TWI744971B - 毛木耳萃取物用於製備誘導未極化的免疫細胞分化成抗發炎型免疫細胞之組成物的用途 - Google Patents

Abstract

本發明提供一種毛木耳萃取物用於製備誘導未極化的免疫細胞分化成抗發炎型免疫細胞之組成物的用途。毛木耳萃取物是以萃取溶液對毛木耳(Auricularia polytricha)子實體進行至少一萃取步驟後獲得，其中毛木耳萃取物包含第一多醣體及第二多醣體，第一多醣體是萃取自蒂頭，第二多醣體是萃取自與蒂頭相連的杯狀部，且第二多醣體與第一多醣體之重量比值不大於1/3。毛木耳萃取物可誘導靜止型(resting)的免疫細胞傾向分化成抗發炎型免疫細胞。因此，意味著毛木耳萃取物可緩和促發炎狀況及/或改善發炎症狀。

Description

毛木耳萃取物用於製備誘導未極化的免疫細胞分化成抗發炎 型免疫細胞之組成物的用途

本發明是關於一種毛木耳萃取物的用途，特別是關於一種毛木耳萃取物用於製備誘導未極化的免疫細胞分化成抗發炎型免疫細胞的用途。

免疫反應分為發炎反應及抗發炎反應，其中前者在生物體抵禦外來病原菌上，或是在辨識癌化細胞上扮演重要角色，後者則拮抗前者，以免過度的發炎反應對個體產生的不良影響，例如：傷口難以癒合、高燒，或甚至導致死亡。M0巨噬細胞是一群多功能的髓系免疫細胞，其在調控免疫上具有重要功能，其中M0(靜止型，resting)巨噬細胞可分化為M1(發炎型)巨噬細胞，以幫助生物體快速清除入侵的微生物，以及M2(抗發炎型)巨噬細胞，以抑制發炎反應，藉以避免身體組織過度受傷害的作用。

毛木耳(Auricularia polytricha)具有豐富的多醣體，且目前研究顯示，多醣體對於輔助免疫系統的功能，例如：增強免疫力，或是抑制癌細胞等等作用。然而，過去研究幾乎都集中在毛木耳子實體的可食用部分或是菌絲體，而忽略了連接毛木耳菌絲體以及毛木耳食用部分之間的蒂頭。此外，蒂頭因質地較硬，口感不佳，無法食用，而被當做是農業廢棄物。然而，毛木耳蒂頭含有相當豐富的多醣體，應有其在免疫上的效用，卻未被好好加以利用。

因此，亟需一種提供毛木耳蒂頭萃取物的其他用途，以解決上述問題。

因此，本發明之一樣態是提供一種毛木耳萃取物用於製備誘導未極化的免疫細胞分化成抗發炎型免疫細胞之組成物的用途，其有效成分包含由毛木耳蒂頭萃取之多醣體，藉以改善發炎症狀。

根據本發明之上述之態樣，提出一種毛木耳萃取物用於製備誘導未極化的免疫細胞分化成抗發炎型免疫細胞之組成物的用途，其中毛木耳萃取物是以萃取溶液對毛木耳(Auricularia polytricha)子實體進行至少一萃取步驟後獲得，且上述組成物是以毛木耳萃取物做為有效物質，藉此使靜止型(resting)免疫細胞傾向分化成抗發炎型免疫細胞，從而緩和促發炎狀況及/或抑制發炎反應。上述毛木耳萃取物包含第一多醣體及第二多醣體，第一多醣體是 萃取自蒂頭，第二多醣體是萃取自與蒂頭相連的杯狀部。上述第一多醣體經分層步驟後分為第一上層多醣體及第一下層多醣體，其中第一上層多醣體之分子量為3.6x10⁴道爾頓(Dalton，Da)至8.1x10⁵Da，且第一下層多醣體之分子量為1.5x10⁵Da。第二多醣體與第一多醣體之重量比值是不大於1/3。此毛木耳萃取物為組成物之有效物質，藉此提升未極化的免疫細胞的TGF-β基因表現量及Arg-1基因表現量。

