TWI702962B

TWI702962B - 治療脂質代謝紊亂的組合物及其方法

Info

Publication number: TWI702962B
Application number: TW106114365A
Authority: TW
Inventors: 陳英俊
Original assignee: 健脂生物科技股份有限公司
Priority date: 2016-05-02
Filing date: 2017-04-28
Publication date: 2020-09-01
Also published as: EP3241552A1; TW201739469A; US20190008870A1; CN107334770A; US20170312286A1

Abstract

本發明提供一種用於抑制溫血動物脂質代謝紊亂的方法。該方法包括對罹患脂質代謝紊亂的溫血動物給予包含磷酸二酯酶類型5抑制劑與他汀類(Statin)類似物的藥物組合物。

Description

治療脂質代謝紊亂的組合物及其方法

本發明關於一種包含磷酸二酯酶類型5抑制劑與他汀類(Statin)類似物的藥物組合物，以用於抑制溫血動物脂質代謝紊亂。尤其，本發明關於包含第一類或第二類磷酸二酯酶類型5抑制劑與Statin類似物的搭配以及混合的藥物組合物，以發揮療效。

KMUP-1化合物已被證實可經由增強內皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)/環鳥嘌呤苷單磷酸鹽(guanosine 3',5'-cyclic monophosphate,cGMP)途徑，包括增加可溶性鳥苷酸環化酶α1(soluble guanylyl cyclase α1,GCα1)和蛋白激酶G(protein kinase G,PKG)的表現，呈現放鬆血管和氣道平滑肌肉收縮。

本發明發明人於《脂質代謝期刊(J.Lipid Res.)》2015年第56卷第11期第2070-2084頁報導的KMUP-1和Das A等人於《藥理學及治療學(Pharmacol.Ther.)》2015年第147期第12-21頁報導的西地那非(Sildenafil)均證實可增加cGMP/PKG脂質代謝，該等化合物為磷酸二酯酶類型5(phosphodiesterase type 5,PDE-5)抑制劑，但其對於肥胖的影響情況未明確。增加cGMP可以擴大和降低白色脂肪組織，其與內臟附睾脂肪墊不同。事實上，eNOS和激素敏感性脂肪酶(hormone-sensitive lipase,HSL)在肥胖病症與減少皮下脂肪組織的脂肪分解有關；而抑制NOS導致白色組織內脂肪分解的增加，且增加一氧化氮(NO)可抑制脂肪的分解。

發明人鑑於習知技術尚呈現所不完備處，經過悉心試驗與研究，並一本鍥而不捨的精神，終構思出本案「治療脂質代謝紊亂的組合物及其方法」，能夠克服先前技術的不足，以下為本案的簡要說明。

根據本發明的一個構想，本發明揭示一種治療脂質代謝紊亂的方法。該方法包括步驟：投予足供療效用量的活性劑藥物組合物於脂質代謝紊亂的溫血動物，其是選自磷酸二酯酶類型5抑制劑與Statin類似物所組成的藥物組合物。上述疾病，包括非酒精性脂肪肝、過度肥胖(hyperadiposity)、血脂異常症(dyslipidemia)、肝臟脂肪變性(hepatic steaotosis)、高脂肪食品誘發肝臟脂質蓄積、高脂肪食品誘發肥胖、胰島素抗性、高脂肪食品誘發脂質蓄積(lipid accumulation)併發炎症和肝臟損傷的後續症候其組合。

根據本發明的另一個構想，本發明揭示一種藥物組合物。該藥物組合物為磷酸二酯酶類型5抑制劑或與其藥學上可接受載體，與Statin類似物或與其藥學上可接受載體所組成的藥物組合物。

根據本發明的其他構想，本發明揭示一種投予足供療效用量的磷酸二酯酶類型5抑制劑及Statin類似物活性劑於溫血動物，以治療疾病的組合投藥(combined administration)方法。

不同的磷酸二酯酶(phosphodiesterase,PDE)家族依據調控細胞內環-3',5'-磷酸腺苷(cyclic-3’,5’-adenosine monophosphate,cAMP)和環-3',5'-磷酸鳥嘌呤(cyclic-3’,5-guanosine monophosphate,cGMP)第二訊息含量的關鍵作用而呈現細胞功能。目前至少有11種或是12種次家族已被確認可水解cAMP、cGMP或兩者。

一些研究指出，增加環-3',5'-磷酸鳥嘌呤(cGMP)的訊號可能是減少糖尿病惡化多個途徑的重要方式。在血糖的控制上，即使以增加細胞內鈣離子作為活化胰島素胞吐作用(exocytosis)的主要訊號，cGMP也可經由顯著的訊號和增效葡萄糖的刺激而有所參與。

一些體外研究同時顯示，cGMP可經由刺激葡萄糖轉運蛋白4(Glucose transporter type 4,GLUT4)補充到細胞膜，以提高肌肉和脂肪細胞的目標器官的胰島素敏感性。此外，因為NO/cGMP為基本的血管保護訊號，此途徑的增量可為受人矚目的方式來減低糖尿病慢性併發症的血管內皮功能的障礙，亦即減輕糖尿病患者造成殘疾和死亡的主要成因。

增加cGMP訊號的藥理方式可經由兩條主要途徑來達成：(1)直接藉由NO的增加而直接活化鳥苷酸環化酶；及/或(2)經由PDE5抑制劑而降低環磷酸鳥苷水解，此已被認為是治療糖尿病患內皮功能障礙的一個重要工具。

磷酸二酯酶5(PDE5)可作用於心臟、肺臟、胰臟、陰莖等組織，且對環磷酸鳥苷(cGMP)呈現特定的水解作用。在脂肪細胞，環磷酸鳥苷經由活化cGMP依賴的蛋白激酶G(cGMP-dependent protein kinase G,PKG)調控關鍵性功能。因此，保持其生理健康至關重要，以避免局部及全身疾病。文獻的實驗結果顯示，一氧化氮(NO)/環-3',5'-磷酸鳥嘌呤(cGMP)/蛋白激酶G(PKG)訊號轉導途徑在脂肪細胞生物學的重要性。磷酸二酯酶5(PDE5)擔負著cGMP失活，而其抑制劑更可加強脂肪組織的平衡。

例如3-異丁基-1-甲基黃嘌呤、咖啡因、茶鹼和可可豆鹼等黃嘌呤衍生物為已知非選擇性磷酸二酯酶(PDE)異構體。最近一些PDE5抑制劑被證實可影響脂肪的分化和芳香化酶的功能。作為本發明活性劑，具療效表現力的PDE5抑制劑可根據其結構的相似性包括下列兩種類型：第一類為哌嗪類似物和哌嗪基複合類似物，第二類為含雜環衍生物(例如，吡咯烷基、嘌呤、喹唑啉、吡啶基)及含氮雜環的稠合衍生物(例如，嘧啶并嘧啶(pyrimido-pyrimidin)、吡嗪并吡啶吲哚(pyrazino-pyrido-indole)、三唑嘧啶(triazolo-pyrimidin)和糖苷類衍生物)。

