TWI789958B - 一種仿穗軟珊瑚萃取物及其用途 - Google Patents

Abstract

本發明提供一種組合物用於製備抗發炎、皮膚美白、治療皮膚傷口以及治療過敏性皮膚炎之藥物的用途，其中該組合物包含一仿穗軟珊瑚萃取物。

Description

一種仿穗軟珊瑚萃取物及其用途

本發明係關於一種仿穗軟珊瑚萃取物之新穎用途，尤其係關於該仿穗軟珊瑚萃取物用於製備具有抗發炎、皮膚美白、治療皮膚傷口或治療過敏性皮膚炎等功效之藥物的用途。

海洋因為特殊的環境及豐富的資源，才能孕育一百萬種的多細胞生物及十億種的單細胞生物。這些生物富含特殊的生物活性，具有發展成藥品、保健品以及藥妝品的潛力。

珊瑚屬於腔腸動物門，有9000餘種，是海洋中最常見的生物之一，約占海洋生物種類的22.4%，是可以大量利用的海洋生物資源。軟珊瑚目(gorgonian)俗稱海扇、海鞭或海柳，是珊瑚動物中的一大分支。在對珊瑚化學成分的研究中，自美國的Weinheiner等人於1969年從軟珊瑚目中發現豐富的具有獨特結構和強烈生理活性的前列腺素前體以來，吸引了眾多天然產物化學家把研究物件從陸地生物轉向海洋生物，大量被發現的海洋天然產物具有廣泛的生物活性，主要作用於神經系統、心血管系統、免疫系統等，且許多有顯著的抗腫瘤活性。

異位性皮膚炎是一種免疫及發炎高度相關的慢性疾病。異位性皮膚炎為伴隨有發癢之發炎皮膚病，並且其為慢性疾病並且其通常在嬰 兒期開始。異位性皮膚炎具有不斷發癢作為主要症狀，並且具有沒有特定原因的反覆康復及惡化之性質。儘管最近對於異位性皮膚炎進行了許多研究，但是直到現在異位性皮膚炎之病因還不清楚。

根據世界衛生組織(World Health Organization，WHO)的資料，2004年共有11億燒燙傷患，約全球人口七分之一。根據統計，在美國有約6百萬人遭受創傷無法癒合的病症，耗費醫療資源估計超過一億美元。因此，尋求促進傷口癒合的新藥為節省醫療成本改善病患生活品質相當重要。

而各種軟珊瑚所純化出來的天然化合物已經證實具有許多生物活性。故軟珊瑚極具研發之潛力，其在醫療應用上仍有許多研發的空間。

本發明是將仿穗軟珊瑚(Paralemnalia thyrsoides)進行乾燥後，再對其用不同的有機溶劑(如乙醇、乙酸乙酯、正丁醇、異丙醇)或CO₂超臨界萃取進行萃取，以得一仿穗軟珊瑚萃取物PC。

在抗發炎實驗中，該仿穗軟珊瑚萃取物PC能抑制發炎因子環氧化酶-2(cyclooxygenase-2，COX-2)及誘導型一氧化氮合成酶(inducible nitric oxide synthase，iNOS)的表現。此結果顯示該仿穗軟珊瑚萃取物PC能抑制發炎因子的表現來達到抗發炎的功效。

在美白實驗中，該仿穗軟珊瑚萃取物PC能降低細胞斑馬魚體內的黑色素的表現量。此結果顯示該仿穗軟珊瑚萃取物PC能抑制黑色素的表現來達到美白的功效。

在傷口癒合的實驗中，該仿穗軟珊瑚萃取物PC從加速燒燙傷以及割傷的傷口癒合所需的時間。此結果顯示該仿穗軟珊瑚萃取物PC能促進傷口的癒合速度。

在異位性皮膚炎的實驗中，該仿穗軟珊瑚萃取物PC可以有效減緩異位性皮膚炎之發炎反應。在異位性皮膚炎小鼠模式中，PC可以有效緩解皮膚外觀的病徵，並緩解脾臟與淋巴結的腫大及降低IgE的濃度。在異位性皮膚的病理組織研究中可以觀察到PC能有效抑制表皮增厚及肥大細胞浸潤的情況。綜合上述結果，PC對於異位性皮膚炎之臨床病徵可有效減緩，且亦有效緩解因異位性皮膚炎所引起之免疫器官腫大，並降低對於過敏原反應。同時，因異位性皮膚炎而破壞的表皮屏障可透過PC治療後得到有效改善之結果。

本文中的用語「一」或「一種」係用以敘述本發明之元件及成分。此術語僅為了敘述方便及給予本發明之基本觀念。此敘述應被理解為包括一種或至少一種，且除非明顯地另有所指，表示單數時亦包括複數。於申請專利範圍中和「包含」一詞一起使用時，該用語「一」可意謂一個或超過一個。

本文在申請專利範圍中所使用之術語「或」意指「及/或」，除非有明確表示要僅意指另一個選擇，或除非其他的選擇互相排斥。

本發明提供一種仿穗軟珊瑚萃取物的製備方法，其包含用一有機溶劑或一超臨界萃取對一仿穗軟珊瑚(Paralemnalia thyrsoides)進行萃取，以得該仿穗軟珊瑚萃取物，其中該有機溶劑為乙醇、乙酸乙酯、水、正丁醇或異丙醇。

於一具體實施例中，該仿穗軟珊瑚萃取物為一仿穗軟珊瑚有機溶劑萃取物。於一較佳具體實施例中，該有機溶劑為乙醇。於一更佳具體實施例中，該仿穗軟珊瑚萃取物為一仿穗軟珊瑚乙醇萃取物。

於另一具體實施例中，該超臨界萃取為CO₂超臨界萃取。根據本發明，CO₂超臨界萃取分離天然物營養成分之製程，主要係利用超臨界狀態之二氧化碳流體於高壓、低溫條件下自天然物萃取出營養成分。於一具體實施例中，該CO₂超臨界萃取條件為CO₂：99%乙醇溶液之流速比=10mL/min：1mL/min；臨界壓力範圍為150-400巴(bar)；以及臨界溫度範圍為20-60℃。於一較佳具體實施例中，該CO₂超臨界萃取條件為CO₂：95%乙醇溶液之流速比=10mL/min：1mL/min；臨界壓力為250巴(bar)；以及臨界溫度為40℃。由於經過CO₂超臨界萃取後，同樣會分成留在CO₂超臨界萃取反應槽裡的原料跟萃取出來的物質(有機溶劑層)，收取該有機溶劑層，以得該仿穗軟珊瑚萃取物。於另一具體實施例中，對該仿穗軟珊瑚用CO₂超臨界萃取，以得該仿穗軟珊瑚萃取物。

於另一具體實施例中，該仿穗軟珊瑚於有機溶劑萃取前，先經過清洗、乾燥及/或粉碎處理。於一較佳具體實施例中，該乾燥處理為冷凍乾燥處理。於一更佳具體實施例中，該冷凍乾燥處理的時間為12至36小時。

於一具體實施例中，該仿穗軟珊瑚於室溫下用該有機溶劑進行萃取。於一較佳具體實施例中，該仿穗軟珊瑚用該有機溶劑浸泡萃取，再經過濾及減壓濃縮後，以得該仿穗軟珊瑚萃取物。

本發明提供一種組合物用於製備抗發炎的藥物之用途，其中 該組合物包含一仿穗軟珊瑚萃取物，其中該仿穗軟珊瑚萃取物的製備方法包含：用一有機溶劑或一超臨界萃取對一仿穗軟珊瑚(Paralemnalia thyrsoides)進行萃取，以得該仿穗軟珊瑚萃取物，其中該有機溶劑為乙醇、乙酸乙酯、正丁醇或異丙醇。

