TWI726850B - 免疫/治療性醣共軛物組合物及其用途 - Google Patents

Abstract

本發明涵蓋包含Globo H-KLH共軛(OBI-822)及/或治療抗體(OBI-821/OBI-834)的治療組合物、以及製造與使用該治療組合物以治療增殖性疾病(諸如癌症)的方法。治療共軛物包括連接至載體的抗原。具體而言，該治療共軛物包括Globo H部分及可選地透過連接物連接的KLH部分及/或衍生化的KLH部分次單元。治療組合物一部分係設想作為癌症疫苗以增進身體保護自己的自然能力，其透過免疫系統以免於受損或異常細胞(諸如癌細胞)所帶來的危害。例示性的免疫反應可具有減少疾病嚴重性的特徵，包括但不限於，疾病預防、疾病發病之延緩、症狀嚴重性之減低、降低之發病率以及延緩死亡率。

Description

免疫/治療性醣共軛物組合物及其用途 【相關申請案】

本案主張於2014年9月15日提交的第62/050,567號美國臨時申請案的優先權，其全部內容以引用方式併入本文。

本發明係針對用於癌症免疫治療的組合物及方法，以及，特別是，可誘發抗癌免疫反應的免疫性/治療性醣共軛物。

醣抗原Globo H(Fucα1→2 Galβ1→3 GalNAcβ1→3 Galα1→4 Galβ1→4 Glc)係於1984年，由Hakomori等人從乳癌細胞株MCF-7中，以神經醯胺鏈結醣脂質之形式被分離並鑑定(Bremer E G,et al.(1984)J Biol Chem 259：14773-14777)。使用抗Globo H單株抗體的進一步研究顯示，Globo H存在於許多其他癌症中，包括前列腺癌、胃癌、胰腺癌、肺癌、卵巢癌和結腸癌，而僅最小量表現於不容易接觸到免疫系統的正常分泌性組織的腔表面(Ragupathi G,et al.(1997)Angew Chem Int Ed 36：125-128)。此外，據證實，乳癌患者的血清中含有高濃度的抗Globo H抗體(Gilewski T et al.(2001)Proc Natl Acad Sci USA 98：3270-3275；Huang C-Y,et al.(2006)Proc Natl Acad Sci USA 103：15-20；Wang C-C,et al.(2008)Proc Natl Acad Sci USA 105(33)：11661-11666)。具有Globo H陽性腫瘤的患者較具有Globo H陰性腫瘤的患者，呈現出較低的存活率(Chang,Y-J,et al.(2007)Proc Natl Acad Sci USA 104(25)：10299-10304)。這些發現使具有六糖抗原決定基的Globo H成為引人注意的腫瘤標記以及癌症疫苗發展的可行標的。

雖然已經開發了針對Globo H引發抗體反應的疫苗，其抗癌功效由於Globo H的低抗原性是不令人滿意的。能夠針對Globo H引發高度免疫反應之新疫苗有其需求。

KLH含有可組裝成十聚體的(decameric)(10-mer)、二十聚體的(didecameric)(20-mer)以及更大顆粒的醣基化多肽次單元。這些多聚體結構已藉由超高速離心技術來特徵化，該超高速離心技術係針對分離次單元產生11-19S的沉澱係數以及針對二十聚體多聚體產生92-107S的沉澱係數。多種因素可影響包括KLH的軟體動物血藍蛋白(molluscan hemocyanin)的尺寸分布。這些因素包括離子強度、pH、溫度、pO₂以及特定二價陽離子(特別是鈣和鎂)的可得性。

本案發明人已開發出具有意想不到的增加功效的組合物，其主要含有連接至複數個Globo H部分的KLH二聚體、三聚體以及其他多聚體。

因此，本發明普遍涵蓋含有Globo H的治療性及/或預防性組合物，以及其免疫治療劑、疫苗、劑型、試劑組以及製備方法和療法。

在一具體實施例中，本發明涵蓋經分離的治療性共軛物(conjugate)，其包含連接至一鑰孔蟲戚血藍蛋白(KLH)部分次單元的一Globo H部分。在部分具體實施例中，所述連接為一共價鍵。

在另一具體實施例中，本發明涵蓋經分離的治療性共軛物，其包含共價地連接至一鑰孔蟲戚血藍蛋白(KLH)部分次單元的一Globo H部分，其中該KLH是衍生化的KLH。當指稱Globo-H及KLH時，本文所使用的術語「共價地連接(covalently linked)」意謂：Globo-H係直接地共價連接至KLH或Globo-H係共價地連接至衍生化的KLH(如本文所述)或Globo-H係透過一連接物基團(如本文所述)共價地連接至KLH或是Globo-H係透過連接物基團和衍生化的KLH兩者共價地連接至KLH。

在部分例示性具體實施例中，本發明的衍生化的KLH具有以下結構：

在一具體實施例中，本發明涵蓋經分離的治療性 共軛物，其包含透過連接物分子共價地連接至一鑰孔蟲戚血藍蛋白(KLH)部分次單元的一Globo H部分。

在一具體實施例中，該等Globo H部分係共軛至KLH部分次單元的離胺酸殘基。

在一具體實施例中，每個KLH部分次單元中總共有確切為或是大約145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、159、160個離胺酸殘基，其可用於或實際上直接或間接地與一Globo H部分共軛。

在另一具體實施例中，本發明涵蓋經分離的治療性共軛物，其包含透過4-(4-N-順丁烯二醯亞胺甲基)環己烷-1-羧醯肼(4-(4-N-maleimidomethyl)cyclohexane-1-carboxyl hydrazide，MMCCH)連接物基團共價地連接至一鑰孔蟲戚血藍蛋白(KLH)部分次單元的一Globo H部分。本發明的MMCCH連接物具有下列結構：

在另一個例示性具體實施例中，本發明涵蓋具有以下一般結構的經分離的治療性共軛物：

其中n為從約1至約160的整數。在部分具體實施例中，一單體的KLH部分可包括約1至約160個Globo H部分。所屬領域中具有通常知識者將理解該結構係例示為亞胺氫氯化物鹽(iminium hydrochloride salts)，但也可以亞胺形式存在或共存在。因此，本發明涵蓋亞胺以及其包括如亞胺氫氯化物鹽類的鹽類兩者。在部分具體實施例中，單體的KLH部分可包括約1至約125個Globo H部分。在部分具體實施例中，單體的KLH部分可包括約1至約100個Globo H部分。在部分具體實施例中，單體的KLH部分可包括約1至約75個Globo H部分。在部分具體實施例中，單體的KLH部分可包括約1至約50個Globo H部分。在部分具體實施例中，單體的KLH部分可包括約1至約25個Globo H部分。在部分具體實施例中，單體的KLH部分可包括約1至約10個Globo H部分。

在部分具體實施例中，該等Globo H部分係以共價至一些胺基酸殘基的方式結合至該等KLH部分。在部分具體實施例中，該等胺基酸殘基可包含或不包含精胺酸、離胺酸、組胺酸、天門冬醯胺酸、脯胺酸、麩醯胺酸或其組合。

在另一具體實施例中，該等Globo H部分係結合至單體的KLH部分次單元上的離胺酸共軛位點。

在另一具體實施例中，在每一單體的KLH部分次單元上有確切為或大約60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109或110個離胺酸共軛位點，其可用於或實際上與一Globo H部分結合。在另一具體實施例中，在每一KLH部分次單元上有62、66、67、68、70、72、76、86、87、88、90、92、93、100個此種離胺酸共軛位點。

在包含部分次單元(例如，KLH1及KLH2或其變體)的混合物之治療組合物的部分具體實施例中，總計可用的離胺酸(對於兩個次單元而言)，以橫跨不同次單元類型一起計算，數目可為確切為或大約290、291、292、293、294、295、296、297、298、299、300、301、302、303、304、305、306、307、308、309或310。在此種具體實施例中，橫跨不同次單元(例如，KLH1及KLH2或其變體)共有確切為或大約130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、159或160個離胺酸共軛位點。在其他的此種具體實施例中，有136、137、141、140、143、147或155個離胺酸結合共軛位點。

在另一例示性具體實施例中，本發明涵蓋具有下列一般結構之經分離的治療性共軛物：

其中n獨立地為約1至約3000的整數，且m獨立地為約1至約20的整數。在部分具體實施例中，當m大於1，KLH部分可聚集以形成多聚體結構。在部分具體實施例中，所述聚集作用是共價鍵結。在部分其他具體實施例中，聚集作用非為共價鍵結(例如，聚集作用是藉由氫鍵或疏水交互作用所形成)。在部分具體實施例中，單體的KLH部分(即，其中m=1)可包括約1至約160個Globo H部分。在部分具體實施例中，二聚體的KLH部分(即，其中m=2)可包括約1至約300個Globo H部分。在部分具體實施例中，三聚體的KLH部分(即，其中m=3)可包括約1至約450個Globo H部分。在部分具體實施例中，四聚體的KLH部分(即，其中m=4)可包括約1至約600個Globo H部分。在部分具體實施例中，五聚體的KLH部分(即，其中m=5)可包括約1至約750個Globo H部分。在部分具體實施例中，六聚體的KLH部分(即，其中m=6)可包括約1至約900個Globo H部分。在部分具體實施例中，二十聚體的KLH部分(即，其中m=20)可包括約1至約3000個Globo H部分。

在另一個例示性具體實施例中，本發明涵蓋具有以下一般結構的經分離的治療性共軛物：

其中n獨立地為約1至約150的整數，且m獨立地為約1至約20的整數。

在另一具體實施例中，本發明涵蓋具有下列一般結構的經分離的治療性共軛物：

其中n獨立地為約1至約160的整數，且其中m獨立地為約1至約20的整數。在部分具體實施例中，m為約1至約5的整數。在部分具體實施例中，m為約1至約3的整數。在部分具體實施例中，m為1。在部分具體實施例中，m為2。在部分具體實施例中，m為3。在部分具體實施例中，m為4。在部分具體實施例中，m為5。在部分具體實施例中，m為6。在部分具體實施例中，m為7。在部分具體實施例中，m為8。在部分具體實施例中，m為9。在部分具體實施例中，m為10。在部分具體實施例中，m為11。在部分具體實施例中，m為12。在部分具體實施例中，m為13。在部分具體實施例中，m為14。在部分具體實施例中，m為15。在部分具體實施例中，m為16。在部分具體實施例中，m為17。在部分具體實施例中，m為18。在部分具體實施例中，m為19。在部分具體實施例中，m為20。在部分具體實施例中，對於任何上述實施例，當m為1至20時，各個n分別為1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、 12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、159或160。

在部分具體實施例中，有一個以上的Globo H部分附接至每一單體的KLH部分。在部分例示性具體實施例中，附接至每一KLH部分之一個以上的Globo H部分係透過一連接物附接。在其他例示性具體實施例中，附接至每一KLH部分的一個以上的Globo H部分係透過連接物附接且被附接至衍生化的KLH部分。

在另一具體實施例中，Globo H部分對KLH部分次單元的比值為至少1。在另一具體實施例中，Globo H部分對KLH部分次單元的比值為至少10。在另一具體實施例中，Globo H部分對KLH部分的比值為至少25。在另一具體實施例中，Globo H部分對KLH部分次單元的比值為至少50。在又一實施例中，Globo H部分對KLH部分次單元的比值為至少100。在又一步實施例中，Globo H部分對KLH部分次單元的比值為至少150。在 又另一具體實施例中，Globo H部分對KLH部分次單元的比值為至少500。在又另一具體實施例中，Globo H部分對KLH部分次單元的比值為至少750。在再另一具體實施例中，Globo H部分對KLH部分次單元的比值為至少1000。在再另一具體實施例中，Globo H部分對KLH部分次單元的比值為至少1500。在再另一具體實施例中，Globo H部分對KLH部分次單元的比值為至少2000。

在多個具體實施例中，本發明涵蓋KLH之單一單體至多個KLH次單元(例如，2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20)，每個皆有附接的多個Globo H部分。在部分具體實施例中，Globo H部分對KLH部分的比值為相同的。在其他具體實施例中，Globo H部分對KLH部分的比值為不同的。

本發明的另一具體實施例涵蓋包含至少兩個KLH部分之組合物。例如，其為二聚體形式的衍生化的KLH部分。在另一具體實施例中，該至少兩個KLH部分是相同的。在另一具體實施例中，該至少兩個KLH部分是不相同的。在又一具體實施例中，該至少兩個KLH部分具有相同的Globo H部分對KLH部分次單元的比值。在再一具體實施例中，該至少兩個KLH部分具有不同的Globo H部分對KLH部分次單元的比值。

本發明的另一具體實施例涵蓋包含至少三個KLH部分之治療組合物，舉例來說，其為三聚體形式的衍生化的KLH部分。在部分具體實施例中，該至少三個KLH部分是相同的。在另一具體實施例中，該至少三個KLH部分是不相同的。在又一具體實施例中，該至少三個KLH部分具有相同的Globo H部分對KLH部分次單元的比值。在再一具體實施例中，該 至少三個KLH部分具有不同的Globo H部分對KLH部分次單元的比值。

本發明的另一具體實施例涵蓋包含至少四個KLH部分之治療組合物，舉例來說，其為四聚體形式的衍生化的KLH部分。在部分具體實施例中，該至少四個KLH部分是相同的。在另一具體實施例中，該至少四個KLH部分是不相同的。在又一具體實施例中，該至少四個KLH部分具有相同的Globo H部分對KLH部分次單元的比值。在再一具體實施例中，該至少四個KLH部分具有不同的Globo H部分對KLH部分次單元的比值。

本發明的另一具體實施例涵蓋包含至少五個KLH部分之治療組合物，舉例來說，其為五聚體形式的衍生化的KLH部分。在部分具體實施例中，該至少五個KLH部分是相同的。在另一具體實施例中，該至少五個KLH部分是不相同的。在又一具體實施例中，該至少五個KLH部分具有相同的Globo H部分對KLH部分次單元的比值。在再一具體實施例中，該至少五個KLH部分具有不同的Globo H部分對KLH部分次單元的比值。

本發明的另一具體實施例涵蓋包含至少六個KLH部分之治療組合物，舉例來說，其為六聚體形式的衍生化的KLH部分。在部分具體實施例中，該至少六個KLH部分是相同的。在另一具體實施例中，該至少六個KLH部分是不相同的。在又一具體實施例中，該至少六個KLH部分具有相同的Globo H部分對KLH部分次單元的比值。在再一具體實施例中，該至少六個KLH部分具有不同的Globo H部分對KLH部分次單元的比值。

本發明的另一具體實施例涵蓋包含至少十個KLH部分之治療組合物，舉例來說，其為十聚體形式的衍生化的KLH部分。在部分具體實施例中，該至少十個KLH部分是相同的。在另一具體實施例中，該至少 十個KLH部分是不相同的。在又一具體實施例中，該至少十個KLH部分具有相同的Globo H部分對KLH部分次單元的比值。在再一具體實施例中，該至少十個KLH部分具有不同的Globo H部分對KLH部分次單元的比值。

本發明的另一具體實施例涵蓋包含至少二十個KLH部分之治療組合物，舉例來說，其為二十聚體形式的衍生化的KLH部分。在部分具體實施例中，該至少二十個KLH部分是相同的。在另一具體實施例中，該至少二十個KLH部分是不相同的。在又一具體實施例中，該至少二十個KLH部分具有相同的Globo H部分對KLH部分次單元的比值。在再一具體實施例中，該至少二十個KLH部分具有不同的Globo H部分對KLH部分次單元的比值。

在一具體實施例中，該Globo H部分包含(Fucα1→2 Galβ1→3 GalNAcβ1→3 Galα1→4 Galβ1→4 Glc)。在又一具體實施例中，該KLH部分次單元為KLH-1或KLH-2部分或其組合。本文中所使用的術語「KLH」係指KLH-1、KLH-2及/或其組合。

在另一具體實施例中，該KLH部分次單元係至少99%相同於相對應的天然存在或人工擴增的KLH部分次單元。

在另一具體實施例中，該KLH部分次單元係至少95%相同於相對應的天然存在或人工擴增的KLH部分次單元。

在另一具體實施例中，該KLH部分次單元係至少90%相同於相對應的天然存在或人工擴增的KLH部分次單元。

在另一具體實施例中，該KLH部分次單元係至少80%相同於相對應的天然存在或人工擴增的KLH部分次單元。

在另一具體實施例中，該KLH部分次單元係至少70%相同於相對應的天然存在或人工擴增的KLH部分次單元。

在另一具體實施例中，該KLH部分次單元係至少60%相同於相對應的天然存在或人工擴增的KLH部分次單元。

在另一具體實施例中，該Globo H部分係透過連接物共價地連接至鑰孔蟲戚血藍蛋白(KLH)部分次單元。在又再一具體實施例中，該Globo H部分係藉由4-(4-N-順丁烯二醯亞胺甲基)環己烷-1-羧醯肼(MMCCH)鍵聯(linkage)共價地連接至鑰孔蟲戚血藍蛋白(KLH)部分次單元。在另再一具體實施例中，該Globo H部分係共價地連接至衍生化的鑰孔蟲戚血藍蛋白(KLH)部分次單元且係藉由4-(4-N-順丁烯二醯亞胺甲基)環己烷-1-羧醯肼(MMCCH)鍵聯連接。

在另一具體實施例中，經分離的治療性共軛物基於具有約350KDa至約400KDa分子量的KLH單體，而具有至少或約150的抗原決定基比(Globo H-KLH結合物的分子量是從350KDa至550KDa)。在另一具體實施例中，經分離的治療性共軛物具有至少或約100的抗原決定基比。在又一具體實施例中，經分離的治療性共軛物具有至少或約75的抗原決定基比。在再一具體實施例中，經分離的治療性共軛物具有至少或約50的抗原決定基比。在又再一具體實施例中，經分離的治療性共軛物具有至少或約25的抗原決定基比。在又另一具體實施例中，經分離的治療性共軛物具有至少或約15的抗原決定基比。在又另一具體實施例中，經分離的治療性共軛物具有至少或約5的抗原決定基比。在又另一具體實施例中，經分離的治療性共軛物具有至少或約1的抗原決定基比。

