TWI720362B - 新型改造t細胞受體及其免疫治療 - Google Patents
新型改造t細胞受體及其免疫治療 Download PDFInfo
- Publication number
- TWI720362B TWI720362B TW107139287A TW107139287A TWI720362B TW I720362 B TWI720362 B TW I720362B TW 107139287 A TW107139287 A TW 107139287A TW 107139287 A TW107139287 A TW 107139287A TW I720362 B TWI720362 B TW I720362B
- Authority
- TW
- Taiwan
- Prior art keywords
- cancer
- tcr
- antigen recognition
- antigen
- col6a3
- Prior art date
Links
- 108091008874 T cell receptors Proteins 0.000 title claims abstract description 200
- 102000016266 T-Cell Antigen Receptors Human genes 0.000 title claims abstract description 190
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 title description 5
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 135
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 134
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 134
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims abstract description 127
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 76
- 102100024338 Collagen alpha-3(VI) chain Human genes 0.000 claims abstract description 48
- 101000909506 Homo sapiens Collagen alpha-3(VI) chain Proteins 0.000 claims abstract description 48
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims abstract description 47
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims abstract description 47
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims abstract description 44
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims abstract description 44
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims abstract description 26
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims abstract description 20
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims abstract description 18
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims abstract description 15
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims abstract description 14
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 claims abstract description 3
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 66
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 64
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 49
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 46
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims description 42
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 40
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims description 28
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 claims description 21
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 10
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 claims description 8
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 8
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims description 7
- 230000035772 mutation Effects 0.000 claims description 7
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 claims description 6
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 6
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 claims description 5
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 claims description 5
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 claims description 5
- 208000001333 Colorectal Neoplasms Diseases 0.000 claims description 4
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 claims description 4
- 238000010790 dilution Methods 0.000 claims description 4
- 239000012895 dilution Substances 0.000 claims description 4
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 4
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 claims description 3
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 claims description 3
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 claims description 3
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 3
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 2
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 claims description 2
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 claims 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 abstract description 10
- 201000010099 disease Diseases 0.000 abstract description 6
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 abstract description 3
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 44
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 41
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 38
- 102100028972 HLA class I histocompatibility antigen, A alpha chain Human genes 0.000 description 31
- 108010075704 HLA-A Antigens Proteins 0.000 description 31
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 26
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 26
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 24
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 24
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 18
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 17
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 16
- 102100035360 Cerebellar degeneration-related antigen 1 Human genes 0.000 description 15
- 101000737793 Homo sapiens Cerebellar degeneration-related antigen 1 Proteins 0.000 description 15
- 238000003259 recombinant expression Methods 0.000 description 15
- 239000000463 material Substances 0.000 description 14
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 13
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 description 13
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 13
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 12
- 108010004729 Phycoerythrin Proteins 0.000 description 11
- 230000009258 tissue cross reactivity Effects 0.000 description 10
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 9
- 206010061424 Anal cancer Diseases 0.000 description 8
- 101100112922 Candida albicans CDR3 gene Proteins 0.000 description 7
- 108700018351 Major Histocompatibility Complex Proteins 0.000 description 7
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 7
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 7
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 7
- 230000020382 suppression by virus of host antigen processing and presentation of peptide antigen via MHC class I Effects 0.000 description 7
- 208000007860 Anus Neoplasms Diseases 0.000 description 6
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 6
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 6
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 6
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 6
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 6
- 201000011165 anus cancer Diseases 0.000 description 6
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 6
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 6
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 6
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 6
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 6
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 6
- 230000004044 response Effects 0.000 description 6
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 6
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 6
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 5
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 5
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 5
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 5
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 5
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 description 4
- 206010008342 Cervix carcinoma Diseases 0.000 description 4
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 4
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 4
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 4
- 208000008839 Kidney Neoplasms Diseases 0.000 description 4
- 208000032271 Malignant tumor of penis Diseases 0.000 description 4
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 4
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 4
- 206010031096 Oropharyngeal cancer Diseases 0.000 description 4
- 206010057444 Oropharyngeal neoplasm Diseases 0.000 description 4
- 208000002471 Penile Neoplasms Diseases 0.000 description 4
- 206010034299 Penile cancer Diseases 0.000 description 4
- 208000015634 Rectal Neoplasms Diseases 0.000 description 4
- 206010038389 Renal cancer Diseases 0.000 description 4
- 208000006105 Uterine Cervical Neoplasms Diseases 0.000 description 4
- 206010047741 Vulval cancer Diseases 0.000 description 4
- 208000004354 Vulvar Neoplasms Diseases 0.000 description 4
- 230000009824 affinity maturation Effects 0.000 description 4
- 201000010881 cervical cancer Diseases 0.000 description 4
- 230000009260 cross reactivity Effects 0.000 description 4
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 4