依據本發明上述之實施例，第二多醣體經分層步驟後分為第二上層多醣體及第二下層多醣體，其中第二上層多醣體之分子量可例如為2.2x10⁴Da至4.2x10⁴Da，且第二下層多醣體之分子量可例如為2x10⁵Da至1x10⁶Da。

依據本發明上述之實施例，萃取溶劑可例如水及/或酒精，且至少一萃取步驟可選擇在例如4℃至10℃下進行。

依據本發明上述之實施例，萃取溶劑可例如水，且至少一萃取步驟可選擇在例如90℃至100℃下進行。

依據本發明上述之實施例，上述組成物為口服組成物、食品組成物或醫藥組成物。

依據本發明上述之實施例，組成物可選擇性包含但不限於食品或醫藥上可接受的載體、佐劑、賦形劑、稀釋劑、輔助劑及/或添加劑。

依據本發明上述之實施例，組成物之劑型為水溶液、 懸浮液、分散液、乳液、水膠、凝膠、固體脂質奈米粒、錠劑、顆粒劑、粉劑及/或膠囊劑。

依據本發明上述之實施例，當組成物投予小鼠時，毛木耳萃取物的有效劑量為每天千克體重3.5g至6g。

依據本發明上述之實施例，其中該組成物投予成人時，毛木耳萃取物的有效劑量為每天千克體重3mg至95mg。

應用本發明之毛木耳萃取物用於製備誘導未極化的免疫細胞分化成抗發炎型免疫細胞之組成物的用途，可有效誘導免疫細胞分化為抗發炎型的免疫細胞，如提升未極化的免疫細胞的TGF-β基因表現量及Arg-1基因表現量，從而改善發炎症狀。

101:杯狀部

103:底部

105:蒂頭

401,403,405,501,503:長條

601,603,605:點

[圖1]是顯示本發明一實施例之毛木耳子實體的剖面示意圖。

[圖2]是顯示本發明一實施例之以不同萃取方法獲得之蒂頭多醣體或杯狀部多醣體誘導R細胞分泌之NO含量的長條圖。

[圖3]是顯示本發明一實施例之R細胞與不同濃度之蒂頭多醣體共培養後之NO分泌量的長條圖。

[圖4]是顯示本發明一實施例之施用蒂頭多醣體後M0細胞的iNOS基因表現量、Arg-1基因表現量及TGF-β基 因表現量之長條圖。

[圖5]是顯示本發明一實施例之小鼠巨噬細胞與不同比例的蒂頭多醣體及杯狀部多醣體混合物共培養後之iNOS基因及Arg-1基因表現量之長條圖。

[圖6]是顯示小鼠食用本發明一實施例之含有毛木耳萃取物的果凍後，腳掌腫脹程度對時間之折線圖。

承上所述，本發明提供一種毛木耳萃取物用於製備改善發炎症狀之組成物的用途，其有效成分包含由毛木耳蒂頭萃取之多醣體，藉以緩和促發炎狀況及/或改善發炎症狀。

所述「毛木耳」(Auricularia polytricha)是一種大型真菌，以菌絲體生長於腐木或是太空包中，在適合的環境下會在腐木或是太空包的表面形成子實體，以進行孢子繁殖。圖1是顯示本發明一實施例之毛木耳子實體的剖面示意圖。如圖1所示，子實體包含杯狀部101及連接於杯狀部101之底部103的蒂頭105。上述蒂頭105是連接杯狀部101及菌絲體的部分，質地較堅硬，不適合食用，因此一般會被視為農業廢棄物而遭到丟棄。然而，蒂頭105的多醣體含量高，應可被加以利用。上述毛木耳可為新鮮毛木耳，或是經乾燥步驟及/或磨碎步驟後獲得之乾燥毛木耳或其粉末。

上述「毛木耳萃取物」是以萃取溶液對毛木耳進行 至少一萃取步驟後獲得。上述毛木耳萃取物包含第一多醣體及第二多醣體，第一多醣體是萃取自蒂頭105，第二多醣體是萃取自子實體杯狀部101。

