TWI731095B - 利用前列腺癌相關抗原之腫瘤疫苗接種之組合物及方法 - Google Patents

Abstract

本發明提供用於構築及產生基於腺病毒之重組載體疫苗的方法及組合物。在特定態樣中，提供涉及腺病毒載體之組合物及方法，該等腺病毒載體包含靶抗原(諸如前列腺特異性抗原(PSA)、前列腺特異性膜抗原(PSMA)、MUC1、CEA及/或Brachyury)及共同刺激分子之基因，用於治療方法中，產生高度反應性抗腫瘤免疫反應且允許在已對腺病毒具有預先存在免疫性之個體中多次接種疫苗。

Description

利用前列腺癌相關抗原之腫瘤疫苗接種之組合物及方法

疫苗藉由訓練免疫系統識別及破壞有害物質及患病細胞而幫助身體對抗疾病。疫苗在很大程度上可分為兩類：預防性及治療性疫苗。向健康人群給與預防性疫苗以預防特定疾病產生，而向已診斷患有疾病之個體給與治療性疫苗(亦稱為免疫療法)以幫助阻止疾病生長及擴展或作為預防性措施。 當前正開發幫助對抗傳染病及癌症的病毒疫苗。此等病毒疫苗的作用係在宿主細胞內誘發一小部分與疾病相關之基因的表現，此表現又增強宿主之免疫系統以鑑別及破壞患病細胞。因此，病毒疫苗之臨床反應可取決於疫苗獲得高位準免疫原性及具有持續性長期表現之能力。 因此，仍需要發現對諸如癌症之複雜疾病具有增強型治療反應之新穎組合物及方法。

在各種態樣中，本發明提供包含複製缺陷型病毒載體之組合物，該病毒載體包含編碼前列腺特異性抗原(PSA)之核酸序列及/或編碼前列腺特異性膜抗原(PSMA)之核酸序列，其中PSA具有與SEQ ID NO: 1或SEQ ID NO: 34至少80%、至少85%、至少90%、至少92%、至少95%、至少97%、或至少99%一致之胺基酸序列或PSMA具有與SEQ ID NO: 11至少80%一致之胺基酸序列。 在一些態樣中，載體包含編碼PSA之核酸序列，該PSA具有與SEQ ID NO: 35至少80%、至少85%、至少90%、至少92%、至少95%、至少97%、或至少99%一致之胺基酸序列，或編碼PSA之核酸序列，該PSA具有與SEQ ID NO: 2至少80%、至少85%、至少90%、至少92%、至少95%、至少97%、或至少99%一致。在一些態樣中，載體包含編碼PSMA之核酸序列，該PSMA具有與SEQ ID NO: 36至少80%、至少85%、至少90%、至少92%、至少95%、至少97%、或至少99%一致之胺基酸序列。 在一些態樣中，組合物進一步包含第二複製缺陷型病毒載體，其包含編碼Brachyury抗原之第二核酸序列；第三複製缺陷型病毒載體，其包含編碼MUC1抗原之第三核酸序列；或其組合。在一些態樣中，Brachyury抗原結合至HLA-A2、HLA-A3、HLA-A24或其組合。在一些態樣中，Brachyury抗原為包含WLLPGTSTV中所闡述之胺基酸序列(SEQ ID NO: 7)之經修飾Brachyury抗原。在一些態樣中，Brachyury抗原為包含與SEQ ID NO: 5、SEQ ID NO: 6或SEQ ID NO: 42至少80%、至少85%、至少90%、至少92%、至少95%、至少97%、或至少99%一致之胺基酸序列的經修飾Brachyury抗原。在一些態樣中，第二複製缺陷型載體包含與SEQ ID NO: 3、SEQ ID NO: 4、SEQ ID NO: 4之位置13至1242、SEQ ID NO: 42至少80%、至少85%、至少90%、至少92%、至少95%、至少97%、或至少99%一致之核苷酸序列。在一些態樣中，第二複製缺陷型載體包含與SEQ ID NO: 12 (具有編碼經修飾Brachyury抗原之序列的Ad載體)、SEQ ID NO: 12之位置1033-2083或SEQ ID NO: 42至少80%、至少85%、至少90%、至少92%、至少95%、至少97%、或至少99%一致之核苷酸序列。 在一些態樣中，MUC1抗原包含與SEQ ID NO: 10或SEQ ID NO: 41至少80%、至少85%、至少90%、至少92%、至少95%、至少97%、或至少99%一致之序列。在一些態樣中，編碼MUC1抗原之第三核酸序列包含與SEQ ID NO: 8、SEQ ID NO: 9或SEQ ID NO: 41之至少80%、至少85%、至少90%、至少92%、至少95%、至少97%、或至少99%一致性。在一些態樣中，MUC-1抗原結合至HLA-A2、HLA-A3、HLA-A24或其組合。 在其他態樣中，複製缺陷型病毒載體、第二複製缺陷型病毒載體及/或第三複製缺陷型病毒載體為腺病毒載體。在一些態樣中，腺病毒載體包含E1區、E2b區、E3區、E4區或其組合中之缺失。在一些態樣中，腺病毒載體包含E2b區中之缺失。在其他態樣中，腺病毒載體包含E1區、E2b區及E3區中之缺失。 在一些態樣中，組合物包含至少1×10⁹ 個病毒粒子至至少5×10¹² 個病毒粒子。在一些態樣中，組合物包含至少5×10⁹ 個病毒粒子。在一些態樣中，組合物包含至少5×10¹⁰ 個病毒粒子。在一些態樣中，組合物包含至少5×10¹¹ 個病毒粒子。在一些態樣中，組合物包含至少5×10¹² 個病毒粒子。 在一些態樣中，組合物或複製缺陷型病毒載體進一步包含編碼共同刺激分子之核酸序列。在一些態樣中，共同刺激分子包含B7、ICAM-1、LFA-3或其組合。在一些態樣中，共同刺激分子包含B7、ICAM-1及LFA-3之組合。 在其他態樣中，組合物進一步包含複數個編碼複數個安置於相同複製缺陷型病毒載體中之共同刺激分子的核酸序列。在一些態樣中，組合物進一步包含複數個編碼複數個安置於獨立複製缺陷型病毒載體中之共同刺激分子的核酸序列。 在其他態樣中，組合物進一步包含編碼一或多種其他靶抗原或其免疫抗原決定基之核酸序列。在一些態樣中，複製缺陷型病毒載體進一步包含編碼一或多種其他靶抗原或其免疫抗原決定基之核酸序列。在一些態樣中，一或多種其他靶抗原為腫瘤新抗原、腫瘤新抗原決定基、腫瘤特異性抗原、腫瘤相關抗原、組織特異性抗原、細菌抗原、病毒抗原、酵母菌抗原、真菌抗原、原蟲抗原、寄生蟲抗原、有絲分裂原或其組合。在一些態樣中，一或多種其他靶抗原為CEA、葉酸受體α、WT1、HPV E6、HPV E7、p53、MAGE-A1、MAGE-A2、MAGE-A3、MAGE-A4、MAGE-A6、MAGE-A10、MAGE-A12、BAGE、DAM-6、-10、GAGE-1、-2、-8、GAGE-3、-4、-5、-6、-7B、NA88-A、NY-ESO-1、MART-1、MC1R、Gp100、PSCA、PSMA、PAP、酪胺酸酶、TRP-1、TRP-2、ART-4、CAMEL、Cyp-B、Her2/neu、BRCA1、BRACHYURY、BRACHYURY (TIVS7-2，多態性)、BRACHYURY (IVS7 T/C多態性)、T BRACHYURY、T、hTERT、hTRT、iCE、MUC1、MUC1 (VNTR多態性)、MUC1c、MUC1n、MUC2、PRAME、P15、RU1、RU2、SART-1、SART-3、WT1、AFP、β-連環蛋白/m、凋亡蛋白酶-8/m、CDK-4/m、Her2/neu、Her3、ELF2M、GnT-V、G250、HSP70-2M、HST-2、KIAA0205、MUM-1、MUM-2、MUM-3、肌球蛋白/m、RAGE、SART-2、TRP-2/INT2、707-AP、磷脂結合蛋白II、CDC27/m、TPI/mbcr-abl、ETV6/AML、LDLR/FUT、Pml/RARα或TEL/AML1，或修飾變異體、剪接變異體、功能性抗原決定基、抗原決定基促效劑或其組合。在一些態樣中，一或多種其他靶抗原為CEA。在一些態樣中，一或多種其他靶抗原為CEA、Brachyury及MUC1。在一些態樣中，CEA與SEQ ID NO: 37或SEQ ID NO: 38至少80%、至少85%、至少90%、至少92%、至少95%、至少97%、或至少99%一致。在一些態樣中，一或多種其他靶抗原為HER3。在一些態樣中，一或多種其他靶抗原為HPV E6或HPV E7。 在一些態樣中，複製缺陷型病毒載體進一步包含可選拔之標記物。在一些態樣中，可選拔之標記物為lacZ基因、胸苷激酶、gpt、GUS或牛痘K1L宿主範圍基因或其組合。 在各種態樣中，本發明提供包含一或多種複製缺陷型病毒載體之組合物，該一或多種複製缺陷型病毒載體包含編碼前列腺特異性抗原(PSA)之核酸序列、編碼前列腺特異性膜抗原(PSMA)之核酸序列、編碼Brachyury抗原之核酸序列、編碼MUC1抗原之核酸序列或其組合。 在各種態樣中，本發明提供包含一或多種複製缺陷型病毒載體之組合物，該一或多種複製缺陷型病毒載體包含編碼前列腺特異性抗原(PSA)之核酸序列、編碼Brachyury抗原之核酸序列及編碼MUC1抗原之核酸序列。 在各種態樣中，本發明提供包含一或多種複製缺陷型病毒載體之組合物，該一或多種複製缺陷型病毒載體包含編碼前列腺特異性膜抗原(PSMA)之核酸序列、編碼Brachyury抗原之核酸序列及編碼MUC1抗原之核酸序列。 在各種態樣中，本發明提供包含一或多種複製缺陷型病毒載體之組合物，該一或多種複製缺陷型病毒載體包含編碼前列腺特異性抗原(PSA)之核酸序列、編碼前列腺特異性膜抗原(PSMA)之核酸序列、編碼Brachyury抗原之核酸序列、編碼MUC1抗原之核酸序列及編碼CEA抗原之核酸序列。 在一些態樣中，以上組合物中之任一者的複製缺陷型病毒載體進一步包含編碼免疫融合搭配物之核酸序列。 在各種態樣中，本發明提供包含根據任何本文所述之組合物的組合物及醫藥學上可接受之載劑之醫藥組合物。 在各種態樣中，本發明提供包含根據任何本文所述之組合物的組合物之宿主細胞。 在各種態樣中，本發明提供一種製備腫瘤疫苗之方法，該方法包含製備如技術方案42之醫藥組合物。在各種態樣中，本發明提供一種為有需要之個體增強免疫反應之方法，該方法包含向個體投與治療有效量之任何本文所述之組合物或如本文所述之醫藥組合物。在各種態樣中，本發明提供一種為有需要之個體治療PSA表現癌或PSMA表現癌之方法，該方法包含向個體投與治療有效量之任何本文所述之組合物或如本文所述之醫藥組合物。 在一些態樣中，該方法進一步包含向個體再投與醫藥組合物。 在一些態樣中，該方法進一步包含向個體投與免疫檢查點抑制劑。在其他態樣中，免疫檢查點抑制劑抑制PD1、PDL1、PDL2、CD28、CD80、CD86、CTLA4、B7RP1、ICOS、B7RPI、B7-H3、B7-H4、BTLA、HVEM、KIR、TCR、LAG3、CD137、CD137L、OX40、OX40L、CD27、CD70、CD40、CD40L、TIM3、GAL9、ADORA、CD276、VTCN1、IDO1、KIR3DL1、HAVCR2、VISTA或CD244。在一些態樣中，免疫檢查點抑制劑抑制PD1或PDL1。在一些態樣中，免疫檢查點抑制劑為抗PD1或抗PDL1抗體。在一些態樣中，免疫檢查點抑制劑為抗PDL1抗體。 在一些態樣中，投與途徑為靜脈內、皮下、淋巴管內、瘤內、皮內、肌肉內、腹膜內、直腸內、陰道內、鼻內、經口、經由膀胱滴入或經由皮膚畫痕法。 在一些態樣中，增強型免疫反應為細胞介導反應或體液反應。在一些態樣中，增強型免疫反應為增強B細胞增殖、CD4+ T細胞增殖、CD8+ T細胞增殖或其組合。在一些態樣中，增強型免疫反應為增強IL-2產生、IFN-γ產生或其組合。在一些態樣中，增強型免疫反應為增強抗原呈遞細胞增殖、功能或其組合。 在一些態樣中，先前已向個體投與腺病毒載體。在一些態樣中，個體對腺病毒載體具有預先存在的免疫性。在一些態樣中，個體經測定對腺病毒載體具有預先存在的免疫性。 在一些態樣中，該方法進一步包含向個體投與化學療法、輻射、不同免疫療法或其組合。 在一些態樣中，個體為人類或非人類動物。在一些態樣中，個體先前已針對癌症進行治療。 在一些態樣中，投與治療有效量係重複至少三次。在一些態樣中，投與治療有效量包含每劑量1×10⁹ 至5×10¹² 個病毒粒子。在一些態樣中，投與治療有效量包含每劑量5×10⁹ 個病毒粒子。在一些態樣中，投與治療有效量包含每劑量5×10¹⁰ 個病毒粒子。在一些態樣中，投與治療有效量包含每劑量5×10¹¹ 個病毒粒子。在一些態樣中，投與治療有效量包含每劑量5×10¹² 個病毒粒子。在一些態樣中，投與治療有效量係每一週、兩週或三週重複一次。 在一些態樣中，投與治療有效量之後為一或多個包含相同組合物或醫藥組合物之追加免疫。在一些態樣中，追加免疫係每一個月、兩個月、三個月、四個月、五個月、六個月、七個月、八個月、九個月、十個月、十一個月或十二個月或更久投與一次。在一些態樣中，追加免疫係重複三次、四次、五次、六次、七次、八次、九次、十次、十一次或十二次或更多次。在一些態樣中，投與治療有效量為每一週、兩週或三週重複一次，持續三次、四次、五次、六次、七次、八次、九次、十次、十一次或十二次或更多次之初次免疫，接著為每一個月、兩個月、三個月、四個月、五個月、六個月、七個月、八個月、九個月、十個月、十一個月或十二個月或更久重複一次，持續三次或更多次之追加免疫。 在其他態樣中，該方法進一步包含向個體投與包含工程改造自然殺手(NK)細胞群體之醫藥組合物。在一些態樣中，工程改造NK細胞包含一或多種已修飾為基本上缺乏KIR (殺手抑制受體)表現之NK細胞、一或多種已經修飾以表現高親和力CD16變異體之NK細胞，及一或多種已經修飾以表現一或多種CAR (嵌合抗原受體)之NK細胞，或其任何組合。在一些態樣中，工程改造NK細胞包含一或多種已修飾為基本上缺乏表現KIR之NK細胞。在一些態樣中，工程改造NK細胞包含一或多種已經修飾以表現高親和力CD16變異體之NK細胞。在一些態樣中，工程改造NK細胞包含一或多種已經修飾以表現一或多個CAR之NK細胞。在其他態樣中，CAR為用於以下之CAR：腫瘤新抗原、腫瘤新抗原決定基、WT1、HPV-E6、HPV-E7、p53、MAGE-A1、MAGE-A2、MAGE-A3、MAGE-A4、MAGE-A6、MAGE-A10、MAGE-A12、BAGE、DAM-6、DAM-10、葉酸受體α、GAGE-1、GAGE-2、GAGE-8、GAGE-3、GAGE-4、GAGE-5、GAGE-6、GAGE-7B、NA88-A、NY-ESO-1、MART-1、MC1R、Gp100、PSA、PSM、酪胺酸酶、TRP-1、TRP-2、ART-4、CAMEL、CEA、Cyp-B、Her2/neu、Her3、BRCA1、Brachyury、Brachyury (TIVS7-2，多態性)、Brachyury (IVS7 T/C多態性)、T Brachyury、T、hTERT、hTRT、iCE、MUC1、MUC1 (VNTR多態性)、MUC1c、MUC1n、MUC2、PRAME、P15、PSCA、PSMA、RU1、RU2、SART-1、SART-3、AFP、β-連環蛋白/m、凋亡蛋白酶-8/m、CDK-4/m、ELF2M、GnT-V、G250、HSP70-2M、HST-2、KIAA0205、MUM-1、MUM-2、MUM-3、肌球蛋白/m、RAGE、SART-2、TRP-2/INT2、707-AP、磷脂結合蛋白II、CDC27/m、TPl/mbcr-abl、ETV6/AML、LDLR/FUT、Pml/RARα、TEL/AML1或其任何組合。 在一些態樣中，細胞包含複製缺陷型腺病毒載體。在一些態樣中，細胞為樹突狀細胞(DC)。 在一些態樣中，該方法進一步包含投與包含治療有效量之IL-15或包含編碼IL-15之核酸序列之複製缺陷型載體之醫藥組合物。 在一些態樣中，個體患有前列腺癌。在一些態樣中，個體患有晚期前列腺癌。在一些態樣中，個體患有不可切除性、局部晚期或轉移癌。 在一些態樣中，投與治療有效量的任何本文所述之組合物或如本文所述之醫藥組合物包含1:1:1:1比率之包含編碼PSA抗原之第一核酸序列的第一複製缺陷型病毒載體、包含編碼PSMA抗原之第二核酸序列的第二複製缺陷型病毒載體、包含編碼Brachyury抗原之第三核酸序列的第三複製缺陷型病毒載體、包含編碼MUC1抗原之第四核酸序列的第四複製缺陷型病毒載體。