- 230000006870 function Effects 0.000 description 4
- 239000000833 heterodimer Substances 0.000 description 4
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 4
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 description 4
- 201000010982 kidney cancer Diseases 0.000 description 4
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 4
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 4
- 201000006958 oropharynx cancer Diseases 0.000 description 4
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 4
- 206010038038 rectal cancer Diseases 0.000 description 4
- 201000001275 rectum cancer Diseases 0.000 description 4
- 206010046885 vaginal cancer Diseases 0.000 description 4
- 208000013139 vaginal neoplasm Diseases 0.000 description 4
- 201000005102 vulva cancer Diseases 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 3
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 101150090583 COL6A3 gene Proteins 0.000 description 3
- 102100035361 Cerebellar degeneration-related protein 2 Human genes 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 3
- 101000737796 Homo sapiens Cerebellar degeneration-related protein 2 Proteins 0.000 description 3
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 3
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 3
- 102000043129 MHC class I family Human genes 0.000 description 3
- 108091054437 MHC class I family Proteins 0.000 description 3
- 208000010505 Nose Neoplasms Diseases 0.000 description 3
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 3
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 3
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 3
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 3
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 3
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 3
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 3
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 3
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 3
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 3
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 3
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 3
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 3
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 3
- 208000037830 nasal cancer Diseases 0.000 description 3
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 3
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 3
- 238000001542 size-exclusion chromatography Methods 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 241000894007 species Species 0.000 description 3
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 3
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 3
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical group N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 2
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 2
- 208000031261 Acute myeloid leukaemia Diseases 0.000 description 2
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 2
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 2
- 208000010839 B-cell chronic lymphocytic leukemia Diseases 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- 206010005003 Bladder cancer Diseases 0.000 description 2
- 206010005949 Bone cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000018084 Bone neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 208000003174 Brain Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- 108010019670 Chimeric Antigen Receptors Proteins 0.000 description 2
- AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N Doxorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(=O)CO)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N 0.000 description 2
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 2
- 208000000461 Esophageal Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 2
- 208000022072 Gallbladder Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- 201000003741 Gastrointestinal carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 206010017993 Gastrointestinal neoplasms Diseases 0.000 description 2
- 208000032612 Glial tumor Diseases 0.000 description 2
- 206010018338 Glioma Diseases 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- 102000008949 Histocompatibility Antigens Class I Human genes 0.000 description 2
- 108010088652 Histocompatibility Antigens Class I Proteins 0.000 description 2
- 208000017604 Hodgkin disease Diseases 0.000 description 2
- 208000021519 Hodgkin lymphoma Diseases 0.000 description 2
- 208000010747 Hodgkins lymphoma Diseases 0.000 description 2
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 2
- 206010021042 Hypopharyngeal cancer Diseases 0.000 description 2
- 206010056305 Hypopharyngeal neoplasm Diseases 0.000 description 2
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- 206010023825 Laryngeal cancer Diseases 0.000 description 2
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 2
- 208000031422 Lymphocytic Chronic B-Cell Leukemia Diseases 0.000 description 2
- 206010025537 Malignant anorectal neoplasms Diseases 0.000 description 2
- 208000003445 Mouth Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- 208000034578 Multiple myelomas Diseases 0.000 description 2
- 208000033776 Myeloid Acute Leukemia Diseases 0.000 description 2
- 208000001894 Nasopharyngeal Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- 206010061306 Nasopharyngeal cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000015914 Non-Hodgkin lymphomas Diseases 0.000 description 2
- 206010030155 Oesophageal carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 208000009565 Pharyngeal Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- 206010034811 Pharyngeal cancer Diseases 0.000 description 2
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 2
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 2
- 208000000453 Skin Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- 208000032383 Soft tissue cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000024313 Testicular Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- 206010057644 Testis cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000024770 Thyroid neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 241000703392 Tribec virus Species 0.000 description 2
- 229940127174 UCHT1 Drugs 0.000 description 2
- 208000023915 Ureteral Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- 206010046392 Ureteric cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000007097 Urinary Bladder Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- 208000002495 Uterine Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- 241000863480 Vinca Species 0.000 description 2
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 2
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 2
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 2
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 2
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 description 2
- 201000007696 anal canal cancer Diseases 0.000 description 2
- -1 antibodies Proteins 0.000 description 2
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 2
- 238000012575 bio-layer interferometry Methods 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 208000002458 carcinoid tumor Diseases 0.000 description 2
- 238000002659 cell therapy Methods 0.000 description 2
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 208000006990 cholangiocarcinoma Diseases 0.000 description 2
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 2
- 208000032852 chronic lymphocytic leukemia Diseases 0.000 description 2
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 2
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 201000004101 esophageal cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000024519 eye neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 201000010175 gallbladder cancer Diseases 0.000 description 2
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 2
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 2
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 2
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 2
- 208000014829 head and neck neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 2
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 2
- 201000006866 hypopharynx cancer Diseases 0.000 description 2
- 230000002998 immunogenetic effect Effects 0.000 description 2
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 238000005305 interferometry Methods 0.000 description 2
- 201000002313 intestinal cancer Diseases 0.000 description 2
