TWI779253B - 抗IL-23p19抗體及其用途 - Google Patents

抗IL-23p19抗體及其用途 Download PDF

Info

Publication number
TWI779253B
TWI779253B TW108143198A TW108143198A TWI779253B TW I779253 B TWI779253 B TW I779253B TW 108143198 A TW108143198 A TW 108143198A TW 108143198 A TW108143198 A TW 108143198A TW I779253 B TWI779253 B TW I779253B
Authority
TW
Taiwan
Prior art keywords
antibody
antigen
binding
amino acid
binding fragment
Prior art date
Application number
TW108143198A
Other languages
English (en)
Other versions
TW202027791A (zh
Inventor
劉軍建
吳敏
李莉
周帥祥
周恩昆
Original Assignee
大陸商信達生物製藥（蘇州）有限公司
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 大陸商信達生物製藥（蘇州）有限公司 filed Critical 大陸商信達生物製藥（蘇州）有限公司
Publication of TW202027791A publication Critical patent/TW202027791A/zh
Application granted granted Critical
Publication of TWI779253B publication Critical patent/TWI779253B/zh

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/24—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
    • C07K16/244—Interleukins [IL]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6845—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a cytokine, e.g. growth factors, VEGF, TNF, a lymphokine or an interferon
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2866—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against receptors for cytokines, lymphokines, interferons
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/564—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for pre-existing immune complex or autoimmune disease, i.e. systemic lupus erythematosus, rheumatoid arthritis, multiple sclerosis, rheumatoid factors or complement components C1-C9
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6863—Cytokines, i.e. immune system proteins modifying a biological response such as cell growth proliferation or differentiation, e.g. TNF, CNF, GM-CSF, lymphotoxin, MIF or their receptors
    • G01N33/6869—Interleukin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/33—Crossreactivity, e.g. for species or epitope, or lack of said crossreactivity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C07K2317/524—CH2 domain
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C07K2317/732—Antibody-dependent cellular cytotoxicity [ADCC]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
    • G01N2333/52—Assays involving cytokines
    • G01N2333/54—Interleukins [IL]
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
    • G01N2333/52—Assays involving cytokines
    • G01N2333/54—Interleukins [IL]
    • G01N2333/5434—IL-12

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Transplantation (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Rehabilitation Therapy (AREA)

Abstract

本發明涉及特異性結合IL-23p19的新型抗體和抗體片段以及含有所述抗體或抗體片段的組合物。此外，本發明涉及編碼所述抗體或其抗體片段的核酸及包含其的宿主細胞，以及相關用途。此外，本發明涉及這些抗體和抗體片段的治療和診斷用途。