第一多醣體及第二多醣體的多醣組成不同，且分子量也不同。第一多醣體經分層步驟後可進一步分為第一上層多醣體及第一下層多醣體，其中第一上層多醣之分子量可例如3.6x10⁴道爾頓(Dalton，Da)至8.1x10⁵Da，而第一下層多醣體之分子量可例如1.5x10⁵Da。第二多醣體經分離處理後可分為第二上層多醣體及第二下層多醣體，其中第二上層多醣體之分子量可例如2.2x10⁴Da至4.2x10⁴Da，而第二下層多醣體之分子量可例如2x10⁵Da至1x10⁶Da。

上述至少一萃取方法不限，可例如利用水、熱水及/或酒精等符合食用或藥用安全標準之萃取溶劑進行。上述至少一萃取方法可例如：冷水萃取、冷水酒沉、熱水萃取、熱水酒沉、高溫高壓萃取、高溫高壓酒沉。前述之冷水萃取是在4℃至10℃下，以純水做為萃取溶劑進行至少一萃取步驟。於冷水萃取後，接續進行分離處理，以獲得第一上清液及第一沉澱物，其中第一上清液定義為冷水萃取物。前述之冷水酒沉是將上述冷水萃取物進一步以等體積的酒精於4℃下進行酒精沉澱，經分離處理後之第一酒沉物定義為冷水酒沉物。前述之熱水萃取及高溫高壓萃取分別是將上述第一沉澱物以90℃至100℃之熱水，或是在1.2kg/cm²下以90℃至100℃之熱水進行萃取，再接 著進行分離處理，以獲得第二上清液及第三上清液，其分別定義為熱水萃取物及高溫高壓萃取物。將上述熱水萃取物及高溫高壓萃取物進一步分別以等體積的酒精於4℃下進行酒精沉澱，並接續進行分離處理，以獲得第二酒沉物及第三酒沉物，其分別定義為熱水酒沉物及高溫高壓酒沉物。

需注意的是，第一多醣體及第二多醣體對免疫反應有不同的功效，其中第一多醣體傾向活化抗發炎型免疫細胞(如：M2巨噬細胞)，而第二多醣體傾向活化發炎型免疫細胞(如：M1巨噬細胞)。然而，在具體實施中，難免有蒂頭103及杯狀部101無法完全分離的狀況，但若毛木耳萃取物中的第一多醣體多於第二多醣體，則上述組成物仍具有緩和促發炎情況及降低發炎反應之功效。在一實施例中，毛木耳萃取物的第二多醣體對第一多醣體之重量比值不大於1/3。在一實施例中，毛木耳萃取物不含第二多醣體。如果組成物中第二多醣體對第一多醣體之重量比值大於1/3，則組成物無法緩和促發炎情況及降低發炎反應之功效。

所述「組成物」是以上述毛木耳萃取物做為有效物質，藉以緩和促發炎狀況及/或改善發炎反應。上述促發炎狀況可例如促發炎細胞激素的增加而未產生發炎症狀的情況，且發炎反應可例如上述促發炎細胞激素引發之一連串反應，從而產生紅、腫、熱、痛及癢等不適應症。在一實施例中，上述組成物是口服組成物。在一實施例中，上述 組成物為食品組成物或醫藥組成物。

在一實施例中，上述組成物可包含但不限於食品或醫藥上可接受的載體、佐劑、賦形劑、稀釋劑、輔助劑及/或添加劑。

在一實施例中，上述組成物之劑型可例如水溶液、懸浮液、分散液、乳液、水膠、凝膠、固體脂質奈米粒、錠劑、顆粒劑、粉劑及/或膠囊劑。

經細胞實驗證實，上述木耳萃取物中可誘導免疫細胞分化為抗發炎型的免疫細胞，從而改善發炎症狀。此外，如以每天千克體重37.5mg至750mg之劑量投予小鼠上述木耳萃取物，可有效抑制老鼠的局部發炎。根據2005年美國食品藥物管理局所公告之實驗初期估算方法(Estimating the maximum safe starting dose in initial clinical trials for therapeutics in adult healthy volunteers)，投予人體之劑量可由投予小鼠等動物之劑量除以換算係數後獲得，其中在一實施例中，上述換算係數是8至12，因此投予人體之劑量是約每天千克體重3mg至95mg。如果超過上述有效劑量之上限值，可能對會造成過敏等反應。如果少於上述有效劑量之下限值，將不足以有效抑制發炎。