- 206010023841 laryngeal neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 208000012987 lip and oral cavity carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 2
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 230000000527 lymphocytic effect Effects 0.000 description 2
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 2
- 208000006178 malignant mesothelioma Diseases 0.000 description 2
- 208000015486 malignant pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 208000026037 malignant tumor of neck Diseases 0.000 description 2
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 2
- 210000003071 memory t lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 2
- 201000003956 middle ear cancer Diseases 0.000 description 2
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 2
- 201000008106 ocular cancer Diseases 0.000 description 2
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000008443 pancreatic carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 2
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 2
- 201000002628 peritoneum cancer Diseases 0.000 description 2
- 201000003437 pleural cancer Diseases 0.000 description 2
- 238000002818 protein evolution Methods 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 2
- 230000001177 retroviral effect Effects 0.000 description 2
- 201000000849 skin cancer Diseases 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 2
- 201000003120 testicular cancer Diseases 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 2
- 201000002510 thyroid cancer Diseases 0.000 description 2
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 2
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 2
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 2
- 201000011294 ureter cancer Diseases 0.000 description 2
- 201000005112 urinary bladder cancer Diseases 0.000 description 2
- 206010046766 uterine cancer Diseases 0.000 description 2
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 1
- VSNHCAURESNICA-NJFSPNSNSA-N 1-oxidanylurea Chemical compound N[14C](=O)NO VSNHCAURESNICA-NJFSPNSNSA-N 0.000 description 1
- STQGQHZAVUOBTE-UHFFFAOYSA-N 7-Cyan-hept-2t-en-4,6-diinsaeure Natural products C1=2C(O)=C3C(=O)C=4C(OC)=CC=CC=4C(=O)C3=C(O)C=2CC(O)(C(C)=O)CC1OC1CC(N)C(O)C(C)O1 STQGQHZAVUOBTE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 108010032595 Antibody Binding Sites Proteins 0.000 description 1
- 102000006306 Antigen Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010083359 Antigen Receptors Proteins 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- 108700016171 Aspartate ammonia-lyases Proteins 0.000 description 1
- 101000984722 Bos taurus Pancreatic trypsin inhibitor Proteins 0.000 description 1
- COVZYZSDYWQREU-UHFFFAOYSA-N Busulfan Chemical compound CS(=O)(=O)OCCCCOS(C)(=O)=O COVZYZSDYWQREU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000003359 CD4-positive helper T lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 1
- 108010043741 Collagen Type VI Proteins 0.000 description 1
- 102000002734 Collagen Type VI Human genes 0.000 description 1
- 102100031519 Collagen alpha-1(VI) chain Human genes 0.000 description 1
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 1
- 241000699802 Cricetulus griseus Species 0.000 description 1
- 241000195493 Cryptophyta Species 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 241000283074 Equus asinus Species 0.000 description 1
- 241000283073 Equus caballus Species 0.000 description 1
- 108700024394 Exon Proteins 0.000 description 1
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000016359 Fibronectins Human genes 0.000 description 1
- 108010067306 Fibronectins Proteins 0.000 description 1
- GHASVSINZRGABV-UHFFFAOYSA-N Fluorouracil Chemical compound FC1=CNC(=O)NC1=O GHASVSINZRGABV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 101150009006 HIS3 gene Proteins 0.000 description 1
- 102000025850 HLA-A2 Antigen Human genes 0.000 description 1
- 108010074032 HLA-A2 Antigen Proteins 0.000 description 1
- 101000941581 Homo sapiens Collagen alpha-1(VI) chain Proteins 0.000 description 1
- 101000941585 Homo sapiens Collagen alpha-2(VI) chain Proteins 0.000 description 1
- 101001095308 Homo sapiens Periostin Proteins 0.000 description 1
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 description 1
- 206010062016 Immunosuppression Diseases 0.000 description 1
- 102000008070 Interferon-gamma Human genes 0.000 description 1
- 108090000172 Interleukin-15 Proteins 0.000 description 1
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 1
- 108010002586 Interleukin-7 Proteins 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N L-methotrexate Chemical compound C=1N=C2N=C(N)N=C(N)C2=NC=1CN(C)C1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010025327 Lymphopenia Diseases 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 1
- 206010028729 Nasal cavity cancer Diseases 0.000 description 1
- 101100494726 Neurospora crassa (strain ATCC 24698 / 74-OR23-1A / CBS 708.71 / DSM 1257 / FGSC 987) pep-4 gene Proteins 0.000 description 1
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 102000015636 Oligopeptides Human genes 0.000 description 1
- 108010038807 Oligopeptides Proteins 0.000 description 1
- 229930012538 Paclitaxel Natural products 0.000 description 1
- 101710199268 Periostin Proteins 0.000 description 1
- 102100037765 Periostin Human genes 0.000 description 1
- 241000276498 Pollachius virens Species 0.000 description 1
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 101100394989 Rhodopseudomonas palustris (strain ATCC BAA-98 / CGA009) hisI gene Proteins 0.000 description 1
- 239000008156 Ringer's lactate solution Substances 0.000 description 1
- 229940122055 Serine protease inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 101710102218 Serine protease inhibitor Proteins 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- 230000006044 T cell activation Effects 0.000 description 1
- 230000024932 T cell mediated immunity Effects 0.000 description 1
- 210000000173 T-lymphoid precursor cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000000447 Th1 cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000004241 Th2 cell Anatomy 0.000 description 1
- 108091023040 Transcription factor Proteins 0.000 description 1
- 102000040945 Transcription factor Human genes 0.000 description 1
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Chemical class Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000061 acid fraction Substances 0.000 description 1
- 230000001464 adherent effect Effects 0.000 description 1
- 238000011467 adoptive cell therapy Methods 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- 230000000735 allogeneic effect Effects 0.000 description 1
- VREFGVBLTWBCJP-UHFFFAOYSA-N alprazolam Chemical compound C12=CC(Cl)=CC=C2N2C(C)=NN=C2CN=C1C1=CC=CC=C1 VREFGVBLTWBCJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010065867 alveolar rhabdomyosarcoma Diseases 0.000 description 1
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 238000004873 anchoring Methods 0.000 description 1
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 1
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 230000008827 biological function Effects 0.000 description 1
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 1
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 1
- 239000012888 bovine serum Substances 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 229960002092 busulfan Drugs 0.000 description 1
- ZEWYCNBZMPELPF-UHFFFAOYSA-J calcium;potassium;sodium;2-hydroxypropanoic acid;sodium;tetrachloride Chemical compound [Na].[Na+].[Cl-].[Cl-].[Cl-].[Cl-].[K+].[Ca+2].CC(O)C(O)=O ZEWYCNBZMPELPF-UHFFFAOYSA-J 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 229960004562 carboplatin Drugs 0.000 description 1
- 190000008236 carboplatin Chemical compound 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 1
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 229960004316 cisplatin Drugs 0.000 description 1
- DQLATGHUWYMOKM-UHFFFAOYSA-L cisplatin Chemical compound N[Pt](N)(Cl)Cl DQLATGHUWYMOKM-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000003501 co-culture Methods 0.000 description 1
- 201000010989 colorectal carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 108091008034 costimulatory receptors Proteins 0.000 description 1
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 229960000975 daunorubicin Drugs 0.000 description 1
- STQGQHZAVUOBTE-VGBVRHCVSA-N daunorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(C)=O)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 STQGQHZAVUOBTE-VGBVRHCVSA-N 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 1