本發明的另一具體實施例涵蓋包含KLH部分次單元的醫藥組合物，其中每一KLH部分次單元包含共價地連接至鑰孔蟲戚血藍蛋白(KLH)部分次單元的一個或多個Globo H部分。在部分具體實施例中，該醫藥組合物包含至少兩個KLH部分次單元的二聚體，其中每一KLH部分次單元包含共價地連接至KLH部分次單元的一個或多個Globo H部分。在部分具體實施例中，該醫藥組合物包含至少三個KLH部分次單元的三聚體，其中每一KLH部分次單元包含共價地連接至KLH部分次單元的一個或多個Globo H部分。在部分具體實施例中，該醫藥組合物包含至少四個KLH部分次單元，其中每一KLH部分次單元包含共價地連接至KLH部分次單元的一個或多個Globo H部分。在部分具體實施例中，醫藥的組合物包含KLH部分次單元的混合物(例如，單體、二聚體、三聚體、四聚體、五聚體等)，其中每一KLH部分次單元包含共價地連接至KLH部分次單元的多個Globo H部分。

另一方面，本發明係關於一種醫藥組合物，其包含KLH部分之單體、二聚體、三聚體、四聚體、五聚體、六聚體或其組合，其中每一KLH包含共價地連接至鑰孔蟲戚血藍蛋白(KLH)部分次單元的一個或多個Globo H部分。

在本發明之一具體實施例中，該組合物中的治療共軛物的抗原決定基比範圍為從約1至3000。在又一具體實施例中，該組合物中的治療共軛物的抗原決定基比範圍為約75至2000。在又另一具體實施例中，該組合物中的治療共軛物的抗原決定基比範圍為約100至1000。在又再一具體實施例中，該組合物中的治療共軛物的平均抗原決定基比範圍為約150至 500。

在另一具體實施例中，在該組合物中的治療共軛物的約1%至約99%為KLH單體。在又一具體實施例中，在該組合物中的治療共軛物的約0%至約99%為KLH二聚體。在又另一具體實施例中，在該組合物中的治療共軛物的約0%至約99%為KLH三聚體。在又另一具體實施例中，在該組合物中的治療共軛物的約0%至約99%為KLH四聚體。在又一具體實施例中，在該組合物中的治療共軛物的約1%至約99%為KLH五聚體。在又另一具體實施例中，在該組合物中的治療共軛物的約0%至約99%包括6個KLH次單元。在又另一具體實施例中，在該組合物中的治療共軛物的約0%至約99%包括7個KLH次單元。在又另一具體實施例中，在該組合物中的治療共軛物的約0%至約99%包括8個KLH次單元。在又另一具體實施例中，在該組合物中的治療共軛物的約0%至約99%包括9個KLH次單元。在又另一具體實施例中，在該組合物中的治療共軛物的約0%至約99%包括10個KLH次單元。在又另一具體實施例中，在該組合物中的治療共軛物的約0%至約99%包括11個KLH次單元。在又另一具體實施例中，在該組合物中的治療共軛物的約0%至約99%包括12個KLH次單元。在又另一具體實施例中，在該組合物中的治療共軛物的約0%至約99%包括13個KLH次單元。在又另一具體實施例中，在該組合物中的治療共軛物的約0%至約99%包括14個KLH次單元。在又另一具體實施例中，在該組合物中的治療共軛物的約0%至約99%包括15個KLH次單元。在又另一具體實施例中，在該組合物中的治療共軛物的約0%至約99%包括16個KLH次單元。在又另一具體實施例中，在該組合物中的治療共軛物的約0%至約99%包括17個KLH次單元。在又另一具體實施例 中，在該組合物中的治療共軛物的約0%至約99%包括18個KLH次單元。在又另一具體實施例中，在該組合物中的治療共軛物的約0%至約99%包括19個KLH次單元。在又另一具體實施例中，在該組合物中的治療共軛物的約0%至約99%包括20個KLH次單元。在又另一具體實施例中，在該組合物中的治療共軛物的約1%至約99%為單體、二聚體、三聚體、四聚體或其組合。在又另一具體實施例中，在該組合物中的治療共軛物的約99%為單體、二聚體、三聚體、四聚體或其組合。

在部分具體實施例中，一些例示性組合物具體實施例以及其使用方法包括或不包括(例如，有但書)任何一個或多個本文所述的其他代表性化合物及/或組合物具體實施例。

在另一具體實施例中，該醫藥組合物包含佐劑。本文中所使用的術語「免疫佐劑」係指與免疫原一起使用的物質，其可增強或改變針對免疫原的免疫反應。具體而言，在本發明中交替使用術語「佐劑」及「免疫佐劑」來指稱一種化合物或混合物，當單獨將其抗予宿主時，其不具免疫性，但當與另一抗原共同投予時，會增強宿主對於該抗原的免疫反應。可由習知技藝評估因佐劑介導而增強及/或時程延長的免疫反應，包括但不限定於以下一個或多個方法：(i)對比於單獨使用抗原於免疫反應中所產生的抗體數量而言，使用佐劑/抗原組合於免疫反應中所產生的抗體數量增加；(ii)辨認抗原或佐劑的T細胞數目增加；以及(iii)一個或多個第一型細胞激素濃度增加。

該佐劑可以作為包含抗原的藥物或疫苗組合物的一部分，或作為單獨的製劑，將它與含有抗原的第二組合物一起共同施用。在任何 這些組合物中，鞘醣脂(GSLs)可與其他佐劑及/或賦形劑/載體結合。這些其他佐劑包括但不限於油乳劑與乳化劑為基礎的佐劑，例如完全佛朗氏佐劑(complete Freund's adjuvant)、不完全佛朗氏佐劑、MF59或SAF；礦物凝膠，例如氫氧化鋁(明礬)、磷酸鋁或磷酸鈣；微生物來源的佐劑，例如霍亂毒素(CT)、百日咳毒素、大腸桿菌易熱性毒素(LT)、突變體毒素(例如，LTK63或LTR72)、卡介苗(BCG)、短小棒狀桿菌、脫氧核糖核酸CpG基序、胞壁醯二肽或單磷酸脂質A；顆粒佐劑，如免疫刺激複合物(ISCOMs)、脂質體、生物可降解微球或皂苷(例如QS-21)；細胞激素，例如IFN-γ、IL-2、IL-12或GM-CSF；合成佐劑，例如非離子嵌段共聚物、胞壁醯肽類似物(例如，N-乙醯-胞壁醯-L-蘇胺醯-D-異麩醯胺[Thr-MDP]、N-乙醯-去甲-胞壁醯-L-丙氨醯-D-異麩醯胺、N-乙醯-胞壁醯-L-丙胺醯-D-異麩醯胺-L-丙胺酸-2-[1'-2'-二棕櫚醯-sn-甘油-3-羥基磷氧]-乙胺)、聚磷腈或合成的多核苷酸，以及表面活性物質，例如溶血卵磷脂、多聚醇、聚陰離子、胜肽、碳氫化合物乳劑或鑰孔血藍蛋白(KLH)，類鐸受體分子、LPS、脂蛋白、脂肽、鞭毛蛋白、雙鏈RNA、病毒DNA、未甲基化的CpG島群、左旋咪唑、卡介苗、異丙肌苷、日達仙(Zadaxin)，PD-1拮抗劑、PD-1抗體、CTLA拮抗劑、CTLA抗體、白細胞激素、細胞激素、GM-CSF、醣脂、鋁鹽基、磷酸鋁、明礬、氫氧化鋁、脂質體、TLR2激動劑、脂肽、奈米顆粒、單磷醯脂質A、OBI-821皂苷、皂苷、OBI-834佐劑、C34佐劑、水包油奈米乳液、以及細菌樣顆粒。較佳而言，這些額外的佐劑亦為醫藥上可接受用於人類者。

在另一具體實施例中，該醫藥組合物包含選自由IL-2、 IL-12、IL-18、IL-2、IFN-γ、TNF、IL-4、IL-10、IL-13、IL-21、GM-CSF以及TGF-β所組成的群組中的細胞激素。在又一具體實施例中，該醫藥組合物包含趨化激素。

在又一具體實施例中，免疫/治療劑係作為醫藥組合物給藥。

在又另一具體實施例中，該醫藥組合物包含單株抗體、化療劑(chemotherapeutics)、荷爾蒙治療劑、類視色素(retinoid)受體調節子、細胞毒性/細胞生長抑制劑、抗癌劑(antineoplastic agent)、抗增生劑(antiproliferative agent)、抗-mTOR劑、抗-Her2劑、抗-EGFR劑、異戊二烯基-蛋白轉移酶抑制劑(prenyl-protein transferase inhibitors)、HMG-CoA還原酶抑制劑、氮芥類(nitrogen mustard)、亞硝基脲(nitroso urea)、血管生成抑制劑、必化思沃蜜(bevacizumab)、細胞增生和存活傳訊路徑的抑制劑、細胞凋亡誘導劑、干擾細胞週期檢查點的藥劑、干擾受體酪胺酸激酶(receptor tyrosine kinases，RTKs)的藥劑、整合素阻斷劑、NSAIDs、PPAR促效劑、先天的多重抗藥性(MDR)的抑制劑、鎮吐劑、有利於治療貧血的藥劑、有利於治療嗜中性球減少症(neutropenia)的藥劑、免疫增強藥物、雙磷酸鹽、芳香酶抑制劑、誘導贅生細胞進行終端分化的藥劑、γ-分泌酶抑制劑、癌症疫苗(例如，主動免疫療法)、單株抗體治療劑(例如，被動免疫療法)、以及任何其組合。

在另一具體實施例中，本發明之治療組合物可進一步包括PD-1/PD-L1抑制劑(細胞毒性T細胞淋巴球(CLTs)免疫療法)、CTLA-4免疫療法、CDK4/6抑制劑(標靶治療)、PI3K抑制劑(標靶治療)、mTOR抑制劑(標靶治療)、AKT抑制劑(標靶治療)、Pan-Her抑制劑(標靶治療)。這些抑制劑 也可被修飾以產生個別的單株抗體。這樣的抗體可被包括進本發明之治療組合物中。

在另一具體實施例中，該醫藥組合物包含醫藥上可接受的載體。在又一具體實施例中，該醫藥組合物為癌症疫苗。在又另一具體實施例中，該醫藥組合物被配制用於皮下給藥。在又另一具體實施例中，該醫藥組合物被配製用於肌肉內給藥。在又另一具體實施例中，該醫藥組合物被配製用於動脈給藥。在又另一具體實施例中，該醫藥組合物被配製用於靜脈內給藥。

本發明的另一具體實施例涵蓋治療待治病患之方法，其包含對該病患投予一治療有效量之所述包含Globo H及KLH的治療組合物。在一具體實施例中，該病患已被診斷出或被懷疑患有癌症。在另一具體實施例中，該癌症為上皮癌。在又一具體實施例中，該癌症為乳癌。在又另一具體實施例中，在該醫藥/治療組合物中，Globo-H部分的治療有效量可介於約0.001μg/kg至約250mg/kg。在又再一具體實施例中，Globo-H部分的治療有效量在該醫藥/治療組合物中，每劑量包含約10μg/kg至約50μg/kg/一治療共軛物。在又再一具體實施例中，Globo-H部分的治療有效量在該醫藥/治療組合物中，每劑量包含約0.10μg/kg至約0.75μg/kg/一治療共軛物。

在又另一具體實施例中，在治療組合物中Globo-H-KLH共軛物的治療有效量可介於約0.001μg/kg至約250mg/kg。在又再一具體實施例中，Globo-H-KLH共軛物在治療組合物中的治療有效量，每劑量包含約10μg/kg至約50μg/kg/一治療共軛物。在又再一具體實施例中，Globo-H-KLH共軛物在治療組合物中的治療有效量，每劑量包含約0.60μg/kg至約 4.50μg/kg/一治療共軛物。

在又另一具體實施例中，該方法能夠延長無進程存活期超過控制組安慰劑大約或至少1週。在又另一具體實施例中，該方法能夠延長無進程存活期超過控制組安慰劑大約或至少2週。在又另一具體實施例中，該方法能夠延長無進程存活期超過控制組安慰劑大約或至少1個月。在又另一具體實施例中，該方法能夠延長無進程存活期超過控制組安慰劑大約或至少3個月。在又另一具體實施例中，該方法能夠延長無進程存活期超過控制組安慰劑大約或至少6個月。在又另一具體實施例中，該方法能夠延長無進程存活期超過控制組安慰劑大約或至少12個月。

當與隨後的詳細說明搭配考量時，可藉由參考附圖來獲得本發明的更完整理解。在圖式中所說明的實施例僅旨在舉例說明本發明且不應被解釋為限制本發明於所說明的實施例。

圖1A顯示Globo H化學結構以及幾個例示性Globo H類似物。Glc代表葡萄糖，Gal代表半乳糖，GalNAc代表N-乙醯半乳胺糖(N-acetylgalactosamine)，且Fuc代表海藻糖(fucose)。圖1B顯示例示性的藉由MMCCH連接物共軛Globo H-KLH次單元。

圖2A顯示例示的Globo H-KLH次單元共軛作用合成路徑。圖2B顯示本發明的Globo H-KLH二聚體和三聚體，相比於被揭露於Slovin等人(1999年)，美國國家科學研究院論文集(Proc Natl Acad Sci USA)，96：5710-5以及Gilewski等人(2001年)，美國國家科學研究院論文集，98：3270-5之Globo H共軛物。

圖3顯示天然KLH(8.3MDa)的多角度雷射散射光譜測定(multi-angle laser scattering spectrometry，MALS)結果。

圖4A顯示以多角度雷射散射光譜測定法(MALS)作為偵測器所進行的KLH之分子篩層析(Size exclusion chromatography)結果。圖4B顯示KLH的質量分佈分析結果。圖4C顯示以多角度雷射散射光譜測定法(MALS)作為偵測器所進行的Globo H-KLH醣共軛物(OBI-822，批號14001)的分子篩層析結果。圖4D顯示Globo H-KLH醣共軛物的質量分佈分析結果。

圖5A顯示以例示性的Globo H-KLH醣共軛物(7.5μg and 25μg)免疫的Lewis大鼠體內B細胞族群的時序增生(chronological expansion)。圖5B顯示以例示性的Globo H-KLH醣共軛物(7.5μg and 25μg)免疫的Lewis大鼠體內CD3 T細胞族群的時序增生。圖5C顯示以例示性的Globo H-KLH醣共軛物(7.5μg and 25μg)免疫的Lewis大鼠體內CD4 T細胞族群的時序增生。圖5D顯示以例示性的Globo H-KLH醣共軛物(7.5μg and 25μg)免疫的Lewis大鼠體內CD8 T細胞族群的時序增生。資料係以標準化至PBS組細胞數百分比的指定組細胞數目百分比來呈現。使用雙因子變異數(two-way ANOVA)，接續進行Bonferroni事後檢測(Bonferroni’spost hoc test)來分析多種比較。*：p<0.05，**：p<0.01，以及***：p<0.001相比於PBS。

圖6A顯示以例示性的Globo H-KLH醣共軛物(7.5μg and 25μg)免疫的Lewis大鼠血液中IgM抗體效價倒數的時序變化。圖6B顯示以例示性的Globo H-KLH醣共軛物(7.5μg and 25μg)免疫的Lewis大鼠血液中IgG抗體效價倒數的時序變化。

圖7顯示小鼠體內相應於Globo H與KLH間共軛比率(0.17：1 和0.07：1)所得之IgM抗體效價。

圖8例示經PBS、Globo H-KLH醣共軛物+皂苷佐劑(OBI-822+OBI821)和Globo H-KLH醣共軛物+C34佐劑(OBI-822+OBI834)進行免疫後的C57BL/6小鼠免疫性。於第42天收集血清進行ELISA分析以測定抗Globo H IgM和IgG抗體的生成量。圖8A顯示IgM的生成量。圖8B顯示IgG的生成量。皮下(SC)施打Globo H-KLH醣共軛物的量為2μg，而佐劑為20μg。

圖9例示明六組免疫健全(6-8週齡)且無病原(SPF)的C57BL/6雌鼠被注射0.1mL含同源於C57BL/6小鼠的5.0×10⁶路易士肺癌細胞(LL/2,ATCC CRL-1642)，其係於第16天，以皮下注射於試驗組小鼠的腹部側邊。於第0、5、11、19、29、34及39天，以每隻小鼠0.2mL(施打於腹部左側及右側位置，0.1mL/位置)的量進行三種試驗條件(僅有PBS、OBI-822+OBI-821佐劑以及OBI-822+OBI-834佐劑)的皮下施打，或以劑量體積10mL/Kg進行腹腔內注射。於第42天犧牲後，拍攝含有腫瘤的全鼠照片。

圖10例示經Globo H-KLH醣共軛物免疫後的C57BL/6小鼠，在第0、5、11、19、29、34及39天接種PBS、OBI-822+OBI-821佐劑以及OBI-822+OBI-834佐劑之後，體內LL/2(路易士肺癌細胞株)腫瘤的生長情況。第16天時，於每隻小鼠皆皮下注射LL/2細胞(0.1mL中含5.0×10⁶個細胞)。於第16、19、23、26、30、34、37、40及42天偵測腫瘤大小。

圖11例示Globo H衍生物的化學結構。圖11A例示Globo H衍生物[化學式：C(56)H(91)N(5)O(33)S(1)，單同位素的(Monoisotopic)MW附加：1393.5317Da]。圖11B例示Globo H衍生物的中性脫失形式。化學式1：C(18)H(28)N(4)O(4)S(1)，單同位素的MW附加：396.1831Da；化學式2： C(24)H(38)N(4)O(9)S(1)，單同位素的MW附加：558.2360Da；化學式3：C(30)H(48)N(4)O(14)S(1)，單同位素的MW附加：720.2888Da；化學式4：C(36)H(58)N(4)O(19)S(1)，單同位素的MW附加：882.3416Da；化學式5：C(44)H(71)N(5)O(24)S(1)，單同位素的MW附加：1085.4210Da。

圖12例示MMCCH衍生物的化學結構。圖12A例示MMCCH衍生物[化學式：C(16)H(24)N(4)O(3)S(1)，單同位素的MW附加：352.1569Da]的化學結構。圖12B說明去醯胺的MMCCH衍生物[化學式：C(16)H(22)N(2)O(4)S(1)，單同位素的MW附加：338.1300Da]。