於一具體實施例中，該有機溶劑為乙醇。於一較佳具體實施例中，該仿穗軟珊瑚萃取物為一仿穗軟珊瑚乙醇萃取物。

於另一具體實施例中，該超臨界萃取為CO₂超臨界萃取。

如本文所使用，術語「抗發炎」包含但不限於治療或處理發炎之病狀。

於一具體實施例中，該抗發炎包含抑制一發炎因子。於一較佳具體實施例中，該發炎因子包含環氧化酶-2(COX-2)及誘導型一氧化氮合成酶(iNOS)。於一更佳具體實施例中，該仿穗軟珊瑚萃取物抑制環氧化酶-2及誘導型一氧化氮合成酶所引起的發炎。

本文中「有效劑量」一詞為一治療劑量可在特定條件下可預防、降低、阻止或逆轉一個體的一症狀的發展，或部分、完全舒緩該個體開始接受治療時於特別情況下已存在的症狀。本領域中之熟習技藝人士亦可輕易地測定在施予該仿穗軟珊瑚萃取物至一個體時適當的劑量用法。例如，該仿穗軟珊瑚萃取物可施予至該個體一次或兩次。當一劑量用法包含多次施予時，可瞭解到施予至該個體的該仿穗軟珊瑚萃取物的有效劑量可包含全部劑量用法期間施予的產物總量。

於一具體實施例中，該個體為動物，較佳為哺乳類，更佳為人類。

在抗發炎方面，於一具體實施例中，該仿穗軟珊瑚萃取物的有效劑量範圍為0.5毫克/公斤體重至50毫克/公斤體重。於一較佳具體實施例中，該仿穗軟珊瑚萃取物的有效劑量範圍為1毫克/公斤體重至20毫克/公斤體重。於一更佳具體實施例中，該仿穗軟珊瑚萃取物的有效劑量範圍為2毫克/公斤體重至10毫克/公斤體重。

本發明另提供一種仿穗軟珊瑚萃取物用於製備皮膚美白之組合物的用途，其中該仿穗軟珊瑚萃取物的製備方法包含：用一有機溶劑或一超臨界萃取對一仿穗軟珊瑚(Paralemnalia thyrsoides)進行萃取，以得該仿穗軟珊瑚萃取物，其中該有機溶劑為乙醇、乙酸乙酯、正丁醇或異丙醇。

於一具體實施例中，該有機溶劑為乙醇。於一較佳具體實施例中，該仿穗軟珊瑚萃取物為一仿穗軟珊瑚乙醇萃取物。

於另一具體實施例中，該超臨界萃取為CO₂超臨界萃取。

根據本發明，該仿穗軟珊瑚萃取物能抑制黑色素生成或減少黑色素，以達到皮膚美白的功效。於一具體實施例中，該仿穗軟珊瑚萃取物抑制黑色素生成或減少黑色素。於一較佳具體實施例中，該仿穗軟珊瑚萃取物用於製備抑制黑色素生成或減少黑色素之組合物。於一更佳具體實施例中，該仿穗軟珊瑚萃取物用於製備抑制黑色素生成或減少黑色素之醫藥品或化粧品。

於一具體實施例中，其中該組合物包含一化粧材料組合物、一食品添加物或一醫藥組合物。於一較佳具體實施例中，該組合物包含一化妝品組合物、一食品或一藥物。因此，該組合物可用於製備成化妝品、食品或藥物。於另一具體實施例中，該仿穗軟珊瑚萃取物用於製備皮膚美白的醫 藥品或化粧品。

在一示例性實施例中，該組合物可以是化妝品組合物。除了該仿穗軟珊瑚萃取物之外，該化妝品組合物可包含功能性添加物和化妝品組合物中常包含的成分。該功能添加物可包括選自水溶性維生素、油溶性維生素、多胜肽(polypeptide)、多醣體(polysaccharide)、神經鞘脂質(sphingolipid)和海藻萃取物的成分。除此之外，還可含有油、脂肪、潤濕劑、潤滑劑(emollient)、表面活性劑、有機或無機顏料、有機粉末、紫外線吸收劑、防腐劑、殺菌劑、抗氧化劑、植物萃取物、酸鹼值控制劑(pH control agent)、酒精、著色劑、香料、血液循環促進劑、清涼劑、止汗劑或純水等。

該化妝品組合物的製劑沒有特別限制，可根據目的適當選擇。例如，可以製備成選自由以下一種或多種製劑組成的群組：洗面乳(skin lotion)，皮膚軟化劑(softener)，皮膚調色劑(toner)，收斂劑(astringent)，化妝水，乳液(milk lotion)，保濕乳液(moisturizing lotion)，滋養乳液(nourishing lotion)，按摩霜(massage cream)，滋養霜(nourishing cream)，保濕霜(moisturizing cream)，護手霜(hand cream)，粉底(foundation)，精華液(essence)，滋養精華(nourishing essence)，包裝(pack)，肥皂，清潔泡沫(cleansing foam)，清潔乳液(cleansing lotion)，清潔霜(cleansing cream)，身體乳液(body lotion)和沐浴乳(body cleanser)，但不限於此。

本發明進一步提供一種抑制黑色素生成或減少黑色素來美白皮膚的方法，其包含對一個體的一皮膚施予一有效劑量的組合物，其中該組合物包含一仿穗軟珊瑚萃取物，其中該仿穗軟珊瑚萃取物的製備方法包 含：用一有機溶劑或一超臨界萃取對一仿穗軟珊瑚(Paralemnalia hyrsoides)進行萃取，以得該仿穗軟珊瑚萃取物，其中該有機溶劑為乙醇、乙酸乙酯、正丁醇或異丙醇。

於一具體實施例中，該有機溶劑為乙醇。於一較佳具體實施例中，該仿穗軟珊瑚萃取物為一仿穗軟珊瑚乙醇萃取物。

於另一具體實施例中，該超臨界萃取為CO₂超臨界萃取。

於另一具體實施例中，該個體為動物，較佳為哺乳類，更佳為人類。

根據本發明，該組合物被施予在該個體的皮膚上，用以抑制或減少該皮膚部位的黑色素，以美白該處皮膚。於一具體實施例中，該組合物被製備為一乳液、一化妝水、一精華液、一防曬乳、一隔離霜或一面膜的形式。

在皮膚美白方面，於一具體實施例中，該仿穗軟珊瑚萃取物的有效劑量範圍為5μg/ml至500μg/ml。於一較佳具體實施例中，該仿穗軟珊瑚萃取物的有效劑量範圍為20μg/ml至200μg/ml。於一更佳具體實施例中，該仿穗軟珊瑚萃取物的有效劑量範圍為50μg/ml至100μg/ml。

本發明進一步提供一種組合物用於製備治療皮膚傷口的藥物之用途，其中該組合物包含一仿穗軟珊瑚萃取物，其中該仿穗軟珊瑚萃取物的製備方法包含：用一有機溶劑或一超臨界萃取對一仿穗軟珊瑚(Paralemnalia thyrsoides)進行萃取，以得該仿穗軟珊瑚萃取物，其中該有機溶劑為乙醇、乙酸乙酯、正丁醇或異丙醇。

於一具體實施例中，該有機溶劑為乙醇。於一較佳具體實施 例中，該仿穗軟珊瑚萃取物為一仿穗軟珊瑚乙醇萃取物。

於另一具體實施例中，該超臨界萃取為CO₂超臨界萃取。

根據本發明，該仿穗軟珊瑚萃取物能促進傷口的癒合速度。於一具體實施例中，該藥物用以促進皮膚傷口之癒合。該皮膚傷口係因物理性、化學性或機械性等因素所產生，其中該等因素包括但不限於：創傷、燒燙傷、化學性灼傷、輻射傷害以及生理病變。於另一具體實施例中，該皮膚傷口包含一因燒燙傷所造成的傷口或一因割傷所造成的傷口。