以下利用數個實施例以說明本發明之應用，然其並非用以限定本發明，本發明技術領域中具有通常知識者，在不脫離本發明之精神和範圍內，當可作各種之更動與潤飾。

實施例一、以不同方法萃取毛木耳的杯狀部及蒂頭

本實施例使用之毛木耳是採收自台灣嘉義縣中埔旭領農場。採收毛木耳之子實體後，將子實體區分為如圖1所示之杯狀部及蒂頭，並進行清洗。接著，分別對蒂頭及杯狀部進行烘乾步驟及磨碎步驟，以獲得杯狀部粉末及蒂頭粉末。上述烘乾步驟及磨碎步驟為本領域為本發明所屬技術領域中具有通常知識者所熟知，可視實際需求任意調整，並不影響後續萃取步驟之進行，在此不另贅述。

對杯狀部粉末進行至少一萃取步驟。製備例1是對杯狀部粉末進行冷水萃取及分離步驟所獲得之第一上清液，其中冷水萃取是將5g之杯狀部粉末浸泡於4℃的無菌水200ml達1天，且離心步驟是在4℃下以6000rpm離心達20分鐘。將杯狀部粉末進行冷水萃取及分離步驟後所獲得之第一沉澱物儲存備用。

製備例2是對上述第一上清液進行酒精沉澱所獲得之第一酒沉物，其中酒精沉澱包含酒沉處理、分離處理及乾燥處理，酒沉處理是將上述第一上清液以等體積的酒精於4℃下進行酒精沉澱達1天，再進行上述離心步驟，並在室溫下進行真空乾燥達2天以去除酒精。

製備例3是對上述第一沉澱物進行熱水萃取及分離處理所獲得之第二上清液，其中熱水處理是以100℃之無菌水500ml浸泡第一沉澱物達2小時。

製備例4是對第二上清液進行上述酒精沉澱所獲得之第二酒沉物。

製備例5是對上述第一沉澱物進行高壓萃取所獲得之第三上清液，其中高壓萃取包含高壓處理及分離處理，且高壓處理是在1.2kg/cm²之壓力以100℃之無菌水500ml進行萃取達2小時。

製備例6是對第三上清液進行上述酒精沉澱所獲得之第三酒沉物。

以相同方法對蒂頭粉末進行上述至少一萃取步驟，以獲得製備例7至製備例12。

將上述製備例1至製備例12進行冷凍乾燥，以獲得製備例1至製備例12之凍乾粉。冷凍乾燥為本領域為本發明所屬技術領域中具有通常知識者所熟知，在此不另贅述。

製備例1至製備例6可視為第二多醣體，即杯狀部多醣體，且製備例7至製備例12則可視為第一多醣體，即蒂頭多醣體。製備例1及製備例7可視為冷水萃取物，製備例2及製備例8可視為冷水酒沉物，製備例3及製備例9可視為熱水萃取物，製備例4及製備例10可視為熱水酒沉物，製備例5及製備例11可視為高溫高壓萃取物，製備例6及製備例12可視為高溫高壓酒沉物。

實施例二、評估實施例一之製備例誘導免疫細胞產生NO的效果

本實施例中，使用小鼠腹腔巨噬細胞珠RAW264.7[美國標準生物品收藏中心(American Type Culture Collection，ATCC)編號ATCC TIB-7，簡 稱為R細胞]是購買自新竹食品工業發展研究所生物資源保存及研究中心(BCRC)。R細胞是BALB/c雄性小鼠經小鼠白血病病毒(Abelson murine leukemia virus)轉染後的癌化細胞，且R細胞受到刺激後，表現之基因類似於M1巨噬細胞受到刺激後表現之基因，例如：在R細胞在受到內毒素脂多醣體(lipopolysaccharide，LPS)的刺激時，可表現一氧化氮合酶(inducible NO synthase，iNOS)之基因，並提高一氧化氮(NO)之分泌。