圖13顯示Globo H和MMCCH衍生物胜肽的離胺酸殘基鑑定之總結。

圖14例示樣本1(1^stLC-MS/MS)中對於KLH1(A)及KLH2(B)的Globo-H共軛胜肽中離胺酸殘基的鑑定細節。

圖15例示樣本2(1^stLC-MS/MS)中對於KLH1(A)及KLH2(B)的Globo-H共軛胜肽中離胺酸殘基的鑑定細節。

圖16例示樣本3(1^stLC-MS/MS)中對於KLH1(A)及KLH2(B)的Globo-H共軛胜肽中離胺酸殘基的鑑定細節。

圖17例示樣本4(1^stLC-MS/MS)中對於KLH1(A)及KLH2(B)的Globo-H共軛胜肽中離胺酸殘基的鑑定細節。

圖18例示樣本1(2^ndLC-MS/MS)中對於KLH1(A)及KLH2(B)的Globo-H共軛胜肽中離胺酸殘基的鑑定細節。

圖19例示樣本2(2^ndLC-MS/MS)中對於KLH1(A)及KLH2(B)的Globo-H共軛胜肽中離胺酸殘基的鑑定細節。

圖20例示樣本3(2^ndLC-MS/MS)中對於KLH1(A)及KLH2(B)的Globo-H共軛胜肽中離胺酸殘基的鑑定細節。

圖21例示樣本4(2^ndLC-MS/MS)中對於KLH1(A)及KLH2(B)的Globo-H共軛胜肽中離胺酸殘基的鑑定細節。

圖22例示樣本1(1^stLC-MS/MS)中對於KLH1(A)及KLH2(B)的MMCCH共軛胜肽中離胺酸殘基的鑑定細節。

圖23例示樣本2(1^stLC-MS/MS)中對於KLH1(A)及KLH2(B)的MMCCH共軛胜肽中離胺酸殘基的鑑定細節。

圖24例示樣本3(1^stLC-MS/MS)中對於KLH1(A)及KLH2(B)的MMCCH共軛胜肽中離胺酸殘基的鑑定細節。

圖25例示樣本4(1^stLC-MS/MS)中對於KLH1(A)及KLH2(B)的MMCCH共軛胜肽中離胺酸殘基的鑑定細節。

圖26例示樣本1(2^ndLC-MS/MS)中對於KLH1(A)及KLH2(B)的MMCCH共軛胜肽中離胺酸殘基的鑑定細節。

圖27例示樣本2(2^ndLC-MS/MS)中對於KLH1(A)及KLH2(B)的MMCCH共軛胜肽中離胺酸殘基的鑑定細節。

圖28例示樣本3(2^ndLC-MS/MS)中對於KLH1(A)及KLH2(B)的MMCCH共軛胜肽中離胺酸殘基的鑑定細節。

圖29例示樣本4(2^ndLC-MS/MS)中對於KLH1(A)及KLH2(B)的MMCCH共軛胜肽中離胺酸殘基的鑑定細節。

圖30例示在(1^stLC-MS/MS)中對於KLH1(A)及KLH2(B)，以及在(2^ndLC-MS/MS)中對於KLH1(C)及KLH2(D)的Globo-H共軛離胺酸鑑 定之總結。

圖31例示在(1^stLC-MS/MS)中對於KLH1(A)及KLH2(B)，以及在(2^ndLC-MS/MS)中對於KLH1(C)及KLH2(D)的MMCCH共軛離胺酸鑑定之總結。

圖32例示Globo-H共軛分析在第一(A)和第二(B)回LC-MS/MS測試的總結。

圖33顯示例示性Globo H和MMCCH衍生胜肽，在組胺酸(H)、天門冬醯胺酸(N)、脯胺酸(P)、麩醯胺酸(Q)和精胺酸(R)殘基的鑑定總結。

圖34例示在樣本1(LC-MS/MS)中對於KLH1(A)及KLH2(B)的Globo H和MMCCH共軛胜肽HNPQR殘基的鑑定細節。

圖35例示在樣本2(LC-MS/MS)中對於KLH1(A)及KLH2(B)的Globo H和MMCCH共軛胜肽HNPQR殘基的鑑定細節。

圖36例示在樣本3(LC-MS/MS)中對於KLH1(A)及KLH2(B)的Globo H和MMCCH共軛胜肽HNPQR殘基的鑑定細節。

圖37例示在樣本4(LC-MS/MS)中對於KLH1(A)及KLH2(B)的Globo H和MMCCH共軛胜肽HNPQR殘基的鑑定細節。

圖38顯示例示性Globo H和MMCCH衍生物，在組胺酸(H)、天門冬醯胺酸(N)、脯胺酸(P)、麩醯胺酸(Q)和精胺酸(R)殘基的分析總結。

本發明的實施將運用所屬領域的技術範圍之分子生物學、微生物學和免疫學的常規技術，除非另有說明。這樣的技術在文獻中完整 地被解釋。參閱，舉例來說，由Sambrook,Fritsch以及Maniatis編輯，冷泉港實驗室於1989年出版(Cold Spring Harbor Laboratory Press)的《分子選殖實驗室手冊，第二版》(Molecular Cloning A Laboratory Manual,2nd Ed.)，；《DNA選殖，第一冊和第二冊》(DNA Cloning,Volumes I and II)(D.N.Glover編著，1985年)；《動物細胞的培養》(Culture Of Animal Cells)(R.I.Freshney,Alan R.Liss,Inc.,1987年)；《固定化細胞和酵素》(Immobilized Cells And Enzymes)(IRL出版，1986年)；B.Perbal，《對分子選殖的實踐引導》(A Practical Guide To Molecular Cloning)(1984年)；論著，《酵素學方法》(Methods In Enzymology)(科學院出版公司，紐約)；《用於哺乳動物細胞的基因轉移載體》(Gene Transfer Vectors For Mammalian Cells)(J.H.Miller及M.P.Calos編著，1987年，冷泉港實驗室出版)；《酵素學方法》，卷154及155(Wu等人，編著)；《細胞與分子生物學的免疫化學方法》(Immunochemical Methods In Cell And Molecular Biology)(Mayer及Walker，編著，科學院出版，倫敦，1987年)；《抗體：實驗室手冊》(Antibodies：A Laboratory Manual)，Harlow及Lanes(冷泉港實驗室出版，1988年)；以及《實驗免疫學講義》(Handbook Of Experimental Immunology)，第一冊至第四冊(D.M.Weir以及C.C.Blackwell編，1986年)。

合成碳水化合物共軛物以引出抗體的用途首先被Goebel與Avery於1929年證實。(Goebel,W.F.及Avery,O.T.,J.實驗醫學期刊(Exp.Med.)，1929年，50，521；Avery,O.T.及Goebel,W.F.,J.實驗醫學期刊，1929年，50，533)，碳水化合物透過醣苷重氯苯(benzenediazonium glycosides)被連接至載體蛋白。以合成抗原使兔子免疫後產生多株抗體。其他研究者 (Allen,P.Z.及Goldstein,I.J.，生物化學(Biochemistry)，1967年，6，3029；Rude,E.及Delius,M.M.，碳水化合物研究(Carbohydr.Res.)，1968年，8，219；Himmelspach,K.等人，歐洲免疫學期刊(Eur.J.Immunol.)，1971年，1，106；Fielder,R.J.等人，免疫學期刊(J.Immunol.)，1970年，105，265)發展出相似的技術用於碳水化合物對蛋白載體的共軛作用。

醣共軛物可被使用在以疫苗接種產生的主動免疫療法，以特異性靶向腫瘤細胞上習知的標靶物。對碳水化合物抗原的反應通常不包括T細胞的使用，其有助於體內對腫瘤的排斥。使用共軛物進行疫苗接種而造成完全腫瘤排斥之概率被認為是不太可能的，這樣的治療將促進免疫監控，並且新腫瘤群落的復發可得以減少。(Dennis,J.，《牛津醣系統醣新知第二版(Oxford Glycosystems Glyconews Second)》，1992年；Lloyd,K.O.於《施以疫苗的癌症特異免疫療法(Specific Immunotherapy of Cancer with Vaccines)》，1993年，紐約科學研究院(New York Academy ofSciences)，50-58)。Toyokuni與Singhal描述一種激發可測量之IgG效價的合成醣共軛物(Toyokuni,T.等人，美國化學學會期刊(J.Am.Chem.Soc.)，1994年，116，395)，其為顯著結果，因為IgG反應通常與輔助T細胞的徵募(enlistment)相關聯。

據證實，在前列腺及轉移性乳癌病患中，與免疫佐劑結合之合成Globo H疫苗主要誘導出IgM，以及較低程度的IgG抗體。在第一期臨床試驗中，疫苗也顯示出最小的毒性以及在疫苗接種部位之短暫局部皮膚反應。(Gilewski T等人，(2001年)，美國國家科學研究院論文集，98：3270-3275；Ragupathi G等人，(1997年)，應用化學國際版，36：125-128；Slovin S F等人(1997年)，美國國家科學研究院論文集，96：5710-5715)。在 部分病患中觀察到的輕度類流感症狀大概是與QS-21的副作用有關聯。含有五個前列腺癌與乳癌相關聯的碳水化合物抗原-Globo-H、GM2、STn、TF以及Tn-共軛至經順丁烯二醯亞胺(maleimide)修飾的載體蛋白KLH的五價疫苗，被報導可產生抗Globo H血清，其在ELISA測定中有著效價較IgM高的IgG。(Zhu J.等人，(2009年)，美國化學學會期刊，131(26)：9298-9303)。

因此，本發明係針對由Globo H導向/介導的免疫/治療性化合物、組合物及/或藥物製劑，以及其免疫治療劑、疫苗、劑型、試劑組以及製備方法和療法。

當在發明申請專利範圍內及/或說明書內與術語「包含」一同使用時，字詞「一(a)」或「一(an)」的使用可表示為「一個」，但其也與「一個或多個」、「至少一」及「一個或一個以上」的含義相符。

本申請全文中，術語「約」用於指一數值包括，例如，測量裝置的誤差的內在變異、採用於測定數值之方法的內在變異，或者存在於研究對象之間的變異。典型地，該術語係指視情況而定涵蓋大約或小於1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%或20%的變異性。

除另有說明，本文所使用的術語「烷基」係指含有1-20個碳原子的直鏈或支鏈單價碳氫化合物，例如，C₁-C₈或C₁-C₄，其可為經取代的或未經取代的。烷基的實例包括但不限於甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基及第三丁基(t-butyl)。

在申請專利範圍中所使用的術語「或」，除非明確指明其僅指稱替代物，或替代物間為相互獨立的，否則係被用於表示「及/或」， 儘管揭露內容支持指稱僅為替代物和「及/或」的定義。

在本說明書和申請專利範圍中所使用的字詞「包含(comprising)」(以及包含的任何形式，像是「包含(comprise)」和「包含(comprises)」)、「具有(having)」(以及具有的任何形式，像是「具有(have)」和「具有(has)」)、「包括(including)」(以及包括的任何形式，像是「包括(includes)」和「包括(include)」)或「含有(containing)」(以及含有的任何形式，像是「含有(contains)」和「含有(contain)」)是廣容性或開放式的，且不排除額外的、未陳述的元件或方法步驟。可思及者，針對任何本發明之方法或組合物，在此說明書中所討論的任何實施例可被實現，反之亦然。此外，本發明的組合物可被用於達成本發明的方法。

在本文中「治療」指治療組合物對個體的投予，其目的在於治癒、緩和、解除、醫治、預防或改善一病症、該病症的症狀、繼發病症的疾病狀態或該病症的傾向因素(predisposition)。

「有效量」為能夠在受治個體中產生如本文所界定之醫學上期望的結果的治療組合物的量。醫學上期望的結果可以是客觀的(即，藉由一些測試或標記物測量)或主觀的(即，個體給出效果的跡象或感覺到效果)。

「可使用治療組合物而進行治療的疾病」在本文中係指任何程序、狀態、病症、疾病及/或發病，其可藉由本文所揭露的治療組合物的投予而被治療。

「增殖性病症(proliferative disorder)」是一種因產生過多量的某類細胞而導致健康的惡化。增殖性病症可為良性或惡性。增殖性病症 可包括，例如，癌症。

本文所使用的「癌症」，其可藉由本文所揭露的治療組合物來治療，包括具有異常生長狀態的細胞。癌症細胞可具有以下特徵：失去正常控制機制，從而能夠連續地增殖、侵入鄰近組織、遷移至身體的遠處部位及促進新血管的生長，該等細胞由其獲得營養物質。在本文中使用時，癌症可為惡性或良性。癌症可從身體內的任何組織發展。隨著細胞生長和增殖，其將形成一團組織，稱為腫瘤。術語腫瘤可包括異常生長或異常質量。腫瘤可為癌性(惡性)或非癌性(良性)。癌性腫瘤可能侵入鄰近組織，並擴散到整個身體(轉移)。然而，良性腫瘤一般不侵入鄰近組織且不會擴散到整個身體。癌症可分為血液和血液形成組織的癌症(白血病和淋巴瘤)以及「實體」腫瘤。「實體」腫瘤可包括癌或肉瘤。

可藉由本發明之治療組合物來治療的癌症包括以部位分類的癌症，包括口腔及咽(唇、舌、唾腺、口腔底、牙齦及其它口腔、鼻咽、扁桃腺、口咽、下咽(hypopharynx)、其他口腔/咽)的癌症；消化系統(食道、胃、小腸、結腸及直腸、肛門、肛管及肛門直腸(anorectum)、肝、肝內膽管、膽囊、其他膽道等、胰腺、腹膜後腔(retroperitoneum)、腹膜、繫膜(omentum)及腸繫膜(mesentery)、其他消化系統)的癌症；呼吸系統(鼻腔、中耳及鼻竇、喉、肺及支氣管、胸膜、氣管、縱膈(mediastinum)、以及其他呼吸系統)的癌症；間皮瘤(mesothelioma)的癌症；骨骼和關節的癌症；以及軟組織的癌症，包括心臟；皮膚癌，包括黑色素瘤以及其它非上皮皮膚癌；卡波西氏肉瘤(Kaposi’s sarcoma)和乳癌；女性生殖系統(子宮頸、子宮體、子宮、卵巢、陰道、外陰(vulva)及其他女性生殖器的)的癌症；男性生殖系統(前列腺、 睾丸、陰莖及其他男性生殖器官的)的癌症；泌尿系統(膀胱、腎及腎盂、輸尿管及其他泌尿系統)的癌症；眼球和眼眶的癌症；腦和神經系統(腦及其他神經系統)的癌症；內分泌系統(甲狀腺和其他內分泌，包括胸腺)的癌症；淋巴瘤(霍奇金氏病(Hodgkin’s disease)和非霍奇金氏病)、多發性骨髓瘤(multiple myeloma)及白血病(淋巴球性白血病、骨髓性白血病、單核球白血病及其它白血病)。

其他依照組織學類型分類而可為本發明之治療性組合物之適用的癌症包括但不限於腫瘤(neoplasm)，惡性的；癌，NOS(NOS)；癌，未分化，NOS；巨細胞和梭狀細胞癌；小細胞癌，NOS；乳頭狀癌，NOS；鱗狀細胞癌，NOS；淋巴上皮癌；基底細胞癌，NOS；毛髮基質癌(Pilomatrix carcinoma)；移行細胞癌，NOS；乳頭狀移行細胞癌；腺癌，NOS；胃泌素瘤，惡性的；膽管癌；肝細胞癌，NOS；合併肝細胞癌和膽管細胞癌；小梁状腺癌(Trabecular adenocarcinoma)；腺樣囊性癌(Adenoid cystic carcinoma)；腺瘤性息肉內腺癌(Adenocarcinoma in adenomatous polyp)；腺癌，家族性結腸息肉(polyposis coli)；實體瘤，NOS；類癌瘤(Carcinoid tumor)，惡性的；細支氣管肺泡腺癌；乳頭狀腺癌，NOS；嫌色細胞癌(chromophobe carcinoma)；嗜酸細胞癌；嗜酸性腺癌；嗜鹼性球癌；透明細胞腺癌，NOS；顆粒細胞癌；濾泡腺癌，NOS；乳頭狀和濾泡狀腺癌；非被囊性硬化性癌(nonencapsulating sclerosing carcinoma)；腎上腺皮質腺癌；子宮內膜癌(Endometrioid carcinoma)；皮膚附器(Skin appendage)癌；頂泌腺腺癌(apocrine adenocarcinoma)；皮脂腺腺癌；耳垢腺腺癌；黏液性表皮樣癌(Mucoepidermoid carcinoma)；囊腺癌(cystadenocarcinoma)，NOS；乳頭狀 囊腺癌(papillary cystadenocarcinoma)，NOS；乳頭狀漿液性(serous)囊腺癌；黏液性囊狀腺癌，NOS；黏液素腺癌；戒環細胞癌；浸潤性導管癌(Infiltrating duct carcinoma)；髓樣癌(medullary carcinoma)，NOS；小葉癌；炎性癌；佩吉特氏病(Paget's disease)，乳腺的；腺泡細胞(Acinar cell carcinoma)癌；腺鱗狀癌(adenosquamous carcinoma)；腺癌與鱗狀轉移瘤(adenocarcinoma w/squamous metaplasia)；胸腺瘤(thymoma)，惡性的；卵巢基質腫瘤，惡性的；卵泡膜細胞瘤(thecoma)，惡性的；粒層細胞腫瘤(Granulosa cell tumor)，惡性的；雄胚瘤(Androblastoma)，惡性的；塞特利氏細胞(Sertoli cell)癌；萊迪希氏細胞(Leydig cell)腫瘤，惡性的；脂質細胞腫瘤，惡性的；副神經節瘤，惡性的；外乳腺副神經節瘤(extra-mammary paraganglioma)，惡性的；嗜鉻細胞瘤(Pheochromocytoma)；皮膚絲球肉瘤(glomangiosarcoma)；惡性黑色素瘤(malignant melanoma)，NOS；非黑色素瘤(amelanotic melanoma)；表淺擴散性黑色素瘤；巨大色素痣內的惡性黑色素瘤(Malig melanoma in giant pigmented nevus)；上皮樣細胞黑色素瘤；藍色痣，惡性的；肉瘤，NOS；纖維肉瘤，NOS；纖維性組織細胞瘤，惡性的；黏液肉瘤；脂肪肉瘤，NOS；平滑肌肉瘤，NOS；橫紋肌肉瘤，NOS；胚胎型橫紋肌肉瘤；肺泡橫紋肌肉瘤；基質惡性肉瘤，NOS；混合瘤，惡性的，NOS；密拉氏混合瘤(Mullerian mixed tumor)；腎胚細胞瘤；肝母細胞瘤(hepatoblastoma)；癌肉瘤，NOS；間葉瘤，惡性的；布蓮約瘤(Brenner tumor)，惡性的；葉狀腫瘤(Phyllodes tumor)，惡性的；滑液肉瘤，NOS；間皮瘤，惡性的；惡性胚胎瘤；胚胎性癌，NOS；畸胎瘤，惡性的，NOS；甲狀腺腫樣卵巢瘤，惡性的；絨毛膜癌；中腎瘤，惡性的；血管肉瘤；血管內皮瘤，惡性的；卡波西氏肉瘤； 血管外皮細胞瘤，惡性的；淋巴管肉瘤(Lymphangiosarcoma)；骨肉瘤，NOS；近皮質骨肉瘤；軟骨肉瘤，NOS；軟骨胚細胞瘤，惡性的；間葉性軟骨肉瘤；骨巨細胞瘤；尤恩氏肉瘤(Ewing’s sarcoma)；齒源性腫瘤，惡性的；釉質母細胞齒源性瘤(Ameloblastic odontosarcoma)；釉質母細胞瘤，惡性的；釉質母細胞纖維瘤；松果體瘤，惡性的；脊索瘤；神經膠質瘤，惡性的；室管膜瘤，NOS；星細胞瘤，NOS；原漿性星形細胞瘤；原纖維性星形細胞瘤；星芽細胞瘤；神經膠質母細胞瘤，NOS；寡樹突神經膠細胞瘤，NOS；寡樹突神經膠母細胞瘤；原始神經外胚層；小腦肉瘤，NOS；神經節母細胞瘤；神經母細胞瘤，NOS；視網膜胚細胞瘤，NOS；嗅覺神經源性腫瘤；腦脊髓膜瘤，惡性的；神經纖維肉瘤；神經鞘瘤，惡性的；顆粒細胞腫瘤，惡性的；惡性淋巴瘤，NOS；何杰金氏淋巴癌(Hodgkin’s disease)，NOS；何杰金氏；類肉芽腫，NOS；惡性淋巴瘤，小淋巴球的；惡性淋巴瘤，大細胞，瀰漫；惡性淋巴瘤，濾泡的，NOS；蕈樣肉芽腫；其他指定的非何杰金氏淋巴癌；惡性組織細胞增生症；多發性骨髓瘤；肥大細胞肉瘤；免疫增生小腸疾病；白血病，NOS；淋巴性白血病，NOS；漿細胞白血病；紅血球性白血病；淋巴肉瘤細胞白血病；骨髓白血病，NOS；嗜鹼性白血病；嗜酸性白血病；單核球性白血病，NOS；肥大細胞白血病；巨核胚細胞白血病；骨髓細胞肉瘤；及毛細胞白血病。

