EA043848B1 - Коагонисты глюкагона и glp-1 для лечения ожирения - Google Patents
Коагонисты глюкагона и glp-1 для лечения ожирения Download PDFInfo
- Publication number
- EA043848B1 EA043848B1 EA201891946 EA043848B1 EA 043848 B1 EA043848 B1 EA 043848B1 EA 201891946 EA201891946 EA 201891946 EA 043848 B1 EA043848 B1 EA 043848B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- glp
- peptide
- less
- dose
- glucagon
- Prior art date
Links
- 102100040918 Pro-glucagon Human genes 0.000 title description 184
- MASNOZXLGMXCHN-ZLPAWPGGSA-N glucagon Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O)C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC=1NC=NC=1)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C1=CC=CC=C1 MASNOZXLGMXCHN-ZLPAWPGGSA-N 0.000 title description 179
- 229960004666 glucagon Drugs 0.000 title description 178
- 102000051325 Glucagon Human genes 0.000 title description 176
- 108060003199 Glucagon Proteins 0.000 title description 173
- DTHNMHAUYICORS-KTKZVXAJSA-N Glucagon-like peptide 1 Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC=1N=CNC=1)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C(C)C)C1=CC=CC=C1 DTHNMHAUYICORS-KTKZVXAJSA-N 0.000 title description 164
- 238000011282 treatment Methods 0.000 title description 84
- 208000008589 Obesity Diseases 0.000 title description 27
- 235000020824 obesity Nutrition 0.000 title description 26
- 101710198884 GATA-type zinc finger protein 1 Proteins 0.000 title 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 341
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 48
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 claims description 34
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 32
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 27
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 19
- 238000002347 injection Methods 0.000 claims description 13
- 239000007924 injection Substances 0.000 claims description 13
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 claims description 10
- 208000008338 non-alcoholic fatty liver disease Diseases 0.000 claims description 6
- 206010053219 non-alcoholic steatohepatitis Diseases 0.000 claims description 6
- 101800000224 Glucagon-like peptide 1 Proteins 0.000 description 160
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 149
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 145
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 98
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 98
- YEKUUBPJRPXMBM-PTCFZACGSA-N (2S)-5-[[(5S)-5-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S,3R)-2-[[(2S)-2-[[(2S,3R)-2-[[2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-amino-3-(1H-imidazol-4-yl)propanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]acetyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-carboxypropanoyl]amino]-6-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-5-carbamimidamido-1-[[(2S)-1-[[(2S)-5-carbamimidamido-1-[[(2S)-3-carboxy-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-4-carboxy-1-[[(2S)-1-[[2-(carboxymethylamino)-2-oxoethyl]amino]-1-oxopropan-2-yl]amino]-1-oxobutan-2-yl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)-1-oxopropan-2-yl]amino]-1-oxopropan-2-yl]amino]-3-methyl-1-oxobutan-2-yl]amino]-1-oxo-3-phenylpropan-2-yl]amino]-1-oxopropan-2-yl]amino]-1-oxopentan-2-yl]amino]-1-oxopropan-2-yl]amino]-1-oxopentan-2-yl]amino]-4-carboxy-1-oxobutan-2-yl]amino]-3-hydroxy-1-oxopropan-2-yl]amino]-3-carboxy-1-oxopropan-2-yl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-(4-hydroxyphenyl)-1-oxopropan-2-yl]amino]-4-carboxy-1-oxobutan-2-yl]amino]-3-hydroxy-1-oxopropan-2-yl]amino]-6-oxohexyl]amino]-2-(hexadecanoylamino)-5-oxopentanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)N[C@@H](CCC(=O)NCCCC[C@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](Cc1ccccc1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)Cc1c[nH]cn1)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](Cc1ccc(O)cc1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](Cc1ccccc1)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](Cc1c[nH]c2ccccc12)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(=O)NCC(O)=O)C(O)=O YEKUUBPJRPXMBM-PTCFZACGSA-N 0.000 description 63
- 108091005205 cotadutide Proteins 0.000 description 62
- 229940121426 cotadutide Drugs 0.000 description 62
- 239000000902 placebo Substances 0.000 description 54
- 229940068196 placebo Drugs 0.000 description 54
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 48
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 48
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 42
- 208000016261 weight loss Diseases 0.000 description 38
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 37
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 36
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 35
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 35
- 230000004580 weight loss Effects 0.000 description 34
- 239000000047 product Substances 0.000 description 32
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 30
- 208000001072 type 2 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 30
- 206010047700 Vomiting Diseases 0.000 description 29
- 102000007446 Glucagon-Like Peptide-1 Receptor Human genes 0.000 description 28
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 28
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 27
- 108010086246 Glucagon-Like Peptide-1 Receptor Proteins 0.000 description 26
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 26
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 25
- 230000008859 change Effects 0.000 description 25
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 24
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 24
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 24
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 24
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 24
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 24
- 108010019598 Liraglutide Proteins 0.000 description 23
- YSDQQAXHVYUZIW-QCIJIYAXSA-N Liraglutide Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCCNC(=O)CC[C@H](NC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC)C(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC=1NC=NC=1)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C(C)C)C1=CC=C(O)C=C1 YSDQQAXHVYUZIW-QCIJIYAXSA-N 0.000 description 23
- 230000008673 vomiting Effects 0.000 description 23
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 22
- 229960002701 liraglutide Drugs 0.000 description 22
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 22
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 21
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 19
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 19
- 108010063919 Glucagon Receptors Proteins 0.000 description 18
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 18
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 18
- 108091016366 Histone-lysine N-methyltransferase EHMT1 Proteins 0.000 description 17
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 description 17
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 description 17
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 17
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 17
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 17
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 17
- 230000036470 plasma concentration Effects 0.000 description 17
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 17
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 16
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 16
- 102100040890 Glucagon receptor Human genes 0.000 description 15
- 206010033307 Overweight Diseases 0.000 description 15
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 description 15
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 description 15
- 230000002641 glycemic effect Effects 0.000 description 15
- 125000001312 palmitoyl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 15
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 14
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 14
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 14
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 13
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 12
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 12
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 12
- 230000037081 physical activity Effects 0.000 description 12
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 11
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 11
- 230000001174 ascending effect Effects 0.000 description 11
- -1 human glucagon Chemical compound 0.000 description 11
- 235000012054 meals Nutrition 0.000 description 11
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 11
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 11
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 11
- UFTFJSFQGQCHQW-UHFFFAOYSA-N triformin Chemical compound O=COCC(OC=O)COC=O UFTFJSFQGQCHQW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 102000003973 Fibroblast growth factor 21 Human genes 0.000 description 10
- 108090000376 Fibroblast growth factor 21 Proteins 0.000 description 10
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 10
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 10
- 235000021588 free fatty acids Nutrition 0.000 description 10
- 150000005830 nonesterified fatty acids Chemical class 0.000 description 10
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 10
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 102000001554 Hemoglobins Human genes 0.000 description 9
- 108010054147 Hemoglobins Proteins 0.000 description 9
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 9
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 9
- 230000009471 action Effects 0.000 description 9
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 9
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 9
- 229940049906 glutamate Drugs 0.000 description 9
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 9
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 9
- XZWYZXLIPXDOLR-UHFFFAOYSA-N metformin Chemical compound CN(C)C(=N)NC(N)=N XZWYZXLIPXDOLR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 229960003105 metformin Drugs 0.000 description 9
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 9
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 9
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 9
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 8
- 206010020772 Hypertension Diseases 0.000 description 8
- 206010028813 Nausea Diseases 0.000 description 8
- 210000000577 adipose tissue Anatomy 0.000 description 8
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 description 8
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 8
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 8
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 8
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 230000008693 nausea Effects 0.000 description 8
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 8
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N trifluoroacetic acid Substances OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 7
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 7
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 101001015516 Homo sapiens Glucagon-like peptide 1 receptor Proteins 0.000 description 7
- 206010022489 Insulin Resistance Diseases 0.000 description 7
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 7
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 7
- 238000013262 cAMP assay Methods 0.000 description 7
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 7
- 235000012631 food intake Nutrition 0.000 description 7
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 7
- 229930195712 glutamate Natural products 0.000 description 7
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 7
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 7
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 7
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 7
- WHBMMWSBFZVSSR-UHFFFAOYSA-N 3-hydroxybutyric acid Chemical compound CC(O)CC(O)=O WHBMMWSBFZVSSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 208000032928 Dyslipidaemia Diseases 0.000 description 6
- 208000017170 Lipid metabolism disease Diseases 0.000 description 6
- 108010058003 Proglucagon Proteins 0.000 description 6
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 208000006011 Stroke Diseases 0.000 description 6
- 235000021152 breakfast Nutrition 0.000 description 6
- 238000001212 derivatisation Methods 0.000 description 6
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 6
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 6
- 230000037406 food intake Effects 0.000 description 6
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 6
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 6
- 208000017169 kidney disease Diseases 0.000 description 6
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 6
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 6
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 6
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 6
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 6
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 6
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 6
- 108010067722 Dipeptidyl Peptidase 4 Proteins 0.000 description 5
- 102100025012 Dipeptidyl peptidase 4 Human genes 0.000 description 5
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 108010011459 Exenatide Proteins 0.000 description 5
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 5
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 5
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 5
- 230000036772 blood pressure Effects 0.000 description 5
- 230000000747 cardiac effect Effects 0.000 description 5
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 5
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 5
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 5
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 5
- 230000003285 pharmacodynamic effect Effects 0.000 description 5
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 5
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 5
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 5
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 5
- 230000035488 systolic blood pressure Effects 0.000 description 5
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 5
- 230000004584 weight gain Effects 0.000 description 5
- 235000019786 weight gain Nutrition 0.000 description 5
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 4
- 125000003088 (fluoren-9-ylmethoxy)carbonyl group Chemical group 0.000 description 4
- 102100036475 Alanine aminotransferase 1 Human genes 0.000 description 4
- 108010082126 Alanine transaminase Proteins 0.000 description 4
- 108010003415 Aspartate Aminotransferases Proteins 0.000 description 4
- 102000004625 Aspartate Aminotransferases Human genes 0.000 description 4
- 102000055006 Calcitonin Human genes 0.000 description 4
- 108060001064 Calcitonin Proteins 0.000 description 4
- 208000024172 Cardiovascular disease Diseases 0.000 description 4
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 4
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 4
- 206010019280 Heart failures Diseases 0.000 description 4
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 4
- 101000788682 Homo sapiens GATA-type zinc finger protein 1 Proteins 0.000 description 4
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 description 4
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 4
- SECXISVLQFMRJM-UHFFFAOYSA-N N-Methylpyrrolidone Chemical compound CN1CCCC1=O SECXISVLQFMRJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 4
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 4
- 230000007815 allergy Effects 0.000 description 4
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 4
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 4
- BBBFJLBPOGFECG-VJVYQDLKSA-N calcitonin Chemical compound N([C@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(N)=O)C(C)C)C(=O)[C@@H]1CSSC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1 BBBFJLBPOGFECG-VJVYQDLKSA-N 0.000 description 4
- 229960004015 calcitonin Drugs 0.000 description 4
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 4
- 230000006240 deamidation Effects 0.000 description 4
- 230000034994 death Effects 0.000 description 4
- 231100000517 death Toxicity 0.000 description 4
- 238000013461 design Methods 0.000 description 4
- 230000035487 diastolic blood pressure Effects 0.000 description 4
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 4
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 4
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 4
- 229960001519 exenatide Drugs 0.000 description 4
- IXZISFNWUWKBOM-ARQDHWQXSA-N fructosamine Chemical compound NC[C@@]1(O)OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O IXZISFNWUWKBOM-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 4
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 4
- 230000009610 hypersensitivity Effects 0.000 description 4
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 4
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 4
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 4
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 4
- 230000006320 pegylation Effects 0.000 description 4
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 4
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 4
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 4
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 4
- 235000002639 sodium chloride Nutrition 0.000 description 4
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 4
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 4
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 4
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 4
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 4
- 238000012353 t test Methods 0.000 description 4
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 4
- FUOOLUPWFVMBKG-UHFFFAOYSA-N 2-Aminoisobutyric acid Chemical compound CC(C)(N)C(O)=O FUOOLUPWFVMBKG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 3
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- HTQBXNHDCUEHJF-XWLPCZSASA-N Exenatide Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CO)C(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CC=1NC=NC=1)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C(C)C)C1=CC=CC=C1 HTQBXNHDCUEHJF-XWLPCZSASA-N 0.000 description 3
- 108010004460 Gastric Inhibitory Polypeptide Proteins 0.000 description 3
- 102100039997 Gastric inhibitory polypeptide receptor Human genes 0.000 description 3
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 3
- 241000700721 Hepatitis B virus Species 0.000 description 3
- 101000886866 Homo sapiens Gastric inhibitory polypeptide receptor Proteins 0.000 description 3
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 3
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 3
- 206010021518 Impaired gastric emptying Diseases 0.000 description 3
- 102000035554 Proglucagon Human genes 0.000 description 3
- 229940100389 Sulfonylurea Drugs 0.000 description 3
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 3
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 3
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 3
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000012911 assay medium Substances 0.000 description 3
- UCMIRNVEIXFBKS-UHFFFAOYSA-N beta-alanine Chemical compound NCCC(O)=O UCMIRNVEIXFBKS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 3
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 3
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 3
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 3
- 208000002173 dizziness Diseases 0.000 description 3
- 230000002526 effect on cardiovascular system Effects 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 230000006870 function Effects 0.000 description 3
- 208000001288 gastroparesis Diseases 0.000 description 3
- 239000003877 glucagon like peptide 1 receptor agonist Substances 0.000 description 3
- 230000004153 glucose metabolism Effects 0.000 description 3
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-L glutamate group Chemical group N[C@@H](CCC(=O)[O-])C(=O)[O-] WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-L 0.000 description 3
- 229960002989 glutamic acid Drugs 0.000 description 3
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 3
- 235000009200 high fat diet Nutrition 0.000 description 3
- NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N hydroxybenzotriazole Substances O=C1C=CC=C2NNN=C12 NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 3
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 3
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 3
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 3
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 3
- 208000030159 metabolic disease Diseases 0.000 description 3
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 3
- 208000010125 myocardial infarction Diseases 0.000 description 3
- 230000026792 palmitoylation Effects 0.000 description 3
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 3
- 230000000291 postprandial effect Effects 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- GCYXWQUSHADNBF-AAEALURTSA-N preproglucagon 78-108 Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC=1N=CNC=1)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C(C)C)C1=CC=CC=C1 GCYXWQUSHADNBF-AAEALURTSA-N 0.000 description 3
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 3
- 108020001580 protein domains Proteins 0.000 description 3
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 description 3
- 230000004044 response Effects 0.000 description 3
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 3
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 3
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 3
- 238000009097 single-agent therapy Methods 0.000 description 3
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 3
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 3
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 3
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 3
- YROXIXLRRCOBKF-UHFFFAOYSA-N sulfonylurea Chemical class OC(=N)N=S(=O)=O YROXIXLRRCOBKF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 description 3
- 125000002221 trityl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1C([*])(C1=C(C(=C(C(=C1[H])[H])[H])[H])[H])C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1[H] 0.000 description 3
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 3
- 239000013585 weight reducing agent Substances 0.000 description 3
- 208000000197 Acute Cholecystitis Diseases 0.000 description 2
- 208000007848 Alcoholism Diseases 0.000 description 2
- 239000004382 Amylase Substances 0.000 description 2
- 102000013142 Amylases Human genes 0.000 description 2
- 108010065511 Amylases Proteins 0.000 description 2
- 206010002388 Angina unstable Diseases 0.000 description 2
- 208000019901 Anxiety disease Diseases 0.000 description 2
- 206010003658 Atrial Fibrillation Diseases 0.000 description 2
- 206010069571 Atrioventricular dissociation Diseases 0.000 description 2
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 2
- 206010006326 Breath odour Diseases 0.000 description 2
- 125000001433 C-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 description 2
- 206010007559 Cardiac failure congestive Diseases 0.000 description 2
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 2
- 241001432959 Chernes Species 0.000 description 2
- 206010008614 Cholecystitis acute Diseases 0.000 description 2
- 208000000668 Chronic Pancreatitis Diseases 0.000 description 2
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 2
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 2
- 229940124213 Dipeptidyl peptidase 4 (DPP IV) inhibitor Drugs 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 208000018522 Gastrointestinal disease Diseases 0.000 description 2
- 208000009139 Gilbert Disease Diseases 0.000 description 2
- 208000022412 Gilbert syndrome Diseases 0.000 description 2
- 101150020692 Gipr gene Proteins 0.000 description 2
- 101710173666 Glucagon-3 Proteins 0.000 description 2
- 101800004266 Glucagon-like peptide 1(7-37) Proteins 0.000 description 2
- 102400000324 Glucagon-like peptide 1(7-37) Human genes 0.000 description 2
- 101800000221 Glucagon-like peptide 2 Proteins 0.000 description 2
- 206010019233 Headaches Diseases 0.000 description 2
- 241000711549 Hepacivirus C Species 0.000 description 2
- 101500028775 Homo sapiens Glucagon Proteins 0.000 description 2
- 101001040075 Homo sapiens Glucagon receptor Proteins 0.000 description 2
- 101000684208 Homo sapiens Prolyl endopeptidase FAP Proteins 0.000 description 2
- 102100026120 IgG receptor FcRn large subunit p51 Human genes 0.000 description 2
- 101710177940 IgG receptor FcRn large subunit p51 Proteins 0.000 description 2
- PIWKPBJCKXDKJR-UHFFFAOYSA-N Isoflurane Chemical compound FC(F)OC(Cl)C(F)(F)F PIWKPBJCKXDKJR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004367 Lipase Substances 0.000 description 2
- 102000004882 Lipase Human genes 0.000 description 2
- 108090001060 Lipase Proteins 0.000 description 2
- 208000037196 Medullary thyroid carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 206010073149 Multiple endocrine neoplasia Type 2 Diseases 0.000 description 2
- 206010073148 Multiple endocrine neoplasia type 2A Diseases 0.000 description 2
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 102400000319 Oxyntomodulin Human genes 0.000 description 2
- 101800001388 Oxyntomodulin Proteins 0.000 description 2
- 206010033645 Pancreatitis Diseases 0.000 description 2
- 206010033647 Pancreatitis acute Diseases 0.000 description 2
- 206010033649 Pancreatitis chronic Diseases 0.000 description 2
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 2
- 206010040639 Sick sinus syndrome Diseases 0.000 description 2
- 102100037202 Sodium/myo-inositol cotransporter 2 Human genes 0.000 description 2
- 101710090560 Sodium/myo-inositol cotransporter 2 Proteins 0.000 description 2
- 208000007718 Stable Angina Diseases 0.000 description 2
- 206010042135 Stomatitis necrotising Diseases 0.000 description 2
- 208000001871 Tachycardia Diseases 0.000 description 2
- 206010070568 Thyroid C-cell hyperplasia Diseases 0.000 description 2
- 102000011923 Thyrotropin Human genes 0.000 description 2
- 108010061174 Thyrotropin Proteins 0.000 description 2
- 238000008050 Total Bilirubin Reagent Methods 0.000 description 2
- 208000007814 Unstable Angina Diseases 0.000 description 2
- 201000008803 Wolff-Parkinson-white syndrome Diseases 0.000 description 2
- 239000008351 acetate buffer Substances 0.000 description 2
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 2
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 2
- 201000003229 acute pancreatitis Diseases 0.000 description 2
- 238000005917 acylation reaction Methods 0.000 description 2
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 2
- 206010001584 alcohol abuse Diseases 0.000 description 2
- 208000025746 alcohol use disease Diseases 0.000 description 2
- 125000003368 amide group Chemical group 0.000 description 2
- 235000019418 amylase Nutrition 0.000 description 2
- 230000000798 anti-retroviral effect Effects 0.000 description 2
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 2
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 2
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 2
- 235000019789 appetite Nutrition 0.000 description 2
- 230000036528 appetite Effects 0.000 description 2
- 235000021407 appetite control Nutrition 0.000 description 2
- 206010003119 arrhythmia Diseases 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 229940049706 benzodiazepine Drugs 0.000 description 2
- 150000001557 benzodiazepines Chemical class 0.000 description 2
- 229940000635 beta-alanine Drugs 0.000 description 2
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 2
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 2
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 2
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000009534 blood test Methods 0.000 description 2
- 230000003491 cAMP production Effects 0.000 description 2
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 2
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 2
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 2
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 2
- JUFFVKRROAPVBI-PVOYSMBESA-N chembl1210015 Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(=O)N[C@H]1[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO[C@]3(O[C@@H](C[C@H](O)[C@H](O)CO)[C@H](NC(C)=O)[C@@H](O)C3)C(O)=O)O2)O)[C@@H](CO)O1)NC(C)=O)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CO)C(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CC=1NC=NC=1)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C(C)C)C1=CC=CC=C1 JUFFVKRROAPVBI-PVOYSMBESA-N 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 238000002192 cholecystectomy Methods 0.000 description 2
- 201000001352 cholecystitis Diseases 0.000 description 2
- 201000001883 cholelithiasis Diseases 0.000 description 2
- 239000003246 corticosteroid Substances 0.000 description 2
- 229960001334 corticosteroids Drugs 0.000 description 2
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 2
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 2
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 2
- DDRJAANPRJIHGJ-UHFFFAOYSA-N creatinine Chemical compound CN1CC(=O)NC1=N DDRJAANPRJIHGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000021316 daily nutritional intake Nutrition 0.000 description 2
- 206010061428 decreased appetite Diseases 0.000 description 2
- 239000007857 degradation product Substances 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 2
- 230000003205 diastolic effect Effects 0.000 description 2
- 230000000378 dietary effect Effects 0.000 description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 2
- 238000003255 drug test Methods 0.000 description 2
- 230000004064 dysfunction Effects 0.000 description 2
- 230000000081 effect on glucose Effects 0.000 description 2
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000029142 excretion Effects 0.000 description 2
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 2
- 239000013020 final formulation Substances 0.000 description 2
- 208000020694 gallbladder disease Diseases 0.000 description 2
- BRZYSWJRSDMWLG-CAXSIQPQSA-N geneticin Chemical compound O1C[C@@](O)(C)[C@H](NC)[C@@H](O)[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](C(C)O)O2)N)[C@@H](N)C[C@H]1N BRZYSWJRSDMWLG-CAXSIQPQSA-N 0.000 description 2
- 108010063245 glucagon-like peptide 1 (7-36)amide Proteins 0.000 description 2
- TWSALRJGPBVBQU-PKQQPRCHSA-N glucagon-like peptide 2 Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O)[C@@H](C)CC)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC=1NC=NC=1)[C@@H](C)O)[C@@H](C)CC)C1=CC=CC=C1 TWSALRJGPBVBQU-PKQQPRCHSA-N 0.000 description 2
- 125000003827 glycol group Chemical group 0.000 description 2
- 231100000869 headache Toxicity 0.000 description 2
- 238000002868 homogeneous time resolved fluorescence Methods 0.000 description 2
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 2
- 229920000592 inorganic polymer Polymers 0.000 description 2
- 230000003914 insulin secretion Effects 0.000 description 2
- 201000004332 intermediate coronary syndrome Diseases 0.000 description 2
- 238000001361 intraarterial administration Methods 0.000 description 2
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 2
- 229960002725 isoflurane Drugs 0.000 description 2
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 2
- 235000019421 lipase Nutrition 0.000 description 2
- 208000019423 liver disease Diseases 0.000 description 2
- 208000004731 long QT syndrome Diseases 0.000 description 2
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 description 2
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 2
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 2
- 229940127554 medical product Drugs 0.000 description 2
- 229940126601 medicinal product Drugs 0.000 description 2
- 208000023356 medullary thyroid gland carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 2
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PXZWGQLGAKCNKD-DPNMSELWSA-N molport-023-276-326 Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)[C@@H](C)O)C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC=1NC=NC=1)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C1=CC=CC=C1 PXZWGQLGAKCNKD-DPNMSELWSA-N 0.000 description 2
- 201000008585 noma Diseases 0.000 description 2
- 230000009871 nonspecific binding Effects 0.000 description 2
- 208000001797 obstructive sleep apnea Diseases 0.000 description 2
- 210000004789 organ system Anatomy 0.000 description 2
- 229920000620 organic polymer Polymers 0.000 description 2
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 2
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 2
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 2
- 102000014187 peptide receptors Human genes 0.000 description 2
- 230000002085 persistent effect Effects 0.000 description 2
- 201000009104 prediabetes syndrome Diseases 0.000 description 2
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 2
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 2
- 208000020016 psychiatric disease Diseases 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 230000000284 resting effect Effects 0.000 description 2
- 230000033764 rhythmic process Effects 0.000 description 2
- 201000002932 second-degree atrioventricular block Diseases 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 238000004904 shortening Methods 0.000 description 2
- 201000008261 skin carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 208000019116 sleep disease Diseases 0.000 description 2
- 239000012064 sodium phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 2
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 2
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 2
- 201000009032 substance abuse Diseases 0.000 description 2
- 231100000736 substance abuse Toxicity 0.000 description 2
- 208000011117 substance-related disease Diseases 0.000 description 2
- 239000008362 succinate buffer Substances 0.000 description 2
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 2
- 125000000999 tert-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- 125000005931 tert-butyloxycarbonyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(OC(*)=O)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- 208000013818 thyroid gland medullary carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 150000003626 triacylglycerols Chemical class 0.000 description 2
- 210000002438 upper gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 2
- 206010047302 ventricular tachycardia Diseases 0.000 description 2
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 2
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 2
- 238000004260 weight control Methods 0.000 description 2
- UIKROCXWUNQSPJ-VIFPVBQESA-N (-)-cotinine Chemical compound C1CC(=O)N(C)[C@@H]1C1=CC=CN=C1 UIKROCXWUNQSPJ-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N (2S,3S,4S,5R,6R)-6-[(2S,3R,4R,5S,6R)-3-Acetamido-2-[(2S,3S,4R,5R,6R)-6-[(2R,3R,4R,5S,6R)-3-acetamido-2,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-2-carboxy-4,5-dihydroxyoxan-3-yl]oxy-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-3,4,5-trihydroxyoxane-2-carboxylic acid Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N 0.000 description 1
- URQNDMXCKJEUEW-DEOSSOPVSA-N (2s)-2-amino-6-[[(4-methylphenyl)-diphenylmethyl]amino]hexanoic acid Chemical compound C1=CC(C)=CC=C1C(NCCCC[C@H](N)C(O)=O)(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 URQNDMXCKJEUEW-DEOSSOPVSA-N 0.000 description 1
- BDNKZNFMNDZQMI-UHFFFAOYSA-N 1,3-diisopropylcarbodiimide Chemical compound CC(C)N=C=NC(C)C BDNKZNFMNDZQMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 1-Hydroxybenzotriazole Chemical compound C1=CC=C2N(O)N=NC2=C1 ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CYDQOEWLBCCFJZ-UHFFFAOYSA-N 4-(4-fluorophenyl)oxane-4-carboxylic acid Chemical compound C=1C=C(F)C=CC=1C1(C(=O)O)CCOCC1 CYDQOEWLBCCFJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 1
- SLXKOJJOQWFEFD-UHFFFAOYSA-N 6-aminohexanoic acid Chemical compound NCCCCCC(O)=O SLXKOJJOQWFEFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XZIIFPSPUDAGJM-UHFFFAOYSA-N 6-chloro-2-n,2-n-diethylpyrimidine-2,4-diamine Chemical compound CCN(CC)C1=NC(N)=CC(Cl)=N1 XZIIFPSPUDAGJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000004998 Abdominal Pain Diseases 0.000 description 1
- 206010000060 Abdominal distension Diseases 0.000 description 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229940077274 Alpha glucosidase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 206010003210 Arteriosclerosis Diseases 0.000 description 1
- 201000001320 Atherosclerosis Diseases 0.000 description 1
- 206010003673 Atrioventricular block complete Diseases 0.000 description 1
- 206010003674 Atrioventricular block first degree Diseases 0.000 description 1
- ZOXJGFHDIHLPTG-UHFFFAOYSA-N Boron Chemical compound [B] ZOXJGFHDIHLPTG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010006578 Bundle-Branch Block Diseases 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 1
- 101500028755 Canis lupus familiaris Glucagon-like peptide 1 Proteins 0.000 description 1
- 101710132601 Capsid protein Proteins 0.000 description 1
- 241000700198 Cavia Species 0.000 description 1
- 101710149695 Clampless protein 1 Proteins 0.000 description 1
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- UIKROCXWUNQSPJ-UHFFFAOYSA-N Cotinine Natural products C1CC(=O)N(C)C1C1=CC=CN=C1 UIKROCXWUNQSPJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SNPQGCDJHZAVOB-SOMABOLJSA-N D-glucosyl-N-tetracosanoylsphinganine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)N[C@H]([C@H](O)CCCCCCCCCCCCCCC)COC1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O SNPQGCDJHZAVOB-SOMABOLJSA-N 0.000 description 1
- 208000002249 Diabetes Complications Diseases 0.000 description 1
- 206010012655 Diabetic complications Diseases 0.000 description 1
- 208000008960 Diabetic foot Diseases 0.000 description 1
- 206010012735 Diarrhoea Diseases 0.000 description 1
- 206010061818 Disease progression Diseases 0.000 description 1
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 1
- IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N Ethylene oxide Chemical compound C1CO1 IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- PZOHPVWRSNXCRP-QRCCJXOFSA-N GPL-1 Chemical compound C([C@@H](NC(=O)CC(O)CCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCC)C(=O)N[C@H]([C@@H](C)OC1[C@@H]([C@H](O)[C@H](O)[C@H](C)O1)O[C@H]1[C@@H]([C@H](O)[C@@H](O)[C@H](C)O1)O)C(=O)N[C@H](C)C(=O)N[C@@H](C)COC1[C@@H]([C@H](OC)[C@@H](OC)[C@H](C)O1)O)C1=CC=CC=C1 PZOHPVWRSNXCRP-QRCCJXOFSA-N 0.000 description 1
- 102100039994 Gastric inhibitory polypeptide Human genes 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 229940089838 Glucagon-like peptide 1 receptor agonist Drugs 0.000 description 1
- 206010018404 Glucagonoma Diseases 0.000 description 1
- 208000002705 Glucose Intolerance Diseases 0.000 description 1
- 206010018429 Glucose tolerance impaired Diseases 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920002527 Glycogen Polymers 0.000 description 1
- 229940121710 HMGCoA reductase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 208000010271 Heart Block Diseases 0.000 description 1
- 239000004705 High-molecular-weight polyethylene Substances 0.000 description 1
- 241001272567 Hominoidea Species 0.000 description 1
- 101500028774 Homo sapiens Glucagon-like peptide 1 Proteins 0.000 description 1
- 206010020880 Hypertrophy Diseases 0.000 description 1
- 208000013016 Hypoglycemia Diseases 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- 102000036770 Islet Amyloid Polypeptide Human genes 0.000 description 1
- 108010041872 Islet Amyloid Polypeptide Proteins 0.000 description 1
- 206010023379 Ketoacidosis Diseases 0.000 description 1
- 208000007976 Ketosis Diseases 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 238000008214 LDL Cholesterol Methods 0.000 description 1
- 208000007177 Left Ventricular Hypertrophy Diseases 0.000 description 1
- 206010054805 Macroangiopathy Diseases 0.000 description 1
- 208000029001 Mediastinal disease Diseases 0.000 description 1
- 208000022768 Mobitz type I atrioventricular block Diseases 0.000 description 1
- 101000788683 Mus musculus GATA-type zinc finger protein 1 Proteins 0.000 description 1
- 101100337057 Mus musculus Glp1r gene Proteins 0.000 description 1
- 101001015515 Mus musculus Glucagon-like peptide 1 receptor Proteins 0.000 description 1
- 208000029027 Musculoskeletal and connective tissue disease Diseases 0.000 description 1
- 206010050819 Musculoskeletal chest pain Diseases 0.000 description 1
- 208000001572 Mycoplasma Pneumonia Diseases 0.000 description 1
- 201000008235 Mycoplasma pneumoniae pneumonia Diseases 0.000 description 1
- 208000012902 Nervous system disease Diseases 0.000 description 1
- 206010068319 Oropharyngeal pain Diseases 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 241000282579 Pan Species 0.000 description 1
- 208000030852 Parasitic disease Diseases 0.000 description 1
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 description 1
- 208000005764 Peripheral Arterial Disease Diseases 0.000 description 1
- 208000030831 Peripheral arterial occlusive disease Diseases 0.000 description 1
- 102100023504 Polyribonucleotide 5'-hydroxyl-kinase Clp1 Human genes 0.000 description 1
- 208000004880 Polyuria Diseases 0.000 description 1
- 241000282405 Pongo abelii Species 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000001280 Prediabetic State Diseases 0.000 description 1
- 102000002067 Protein Subunits Human genes 0.000 description 1
- 108010001267 Protein Subunits Proteins 0.000 description 1
- 101100337058 Rattus norvegicus Glp1r gene Proteins 0.000 description 1
- 101500026178 Rattus norvegicus Glucagon-like peptide 1 Proteins 0.000 description 1
- 101001015518 Rattus norvegicus Glucagon-like peptide 1 receptor Proteins 0.000 description 1
- 206010062237 Renal impairment Diseases 0.000 description 1
- 208000017442 Retinal disease Diseases 0.000 description 1
- 206010038923 Retinopathy Diseases 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 241000555745 Sciuridae Species 0.000 description 1
- 206010048908 Seasonal allergy Diseases 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229940123518 Sodium/glucose cotransporter 2 inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 208000003734 Supraventricular Tachycardia Diseases 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- 108010034949 Thyroglobulin Proteins 0.000 description 1
- 102000009843 Thyroglobulin Human genes 0.000 description 1
- 208000032109 Transient ischaemic attack Diseases 0.000 description 1
- 208000025865 Ulcer Diseases 0.000 description 1
- 241000282458 Ursus sp. Species 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000009729 Ventricular Premature Complexes Diseases 0.000 description 1
- 206010047289 Ventricular extrasystoles Diseases 0.000 description 1
- 206010049761 Ventricular pre-excitation Diseases 0.000 description 1
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 230000021736 acetylation Effects 0.000 description 1
- 238000006640 acetylation reaction Methods 0.000 description 1
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000010933 acylation Effects 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 150000001299 aldehydes Chemical class 0.000 description 1
- 238000005804 alkylation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003888 alpha glucosidase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000009435 amidation Effects 0.000 description 1
- 238000007112 amidation reaction Methods 0.000 description 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 239000008135 aqueous vehicle Substances 0.000 description 1
- 125000000637 arginyl group Chemical group N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)* 0.000 description 1
- 230000006793 arrhythmia Effects 0.000 description 1
- 208000011775 arteriosclerosis disease Diseases 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000012131 assay buffer Substances 0.000 description 1
- 230000001746 atrial effect Effects 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 238000007681 bariatric surgery Methods 0.000 description 1
- 210000000227 basophil cell of anterior lobe of hypophysis Anatomy 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 208000024330 bloating Diseases 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 238000009530 blood pressure measurement Methods 0.000 description 1
- 229910052796 boron Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 239000006172 buffering agent Substances 0.000 description 1
- 229940084891 byetta Drugs 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011148 calcium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 238000004422 calculation algorithm Methods 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 235000019577 caloric intake Nutrition 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 125000002915 carbonyl group Chemical group [*:2]C([*:1])=O 0.000 description 1
- 230000011128 cardiac conduction Effects 0.000 description 1
- 230000007211 cardiovascular event Effects 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- WDRMVIMVHHWVBI-STCSGHEYSA-N chembl1222074 Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(O)=O)[C@@H](C)O)[C@H](C)O)C(C)C)C1=CC=CC=C1 WDRMVIMVHHWVBI-STCSGHEYSA-N 0.000 description 1
- 238000007385 chemical modification Methods 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 108091006116 chimeric peptides Proteins 0.000 description 1
- 235000019504 cigarettes Nutrition 0.000 description 1
- 238000002648 combination therapy Methods 0.000 description 1
- 208000012696 congenital leptin deficiency Diseases 0.000 description 1
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 1
- 208000029078 coronary artery disease Diseases 0.000 description 1
- 238000010219 correlation analysis Methods 0.000 description 1
- 229950006073 cotinine Drugs 0.000 description 1
- 229940109239 creatinine Drugs 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 208000010643 digestive system disease Diseases 0.000 description 1
- 230000023011 digestive tract development Effects 0.000 description 1
- BGRWYRAHAFMIBJ-UHFFFAOYSA-N diisopropylcarbodiimide Natural products CC(C)NC(=O)NC(C)C BGRWYRAHAFMIBJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 239000003603 dipeptidyl peptidase IV inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000005750 disease progression Effects 0.000 description 1
- 229940125542 dual agonist Drugs 0.000 description 1
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 description 1
- 238000002330 electrospray ionisation mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 230000009881 electrostatic interaction Effects 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 210000003158 enteroendocrine cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000003628 erosive effect Effects 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000013213 extrapolation Methods 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 201000002934 first-degree atrioventricular block Diseases 0.000 description 1
- IRXSLJNXXZKURP-UHFFFAOYSA-N fluorenylmethyloxycarbonyl chloride Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)Cl)C3=CC=CC=C3C2=C1 IRXSLJNXXZKURP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PTCGDEVVHUXTMP-UHFFFAOYSA-N flutolanil Chemical compound CC(C)OC1=CC=CC(NC(=O)C=2C(=CC=CC=2)C(F)(F)F)=C1 PTCGDEVVHUXTMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000012595 freezing medium Substances 0.000 description 1
- 230000005714 functional activity Effects 0.000 description 1
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 1
- 230000030136 gastric emptying Effects 0.000 description 1
- 230000030135 gastric motility Effects 0.000 description 1
- 208000018685 gastrointestinal system disease Diseases 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 230000024924 glomerular filtration Effects 0.000 description 1
- 230000004110 gluconeogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000014101 glucose homeostasis Effects 0.000 description 1
- 230000010030 glucose lowering effect Effects 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 125000000404 glutamine group Chemical group N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)* 0.000 description 1
- 229940096919 glycogen Drugs 0.000 description 1
- 230000004116 glycogenolysis Effects 0.000 description 1
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 1
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 1
- 125000003630 glycyl group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 230000005802 health problem Effects 0.000 description 1
- 208000019622 heart disease Diseases 0.000 description 1
- 230000000004 hemodynamic effect Effects 0.000 description 1
- 125000000487 histidyl group Chemical group [H]N([H])C(C(=O)O*)C([H])([H])C1=C([H])N([H])C([H])=N1 0.000 description 1
- 230000003284 homeostatic effect Effects 0.000 description 1
- 102000056448 human GLP1R Human genes 0.000 description 1
- 229920002674 hyaluronan Polymers 0.000 description 1
- 229960003160 hyaluronic acid Drugs 0.000 description 1
- 125000001165 hydrophobic group Chemical group 0.000 description 1
- 201000001421 hyperglycemia Diseases 0.000 description 1
- 230000002218 hypoglycaemic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 208000026278 immune system disease Diseases 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 208000000509 infertility Diseases 0.000 description 1
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 1
- 231100000535 infertility Toxicity 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 238000009533 lab test Methods 0.000 description 1
- 208000006443 lactic acidosis Diseases 0.000 description 1
- 230000003908 liver function Effects 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 1
- 206010062198 microangiopathy Diseases 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 208000001022 morbid obesity Diseases 0.000 description 1
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 1
- 206010051747 multiple endocrine neoplasia Diseases 0.000 description 1
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 1
- 125000001419 myristoyl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 201000009240 nasopharyngitis Diseases 0.000 description 1
- 230000023187 negative regulation of glucagon secretion Effects 0.000 description 1
- 201000001119 neuropathy Diseases 0.000 description 1
- 230000007823 neuropathy Effects 0.000 description 1
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 1
- 206010029446 nocturia Diseases 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 1
- 208000030212 nutrition disease Diseases 0.000 description 1
- QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Chemical group CCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940126701 oral medication Drugs 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 239000003002 pH adjusting agent Substances 0.000 description 1
- 239000006174 pH buffer Substances 0.000 description 1
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 108010011903 peptide receptors Proteins 0.000 description 1
- 125000001151 peptidyl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000000737 periodic effect Effects 0.000 description 1
- 208000030613 peripheral artery disease Diseases 0.000 description 1
- 208000033808 peripheral neuropathy Diseases 0.000 description 1
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 1
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 1
- 230000035790 physiological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 231100000572 poisoning Toxicity 0.000 description 1
- 230000000607 poisoning effect Effects 0.000 description 1
- 229920000729 poly(L-lysine) polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920001308 poly(aminoacid) Polymers 0.000 description 1
- 206010036067 polydipsia Diseases 0.000 description 1
- 229920002643 polyglutamic acid Polymers 0.000 description 1
- 231100000857 poor renal function Toxicity 0.000 description 1
- 238000012987 post-synthetic modification Methods 0.000 description 1
- 230000001323 posttranslational effect Effects 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 description 1
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- OIGNJSKKLXVSLS-VWUMJDOOSA-N prednisolone Chemical compound O=C1C=C[C@]2(C)[C@H]3[C@@H](O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 OIGNJSKKLXVSLS-VWUMJDOOSA-N 0.000 description 1
- 238000004237 preparative chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 238000002203 pretreatment Methods 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 230000006920 protein precipitation Effects 0.000 description 1
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 description 1
- 230000006337 proteolytic cleavage Effects 0.000 description 1
- 238000000306 qrs interval Methods 0.000 description 1
- 238000003259 recombinant expression Methods 0.000 description 1
- 231100000272 reduced body weight Toxicity 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 231100000279 safety data Toxicity 0.000 description 1
- 238000009781 safety test method Methods 0.000 description 1
- 239000012898 sample dilution Substances 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 238000002864 sequence alignment Methods 0.000 description 1
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 1
- 235000004400 serine Nutrition 0.000 description 1
- 230000000391 smoking effect Effects 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 239000001540 sodium lactate Substances 0.000 description 1
- 229940005581 sodium lactate Drugs 0.000 description 1
- 235000011088 sodium lactate Nutrition 0.000 description 1
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 229940035044 sorbitan monolaurate Drugs 0.000 description 1
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 1
- 125000003696 stearoyl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 239000008174 sterile solution Substances 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 1
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L succinate(2-) Chemical compound [O-]C(=O)CCC([O-])=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 230000002459 sustained effect Effects 0.000 description 1
- 208000019270 symptomatic heart failure Diseases 0.000 description 1
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 1
- 230000006794 tachycardia Effects 0.000 description 1
- 229960000814 tetanus toxoid Drugs 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 201000002931 third-degree atrioventricular block Diseases 0.000 description 1
- 230000035922 thirst Effects 0.000 description 1
- 210000000115 thoracic cavity Anatomy 0.000 description 1
- 235000008521 threonine Nutrition 0.000 description 1
- 229960002175 thyroglobulin Drugs 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000041 toxicology testing Toxicity 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 201000010875 transient cerebral ischemia Diseases 0.000 description 1
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- ZGYICYBLPGRURT-UHFFFAOYSA-N tri(propan-2-yl)silicon Chemical compound CC(C)[Si](C(C)C)C(C)C ZGYICYBLPGRURT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000002374 tyrosine Nutrition 0.000 description 1
- 231100000397 ulcer Toxicity 0.000 description 1
- 238000001195 ultra high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000004704 ultra performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 description 1
- 238000002562 urinalysis Methods 0.000 description 1
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 1
- 230000002861 ventricular Effects 0.000 description 1
- 229940007428 victoza Drugs 0.000 description 1
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 1
- 210000004916 vomit Anatomy 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 229920003169 water-soluble polymer Polymers 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
- 230000037221 weight management Effects 0.000 description 1
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 1
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 1
Description
Перекрестная ссылка на родственные заявки
Настоящая заявка испрашивает приоритет по предварительной заявке на патент США № 62/306121, поданной 10 марта 2016 г., которая включена в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте.
