TWI755380B - Ilt7結合分子及其使用方法 - Google Patents

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Abstract

本發明係關於ILT7結合分子，例如，抗-ILT7抗體，及用於治療或預防與ILT7表現細胞相關聯的病症及疾病(諸如自體免疫疾病)之方法。

Description

ILT7結合分子及其使用方法
本發明係關於ILT7結合分子，例如，抗-ILT7抗體及其抗原結合片段、變異體或衍生物，使用該等抗體及片段之方法，及用於治療或預防與ILT7表現細胞相關聯的自體免疫疾病及病症之方法。
漿細胞樣樹突狀細胞(pDC)為周邊血液及二級淋巴器官中僅佔周邊血液單核細胞(PBMC)約0.1至0.5%之獨特樹突狀細胞(DC)群體。然而，此等細胞因其係I型干擾素(IFN)的主要來源而為免疫系統之特別重要的調節者。I型IFN促進NK細胞、B細胞、T細胞及骨髓樹突狀細胞的功能。此等IFN在初始免疫反應中具重要意義且具有抗病毒及抗腫瘤活性。然而，亦認為pDC及I型IFN在自體免疫疾病(諸如全身性紅斑狼瘡、慢性風濕病及牛皮癬)之發展中起作用。因此，理解如何調節涉及IFN釋放之分子路徑可用於控制免疫反應及治療及預防疾病。 回應於藉由表現於pDC表面上之類鐸受體(TLR) TLR7及TLR9感測到的核酸，pDC釋放IFN。藉由包含基於免疫受體酪胺酸之活化基元(ITAM)之受體調節由TLR引起之反應。免疫球蛋白樣轉錄本-7(ILT7)(亦稱為LIRA4、LILRA4或CD85g)為一種此類受體。 ILT7為免疫球蛋白樣轉錄本(ILT)或白血球免疫球蛋白樣受體(LIR)基因家族中的一員。ILT7選擇性地表現於人類漿細胞樣樹突狀細胞(pDC)表面上而非表現於骨髓樹突狀細胞或其他周邊血液白血球上。Cao等人，J. Exp. Medicine 6: 1399-1405 (2006)。ILT7包含四個免疫球蛋白樣胞外域及一個跨膜域。該胞外部分對於與ILT7配位體、骨髓基質細胞抗原2(BST2)間的相互作用而言具重要意義，且ILT7之該跨膜域包含使其與FcεRIγ複合之帶正電荷的殘基。已假設BST2-ILT7相互作用負面調節pDC之先天免疫功能，潛在性地作為負反饋機制。另外，已證實ILT7之活體外抗體交聯負面地調節pDC產生IFN-α及TNF-α。因此，需要可用於中和ILT7並調節pDC活性及IFN釋放之抗體及其他ILT7結合分子，例如，以治療及預防諸如自體免疫疾病之疾病。
本文提供ILT7結合分子，例如，抗-ILT7抗體及其抗原結合片段。 在一種情況下，經單離的ILT7結合蛋白為可結合至與包含SEQ ID NO:202之重鏈可變區(VH)及SEQ ID NO:207之輕鏈可變區(VL)的抗體相同的ILT7抗原決定基之ILT7結合蛋白。 在一種情況下，經單離的ILT7結合蛋白為以競爭方式抑制結合至包含SEQ ID NO:202之VH及SEQ ID NO:207之VL的抗體的ILT7之ILT7結合蛋白。 在一種情況下，經單離的ILT7結合蛋白為包含分別包含SEQ ID NO:203、204、205、208、209及210之序列的互補決定區(CDR) HCDR1、HDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2及LCDR3之ILT7結合蛋白。 在一種情況下，ILT7結合蛋白包含與SEQ ID NO:202至少85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%相同之VH及/或與SEQ ID NO:207至少85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%相同之VL。 在一種情況下，ILT7結合蛋白包含包含SEQ ID NO:202之VH及包含SEQ ID NO:207之VL。 在一種情況下，經單離的ILT7結合蛋白為包含包含SEQ ID NO:202之VH的ILT7結合蛋白。 在一種情況下，經單離的ILT7結合蛋白為包含包含SEQ ID NO:207之VL的ILT7結合蛋白。 在一種情況下，經單離的ILT7結合蛋白為可結合至與包含選自由以下組成之群的VH及VL之抗體相同的ILT7抗原決定基的ILT7結合蛋白：分別SEQ ID NO:12及SEQ ID NO:17；分別SEQ ID NO:22及SEQ ID NO:27；分別SEQ ID NO:32及SEQ ID NO:37；分別ID NO:42及SEQ ID NO:47；分別ID NO:52及SEQ ID NO:57；分別ID NO:62及SEQ ID NO:67；分別ID NO:72及SEQ ID NO:77；分別ID NO:82及SEQ ID NO:87；分別ID NO:92及SEQ ID NO:97；分別ID NO:102及SEQ ID NO:107；分別ID NO:112及SEQ ID NO:117；分別ID NO:122及SEQ ID NO:127；分別ID NO:132及SEQ ID NO:137；分別ID NO:142及SEQ ID NO:147；分別ID NO:152及SEQ ID NO:157；分別ID NO:162及SEQ ID NO:167；分別ID NO:172及SEQ ID NO:177；分別ID NO:182及SEQ ID NO:187；分別ID NO:192及SEQ ID NO:197；分別ID NO:212及SEQ ID NO:217；分別ID NO:222及SEQ ID NO:227；分別ID NO:232及SEQ ID NO:237；及SEQ ID NO:242及SEQ ID NO:247。 在一種情況下，經單離的ILT7結合蛋白為以競爭方式抑制結合至包含選自由以下組成之群的VH及VL之抗體的ILT7的ILT7結合蛋白：分別SEQ ID NO:12及SEQ ID NO:17；分別SEQ ID NO:22及SEQ ID NO:27；分別ID NO:32及SEQ ID NO:37；分別ID NO:42及SEQ ID NO:47；分別ID NO:52及SEQ ID NO:57；分別ID NO:62及SEQ ID NO:67；分別ID NO:72及SEQ ID NO:77；分別ID NO:82及SEQ ID NO:87；分別ID NO:92及SEQ ID NO:97；分別ID NO:102及SEQ ID NO:107；分別ID NO:112及SEQ ID NO:117；分別ID NO:122及SEQ ID NO:127；分別ID NO:132及SEQ ID NO:137；分別ID NO:142及SEQ ID NO:147；分別ID NO:152及SEQ ID NO:157；分別ID NO:162及SEQ ID NO:167；分別ID NO:172及SEQ ID NO:177；分別ID NO:182及SEQ ID NO:187；分別ID NO:192及SEQ ID NO:197；分別ID NO:212及SEQ ID NO:217；分別ID NO:222及SEQ ID NO:227；分別ID NO:232及SEQ ID NO:237；及分別SEQ ID NO:242及SEQ ID NO:247。 在一種情況下，經單離的ILT7結合蛋白為包含選自由以下組成之群的CDR：HCDR1、HDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2及LCDR3之ILT7結合蛋白：分別SEQ ID NO:13、14、15、18、19及20；分別SEQ ID NO:23、24、25、28、29及30；分別SEQ ID NO:33、34、35、38、39及40；分別SEQ ID NO:103、104、105、108、109及110；分別SEQ ID NO:213、214、215、218、219及220；分別SEQ ID NO:223、224、225、228、229及230；分別SEQ ID NO:233、234、235、238、239及240；分別SEQ ID NO:243、244、245、248、249及250。 在一種情況下，ILT7結合蛋白包含與以下至少85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%相同之VH及VL：分別SEQ ID NO:12及SEQ ID NO:17；分別SEQ ID NO:22及SEQ ID NO:27；分別SEQ ID NO:32及SEQ ID NO:37；分別SEQ ID NO:42及SEQ ID NO:47；分別SEQ ID NO:52及SEQ ID NO:57；分別SEQ ID NO:62及SEQ ID NO:67；分別SEQ ID NO:72及SEQ ID NO:77；分別SEQ ID NO:82及SEQ ID NO:87；分別SEQ ID NO:92及SEQ ID NO:97；分別SEQ ID NO:102及SEQ ID NO:107；分別SEQ ID NO:112及SEQ ID NO:117；分別SEQ ID NO:122及SEQ ID NO:127；分別SEQ ID NO:132及SEQ ID NO:137；分別SEQ ID NO:142及SEQ ID NO:147；分別SEQ ID NO:152及SEQ ID NO:157；分別SEQ ID NO:162及SEQ ID NO:167；分別SEQ ID NO:172及SEQ ID NO:177；分別SEQ ID NO:182及SEQ ID NO:187；分別SEQ ID NO:192及SEQ ID NO:197；分別SEQ ID NO:212及SEQ ID NO:217；分別SEQ ID NO:222及SEQ ID NO:227；分別SEQ ID NO:232及SEQ ID NO:237；分別SEQ ID NO:242及SEQ ID NO:247。 在一種情況下，該VH及VL包括以下：分別SEQ ID NO:12及SEQ ID NO:17；分別SEQ ID NO:22及SEQ ID NO:27；分別SEQ ID NO:32及SEQ ID NO:37；分別SEQ ID NO:42及SEQ ID NO:47；分別SEQ ID NO:52及SEQ ID NO:57；分別SEQ ID NO:62及SEQ ID NO:67；分別SEQ ID NO:72及SEQ ID NO:77；分別SEQ ID NO:82及SEQ ID NO:87；分別SEQ ID NO:92及SEQ ID NO:97；分別SEQ ID NO:102及SEQ ID NO:107；分別SEQ ID NO:112及SEQ ID NO:117；分別SEQ ID NO:122及SEQ ID NO:127；分別SEQ ID NO:132及SEQ ID NO:137；分別SEQ ID NO:142及SEQ ID NO:147；分別SEQ ID NO:152及SEQ ID NO:157；分別SEQ ID NO:162及SEQ ID NO:167；分別SEQ ID NO:172及SEQ ID NO:177；分別SEQ ID NO:182及SEQ ID NO:187；分別SEQ ID NO:192及SEQ ID NO:197；分別SEQ ID NO:212及SEQ ID NO:217；分別SEQ ID NO:222及SEQ ID NO:227；分別SEQ ID NO:232及SEQ ID NO:237；或分別SEQ ID NO:242及SEQ ID NO:247。 在一種情況下，經單離的ILT7結合蛋白包含包括SEQ ID NO:12、22、32、42、52、62、72、82、92、102、112、122、132、142、152、162、172、182、192、212、222、232或242之VH。 在一種情況下，經單離的ILT7結合蛋白包含包括SEQ ID NO:17、27、37、47、57、67、77、87、97、107、117、127、137、147、157、167、177、187、197、217、227、237或247之VL。 在一種情況下，該ILT7結合蛋白包含抗體或其抗原結合片段。在一種情況下，該抗體或其抗原結合片段係經去岩藻糖基化。 在一種情況下，該ILT7結合蛋白結合至ILT7之Ig1區。在一種情況下，該ILT7結合蛋白結合至ILT7之Ig2區。 在一種情況下，該ILT7結合蛋白結合至人類及食蟹獼猴ILT7。 在一種情況下，該ILT7結合蛋白抑制從周邊血液單核細胞(PBMC)釋放干擾素(IFN) α。在一種情況下，該ILT7結合蛋白在PMBC中具有抗漿細胞樣樹突狀細胞(pDC)之ADCC活性。 在一種情況下，該ILT7結合蛋白包含鼠類、人類、嵌合、人源化或表面重塑抗體或其抗原結合片段。 在一種情況下，該ILT7結合蛋白包括抗體、Fab、Fab'、F(ab')2、Fd、單鏈Fv或scFv、經雙硫鍵連接的Fv、V-NAR域、IgNar、內抗體(intrabody)、IgGΔCH2、微型抗體(minibody)、F(ab')3、四功能抗體、三功能抗體、雙功能抗體、單域抗體、DVD-Ig、Fcab、mAb2、(scFv)2或scFv-Fc。 在一種情況下，該ILT7結合蛋白包含單株抗體或其抗原結合片段。 在一種情況下，該ILT7結合蛋白包含選自由以下組成之群的重鏈免疫球蛋白恆定域：(a)IgA恆定域；(b)IgD恆定域；(c)IgE恆定域；(d)IgG1恆定域；(e)IgG2恆定域；(f)IgG3恆定域；(g)IgG4恆定域；及(h)IgM恆定域。 在一種情況下，該ILT7結合蛋白包含選自由以下組成之群的輕鏈免疫球蛋白恆定域：(a)Ig κ恆定域；及(b)Ig λ恆定域。 在一種情況下，該ILT7結合蛋白包含人類IgG1恆定域及人類λ恆定域。 在一種情況下，本文提供一種產生ILT7結合分子之寄主細胞。 在一種情況下，本文提供一種經單離的多核苷酸，其包含編碼VH之核酸，其中該VH包含與SEQ ID NO:202、12、22、32、42、52、62、72、82、92、102、112、122、132、142、152、162、172、182、192、212、222、232或242之VH至少85%、90%、95%相同或相同的胺基酸序列。在一種情況下，該多核苷酸包含與SEQ ID NO:201、11、21、31、41、51、61、71、81、91、101、111、121、131、141、151、161、171、181、191、211、221、231或241至少85%、90%、95%相同或相同的序列。 在一種情況下，本文提供一種經單離的多核苷酸，其包含編碼VL之核酸，其中該VL包含與207、17、27、47、57、67、77、87、97、107、117、127、137、147、157、167、177、187、197、217、227、237或247之VL至少85%、90%、95%相同或相同的胺基酸序列。在一種情況下，該多核苷酸包含與SEQ ID NO:206、16、26、36、46、56、66、76、86、96、106、116、126、136、146、156、166、176、186、196、216、226、236或246至少85%、90%、95%相同或相同的序列。 在一種情況下，該核酸可以操作方式與控制序列連接。在一種情況下，包含由核酸編碼的VH或VL之抗體或其抗原結合片段可特異性地結合至ILT7。 在一種情況下，多核苷酸編碼本文所提供的ILT7結合分子。 在一種情況下，本文提供一種包含多核苷酸之載體。 在一種情況下，本文提供一種由多核苷酸編碼之多肽。 在一種情況下，本文提供一種以本文所提供的多核苷酸(例如，包含編碼VH之核酸之多核苷酸及包含編碼VL之核酸之多核苷酸)轉形之寄主細胞。 在一種情況下，本文提供一種包含本文所提供的多核苷酸(例如，包含編碼VH之核酸之多核苷酸及包含編碼VL之核酸之多核苷酸)、本文所提供的載體或本文所提供的多肽之寄主細胞。在一種情況下，該寄主細胞為哺乳動物寄主細胞。在一種情況下，該寄主細胞為NS0鼠類骨髓瘤細胞、PER. C6® 人類細胞或中國倉鼠卵巢(CHO)細胞。在一種情況下，該寄主細胞缺乏酶α-1,6-岩藻糖基轉移酶。 在一種情況下，本文提供一種製備抗-ILT7結合分子之方法，其包括培養本文所提供的寄主細胞及回收該結合分子。在一種情況下，本文提供一種抗-ILT7結合分子，其係依該方法製備。 在一種情況下，本文提供一種用於檢測樣本中ILT7表現之方法，其包括(a)使該樣本與本文所提供的ILT7結合分子接觸及(b)檢測該樣本中該結合分子之結合。 在一種情況下，本文提供一種用於檢測漿細胞樣樹突狀細胞之方法，其包括(a)使包含細胞之樣本與本文所提供的ILT7結合分子接觸及(b)檢測該樣本中該結合分子之結合。 在一種情況下，本文提供一種醫藥組合物，其包含(a)本文所提供的ILT7結合分子、本文所提供的多核苷酸、本文所提供的載體、本文所提供的多肽或本文所提供的寄主細胞及(b)載劑。 在一種情況下，本文提供一種用於減少從漿細胞樣樹突狀細胞釋放IFN-α之方法，其包括使漿細胞樣樹突狀細胞與本文所提供的ILT7結合分子、本文所提供的多核苷酸、本文所提供的載體、本文所提供的多肽、本文所提供的寄主細胞或本文所提供的醫藥組合物接觸。 在一種情況下，本文提供一種用於治療罹患自體免疫疾病之人類個體之方法，其包括對該個體投與有效量之本文所提供的ILT7結合分子、本文所提供的多核苷酸、本文所提供的載體、本文所提供的多肽、本文所提供的寄主細胞或本文所提供的醫藥組合物。 在一種情況下，本文提供一種用於預防人類個體之自體免疫疾病之方法，其包括對該個體投與有效量之本文所提供的ILT7結合分子、本文所提供的多核苷酸、本文所提供的載體、本文所提供的多肽、本文所提供的寄主細胞或本文所提供的醫藥組合物。在一種情況下，該自體免疫疾病為全身性紅斑狼瘡。在一種情況下，該自體免疫疾病為慢性風濕病。
以電子方式提交的序列表參考 連同本申請案一起申請之呈ASCII文字檔案(名稱2943_083STR0_SeqListing_ST25.txt；大小：143,686字元；及創建日期：2016年3月3日)以電子方式提交的序列表之內文以其全文引用之方式併入本文中。 I. 定義 應注意的是，術語「一」或「一個」實體係指一或多個該實體；例如，「一抗-ILT7抗體」理解為代表一或多個抗-ILT7抗體。照此，術語「一」(或「一種」)、「一或多個」及「至少一種」在本文中可互換使用。 如本文中所使用，術語「多肽」意欲包含單數個「多肽」及複數個「多肽」且係指由以醯胺鍵(亦稱為肽鍵)線性連接之單體(胺基酸)組成之分子。術語「多肽」係指具有兩個或更多個胺基酸之任一鏈或多條鏈，而並非指特定長度之產物。因此，習慣係指具有兩個或更多個胺基酸之任一鏈或多條鏈之肽、二肽、三肽、寡肽、「蛋白質」、「胺基酸鏈」或任何其他術語係包含於「多肽」之定義內且可使用術語「多肽」替換此等術語中之任何一者或與此等術語中之任何一者交換使用。術語「多肽」亦意欲係指多肽之後表現修飾之產物，該等後表現修飾包含但不限於醣基化、乙醯化、磷酸化、醯胺化、藉由已知保護基/阻斷基團之衍生化、蛋白質分解裂解或藉由非天然生成之胺基酸之修飾。多肽可衍生自天然生物源或藉由重組技術產生，但未必係轉譯自指定核酸序列。其可以任何方式產生，包含藉由化學合成。 本發明之多肽可具有約3或更多；5或更多；10或更多；20或更多；25或更多；50或更多；75或更多；100或更多；200或更多；500或更多；1,000或更多；或2,000或更多個胺基酸之大小。多肽可具有指定三維結構，然而其等未必需具有此類結構。具有指定三維結構之多肽係稱作折疊式，及不具有指定三維結構但相反可採用大量不同構形之多肽係稱作未折疊式。如本文中所使用，術語醣蛋白係指偶聯至至少一個碳水化合物部分的蛋白質，該碳水化合物部分經胺基酸殘基(例如，絲胺酸殘基或天冬醯胺酸殘基)之含氧或含氮側鏈附接至該蛋白質。 關於「經單離之」多肽或其片段、變異體或衍生物意謂非於其自然環境中之多肽。無需特定程度的純化。例如，經單離之多肽可自其天然或自然環境移除。出於本發明之目的，於寄主細胞中表現之重組產生之多肽及蛋白質被視為係經單離為係已藉由任何合適之技術分離、分級分離或部分或實質上純化之天然或重組多肽。 本發明之多肽亦包括前述多肽之片段、衍生物、類似物或變異體及其任何組合。術語「片段」、「變異體」、「衍生物」及「類似物」當提及本發明之抗-ILT7抗體或抗體多肽時包括保留本發明之對應抗體或抗體多肽之至少部分抗原結合性質的任何多肽。除了本文別處所述的特異性抗體片段外，本發明多肽之片段亦包括蛋白質分解片段及缺失片段。本發明之抗-ILT7抗體及抗體多肽之變異體包含如上所述的片段及亦包含由於胺基酸取代、缺失或插入而具有改變之胺基酸序列的多肽。變異體可天然生成或係非天然生成的。可使用此項技術已知的突變技術來產生非天然生成之變異體。變異體多肽可包括保守性或非保守性胺基酸取代、缺失或添加。本文亦可將變異體多肽稱為「多肽類似物」。如本文中所使用，抗-ILT7抗體或抗體多肽之「衍生物」係指具有一或多個藉由官能性側基之反應化學衍生之殘基的主旨多肽。「衍生物」亦包含彼等含有一或多個二十個標準胺基酸之天然生成之胺基酸衍生物之肽。例如，4-羥基脯胺酸可取代脯胺酸；5-羥基離胺酸可取代離胺酸；3-甲基組胺酸可取代組胺酸；高絲胺酸可取代絲胺酸；及鳥胺酸可取代離胺酸。本發明之抗-ILT7抗體及抗體多肽之衍生物可包括已經改變以便於展示未於本發明之參考抗體或抗體多肽上發現的額外特徵之多肽。 術語「多核苷酸」意欲包含單數個核酸及複數個核酸，且係指經單離的核酸分子或構築體，例如，信使RNA(mRNA)或質體DNA(pDNA)。多核苷酸可包括習知磷酸二酯鍵或非習知鍵(例如，諸如發現於肽核酸(PNA)中之醯胺鍵)。術語「核酸」係指存在於多核苷酸中之任何一或多個核酸片段，例如，DNA或RNA片段。「經單離的」核酸或多核苷酸意指已自其自然環境移除的核酸分子、DNA或RNA。例如，包含於載體中的編碼抗-ILT7結合分子(例如抗體或其抗原結合片段)之重組多核苷酸係視為出於本發明之目的而經單離的。經單離的多核苷酸之其他實例包括維持於異種寄主細胞之重組多核苷酸或在溶液中之經(部分或實質)純化之多核苷酸。經單離的RNA分子包括本發明多核苷酸之活體內或活體外RNA轉錄本。根據本發明之經單離的多核苷酸或核酸進一步包括合成產生之此類分子。此外，多核苷酸或核酸可係或可包含調節元件，諸如啟動子、核糖體結合位點或轉錄終止子。 如本文中所使用，「編碼區」係核酸之一部分，其係由轉譯成胺基酸之密碼子組成。雖然「終止密碼子」(TAG、TGA或TAA)未轉譯成胺基酸，但可將其視為編碼區之一部分，然而任何毗鄰序列(例如，啟動子、核糖體結合位點、轉錄終止子、內含子及類似物)係非編碼區之一部分。本發明之兩個或更多個編碼區可存在於單一多核苷酸構築體中，例如，在單一載體上或在各別多核苷酸構築體中，例如，在各別(不同)載體上。此外，任何載體可含有單一編碼區或可包括兩個或更多個編碼區，例如，單一載體可各別編碼免疫球蛋白重鏈可變區及免疫球蛋白輕鏈可變區。此外，本發明之載體、多核苷酸或核酸可編碼異種編碼區，其融合或未融合至編碼抗-ILT7抗體之核酸或其片段、變異體或衍生物。異種編碼區包含(但不限於)特定元件或基元，諸如分泌信號肽或異種功能域。 在某些實施例中，該多核苷酸或核酸係DNA。在DNA之情況下，包括編碼多肽之核酸之多核苷酸通常可包含啟動子及/或以可操作方式締合一或多個編碼區之其他轉錄或轉譯控制元件。以可操作方式締合係當將針對基因產物(例如多肽)之編碼區以使得該基因產物之表現置於一或多個調節序列之影響或控制下之方式與該(等)調節序列締合。若啟動子功能之誘導導致編碼該所需基因產物之mRNA之轉錄及若兩個DNA片段之間之連接之性質不干擾表現調節序列引導該基因產物之表現之能力或干擾DNA模板被轉錄之能力，則該等兩個DNA片段(諸如多肽編碼區及與其締合之啟動子)係「以可操作方式締合」。因此，若啟動子可影響核酸之轉錄，則該啟動子區域將以可操作方式締合該編碼多肽之核酸。該啟動子可係僅於預定細胞內引導DNA之實質性轉錄之細胞特異性啟動子。除啟動子外，其他轉錄控制元件(例如，強化子、操作子、抑制子及轉錄終止信號)以可操作方式締合該多核苷酸以引導細胞特異性轉錄。本文揭示合適之啟動子及其他轉錄控制區域。 熟習此項技術者已知各種轉錄控制區域。此等包含(但不限於)在脊椎動物細胞中起作用之轉錄控制區域，諸如但不限於來自細胞巨大病毒(即刻早期啟動子，其結合內含子-A)、猿病毒40(早期啟動子)及逆轉錄病毒(諸如勞氏肉瘤病毒)之啟動子及強化子區段。其他轉錄控制區域包含彼等衍生自脊椎動物基因者(諸如肌動蛋白、熱休克蛋白、牛生長激素及兔β-血球蛋白)及能夠控制於真核細胞中之基因表現之其他序列。額外合適之轉錄控制區域包含組織特異性啟動子及強化子以及淋巴激素可誘導之啟動子(例如，藉由干擾素或介白素可誘導之啟動子)。 同樣，一般技術者已知各種轉譯控制元件。此等包含(但不限於)核糖體結合位點、轉譯起始及終止密碼子及衍生自微小核糖核酸病毒(特別係內部核糖體進入位點或IRES，亦稱為CITE序列)之元件。 在其他實施例中，本發明之多核苷酸為RNA，例如，呈信使RNA(mRNA)之形式。 本發明之多核苷酸及核酸編碼區可締合編碼分泌肽或信號肽之額外編碼區，該分泌肽或信號肽引導由本發明之多核苷酸編碼之多肽之分泌。根據信號假說，藉由哺乳動物細胞分泌之蛋白質具有信號肽或分泌前導序列，其是在引發生長蛋白鏈跨粗糙內質網輸出時自成熟蛋白裂解而來。一般技術者知曉由脊椎動物細胞分泌之多肽通常具有融合至該多肽之N端之信號肽，其係裂解自完整或「全長」多肽以產生該多肽之分泌或「成熟」形式。在某些實施例中，使用天然信號肽(例如，免疫球蛋白重鏈或輕鏈信號肽)或使用該序列之功能性衍生物，其保留引導與其以可操作方式締合之多肽分泌之能力。或者，可使用異種哺乳動物信號肽或其功能性衍生物。例如，可以人類組織胞漿素原活化物(TPA)或小鼠β-葡萄醣醛酸酶之前導序列取代野生型前導序列。 本發明之「結合分子」或「抗原結合分子」在其最寬泛意義上係指特異性結合抗原決定子之分子。在一個實施例中，該結合分子特異性結合至ILT7，例如，全長ILT7或成熟ILT7。在另一個實施例中，本發明之結合分子為抗體或其抗原結合片段。在另一個實施例中，本發明之結合分子包含參考抗體分子之至少一個重鏈或輕鏈CDR。在另一個實施例中，本發明之結合分子包含源自一或多個參考抗體分子之至少兩個CDR。在另一個實施例中，本發明之結合分子包含源自一或多個參考抗體分子之至少三個CDR。在另一個實施例中，本發明之抗體分子包含源自一或多個參考抗體分子之至少四個CDR。在另一個實施例中，本發明之結合分子包含源自一或多個參考抗體分子之至少五個CDR。在另一個實施例中，本發明之結合分子包含源自一或多個參考抗體分子之至少六個CDR。在某些實施例中，該參考抗體分子為7C7、ILT70080、ILT70080.1-ILT70080.7、ILT70083、ILT70083.1-ILT70083.9、ILT70089、ILT70100、ILT70137、ILT70142、ILT70144或ILT70052。 本發明係關於某些抗-ILT7抗體或其抗原結合片段、變異體或衍生物。術語「抗體」意指經由免疫球蛋白分子之可變區域中的至少一個抗原識別位點識別且特異性結合至標靶，諸如蛋白質、多肽、肽、碳水化合物、多核苷酸、脂質或前述之組合之免疫球蛋白分子。如本文中所使用，術語「抗體」涵蓋完整多株抗體、完整單株抗體、嵌合抗體、人源化抗體、人類抗體、包含抗體之融合蛋白質及任何其他經修飾的免疫球蛋白分子，只要該等抗體展示所需生物活性即可。抗體可係免疫球蛋白之任一五種主要類別：IgA、IgD、IgE、IgG及IgM，或其亞類(同型物)(例如，IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1及IgA2)，基於其分別稱為α、δ、ε、γ及μ的重鏈恆定域之同一性。不同類別之免疫球蛋白具有不同且熟知的亞單元結構及三維組態。抗體可係裸的或與其他分子(諸如毒素、放射性同位素等)共軛。 術語「抗體片段」或「其抗體片段」係指完整抗體之一部分。「抗原結合片段」或「其抗原結合片段」係指完整抗體之結合至抗原的部分。抗原結合片段可包含完整抗體之抗原決定可變區。抗體片段之實例包括(但不限於)Fab、Fab'、F(ab')2及Fv片段、線性抗體、scFv及單鏈抗體。 如本文中所使用，「人類」或「完全人類」抗體包括具有人類免疫球蛋白之胺基酸序列之抗體且包括單離自人類免疫球蛋白庫或單離自針對一或多種人類免疫球蛋白轉殖基因且不表現內源性免疫球蛋白之動物的抗體，如後文或例如美國專利第5,939,598號，Kucherlapati等人中所述。完全人類抗體係治療處理人類患者多所特別所需的。 可藉由此項技術中已知的多種方法，包括使用衍生自人類免疫球蛋白序列之抗體庫的噬菌體呈現法來製造人類抗體，如Vaughan等人，Nat. Biotech. 14: 309-314 (1996)，Sheets等人，Proc. Nat’l. Acad. Sci. 95:6157-6162 (1998)，Hoogenboom及Winter，J. Mol. Biol. 227:381 (1992)，及Marks等人，J. Mol. Biol. 222:581 (1991))中所述。可用於製造及使用抗體之噬菌體呈現法之其他實例包括彼等揭示於以下者：Rothe等人，J. Mol. Biol.，376:1182 (2008)，Brinkman等人，J. Immunol. Methods 182:41-50 (1995)；Ames等人，J. Immunol. Methods 184:177-186 (1995)；Kettleborough等人，Eur. J. Immunol. 24:952-958 (1994)；Persic等人，Gene 187:9-18 (1997)；Burton等人，Advances in Immunology 57:191-280 (1994)；PCT申請案第PCT/GB91/01134號；PCT公開案WO 90/02809；WO 91/10737；WO 92/01047；WO 92/18619；WO 93/11236；WO 95/15982；WO 95/20401；及美國專利第6,172,197號；第5,885,793號、第6,521,404號；第6,544,731號；第6,555,313號；第6,582,915號；第6,593,081號；第6,300,064號；第6,653,068號；第6,706,484號；第7,264,963號；第5,698,426號；第5,223,409號；第5,403,484號；第5,580,717號；第5,427,908號；第5,750,753號；第5,821,047號；第5,571,698號；第5,427,908號；第5,516,637號；第5,780,225號；第5,658,727號；第5,733,743號及第5,969,108號；該等案件之各者以其全文引用之方式併入本文中。 此外，如此項技術中已知，可使用無法表現功能性內源性免疫球蛋白但可表現人類免疫球蛋白基因的轉殖基因小鼠產生人類抗體。關於該種技術之綜述，參見Lonberg及Huszar，Int. Rev. Immunol. 13:65-93 (1995)。 抗體工程技術中可利用的其他技術可單離人類抗體或其片段。例如，可依Kontermann及Sefan. Antibody Engineering，Springer Laboratory Manuals (2001)所述製造人類雜種瘤。亦可藉由各種呈現技術，例如，噬菌體呈現或其他病毒呈現系統製造完全人類抗體。在噬菌體呈現法中，功能性抗體域係呈現於攜帶編碼其之多核苷酸序列的噬菌體顆粒表面上。例如，編碼VH及VL區域之DNA序列係自動物cDNA庫(例如，淋巴組織之人類或鼠類cDNA庫)或合成cDNA庫擴增。在某些實施例中，該等編碼VH及VL區域之DNA係由scFv連接子依PCR接合在一起並經選殖至噬菌粒載體(例如，p CANTAB 6或pComb 3 HSS)中。該載體經電穿孔於大腸桿菌中且該大腸桿菌感染輔助噬菌體。用於此等方法中的噬菌體通常為絲狀噬菌體，包括fd及M13，及該等VH或VL區域通常係重組融合至噬菌體基因III或基因VIII。可利用抗原，例如，使用標記抗原或結合或捕捉至固體表面或微珠之抗原，篩選或識別表現結合至所關注抗原(即ILT7)之抗原結合域的噬菌體。 「人類」或「完全人類」抗體亦包括包含至少重鏈之可變域或至少重鏈及輕鏈之可變域(其中該(等)可變域具有人類免疫球蛋白可變域之胺基酸序列)之抗體。 「人類」或「完全人類」抗體亦包括如上所述之「人類」或「完全人類」抗體，其包括本文所述抗體分子(例如，VH區域及/或VL區域)之變異體(包括衍生物)、基本上由其組成或由其組成，該等抗體或其抗原結合片段、變異體或衍生物免疫特異性地結合至ILT7多肽或其片段或變異體。熟習此項技術者已知的標準技術可用於引入突變於編碼人類抗-ILT7抗體之核苷酸序列中，包括(但不限於)導致胺基酸取代之定點突變及PCR介導之突變。該等變異體(包括衍生物)可編碼相對於參考VH區域(VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3)、VL區域(VLCDR1、VLCDR2或VLCDR3)少於50種胺基酸取代、少於40種胺基酸取代、少於30種胺基酸取代、少於25種胺基酸取代、少於20種胺基酸取代、少於15種胺基酸取代、少於10種胺基酸取代、少於5種胺基酸取代、少於4種胺基酸取代、少於3種胺基酸取代或少於2種胺基酸取代。 在某些實施例中，該等胺基酸取代為保守性胺基酸取代，於下文中進一步論述。或者，可伴隨所有或部分編碼序列隨機地引入突變，諸如藉由飽和突變，及該等所得突變體可基於生物活性進行篩選以識別保留活性(例如，結合ILT7多肽，例如，人類、靈長類、鼠類或人類、靈長類及鼠類之任何組合ILT7之能力)的突變體。「人類」或「完全人類」抗體之該等變異體(或其衍生物)亦可稱為「經最佳化」或「針對抗原結合最佳化」的人類或完全人類抗體且包括具有改良的對抗原之親和力之抗體。 脊椎動物系統中之鹼性免疫球蛋白結構相對較好瞭解。參見，例如，Harlow等人 (1988) Antibodies:A Laboratory Manual (第2版；Cold Spring Harbor Laboratory Press)。 如將於下文更詳細地論述，術語「免疫球蛋白」包括可生化學區分的多種廣泛類別的多肽。熟習此項技術者將瞭解，重鏈分類為γ、μ、α、δ或ε，(g、m、a、d、e)及其中的一些亞類(例如，γ1至γ4)。該鏈的性質確定抗體的「類別」，分別為IgG、IgM、IgA IgG或IgE。免疫球蛋白亞類(同型物)，例如，IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1等已經良好表徵且已知賦予功能性特殊化作用。此等類別及同型物各者的修飾形式可輕易地由熟習此項技術者根據本發明識別及因此在本發明範疇中。雖然以下論述將大體上關於免疫球蛋白分子之IgG類別，但所有免疫球蛋白類別明確地在本發明範疇中。關於IgG，標準免疫球蛋白分子包含分子量約23,000道爾頓的兩條相同輕鏈多肽及分子量53,000至70,000的兩條相同重鏈多肽。該四條鏈通常由雙硫鍵以「Y」組態連接，其中該等輕鏈從「Y」口開始且繼續穿過可變區而托住該等重鏈。 輕鏈分類為κ或λ(k、l)。每種重鏈類別可與κ或λ輕鏈中任一者結合。一般而言，輕鏈及重鏈彼此共價結合，及在由雜種瘤、B細胞或基因工程化寄主細胞中任一者產生免疫球蛋白時，此兩條重鏈之「尾」部經共價雙硫鍵或非共價鍵聯彼此結合。在重鏈中，胺基酸序列係自Y組態叉端處的N端至各鏈底部的C端運行。 抗體「Y」的基部稱為Fc(可結晶片段)區域，且由根據抗體類別促成兩個或三個恆定域之兩條重鏈組成。因此，該Fc區域結合至特定類別的Fc受體、及其他免疫分子(諸如補體蛋白)。輕鏈及重鏈均分成結構及功能同源的區域。術語「恆定」及「可變」係在功能意義上使用。就此而言，應瞭解輕鏈(VL或VK)或重鏈(VH)部分二者的可變域決定抗原識別及特異性。相反地，輕鏈(CL)及重鏈(CH1、CH2或CH3)之恆定域賦予重要生物性質，諸如分泌、經胎盤活動性、Fc受體結合、補體結合及類似者。依照規約，恆定區域距抗體的抗原結合位點或胺基端越遠，恆定區域的編號越大。N端部分為可變區及在C端部分為恆定區；CH3及CL域實際上分別包含重鏈及輕鏈的羧基端。 如上所示，可變區允許抗體選擇性地識別並特異性地結合抗原上的抗原決定基。亦即，抗體之該VL域及VH域或於此等可變域中的互補決定區(CDR)之子組組合形成限定三維抗原結合位點的可變區。該四級抗體結構形成存於Y之每條臂端部的抗原結合位點。更具體言之，該抗原結合位點係由VH及VL鏈各者上的三個CDR所限定。在一些情況中，例如，衍生自駱駝科或基於駱駝免疫球蛋白工程化之某些免疫球蛋白分子(完整免疫球蛋白分子)可僅由重鏈組成，不含輕鏈。參見，例如，Hamers-Casterman等人，Nature 363:446-448 (1993)。 在天然生成之抗體中，存於各抗原結合域中的六個「互補決定區」或「CDR」為胺基酸之短的非鄰接序列，其經特異性定位以形成抗原結合域，因為抗體假設其在水環境中之三維組態。抗原結合域中胺基酸之其餘部分(稱為「架構」區)顯示減小的分子間可變性。該等架構區主要採用β-片狀構型且CDR形成連接β-片狀結構的環，及在一些情況下形成β-片狀結構之部分。因此，架構區用於形成藉由鏈間非共價鍵相互作用定位CDR成正確定向的骨架。由經定位的CDR形成之抗原結合域限定與免疫反應性抗原上的抗原決定基互補之表面。該互補表面促進抗體與其同源抗原決定基之非共價結合。任何給定重鏈或輕鏈可變域可由一般技術者輕易地識別分別包含CDR及架構區之胺基酸，因為其等已進行精確定義(參見下文)。 在相關技術中所使用及/或接受的術語存在兩種或更多種定義之情況下，除非明確地有相反規定，否則如本文中所使用的術語的定義意欲包括所有該等含義。一個具體實例係使用術語「互補決定區」(「CDR」)以描述於重鏈及輕鏈多肽的可變區中發現之非鄰接抗原組合位點。該特定區域已述於Kabat等人 (1983) U.S. Dept. of Health and Human Services，「Sequences of Proteins of Immunological Interest」及Chothia及Lesk，J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)中，該等案係以引用的方式併入本文中，其中當彼此相比較時，該等定義包括胺基酸殘基之重疊或子集。然而，應用任一種定義以指抗體或其變異體之CDR意欲在如本文中所定義及使用的術語範疇內。IMGT(ImMunoGeneTics)亦提供針對免疫球蛋白可變區(包括CDR)之編號系統。參見，例如，Lefranc, M.P.等人，Dev. Comp. Immunol. 27:55-77(2003)，其係以引用的方式併入本文中。IMGT編號系統係基於超過5,000個序列的比對、結構資料、及超變環的特徵分析且允許輕易地比較所有物種之可變區及CDR區域。包含如上文所引用的各參考所定義的CDR之適當胺基酸殘基述於下表1中作為比較。包含特定CDR的確切殘基編號可取決於CDR之序列及尺寸而改變。給定抗體之可變區胺基酸序列，熟習此項技術者可例行地確定哪些殘基包含特定CDR。   表1.CDR定義1