交叉引用 本申請案主張2016年6月3日申請之美國臨時專利申請案第62/345,582之權益，其揭示內容以全文引用的方式併入本文中。 以下文章更詳細地描述某些實施例之不同態樣。除非相反地明確指示，否則各態樣可與任何其他態樣組合。特定言之，任何指明為較佳或有利之特徵可與任何其他指明為較佳或有利之特徵組合。 除非另外指示，否則任何實施例可與任何其他實施例組合。多種態樣可以範圍型式呈現。應理解，範圍型式中之描述僅為了方便及簡潔起見且不應解釋為對本發明範疇的固定限制。因此，範圍之描述應視為已特定揭示所有可能的子範圍以及該範圍內之個別數值，如同明確寫出一樣。舉例而言，對諸如1至6之範圍的描述應被視為已特定揭示子範圍，諸如1至3、1至4、1至5、2至4、2至6、3至6等，以及彼範圍內之個別數值，例如1、2、3、4、5及6。不管範圍之廣度如何，此均適用。當範圍存在時，該等範圍包括範圍端點。 I. 靶抗原 在某些態樣中，可提供包含編碼一或多種如本文所述之所關注的靶蛋白或靶抗原，諸如PSA、PSMA、CEA、MUC1、Brachyury或其組合之核酸序列的表現構築體或載體。就此而言，可提供表現構築體或載體，其可含有編碼至少、至多或大約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、30、40、50、60、70、80、90、100、200、300、400、或500個或自其導出之任何數目或範圍之不同所關注的靶抗原之核酸。表現構築體或載體可含有編碼多個來自一或多種靶抗原之片段或抗原決定基的核酸序列或可含有一或多個來自許多不同靶抗原之片段或抗原決定基。 靶抗原可為全長蛋白或可為其免疫原性片段(例如抗原決定基)。免疫原性片段可使用可用的技術，諸如Paul, Fundamental Immunology, 第3版, 243-247 (Raven Press, 1993)及其中所引用之參考文獻中概述之彼等鑑別。鑑別免疫原性片段之代表性技術包括篩選多肽與抗原特異性抗血清及/或T細胞株或純系反應之能力。特定靶多肽之免疫原性片段可為以基本上小於全長靶多肽之反應性(例如在ELISA及/或T細胞反應性分析中)的水準與此類抗血清及/或T細胞反應之片段。換言之，免疫原性片段可以與全長多肽之反應性類似或超過其之水準在此類分析內反應。此類篩選可使用可供一般技術者使用之方法，諸如Harlow and Lane, Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, 1988中所述之彼等進行。 在一些情況下，靶抗原可為免疫原性抗原決定基，例如長度為8至10個胺基酸之抗原決定基。在一些情況下，靶抗原之長度為四至十個胺基酸或超過10個胺基酸。靶抗原可包含1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20個或自其導出之任何數目或範圍之胺基酸的長度或可包含至少、大約或至多所述長度。靶抗原可為任何長度的胺基酸。 靶抗原之其他非限制性實例包括癌胚抗原(CEA)、葉酸受體α、WT1、brachyury (TIVS7-2，多態性)、brachyury (IVS7 T/C多態性)、T brachyury、T、hTERT、hTRT、iCE、HPV E6、HPV E7、BAGE、DAM-6、-10、GAGE-1、-2、-8、GAGE-3、-4、-5、-6、-7B、NA88-A、NY-ESO-1、MART-1、MC1R、Gp100、PSA、PSMA、PSCA、STEAP、PAP、酪胺酸酶、TRP-1、TRP-2、ART-4、CAMEL、Cyp-B、EGFR、Her2/neu、Her3、MUC1、MUC1 (VNTR多態性)、MUC1-c、MUC1-n、MUC1、MUC2、PRAME、P15、RU1、RU2、SART-1、SART-3、WT1、AFP、β-連環蛋白/m、凋亡蛋白酶-8/m、CDK-4/m、ELF2M、GnT-V、G250、HSP70-2M、HST-2、KIAA0205、MUM-1、MUM-2、MUM-3、肌球蛋白/m、RAGE、SART-2、TRP-2/INT2、707-AP、磷脂結合蛋白II、CDC27/m、TPI/mbcr-abl、ETV6/AML、LDLR/FUT、Pml/RARα、TEL/AML1、人類表皮生長因子受體2 (HER2/neu)、人類表皮生長因子受體3 (HER3)、人類乳突狀瘤病毒(HPV)、前列腺特異性抗原(PSA)、α-輔肌動蛋白-4、ARTC1、CAR-ABL融合蛋白(b3a2)、B-RAF、CASP-5、CASP-8、β-連環蛋白、Cdc27、CDK4、CDKN2A、COA-1、dek-can融合蛋白、EFTUD2、延長因子2、ETV6-AML1融合蛋白、FLT3-ITD、FN1、GPNMB、LDLR-海藻糖基轉移酶融合蛋白、HLA-A2d、HLA-Al ld、hsp70-2、KIAAO205、MART2、ME1、neo-PAP、I類肌球蛋白、NFYC、OGT、OS-9、pml-RARα融合蛋白、PRDX5、PTPRK、K-ras、N-ras、RBAF600、SIRT2、SNRPD1、SYT-SSX1-或-SSX2融合蛋白、TGF-βRII、磷酸丙糖異構酶、BAGE-1、GAGE-1、2、8、Gage 3、4、5、6、7、GnTVf、HERV-K-MEL、KK-LC-1、KM-HN-1、LAGE-1、MAGE-A1、MAGE-A2、MAGE-A3、MAGE-A4、MAGE-A6、MAGE-A9、MAGE-A10、MAGE-Al2、MAGE-C2、mucink、NA-88、NY-ESO-1/LAGE-2、SAGE、Sp17、SSX-2、SSX-4、TAG-1、TAG-2、TRAG-3、TRP2-INT2g、XAGE-1b、gp100/Pmel17、激肽釋放酶4、乳腺球蛋白-A、Melan-A/MART-1、NY-BR-1、OA1、PSA、RAB38/NY-MEL-1、TRP-1/gp75、TRP-2、酪胺酸酶、親脂素、AIM-2、ALDH1A1、BCLX (L)、BCMA、BING-4、CPSF、細胞週期素D1、DKK1、ENAH (hMena)、EP-CAM、EphA3、EZH2、FGF5、G250/MN/CAIX、HER-2/neu、IL13Rα2、腸羧基酯酶、α胎蛋白、M-CSFT、MCSP、mdm-2、MMP-2、MUC1、p53、PBF、PRAME、PSMA、RAGE-1、RGS5、RNF43、RU2AS、分離蛋白1、SOX10、STEAP1、存活素、端粒酶、VEGF或其任何組合。 在一些態樣中，如本文所用之腫瘤新抗原決定基為腫瘤特異性抗原決定基，諸如EQVWGMAVR (SEQ ID NO: 13)或CQGPEQVWGMAVREL (SEQ ID NO: 14) (FLRT2之R346W突變)、GETVTM PCP (SEQ ID NO: 15)或NVGETVTMPCPKVFS (SEQ ID NO: 16) (VIPR2之V73M突變)、GLGAQC SEA (SEQ ID NO: 17)或NNGLGAQCSEAVTLN (SEQ ID NO: 18) (FCRL1之R286C)、RKL TTELTI (SEQ ID NO: 19)、LGPERRKLTTELTII (SEQ ID NO: 20)或PERRKL TTE (SEQ ID NO: 21) ( FAT4之S1613L突變)、MDWVWM DTT (SEQ ID NO: 22)、AVMDWVWMDTTLSLS (SEQ ID NO: 23)或VWM DTTLSL (SEQ ID NO: 24) (PIEZO2之T2356M突變)、GKT LNPSQT (SEQ ID NO: 25)、SWFREGKTLNPSQTS (SEQ ID NO: 26)或REGKT LNPS (SEQ ID NO: 27) (SIGLEC14之A292T突變)、VRN ATSYRC (SEQ ID NO: 28)、LPNVTVRNATSYRCG (SEQ ID NO: 29)或NVTVRN ATS (SEQ ID NO: 30) (SIGLEC1之D1143N突變)、FAMAQIP SL (SEQ ID NO: 31)、PFAMAQIPSLSLRAV (SEQ ID NO: 32)或AQIP SLSLR (SEQ ID NO: 33) (SLC4A11之Q678P突變)。 腫瘤相關抗原可為通常不藉由宿主表現之抗原；其可為通常藉由宿主表現之分子之突變、截短、錯誤摺疊或其他異常表現；其可與通常經表現但以異常高水準表現之分子一致；或其可在異常情形或環境下表現。腫瘤相關抗原可例如為蛋白質或蛋白質片段、複合碳水化合物、神經節苷脂、半抗原、核酸、其他生物分子或其任何組合。 II. PSA家族抗原標靶 本文所揭示的包括包含複製缺陷型載體之組合物，該等載體包含相同或獨立複製缺陷型載體中之一或多種編碼PSA及/或PSMA抗原之核酸序列，及/或一或多種編碼黏蛋白家族抗原(諸如MUC1)之核酸序列，及/或一或多種編碼Brachyury之核酸序列，及/或一或多種編碼CEA之核酸序列。 前列腺特異性抗原(PSA)(亦稱為γ-精漿蛋白或激肽釋放酶-3 (KLK3))為在人體中藉由KLK3基因編碼之醣蛋白酶。PSA為激肽釋放酶相關肽酶家族之成員且藉由前列腺之上皮細胞分泌。產生PSA用於射精，其中其使精液凝塊中的精液液化且允許精子自由遊動。亦咸信其在溶解子宮頸黏液中起作用，允許精子進入子宮中。 PSA以少量存在於具有健康前列腺之男性的血清中，但通常在前列腺癌或其他前列腺病症存在下較高。PSA並非前列腺癌之獨特指示器，但亦可偵測前列腺炎或良性前列腺增生。30%具有高PSA之患者在生檢之後診斷患有前列腺癌。 靶向PSA及基於其致瘤性起始療法為當前可行的，因為可靠的測試可快速確認循環及人類癌症生檢中之較高PSA水準的存在。將PSA視為用於腫瘤特異性免疫療法之有吸引力的抗原標靶，因為前列腺癌細胞過度表現此抗原且較高PSA水準與前列腺癌之診斷相關。研究指示PSA誘導之免疫反應有效地誘發人類及PSA表現癌之實驗動物模型中之抗腫瘤CMI反應。 本文所揭示的包括使用基於Ad5[E1-, E2b-]之載體平台插入人類PSA基因作為治療表現PSA之前列腺癌之新穎免疫療法疫苗(稱為Ad5[E1-, E2b-]-PSA])。在某些實施例中所述之臨床前研究中，此疫苗在PSA表現癌之小鼠模型中誘發抗腫瘤細胞介導之免疫(CMI)反應且向吾等提供使用Ad5[E1-, E2b-]-PSA作為治療表現之PSA前列腺癌之免疫治療疫苗的強力基本原理。 在一些實施例中，本發明之PSA抗原可具有與SEQ ID NO: 34至少80%、至少85%、至少90%、至少92%、至少95%、至少97%、或至少99%一致之胺基序列。在某些實施例中，本發明之PSA抗原可具有如SEQ ID NO: 34中所闡述之胺基酸序列。在一些實施例中，本發明之PSA抗原可具有與SEQ ID NO: 35至少80%、至少85%、至少90%、至少92%、至少95%、至少97%、或至少99%一致之肽序列。在某些實施例中，本發明之PSA抗原可具有如SEQ ID NO: 35中所闡述之核苷酸序列。 III. PSMA抗原標靶 本文所揭示的包括包含複製缺陷型載體之組合物，該等載體包含相同或獨立複製缺陷型載體中之一或多種編碼PSA及/或PSMA抗原之核酸序列，及/或一或多種編碼黏蛋白家族抗原(諸如MUC1)之核酸序列，及/或一或多種編碼Brachyury之核酸序列，及/或一或多種編碼CEA之核酸序列。 麩胺酸羧肽酶II (GCPII)(亦稱為N-乙醯基-L-天冬胺醯基-L-麩胺酸肽酶I (NAALADase I)、NAAG肽酶或前列腺特異性膜抗原(PSMA))為在人體中藉由FOLH1 (葉酸水解酶1)基因編碼之酶。人類GCPII含有750個胺基酸且稱重為大致84 kDa。 GCPII為存在於膜中之鋅金屬酶。大部分酶存在於細胞外空間中。GCPII為II類膜醣蛋白。其根據向右之反應流程催化N-乙醯天冬胺醯麩胺酸(NAAG)水解為麩胺酸及N-乙醯天冬胺酸(NAA)。 在一些實施例中，本發明之PSMA抗原可具有與SEQ ID NO: 11至少80%、至少85%、至少90%、至少92%、至少95%、至少97%、或至少99%一致之胺基序列。在某些實施例中，本發明之PSMA抗原可具有如SEQ ID NO: 11中所闡述之胺基酸序列。在一些實施例中，本發明之PSMA抗原可具有與SEQ ID NO: 36至少80%、至少85%、至少90%、至少92%、至少95%、至少97%、或至少99%一致之肽序列。在某些實施例中，本發明之PSMA抗原可具有如SEQ ID NO: 36中所闡述之核苷酸序列。 IV. 黏蛋白家族抗原標靶 本文所揭示的包括包含複製缺陷型載體之組合物，該等載體包含相同或獨立複製缺陷型載體中之一或多種編碼PSA及/或PSMA抗原之核酸序列，及/或一或多種編碼黏蛋白家族抗原(諸如MUC1)之核酸序列，及/或一或多種編碼Brachyury之核酸序列，及/或一或多種編碼CEA之核酸序列。 人類黏蛋白家族(MUC1至MUC21)包括在體內形成上皮表面上之保護性黏液屏障中起一定作用之分泌及跨膜黏液素。此等蛋白質起保護內襯呼吸道、胃腸道之上皮細胞，及諸如乳腺、肝臟、胃、胰臟及腎之重要器官中之內襯管的作用。 MUC1 (CD227)為對於大多數人類癌瘤及若干血液科惡性疾病過度表現之TAA。MUC1 (GenBank：X80761.1，NCBI：NM_001204285.1)且活化許多已知涉及人類疾病之重要細胞路徑。MUC1為通常過度表現於若干人類癌症中之由兩個亞單位形成之雜二聚體蛋白質。MUC1經歷自體溶解以產生兩個亞單位MUC1n及MUC1c，其轉而形成穩定非共價異質二聚體。 MUC1 C端亞單位(MUC1c)可包含58個胺基酸之胞外域(ED)、28個胺基酸之跨膜域(TM)及72個胺基酸之細胞質域(CD)。MUC1c亦可含有「CQC」基元，其可允許MUC1之二聚化且其亦可賦予細胞致癌功能。在一些情況下，MUC1可經由MUC1c誘發細胞信號傳導而部分地起致癌作用。MUC1c可與EGFR、ErbB2及其他受體酪胺酸激酶相互作用且促進PI3K→AKT及MEK→ERK細胞路徑之活化。在細胞核中，MUC1c活化Wnt/β-連環蛋白、STAT及NF-κB RelA細胞路徑。在一些情況下，MUC1可經由MUC1n誘發細胞信號傳導而賦予致癌功能。MUC1 N端亞單位(MUC1n)可包含可變數目的可經糖基化之20胺基酸串聯重複序列。MUC1通常表現於腺上皮細胞之表面處且在癌瘤中過度表現及異常糖基化。MUC1為可用作腫瘤免疫療法之標靶的TAA。已進行及正進行若干臨床試驗以評估MUC1在免疫治療疫苗中之用途。重要的是，此等試驗指示具有MUC1靶向之免疫療法安全且可提供生存益處。 然而，臨床試驗亦已顯示MUC1為相對不佳免疫原。為了解決此問題，本發明人已鑑別MUC1癌蛋白之C端區(MUC1-C或MUC1c)中之T淋巴細胞免疫增強子肽序列。相比於天然肽序列，其經修飾MUC1-C中之促效劑(a)在較低肽濃度下結合HLA-A2，(b)對於HLA-A2展示較高親合力，(c)當與抗原呈遞細胞一起使用時，相比於使用天然肽，藉由T細胞誘導產生更多IFN-γ，及(d)能夠更有效地自癌症患者產生MUC1特異性人類T細胞株。重要的是，使用促效劑抗原決定基產生之T細胞株比藉由天然抗原決定基產生之彼等對於溶解經天然抗原決定基脈衝之標靶及在溶解表現MUC1之HLA-A2人類腫瘤細胞中更有效。另外，本發明人已鑑別MUC1-C之其他CD8+細胞毒性T淋巴細胞免疫增強子促效劑序列抗原決定基。 在某些態樣中，提供關於免疫增強子能力經修飾之強力MUC1-C (mMUC1-C或MUC1-C或MUC1c)。本發明提供關於免疫增強子能力經修飾之強力MUC1-C，將其併入重組Ad5[E1-, E2b-]平台中以產生新穎且更強力之免疫治療疫苗。舉例而言，免疫治療疫苗可為用於治療表現MUC1之癌症或傳染病之Ad5[E1-, E2b-]-mMUC1-C。 轉譯後修飾在控制體內之蛋白質功能及人類疾病中起重要作用。舉例而言，除上文所述之蛋白分解裂解以外，MUC1可具有若干轉譯後修飾，諸如特定胺基酸殘基處之糖基化、唾液酸化、棕櫚醯化或其組合。本發明提供靶向MUC1之糖基化、唾液酸化、磷酸化或棕櫚醯化修飾之免疫療法。 MUC1可經高度糖基化(各串聯重複序列內之絲胺酸及蘇胺酸殘基上不同程度之N-基O-鍵聯碳水化合物及唾液酸，介於單糖基化至五糖基化範圍內)。在乳房癌中經3,4-鍵聯GlcNAc不同地O-糖基化。N-糖基化由高甘露糖、呈分泌形式之酸性複合型及混合聚糖MUC1/SEC及呈跨膜形式之中性複合型MUC1/TM.4組成。本發明提供靶向MUC1之不同O-糖基化形式的免疫療法。 另外，MUC1可經唾液酸化。來自腎癌細胞及乳癌細胞之脫膜醣蛋白優先具有唾液酸化核心1結構，而來自相同組織之分泌形式主要顯示核心2結構。O-糖基化含量在此兩個組織中重疊，其中末端海藻糖及半乳糖、2-及3-鍵聯半乳糖、3-及3,6-鍵聯GalNAc-醇及4-鍵聯GlcNAc占主導地位。本發明提供靶向MUC1之各種唾液酸化形式之免疫療法。CQC基元中之半胱胺酸殘基的雙重棕櫚醯化對於自內體再循環回質膜係所需的。本發明提供靶向MUC1之各種棕櫚醯化形式之免疫療法。 磷酸化可影響MUC1誘發對於人類健康重要之特定細胞信號傳導反應的能力。本發明提供靶向MUC1之各種磷酸化形式之免疫療法。舉例而言，MUC1可在C端域中之酪胺酸及絲胺酸殘基上經磷酸化。C端域中之酪胺酸上之磷酸化可增加MUC1及β-連環蛋白之核定位。藉由PKC δ之磷酸化可誘發MUC1與β-連環蛋白/CTNNB1之結合且減少β-連環蛋白/E-鈣黏素複合物的形成。MUC1之Src介導磷酸化可抑制與GSK3B之相互作用。Tyr-1229上之MUC1之Src及EGFR介導磷酸化可增加與β-連環蛋白/CTNNB1之結合。Ser-1227上之MUC1之GSK3B介導磷酸化可減少此相互作用，但恢復β-鈣黏素/E-鈣黏素複合物之形成。MUC1之PDGFR介導磷酸化可增加MUC1CT及CTNNB1之核共定位。本發明提供靶向MUC1、MUC1c及MUC1n之不同磷酸化形式之免疫療法，已知該等免疫療法調節該等磷酸化形式之細胞信號傳導能力。 本發明提供調節MUC1c細胞質域及其在細胞中之功能的免疫療法。本發明提供包含調節MUC1c中之CQC基元之免疫療法。本發明提供包含調節MUC1c之胞外域(ED)、跨膜域(TM)、細胞質域(CD)或其組合之免疫療法。本發明提供包含調節MUC1c經由EGFR、ErbB2或其他受體酪胺酸激酶誘發細胞信號傳導之能力的免疫療法。本發明提供包含調節MUC1c誘發PI3K→AKT、MEK→ERK、Wnt/β-連環蛋白、STAT、NF-κB RelA細胞路徑或其組合之能力的免疫療法。 在一些實施例中，MUC1c免疫療法可另外包含相同複製缺陷型病毒載體或獨立複製缺陷型病毒載體中之PSA、PSMA、CEA或Brachyury免疫療法。 本發明亦提供調節MUC1n及其細胞功能之免疫療法。本發明亦提供包含MUC1n之串聯重複序列、MUC1n之串聯重複序列上之糖基化位點或其組合之免疫療法。在一些實施例中，MUC1n免疫療法另外包含相同複製缺陷型病毒載體或獨立複製缺陷型病毒載體中之PSA、PSMA、CEA或Brachyury免疫療法。 本發明亦提供包含MUC1n、MUC1c、PSA、brachyury、CEA或其組合之疫苗。本發明提供包含MUC1c及PSA、PSMA、brachyury、CEA或其組合之疫苗。本發明亦提供靶向MUC1n及PSA、Brachyury、CEA或其組合之疫苗。在一些實施例中，抗原組合包含於如本文所提供之同一載體中。在一些實施例中，抗原組合包含於如本文所提供之分開載體中。 本發明係關於包含編碼免疫原性多肽之序列的血清型5之複製缺陷型腺病毒載體。免疫原性多肽可為MUC1之同功異型物或其亞單位或片段。在一些實施例中，複製缺陷型腺病毒載體包含編碼與免疫原性多肽具有至少75%、80%、85%、90%、95%、98%、99%、99.5 %或99.9%一致性之多肽的序列。在一些實施例中，相比於野生型人類MUC1序列，由本文所述之腺病毒載體編碼之免疫原性多肽包含至多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、、12、13、14、15、16、17、18、19、20、25、30、35、40或更多個點突變，諸如單胺基酸取代或缺失。 在一些實施例中，本發明之MUC1-c抗原可為經修飾MUC1且可具有與SEQ ID NO: 10至少80%、至少85%、至少90%、至少92%、至少95%、至少97%、或至少99%一致之胺基酸序列。在某些實施例中，本發明之MUC1-c抗原可具有如SEQ ID NO: 10中所闡述之胺基酸序列。在一些實施例中，本發明之MUC1-c抗原可為經修飾MUC1且可具有與SEQ ID NO: 41至少80%、至少85%、至少90%、至少92%、至少95%、至少97%、或至少99%一致之核苷酸序列。在某些實施例中，本發明之MUC1-c抗原可具有如SEQ ID NO: 41中所闡述之核苷酸序列。 V. Brachyury抗原標靶 本文所揭示的包括包含複製缺陷型載體之組合物，該等載體包含相同或獨立複製缺陷型載體中之一或多種編碼PSA及/或PSMA抗原之核酸序列，及/或一或多種編碼黏蛋白家族抗原(諸如MUC1)之核酸序列，及/或一或多種編碼Brachyury之核酸序列，及/或一或多種編碼CEA之核酸序列。 本發明提供包含一或多種針對Brachyury之抗原的免疫療法。Brachyury (在人體中亦稱為「T」蛋白)為在早期發育期間，主要在正常中胚層之形成及分化中起關鍵作用之轉錄因子之T-box家族的成員且特徵在於指定為T-域之高度保守DNA結合域。上皮細胞成為間葉細胞之轉化(EMT)為原發性腫瘤演進至轉移狀態期間的關鍵步驟，其中Brachyury具有重要作用。Brachyury在人類癌細胞中之表現誘發EMT所特有之變化，包括間質標記物之上調、上皮標記物之下調以及細胞遷移及侵襲之增加。相反，Brachyury之抑制導致間質標記物之下調，及細胞遷移及侵襲之喪失，且降低人類腫瘤細胞形成癌轉移之能力。Brachyury之功能在於介導上皮-間質轉化及促進侵襲。 本發明亦提供在諸如癌症之細胞增殖疾病中調節Brachyury對上皮-間質轉化功能之效應的免疫療法。本發明亦提供調節Brachyury促進諸如癌症之細胞增殖疾病中之侵襲之能力的免疫療法。本發明亦提供調節Brachyury之T-box域之DNA結合功能的免疫療法。在一些實施例中，Brachyury免疫療法可進一步包含一或多種針對PSA、PSMA、CEA或MUC1、MUC1c或MUC1n之抗原。 在大部分正常人類組織中幾乎不會偵測到Brachyury表現，且高度侷限於人類腫瘤，且通常過度表現，以致其成為免疫療法之有吸引力的靶抗原。在人體中，Brachyury由T基因編碼(GenBank：AJ001699.1，NCBI：NM_003181.3)。已在人體中發現至少兩種由選擇性剪接產生之不同同功異型物。各同功異型物具有多種天然變異體。 Brachyury為免疫原性，且活體外擴增之Brachyury特異性CD8+ T細胞可溶解表現Brachyury之腫瘤細胞。Brachyury之此等特徵使其成為用於免疫療法之有吸引力的腫瘤相關抗原(TAA)。Brachyury蛋白質為T-box轉錄因子。其可經由其N端中之區(稱作T-box)結合至特定DNA元件，一種接近回文序列「TCACACCT」，以在結合至此類位點時活化基因轉錄。 本發明亦提供包含Brachyury、PSA、PSMA、MUC1、CEA或其組合之疫苗。在一些實施例中，抗原組合包含於如本文所提供之同一載體中。在一些實施例中，抗原組合包含於如本文所提供之分開載體中。 在特定實施例中，本發明係關於包含編碼免疫原性多肽之序列的血清型5之複製缺陷型腺病毒載體。免疫原性多肽可為Brachyury之同功異型物或其亞單位或片段。在一些實施例中，複製缺陷型腺病毒載體包含編碼與免疫原性多肽具有至少70%、75%、80%、85%、90%、95%、98%、99%、99.5 %或99.9%一致性之多肽的序列。在一些實施例中，相比於野生型人類Brachyury序列，藉由本文所述之腺病毒載體編碼之免疫原性多肽包含至多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、25、30、35、40或更多個點突變，諸如單胺基酸取代或缺失。 在一些實施例中，本發明之Brachyury抗原可具有與SEQ ID NO: 42至少80%、至少85%、至少90%、至少92%、至少95%、至少97%、或至少99%一致之胺基序列。在某些實施例中，本發明之Brachyury抗原可具有如SEQ ID NO: 42中所闡述之胺基酸序列。 VI. CEA抗原標靶 本文所揭示的包括包含複製缺陷型載體之組合物，該等載體包含相同或獨立複製缺陷型載體中之一或多種編碼PSA及/或PSMA抗原之核酸序列，及/或一或多種編碼黏蛋白家族抗原(諸如MUC1)之核酸序列，及/或一或多種編碼Brachyury之核酸序列，及/或一或多種編碼CEA之核酸序列。 CEA表示用於免疫療法之有吸引力的靶抗原，因為其過度表現於幾乎所有結腸直腸癌及胰臟癌中，且亦經一些肺癌及乳癌及不常見腫瘤(諸如甲狀腺髓樣癌)表現，但不表現於身體之其他細胞中，除了在胃腸上皮細胞中之低位準表現。CEA含有可以MHC限制性方式經T細胞識別之抗原決定基。 發現編碼腫瘤抗原CEA之多個具有Ad5 [E1-,E2b-]-CEA (6D)之同源免疫在小鼠中誘導具有抗腫瘤活性之CEA特異性細胞介導免疫(CMI)反應，不管預先存在或誘導之Ad5中和抗體的存在。在本發明I/II期研究中，患有晚期結腸直腸癌之患者群用遞增劑量之Ad5 [E1-, E2b-]-CEA(6D)免疫。不管在大多數(61.3%)患者中存在預先存在之Ad5免疫性，觀測到CEA特異性CMI反應。重要的是，存在最小毒性，且不管預先存在之Ad5中和抗體滴度，總患者存活率(在12個月處為48%)類似。結果展示在癌症患者中，新穎的Ad5 [E1-, E2b-]基因傳遞平台在天然獲得性以及免疫誘導之Ad5特異性免疫性之設定中均對腫瘤抗原CEA產生顯著CMI反應。 CEA抗原特異性CMI可例如為每10⁶ 個外周血液單核細胞(PBMC)大於10、20、30、40、50、100、200、300、400、500、600、700、800、900、1000、5000、10000或更多個IFN-γ斑點形成細胞(SFC)。在一些實施例中，免疫反應在具有大於50、100、150、200、300、400、500、600、700、800、900、1000、1500、2000、2500、3000、3500、4000、4500、5000、6000、7000、8000、9000、1000、12000、15000或更高之預先存在的逆Ad5中和抗體滴度之人類個體中升高。免疫反應可包含如本文所述之細胞介導免疫性及/或體液免疫性。免疫反應可藉由以下中之一或多者來量測：細胞內細胞介素染色(ICS)、ELISpot、增殖分析、細胞毒性T細胞分析(包括鉻釋放或等效分析)，及使用任何數目的聚合酶鏈反應(PCR)之基因表現分析或基於RT-PCR之分析，其如本文所述且在其可供熟習此項技術者使用之程度上，以及此項技術中已知用於量測免疫反應之任何其他適合之分析。 在一些實施例中，複製缺陷型腺病毒載體包含編碼與多肽之野生型亞單位具有至少75%、80%、85%、90%、95%、98%、99%、99.5 %或99.9%一致性之亞單位的經修飾序列。 免疫原性多肽可為突變CEA或其片段。在一些實施例中，免疫原性多肽包含具有Asn-＞Asp取代位置610之突變CEA。在一些實施例中，複製缺陷型腺病毒載體包含編碼與免疫原性多肽具有至少75%、80%、85%、90%、95%、98%、99%、99.5 %或99.9%一致性之多肽的序列。在一些實施例中，編碼免疫原性多肽之序列包含SEQ ID NO: 37 (用於CEA-CAP1 (6D)之核酸序列)或SEQ ID NO: 38 (用於突變CAP1 (6D)抗原決定基之胺基酸序列)之序列。 在一些實施例中，編碼免疫原性多肽之序列包含與SEQ ID NO: 37或SEQ ID NO: 38具有至少70%、75%、80%、85%、90%、95%、98%、99%、99.5 %或99.9%一致性之序列或藉由替代性密碼子替代產生自SEQ ID NO: 37或SEQ ID NO: 38之序列。在一些實施例中，相比於野生型人類CEA序列，由腺病毒載體編碼之免疫原性多肽包含至多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、25、30、35、40或更多個點突變，諸如單胺基酸取代或缺失。 在一些實施例中，免疫原性多肽包含來自SEQ ID NO: 37之序列或經修飾型式，例如包含SEQ ID NO: 37或SEQ ID NO: 38之至多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、25、30、35、40或更多個點突變，諸如單胺基酸取代或缺失。 CEA基因家族之成員基於序列相似性、發育表現模式及其生物功能而細分為三個子組：含有12個基因(CEACAM1 、CEACAM3 - CEACAM8 、CEACAM16 及CEACAM18 - CEACAM21 )之CEA相關細胞黏附分子(CEACAM)子組、含有十一個緊密相關基因(PSG1 - PSG11 )之妊娠特異性醣蛋白(PSG)子組及十一個假基因(CEACAMP1 - CEACAMP11 )之子組。CEACAM子組之大部分成員具有由細胞外Ig樣域組成之類似結構，該細胞外Ig樣域由單一N端V-set域組成，與免疫球蛋白可變域具有結構同源性，接著為改變數目的A或B亞型之C2-set域、跨膜域及細胞質域。存在兩個在結構組織中顯示一些例外之CEACAM子組的成員(CEACAM16 及CEACAM20 )。CEACAM16在其N及C端含有兩個Ig樣V型域且CEACAM20含有截短Ig樣V型1域。CEACAM分子可經由其跨膜域(CEACAM5 至CEACAM8 )錨定至細胞表面或直接連接至糖磷脂醯肌醇(GPI)脂質部分(CEACAM5 、CEACAM18 至CEACAM21 )。 CEA家族成員表現於不同細胞類型中且具有大範圍的生物功能。CEACAM顯著地發現於大部分上皮細胞上且存在於不同白血球上。在人體中，CEACAM1 (CEA家族之祖先成員)表現於上皮及內皮細胞之頂面上以及淋巴及骨髓細胞上。CEACAM1 經由嗜血性(CEACAM1 至CEACAM1 )以及異宗配合(例如CEACAM1 至CEACAM5 )相互作用介導細胞-細胞黏附。另外，CEACAM1 參與許多其他生物過程，諸如血管生成、細胞遷移及免疫功能。CEACAM3 及CEACAM4 表現在很大程度上受限於粒細胞，且其能夠傳達包括奈瑟氏菌屬(Neisseria)、莫拉菌屬(Moraxella)及嗜血桿菌屬(Haemophilus)物種之若干細菌病原體的吸收及破壞。 因此，在各種實施例中，組合物及方法與升高相對於選自由以下組成之群的CEA之免疫反應有關：CEACAM1、CEACAM3、CEACAM4、CEACAM5、CEACAM6、CEACAM7、CEACAM8、CEACAM16、CEACAM18、CEACAM19、CEACAM20、CEACAM21、PSG1、PSG2、PSG3、PSG4、PSG5、PSG6、PSG7、PSG8、PSG9及PSG11。免疫反應可使用方法及組合物相對於細胞，例如癌細胞升高，表現或過度表現CEA中之一或多者。在一些實施例中，相比於非癌細胞，一或多種CEA於此類癌細胞中之過度表現係超過5、10、20、30、40、50、60、70、80、90、100倍或更多倍。 在某些實施例中，本文所用之CEA抗原為野生型CEA抗原或具有至少YLSGANLNL (SEQ ID NO: 39)，CEA之CAP1抗原決定基之突變的經修飾CEA抗原。突變可為保守或非保守取代、添加或缺失。在某些實施例中，本文所用之CEA抗原具有YLSGADLNL (SEQ ID NO: 38)，一種突變CAP1抗原決定基中所闡述之胺基酸序列。在其他實施例中，第一複製缺陷型載體或表現CEA之複製缺陷型載體具有與SEQ ID NO: 40 (表現經修飾CEA抗原之腺病毒載體的預測序列)之任何部分，諸如SEQ ID NO: 40之位置1057至3165或全長SEQ ID NO: 40至少50%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、98%、99%、99.5 %、99.9%或100%一致之核苷酸序列。 VII. 前列腺癌 本文揭示的包括治療前列腺癌之方法，其包含向有需要之個體投與包含複製缺陷型載體之組合物，該等載體包含相同或獨立複製缺陷型載體中之一或多種編碼PSA家族抗原(例如PSA及/或PSMA)之核酸序列，及/或一或多種編碼黏蛋白家族抗原(諸如MUC1)之核酸序列，及/或一或多種編碼Brachyury之核酸序列，及/或一或多種編碼CEA之核酸序列。 前列腺癌(亦稱為前列腺癌瘤)為在前列腺(雄性生殖系統中之腺體)中產生癌症。大部分前列腺癌緩慢生長；然而，一些相對快速地生長。癌細胞可自前列腺擴散至身體之其他部分，特定言之骨骼及淋巴結。其可起初不引起症狀。在隨後階段中，其可導致排尿困難、血尿或骨盆、背部或排尿時之疼痛。稱為良性前列腺增生之疾病可產生類似症狀。其他晚期症狀可包括由低紅血球水準所致的感覺疲倦。 早期前列腺癌通常不具有明顯症狀。然而，有時，前列腺癌確實引起症狀，其通常與諸如良性前列腺增生之疾病之彼等類似。此等包括尿頻、夜尿症(夜晚排尿增加)、難以起始及維持穩定尿流、血尿(尿中帶血)、及尿痛(排尿疼痛)。基於美國1998患者護理評估(1998 Patient Care Evaluation in the US)之研究發現約三分之一診斷患有前列腺癌之患者具有一或多種此類症狀，而三分之二不具有症狀。 前列腺癌係與排尿功能障礙相關聯，因為前列腺圍繞前列腺尿道。因此，腺內之變化直接影響排尿功能。由於輸精管將精液存入前列腺尿道中，且來自前列腺自身之分泌物包括於精液含量中，前列腺癌亦可引起性功能及表現問題，諸如難以勃起或射精疼痛。 在某些態樣中，晚期前列腺癌可擴散至身體之其他部分，可能引起其他症狀。最常見症狀為骨痛，其通常在脊椎(脊柱骨)、骨盆或肋骨中。癌症擴散至諸如股骨之其他骨骼中通常為擴展至骨骼之近端或鄰近部分之結果。脊柱中之前列腺癌亦可壓縮脊髓，引起發麻、腿虛弱及大小便失禁。 出於若干原因，前列腺癌為免疫療法之理想候選物。前列腺內之癌症之緩慢生長性質允許在初次/追加或多個免疫策略之後產生抗腫瘤免疫反應之足夠時間。另外，前列腺癌表現許多腫瘤相關抗原(TAA)，其包括前列腺特異性抗原(PSA)、前列腺酸性磷酸酶(PAP)、前列腺特異性膜抗原(PSMA)、前列腺幹細胞抗原(PSCA)及前列腺六跨膜上皮抗原(STEAP)。所有此等TAA提供多個潛在免疫抗腫瘤標靶且標靶之理想抗原組合尚待完全確定。 患者血清中存在PSA使得能夠提早偵測到惡性腫瘤，且在一些情況下，在腫瘤以放射學方式可偵測之前。此轉而可促進更早治療。先前已偵測到與前列腺TAA反應之循環T細胞，其表明可克服針對此等抗原之自身耐受性。前列腺係視為非必需器官且因此誘發針對特定前列腺TAA之免疫反應不應引起急性非靶毒性。最重要地，第一前列腺癌特異性免疫療法Sipuleucel-T (Provenge®, Dendreon Corporation, Seattle, WA)在2010年由美國食品及藥物管理局(FDA)特許用於無症狀或最低症狀耐去勢性前列腺癌(CRPC)。Sipuleucel-T由具有呈遞樹突狀細胞之抗原的自體外周血液單核細胞組成，該等樹突狀細胞已藉由重組融合蛋白(PA2024)離體活化，該重組融合蛋白由連接至粒細胞-巨噬細胞群落刺激因子(GM-CSF)之PAP組成。在III期試驗中，接受Sipuleucel-T之CPRC患者展現死亡率之22%減少。治療性Sipuleucel-T之成功現已為其他免疫治療性前列腺癌疫苗經授與監管批准及市場准入鋪路。 在隨機化2期試驗中評估基於痘病毒PSA之疫苗(牛痘-PSA初次，禽痘-PSA追加)。患有最低症狀轉移性耐去勢性前列腺癌之個體以2/1 (85/41)隨機分組為疫苗療法相對於安慰劑。經治療個體具有延長之中位總生存期(OS)(26個月相對於18個月)。此方法已開始進行關鍵性隨機化3期試驗，現經完全登記(N=1200)，且等待事件驅動之結果。 另外，正開發腺病毒-PSA方法。PSA已併入至基於複製缺陷型早代Ad5 [E1-]之載體平台中且在1期試驗中測試。連續個體群體具有增加劑量之單次Ad5-PSA注射。大部分(18/32(67%))個體產生可偵測細胞介導抗PSA反應。此方法正在以1個月時間間隔使用多個劑量(3次注射)之2期試驗中評估。 因此，基於PSA之疫苗接種方法具有臨床活性以及誘發抗PSA定向細胞免疫之能力的初步證據。改良之載體，諸如本文所述之新穎的基於Etubics Ad5 [E1-, E2b-]之載體平台應促進臨床開發此靶向方法。非複製腺病毒載體應改善此方法之安全性，且避免中和抗病毒免疫反應之能力將使得能夠持續追加以使免疫反應最大化。此等特徵可藉由如本文所述之Ad5 [E1-, E2b-]載體提供。 侵襲性前列腺癌之標準治療可涉及手術(亦即根除性前列腺切除術)、放射療法，包括近接療法(前列腺近接療法)及外照射放射療法、高強度聚焦超音波(HIFU)、化學療法、口服化學治療藥物(替莫唑胺/TMZ)、冷凍手術、激素療法或某一組合。 在某些實施例中，如本文所用之基於Ad5 [E1-, E2b-]-PSA及/或PSMA之疫苗接種方法可與任何可用的前列腺癌療法，諸如上文所述之實例組合。 VIII. 載體 某些態樣包括將細胞轉移至包含一或多種編碼一或多種靶抗原，諸如PSA、MUC1、Brachyury、PSMA、CEA或其組合之核酸序列的表現構築體中。在某些實施例中，可使用病毒載體實現將表現構築體轉移至細胞中。病毒載體可用於包括含有病毒序列之彼等構築體，該等病毒序列足以表現已選殖至其中之重組基因構築體。 在特定實施例中，病毒載體為腺病毒載體。腺病毒為特徵在於含有線性雙鏈基因組之二十面體非包封衣殼之DNA病毒家族。在人類腺病毒中，無一者與任何贅生性疾病相關，且僅在具有免疫能力的個體中引起相對輕度、自我限制性疾病。 腺病毒載體可具有較低整合至基因組DNA中之能力。腺病毒載體可導致高效基因轉移。腺病毒載體之其他優點包括其在傳遞至未分裂及分裂細胞中有效且可大量地產生。 相比於整合病毒，宿主細胞之腺病毒感染可不導致染色體整合，因為腺病毒DNA可在無潛在基因毒性的情況下以游離方式複製。另外，腺病毒載體可結構上穩定，且未在廣泛擴增之後偵測到基因組重排。腺病毒由於其中型基因組、操縱簡易性、高滴度、寬靶細胞範圍及高感染力而尤其適合於用作基因轉移載體。 藉由病毒表現之第一基因為E1基因，其用於自存在於野生型基因組中之其他Ad5基因啟動子起始高位準基因表現。後代病毒粒子之病毒DNA複製及組裝發生於經感染細胞之細胞核內，且整個生命週期耗時約36 h，輸出為每細胞大致10⁴ 個病毒粒子。 野生型Ad5基因組為大致36 kb，且取決於其在DNA複製之前或之後表現而編碼分成早期及晚期病毒功能之基因。早期/晚期定界為幾乎絕對的，因為已展示先前感染Ad5之細胞的超感染導致缺乏自超感染病毒之晚期基因表現，直至其已複製其自身基因組之後。不受理論束縛，此可能係由於Ad5主要晚期啟動子(MLP)之複製依賴性順式活化，預防晚期基因表現(主要為Ad5衣殼蛋白質)直至複製之基因組呈現為經囊封。組合物及方法可在開發後生世代Ad載體/疫苗中利用此等特徵。 腺病毒載體可為複製缺陷型，或至少條件缺陷型的。腺病毒可具有42種不同已知血清型或子組A-F中之任一者且預想其他血清型或子組。子組C之腺病毒類型5可用於特定實施例中以獲得複製缺陷型腺病毒載體。此係由於腺病毒類型5為已知大量關於其之生物化學及基因資訊的人類腺病毒，且其歷史上已用於大部分採用腺病毒作為載體之構築體。 腺病毒生長及操縱為熟習此項技術者已知，且在活體外及活體內展現寬宿主範圍。亦可使用經修飾病毒，諸如具有CAR域之改變的腺病毒。亦預想增強傳遞或避開免疫反應之方法，諸如病毒之脂質體囊封。 載體可包含腺病毒之基因工程改造形式，諸如E2缺失之腺病毒載體，或更特定言之E2b缺失之腺病毒載體。如本文所用，術語「E2b缺失」係指以使得預防至少一種E2b基因產物之表現及/或功能之方式突變的特定DNA序列。因此，在某些實施例中，「E2b缺失」係指自Ad基因組缺失(移除)之特定DNA序列。E2b缺失或「含有E2b區內之缺失」係指在Ad基因組之E2b區內缺失至少一個鹼基對。在某些實施例中，超過一個鹼基對經缺失且在其他實施例中，至少20、30、40、50、60、70、80、90、100、110、120、130、140或150個鹼基對經缺失。在另一實施例中，缺失為Ad基因組之E2b區內之大於150、160、170、180、190、200、250或300個鹼基對。E2b缺失可為預防至少一種E2b基因產物之表現及/或功能的缺失，且因此涵蓋編碼E2b特異性蛋白質之一部分的外顯子內之缺失以及啟動子及前導序列內之缺失。在某些實施例中，E2b缺失為預防E2b區之DNA聚合酶及終端前蛋白質中之一者或兩者之表現及/或功能的缺失。在另一實施例中，「E2b缺失」係指Ad基因組之此區之DNA序列中之一或多個點突變，使得一或多種編碼蛋白質為非功能性的。此類突變包括經不同殘基置換，導致產生非功能蛋白質之胺基酸序列之變化的殘基。 如熟習此項技術者在閱讀本發明後將理解，Ad基因組之其他區可經缺失。因此，如本文所用，在Ad基因組之特定區中經「缺失」係指以使得預防至少一種藉由該區編碼之基因產物之表現及/或功能之方式突變的特定DNA序列。在某些實施例中，在特定區中經「缺失」係指以使得預防藉由該區編碼之表現及/或功能(例如DNA聚合酶或終端前蛋白質功能之E2b功能)之方式自Ad基因組缺失(移除)的特定DNA序列。在特定區內「缺失」或「含有缺失」係指在Ad基因組之該區內缺失至少一個鹼基對。 因此，在某些實施例中，超過一個鹼基對經缺失，且在其他實施例中，至少20、30、40、50、60、70、80、90、100、110、120、130、140或150個鹼基對自特定區缺失。在另一實施例中，缺失為Ad基因組之特定區內之大於150、160、170、180、190、200、250或300個鹼基對。此等缺失使得預防藉由該區編碼之基因產物的表現及/或功能。因此，缺失涵蓋蛋白質之外顯子編碼部分內之缺失以及啟動子及前導序列內之缺失。在另一實施例中，Ad基因組之特定區中之「缺失」係指Ad基因組之此區之DNA序列中之一或多個點突變，使得一或多種編碼蛋白質為非功能性的。此類突變包括經不同殘基置換，導致產生非功能蛋白質之胺基酸序列之變化的殘基。 在某些實施例中，考慮使用之腺病毒載體包括在Ad基因組之E2b區且視情況在E1區中具有缺失的E2b缺失之腺病毒載體。在一些情況下，此類載體未缺失Ad基因組之任何其他區。 在另一實施例中，考慮使用之腺病毒載體包括在Ad基因組之E2b區中具有缺失，且視情況在E1及E3區中具有缺失的E2b缺失之腺病毒載體。在一些情況下，此類載體未缺失其他區。 在另一實施例中，考慮使用之腺病毒載體包括在Ad基因組之E2b區中具有缺失，且視情況在E1、E3中具有缺失，且亦視情況部分或完全移除E4區之腺病毒載體。在一些情況下，此類載體不具有其他缺失。 在另一實施例中，考慮使用之腺病毒載體包括在Ad基因組之E2b區中具有缺失，且視情況在E1及/或E4區中具有缺失的腺病毒載體。在一些情況下，此類載體不含其他缺失。 