Ссылка на перечень последовательностей, предоставленный в электронном виде
Содержание перечня последовательностей, предоставленного в электронном виде в текстовом файле ASCII (название: Sequencelisting_ST25.txt; размер: 14333 байта; и дата создания: 6 марта 2017 г.), который был подан вместе с настоящей заявкой, включено в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте.
Предпосылки изобретения
Ожирение представляет собой значительную и растущую проблему здравоохранения во всем мире. Оно связано со многими опасными для жизни заболеваниями, такими как сердечно-сосудистое заболевание, заболевание почек, гипертензия, инсульт, бесплодие, нарушение функции дыхательной системы и диабет 2 типа.
Глюкагон и глюкагоноподобный пептид 1 (GLP-1) происходят из препроглюкагона, полипептидапредшественника из 158 аминокислот, который подвергается процессингу в различных тканях с образованием ряда различных пептидов, происходящих из проглюкагона, в том числе глюкагона, глюкагоноподобного пептида 1 (GLP-1), глюкагоноподобного пептида 2 (GLP-2) и оксинтомодулина (ОХМ), которые вовлечены в широкий спектр физиологических функций, в том числе гомеостаз глюкозы, секрецию инсулина, опорожнение желудка и развитие кишечника, а также регуляцию потребления пищи. Глюкагон представляет собой пептид из 29 аминокислот, который соответствует аминокислотам 33-61 проглюкагона (53-81 препроглюкагона), тогда как GLP-1 вырабатывается в виде пептида из 37 аминокислот, который соответствует аминокислотам 72-108 проглюкагона (92-128 препроглюкагона). Амид GLP-1(7-36) или кислота GLP-1(7-37) являются биологически активными формами GLP-1, которые характеризуются по сути эквивалентной активностью по отношению к рецептору GLP-1.
Глюкагон выделяется поджелудочной железой и взаимодействует с рецептором глюкагона (glucR). Глюкагон оказывает свое действие в печени с повышением уровня глюкозы в крови посредством глюконеогенеза и гликогенолиза. Когда уровень глюкозы начинает снижаться, глюкагон дает сигнал печени расщеплять гликоген и высвобождать глюкозу, что вызывает повышение уровней глюкозы в крови до нормального уровня.
GLP-1 характеризуется отличающимися биологическими активностями в сравнении с глюкагоном. Он секретируется из L-клеток кишечника и связывается с рецептором GLP-1. Его виды активности включают стимуляцию синтеза и секреции инсулина, ингибирование секреции глюкагона и подавление потребления пищи.
Было показано, что как глюкагон, так и GLP-1, действуя в качестве агонистов в отношении их соответствующих рецепторов, являются эффективными в потере веса. Определенные аналоги GLP-1 для лечения ожирения имеются в продаже или находятся на стадии разработки, в том числе, например, лираглутид (VICTOZA® от Novo Nordisk) и эксенатид (Byetta® от Eli Lilly/Amylin). Пептиды, являющиеся агонистами глюкагона/GLP-1, также были раскрыты в WO 2014/091316.
Несмотря на доступность некоторых терапевтических средств для контроля уровня глюкозы в крови ни одно из них в настоящее время не способствует значительной потере веса, что остается существенной неудовлетворенной потребностью для пациентов. Пятьдесят процентов пациентов переходят от монотерапии пероральными лекарственными препаратами для контроля уровня глюкозы (обычно метформином) к началу приема инсулина в течение 10 лет, часто принимая многочисленные пероральные комбинированные терапевтические средства до начала приема инсулина. Применение инсулина усиливает набор веса, что может составлять почти 6 кг в первый год после начала терапии инсулином. Такой набор веса может приводить к повышенной инсулинорезистентности, которая связана с гипертензией, дислипидемией и повышенным риском существенных нежелательных явлений со стороны сердечнососудистой системы. Что касается снижения инсулинорезистентности, значительная потеря веса (>5%) является оптимальным вмешательством для снижения инсулинорезистентности, хотя этого в настоящее время можно достичь посредством интенсивных вмешательств в режим питания и образ жизни и/или бариатрического хирургического вмешательства. Сохраняется потребность в способах введения пептидов, являющихся агонистами GLP-1/глюкагона, людям с применением схем дозирования, которые являются терапевтически эффективными при лечении диабета и ожирения, но не вызывают нежелательных эффектов.
Краткое описание
В данном документе предусмотрены способы предупреждения и лечения ожирения и диабета, а также связанных состояний у пациентов, предусматривающие введение пептидов, являющихся агонистами GLP-1/глюкагона.
В одном случае способ снижения веса тела предусматривает введение субъекту-человеку, нуждающемуся в этом, 50-600 или 100-600 мкг пептида, содержащего аминокислотную последовательность
HX2QGTFTSDX1oSX12X13LX15X16X17Xi8AX2oX2iFX23X24WLX27X28GX3o;
- 1 043848 где X2 представляет собой G или S, X10 представляет собой Y или K, X12 представляет собой K, E, R или S, X13 представляет собой K или Y, X15 представляет собой D или Е, X16 представляет собой S или G, X17 представляет собой Е, R, Q или K, X18 представляет собой R, S или А, Х20 представляет собой R, K или Q, X21 представляет собой D или Е, Х23 представляет собой V или I, X24 представляет собой А или Q, X27 представляет собой Е или V, Х28 представляет собой А или K и Х30 представляет собой G или R (SEQ ID NO: 4).
В одном случае способ снижения содержания жира в организме предусматривает введение субъекту-человеку, нуждающемуся в этом, 50-600 или 100-600 мкг пептида, содержащего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 4.
В одном случае способ лечения ожирения предусматривает введение субъекту-человеку, нуждающемуся в этом, 50-600 или 100-600 мкг пептида, содержащего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 4.
В одном случае способ лечения или предупреждения заболевания или состояния, вызванного или характеризующегося избыточным весом тела, предусматривает введение субъекту-человеку, нуждающемуся в этом, 50-600 или 100-600 мкг пептида, содержащего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 4.
В одном случае способ контроля веса предусматривает введение субъекту-человеку, нуждающемуся в этом, 50-600 или 100-600 мкг пептида, содержащего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 4.
В одном случае способ лечения неалкогольного стеатогепатита (NASH) предусматривает введение субъекту-человеку, нуждающемуся в этом, 50-600 или 100-600 мкг пептида, содержащего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 4.
В одном случае способ усиления окисления липидов предусматривает введение субъекту-человеку, нуждающемуся в этом, 50-600 или 100-600 мкг пептида, содержащего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 4.
В одном случае способ сокращения потребления пищи предусматривает введение субъектучеловеку, нуждающемуся в этом, 50-600 или 100-600 мкг пептида, содержащего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 4.
В одном случае способ снижения уровня глюкозы в плазме крови предусматривает введение субъекту-человеку, нуждающемуся в этом, 50-600 или 100-600 мкг пептида, содержащего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 4.
В одном случае способ улучшения гликемического контроля предусматривает введение субъектучеловеку, нуждающемуся в этом, 50-600 или 100-600 мкг пептида, содержащего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 4.
В одном случае способ достижения гликемического контроля предусматривает введение субъектучеловеку, нуждающемуся в этом, 50-600 или 100-600 мкг пептида, содержащего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 4.
В одном случае способ снижения веса и контроля уровня глюкозы предусматривает введение субъекту-человеку, нуждающемуся в этом, 50-600 или 100-600 мкг пептида, содержащего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 4.
В одном случае у субъекта имеется диабет. В одном случае диабет представляет собой сахарный диабет 2 типа.
В одном случае способ лечения сахарного диабета 2 типа предусматривает введение человеку пептида, содержащего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 4.
В одном случае способ улучшения гликемического контроля у субъекта-человека с сахарным диабетом 2 типа предусматривает введение субъекту 50-600 или 100-600 мкг пептида, содержащего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 4.
В одном случае посредством введения обеспечивается снижение веса тела. В одном случае посредством введения обеспечивается лечение ожирения. В одном случае посредством введения обеспечивается снижение содержания жира в организме.
В одном случае Х2 представляет собой G, Х10 представляет собой K, X12 представляет собой Е, R или S, X13 представляет собой K, X17 представляет собой Е или K, X18 представляет собой S, Х20 представляет собой R, Х27 представляет собой Е или Х28 представляет собой А.
В одном случае Х2 представляет собой G, X10 представляет собой K, X12 представляет собой Е, R или S, X13 представляет собой K, X17 представляет собой Е или K, X18 представляет собой S, Х20 представляет собой R, Х27 представляет собой Е и Х28 представляет собой А.
В одном случае пептид содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 19, состоит по сути из таковой или состоит из таковой.
В одном случае введение предусматривает введение начальной дозы в течение 3-10 дней и второй более высокой дозы после этого.
В одном случае начальную дозу вводят в течение 3-7 дней. В одном случае начальная доза представляет собой 100 мкг пептида. В одном случае вторую дозу вводят в течение по меньшей мере четырех
- 2 043848 дней. В одном случае начальную дозу вводят в течение четырех последовательных дней и вторую дозу вводят в течение по меньшей мере четырех последовательных дней. В одном случае вторая доза составляет 150-200 мкг пептида. В одном случае вторая доза составляет 150 или 200 мкг пептида.
В одном случае введение дополнительно предусматривает введение третьей дозы после второй дозы, где третья доза является более высокой, чем вторая доза. В одном случае начальную дозу вводят в течение 3-10 дней и вторую дозу вводят в течение 3-10 дней. В одном случае начальную дозу вводят в течение 3-7 дней и вторую дозу вводят в течение 3-7 дней. В одном случае начальную дозу вводят в течение четырех последовательных дней, вторую дозу вводят в течение четырех последовательных дней и третью дозу вводят в течение по меньшей мере четырех последовательных дней. В одном случае начальную дозу вводят в течение четырех последовательных дней, вторую дозу вводят в течение семи последовательных дней и третью дозу вводят в течение по меньшей мере четырех последовательных дней. В одном случае третья доза составляет 200-400 мкг пептида. В одном случае третья доза составляет 200, 300 или 400 мкг пептида.
В одном случае начальную дозу, составляющую 100 мкг, вводят в течение четырех дней, вторую дозу, составляющую 150 мкг, вводят в течение четырех дней, и затем третью дозу, составляющую 200 мкг, вводят ежедневно. В одном случае начальную дозу, составляющую 100 мкг, вводят в течение пяти дней, вторую дозу, составляющую 150 мкг, вводят в течение пяти дней, и третью дозу, составляющую 200 мкг, вводят в течение пяти дней, и затем четвертую дозу, составляющую 300 мкг, вводят ежедневно. В одном случае начальную дозу, составляющую 100 мкг, вводят в течение пяти дней, вторую дозу, составляющую 200 мкг, вводят в течение пяти дней, и затем третью дозу, составляющую 300 мкг, вводят ежедневно.
В одном случае вводят 50 мкг пептида. В одном случае вводят 100 мкг пептида. В одном случае вводят 150 мкг пептида. В одном случае вводят 200 мкг пептида. В одном случае вводят 250 мкг пептида. В одном случае вводят 300 мкг пептида. В одном случае вводят 400 мкг пептида.
В одном случае пептид вводят ежедневно. В одном случае пептид вводят один раз в день.
В одном случае пептид вводят в течение по меньшей мере одной недели, в течение по меньшей мере двух недель, в течение по меньшей мере трех недель или в течение по меньшей мере четырех недель.
В одном случае пептид вводят с помощью инъекции. В одном случае введение является подкожным.
В одном случае введение приводит в результате к по меньшей мере 20% снижению площади под кривой зависимости концентрации глюкозы от времени после проведения теста толерантности к пище.
В одном случае уровень глюкозы снижается. В одном случае уровень глюкозы представляет собой уровень глюкозы в плазме крови натощак. В одном случае уровень глюкозы представляет собой постпрандиальный уровень глюкозы после проведения теста толерантности к пище.
В одном случае введение приводит в результате к потере веса на по меньшей мере 1,0 кг, по меньшей мере 1,3 кг или от приблизительно 1,3 кг до приблизительно 2,0 кг. В одном случае вес субъекта снижается на по меньшей мере 3,5 кг или по меньшей мере 5 кг. В одном случае вес субъекта снижается на по меньшей мере 2%, по меньшей мере 4%, по меньшей мере 5% или по меньшей мере 10%. В одном случае вес субъекта снижается на от приблизительно 2% до приблизительно 20%, от приблизительно 2% до приблизительно 25% или от приблизительно 2% до приблизительно 30%.
В одном случае жир представляет собой жир в печени. В одном случае содержание жира в печени снижается на по меньшей мере 20%. В одном случае содержание жира в печени у субъекта снижается на от приблизительно 20% до приблизительно 40%. В одном случае введение приводит в результате к снижению содержания жира в печени на приблизительно одну треть. В одном случае у субъекта снижается объем печени.
В одном случае посредством введения обеспечивается снижение уровней гемоглобина A1c (HbA1c). В одном случае уровень HbA1c у субъекта снижается на по меньшей мере 0,6%. В одном случае уровень HbA1c у субъекта снижается на по меньшей мере 0,9%. В одном случае уровень HbA1c у субъекта снижается на от приблизительно 0,5% до приблизительно 1,5%, от приблизительно 0,5% до приблизительно 2% или от приблизительно 0,5% до приблизительно 3%. В одном случае уровень HbA1c у субъекта снижается до 6,3% или ниже.
В одном случае посредством введения обеспечивается снижение уровней фруктозамина.
В одном случае аппетит субъекта снижается.
В одном случае расход энергии у субъекта повышается.
В одном случае прогрессирование заболевания прекращается. В одном случае прогрессирование заболевания обращается.
В одном случае пептид получен синтетическим способом с помощью твердофазного синтеза.
В одном случае при твердофазном синтезе применяют химическое средство на основе флуоренилметилоксикарбонилхлорида.
В одном случае карбоксильная группа Х30, представляющей собой G или R, в пептиде является немодифицированной. В одном случае карбонильная группа Х30 в пептиде является амидированной.
В одном случае пептид содержит пальмитоиловый фрагмент при К(эпсилон)-группе остатка лизи- 3 043848 на. В одном случае пальмитоиловая группа связана с лизином посредством линкера. В одном случае линкер представляет собой гамма-глутамат. В одном случае пептид содержит стеароиловый или стеаратный фрагмент при N(эпсилон)-груnпе остатка лизина. В одном случае лизиновый остаток представляет собой X10.
В одном случае пептид связывается с рецептором глюкагона человека в анализе сАМР 1 при ЕС50 менее 10000 пМ, менее 5000 пМ, менее 2500 пМ, менее 1000 пМ, менее 900 пМ, менее 800 пМ, менее 700 пМ, менее 600 пМ, менее 500 пМ, менее 400 пМ, менее 300 пМ, менее 200 пМ, менее 100 пМ, менее 50 пМ, менее 25 пМ, менее 20 пМ, менее 15 пМ, менее 10 пМ, менее 5 пМ, менее 4 пМ, менее 3 пМ или менее 2 пМ.
В одном случае пептид связывается с рецептором GLP-1 человека в анализе сАМР 1 при ЕС50 менее 10000 пМ, менее 5000 пМ, менее 2500 пМ, менее 1000 пМ, менее 900 пМ, менее 800 пМ, менее 700 пМ, менее 600 пМ, менее 500 пМ, менее 400 пМ, менее 300 пМ, менее 200 пМ, менее 100 пМ, менее 50 пМ, менее 25 пМ, менее 20 пМ, менее 15 пМ, менее 10 пМ, менее 5 пМ, менее 4 пМ, менее 3 пМ или менее 2 пМ.
В одном случае пептид является агонистом в отношении активности GLP-1, агонистом в отношении активности глюкагона или агонистом в отношении активности как GLP-1, так и глюкагона.
В одном случае пептид связывается как с рецептором глюкагона, так и с рецептором GLP-1, при этом пептид характеризуется в по меньшей мере приблизительно 2, 5 или 10 раз большей активностью по сравнению с природным лигандом в отношении рецептора GLP-1, чем в отношении рецептора глюкагона.
В одном случае пептид дополнительно содержит гетерологичный фрагмент. В одном случае гетерологичный фрагмент представляет собой белок, пептид, домен белка, линкер, органический полимер, неорганический полимер, полиэтиленгликоль (PEG), биотин, альбумин, сывороточный альбумин человека (HSA), участок, отвечающий за связывание HAS с FcRn, антитело, домен антитела, фрагмент антитела, одноцепочечное антитело, доменное антитело, альбумин-связывающий домен, фермент, лиганд, рецептор, связывающий пептид, каркасную структуру, отличную от каркасной структуры на основе FnIII, эпитопную метку, рекомбинантный полипептидный полимер, цитокин, липид или комбинацию двух или более из перечисленных фрагментов.
В одном случае субъект имеет индекс массы тела (BMI), составляющий от 27 до 40 кг/м2. В одном случае субъект имеет BMI, составляющий 30-39,9 кг/м2. В одном случае субъект имеет BMI, составляющий по меньшей мере 40 кг/м2.
В одном случае у субъекта имеется избыточный вес. В одном случае субъект страдает ожирением. В одном случае у субъекта имеется (i) избыточный вес; и (ii) гипертензия, сахарный диабет 2 типа, дислипидемия, сердечно-сосудистое заболевание в анамнезе или их комбинация.
В одном случае у субъекта имеется (i) избыточный вес; и (ii) дисгликемия, гипертензия, дислипидемия, синдром обструктивного апноэ во сне или их комбинация.
В одном случае субъект получает терапию инсулином. В одном случае количество вводимого инсулина снижают. В одном случае терапию инсулином прекращают.
В одном случае субъект получает инсулин, метформин, сульфонилмочевину, ингибитор натрийзависимого котранспортера глюкозы 2 (sglt-2), ингибитор дипептидилпептидазы 4 (DPP-IV), глютазон, ингибитор альфа-глюкозидазы или их комбинацию.
В одном случае период полувыведения пептида составляет от приблизительно 10 ч до приблизительно 12 ч.
В одном случае введение является дополнением к режиму питания и физической нагрузке.
В одном случае пептид содержит SEQ ID NO: 19 и пептид вводят в начальной дозе, составляющей 100 мкг, в течение четырех дней, во второй дозе, составляющей 150 мкг, в течение четырех дней, а затем в дозе, составляющей 200 мкг, ежедневно.
В одном случае пептид содержит SEQ ID NO: 19 и пептид вводят в начальной дозе, составляющей 100 мкг, в течение пяти дней, во второй дозе, составляющей 200 мкг, в течение пяти дней, а затем в дозе, составляющей 300 мкг, ежедневно.
В одном случае пептид содержит SEQ ID NO: 19 и пептид вводят в начальной дозе, составляющей 100 мкг, в течение пяти дней, во второй дозе, составляющей 150 мкг, в течение пяти дней, во второй дозе, составляющей 200 мкг, в течение пяти дней, а затем в дозе, составляющей 300 мкг, ежедневно.
В одном случае у субъекта имеется сахарный диабет 2 типа. В одном случае субъект страдает ожирением. В одном случае у субъекта имеется (i) избыточный вес; и (ii) гипертензия, сахарный диабет 2 типа, дислипидемия, сердечно-сосудистое заболевание в анамнезе или их комбинация.
- 4 043848
В одном случае у субъекта имеется (i) избыточный вес; и (ii) дисгликемия, гипертензия, дислипидемия, синдром обструктивного апноэ во сне или их комбинация.
Краткое описание графических материалов/фигур
На фиг. 1 показано среднее процентное изменение веса тела от нулевого дня у мышей DIO после введения пептида G730, являющегося коагонистом глюкагона/GLP-1, в трех различных дозах по сравнению с обработкой инертной средой и обработкой лираглутидом. Исходный вес тела в различных группах составлял соответственно: инертная среда: 47,4±3,7 г; 10 нмоль/кг G730: 44,5±2,2 г; 20 нмоль/кг G730: 45,9±3,6 г; и 50 нмоль/кг G730: 46,1±2,4 г.
На фиг. 2 показано среднее процентное изменение веса тела от нулевого дня у мышей DIO после введения пептида G797, являющегося коагонистом глюкагона/GLP-1, в трех различных дозах по сравнению с обработкой инертной средой и обработкой лираглутидом. Исходный вес тела в различных группах составлял соответственно: инертная среда: 47,4±3,7 г; 5 нмоль/кг G797: 47,5±1,2 г; 20 нмоль/кг G797: 47,4±2,2 г; и 50 нмоль/кг G797: 47,2±1,8 г.
На фиг. 3 показано среднее процентное изменение веса тела от нулевого дня у мышей DIO после введения пептида G812, являющегося коагонистом глюкагона/GLP-1, в дозе, составляющей 20 нмоль/кг, по сравнению с обработкой инертной средой и обработкой лираглутидом. Исходный вес тела в различных группах составлял соответственно: инертная среда: 47,4±3,7 г; и 20 нмоль/кг G812: 49,2±3,4 г.
Фиг. 4 представляет собой график, на котором сравниваются результаты в отношении изменения веса тела для трех пептидов, являющихся коагонистами глюкагона/GLP-1, которые представлены на фиг. 1, 2 и 3.
На фиг. 5 показано среднее процентное изменение веса тела от нулевого дня у мышей DIO после введения пептида G796, являющегося коагонистом глюкагона/GLP-1, в двух различных дозах по сравнению с обработкой инертной средой и обработкой лираглутидом.
На фиг. 6 показано среднее процентное изменение веса тела от нулевого дня у мышей DIO после введения пептида G865, являющегося коагонистом глюкагона/GLP-1, в двух различных дозах по сравнению с обработкой инертной средой и обработкой лираглутидом.
На фиг. 7 показано среднее процентное изменение веса тела от нулевого дня у мышей DIO после введения пептида G933, являющегося коагонистом глюкагона/GLP-1, в двух различных дозах по сравнению с обработкой инертной средой и обработкой лираглутидом.
Фиг. 8 представляет собой график, на котором сравниваются результаты в отношении изменения веса тела для трех пептидов, являющихся коагонистами глюкагона/GLP-1, которые представлены на фиг. 5, 6 и 7.
На фиг. 9 представлены блок-схемы запланированного и фактического исследования с однократной нарастающей дозой G933.
На фиг. 10 представлено распределение субъектов в исследовании с однократной нарастающей дозой G933.
На фиг. 11 показаны медианные уровни глюкозы у субъектов в исследовании с однократной нарастающей дозой G933.
На фиг. 12 показаны медианные уровни инсулина у субъектов в исследовании с однократной нарастающей дозой G933.
На фиг. 13 представлена блок-схема когорт 1-4 в исследовании с многократными нарастающими дозами G933. MEDI0382 относится к линейному пептиду из 30 аминокислот с последовательностью под SEQ ID NO: 19.
На фиг. 14 показаны средние уровни глюкозы в тесте толерантности к пище у субъектов, получавших лечение с помощью плацебо или 100 мкг G933 в день 7 (когорта 1), плацебо или 150 мкг G933 в день 11 (когорта 2) и плацебо или 200 мкг G933 в день 15 (когорта 3).
На фиг. 15 показано изменение исходных уровней глюкозы натощак у субъектов, получавших лечение с помощью плацебо или G933 в день 7 (когорта 1), плацебо или G933 в день 9 (когорта 3) и плацебо или G933 в день 15 (когорта 3).
На фиг. 16 показано изменение веса от исходного веса в течение исследования в обеих когортах 1 и 3 и в дни 7 и 15 в когортах 1 и 3 соответственно.
На фиг. 17 показана концентрация MEDI0382 в плазме крови после повторного введения доз.
На фиг. 18 показано улучшение контроля уровня глюкозы, как измерено по уровням глюкозы у пациентов, получавших лечение с помощью G933. Пунктирные линии представляют уровни глюкозы, наблюдаемые на исходном уровне (день 1), а сплошные линии представляют уровни глюкозы, наблюдаемые в день 41.
На фиг. 19 показано улучшение контроля уровня глюкозы, как измерено по уровням HbA1c у пациентов, получавших лечение с помощью G933.
На фиг. 20 показано снижение абсолютного значения веса у пациентов, получавших лечение с по- 5 043848 мощью G933 (на данной фигуре G933 обозначен как MEDI или 0382; Plac обозначает плацебо).
На фиг. 21 показано снижение процентного значения веса у пациентов, получавших лечение с помощью G933 (на данной фигуре MEDI обозначает MEDI0382).
На фиг. 22 показана оценка снижения содержания жира в печени у пациентов, получавших лечение с помощью G933. Представлены репрезентативные изображения от отдельных субъектов.
На фиг. 23 показана частота тошноты и рвоты, наблюдаемая у пациентов, получавших лечение с помощью G933.
На фиг. 24 представлена блок-схема когорт 5 и 6 в исследовании с многократными нарастающими дозами G933.
На фиг. 25 показано улучшение контроля уровня глюкозы, как измерено по уровням глюкозы у пациентов когорты 5, получавших лечение с помощью G933, по сравнению с плацебо. Пунктирные линии представляют уровни глюкозы, наблюдаемые на исходном уровне (день 1), а сплошные линии представляют уровни глюкозы, наблюдаемые в день 17 (на данной фигуре G933 обозначен как MEDI).