Figure 106107877-A0304-0001
 1 表1中所有CDR定義的編號係依照 Kabat等人所述的編號約定(參見下文)。   Kabat等人亦定義可適用於任何抗體之可變域序列的編號系統。熟習此項技術者可明確地指派該「Kabat編號」系統給任何可變域序列，而不用依賴於除序列本身外的任何經驗資料。如本文中所使用，「Kabat編號」係指Kabat等人 (1983) U.S. Dept. of Health and Human Services，「Sequence of Proteins of Immunological Interest」所述的編號系統。 本發明之抗體或其抗原結合片段、變異體或衍生物包括(但不限於)多株、單株、小鼠、人類、人源化、靈長類化或嵌合抗體、單鏈抗體、抗原決定基結合片段(例如，Fab、Fab'及F(ab')2 、Fd、Fvs、單鏈Fv(scFv)、雙硫鍵連接之Fv(sdFv)、包含VL或VH域之片段、藉由Fab表現文庫產生之片段)及抗獨特性(抗-Id)抗體(包括，例如，本文所揭示的抗-Id抗體至抗-ILT7抗體)。ScFv分子係此項技術中已知並描述於例如美國專利第5,892,019號中。本發明之免疫球蛋白或抗體分子可係免疫球蛋白分子之任何類型(例如，IgG、IgE、IgM、IgD、IgA及IgY)、類別(例如，IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1及IgA2等)或亞類。 如本文中所使用，術語「重鏈部分」包括衍生自免疫球蛋白重鏈之胺基酸序列。包含重鏈部分之多肽包含下列中之至少一者：CH1域、鉸鏈(例如，上、中及/或下鉸鏈區)域、CH2域、CH3域或其變異體或片段。例如，用於本發明中的結合多肽可包含包含CH1域之多肽鏈；包含CH1域、鉸鏈域之至少一部分及CH2域之多肽鏈；包含CH1域及CH3域之多肽鏈；包含CH1域、鉸鏈域之至少一部分及CH3域之多肽鏈或包含CH1域、鉸鏈域之至少一部分、CH2域及CH3域之多肽鏈。在另一個實施例中，本發明之多肽包含包含CH3域之多肽鏈。另外，用於本發明中之結合多肽可缺乏CH2域之至少一部分(例如，整個CH2域或其一部分)。如上所述，一般技術者應明瞭，可修飾此等域(例如，重鏈部分)以使彼等的胺基酸序列自天然生成之免疫球蛋白分子改變。 在本文所揭示的某些抗-ILT7抗體或其抗原結合片段、變異體或衍生物中，多聚物之一條多肽鏈的重鏈部分與多聚物之第二條多肽鏈上的彼等相同。或者，本發明之含重鏈部分之單體不同。 用於本文所揭示的診斷及治療方法中的結合分子之重鏈部分可衍生自不同免疫球蛋白分子。例如，多肽之重鏈部分可包含衍生自IgG1分子之CH1域及衍生自IgG3分子之鉸鏈區。在另一個實例中，重鏈部分可包含部分衍生自IgG1分子及部分衍生自IgG3分子之鉸鏈區。在另一個實例中，重鏈部分可包含部分衍生自IgG1分子及部分衍生自IgG4分子之嵌合鉸鏈。 如本文中所使用，術語「輕鏈部分」包括衍生自免疫球蛋白輕鏈(例如，κ或λ輕鏈)之胺基酸序列。該輕鏈部分可包含VL或CL域中之至少一者。 本文所揭示的抗-ILT7抗體或其抗原結合片段、變異體或衍生物可就抗原(例如，本文所揭示的標靶多肽(例如，全長或成熟ILT7))之其識別或特異性結合的抗原決定基或部分而言進行描述或說明。標靶多肽之該與抗體之抗原結合域特異性相互作用的部分為「抗原決定基」或「抗原決定子」。標靶多肽可包含單一抗原決定基，但通常包含至少兩個抗原決定基，且可包括任何數目之抗原決定基，端視抗原之尺寸、構形及類型而定。另外，應注意，標靶多肽上的「抗原決定基」可為或可包括非多肽元件，例如，抗原決定基可包括碳水化合物側鏈。 抗體之肽或多肽抗原決定基的最小尺寸被認為在約四個至五個胺基酸。肽或多肽抗原決定基可包含至少七個、至少九個或至少約15個至約30個胺基酸。因為CDR可識別呈其三級形式之抗原肽或多肽，故包含抗原決定基之胺基酸不需要係鄰接的，且在一些情況下，可甚至不在相同肽鏈上。藉由本發明抗-ILT7抗體識別的肽或多肽抗原決定基可包含ILT7之至少4個、至少5個、至少6個、至少7個、至少8個、至少9個、至少10個、至少15個、至少20個、至少25個或約15至約30個鄰接或非鄰接胺基酸之序列。 關於「特異性結合」，其通常意指抗體經由其抗原結合域結合至抗原決定基且該結合在抗原結合域與抗原決定基之間需一些互補性。根據此定義，當抗體經由其抗原結合域結合至抗原決定基比其結合至隨機非相關抗原決定基更容易時，認為該抗體「特異性結合」至該抗原決定基。本文中使用術語「特異性」以定性某抗體結合至某抗原決定基之相對親和力。例如，抗體「A」可視為對給定之抗原決定基具有比抗體「B」更高特異性或抗體「A」可認為可以相較於對相關抗原決定基「D」之結合更高的特異性結合至抗原決定基「C」。 關於「優先結合」，其意指抗體特異性比其結合至相關、相似、同源、或類似抗原決定基更容易地結合至抗原決定基。因此，「優先結合」至給定抗原決定基的抗體相比結合至相關抗原決定基更可能結合至該抗原決定基，儘管該抗體可與相關抗原決定基交叉反應。 舉非限制性實例，若抗體以比抗體對第二抗原決定基之解離常數(KD )小的KD 結合該第一抗原決定基，則該抗體可被認為優先結合第一抗原決定基。在另一個非限制性實例中，若抗體以比抗體對第二抗原決定基之KD 小至少一個數量級的親和力結合第一抗原決定基，則該抗體可被視為優先結合第一抗原。在另一個非限制性實例中，若抗體以比抗體對第二抗原決定基之KD 小至少兩個數量級的親和力結合第一抗原決定基，則該抗體可被認為優先結合第一抗原決定基。 在另一個非限制性實例中，若抗體以比抗體對第二抗原決定基之脫離速率(k(off))小的k(off)結合第一抗原決定基，則該抗體可被視為優先結合第一抗原決定基。在另一個非限制性實例中，若抗體以比抗體對第二抗原決定基之k(off)小至少一個數量級的親和力結合第一抗原決定基，則該抗體可被視為優先結合第一抗原決定基。在另一個非限制性實例中，若抗體以比抗體對第二抗原決定基之k(off)小至少兩個數量級的親和力結合第一抗原決定基，則該抗體可被視為優先結合第一抗原決定基。本文中所揭示的抗體或其抗原結合片段、變異體或衍生物可認為以小於或等於5 X 10-2 sec-1 、10-2 sec-1 、5 X l0-3 sec-1 或l0-3 sec-1 的脫離速率(k(off))結合本文中所揭示的標靶多肽(例如，ILT7，例如，人類ILT7、靈長類ILT7、鼠類ILT7或人類ILT7、靈長類ILT7及鼠類ILT7之任何組合)或其片段或變異體。本發明之抗體可認為以小於或等於5 X 10-4 sec-1 、10-4 sec-1 、5 X 10-5 sec-1 或10-5 sec-1 、5 X 10-6 sec-1 、10-6 sec-1 、5 X 10-7 sec-1 或10-7 sec-1 的脫離速率(k(off))結合本文中所揭示的標靶多肽(例如，ILT7，例如，人類ILT7、靈長類ILT7、鼠類ILT7或人類ILT7、靈長類ILT7及鼠類ILT7之任何組合)或其片段或變異體。 本文中所揭示的抗體或其抗原結合片段、變異體或衍生物可認為以大於或等於103 M-1 sec-1 、5 X 103 M-1 sec-1 、104 M-1 sec-1 或5 X 104 M-1 sec-1 的結合速率(k(on))結合本文中所揭示的標靶多肽(例如，ILT7，例如，人類ILT7、靈長類ILT7、鼠類ILT7或人類ILT7、靈長類ILT7及鼠類ILT7之任何組合)或其片段或變異體。本發明之抗體可以大於或等於105 M-1 sec-1 、5 X 105 M-1 sec-1 、106 M-1 sec-1 或5 X 106 M-1 sec-1 或107 M-1 sec-1 的結合速率(k(on))結合本文中所揭示的標靶多肽(例如，ILT7，例如，人類ILT7、靈長類ILT7、鼠類ILT7或人類ILT7、靈長類ILT7及鼠類ILT7之任何組合)或其片段或變異體。 若抗體優先結合抗原決定基或重疊抗原決定基達到其在某種程度上阻斷參考抗體與抗原決定基結合的程度，則該抗體被認為競爭性地抑制參考抗體結合至給定抗原決定基。競爭性抑制可藉由相關技術中已知的任何方法，例如，競爭ELISA分析法來測定。抗體可被認為競爭性地抑制至少90%、至少80%、至少70%、至少60%或至少50%參考抗體與給定抗原決定基之結合。 如本文中所使用，術語「親和力」係指個別抗原決定基與免疫球蛋白分子之CDR結合之強度的量度。參見，例如，Harlow等人 (1988) Antibodies:A Laboratory Manual (Cold Spring Harbor Laboratory Press，第2版) 第27至28頁。如本文中所使用，術語「結合性」係指群體免疫球蛋白與抗原之間之複合的整體穩定性，換言之，免疫球蛋白混合物與抗原之功能性組合強度。參見，例如，Harlow，第29至34頁。結合性係不但與群體中之個別免疫球蛋白分子與特異性抗原決定基之親和力相關，而且與免疫球蛋白與抗原之價相關。例如，二價單株抗體與具有高度重複抗原決定基結構之抗原(諸如聚合物)之間之相互作用將係高結合性之相互作用。 本發明之抗-ILT7抗體或其抗原結合片段、變異體或衍生物亦可就其交叉反應性而言進行描述或說明。如本文中所使用，術語「交叉反應性」係指對一種抗原具特異性之抗體與第二抗原反應的能力；兩種不同抗原物質之間之相關性的量度。因此，若抗體結合至除了誘導抗體形成之抗原決定基之外的抗原決定基，則該抗體具交叉反應性。交叉反應性抗原決定基一般包含許多與誘導抗原決定基相同的互補結構特徵，及在一些情況下，可實際上比初始抗原決定基配合更好。 例如，某些抗體具有某種程度的交叉反應性，在於其結合相關但不同的抗原決定基，例如，與參考抗原決定基至少95%、至少90%、至少85%、至少80%、至少75%、至少70%、至少65%、至少60%、至少55%及至少50%同一性(如使用相關技術中已知且於本文中描述的方法計算得)之抗原決定基。若抗體不結合具有與參考抗原決定基之小於95%、小於90%、小於85%、小於80%、小於75%、小於70%、小於65%、小於60%、小於55%及小於50%同一性(如使用相關技術中已知且於本文中描述的方法計算得)之抗原決定基，則該抗體可被認為具有很小或無交叉反應性。若抗體不結合抗原決定基之任何其他類似物、直系同源物(ortholog)或同源物，則該抗體可被認為對某抗原決定基具有「高度特異性」。 本發明之抗-ILT7結合分子，例如，抗體或其抗原結合片段、變異體或衍生物亦可就其對本發明多肽(例如，ILT7，例如，人類ILT7、靈長類ILT7、鼠類ILT7或人類ILT7、靈長類ILT7及鼠類ILT7之任何組合)之結合親和力而言進行描述或說明。有用的結合親和力包括彼等具有小於5 x 10-2 M、10-2 M、5 x 10-3 M、10-3 M、5 x 10-4 M、10-4 M、5 x 10-5 M、10-5 M、5 x 10-6 M、10-6 M、5 x 10-7 M、10-7 M、5 x 10-8 M、10-8 M、5 x 10-9 M、10-9 M、5 x 10-10 M、10-10 M、5 x 10-11 M、10-11 M、5 x 10-12 M、10-12 M、5 x 10-13 M、10-13 M、5 x 10-14 M、10-14 M、5 x 10-15 M或10-15 M之解離常數或Kd之結合親和力。 在一些實施例中，抗體以小於1 nM之解離常數或Kd結合至人類ILT7。在一些實施例中，抗體以小於5 nM之解離常數或Kd結合至食蟹獼猴ILT7。在一些實施例中，抗體以小於1 nM之解離常數或Kd結合至人類ILT7及以小於5 nM之解離常數或Kd結合至食蟹獼猴ILT7。 如前面所示，各種免疫球蛋白類別的恆定區域之亞單元結構及三維組態係熟知的。如本文中所使用，術語「VH域」包括免疫球蛋白重鏈之胺基端可變域及術語「CH1域」包括免疫球蛋白重鏈之前(最胺基端)恆定區域。CH1域與VH域相鄰且為免疫球蛋白重鏈分子之鉸鏈區的胺基端。 如本文中所使用，術語「CH2域」包括重鏈分子之部分，其(例如)使用習知編號方案自抗體之約殘基244延伸至殘基360(殘基244至360，Kabat編號系統；及殘基231至340，EU編號系統；參見Kabat EA等人)。CH2域係獨特的，在於其與另一域不完全成對。而是，兩個經N連接之碳水化合物分支鏈插入介於完整天然IgG分子之兩個CH2域之間。亦有據可查係CH3域自IgG分子之CH2域延伸至C端且包括約108個殘基。 如本文中所使用，術語「鉸鏈區」包括重鏈分子之連接CH1域與CH2域之部分。該鉸鏈區包含約25個殘基且係可撓的，因此容許兩個N端抗原結合區域獨立地移動。鉸鏈區可細分為三個不同域：上、中及下鉸鏈域(Roux等人，J. Immunol. 161:4083 (1998))。 如本文中所使用，術語「雙硫鍵」包括形成於兩個硫原子之間之共價鍵。胺基酸半胱胺酸包括可與第二硫醇基形成雙硫鍵或橋之硫醇基。在大多數天然生成之IgG分子中，CH1及CL區藉由雙硫鍵連接及此兩條重鏈係由在使用Kabat編號系統對應於239及242之位置(位置226或229，EU編號系統)的兩個雙硫鍵連接。 如本文中所使用，術語「嵌合抗體」將意指其中免疫反應性區或位點係獲自或衍生自第一物種及恆定區(其可係完整、部分或依照本發明經修飾)係獲自第二物種之任何抗體。在某些實施例中，標靶結合區或位點將源自於非人類源(例如，鼠類或靈長類)及恆定區係人類。 如本文中所使用，術語「工程化抗體」係指其中重鏈或輕鏈或二者中的可變域係藉由具已知特異性之抗體之一或多個CDR之至少部分置換且若需要則藉由部分架構區置換及序列改變而改變之抗體。雖然CDR可衍生自與衍生架構區的抗體相同類別或甚至亞類的抗體，但可設想CDR將衍生自不同類別之抗體或衍生自不同物種之抗體。本文中，其中源自具已知特異性之非人類抗體之一或多個「供體」CDR接枝於人類重鏈或輕鏈架構區中之工程化抗體稱為「人源化抗體」。可不需要用源自供體可變域之完整CDR置換所有CDR以使一個可變域之抗原結合能力轉移至另一個可變域。而是，可僅需要轉移維持標靶結合位點之活性所必需之彼等殘基。 進一步認識到，於人源化抗體之重鏈或輕鏈或二者中之可變域中的架構區可僅包含人類來源殘基，在該情況下，人源化抗體之此等架構區稱為「全人類架構區」。或者，若需要維持適當之結合或增進結合至ILT7抗原，則供體可變域之架構區之一或多個殘基可於人源化抗體之重鏈或輕鏈或二者中之可變域之人類架構區的對應位置中經工程化。已依此方式工程化的人類架構區因此將包含人類及供體架構殘基之混合物，且在本文中稱為「部分人類架構區」。 例如，可大體上依照Winter與合作者 (Jones等人，Nature 321:522-525 (1986)；Riechmann等人，Nature 332:323-327 (1988)；Verhoeyen等人，Science 239:1534-1536 (1988))之方法，藉由取代齧齒類或突變體齧齒類抗-ILT7 CDR或CDR序列成人類抗體之對應序列進行抗-ILT7抗體之人源化。亦可參見美國專利第5,225,539號；第5,585,089號；第5,693,761號；第5,693,762號；第5,859,205號；以引用的方式併入本文中。所得人源化抗-ILT7抗體將包含於人源化抗體之重鏈及/或輕鏈之可變域之全人類架構區中的至少一個齧齒類或突變體齧齒類CDR。在一些情況下，於人源化抗-ILT7抗體之一或多個可變域之架構區中的殘基被對應非人類(例如齧齒類)殘基置換(參見，例如，美國專利第5,585,089號；第5,693,761號；第5,693,762號；及第6,180,370號)，在該情況下，所得人源化抗-ILT7抗體將包含於重鏈及/或輕鏈之可變域中之部分人類架構區。 此外，人源化抗體可包含未見於接受者抗體或供者抗體之殘基。進行此等修飾以進一步精化抗體性能(例如，以獲得所需親和力)。一般而言，人源化抗體將包含實質上所有至少一個，及通常兩個可變域，其中所有或實質上所有CDR相當於彼等非人類免疫球蛋白之CDR區，而所有或實質上所有架構區為彼等人類免疫球蛋白序列之架構區。人源化抗體亦視需要包含通常來自人類免疫球蛋白之免疫球蛋白恆定區(Fc)之至少一部分。關於其他細節，參見Jones等人，Nature 331:522-525 (1986)；Riechmann等人，Nature 332:323-329 (1988)；及Presta，Curr. Op. Struct. Biol. 2:593-596 (1992)；以引用的方式併入本文中。因此，此等「人源化」抗體可包括其中實質上少於完全人類可變域被來自非人類物種之對應序列取代之抗體。在實務中，人源化抗體通常為人類抗體，其中一些CDR殘基及可能一些架構殘基會被來自齧齒類抗體之類似位點之殘基取代。參見，例如，美國專利第5,225,539號；第5,585,089號；第5,693,761號；第5,693,762號；第5,859,205號。亦可參見美國專利第6,180,370號及國際公開案第WO 01/27160號，其中揭示人源化抗體及用於產生具有針對預定抗原之改良親和力之人源化抗體之技術。 如本文中所使用，術語「連接」、「融合(fused/fusion)」係互換使用。此等術語係指藉由包含化學結合或重組方式之方式將兩個以上之元件或組件接合在一起。「框內融合」係指以保持原始ORF之正確轉譯閱讀框的方式接合兩個或更多個多核苷酸開放閱讀框(ORF)以形成鄰接較長ORF。因此，重組融合蛋白質係含有兩個或更多個對應於由原始ORF編碼之多肽之區段(該等區段在自然中通常不如此接合)之單一蛋白質。儘管在整個融合區段中如此連續製造該閱讀框，但可藉由(例如)框內連接子序列物理地或空間地分開該等區段。例如，編碼免疫球蛋白可變區之CDR之多核苷酸可進行框內融合，但間隔編碼至少一種免疫球蛋白架構區或其他CDR區之多核苷酸，只要「融合」CDR共轉譯為鄰接多肽的一部分即可。 在多肽之內容中，「線性序列」或「序列」係於多肽中胺基酸以胺基端至羧基端之方向之順序，其中在該序列中彼此相鄰之殘基在多肽之初級結構中係鄰接的。 如本文中所使用，術語「表現」係指基因產生生化物例如多肽之過程。該過程包括基因於細胞內之任何功能性呈現之操作，包含但不限於基因敲低(gene knockdown)及暫態表現及穩態表現二者。其包括(但不限於)基因轉錄成信使RNA(mRNA)及此類mRNA轉譯成多肽。若最終所需產物係生化物，則表現包括該生化物及任何前體之產生。基因之表現產生「基因產物」。如本文中所使用，基因產物可係核酸(例如，藉由基因之轉錄產生之信使RNA)或轉譯自轉錄本之多肽。本文描述之基因產物進一步包括經轉錄後修飾(例如，聚腺核苷酸化)之核酸或經轉譯後修飾(例如，甲基化、醣化、脂質加成、締合其他蛋白亞單元、蛋白分解裂解及類似修飾)之多肽。 如本文中所使用，術語「治療」係指治療性治療及預防性(prophylactic/preventative)措施，其中目標係防止或減慢(減輕)非期望生理變化或失調症，諸如自體免疫病症之發展。有利或所需臨床結果包括(但不限於)緩和症狀、及減輕疾病程度、穩定(即不惡化)疾病狀態及延遲或減慢疾病進展、或改善或減緩疾病狀態、及緩解(不論部分或全部)，不論是否可檢測到。「治療」亦可意指相較於若非接受治療之預期存活期，延長生存期。彼等有需要治療者包括彼等已經患有病症或失調症者以及彼等易罹患病症或失調症者或彼等欲預防病症或失調症者。 關於「個體(subject)」或「個體(individual)」或「動物」或「患者」或「哺乳動物」意指需要診斷、預後或療法之任何個體，特別係哺乳動物個體。哺乳動物個體包括人類、家畜、農畜、及動物園中之動物、競技動物、或寵物動物，諸如，狗、貓、天竺鼠、兔、大鼠、小鼠、馬、牛、乳牛等等。 如本文中所使用，片語諸如「將從投與抗-ILT7抗體中獲益的個體」及「有需要治療的動物」包括將從投與所使用的抗-ILT7抗體(例如，用於檢測抗-ILT7多肽(例如，用於診斷程序))獲益及/或從用抗-ILT7抗體治療(即，減輕或預防疾病)中獲益之個體，諸如哺乳動物個體。 II. ILT7 如本文中所使用，術語「ILT7」及「ILT7多肽」可互換使用。在某些實施例中，ILT7為全長ILT7。在另一個實施例中，ILT7為成熟ILT7(胺基酸24至499)。在其他實施例中，ILT7可包括全長ILT7、其片段或ILT7變異體多肽，其中該ILT7之片段或ILT7變異體多肽保留活性ILT7之部分或全部功能性質。 全長人類ILT7為499個胺基酸的蛋白質(寄存編號P59901)，其包含信號肽(胺基酸1至23)、胞外域(胺基酸24至446)、跨膜域(胺基酸447至467)及細胞質域(胺基酸468-499)。該胞外域包括四個免疫球蛋白樣C2域(胺基酸24至118、123至213、224至313及324至413)。ILT7為免疫球蛋白樣轉錄本(ILT)或白血球免疫球蛋白樣受體(LIR)基因家族的一員。食蟹獼猴ILT7之序列係以SEQ ID NO:292提供：
Figure 02_image001
ILT7係選擇性表現於周邊血液單核細胞(PBMC)之子組(稱為漿細胞樣樹突狀細胞(pDC))上。pDC為免疫調節分子干擾素(IFN)-α的主要來源，及ILT7在調節從此等細胞釋放IFN-α上發揮作用。 III. 抗-ILT7結合分子 在某些實施例中，本文中所提供的ILT-7結合分子為包含本文中所提供的ILT7-結合抗體之序列及/或性質之抗體或其抗原結合片段。ILT7抗體之序列之SEQ ID NO提供於表2中。   表2：ILT7抗體序列SEQ ID NO
Figure 106107877-A0304-0002
 在某些實施例中，本發明之結合分子(例如，抗體或其抗原結合片段、變異體或衍生物，例如，抗體7C7、ILT70080、ILT70080.1至ILT70080.7、ILT70083、ILT70083.1至ILT70083.9、ILT70089、ILT70100、ILT70137、ILT70142、ILT70144及ILT70052)結合至ILT7並抑制從漿細胞樣樹突狀細胞釋放IFN-α。 在某些實施例中，本發明之抗體包括抗-ILT7抗體或結合至ILT7的其抗原結合片段、變異體或衍生物，例如，抗體7C7、ILT70080、ILT70080.1至ILT70080.7、ILT70083、ILT70083.1至ILT70083.9、ILT70089、ILT70100、ILT70137、ILT70142、ILT70144及ILT70052。在某些實施例中，該抗-ILT7抗體結合人類ILT7、靈長類ILT7、鼠類ILT7、或人類ILT7、靈長類ILT7及鼠類ILT7之任何組合。 在一個實施例中，本發明提供一種經單離的結合分子(例如，抗體或其抗原結合片段、變異體或衍生物)，其特異性結合至與抗體7C7、ILT70080、ILT70080.1至ILT70080.7、ILT70083、ILT70083.1至ILT70083.9、ILT70089、ILT70100、ILT70137、ILT70142、ILT70144或ILT70052相同的ILT7抗原決定基。在另一個實施例中，本發明提供一種經單離的結合分子，例如，抗體或其抗原結合片段、變異體或衍生物，其特異性結合至與包含7C7、ILT70080、ILT70080.1至ILT70080.7、ILT70083、ILT70083.1至ILT70083.9、ILT70089、ILT70100、ILT70137、ILT70142、ILT70144或ILT70052之VH及VL之抗體相同的ILT7抗原決定基。在另一個實施例中，本發明提供一種經單離的結合分子，例如，抗體或其抗原結合片段、變異體或衍生物，其特異性結合至與包含7C7、ILT70080、ILT70080.1至ILT70080.7、ILT70083、ILT70083.1至ILT70083.9、ILT70089、ILT70100、ILT70137、ILT70142、ILT70144或ILT70052之VH或VL之抗體相同的ILT7抗原決定基。 在另一個實施例中，本發明提供一種經單離的結合分子，例如，抗體或其抗原結合片段、變異體或衍生物，其特異性結合至ILT7，且競爭性抑制抗體7C7、ILT70080、ILT70080.1至ILT70080.7、ILT70083、ILT70083.1至ILT70083.9、ILT70089、ILT70100、ILT70137、ILT70142、ILT70144或ILT70052特異性結合至ILT7，例如，人類ILT7、靈長類ILT7、鼠類ILT7、或人類ILT7、靈長類ILT7及鼠類ILT7之任何組合。在另一個實施例中，本發明提供一種經單離的結合分子，例如，抗體或其抗原結合片段、變異體或衍生物，其特異性結合至ILT7，且競爭性抑制包含7C7、ILT70080、ILT70080.1至ILT70080.7、ILT70083、ILT70083.1至ILT70083.9、ILT70089、ILT70100、ILT70137、ILT70142、ILT70144或ILT70052之VH及VL之抗體特異性結合至ILT7，例如，人類ILT7、靈長類ILT7、鼠類ILT7、或人類ILT7、靈長類ILT7及鼠類ILT7之任何組合。在另一個實施例中，本發明提供一種經單離的結合分子，例如，抗體或其抗原結合片段、變異體或衍生物，其特異性結合至ILT7，且競爭性抑制包含7C7、ILT70080、ILT70080.1至ILT70080.7、ILT70083、ILT70083.1至ILT70083.9、ILT70089、ILT70100、ILT70137、ILT70142、ILT70144或ILT70052之VH或VL之抗體特異性結合至ILT7，例如，人類ILT7、靈長類ILT7、鼠類ILT7、或人類ILT7、靈長類ILT7、鼠類ILT7之任何組合。 在某些實施例中，本發明之結合分子具有與參考抗-ILT7抗體分子之胺基酸序列具有至少80%、85%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%或95%序列同一性之胺基酸序列。在另一個實施例中，結合分子與參考抗體具有至少96%、97%、98%、99%或100%序列同一性。在某些實施例中，該參考抗體為7C7、ILT70080、ILT70080.1至ILT70080.7、ILT70083、ILT70083.1至ILT70083.9、ILT70089、ILT70100、ILT70137、ILT70142、ILT70144或ILT70052。 在另一個實施例中，本發明提供一種經單離的抗體或其抗原結合片段、變異體或衍生物，其包含具有與SEQ ID NO:22、42、52、62、72、82、92、102、112、122、132、142、152、162、172、182、192、202、212、222、232、242、252及262之VH胺基酸序列至少80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同的胺基酸序列之VH域、基本上由其組成、或由其組成，其中該包含該VH域之抗體或其抗原結合片段、變異體或衍生物特異性或優先結合至ILT7。在另一個實施例中，抗體或其抗原結合片段、變異體或衍生物抑制IFN-α從漿細胞樣樹突狀細胞釋放。 在另一個實施例中，本發明包括一種經單離的抗體或其抗原結合片段、變異體或衍生物，其包含具有與SEQ ID NO:27、47、57、67、77、87、97、107、117、127、137、147、157、167、177、187、197、207、217、227、237、247、257或267之VL胺基酸序列至少80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同的胺基酸序列之VL域、基本上由其組成、或由其組成，其中該包含該VL域之抗體或其抗原結合片段、變異體或衍生物特異性或優先結合至ILT7。在另一個實施例中，該抗體或其抗原結合片段、變異體或衍生物抑制IFN-α從漿細胞樣樹突狀細胞釋放。 在另一個實施例中，本發明包括一種經單離的抗體或其抗原結合片段、變異體或衍生物，其包含具有與分別SEQ ID NO:22及27；分別42及47；分別52及57；分別62及67；分別72及77；分別82及87；分別92及97；分別102及107；分別112及117；分別122及127；分別132及137；分別142及147；分別152及157；分別162及167；分別172及177；分別182及187；分別192及197；分別202及207；分別212及217；分別222及227；分別232及237；分別242及247；分別252及257；或分別262及267之VH及VL序列至少80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同的胺基酸序列之VH域及VL域、基本上由其組成、或由其組成，其中該包含VH及VL域之抗體或其抗原結合片段、變異體或衍生物特異性或優先結合至ILT7。在另一個實施例中，該抗體或其抗原結合片段、變異體或衍生物抑制IFN-α從漿細胞樣樹突狀細胞釋放。 在另一個實施例中，本發明包括一種經單離的抗體或其抗原結合片段、變異體或衍生物，其包含具有分別SEQ ID NO:23、24、25、28、29及30；分別43、44、45、48、49及50；分別53、54、55、58、59及60；分別63、64、65、68、69及70；分別73、74、74、78、79及80；分別83、84、85、88、89及90；分別93、94、95、98、99及100；分別103、104、105、108、109及110；分別113、114、115、118、119及120；分別123、124、125、128、129及130；分別133、134、135、138、139及140；分別143、144、145、148、149及150；分別153、154、155、158、159及160；分別163、164、165、168、169及170；分別173、174、175、178、179及180；分別183、184、185、188、189及190；分別193、194、195、198、199及200；分別203、204、205、208、209及210；分別213、214、215、218、219及220；分別223、224、225、228、229及230；分別233、234、235、238、239及240；分別243、244、245、248、249及250；分別253、254、255、258、259及260；分別263、264、265、268、269及270之VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3序列之VH域及VL域、基本上由其組成、或由其組成，其中該包含VH及VL域之抗體或其抗原結合片段、變異體或衍生物特異性或優先結合至ILT7。在另一個實施例中，該抗體或其抗原結合片段、變異體或衍生物抑制IFN-α從漿細胞樣樹突狀細胞釋放。 本發明抗-ILT7抗體之合適的生物活性變異體可用於本發明方法中。該等變異體將保留親本抗-ILT7抗體之所需結合性質。用於製造抗體變異體之方法一般於此項技術中可得。 此項技術中熟知用於突變誘發及核苷酸序列改變之方法。參見，例如，Walker及Gaastra編(1983) Techniques in Molecular Biology (MacMillan Publishing Company，New York)；Kunkel，Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82:488-492 (1985)；Kunkel等人，Methods Enzymol. 