本文中所定義「上皮癌」係指從在皮膚內、中空內臟及其他器官的上皮或相關組織所發展的癌症。上皮癌包括但不限於乳癌、肺癌、肝癌、口腔癌、胃癌、結腸癌、鼻咽癌、皮膚癌、腎癌、腦腫瘤、前列腺癌、卵巢癌、子宮頸癌、子宮內膜癌、腸癌、胰腺癌及膀胱癌。

本文中所用的「病患」或「個體」係指被診斷有或懷疑患有或發展增殖性疾病像是癌症的哺乳動物個體。例示性的病患可為人、猿、狗、豬、牛、貓、馬、山羊、綿羊、囓齒動物及其他哺乳動物，其可有利於發展增殖性疾病，諸如癌症。

本文中所使用的「實質上經純化的」或「實質上經分離的」係指一種分子(例如，化合物)在一狀態中，分開了該分子和在其天然狀態中通常與之相關聯的實質上所有其他分子。較佳地，實質上經純化的分子是存在於製劑的主要種類。具體而言，實質上經純化的分子可大於60%不含、較佳地75%不含、更較佳地90%不含，且最佳95%不含存在於天然混合物內之其他分子(不包括溶劑)。術語「實質上經純化的」或「實質上經分離的」並非意欲包括存在於天然狀態中分子或物質。在部分具體實施例中，術語「實質上經純化的」或「實質上經分離的」包括從另一KLH部分純化出一KLH部分(例如，自一KLH三聚體部分實質上純化或實質上分離出一KLH二聚體部分)。在另一具體實施例中，術語「實質上經純化的」或「實質上經分離的」不包括從另一KLH部分純化出一KLH部分(例如，KLH二聚體和KLH三聚體被包括於實質上經純化的或實質上經分離的一組合物中)，但實質上去除雜質。

「給藥」在本文中係指提供本發明之治療組合物予一病患。例示性而非限制性地，組合物給藥，例如，注射，可藉由靜脈內(i.v.)注射、皮下(s.c.)注射、皮內(i.d.)注射、腹腔內(i.p.)注射或肌肉內(i.m.)注射來執行。可採用一個或多個如此的途徑。非口服給藥可為，例如，藉由一次大劑量注射(bolus injection)或在一段時間內逐步灌流。可選地，或同時 地，可經由口服途徑投予。另外，也可以藉由手術放置丸藥或置設醫療裝置來投予。

「待治病患」(a patient in need thereof)在本文中係指被診斷患有或被懷疑具有增殖性病症的病患。在一具體實施例中，所述病患具有或有可能發展癌症。

本文中所使用的術語「抗原」係定義為能夠引發免疫反應的任何物質，其可具有或不具有蛋白載體及/或佐劑的輔助。較佳地，本發明之組合物的抗原包括碳水化合物，且更較佳地為聚醣抗原，而最佳為一Globo H部分。

本文中所使用的術語「免疫原性」係指免疫原、抗原或疫苗刺激免疫反應的能力。

本文中所使用的術語「免疫療法」係指一組治療方案，其以調節免疫系統為基礎，以達成預防及/或治療目標。

本文中所使用的術語「抗原決定基」係定義為一抗原分子接觸一抗體或一T細胞受體的抗原結合位的部分。

本發明中的「治療組合物」包括免疫原性共軛物及/或治療共軛物及/或「治療抗體」。所述治療共軛物包括連接至載體的至少一抗原。較佳地，所述治療共軛物的鍵聯是共價的。在所述治療共軛物的一具體實施例中，抗原為一聚醣，諸如一Globo H部分，且該載體為KLH部分及/或KLH部分次單元。因此，術語治療共軛物涵蓋連接至一個或多個Globo H部分的一個或多個KLH部分次單元。在一具體實施例中，術語治療共軛物涵蓋連接至大約或至少1、10、10²或10³個Globo H部分的一個或多個KLH部 分。在另一具體實施例中，術語治療共軛物涵蓋連接至約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、159、160個或更多Globo H部分的一個或多個KLH部分。另一具體實施例涵蓋如此的Globo H連接的KLH部分次單元的經分離的二聚體、三聚體、四聚體、五聚體或六聚體或其組合。

在一具體實施例中，所述治療共軛物為：Fucα(1→2)Galβ(1→3)GalNAcβ(1→3)Galα(1→4)Galβ(1→4)Gluβ(1-O-乙基肼-1-羰基-環己基-4-(甲基-N-順丁烯二醯亞基)-3-(硫代丁基-亞胺基)-鑰孔蟲戚血藍蛋白(KLH)(Fucα(1→2)Galβ(1→3)GalNAcβ(1→3)Galα(1→4)Galβ(1→4)Gluβ(1-O-ethylhydrazyl-1-carbonyl-cyclohexyl-4-(methyl-N-maleimido)-3-(thiobutyl-imidyl)-Keyhole Limpet Haemocyanin)，亦稱為OBI-822。

「治療抗體」係定義為特異性結合本發明的治療共軛物且 較佳地為治療共軛物的Globo H部分之抗體(如下文進一步定義的)。

本文中所使用的術語「疫苗」係指含有治療共軛物的治療組合物，該治療共軛物用以賦予針對與抗原相關的疾病的免疫力。設計癌症疫苗來透過免疫系統提高身體保護自身的天然能力，對抗受損或異常細胞(諸如癌細胞)所帶來的危害。保護性免疫反應是一種減低疾病嚴重程度的反應，包括但不限於疾病的預防、延遲疾病發作、減少症狀的嚴重程度、減少發病率以及存活期延長。較佳地，疫苗能夠活化體液免疫反應(例如，刺激B淋巴球之抗體生成)以及細胞免疫反應(例如，由T淋巴球及/或其他細胞(諸如NK細胞和巨噬細胞)介導的免疫反應)。已發展有用以測定免疫反應的標準分析法，諸如，酵素結合免疫吸附分析(ELISA)、流式細胞分析、細胞增殖分析、CTL分析以及ADCC/CDC分析。

本文中所使用的術語「聚醣」係指多醣或寡醣。本文中亦使用聚醣來指醣共軛物(諸如醣蛋白、醣脂質、醣肽、醣蛋白質體(glycoproteome)、肽聚醣、脂多醣或蛋白多醣(proteoglycan))的碳水化合物部分。聚醣通常僅由單糖之間的O-醣苷鍵聯組成。舉例來說，纖維素是一種由β-1,4-連接的D-葡萄糖(β-1,4-linked D-glucose)構成的聚醣(或更具體地，一種葡聚醣)，而幾丁質是一種由β-1,4-連接的N-乙醯基-D-葡糖胺(β-1,4-linked N-acetyl-D-glucosamine)構成的聚醣。聚醣可為單糖殘基之同聚物(homopolymer)或異聚物(heteropolymer)，並且可為直鏈或支鏈的。可發現聚醣附接於蛋白如醣蛋白和蛋白多醣中。其一般見於細胞的外表面上。O-和N-連接的聚醣在真核生物中很普遍，但也可在原核生物中被發現，儘管較不普遍。N-連接的聚醣被發現附接到在序列子(sequon)中之天門冬醯胺酸 的R-基團氮(N)。該序列子為Asn-X-Ser或Asn-X-Thr序列，其中X為除脯胺酸之外的任何胺基酸。較佳的聚醣為Globo H部分。

Globo H為一六醣，其係為抗原性碳水化合物家族的成員，高度表現在各種類型的癌症上，特別是乳癌、前列腺癌、胰腺癌、胃癌、卵巢癌、結腸癌及肺癌。在一例示性具體實施例中，部分病患在時間零時呈現的抗-Globo H抗體量為無，而在以本發明之治療組合物免疫後，偵測到高效價。在其他例示性具體實施例中，部分病患在時間零時呈現出抗-Globo H抗體的量，而在以本發明之治療組合物免疫後，偵測到了高效價。在部分具體實施例中，所述抗-Globo H抗體表現於癌細胞表面作為醣脂質且可能作為醣蛋白。在其他具體實施例中，乳癌病患的血清含有針對Globo H抗原決定基的高量抗體。在部分具體實施例中，在免疫組織化學研究中亦藉由單株抗體Mbr1、VK9和抗SSEA-3來靶向抗原決定基。雖然部分正常組織也與Mbr1反應，包括正常乳腺、胰腺、小腸以及前列腺組織，然而這些組織中的抗原係主要位於免疫系統之獲取受限的分泌邊界(secretary border)。

在本文中「Globo H部分」定義為一種聚醣(即，含有糖部分的分子)，其為Globo H或其片段或其類似物。Globo H為一種聚醣，其含有六糖抗原決定基(Fucα1→2Galβ1→3GalNAcβ1→3Galα1→4Galβ1→4Glc)，以及任選地，一非糖部分。其片段為一種聚醣，其含有六糖類抗原決定基的片段以及，如果適用的話，該非糖部分。可藉由常規方法製備這些寡糖。參見Huang等人，美國國家科學研究院論文集，103：15-20(2006年)。如果需要的話，其可被連接至一非糖部分。美國專利申請案第12/485,546號係關於一種藉由將如上所述的免疫組合物投予非人類哺乳動物(例如， 小鼠、兔、山羊、綿羊或馬)，以及藉由從哺乳動物分離結合至Globo H或其片段的抗體，來生產對Globo H或其片段具有特異性的抗體之方法。

Globo H的類似物可使用聚醣微陣列來產生，並且包括在Wang等人，美國國家科學研究院論文集，2008年8月19；105(33)：11661-11666中所描述及於第1圖中所顯示者。

Globo H類似物較佳係與抗體VK-9、Mbr1以及抗-SSEA-3抗體結合。較佳地，Globo H類似物係在特定的解離常數(KD,surf)下結合。可使用Langmuir等溫吸附以分析結合曲線，而獲得表面的解離常數(KD,surf)。在反應過程中的平衡情況下，重複點的平均螢光值(Fobs)可由以下來描述：F _obs=F _max[P]/(K _D,surf+[P])其中，Fmax為最大螢光強度，其為表面活性碳水化合物含量的測量值，[P]為總抗體濃度，而KD,surf為表面碳水化合物和抗體的平衡解離常數。如Wang et al.所述。在部分具體實施例中，關於由Wang et al.所述的VK-9、Mbr1及抗-SSEA-3抗體而言，Globo H類似物的較佳(KD,surf)至少為、約為或確切為0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5或1.6nM。

「鎖孔蟲戚血藍蛋白」(KLH)是被發現在巨大鎖孔蟲戚(Megathura crenulata)的血淋巴內的大型、多次單元、攜氧的金屬蛋白。KLH是異質的醣苷化蛋白質，由有著約350,000至約390,000的分子量與具有約400kDa(例如，KLH單體)至約8000kDa(例如，KLH二十聚體)的分子量聚集的次單元組成。KLH次單元的每個結構域含有一起結合單一氧分子的兩個銅原子。當氧氣被結合到血藍蛋白時，分子呈現出獨特的透明度、乳光 藍色。在部分具體實施例中，KLH蛋白是強免疫原性的，但對人類安全。在部分具體實施例中，KLH可從Megathura crenulata的血淋巴中，藉由一系列的步驟來純化，其典型地包括硫酸銨沉澱和透析，且可涉及層析純化以獲得最高純度。在部分具體實施例中，KLH純化也可包括內毒素移除，但此步驟可為非必要的，因為當用於抗體產生注射時，內毒素可作為佐劑。較佳地，具清澈乳光藍色之高質量KLH製備是KLH溶解性的最佳指標。在部分具體實施例中，KLH單體單元集合成具有約4,000kDa至8,000kDa的總分子量之大型多聚體(十聚體或二十聚體)。「鑰孔蟲戚血藍蛋白部分」或「KLH部分」是在本文中被定義為KLH1(SEQ ID NO：1)或KLH2(SEQ ID NO：2)蛋白或基本上相同的蛋白或其混合物。在這種情況下基本上相同表示每個KLH部分具有至少，大約或洽好：100、99、98、97、96、95、94、93、92、91、90、89、88、87、86、85、84、83、82、81、80、79、78、77、76或75百分比的胺基酸序列，相同於自然野生型KLH。在部分具體實施例中，本發明的KLH具有增強的免疫原活性，特別是增強的抗腫瘤活性。在部分具體實施例中，KLH在本發明的組合物中包含完整的、非降解的，大約400,000分子量的次單元。在其他具體實施例中，本發明的KLH包含更高的KLH多聚體。

在部分具體實施例中，較高KLH多聚體具有大約8-10百萬分子量，有著約92-107S之沉降係數。更高的KLH多聚物存在的量是基於沉降平衡及/或沉降速度超速離心分析。在其他具體實施例中，本發明的KLH呈現增強的免疫原活性，特別是增強的抗腫瘤活性。增強的免疫活性見於，例如，但不限於：(a)注射KLH(無佐劑)，(b)KLH使用作為佐劑，(c)KLH 使用作為半抗原或弱免疫原性抗原的載體免疫原，以及(d)KLH使用作為抗腫瘤劑。本發明的KLH組合物針對許多腫瘤展現增強的抗腫瘤活性，包括但不限於，膀胱癌、乳癌、卵巢腫瘤等。在部分具體實施例中，兩個KLH部分可透過KLH單體之間的共價鍵聯形成二聚體。不受理論所限制，據信KLH部分之間的共價鍵聯是通過雙硫鍵。在部分具體實施例中，兩個或更多的KLH部分，透過KLH單體、二聚體、三聚體等之間的共價鍵聯可形成二聚體、三聚體、四聚體、五聚體等。不受理論所限制，據信KLH部分之間的共價鍵聯是透過雙硫鍵。

有多種用於將KLH部分連接至抗原的方法，其包括直接共軛結合以及以雙官能基連接物基團(諸如4-(4-N-順丁烯二醯亞胺甲基)環己烷-1-羧醯肼(MMCCH))共軛。如此的鍵聯技術揭露於美國專利號6,544,952。在一些具體實施例中，為了製備本發明的治療共軛物，例如，藉由臭氧分解使Globo H烯丙基醣苷轉化為醛類，且該醛基被附接到交聯劑MMCCH上的NH基團，獲得Globo H-MMCCH；將載體蛋白KLH硫醇化以產生KLH-SH；然後將經硫醇化的KLH上的巰基附接到MMCCH上的順丁烯二醯亞胺基，產生Globo H-KLH共軛物。

在一具體實施例中，Globo H烯丙基醣苷通過化學合成來製備。亦使用一硫醇化試劑，2-亞胺基四氫噻吩(2-iminothiolane)和cGMP-級KLH以及4-(4-N-順丁烯二醯亞胺甲基)環己烷-1-羧醯肼(MMCCH)連接物。在一些具體實施例中，進行以下步驟：1)使Globo H烯丙基醣苷轉化成Globo H-醛類；2)分別使Globo H-醛類與MMCCH耦合成為Globo H-MMCCH；3)KLH的化學硫醇化；4)使Globo H-MMCCH共軛至經硫醇化的KLH；以及 5)純化Globo H-KLH共軛物(OBI-822)。Globo H-KLH次單元共軛作用路徑顯示於圖2A中。

