TWI717559B - 包含葫蘆巴萃取物之組合物用於製備預防非酒精性脂肪肝之醫藥組合物的用途 - Google Patents

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Abstract

本發明提供一種葫蘆巴萃取物的製備方法包含以下步驟：(1)齊備一葫蘆巴植物組織，並浸泡於水溶劑且於25℃至100℃、0.5小時至5小時進行萃取；以及(2)將經萃取的葫蘆巴植物組織進行過濾，獲得葫蘆巴萃取物。本發明更提供包含前述葫蘆巴萃取物的組合物。本發明另提供包括前述組合物及其醫藥上可接受的載劑的醫藥組合物與用途。藉由本發明所述之製備方法所萃取而得的葫蘆巴萃取物能有效預防或治療非酒精性脂肪肝。

Description

包含葫蘆巴萃取物之組合物用於製備預防非酒精性脂肪 肝之醫藥組合物的用途
本發明係涉及一種葫蘆巴萃取物的製備方法，特別是指以水萃取的葫蘆巴萃取物的製備方法。本發明另涉及一種用於預防或治療非酒精性脂肪肝的組合物，特別是指前述葫蘆巴萃取物與紅麴萃取物。本發明另涉及一種醫藥組合物，特別是指前述葫蘆巴萃取物、紅麴萃取物、米糠、朝鮮薊、人蔘或其組合。本發明另涉及一種醫藥組合物的用途，特別是指前述之醫藥組合物用於預防或治療非酒精性脂肪肝之用途。
脂肪肝(fatty liver)由肝臟細胞積聚脂肪而成。當飲食攝取的脂肪多過人體所能應付時，肝臟便會漸漸積聚脂肪組織。如果脂肪佔肝臟5%以上，這情況便為脂肪肝。肝臟一旦積聚脂肪便很容易繼續受損，導致肝臟發炎和結疤。非酒精性脂肪肝病(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)是一種漸進性的複合肝臟疾病，它始於肝臟內脂肪的積聚，而這種脂肪積聚並非過量酒精導致。非酒精性脂肪肝炎(non-alcoholic steatohepatitis,NASH)是非酒精性脂肪肝病(NAFLD)中較為嚴重的、晚期的一種。脂肪肝炎是指有炎癥的，即損害持續進行的脂肪肝病，與酒精性肝病類似，但發生在不喝酒或只喝少量酒的人身上。非酒精性脂肪肝炎與單純的肝臟脂肪積聚不同，如果是後者身體狀況仍然可以很好。患有非酒精性脂肪肝炎的成人中，其中20%會形成肝硬化，其中11%會因肝病致命，也有很多出現慢性肝臟衰竭而需要肝臟移植。
葫蘆巴，學名(Trigonella foenum-graecum)，為一年生豆科蝶形花亞科葫蘆巴屬的一種植物，其種子可作為調味料和中藥。中醫認為葫蘆巴種子性味苦溫，入腎肝經。用來治療腎虛、陽痿、脫髮，胃寒痛等疾病。也可作為鬆弛劑、腸道潤滑劑和降低發燒的溫度，有助於降低膽固醇和血糖的含量，藉由減少黏液來幫助氣喘及鼻竇炎。現有技術多以有機溶劑如甲醇、乙醇(酒精)、丙酮、乙酸乙酯等進行萃取。然而，隨著現代人對飲食安全的重視，由於有機溶劑容易殘留於萃取物中不易分離，因此有待進一步改進萃取方法。
有鑑於此，如何發展出安全的萃取方式以萃取葫蘆巴，現有技術實有待改善的必要。
為了克服現有技術之缺點，本發明的目的在於提供一種葫蘆巴萃取物的製備方法，製備而得的葫蘆巴萃取物能達成預防或治療非酒精性脂肪肝的效果。
為達到上述之發明目的，本發明提供一種葫蘆巴萃取物的製備方法，其包含以下步驟：(1) 齊備一葫蘆巴植物組織，並浸泡於水溶劑且於25ºC至100ºC、0.5小時至5小時進行萃取；以及，(2) 將經萃取的葫蘆巴植物組織進行過濾，獲得一葫蘆巴萃取物。