在具體的實施例中，本文用語「第二類PDE5抑制劑」包括但並非限於阿伐那非(Avanafil)、Benzamidenafil、Dasantafil、雙嘧達莫(Dipyridamole)、E4021、淫羊藿苷(Icariin)、Rolipram、Piclamilast、他達拉非(Tadalafil)、苯氮嘌呤酮(Zaprinast)的組成。阿伐那非(Avanafil)化合物的化學名為4-[(3-氯基-4-甲氧基苯)氨基]-2-[(2S)-2-(羥甲基)-1-吡咯烷基]-N-(2-嘧啶基甲基)-5-嘧啶甲醯胺(4-[(3-chloro-4-methoxyphenyl)amino]-2-[(2S)-2-(hydroxymethyl)-1-pyrrolidinyl]-N-(2-pyrimidinyl-methyl)-5-pyrimidincarboxamide)。Benzamidenafil化合物的化學名為N-(3,4-二甲氧基苄基)-2-((2-羥基-1-甲基乙基)氨基)-5-硝基苯甲醯胺(N-(3,4-dimethoxybenzyl)-2-((2-hydroxy-1-methylethyl)amino)-5-nitrobenzamide)。Dasantafil化合物的化學名為7-[(3-溴基-4-甲氧基苯)甲基]-1-乙基-8-[(2-羥基環戊基)氨基]-3-(2-羥乙基)嘌呤-2,6-二酮(7-[(3-bromo-4-methoxyphenyl)methyl]-1-ethyl-8-[(2-hydroxycyclopentyl)amino]-3-(2-hydroxyethyl)purine-2,6-dione)。雙嘧達莫(Dipyridamole)化合物的化學名為2-[[2-[雙(2-羥基乙基)氨基]-4,8-二(哌啶-1-基)嘧啶并[5,4-d]嘧啶-6-基]-(2-羥基乙基)氨基]乙醇(2-[[2-[bis(2-hydroxyethyl)amino]-4,8-di(piperidin-1-yl)pyrimido[5,4-d]pyrimidin-6-yl]-(2-hydroxyethyl)amino]ethanol)。E4021化合物的化學名為1-[4-(1,3-苯并二氧戊環-5-甲基)氨基)-6-氯喹唑啉-2-基]哌啶-4-甲酸鈉(sodium；1-[4-(1,3-benzodioxol-5-ylmethylamino)-6- chloroquinazolin-2-yl]piperidine-4-carboxylate)。淫羊藿苷(Icariin)化合物的化學名為3,5,7-三羥基-4'-甲氧基-8-異戊烯基黃酮-3-0-α-L-吡喃鼠李糖-7-0-β-D-吡喃葡萄糖苷(3,5,7-three hydroxy-4'-methoxy-8-prenyl flavonoids-3-0-α-L-topiramate Nom rhamnose-7-0-D-gluco-pyranoside)。Rolipram化合物的化學名為4-[3-(環戊基氧基)-4-甲氧基苯基]-2-吡咯烷酮(4-[3-(Cyclopentyloxy)-4-methoxyphenyl]-2-pyrrolidinone)。Piclamilast化合物的化學名為3-(環戊基氧基)-N-(3,5-二氯吡啶-4-基)-4-甲氧基苯甲醯胺(3-(cyclopentyloxy)-N-(3,5-dichloro-pyridin-4-yl)-4-methoxybenzamide)。他達拉非(Tadalafil)化合物的化學名為(6R-反式)-6-(1,3-苯並二氧戊環-5-基)-2-甲基-2,3,6,7,12,12a-六氫吡嗪並[1',2'-1,6]-吡啶並[3,4-b]引哚-1,4-二酮((6R-trans)-6-(1,3-benzo-dioxol-5-yl)-2-methyl-2,3,6,7,12,12a-hexa-hydropyr azino[1',2'：1,6]pyrido[3,4-b]indole-1,4-dione)。苯氮嘌呤酮(zaprinast)化合物的化學名為5-(2-丙氧基苯)-2,3-二氫三唑[4,5-d]嘧啶-7-酮(5-(2-propoxyphenyl)-2,3-dihydrotriazolo[4,5-d]pyrimidin-7-one)。

根據本發明的一個構想，哌嗪基類似物和哌嗪基複合類似物為第一類PDE5抑制劑，哌嗪基類似物和哌嗪基複合類似物均可分別再區分為兩次類，其中一次類為哌嗪基類似物(Piperazinyl Analogue)，包括KMUPs衍生物和西地那非(Sildenafil)類似物，而另一次類為哌嗪基複合類似物(Piperazinyl Complex Analogue)，包括KMUPs衍生物複合物和西地那非類似物複合物。KMUPs衍生物複合物如通式KMUPs-RX(I)或是KMUPs-RX-RX(II)所示，西地那非類似物複合物也如通式西地那非類似物-RX(IV,V)所示。而RX為羧酸基團提供者，與KMUPs衍生物(III)或是西地那非類似物(VI)的活性劑相結合，可形成KMUPs衍生物複合物或西地那非類似物複合物。

在較佳的實施例，結構式I和結構式II皆可代表KMUPs衍生物複合物，其中結合一分子的RX基團形成的單量體KMUPs-RX複合物(式I)，而雙量體KMUPs-RX-RX結構(式II)為結合兩分子的RX基團。KMUPs衍生物(式III)化學結構的R2和R4取代基為各自獨立地選自C1-C5烷氧基、氫原子、硝基和鹵素原子所組成的群組。上述鹵素是指氟原子、氯原子、溴原子和碘原子。

用語「KMUPs衍生物」是指選自KMUP-1、KMUP-2、KMUP-3、KMUP-4及其藥學可接受的鹽類所組成的群組。在較佳的實施例中，更包括至少一個藥學上可接受的載體和輔料的藥物組合物。

本發明所揭示較佳的KMUPs衍生物，其中KMUP-1的R2為氯原子且R4為氫原子，其一般化學名為7-[2-[4-(2-氯苯)哌嗪基]乙基]-1,3-二甲基黃嘌呤(7-[2-[4-(2-chlorophenyl)piperazinyl]ethyl]-1,3-dimethyl xanthine)。KMUP-2的一般化學名為7-[2-[4-(2-甲氧基苯基)哌嗪基]乙基]-1,3-二甲基黃嘌呤(7-[2-[4-(2-methoxyphenyl)piperazinyl]ethyl]-1,3-dimethyl xanthine)，其中R2為甲氧基且R4為氫原子基團。KMUP-3的一般化學名為7-[2-[4-(4-硝基苯基)哌嗪基]乙基]-1,3-二甲基黃嘌呤(7-[2-[4-(4-nitrophenyl)piperazinyl]ethyl]-1,3-dimethyl xanthine)，其中R2為氫原子且R4為硝基基團。KMUP-4的R2為硝基且R4為氫原子基團，其一般化學名為7-[2-[4-(2-硝基苯基)哌嗪基]乙基]-1,3-二甲基黃嘌呤(7-[2-[4-(2-nitrophenyl)piperazinyl]ethyl]-1,3-dimethyl xanthine)。

於具體的實施例中，本文用語「RX基團」是指選自D-抗壞血酸(D-ascorbic acid)、L-抗壞血酸(L-ascorbic acid)、DL-抗壞血酸(DL-ascorbic acid)、油酸(oleic acid)、磷酸(phosphoric acid)、檸檬酸(citric acid)、菸鹼酸(nicotinic acid)、羧甲基纖維素鈉(sodium carboxyl methylcellulose,sodium CMC)、玻尿酸(hyaluronic acid)、聚丙烯酸(polyacrylic acid,PAA)、聚甲基丙烯酸甲酯(polymethylmethacrylates,PMMA)、丙烯酸樹脂(Eudragit)、葡聚糖硫酸(dextran sulfate)、硫酸乙醯肝素(heparan sulfate)、聚乳酸或聚乳酸酯(polylactide,PLA)、聚乳酸鈉、聚羥基磺酸鈉(polyglycolic acid sodium,PGCA sodium)、聚-γ-聚麩胺酸鈉(sodium γ-polyglutamate,poly-γ-polyglutamic acid sodium,γ-PGA sodium)、γ-聚麩胺酸、海藻酸鈉-聚-1-離胺酸-海藻酸鈉(alginate-poly-1-lysine-alginate,APA)和聚γ-聚麩胺酸衍生物(poly-γ-polyglutamic acid derivative)的群組其中之一。

在具體的實施例中，KMUP-1、KMUP-2、KMUP-3和KMUP-4 的藥學上可接受的鹽類包括但非限於檸檬酸酸、菸鹼酸和鹽酸。另一方面，除已發現的西地那非類似物化合物，該類似物的鹽類也不限於檸檬酸鹽、二鈉鹽和鹽酸鹽。

根據本發明的一個構想，用語「西地那非類似物化合物」具有雜環化學結構。西地那非類似物的化學結構如通式VI所示，其RB取代基包括但非限於被取代的雜環基團，例如吡唑并嘧啶(pyrazolopyrimidinone)基團、吡嗪并吡啶吲哚(pyrazinopyridoindole)基團、咪唑三嗪酮(imidazotriazinone)基團、吡咯啶(pyrrolidin)基團。雜環主鏈上的六元環通常有一個氧原子或硫原子與環的碳形成雙鍵連接、氧基-噻唑-N-甲基亞硝胺(oxyl-thiazol-N-methylnitrous amide)的氧原子與環的碳形成單鍵連接。RS取代基依據結構式分別結合磺醯苯基團或乙醯苯基團。R3取代基包括烷基，而R7取代基包括未取代與被取代的六氫吡啶(piperidine)基團、被取代吡咯烷(pyrrolidin)基團、氫原子、N-alkyl含氮烷基、烷氧基、醇基。

西地那非類似物化合物已獲美國食品和藥物管理局(美國FDA)、中國、歐洲、澳大利亞、英國、加拿大以及日本等製藥、醫療和健康相關的政府機構所核准，可用於人類治療藥物。

