TWI772324B - 基於線蟲嗅覺的對氣味物質之趨性行動之評價方法、以及用於該評價方法的培養皿及行動評價系統 - Google Patents

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Abstract

[課題] 本發明係提供一種，基於線蟲嗅覺的對氣味物質之趨性行動之評價方法及用於該評價方法的培養皿及行動評價系統。 　　[解決手段] 一種方法及適合於該方法的培養皿或趨性行動評價系統，該方法係評價線蟲對於被檢試料之氣味之趨性行動的方法，其係含有： 　　a）提供在底面被配置有被檢試料之培養皿，該培養皿係在從被檢試料遠離1cm～3cm的底面之領域或部位，配置線蟲；和 　　b）在被檢試料或線蟲之中較晚者被配置起起3～15分鐘後，觀察線蟲在底面上之配置； 　　c）根據所觀察到的線蟲之配置，來評價其對被檢試料是呈現誘引行動還是呈現忌避行動。

Description

基於線蟲嗅覺的對氣味物質之趨性行動之評價方法、以及用於該評價方法的培養皿及行動評價系統
[0002] 本發明係有關於，基於線蟲嗅覺的對氣味物質之趨性行動之評價方法、以及用於該評價方法的培養皿及行動評價系統。
[0003] 線蟲，係在生物研究中作為模式生物而在世界中被廣泛飼育、研究的普遍的生物，具有容易飼育的特徵。線蟲的神經是在細胞層級上已經全部解明，行動分析的研究也日益興盛。 　　[0004] 在線蟲的行動評價時，是使用9cm的圓形培養皿。這是因為，為了確保較長的線蟲的移動距離，但為了維持線蟲的行動評價的精確度，這是不可或缺的。本發明人們係證實了，若利用線蟲的嗅覺，則可高靈敏度且高精確度地偵測癌症（非專利文獻1及專利文獻1）。 　　[0005] 如上述，先前，為了評價線蟲的透過嗅覺之趨性行動，而在培養皿上將被檢物質與線蟲區隔一定以上距離而配置，觀察培養皿上的線蟲的配置來作為趨性行動。線蟲的趨性行動，係具有搖擺，並不一定是對被驗物質以最短距離而移動，而是一面迂迴一面呈現趨性，因此為了提高趨性行動的評價結果的精確度，係和一般的行動評價同樣地，只評價已移動一定以上之長距離的線蟲，此一手法被認為是必要的。此外，氣味係可傳達到遠處，因此可將被檢試料與線蟲之距離分得很開而配置來進行試驗，被認為被檢試料與線蟲之距離分得越開就越能正確地評價趨性行動，因此相信氣味是適合於將被檢試料與線蟲之距離分得很開的評價系統。因此，即使透過嗅覺的趨性行動之評價中，仍是以使用一般的行動評價之系統為前提。 　　[0006] 順便一提，為了促使線蟲移動達一定以上之長距離，必須要跨越一定以上之長時間而容許線蟲移動。另一方面，若跨越一定以上之長時間而刺激嗅覺，線蟲的嗅覺會發生敏化而開始隨機運動，因此會變成無法評價嗅覺所致之趨性行動。因此，在評價線蟲的透過嗅覺之趨性行動之際，係使用殺線蟲劑（例如疊氮化鈉等劇毒），停止呈現趨性行動之線蟲的運動，需要這些動作（非專利文獻1及專利文獻1)。
[先前技術文獻] [專利文獻]
[專利文獻1]WO2015/88039
[非專利文獻]
[非專利文獻1]Hirotsu T. et al., PLOS ONE, 10(3): e0118699, 2015
本發明係提供一種，基於線蟲嗅覺的對氣味物質之趨性行動之評價方法、以及用於該評價方法的培養皿及行動評價系統。
本發明人們係發現，與一般的行動評價不同，在透過嗅覺的趨性評價時，若將被檢試料與線蟲配置成近距離，則出乎意料地可比先前更高精確度地評價趨性行動。本發明人們又基於此一發現，發明了適合於評價線蟲的透過嗅覺之趨性行動的培養皿。本發明係基於這些發現及發明而成者。
本發明中，係提供以下的發明。
(1)一種培養皿，係為具有略方形形狀(例如長度方向為3~6cm，橫向方向為1~3cm或3cm~6cm的略方形 形狀)之底面之培養皿，其中，底面係在長度方向上從單側的末端往另一末端而被區隔成第一領域、第二領域及第三領域之至少3個領域，第二領域是被配置在第一領域與第三領域之交界。
(2)上記(1)所記載之培養皿，其中，區隔係為，相對於底面之上面的凹凸形狀或印刷，或是相對於下面的凹凸形狀或印刷所致之區隔。
(3)如上記(1)或(2)所記載之培養皿，其中，具有用來區別第一領域與第三領域的標示。
(4)一種多格盤，係由上記(1)~(3)之任一項所記載之培養皿做複數連結而成。
(5)一種方法，係評價線蟲對於被檢試料之氣味之趨性行動的方法，其係含有：a)提供被配置有被檢試料之培養皿，該培養皿係在從被檢試料遠離1cm~3cm的底面之領域或部位，配置線蟲；和b)在被檢試料與線蟲被配置在培養皿起3~15分鐘後，觀察線蟲在底面上之配置；c)根據所觀察到的線蟲之配置，來評價其對被檢試料是呈現誘引行動還是呈現忌避行動。
(6)如上記(5)所記載之方法，其中，被檢試料係為，從疑似癌症患者之對象所取得的試料。
(7)如上記(6)所記載之方法，其中，被檢試料係為，從疑似癌症患者之對象所取得的尿液。
(8)如上記(6)或(7)所記載之方法，其中，還含有：於c)中若線蟲對被檢試料呈現誘引行動的情況下，則判定為被檢試料中含有癌症由來的誘引物質，又，若線蟲對被檢試料呈現忌避行動的情況下，則判定為被檢試料中不含癌症由來的誘引物質。
(9)如上記(5)~(8)之任一項所記載之方法，其中，不使用殺線蟲劑。
(10)如上記(5)~(9)之任一項所記載之方法，其中，於a)中係使用：如上記(1)~(3)之任一項所記載之培養皿或上記(4)所記載之多格盤中所包含之任1種培養皿。
本發明係還提供了，對於伴隨上記發明所致之培養皿的小型化，潛入培養皿內壁與固體培養基之空隙的線蟲數會增多，可觀察的線蟲數會隨時間經過而減少的新課題的解決手段。
關於這點，本發明人們係發現，在固體培養基形成線蟲之厚度以上的面狀之凹陷，以蓋子將凹陷完全覆蓋，一旦在該凹陷內進行基於嗅覺的趨性行動評價，則線蟲就無法從行動觀察面逃出，在行動評價時可大幅增加可觀察的線蟲數。本發明係基於這些發現而成者。
(1A)一種趨性行動評價系統，係具有略方形形狀(例如長度方向為3~6cm，橫向方向為1~3cm或3cm~6cm的略方形形狀)之底面與圍繞底面之周圍之側壁的線蟲之趨性行動評價系統，其中，底面係藉由標誌而 在長度方向上從單側的末端往另一末端而被區隔成第一領域、第二領域及第三領域之至少3個領域，第二領域是被配置在第一領域與第三領域之交界。
(2A)如上記(1A)所記載之趨性行動評價系統，其中，標誌係為，相對於底面之上面的凹凸形狀或印刷，或是相對於下面的凹凸形狀或印刷所成之標誌。
(3A)如上記(1A)或(2A)所記載之趨性行動評價系統，其中，具有用來區別第一領域與第三領域的標示。
(4A)一種多格盤，係由上記(1A)~(3A)之任一項所記載之趨性行動評價系統做複數連結而成。
(5A)一種線蟲之趨性行動評價系統，其係具備：培養皿，係為略方形形狀(例如長度方向為3~6cm，橫向方向為1~3cm或3cm~6cm)，且被導入固體培養基，其表面具有深度為線蟲之厚度以上且為2mm以下的略方形面形狀之凹陷；和從上部覆蓋前記凹陷的板子。