154:367-382 (1987)；Sambrook等人 (1989) Molecular Cloning: A Laboratory Manual (Cold Spring Harbor，N.Y.)；美國專利第4,873,192號；及該文中所引用的參考文獻；以引用的方式併入本文中。關於不影響所關注多肽之生物活性之適當胺基酸取代的指導可參見Dayhoff等人之模型 (1978)，Atlas of Protein Sequence and Structure (Natl. Biomed. Res. Found.，Washington，D.C.)，第345至352頁，以其全文引用的方式併入本文中。Dayhoff等人之模型使用可接受的點突變(PAM)胺基酸相似性矩陣(PAM 250矩陣)以確定適合的保守性胺基酸取代。保守性取代，諸如一個胺基酸與另一個具有相似性質之胺基酸交換，可係有利的。如由Dayhoff等人模型之PAM 250矩陣所教示之保守性胺基酸取代的實例包括(但不限於)Gly↔Ala、Val↔Ile↔Leu、Asp↔Glu、Lys↔Arg、Asn↔Gln及Phe↔Trp↔Tyr。 在構築抗-ILT7結合分子 (例如，抗體或其抗原結合片段、變異體或衍生物)之變異體中，進行修飾使得變異體繼續具有所需性質，例如，能夠特異性結合至ILT7，及在某些實施例中，可抑制IFN-α之釋放。明顯地，在編碼變異體多肽之DNA中所進行的任何突變不需要放置序列在閱讀框外。在一些實施例中，在DNA中所進行的任何突變不會建立可產生二級mRNA結構的互補區域。 用於測量抗-ILT7結合分子(例如，抗體或其抗原結合片段、變異體或衍生物)之結合特異性之方法包括(但不限於)標準競爭結合分析、細胞毒性分析、IFN釋放分析、ELISA分析及類似者。 當本文中論述本文所揭示的任何特定多肽(包括恆定區、CDR、VH域或VL域)是否與另一多肽為至少65%、70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或甚至100%相同時，可使用此項技術中已知的方法及電腦程式/軟體，諸如(但不限於)BESTFIT程式(Wisconsin Sequence Analysis Package，Unix第8版，Genetics Computer Group，University Research Park，575 Science Drive，Madison，Wis. 53711)，來確定同一性%。BESTFIT使用Smith及Waterman之局部同源性算法(1981) Adv. Appl. Math. 2:482-489，以發現兩個序列之間具同源性的最佳片段。當使用BESTFIT或任何其他序列比對程式以確定特定序列是否與根據本發明之參考序列為例如95%相同時，當然，設置參數，使得於參考多肽序列之整個長度上計算同一性百分比，及允許同源性為至多5%參考序列中胺基酸總數之空隙。 就本發明目的而言，可使用Smith-Waterman同源性檢索算法，利用具有12之空隙開放扣分及2之空隙擴展扣分、62之BLOSUM矩陣之仿射空隙檢索，來確定序列同一性百分比。Smith及Waterman (1981) Adv. Appl. Math. 2:482-489中教示該Smith-Waterman同源性檢索算法。變異體可例如不同於參考抗-ILT7抗體(例如，7C7、ILT70080、ILT70080.1至ILT70080.7、ILT70083、ILT70083.1至ILT70083.9、ILT70089、ILT70100、ILT70137、ILT70142、ILT70144或ILT70052)少到1至15個胺基酸殘基，少到1至10個胺基酸殘基，諸如6至10個，少到5個，少到4個、3個、2個或甚至1個胺基酸殘基。 能夠特異性結合ILT7且保留所需活性之多肽之精確化學結構取決於許多因素。因分子中存在可離子化胺基及羧基，故特定多肽可呈酸性或鹼性鹽形式或呈中性形式獲得。當置於適宜環境條件中時保留其生物活性之所有該等製劑包含於如本文中所使用的抗-ILT7抗體之定義中。此外，可藉由使用糖基團衍生化(醣化)或藉由其他補充分子(諸如脂質、磷酸鹽、乙醯基及類似者)擴充多肽之一級胺基酸序列。其亦可藉由與醣類共軛來擴充。此擴充之某些態樣係經由產生寄主之轉譯後處理系統來達成；其他此等修飾可活體外引入。在任何事件中，此等修飾包含於本文中所使用的抗-ILT7抗體之定義中，只要不破壞抗-ILT7抗體之所需性質即可。預期在各種分析中，此等修飾可藉由增強或消除多肽之活性來定量或定性地影響活性。此外，鏈中的個別胺基酸殘基可藉由氧化、還原或其他衍生化修飾，及多肽可經裂解以得到保留活性之片段。不破壞所需性質(例如，對ILT7之結合特異性、結合親和力及相關聯活性，例如，抑制從肥大細胞、內皮細胞釋放受ILT7驅動之細胞激素之能力及TF-1細胞之增殖)之此等改變並未使多肽序列從如本文中所使用的所關注抗-ILT7抗體之定義中移出。 此項技術提供關於多肽變異體之製備及使用之基本指導。在製備抗-ILT7結合分子(例如抗體或其抗原結合片段、變異體或衍生物)之變異體中，熟習此項技術者可輕易地確定天然蛋白質之核苷酸或胺基酸序列之哪種修飾將得到適合用作用於本發明方法中之醫藥組合物之治療活性組分的變異體。 抗-ILT7抗體之恆定區可經變異以多種方法改變效應子功能。例如，參見美國專利第6,737,056B1號及美國專利申請公開案第2004/0132101A1號，該等案件揭示將抗體與Fc受體之結合最佳化之Fc突變。 在某些抗-ILT7抗體中，Fc部分可使用相關技術中已知的技術進行突變以減小效應子功能。例如，恆定區域之缺失或失活(經由點突變或其他方法)可減弱Fc受體與循環經修飾抗體之結合。在其他情況下，與本發明一致之恆定區修飾可使得適度補充結合且因此減小經共軛細胞毒素之血清半衰期及非特異性締合。恆定區之其他修飾可用於修飾雙硫鍵或寡醣基團，由於抗原特異性或抗體撓性之增加而增進局部化。所得生理特性、生物可利用性及修飾之其他生化效應(諸如生物分佈及血清半衰期)可使用熟知的免疫學技術在不過度實驗下輕易地測定並量化。 本文中所提供的某些ILT7抗體係經去岩藻糖基化。缺乏Fc N-聚糖的核心岩藻糖殘基之抗體在相比岩藻糖基化對應物以更低濃度但效力高很多下展示強的ADCC，且彼等可經由其高度結合至γ受體IIIa(Fc FcγRIIIa)避免血清免疫球蛋白G (IgG)對ADCC之抑制效應。 本發明之抗-ILT7抗體亦包括例如藉由將任何類型之分子共價連接至抗體進行修飾而共價連接不防止抗體特異性結合至其同源抗原決定基之衍生物。例如，但非限制地，該等抗體衍生物包括已例如藉由醣化、乙醯化、聚乙二醇化、磷酸化、醯胺化、藉由已知保護基/阻斷基衍生化、蛋白分解裂解、與細胞配位體或其他蛋白質連接等修飾之抗體。多種化學修飾中之任何者可藉由已知技術(包括(但不限於)特異性化學裂解、乙醯化、甲醯化等)進行。另外，該衍生物可包含一或多個非典型胺基酸。 「保守胺基酸取代」為胺基酸殘基係經具有帶相似電荷的側鏈之胺基酸殘基取代者。相關技術中已經定義具有帶類似電荷的側鏈之胺基酸殘基家族。該等家族包括具有鹼性側鏈的胺基酸(例如，離胺酸、精胺酸、組胺酸)、具有酸性側鏈的胺基酸(例如，天冬胺酸、麩胺酸)、具有未帶電荷極性側鏈的胺基酸(例如，甘胺酸、天冬醯胺、麩胺醯胺、絲胺酸、蘇胺酸、酪胺酸、半胱胺酸)、具有非極性側鏈的胺基酸(例如，丙胺酸、纈胺酸、白胺酸、異白胺酸、脯胺酸、苯丙胺酸、甲硫胺酸、色胺酸)、具有β分支側鏈的胺基酸(例如，蘇胺酸、纈胺酸、異白胺酸)及具有芳族側鏈的胺基酸(例如，酪胺酸、苯基丙胺酸、色胺酸、組胺酸)。或者，突變可順著全部或部分編碼序列隨機引入，諸如藉由飽和突變誘發，及可基於生物活性篩選所得突變體以識別保留活性(例如，結合抗-ILT7多肽之能力)的突變體。 例如，可僅在抗體分子之架構區中或僅在CDR區中引入突變。所引入的突變可係沉默或中性錯義突變，即，對抗體結合抗原之能力無影響或影響很小。此等類型之突變可用於將密碼子使用最佳化，或增進雜種瘤之抗體產生。或者，非中性錯義突變可改變抗體結合抗原之能力。大多數沉默及中性錯義突變之位置極有可能在架構區中，而大多數非中性錯義突變之位置極有可能在CDR中，然而，此並非係絕對要求。熟習此項技術者可設計並測試具有所需性質之突變體分子，諸如抗原結合活性無改變或結合活性改變(例如，抗原結合活性改善或抗體特異性改變)。突變誘發後，可例行表現經編碼之蛋白質及可使用本文中所述的技術或藉由相關技術中已知的例行修飾技術來確定經編碼之蛋白質之功能性及/或生物活性(例如，免疫特異性結合ILT7多肽之至少一個抗原決定基之能力)。 在某些實施例中，本發明之抗-ILT7抗體包含至少一個最佳化互補決定區(CDR)。關於「最佳化之CDR」意指CDR已經過修飾並基於賦予包含最佳化之CDR之抗-ILT7抗體持續或改善之結合親和性及/或抗-ILT7活性篩選最佳化之序列。「抗-ILT7活性」可包括(例如)調節以下與ILT7相關聯之活性中之一或多者之活性(例如，ILT7驅動之干擾素自漿細胞樣樹突狀細胞之釋放、對ILT7-表現細胞之細胞毒性或與ILT7相關聯之任何其他活性)。抗-ILT7活性亦可造成與ILT7表現相關聯之疾病(包括(但不限於)某些類型之自體免疫病症，例如，全身性紅斑狼瘡、慢性風濕病及牛皮癬)之發病率或嚴重度之減小。該等修飾可涉及置換CDR中之胺基酸殘基使得抗-ILT7抗體保留對ILT7抗原之特異性且具有改良之結合親和性及/或改良之抗-ILT7活性。 IV. 編碼抗-ILT7抗體之多核苷酸 本發明亦提供編碼本發明抗-ILT7抗體或其抗原結合片段、變異體或衍生物之核酸分子。 在另一個實施例中，本發明包括一種經單離的多核苷酸，其包含編碼具有與包含SEQ ID NO:12、22、32、42、52、62、72、82、92、102、112、122、132、142、152、162、172、182、192、202、212、222、232或242之參考VH域多肽序列係至少80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同的胺基酸序列之VH域之核酸、基本上由其組成、或由其組成，其中該包含經編碼之VH域之抗-ILT7抗體特異性或優先結合至ILT7。在某些實施例中，多核苷酸編碼抑制IFN-α自漿細胞樣樹突狀細胞釋放之抗體或其抗原結合片段、變異體或衍生物。 在另一個實施例中，本發明包括一種經單離的多核苷酸，其包含編碼具有與包含SEQ ID NO:17、27、37、47、57、67、77、87、97、107、117、127、137、147、157、167、177、187、197、207、217、227、237或247之參考VL域多肽序列係至少80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同的胺基酸序列之VL域之核酸、基本上由其組成、或由其組成，其中該包含經編碼之VL域之抗-ILT7抗體特異性或優先結合至ILT7。在某些實施例中，多核苷酸編碼抑制IFN-α自漿細胞樣樹突狀細胞釋放之抗體或其抗原結合片段、變異體或衍生物。 上文所述之任何多核苷酸可進一步包括編碼例如信號肽以引導經編碼之多肽之分泌、如本文中所述之抗體恆定區或如本文中所述之其他異種多肽之附加核酸。此外，如本文別處更詳細地所描述，本發明包括包含上文所述多核苷酸中之一或多者之組合物。 在一個實施例中，本發明包括包含第一多核苷酸及第二多核苷酸之組合物，其中該第一多核苷酸編碼如本文中所述之VH域及其中該第二多核苷酸編碼如本文中所述之VL域。具體而言，組合物可包含如以SEQ ID NO:11、21、31、41、51、61、71、81、91、101、111、121、131、141、151、161、171、181、191、201、211、221、231或241陳述之編碼VH域之多核苷酸及如以SEQ ID NO:16、26、36、46、56、66、76、86、96、106、116、126、136、146、156、166、176、186、196、206、216、226、236或246陳述之編碼VL域之多核苷酸、或基本上由其組成、或由其組成。組合物亦可包含編碼以SEQ ID NO:12、22、32、42、52、62、72、82、92、102、112、122、132、142、152、162、172、182、192、202、212、222、232或242陳述之序列之編碼VH域之多核苷酸及編碼以SEQ ID NO:17、27、37、47、57、67、77、87、97、107、117、127、137、147、157、167、177、187、197、207、217、227、237、247、257或267陳述之序列之編碼VL域之多核苷酸、基本上由其組成、或由其組成。在一些實施例中，該編碼VH域之多肽及該編碼VL域之多肽係於相同載體上。在一些實施例中，該編碼VH域之多肽及該編碼VL域之多肽係於不同載體上。 本發明亦包括如別處所述之本發明多核苷酸之片段。另外，本發明亦包涵編碼如本文中所述的融合多肽、Fab片段及其他衍生物之多核苷酸。 可由相關技術中已知的任何方法產生或製造多核苷酸。例如，若已知抗體之核苷酸序列，則編碼抗體之多核苷酸可自經化學合成之寡核苷酸組裝(例如，如Kutmeier等人，Bio Techniques 17:242 (1994)中所述)，此簡單涉及合成包含編碼抗體之序列之一部分之重疊寡核苷酸，退火及連接彼等寡核苷酸，且然後藉由PCR擴增所連接的寡核苷酸。 或者，本發明之編碼抗-ILT7抗體、或其抗原結合片段、變異體或衍生物之多核苷酸可自適宜來源之核酸產生。若包含編碼特定抗體之核酸之純系不可用，但已知抗體分子之序列，則編碼該抗體之核酸可經化學合成或藉由使用可雜交至該序列3'及5'端之合成引物的PCR擴增或藉由使用特異性針對特定基因序列之寡核苷酸探針的選殖以從編碼該抗體或其他抗-ILT7抗體之cDNA庫識別(例如)cDNA純系，而從適宜來源(例如，抗體cDNA庫、或產生自表現該抗體或其他抗-ILT7抗體之任何組織或細胞(諸如經選擇以表現抗體之雜種瘤細胞)之cDNA庫、或單離自表現抗體或其他抗-ILT7抗體之任何組織或細胞(諸如經選擇以表現抗體之雜種瘤細胞之核酸)，例如，poly A+RNA)獲得。藉由PCR產生之經擴增核酸可然後使用相關技術中熟知的任何方法選殖至可複製選殖載體中。 一旦確定抗體-ILT7抗體或其抗原結合片段、變異體或衍生物之核苷酸序列及對應之胺基酸序列，可使用相關技術中熟知的用於操縱核苷酸序列之方法，例如，重組DNA技術、定向誘變、PCR等操縱其核苷酸序列(參見，例如，Sambrook等人 (1990) Molecular Cloning，實驗室手冊(第2版；Cold Spring Harbor Laboratory，Cold Spring Harbor，N.Y.)及Ausubel等人編(1998) Current Protocols in Molecular Biology (John Wiley & Sons，NY)中所述技術，該兩案係以其全文引用的方式併入本文中)，以產生具有不同胺基酸序列之抗體，例如以建立胺基酸取代、缺失及/或插入。 編碼抗-ILT7結合分子(例如抗體或其抗原結合片段、變異體或衍生物)之多核苷酸可由任何多核糖核苷酸或多脫氧核糖核苷酸(其可為未經修飾之RNA或DNA或經修飾之RNA或DNA)組成。例如，編碼抗-ILT7抗體或其抗原結合片段、變異體或衍生物之多核苷酸可由單股及雙股DNA、為單股區及雙股區之混合物之DNA、單股及雙股RNA、及為單股區及雙股區之混合物之RNA、包含可為單股或更通常雙股或單股區及雙股區之混合物之DNA及RNA之雜種分子。另外，編碼抗-ILT7結合分子(例如抗體或其抗原結合片段、變異體或衍生物)之多核苷酸可由包含RNA或DNA、或RNA及DNA二者之三股區組成。編碼抗-ILT7結合分子(例如抗體或其抗原結合片段、變異體或衍生物)之多核苷酸亦可包含一或多個經修飾鹼基或出於穩定性或出於其他原因而修飾之DNA或RNA主鏈。「經修飾」鹼基包括(例如)三苯甲基化鹼基及非尋常鹼基(諸如肌苷)。可對DNA及RNA進行多種修飾；因此，「多核苷酸」包括經化學、酶、或代謝修飾之形式。 編碼衍生自免疫球蛋白(例如，免疫球蛋白重鏈部分或輕鏈部分)之多肽之非天然變異體之經單離的多核苷酸可藉由引入一或多個核苷酸取代、添加或缺失至免疫球蛋白之核苷酸序列中使得一或多個胺基酸取代、添加或缺失引入至經編碼之蛋白質中而建立。突變可藉由標準技術，諸如定點誘變及PCR介導誘變引入。保守胺基酸取代可在一或多個非必需胺基酸殘基進行。 V. 融合蛋白質及抗體共軛物 如本文別處更詳細地論述，抗-ILT7結合分子(例如，本發明之抗體或其抗原結合片段、變異體或衍生物)可進一步重組融合至異種多肽(在N-或C-端)或化學共軛 (包括共價及非共價共軛)至多肽或其他組合物。例如，抗-ILT7抗體可重組融合或共軛至可作為檢測分析中之標籤之分子及效應子分子(諸如異種多肽、藥物、放射性核素或毒素)。參見，例如，PCT公開案WO 92/08495；WO 91/14438；WO 89/12624；美國專利第5,314,995號；及EP 396,387。 本發明之抗-ILT7抗體或其抗原結合片段、變異體或衍生物可包括經修飾，即，藉由將任何類型之分子共價連接至抗體使得共價連接不防止抗體結合至ILT7之衍生物。例如，但非限制地，該等抗體衍生物包括已經過修飾，例如，藉由醣化、乙醯化、聚乙二醇化、磷酸化、醯胺化、藉由已知保護基/阻斷基衍生化、蛋白分解裂解、連接至細胞配位體或其他蛋白質等之抗體。任何多種化學修飾可藉由已知技術，包括(但不限於)特異性化學裂解、乙醯化、甲醯化等進行。另外，該衍生物可包含一或多個非典型胺基酸。 抗-ILT7結合分子(例如，本發明之抗體或其抗原結合片段、變異體或衍生物)可由經肽鍵或經修飾肽鍵(即肽電子等排體)彼此接合之胺基酸組成，且可包含除20個基因編碼之胺基酸之外的胺基酸。例如，抗-ILT7抗體可藉由自然過程(諸如轉譯後處理)或藉由相關技術中熟知的化學修飾技術進行修飾。此等修飾以基礎文本及更詳細的專著、以及大量研究文獻進行充分描述。修飾可發生在抗-ILT7結合分子中之任何地方(包括肽主鏈、胺基酸側鏈及胺基或羧基端)，或發生在諸如碳水化合物之部分上。應明瞭，相同類型之修飾可以相同或不同程度存在於給定抗-ILT7結合分子中的若干位點。此外，給定抗-ILT7結合分子可包含諸多類型之修飾。抗-ILT7結合分子可為分支鏈，例如，由於泛素化所致，且彼等可為環狀，含有或不含支化。環狀、分支鏈及分支鏈環狀抗-ILT7結合分子可自轉譯後自然過程獲得或可藉由合成方法製得。修飾包括乙醯化、醯化、ADP-核糖基化、醯胺化、黃素之共價連接、原血紅素部分之共價連接、核苷酸或核苷酸衍生物之共價連接、脂質或脂質衍生物之共價連接、磷脂醯肌醇之共價連接、交聯、環化、雙硫鍵形成、脫甲基作用、共價交聯之形成、半胱胺酸之形成、焦麩胺酸鹽之形成、甲醯化、γ-羧化、醣化、GPI固著點形成、羥基化、碘化、甲基化、豆蔻醯化、氧化、聚乙二醇化、蛋白分解處理、磷酸化、異戊二烯化、外消旋化、硒醯化、硫酸鹽化、諸如精胺醯化之胺基酸至蛋白質之轉運-RNA介導的加成、及泛素化。(參見，例如，Proteins--Structure and Molecular Properties，T. E. Creighton，W. H. Freeman and Company，NY；第2版 (1993)；Johnson編(1983) Posttranslational Covalent Modification of Proteins (Academic Press，NY)，第1至12頁；Seifter等人，Meth. Enzymol. 182:626-646 (1990)；Rattan等人，Ann. NY Acad. Sci. 663:48-62 (1992))。 本發明亦提供融合蛋白質，其包含抗-ILT7抗體或其抗原結合片段、變異體或衍生物、及異種多肽。抗體所融合的異種多肽可用於作用於或可用於靶向抗-ILT7多肽表現細胞。 在一個實施例中，本發明之融合蛋白質包含具有本發明抗體之VH域中任何一或多者之胺基酸序列或本發明抗體或其片段、變異體或衍生物之VL域中任何一或多者之胺基酸序列、及異種多肽序列之多肽、基本上由其組成、或由其組成。 在另一個實施例中，用於本文中所揭示的診斷及治療方法中之融合蛋白質包含具有抗-ILT7抗體或其抗原結合片段、變異體或衍生物之VH域中CDR之任何一者、二者、三者之胺基酸序列、或抗-ILT7抗體或其片段、變異體或衍生物之VL域中CDR之任何一者、二者、三者之胺基酸序列及異種多肽序列之多肽、基本上由其組成、或由其組成。在一個實施例中，融合蛋白質包含具有本發明抗-ILT7抗體之至少一個VH域之胺基酸序列及本發明抗-ILT7抗體或其片段、衍生物或變異體之至少一個VL域之胺基酸序列及異種多肽序列之多肽。在一些實施例中，融合蛋白質之VH及VL域對應於特異性結合ILT7之至少一個抗原決定基之單一源抗體(或scFv或Fab片段)。在又一個實施例中，用於本文中所揭示的診斷及治療方法中之融合蛋白質包含具有抗-ILT7抗體之VH域中CDR之任何一者、二者、三者或更多者之胺基酸序列及抗-ILT7抗體或其抗原結合片段或變異體之VL域中CDR之任何一者、二者、三者或更多者之胺基酸序列及異種多肽序列之多肽。在一些實施例中，該VH域或VL域中CDR之兩者、三者、四者、五者、六者或更多者對應於本發明之單一源抗體(或scFv或Fab片段)。本發明亦包含編碼此等融合蛋白質之核酸分子。 於文獻中報告之例示性融合蛋白質包括T細胞受體之融合(Gascoigne等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA 84:2936-2940 (1987))；CD4(Capon等人，Nature 337:525-531 (1989)；Traunecker等人，Nature 339:68-70 (1989)；Zettmeissl等人，DNA Cell Biol. USA 9:347-353 (1990)；及Byrn等人，Nature 344: 667-670 (1990))；L-選擇素(歸巢受體)(Watson等人，J. Cell. Biol. 110: 2221-2229 (1990)；及Watson等人，Nature 349: 164-167 (1991))；CD44 (Aruffo等人，Cell 61: 1303-1313 (1990))；CD28及B7(Linsley等人，J. Exp. Med. 173: 721-730 (1991))；CTLA-4 (Lisley等人，J. Exp. Med. 174: 561-569 (1991))；CD22 (Stamenkovic等人，Cell 66: 1133-1144 (1991))；TNF受體(Ashkenazi等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88: 10535-10539 (1991)；Lesslauer等人，Eur. J. Immunol. 27: 2883-2886 (1991)；及Peppel等人，J. Exp. Med. 174: 1483-1489 (1991))；及IgE受體a(Ridgway及Gorman，J. Cell. Biol. 第115卷，文摘號1448(1991))。 如本文別處所述，抗-ILT7結合分子，例如，本發明之抗體或其抗原結合片段、變異體或衍生物可融合至異種多肽以增加多肽之活體內半衰期或用於使用相關技術中已知方法的免疫檢測中。例如，在一個實施例中，PEG可共軛至本發明之抗-ILT7抗體以增加其活體內半衰期。參見Leong等人，Cytokine 16: 106 (2001)；Adv. in Drug Deliv. Rev. 54:531 (2002)；或Weir等人，Biochem. Soc. Transactions 30:512 (2002)。 此外，抗-ILT7結合分子(例如，本發明之抗體或其抗原結合片段、變異體或衍生物)可融合至標記序列(諸如肽)以利於其純化或檢測。在一些實施例中，標記胺基酸序列為六聯組胺酸肽，尤其地，諸如提供於pQE載體中之標籤(QIAGEN, Inc.,，9259 Eton Avenue，Chatsworth，Calif.，91311)，其中許多可從市面購得。如Gentz等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86: 821-824 (1989)中所述，例如，六聯組胺酸提供融合蛋白質之簡便純化。可用於純化之其他肽標籤包括(但不限於)「HA」標籤(其對應於衍生自流行性感冒血球凝集素蛋白之抗原決定基(Wilson等人，Cell 37: 767 (1984)))及「旗標」標籤。 可使用相關技術中熟知的方法(參見(例如)美國專利第5,116,964號及第5,225,538號)來製備融合蛋白質。可經驗上選擇進行融合的精確位點以將融合蛋白質之分泌或結合特徵最佳化。然後，將編碼融合蛋白質之DNA轉染至寄主細胞中以用於表現。 抗-ILT7結合分子(例如，本發明之抗體或其抗原結合片段、變異體或衍生物)可呈非共軛形式使用或可共軛至多種分子中之至少一者，例如，以改善分子之治療性質，以利於標靶檢測，或用於患者之成像或治療。抗-ILT7結合分子(例如，本發明之抗體或其抗原結合片段、變異體或衍生物)可在純化之前或之後、或在進行純化時進行標記或共軛。 特定言之，可將本發明之抗-ILT7抗體或其抗原結合片段、變異體或衍生物共軛至治療劑、前藥、肽、蛋白質、酶、病毒、脂質、生物反應改質劑、藥劑或PEG。 熟習此項技術者當明瞭共軛物亦可使用多種技術根據所選的待共軛的作用劑進行組裝。例如，與生物素之共軛物係例如藉由使結合多肽與生物素之活化酯(諸如生物素N-羥基琥珀醯亞胺酯)反應進行製備。類似地，與螢光標記物之共軛物可在偶聯劑(例如，彼等列於本文中者)的存在下，或藉由與異硫氰酸酯(諸如螢光素-異硫氰酸酯)反應進行製備。依類似方法製備本發明之抗-ILT7抗體或其抗原結合片段、變異體或衍生物之共軛物。 本發明進一步包涵共軛至診斷劑或治療劑之抗-ILT7結合分子，例如，本發明之抗體或其抗原結合片段、變異體或衍生物。抗-ILT7抗體(包括其抗原結合片段、變異體及衍生物)可診斷上使用，以例如監測疾病之發展或進展作為臨床測試程序之一部分以例如確定給定治療及/或預防方案之療效。例如，檢測可藉由偶聯抗-ILT7抗體或其抗原結合片段、變異體或衍生物與可檢測物質促進。可檢測物質之實例包括各種酶、輔基、螢光材料、發光材料、生物發光材料、放射性材料、使用各種正電子發射斷層攝影術之正電子發射金屬、及非放射性順磁性金屬離子。關於可共軛至根據本發明用作診斷劑之抗體的金屬離子，參見，例如，美國專利第4,741,900號。適宜酶之實例包括辣根過氧化物酶、鹼性磷酸酶、β-半乳糖苷酶或乙醯膽鹼酯酶；適宜輔基錯合物之實例包括鏈黴抗生物素(streptavidin)/生物素及抗生物素蛋白(avidin)/生物素；適宜螢光材料之實例包括傘形酮(umbelliferone)、螢光素、異硫氰酸螢光素、若丹明(rhodamine)、二氯三嗪胺螢光素、丹磺醯氯或藻紅素(phycoerythrin)；發光材料之實例包括魯米諾(luminol)；生物發光材料之實例包括螢光素酶、蟲螢光素及水母素；及適宜放射性材料之實例包括125 I、131 I、111 In、90 Y或99 Tc。 抗-ILT7結合分子(例如抗體或其抗原結合片段、變異體或衍生物)亦藉由偶聯其至化學發光化合物以可檢測方式標記。然後，藉由檢測產生於化學反應過程中之發光之存在來確定化學發光標記之抗-ILT7結合分子之存在。特別有用的化學發光標記化合物之實例為魯米諾、異魯米諾(isoluminol)、熱性吖錠酯、咪唑、吖啶鎓鹽及草酸酯。 抗-ILT7抗體或其抗原結合片段、變異體或衍生物以可檢測方式標記之方法之一係藉由藉由連接其至酶且將經連接產物用於酶免疫分析(EIA)(Voller, A.，「The Enzyme Linked Immunosorbent Assay (ELISA)」 Microbiological Associates Quarterly Publication，Walkersville, Md.；Diagnostic Horizons 2:1-7 (1978)；Voller等人，J. Clin.Pathol.31: 507-520 (1978)；Butler, Meth. Enzymol. 73: 482-523 (1981)；Maggio編 (1980) Enzyme Immunoassay, CRC Press，Boca Raton, Fla.；Ishikawa等人編(1981) Enzyme Immunoassay (Kgaku Shoin，Tokyo)。結合至抗-ILT7抗體之酶將與適宜受質(諸如發色受質)以此種產生可例如藉由分光光度法、螢光光度法或藉由視覺方法檢測之化學基團的方式反應。可用於以可檢測方式標記抗體之酶包括(但不限於)蘋果酸脫氫酶、葡萄球菌核酸酶、δ-5-類固醇異構酶、酵母菌乙醇脫氫酶、α-甘油磷酸酯、脫氫酶、磷酸丙糖異構酶、辣根過氧化物酶、鹼性磷酸酶、天冬醯胺酸酶、葡萄糖氧化酶、β-半乳糖苷酶、核糖核酸酶、脲酶、觸酶(catalase)、葡萄糖-6-磷酸脫氫酶、葡糖澱粉酶及乙醯膽鹼酯酶。另外，檢測可藉由採用酶呈色受質的比色法來達成。檢測亦可藉由受質酶反應的程度相比類似製備標準品之視覺比較來達成。 檢測亦可使用任何多種其他免疫分析法來達成。例如，藉由放射性標記抗-ILT7結合分子，例如，抗體或其抗原結合片段、變異體或衍生物，經使用放射免疫分析(RIA)(參見，例如，Weintraub (1986年3月) Principles of Radioimmunoassays，Seventh Training Course on Radioligand Assay Techniques (The Endocrine Society)，其以引用的方式併入本文中)，可檢測該結合分子。可藉由裝置(包括(但不限於)γ計數器、閃爍計數器或放射自顯影術)檢測放射性同位素。 抗-ILT7結合分子(例如抗體或其抗原結合片段、變異體或衍生物)亦可使用螢光發射金屬(諸如152Eu)或其他鑭系金屬進行以可檢測方式標記。此等金屬可使用諸如二伸乙基三胺五乙酸(DTPA)或乙二胺四乙酸(EDTA)之此等金屬螯合基團連接至結合分子。 熟知用於共軛各種基團至抗體(例如，抗-ILT7抗體)或其抗原結合片段、變異體或衍生物之技術，參見，例如，Amon等人 (1985) 「Monoclonal Antibodies for Immunotargeting of Drugs in Cancer Therapy」，Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy，Reisfeld等人編(Alan R. Liss, Inc.)，第243-56頁；Hellstrom等人(1987) 「Antibodies for Drug Delivery」，Controlled Drug Delivery，Robinson等人編(第2版；Marcel Dekker, Inc.)，第623-53頁)；Thorpe (1985) 「Antibody Carriers of Cytotoxic Agents in Cancer Therapy:A Review」，Monoclonal Antibodies '84:Biological and Clinical Applications，Pinchera等人編，第475-506頁；「Analysis, Results, and Future Prospective of the Therapeutic Use of Radiolabeled Antibody in Cancer Therapy」，Monoclonal Antibodies for Cancer Detection and Therapy，Baldwin等人編，Academic Press，第303-16頁(1985)；及Thorpe等人(1982) 「The Preparation and Cytotoxic Properties of Antibody-Toxin Conjugates」，Immunol.Rev. 62: 119-58。 VI. 抗體多肽之表現 使用逆轉錄酶及DNA聚合酶，依照熟知的方法，可同時地或分開地製造編碼抗體之輕鏈及重鏈之DNA序列。可藉由共有恆定區引物或藉由基於經公開之重鏈及輕鏈DNA及胺基酸序列之更具特異性引物引發PCR。如上所述，PCR亦可用於單離編碼抗體輕鏈及重鏈之DNA純系。在此情況下，可藉由共有引物或較大同源探針(諸如小鼠恆定區探針)篩選庫。 使用相關技術中已知的技術，限制性圖譜分析及序列分析，依照詳細述於(例如)關於重組DNA技術之前述參考文獻的標準所熟知技術，可自細胞單離得DNA(通常係質體DNA)。當然，DNA係可依照本發明在單離製程或隨後分析期間的任何時間點合成。 於操縱所單離的遺傳物質以提供本發明之抗-ILT7抗體或其抗原結合片段、變異體或衍生物後，通常，將編碼抗-ILT7抗體之多核苷酸插入表現載體中以引入可用於產生所需量抗-ILT7抗體之寄主細胞中。 結合至本文中所述靶分子(例如ILT7)之抗體或其片段、變異體或衍生物(例如抗體之重鏈或輕鏈)之重組表現需要構建含有編碼抗體之多核苷酸之表現載體。一旦已獲得本發明之編碼抗體分子或抗體之重鏈或輕鏈、或其部分(例如，含有重鏈或輕鏈可變域)之多核苷酸，藉由重組DNA技術，採用相關技術中熟知的技術，可製得用於產生抗體分子之載體。因此，本文中描述藉由表現含有編碼抗體之核苷酸序列之多核苷酸製備蛋白質之方法。可使用熟習此項技術者所熟知的方法來構建含有抗體編碼序列及適宜轉錄及轉譯控制信號之表現載體。此等方法包括(例如)活體外重組DNA技術、合成技術及活體內基因重組。因此，本發明提供包含可以操作方式與啟動子連接之編碼本發明抗體分子或其重鏈或輕鏈、或重鏈或輕鏈可變域之核苷酸序列之可複製載體。此等載體可包括編碼抗體分子之恆定區之核苷酸序列(參見，例如，PCT公開案WO 86/05807；PCT公開案WO 89/01036；及美國專利第5,122,464號)及抗體之可變域可選殖至用於表現整條重鏈或輕鏈之此種載體中。 本文中使用術語「載體」或「表現載體」意指依照本發明用作用於引入寄主細胞並在寄主細胞中表現所需基因之媒劑之載體。如熟習此項技術者已知，此等載體可輕易地選自由質體、噬菌體、病毒及逆轉錄病毒組成之群。一般而言，與本發明相容之載體將包含篩選標記、有利於所需基因之選殖及在真核或原核細胞中進入及/或複製之能力之適宜限制位點。 為達本發明之目的，可使用許多表現載體系統。例如，一類載體使用衍生自動物病毒(諸如牛乳突狀瘤病毒、多瘤病毒、腺病毒、疫苗病毒、桿狀病毒、逆轉錄病毒(RSV、MMTV或MOMLV)或SV40病毒)之DNA元件。其他載體涉及使用具有內部核糖體結合位點之多順反子系統。另外，可藉由引入允許篩選經轉染之寄主細胞之一或多個標記來篩選DNA已經整合進入至其染色體中之細胞。該標記可提供營養性寄主之質子移變、殺生物劑抗性(例如，抗生素)或重金屬(諸如銅)抗性。