許多西地那非類似物已被開發。因此，用語「西地那非類似物」包括但非限於下列化合物：Acetidenafil、Aildenafil、Avanafil、Benzyl-Sildenafil、Carbodenafil、Cinnamyldenafil、Cyclopenylnafil、Descarbon-Sildenafil、N-Desmethyl-Sildenafil、Desmethyl Carbodenafil、Dimethyl-Acetidenafil、Dioxy-Acetidenafil、Dithiodesmethyl Carbodenafil、Gendenafil、Gisadenafil、Hydroxy-Acetidenafil、Hydroxy Chlorodenafil、Hydroxyhomo-Sildenafil、Hydroxythiohomo-Sildenafil、Homo-Sildenafil、Isopiperazinonafil、Lodenafil Carbonate、Mirodenafil、Nitrodenafil、Nor-Acetidenafil、Normeo-Sildenafil、Piperildino-Acetidenafil、Piperazinonafil、Propoxyphentyl-Aildenafil、Propoxyphentyl-Sildenafil、SulfohomoSildenafil、Propoxyphentylthio-Aildenafil、ThioAildenafil、ThioSildenafil、Udenafil及Vardenafil。此處揭示西地那非類似物包括但非限於不含鹽類的化合物、或含藥學上可接受的鹽類、化合物的溶劑、或化合物的前藥。

在較佳的實施例中，本文所敘述用語「西地那非類似物」包括但並非限於Acetidenafil、Avanafil、DesmethylSildenafil、Gisadenafil、HomoSildenafil、HydroxyhomoSildenafil、Mirodenafil、Lodenafil Carbonate、西地那非(Sildenafil)、Udenafil和伐地那非(Vardenafil)的組成化合物。Acetidenafil化合物的化學名為5-{2-乙氧基-5-[2-(4-乙基哌嗪-1-基)-乙醯基]苯基}-1-甲基-3-丙基-4氫-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(5-{2-ethoxy-5-[2-(4-ethylpiperazin-1-yl)acetyl]phenyl}-1-methyl-3-propyl-4H-pyrazolo[4,3-d]pyrimidin-7-one)。Avanafil化合物的化學名為4-[(3-氯基-4-甲氧基苯基)甲基胺基]-2-[(2S)-2-(羥甲基)吡咯-1-基]-N-(2-嘧啶-2-基甲基)-5-嘧啶甲醯胺(4-[(3-Chloro-4-methoxyphenyl)methylamino]-2-[(2S)-2-(hydroxymethyl)pyrrolidin-1-yl]-N-(pyrimidin-2-ylmethyl)pyrimidine-5-carbox amide)。Desmethylsildenafil化合物的化學名為5-[2-乙氧基-5-哌啶-1-基磺醯苯基]-1-甲基-3-丙基-4氫-吡唑并[4,3d]嘧啶-7-酮(5-[2-ethoxy-5-piperazin-1-ylsulfonylphenyl]-1-methyl-3-propyl-4H-pyrazolo[4,3-d]pyrimidin-7-one)。Gisadenafil化合物的化學名為5-[2-乙氧基-5-(4-乙基哌啶-1-基)磺醯吡啶-3-基]-3-乙基-2-(2-甲氧基乙基)-4氫-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(5-[2-Ethoxy-5-(4-ethylpiperazin-1-yl)sulfonyl-pyridin-3-yl]-3-ethyl-2-(2-methoxyethyl)-4H-pyrazolo[4,3-d]pyrimidin-7-one)。HomoSildenafil化合物的化學名為5-[2-乙氧基-5-(4-乙基哌嗪-1基)磺醯苯基]-3-丙基-4H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(5-[2-ethoxy-5-(4-ethylpiperazin-1-yl)sulfonylphenyl]-1-methyl-3-propyl-4H-pyrazolo[4,3-d]pyrimidin-7-one)。Hydroxyhomo-Sildenafil化合物的化學名為5-[2-乙氧基-5-[4-(2-羥基乙基)哌啶-1-基]磺醯苯基]-1-甲基-3-丙基-4氫-吡唑并[4,3d]嘧啶-7-酮(5-[2-ethoxy-5-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]sulfonylphenyl]-1-methyl-3-propyl-4H-pyrazolo[4,3-d]pyrimidin-7-one)。Mirodenafil化合物的化學名為5-乙基-2-(5-{[4-(2-羥乙基)哌啶-1-基]磺醯)-2-丙氧基苯基]-7-丙基-1氫-吡唑并[3,2-d]嘧啶-4-酮(5-Ethyl-2-{5-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]sulfonyl-2-propoxyphenyl}-7-propyl-1H-pyrrolo[3,2-d]pyrimidin-4-one)。Lodenafil Carbonate化合物的化學名為雙[2-[4-[4-乙氧基-3-(1-甲基-7-氧基-3-丙基-4氫-吡唑并[4,3-d]嘧啶-5-基)苯基]磺醯]-1-基]乙基]碳酸酯(bis[2-[4-[4-ethoxy-3-(1-methyl-7-oxo-3-propyl-4H-pyrazolo[4,3-d]pyrimidin-5-yl)phenyl]sulfonyl-piperazin-1-yl]ethyl]Carbonate)。西地那非化合物的化學名為5-[2-乙氧基-5-(4-甲基哌啶-1-基-磺醯)苯基]-1-甲基-3-丙基-4氫-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(5-[2-ethoxy-5-(4-methylpiperazin-1-yl)sulphonylphenyl]-1-methyl-3-propyl-4H-pyrazolo[4,3-d]pyrimidin-7-one)或是1-[3-(4,7-二氫-1-甲基-7-氧基-3-丙基-1氫-吡唑并[4,3-d]嘧啶-5-基)-4-乙氧基苯基]磺醯]-4-甲基哌啶(1-[3-(4,7-dihydro-1-methyl-7-oxo-3-propyl-1H-pyrazolo[4,3-d]pyrimidin-5-yl)-4-ethoxyphenyl]sulfonyl]-4-methylpiperazine)。Udenafil化合物的化學名為3-(1-甲基-7-氧基-3-丙基-4氫-吡唑并[4,3-d]嘧啶-5-基)-N-[2-(1-甲基吡咯烷-2-基)乙基]-4-丙氧基-苯磺醯胺(3-(1-methyl-7-oxo-3-propyl-4H-pyrazolo[4,3-d]pyrimidine-5-yl)-N-[2-(1-methylpyrollidin-2-yl)ethyl]-4-propoxybenzene sulfonamide)。Vardenafil化合物的化學名為2-[2-乙氧基-5-(4-乙基哌啶-1-基)磺醯苯基]-5-甲基-7-丙基-1H-咪唑并[5,1-f][1,2,4]三唑-4-酮(2-[2-ethoxy-5-(4-ethylpiperazin-1-yl)sulfonylphenyl]-5-methyl-7-propyl-1H-imidazo[5,1-f][1,2,4]triazin-4-one)。

本文用語「他汀類類似物(Statin Analogue)」是指市售的他汀類衍生藥物。在較佳的實施例中，他汀類類似物包括但並不僅限於阿伐他汀(Atorvastatin)、西立伐他汀(Cerivastatin)、氟伐他汀(Fluvastatin)、洛伐他汀(Lovastatin)、美伐他汀(Mevastatin)、普伐他汀(Pravastatin)、羅伐他汀(Rosuvastatin)、辛伐他汀(Simvastatin)和普瑪他汀酸(Pravastatin acid)及其藥學上可接受的鹽類。

根據本發明的另一個構想，取決於臨床應用及效果的需求，本發明揭示適於投予組合物方法的構成藥物，包含磷酸二酯酶類型5抑制劑及他汀類類似物，其投予包括選自口服給藥、靜脈注射、皮下注射、腹腔注射、肌內注射和舌下給藥其中之一。

根據本發明的另一個構想，揭示足以治療如人類、山羊(goat)、羔羊(lamb)、豬(pig)、牛(cow)、雞(chicken)、鴨(duck)等溫血動物脂質代謝紊亂的方法，該治療必需投予上述動物足供療效用量的活性劑，其選自磷酸二酯酶類型5抑制劑與Statin類似物所組成的藥物組合物，或該化合物的藥學可接受的鹽類、溶劑化物、溶劑、或鹽類或前藥。

本文用語「載體」是指賦形劑，其與活性劑配方製備成組合物。無菌注射組合物可溶解或懸浮於無毒性的靜脈注射稀釋劑或溶劑，例如1,3-丁二醇。其他可接受的載體如甘露醇或水。此外，固定油(fixing oil)、合成的甘油酯或雙甘油酯(di-glycerol ester)均為常用溶劑。脂肪酸如油酸、橄欖油、或蓖麻油和丙三酯衍生物等，尤其是乙醯化類型(oxy-acetylated type)，可製備為注射油和天然的藥學上可接受油。此等油溶液或懸浮液可包含長鏈醇類稀釋劑(alcohol diluent)或分散劑、羧甲基纖維素或類似的分散劑。其他載體如Tween、Spans或其他類似的乳液或藥學上可接受的固體、液體或其他生物可用的促進劑均常見於藥學工業的配方。