(6A)如上記(5A)所記載之趨性行動評價系統，其中，培養皿之底面的對應於前記凹陷之部位，係藉由標誌而在長度方向上從單側的末端往另一末端而被區隔成第一領域、第二領域及第三領域之至少3個領域，第二領域是被配置在第一領域與第三領域之交界。
(7A)如上記(5A)所記載之趨性行動評價系統，其中，從上部覆蓋前記凹陷的板子的對應於前記凹陷之部位，係藉由標誌而在長度方向上從單側的末端往另一末端 而被區隔成第一領域、第二領域及第三領域之至少3個領域，第二領域是被配置在第一領域與第三領域之交界。
(8A)如上記(6A)或(7A)所記載之趨性行動評價系統，其中，標誌係為，相對於底面之上面的凹凸形狀或印刷，或是相對於下面的凹凸形狀或印刷所成之標誌。
(9A)如上記(1A)~(8A)之任一項所記載之線蟲之趨性行動評價系統，其中，第一領域與第三領域係銜接，第二領域係為封閉之形狀。
(10A)如上記(1A)~(4A)之任一項所記載之線蟲之趨性行動評價系統，其中，具備蓋子，其係在蓋子蓋上時，在對向於前記底面的面上，具備被檢試料配置部位。
(11A)如上記(1A)~(10A)之任一項所記載之線蟲之趨性行動評價系統，其中，在第二領域上配置線蟲。
(12A)如上記(1A)~(11A)之任一項所記載之線蟲之趨性行動評價系統，其中，在第一領域或第三領域配置被檢試料。
(13A)一種方法，係評價線蟲對於被檢試料之氣味之趨性行動的方法，其係含有：a)提供被配置有被檢試料之培養皿，該培養皿係在從被檢試料遠離1cm~3cm的底面之領域或部位，配置線蟲；和b)在被檢試料與線蟲被配置在培養皿起3~15分鐘 後，觀察線蟲在底面上之配置；c)根據所觀察到的線蟲之配置，來評價其對被檢試料是呈現誘引行動還是呈現忌避行動。
(14A)如上記(13A)所記載之方法，其中，被檢試料係為，從疑似癌症患者之對象所取得的試料。
(15A)如上記(14A)所記載之方法，其中，被檢試料係為，從疑似癌症患者之對象所取得的尿液。
(16A)如上記(14A)或(15A)所記載之方法，其中，於c)中若線蟲對被檢試料呈現誘引行動的情況下，則判定為被檢試料中含有癌症由來的誘引物質，又，若線蟲對被檢試料呈現忌避行動的情況下，則判定為被檢試料中不含癌症由來的誘引物質。
(17A)如上記(13A)~(16A)之任一項所記載之方法，其中，不使用殺線蟲劑。
(18A)如上記(13A)~(17A)之任一項所記載之方法，其中，於a)中，係使用：如上記(1A)~(3A)之任一項所記載之趨性行動評價系統或者如上記(4A)所記載之多格盤、或是如上記(5A)~(12A)之任一項所記載之趨性行動評價系統之任1者。
(19A)如上記(13A)~(18A)之任一項所記載之方法，其中，於a)中係使用如以下之培養皿：(i)一種培養皿，係為具有略方形形狀(例如長度方向為3~6cm，橫向方向為1~3cm或3cm~6cm的略方形形狀)之底面之培養皿，其中，底面係在長度方向上從 單側的末端往另一末端而被區隔成第一領域、第二領域及第三領域之至少3個領域，第二領域是被配置在第一領域與第三領域之交界；或是(ii)一種線蟲之趨性行動評價系統，其係具備：培養皿，係為略方形形狀(例如長度方向為3~6cm，橫向方向為1~3cm或3cm~6cm)，且被導入固體培養基，其表面具有深度為線蟲之厚度以上且為2mm以下的略方形面形狀之凹陷；和從上部覆蓋前記凹陷的板子；或(iii)上記(i)之培養皿或上記(ii)之趨性行動評價系統做複數連結而成之多格盤中所包含之任1者。
若依據本發明，則具有可提升基於線蟲嗅覺的趨性行動之評價的精確度，同時可大幅縮短測定時間之優點及可以不必使用疊氮化鈉等之劇毒之優點。
[發明的具體說明] 　　[0017] 本說明書中，所謂「線蟲」，係意味著秀麗隱桿線蟲（Caenorhabditis elegans）。線蟲，係在生物研究中作為模式生物而在世界中被廣泛飼育、研究的普遍的生物，具有容易飼育、嗅覺靈敏等特徵。 　　[0018] 本說明書中，所謂「癌症」，係意味著：胃癌、直腸結腸癌、食道癌、胰臟癌、前列腺癌、膽管癌、肺癌、血癌、白血病、淋巴腫等之癌腫。 　　[0019] 本說明書中，所謂「對象」，係意味著哺乳動物，例如人類。 　　[0020] 本說明書中，所謂「趨性行動」，係意味著誘引行動或忌避行動。所謂誘引行動，係意味著縮短與某種物質的物理距離的行動，所謂忌避行動，係意味著增長與某種物質的物理距離的行動。誘發誘引行動的物質稱作誘引物質，誘發忌避行動的物質稱作忌避物質。 　　[0021] 線蟲（C. elegans）係具有，藉由嗅覺而對誘引物質呈現誘引，從忌避物質呈現忌避的性質。對誘引物質呈現誘引的行動稱作誘引行動，從忌避物質呈現忌避的行動稱作忌避行動。又，誘引行動與忌避行動合稱為趨性行動。 　　[0022] 若依據本發明，則可提供適合於皮嫁線蟲的透過嗅覺之趨性行動的行動評價系統（例如下記實施形態所示的培養皿及因應需要的其之蓋子）。培養皿及蓋子，係可為塑膠等之樹脂製，可為透明的樹脂製。以下，按照每一實施形態來說明本發明。此外，以下所謂區隔線之表現，係並非將領域做實體性區隔，而是以標誌而將領域間做區隔的意思。線蟲係在行動評價時，可跨越區隔線而移動至其他領域。 　　[0023] 第一實施形態 　　參照圖1A及1B說明本發明的第一實施形態。 　　[0024] 本實施形態中的培養皿100，係如圖1A所示，是具有略方形形狀之底面的培養皿。培養皿100的底面，係具有至少2個區隔線25及35，在長度方向從單側的末端往另一末端，將底面的領域區隔成至少3個領域。藉此，底面係被區隔成第一領域20、第二領域30及第三領域40之至少3個領域，尤其是第二領域30是被配置在第一領域20與第三領域40之交界。此外，培養皿100，係有側壁是以圍繞底面之周圍的方式而往上方延伸。又，如圖1I所示，培養皿100的底面內面100a，係對側壁呈略垂直。又，培養皿100的底面的內面100a，係對底面的外面100b呈略平行。 　　[0025] 第一實施形態的培養皿100係可為：底面是具有略方形之形狀的培養皿，底面的長度方向之長度係為3cm～6cm，橫向方向的長度係為1cm～3cm或3cm～6cm之範圍的長度。長度方向之長度，理想係為4cm～6cm，較理想係為4.5cm～5.5cm，更理想係為5cm。橫向方向之長度，理想係為1.5cm～2.5cm，較理想係為2cm。或者，橫向方向之長度，理想係為3.5cm～5.5cm，較理想係為4cm～5cm。然後，第一實施形態的培養皿100係可為：底面具有略方形的形狀，底面的長度方向之長度係為4cm～6cm，理想係為4.5cm～5.5cm，且底面的橫向方向之長度係為1.5cm～2.5cm或3.5cm～5.5cm。第一實施形態的培養皿100係亦可為，底面具有略方形的形狀，長度方向之長度係為4.5cm～5.5cm，橫向方向之長度係為4.5cm～5.5cm。又，第一實施形態的培養皿100係亦可為，高度係為1cm～3cm。 　　[0026] 第二領域30，係亦可將第一領域20與第三領域40分離配置。第二領域30，係如圖1A所示，理想係為，第一領域20與第三領域40是夾著第二領域30而呈對向配置。 　　[0027] 第二領域30係可為，底面的總面積的30%以下、25%以下、20%以下、15%以下、10%以下、或5%以下。 　　