該可選擇標記基因可直接連接至待表現之DNA序列，或藉由共轉化引入至相同細胞中。其他元件亦可為mRNA之最佳合成所需。此等元件可包括信號序列、接合信號、以及轉錄啟動子、增強子及終止信號。 在一些實施例中，經選殖之可變區基因係連同依上所述合成之重鏈及輕鏈恆定區基因(例如人類)一起插入至表現載體中。當然，本發明中可使用能夠在真核細胞中引起表現之任何表現載體。適宜載體之實例包括(但不限於)質體pcDNA3、pHCMV/Zeo、pCR3.1、pEF 1/His、pIND/GS、pRc/HCMV2、pSV40/Zeo2、pTRACER-HCMV、pUB6/V5-His、pVAX1及pZeoSV2(可從Invitrogen，San Diego，Calif.獲得)及質體pCI(可從Promega，Madison，Wis.獲得)。一般而言，若免疫球蛋白重鏈及輕鏈為可例如藉由自動化系統進行之例行實驗，則從較大數目之經轉化之細胞篩選彼等適宜表現高水平者。 更一般而言，一旦已製備編碼抗-ILT7抗體之單體亞單元之載體或DNA序列，可引入表現載體至適宜寄主細胞中。引入質體至寄主細胞中可藉由熟習此項技術者熟知的各種技術來達成。此等技術包括(但不限於)轉染(包括電泳及電穿孔)、原生質體融合、磷酸鈣沉澱、細胞與經包覆DNA之融合、微量注射及完整病毒之感染。參見，Ridgway (1988) 「Mammalian Expression Vectors」 Vectors，Rodriguez及Denhardt編(Butterworths，Boston，Mass.)，第24.2章，第470-472頁。通常，寄主中質體之引入係經由電穿孔。具有表現構築體之寄主細胞在適合產生輕鏈及重鏈之條件下生長，且分析重鏈及/或輕鏈蛋白質合成。例示性分析技術包括酶聯免疫吸附分析(ELISA)、放射免疫測定分析(RIA)或螢光活化細胞分選分析(FACS)、免疫組織化學法及類似者。 藉由習知技術將該表現載體轉移至宿主細胞中，且接著藉由習知技術培養該等經轉染細胞以產生用於本文所述方法中之抗體。因此，本發明包括含有以可操作方式連接至異種啟動子之編碼本發明抗體或其重鏈或輕鏈之多核苷酸之寄主細胞。在針對於雙鏈抗體之表現的一些實施例中，編碼重鏈及輕鏈兩者之載體可於寄主細胞中共表現以表現整個免疫球蛋白分子，如下文詳述。 如本文中所使用，「寄主細胞」係指具有使用重組DNA技術所構建的載體且編碼至少一個異種基因之細胞。在用於自重組寄主單離抗體之製程的描述中，術語「細胞」及「細胞培養物」可互換用於表示抗體來源，除非另外清楚地指出。換言之，從「細胞」回收多肽可意指從離心沉降的全細胞，或從同時含有培養基及懸浮細胞之細胞培養物任一者。 多種寄主表現載體系統可用於表現用於本文所述方法中之抗體分子。此等寄主表現系統代表載體(藉由該等載體可產生及隨後純化所需的編碼序列)，且亦代表在經適宜核苷酸編碼序列轉化或轉染時可在原位表現本發明抗體分子之細胞。該等寄主表現系統包括(但不限於)微生物，諸如經含有抗體編碼序列之重組噬菌體DNA、質體DNA或黏質體DNA表現載體轉化之細菌(例如，大腸桿菌(E. coli )、枯草桿菌(B. subtilis ))；經含有抗體編碼序列之重組酵母表現載體轉化之酵母(例如，酵母菌屬(Saccharomyces)、畢氏酵母菌(Pichia))；感染含有抗體編碼序列之重組病毒表現載體(例如，桿狀病毒)之昆蟲細胞系統；感染重組病毒表現載體(例如，椰菜花葉病毒，CaMV；煙草花葉病毒，TMV)或利用含有抗體編碼序列之重組質體表現載體(例如，Ti質體)轉化之植物細胞系統；或具有含有衍生自哺乳動物細胞基因組之啟動子(例如，金屬硫蛋白啟動子)或衍生自哺乳動物病毒(例如，腺病毒晚期啟動子；疫苗病毒7.5K啟動子)之重組表現構築體之哺乳動物細胞系統(例如，COS、CHO、BLK、293、3T3細胞)。尤其用於表現完整重組抗體分子之細菌細胞(諸如大腸埃希氏菌(Escherichia coli )或真核細胞)係用於表現重組抗體分子。例如，結合包含(例如)來自人類細胞巨大病毒之主要中間早期基因啟動子元件之載體之哺乳動物細胞(諸如中國倉鼠卵巢細胞(CHO))為抗體之有效表現系統(Foecking等人，Gene 45: 101 (1986)；Cockett等人，Bio/Technology 8: 2 (1990))。 用於蛋白質表現之寄主細胞系通常係源自哺乳動物；據信熟習此項技術者有能力確定最適合於欲表現於其中之所需基因產物之特定寄主細胞系。例示性寄主細胞系包括(但不限於)CHO(中國倉鼠卵巢)、DG44及DUXB11(中國倉鼠卵巢細胞系，DHFR-)、HELA(人類子宮頸癌)、CVI(猴子腎臟細胞系)、COS(具有SV40 T抗原之CVI之衍生物)、VERY、BHK(幼年倉鼠腎臟)、MDCK、293、WI38、R1610(中國倉鼠纖維母細胞) BALBC/3T3(小鼠纖維母細胞)、HAK(倉鼠腎細胞系)、SP2/O(小鼠骨髓瘤)、P3.×63-Ag3.653(小鼠骨髓瘤)、BFA-1c1BPT(牛內皮細胞)、RAJI(人類淋巴細胞)及293(人類腎臟)。寄主細胞系通常可自商業服務(美國組織培養物保藏所(American Tissue Culture Collection))或自經公開之文獻得到。 另外，可選擇會調節所插入序列之表現，或以所需特定方式修飾並處理基因產物之寄主細胞菌株。蛋白質產物之此等修飾(例如，醣化)及處理(例如，裂解)對於蛋白質功能可具重要作用。不同寄主細胞就蛋白質及基因產物之轉譯後處理及修飾而言具有特徵性及特異性機制。可選擇適宜的細胞系或寄主系統以確保經表現之外源蛋白質之正確修飾及處理。對此，可使用具有用於恰當處理基因產物之初級轉錄本、醣化及磷酸化之細胞機器之真核寄主細胞。 就長時間高產率產生重組蛋白質而言，穩定表現係有用的。例如，穩定表現抗體分子之細胞系可經工程化。勝於使用包含病毒複製來源之表現載體，寄主細胞可改用藉由適宜表現控制元件(例如，啟動子、增強子、序列、轉錄終止子、聚腺苷酸化位點等)控制之DNA及可選擇標記進行轉化。於引入外源DNA之後，可允許經工程化細胞在豐富培養基中生長1至2天，且然後更換為選擇性培養基。重組質體中的可選擇標記賦予選擇抗性且允許細胞穩定地整合質體至其染色體中且生長形成變異區，該等變異區繼而可經選殖並擴增至細胞系中。該方法可有利地用於將穩定表現抗體分子之細胞系工程化。 可使用多種篩選系統，包括(但不限於)單純疱疹病毒胸苷激酶(Wigler等人，Cell 11:223 (1977))、次黃嘌呤-鳥嘌呤磷酸核糖轉移酶(Szybalska及Szybalski，Proc. Natl. Acad. Sci. USA 48: 202 (1992))及腺嘌呤磷酸核糖基轉移酶(Lowy等人，Cell 22: 817 (1980))基因可分別用於tk-、hgprt-或aprt-細胞中。此外，抗代謝物抗性可用為以下基因之篩選的基礎：dhfr，其對甲胺喋呤賦予抗性(Wigler等人，Natl. Acad. Sci. USA 77: 357 (1980)；O'Hare等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA 78: 1527 (1981))；gpt，其對麥考酚酸(mycophenolic acid)賦予抗性(Mulligan及Berg，Proc. Natl. Acad. Sci. USA 78:2072 (1981))；neo，其對胺基糖苷G-418賦予抗性(Clinical Pharmacy 12: 488-505)；Wu及Wu，Biotherapy 3: 87-95 (1991)；Tolstoshev，Ann. Rev. Pharmacol. Toxicol. 32: 573-596 (1993)；Mulligan，Science 260: 926-932 (1993)；及Morgan及Anderson，Ann. Rev. Biochem. 62: 191-217 (1993)；TIB TECH 11(5): 155-215 (1993年5月)；及hygro，其對潮黴素賦予抗性(Santerre等人，Gene 30: 147 (1984)。可使用的通常在重組DNA技術中為人知曉的方法述於Ausubel等人(1993) Current Protocols in Molecular Biology (John Wiley & Sons，NY)；Kriegler (1990) 「Gene Transfer and Expression」 in A Laboratory Manual (Stockton Press，NY)；Dracopoli等人(編)(1994) Current Protocols in Human Genetics (John Wiley & Sons，NY) 第12章及第13章；Colberre-Garapin等人(1981) J. Mol. Biol. 150: 1，該等案件係以其全文引用的方式併入本文中。 抗體分子之表現水平可藉由載體擴增(欲回顧，請參見Bebbington及Hentschel (1987) 「The Use of Vectors Based on Gene Amplification for the Expression of Cloned Genes in Mammalian Cells in DNA Cloning」 (Academic Press，NY)(第3卷)增加。在表現抗體之載體系統中的標記係可擴增時，存於寄主細胞培養物中之抑制劑含量之增加將使得標記基因複製本的數量增加。由於擴增區與抗體基因相關聯，故抗體的產量亦將增加(Crouse等人，Mol. Cell. Biol. 3: 257 (1983))。 活體外產生允許擴大規模以得到大量的所需多肽。相關技術中已知在組織培養條件下進行哺乳動物細胞培養之技術且包括均質懸浮培養，例如在氣升式反應器或在連續攪拌反應器中，或固定或包埋式細胞培養，例如在中空纖維、微膠囊中，於瓊脂糖微珠或陶瓷濾筒上。若需要及/或期望，可藉由常用層析法，例如凝膠過濾、離子交換層析、於DEAE-纖維素上層析或(免疫-)親和力層析，例如，在優先生物合成合成鉸鏈區多肽之後或在本文所述的HIC層析步驟之前或之後，來純化多肽之溶液。 編碼本發明之抗-ILT7抗體或其抗原結合片段、變異體或衍生物之基因亦可在非哺乳動物細胞(諸如昆蟲、細菌或酵母或植物細胞)中表現。容易吸收核酸之細菌包括腸桿菌科成員，諸如大腸埃希氏菌或沙門氏菌(Salmonella )菌株；芽胞桿菌科，諸如枯草桿菌(Bacillus subtilis )；肺炎球菌(Pneumococcus )；鏈球菌及流感嗜血桿菌。應進一步瞭解，當在細菌中表現時，異種多肽通常變成內含體之一部分。該等異種多肽必須經單離，純化及然後組裝至功能性分子中。在需要四價抗體形式的情況下，亞單元將接著自組裝至四價抗體(WO 02/096948A2)中。 在細菌系統中，許多表現載體宜可根據欲針對於所表現的抗體分子之用途來選擇。例如，當欲製造大量此類蛋白質時，就產生抗體分子之醫藥組合物而言，可期望引導高含量的融合蛋白質產物(其易於純化)之表現之載體。此等載體包括(但不限於)大腸桿菌表現載體pUR278(Ruther等人，EMBO J. 2:1791 (1983))，其中抗體編碼序列可個別地在具有lacZ編碼區之框中接合至載體中以製得融合蛋白質；pIN載體(Inouye及Inouye，Nucleic Acids Res. 13: 3101-3109 (1985)；Van Heeke及Schuster，J. Biol. Chem. 24: 5503-5509 (1989))；及類似者。pGEX載體亦可用於表現外源多肽為具有麩胱甘肽S-轉移酶(GST)之融合蛋白質。一般而言，此等融合蛋白質係可溶的且可自溶解細胞藉由吸附並結合至基質麩胱甘肽-瓊脂糖珠粒接著在游離麩胱甘肽之存在下溶離而輕易地純化。pGEX載體係設計成包含凝血酶或因子Xa蛋白酶裂解位點，使得經選殖靶基因產物可自GST部分釋放。 除了原核生物外，亦可使用真核微生物。釀酒酵母菌(Saccharomyces cerevisiae )或常見麵包酵母係真核微生物中最常用者，然而，許多其他菌株通常係可用的，例如，畢氏酵母菌(Pichia pastoris )。 就在酵母菌屬中的表現而言，通常使用例如質體YRp7(Stinchcomb等人，Nature 282: 39 (1979)；Kingsman等人，Gene 7: 141 (1979)；Tschemper等人，Gene 10: 157 (1980))。該質體已經含有TRP1基因，該基因提供針對於在色胺酸中無法生長的突變體酵母菌株之篩選標記，例如ATCC號44076或PEP4-1(Jones，Genetics 85: 12 (1977))。接著，存在作為酵母寄主細胞基因組之特徵之trp1損傷可提供用於檢測藉由在缺乏色胺酸下生長之轉化作用的有效環境。 在昆蟲系統中，苜蓿銀紋夜蛾(Autographa californica )細胞核多角體病毒(AcNPV)通常用作用於表現外源基因的載體。該病毒生長於草地貪夜蛾(Spodoptera frugiperda )細胞中。抗體編碼序列可個別地選殖至病毒之非必需區域(例如多角體蛋白基因)中並在AcNPV啟動子(例如多角體蛋白啟動子)控制下定位。 一旦本發明之結合分子已重組表現，其可藉由免疫球蛋白分子純化技術中已知的任何方法，例如，藉由層析法(例如，離子交換、親和力，尤其藉由於蛋白質A之後針對於特異性抗原之親和力、及尺寸分級管柱層析法)、離心、差速溶解，或藉由任何其他用於蛋白純化之標準技術來純化。或者，用於增加本發明抗體之親和力的有益方法揭示於美國專利申請公開案第2002 0123057 A1號。 VII. 使用治療性抗-ILT7結合分子之處理方法 本發明之方法係關於一種抗-ILT7結合分子，例如抗體(包括其抗原結合片段、變異體及衍生物)來治療罹患與ILT7表現或ILT7-表現細胞相關聯的疾病之患者的用途。關於「ILT7-表現細胞」意指表現ILT7抗原之細胞。相關技術中熟知用於檢測細胞中ILT7表現之方法且包括(但不限於)PCR技術、免疫組織化學法、流式細胞測量術、西方墨點法、ELISA及類似者。 雖然以下論述係關於利用本發明抗-ILT7抗體之診斷方法及治療各種疾病及病症，但本文所述的方法亦適用於該等抗-ILT7抗體之保留本發明抗-ILT7抗體之所需性質(例如，能夠特異性結合ILT7及中和ILT7病原活性)之抗原結合片段、變異體及衍生物。 在一個實施例中，治療包括施用或投與抗-ILT7結合分子(例如，本發明之抗體或其抗原結合片段、變異體或衍生物)至個體或患者，或施用或投與抗-ILT7結合分子至單離自個體或患者之組織或細胞系，其中該個體或患者具有某一疾病、疾病之某一症狀或患疾病之傾向。在另一個實施例中，治療亦意欲包括施用或投與包含抗-ILT7結合分子(例如本發明之抗體或其抗原結合片段、變異體或衍生物)之醫藥組合物至個體或患者，或施用或投與包含抗-ILT7結合分子之醫藥組合物至單離自個體或患者之組織或細胞系，該個體或患者具有某一疾病、疾病之症狀或患疾病之傾向。 本發明之抗-ILT7結合分子(例如抗體或其抗原結合片段、變異體或衍生物)可用於治療各種自體免疫病症。例如，利用至少一種抗-ILT7抗體之療法會引起生理反應，例如，干擾素減少，該生理反應就治療人類之與ILT7-表現細胞相關聯的疾病狀態而言有益。 在一個實施例中，本發明係關於抗-ILT7結合分子(例如抗體或其抗原結合片段、變異體或衍生物)，其係用作藥物，特定言之用於治療或預防自體免疫病症或疾病。自體免疫疾病之實例包括(但不限於)：肌炎、糖尿病、橋本氏病(Hashimoto's disease)、自體免疫腎上腺功能不全、純紅細胞性貧血、多發性硬化症、類風濕性心臟炎、全身性紅斑狼瘡、牛皮癬、類風濕性關節炎、慢性炎症、休格倫氏症候群(Sjogren's syndrome)、多發性肌炎、皮肌炎、包涵體肌炎、幼年型肌炎及硬皮病。 根據本發明之方法，使用至少一種如本文別處所定義的抗-ILT7結合分子(例如抗體或其抗原結合片段、變異體或衍生物)以增進相對於自體免疫反應之陽性治療反應。關於相對於自體免疫反應之「陽性治療反應」意指與該等結合分子(例如抗體或其抗原結合片段、變異體或衍生物)相關聯的疾病之改善及/或與疾病相關聯的症狀之改善。亦即，可觀察到干擾素-α含量之減小、漿細胞樣樹突狀細胞之數量或活性之減少、或與疾病相關聯的一或多種症狀之減少。因此，例如，疾病之改善可表徵為完全反應。關於「完全反應」意指在將任何先前測試結果標準化下無臨床上可檢測疾病。此種反應必須在根據本發明方法治療之後持續至少一個月。或者，疾病之改善可歸類為部分反應。 本文所述的抗-ILT7結合分子(例如抗體或其抗原結合片段、變異體或衍生物)亦可用於治療自體免疫疾病及免疫系統之與ILT7表現細胞相關聯的缺陷或病症。自體免疫疾病之特徵為由個體對其自身細胞、組織及/或器官之免疫學反應引起之細胞、組織及/或器官損傷。在一個實施例中，該自體免疫疾病為全身性紅斑狼瘡。 可使用篩選技術，諸如磁共振成像(MRI)掃描、x-放射攝影成像、電腦斷層攝影(CT)掃描、流式細胞測量術或經螢光活化之細胞分選(FACS)分析、組織學、大體病理學(gross pathology)、及血液化學，包括(但不限於)可藉由ELISA、RIA、層析檢測之變化、及類似者，來評估臨床反應。除了該等陽性治療反應外，利用抗-ILT7結合分子(例如抗體或其抗原結合片段、變異體或衍生物)治療的個體可經歷與疾病相關聯的症狀有所改善之有益效果。 本發明之另一個實施例係一種抗-ILT7結合分子(例如抗體或其抗原結合片段、變異體或衍生物)於作為臨床測試程序的一部分診斷性監測組織中蛋白質含量，例如，以確定給定治療方案之療效之用途。例如，可藉由將抗體與可檢測物質偶聯來促進檢測。可檢測物質之實例包括各種酶、輔基、螢光材料、發光材料、生物發光材料及放射性材料。適宜酶之實例包括辣根過氧化物酶、鹼性磷酸酶、β-半乳糖苷酶或乙醯膽鹼酯酶；適宜輔基錯合物之實例包括鏈黴抗生物素/生物素及抗生物素蛋白/生物素；適宜螢光材料之實例包括傘形酮(umbelliferone)、螢光素、異硫氰酸螢光素、若丹明、二氯三嗪胺螢光素、丹磺醯氯或藻紅素；發光材料之實例包括魯米諾；生物發光材料之實例包括螢光素酶、蟲螢光素及水母素；及適宜放射性材料之實例包括125 I、131 I、35 S或3 H。 VIII. 醫藥組合物及投與方法 製備及投與本文所提供的抗-ILT7結合分子(例如抗體或其抗原結合片段、變異體或衍生物)至有此需要的個體之方法係熟知的或由熟習此項技術者輕易確定。 如本文中所論述，本文所提供的抗-ILT7結合分子(例如抗體或其抗原結合片段、變異體或衍生物)可以醫藥有效量投與以活體內治療ILT7-表現細胞介導之疾病，諸如某些類型的自體免疫疾病。就此而言，應瞭解，所揭示的本發明結合分子將經調配以利於投與並促進活性劑之穩定性。根據本發明之醫藥組合物可包含醫藥上可接受之非毒性無菌載劑。就本申請案之目的而言，醫藥有效量之共軛或未共軛的抗-ILT7結合分子(例如抗體或其抗原結合片段、變異體或衍生物)意指足以達成與標靶之有效結合及足以達成效益(例如，改善疾病或病症之症狀)或檢測物質或細胞之量。 適合注射劑之醫藥組合物應無菌且應在存在容易注射能力的程度上為流體。其應在製造及儲存之條件下為穩定及將有益地抗微生物諸如細菌及真菌之污染作用而保存。微生物作用之預防可藉由各種抗細菌劑及抗真菌劑來達成。用於本文所揭示的治療性方法之適宜調配物述於Remington's Pharmaceutical Sciences (Mack Publishing Co.)(第16版)(1980)中。 與本發明範圍保持一致，本發明之抗-ILT7抗體或其抗原結合片段、變異體或衍生物可依前述治療方法以足以產生治療效應之量投與人類或其他動物。本發明之抗-ILT7抗體或其抗原結合片段、變異體或衍生物可呈藉由將本發明之抗體或其抗原結合片段、變異體或衍生物與習知醫藥上可接受之載劑或稀釋劑組合根據習知技術所製得的習知劑型投與至該人類或其他動物。熟習此項技術者當知曉醫藥上可接受之載劑或稀釋劑之形式及特徵係由其欲組合的活性成分之量、投藥途徑及其他熟知變數決定。熟習此項技術者將進一步明瞭包含本發明之抗-ILT7抗體分子(例如抗體或其抗原結合片段、變異體或衍生物)之一或多種物質之混合物可證實係特別有效。 關於「治療有效劑量或量」或「有效量」意指當投與時對欲治療疾病或病症之患者之治療帶來陽性治療反應的抗-ILT7結合分子(例如抗體或其抗原結合片段或變異體或衍生物)之量。 用於治療ILT7-表現細胞介導之疾病(諸如某些類型之自體免疫疾病，包括(例如)全身性紅斑狼瘡)之本發明組合物之治療有效劑量取決於許多不同因素，包括投與方式、靶位點、患者之生理狀態、患者是人類還是動物、所投與的其他藥物及治療是預防性還是治療性而變化。通常，該患者為人類，但亦可治療非人類哺乳動物，包括基因轉殖哺乳動物。治療劑量可經滴定以將安全性及療效最佳化。 本發明亦提供一種抗-ILT7結合分子(例如抗體或其抗原結合片段、變異體或衍生物)於製造用於治療自體免疫疾病(包括(例如)全身性紅斑狼瘡)之藥物的用途。 IX. 診斷 本發明進一步提供一種可用於診斷ILT7-表現細胞介導之疾病(諸如某些類型之自體免疫疾病，包括(例如)全身性紅斑狼瘡)的診斷方法，其包括測量個體之組織或其他細胞或體液中ILT7蛋白質或轉錄本之表現水平及將所測得的表現水平與正常組織或體液中之標準ILT7表現水平進行比較，其中與標準相比表現水平增加指示病症。 本發明之抗-ILT7抗體及其抗原結合片段、變異體及衍生物可用於分析生物樣本中之ILT7蛋白質含量，使用熟習此項技術者已知的經典免疫組織學方法(例如，參見Jalkanen等人，J. Cell. Biol. 101: 976-985 (1985)；Jalkanen等人，J. Cell Biol. 105: 3087-3096 (1987))。可用於檢測ILT7蛋白質表現之其他基於抗體之方法包括免疫分析法，諸如酶聯免疫吸附分析法(ELISA)、免疫沉澱或西方墨點法。適宜之分析法更詳細地述於本文別處。 關於「檢定ILT7多肽之表現水平」意指定性或定量測量或估計第一生物樣本中ILT7多肽之含量，以直接方式(例如，藉由確定或估計絕對蛋白質含量)或以相對方式(例如，藉由與第二生物樣本中與疾病相關聯的多肽含量進行比較)。可測量或估計第一生物樣本中之ILT7多肽表現水平並與標準ILT7多肽水平進行比較，該標準係取自獲自不具有病症的個體之第二生物樣本或係藉由不具有病症之個體群體之平均水平來確定。如相關技術中所瞭解，一旦已知「標準」ILT7多肽水平，則其可重複地用為比較標準。 關於「生物樣本」意指獲自個體、細胞系、組織培養物或潛在地表現ILT7之其他細胞來源之任何生物樣本。相關技術中熟知用於自哺乳動物獲得組織活檢及體液之方法。 X. 免疫分析法 本發明之抗-ILT7結合分子(例如抗體或其抗原結合片段、變異體或衍生物)可藉由相關技術中已知的任何方法分析免疫特異性結合。可使用之免疫分析法包括(但不限於)使用諸如西方墨點、放射免疫分析法、ELISA(酶結合免疫吸附分析法)、「夾心」免疫分析法、免疫沉澱分析法、沈澱素反應、凝膠擴散沈澱素反應、免疫擴散分析法、凝集分析法、補體結合分析法、免疫放射量分析法、螢光免疫分析法、蛋白質A免疫分析法(略舉數例)之技術之競爭性及非競爭性分析系統。此類分析法係例行方法且此項技術中熟知(參見，例如，Ausubel等人編(1994) Current Protocols in Molecular Biology (John Wiley & Sons, Inc.，NY) 第1卷，其全部內容以引用的方式併入本文中)。例示性免疫分析法簡要述於下文(而無意以限制方式)。 另外，本發明之抗-ILT7抗體或其抗原結合片段、變異體或衍生物可組織學上使用，如在免疫螢光、免疫電鏡或非免疫學分析中，用於原位檢測ILT7蛋白質或其保守性變異體或肽片段。原位檢測可藉由自患者移去組織學標本，且對其施用經標記之抗-ILT7抗體或其抗原結合片段、變異體或衍生物(例如，藉由覆蓋經標記抗體(或片段)施用至生物樣本上)來達成。經由使用該程序，不僅可確定ILT7蛋白質或保守性變異體或肽片段之存在，而且可確定其在所檢查組織中之分佈。使用本發明，熟習此項技術者將輕易地理解多種組織學方法(諸如染色程序)中任一者可經修改以達成此種原位檢測。 ILT7基因產物或其保守性變異體或肽片段之免疫分析及非免疫分析將通常包括培養樣本，諸如生物流體、組織提取物、新鮮獲得之細胞或已在細胞培養中於能夠結合至ILT7或其保守性變異體或肽片段之經檢測性標記之抗體的存在下培養之細胞溶解物，及藉由相關技術中熟知的多種技術中任一者檢測結合之抗體。 可使生物樣本與固相擔體或載體(諸如硝基纖維素)或能夠固定細胞、細胞顆粒或可溶性蛋白之其他固體擔體接觸並固定至其上。可接著用適宜緩衝液洗滌該擔體，接著以經檢測性標記之抗-ILT7抗體或其抗原結合片段、變異體或衍生物處理。可接著用緩衝液第二次洗滌該固相擔體以移除未結合的抗體。視情況，於隨後標記該抗體。可接著藉由習知方法檢測固體擔體上之經結合標記的量。 關於「固相擔體或載體」意指能夠結合抗原或抗體之任何擔體。熟知的擔體或載體包括玻璃、聚苯乙烯、聚丙烯、聚乙烯、葡聚糖、尼龍、澱粉酶、天然及改質纖維素、聚丙烯醯胺、輝長岩(gabbros)及磁鐵礦(magnetite)。載體之性質可就本發明之目的而言在某種程度上係可溶或不溶。擔體材料可具有實質上任何可能的結構組態，只要所偶聯的分子能夠結合至抗原或抗體即可。因此，擔體組態可為球形(如呈珠粒形狀)、或圓柱形(如呈試管內表面或桿之外表面形式)。或者，表面可係平坦的，諸如薄片、測試條等。例示性擔體包括聚苯乙烯珠粒。熟習此項技術者將知曉用於結合抗體或抗原之許多其他適宜載體，或將能夠藉由使用例行實驗確定該等載體。 可依熟知方法確定給定批次之抗-ILT7抗體或其抗原結合片段、變異體或衍生物之結合活性。熟習此項技術者將能夠藉由採用例行實驗確定每次確定之操作及最佳分析條件。 可藉由競爭性結合分析來確定抗體結合至抗原之結合親和力及抗體-抗原相互作用之脫離速率。競爭性結合分析之一個實例為放射免疫分析，其包括於存在漸增量之未標記抗原下培養經標記抗原(例如，3 H或125 I)與受關注抗體，及檢測結合至經標記抗原之抗體。可藉由斯卡查德作圖分析(scatchard plot analysis) 從數據確定受關注抗體對特定抗原之親和力及結合脫離速率。亦可使用放射免疫分析法來確定與第二抗體之競爭。在此情況下，於存在漸增量之未標記第二抗體下，培養抗原與共軛至經標記化合物(例如，3 H或125 I)之受關注抗體。 存在可用於測定抗體-抗原相互作用之親和力的多種方法，但用於測定速率常數之方法相對地少。大多數方法仰賴於標記抗體或抗原中任一者，此不可避免地使例行量測複雜化且在所測得的量中引入不確定度。 如在BIACORE® 上進行的表面電漿子共振(SPR)具有優於測量抗體-抗原相互作用之親和力之習知方法之許多優點：(i)不需要標記抗體或抗原中任一者；(ii)抗體不需要事先純化，細胞培養上清液可直接進行使用；(iii)可進行即時測量，允許對不同單株抗體相互作用進行快速半定量比較且已足夠用於許多評估目的；(iv)可再生生物特異性表面使得一系列不同單株抗體可在相同條件下輕易地進行比較；(v)分析程序係完全自動化，及可進行多個系列之測量而無需使用者介入。BIAapplications Handbook，AB版(1998年再版)，BIACORE®代號BR-1001-86；BIAtechnology Handbook，AB版(1998年再版)，BIACORE®代號BR-1001-84。基於SPR之結合研究需要結合對中的一員固定於感測表面上。所固定的結合搭配物稱為配位體。呈溶液形式之結合搭配物稱為分析物。在一些情況下，該配位體係經由結合至另一經固定分子(稱為捕捉分子)間接附接至表面。SPR反應反映在分析物結合或解離時檢測器表面處質量濃度之改變。 基於SPR，在相互作用發生時，即時BIACORE®測量值係直接監測該等相互作用。該技術極適於確定動力學參數。易於進行對照性親和力排名，及動力學及親和力常數皆可從感應圖數據導出。 當分析物以離散脈衝跨配位體表面注射時，可將所得感應圖分成三個基本階段：(i)樣本注射期間分析物與配位體之締合；(ii)樣本注射期間之平衡或穩態，其中分析物結合之速率係由從複合物解離來平衡；(iii)緩衝液流動期間分析物自表面之解離。 締合及解離階段提供於分析物-配位體相互作用之動力學(ka 及kd ，複合物形成及解離之速率，kd /ka =KD )上之資訊。平衡階段提供關於分析物-配位體相互作用之親和力(KD )之資訊。 BIA評估軟體針對於使用數值積分及整體擬合演算法兩種方法進行曲線擬合提供全面設施。利用數據之適宜分析，就相互作用而言之個別速率及親和力常數可從簡單的BIACORE®研究獲得。可藉由該技術測定之親和力之範圍極廣泛，從mM至pM。 抗原決定基特異性為單株抗體之重要特徵。利用BIACORE®之抗原決定基測圖與使用放射免疫分析、ELISA或其他表面吸附方法之習知技術對比，不需要標記或純化抗體，及允許使用若干單株抗體之序列之多位點特異性測試。另外，可自動地處理大量分析物。 逐對結合實驗測試兩個MAb同時結合至相同抗原之能力。針對不同抗原決定基之MAb將獨立地結合，然而，針對相同或緊密相關之抗原決定基之MAb將干擾彼此的結合。利用BIACORE®之此等結合實驗是直接進行。 例如，可使用捕捉分子以結合第一Mab，接著依序添加抗原及第二MAb。感應圖將顯示：(1)多少抗原結合至第一Mab，(2)第二MAb結合至表面附著抗原的程度，(3)若第二MAb未結合，則顛倒逐對測試之順序是否改變結果。 肽抑制作用為用於抗原決定基測圖之另一技術。該方法可與逐對抗體結合研究互補，且當抗原之一級序列為已知時，功能性抗原決定基可與結構特徵相關聯。測試肽或抗原片段對不同MAb與經固定抗原結合之抑制作用。假設干擾所給定MAb之結合之肽結構上與由該MAb所界定的抗原決定基有關。 除非另外指出，否則本發明之實務將使用此項技術內之細胞生物學、細胞培養、分子生物學、基因轉殖生物學、微生物學、重組DNA及免疫學之習知技術。此類技術充分闡釋於文獻中。參見，例如，Sambrook等人編 (1989) Molecular Cloning A Laboratory Manual (第2版；Cold Spring Harbor Laboratory Press)；Sambrook等人編(1992) Molecular Cloning:A Laboratory Manual，(Cold Springs Harbor Laboratory，NY)；D. N. Glover編 (1985) DNA Cloning，第I卷及第II卷；Gait編 (1984) Oligonucleotide Synthesis；Mullis等人，美國專利第4,683,195號；Hames及Higgins編(1984) Nucleic Acid Hybridization；Hames及Higgins編(1984) Transcription And Translation；Freshney (1987) Culture Of Animal Cells (Alan R. Liss, Inc.)；Immobilized Cells And Enzymes (IRL Press) (1986)；Perbal (1984) A Practical Guide To Molecular Cloning；the treatise, Methods In Enzymology (Academic Press, Inc., N.Y.)；Miller及Calos編(1987) Gene Transfer Vectors For Mammalian Cells，(Cold Spring Harbor Laboratory)；Wu等人編，Methods In Enzymology，第154卷及第155卷；Mayer及Walker編(1987) Immunochemical Methods In Cell And Molecular Biology (Academic Press，London)；Weir及Blackwell編，(1986) Handbook Of Experimental Immunology，第I至IV卷；Manipulating the Mouse Embryo，Cold Spring Harbor Laboratory Press，Cold Spring Harbor，N.Y.，(1986)；及Ausubel等人 (1989) Current Protocols in Molecular Biology (John Wiley及Sons，Baltimore, Md.)。 抗體工程化之一般原理闡明於Borrebaeck編(1995) Antibody Engineering (第2版；Oxford Univ.Press)中。蛋白質工程化之一般原理闡明於Rickwood等人編(1995) Protein Engineering, A Practical Approach (IRL Press，Oxford Univ.Press，Oxford, Eng.)中。抗體及抗體-半抗原結合之一般原理闡明於：Nisonoff (1984) Molecular Immunology (第2版；Sinauer Associates, Sunderland, Mass.)中；及Steward (1984) Antibodies, Their Structure and Function (Chapman and Hall, New York, N.Y.)中。另外，為相關技術中已知但未明確描述的標準免疫學方法一般係依照Current Protocols in Immunology，John Wiley & Sons，New York；Stites等人編(1994) Basic and Clinical Immunology (第8版；Appleton & Lange，Norwalk, Conn.)及Mishell及Shiigi(編)(1980) Selected Methods in Cellular Immunology(W.H. Freeman and Co.，NY)。 闡明免疫學之一般原理之標準參考著作包括Current Protocols in Immunology，John Wiley & Sons，New York；Klein (1982) J., Immunology:The Science of Self-Nonself Discrimination (John Wiley & Sons，NY)；Kennett等人編(1980) Monoclonal Antibodies, Hybridoma:A New Dimension in Biological Analyses (Plenum Press，NY)；Campbell (1984) 「Monoclonal Antibody Technology」 in Laboratory Techniques in Biochemistry and Molecular Biology Burden等人編(Elsevere，Amsterdam)；Goldsby等人編(2000) Kuby Immunology (第4版；H. Freemand & Co.)