在治療皮膚傷口方面，於一具體實施例中，該仿穗軟珊瑚萃取物的有效劑量範圍為0.01至5mg/ml。於一較佳具體實施例中，該仿穗軟珊瑚萃取物的有效劑量範圍為0.05至5mg/ml。於一更佳具體實施例中，該仿穗軟珊瑚萃取物的有效劑量範圍為0.1至2mg/ml。

本發明另提供一種組合物用於製備治療過敏性皮膚炎的藥物之用途，其中該組合物包含一仿穗軟珊瑚萃取物，其中該仿穗軟珊瑚萃取物的製備方法包含：用一有機溶劑或一超臨界萃取對一仿穗軟珊瑚(Paralemnalia thyrsoides)進行萃取，以得該仿穗軟珊瑚萃取物，其中該有機溶劑為乙醇、乙酸乙酯、正丁醇或異丙醇。

於一具體實施例中，該有機溶劑為乙醇。於一較佳具體實施例中，該仿穗軟珊瑚萃取物為一仿穗軟珊瑚乙醇萃取物。

於另一具體實施例中，該超臨界萃取為CO₂超臨界萃取。

如本文所使用，術語「過敏性皮膚炎」係指以過敏反應為要因的皮膚疾病的總稱，慢性的發癢及臉、頸、肘及/或膝之發疹為特徵。就過敏性皮膚炎而言，可列舉例如，接觸性皮膚炎、異位性皮膚炎等。「接觸 性皮膚炎」係指由於外來性之抗原與皮膚接觸所致的發病的濕疹性之炎症性疾病，可列舉例如，過敏性接觸皮膚炎、光接觸皮膚炎、全身性接觸皮膚炎和接觸蕁麻疹。又，就抗原而言，可列舉例如，金屬過敏原(鈷、鎳等)、植物過敏原(漆樹、櫻草等)和食物過敏原(芒果、銀杏等)。「異位性皮膚炎(atopic dermatitis，AD)」係指許多患者具有異位性傾向的皮膚疾病。重複地惡化、緩解之左右對稱的全身性濕疹為特徵，可列舉例如，瀰漫性神經皮膚炎、異位性濕疹、異位性神經皮膚炎、貝尼耶癢疹(Besnier prurigo)、急性嬰兒濕疹、屈曲部濕疹、四肢兒童濕疹、兒童異位性濕疹、兒童乾燥型濕疹、兒童濕疹、成人異位性皮膚炎、內因性濕疹、兒童皮膚炎和慢性兒童濕疹。

於一具體實施例中，該過敏性皮膚炎包含一接觸性皮膚炎或一異位性皮膚炎。於一較佳具體實施例中，該過敏性皮膚炎包含一異位性皮膚炎。於一更佳具體實施例中，該異位性皮膚炎包含瀰漫性神經皮膚炎、異位性濕疹、異位性神經皮膚炎、貝尼耶癢疹、急性嬰兒濕疹、屈曲部濕疹、四肢兒童濕疹、兒童異位性濕疹、兒童乾燥型濕疹、兒童濕疹、成人異位性皮膚炎、內因性濕疹、兒童皮膚炎或慢性兒童濕疹。

於另一具體實施例中，該藥物抑制異位性皮膚炎的病徵，其包含紅斑、浮腫、脫皮或皮膚乾燥。

於一具體實施例中，該藥物降低因該異位性皮膚炎所造成IgE表現量上升的情況。

於另一具體實施例中，該藥物改善因該異位性皮膚炎所造成脾臟或淋巴結腫大的情況。

於一具體實施例中，該藥物改善因該異位性皮膚炎所造成肥大細胞浸潤的情況。

於另一具體實施例中，該藥物改善因該異位性皮膚炎所造成皮膚屏障缺陷的情況。於一較佳具體實施例中，該藥物透過上調精胺酸酶-1(Arginase-1)、密連蛋白-1(Claudin-1)、絲聚蛋白(Filaggrin)以及上皮鈣粘蛋白(epithelial cadherin，E-cadherin)來改善因該異位性皮膚炎所造成皮膚屏障缺陷的情況。

在治療過敏性皮膚炎方面，於一具體實施例中，該仿穗軟珊瑚萃取物的有效劑量範圍為0.01至5mg/ml。於一較佳具體實施例中，該仿穗軟珊瑚萃取物的有效劑量範圍為0.05至5mg/ml。於一更佳具體實施例中，該仿穗軟珊瑚萃取物的有效劑量範圍為0.1至2mg/ml。

於一具體實施例中，上述藥物進一步包含一醫藥上可接受的載體(pharmaceutically acceptable carrier)。如本文所使用，術語「醫藥上可接受的載體」為透過特定組合施用及特定方法施用組合物所決定。如本文所用「載體」一詞包含但不局限任何及所有溶劑、分散介質、載具、包衣、稀釋劑、抗細菌和抗真菌劑等滲透和吸收延遲劑、緩衝劑、載體溶液、懸浮液或膠體等。用於藥物活性物質的這些介質和試劑在本領域中是公知的。除非任何常規介質或試劑與活性成分不相容，其用於治療的組合就需要被考慮。補充的活性成分也可摻入組合物中。術語「醫藥上可接受的」係指分子實體和組合物施用於受試者時不產生過敏或類似的不良反應。以蛋白質作為活性物質的水組合物製備在本領域中是習知的。通常，此組合物被製備為液體溶液、錠劑、膠囊或懸浮液注射劑；亦可製備為可用於注射劑之可溶解或懸 浮液之固體形式。於另一具體實施例中，該醫藥上可接受的載體包含一皮膚學上可容許之介質。「皮膚學上可容許之介質」係指在生物學上適切的物質，如鹽類、酯類及/或醯胺類之成份。也就是說這物質，其與所選擇之有效成份一起用時，在個體投與時不會引起不期望之生物學作用。另外，與含其之藥劑組成份中之任何成份都不會發生有害之交互作用之物質。同樣地，文中的「皮膚學上可容許的鹽」，或「皮膚學上可容許的酯」為在生物學上適切之鹽或酯。

根據本發明，上述組合物(包含該仿穗軟珊瑚萃取物)及醫藥上可接受的載體的配製可能經由無菌的水溶液或分散體、水懸浮液、油乳化液、油包乳化液中的水、特定點的乳化液、長停留乳化液、黏性乳化液、微乳液、奈米乳液、微脂粒、微粒、微球、奈米球、奈米顆粒、微汞及數種可持續釋放的天然或合成聚合物。醫藥上可接受的載體及該仿穗軟珊瑚萃取物也可配置成氣霧劑、片劑、丸劑、膠囊、無菌粉末、栓劑、洗劑、霜劑、軟膏劑、糊劑、凝膠、水凝膠，或其他可用於組合物輸送的製劑。

另外，本發明所稱之組合物包含施予於局部和區域作用的組合物。本文所用的術語「局部」涉及使用本文所述的組合物摻入合適的藥用載體中且施塗在皮膚的部位，例如過敏性皮膚炎的患部，以實施局部作用。因此，此類局部用該組合物包含其中透過與待處理皮膚表面直接接觸來自外部施塗之化合物的那些藥物形式。用於此目的的常規藥物形式包含軟膏劑、抹劑、乳膏、洗髮劑、乳液、糊劑、凝膠、噴劑、氣溶膠等，並且可以根據待治療的身體部位以貼片或浸潰敷料形式施用。術語「軟膏劑」包含具有油性基質、水溶性基質和乳液型基質的製劑(包含乳膏)，所述基質如凡 士林、羊毛脂、聚乙二醇類以及這些組合的混合物。