較佳的，所述之步驟(1)中，該葫蘆巴植物組織為葫蘆巴種子或葫蘆巴根莖葉。
較佳的，所述之步驟(1)中，該水溶劑使用的重量比為葫蘆巴植物組織的1倍至20倍。
較佳的，所述之步驟(1)中，該萃取溫度與時間為50ºC至95ºC、0.5小時至3小時。
本發明另提供一種預防或治療非酒精性脂肪肝的組合物，其包含如前述之葫蘆巴萃取物。
較佳的，所述之組合物更包含紅麴萃取物、米糠萃取物、朝鮮薊萃取物、牛磺酸、人蔘萃取物或其組合。
更佳的，所述之葫蘆巴萃取物為12重量份至16重量份，紅麴萃取物為3重量份至14重量份，米糠萃取物為0.5重量份至5重量份，朝鮮薊萃取物為0.5重量份至3重量份，牛磺酸為0.8重量份至25重量份，人蔘萃取物為0.1重量份至10重量份。
本發明另提供一種預防或治療非酒精性脂肪肝的醫藥組合物，其包括如前述之組合物以及其藥學上可接受的載劑。
本發明另提供一種組合物用於製備預防或治療非酒精性脂肪肝之醫藥組合物的用途，其係將醫藥組合物以有效劑量施予受體，以使受體達到預防或治療非酒精性脂肪肝之效果。
本發明的醫藥組合物係可利用熟習此技藝者所詳知的技術，將上述的組合物與一藥學上可接受之載劑製備成一適用本發明組合物之劑型。所述之醫藥組合物可用現有技術水準中已習知之方法，利用已知之賦形劑包含，但不限於增塑劑、填料、潤滑劑、稀釋劑、黏合劑、崩解劑、溶劑、界面活性劑、防腐劑、甜味劑、抗氧化劑及黏度劑；較佳的，所述增塑劑包括，但不限於玉米粉；較佳的，所述潤滑劑包括，但不限於二氧化矽(SiO2 )、硬脂酸鎂(magnesium stearate, MAG)；較佳的，所述稀釋劑包括，但不限於麥芽糊精(Fibersol-2® )。較佳的，所述抗氧化劑包括，但不限維生素E。
本發明所述之醫藥組合物可以多種形式存在，該等形式包括，但不限於固體藥劑形式，其中固體藥劑包括，但不限於膠囊、錠劑、丸劑、粉劑、脂質體及栓劑。較佳的形式取決於預期的投藥模式及治療應用；較佳的，本發明所述之醫藥組合物之劑型是口服。
依據本發明，「有效劑量」係指在劑量上及對於所需要之時間而言對達成所要預防或治療非酒精性脂肪肝有效之量；其如本發明所例示者，有效預防非酒精性脂肪肝劑量可透過油滴生成試驗、組織切片染色、血液分析總膽固醇、血清麩胺草醋酸轉胺酶(serum glutamic oxaloacetic transaminase, sGOT)與血清丙胺酸轉胺酶(serum glutamic-pyruvic transaminase, sGPT)等試驗而得知。
較佳的，所述之組合物包含葫蘆巴萃取物、紅麴萃取物、米糠萃取物、朝鮮薊萃取物、牛磺酸及人蔘萃取物，該組合物施予方式係口服施予，且施予受體之有效劑量係介於受體每日每公斤0.0004克(g/kg/day)至0.81 g/kg/day。以上劑量是根據2005年美國食品藥物管理局所公告之實驗初期估算方法(Estimating the maximum safe starting dose in initial clinical trials for therapeutics in adult healthy volunteers)計算而得。
本發明的優點在於本發明以水萃取製備方法萃取而得的葫蘆巴萃取物，其預防或治療非酒精性脂肪肝的效果相較於以有機溶劑萃取的葫蘆巴萃取物來得更佳，且在相同的劑量下以水萃取的葫蘆巴萃取物相較於以有機溶劑萃取的葫蘆巴萃取物抑制脂肪肝的效果更好；此外，前述葫蘆巴萃取物與紅麴萃取物、米糠萃取物、朝鮮薊萃取物、牛磺酸、人蔘萃取物一併使用時，其預防或治療非酒精性脂肪肝的效果又比單獨使用葫蘆巴萃取物來得更佳。