На фиг. 26 показано улучшение контроля уровня глюкозы, как измерено по уровням глюкозы у пациентов когорты 6, получавших лечение с помощью G933, по сравнению с плацебо. Пунктирные линии представляют уровни глюкозы, наблюдаемые на исходном уровне (день 1), а сплошные линии представляют уровни глюкозы, наблюдаемые в день 17 (на данной фигуре G933 обозначен как MEDI).
На фиг. 27 показано процентное изменение AUC глюкозы от исходного уровня во всех когортах.
На фиг. 28 показано улучшение в отношении уровней глюкозы натощак в когортах 5 и 6 (на данной фигуре G933 обозначен как MEDI).
На фиг. 29 показано изменение веса от исходного уровня в когортах 5 и 6 (на данной фигуре G933 обозначен как MEDI).
На фиг. 30 показана потеря веса и изменение уровня глюкозы во всех когортах.
На фиг. 31 показана концентрация G933 в плазме крови в когорте 5 в дни 16 и 22 и в когорте 6 в дни 11 и 17.
Подробное описание
Определения.
Во всем настоящем раскрытии форма единственного числа объекта относится к одному или нескольким таким объектам; например, подразумевается, что полинуклеотид представляет собой один или несколько полинуклеотидов. В связи с этим формы единственного числа, термины один или несколько и по меньшей мере один могут использоваться в данном документе взаимозаменяемо.
Кроме того, термин и/или, в случаях когда он используется в данном документе, следует рассматривать как конкретное раскрытие каждого из двух указанных признаков или компонентов с другим или без другого. Таким образом, подразумевается, что термин и/или, используемый в данном документе в такой фразе, как А и/или В, включает А и В, А или В, А (отдельно) и В (отдельно). Аналогично подразумевается, что термин и/или, используемый в такой фразе, как А, В и/или С, охватывает каждый из следующих аспектов: А, В и С; А, В или С; А или С; А или В; В или С; А и С; А и В; В и С; А (отдельно); В (отдельно) и С (отдельно).
Следует понимать, что какие бы аспекты ни описывались в данном документе формулировкой содержащий, другие аналогичные аспекты, описываемые терминами состоящий из и/или состоящий по сути из, также предусмотрены. Пептид, содержащий конкретную аминокислотную последовательность, относится к пептиду, содержащему аминокислотную последовательность, где пептид может содержать дополнительные аминокислоты или другие модификации аминокислотной последовательности или не содержать их. Пептид, состоящий из конкретной аминокислотной последовательности, относится к пептиду, содержащему только данную аминокислотную последовательность, а не дополнительные аминокислоты или другие модификации аминокислотной последовательности. Пептид, содержащий аминокислотную последовательность, состоящую из конкретной аминокислотной последовательности, относится к пептиду, содержащему аминокислотную последовательность, а не дополнительные аминокислоты; однако пептид может содержать другие модификации аминокислотной последовательности (например, ацильный фрагмент или пальмитоильный фрагмент).
Если не определено иное, то все используемые в данном документе технические и научные термины имеют то же значение, которое обычно понимает средний специалист в области техники, к которой относится настоящее изобретение. Например, Concise Dictionary of Biomedicine and Molecular Biology, Juo, Pei-Show, 2nd ed., 2002, CRC Press; The Dictionary of Cell and Molecular Biology, 3rd ed., 1999, Academic Press и Oxford Dictionary Of Biochemistry And Molecular Biology, Revised, 2000, Oxford University Press, обеспечивают специалиста общим словарем многих терминов, используемых в настоящем изобретении. Единицы измерения, приставки и символы указаны в их форме, принятой согласно Международной системе единиц (SI). Числовые диапазоны включают числа, определяющие диапазон. Если не указано иное, то аминокислотные последовательности записаны слева направо в направлении от амино- к карбокси-концу. Приведенные в данном документе заголовки не ограничивают различные аспекты настоящего изобретения, которые могут обеспечиваться ссылкой на описание в целом. Соответственно термины, определяемые непосредственно ниже, более полно определены посредством ссылки на описание во
- 6 043848 всей его полноте.
Подразумевается, что используемый в данном документе термин полипептид охватывает полипептид в единственном числе, а также полипептиды во множественном числе, и содержит любую цепь или цепи из двух или более аминокислот. Таким образом, используемые в данном документе термины пептид, пептидная субъединица, белок, аминокислотная цепь, аминокислотная последовательность или любой другой термин, используемый для обозначения цепи или цепей из двух или более аминокислот, включены в определение полипептид, несмотря на то что каждый из этих терминов может иметь более конкретное значение. Термин полипептид можно использовать вместо любых из этих терминов или взаимозаменяемо с таковыми. Термин дополнительно подразумевает полипептиды, которые подверглись посттрансляционным или постсинтетическим модификациям, например, гликозилированию, ацетилированию, фосфорилированию, амидированию, дериватизации с помощью известных защитных/блокирующих групп, протеолитическому расщеплению или модификации с помощью не встречающихся в природе аминокислот.
Более конкретно, термин пептид, используемый в данном документе, охватывает полноразмерные пептиды и их фрагменты, варианты или производные, например, пептид, являющийся агонистом GLP-1/глюкагона (например, длиной в 29, 30 или 31 аминокислоту). Пептид, раскрытый в данном документе, например, пептид, являющийся агонистом GLP-1/глюкагона, может представлять собой часть слитого полипептида, содержащего дополнительные компоненты, такие как, например, Fc-домен или домен альбумина, в целях повышения периода полувыведения. Пептид, описанный в данном документе, также может быть дериватизирован с помощью ряда различных способов.
Термин выделенный относится к состоянию, в котором пептиды или нуклеиновые кислоты будут в целом соответствовать настоящему изобретению. Выделенные пептиды и выделенные нуклеиновые кислоты не будут содержать или фактически не будут содержать материал, с которым они связаны в природных условиях, как, например, другие пептиды или нуклеиновые кислоты, с которыми они встречаются в их природном окружении или среде, в которой их получают (например, клеточной культуре), если такое получение осуществляют с помощью технологии рекомбинантной ДНК, осуществляемой на практике in vitro или in vivo. Пептиды и нуклеиновую кислоту можно составлять с разбавителями или вспомогательными веществами и оставлять выделенными для практических целей - например, пептиды, как правило, будут смешивать с желатином или другими носителями, в случае применения для покрытия микротитрационных планшетов для применения в иммунологических анализах, или будут смешивать с фармацевтически приемлемыми носителями или разбавителями при применении в диагностике или терапии.
Рекомбинантный пептид относится к пептиду, полученному посредством технологии рекомбинантной ДНК. Полученные рекомбинантным путем пептиды, экспрессируемые в клетках-хозяевах, считаются выделенными для целей настоящего изобретения, поскольку представляют собой нативные или рекомбинантные полипептиды, которые были отделены, фракционированы или частично или в значительной степени очищены с помощью любой подходящей методики.
Термины фрагмент, аналог, производное или вариант в контексте пептида, являющегося агонистом GLP-1/глюкагона, подразумевают любой пептид, у которого сохраняется по меньшей мере некоторая необходимая активность, например, связывание с рецепторами глюкагона и/или GLP-1. Предусмотренные в данном документе фрагменты пептидов, являющихся агонистами GLP-1/глюкагона, включают фрагменты, подвергнутые протеолитическому расщеплению, фрагменты, подвергнутые делеции, которые характеризуются необходимыми свойствами в ходе экспрессии, очистки и/или введения субъекту.
Термин вариант, используемый в данном документе, относится к пептиду, который отличается от упомянутого пептида вследствие аминокислотных замен, делеций, вставок и/или модификаций. Варианты можно получать с применением известных из уровня техники методик мутагенеза. Варианты могут также или в качестве альтернативы содержать другие модификации - например, пептид можно конъюгировать или связывать, например, сливать с гетерологичной аминокислотной последовательностью или другим фрагментом, например, для повышения периода полувыведения, растворимости или стабильности. Примеры фрагментов, подлежащих конъюгации или связыванию с пептидом, предусмотренным в данном документе, включают без ограничения альбумин, Fc-область иммуноглобулина, полиэтиленгликоль (PEG) и т.п. Пептид может быть также конъюгирован или получен в виде связанного с линкером или другой последовательностью для облегчения синтеза, очистки или идентификации пептида (например, 6-His) или для усиления связывания полипептида с твердой подложкой.
Термин идентичность последовательности, используемый в данном документе, относится к связи между двумя или более полинуклеотидными последовательностями или между двумя или более полипептидными последовательностями. Если положение в одной последовательности занято одним и тем же основанием нуклеиновой кислоты или аминокислотой, что и в соответствующем положении в сравниваемой последовательности, то последовательности в этом положении считаются идентичными. Процентное значение идентичности последовательностей рассчитывают путем определения числа положений, в которых идентичное основание нуклеиновой кислоты или аминокислота находится в обеих после
- 7 043848 довательностях, с получением числа идентичных положений. Число идентичных положений затем делят на общее число положений в окне сравнения и умножают на 100 с получением процентного значения идентичности последовательностей. Процентное значение идентичности последовательностей определяют путем сравнения двух последовательностей, подвергнутых оптимальному выравниванию, в окне сравнения. Чтобы произвести оптимальное выравнивание последовательностей для сравнения, часть последовательности полинуклеотида или полипептида в окне сравнения может содержать добавления или делеции, называемые гэпами, в то время как эталонная последовательность остается неизменной. Оптимальное выравнивание представляет собой такое выравнивание, в котором даже при наличии гэпов образуется наибольшее возможное число идентичных положений между эталонной и сравниваемой последовательностями. Процентное значение идентичности последовательностей между двумя последовательностями можно определить с помощью версии программы BLAST 2 Sequences, которая была доступна из Национального центра биотехнологической информации по состоянию на 1 сентября 2004 г., при этом программа включает в себя программы BLASTN (для сравнения нуклеотидных последовательностей) и BLASTP (для сравнения полипептидных последовательностей), при этом в основе данных программ лежит алгоритм Карлина-Альтшуля (Proc. Natl. Acad. Sci., USA, 90(12):5873-5877, 1993). При использовании BLAST 2 Sequences для длины слова (3), штрафа за открытие гэпа (11), штрафа за продолжение гэпа (1), величины максимального продления с использованием гэпов (50), ожидаемого значения (10) и каких-либо других необходимых параметров, включая, без ограничения, опцию matrix, можно применять параметры, которые были параметрами по умолчанию по состоянию на 1 сентября 2004 года. Термины композиция или фармацевтическая композиция относятся к композициям, содержащим предусмотренный в данном документе пептид, являющийся агонистом GLP1/глюкагона, вместе, например, с фармацевтически приемлемыми носителями, наполнителями или разбавителями, для введения субъекту, нуждающемуся в лечении, например, субъекту-человеку, подлежащему лечению от ожирения.
Термин фармацевтически приемлемый относится к композициям, которые по результатам тщательной медицинской оценки являются подходящими для контакта с тканями людей и животных без чрезмерной токсичности или других осложнений в соответствии с разумным соотношением польза/риск.
Эффективное количество представляет собой такое количество предусмотренного в данном документе пептида, являющегося агонистом GLP-1/глюкагона, введение которого субъекту, либо в однократной дозе, либо в виде части серии доз, является эффективным для лечения, например, лечения ожирения. Количество является эффективным, например, если его введение приводит в результате к одному или нескольким из потери веса или поддержания веса (например, предотвращения набора веса), снижения содержания жира в организме, предупреждения или модуляции гипогликемии, предупреждения или модуляции гипергликемии, стимуляции синтеза инсулина или сокращения потребления пищи. Данное количество может представлять собой фиксированную дозу для всех субъектов, подлежащих лечению, или может меняться в зависимости от веса, состояния здоровья и физического состояния субъекта, подлежащего лечению, необходимой степени потери веса или поддержания веса, состава пептида, профессиональной оценки медицинского случая и других значимых факторов.
Термин субъект означает любого субъекта, в частности субъекта-млекопитающего, нуждающегося в лечении с помощью предусмотренного в данном документе пептида, являющегося агонистом GLP1/глюкагона. Субъекты-млекопитающие включают без ограничения людей, собак, кошек, морских свинок, кроликов, крыс, мышей, лошадей, крупный рогатый скот, медведей, коров, человекообразных обезьян, обезьян, орангутанов и шимпанзе и т.д. В одном варианте осуществления субъектом является субъект-человек. Используемый в данном документе термин субъект, нуждающийся в этом относится к индивидууму, для которого целесообразным является лечение, например, к субъекту, страдающему ожирением, или субъекту, склонному к ожирению, для которого целесообразным является содействие потере веса или снижению содержания жира в организме, поддержание веса или содержания жира в организме или предупреждение или сведение к минимуму набора веса в течение определенного периода времени.
Такие термины, как осуществление лечения, или лечение, или лечить, относятся к терапевтическим мерам, с помощью которых излечивают диагностированное патологическое состояние или нарушение и/или останавливают его прогрессирование. Такие термины, как предупреждение, относятся к профилактическим или предупредительным мерам, с помощью которых предупреждают и/или замедляют развитие целевого патологического состояния или нарушения. Таким образом, нуждающиеся в лечении включают тех, у кого уже имеется заболевание или состояние. Нуждающиеся в предупреждении включают тех, кто склонен к развитию заболевания или состояния, и тех, у кого необходимо предупредить заболевание или состояние. Например, фраза лечение пациента, у которого имеется заболевание или состояние, вызванное или характеризующееся избыточным весом тела, относится к снижению тяжести заболевания или состояния до такой степени, что субъект больше не страдает от дискомфорта и/или вызванной им измененной функции. Фраза предупреждение заболевания или состояния, вызванного или характеризующегося избыточным весом тела, относится к снижению вероятности возникновения заболевания или состояния и/или снижению частоты возникновения заболевания или состояния (например, относительному снижению частоты возникновения по сравнению с пациентами, не получавшими
- 8 043848 лечение).
Такие термины, как снижение тяжести, относятся к терапевтическим мерам, с помощью которых замедляют или ослабляют симптомы диагностированного патологического состояния или нарушения. Например, фраза снижение тяжести заболевания или состояния, вызванного или характеризующегося избыточным весом тела, относится к снижению тяжести заболевания или состояния (например, снижению веса по сравнению с пациентами, не получавшими лечение, или повышению контроля уровня глюкозы).
Как используется в данном документе, пептид, являющийся агонистом GLP-1/глюкагона представляет собой химерный пептид, который характеризуется активностью в отношении рецептора глюкагона, составляющей по меньшей мере приблизительно 1, 5, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 95% или более по сравнению с нативным глюкагоном, и также характеризуется активностью в отношении рецептора GLP-1, составляющей по меньшей мере приблизительно 1, 5, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 95% или более по сравнению с нативным GLP-1, в условиях анализа 1.
Используемый в данном документе термин нативный глюкагон относится к встречающемуся в природе глюкагону, например глюкагону человека, содержащему последовательность под SEQ ID NO: 1. Термин нативный GLP-1 относится к встречающемуся в природе GLP-1, например GLP-1 человека, и представляет собой общий термин, который охватывает, например, амид GLP-1(7-36) (SEQ ID NO: 2), кислоту GLP-1(7-37) (SEQ ID NO: 3) или смесь этих двух соединений. Подразумевается, что используемая в данном документе общая ссылка на глюкагон или GLP-1 в отсутствие любого дополнительного обозначения означает соответственно нативный глюкагон человека или нативный GLP-1 человека. Если не указано иное, глюкагон относится к глюкагону человека, и GLP-1 относится к GLP-1 человека.
Пептиды, являющиеся агонистами GLP-1/глюкагона.
В данном документе предусмотрены пептиды, которые связываются как с рецептором глюкагона, так и с рецептором GLP-1. Иллюстративные пептиды предусмотрены в WO 2014/091316, который включен в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте. В определенных вариантах осуществления пептид представляет собой MEDI0382, т.е. линейный пептид из 30 аминокислот с последовательностью под SEQ ID NO: 19, которая содержит гамма-глутаматный линкер и дериватизацию пальмитоиловой группой по остатку 10. В определенных вариантах осуществления пептиды, предусмотренные в данном документе, являются коагонистами активности глюкагона и GLP-1. Такие пептиды обозначаются в данном документе как пептиды, являющиеся агонистами GLP-1/глюкагона. Предусмотренные в данном документе пептиды, являющиеся агонистами GLP-1/глюкагона, характеризуются активностями GLP-1 и глюкагона в оптимальных соотношениях для содействия потере веса, предупреждению набора веса или поддержанию необходимого веса тела, а также характеризуются оптимальной растворимостью, способностью составления и стабильностью. В определенных вариантах осуществления предусмотренные в данном документе пептиды, являющиеся агонистами GLP-1/глюкагона, являются активными в отношении рецепторов GLP1 человека и глюкагона человека, в определенных вариантах осуществления относительная активность по сравнению с природным лигандом в отношении рецептора GLP-1 составляет в 1, 2, 5, 8, 10, 15, 20 или 25 раз больше, чем в отношении рецептора глюкагона.
В определенных вариантах осуществления раскрытые пептиды, являющиеся агонистами GLP-1/глюкагона, характеризуются необходимыми специфическими активностями в отношении рецепторов глюкагона и GLP-1 и характеризуются необходимыми относительными специфическими активностями для содействия потере веса. В определенных вариантах осуществления раскрытые пептиды, являющиеся агонистами GLP-1/глюкагона, характеризуются специфическими активностями в отношении рецептора GLP-1 in vitro, показанными с помощью ЕС50 в анализе сАМР 1 (см. пример 2), составляющей менее 10000 пМ, менее 5000 пМ, менее 2500 пМ, менее 1000 пМ, менее 900 пМ, менее 800 пМ, менее 700 пМ, менее 600 пМ, менее 500 пМ, менее 400 пМ, менее 300 пМ, менее 200 пМ, менее 100 пМ, менее 50 пМ, менее 25 пМ, менее 20 пМ, менее 15 пМ, менее 10 пМ, менее 5 пМ, менее 4 пМ, менее 3 пМ или менее 2 пМ. В определенных вариантах осуществления раскрытые пептиды, являющиеся агонистами GLP-1/глюкагона, характеризуются специфическими активностями в отношении рецептора GLP-1 in vitro, показанными с помощью ЕС50 в анализе сАМР с 4,4% сывороточного альбумина человека (анализ 2, см. пример 2), составляющей менее 10000 пМ, менее 5000 пМ, менее 2500 пМ, менее 1000 пМ, менее 900 пМ, менее 800 пМ, менее 700 пМ, менее 600 пМ, менее 500 пМ, менее 400 пМ, менее 300 пМ, менее 200 пМ, менее 100 пМ, менее 50 пМ, менее 25 пМ, менее 20 пМ, менее 15 пМ, менее 10 пМ, менее 5 пМ, менее 4 пМ, менее 3 пМ или менее 2 пМ. В определенных вариантах осуществления раскрытые пептиды, являющиеся агонистами GLP-1/глюкагона, характеризуются специфическими активностями в отношении рецептора глюкагона in vitro, показанными с помощью ЕС50 в анализе сАМР 1 (см. пример 2), составляющей менее 10000 пМ, менее 5000 пМ, менее 2500 пМ, менее 1000 пМ, менее 900 пМ, менее 800 пМ, менее 700 пМ, менее 600 пМ, менее 500 пМ, менее 400 пМ, менее 300 пМ, менее 200 пМ, менее 100 пМ, менее 50 пМ, менее 25 пМ, менее 20 пМ, менее 15 пМ, менее 10 пМ, менее 5 пМ, менее 4 пМ, менее 3 пМ или менее 2 пМ. В определенных вариантах осуществления раскрытые пептиды, являющиеся агонистами GLP-1/глюкагона, характеризуются специфическими активностями в отношении рецептора глюкагона in vitro, показанными с помощью ЕС50 в анализе сАМР с 4,4% сывороточного альбумина че
- 9 043848 ловека (анализ 2, см. пример 2), составляющей менее 10000 пМ, менее 5000 пМ, менее 2500 пМ, менее 1000 пМ, менее 900 пМ, менее 800 пМ, менее 700 пМ, менее 600 пМ, менее 500 пМ, менее 400 пМ, менее 300 пМ, менее 200 пМ, менее 100 пМ, менее 50 пМ, менее 25 пМ, менее 20 пМ, менее 15 пМ, менее 10 пМ, менее 5 пМ, менее 4 пМ, менее 3 пМ или менее 2 пМ. В определенных вариантах осуществления раскрытые пептиды, являющиеся агонистами GLP-1/глюкагона, характеризуются относительными соотношениями специфической активности в отношении GLP1-R/glucR по сравнению с нативными лигандами в диапазоне от приблизительно 0,01 до 0,50, например, от приблизительно 0,02 до 0,30, например, приблизительно 0,02, 0,03, 0,04, 0,05, 0,06, 0,07, 0,08, 0,09, 0,10, 0,11. 0,12, 0,13, 0,14, 0,15, 0,16, 0,17, 0,18, 0,19, 0,20, 0,21, 0,22, 0,23, 0,24, 0,25, 0,26, 0,27, 0,28 или 0,30 при применении анализа 2.
В определенных вариантах осуществления раскрытые пептиды, являющиеся агонистами GLP1/глюкагона, характеризуются специфическими активностями в отношении глюкозозависимого инсулинотропного пептида (желудочного ингибиторного пептида) (GIPR) in vitro, показанными с помощью ЕС50 в анализе сАМР 1 (см. пример 2), составляющей менее 10000 пМ, менее 5000 пМ, менее 2500 пМ, менее 1000 пМ, менее 900 пМ, менее 800 пМ, менее 700 пМ, менее 600 пМ, менее 500 пМ, менее 400 пМ, менее 300 пМ, менее 200 пМ, менее 100 пМ, менее 50 пМ, менее 25 пМ, менее 20 пМ, менее 15 пМ, менее 10 пМ, менее 5 пМ, менее 4 пМ, менее 3 пМ или менее 2 пМ. В определенных вариантах осуществления раскрытые пептиды, являющиеся агонистами GLP-1/глюкагона, характеризуются специфическими активностями в отношении рецептора GIPR in vitro, показанными с помощью ЕС50 в анализе сАМР с 4,4% сывороточного альбумина человека (анализ 2, см. пример 2), составляющей менее 10000 пМ, менее 5000 пМ, менее 2500 пМ, менее 1000 пМ, менее 900 пМ, менее 800 пМ, менее 700 пМ, менее 600 пМ, менее 500 пМ, менее 400 пМ, менее 300 пМ, менее 200 пМ, менее 100 пМ, менее 50 пМ, менее 25 пМ, менее 20 пМ, менее 15 пМ, менее 10 пМ, менее 5 пМ, менее 4 пМ, менее 3 пМ или менее 2 пМ. В определенных вариантах осуществления предусмотренные в данном документе пептиды, являющиеся агонистами GLP-1/глюкагона, характеризуются одним или несколькими критериями из приемлемой растворимости, простоты составления, стабильности в плазме крови и улучшенных фармакокинетических свойств. В определенных вариантах осуществления раскрытые пептиды, являющиеся агонистами GLP1/глюкагона, являются растворимыми в стандартных буферах в пределах широкого диапазона значений pH. В определенных вариантах осуществления пептиды, являющиеся агонистами GLP-1/глюкагона, являются растворимыми в обычных буферных растворах при концентрации не более 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 мг/мл или более, в буферных системах и при диапазоне значений ионной силы, например, от 0,25 до 150 мМ, в том числе без ограничения фосфатном буфере, Tris-буфере, глутаматном буфере, ацетатном буфере, сукцинатном буфере или гистидиновом буфере. Иллюстративные буферы включают 100 мМ глутаматный буфер с pH 4,5, 100 мМ ацетатный буфер с pH 5, 100 мМ сукцинатный буфер с pH 5, 100 мМ фосфатный буфер с pH 6, 100 мМ гистидиновый буфер с pH 6, 100 мМ фосфатный буфер с pH 6,5, 100 мМ фосфатный буфер с pH 7,0, 100 мМ гистидиновый буфер с pH 7,0, 100 мМ фосфатный буфер с pH 7,5, 100 мМ Tris-буфер с pH 7,5 и 100 мМ Tris-буфер с pH 8,0. В определенных вариантах осуществления раскрытые пептиды, являющиеся агонистами GLP-1/глюкагона, являются растворимыми в стандартных буферах при 0,8 мг/мл в пределах диапазона значений pH, например, от pH 4,0 до pH 8,0, например, при значениях pH, составляющих 4,0, 4,5, 5,0, 5,5, 6,0, 6,5, 7,0, 7,5, 8,0 или 8,5. В определенных вариантах осуществления раскрытые пептиды, являющиеся агонистами GLP-1/глюкагона, являются растворимыми в стандартных буферах со значениями pH от 4,5 до 8,0, от 5,0 до 8,0, от 5,5 до 8,0, от 6,0 до 8,0, от 6,5 до 8,0, от 7,0 до 8,0, от 4,5 до 8,5, от 5,5 до 8,5, от 5,5 до 8,5, от 6,0 до 8,5, от 6,5 до 8,5 или от 7,0 до 8,5.
В определенных вариантах осуществления раскрытые пептиды, являющиеся агонистами GLP-1/глюкагона, могут быть составлены в стандартные фармацевтические составы. Иллюстративные составы включают без ограничения: 0,1 М Tris с pH 7,5, 150 мМ маннита, конечное значение pH состава 7,2; 0,05 М Tris, 50 мМ аргинина/пролина, конечное значение pH состава 8,0; или натрий-фосфатный буфер (pH 8)/1,85% вес./об., пропиленгликоля, конечное значение pH состава 7,0. В определенных вариантах осуществления раскрытые пептиды, являющиеся агонистами GLP-1/глюкагона, являются растворимыми в этих или других составах при концентрации не более 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 мг/мл или более.
В определенных вариантах осуществления раскрытые пептиды, являющиеся агонистами GLP1/глюкагона, являются приемлемо стабильными в сыворотке крови или плазме крови. Обычные продукты распада глюкагона или GLP-1 включают продукты с массой +1 (кислоту) и продукты расщепления под действием DPP IV. Продукты с массой +1 могут образовываться в результате деамидирования на амидных группах глутамата или на С-конце. Продукты расщепления образуются в результате действия протеазы DPP IV в плазме крови. В определенных вариантах осуществления раскрытые пептиды, являющиеся агонистами GLP-1/глюкагона, остаются стабильными в плазме крови при уровнях вплоть до 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90 или 100% через 24 ч в плазме крови при 37°С.
В данном документе предусмотрен пептид, являющийся агонистом GLP-1/глюкагона, содержащий аминокислотную последовательность
HX2QGTFTSDX10SX12X13LX15X16X17X18AX20X21FX23X24WLX27X28GX30;
- 10 043848 где Х2 представляет собой G или S, X10 представляет собой Y или K, Х12 представляет собой K, Е, R или S, X13 представляет собой K или Y, X15 представляет собой D или Е, Х16 представляет собой S или G, X17 представляет собой Е, R, Q или K, X18 представляет собой R, S или А, Х20 представляет собой R, K или Q, X21 представляет собой D или Е, Х23 представляет собой V или I, X24 представляет собой А или Q, X27 представляет собой Е или V, Х28 представляет собой А или K и Х30 представляет собой G или R (SEQ ID NO: 4). В определенных вариантах осуществления предусмотрен выделенный пептид, показанный выше (SEQ ID NO: 4), где Х2 представляет собой G, X10 представляет собой K, Х12 представляет собой Е, R или S, X13 представляет собой K, X17 представляет собой Е или K, X18 представляет собой S, X20 представляет собой R, X27 представляет собой Е и/или Х28 представляет собой А. В определенных вариантах осуществления предусмотрен выделенный пептид, показанный выше (SEQ ID NO: 4), где Х10 представляет собой K, Х12 представляет собой Е, X17 представляет собой Е, Х20 представляет собой R, X27 представляет собой Е и/или Х28 представляет собой А.
В определенных вариантах осуществления предусмотрен выделенный пептид, показанный выше, где Х2 представляет собой S, X10 представляет собой Y или K, Х12 представляет собой K, Е, R или S, X13 представляет собой К или Y, X15 представляет собой D, X16 представляет собой S, X17 представляет собой Е, R, Q или K, X18 представляет собой R, S или А, Х20 представляет собой R, X21 представляет собой D, X23 представляет собой V, Х24 представляет собой А, Х27 представляет собой Е или V, Х28 представляет собой А и X30 представляет собой G (SEQ ID NO: 5). В определенных вариантах осуществления предусмотрен выделенный пептид, показанный выше, где Х2 представляет собой S, X10 представляет собой Y или K, Х12 представляет собой K, Е, R или S, X13 представляет собой K или Y, X15 представляет собой D, X16 представляет собой S, если X17 представляет собой Е, и X18 представляет собой R, или если X17 представляет собой R, и X18 представляет собой S, то Х20 представляет собой R, X21 представляет собой D, X23 представляет собой V, Х24 представляет собой А, Х27 представляет собой Е или V, Х28 представляет собой А и X30 представляет собой G (SEQ ID NO: 6 и SEQ ID NO: 7 соответственно). В определенных вариантах осуществления предусмотрен выделенный пептид, показанный выше, где Х2 представляет собой S, X10 представляет собой Y, X12 представляет собой K, Х13 представляет собой K, X15 представляет собой D, X16 представляет собой S, если X17 представляет собой Е, и X18 представляет собой R, или если Х17 представляет собой R, и X18 представляет собой S, то Х20 представляет собой R, X21 представляет собой D, X23 представляет собой V, Х24 представляет собой А, Х27 представляет собой V, Х28 представляет собой А и X30 представляет собой G (SEQ ID NO: 8 и SEQ ID NO: 9 соответственно). В определенных вариантах осуществления предусмотрен выделенный пептид, показанный выше, где Х2 представляет собой S, X10 представляет собой K, Х12 представляет собой K, Е, R или S, X13 представляет собой Y, X15 представляет собой D, X16 представляет собой S, если X17 представляет собой Е, и X18 представляет собой R, и если X17 представляет собой R, и X18 представляет собой S, X20 представляет собой R, X21 представляет собой D, X23 представляет собой V, Х24 представляет собой А, Х27 представляет собой Е, Х28 представляет собой А и X30 представляет собой G (SEQ ID NO: 10 и SEQ ID NO: 11 соответственно). В определенных вариантах осуществления предусмотрен выделенный пептид, показанный выше, где Х2 представляет собой S, X10 представляет собой K, X12 представляет собой Е, X13 представляет собой Y, X15 представляет собой D, X16 представляет собой S, если X17 представляет собой Е, и X18 представляет собой R, или если Х17 представляет собой R, и Х18 представляет собой S, X20 представляет собой R, X21 представляет собой D, X23 представляет собой V, Х24 представляет собой А, Х27 представляет собой Е, Х28 представляет собой А и X30 представляет собой G (SEQ ID NO: 12 и SEQ ID NO: 13 соответственно). В определенных вариантах осуществления предусмотрен выделенный пептид, показанный выше, где Х2 представляет собой S, X10 представляет собой K, X12 представляет собой R, X13 представляет собой Y, X15 представляет собой D, X16 представляет собой S, если X17 представляет собой Е, и X18 представляет собой R, или если X17 представляет собой R, и X18 представляет собой S, X20 представляет собой R, X21 представляет собой D, X23 представляет собой V, Х24 представляет собой А, Х27 представляет собой Е, Х28 представляет собой А и X30 представляет собой G (SEQ ID NO: 14 и SEQ ID NO: 15 соответственно).
Предусмотренные в данном документе пептиды, являющиеся агонистами GLP-1/глюкагона, включают без ограничения G730 (SEQ ID NO: 16), G797 (SEQ ID NO: 17), G849 (SEQ ID NO: 18), G933 (SEQ ID NO: 19), G865 (SEQ ID NO: 20), G796 (SEQ ID NO: 21), G812 (SEQ ID NO: 22) и G380 (SEQ ID NO: 23). Данные пептиды, являющиеся агонистами GLP-1/глюкагона, перечислены в табл. 1.
- 11 043848
Таблица 1
Последовательности пептидов, являющихся агонистами GLP-1/глюкагона
Пептид | Последовательность | SEQ ID NO: : 16 |
G730 | : HSQGT FTSDY SKXLD SERAR DFVAW LVAGG-амид Х13 = K(gE-palm) | 17 |
G797 | <HSQGT FTSDX SEYLD SERAR DFVAW LEAGG-амид X10 = K(gE-palm) | 18 |
G849 | HSQGT FTSDX SRYLD SRSAR DFVAW LEAGG-амид X10 = K(gE-palm) | ; 19 |
G933 | HSQGT FTSDX SEYLD SERAR DFVAW LEAGG-кислота X10 = K(gE-palm) | ! 20 |
G865 | HSQGT FTSDX SSYLD SRSAR DFVAW LEAGG-амид X10 = K(gE-palm) | 21 |
G796 | > HSQGT FTSDX SSYLD SRRAR DFVAW LEAGG-амид X10 = K(gE-palm) | 22 |
G812 | HSQGT FTSDX SKYLE GQAAK EFIAW LEKGR-амид X10 = K(gE-palm) | > 23 |
G380 | ; HGQGT FTSDY SKYLD SXRAQ DFVQW LVAGG-амид X17 = K(gE-palm) | ! 24 |
G931 | HSQGT FTSDY SKXLD SERAR DFVAW LVAGG-кислота X13 = K(gE-palm) | 25 |
G934 | HSQGT FTSDX SKYLE GQAAK EFIAW LEKGR-кислота X10 = K(gE-palm) | 26 |
G973 | '< HSQGT FTSDX SSYLD SRSAR DFVAW LEAGG-кислота X10 = K(gE-palm) | ; SEQ ID ; NO: 2 > (амид 736)/SEQ ID NO :3 : (кислота |
GLP1 | HAEGT FTSDV SSYLE GQAAK EFIAW LVKGR | i 7-37) SEQ ID |
Глюкагон | HSQGT FTSDY SKYLD SRRAQ DFVQW LMNT | NO: 1 |
K(gE-Palm)=nn3HH с пальмитоиловой группой, конъюгированной с азотом в положении эпсилон посредством линкера на основе гамма-глутаминовой кислоты.
В определенных вариантах осуществления выделенный пептид представляет собой G933 (SEQ ID NO: 19).