本發明的藥物可進一步包含一醫藥上可接受的載體，在本發明相關領域下習知的治療方式中可透過許多不同途徑施予於一個體。在一些實施例中，該組合物(包含該仿穗軟珊瑚萃取物)及醫藥上可接受的載體會經由外用、靜脈、肌肉、皮下、局部、口服或吸入施予。該藥物將會透過消化及循環系統被傳遞到目標處。

圖1為仿穗軟珊瑚萃取物PC對於酯多糖(LPS)誘發RAW264.7細胞發炎模式中的發炎因子(誘導型一氧化氮合成酶(iNOS)及環氧化酶-2(COX-2))蛋白的表現量的影響。圖1A顯示PC對發炎因子的西方墨點法的結果。圖1B顯示給予PC治療後可以使LPS誘發的iNOS蛋白表現降低。圖1C顯示給予PC治療後可以使LPS誘發的COX-2蛋白表現降低。

圖2為仿穗軟珊瑚萃取物PC於斑馬魚美白試驗之結果。經量化之黑色素數值，以控制組作為100%，計算黑色素百分比。結果顯示在熊果素(Arbutin)、PTU及PC的組別中黑色素比例較低，表示PC具有美白活性。

圖3為給予不同劑量的仿穗軟珊瑚萃取物PC治療的大鼠燙傷傷口癒合之外觀。由實驗結果顯示，各組別之傷口都會隨著天數而癒合，低劑量PC的治療組在第8天開始從傷口邊緣逐漸脫去死皮。比例尺為1cm。

圖4為給予仿穗軟珊瑚萃取物PC後，對皮膚燙傷傷口之治 療情形。圖4A為各組傷口面積(以百分比呈現)與受傷後天數之曲線圖。圖4B為將控制組每天的傷口面積分別與媒液組、低劑量PC組及高劑量PC組相減，並作成與受傷後時間之曲線圖，數值越大表示傷口面積越小。圖4C為以圖4B中曲線下面積做出的AUC，數值越大表示癒合越好。根據結果顯示，給予仿穗軟珊瑚萃取物治療後，燙傷傷口癒合情形顯著比控制組好，又以低劑量PC組對傷口癒合恢復情形最好。利用單因子變異數分析(one way ANOVA)進行數據統計分析，並以鄧肯氏方式(Duncan's Method)進行多重組間差異比較。*表示與受傷組組比較，P<0.05；#表示與媒液組比較，P<0.05。n：數量；w：傷口數量。

圖5為給予仿穗軟珊瑚萃取物24天後，對皮膚燙傷傷口之病理切片。(A)：控制組；(B)：受傷組；(C)：媒液組；(D)：低劑量PC組；(E)：高劑量PC組。將石蠟組織切片用蘇木紫-伊紅染色(HE stain)進行染色，以觀察傷口組織受傷情形，照片為10倍放大圖。實驗結果顯示，受傷組(圖5B)的表皮層上方仍有脫離不完全之結痂。而媒液組(圖5C)、低劑量PC組(圖5D)、高劑量PC組(圖5E)已形成較厚的表皮。

圖6為給予仿穗軟珊瑚萃取物後，對皮膚割傷傷口之外觀。實驗結果顯示，各組別之傷口都會隨著天數而癒合，低劑量PC組及高劑量PC組的傷口癒合速度顯著高於媒液組。比例尺為23μm。

圖7為給予仿穗軟珊瑚萃取物後，對皮膚割傷傷口之治療情形。圖7A為各組傷口面積(以百分比呈現)與受傷後天數之曲線圖。圖7B為將媒液組每天的傷口面積分別與低劑量PC組及高劑量PC組相減，並作成與受傷後時間之曲線圖，數值越大表示傷口面積越小。圖7C為以圖7B 中曲線下面積做出的AUC，數值越大表示癒合越好。根據結果顯示，給予仿穗軟珊瑚萃取物治療後，割傷傷口癒合情形顯著比媒液組好，又以低劑量PC組對傷口癒合恢復情形最好。利用單因子變異數分析進行數據統計分析，並以鄧肯氏方式進行多重組間差異比較。*表示與媒液組比較，P<0.05。n：數量；w：傷口數量。

圖8為給予仿穗軟珊瑚萃取物13天後，對皮膚割傷傷口之病理切片。(A)：控制組；(B)：媒液組；(C)：低劑量PC組；(D)：高劑量PC組。將石蠟組織切片用蘇木紫-伊紅染色進行染色，以觀察傷口組織受傷情形，照片為10倍放大圖。實驗結果顯示，割傷13天後，低劑量PC組(圖8C)及高劑量PC組(圖8D)中表皮層明顯增厚，並已發育完整。

圖9為仿穗軟珊瑚萃取物PC對小鼠異位性皮膚炎外觀的影響。DNCB誘發異位性皮膚炎後，在AD組及AD-V組中的小鼠皮膚外觀產生紅、腫脹、痂皮、增厚及乾燥之病癥，給予低和高劑量PC以及克立硼羅(crisaborole)治療後，可以觀察到上述的病狀皆有明顯改善。

圖10為仿穗軟珊瑚萃取物PC對異位性皮膚炎外觀之皮膚炎指數(dermatitis scores)的影響。圖10A顯示皮膚炎的分數，評分項目包含紅、腫脹、滲液/痂皮、增厚、乾燥等五項，每項為0-3分，總分最低為0分，最高為15分。圖10B為AD-V為比較組，將每天的分數分別與其他各組相減，並做成與治療後時間關係圖，正的數值越大表示治療效果越好。圖10C為以圖10B中曲線下面積做出的AUC，正的數值越大表示恢復程度越好。根據實驗結果顯示，在給予低和高劑量PC以及克立硼羅治療後，分數顯著下降。利用單因子變異數分析進行數據統計分析，並以鄧肯氏方式進行 多重組間差異比較。$表示與控制組相比，p<0.05；*表示與AD組相比，p<0.05；#表示與AD-V組相比，p<0.05。n：數量。

圖11為仿穗軟珊瑚萃取物PC對異位性皮膚炎的脾臟重量之影響。經統計分析後，AD組及AD-V組中脾臟重量明顯增加，給予低和高劑量PC及克立硼羅後，可以有效抑制異位性皮膚炎造成的脾臟腫大。利用單因子變異數分析進行數據統計分析，並以鄧肯氏方式進行多重組間差異比較。$表示與控制組相比，p<0.05；*表示與AD組相比，p<0.05；#表示與AD-V組相比，p<0.05。比例尺為1cm。

圖12為仿穗軟珊瑚萃取物PC對異位性皮膚炎的淋巴結重量之影響。經統計分析後，AD組及AD-V組中淋巴結重量明顯增加，給予低和高劑量PC及克立硼羅治療後，可以有效抑制異位性皮膚炎造成的淋巴結腫大。利用單因子變異數分析進行數據統計分析，並以鄧肯氏方式進行多重組間差異比較。$表示與控制組相比，p<0.05；*表示與AD組相比，p<0.05；#表示與AD-V組相比，p<0.05。比例尺為1cm。

圖13為仿穗軟珊瑚萃取物PC對於異位性皮膚炎的血清中IgE濃度之影響。經統計分析後，AD組及AD-V組中血清中IgE明顯增加，給予高劑量PC及克立硼羅治療後，血清中IgE的濃度皆有顯著下降；然而低劑量PC則無顯著之影響。利用單因子變異數分析進行數據統計分析，並以鄧肯氏方式進行多重組間差異比較。$表示與控制組相比，p<0.05；*表示與AD組相比，p<0.05；#與AD-V組相比，p<0.05。