關於一般口服的製劑，載體顆粒用於改善藥物顆粒的流動性以及劑量的精確度和減少劑量變異性，易於觀察藥物配方而更利於生產處理的安定性。口服投予組合物採用任何口服可接受的配方，包括膠囊、錠劑、丸劑、乳液、懸浮分散劑、溶劑。以錠劑為例，載體可為乳糖、玉米澱粉、潤滑劑和鎂硬脂酸鹽等基本的添加劑。而膠囊使用的稀釋劑包括乳糖、乾燥的玉米澱粉。製備懸浮液或乳狀液配方，其活性成分懸浮或溶解在與乳液或懸浮劑組合的油性界面，並根據需要添加適量的甜味劑、香料或色素。

本發明的化合物也可製備為皮下注射、肌肉注射、或關節內、顱內、關節腔內流體和脊髓內注射、動脈注射、胸骨注射、疤痕內注射(intra-lesion injection)或其他適當的注射投藥。

在本發明的適當實施例中，採用組合治療(combination therapy)以治療及/或防止脂肪代謝紊亂的疾病。本發明內文將詳述治療及/或防止所需組合物的組合和投予的方式。取決於所欲的目標治療，選自第一類及第二類磷酸二酯酶類型5抑制劑其中之一者為活性劑可與Statin類似物組合治療方式投予以發揮療效。於其他實施例中，組合治療也包括投予不同劑型的組合物，該組合物包含活性劑及其藥學賦形劑，其選自磷酸二酯酶類型5抑制劑，和Statin類似物以及其藥學賦形劑，本質上投予的時間相同，例如同時投予，或者不同時間的相繼地依序投予。在某些實施例中，該組合治療的投予採取在療程的不同時段以單一組合製劑但各自分開。或者，以同時、交錯和交替地投予藥物製劑治療。

在適當的實施例中，選自第一類及第二類磷酸二酯酶類型5抑制劑其中之一與活性劑Statin類似物其中之一，於單一配方可採用如片劑或膠囊的口服劑型組合物投予病患，或各自分開的口服劑型組合物。將不同的活性劑製備成各自分開的口服劑型組合物則可於同一時間投予。在組合治療的適當實施例中，可採用適宜的投予途徑包括口服(包括頰、舌下含錠)、直腸、鼻腔、呼吸道吸入(例如，液霧、乾粉或霧化吸入的配方)、陰道和注射(包括皮下、肌肉注射、靜脈注射和皮下)，局部給藥包括但並不限於噴劑、霧、氣溶膠、液劑、乳液、凝膠、面霜、藥膏、糊劑、油膏、乳劑(emulsion)和懸浮液，以口服或注射為佳。較佳的投予途徑隨著條件與年齡而變化。

也可採取單獨投予活性劑原料，較佳為藥物製劑劑型的一部分所組成。在本發明的製劑中，如上所述，包括兩種主成分以及一個或多個可接受的載體。載體必須是「藥學上可接受的」，其意義是與其他成分的配方具備相容性，且並無和不利於病患。

將藥用活性劑以任何方式投予至少其中一部分，較佳約1重量%至約100重量%，以到達有機體的血液。因此，活性劑可經由消化道或其他途徑投予，例如，經由靜脈滴注、皮下注射、肌內注射、吸入或經皮吸收等。

本發明揭示的藥物組合物，其活性劑為磷酸二酯酶類型5抑制劑與Statin類似物，具有增加環磷酸鳥苷(guanosine 3',5'-cyclic monophosphate,cGMP)進行脂肪生成(adipogenesis)或是脂肪分解(lipoysis)作用，而參與磷酸化激素敏感性脂肪酶/脂肪三酸甘油酯脂肪酶(phosphorylated hormone-sensitive lipase/adipose triglyceride lipase,p-HSL/ATGL)呈現治療脂質代謝紊亂的作用。

本發明所揭示的藥物組合物包含選自第一類或第二類磷酸二酯酶類型5抑制劑至少其中之一，作為活性劑，採取組合治療方式投予，以及Statin類似物的活性劑，能有效地抑制組織的油脂累積，減少脂肪性肝炎，該藥物組合物與抑制脂質代謝紊亂有關。

脂肪組織為一種內分泌器官，負責釋放多種具有最多變化代謝功能的細胞激素。代謝是生物體將蛋白質、碳水化合物和脂肪等養分經由消化作用轉換為能量的過程。生物體將此等能量累積在肝臟、肌肉和身體脂肪。生物體的細胞利用該反應過程提供的能量於生理過程和合成新組織的材質。

白色脂肪細胞(white adipocytes)因應運動的高代謝需求或飲食限制造成的負能量平衡(negative energy balance)將球形細胞加以特化和分化，其儲存三酸甘油酯的容量可獲得增加以利後續脂肪酸的釋出。與白色脂肪細胞的內分泌角色類似，棕色脂肪組織也合成及分泌多種因子。

胰島素調節使脂肪分解的失活，與脂肪三酸甘油酯脂肪酶(adipose triglyceride lipase,ATGL)轉錄下調和激素敏感脂肪酶(hormone-sensitive lipase,HSL)表現之間呈現著相關性。此外，蛋白激酶B(protein kinase B,PKB/Akt)磷酸化及各種磷酸二酯酶(PDE)異構體的活化，傳遞的胰島素訊號致使腺苷-3',5'-環化單磷酸(cyclic adenosine monophosphate,cAMP)催化PDE水解，因而造成被活化的蛋白激酶A(PKA)的減量。

在脂肪組織、肝臟、骨骼肌、腸和胰臟的脂肪酸代謝干擾在胰島素抗性、葡萄糖代謝異常以及第2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)的發展上扮演重要角色。在內分泌功能異常的過程中，改變血脂的儲存和轉化特性可在胰島素抗性及代謝紊亂的發展呈現著極具大的影響作用。因而代謝性疾病包括所有擾亂正常性新陳代謝過程的疾病或障礙。具體而言，代謝紊亂包括第一型或第二型糖尿病，和例如肥胖、糖耐量受損、高胰島素血症、血脂異常和胰島素抗性等相關疾病。

近年來，以高脂飼料誘發肥胖小鼠的實驗顯示出脂肪細胞和肝臟內巨噬細胞可經由減少巨噬細胞炎性蛋白-1α、M1/M2巨噬細胞的極化與遷移同時誘導，減輕肥胖引起的炎症與胰島素增敏作用。

另外從人類和動物的研究資料也顯示，由巨噬細胞產生的細胞激素及趨化激素可生成局部與全身炎症反應，且此狀況導致肝臟、脂肪和骨骼肌組織呈現出胰島素抗性和胰島β細胞功能障礙。巨噬細胞經由細胞與細胞間相互作用和釋放的促炎性細胞激素、趨化激素和蛋白酶誘導炎症細胞、細胞凋亡、血管生成和基質蛋白重塑，促使第二型糖尿病患者罹患併發症。

該等研究足以說明，肥胖影響著白色脂肪組織的慢性和間歇性缺氧，以及基因表現和細胞新陳代謝，在脂肪組織的慢性炎症(特別對於肥胖相關胰島素抗性)的發展擔負重要的作用。

G蛋白偶聯受體(G-protein-coupled receptors,GPCRs)為頗常見具有潛在的藥理作用，然而尚無G蛋白偶聯受體拮抗劑可抑制脂肪組織的脂肪形成(adipogenesis)的報告。主要激酶(包括絲裂原活化蛋白激酶 (mitogen-activated protein kinase,MAPK)、細胞外訊號調節激酶(extracellular signal-regulated protein kinases,ERK)和絲裂原活化蛋白激酶激酶1(mitogen-activated protein kinase 1,MEK1))的G蛋白偶聯受體調控的活化作用很可能對於確定G蛋白偶聯受體拮抗劑(GPCRs antagonist)針對脂肪的分解與形成變得重要。

他汀類為降低血漿低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)和高敏度C-反應蛋白(high-sensitivity c-reactive protein)含量頗為理想的藥物。菸鹼酸作為降血脂(hypolipidemic)藥物，其可經由G-蛋白偶聯受體調控在脂肪組織的脂肪分解(lipolysis)。然而最近的預後試驗結果顯示在主要心血管高危險患者減少血脂，菸鹼酸對於他汀類藥物並未能增加治療的效果。

擁有G蛋白偶聯受體拮抗劑活性的KMUP-1於長期期間投予，其作用於肝細胞/脂肪細胞的脂解，可防止肥胖生物體進行慢性過度刺激兒茶酚胺的現象。相對於一般的G蛋白偶聯受體激動劑，無法經由刺激中樞神經系統而降低食欲呈現抑制肥胖效果。KMUP-1可經由抑制磷酸二酯酶(PDE)增加PKA/PKG/HSL刺激脂肪細胞/肝細胞。