Оба пептида G797 и G933 имеют остаток глутамата в положении 12 и сохраняют устойчивую активность в отношении рецепторов как глюкагона, так и GLP-1, как показано в примере 2. Соответствующий остаток в эксендине-4 и глюкагоне представляет собой лизин, а в GLP-1 -серин. Хотя считается, что данный остаток не контактирует с рецептором, изменение заряда с положительного на отрицательный может модифицировать смежное окружение. Кроме того, G797, G849 и G933 имеют остаток глутамата в положении 27. Остаток 27 представляет собой лизин в эксендине-4, и представляет собой незаряженный гидрофобный остаток в GLP1 (валин) и глюкагоне (метионин). Лизин в эксенатиде способствует электростатическим взаимодействиям с рецептором GLP1 в положениях, соответствующих остаткам G1U127 и Glu24 (C.R. Underwood et al., J. Biol. Chern., 285, 723-730 (2010); S. Runge et al., J. Biol. Chern., 283, 11340-11347 (2008)). Несмотря на то что можно ожидать потерю активности GLP1R в случае, когда заряд в положении 27 изменяется на отрицательный, данное изменение является совместимым с активностью G797, G849 и G933 в отношении GLP1R.
MEDI0382 представляет собой синтетический пептид, являющийся двойным агонистом рецепторов глюкагоноподобного пептида 1 (GLP-1) и глюкагона. MEDI0382 представляет собой G933 (SEQ ID NO: 19), который содержит гамма-глутаматный линкер и дериватизацию пальмитоиловой группой по остатку 10.
MEDI0382 является химически синтезированным. Удлинение пептидной цепи на смоле выполняют с помощью твердофазного пептидного синтезатора с применением протоколов, предоставляемых производителем, в целях соединения Fmoc-аминокислот. Остатки глутамина 20 и 24 замещают аминокислотами, которые не подвергаются деамидированию и остаток аргинина 17 заменяют на глутамат в целях снижения подверженности к протеолизу. Последовательность MEDI0382 показана ниже.
Е-гистидил-Е-серил-Е-глутаминилглицил-Е-треонил-Е-фенилаланил-Е-треонил-Е-серил-Е-альфаacπapτил-(N6-[N-(l-oκcoгeκcaдeцил)-L-гaммa-глyτaмил])-L-лизил-L-cepил-L-aльφa-глyτaмил-L-τиpoзил-Lлейцил-Е-альфа-аспартил-Е-серил-Е-альфа-глутамил-Е-аргинил-Е-аланил-Е-аргинил-Е-альфа-Е-аспартил-Ефенил аланил-Е-валил-Е-аланил-Е-триптофил-Е-лейцил-Е-альфа-глутамил-Е-аланилглицилглицин.
- 12043848
Способы получения пептидов, являющихся агонистами GLP-1/глюкагона.
В настоящем изобретении предусмотрен способ получения пептида, являющегося агонистом GLP-1/глюкагона. Предусмотренные в данном документе пептиды, являющиеся агонистами GLP-1/глюкагона, можно получить с помощью любого подходящего способа. Например, в определенных вариантах осуществления предусмотренные в данном документе пептиды, являющиеся агонистами GLP-1/глюкагона, химически синтезируют с помощью способов, известных средним специалистам в данной области техники, например, с помощью твердофазного синтеза, как описано Merrifield (1963, J. Am. Chem. Soc., 55:2149-2154). Твердофазный синтез пептидов можно выполнять, например, с помощью автоматических синтезаторов с применением стандартных реагентов, например, как объясняется в примере 1. В качестве альтернативы предусмотренные в данном документе пептиды, являющиеся агонистами GLP-1/глюкагона, можно получить рекомбинантным путем с применением подходящей комбинации вектор/клетка-хозяин, как хорошо известно среднему специалисту в данной области техники. Доступен ряд способов рекомбинантного получения пептидов, являющихся агонистами GLP-1/глюкагона. В целом полинуклеотидную последовательность, кодирующую пептид, являющийся агонистом GLP-1/глюкагона, вставляют в соответствующее средство экспрессии, например, вектор, который содержит необходимые элементы для транскрипции и трансляции вставленной кодирующей последовательности. Нуклеиновую кислоту, кодирующую пептид, являющийся агонистом GLP-1/глюкагона, вставляют в вектор в соответствующей рамке считывания. Затем вектором экспрессии трансфицируют подходящую клетку-хозяина, которая будет экспрессировать пептид, являющийся агонистом GLP-1/глюкагона. Подходящие клеткихозяева включают без ограничения клетки бактерий, дрожжей или млекопитающих. Ряд коммерчески доступных векторных систем для экспрессии в хозяине можно использовать для экспрессии описанных в данном документе пептидов, являющихся агонистами GLP-1/глюкагона.
Модификации, конъюгаты, продукты слияния и производные.
В определенных вариантах осуществления предусмотренные в данном документе пептиды, являющиеся агонистами GLP-1/глюкагона, стабилизируют посредством аминокислотных модификаций. В определенных вариантах осуществления карбоксильная группа С-концевой аминокислоты является амидированной. В определенный вариантах осуществления С-концевая аминокислота представляет собой амидированный глицин, например, G730, G797, G849, G865, G796, G812 и G380. В определенных вариантах осуществления, например в G933, С-концевой глицин представляет собой немодифицированную кислоту. В определенных вариантах осуществления предусмотрены пептиды, являющиеся агонистами GLP1/глюкагона, в которых один или несколько аминокислотных остатков являются ацилированными. Например, в определенных вариантах осуществления предусмотренные в данном документе пептиды, являющиеся агонистами GLP-1/глюкагона, содержат один или несколько остатков лизина, в которых пальмитоиловый фрагмент присоединен к N(эпсилон)-группе. В определенных вариантах осуществления линкер вставлен между лизином и пальмитоиловой группой. Данный линкер может представлять собой группу гамма-глутаминовой кислоты или альтернативный линкер, такой как без ограничения бетааланин и аминогексановая кислота. Можно применять различные способы ацилирования, такие как добавление холестериновых или миристоиловых групп. В определенных вариантах осуществления пальмитоиловый фрагмент добавлен в положении 13 (например, G730). В определенных вариантах осуществле- 13 043848 ния пальмитоиловый фрагмент добавлен в положении 10 (например, G797, G849, G933, G865, G796 и
G812). В определенных вариантах осуществления пальмитоиловый фрагмент добавлен в положении 17 (например, G380).
Предусмотренные в данном документе пептиды, являющиеся агонистами GLP-1/глюкагона, например, G730, G797, G849 и G933, могут быть пальмитоилированными для продления их периода полувыведения за счет связывания с сывороточным альбумином, благодаря чему снижается их предрасположенность к почечному клиренсу, как описано в примере 1. В качестве альтернативы или в дополнение раскрытый в данном документе пептид, являющийся агонистом GLP-1/глюкагона, может быть связан с гетерологичным фрагментом, например, для продления периода полувыведения. Гетерологичный фрагмент может представлять собой белок, пептид, домен белка, линкер, органический полимер, неорганический полимер, полиэтиленгликоль (PEG), биотин, альбумин, сывороточный альбумин человека (HSA), участок, отвечающий за связывание HSA с FcRn, антитело, домен антитела, фрагмент антитела, одноцепочечное антитело, доменное антитело, альбумин-связывающий домен, фермент, лиганд, рецептор, связывающий пептид, каркасную структуру, отличную от каркасной структуры на основе FnIII, эпитопную метку, рекомбинантный полипептидный полимер, цитокин или комбинацию двух или более таких фрагментов.
Например, пептиды, являющиеся агонистами GLP-1/глюкагона, могут быть слиты с гетерологичным полипептидом. Пептиды могут быть слиты с белками посредством слияния и экспрессии рекомбинантного гена либо посредством химической конъюгации. Белки, которые подходят в качестве партнеров для слияния, включают без ограничения сывороточный альбумин человека, антитела и фрагменты антител, в том числе слияние с Fc-участком антител. GLP-1 сливали с данными белками с сохранением специфической активности (L. Baggio et al., Diabetes, 53, 2492-2500 (2004); P. Barrington et al., Diabetes, Obesity and Metabolism, 13, 426-433 (2011); P. Paulik et al., American Diabetes Association, 2012, Poster, 1946). Удлиненные последовательности рекомбинантных пептидов также были описаны для получения высокой молекулярной массы пептида (V. Schellenberger et al., Nature Biotechnol., 27, 1186-1190 (2009); PASylation (EP2173890)). В определенных вариантах осуществления пептиды, являющиеся агонистами GLP1/глюкагона, включены в качестве N-концевой части слитого белка с партером по слиянию, например, альбумином или Fc-участком, на С-терминальном конце. Описанные в данном документе пептиды, являющиеся агонистами GLP-1/глюкагона, также могут быть слиты с пептидами или белковыми доменами, такими как 'Albudab', которые характеризуются аффинностью к сывороточному альбумину человека (M.S. Dennis et al., J. Biol. Chem., 277, 35035-35043 (2002); A. Walker et al., Protein Eng Design Selection, 23, 271-278 (2010)). Способы слияния раскрытых в данном документе пептидов, являющихся агонистами GLP-1/глюкагона, с гетерологичным полипептидом, например, альбумином или Fc-областью, хорошо известны средним специалистам в данной области техники.
Другие гетерологичные фрагменты могут быть конъюгированы с пептидами, являющимися агонистами GLP-1/глюкагона, для дополнительной стабилизации или увеличения периода полувыведения. В случае химического слияния определенные варианты осуществления предусматривают сохранение свободного N-конца, однако могут быть сделаны альтернативные точки для дериватизации. Дополнительным альтернативным способом является дериватизация пептида посредством крупного химического фрагмента, такого как высокомолекулярный полиэтиленгликоль (PEG). Пегилированный пептид, являющийся агонистом GLP-1/глюкагона имеет цепь PEG, ковалентно связанную с ним. Дериватизацию пептидов, являющихся агонистами GLP-1/глюкагона, например, пегилирование, можно выполнять по лизину, который является пальмитоилированным, или в качестве альтернативы по остатку, таком как цистеин, который замещен или включен в результате удлинения с целью обеспечения возможности дериватизации. Вышеуказанные формы пептидов, являющихся агонистами GLP-1/глюкагона, можно характеризовать in vitro и/или in vivo в отношении относительной специфической активности и соотношения между активацией рецепторов GLP-1 и глюкагона.
Общий термин цепь полиэтиленгликоля или цепь PEG относится к смесям конденсированных полимеров этиленоксида и воды с разветвленной или прямой цепью, представленных общей формулой H(OCH2CH2)nOH, где n представляет собой целое число, равное 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или больше. Цепи PEG включают полимеры этиленгликоля со средней суммарной молекулярной массой, выбранной из диапазона от приблизительно 500 до приблизительно 40000 дальтон. Средняя молекулярная масса цепи PEG указывается числом, например, PEG-5000 обозначает цепь полиэтиленгликоля, имеющую среднюю суммарную молекулярную массу, составляющую приблизительно 5000.
Пегилирование можно выполнять с помощью любой из реакций пегилирования, известных из уровня техники. См., например, Focus on Growth Factors, 3:4-10, 1992 и заявки на европейский патент EP 0154316 и EP 0401384. Пегилирование можно проводить с помощью реакции ацилирования или реакции алкилирования с реакционноспособной молекулой полиэтиленгликоля (или аналогичным реакционноспособным водорастворимым полимером). Способы получения пегилированных пептидов, являющихся агонистами GLP-1/глюкагона, в целом предусматривают стадии (а) обеспечения вступления в реакцию пептида, являющегося агонистом GLP-1/глюкагона, с полиэтиленгликолем (таким как реакционноспособный сложный эфир или альдегидное производное PEG) в
- 14 043848 условиях, при которых молекула присоединяется к одной или нескольким группам PEG; и (b) получения продукта(продуктов) реакции.
Фармацевтические композиции.
Дополнительно предусмотрены композиции, например фармацевтические композиции, которые содержат эффективное количество предусмотренного в данном документе пептида, являющегося агонистом GLP-1/глюкагона, которые составлены для лечения заболеваний обмена веществ, например ожирения.
Композиции по настоящему изобретению могут быть составлены в соответствии с известными способами. Подходящие способы получения описаны, например, в Remington's Pharmaceutical Sciences, 19th edition, A.R. Gennaro, ed., Mack Publishing Co., Easton, PA (1995), которая включена в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте. Композиция может быть представлена во множестве форм, в том числе без ограничения в форме водного раствора, эмульсии, геля, суспензии, лиофилизированной форме или любой другой форме, известной из уровня техники. Кроме того, композиция может содержать фармацевтически приемлемые добавки, в том числе, например, разбавители, связующие, стабилизаторы и консерванты. Непосредственно после составления композиции по настоящему изобретению можно вводить субъекту.
Носители, которые можно использовать с композициями по настоящему изобретению, хорошо известны из уровня техники и включают без ограничения, например, тироглобулин, альбумины, такие как сывороточный альбумин человека, столбнячный анатоксин и полиаминокислоты, такие как поли-Lлизин, поли-L-глутаминовαя кислота, коровый белок вируса гриппа, вируса гепатита В и т.п. Можно использовать ряд водных носителей, например воду, буферную воду, 0,8% физиологический раствор, 0,3% глицин, гиалуроновую кислоту и т.п. Композиции можно стерилизовать с помощью обычных хорошо известных методик стерилизации или можно стерилизовать посредством фильтрации. Полученная в результате композиция может быть упакована для применения как есть, или лиофилизирована, при этом перед введением лиофилизированный препарат объединяют со стерильным раствором. Композиции могут содержать фармацевтически приемлемые вспомогательные вещества, необходимые для того, чтобы практически соответствовать физиологическим условиям, например, вещества для регулирования уровня pH и буферные вещества, вещества для регулирования тоничности, смачивающие вещества и т.п., например, ацетат натрия, лактат натрия, хлорид натрия, хлорид калия, хлорид кальция, сорбитанмонолаурат, триэтаноламинолеат и т.д.
Способы лечения.
Значительная потеря веса без хирургического вмешательства с эффективным контролем уровня глюкозы остается важнейшей неудовлетворенной потребностью для пациентов с сахарным диабетом 2 типа. Способы лечения, предусмотренные в данном документе, могут удовлетворить эту потребность.
Пептиды, являющиеся агонистами GLP-1/глюкагона (например, MEDI0382) могут сочетать в себе эффект глюкагона, например, подавление потребления пищи или регуляцию уровней глюкозы, с эффектом GLP-1, например, подавление моторики желудка или стимуляция высвобождения инсулина. Следовательно, они могут оказывать свое действие с ускорением устранения избыточной жировой ткани, индуцированием устойчивой потери веса и улучшением гликемического контроля. Пептиды, являющиеся агонистами GLP-1/глюкагона (например, MEDI0382), могут также оказывать свое действие со снижением факторов риска сердечно-сосудистых заболеваний, таких как высокий уровень холестерина и высокий уровень холестерина LDL или нарушенные соотношения HDL/LDL. Пептиды, являющиеся агонистами GLP-1/глюкагона (например, MEDI0382), могут также оказывать свое действие со снижением уровней триглицеридов.
В настоящем изобретении предусмотрен способ лечения ожирения или связанного с ожирением заболевания или нарушения, предусматривающий введение субъекту, нуждающемуся в лечении, 50-600 или 100-600 мкг (например, 50, 100, 125, 150, 175, 200, 225, 250, 275, 300, 325, 350, 375, 400, 425, 450, 475, 500, 525, 550, 575 или 600 мкг) раскрытого в данном документе пептида, являющегося агонистом GLP-1/глюкагона, (например, MEDI0382). В определенных случаях введение является дополнением к режиму питания и физической нагрузке. Дополнительно предусмотрено 50-600 или 100-600 мкг (например, 50, 100, 125, 150, 175, 200, 225, 250, 275, 300, 325, 350, 375, 400, 425, 450, 475, 500, 525, 550, 575 или 600 мкг) пептида, являющегося агонистом GLP-1/глюкагона (например, MEDI0382), для лечения ожирения или связанного с ожирением заболевания или нарушения. Дополнительно предусмотрено применение 50-600 или 100-600 мкг (например, 50, 100, 125, 150, 175, 200, 225, 250, 275, 300, 325, 350, 375, 400, 425, 450, 475, 500, 525, 550, 575 или 600 мкг) предусмотренного в данном документе пептида, являющегося агонистом GLP-1/глюкагона (например, MEDI0382), в изготовлении лекарственного препарата для лечения ожирения или связанного с ожирением заболевания или нарушения. 50-600 или 100-600 мкг раскрытого в данном документе пептида, являющегося агонистом GLP-1/глюкагона (например, MEDI0382), можно вводить в одной или раздельных дозах. Кроме того, 50-600 или 100-600 мкг раскрытого в данном документе пептида, являющегося агонистом GLP-1/глюкагона (например, MEDI0382), можно вводить в возрастающих дозах (например, титрование дозы, как, например, начальная доза, составляющая 100 мкг, вторая доза, составляющая 150 или 200 мкг, и необязательно третья доза, составляющая 200, 300 или 400 мкг, например, где начальную дозу и/или вторую дозу вводят в течение 3-10 или 3-7 дней). В опре
- 15 043848 деленных случаях у субъекта имеется сахарный диабет 2 типа. В определенных случаях субъект имеет индекс массы тела (BMI), составляющий от 30 до 39,9 кг/м2. В определенных случаях субъект имеет BMI, составляющий по меньшей мере 40. В настоящем изобретении также предусмотрен способ снижения веса тела, предусматривающий введение субъекту, нуждающемуся в лечении, 50-600 или 100-600 мкг (например, 50, 100, 125, 150, 175, 200, 225, 250, 275, 300, 325, 350, 375, 400, 425, 450, 475, 500, 525, 550, 575 или 600 мкг) раскрытого в данном документе пептида, являющегося агонистом GLP-1/глюкагона (например, MEDI0382). 50-600 или 100-600 мкг раскрытого в данном документе пептида, являющегося агонистом GLP-1/глюкагона (например, MEDI0382), можно вводить в одной или раздельных дозах. Кроме того, 50-600 или 100-600 мкг раскрытого в данном документе пептида, являющегося агонистом GLP-1/глюкагона (например, MEDI0382), можно вводить в возрастающих дозах (например, титрование дозы, как, например, начальная доза, составляющая 100 мкг, вторая доза, составляющая 150 или 200 мкг, и необязательно третья доза, составляющая 200, 300 или 400 мкг, например, где начальную дозу и/или вторую дозу вводят в течение 3-10 или 3-7 дней). В определенных случаях введение является дополнением к режиму питания и физической нагрузке. В определенных случаях у субъекта имеется сахарный диабет 2 типа. В определенных случаях субъект имеет BMI, составляющий от 27 до 40 кг/м2. В определенных случаях субъект имеет BMI, составляющий от 30 до 39,9 кг/м2. В определенных случаях субъект имеет BMI, составляющий по меньшей мере 40. В определенных случаях у субъекта имеется избыточный вес. В определенных случаях субъект страдает ожирением.
В настоящем изобретении также предусмотрен способ снижения содержания жира в организме, предусматривающий введение субъекту, нуждающемуся в лечении, 50-600 или 100-600 мкг (например, 50, 100, 125, 150, 175, 200, 225, 250, 275, 300, 325, 350, 375, 400, 425, 450, 475, 500, 525, 550, 575 или 600 мкг) раскрытого в данном документе пептида, являющегося агонистом GLP-1/глюкагона (например, MEDI0382). 50-600 или 100-600 мкг раскрытого в данном документе пептида, являющегося агонистом GLP1/глюкагона (например, MEDI0382), можно вводить в одной или раздельных дозах. Кроме того, 50-600 или 100-600 мкг раскрытого в данном документе пептида, являющегося агонистом GLP1/глюкагона (например, MEDI0382), можно вводить в возрастающих дозах (например, титрование дозы, как, например, начальная доза, составляющая 100 мкг, вторая доза, составляющая 150 или 200 мкг, и необязательно третья доза, составляющая 200, 300 или 400 мкг, например, где начальную дозу и/или вторую дозу вводят в течение 3-10 или 3-7 дней). В определенных случаях введение является дополнением к режиму питания и физической нагрузке. В определенных случаях у субъекта имеется сахарный диабет 2 типа. В определенных случаях субъект имеет BMI, составляющий от 27 до 40 кг/м2. В определенных случаях субъект имеет BMI, составляющий от 30 до 39,9 кг/м2. В определенных случаях субъект имеет BMI, составляющий по меньшей мере 40. В определенных случаях у субъекта имеется избыточный вес. В определенных случаях субъект страдает ожирением. В определенных случаях жир представляет собой жир в печени. Снижение содержания жира в печени может привести к повышенной чувствительности к инсулину и/или улучшению функции печени. В определенных случаях содержание жира в печени снижается по меньшей мере на 20%. В определенных случаях содержание жира в печени у субъекта снижается на от приблизительно 20% до приблизительно 40%. В определенных случаях введение приводит в результате к снижению содержания жира в печени на приблизительно одну треть. В определенных случаях у субъекта снижается объем печени. В определенных случаях посредством введения обеспечивается снижение уровней гемоглобина A1c (HbA1c) (например, на по меньшей мере 0,6%, на по меньшей мере 0,9%, на от приблизительно 0,5% до приблизительно 1,5%, на от приблизительно 0,5% до приблизительно 2%, на от приблизительно 0,5% до приблизительно 3% или до приблизительно 6,3% или ниже).
В настоящем изобретении также предусмотрен способ контроля веса, предусматривающий введение субъекту, нуждающемуся в этом, 50-600 или 100-600 мкг (например, 50, 100, 125, 150, 175, 200, 225, 250, 275, 300, 325, 350, 375, 400, 425, 450, 475, 500, 525, 550, 575, или 600 мкг) раскрытого в данном документе пептида, являющегося агонистом GLP-1/глюкагона (например, MEDI0382). 50-600 или 100-600 мкг раскрытого в данном документе пептида, являющегося агонистом GLP-1/глюкагона (например, MEDI0382), можно вводить в одной или раздельных дозах. Кроме того, 50-600 или 100-600 мкг раскрытого в данном документе пептида, являющегося агонистом GLP-1/глюкагона (например, MEDI0382), можно вводить в возрастающих дозах (например, титрование дозы, как, например, начальная доза, составляющая 100 мкг, вторая доза, составляющая 150 или 200 мкг, и необязательно третья доза, составляющая 200, 300 или 400 мкг, например, где начальную дозу и/или вторую дозу вводят в течение 3-10 дней или 3-7 дней). В определенных случаях введение является дополнением к режиму питания и физической нагрузке. В определенных случаях у субъекта имеется сахарный диабет 2 типа. В определенных случаях субъект имеет BMI, составляющий от 27 до 40 кг/м2. В определенных случаях субъект имеет BMI, составляющий от 30 до 39,9 кг/м2. В определенных случаях субъект имеет BMI, составляющий по меньшей мере 40. В определенных случаях у субъекта имеется избыточный вес. В определенных случаях субъект страдает ожирением.
В настоящем изобретении также предусмотрен способ лечения неалкогольного стеатогепатита (NASH), предусматривающий введение субъекту, нуждающемуся в лечении, 50-600 или 100-600 мкг (например, 50, 100, 125, 150, 175, 200, 225, 250, 275, 300, 325, 350, 375, 400, 425, 450, 475, 500, 525, 550, 575
- 16 043848 или 600 мкг) раскрытого в данном документе пептида, являющегося агонистом GLP-1/глюкагона (например, MEDI0382). 50-600 или 100-600 мкг раскрытого в данном документе пептида, являющегося агонистом GLP-1/глюкагона (например, MEDI0382), можно вводить в одной или раздельных дозах. Кроме того, 50-600 или 100-600 мкг раскрытого в данном документе пептида, являющегося агонистом GLP-1/глюкагона (например, MEDI0382), можно вводить в возрастающих дозах (например, титрование дозы, как, например, начальная доза, составляющая 100 мкг, вторая доза, составляющая 150 или 200 мкг, и необязательно третья доза, составляющая 200, 300 или 400 мкг, например, где начальную дозу и/или вторую дозу вводят в течение 3-10 или 3-7 дней). В определенных случаях введение является дополнением к режиму питания и физической нагрузке. Посредством введения может также обеспечиваться снижение веса тела или лечение ожирения. В определенных случаях субъект имеет BMI, составляющий от 27 до 40 кг/м2. В определенных случаях субъект имеет BMI, составляющий от 30 до 39,9 кг/м2. В определенных случаях субъект имеет BMI, составляющий по меньшей мере 40. В определенных случаях у субъекта имеется избыточный вес. В определенных случаях субъект страдает ожирением.
Как предусмотрено в данном документе, 50-600 или 100-600 мкг (например, 50, 100, 125, 150, 175, 200, 225, 250, 275, 30θ, 325, 350, 375, 40θ, 425, 450, 475, 500, 525, 550, 575 или 6θ0 мкг) предусмотренных в данном документе пептидов, являющихся агонистами GLP-1/глюкагона (например, MEDI0382), можно вводить для предупреждения набора веса, предупреждения повышения содержания жира (например, жира в печени), содействия потере веса, содействия снижения содержания жира (например, жира в печени), снижения избыточного веса тела, снижения содержания жира (например, жира в печени) или лечения ожирения (например, посредством контроля аппетита, питания, потребления пищи, потребления калорий и/или расхода энергии), в том числе патологического ожирения. Повышенный расход энергии может быть результатом, например, повышенного окисления жирных кислот и/или глюкозы в печени. В настоящем изобретении также предусмотрен способ лечения или предупреждения заболевания или состояния, вызванного или характеризующегося избыточном весом тела или избыточным содержанием жира в организме, предусматривающий введение субъекту, нуждающемуся в лечении, 50-600 или 100-600 мкг (например, 50, 100, 125, 150, 175, 200, 225, 250, 275, 300, 325, 350, 375, 400, 425, 450, 475, 500, 525, 550, 575 или 600 мкг) раскрытого в данном документе пептида, являющегося агонистом GLP-1/глюкагона (например, MEDI0382). В определенных случаях введение является дополнением к режиму питания и физической нагрузке. Кроме того, 50-600 или 100-600 мкг (например, 50, 100, 125, 150, 175, 200, 225, 250, 275, 300, 325, 350, 375, 400, 425, 450, 475, 500, 525, 550, 575 или 6θ0 мкг) предусмотренных в данном документе пептидов, являющихся агонистами GLP-1/глюкагона (например, MEDI0382), можно применять для лечения других связанных с ожирением нарушений обмена веществ. 50-600 или 100-600 мкг раскрытого в данном документе пептида, являющегося агонистом GLP-1/глюкагона (например, MEDI0382), можно вводить в одной или раздельных дозах. Кроме того, 50-600 или 100-600 мкг раскрытого в данном документе пептида, являющегося агонистом GLP-1/глюкагона (например, MEDI0382), можно вводить в возрастающих дозах (например, титрование дозы, как, например, начальная доза, составляющая 100 мкг, вторая доза, составляющая 150 или 200 мкг, и необязательно третья доза, составляющая 200, 300 или 400 мкг, например, где начальную дозу и/или вторую дозу вводят в течение 3-10 или 3-7 дней). Примеры других связанных с ожирением (связанных с избыточным весом тела) нарушений включают без ограничения инсулинорезистентность, нарушение толерантности к глюкозе, преддиабет, повышенный уровень глюкозы натощак, диабет 2 типа, гипертензию, дислипидемию (или комбинацию этих факторов риска, связанных с обменом веществ), формы глюкагономы, сердечно-сосудистые заболевания, такие как застойная сердечная недостаточность, атеросклероз, артериосклероз, коронарное заболевание сердца или заболевание периферических артерий, инсульт, нарушение функции дыхательной системы или заболевание почек. В настоящем изобретении также предусмотрен способ лечения сахарного диабета 2 типа, предусматривающий введение субъекту, нуждающемуся в лечении, 50-600 или 100-600 мкг (например, 50, 100, 125, 150, 175, 200, 225, 250, 275, 300, 325, 350, 375, 400, 425, 450, 475, 500, 525, 550, 575 или 600 мкг) раскрытого в данном документе пептида, являющегося агонистом GLP-1/глюкагона (например, MEDI0382). 50-600 или 100-600 мкг раскрытого в данном документе пептида, являющегося агонистом GLP1/глюкагона (например, MEDI0382), можно вводить в одной или раздельных дозах. Кроме того, 50-600 или 100-600 мкг раскрытого в данном документе пептида, являющегося агонистом GLP-1/глюкагона (например, MEDI0382), можно вводить в возрастающих дозах (например, титрование дозы, как, например, начальная доза, составляющая 100 мкг, вторая доза, составляющая 150 или 200 мкг, и необязательно третья доза, составляющая 200, 300 или 400 мкг, например, где начальную дозу и/или вторую дозу вводят в течение 3-10 или 3-7 дней). В определенных случаях введение является дополнением к режиму питания и физической нагрузке. Посредством введения может также обеспечиваться снижение веса тела или лечение ожирения. В определенных случаях субъект имеет BMI, составляющий от 27 до 40 кг/м2. В определенных случаях субъект имеет BMI, составляющий от 30 до 39,9 кг/м2. В определенных случаях субъект имеет BMI, составляющий по меньшей мере 40. В определенных случаях у субъекта имеется избыточный вес. В определенных случаях субъект страдает ожирением.
В настоящем изобретении также предусмотрен способ улучшения гликемического контроля или достижения гликемического контроля, предусматривающий введение субъекту, нуждающемуся в лече
- 17 043848 нии, 50-600 мкг или 100-600 мкг (например, 50, 100, 125, 150, 175, 200, 225, 250, 275, 300, 325, 350, 375, 400, 425, 450, 475, 500, 525, 550, 575 или 600 мкг) раскрытого в данном документе пептида, являющегося агонистом GLP-1/глюкагона (например, MEDI0382). 50-600 или 100-600 мкг раскрытого в данном документе пептида, являющегося агонистом GLP-1/глюкагона (например, MEDI0382), можно вводить в одной или раздельных дозах. Кроме того, 50-600 или 100-600 мкг раскрытого в данном документе пептида, являющегося агонистом GLP-1/глюкагона (например, MEDI0382), можно вводить в возрастающих дозах (например, титрование дозы, как, например, начальная доза, составляющая 100 мкг, вторая доза, составляющая 150 или 200 мкг, и необязательно третья доза, составляющая 200, 300 или 400 мкг, например, где начальную дозу и/или вторую дозу вводят в течение 3-10 или 3-7 дней). В определенных случаях введение является дополнением к режиму питания и физической нагрузке. Посредством введения может также обеспечиваться снижение веса тела или лечение ожирения. В определенных случаях у субъекта имеется сахарный диабет 2 типа. В определенных случаях субъект имеет BMI, составляющий от 27 до 40 кг/м2. В определенных случаях субъект имеет BMI, составляющий от 30 до 39,9 кг/м2. В определенных случаях субъект имеет BMI, составляющий по меньшей мере 40. В определенных случаях у субъекта имеется избыточный вес. В определенных случаях субъект страдает ожирением. Улучшение гликемического контроля можно оценивать с помощью теста толерантности к пище. В определенных случаях улучшение гликемического контроля приводит в результате к по меньшей мере 10% снижению площади под кривой зависимости концентрации глюкозы от времени (AUC) после проведения теста толерантности к пище (например, по сравнению с AUC до лечения). В определенных случаях улучшение гликемического контроля приводит в результате к по меньшей мере 15% снижению AUC после проведения теста толерантности к пище (например, по сравнению с AUC до лечения). В определенных случаях улучшение гликемического контроля приводит в результате к по меньшей мере 20% снижению AUC глюкозы после проведения теста толерантности к пище (например, по сравнению с AUC до лечения). В определенных случаях улучшение гликемического контроля приводит в результате к по меньшей мере 25% снижению AUC глюкозы после проведения теста толерантности к пище (например, по сравнению с AUC до лечения). В определенных случаях улучшение гликемического контроля приводит в результате к по меньшей мере 30% снижению AUC глюкозы после проведения теста толерантности к пище (например, по сравнению с AUC до лечения). Улучшение гликемического контроля также можно оценивать на основании уровня гемоглобина A1c и фруктозамина.
В настоящем изобретении также предусмотрен способ снижения веса и контроля уровня глюкозы, предусматривающий введение субъекту, нуждающемуся в лечении, 50-600 или 100-600 мкг (например, 50, 100, 125, 150, 175, 200, 225, 250, 275, 300, 325, 350, 375, 400, 425, 450, 475, 500, 525, 550, 575 или 600 мкг) раскрытого в данном документе пептида, являющегося агонистом GLP-1/глюкагона (например, MEDI0382). 50-600 или 100-600 мкг раскрытого в данном документе пептида, являющегося агонистом GLP-1/глюкагона (например, MEDI0382), можно вводить в одной или раздельных дозах. Кроме того, 50-600 или 100-600 мкг раскрытого в данном документе пептида, являющегося агонистом GLP-1/глюкагона (например, MEDI0382), можно вводить в возрастающих дозах (например, титрование дозы, как, например, начальная доза, составляющая 100 мкг, вторая доза, составляющая 150 или 200 мкг, и необязательно третья доза, составляющая 200, 300 или 400 мкг, например, где начальную дозу и/или вторую дозу вводят в течение 3-10 или 3-7 дней). В определенных случаях введение является дополнением к режиму питания и физической нагрузке. Посредством введения может также обеспечиваться снижение веса тела или лечение ожирения. В определенных случаях у субъекта имеется сахарный диабет 2 типа. В определенных случаях субъект имеет BMI, составляющий от 27 до 40 кг/м2. В определенных случаях субъект имеет BMI, составляющий от 30 до 39,9 кг/м2. В определенных случаях субъект имеет BMI, составляющий по меньшей мере 40. В определенных случаях у субъекта имеется избыточный вес. В определенных случаях субъект страдает ожирением. В определенных случаях введение приводит в результате к потере веса на по меньшей мере 1,0 кг, по меньшей мере 1,3 кг или от приблизительно 1,3 кг до приблизительно 2,0 кг. В определенных случаях вес субъекта снижается на по меньшей мере 3,5 кг или по меньшей мере 5 кг. В определенных случаях вес субъекта снижается на от приблизительно 2 кг до приблизительно 30 кг. В определенных случаях вес субъекта снижается на по меньшей мере 2%, по меньшей мере 4%, по меньшей мере 5% или по меньшей мере 10%. В определенных случаях вес субъекта снижается на от приблизительно 2% до приблизительно 20%, от приблизительно 2% до приблизительно 25% или от приблизительно 2% до приблизительно 30%.