圖14為仿穗軟珊瑚萃取物PC對於異位性皮膚炎之影響。圖14A顯示AD組及AD-V組之表皮層有大量角質細胞堆積造成表皮層增 生。給予低和高劑量PC及克立硼羅治療後表皮層的過度增生有明顯被抑制。照片為100倍放大圖，比例尺為100μm。圖14B顯示藉由組織切片圖量測表皮層厚度，經統計分析後，AD組及AD-V組之表皮厚度明顯增加，給予低和高劑量PC及克立硼羅治療後，表皮層過度增生的狀況會被抑制。利用單因子變異數分析進行數據統計分析，並以鄧肯氏方式進行多重組間差異比較。$表示與控制組相比，p<0.05；*表示與AD組相比，p<0.05；#表示與AD-V組相比，p<0.05。

圖15為仿穗軟珊瑚萃取物PC對異位性皮膚炎中肥大細胞浸潤的影響。圖15A顯示AD組及AD-V組中真皮層有大量肥大細胞浸潤，給予高劑量PC及克立硼羅治療後可以有效的抑制肥大細胞浸潤的情況；然而PC低劑量則無顯著之影響。比例尺為50μm。圖15B顯示經統計分析後，AD組及AD-V組中肥大細胞數量明顯增加，給予高劑量PC及克立硼羅治療後可以有效抑制肥大細胞的浸潤；然而低劑量PC則無明顯效果。$表示與控制組相比，p<0.05；*表示與AD組相比，p<0.05；#表示與AD-V組相比，p<0.05。

圖16為仿穗軟珊瑚萃取物PC對於異位性皮膚炎中精胺酸酶-1(Arginase-1)之影響。圖16A為100X的放大圖，圖16B為400X的放大圖。實驗結果顯示給予DNCB誘導異位性皮膚炎後，精胺酸酶-1的表現量下降，在施予低和高劑量PC及克立硼羅治療後，可以使精胺酸酶-1回升。100X的比例尺為100μm，400X的比例尺為50μm。

圖17為仿穗軟珊瑚萃取物PC對於異位性皮膚炎中密連蛋白-1(Claudin-1)之影響。圖17A為100X的放大圖，圖17B為400X的放 大圖。實驗結果顯示，給予DNCB誘導異位性皮膚炎後，密連蛋白-1的表現量下降，在施予低和高劑量PC及克立硼羅治療後，可以使密連蛋白-1表現量回升。100X中比例尺為100μm，400X中比例尺為50μm。

圖18為仿穗軟珊瑚萃取物PC對於異位性皮膚炎中絲聚蛋白(Filaggrin)之影響。圖18A為100X的放大圖，圖18B為400X的放大圖。實驗結果顯示，給予DNCB誘導異位性皮膚炎後，絲聚蛋白表現量下降，在施予低和高劑量PC及克立硼羅治療後，可以使絲聚蛋白表現量回升。100X中比例尺為100μm，400X中比例尺為50μm。

圖19為仿穗軟珊瑚萃取物PC對於異位性皮膚炎中上皮鈣粘蛋白(E-cadherin)之影響。實驗結果顯示，給予DNCB誘導異位性皮膚炎後，使上皮鈣粘蛋白表現量下降，再給予低和高劑量PC及克立硼羅治療後，可以使上皮鈣粘蛋白表現量回升。比例尺為100μm。

本發明包括但不限於上述與下開之說明。實施方法則如下範例所示。

養殖型仿穗軟珊瑚之萃取：

本發明使用的是人工養殖的仿穗軟珊瑚(Paralemnalia thyrsoides)。

本發明選用乙醇進行對仿穗軟珊瑚萃取，詳細的萃取流程如下：仿穗軟珊瑚(濕重4075.0g)先進行冷凍乾燥24小時，得到乾重580g。乾燥的珊瑚在室溫下以2L之乙醇溶劑浸泡並震盪4次，每次30分鐘，得到的萃取液以減壓濃縮劑進行濃縮，得到仿穗軟珊瑚萃取物PC 50.487g， 計算萃取率為8.7%(乾重)或1.24%(濕重)。

另外，上述萃取步驟中，該乙醇溶劑可改用其他有機溶劑進行替換，例如使用乙酸乙酯、正丁醇或異丙醇進行萃取，或者將乙醇萃取步驟改成超臨界萃取(如CO₂超臨界萃取)，都可以得到與PC相同成分之萃取物。

上述CO₂超臨界萃取條件為CO₂：95%乙醇溶液之流速比=10mL/min：1mL/min；臨界壓力為250巴(bar)；以及臨界溫度為40℃。

離體實驗的材料和方法：

抗發炎功效性

利用酯多糖(LPS)誘發小鼠巨噬細胞RAW 264.7細胞株來進行仿穗軟珊瑚萃取物PC之離體抗發炎效果。於6公分培養皿培養適量細胞數目的RAW 264.7細胞，再給予LPS及待測物16-18小時後收集細胞，並進行西方墨點法。藉由評估發炎反應指標蛋白(誘導型一氧化氮合成酶(iNOS)及環氧化酶-2(COX-2))之表現量，倘若待測物可抑制指標蛋白之表現量，即可推斷具有抗發炎之潛力。以單獨加入酯多糖(LPS)組別為100%，最後以β-肌動蛋白(β-actin)作為內控制組。

活體實驗的材料和方法：

1.斑馬魚美白實驗

安全性試驗實驗品系為野生型(wild-type)斑馬魚，飼養在水循環系統中，依照性別分開飼養於缸中，以便配對時取用，魚缸皆連通水循環過濾系統，光週期為14小時光照及10小時的黑暗，溫度調控在26±1℃。

將公母魚配對於產卵配對內盒，公母魚隻數為4：3或3： 2，其外盒使用3L飼養缸，隔日早上收集魚卵，並放入含有漢克緩衝液(Hank’s buffer)的培養皿中，放入28℃恆溫培養箱中，經過9小時後，挑除形態異常的卵以確定魚卵品質；取100μl含漢克緩衝液之3顆魚卵加入96孔盤的小格中，再加入100μl試驗樣品後，放置恆溫培養箱，加藥48小時後，以實體顯微鏡觀察記錄仔魚形態，並使用MS-222麻醉及2%甲基纖維素(methyl cellulose)固定魚隻於凹坡片上，拍攝其魚體，並以魚體身上的黑色素為標準。在拍攝魚隻時固定顯微鏡倍率，利用Image J軟體計算魚體的黑色素將其量化成像素數值，以控制組作為100%，計算其他組別之黑色素百分比，若所佔的黑色素百分比較低則代表其可能具有美白之功效。實驗組別為控制組、正控制組(20M熊果素(Arbutin)及200μM苯基硫脲(1-phenyl-2-thiourea，PTU))及仿穗軟珊瑚萃取物，所有樣品皆溶於1%二甲基亞碸(Dimethyl sulfoxide，DMSO)/漢克緩衝液，每組n值皆

12。

2.燒燙傷、割傷模式

400-450克的Wistar大白鼠之公鼠飼養在光週期維持12小時光照/12小時黑暗的環境下，大白鼠可以自由取用飲水及食物。並以空調系統控制飼養環境的溫度和溼度，使環境溫度保持在23℃。在燙傷實驗中，將大白鼠以2.5%異氟醚(isoflurane)麻醉下進行背部除毛，選定燒燙傷位置。將要燒燙傷的位置皮膚拉緊拉撐，將以乾浴槽預熱至165℃之銅塊(2 x 2cm)緊密接觸10秒以製造傷口，形成全層皮膚之燒燙傷口。過程中適時移動銅塊確保有完整燙出四邊形，過程中勿額外施加壓力以確保每次給與壓力相同。而在割傷實驗中，將大鼠麻醉後剔除背部毛髮，再以剪刀剪下半徑一公分的圓形皮膚。