- 230000009274 differential gene expression Effects 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 229960004679 doxorubicin Drugs 0.000 description 1
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 239000008151 electrolyte solution Substances 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000017188 evasion or tolerance of host immune response Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 1
- 229960002949 fluorouracil Drugs 0.000 description 1
- 229960005277 gemcitabine Drugs 0.000 description 1
- SDUQYLNIPVEERB-QPPQHZFASA-N gemcitabine Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@H]1C(F)(F)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 SDUQYLNIPVEERB-QPPQHZFASA-N 0.000 description 1
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 230000006801 homologous recombination Effects 0.000 description 1
- 238000002744 homologous recombination Methods 0.000 description 1
- 102000048431 human POSTN Human genes 0.000 description 1
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 1
- 230000007124 immune defense Effects 0.000 description 1
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 description 1
- 238000002513 implantation Methods 0.000 description 1
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 229960003130 interferon gamma Drugs 0.000 description 1
- 208000014899 intrahepatic bile duct cancer Diseases 0.000 description 1
- 201000007450 intrahepatic cholangiocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000741 isoleucyl group Chemical group [H]N([H])C(C(C([H])([H])[H])C([H])([H])C([H])([H])[H])C(=O)O* 0.000 description 1
- FZWBNHMXJMCXLU-BLAUPYHCSA-N isomaltotriose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O)O1 FZWBNHMXJMCXLU-BLAUPYHCSA-N 0.000 description 1
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 1
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 1
- 231100001023 lymphopenia Toxicity 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 108010026228 mRNA guanylyltransferase Proteins 0.000 description 1
- FVVLHONNBARESJ-NTOWJWGLSA-H magnesium;potassium;trisodium;(2r,3s,4r,5r)-2,3,4,5,6-pentahydroxyhexanoate;acetate;tetrachloride;nonahydrate Chemical compound O.O.O.O.O.O.O.O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[Mg+2].[Cl-].[Cl-].[Cl-].[Cl-].[K+].CC([O-])=O.OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C([O-])=O FVVLHONNBARESJ-NTOWJWGLSA-H 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 230000013011 mating Effects 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 229960000485 methotrexate Drugs 0.000 description 1
- 210000001724 microfibril Anatomy 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 210000002747 omentum Anatomy 0.000 description 1
- 238000011275 oncology therapy Methods 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 1
- 229960001592 paclitaxel Drugs 0.000 description 1
- 230000002688 persistence Effects 0.000 description 1
- 239000008024 pharmaceutical diluent Substances 0.000 description 1
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 1
- 150000004713 phosphodiesters Chemical class 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 1
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 1
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 1
- 230000008092 positive effect Effects 0.000 description 1
- 210000004986 primary T-cell Anatomy 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 1
- 210000001236 prokaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 201000009410 rhabdomyosarcoma Diseases 0.000 description 1
- 210000003705 ribosome Anatomy 0.000 description 1
- 229960004641 rituximab Drugs 0.000 description 1
- 229920002477 rna polymer Polymers 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 239000003001 serine protease inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 1
- 235000020183 skimmed milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 235000010356 sorbitol Nutrition 0.000 description 1
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 230000010473 stable expression Effects 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 230000008093 supporting effect Effects 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N taxol Chemical compound O([C@@H]1[C@@]2(C[C@@H](C(C)=C(C2(C)C)[C@H](C([C@]2(C)[C@@H](O)C[C@H]3OC[C@]3([C@H]21)OC(C)=O)=O)OC(=O)C)OC(=O)[C@H](O)[C@@H](NC(=O)C=1C=CC=CC=1)C=1C=CC=CC=1)O)C(=O)C1=CC=CC=C1 RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N 0.000 description 1
- 210000001541 thymus gland Anatomy 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 230000010474 transient expression Effects 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 1
- 108010047303 von Willebrand Factor Proteins 0.000 description 1
- 102100036537 von Willebrand factor Human genes 0.000 description 1
- 229960001134 von willebrand factor Drugs 0.000 description 1
- 239000012130 whole-cell lysate Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
- C07K14/7051—T-cell receptor (TcR)-CD3 complex
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/775—Apolipopeptides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/78—Connective tissue peptides, e.g. collagen, elastin, laminin, fibronectin, vitronectin or cold insoluble globulin [CIG]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
- C07K16/2809—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against the T-cell receptor (TcR)-CD3 complex
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
- C07K16/2833—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against MHC-molecules, e.g. HLA-molecules
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/62—DNA sequences coding for fusion proteins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
- C12N5/0636—T lymphocytes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/32—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency specific for a neo-epitope on a complex, e.g. antibody-antigen or ligand-receptor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/55—Fab or Fab'
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
- C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
- C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
- C07K2317/622—Single chain antibody (scFv)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
- C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/01—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif
- C07K2319/03—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif containing a transmembrane segment
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/33—Fusion polypeptide fusions for targeting to specific cell types, e.g. tissue specific targeting, targeting of a bacterial subspecies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2510/00—Genetically modified cells
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Public Health (AREA)
- Hematology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Steroid Compounds (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本發明涉及針對 COL6A3 抗原的抗原識別構建體。本發明特別提出了對腫瘤表達抗原 COL6A3 具有選擇性和特異性的新型改造 T 細胞受體 (TCR) 分子。本發明的 TCR 及其衍生的 COL6A3 抗原結合片段可用於診斷、治療和預防表達 COL6A3 的癌性疾病。還提出了編碼本發明抗原識別構建體的核酸、包含這些核酸的載體、表達抗原識別構建體的重組細胞以及包含本發明化合物的藥物組合物。
Description
本發明涉及針對 COL6A3 抗原的抗原識別構建體。本發明特別提出了對腫瘤表達抗原 COL6A3 具有選擇性和特異性的新型改造 T 細胞受體 (TCR) 分子。本發明的 TCR 及其衍生的 COL6A3 抗原結合片段可用於診斷、治療和預防表達 COL6A3 的癌性疾病。還提出了編碼本發明抗原識別構建體的核酸、包含這些核酸的載體、表達抗原識別構建體的重組細胞以及包含本發明化合物的藥物組合物。
膠原蛋白是一種蛋白質超家族,在維持各種組織完整性方面發揮作用。膠原蛋白為細胞外基質蛋白,並具有三螺旋結構域作為其共同的結構元素。膠原蛋白 VI 是微纖維的主要結構成分。膠原蛋白 VI 的基本結構單元為 α1 (VI)、α2 (VI) 和 α3 (VI) 膠原鏈的異源三聚體。α1 (VI) 和 α2 (VI) 鏈分別由 COL6A1 和 COL6A2 基因編碼。由 COL6A3 基因編碼的蛋白質為 VI 型膠原蛋白(α3 (VI) 膠原鏈)的 α3 亞基 (Bertini et al., 2002 Eur. J. Paediatr. Neurol 6:193-8)。COL6A3 基因表達之前被證明與乳腺癌進展相關,並在結腸癌中升高 (Smith MJ, et al.「Analysis of differential gene expression in colorectal cancer and stroma using fluorescence-activated cell sorting purification」 British journal of cancer.2009;100:1452–1464; Tilman G et al 「Human periostin gene expression in normal tissues, tumors and melanoma:evidences for periostin production by both stromal and melanoma cells」 Mol Cancer.2007;6:80)並作為結直腸癌的預後指標 (Qiao J et al.「Stroma derived COL6A3 is a potential prognosis marker of colorectal carcinoma revealed by quantitative proteomics」 Oncotarget.2015 Oct 6; 6(30):29929–29946). COL6A3 基因位於人基因組中 2q37 的位置,包含 44 個外顯子。COL6A3 蛋白有 3177 個氨基酸,包含 12 個血管性假血友病因子 A 型 (vWA) 結構域,一個纖連蛋白 3 型結構域和一個 BPTI/Kunitz 絲氨酸蛋白酶抑制劑家族 (KU) 結構域。
基於 T 細胞的免疫治療的靶標表示主要組織相容性複合體 (MHC) 分子呈遞的來源於腫瘤相關蛋白或腫瘤特異性蛋白的肽表位。這些腫瘤相關抗原 (TAA) 可以是源自所有蛋白類型的肽,如酶、受體、轉錄因子等,它們在相應腫瘤的細胞中被表達,並且與同源未變的細胞相比,其表達通常上調。
細胞免疫反應的特定元素能選擇性地識別和破壞腫瘤細胞。從腫瘤浸潤細胞群或外周血中分離出的腫瘤抗原特異性 T 細胞表明,這些細胞在癌症的天然免疫防禦中發揮了重要作用。特別是 CD8 陽性 T 細胞在這種反應中發揮重要作用,TCD8+