游離脂肪酸含量升高，部分與胰島素減少抑制脂肪組織的脂肪分解有關，導致更多的游離脂肪酸傳送到肝臟。在肝臟合成多餘的三酸甘油酯是經由脂肪酸供應來驅動，且肝脂肪過量累積則加劇了肝脂肪酸因氧化而受損，繼發胰島素抗性。

在糖尿病前期或顯性糖尿病時，當血糖含量升高更促使三酸甘油酯合成。此外，通常發生在胰島素抗性的受損極低密度脂蛋白(VLDL)分泌更促使肝脂肪堆積。胰島素抗性不僅是肥胖和糖尿病的因素，即使在正葡萄糖胰島素鉗夾試驗(euglycemic insulin clamp study)注意到的無糖尿病的非肥胖個體，胰島素抗性也是非酒精性脂肪肝疾病的潛在機制。

經由高脂肪食品(high-fat diet,HFD)可造成過度肥胖(hyperadiposity)的肝臟脂肪變性(hepatic steaotosis)，該類肝臟組織的過度肥胖包括在肝臟因為炎症反應而併發脂質蓄積(lipid accumulation)，以及導致更嚴重的肝臟損傷。經由長期食用高脂肪食品而誘發活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)，通常生物體也伴隨著呈現氧化應激狀態，而併發造成脂肪性肝炎(steatohepatitis)。HFD所造成的肥胖則由於活性氧簇而呈現氧化應激狀態，間接地可增加肝細胞的促分裂素原活化蛋白激酶(MAPK)和細胞外訊號調節激酶(ERK)的表現。本發明發現被巨噬細胞包圍的脂肪細胞能抑制活性氧簇、抑制炎症的腫瘤壞死因子(tumor necrosis factor alpha,TNF-α)和基質金屬蛋白酶-9(matrix metallopeptidase,MMP-9)。

代謝綜合症表示群集相關的代謝異常，包括中心性肥胖、高血壓、血脂異常、高血糖、胰島素抗性，其中中心性肥胖和胰島素抗性特別是公認的誘發因素。這些代謝紊亂對於心血管疾病、第二型糖尿病顯示為明顯的危險因素，被公認為主要的臨床結局。

身體脂肪儲存隨熱量過剩和逐步肥胖而擴大，脂質代謝的改變、脂肪組織的發炎反應以及異位性脂肪的沉積導致胰島素抗性，顯著地僅次於胰島素訊號路徑的後受體異常。

肥胖的脂肪組織發炎反應的特性受典型活化的巨噬細胞(classically activated macrophages,CAM)、M1/M2開關(M1/M2 switching)所調控；大多數HFD誘導肝臟炎症可經由巨噬細胞的免疫染色(immunostaining)而呈現。

提高高密度脂蛋白(high density lipoprotein,HDL)和降低低密度脂蛋白(low-density of lipoprotein,LDL)含量的療法被認為可運用於內皮型一氧化氮合酶(eNOS)的活化、增加過氧化物酶體增殖物活化受體 γ(peroxisome proliferator activated receptor γ,PPARγ)以及抑制清道夫受體B族1型(scavenger receptor class B type 1,SR-B1)影響粥樣含量。

肝細胞經由甲羥戊酸(mevalonate)生合成異戊二烯化合物的法尼酯焦磷酸(farnesyl pyrophosphate,FPP)和香葉基香葉基焦磷酸(geranylgeranyl pyrophosphate,GGPP)，而後形成膽固醇的過程，Statin類藥物可競爭性地抑制3-羥基-3-甲基戊二醯輔酶A還原酶(3-hydroxy-3-methylglutaryl-CoA reductase,HMG CoA reductase,HMGR)而減少甲羥戊酸的生成進而影響膽固醇產量。香葉基香葉基焦磷酸的衍生活化RhoA/ROCK II，後續介入PPARγ參與高密度脂蛋白(HDL)的增加。人類轉運體亞族成員之一的ATP結合盒轉運體(ATP-binding cassette transporter,ABCA1)與載脂蛋白A-I(apolipoprotein A-I)參與著膽固醇流出的調控，此等物質影響著高密度脂蛋白的主要蛋白質成分。

細胞內膽固醇能否穩態存在，部分受PPARs和肝X受體(Liver X receptor,LXRα)所影響。他汀類藥物導致RhoA/ROCK的失活有助於激發LXRα/PPARs以及呈現多效性作用。異戊二烯化合物中間體能影響PPARs和LXRα的活化。異戊二烯化合物的活化產生FPP和GGPP，其抑制著ABCA1直接經由LXRα的拮抗作用和四異戊二烯化(geranylgeranylation)的激活而間接經由RhoA。在脂肪儲存方面其PPARγ的表現伴隨著炎症的生成。

食物攝取影響著體重增加量、血清內脂肪的狀態

如表1所示，以標準飼料(standard diet,STD)或是高脂肪飼料(high-fat diet,HFD)餵飼8週的小鼠的體重增加量(weight gain)。為期8 週投予高脂肪飼料，該組小鼠體重的增加量與標準飼料相比較呈現顯著地增加現象(p<0.05)。每天經口投予(p.o.)2.5、5毫克/公斤的KMUP-1或是5毫克/公斤的西地那非(Sildenafil)，其體重的增加量與高脂肪飼料組相比較均呈現減少現象(p<0.05)。而西地那非降低該體重的增加量以及三酸甘油酯殘留含量與KMUP-1相比較分別呈現較少或是較多的現象。

如表2所示，餵飼高脂肪飼料組血清的三酸甘油酯(triglyceride,TG)、總膽固醇(total cholesterol)、低密度脂蛋白膽固醇(low density lipoprotein cholesterol,LDL)、胰島素，與標準飼料組相比較呈現顯著增加現象。而高脂肪飼料誘發高膽固醇血症(hypercholesterolemia)，經投予KMUP-1、KMUP-1-DL-ascorbic acid+Simva或是KMUP-1-CMC+Simva可顯著地改善。尤其，胰島素改善較顯著。另外，高密度脂蛋白膽固醇(high-density lipoprotein cholesterol,HDL cholesterol)含量，經投予KMUP-1、KMUP-1-DL-ascorbic acid+Simva或是KMUP-1-CMC+Simva呈現顯著增加。餵飼高脂肪飼料8週的小鼠，於期滿到第14週，其飼料攝取量下降，或許尚有些未知因素影響飼料的攝取。

肝臟的重量與整體形態的改變

讓高脂肪飼料小鼠組經由飲用方式投予200毫升含有2.5毫克KMUP-1鹽酸鹽的液態藥物，不論於預防組或是治療組，均可減少其因餵食高脂肪飼料而增加體重的現象。餵食高脂肪飼料小鼠，肝臟表面可發現大量的白色脂肪組織。於預防組可顯著地減少脂肪組織，與治療組的肝臟相比較呈現顯著減少現象。

高脂肪飼料誘發肝臟內SR-B1的表現

餵飼高脂肪飼料(HFD)小鼠，飲用KMUP-1液態藥物，如表3所示，可發現能抑制HFD誘發肝臟清道夫受體B族1型(scavenger receptor class B type 1,SR-B1)的表現。不論於預防組或是治療組，均可促進蛋白激酶A/蛋白激酶G(PKA/PKG)的表現。

肝臟組織的蘇木精-伊紅染色(Hematoxylin and eosin(H & E)stain)

從餵食14週高脂肪飼料小鼠所分離的發炎肝臟整體組織與餵食高脂肪飼料以及KMUP-1預防組小鼠的紅棕色肝臟組織相比較，呈現大量的白色脂肪組織。形態於預防組可顯著地減少脂肪組織，與治療組的肝臟相比較呈現顯著減少現象。

蘇木精-伊紅(Hematoxylin and eosin,H & E)染色的肝臟切片細胞，不論是以高脂肪飼料餵飼的治療組或預防組，其小鼠肝臟運用有機溶劑清洗可呈現大空泡的脂肪球(macrovesicular fat globules)。餵食高脂肪飼料的肥胖小鼠從第8週起投予2.5毫克濃度KMUP-1到第14週共6週治療組，可發現大空泡的脂肪球及玻璃樣透明體(Mallory's hyaline bodies)。而以2.5毫克/千克濃度投予KMUP-1預處理6週/14週，其脂肪球減少，玻璃樣透明體幾乎消失。

以IHC染色的脂肪性肝炎

餵食高脂肪飼料小鼠的肝臟組織切片，對照組的激素敏感性脂肪酶/磷酸化激素敏感性脂肪酶(HSL/p-HSL)呈現深棕色，顯示包含大量的發炎性蛋白質或酶，如發炎性基質金屬蛋白酶-9/腫瘤壞死因子-α，失活的激素敏感性脂肪酶/p-HSL/脂肪三酸甘油酯脂肪酶(ATGL)，白色油滴的肥胖過度以及肥胖肝臟生成的活性氧簇(ROS)產物。