以下配合圖式及本發明之較佳實施例，進一步闡述本發明為達成目的所採取的技術手段。
製備例1 葫蘆巴的水萃製程
取新鮮或乾燥的葫蘆巴種子以水溶劑萃取，其中該水溶劑所使用的重量比為葫蘆巴種子的1倍至20倍，較佳為5倍至10倍。將浸泡於水溶劑的葫蘆巴種子置於25ºC至100ºC、0.5小時至5小時，較佳為50ºC至95ºC、0.5小時至3小時，並經過過濾(以已知之物理過濾方法進行固-液分離，例如孔洞、重量或密度)後，獲得一葫蘆巴萃取物(簡稱YE2)。該葫蘆巴萃取物可以已知食品加工方法進行濃縮或乾燥。
製備例2 葫蘆巴的有機溶劑萃取製程
取新鮮或乾燥的葫蘆巴種子以50%酒精溶劑萃取，其中該酒精溶劑所使用的重量比為葫蘆巴種子的1倍至20倍，較佳為5倍至10倍。將浸泡於酒精溶劑的葫蘆巴種子置於25ºC至100ºC、0.5小時至5小時，較佳為50ºC至95ºC、0.5小時至3小時，並經過過濾(以已知之物理過濾方法進行固-液分離，例如孔洞、重量或密度)後，獲得一葫蘆巴酒精萃取物(簡稱YE3)。該葫蘆巴萃取物可以已知食品加工方法進行濃縮或乾燥。
實施例1 細胞實驗-同時加藥與刺激，模擬預防機轉
(1) 取肝癌細胞(liver hepatocellular carcinoma, HepG2)種植於每孔2.5×104 個細胞，培養24小時。
(2) 此處分為以下多組：
控制組：添加與油滴誘導劑等體積的細胞培養液及1% 二甲基亞碸(dimethyl sulfoxide, DMSO)於肝癌細胞中6小時。
油滴誘導組：添加1% DMSO與500毫莫耳濃度(mM)的油滴誘導劑[單元脂肪酸油酸(oleic acid, OA，C18：1)與飽和脂肪酸棕櫚酸(paltimic acid, PA，C16：0)，以體積比2：1(v/v)比例溶於細胞培養液中]於肝癌細胞中6小時進行刺激。
正對照組：添加磷脂醯膽鹼(phosphoatidylcholine)每毫升0.01微克(mg/mL)以及500毫莫耳濃度(mM)的油滴誘導劑於肝癌細胞中6小時進行刺激。
A組：取製備例1經水萃取製程萃取之乾燥的葫蘆巴萃取物溶於1% DMSO溶劑中，使濃度最終成為每毫升10-6 微克(mg/mL)、10-5 mg/mL、10-4 mg/mL、10-3 mg/mL、10-2 mg/mL及10-1 mg/mL後，同時與500 mM的油滴誘導劑分別添加於肝癌細胞中6小時。
B組：取製備例2經酒精萃取製程所萃取之乾燥的葫蘆巴酒精萃取物溶於1% DMSO溶劑中，使濃度最終成為10-6 mg/mL、10-5 mg/mL、10-4 mg/mL、10-3 mg/mL、10-2 mg/mL及10-1 mg/mL後，同時與500 mM的油滴誘導劑分別添加於肝癌細胞中6小時。
(3) 以上各組最後以細胞存活率試驗(MTS assay)及油紅組織染色(oil red-O stain)進行檢測，並以oil red OD值 / MTS OD值做為油滴生成的指數(index)依據。
請參閱圖1至圖2所示，用水萃或酒精進行萃取時，發現當濃度越高，抑制油滴生成於肝癌細胞的效果越好。A組的半致死劑量(half maximal inhibitory concentration, IC50 )為0.1 ng/mL，B組的IC50 為0.3 ng/mL。其中A組可發現經水萃取製程所劑萃取之葫蘆巴萃取物在濃度為10-5 mg/mL時即有非常好的抑制效果。