能識別通常8至10個源自蛋白或位於細胞質的缺損核糖體產物 (DRiP) 的氨基酸殘基的主要組織相容性複合體 (MHC) 所載的肽中所含的I類分子。人 MHC 分子也稱為人白細胞-抗原 (HLA)。
TCR 是免疫球蛋白超家族的異二聚體細胞表面蛋白,其與參與介導信號轉導的 CD3 複合體的不變蛋白質相關。TCR 以 αβ 和 γδ 異源二聚體形式存在,其結構相似,但解剖位置非常不同,也可能功能也非常不同。天然異二聚體 αβTCR 的細胞外部分由兩個多肽鏈組成,每個多肽都有一個膜近端恒定結構域和一個膜遠端可變結構域。每個恒定和可變結構域都包括一個鏈內二硫鍵。可變結構域包含與抗體互補決定區 (CDR) 類似的高度多態性環。使用 TCR 基因療法可克服目前的一些障礙。它可讓患者自己的 T 細胞在短時間內具有所需的特異性並產生足夠數量的 T 細胞,從而避免其耗盡。TCR 將被轉導至中央記憶 T 細胞或具有幹細胞特徵的 T 細胞中,這可確保轉移時產生更好的持久性和功能。TCR 工程化 T 細胞將透過化學療法或照射被注入淋巴細胞減少的癌症患者,從而獲得有效的植入,但抑制免疫抑制。
雖然在開發用於癌症治療的分子靶向藥物方面取得了進展,但是,本領域仍然需要開發專門靶向作用於癌細胞高度特異性分子的抗癌新藥。本發明說明書透過提出新型改造 COL6A3 TCR、各自的重組 TCR 構建體、核酸、載體和與 COL6A3 表位特異性結合的公開宿主細胞來滿足此需求;以及使用這些分子治療癌症的方法。
第一方面,本發明的目的透過抗原識別構建體來解決,所述抗原識別構建體包含由根據 SEQ ID NO:5 (CDRa1)、6 (CDRa2) 和 7 (CDRa3) 的三個互補決定區 (CDR) 組成的第一結構域和由根據 SEQ ID NO:13 (CDRb1)、14 (CDRb2) 和 15 (CDRb3) 的三個互補決定區 (CDR) 組成的第二結構域,其中至少一個所述互補決定區被選自以下組的至少一個序列取代:a) SEQ ID NO:26 (CDRa1-mut1) 和 SEQ ID NO:37 至 49(CDRb1-mut1 至 CDRb1-mut13),優選為 SEQ ID NO:40,和 b) SEQ ID NO:26 和 SEQ ID NO:37 至 49,優選為 SEQ ID NO:40 的突變序列,其包含保守氨基酸交換。
另一方面,抗原識別構建體的 CDRa1 可能與根據 SEQ ID NO: 5 的氨基酸序列具有至少 25%、至少 30%、至少 35%、至少 40%、至少 45%、至少 50%、至少 55%、至少 60%、至少 65%、至少 70%、至少 75%、至少 80%、至少 85%、至少 90%、至少 95%、至少 96%、至少 97%、至少 98% 或至少 99% 的同一性。
另一方面,抗原識別構建體的 CDRa2 可能與根據 SEQ ID NO: 6 的氨基酸序列具有至少 25%、至少 30%、至少 35%、至少 40%、至少 45%、至少 50%、至少 55%、至少 60%、至少 65%、至少 70%、至少 75%、至少 80%、至少 85%、至少 90%、至少 95%、至少 96%、至少 97%、至少 98% 或至少 99% 的同一性。
另一方面,抗原識別構建體的 CDRa3 可能與根據 SEQ ID NO: 7 的氨基酸序列具有至少 25%、至少 30%、至少 35%、至少 40%、至少 45%、至少 50%、至少 55%、至少 60%、至少 65%、至少 70%、至少 75%、至少 80%、至少 85%、至少 90%、至少 95%、至少 96%、至少 97%、至少 98% 或至少 99% 的同一性。
另一方面,抗原識別構建體的 CDRb1 可能與根據 SEQ ID NO: 13 的氨基酸序列具有至少 25%、至少 30%、至少 35%、至少 40%、至少 45%、至少 50%、至少 55%、至少 60%、至少 65%、至少 70%、至少 75%、至少 80%、至少 85%、至少 90%、至少 95%、至少 96%、至少 97%、至少 98% 或至少 99% 的同一性。
另一方面,抗原識別構建體的 CDRb2 可能與根據 SEQ ID NO:14 的氨基酸序列具有至少 25%、至少 30%、至少 35%、至少 40%、至少 45%、至少 50%、至少 55%、至少 60%、至少 65%、至少 70%、至少 75%、至少 80%、至少 85%、至少 90%、至少 95%、至少 96%、至少 97%、至少 98% 或至少 99% 的同一性。
另一方面,抗原識別構建體的 CDRb3 可能與根據 SEQ ID NO:15 的氨基酸序列具有至少 25%、至少 30%、至少 35%、至少 40%、至少 45%、至少 50%、至少 55%、至少 60%、至少 65%、至少 70%、至少 75%、至少 80%、至少 85%、至少 90%、至少 95%、至少 96%、至少 97%、至少 98% 或至少 99% 的同一性。
在本發明的背景下,發明人已發現改良的 COL6A3 TCR R4P3F9 的改造形式,其包含改善親本 R4P3F9 穩定性、識別和選擇性的 α 和 β 鏈中的突變 CDR1 序列。在兩步法中選擇這些成熟的 TCR 變體,其中一步選擇變體的穩定性、第二步選擇變體的親和力(參見實施例)。雖然本發明的 TCR 包含突變的 CDR1 區域,但 CDR2 和/或 CDR3 也可能發生突變,以增加結合親和力/特異性和/或選擇性,在理想情況下,現有構建體中可能包括此類突變的 CDR。
親和力成熟鑒定了對 HLA-A*02/COL6A3-肽具有顯著更強結合活性的變體,同時保留或甚至改善特異性。與親本 TCR C-1(包含野生型 CDR 的 R4P3F9TCR,參見表 5)相比,本發明的所有變體改善了 IFN-γ 釋放,針對較低肽負載濃度已經達到了較高水準。
在可變結構域內,CDR1 和 CDR2 位於多肽鏈的可變 (V) 區域,CDR3 包括一部分 V 區域、全部多樣性 (D) 區域和連接 (J) 區域。假設 CDR3 是最可變的,是負責特異性和選擇性識別抗原的主要 CDR。令人驚訝的是,對於一些 TCR,CDR1 似乎也與肽接觸,因此也負責選擇性識別。在本發明的情況下,若不受特定理論約束,突變的 CDR1b 似乎與 COL6A3-肽的第 8 位相互作用。
天然 α-β 異二聚體 TCR 具有 α 鏈和 β 鏈。每個 α 鏈都包括可變、連接和恒定區域,β 鏈通常還包括可變區和連接區之間的短多樣性區域,但是該多樣性區域常被視為連接區域的一部分。每個可變區都包括嵌入在框架序列中的三個 CDR(互補決定區),其中一個是稱為 CDR3 的高度可變區。存在幾種類型的 α 鏈可變 (Vα) 區和幾種類型的 β 鏈可變 (Vβ) 區,由其框架、CDR1 和 CDR2 序列及部分定義的 CDR3 序列區分。Vα 類型透過唯一的 TRAV 號在 IMGT 命名中提及,Vβ類型透過唯一的 TRBV 號被提及。
優選情況是,本發明的抗原識別構建體包含本文公開的本發明的單個改造 TCR 可變區的各 CDR1 至 CDR3。 Preferred are antigen recognizing constructs (e.g. αβ and γδ TCRs) of the invention which comprise at least one, preferably two, maturated CDR1 sequences.
如果沒有其他說明,文中公開的 CDR 變體,特別是 CDR1 變體,可以透過在肽鏈內的不同位點(可能是選擇性位點)替換一個或多個殘基來進行修飾。此取代是保守性的,其中一個氨基酸被具有類似結構和特點的另一個氨基酸所取代,比如其中一個疏水性氨基酸被另一個疏水性氨基酸取代。更保守的取代是具有相同或類似的大小和化學性質的氨基酸間的取代,例如,亮氨酸被異亮氨酸取代。在天然同源蛋白質家族序列變異的研究中,某些氨基酸的取代往往比其他氨基酸更具有耐受性,這些氨基酸往往表現出與原氨基酸的大小、電荷、極性和疏水性之間的相似性相關,這是確定「保守取代」的基礎。在本文中,優選保守取代定義為在以下五種基團之一的內部進行交換:基團 1 — 小脂肪族、非極性或略具極性的殘基 (Ala, Ser, Thr, Pro, Gly);基團 2 — 極性、帶負電荷的殘基及其醯胺 (Asp, Asn, Glu, Gln);基團 3 — 極性、帶正電荷的殘基 (His, Arg, Lys);基團 4 — 大脂肪族非極性殘基 (Met, Leu, Ile, Val, Cys) 以及基團 5 — 大芳香殘基 (Phe, Tyr, Trp)。
較不保守的取代可能涉及一個氨基酸被另一個具有類似特點但在大小上有所不同的氨基酸所取代,如:丙氨酸被異亮氨酸殘基取代。
本文所用術語「特異性」或「抗原特異性」或「特異性針對」給定抗原系指當所述抗原為 HLA,優選為 HLA A2 呈遞時,抗原識別構建體可與所述抗原特異性結合,優選為 COL6A3 抗原,更優選為具有高親合力的抗原。例如,作為抗原識別構建體的 TCR 可視為對 COL6A3 抗原具有「抗原特異性」,條件是在與使用低濃度 COL6A3 抗原,例如下文提出的 COL6A3 表位(例如,約 10-11 mol/l、10-10 mol/l、10-9 mol/l、10-8 mol/l、10-7 mol/l、10-6 mol/l、10-5 mol/l)脈衝處理的 HLA A2 靶細胞共培養時,表達 TCR 對呈遞 HLA 的 COL6A3 作出反應的 T 細胞分泌至少約 200pg/ml 或以上(例如,250pg/ml 或以上、300pg/ml 或以上、400pg/ml 或以上、500pg/ml 或以上、600pg/ml 或以上、700pg/ml 或以上、1000pg/ml 或以上、2,000 pg/ml 或以上、2,500 pg/ml 或以上、5,000 pg/ml 或以上)的干擾素 γ (IFN-γ)。替代或附加情況是,如果表達 TCR 的 T 細胞在與低濃度 COL6A3 抗原脈衝的靶細胞共培養時分泌至少兩倍於 IFN-γ 未轉染背景水準的 IFN-γ,則認為 TCR 對 COL6A3 具有「抗原特異性」。如上所述的這種「特異性」可用 ELISA 進行分析。
在本發明的一個替代或附加實施方案中,抗原識別構建體穩定並可特異性地和/或選擇性地與 COL6A3 抗原結合;優選其中 COL6A3 抗原為具有 SEQ ID NO: 1 所示氨基酸序列的蛋白質表位或肽或其變體,其中所述變體氨基酸缺失、添加、插入或取代不超過三個、優選為兩個、最優選為不超過一個氨基酸位置。
術語「選擇性」或「選擇性識別/結合」被理解為是指抗原識別構建體(如 TCR 或抗體)的性質,選擇性地識別或結合至優選僅一個特異性表位,優選為與另一個表位沒有或基本上沒有交叉反應。優選情況為,術語「選擇性」或「選擇性識別/結合」是指抗原識別構建體(例如 TCR)選擇性地識別或結合優選僅一個特異性表位,且優選為與另一個表位沒有或基本上沒有交叉反應,其中所述表位對於一種蛋白質是獨特的,使得抗原識別構建體對另一種表位和另一種蛋白質沒有或基本上沒有交叉反應性。
根據本發明的抗原識別構建體優選為選自抗體或其衍生物或片段、雙特異性分子或 T 細胞受體 (TCR) 或其衍生物或片段。本發明的抗體或 TCR 的衍生物或片段應優選為可保留母體分子的抗原結合/識別能力,特別是其如上所述的特異性和/或選擇性。
在本發明的一實施方案中,本發明改造的 TCR 能夠以主要組織相容性複合體 (MHC) I 類依賴性方式識別 COL6A3 抗原。本文使用的「MHC I 類依賴性方式」系指在 MHC I 類分子的背景中在結合 COL6A3 肽抗原時 TCR 引起免疫應答。MHC I 類分子可以是本領域已知的任何 MHC I 類分子,例如 HLA-A 分子。在本發明的一項優先實施方案中,MHC I 類分子為 HLA-A2 分子。
本發明提供單鏈抗原識別構建體和雙鏈識別構建體以及其他變異分子。本發明特別提出一種作為抗原識別構建體或其片段或衍生物的改造 TCR。改造 TCR 優選為來源於人,其被理解為由人 TCR 基因座產生,因此包含人 TCR 序列。此外,本發明 TCR 的特徵在於親和力成熟的 TCR,其能夠特異性地和選擇性地識別 COL6A3 肽抗原。
本發明的另一項實施方案另外提供上述抗原識別構建體,其誘導免疫應答,優選為其中免疫應答的特徵在於干擾素 (IFN) γ 水準增加。
本發明的 TCR 可以為單鏈 α 或 β,或 γ 和 δ 分子,或為由 α 和 β 鏈或 γ 和 δ 鏈兩者組成的雙鏈構建體。
最優選地,在一些附加的實施方案中,其中本披露是指包含本文公開的改造 TCR 鏈的任何一個、兩個或全部 CDR1 至 CDR3 區的抗原識別構建體(參見表 1)。抗原識別構建體可能為優選,其包含天然或改造的 CDR 序列,其具有三個、兩個、優選為僅一個修飾的氨基酸殘基。修飾的氨基酸殘基可能選自氨基酸插入、缺失或取代基。最為優先的情況是三個、兩個、優選為一個修飾的氨基酸殘基為相應 CDR 序列的第一個或最後一個氨基酸殘基。如果修飾是取代,則在一些實施方案中優選取代為保守的氨基酸取代。
本發明的 TCR 可以進一步包含源自任何合適物種的恒定區,如任何哺乳動物,例如:人、大鼠、猴、兔、驢或小鼠。在本發明的一項實施方案中,本發明的 TCR 進一步包含人恒定區。在一些優選實施方案中,本發明 TCR 的恒定區可例如透過引入異源序列、優選為小鼠序列來稍加修飾,這可能增加 TCR 的表達和穩定性。此外,可以引入現有技術中已知的進一步穩定化突變(例如 DE 10 2016 123 893.7),例如,替換 V 區中的不利氨基酸和/或在 TCR C 結構域之間引入二硫鍵以及去除不配對的半胱氨酸。
本文所用的術語「鼠」或「人」在提及抗原識別構建體或 TCR 時,或本文所述的 TCR 的任何組分(例如,互補性決定區 (CDR)、可變區、恒定區,α 鏈和/或β 鏈)是指分別源自小鼠或人未經排列的 TCR 基因座的 TCR(或其組分)。
在本發明的一項實施方案中,提供了嵌合 TCR,其中所述 TCR 鏈包含來自多物種的序列。優選情況為,本發明的 TCR 可包含 α 鏈,其包含 α 鏈的人可變區和例如鼠 TCRα 鏈的鼠恒定區。
在一項實施方案中,本發明的 TCR 是由根據上述實施方案的人可變區和人恒定區組成的人 TCR。
本發明的 TCR 可能為單鏈 TCR (scTCR)。scTCR 可包含第一 TCR 鏈(例如,α 鏈)的可變區的多肽和整個(全長)第二 TCR 鏈(例如,β 鏈)的多肽,反之亦然。此外,scTCR 可以任選地包含一個或多個將兩個或多個多肽連接在一起的接頭。例如,接頭可以是肽,其將兩個單鏈連接在一起,如本文所述。還提供了本發明的 scTCR,其與人細胞因子如 IL-2、IL-7 或 IL-15 融合。
本發明的抗原識別構建體還可能以包含至少兩個 scTCR 分子的多聚複合體形式提供,其中所述 scTCR 分子各自與至少一種生物素部分融合,並且其中所述 scTCR 透過生物素-鏈黴親和素相互作用相互連接,以形成所述多聚體複合體。用於產生多聚體 TCR 的類似方法也是可能的並且包括在本披露資料中。還提出了更高級的多聚體複合體,其包含本發明兩種以上的 scTCR。
為了本發明的目的,TCR 是具有至少一個 TCRα 或γ 和/或 TCR β 或 δ 可變結構域的部分。通常他們包括 TCR α 可變結構域和 TCR β 可變結構域。他們可能為 αβ 異源二聚體,也可能為單鏈形式。為了用於過繼療法,αβ 異二聚體 TCR 可能例如被轉染為具有細胞質和跨膜結構域的全長鏈。如果需要,相應恒定結構域殘基之間可能存在引入的二硫鍵。
在一項優選的實施方案中,抗原識別構建體為人 TCR 或其片段或衍生物。人 TCR 或其片段或衍生物是一種 TCR,其包含超過 50% 的相應人 TCR 序列。優選情況為,只有少部分 TCR 序列為人工來源或源自其他物種。然而,眾所周知,例如,人源的嵌合 TCR 在恒定結構域含有鼠源序列是有利的。因此,特別優選的是根據本發明的 TCR,其在其恒定結構域的細胞外部分含有鼠序列。
因此,又為優選的是本發明的抗原識別構建體能夠以人白細胞抗原 (HLA) 依賴性方式、優選以 HLA-A02 依賴性方式識別其肽抗原。在本發明的上下文中,術語「HLA 依賴性方式」系指抗原識別構建體僅在抗原肽由所述 HLA 呈遞的情況下才與抗原結合。
在一項實施方案中,根據本發明的抗原識別構建體優選為誘導免疫應答,優選為其中免疫應答的特徵在於干擾素 (IFN) γ 水準增加。
如本文所用的術語「多肽」包括寡肽,系指透過一個或多個肽鍵連接的單鏈氨基酸。關於本發明的多肽,功能部分可以是包含 TCR(或其功能變體)連續氨基酸的任何部分,其中部分條件是功能部分與 COL6A3 抗原特異性結合,優選為如表 1 中所公開的。當使用與 TCR(或其功能變體)相關時,術語「功能部分」系指本發明 TCR(或其功能變體)的任何部分或片段,其中該部分或片段保留 TCR(或其功能變體)的生物活性,其為母體 TCR 或其親代功能變體的一部分。功能部分包括,例如,保留與 COL6A3 抗原特異性結合的能力(以 HLA 依賴性方式) 或以與母體 TCR(或其功能變體)相似程度、相同程度或更高程度檢測、治療或預防癌症的 TCR(或其功能變體)的那些部分。
功能部分可以在該部分的氨基或羧基末端或兩個末端包含額外的氨基酸,其中在母體 TCR 或其功能變體的氨基酸序列中未發現額外的氨基酸。理想的情況是,額外的氨基酸不干擾功能部分的生物學功能,例如,特異性結合 COL6A3 抗原;和/或具有檢測癌症、治療或預防癌症等能力。更理想的是,與母體 TCR 或其功能變體的生物學活性相比,額外的氨基酸增強了生物學活性。
如上所述,本發明 TCR 的結合功能可能在抗體框架中提供。本文中使用了各種語法形式的術語「抗體」,系指免疫球蛋白分子和免疫球蛋白分子的免疫活性部分,即含有抗原結合位點或互補位的分子。此類分子也被稱為免疫球蛋白分子的「抗原結合片段」。本發明還提出了與本文所述的抗原特異性結合的抗體或其抗原結合部分。抗體可以是本領域已知的任何類型的免疫球蛋白。例如,抗體可以是任何同種型免疫球蛋白,例如 IgA、IgD、IgE、IgG、IgM 等。抗體可以是單克隆或多克隆抗體。抗體可以是天然存在的抗體,例如從哺乳動物(例如,小鼠、兔、山羊、馬、雞、倉鼠、人等)中分離和/或純化的抗體。或者,抗體可以是基因工程化抗體,例如人源化抗體或嵌合抗體。抗體可以是單體或聚合體形式。
本發明還提出了本文所述任何抗體的抗原結合部分。抗原結合部分可以是具有至少一個抗原結合位元點的任何部分,例如 Fab、F(ab')2、dsFv、scFv、雙抗體和三抗體。由包含透過合成肽連接到輕鏈抗體的可變 (V) 結構域的抗體重鏈的 V 結構域的截短 Fab片段所組成的單鏈可變區片段 (scFv) 抗體片段可使用常規重組 DNA 技術方法產生。類似地,二硫鍵穩定的可變區片段 (dsFv) 可以透過重組 DNA 技術製備,但本發明的抗體片段不限於這些示例性類型的抗體片段。此外,抗體或其抗原結合部分可以被修飾為包括可檢測的標記,例如放射性同位素、螢光團(例如,異硫氰酸螢光素 (FITC)、藻紅蛋白 (PE))、酶(例如,鹼性磷酸酶、辣根過氧化物酶)和元素顆粒(例如,金顆粒)。
製備抗體的合適方法是本領域已知的。例如,標準雜交瘤方法描述於例如,Kohler and Milstein, Eur. J. Immunol, 5, 51 1-519 (1976), Harlow and Lane (eds.), Antibodies:A Laboratory Manual, CSH Press (1988), and C.A. Janeway et al.(eds.), Immunobiology, 8 Ed., Garland Publishing, New York, NY (201 1) 一文中。或者,其他方法,例如 EBV 雜交瘤方法(Haskard and Archer, J. Immunol. Methods, 74(2), 361-67 (1984), 和 Roder et al, Methods Enzymol, 121, 140-67 (1986))和噬菌體載體表達系統(參見例如,Huse et al., Science, 246, 1275-81 (1989))都是本領域已知的。此外,在非人動物中產生抗體的方法描述於例如美國專利 5,545,806、5,569,825 和 5,714,352 以及美國專利申請公開號 2002/0197266 中。