；Roitt等人(2001) Immunology (第6版；London:Mosby)；Abbas等人 (2005) Cellular and Molecular Immunology (第5版；Elsevier Health Sciences Division)；Kontermann及Dubel (2001) Antibody Engineering (Springer Verlan)；Sambrook及Russell (2001) Molecular Cloning:A Laboratory Manual (Cold Spring Harbor Press)；Lewin (2003) Genes VIII (Prentice Hall2003)；Harlow及Lane (1988) Antibodies:A Laboratory Manual (Cold Spring Harbor Press)；Dieffenbach及Dveksler (2003) PCR Primer (Cold Spring Harbor Press)。 上文引用之所有參考文獻及本文引用之所有參考文獻係以全文引用的方式併入本文中。 藉由闡述之方式而非限制之方式提供下列實例。 實例 材料及方法 生物樣本 藉由MedImmune供血者計劃(MedImmune Blood Donor Program)，以書面知情同意書及獲IRB批准，獲得正常健康志願者之人類周邊血液。自新鮮全血使用具有檸檬酸鈉之真空採血管CPT細胞製劑管(Becton Dickinson Biosciences，NJ，USA)，單離得周邊血液單核細胞(PBMC)。該等管以17000 g最小制動下旋轉25 min(22℃)。於旋轉之後，移去血清，且將細胞膚色血球層轉移至錐形50 mL管(BD Biosciences)。在22℃下，用無菌磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)(Invitrogen Life Technologies，CA，USA)以350 g兩次洗滌經純化細胞10分鐘。將該等細胞再懸浮於補充10%胎牛血清(Invitrogen)之PBS或RPMI 1640培養基中且使用具有細胞過濾蓋之BD Falcon 5 mL管(BD Biosciences)過濾。使用Vi-Cell XR® 細胞計數器(Beckman Coulter，CA，USA)測定細胞密度。 依照國家健康研究院針對於靈長類照護及使用之指導，從Bioqual (Bioqual, Inc. MD，USA)獲得健康動物之食蟹獼猴周邊血液。使用具有檸檬酸鈉之真空採血管CPT細胞製劑管(如上所述)或利用Histopaque 10771 (Sigma-Aldrich，MO，USA)來單離食蟹獼猴PBMC。簡言之，利用無菌PBS將新鮮全血調整至初始血液體積的50x。然後，將25 mL經稀釋血液覆蓋至10 mL 90% Histopaque 10771 (Sigma Aldrich)上及樣本以400 g在室溫下最小制動下旋轉20 min。移去細胞盤且轉移至新的50 mL錐形管。在22℃下，用無菌PBS以350 g洗滌經純化細胞10分鐘兩次。將細胞再懸浮於補充10%胎牛血清之PBS或RPMI 1640培養基中，過濾，然後如上所述計數。 細胞 從Dr. Yong-Jun Liu (University of Texas M.D. Anderson Cancer Center，Houston，TX，USA)獲得CT-125及CT-550細胞。藉由利用未標記的小鼠FcεR1γ及NFAT-GFP報導子基因轉導2B4鼠類T-細胞融合瘤來產生CT-125細胞及藉由利用HA-標記人類ILT7轉導CT-125細胞來產生CT-550細胞(Ohtsuka M.等人，PNAS 101:8126-8131 (2004)；Cao W.等人，JEM 203: 第1399-1405頁(2006))。藉由利用選殖至pME18X質體載體中之食蟹獼猴ILT7基因轉染CT-125細胞來產生CT-125食蟹獼猴ILT7穩定細胞系。在補充10%胎牛血清(FBS)及1X青黴素/鏈黴素(均來自Invitrogen Life Technologies)之RPMI 1640中培養CT細胞。 KC1333細胞係從Biowa (Biowa，NJ，USA)獲得。在補充10% FBS、4 mM L-麩醯胺酸、0.2 µg/mL遺傳黴素(均來自Invitrogen)及18.3 pg/mL重組人類IL-2(PeproTech，NJ，USA)之高級RPMI 1640中培養KC1333細胞。 抗體及試劑 於MedImmune生產抗-ILT7人源化抗體變異體、抗-ILT7純系7C7(7C7)及人源化同型對照R347。使用APC單株抗體標記套組(Thermo Fisher Scientific，IL，USA)產生別藻藍蛋白(APC)共軛的抗-ILT7人源化抗體變異體、7C7及同型對照R347。R-藻紅素(PE)及FITC-標記之抗人類BDCA-2抗體(純系AC144)、R-PE抗人類BDCA-4(純系AD5-17F6)及人類FcR阻斷試劑係來自Miltenyi Biotech，CA，USA。共軛至R-PE、FITC或APC中任一者之抗人類CD123(純系7G3)、Alexa Fluor 488抗人類CD8(純系RPA-T8)、Alexa Fluor 488抗人類CD3(純系SP34-2)、FITC抗人類CD14(純系M5E2)、FITC抗人類CD20(純系2H7)及PerCP-Cy 5.5抗人類HLA-DR(純系G46-6)係從BD Biosciences獲得。太平洋藍(Pacific Blue)抗人類CD56抗體(純系MEM-188)係從BioLegend，CA，USA獲得。DyLight 649-標記抗人類IgG及人類完整IgG係來自Jackson Immunoresearch，PA，USA。 使用BD FACS胞溶溶液(BD Biosciences)進行全血染色。7-AAD係從Invitrogen獲得。人類雄性AB血漿係從Sigma-Aldrich獲得。重組人類IL-2係來自R&D Systems，MN，USA，及重組人類干擾素β(IFN-β)係來自PBL Biomedical，NJ，USA。CpG A ODN 2216係來自InvivoGen，CA，USA。 人類及食蟹獼猴重組ILT7之標記 藉由游離胺，使用EZ link Sulfo-NHS-LC-生物素(Thermo/Pierce，產品：21335)，將蛋白質生物素化。將該試劑溶解於無水二甲基甲醯胺，及用含在D-PBS中之1M NaHCO3 將基於PBS之蛋白質溶液調整至pH ~8。 在所有情況下，藉由MALDI-TOF質譜法評估標記之併入，及藉由緩衝液交換，使用與D-PBS平衡之丟棄式Sephadex G25管柱，清除未反應的試劑。就生物素化而言，藉由280 nm吸光度，使用自胺基酸序列計算得的消光係數，測定最終蛋白質濃度。 ELISA結合分析 將單鏈Fv片段呈現於噬菌體顆粒上及在結合分析中測試以確定與一組重組抗原之交叉反應性及對該組重組抗原之特異性。可如下在96-孔深孔板中產生噬菌體呈現scFv上清液樣本。將96-孔樣板每孔5 ml培養物轉移至含有500 ml 2TYAG(2TY + 100 mg/ml胺苄西林(ampicillin) + 2%葡萄糖)培養基之Greiner深孔培養板中且在37℃，280 rpm下培養5小時。然後，以100 ml/孔添加K07 M13輔助噬菌體(經稀釋至1.5 x 1011 pfu/ml，含於2TYAG中)且在37℃，150 rpm下培養該板以允許感染。以3200 rpm旋轉該板10分鐘並移去上清液。將細菌團塊再懸浮於500 ml/孔2TYAK(2TY + 100 mg / ml胺苄西林 + 50 mg/ml康黴素)中且在25℃，280 rpm下培養該板過夜。在上午，每孔添加含在2x PBS中之500 ml 6% (w/v)脫脂奶粉且在室溫下培養該板1小時。然後，以3200 rpm離心該板10分鐘及將經阻斷之噬菌體呈現scFv上清液直接用於ELISA實驗中。 就EC50之測定而言，通常，在含於PBS中之3% (w/v)經乾燥乳粉(PBS-M)中3倍稀釋經純化之IgG，以得到11個濃度點。稀釋製劑使用96-孔Greiner聚丙烯板(Greiner，650201)。一般而言，一式兩份製備各稀釋液。於室溫下，在直接用於ELISA實驗之前，允許IgG稀釋液在PBS-M中阻斷1小時。 IL-T7結合分析為基本上如下進行之基於板之ELISA。每個實驗並非使用所有抗原，但通常測試人類、小鼠及食蟹獼猴IL-T7抗原。相關對照抗原(若適宜，牛胰島素加上IL-4Rα FLAG® His)亦用於測試非特異性結合。除了牛胰島素以外，所有抗原係經生物素化且均係使用細菌表現產生。IL-T7抗原係藉由游離硫氫基，使用EZ link生物素-BMCC(Perbio/Pierce 21900) 生物素化。用於產生用為對照抗原之IL-4Rα FLAG® His之方法述於WO/2010/070346中。IL-4Rα FLAG® His係藉由游離胺，使用EZ link Sulfo-NHS-LC-生物素(Perbio/Pierce，21335) 生物素化。 使鏈黴抗生物素板(Thermo Scientific，AB-1226)在PBS中以0.5 µg/ml塗覆經生物素化抗原且在4℃下培養過夜。用PBS洗滌該等板3x且利用300 µl/孔阻斷緩衝液(PBS-M)阻斷1小時。用PBS洗滌該等板1x且在室溫下阻斷經添加樣本(50 µl/孔)1小時。用PBS-T(PBS + 1% (v/v) Tween-20)洗滌該等板3x及在室溫下歷時1小時以50 µl/孔(含於PBS-M中)添加1:5000稀釋度之檢測試劑[抗人類IgG HRP(Sigma，A0170)或抗-M13-HRP抗體(Amersham，27-9421-01)，分別用於檢測IgG或噬菌體呈現scFv]。用PBS-T洗滌該等板3x且用50 µl/孔TMB(Sigma，T0440)顯影。於在EnVision™板式讀取器或類似設備上於450 nm下讀取之前以50 µl/孔 0.1M H2 SO4 淬滅反應。 使用Prism(Graphpad)曲線擬合軟體繪製IgG滴定之劑量反應曲線。若吸光度(450 nm)為＞0.5，則噬菌體呈現scFv被視為結合IL-T7抗原，及相同樣本於對照(胰島素及IL-4Rα Flag® His)上為＜0.1至0.2。單鏈Fv片段呈現於噬菌體顆粒上且在單點ELISA篩選中作為未純化之製劑測試。 螢光微量檢定技術(FMAT)細胞結合檢定 該均質檢定係評估在384-孔(Costar 3655)形式中粗scFv上清液樣本或經純化IgG與表現人類或食蟹獼猴ILT7之中國倉鼠卵巢(CHO)細胞之結合。分別使用小鼠抗-His/山羊抗小鼠Alexafluor®-647標記抗體(分子探針A21236)混合物或山羊抗人類Alexafluor®-647標記抗體(分子探針A21445)來檢測ScFv或Ab與細胞之結合。在Applied Biosystems細胞檢測系統8200讀取器上讀取該等板。氦氖激發雷射聚焦於孔底部100 µm深度以內，掃描1 mm2 之面積。細胞沉降在孔底部，且在633 nm下雷射激發後，結合螢光團之該等微珠(其中螢光團之局部濃度與未結合之螢光團相比相對高)發射在650至685 nm之信號，該信號係使用光線倍增管-1(PMT1)測得。溶液中未結合之螢光團在激發深度以外或處在相對低的局部濃度，及因此不發射明顯信號。孔底部存在結合至細胞之scFv或IgG樣本引起在激發深度內Alexafluor-標記檢測抗體增加。此經測量為螢光之增加。 在此等實驗中，分析緩衝液為含有0.1% BSA(Sigma A9576 – 50 ml)、0.1% Tween-20(Sigma P2287)及0.01%疊氮化鈉之PBS(Gibco 14190-094)。為建立ScFv檢測混合物，小鼠抗-His及抗小鼠AF647抗體分別以1 ug/ml及2 ug/ml混合於分析緩衝液中。為建立IgG檢測混合物，在分析緩衝液中以2 ug/ml製得抗人類AF647抗體。 所使用的細胞為使用標準組織培養技術培養的表現人類或食蟹獼猴ILT7之CHO-K1細胞。使該等細胞在F-10(Gibco，22390-025) + 10% FCS(SAFC Biosciences，13068C) + 0.5 mg/ml爭光黴素(Zeocin)(Invitrogen，R250-01)中生長至約80%匯合率，用PBS洗滌，利用細胞剝離試劑(accutase)(PAA，L11-007)剝離，及以1.5 x 105 個細胞/ml再懸浮於PBS中。 在96深孔板中產生粗scFv上清液樣本。將96-孔樣板各孔的5 µl培養物轉移至含有900 µl 2TY(1.6% 胰化蛋白胨(tryptone)、1%酵母提取物、0.5% NaCl，pH 7.0) + 100 µg/ml胺苄西林 + 0.1%葡萄糖培養基之Greiner深孔培養板中且在37℃，280 rpm下培養5小時。然後，以100 µl/孔添加含在TY中之10 mM IPTG，及在30℃，280 rpm下培養該區塊過夜。在上午，將該區塊以3200 rpm旋轉 15分鐘。就高通量篩選而言，將深孔區塊之scFv上清液直接轉移至分析板以進行所需的20%之稀釋。 添加下列物質至384-孔透明底非結合表面黑色Costar板之測試孔：10 µl樣本(IgG或ScFv)、10 µl檢測抗體或抗體混合物及30 µl細胞。用於此等實驗中之陰性對照通常涉及改加同型物(IgG)或不相干(ScFv)對照或分析緩衝液替代實驗樣本。密封該等板且在室溫下於黑暗中培養四小時且接著在Applied Biosystems細胞檢測系統8200讀取器上讀數。通常利用速度算法分析數據，門控設為色比＜0.4，尺寸15至30，及最小計數20。自粗scFv上清液樣本之命中數係定義為顯示相比總結合對照孔信號受到50%或更大抑制。使用Prism(Graphpad)曲線擬合軟體繪製經純化IgG滴定之劑量反應曲線。 就IC50 之測定而言，通常，在分析緩衝液中自500 nM 2倍稀釋經純化IgG以得到11個濃度點。使用96-孔Greiner聚丙烯(Greiner，650201)板以進行稀釋液製備。一般而言，一式兩份製備各稀釋液。或者，以取自範圍500 nM至0.2 nM之單一濃度進行IgG測試。 藉由流式細胞術評估細胞系上之抗體結合 藉由流式細胞術分析，分別使用CT-550及食蟹獼猴ILT7 CT-125細胞，來評估抗-ILT7變異體及同型對照於人類及食蟹獼猴ILT7上之結合。CT-125細胞用為對照。將該等細胞以5百萬個細胞/mL之濃度再懸浮於阻斷緩衝液(補充10% FBS之PBS)中且以每孔100 µL轉移至圓底96-孔板(BD FalconTM透明微量測試板，BD Biosciences)中。在4℃下，於板振盪器上，將抗-ILT7變異體及對照抗體添加至該等細胞持續30 min。用PBS洗滌該等細胞三次且再懸浮於阻斷緩衝液(100 µL/孔)中。使用共軛至DyLight 649(1/1000稀釋)之二級抗人類IgG抗體來檢測細胞表面上之人類IgG之結合。在4℃下，於板振盪器上，在黑暗中培養該等細胞30 min。用PBS洗滌該等細胞三次且使用LSRII流式細胞測量系統及FACSDiva軟體(均來自BD Biosciences)獲得表面螢光。 藉由流式細胞術評估全血及PBMC上之抗體結合 藉由流式細胞測量術分析評估APC-標記之抗-ILT7抗體及同型對照於人類及食蟹獼猴全血上之結合。將全血轉移至50 mL錐形管中，每管1 mL。將APC-標記之抗體直接添加至全血中。抗-BDCA-2-PE及抗-CD123-PE抗體在人類全血染色及食蟹獼猴全血染色中分別用為漿細胞樣樹突狀細胞(pDC)-特異性標記。在4℃下，於黑暗中，在板振盪器上，將全血與抗體培養30 min。用BD FACS胞溶溶液依製造商說明書處理血液。洗滌該等細胞，及藉由流式細胞術，使用LSRII流式細胞測量系統及FACSDiva軟體，來評估抗體結合。 就PBMC染色而言，先用PBS洗滌PBMC及於4℃下，在板振盪器上，再懸浮於含有50%人類雄性AB血漿、20μg/mL人類IgG及200 µL/mL人類FcR阻斷試劑之冷的基於PBS之阻斷緩衝液中15 min。於15 min後，將APC標記之抗-ILT7變異體或APC標記之同型對照抗體直接添加至阻斷溶液中。抗-BDCA-2-PE及抗-BDCA-4-PE抗體替代性地用為人類PBMC染色之pDC特異性標記。在食蟹獼猴PBMC中，pDC係定義為HLA-DR+ 、譜系- 、CD11c- 及CD123high (Malleret等人，Immunology 124:223-233 (2008))。因此，抗-HLA-DR PerCP-Cy5.5、譜系-FITC(CD3、CD8、CD20及CD14抗體)及抗-CD123-PE抗體用為食蟹獼猴PBMC染色之pDC-特異性標記。在黑暗中，於板振盪器上培養PBMC 30 min(4℃)。洗滌該等細胞且藉由流式細胞術，使用LSRII流式細胞測量系統及FACSDiva軟體，來評估抗體結合。 藉由抗體依賴性細胞介導之細胞毒性(ADCC)分析，使用細胞系，評估抗體效力 使用ADCC活體內基於細胞之分析來測定抗-ILT7抗體之效力。KC1333細胞(效應子)及CT細胞(標靶)係以5:1比(2.5 x 105 KC1333相對0.5 x 105 CT細胞)在圓底96-孔板中共培養。於存在抗-ILT7抗體或同型對照下，在補充10% FBS之RPMI 1640培養基中，於37℃，5% CO2 下，共培養該等細胞16小時。然後，洗滌該等細胞，且轉移至阻斷緩衝液(PBS-10% FBS)中。使用太平洋藍-抗-CD56抗體檢測KC1333細胞。使用7-AAD檢測死細胞。藉由流式細胞術，使用LSRII流式細胞測量系統及FACSDiva軟體，來評估靶細胞活力。藉由應用以下公式得到細胞毒性之百分比：細胞毒性百分比=100 - (活標靶數/基線活標靶數) x 100。 藉由ADCC分析，使用人類PBMC，評估抗體效力 用PBS洗滌人類PBMC及以5.0 x 106 個細胞/mL之濃度再懸浮於補充10% FBS及200 ng/mL重組人類IL-2之RPMI培養基中。一式兩份將PBMC接種於圓底96-孔板中，每孔100 µl。製備抗-ILT7抗體及對照抗體之10倍連續稀釋液，及添加100 μL抗體溶液至適宜孔以達成33.85 nM至3.385 fM之最終濃度。在37℃，5% CO2 下培養該等細胞6小時。於培養之後，在250 μL冷PBS中洗滌細胞兩次。在4℃下，將該等細胞再懸浮於含有50%人類雄性AB血漿、20 μg/mL人類IgG及200 µL/mL人類FcR阻斷試劑之100 μL冷的基於PBS之阻斷緩衝液15 min。於阻斷步驟之後，添加含有FITC-抗人類BDCA2及APC-抗人類CD123抗體之100 μL冷的阻斷緩衝液至適宜孔。培養該等板，在4℃下輕輕地振盪30分鐘。於培養之後，在250 μL冷的PBS中洗滌細胞兩次，且最終再懸浮於200 μL冷PBS中。將50 μL冷7-AAD(Invitrogen)溶液添加至所有孔，及使用LSRII流式細胞測量系統及FACSDiva軟體來評估7-AAD陽性漿細胞樣樹突狀細胞。 人類PBMC之IFNα分泌檢定 用PBS洗滌人類PBMC且以150,000至156,000個細胞/孔之最終密度一式兩份地接種於含有補充10% FBS及200 ng/mL重組人類IL-2之RPMI培養基之圓底96-孔板中。製備抗-ILT7抗體及對照抗體之10-倍連續稀釋液，及將100 μL抗體溶液添加至適宜孔以達成6.77 nM至0.677 fM之最終濃度。在37℃，5% CO2 下培養細胞及抗體9.5至10小時。於培養之後，將50 uL ODN2216(InvitrogenTM )添加至適宜孔以達成0.5 μM之最終濃度，及在37℃，5% CO2 下再進一步培養該等板16小時。於培養之後，以350 g旋轉該等板10分鐘，小心地移去上清液，及使用多亞型IFNα ELISA套組(PBL Biomedical)定量IFNα。 食蟹獼猴PBMC之IFNα分泌檢定 用PBS洗滌食蟹獼猴PBMC且再懸浮於補充10% FBS、220 ng/mL重組人類IL-2及500 IU/mL重組人類IFN-β之RPMI 1640中。以範圍自314,000至818,000個細胞/孔之密度將最大數目之細胞添加至適宜孔。製備抗-ILT7抗體及對照抗體之10-倍連續稀釋液，及將100 μL抗體溶液添加至適宜孔以達成33.85 nM至3.385 fM之最終濃度。在37℃，5% CO2 下培養細胞及抗體9.5至10小時。於培養之後，將50 µL ODN2216 (InvitrogenTM )添加至適宜孔以達成0.5 μM之最終濃度，且在37℃，5% CO2 下再進一步培養該等板16小時。於培養之後，以350 g旋轉該等板10分鐘，小心地移去上清液，及使用恆河猴/食蟹獼猴IFNα ELISA套組(PBL Biomedical)定量上清液IFNα。 統計分析 使用GraphPad Prims 5軟體(GraphPad Software，CA，USA)產生就結合、ADCC及細胞激素分泌檢定而言之EC50 及IC50 曲線。 實例1 自鼠類抗體SB128產生人源化ILT7抗體 鼠類mAb SBI28(SBI28係指提供於美國公開申請案第2009/0280128號中之抗-ILT7抗體ILT7#28)係藉由架構改組(Dall’Acqua等人，Methods 36: 43-60 (2005))人源化。採用該方法，鼠類mAb SBI28係藉由合成由其框內融合至一池個別人類生殖系架構之六個CDR組成之組合庫而人源化。人類架構基因係選自抗體生殖系基因之可公開取得之池。此等通用架構引物池包括46個人類生殖系κ鏈基因、5個人類生殖系Jk序列、44個人類生殖系重鏈基因及6個人類生殖系JH序列。引物庫係設計成編碼各生殖系基因之各架構。亦利用與架構池重疊之間併端來合成抗體特異性CDR引物。藉由配對可變重鏈架構改組子庫與可變輕鏈架構改組子庫來構建SBI28架構改組庫。使用PCR，藉由重疊延伸，依序組裝架構改組子庫。進行第一融合-PCR以合成與對應之CDR之一部分框內融合之各個別人類生殖系架構。然後，使用融合-PCR產物作為模板擴增全長VH及VL子庫，進行第二「組裝-PCR」。使用Kunkel法雜交誘變，將SBI28架構改組庫選殖至基於M13之Fab表現載體中。於表現重組ILT7CHO-細胞之CHO細胞上，使用MesoScale Discovery (MSD)分析，來篩選SBI28架構改組庫之約1300個純系。一種人源化變異體10D10以與其嵌合親本(「SBI28ch」)相比低3倍的親和力結合至人類ILT7，藉由表面電漿子共振(SPR)於ProteOn上測得。SBI28ch係指如提供於美國公開申請案第2009/0280128號中之抗-ILT7抗體ILT7#28，該案係以其全文引用的方式併入本文中。 開始10D10之親和力最佳化以改良其對人類及食蟹獼猴ILT7之結合親和力。先將10D10選殖至基於M13之ScFv表現載體中以達成簡單誘變。在該方法中，每一殘基位置使用兩個個別庫(NSS及NWS)來隨機突變所有6個CDR之各個別胺基酸。就6個CDR而言，使用Kunkel法雜交誘變構建總計12個獨立庫。(Kunkel, T. A.等人，Methods Enzymol. 154: 367 (1987))。所合成的庫之篩選由經設計成捕捉限制濃度之分泌自細菌培養基之ScFv以將每一孔中之scFv濃度標準化之單點ELISA組成。結合至所捕捉ScFv的經標記ILT7抗原，及該相互作用之信號強度與相對結合親和力相關。篩選約2,000至3,000個純系。為進一步工程化具有經改良之親和力之變異體，所有有益單胺基酸變化一起進行編碼而建立小且集中之組合庫。在該步驟中，於6個CDR中的9個位置之14次個別陽性命中係同時編碼以構築組合scFv庫。簡言之，間併引物係設計成編碼所有有益胺基酸變化以及在相同位置之親本殘基。利用如先前所述之單點捕捉ELISA來篩選該組合庫。篩選約1,200個純系。將親和力改良之變異體7C7之可變區個別地選殖至哺乳動物表現pOE載體中且暫時性地於HEK293細胞中表現。直接自經調節之培養基純化所分泌的可溶性人類IgG。使用ProteOn及FACS分析經純化IgG與rILT7之結合。在ProteOn實驗中，親和力最佳化抗體7C7顯示優於SBI28ch之約60倍KD改善。藉由FAC，在測得結合至表現於CHO細胞上之重組人類及食蟹獼猴ILT7之情況下，與SBI28ch相比，7C7顯示對人類及食蟹獼猴ILT7之EC50 分別好2.2倍及14倍。SBI28、10D10及7C7之VH及VL序列之比對分別提供於圖1A及1B中。 實例2 自人類庫產生人類ILT7抗體 除了將鼠類抗-ILT7抗體人源化(如上文實例1中所述)外，使用人類序列庫產生人類抗體。追求多種策略以產生抗-ILT7抗體將產生具有獨特特徵之抗-ILT7抗體之機會最大化，因此，可選擇用於特定目的之理想抗體。 2.1    篩選 使用衍生自成年初始供體骨髓之選殖至基於絲狀噬菌體M13之噬菌粒載體中之個別重鏈可變區及輕鏈可變區產生的大單鏈Fv(scFv)人類抗體庫係用於篩選(Hutchings, C.，「Generation of Naïve Human Antibody Libraries」 in Antibody Engineering，Dubel.Berlin，Springer Laboratory Manuals:第93頁(2001)；Lloyd等人，Protein Eng. Des. Sel. 22(3):159-68 (2009))。在針對於基本上如先前述於Vaughan等人(Nat. Biotechnol. 14(3): 309-14 (1996))中之重組人類及/或食蟹獼猴ILT7之一系列重複篩選循環中，ILT7-特異性scFv抗體係單離自噬菌體呈現庫。簡言之，將scFv-噬菌體顆粒與呈溶液形式之生物素化重組ILT7(藉由游離胺使用EZ link Sulfo-NHS-LC-生物素(Thermo/Pierce，產品：21335)生物素化)一起培養。通常，將scFv-噬菌體顆粒與100 nM生物素化重組ILT7培養1小時。然後，按照製造商推薦，於經鏈黴抗生物素塗覆之順磁性珠粒(Dynabeads® M-280)上捕捉結合至抗原之ScFv。在一系列清洗循環中使用PBS-Tween洗去未結合之噬菌體。溶離留在抗原上之噬菌體顆粒，感染進入細菌中，並營救用於下一輪篩選。通常，依此方式進行三輪篩選。 2.2    藉由噬菌體ELISA識別ILT7特異性結合劑 scFv呈現於噬菌體顆粒上且在結合分析中進行測試以確定交叉反應性及對重組抗原之特異性。詳細的分析法提供於材料及方法部分中。自結合分析獲得約2100個個別數據點，及對經識別之命中(即，顯示結合至重組ILT7之scFv純系)進行DNA序列分析(Osbourn等人，Immunotechnology 2(3):181-96 (1996)；Vaughan等人，Nat. Biotechnol. 14(3): 309-14 (1996))。 2.3    藉由FMAT識別ILT7結合劑 獨特scFv表現於細菌胞外質中且在螢光微量分析技術(FMAT)結合分析中基於其結合活性進行篩選。使用山羊抗小鼠Alexafluor®-647標記抗體檢測scFv與表現於細胞表面上之ILT7之結合。詳細分析方法提供於材料及方法部分中。 2.4    scFv與IgG1之重新格式化 基本上如Persic等人(Gene 187(1): 9-18 (1997))所述，利用後來的修飾將最有效之scFv結合劑轉化為完全免疫球蛋白G1(IgG1)抗體形式。OriP片段包含於表現載體中以利於與CHO-暫態細胞併用且允許附加體複製。將VH域選殖至含有人類重鏈恆定域及調節元件之載體(pEU1.3)中以在哺乳動物細胞中表現整條IgG1重鏈。同樣，將VL域選殖至用於表現人類輕鏈(λ)恆定域及調節元件之載體(pEU4.4)中以在哺乳動物細胞中表現整條IgG輕鏈。為獲得IgG，將重鏈及輕鏈IgG表現載體轉染至CHO-暫態哺乳動物細胞中。IgG係經表現且分泌至培養基中。將收集物組併在一起且在純化之前過濾。然後，使用蛋白質A層析法，純化IgG。將培養上清液加載於選用尺寸的陶瓷蛋白質A(BioSepra)管柱上且用50 mM Tris-HCl pH 8.0、250 mM NaCl洗滌。自該管柱使用0.1M檸檬酸鈉(pH 3.0)溶離經結合之IgG且藉由添加Tris-HCl (pH 9.0)中和。使用Nap10管柱(Amersham，#17-0854-02)將經溶離之材料緩衝液交換至PBS中，及使用基於IgG之胺基酸序列之消光係數，以分光光度方式測定IgG之濃度(Mach等人，Anal. Biochem. 200(1): 74-80 (1992))。 2.5    針對IgG的結合分析 使用FMAT結合分析測定抗-ILT7抗體之物種交叉反應性。詳細分析方法提供於材料及方法部分中。以下11種抗體在FMAT篩選分析中識別為成功結合至人類及食蟹獼猴ILT7兩者之抗體：ILT70019、ILT70028、ILT70052、ILT70076、ILT70080、ILT70083、ILT70089、ILT70100、ILT70137、ILT70142及ILT70144。 實例3 ILT7抗體結合至ILT7-表現細胞 為測定ILT70019、ILT70028、ILT70052、ILT70076、ILT70080、ILT70083、ILT70089、ILT70100、ILT70137、ILT70142及ILT70144於表現人類ILT7之細胞上之結合EC50 ，基於CT-550細胞上之結合，藉由流式細胞測量術，篩選候選者。ILT70080(EC50 = 0.28 nM)、ILT70083(EC50 = 0.37 nM)、ILT70137(EC50 = 0.41 nM)、ILT70144、ILT70142、ILT70052及ILT70100結合至人類ILT7表現細胞。候選者ILT70019、ILT70028及ILT70076不結合人類ILT7表現細胞。抗-ILT7抗體7C7(7C7述於上文實例1中)及SBI33(SBI33係指提供於美國公開申請案第2009/0280128號中之抗-ILT7抗體ILT7#33)用為陽性對照。同型對照R347用為陰性對照及在ILT7-表現細胞上不顯示任何結合。顯示於圖2中之曲線表示兩個獨立實驗之平均結果，及顯示於圖2中之表顯示平均EC50 。  為測定變異體於表現食蟹獼猴ILT7上之結合EC50 ，基於食蟹獼猴ILT7 CT-125細胞上之結合，藉由流式細胞測量術，篩選該等抗體。ILT70052(EC50 = 0.35 nM)、ILT70080(EC50 = 0.44 nM)、ILT70083(EC50 = 1.37 nM)、ILT70137(EC50 = 1.40 nM)、ILT70100(EC50 = 1.63 nM)、及ILT70144(EC50 = 7.81 nM)、ILT70142及ILT70089就人類ILT7上之結合而言陽性。ILT70019、ILT70028及ILT70076不結合食蟹獼猴ILT7-表現細胞。同型對照R347未顯示於ILT7-表現細胞上之任何結合。圖3中之曲線表示兩個獨立實驗之平均結果，及圖3中之表顯示平均EC50 。 因此，所有ILT70052、ILT70080、ILT70083、ILT70100、ILT70137、ILT70142及ILT70144均結合至表現食蟹獼猴ILT7或人類ILT7中任一者之細胞。利用表現食蟹獼猴及人類ILT7兩者之細胞，使用ILT70080、ILT70083及ILT70137，得到特別低的EC50 值。 實例4 ILT7抗體之ADCC效力 使用活體外基於細胞之分析，測試抗-ILT7抗體之抗人類ILT7表現細胞系之ADCC效力。用自然殺手(NK)細胞系KC1333(效應子細胞)在抗-ILT7變異體或同型對照之存在下以1:5比例接種表現人類ILT7之細胞(靶細胞)持續18小時。於流式細胞測量分析期間，使用NK標記CD56(Biolegend #304624)門輸出KC1333細胞，及使用7-AAD以區分活細胞與死細胞。使用該方法，計算活的靶細胞百分比並與基線(不含抗體之對照)進行比較。使用以下公式計算得細胞毒性： 細胞毒性百分比 = 100 – (活標靶數/不含抗體對照之活標靶數) x 100 ILT70080具有抗人類ILT7表現細胞之最大ADCC效力(EC50 = 0.022 nM)，其次係ILT70137(EC50 = 0.044 nM)及ILT70083(EC50 = 0.094 nM)。ILT70142、ILT70052、ILT70100及ILT70144亦顯示ADCC活性(圖4)。同型對照R347及R347之去岩藻糖基化形式(「Afuc R347」)不顯示就人類ILT7表現細胞而言之任何ADCC活性。 利用活體外基於細胞之活性，亦測試抗-ILT7抗體抗食蟹獼猴ILT7表現細胞之ADCC效力。ILT70080具有抗食蟹獼猴ILT7表現細胞之最大ADCC效力(EC50 = 0.008 nM)，其次係ILT70137(EC50 = 0.015 nM)、ILT70142(EC50 = 0.058 nM)、ILT70052(EC50 = 0.073 nM)、ILT70144(EC50 = 0.123)、ILT70100(EC50 = 0.188 nM)及ILT70083(EC50 = 0.433 nM)。ILT70089亦顯示ADCC活性。陽性對照7C7顯示ADCC，及同型(陰性)對照R347就食蟹獼猴ILT7表現細胞而言不顯示任何ADCC。圖5中之圖及表代表兩個獨立實驗。 因此，ILT70080及ILT70137顯示在食蟹獼猴及人類ILT-7表現細胞二者中之最大ADCC活性。 實例5 ILT7抗體與PBMC之結合 藉由流式細胞測量術，使用2.5 µg/ml之抗體濃度，評估抗-ILT7抗體ILT70080、ILT70083及ILT70137於人類PBMC上之結合。ITL70080、ILT70083及ILT70137特異性結合至pDC(BDCA-4+ 細胞)(圖6A及B)。結合就同型對照R347而言陰性。 亦藉由流式細胞測量術評估抗-ILT7抗體ILT70080、ILT70083及ILT70137於食蟹獼猴PBMC上之結合。ITL70080及ILT70083特異性結合至pDC(HLA-DR+ 、譜系- 、CD123高 細胞)。 實例6 ILT7抗體對於IFN-α分泌之效應 測試抗-ILT7變異體在如上所述之人類及食蟹獼猴PBMC中之ADCC效力。藉由ELISA測量利用抗-ILT7抗體及CpG-A培養之PBMC之上清液中IFNa之分泌。ILT70080、ILT70083及ILT70137均抑制人類及食蟹獼猴PBMC中對CpG-A之IFNa反應。ILT70080對於IFNa反應具有最大抑制效應。 實例7 ILT70080及ILT70083抗體之去岩藻糖基化 IgG1抗體包含針對於N-連接之寡醣之兩個位點於Fc區中，且該等位點在人類抗體中高度岩藻糖基化。抗體依賴性細胞細胞毒性(ADCC)係藉由淋巴細胞受體與抗體Fc區之結合介導，且此受到岩藻糖基化的量影響。已觀察到隨著岩藻糖基化之減小，ADCC增加。因此，產生ILT7之去岩藻糖基化形式並進行分析。 