實施例2 細胞實驗-先加藥後刺激，模擬預防機轉
(1) 取肝癌細胞(HepG2)種植於每孔2.5×104 個細胞，培養24小時。
(2) 此處分為以下多組：
控制組：添加與C組等體積之1% DMSO於肝癌細胞中並靜置16小時，再添加與油滴誘導劑等體積的細胞培養液16小時。
油滴誘導組：添加1% DMSO於肝癌細胞中並靜置16小時，再添加500 mM的油滴誘導劑(同實施例1) 16小時進行刺激。
正對照組：添加磷脂醯膽鹼0.01 mg/mL於肝癌細胞中並靜置16小時，再添加500 mM的油滴誘導劑16小時進行刺激。
C組：取製備例1經水萃取製程所萃取之乾燥的葫蘆巴萃取物溶於1% DMSO溶劑中，使濃度最終成為10-6 mg/mL、10-5 mg/mL、10-4 mg/mL、10-3 mg/mL、10-2 mg/mL及10-1 mg/mL後，分別添加於肝癌細胞中並靜置16小時，再添加500 mM的油滴誘導劑16小時做為刺激。
D組：取製備例2經酒精萃取製程所萃取之乾燥的葫蘆巴酒精萃取物溶於1% DMSO溶劑中，使最終濃度成為10-6 mg/mL、10-5 mg/mL、10-4 mg/mL、10-3 mg/mL、10-2 mg/mL及10-1 mg/mL後，分別添加於肝癌細胞中並靜置16小時，再添加500 mM的油滴誘導劑16小時做為刺激。
(3) 以上各組最後以MTS assay及oil red-O stain進行檢測，並以oil red OD值 / MTS OD值做為油滴生成的指數依據。
請參閱圖3至圖4所示，C組IC50 為0.3 ng/mL，D組的IC50 為0.9 ng/mL。其中以水萃取製程所萃取之C組劑量為10-3 mg/mL時指數為0.3839±0.0203具有最佳抑制油滴生成的效果，而以酒精萃取的D組當劑量為10-3 mg/mL時指數為0.4471±0.0086，甚至不如C組劑量為10-3 mg/mL時所能抑制油滴生成的效果。
實施例3 動物實驗
(1) 取7週齡雄性C57BL/6J小鼠進行實驗。
(2) 實驗分成以下幾組：
控制組：給予小鼠控制飲食(chow diet, CD)，包括4.8%仟卡(% kcal)脂肪與0%仟卡膽固醇，並持續12周，共6隻。
高脂組：給予小鼠高脂飲食(high fat diet, HFD)，包括42%仟卡脂肪與0.2%仟卡膽固醇，並持續12周，共6隻。
YE2組：給予小鼠高脂飲食，同時給予製備例1經水萃取製程所萃取之乾燥的葫蘆巴萃取物以0.108 g/kg/day混合於高脂飲食中，並持續12周，共6隻。
(3) 動物犧牲後，將肝臟組織切片以蘇木精-伊紅染色(hematoxylin and eosin stain, H&E)染色，根據2005年Kleiner等人所建立的評分標準，針對大囊泡性脂肪變性(macrovesicular steatosis)：分數0為＜5%(大囊泡占組織中的百分比)，分數1為5%至33%，分數2為＞33%至66%，分數3為＞66%；針對小囊泡性脂肪變性(microvesicular steatosis)：分數0為未產生，分數1為有產生；針對肝細胞氣球化(ballooning)：分數0為未產生，分數1為少量細胞氣球化，分數2為多數細胞氣球化。此外，同時抽取動物血液，針對總膽固醇、sGOT與sGPT進行分析。