В определенных случаях введение предусмотренных в данном документе пептидов, являющихся агонистами GLP-1/глюкагона (например, MEDI0382), приводит в результате к потере веса на по меньшей мере 1 кг. В определенных случаях введение предусмотренных в данном документе пептидов, являющихся агонистами GLP-1/глюкагона (например, MEDI0382), приводит в результате к потере веса на по меньшей мере 1,3 кг. В определенных случаях введение предусмотренных в данном документе пептидов, являющихся агонистами GLP-1/глюкагона, приводит в результате к потере веса на по меньшей мере 1,5 кг. В определенных случаях введение предусмотренных в данном документе пептидов, являющихся агонистами GLP-1/глюкагона (например, MEDI0382), приводит в результате к потере веса на 1-3 кг после четырех недель повторного введения дозы один раз в день. В определенных случаях введение преду
- 18 043848 смотренных в данном документе пептидов, являющихся агонистами GLP-1/глюкагона (например, MEDI0382), приводит в результате к потере веса на 1,3-2 кг после четырех недель повторного введения дозы один раз в день. Путь введения предусмотренных в данном документе пептидов, являющихся агонистами GLP-1/глюкагона (например, MEDI0382), может представлять собой, например, пероральный, парентеральный, ингаляционный или местный. Термин парентеральный, используемый в данном документе, предусматривает, например, внутривенное, внутриартериальное, внутрибрюшинное, внутримышечное, подкожное, ректальное или вагинальное введение. Другим примером формы для введения является раствор для инъекций, в частности для внутривенных или внутриартериальных инъекций или капельного введения. Предусмотренные в данном документе пептиды, являющиеся агонистами GLP1/глюкагона (например, MEDI0382), можно вводить в однократной дозе или многократных дозах. В определенных вариантах осуществления 50-600 или 100-600 мкг (например, 50, 100, 125, 150, 175, 200, 225, 250, 275, 300, 325, 350, 375, 400, 425, 450, 475, 500, 525, 550, 575 или 6θ0 мкг) пептида, являющегося агонистом GLP-1/глюкагона, вводят с помощью подкожной инъекции.
Составы для парентерального введения могут представлять собой однократную болюсную дозу, инфузионную или нагрузочную болюсную дозу с последующей поддерживающей дозой. Эти композиции можно вводить с конкретными фиксированными или переменными интервалами, например, один раз в день или по мере необходимости. Схемы дозирования также можно корректировать для обеспечения оптимального требуемого ответа (например, терапевтического или профилактического ответа).
В определенных случаях 50-600 или 100-600 мкг (например, 50, 100, 125, 150, 175, 200, 225, 250, 275, 300, 325, 350, 375, 40θ, 425, 450, 475, 500, 525, 550, 575 или 600 мкг) предусмотренных в данном документе пептидов, являющихся агонистами GLP-1/глюкагона (например, MEDI0382), можно вводить один раз в день. В определенных случаях 50-600 или 100-600 мкг (например, 50, 100, 125, 150, 175, 200, 225, 250, 275, 300, 325, 350, 375, 4θ0, 425, 450, 475, 500, 525, 550, 575 или 600 мкг) предусмотренных в данном документе пептидов, являющихся агонистами GLP-1/глюкагона (например, MEDI0382), можно вводить один раз в день посредством инъекции (например, подкожного введения). В определенных случаях 50-600 или 100-600 мкг (например, 50, 100, 125, 150, 175, 200, 225, 250, 275, 300, 325, 350, 375, 400, 425, 450, 475, 500, 525, 550, 575 или 600 мкг) предусмотренных в данном документе пептидов, являющихся агонистами GLP-1/глюкагона (например, MEDI0382), можно вводить один раз в день посредством инъекции (например, подкожного введения) в течение периода, составляющего по меньшей мере одну неделю, в течение периода, составляющего по меньшей мере две недели, в течение периода, составляющего по меньшей мере три недели, или в течение периода, составляющего по меньшей мере четыре недели. В определенных случаях 50-600 или 100-600 мкг (например, 100, 125, 150, 175, 200, 225, 250, 275, 300, 325, 350, 375, 400, 425, 450, 475, 500, 525, 550, 575 или 600 мкг) предусмотренных в данном документе пептидов, являющихся агонистами GLP-1/глюкагона (например, MEDI0382), можно вводить в однократной дозе или разделенных дозах. В определенных случаях 50-600 или 100-600 мкг (например, 100, 125, 150, 175, 200, 225, 250, 275, 300, 325, 350, 375, 400, 425, 450, 475, 500, 525, 550, 575 или 600 мкг) предусмотренных в данном документе пептидов, являющихся агонистами GLP-1/глюкагона (например, MEDI0382), можно вводить в возрастающих дозах (например, титрование дозы, как, например, начальная доза, составляющая 100 мкг, вторая доза, составляющая 150 или 200 мкг, и необязательно третья доза, составляющая 200, 300 или 400 мкг, например, где начальную дозу и/или вторую дозу вводят в течение 3-10 или 3-7 дней). В определенных вариантах осуществления предусмотренные в данном документе пептиды, являющиеся агонистами GLP-1/глюкагона (например, MEDI0382), можно вводить в начальной дозе, составляющей 100 мкг, в течение четырех дней, во второй дозе, составляющей 150 мкг, в течение четырех дней, и затем в третьей дозе, составляющей 200 мкг, которую вводят ежедневно. В определенных вариантах осуществления предусмотренные в данном документе пептиды, являющиеся агонистами GLP-1/глюкагона (например, MEDI0382), можно вводить в начальной дозе, составляющей 100 мкг, в течение пяти дней, во второй дозе, составляющей 150 мкг, в течение пяти дней, в третьей дозе, составляющей 200 мкг, в течение пяти дней, и затем в четвертой дозе, составляющей 300 мкг, которую вводят ежедневно. В определенных вариантах осуществления предусмотренные в данном документе пептиды, являющиеся агонистами GLP-1/глюкагона (например, MEDI0382), можно вводить в начальной дозе, составляющей 100 мкг, в течение пяти дней, во второй дозе, составляющей 200 мкг, в течение пяти дней, и затем в третьей дозе, составляющей 300 мкг, которую вводят ежедневно.
В определенных случаях период полувыведения предусмотренных в данном документе пептидов, являющихся агонистами GLP-1/глюкагона (например, MEDI0382), составляет от приблизительно 7 до 13 ч. В определенных случаях период полувыведения предусмотренных в данном документе пептидов, являющихся агонистами GLP-1/глюкагона (например, MEDI0382), составляет от приблизительно 9 до 13 ч. В определенных случаях период полувыведения предусмотренных в данном документе пептидов, являющихся агонистами GLP-1/глюкагона (например, MEDI0382), составляет от приблизительно 7 до 12 ч. В определенных случаях период полувыведения предусмотренных в данном документе пептидов, являющихся агонистами GLP-1/глюкагона (например, MEDI0382), составляет от приблизительно 10 до 12 ч. В определенных случаях период полувыведения предусмотренных в данном документе пептидов, являющихся агонистами GLP-1/глюкагона (например, MEDI0382), составляет от приблизительно 8 до 11 ч.
- 19 043848
Наборы.
В еще одних вариантах осуществления настоящего изобретения предусмотрены наборы, содержащие пептиды, являющиеся агонистами GLP-1/глюкагона, которые можно применять для выполнения способов, описанных в данном документе. В определенных вариантах осуществления набор содержит раскрытый в данном документе пептид, являющийся агонистом GLP-1/глюкагона, в одном или нескольких контейнерах. Специалист в данной области техники без труда поймет, что раскрытые пептиды, являющиеся агонистами GLP-1/глюкагона, могут быть легко включены в один из установленных форматов набора, которые хорошо известны из уровня техники.
Примеры
Пример 1. Синтез, модификации и определение характеристик пептидов, являющихся агонистами GLP-1/ глюкагона.
Список сокращений.
Boc: трет-бутилоксикарбонил;
трет-Bu: трет-бутил;
DCM: дихлорметан;
DIC: диизопропилкарбодиимид;
Fmoc: 9-флуоренилфенилметоксикарбонил;
HOBt: 1-гидроксибензотриазол;
HPLC: высокоэффективная жидкостная хроматография;
Mtt: 4-метилтритил;
NMP: N-метилпирролидон;
Pbf: 2,2,4,6,7-пентаметилдигидробензофуран-5-сульфонил;
TFA: трифторуксусная кислота;
TIS: триизопропилсилан;
Trt: трифенилметил, тритил.
Пептиды, являющиеся агонистами GLP-1/глюкагона, синтезировали следующим образом. Удлинение пептидных цепей на смоле TGR NovaSyn или предварительно нагруженной Fmoc смоле Ванга (NovaBiochem) выполняли с помощью твердофазного пептидного синтезатора PRELUDE™ (Protein Technologies, Тусон, Аризона, США). Протоколы, предоставляемые производителем, применяли для связывания сложных гидроксибензотриазоловых эфиров аминокислот в N-метилпирролидоне (NMP). Флуоренилметоксикарбонильную (Fmoc) группу использовали для временной защиты альфа-аминогрупп аминокислот, тогда как боковые цепи защищали трет-бутилом (mpem-Bu) в случае серина, треонина, аспарагиновой кислоты, глутаминовой кислоты, тирозина, и 2,2,4,6,7-пентаметилдигидробензофуран-5сульфонилом (Pbf) в случае аргинина, и тритилом (Trt) в случае гистидина. N-концевую аминогруппу гистидина в положении 1 защищали трет-бутилоксикарбонильной группой (Boc). Lys(Mtt) включали в пептидную цепь в случае, если требовалась последующая химическая модификация боковой цепи.
По завершении удлинения пептидной цепи Mtt-группу удаляли путем промывания смолы с пептидом с помощью DCM, содержащего 2% TFA и 5% TIS (10x7 мл, каждый по 0,5 мин). Связывание липидного фрагмента с боковой цепью Lys выполняли на пептидном синтезаторе PRELUDE™ с применением DIC в качестве связующего реагента в присутствии HOBt. Пептиды отщепляли от смолы с применением смеси TFA:TIS:вода (95:2,5:2,5). Спустя 2 ч пребывания при комнатной температуре смолу с пептидилом фильтровали, промывали с помощью TFA и объединенные фильтраты испаряли досуха in vacuo. Остаток растирали с простым эфиром, и образованный осадок фильтровали, промывали простым эфиром и высушивали. Неочищенные пептиды растворяли в 5% уксусной кислоте в воде и анализировали с помощью обращенно-фазовой жидкостной хроматографии высокого давления на колонке С8-А Polaris 3, соединенной с системой Varian 920-LC. Для анализа использовали стандартную градиентную систему из 10-90% буфера В в течение 15 мин. Буфер А представлял собой 0,1% TFA в воде и буфер В представлял собой 0,1% TFA в ацетонитриле. Профили HPLC регистрировали при 210 нм. Разделения посредством препаративной хроматографии выполняли на системе Varian ProStar с применением полупрепаративной колонки С18 RP XBridge от Waters. Для разделения использовали вышеописанную систему растворителей на основе воды и ацетонитрила в градиенте из 30-70% буфера В в течение 30 мин. Хроматографически гомогенные продукты (чистота >97%) анализировали с помощью масс-спектрометрии с электрораспылением (MassLynx, Waters).
Пример 2. Исследования in vitro.
Опосредованная рецептором глюкагона и GLP-1 выработка сАМР.
Биологическая активность пептидов в клеточном анализе активности сАМР (анализ 1).
Биологическую активность пептидов, являющихся агонистами GLP-1/глюкагона, синтезированных с помощью способа из примера 1, тестировали в отношении биологической активности, например стимуляции ответов со стороны одного или нескольких клеточных рецепторов, с помощью следующих способов. Стабильные линии клеток, экспрессирующие рецептор GLP-1 (GLP-1R) человека, мыши, крысы или собаки, рецептор глюкагона (GCGR) или рецептор глюкозозависимого инсулинотропного пептида
- 20 043848 (желудочного ингибиторного полипептида) (GIPR), создавали из клеток НЕК293 или клеток СНО с помощью стандартных способов. Пептидная активация таких различных рецепторов приводила в результате к последующей выработке вторичного мессенджера сАМР, уровень которого можно было измерять в ходе анализа функциональной активности. Анализы сАМР выполняли с применением среды для анализа.
Среда для анализа: 10% FBS в DMEM (Gibco № 41966), содержащая 0,5 мМ IBMX (Sigma № 17018).
Применяли 384-луночные планшеты с низкой способностью связывания белков (Greiner № 781280) для выполнения одиннадцати серийных разведений 1 к 5 тестируемых образцов, которые проводили в среде для анализа. Все разведения образцов получали в двух повторностях.
Замороженную криопробирку с клетками, экспрессирующими рецептор, представляющий интерес, быстро размораживали на водяной бане, переносили в предварительно нагретую среду для анализа и центрифугировали при 240xg в течение 5 мин. Клетки ресуспендировали в среде для анализа в оптимальной концентрации (например, клетки, экспрессирующие hGCGR, в количестве 1х105 клеток/мл, клетки, экспрессирующие hGLP-lR и hGIPR, в количестве 0,5х105 клеток/мл).
Из планшета для разведений 5 мкл повтора вносили в 384-луночный планшет с черными мелкими лунками с U-образным дном (Corning № 3676). К нему добавляли 5 мкл суспензии клеток и планшеты инкубировали при комнатной температуре в течение 30 мин. Уровни сАМР измеряли с помощью коммерчески доступного набора сАМР dynamic 2 HTRF (Cisbio, № по кат. 62AM4PEJ) согласно двухстадийному протоколу в соответствии с рекомендациями производителя. Вкратце отдельно получали меченное криптатом антитело к сАМР (донорный флуорофор) и cAMP-d2 (акцепторный флуорофор) путем разведения каждого 1/20 в буфере для конъюгата и лизиса, который предоставлялся в наборе. Во все лунки планшета для анализа добавляли 5 мкл меченного криптатом антитела к сАМР, и во все лунки добавляли 5 мкл cAMP-d2, за исключением лунок для неспецифичного связывания (NSB), в которые добавляли буфер для конъюгата и лизиса. Планшеты инкубировали при комнатной температуре в течение 1 ч, а затем считывали на Envision (Perkin Elmer) с применением длины волны возбуждения 320 нм и длин волн испускания 620 и 665 нм. Последовательности синтезированных пептидов, являющихся агонистами GLP-1/глюкагона, и их значения ЕС50, определенные в анализах сАМР, выполняемых в среде для анализа, показаны в табл. 2. Все пептиды из табл. 2 синтезировали с амидом на С-конце. Дополнительные пептиды, являющиеся агонистами GLP-1/глюкагона, синтезировали с кислотой на С-конце, и значения ЕС50, определенные в анализах сАМР, выполняемых в среде для анализа, показаны в табл. 3. Значения ЕС50 для дополнительных пептидов, являющихся агонистами GLP-1/глюкагона, которые получали в среде для анализа, показаны в табл. 4. Все пептиды из табл. 4 имели амид на С-конце, если только они не обозначены как кислота, в случае чего они имели кислоту на С-конце.
Таблица 2
Активность пептидов с амидом на С-конце, являющихся агонистами GLP-1/глюкагона, в отношении сАМР (анализ 1)
Анализ в среде для анализа | |||
Пептид | ЕС50 для GlucR человека | ЕС50 дляСЬР1И человека | ЕС50 для GIPr человека |
М | М | М | |
G730 | 6.23Е-12 | 1.8Е-11 | 4.5Е-08 |
G797 | 6.14Е-12 | 1,4Е-11 | 3.4Е-09 |
G849 | 2.26Е-12 | 9.0Е-12 | 1.7Е-08 |
G865 | 1.26Е-11 | 8,ЗЕ-12 | 2.2Е-08 |
G796 | 1.76Е-12 | 1,ЗЕ-11 | 1,4Е-08 |
G812 | 8.17Е-12 | 1.1Е-11 | 2.7Е-09 |
G380 | 2.17Е-10 | 7.7Е-11 | 1,ЗЕ-07 |
GLP1 | 8.1Е-11 | ||
Глюкагон | 3,ЗЕ-12 |
-21 043848
Таблица 3
Активность пептидов с кислотой на С-конце, являющихся агонистами GLP-1/глюкагона, в отношении сАМР (анализ 1)
Пептид | ЕС50 для GlucR человека | ЕС50 для GLP1R человека | ЕС50 для GIPr человека |
М | М | М | |
G931 | 1,78Е-11 | 1,ЗОЕ-10 | 0,00Е+00 |
G933 | 5,92Е-12 | 3,20Е-11 | 9,70Е-09 |
G934 | 6,ЗОЕ-12 | 1,80Е-11 | 3,60Е-09 |
G973 | 8,90Е-12 | 1,20Е-11 | 4,70Е-08 |
Таблица 4
Активность дополнительных пептидов, являющихся агонистами GLP-1/глюкагона, в отношении сАМР (анализ 1)
Исходная последовательность HSQGT FTSDY SKYLD SRRAQ DFVQW LVAGG всех пептидов, представленных в данном разделе, содержит LVAGG в положениях, соответствующих остаткам 26-30 | ||||
hGlucR | HGLP1R | hGIPR | Участок и характер пальмитоилирования, замещений в исходной последовательности | |
ЕС50 М | ЕС50 М | ЕС50 М | ||
Глюкагон | 3,ЗЕ-12 | 4,2Е-09 | 1,99Е-07 | |
GLP1 | 1,53Е-07 | 8,1Е-11 | 1,53Е-07 | |
д715 | 2,53Е-12 | 2,04Е-11 | 9,98Е-10 | К(gE-palm)10 |
д716 | 2,46Е-09 | 1,29Е-08 | 1,18Е-08 | К(gEpalm)11 |
д702 | 1,49Е-09 | 3,35Е-09 | 0,00Е+00 | K(gEpalm)12, Е17 |
д728 | 2,44Е-09 | 1,69Е-10 | 3,95Е-07 | К(gEpalm)12, Е17 R20 А24 |
д729 | 3,19Е-11 | 7,29Е-11 | 2,09Е-07 | К(gEpalm)13 Е17 |
д730 | 1,50Е-11 | 3,95Е-11 | 5,66Е-08 | К(gEpalm)13 Е17 R20 А2 4 |
д875 | 1,29Е-10 | 2,98Е-11 | 2,90Е-08 | К(gEpalm)13 R20 А24, Е17 Aib2 |
д841 | Нет данных | К(gEpalm)13 R20 А24, S18 R12 кислота | ||
д802 | 1,81Е-09 | 9,64Е-11 | 9,12Е-08 | К(gEpalm)13, R20 А24, Е17, Е12 |
д820 | 1,17Е-11 | 3,39Е-11 | 7,11Е-08 | К(gEpalm)13, R20 А24, Е17, R12 |
д842 | 8,31Е-12 | 5,12Е-11 | 8,83Е-08 | К(gEpalm)13, R20 А24, Е17, R12 кислота |
д733 | б,20Е-08 | 2,31Е-11 | 8,17Е-07 | К(gEpalm)14, G2 ЕЗ |
д803 | 1,08Е-11 | 2,96Е-11 | 3,29Е-08 | К(gEpalm)14, R20 Е24, 318 |
д843 | Нет данных | К(gEpalm)14, R20 Е24, 318 R12, кислота | ||
д732 | 3,96Е-11 | 2,32Е-11 | 2,94Е-08 | К(gEpalm)14, R20 А24, Е17 G2 |
д777 | 1,24Е-12 | 2,74Е-11 | 4,53Е-09 | К(gEpalm)14, R20 А24, Е17 |
д844 | Нет данных | К(gEpalm)14, R20 А24, Е17 R12 Aib2 кислота | ||
д845 | Нет данных | К(gEpalm)14, R20 А24, Е17 R12, кислота | ||
д821 | 4,63Е-12 | 5,58Е-11 | 1,40Е-08 | К(gEpalm)14, R20 А24, Е17, R12 |
- 22 043848
g846 | 3,41Е-11 | 4,38Е-11 | 1,18Е-08 | К(gEpalm)14, R20 A24, E17, E12 |
g731 | 2,77Е-11 | 4,22Е-11 | 4,07Е-08 | K(gEpalm)14, E12 |
g670 | 8,00Е-12 | 2,ОЗЕ-11 | 1,49Е-08 | K(gEpalm)14, S18 |
g335 | 1,05Е-11 | 7,ЗЗЕ-11 | 5,82Е-07 | К (gE-palm)17 |
g336 | 1,77Е-12 | 3,66Е-11 | 1,96Е-08 | К (gE-gE-palm)17 |
g384 | 4,29Е-11 | 2,72Е-11 | 1,70Е-08 | K(gEpalm)17, Aib2 |
g380 | 3,62Е-10 | 1,00Е-10 | 6,09Е-07 | K(gEpalm)17, G2 |
g736 | 9,19Е-10 | 8,54Е-11 | 0,00Е+00 | К(gEpalm)17, G2, A20 A24 |
g381 | 1,93Е-09 | 9,08Е-11 | 5,45Е-07 | K(gEpalm)17, E3 |
g678 | 4,52Е-09 | 1,06Е-10 | 1,23Е-07 | К(gEpalm)17, G2 E20 |
g599, g688 | 6,98Е-11 | 1,20Е-10 | 1,12Е-07 | K(gEpalm)17, E20 |
g679 | 1,89Е-10 | 1,35Е-10 | 1,17Е-07 | К(gEpalm)17, G2 E24 |
g600, g689 | 5,47Е-12 | 6,66Е-11 | 8,28Е-08 | K(gEpalm)17, E24 |
g680 | 3,68Е-09 | 1,95Е-10 | 9,67Е-08 | К(gEpalm)17, G2 E20 E24 |
g639 | 8,21Е-08 | 2,44Е-10 | 8,21Е-08 | К (gEpalm)17,S2 ЕЗ E20 E24 |
g681 | 3,99Е-08 | 2,83Е-10 | 1,24Е-07 | К(gEpalm)17,G2, E3 E20 E24 |
g720 | 3,52Е-10 | 5,34Е-11 | 0,00Е+00 | К(gEpalm)17, G2 R20 E24 R12 |
g660 | 1,52Е-09 | 1,06Е-09 | 3,32Е-07 | К(gEpalm)17, G2 R20 E24 |
g835 | 4,24Е-10 | 1,91Е-10 | 9,72Е-08 | K(gEpalm)17, R20 E24, E12 |
g776 | 4,65Е-12 | 7,02Е-11 | 4,79Е-08 | К(gEpalm)17, R20 E24 |
g823 | 9,48Е-12 | 9,73Е-11 | 8,42Е-08 | K(gEpalm)17, R20 E24, R12 |
g867 | 7,04Е-12 | 4,48Е-11 | 4,17Е-08 | К(gEpalm)17, R20 A24 |
g736 | 9,20Е-10 | 8,54Е-11 | 0,00Е+00 | К(gEpalm)17, A20 A24, G2 |
g737 | 7,34Е-07 | 8,14Е-11 | 0,00Е+00 | К(gEpalm)17, A20 A24, G2 E3 |
g675 | 3,84Е-08 | 1,51Е-10 | 1,61Е-06 | К(gEpalm)17, E12 R20 A2 4 G2 |
Исходная последовательность HSQGT FTSDY SKYLD SRRAQ DFVQW LEAGG всех пептидов, представленных в данном разделе, имеет последовательность LEAGG в положениях от остатка 26 и далее, если не указано иное, например, LERGG | ||||
hGlucR | hGLPIR | hGIPR | Участок и характер пальмитоилирования, Замещений в исходной последовательности | |
ЕС50 М | ЕС50 М | ЕС50 М | ||
д717 | 4,55Е-13 | 5,77Е-12 | 1,48Е-09 | К(gEpalm)10, LEAGG |
д796 | 1,81Е-12 | 1,40Е-11 | 1,74Е-08 | К(gEpalm)10, LEAGG, R20 A24 S12 |
д847 | Нет данных | К(gEpalm)10, LEAGG, R20 A2 4 SI8 E12 Aib2 кислота | ||
д797 | 9,64Е-12 | 2,26Е-11 | 4,64Е-09 | К(gEpalm)10, LEAGG, R20 A24 El7 E12 |
д798 | 5,10Е-13 | 9,07Е-12 | 1,51Е-09 | К(gEpalm)10, LEAGG, R20 A24 El7 |
д848 | 9,66Е-13 | 9,42Е-12 | 2,77Е-09 | К(gEpalm)10, LEAGG, R20 A24 El7 R12 |
д849 | 2,28Е-12 | 9,07Е-12 | 1,81Е-08 | К(gEpalm)10, LEAGG, R20 A24 SI8 R12 |
д701 | 3,83Е-09 | 7,40Е-09 | 0,00Е+00 | K(gEpalm)12, LERGG, G2 E17 |
д840 | 5,ЗОЕ-12 | 1,45Е-10 | 1,02Е-07 | LEAGG, R20 A24, E17 |
д824 | 1,05Е-12 | 4,71Е-11 | 5,74Е-08 | К(gEpalm)14, LEAGG, R20, E24 |
д780 | 7,92Е-13 | 1,20Е-11 | 6,40Е-08 | К(gEpalm)14, LEAGG, R20 A24 |
д601 | 4,93Е-13 | 3,98Е-11 | 7,41Е-08 | К(gEpalm)14, LEAGG |
д816 | 1,10Е-12 | 3,16Е-11 | 2,00Е-08 | К(gEpalm)14, LEAGG, E17 |
д817 | 1,68Е-12 | 2,51Е-11 | 1,52Е-08 | К(gEpalm)14, LEAGG, Al8 |
д876 | 1,04Е-11 | 8,63Е-11 | 7,90Е-08 | К(gEpalm)14, LEAGG, R20, E24, E12 |
д805 | 1,44Е-12 | 2,28Е-11 | 9,97Е-08 | К(gEpalm)14, LEAGG, R20 E24 |
д850 | 2,19Е-12 | 2,12Е-11 | 8,96Е-08 | K(gEpalm)14, LEA, R20, A24, S18 R12 |
-23 043848
g836 | 1,55Е-11 | 1,24Е-10 | 1,00Е-07 | K(gEpalm)14, LEAGG, R20 Е24, Е17 |
g804 | 1,95Е-12 | 7,15Е-11 | 9,97Е-08 | K(gEpalm)14, LEA, R20, А24 |
g618 | Нет данных | К(Ahx-palm)20, LEKGR | ||
g781 | 2,86Е-12 | 1,04Е-10 | 4,02Е-07 | K(gEpalm)16, LEAGG, R20 A24 |
g782 | 1,56Е-10 | 2,54Е-11 | 1,43Е-06 | K(gEpalm)18, LEAGG, R20 A24 |
g744 | 3,92Е-11 | 2,45Е-09 | 0,00Е+00 | К (gE-palm)20, LEAGG |
g746 | 3,54Е-11 | 1,15Е-08 | 0,00Е+00 | К(gE-palm)24, LEAGG |
g747 | 9,42Е-11 | 3,16Е-09 | 1,04Е-06 | К(gE-palm)31, LEAGG |
g512 | 6,06Е-11 | 9,80Е-11 | 4,07Е-07 | K(gEpalm)17, LEAGG, G2, |
g513 | 7,23Е-10 | 1,75Е-10 | 2,98Е-07 | K(gEpalm)17, LEAGG, E3, |
g734 | 8,28Е-08 | 6,95Е-11 | 1,17Е-06 | К(bA-palm)17, LEAGG, R20 A24, E3 E12 |
g837 | 2,13Е-10 | 4,67Е-10 | 1,14Е-07 | К(gE-palm)17, LEAGG, R20 A24 E12 |
g838 | 5,68Е-12 | 2,37Е-11 | 8,43Е-08 | К(Ahx-palm)17, LEAGG, R20 A24 E12 |
g783 | 9,11Е-11 | 4,24Е-11 | 8,46Е-07 | К(bA-palm)17, LEAGG, R20 A24 E12 |
g851 | Нет данных | К(bA-palm)17, LEAGG, R20 A24, R12 кислота | ||
g852 | Нет данных | К(bA-palm)17, LEAGG, R20 A24, R12 Aib2 кислота | ||
g819 | 2,34Е-12 | 1,80Е-11 | 1,03Е-07 | К(bA-palm)17, LEAGG, R20 A24 |
g536 | 4,78Е-12 | 7,45Е-11 | 0,00Е+00 | |
g600 | 5,47Е-12 | 6,66Е-11 | 1,24Е-07 | К(gE-palm)17, LVAGG, E24 |
g599 | 9,62Е-11 | 8,76Е-11 | 1,13Е-07 | К(gE-palm)17, LVAGG, E20 |
Исходная последовательность HSQGT5 FTSDY10 SKYLD15 SRRAQ20 DFVQW25 LERGGамид всех пептидов, представленных в данном разделе, имеет последовательность LERGG в положениях от остатка 26 и далее, если не указано иное, например, LENT | ||||
hGlucR | hGLPIR | hGIPR | Участок и характер пальмитоилирования, Замещений в исходной последовательности | |
ЕС50 М | ЕС50 М | ЕС50 М | ||
g825 | 3,67Е-12 | 1,91Е-11 | 8,67Е-08 | К(Ahx-palm)17, LENT, R20 Е24, Е12 |
g588 | 7,23Е-11 | 1,10Е-10 | 9,80Е-08 | K(gEpalm)17, LERGG, G2 |
g614 | 3,65Е-12 | 9,31Е-12 | 9,93Е-08 | К(Ahx-palm)17, LERGG, E12 |
д684 | 1,64Е-10 | 1,51Е-11 | 1,46Е-07 | К(Ahx-palm)17, LERGG, R20 A24 E12 G2 |
д721 | 3,23Е-09 | 4,11Е-10 | 9,79Е-07 | К(gE-palm)17, LERGG, R20 A24 E12 G2 |
д724 | 3,09Е-08 | 1,90Е-11 | 9,ЗЗЕ-07 | К(Ahx-palm)17, LERGG, R20 A24 E12 G2 E3 |
д772 | 1,84Е-10 | 2,92Е-10 | 1,54Е-06 | К(gE-palm)17, LERGG, R20 A24 E12 |
д795 | 1,10Е-10 | 7,34Е-11 | 5,79Е-07 | К(bA-palm)17, LERGG, R20 A24 E12 |
д794 | 4,69Е-12 | 1,57Е-11 | 3,22Е-08 | К(Ahx-palm)17, LERGG, R20 A24 E12 |
д826 | 4,23Е-12 | 2,93Е-11 | 5,80Е-08 | К(Ahx-palm)17, LERGG, R20 A24 E12 кислота |
- 24 043848
д727 | 2,18Е-10 | 2,63Е-11 | 1,77Е-07 | К(Ahx-palm)17, LERGG, R20 А24 Е12 G2 кислота |
д683 | 3,72Е-10 | 1,59Е-11 | 1,26Е-07 | К(Ahx-palm)17, LERGG, А20 А24 Е12 G2 |
д722 | 1,11Е-08 | 4,26Е-10 | 1,67Е-06 | К (gE-palm)17, LERGG, А20 А24 Е12 G2 |
д725 | 5,99Е-08 | 2,52Е-11 | 1,48Е-06 | К(Ahx-palm)17, LERGG, A20 A24 E12 G2 ЕЗ |
д818 | 8,90Е-12 | 2,10Е-11 | 9,40Е-08 | К(Ahx-palm)17, LERGG, A20 A24 E12 |
д682 | 1,95Е-10 | 1,43Е-11 | 1,22Е-07 | К(Ahx-palm)17, LERGG, R20 E24 E12 G2 |
д723 | 8,95Е-09 | 3,ЗОЕ-10 | 7,61Е-07 | К(gE-palm)17, LERGG, R20 E24 E12 G2 |
д726 | 1,31Е-08 | 7,91Е-12 | 2,15Е-07 | К(Ahx-palm)17, LERGG, R20 E24 E12 G2 E3 |
д771 | 5,51Е-12 | 1,75Е-11 | 3,71Е-08 | К(Ahx-palm)17, LERGG, R20 E24 E12 |
д617 | Нет данных | К(Ahx-palm)20, LERGG, G2, E12, | ||
д787 | 4,36Е-11 | 6,65Е-09 | 0,00Е+00 | К(Ahx-palm)20, LERGG, A24 E17 |
д806 | 9,9Е-12 | 1,71Е-10 | 1,05Е-07 | К(Ahx-palm)21, LERGG, A18 |
д616 | Нет данных | К(Ahx-palm)24, LERGG, G2, E12 | ||
д701 | 3,83Е-09 | 7,4Е-09 | 0,00Е+00 | K(gEpalm)12, LERGG, G2 E17 |
Удлинение исходной последовательности HSQGT5 FTSDY10 SKYLD15 SRRAQ20 DFVQW25 LVAGG пептидов, представленных в данном разделе, имеют остатки, обозначенные по отношению к С-концу остатка 30, и амид на С-конце | ||||
hGlucR | hGLPIR | hGIPR | Удлинение последовательности | |
ЕС50 М | ЕС50 М | ЕС50 М | ||
д316 | 1,06Е-11 | 3,14Е-11 | 3,65Е-09 | SSGGSS |
д317 | 0,00Е+00 | 2,63Е-09 | 0,00Е+00 | SSGGSS К |
д318 | 9,04Е-09 | 1,14Е-09 | 0,00Е+00 | SSGGSSK(palm) |
д402 | 5,96Е-11 | 8,57Е-11 | 0,00Е+00 | SGSGSG |
д319 | 1,04Е-11 | 3,61Е-11 | 0,00Е+00 | PSSGA PPPSK |
д320 | 3,20Е-12 | 9,38Е-12 | 1,01Е-09 | PSSGA PPPSK(palm) |
д315 | 5,04Е-12 | 2,73Е-11 | 1,97Е-08 | GGGG |
д325 | 1,ОЗЕ-11 | 2,61Е-11 | 0,00Е+00 | GGGGK |
д326 | 2,82Е-12 | 2,47Е-11 | 1,26Е-08 | GGGGK(palm) |
д327 | 2,32Е-12 | 1,93Е-11 | 1,28Е-08 | GGGGK(gEpalm) |
д321 | 2,79Е-11 | 2,72Е-11 | 6,41Е-09 | KNNRNNIAK |
д322 | 3,55Е-12 | 1,06Е-11 | 1,72Е-09 | KNNRNNIAK(palm) |
Сокращения.
K(gE-palm)=HH3HH с пальмитоиловой группой, конъюгированной с азотом в положении эпсилон посредством линкера на основе гамма-глутаминовой кислоты.
К(Айх-ра1т)=лизин с пальмитоиловой группой, конъюгированной с азотом в положении эпсилон посредством линкера на основе аминогексановой кислоты.