分別將上述製備例1至製備例12之凍乾粉以含有10%胎牛血清、10%盤尼西林及10%之Dulbecco's modified minimal essential medium(DMEM)細胞培養液配置成33.3μg/mL的測試液，並以上述測試液於37℃、5% CO₂下培養R細胞達24小時。對照例1之測試液中不含凍乾粉。比較例1之測試液含有50ng/mL之LPS而不含凍乾粉。

接著，以格里斯法(Griess assay)測量NO濃度。由於NO不穩定，在水溶液中會迅速被氧化成硝酸鹽，再進一步被氧化成亞硝酸鹽，因此格里斯法是先利用胺基苯磺酸與亞硝酸根進行重氮化反應，以獲得成對氨基苯磺酸，再加入N-(1-萘基)乙烯二胺二鹽酸鹽[N-(1-naphthyl)-ethylene diamine dihydrochloride，NED]，藉以使對氨基苯磺酸成玫瑰紅色。接著，利用ELISA判讀儀(reader)讀取570nm之吸光值，再另外以NO標準品繪 製標準曲線圖，並利用標準曲線圖計算亞硝酸鹽濃度，從而回推NO濃度。其結果顯示於圖2。

圖2是顯示本發明一實施例之以不同萃取方法獲得之杯狀部多醣體(製備例1至製備例6)或蒂頭多醣體(製備例7至製備例12)誘導R細胞分泌之NO含量的長條圖，其中橫軸表示組別，縱軸表示NO濃度，且a、b、c、d、及e表示組間有顯著差異。

如圖2所示，相較製備例9、製備例10、製備例11及製備例12的蒂頭多醣體，以相同方法進行至少一萃取步驟所獲得之杯狀部多醣體(分別為製備例3、製備例4、製備例5及製備例6可誘導R細胞分泌較多的NO，其中同樣以高壓萃取進行萃取步驟，製備例5(杯狀部)誘導之NO含量顯著高於製備例11(蒂頭)誘導之NO含量，顯示相較於蒂頭多醣體，杯狀部多醣體較傾向誘導發炎反應。

實施例三、評估木耳蒂頭冷水萃取物之有效劑量

將上述製備例7之凍乾粉以上述DMEM細胞培養液配置成濃度為15、30、45及90μg/mL的測試液，並以上述測試液於37℃、5% CO₂下培養上述R細胞達24小時。對照例2不含凍乾粉，且比較例2含有50ng/mL之LPS。另外，分別在含有90μg/mL及30μg/mL之凍乾粉的測試液中加入50ng/mL之LPS，以做為製備例13及製備例14。接著，以上述格里斯法測量NO濃度，並將結果顯示於圖3中。

圖3是顯示本發明一實施例之R細胞與不同濃度 之蒂頭多醣體共培養後之NO分泌量的長條圖，其中縱軸為NO濃度，圖號「*」及「+」分別表示利用t-test進行統計後，與對照例2及比較例2具有顯著差異(P<0.05，n=3)。如圖3所示，相較於對照例2，製備例7之凍乾粉在濃度30μg/mL以上時，誘導的NO濃度顯著較低。其次，相較於比較例2，製備例14的NO濃度顯著較低，顯示30μg/mL之蒂頭冷水萃取物可在R細胞受到刺激時，與LPS拮抗，從而降低R細胞分泌NO。再者，相較於比較例2，製備例13的NO濃度顯著較低，甚至顯著低於對照例2，顯示90μg/mL之蒂頭冷水萃取物可有效抑制R細胞分泌NO，在R細胞受到刺激時仍能有效抑制R細胞分泌NO，意味著蒂頭多醣體抑制發炎型免疫細胞之活化。