在部分具體實施例中，在Globo H部分蛋白質與KLH部分的共軛作用期間，相較於未反應分子，部分具體實施例中顯示KLH部分蛋白較佳地由於Globo H部分次單元的解離而有分子量降低的現象。在其他具體實施例中，本文所揭露的共軛作用方法導致先前未曾報導的KLH次單元解離。雖然不希望受限於任何特定的理論，可以預料的到的是發明的Globo H部分-KLH部分次單元共軛物的高醣苷化量導致Globo H部分之間氫鍵鍵結的形成。如此一來，在部分具體實施例中，KLH部分次單元之間的凡德瓦力及疏水性相互作用係藉由Globo H氫鍵鍵結被替換，而這導致KLH部分次單元的分離。共軛作用後，Globo H部分-KLH部分共軛物的KLH部分次單元較佳聚集以形成新穎單體、二聚體、三聚體、四聚體、五聚體或六聚體或其任何組合。所產生含有不可預期地大的抗原決定基比的例示性治療Globo H部分-KLH部分共軛物具有意想不到且不可預期地優越的免疫原性特性。在部分具體實施例中，Globo H部分係共軛至KLH1及KLH2上的離胺酸。在其他具體實施例中，Globo H部分並非共軛至KLH1及KLH2上的離胺酸。在部分具體實施例中，在胜肽映射分析(peptide mapping analysis)中發現，共軛有Globo H的離胺酸部位為保守的，其暗示Globo H-KLH醣共軛物組成在的結構是獨特的。

在一具體實施例中，本發明之治療組合物包括一個或多個KLH部分次單元，其中至少一如此的次單元係共軛至至少、大約或確切為1、10、10²或10³倍：1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、 15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、159或160或更多的Globo H部分。

本案發明人使用質譜分析發現Globo H部分係共軛至KLH的離胺酸殘基。因此，在部分具體實施例中，Globo H部分較佳係共軛至離胺酸殘基。

在一具體實施例中，每KLH部分次單元總共確切或大約有145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、159、160個總離胺酸殘基。在另一具體實施例中，每KLH部分次單元確切或大約有150或156個離胺酸殘基。在另一具體實施例中，在每個KLH部分次單元上確切或大約有60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109或110個離胺酸共軛位點可用於 結合至或實際結合到Globo H部分。在另一具體實施例中，有62、66、67、68、70、72、76、86、87、88、90、92、93、100個這樣的離胺酸共軛位點在各KLH部分次單元上。離胺酸共軛位點是在KLH部分內可用於結合或實際上結合至Globo H部分的該等離胺酸殘基及/或至Globo H部分之連接物，諸如是，例如，MMCCH連接物。

在含有部分次單元的混合物(例如，KLH1及KLH2或其變體)之特定治療具體實施例中，總共可用的離胺酸(對於次單元兩者)係跨不同次單元類型一起計算，且數目可以是確切或大約為290、291、292、293、294、295、296、297、298、299、300、301、302、303、304、305、306、307、308、309或310。在這樣的具體實施例中，可能有確切為或大約為共130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、159或160個離胺酸共軛位點，跨不同次單元(例如，KLH1及KLH2或其變體)。在其他這類具體實施例中，有136、137、141、140、143、147或155離胺酸共軛位點。

在一最佳具體實施例中，在KLH1/KLH2的全部306個離胺酸殘基之中，有136、137、140、141、143、147或155個離胺酸共軛位點。

在部分具體實施例中，本發明之治療組合物含有KLH部分次單元-Globo H部分共軛物的混合物，其中這樣的共軛物仍為單體或形成二聚體、三聚體、四聚體、五聚體或六聚體或其任意組合。在另一具體實施例中，本發明之治療組合物包括經分離的KLH部分次單元-Globo H部分共軛物單體、二聚體、三聚體或四聚體或其組合。在又一具體實施例中，本 發明之治療組合物僅包括KLH部分次單元-Globo H部分共軛物二聚體及三聚體。

在另一具體實施例中，所述治療組合物含有至少兩個KLH部分次單元，其中該兩個KLH-部分次單元各連接至不同的聚醣。可連接至KLH部分次單元的其他腫瘤相關的聚醣抗原可包括但不限於GM2、GD2、GD3、岩藻糖基(fucosyl)、GM1、sTn、唾液酸化的路易斯寡糖^X(sialyl-Lewis^x)、路易斯寡糖^X(Lewis^x)、唾液酸化的路易斯寡糖^a(sialyl Lewis^a)、路易斯寡糖^a(Lewis^a)、sTn、TF、聚唾液酸(polysialic acid)、路易斯寡糖^y(Lewis^y)、黏蛋白、T抗原及類似物。在一些具體實施例中，在治療組合物中KLH部分次單元的至少或大約10、20、30、40、50、60、70、80、90或100百分比係連接至Globo H部分，而在治療組合物中剩餘的KLH部分次單元係連接至其他腫瘤相關的聚醣抗原。

本文中所使用的「抗原決定基比」，其係關於本文所揭露的治療共軛物，係指，例如，治療共軛物的抗原之抗原決定基對載體分子之關係。較佳地，其係指Globo H部分對KLH部分的關係。最佳地，治療共軛物的抗原決定基比是使用下列公式=(實際Globo H部分重量/Globo H部分分子量)/(實際KLH部分重量/KLH部分分子量)來計算。抗原決定基比可由所屬領域的技術人員輕易測定。較佳地，Globo H的重量是以例如高效陰離子交換層析與脈衝安培檢測法(HPAEC-PAD)來測定。

較佳地，本發明的治療共軛物的抗原決定基比是大約、至少或確切為：1、10、25、50、75、100、125、150、175、200、225、250、275、300、325、350、375、400、425、450、475、500、525、575、600、 625、650、675、700、725、750、775、800、825、850、875、900、925、950、975、1000、1025、1050、1075、1100、1125、1150、1175、1200、1225、1250、1275、1300、1325、1350、1375、1400、1425、1450、1475、1500、1525、1550、1575、1600、1625、1650、1675、1700、1725、1750、1775、1800、1825、1850、1875、1900、1925、1950、1975、2000、2025、2050、2075、2100、2125、2150、2175、2200、2225、2250、2275、2300、2325、2350、2375、2400、2425、2450、2475、2500、2525、2550、2575、2600、2625、2650、2675、2700、2725、2750、2775、2800、2825、2850、2875、2900、2925、2950、2975或3000。

在一具體實施例中，本發明之治療組合物包括治療共軛物的混合物，其具有一範圍的抗原決定基比。在一具體實施例中，在治療組合物中的治療共軛物之抗原決定基比的範圍、平均值或中位數為約10至約3200、約800至約2500、約1000至約2000、約1250至約1750或約1400至約1600。在另一具體實施例中，在治療組合物中的治療共軛物之抗原決定基比的範圍、平均值或中位數為約10至約150、約40至約125、約50至約100、約62至約87或約70至約80。在另一具體實施例中，在治療組合物中的治療共軛物之抗原決定基比的範圍、平均值或中位數為約20至約300、約80至約250、約100至約200、約125至約175或約140至約160。在另一具體實施例中，在治療組合物中的治療共軛物之抗原決定基比的範圍、平均值或中位數為約30至約450、約120至約375、約150至約300、約185至約260或約210至約240。在一些醫藥組合物中，至少或大約30、40、50、60、70、80、90、95、98、99或100%的治療共軛物係以單體或以二聚體、三聚體、四聚體、五聚 體或其組合的形式存在。

治療共軛物的抗體

在部分例示性具體實施例中，本發明亦涵蓋經分離的治療抗體，其具親和力地與本文所揭露的治療共軛物特異性結合，以及其在增殖性疾病的治療及/或診斷中的用途。

本文中所使用的術語「抗體(antibody)」和「抗體(antibodies)」(免疫球蛋白)涵蓋單株抗體(包括全長單株抗體)、多株抗體、從至少二完整抗體形成的多特異性抗體(例如，雙特異性抗體)、人類抗體、人源化抗體、駱駝源化抗體、嵌合抗體、單鏈Fvs(scFv)、單鏈抗體、單結構域抗體、結構域抗體、Fab片段、F(ab')2片段，展現出所需生物活性的抗體片段、雙硫鍵連接的Fvs(sdFv)、以及抗特應(抗-Id)抗體(包括，例如，抗本發明抗體的抗-Id抗體)、內抗體、以及上述任何的抗原決定基結合片段。特別是，抗體包括免疫球蛋白分子及免疫球蛋白分子的免疫活性片段，亦即，含有抗原結合位點的分子。免疫球蛋白分子可為任何類型(例如，IgG、IgE、IgM、IgD、IgA及IgY)，級別(例如，IgG1、IgG2、1gG3、IgG4、IgA1及IgA2)或子級別。

用於本文描述的治療的抗體對一抗原決定基(例如，治療共軛物的Globo H部分)的「親和力」是本技術領域中習知的術語，且意指抗體對抗原決定基結合的程度或強度。親和力可以所屬技術領域中習知的若干方式測量及/或表示，包括但不限於，平衡解離常數(KD或Kd)、表觀平衡解離常數(KD'或Kd’)、以及IC 50(在競爭測試中影響50%抑制所需的量)。可理解的是，就本發明的目的，親和力是結合至一抗原決定基的給定群體的抗體的平均親和力。本文中以每mL的mg IgG或mg/mL方式報導的KD’值 表示每mL的血清(亦可使用血漿)的mg Ig。當使用抗體親和力作為本文所描述的治療方法或用於本文所述的治療方法的選擇的投予基礎上時，可在治療之前及/或治療期間測量抗體親和力，且臨床人員可使用所獲得的值來評估一人類病患是否為治療的適當候選者。

本文中所使用的術語「特異性結合」係指結合對(binding pairs)(例如，抗體與抗原)之間的相互作用。在各種情況中，特異性結合可藉由至少或大約10^-6莫耳/升、約10^-7莫耳/升或大約10^-8莫耳/升或更小的親和力常數來體現。

抗Globo H的例示性抗體的製備，可經由收集經評估可增加所需抗體的免疫個體的體液(例如血清)而達成，以及藉由常規方法自血液中分離血清。

一般而言，抗體的產生係經由多次注射相關抗原及佐劑而達成。可能有用的是使相關抗原結合至一蛋白(例如，鑰孔蟲戚血藍蛋白)，其在將被免疫的物種中是有免疫原性的。

以抗原免疫動物的方法為習知技藝。腹腔內注射或皮下注射抗原是一種標準的哺乳動物免疫方法。更具體地，可將抗原稀釋並懸浮於適當量的磷酸緩衝鹽水、生理食鹽水等。有必要的話，該抗原懸浮液可與適量的佐劑混合，然後投予至個體。

在部分具體實施例中，可藉由多次施用與適當量佐劑混合的抗原，而使個體可以加強免疫，直到效價達到高原值。亦可使用適當的載體於免疫中。經上述免疫後，以一方法檢測血清，以確定所需抗體量是否有增加。

生物學分析

在一具體實施例中，當投予至一病患時，包含本發明的治療共軛物的治療組合物能夠誘導抗Globo H抗體效價至少或大約為1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、50、100、250、500、1000、1500、2000、2500、3000、4000、5000倍或更大倍數於在相同實驗中投予之前(亦即，前置處理基線效價)之相同抗Globo H抗體效價。在部分具體實施例中，所述抗Globo H抗體為IgM抗體。在另一具體實施例中，所述抗Globo H抗體為IgG抗體。

本發明之治療組合物能夠在個體中誘導體液和細胞反應兩者。在部分具體實施例中，本發明的疫苗組合物誘導Globo H部分特異性IgG及IgM抗體的生成以及B細胞及T細胞(例如，CD3⁺ T細胞，CD4⁺ T細胞及/或CD8⁺ T細胞)的擴增。典型地，這些免疫反應在給藥後依照時間順序發生。在一具體實例中，給藥後，B細胞的生成出現在大約第3、4、5、6、7、8、9、10、20、30或60天，接著IgG及IgM抗體的生成在大約第10、20、30、60或90天，且隨後的T細胞生成大約在第24、30、40、50、60、90、120、150或180天。本發明的疫苗組合物潛在地提供了長期的免疫保護作用，其能阻止少量癌細胞的生長，因而對最小化殘留疾病從而達到疾病穩定及生存改善是理想的。

「抗體依賴細胞介導細胞毒性」及「ADCC」係指細胞-介導的反應，其中非特異性細胞毒性細胞(例如，自然殺手細胞、嗜中性球及巨噬細胞)辨識標靶細胞上的結合抗體，且隨後造成標靶細胞的裂解。在一具體實施例中，這樣的細胞為人類細胞。雖然不希望為任何特定的作 用機制所限定，這些介導ADCC的細胞毒性細胞通常表現Fc受體(FcRs)。用於介導ADCC的初代細胞，NK細胞，表現FcγRIII，而單核球則表現FcγRI、FcγRII、FcγRIII及/或FcγRIV。造血細胞上的FcR表現總結於Ravetch及Kinet，免疫學年鑑(Annu.Rev.Immunol.)，9：457-92(1991年)。為了評估分子ADCC活性，可執行體外ADCC測定，諸如在美國專利號5,500,362或5,821,337中描述者。對於這樣測定有用的作用細胞包括周邊血液單核細胞(peripheral blood mononuclear cell，PBMC)和自然殺手(Natural Killer，NK)細胞。可替換地，或另外地，本發明的治療共軛物的ADCC活性可在體內進行評估，例如，在動物模型中，諸如揭露於Clynes等人，美國國家科學研究院論文集，95：652-656(1998年)。

在部分具體實施例中，該醫藥組合物的給藥可產生免疫反應，包括產生特異性結合至Globo H的抗體。在部分具體實施例中，發展抗體以標定一個或多個表現在癌細胞表面的Globo H，並誘發CDC及/或ADCC而殺死該細胞。在部分具體實施例中，抗體主要包括IgG抗體。在部分具體實施例中，本文提供的免疫組合物主要誘導出IgG1、IgG2b、IgG2c以及IgG3。

「補體依賴細胞毒性」或「CDC」係指治療共軛物以初始化補體活性並在補體的存在下裂解標靶的能力。補體活化路徑係藉由使補體系統的第一成份(C1q)結合至與同源抗原複合的分子(例如，抗體)上而起始。為了評估補體活化，可執行CDC測定法，例如，描述於Gazzano--Santaro等人所注之免疫學方法期刊(J.Immunol.Methods)，202：163(1996年)中者。

在另一具體實施例中，當將含有本發明的治療共軛物的治療組合物給藥予病患時，能夠誘導在病患/個體內抗Globo H免疫血清的產 生，其特異性結合至Globo H陽性癌細胞株，例如，MCF-7細胞。

組合物

治療組合物可包括其它抗癌/抗增殖藥物，以及佐劑和其它免疫調節分子，諸如細胞激素或趨化激素。在部分具體實施例中，該組合物可為以個別試劑/組合物進行共同給藥，或者為共製劑。這些試劑可由一個將其置於個別容器或單一容器中的套組形式一起進行遞送。試劑可在給藥時，或給藥前至少或大約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23或24分鐘、小時或天數，進行結合。

佐劑是修飾其他試劑的效果的醫藥或免疫學試劑。其可為無機的或有機的化學、巨分子或全部癌細胞或其部分，其增進對給定抗原的免疫反應。佐劑包括完全和不完全弗氏佐劑，類鐸受體分子以及其模擬物、LPS、脂蛋白、脂肽、鞭毛蛋白、雙股RNA、未甲基化CpG島區、左旋咪唑、卡介苗、體抑素胜肽(octreotide)、異丙肌苷和日達仙、藉由細菌和病毒典型地釋放的DNA及RNA的各種形式、PD-1拮抗劑和CTLA拮抗劑。在一具體實施例中，佐劑是皂素佐劑。

在某個實施例中，皂素佐劑是OBI-821皂素，其大致上是純的。在其它實施例中，OBI-821皂素是其生物活性片段。佐劑也可涵蓋OBI-821皂素的不純形式。當以本文描述的疫苗或與其他大致上純的皂素或非皂素佐劑混合施用時，純化的OBI-821皂素展現增強的佐劑效果。

OBI-821皂素是天然存在的醣苷，從石鹼木(Quillaja saponaria Molina)的樹皮藉由高壓液相層析法(HPLC)、低壓液相矽膠層析 法、以及親水的交互式層析(hydrophilic interactive chromatography，HILIC)被高純化地萃取出，如描述於美國專利號5,057,540和美國專利號6,524,584者般，其內容藉由引用全部併入。高壓液相層析法分析顯示，OBI-821是結構上相關的異構化合物的混合物。OBI-821皂素的不同純化的異構化合物已被鑑定並在本文中揭露。

在部分具體實施例中，OBI-821皂素包括如下化學式I的至少一種經分離的化合物：

其中，R¹是β-D-洋芹糖(β-D-Apiose)或β-D-木糖(β-D-Xylose)；以及R²與R³獨立地為H、烷基，

(用於化合物1989之脂肪醯基部分)，或

(用於化合物1857之脂肪醯基部分)。

OBI-821皂素也可包含化學式I的經分離化合物，其中(i)R¹是β-D-洋芹糖，R²是用於上述1989化合物的脂肪醯基部分，且R³是H(1989化合物V1A)； (ii)R¹是β-D-洋芹糖，R²是H，且R³是用於上述1989化合物的脂肪醯基部分(1989化合物V1B)；(iii)R¹是β-D-木糖，R²是用於上述1989化合物的脂肪醯基部分，且R³是H(1989化合物V2A)；或(iv)R¹是β-D-木糖，R²是H，且R³是用於上述1989化合物的脂肪醯基部分(1989化合物V2B)。總結地，1989化合物V1A、1989化合物V1B、1989化合物V2A以及1989化合物V2B被稱為「1989化合物混合物」。

表1總結1989化合物的官能基以及各個1857化合物在該1857化合物混合物中的莫耳%。

OBI-821皂素可包含化學式I的經分離化合物，其中(i)R¹是β-D-洋芹糖，R²是用於上述1857化合物的脂肪醯基部分，且R³是H(1857化合物V1A)；(ii)R¹是β-D-洋芹糖，R²是H，且R³是用於上述1857化合物的脂肪醯基部分(1857化合物V1B)；(iii)R¹是β-D-木糖，R²是用於上述1857化合物的脂肪醯基部分，以及R³是H(1857化合物V2A)；或(iv)R¹是β-D-木糖，R²是H，且R³是用於上述1857化合物的脂肪醯基部分(1857化合物V2B)。總結地，1857化合物V1A、1857化合物V1B、1857化合物V2A以及1857化合物V2B被稱為「1857化合物混合物」。