在另一實施例中，考慮使用之腺病毒載體包括在Ad基因組之E2a、E2b及/或E4區中具有缺失之腺病毒載體。在一些情況下，此類載體不具有其他缺失。 在一個實施例中，本文使用之腺病毒載體包含缺失E2b區之E1及/或DNA聚合酶功能之載體。在一些情況下，此類載體不具有其他缺失。 在另一實施例中，本文使用之腺病毒載體缺失E2b區之E1及/或終端前蛋白質功能。在一些情況下，此類載體不具有其他缺失。 在另一實施例中，本文使用之腺病毒載體缺失E1、DNA聚合酶及/或終端前蛋白質功能。在一些情況下，此類載體不具有其他缺失。在一個特定實施例中，預期用於本文之腺病毒載體缺失E2b區及/或E1區的至少一部分。 在一些情況下，此類載體不為「有病毒基因的」腺病毒載體。就此而言，載體可缺失E2b區之DNA聚合酶及終端前蛋白質功能兩者。在另一實施例中，使用之腺病毒載體包括在腺病毒基因組之E1、E2b及/或100K區中具有缺失之腺病毒載體。在某些實施例中，腺病毒載體可為「有病毒基因的」腺病毒載體。 在一個實施例中，本文使用之腺病毒載體包含缺失E1、E2b及/或蛋白酶功能之載體。在一些情況下，此類載體不具有其他缺失。 在另一實施例中，本文使用之腺病毒載體缺失E1及/或E2b區，同時纖維基因已藉由突變或其他改變(例如用以改變Ad向性)修飾。自E3或E4區移除基因可添加至提及之腺病毒載體中之任一者。 缺失之腺病毒載體可使用此項技術中已知之重組技術產生(參見例如Amalfitano等人 J. Virol. 1998; 72:926-33；Hodges等人 J Gene Med 2000; 2:250-59)。如熟習此項技術者將認可，用於某些態樣之腺病毒載體可使用組成性表現E2b基因產物及可缺失所需基因中之任一者之產物的適當包裝細胞株成功地生長至高滴度。在某些實施例中，可使用不僅組成性表現E1及DNA聚合酶蛋白質，且亦表現Ad-終端前蛋白質之HEK-293源性細胞。在一個實施例中，E.C7細胞用於成功地生長腺病毒載體之高滴度儲備液(參見例如Amalfitano等人 J. Virol. 1998; 72:926-33；Hodges等人 J Gene Med 2000; 2:250-59)。 為了從自傳播腺病毒載體刪除重要基因，由靶基因編碼之蛋白質可與E1蛋白質一起共表現於HEK-293細胞或類似者中。因此，僅可利用在組成性共表現(或毒性蛋白質誘導性表現)時無毒之彼等蛋白質。已展示E1及E4基因在HEK-293細胞中之共表現(使用誘導性非組成型啟動子)(Yeh等人 J. Virol. 1996; 70:559；Wang等人 Gene Therapy 1995; 2:775；及Gorziglia等人 J. Virol. 1996; 70:4173)。已共表現E1及蛋白質IX基因(病毒粒子結構蛋白)(Caravokyri等人 J. Virol. 1995; 69: 6627)，且亦已描述E1、E4及蛋白質IX基因之共表現(Krougliak, et al. Hum. Gene Ther. 1995; 6:1575)。E1及100k基因已成功地表現於反補細胞株中，因為具有E1及蛋白酶基因(Oualikene等人 Hum Gene Ther 2000; 11:1341-53；Hodges等人 J. Virol 2001; 75:5913-20)。 共表現用於生長高滴度的E2b缺失之Ad粒子之E1及E2b基因產物之細胞株係描述於美國專利第6,063,622號中。E2b區編碼對於Ad基因組複製絕對需要之病毒複製蛋白質(Doerfler等人Chromosoma 1992; 102:S39-S45)。適用細胞株組成性地表現大致140 kDa Ad-DNA聚合酶及/或大致90 kDa終端前蛋白質。特定言之，在無毒性的情況下具有E1、DNA聚合酶及終端前蛋白質之高水準、組成型共表現的細胞株(例如E.C7)對於用於傳播用於多個疫苗接種中之Ad為所需的。此等細胞株准許傳播缺失E1、DNA聚合酶及終端前蛋白質之腺病毒載體。 重組腺病毒載體可使用此項技術中可用之技術傳播。舉例而言，在某些實施例中，含有E.C7細胞之組織培養盤經適當MOI (例如5)下之腺病毒載體病毒儲備液感染且在37.0℃下培育40-96 h。收穫經感染細胞，再懸浮於10 mM Tris-CI (pH 8.0)中，且經音波處理，且病毒藉由兩輪氯化銫密度離心純化。在某些技術中，含有病毒之帶經Sephadex CL-6B管柱(Pharmacia Biotech, Piscataway, NJ.)去鹽，添加蔗糖或甘油，且將等分試樣儲存於-80℃下。在一些實施例中，將病毒置於經設計以增強其穩定性之溶液，諸如A195中(Evans等人 J Pharm Sci 2004; 93:2458-75)。儲備液之滴度經量測(例如藉由在SDS溶解之後量測病毒之等分試樣在260 nm處之光學密度)。在另一實施例中，包涵整個重組E2b缺失之腺病毒載體的線性或環狀質體DNA可轉染至E.C7或類似細胞中，且在37.0℃下培育直至存在病毒產生之跡象(例如細胞病變效應)。來自此等細胞之條件培養基可隨後用於感染更多E.C7或類似細胞，以在純化之前擴大產生之病毒的量。純化可藉由兩輪氯化銫密度離心或選擇性過濾實現。在某些實施例中，病毒可使用市售產品(例如來自Puresyn, Inc., Malvem, PA之Adenopure)或定製層析管柱藉由管柱層析法純化。 在某些實施例中，重組腺病毒載體可包含足夠病毒以確保待感染之細胞遭遇某一數目之病毒。因此，可提供重組Ad儲備液，特定言之不含RCA之重組Ad儲備液。Ad儲備液之製備及分析可使用任何此項技術中可用的方法。病毒儲備液之滴度顯著變化，其在很大程度上取決於病毒基因型及用於製備其之方案及細胞株。病毒儲備液可具有每毫升至少約10⁶ 、10⁷ 或10⁸ 個病毒粒子(VP)之滴度，且許多此類儲備液可具有更高滴度，諸如至少約10⁹ 、10¹⁰ 、10¹¹ 或10¹² VP/ml。 某些態樣涵蓋使用E2b缺失之腺病毒載體，諸如美國專利第6,063,622號；第6,451,596號；第6,057,158號；第6,083,750號；及第8,298,549號中所述之彼等。在E2b區中具有缺失之載體在許多情況下削弱病毒蛋白質表現及/或減小產生複製勝任型Ad (RCA)之頻率。 可使用表現缺失E2b基因產物之細胞株進行此等E2b缺失腺病毒載體之傳播。某些態樣亦提供此類包裝細胞株；例如衍生自HEK-293細胞株之E.C7 (正式地稱作C-7)。 在其他態樣中，E2b基因產物、DNA聚合酶及終端前蛋白質可與E1基因產物一起組成性地表現於E.C7或類似細胞中。將來自Ad基因組之基因片段轉移至生產細胞株具有直接效益：(1)增加的攜載容量；及(2)減少的RCA產生潛能，通常需要兩個或大於兩個獨立重組事件來產生RCA。表現本文所用之細胞株之E1、Ad DNA聚合酶及/或終端前蛋白質可使得能夠在不需要污染輔助病毒的情況下以接近13 kb的攜載容量傳播腺病毒載體。另外，當對於病毒生命週期至關重要之基因(例如E2b基因)經缺失時，出現Ad複製或表現其他病毒基因蛋白質之進一步削弱。此可減少病毒感染細胞之免疫識別，且允許延長外來轉殖基因表現之持續時間。 E1、DNA聚合酶及終端前蛋白質缺失載體通常無法表現來自E1及E2b區之對應蛋白質。另外，其可顯示大部分病毒結構蛋白之表現的缺乏。舉例而言，Ad之主要晚期啟動子(MLP)負責晚期結構蛋白L1經由L5之轉錄。儘管MLP在Ad基因組複製之前最低限度地具活性，高度毒性Ad晚期基因僅在出現病毒基因組複製之後自MLP主要地轉錄及轉譯。晚期基因轉錄之此順式依賴性活化為一般DNA病毒，諸如多瘤病毒及SV-40之生長中之特徵。DNA聚合酶及終端前蛋白質對於Ad複製重要(不同於E4或蛋白質IX蛋白質)。其缺失可對於腺病毒載體晚期基因表現，及該表現在諸如APC之細胞中之毒性效應極其有害。E1缺失之腺病毒載體 某些態樣涵蓋使用E1缺失之腺病毒載體。構築第一代或E1缺失之腺病毒載體Ad5 [E1-]，使得轉殖基因僅置換基因之E1區。通常，約90%野生型Ad5基因組保留於載體中。Ad5 [E1-]載體具有減弱的複製能力且無法在不表現Ad5 E1基因之細胞的感染之後產生感染性病毒。重組Ad5 [E1-]載體在人類細胞(通常293細胞)中傳播，允許Ad5 [E1-]載體複製及包裝。Ad5 [E1-]載體具有多種正面屬性；最重要屬性中之一者為其按比例增大及cGMP生產之相對簡易性。當前，遠超過220個人類臨床試驗利用Ad5 [E1-]載體，其中超過兩千個個體皮下、肌肉內或靜脈內給與病毒。 另外，Ad5載體並未整合；其基因組保持游離。一般而言，對於不整合至宿主基因組中之載體，插入型突變誘發及/或生殖系傳遞之風險極低(即使有的話)。習知Ad5 [E1-]載體具有接近7 kb之攜載容量。 人類及動物中之研究已展示針對Ad5之預先存在的免疫性可為商業使用基於Ad之疫苗的抑制因素。多數人類具有針對Ad5 (人類疫苗之最廣泛使用亞型)之抗體，其中三分之二的經研究人類具有針對Ad5之淋巴增生性反應。此預先存在的免疫性可抑制使用典型Ad5疫苗之免疫或再免疫且可稍後使用Ad5載體排除針對第二抗原之疫苗的免疫。克服預先存在的抗載體免疫性之問題已成為密集研究的主題。已檢驗使用替代性人類(並非基於Ad5)Ad5亞型或甚至Ad5之非人類形式的研究。即使此等方法在初始免疫中成功，後續疫苗接種可由於針對新穎Ad5亞型之免疫反應而有問題。 為了避免Ad5免疫屏障，且改良第一代Ad5 [E1-]載體之誘發最佳免疫反應之有限功效，提供與下一代基於Ad5載體之疫苗平台相關的某些實施例。下一代Ad5平台具有E2b區中之其他缺失，移除DNA聚合酶及終端前蛋白質基因。Ad5 [E1-, E2b-]平台具有足以允許包括多種可能基因之經擴展選殖容量。相比於Ad5 [E1-]載體之7 kb容量，Ad5 [E1-, E2b-]載體具有至多約12 kb基因攜載容量，必要時對於多種基因提供空間。在一些實施例中，大於1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或11 kb之插入物引入至Ad5載體，諸如Ad5 [E1-, E2b-]載體中。 E2b區之缺失可賦與Ad5載體有利免疫特性，通常對靶抗原，諸如PSA、PSMA、MUC1、Brachyury、CEA或其組合引發強力免疫反應，同時使針對Ad病毒蛋白質之免疫反應最小化。 在各種實施例中，Ad5 [E1-, E2b-]載體，以及針對載體表現之靶抗原，諸如PSA、PSMA、MUC1、Brachyury、CEA或其組合的抗體可誘發強力CMI，即使在Ad免疫性存在下亦如此。 Ad5 [E1-, E2b-]載體亦具有相比於Ad5 [E1-]載體減少之不良反應，特定言之肝毒性及組織損傷的出現。 此等Ad5載體之某些態樣為Ad晚期基因之表現極大地減少。舉例而言，可對於Ad5 [E1-]載體活體內偵測到衣殼纖維蛋白質之生產，同時自Ad5 [E1-, E2b-]載體疫苗消除纖維表現。針對野生型Ad之先天性免疫反應為複雜的。自Ad5 [E1-, E2b-]載體缺失之蛋白質一般起重要作用。特定言之，具有終端前蛋白質或DNA聚合酶之缺失的Ad5 [E1-, E2b-]載體在注射之後的首先24至72小時期間顯示相比於Ad5 [E1-]載體減少的發炎。在各種實施例中，缺乏Ad5基因表現使得經感染細胞對於抗Ad活性不可見且准許經感染細胞持續延長時段表現轉殖基因，其產生針對標靶之免疫性。 各種實施例涵蓋增加Ad5 [E1-, E2b-]載體轉導樹突狀細胞之能力，藉由利用減少的針對Ad5 [E1-, E2b-]載體病毒蛋白質之發炎反應及所得預先存在之Ad免疫性的逃避改良疫苗中之抗原特異性免疫反應。 在一些情況下，此免疫誘發可耗時數月。Ad5 [E1-, E2b-]載體不僅比Ad5 [E1-]載體更安全，且似乎關於誘發抗原特異性免疫反應優於Ad5 [E1-]載體，使其適合得多地用作傳遞可導致臨床反應之腫瘤疫苗的平台。 在某些實施例中，藉由利用Ad5 [E1-, E2b-]載體系統產生治療性腫瘤疫苗而提供方法及組合物，該治療性腫瘤疫苗克服在其他Ad5系統之情況下發現之障礙且准許使先前已暴露於Ad5的人免疫。 相比於第一代腺病毒載體之5至6 kb容量，E2b缺失之載體可具有至多13 kb基因攜載容量，容易地對於編碼多種靶抗原，諸如PSA、PSMA、MUC1、Brachyury或其組合中之任一者的核酸序列提供空間。 E2b缺失之腺病毒載體亦具有相比於第一代腺病毒載體減少的不良反應。E2b缺失之載體具有減少的病毒基因表現，且此特徵導致擴展的活體內轉殖基因表現。 相比於第一代腺病毒載體，第二代E2b缺失之腺病毒載體之某些實施例含有其他的DNA聚合酶基因(pol)之缺失及終端前蛋白質(pTP)之缺失。 似乎自腺病毒載體表現之Ad蛋白質起重要作用。特定言之，E2b缺失之載體中之終端前蛋白質及DNA聚合酶之缺失似乎減少注射之後的首先24至72小時期間的發炎，而第一代腺病毒載體在此時段期間刺激發炎。 另外，已報導藉由E2b缺失產生之其他複製阻斷亦導致Ad晚期基因之表現的10,000倍減少，遠超出藉由單獨的E1、E3缺失獲得之減少。減少含量的藉由E2b缺失之腺病毒載體產生之Ad蛋白質有效地減少針對Ad抗原之競爭性、非所需免疫反應的潛能，該等免疫反應為預防平台在Ad免疫或暴露個體中之重複使用的反應。 減少的藉由第二代E2b缺失之載體誘發之發炎反應導致增加的載體在抗原呈遞細胞(亦即樹突狀細胞)感染期間表現所需疫苗抗原，諸如PSA、PSMA、MUC1、Brachyury、CEA或其組合之潛能，減少抗原競爭之潛能，導致相對於藉由第一代腺病毒載體之相同嘗試較大的針對所需抗原之疫苗的免疫。 E2b缺失之腺病毒載體提供改良的基於Ad之候選疫苗，其比使用第一代腺病毒載體之上述候選疫苗更安全、更有效且更通用。 因此，第一代E1缺失之基於腺病毒亞型5 (Ad5)之載體儘管為用作疫苗之有前景的平台，但可藉由天然存在或誘發之Ad特異性中和抗體阻礙活性。 不受理論束縛，具有E1及E2b區之缺失的基於Ad5之載體(Ad5 [E1-, E2b-])(後者編碼DNA聚合酶及終端前蛋白質，例如藉助於減少的晚期病毒蛋白質表現)可避免免疫清除且在Ad免疫宿主中誘發針對編碼之抗原轉殖基因，諸如PSA、PSMA、MUC1、Brachyury、CEA或其組合的更強力免疫反應。 IX. 異源核酸 在一些實施例中，載體，諸如腺病毒載體可包含編碼一或多種腫瘤抗原，諸如PSA、PSMA、MUC1、Brachyury、CEA或其組合、其融合物或其片段之異源核酸序列，其可調節免疫反應。在某些態樣中，可提供第二代E2b缺失之腺病毒載體，其包含編碼一或多種腫瘤抗原，諸如PSA、PSMA、MUC1、Brachyury、CEA或其組合之異源核酸序列。 因此，可提供編碼來自如本文中進一步描述之任何來源的PSA、PSMA、MUC1、Brachyury、CEA或其組合之聚核苷酸，包含此類聚核苷酸之載體或構築體，以及經此類載體或表現構築體轉化或轉染之宿主細胞。 術語「核酸」及「聚核苷酸」在本文中基本上可互換地使用。如熟習此項技術者亦將認可，本文所用之聚核苷酸可為單鏈(編碼或反義)或雙鏈，且可為DNA (基因組、cDNA或合成)或RNA分子。RNA分子可包括HnRNA分子，其含有內含子且以一對一方式對應於DNA分子；及mRNA分子，其不含內含子。其他編碼或非編碼序列可(但未必)存在於如本文所揭示之聚核苷酸內，且聚核苷酸可(但未必)連接至其他分子及/或支撐材料。如本文所用，經分離聚核苷酸意謂聚核苷酸基本上遠離其他編碼序列。舉例而言，如本文所用之經分離DNA分子不含較大無關編碼DNA部分，諸如較大染色體片段或其他功能基因或多肽編碼區。當然，此係指最初分離之DNA分子，且不排除隨後經由實驗室中之重組添加至片段之基因或編碼區。 如熟習此項技術者將理解，聚核苷酸可包括基因組序列、外基因組及質體編碼之序列及較小工程改造基因片段，其表現或可經調適以表現如本文所述之靶抗原、抗原片段、肽及其類似物。此等片段可自然地分離，或藉由人手以合成方式修飾。 聚核苷酸可包含天然序列(亦即編碼一或多種腫瘤抗原，諸如PSA、PSMA、MUC1、Brachyury、CEA或其組合或其一部分之內源性序列)或可包含編碼此類序列之變異體或衍生物之序列。在某些實施例中，本文所闡述之聚核苷酸序列編碼一或多種突變腫瘤抗原，諸如PSA、PSMA、MUC1、Brachyury、CEA或其組合。在一些實施例中，聚核苷酸表示已對於特定細胞類型(亦即人類細胞株)中之表現最佳化之新穎基因序列，該等特定細胞類型可基本上在天然核苷酸序列或變異體之範圍內變化，但編碼類似蛋白質抗原。 在其他相關實施例中，可提供與編碼一或多種腫瘤抗原，諸如PSA、PSMA、MUC1、Brachyury、CEA或其組合之天然序列具有大體一致性之聚核苷酸變異體，例如相比於編碼一或多種腫瘤抗原，諸如PSA、MUC1、Brachyury、CEA或其組合之天然聚核苷酸序列，包含至少70、80、90、95、96、97、98或99%序列一致性(或其任何可導出範圍或值)，特定言之至少75%至99%或更高序列一致性之彼等，其使用本文所描述之方法(例如使用標準參數之BLAST分析，如下所述)。熟習此項技術者將認識到此等值可恰當地調節以測定藉由兩個核苷酸序列編碼之蛋白質的對應一致性，其藉由考量密碼簡併、胺基酸相似性、閱讀框架定位及其類似者。 在一些實施例中，聚核苷酸變異體含有一或多個取代、添加、缺失及/或插入，尤其使得藉由變異聚核苷酸編碼之多肽之抗原決定基之免疫原性或使得異源靶蛋白之免疫原性不相對於藉由天然聚核苷酸序列編碼之多肽大體上減少。如本文中他處所描述，聚核苷酸變異體較佳編碼一或多種腫瘤抗原，諸如PSA、PSMA、MUC1、Brachyury、CEA或其組合，或其片段(例如抗原決定基)，其中變異體多肽或其片段(例如抗原決定基)與抗原特異性抗血清及/或T細胞株或純系反應之傾向不相對於天然多肽大體上減少。術語「變異體」亦應理解為涵蓋異種來源之同源基因。 在某些態樣中，可提供編碼本文所述多肽(包括靶蛋白抗原)包含至少約5至1000個或更多個(以及其間所有中間長度)連續核苷酸或由其組成之聚核苷酸。可輕易瞭解在本文中“中間長度”意謂引用值之間的任何長度，諸如16、17、18、19等；21、22、23等；30、31、32等；50、51、52、53等；100、101、102、103等；150、151、152、153等；包括200-500；500-1,000，及其類似者中所有整數。如本文所述之聚核苷酸序列在一端或兩端可藉由未發現於編碼本文所述之多肽(諸如抗原決定基或異源靶蛋白)之天然序列中之其他核苷酸延伸。此其他序列可由1至20個或更多個核苷酸組成，於所揭示序列之任一端或於所揭示序列之兩端。 不管編碼序列自身之長度，聚核苷酸或其片段可與其他DNA序列，諸如啟動子、表現控制序列、聚腺苷酸化信號、其他限制酶位點、多個選殖位點、其他編碼片段及其類似者組合，使得其總長度可有許多變化。因此預期可使用幾乎任何長度之核酸片段，其中總長度較佳受製備容易性及所欲重組DNA方案中之用途限制。舉例而言，預期約1000、2000、3000、4000、5000、6000、7000、8000、9000、10,000、約500、約200、約100、約50個鹼基對長度及其類似者(包括所有中間長度)之總長度的例示性聚核苷酸片段適用於某些態樣。 當比較聚核苷酸序列時，若兩個序列中之核苷酸序列在關於最大對應性比對時(如下所述)相同，則兩個序列稱為“一致”。兩個序列之間的比較通常藉由在比較窗口比較序列以鑑別且比較局部區之序列相似性來進行。如本文中所使用之「比較窗口」係指至少約20個、通常30至約75個、40至約50個連續位置之片段，其中在兩個序列經最佳比對之後，一個序列可與相同數目的連續位置之參考序列相比較。 用於比較之最佳序列比對可使用生物資訊軟體之Lasergene套件中之Megalign程式(DNASTAR, Inc., Madison, WI)使用預設參數來進行。此程式體現以下參考文獻中描述之若干比對方案：Dayhoff MO (1978) A model of evolutionary change in proteins - Matrices for detecting distant relationships. Dayhoff MO (編) Atlas of Protein Sequence and Structure, National Biomedical Research Foundation, Washington DC 第5卷, 第3增刊, 第345- 358頁；Hein J Unified Approach to Alignment and Phylogenes, 第626-645頁 (1990)；Methods in Enzymology 第183期, Academic Press, Inc., San Diego, CA；Higgins等人 PM CABIOS 1989; 5:151-53；Myers EW等人 CABIOS 1988; 4:11-17；Robinson ED Comb. Theor 1971; 11A 05；Saitou N等人 Mol. Biol. Evol. 1987; 4:406-25; Sneath PHA and Sokal RR Numerical Taxonomy - the Principles and Practice of Numerical Taxonomy, Freeman Press, San Francisco, CA (1973)；Wilbur WJ等人 Proc. Natl. Acad., Sci. USA 1983 80:726-30)。 或者，用於比較之最佳序列比對可如下進行：藉由Smith等人 Add. APL. Math 1981; 2:482之局部標識算法，藉由 Needleman等人 Mol. Biol. 1970 48:443之標識比對算法，藉由搜尋Pearson及Lipman, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1988; 85:2444之相似性方法，藉由此等算法之電腦化實施(Wisconsin Genetics Software Package中之GAP、BESTFIT、BLAST、FASTA及TFASTA, Genetics Computer Group (GCG), 575 Science Dr., Madison, Wl)或藉由檢驗。 適合於測定序列一致性及序列相似性百分比之算法的一個實例為BLAST及BLAST 2.0算法，其分別描述於Altschul等人, Nucl. Acids Res. 1977 25:3389-3402及Altschul等人 J. MoI. Biol. 1990 215:403-10中。BLAST及BLAST 2.0可例如與本文所述之參數一起使用，以測定聚核苷酸之序列一致性百分比。進行BLAST分析之軟體可經由國家生物技術資訊中心(National Center for Biotechnology Information)公開獲得。在一個說明性實例中，對於核苷酸序列，可使用參數M (對於匹配殘基對，獎勵分值；始終＞0)及N (對於錯配殘基，罰分；始終＜0)計算累計分值。當以下情況時，字語命中在各方向中之延伸中斷：累積對準分數自其達成之最大值降低量X；累積分數歸因於一或多種負評分殘基比對之累積而變成0或0以下；或達到任一序列之末端。BLAST算法參數W、T及X決定比對之靈敏度及速度。BLASTN程式(對於核苷酸序列)使用字長(W) 11及期望值(E) 10作為預設值，且BLOSUM62計分矩陣(參見Henikoff等人 Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1989; 89:10915)比對使用如下參數作為預設值：(B) 50，期望值(E) 10，M=5，N=-4及兩股比較。 在某些實施例中，「序列一致性百分比」藉由經至少20個位置之比較窗口比較兩個最佳比對序列確定，其中比較窗口中之聚核苷酸序列部分相比於用於兩個序列之最佳比對的參考序列(其不包含添加或缺失)可包含20%或更小，通常5%至15%，或10%至12%之添加或缺失(亦即，間隙)。百分比係如下計算：測定一致核酸鹼基出現於兩個序列中之位置數以產生匹配位置數、將匹配位置數除以參考序列中之位置總數(亦即窗口尺寸)且將結果乘以100以產生序列一致性百分比。 一般技術者應瞭解，由於基因密碼之簡併，存在許多如本文所述的編碼特定所關注抗原或其片段之核苷酸序列。一些此等聚核苷酸與任何天然基因之核苷酸序列攜帶最小同源性。儘管如此，特定地涵蓋由於密碼子使用中之差異而變化之聚核苷酸。 另外，亦可涵蓋包含本文提供之聚核苷酸序列之基因的對偶基因。對偶基因為由於核苷酸之一或多個突變(諸如缺失、添加及/或取代)而變化的內源基因。所得mRNA及蛋白質可(但不必須)具有變化的結構或功能。對偶基因可使用標準技術(諸如雜交、擴增及/或資料庫序列比較)來識別。 因此，在另一實施例中，突變誘發方法，諸如定點突變誘發係用於製備編碼一或多種如本文所述之腫瘤抗原，諸如PSA、PSMA、MUC1、Brachyury、CEA或其組合，或其片段之核酸序列的變異體及/或衍生物。藉由此方法，可經由使編碼多肽序列之基礎聚核苷酸突變誘發，對多肽序列進行特定修飾。此等技術提供一種製備及測試序列變異體之簡單方法，例如藉由引入一或多種核苷酸序列改變至聚核苷酸中，併入以上考慮因素中之一或多者。 位點特異性突變誘發允許經由使用編碼所需突變體之DNA序列的特定寡核苷酸序列以及足夠數目之相鄰核苷酸產生突變體，以提供具有足夠尺寸及序列複雜性之引子序列，從而在所穿過之缺失連接片段之兩側上形成穩定雙螺旋。突變可用於所選聚核苷酸序列，以改善、更改、減少、改變或者變化聚核苷酸本身之特性，及/或改變編碼多肽之特性、活性、組成、穩定性或一級序列。 一或多種編碼多肽之聚核苷酸片段可藉由例如藉由化學方法直接合成片段而製備，如通常使用自動化寡核苷酸合成器所實踐。另外，片段可如下獲得：藉由應用核酸複製技術(諸如美國專利4,683,202之PCR™技術)、藉由將所選序列引入至重組載體中以進行重組生產及藉由熟習分子生物學技術者周知之其他重組DNA技術(參見例如Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley and Sons, NY, NY)。 為了表現如本文所述之所需腫瘤抗原，諸如PSA、PSMA、MUC1、Brachyury、CEA或其組合，多肽或其片段，或包含以上中之任一者的融合蛋白，編碼多肽之核苷酸序列或功能等效物係使用此項技術中已知之重組技術插入至適當載體，諸如如本文所述之複製缺陷型腺病毒載體中。適當載體含有插入之編碼序列及任何所需連接子之轉錄及轉譯所需的元件。 可供熟習此項技術者使用之方法可用於構築含有編碼一或多種腫瘤抗原，諸如PSA、MUC1、Brachyury、CEA或其組合之序列及適當轉錄及轉譯控制元件之此等載體。此等方法包括活體外重組DNA技術、合成技術及活體內基因重組。此類技術描述於例如Amalfitano等人 J. Virol. 1998; 72:926-33；Hodges等人 J Gene Med 2000; 2:250-259；Sambrook J等人 (1989) Molecular Cloning, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Press, Plainview, N.Y.及Ausubel FM等人 (1989) Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, New York. N.Y中。 多種載體/宿主系統可用於包含及產生聚核苷酸序列。此等包括(但不限於)經重組噬菌體、質體或黏質體DNA載體轉化之微生物，諸如細菌；經酵母菌載體轉化之酵母菌；經病毒載體(例如桿狀病毒)感染之昆蟲細胞系統；經病毒載體(例如花椰菜嵌紋病毒，CaMV；菸草嵌紋病毒，TMV)或經細菌載體(例如Ti或pBR322質體)轉化之植物細胞系統；或動物細胞系統。 存在於載體，諸如腺病毒載體中之“控制元件”或“調節序列”為載體之彼等非轉譯區-增強子、啟動子、5'及3'非轉譯區-其與宿主細胞蛋白質相互作用以進行轉錄及轉譯。此類元件可在其強度及特異性中變化。取決於利用之載體系統及宿主，可使用任何數目的適合轉錄及轉譯元件，包括組成型及誘導性啟動子。舉例而言，編碼一或多種腫瘤抗原，諸如PSA、PSMA、MUC1、Brachyury、CEA或其組合之序列可接合至由晚期啟動子及三聯體前導序列組成之Ad轉錄/轉譯複合物。插入病毒基因組之非必需E1或E3區中可用於獲得能夠表現感染宿主細胞中之多肽的活病毒(Logan J等人 Proc. Natl. Acad. Sci 1984; 87:3655-59)。另外，轉錄增強子，諸如勞氏肉瘤病毒(RSV)增強子可用於增加哺乳動物宿主細胞中之表現。 特定起始信號亦可用於達成編碼一或多種腫瘤抗原，諸如PSA、PSMA、MUC1、Brachyury、CEA或其組合之序列的更有效轉譯。此類信號包括ATG起始密碼子及相鄰序列。在編碼多肽之序列、其起始密碼子及上游序列插入至適當表現載體中之情況下，可能不需要其他轉錄或轉譯控制信號。然而，在僅僅編碼序列或其一部分插入之情況下，應提供包括ATG起始密碼子之外源轉譯控制信號。此外，起始密碼子應在正確的閱讀框架中以確保整個插入物之轉譯。外源轉譯元件及起始密碼子可源自各種天然及合成來源。表現效率可藉由包括適合於使用之特定細胞系統的增強子，諸如文獻中所述之彼等而增強(Scharf D等人 Results Probl. Cell Differ. 1994; 20:125-62)。亦可併入用於轉錄或轉譯之特定終止序列以達成編碼所選多肽之序列的有效轉譯。 多種偵測及量測聚核苷酸編碼產物(例如一或多種腫瘤抗原，諸如PSA、PSMA、MUC1、Brachyury、CEA或其組合)之表現的方案為此項技術中已知的，其使用對產物具有特異性之多株或單株抗體。實例包括酶聯免疫吸附分析(ELISA)、放射免疫分析(RIA)及螢光活化細胞分選(FACS)。使用單株抗體與給定多肽上之兩個非干擾抗原決定基之反應性的雙位點、基於單株之免疫分析可對於一些應用較佳，但亦可採用競爭性結合分析。此等及其他分析描述於Hampton R等人(1990; Serological Methods, a Laboratory Manual, APS Press, St Paul. Minn.)及Maddox DE等人 J. Exp. Med. 1983; 758:1211-16)中以及他處。 在某些實施例中，增加所需腫瘤抗原，諸如PSA、PSMA、MUC1、Brachyury、CEA或其組合之表現的元件可併入至表現構築體或載體，諸如本文所述之腺病毒載體的核酸序列中。此類元件包括內部核糖體結合位點(IRES; Wang等人 Curr. Top. Microbiol. Immunol 1995; 203:99；Ehrenfeld等人 Curr. Top. Microbiol. Immunol. 1995; 203:65；Rees等人 Biotechniques 1996; 20:102；Sugimoto等人 Biotechnology 1994; 2:694)。IRES增加轉譯效率。同樣，其他序列可增強表現。對於一些基因，序列尤其在5'端抑制轉錄及/或轉譯。此等序列通常為可形成髮夾結構之回文序列。待傳遞之核酸中之任何此類序列一般經缺失。分析轉錄物或轉譯產物之表現量以確認或確定何等序列影響表現。可藉由任何已知方法分析轉錄物水準，包括Northern印跡雜交、RNA酶探針保護及其類似方法。可藉由任何已知方法，包括ELISA分析蛋白質含量。 如熟習此項技術者將認識到，包含異源核酸序列之載體，諸如本文所述之腺病毒載體可使用此項技術中已知之重組技術產生，諸如Maione等人 Proc Natl Acad Sci USA 2001; 98:5986-91；Maione等人 Hum Gene Ther 2000 1:859-68；Sandig等人 Proc Natl Acad Sci USA, 2000; 97:1002-07；Harui等人 Gene Therapy 2004; 11:1617-26；Parks等人 Proc Natl Acad Sci USA 1996; 93:13565-570；DelloRusso等人 Proc Natl Acad Sci USA 2002; 99:12979-984; Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley and Sons, NY, NY)中所述之技術。 X. 醫藥組合物 在某些態樣中，可提供包含編碼針對其產生免疫反應之一或多種腫瘤抗原(諸如PSA、PSMA、MUC1、Brachyury、CEA或其組合)之核酸序列的醫藥組合物。 舉例而言，本文所述之腺病毒載體儲備液可與適當緩衝液、生理學上可接受之載劑、賦形劑或其類似物組合。在某些實施例中，適當數目之腺病毒載體粒子係在諸如無菌PBS之適當緩衝液中投與。在某些環境中，將需要非經腸、靜脈內、肌肉內或甚至腹膜內傳遞本文揭示之腺病毒載體組合物。 在某些實施例中，呈游離鹼或藥理學上可接受之鹽形式之醫藥組合物之溶液可在適當地與諸如羥丙基纖維素之界面活性劑混合之水中製備。亦可在甘油、液態聚乙二醇及其混合物中及在油中製備分散液。在其他實施例中，E2b缺失之腺病毒載體可以丸劑形式傳遞、藉由吞咽或藉由栓劑傳遞。 適合於可注射用途之說明性醫藥形式包括無菌水溶液或分散液及用於臨時製備無菌可注射溶液或分散液之無菌粉末(例如參見美國專利5,466,468)。在所有情況下，形式必須為無菌的且必須為流體，達到存在可容易注射性之程度。其必須在製造及儲存條件下穩定，且必須保護其免於微生物(諸如細菌、黴菌及真菌)之污染作用。 載劑可為含有例如水、脂質、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇及液體聚乙二醇及其類似物)、其適合混合物及/或植物油之溶劑或分散介質。可例如藉由使用包衣(諸如卵磷脂)、在分散液之情況下藉由維持所需粒度及/或藉由使用界面活性劑來維持適當流動性。微生物作用之預防可藉由各種抗細菌劑及抗真菌劑(例如對羥基苯甲酸酯、氯丁醇、酚、山梨酸、硫柳汞及其類似物)來促進。在多種情況下，將適合地包括等張劑，例如糖或氯化鈉。可藉由將延遲吸收劑(例如單硬脂酸鋁及明膠)用於組合物中來達成可注射組合物之延長吸收。 在一個實施例中，對於水溶液中之非經腸投與而言，溶液可在必要時經適當緩衝且首先用充足鹽水或葡萄糖賦予液體稀釋劑等張性。此等特定水溶液尤其適合於靜脈內、肌肉內、皮下及腹膜內投與。就此而論，根據本發明，可採用之無菌水性介質將為熟習此項技術者已知。舉例而言，單次劑量可溶解於1 ml等張NaCl溶液中，且添加至1000 ml皮下灌注流體，或在建議之輸注位點注射，(參見例如「Remington's Pharmaceutical Sciences」第15版, 第1035-1038及1570-1580頁)。視所治療個體之病況而定，將必然出現一些劑量變化。此外，對於人類投與，製劑將當然適當地滿足如FDA生物標準辦公室(FDA Office of Biology standards)要求之無菌性、發熱性及一般安全性及純度標準。 載劑可另外包含任何及所有溶劑、分散介質、媒劑、包衣、稀釋劑、抗細菌及抗真菌劑、等張及吸收延緩劑、緩衝劑、載劑溶液、懸浮液、膠體及其類似物。此類介質及試劑用於醫藥活性物質之用途在此項技術中為熟知的。除非任何習知介質或試劑與活性成分不相容，否則考慮將其用於治療組合物中。補充活性成份亦可併入組合物中。片語「醫藥學上可接受」係指當向人類投與時不產生過敏性或類似不良反應之分子實體及組合物。 本文所述之治療組合物之投與途徑及頻率以及劑量將在個體與個體及疾病與疾病之間變化，且可易於使用標準技術建立。一般而言，可藉由注射(例如皮內、肌肉內、靜脈內或皮下)、經鼻(例如藉由抽吸)、以丸劑形式(例如吞咽、用於經陰道或經直腸傳遞之栓劑)投與。在某些實施例中，可經6週時段投與1至3個劑量且可隨後週期性地給與另外的追加疫苗接種。 舉例而言，適合劑量為當如上文所述地投與時，能夠促進如本文中他處所描述之靶抗原免疫反應之腺病毒載體的量。在某些實施例中，免疫反應高於基礎(亦即未處理)位準至少10-50%。此類反應可藉由量測患者中之靶抗原抗體或藉由疫苗依賴性產生能夠活體外殺死表現靶抗原之細胞之溶細胞性效應細胞，或其他此項技術中已知用於監測免疫反應之方法來監測。在某些態樣中，靶抗原為PSA、PSMA、MUC1、Brachyury、CEA或其組合。 一般而言，適當劑量及治療方案以足以提供防治益處之量提供腺病毒載體。保護性免疫反應可一般使用標準增殖、細胞毒性或細胞介素分析評估，其可使用獲自免疫(疫苗接種)之前及之後的患者之樣品進行。 在某些態樣中，向患者或個體投與之組合物的實際劑量可藉由物理及生理因素，諸如體重、病況嚴重程度、治療之疾病的類型、先前或並行的治療性干預、患者之特發病及投與途徑測定。負責投藥的從業者將在任何情況下確定組合物中活性成分之濃度及適用於單獨個體的劑量。 儘管本文所述之組合物及方法的一個優勢為能夠藉由相同腺病毒載體投與多個疫苗接種，尤其在具有針對Ad之預先存在的免疫性之個體中，本文所述之腺病毒疫苗亦可作為初次及追加方案之一部分投與。混合模態初次及追加接種流程可導致增強型免疫反應。因此，一個態樣為如下方法：藉由質體疫苗，諸如包含編碼一或多種腫瘤抗原，諸如PSA、PSMA、MUC1、Brachyury、CEA或其組合之核酸序列的質體載體對個體引發，其藉由投與質體疫苗至少一次，允許經過預定時間長度，且接著藉由投與本文所述之腺病毒載體而追加。 可採用多次引發，例如1-3次，儘管可使用更多次。引發與追加之間的時間長度可通常在約6個月至1年範圍內變化，但可使用其他時間範圍。 在某些實施例中，醫藥組合物可包含例如至少約0.1%治療劑，諸如在本文中用作疫苗之表現構築體或載體、相關脂質微型小泡或裝載有治療劑之外來體或微型小泡。在其他實施例中，治療劑可例如包含單元之重量的約2%至約75%，或約25%至約60%，及可在其中導出之任何範圍。在其他非限制性實例中，劑量亦可包含每次投與約1微克/公斤/體重、約5微克/公斤/體重、約10微克/公斤/體重、約50微克/公斤/體重、約100微克/公斤/體重、約200微克/公斤/體重、約350微克/公斤/體重、約500微克/公斤/體重、約1毫克/公斤/體重、約5毫克/公斤/體重、約10毫克/公斤/體重、約50毫克/公斤/體重、約100毫克/公斤/體重、約200毫克/公斤/體重、約350毫克/公斤/體重、約500毫克/公斤/體重至約1000毫克/公斤/體重或更大，及可在其中導出之任何範圍。在可自本文所列之數目導出之範圍的非限制性實例中，可投與約5微克/公斤/體重至約100毫克/公斤/體重、約5微克/公斤/體重至約500毫克/公斤/體重等的範圍。 醫藥組合物之有效量係基於預期目標而確定。術語「單位劑量」或「劑量」係指適用於個體之物理離散單元，各單元含有經計算以產生與其投與，亦即適當途徑及治療方案相關之上文所述之所需反應的醫藥組合物之預定量。根據治療數目及單位劑量兩者之待投與之量取決於所需之保護或效應。 醫藥組合物之精確量亦取決於從業者之判斷且為各個體所特有。影響劑量之因素包括患者之物理及臨床狀態、投與途徑、預期治療目標(例如緩解症狀相對於治癒)以及特定治療物質之效能、穩定性及毒性。 在某些態樣中，包含如本文所述之疫苗接種方案之組合物可藉由任何途徑單獨或與醫藥學上可接受之載劑或賦形劑一起投與，且此類投與可以單一及多個劑量進行。更特定言之，醫藥組合物可與各種醫藥學上可接受之惰性載劑組合，該等惰性載劑呈錠劑、膠囊、口含錠、糖衣錠、手工糖果、粉末、噴霧劑、水性懸浮液、可注射溶液、酏劑、糖漿及其類似形式。此類載劑包括固體稀釋劑或填充劑、無菌水性介質及各種無毒有機溶劑等。此外，此類口服醫藥調配物可藉助於各種通常用於此類目的之類型的藥劑適當地甜化及/或調味。通篇描述之組合物可調配為藥劑且用於治療診斷患有疾病(例如癌症)之有需要之人類或哺乳動物，或用於增強免疫反應。 在某些實施例中，本文所述之病毒載體或組合物可與一或多種免疫刺激劑，諸如佐劑結合投與。免疫刺激劑係指加強或增強針對抗原之免疫反應(抗體及/或細胞介導)的基本上任何物質。一種類型之免疫刺激劑包含佐劑。許多佐劑含有經設計以保護抗原免於快速代謝之物質，諸如氫氧化鋁或礦物油，及免疫反應之刺激劑，諸如脂質A、百日咳博德特氏菌(Bortadella pertussis)或結核分支桿菌(Mycobacterium tuberculosis)源性蛋白質。某些佐劑以例如以下之形式市售：弗氏不完全佐劑及完全佐劑(Difco Laboratories)；Merck Adjuvant 65 (Merck and Company, Inc.) AS-2 (SmithKline Beecham)；鋁鹽，諸如氫氧化鋁凝膠(礬)或磷酸鋁；鈣、鐵或鋅之鹽；醯化酪胺酸之不溶懸浮液；醯化糖；陽離子或陰離子衍生之多醣；聚磷氮烯；生物可降解微球；單磷醯基脂質A及植物皂甙(quil A)。諸如以下之細胞介素亦可用作佐劑：GM-CSF、IFN-γ、TNFα、IL-2、IL-8、IL-12、IL-18、IL-7、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-9、IL-10、IL-13、IL-15、IL-16、IL-23及/或IL-32，及其他者，如生長因子。 在某些實施例內，佐劑組合物可為誘發主要為Th1類型之免疫反應的組合物。高水準之Th1型細胞介素(例如IFN-γ、TNFα、IL-2及IL-12)傾向於有利於對投與之抗原誘發細胞介導之免疫反應。相比之下，高水準之Th2型細胞介素(例如IL-4、IL-5、IL-6及IL-10)傾向於有利於誘發體液免疫反應。在施加如本文所提供之疫苗後，患者可支持包括Th1型及/或Th2型反應之免疫反應。在反應主要為Th1型之某些實施例內，Th1型細胞介素之水準將增加至相比於Th2型細胞介素之水準更大的程度。此等細胞介素之水準可易於使用標準分析評估。因此，各種實施例係關於使用與複製缺陷型病毒載體治療同時供應之細胞介素，例如IFN-γ、TNFα、IL-2、IL-8、IL-12、IL-18、IL-7、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-9、IL-10、IL-13及/或IL-15升高針對靶抗原，例如PSA、PSMA、MUC1、Brachyury、CEA或其組合之免疫反應的療法。在一些實施例中，細胞介素或編碼細胞介素之核酸係與本文所述之複製缺陷型病毒一起投與。在一些實施例中，細胞介素投與係在病毒載體投與之前或之後進行。在一些實施例中，能夠升高針對靶抗原，例如PSA、PSMA、MUC1、Brachyury、CEA或其組合之免疫反應的複製缺陷型病毒載體進一步包含編碼細胞介素之序列。 引發主要為Th1型反應之某些說明性佐劑包括例如單磷醯基脂質A，諸如3-去-O-醯化單磷醯基脂質A與鋁鹽之組合。MPL®佐劑為可商購的(參見例如美國專利第4,436,727號；第4,877,611號；第4,866,034號；及第4,912,094號)。含CpG之寡核苷酸(其中CpG二核苷酸未甲基化)亦誘發主要的Th1反應。(參見例如WO 96/02555、WO 99/33488及美國專利第6,008,200號及第5,856,462號)。亦可使用免疫刺激性DNA序列。 用於一些實施例之另一佐劑包含皂素，諸如植物皂甙，或其衍生物，包括QS21及QS7 (Aquila Biopharmaceuticals Inc.)