Description

抗IL-23p19抗體及其用途
本發明涉及特異性結合IL-23p19的新型抗體和抗體片段以及含有所述抗體或抗體片段的組合物。此外，本發明涉及編碼所述抗體或其抗體片段的核酸及包含其的宿主細胞，以及相關用途。此外，本發明涉及這些抗體和抗體片段的治療和診斷用途。
白細胞介素(IL)-12是一種分泌的異二聚體細胞因子，由兩個二硫化物連接的糖基化蛋白亞基組成，這兩個亞基由於它們近似的分子量命名為p35與p40。人們發現IL-12的p40蛋白亞基還可以與一種命名為p19的分離的蛋白亞基連接，形成一種新的細胞因子，即白細胞介素-23(IL-23)(Oppman等人，2000)。
白細胞介素-23(IL-23)是包含下述2個亞基的異二聚細胞因子：IL-23特有的p19(Il-23p19)和與IL-12(IL-12)共有的p40(IL-12p40)。p19亞基與IL-6、粒細胞集落刺激因子(G-CSF)和IL-12的p35亞基在結構上相關。IL-23藉由與包含兩個亞基的異二聚體受體結合介導信號傳導，所述兩個亞基為IL-23受體特有的IL-23R，和與IL-12受體共有的IL-12Rb1。
許多早期的研究證明，p40中的遺傳缺陷(p40剔除小鼠；p40KO小鼠)的後果比p35缺陷小鼠(例如p35KO)中觀察到的更嚴重。這些結果一般解釋為p40剔除不僅阻止IL-12的表達，而且阻止IL-23的表達。參見，例如，Oppmann等(2000)Immunity 13：715-725；Wiekowski等(2001)J.Immunol.166：7563-7570；Parham等(2002)J.Immunol.168：5699-708；Frucht(2002)Sci STKE 2002,E1-E3；Elkins等(2002)Infection Immunity 70：1936-1948)。最新研究已經證實，藉由IL-23p19缺陷小鼠或IL-23的特異性抗體中和，IL-23抑制可以提供與抗IL-12p40策略相當的益處(Cua等人，2003，Murphy等人，2003，Benson等人2004)。因此，存在IL-23在免疫介導的疾病中的特異性作用的增加的證據。中和IL-23不抑制IL-12途徑，因此能提供免疫介導的疾病的有效治療，同時對重要的宿主防禦免疫機理具有有限的影響。這將代表對目前的治療選擇的一種顯著的改進。
因此，本領域中存在對新的IL-23p19抗體的需求，本發明致力於開發一種新的具有與現有抗體相當或更佳性質的IL-23p19抗體。
本發明因此提供了一種新的結合IL-23p19的抗體，以及其抗原結合片段。
在一些實施方案中，本發明的抗IL-23p19抗體具有以下一個或多個特性：
(i)以高親和力與IL-23p19結合；
(ii)阻斷IL-23信號通路，例如藉由阻斷IL-23對於細胞分泌IL-17的誘導；
(iii)治療或預防IL-23相關疾病。
在一些實施方案中，本發明提供了結合IL-23p19的抗體或其抗原結合片段，包含如SEQ ID NO：9或10所示的序列的3個重鏈CDR(HCDR)，和/或如SEQ ID NO：11或12所示的序列的3個輕鏈CDR(LCDR)。
在一些實施方案中，本發明提供了編碼本發明抗體或其片段的核酸，包含所述核酸的載體，包含所述載體的宿主細胞。
在一些實施方案中，本發明提供了製備本發明抗體或其片段的方法。
在一些實施方案中，本發明提供了包含本發明抗體的免疫綴合物、醫藥組成物和組合產品。
本發明還提供了利用本發明抗體在受試者中阻斷IL-23介導的信號通路的方法，以及預防或治療IL-23相關疾病，例如免疫系統疾病(例如自身免疫疾病或炎症)的方法。
本發明還涉及在樣品中檢測IL-23p19的方法。
在下面的圖式和具體實施方案中進一步說明本發明。然而，這些圖式和具體實施方案不應被認為限制本發明的範圍，並且本領域技術人員容易想到的改變將包括在本發明的精神和所附申請專利範圍的保護範圍內。
第1圖顯示了17D1人源化抗體、17D1-YTE抑制IL-23誘導小鼠脾臟淋巴細胞分泌IL-17的能力。
第2圖顯示了各組中小鼠右耳平均厚度隨時間變化。
第3圖顯示了各組小鼠耳朵腫脹抑制率隨時間變化。
第4圖顯示了各組小鼠體重隨時間變化。
[發明詳述]
I. 定義
在下文詳細描述本發明前，應理解本發明不限於本文中描述的特定方法學、方案和試劑，因為這些可以變化。還應理解本文中使用的術語僅為了描述具體實施方案，而並不意圖限制本發明的範圍，其僅會由所附申請專利範圍限制。除非另外定義，本文中使用的所有技術和科學術語與本發明所屬領域中普通技術人員通常的理解具有相同的含義。
為了解釋本說明書，將使用以下定義，並且只要適當，以單數形式使用的術語也可以包括複數，並且反之亦然。要理解，本文所用的術語僅是為了描述具體的實施方案，並且不意欲是限制性的。
術語“約”在與數字數值聯合使用時意為涵蓋具有比指定數字數值小5%的下限和比指定數字數值大5%的上限的範圍內的數字數值。
如本文所用，術語“和/或”意指可選項中的任一項或可選項的兩項或多項。
如本文所用，術語“包含”或“包括”意指包括所述的要素、整數或步驟，但是不排除任意其他要素、整數或步驟。在本文中，當使用術語“包含”或“包括”時，除非另有指明，否則也涵蓋由所述及的要素、整數或步驟組合的情形。 例如，當提及“包含”某個具體序列的抗體可變區時，也旨在涵蓋由該具體序列組成的抗體可變區。
IL-23的p19亞基(在本文中亦稱為“IL-23p19”及“p19亞基”)為一種具有189個胺基酸的多肽，其含有具有21個胺基酸的前導序列(Oppmann等人，Immunity 13：715(2000)，SEQ ID NO：181)，並且包含稱為A、B、C和D的4個被壓縮的(packed)α螺旋，具有上-上-下-下拓撲結構。4個螺旋藉由3個多肽環連接。A-B和C-D環被製作得相對較長，因為它們連接平行螺旋。短B-C環連接反向平行的B和C螺旋。IL-23的p19亞基是螺旋狀細胞因子的IL-6家族成員。該細胞因子家族藉由3個保守表位(位點I、II和III；Bravo和Heath(2000)EMBO J.19：2399-2411)與其同族受體結合。p19亞基與3個細胞因子受體亞基相互作用，以形成感受態信號轉導複合物。當在細胞中表達時，p19亞基首先與p40亞基形成複合物，p19亞基與IL-12共用p40亞基。p19p40複合物作為異二聚蛋白從細胞中分泌出來，並被稱為IL-23。在一個實施方案中，本發明的IL-23p19來自人(NCBI：AAG37232)或食蟹猴(NCBI：AEY84629)。
本文所用的術語“抗IL-23p19抗體”、“抗IL-23p19”、“IL-23p19抗體”或“結合IL-23p19的抗體”是指這樣的抗體，所述抗體能夠以足夠的親合力結合(人或食蟹猴)IL-23p19亞基或其片段以致所述抗體可以用作靶向(人或食蟹猴)IL-23p19中的診斷劑和/或治療劑。在一個實施方案中，抗IL-23p19抗體與非(人或食蟹猴)IL-23p19蛋白結合的程度低於所述抗體與(人或食蟹猴)IL-23p19結合的約10%、約20%、約30%、約40%、約50%、約60%、約70%、約80%或約90%或以上，如例如藉由放射性免疫測定(RIA)或生物光干涉測定法或MSD測定法測量的。
“抗體片段”指與完整抗體不同的分子，其包含完整抗體的一部分且結合完整抗體所結合的抗原。抗體片段的例子包括但不限於Fv，Fab，Fab’，Fab’-SH，F(ab’)2；雙抗體；線性抗體；單鏈抗體(例如scFv)；單結構域抗體；雙價或雙特異性抗體或其片段；駱駝科抗體；和由抗體片段形成的雙特異性抗體或多特異性抗體。
如本文所用，術語“表位”指抗原(例如，IL-23p19)中與抗體分子特異性相互作用的部分。
與對照抗體“結合相同或重疊表位的抗體”是指這樣的抗體，其在競爭測定中阻斷50%、60%、70%、80%、90%或95%以上的所述對照抗體與其抗原的結合，反言之，對照抗體在競爭測定中阻斷50%、60%、70%、80%、90%或95%以上的該抗體與其抗原的結合。
與對照抗體競爭結合其抗原的抗體是指這樣的抗體，其在競爭測定中阻斷50%、60%、70%、80%、90%或95%以上的所述對照抗體與其抗原的結合。反言之，對照抗體在競爭測定中阻斷50%、60%、70%、80%、90%或95%以上的該抗體與其抗原的結合。眾多類型的競爭性結合測定可用於確定一種抗體是否與另一種競爭，這些測定例如：固相直接或間接放射免疫測定(RIA)、固相直接或間接酶免疫測定(EIA)、夾心競爭測定(參見例如Stahli等，1983，Methods in Enzymology 9：242-253)。
抑制(例如競爭性抑制)對照抗體與其抗原的結合的抗體是指這樣的抗體，其抑制50%、60%、70%、80%、90%或95%以上的所述對照抗體與其抗原的結合。反言之，對照抗體抑制50%、60%、70%、80%、90%或95%以上 的該抗體與其抗原的結合。抗體與其抗原的結合可以親和力(例如平衡解離常數)衡量。測定親和力的方法是本領域已知的。
與對照抗體顯示相同或相似的結合親和力和/或特異性的抗體是指這樣的抗體，其能夠具有對照抗體的至少50%、60%、70%、80%、90%或95%以上的結合親和力和/或特異性。這可以藉由本領域已知的任何測定結合親和力和/或特異性的方法進行測定。
“互補決定區”或“CDR區”或“CDR”是抗體可變結構域中在序列上高變並且形成在結構上確定的環(“超變環”)和/或含有抗原接觸殘基(“抗原接觸點”)的區域。CDR主要負責與抗原表位結合。重鏈和輕鏈的CDR通常被稱作CDR1、CDR2和CDR3，從N-端開始順序編號。位於抗體重鏈可變結構域內的CDR被稱作HCDR1、HCDR2和HCDR3，而位於抗體輕鏈可變結構域內的CDR被稱作LCDR1、LCDR2和LCDR3。在一個給定的輕鏈可變區或重鏈可變區胺基酸序列中，各CDR的精確胺基酸序列邊界可以使用許多公知的抗體CDR指派系統的任一種或其組合確定，所述指派系統包括例如：基於抗體的三維結構和CDR環的拓撲學的Chothia(Chothia等人.(1989)Nature 342：877-883，Al-Lazikani等人，“Standard conformations for the canonical structures of immunoglobulins”,Journal of Molecular Biology,273,927-948(1997))，基於抗體序列可變性的Kabat(Kabat等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest，第4版，U.S.Department of Health and Human Services,National Institutes of Health(1987)),AbM(University of Bath)，Contact(University College London)，國際ImMunoGeneTics database(IMGT)(在萬維網上imgt.cines.fr/上)，以及基於利用大量晶體結構的近鄰傳播聚類(affinity propagation clustering)的North CDR定義。
例如，根據不同的CDR確定方案，每一個CDR的殘基如下所述。
Figure 108143198-A0101-12-0008-1
CDR也可以基於與參考CDR序列(例如本發明示例性CDR之任一)具有相同的Kabat編號位置而確定。
除非另有說明，否則在本發明中，術語“CDR”或“CDR序列”涵蓋以上述任一種方式確定的CDR序列。
除非另有說明，否則在本發明中，當提及抗體可變區中的殘基位置(包括重鏈可變區殘基和輕鏈可變區殘基)時，是指根據Kabat編號系統(Kabat等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest,5th Ed.Public Health Service,National Institutes of Health,Bethesda,Md.(1991))的編號位置。
在一個實施方案中，本發明抗體的CDR藉由AbM規則確定邊界，例如其序列如表1所示。
應該注意，基於不同的指派系統獲得的同一抗體的可變區的CDR的邊界可能有所差異。即不同指派系統下定義的同一抗體可變區的CDR序列有所不同。因此，在涉及用本發明定義的具體CDR序列限定抗體時，所述抗體的範圍還涵蓋了這樣的抗體，其可變區序列包含所述的具體CDR序列，但是由於應用了不同的方案(例如不同的指派系統規則或組合)而導致其所聲稱的CDR邊界與本發明所定義的具體CDR邊界不同。
具有不同特異性(即，針對不同抗原的不同結合位點)的抗體具有不同的CDR(在同一指派系統下)。然而，儘管CDR在抗體與抗體之間是不同的，但是CDR內只有有限數量的胺基酸位置直接參與抗原結合。使用Kabat,Chothia,AbM、Contact和North方法中的至少兩種，可以確定最小重疊區域，從而提供用於抗原結合的“最小結合單位”。最小結合單位可以是CDR的一個子部分。正如本領域技術人員明瞭，藉由抗體的結構和蛋白折疊，可以確定CDR序列其餘部分的殘基。因此，本發明也考慮本文所給出的任何CDR的變體。例如，在一個CDR的變體中，最小結合單位的胺基酸殘基可以保持不變，而根據Kabat或Chothia定義的其餘CDR殘基可以被保守胺基酸殘基替代。
如本文所用，術語“IL-23相關病症”或“IL-23相關疾病”是指由IL-23活性促成、且IL-23通常異常表達的病狀。IL-23相關病症包括免疫系統疾病，例如自身免疫疾病及炎症病症。所述疾病包括(但不限於)類風濕性關節炎(RA)、全身性紅斑狼瘡(SLE)、硬皮症、修格連(Sjogren)氏綜合症、多發性硬化、銀屑病、銀屑病性關節炎、炎性腸病(例如，潰瘍性結腸炎及克羅恩氏病)、炎症、哮喘、特發性血小板減少性紫癜(ITP)及強直性脊椎炎。
如本文所用，術語“免疫系統疾病”包括與免疫系統障礙有關的疾病。術語“自身免疫疾病”是指機體對自身抗原發生免疫反應而導致自身組織損害所引起的疾病。本文所用的術語“炎症病症”指這樣的病症：其中所述病理整體或部分起因於例如免疫系統細胞的數目變化、遷移率變化或活化變化。免疫系統的細胞包括例如T細胞、B細胞、單核細胞或巨噬細胞、抗原提呈細胞(APC)、樹突細胞、小膠質細胞、NK細胞、NKT細胞、嗜中性粒細胞、嗜酸性粒細胞、肥大細胞或與免疫學特異性相關的任何其它細胞，例如生產細胞因子的內皮或上皮細胞。
本文所述的術語“治療劑”涵蓋在預防或治療IL-23相關疾病中有效的任何物質，包括化療劑、細胞因子、細胞毒性劑、其它抗體、小分子藥物或免疫調節劑(例如抗炎劑或免疫抑制劑)。
術語“細胞毒性劑”用在本發明中指抑制或防止細胞功能和/或引起細胞死亡或破壞的物質。
“化療劑”包括在治療免疫系統疾病中有用的化學化合物，包括但不限於烷化劑；抗代謝物；天然產物；抗生素；酶；雜類試劑；激素和拮抗劑；抗雌激素；抗雄激素；以及非類固醇抗雄激素等。
術語“小分子藥物”是指低分子量的能夠調節生物過程的有機化合物。“小分子”被定義為分子量小於10kD、通常小於2kD和較佳小於1kD的分子。小分子包括但不限於無機分子、有機分子、含無機組分的有機分子、含放射性原子的分子、合成分子、肽模擬物和抗體模擬物。作為治療劑，小分子可以比大分子更能透過細胞、對降解更不易感和更不易於引發免疫應答。有關小分子，例如抗體和細胞因子的肽模擬物，以及小分子毒素的描述參見例如Casset等， (2003)Biochem.Biophys.Res.Commun.307：198-205；Muyldermans(2001)J.Biotechnol.74：277-302；Li(2000)Nat.Biotechnol.18：1251-1256；Apostolopoulos等，(2002)Curr.Med.Chem.9：411-420；Monfardini等，(2002)Curr.Pharm.Des.8：2185-2199；Domingues等，(1999)Nat.Struct.Biol.6：652-656；Sato和Sone(2003)Biochem.J.371：603-608；美國專利號6,326,482。
本文使用的術語“免疫調節劑”指抑制或調節免疫應答的天然或合成活性劑或者藥物。免疫應答可以是體液應答或細胞應答。免疫調節劑包含免疫抑制劑或抗炎劑。
本文使用的“免疫抑制劑”、“免疫抑制藥物”或“免疫抑制物”是在免疫抑制治療中用於抑制或阻止免疫系統活性的治療劑。在臨床上它們用於阻止移植的器官和組織(例如骨髓、心臟、腎、肝)的排斥，和/或用於自身免疫疾病或最可能是自身免疫起源的疾病(例如類風濕性關節炎、重症肌無力、系統性紅斑狼瘡、潰瘍性結腸炎、多發性硬化)的治療。免疫抑制藥物可以分為4類：糖皮質激素類細胞抑制劑；抗體(包括生物應答調節劑或DMARD)；作用於免疫親和素的藥物；其它藥物，包括在增生性病症治療中使用的已知化療劑。特別地，對於多發性硬化，本發明的抗體可以與稱為克帕松(copaxone)的新類型髓鞘結合蛋白樣治療劑聯合給予。
“抗炎劑”或“消炎藥”是指類固醇或非類固醇類治療劑。類固醇也稱為皮質類固醇，是非常類似皮質醇的藥物，皮質醇是由腎上腺天然生產的激素。類固醇主要用於治療某些炎性病症，例如：系統性脈管炎(血管炎症)；和肌炎(肌肉炎症)。類固醇還可以選擇性地用於治療諸如以下炎性病症：類風濕性關節炎(在身體兩側上的關節中發生的慢性炎症性關節炎)；系統性紅斑狼瘡(由異 常免疫系統功能引起的全身性疾病)；Sjogren氏綜合症(引起眼睛乾澀和口乾的慢性病症)。
非類固醇消炎藥通常縮寫為NSAID，是具有止痛、退熱和抗炎作用的藥物，它們減輕疼痛、發熱和炎症。術語“非類固醇”用於區別這些藥物與類固醇，所述藥物(在廣泛範圍的其它作用中)具有類似的類二十烷酸抑制、抗炎作用。一般說來，NSAID用於下列病症的症狀緩解：類風濕性關節炎；骨關節炎；炎性關節病(例如僵直性脊柱炎、銀屑病性關節炎、萊特(Reiter)氏綜合症)；急性痛風；痛經；轉移性骨痛；頭痛和偏頭痛；手術後疼痛；歸因於炎症和組織損傷的輕度至中等疼痛；發熱；和腎絞痛。NSAID包括水楊酸類、芳基鏈烷酸類、2-芳基丙酸類、N-芳基鄰胺基苯甲酸類(滅酸類)、昔康類(oxicams)、昔布類(coxibs)和N-磺醯苯胺類(sulphonanilides)。
如本文所述的TNF(腫瘤壞死因子)較佳地包括TNFα，其是多效性同三聚體細胞因子，所述細胞因子主要由單核細胞和巨噬細胞分泌，還已知由CD4+及CD8+外周血T淋巴細胞產生。TNFα以可溶性形式和跨膜形式表達(膜結合的前體形式可以由金屬蛋白酶TNFα轉化酶(TACE))以蛋白酶解方式切割成可溶型同三聚體)。認為TNFα在免疫細胞的調節中發揮作用並且在全身性炎症、尤其急性期炎症反應方面重要。過量的TNFα與多種形式的自身免疫性疾病(包括RA、CD和銀屑病)相關。
如本文所述的“IL-17”例如IL-17A、IL-17F是參與炎症的細胞因子。IL-17A誘導由滑膜成纖維細胞、單核細胞及巨噬細胞產生諸如IL-1β、TNF-α、IL-6及IL-23等炎症性細胞因子，所有這些因子均促進炎症及Th17發生。IL-17A亦誘導大量趨化因子(包括CXCL-1、CXCL-2、CXCL-5、CXCL-8、CCL-2 及CCL-20)，從而引起T細胞、B細胞、單核細胞及嗜中性粒細胞的募集。Lundy,S.K.,Arthritis Res.Ther.,9：202(2007)。IL-17F與IL-17A擁有最大同源性(55%)且亦為促炎症細胞因子。IL-17A及IL-17F皆由Th17細胞產生，而其他IL-17家族成員IL-17B、IL-17C及IL-17D由非T細胞源產生。IL-17A及IL-17F可以IL-17A同二聚體及IL-17F同二聚體或IL-17A/F異二聚體形式存在。Liang,S.C.等人，J.Immunol.,179：7791-7799(2007)。IL-17A在類風濕性關節炎血清及滑液中有所增多，且存在於滑膜的富T細胞區域中。Shahrara,S.,Arthritis Res.Ther.,10：R93(2005)。IL-17A亦可協調骨及軟骨損害。對IL-17的有效阻斷需要中和IL-17A同二聚體、IL-17F同二聚體及IL-17A/F異二聚體。