[0028] 區隔，係只要能夠讓人類或機械，能夠分別辦別上記至少3個領域即可，無論哪種方式被區隔皆可。尤其是，區隔，係只要能夠視覺性地看出各領域的交界即可，而不要完全妨礙線蟲的領域間之移動。區隔，係可讓線蟲在領域間做移動。區隔雖無特別限定，但例如，可藉由對底面的印刷或底面的凹凸形狀而為之。對底面的印刷或底面的凹凸形狀，係可對底面的上面為之，也可對其下面為之。區隔係可為例如圖1A所示，藉由區隔線25及區隔線35等之作為交界線的區隔線來為之。區隔線係雖然不一定要是直線，但理想而言係可設計成直線。區隔線係亦可不一定要有凹凸形狀。 　　[0029] 所謂第一領域20與第三領域40，係亦可具有能夠用來區別誰是第一領域而誰是第三領域的標示。標示係可為○或×等之記號，也可以是文字，也可以是某種印記。為了區別第一領域與第三領域，培養皿100係亦可具有標籤90。第一領域與第三領域的面積亦可為不同，亦可利用面積為不同這件事情來區別其各者。 　　[0030] 標籤90係可為了例如用來一一區別複數個培養皿100而被使用。標籤90係為特別限定，但可附上例如條碼或二維條碼等之標示，在前記標示中可以含有各個培養皿100的管理資訊。 　　[0031] 培養皿100，係如圖1B所示在底面的緣部具有側壁，具備容器的形狀。 　　[0032] 第一實施形態的培養皿的使用方法 　　第一實施形態的培養皿100，係適合於評價線蟲的透過嗅覺之趨性行動。以下說明，使用第一實施形態的培養皿100，來評價線蟲的透過嗅覺之趨性行動的方法。 　　[0033] 第一實施形態的培養皿100，係可在內部加入線蟲所需之固體培養基。固體培養基係例如為洋菜培養基，只要是當業者都可以作成適合線蟲生存的培養基等之培養基，並添加至培養皿中。 　　線蟲60係可播種在第二領域30。線蟲係亦可被播種至第二領域30的全面，亦可只被播種在第二領域30的一部分。被檢試料，係可配置在第一領域20或第三領域40，且為例如，距離線蟲所被播種之領域1cm～3cm遠的位置。 　　[0034] 已被配置有被檢試料的第一實施形態的培養皿100中，一旦播種線蟲，則線蟲係在被檢試料是誘引物質的情況下，會對被檢試料呈現誘引行動，而往靠近被檢試料的場所移動，但若被檢試料是忌避物質的情況下，則會對被檢試料呈現忌避行動，而往遠離被檢試料的場所移動。因此，藉由觀察線蟲移動到的場所（根據所被觀察到的線蟲之配置），就可判別被檢試料是誘引物質還是忌避物質。觀察係例如，可以目視或顯微鏡來進行。觀察係亦可將線蟲的配置資訊予以影像化，使用影像來進行。 　　[0035] 第一實施形態的變形例 　　關於第一實施形態的變形例100A，參照圖1C而說明如下。第一實施形態的變形例100A，係底面中的第一、第二及第三領域的區隔圖案（區隔形狀）不同以外，其餘構成要素及其使用法都和圖1A及1B所示的第一實施形態的培養皿100相同。因此，以下只說明區隔圖案，與第一實施形態的培養皿100相同部分係標示相同符號而省略說明。 　　[0036] 在第一實施形態的變形例100A中，第二領域30A是被配置在第一領域20A與第三領域40A之交界這點，係和第一實施形態的培養皿100相同。可是，在第一實施形態的變形例100A中，第一領域20A與第三領域40A係為銜接這點，是和第一實施形態的培養皿100不同。 　　[0037] 第二領域30A係若為封閉的形狀，則亦可有各種形狀。在圖1C中雖然是被區隔成略圓形狀，但不限於圓形狀，亦可為略多角形形狀（例如略4方形、略6方形、或略8方形等）。 　　[0038] 對第一實施形態的培養皿100及其變形例100A的蓋子150 　　第一實施形態的培養皿100及其變形例100A，係亦可具備蓋子150。以下關於蓋子150，參照圖1D及1E來做說明。 　　[0039] 如圖1D及1E所示，蓋子150係為覆蓋培養皿100之上面的蓋子。蓋子150的形狀，係只要是能夠覆蓋培養皿100之上面的蓋子即可，其形狀不拘。蓋子150，係覆蓋培養皿100之上面，且能夠遮斷培養皿100內部與外部的空氣之流動的蓋子，這在提高基於嗅覺的行動評價之精確度的觀點上，係為理想。 　　[0040] 標籤90係亦可被具備在蓋子150。 　　[0041] 蓋子150的使用法 　　蓋子150，係可在配置了被檢試料與線蟲之後，就蓋住培養皿。藉此，可防止外氣的影響，又，可使氣味有效地封閉在培養皿內部。 　　[0042] 蓋子150的變形例150A 　　關於蓋子150的變形例150A，參照圖1D及1F而說明如下。蓋子150A，係如圖1F所示，除了具備被檢試料配置部位151以外，其餘構成要素及其使用法係和蓋子150相同。因此，以下只說明被檢試料配置部位151，與蓋子150相同部分係標示相同符號而省略說明。 　　[0043] 如圖1F所示，蓋子150A係在蓋子蓋上時，在對向於培養皿底面的面上，具備被檢試料配置部位151。被檢試料配置部位151係被形成在，從蓋子150A之長度方向中心部起算遠離1～3cm的領域。在圖1F中，被檢試料配置部位151係以圓形狀而被圖示，但不限於此，被檢試料配置部位151係亦可為略圓形狀、略線形狀或略四方形狀。 　　[0044] 在某個態樣下，被檢試料配置部位151係具有：被檢試料配置部位151和其以外之領域152的交界153。交界153係可藉由印刷或凹凸形狀而被形成。 　　[0045] 在某個態樣下，在被檢試料配置部位151與其以外之領域152的交界153上，具有落差。在某個態樣下，亦可如圖1G所示，被檢試料配置部位151，係比其以外之領域152，在蓋子蓋上時朝向培養皿底面而突出，在某個態樣下，亦可如圖1H所示，被檢試料配置部位151係在蓋子蓋上時比領域152而相對於培養皿底面呈凹陷。如圖1G所示，被檢試料配置部位151，係在蓋子蓋上時比其以外之領域152而朝向培養皿底面突出的情況下，則被檢試料配置部位151的素材，係亦可與領域152或蓋子150A的素材相同，亦可為不同。 　　[0046] 在某個態樣下，在蓋子150A中，在蓋子蓋上時，在對向於培養皿底面的面中，被檢試料配置部位151，係具有與其以外之領域152不同的親水性度。 　　在某個態樣下，被檢試料配置部位151係具有親水性表面，其以外之領域152具有疏水性表面。藉此，水性的被檢試料係可被正確地配置在被檢試料配置部位151上。在某個態樣下，被檢試料配置部位151係具有疏水性表面，其以外之領域152具有親水性表面。藉此，油性的被檢試料係可被正確地配置在被檢試料配置部位151上。 　　[0047] 蓋子的變形例150A的使用方法 　　蓋子150A，係可在配置了被檢試料與線蟲之後，就蓋住培養皿。藉此，可防止外氣的影響，又，可使氣味有效地封閉在培養皿內部。 　　[0048] 在使用蓋子150A的情況下，可在蓋子150A的被檢試料配置部位151配置被檢試料，可在培養皿配置線蟲。於透過嗅覺的趨性行動之評價中，被檢試料與線蟲係亦可隔著空間而被配置，即使在此情況下，氣味仍會在空中擴散，而可抵達線蟲。又，在蓋子150A的被檢試料配置部位151配置被檢試料，而抵達線蟲的係為氣味成分，因此在趨性行動之中，適合於評價透過嗅覺的部分。