本發明的一些實施方案也涉及作為可溶性 TCR 的 TCR 或其功能片段和多肽。用於本文時,術語可溶性「T 細胞受體」系指天然 TCR 的單鏈或異二聚體截短變體,其至少包含由多肽接頭連接的 TCR α 鏈和 β 鏈的可變結構域(SEQ ID NO: 22、24、25 和 27)。TCR 的可溶性變體通常至少缺乏天然蛋白質的跨膜和胞質結構域;有時優選地,此類可溶性構建體不包含任何恒定的結構域序列。在優選的實施方案中,本發明的可溶性 T 細胞受體構建體包含由本文提供的 α 和 β 鏈可變結構域序列組成的構建體,其透過合適的接頭序列連接。可溶性 TCR α 鏈和 β 鏈的可變結構域序列(氨基酸或核酸)可以與天然 TCR 中的相應序列相同,或者與相應的天然 TCR 序列相比,可以包含可溶性 TCR α 鏈和 β 鏈可變結構域序列的變體。本文所用的術語可溶性「T 細胞受體」包括具有變體或非變體可溶性 TCR α 鏈和 β 鏈可變結構域序列的可溶性 TCR。這些變異可以在可溶性 TCR α 鏈和 β 鏈可變結構域序列的框架和/或 CDR 區中,並且可以包括但不限於氨基酸缺失、插入、取代突變以及不改變氨基酸序列的核酸序列改變。在任何情況下,本發明的可溶性 TCR 都保留或優先改善其親本 TCR 分子的結合功能。
上述問題透過編碼本發明抗原識別構建體的核酸或任何上述蛋白質或多肽構建體得以進一步解決。核酸優選為 (a) 具有編碼根據本發明的抗原識別構建體的鏈;(b) 具有與 (a) 中的鏈互補的鏈;或 (c) 具有在嚴格條件下與如 (a) 或 (b) 所述的分子雜交的鏈。嚴格條件是本領域技術人員已知的,具體來自 Sambrook 等人的「Molecular Cloning」一文。除此之外,核酸任選具有進一步的序列,其是表達對應於蛋白質的核酸序列所必需的,特別是用於在哺乳動物/人細胞中表達。使用的核酸可包含於適於允許在細胞中表達對應於該多肽的核酸序列的載體中。然而,核酸也可用於轉化抗原呈遞細胞,其可能不限於經典的抗原呈遞細胞,例如樹突狀細胞,這樣,使得他們本身在其細胞表面上產生相應的蛋白質。
本文所用的「核酸」包括「多核苷酸」、「寡核苷酸」和「核酸分子」,通常是指可以為單鏈或雙鏈、合成或從自然資源中獲得(例如,分離和/或純化)的 DNA 或 RNA 聚合物,其可含有天然、非天然的或改變的核苷酸,並且可含有天然、非天然的或改變的核苷酸間連接子,例如氨基磷酸酯連接子或磷硫代磷酸酯連接子,而非未修飾寡核苷酸的核苷酸之間的磷酸二酯。
優選地,本發明的核酸為重組核酸。本文所用的術語「重組」系指 (i) 透過將天然或合成核酸區段連接到可在活細胞中複製的核酸分子而構建在活細胞外部的分子,或 (ii) 從複製上述 (i) 中所述內容而產生的分子。為了本文的目的,複製可以是體外複製,也可以是體內複製。核酸可包含編碼本文所述的任何 TCR、多肽或蛋白質或功能部分或其功能變體的任何核苷酸序列。
此外,本發明提出了包含如上所述的本發明核酸的載體。理想情況是,載體為表達載體或重組表達載體。術語「重組表達載體」在本發明背景下系指允許在合適宿主細胞中表達 mRNA、蛋白質或多肽的核酸構建體。本發明的重組表達載體可以是任何合適的重組表達載體,並可用於轉化或轉染任何合適的宿主。合適的載體包括設計用於繁殖和擴增或用於表達或兩者兼有的載體,例如質粒和病毒。動物表達載體的實例包括 pEUK-Cl、pMAM 和 pMAMneo。優選地,重組表達載體為病毒載體,例如,逆轉錄病毒載體。重組表達載體包括調節序列,例如轉錄和翻譯起始和終止密碼子,其特異於宿主細胞(例如,細菌、真菌、植物或動物)的類型,其中載體將被引入其中並且在其中可以進行本發明核酸的表達。此外,本發明的載體可能包括一個或多個標誌物基因,其允許選擇轉化或轉染的宿主。重組表達載體可包含與編碼本發明構建體的核苷酸序列或者與編碼本發明構建體的核苷酸序列互補或雜交的核苷酸序列在操作上可連接的天然或規範性啟動子。啟動子的選擇包括例如強、弱、誘導型、組織特異性和開發特異性啟動子。啟動子可以是非病毒啟動子,也可以是病毒啟動子。本發明的重組表達載體可以被設計用於暫態表達、穩定表達或兩者的表達。此外,重組表達載體可以用於組成型表達或誘導型表達。
本發明還涉及包含根據本發明的抗原識別構建體的宿主細胞。具體地,本發明的宿主細胞包含如上所述的核酸或載體。宿主細胞可以是真核細胞,例如植物、動物、真菌或藻類,也可以是原核細胞,例如細菌或原生動物。宿主細胞可以是培養細胞或原代細胞,即直接從生物體(例如人)分離。宿主細胞可以是貼壁細胞或懸浮細胞(即,在懸浮液中生長的細胞)。為了產生重組 TCR 、多肽或蛋白質的目的,宿主細胞優選為哺乳動物細胞,例如中國倉鼠卵巢 (CHO) 細胞。最優選地,宿主細胞為人細胞。雖然宿主細胞可以是任何細胞類型,可以來自任何類型的組織,可以是任何發育階段的細胞,但是宿主細胞優選為外周血白細胞 (PBL) 或外周血單核細胞 (PBMC)。更優選地,宿主細胞為 T 細胞。T 細胞可以是任何 T 細胞,諸如培養的 T 細胞,例如,原代 T 細胞或來自培養 T 細胞系的 T 細胞,例如 Jurkat、SupT1 等,或獲得自哺乳動物的 T 細胞,優選為來自人類患者的 T 細胞或 T 細胞前體。如果獲得自哺乳動物,T 細胞可從許多來源獲得,包括但不限於血液、骨髓、淋巴結、胸腺或其他組織或液體。T 細胞還可以是富集或純化的。優選地,T 細胞為人 T 細胞。更優選地,T 細胞是分離自人的 T 細胞。T 細胞可以是任何類型的 T 細胞並且可以是任何發育階段的,包括但不限於 CD4 陽性和/或 CD8 陽性、CD4 陽性輔助 T 細胞,例如,Th1 和 Th2 細胞、CD8-陽性 T 細胞(例如,細胞毒性 T 細胞)、腫瘤浸潤細胞 (TIL)、記憶 T 細胞、幼稚 T 細胞等。優選地,T 細胞為 CD8 陽性 T 細胞或 CD4 陽性 T 細胞。
優選地,本發明的宿主細胞為淋巴細胞,優選為 T 淋巴細胞,例如 CD4 陽性或 CD8 陽性 T 細胞。宿主細胞更優選為對表達 COL6A3 的腫瘤細胞特異性的腫瘤反應性 T 細胞。
本發明的另一方面涉及本文公開的用於藥物中的抗原識別構建體、核酸、載體、藥物組合物和/或宿主細胞。在一項優選實施方案中在藥物中的用途包括在診斷、預防和/或治療諸如惡性或良性腫瘤疾病等腫瘤疾病中的用途。腫瘤疾病為,例如,在所述腫瘤疾病的癌細胞或腫瘤細胞中以表達 COL6A3 為特徵的腫瘤疾病。
關於抗原識別構建體及其衍生其他材料的上述醫療用途,待治療和/或診斷的癌症可以為任何癌症,包括以下癌症中任一種:急性淋巴細胞癌、急性骨髓性白血病、腺泡狀橫紋肌肉瘤、骨癌、腦癌、乳腺癌、肛門癌、肛管癌或肛門直腸癌、眼癌、肝內膽管癌、關節癌、頸癌、膽囊癌或胸膜癌、鼻癌、鼻腔癌或中耳癌、口腔癌、陰道癌、外陰癌、慢性淋巴細胞性白血病、慢性髓細胞癌、結腸癌、食管癌、宮頸癌、胃腸類癌、神經膠質瘤、霍奇金淋巴瘤、下嚥癌、腎癌、喉癌、肝癌、肺癌、惡性間皮瘤、黑色素瘤、多發性骨髓瘤、鼻咽癌、非霍奇金淋巴瘤、口咽癌、卵巢癌、陰莖癌、胰腺癌、腹膜癌、網膜癌、腸系膜癌、咽癌、攝護腺癌、直腸癌、腎癌、皮膚癌、小腸癌、軟組織癌、胃癌、睾丸癌、甲狀腺癌、子宮癌、輸尿管癌和膀胱癌。優選的癌症為宮頸癌、口咽癌、肛門癌、肛管癌、肛門直腸癌、陰道癌、外陰癌或陰莖癌。特別優選的癌症為 COL6A3 陽性癌症,包括胃腸癌和胃癌。
本發明的構建體、蛋白質、TCR、抗體、多肽和核酸特別用於免疫治療,優選用於過繼性 T 細胞治療。本發明化合物的給藥可以,例如,涉及將本發明的 T 細胞輸注入所述患者體內。優選地,此類 T 細胞為患者的自體 T 細胞,並且用本發明的核酸或抗原識別構建體在體外轉導。
WO 2016/011210 公開了用於過繼療法的工程細胞,包括 NK 細胞和 T 細胞以及含有所述細胞的組合物及其受試者給藥方法。所述細胞可以含有特異性結合抗原的基因工程化抗原受體,例如,嵌合抗原受體 (CAR) 和共刺激受體。
本發明的目的還透過製備表達細胞系的 COL6A3 特異性抗原識別構建體的方法來解決,包括
a. 提出合適的宿主細胞,
b. 提出一種基因構建體,其包含編碼根據請求項 1 至 4 中任一項所述的抗原識別構建體的編碼序列,
c. 將所述基因構建體引入所述合適的宿主細胞,和
d. 由所述合適的宿主細胞表達所述基因構建體。
所述方法可能進一步包括在所述合適宿主細胞上進行細胞表面呈遞所述抗原識別構建體的步驟。
在其他優選的實施方案中,所述基因構建體是包含與所述編碼序列可操作地連接的啟動子序列的表達構建體。
優選地,所述抗原識別構建體來源於哺乳動物,優選來源於人。用於本發明方法的優選合適宿主細胞為哺乳動物細胞,諸如人細胞,特別是人 T 淋巴細胞。用於本發明的 T 細胞在上文中進行了詳細描述。
本發明還包括實施方案,其中所述抗原識別構建體為修飾的 TCR,其中所述修飾是加入功能結構域,諸如標記物或治療活性物質。此外,包括具有可選結構域的 TCR,諸如可選膜錨定結構域而不是內源性跨膜區。
理想情況是,用於將基因構建體引入所述合適宿主細胞的轉染系統為逆轉錄病毒載體系統。此類系統是本領域技術人員所熟知的。
本發明還包括在一項實施方案中,從細胞中分離和純化抗原識別構建體的另外的方法步驟,以及任選地在 T 細胞中重構經翻譯的抗原識別構建體片段。
本發明的另一方面提出了透過產生 T 細胞受體 (TCR) 的方法獲得的或可獲得的 T 細胞,其中 T 細胞受體 (TCR) 對於腫瘤細胞具有特異性並且具有如上所述的高親合力。此類 T 細胞取決於本發明方法中使用的宿主細胞,例如人或非人 T 細胞,優選為人 TCR。
本發明的 TCR、多肽、蛋白質(包括其功能變體)、核酸、重組表達載體、宿主細胞(包括其群體)和抗體(包括其抗原結合部分)可以進行分離和/或純化。本文所用的術語「分離」系指已經從其自然環境中去除。本文所用的術語「純化」系指純度增加,其中「純度」為一個相對術語,並不一定要解釋為絕對純度。例如,純度可以為至少約 50%,可以大於 60%、70%、80%、90%、95%,也可以為 100%。
本發明的抗原識別構建體、TCR、多肽、蛋白質(包括其功能變體)、核酸、重組表達載體、宿主細胞(包括其群體)和抗體(包括其抗原結合部分)以下統稱為「本發明的 TCR 材料」,可以配製成組合物,諸如藥物組合物。就此而言,本發明提出了一種藥物組合物,其包含本文所述的任意抗原識別構建體、TCR、多肽、蛋白質、功能部分、功能變體、核酸、表達載體、宿主細胞(包括其群體)和抗體(包括其抗原結合部分)以及藥用載體、賦形劑和/或穩定劑。含有任何本發明 TCR 材料的本發明藥物組合物可包含多於一種本發明的 TCR 材料,例如,多肽和核酸,或兩種或更多種不同的 TCR(包括功能部分及其功能變體)。或者,藥物組合物可包含與另一種藥物活性劑或藥物組合的本發明 TCR 材料,諸如,化學治療劑,例如,天冬醯胺酶、白消安、卡鉑、順鉑、柔紅黴素、多柔比星、氟尿嘧啶、吉西他濱、羥基脲、甲氨蝶呤、紫杉醇、利妥昔單抗、長春花堿、長春新堿等。優選地,載體為藥用載體。關於藥物組合物,載體可以是常規用於所考慮的本發明的特定 TCR 材料的任意載體。這些藥用載體是本領域技術人員所熟知的,並且是公眾容易獲得的。優選情況是,藥用載體是在使用條件下無有害副作用或毒性的一種載體。
因此,本還提出了一種藥物組合物,其包含本文所述的本發明的任何產品和本發明的任何 TCR 材料,特別是任何蛋白質、核酸或宿主細胞。在一項優選的實施方案中,藥物組合物用於免疫治療,優選為繼代細胞治療。
優選地,本發明的 TCR 材料透過注射施用,如,靜脈內施用。當本發明的 TCR 材料為表達本發明 TCR(或其功能變體)的宿主細胞時,用於注射的細胞藥用載體可能包括任何等滲載體,例如,生理鹽水(水中含有約 0.90%w/v 的 NaCl、水中含有約 300mOsm/L NaCl、或每升水中含有約 9.0g NaCl)、NORMOSOL R 電解質溶液 (Abbott, Chicago, IL)、PLASMA-LYTE A (Baxter, Deerfield, IL)、水中含約 5% 葡萄糖或林格氏乳酸鹽。在一項實施方案中,藥用載體用人血清白蛋白補充。
為了本發明的目的,施用本發明 TCR 材料的數量或劑量(例如,當本發明 TCR 材料為一個或多個細胞時的細胞數量)可能在合理時間框架內在受試者或動物中足以影響治療或預防反應。例如,本發明 TCR 材料的劑量應該自施用起約 2 個小時或更長時間(例如,12 至 24 小時)或更多小時的期間內與癌症抗原結合或檢測、治療或預防癌症。在某些實施方案中,時間可能更長。劑量將由本發明特定 TCR 材料的療效和動物(例如,人)的狀況以及待治療動物(例如,人)的體重決定。
預期本發明的藥物組合物、TCR(包括其功能變體)、多肽、蛋白質、核酸、重組表達載體、宿主細胞或細胞群可用於癌症或 COL6A3 陽性癌前病變的治療或預防方法。本發明的 TCR(及其功能變體)被認為可與 COL6A3 抗原特異性結合,使得 TCR(或本發明相關多肽或蛋白質及其功能變體)由細胞表達時能夠介導針對表達本發明 COL6A3 抗原的靶細胞。就此而言,本發明提出了哺乳動物中病症(特別是癌症)的治療或預防方法,包括向哺乳動物施用任何藥物組合物、抗原識別構建體,特別是 TCR(及其功能變體)、多肽或本文所述的蛋白質、任何核酸或重組表達載體,其包含編碼本文所述的任何 TCR(及其功能變體)、多肽、蛋白質的核苷酸序列或包含重組載體的任何宿主細胞或細胞群,該重組載體編碼本文所述的本發明的任何構建體(及其功能變體)、多肽或蛋白質,用量為有效治療或預防哺乳動物中病症的量,其中所述病症為癌症,優選為 COL6A3 陽性癌症。
可用於本發明的藥用載體或稀釋劑的實例包括諸如 SPGA、碳水化合物(例如,山梨糖醇、甘露糖醇、澱粉、蔗糖、葡萄糖、葡聚糖)等穩定劑,諸如白蛋白或酪蛋白等蛋白質,諸如牛血清或脫脂牛奶和緩衝液(例如,磷酸鹽緩衝液)等含蛋白製劑。
本文中所用的術語「治療」和「預防」以及源自這些術語的詞語並不一定意味著 100% 或完全治療或預防。相反,存在不同程度的治療或預防,而本領域普通技術人員認識到具有潛在的益處或治療效果。就此而言,本發明的方法可為哺乳動物的病症提供任何治療或預防水準的任意量。此外,本發明方法提出的治療或預防可包括待治療或預防病症(例如,癌症)的一種或多種病症或症狀的治療或預防。例如,治療或預防可以包括促進腫瘤消退。此外,為了本文之目的,「預防」可以包括推遲疾病或其症狀或病症的發作。
本發明還涉及一種治療癌症的方法,其包括與至少一種化學治療劑和/或放射治療組合施用本說明書的 TCR、核酸或宿主細胞。
還提出了一種在有需要的受試者中治療癌症的方法,包括:
a) 從所述受試者中分離細胞;
b) 用編碼本發明的抗原識別構建體的至少一種載體轉化細胞以產生轉化的細胞;
c) 擴增轉化細胞以產生多個轉化細胞;和
d) 將所述多個轉化細胞施用於所述受試者。
還提出了一種在有需要的受試者中治療癌症的方法,包括:
a) 從健康供體中分離細胞;
b) 用編碼本發明的抗原識別構建體的一種載體轉化細胞以產生轉化的細胞;
c) 擴增轉化細胞以產生多個轉化細胞;和
d) 將所述多個轉化細胞施用於所述受試者。
還提出了一種檢測生物樣本中癌症的方法,包括:
a) 使生物樣本與本說明書的抗原識別構建體接觸;
b) 檢測抗原識別構建體與生物樣本的結合情況。
在一些實施方案中,檢測癌症的方法在體外、體內或原位進行。
還提出了檢測哺乳動物中有無病症的方法。該方法包括 (i) 將包含哺乳動物一種或多種細胞的樣本接觸本發明的任何 TCR(及其功能變體)、多肽、蛋白質、核酸、重組表達載體、宿主細胞、細胞群、抗體或其抗原結合部分或本文所述的藥物組合物,從而形成複合體,並 (ii) 包括檢測複合體,其中所述複合體的檢測提示哺乳動物中是否存在病症,其中所述病症為癌症,諸如 COL6A3 陽性惡性疾病。
關於檢測哺乳動物疾病的本發明方法,細胞樣本可以是包含全細胞、其裂解物或全部細胞裂解物的一部分的樣本,例如核或細胞質級分、全蛋白質級分或核酸級分。
為了本發明的檢測方法之目的,所述接觸可以在哺乳動物體外或體內進行。優選情況是,接觸在體外進行。
此外,複合體的檢測可以透過本領域已知的任何方式進行。例如,本文所述的本發明抗原識別構建體(及其功能變體)、多肽、蛋白質、核酸、重組表達載體、宿主細胞、細胞群或抗體或 TCR 或其抗原結合部分可以用檢測到的標記(諸如,放射性同位素、螢光團(例如,異硫氰酸螢光素 (FITC)、藻紅蛋白 (PE))、酶(例如,鹼性磷酸酶、辣根過氧化物酶)和元素顆粒(例如,金顆粒)進行標記。
為了本發明方法之目的,其中施用宿主細胞或細胞群,所述細胞可以是與哺乳動物同種異體或自體的細胞。優選情況是,細胞為哺乳動物自體細胞。
關於本發明 TCR 材料的上述醫療用途,待治療和/或診斷的癌症可以為任何癌症,包括以下癌症中任一種:急性淋巴細胞癌、急性骨髓性白血病、腺泡狀橫紋肌肉瘤、骨癌、腦癌、乳腺癌、肛門癌、肛管癌或肛門直腸癌、眼癌、肝內膽管癌、關節癌、頸癌、膽囊癌或胸膜癌、鼻癌、鼻腔癌或中耳癌、口腔癌、陰道癌、外陰癌、慢性淋巴細胞性白血病、慢性髓細胞癌、結腸癌、食管癌、宮頸癌、胃腸類癌、神經膠質瘤、霍奇金淋巴瘤、下嚥癌、腎癌、喉癌、肝癌、肺癌、惡性間皮瘤、黑色素瘤、多發性骨髓瘤、鼻咽癌、非霍奇金淋巴瘤、口咽癌、卵巢癌、陰莖癌、胰腺癌、腹膜癌、網膜癌、腸系膜癌、咽癌、攝護腺癌、直腸癌、腎癌、皮膚癌、小腸癌、軟組織癌、胃癌、睾丸癌、甲狀腺癌、子宮癌、輸尿管癌和膀胱癌。優選的癌症為宮頸癌、口咽癌、肛門癌、肛管癌、肛門直腸癌、陰道癌、外陰癌或陰莖癌。特別優選的癌症為 COL6A3 陽性癌症,例如,胃腸癌或胃癌。
總體上,本發明提出了患有腫瘤或腫瘤疾病的受試者的治療方法,其包括施用本發明公開的抗原識別構建體、核酸、載體、藥物組合物和/或宿主細胞。優選地,所述受試者為需要這種治療的受試者。優選實施方案中的受試者為患有 COL6A3 陽性的腫瘤或腫瘤疾病的哺乳動物受試者,優選為人類患者。
表 1:本發明的肽序列(位置根據 IMGT 編號:
(François Ehrenmann、Patrice Duroux、Chantal Ginestoux;蛋白展示:人(智人)TRAV;IMGT 庫。IMGT®,國際 ImMunoGenetics 資訊系統® http://www.imgt.org.;創建時間:2011 年 3 月 16 日。版本:2016 年 6月 3 日;François Ehrenmann、Patrice Duroux、Chantal Ginestoux;蛋白展示:人(智人)TRBV;IMGT 庫。IMGT®,國際 ImMunoGenetics 資訊系統® http://www.imgt.org.;創建時間: 2011 年 3 月 16 日。 版本: 2016 年 6月 3 日。)
與靶向作用於病毒抗原的TCR相比,抗癌抗原的天然T細胞受體(TCR)通常親和力較低,這可能是腫瘤免疫逃逸的一種可能解釋(Aleksic et al.2012)。因此,希望具有更高親和力的TCR變體,其設計用作過繼細胞療法中的抗原識別構建體,或者作為可溶性方法的識別模組,即,使用雙特異性分子(Hickman et al.2016)。因此,本發明涉及天然存在的T細胞受體R4P3F9(SEQ ID NO:2和10)的修飾和優化,其靶向作用於親和力為約60μM的腫瘤相關肽
COL6A3-002(SEQ ID NO:1)(DE102016115246)。