“功能性Fc區”擁有天然序列Fc區的“效應器功能”。例示性的“效應器功能”包括C1q結合；CDC；Fc受體結合；ADCC；吞噬作用；細胞表面受體(例如B細胞受體；BCR)下調等。此類效應器功能一般要求Fc區與結合結構域(例如抗體可變域)聯合，而且可以使用多種測定法來評估，例如本文所公開的那些。
術語“Fc區”在本文中用於定義免疫球蛋白重鏈的C端區域，所述區域包含至少一部分的恆定區。該術語包括天然序列Fc區和變體Fc區。在某些實施方案中，人IgG重鏈Fc區從Cys226或Pro230延伸至重鏈的羰基端。然而，Fc區的C端賴胺酸(Lys447)可以存在或者可以不存在。除非另外說明，Fc區或恆定區中的胺基酸殘基的編號是根據EU編號系統，其也被稱為EU索引，如在Kabat等，Sequences of Proteins of Immunological Interest，5th Ed.Public Health Service，National Institutes of Health，Bethesda，MD，1991中所述。
“IgG形式的抗體”是指抗體的重鏈恆定區所屬於的IgG形式。所有同一型的抗體的重鏈恆定區都是相同的，不同型的抗體之間的重鏈恆定區不同。例如，IgG1形式的抗體是指其重鏈恆定區Ig結構域為IgG1的Ig結構域。
術語“有效量”指本發明的抗體或片段或綴合物或組合物的這樣的量或劑量，其以單一或多次劑量施用患者後，在需要治療或預防的患者中產生預期效果。有效量可以由作為本領域技術人員的主治醫師藉由考慮以下多種因素來容易地確定：諸如哺乳動物的物種；它的大小、年齡和一般健康；涉及的具體疾病；疾病的程度或嚴重性；個體患者的應答；施用的具體抗體；施用模式；施用製劑的生物利用率特徵；選擇的給藥方案；和任何伴隨療法的使用。
“治療有效量”指以需要的劑量並持續需要的時間段，有效實現所需治療結果的量。抗體或抗體片段或其綴合物或組合物的治療有效量可以根據多種因素如疾病狀態、個體的年齡、性別和重量和抗體或抗體部分在個體中激發所需反應的能力而變動。治療有效量也是這樣的一個量，其中抗體或抗體片段或其綴合物或組合物的任何有毒或有害作用不及治療有益作用。相對於未治療的對象，“治療有效量”較佳地抑制可度量參數(例如腫脹率等)至少約20%、更佳地至少約40%、甚至更佳地至少約50%、60%或70%和仍更佳地至少約80%或90%。可以在預示人自身免疫疾病或炎症中的功效的動物模型系統中評價化合物抑制可度量參數(例如，腫脹率)的能力。
“預防有效量”指以需要的劑量並持續需要的時間段，有效實現所需預防結果的量。通常，由於預防性劑量在對象中在疾病較早階段之前或在疾病較早階段使用，故預防有效量將小於治療有效量。
術語“宿主細胞”、“宿主細胞系”和“宿主細胞培養物”可交換地使用且是指其中引入外源核酸的細胞，包括這種細胞的後代。宿主細胞包括“轉化體”和“轉化的細胞”，其包括初級轉化的細胞和來源於其的後代，而不考慮傳代的數目。後代在核酸內容上可能與親本細胞不完全相同，而是可以包含突變。本文中包括在最初轉化的細胞中篩選或選擇的具有相同功能或生物學活性的突變體後代。
“人抗體”指具有這樣的胺基酸序列的抗體，所述胺基酸序列對應於下述抗體的胺基酸序列，所述抗體由人或人細胞生成或來源於非人來源，其利用人抗體庫或其它人抗體編碼序列。人抗體的這種定義明確排除包含非人抗原結合殘基的人源化抗體。
“人源化”抗體是指包含來自非人CDR的胺基酸殘基和來自人FR的胺基酸殘基的嵌合抗體。在一些實施方案中，人源化抗體將包含基本上所有的至少一個、通常兩個可變結構域，其中所有或基本上所有的CDR(例如，CDR)對應於非人抗體的那些，並且所有或基本上所有的FR對應於人抗體的那些。人源化抗體視需要可以包含至少一部分的來源於人抗體的抗體恆定區。抗體(例如非人抗體)的“人源化形式”是指已經進行了人源化的抗體。
“免疫綴合物”是與一個或多個其它物質(包括但不限於細胞毒性劑或標記)綴合的抗體。
本文所使用的術語“標記”是指被直接或間接綴合或融合至試劑(諸如多核苷酸探針或抗體)並且促進其所綴合或融合的試劑的檢測的化合物或組合物。標記本身可以是可檢測的(例如，放射性同位素標記或螢光標記)或在酶促標記的情況下可以催化可檢測的底物化合物或組合物的化學改變。術語旨在 涵蓋藉由將可檢測物質偶聯(即，物理連接)至探針或抗體來直接標記探針或抗體以及藉由與直接標記的另一種試劑反應來間接標記探針或抗體。間接標記的實例包括使用螢光標記的二級抗體進行的一級抗體的檢測和具有生物素的DNA探針的末端標記，使得其可以用螢光標記的鏈黴抗生素蛋白來檢測。
“個體”或“受試者”包括哺乳動物。哺乳動物包括但不限於，家養動物(例如，牛，羊，貓，狗和馬)，靈長類動物(例如，人和非人靈長類動物如猴)，兔，以及齧齒類動物(例如，小鼠和大鼠)。在一些實施方案中，個體或受試者是人。
“分離的”抗體是這樣的抗體，其已經與其天然環境的組分分離。在一些實施方案中，將抗體純化至超過95%或99%純度，如藉由例如電泳(例如，SDS-PAGE，等電聚焦(IEF)，毛細管電泳)或層析(例如，離子交換或反相HPLC)確定的。對於用於評估抗體純度的方法的綜述，參見，例如，Flatman等，J.Chromatogr.B848：79-87(2007)。
“分離的編碼抗IL-23p19抗體或其片段的核酸”是指一個或多個核酸分子，其編碼抗體重鏈或輕鏈(或其片段)，包括在單一載體或分開的載體中的這樣的核酸分子，以及存在於宿主細胞中的一個或多個位置處的這樣的核酸分子。
如下進行序列之間序列同一性的計算。
為確定兩個胺基酸序列或兩個核酸序列的同一性百分數，將所述序列出於最佳比較目的比對(例如，可以為了最佳比對而在第一和第二胺基酸序列或核酸序列之一或二者中引入空位或可以為比較目的而拋棄非同源序列)。在一個較佳實施方案中，為比較目的，所比對的參考序列的長度是至少30%、較佳 地至少40%、更佳地至少50%、60%和甚至更佳地至少70%、80%、90%、100%的參考序列長度。隨後比較在對應胺基酸位置或核苷酸位置處的胺基酸殘基或核苷酸。當第一序列中的位置由第二序列中對應位置處的相同胺基酸殘基或核苷酸佔據時，則所述分子在這個位置處是相同的。
可以利用數學算法實現兩個序列間的序列比較和同一性百分數的計算。在一個較佳實施方案中，使用已經集成至GCG軟件包的GAP程序中的Needlema和Wunsch((1970)J.Mol.Biol.48：444-453)算法(在http：//www.gcg.com可獲得)，使用Blossum 62矩陣或PAM250矩陣和空位權重16、14、12、10、8、6或4和長度權重1、2、3、4、5或6，確定兩個胺基酸序列之間的同一性百分數。在又一個較佳的實施方案中，使用GCG軟件包中的GAP程序(在http：//www.gcg.com可獲得)，使用NWSgapdna.CMP矩陣和空位權重40、50、60、70或80和長度權重1、2、3、4、5或6，確定兩個核苷酸序列之間的同一性百分數。特別佳的參數集合(和除非另外說明否則應當使用的一個參數集合)是採用空位罰分12、空位延伸罰分4和移碼空位罰分5的Blossum 62評分矩陣。
還可以使用PAM120加權餘數表、空位長度罰分12，空位罰分4)，利用已經併入ALIGN程序(2.0版)的E.Meyers和W.Miller算法，((1989)CABIOS,4：11-17)確定兩個胺基酸序列或核苷酸序列之間的同一性百分數。
額外地或備選地，可以進一步使用本文所述的核酸序列和蛋白質序列作為“查詢序列”以針對公共數據庫執行檢索，以例如鑒定其他家族成員序列或相關序列。
術語“藥用輔料”指與活性物質一起施用的稀釋劑、佐劑(例如弗氏佐劑(完全和不完全的))、賦形劑、載體或穩定劑等。
術語“醫藥組成物”指這樣的組成物，其以允許包含在其中的活性成分的生物學活性有效的形式存在，並且不包含對施用所述組成物的受試者具有不可接受的毒性的另外的成分。
術語“組合產品”是指一種劑量單位形式的固定組合或非固定組合或用於組合施用的部分的試劑盒，其中兩種或更多種治療劑可以獨立地在同一時間或在時間間隔內分開施用，尤其是在這些時間間隔允許組合伴侶展示協作，例如，協同效應時。術語“固定組合”是指本發明抗體和組合伴侶(例如其他治療劑，例如免疫調節劑，例如免疫抑制劑或抗炎劑)以單一實體或劑量的形式同時施用於患者。術語“非固定組合”意指本發明抗體和組合伴侶(例如其他治療劑，例如免疫調節劑，例如免疫抑制劑或抗炎劑)作為分開的實體同時、並行或依次施用於患者，沒有特定的時間限制，其中這樣的施用提供了患者體內兩種化合物的治療有效水平。後者也適用於雞尾酒療法，例如施用三種或更多種治療劑。在一個較佳的實施方案中，藥物組合是非固定組合。
術語“組合療法”是指施用兩種或更多種治療劑或治療方式(例如放射療法或手術)以治療如本公開所述的IL-23相關疾病。這種施用包括以基本上同時的方式共同施用這些治療劑，例如以具有固定比例的活性成分的單一膠囊。或者，這種施用包括對於各個活性成分在多種或在分開的容器(例如片劑、膠囊、粉末和液體)中的共同施用。粉末和/或液體可以在施用前重構或稀釋至所需劑量。此外，這種施用還包括以大致相同的時間或在不同的時間以順序的方式 使用每種類型的治療劑。在任一情況下，治療方案將提供藥物組合在治療本文所述的病症或病狀中的有益作用。
用於本文時，“治療”指減緩、中斷、阻滯、緩解、停止、降低、或逆轉已存在的症狀、病症、病況或疾病的進展或嚴重性。
用於本文時，“預防”包括對疾病或病症或特定疾病或病症的症狀的發生或發展的抑制。在一些實施方式中，具有免疫系統疾病(自身免疫疾病或炎症)家族病史的受試者是預防性方案的候選。通常，在免疫系統疾病(自身免疫疾病或炎症)的背景中，術語“預防”是指在免疫系統疾病(自身免疫疾病或炎症)的病徵或症狀發生前，特別是在具有免疫系統疾病(自身免疫疾病或炎症)風險的受試者中發生前的藥物施用。
術語“載體”當在本文中使用時是指能夠增殖與其相連的另一個核酸的核酸分子。該術語包括作為自我複製核酸結構的載體以及結合到已經引入其的宿主細胞的基因組中的載體。一些載體能夠指導與其可操作相連的核酸的表達。這樣的載體在本文中被稱為“表達載體”。
“受試者/患者樣品”指從患者或受試者得到的細胞或流體的集合。組織或細胞樣品的來源可以是實體組織，像來自新鮮的、冷凍的和/或保存的器官或組織樣品或活檢樣品或穿刺樣品；血液或任何血液組分；體液，諸如腦脊液、羊膜液(羊水)、腹膜液(腹水)、或間隙液；來自受試者的妊娠或發育任何時間的細胞。組織樣品可能包含在自然界中天然不與組織混雜的化合物，諸如防腐劑、抗凝劑、緩衝劑、固定劑、營養物、抗生素、等等。
II. 抗體
在一些實施方案中，本發明的抗IL-23p19抗體或其片段以高親和力結合IL-23p19(例如人IL-23中的人IL-23p19或食蟹猴IL-23中的食蟹猴IL-23p19)，例如，以以下平衡解離常數(KD)與IL-23p19結合，所述KD小於大約10nM，較佳地，小於或等於大約5nM、4nM、或3nM，最佳地，所述KD小於或等於大約2nM、1.9nM、1.8nM、1.79nM、1.78nM、1.77nM、1.76nM、1.75nM、1.74nM、1.73nM、1.72nM、1.71nM、1.7nM、1.69nM、1.68nM、1.67nM、1.66nM、1.65nM、1.64nM、1.63nM、1.62nM、1.61nM、1.6nM、1.55nM、1.5nM、1.45nM、1.4nM、1.35nM、1.3nM、1.25nM、1.2nM、1.15nM、1.1nM、1.05nM、1nM、0.95nM、0.9nM、0.85nM、0.8nM、0.75nM、0.7nM、0.69nM、0.68nM、0.67nM、0.66nM、0.65nM、0.64nM、0.63nM、0.62nM、0.61nM、0.6nM、0.59nM、0.58nM、0.57nM、0.56nM、0.55nM、0.54nM、0.53nM、0.52nM、0.51nM、0.5nM、0.49nM、0.48nM、0.47nM、0.46nM、0.45nM、0.44nM、0.43nM、0.42nM、0.41nM、0.4nM、0.39nM、0.38nM、0.37nM。在一些實施方案中，本發明的抗IL-23p19抗體以0.1nM-3nM，較佳地0.2nM-2nM、0.2nM-1.9nM、0.2nM-1.8nM、0.3nM-2nM、0.3nM-1.9nM、0.3nM-1.8nM、0.4nM-2nM、0.4nM-1.9nM、0.4nM-1.8nM、0.5nM-2nM、0.5nM-1.9nM、0.5nM-1.8nM、0.6nM-2nM、0.6nM-1.9nM、0.6nM-1.8nM的KD結合IL-23p19。在一些實施方案中，IL-23p19為人IL-23p19。在一些實施方案中，IL-23p19為食蟹猴IL-23p19。在一些實施方案中，抗體結合親和力是使用生物光干涉測定法(例如Fortebio親和測量)測定的。
在一些實施方案中，本發明的抗體或其片段藉由與IL-23p19分子結合而抑制細胞(例如脾細胞)分泌IL-17，例如，本發明的抗體或其片段對細胞分泌IL-17的抑制率達到50%、60%、70%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、 86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%。
在一些實施方案中，本發明的抗體或其片段(視需要地與治療方式和/或其它治療劑，例如免疫調節劑組合)能夠預防或治療IL-23相關疾病，例如免疫系統疾病(例如自身免疫疾病或炎症)。在一些實施方案中，所述自身免疫疾病例如銀屑病、克羅恩病、類風濕性關節炎、僵直性脊柱炎、銀屑病性關節炎等。
在一些實施方案中，本發明的抗IL-23p19抗體或其抗原結合片段包含重鏈可變區(VH)，其中所述VH包含
(i)如SEQ ID NO：9或10所示的VH中所含的三個互補決定區域(CDR)，或
(ii)相對於(i)的序列，在所述三個CDR區上共包含至少一個且不超過5、4、3、2或1個胺基酸改變(較佳胺基酸置換，較佳保守置換)的序列。
在一些實施方案中，本發明的抗IL-23p19抗體或其抗原結合片段包含輕鏈可變區(VL)，其中所述VL包含：
(i)如SEQ ID NO：11或12所示的VL中所含的三個互補決定區域(CDR)；或
(ii)相對於(i)的序列，在所述三個CDR區上共包含至少一個且不超過5、4、3、2或1個胺基酸改變(較佳胺基酸置換，較佳保守置換)的序列。
在一些實施方案中，本發明的抗IL-23p19抗體或其抗原結合片段包含重鏈可變區VH和輕鏈可變區VL，其中
(a)所述VH包含
(i)如SEQ ID NO：9或10所示的VH中所含的三個互補決定區域(CDR)，或
(ii)相對於(i)的序列，在所述三個CDR區上共包含至少一個且不超過5、4、3、2或1個胺基酸改變(較佳胺基酸置換，較佳保守置換)的序列；和/或 (b)所述VL包含：
(i)如SEQ ID NO：11或12所示的VL中所含的三個互補決定區域(CDR)；或
(ii)相對於(i)的序列，在所述三個CDR區上共包含至少一個且不超過5、4、3、2或1個胺基酸改變(較佳胺基酸置換，較佳保守置換)的序列。
在較佳的實施方案中，VH包含選自SEQ ID NO：9或10所示的胺基酸序列，或由所述胺基酸序列組成。
在較佳的實施方案中，VL包含選自SEQ ID NO：11或12所示的胺基酸序列，或由所述胺基酸序列組成。
在較佳的實施方案中，本發明抗IL-23p19抗體或其抗原結合片段包含
(i)如SEQ ID NO：9或10所示的重鏈可變區的3個互補決定區HCDR，以及 如SEQ ID NO：11或12所示的輕鏈可變區的3個互補決定區LCDR。
在一些實施方案中，本發明的抗IL-23p19抗體或其抗原結合片段包含重鏈可變區(VH)和/或輕鏈可變區(VL)，其中
(i)所述VH包含互補決定區域(CDR)HCDR1、HCDR2和HCDR3，其中HCDR1包含SEQ ID NO：1的胺基酸序列，或由所述胺基酸序列組成，或者HCDR1包含與SEQ ID NO：1的胺基酸序列相比具有一個、兩個或三個改變(較佳胺基酸置換，較佳保守置換)的胺基酸序列；HCDR2包含選自SEQ ID NO：2或3或23的胺基酸序列，或由所述胺基酸序列組成，或者HCDR2包含與選自SEQ ID NO：2或3或23的胺基酸序列相比具有一個、兩個或三個改變(較佳胺基酸置換，較佳保守置換)的胺基酸序列；HCDR3包含SEQ ID NO：4的胺基酸序列或由 所述胺基酸序列組成，或者HCDR3包含與SEQ ID NO：4的胺基酸序列相比具有一個、兩個或三個改變(較佳胺基酸置換，較佳保守置換)的胺基酸序列；和/或
(ii)其中所述VL包含互補決定區域(CDR)LCDR1、LCDR2和LCDR3，其中LCDR1包含SEQ ID NO：5的胺基酸序列或由所述胺基酸序列組成，或者LCDR1包含與SEQ ID NO：5的胺基酸序列相比具有一個、兩個或三個改變(較佳胺基酸置換，較佳保守置換)的胺基酸序列；LCDR2包含SEQ ID NO：6的胺基酸序列或由所述胺基酸序列組成，或者LCDR2包含與SEQ ID NO：6的胺基酸序列相比具有一個、兩個或三個改變(較佳胺基酸置換，較佳保守置換)的胺基酸序列；LCDR3包含選自SEQ ID NO：7或8或24的胺基酸序列或由所述胺基酸序列組成，或者LCDR3包含與SEQ ID NO：7或8或24的胺基酸序列相比具有一個、兩個或三個改變(較佳胺基酸置換，較佳保守置換)的胺基酸序列。
在較佳的實施方案中，本發明提供抗IL-23p19抗體或其抗原結合片段，其包含重鏈可變區(VH)和輕鏈可變區(VL)，其中
(a)所述VH包含
(i)表A所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3的組合；或
(ii)(i)的HCDR組合的變體，所述變體在所述三個CDR區上共包含至少一個且不超過5、4、3、2或1個胺基酸改變(較佳胺基酸置換，較佳保守置換)；和/或
(b)所述VL包含
(i)表A所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3的組合；或者
(ii)(i)的LCDR組合的變體，所述變體在所述三個CDR區上共包含至少一個且不超過5、4、3、2或1個胺基酸改變(較佳胺基酸置換，較佳保守置換)。
在較佳的實施方案中，本發明提供抗IL-23p19抗體或其抗原結合片段，其包含重鏈可變區(VH)和輕鏈可變區(VL)，其中所述VH包含互補決定區域(CDR)HCDR1、HCDR2和HCDR3並且所述VL包含(CDR)LCDR1、LCDR2和LCDR3，其中所述抗體或其抗原結合片段所包含的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3的組合如下表(表A)所示：
表A：本發明抗體或其抗原結合片段中HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3的示例性組合
Figure 108143198-A0101-12-0024-2
在一些實施方案中，本發明的抗IL-23p19抗體或其抗原結合片段包含重鏈可變區VH和/或輕鏈可變區VL，其中，
(a)重鏈可變區VH
(i)包含與選自SEQ ID NO：9或10的胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的胺基酸序列或由其組成；或者
(ii)包含選自SEQ ID NO：9或10的胺基酸序列或由其組成；或者
(iii)包含與選自SEQ ID NO：9或10的胺基酸序列相比具有1個或多個(較佳不超過10個，更佳不超過5、4、3、2、1個)的胺基酸改變(較佳胺基酸置換，更佳胺基酸保守置換)的胺基酸序列，較佳地，所述胺基酸改變不發生在CDR區中；和/或