尤其是在被檢試料具有強力化學趨性的情況下，適合於評價被檢試料中所含之氣味成分的透過嗅覺之趨性行動。 　　[0049] 關於被檢試料對蓋子150A的配置，係可在蓋子150A的蓋子蓋上時以使對向於培養皿底面的面朝下的狀態，將被檢試料從蓋子之下予以導入，藉此而為之。被檢試料對蓋子150A的配置，係可在蓋子150A的蓋子蓋上時以使對向於培養皿底面的面朝上的狀態，將被檢試料從蓋子之下予以導入，其後，上下翻轉，藉此而為之。 　　[0050] 第二實施形態 　　關於第二實施形態的培養皿200，使用圖2A來做說明。第二實施形態的培養皿200，係底面的區隔圖案為不同以外，其餘係和圖1A及1B所示的第一實施形態的培養皿100相同。因此，與第一實施形態的培養皿100相同部分係標示相同符號而省略說明。 　　[0051] 如圖2A所示，在第二實施形態的培養皿200中，底面係在長度方向上從單側的末端起往另一末端，被區隔成第一領域210、第二領域220、第三領域30、及第四領域40之至少4個領域。與第一實施形態的培養皿100不同，第一領域10係為，在第二實施形態的培養皿200中，再被區隔成第一領域210與第二領域220之2者這點如圖2A所示，在第二實施形態的培養皿200中，藉由線215而區隔出第一領域210與第二領域220。 　　[0052] 在第二實施形態的培養皿200中，被檢試料係可配置在例如，第一領域210或是線215上或其雙方。被檢試料的配置領域係藉由區隔而被表示，在使被檢試料、與線蟲60（被塗布在第三領域30的一部分或全部）之距離為不同的試驗間，可以容易保持成一定。第一領域210與第三領域30係可具有例如：1cm～3cm左右、1cm～2cm左右、或1.5cm～2.5cm左右、1.5cm～2cm左右的距離。 　　[0053] 第二實施形態的變形例200A 　　關於第二實施形態的變形例200A，參照圖2B而說明如下。第二實施形態的變形例200A，係除了底面中的區隔圖案（區隔形狀）為不同以外，其餘構成要素係和圖2A及1B所示的第二實施形態的培養皿200相同。因此，以下只說明區隔圖案，與第二實施形態的培養皿200相同部分係標示相同符號而省略說明。 　　[0054] 在第二實施形態的變形例200A中，第三領域30A是被配置在第二領域220與第四領域40A之交界這點，係和第一實施形態的培養皿100相同。可是，在第二實施形態的變形例200A中，第二領域220與第四領域40A係為銜接這點，是和第二實施形態的培養皿200不同。 　　[0055] 第三領域30A係若為封閉的形狀，則亦可有各種形狀。在圖2B中雖然是被區隔成略圓形狀，但不限於圓形狀，亦可為略多角形形狀（例如略4方形、略6方形、或略8方形等）。 　　[0056] 於上記中，雖然按照每一實施形態來說明本發明的培養皿，但在這些培養皿中，底面係亦可還再被細緻地區隔。區隔，係和上記同樣地區隔，只要能夠讓人類或機械，能夠分別辦別上記至少3個領域即可，無論哪種方式被區隔皆可。 　　[0057] 本發明的多重面板 　　以下參照圖3來說明本發明的多重面板。 　　[0058] 如圖3A所示，本發明的多重面板500係可為，由本發明的第一實施形態的培養皿100做縱或橫地配置而成的集合體。又，如圖3B所示，本發明的多重面板500A係可為，由本發明的第一實施形態的培養皿100做縱橫配置而成的集合體。在本發明的多重面板500或500A中，雖然沒有特別限定，但例如，本發明的第一實施形態的培養皿100係亦可被配置2個～1000個、4個～700個、6個～600個、8個～500個、或10個～300個配置。 　　[0059] 又，在多重面板中，相鄰的第一實施形態的培養皿100彼此係可直接連結，也可隔著間隔物而連結。 　　[0060] 在圖3A及B中，作為培養皿，圖示了使用第一實施形態的培養皿100的例子，但培養皿係亦可為第二實施形態的培養皿200，也可為第一實施形態的變形例100A或第二實施形態的變形例200A。 　　[0061] 本發明的多重面板500或500A，係亦可還具備有蓋子600。藉由蓋子600與各培養皿的側壁，就可期待有效防止各培養皿內的被檢試料滲漏到隔壁的培養皿。蓋子600，係亦可和蓋子150A同樣地具備被檢試料配置部位151。蓋子600的使用法，係如同蓋子150及蓋子150A中所說明，因此省略說明。 　　[0062] 第三實施形態 　　第三實施形態，係對於伴隨培養皿的小型化，潛入培養皿內壁與固體培養基之空隙的線蟲數會增多，可觀察的線蟲數會隨時間經過而減少的新課題，提供其解決手段。第三實施形態，係並非培養皿本身的形狀，而是在對培養皿導入了固體培養基之後所形成的固體培養基表面（上面）的形狀，具有特徵。以下，以圖10～12來說明第三實施形態。 　　[0063] 圖10係為，先前的專利文獻1所記載的評價系統，與本發明的第三實施形態的評價系統做對比的模式圖。先前的評價系統，其播種線蟲的面，係被培養皿的側壁而圍繞於其外周。本發明的第三實施形態的評價系統，係在評價系統的固體培養基面具有面形狀之凹陷，是在該凹陷內評價趨性行動。此外，在觀察線蟲的趨性行動之際，係將該凹陷蓋上蓋子而將線蟲封閉在凹陷內進行觀察，因此該凹陷在本說明書係被稱為「行動觀察面」。 　　[0064] 如圖11所示，在第三實施形態中，固體培養基面610係具有略方形形狀之面狀的凹陷600。略方形形狀之面狀的凹陷600，係具有凹陷的底面600a與凹陷的側面600b。凹陷的底面600a係可為，長度方向之長度係為3cm～6cm，橫向方向之長度係為1cm～3cm或3cm～6cm之範圍的長度。前記凹陷的底面600a的長度方向之長度，理想係為4cm～6cm，較理想係為4.5cm～5.5cm，更理想係為5cm。前記凹陷的底面600a的橫向方向之長度，理想係為1.5cm～2.5cm，較理想係為2cm。或者，橫向方向之長度，理想係為3.5cm～5.5cm，較理想係為4cm～5cm。前記凹陷係又可為，長度方向之長度係為4.5cm～5.5cm，橫向方向之長度係為4.5cm～5.5cm。前記凹陷600之深度（厚度）或凹陷的側面600b之高度，係為線蟲的厚度以上，5mm以下、4mm以下、3mm以下、2mm以下，理想係為1mm以下，較理想係為0.5mm以下，更理想係為0.3mm以下，再更理想係為0.2mm以下，例如0.1mm左右。若設計成行動觀察中所使用的線蟲的厚度+10～50%左右的深度，線蟲的厚度+10～40%左右的深度，線蟲的厚度+10～30%左右的深度，線蟲的厚度+10～20%左右的深度，則可兼顧將線蟲封閉在行動觀察面之目的，與令線蟲在行動觀察面內行動之目的。 　　[0065] 在容易進行顯微鏡觀察的觀點上，凹陷的底面600a係為略平面為佳。如此可以使顯微鏡的焦點保持一定，可容易觀察行動觀察面全體。 　　[0066] 又，在行動觀察時，可將凹陷600以蓋子650完全覆蓋而防止線蟲逃到凹陷600的外部。又，在本發明中，可將凹陷600的深度設成接近線蟲的厚度（例如約0.1mm左右）。藉由如此設計，將凹陷600以覆蓋板650覆蓋時，線蟲就難以逃到凹陷600之外，同時，附著在板子650之內壁650a的線蟲，也可和附著在凹陷600之底面600a的線蟲，同樣地觀察。 　　