腫瘤壞死因子-α的深棕色抗體反應，於預防組或治療組呈現不一樣的遮蔽現象，其中油滴幾乎消失，然而反應的色澤並無大幅度地減少，顯示抗發炎作用不彰。基質金屬蛋白酶-9(Matrix metallopeptidase 9,MMP-9)的深棕色抗體反應，於治療組也呈現遮蔽現象，油滴於治療組也幾乎消失。如表4所示，油滴直徑變化和數目的分佈於預防組或治療組呈現大幅度地減少。於陰性對照組中，投予KMUP-1的預防組或治療組，即使不再增加抗體，餵食高脂肪飼料小鼠的肝臟組織切片內油滴幾乎消失。

在預防組及治療組中，減少的白色油滴表示因為KMUP-1活化p-HSL產生脂肪分解，但是並非完全為HSL所造成脂解的結果。投予KMUP-1的治療組或預防組，部分可增加HSL，也可經由活化ATGL同時改變一些p-HSL現象。如表5所示，HSL同時改變油滴數量和直徑。抗體反應伴隨著多數油滴數量的改變，經染色的p-HSL在預防組比治療組更顯著，表明KMUP-1抑制脂肪性肝炎的主要角色p-HSL比HSL還突出。

同樣地抗體反應和油滴數量數變化在經染色的ATGL，顯示KMUP-1誘發脂解抑制脂肪性肝炎，在預防組與治療組相比較，ATGL為重要角色。

免疫組織化學染色脂肪肝炎的2種巨噬細胞

以F4/80和CD11c染料進行典型活化的巨噬細胞(M1)的免疫組織化學染色，以及以CD206和CD209a染料進行另一種活化的巨噬細胞(M2)的免疫組織化學染色。其中CD209a染色是極敏感的抗體反應。在餵食高脂肪飼料小鼠的肝臟組織可發現大量的白色油滴，顯示為導致脂肪性肝炎過度肥胖(hyperadiposity)。這些白色油滴受背景顏色的干擾而影響對比差異的區分程度。HFD的油滴數量及直徑顯現於KMUP-1的預防組。所有標本經免疫組織化學染色(IHC)的影像於相同的光照條件進行光學顯微鏡觀察。對於M1或M2型巨噬細胞的所有抗體反應，經電腦計算顏色強度，平均區分為4種類型的飽和度。如表5所示，預防組的油滴直徑變化和治療組相比較呈現顯著差異。

表6 脂肪肝炎附睾脂肪墊的重量變化

附睾脂肪墊的蘇木精-伊紅染色

餵食高脂肪飼料誘發小鼠的肥厚/增生白細胞類型附睾脂肪墊(epididymal fat pad)，經蘇木精-伊紅(H & E)染色的切片顯示投予2.5毫克/千克濃度KMUP-1的預防組可呈現抑制效果。如表7所示，餵食高脂肪飼料的附睾脂肪墊重量呈現增加，投予KMUP-1進行14週的治療組可減少其重量。KMUP-1每天投予2.5毫克/公斤濃度的預防組，其附睾脂肪墊重量以及脂肪細胞直徑均呈現顯著地減少現象。

經免疫組織化學染色附睾脂肪墊的eNOS/HSL以及IL-10/TNF-α

餵食高脂肪飼料進行為期14週誘發的脂肪組織，針對eNOS、HSL、白細胞介素-10(IL-10)及腫瘤壞死因子-α(TNF-α)進行免疫組織化學(IHC)染色。每天投予2.5毫克/千克濃度KMUP-1的預防組可抑制eNOS、TNF-α，而增加HSL、IL-10分別顯示能改變附睾脂肪墊的免疫反應百分率。

高脂肪飼料誘發肝臟內SR-B1、HMG CoA reductase、ROCK II、PPARγ與ABCA1的表現

餵飼高脂肪飼料老鼠8週後，經口強飼KMUP-1能影響3-羥基-3-甲基戊二醯輔酶A還原酶(HMG CoA reductase)受高脂肪飼料減少的表現。餵飼高脂肪飼料老鼠與標準飼料組相比較，該還原酶的表現呈現減少現象。經口投予2.5、5毫克/公斤濃度的KMUP-1和KMUP-1 DL-ascorbic acid+simvastatin和5毫克/千克濃度的辛伐他汀(simvastatin)，如表9所示，均可顯著地可逆肝臟內受到高脂肪飼料而降低3-羥基-3-甲基戊二醯輔酶A還原酶的表現。此外KMUP-1也能活化餵飼高脂肪飼料小鼠肝臟內PPARγ、ABCA1的表現，使其ROCK II失活。

於HepG2細胞血清/生理食鹽水培養基內甲羥戊酸誘導3-羥基-3-甲基戊二醯輔酶A還原酶的表現

以含血清/生理食鹽水的培養基培養HepG2細胞24小時，投予10^-9~10^-5M KMUP-1或辛伐他汀，與生理食鹽水或溶液的對照組相比較，如表11顯示隨著KMUP-1或辛伐他汀濃度的增加，3-羥基-3-甲基戊二醯輔酶A還原酶的表現也呈現依賴性的增加。於HepG2細胞培養基內添加60、80、100μM的甲羥戊酸(mevalonate)，如表11所示隨著濃度的增加，3-羥基-3-甲基戊二醯輔酶A還原酶的表現呈現依賴性下降現象。以100μM甲羥戊酸能大幅抑制3-羥基-3-甲基戊二醯輔酶A還原酶的表現，以甲羥戊酸與10^-5M濃度的KMUP-1或辛伐他汀的組合能逆轉該抑制作用，顯示是3-羥基-3-甲基戊二醯輔酶A還原酶最終產物回饋(end-product feedback)的調節現象。

當脂肪細胞呈現脂質代謝的表現，PPARγ可反應該脂質代謝的訊號。抑制PDE-3B/PDE-5A導致激素敏感脂肪酶(hormone sensitive lipase,HSL)的活化，顯示脂肪細胞承受反應而經cGMP/PKG誘導呈現脂肪分解。HSL調節各器官中甘油酯(acylglycerol或glyceride)和膽固醇酯(cholesteryl ester)的水解，且被PKG活化而增加脂肪油滴的脂肪分解(lipolysis)。表12顯示eNOS、PDE-5A及ROCK II的表現。

肝細胞內PPARγ/ABCA1/ApoA-I/LXRα表現的增加

以10^-9-10^-5M濃度的KMUP-1或辛伐他汀可增加在HepG2肝細胞的過氧化物酶體增殖物活化受體(PPARγ)與三磷酸腺苷結合盒轉運體A1(ABCA1)的表現。顯示KMUP-1或辛伐他汀可影響脂質代謝過程內高密度脂蛋白膽固醇的形成。投予KMUP-1增加的PPARγ達2-3倍，符合增加體重幅度的減少，表明KMUP-1活化PPARγ可參與降低身體的重量。隨著投予10^-9-10^-5M濃度的KMUP-1或辛伐他汀的濃度，在肝細胞內ApoA-I/LXRα的表現呈現依賴性增加。

cGMP途徑與RhoA/ROCK II

如表13所示，5ng/ml的RhoA激酶拮抗劑C3胞外酶(C3 exoenzyme)以及10^-5M的ROCK拮抗劑Y27632均可使ROCK II的表現失活，而經由10μM的cGMP拮抗劑Rp-8-pCPT-cGMPS(8-(p-chlorophenylthio)guanosine-3,5-monophosphorothioate)可使其表現增加，若併用10μM的KMUP-1則呈現抑制作用，上述作用涉及肝細胞內cGMP信號傳遞途徑的參與。此外KMUP-1、辛伐他汀、C3胞外酶以及Y27632均能增加PPARγ與ABCA1的表現。KMUP-1也增加PPARγ同時降低體重增加量，表示PPARγ在降低體重增加量扮演重要角色。

在HepG2肝細胞內，如表15所示，KMUP-1運用香葉基香葉基焦磷酸(geranylgeranyl pyrophosphat,GGPP)和焦磷酸法尼酯(Farnesyl pyrophosphate,FPP)可削弱其中的PRhoA與ROCK II的表現，受外源性GGPP或FPP的活化現象。而辛伐他汀則不能經由外源性GGPP或FPP使ROCK II失活。

外源性GGPP或FPP可減少PPARγ與ABCA1的表現

單獨以10μM濃度的FPP或GGPP培養HepG2細胞可抑制PPARγ與ABCA1的表現。不論於FPP或GGPP的培養基內投予10^-9-10^-5M濃度的KMUP-1，均可反轉此現象，恢復PPARγ與ABCA1的表現。但在10μM的GGPP培養基內添加內辛伐他汀無法使PPARγ的形成獲得還原。