7.1 抗-ILT7抗體之去岩藻糖基化形式之產生 ILT70080及ILT70083 IgG1表現於缺乏酶α-1,6-岩藻糖基轉移酶之CHO細胞系中。於該細胞系中之表現得到重鏈之Asn-297處之N-聚糖上缺乏α-1,6岩藻糖基團之抗體。 7.2 測試去岩藻糖基化ILT70080及ILT70083抗ILT7抗體 進行經去岩藻糖基化及親本ILT70080及ILT70083抗體於ILT7-表現細胞上之結合分析以評估去岩藻糖基化是否影響抗體之結合EC50 。親本及去岩藻糖基化抗體顯示於人類及食蟹獼猴ILT7-表現細胞上之相似結合(圖7)。 使用上述活體外基於細胞之分析(實例3)，測試去岩藻糖基化ILT70080及ILT70083抗體於人類及食蟹獼猴ILT7表現細胞上之ADCC效力。就所有所測試的候選者而言，去岩藻糖基化使得ADCC效力增加(圖8)。在人類及食蟹獼猴分析中，於去岩藻糖基化之後，就ILT70080抗體而言，觀察到效力增加十倍(分別地，自EC50 = 0.013 nM增加至EC50 = 0.001 nM，及自EC50 = 0.006 nM增加至EC50 = 0.00051 nM)，而就ILT70083而言，觀察到增加6至7倍(分別地，自EC50 = 0.089 nM至EC50 = 0.0105 nM，及自EC50 = 0.36 nM至EC50 = 0.057 nM)。就ILT7表現細胞而言，去岩藻糖基化同型對照R347不顯示任何ADCC。 藉由流式細胞測量術評估去岩藻糖基化抗-ILT7抗體ILT70080及ILT70083於人類PBMC上之結合。去岩藻糖基化變異體ITL70080及ILT70083特異性結合至pDC(BDCA-2+ 細胞)。就同型對照R347而言，結合為陰性。 亦藉由流式細胞測量術評估去岩藻糖基化抗-ILT7變異體ILT70080及ILT70083於食蟹獼猴PBMC上之結合。去岩藻糖基化變異體ITL70080及ILT70083特異性結合至pDC(HLA-DR+ 譜系- CD123高 )。就同型對照R347而言，結合為陰性。 實例8 ILT70080及ILT70083抗體之工程化 8.1 ILT70080之工程化 將ILT70080 VH及VL之胺基酸序列與VBASE資料庫(Althaus H-H，Müller W及Tomlinson I:V BASE；http://vbase.mrc-cpe.cam.ac.uk/)中之已知人類生殖系序列比對，及藉由序列相似性識別最接近的生殖系序列。就VH域而言，其為VH1-69 (DP-10)，及就VL域而言，其為Vlambda3-h。選擇VH域之架構(FW)中之七個殘基(A13K、T16S、L69I*、S70T、L80M、Y84S及D85E)及VL域之架構(FW)中之七個殘基(E3V、K20R、S22T、M46L*、M48I*、F50Y*及I66N*)以用於回復至最接近之生殖系序列。標有星號的突變在歸類為Vernier殘基之位置(Foote, J.等人 J. Mol.Biol.224:487 (1992))且通常不變。然而，藉由CDR之Kabat (Wu，T. T.及Kabat E. A，J. Exp. Med. 132:211-250 (1970))及IMGT(Lefranc，M.-P.等人，Dev. Comp. Immunol. 27:55-77(2003))分類兩者之分析，該等位置被視為提供進一步減低免疫原性之附加機會，且改變親本抗體之結合性質之風險低。另外，於VH CDR2(Kabat定義)序列中進行重鏈N64Q誘變，以移除該位置處可能之脫醯胺化(NG)位點。使用標準分子生物技術，於pCantab6中之ILT70080 scFv序列上進行誘變(McCafferty等人，Appl Biochem Biotech 47:157 (1994))。多種誘變反應中使用不同誘變寡核苷酸組合以產生含有FW突變之不同組合之序列之庫。然後，在如上所述的FMAT細胞結合分析中測試ILT70080 scFv變異體小組之作為粗胞外質提取物對結合至人類ILT7之保留作用。 產生七個ILT70080變異體作為IgG。關於VH及VL序列比對，分別參見圖9A及9B。 8.2 ILT70083之工程化 亦進行ILT70083之生殖系化。就VH及VL序列而言，經識別之最接近的生殖系序列分別為VH3-23(DP-47)及Vlambda1-b(DPL-5)。選擇一個FW殘基以用於VH域(W66R)中之誘變，及VL域中選擇八個FW殘基，再次包括所選的Vernier位置(V4L*、R42T、A64G*、I66K*、S68G*、A72T、A74G及E81G)。使用標準分子生物技術，於含有個別VH及VL鏈之pEU載體上直接產生含有突變之不同組合之ILT70083變異體。然後，以不同組合共轉染ILT70083 VH及VL鏈以產生九個ILT70083 IgG1變異體。關於VH及VL比對，分別參見圖10A及10B。 8.3 工程化抗體之測試 測試所得IgG1以證實併入ILT70080及ILT70083中且對親本抗體與表現人類ILT7之細胞(CT-550細胞)或食蟹獼猴ILT7之細胞(CT-125細胞)之結合無不利影響之序列變化。藉由流式細胞測量術，基於結合來篩選該等變異體。所有ILT70080變異體具有類似於親本ILT70080抗體與人類及食蟹獼猴ILT7(分別地，EC50 = 0.213 nM及0.547 nM)之結合。參見圖11。針對人類ILT7，ILT70083變異體之結合亦類似於親本抗體 (EC50 = 0.464 nM)。參見圖12。然而，針對食蟹獼猴ILT7，五個ILT70083變異體(ILT70083.4、ILT70083.9、ILT70083.3、ILT70083.6及ILT70083.8)具有相比親本抗體改良之結合能力。參見圖12。 使用活體外基於細胞之分析，測試工程化ILT70080及ILT70083抗體之抗人類ILT7表現細胞系之ADCC效力。所有ILT70080變異體具有相比親本抗體增加之ADCC效力(EC50 ＜ 14.1 pM)。參見圖13。具有最低EC50 之兩個候選者為ILT70080.6(EC50 = 6.9 pM)及ILT70080.1(EC50 = 8.0 pM)。其他ILT70080變異體之EC50 值如下：ILT70080.1 EC50 = 10.0 pM；ILT70080.3 EC50 = 11.0 pM；ILT70080.4 EC50 = 11.9 pM；ILT70080.5 EC50 = 8.6 pM；及ILT70080.7 EC50 = 7.8 pM。發現所有ILT70083變異體具有相比親本抗體減低之效力(EC50 ＞ 89.0 pM)。參見圖14。 實例9 工程化ILT70080及ILT70083抗體之去岩藻糖基化 產生ILT70080.6之去岩藻糖基化形式。ILT70080.6抗體之去岩藻糖基化不影響其與人類或食蟹獼猴ILT7表現細胞中任一者之結合。去岩藻糖基化ILT70080.6於人類及食蟹獼猴ILT7表現細胞上之結合EC50 分別為152.3 pM及366.2 pM。參見圖15。圖15中之表提供測量平均螢光強度(MFI)之三個獨立結合實驗之平均結果。 亦評估ILT70080.6及ILT70083之去岩藻糖基化形式之ADCC活性(參見上述實例7)。ILT70080.6之去岩藻糖基化使得其抗人類及食蟹獼猴ILT7表現細胞之ADCC效力提高約10倍。參見圖16。去岩藻糖基化ILT0080.6之抗人類ILT7表現細胞之EC50 為1.12 pM及抗食蟹獼猴ILT7表現細胞之EC50 為0.44 pM。圖16中之表提供測量細胞毒性之三個獨立ADCC分析之平均結果。 測試去岩藻糖基化ILT70080.6及ILT70083在人類PBMC中之ADCC效力。藉由流式細胞測量術評估抗體之細胞毒性及藉由ELISA測量上清液中之CpG A介導之IFNa分泌。結果顯示於圖17中。在食蟹獼猴PBMC中，就IFNa分泌而言使用去岩藻糖基化ILT70080.6及ILT70083抗體之EC50 值分別為58 pM及5216 pM。 在人類全血及PBMC中，發現去岩藻糖基化ILT70080.6及ILT70083抗體特異性結合至BDCA-2陽性細胞。兩個抗體之結合受限於在所有測試濃度(0.1至5.0 µg/mL)下之人類pDC。 在食蟹獼猴全血中，發現去岩藻糖基化ILT70080.6及ILT70083抗體結合至在所有測試濃度(0.5至2.5 µg/ml)下之pDC(HLA-DR+ 譜系– CD123高 細胞)。 實例10 ILT70137抗體之去岩藻糖基化 如上文在實例7中針對於ILT70080及ILT70083抗體所述製得ILT70137抗體之去岩藻糖基化形式。 10.1  結合至可溶性重組人類ILT7 BIAcore(表面電漿子共振)係用於測量針對於去岩藻糖基化IgG1 ILT70137與人類ILT7蛋白質使用IgG-捕捉分析格式之結合的動力學速率(kon 、koff )常數。於首先捕捉IgG至感測晶片表面上之後，接著捕捉ILT7蛋白質或儀器緩衝液，記錄ILT7蛋白質之各濃度連續兩倍稀釋液系列之結合。在各對注射之間，再生IgG捕捉表面。然後，自所得結合曲線，使用可經由vendor軟體獲得之Biaevaluation軟體利用1:1擬合模型(此包括針對質量輸送限制之結合校正之條件，其應進行檢測)，來計算得個別締合及解離速率常數。自數據之高解析度BIAcore圖，測定ILT7蛋白質與去岩藻糖基化IgG1 ILT70137之結合之締合速率常數及解離速率常數為1.855 × 105 M-1 s-1 。該相同圖亦用於測定該相互作用之對應之解離速率常數，該解離速率常數係測得為3.175 × 10-2 s-1 。由此等速率常數，然後自koff /kon 之商數計算得KD 為171 nM。該等結果概述於下表3中。kon 及koff 之個別誤差小，及如藉由經計算之Rmax (最大反應)之~1%的Chi2值判斷，對數據之整體擬合良好。總之，此表明使用單點結合模型以擬合該數據係適宜的。評估未指示結合係受質量輸送限制，因此，測得之締合速率常數被視為有效。
Figure 106107877-A0304-0003
 10.2  與ILT7-表現細胞系之結合 使用穩定表現人類或食蟹獼猴ILT7之細胞系來測定去岩藻糖基化ILT70137與ILT7之結合。藉由流式細胞測量術評估細胞結合之抗體之平均螢光強度。在4℃下，將細胞與範圍自0.004至333.3 nM漸增濃度之測試抗體培養30分鐘。於培養之後，用冷PBS洗滌該等細胞且在4℃下與抗人類-Alexa Fluor 647抗體培養30分鐘。然後，藉由FACS測定螢光強度及使用非線性擬合公式在GraphPad Prism 6軟體中計算得EC50 值。 結果顯示於圖18中。發現去岩藻糖基化ILT70137係以劑量依賴性方式結合重組人類及食蟹獼猴ILT7-表現細胞。就同型對照而言未觀察到顯著結合。就結合至人類ILT7表現細胞而言，去岩藻糖基化ILT70137半數最大有效濃度(EC50 )平均為0.303 nM及就食蟹獼猴ILT7表現細胞而言為2.148 nM。10.3 於ILT7-表現細胞系上之ADCC活性 藉由對於表現人類或食蟹獼猴ILT7之靶細胞之螢光活化細胞分選(FACS)檢定測量去岩藻糖基化ILT70137引起ADCC的潛力。將靶細胞與效應子NK細胞系KC1333以1:5之比在漸增濃度之去岩藻糖基化ILT70137或同型對照(範圍自0至6.66 × 10-9 M)之存在下共培養。就藉由流式細胞測量術評估靶細胞活力而言，使用CD56門輸出KC1333，及使用7-胺基-放線菌素D(7-AAD)存活菌株門輸出死細胞。活靶細胞定義為CD56陰性，7-AAD陰性。使用以下公式計算得細胞毒性百分比：細胞毒性% = 100 - (活靶細胞百分比/無抗體對照中之活靶細胞之百分比) × 100。在GraphPad Prism 6軟體中，使用非線性擬合方程式計算得半數最大有效濃度(EC50 )值。x-軸：抗體濃度。 結果顯示於圖19中。去岩藻糖基化ILT70137以劑量依賴方式誘導ADCC，其中於表現人類ILT-7之細胞上之EC50 為4.19 pM及就表現食蟹獼猴ILT7之細胞而言為1.89 pM。10.4 對於初級漿細胞樣樹突狀細胞之ADCC活性 回應於類鐸受體9(TLR9)促效劑之IFN-α分泌大程度上歸因於周邊血液單核細胞(PBMC)製劑中之漿細胞樣樹突狀細胞(pDC)。因此，藉由評估其阻斷PBMC中IFN-α之分泌之能力間接測量去岩藻糖基化ILT70137誘導初級pDC之ADCC之潛力。在此等分析中，將經純化PBMC接種於96孔圓底板之含有補充10%胎牛血清及200 ng/mL重組人類IL-2之培養基。一式兩份將去岩藻糖基化ILT70137及對照抗體之連續稀釋液添加至適宜孔中並培養9.5小時。於培養之後，添加50 μL TLR9促效劑ODN2216至各孔以達成0.5 μM之最終濃度。使用多亞型IFN-α ELISA套組在上清液中定量IFN-α，及在圖20中呈現為pg/mL上清液。使用非線性擬合方程式在GraphPad Prism v5.01軟體中計算得ADCC之IC50 。 去岩藻糖基化ILT70137係以劑量依賴性方式減少PBMC中IFN-α之TLR9介導之分泌，其中半數最大抑制濃度(IC50 )為0.048 nM。此等結果指示去岩藻糖基化ILT70137有效地耗盡PBMC中之天然生成之初級人類pDC。 10.5  與初級漿細胞樣樹突狀細胞之結合 藉由FACS在周邊血液單核細胞(PBMC)中評估去岩藻糖基化ILT70137對人類初級漿細胞樣樹突狀細胞(pDC)之特異性。PBMC係單離自人類供體。為恰當地識別該樹突狀細胞子組，先利用標記CD123(表現於pDC及嗜鹼性粒細胞上)及CD304(pDC獨特)。pDC為CD123+CD304+雙陽性，及CD304染色係足以識別pDC。參見圖21(上方小圖)。去岩藻糖基化ILT70137僅結合至CD304陽性細胞，表明其獨特地結合至pDC。參見圖21(右下小圖)。就人類IgG1同型去岩藻糖基化對照抗體R3-47而言，未觀察到與該群體之顯著結合。參見圖21(左下小圖)。 實例11 ILT7抗體之活體內活性 將三種抗-ILT7抗體投與雄性食蟹獼猴：去岩藻糖基化7C7、去岩藻糖基化ILT70080.6及去岩藻糖基化IgG1 ILT70137。所有這三種抗體在漿細胞樣樹突狀細胞(pDC)之耗盡中具活性。 一般而言，去岩藻糖基化ILT70080.6之投與具良好耐受性。然而，觀察到以下病理學發現：嗜中性粒細胞計數減小、血管性白血球增多症、腎絲球基質增多、及血管性/血管周發炎。另外，抗去岩藻糖基化ILT70080.6抗體之抗體(抗藥物抗體)之出現與去岩藻糖基化ILT70080.6之清除率增加相關聯。 在另一研究中，研究去岩藻糖基化7C7及去岩藻糖基化ILT70137之毒理動力學。在該研究中，藉由輸注投與5當量劑量之抗體至食蟹獼猴。於投與之後，處於穩定狀態之去岩藻糖基化7C7與去岩藻糖基化ILT70137之間的暴露量係可相比較的。另外，如圖22中所顯示，使用任一種抗體以達成pDC之特異性及可逆性耗盡。pDC耗盡導致IFNα生成之間接活體內抑制。參見圖23。 然而，利用去岩藻糖基化7C7及去岩藻糖基化ILT70137處理之動物的病理學不同。在用去岩藻糖基化7C7處理之一些動物中觀察到脾臟重量增加。在用去岩藻糖基化7C7處理之一些動物中亦觀察到顯微鏡發現。特定言之，在脾臟中觀察到紅髓(red pulp)及巨噬細胞過度生長/增生。在肝臟中觀察到庫弗細胞過度生長/增生。另外，免疫組織化學顯示含人類IgG/7C7及猴IgG之顆粒狀沉積物與肝臟中之庫弗細胞及脾臟中之紅髓巨噬細胞過度生長/增生相關聯。此等觀察結果與含有藥物(7C7)及抗藥物抗體(ADA)之免疫複合物之放大生理清除率一致。相比之下，就去岩藻糖基化ILT70137而言未觀察到器官重量變化及宏觀或微觀發現。 另外，雖然兩隻經去岩藻糖基化7C7抗體處理之猴子之嗜中性白細胞計數下降到低於1 E3/µl，但在經對照或去岩藻糖基化ILT70137處理之猴子中未觀察到嗜中性粒細胞計數之顯著變化。 因此，雖然所有這三種抗體活體內耗盡pDC，但於投與去岩藻糖基化ILT70137之後之優異的安全性及抗藥物抗體之缺乏係驚人有利的。 實例12 抗原決定基測圖 為確定藉由ILT7抗體結合之抗原決定基，構築含有ILT7及ILT1多肽之嵌合多肽，及測試ILT7抗體與此等構築體之結合。選擇ILT1(寄存編號Q8N149)以構築嵌合變異體，因為其具有與ILT7相同的模式結構且與ILT7共有65%同一性，但無法藉由ILT7單株抗體識別。藉由用ILT1對應物置換ILT7之胞外Ig域產生嵌合多肽。所有該等構築體包含N-端旗標標籤。結果證實ILT70080及ILT70083結合至ILT7之Ig1域。相比之下，7C7抗體結合至ILT7之Ig2域。 具體實施例之前述說明將如此全面地呈現本發明之一般本質，使得他人可在不需過度實驗下，在不脫離本發明之一般概念下應用本技術技能中之知識簡單地改動及/或修改該等具體實施例之不同應用。因此，基於本文呈現之教示及指導，該等修改及改動意欲屬於所揭示實施例等效物的含義及範圍內。應瞭解，本文中之行語(phraseology)或術語(terminology)係用於說明而非限制之目的，因此，本說明書之術語或行語欲由熟練技術者根據教示及指導作解釋。 本發明之寬度及範圍不應受任何上述例示性實施例限制，而僅應根據下列申請專利範圍及其等效物來定義。
圖1A及1B：顯示SBI28(#28)、10D10及7C7抗體之可變重鏈(1A)及可變輕鏈(1B)序列比對。陰影指示CDR序列。開放盒表示10D10中引入以產生7C7之突變。 圖2：顯示如藉由流式細胞儀測得之ILT7抗體及陰性對照抗體(R437)與表現人類ILT7之CT-550細胞之結合。SBI33係指如美國公開申請案第2009/0280128號中所提供的抗-ILT7抗體ILT7#33。 圖3：顯示藉由流式細胞測量術測得之ILT7抗體及陰性對照抗體(R437)與表現食蟹獼猴ILT7之CT-125細胞之結合。 圖4：顯示ILT7抗體及陰性對照抗體(R437)抗人類ILT7表現細胞之ADCC效力。 圖5：顯示ILT7抗體及陰性對照抗體(R437)抗食蟹獼猴ILT7表現細胞之ADCC效力。 圖6A及6B：顯示ILT7抗體及陰性對照抗體(R437)與周邊血液單核細胞(PBMC)中漿細胞樣樹突狀細胞(pDC)之結合。 圖7：顯示藉由流式細胞測量術測得之去岩藻糖基化ILT7抗體及其親本抗體與表現人類(左小圖)及食蟹獼猴(右小圖)ILT7之CT-550細胞之結合。 圖8：顯示去岩藻糖基化ILT7抗體及其親本抗體抗人類(左小圖)及食蟹獼猴(右小圖)ILT7表現細胞之ADCC效力。 圖9A及9B：顯示七種ILT70080變異體之可變重鏈(9A)及可變輕鏈(9B)序列比對。最接近的生殖系序列(IGHV1-69*01及IGLV3-21*01)亦顯示在比對中。 圖10A及10B：顯示九種ILT70083變異體之可變重鏈(10A)及可變輕鏈(10B)序列比對。最接近的生殖系序列(IGHV3-23*01及IGLV1-51*01)亦顯示在比對中。 圖11：顯示ILT70080變異體與表現人類ILT7之細胞(CT-550；頂小圖)及表現食蟹獼猴ILT7之細胞(CT-125；底小圖)之結合。 圖12：顯示ILT70083變異體與表現人類ILT7之細胞(頂小圖)或表現食蟹獼猴ILT7之細胞(底小圖)之結合。 圖13：顯示ILT70080變異體抗體抗人類ILT7表現細胞之ADCC效力。 圖14：顯示ILT70083變異體抗體抗人類ILT7表現細胞之ADCC效力。 圖15：顯示去岩藻糖基化ILT70080.6及ILT70083抗體與人類ILT7表現細胞(左小圖)及食蟹獼猴ILT7表現細胞(右小圖)之結合。 圖16：顯示去岩藻糖基化ILT70080.6及ILT70083抗體對於人類ILT7表現細胞(左小圖)及食蟹獼猴ILT7表現細胞(右小圖)之ADCC活性。 圖17：顯示經暴露於去岩藻糖基化ILT70080.6及ILT70083抗體之人類PBMC的細胞毒性(左)及IFN-α分泌(右)。 圖18：顯示去岩藻糖基化ILT70137與表現人類ILT7之細胞(左小圖)或表現食蟹獼猴ILT7之細胞(右小圖)之結合。圓形表示去岩藻糖基化ILT70137，及三角形表示對照。 圖19：顯示去岩藻糖基化ILT70137對於表現人類ILT7之細胞(左小圖)或表現食蟹獼猴ILT7之細胞(右小圖)之ADCC活性。三角形表示去岩藻糖基化ILT70137，及圓形表示對照。 圖20：顯示去岩藻糖基化ILT70137之ADCC活性，其藉由測量對IFN-α產生之抑制作為抗體活體外引起周邊血液單核細胞(PBMC)之ADCC的能力的間接評估。 圖21：顯示去岩藻糖基化ILT70137與人類初級漿細胞樣樹突狀細胞(pDC)之結合。 圖22：顯示經去岩藻糖基化7C7或去岩藻糖基化ILT70137處理之食蟹獼猴中pDC之耗盡。圖底部的箭頭指示抗體投與的時間點。 圖23：顯示經去岩藻糖基化7C7或去岩藻糖基化ILT70137處理之後IFNα之產生。圖底部的箭頭指示抗體投與的時間點。
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<223> ILT70080 VH
<400> 22
Figure 106107877-A0305-02-0118-24
Figure 106107877-A0305-02-0119-25
<210> 23
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70080 VHCDR1
<400> 23
Figure 106107877-A0305-02-0119-26
<210> 24
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70080 VHCDR2
<400> 24
Figure 106107877-A0305-02-0119-27
<210> 25
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70080 VHCDR3
<400> 25
Figure 106107877-A0305-02-0119-28
Figure 106107877-A0305-02-0120-29
<210> 26
<211> 324
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70080 VL
<400> 26
Figure 106107877-A0305-02-0120-30
<210> 27
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70080 VL
<400> 27
Figure 106107877-A0305-02-0120-31
Figure 106107877-A0305-02-0121-32
<210> 28
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70080 VLCDR1
<400> 28
Figure 106107877-A0305-02-0121-33
<210> 29
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70080 VLCDR2
<400> 29
Figure 106107877-A0305-02-0121-34
<210> 30
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70080 VLCDR3
<400> 30
Figure 106107877-A0305-02-0122-35
<210> 31
<211> 375
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70080.1 VH
<400> 31
Figure 106107877-A0305-02-0122-36
<210> 32
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70080.1 VH
<400> 32
Figure 106107877-A0305-02-0122-37
Figure 106107877-A0305-02-0123-38
<210> 33
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70080.1 VHCDR1
<400> 33
Figure 106107877-A0305-02-0123-39
<210> 34
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70080.1 VHCDR2
<400> 34
Figure 106107877-A0305-02-0123-40
<210> 35
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70080.1 VHCDR3
<400> 35
Figure 106107877-A0305-02-0124-41
<210> 36
<211> 324
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70080.1 VL
<400> 36
Figure 106107877-A0305-02-0124-42
<210> 37
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70080.1 VL
<400> 37
Figure 106107877-A0305-02-0124-43
Figure 106107877-A0305-02-0125-44
<210> 38
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70080.1 VLCDR1
<400> 38
Figure 106107877-A0305-02-0125-45
<210> 39
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70080.1 VLCDR2
<400> 39
Figure 106107877-A0305-02-0126-46
<210> 40
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70080.1 VLCDR3
<400> 40
Figure 106107877-A0305-02-0126-47
<210> 41
<211> 375
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70080.2 VH
<400> 41
Figure 106107877-A0305-02-0126-48
<210> 42
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70080.2 VH
<400> 42
Figure 106107877-A0305-02-0127-49
<210> 43
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70080.2 VHCDR1
<400> 43
Figure 106107877-A0305-02-0127-50
<210> 44
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70080.2 VHCDR2
<400> 44
Figure 106107877-A0305-02-0128-51
<210> 45
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70080.2 VHCDR3
<400> 45
Figure 106107877-A0305-02-0128-52
<210> 46
<211> 324
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70080.2 VL
<400> 46
Figure 106107877-A0305-02-0128-53
Figure 106107877-A0305-02-0129-54
<210> 47
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70080.2 VL
<400> 47
Figure 106107877-A0305-02-0129-55
<210> 48
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70080.2 VLCDR1
<400> 48
Figure 106107877-A0305-02-0130-56
<210> 49
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70080.2 VLCDR2
<400> 49
Figure 106107877-A0305-02-0130-57
<210> 50
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70080.2 VLCDR3
<400> 50
Figure 106107877-A0305-02-0130-58
<210> 51
<211> 375
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70080.3 VH
<400> 51
Figure 106107877-A0305-02-0130-59
Figure 106107877-A0305-02-0131-60
<210> 52
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70080.3 VH
<400> 52
Figure 106107877-A0305-02-0131-61
<210> 53
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70080.3 VHCDR1
<400> 53
Figure 106107877-A0305-02-0132-62
<210> 54
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70080.3 VHCDR2
<400> 54
Figure 106107877-A0305-02-0132-63
<210> 55
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70080.3 VHCDR3
<400> 55
Figure 106107877-A0305-02-0132-64
<210> 56
<211> 324
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70080.3 VL
<400> 56
Figure 106107877-A0305-02-0133-65
<210> 57
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70080.3 VL
<400> 57
Figure 106107877-A0305-02-0133-66
Figure 106107877-A0305-02-0134-67
<210> 58
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70080.3 VLCDR1
<400> 58
Figure 106107877-A0305-02-0134-68
<210> 59
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70080.3 VLCDR2
<400> 59
Figure 106107877-A0305-02-0134-69
<210> 60
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70080.3 VLCDR3
<400> 60
Figure 106107877-A0305-02-0134-70
<210> 61
<211> 375
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70080.4 VH
<400> 61
Figure 106107877-A0305-02-0135-71
<210> 62
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70080.4 VH
<400> 62
Figure 106107877-A0305-02-0135-72
Figure 106107877-A0305-02-0136-73
<210> 63
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70080.4 VHCDR1
<400> 63
Figure 106107877-A0305-02-0136-74
<210> 64
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70080.4 VHCDR2
<400> 64
Figure 106107877-A0305-02-0136-75
<210> 65
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70080.4 VHCDR3
<400> 65
Figure 106107877-A0305-02-0137-76
<210> 66
<211> 324
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70080.4 VL
<400> 66
Figure 106107877-A0305-02-0137-77
<210> 67
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70080.4 VL
<400> 67
Figure 106107877-A0305-02-0137-78
Figure 106107877-A0305-02-0138-79
<210> 68
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70080.4 VLCDR1
<400> 68
Figure 106107877-A0305-02-0138-80
<210> 69
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70080.4 VLCDR2
<400> 69
Figure 106107877-A0305-02-0138-81
<210> 70
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70080.4 VLCDR3