對於本發明,先前研究的TCR R4P3F9(SEQ ID NO:2和10)被轉化為單鏈TCR構建體(scTv,SEQ ID NO:22),透過酵母表面展示以含有各自恒定結構域(SEQ ID NO:9和17)的附加物和適當的甘氨酸-絲氨酸接頭序列的可變α(SEQ ID NO:4)和β(SEQ ID NO:12)結構域的組合進行成熟。合成相應序列的DNA並轉化為釀酒酵母EBY100(MATa AGA1::GAL1-AGA1::URA3 ura3-52 trp1 leu2-delta200 his3-delta200 pep4::HIS3 prbd1.6R can1 GAL)(ATCC® MYA-4941TM)與基於pCT302的含有前導序列和Aga2p酵母交配蛋白(SEQ ID NO:20)的酵母展示載體(Boder et al.2000)。在酵母中同源重組後得到的融合蛋白(SEQ ID NO:19)在Aga2p蛋白的N末端含有前導肽(負責顯示目的蛋白)(Boder et al.1997)、短肽標籤,包括用於表達對照和目的蛋白質的接頭序列(SEQ ID NO:21和23),即scTv R4P3F9(SEQ ID NO:22)或其變體。如DE102016121899中所述進行轉化,每個文庫產生多達109個酵母克隆。透過跨越scTv R4P3F9的完整基因序列的隨機突變PCR方法產生文庫。
具有在HLA-A*02背景下選擇性結合COL6A3-002的最佳表達scTv的酵母克隆的選擇過程基本上如Smith et al 2015中所述進行。為了確定在酵母表面上顯示的scTv R4P3F9變體的高表達和正確構象,抗-Vβ1(Beckman Coulter,克隆BL37.2)抗體與HLA-A*02/COL6A3□002四聚體一起使用(圖1)。透過酵母表面展示的scTv轉化揭示了框架區中兩個關鍵穩定突變以及用於在細胞表面上正確呈遞scTv的原始CDR序列,即bQ43K(SEQ ID NO:24)和bL72S(SEQ ID NO:25),均位於β鏈上。此外,在穩定性成熟期間,α鏈的CDR1中的第29位置(SEQ ID NO:5)從甘氨酸轉化為精氨酸(CDRa1突變體1,SEQ ID NO:26),這導致四聚體結合改善。
為了產生對HLA-A*02/COL6A3□002具有更高結合親和力的scTv分子,使用先前鑒定的表達穩定突變aG29R、bQ43K和bL72S的穩定化scTv R4P3F9S支架(SEQ ID NO:27)對CDRb1(SEQ ID NO:13)進行簡並。透過使用基本上如前所述的簡並DNA寡聚引物隨機化處理CDRb1殘基(Smith et al.2015)。如實施例1中所述轉化所得到的DNA文庫。為了保持scTv結合選擇性,對包含衍生自正常組織的肽(SEQ ID NO:28至36)的HLA□A*02四
聚體進行陰性選擇,其顯示出與COL6A3-002肽的高度序列相似性。
為了選擇親和力增強的和選擇性的scTv R4P3F9S變體,每個分選回合使用降低濃度的HLA□A*02/COL6A3□002四聚體。在三輪選擇後,分離單個scTv克隆並測序,產生多種親和力成熟的CDRb1序列(SEQ ID NO:37至49)。對於具有成熟CDRb1序列的scTv,可以證明COL6A3-002結合的強烈改善,同時保留COL6A3-002結合的選擇性,因為未觀察到9種類似肽的結合(圖2)。
針對HLA□A*02/COL6A3□002的穩定和親和力成熟的scTv可以與針對CD3的抗體部分融合表達,從而允許腫瘤特異性重新靶向作用於和活化T細胞,而與其天然特異性無關。本發明人產生了雙特異性抗體-TCR融合蛋白,其包含與scTv R4P3F9S變體(SEQ ID NO:50、64、65和66)融合的抗CD3 Fab(UCHT1)重鏈(SEQ ID NO:51)和抗CD3 Fab(UCHT1)輕鏈(SEQ ID NO:52)。得到的Fab-scTv融合蛋白的分子量約為75kDa。基於scTvR4P3F9S α(SEQ ID NO:5和26)和β鏈(SEQ ID NO:13和37至49)的不同CDR1序列,不同的Fab-scTv融合變體(75-1至75-25,表2)按照製造商的建議在暫態轉染的ExpiCHO細胞中表達。透過蛋白L和
尺寸排阻色譜法純化蛋白質。所有融合變體均可產生,產量範圍為80μg至1mg(表2)並且均勻形成的異二聚體預期大小如透過尺寸排阻色譜法分析的大小(圖3)。
透過生物層干涉測量法測量抗CD3-scTv R4P3F9S融合蛋白對具有COL6A3-002或不同類似肽的HLA-A*02單體的結合親和力。使用製造商推薦的設置在Octet RED384系統上進行測量。簡而言之,在分析HLA-A*02/COL6A3-002的系列稀釋液之前,將純化的Fab-scTv分子上樣到生物感測器(FAB2G)上。與包含野生型CDRa1和野生型CDRb1的變體75-1和75-24相比,具有成熟CDRa1和/或CDRb1序列的Fab-scTv變體觀察到結合親和力增加高達40倍(表3、圖4)。為了評估與HLA-A*02/COL6A3-002結合的選擇性,篩選載入到FAB2G生物感測器上的純化Fab-scTv分子與1μM相似肽(SEQ ID NO:28至36)結合,每個都與HLA-A*02複合。除了與大多數含有成熟CDRa1(SEQ ID NO:26)的Fab-scTv變體結合的H LA-A*02/COL6A1-001(SEQ ID NO:30)外,Fab-scTv變體顯示不與相似肽結合(圖5),支持高結合選擇性。對於一些Fab-scTv變體,透過將生物素化肽-HLA複合體載入到生物感測器(SA)上並分析Fab-scTv變體的稀釋系列來研究HLA-A*02/COL6A3-002與HLA-A*02/COL6A1-001結合之間的治療視窗。雖然包含成熟CDRa1(SEQ ID NO:26)和野生型CDRb1(SEQ ID NO:13)序列的變體75-10顯示
出對HLA-A*02/COL6A3-002的結合親和力比對HLA-A*02/COL6A1-001增加8倍,但是對於包含成熟CDRb1(SEQ ID NO:39)的Fab-scTv變體75-13的結合親和力檢測到增加高達57倍,從而支援治療視窗有所改善(表4、圖6)。
修飾T細胞以表達識別腫瘤特異性肽-HLA的TCR是將T細胞重定向至癌細胞的有前景的替代方案。由於使用成熟的CDR1序列可以改善針對HLA-A*02/COL6A3-002的細胞結合TCR,因此將鑒定的CDRa1和CDRb1突變體序列移植到親本TCR R4P3F9(SEQ ID NO:2和10)上。在電穿孔透過PCR擴增DNA構建體的體外轉錄產生的相應mRNA後,在人CD8+ T細胞中表達所得的突變TCR變體(C-1至C-18、表5)。出於對照目的,表達針對NYESO1-001肽(SEQ ID NO:61)的1G4 TCR(SEQ ID NO:53和57)。在RNA電穿孔的CD8+ T細胞過夜孵育後,透過用PE標記的HLA-A*02/COL6A3-002四聚體或HLA-A*02/NYESO1-001四聚體染色來分析引入
TCR變體的表達。雖然親本TCR R4P3F9變體C-1僅顯示出對HLA-A*02/COL6A3-002四聚體的最少染色,但具有成熟CDRa1和/或CDRb1的R4P3F9 TCR變體C-2至C-18顯示四聚體染色增加(圖7)。表達不同成熟R4P3F9 TCR變體的CD8+ T細胞(20,000個細胞/孔)的功能性活化透過測定與T2細胞(20,000個細胞/孔)共同培養後釋放的IFN-γ水準來研究,所述T2細胞載入有稀釋系列的COL6A3-002(SEQ ID NO:1)或10μM COL6A3-002和類似肽(SEQ ID NO:28至36)。與親本R4P3F9 TCR變體C-1相比,成熟的TCR變體C-2至C-18顯示出IFN-γ釋放增加,在較低的肽濃度下已達到最高水準(圖8)。如所預期的,對於不表達TCR的T細胞或對NYESO1-001特異的1G4對照TCR未觀察到IFN-γ釋放。為了分析COL6A3-002對成熟R4P3F9 TCR變體的識別選擇性,分析了負載不同相似肽(SEQ ID NO:28至36)的T2細胞的IFN-γ釋放,並顯示了成熟R4P3F9 TCR變體的不同選擇性特徵。最有趣的是,包含相同成熟CDRb1(SEQ ID NO:40)的TCR變體C-5(SEQ ID No 62和2)和C-14(SEQ ID NO:62和63)未對COL6A1-001或其他類似肽(圖9)顯示出任何交叉反應性,這使親和力成熟R4P3F9 TCR變體C-5
和C14成為最有希望用於基於細胞TCR腫瘤靶向作用的候選變體。
如上所述進行R4P3F9變體的細胞表達和分析。根據先前的實驗(圖7),與親本TCR C-1相比,用PE標記的HLA-A*02/COL6A3-002四聚體對表達R4P3F9 TCR變體C-2至C-18的T細胞染色增加。另外,TCR變體C-12和C-17顯示與HLA-A*02/COL6A1-001結合(圖10)。所有成熟R4P3F9變體的表達改善了CD8+ T細胞的功能性活
化,以應答載入有COL6A3-002稀釋系列(SEQ ID NO:1)的T2細胞,與親本TCR C-1相比,EC50值降低5至90倍(圖11、表6)。發現了變體C-14的最低EC50值。同樣,包含相同成熟CDRb1(SEQ ID NO:40)的TCR變體C-5(SEQ ID No 62和2)和C-14(SEQ ID NO:62和63)未對COL6A1-001顯示出任何交叉反應性,但是,其他變體顯示出強識別能力,EC50視窗(COL6A3-002與COL6A1-001)低至因子5。
如上所述進行R4P3F9變體的細胞表達和分析。
與親本TCR C-1相比,成熟R4P3F9變體C-5(SEQ ID NO 62和2)和C-14(SEQ ID NO:62和63)的表達改善了CD8+ T細胞的功能性活化,以應答呈遞COL6A3-002(SEQ ID NO:1)的腫瘤細胞系(圖12)。該研究期間使用的腫瘤細胞系呈遞不同量的靶肽。SF539細胞每個細胞攜帶~4000個拷貝的HLA-A*02/COL6A3-002,SW982細胞每個細胞攜帶~460個拷貝。儘管親本TCR C-1在與靶陽性細胞系共培養後不介導強的T細胞活化,但TCR變體C-14顯示出比TCR變體C-5更強的功能性活化改善。這些資料符合從TCR C-1到C-5和至C-14的EC50改善(表6)。靶陰性腫瘤細胞系MCF-7未被任何這些TCR識別。
參考文獻:Aleksic et al. 2012: Different affinity windows for virus and cancer-specific T-cell receptors - implications for therapeutic strategies, Eur J Immunol. 2012 Dec;42(12):3174-9;
Hickman et al. 2016: Antigen Selection for Enhanced Affinity T-Cell Receptor-Based Cancer Therapies, J Biomol Screen. 2016 Sep;21(8):769-85; Boder and Wittrup 2000: Yeast surface display for directed evolution of protein expression, affinity, and stability, Methods Enzymol. 2000;328:430-44; Boder and Wittrup 1997: Yeast surface display for screening combinatorial polypeptide libraries, Nat Biotechnol. 1997 Jun;15(6):553-7; Smith et al. 2015: T Cell Receptor Engineering and Analysis Using the Yeast Display Platform, Methods Mol Biol. 2015;1319:95-141; DE102016121899.5 DE102016115246
在以下實施例中將對本發明進一步進行說明,參照隨附圖表和序列,但是不僅限於此。為了本發明之目的,所有參考文獻均以完整引用的形式併入本文。在圖和序列中:
圖 1 顯示了透過酵母表面展示技術將 TCR 轉化為穩定的 Vα/Vβ 單鏈 TCR (scTv)。顯示於轉化釀酒酵母 EBY100 表面上的 ScTv 分子用 FITC 標記的抗 Vbeta1 抗體和 PE 標記的 HLA-A*02/COL6A3‑002 四聚體染色。將未修飾的 scTv R4P3F9(左圖,SEQ ID NO: 22)與帶有單點突變的 scTv 克隆進行比較,以穩定 scTv 支架(右圖),其源自隨機突變 scTv 文庫的選擇。
圖 2 顯示了透過酵母表面展示的 scTv 親和力成熟。將具有和不具有親和力成熟 CDR1 β 的穩定 scTv 分子用含有 COL6A3-002 (SEQ ID NO: 1) 的 HLA-A*02 四聚體進行染色,並用含有與 COL6A3-002 具有高度序列相似性的 9 種肽(SEQ ID NO: 28 至 36)的 HLA-A*02 四聚體混合物進行複染。將具有非成熟 β 鏈 CDR1 序列 RSGDLS (SEQ ID NO: 13) 的穩定 scTv (SEQ ID NO: 27) 與攜帶親和力成熟 β 鏈 CDR1 序列 (SEQ ID NO: 40) 和 ARWHRN (SEQ ID NO: 39) 的 scTv 克隆進行比較。
圖 3 顯示了抗 CD3 Fab-scTv R4P3F9S 融合變體 75-1 至 75-25 的尺寸排阻色譜洗脫曲線。
圖 4 顯示了透過生物層干涉測量法測量的抗 CD3 Fab-scTv R4P3F9S 融合變體 75-1 至 75-25 的 HLA-A*02/COL6A3-002 結合動力學。顯示了 HLA-A*02/COL6A3-002 的分析濃度。
圖 5 顯示了透過生物層干涉測量法 (BLI) 測量的抗 CD3 Fab-scTv R4P3F9S 融合變體 75-1 至 75-25 的 結合分析。分析了與指定的相似肽複合的 1 μM HLA-A*02。
圖 6 顯示了不同抗 CD3 Fab-scTv R4P3F9S 融合變體的 HLA-A*02/COL6A3-002 和 HLA-A*02/COL6A1-001 (SEQ ID NO: 30) 結合動力學的比較。顯示了 Fab-scTv 分子的分析濃度。
圖 7 顯示了用 PE 標記的HLA-A*02/COL6A3-002 四聚體染色表達人 CD8+
T 細胞的成熟 R4P3F9 TCR 變體。出於對照目的,沒有表達對 NYESO1-001 特異的 TCR(空白對照)或 1G4 TCR,並且使用 PE 標記的 HLA-A*02/NYESO1-001 四聚體進行染色。
圖 8 顯示了應答 COL6A3-002 的表達人 CD8+
T 細胞的成熟 R4P3F9 TCR 變體的 IFN-γ 釋放。出於對照目的,沒有表達對 NYESO1-001 特異的 TCR(空白對照)或 1G4 TCR。在電穿孔的 CD8+
T 細胞與載有連續稀釋的 COL6A3-002 的 T2 細胞共培養後,透過 ELISA 法測定 IFN-γ 釋放。
圖 9 顯示了應答 COL6A3-002 和不同相似肽的表達人 CD8+
T 細胞的成熟 R4P3F9 TCR 變體的 IFN-γ 釋放。出於對照目的,沒有表達對 NYESO1-001 特異的 TCR(空白對照)或 1G4 TCR。在電穿孔的 CD8+
T 細胞與載有 10 µM COL6A3-002 或相似肽 的 T2 細胞共培養後,透過 ELISA 法測定 IFN-γ 釋放。
圖 10 顯示了用 PE 標記的肽-HLA-A*02 四聚體染色表達人 CD8+
T 細胞的成熟 R4P3F9 TCR 變體。出於對照目的,沒有表達對 NYESO1-001 特異的 TCR(空白對照)或 1G4 TCR,並且使用 PE 標記的 HLA-A*02/NYESO1-001 四聚體進行染色。
圖 11 顯示了應答 COL6A3-002 或 COL6A1-001 的表達人 CD8+
T 細胞的成熟 R4P3F9 TCR 變體的 IFN-γ 釋放。出於對照目的,沒有表達對 NYESO1-001 特異的 TCR(空白對照)或 1G4 TCR。在電穿孔的 CD8+
T 細胞與載有連續稀釋的 COL6A3-002 或 COL6A1-001 的 T2 細胞共培養後,透過 ELISA 法測定 IFN-γ 釋放。
圖 12 顯示了與不同腫瘤細胞系共培養後表達 R4P3F9 TCR 變體的原代人 CD8+
T 細胞的 IFN-γ 釋放。SF539、SW982 和 Hs840.T 細胞以不同水準呈遞靶肽。MCF-7 細胞不呈遞靶肽。作為對照,無外源性 TCR 的效應細胞與具有目標 TCR 的細胞一起分析。透過 ELISA 法測定 IFN-γ 釋放。* 標記超出範圍的資料點。
國內寄存資訊 (請依寄存機構、日期、號碼順序註記)
無
國外寄存資訊 (請依寄存國家、機構、日期、號碼順序註記)
無
<110> Immatics Biotechnologies GmbH
<120> 新型改造T細胞受體及其免疫治療
<150> DE 10 2017 125 888.4
<151> 2017-11-06
<150> US 62/582,202
<151> 2017-11-06
<160> 66
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 9
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<210> 2
<211> 274
<212> PRT
<213> Homo sapiens
Claims (18)
- 一種抗原識別構建體,其包含一第一結構域及一第二結構域,該第一結構域及該第二結構域各包含三個互補決定區(CDR),其中該第一結構域包含根據SEQ ID NO:6(CDRa2)和7(CDRa3)的氨基酸序列,以及該第二結構域包含根據SEQ ID NO:14(CDRb2)和15(CDRb3)的氨基酸序列,其中a)該第一結構域的CDRa1為SEQ ID NO:5和該第二結構域的CDRb1為選自根據SEQ ID NO:37至44的氨基酸序列之一者,或b)該第一結構域的CDRa1為SEQ ID NO:26和該第二結構域的CDRb1為選自根據SEQ ID NO:13及37至49的氨基酸序列之一者。
- 如請求項1所述的抗原識別構建體,其中該抗原識別構建體為穩定的,並且在MHC的背景下能夠特異性地和/或選擇性地與包含根據SEQ ID NO:1的氨基酸序列的一COL6A3抗原肽結合。
- 如請求項1或2所述的抗原識別構建體,其中該抗原識別構建體為一抗體或其衍生物或片段,或一T細胞受體(TCR)或其衍生物或片段,其中該衍生物或片段保留特異性地和/或選擇性地與COL6A3抗原多肽結合的抗原結合和/或識別能力。
- 如請求項1所述的抗原識別構建體,其中該第一結構域是一TCR α或γ鏈的一部分;和/或其中該第二結構域是一TCR β或δ鏈的一部分。
- 如請求項1所述的抗原識別構建體,其中該抗原識別構建體為一單鏈抗原識別構建體。
- 如請求項1所述的抗原識別構建體,其中該抗原識別構建體為一可溶性TCR。
- 一種核酸,其編碼如請求項1、2、4、5或6任一項所述的抗原識別構建體
- 一種核酸載體,其包含如請求項7所述的核酸。
- 一種重組宿主細胞,其包含如請求項7所述的核酸或如請求項8所述的載體。
- 如請求項9所述的重組宿主細胞,其中該重組宿主細胞為一淋巴細胞。
- 一種藥物組合物,其包含如請求項1至6中任一項所述的抗原識別構建體、如請求項7所述的核酸,如請求項8所述的載體,或如請求項9或10所述的重組宿主細胞,以及一藥用載體、稀釋穩定劑和/或賦形劑。
- 一種製造如請求項1所述的COL6A3特異性抗原識別構建體的方法,包括: a.提供一合適的宿主細胞,b.提供一基因構建體,其包含編碼如請求項1所述的抗原識別構建體的一編碼序列,c.將該基因構建體引入該合適的宿主細胞,和d.由該合適的宿主細胞表達該基因構建體。
- 如請求項12所述的方法,進一步包括從該合適的宿主細胞分離和純化該抗原識別構建體,以及任選地在一T細胞中重構該抗原識別構建體。
- 一種如請求項1所述的抗原識別構建體、如請求項7所述的核酸、如請求項8所述的載體,或如請求項9所述的重組宿主細胞於製備一藥物上的用途。