、七葉素；毛地黃皂苷；或滿天星(Gypsophila)或藜麥(Chenopodium quinoa)皂素。其他調配物可在佐劑組合中包括超過一種皂素，例如包含QS21、QS7、植物皂甙、β-七葉素或毛地黃皂苷之以下群組中之至少兩者的組合。 在一些實施例中，組合物可藉由鼻內噴霧劑、吸入劑及/或其他氣霧劑傳遞媒劑傳遞。可採用使用鼻內微粒樹脂及溶血磷脂醯基-甘油化合物之藥物的傳遞(參見例如美國專利第5,725,871號)。同樣，可採用呈聚四氟乙烯支持矩陣形式之說明性經黏膜藥物傳遞(參見例如美國專利第5,780,045號)。 脂質體、奈米囊劑、微米粒子、脂質粒子、囊泡及其類似物可用於將如本文所述之組合物引入至適合之熱細胞/有機體中。如本文所述之組合物可調配用於傳遞，其囊封於脂質粒子、脂質體、囊泡、奈米球或奈米粒子或其類似物中。或者，如本文所述之組合物可共價或非共價結合至此類載劑媒劑之表面。脂質體可有效地用於將基因、各種藥物、放射冶療劑、酶、病毒、轉錄因子、異位效應子及其類似物引入至多種培養細胞株及動物中。此外，使用脂質體似乎不與全身傳遞之後的自體免疫反應或不可接受的毒性相關。在一些實施例中，脂質體由磷脂形成，磷脂分散在水性介質中且自發形成多層同心雙層囊泡(亦即多層囊泡(MLV))。 在一些實施例中，提供如本文所述之組合物或載體的醫藥學上可接受之奈米囊劑調配物。奈米囊劑一般可以穩定及可再現方式捕獲醫藥組合物。為避免由細胞內聚合物過載所致之副作用，此類超細粒子(尺寸為約0.1 µm)可使用能夠在活體內降解之聚合物設計。 在某些態樣中，包含IL-15之醫藥組合物可與一或多種本文提供之療法，特定言之一或多種包含編碼一或多種腫瘤抗原，諸如PSA、PSMA、MUC1、Brachyury、CEA或其組合之核酸序列的腺病毒載體組合向有需要之個體投與。 介白素15 (IL-15)為與IL-2具有結構相似性之細胞介素。如同IL-2，IL-15結合至由IL-2/IL-15受體β鏈(CD122)及公共γ鏈(γ-C，CD132)組成之複合物且經由其傳導信號。IL-15在經一或多種病毒感染之後藉由單核吞噬細胞(及一些其他細胞)分泌。此細胞介素誘發自然殺手細胞之細胞增殖；自然殺手細胞為主要作用為殺死病毒感染細胞之先天免疫系統的細胞。 IL-15可增強臨床前模型中之CD8+ T細胞的抗腫瘤免疫性。已開始用於評估IL-15於患有轉移性黑素瘤及腎細胞癌(腎癌)之患者中之安全性、投配及抗腫瘤功效之I期臨床試驗以在美國國家衛生研究院(National Institutes of Health)登記患者。 本文揭示之IL-15亦可包括經修飾以維持其天然形式之功能之IL-15的突變體。 IL-15為由小鼠之染色體4之34 kb區4q31及染色體8之中心區編碼之14-15 kDa醣蛋白。人類IL-15基因包含9個外顯子(1-8及4A)及8個內含子，其中之四個(外顯子5至8)編碼成熟蛋白。已報導編碼相同蛋白質之此基因之兩個選擇性剪接轉錄變異體。具有48個胺基酸之長信號肽(IL-15 LSP)的最初鑑別之同功異型物由316 bp 5'-非轉譯區(UTR)、486 bp編碼序列及C端400 bp 3'-UTR區組成。另一同功異型物(IL-15 SSP)具有由外顯子4A及5編碼之21個胺基酸的短信號肽。兩種同功異型物共用N端之信號序列之間的11個胺基酸。儘管兩種同功異型物產生相同成熟蛋白，其不同之處在於其細胞遷移。IL-15 LSP同功異型物鑑別於高基氏體(Golgi apparatus；GC)、早期內體及內質網(ER)中。其以兩種形式存在，尤其在樹突狀細胞上分泌及膜結合。另一方面，IL-15 SSP同功異型物不分泌且其似乎受限於細胞質及細胞核，在其中在調節細胞週期中起重要作用。 已展示IL-15 mRNA之兩種同功異型物係由小鼠中之選擇性剪接產生。具有含有另一3'剪接位點之替代外顯子5的同功異型物展現高轉譯效率，且產物在N端之信號序列中缺乏疏水域。此表明衍生自此同功異型物之蛋白質位於細胞內。可在細胞外釋放具有正常外顯子5之另一同功異型物，其由替代外顯子5之整體剪接產生。 儘管IL-15 mRNA可發現於許多細胞及組織(包括肥大細胞、癌細胞或纖維母細胞)中，此細胞介素主要藉由樹突狀細胞、單核細胞及巨噬細胞以成熟蛋白形式產生。廣泛出現IL-15 mRNA與有限產生蛋白質之間的此差異可藉由起始密碼子上游之人類中之12個及小鼠中之5個的存在解釋，其可抑制IL-15 mRNA之轉譯。轉譯非活性mRNA儲存於細胞內且可受特定信號誘導。可藉由細胞介素，諸如GM-CSF、雙股mRNA、未甲基化CpG寡核苷酸、脂多醣(LPS)，經由Toll樣受體(TLR)、干擾素γ (IFN-γ)或在單核細胞疱疹病毒、結核分支桿菌及白色念珠菌之感染之後刺激IL-15之表現。 XI. 自然殺手(NK)細胞 在某些實施例中，可提供天然或工程改造NK細胞以與如本文所述之基於腺病毒載體之組合物或免疫療法組合向有需要之個體投與。 免疫系統為許多不同家族的免疫細胞，其在保護免於感染及疾病中各自具有其自身的不同作用。在此等免疫細胞中包括自然殺手或NK細胞作為身體之第一道防線。NK細胞具有在不藉由其他支持分子先前曝露或活化的情況下快速搜尋及破壞異常細胞，諸如癌症或病毒感染細胞之天生能力。相比於諸如T細胞之適應性免疫細胞，NK細胞已在1期臨床試驗中用作基於細胞之「現成的」處理，且已對於癌症展示腫瘤殺死能力。1. aNK 細胞 除天然NK細胞以外，可提供用於向不表現殺手抑制受體(KIR)之患者投與之NK細胞，該等患病細胞通常用於逃避NK細胞之殺死功能。此獨特活化NK或aNK細胞不具有此等抑制受體，同時保留寬陣列之活化受體，其使得能夠選擇性靶向及殺死患病細胞。aNK細胞亦攜有較大有效負載之含有顆粒酶及穿孔素之顆粒，進而使其能夠向多個目標傳遞大得多的有效負載之致死性酶。2. taNK 細胞 嵌合抗原受體(CAR)技術在當前正開發之最新癌症治療方法之中。CAR為允許免疫效應細胞靶向顯示比表面積抗原(標靶活化自然殺手)為平台之癌細胞的蛋白質，在該平台中，aNK細胞經一或多種CAR工程改造以靶向發現於癌症中之標靶蛋白質且接著與寬範圍之CAR整合。此策略具有多個優於其他使用患者或供者源性效應細胞，諸如自體T細胞之CAR方法的優點，尤其就可擴充性、品質控制及一致性而言。 許多癌細胞殺死依賴於ADCC (抗體依賴性細胞介導之細胞毒性)，效應免疫細胞因此附接至抗體，其轉而結合至靶癌細胞，進而促進藉由效應細胞之癌症殺死。NK細胞為對於ADCC關鍵之體內效應細胞且利用特殊受體(CD16)來結合抗體。3. haNK 細胞 研究已顯示可能僅20%之人類群體均一地表現CD16 (haNK細胞)之「高親和力」變異體，其與相比於具有「低親和力」CD16之患者更有利的治療結果強烈相關。另外，許多癌症患者由於化學療法、疾病自身或其他因素而具有嚴重減弱的免疫系統。 在某些態樣中，NK細胞經修飾以表現高親和力CD16 (haNK細胞)。因此，haNK細胞可強化廣泛範圍的針對癌細胞之抗體之療效。 XII. 組合療法 包含基於腺病毒載體之接種疫苗之組合物可調配為藥劑且用於治療有需要或診斷患有疾病(例如癌症)之人類或哺乳動物，該接種疫苗包含編碼腫瘤抗原，諸如通篇描述之PSA、PSMA、MUC1、Brachyury、CEA或其組合之核酸序列。此等藥物可與一或多種其他疫苗或連同一或多種常規癌症療法或替代癌症療法、諸如IL-15之細胞介素或編碼此類細胞介素之核酸序列、工程改造自然殺手細胞、或如本文所述之免疫路徑檢查點調節劑一起向人類或哺乳動物共投與。 習知癌症療法包括選自基於化學或輻射之治療及手術中之一或多者。化學療法包括例如順鉑(CDDP)、卡鉑、丙卡巴肼、氮芥、環磷醯胺、喜樹鹼、異環磷醯胺、美法侖、苯丁酸氮芥、白消安、亞硝基脲、更生黴素、道諾黴素、小紅莓、博萊黴素、光輝黴素(plicomycin)、絲裂黴素、依託泊苷(etoposide)(VP16)、他莫昔芬(tamoxifen)、雷諾昔酚(raloxifene)、雌激素受體結合劑、紫杉醇、吉西他濱(gemcitabien)、溫諾平(navelbine)、法呢基蛋白轉移酶抑制劑、反鉑、5-氟尿嘧啶、長春新鹼、長春鹼及甲胺喋呤或前述之任何類似物或衍生變異體。 在一些實施例中，本文所述之任何疫苗(例如Ad5[E1-, E2b-]-HER3)可與低劑量化學療法或低劑量輻射組合。舉例而言，在一些實施例中，任何本文所述之疫苗(例如Ad5[E1-, E2b-]-HER3)可與化學療法組合，使得投與之化學療法的劑量低於臨床照護標準。在一些實施例中，化學療法可為環磷醯胺。環磷醯胺可以低於臨床照護標準劑量之劑量投與。舉例而言，化學療法可在每2週之第1-5及8-12天以50 mg投與，每天兩次(BID)，持續總共8週。在一些實施例中，任何本文所述之疫苗(例如Ad5[E1-, E2b-]-HER3)可與輻射組合，使得投與之輻射劑量低於臨床照護標準。舉例而言，在一些實施例中，8 Gy之同時發生的立體定向體部療法(SBRT)可在第8、22、36、50天給出(每2週一次，持續4個劑量)。輻射可向使用SBRT之所有可行的腫瘤位點投與。 造成DNA損傷且已廣泛使用之放射療法包括通常稱為γ-射線、X射線及/或將放射性同位素定向傳遞至腫瘤細胞之彼等。亦涵蓋其他形式之DNA損傷因素，諸如微波及UV照射。最可能之情形為，所有此等因素對DNA、DNA之前驅物、DNA之複製及修復，及染色體之組裝及維持造成大範圍損害。X射線之劑量範圍在50至200倫琴日劑量持續較長時段(3至4週)到2000至6000倫琴之日劑量範圍內。放射性同位素之劑量範圍變化極大，且取決於同位素之半衰期、發射之輻射的強度及類型，及贅生性細胞之攝取。 當應用於細胞時，術語「接觸」及「暴露」在本文中用於描述治療構築體及化學治療劑或放射線治療劑藉以傳遞至靶細胞或與靶細胞直接並接地安置之過程。為了達成細胞殺死或鬱滯，兩種藥劑以有效殺死細胞或預防其分裂之組合量傳遞至細胞。 大致60%患有癌症的人將經歷一些類型之手術，其包括預防性、診斷或分期、治癒性及姑息性手術。治癒性手術為可與其他療法結合使用之癌症治療，諸如本文所述之治療、化學療法、放射線療法、激素療法、基因療法、免疫療法及/或替代療法。 治癒性手術包括切除，其中癌組織之全部或一部分經物理移除、切除及/或破壞。腫瘤切除係指物理移除腫瘤的至少一部分。除腫瘤切除以外，手術治療包括雷射手術、冷凍手術、電手術顯及微鏡控制手術(莫氏手術(Mohs' surgery))。另外預期本文所述之治療方法可與移除淺表癌、初癌或附帶量之正常組織結合使用。 在切除一部分或所有癌細胞、組織或腫瘤後，可在體內形成空腔。治療可藉由用其他抗癌療法對該區域灌注、直接注射或局部施用而實現。此類治療可例如每1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14天，或每1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20週，或每1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、18、20、22、23或24個月重複一次。此等治療亦可具有改變劑量。 替代癌症療法包括任何除手術、化學療法及放射療法以外之癌症療法，諸如免疫療法、基因療法、激素療法或其組合。使用本發明方法鑑別具有不佳預後之個體可能對單獨的習知治療沒有有利反應，且可指定或投與一或多種替代癌症療法本身或與一或多種習知治療組合。 免疫治療劑通常依賴於使用免疫效應細胞及分子，以靶向及摧毀癌細胞。免疫效應子可例如為對腫瘤細胞表面上之一些標記物具有特異性之抗體。單獨的抗體可充當療法之效應子，或其可募集其他細胞，以實際達成殺死細胞。抗體亦可接合藥物或毒素(化學治療劑、放射性核種、蓖麻毒素A鏈、霍亂毒素、百日咳毒素等)且僅用作靶向劑。或者，效應子可為攜帶直接或間接與腫瘤細胞標靶相互作用之表面分子的淋巴細胞。各種效應細胞包括細胞毒性T細胞及NK細胞。 基因療法為將聚核苷酸(包括DNA或RNA)插入至個體之細胞及組織中以治療疾病。反義療法亦為一種形式之基因療法。治療性聚核苷酸可在第一癌症療法之前、之後或與其同時投與。在一些實施例中提供編碼多種蛋白質之載體的傳遞。舉例而言，外源腫瘤抑制致癌基因之細胞表現將發揮其功能以抑制過度的細胞增殖，諸如p53、p16及C-CAM。 待用於改良治療之療效的其他藥劑包括免疫調節劑、影響細胞表面受體及GAP連接之上調的藥劑、細胞生長抑制劑及分化劑、細胞黏附抑制劑、或增加過度增殖性細胞對細胞凋亡誘導劑之敏感性的藥劑。免疫調節劑包括腫瘤壞死因子；干擾素α、β及γ；IL-2及其他細胞介素；F42K及其他細胞介素類似物；或MIP-1 MIP-1β、MCP-1、RANTES及其他趨化因子。另外預期細胞表面受體或其配位體(諸如Fas/Fas配位體、DR4或DR5/TRAIL)之上調將可藉由對於過度增殖性細胞建立自分泌或旁分泌效應而強化誘導細胞凋亡之能力。藉由升高GAP連接之數目來提高細胞間信號傳導，將可對相鄰過度增殖性細胞群體提高抗過度增殖性效應。在其他實施例中，細胞生長抑制劑或分化劑可與本文所述之醫藥組合物組合使用，以改良治療之抗過度增殖性功效。預期細胞黏附抑制劑可以改良本文所述之醫藥組合物之功效。細胞黏附抑制劑之實例為局部黏著斑激酶(FAK)抑制劑及洛伐他汀(Lovastatin)。另外預期其他可增加過度增殖性細胞對細胞凋亡之敏感性的藥劑，諸如抗體c225，可與本文所述之醫藥組合物組合使用，以改良治療功效。 激素療法亦可與上述之任何其他癌症療法組合使用。使用激素可用於治療某些癌症，諸如乳癌、前列腺癌、卵巢癌或子宮頸癌以降低諸如睾固酮或雌激素之某些激素的位準或阻斷其效應。此治療通常與至少一種其他癌症療法組合用作治療選項或用於降低癌轉移之風險。 如本文所用之「化學治療劑」或「化學治療化合物」及其語法等效物可為適用於治療癌症之化合物。可與所揭示之T細胞組合使用之癌症化學治療劑包括(但不限於)有絲分裂抑制劑(長春花生物鹼)。此等包括長春新鹼、長春鹼、長春地辛及Navelbine™(長春瑞賓，5'-noranhydroblastine)。在其他實施例中，癌症化學治療劑包括拓樸異構酶I抑制劑，諸如喜樹鹼化合物。如本文所用，「喜樹鹼化合物」包括Camptosar™ (鹽酸伊立替康(irinotecan))、Hycamtin™(鹽酸拓朴替康(topotecan))及其他衍生自喜樹鹼之化合物及其類似物。可用於本文揭示之方法及組合物中之另一類癌症化學治療劑為鬼臼毒素衍生物，諸如依託泊苷(etoposide)、替尼泊甙(teniposide)及米托肼(mitopodozide)。 在某些態樣中，本文所述之方法或組合物另外涵蓋使用稱為烷基化劑之癌症化學治療劑，其使腫瘤細胞中之遺傳物質烷基化。此等包括(但不限於)順鉑、環磷醯胺、氮芥、伸丙基噻替派(thiophosphoramide)、卡莫司汀(carmustine)、白消安(busulfan)、苯丁酸氮芥、貝魯司汀(belustine)、尿嘧啶氮芥、chlomaphazin及達卡巴嗪(dacarbazine)。本發明包含抗代謝物作為化學治療劑。此等類型之藥劑之實例包括胞嘧啶阿拉伯糖苷、氟尿嘧啶、甲胺喋呤、巰基嘌呤、硫唑嘌吟及丙卡巴肼(procarbazine)。可用於本文揭示之方法及組合物中之另一類癌症化學治療劑包括抗生素。實例包括(但不限於)小紅莓、博萊黴素、更生黴素、道諾黴素、光神黴素、絲裂黴素、絲裂黴素C及柔紅黴素。存在許多對於此等化合物市售之脂質調配物。在某些態樣中，本文所述之方法或組合物另外包含使用其他癌症化學治療劑，其包括(但不限於)抗腫瘤抗體、達卡巴嗪、氮胞苷、安吖啶、美法侖、異環磷醯胺及米托蒽醌。 本文中所揭示之腺病毒疫苗可與其他抗腫瘤劑，包括細胞毒性劑/抗腫瘤劑及抗血管生成劑組合投與。細胞毒性劑/抗腫瘤劑可定義為攻擊及殺死癌細胞之藥劑。一些細胞毒性劑/抗腫瘤劑可為烷基化劑，其使腫瘤細胞中之遺傳物質烷基化，例如順鉑、環磷醯胺、氮芥、伸丙基噻替派、卡莫司汀、白消安、苯丁酸氮芥、貝魯司汀尿嘧啶氮芥、chlomaphazin及達卡巴嗪。其他細胞毒性劑/抗腫瘤劑可為用於腫瘤細胞之抗代謝物，例如胞嘧啶阿拉伯糖苷、氟尿嘧啶、甲胺喋呤、巰基嘌呤、硫唑嘌吟及丙卡巴肼。其他細胞毒性劑/抗腫瘤劑可為抗生素，例如小紅莓、博萊黴素、更生黴素、道諾黴素、光神黴素、絲裂黴素、絲裂黴素C及柔紅黴素。存在許多對於此等化合物市售之脂質調配物。其他細胞毒性劑/抗腫瘤劑可為有絲分裂抑制劑(長春花生物鹼)。此等包括長春新鹼、長春鹼及依託泊苷。混雜細胞毒性劑/抗腫瘤劑包括紫杉醇及其衍生物、L-天冬醯胺酶、抗腫瘤抗體、達卡巴嗪、氮胞苷、安吖啶、美法侖、VM-26、異環磷醯胺、米托蒽醌及長春地辛。 包含CAR T細胞、T細胞受體工程改造T細胞、B細胞受體工程改造細胞群體之其他調配物可在投與本文所述之醫藥組合物之前或之後結合向個體投與。可在實踐本文所描述之方法時向個體投與治療有效的過繼性轉移細胞群體。大體而言，投與包含約1×10⁴ 個至約1×10¹⁰ 個CAR T細胞、T細胞受體工程改造細胞或B細胞受體工程改造細胞之調配物。在一些情況下，調配物包含約1×10⁵ 個至約1×10⁹ 個工程改造細胞、約5×10⁵ 個至約5×10⁸ 個工程改造細胞或約1×10⁶ 個至約1×10⁷ 個工程改造細胞。然而，向個體投與之工程改造細胞的數目將在寬限度之間變化，其取決於癌症之位置、來源、身分標識、程度及嚴重程度、待治療之個體之年齡及條件等。醫師將最終決定待使用之適當劑量。 亦可使用抗血管生成劑。用於所揭示方法及組合物之適合抗血管生成劑包括抗VEGF抗體(包括人類化及嵌合抗體)、抗VEGF適體及反義寡聚核苷酸。其他血管生成抑制劑包括血管生長抑素、內皮生長抑素、干擾素、介白素1 (包括α及β)介白素12、視黃酸及金屬蛋白酶-1及-2之組織抑制劑(TIMP-1及-2)。亦可使用小分子，包括拓樸異構酶，諸如雷佐生(razoxane)，一種具有抗血管生成活性之拓樸異構酶II抑制劑。 在一些情況下，舉例而言，在治療癌症之組合物、調配物及方法中，投與之組合物或調配物之單位劑量可為5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95或100 mg。在一些情況下，投與之組合物或調配物之總量可為0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、1.5、2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、5.5、6、6.5、7、7.5、8、8.5、9、9.5、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、25、30、40、50、60、70、80、90或100 g。 XIII. 免疫融合搭配物抗原標靶 本文所述之病毒載體或組合物可進一步包含編碼蛋白質或「免疫融合搭配物」之核酸序列，該免疫融合搭配物可增加靶抗原，諸如PSA及/或PSMA之免疫原性，或其中靶抗原為本文揭示之任何靶抗原。就此而言，在藉由含有此類蛋白質之病毒載體免疫之後產生之蛋白質可為包含所關注的靶抗原之融合蛋白，所關注的靶抗原融合至增加所關注的靶抗原之免疫原性之蛋白質。此外，藉由編碼PSA及/或PSMA及免疫融合搭配物之Ad5[E1-, E2b-]載體的組合療法可使得促進免疫反應，使得相比於編碼單獨的PSA及/或PSMA或單獨的免疫融合搭配物的Ad5[E1-, E2b-]載體，兩種治療部分之組合協同地用以促進免疫反應。舉例而言，藉由編碼PSA及/或PSMA及免疫融合搭配物之Ad5[E1-, E2b-]載體之組合療法可導致以下各者之協同增強：抗原特異性效應CD4+及CD8+ T細胞之刺激、針對殺死經感染細胞之NK細胞反應之刺激、針對經由抗體依賴性細胞介導之細胞毒性(ADCC)殺死經感染細胞之嗜中性白細胞或單核細胞反應之刺激、抗體依賴性細胞吞噬(ADCP)機制或其任何組合。此協同促進可極大地改良向有需要之個體投藥之後的生存率結果。在某些實施例中，藉由編碼PSA及/或PSMA及免疫融合搭配物之Ad5[E1-, E2b-]載體之組合療法可導致產生免疫反應包含相比於對照的投與腺病毒載體之個體中之約1.5至20倍或更多倍之靶抗原特異性CTL活性增加。在另一實施例中，產生免疫反應包含相比於對照的投與編碼PSA及/或PSMA及免疫融合搭配物之Ad5[E1-, E2b-]載體之個體中之約1.5至20倍或更多倍之標靶特異性CTL活性增加。在另一實施例中，產生免疫反應包含相比於對照的約1.5至20倍或更多倍之靶抗原特異性細胞介導免疫活性增加，其如藉由量測細胞介素分泌，諸如干擾素-γ (IFN-γ)、介白素-2 (IL-2)、腫瘤壞死因子-α (TNF-α)或其他細胞介素之ELISpot分析所量測。在另一實施例中，產生免疫反應包含相比於適當對照的投與如本文所述之編碼PSA及/或PSMA及免疫融合搭配物之Ad5[E1-, E2b-]載體之個體中1.5與5倍之間的標靶特異性抗體產量增加。在另一實施例中，產生免疫反應包含相比於對照的投與腺病毒載體之個體中之約1.5至20倍或更多倍之標靶特異性抗體產量增加。 作為另一實例，藉由編碼靶抗原決定基抗原及免疫融合搭配物之Ad5[E1-, E2b-]載體之組合療法可導致以下各者之協同增強：抗原特異性效應CD4+及CD8+ T細胞之刺激、針對殺死經感染細胞之NK細胞反應之刺激、針對經由抗體依賴性細胞介導之細胞毒性(ADCC)殺死經感染細胞之嗜中性白細胞或單核細胞反應之刺激、抗體依賴性細胞吞噬(ADCP)機制或其任何組合。此協同促進可極大地改良向有需要之個體投藥之後的生存率結果。在某些實施例中，藉由編碼靶抗原決定基抗原及免疫融合搭配物之Ad5[E1-, E2b-]載體之組合療法可導致產生免疫反應包含相比於對照的投與腺病毒載體之個體中之約1.5至20倍或更多倍之靶抗原特異性CTL活性增加。在另一實施例中，產生免疫反應包含相比於對照的投與編碼靶抗原決定基抗原及免疫融合搭配物之Ad5[E1-, E2b-]載體之個體中之約1.5至20倍或更多倍之標靶特異性CTL活性增加。在另一實施例中，產生免疫反應包含相比於對照的約1.5至20倍或更多倍之靶抗原特異性細胞介導免疫活性增加，其如藉由量測細胞介素分泌，諸如干擾素-γ (IFN-γ)、介白素-2 (IL-2)、腫瘤壞死因子-α (TNF-α)或其他細胞介素之ELISpot分析所量測。在另一實施例中，產生免疫反應包含相比於適當對照的投與如本文所述之腺病毒載體之個體中1.5與5倍之間的標靶特異性抗體產量增加。在另一實施例中，產生免疫反應包含相比於對照的投與腺病毒載體之個體中之約1.5至20倍或更多倍之標靶特異性抗體產量增加。 在一個實施例中，此類免疫融合搭配物衍生自分支桿菌屬，諸如結核分支桿菌(Mycobacterium tuberculosis )衍生之Ra12片段。衍生自分支桿菌屬之免疫融合搭配物可為SEQ ID NO: 43-SEQ ID NO: 51中所闡述之序列中的任一者。Ra12組合物及其用於增強異源聚核苷酸/多肽序列之表現及/或免疫原性之方法描述於以全文引用的方式併入本文中之美國專利第7,009,042號中。簡言之，Ra12係指作為結核分支桿菌MTB32A核酸之子序列的聚核苷酸區。MTB32A為由結核分枝桿菌之毒性及無毒菌株中之基因編碼之32 kDa的絲胺酸蛋白酶。已描述MTB32A之核苷酸序列及胺基酸序列(參見例如美國專利第7,009,042號；Skeiky等人, Infection and Immun. 67:3998-4007 (1999)，其以全文引用的方式併入本文中)。MTB32A編碼序列之C端片段可以高位準表現且在整個純化過程中保持為可溶多肽。此外，Ra12可增強與其融合之異源免疫原性多肽的免疫原性。Ra12融合多肽可包含對應於MTB32A之胺基酸殘基192至323的14 kDa C端片段。其他Ra12聚核苷酸一般可包含至少約15、30、60、100、200、300或更多個編碼Ra12多肽之一部分的核苷酸。Ra12聚核苷酸可包含天然序列(亦即，編碼Ra12多肽或其一部分之內源序列)或可包含此類序列之變異體。Ra12聚核苷酸變異體可含有一或多個取代、添加、缺失及/或插入，使得相對於包含天然Ra12多肽之融合多肽，編碼之融合多肽之生物活性大體上不減弱。變異體可與編碼天然Ra12多肽或其一部分之聚核苷酸序列具有至少約70%、80%或90%或更大之一致性。 在某些態樣中，免疫融合搭配物可衍生自蛋白質D，一種革蘭氏陰性細菌流感嗜血桿菌(Haemophilus influenzae ) B的表面蛋白質。衍生自蛋白質D之免疫融合搭配物可為SEQ ID NO: 52中闡述之序列。在一些情況下，蛋白質D衍生物包含大致該蛋白質的前三分之一(例如前100-110個N端胺基酸)。蛋白質D衍生物可經脂化。在某些實施例內，在N端上包括脂蛋白D融合搭配物的前109個殘基以提供具有其他外源T細胞抗原決定基之多肽，其可增加大腸桿菌中之表現量且可充當表現增強子。脂質尾可確保抗原最佳地呈遞至抗原呈遞細胞。其他融合搭配物可包括來自流感病毒NS1 之非結構蛋白(血球凝集素)。通常，使用81個N端胺基酸，儘管可使用包括T-輔助抗原決定基之不同片段。 在某些態樣中，免疫融合搭配物可為稱為LYTA之蛋白質，或其一部分(特定言之C端部分)。衍生自LYTA之免疫融合搭配物可為SEQ ID NO: 53中闡述之序列。LYTA係衍生自肺炎鏈球菌(Streptococcus pneumoniae )，其合成稱為醯胺酶LYTA之N-乙醯基-L-丙胺酸醯胺酵素(由LytA基因編碼)。LYTA為特定降解肽聚糖主鏈中之某些鍵的自溶血素。LYTA蛋白質之C端域引起對膽鹼或對諸如DEAE之一些膽鹼類似物之親和力。此特性已用於產生適用於表現融合蛋白之大腸桿菌C-LYTA表現質體。可採用在胺基端含有C-LYTA片段之雜交蛋白質的純化。在另一實施例中，LYTA之重複部分可併入至融合多肽中。重複部分可例如發現於起始於殘基178處之C端區中。一個特定重複部分併有殘基188-305。 在一些實施例中，靶抗原融合至免疫融合搭配物，其在本文中亦稱為「免疫原性組分」，包含選自以下群之細胞介素：IFN-γ、TNFα、IL-2、IL-8、IL-12、IL-18、IL-7、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-9、IL-10、IL-13、IL-15、IL-16、IL-17、IL-23、IL-32、M-CSF (CSF-1)、IFN-α、IFN-β、IL-1α、IL-1β、IL-1RA、IL-11、IL-17A、IL-17F、IL-19、IL-20、IL-21、IL-22、IL-24、IL-25、IL-26、IL-27、IL-28A、B、IL-29、IL-30、IL-31、IL-33、IL-34、IL-35、IL-36α、β、λ、IL-36Ra、IL-37、TSLP、LIF、OSM、LT-α、LT-β、CD40配位體、Fas配位體、CD27配位體、CD30配位體、4-1BBL、Trail、OPG-L、APRIL、LIGHT、TWEAK、BAFF、TGF-β1及MIF。靶抗原融合可產生與以下中之一或多者具有大體一致性之蛋白質：IFN-γ、TNFα、IL-2、IL-8、IL-12、IL-18、IL-7、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-9、IL-10、IL-13、IL-15、IL-16、IL-17、IL-23、IL-32、M-CSF (CSF-1)、IFN-α、IFN-β、IL-1α、IL-1β、IL-1RA、IL-11、IL-17A、IL-17F、IL-19、IL-20、IL-21、IL-22、IL-24、IL-25、IL-26、IL-27、IL-28A、B、IL-29、IL-30、IL-31、IL-33、IL-34、IL-35、IL-36α、β、λ、IL-36Ra、IL-37、TSLP、LIF、OSM、LT-α、LT-β、CD40配位體、Fas配位體、CD27配位體、CD30配位體、4-1BBL、Trail、OPG-L、APRIL、LIGHT、TWEAK、BAFF、TGF-β1及MIF。靶抗原融合可編碼一核酸，該核酸編碼與以下中之一或多者具有大體一致性之蛋白質：IFN-γ、TNFα、IL-2、IL-8、IL-12、IL-18、IL-7、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-9、IL-10、IL-13、IL-15、IL-16、IL-17、IL-23、IL-32、M-CSF (CSF-1)、IFN-α、IFN-β、IL-1α、IL-1β、IL-1RA、IL-11、IL-17A、IL-17F、IL-19、IL-20、IL-21、IL-22、IL-24、IL-25、IL-26、IL-27、IL-28A、B、IL-29、IL-30、IL-31、IL-33、IL-34、IL-35、IL-36α、β、λ、IL-36Ra、IL-37、TSLP、LIF、OSM、LT-α、LT-β、CD40配位體、Fas配位體、CD27配位體、CD30配位體、4-1BBL、Trail、OPG-L、APRIL、LIGHT、TWEAK、BAFF、TGF-β1及MIF。在一些實施例中，靶抗原融合進一步包含一或多種免疫融合搭配物，其在本文中亦稱為「免疫原性組分」，包含選自以下群之細胞介素：IFN-γ、TNFα、IL-2、IL-8、IL-12、IL-18、IL-7、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-9、IL-10、IL-13、IL-15、IL-16、IL-17、IL-23、IL-32、M-CSF (CSF-1)、IFN-α、IFN-β、IL-1α、IL-1β、IL-1RA、IL-11、IL-17A、IL-17F、IL-19、IL-20、IL-21、IL-22、IL-24、IL-25、IL-26、IL-27、IL-28A、B、IL-29、IL-30、IL-31、IL-33、IL-34、IL-35、IL-36α、β、λ、IL-36Ra、IL-37、TSLP、LIF、OSM、LT-α、LT-β、CD40配位體、Fas配位體、CD27配位體、CD30配位體、4-1BBL、Trail、OPG-L、APRIL、LIGHT、TWEAK、BAFF、TGF-β1及MIF。IFN-γ之序列可為(但不限於)如SEQ ID NO: 54中所闡述之序列。TNFα之序列可為(但不限於)如SEQ ID NO: 55中所闡述之序列。IL-2之序列可為(但不限於)如SEQ ID NO: 56中所闡述之序列。IL-8之序列可為(但不限於)如SEQ ID NO: 57中所闡述之序列。IL-12之序列可為(但不限於)如SEQ ID NO: 58中所闡述之序列。IL-18之序列可為(但不限於)如SEQ ID NO: 59中所闡述之序列。IL-7之序列可為(但不限於)如SEQ ID NO: 60中所闡述之序列。IL-3之序列可為(但不限於)如SEQ ID NO: 61中所闡述之序列。IL-4之序列可為(但不限於)如SEQ ID NO: 62中所闡述之序列。IL-5之序列可為(但不限於)如SEQ ID NO: 63中所闡述之序列。IL-6之序列可為(但不限於)如SEQ ID NO: 64中所闡述之序列。IL-9之序列可為(但不限於)如SEQ ID NO: 65中所闡述之序列。IL-10之序列可為(但不限於)如SEQ ID NO: 66中所闡述之序列。IL-13之序列可為(但不限於)如SEQ ID NO: 67中所闡述之序列。IL-15之序列可為(但不限於)如SEQ ID NO: 68中所闡述之序列。IL-16之序列可為(但不限於)如SEQ ID NO: 95中所闡述之序列。IL-17之序列可為(但不限於)如SEQ ID NO: 96中所闡述之序列。IL-23之序列可為(但不限於)如SEQ ID NO: 97中所闡述之序列。IL-32之序列可為(但不限於)如SEQ ID NO: 98中所闡述之序列。 在一些實施例中，靶抗原融合或連接至免疫融合搭配物，其在本文中亦稱為「免疫原性組分」，包含選自以下群之細胞介素：IFN-γ、TNFα、IL-2、IL-8、IL-12、IL-18、IL-7、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-9、IL-10、IL-13、IL-15、IL-16、IL-17、IL-23、IL-32、M-CSF (CSF-1)、IFN-α、IFN-β、IL-1α、IL-1β、IL-1RA、IL-11、IL-17A、IL-17F、IL-19、IL-20、IL-21、IL-22、IL-24、IL-25、IL-26、IL-27、IL-28A、B、IL-29、IL-30、IL-31、IL-33、IL-34、IL-35、IL-36α、β、λ、IL-36Ra、IL-37、TSLP、LIF、OSM、LT-α、LT-β、CD40配位體、Fas配位體、CD27配位體、CD30配位體、4-1BBL、Trail、OPG-L、APRIL、LIGHT、TWEAK、BAFF、TGF-β1及MIF。在一些實施例中，靶抗原與免疫融合搭配物共表現於細胞中，該免疫融合搭配物在本文中亦稱為「免疫原性組分」，包含選自以下群之細胞介素：IFN-γ、TNFα、IL-2、IL-8、IL-12、IL-18、IL-7、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-9、IL-10、IL-13、IL-15、IL-16、IL-17、IL-23、IL-32、M-CSF (CSF-1)、IFN-α、IFN-β、IL-1α、IL-1β、IL-1RA、IL-11、IL-17A、IL-17F、IL-19、IL-20、IL-21、IL-22、IL-24、IL-25、IL-26、IL-27、IL-28A、B、IL-29、IL-30、IL-31、IL-33、IL-34、IL-35、IL-36α、β、λ、IL-36Ra、IL-37、TSLP、LIF、OSM、LT-α、LT-β、CD40配位體、Fas配位體、CD27配位體、CD30配位體、4-1BBL、Trail、OPG-L、APRIL、LIGHT、TWEAK、BAFF、TGF-β1及MIF。 在一些實施例中，靶抗原融合或連接至免疫融合搭配物，其包含CpG ODN (非限制性實例序列顯示於SEQ ID NO: 69中)、霍亂毒素(非限制性實例序列顯示於SEQ ID NO: 70中)、衍生自細菌ADP-核糖基化外毒素之截短A亞單位編碼區(非限制性實例序列顯示於SEQ ID NO: 71中)、衍生自細菌ADP-核糖基化外毒素之截短B亞單位編碼區(非限制性實例序列顯示於SEQ ID NO: 72中)、Hp91 (非限制性實例序列顯示於SEQ ID NO: 73中)、CCL20 (非限制性實例序列顯示於SEQ ID NO: 74中)、CCL3 (非限制性實例序列顯示於SEQ ID NO: 75中)、GM-CSF (非限制性實例序列顯示於SEQ ID NO: 76中)、G-CSF (非限制性實例序列顯示於SEQ ID NO: 77中)、LPS肽模擬物(非限制性實例序列顯示於SEQ ID NO: 78-SEQ ID NO: 89中)、志賀毒素(shiga toxin)(非限制性實例序列顯示於SEQ ID NO: 90中)、白喉毒素(非限制性實例序列顯示於SEQ ID NO: 91中)或CRM₁₉₇ (非限制性實例序列顯示於SEQ ID NO: 94中)。 在一些實施例中，靶抗原融合或連接至包含IL-15超促效劑之免疫融合搭配物。介白素15 (IL-15)為在病毒感染之後分泌之天然存在之發炎性細胞介素。分泌之IL-15可藉由經由其效應免疫細胞上之同源受體的信號傳導執行其功能，且因此可導致效應免疫細胞活性之總體增強。 基於IL-15刺激及維持細胞免疫反應之廣泛能力，咸信其為可潛在地治癒某些癌症之有前景的免疫治療藥物。然而，IL-15之臨床發展中之主要限制可包括標準哺乳動物細胞表現系統之低生產產率及短血清半衰期。此外，包含藉由相同細胞而非游離IL-15細胞介素共表現之蛋白質的IL-15:IL-15Rα複合物可引起刺激攜有IL-15 βγc受體之免疫效應細胞。 為了對付此等缺點，鑑別具有增加的結合IL-15Rβγc能力及增強的生物活性之新穎IL-15超促效劑突變體(IL-15N72D)。將小鼠或人類IL-15Rα及Fc融合蛋白(免疫球蛋白之Fc區)添加至相同莫耳濃度之IL-15N72D可提供IL-15生物活性之進一步增加，使得IL-15N72D:IL-15Rα/Fc超促效劑複合物展現支持IL-15依賴性細胞生長之中值有效濃度(EC50)，該中值有效濃度低於游離IL-15細胞介素之中值有效濃度超過10倍。 在一些實施例中，IL-15超促效劑可為新穎IL-15超促效劑突變體(IL-15N72D)。在某些實施例中，將小鼠或人類IL-15Rα及Fc融合蛋白(免疫球蛋白之Fc區)添加至相同莫耳濃度之IL-15N72D可提供IL-15生物活性之進一步增加，使得IL-15N72D:IL-15Rα/Fc超促效劑複合物展現支持IL-15依賴性細胞生長之中值有效濃度(EC50)，該中值有效濃度低於游離IL-15細胞介素之中值有效濃度超過10倍。 因此，在一些實施例中，本發明提供具有支持IL-15依賴性細胞生長之EC50的IL-15N72D:IL-15Rα/Fc超促效劑複合物，該EC50低於游離IL-15細胞介素之EC50超過2倍、超過3倍、超過4倍、超過5倍、超過6倍、超過7倍、超過8倍、超過9倍、超過10倍、超過15倍、超過20倍、超過25倍、超過30倍、超過35倍、超過40倍、超過45倍、超過50倍、超過55倍、超過60倍、超過65倍、超過70倍、超過75倍、超過80倍、超過85倍、超過90倍、超過95倍或超過100倍。 在一些實施例中，IL-15超促效劑為兩個IL-15N72D分子及可溶IL-15Rα/Fc融合蛋白之二聚體的生物學活性蛋白質複合物，亦稱為ALT-803。ALT-803之組成及產生及使用ALT-803之方法描述於以引用的方式併入本文中之美國專利申請公開案2015/0374790中。已知在N端含有所謂的「壽司(sushi)」域(Su)之可溶IL-15Rα片段可攜有大部分造成高親和力細胞介素結合之結構元件。可溶融合蛋白可藉由連接人類IL-15RαSu域(成熟人類IL-15Rα蛋白質之胺基酸1-65)與含有Fc域(232個胺基酸)之人類IgG1 CH2-CH3區產生。此IL-15RαSu/IgG1 Fc融合蛋白可具有經由IgG1域之二硫鍵合形成二聚體及易於使用標準蛋白A親和性層析法純化之優點。 在一些實施例中，ALT-803可具有可溶複合物，其由與對於二聚IL-15Rα壽司域/人類IgG1 Fc融合蛋白之高親和力相關之人類IL-15變異體之2個蛋白質亞單位組成。IL-15變異體為包含成熟人類IL-15細胞介素序列之114個胺基酸之多肽，該序列在螺旋C N72D之位置72處具有Asn取代為Asp之取代)。人類IL-15R壽司域/人類IgG1 Fc融合蛋白包含與含有Fc域(232個胺基酸)之人類IgG1 CH2-CH3區連接之IL-15R亞單位(成熟人類IL-15Rα蛋白質之胺基酸1-65)之壽司域。除N72D取代以外，所有蛋白質序列為人類。基於亞單位之胺基酸序列，包含兩個IL-15N72D多肽(例示性IL-15N72D序列顯示於SEQ ID NO: 92中)及二硫鍵鍵聯之均二聚IL-l5RαSu/IgG1 Fc蛋白質(例示性IL-15RαSu/Fc域顯示於SEQ ID NO: 93中)之複合物的計算分子量為92.4 kDa。在一些實施例中，編碼靶抗原及ALT-803之重組載體可具有任何本文所述之序列以編碼靶抗原且可具有按任何次序之SEQ ID NO: 92、SEQ ID NO: 92、SEQ ID NO: 93及SEQ ID NO: 93以編碼ALT-803。 各IL-15N720多肽具有大致12.8 kDa之計算分子量且IL-15RαSu/IgG 1 Fc融合蛋白具有大致33.4 kDa之計算分子量。IL-15N72D及IL-15RαSu/IgG 1 Fc蛋白質均可經糖基化，使得藉由尺寸排阻層析法之ALT-803的表觀分子量為大致114 kDa。對於ALT-803測定之等電點(pI)可在大致5.6至6.5範圍內變化。因此，融合蛋白可在pH 7處帶負電。 藉由編碼PSA及/或PSMA及ALT-803之Ad5[E1-, E2b-]載體之組合療法可導致促進免疫反應，使得兩種治療部分之組合比單獨的任一療法協同地用以促進免疫反應。舉例而言，藉由編碼PSA及/或PSMA及ALT-803之Ad5[E1-, E2b-]載體之組合療法可導致以下各者之協同增強：抗原特異性效應CD4+及CD8+ T細胞之刺激、針對殺死經感染細胞之NK細胞反應之刺激、針對經由抗體依賴性細胞介導之細胞毒性(ADCC)殺死經感染細胞之嗜中性白細胞或單核細胞反應之刺激或抗體依賴性細胞吞噬(ADCP)機制。藉由編碼PSA及/或PSMA及ALT-803之Ad5[E1-, E2b-]載體之組合療法可協同地促進以上反應中之任一者，或以上反應之組合，以極大地改良向有需要之個體投藥之後的生存率結果。 本文所述之免疫原性增強劑中之任一者可藉由使用任何本文所述之重組載體在相同重組載體中表現免疫原性增強劑及靶抗原而融合或連接至靶抗原。 編碼此類免疫原性增強劑之核酸序列可為SEQ ID NO: 43-SEQ ID NO: 98中之任一者且概述於表 1 中。表 1 ：免疫原性增強劑之序列 在一些實施例中，靶抗原及免疫融合搭配物之核酸序列不藉由任何核酸分離。在其他實施例中，編碼連接子之核酸序列可插入於編碼任何本文所述之靶抗原之核酸序列與編碼任何本文所述之免疫融合搭配物之核酸序列之間。因此，在某些實施例中，在藉由含有靶抗原、連接子及免疫融合搭配物之病毒載體免疫之後產生的蛋白質可為融合蛋白，其包含所關注的靶抗原，接著為連接子且以免疫融合搭配物結束，因此經由連接子將靶抗原連接至增加所關注的靶抗原之免疫原性的免疫融合搭配物。在一些實施例中，連接子核酸之序列的長度可為約1至約150個核酸、約5至約100個核酸或約10至約50個核酸。在一些實施例中，核酸序列可編碼一或多種胺基酸殘基。在一些實施例中，連接子之胺基酸序列的長度可為約1至約50、或約5至約25個胺基酸殘基。在一些實施例中，連接子之序列包含小於10個胺基酸。在一些實施例中，連接子可為聚丙胺酸連接子、聚甘胺酸連接子、或具有丙胺酸及甘胺酸兩者之連接子。 編碼此類連接子之核酸序列可為SEQ ID NO: 99-SEQ ID NO: 113中之任一者且概述於表 2 中。表 2 ：連接子之序列 XIV. 共同刺激分子 除使用含有諸如PSA、PSMA、MUC1、Brachyury、CEA或其組合之靶抗原的基於腺病毒之重組載體疫苗以外，共同刺激分子可併入該疫苗中以提高免疫原性。免疫反應之起始需要至少兩個用於藉由APC活化初始T細胞之信號(Damle等人 J Immunol 148:1985-92 (1992)；Guinan等人 Blood 84:3261-82 (1994)；Hellstrom等人 Cancer Chemother Pharmacol 38:S40-44 (1996)；Hodge等人 Cancer Res 39:5800-07 (1999))。抗原特異性第一信號係經由肽/主要組織相容性複合體(MHC)經T細胞受體(TCR)傳遞且使得T細胞進入細胞週期。可傳遞第二或共同刺激信號以用於細胞介素產生及增殖。 