表2總結1857化合物的功能性基團以及各個1857化合物在 該1857化合物混合物中的莫耳%。HPLC。

OBI-821皂素包含一個或多個下列化合物：(i)1857化合物V1A；(ii)1857化合物V1B；(ii)1857化合物V2A；(iii)1857化合物V2B；(iv)1989化合物V1A；(v)1989化合物V1B；(vi)1989化合物V2A；或(vii)1989化合物V2B。

1857化合物混合物和1989化合物混合物在OBI-821皂素中的百分比範圍可為如下：(i)包含1857化合物混合物的OBI-821的大約1莫耳%至約15莫耳%；以及(ii)包含1989化合物混合物的OBI-821的大約85莫耳%至約99莫耳%。

所有莫耳%可以0.1%增量(例如，大約87%至大約90%、大約90.5%至大約97%、大約3.5%至大約11%、大約10%至大約14%)而變化。

1989化合物混合物可包含大約60-70莫耳%的1989化合物V1A；大約1-5莫耳%的1989化合物V1B；大約30-40莫耳%的1989化合物V2A；以及大約0.1-3莫耳%的1989化合物V2B。所有莫耳%可以0.1增量(例如，65%、2.5%、35.6%)而變化。

1857化合物混合物可包含大約60-70莫耳的1857化合物V1A%；大約1-5莫耳%的1857化合物V1B；大約30-40莫耳%的1857化合物V2A；以及大約0.1-3莫耳%的1857化合物V2B。所有莫耳%可以0.1增量(例 如，65%、2.5%、35.6%)而變化。

在其他的實施例中，大致上純的OBI-821是從原態的石鹼木萃取物中純化出，其中所述OBI-821的特徵為，當使用具有5um顆粒尺寸、100Å孔洞、4.6mm IDx25cm L的Symmetry C18管柱，且移動相A是含0.1%三氟乙酸的蒸餾水，移動相B是含0.1%三氟乙酸的乙腈(acetonitrile)，並以包含A：B 95%：5%至75%：25%的移動相溶析程式，在1ml/min的流速下進行逆相-HPLC中分析時，其層析圖中在11分鐘處具有一個單一主要峰值，該峰值扣掉溶劑峰值後包含所有峰值總面積的90%或更多的面積。

在一具體實施例中，該醫藥組合物包含化學式(I)的化合物

其中，R¹是β-D-洋芹糖或β-D-木糖；以及

R²與R³獨立地為H、烷基或

(用於化合物1857之脂肪醯基部分)，以及醫藥上可接受的載體。

疫苗可包含碳水化合物抗原或其免疫原性片段以及OBI-821皂素。在又另一具體實施例中，疫苗包含碳水化合物抗原或其免疫原性片段；載體蛋白以及OBI-821皂素。在另一具體實施例中，疫苗包含選自Globo H、KLH、以及OBI-821皂素的碳水化合物抗原。載體蛋白的非限制性實例包括KLH。

術語「α-半乳糖苷-神經醯胺」以及「α-CalCer」意指一種刺激自然殺手T細胞產生T輔助細胞1(TH1)與TH2細胞激素的醣脂，如描述於美國專利號8,268,969中，其全部內容以引用方式併入。在某一具體實施例中，OBI-834(亦稱為C34)佐劑的特徵為以下的例示性結構：

本文中所使用的術語「細胞激素」係指藉由影響免疫細胞分化過程而調控免疫反應的強度和持續時間的任何許多小分泌蛋白質，免 疫細胞分化過程通常涉及基因表現中前驅細胞變成獨特特化細胞類型的變化。細胞激素基於其假定功能、分泌的細胞或作用的目標，而被不同地命名為淋巴介質(lymphokine)、白細胞激素及趨化激素。舉例來說，一些常見的白細胞激素包括但不限於、IL-2、IL-12、IL-18、IL-2、IFN-γ、TNF、IL-4、IL-10、IL-13、IL-21、GM-CSF和TGF-β。

本文中所使用的術語「趨化激素」係指在感染部位提供用於淋巴球的動員和活化的手段所釋放的任何各種小的趨化性細胞激素。趨化激素吸引白血球至感染部位。趨化激素具有保守半胱胺酸殘基，其允許其被分配成四組。有著代表性的趨化激素的分組，是C-C趨化激素(RANTES、MCP-1、MIP-1α和MIP-1β)、C-X-C趨化激素(IL-8)、C趨化激素(淋巴細胞趨化因子(Lymphotactin))以及CXXXC趨化激素(分形介素(fractalkine))。

本發明之治療組合物可進一步包括PD-1/PD-L1抑制劑(細胞毒性T細胞淋巴球(CTLs)免疫療法)、CTLA-4免疫療法、CDK4/6抑制劑(標靶治療)、PI3K抑制劑(標靶治療)、mTOR抑制劑(標靶治療)、AKT抑制劑(標靶治療)、Pan-Her抑制劑(標靶治療)。這些抑制劑也可被修飾以產生各自的單株抗體。這樣的抗體可被包含在本發明之治療組合物中。

治療組合物可包括其它抗癌/抗增殖或化學治療劑。在一些具體實施例中，這樣試劑的實例可見於《癌症原理和腫瘤學的實踐》(Cancer Principles and Practice of Oncology)中，V.T.Devita以及S.Hellman(編者)，第六版(2001年2月15日)，Lippincott Williams & Wilkins出版社。這樣的抗癌劑包括但不限於，以下：荷爾蒙治療劑(例如，選擇的雌性激素受體調節子、 雄性激素受體調節子)、單株抗體治療、化學治療、類視色素受體調節子、細胞毒性/細胞生長抑制劑、抗腫瘤劑、抗增殖劑、異戊二烯基-蛋白轉移酶抑制劑、HMG-CoA還原酶抑制劑、氮芥類、亞硝基脲、血管生成抑制劑(例如，必化思沃蜜)、細胞增殖和存活傳訊路徑的抑制劑、細胞凋亡誘導劑、干擾細胞週期檢查點的藥劑、干擾受體酪胺酸激酶(RTKs)的藥劑、雷帕黴素的哺乳動物標靶(mTOR)抑制劑、人類表皮生長因子受體2(HER2)抑制劑、表皮生長因子受體(EGFR)抑制劑、整合素阻斷劑、NSAIDs、PPAR促效劑、先天的多重抗藥性(MDR)的抑制劑、鎮吐劑、用於貧血治療的藥劑、用於嗜中性球減少症的治療的藥劑、免疫增強藥物、二磷酸鹽、芳香酶抑制劑、誘導贅生細胞的最後分化的藥劑、γ-分泌酶抑制劑、癌症疫苗、以及其任何組合物。

本發明的製劑配方

治療組合物(本文中也稱為醫藥組合物)通常包含醫藥上可接受的載體。如本文中所使用的語詞「醫藥上可接受的載體」包括與醫藥施用相容的溶劑、分散媒介、塗層、抗菌劑和抗真菌劑、等滲透和吸收延遲劑、以及類似物。補充的活性化合物也可被併入到組合物中。醫藥組合物被調配成與其給藥的預期途徑相容。給藥途徑的實例包括非口服的(parenteral)，例如，靜脈內、皮內、皮下、肌肉內、動脈、口服(例如，吸入)、經皮(局部)、經黏膜及直腸給藥。使用於非口服的、皮內或皮下應用的溶液或懸浮液可包括以下成分：無菌稀釋劑諸如注射用水、鹽水溶液、磷酸鹽緩衝鹽水、tris緩衝鹽水、不揮發油(fixed oil)、聚乙二醇、甘油、丙二醇或其它合成溶劑；抗菌劑像是苯甲醇或對羥基苯甲酸甲酯(methyl paraben)；抗氧化劑像是抗壞血酸(ascorbic acid)或亞硫酸氫鈉(sodium bisulfite)；螯合劑(chelating agent)如乙二胺四醋酸(ethylenediaminetetraacetic acid)；緩衝劑像是醋酸鹽、檸檬酸鹽或磷酸鹽和用於調整張力的藥劑像是氯化鈉或右旋糖(dextrose)。pH可以用酸或鹼，像是鹽酸或氫氧化鈉來調整。非口服製劑可封裝在玻璃或塑膠製的安瓿瓶、拋棄式注射器或多劑量小瓶中。

適合用於可注射用途的醫藥組合物包括無菌水溶液(其中水可溶)或分散體和無菌粉末用於無菌注射溶液或分散體的臨時製備。針對靜脈內給藥，合適的載體包括生理鹽水、抑菌水(bacteriostatic water)、Cremophor EL®(BASF，帕西帕尼，紐澤西州)或磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)中。在所有情況下，組合物應當是無菌的，並且應當是輕易可注射性(syringability)存在程度的流體。其應在製造和貯存的條件下是穩定的，且防止針對諸如細菌和真菌的微生物的污染作用。載體可是含有，例如水、乙醇、多元醇(例如，甘油、丙二醇及液體聚乙二醇及類似物)的溶劑或分散液及其合適的混合物。適當的流動性可被維持，例如，藉由包衣，諸如卵磷脂的使用、藉由在分散液的條件下對所需顆粒尺寸的維持以及藉由表面活性劑的使用。防止微生物的作用可藉由各種抗菌劑和抗真菌劑來達成，例如對羥苯甲酸(paraben)、氯丁醇(chlorobutanol)、酚、抗壞血酸、硫柳汞(thimerosal)及類似物。在許多情況下，其將較佳為包括等滲透劑，例如糖、多元醇諸如甘露醇(mannitol)、山梨醇(sorbitol)或氯化鈉在組合物中。可注射組合物的延長吸收可藉由被包含在延遲吸收之藥劑的該組合物中來實現，例如，單硬脂酸酯鋁(aluminum monostearate)和明膠。

無菌可注射溶液可藉由在一適當溶劑中與以上列舉之一個或組合之成分的併入所需量之活性化合物來製備，如果需要，接續進行過濾滅菌。一般地，分散液藉由併入活性化合物進入含有基本分散媒介和來自上述列舉的所需其它成分的無菌載體來製備。在用於無菌注射溶液的製備之無菌粉末情況中，製備的方法包括真空乾燥和冷凍乾燥，其從先前無菌過濾溶液中產生活性成分加上任何另外期望成分的粉末。

口服組合物一般包括惰性稀釋劑或可食用載體。針對口服治療給藥的目的，活性化合物可與賦形劑合併並以片劑、錠劑或膠囊，例如，明膠膠囊的形式被使用。口服組合物也可使用流體載體被製備用於漱口水的用途。醫藥上可相容的黏合劑，或佐劑材料可被包含作為組合物的一部分。片劑、丸劑、膠囊、錠劑和類似物可含有任何下列成分或類似性質的化合物：黏合劑諸如微晶型纖維素、黃蓍膠(gum tragacanth)或明膠；賦形劑諸如澱粉或乳糖；崩散劑(disintegrating agent)如海藻酸(alginic acid)、初生凝膠(Primogel)或玉米澱粉；潤滑劑諸如硬脂酸鎂或氫化植物油(Sterotes)；助流劑(glidant)如膠體(colloidal)二氧化矽(silicon dioxide)；甜味劑如蔗糖或糖；或調味劑如薄荷、柳酸甲酯或柑橘香料。

再者，對於口服給藥，本發明的製劑可為片劑或膠囊的型態，其係經由常規方法，與醫藥可接受的賦形劑一起製備，例如黏合劑(例如，預糊化玉米澱粉、聚乙烯吡咯烷酮或羥丙基甲基纖維素)；填料(例如，乳糖、微晶型纖維素或磷酸氫鈣)；潤滑劑(例如，硬脂酸鎂、滑石或矽石)；崩散劑(如馬鈴薯澱粉或澱粉羥基乙酸鈉)；或潤濕劑(例如，月桂基硫酸鈉)。片劑可以通過本領域中所習知的方法進行包衣。本發明的組合物也可 以引入微球或微膠囊中，例如，從聚乙醇酸/乳酸(PGLA)製成(參見，美國專利號5,814,344；5,100,669和4,849,222；PCT公開號WO95/11010和WO93/07861)。液體口服製劑可以採取的形式，例如，溶液、糖漿、乳液或懸浮液，或者，其可以乾燥產品形式呈現，並在使用前以水或其他適當載體進行重製。這樣的液體製劑可以通過常規方法用醫藥可接受的添加劑進行製備，例如懸浮劑(例如，山梨醇糖漿、纖維素衍生物或氫化食用脂肪)；乳化劑(例如，卵磷脂或阿拉伯膠)；非水載體(例如，杏仁油、油酯、乙醇或分餾的植物油)；和防腐劑(例如，甲基或丙基對羥基苯甲酸酯或山梨酸)。該製劑還可以含有適當的緩衝鹽、調味劑、著色劑和甜味劑。口服給藥製劑可經由適當地配製，以達到活性化合物的控制釋放效果。

對於藉由吸入給藥，化合物係以氣溶膠噴霧形式，自含有合適推進劑，例如氣體諸如二氧化碳的加壓容器或分配器，或噴霧器被遞送。

全身性給藥也可經黏膜或經皮。對於經黏膜或經皮給藥，對於滲透之阻隔適用的滲透劑被使用於製劑中。這樣的滲透劑通常是所屬技術領域所習知的，且包括，例如，用於經黏膜給藥之清潔劑、膽鹽、以及梭鏈孢酸(fusidic acid)衍生物。經黏膜給藥可透過鼻腔噴霧劑或栓劑的使用來完成。對於經皮給藥，活性化合物被配製成軟膏、藥膏、凝膠或乳膏劑，如通常為所屬技術領域所習知的。該化合物也能以栓劑的形式製備(例如，用常規的栓劑基質，像是可可脂和其它甘油酯)或用於直腸遞送的保留灌腸。

根據實作，活性化合物與將保護該化合物免於從身體快速 消除的載體一起製備，諸如控釋製劑(controlled release formulation)，包括植入物和微膠囊化遞送系統。生物可分解的、生物相容的聚合物可被使用，諸如乙烯-醋酸乙烯酯(ethylene vinyl acetate)、聚酐(polyanhydride)、聚乙醇酸(polyglycolic acid)、膠原、聚原酸酯(polyorthoester)及聚乳酸(polylactic acid)。用於這類製劑製備的方法將對那些所屬技術領域具有通常知識者而言為顯而易見的。材料還可以商業購得。脂質體懸浮液(包括對感染細胞以單株抗體對細胞特異性抗原標的之脂質體)也可被用作醫藥上可接受的載體。這些可根據所屬技術領域所習知的方法進行製備，例如，描述於美國專利號4,522,811中的方法，，其藉由引用的方式併入本文中。

為了給藥之容易以及劑量的均勻，有優勢的是製劑成劑量單位形式的口服或非口服組合物。本文所使用的劑量單位形式指稱作為適於待治療的個體的單一劑量的物理上離散的單位；每個單位含有經計算以產生與所需的醫藥上載體相關聯的預期治療效果之活性化合物的預定量。

本發明的免疫原性製劑可以由腸胃道給藥，亦即，藉由靜脈內(i.v.)、皮下(s.c.)、腹腔內(i.p.)、肌肉內(i.m.)、皮下(s.d.)或皮內(i.d.)給藥，藉由直接注射，其經由，例如，推注、連續輸注或基因槍(例如，施用載體疫苗予個體，如裸DNA或RNA)。用於注射的製劑可以以單位劑量形式呈現，例如，在安瓿或多劑量容器中，含添加的防腐劑。該組合物可以採取這樣的形式作為賦形劑、懸浮液、溶液或在油性或水性載體中的乳劑，並且其可含有配製劑如懸浮劑，穩定劑和/或分散劑。另可選地，該活性成分可以是粉末形式，並在使用前，與適當的載體，例如，無菌無熱原水，進行重製。

本發明還考慮各種粘膜疫苗接種策略。

劑量形式

這類治療組合物的毒性和治療功效可藉由標準醫藥程序在細胞培養物或實驗動物中來測定，例如，用於測定LD₅₀(致使群體50%死亡的劑量)和ED₅₀(在群體50%中治療有效的劑量)。毒性和治療效果之間的劑量比值為治療指數(therapeutic indices)，且其可表達為比值LD₅₀/ED₅₀。展現高治療指數的治療組合物為較佳的。雖然展現出毒性副作用的化合物可被使用，應當小心設計標的此類化合物至受影響位置的遞送系統，以最小化對未感染細胞的潛在損害，並且，由此減少副作用。

從細胞培養試驗和動物研究中獲得的數據可被使用於調配一範圍劑量以用於人體中。這類化合物的劑量較佳位於包括具有很少或沒有毒性的ED₅₀的循環濃度的範圍內。劑量可在基於執行的劑量形式以及所利用的給藥途徑而定之範圍內變化。對於在本公開的方法中使用的任何化合物，治療有效劑量能最初以從細胞培養測定來估計。劑量可在動物模型中配製以達到包括IC₅₀的循環血漿濃度範圍(亦即，達到症狀的最大半抑制的測試化合物的濃度)，如在細胞培養中被測定。此類資訊可被使用於更精確地確定在人體中有用的劑量。血漿中的量可被測量，例如，藉由高效液相層析法。

在本發明的組合物中，抗原與佐劑兩者皆以免疫有效量存在。對於各個特定抗原，最適的免疫有效量應以實驗決定(考量給定病患及/或治療種類的特定特徵)。一般而言，此量範圍為每Kg體重有0.01μg-250mg的抗原。對於本發明的某一例示性佐劑，其免疫有效量範圍為每Kg體重有 10-250μg的抗原。

在一些具體實施例中，治療組合物的治療有效量(亦即，有效劑量)可介於約0.001μg/kg至大約250g/kg、0.01μg/kg至10g/kg或0.1μg/kg至1g/kg或每公斤病患體重大約或至少為：0.001、0.002、0.003、0.004、0.005、0.006、0.007、0.008、0.009；0.01、0.02、0.03、0.04、0.05、0.06、0.07、0.08、0.09；0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、125、150、175、200、225或250克或微克或任何介於本文所列任何數字間的範圍或其它範圍，其對技術人員而言在無須過度實驗下將是顯而易見且明瞭的。本領域具有通常知識者將理解的是，部分因素可影響所需有效治療個體的劑量和時間，包括但不限於疾病或病症的嚴重性、先前的治療、個體的一般健康狀況或年齡、以及存在的其他疾病。