К(ЬА-ра1т)=лизин с пальмитоиловой группой, конъюгированной с азотом в положении эпсилон посредством линкера на основе бета-аланина; Aib, аминоизомасляная кислота.
К(ра1ш)=лизин с пальмитоиловой группой, непосредственно конъюгированной с азотом в положении эпсилон.
Анализы опосредованной рецептором глюкагона и GLP-1 выработки с АМР в присутствии плазменных концентраций сывороточного альбумина (анализ 2).
Показатели агонистической специфической активности пептидов, индуцирующих выработку сАМР, измеряли в клетках СНО, экспрессирующих рецепторы глюкагона (сокращенно GlucR или GCGR) или рецепторы GLP-1 человека, крысы или мыши, в присутствии сывороточного альбумина человека, крысы или мыши в концентрации 4,4, 3,2 и 3,2% соответственно следующим образом.
Клетки СНО со стабильной рекомбинантной экспрессией рецептора GlucR или GLP-1 человека, мыши или крысы культивировали в DMEM с 10% FBS и генетицином (100 мкг/мл). Криоконсервированные исходные суспензии клеток получали в 1 х бессывороточной среде для замораживания клеток на основе DMSO (Sigma Aldrich) в количестве 2х107 /флакон и хранили при -80°С. Клетки быстро размораживали при 37°С и затем разводили в буфере для анализа (DMEM), содержащем сывороточный альбумин в концентрации 4,4, 3,2 и 3,2% соответственно в случае сывороточного альбумина человека, крысы и мыши. Пептиды серийно разводили в DMSO, а затем разводили в 100 раз в DMEM, содержащей сывороточный альбумин в указанной конечной концентрации. Разведенные пептиды затем переносили в 384-луночные микротитрационные планшеты для анализа с черными мелкими лунками. В планшеты для
-25 043848 анализа добавляли клетки и инкубировали в течение 30 мин. при комнатной температуре. После инкубирования анализ прекращали и измеряли уровни cAMP с применением набора для анализа HTRF® dynamic d2 сАМР, доступного от CisBio Bioassays, в соответствии с руководствами производителя. Планшеты считывали на флуоресцентных планшет-ридерах ENVISION® от Perkin Elmer. Сывороточный альбумин человека и крысы приобретали у Sigma Aldrich, а сывороточный альбумин мыши у Equitech Bio Ltd. Данные преобразовывали в % дельта F, как описано в руководствах производителя, и анализировали с помощью 4-параметрической логистической модели для определения значений EC50. Значения EC50 в анализе 2 для определенных пептидов показаны в табл. 5. Определенные значения ЕС50 в анализе 2 зависели как от характерной специфической активности тестируемых пептидов в отношении рецепторов GLP1 и глюкагона в рекомбинантных линиях клеток, так и от аффинности пептида к сывороточному альбумину, с помощью которой определяли количество свободного пептида. Связывание с сывороточным альбумином способствовало повышению получаемого значения ЕС50. Долю свободного пептида при плазменных концентрациях альбумина и значение ЕС50 при 0% HSA можно рассчитывать исходя из изменения выработки сАМР при определенной концентрации HSA. Например, для G730 и G933 получали значения содержания свободного пептида, составляющие 0,85 и 0,29%, при 4,4% HSA, и значения ЕС50 в отношении GLP1R, составляющие 7 и 6 пМ, при 0% HSA соответственно. Для G797 и G849 получали значения содержания свободного пептида, составляющие 0,82 и 0,48%, при 4,4% HSA, и значения ЕС50 в отношении GLP1R, составляющие 7 и 2 пМ, при 0% HSA соответственно. Для сравнения соотношения активностей в отношении GLP1R и GlucR среди разных пептидов и при разных условиях, можно было провести корреляционный анализ с применением расчета, приведенного ниже, где значения ЕС50 соотносили со значениями ЕС50 природных лигандов.
Таблица 5
Выраженные в ЕС50 специфические активности пептидов, являющихся агонистами GLP-1/глюкагона, в присутствии плазменных концентраций сывороточного альбумина (анализ 2)
Анализ с 4,4% сывороточного альбумина человека | Анализ с 3,2% сывороточного альбумина мыши | Анализ с 3,2% сывороточного альбумина крысы | |||||||
Пептид | ЕС50 Для GLP1R челове ка | ЕС50 Для GlucR челове ка | Соотн ошени е GlucR челове ка/GLP 1R челове ка1 | ЕС50 Для GLP1R мыши | ЕС50 Для GlucR мыши | Соотн ошени е GlucR мыши/ GLP1R мыши1 | ЕС50 Для GLP1R крысы | ЕС50 Для GlucR крысы | Соотн ошени е GlucR крысы /GLP1R крысы |
пМ | пМ | пМ | пМ | пМ | пМ | ||||
G730 | 455 | 402 | 0,122 | 1100 | 5460 | 0,04 | 81 | 45080 | 0,06 |
G797 | 739 | 1137 | 0,07 | 290 | 764 | 0,08 | 60 | 23170 | 0,08 |
G849 | 172 | 79 | 0,235 | 88 | 103 | 0,17 | 44 | 4055 | 0,33 |
G933 | 943 | 564 | 0,179 | 540 | 377 | 0,29 | 136 | 15500 | 0,27 |
G865 | 150 | 570 | 0,027 | 96 | 1100 | 0,021 | 18 | 87100 | 0,01 |
G796 | 140 | 53 | 0,275 | 130 | 34 | 0,78 | 23 | 2000 | 0,36 |
G812 | 316 | 764 | 0,044 | 130 | 947 | 0,032 | 19 | 14100 | 0,04 |
G380 | 6543 | 53590 | 0,013 | 15000 | 576000 | 0,006 | |||
GLP1 | 25 | 21 | 1,9 | ||||||
Глюкагон | 2,7 | 9700 | 4,97 | 557 | 60 |
1 Соотношения GlucR/GLP1R определяли следующим образом:
относительная специфическая активность в отношении GlucR=EC50 глюкагона/ЕС50 тестируемого пептида;
относительная специфическая активность в отношении GLP1R=EC5O GLP1/EC50 тестируемого пептида;
соотношение GlucR/GLP1R=относительная специфическая активность в отношении GlucR/относительная специфическая активность в отношении GLP1R.
Тестирование стабильности пептидов в плазме крови.
Стабильность пептидов G730, G797, G849 и G933 в плазме крови определяли следующим образом.
Исходные растворы пептидов с концентрацией приблизительно 200 мкмоль/л получали путем взвешивания пептида в виде твердого вещества в пробирке Eppendorf с низкой связывающей способностью и растворения в DMSO. 10 мкл исходных растворов добавляли к 990 мкл плазмы крови в пробирке Eppendorf с низкой связывающей способностью с получением в результате начальных концентраций
- 26 043848 пептидов в плазме крови, составляющих приблизительно 2 мкмоль/л. Замороженную контрольную плазму крови, полученную от человека, крысы и мыши, размораживали и нагревали до температуры 37°С перед добавлением исходного раствора. Образцы плазмы крови с добавлением известного количества измеряемого вещества осторожно смешивали и обеспечивали уравновешивание в течение приблизительно 5 мин перед началом эксперимента. Образцы плазмы крови инкубировали в течение 48 ч в CO2 инкубаторе от GalaxyR при 37° С. Взятие образцов (30 мкл) выполняли через 0, 1, 2, 6,5, 17, 24 и 48 ч. Образцы хранили при -70°С до проведения анализа.
Образцы плазмы крови анализировали следующим образом. Образцы плазмы крови объемом 30 мкл подвергали осаждению белков с помощью 180 мл холодного этанола в 96-луночном планшете с низкой связывающей способностью (Eppendorf Protein LoBind). После смешивания и центрифугирования 100 мкл надосадочной жидкости переносили в новый планшет и 1 мкл вводили в аналитическую колонку.
Анализ выполняли с применением μLC-системы (LC Exigent pLC), сопряженной с массспектрометром с умеренным и высоким разрешением (PenTOF от Perkin Elmer) с ионизацией распылением в режиме положительных ионов. Аналитическая колонка представляла собой колонку Poroshell от Agilent (изготовленую по заказу) с характеристиками: 5 см, 1 мм, С18, с размером частиц 2,7 мкм. Расход: 0,1 мл/мин, с применением медленного градиента в обращенной фазе. Применяемые подвижные фазы представляли собой ацетонитрил и воду, содержащую 0,1% муравьиной кислоты.
Полученные данные оценивали неавтоматизированным способом в отношении следующих продуктов распада: продукт с массой +1 (кислота) и продукт расщепления под действием DPP IV. Продукты с массой +1 могут образовываться в результате деамидирования на амидных группах глутамата или на С-конце. Продукты расщепления образуются в результате действия протеазы DPP IV в плазме крови. Как распад пептидов, так и образование продуктов пептидов выражали в процентом значении от начальной концентрации пептида. Пики объединяли и рассчитывали процент (%) оставшегося пептида: (площадь пика/площадь пика ОН)х100. Данные для момента времени 24 ч показаны в табл. 6. Уровни деамидирования и расщепления под действием DPP IV были низкими для G797 и G933.
Таблица 6
Стабильность пептидов в плазме крови | |||||||||
Стабильность в плазме ; | Стабильность в плазме | Стабильность в плазме | |||||||
крови мыши через 24 ч. j | крови человека через 24 ч. : | крови крысы через 24 ч. | |||||||
% | % | % ; | % | % | % | % | % | ||
стаби | про | расщепленно | стаби | про | ί расщепленно | стаби | % | расщепленно | |
льног | д. с | го под | льног | д. с | го под | льног | про | : го под | |
о | мае | действием | о | мае | действием | о | д. С | действием | |
пепти | сой | DPP | пепти | сой | DPP | пепти | мае | DPP | |
да | +1 | продукта/рас | да | +1 | продукта/рас ; | да | сой | продукта/рас | |
щепленного | щепленного ; | +1 | щепленного | ||||||
под | под | под | |||||||
действием | действием | действием | |||||||
DPP | DPP | DPP | |||||||
Пеп | продукта с | продукта с ; | продукта с | ||||||
тид | массой +1 | массой +1 | массой +1 | ||||||
G73 | |||||||||
0 | 65 | 15 | 14/5 ; | 100 | <1 | <1 | 24 | 58 | 2 |
G79 | |||||||||
7 | 84 | <1 | 1 ; | 85 | <1 | <1 | 60 | <1 | 1 |
G84 | |||||||||
9 | 38 | <1 | 22 ; | 100 | <1 | <1 | 69 | 16 | 3 |
G93 3 | 83 | ..... 1........ j | 86 | <1 | 85 | <1 |
Растворимость.
Растворимость пептидов оценивали в ряде буферных сред с pH в диапазоне от 4,5 до 8,0 следующим образом. Пептиды, являющиеся агонистами GLP-1/глюкагона, в формах высушенных порошков разводили в различных буферах при комнатной температуре. Поглощение измеряли при 280 нм с применением спектрофотометра NanoDrop 2000, и концентрацию пептида рассчитывали с применением следующего уравнения:
С = (A280*Mw)/8, где с - концентрация;
ε - коэффициент поглощения;
Mw - молекулярная масса;
А280 - поглощение при 280 нм;
ε = (1 х Тгр = 5560) + (1 х Туг = 1200).
Результаты показаны в табл. 7. Каждый из пептидов при концентрации 0,8 мг/мл был растворим в диапазоне pH (от 6,5 до 8,5). G730 был растворим в диапазоне pH от 4,5 до 8,0, G797 был растворим в диапазоне pH от 6 до 8,0, и G933 был растворим в диапазоне pH от 6 до 8,0. Растворимость G933 тестировали в ряде различных буферных систем, также показанных в табл. 7. G933 был растворим при концентрации
- 27 043848 мг/мл по меньшей мере в следующих буферных системах: гистидин (pH 6 и 7; ионная сила: от
0,25 до 100 мМ), фосфат натрия (pH 6-7,5; ионная сила: от 0,25 до 100 мм) и tris/гидроксиметиламинометан (pH 7-9; ионная сила: от 0,25 до 100 мМ).
Таблица 7
Профиль растворимости пептидов (ионная сила всех буферов: 100 мМ)
Буфер | Конц, (мг/мл) при А280 Целевая 1 мг/мл | |||
G730 | G797 | G849 | G933 | |
Глутаматный, pH 4,5 | 0,83 | 0,023 | Не определено | 0,02 |
Ацетатный, pH 5 | Не определено | Не определено | Не определено | 0,03 |
Сукцинатный, pH 5 | Не определено | Не определено | Не определено | 1,1 |
Фосфатный, pH 6 | 0,14 | 0,84 | 0,06 | 1,2 |
Гистидиновый, pH 6 | Не определено | Не определено | Не определено | 1,2 |
Фосфатный, pH 6,5 | 0,83 | 0,84 | Не определено | Не определено |
Фосфатный, pH 7,0 | Не определено | Не определено | Не определено | 1,1 |
Гистидиновый, pH 7,0 | Не определено | Не определено | Не определено | 1,1 |
Фосфатный, pH 7,5 | 0,85 | 0,86 | Не определено | 1,2 |
Tris, pH 7,5 | 0,83 | 0,89 | 0,89 | 1,2 |
Tris, pH 8,0 | 1,1 | 0,83 | 0,89 | 1,2 |
Составы.
Растворимость пептидов оценивали в трех различных изотонических составах.
1. Базовый состав (DF)=0,1 М Tris, pH 7,5, 150 мМ маннита. Конечное значение pH состава 7,2.
2. Дополнительный состав 1 (BF1)=0,05 М Tris, 50 мМ аргинина/пролина. Конечное значение pH состава 8,0.
3. Дополнительный состав 2 (BF2)=натрий-фосфатный буфер (pH 8)/1,85% вес./об., пропиленгликоля. Конечное значение pH состава 7,0.
Растворимость измеряли, как подробно описано выше, и результаты показаны в табл. 8. G730, G797 и G933 были растворимы до по меньшей мере 5 мг/мл в DF, максимальная растворимость G849 в DF составляла 3,7 мг/мл, G797 был растворим до по меньшей мере 10 мг/мл в BF1 и G933 был растворим до по меньшей мере 10 мг/мл в BF2.
Таблица 8
Растворимость пептидов в составе
Основной кандидат | Концентрация в составе | Состав | Растворимость при 10 мг/мл (BF2) |
G730 | 5 мг/мл | DF | нет |
G797 | 5 мг/мл | DF/BF1 | да |
G849 | 3,7 мг/мл | DF | не определено |
G933 | 5 мг/мл | DF | да |
Концентрацию определяли при А280 нм.
Стабильность в DF оценивали путем измерения чистоты с помощью обращенно-фазовой ультравысокоэффективной жидкостной хроматографии (RP UPLC) в течение одного месяца. Условия хранения составляли 5, 25, 40 и -80°С. Результаты показаны в табл. 9 и 10.
- 28 043848
Таблица 9
Чистота пептидов в составе спустя 1 месяц хранения в условиях исследования стабильности
Пептид | 5°С | 25 °C | 40 °C | минус 80°С |
G730 DF | 97,7 | 96,1 | 86,1 | 97,7 |
G797 BF1 | 98,72 | 98,84 | 77,54 | Не определено |
G849_DF | 95,5 | Не определено | Не определено | Не определено |
G933_DF | 97,8 | 95,9 | 88,9 | 98,9 |
Таблица 10
Потеря чистоты пептидов в составе (% по сравнению с Т0) спустя 1 месяц хранения в условиях исследования стабильности
Основной кандидат | 5°C | 25°C | 40°С | минус 80°С |
G730_DF | 0,82 | 2,43 | 12,54 | 0,3 |
G797_BF1 | 0,24 | 0,12 | 21,65 | 0,3 |
G849_DF | не определено | не определено | не определено | не определено |
G933_DF | 0,3 | 2,2 | 9,3 | (-)0,8 |
Все пептиды характеризовались приемлемыми свойствами в отношении растворимости, способности составления и стабильности.
Пример 3. Исследования in vivo.
G730, G797 и G812 (исследование А).
Определенные раскрытые в данном документе пептиды, являющиеся агонистами GLP-1/глюкагона, тестировали на мышиной модели ожирения, индуцированной рационом (DIO), следующим образом. Самок линии C57/B16JHsdO1a (полученных из Harlan Laboratories, Великобритания) в возрасте 9-11 недель помещали на рацион с высоким содержанием жиров, состоящий из D12492 (Research Diets, Нью-Джерси, США) и шоколадных изделий delicato ball (Delicata Bakverk, Швеция), и содержали на этом рационе в течение 16 недель до прибытия в виварий, в течение трехнедельного периода акклиматизации и в течение периода обработки лекарственным средством; содержание калорий в двух компонентах рациона показано в табл. 11. Мышей разделяли на 9 групп (n=5-6), и обработку начинали в возрасте 29 недель. Группы обработки и дозы показаны в табл. 12.
Таблица 11
Содержание рациона DIO
Продукт | Белки (%) | Углеводы (%) | Жиры (%) | Ккал жиров (%) | Всего ккал/грамм |
Delicatoball (Delicata Bakverk АВ, Гуддинге, Швеция) | 5 | 53 | 31 | 54 | 5,05 |
D12492 (Research Diets, Нью-Джерси, США) | 26,2 | 26,3 | 34,9 60 Таблица 12 | 5,24 |
Группы обработки для исследования А
Пептид | Доза | Число животных |
Инертная среда | Не определяется | 6 |
Лираглутид | 26,6 нмоль/кг | 6 |
G730 | 10 нмоль/кг | 6 |
G730 | 20 нмоль/кг | 5 |
G730 | 50 нмоль/кг | 6 |
G797 | 5 нмоль/кг | 5 |
G797 | 20 нмоль/кг | 6 |
G797 | 50 нмоль/кг | 6 |
G812 | 20 нмоль/кг | 5 |
Пептиды G730, G797 и G812, являющиеся агонистами GLP-1/глюкагона, а также лираглутид составляли в инертной среде, 100 мМ Tris/150 мМ маннита, pH 7,4. Средства для обработки вводили подкожно два раза в день в течение 14 дней, при этом животных содержали на рационе с высоким содержанием жиров. Вес тела животных контролировали ежедневно в течение периода введения доз. В день 14 получали образцы крови для измерения уровня глюкозы и инсулина в плазме крови от мышей, находящихся в сознании, после 4-часового периода голодания. Затем мышей анестезировали изофлураном и
- 29 043848 последний образец крови собирали из капиллярного русла, расположенного за глазом. Измеряли следующие параметры: показатели биохимического анализа крови, представляющие собой уровни триглицеридов, общего холестерина, неэстерифицированных жирных кислот (NEFA), бета-гидроксибутирата и фактора роста фибробластов 21 (FGF21) (табл. 14 и 15 ниже). Влияние обработки лираглутидом и пептидами G730, G797 и G812, являющимися агонистами GLP-1/глюкагона, на вес тела по сравнению с лираглутидом и инертной средой, показано на фиг. 1-4. Животные, которых обрабатывали G730 либо G797, характеризовались дозозависимой и непрерывной потерей веса в течение 14-дневного периода введения доз. У животных, которых обрабатывали 50 нмоль/кг G730 и G797, наблюдалось приблизительно 24% изменение веса в день 14 по сравнению с животными, которых обрабатывали инертной средой.
Мыши, которых обрабатывали G730 или G797, характеризовались дозозависимым снижением уровней глюкозы в день 14 (табл. 13). Также наблюдали сниженные уровни инсулина при этих двух обработках, особенно при более высоких дозах (табл. 13). Индекс гомеостатической модели оценки чувствительности к инсулину (НОМА) значительно повышался при 20 нмоль/кг G730 и 20 и 50 нмоль/кг G797. НОМА представлял собой способ моделирования, в котором используют суммарные значения уровней инсулина и глюкозы в плазме крови для оценки функции β-клеток и инсулинорезистентности (табл. 14). Уровень общего холестерина в плазме крови снижался как посредством лираглутида, так и посредством G730 и G797 при всех дозах, при этом менее выраженные изменения были характерны для уровней неэстерифицированных жирных кислот (NEFA) в плазме крови и уровней триглицеридов (TG) в плазме крови и печени. Наблюдали тенденции к повышенным уровням бета-гидроксибутирата (ВеНу) в соответствии с потерей веса тела. Уровень фактора роста фибробластов 21 (FGF21) в целом повышался при обработке пептидом, являющимся двойным агонистом GLP-1/глюкагона.
Таблица 13
Влияние обработки пептидом, являющимся агонистом GLP-1/глюкагона, на уровень глюкозы, инсулина и НОМА
Пептид | доза (нмоль/кг) | ИСХОДНЫЙ bw (г) | SEM | BW в день 14 (% изменения от ср. знач. инерт. среды | SEM | Уровень глюкозы (ММ) | SEM | Уровень инсулина (НМ) | SEM | НОМА | SEM | ||||||||||
инертная среда | О | 47,4 | + | 3,7 | О | + | 0 | 8,8 | + | 0,6 | 0,8 | + | 0,23 | 7,2 | + | 2 | |||||
Лираглутид | 27 | 47,5 | + | 1,8 | -13,3 | + | 1,4 | 8 | + | 0,2 | 0,3 | + | 0,12 | 2,8 | + | 1,1 | |||||
G73O | 10 | 44,5- | + | 2,2 | -7,5 | + | 1,1 | 7,2 | + | 0,3 | * | 0,4 | + | 0,14 | 3,3 | + | 1,1 | ||||
G73O | 20 | 45,9 | + | 3,6 | -15,6 | + | 2,2 | 6,7 | + | 0,6 | * | 0,2 | + | 0,06 | 1,7 | + | 0,5 | * | |||
G73O | 50 | 46,1 | + | 2,4 | -24,0 | + | 5,1 | 5,9 | + | 0,7 | * | 0,3 | + | 0,13 | 2,1 | + | 1,0 | ||||
G797 | 5 | 47,5- | + | 1,2 | -5,7 | + | 3,2 | 7,5 | + | 0,3 | 0,7 | + | 0,25- | 5,3- | + | 2,0 | |||||
G797 | 20 | 47,4 | + | 2,2 | -16,0 | + | 4,4 | 7,1 | + | 0,6 | 0,3 | + | 0,09 | 2,0 | + | 0,8 | * | ||||
G797 | 50 | 47,2 | + | 1,8 | -25,4 | + | 2 | 6,6 | + | 0,5 | * | 0,1 | + | 0,01 | * | 0,6 | + | од | * | ||
G812 | 20 | 49,2 | + | 3,4 | -8,7 | + | 1,4 | 8 | + | 0,4 | 0,7 | + | 0,23 | 6 | + | 2,1 |
Результаты оценивали с помощью t-критерия для двустороннего распределения с двумя выборками при неодинаковой дисперсии.
* Указывает р<0,05 по сравнению с инертной средой.
Таблица 14
Влияние обработки пептидом, являющимся агонистом GLP-1/глюкагона, на дополнительные показатели биохимического анализа крови
Пептид | доза (нмоль/кг) | уровень TG в печени (г TG/100r ткани) | SEM | уровень TG в плазме крови (мМ) | SEM | уровень NEFA в плазме крови (иМ) | SEM | уровень холестерина в плазме крови (мМ) | SEM | уровень ВеНу (мкмоль/л) | SEM | уровень FGF21 (пг/мл) | SEM | ||||||||||||
инертная среда | 0 | 13,6 | + | 0,5 | 0,19 | + | 0,02 | 0,22 | + | 0,01 | 4,65 | + | ОД 2 | 389 | + | 46 | 2757 | + | 317 | ||||||
Лираглутид | 27 | 13,1 | + | 2Д | 0,24 | + | 0,01 | 0,24 | + | 0,01 | 3,75 | + | 0,16 | * | 345 | + | 21 | 2481 | + | 650 | |||||
6790 | 10 | 9,0 | + | 0,9 | * | 0,21 | + | 0,02 | 0,28 | + | 0,02 | * | 3,10 | 0,16 | 428 | + | 54 | 1963 | 219 | ||||||
G790 | 20 | 17,7 | + | 3,4 | 0,20 | + | 0,03 | 0,26 | + | 0,03 | 2Д5 | + | 0,30 | 750 | + | 318 | 2235 | + | 300 | ||||||
6790 | 50 | 23Д | + | 10,1 | 0,23 | + | 0,03 | 0,32 | + | 0,05 | 2,19 | + | 0,23 | * | 1477 | + | 479 | 5294 | + | 2307 | |||||
G797 | 5 | 13,0 | + | 1Д | 0,16 | + | 0,02 | 0,24 | + | 0,03 | 3,32 | + | 0,39 | « | 392 | + | 111 | 2362 | + | 342 | |||||
G797 | 20 | 17,7 | + | 5,7 | 0,14 | + | 0,02 | 0,27 | + | 0,05 | 2,44 | + | 0,27 | * | 659 | + | 240 | 7277 | + | 2455 | |||||
G797 | 50 | 15,6 | + | 5,8 | 0,12 | + | 0,02 | = | 0,24 | + | 0,02 | 1,.85- | 0,07 | = | 1257 | + | 285 | 5373 | + | 813 | * | ||||
G812 | 20 | 7,9 | + | 0,6 | » | 0,13 | + | 0,01 | 0,21 | + | 0,01 | 2,79 | + | 0,24 | 333 | + | 63 | 3207 | + | 388 |
Результаты оценивали с помощью t-критерия для двустороннего распределения с двумя выборками при неодинаковой дисперсии.
* Указывает р<0,05 по сравнению с инертной средой.
G865, G933 и G796 (исследование В).
Дополнительный набор пептидов, являющихся агонистами GLP-1/глюкагона, тестировали на модели ожирения, индуцированной рационом, с применением аналогичного протокола, как указанно выше, но с группами обработки и дозами, показанными в табл. 15.
- 30 043848
Таблица 15
Группы обработки для исследования В______
Пептид | Доза | Число животных |
Инертная среда | Не определяется | 6 |
Лираглутид | 26,6 нмоль/кг | 6 |
G865 | 5 нмоль/кг | 6 |
G865 | 10 нмоль/кг | 6 |
G933 | 5 нмоль/кг | 6 |
G933 | 10 нмоль/кг | 6 |
G796 | 20 нмоль/кг | 6 |
G796 | 50 нмоль/кг | 6 |
Пептиды G865, G933 и G796, являющиеся агонистами GLP-1/глюкагона, а также лираглутид составляли в инертной среде, 100 мМ Tris/150 мМ маннита, pH 7,4. Средства для обработки вводили подкожно два раза в день в течение 14 дней, при этом животных содержали на рационе с высоким содержанием жиров. Вес тела животных контролировали ежедневно в течение периода введения доз. В день 14 получали образцы крови для измерения уровня глюкозы и инсулина в плазме крови от мышей, находящихся в сознании, после 4-часового периода голодания. Затем мышей анестезировали изофлураном и последний образец крови собирали из капиллярного русла, расположенного за глазом. Измеряли следующие параметры: показатели биохимического анализа крови, представляющие собой уровни триглицеридов, общего холестерина, неэстерифицированных жирных кислот (NEFA), бета-гидроксибутирата и фактора роста фибробластов 21 (FGF21) (табл. 16 и 17 ниже). Влияние обработки лираглутидом и пептидами G933, G865, G796, являющимися агонистами GLP-1/глюкагона, на вес тела по сравнению с лираглутидом и инертной средой, показано на фиг. 5-8. Животные, которых обрабатывали G933, G865 либо G796, характеризовались дозозависимой и непрерывной потерей веса в течение 14-дневного периода введения доз. Уровни глюкозы, уровни инсулина и НОМА в день 14 после обработки показаны в табл. 16. Уровни общего холестерина в плазме крови, уровни неэстерифицированных жирных кислот (NEFA) в плазме-крови, уровни триглицеридов (TG) в плазме крови и печени, уровни бета-гидроксибутирата (BeHy) и уровни фактора роста фибробластов 21 (FGF21) в день 14 после обработки показаны в табл. 17.
Таблица 16
Влияние обработки пептидом, являющимся агонистом GLP-1/глюкагона, на уровень глюкозы, инсулина и НОМА
Пептид | доза (нмоль/кг) | ИСХОДНЫЙ | SEM | BW в день 14 j % .изменения от ср. анач. мнерт. среды | SEM | Уровень глюкозы (мМ| | SEM | Уровень инсулина (нМ) | SEM | НОМА | SEM | ||||||||||
инертная среда | 0 | 46,9 | ± | 1 | 0 | ± | 0 | 8,7 | ± | 0,8 | 0,58 | ± | 0,09 | 5,05 | ± | ОД | |||||
Лираглутид | 27 | 46,3 | + | 1,7 | -14 | ± | 2,1 | 7,7 | + | 0,7 | 0,31 | ± | 0,07 | * | 2,51 | ± | 0,7 | ||||
G865 | 5 | 46,9 | + | 0,8 | -4 | + | ОД | 6,2 | + | 0,6 | и | 0,33 | + | 0,08 | 2,14 | ± | 0,6 | $ | |||
G865 | 10 | 47 | ± | 0,9 | -14 | ± | 3,4 | 6,6 | ± | 0,5 | * | 0,36 | ± | 0,06 | 2,43 | ± | 0,5 | ж | |||
G933 | 5 | 48,1 | ± | 1,6 | -11 | ± | 2,7 | 6,2 | ± | 0,8 | * | 0,53 | ± | 0,13 | 3,31 | ± | 0,8 | ||||
G933 | 10 | 48,6 | ± | 0,5 | -19 | ± | ЗД | 7,2 | ± | 0,6 | * | 0,27 | ± | 0,07 | * | 1,98 | ± | 0,6 | ΐ | ||
G796 | 20 | 50,9 | + | 1,3 | -16 | + | 0,6 | 6,1 | + | 0,2 | 0,38 | + | 0,05 | 2,2 | + | 0,2 | ¢: | ||||
G796 | 50 | 49,7 | + | 0,8 | -23 | + | 1,6 | 6,4 | + | 1,1 | * | 0,43 | + | 0,14 | 2,87 | + | 1,1 |
Результаты оценивали с помощью t-критерия для двустороннего распределения с двумя выборками при неодинаковой дисперсии.
* Указывает р<0,05 по сравнению с инертной средой.
Таблица 17
Влияние обработки пептидом, являющимся агонистом GLP-1/глюкагона, на дополнительные показатели биохимического анализа крови
Пептид | доза (нмоль/kf) | уровень TG в печени (г TG/lWr ткани] | SEM | уровень TG в плазме крови О™! | SEM | уровень NEFA в плазме крови (мМ) | SEM | уровень холестерина в плазме и рези (иМ) | SEM | уровень ВеНу (мкмоль/л) | SEM | уровень FGF21 (пг/мл) | SEM | ||||||||||||
инертная среда | 0 | 17.53 | + | 1,3 | 0,25 | + | 0.01 | 0.28 | ± | 0.03 | 4,56 | ± | 0.33 | 387,52 | ± | 87,4 | 2002 | ± | 174 | ||||||
Лираглутид | 27 | 13,4 | ± | 2.5 | 0,28 | ± | 0,03 | * | 0.29 | ± | 0,02 | 3,26 | + | 0.23 | * | 572,25 | + | 82,4 | * | 2990 | + | 729 | |||
G855 | 5 | 20,7 | ± | 5.6 | 0,26 | ± | 0,03. | 0.29 | ± | 0,05· | 3,06 | ± | 0.14 | Г | 775,06 | ± | 295,5 | * | 8151 | ± | 4788 | ||||
G855 | 10 | 22,3 | ± | 5,1 | 0,23 | ± | 0>02 | 0.27 | ± | 0,03 | 2,89 | ± | 0.24 | « | 567,46 | ± | 169,3 | к | 5953· | ± | 3409 | ||||
G933 | 5 | 11,3 | ± | 0,8 | * | 0Д9 | ± | 0,01 | 0.28 | ± | 0,03- | 2,88 | ± | 0,28 | 673,08 | ± | 117,2 | 2582 | ± | 248,0 | |||||
G933 | 10 | 14f7 | ± | 4,1 | 0Д6 | ± | 0,01 | * | 0.27 | ± | 0,03- | 2,32 | ± | 0.20 | * | 693,56 | ± | 158,3 | * | 4459· | ± | 1249,0 | |||
G796 | 20 | 9.6 | ± | 0,9 | * | 0,26 | ± | 0,05- | 0.24 | ± | 0,02 | * | 2,11 | + | 0,07 | * | 350,49 | + | 51,1 | 6441,0 | + | 1784 | |||
6796 | 50 | 9.9 | ± | 0,6 | * | 0,16 | ± | 0.01 | * | 0,21 | ± | 0,02 | 1,91 | ± | 0.05 | * | 451,8 | ± | 63,4 | 983.0 | ± | 3278 |
Результаты оценивали с помощью t-критерия для двустороннего распределения с двумя выборками при неодинаковой дисперсии.
- 31 043848 * Указывает р<0,05 по сравнению с инертной средой.
Пример 4. Исследование с однократно нарастающей дозой.
(А) Субъекты.
В общей сложности 362 субъекта дали согласие на участие в исследовании в Германии. Субъекты проходили скрининг в отношении следующих критериев включения и исключения.
Критерии включения.
Здоровые добровольцы в возрасте от 18 до 45 лет на момент скрининга.
Индекс массы тела от >22 до <30 кг/м и вес тела >70 кг.
Венозный доступ, подходящий для многократных катетеризаций.
Критерии исключения.
Любое состояние, которое будет препятствовать оценке G933 или интерпретации безопасности у субъектов или результатов исследования. Конкретные примеры включали (а) наличие в анамнезе острого или хронического панкреатита или уровень панкреатической амилазы или липазы выше верхней границы нормы (ULN) на момент скрининга;
(b) наличие в анамнезе гастропареза, требующего лечения;
(с) наличие в анамнезе хирургического вмешательства, затрагивающего верхнюю часть желудочнокишечного тракта, которое, вероятно, будет влиять на интерпретацию данных о безопасности и переносимости;
(d) наличие в анамнезе холелитиаза, приводящего к приступам острого холецистита, не поддающегося лечению с помощью холецистэктомии, или заболевания желчного пузыря;
(е) наличие в анамнезе или семейном анамнезе множественной эндокринной неоплазии 2 типа (MEN-2), уровня кальцитонина в сыворотке крови, указывающего на гиперплазию С-клеток щитовидной железы (уровень кальцитонина >50 нг/л), или медуллярной карциномы щитовидной железы на момент скрининга;
(f) наличие в анамнезе клинически значимого нарушения сердечного ритма, например, перманентной или пароксизмальной фибрилляции/трепетания предсердий, пароксизмальной суправентрикулярной тахикардии, пароксизмальной вентрикулярной тахикардии, наличие имплантированного кардиостимулирующего устройства или кардиовертера/дефибриллятора;
(g) наличие в анамнезе пролеченной или симптоматической сердечной недостаточности; и (h) наличие в анамнезе ранее полученного инфаркта миокарда или острого нарушения мозгового кровообращения (например, инсульта).