至少三種通常發現於專業抗原呈遞細胞(APC)之表面上的不同分子已報導為能夠提供對於T細胞活化至關重要的第二信號：B7-1 (CD80)、ICAM-1 (CD54)及LFA-3 (人類CD58)(Damle等人 J Immunol 148:1985-92 (1992)；Guinan等人 Blood 84: 3261-82 (1994)；Wingren等人 Crit Rev Immunol 15: 235-53 (1995)；Parra等人 Scand. J Immunol 38: 508-14 (1993)；Hellstrom等人 Ann NY Acad Sci 690: 225-30 (1993)；Parra等人 J Immunol 158: 637-42 (1997)；Sperling等人 J Immunol 157: 3909 -17 (1996)；Dubey等人 J Immunol 155: 45-57 (1995)；Cavallo等人 Eur J Immunol 25: 1154 -62 (1995))。 此等共同刺激分子具有不同T細胞配位體。B7-1與CD28及CTLA-4分子相互作用，ICAM-1與CD11a/CD18 (LFA-1β2整合素)複合物相互作用，及LFA-3與CD2 (LFA-2)分子相互作用。因此，在一個較佳實施例中，將需要具有分別含有B7-1、ICAM-1及LFA-3之重組腺病毒載體，其在與含有一或多種編碼靶抗原(諸如PSA、MUC1、Brachyury、CEA或其組合)之核酸的基於腺病毒之重組載體疫苗組合時，將進一步增加/增強針對特定靶抗原之抗腫瘤免疫反應。 XV. 免疫路徑檢查點調節劑 在某些實施例中，免疫路徑檢查點抑制劑，即免疫檢查點抑制劑，與包含本文揭示之腺病毒載體之組合物組合。在某些實施例中，患者接受免疫路徑檢查點抑制劑連合本文所述之疫苗或醫藥組合物。在其他實施例中，組合物與一或多種免疫路徑檢查點調節劑一起投與。活化與抑制信號之間的平衡調節T淋巴細胞與疾病細胞之間的相互作用，其中T細胞反應係經由T細胞受體(TCR)之抗原識別起始。抑制路徑及信號係稱為免疫路徑檢查點。在正常環境中，免疫路徑檢查點在控制及預防自體免疫性中起重要作用且亦保護組織免於病原感染反應之損害。 某些實施例提供組合免疫療法，其包含用於調節免疫路徑檢查點抑制路徑以預防及/或治療癌症及傳染病的基於病毒載體之疫苗及組合物。在一些實施例中，調節為增加基因或蛋白質之表現或活性。在一些實施例中，調節為減少基因或蛋白質之表現或活性。在一些實施例中，調節影響基因或蛋白質家族。 大體而言，免疫抑制路徑係藉由配位體-受體相互作用起始。現在明白在疾病中，疾病可收編(co-opt)免疫檢查點路徑作為誘發個體之免疫抗性的機制。 在個體中由特定疾病誘發之免疫抗性或免疫抑制路徑可藉由已知調節免疫抑制路徑中之一或多者的分子組合物，諸如siRNAs、反義鏈、小分子、模擬物、重組形式之配位體、受體或蛋白質或抗體(其可為Ig融合蛋白)阻斷。舉例而言，以免疫檢查點蛋白質(諸如細胞毒性T-淋巴細胞相關抗原4 (CTLA4)及程式性細胞死亡蛋白1 (PD1))之阻斷劑之初步臨床發現已顯示增強抗腫瘤免疫性之前景。 由於患病細胞可表現多種抑制配位體，且疾病浸潤淋巴細胞表現多種抑制性受體，免疫路徑檢查點蛋白質之雙重或三重阻斷可增強抗疾病免疫性。如本文提供之組合免疫療法可包含一或多種組合物，其包含靶向以下免疫檢查點蛋白質中之一或多者的免疫路徑檢查點調節劑：PD1、PDL1、PDL2、CD28、CD80、CD86、CTLA4、B7RP1、ICOS、B7RPI、B7-H3 (亦稱為CD276)、B7-H4 (亦稱為B7-S1、B7x及VCTN1)、BTLA (亦稱為CD272)、HVEM、KIR、TCR、LAG3 (亦稱為CD223)、CD137、CD137L、OX40、OX40L、CD27、CD70、CD40、CD40L、TIM3 (亦稱為HAVcr2)、GAL9、A2aR及腺苷。 在一些實施例中，分子組合物包含siRNA。在一些實施例中，分子組合物包含小分子。在一些實施例中，分子組合物包含重組形式的配位體。在一些實施例中，分子組合物包含重組形式之受體。在一些實施例中，分子組合物包含抗體。在一些實施例中，組合療法包含超過一種分子組合物及/或超過一種類型之分子組合物。如熟習此項技術者應瞭解，亦預想本發明涵蓋免疫檢查點抑制路徑之未來發現的蛋白質。 在一些實施例中，組合免疫療法包含用於調節CTLA4之分子組合物。在一些實施例中，組合免疫療法包含用於調節PD1之分子組合物。在一些實施例中，組合免疫療法包含用於調節PDL1之分子組合物。在一些實施例中，組合免疫療法包含用於調節LAG3之分子組合物。在一些實施例中，組合免疫療法包含用於調節B7-H3之分子組合物。在一些實施例中，組合免疫療法包含用於調節B7-H4之分子組合物。在一些實施例中，組合免疫療法包含用於調節TIM3之分子組合物。在一些實施例中，調節為表現之增加或增強。在其他實施例中，調節為表現不存在之減少。 兩種非限制性例示性免疫路徑檢查點抑制劑包括細胞毒性T淋巴細胞相關抗原-4 (CTLA-4)及程式性細胞死亡蛋白-1 (PD1)。CTLA-4可僅僅表現於T細胞上，其在T細胞中調節T細胞活化之早期階段。CTLA-4與共同刺激T細胞受體CD28相互作用，其可導致抑制T細胞活性之信號傳導。一旦TCR抗原識別發生，CD28信號傳導可增強TCR信號傳導，在一些情況下產生經活化T細胞且CTLA-4抑制CD28之信號傳導活性。本發明提供如本文所提供之免疫療法，其與抗CTLA-4單株抗體組合用於預防及/或治療癌症及傳染病。本發明提供如本文所提供之疫苗或免疫療法，其與CTLA-4分子組合物組合用於預防及/或治療癌症及傳染病。 漸進式死亡細胞蛋白質配位體-1 (PDL1)為B7家族之成員且分佈於各種組織及細胞類型中。PDL1可與PD1相互作用，因而抑制T細胞活化及CTL介導之溶胞。已在各種人類腫瘤上展示PDL1之顯著表現且PDL1表現為腫瘤逃避宿主抗腫瘤免疫反應之關鍵機制中的一者。漸進式死亡配位體1 (PDL1)及程式性細胞死亡蛋白-1 (PD1)作為免疫路徑檢查點相互作用。此相互作用可為導致抗腫瘤免疫反應及後續腫瘤演進之鈍化的主要耐性機制。PD1存在於活化T細胞上且PD1之初級配位體PDL1通常表現於腫瘤細胞及抗原呈遞細胞(APC)以及其他細胞，包括B細胞上。已在包括HPV相關頭頸癌之各種人類腫瘤上展示PDL1之顯著表現。PDL1與T細胞上之PD1相互作用，抑制T細胞活化及細胞毒性T淋巴細胞(CTL)介導之溶胞。本發明提供如本文所提供之免疫療法，其與抗PD1或抗PDL1單株抗體組合用於預防及/或治療癌症及傳染病。 某些實施例可提供如本文所提供之免疫療法，其與PD1或抗PDL1分子組合物組合用於預防及/或治療癌症及傳染病。某些實施例可提供如本文所提供之免疫療法，其與抗CTLA-4及抗PD1單株抗體組合用於預防及/或治療癌症及傳染病。某些實施例可提供如本文所提供之免疫療法，其與抗CTLA-4及PDL1單株抗體組合。某些實施例可提供如本文所提供之疫苗或免疫療法，其與抗CTLA-4、抗PD1、抗PDL1單株抗體或其組合組合用於治療癌症及傳染病。 免疫路徑檢查點分子可藉由T細胞表現。免疫路徑檢查點分子可有效地充當「刹車」以下調或抑制免疫反應。免疫路徑檢查點分子包括(但不限於)漸進式死亡1 (PD1或PD-1，亦稱為PDCD1或CD279，寄存編號：NM_005018)、細胞毒性T-淋巴細胞抗原4 (CTLA-4，亦稱為CD152，GenBank寄存編號AF414120.1)、LAG3 (亦稱為CD223，寄存編號：NM_002286.5)、Tim3 (亦稱為A型肝炎病毒細胞受體2 (HAVCR2)，GenBank寄存編號：JX049979.1)、B及T淋巴細胞相關(BTLA) (亦稱為CD272，寄存編號：NM_181780.3)、BY55 (亦稱為CD160，GenBank寄存編號：CR541888.1)、TIGIT (亦稱為IVSTM3，寄存編號：NM_173799)、LAIR1 (亦稱為CD305，GenBank寄存編號：CR542051.1)、SIGLECIO (GenBank寄存編號：AY358337.1)、自然殺手細胞受體2B4 (亦稱為CD244，寄存編號：NM_001166664.1)、PPP2CA、PPP2CB、PTPN6、PTPN22、CD96、CRTAM、SIGLEC7、SIGLEC9、TNFRSF10B、TNFRSF10A、CASP8、CASP10、CASP3、CASP6、CASP7、FADD、FAS、TGFBRII、TGFRBRI、SMAD2、SMAD3、SMAD4、SMAD10、SKI、SKIL、TGIFl、ILIORA、IL10RB、HMOX2、IL6R、IL6ST、EIF2AK4、CSK、PAG1、SIT1、FOXP3、PRDM1、BATF、GUCY1A2、GUCY1A3、GUCY1B2、GUCY1B3，其直接抑制免疫細胞。舉例而言，PD1可與基於腺病毒載體之組合物組合以治療有需要之患者。 可靶向之其他免疫路徑檢查點可為腺苷A2A受體 (ADORA)、CD276、含有V-set域之T細胞活化抑制劑1(VTCN1)、吲哚胺2,3-二加氧酶1 (IDO1)、殺手細胞免疫球蛋白樣受體三域長胞質尾區1 (KIR3DL1)、T細胞活化之V域免疫球蛋白抑制劑(VISTA)、含細胞介素誘導性SH2之蛋白(CISH)、次黃嘌呤磷酸核糖轉移酶1 (HPRT)、腺相關病毒整合位點1 (AAVS1)或趨化因子(C-C基元)受體5(基因/假基因)(CCR5)或其任何組合。表 3 在不窮舉之情況下顯示可經不活化以提高如本文所述之基於腺病毒載體之組合物之效率的例示性免疫路徑檢查點基因。免疫路徑檢查點基因可選自表 3 中所列之此類基因及與以下各者相關之其他基因：共抑制受體功能、細胞死亡、細胞介素信號傳導、精胺酸色胺酸不足、TCR信號傳導、誘導性T-reg抑制、控制衰竭或惰能之轉錄因子及低氧症介導之耐受性。表 3 - 例示性免疫路徑檢查點基因 基於腺病毒之組合物及免疫路徑檢查點調節劑之組合可導致相比於任一單獨藥劑，經治療患者之疾病之感染、演進或症狀的減輕。在另一實施例中，基於腺病毒之組合物及免疫路徑檢查點調節劑之組合可導致相比於任一單獨藥劑改良之經治療患者之總生存率。在一些情況下，基於腺病毒之組合物及免疫路徑檢查點調節劑之組合可相比於任一單獨藥劑增加經治療患者中之疾病特異性T細胞反應之頻率強度。 某些實施例亦可提供免疫路徑檢查點抑制以改良基於腺病毒載體之組合物之效能之用途。某些免疫路徑檢查點抑制劑可在基於腺病毒載體之組合物時投與。某些免疫路徑檢查點抑制劑亦可在投與基於腺病毒載體之組合物之後投與。免疫路徑檢查點抑制可與腺病毒疫苗投與同時進行。免疫路徑檢查點抑制可在疫苗接種之後1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、30、40、50或60分鐘發生。免疫路徑檢查點抑制亦可在投與基於腺病毒載體之組合物之後1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23或24小時進行。在一些情況下，免疫抑制可在疫苗接種之後1、2、3、4、5、6或7天發生。免疫路徑檢查點抑制可在投與基於腺病毒載體之組合物之前或之後的任何時間發生。 在另一態樣中，提供涉及包含一或多種編碼抗原之核酸及免疫路徑檢查點調節劑之疫苗的方法。舉例而言，提供一種治療個體之方法，該個體患有將受益於個體之細胞上之免疫路徑檢查點蛋白質，例如PD1或PDL1及其天然結合搭配物之下調的病況。 免疫路徑檢查點調節劑可與包含一或多種編碼任何抗原之核酸的基於腺病毒載體之組合物組合。舉例而言，抗原可為腫瘤抗原，諸如PSA、PSMA、MUC1、Brachyury、CEA或其組合，或任何本文所述之抗原。 免疫路徑檢查點調節劑可在與諸如疫苗之基於腺病毒載體之組合物組合時產生協同效應。免疫路徑檢查點調節劑亦可在與基於腺病毒載體之組合物組合時產生有益效應。 XVI. 癌症 特定預期包含本文所述之腺病毒載體之組合物可用於評估或治療各種階段之疾病，諸如在增生、發育不良、贅瘤形成、初癌與癌症之間，或在原發腫瘤與轉移腫瘤之間。 如本文所用，術語「贅生性細胞」及「贅瘤形成」可互換使用且係指展現相對自發生長，以使其展現特徵在於細胞增殖之顯著失去控制的異常生長表現型。贅生性細胞可為惡性或良性的。在特定態樣中，贅瘤形成包括發育不良及癌症兩者。贅瘤可為良性、癌前(原位癌瘤或發育不良)或惡性(癌症)。贅生性細胞可形成或可不形成腫塊(亦即腫瘤)。 術語「發育不良」可在細胞異常受限於發端組織時使用，如在早期原位贅瘤之情況下。發育不良可指示早期贅生性過程。術語「癌症」可指惡性贅瘤，包括涉及不受調控之細胞生長之各種疾病的廣泛群組。 癌轉移或轉移性疾病可指癌症自一個器官或部分向另一非鄰接器官或部分之擴散。因此產生之新出現的疾病可稱為癌轉移。 可藉由所揭示方法及組合物評估或治療之癌症包括特定來自胰臟之癌細胞，包括胰管腺癌(PDAC)，但亦可包括來自膀胱、血液、骨骼、骨髓、大腦、乳房、結腸、食道、胃腸、牙齦、頭部、腎、肝臟、肺、鼻咽、頸部、卵巢、前列腺、皮膚、胃、睾丸、舌頭或子宮之細胞及癌細胞。另外，癌症可特定具有以下組織學類型，儘管其不限於此等：贅瘤，惡性；癌瘤；癌，未分化；巨細胞及梭狀細胞癌；小細胞癌；乳頭狀癌；鱗狀細胞癌；淋巴上皮癌；基底細胞癌；毛母質癌；轉移細胞癌；乳頭狀轉移細胞癌；腺癌；胃泌素瘤，惡性；膽管癌；肝細胞癌；組合肝細胞癌及膽管癌；小樑腺癌；腺樣囊性癌症；腺瘤息肉中之腺癌；腺癌，家族性結腸息肉；實體癌；類癌，惡性；細支氣管肺泡腺癌；乳頭狀腺癌；嫌色細胞癌；嗜酸細胞癌；嗜酸性腺癌；嗜鹼細胞癌；透明細胞腺癌；顆粒細胞癌；濾泡狀腺癌；乳頭狀及濾泡狀腺癌；無包膜硬化性癌；腎上腺皮質癌；子宮內膜樣癌(endometroid carcinoma )；皮膚附屬器癌；大汗腺腺癌；皮脂腺癌；耵聹腺腺癌；黏液表皮樣癌；嚢腺癌；乳頭狀嚢腺癌；乳頭狀漿液性嚢腺癌；黏液性嚢腺癌；黏液性腺癌；印戒細胞癌；浸潤性導管癌；髓樣癌；小葉癌；炎性癌；佩吉特氏病(paget's disease)，乳腺；腺泡細胞癌；腺鱗癌；腺癌w/鱗狀化生；胸腺瘤，惡性；卵巢間質腫瘤，惡性；泡膜細胞瘤，惡性；粒層細胞瘤，惡性；睾丸母細胞瘤，惡性；塞特利氏細胞癌(sertoli cell carcinoma)；萊迪希細胞瘤(leydig cell tumor)，惡性；脂質細胞瘤，惡性；副神經節瘤，惡性；乳房外副神經節瘤，惡性；嗜鉻細胞瘤；血管球肉瘤；惡性黑素瘤；無黑色素性黑素瘤；淺表擴展性黑素 瘤；巨大色素痣內惡性黑素瘤；上皮樣細胞黑素瘤；藍痣，惡性；肉瘤；纖維肉瘤；纖維組織細胞瘤，惡性；黏液肉瘤；脂肉瘤；平滑肌肉瘤；橫紋肌肉瘤；胚胎性橫紋肌肉瘤；小泡型橫紋肌肉瘤；間質肉瘤；混合瘤，惡性；苗勒管混合瘤；腎胚細胞瘤；肝母細胞瘤；癌肉瘤；間葉瘤，惡性；布倫納氏瘤(brenner tumor)，惡性；葉狀腫瘤，惡性；滑膜肉瘤；間皮瘤，惡性；無性細胞瘤；胚胎性癌；畸胎瘤，惡性；卵巢甲狀腺腫，惡性；絨毛膜癌；中腎瘤，惡性；血管肉瘤；血管內皮瘤，惡性；卡波西肉瘤；血管外皮瘤，惡性；淋巴管肉瘤；骨肉瘤；皮質旁骨肉瘤；軟骨肉瘤；軟骨母細胞瘤，惡性；間質軟骨肉瘤；骨巨細胞瘤；尤文氏肉瘤(ewing's sarcoma)；牙源性腫瘤，惡性；成釉細胞牙肉瘤；成釉細胞瘤，惡性；成釉細胞纖維肉瘤；松果體瘤，惡性；脊索瘤；神經膠質瘤， 惡性；室管膜瘤；星形細胞瘤；原漿性星形細胞瘤；纖維性星形細胞瘤；星形母細胞瘤；神經膠母細胞瘤；少突神經膠質瘤；成少突神經膠質細胞瘤；原發性神經外胚層；小腦肉瘤；成神經節細胞瘤；神經母細胞瘤；視網膜母細胞瘤；嗅神經源性腫瘤；腦脊膜瘤，惡性；神經纖維肉瘤；神經鞘瘤，惡性；顆粒細胞瘤，惡性；惡性淋巴瘤；霍奇金氏病(Hodgkin's disease)；霍奇金氏淋巴瘤；類肉芽腫；惡性淋巴瘤，小淋巴細胞性；惡性淋巴瘤，大細胞，彌散性；惡性淋巴瘤，濾泡性；蕈樣黴菌病；其他指定的非霍奇金氏淋巴瘤；惡性組織細胞增多病；多發性骨髓瘤；肥大細胞肉瘤；免疫增殖性小腸疾病；白血病；淋巴性白血病；漿細胞白血病；紅白血病；淋巴肉瘤細胞性白血病；骨髓白血病；嗜鹼細胞性白血病；嗜伊紅血球性白血病；單核細胞性白血病；肥大細胞白血病；巨核母細胞白血病；髓樣肉瘤；及毛細胞性白血病。 XVII. 治療方法 本文所述之腺病毒載體可用於多種疫苗設定以產生針對一或多種如本文所述之靶抗原的免疫反應。在一些實施例中，提供產生針對任何靶抗原，諸如PSA、PSMA、MUC1、Brachyury、CEA或其組合之免疫反應的方法。 腺病毒載體尤其重要，因為出人意料地發現其可用於在對Ad具有預先存在的免疫性之個體中產生免疫反應且可用於包括多輪使用腺病毒載體之免疫的疫苗接種方案，其為使用前一代腺病毒載體不可能的方案。 一般而言，產生免疫反應包含誘發體液反應及/或細胞介導反應。可能需要增加針對所關注的靶抗原之免疫反應。 產生免疫反應可涉及免疫系統之某些細胞之活性及/或數目的減小或某些細胞介素或其他效應分子之水準及/或活性之減小。用於偵測免疫反應中之改變(例如細胞數目、細胞介素表現、細胞活性)之多種方法為可用的且適用於一些態樣。適用於此情形之說明性方法包括細胞內細胞介素染色(ICS)、ELISpot、增殖分析、細胞毒性T細胞分析(包括鉻釋放或等效分析)，及使用任何數目的聚合酶鏈反應(PCR)之基因表現分析或基於RT-PCR之分析。 產生免疫反應可包含相比於對照，投與如本文所述之腺病毒載體之個體中1.5至5倍的靶抗原特異性CTL活性增加。在另一實施例中，產生免疫反應包含相比於對照，投與腺病毒載體之個體中約2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、5.5、6、6.5、7、7.5、8、8.5、9、9.5、10、10.5、11、11.5、12、12.5、15、16、17、18、19、20或更多倍的靶特異性CTL活性增加。 產生免疫反應可包含相比於適當對照，投與包含編碼靶抗原之核酸的如本文所述之腺病毒載體之個體中1.5至5倍的靶抗原特異性HTL活性(諸如輔助T細胞增殖)增加。在另一實施例中，產生免疫反應包含相比於對照，約2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、5.5、6、6.5、7、7.5、8、8.5、9、9.5、10、10.5、11、11.5、12、12.5、15、16、17、18、19、20或更多倍的靶特異性HTL活性增加。在此背景下，HTL活性可包含諸如以下之特定細胞介素之生產中的如上文所述之增加或減少：干擾素-γ (IFN-γ)、介白素-1 (IL-1)、IL-2、IL-3、IL-6、IL-7、IL-12、IL-15、腫瘤壞死因子-α (TNF-α)、粒細胞巨噬細胞群落刺激因子(GM-CSF)、粒細胞群落刺激因子(G-CSF)或其他細胞介素。就此而言，產生免疫反應可包含Th2型反應向Th1型反應之轉換，或在某些實施例中，Th1型反應向Th2型反應之轉換。在其他實施例中，產生免疫反應可包含刺激主要的Th1或Th2型反應。 產生免疫反應可包含相比於適當對照，投與如本文所述之腺病毒載體之個體中1.5與5倍之間的靶特異性抗體產量增加。在另一實施例中，產生免疫反應包含相比於對照，投與腺病毒載體之個體中約2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、5.5、6、6.5、7、7.5、8、8.5、9、9.5、10、10.5、11、11.5、12、12.5、15、16、17、18、19、20或更多倍的靶特異性抗體產量增加。 因此，在某些實施例中，提供產生針對所關注的靶抗原，諸如PSA、PSMA、MUC1、Brachyury、CEA或其組合之免疫反應的方法，其包含向個體投與包含以下之腺病毒載體：a)複製缺陷型腺病毒載體，其中腺病毒載體具有E2b區中之缺失，及b)編碼靶抗原，諸如PSA、PSMA、MUC1、Brachyury、CEA或其組合之核酸；及向個體再投與腺病毒載體至少一次；進而產生針對靶抗原之免疫反應。在某些實施例中，提供投與之載體並非有病毒基因的載體之方法。在特定實施例中，靶抗原可為野生型蛋白質、其片段、變異體或變異體片段。在一些實施例中，靶抗原包含腫瘤抗原，諸如PSA、MUC1、Brachyury、CEA或其組合、其片段、變異體或變異體片段。 在另一實施例中，提供藉由向個體投與包含以下之腺病毒載體而在個體中產生針對靶抗原之免疫反應的方法，其中該個體對Ad具有預先存在之免疫性：a)複製缺陷型腺病毒載體，其中該腺病毒載體具有E2b區中之缺失，及b)編碼靶抗原之核酸；及向該個體再投與腺病毒載體至少一次；進而產生針對靶抗原之免疫反應。在特定實施例中，靶抗原可為野生型蛋白質、其片段、變異體或變異體片段。在一些實施例中，靶抗原包含諸如PSA、PSMA、MUC1、Brachyury、CEA或其組合、其片段、變異體、或變異體片段。 關於預先存在的針對Ad之免疫性，此可使用此項技術中已知之方法，諸如基於抗體之分析測定，以測試Ad抗體之存在。另外，在某些實施例中，如本文所述之方法包括首先測定個體對Ad具有預先存在之免疫性，接著投與如本文所述之E2b缺失腺病毒載體。 一個實施例提供一種在個體中產生針對一或多種靶抗原之免疫反應之方法，其包含向個體投與包含複製缺陷型腺病毒載體之第一腺病毒載體，其中腺病毒載體具有E2b區中之缺失，及編碼至少一種靶抗原之核酸；向個體投與包含複製缺陷型腺病毒載體之第二腺病毒載體，其中該腺病毒載體具有E2b區中之缺失，及編碼至少一種靶抗原之核酸，其中第二腺病毒載體之至少一種靶抗原與第一腺病毒載體之至少一種靶抗原相同或不同。在特定實施例中，靶抗原可為野生型蛋白質、其片段、變異體或變異體片段。在一些實施例中，靶抗原包含腫瘤抗原，諸如PSA、PSMA、MUC1、Brachyury、CEA或其組合、其片段、變異體或變異體片段。 因此，某些實施例涵蓋多個藉由相同E2b缺失之腺病毒載體的免疫或多個藉由不同E2b缺失之腺病毒載體的免疫。在各情況下，腺病毒載體可包含編碼一或多種如本文中他處所描述之靶抗原之核酸序列。在某些實施例中，方法包含藉由編碼一種靶抗原之E2b缺失之腺病毒的多次免疫，及再投與相同腺病毒載體多次，進而誘發針對靶抗原之免疫反應。在一些實施例中，靶抗原包含腫瘤抗原，諸如PSA、PSMA、MUC1、Brachyury、CEA或其組合、其片段、變異體或變異體片段。 在另一實施例中，方法包含藉由編碼一或多種靶抗原之第一腺病毒載體之免疫，且接著投與編碼一或多種靶抗原之第二腺病毒載體，該一或多種靶抗原可與藉由第一腺病毒載體編碼之彼等抗原相同或不同。就此而言，編碼之靶抗原中之一者可不同或所有編碼之抗原可不同，或一些可相同且一些可不同。另外，在某些實施例中，方法包括投與第一腺病毒載體多次及投與第二腺病毒多次。就此而言，方法包含投與第一腺病毒載體1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15或更多次，及投與第二腺病毒載體1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15或更多次。投與順序可包含連續投與第一腺病毒一或多次，接著連續投與第二腺病毒載體一或多次。在某些實施例中，方法包括以各投與一次、各投與兩次、各投與三次等形式交替投與第一及第二腺病毒載體。在某些實施例中，第一及第二腺病毒載體係同時投與。在其他實施例中，第一及第二腺病毒載體係依序投與。在一些實施例中，靶抗原包含腫瘤抗原，諸如PSA、PSMA、MUC1、Brachyury、CEA或其組合、其片段、變異體或變異體片段。 如熟習此項技術者將易於理解，可在如本文所述之方法中使用超過兩種腺病毒載體。可在如本文所述之方法中使用3、4、5、6、7、8、9、10或更多種不同腺病毒載體。在某些實施例中，方法包含每次投與超過一種E2b缺失之腺病毒載體。就此而言，針對多種所關注的靶抗原之免疫反應可由同時投與多種不同腺病毒載體產生，該等腺病毒載體各包含編碼一或多種靶抗原之核酸序列。 腺病毒載體可用於產生針對癌症，諸如癌瘤或肉瘤(例如實體腫瘤、淋巴瘤及白血病)之免疫反應。腺病毒載體可用於產生針對癌症之免疫反應，諸如神經癌、黑素瘤、非霍奇金氏淋巴瘤、霍奇金氏病、白血病、漿細胞瘤、腺瘤、神經膠質瘤、胸腺瘤、乳癌、前列腺癌、結腸直腸癌、腎癌、腎細胞癌、子宮癌、胰臟癌、食道癌、肺癌、卵巢癌、子宮頸癌、睾丸癌、胃癌、多發性骨髓瘤、肝癌、急性淋巴母細胞白血病(ALL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性骨髓性白血病(CML)及慢性淋巴球性白血病(CLL)或其他癌症。 方法亦提供治療或改善如本文所述之傳染病或癌症中之任一者之症狀。治療方法包含向罹患如本文所述之感染性疾病或癌症或處於罹患該感染性疾病或癌症之風險下之個體投與腺病毒載體一或多次。因此，某些實施例提供用於針對處於產生傳染病或癌症之風險下之個體中之此類疾病進行疫苗接種之方法。處於風險下之個體可為可在某些時間暴露於傳染劑或先前已暴露但尚未具有感染症狀之個體或具有產生癌症之遺傳傾向性或尤其易受傳染劑影響之個體。罹患本文所述之感染性疾病或癌症之個體可經測定以表現及/或呈遞靶抗原，其可用於導引本文中之療法。舉例而言，可發現實例以表現及/或呈遞靶抗原且編碼靶抗原之腺病毒載體、其變異體、片段或變異體片段可隨後投與。 某些實施例涵蓋使用腺病毒載體以活體內傳遞編碼靶抗原、或其片段、變異體或變異體片段之核酸。一旦注射至個體中，核酸序列經表現，產生針對藉由序列編碼之抗原的免疫反應。腺病毒載體疫苗可以「有效量」，亦即在一或多種選擇之投與途徑中有效地引發如本文中他處所描述之免疫反應的腺病毒載體之量投與。有效量可誘發有效地促進宿主針對目標傳染劑或癌症之保護或治療的免疫反應。各疫苗劑量中之載體的量選擇為在無一般與典型疫苗相關之顯著副作用的情況下誘發免疫、免疫保護性或其他免疫治療性反應的量。一旦經疫苗接種，個體可經監測以測定疫苗治療之功效。監測疫苗接種之功效可藉由一般熟習此項技術者已知之任何方法進行。在一些實施例中，可分析血液或流體樣品以偵測抗體水準。在其他實施例中，可進行ELISpot分析以自循環血細胞或自淋巴組織細胞偵測細胞介導之免疫反應。 在某些實施例中，可經52週時段投與1至10劑量。在某些實施例中，6劑量係以1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20週、1、2、3、4、5、6、7、8、9、11、12、13、14、15、16、17、18、20、22、23或24個月，或可自其導出之任何範圍或值的時間間隔投與，且此後可以1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20週、1、2、3、4、5、6、7、8、9、11、12、13、14、15、16、17、18、20、22、23或24個月，或可自其導出之任何範圍或值的時間間隔週期性地給出另外的追加疫苗接種。替代方案可適合於個別患者。因此，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或更多個劑量可經1年時段或經較短或較長時段，諸如經35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95或100週時段投與。劑量可以1、2、3、4、5或6週時間間隔或較長時間間隔投與。 疫苗可經小於約4小時之時段，且更佳經小於約3小時之時段輸注。舉例而言，首先25-50 mg可在30分鐘，較佳甚至15分鐘內輸注，且其餘部分經隨後2-3 h輸注。更一般而言，投與之疫苗構築體之劑量可投與為每2或3週一個劑量，重複總共至少3個劑量。或者，構築體可每週投與兩次，持續4-6週。給藥時程可視情況以其他時間間隔重複且劑量可經由各種非經腸途徑，在劑量及時程之適當調節的情況下給出。如本文所述之組合物可與任何數目的相關治療模式結合(例如在其之前、與其同時或在其之後)向患者投與。 適合劑量為當如上文所述地投與時，能夠促進如本文中他處所描述之靶抗原免疫反應之腺病毒載體的量。在某些實施例中，免疫反應高於基礎(亦即未處理)位準至少10-50%。在某些實施例中，免疫反應超過基礎位準至少2、3、4、5、6、7、8、9、10、12、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、100、110、125、150、200、250、300、400、500或更多。此類反應可藉由量測患者中之靶抗原抗體或藉由疫苗依賴性產生能夠活體外殺死患者腫瘤或經感染細胞之溶細胞性效應細胞，或其他此項技術中已知用於監測免疫反應之方法來監測。此類疫苗亦應能夠引起相比於非疫苗接種患者，在經疫苗接種患者中導致改進的所述疾病之臨床結果之免疫反應。在一些實施例中，改進的臨床結果包含治療疾病、減輕疾病症狀、改變疾病演進或延長壽命。 本文提供之組合物中之任一者可向個體投與。「個體(individual)」可與「個體(subject)」或「患者」互換使用。個體可為哺乳動物，例如人類或動物，諸如非人類靈長類動物、嚙齒動物、兔、大鼠、小鼠、馬、驢、山羊、貓、狗、母牛、豬或綿羊。在實施例中，個體為人類。在實施例中，個體為胎兒、胚胎或兒童。在一些情況下，本發明提供之組合物係離體向細胞投與。在一些情況下，本發明提供之組合物作為治療疾病或病症之方法向個體投與。在一些實施例中，個體患有基因疾病。在一些情況下，個體處於患有疾病，諸如本文所述之疾病中之任一者的風險下。在一些實施例中，個體處於患有由蛋白質之不充分量或蛋白質之不充分活性引起之疾病或病症之增加的風險下。若個體「處於」患有疾病或病症之「增加的風險下」，則該方法包含預防性或防治性治療。舉例而言，個體可由於家族病史而處於患有此類疾病或病症之增加的風險下。通常，處於患有此類疾病或病症之增加的風險下之個體受益於防治性治療(例如藉由預防或延遲疾病或病症之起始或演進)。 在一些情況下，個體不患有疾病。在一些情況下，如本文所述之治療係在疾病發作之前投與。個體可患有未偵測疾病。個體可具有低疾病負擔。個體亦可具有高疾病負擔。在某些情況下，個體可根據分級量表投與如本文所述之治療。分級量表可為格里森分類(Gleason classification)。格里森分類反映腫瘤組織與正常前列腺組織的不同程度。其使用1至5之分級。醫師基於癌細胞之模式及生長而給與癌症編號。編號愈低，癌細胞看起來愈正常且級別愈低。編號愈高，癌細胞看起來愈不正常且級別愈高。在某些情況下，治療可向具有低格里森評分之患者投與。較佳地，可向具有3或更低之格里森評分的患者投與如本文所述之治療。 各種實施例係關於在選擇之患者群體中升高針對一或多種特定靶抗原，諸如PSA、PSMA、MUC1、Brachyury、CEA或其組合之免疫反應的組合物及方法。因此，如本文所述之方法及組合物可靶向患有包括(但不限於)以下之癌症的患者：癌瘤或肉瘤，諸如神經癌、黑素瘤、非霍奇金氏淋巴瘤、霍奇金氏病、白血病、漿細胞瘤、腺瘤、神經膠質瘤、胸腺瘤、乳癌、結腸直腸癌、腎癌、腎細胞癌、子宮癌、胰臟癌、食道癌、肺癌、卵巢癌、子宮頸癌、睾丸癌、胃癌、多發性骨髓瘤、肝癌、急性淋巴母細胞白血病(ALL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性骨髓性白血病(CML)及慢性淋巴球性白血病(CLL)，或其他可經靶向以進行治療之癌症。 在一些情況下，靶向之患者群體可限於患有結腸直腸腺癌、轉移性結腸直腸癌、晚期PSA、PSMA、MUC1、MUC1c、MUC1n、T或CEA表現癌、前列腺癌、結腸直腸癌、頭頸癌、肝癌、乳癌、肺癌、膀胱癌或胰臟癌之個體。可使用所選癌症，例如結腸直腸腺癌之組織學確診。可選擇特定疾病階段或演進，例如可選擇患有轉移性、復發性、III期或IV期癌症中之一或多者之患者以藉由如本文所述之方法及組合物進行治療。在一些實施例中，患者可能需要接受包括(但不限於)以下之其他療法且視情況經由該等療法演進：含有氟嘧啶、伊立替康、奧賽力鉑、貝伐單抗(bevacizumab)、西妥昔單抗(cetuximab)或帕尼單抗(panitumumab)之療法。在一些情況下，個體拒絕接受此類療法可允許患者包含於藉由如本文所述之方法及組合物的療法合格池中。在一些實施例中，使用如本文所述之方法及組合物接受療法之個體可能需要具有至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、14、15、18、21或24個月之估計預期壽命。使用如本文所述之方法及組合物接受療法之患者池可藉由年齡限制。舉例而言，大於2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、25、30、35、40、50、60歲或更多歲之個體可符合藉由如本文所述之方法及組合物之療法的條件。對於另一實例，年齡小於75、70、65、60、55、50、40、35、30、25、20或更少歲之個體可符合藉由如本文所述之方法及組合物之療法的條件。 在一些實施例中，使用如本文所述之方法及組合物接受療法之患者限於具有足夠血液學功能之個體，例如具有以下中之一或多者：每微升至少1000、1500、2000、2500、3000、3500、4000、4500、5000或更大之白細胞(WBC)計數；至少5、6、7、8、9、10、11、12、13、14 g/dL或更大之血色素含量；每微升至少50,000、60,000、70,000、75,000、90,000、100,000、110,000、120,000、130,000、140,000、150,000或更大之血小板計數；以及小於或等於0.8、1.0、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.8、2.0、2.5、3.0或更高之PT-INR值，小於或等於1.2、1.4、1.5、1.6、1.8、2.0 X ULN或更大之PTT值。在各種實施例中，血液學功能指示器限度係對於不同性別及年齡組之個體不同地選擇，例如0-5、5-10、10-15、15-18、18-21、21-30、30-40、40-50、50-60、60-70、70-80歲或大於80歲。 在一些實施例中，使用如本文所述之方法及組合物接受療法之患者限於具有足夠腎及/或肝功能之個體，例如具有以下中之一或多者：小於或等於0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2 mg/dL或更大之血清肌酐位準；.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2 mg/dL或更大之膽紅素位準，同時允許對於吉伯特氏症候群(Gilbert's syndrome)之較高限度，例如小於或等於1.5、1.6、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3或2.4 mg/dL，小於或等於小於或等於1.5、2.0、2.5、3.0×正常上限(ULN)或更大之ALT及AST值。在各種實施例中，腎或肝功能指示器限度係對於不同性別及年齡組之個體不同地選擇，例如0-5、5-10、10-15、15-18、18-21、21-30、30-40、40-50、50-60、60-70、70-80歲或大於80歲。 在一些實施例中，可測定作為使用如本文所述之方法及組合物之療法之候選者的個體之K-ras突變狀態。具有預先選擇之K-ras突變狀態之個體可包含於使用如本文所述之方法及組合物之療法的合格患者池中。 在各種實施例中，使用如本文所述之方法及組合物接受療法之患者限於以下個體：不具有同時發生的細胞毒性化學療法或放射療法，腦轉移瘤病史或當前存在的腦轉移瘤，自體免疫疾病，諸如(但不限於)發炎性腸病、全身性紅斑性狼瘡症、僵直性脊椎炎、硬皮病、多發性硬化症、甲狀腺疾病及白斑病之病史，嚴重併發慢性或急性疾病，諸如心臟病(NYHA III類或IV類)或肝病，對於與方案之可能順應性的醫學或心理障礙，除非黑素瘤皮膚癌、原位子宮頸癌、受控淺表性膀胱癌或其他已治療之原位癌瘤以外之同時發生的(或在最近5年內)第二惡性腫瘤，包括尿道感染、HIV (例如如藉由ELISA所測定及藉由西方墨點法確認)及慢性肝炎之活性急性或慢性感染，或同時發生的類固醇療法(或其他免疫抑制劑，諸如硫唑嘌呤或環孢素A)。在一些情況下，停止任何類固醇療法(除了用作化學療法或對比增強研究之術前用藥法)至少3、4、5、6、7、8、9或10週之患者可包含於使用如本文所述之方法及組合物之療法的合格個體池中。在一些實施例中，使用如本文所述之方法及組合物接受療法之患者包括患有甲狀腺疾病及白斑病之個體。 在各種實施例中，可收集來自使用如本文所述之方法及組合物之療法之個體或候選個體的樣品，例如血清或尿液樣品。樣品可在療法之前、期間及/或之後收集，例如在療法起始之前2、4、6、8、10週內，在距療法起始1週、10天、2週、3週、4週、6週、8週或12週內，在療法起始之前2、4、6、8、10週內，在距療法起始1週、10天、2週、3週、4週、6週、8週、9週或12週內，在療法期間以1週、10天、2週、3週、4週、6週、8週、9週或12週時間間隔，在療法之後以1個月、3個月、6個月、1年、2年時間間隔，在療法之後的1個月、3個月、6個月、1年、2年或更長時間內，持續6個月、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10年或更久之持續時間。可對於樣品測試本文中描述之血液學、腎或肝功能指示器中之任一者以及此項技術中已知之適合的其他指示器，例如對於具有生育潛能之女性測試ß-HCG。在彼方面，在某些態樣中涵蓋血液學及生物化學測試，包括藉由差分、PT、INR及PTT之細胞血液計數，量測Na、K、Cl、CO₂ 、BUN、肌酐、Ca、總蛋白質、白蛋白、總膽紅素、鹼性磷酸酶、AST、ALT及葡萄糖之測試。在一些實施例中，在來自使用本文所述之方法及組合物之療法之個體或候選個體的樣品中測定HIV抗體、肝炎BsAg或C型肝炎抗體之存在或量。 可在來自使用本文所述之方法及組合物之療法之個體或候選個體的樣品，諸如血清中測試生物標記物，諸如針對靶抗原之抗體或針對Ad5載體之中和抗體。在一些情況下，可自使用本文所述之方法及組合物之療法之個體或候選個體收集及存檔一或多種樣品，諸如血液樣品。可分析收集之樣品以用於免疫評估。可在成像研究中評估使用本文所述之方法及組合物之療法之個體或候選個體，例如使用胸部、腹部或骨盆之CT掃描或MRI。成像研究可在使用本文所述之方法及組合物之療法之前、該療法期間及/或之後進行，例如在療法起始之前2、4、6、8、10週內，在距療法起始1週、10天、2週、3週、4週、6週、8週或12週內，在療法起始之前2、4、6、8、10週內，在距療法起始1週、10天、2週、3週、4週、6週、8週、9週或12週內，在療法期間以1週、10天、2週、3週、4週、6週、8週、9週或12週時間間隔，在療法之後以1個月、3個月、6個月、1年、2年時間間隔，在療法之後的1個月、3個月、6個月、1年、2年或更長時間內，持續6個月、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10年或更久之持續時間。 本文所述之組合物及方法涵蓋療法期間之各種劑量及投與方案。患者可接受一或多種複製缺陷型腺病毒或腺病毒載體，例如包含能夠相對於本文所述之靶抗原在個體中升高免疫反應之靶抗原的Ad5[E1-, E2B-]-載體。 在各種實施例中，複製缺陷型腺病毒以適合於實現此類免疫反應之劑量投與。在一些實施例中，複製缺陷型腺病毒以每次免疫約1×10⁸ 個病毒粒子至約5×10¹³ 個病毒粒子之劑量投與。在一些情況下，複製缺陷型腺病毒以每次免疫約1×10⁹ 個至約5×10¹² 個病毒粒子之劑量投與。在一些實施例中，複製缺陷型腺病毒以每次免疫約1×10⁸ 個病毒粒子至約5×10⁸ 個病毒粒子之劑量投與。在一些實施例中，複製缺陷型腺病毒以每次免疫約5×10⁸ 個病毒粒子至約1×10⁹ 個病毒粒子之劑量投與。在一些實施例中，複製缺陷型腺病毒以每次免疫約1×10⁹ 個病毒粒子至約5×10⁹ 個病毒粒子之劑量投與。在一些實施例中，複製缺陷型腺病毒以每次免疫約5×10⁹ 個病毒粒子至約1×10¹⁰ 個病毒粒子之劑量投與。在一些實施例中，複製缺陷型腺病毒以每次免疫約1×10¹⁰ 個病毒粒子至約5×10¹⁰ 個病毒粒子之劑量投與。在一些實施例中，複製缺陷型腺病毒以每次免疫約5×10¹⁰ 個病毒粒子至約1×10¹¹ 個病毒粒子之劑量投與。在一些實施例中，複製缺陷型腺病毒以每次免疫約1×10¹¹ 個病毒粒子至約5×10¹¹ 個病毒粒子之劑量投與。在一些實施例中，複製缺陷型腺病毒以每次免疫約5×10¹¹ 個病毒粒子至約1×10¹² 個病毒粒子之劑量投與。在一些實施例中，複製缺陷型腺病毒以每次免疫約1×10¹² 個病毒粒子至約5×10¹² 個病毒粒子之劑量投與。在一些實施例中，複製缺陷型腺病毒以每次免疫約5×10¹² 個病毒粒子至約1×10¹³ 個病毒粒子之劑量投與。在一些實施例中，複製缺陷型腺病毒以每次免疫約1×10¹³ 個病毒粒子至約5×10¹³ 個病毒粒子之劑量投與。在一些實施例中，複製缺陷型腺病毒以每次免疫約1×10⁸ 個病毒粒子至約5×10¹⁰ 個病毒粒子之劑量投與。在一些實施例中，複製缺陷型腺病毒以每次免疫約1×10¹⁰ 個病毒粒子至約5×10¹² 個病毒粒子之劑量投與。在一些實施例中，複製缺陷型腺病毒以每次免疫約1×10¹¹ 個病毒粒子至約5×10¹³ 個病毒粒子之劑量投與。在一些實施例中，複製缺陷型腺病毒以每次免疫約1×10⁸ 個病毒粒子至約1×10¹⁰ 個病毒粒子之劑量投與。在一些實施例中，複製缺陷型腺病毒以每次免疫約1×10¹⁰ 個病毒粒子至約1×10¹² 個病毒粒子之劑量投與。在一些實施例中，複製缺陷型腺病毒以每次免疫約1×10¹¹ 個病毒粒子至約5×10¹³ 個病毒粒子之劑量投與。在一些情況下，複製缺陷型腺病毒係以每次免疫大於或等於1×10⁹ 、2×10⁹ 、3×10⁹ 、4×10⁹ 、5×10⁹ 、6×10⁹ 、7×10⁹ 、8×10⁹ 、9×10⁹ 、1×10¹⁰ 、2×10¹⁰ 、3×10¹⁰ 、4×10¹⁰ 、5×10^{10 、} 6×10¹⁰ 、7×10¹⁰ 、8×10¹⁰ 、9×10¹⁰ 、1×10¹¹ 、2×10¹¹ 、3×10¹¹ 、4×10¹¹ 、5×10¹¹ 、6×10¹¹ 、7×10¹¹ 、8×10¹¹ 、9×10¹¹ 、1×10¹² 、1.5×10¹² 、2×10¹² 、3×10¹² 個或更多個病毒粒子(VP)之劑量投與。在一些情況下，複製缺陷型腺病毒係以每次免疫小於或等於1×10⁹ 、2×10⁹ 、3×10⁹ 、4×10⁹ 、5×10⁹ 、6×10⁹ 、7×10⁹ 、8×10⁹ 、9×10⁹ 、1×10¹⁰ 、2×10¹⁰ 、3×10¹⁰ 、4×10¹⁰ 、5×10¹⁰ 、6×10¹⁰ 、7×10¹⁰ 、8×10¹⁰ 、9×10¹⁰ 、1×10¹¹ 、2×10¹¹ 、3×10¹¹ 、4×10¹¹ 、5×10¹¹ 、6×10¹¹ 、7×10¹¹ 、8×10¹¹ 、9×10¹¹ 、1×10¹² 、1.5×10¹² 、2×10¹² 、3×10¹² 個或更多個病毒粒子之劑量投與。在各種實施例中，本文所述之所需劑量係在適合體積之調配物緩衝液中投與，例如約0.1-10 mL、0.2-8 mL、0.3-7 mL、0.4-6 mL、0.5-5 mL、0.6-4 mL、0.7-3 mL、0.8-2 mL、0.9-1.5 mL、0.95-1.2 mL或1.0-1.1 mL之體積。熟習此項技術者瞭解體積可落入藉由此等值中之任一者界定之任何範圍(例如約0.5 mL至約1.1 mL)內。病毒粒子之投與可經由多種適合之傳遞路徑，例如其可藉由注射(例如皮內、肌肉內、靜脈內或皮下)、經鼻內(例如藉由抽吸)、呈丸劑形式(例如吞咽、用於經陰道或經直腸傳遞之栓劑。在一些實施例中，皮下傳遞可為較佳且可更接近樹突狀細胞。 可重複向個體投與病毒粒子。重複傳遞病毒粒子可遵循時程，或者可在按需要基礎上執行。