在其他具體實施例中，在治療組合物中Globo-H部分的治療有效量(亦即，有效劑量)可介於大約0.001μg/kg至大約250g/kg、0.01μg/kg至10g/kg或0.1μg/kg至1g/kg或每公斤病患體重大約或至少為：0.001、0.002、0.003、0.004、0.005、0.006、0.007、0.008、0.009；0.01、0.02、0.03、0.04、0.05、0.06、0.07、0.08、0.09；0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、125、150、175、200、225或250克或微克或任何介於本文所列任何數字間的範圍或其它範圍，其對技術人員而言在無須過度實驗下將是顯而易見且明瞭的。本領域具有通常知識者將理解，部分因素可影響所需有效治療個體的劑量和時間，包括但不限於疾病或病症的嚴重性、先前治療、個體的一般健康狀況或年齡、以及存在的其他疾病。

在部分具體實施例中，本文所揭露的治療組合物含有或相關於，至少一種治療共軛物或治療抗體，其中至少一種治療共軛物或治療抗體係各存在於單一劑量內，為大約、至少或多於0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98或99的濃度，每次每劑量為10^-9、10^-8、10^-7、10^-7、10^-6、10^-5、10^-4、10^-3、10^-2、10^-1莫耳。較佳地，治療共軛物係存在於單劑量內為大約： 1-100、2-60、3-50、4-40、5-30、6-20、7-15、8-10、2-18、3-16、4-14、5-12、6-10或7-8μM之間的濃度。

在一些具體實施例中，本文揭露的治療組合物含有或相關於，至少一種治療共軛物或治療抗體，其中至少一種治療共軛物或治療抗體係各存在於單一劑量中為大約、至少或高於：01、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98或99的濃度，每次10^-3、10^-2、10^-1或10微克。在部分具體實施例中，每劑量中包括大約或至少為10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、110、120、130、140、150、200、250或更多微克的一種治療共軛物或治療抗體。

在部分具體實施例中，本文所揭露的治療組合物係給藥於一劑量為每天每週或每月大約或至少或超過1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23或24次，歷經大約或至少或超過：1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23或24天、週、月或年之期間。

有效劑量與安全性評估

根據本發明的方法，本文所述的該醫藥與疫苗組合物係以 免疫有效劑量給藥予病患，較佳地，在最小毒性的情況下。如在章節標題為所揭露配方的「定義」、「免疫有效劑量」或「治療有效劑量」意指抗原及/或佐劑的量係足夠於在治療個體中產生有效免疫反應，且因此，足夠有益於該個體的健康。

套組

根據另一個態樣，部件的一個或多個套組可由所屬技術領域具有通常知識者設想，部件的套組以執行本文揭露的方法的至少一種，部件的套組包括一個或多個治療共軛物、抗癌/抗增殖劑、佐劑、細胞激素及/或趨化激素。根據上述方法的至少一個，治療組合物包含單獨或搭配之本文所揭露的治療組合物的有效量。前述試劑可在套組內於單一容器中或不同的容器中。

有需要的話，該組合物可被呈現在其可包含含有活性成分(即，含有佐劑的抗原及/或鞘醣脂(GSLs))的一個或多個單位劑型的包裝或分配器裝置。該包裝可，例如，包含金屬或塑膠薄層，例如泡殼包裝。該包裝或分配器裝置可附有使用說明書以便進行給藥。調配於一種相容的醫藥載體中的本發明組合物亦可被製備，放置於適當的容器中，以及針對預定的治療條件進行標示。

套組可能地也包括對生物事件的識別物或藉由所屬技術領域具有通常知識者在參閱本揭露內容下可識別的其他化合物。套組也可包含至少一種組合物，其包含本文所揭露的治療組合物的有效量。根據所屬技術領域具有通常知識者可識別的程序，套組的治療組合物用以執行本文所揭露的至少一種方法。

本揭露也包括利用本文揭露的治療組合物治療增殖性疾病的方法。在一具體實施例中，該方法涉及癌症的治療，例如，乳癌。該方法一般涉及以有效量提供本文所揭露的治療組合物給待治病患以治療增殖性疾病。

在一些具體實施例中，本發明之治療組合物於一方法中被給藥給有需求的個體(例如，具有癌症者，例如乳癌)，其平均延伸無進展生存期或超過例如，磷酸鹽緩衝鹽水安慰劑的控制組安慰劑的整體存活期，大約或至少為1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40天、週、月或年。

在一些具體實施例中，治療組合物被皮下給予於第0-2、6、14、以及26週，在沒有不可接受毒性或疾病進展的情況下。

在一些具體實施例中，本發明之治療組合物於一方法中給予有需求的個體(例如，具有癌症者，如乳癌)，其在病患中相對於控制組安慰劑，例如，磷酸鹽緩衝鹽水安慰劑，腫瘤收縮的平均體積為大約或至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或更多百分比，在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、 16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40天、週，月或年的過程中。

在一些具體實施例中，腫瘤體積可在至少一個維度上(待紀錄的測量平面上之最長直徑)以10mm的最小尺寸藉由CT掃描(建議的CT掃描切片厚度為2.5mm及5mm)被精確地測量。

合成本發明的組合物之方法

本發明之治療組合物的Globo H六醣類部分被化學地合成為烯丙基醣苷，接著被製備用於與KLH共軛作用。

在一說明實施例中，Glolbo H的化學合成涉及下列概略步驟

以2-亞胺基四氫噻吩在水溶液緩衝液中處理KLH。接著透過Sephadex G-15管柱的粒徑篩析管柱從未反應的2-亞胺基四氫噻吩中分離出硫醇化的KLH。硫醇化的KLH被貯存於惰性氣體(氮氣或氬氣)環境下，且 立即被使用於與Globo H及MMCCH的共軛作用中。

實例

實例1：本發明之醣共軛物的製備(Globo H-KLH)

藉由臭氧分解法使Globo H烯丙基醣苷(市售可得)轉化成醛類。Globo H醛類與MMCCH(連接物)及NaCNBH₃反應以得到Globo H-MMCCH。以管柱純化混合物而獲得Globo H-MMCCH。Globo H-MMCCH陽性的部分係藉由高效液相層析(HPLC)來確定，且接著集中在一起。將KLH溶解在硫醇化緩衝劑中，且將2-亞胺基四氫噻吩依比例添加至反應中。孕育一段時間至完成該反應，接著以管柱純化KLH-SH。將Globo H-MMCCH與KLH-SH結合。使該反應攪拌至完成。接者，純化Globo H-KLH以獲得最終產物。

實例2：在醣共軛物中Globo H對KLH重量比之分析

在所製備的醣共軛物中Globo H和KLH的重量比係藉由高效能陰離子交換層析與脈衝安培檢測法(HPAEC-PAD)來確定。結果顯示在表3。

實例3：在醣共軛物中Globo H對KLH之抗原決定基比的分析

KLH二十聚體(天然聚集的形式)的分子量是大約7.5MDa~8.6Mda，如在文獻中所描述的，諸如美光期刊30(Micron 30)(1999年)597-623。天然的KLH係藉由粒徑篩析層析法以及多角度雷射散射光譜測定(laser scattering spectrometry，MALS)來確定，其具有大約8.6MDa的分子量(參閱圖3)。

以粒徑篩析層析法並使用多角度雷射散射光譜儀(SEC-MALS)評估及獲得KLH和Globo H-KLH醣共軛物(OBI-822，批號14001)的質量分佈。根據蛋白質含量(ε=1.39)計算分子量(參見圖4)。圖4A中，可觀察到KLH的二十聚體(n=20)以及多-十聚體(n>20)。圖4B顯示二十聚體的峰值面積為74.3%，而多-十聚體則為25.7%。的圖4C中，可觀察到Globo H-KLH醣共軛物(OBI-822)的單體至六聚體(n=1-6)以及多聚體(n>7-20)。圖4D顯示單體至六聚體(n=1-6)的峰值面積，其為最主要的成份(>97%)，而多聚體(n>7-20)則僅為小量(2.2%)。KLH及OBI-822寡聚體的質量分佈分析總結顯示於表4中。

結果顯示，相較於天然聚集的KLH二十聚體而言，本發明醣共軛物表現出分子量的降低。分子量比率計算於表5中。

根據上述，可以總結的是在本發明的醣共軛物中，KLH單體單元在與Globo H共軛之後形成單體、二聚體、三聚體、四聚體、五聚體及/或六聚體。

實例4：在大鼠中疫苗組合物的製備和免疫作用

如在實例1中所製備的醣共軛物(Globo H-KLH)的不同樣品被貯存在4℃，並在層流通風櫥(laminar flow hood)中與皂素佐劑混合。將所 生成之疫苗組合物置放於冰上，並運送到動物設施以進行後續的免疫作用。

以各種不同的疫苗組合物使三組Lewis大鼠免疫，如表6所示。

大鼠在第0、7、14、以及21天被免疫化。周邊血液單核球細胞(PBMC)以及血漿在第0、3、10、17、24、以及31天被收集。脾臟、淋巴結、以及腹膜灌洗在第31天進行收集。

實例5：用於在大鼠內之體液及細胞免疫反應的誘導的測定

實例5.1：藉由流式細胞儀對免疫效應細胞亞群的分析

周邊血液單核球(PBMCs)係從動物中分離，接著，在PBMC中之多種免疫效應細胞亞群係藉由流式細胞儀，使用針對不同細胞標記物的特異抗體來鑑定。從經免疫的大鼠在第0、3、10、17、24、以及31天中所分離之PBMCs係以不同的螢光(FITC)-結合的抗體進行染色，並將其放置在冰上30分鐘。培養之後，以洗滌緩衝液(在磷酸鹽緩衝鹽水(UniRegion Biotech)中的1%牛血清白蛋白(Sigma)以及0.1% NaN₃(Sigma))清洗細胞，並 以350g離心5分鐘。使細胞重新懸浮在洗滌緩衝液中，藉由FACS Canto(BD生物科學事業(BD Bioscience))進行螢光測定。資料以BD FACSDiva(BD生物科學事業)軟體進行分析。結果顯示，經本發明的醣共軛物免疫的大鼠內，相較於PBS控制組而言，其B細胞和T細胞係顯著地增殖。具體而言，B細胞族群首先出現在第3天，且隨後CD3T、CD4T以及CD8T細胞出現在第24天。參閱圖5A至圖5D。

實例5.2：以ELISA測試Globo H特異性抗體

由經免疫大鼠的血清中所得的Globo H特異性抗體係以ELISA檢測法來測定。結果顯示，Globo H特異抗IgG的效價在免疫作用之後第10天開始上升，且在第17天達到峰值。相似的模式在Globo H特異IgM抗體的生成中也被觀察到。參閱圖6A-圖6B。僅以PBS處理之大鼠，則沒有Globo H特異IgG和IgM抗體的反應。

總結來說，在經免疫的大鼠中，B細胞的生成出現在第3天，接者，抗Globo H的IgM和IgG抗體則出現在第10天，之後，CD3T、CD4T及CD8T細胞於第24天出現。本發明的醣共軛物(Globo H-KLH)對於誘導體液和細胞反應兩者是有效的。

實例6：在小鼠內的免疫作用及以ELISA作抗體測試

醣共軛物(Globo H-KLH)的不同樣本被貯存在4℃，且在層流通風櫥中與皂素佐劑混合。將所生成之疫苗組合物置放於冰上，並運送到動物設施以進行後續的免疫作用。。

大約八週大的Balb/c小鼠係透過皮下注射方式，每週一次以不同的碳水化合物比蛋白質(Globo H：KLH)比值來給予Globo H-KLH，給 予四週(第0天、第7天、第14天和第21天)。血液樣本在無抗凝血劑下於免疫前或者第0天、以及在每次疫苗接種之後三天(第10、17及24天)透過眼窩(retro-orbital)或面部靜脈收集。接著離心樣本以分離血清和紅血球。血清被收集並貯存在-20℃，之後以ELISA分析。曼-懷特尼t檢定(Mann-Whitney t-test)被使用於統計分析。

如圖7顯示，根據本發明，相比於PBS控制組，與皂素佐劑組合之醣共軛物(Globo H-KLH)呈現出，在動物模型內可顯著地誘導Globo H特異IgM抗體反應。具體而言，有著0.17：1(Globo H：KLH)的重量比值的醣共軛物比起有著0.07：1(Globo H：KLH)的重量比值的醣共軛物而言，得以誘導出較佳的抗體效價。

總結來說，根據本發明，與適當之佐劑組合之Globo H-KLH醣共軛物(OBI-822)係在動物模型內呈現出得以誘導意外優異體液及細胞免疫反應，特別是包括CTLs及IgM和IgG反應的B細胞及T細胞的增殖，其在癌症免疫療法中是重要的。

實例7：小鼠內Globo H-KLH與不同佐劑的免疫原性研究

當與不同佐劑(OBI-821/OBI-834)進行配對時，本發明的Globo H組合物在小鼠上引出免疫反應的能力已被執行。Lewis肺癌(LL/2，ATCC CRL-1642)細胞由汎球藥理研究所股份有限公司(Eurofins Panlabs Taiwan Ltd.)提供，使用濃度為0.1mL內含5.0×10⁶個細胞，其同源於C57BL/6小鼠，於第16天將其朝向試驗小鼠的側邊，經由皮下注射入腹腔區域。以Globo H-KLH共軛物(OBI-822)及不同佐劑使六組6-8週齡的老雌性C57BL/6小鼠於皮下注射進行免疫。各組中的OBI-822劑量為等效量。各注射間含有 相當於2.0μg疫苗(OBI-822)和20μg佐劑(OBI-821/OBI-834)，其係以皮下注射方式給藥於小鼠，每隻小鼠0.2mL(在腹部左側及右側兩者，每側0.1mL)。免疫作用發生於第0、5、11、19、29、34及39天，而血清則於第0天(注射前)以及第42天進行收集，以便以ELISA做比較性分析。以ELISA測量血清性反應，藉以決定抗Globo H的IgM和IgG抗體效價。

如圖8所示，以磷酸緩衝鹽(PBS)處理的小鼠沒有任何反應發生。相反地，以OBI-822+OBI821以及OBI-822+OBI-834處理的小鼠則產生顯著的IgM抗Globo H效價(圖8A)。然而，平均的IgG效價較IgM為低(圖8B)。此現象說明OBI-821和OBI-834兩種佐劑可能誘導Globo H-KLH(OBI-822)的免疫原性。接種Globo H-KLH和佐劑可被證明能在雌性C57BL/6小鼠中引出IgG和IgM抗Globo H反應。

如圖9所示，於第16、19、23、26、30、34、37、40及42天，監測六組C57BL/6小鼠的體重與腫瘤尺寸。在第42天進行犧牲後，拍攝包含腫瘤的全身照片。如圖10所示，根據扁長橢球公式：長度(mm)x[寬度(mm)]² x 0.5，估計腫瘤體積(mm³)。在以化合物處理的動物身上的腫瘤生長係以T/C(處理/控制組)x 100%計算；使用單因子ANOVA，接著以Dunnetts測驗或非成對Student’s t測驗，以決定腫瘤生長的顯著抑制現象以證明抗腫瘤活性。第42天的OBI-822+OBI-821腫瘤抑制率約為35%，而OBI-822+OBI-834則約為22%。由此可知OBI-821與OBI-834兩種佐劑皆可與Globo H-KLH共軛物(OBI-822)抑制腫瘤生長。

實例8：在KLH上之Globo-H共軛位點(離胺酸)的LC-MS/MS分析

在四個KLH樣本上的Globo H共軛位點係使用多種酵素分解及LC-MS/MS來鑑定。四個Globo H共軛的KLH樣本被首先以四個不同酵素分解，且接著以LC-MS/MS及Mascot資料庫搜索來分析。兩種型態的衍生物被鑑定：Globo H衍生物(Globo H+MMCCH)以及MMCCH衍生物(僅MMCCH)。Globo H衍生物以及其中性缺失形式被考慮於Globo H共軛位點的鑑定。MMCCH形式及其去醯胺基形式被計算於MMCCH共軛位點的鑑定。只有那些有著高品質MS/MS光譜和Mascot分數的胜肽被算進去。對於Globo H共軛分析，31及28個經共軛的離胺酸係從OBI-822-13001-DP(樣本1)的兩次重複LC-MS/MS分析中被觀察到；19和21個經共軛的離胺酸係從OBI-822-13002-DP(樣本2)的兩次重複LC-MS/MS分析中被觀察到；10和11個經共軛的離胺酸係從OBI-822-13003-DP(樣本3)的兩次重複LC-MS/MS分析中被觀察到；18和19個經共軛的離胺酸係從OBI-822-13004-DP(樣本4)的兩次重複LC-MS/MS分析中被觀察到。對於MMCCH共軛分析，155和141個經共軛的離胺酸係見於OBI-822-13001-DP(樣本1)的兩次重複LC-MS/MS分析中；143及137個經共軛的離胺酸係見於OBI-822-13002-DP(樣本2)的兩次重複LC-MS/MS分析中；147及143個經共軛的離胺酸係見於OBI-822-13003-DP(樣本3)的兩次重複LC-MS/MS分析中；140及136個經共軛的離胺酸係見於OBI822-13004-DS(樣本4)的兩次重複LC-MS/MS分析中。

實例8：材料和方法

縮寫表列如下： K=離胺酸；LC-MS/MS=液相層析-串聯式質譜測定法； DTT=二硫蘇糖醇；IAM=碘乙醯胺；ACN=乙腈；FA=甲酸；Glu-C=蛋白內切酶Glu-C；ABC=碳酸氫銨；RT=室溫；MW=分子量

四個KLH樣本，樣本1-4，被首先以100kDa阻斷性(cut-off)的Amicon超離心過濾器(Ultra Centrifugal Filter)處理以進行緩衝液交換至50mM碳酸氫銨緩衝溶液內，並且以6M尿素進行變性。樣本接著以10mM DTT於37℃還原1小時，於黑暗中在室溫下使用50mM IAM進行烷基化30分鐘，之後以50mM DTT於室溫下進行抑制反應(quenched)5分鐘。所生成之蛋白質被稀釋直到尿素濃度為1M，然後以不同酵素來進行溶液內酶分解(in-solution digestion)，如下列段落中描述的。

以不同的酵素作溶液內酶分解係以下列分解條件來執行：(1)於37℃進行胰蛋白酶分解24小時(蛋白質：酵素=40：1)；(2)於37℃進行Glu-C分解24小時(蛋白質：酵素=25：1)；(3)於室溫進行胰凝乳蛋白酶分解24小時(蛋白質：酵素=25：1)；(4)於37℃進行嗜熱菌蛋白酶(thermolysin)分解24小時(蛋白質：酵素=25：1)。