<400> 70
Figure 106107877-A0305-02-0139-82
<210> 71
<211> 375
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70080.5 VH
<400> 71
Figure 106107877-A0305-02-0139-83
<210> 72
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70080.5 VH
<400> 72
Figure 106107877-A0305-02-0139-84
Figure 106107877-A0305-02-0140-85
<210> 73
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70080.5 VHCDR1
<400> 73
Figure 106107877-A0305-02-0140-86
<210> 74
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70080.5 VHCDR2
<400> 74
Figure 106107877-A0305-02-0141-87
<210> 75
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70080.5 VHCDR3
<400> 75
Figure 106107877-A0305-02-0141-88
<210> 76
<211> 324
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70080.5 VL
<400> 76
Figure 106107877-A0305-02-0141-89
<210> 77
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70080.5 VL
<400> 77
Figure 106107877-A0305-02-0142-90
<210> 78
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70080.5 VLCDR1
<400> 78
Figure 106107877-A0305-02-0142-91
<210> 79
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70080.5 VLCDR2
<400> 79
Figure 106107877-A0305-02-0143-92
<210> 80
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70080.5 VLCDR3
<400> 80
Figure 106107877-A0305-02-0143-93
<210> 81
<211> 375
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70080.6 VH
<400> 81
Figure 106107877-A0305-02-0143-94
<210> 82
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70080.6 VH
<400> 82
Figure 106107877-A0305-02-0144-95
<210> 83
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70080.6 VHCDR1
<400> 83
Figure 106107877-A0305-02-0145-96
<210> 84
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70080.6 VHCDR2
<400> 84
Figure 106107877-A0305-02-0145-97
<210> 85
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70080.6 VHCDR3
<400> 85
Figure 106107877-A0305-02-0145-98
<210> 86
<211> 324
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70080.6 VL
<400> 86
Figure 106107877-A0305-02-0145-99
Figure 106107877-A0305-02-0146-100
<210> 87
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70080.6 VL
<400> 87
Figure 106107877-A0305-02-0146-101
<210> 88
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70080.6 VLCDR1
<400> 88
Figure 106107877-A0305-02-0147-102
<210> 89
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70080.6 VLCDR2
<400> 89
Figure 106107877-A0305-02-0147-103
<210> 90
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70080.6 VLCDR3
<400> 90
Figure 106107877-A0305-02-0147-104
<210> 91
<211> 375
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70080.7 VH
<400> 91
Figure 106107877-A0305-02-0147-105
Figure 106107877-A0305-02-0148-106
<210> 92
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70080.7 VH
<400> 92
Figure 106107877-A0305-02-0148-107
Figure 106107877-A0305-02-0149-108
<210> 93
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70080.7 VHCDR1
<400> 93
Figure 106107877-A0305-02-0149-109
<210> 94
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70080.7 VHCDR2
<400> 94
Figure 106107877-A0305-02-0149-110
<210> 95
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70080.7 VHCDR3
<400> 95
Figure 106107877-A0305-02-0149-111
<210> 96
<211> 324
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70080.7 VL
<400> 96
Figure 106107877-A0305-02-0150-112
<210> 97
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70080.7 VL
<400> 97
Figure 106107877-A0305-02-0150-113
Figure 106107877-A0305-02-0151-114
<210> 98
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70080.7 VLCDR1
<400> 98
Figure 106107877-A0305-02-0151-115
<210> 99
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70080.7 VLCDR2
<400> 99
Figure 106107877-A0305-02-0151-116
<210> 100
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70080.7 VLCDR3
<400> 100
Figure 106107877-A0305-02-0151-117
Figure 106107877-A0305-02-0152-118
<210> 101
<211> 375
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70083 VH
<400> 101
Figure 106107877-A0305-02-0152-119
<210> 102
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70083 VH
<400> 102
Figure 106107877-A0305-02-0152-120
Figure 106107877-A0305-02-0153-121
<210> 103
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70083 VHCDR1
<400> 103
Figure 106107877-A0305-02-0153-122
<210> 104
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70083 VHCDR2
<400> 104
Figure 106107877-A0305-02-0153-123
<210> 105
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70083 VHCDR3
<400> 105
Figure 106107877-A0305-02-0154-124
<210> 106
<211> 330
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70083 VL
<400> 106
Figure 106107877-A0305-02-0154-125
<210> 107
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70083 VL
<400> 107
Figure 106107877-A0305-02-0154-126
Figure 106107877-A0305-02-0155-127
<210> 108
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70083 VLCDR1
<400> 108
Figure 106107877-A0305-02-0155-128
<210> 109
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70083 VLCDR2
<400> 109
Figure 106107877-A0305-02-0155-129
Figure 106107877-A0305-02-0156-130
<210> 110
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70083 VLCDR3
<400> 110
Figure 106107877-A0305-02-0156-131
<210> 111
<211> 375
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70083.1 VH
<400> 111
Figure 106107877-A0305-02-0156-132
<210> 112
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70083.1 VH
<400> 112
Figure 106107877-A0305-02-0157-133
<210> 113
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70083.1 VHCDR1
<400> 113
Figure 106107877-A0305-02-0157-134
<210> 114
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70083.1 VHCDR2
<400> 114
Figure 106107877-A0305-02-0158-135
<210> 115
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70083.1 VHCDR3
<400> 115
Figure 106107877-A0305-02-0158-136
<210> 116
<211> 330
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70083.1 VL
<400> 116
Figure 106107877-A0305-02-0158-137
<210> 117
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70083.1 VL
<400> 117
Figure 106107877-A0305-02-0159-138
<210> 118
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70083.1 VLCDR1
<400> 118
Figure 106107877-A0305-02-0159-139
Figure 106107877-A0305-02-0160-140
<210> 119
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70083.1 VLCDR2
<400> 119
Figure 106107877-A0305-02-0160-352
<210> 120
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70083.1 VLCDR3
<400> 120
Figure 106107877-A0305-02-0160-142
<210> 121
<211> 375
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70083.2 VH
<400> 121
Figure 106107877-A0305-02-0160-143
Figure 106107877-A0305-02-0161-144
<210> 122
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70083.2 VH
<400> 122
Figure 106107877-A0305-02-0161-145
<210> 123
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70083.2 VHCDR1
<400> 123
Figure 106107877-A0305-02-0162-146
<210> 124
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70083.2 VHCDR2
<400> 124
Figure 106107877-A0305-02-0162-147
<210> 125
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70083.2 VHCDR3
<400> 125
Figure 106107877-A0305-02-0162-148
<210> 126
<211> 330
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70083.2 VL
<400> 126
Figure 106107877-A0305-02-0163-149
<210> 127
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70083.2 VL
<400> 127
Figure 106107877-A0305-02-0163-150
Figure 106107877-A0305-02-0164-151
<210> 128
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70083.2 VLCDR1
<400> 128
Figure 106107877-A0305-02-0164-152
<210> 129
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70083.2 VLCIDR2
<400> 129
Figure 106107877-A0305-02-0164-153
<210> 130
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70083.2 VLCIDR3
<400> 130
Figure 106107877-A0305-02-0164-154
<210> 131
<211> 375
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70083.3 VH
<400> 131
Figure 106107877-A0305-02-0165-155
<210> 132
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70083.3 VH
<400> 132
Figure 106107877-A0305-02-0165-156
Figure 106107877-A0305-02-0166-157
<210> 133
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70083.3 VHCDR1
<400> 133
Figure 106107877-A0305-02-0166-158
<210> 134
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70083.3 VHCDR2
<400> 134
Figure 106107877-A0305-02-0166-159
<210> 135
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70083.3 VHCDR3
<400> 135
Figure 106107877-A0305-02-0167-160
<210> 136
<211> 330
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70083.3 VL
<400> 136
Figure 106107877-A0305-02-0167-161
<210> 137
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70083.3 VL
<400> 137
Figure 106107877-A0305-02-0167-162
Figure 106107877-A0305-02-0168-163
<210> 138
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70083.3 VLCDR1
<400> 138
Figure 106107877-A0305-02-0168-164
<210> 139
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70083.3 VLCDR2
<400> 139
Figure 106107877-A0305-02-0168-165
<210> 140
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70083.3 VLCDR3
<400> 140
Figure 106107877-A0305-02-0169-166
<210> 141
<211> 375
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70083.4 VH
<400> 141
Figure 106107877-A0305-02-0169-167
<210> 142
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70083.4 VH
<400> 142
Figure 106107877-A0305-02-0169-168
Figure 106107877-A0305-02-0170-169
<210> 143
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70083.4 VHCDR1
<400> 143
Figure 106107877-A0305-02-0170-170
<210> 144
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70083.4 VHCDR2
<400> 144
Figure 106107877-A0305-02-0170-171
Figure 106107877-A0305-02-0171-172
<210> 145
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70083.4 VHCDR3
<400> 145
Figure 106107877-A0305-02-0171-173
<210> 146
<211> 330
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70083.4 VL
<400> 146
Figure 106107877-A0305-02-0171-174
<210> 147
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70083.4 VL
<400> 147
Figure 106107877-A0305-02-0172-175
<210> 148
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70083.4 VLCDR1
<400> 148
Figure 106107877-A0305-02-0172-176
<210> 149
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70083.4 VLCDR2
<400> 149
Figure 106107877-A0305-02-0173-177
<210> 150
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70083.4 VLCDR3
<400> 150
Figure 106107877-A0305-02-0173-178
<210> 151
<211> 375
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70083.5 VH
<400> 151
Figure 106107877-A0305-02-0173-179
<210> 152
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70083.5 VH
<400> 152
Figure 106107877-A0305-02-0174-180
<210> 153
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70083.5 VHCDR1
<400> 153
Figure 106107877-A0305-02-0174-181
Figure 106107877-A0305-02-0175-182
<210> 154
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70083.5 VHCDR2
<400> 154
Figure 106107877-A0305-02-0175-183
<210> 155
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70083.5 VHCDR3
<400> 155
Figure 106107877-A0305-02-0175-184
<210> 156
<211> 330
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70083.5 VL
<400> 156
Figure 106107877-A0305-02-0175-185
Figure 106107877-A0305-02-0176-186
<210> 157
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70083.5 VL
<400> 157
Figure 106107877-A0305-02-0176-187
<210> 158
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70083.5 VLCDR1
<400> 158
Figure 106107877-A0305-02-0177-188
<210> 159
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70083.5 VLCDR2
<400> 159
Figure 106107877-A0305-02-0177-189
<210> 160
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70083.5 VLCDR3
<400> 160
Figure 106107877-A0305-02-0177-190
<210> 161
<211> 375
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70083.6 VH
<400> 161
Figure 106107877-A0305-02-0177-191
Figure 106107877-A0305-02-0178-192
<210> 162
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70083.6 VH
<400> 162
Figure 106107877-A0305-02-0178-193
Figure 106107877-A0305-02-0179-194
<210> 163
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70083.6 VHCDR1
<400> 163
Figure 106107877-A0305-02-0179-195
<210> 164
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70083.6 VHCDR2
<400> 164
Figure 106107877-A0305-02-0179-196
<210> 165
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70083.6 VHCDR3
<400> 165
Figure 106107877-A0305-02-0179-197
<210> 166
<211> 330
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70083.6 VL
<400> 166
Figure 106107877-A0305-02-0180-198
<210> 167
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70083.6 VL
<400> 167
Figure 106107877-A0305-02-0180-199
Figure 106107877-A0305-02-0181-200
<210> 168
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70083.6 VLCDR1
<400> 168
Figure 106107877-A0305-02-0181-201
<210> 169
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70083.6 VLCDR2
<400> 169
Figure 106107877-A0305-02-0181-202
<210> 170
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70083.6 VLCDR3
<400> 170
Figure 106107877-A0305-02-0181-203
<210> 171
<211> 375
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70083.7 VH
<400> 171
Figure 106107877-A0305-02-0182-204
<210> 172
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70083.7 VH
<400> 172
Figure 106107877-A0305-02-0182-205
Figure 106107877-A0305-02-0183-206
<210> 173
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70083.7 VHCDR1
<400> 173
Figure 106107877-A0305-02-0183-207
<210> 174
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70083.7 VHCDR2
<400> 174
Figure 106107877-A0305-02-0183-208
<210> 175
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70083.7 VHCDR3
<400> 175
Figure 106107877-A0305-02-0184-209
<210> 176
<211> 330
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70083.7 VL
<400> 176
Figure 106107877-A0305-02-0184-210
<210> 177
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70083.7 VL
<400> 177
Figure 106107877-A0305-02-0184-211
Figure 106107877-A0305-02-0185-212
<210> 178
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70083.7 VLCDR1
<400> 178
Figure 106107877-A0305-02-0185-213
<210> 179
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70083.7 VLCDR2
<400> 179
Figure 106107877-A0305-02-0185-214
<210> 180
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70083.7 VLCDR3
<400> 180
Figure 106107877-A0305-02-0186-215
<210> 181
<211> 375
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70083.8 VH
<400> 181
Figure 106107877-A0305-02-0186-216
<210> 182
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70083.8 VH
<400> 182
Figure 106107877-A0305-02-0186-217
Figure 106107877-A0305-02-0187-218
<210> 183
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70083.8 VHCDR1
<400> 183
Figure 106107877-A0305-02-0187-219
<210> 184
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70083.8 VHCDR2
<400> 184
Figure 106107877-A0305-02-0188-220
<210> 185
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70083.8 VHCDR3
<400> 185
Figure 106107877-A0305-02-0188-221
<210> 186
<211> 330
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70083.8 VL
<400> 186
Figure 106107877-A0305-02-0188-222
<210> 187
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70083.8 VL