舉例而言，可測試個體針對靶抗原，例如腫瘤抗原，諸如PSA、PSMA、MUC1、Brachyury、CEA或其組合、其片段、變異體或變異體片段之免疫性且視需要藉由其他傳遞補充。在一些實施例中，傳遞時程包括以常規時間間隔投與病毒粒子。可設計包含具有時程之時段及/或在投與之前評估的基於需要之投與之時段中之一或多者之關節傳遞方案。舉例而言，治療方案可包括投藥，諸如每三週一次之皮下投藥，接著為每三個月一次之另一免疫療法治療，直至出於包括死亡之任何原因自療法移除。另一例示性方案包含每三週投藥三次，接著為每三個月之另一組三次免疫療法治療。 另一實例方案包含具有第一頻率下之第一投與數目的第一時段、具有第二頻率下之第二投與數目的第二時段、具有第三頻率下之第三投與數目的第三時段等，及根據需求視情況存在之一或多個具有未確定投與數目的時段。可獨立地選擇各時段中之投與數目且可例如為1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或更大。亦可獨立地選擇各時段中之投與頻率，可例如為約每天、每隔一天、每三天、一週兩次、一週一次、每隔一週、每三週、每月、每6週、每隔一個月、每3個月、每4個月、每5個月、每6個月、每年一次等。療法可耗時至多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、30、36個月或更長之總時段。 可修改免疫之間的預定時間間隔以使得免疫之間的時間間隔經該時間間隔之至多五分之一、四分之一、三分之一或一半修正。舉例而言，對於3週間隔時程，免疫可重複20至28天(3週-1天至3週+7天)。對於前3次免疫，若第二及/或第三免疫延遲，則後續免疫可經移動，以允許免疫之間最小量的緩衝。舉例而言，對於三週間隔時程，若免疫延遲，則後續免疫可安排為前一次免疫之後不早於17、18、19或20天發生。 本文所述之組合物可在各種狀態下，例如在室溫下、在冰上或冷凍地提供。組合物可提供於適合尺寸之容器，例如2 mL小瓶中。在一個實施例中，具有1.0 mL可提取疫苗之2 ml小瓶含有每毫升5×10¹¹ 個總病毒粒子。包括溫度及濕度之儲存條件可變化。舉例而言，用於療法之組合物可儲存於室溫、4℃、-20℃或更低溫度下。 在各種實施例中，對根據如本文所述之方法及組合物接受治療之個體進行一般評估。可按需要或在預定基礎上進行任何測試中之一或多者，諸如在第0、3、6週等。可與免疫相對於無免疫之時間點處同時進行不同組之測試。 一般評估可包括病史、ECOG表現評分、卡諾斯基體能狀態(Karnofsky performance status)及全面體格檢查(由主治醫師權衡)中之一或多者。可記錄患者正接受或自從最後一次問診已接受之任何其他治療、藥物、生物製劑或血液製品。患者可在接受疫苗之後臨床跟蹤適合時段，例如大致30分鐘以監測任何不良反應。 在某些實施例中，可持續選擇之時間，例如3天(免疫當天及此後的2天)每天評估各疫苗劑量之後的局部及全身性反應原性。日記卡可用於報導症狀且直尺可用於量測局部反應原性。可評估免疫注射位點。可進行胸部、腹部及骨盆之CT掃描或MRI。 在各種實施例中，對根據如本文所述之方法及組合物接受治療之個體進行血液及生物化學評估。可按需要或在預定基礎上進行任何測試中之一或多者，諸如在第0、3、6週等。可與免疫相對於無免疫之時間點處同時進行不同組之測試。血液及生物化學評估可包括以下中之一或多者：用於化學及血液學之血液測試、藉由差分之CBC、Na、K、Cl、CO₂ 、BUN、肌酐、Ca、總蛋白質、白蛋白、總膽紅素、鹼性磷酸酶、AST、ALT、葡萄糖及ANA。 在各種實施例中，對根據如本文所述之方法及組合物接受治療之個體評估生物學標記物。可按需要或在預定基礎上進行任何測試中之一或多者，諸如在第0、3、6週等。可與免疫相對於無免疫之時間點處同時進行不同組之測試。 生物標記物評估可包括自足夠體積之血清樣品量測本文所述之針對靶抗原或病毒載體之抗體中之一或多者，例如若經測定且可用，則可檢查約5 ml生物標記物。 在各種實施例中，對根據如本文所述之方法及組合物接受治療之個體進行免疫評估。可按需要或在預定基礎上進行任何測試中之一或多者，諸如在第0、3、6週等。可與免疫相對於無免疫之時間點處同時進行不同組之測試。 外周血(例如約90 mL)可在各免疫之前及至少一些免疫之後的某一時間抽吸，以測定是否對研究期間及/或特定數目之免疫之後的特定時間點處之免疫反應存在影響。免疫評估可包括以下中之一或多者：使用ELISpot關於針對靶抗原的T細胞反應分析外周血液單核細胞(PBMC)、增殖分析、多參數流式細胞分析及細胞毒性分析。來自各抽血之血清可經存檔及發送以及測定。 在各種實施例中，對根據如本文所述之方法及組合物接受治療之個體進行腫瘤評估。可按需要或在預定基礎上進行任何測試中之一或多者，諸如在治療之前、在第0、3、6週等。可與免疫相對於無免疫之時間點處同時進行不同組之測試。腫瘤評估可包括胸部、腹部、或骨盆之CT或MRI掃描中之一或多者，其在治療之前、至少一些免疫之後的某一時間及在完成選擇數目，例如2、3或4次之第一治療之後大致每三個月進行一次且例如直至自治療移除。 可使用一或多種適合於免疫反應之測試，諸如ELISpot、細胞介素流動式細胞測量術或抗體反應自樣品，諸如個體之外周血樣品評估針對靶抗原，諸如PSA、PSMA、MUC1、Brachyury、CEA或其組合之免疫反應。可藉由量測T細胞反應測定陽性免疫反應。若對於具有抗原之6個孔中之背景調節之平均點數超過6個對照孔中之點數10且含有抗原之6個孔與6個對照孔之單值之間的差值在使用斯圖登氏t檢驗(Student's t-test)之p≤0.05之位準下統計顯著，則T細胞反應可視為陽性。免疫原性分析可在個免疫之前及治療時段期間之預定時間點處進行。舉例而言，關於治療之大約第1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、18、20、24、30、36或48週處之免疫原性分析之時間點可甚至在此時無預定免疫的情況下預定。在一些情況下，若個體接受至少最小數目之免疫，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或更多次免疫，則其可視為對於免疫反應可評估。 在一些實施例中，疾病演進或臨床反應確定係根據RECIST 1.1標準在患有可量測/可評估疾病之患者中進行。在一些實施例中，使用如本文所述之方法及組合物之療法影響接受療法之個體中之完全反應(CR；對於目標病變之所有目標病變之消失或對於非目標病變之所有非目標病變之消失及腫瘤標記物水準之標準化)。在一些實施例中，使用如本文所述之方法及組合物之療法影響接受療法之個體中之部分反應(PR；目標病變之LD之總和的至少30%減少，採用目標病變之基線總和LD作為參考)。 在一些實施例中，使用如本文所述之方法及組合物之療法影響接受療法之個體中之穩定疾病(SD；既不充分縮小以符合PR亦不充分增加以符合PD，採用自從對於目標病變起始治療的最小總和LD作為參考)。在一些實施例中，使用本文所述之方法及組合物之療法影響接受療法之個體中之不完全反應/穩定疾病(SD；一或多種非目標病變之持續或/及高於非目標病變之正常限度之腫瘤標記物水準之維持)。在一些實施例中，使用如本文所述之方法及組合物之療法影響接受療法之個體中之進行性疾病(PD；目標病變之LD之總和的至少20%增加，採用自從治療開始記錄之最小總和LD作為參考或目標病變之一或多種新穎病變之出現或一或多種非目標病變之持續或/及高於非目標病變之正常限度之腫瘤標記物水準之維持)。套組 本文所述之組合物、免疫療法或疫苗可以套組形式供應。本發明之套組可進一步包含關於劑量及或投與之說明書，包括治療方案資訊。 在一些實施例中，套組包含提供所述免疫療法或疫苗之組合物及方法。在一些實施例中，套組可進一步包含適用於投與套組組件之組件及如何製備該等組件之說明書。在一些實施例中，套組可進一步包含在藉由適當實驗室測試進行處理之前及之後實施監測患者，或與醫務人員交流結果及患者資料之軟體。 包含套組之組件可呈乾燥或液體形式。若其呈乾燥形式，則套組可包括溶液以溶解乾燥材料。套組亦可包括呈液體或乾燥形式之轉移因子。在一些實施例中，若轉移因子呈乾燥形式，則套組包括溶液以溶解轉移因子。套組亦可包括混合及製備組分之容器。套組亦可包括幫助投與之儀器，例如針、管、施料器、吸入器、注射器、滴管、鑷子、量匙、滴眼管或任何此類醫學認可的傳遞媒劑。如本文所述之套組或藥物傳遞系統亦將通常包括用於包含本發明之組合物的構件，其經封閉限制以用於商業銷售及分佈。 可組合上述各種實施例以提供另外之實施例。本說明書中提及及/或本申請案資料表中所列之所有美國專利、美國專利申請公開案、美國專利申請案、外國專利、外國專利申請案及非專利公開案係以全文引用的方式併入本文中，其程度如同各個別公開案、專利或專利申請案專門且獨立地指示為以引用的方式併入一般。 該等實施例之態樣必要時可經修改以採用各種專利、申請及公開案之概念來提供又其他實施例。 可鑒於以上實施方式來對實施例進行此等及其他變化。一般而言，在以下申請專利範圍中，所用術語不應解釋為將申請專利範圍限制於本說明書及申請專利範圍中所揭示之特定實施例，而應解釋為包括所有可能之實施例以及該申請專利範圍有權要求的等效物之全部範疇。因此，申請專利範圍不受本發明限制。 實例 包括以下實例以展示本發明之較佳實施例。熟習此項技術者應瞭解，以下實例中所揭示之技術代表本發明人發現在本發明實施中起良好作用之技術，且因此可視為構成其較佳實施方式。然而，根據本發明，熟習此項技術者應瞭解，在不背離本發明之精神及範疇的情況下可對所揭示之特定實施例作出許多改變且仍獲得相同或類似結果。實例 1 小鼠中之 Ad5 [ E1 -, E2b -]- PSA 疫苗 此實例描述小鼠模型中之Ad5 [E1-, E2b-]-PSA疫苗之臨床前測試。進行研究來評估Ad5 [E1-, E2b-]-PSA作為癌症疫苗在BALB/c小鼠模型中之用途。Ad5 [E1-, E2b-]-PSA在小鼠中誘發針對PSA之強CMI。亦進行研究以顯示疫苗在PSA表現癌之鼠類模型中的抗腫瘤活性。此等資料表明Ad5 [E1-, E2b-]-PSA之活體內傳遞可誘發針對PSA表現癌之PSA定向抗腫瘤免疫性。 在BALB/c鼠類模型中進行臨床前研究以展示Ad5 [E1-, E2b-]-PSA疫苗之免疫原性。在 Ad5 [ E1 -, E2b -]- PSA 免疫之後誘發 CMI 反應 為了在Ad5 [E1-, E2b-]-PSA多次同源免疫之後藉由流式細胞測量術評估CMI誘發，若干組Ad5免疫BALB/c小鼠(n=5/組)以1週時間間隔藉由10¹⁰ VP之Ad5 [E1-, E2b-]-PSA皮下免疫三次。對照小鼠僅注射緩衝溶液。在最後一次免疫之後兩週，收穫脾細胞且暴露於PSA蛋白質且藉由ELISpot評估針對分泌IFN-γ或IL-2之脾細胞之CMI反應。 在經疫苗接種但非對照小鼠中誘發PSA定向CMI反應(圖 1A 及 1B )。CMI反應之特異性係於ELISpot分析中使用無關的HIV-gag或巨細胞病毒(CMV)抗原展示(圖 2A 及圖 2B )。亦測試抗體反應且在經免疫但非對照小鼠中偵測PSA定向抗體反應(圖 3 )。 為了測定感染之人類DC是否可刺激人類抗原特異性T細胞株分泌IFN-γ，將特異性感染之DC與抗原特異性T細胞株一起培育且測試IFN-γ分泌活性作為刺激之量度。人類DC經Ad5載體感染，培育48小時，洗滌且用於刺激人類抗原特異性T細胞。如表 4 中所示，人類樹突狀細胞(來自HLA-A2供體)經編碼轉殖基因之重組Ad5-PSA載體感染可活化PSA特異性T細胞株產生IFN-γ。 此等上述結果展示Ad5 [E1-, E2b-]-PSA疫苗有效誘發PSA定向免疫反應。表 4 - 活化 PSA 特異性 T 細胞株以產生 IFN - γ 結果以每5×10⁵ 個T細胞/毫升之IFN-γ的皮克數表示。僅DC=＜0.732。Ad5 [ E1 -, E2b -]- PSA 疫苗之抗腫瘤活性 在PSA表現癌之鼠類模型中測試Ad5 [E1-, E2b-]-PSA疫苗之抗腫瘤活性。BALB/c小鼠藉由1×10¹⁰ VP之Ad5 [E1-, E2b-]-null (空載體對照)或1×10¹⁰ VP之Ad5 [E1-, E2b-]-PSA疫苗以兩週時間間隔經皮下(SC)免疫三次。在最後一次免疫(疫苗接種)之後兩週，小鼠植入有5×10⁵ 個表現PSA之鼠類腫瘤細胞。對於所有小鼠監測腫瘤生長且計算腫瘤體積以測定經Ad5 [E1-, E2b-]-PSA預免疫是否抑制經免疫但非對照小鼠中之腫瘤的生長。根據式V=(腫瘤寬度² ×腫瘤長度)/2計算腫瘤體積。相比於注射Ad5 [E1-. E2b-]-null之對照小鼠，經Ad5 [E1-, E2b-]-PSA免疫之小鼠經歷較慢腫瘤生長(圖 4 )。此等研究指示Ad5 [E1-, E2b-]-PSA載體平台具有用作治療PSA表現腫瘤之免疫治療劑的潛能。藉由 ELISPOT 評估抗原特異性反應 在實驗結束(腫瘤接種後37天)時收集脾細胞且離體暴露於PSA肽池、陰性對照(SIV-Nef肽池)或陽性對照(伴刀豆球蛋白A (Con A))。在離體刺激之後使用ELISPOT分析量測細胞介素分泌，如圖 14 中所示。資料報導為每10⁶ 個脾細胞之斑點形成細胞(SFC)的數目且誤差條顯示SEM。圖 14A 說明離體刺激之後的IFN-γ分泌細胞。圖 14B 說明離體刺激之後的IL-2分泌細胞。圖 14C 說明離體刺激之後的顆粒酶B分泌細胞。藉由細胞內細胞介素染色及流動式細胞測量術評估抗原特異性反應 在實驗結束(腫瘤接種後37天)時收集脾細胞且離體暴露於PSA肽池或陰性對照抗原(培養基或SIV-Nef肽池)。細胞關於表面標記物且關於細胞內細胞介素分泌染色且藉由流動式細胞測量術分析，如圖 15 中所示。圖 15A 說明分泌IFN-γ之CD8β+脾細胞的百分比。圖 15B 說明分泌IFN-γ之CD4+脾細胞的百分比。圖 15C 說明分泌IFN-γ及TNF-α之CD8β+脾細胞的百分比。圖 15D 說明分泌IFN-γ及TNF-α之CD4+脾細胞的百分比。藉由 ELISA 評估針對 PSA 之 抗原特異性抗體 在實驗結束(腫瘤接種後37天)時收集血清且使用酶聯免疫吸附分析(ELISA)分析抗體之存在，如圖 16 中所示。圖 16A 說明針對PSA之IgG特異性抗體的質量。圖 16B 說明針對PSA之IgG1特異性抗體的質量。評估 Ad5 [ E1 -, E2b -]- PSA 疫苗之毒性 進行廣泛臨床前毒理學研究以評估BALB/c小鼠中之皮下注射之後的Ad5 [E1-, E2b-]-PSA之毒性。在注射後的各種時間點評估毒性端點。動物在第1、22及43天投與至多3次皮下注射，其中媒劑對照或Ad5 [E1-, E2b-]-PSA之劑量與用於臨床試驗以解釋身體質量差異之劑量一致。評估由對體重、體重增加、食物消費病理學、血液學分析、血液化學分析及凝血時間測試之影響組成。 總體而言，Ad5 [E1-, E2b-]-PSA為靶向誘發穩固免疫反應之PSA的治療疫苗。Ad5 [E1-, E2b-]-PSA在小鼠中誘發針對PSA之強力CMI，其如在關於分泌IFN-γ及IL-2之脾細胞的ELISpot分析中評估。另外，人類抗原特異性T細胞株係藉由經Ad5 [E1-, E2b-]-PSA感染之人類DC刺激。 重要的是，Ad5 [E1-, E2b-]-PSA疫苗在PSA表現癌之臨床前鼠類模型中產生抗腫瘤活性。實例 2 患有晚期前列腺癌之個體中之 Ad5 [ E1 -, E2b -]- PSA 疫苗之 I / IIa 期 研究 此實例描述患有晚期前列腺癌之個體中之Ad5 [E1-, E2b-]-PSA疫苗之I/IIa期研究。目標為臨床測試針對PSA之此治療疫苗，其利用克服其他Ad5系統之情況下發現之障礙的Ad5載體系統。臨床研究之結果可確立使用此Ad5 [E1-, E2b-]-PSA疫苗作為免疫治療劑之安全性及免疫原性。 研究之特定目標為評估患有晚期前列腺癌之患者中藉由Ad5 [E1-, E2b-]-PSA免疫治療劑之治療性免疫療法之安全性及可行性。Ad5 [E1-, E2b-]-PSA經設計以誘發抗腫瘤T細胞介導之免疫反應。 Ad5 [E1-, E2b-]-PSA為已藉由移除早期1 (E1)、早期2b (E2b)及早期3 (E3)基因區及插入人類前列腺特異性抗原(PSA)基因而改性之腺病毒血清型5 (Ad5)載體。所得重組複製缺陷型載體在以反式供應載體產生所需的E1及E2b基因功能的新工程改造之專有人類293基細胞株(E.C7)中傳播。未就此方案提出基因轉移插入；產物起作用且保持游離。 在總共至多24位患有表現PSA之前列腺癌之患者的情況下進行開放標記、劑量遞增I/IIa期研究。評估5×10⁹ 、5×10¹⁰ 及5×10¹¹ 個腺病毒VP劑量水準。在I期中，患者登記為3或6位患者之連續劑量水準群體且監測劑量限制性毒性(DLT)。各患者藉由每3週皮下注射一次，持續3次免疫而給與Ad5 [E1-, E2b-]-PSA。在群體中之所有患者已在接受其最後一個疫苗劑量之後至少3週具有研究訪問之後進行關於劑量遞增之DLT評估。對於此疫苗之任何組分具有過敏性反應病史之患者不包括於試驗中。產品描述 Ad5 [E1-, E2b-]-PSA疫苗為填充於含有1 mL可提取疫苗之2 mL琥珀色小瓶中之透明無色液體。在1 mL產品中存在總共5.0x10¹¹ 個總VP。各小瓶用橡膠塞密封且具有白色易拉密封蓋。產品之最終使用者用其拇指將蓋之白色塑膠部分向上/下彈開以暴露橡膠塞，且接著用注射針刺穿塞子以抽取液體。橡膠塞藉由鋁捲曲之密封部分固定至小瓶。 Ad5 [E1-, E2b-]-PSA之特徵在於經轉染細胞內之PSA的高水準表現。劑量及投藥 取決於患者所登記之群體，Ad5 [E1-, E2b-]-PSA之劑量為5×10⁹ 、5×10¹⁰ 或5×10¹¹ VP。在劑量遞增研究中測定最大耐受劑量。 Ad5 [E1-, E2b-]-PSA疫苗儲存於≤-20℃下。在注射之前，自冷凍器移除適當小瓶且使其在受控室溫(20-25℃，68-77℉)下解凍至少20分鐘且不超過30分鐘，隨後將其保持於2-8℃ (35-46℉)下。疫苗在自冷凍器移除之後，在保持冷藏於2-8℃ (35-46℉)時穩定至少8小時。 解凍小瓶經旋動且接著使用無菌技術，藥師使用1 mL注射器自適當小瓶抽取適當體積(1 mL)。一旦可能時便使用1至1/2吋、20至25計量針注射疫苗。若疫苗無法立即注射，則注射器儲存於2-8℃ (35-46℉)下。 所有疫苗注射在藉由酒精製備位點之後藉由上臂中之皮下注射以1 mL體積給與。任一臂用於各注射。 當在注射器中製備劑量且投與劑量時，考慮可在投與劑量之後保持於針中之溶液的體積以確保投與方案中規定之完全劑量。 Ad5[E1-, E2b-]-PSA疫苗供應為2 mL單劑量小瓶中之無菌透明溶液。各小瓶含有以5×10¹¹ VP/mL提供之疫苗之單次劑量。各小瓶含有1.3 mL總體積。產品儲存於≤-20±10℃下直至使用。 Ad5 [E1-, E2b-]-PSA之個別小瓶(以所需數目)包裝於卡紙板箱中且藉由包括溫度監測裝置之隔夜快遞在乾冰(＜-20℃)上裝運。在接收後，關於任何明顯的損壞或缺陷檢查包裝內含物。將裝運內含物拆包且將含有Ad5 [E1-, E2b-]-PSA小瓶之卡紙板箱置於具有＜-20℃之溫度控制的冷凍器中。接收者藉由斷開電源開關而停止溫度監測裝置(處置及操作溫度監測裝置之說明書隨包裝一同提供)。劑量製備指示 - 5×10⁹ 個病毒粒子 自0.9%無菌生理鹽水之5.0 mL小瓶移除0.05 mL流體，留下4.95 mL。接著自標註為Ad5 [E1-, E2b-]-PSA之小瓶移除0.05 mL且將此體積傳遞至5 mL無菌生理鹽水小瓶中。藉由倒置5 mL稀藥物而混合內含物。接著抽吸1 mL稀藥物且藉由皮下注射傳遞至患者(劑量製備之詳細描述係描述於插入物中)。劑量製備指示 - 5×10¹⁰ 個病毒粒子 自0.9%無菌生理鹽水之5.0 mL小瓶移除0.5 mL流體，其留下4.5 mL。接著自標註為Ad5 [E1-, E2b-]-PSA之小瓶移除0.5 mL且將此體積傳遞至5 mL無菌生理鹽水小瓶中。藉由倒置5 mL稀藥物而混合內含物。接著抽吸1 mL稀藥物且藉由皮下注射傳遞至患者(劑量製備之詳細描述係描述於插入物中)。劑量製備指示 - 5×10¹¹ 個病毒粒子 自小瓶抽取1 mL內含物且在無任何其他操縱的情況下藉由皮下注射傳遞至患者。實例 3 生產多靶向疫苗 此實例描述生產包含超過一個抗原標靶之多靶向疫苗。生產多靶向載體 構築及生產Ad5 [E1-, E2b-]-brachyury、Ad5 [E1-, E2b-]-PSA (及/或PSMA)及Ad5 [E1-, E2b-]-MUC1。簡言之，轉殖基因係使用基於同源重組之方法次選殖至Ad5 [E1-, E2b-]載體之E1區中。複製缺陷型病毒在E.C7包裝細胞株中傳播，經CsCl₂ 純化且滴定。病毒感染性滴度測定為E.C7細胞單層上之溶菌斑形成單位(PFU)。VP濃度係藉由十二烷基硫酸鈉(SDS)破壞及260 nm及280 nm處置分光光度法測定。 如同SEQ ID NO: 1或SEQ ID NO: 35構築編碼人類PSA抗原之序列且隨後選殖至Ad5載體中以產生Ad5 [E1-, E2b-]-PSA構築體。類似地，如同SEQ ID NO: 11構築編碼人類PSMA抗原之序列且隨後選殖至Ad5載體中以產生Ad5 [E1-, E2b-]-PSMA構築體。 編碼人類Brachyury蛋白質(T，NM_003181.3)之序列係藉由引入增強子T細胞HLA-A2抗原決定基(WLLPGTSTV；SEQ ID NO: 7)及移除參與DNA結合之25胺基酸片段而修飾。所得構築體隨後次選殖至Ad5載體中以產生Ad5 [E1-, E2b-]-Brachyury構築體。 MUC1分子由兩個區組成：N端(MUC1-n)，其為MUC1之大型胞外域，及C端(MUC1-c)，其具有三個區：小型胞外域、單一跨膜域及胞質尾區。胞質尾區含有與信號傳導蛋白質相互作用之位點且充當癌基因及癌動力、侵襲性及轉移之驅動器。(38) 為了構築Ad5 [E1-, E2b-]-MUC1，整個MUC1轉殖基因(包括8個促效劑抗原決定基)將次選殖至Ad5載體中。包含於Ad5 [E1-, E2b-]-MUC1載體中之促效劑抗原決定基結合至HLA-A2 (N端中之抗原決定基P93L、VNTR區中之V1A及V2A以及C端中之C1A、C2A及C3A)、HLA-A3 (抗原決定基C5A)及HLA-A24 (C端中之抗原決定基C6A)。 Tri-Ad5疫苗係藉由以1:1:1之比率組合10¹⁰ VP之Ad5 [E1-, E2b-]-Brachyury、Ad5 [E1-, E2b-]-PSA (或者Ad5 [E1-, E2b-]-PSMA)及Ad5 [E1-, E2b-]-MUC1 (總共3×10¹⁰ VP)而產生。GLP 生產多靶向疫苗 以下顯示使用良好實驗室實踐(GLP)標準生產臨床級多靶向疫苗。Ad5 [E1-, E2b-]-PSA (及/或PSMA)、Ad5 [E1-, E2b-]-MUC1及Ad5 [E1-, E2b-]-Brachyury產物可在5 L細胞生物反應器中生產。 簡言之，E.C7製造細胞株之小瓶經解凍，轉移至T225燒瓶中，且起初在含有10% FBS/4 mM L-麩醯胺酸之DMEM中在37℃下於5% CO₂ 中培養。在擴增之後，E.C7細胞使用10層CellSTACKS (CS-10)擴增且轉換至自由式無血清培養基(SFM)。E.C7細胞在SFM中在37℃下於5% CO₂ 中培養24小時以在細胞生物反應器中達到5×10⁵ 個細胞/毫升之目標密度。E.C7細胞將接著分別經Ad5 [E1-, E2b-]-PSA、Ad5 [E1-, E2b-]- MUC1或Ad5 [E1-, E2b-]-Brachyury感染，且培養48小時。 在收穫之前進行中流處理30分鐘，且核酸酶將添加至培養物以促進用於濃縮之較佳細胞粒化。在藉由離心粒化之後，丟棄上清液且集結粒在室溫下再懸浮於含有1%聚山梨醇酯-20之溶解緩衝液中90分鐘。溶解物將接著用核酸酶處理且藉由添加5 M NaCl淬滅反應。漿液將經離心且丟棄集結粒。溶解物將藉由過濾澄清且經受雙管柱離子交換程序。 為了純化疫苗產物，進行雙管柱陰離子交換程序。第一管柱填充有Q Sepharose XL樹脂，經消毒且藉由加樣緩衝液平衡。澄清溶解物負載至管柱上且用加樣緩衝液洗滌。疫苗產物經溶離且含有Ad5 [E1-, E2b-]-PSA (及/或PSMA)、Ad5 [E1-, E2b-]- MUC1或Ad5 [E1-, E2b-]-Brachyury之主溶離峰(溶離液)繼續進行下一步驟。第二管柱填充有Source 15Q樹脂，經消毒，且藉由加樣緩衝液平衡。來自第一陰離子交換管柱之溶離液負載至第二管柱上且疫苗產物用起始於100%緩衝液A (20 mM Tris，1 MgCl₂ ，pH 8.0)，運行至50% 緩衝液B (20 mM Tris，1 mM MgCl₂ ，2M NaCl，pH 8.0)之梯度溶離。收集含有Ad5 [E1-, E2b-]-PSA (及/或PSMA)、Ad5 [E1-, E2b-]- MUC1或Ad5 [E1-, E2b-]-Brachyury之溶離峰且在2-8℃下儲存隔夜。峰溶離份係經由切向流過濾(TFF)系統處理以相對於調配物緩衝液(20 mM Tris，25 mM NaCl，2.5% (v/v)甘油，pH 8.0)濃縮及透濾。在處理之後，最終疫苗產物經無菌過濾，分配為等分試樣，且儲存於≤-60℃下。通常產生接近100%純度之高度純化產物且對於此等產物預測類似結果。 產生之VP產物之濃度及總數係以分光光度法測定。產物純度係藉由HPLC評估。感染活性係藉由使用套組對於感染性粒子進行Ad5六鄰體染色分析而測定。 使用來自載體轉染之A549細胞之溶解物進行西方墨點法以驗證PSA、PSMA、MUC1或Brachyury表現。進行品質控制測試以確定最終疫苗產物不含黴漿菌，不具有微生物生物負荷且展現每毫升小於2.5內毒素單位(EU)之內毒素水準。為了確認免疫原性，如下(實例 4 )所述地在小鼠中測試個別載體。實例 4 多靶向 PSA ( 及 / 或 PSMA ) 、 MUC1 、 Brachyury 病毒載體之免疫原性 此實例描述使用針對PSA (及/或PSMA)、MUC1及T (亦即Brachyury)之多靶向疫苗之免疫原性結果。如本文所述地對各病毒載體產物測試純度、感染力及抗原表現，且各自通過此等標準。疫苗接種及脾細胞製備 雌性C57BL/6小鼠(n=5)皮下注射10¹⁰ VP之Ad5 [E1-, E2b-]-Brachyury或Ad5 [E1-, E2b-]-PSA (及/或PSMA)或Ad5 [E1-, E2b-]-MUC1或1:1:1之比率的10¹⁰ VP全部三種病毒之組合(具有PSA及/或PSMA、MUC1及Brachyury之Tri-Ad5)。對照小鼠經注射3×10¹⁰ VP之Ad-null (無轉殖基因插入)。劑量係以25 μl注射緩衝液(20 mM HEPES，具有3%蔗糖)投與且小鼠以14天時間間隔經疫苗接種三次。在最後一次注射之後14天收集脾臟及血清。血清在-20℃下冷凍。脾細胞懸浮液係藉由經由70 μM耐綸細胞過濾器(BD Falcon, San Jose, CA)平緩地壓碎脾臟而產生。紅血球係藉由添加紅血球溶解緩衝液(Sigma-Aldrich, St. Louis, MO)而移除且脾細胞經洗滌兩次且再懸浮於R10 (RPMI 1640，補充有L-麩醯胺酸(2 mM)、HEPES (20 mM)、青黴素100 U/ml及鏈黴素100 μg/ml，及10%胎牛血清中。脾細胞係藉由ELISPOT及流動式細胞測量術分析細胞介素產生。免疫原性研究： 經Ad5 [E1-, E2b-]載體之免疫為劑量依賴性的且使用每劑量1×10¹⁰ 個VP。使用數組(N=5) C57BL/6小鼠。 在此研究中，C57BL/6小鼠以一週時間間隔或2週時間間隔皮下注射3次，注射包含1×10¹⁰ 個病毒粒子(VP) Ad5 [E1-, E2b-]-null (空載體對照)之三重免疫或1×10¹⁰ VP含有Ad5 [E1-, E2b-]-PSA (及/或PSMA)、Ad5 [E1-, E2b-]-MUC1及Ad5 [E1-, E2b-]-Brachyury之1:1:1混合物。 在最後一次免疫之後兩週，採用ELISpot分析對於將脾細胞分別暴露於PSA、MUC1或Brachyury肽池之後的IFN-γ分泌細胞(SFC)測定CMI活性。 在經免疫小鼠中偵測到針對多靶向載體之顯著CMI反應。對暴露於PSA及/或PSMA肽之後的脾細胞進行使用細胞內細胞介素染色之流動式細胞測量術以評估活化CD4+及CD8+ T細胞之量。 簡言之，如藉由關於IFN-γ分泌脾細胞(SFC)之ELISpot分析評估的針對PSA、PSMA、MUC1及Brachyury之CMI反應係在多靶向經免疫小鼠但未在非對照小鼠(注射Ad5-Null空載體)中偵測到。ELISpot分析反應之特異性係藉由不具有針對無關SIV-nef或SIV-vif肽抗原之反應性而確認。陽性對照包括暴露於伴刀豆球蛋白A (Con A)之細胞。抗腫瘤免疫療法研究 ： 進行研究以分別在具有確立PSA、MUC1或Brachyury表現腫瘤之小鼠中之免疫療法研究中測試基於Ad5 [E1-, E2b-]之三重疫苗(Tri-Ad5，亦即Ad5 [E1-, E2b-]-PSA (及/或PSMA)、Ad5 [E1-, E2b-]-MUC1及/或Ad5 [E1-, E2b-]-Brachyury)之抗腫瘤能力。在此研究中，評估基於Ad5 [E1-, E2b-]之三重疫苗之個別組分的抗腫瘤活性。 對於活體內腫瘤治療研究，數組(n=7) C57BL/6小鼠在右側腹皮下注射5×10⁵ 個表現PSA (及/或PSMA)、MUC1及/或Brachyury之鼠類腫瘤細胞。在偵測到可觸知腫瘤之後，小鼠係藉由每週時間間隔之3次皮下注射處理，分別注射1×10¹⁰ VP Ad5 [E1-, E2b-]-null (無轉殖基因，例如空載體)、Ad5 [E1-, E2b-]-PSA (及/或PSMA)、Ad5 [E1-, E2b-]-MUC1及/或Ad5 [E1-, E2b-]-Brachyury中之每一者。對照小鼠係注射3×10¹⁰ VP之Adeno-null。計算腫瘤體積且標繪腫瘤生長曲線。每組7-10隻小鼠對於處理之統計評估足夠。當腫瘤達到1500 m³ 或變得嚴重潰瘍時終止腫瘤研究。 較大數目之小鼠經處理以顯示顯著抗腫瘤活性及將免疫療法與免疫路徑檢查點調節劑，諸如抗檢查點抑制劑抗體組合以測定抗腫瘤活性是否經增強。實例 5 疫苗接種之後的 PSA 抗體活性 此實例描述在疫苗接種之後誘發PSA抗體活性。自經Ad5 [E1-, E2b-]-PSA/B7-1/ICAM-1/LFA-3疫苗接種之小鼠之血清評估PSA抗體活性。PSA IgG水準如藉由經Ad5 [E1-, E2b-]-PSA/B7-1/ICAM-1/LFA-3疫苗接種三次之小鼠中之ELISA所測定。 針對相同組之小鼠中之PSA表現腫瘤細胞之補體依賴性細胞細胞毒性(CDCC)係藉由測試個體展示。在經疫苗接種小鼠但未在對照小鼠或僅暴露於補體之細胞中觀測到細胞毒性活性。實例 6 Ad5 [ E1 -, E2b -]- PSA / B7 - 1 / ICAM - 1 / LFA - 3 組合免疫療法臨床試驗 此實例描述組合療法形式之Ad5 [E1-, E2b-]-PSA/B7-1/ICAM-1/LFA-3之臨床試驗。臨床試驗採用Ad5 [E1-, E2b-]-PSA/B7-1/ICAM-1/LFA-3疫苗及抗PDL1抗體之組合用於前列腺癌患者製造免疫療法。研究之I期部分測定經Ad5 [E1-, E2B-]-PSA/B7-1/ICAM-1/LFA-3之免疫在患有前列腺癌之患者中之安全性。研究之II期部分評估針對免疫之患者免疫反應及藉由與抗PDL1抗體組合之Ad5 [E1-, E2b-]-PSA/B7-1/ICAM-1/LFA-3疫苗治療前列腺癌之臨床可行性。 研究群體由患有組織學確診之PSA陽性前列腺癌之患者組成。Ad5 [E1-, E2B-]- PSA/B7-1/ICAM-1/LFA-3疫苗之三個劑量水準之安全性(I期部分)，及使用與抗PDL1抗體組合之Ad5 [E1-, E2B-]- PSA/B7-1/ICAM-1/LFA-3疫苗治療前列腺癌之安全性及適合性(II期部分)係藉由研究測定。 I期研究藥物為藉由皮下(SC)注射給與的Ad5 [E1-, E2B-]-PSA/B7-1/ICAM-1/LFA-3，每3週一次，持續3次免疫。II期研究藥物為藉由皮下(SC)注射給與的與抗PDL1抗體組合之Ad5 [E1-, E2B-]-PSA/B7-1/ICAM-1/LFA-3，每3週一次，持續3次免疫。在前述群體中之最後一位患者已接受其第一次注射之後至少3週在各群體中評估安全性。若＜33%的在一定劑量水準下治療之患者經歷DLT (例如3個患者中之0個、6個患者中之≤1個、12個患者中之≤3個或18個患者中之≤5個)，則給藥方案視為安全。實例 7 Ad5 [ E1 -, E2b -]- PSA / B7 - 1 / ICAM - 1 / LFA - 3 、 Ad5 [ E1 -, E2b -]- PSMA / B7 - 1 / ICAM - 1 / LFA - 3 、 Ad5 [ E1 -, E2b -]- MUC1 / B7 - 1 / ICAM - 1 / LFA - 3 、 Ad5 [ E1 -, E2b -]- Brachyury / B7 - 1 / ICAM - 1 / LFA - 3 及抗 PDL1 抗體組合免疫療法臨床試驗 此實例描述組合療法形式之Ad5 [E1-, E2b-]-PSA/B7-1/ICAM-1/LFA-3、Ad5 [E1-, E2b-]-PSMA/B7-1/ICAM-1/LFA-3、Ad5 [E1-, E2b-]-MUC1/B7-1/ICAM-1/LFA-3、Ad5 [E1-, E2b-]-Brachyury/B7-1/ICAM-1/LFA-3及抗PDL1抗體之臨床試驗。臨床試驗採用Ad5 [E1-, E2b-]-PSA/B7-1/ICAM-1/LFA-3疫苗、Ad5 [E1-, E2b-]-PSMA/B7-1/ICAM-1/LFA-3疫苗、Ad5 [E1-, E2b-]-MUC1/B7-1/ICAM-1/LFA-3疫苗、Ad5 [E1-, E2b-]-Brachyury/B7-1/ICAM-1/LFA-3疫苗及抗PDL1抗體之組合用於晚期PSA表現前列腺癌患者之免疫療法中。研究之I期部分測定經Ad5 [E1-, E2b-]-PSA/B7-1/ICAM-1/LFA-3、Ad5 [E1-, E2b-]-PSMA/B7-1/ICAM-1/LFA-3疫苗、Ad5 [E1-, E2b-]-MUC1/B7-1/ICAM-1/LFA-3、Ad5 [E1-, E2b-]-Brachyury/B7-1/ICAM-1/LFA-3疫苗之免疫在患有前列腺癌之患者中之安全性。研究之II期部分評估針對免疫之患者免疫反應及藉由與抗PDL1抗體組合之Ad5 [E1-, E2b-]-PSA/B7-1/ICAM-1/LFA-3、Ad5 [E1-, E2b-]-PSMA/B7-1/ICAM-1/LFA-3疫苗、Ad5 [E1-, E2b-]-MUC1/B7-1/ICAM-1/LFA-3、Ad5 [E1-, E2b-]-Brachyury/B7-1/ICAM-1/LFA-3疫苗治療前列腺癌之臨床可行性。 研究群體由患有組織學確診之PSA陽性前列腺癌之患者組成。Ad5 [E1-, E2b-]-PSA/B7-1/ICAM-1/LFA-3、Ad5 [E1-, E2b-]-PSMA/B7-1/ICAM-1/LFA-3疫苗、Ad5 [E1-, E2b-]-MUC1/B7-1/ICAM-1/LFA-3、Ad5 [E1-, E2b-]-Brachyury/B7-1/ICAM-1/LFA-3疫苗之三個劑量水準之安全性(I期部分)，及使用與抗PDL1抗體組合之Ad5 [E1-, E2b-]-PSA/B7-1/ICAM-1/LFA-3、Ad5 [E1-, E2b-]-PSMA/B7-1/ICAM-1/LFA-3疫苗、Ad5 [E1-, E2b-]-MUC1/B7-1/ICAM-1/LFA-3、Ad5 [E1-, E2b-]-Brachyury/B7-1/ICAM-1/LFA-3疫苗治療前列腺癌之安全性及適合性(II期部分)係藉由研究測定。 I期研究藥物為藉由皮下(SC)注射給與的Ad5 [E1-, E2b-]-PSA/B7-1/ICAM-1/LFA-3、Ad5 [E1-, E2b-]-PSMA/B7-1/ICAM-1/LFA-3疫苗、Ad5 [E1-, E2b-]-MUC1/B7-1/ICAM-1/LFA-3、Ad5 [E1-, E2b-]-Brachyury/B7-1/ICAM-1/LFA-3疫苗之組合，每3週一次，持續3次免疫。II期研究藥物為藉由皮下(SC)注射給與的與抗PDL1抗體組合之Ad5 [E1-, E2b-]-PSA/B7-1/ICAM-1/LFA-3、Ad5 [E1-, E2b-]-PSMA/B7-1/ICAM-1/LFA-3疫苗、Ad5 [E1-, E2b-]-MUC1/B7-1/ICAM-1/LFA-3、Ad5 [E1-, E2b-]-Brachyury/B7-1/ICAM-1/LFA-3疫苗，每3週一次，持續3次免疫。在前述群體中之最後一位患者已接受其第一次注射之後至少3週在各群體中評估安全性。若＜33%的在一定劑量水準下治療之患者經歷DLT (例如3個患者中之0個、6個患者中之≤1個、12個患者中之≤3個或18個患者中之≤5個)，則給藥方案視為安全。實例 8 藉由 Ad5 [ E1 -, E2b -]- PSA 及 / 或 Ad5 [ E1 -, E2b -]- PSMA 治療癌症 此實例描述為有需要之個體治療癌症，包括PSA表現癌及/或PSMA表現癌。編碼PSA或PSMA之Ad5 [E1-, E2b-]載體係以1×10⁹ -5×10¹¹ 個病毒粒子(VP)之劑量向有需要之個體皮下投與。總共投與疫苗3次且各疫苗接種係由3週時間間隔分離。此後，每兩個月(每兩月)給與追加注射。個體為任何動物，例如哺乳動物，諸如小鼠、人類或非人類靈長類動物。在投與疫苗後，針對PSA表現癌或PSMA表現癌起始細胞及體液反應且消除癌症。實例 9 藉由 Ad5 [ E1 -, E2b -]- PSA 及 / 或 Ad5 [ E1 -, E2b -]- PSMA 及共同刺激分子組合治療癌症 此實例描述組合為有需要之個體治療癌症，包括PSA表現癌及/或PSMA表現癌。編碼PSA或PSMA之Ad5 [E1-, E2b-]載體係與共同刺激分子組合以1×10⁹ -5×10¹¹ 個病毒粒子(VP)之劑量向有需要之個體皮下投與。總共投與疫苗3次且各疫苗接種係由3週時間間隔分離。此後，投與每兩月追加注射。共同刺激分子為B7-1、ICAM-1或LFA-3。個體為任何動物，例如哺乳動物，諸如小鼠、人類或非人類靈長類動物。在投與疫苗及共同刺激分子後，針對PSA表現癌或PSMA表現癌起始細胞及體液反應且消除癌症。實例 10 藉由 Ad5 [ E1 -, E2b -]- PSA 及 / 或 Ad5 [ E1 -, E2b -]- PSMA 及檢查點抑制劑組合治療癌症 此實例描述為有需要之個體治療癌症，包括PSA表現癌及/或PSMA表現癌。編碼PSA及/或PSMA之Ad5 [E1-, E2b-]載體係與檢查點抑制劑組合以1×10⁹ -5×10¹¹ 個病毒粒子(VP)之劑量向有需要之個體皮下投與。總共投與疫苗3次且各疫苗接種係由3週時間間隔分離。此後，投與每兩月追加注射。檢查點抑制劑為抗PDL1抗體，諸如艾維路單抗(Avelumab)。艾維路單抗係根據標註為10 mg/kg之包裝說明書給藥及投與。個體為任何動物，例如哺乳動物，諸如小鼠、人類或非人類靈長類動物。在投與疫苗及檢查點抑制劑後，針對PSA表現癌或PSMA表現癌起始細胞及體液反應且消除癌症。實例 11 藉由 Ad5 [ E1 -, E2b -]- PSA 及 / 或 Ad5 [ E1 -, E2b -]- PSMA 及工程改造 NK 細胞組合治療癌症 此實例描述組合為有需要之個體治療癌症，包括PSA表現癌及/或PSMA表現癌。編碼PSA及/或PSMA之Ad5 [E1-, E2b-]載體係與共同刺激分子組合以1×10⁹ -5×10¹¹ 個病毒粒子(VP)之劑量向有需要之個體皮下投與。總共投與疫苗3次且各疫苗接種係由3週時間間隔分離。此後，投與每兩月追加注射。個體另外經投與工程改造NK細胞，特定言之活化NK細胞(aNK細胞)。aNK細胞係以每次治療2×10⁹ 個細胞之劑量在第-2、12、26及40天輸注。有需要之個體具有CEA表現癌細胞，諸如結腸直腸癌。個體為任何哺乳動物，諸如人類或非人類靈長類動物。實例 12 藉由 Ad5 [ E1 -, E2b -]- PSA 及 / 或 Ad5 [ E1 -, E2b -]- PSMA 及 ALT - 803 組合治療癌症 此實例描述組合為有需要之個體治療癌症，包括PSA表現癌及/或PSMA表現癌。編碼PSA及/或PSMA之Ad5 [E1-, E2b-]載體係與共同刺激分子組合以1×10⁹ -5×10¹¹ 個病毒粒子(VP)之劑量向有需要之個體皮下投與。總共投與疫苗3次且各疫苗接種係由3週時間間隔分離。此後，投與每兩月追加注射。個體亦分別在第1、2、4、5、7及8週以10 µg/kg SC之劑量投與超促效劑/超促效劑複合物，諸如ALT-803。有需要之個體具有CEA表現癌細胞，諸如結腸直腸癌。個體為任何哺乳動物，諸如人類或非人類動物。實例 13 藉由 Ad5 [ E1 -, E2b -]- PSA 及 / 或 Ad5 [ E1 -, E2b -]- PSMA 及 低劑量化學療法組合治療癌症 此實例描述組合為有需要之個體治療癌症，包括PSA表現癌及/或PSMA表現癌。編碼PSA及/或PSMA之Ad5 [E1-, E2b-]載體係與共同刺激分子組合以1×10⁹ -5×10¹¹ 個病毒粒子(VP)之劑量向有需要之個體皮下投與。總共投與疫苗3次且各疫苗接種係由3週時間間隔分離。此後，投與每兩月追加注射。 亦向個體投與低劑量化學療法。化學療法為環磷醯胺。化學療法係以低於臨床照護標準劑量之劑量投與。舉例而言，化學療法係在每2週之第1-5及8-12天以50 mg投與，每天兩次(BID)，持續總共8週。有需要之個體具有CEA表現癌細胞，諸如結腸直腸癌。個體為任何哺乳動物，諸如人類或非人類動物。實例 14 藉由 Ad5 [ E1 -, E2b -]- PSA 及 / 或 Ad5 [ E1 -, E2b -]- PSMA 及低劑量輻射組合治療癌症 此實例描述組合為有需要之個體治療癌症，包括PSA表現癌及/或PSMA表現癌。編碼PSA及/或PSMA之Ad5 [E1-, E2b-]載體係與共同刺激分子組合以1×10⁹ -5×10¹¹ 個病毒粒子(VP)之劑量向有需要之個體皮下投與。總共投與疫苗3次且各疫苗接種係由3週時間間隔分離。此後，投與每兩月追加注射。 亦向個體投與低劑量輻射。低劑量輻射係以低於臨床照護標準劑量之劑量投與。在第8、22、36、50天給與8 Gy之同步立體定向體部放射治療(SBRT)(每2週一次，持續4個劑量)。輻射係向使用SBRT之所有可行的腫瘤位點投與。有需要之個體具有CEA表現癌細胞，諸如結腸直腸癌。個體為任何哺乳動物，諸如人類或非人類動物。 雖然本文中已展示及描述本發明之較佳實施例，但熟習此項技術者將明白，此等實施例僅藉助於實例提供。熟習此項技術者現將在不背離本發明之情況下想到許多變化、改變及取代。應理解，本文所描述之本發明實施例之各種替代方案可用於實踐本發明。希望以下申請專利範圍限定本發明之範疇，且從而涵蓋此申請專利範圍及其等效物之範疇內的方法及結構。 序列表