- 一種如請求項1所述的抗原識別構建體、如請求項7所述的核酸、如請求項8所述的載體,或如請求項9所述的重組宿主細胞於製備一用於診斷、預防和/或治療癌症之藥物上的用途。
- 如請求項15所述的用途,其中該癌症選自COL6A3過度表達、突變和/或呈現一COL6A3衍生腫瘤相關抗原的癌症。
- 如請求項16所述的用途,其中該癌症為結直腸癌、結腸癌、肝癌、卵巢癌或胃癌。
- 一種於體外在一生物樣本中檢測癌症的方 法,包含:a)使該生物樣本與如請求項1所述的抗原識別構建體接觸;以及b)檢測該抗原識別構建體與該生物樣本的結合情況。
Applications Claiming Priority (4)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US201762582202P | 2017-11-06 | 2017-11-06 | |
DE102017125888.4 | 2017-11-06 | ||
US62/582,202 | 2017-11-06 | ||
DE102017125888.4A DE102017125888A1 (de) | 2017-11-06 | 2017-11-06 | Neue konstruierte T-Zell-Rezeptoren und deren Verwendung in Immuntherapie |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
TW201930339A TW201930339A (zh) | 2019-08-01 |
TWI720362B true TWI720362B (zh) | 2021-03-01 |
Family
ID=64308714
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
TW107139287A TWI720362B (zh) | 2017-11-06 | 2018-11-06 | 新型改造t細胞受體及其免疫治療 |
TW110104935A TWI788781B (zh) | 2017-11-06 | 2018-11-06 | 新型改造t細胞受體及其免疫治療 |
Family Applications After (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
TW110104935A TWI788781B (zh) | 2017-11-06 | 2018-11-06 | 新型改造t細胞受體及其免疫治療 |
Country Status (13)
Country | Link |
---|---|
US (4) | US10618956B2 (zh) |
EP (1) | EP4219543A1 (zh) |
CN (1) | CN118324918A (zh) |
CL (1) | CL2020001181A1 (zh) |
CO (1) | CO2020006905A2 (zh) |
DK (1) | DK3707159T3 (zh) |
ES (1) | ES2941965T3 (zh) |
FI (1) | FI3707159T3 (zh) |
IL (2) | IL308007A (zh) |
MX (1) | MX2020004741A (zh) |
PH (1) | PH12020550600A1 (zh) |
TW (2) | TWI720362B (zh) |
WO (1) | WO2019086665A1 (zh) |
Families Citing this family (18)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
GB201423361D0 (en) * | 2014-12-30 | 2015-02-11 | Immatics Biotechnologies Gmbh | Method for the absolute Quantification of naturally processed HLA-Restricted cancer peptides |
ZA201900664B (en) * | 2016-08-17 | 2021-09-29 | Paul Ehrlich Strasse 15 Tuebingen 72076 Germany | T cell receptors and immune therapy using the same |
DK3707159T3 (da) * | 2017-11-06 | 2023-04-11 | Immatics Biotechnologies Gmbh | Hidtil ukendte modificerede t-cellereceptorer og immunterapi med anvendelse deraf |
EP3976805A1 (en) | 2019-05-27 | 2022-04-06 | Immatics US, Inc. | Viral vectors and their use in adoptive cellular therapy |
WO2020257575A1 (en) * | 2019-06-21 | 2020-12-24 | St, Jude Children's Research Hospital | T-cell receptor for treating fibrolamellar hepatocellular carcinoma |
US20230108300A1 (en) * | 2020-01-29 | 2023-04-06 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Compositions and methods of t cell receptor vb family member targeting for the treatment of t cell associated disease |
JP2023515131A (ja) | 2020-02-24 | 2023-04-12 | イマティクス ユーエス,アイエヌシー. | がんおよび関連する悪性腫瘍の治療のためにt細胞を増殖させる方法 |
DE102020111571A1 (de) | 2020-03-11 | 2021-09-16 | Immatics US, Inc. | Wpre-mutantenkonstrukte, zusammensetzungen und zugehörige verfahren |
CN116096740A (zh) * | 2020-06-09 | 2023-05-09 | 得克萨斯州大学系统董事会 | 经改造t细胞受体和使用方法 |
TW202227616A (zh) | 2020-08-21 | 2022-07-16 | 美商英麥提克斯股份有限公司 | 分離cd8+選擇t細胞的方法 |
TW202241938A (zh) | 2020-12-31 | 2022-11-01 | 美商英麥提克斯股份有限公司 | Cd8多肽、組合物及其使用方法 |
DE102021100038A1 (de) | 2020-12-31 | 2022-06-30 | Immatics US, Inc. | Modifizierte cd8-polypeptide, zusammensetzungen und verfahren zu deren verwendung |
TW202332765A (zh) | 2021-09-20 | 2023-08-16 | 美商英麥提克斯股份有限公司 | 用於t細胞療法之t細胞群體的單核球耗盡 |
US20230142468A1 (en) | 2021-11-08 | 2023-05-11 | Immatics US, Inc. | Methods for generating cell spheroids |
WO2023212655A1 (en) | 2022-04-28 | 2023-11-02 | Immatics US, Inc. | Il-12 polypeptides, il-15 polypeptides, il-18 polypeptides, cd8 polypeptides, compositions, and methods of using thereof |
WO2023212697A1 (en) | 2022-04-28 | 2023-11-02 | Immatics US, Inc. | Membrane-bound il-15, cd8 polypeptides, cells, compositions, and methods of using thereof |
WO2023212691A1 (en) | 2022-04-28 | 2023-11-02 | Immatics US, Inc. | DOMINANT NEGATIVE TGFβ RECEPTOR POLYPEPTIDES, CD8 POLYPEPTIDES, CELLS, COMPOSITIONS, AND METHODS OF USING THEREOF |
WO2023215825A1 (en) | 2022-05-05 | 2023-11-09 | Immatics US, Inc. | Methods for improving t cell efficacy |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
TW201700496A (zh) * | 2015-03-27 | 2017-01-01 | 英麥提克生物技術股份有限公司 | 用於各種腫瘤免疫治療的新型肽和肽複合物 |
Family Cites Families (11)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5545806A (en) | 1990-08-29 | 1996-08-13 | Genpharm International, Inc. | Ransgenic non-human animals for producing heterologous antibodies |
DE69127627T2 (de) | 1990-08-29 | 1998-02-19 | Genpharm Int | Produktion und Nützung nicht-menschliche transgentiere zur Produktion heterologe Antikörper |
US5714352A (en) | 1996-03-20 | 1998-02-03 | Xenotech Incorporated | Directed switch-mediated DNA recombination |
JP2004511425A (ja) | 2000-02-08 | 2004-04-15 | ザ ペン ステート リサーチ ファウンデーション | 免疫療法に使用されるインターロイキン13受容体サブユニットアルファー2 |
WO2006023382A2 (en) | 2004-08-23 | 2006-03-02 | Albert Einstein College Of Medicine Of Yeshiva University | Collagen vi and cancer |
GB201004551D0 (en) | 2010-03-19 | 2010-05-05 | Immatics Biotechnologies Gmbh | NOvel immunotherapy against several tumors including gastrointestinal and gastric cancer |
MA40253A (fr) | 2014-07-15 | 2017-05-24 | Juno Therapeutics Inc | Cellules modifiées pour thérapie cellulaire adoptive |
DE102016115246C5 (de) * | 2016-08-17 | 2018-12-20 | Immatics Biotechnologies Gmbh | Neue t-zellrezeptoren und deren verwendung in immuntherapie |
DE102016121899A1 (de) | 2016-11-15 | 2018-05-17 | Immatics Biotechnologies Gmbh | Verfahren zur Herstellung von elektrokompetenten Hefezellen und Verfahren zur Verwendung dieser Zellen |
DE102016123893A1 (de) | 2016-12-08 | 2018-06-14 | Immatics Biotechnologies Gmbh | T-Zellrezeptoren mit verbesserter Bindung |
DK3707159T3 (da) * | 2017-11-06 | 2023-04-11 | Immatics Biotechnologies Gmbh | Hidtil ukendte modificerede t-cellereceptorer og immunterapi med anvendelse deraf |
-
2018
- 2018-11-05 DK DK18803349.2T patent/DK3707159T3/da active
- 2018-11-05 EP EP23150210.5A patent/EP4219543A1/en active Pending
- 2018-11-05 CN CN202410414193.9A patent/CN118324918A/zh active Pending
- 2018-11-05 US US16/180,980 patent/US10618956B2/en active Active
- 2018-11-05 FI FIEP18803349.2T patent/FI3707159T3/fi active
- 2018-11-05 ES ES18803349T patent/ES2941965T3/es active Active
- 2018-11-05 WO PCT/EP2018/080176 patent/WO2019086665A1/en unknown
- 2018-11-05 IL IL308007A patent/IL308007A/en unknown
- 2018-11-05 IL IL274505A patent/IL274505B2/en unknown
- 2018-11-05 MX MX2020004741A patent/MX2020004741A/es unknown
- 2018-11-06 TW TW107139287A patent/TWI720362B/zh active
- 2018-11-06 TW TW110104935A patent/TWI788781B/zh active
-
2020
- 2020-01-07 US US16/736,337 patent/US10889645B2/en active Active
- 2020-05-05 CL CL2020001181A patent/CL2020001181A1/es unknown
- 2020-05-05 PH PH12020550600A patent/PH12020550600A1/en unknown
- 2020-06-04 CO CONC2020/0006905A patent/CO2020006905A2/es unknown
- 2020-12-17 US US17/125,135 patent/US11932689B2/en active Active
-
2024
- 2024-02-20 US US18/581,837 patent/US20240228611A1/en active Pending
Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
TW201700496A (zh) * | 2015-03-27 | 2017-01-01 | 英麥提克生物技術股份有限公司 | 用於各種腫瘤免疫治療的新型肽和肽複合物 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
US20210101975A1 (en) | 2021-04-08 |
MX2020004741A (es) | 2020-09-18 |
EP4219543A1 (en) | 2023-08-02 |
CN118324918A (zh) | 2024-07-12 |
TW201930339A (zh) | 2019-08-01 |
CL2020001181A1 (es) | 2020-08-21 |
US20200207849A1 (en) | 2020-07-02 |
IL274505B2 (en) | 2024-04-01 |
FI3707159T3 (fi) | 2023-04-18 |
ES2941965T3 (es) | 2023-05-29 |
TWI788781B (zh) | 2023-01-01 |
IL274505B1 (en) | 2023-12-01 |
PH12020550600A1 (en) | 2021-02-15 |
DK3707159T3 (da) | 2023-04-11 |
US20190135914A1 (en) | 2019-05-09 |
US10889645B2 (en) | 2021-01-12 |
US10618956B2 (en) | 2020-04-14 |
CO2020006905A2 (es) | 2020-08-31 |
IL308007A (en) | 2023-12-01 |
TW202136291A (zh) | 2021-10-01 |
IL274505A (en) | 2020-06-30 |
US11932689B2 (en) | 2024-03-19 |
US20240228611A1 (en) | 2024-07-11 |
WO2019086665A1 (en) | 2019-05-09 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
TWI720362B (zh) | 新型改造t細胞受體及其免疫治療 | |
US10526407B2 (en) | T cell receptors and immune therapy using the same | |
US10725044B2 (en) | T cell receptors and immune therapy using the same | |
US20210388079A1 (en) | Novel t cell receptors and immune therapy using the same | |
US11939376B2 (en) | T cell receptors and immune therapy using the same | |
TW201839010A (zh) | T細胞受體及其針對prame陽性癌症的免疫治療 | |
CN111448209B (zh) | 新型改造t细胞受体及其免疫治疗的应用 | |
TWI790162B (zh) | 新穎t細胞受器及使用其之免疫治療 | |
EA043746B1 (ru) | Новые полученные методами генной инженерии t-клеточные рецепторы и иммунная терапия с их использованием |