請參閱圖5所示，從組織切片染色圖可看出高脂組的肝臟細胞充滿脂肪，呈現如空包狀且組織疏鬆，而YE2組則與控制組較為相同；請參閱圖6所示，YE2組相較於高脂組，大囊泡性脂肪變性顯著降低；請參閱圖7所示，YE2組小囊泡性脂肪變性呈度與高脂組相當；請參閱圖8所示，YE2組相較於高脂組，肝細胞氣球化程度顯著降低；請參閱圖9所示，YE2組的總膽固醇含量與高脂組相當；請參閱圖10所示，YE2組相較於高脂組，sGOT含量顯著降低；請參閱圖11所示，YE2組相較高脂組與控制組，sGPT含量皆顯著降低。
實施例4 細胞實驗-葫蘆巴萃取物複方
(1) 取肝癌細胞(HepG2)種植於每孔2.5×104 個細胞，培養24小時。
(2) 此處分為以下多組：
控制組：添加與實驗組別之萃取物等體積的1% DMSO於肝癌細胞中並靜置16小時，再添加與油滴誘導劑等體積的細胞培養液16小時。
油滴誘導組：添加與實驗組別之萃取物等體積的1% DMSO於肝癌細胞中並靜置16小時，再添加500 mM的油滴誘導劑(同實施例2) 16小時進行刺激。
實驗組別：取製備例1經水萃取製程萃取之乾燥的葫蘆巴萃取物、紅麴萃取物、米糠萃取物、朝鮮薊萃取物、牛磺酸與人蔘萃取物共6種原料，其中後5種原料皆為市售可取得之原料，以不同重量份混成8組分別為實驗組別1至實驗組別8，如下表1所示。此外，在一較佳的實施例中可依需求額外添加VitE、SiO2、MAG及Fibersol-2® 。分別添加如下表1所示不同實驗組別於肝癌細胞中並靜置16小時，再添加500 mM的油滴誘導劑16小時進行刺激。 表1、各組別之原料含量(重量份)
Figure 106134925-A0304-0001
 註：「-」表示未添加。
(3) 以上各組最後以MTS assay及oil red-O stain進行檢測，並以oil red OD值 / MTS OD值做為油滴生成的指數依據。
請參閱圖12所示，以油滴誘導組油滴生成百分率為100%，其中，實驗組別1油滴生成百分率約97%、實驗組別2油滴生成百分率約38.6%，實驗組別3油滴生成百分率約57%、實驗組別4油滴生成百分率約58.4%、實驗組別5油滴生成百分率約79.3%、實驗組別6油滴生成百分率約78.1%、實驗組別7油滴生成百分率約72.4%、實驗組別8油滴生成百分率約60.1%。因此，以上實驗組別2至7皆能顯著降低油滴的生成，其中實驗組別2中6種原料都有的複方，其油滴生成百分率最低。
請參閱圖13所示，無論是控制組、油滴誘導組或是實驗組別1至8的細胞存活OD值都無顯著改變，因此，施予實驗組別2至8都能維持相同的細胞存活率。
實施例5 動物實驗-葫蘆巴萃取物複方
(1) 取8週齡雄性C57BL/6J小鼠進行實驗。
(2) 實驗分成以下幾組：
控制組：每日口服施予小鼠0.2 mL二次水，第二週開始之後給予控制飲食，餵食一般飼料與管餵二次水(ddH2 O)，並持續至第18週，共10隻。
高脂組：每日口服施予小鼠0.2 mL二次水，第二週開始之後給予小鼠高脂飲食，餵食60%高脂飼料誘發肝損傷與管餵二次水，並持續至第18週，共10隻。其中，60%高脂飼料為20%仟卡蛋白質、20%仟卡碳水化合物及60%仟卡脂肪，該配方由E. A. Ulman, Ph. D.,所調配於Research Diets, Inc., 8/26/98與3/11/99，產品編號D12492。
低劑量組：每日口服施予小鼠0.2 mL 1倍(0.005~1 g/kg/day)的葫蘆巴萃取物複方(同實施例4實驗組2中，葫蘆巴萃取物、紅麴萃取物、米糠萃取物、朝鮮薊萃取物、牛磺酸與人蔘萃取物之比例)，第二週開始之後給予小鼠高脂飲食，並持續至第18週，共10隻。