本發明之新穎特徵詳細闡明於隨附申請專利範圍中。將參考闡述利用本發明原理之說明性實施例及其附圖的以下詳細描述來獲得對本發明之特徵及優勢的更好理解：圖 1 說明在同源免疫之後於小鼠中誘發PSA特異性細胞免疫。圖 1A 說明Ad5免疫BALB/c小鼠中之IFN-γ細胞介導之免疫(CMI)反應，該等小鼠以7天時間間隔經注射緩衝液(對照組)或10¹⁰ 病毒粒子(VP)之Ad5 [E1-, E2b-]-PSA免疫三次。圖 1B 說明Ad5免疫BALB/c小鼠中之IL-2細胞介導之免疫(CMI)反應，該等小鼠以7天時間間隔經注射緩衝液(對照組)或10¹⁰ 病毒粒子(VP)之Ad5 [E1-, E2b-]-PSA免疫三次。圖 2 說明在經Ad5 [E1-, E2b-]-PSA免疫之後，PSA細胞介導之免疫性之特異性。圖 2A 說明在離體暴露於PSA或對照抗原(HIV-gag，CMV)之後，每10⁶ 個脾細胞之IFN-γ斑點形成細胞(SFC)。圖 2B 說明在離體暴露於PSA或對照抗原(HIV-gag，CMV)之後，每10⁶ 個脾細胞之IL-2斑點形成細胞(SFC)。圖 3 說明使用定量ELISA之PSA定向抗體(抗PSA Ab)反應。圖 4 說明在植入表現PSA之腫瘤細胞後，經Ad5 [E1-, E2b-]-PSA免疫之小鼠相比於經Ad5 [E1-, E2b-]-null免疫之小鼠的腫瘤生長。圖 5 說明在經Ad5 [E1-]-PSA或Ad5 [E1-, E2b-]-PSA感染之後自細胞之PSA分泌。RM-11鼠類前列腺腫瘤細胞或HEK-293細胞分別經Ad5 [E1-]-PSA或Ad5 [E1-, E2b-]-PSA感染。分泌至培養基中之PSA的水準係在各種時間點評估。注意相比於經Ad5 [E1-]-PSA感染之細胞，藉由經Ad5 [E1-, E2b-]-PSA感染之細胞的較大PSA分泌。圖 6 說明經Ad5 [E1-, E2b-]-PSA免疫三次之後的初始(naïve)小鼠中或經Ad5 [E1-, E2b-]-PSA免疫三次之後的Ad5免疫小鼠中之PSA特異性細胞免疫性。初始或Ad5免疫BALB/c小鼠以7天時間間隔經注射緩衝液(對照組)或10¹⁰ VP之Ad5 [E1-, E2b-]-PSA免疫三次。在最終免疫之後14天在ELISpot分析中關於IFN-γ分泌對脾細胞進行評估。細胞暴露於2 μg之PSA抗原。圖 7 說明經Ad5 [E1-, E2b-]-PSA免疫三次之後的初始小鼠中或經Ad5 [E1-, E2b-]-PSA免疫三次之後的Ad5免疫小鼠中之PSA特異性細胞免疫性。初始或Ad5免疫BALB/c小鼠以7天時間間隔經注射緩衝液(對照組)或10¹⁰ VP之Ad5 [E1-, E2b-]-PSA免疫三次。在最終免疫之後14天在ELISpot分析中關於IL-2分泌對脾細胞進行評估。細胞暴露於2 μg之PSA抗原。圖 8 說明在Ad5免疫小鼠中藉由Ad5 [E1-, E2b-]-PSA免疫之後的PSA細胞介導免疫性之特異性。Ad5免疫BALB/c小鼠以14天時間間隔經10¹⁰ VP Ad5 [E1-]-null免疫兩次。在Ad5 [E1-]-null之最後一次免疫之後兩週，小鼠以7天時間間隔經10¹⁰ VP之Ad5 [E1-, E2b-]-PSA免疫三次。在最後一次免疫之後14天藉由ELISpot分析關於離體暴露於PSA或對照抗原(HIV-gag，CMV)之後的IFN-γ及IL-2兩者之分泌對脾細胞進行評估。圖 8A 說明在將脾細胞離體暴露於PSA或對照抗原肽池(HIV-gag，CMV)之後的IFN-γ分泌細胞之頻率。圖 8B 說明在將脾細胞離體暴露於PSA或對照抗原肽池(HIV-gag，CMV)之後的IL-2分泌細胞之頻率。圖 9 說明在經Ad5 [E1-, E2b-]-PSA免疫三次之後的初始小鼠中之抗PSA抗體(Ab)活性。BALB/c小鼠以7天時間間隔經注射緩衝液(對照組)或10¹⁰ VP之Ad5 [E1-, E2b-]-PSA免疫三次。在最後一次免疫之後14天在使用純化PSA作為抗體捕獲抗原標靶之定量ELISA中關於抗PSA Ab之存在對血清進行評估。圖 10 說明插入至Ad5 [E1-, E2b-]中之可能的前列腺癌多抗原基因構築體。圖 10A 說明用於前列腺癌疫苗之三重基因插入物。圖 10B 說明圖 10A 之轉譯之後的產物。圖 11 說明在藉由Ad5 [E1-, E2b-]-PSMA對小鼠疫苗接種之後的表現IFN-γ、IL-2及顆粒酶B之脾細胞之分析。C57BL/6小鼠(n=5/組)以2週時間間隔經10¹⁰ VP之Ad5 [E1-, E2b-]-PSMA (紅色條)或Ad5 [E1-, E2b-]-null (黑色條)疫苗接種兩次。在最後一次疫苗接種及離體暴露於PSMA肽池、陰性對照抗原(Nef肽池)或陽性對照(ConA)之後7天收集脾細胞。ELISPOT分析係用於評估分別暴露於PSMA肽池、陰性對照抗原(Nef肽池)或ConA之後的IFN-γ分泌、IL-2分泌及顆粒酶B分泌。資料報導為每10⁶ 個脾細胞之斑點形成細胞(SF)的數目。誤差條描繪SEM。圖 11A 說明離體刺激之後的IFN-γ分泌細胞之頻率。圖 11B 說明離體刺激之後的IL-2分泌細胞之頻率。圖 11C 說明離體刺激之後的顆粒酶B分泌細胞之頻率。圖 12 說明對疫苗接種Ad5 [E1-, E2b-]-PSMA之後的CD8+脾細胞及CD4+脾細胞及多功能細胞群體之分析。C57BL/6小鼠(n=5/組)以2週時間間隔經10¹⁰ VP之Ad5 [E1-, E2b-]-PSMA 或Ad5 [E1-, E2b-]-null (黑色條)疫苗接種兩次。在最後一次疫苗接種之後7天收集脾細胞且經PSMA肽池或陰性對照(普通培養基或SIV nef肽池)離體刺激。藉由流動式細胞測量術關於表現型及發炎性細胞介素分泌對細胞進行評估。對於陽性對照，脾細胞係暴露於PMA/離子黴素(資料未示出)。誤差條描繪SEM。圖 12A 說明離體刺激之後的分泌IFN-γ之CD8β+脾細胞之百分比。圖 12B 說明離體刺激之後的分泌IFN-γ之CD4+脾細胞之百分比。圖 12C 說明離體刺激之後的分泌IFN-γ及TNF-α之CD8β+脾細胞之百分比。圖 12D 說明離體刺激之後的分泌IFN-γ及TNF-α之CD4+脾細胞之百分比。圖 13 說明疫苗接種Ad5 [E1-, E2b-]-PSMA之後的小鼠中之抗體反應。C57BL/6小鼠(n=5/組)以2週時間間隔經10¹⁰ VP之Ad5 [E1-, E2b-]-PSMA (紅色條)或Ad5 [E1-, E2b-]-null (黑色條)疫苗接種兩次。在最後一次疫苗接種之後7天收集血清且藉由ELISA評估針對PSMA蛋白質之抗原特異性抗體。圖 14 說明在藉由Ad5 [E1-, E2b-]-PSA對小鼠疫苗接種之後的表現IFN-γ、IL-2及顆粒酶B之脾細胞之分析。C57BL/6小鼠(n=5/組)以2週時間間隔經疫苗接種三次，隨後腫瘤植入有10¹⁰ VP之Ad5 [E1-, E2b-]-PSA (條紋狀條)或Ad5 [E1-, E2b-]-null (黑色條)。在最後一次疫苗接種之後兩週，小鼠經注射5×10⁵ 個表現PSA之D2F2致瘤細胞，注射至小鼠之右後肢側。在實驗結束(腫瘤植入後37天)時收集脾細胞且經PSA肽池、陰性對照(SIV-Nef肽池)或陽性對照(伴刀豆球蛋白A (Con A))離體刺激。使用ELISPOT分析在離體刺激之後量測細胞介素分泌。資料報導為每10⁶ 個脾細胞之斑點形成細胞(SFC)的數目且誤差條顯示SEM。圖 14A 說明離體暴露刺激之後的每10⁶ 個脾細胞之IFN-γ斑點形成細胞(SFC)。圖 14B 說明離體刺激之後的每10⁶ 個脾細胞之IL-2斑點形成細胞(SFC)。圖 14C 說明離體刺激之後的每10⁶ 個脾細胞之顆粒酶B斑點形成細胞(SFC)。圖 15 說明對疫苗接種Ad5 [E1-, E2b-]-PSA之後的CD8+脾細胞及CD4+脾細胞及多功能細胞群體之分析。C57BL/6小鼠(n=5/組)以2週時間間隔經10¹⁰ VP之Ad5 [E1-, E2b-]-PSA 或Ad5 [E1-, E2b-]-null (黑色條)疫苗接種三次。在最後一次疫苗接種之後兩週，小鼠經注射5×10⁵ 個表現PSA之D2F2致瘤細胞，注射至小鼠之右後肢側。在實驗結束(腫瘤接種後37天)時收集脾細胞且離體暴露於PSA肽池或陰性對照抗原(培養基或SIV-Nef肽池)。細胞關於表面標記物及細胞內細胞介素分泌染色且藉由流動式細胞測量術分析。圖 15A 說明分泌IFN-γ之CD8β+脾細胞的百分比。圖 15B 說明分泌IFN-γ之CD4+脾細胞的百分比。圖 15C 說明分泌IFN-γ及TNF-α之CD8β+脾細胞的百分比。圖 15D 說明分泌IFN-γ及TNF-α之CD4+脾細胞的百分比。圖 16 說明在來自BALB/c小鼠(n=5/組)之血清中量測之抗體反應，該等小鼠每兩週經10¹⁰ VP之Ad5 [E1-, E2b-]-null或Ad5 [E1-, E2b-]-PSA免疫三次。在最後一次疫苗接種之後兩週，小鼠經注射5×10⁵ 個表現PSA之D2F2致瘤細胞，注射至小鼠之右後肢側。在實驗結束(腫瘤接種後37天)時收集血清且使用酶聯免疫吸附分析(ELISA)來分析抗體之存在。圖 16A 說明針對PSA之IgG特異性抗體的質量。圖 16B 說明針對PSA之IgG1特異性抗體的質量。