(b)輕鏈可變區VL
(i)包含與選自SEQ ID NO：11或12的胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的胺基酸序列或由其組成；
(ii)包含選自SEQ ID NO：11或12的胺基酸序列或由其組成；或者
(iii)包含與選自SEQ ID NO：11或12的胺基酸序列相比具有1個或多個(較佳不超過10個，更較佳不超過5、4、3、2、1個)的胺基酸改變(較佳胺基酸置換，更佳胺基酸保守置換)的胺基酸序列，較佳地，所述胺基酸改變不發生在CDR區中。
在較佳的實施方案中，本發明提供抗IL-23p19抗體或其抗原結合片段，其包含重鏈可變區(VH)和輕鏈可變區(VL)，其中所述抗體或其抗原結合片段所包含的重鏈可變區VH和輕鏈可變區VL的組合如下表(表B)所示：
表B：本發明抗體或其抗原結合片段中重鏈可變區VH和輕鏈可變區VL的示例性組合
Figure 108143198-A0101-12-0026-3
在一些實施方案中，本發明的抗IL-23p19抗體或其抗原結合片段包含重鏈和/或輕鏈，其中
(a)重鏈
(i)包含與選自SEQ ID NO：13、14或15的胺基酸序列具有至少85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的胺基酸序列或由其組成；
(ii)包含選自SEQ ID NO：13、14或15的胺基酸序列或由其組成；或者
(iii)包含與選自SEQ ID NO：13、14或15的胺基酸序列相比具有1個或多個(較佳不超過20個或10個，更較佳不超過5、4、3、2、1個)的胺基酸改變(較佳胺基酸置換，更佳胺基酸保守置換)的胺基酸序列，較佳地，所述胺基酸改變不發生在重鏈的CDR區中，更佳地，所述胺基酸改變不發生在重鏈可變區中；和/或
(b)輕鏈
(i)包含與選自SEQ ID NO：16或17的胺基酸序列具有至少85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的胺基酸序列或由其組成；
(ii)包含選自SEQ ID NO：16或17的胺基酸序列或由其組成；或者
(iii)包含與選自SEQ ID NO：16或17的胺基酸序列相比具有1個或多個(較佳不超過20個或10個，更較佳不超過5、4、3、2、1個)的胺基酸改變(較佳胺基酸置換，更佳胺基酸保守置換)的胺基酸序列，較佳地，所述胺基酸改變不發生在輕鏈的CDR區中，更佳地，所述胺基酸改變不發生在輕鏈可變區中。
在較佳的實施方案中，本發明提供抗IL-23p19抗體或其抗原結合片段，其包含重鏈和輕鏈，其中所述抗體或其抗原結合片段所包含的重鏈和輕鏈的組合如下表(表C)所示：
表C：本發明抗體或其抗原結合片段中重鏈和輕鏈的示例性組合
Figure 108143198-A0101-12-0027-4
在一些實施方案中，本發明抗IL-23p19抗體或其片段的重鏈和/或輕鏈還包含信號肽序列，例如METDTLLLWVLLLWVPGSTG(SEQ ID NO：25)。
在本發明的一個實施方案中，本文所述的胺基酸改變包括胺基酸的置換、插入或缺失。較佳的，本文所述的胺基酸改變為胺基酸置換，較佳地保守置換。
在較佳的實施方案中，本發明所述的胺基酸改變發生在CDR外的區域(例如在FR中)。更佳地，本發明所述的胺基酸改變發生在重鏈可變區外和/或輕鏈可變區外的區域。
在一些實施方案中，置換為保守性置換。保守置換是指一個胺基酸經相同類別內的另一胺基酸置換，例如一個酸性胺基酸經另一酸性胺基酸置換，一個鹼性胺基酸經另一鹼性胺基酸置換，或一個中性胺基酸經另一中性胺基酸置換。示例性的置換如下表D所示：
表D
Figure 108143198-A0101-12-0029-5
在某些實施方案中，置換發生在抗體的CDR區。通常，獲得的變體相對於親本抗體在某些生物學特性方面(例如，增加的親和力)具有修飾(例如，改善)和/或將具有親本抗體的基本上保留的某些生物學特性。示例性置換變體是親和力成熟抗體。
在某些實施方案中，本文中所提供的抗體經改變以增加或降低抗體經糖基化的程度。對抗體的糖基化位點的添加或缺失可藉由改變胺基酸序列以便產生或移除一或多個糖基化位點而方便地實現。當抗體包含Fc區時，可以改變附著於其的糖類。在一些應用中，除去不想要的糖基化位點的修飾可以是有用的，例如除去岩藻糖模塊以提高抗體依賴性細胞性細胞毒性(ADCC)功能(參見Shield等(2002)JBC277：26733)。在其它應用中，可以進行半乳糖苷化修飾以修飾補體依賴性細胞毒性(CDC)。
在某些實施方案中，可在本文中所提供抗體的Fc區中引入一個或多個胺基酸修飾，以此產生Fc區變體，以便增強例如抗體的親和力或治療疾病的有效性。Fc區變體可包括在一或多個胺基酸位置處包含胺基酸修飾(例如置換)的人Fc區序列(例如人IgG1、IgG2、IgG3或IgG4Fc區)。關於Fc變體的實例參見美國專利號7,332,581，美國專利號6,737,056，美國專利號6,737,056；WO 2004/056312和Shields等人，J.Biol.Chem.9(2)：6591-6604(2001)，美國專利號6,194,551、WO 99/51642和Idusogie等人J.Immunol.164：4178-4184(2000)，美國專利號7,371,826，Duncan&Winter,Nature 322：738-40(1988)；美國專利號5,648,260；美國專利號5,624,821；和WO 94/29351。
在本發明的一個實施方案中，本文所述抗體在Fc區引入取代突變(M252Y/S254T/T256E)，來提高與人FcRn的結合能力，以期延長其在體內的半衰期。
在某些實施方案中，可能需要產生經半胱胺酸工程改造的抗體，例如“硫代MAb”，其中抗體的一或多個殘基經半胱胺酸殘基置換。可以如，例如美國專利號7,521,541中所述地生成半胱胺酸改造的抗體。
在某些實施方案中，本文中所提供的抗體可進一步經修飾為含有本領域中已知且輕易獲得的其他非蛋白質部分。適合抗體衍生作用的部分包括，但不限於，水溶性聚合物。水溶性聚合物的非限制性實例包括，但不限於，聚乙二醇(PEG)、乙二醇/丙二醇共聚物、羧甲基纖維素、葡聚糖、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚-1,3-二烷、聚-1,3,6-三烷、乙烯/馬來酸酐共聚物、聚胺基酸(均聚物或無規共聚物)、及葡聚糖或聚(n-乙烯基吡咯烷酮)聚乙二醇、丙二醇均聚物、聚環氧丙烷/氧化乙烯共聚物、聚氧乙基化多元醇(例如甘油)、聚乙烯醇、及其混合物。
在一些實施方案中，本發明的抗IL-23p19抗體或其抗原結合片段具有以下一個或多個特性：
(i)顯示與本發明抗體(例如表3所列的任一抗體)對IL-23p19相同或相似的結合親和力和/或特異性；
(ii)抑制(例如，競爭性抑制)本發明抗體(例如表3所列的任一抗體)與IL-23p19的結合；
(iii)與本發明抗體(例如表3所列的任一抗體)結合相同或重疊的表位；
(iv)與本發明抗體(例如表3所列的任一抗體)競爭結合IL-23p19；
(v)具有本發明抗體(例如表3所列的任一抗體)的一個或多個生物學特性。
在一些實施方案中，本發明的抗IL-23p19抗體是IgG1形式的抗體或IgG2形式的抗體或IgG4形式的抗體。
在一些實施方案中，抗IL-23p19抗體是單株抗體。
在一些實施方案中，抗IL-23p19抗體是人源化的。用於使抗體人源化的不同方法是技術人員已知的，如由Almagro&Fransson綜述的，其內容藉由提述完整併入本文(Almagro JC和Fransson J(2008)Frontiers inBioscience13：1619-1633)。
在一些實施方案中，抗IL-23p19抗體是人抗體。可使用本領域中已知的各種技術來製備人抗體。人抗體一般描述於van Dijk和van de Winkel，Curr.Opin.Pharmacol 5：368-74(2001)以及Lonberg，Curr.Opin.Immunol 20：450-459(2008)。
在一些實施方案中，抗IL-23p19抗體是嵌合抗體。
在一些實施方案中，至少部分的抗IL-23p19抗體的框架序列是人共有框架序列。在一個實施方案中，本發明的抗IL-23p19抗體還涵蓋其抗體片段，較佳地選自以下的抗體片段：Fab、Fab’、Fab’-SH、Fv、單鏈抗體(例如scFv)或(Fab’)2、單結構域抗體、雙抗體(dAb)或線性抗體。
在某些實施方案中，抗IL-23p19抗體分子處於雙特異性或多特異性抗體分子形式。在一個實施方案中，雙特異性抗體分子具有針對IL-23p19的第一結合特異性和針對TNF(例如TNFα)或IL-17(例如IL17A或IL17F)的第二結合特異性。在一個實施方案中，雙特異性抗體分子與IL-23p19和TNF或IL-17結合。多特異性抗體分子可以具有任何針對前述分子的結合特異性的組合。
II. 本發明的核酸以及包含其的宿主細胞
在一方面，本發明提供了編碼以上任何抗IL-23p19抗體或其片段的核酸。在一個實施方案中，提供包含所述核酸的載體。在一個實施方案中，載體是表達載體。在一個實施方案中，提供包含所述核酸或所述載體的宿主細胞。在一個實施方案中，宿主細胞是真核的。在另一個實施方案中，宿主細胞選自酵母細胞、哺乳動物細胞(例如CHO細胞或293細胞)或適用於製備抗體或其抗原結合片段的其它細胞。在另一個實施方案中，宿主細胞是原核的。
在一方面，本發明提供了編碼本文所述任何抗IL-23p19抗體或其片段的核酸。所述核酸可以包含編碼抗體的輕鏈可變區和/或重鏈可變區的胺基酸序列的核酸，或包含編碼抗體的輕鏈和/或重鏈的胺基酸序列的核酸。示例性的編碼抗體重鏈的核酸序列包含與選自SEQ ID NO：18、19或20的核酸序列具有至少80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%的同一性的核酸序列，或者包含選自SEQ ID NO：18、19或20的核酸序列。示例性的編碼抗體輕鏈的核酸序列包含與選自SEQ ID NO：21或22的核酸序列具有至少80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%的同一性的核酸序列，或者包含選自SEQ ID NO：21或22的核酸序列。
在一個實施方案中，提供包含所述核酸的一個或多個載體。在一個實施方案中，載體是表達載體，例如真核表達載體。載體包括但不限於病毒、質粒、黏粒、λ噬菌體或酵母人工染色體(YAC)。在一個實施方案中，載體是pTT5載體。
在一個實施方案中，提供包含所述載體的宿主細胞。用於選殖或表達編碼抗體的載體的適當宿主細胞包括本文描述的原核或真核細胞。例如，抗 體可在細菌中產生，特別當不需要糖基化和Fc效應子功能時。對於抗體片段和多肽在細菌中的表達，見，例如，美國專利號5,648,237，5,789,199和5,840,523，還見Charlton，Methods in Molecular Biology，卷248(B.K.C.Lo，編輯，Humana Press，Totowa，NJ，2003)，第245-254頁，其描述抗體片段在大腸桿菌中的表達)。在表達後，抗體可以從可溶級分中的細菌細胞糊狀物分離，並且可以進一步純化。
在一個實施方案中，宿主細胞是真核的。在另一個實施方案中，宿主細胞選自酵母細胞、哺乳動物細胞或適用於製備抗體或其抗原結合片段的其它細胞。例如，真核微生物諸如絲狀真菌或酵母是關於編碼抗體的載體的合適純株或表達宿主。例如，糖基化途徑已經進行“人源化”的真菌和酵母菌株導致產生具有部分或完全人糖基化模式的抗體。參見Gerngross，Nat.Biotech.22：1409-1414(2004)，和Li等，Nat.Biotech.24：210-215(2006)。適於表達糖基化抗體的宿主細胞也衍生自多細胞生物體(無脊椎動物和脊椎動物)。也可以將脊椎動物細胞用作宿主。例如，可以使用被改造以適合於懸浮生長的哺乳動物細胞系。有用哺乳動物宿主細胞系的其它實例是用SV40轉化的猴腎CV1系(COS-7)；人胚腎系(293HEK或293F或293細胞，如例如Graham等，J.Gen Virol.36：59(1977)中所描述的)等。其它有用的哺乳動物宿主細胞系包括中國倉鼠卵巢(CHO)細胞，包括DHFR-CHO細胞(Urlaub等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 77：216(1980)、CHO-S細胞等；以及骨髓瘤細胞系如Y0，NS0和Sp2/0。關於適合產生抗體的某些哺乳動物宿主細胞系的綜述見例如Yazaki和Wu，Methods in Molecular Biology，卷248(B.K.C.Lo編著，Humana Press，Totowa，NJ)，第255-268頁(2003)。
在一個實施方案中，本發明提供製備抗IL-23p19抗體或其片段(較佳的抗原結合片段)的方法，其中所述方法包括在適於表達編碼所述抗體或其片段(較佳的抗原結合片段)的核酸的條件下培養所述宿主細胞，以及視需要地分離所述抗體或其片段(較佳地抗原結合片段)。在某個實施方案中，所述方法還包括從宿主細胞回收抗IL-23p19抗體或其片段(較佳地抗原結合片段)。
在一個實施方案中，提供了製備抗IL-23p19抗體的方法，其中所述方法包括，在適合抗體表達的條件下，培養包含編碼所述抗體的核酸的宿主細胞，如上文所提供的，和視需要地從所述宿主細胞(或宿主細胞培養基)回收所述抗體。為了重組產生抗IL-23p19抗體，分離編碼抗體(例如上文所描述的抗體)的核酸，並將其插入一個或多個載體，用於在宿主細胞中進一步克隆和/或表達。此類核酸易於使用常規規程分離和測序(例如藉由使用能夠與編碼抗體重鏈和輕鏈的基因特異性結合的寡核苷酸探針進行)。
III. 測定法
可以藉由本領域中已知的多種測定法對本文中提供的抗IL-23p19抗體鑒定，篩選，或表徵其物理/化學特性和/或生物學活性。一方面，對本發明的抗體測試其抗原結合活性，例如藉由已知的方法諸如ELISA，Western印跡，等來進行。可使用本領域已知方法來測定對IL-23p19的結合，本文中公開了例示性方法。在一些實施方案中，使用生物光干涉測定法(例如Fortebio親和測量)或MSD測定法。
另一方面，可使用競爭測定法來鑒定與本文中公開的任何抗IL-23p19抗體競爭對IL-23p19的結合的抗體。在某些實施方案中，此類競爭性抗體結合與本文中公開的任何抗IL-23p19抗體所結合表位相同或重疊的表位(例如線 性或構象表位)。用於定位抗體所結合表位的詳細例示性方法見Morris(1996)“Epitope Mapping Protocols”,Methods in Molecular Biology vol.66(Humana Press,Totowa,NJ)。
本發明還提供了用於鑒定具有生物學活性的抗IL-23p19抗體的測定法。生物學活性可以包括例如結合IL-23p19(例如結合人和/或食蟹猴IL-23p19)，抑制IL-23對IL-17分泌的誘導，阻斷IL-23信號通路等。還提供在體內和/或在體外具有此類生物學活性的抗體。
在某些實施方案中，對本發明的抗體測試此類生物學活性。
供任何上述體外測定法使用的細胞包括天然表達IL-23p19或經改造而表達IL-23p19細胞系。此類細胞還包括表達IL-23p19和並非正常情況下表達IL-23p19的編碼IL-23p19 DNA轉染的細胞系。
可以理解的是，能夠使用本發明的免疫綴合物替換或補充抗IL-23p19抗體來進行任何上述測定法。
可以理解的是，能夠使用抗IL-23p19抗體和別的活性劑來進行任何上述測定法。
IV. 免疫綴合物
在一些實施方案中，本發明提供了免疫綴合物，其包含本文中提供的任何抗IL-23p19抗體和其它物質，例如治療劑，包括化療劑、細胞因子、細胞毒性劑、其它抗體、小分子藥物或免疫調節劑(例如抗炎劑或免疫抑制劑)。在一個實施方案中，所述其它物質例如細胞毒性劑，其包括任何對細胞有害的藥劑。適合於形成免疫綴合物的細胞毒性劑的例子是本領域中已知的。例如，細胞毒性劑包括但不限於：放射性同位素；生長抑制劑；酶及其片段如核酸水解酶；抗生素；毒素 如小分子毒素或細菌、真菌、植物或動物起源的酶促活性毒素，包括其片段和/或變體。可以與本發明抗體形成免疫綴合物的其它示例還參見US61642032。
在一些實施方案中，所述免疫綴合物用於預防或治療IL-23相關疾病，例如免疫系統疾病(例如自身免疫疾病或炎症)。在一些實施方案中，所述自身免疫疾病例如銀屑病、克羅恩病、類風濕性關節炎、強直性脊柱炎、銀屑病性關節炎等。
V. 醫藥組成物和藥物製劑
在一些實施方案中，本發明提供包含本文所述的任何抗IL-23p19抗體或其片段(較佳地其抗原結合片段)或其免疫綴合物的組合物，較佳地組合物為醫藥組成物。在一個實施方案中，所述組合物還包含藥用輔料。在一個實施方案中，組合物，例如，醫藥組成物，包含本發明的抗IL-23p19抗體或其片段或其免疫綴合物，以及一種或多種其它治療劑的組合。
在一些實施方案中，所述組合物用於預防或治療IL-23相關疾病，例如免疫系統疾病(例如自身免疫疾病或炎症)。在一些實施方案中，所述自身免疫疾病例如銀屑病、克羅恩病、類風濕性關節炎、強直性脊柱炎、銀屑病性關節炎等。
本發明還包括包含抗IL-23p19抗體或其免疫綴合物的組合物(包括醫藥組成物或藥物製劑)，或包含編碼抗IL-23p19抗體的多核苷酸的組合物(包括醫藥組成物或藥物製劑)。在某些實施方案中，組合物包含一種或多種結合IL-23p19的抗體或其片段，或一種或多種編碼一種或多種抗IL-23p19的抗體或其片段的多核苷酸。這些組合物還可以包含合適的藥用輔料，如本領域中已知的藥用載體、藥用賦形劑，包括緩衝劑。
適用於本發明的藥用載體可以是無菌液體，如水和油，包括那些具有石油、動物、植物或合成起源的，如花生油、大豆油、礦物油、芝麻油等。當靜脈內施用醫藥組成物時，水是較佳的載體。還可以將鹽水溶液和水性右旋糖以及甘油溶液用作液體載體，特別是用於可注射溶液。合適的藥用賦形劑包括澱粉、葡萄糖、乳糖、蔗糖、明膠、麥芽、米、麵粉、白堊、矽膠、硬脂酸鈉、甘油單硬脂酸酯、滑石、氯化鈉、乾燥的脫脂乳、甘油、丙烯、二醇、水、乙醇等。對於賦形劑的使用及其用途，亦參見“Handbook of PharmaceuticalExcipients”，第五版，R.C.Rowe,P.J.Seskey和S.C.Owen,PharmaceuticalPress,London,Chicago。若期望的話，所述組合物還可以含有少量的潤濕劑或乳化劑，或pH緩衝劑。這些組合物可以採用溶液、懸浮液、乳劑、片劑、丸劑、膠囊劑、粉末、持續釋放配製劑等的形式。口服配製劑可以包含標準載體，如藥用級甘露醇、乳糖、澱粉、硬脂酸鎂、糖精。
可以藉由將具有所需純度的本發明的抗IL-23p19抗體與一種或多種視需要的藥用輔料(Remington's Pharmaceutical Sciences，第16版，Osol，A.編(1980))混合來製備包含本文所述的抗IL-23p19抗體的藥物製劑，較佳地以凍乾製劑或水溶液的形式。
示例性的凍乾抗體製劑描述於美國專利號6,267,958。水性抗體製劑包括美國專利號6,171,586和WO2006/044908中所述的那些，後一種製劑包括組胺酸-乙酸鹽緩衝劑。
本發明的醫藥組成物或製劑還可以包含一種或多種其它活性成分，所述活性成分是被治療的特定適應證所需的，較佳具有不會不利地影響彼此的互補活性的那些活性成分。所述活性成分以對於目的用途有效的量合適地組 合存在。示例性的活性成分包括化療劑、細胞因子、細胞毒性劑、其它抗體、小分子藥物或免疫調節劑等。
可製備持續釋放製劑。持續釋放製劑的合適實例包括含有抗體的固體疏水聚合物的半滲透基質，所述基質呈成形物品，例如薄膜或微囊形式。