每日相同時間取相同劑量之藥膏均勻敷於傷口上。藥膏配置為取1克之羧甲基纖維素(carboxymethyl cellulose)(high viscosity,Sigma-Aldrich Co,USA)和80克之超純水以磁石攪拌成凝膠。後加入不同濃度之仿穗軟珊瑚萃取物以磁石攪拌配置成為藥膏。並每日將大鼠麻醉後，以數位相機(Coolpix P6000,Nikon,Japan)在相同條件下(光圈7.2、快門1/60秒)拍攝一系列照片，拍照後測量記錄老鼠體重。最後以病理組織切片、蘇木精-伊紅染色(Hematoxylin-Eosin stain，HE stain)、免疫染色進行觀察。

利用軟體使用軟體計算每一張照片之每公分為幾個像素。Spot軟體(Diagnostic Instruments,Inc.,Sterling Heights,MI,USA)可以提供所圈選之傷口面積，再利用上面之比例推算出實際傷口面積。

3.誘發異位性皮膚炎(AD)之動物模式

本發明的實驗動物組別如下：(1)控制組(control組)：為有剃毛但無誘發疾病之正常小鼠；(2)純受傷組(AD組)：為剃毛後給予2,4-二硝基氯苯(2,4-dinitirochlorobenzene，DNCB)誘發異位性皮膚炎(AD)之小鼠，誘發面積約為1.6mm²；(3)受傷組(AD vehicle(AD-V)組)：為剃毛後給予DNCB誘發AD後，傷口區域每天只塗抹基質1%甲基纖維素，面積約為1.6mm²；(4)低劑量PC組(PC-L)：為剃毛後給予DNCB誘發AD後，傷口區域每天給予仿穗軟珊瑚萃取物PC(10μg)，面積約為1.6mm²；(5)高劑量PC組(PC-H)：為剃毛後給予DNCB誘發AD後，傷口區域每天給予仿穗軟珊瑚萃取物PC(40μg)，面積約為1.6mm²；(6)克立硼羅組(Cris)：為剃毛後給予DNCB誘發AD後，傷口區域每天給予克立硼羅(crisaborole，Cris)200μg，面積約為1.6mm²。

小鼠以2.5%異氟醚麻醉後剔除背部毛髮。然後給予4次DNCB並勻塗抹於皮膚(面積約0.8cm²)誘發AD(每次每隻給予200μl)，使小鼠皮膚出現AD的疾病表徵。待皮膚外觀復原後(4周)，準備進行第2次誘發，再次去除毛髮，並分別於剃毛後第1、3、5、7天以2% DNCB均勻塗抹於皮膚，使其出現AD表徵，之後於第9、11、13天以0.2% DNCB刺激以維持AD表徵，於第9-15天每天塗抹100μl之媒液(vehicle)、不同濃度的仿穗軟珊瑚萃取物PC或克立硼羅。於第16天犧牲，進行心臟採血及收集皮膚組織、脾臟及淋巴結。

4.皮膚觀察以及皮膚炎評分依據

小鼠麻醉後以數位相機(Coolpix P6000,Nikon,Japan)在相同條件下(光圈6.4、快門1/80秒)拍攝傷口癒合情況。每天拍一次傷口照片，來觀察傷口外觀變化情況。

利用四個皮膚表面症狀來評估臨床皮膚炎的嚴重性：紅(redness)、腫(swelling)、結痂/滲液(oozing/crusting)、皮膚厚度(skin thickening)、乾燥(dryness)等項目，各項目中0分為無病徵；1分為輕度；2分為中度；3分為嚴重。依據不同程度症狀去比對並作評分。分數越高即代表皮膚炎的嚴重程度越嚴重。

5.皮膚樣品收集與組織學分析

接受燙傷、割傷後之大鼠及誘發後之小鼠在實驗設計天數給予人道犧牲，利用手術剪刀將異位性皮膚炎區域仔細取下，在4℃環境下靜置於4%福馬林液固定一晚，接下來進行固定組織的脫水與滲蠟處理，利用組織自動處理系統(Tissue-Tek,Sakura Finetek Japan Co.,Ltd,Japan)將皮膚 組織進行脫水及滲蠟，接著以石蠟組織包埋機(Tissue Embedding,EC780-1,EC780-2,Csa Microm)將組織包埋成石蠟塊(paraffin block)。然後以石蠟切片機進行組織切片後，使用蘇木紫-伊紅染色(HE stain)、甲苯胺藍染色(Toluidine Blue)或免疫組織化學染色(Immunohistochemistry，IHC)進行染色。完成後以封片膠封片，再將樣品玻片置於光學顯微鏡(Leica DM-6000B,Leica,Germany)下觀察，用SPOT數位影像擷取系統(Diagnostic Instruments,Inc.,Sterling Heights,USA)拍攝記錄切片結果。

6.器官秤重

若發生發炎或免疫相關之疾病，淋巴結及脾臟會腫大(swell)。因此，小鼠犧牲時，收取這兩個器官拍照，並秤量其重量。

7.分析血清中之IgE濃度

犧牲時收取動物的血液，以離心機3000rpm，10分鐘後，並吸取分離的血清。依照廠商之操作方法進行實驗，適當的稀釋血清，以IgE ELISA套組(Catalog # 88-50460-22,Thermo,USA)檢測血清中IgE含量。

8.肥大細胞的染色

肥大細胞是使用10%(W/V)甲苯胺藍(toluidine blue)進行染色。進行甲苯胺藍(T3260,Sigma-Aldrich,USA)染色步驟時，先將石蠟切片浸泡於二甲苯20分鐘兩次後，依序浸泡於100%酒精1分鐘、95%酒精1分鐘、75%酒精1分鐘和50%酒精1分鐘，再利用流動水水洗3~5分鐘。將石蠟切片泡入10%(W/V)甲苯胺藍15秒鐘，用50%酒精把多餘的染劑清洗掉，再利用流動水水洗5分鐘，並將玻片晾乾再以封片膠封片。最後將樣品玻片置於光學顯微鏡下觀察，利用SPOT數位影像擷取系統拍 攝記錄切片結果。

9.免疫組織化學染色法

進行免疫組織化學染色法(immunohistochemistry，IHC)進行染色步驟時，先將石蠟切片浸泡在二甲苯20分鐘兩次後，依序浸泡於100%酒精1分鐘、95%酒精1分鐘、75%酒精1分鐘和50%酒精1分鐘，接著利用流動水水洗5分鐘。以免疫化學組織筆(Liquid Blocker)在玻片外圍畫一圈，過程中須保持組織在濕潤的狀態。將石蠟切片以TTBS溶液(Tris-Tween Buffered Saline；20mM T-HCl，137mM NaCl，0.1% Tween 20，pH7.4)潤洗三次(每次8分鐘)。用蛋白酶K(Proteinase K)(P2308,Sigma-Aldrich,USA)以TE緩衝液(50mM Tris Base，1mM EDTA)稀釋10倍，將樣本覆蓋稀釋後之蛋白酶K於37℃中震盪30分鐘，接著以TTBS溶液潤洗三次(每次8分鐘)，再加入3%H₂O₂覆蓋樣本10分鐘，再以TTBS溶液潤洗三次。用Rodent Block M(RBM961,Biocare Medical,USA)覆蓋樣本，室溫震盪30分鐘。移除Rodent Block M後以TTBS溶液潤洗三次，加入針對目標蛋白作用的一級抗體(如精胺酸酶-1(Arginase-1)、密連蛋白-1(Claudin-1)、絲聚蛋白(Filaggrin)和上皮鈣粘蛋白(E-cadherin))使其在4℃下震盪一晚。隔天使用TTBS溶液潤洗三次，加入針對先前所使用一級抗體的二級抗體，於室溫震盪30分鐘後，將樣本覆蓋於TTBS液中清洗三次，接著利用DAB染劑(SK-4100,Vector Laboratories,Inc.,USA)呈色，之後利用流動水水洗5分鐘，將玻片依序浸泡於75%、95%、100%酒精各30秒，二甲苯1分鐘後，以封片膠封片。最後將完成的樣本玻片置於光學顯微鏡下觀察，用SPOT數位影像擷取系統拍攝記錄切片結果。