<110> 美商依圖比克斯公司(ETUBICS CORPORATION)

<120> 利用前列腺癌相關抗原之腫瘤疫苗接種之組合物及方法

<130> 39891-730.601

<140> TW 106118357

<141> 2017-06-02

<150> US 62/345,582

<151> 2016-06-03

<160> 113

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 261

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列之描述：合成多肽

<400> 1

<210> 2

<211> 783

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列之描述：合成聚核苷酸

<400> 2

<210> 3

<211> 2500

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列之描述：合成聚核苷酸

<400> 3

<210> 4

<211> 1251

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列之描述：合成聚核苷酸

<400> 4

<210> 5

<211> 410

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列之描述：合成多肽

<400> 5

<210> 6

<211> 435

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列之描述：合成多肽

<400> 6

<210> 7

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列之描述：合成肽

<400> 7

<210> 8

<211> 1826

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列之描述：合成聚核苷酸

<400> 8

<210> 9

<211> 1826

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列之描述：合成聚核苷酸

<400> 9

<210> 10

<211> 475

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列之描述：合成多肽

<400> 10

<210> 11

<211> 750

<212> PRT

<213> 智人

<400> 11

<210> 12

<211> 31465

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列之描述：合成聚核苷酸

<400> 12

<210> 13

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列之描述：合成肽

<400> 13

<210> 14

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列之描述：合成肽

<400> 14

<210> 15

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列之描述：合成肽

<400> 15

<210> 16

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列之描述：合成肽

<400> 16

<210> 17

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列之描述：合成肽

<400> 17

<210> 18

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列之描述：合成肽

<400> 18

<210> 19

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列之描述：合成肽

<400> 19

<210> 20

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列之描述：合成肽

<400> 20

<210> 21

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列之描述：合成肽

<400> 21

<210> 22

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列之描述：合成肽

<400> 22

<210> 23

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列之描述：合成肽

<400> 23

<210> 24

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列之描述：合成肽

<400> 24

<210> 25

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列之描述：合成肽

<400> 25

<210> 26

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列之描述：合成肽

<400> 26

<210> 27

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列之描述：合成肽

<400> 27

<210> 28

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列之描述：合成肽

<400> 28

<210> 29

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列之描述：合成肽

<400> 29

<210> 30

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列之描述：合成肽

<400> 30

<210> 31

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列之描述：合成肽

<400> 31

<210> 32

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列之描述：合成肽

<400> 32

<210> 33

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列之描述：合成肽

<400> 33

<210> 34

<211> 261

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列之描述：合成多肽

<400> 34

<210> 35

<211> 786

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列之描述：合成聚核苷酸

<400> 35

<210> 36

<211> 2253

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列之描述：合成聚核苷酸

<400> 36

<210> 37

<211> 2109

<212> DNA

<213> 智人

<400> 37

<210> 38

<211> 9

<212> PRT

<213> 智人

<400> 38

<210> 39

<211> 9

<212> PRT

<213> 智人

<400> 39

<210> 40

<211> 32315

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列之描述：合成聚核苷酸

<400> 40

<210> 41

<211> 1428

<212> DNA

<213> 智人

<400> 41

<210> 42

<211> 1233

<212> DNA

<213> 智人

<400> 42

<210> 43

<211> 132

<212> PRT

<213> 結核分支桿菌

<400> 43

<210> 44

<211> 230

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列之描述：合成多肽

<400> 44

<210> 45

<211> 578

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列之描述：合成多肽

<400> 45

<210> 46

<211> 220

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列之描述：合成多肽

<400> 46

<210> 47

<211> 729

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列之描述：合成多肽

<400> 47

<210> 48

<211> 30

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列之描述：合成多肽

<400> 48

<210> 49

<211> 128

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列之描述：合成多肽

<400> 49

<210> 50

<211> 128

<212> PRT

<213> 結核分支桿菌

<400> 50

<210> 51

<211> 355

<212> PRT

<213> 結核分支桿菌

<400> 51

<210> 52

<211> 364

<212> PRT

<213> 流感嗜血桿菌

<400> 52

<210> 53

<211> 313

<212> PRT

<213> 肺炎鏈球菌

<400> 53

<210> 54

<211> 166

<212> PRT

<213> 智人

<400> 54

<210> 55

<211> 233

<212> PRT

<213> 智人

<400> 55

<210> 56

<211> 153

<212> PRT

<213> 智人

<400> 56

<210> 57

<211> 99

<212> PRT

<213> 智人

<400> 57

<210> 58

<211> 662

<212> PRT

<213> 智人

<400> 58

<210> 59

<211> 193

<212> PRT

<213> 智人

<400> 59

<210> 60

<211> 177

<212> PRT

<213> 智人

<400> 60

<210> 61

<211> 152

<212> PRT

<213> 智人

<400> 61

<210> 62

<211> 153

<212> PRT

<213> 智人

<400> 62

<210> 63

<211> 134

<212> PRT

<213> 智人

<400> 63

<210> 64

<211> 212

<212> PRT

<213> 智人

<400> 64

<210> 65

<211> 140

<212> PRT

<213> 智人

<400> 65

<210> 66

<211> 178

<212> PRT

<213> 智人

<400> 66

<210> 67

<211> 145

<212> PRT

<213> 智人

<400> 67

<210> 68

<211> 136

<212> PRT

<213> 智人

<400> 68

<210> 69

<211> 656

<212> PRT

<213> 智人

<400> 69

<210> 70

<211> 124

<212> PRT

<213> 霍亂弧菌

<400> 70

<210> 71

<211> 258

<212> PRT

<213> 霍亂弧菌

<400> 71

<210> 72

<211> 124

<212> PRT

<213> 霍亂弧菌

<400> 72

<210> 73

<211> 18

<212> PRT

<213> 智人

<400> 73

<210> 74

<211> 96

<212> PRT

<213> 智人

<400> 74

<210> 75

<211> 92

<212> PRT

<213> 智人

<400> 75

<210> 76

<211> 144

<212> PRT

<213> 智人

<400> 76

<210> 77

<211> 204

<212> PRT

<213> 智人

<400> 77

<210> 78

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列之描述：合成肽

<400> 78

<210> 79

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列之描述：合成肽

<400> 79

<210> 80

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列之描述：合成肽

<400> 80

<210> 81

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列之描述：合成肽

<400> 81

<210> 82

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列之描述：合成肽

<400> 82

<210> 83

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列之描述：合成肽

<400> 83

<210> 84

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列之描述：合成肽

<400> 84

<210> 85

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列之描述：合成肽

<400> 85

<210> 86

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列之描述：合成肽

<400> 86

<210> 87

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列之描述：合成肽

<400> 87

<210> 88

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列之描述：合成肽

<400> 88

<210> 89

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列之描述：合成肽

<400> 89

<210> 90

<211> 69

<212> PRT

<213> 痢疾桿菌1

<400> 90

<210> 91

<211> 560

<212> PRT

<213> 棒狀桿菌噬菌體Ω

<400> 91

<210> 92

<211> 114

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列之描述：合成多肽

<400> 92

<210> 93

<211> 297

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列之描述：合成多肽

<400> 93

<210> 94

<211> 535

<212> PRT

<213> 白喉棒狀桿菌

<400> 94

<210> 95

<211> 1331

<212> PRT

<213> 智人

<400> 95

<210> 96

<211> 155

<212> PRT

<213> 智人

<400> 96

<210> 97

<211> 476

<212> PRT

<213> 智人

<400> 97

<210> 98

<211> 234

<212> PRT

<213> 智人

<400> 98

<210> 99

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列之描述：合成肽

<400> 99

<210> 100

<211> 4

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列之描述：合成肽

<400> 100

<210> 101

<211> 2

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列之描述：合成肽

<400> 101

<210> 102

<211> 3

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列之描述：合成肽

<400> 102

<210> 103

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列之描述：合成肽

<400> 103

<210> 104

<211> 2

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列之描述：合成肽

<400> 104

<210> 105

<211> 2

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列之描述：合成肽

<400> 105

<210> 106

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列之描述：合成肽

<400> 106

<210> 107

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列之描述：合成肽

<400> 107

<210> 108

<211> 14

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列之描述：合成肽

<400> 108

<210> 109

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列之描述：合成肽

<400> 109

<210> 110

<211> 20

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列之描述：合成肽

<400> 110

<210> 111

<211> 23

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列之描述：合成肽

<400> 111

<210> 112

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列之描述：合成肽

<400> 112

<210> 113

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列之描述：合成肽

<400> 113

Claims (17)

1. 一種包含複製缺陷型腺病毒載體之組合物，該腺病毒載體包含E1基因缺失及E2b基因缺失以及編碼前列腺特異性抗原(PSA)之核酸序列，其中該PSA具有與SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：34至少85%一致之胺基酸序列。
2. 如請求項1之組合物，其中該編碼PSA之核酸序列具有與SEQ ID NO：35至少99%一致之序列，或該編碼PSA之核酸序列具有與SEQ ID NO：2至少99%一致之序列。
3. 如請求項1之組合物，其進一步包含額外之複製缺陷型病毒載體，該額外之複製缺陷型病毒載體包含編碼Brachyury抗原之額外之核酸序列。
4. 如請求項1至3中任一項之組合物，其進一步包含額外之複製缺陷型病毒載體，該額外之複製缺陷型病毒載體包含編碼MUC1抗原之額外之核酸序列。
5. 如請求項3之組合物，其中該額外之複製缺陷型載體包含與SEQ ID NO：12(具有編碼經修飾Brachyury抗原之序列的Ad載體)、SEQ ID NO：12之位置1033-2083或SEQ ID NO：42至少99%一致之核苷酸序列。
6. 如請求項4之組合物，其中該MUC1抗原包含與SEQ ID NO：10或SEQ ID NO：41至少85%一致之序列；及/或 其中該編碼MUC1抗原之額外之核酸序列包含與SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：9或SEQ ID NO：41至少99%一致性。
7. 如請求項3或5之組合物，其中該包含編碼MUC1抗原之額外之核酸序列的該額外之複製缺陷型病毒載體為腺病毒載體。
8. 如請求項4之組合物，其中該包含編碼Brachyury抗原之額外之核酸序列的該額外之複製缺陷型病毒載體為腺病毒載體。
9. 如請求項1至3及5中任一項之組合物，其中該組合物包含至少1×10⁹個病毒粒子至5×10¹²個病毒粒子。
10. 如請求項1至3及5中任一項之組合物，其中該組合物或該複製缺陷型病毒載體進一步包含編碼共同刺激分子之核酸序列，且其中該共同刺激分子包含B7、ICAM-1、LFA-3或其組合。
11. 如請求項1至3及5中任一項之組合物，其中該組合物進一步包含編碼複數個共同刺激分子的複數個核酸序列置於相同複製缺陷型病毒載體中，其中該共同刺激分子包含B7、ICAM-1、LFA-3或其組合；或其中該組合物進一步包含編碼複數個共同刺激分子的複數個核酸序列置於分開的複製缺陷型病毒載體中，其中該共同刺激分子包含B7、ICAM-1、LFA-3或其組合。
12. 如請求項1至3及5中任一項之組合物，其中該組合物進一步包含編碼 一或多個額外靶抗原或其免疫抗原決定基之核酸序列；或其中該複製缺陷型病毒載體進一步包含編碼一或多個額外靶抗原或其免疫抗原決定基之核酸序列。
13. 如請求項12之組合物，其中該一或多個額外靶抗原為CEA、葉酸受體α、WT1、HPV E6、HPV E7、p53、MAGE-A1、MAGE-A2、MAGE-A3、MAGE-A4、MAGE-A6、MAGE-A10、MAGE-A12、BAGE、DAM-6、DAM-10、GAGE-1、GAGE-2、GAGE-8、GAGE-3、GAGE-4、GAGE-5、GAGE-6、GAGE-7B、NA88-A、NY-ESO-1、MART-1、MC1R、Gp100、PSCA、PSMA、PAP、酪胺酸酶、TRP-1、TRP-2、ART-4、CAMEL、Cyp-B、Her2/neu、BRCA1、BRACHYURY、BRACHYURY(TIVS7-2，多態性)、BRACHYURY(IVS7T/C多態性)、T BRACHYURY、T、hTERT、hTRT、iCE、MUC1、MUC1(VNTR多態性)、MUC1c、MUC1n、MUC2、PRAME、P15、RU1、RU2、SART-1、SART-3、WT1、AFP、β-連環蛋白(catenin)/m、凋亡蛋白酶(Caspase)-8/m、CDK-4/m、Her2/neu、Her3、ELF2M、GnT-V、G250、HSP70-2M、HST-2、KIAA0205、MUM-1、MUM-2、MUM-3、肌球蛋白/m、RAGE、SART-2、TRP-2/INT2、707-AP、磷脂結合蛋白(Annexin)II、CDC27/m、TPI/mbcr-abl、ETV6/AML、LDLR/FUT、Pml/RARα或TEL/AML1，或剪接變異體或其組合。
14. 如請求項1至3及5中任一項之組合物，其中該複製缺陷型病毒載體進一步包含可選拔之標記物。
15. 一種醫藥組合物，其包含如請求項1至14中任一項之組合物及醫藥學上可接受之載劑。
16. 一種宿主細胞，其包含如請求項1至14中任一項之組合物。
17. 一種如請求項1至14中任一項之組合物或如請求項15之醫藥組合物用於製備藥物之用途，其中該藥物係於有需要之個體用於治療表現PSA之癌症。

Images