[0067] 先前，線蟲係一旦抵達評價系統的側壁，就會潛入側壁與固體培養基之間，潛入的線蟲就無法被使用於行動評價。在本發明中，凹陷600的內面，其表面係被整形成平滑。所被整形成平滑，係意味著不具有讓線蟲可以潛入的縫隙或是孔穴。如此表面是被整形成平滑的凹陷，係將加熱溶解、冷卻即會固化的培養基，導入至培養皿，在凝固前從溶解的培養基之上方，抵接凹陷600之形狀的模具同時讓其冷卻，就可作成。凹陷600之形狀的模具係例如圖11C所示，可為具有與凹陷600之形狀為互補之形狀的模具660。 　　[0068] 此處，培養皿，係在從上方觀察凹陷的底面600a時，亦可設有表示中央部之領域的二條線620（標誌）。可在線620所表示的領域中配置線蟲，在二條線620的外側之領域的其中一方，配置被檢試料（被檢試料係亦可配置在蓋子）。亦即，凹陷600的底面600a（行動觀察面），係和第一實施形態或第二實施形態同樣地，具有至少2個區隔線25及35來作為標誌，在長度方向從單側的末端往另一末端，將底面的領域區隔成至少3個領域。藉此，底面係被區隔成第一領域20、第二領域30及第三領域40之至少3個領域，尤其是第二領域30是被配置在第一領域20與第三領域40之交界。區隔線，係並非將領域做物理性分斷，作為標誌是只要能夠達到區別不同領域間之交界的目的，即已足夠。 　　[0069] 如圖12所示，凹陷600，係在測定時，被覆蓋凹陷全體的板子650所覆蓋。板子650係為平面上。板子650，係在培養皿是透光性的情況下則亦可不具透光性，但可設計成透光性。若板子650是透光性，則可從上部使用顯微鏡，在以板子650覆蓋凹陷600的狀態下就可觀察線蟲，有此優點。板子650為非透光性的情況下，則培養皿係為透光性為理想，此情況下，可從培養皿的下部使用倒立顯微鏡來觀察線蟲。若板子與培養皿都非透光性，則在觀察時，可將板子打開，來觀察附著在凹陷、及/或板子上的線蟲。 　　區隔線620，係可被設在培養皿的底面，也可被設在板子650的上面或下面650a。 　　[0070] 在本發明中係提供：用來作成第三實施形態的行動評價系統所需之培養皿、覆蓋凹陷600的板子650、及用來作成凹陷600所需之模具660的組合。於前記組合中，培養皿，係亦可在凹陷600所被形成之部位的正下方的凹陷600之形狀所對應之位置，具有與第一實施形態的培養皿100、變形例100A、第二實施形態的培養皿200、或變形例200A的底面中的區隔圖案相同的區隔圖案。又，在覆蓋凹陷600的板子650，係亦可在覆蓋凹陷600時在凹陷600所對應之位置，具有與第一實施形態的培養皿100、變形例100A、第二實施形態的培養皿200、或變形例200A的底面中的區隔圖案相同的區隔圖案。藉由如此設計，可使配置線蟲的場所變得穩定，又，可容易分辨誘引行動與忌避行動。 　　[0071] 本發明中的線蟲的透過嗅覺之趨性行動之評價方法 　　以下說明線蟲的透過嗅覺之趨性行動之評價方法。 　　[0072] 若依據本發明，則 　　可提供一種方法，係評價線蟲對於被檢試料之氣味之趨性行動的方法，其係含有： 　　a）提供被配置有被檢試料之培養皿，該培養皿係在從被檢試料遠離1cm～3cm的底面之領域或部位，配置線蟲；和 　　b）從播種起3～15分鐘後，觀察線蟲之配置； 　　c）根據所觀察到的線蟲之配置，來評價其對被檢試料是呈現誘引行動還是呈現忌避行動。 　　[0073] 以下說明a）～c）之每一工程。 　　[0074] a）提供被配置有被檢試料之培養皿，該培養皿係在從被檢試料遠離1cm～3cm的底面之領域或部位，配置線蟲 　　[0075] 在a）中，係使用已被配置有被檢試料的培養皿。培養皿，係亦可不具蓋子，但理想係可使用具有蓋子者。培養皿中係可添加線蟲所需之固體培養基。作為線蟲所需之固體培養基，可使用培養或增殖線蟲所需之固體培養基。作為固體培養基係可使用周知的培養基，例如洋菜培養基。被檢試料係無特別限定但理想係可被配置在培養皿底面，尤其是可被配置在培養皿底面的周邊部附近。或者，被檢試料係特別限定但理想係可被配置在培養皿的蓋上的，對向於培養皿底面的面（或下面），尤其是可被配置在蓋子的下面的周邊部附近。藉由在培養皿底面或蓋子的周邊部（亦即側壁附近）配置被檢試料，將線蟲配置在培養皿的底面中央時，可容易確保其與被檢試料之距離為一定以上。 　　[0076] 從被檢試料所被配置的部位，到線蟲所被播種的部位為止的距離，係可設為1cm～3cm左右、1～2.5cm左右、1.5～2cm左右、1.5cm～2.5cm左右、或2cm左右。 　　[0077] 播種的線蟲的個體數係可為例如10～500左右、例如100～500左右。 　　[0078] 被檢試料，係可使用任意的試料。作為被檢試料係可舉出例如，疑似罹患癌症的對象（例如人類）的試料。被檢試料係可為例如，疑似癌症細胞的細胞、疑似癌症組織的組織、或這些的抽出物或是溶解物，或者為疑似罹患癌症之對象的體液試料，例如血液（例如血漿）或尿液。 　　[0079] 關於線蟲的透過嗅覺之趨性評價，係可像是例如WO2015/088039中所記載般地實施。 　　[0080] 在先前的方法中，在a）所提供的培養皿中，必須要將殺線蟲劑（例如疊氮化鈉），配置在被檢試料附近及從配置線蟲的位置來看是與被檢試料相反側的領域上，但在本發明的方法，係可不必使用殺線蟲劑。 　　[0081] a）所提供的，被配置有被檢試料之培養皿，且為在從被檢試料遠離1cm～3cm的領域或部位配置有線蟲的培養皿，係亦可在配置了被檢試料之後才配置線蟲，亦可先配置線蟲然後才配置被檢試料。若先配置線蟲然後才配置被檢試料，則亦可在應被配置之地點先配置線蟲然後予以培養而增殖，然後才配置被檢試料。 　　由於從配置線蟲起隨著時間經過，線蟲在底面上廣泛擴散開來的可能性會變高，因此配置了線蟲之後迅速地開始觀察為佳。因此，理想係為，將被檢試料配置在培養皿的所定位置，其後，將線蟲配置在所定位置，然後立刻開始後述的b）中的3～15分鐘的時間之計數為佳。若先配置線蟲然後才配置被檢試料，則在配置線蟲後，理想係在3分種以內，較理想係在1分鐘以內，配置被檢試料為佳。 　　a）所提供的培養皿中，線蟲所被配置的場所，理想係為，從培養皿或其蓋子的任一側壁起，都遠離0.5cm以上的領域中配置線蟲（但是，在距離側壁0.5cm以內的領域中配置也無妨）。 　　[0082] b）在被檢試料與線蟲被配置在培養皿起3～15分鐘後，觀察線蟲在底面上之配置 　　在b）中，線蟲係一旦在培養皿中配置被檢試料（或線蟲一旦被配置到已被配置有被檢試料的培養皿中），就會立刻展現趨性行動。一旦等待3～15分鐘左右，理想係為3～12分鐘，較理想係為5～10分鐘，例如5分鐘、7.5分鐘或10分鐘，則線蟲就會移動達到足以評價趨性行動的距離。因此，從被檢試料或線蟲的其中較遅的一方被配置起，等待3～15分鐘左右、理想係為3～12分鐘、較理想係為5～10分鐘，例如5分鐘、7.5分鐘或10分鐘後，就可觀察線蟲在底面上之配置，藉此已就可評價線蟲的趨性行動。藉由將該時間設成3分鐘以上，線蟲的趨性行動就會大到足以可視化的程度，因此可提高趨性行動的評價精確度。