實施例四、評估木耳蒂頭熱水萃取物之有效劑量

對新鮮毛木耳之蒂頭進行實施例二所述之熱水處理、酒精沉澱，以獲得新鮮蒂頭之熱水酒沉物。將新鮮蒂頭之熱水酒沉物進行冷凍乾燥，以獲得新鮮蒂頭之熱水酒沉物之凍乾粉。將新鮮蒂頭之熱水酒沉物之凍乾粉以上述DMEM細胞培養液配置成15μg/mL的測試液，並以上述測試液於37℃、5% CO₂下培養上述健康小鼠腹腔靜止型巨噬細胞(M0 macrophage，簡稱為M0細胞)達24小時，以做為實驗組1。對照例3是以不含凍乾粉之DMEM細胞培養液以相同條件培養M0細胞。上述M0細胞是分離自BALB/c小鼠的腹腔巨噬細胞，分離M0細胞之方法本領域為本發明所屬技術領域中具有通常知識者所熟知， 在此不另贅述。

接著，進行細胞全RNA抽取步驟、反轉錄步驟及聚合脢連鎖反應(polymerase chain reaction，PCR)步驟，其中全RNA抽取步驟、反轉錄步驟及PCR的方法為本領域中具有通常知識者所熟知，在此不另贅述。上述PCR步驟是利用如序列辨識編號(SEQ ID NO)：1至2所示之引子對定量iNOS基因表現量、利用SEQ ID NO：3至4所示之引子對定量精胺酸酶(arginase-1，Arg-1)基因表現量，以及利用SEQ ID NO：5至6所示之引子對定量乙型轉化生長因子(Transforming Growth Factor Beta，TGF-β)基因表現量，並將結果顯示於圖4。

圖4是顯示本發明一實施例之施用蒂頭多醣體後M0細胞的iNOS基因表現量、Arg-1基因表現量及TGF-β基因表現量之長條圖，其中橫軸表示組別，由左至右分別為對照例3及實驗組1，縱軸表示以對照例3之RNA含量為1之相對RNA含量，長條401、長條403及長條405表示iNOS基因表現量、Arg-1基因表現量及TGF-β基因表現量。如圖4所示，相較於對照例3，實驗組1的iNOS基因表現量較低，且Arg-1基因表現量及TGF-β基因表現量較高。由於M0細胞是尚未極化為M1巨噬細胞或M2巨噬細胞之巨噬細胞，因此以M0細胞做為蒂頭多醣體的施用對象可較佳地反映蒂頭多醣體對於發炎反應的功效。由於M0細胞極化為M2巨噬細胞後，可 分泌Arg-1及TGF-β等物質來抑制發炎反應，因此圖4之結果意味蒂頭多醣體確實可抑制發炎反應。

實施例五、評估不同比例之蒂頭多醣體及杯狀部多醣體對免疫細胞的影響

將上述製備例3及製備例9之凍乾粉進行混合，以獲得重量比值分別為1/3及3之製備例15及製備例16。將上述製備例以DMEM細胞培養液配置成50μg/mL之測試液。將製備例15及製備例16之測試液在37℃下培養M0細胞達8小時，再進行細胞全RNA抽取步驟、反轉錄步驟及PCR步驟，其中PCR步驟是利用SEQ ID NO：1至2所示之引子對定量iNOS基因表現量，以及利用SEQ ID NO：3至4所示之引子對定量Arg-1基因表現量。對照例4是以不含凍乾粉DMEM細胞培養液以相同條件培養M0細胞。上述結果是顯示於圖5。