<400> 187
Figure 106107877-A0305-02-0189-223
<210> 188
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70083.8 VLCDR1
<400> 188
Figure 106107877-A0305-02-0189-224
<210> 189
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70083.8 VLCDR2
<400> 189
Figure 106107877-A0305-02-0190-225
<210> 190
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70083.8 VLCDR3
<400> 190
Figure 106107877-A0305-02-0190-226
<210> 191
<211> 375
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70083.9 VH
<400> 191
Figure 106107877-A0305-02-0190-227
Figure 106107877-A0305-02-0191-228
<210> 192
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70083.9 VH
<400> 192
Figure 106107877-A0305-02-0191-229
<210> 193
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70083.9 VHCDR1
<400> 193
Figure 106107877-A0305-02-0192-230
<210> 194
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70083.9 VHCDR2
<400> 194
Figure 106107877-A0305-02-0192-231
<210> 195
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70083.9 VHCDR3
<400> 195
Figure 106107877-A0305-02-0192-232
<210> 196
<211> 330
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70083.9 VL
<400> 196
Figure 106107877-A0305-02-0193-233
<210> 197
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70083.9 VL
<400> 197
Figure 106107877-A0305-02-0193-234
<210> 198
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70083.9 VLCDR1
<400> 198
Figure 106107877-A0305-02-0194-235
<210> 199
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70083.9 VLCDR2
<400> 199
Figure 106107877-A0305-02-0194-236
<210> 200
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70083.9 VLCDR3
<400> 200
Figure 106107877-A0305-02-0194-237
<210> 201
<211> 366
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70137 VH
<400> 201
Figure 106107877-A0305-02-0195-238
<210> 202
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70137 VH
<400> 202
Figure 106107877-A0305-02-0195-239
Figure 106107877-A0305-02-0196-240
<210> 203
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70137 VHCDR1
<400> 203
Figure 106107877-A0305-02-0196-241
<210> 204
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70137 VHCDR2
<400> 204
Figure 106107877-A0305-02-0196-242
<210> 205
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70137 VHCDR3
<400> 205
Figure 106107877-A0305-02-0197-243
<210> 206
<211> 330
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70137 VL
<400> 206
Figure 106107877-A0305-02-0197-244
<210> 207
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70137 VL
<400> 207
Figure 106107877-A0305-02-0197-245
Figure 106107877-A0305-02-0198-246
<210> 208
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70137 VLCDR1
<400> 208
Figure 106107877-A0305-02-0198-247
<210> 209
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70137 VLCDR2
<400> 209
Figure 106107877-A0305-02-0198-248
<210> 210
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70137 VLCDR3
<400> 210
Figure 106107877-A0305-02-0199-249
<210> 211
<211> 360
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70052 VH
<400> 211
Figure 106107877-A0305-02-0199-250
<210> 212
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70052 VH
<400> 212
Figure 106107877-A0305-02-0199-251
Figure 106107877-A0305-02-0200-252
<210> 213
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70052 VHCDR1
<400> 213
Figure 106107877-A0305-02-0200-253
<210> 214
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70052 VHCDR2
<400> 214
Figure 106107877-A0305-02-0200-254
<210> 215
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70052 VHCDR3
<400> 215
Figure 106107877-A0305-02-0201-255
<210> 216
<211> 330
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70052 VL
<400> 216
Figure 106107877-A0305-02-0201-256
<210> 217
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70052 VL
<400> 217
Figure 106107877-A0305-02-0201-257
Figure 106107877-A0305-02-0202-258
<210> 218
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70052 VLCDR1
<400> 218
Figure 106107877-A0305-02-0202-259
<210> 219
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70052 VLCDR2
<400> 219
Figure 106107877-A0305-02-0203-260
<210> 220
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70052 VLCDR3
<400> 220
Figure 106107877-A0305-02-0203-261
<210> 221
<211> 360
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70100 VH
<400> 221
Figure 106107877-A0305-02-0203-262
<210> 222
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70100 VH
<400> 222
Figure 106107877-A0305-02-0204-263
<210> 223
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70100 VHCDR1
<400> 223
Figure 106107877-A0305-02-0204-264
<210> 224
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70100 VHCDR2
<400> 224
Figure 106107877-A0305-02-0205-265
<210> 225
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70100 VHCDR3
<400> 225
Figure 106107877-A0305-02-0205-266
<210> 226
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70100 VH
<400> 226
Figure 106107877-A0305-02-0205-267
<210> 227
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70100 VL
<400> 227
Figure 106107877-A0305-02-0206-268
<210> 228
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70100 VLCDR1
<400> 228
Figure 106107877-A0305-02-0206-269
Figure 106107877-A0305-02-0207-270
<210> 229
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70100 VLCDR2
<400> 229
Figure 106107877-A0305-02-0207-271
<210> 230
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70100 VLCDR3
<400> 230
Figure 106107877-A0305-02-0207-272
<210> 231
<211> 366
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70142 VH
<400> 231
Figure 106107877-A0305-02-0207-273
Figure 106107877-A0305-02-0208-274
<210> 232
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70142 VH
<400> 232
Figure 106107877-A0305-02-0208-275
<210> 233
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70142 VHCDR1
<400> 233
Figure 106107877-A0305-02-0209-276
<210> 234
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70142 VHCDR2
<400> 234
Figure 106107877-A0305-02-0209-277
<210> 235
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70142 VHCDR3
<400> 235
Figure 106107877-A0305-02-0209-278
<210> 236
<211> 330
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70142 VL
<400> 236
Figure 106107877-A0305-02-0210-279
<210> 237
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70142 VL
<400> 237
Figure 106107877-A0305-02-0210-280
Figure 106107877-A0305-02-0211-281
<210> 238
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70142 VLCDR1
<400> 238
Figure 106107877-A0305-02-0211-282
<210> 239
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70142 VLCDR2
<400> 239
Figure 106107877-A0305-02-0211-283
<210> 240
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70142 VLCDR3
<400> 240
Figure 106107877-A0305-02-0211-284
<210> 241
<211> 366
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70144 VH
<400> 241
Figure 106107877-A0305-02-0212-285
<210> 242
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70144 VH
<400> 242
Figure 106107877-A0305-02-0212-286
Figure 106107877-A0305-02-0213-287
<210> 243
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70144 VHCDR1
<400> 243
Figure 106107877-A0305-02-0213-288
<210> 244
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70144 VHCDR2
<400> 244
Figure 106107877-A0305-02-0213-289
<210> 245
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70144 VHCDR3
<400> 245
Figure 106107877-A0305-02-0214-290
<210> 246
<211> 330
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70144 VL
<400> 246
Figure 106107877-A0305-02-0214-291
<210> 247
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70144 VL
<400> 247
Figure 106107877-A0305-02-0214-292
Figure 106107877-A0305-02-0215-293
<210> 248
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70144 VLCDR1
<400> 248
Figure 106107877-A0305-02-0215-294
<210> 249
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70144 VLCDR2
<400> 249
Figure 106107877-A0305-02-0215-295
<210> 250
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70144 VLCDR3
<400> 250
Figure 106107877-A0305-02-0216-296
<210> 251
<211> 351
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70019 VH
<400> 251
Figure 106107877-A0305-02-0216-297
<210> 252
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70019 VH
<400> 252
Figure 106107877-A0305-02-0216-298
Figure 106107877-A0305-02-0217-299
<210> 253
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70019 VHCDR1
<400> 253
Figure 106107877-A0305-02-0217-300
<210> 254
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70019 VHCDR2
<400> 254
Figure 106107877-A0305-02-0217-301
<210> 255
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70019 VHCDR3
<400> 255
Figure 106107877-A0305-02-0218-302
<210> 256
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70019 VL
<400> 256
Figure 106107877-A0305-02-0218-303
<210> 257
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70019 VL
<400> 257
Figure 106107877-A0305-02-0218-304
Figure 106107877-A0305-02-0219-305
<210> 258
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70019 VLCDR1
<400> 258
Figure 106107877-A0305-02-0219-306
<210> 259
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70019 VLCDR2
<400> 259
Figure 106107877-A0305-02-0219-307
Figure 106107877-A0305-02-0220-308
<210> 260
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70019 VLCDR3
<400> 260
Figure 106107877-A0305-02-0220-309
<210> 261
<211> 351
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70028 VH
<400> 261
Figure 106107877-A0305-02-0220-310
<210> 262
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70028 VH
<400> 262
Figure 106107877-A0305-02-0220-311
Figure 106107877-A0305-02-0221-312
<210> 263
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70028 VHCDR1
<400> 263
Figure 106107877-A0305-02-0221-313
<210> 264
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70028 VHCDR2
<400> 264
Figure 106107877-A0305-02-0222-314
<210> 265
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70028 VHCDR3
<400> 265
Figure 106107877-A0305-02-0222-315
<210> 266
<211> 330
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70028 VL
<400> 266
Figure 106107877-A0305-02-0222-316
<210> 267
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70028 VL
<400> 267
Figure 106107877-A0305-02-0223-317
<210> 268
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70028 VLCDR1
<400> 268
Figure 106107877-A0305-02-0223-318
<210> 269
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70028 VLCDR2
<400> 269
Figure 106107877-A0305-02-0224-319
<210> 270
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70028 VLCDR3
<400> 270
Figure 106107877-A0305-02-0224-320
<210> 271
<211> 354
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70076 VH
<400> 271
Figure 106107877-A0305-02-0224-321
<210> 272
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70076 VH
<400> 272
Figure 106107877-A0305-02-0225-322
<210> 273
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70076 VHCDR1
<400> 273
Figure 106107877-A0305-02-0225-323
Figure 106107877-A0305-02-0226-324
<210> 274
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70076 VHCDR2
<400> 274
Figure 106107877-A0305-02-0226-325
<210> 275
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70076 VHCDR3
<400> 275
Figure 106107877-A0305-02-0226-326
<210> 276
<211> 330
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70076 VL
<400> 276
Figure 106107877-A0305-02-0226-327
Figure 106107877-A0305-02-0227-328
<210> 277
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70076 VL
<400> 277
Figure 106107877-A0305-02-0227-329
<210> 278
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70076 VHCDR1
<400> 278
Figure 106107877-A0305-02-0228-330
<210> 279
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70076 VHCDR2
<400> 279
Figure 106107877-A0305-02-0228-331
<210> 280
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70076 VHCDR3
<400> 280
Figure 106107877-A0305-02-0228-332
<210> 281
<211> 360
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70089 VH
<400> 281
Figure 106107877-A0305-02-0228-333
Figure 106107877-A0305-02-0229-334
<210> 282
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70089 VH
<400> 282
Figure 106107877-A0305-02-0229-335
<210> 283
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70089 VHCDR1
<400> 283
Figure 106107877-A0305-02-0230-336
<210> 284
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70089 VHCDR2
<400> 284
Figure 106107877-A0305-02-0230-337
<210> 285
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70089 VHCDR3
<400> 285
Figure 106107877-A0305-02-0230-338
<210> 286
<211> 330
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70089 VL
<400> 286
Figure 106107877-A0305-02-0231-339
<210> 287
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70089 VL
<400> 287
Figure 106107877-A0305-02-0231-340
Figure 106107877-A0305-02-0232-341
<210> 288
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70089 VLCDR1
<400> 288
Figure 106107877-A0305-02-0232-342
<210> 289
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70089 VLCDR2
<400> 289
Figure 106107877-A0305-02-0232-343
<210> 290
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ILT70089 VLCDR3
<400> 290
Figure 106107877-A0305-02-0232-344
<210> 291
<211> 499
<212> PRT
<213> 現代人
<400> 291
Figure 106107877-A0305-02-0233-345
Figure 106107877-A0305-02-0234-346
Figure 106107877-A0305-02-0235-347
<210> 292
<211> 483
<212> PRT
<213> 食蟹獼猴
<400> 292
Figure 106107877-A0305-02-0235-348
Figure 106107877-A0305-02-0236-349
Figure 106107877-A0305-02-0237-350
Figure 106107877-A0305-02-0238-351

Claims (21)

  1. 一種抗免疫球蛋白樣轉錄本-7(ILT7)抗體，其包含互補決定區(CDR)HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2及LCDR3，其中該HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2及LCDR3分別由SEQ ID NO：203、204、205、208、209及210之胺基酸序列組成。
  2. 如請求項1之抗ILT7抗體，其中該抗體包含重鏈可變區(VH)及輕鏈可變區(VL)，其中該VH及VL區分別包含與SEQ ID NO：202及SEQ ID NO：207至少95%相同的胺基酸序列。
  3. 如請求項2之抗ILT7抗體，其中該VH及VL區分別由SEQ ID NO：202及SEQ ID NO：207之胺基酸序列組成。
  4. 如請求項1至3中任一項之抗ILT7抗體，其中該抗體包含選自由以下組成之群的重鏈免疫球蛋白恆定域：IgA恆定域、IgE恆定域、IgG1恆定域、IgG2恆定域、IgG3恆定域、IgG4恆定域及IgM恆定域。
  5. 如請求項4之抗ILT7抗體，其中該抗體包含IgG1恆定域。
  6. 如請求項1至3中任一項之抗ILT7抗體，其中該抗體包含選自由以下組成之群的輕鏈免疫球蛋白恆定域：Ig κ恆定域及Ig λ恆定域。
  7. 如請求項6之抗ILT7抗體，其中該抗體包含λ恆定域。
  8. 如請求項1至3中任一項之抗ILT7抗體，其中該抗體為單株抗體。
  9. 如請求項1至3中任一項之抗ILT7抗體，其中該抗體為鼠類、人類、嵌合、人源化或表面重塑(resurfaced)抗體。
  10. 如請求項9之抗ILT7抗體，其中該抗體為人類抗體。
  11. 如請求項1至3中任一項之抗ILT7抗體，其中該抗體係去岩藻糖基化。
  12. 如請求項1至3中任一項之抗ILT7抗體，其中該抗體特異性結合人類及食蟹獼猴ILT7。
  13. 一種去岩藻糖基化之人類單株抗ILT7抗體，其包含：i.互補決定區(CDR)HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2及LCDR3；ii.人類IgG1恆定域；及iii.人類λ恆定域，其中該HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2及LCDR3分別由SEQ ID NO：203、204、205、208、209及210之胺基酸序列組成。
  14. 如請求項13之抗ILT7抗體，其中重鏈可變區(VH)包含SEQ ID NO：202之胺基酸序列及輕鏈可變區(VL)包含SEQ ID NO：207之胺基酸序列。
  15. 一種醫藥組合物，其包含如請求項1至14中任一項之抗ILT7抗體及載劑。
  16. 一種多核苷酸，其編碼如請求項1至14中任一項之抗ILT7抗體。
  17. 一種經單離宿主細胞，其包含如請求項16之多核苷酸。
  18. 一種如請求項1至14中任一項之抗ILT7抗體之用途，其係用於製備治療自體免疫疾病之藥物。
  19. 如請求項18之用途，其中該自體免疫疾病係選自由以下組成之群：肌炎、糖尿病、橋本氏病(Hashimoto's disease)、自體免疫腎上腺功能不全、純紅細胞性貧血、多發性硬化症、類風濕性心臟炎、全身性紅斑狼瘡、牛皮癬、類風濕性關節炎、慢性炎症、休格倫氏症候群(Sjogren's syndrome)、多發性肌炎、皮肌炎、包涵體肌炎、幼年型肌炎及硬皮病。
  20. 如請求項19之用途，其中該自體免疫疾病係全身性紅斑狼瘡。
  21. 如請求項19之用途，其中該自體免疫疾病係皮肌炎。
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