添加甲酸以中止酶分解反應，之後使所有4個已分解的樣本進行LC-MS/MS分析。以搭配Ultimate 3000 RSLC系統(Dionex)的Q Exactive質譜儀(Thermo Scientific)分析樣本。使用C18管柱(Acclaim PepMap RSLC，75μm x 150mm,2μm,100Å)進行LC分離，其操作梯度如表7所示。

在源內CID(In-source CID)被設在45eV。全頻MS掃描在m/z 350-2000的範圍內被執行，且使來自MS掃描中最強烈的十個離子進行裂解以進行MS/MS光譜分析。原始資料藉由Proteome Discoverer 1.4於Mascot資料庫搜索被處理為峰值列表。

資料庫搜索以Mascot版本2.4.1以及Thermo Proteome Discoverer版本1.4針對KLH1序列(SEQ ID NO.1)和KLH2序列(SEQ ID NO.2)來執行。使用的參數如下：

酵素：根據酶分解方法的胰蛋白酶、Glu-C、胰凝乳蛋白酶以及嗜熱菌蛋白酶；固定修飾：脲甲基化(Carbamidomethyl)(C)。

對於MMCCH衍生物的可變動修飾(僅MMCCH)：去醯胺基(NQ)、氧化作用(M)、dK_MMCCH-1(K)、dK_MMCCH-2(K)。

對於Globo H衍生物的可變動修飾(Globo H+MMCCH)：去醯胺基(NQ)、氧化作用(M)、Globo_H_MMCCH(K)、dK_MMCCH_NL997(K)、dK_MMCCH_NL835(K)、dK_MMCCH_NL673(K)、dK_MMCCH_NL511(K)、dK_MMCCH_NL308(K)

胜肽質量公差(Peptide Mass Tolerance)：±10ppm；片段質量公差：±0.05Da；最大漏切位點數(Max Missed Cleavages)：5；儀器類型：ESI-TRAP；離子阻斷值(Ion cut-off score)：13。

「dK_MMCCH-1」在搜索參數內指明MMCCH-共軛離胺酸有著352.1569Da的MW附加。

「dK_MMCCH-2」在搜索參數內指明MMCCH-共軛離胺酸的去醯胺基形式有著338.1300Da的MW附加。

「Globo_H_MMCCH(K)」在搜索參數內指明Globo H共軛離胺酸有著1393.5317Da的MW附加。

「dK_MMCCH_NL997」在搜索參數內指明Globo H共軛離胺酸的中性缺失形式有著396.1831Da的MW附加。

「dK_MMCCH_NL835」在搜索參數內指明Globo H共軛離胺酸的中性缺失形式有著558.2360Da的MW附加。

「dK_MMCCH_NL673」在搜索參數內指明Globo H共軛的離胺酸的中性缺失形式有著720.2888Da的MW附加。

「dK_MMCCH_NL511」在搜索參數內指明Globo H共軛的離胺酸的中性缺失形式有著882.3416Da的MW附加。

「dK_MMCCH_NL308」在搜索參數內指明Globo H共軛的離胺酸的中性缺失形式有著1085.4210Da的MW附加。

「MW附加」意味著相較於完整的離胺酸殘基，該分子量的附加。

實例8結果：

基於LC-MS/MS的技術是用於蛋白質的鑑定以及胺基酸修飾定性的工具。關於胜肽序列與修飾位點的詳細資訊可藉由MS/MS光譜所提供的片段離子的分配來獲得。Mascot是一款搜索引擎，且其基於概率的計分演算法係被廣泛採用。Mascot分數在本研究中被採用作為用於蛋白質定序與Globo H或MMCCH共軛位點鑑定的信賴參考。用以廣泛地分析樣本1-4內Globo H或MMCCH共軛位點的分佈，這些樣本以多種酵素進行分解，隨後以LC-MS/MS分析。

對於Globo H衍生物(Globo H+MMCCH)的期望化學結構係顯示於第11A圖，且相對應的在含有胜肽的離胺酸上之1393.53Da之MW附加可在結果之中被觀察到。此外，不穩定的多醣在LC-MS分析中電灑游離(electrospray ionization)期間透過中性缺失趨向衰減(fall off)。因此，源自中性缺失造成的396.18Da、558.24Da、720.29Da、882.34Da以及1085.42Da的分子量附加也可由於醣共軛的胜肽被觀察到，如顯示在圖11B內。所有的衍生化形式被考量用於Globo H共軛位點的鑑定。

另外，在這些Globo H共軛的KLH樣本內MMCCH衍生物也被觀察到(僅MMCCH)。用於MMCCH衍生物和其去醯胺基形式的期望化學結構被顯示在圖12A以及圖12B，且分別地在含有胜肽的離胺酸上相對應的352.16Da及338.13Da的MW附加，可在結果之中被觀察到。兩者衍生化形式被考量用於MMCCH共軛位點的鑑定。從Globo H衍生物至MMCCH的轉換並不清楚，但其應該是在樣本處理期間發生。

對於前驅物離子為±10ppm而對於片段離子為±0.05Da的質量精確度係被採用作為蛋白質鑑定和光譜判讀的標準。Globo H衍生物以及 其中性的缺失形式係選擇作為可變化修飾，以進行Globo H共軛位點鑑定，而被且MMCCH衍生物以及其去醯胺基形式亦被選擇作為可變化修飾，以進行MMCCH共軛位點鑑定。針對KLH1(SEQ ID NO.1)及KLH2(SEQ ID NO.2)序列進行資料庫搜索。只有那些有著高品質MS/MS光譜(離子分數

13，p<0.05的胜肽在報告中被列出。

為了展示再現性結果，執行LC-MS/MS分析兩次，隨後由個別Mascot資料庫搜索，以進行Globo H共軛位點鑑定及MMCCH共軛位點鑑定，如總結於圖13A及圖13B。

在Globo H共軛位點分析中，針對樣本1、31及28個離胺酸分別在第一次LC-MS/MS和第二次LC-MS/MS中發現；針對樣本2，19及21個離胺酸分別在第一次LC-MS/MS和第二次LC-MS/MS中發現；針對樣本3，10及11個離胺酸分別在第一次LC-MS/MS和第二次LC-MS/MS中發現；針對樣本4，18及19個離胺酸分別在第一次LC-MS/MS和第二次LC-MS/MS中發現。鑑定的細節被表列在圖14-21。在MMCCH共軛分析中，針對樣本1，155及141個離胺酸分別在第一次LC-MS/MS和第二次LC-MS/MS中發現；針對樣本2，143及137個離胺酸分別在第一次LC-MS/MS和第二次LC-MS/MS中發現；針對樣本3，147及143個離胺酸分別在第一次LC-MS/MS和第二次LC-MS/MS中發現；針對樣本4，140及136個離胺酸分別在第一次LC-MS/MS和第二次LC-MS/MS中發現。鑑定的細節被表列在圖22-29。

來自多種酵素實驗的Globo H共軛位點總結在圖30，且MMCCH共軛位點總結在圖31。對於Globo H共軛的樣本之整體共軛位點分析結果總結在圖32。

實例8結論：

由於多種中性缺失形式以及多醣之較低游離效率，Globo H衍生物共軛的胜肽之質譜儀訊號低於MMCCH共軛胜肽之訊號，其使得Globo H共軛的直接鑑定較為困難。這是為什麼鑑定的胜肽數目高於MMCCH共軛分析。因此，MMCCH結果可被使用於表示Globo H共軛。

共軛位點分析提出，針對樣本1-4，在KLH1/KLH2內全部306個離胺酸殘基之中鑑定分別有155個、143個、147個及140個離胺酸共軛位點。在重複分析中，針對樣本1-4，分別有141個、137個、143以及136個共軛位點被鑑定。

實例9：KLH上Globo H共軛位點的LC-MS/MS分析(組胺酸、天門冬醯胺酸、脯胺酸、麩醯胺酸及精胺酸)

鑑定兩種型態衍生物上的五種殘基(組胺酸、天門冬醯胺酸、脯胺酸、麩醯胺酸及精胺酸)：GMd(Globo H+MMCCH連接物+離胺酸衍生物)以及Md(MMCCH連接物+離胺酸衍生物)。

進行HNPQR(GMd及Md)的修飾分析後，對OBI-822-13001-DP(樣本1)而言，在KLH1及KLH2中分別產生6及13個經共軛的HNPQR位點；對OBI-822-13002-DP(樣本2)而言，在KLH1及KLH2中分別產生11及10個經共軛的HNPQR位點；對OBI-822-13003-DP(樣本3)而言，在KLH1及KLH2中分別產生13及9個經共軛的HNPQR位點；對OBI-822-13004-DP(樣本4)而言，在KLH1及KLH2中分別產生8及10個經共軛的HNPQR位點。

實例9：材料與方法

縮寫表列如下：K=離胺酸；H=組胺酸；N=天門冬醯胺酸；P=脯胺酸；Q=麩醯胺酸；R=精胺酸；LC-MS/MS=液相層析-串聯式質譜測定法；MW=分子量。

資料庫搜索以Mascot版本2.4.1針對KLH1序列(SEQ ID NO.1)和KLH2序列(SEQ ID NO.2)來執行。使用的參數如下：

酵素：根據酶分解方法的胰蛋白酶、Glu-C、胰凝乳蛋白酶以及嗜熱菌蛋白酶；

固定修飾：脲甲基化(Carbamidomethyl)(C)。

可變動修飾：氧化作用(M)、去醯胺化(NQ)

1. OBI822_GMd(HKNPQR)，GMd_NL997(HKNPQR)；2. OBI822_Md(HKNPQR)，Md_去醯胺化(HKNPQR)；胜肽質量公差(Peptide Mass Tolerance)：±10ppm；片段質量公差：±0.05Da；最大漏切位點數(Max Missed Cleavages)：5；儀器類型：ESI-TRAP；離子阻斷值(Ion cut-off score)：13。

「OBI822_GMd」在搜尋參數內指明GMd共軛殘基(HKNPQR)有著1393.5317Da的MW附加。

「GMd_NL997」在搜尋參數內指明GMd共軛殘基(HKNPQR)有著396.1831Da的MW附加。

「OBI822_Md」在搜尋參數內指明Md-共軛殘基(HKNPQR)有著352.1569Da的MW附加。

「Md_去醯胺化」在搜尋參數內指明Md-共軛殘基 (HKNPQR)的去醯胺化形式，其有著338.1300Da的MW附加。

實例9結果：

基於LC-MS/MS的技術是用於蛋白質的鑑定以及胺基酸修飾定性的工具。關於胜肽序列與修飾位點的詳細資訊可藉由MS/MS光譜所提供的片段離子的分配來獲得。Mascot是一款搜索引擎，且其基於概率的計分演算法係被廣泛採用。Mascot是目前最熱門的搜尋引擎，其具有廣為接受的基於概率的評分演算法。為了鑑定樣本1-4中離胺酸(K)及其他特定殘基(HNPQR)上的不同修飾，所有搜尋結果經過後續人工鑑別後，可篩選出那些僅僅具有高品質MS/MS圖譜的胜肽。

在以MASCOT搜尋GMd(Globo H+MMCCH連接物+離胺酸衍生物)以及Md(MMCCH連接物+離胺酸衍生物)在HNPQR殘基上的修飾作用期間，有假性胜肽被鑑別出。假若指定的修飾位點靠近離胺酸殘基，有可能地，該離胺酸為實際修飾位點。這些胜肽即從鑑定列表中被排除。假若沒有觀察到鄰近的離胺酸殘基，則HNPQR上的修飾作用即可被確認。如圖38所示，經GMd修飾位點分析後，對於樣本1-4而言，在KLH1中分別產生1、2、2及3個經共軛的HNPQR位點，以及對於樣本1-4而言，在KLH2中分別產生4、4、2及3個經共軛的HNPQR位點。經Md修飾位點分析後，對於樣本1-4而言，在KLH1中分別產生5、9、11及5個經共軛的HNPQR位點，以及對於樣本1-4而言，在KLH2中分別產生9、6、7及7個經共軛的HNPQR位點。

實例9結論：

在這些4種樣本中，在部分殘基(HNPQR)上的GMd及Md修 飾分析指明，對於樣本1-4而言，在KLH1上分別有6、11、13及8個經共軛的HNPQR位點，以及，對於樣本1-4而言，在KLH2上分別有13、10、9及10個經共軛的HNPQR位點。

除非另有定義，否則本文使用的所有技術及科學術語以及任何縮寫詞具有如同本發明的所屬技術領域具有通常知識者所普遍理解的相同含義。雖然類似或等同於那些本文所描述的任何組合物、方法、套組、以及用於溝通訊息的裝置可被用於實踐本發明，較佳組合物、方法、套組及用於溝通訊息的裝置在本文中被描述。

本文所引用的所有參考文獻於法律所允許下完整地以引用的方式併入本文。這些參考文獻的討論僅僅旨在總結其作者所做的主張。並不承認任何參考文獻(或任何參考文獻的一部分)是相關的先前技術。申請人保留挑戰任何引用參考文獻的準確性和適切性(pertinence)的權利。

<110> OBI Pharma,Inc.

<120> IMMUNOGENIC/THERAPEUTIC GLYCOCONJUGATE COMPOSITIONS AND USES THEREOF 免疫性/治療性醣共軛物組合物及其用途

<130> IO0291/OBI0005TW

<160> 2

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 3125

<212> PRT

<213> Megathura crenulata巨型鑰孔帽貝

<400> 1

<210> 2

<211> 3421

<212> PRT

<213> Megathura crenulata巨型鑰孔帽貝

<400> 2

Claims (43)

1. 一種組合物，包含複數個共價地連接至一至二十個鑰孔蟲戚血藍蛋白(KLH)部分的Globo H部分，其中該Globo H部分係在一個或多個胺基酸殘基上藉由4-(4-N-順丁烯二醯亞胺甲基)環己烷-1-羧醯肼(MMCCH)鍵聯共價地連接至該KLH部分，其中該胺基酸殘基包括離胺酸及選自精胺酸、組胺酸、天門冬醯胺酸、脯胺酸、麩醯胺酸及其任何組合所組成之族群的其它胺基酸，且該組合物的抗原決定基比範圍為750到3000，其中該組合物係在惰性氣體環境下進行共軛而製得。
2. 如請求項1的組合物，其中該KLH部分係一單體。
3. 如請求項1的組合物，其中該KLH部分係二聚體。
4. 如請求項1的組合物，其中該KLH部分係三聚體。
5. 如請求項1的組合物，其中該KLH部分係四聚體。
6. 如請求項1的組合物，其中該KLH部分係五聚體。
7. 如請求項1的組合物，其中該KLH部分係六聚體。
8. 如請求項1的組合物，其中該KLH部分係七聚體。
9. 如請求項1的組合物，其中該KLH部分係八聚體。
10. 如請求項1的組合物，其中該KLH部分係九聚體。
11. 如請求項1的組合物，其中該KLH部分係十聚體。
12. 如請求項1的組合物，其中該KLH部分係十一聚體。
13. 如請求項1的組合物，其中該KLH部分係十二聚體。
14. 如請求項1的組合物，其中該KLH部分係十三聚體。
15. 如請求項1的組合物，其中該KLH部分係十四聚體。
16. 如請求項1的組合物，其中該KLH部分係十五聚體。
17. 如請求項1的組合物，其中該KLH部分係十六聚體。
18. 如請求項1的組合物，其中該KLH部分係十七聚體。
19. 如請求項1的組合物，其中該KLH部分係十八聚體。
20. 如請求項1的組合物，其中該KLH部分係十九聚體。
21. 如請求項1的組合物，其中該KLH部分係二十聚體。
22. 如請求項1的組合物，其中該KLH部分係相同的。
23. 如請求項1的組合物，其中該KLH部分係不同的。
24. 如請求項1的組合物，其中該KLH部分具有相同數量的Globo H部分。
25. 如請求項1的組合物，其中該KLH部分具有不同數量的Globo H部分。
26. 如請求項1的組合物，其中該Globo H部分包含(Fucα1→2 Galβ1→3 GalNAcβ1→3 Galα1→4 Galβ1→4 Glc)。
27. 如請求項1的組合物，其中該KLH部分次單元係SEQ ID NO.1。
28. 如請求項1的組合物，其中該KLH部分次單元係至少95%相同於相對應的SEQ ID NO.1的KLH部分。
29. 如請求項1的組合物，其中該KLH部分次單元係至少90%相同於相對應的SEQ ID NO.1的KLH部分。
30. 如請求項1的組合物，其中該KLH部分次單元係至少80%相同於相對應的SEQ ID NO.1的KLH部分。
31. 如請求項1的組合物，其中該KLH部分次單元係SEQ ID NO.2。
32. 如請求項1的組合物，其中該KLH部分次單元係至少95%相同於相對應的SEQ ID NO.2的KLH部分。
33. 如請求項1的組合物，其中該KLH部分次單元係至少90%相同於相對應的SEQ ID NO.2的KLH部分。
34. 如請求項1的組合物，其中該KLH部分次單元係至少80%相同於相對應的SEQ ID NO.2的KLH部分。
35. 一種如請求項1至34中任一項的組合物的用途，其用於製備治療病患癌症的醫藥組合物。
36. 如請求項35的用途，其中該癌症為上皮癌。
37. 如請求項36的用途，其中該上皮癌為乳癌、肺癌、肝癌、口腔癌、胃癌、結腸癌、鼻咽癌、皮膚癌、腎癌、腦腫瘤、胰腺癌、前列腺癌、卵巢癌、膀胱癌、腸癌、子宮頸癌或子宮內膜癌。
38. 如請求項35的用途，其中該癌症為表現Globo H的癌症。
39. 一種如請求項1至34中任一項的組合物在製造治療性或診斷性單株抗體的用途。
40. 一種醫藥組合物，包含：(a)如請求項1至34中任一項的組合物；以及(b)佐劑。
41. 如請求項40的醫藥組合物，其中該佐劑為α半乳糖神經醯胺(α-GalCer)佐劑。
42. 如請求項41的醫藥組合物，其中該α-半乳糖神經醯胺佐劑具有以下結構：

    
43. 一種請求項40至42中任一項的醫藥組合物在製造治療性或診斷性單株抗體的用途。

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