又，若將該時間設成15分鐘以下，則可降低因為線蟲嗅覺敏化而導致線蟲開始在培養皿上隨機移動的可能性，可提高趨性行動的精確度。在培養皿的底面配置線蟲，將被檢試料配置在蓋子的情況下，則所謂「被檢試料與線蟲被配置在培養皿時」，係為將前記蓋子蓋上前記培養皿的時候。 　　[0083] c）根據所觀察到的線蟲之配置，來評價其對被檢試料是呈現誘引行動還是呈現忌避行動 　　在c）中，根據所被觀察到的線蟲之配置，就可評價線蟲是對被檢試料呈現誘引行動，還是呈現忌避行動之哪一種。在c）中，接近被檢試料的線蟲之比率，比遠離被檢試料的線蟲之比率還高的情況下，則可評價為線蟲對被檢試料呈現誘引行動。在c）中，接近被檢試料的線蟲之比率，比遠離被檢試料的線蟲之比率還低的情況下，則可評價為線蟲對被檢試料呈現忌避行動。在c）中，接近被檢試料的線蟲之比率，與遠離被檢試料的線蟲之比率相同的情況下，則亦可評價為線蟲對被檢試料既不呈現誘引行動也不呈現忌避行動。 　　[0084] 又，在c）中，亦可例如，以下記式子求出趨性指數，來評價線蟲是呈現誘引行動、還是呈現忌避行動。 　　[0085] 趨性指數 (趨性指數)= {(以○所表示之領域的線蟲個體數)-(以×所表示之領域的線蟲個體數)}/全線蟲個體數 　　[0086] 趨性指數，係取-1～+1之間的數值，在呈現誘引行動的情況下係取正的值，在呈現忌避行動的情況下係取負的值。然後，數值的絕對值越大，可解釋成展現越強的趨性行動。 　　[0087] c）係亦可還包含：基於線蟲對被檢試料所呈現的趨性行動，來將被檢試料評價為是誘引物質還是忌避物質，或者兩者皆非。 　　[0088] 本發明人們，係於WO2015/088039中，揭露了線蟲對癌症患者的體液（例如尿液）呈現誘引行動，以及對健康者的體液（例如尿液）呈現忌避行動。這可被理解為，從癌症患者的癌症細胞或癌症組織會有癌症特有的因子被放出至癌症患者的體液中，而這就是引起線蟲的誘引行動所致。 　　[0089] 因此，在本發明中，作為被檢試料，是使用疑似癌症細胞的細胞、疑似癌症組織的組織、或這些的抽出物或是溶解物，或者為疑似罹患癌症之對象（例如人類）的體液試料，例如血液（例如血漿）或尿液的情況下，係可基於線蟲的趨性行動，來判別試料是否含有癌症由來的誘引物質。然後其判定之結果，係有益於醫師在癌症的診斷時作為基礎資訊之一，可作為醫師在做癌症診斷時的輔助。 　　[0090] 因此，於本發明的另一側面中，提供一種方法，係為判定被檢試料中是否含有癌症由來之誘引物質的方法，其係含有上記a）～c），且還含有：基於線蟲的趨性行動，來判定被檢試料是否含有癌症由來的誘引物質。 　　[0091] 又，在本發明的另一側面中，係提供一種方法，係為診斷對象是否罹患癌症的方法，其係含有：從對象取得被檢試料；上記a)~c)，且含有：d)若線蟲對被檢試料呈現誘引行動的情況下則評價為對象罹患癌症，又若線蟲對被檢試料呈現忌避行動的情況下則評價為對象未罹患癌症。
在本發明的評價線蟲對於被檢試料之氣味之趨性行動的方法、判定被檢試料中是否含有癌症由來的誘引物質的方法、及診斷對象是否罹患癌症的方法中，雖然是評價線蟲的透過嗅覺之趨性行動，但不須使用用來停止線蟲移動所需之殺線蟲劑(例如疊氮化鈉等之劇毒)。疊氮化鈉等之劇毒，係由於對其保管或使用要求進行嚴格的管理(有這類的限制)，因此不使用其的本發明之方法，係在去除實施上之限制之一這點上，是有益的。
在本發明的評價線蟲對於被檢試料之氣味之趨性行動的方法、判定被檢試料中是否含有癌症由來的誘引物質的方法、及診斷對象是否罹患癌症的方法中，可使用上記所說明的本發明的培養皿或行動評價系統，也可使用多格盤。本發明之方法中的本發明的培養皿、行動評價系統、及多格盤的使用方法，係如同上述。
[實施例] 實施例1：利用線蟲嗅覺的趨性行動之評價系統的建構
在本實施例中，嘗試建構新的線蟲之趨性行動的評價 系統。
首先，作為一例而製作底面為5cm×2cm的方形培養皿(參照圖1A及B)。實際製作的培養皿的照片係如圖4所示。在該方形培養皿的長度方向中央部中被2條線區隔的領域中播種線蟲，在左末端之領域中塗布誘引物質或忌避物質，分別觀察線蟲對誘引物質的誘引行動或對或忌避物質的忌避行動。在本實施例中，作為誘引物質是使用異戊醇，作為忌避物質是使用壬酮。具體而言，異戊醇係用水稀釋1000倍，將1μL塗布在左末端的領域。又，壬酮係將原液1μL塗布在左末端的領域。作為線蟲係使用野生型C.elegans(10~50隻/實驗)。
針對線蟲的誘引行動及忌避行動，求出下記說明的趨性指數，確認所建構之評價系統的靈敏度。具體而言，塗布有誘引物質或忌避物質的左末端之領域、與長度方向中央部的線蟲播種領域之間的領域(於圖4中以○所表示的領域；對應於第一實施形態的領域1)，求出在其中移動的線蟲之個體數，與在其相反側之領域(於圖4中以×所表示的領域；對應於第一實施形態的領域2)中移動的線蟲之個體數的差，除以全線蟲個體數而求出趨性指數。
趨性指數
(趨性指數)={(以記號"○"所表示之領域的線蟲個體數)-(以記號"×"所表示之領域的線蟲個體數)}/全線蟲個體數 　　[0098] 實驗係重複5次，求出趨性指數的平均值與SEM。 　　[0099] 結果如圖5所示。圖5係圖示播種線蟲後經過短短10分鐘後所測定到的趨性指數與標準差（SEM）。如圖5所示，短短10分鐘的測定下，對誘引物質也就是異戊醇，趨性指數呈現超過0.8的值。其結果為，9成以上的線蟲是在這短期間之間就對誘引物質呈現誘引行動，表示可以測定此事。 　　又，對忌避物質也就是壬酮而趨性指數呈現低於-0.8的值。其結果為，9成以上的線蟲是在這短期間之間就對忌避物質呈現忌避行動，表示可以測定此事。 　　[0100] 在使用嗅覺的趨性行動之評價中，有時候目的在於判別試驗物質是誘引物質還是忌避物質，或兩者皆非，而實施評價。可知若採用本發明的評價系統，則可在短的測定時間就以驚人的靈敏度，判別試驗物質是誘引物質、還是忌避物質。 　　[0101] 先前係基於嗅覺的趨性行動之評價是使用9cm的圓形培養皿來進行，此情況下，線蟲的可動領域係較廣，又移動中嗅覺會受到敏化而立刻就不呈現趨性行動，開始隨機亂動，已為習知。為了防止一度移動過的線蟲又再次隨機運動，而會採取在其移動目的地之領域，塗布疊氮化鈉等之毒物的對策。 　　[0102] 另一方面，在本發明的評價系統中，完全不必使用任何毒物，就可以超高靈敏度來測定基於線蟲嗅覺的趨性行動。在本發明中，不需要使用先前基於嗅覺之趨性行動的觀察中所必須的疊氮化鈉。 　　[0103] 又，在先前的評價系統中，為了評價線蟲的趨性行動，必須要跨越30分鐘以上的期間而讓線蟲行動。相對於此，在本發明的評價系統中，不但只須先前的數分之1以下的時間讓線蟲行動就可評價，而且可比先前還高靈敏度地評價趨性。 　　[0104] 本實施例係為，若將被檢試料與線蟲配置得比先前還靠近，就可進行高精確度的評價。本發明的評價方法中能夠高精確度地進行趨性評價的理由是，在基於嗅覺的趨性行動評價之際，線蟲的行動能力（例如受到營養狀態、環境溫度、培養條件、及成長階段的影響）之影響會是大到無法忽視之雜訊之影響（本發明以前係並未得知該影響本身），但在本發明的評價方法中，被認為該影響是被成功地最小化所致。 　　