中劑量組：每日口服施予小鼠0.2 mL 5倍(0.025~5 g/kg/day)的葫蘆巴萃取物複方(同實施例4實驗組2中，葫蘆巴萃取物、紅麴萃取物、米糠萃取物、朝鮮薊萃取物、牛磺酸與人蔘萃取物之比例；中劑量組為5倍低劑量組的劑量)，第二週開始之後給予小鼠高脂飲食，並持續至第18週，共10隻。
高劑量組：每日口服施予小鼠0.2 mL 10倍(0.05~10 g/kg/day)的葫蘆巴萃取物複方(同實施例4實驗組2中，葫蘆巴萃取物、紅麴萃取物、米糠萃取物、朝鮮薊萃取物、牛磺酸與人蔘萃取物之比例；高劑量組為10倍低劑量組的劑量)，第二週開始之後給予小鼠高脂飲食，並持續至第18週，共10隻。
(3) 於第18週抽取動物血液，針對血清中三酸甘油脂、血清中膽固醇、血清中游離脂肪酸、血清中ALT、血清中AST、與sGPT進行分析。此外，於第18週動物犧牲後，將肝臟組織切片以H&E染色，並針對肝臟組織進行總肝中膽固醇、總肝中三酸甘油脂以及總肝中游離脂肪酸的分析。
請參閱圖14所示，無論是低劑量組、中劑量組或高劑量組相較於高脂組，血清中三酸甘油脂皆顯著降低。請參閱圖15所示，低劑量組、中劑量組或高劑量隨著劑量的增加，相較於高脂組，中劑量組或與高劑量血清中膽固醇也顯著減少。請參閱圖16所示，無論是低劑量組、中劑量組或高劑量組相較於高脂組，血清中游離脂肪酸皆顯著降低。請參閱圖17所示，相較於高脂組，低劑量組及中劑量組血清中游離脂肪酸皆顯著降低。請參閱圖18所示，相較於高脂組，低劑量組及高劑量血清中AST皆顯著降低。
請參閱圖19所示，從組織切片染色圖可看出高脂組的肝臟細胞充滿脂肪，呈現如空包狀且組織疏鬆，而隨著低劑量組、中劑量組或高劑量組其劑量的增加，肝臟細胞越為緊密，其中高劑量組與控制組較為相同；請參閱圖20所示，相較於高脂組，中劑量組及高劑量組的總肝中膽固醇含量顯著降低；請參閱圖21所示，無論是低劑量組、中劑量組或高劑量組相較於高脂組，總肝中三酸甘油脂皆顯著降低；請參閱圖22所示，相較於高脂組，中劑量組及高劑量組的總肝中游離脂肪酸含量顯著降低。
實施例6 葫蘆巴植物組織的成份分析
取製備例1葫蘆巴種子以水萃取而得的葫蘆巴萃取物，以及取新鮮或乾燥的葫蘆巴根莖葉(約一個月大的植株)以同製備例1的製備方法獲得一葫蘆巴根莖葉萃取物，分別進行HPLC。HPLC的分析條件為管柱：C18 [(5微米(µm)，x 250毫米(mm)]；流動相-甲醇：水=90：10；偵測波長：203奈米(nm)；注入體積為20微升(µL)；流洗時間為30分鐘；流速為1 mL/分鐘(min)。
請參閱圖23與圖24所示，結果顯示葫蘆巴萃取物(圖23)和葫蘆巴根莖葉萃取物(圖24)中總皂苷(saponins)輪廓(profile)的相似度高，因此無論是葫蘆巴種子或是葫蘆巴根莖葉以水進行萃取之萃取物，應具有相似的功效。
根據本發明可作之不同修正及變化對於熟悉該項技術者而言均顯然不會偏離本發明的範圍與精神。雖然本發明已敘述特定的較佳具體事實，必須瞭解的是本發明不應被不當地限制於該等特定具體事實上。事實上，在實施本發明之已述模式方面，對於熟習該項技術者而言顯而易知之不同修正亦被涵蓋於下列申請專利範圍之內。
無