關於包含本發明抗體的藥物製劑/醫藥組成物的其它組分，還可以參見WO2008103473A1或WO2007076524A2或WO2008103432A1等中公開的那些。
VI. 組合產品
在一些實施方案中，本發明還提供了組合產品，其包含本發明的抗體或其抗原結合片段，或其免疫綴合物，以及一種或多種其它治療劑(例如化療劑、細胞因子、細胞毒性劑、其它抗體、小分子藥物或免疫調節劑等)。在一些實施方案中，免疫調節劑例如免疫抑制劑或抗炎藥。在一些實施方案中，其它抗體例如抗TNF抗體或抗IL-17抗體。
適當的可以與本發明抗體用於組合產品的其它治療劑還可以參見WO2008103473A1或WO2007076524A2或WO2008103432A1中公開的那些。
在一些實施方案中，所述組合產品用於預防或治療IL-23相關疾病，例如免疫系統疾病(例如自身免疫疾病或炎症)。在一些實施方案中，所述自身免疫疾病例如銀屑病、克羅恩病、類風濕性關節炎、僵直性脊柱炎、銀屑病性關節炎等。
VII. 用途
本發明一方面提供了在受試者中治療IL-23相關疾病的方法，包括向受試者施用有效量的本發明的抗IL-23p19的抗體或其抗原結合片段、免疫綴合物、醫藥組成物或組合產品。
受試者可以是哺乳動物，例如，靈長類，較佳地，高級靈長類，例如，人類(例如，患有本文所述疾病或具有患有本文所述疾病的風險的患者)。在一個實施方案中，受試者患有本文所述疾病(例如，如本文所述的IL-23相關疾病，例如免疫系統疾病(例如自身免疫疾病或炎症))或具有患有本文所述疾病的風險。在某些實施方案中，受試者接受或已經接受過其它治療，例如抗炎藥或免疫抑制劑治療和/或放射療法。
在一些實施方案中，本文所述的IL-23相關疾病包括免疫系統疾病，例如自身免疫疾病及炎症疾病。所述疾病包括(但不限於)銀屑病、克羅恩病、類風濕性關節炎、僵直性脊柱炎、銀屑病性關節炎等。
在一個實施方案中，免疫系統疾病是表達升高水平的IL-23p19的疾病。
在其他方面，本發明提供抗IL-23p19抗體或其片段在生產或製備藥物中的用途，所述藥物用於治療本文提及的相關疾病或病症。
在一些實施方案中，本發明的抗體或抗體片段或免疫綴合物或組合物或產品會延遲病症和/或與病症相關的症狀的發作。
在一些實施方案中，本文所述的預防或治療方法還包括向所述受試者或個體組合施用本文公開的抗體分子或醫藥組成物或免疫綴合物，以及一種或多種其它療法，例如治療方式和/或其它治療劑。
在一些實施方案中，治療方式包括外科手術、放射療法(例如，外粒子束療法，它涉及其中設計照射區域的三維適形放射療法)、局部照射(例如，指向預選靶或器官的照射)或聚焦照射)等。
在一些實施方案中，治療劑選自化療劑、細胞因子、細胞毒性劑、其它抗體、小分子藥物或免疫調節劑。
示例性的其它抗體包括但不限於抗TNF抗體或抗IL-17抗體，例如抗TNFα抗體或抗IL-17A抗體或抗IL-17F抗體。
示例性的免疫調節劑包括免疫抑制劑或抗炎劑。
在一些實施方案中，本文中描述的抗體組合可以分別施用，例如，作為單獨的抗體分別施用，或連接時(例如作為雙特異性或三特異性抗體分子)施用。
更多的可以與抗IL-23p19抗體或其片段組合的療法或治療劑可以參見WO2008103473A1或WO2007076524A2或WO2008103432A1。
此類組合療法涵蓋組合施用(例如兩種或更多種治療劑包含在同一配製劑或分開的配製劑中)，和分開施用，在該情況中，可以在施用別的治療劑和/或藥劑之前，同時，和/或之後發生本發明的抗體的施用。在一個實施方案中，抗IL-23p19抗體的施用和別的治療劑的施用彼此在約一個月內，或約一，兩或三週內，或約1、2、3、4、5、或6天內發生。
待採用的含抗IL-23p19抗體的醫藥組成物的治療有效量將例如取決於治療背景和目標。本領域技術人員將理解用於治療的適當劑量水平將部分地根據以下因素而變化：遞送的分子、所針對使用的適應症、施用途徑、以及 患者的體重、身體表面積或器官大小和/或情況(年齡和一般健康狀態)。在某些實施方案中，臨床醫師可滴定劑量並且更改施用途徑以獲得最佳治療效果。
給藥頻率將取決於在所用製劑中的具體抗IL-23p19抗體的藥物代謝動力學參數。通常，臨床醫師施用組合物直到達到獲得預期效果的劑量。本發明的抗體因此可以單一劑量施用，或者在一定時間內以兩次或更多次劑量(其可包含相同或不同量的所需分子)施用，或者藉由植入裝置或導管連續輸注施用。適當的劑量可藉由使用適當的劑量反應數據確定。在某些實施方案中，可在延長的時間期限內向患者施用抗體。在某些實施方案中，抗體是每週、每兩週、每月、每兩個月、每三個月、每四個月、每五個月或每六個月給藥。
醫藥組成物的施用途徑是根據已知方法，例如，經口、藉由靜脈內注射、腹膜內、腦內(實質內)、腦室內、肌內、眼內、動脈內、門脈內或病灶內途徑；藉由持續釋放系統或藉由植入裝置。在某些實施方案中，組合物可藉由彈丸注射或藉由連續輸注或藉由植入裝置施用。
組合物還可經由植入膜、海綿或其上吸收或膠囊包封所需分子的另一種適當的材料被局部施用。在某些實施方案中，當使用植入裝置時，所述裝置可被植入到任何合適的組織或器官中，並且可經由擴散、定時釋放的大丸劑、或連續施用遞送所需分子。
可以理解的是，能夠使用本發明的免疫綴合物替換或補充抗IL-23p19抗體來進行任何治療。
VIII. 用於診斷和檢測的方法和組成物
在某些實施方案中，本文中提供的任何抗IL-23p19抗體或其抗原結合片段可以用於檢測IL-23p19在生物樣品中的存在。術語“檢測”用於本文中時，包括 定量或定性檢測，示例性的檢測方法可以涉及免疫組織化學、免疫細胞化學、流式細胞術(例如，FACS)、抗體分子複合的磁珠、ELISA測定法、PCR-技術(例如，RT-PCR)。在某些實施方案中，生物樣品是血、血清或生物來源的其他液體樣品。在某些實施方案中，生物樣品包含細胞或組織。在一些實施方案中，生物樣品來自免疫系統疾病(例如自身免疫疾病或炎症)相關病灶。
在一個實施方案中，提供用於診斷或檢測方法的抗IL-23p19抗體。在另一個方面中，提供檢測IL-23p19在生物樣品中的存在的方法。在某些實施方案中，方法包含檢測IL-23p19蛋白在生物樣品中的存在。在某些實施方案中，IL-23p19是人IL-23p19或食蟹猴IL-23p19。在某些實施方案中，所述方法包括將生物樣品與如本文所述的抗IL-23p19抗體在允許抗IL-23p19抗體與IL-23p19結合的條件下接觸，並檢測在抗IL-23p19抗體和IL-23p19之間是否形成複合物。複合物的形成表示存在IL-23p19。該方法可以是體外或體內方法。在一個實施方案中，抗IL-23p19抗體被用於選擇適合利用抗IL-23p19抗體的治療的受試者，例如其中IL-23p19是用於選擇所述受試者的生物標記物。
在一個實施方案中，可以使用本發明抗體診斷IL-23相關疾病例如免疫系統疾病(例如自身免疫疾病或炎症)，例如評價(例如，監測)對象中本文所述疾病(例如，IL-23相關疾病例例如免疫系統疾病(例如自身免疫疾病或炎症))的治療或進展、其診斷和/或分期。在某些實施方案中，提供標記的抗IL-23p19抗體。標記包括但不限於，被直接檢測的標記或部分(如螢光標記、發色團標記、電子緻密標記、化學發光標記和放射性標記)，以及被間接檢測的部分，如酶或配體，例如，藉由酶促反應或分子相互作用。示例性標記包括但不限於，放射性同位素32P、14C、125I、3H和131I，螢光團如稀土螯合物或螢光素及其衍生物，羅 丹明及其衍生物，丹醯(dansyl)，傘形酮(umbelliferone)，螢光素酶(luceriferase)，例如，螢火蟲螢光素酶和細菌螢光素酶(美國專利號4,737,456)、螢光素、2,3-二氫酞嗪二酮、辣根過氧化物酶(HR)、鹼性磷酸酶、β-半乳糖苷酶、葡糖澱粉酶、溶解酶、糖類氧化酶、例如，葡萄糖氧化酶、半乳糖氧化酶、和葡萄糖-6-磷酸脫氫酶，雜環氧化酶如尿酸酶和黃嘌呤氧化酶，以及利用過氧化氫氧化染料前體的酶如HR、乳過氧化物酶、或微過氧化物酶(microperoxidase)、生物素/親和素、自旋標記、噬菌體標記、穩定的自由基等等。
在本文中提供的任何發明的一些實施方案中，樣品是在用抗IL-23p19抗體治療之前獲得的。在一些實施方案中，樣品是在用IL-23相關疾病例如免疫系統疾病(例如自身免疫疾病或炎症)藥物治療之前獲得的。在一些實施方案中，樣品是福爾馬林固定、石蠟包膜(FFPE)的。在一些實施方案中，樣品是活檢(例如芯活檢)，手術標本(例如來自手術切除的標本)，或細針吸出物。
在一些實施方案中，在治療之前，例如，在起始治療之前或在治療間隔後的某次治療之前檢測IL-23p19。
在一些實施方案中，提供了一種治療IL-23相關疾病例如免疫系統疾病(例如自身免疫疾病或炎症)的方法，所述方法包括：對受試者(例如，樣品)(例如，受試者樣品)檢驗IL-23p19的存在，因而確定IL-23p19值，將IL-23p19值與對照值比較，並且如果IL-23p19值大於對照值，則向受試者施用治療有效量的視需要與一種或多種其他療法組合的抗IL-23p19抗體(例如，本文所述的抗IL-23pI9抗體)，因而治療IL-23相關疾病例如免疫系統疾病(例如自身免疫疾病或炎症)。
IX 本發明的示例性抗IL-23p19抗體
表1：本發明示例抗體的CDR的胺基酸序列(根據Abm規則確定)
Figure 108143198-A0101-12-0045-6
表2：本發明示例抗體的重鏈可變區和輕鏈可變區的胺基酸序列
Figure 108143198-A0101-12-0046-7
表3：本發明示例性抗體的重鏈(HC)和輕鏈(LC)的胺基酸序列
Figure 108143198-A0101-12-0046-8
本發明的這些以及其它方面和實施方案在圖式(圖式簡述緊隨其後)和以下的發明詳述中得到描述並且示例於以下實施例中。上文以及整個本申請中所論述的任何或所有特徵可以在本發明的各種實施方案中組合。以下實施例進一步說明本發明，然而，應理解實施例以說明而非限定的方式來描述，並且本領域技術人員可以進行多種修改。
[實施例]
實施例1、融合瘤細胞的製備
本發明採用融合瘤技術，以鼠IL-12p40和人IL-23p19融合蛋白免疫小鼠，然後獲取小鼠的脾細胞和骨髓瘤細胞融合，獲得能夠表達陽性抗體的融合瘤細胞。
融合瘤融合
表4：實驗動物及免疫信息
Figure 108143198-A0101-12-0047-9
鼠IL-12p40和人IL-23p19的融合蛋白、食蟹猴IL23蛋白、人IL23蛋白的製備
為了篩選到只結合人IL23 p19抗體，因此設計了鼠IL-12p40和人IL-23p19的融合蛋白，設計如下：鼠IL12 p40(NCBI：P43432,Met23-Ser335)與人IL-23 p19(NCBI：AAG37232,Ala21-Pro189)中間連入Linker(GSGSSRGGSGSGGSGGGGSKL)並在C末端連入His Tag(HHHHHH)。
食蟹猴IL23蛋白的設計方案：食蟹猴IL12 p40(NCBI：AEY84628,Ile23-Ser328)與食蟹猴IL23 p19(NCBI：AEY84629,Ala21-Pro189)藉由Linker(GSGSSRGGSGSGGSGGGGSKL)連接，並在C末端連入His Tag(HHHHHH)。
人IL23蛋白的設計方案：人IL12 p40(NCBI：P29460,Ile23-Ser328)與人IL23 p19(NCBI：AAG37232,Ala21-Pro189)藉由Linker(GSGSSRGGSGSGGSGGGGSKL)連接，並在C末端連入His Tag(HHHHHH)。
三者均採用Expi293細胞(Thermo，A14527)瞬轉表達獲得，按瞬轉表達試劑盒ExpiFectamineTM 293(Theomo，A14524)的步驟大量表達蛋白，並收集細胞上清用HisTrap Excel(GE，17-3712-06)預裝柱純化上清液，最終蛋白純度>90%。
對照抗體guselkumab(Gmab)的製備
對照抗體guselkumab序列來源於WHO INN網站(Jassen公司guselkumab，胺基酸序列還參見專利US20160237151，以下簡稱Gmab)。抗體採用Expi293細胞(Thermo，A14527)瞬轉表達獲得，按瞬轉表達試劑盒ExpiFectamineTM 293(Theomo，A14524)的步驟大量表達抗體，並收集細胞上清用HiTrap MabSelect SuRe(GE，11003495)純化上清液，使抗體的純度>95%。
電融合皿準備：用70%乙醇徹底浸泡電融合皿，並於超淨台中吹乾備用。
分離脾細胞：頸脫位將小鼠處死，用75%酒精消毒體表5min，隨即放入超淨台內小鼠解剖板上，左側臥位，用7號針頭固定四肢。無菌打開腹腔取出脾臟，用基礎培養基(配製方法如下表5)洗滌，並仔細去掉周圍附著的結締組織。隨後將脾臟轉移到另一個盛有基礎培養基的平皿中。以彎頭針頭壓住脾臟，用小針頭在脾臟上插孔，並用鑷子擠壓，使脾細胞充分釋放，製成脾細胞懸液。細胞懸液經70μM細胞篩網過濾後用30ml基礎培養基洗一遍，1200rpm離心6min。
表5：
Figure 108143198-A0101-12-0049-10
裂解紅細胞：去除上清，用10ml RBC裂解緩衝液(GIBCO)重懸細胞。然後再加入20ml RBC裂解緩衝液。懸液靜置5min後1100rpm離心6min。去上清後用10ml基礎培養基重懸細胞，然後再加入30ml基礎培養基，1100rpm離心6min。去除上清後，細胞重懸於20ml基礎培養基中並計數。
電融合：用20ml基礎培養基重懸小鼠骨髓瘤細胞SP2/0細胞(ATCC)並計數。將SP2/0和裂解紅細胞後的脾細胞以1：2~1：1的比例混合，1000rpm離心6min。去除上清後將混合的細胞重懸於10ml融合緩衝液(BTXpress) 中。再加入15ml融合緩衝液，1000rpm離心5min，去除上清。重複上述步驟一遍後，加入適量體積的融合緩衝液重懸細胞，調整混合細胞密度至1×107個細胞/ml。電融合儀的參數設置如下表6。每個電融合皿中加入2ml上述細胞懸液進行電融。
表6：電融合儀參數設置
Figure 108143198-A0101-12-0050-11
電融合後鋪板：細胞於電融合皿中室溫靜置5min。將細胞轉移入離心管中，用篩選培養基(配置方法如下表7)稀釋細胞至1~2×104個細胞/ml。96孔板中每孔加入100μl細胞懸液。融合後第7天更換篩選培養基。培養第10天(或更久，根據細胞生長狀態)後以ELISA檢測法篩選出表達特異性抗IL-23p19抗體的融合瘤細胞，且分泌的抗體不與IL-12 p40結合。
表7：篩選培養基
Figure 108143198-A0101-12-0050-12
陽性融合瘤細胞亞選殖
亞選殖步驟：準備一塊96孔板，第2至第8排每孔加入200μl如上所述的基礎培養基。將上述融合篩選出的陽性孔的細胞，按約1×105個/ml的密度，分別取300ul加入到第一排的每個孔中。用排搶，將第1排細胞懸液取100μl加入第2排，充分混勻後取100μl加入下一排。重複上述步驟，直至最後一列體積變為300μl；靜置96孔板15min，顯微鏡下觀察計數。取100個細胞對應的體積加入20ml如上所述的基礎培養基中，並混勻鋪板，每孔200μl。一周後顯微鏡下觀察，判斷並標記出單純株孔，待測挑出陽性孔。
細胞凍存：觀察細胞狀態，等細胞生長良好，活力>90%時，1000rpm離心5min，去除上清。用凍存液(45.5%FBS(Hyclone)，44.5%RPMI-1640(Hyclone)，10%DMSO)重懸細胞至1×107個細胞/ml，分裝至凍存管，放入程序降溫盒中，-80℃凍存。
實施例2. 融合瘤細胞的活性篩選
本發明採用功能性實驗，原理是抗IL-23p19抗體能抑制IL-23誘導小鼠脾臟淋巴細胞分泌IL-17，篩選出表達抑制IL-23誘導小鼠脾臟淋巴細胞分泌IL-17的抗IL-23p19抗體的融合瘤細胞。
分離小鼠脾臟淋巴細胞
頸椎脫臼法處死空白的Balb/c小鼠(北京維通利華實驗動物技術有限公司)，取出小鼠脾臟浸泡在乾淨的PBS溶液中；在一個培養皿中加入適量的PBS溶液，放一個細胞篩，將脾臟取出放於細胞篩中；取乾淨的注射器，用其按壓處的末端對組織進行碾壓，膜內細胞會慢慢游離出來，經過細胞篩之後，懸浮在培養皿溶液中；收集含有小鼠脾臟淋巴細胞的PBS，400g，離心10min；去上清，加5mL 紅細胞裂解液(ACK裂解緩衝液(GIBCO))重懸細胞；裂解2分鐘；400g，離心10min；加入30mL PBS洗一遍，離心400g，除去上清；加5mL完全培養基(RPMI-1640培養基加入10%FBS)重懸細胞，獲得細胞懸液。
鋪板
取10μl上文所得的細胞懸液計數，以完全培養基將細胞密度稀釋為4*106/mL後鋪入96孔板，每孔100uL，每孔細胞總數為4*105個。
IL-23或IL-23與融合瘤上清的混合物誘導小鼠脾細胞分泌IL-17以完全培養基將IL-23(R&D Systems，貨號1290-IL-500/CF)稀釋至120ng/mL，取120uL IL-23與120uL實施例1中獲得的融合瘤細胞培養上清混合後置於37度孵育30min，30min後，取100uL混合物加入已經鋪有小鼠脾臟淋巴細胞的96孔板上鋪板的小鼠脾臟淋巴細胞，混勻，37度孵育4天；將120uL IL-23與120uL完全培養基(RPMI-1640培養基加入10%FBS)的混合物作為陰性對照。
測定IL-17含量，計算融合瘤上清的抑制率
本發明以Mouse IL-17 DuoSet ELISA試劑盒(R&D Systems，貨號DY421)檢測IL-17含量，融合瘤上清的抑制率計算公式為：
抑制率(%)=(IL-17陰性對照-IL-17待測樣品)/IL-17陰性對照*100%
本發明以此功能性實驗篩選出一個活性優於對照抗體的融合瘤細胞，純株號為17D1。結果如下表8：
表8：
Figure 108143198-A0101-12-0053-13
實施例3. 嵌合抗體的製備
利用分子生物學技術，獲得實施例1中融合瘤細胞產生的抗IL-23p19抗體的抗體序列，並利用其構建人鼠嵌合抗體。
融合瘤測序
RNA抽提：取新鮮培養的17D1純株號的細胞約5×106個，300g離心5min，去除上清，沉澱中加入500μl LY緩衝液(Biomiga)(在使用前每1ml加入20μl β巰基乙醇)，混勻至澄清。加入到DNA去除管中，13000rpm離心2min，收集流穿液。按1/2的比例向流穿液中加入100%乙醇，上下顛倒5次混勻至澄清。將澄清的溶液加入到RNA收集管中，13000rpm離心1min去除液體，加入500μl RB(Recovery Buffer，回收緩衝液)(Takara)，13000rpm離心30s，再加入500μl RNA洗滌緩衝液(Biomiga)(用之前加入適量乙醇)，離心30s，重複一遍上述過程後，離心徹底揮發去除乙醇後，向收集柱(來自PrimeScript II 1st Strand cDNA Synthesis Kit)中加入30μl DEPC水，12000g離心2min，收集洗脫液。測定RNA濃度。
利用PrimeScript II 1st Strand cDNA Synthesis Kit(Takara)反轉錄獲得cDNA，步驟如下(所提及試劑均來自該試劑盒)：
配製反應體系I如下表9。
表9：
Figure 108143198-A0101-12-0054-14
65℃溫育5min後，迅速置冰上冷卻。將反應體系I加入到下列反轉錄體系(表10)中，總量為20μl：
表10：反轉錄體系
Figure 108143198-A0101-12-0054-15
緩慢混勻後按下列條件進行反轉錄翻譯：42℃ 60min→95℃ 5min，然後放冰上冷卻，獲得cDNA。
將cDNA連接T載體，採用Mighty TA-cloning Kit試劑盒(Takara)：
PCR分別擴增重鏈和輕鏈可變區，PCR反應體系如下表11。