[0105] 實施例2：使用癌症患者之尿液的線蟲的透過嗅覺之趨性行動的評價 　　野生型線蟲，係對癌症患者的尿液呈現誘引行動，對健康者的尿液呈現忌避行動此事為已知。在本實施例中，是使用實施例1中所建構的新的評價系統，來評價對癌症患者由來之尿液的趨性行動。 　　[0106] 除了將誘引物質或忌避物質改成癌症患者的尿液（稀釋1/20）或健康者的尿液（稀釋1/20）以外，其餘皆和實施例1同樣地評價趨性行動。測定時間係根據實施例1的結果而設成，從線蟲的播種起算5分鐘後或10分鐘後。結果如圖6所示。 　　[0107] 如圖6所示，就算是高稀釋倍率，即使在5分鐘後仍可明確觀察到對癌症患者之尿液的誘引行動與對健康者之尿液的忌避行動。結果在10分鐘後也是相同。又，趨性指數係為，對於癌症患者的尿液樣本，在5分鐘後為0.5，在10分鐘後為0.6，分別意味著有75%及80%的線蟲呈現誘引行動，而為良好的數值。 　　[0108] 相對於此，使用9cm培養皿而進行與 WO2015/088039的實施例1相同的實驗，在使用稀釋1/10的尿液，測定時間30分鐘，使用疊氮化鈉的條件下，趨性指數係只停留在0.3的如此低的值（參照圖7）。亦即，在9cm培養皿的系統中，就算尿液濃度是2倍濃，趨性指數仍只看到很低的值。 　　[0109] 接著，在本實施例的上記評價法中，將尿液的濃度稀釋1/200，將測定時間設成10分鐘以外，其餘係和獲得上記圖6之結果的實驗相同條件，觀察線蟲的趨性行動。尿液係使用從不同的複數個癌症患者所得的尿液。結果如圖8所示。 　　[0110] 如圖8所示，對於來自任一癌症患者的尿液，線蟲都呈現誘引行動，對於任一健康者的尿液，線蟲都呈現忌避行動。趨性指數係就算將尿液以高倍率稀釋仍為0.1～0.2，證實本評價方法的靈敏度之高。另一方面，即使對健康者的尿液，趨性指數也為-0.15～-0.2，再次驗證本評價方法的靈敏度之高。 　　[0111] 實施例3：使用3cm×1cm的方形培養皿的線蟲的趨性行動之評價 　　本實施例中，使用比實施例1還小的方形培養皿來評價線蟲的趨性行動。 　　[0112] 除了使用3cm×1cm的方形培養皿以外，其餘係和獲得上記圖6之結果的實驗相同條件，觀察線蟲的趨性行動。評價係在線蟲播種5分鐘後及10分鐘後進行。結果如圖9所示。 　　[0113] 如圖9所示，5分鐘後，對癌症患者的尿液呈現誘引行動，對健康者的尿液呈現忌避行動。另一方面，在10分鐘後，對癌症患者的尿液呈現誘引行動，但對健康者的尿液並未呈現忌避行動。 　　[0114] 其結果為，雖然用小型的方形培養皿也是可以評價線蟲的趨性行動，可是，另一方面，也教示了其靈敏度有可能降低。 　　[0115] 調查靈敏度降低的原因，發現在10分鐘後，線蟲係爬到培養皿的側壁上、或線蟲從側壁部潛入培養基內，因此可計數的線蟲個體數會降低，得知這是其中一個原因。亦即得知，線蟲所被配置的場所，係距離培養皿的側壁達0.5cm以上為佳。 　　[0116] 實施例B4：第三實施形態所致之趨性行動評價系統 　　在本實施例中，不是培養皿本身的形狀，而是在固體培養基中設置用來評價趨性行動所需之場域（凹陷600），在其內部評價線蟲的趨性行動。 　　[0117] 使用線蟲株也就是N2 Bristol株來評價基於嗅覺的趨性行動。線蟲的飼育，係使用以下表1所記載的NGM盤而為之。 　　[0118] 表1：NGM盤的培養基組成
Figure 106130931-A0304-0001
 [0119] 又，線蟲的趨性行動評價，係以下表2所記載的多格細胞培養盤（直徑5cm或9cm培養皿）來進行。 　　[0120] 表2：多格細胞培養盤的培養基組成（直徑5cm或9cm培養皿）
Figure 106130931-A0304-0002
 [0121] 以上記多格細胞培養盤的培養基組成來混合試藥，在經過高壓蒸氣滅菌後，適量倒入9cm培養皿，將5cm×2cm×1mm的塑膠板子壓在表面取型同時冷卻，使固體培養基凝固。固體培養基凝固後，移除塑膠板子，在固體培養基表面形成了長度5cm、寬度2cm、深度1mm的凹陷。如此就獲得了，如圖11A及B所示的具有在表面具有凹陷的固體培養基的培養皿。 　　[0122] 接著，在圖13右的「+」所示的位置，配置稀釋10-5 倍的異戊醇（IAA）或稀釋10-3 倍的壬酮（Nona），將20℃下培養了4天的線蟲，配置在中央部（相當於圖13的領域B）。其後，在23℃下觀察線蟲的趨性行動。 　　[0123] 又，與使用在實施例1及2中所用的行動評價系統的觀察結果，進行比較。 　　[0124] 經過時間為0分鐘、5分鐘、10分鐘、20分鐘後，計測存在於圖13的A、B及C之領域所對應之領域中的線蟲的數量。線蟲的殘存數是以各時間的線蟲數相對於0分鐘時的線蟲數之比率，而加以算出。又，趨性指數係根據[N(A)-N(B)]/[N(A)+N(B)]的式子而算出。此處，N（A）係為移動到領域A的線蟲個體數，N（B）係為移動到領域B的線蟲個體數。 　　[0125] 結果如圖14所示。如圖14右所示，實施例1及2中所用的行動評價系統（5cm plate（Nona））中，隨著時間經過（橫軸，單位：分鐘），線蟲會逐漸潛入固體培養基與盤側壁之間，從觀察面逐漸減少。相對於此，在第三實施形態的評價系統（New plate（Nona）及New plate（IAA））中，幾乎看不到隨著時間經過，線蟲從觀察面減少。又，如圖14左所示，在第三實施形態的評價系統中，在5分鐘可明確觀察到對壬酮（Nona）的忌避行動。在第三實施形態的評價系統中又還可在5分鐘、尤其是20分鐘時，明確觀察到對異戊醇（IAA）的遊走行動。配合圖14右，即使在結果已經明瞭的20分鐘後，若使用第三實施形態的評價系統則線蟲仍不會減少，可認為在觀察結果明瞭這點上有很大的優點。
[0126]20‧‧‧第一領域25‧‧‧區隔線30‧‧‧第二領域35‧‧‧區隔線40‧‧‧第三領域60‧‧‧線蟲90‧‧‧標籤100‧‧‧培養皿150‧‧‧蓋子151‧‧‧被檢試料配置部位152‧‧‧領域153‧‧‧交界200‧‧‧培養皿210‧‧‧第一領域215‧‧‧線220‧‧‧第二領域500‧‧‧多重面板600‧‧‧凹陷610‧‧‧固體培養基面620‧‧‧線650‧‧‧蓋子660‧‧‧模具100A‧‧‧培養皿100a‧‧‧內面100b‧‧‧外面150A‧‧‧蓋子200A‧‧‧培養皿20A‧‧‧第一領域210A‧‧‧第一領域220A‧‧‧第二領域30A‧‧‧第二領域40A‧‧‧第三領域500A‧‧‧多重面板600a‧‧‧底面600b‧‧‧側面650a‧‧‧下面
[圖1A]圖1A係本發明的第一實施形態的培養皿100的平面圖。圖中的二點鎖線係表示底面的區隔圖案的交界線。
[圖1B]圖1B係本發明的第一實施形態的培養皿100的正面圖。
[圖1C]圖1C係本發明的第一實施形態的變形例100A的平面圖。圖中的二點鎖線係表示底面的區隔圖案的交界線。
[圖1D]圖1D係將蓋子150蓋上的本發明的第一實施形態的培養皿100的正面圖。
[圖1E]圖1E係蓋子150的平面圖。
[圖1F]圖1F係蓋子150的變形例150A的平面圖。
[圖1G]圖1G係變形例150A的一態樣中的，通過151之直線上的剖面圖。