圖5是顯示本發明一實施例之M0細胞之iNOS基因及Arg-1基因表現量之長條圖，其中橫軸表示組別，由左至右分別是對照例4、製備例15及製備例16，縱軸表示以對照例4之基因表現量為1之相對基因表現量，且長條501及長條503分別代表iNOS基因及Arg-1基因。如圖5所示，相較於以對照例4進行培養，以製備例15之測試液進行培養的M0細胞之iNOS基因表現量沒有變化，但Arg-1基因表現量上升，而以製備例16之測試液進行培養的M0細胞之iNOS基因表現量上升，但Arg-1基因表現量略微下降。上述結果顯示，將杯狀物多醣體及 蒂頭多醣體以1/3之重量比值進行混合，仍可促進抗發炎相關基因之表達，而杯狀物多醣體及蒂頭多醣體以1/3之重量比值進行混合，則可促進發炎相關基因之表達，意味著雖然杯狀物多醣體及蒂頭多醣體對發炎反應的效果不同，但當木耳萃取物中的杯狀物多醣體及蒂頭多醣體之混合重量比值是不大於為1/3時，木耳萃取物具有改善發炎反應的效果。

實施例六、評估蒂頭多醣體與杯狀部多醣體混合物對小鼠延遲型過敏反應之影響

將上述製備例15及製備例16之混合凍乾粉混入5%之吉利丁(gelatin)中，以獲得製備例15及製備例16之果凍。

每日餵食老鼠57至60克的果凍，並在連續餵食果凍達28天後，以愛氟寧吸入劑(isoflurane)麻醉小鼠，再以SM-112厚度計測量小鼠左腳腳掌之厚度。接著，於小鼠的左腳腳掌以31G之針頭注射50μg/10μL植物凝血(phytohemagglutinin，PHA)，以誘發延遲型過敏反應，或是注射同體積之磷酸鹽緩衝生理鹽水(phosphate buffered saline，PBS)，以做為對照例5。注射後，連續3天觀察並測量小鼠的左腳腳掌之厚度。測量結果是顯示於圖6。

如圖6是顯示小鼠食用本發明一實施例之含有毛木耳萃取物的果凍後，腳掌腫脹程度對時間之折線圖，其中橫軸表示時間，縱軸表示腳掌腫脹程度，腳掌腫脹程度 是注射後之腳掌厚度減去注射前腳掌厚度之厚度差，點701、點703及點705分別表示對照例5、製備例15及製備例16。如圖6所示，相比於對照例5，餵食製備例15果凍之小鼠在誘發延遲型過敏反應後72小時後，腳掌腫脹程度下降，餵食製備例16果凍之小鼠在誘發延遲型過敏反應後72小時後，腳掌腫脹程度不減反增。上述結果顯示，杯狀部多醣體與蒂頭多醣體以1/3之重量比值混合後，可減緩誘發延遲型過敏反應引起的不適應症。

由上述實施例可知，本發明之毛木耳萃取物用於製備改善發炎症狀之組成物的用途，其優點在於利用一般被當作農業廢棄物之蒂頭的多醣體做為有效成分，以誘導M0(靜止型)巨噬細胞分化成M2(抗發炎型)巨噬細胞，因此上述組成物有潛力抑制發炎反應(例如腫脹)的不適症狀，或是緩和促發炎狀況。由於M2巨噬細胞所分泌之TGF-β也可用於修復組織，且蒂頭多醣體可提高免疫細胞之TGF-β基因表現量，因此本發明之毛木耳萃取物也具有促進傷口癒合之潛力，而可應用於醫療美容及/或加速收口癒合的藥用組成物或化妝品組成物中。

應理解的是，本發明雖使用特定的萃取方法、特定的劑型、特定的對象、特定的投予方式或特定的評估方式作為例示，說明本發明之毛木耳萃取物用於製備改善發炎症狀之組成物的用途，惟本發明所屬技術領域中任何具有通常知識者可知，本發明並不限於此，在不脫離本發明之精神和範圍內，本發明亦可使用其他的劑型、其他的對象、 其他的投予方式或其他的評估方式進行。

雖然本發明已以數個實施例揭露如上，然其並非用以限定本發明，在本發明所屬技術領域中任何具有通常知識者，在不脫離本發明之精神和範圍內，當可作各種之更動與潤飾，因此本發明之保護範圍當視後附之申請專利範圍所界定者為準。