表11：
Figure 108143198-A0101-12-0055-16
PCR反應條件如下表12。
表12：
Figure 108143198-A0101-12-0055-17
取4.5μl上述PCR反應獲得的PCR產物，加入0.5μl pMD20-T載體(Takara)，5μl Ligation Mighty Mix(Takara)，輕輕混勻，於37℃反應2h，獲得連接產物。
轉化細胞：
-80℃取出TOP10感受態(天根生化科技(北京)有限公司)，冰上融化，取上述獲得的連接產物5μl加入到融化的TOP10感受態中，混勻後冰上孵育30min。42℃熱激90s後迅速冰上冷卻2min，向EP管中補加900μl LB培養基(生工生物工程(上海)股份有限公司)，37℃，220rpm搖床培養1h。3000g離心2min，吸除800μl上清，用剩餘的培養基將菌體重懸並塗布在胺苄青黴素抗性的平板上。於37℃培養過夜，挑純株測序。
構建嵌合抗體
PCR擴增已經測序的實施例1中融合瘤細胞產生的抗IL-23p19抗體VH及VL區：上下游引子序列見表13及表14。
表13.小鼠抗IL-23p19抗體的重鏈可變區(VH)引子(Primer Mix 1)
Figure 108143198-A0101-12-0056-18
按上述比例混合後，獲得Primer Mix 1用於後續VH的PCR擴增。
表14.小鼠抗IL-23p19抗體的輕鏈可變區(VL)引子(Primer Mix 2)：
Figure 108143198-A0101-12-0057-19
按上述比例混合後，獲得Primer Mix 2用於後續VL的PCR擴增。
PCR體系如下表15。
表15：
Figure 108143198-A0101-12-0058-21
切膠回收PCR擴增產物。
同源重組反應：
同源重組體系如下表16。
表16：
Figure 108143198-A0101-12-0058-22
37℃反應30min，獲得重組產物。重組產物轉化TOP10感受態，並挑取單純株測序，選擇包含插入方向正確的質粒的純株作為陽性純株，保存陽性純株。
本發明示例的一個嵌合抗體(17D1嵌合抗體)的CDR、輕鏈可變區和重鏈可變區，輕鏈和重鏈的胺基酸序列，以及對應的核苷酸序列在本申請的表1-3以及序列表部分列出。
實施例4、嵌合抗體的人源化
將實施例3得到的嵌合抗體進行人源化。藉由以下步驟進行人源化：
①確定CDR環結構；
②在人種系序列數據庫為重鏈和輕鏈的每個V/J區域找到最接近的同源序列；
③篩選與重鏈輕鏈最匹配的人種系以及最低量的回復突變；
④將嵌合抗體的CDR區構建至人的骨架區上；
⑤使用序列和結構特徵，確定骨架區中發揮維持CDR功能的胺基酸位置；
⑥在確定為重要的序列位置進行回復突變(返回到輸入胺基酸類型)；
⑦優化風險位點的胺基酸。
本發明示例的一個嵌合抗體(17D1人源化抗體)的CDR、輕鏈可變區和重鏈可變區，輕鏈和重鏈的胺基酸序列，以及對應的核苷酸序列在本申請的表1-3以及序列表部分列出。
實施例5、人源化抗體的表達和純化
本發明採用在CHO-S細胞中的表達和純化人源化抗體。
根據製造商的說明書，使用Freedom® CHO-S®試劑盒(Invitrogen)產生表達抗體的CHO-S細胞系。首先將17D1人源化抗體分子重鏈和輕鏈的 DNA序列插入到同一個pCHO1.0質粒中，其中重鏈在輕鏈的上游。之後採用化學轉染法和電轉染法將構建的pCHO1.0質粒轉入CHO細胞系(Life Technology)，轉染48小時之後利用ForteBio檢測抗體產量以判斷轉染效率。轉染後的細胞經過兩輪加壓篩選得到高表達抗體的細胞池(pool)。之後擴增細胞池，大量表達抗體，並收集細胞上清用Protein A純化上清液，使抗體的純度>95%。
YTE抗體的製備
將17D1人源化抗體的Fc段3個位點進行定點突變(M252Y/S254T/T256E)，以提高與人FcRn的結合能力，以期延長其在體內的半衰期。與17D1人源化抗體製備類似的，使用Freedom® CHO-S®試劑盒(Invitrogen)產生表達抗體的CHO-S細胞系。轉染後的細胞經過兩輪加壓篩選得到高表達抗體的細胞池(pool)。之後擴增細胞池，大量表達抗體，並收集細胞上清用Protein A純化上清液，使抗體的純度>95%。所獲得的抗體命名為17D1-YTE。
實施例6、人源化抗體的親和力測定
採用生物光干涉測量(ForteBio)測定法測定本發明上述17D1人源化抗體、17D1-YTE結合人IL-23p19的平衡解離常數(KD)。
ForteBio親和力測定按照現有的方法(Estep,P等人，High throughput solution Based measurement of antibody-antigen affinity and epitope binning.MAbs,2013.5(2)：p.270-8)進行。簡言之，傳感器在分析緩衝液中線下平衡30分鐘，然後線上檢測60秒建立基線，在線加載如上所述獲得的經純化的抗體至AHQ傳感器(ForteBio)上進行ForteBio親和測量。再將具有加載的抗體的傳感器暴露於100nM的XX抗原中作用5分鐘，之後將傳感器轉移至分析緩衝液解離5分鐘用於解離速率測量。使用1：1結合模型進行動力學的分析。
在如以上測定法所述進行的實驗中，本發明上述17D1人源化抗體、17D1-YTE以及對照抗體Gmab與人IL-23(如實施例1所述獲得，100mM)親和力如下表17所示。
表17：抗體與人IL-23的親和力
Figure 108143198-A0101-12-0061-23
由以上表17結果可見，本發明上述17D1人源化抗體、17D1-YTE顯示極高的親和力，17D1和對照抗體Gmab具有相似的親和力，17D1-YTE和對照抗體Gmab具有更高的親和力。
採用生物光干涉測量(ForteBio)測定法測定本發明上述17D1人源化抗體、17D1-YTE抗體結合同家族人白介素蛋白人IL-12(ACRO Biosystems,Cat# IL2-H4210)或人IL-12p40(ACRO Biosystems,Cat# NK2-H52H7)的平衡解離常數(KD)(表18)。
表18：抗體與人不同抗原的親和力
Figure 108143198-A0101-12-0061-24
由以上表18結果表明17D1人源化抗體、17D1-YTE抗體與人IL-12、人IL-12p40不結合。
採用生物光干涉測量(ForteBio)測定法測定本發明上述17D1人源化抗體、17D1-YTE結合食蟹猴IL-23(如實施例1所述獲得，100mM)的平衡解離常數(KD)(表19)。
表19. 17D1-YTE與食蟹猴IL-23的親和力
Figure 108143198-A0101-12-0062-25
由以上表結果可見，本發明上述17D1人源化抗體、17D1-YTE顯示極高的親和力，17D1-YTE和對照抗體Gmab具有相似的親和力。
ForteBio檢測候選抗體與人FcRn的親和力
本研究利用ForteBio Octet RED96 System檢測17D1人源化抗體和17D1-YTE與人FcRn(Acro，貨號FCM-H5286)的結合動力學常數(KD)。結果如表20所示，17D1-YTE與人FcRn的親和力是17D1人源化抗體和對照抗體Gmab的3倍。
先將如上文所述製備17D1人源化抗體，17D1-YTE和Gmab(guselkumab)分別用生物素(Biotin)孵育標記，抗體與生物素摩爾比為1：3，用脫鹽柱將未標記的生物素去除，標記後的樣品重新測定濃度，保存備用。
取適量SA傳感器(Fortebio，貨號18-5019)於分析緩衝液中浸泡30分鐘。將生物素化的17D1人源化抗體，17D1-YTE和Gmab稀釋至100nM，人FcRn(Acro，貨號FCM-H5286)按兩倍梯度稀釋為5個濃度點(5，2.5，1.25，0.625，0.3125μg/ml)。設置實驗程序，傳感器先在分析緩衝液終平衡120s，再將生物素化的抗體加載至SA傳感器上，固化時間100s，固化後繼續平衡120s。待基線穩定後，將梯度稀釋的FcRn分別結合到抗體固化水平一致的傳感器上，結合時間設定為100s，之後在分析緩衝液終解離120s，分別測定結合和解離。實驗數據使用1：1模型進行分析，親和力數據如表20所示。
表20. 17D1-YTE與人FcRn的親和力
Figure 108143198-A0101-12-0063-26
實施例7、人源化抗體的活性鑒定
採用功能性實驗測定本發明所獲得的17D1人源化抗體、17D1-YTE抑制IL-23誘導小鼠脾臟淋巴細胞分泌IL-17的活性。試驗方法同實施例2，不同的是使用的是4μg/ml的17D1人源化抗體和17D1-YTE的PBS溶液(對照為Gmab)。檢測結果如第1圖所示。
在以上試驗中，17D1人源化抗體、17D1-YTE能夠抑制IL-23誘導小鼠脾臟淋巴細胞分泌IL-17，與對照抗體相比具有相似的活性。
實施例8、動物體內藥效試驗
本實驗採用C57BL/6雄性小鼠測定本發明的IL-23抗體的預防性抗炎症作用。
C57BL/6雄性小鼠：C57Bl/6雄性小鼠(42-62天)購自北京維通利華實驗動物技術有限公司。等級SPF級，數量48隻，合格證編號NO.11400700260631，到達後馴化飼養7天，開始進行試驗。
給藥：共48隻小鼠，隨機分成8組，每組6隻(h-IgG+PBS組一隻雄鼠由於被毆打，傷勢過重，故將其移除出組)。提前一天腹腔注射抗體的PBS溶液，劑量如下：h-IgG 5mg/kg；17D1人源化抗體(後簡稱17D1)-1mg/kg；17D1-5mg/kg；17D1-YTE-1mg/kg；17D1-YTE-5mg/kg；Gmab-1mg/kg；Gmab-5mg/kg；第二天第一組h-IgG 5mg/kg右耳皮下注射PBS；剩餘組右耳皮下注射IL-23抗原(如實施例1所述獲得的人IL-23蛋白)1ug(PBS中)每隻小鼠，連續右耳皮下注射9天。給藥劑量和方式如表21所示，每隔1-2天監測一次小鼠右耳厚度和體重，監測至第9天結束。採用遊標卡尺測量小鼠右耳厚度(第2圖)。採用電子天平測定體重。
表21. 實驗設計表
Figure 108143198-A0101-12-0065-28
表22.藥品信息
Figure 108143198-A0101-12-0065-29
耳朵腫脹抑制率如第3圖所示：在連續7天IL-23抗原右耳皮下注射後，17D1-1mg/kg；17D1-5mg/kg；17D1-YTE-1mg/kg；17D1-YTE-5mg/kg； Gmab-1mg/kg；Gmab-5mg/kg；均有很好的耳朵腫脹抑制效果；與H-IgG相比，17D1-1mg/kg腫脹抑制率71%，17D1-5mg/kg腫脹抑制率54%，17D1-YTE-1mg/kg腫脹抑制率67%，17D1-YTE-5mg/kg腫脹抑制率86%，Gmab-1mg/kg腫脹抑制率74%，Gmab-5mg/kg的腫脹抑制率88%。同時我們對小鼠體重進行監測，如第4圖所示小鼠體重無顯著差異。因此，本研究中IL-23抗體有明顯的預防性抗炎症作用。
表23. 第7天耳朵腫脹抑制率(%)
Figure 108143198-A0101-12-0066-30
其中，對照組給藥前耳朵厚度：0.298mm
<110> 信達生物製藥(蘇州)有限公司(INNOVENT BIOLOGICS(SUZHOU)CO.,LTD.)
<120> 抗IL-23p19抗體及其用途
<130> PF 180317CNI
<150> CN 201811424552.X
<151> 2018-11-27
<160> 25
<170> PatentIn version 3.3
<210> 1
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 17D1抗體HCDR1
<400> 1
Figure 108143198-A0305-02-0068-6
<210> 2
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 17D1嵌合抗體HCDR2
<400> 2
Figure 108143198-A0305-02-0068-7
<210> 3
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 17D1人源化抗體或17D1-YTE抗體HCDR2
<400> 3
Figure 108143198-A0305-02-0068-8
<210> 4
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 17D1抗體HCDR3
<400> 4
Figure 108143198-A0305-02-0069-9
<210> 5
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 17D1抗體LCDR1
<400> 5
Figure 108143198-A0305-02-0069-10
<210> 6
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 17D1抗體LCDR2
<400> 6
Figure 108143198-A0305-02-0069-11
<210> 7
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 17D1嵌合抗體LCDR3
<400> 7
Figure 108143198-A0305-02-0069-12
<210> 8
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 17D1人源化抗體或17D1-YTE抗體LCDR3
<400> 8
Figure 108143198-A0305-02-0070-13
<210> 9
<211> 115
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 17D1嵌合抗體VH
<400> 9
Figure 108143198-A0305-02-0070-14
<210> 10
<211> 115
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 17D1人源化抗體或17D1-YTE抗體VH
<400> 10
Figure 108143198-A0305-02-0071-15
<210> 11
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 17D1嵌合抗體VL
<400> 11
Figure 108143198-A0305-02-0071-16
Figure 108143198-A0305-02-0072-17
<210> 12
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 17D1人源化抗體或17D1-YTE抗體腔VL
<400> 12
Figure 108143198-A0305-02-0072-18
<210> 13
<211> 445
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 17D1嵌合抗體HC
<400> 13
Figure 108143198-A0305-02-0073-19
Figure 108143198-A0305-02-0074-1
Figure 108143198-A0305-02-0075-20
<210> 14
<211> 444
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 17D1人源化抗體HC
<400> 14
Figure 108143198-A0305-02-0075-21
Figure 108143198-A0305-02-0076-4
Figure 108143198-A0305-02-0077-22
<210> 15
<211> 444
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 17D1-YTE抗體HC
<400> 15
Figure 108143198-A0305-02-0077-23
Figure 108143198-A0305-02-0078-5
Figure 108143198-A0305-02-0079-24
<210> 16
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 17D1-嵌合抗體LC
<400> 16
Figure 108143198-A0305-02-0079-25
Figure 108143198-A0305-02-0080-26
<210> 17
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 17D1-人源化抗體或17D1-YTE抗體LC
<400> 17
Figure 108143198-A0305-02-0080-27
Figure 108143198-A0305-02-0081-28
<210> 18
<211> 1339
<212> DNA
<213> 人工
<220>
<223> 17D1嵌合抗體HC DNA
<400> 18
Figure 108143198-A0305-02-0081-37
Figure 108143198-A0305-02-0082-30
<210> 19
<211> 1335
<212> DNA
<213> 人工
<220>
<223> 17D1人源化抗體HC DNA
<400> 19
Figure 108143198-A0305-02-0082-40
Figure 108143198-A0305-02-0083-31
<210> 20
<211> 1335
<212> DNA
<213> 人工
<220>
<223> 17D1-YTE抗體HC DNA
<400> 20
Figure 108143198-A0305-02-0083-43
Figure 108143198-A0305-02-0084-32
<210> 21
<211> 646
<212> DNA
<213> 人工
<220>
<223> 17D1嵌合抗體LC DNA
<400> 21
Figure 108143198-A0305-02-0084-45
Figure 108143198-A0305-02-0085-33
<210> 22
<211> 645
<212> DNA
<213> 人工
<220>
<223> 17D1人源化抗體或17D1-YTE抗體LC DNA
<400> 22
Figure 108143198-A0305-02-0085-48
<210> 23
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<221> misc_feature
<222> (7)..(7)
<223> 抗體HCDR2，其中Xaa可以為任何胺基酸，視需要地為D或E
<400> 23
Figure 108143198-A0305-02-0086-34
<210> 24
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<221> misc_feature
<222> (2)..(2)
<223> 抗體LCDR3，其中Xaa可以為任何胺基酸，視需要地為Q或N
<400> 24
Figure 108143198-A0305-02-0086-35
<210> 25
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 信號肽序列
<400> 25
Figure 108143198-A0305-02-0086-36