10.實驗數據分析

所有實驗數據皆以平均值±平均值標準誤差(mean±SEM)的方式呈現。兩組間數據之比較，依t測試(t-test)進行統計分析。多組間之數據比較，則利用單因子變異數分析(one-way analysis of variance，ANOVA)進行數據統計分析，並根據鄧肯氏方式(Duncan's Method)進行多組間差異性比較。當P值小於0.05時，表示組間有顯著差異。

實驗結果：

1.抗發炎蛋白之表現量

圖1為仿穗軟珊瑚萃取物PC對於酯多糖(LPS)誘發RAW264.7細胞發炎模式中誘導型一氧化氮合成酶(iNOS)及環氧化酶-2(COX-2)蛋白表現量的影響。利用LPS誘導RAW264.7細胞產生發炎，圖1A為仿穗軟珊瑚萃取物PC對發炎蛋白的影響之西方墨點法的結果。圖1B為iNOS蛋白表現量，以LPS單獨組預設為100%，在給予PC治療後可以有效降低LPS造成的iNOS上升。圖1C為COX-2蛋白表現量，以LPS單獨組預設為100%，在給予PC治療後可以有效降低LPS造成的COX-2上升。

2. PC於斑馬魚美白之功效

經量化之黑色素數值，以控制組作為100%，計算黑色素百分比。如圖2所示，熊果素、PTU及仿穗軟珊瑚萃取物PC中黑色素比例較低，表示其具有美白活性。經統計分析後，PC與控制組相比黑色素顯著下降。

3. PC對傷口癒合的功效

3.1 PC對大鼠燙傷傷口癒合之影響

燙傷實驗分為四組：控制組為純受傷(injury)的組別，媒液(vehicle)組為1%羧甲基纖維素，PC治療組分為低劑量PC組及高劑量PC組，均將仿穗軟珊瑚萃取物PC溶於1%羧甲基纖維素中，低劑量PC組為每個傷口給予10μg仿穗軟珊瑚萃取物，高劑量PC組為每個傷口給予40μg仿穗軟珊瑚萃取物。由實驗結果顯示，各組別之傷口都會隨著天數而癒合，低劑量治療組在第8天開始從傷口邊緣逐漸脫去死皮(圖3)。由傷口面積曲線圖也可以觀察到(圖4A)，隨著時間傷口會逐漸恢復，但相較於媒液組的面積曲線，低劑量PC組中傷口面積曲線圖有更快速的縮小傷口面積的情形，為了更進一步觀察受傷組與治療組間的差異，將受傷組面積曲線與治療組相減(圖4B)，可以觀察到更明顯的癒合面積差。而高劑量PC組雖然有比媒液組癒合更快速，但傷口面積縮小率仍比低劑量PC組慢(圖4B)。接著利用圖4B中面積差曲線圖做積分得到曲線下面積(area under curve，AUC)(圖4C)，數值越大表示癒合面積越多。媒液組的傷口也會隨時間自動癒合，但傷口面積曲線癒合明顯較為緩慢。因此在傷口外觀及曲線圖的觀察中可以確認給予仿穗軟珊瑚萃取物PC治療的組別會比控制組的受傷傷口更能有效促進傷口癒合。

本發明進一步利用病理組織染色(HE染色)分析燙傷後給予仿穗軟珊瑚萃取物PC對於受傷組織之影響。如圖5所示，燙傷24天後，受傷組(圖5B)的之表皮層上方仍有脫離不完全之結痂。而媒液組(圖5C)、低劑量PC組(圖5D)以及高劑量PC組(圖5E)已形成較厚的表皮。

3.2 PC對大鼠割傷傷口癒合之影響

分別每日給予媒液(1%羧甲基纖維素)、低劑量PC(10μg仿穗軟珊瑚萃取物)以及高劑量PC(40μg仿穗軟珊瑚萃取物)進行治療，並且每隔兩日拍照紀錄，持續觀察至割傷後第13天(圖6)。如圖7A所示，各組傷口面積(以百分比呈現)與受傷後天數之曲線圖。如圖7B所示，將媒液組每天的傷口面積分別與其他各組相減，並作成與受傷後時間之曲線圖，數值越大表示傷口面積越小。如圖7C所示，將圖7B中各組之曲線取積分得到曲線下面積(AUC)並作圖，數值越大表示傷口癒合效果越佳。實驗結果顯示，低劑量PC組及高劑量PC組的傷口癒合速度顯著高於媒液組，而AUC定量結果同樣也顯示低劑量PC組及高劑量PC組的治療效果顯著高於媒液組。

本發明進一步利用病理組織染色(HE染色)分析割傷後給予珊瑚萃取物對於受傷組織之影響。如圖8所示，割傷13天後，低劑量PC組(圖8C)和高劑量PC組(圖8D)中表皮層明顯增厚，並已發育完整。

4. PC對異位性皮膚炎的功效

4.1 PC對小鼠異位性皮膚炎外觀的影響

如圖9所示，利用影像紀錄傷口外觀，並依照傷口外觀徵狀程度進行評分。依下列5種症狀分別評分：發紅、腫脹、乾燥、出血/結痂、增厚，依照症狀程度分級：0(無症狀)、1(輕度)、2(中度)以及3(重度)。每種症狀最高分為3分，總分最高為15分，計算至動物犧牲前。此傷口的嚴重程度的評分可以作為皮膚炎指數(dermatitis scores)。如圖10所示，實驗結果之分數統計為：AD組：10.6±0.75；AD-V組：10±0.91；PC-L組：5.71±0.29；PC-H組：6.57±0.65；Cris組：7±0.79。在給予低和高劑 量PC以及克立硼羅治療後皆有顯著效果，然而治療組之間無統計上差異。

4.2 脾臟重量

仿穗軟珊瑚萃取物PC對DNCB誘導異位性皮膚炎的脾臟重量的影響(圖11)。實驗結果可以觀察到DNCB誘發疾病後，AD組的脾臟大小明顯增加，在給予低和高劑量PC以及克立硼羅治療後，脾臟皆有明顯變小的現象。經過測量後，控制組：93.27±9.76mg，AD組：462.87±47.57mg；AD-V組：523.18±37.03mg；PC-L組：251.67±32.94mg；PC-H組：287.58±43.48mg；以及Cris組：328.24±24.99mg。統計結果顯示，給予低和高劑量PC以及克立硼羅治療可以抑制異位性皮膚炎造成的脾臟腫大。

4.3 淋巴結重量

仿穗軟珊瑚萃取物PC對DNCB誘導異位性皮膚炎的淋巴結重量的影響(圖12)。實驗結果可以觀察到DNCB誘發疾病後，AD組的淋巴結大小明顯增加，在給予低和高劑量PC及克立硼羅治療後，淋巴結皆有明顯變小的現象。經過測量後，控制組：10.75±1.58mg；AD組：27.35±3.07mg；AD-V組：27.84±1.87mg；PC-L組：20.67±0.55mg；PC-H組：17.10±1.58mg；以及Cris組：22.30±0.92mg。統計結果顯示，給予高劑量PC可以抑制異位性皮膚炎造成的淋巴結腫大，雖然低劑量PC及克立硼羅有治療效果，但無統計上差異。