<110> 國立嘉義大學

<120> 毛木耳萃取物用於製備誘導未極化的免疫細胞分化成抗發炎型免疫細胞之組 成物的用途

<130> 無

<160> 6

<210> 1

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> iNOS基因上游引子

<400> 1

<210> 2

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> iNOS基因下游引子

<400> 2

<210> 3

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> Arg-1基因上游引子

<400> 3

<210> 4

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> Arg-1基因下游引子

<400> 4

<210> 5

<211> 17

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> TGF-β基因上游引子

<400> 5

<210> 6

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> TGF-β基因下游引子

<400> 6

501,503:長條

Claims (10)

1. 一種毛木耳萃取物用於誘導未極化的免疫細胞分化成抗發炎型免疫細胞之組成物的用途，其中該毛木耳萃取物是對毛木耳(Auricularia polytricha)子實體以一萃取溶液進行至少一萃取步驟後獲得，且該毛木耳萃取物包含：一第一多醣體，萃取自連接於該毛木耳之一蒂頭，該第一多醣體經一分層步驟後分為：一第一上層多醣體，該第一上層多醣體之分子量為3.6x10⁴道爾頓(Dalton，Da)至8.1x10⁵Da；以及一第一下層多醣體，該第一下層多醣體之分子量為1.5x10⁵Da；以及一第二多醣體，萃取自與該蒂頭相連的一杯狀部，該第二多醣體與該第一多醣體之一重量比值是不大於1/3；且其中該毛木耳萃取物為該組成物之一有效物質，藉此提升該未極化的免疫細胞的TGF-β基因表現量及Arg-1基因表現量。
2. 如請求項1所述之毛木耳萃取物用於製備誘導未極化的免疫細胞分化成抗發炎型免疫細胞之組成物的用途，其中該第二多醣體經一分層步驟後分為：一第二上層多醣體，且該第二上層多醣體之分子量為2.2x10⁴Da至4.2x10⁴Da；以及一第二下層多醣體，且該第二下層多醣體之分子量為 2x10⁵Da至1x10⁶Da。
3. 如請求項1所述之毛木耳萃取物用於製備誘導未極化的免疫細胞分化成抗發炎型免疫細胞之組成物的用途，其中該萃取溶劑是水及/或酒精，且該至少一萃取步驟是在4℃至10℃下進行。
4. 如請求項1所述之毛木耳萃取物用於製備誘導未極化的免疫細胞分化成抗發炎型免疫細胞之組成物的用途，其中該萃取溶劑是水，且該至少一萃取步驟是在90℃至100℃下進行。
5. 如請求項1所述之毛木耳萃取物用於製備誘導未極化的免疫細胞分化成抗發炎型免疫細胞之組成物的用途，其中該組成物為一口服組成物。
6. 如請求項1所述之毛木耳萃取物用於製備誘導未極化的免疫細胞分化成抗發炎型免疫細胞之組成物的用途，其中該組成物為一食品組成物或一醫藥組成物。
7. 如請求項1所述之毛木耳萃取物用於製備誘導未極化的免疫細胞分化成抗發炎型免疫細胞之組成物的用途，其中該組成物更包含食品或醫藥上可接受的一載體、一佐劑、一賦形劑、一稀釋劑、一輔助劑及/或一添加劑。
8. 如請求項1所述之毛木耳萃取物用於製備誘導未極化的免疫細胞分化成抗發炎型免疫細胞之組成物的用途，其中該組成物之一劑型為一水溶液、一懸浮液、一分散液、一乳液、一水膠、一凝膠、一固體脂質奈米粒、一錠劑、一顆粒劑、一粉劑及/或一膠囊劑。
9. 如請求項1所述之毛木耳萃取物用於製備誘導未極化的免疫細胞分化成抗發炎型免疫細胞之組成物的用途，其中當該組成物投予一小鼠時，該毛木耳萃取物的一有效劑量為每天千克體重37.5mg至750mg。
10. 如請求項1所述之毛木耳萃取物用於製備誘導未極化的免疫細胞分化成抗發炎型免疫細胞之組成物的用途，其中當該組成物投予一成人時，該毛木耳萃取物的一有效劑量為每天千克體重3mg至95mg。

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