[圖1H]圖1H係變形例150A的一態樣中的，通過151之直線上的剖面圖。
[圖1I]圖1I係本發明的第一實施形態的培養皿100的A-A剖面圖(參照圖1A)。
[圖2A]圖2A係本發明的第二實施形態的培養皿200的平面圖。圖中的二點鎖線係表示底面的區隔圖案的交界線。
[圖2B]圖2B係本發明的第二實施形態的變形例200A的平面圖。圖中的二點鎖線係表示底面的區隔圖案的交界線。
[圖3A]圖3A係本發明的多格盤之一例500的平面圖。
[圖3B]圖3B係本發明的多格盤之一例500A的平面圖。
[圖3C]圖3C係本發明的附蓋子600的多格盤之一例500的正面圖。
[圖4]圖4係本實施例中所被作成的5cm×2cm的方形培養皿的照片。照片中，白色細點所表示的係為線蟲。
[圖5]圖5係若使用本發明的培養皿，就可高靈敏度地測定對誘引物質（異戊醇）的誘引行動及對忌避物質（壬酮）的忌避行動的圖示。 　　[圖6] 圖6係使用本發明的培養皿，以5分鐘及10分鐘即可明確地評價對癌症患者之尿液的誘引行動及對健康者之尿液的忌避行動的圖示。 　　[圖7] 圖7係基於先前法的對尿液樣本的趨性行動評價之結果的圖示。 　　[圖8] 圖8係使用從各種癌症患者及健康者所得之尿液（1/200稀釋）的趨性行動評價之結果的圖示。 　　[圖9] 圖9係使用3cm×1cm的方形培養皿來進行趨性行動評價之結果的圖示。 　　[圖10] 圖10係先前的線蟲之趨性行動評價系統與本發明的第三實施形態的評價系統做比較的模式圖。在記號「+」的位置配置被檢試料，在記號「C」的領域配置線蟲，線蟲移動到「A」時係得知呈現誘引行動，移動到「B」時係得知呈現忌避行動的評價系統。 　　[圖11A] 圖11A係本發明的第三實施形態所致之評價系統的固體培養基表面的平面圖。 　　[圖11B] 圖11B係本發明的第三實施形態所致之評價系統的固體培養基表面的A-A剖面圖。 　　[圖11C] 圖11C係用來作成凹陷所需之模具的剖面圖。 　　[圖12A] 圖12A係本發明的第三實施形態所致之評價系統的平面圖。 　　[圖12B] 圖12B係本發明的第三實施形態所致之評價系統的B-B剖面圖。 　　[圖13] 圖13係於實施例B4中所建構的本發明的第三實施形態所致之評價系統的照片。 　　[圖14] 圖14係使用實施例B4中所建構的本發明的第三實施形態所致之評價系統的線蟲的趨性行動之評價結果（左）及殘存在觀察面的線蟲之比率的經時變化（右）。
20‧‧‧第一領域
25‧‧‧區隔線
30‧‧‧第二領域
35‧‧‧區隔線
40‧‧‧第三領域
60‧‧‧線蟲
90‧‧‧標籤
100‧‧‧培養皿

Claims (15)

  1. 一種線蟲之趨性行動評價系統，係具有方形形狀之底面與圍繞前記底面之周圍之側壁的線蟲之趨性行動評價系統，其中，具有長邊方向為3~6cm、横向方向為1~3cm之底面，前記底面係藉由標誌而在長度方向上從單側的末端往另一末端而被區隔成第一領域、第二領域及第三領域之至少3個領域，前記第二領域是被配置在前記第一領域與前記第三領域之交界；前記標誌係並非將前記領域間做物理性區隔，而讓線蟲可在前記領域間移動。
  2. 如請求項1所記載之線蟲之趨性行動評價系統，其中，前記標誌係為，相對於前記底面之上面的凹凸形狀或印刷，或是相對於下面的凹凸形狀或印刷所成之標誌。
  3. 如請求項1或2所記載之線蟲之趨性行動評價系統，其中，具有用來區別前記第一領域與前記第三領域的標示。
  4. 一種線蟲之趨性行動評價系統，係由如請求項1或2所記載的趨性行動評價系統做複數連結而成。
  5. 一種線蟲之趨性行動評價系統，其係具備：培養皿，係被導入固體培養基，其表面具有深度為線蟲之厚度以上且為2mm以下的方形面形狀之凹陷；和從上部覆蓋前記凹 陷的板子；其中，(i)前記培養皿之底面的對應於前記凹陷之部位，係藉由標誌而在長度方向上從單側的末端往另一末端而被區隔成第一領域、第二領域及第三領域之至少3個領域，前記第二領域是被配置在前記第一領域與前記第三領域之交界；或者(ii)從上部覆蓋前記凹陷的板子的對應於前記凹陷之部位，係藉由標誌而在長度方向上從單側的末端往另一末端而被區隔成第一領域、第二領域及第三領域之至少3個領域，前記第二領域是被配置在前記第一領域與前記第三領域之交界。
  6. 如請求項5所記載之線蟲之趨性行動評價系統，其中，前記標誌係為，相對於前記底面之上面的凹凸形狀或印刷，或是相對於下面的凹凸形狀或印刷所成之標誌。
  7. 如請求項1、2、5、6之任一項所記載之線蟲之趨性行動評價系統，其中，前記第一領域與前記第三領域係銜接，前記第二領域係為封閉之形狀。
  8. 如請求項1或2所記載之線蟲之趨性行動評價系統，其中，具備蓋子，其係在將蓋子予以蓋上時，在前記底面所對向之面上具備被檢試料配置部位。
  9. 如請求項1、2、5、6之任一項所記載之線蟲之趨性行動評價系統，其中，在前記第二領域上配置線蟲。
  10. 如請求項1、2、5、6之任一項所記載之線蟲之趨性行動評價系統，其中，在前記第一領域或前記第三領域配置被檢試料。
  11. 一種線蟲趨性行動評價方法，係評價線蟲對於被檢試料之氣味之趨性行動的方法，其係含有：a)提供被配置有前記被檢試料之線蟲之趨性行動評價系統，該線蟲之趨性行動評價系統係在從被檢試料遠離1cm~3cm的底面之領域或部位，配置線蟲；和b)在前記被檢試料與線蟲被配置在前記線蟲之趨性行動評價系統起3~15分鐘後，觀察線蟲在底面上之配置；c)根據所觀察到的線蟲之配置，來評價其對前記被檢試料是呈現誘引行動還是呈現忌避行動；於a)中係使用包含以下之任一者的培養皿：(i)具有方形形狀之底面之培養皿，其中，該培養皿係為，具有長邊方向為3~6cm、横向方向為1~3cm之底面，前記底面係藉由標誌而在長度方向上從單側的末端往另一末端而被區隔成第一領域、第二領域及第三領域之至少3個領域，前記第二領域是被配置在前記第一領域與前記第三領域之交界，前記標誌係並非將前記領域間做物理 性區隔，而讓線蟲可在前記領域間移動；或者(ii)一種線蟲之趨性行動評價系統，其係具備：培養皿，係被導入固體培養基，其表面具有深度為線蟲之厚度以上且為2mm以下的方形面形狀之凹陷；和從上部覆蓋前記凹陷的板子；或(iii)上記(i)之培養皿或上記(ii)之趨性行動評價系統做複數連結而成之多格盤。
  12. 如請求項11所記載之線蟲趨性行動評價方法，其中，前記被檢試料係為，從疑似癌症患者之對象所取得的試料。
  13. 如請求項12所記載之線蟲趨性行動評價方法，其中，前記被檢試料係為，從疑似癌症患者之對象所取得的尿液。
  14. 如請求項12或13所記載之線蟲趨性行動評價方法，其中，還含有：於c)中若線蟲對前記被檢試料呈現誘引行動的情況下，則判定為前記被檢試料中含有癌症由來的誘引物質，又，若線蟲對前記被檢試料呈現忌避行動的情況下，則判定為前記被檢試料中不含癌症由來的誘引物質。
  15. 如請求項11~13之任一項所記載之線蟲趨性行動評價方法，其中，不使用殺線蟲劑。
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