4.4 血清中IgE濃度

仿穗軟珊瑚萃取物PC對DNCB誘導異位性皮膚炎的血清中IgE濃度的影響(圖13)。實驗數據顯示，DNCB誘發疾病後，AD組及AD-V組中血液中的IgE濃度顯著上升，而在給予藥物治療後，血清中IgE 的濃度在高劑量PC組及克立硼羅組有顯著下降。控制組：0.89±0.13mg/ml；AD組：31.62±2.42mg/ml；AD-V組：31.09±1.69mg/ml；PC-L組：30.20±2.18mg/ml；PC-H組：24.49±1.29mg/ml；以及Cris組：25.214±2.81mg/ml。統計結果顯示，給予高劑量PC及克立硼羅治療後，對AD血清中IgE的濃度上升有抑制的效果；然而低劑量PC則對血清中IgE的濃度抑制無效。

4.5 AD皮膚之病理影響

仿穗軟珊瑚萃取物PC對DNCB誘導異位性皮膚炎病理切片的影響(圖14A)。小鼠誘發異位性皮膚炎並合併給予PC治療後，於第16天取下皮膚進行組織病理切片分析定量表皮層厚度。AD病變組之表皮層因為異位性皮膚炎導致角質層不當增生，造成表皮增厚，給予低及高劑量PC或臨床用藥克立硼羅治療後，皆有明顯的抑制角質層增厚的情形。如圖14B所示，經統計分析後，控制組：18.08±2.43mm；AD組：122.8±12.98mm，AD-V組：165.83±24.86mm；PC-L組：64.63±8.22mm；PC-H組：83.75±12.59mm；以及Cris組：60.63±2.28mm。在給予低和高劑量PC及克立硼羅治療後皆有顯著效果，而治療組之間並無統計上差異。

4.6 AD皮膚組織中肥大細胞表現量之影響

仿穗軟珊瑚萃取物PC對異位性皮膚炎中肥大細胞浸潤的影響(圖15A)。將石蠟組織切片用甲苯胺藍染色進行染色，以觀察傷口肥大細胞浸潤情況，圖15A中偏紫色(箭號處)為肥大細胞。實驗結果顯示，由DNCB誘發AD後，AD組及AD-V組之肥大細胞浸潤程度較多；給予高劑量PC及克立硼羅治療後可以有效減緩肥大細胞的浸潤，而低劑量PC則無明顯治療效果。經統計分析後(圖15B)，控制組：6.70±1.71細胞/mm²； AD組：58.90±4.61細胞/mm²；AD-V組：53.96±4.99細胞/mm²；PC-L組：58.01±8.21細胞/mm²；PC-H組：33.82±6.32細胞/mm²；以及Cris組：39.18±0.85細胞/mm²。在給予高劑量PC及克立硼羅治療後皆有顯著效果，而低劑量PC則無效果，然治療組間無統計上差異。

4.7 AD皮膚組織中精胺酸酶-1(Arginase-1)表現量之影響

仿穗軟珊瑚萃取物PC對於異位性皮膚炎中精胺酸酶-1之影響(圖16)。在異位性皮膚炎下精胺酸酶-1表現量會下降，在組織趨於恢復正常時，精胺酸酶-1表現量會上升。實驗結果顯示，AD組與AD-V組中，表皮層之精胺酸酶-1的表現量下降，在施予低和高劑量PC及克立硼羅治療後，可以使精胺酸酶-1表現量回升。

4.8 AD皮膚組織中密連蛋白-1(Claudin-1)表現量之影響

仿穗軟珊瑚萃取物PC對於異位性皮膚炎中密連蛋白-1之影響(圖17)。在異位性皮膚炎的狀態下，表皮屏障被破壞，造成密連蛋白-1下降。實驗結果顯示，在AD組與AD-V組中，表皮層之密連蛋白-1的表現量下降，在施予低和高劑量PC及克立硼羅治療後，可以使密連蛋白-1表現量回升。

4.9 AD皮膚組織中絲聚蛋白(Filaggrin)表現量之影響

仿穗軟珊瑚萃取物PC對於異位性皮膚炎中絲聚蛋白之影響(圖18)。在異位性皮膚炎的狀態下，表皮屏障被破壞，造成絲聚蛋白下降。實驗結果顯示，在AD組與AD-V組中，表皮層之絲聚蛋白的表現量下降，在施予低和高劑量PC及克立硼羅治療後，可以使絲聚蛋白表現量回升。

4.10 AD皮膚組織中上皮鈣粘蛋白(E-cadherin)表現量之影 響

仿穗軟珊瑚萃取物PC對於異位性皮膚炎中上皮鈣粘蛋白之影響(圖19)。在異位性皮膚炎的狀態下，表皮屏障被破壞，而上皮鈣粘蛋白的表現可以評估表皮屏障的完整性。實驗結果顯示，在AD組與AD-V組中，表皮層之上皮鈣粘蛋白的表現量下降，在施予低和高劑量PC及克立硼羅治療後，可以使上皮鈣粘蛋白表現量回升。

本發明適當地描述可以在本文未具體公開的要件或限制下實施。已被用作描述的術語並不是限制。在使用這些術語和除此之外的任何同等物的表達和描述是沒有差別的，但應當認識到本發明內的權利是可能修改的。因此，雖然本發明已說明實施例和其他情況，本文中所公開的內容可以被本領域的技術人員進行修飾和變化，並且這樣的修改和變化被認為是在本發明的權利範圍之內。

Claims (7)

1. 一種組合物用於製備抗發炎的藥物之用途，其中該組合物包含一仿穗軟珊瑚萃取物，其中該仿穗軟珊瑚萃取物的製備方法包含：用一有機溶劑對一仿穗軟珊瑚(Paralemnalia thyrsoides)進行萃取，以得該仿穗軟珊瑚萃取物，其中該有機溶劑為乙醇。
2. 一種仿穗軟珊瑚萃取物用於製備皮膚美白之組合物的用途，其中該仿穗軟珊瑚萃取物的製備方法包含：用一有機溶劑對一仿穗軟珊瑚(Paralemnalia thyrsoides)進行萃取，以得該仿穗軟珊瑚萃取物，其中該有機溶劑為乙醇。
3. 如請求項2所述的用途，其中該組合物包含一化妝品組合物、一食品或一藥物。
4. 一種組合物用於製備治療皮膚傷口的藥物之用途，其中該組合物包含一仿穗軟珊瑚萃取物，其中該仿穗軟珊瑚萃取物的製備方法包含：用一有機溶劑對一仿穗軟珊瑚(Paralemnalia thyrsoides)進行萃取，以得該仿穗軟珊瑚萃取物，其中該有機溶劑為乙醇。
5. 如請求項4所述的用途，其中該皮膚傷口包含一因燒燙傷所造成的傷口或一因割傷所造成的傷口。
6. 一種組合物用於製備治療過敏性皮膚炎的藥物之用途，其中該組合物包含一仿穗軟珊瑚萃取物，其中該仿穗軟珊瑚萃取物的製備方法包含：用一有機溶劑對一仿穗軟珊瑚(Paralemnalia thyrsoides)進行萃取，以得該仿穗軟珊瑚萃取物，其中該有機溶劑為乙醇。
7. 如請求項6所述的用途，其中該過敏性皮膚炎包含一異位性皮膚炎。

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