Claims (22)

  1. 一種結合IL-23P19的抗體或其抗原結合片段，其包含重鏈可變區的3個互補決定區HCDR1、HCDR2和HCDR3，以及輕鏈可變區的3個互補決定區LCDR1、LCDR2和LCDR3，其中根據AbM規則確定，HCDR1由SEQ ID NO：1所示的胺基酸序列組成，HCDR2由SEQ ID NO：3所示的胺基酸序列組成，HCDR3由SEQ ID NO：4所示的胺基酸序列組成，LCDR1由SEQ ID NO：5所示的胺基酸序列組成，LCDR2由SEQ ID NO：6所示的胺基酸序列組成，且LCDR3由SEQ ID NO：8所示的胺基酸序列組成。
  2. 如申請專利範圍第1項所述的抗體或其抗原結合片段，其包含輕鏈可變區和/或重鏈可變區，其中，重鏈可變區包含SEQ ID NO：10的胺基酸序列或由其組成；和輕鏈可變區包含SEQ ID NO：12的胺基酸序列或由其組成。
  3. 如申請專利範圍第1項所述的抗體或其抗原結合片段，其包含由SEQ ID NO：10所示的胺基酸序列的重鏈可變區，和含有SEQ ID NO：12所示的胺基酸序列的輕鏈可變區。
  4. 如申請專利範圍第1項所述的抗體或其抗原結合片段，其包含(a)重鏈其包含SEQ ID NO：14的胺基酸序列或由其組成和(b)輕鏈其包含與選自SEQ ID NO：17的胺基酸序列或由其組成； 或者(a)重鏈，其包含選自SEQ ID NO：15的胺基酸序列或由其組成；和(b)輕鏈，其包含選自SEQ ID NO：17的胺基酸序列或由其組成。
  5. 如申請專利範圍第1項所述的結合IL-23p19的抗體或其抗原結合片段，其具有以下一個或多個特性：(i)以kD小於或等於1.75nM的親和力與IL-23p19結合；(ii)顯示與17D1嵌合抗體、17D1人源化抗體及17D1-YTE抗體的任一抗體對IL-23p19相同或相似的結合親和力和/或特異性；(iii)競爭性抑制17D1嵌合抗體、17D1人源化抗體及17D1-YTE抗體與IL-23p19的結合；(iv)與17D1嵌合抗體、17D1人源化抗體及17D1-YTE抗體的任一抗體結合相同或重疊的表位；(v)與17D1嵌合抗體、17D1人源化抗體及17D1-YTE抗體的任一抗體競爭結合IL-23p19；(vi)具有17D1嵌合抗體、17D1人源化抗體及17D1-YTE抗體的任一抗體分子的一個或多個生物學特性。
  6. 如申請專利範圍第1項所述的結合IL-23p19的抗體或其抗原結合片段，其中所述抗體是IgG1形式或IgG2形式或IgG4形式的抗體或抗原結合片段。
  7. 如申請專利範圍第1項所述的結合IL-23p19的抗體或其抗原結合片段，其中所述抗體是單株抗體。
  8. 如申請專利範圍第1項所述的結合IL-23p19的抗體或其抗原結合片段，其中所述抗體是人源化的抗體或人抗體或嵌合抗體。
  9. 如申請專利範圍第1項所述的抗體或其抗原結合片段，其中所述抗原結合片段是選自以下的抗體片段：Fab、Fab’、Fab’-SH、Fv、scFv、(Fab’)2、單結構域抗體、雙抗體(dAb)或線性抗體。
  10. 如申請專利範圍第1項所述的抗體或其抗原結合片段，其中所述抗體為雙特異性，所述雙特異性抗體分子與IL-23p19和TNFα或IL-17A或IL-17F結合。
  11. 一種分離的核酸，其編碼申請專利範圍第1至10項中任一項所述的結合IL-23p19的抗體或其抗原結合片段。
  12. 一種包含申請專利範圍第11項所述的核酸的載體。
  13. 一種包含申請專利範圍第11項所述的核酸或申請專利範圍第12項所述的載體的宿主細胞，其中，所述宿主細胞是293細胞或CHO細胞。
  14. 一種製備結合IL-23p19的抗體或其抗原結合片段的方法，所述方法包括在適於表達編碼申請專利範圍第1至10項中任一項所述的結合IL-23p19的抗體或其抗原結合片段的核酸的條件下培養申請專利範圍第13項所述的宿主細胞，視需要地分離所述抗體或其抗原結合片段，視需要地所述方法還包括從所述宿主細胞回收所述結合IL-23p19的抗體或其抗原結合片段。
  15. 一種免疫綴合物，其包含申請專利範圍第1至10項中任一項所述的結合IL-23p19的抗體或其抗原結合片段和其它物質。
  16. 一種醫藥組成物，其包含申請專利範圍第1至10項中任一項所述的結合IL-23p19的抗體或其抗原結合片段或申請專利範圍第15項所述的免疫綴合物和藥用輔料。
  17. 如申請專利範圍第16項所述的醫藥組成物，其還包含一種或多種其它治療劑。
  18. 一種組合產品，其包含申請專利範圍第1至10項中任一項所述的結合IL-23p19的抗體或其抗原結合片段或申請專利範圍第15項所述的免疫綴合物，以及一種或多種其它治療劑。
  19. 一種申請專利範圍第1至10項中任一項所述的結合IL-23p19的抗體或其抗原結合片段、或申請專利範圍第15項所述的免疫綴合物在製備醫藥組成物或組合產品中的用途，所述醫藥組成物或組合產品用於在受試者中介導ADCC或激活效應T細胞或激活NF-kappaB信號通路或消除調節T細胞。
  20. 一種申請專利範圍第1至10項中任一項所述的結合IL-23p19的抗體或其抗原結合片段、或申請專利範圍第15項所述的免疫綴合物在製備醫藥組成物或組合產品中的用途，所述醫藥組成物或組合產品用於預防或治療受試者IL-23相關疾病。
  21. 如申請專利範圍第20所述的用途，其中所述醫藥組成物或組合產品與一種或多種療法聯合施用。
  22. 一種檢測樣品中IL-23p19的方法，所述方法包括(a)將樣品與申請專利範圍第1至10項中任一項所述的任何結合IL-23p19的抗體或其抗原結合片段接觸；和 (b)檢測結合IL-23p19的抗體或其抗原結合片段與IL-23p19間的複合物的形成；視需要地，結合IL-23p19的抗體是被可檢測地標記的。
TW108143198A 2018-11-27 2019-11-27 抗IL-23p19抗體及其用途 TWI779253B (zh)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201811424552 2018-11-27
CN201811424552.X 2018-11-27