圖1為本發明之A組(經水萃取製程所萃取之葫蘆巴萃取物)之油滴生成的指數柱狀圖；各組為二重複，平均值(mean)±標準差(standard deviation, SD)；以學生t檢驗(student’st test)，*代表p˂0.05、**代表p˂0.01、***代表p˂0.001；MTS作為細胞存活的分析方法。 圖2為本發明之B組(經酒精萃取製程2萃取之葫蘆巴酒精萃取物)之油滴生成的指數柱狀圖；各組為二重複，mean±SD；student’st test，*代表p˂0.05、**代表p˂0.01、***代表p˂0.001。 圖3為本發明之C組(經水萃取製程所萃取之葫蘆巴萃取物)之油滴生成的指數柱狀圖；各組為二重複，mean±SD；student’st test，*代表p˂0.05、**代表p˂0.01、***代表p˂0.001。 圖4為本發明之D組(經酒精萃取製程2萃取之葫蘆巴酒精萃取物)之油滴生成的指數柱狀圖；各組為二重複，mean±SD；student’st test，*代表p˂0.05、***代表p˂0.001。 圖5為本發明之控制組、高脂組與YE2組(經水萃取製程所萃取之葫蘆巴萃取物)之動物肝臟組織切片染色圖。 圖6為本發明之控制組、高脂組與YE2組之動物肝臟組織切片之大囊泡性脂肪變性分數之柱狀圖；mean ± SD；單因子變異數分析(one-way ANOVA)，*代表相較於控制組p˂0.05；†代表相較於高脂組，p˂0.05。 圖7為本發明之控制組、高脂組與YE2組之動物肝臟組織切片之小囊泡性脂肪變性分數之柱狀圖；mean ± SD；one-way ANOVA，*代表相較於控制組p˂0.05；†代表相較於高脂組，p˂0.05。 圖8為本發明之控制組、高脂組與YE2組之動物肝臟組織切片之細胞氣球化分數之柱狀圖；mean ± SD；one-way ANOVA，*代表相較於控制組p˂0.05；†代表相較於高脂組，p˂0.05。 圖9為本發明之控制組、高脂組與YE2組之動物血液之總膽固醇之柱狀圖；mean ± SD；one-way ANOVA，*代表相較於控制組p˂0.05；†代表相較於高脂組，p˂0.05；毫克/每升(mg/L)。 圖10為本發明之控制組、高脂組與YE2組之動物血液之sGOT之柱狀圖；mean ± SD；one-way ANOVA，*代表相較於控制組p˂0.05；†代表相較於高脂組，p˂0.05；每單位/每升(U/L)。 圖11為本發明之控制組、高脂組與YE2組之動物血液之sGPT之柱狀圖；mean ± SD；one-way ANOVA，*代表相較於控制組p˂0.05；†代表相較於高脂組，p˂0.05；每單位/每升(U/L)。 圖12為本發明之葫蘆巴萃取物複方之油滴生成的指數柱狀圖；各組為四重複，mean ± SD；student’st test，***代表p˂0.001。 圖13為本發明之葫蘆巴萃取物複方之細胞存活光密度(oblivion dust，OD)值之柱狀圖；各組為四重複，mean ± SD；student’st test，***代表p˂0.001。 圖14為本發明之葫蘆巴萃取物複方於不同劑量之血清中三酸甘油脂之柱狀圖；各組為十重複，mean ± SD；one-way ANOVA與鄧肯氏多變域測驗(Duncan’s multiple range test)，當兩字母分別為a與b時，代表p˂0.05。 圖15為本發明之葫蘆巴萃取物複方於不同劑量之血清中膽固醇之柱狀圖；各組為十重複，mean ± SD；one-way ANOVA與Duncan’s multiple range test，當其中兩組的字母分別為不同的兩字母時，代表p˂0.05。 