Наличие в анамнезе или наличие в данный момент заболевания желудочно-кишечного тракта, почек или печени (за исключением синдрома Жильбера) или любого другого состояния, которое, как известно, нарушает всасывание, распределение, метаболизм или выведение лекарственных средств.
Наличие в анамнезе рака за исключением немеланомного рака кожи.
Любое клинически значимое заболевание, медицинская/хирургическая процедура или травма за 4 недели до дня 1 введения доз.
Положительный результат в анализе сыворотки крови на наличие поверхностного антигена вируса гепатита В или антитела к вирусу гепатита С на момент скрининга.
Положительный результат теста на наличие вируса иммунодефицита человека (HIV) на момент скрининга или применение антиретровирусных лекарственных препаратов, что устанавливают путем изучения медицинского анамнеза или со слов субъекта.
Уровень калия или кальция в сыворотке крови, выходящий за пределы нормального диапазона значений, на момент скрининга.
Уровни креатинина, аспартатаминотраснферазы (AST), аланинаминотраснферазы (ALT) или общего билирубина в сыворотке крови, превышающие ULN, на момент скрининга.
Любые другие клинически значимые отклонения от нормы в результатах клинического биохимического анализа крови, общего анализа крови или общего анализа мочи согласно оценке исследователя также должны приводить к исключению из исследования.
Применение любых из следующих медицинских продуктов:
(а) одновременное или предшествующее применение агониста рецептора GLP-1;
(b) текущее или предшествующее применение системных кортикостероидов за последние 28 дней до скрининга; или (с) применение любых медицинских продуктов или препаратов на основе лекарственных растений, разрешенных для контроля веса тела или аппетита, запрещено, начиная за 1 неделю до дня -1 по день 7.
Не соответствующие норме показатели жизненно-важных функций после 10 мин отдыха лежа на спине, определяемые в виде любого из следующего:
(а) систолическое давление крови <90 или >140 мм рт.ст.;
(b) диастолическое давление крови <50 или >90 мм рт.ст.; или (с) частота сердечных сокращений <50 или >90 ударов в минуту (уд./мин).
Любые клинически значимые не соответствующие норме показатели ритма, проводимости (напри- 32 043848 мер, синдром Вольфа-Паркинсона-Уайта, синдром слабости синусового узла) или морфологии согласно
ECG в 12 отведениях в состоянии покоя, или любые не соответствующие норме показатели ECG, которые, по мнению исследователя, могут препятствовать интерпретации изменений интервала QT, скорректированного с учетом частоты сердечных сокращений (QTc), в том числе не соответствующая норме морфология Т-зубца или гипертрофия левого желудочка.
Удлиненный QT, рассчитанный с применением формулы Фредерика (QTcF), составляющий >450 мс, или укороченный QTcF, составляющий <340 мс, на основании результатов ECG в 12 отведениях, или наличие в семейном анамнезе синдрома удлиненного интервала QT;
Укорочение интервала PR (PQ) до <120 мс или удлинение >200 мс (атривентрикулярная блокада первой степени).
Транзиторная блокада второй степени (блокада Венкебаха во время сна не исключается), или блокада третьей степени, или атриовентрикулярная диссоциация.
Интервал QRS, выходящий за пределы диапазона 50-110 мс.
Наличие в анамнезе подтвержденного или предполагаемого злоупотребления наркотическими веществами в течение последних 3 лет.
Наличие в анамнезе злоупотребления алкоголем или избыточного потребления алкоголя в течение последних 3 лет.
Курение в данный момент (>0 сигарет в день). Также исключаются субъекты в случае положительного результата в тесте на наличие котинина на момент скрининга.
Положительный результат в анализе на наркотики на момент скрининга или приема в отделение клинического исследования или положительный результат пробы на алкоголь в выдыхаемом воздухе на момент приема в отделение клинического исследования перед введением исследуемого продукта. Субъекты, которые принимают бензодиазепины от хронической тревожности или нарушений сна, могут быть допущены для включения в исследование.
Наличие в анамнезе тяжелой формы аллергии/гиперчувствительности или текущей клинически значимой аллергии/гиперчувствительности.
Донорство цельной крови или эритроцитов или любая потеря крови в количестве >500 мл за 2 месяца до скрининга.
Прием другого нового химического соединения (определяемого как соединение, которое не было одобрено для продажи) или участие в любом другом клиническом исследовании, которое включало лечение лекарственным средством по меньшей мере за 30 дней или 5 периодов полувыведения до введения исследуемого препарата в данном исследовании (в зависимости от того, что наступает позже). Период исключения начинается за 30 дней или 5 периодов полувыведения исследуемого продукта после введения последней дозы или после последнего визита в зависимости от того, что наступает позже. Субъекты, которые дали согласие и прошли скрининг, но не были рандомизированы в данном исследовании или предшествующем исследовании, не исключаются.
Психическое заболевание, вследствие которого субъектов помещали в лечебное учреждение в результате официального или судебного решения.
После проведения скрининга 313 субъектов определили как таковых, которые не соответствовали критериям включения/исключения. Оставшихся 48 субъектов рандомизировали, и они получали G933. Демографические характеристики 48 пациентов, получавших лечение, показаны в таблице ниже.
- 33 043848
Демографические характеристики популяции пациентов, получавших лечение
Таблица 18
Параметр | Плацебо №12 | G933 | Всего №48 | ||||||
5 мкг №6 | 10 мкг №6 | 30 мкг №6 | 100 мкг №6 | 150 мкг №6 | 300 мкг №6 | Всего №36 | |||
Возраст (лет) | |||||||||
Среднее значение | 32,8 | 37,3 | 31,8 | 33,2 | 27,8 | 34,5 | 28,3 | 36 | 32,3 |
SD | 9Д | 6,4 | 6,8 | 10,4 | 4,3 | 6,5 | 5,9 | 26,12 | 7,7 |
Медиана | 29,0 | 37,0 | 34,0 | 32,5 | 28,5 | 33,0 | 26,5 | 2,29 | 31,0 |
Мин., макс. | 22, 45 | 28, 45 | 22, 39 | 20, 45 | 20, 32 | 27, 44 | 21, 38 | 25,79 | 20, 45 |
Пол | |||||||||
Мужской | 12 (100%) | 6 (100%) | 6 (100%) | 6 (100%) | 6 (100%) | 6 (100%) | 6 (100%) | 36 (100%) | 48 (100%) |
Расаа | |||||||||
Американские аборигены или коренные жители Аляски | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 1 (16,7%) | 0 | 1 (2,8%) | 1 (2,1%) |
Азиаты | 1 (8,3%) | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 1 (2,1%) |
Белые | 11 (91,7%) | 6 (100%) | 5 (83,3%) | 6 (100%) | 6 (100%) | 5 (83,3%) | 6 (100%) | 34 (94,4%) | 45 (93,8%) |
Другие | 0 | 0 | 1 (16,7%) | 0 | 0 | 0 | 0 | 1 (2,8%) | 1 (2,1%) |
Этническая принадлежность | |||||||||
Испанцы или латиноамериканцы | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 1 (16,7%) | 1 (16,7%) | 2 (5,6%) | 2 (4,2%) |
Отличные от испанцев или латиноамериканцев | 12 (100%) | 6 (100%) | 6 (100%) | 6 (100%) | 6 (100%) | 5 (83,3%) | 5 (83,3%) | 34 (94,4%) | 46 (95,8%) |
Вес (кг) | |||||||||
Среднее значение | 84,71 | 88,82 | 81,82 | 81,22 | 84,93 | 83,68 | 91,03 | 85,25 | 85,11 |
SD | 12,10 | 10,48 | 7,66 | 7,28 | 8,23 | 12,90 | 11,07 | 9,79 | 10,28 |
Медиана | 78,30 | 88,15 | 80,80 | 78,95 | 83,80 | 77,85 | 94,65 | 83,60 | 81,90 |
Мин., макс. | 73,8, 108,1 | 77,2, 107,5 | 72,8, 90,5 | 74,2, 90,6 | 75,9, 95,9 | 71,2, 101,0 | 74,3, 101,0 | 71,2, | 71,2, |
107,5 | 108,1 | ||||||||
Рост (см) | |||||||||
Среднее значение | 181,28 | 179,17 | 182,83 | 181,17 | 180,30 | 177,67 | 182,00 | 180,52 | 180,71 |
SD | 5,33 | 5,31 | 8,57 | 4,45 | 6,71 | 6,38 | 3,41 | 5,86 | 5,69 |
Медиана | 180,00 | 177,00 | 179,00 | 181,50 | 180,00 | 175,00 | 182,00 | 179,50 | 180,00 |
Мин., макс. | 174,0, 191,0 | 174,0, 188,0 | 176,0, 198,0 | 174,0, 186,0 | 171,0, 190,0 | 170,0, 186,0 | 177,0, 187,0 | 170,0, 198,0 | 170,0, 198,0 |
BMI (кг/м2) | |||||||||
Среднее значение | 25,67 | 27,61 | 24,47 | 24,74 | 26,09 | 26,36 | 27,44 | 26,12 | 26,01 |
SD | 2,41 | 2,25 | 1,64 | 1,91 | 1,55 | 2,16 | 2,82 | 2,29 | 2,30 |
Медиана | 25,27 | 27,39 | 24,24 | 24,51 | 26,19 | 25,42 | 28,64 | 25,79 | 25,79 |
Мин., макс. | 22,3, 29,9 | 24,4, 30,4 | 22,7, 27,1 | 22,2, 27,5 | 23,7, 28,0 | 24,6, 29,5 | 22,4, 29,8 | 22,2, 30,4 | 22,2, 30,4 |
ВМ1=индекс массы тела;
макс.=максимальное значение;
мин.=минимальное значение;
N=число субъектов;
SD=стандартное отклонение.
а Каждая расовая категория включает субъектов, которые выбрали лишь одну категорию.
(В) План исследования.
Выполняли рандомизированное слепое исследование фазы 1 с применением однократной нарастающей дозы. Блок-схема предполагаемого исследования представлена на фиг. 9. Планировали включение восьми субъектов на когорту. В каждой когорте субъектов рандомизировали в соотношении 3:1 к введению G933 (MEDI0382) или плацебо. На основании моделирования PK/PD, проведенного с применением данных клинической литературы по модуляторам GPL-1 и глюкагона, предсказывали клинически эффективную дозу G933, которая находилась в диапазоне от 300 до 2000 мкг/день. Таким образом, выбирали возрастание дозы G933, соответствующее 5, 10, 30, 100, 300, 600, 1200 или 2000 мкг. Данные о безопасности по каждой когорте оценивали до того, как выполняли повышение дозы. Для дополнительного повышения безопасности кратности увеличения были наибольшими на нижнем пределе предлагаемого диапазона доз, и они постепенно снижались таким образом, что последнее повышение дозы было менее чем 2-кратное. Максимальный предлагаемый уровень дозы в данном исследовании составлял 2000 мкг. Предел безопасности при максимальной предлагаемой дозе для человека, составляющей 2000 мкг, основанный на данных AUC у обезьян, составлял 0,8.
Субъекты получали 1 дозу G933 в ходе исследования. Для всех субъектов скрининговый визит проводили за 28 дней до рандомизации (со дня -29 по день -2). Субъектов помещали в отделение вечером накануне приема исследуемого продукта (день -1) в целях обеспечения повторной оценки критериев от
- 34 043848 бора, выполнения мониторинга посредством кардиотелеметрии в течение 4-часового периода и стандартизации уровня физической активности до начала введения доз на следующее утро. В день 1, после ночного голодания в течение как минимум 8 ч, получали оценки безопасности и образцы крови исходного уровня, и субъекту вводили однократную подкожную (SC) дозу G933 либо плацебо. Субъекты оставались на базе клинического исследования для проведения запланированных на определенное время оценок и мониторинга безопасности (в том числе мониторинга сердца посредством непрерывной телеметрии и периодических цифровых электрокардиограмм [ECG]) в течение дня 1 и дня 2, и оставались в помещении до выписки. Субъектов выписывали из отделения утром в день 3 после выполнения оценок безопасности и сбора образцов крови. Субъекты возвращались в отделение для амбулаторных визитов в дни 4, 7 и 28.
После скрининга продолжительность исследования для каждого субъекта составляла примерно 29 дней, которые включали период оценки в стационаре и период последующего наблюдения в амбулатории.
Для оценок фармакодинамических характеристик в день 1 образцы крови для измерения уровней глюкозы и инсулина отбирали перед каждым приемом пищи (завтраком, обедом и ужином) и через 1 и 2 ч (±15 мин) после начала каждого приема пищи.
Регистрировали начало каждого приема пищи в день 1, и каждый прием пищи должен был завершиться в течение 30 мин.
Для иммунологических оценок взятие образцов для определения наличия антитела к лекарственному средству (ADA) выполняли в день 1, через примерно 1 неделю после введения дозы и через примерно 1 месяц после введения дозы.
Для оценок фармакокинетических характеристик (РК) моменты времени забора образцов представляли собой до введения дозы и через 1, 2, 4, 6, 8, 10, 12, 16, 24, 36, 48 и 72 ч после введения дозы (±15 мин для первых 2 ч и ±30 мин для остальных моментов времени до 48 ч после введения дозы). В день 1 образцы для оценки РК также отбирали перед каждым приемом пищи (завтраком, обедом и ужином), через 1 и 2 ч (±15 мин) после начала каждого приема пищи.
(С) Результаты.
Повышение дозы выполняли от 5 до 300 мкг, как планировали в соответствии с протоколом; однако доза, составляющая 300 мкг, не являлась переносимой, о чем свидетельствовали явления значительной рвоты, и для конечной когорты дозу снижали до 150 мкг. Блок-схема фактического исследования представлена на фиг. 9, и распределение субъектов показано на фиг. 10.
РК-параметры не могли получить для дозы G933, составляющей 5 мкг, поскольку только у 3 субъектов наблюдался по меньшей мере один подлежащий количественному определению уровень в плазме крови. Концентрации G933 в плазме крови поддавались измерению в пределах периода от 2-4,5 до 16-24 ч у всех субъектов в группах введения 5 и 10 мкг G933. Концентрации G933 в плазме крови поддавались измерению в пределах периода до 48 ч у всех субъектов в группах введения 100 и 300 мкг G933. Ни у одного из субъектов не выявляли подлежащих количественному определению концентраций G933 в плазме крови через 72 ч после введения дозы.
Профили зависимости средней концентрации от времени для всех доз G933 характеризовались очевидным моноэкспоненциальным снижением после достижения пика с умеренно быстрым падением значений концентрации в период между достижением пика и через 48 ч после введения дозы.
Оцененные РК-параметры однократной дозы G933 в плазме крови приведены с группированием по субъектах и лечению и кратко описаны с группированием по лечению в табл. 19.
- 35 043848
Таблица 19
Краткое описание оцененных медианных фармакокинетических параметров однократной дозы G933 (геометрическое среднее [95% CI])
Доза (мкг) | ||||||
Параметры | 5 | 10 | 30 | 100 | 150 | 300 |
Стах (нг/мл)а | 0,47 [0,44-0,50] N=3 | 0,80 [0,62-1,03] N=6 | 3,00 [2,59-3,47] N=6 | 6,19 [4,29-8,92] N=6 | 8,97 [6,20-12,97] N=6 | 20,98 [16,21-27,14] N=6 |
Ттах (ч.)Ь | 7,00 [5,88-10,00] N=3 | 6,94 [4,00-13,50] N=6 | 9,00 [4,50-10,02] N=6 | 7,53 [4,50-10,00] N=6 | 9,00 [4,00-12,00] N=6 | 4,50 [4,00-5,88] N=6 |
11/2 (ч.)а | ПС | ПС | 11,43 [8,42-15,50] N=4 | 12,07 [9,58-15,20] N=6 | 10,97 [8,60-13,99] N=6 | 9,54 [8,63-10,56] N=6 |
АиС(0-последн.) (нг.ч./мл)а | 1,96 [0,58-6,64] N=3 | 9,97 [7,01-14,17] N=6 | 51,99 [44,55-60,67] N=6 | 137,33 [106,15-177,67] N=6 | 194,60 [162,84-232,56] N=6 | 364,47 [298,50-445,02] N=6 |
AUC(O-oo) (нг.ч./мл)а | ПС | ПС | 63,10 [51,49-77,33] N=4 | 150,03 [118,44-190,04] N=6 | 209,03 [178,45-244,86] N=6 | 379,12 [310,26-463,25] N=6 |
% экстрап. AUC(O-oo) (нг.ч./мл)с | ПС | ПС | 13,97 [7,22-20,73] N=4 | 8,35 [3,21-13,48] N=6 | 6,80 [1,92-11,69] N=6 | 3,86 [2,64-5,07] N=6 |
CL/f (л/ч.)а | ПС | ПС | 0,48 [0,39-0,58] N=4 | 0,67 [0,53-0,84] N=6 | 0,72 [0,61-0,84] N=6 | 0,79 [0,65-0,97] N=6 |
% экстрап. AUC(0-№)=процентное значение AUC(0-^), полученное в результате экстраполяции;
AUC=площадь под кривой зависимости концентрации от времени;
AUC(0-последн.)=AUC, начиная с нулевого момента времени до последней подлежащей количественному определению концентрации;
AUC(0-^)=AUC, начиная с нулевого момента времени до бесконечности;
CL/f=кажущийся клиренс;
Cmax=максимальная наблюдаемая концентрация;
С^доверительный интервал;
Ш2=период полувыведения;
Tmax=время до достижения Cmax;
п=число значений, включенных в статистический анализ;
nc=не рассчитано.
a Геометрическое среднее (95% CI).
b Медиана (диапазон).
c Арифметическое среднее (95% CI).
G933 всасывался с медианным временем до достижения максимальной концентрации (tmax), составляющим 7,0-9,0 ч после однократного введения G933 в дозах, находящихся в диапазоне от 5 до 150 мкг, и с медианным tmax, составляющим 4,5 ч, при наиболее высоком уровне дозы, составляющем 300 мкг.
Кажущийся конечный период полувыведения (t1/2) G933 определяли с помощью по меньшей мере 3 замеров на основании визуального исследования в течение 72-часового периода взятия образцов. T1/2 не поддавался оценке у субъектов из группы введения дозы 5 мкг в связи со слишком низкими значениями концентрации в плазме крови. В других группах введения доз, когда %AUCaKcmp. был выше, чем 20%, t1/2 и, следовательно, AUC0-/ также не регистрировали. Геометрического среднее значение t1/2 составляло приблизительно 10-12 ч.
Межсубъектная вариабельность значений максимальной концентрации в плазме крови (Cmax) и AUC0-/, выраженная посредством коэффициента вариации (CV), была умеренной (3-37%) для обоих параметров.
Никто из субъектов не имел положительный результат в анализе ADA на исходном уровне или после исходного уровня.
Осуществляли мониторинг показателей давления крови, пульса, потребления пищи и нежелательных явлений в ходе исследования, и они кратко описаны в табл. 20.
Все нежелательные явления, возникшие в ходе лечения (ТЕАЕ), по тяжести характеризовались степенью 1 (слабые) или степенью 2 (умеренные). Они кратко описаны в табл. 21 ниже.
- 36 043848
Таблица 20
Доза | Медиана | Медиана | Медиана | Медиана | Медиана | Медиана | Число | Общее | Медиана | Медиана | Медиана |
(мкг) | пиковых | максималь | пиковых | максималь | пиковых | максималь | субъектов | суточное | пиковых | пиковых | пиковых |
значений | ных | значений | ных | значений | ных | с | потреблен | значений | значений | значений | |
пульса | значений | диастол ич | значений | систоличес | значений | наличием | ие пищи | уровня | уровня | уровня | |
(уд./мин.) | пульса | еского ВР | диастол ич | кого ВР | систоличес | рвоты | по | глюкозы | глюкозы | глюкозы | |
(а) | после | (мм рт.ст.) | еского ВР | (мм рт.ст.) | кого ВР | (приступов | сравнению | (ммоль/л) | (ммоль/л) | (ммоль/л) | |
изменения | после | после | рвоты) | с плацебо | после | после | после | ||||
дозы | изменения | изменения | (%)(с) | завтрака | обеда (е) | ужина (f) | |||||
(уд./мин.) | дозы (мм | дозы (мм | (d) | ||||||||
(Ь) | рт.ст.) | рт.ст.) | |||||||||
0 | 72,2 | 11,8 | 77 | 8,5 | 134 | 12 | 0(0) | 100 | 7,5 | 5,2 | 7,1 |
5 | 79,7 | 11,3 | 79,5 | 13 | 122 | 10,5 | 0(0) | 100 | 6,2 | 4,9 | 7,0 |
10 | 72,8 | 12,7 | 71,5 | 8 | 124,5 | 9,5 | 0(0) | 100 | 5,8 | 5,1 | 6,0 |
30 | 70 | 9,8 | 76,5 | 10,5 | 124 | 13,5 | 0(0) | 96 | 5,4 | 4,4 | 5,2 |
100 | 72 | 16,8 | 86,5 | 16 | 129,5 | 8,5 | 1(1) | 82 | 5,5 | 4,7 | 5,2 |
150 | 81 | 15,7 | 75 | 15 | 128,5 | 7,5 | 4(9) | 60 | 5,1 | 5,1 | 5,2 |
300 | 102 | 35,5 | 80 | 19 | 138,5 | 26 | 5(30) | 23 | 4,7 | 5,1 | 4,9 |
ВР=давление крови.
(а) Медиану пиковых значений пульса определяли как медиану максимальных значений пульса, полученных начиная с момента до введения дозы до дня 28.
(b) Медиану максимальных значений пульса после изменения дозы определяли как медиану максимального изменения пульса, начиная с момента до введения дозы до дня 28.
(c) Общее суточное потребление пищи во время завтрака, обеда и ужина.
(d) Медиана значений уровня глюкозы, собранных через примерно 1 ч после завтрака, что соответствовало 3,5 ч после введения дозы.
(e) Медиана значений уровня глюкозы, собранных через примерно 1 ч после обеда, что соответствовало 7 ч после введения дозы.
(f) Медиана значений уровня глюкозы, собранных через примерно 1 ч после ужина, что соответствовало 13,5 ч после введения дозы.
Таблица 21
Возникшие в ходе лечения побочные явления, сгруппированные по системно-органному классу и предпочтительному термину, у популяции пациентов, получавших лечение
Системно-органный класса Предпочтительный термин (MedDRA, версия 18.0) | Плацебо №12 | G933 | ||||||
> 5 мкг №6 | > 10 мкг №6 | > 30 мкг №6 | >100 мкг №6 | > 150 мкг №6 | > 300 мкг №6 | Всего N = 36 | ||
Субъекты с по меньшей мере одним явлением | 2 (16,7%) | 2 (33,3%) | 3 (50,0%) | 4 (66,7%) | 2 (33,3%) | 5 (83,3%) | 5 (83,3%) | 21 (58,3%) |
Нарушения со стороны сердца | 0 | 0 | 1 (16,7%) | 0 | 1 (16,7%) | 0 | 1 (16,7%) | 3 (8,3%) |
Аритмия | 0 | 0 | 0 | 0 | 1 (16,7%) | 0 | 0 | 1 (2,8%) |
Атриовентрикулярная блокада второй степени | 0 | 0 | 1 (16,7%) | 0 | 0 | 0 | 0 | 1 (2,8%) |
Желудочковые экстрасистолы | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 1 (16,7%) | 1 (2,8%) |
Нарушения со стороны желудочно-кишечного тракта | 1 (8,3%) | 0 | 1 (16,7%) | 0 | 1 (16,7%) | 5 (83,3%) | 5 (83,3%) | 12 (33,3%) |
Вздутие живота | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 2 (33,3%) | 0 | 2 (5,6%) |
Боль в животе | 0 | 0 | 1 (16,7%) | 0 | 0 | 0 | 0 | 1 (2,8%) |
Диарея | 0 | 0 | 1 (16,7%) | 0 | 0 | 0 | 0 | 1 (2,8%) |
Тошнота | 1 (8,3%) | 0 | 0 | 0 | 1 (16,7%) | 4 (66,7%) | 3 (50,0%) | 8 (22,2%) |
Рвота | 0 | 0 | 0 | 0 | 1 (16,7%) | 4 (66,7%) | 5 (83,3%) | 10 (27,8%) |
Общие нарушения и осложнения в месте введения | 0 | 0 | 0 | 1 (16,7%) | 0 | 0 | 1 (16,7%) | 2 (5,6%) |
Эрозия в месте введения | 0 | 0 | 0 | 1 (16,7%) | 0 | 0 | 0 | 1 (2,8%) |
Повреждение, связанное с устройством | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 1 (16,7%) | 1 (2,8%) |
Нарушения со стороны иммунной системы | 0 | 0 | 0 | 1 (16,7%) | 0 | 0 | 0 | 1 (2,8%) |
Сезонная аллергия | 0 | 0 | 0 | 1 (16,7%) | 0 | 0 | 0 | 1 (2,8%) |
Инфекционные и паразитарные заболевания | 1 (8,3%) | 1 (16,7%) | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 1 (2,8%) |
Назофарингит | 1 (8,3%) | 1 (16,7%) | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 1 (2,8%) |
Травмы, отравления и осложнения после проведения процедур | 0 | 0 | 0 | 1 (16,7%) | 0 | 0 | 0 | 1 (2,8%) |
Связанное с процедурами головокружение | 0 | 0 | 0 | 1 (16,7%) | 0 | 0 | 0 | 1 (2,8%) |
Нарушения со стороны обмена веществ и питания | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 2 (33,3%) | 0 | 2 (5,6%) |
- 37 043848
Снижение аппетита | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 2 (33,3%) | 0 | 2 (5,6%) |
Нарушения со стороны скелетно-мышечного аппарата и соединительной ткани | 0 | 0 | 0 | 1 (16,7%) | 0 | 0 | 0 | 1 (2,8%) |
Скелетно-мышечная боль в груди | 0 | 0 | 0 | 1 (16,7%) | 0 | 0 | 0 | 1 (2,8%) |
Нарушения со стороны нервной системы | 0 | 1 (16,7%) | 1 (16,7%) | 1 (16,7%) | 1 (16,7%) | 2 (33,3%) | 1 (16,7%) | 7 (19,4%) |
Г о ло во кружение | 0 | 0 | 1 (16,7%) | 1 (16,7%) | 0 | 2 (33,3%) | 1 (16,7%) | 5 (13,9%) |
Головная боль | 0 | 1 (16,7%) | 0 | 1 (16,7%) | 1 (16,7%) | 1 (16,7%) | 0 | 4(11,1%) |
Нарушения со стороны дыхательной системы, органов грудной клетки и средостения | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 1 (16,7%) | 0 | 1 (2,8%) |
Орофарингеальная боль | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 1 (16,7%) | 0 | 1 (2,8%) |
а Субъектов учитывали один раз для каждого системно-органного класса и предпочтительного термина независимо от числа явлений.
В целом G933 был хорошо переносимым, при этом рвоту, повышение частоты пульса и давления крови наблюдали при более высоких дозах. Предварительно определенные исследовательские конечные точки предусматривали сокращение общего суточного потребления пищи у субъектов, получавших лечение с помощью GP933 при всех дозах, по сравнению с плацебо.
Индивидуальные показатели уровней глюкозы и инсулина в крови в определенные моменты времени приема пищи и медианные уровни глюкозы в плазме крови и инсулина в плазме крови в зависимости от дозы показаны соответственно на фиг. 11 и 12 при временном интервале 2,5-14 ч после введения дозы. Эффект снижения уровня глюкозы наблюдали по уровнях глюкозы в плазме крови у субъектов, получавших лечение G933 при всех дозах. Этот эффект был более заметен во время первого приема пищи. Аналогично уровни инсулина в плазме крови характеризовались зависимостью от дозы, особенно при дозах, составляющих 100 мкг или выше, в соответствии с моментом времени первого приема пищи.
Наиболее частыми ТЕАЕ (встречаемость >10% субъектов) были рвота, тошнота, головокружение и головная боль. ТЕАЕ в виде рвоты встречались только при наиболее высоких дозах G933 (100, 150 и 300 мкг). Всего было 40 приступов рвоты для 10 субъектов, которые испытывали рвоту. Тридцать приступов наступали у 5 субъектов при дозе 300 мкг, 9 приступов - у 4 субъектов при дозе 150 мкг и 1 приступ - у 1 субъекта при дозе 100 мкг.
О значительной рвоте, определяемой как 3 или более приступов рвоты в один день или в течение 2 последовательных дней, вне зависимости от корректировки режима питания, сообщали у 2 из 6 субъектов (33,3%) в группе введения 150 мкг G933 и 5 из 6 субъектов (83,3%) в группе введения 300 мкг G933. В результате явлений значительной рвоты, наблюдаемой при дозе 300 мкг, дозу G933 для конечной когорты снижали до 150 мкг. При дозах, составляющих не более 150 мкг, переносимость G933 была приемлемой, что касается тошноты, рвоты, тахикардии и давления крови. При дозе 300 мкг G933 наблюдали неприемлемые уровни рвоты, также происходило значительное повышение систолического давления крови и частоты пульса. Значительное повышение пульса, наряду с тошнотой и рвотой, наблюдалось у ряда продаваемых на рынке агонистов GLP-1 после введения однократной дозы, особенно у здоровых добровольцев. Учитывая, что эффекты G933 в отношении желудочно-кишечного тракта (рвота) наблюдались при однократной дозе 150 мкг без каких-либо эффектов в отношении сердечно-сосудистой системы, существовал диапазон, в пределах которого G933 можно было безопасно вводить субъектам с сахарным диабетом 2 типа при дозе, которая, как ожидается, улучает гликемический контроль и способствует снижению веса, без отрицательного влияния на профиль риска сердечно-сосудистого заболевания. G933 отвечал конечным точкам безопасности и переносимости в данном исследовании однократной дозы с участием здоровых добровольцев.
Пример 5. Исследование с многократными нарастающими дозами, часть I.
(А) Субъекты.
Примерно 75 субъектов с избыточным весом или ожирением с относительно эффективно контролируемым сахарным диабетом 2 типа (T2DM) включали для участия в исследовании. Включенные в исследование субъекты соответствовали следующим критериям включения и исключения.
Критерии включения.
Мужчина или женщина в возрасте от 18 до 65 лет на момент скрининга.
Индекс массы тела от 27 до 40 кг/м2 (включительно).
Диагноз T2DM и контроль уровней глюкозы, осуществляемый монотерапией метформином, при котором значительного изменения дозы (повышения или понижения >500 мг/день) не происходило в течение 3 месяцев до скрининга:
(а) значение уровня гемоглобина А1С (гликолированный гемоглобин; HbA1c) на момент скрининга должно находиться в целевом диапазоне от 6,5 до 8,5% или необязательно от 7,0 до 8,5%;
(b) субъекты, которым назначали ингибитор дипептидилпептидазы-4 (DPPIV) в дополнение к монотерапии метформином, могут быть включены в исследование после 4-недельного отмывочного периода с выведением ингибитора DPPIV до скрининга;
(с) субъекты, которым назначали менее чем 50% разрешенной дозы сульфонилмочевы в дополнение к терапии метформином, могут быть включены в исследование после 4-недельного отмывочного периода с выведением сульфонилмочевины; и
- 38 043848 (d) субъекты, которым назначали ингибитор натрий-зависимого котранспортера глюкозы 2 (SGLT2) в дополнение к терапии метформином, могут быть включены в исследование после 4-недельного отмывочного периода с выведением ингибитора SGLT2.
Венозный доступ, подходящий для многократных катетеризации.
Субъекты когорты 4 должны принимать >10 мг суточную дозу статина в течение периода по меньшей мере 4 недели до скрининга.
Субъекты когорты 4 должны хотеть и иметь возможность самостоятельно выполнять ежедневные подкожные (SC) инъекции после начальной самостоятельной инъекции плацебо в ходе скринингового периода.
Критерии исключения.
Любое состояние, которое будет препятствовать оценкам исследуемого продукта или интерпретации безопасности у субъектов или результатов исследования. Конкретными примерами являются (а) наличие в анамнезе острого или хронического панкреатита или уровень панкреатической амилазы или липазы, превышающий в два раза верхнюю границу нормы (ULN) диапазона лабораторного эталона, на момент скрининга;
(b) наличие в анамнезе гастропареза, требующего лечения;
(с) наличие в анамнезе хирургического вмешательства, затрагивающего верхнюю часть GI тракта, которое, вероятно, будет влиять на интерпретацию данных о безопасности и переносимости;
(d) наличие в анамнезе холелитиаза, приводящего к приступам острого холецистита, не поддающегося лечению с помощью холецистэктомии, или заболевания желчного пузыря; и (е) уровень кальцитонина в сыворотке крови, указывающий на гиперплазию С-клеток щитовидной железы (уровень кальцитонина >50 нг/л), наличие в анамнезе или семейном анамнезе медуллярной карциномы щитовидной железы или множественной эндокринной неоплазии на момент скрининга.
Наличие в анамнезе или наличие в данный момент заболевания GI тракта, почек или печени (за исключением синдрома Жильбера) или любого другого состояния, которое, как известно, нарушает всасывание, распределение, метаболизм или выведение лекарственных средств.
Наличие в анамнезе рака (необязательно в течение последних 10 лет), за исключением немеланомного рака кожи.
Наличие в анамнезе или наличие в данный момент язв, обусловленных синдромом диабетической стопы.
Любое клинически значимое заболевание (помимо T2DM для субъектов с подтвержденным диабетом), медицинская/хирургическая процедура или травма за 4 недели до дня 1 введения доз.
Симптомы инсулинопении или неудовлетворительный контроль уровня глюкозы в крови (например, значительная жажда, ноктурия, полиурия, полидипсия или потеря веса).
Уровень глюкозы в крови натощак >200 мг/дл (11,11 ммоль/л).
Положительный результат в анализе сыворотки крови на наличие поверхностного антигена вируса гепатита В или антитела к вирусу гепатита С на момент скрининга.
Положительный результат теста на наличие вируса иммунодефицита человека (HIV) на момент скрининга или применение субъектом антиретровирусных лекарственных препаратов, что устанавливают путем изучения медицинского анамнеза или со слов субъекта.