[ ¹⁴ C]甲羥戊酸的生合成

10μM的KMUP-1並未減少[¹⁴C]甲羥戊酸的形成。相反地，辛伐他汀與溶媒對照組相比較，可抑制[¹⁴C]甲羥戊酸的形成達86.6±4.2%。以Sigma-Adrich公司90%以上純度的[¹⁴C]3-羥基-3-甲基戊二醯輔酶A還原酶([¹⁴C]HMG CoA reductase)為例，以20units/mg的用量用於測定[¹⁴C]甲羥戊酸的形成。

肝臟LDLRs的免疫組織化學染色與PKG/PKA的表現

餵食高脂肪飼料誘發的肝臟，其低密度脂蛋白受體(Low density lipoprotein receptor,LDLRs)的表現可經由免疫組織化學染色法(IHC staining methods)進行評估。不論餵食高脂肪飼料的預防組或是治療組，KMUP-1 HCl可增加其肝臟的低密度脂蛋白受體。於高脂肪飼料飼養小鼠肝臟，運用西方墨點法比較LDLRs與PKA/PKG的表現。肝臟內存在著低密度脂蛋白受體(500μg/mL)，投予KMUP-1(10、20及40μM)，無法呈現顯著影響其PKA蛋白表現的現象。該高脂血症的病理模型卻可增加PKG的表現。然而200μg/mL氧化低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,oxidized LDL,oxLDL)誘發減少PKA蛋白的表現，投予KMUP-1(1、10及100μM)可呈現反轉現象。

細胞內LDLRs/PKA/HSL的螢光染色

肝臟HepG2細胞的螢光(fluorencent)染色。其結果是隨著KMUP-1濃度10^-6、10^-5至10^-4M或是10^-5M濃度辛伐他汀(simvastatin)的增加而呈現低密度脂蛋白受體(LDLR)的綠色螢光的增加現象。該HepG2細胞綠色螢光增加量與未投予KMUP-1處理的對照組進行比較，隨著KMUP-1超過10^-4M濃度，綠色染色反而呈現不明原因的衰退，於HepG2細胞KMUP-1濃度接近可運用的範圍。於HepG2細胞投予KMUP-1或是辛伐他汀處理則顯示PKA與HSL的綠色螢光增加其免疫活性也增加。而KMUP-1無法顯著地影響PKG蛋白的免疫活性。

綜上所述，本發明中揭示以磷酸二酯酶類型5抑制劑與Statin類似物的藥物組合物，可改善脂質代謝紊亂症。其是以高脂肪飼料餵食C57BL/6J雄性小鼠8週後，經口投予磷酸二酯酶類型5抑制劑，或是磷酸二酯酶類型5抑制劑與Statin類似物的藥物組合物進行實驗。待測藥物可降低血清與肝臟的三酸甘油酯、總膽固醇、低密度脂蛋白，增加HDL/HMGR/ROCK II/PPAR/ABCA1的表現，增加量與清道夫受體B族1型(SR-B1)、PKA/PKG的表現，以及增加低密度脂蛋白受體(LDLRs)/PKA的免疫活性。

材料和方法(Materials and Methods)

實驗動物與血清(Animals and serum)

於8週的高脂血症模式實驗中是使用禁食的21~22克重C57BL/6J雄性小鼠，再餵飼高脂肪飼料(HFD)。於2個月的實驗中，小鼠於實驗前禁食一夜，以高脂肪飼料代替標準飼料(standard diet,STD)，然後隨機分為13組，包括1個預防組、2個對照組和10個治療組，各組均為6隻小鼠。對照組於14週內均餵飼一般標準飼料或高脂肪飼料，而治療組餵飼高脂肪飼料，並於9~14週強飼投予2.5或5mg/kg/day的KMUP-1 HCl、Sildenafil、KMUP-1 HCl+simvastatin、KMUP-1-DL-ascorbic acid+simvastatin、Sildenafil+simvastatin、Tadalafil、simvastatin或其他實驗所需的待測藥物，於體重增加後進行生化分析。於預防組投予1mg/kg/day的KMUP-1 HCl，收集肝臟測定3-羥基-3-甲基戊二醯輔酶A還原酶(3-hydroxy-3-methylglutaryl-CoA reductase,HMG CoA reductase,HMGR)的表現。各組從第1週至第14週期間，自由地飲用作為常態礦物質營養的自來水。

於高雄醫學大學動物實驗中心的日夜循環系統餵養上述動物。動物的全部照顧方式及實驗室的使用規定遵守高雄醫學大學委員會的核准指南，且依照美國國家衛生研究院的動物照顧與使用協定。

血液的生化分析

在2個月實驗內，餵飼飼料3天後測量小鼠的平均重量。每組小鼠體重的增加量及血清脂肪含量(plasma lipid levels)均加以測量並與對照組進行比較。小鼠心臟穿刺後，將收集的血液以90×g速度的離心機(Benchtop Centrifuge,U.S.A.)離心，分離血清，隨後於-80℃凍結，運用日立臨床分析儀7070(Hitachi Clinical Analyzer 7070，日本)，以默克公司(Merck & Co.,Kenilworth,NJ,U.S.A.)的試劑進行生化分析。運用臨床常用方式測量小鼠血清的三酸甘油酯(Triglyceride)、總膽固醇(total cholesterol)、低密度脂蛋白膽固醇(low-density lipoprotein cholesterol,LDL cholesterol)及高密度脂蛋白膽固醇(high-density lipoprotein cholesterol,HDL cholesterol)。測量經分離的動物肝臟切片的肝臟三酸甘油酯。

細胞培養(Cell culture)

購自美國菌種保藏中心(American Type Culture Collection(ATCC),Manassas,VA,U.S.A.)的人類肝癌細胞株(human liver hepatocellular carcinoma)HepG2細胞培養於基礎培養基(Dulbecco's Modified Eagle' Medium,DMEM)。該基礎培養基包含5%熱滅活的胎牛血清(Fetal Bovine Serum,FBS)、100U/mL盤林西尼(penicillin)、100μg/mL鏈黴素(streptomycin)。細胞生長環境為37℃以20%氧氣(20% O₂,v/v)、5%二氧化碳(5% CO₂)組成飽和濕度空氣的140毫米汞柱(mmHg)培養箱。關於待測藥物之間的溶解度差異性，應考慮各自適當溶媒的選擇，因而將KMUP-1鹽酸鹽溶於蒸餾水，辛伐他汀(simvastatin)溶於丙二醇(propylene glycol)溶媒。將待測藥物溶液與培養基一起培養24小時，接著進行蛋白質萃取。將待測藥物分別加入溶媒或蒸餾水的最終濃度培養細胞後，在上述介質內，觀察3-羥基-3-甲基戊二醯輔酶A還原酶(HMG CoA reductase)的丙二醇表現變化程度低於0.1%人類肝癌細胞株。

西方墨點法分析HepG2細胞以及肝臟的蛋白質表現

以各種濃度的待測藥物處理HepG2細胞24小時後，以經冷PBS洗滌2次以終止反應，收集細胞。以冰冷的溶解緩衝溶液(lysis buffer)以及蛋白酶抑制劑(Sigma-Aldrich,St.Louis,MO,U.S.A.)，將整個細胞溶解並均質化蛋白質。於4℃將均質化的蛋白質以90,000g離心15分鐘，回收上清液作為總量細胞蛋白質(total cellular protein)。依照細胞質核膜分部蛋白質萃取套組(Cytosol Nuclear Membrane(CNM)compartmental protein extraction kit,BioChain Institute Inc.,Hayward,CA,U.S.A.)的製造商操作指南，進行製備HepG2細胞的細胞質以及細胞膜部分。所有分餾的蛋白溶液儲存於-80℃待用。為了測量藥物影響的蛋白質表現，再以處理組培養24小時後萃取總細胞蛋白，進行如前述西方蛋白印跡方法。

觀察SR-B1、HMG CoA reductase、PPARγ與ROCK II的表現

此是將分離的肝臟切成小片後置入萃取緩衝液(extraction buffer)來萃取肝臟的蛋白質，並於20,000×g離心30分鐘。萃取緩衝液的組成為pH值為7.0的10mM三羥甲基氨基甲烷(Tris)、2mM的苯甲基磺醯氟(phenylmethylsulfonyl fluoride,PMSF)、140mM的氯化鈉、5mM的二硫蘇糖醇(Dithiothreitol,DTT)、0.5%的NP-40裂解液、0.05mM的抑肽素(pepstatin A)和0.2mM的亮肽素(leupeptin)。將獲得的蛋白質萃取物以4：1比例與樣本緩衝液煮沸成為樣本。樣本緩衝液的組成為100mM pH 6.8的三羥甲基氨基甲烷(Tris)、20%的甘油(glycerol)、4%的十二烷基硫酸鈉(Sodium Dodecyl Sulfate，SDS)、0.2%的溴酚藍(bromophenol blue)。使用10%十二烷基硫酸鈉聚丙烯醯胺凝膠(SDS-polyacrylamide gel)，以100V、40mA將各電泳孔洞的20μg蛋白質進行電泳(Electrophoresis)1小時。