圖16為本發明之葫蘆巴萃取物複方於不同劑量之血清中游離脂肪酸之柱狀圖；各組為十重複，mean ± SD；one-way ANOVA與Duncan’s multiple range test，當其中兩組的字母分別為不同的兩字母時，代表p˂0.05。 圖17為本發明之葫蘆巴萃取物複方於不同劑量之血清中ALT之柱狀圖；各組為十重複，mean ± SD；one-way ANOVA與Duncan’s multiple range test，當其中兩組的字母分別為不同的兩字母時，代表p˂0.05。 圖18為本發明之葫蘆巴萃取物複方於不同劑量之血清中AST之柱狀圖；各組為十重複，mean ± SD；one-way ANOVA與Duncan’s multiple range test，當其中兩組的字母分別為不同的兩字母時，代表p˂0.05。 圖19為本發明之葫蘆巴萃取物複方於不同劑量之動物肝臟組織切片染色圖。 圖20為本發明之葫蘆巴萃取物複方於不同劑量之總肝中膽固醇之柱狀圖；各組為十重複，mean ± SD；one-way ANOVA與Duncan’s multiple range test，當其中兩組的字母分別為不同的兩字母時，代表p˂0.05。 圖21為本發明之葫蘆巴萃取物複方於不同劑量之總肝中三酸甘油脂之柱狀圖；各組為十重複，mean ± SD；one-way ANOVA與Duncan’s multiple range test，當其中兩組的字母分別為不同的兩字母時，代表p˂0.05。 圖22為本發明之葫蘆巴萃取物複方於不同劑量之總肝中游離脂肪酸之柱狀圖；各組為十重複，mean ± SD；one-way ANOVA與Duncan’s multiple range test，當其中兩組的字母分別為不同的兩字母時，代表p˂0.05。 圖23為本發明之葫蘆巴萃取物以高效液相層析(high performance liquid chromatography, HPLC)偵測總皂苷於波長203 nm分析之高效液相層析圖。 圖24 為本發明之葫蘆巴根莖葉萃取物以HPLC偵測總皂苷於波長203 nm分析之高效液相層析圖。
無

Claims (7)

  1. 一種包含葫蘆巴萃取物之組合物用於製備預防非酒精性脂肪肝之醫藥組合物的用途，該葫蘆巴萃取物的製備方法包含以下步驟：(1)齊備一葫蘆巴植物組織，並浸泡於水溶劑且於25℃至100℃、0.5小時至5小時進行萃取；以及，(2)將經萃取的葫蘆巴植物組織進行過濾，獲得該葫蘆巴萃取物。
  2. 如請求項1所述之用途，其中該步驟(1)中，該葫蘆巴植物組織為葫蘆巴種子或葫蘆巴根莖葉。
  3. 如請求項1所述之用途，其中該步驟(1)中，該水溶劑使用的重量比為葫蘆巴植物組織的1倍至20倍。
  4. 如請求項1至3中任一項所述之用途，其中該步驟(1)中，該萃取溫度與時間為50℃至95℃、0.5小時至3小時。
  5. 如請求項1所述之用途，其中該組合物更包含紅麴萃取物、米糠萃取物、朝鮮薊萃取物、牛磺酸、人蔘萃取物或其組合。
  6. 如請求項5所述之用途，其中葫蘆巴萃取物為12重量份至16重量份，紅麴萃取物為3重量份至14重量份，米糠萃取物為0.5重量份至5重量份，朝鮮薊萃取物為0.5重量份至3重量份，牛磺酸為0.8重量份至25重量份，人蔘萃取物為0.1重量份至10重量份。
  7. 如請求項1、5或6中任一項所述之用途，其更包含藥學上可接受的載劑。
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