Уровень аспартаттрансаминазы (AST) >2,5xULN на момент скрининга.
Уровень аланинтрансаминазы (ALT) >2,5xULN на момент скрининга.
Уровень общего билирубина >2xULN на момент скрининга.
Уровень гемоглобина ниже нижнего предела нормального диапазона на момент скрининга.
Уровень нейтрофилов <1,5x109 /л на момент скрининга.
Уровень тиреостимулирующего гормона (TSH) выше нормального диапазона на момент скрининга.
Нарушенная функция почек, определяемая как скорость клубочковой фильтрации (GFR) <60 мл/мин/1,73 м2 (GFR оценивали в соответствии с Modification in Renal Disease).
Устойчивая (определяемая как зафиксированные >2 предыдущих случаев лечащим врачом субъекта) макроальбуминурия (>300 мг/л).
Значительные поздние диабетические осложнения (макроангиопатия с симптомами застойной сердечной недостаточности или заболевания периферических артерий, микроангиопатия с симптомами нейропатии, гастропареза, ретинопатии, нефропатии).
Нарушение сердечной проводимости (например, синдром Вольфа-Паркинсона-Уайта, синдром слабости синусового узла) в ходе скринингового периода.
Не соответствующие норме показатели жизненно-важных функций после 10 мин отдыха лежа на спине, определяемые в виде любого из следующего:
(а) для возраста <60 лет, систолическое ВР <90 или >140 мм рт.ст.; для возраста >60 лет, систолическое ВР <90 или >150 мм рт.ст., (b) диастолическое ВР <50 или >90 мм рт.ст., или (с) HR <45 или >85 уд./мин.
- 39 043848
Любые клинически значимые не соответствующие норме показатели ритма, проводимости или морфологии ECG в состоянии покоя и любые не соответствующие норме показатели ECG в 12 отведениях, которые могут препятствовать интерпретации изменений интервала QT, в том числе не соответствующая норме морфология ST-T-зубца или гипертрофия левого желудочка.
Удлиненный QTcF>450 мс (для обоих полов) или укороченный QTcF<340 мс, или наличие в семейном анамнезе синдрома удлиненного интервала QT.
Укорочение интервала PR (PQ)<120 мс (PR<120, но >110 мс является допустимым, если отсутствуют признаки предвозбуждения желудочков).
Удлинение интервала PR (PQ) (>240 мс), транзиторная AV-блокада второй или третьей степени или AV диссоциация.
Продолжительность QRS >120 мс, в том числе устойчивая или транзиторная блокада ножки пучка.
Имплантированный кардиодефибриллятор или постоянный кардиостимулятор и симптоматические желудочковые и/или предсердные тахиаритмии.
Нестабильная стенокардия или стабильная стенокардия, классифицируемая выше, чем класс II согласно Канадскому обществу кардиологов, или инфаркт миокарда, или инсульт.
Случай госпитализации, вызванной сердечной недостаточностью, или диагноз сердечной недостаточности.
Наличие в анамнезе подтвержденного или предполагаемого злоупотребления наркотическими веществами в течение последних 3 лет.
Наличие в анамнезе злоупотребления алкоголем или избыточного потребления алкоголя в течение последних 3 лет.
Положительный результат в анализе на наркотики на момент скрининга или приема в отделение клинического исследования или положительный результат пробы на алкоголь в выдыхаемом воздухе на момент приема в отделение перед введением исследуемого продукта. Пациенты, которые принимают бензодиазепины от хронической тревожности или нарушений сна, могут быть допущены для включения в исследование.
Наличие в анамнезе тяжелой формы аллергии/гиперчувствительности или текущей клинически значимой аллергии/гиперчувствительности.
Донорство цельной крови или эритроцитов или любая потеря крови в количестве >500 мл в течение 2 месяцев до скрининга.
Прием другого нового химического соединения (определяемого как соединение, которое не было одобрено для продажи) или участие в любом другом клиническом исследовании, которое включало лечение лекарственным средством по меньшей мере за 30 дней или 5 периодов полувыведения до первого введения исследуемого препарата в данном исследовании (в зависимости от того, что наступает позже). Период исключения начинается за 30 дней или 5 периодов полувыведения исследуемого продукта после введения последней дозы или после последнего визита в зависимости от того, что наступает позже. Субъекты, которые дали согласие и прошли скрининг, но не были рандомизированы в данном исследовании или предшествующем исследовании фазы 1, не исключаются.
Одновременное участие в другом исследовании любого типа.
Применение любого из следующих медицинских продуктов:
(а) одновременное или предшествующее применение агониста GLP-1;
(b) применение системных кортикостероидов в течение 28 дней до скрининга;
(с) применение соединений, которые, как известно, удлиняют интервал QTc; или (d) применение любых препаратов или медицинских продуктов на основе лекарственных растений, разрешенных для контроля веса тела или аппетита, за 1 неделю до дня 1.
Психическое заболевание, вследствие которого субъектов помещали в лечебное учреждение в результате официального или судебного решения.
Наличие в анамнезе лактацидоза или кетоацидоза.
(В) План исследования.
Рандомизированное двойное слепое исследование фазы 1/2 с применением многократных нарастающих доз выполняли в двух частях (А и В). Блок-схема исследования представлена на фиг. 13. В части А устанавливали схему титрования дозы для G933 (MEDI0382) и максимальную эффективную дозу после титрования у субъектов с T2DM, которых поддерживали на терапии метформином в течение периода примерно 12 дней, которую затем применяли в течение продленного периода дозирования (часть В) в целях определения эффективности G933 в отношении контроля веса и гликемического контроля.
Часть А предусматривала 3 когорты. В когорте 1 предусматривали стабильную дозу (например, 100 мкг) исследуемого продукта, вводимого ежедневно в течение 7 дней (9 субъектов; 6 G933, 3 плацебо). В когорте 2 предусматривали начальную дозу (например, 100 мкг) исследуемого продукта в течение 4 дней и стадию повышения дозы (титрационная доза 1; например, 150 мкг) в течение 7 дней (9 субъектов; 6 G933, 3 плацебо), и в когорте 3 предусматривали начальную дозу (например, 100 мкг) исследуемого продукта в течение 4 дней, стадию повышения дозы (титрационная доза 1; например, 150 мкг) в течение 4 дней и вторую стадию повышения дозы (титрационная доза 2; например, 200 мкг) в течение 7 дней
- 40 043848 (9 субъектов; 6 G933, 3 плацебо). Часть В предусматривала 1 когорту. Субъектам в этой когорте (когорта 4) вводили исследуемый продукт в начальной дозе (например, 100 мкг) в течение 4 дней, в дозе стадии повышения дозы (титрационная доза 1; например, 150 мкг) в течение 4 дней, в дозе второй стадии повышения дозы (титрационная доза 2; например, 200 мкг) в течение 4 дней и затем в титрационной дозе 2 (например, 200 мкг) в течение 28 дней на дому (48 субъектов; 24 G933, 24 плацебо).
Начальная доза составляла 100 мкг. Титрационные дозы 1 и 2 не превышали 300 мкг. Продолжительность исследования для каждого субъекта варьировала в зависимости от когорты и предусматривала период в стационаре с применением многократных нарастающих доз (MAD) или период оценки с повышением доз (начиная с дня -2 и заканчивая после дня 8 для когорты 1, дня 12 для когорты 2, дня 16 для когорты 3 и дня 13 для когорты 4) и период последующего наблюдения в амбулатории. Дополнительно только для когорты 4 включали 28-дневный период самостоятельного введения исследуемого продукта на дому (с еженедельными визитами в исследовательский центр) после второй стадии повышения дозы в стационаре и до визита окончания исследования. Субъектов помещали вечером за два дня до приема исследуемого продукта в целях обеспечения повторной оценки критериев отбора и выполнения теста толерантности к пище (ММТ) на исходном уровне и стандартизации уровня физической активности до начала введения доз на следующее утро. В день 1, после ночного голодания в течение как минимум 8 ч, забирали образцы крови исходного уровня для проведения лабораторных тестов в отношении безопасности, эффективности, фармакокинетических характеристик (PK), фармакодинамических характеристик (PD) и наличия антитела к лекарственному средству (ADA). Кроме того, регистрировали показатели ECG в 12 отведениях, и субъекту вводили однократную SC дозу G933 либо плацебо. Субъект оставался на базе клинического исследования для наблюдения и проведения тестов в отношении безопасности, в том числе ECG, телеметрии, мониторинга показателей жизненно-важных функций и оценок места инъекции на наличие возможных реакций в течение дня и в ходе периода лечения. Дополнительно для когорты 4 выполняли 24-часовой амбулаторный мониторинг давления крови (АВРМ).
Процедуры теста толерантности к пище (ММТ) выполняли в день -1 и в последний день введения наиболее высокого достигаемого уровня дозы в случае всех когорт. Дополнительные моменты времени включали первый день введения титрационной дозы 1 (когорта 2), первый день введения титрационной дозы 2 (когорта 3), день завершения периода повышения дозы в стационаре (пятый день введения титрационной дозы 2; когорта 4) и еженедельные визиты в исследовательский центр в течение 28-дневного периода самостоятельного введения на дому (когорта 4). Для проведения ММТ субъект потреблял стандартизированную пищу (Ensure Plus®) в течение 5 мин, и в течение последовательных моментов времени получали образцы крови для измерения уровня глюкозы и параметров, связанных с метаболизмом глюкозы, непосредственно до и в течение 240 мин после потребления стандартизированной пищи. Во время периода в стационаре образцы крови из пальца для определения уровня глюкозы собирали за 15 мин до и через 2 ч после завтрака, обеда и ужина и перед сном.
Субъектов когорты 4 повторно помещали на одну ночь в стационарный режим в конце периода самостоятельного введения на дому для сбора данных конечных точек. Вес тела измеряли в несколько моментов времени, включая (без ограничения) до введения первой дозы, в ходе периода введения доз в стационаре (и в ходе периода в амбулатории для когорты 4), при выписке из отделения и на визитах последующего наблюдения со дня 7 по день 14.
Образцы для оценки фармакокинетических характеристик G933 получали до и после введения дозы и в различные моменты времени в зависимости от когорты вплоть до 48 ч после введения последней дозы G933. Образцы для определения концентрации метформина получали до введения доз G933. Образцы для определения антител к лекарственному средству получали до введения дозы и в различные моменты времени вплоть до 28 дней после введения последней дозы.
Субъектов выписывали из отделения через день после введения последней дозы в исследовании. Визит последующего наблюдения выполняли для проведения конечных оценок безопасности примерно через 28 дней после введения последней дозы исследуемого продукта.
(C) Оценки эффективности.
Для оценки влияния на контроль уровня глюкозы и вес многократных доз G933 по сравнению с плацебо, процентное значение изменения AUC глюкозы в ММТ (вплоть до 240 мин после ММТ) и изменения веса от исходного уровня (день -1) до конца лечения в когорте 4 сравнивали между группами введения G933 и плацебо с помощью ковариационного анализа посредством корректировки по отношению к показателю измерения на исходном уровне и группе лечения. Недостающие показатели измерения в конце лечения заменяли последним доступным показателем измерения. Сравнение проводили при двустороннем уровне значимости, составляющем 0,1. Снижение веса (например, от 1,3 до 2,0 кг в течение 4 недель после повторного введения дозы один раз в день) в группе лечения G933 по сравнения с группой плацебо указывало на то, что G933, например, в дозе 100-300 мкг, был эффективным для снижения веса.
Изменение уровня гемоглобина A1c (гликолированного гемоглобина, HbA1c) и фруктозамина от исходного уровня (день -2) и процентное значение изменения AUC глюкозы за 24 ч после ММТ от исходного уровня (день -1) анализировали в когорте 4 аналогичным оценке веса образом. Анализы AUC глюкозы за 24 ч включали показатели измерения уровней глюкозы с помощью панели метаболизма глю- 41 043848 козы до/после ММТ, а также уровни глюкозы, полученные при биохимическом анализе сыворотки крови и образцов для PD оценки уровня глюкозы, где эти результаты получали в определенные моменты времени. Повышение контроля уровня глюкозы (например, по меньше мере 20% снижение площади под кривой зависимости концентрации глюкозы от времени (AUC) после проведения теста толерантности к пище (ММТ) и/или измеряемое по уровню гемоглобина A1c и фруктозамина) в группе лечения G933 по сравнению с группой плацебо указывало на то, что G933, например, в дозе 100-300 мкг, был эффективным для улучшения контроля уровня глюкозы.
(D) Результаты.
(i) Часть А: когорты 1 -3.
G933 успешно вводили в дозах, составляющих не более 200 мкг один раз в день (QD), в течение 15 дней включительно.
Значимые снижения уровней глюкозы до нормальных уровней с применением G933 наблюдали как в случае уровня глюкозы в плазме натощак, так и в случае постпрандиального уровня глюкозы после проведения теста толерантности к пище. В тесте толерантности к пище площадь под кривой зависимости концентрации глюкозы от времени (AUC) снижалась на >40% в когортах 1-3 (фиг. 14). Изменение уровней глюкозы натощак от исходного уровня в когорте 1 (в день 7) и когорте 3 (в дни 9 и 15) показано на фиг. 15.
Наблюдали дозозависимую тенденцию к значительной потере веса до 2 кг. Результаты показаны на фиг. 16 и указывают на то, что G933 значительно снижал вес тела у пациентов с избыточным весом/ожирением с сахарным диабетом 2 типа. В когорте 3 наблюдали разницу более 2 кг.
G933 был хорошо переносимым вплоть до 200 мкг при титровании доз.
Фармакокинетические характеристики после повторного введения доз показаны на фиг. 17. РК была линейной и предсказуемой. Период полувыведения составлял примерно 11 ч. Присутствовало минимальное накопление или отсутствие такового после введения многократных ежедневных доз, а устойчивого состояния достигали в период от дня 4 до 7. Максимальные концентрации в плазме крови в тестируемом диапазоне доз составляли 4,21 и 18,90 нг/мл. Средняя суточная экспозиция находилась в диапазоне от 2,89 до 12,45 нг/мл.
Только один образец подтверждали в качестве положительного в отношении антитела к G933 после исходного уровня.
Нежелательные явления были контролируемыми и согласовывались с таковыми, которые ожидались для моноагонистов GLP-1.
Подавляющее большинство сообщаемых явлений тошноты и рвоты происходило в начале лечения, например, при уровне дозы 100 мкг. Рвота происходила у 26% (n=5) пациентов, получавших G933, и не возникала при получении плацебо. В когорте 1 о явлениях рвоты не сообщали. В когорте 2 сообщали о трех явлениях рвоты у двух пациентов, получавших активное средство. Оба случая происходили в день 1 при уровне дозы 100 мкг и оба случая разрешались без вмешательства. В когорте 3 сообщали о тринадцати явлениях рвоты у трех пациентов, получавших активное средство. У двух субъектов рвоту отмечали в день 1, и эти случаи разрешались без вмешательства. У одного субъекта рвота наблюдалась шесть раз в течение периода от дня 1 до дня 5. Физиологический раствор для внутривенного введения вводили в день 3, и субъекта выписывали в день 5.
О нежелательных явлениях со стороны сердца сообщали у четырех (44,4%) пациентов, получавших плацебо, и у семи (36,8%) пациентов, получавших лечение с помощью G933. По-видимому, их частота не повышалась по мере роста дозы в когортах, получавших активное средство. Повышение частоты пульса на приблизительно 10 уд./мин наблюдали в каждой когорте после осуществления лечения с помощью G933. Значимого изменения систолического или диастолического давления крови не наблюдали, однако тенденцию к снижению давления крови наблюдали во всех когортах, получавших как G933, так и плацебо.
О нежелательных явлениях со стороны желудочно-кишечного тракта (GI) сообщали у четырех (44,4%) пациентов, получавших плацебо, и у тринадцати (68,4%) пациентов, получавших лечение с помощью G933. Нежелательные явления со стороны GI наблюдали у 3, 4 и 6 пациентов в когортах 1, 2 и 3 соответственно. Наиболее распространенным нежелательным явлением со стороны GI была тошнота, о которой сообщали у 6 (31,6%) пациентов, получавших лечение с помощью G933.
О сниженном аппетите сообщали у шести (85,7%) пациентов, получавших лечение с помощью G933, в когорте 3.
Сообщали об одном серьезном нежелательном явлении (SAE): пневмонии, вызванной микоплазмами.
Подводя итог, G933 был хорошо переносимым, приводил к значимым снижениям постпрандиального уровня глюкозы и демонстрировал клинически значимую дозозависимую потерю веса.
(ii) Часть В: когорта 4.
G933 эффективно снижал уровень глюкозы в крови и приводил к потере веса в течение 41-дневного периода введения доз. Среднее снижение площади под кривой зависимости уровня глюкозы (AUC) от исходного уровня (день 1) ко дню 41 показано на фиг. 18. В течение этого времени G933 приводил к 38,5% снижению (90% C.I. -47,1, -29,0), в то время как плацебо приводил только к 16,1% снижению (90% C.I. -24,9, -8,0) (р-значение: 0,001). G933 также повышал контроль уровня глюкозы, измеряемый по
- 42 043848
HbAlc (см. фиг. 19).
Через 41 день лечения уровень HbAlc снижался на 0,92 процента от среднего значения исходного уровня, составляющего 7,2%, до среднего значения, составляющего 6,3%, в день 42. По сравнению с этим, плацебо снижал уровень HbA1c только на 0,58% от среднего значения исходного уровня, составляющего 7,3%, до среднего значения, составляющего 6,7%.
Эффекты G933 в отношении веса показаны на фиг. 20 и 21. На фиг. 20 показано, что через 41 день лечения с помощью G933 пациенты теряли приблизительно 3,83 кг, тогда как пациенты, получавшие плацебо, теряли только приблизительно 1,71 кг (разница 2,12 кг между G933 и плацебо; р<0,001). Кроме того, 44% пациентов, получавших лечение с помощью G933, теряли по меньшей мере 5 кг, тогда как только 8% пациентов, получавших плацебо, теряли по меньшей мере 5 кг. На фиг. 21 показано, что через 41 день лечения с помощью G933 пациенты теряли приблизительно 4,18% своего веса, тогда как пациенты, получавшие плацебо, теряли только приблизительно 1,71% своего веса (разница 2,47% между G933 и плацебо; р<0,001). Кроме того, 84% пациентов, получавших лечение с помощью G933, теряли по меньшей мере 2% своего веса, тогда как только 42% пациентов, получавших плацебо, теряли по меньшей мере 2% своего веса. Лечение G933 также приводило к снижению содержания жира в печени (см. фиг. 22). Среднее относительное снижение процента жира в печени от исходного уровня (95% CI) с применением G933 по сравнению с плацебо составляло 20,5% (7,2, 33,9) (р=0,004). Значимое снижение объема печени также наблюдали у пациентов, получавших лечение с помощью G933, по сравнению с плацебо (0,14 л (-0,24, -0,03), р=0,01). В целом нежелательные явление были уравновешены у пациентов, получавших лечение с помощью G933 и плацебо. Нежелательные явления кратко описаны в табл. ниже. Летальных исходов не происходило.____________________________________________________________
Субъект, имеющий | Плацебо N=26 | 200 мкг G933 N=25 |
по меньшей мере одно явление | 21 (80,8%) | 22 (88,8%) |
по меньшей мере одно связанное с G933 явление | 15 (57,7%) | 20 (80,0%) |
по меньшей мере одно явление > 3-й степени тяжести | 2 (7,7%) | 0 |
летальный исход (5-я степень тяжести) | 0 | 0 |
по меньшей мере одно серьезное явление | 1 (3,8%) | 0 |
по меньшей мере одно серьезное и/или > 3-й степени тяжести явление | 2 (7,7%) | 0 |
по меньшей мере одно связанное с G933 серьезное явление | 1 (3,8%) | 0 |
по меньшей мере одно явление, ведущее к прекращению приема G933 | 1 (3,8%) | 3 (12,0%) |
В общей сложности о тошноте сообщали у 17 пациентов: 4, получавших плацебо (15,4%), и 13, получавших лечение G933 (52,0%). В общей сложности у 8 пациентов происходила рвота: 0, получавших плацебо, и 8, получавших лечение G933 (32,0%). Тошнота и рвота чаще всего происходили во время введения более ранних доз (см. фиг. 23). Нежелательных изменений параметров работы сердца и гемодинамических параметров не наблюдали. Повышения систолического или диастолического давления крови не наблюдали. Повышение частоты сердечных сокращений на 12,8 уд./мин наблюдали в день 13, однако оно снижалось до 6,9 уд./мин ко дню 41. В целом G933 был эффективным в отношении как снижения уровня глюкозы в крови, так и потери веса в течение 41-дневного периода. Метаболизм глюкозы на основании теста толерантности к пище нормализовался и сопровождался значимым снижением уровня HbA1c. Примечательно, что наблюдали более высокую точечную оценку в отношении снижения веса, чем ожидаемая в случае лечения лираглутидом (3 мг).
G933 был хорошо переносимым вплоть до дня 41 при повышении доз от 100 до 200 мкг, что подтверждало достижение устойчивого состояния в течение одной недели лечения при 200 мкг и минимальное накопление после многократного введения доз. Максимальные концентрации в плазме крови, наблюдаемые при уровнях дозы 200 мкг, находились в диапазоне от 1,98 до 34,30 нг/мл.
Пример 6. Исследование с применением многократных возрастающих доз, часть II.
(А) Субъекты.
Примерно 32 субъектов с избыточным весом или ожирением с относительно эффективно контролируемым сахарным диабетом 2 типа (T2DM) включали для участия в исследовании. Включенные в исследование субъекты соответствовали критериям включения и исключения, описанным в примере 5, со следующими исключениями.
Критерий включения.
Субъекты когорты 5 и 6 должны хотеть и иметь возможность самостоятельно выполнять ежедневные подкожные (SC) инъекции после начальной самостоятельной инъекции плацебо (или физиологиче- 43 043848 ского раствора) в ходе скринингового периода.
Критерии исключения.
Не соответствующие норме показатели жизненно-важных функций после 10 мин отдыха лежа на спине определяли в виде любого из следующего:
(а) систолическое ВР <90 или >140 мм рт.ст.;
(b) диастолическое ВР <50 или >90 мм рт.ст.; или (с) HR <45 или >85 уд./мин.
Нестабильная стенокардия или стабильная стенокардия, классифицируемая выше, чем класс II согласно Канадскому обществу кардиологов, или наличие в предшествующем анамнезе инфаркта миокарда или инсульта; или наличие в анамнезе транзиторной ишемической атаки в течение предшествующих 12 месяцев.
(В) План исследования.
Выполняли рандомизированное двойное слепое исследование с применением многократных нарастающих доз. Блок-схема исследования представлена на фиг. 24. Данное исследование предусматривало 2 когорты: когорту 5 и когорту 6. Когорта 5 предусматривала 16 субъектов (12 активное средство, 4 плацебо), которым начинали введение G933 (MEDI0382) в дозе 100 мкг в течение 5 дней с последующим введением 150 мкг в течение 5 дней, 200 мкг в течение 5 дней и 300 мкг в течение 7 дней. Когорта 6 предусматривала 16 дополнительных субъектов (12 активное средство, 4 плацебо), которым начинали введение G933 в дозе 100 мкг в течение 5 дней с последующим введением 200 мкг в течение 5 дней и 300 мкг в течение 7 дней. Когорты 5 и 6 предусматривали в общей сложности примерно 32 субъекта и проводились параллельно. Исследование предусматривало период оценки с повышением дозы в стационаре, начиная с дня 3 в случае обеих когорт 5 и 6, и период последующего наблюдения в амбулатории. Первые 4 дня и заключительный день введения дозы 300 мкг проводили в стационаре. Субъектов помещали в клинику, как описано в примере 5 в случае когорт 1-4. Однако у них был начальный период в стационаре, заканчивающийся в день 3, с последующим самостоятельным введением G933 на дому с визитом в клинику на каждой стадии повышения дозы до начала введения дозы 300 мкг. У субъектов был второй период в стационаре для начала введения дозы 300 мкг, заканчивающийся на четвертый день, с последующим самостоятельным введением этой же дозы на дому.
Процедуры теста толерантности к пище (ММТ) выполняли в день -1 и в последний день введения наиболее высокого достигаемого уровня дозы. Дополнительные моменты времени включали момент времени до начала введения дозы 300 мкг (день 16 в случае когорты 5 и день 11 в случае когорты 6) и момент времени в конце введения доз (день 22 в случае когорты 5 и день 17 в случае когорты 6). ММТ выполняли, как описано в примере 5.
Вес тела измеряли в несколько моментов времени, включая (без ограничения) до введения первой дозы, в ходе периода введения доз в стационаре, и в ходе периода в амбулатории, при выписке из отделения, и на визитах последующего наблюдения со дня 7 по день 14, и на визите окончания исследования после 28 дней.
Образцы для оценки фармакокинетических характеристик G933 получали до и после введения дозы и в различные моменты времени в зависимости от когорты вплоть до 48 ч после введения последней дозы G933. Образцы для определения концентрации метформина получали до введения доз G933. Образцы для определения антител к лекарственному средству получали до введения дозы и в различные моменты времени вплоть до 28 дней после введения последней дозы.
Субъектов выписывали из отделения через день после введения последней дозы в исследовании. Визит последующего наблюдения выполняли для проведения конечных оценок безопасности примерно через 28 дней после введения последней дозы исследуемого продукта.
(С) Результаты.
G933 эффективно снижал уровень глюкозы в когортах 5 и 6. Уровни AUC глюкозы, наблюдаемые в когортах 5 и 6, показаны на фиг. 25 и 26 соответственно. В когорте 5 лечение с помощью G933 приводило к снижению AUC глюкозы на 41,7% (90% C.I. -49,9, -33,5), тогда как лечение с помощью плацебо приводило только к 8,0% снижению уровня глюкозы (90% C.I. -19,6, 3,6) (р<0,001). В когорте 6 лечение с помощью G933 приводило к снижению AUC глюкозы на 35,8% (90% C.I. -43,3, -28,3), тогда как лечение с помощью плацебо приводило только к -6,9% снижению уровня глюкозы (90% C.I. -20,2, 6,3) (р= 0,002). Эффект в отношении AUC глюкозы был сопоставим с таковым у предыдущих когорт, т.е. нормализован на приблизительно 40% снижение. Процент снижения AUC глюкозы от исходного уровня во всех когортах показан на фиг. 27. G933 также эффективно снижал уровни глюкозы натощак в когортах 5 и 6, как показано на фиг. 28. G933 был также эффективным в снижении веса. Как показано на фиг. 29, через 22 дня лечения пациенты, получавшие лечение с помощью G933, в когорте 5 теряли приблизительно 3,09 кг, тогда как пациенты, получавшие лечение с помощью плацебо, теряли только приблизительно 0,98 кг (разница 2,11 кг). Аналогично через 17 дней лечения пациенты, получавшие лечение с помощью G933, в когорте 6 теряли приблизительно 2,23 кг, тогда как пациенты, получавшие лечение с помощью плацебо, теряли только приблизительно 0,35 кг (разница 1,88 кг). Обе когорты 5 (2,11 кг) и 6 (1,88 кг)
- 44 043848 характеризовались сопоставимой потерей веса через 22 и 17 дней по сравнению с таковой, наблюдаемой в течение 41 дня введения доз в когорте 4.
Изменение веса и уровней глюкозы представлены на графике совместно на фиг. 30 и кратно описаны в табл. 22 ниже.
Таблица 22
Когорта N= получавшие активное средство | Вес (кг) | AUC глюкозы | Уровень глюкозы натощак (мг/дл) |
1, 100 мкг, п=6 | -1,1 | -27,3 | -28,00 |
2, 150 мкг, п=6 | -0,5 | -8,9 | -17,90 |
3, 200 мкг, п=6 | -2,4 | -31,6 | -43,20 |
4, 200 мкг, п=25 | -2,И | -22,5 | -32,62 |
5, 300 мкг, п=12 | -2,11 | -33,7 | -24,40 |
6, 300 мкг, п=12 | -1,88 | -28,9 | -36,94 |
G933 был хорошо переносимым в когортах 5 и 6, и профиль нежелательных явлений согласовывался с таковым у других продаваемых на рынке аналогов GLP-1, как, например, лираглутида. Ни в одной когорте не наблюдали летальных исходов или серьезных нежелательных явлений.
Обе схемы титрования дозы показали, что дозы G933 вплоть до 300 мкг были хорошо переносимыми, что касается тошноты и рвоты. В когорте 5 в общей сложности у 4 пациентов сообщали о 8 приступах тошноты: 1 пациент (20%), который получал плацебо, и 3 пациента (27,3%), которые получали G933. В общей сложности у 3 пациентов сообщали о 8 приступах рвоты: ни один из пациентов, которые получали плацебо (0%), и 3 пациента, которые получали G933 (27,3%). В когорте 6 в общей сложности у 5 пациентов сообщали о 6 приступах тошноты: ни один из пациентов, которые получали плацебо (0%), и 5 пациентов, которые получали G933 (41,7%). У одного пациента рвота наблюдалась дважды: ни у одного из пациентов, которые получали плацебо (0%), и у 1 пациента, который получал G933 (8,3%). Более низкую частоту тошноты (8/24=33%) и рвоты (4/24=16%) наблюдали после того, как пациенты переходили на амбулаторное лечение через 48 ч после введения первой дозы.
Амбулаторное измерение давления крови не показало повышения систолического давления крови/диастолического давления крови (SBP/DBP) от исходного уровня у пациентов, получавших лечение с помощью G933, а показало потенциальную тенденцию к их снижению. В когорте 5 частота сердечных сокращений повышалась на примерно 7,6 уд./мин от исходного уровня через 22 дня введения G933, что согласовывалось с тем, что наблюдали ранее, и другими аналогами GLP-1, и в когорте 4. В когорте 6 частота сердечных сокращений повышалась на примерно 5,9 уд./мин от исходного уровня через 17 дней введения G933.
Концентрации G933 в плазме крови через 7 дней введения при наиболее высокой дозе 300 мкг, полученные при обеих схемах титрования доз, представлены на фиг. 31. Профили перекрывались, особенно после достижения устойчивого состояния, что указывает на то, что экспозиция при этом уровне дозы была независимой от принятой схемы титрования доз. Максимальная концентрация в плазме крови, наблюдаемая при дозе 300 мкг, находилась в диапазоне от 7,9 до 30,9 нг/мл.
Краткое описание результатов исследования с применением многократных нарастающих доз (части I и II)
В целом в диапазоне доз 100-300 мкг G933 характеризовался линейной PK с периодом полувыведения примерно 8-11 ч, минимальным накоплением после повторного ежедневного введения доз и достижением устойчивого состояния в период от дня 4 до дня 7 при всех четырех тестируемых уровнях доз. Результаты подтверждали результаты, полученные в исследовании с применением однократной дозы (пример 4). Концентрации в плазме крови, достигаемые через 7 дней введения наиболее высокой дозы, составляющей 300 мкг, не зависели от принятой схемы титрования доз. Межсубъектная вариабельность значений Cmax составляла примерно 20-30% в более меньших когортах и 40-50% в более крупной когорте 4. Максимальные концентрации в плазме крови при тестируемом диапазоне доз и при принятой схеме титрования доз находилась в диапазоне от 1,98 до 34,3 нг/мл, при этом средняя суточная концентрация в плазме крови находилась в диапазоне от 0,87 до 16,3 нг/мл.
Профиль безопасности и переносимости был сопоставим с другими миметиками GLP-1, и, что важно, G933 приводил как к потере веса, так и к контролю уровня глюкозы.
Настоящее изобретение не подлежит ограничению по объему конкретными описанными вариантами осуществления, которые, как предполагается, являются единичными иллюстрациями отдельных аспектов настоящего изобретения, и любые композиции или способы, являющиеся функционально эквивалентными, находятся в пределах объема настоящего изобретения. В действительности различные моди- 45 043848 фикации настоящего изобретения, в дополнение к показанным и описанным в данном документе, станут очевидными специалистам в данной области из предшествующего описания и сопроводительных графических материалов. Предполагается, что такие модификации находятся в пределах объема прилагаемой формулы изобретения.
Все публикации и заявки на патенты, упоминаемые в настоящем описании, включены в данный документ посредством ссылки в такой же степени, как если бы каждая отдельная публикация или заявка на патент была конкретно и отдельно указана как включенная посредством ссылки.
Claims (9)
1. Применение пептида, содержащего аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 19 в способе лечения неалкогольного стеатогепатита (NASH), где 50-600 мкг пептида вводят в каждой дозе субъекту-человеку, нуждающемуся в этом.
2. Применение по п.1, где пептид вводят ежедневно.
3. Применение по п.2, где пептид вводят один раз в день.
4. Применение по п.3, где пептид вводят в течение по меньшей мере одной недели, в течение по меньшей мере двух недель, в течение по меньшей мере трех недель или в течение по меньшей мере четырех недель.
5. Применение по п.4, где пептид вводят с помощью инъекции.
6. Применение по п.5, где введение является подкожным.
7. Применение по любому из пп.1-6, где прогрессирование заболевания прекращается.
8. Применение по любому из пп.1-6, где прогрессирование заболевания обращается.
9. Применение по любому из пп.1-8, где 100-600 мкг пептида вводят в каждой дозе.
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US62/306,121 | 2016-03-10 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
EA043848B1 true EA043848B1 (ru) | 2023-06-29 |
Family
ID=
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
AU2017229530B2 (en) | Glucagon and GLP-1 co-agonists for the treatment of obesity | |
AU2017261505C1 (en) | Glucagon/glp-1 agonists for the treatment of obesity | |
KR20140083929A (ko) | 장기-작용성 glp-1/글루카곤 수용체 작용제 | |
WO2008152403A1 (en) | Glucagon analogues | |
JP2016512213A (ja) | 肥満の治療のためのペグ化グルカゴン及びglp−1コアゴニスト | |
JPWO2017153575A5 (ru) | ||
EA043848B1 (ru) | Коагонисты глюкагона и glp-1 для лечения ожирения | |
Tang et al. | Discovery of lixisenatide analogues as long-acting hypoglycemic agents using novel peptide half-life extension technology based on mycophenolic acid | |
NZ785999A (en) | Glucagon and glp-1 co-agonists for the treatment of obesity | |
EP4364750A1 (en) | Therapeutic use of combination comprising triple activator having activity on all of glucagon, glp-1 and gip receptor | |
KR20220021890A (ko) | 삼중 활성체 지속형 결합체를 유효성분으로 포함하는 약학 조성물 |