Publications (2)

Publication Number Publication Date
TW202027791A TW202027791A (zh) 2020-08-01
TWI779253B true TWI779253B (zh) 2022-10-01

Family

ID=70854104

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
TW108143198A TWI779253B (zh) 2018-11-27 2019-11-27 抗IL-23p19抗體及其用途

Country Status (8)

Country Link
EP (1) EP3904382A4 (zh)
JP (1) JP7517999B2 (zh)
KR (1) KR20210096559A (zh)
CN (1) CN112334483B (zh)
AU (2) AU2019386021B2 (zh)
CA (1) CA3101670C (zh)
TW (1) TWI779253B (zh)
WO (1) WO2020108530A1 (zh)

Families Citing this family (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2023525825A (ja) * 2020-05-13 2023-06-19 イノベント バイオロジクス（スーチョウ）カンパニー，リミティド 抗ＩＬ－２３ｐ１９抗体を含む製剤、その調製方法および使用
WO2021248048A2 (en) * 2020-06-05 2021-12-09 Development Center For Biotechnology Antibody-drug conjugates containing an anti-mesothelin antibody and uses thereof
CN111718414B (zh) * 2020-06-12 2021-03-02 江苏荃信生物医药有限公司 抗人白介素23单克隆抗体及其应用
WO2022041390A1 (zh) * 2020-08-28 2022-03-03 江苏荃信生物医药股份有限公司 包含高浓度抗人白介素23单克隆抗体的低粘度液体制剂及其制备方法
CN115785267B (zh) * 2021-09-10 2023-12-15 三优生物医药(上海)有限公司 一种靶向IL-23p19的抗体或其抗原结合片段及其应用
EP4410841A1 (en) * 2021-09-30 2024-08-07 Jiangsu Hengrui Pharmaceuticals Co., Ltd. Anti-il23 antibody fusion protein and uses thereof

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8513389B2 (en) * 2007-02-23 2013-08-20 Merck Sharp & Dohme Corp. Engineered anti-IL-23p19 antibodies
EP3326649A1 (en) * 2012-05-03 2018-05-30 Boehringer Ingelheim International GmbH Anti-il-23p19 antibodies

Family Cites Families (22)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4737456A (en) 1985-05-09 1988-04-12 Syntex (U.S.A.) Inc. Reducing interference in ligand-receptor binding assays
DE3883899T3 (de) 1987-03-18 1999-04-22 Sb2, Inc., Danville, Calif. Geänderte antikörper.
US7018809B1 (en) 1991-09-19 2006-03-28 Genentech, Inc. Expression of functional antibody fragments
WO1994029351A2 (en) 1993-06-16 1994-12-22 Celltech Limited Antibodies
US5789199A (en) 1994-11-03 1998-08-04 Genentech, Inc. Process for bacterial production of polypeptides
US5840523A (en) 1995-03-01 1998-11-24 Genetech, Inc. Methods and compositions for secretion of heterologous polypeptides
US6267958B1 (en) 1995-07-27 2001-07-31 Genentech, Inc. Protein formulation
US6171586B1 (en) 1997-06-13 2001-01-09 Genentech, Inc. Antibody formulation
JP2002510481A (ja) 1998-04-02 2002-04-09 ジェネンテック・インコーポレーテッド 抗体変異体及びその断片
US6194551B1 (en) 1998-04-02 2001-02-27 Genentech, Inc. Polypeptide variants
US6326482B1 (en) 1999-04-23 2001-12-04 Genentech, Inc. SH2 domain-containing peptides
PL209786B1 (pl) 1999-01-15 2011-10-31 Genentech Inc Przeciwciało zawierające wariant regionu Fc ludzkiej IgG1, przeciwciało wiążące czynnik wzrostu śródbłonka naczyń oraz immunoadhezyna
US6737056B1 (en) 1999-01-15 2004-05-18 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
BRPI0316779B1 (pt) 2002-12-16 2020-04-28 Genentech Inc anticorpo humanizado que liga cd20 humano, composição, artigo manufaturado, método de indução da apoptose, método de tratamento de câncer cd20 positivo, métodos de tratamento de doenças autoimunes, ácidos nucléicos isolados, vetores de expressão, células hospedeiras, método para a produção de um anticorpo 2h7 humanizado, polipeptídeo isolado, formulação líquida, método de tratamento de artrite reumatóide (ra) e anticorpos de ligação de cd20 humanizados
AU2005286607B2 (en) 2004-09-23 2011-01-27 Genentech, Inc. Cysteine engineered antibodies and conjugates
JO3000B1 (ar) 2004-10-20 2016-09-05 Genentech Inc مركبات أجسام مضادة .
US7491391B2 (en) * 2005-06-30 2009-02-17 Centocor, Inc. Anti-IL-23 antibodies, compositions, methods and uses
US20070142838A1 (en) * 2005-12-19 2007-06-21 Christopher Jordan Surgical suture staple and attachment device for securing a soft tissue to a bone
ES2622602T3 (es) * 2005-12-29 2017-07-06 Janssen Biotech, Inc. Anticuerpos anti-IL-23 humanos, composiciones, procedimientos y usos
AR065420A1 (es) * 2007-02-23 2009-06-03 Schering Corp Anticuerpos anti-il-23 p19 de ingenieria
TWI609882B (zh) * 2012-05-22 2018-01-01 必治妥美雅史谷比公司 雙特異性抗體及其使用方法
KR20240065333A (ko) * 2016-11-16 2024-05-14 얀센 바이오테크 인코포레이티드 항-il23 특이적 항체로 건선을 치료하는 방법

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8513389B2 (en) * 2007-02-23 2013-08-20 Merck Sharp & Dohme Corp. Engineered anti-IL-23p19 antibodies
EP3326649A1 (en) * 2012-05-03 2018-05-30 Boehringer Ingelheim International GmbH Anti-il-23p19 antibodies

Also Published As

Publication number Publication date
EP3904382A4 (en) 2022-07-13
US20210115130A1 (en) 2021-04-22
AU2019386021B2 (en) 2024-02-15
TW202027791A (zh) 2020-08-01
CA3101670A1 (en) 2020-06-04
AU2024200493A1 (en) 2024-02-22
CA3101670C (en) 2024-02-06
CN112334483A (zh) 2021-02-05
JP2022505001A (ja) 2022-01-14
EP3904382A1 (en) 2021-11-03
JP7517999B2 (ja) 2024-07-17
CN112334483B (zh) 2022-05-10
AU2019386021A1 (en) 2020-12-17
WO2020108530A1 (zh) 2020-06-04
KR20210096559A (ko) 2021-08-05

Similar Documents

Publication Publication Date Title
TWI779253B (zh) 抗IL-23p19抗體及其用途
TWI796328B (zh) Ｂ７-ｈ３抗體、其抗原結合片段及其醫藥用途
RU2736732C2 (ru) Антитела к альфа-рецептору собачьего интерлейкина-4
JP6865826B2 (ja) インターロイキン１７ａを標的とする抗体、その製造方法及び応用
TW202332696A (zh) 治療發炎症狀的方法
CN102178953A (zh) 白介素-17f抗体及其它il-17f信号传递拮抗剂和它们的用途
JPH07505767A (ja) ヒトインターロイキン−５に対するヒト化モノクローナル抗体の設計，クローン化および発現
TWI747043B (zh) Btla同效劑抗體及其用途
JP7473531B2 (ja) 抗ｃｘｃｒ２抗体及びその使用
TWI756621B (zh) 新型雙特異性抗體分子以及同時結合pd-l1和lag-3的雙特異性抗體
JP2022502024A (ja) 抗ヒトｃｄ４５ｒｃ抗体及びその使用
JP2023524515A (ja) インターロイキン－３４を標的とする化合物及び方法
AU2021209746A1 (en) Anti-ANGPTL3 antibody and use thereof
CA3194457A1 (en) Caninized antibodies to canine interleukin-31 receptor alpha
TWI743469B (zh) 抗ｇｉｔｒ抗體及其用途
US20230159632A1 (en) Anti-il-17a antibody and use thereof
KR20240099435A (ko) 인간 종양 괴사 인자 알파 항체
US12098195B2 (en) Anti-IL-23p19 antibody and use thereof in treating diseases
JP2022511062A (ja) ヒト化抗ｉｌ１７ｂｒ抗体
WO2023116759A9 (zh) 抗bcma抗体及其用途
CN114867526A (zh) 犬白介素-4受体α的抗体

Legal Events

Date Code Title Description
GD4A Issue of patent certificate for granted invention patent