被分離的蛋白質經3次離心以清除上層脂肪雜質，以5%脫脂奶粉轉印至聚偏氟乙烯(Polyvinylidene Difluoride,PVDF)膜，於90分鐘以100V阻隔非特異性的IgGs，以及與專一性蛋白質抗體培養。以連接鹼性磷酸酶1：1000的抗山羊或抗小鼠抗體IgG培養該印跡1小時。以量測SR-B1、3-羥基-3-甲基戊二醯輔酶A還原酶，PPAR與ROCK II的表現。

3-羥基-3-甲基戊二醯輔酶A還原酶與[ ¹⁴ C]甲羥戊酸的形成

使用大腸桿菌菌株(H7039,Sigma-Adrich,MO,U.S.A.)中表現的人類基因重組3-羥基-3-甲基戊二醯輔酶A還原酶。使用經10%十二烷基硫酸鈉聚丙烯醯胺凝膠(SDS-polyacrylamide gel)及純度

90%的蛋白質(擁有2-8 units/mg蛋白質的活性及分子量約~76kDa)以測定3-羥基-3-甲基戊二醯輔酶A還原酶與[¹⁴C]甲羥戊酸的形成量。將KMUP-1及待測藥物預培養於37℃、含有35ng/ml酶的pH 7.5磷酸緩衝液。藉由添加2.5μM[¹⁴C]3-羥基-3-甲基戊二醯輔酶A還原酶開始反應並另行培養20分鐘，並於添加1N鹽酸終止反應。經由管柱移除等分試樣，以測定[¹⁴C]甲羥戊酸的形成(Ricera^® Co.Ltd.,Taipei,Taiwan)。

cGMP路徑與RhoA/ROCK II

將RhoA激酶拮抗劑5μg/ml的C3胞外酶(exoenzyme)和ROCK拮抗劑10μM的Y27632分別溶於10%丙烯乙二醇(propylene glycol)溶液使ROCK II失活，分別將其添加於細胞培養液24小時。進行ROCK II的表現測量，並於HepG2細胞測量PPARγ、ABCA-1相關的表現。

將10μM的環磷酸鳥嘌呤核苷(cGMP)拮抗劑Rp-8-pCPT-cGMPs溶於10%丙二醇增加ROCK II活性，而Rp-8-pCPT-cGMPs誘導ROCK II活性的現象可被KMUP-1的類待測藥物所抑制。於HepG2細胞以Rp-8-pCPT-cGMPs預培養30分鐘作為對照組，再添加10μM的KMUP-1或待測藥物培養24小時。

肝臟內低密度脂蛋白受體(LDLRs)的免疫組織化學染色

以10%的福馬林(formalin)固定肝臟組織24小時，並經石蠟(paraffin)包埋。將石蠟所包埋的肝臟組織切成4μm厚的切片，先熱封再以二甲苯(xylene)脫蠟，其次以梯次濃度的乙醇進行脫水，以蒸餾水洗滌。最後，以過碘酸希夫瓦(Periodic Acid-Schiff,PAS)和蘇木精染液(Mayer’s hematoxylin)對組織切片進行染色。

於外源性LDL存在下LDLRS的表現與螢光染色

於存在500μg/ml外源性LDL的條件下，使用HepG2細胞株檢測外源性低密度脂蛋白受體(LDLRs)細胞蛋白的表現。於4℃下以二級抗體共軛的紅色螢光Cy3隔夜偵測HepG2細胞上的綠色氟螢光Bodipy 493/503和LDLRs，接著以獲得的BODIPY影像和低密度脂蛋白影像合併來分析LDLRs位置。藉由以尼康顯微鏡(Eclipse TE200-S,Tokyo,Japan)掃描而收集及分析所有影像。

PKA/PKG的表現與PKA/HSL的免疫活性

將10^-4M、10^-5M或10^-6M KMUP-1或待測藥物與HepG2細胞培養24小時，使用免疫印跡法測量PKA/PKG的蛋白表現，或者以螢光染色法測量PKA/PKG和HSL的免疫活性，在添加或無添加200μg/ml的氧化型低密度脂蛋白(oxidized LDL,oxLDL)結合影像掃描，以評估待測化合物可否影響PKA。

脂肪性肝炎的油滴直徑與數量的測量

將全肝臟切片白色條紋圖像的直徑訂為100μM，以作為顯微鏡觀測標準，借助Powerpoint PC電腦軟體(微軟，美國)以測量照片中油滴的直徑，並以美國惠普(HP)印表機列印。油滴直徑和細胞數目的增加表示肝臟脂肪變性增多，即視為脂肪性肝炎(steaotohepatitis)。相對地，脂肪性肝炎的形成受到抑制，呈現直徑和脂肪細胞的數量減少。以尼康Eclipse TE200-S顯微鏡觀察全肝切片的油滴。

肝臟和附睾脂肪墊的蘇木精-伊紅染色

將小鼠肝臟及附睾脂肪墊組織切片以福馬林固定，梯度酒精脫水，石蠟包埋。肝臟及附睾脂肪墊組織標本以4%福馬林固定，於4℃下經石蠟包埋切成4μm厚，經蘇木精-伊紅(Hematoxylin-Eosin，H&E)染色進行切片，以顯微鏡觀察圖像。

MMP-9/TNFα、HSL/p-HSL/ATGL以及eNOS/IL-10的免疫組織化學染色

以內含pH 9.0賦活溶液(Dako target retrieval solution)的蔬菜蒸鍋(vegetable steamer)對於經脫蠟切片的基質金屬蛋白酶-9(MMP-9)/腫瘤壞死因子(TNF-α)、激素敏感性脂肪酶(HSL)/p-HSL/脂肪甘油三酯脂肪酶(ATGL)、內皮型一氧化氮合酶(eNOS)和白細胞介素-10(IL-10)進行抗原修復(antigen retrieval)，而後以含3.0% H₂O₂的甲醇溶液抑制其內源性過氧化物酶活性，再進行免疫組織化學染色(IHC)。在4℃恆溫箱將切片與特定一級抗體培養過夜。使用的特定抗體包括經1：50倍稀釋的兔多株抗eNOS抗體(Abcam,Cambridge,UK)，或經1：50倍稀釋的活化半胱胺酸蛋白酶蛋白-3兔單株抗體(rabbit monoclonal anti-cleaved caspase-3,Cell Signaling,U.S.A.)。使用DAKO檢測試劑(DAKO REAL EnVision^TM Detection System kit,DAKO,Carpinteria,CA,U.S.A.)檢測切片，再經蘇木精(hematoxylin)複染，以尼康顯微鏡(Nikon Eclipse TE200-S)觀察影像。

使用辣根過氧化物酶(horseradish peroxidase)-共軛二次抗體和隨後的增強化學發光(Enhanced Chemiluminescence(ECL),GE Healthcare Bio-Sciences Corp.,Piscataway,NJ,U.S.A.)進行檢測，使免疫反應的結合帶呈現視覺化。免疫印跡分析使用的抗小鼠或抗兔單株抗體包括抗ROCK II的抗體(Upstate,Lake Placid,NY,U.S.A.)、抗RhoA的抗體(Santa Cruze,Biotechnology,Santa Cruz,CA,U.S.A.)、抗HMG CoA reductase的抗體(Upstate,Lake Placid,NY,U.S.A.)、抗PPARγ的抗體(Abcam,Cambridge,UK)、抗ABCA-1的抗體(Cell Signaling,Boston,MA,U.S.A.)、抗ApoA-I的抗體(Abcam,Cambridge,UK)、抗LXRα的抗體(Santa Cruze, Biotechnology,Santa Cruz,CA,U.S.A.)、抗LDLR的抗體(Abcam,Cambridge,UK)、抗HSL的抗體(Cell Signaling,Boston,MA,U.S.A.)、抗eNOS的抗體(Abcam,Cambridge,UK)、抗MMP-9的抗體(Abcam,Cambridge,UK)、抗TNFα的抗體(Abcam,Cambridge,UK)、抗IL-10的抗體(Abcam,Cambridge,UK)和填注控制組蛋白質β-肌動蛋白(Sigma-Adrich,St.Louis,MO,U.S.A.)。以兔多株抗體進行辨識PPARγ1與PPARγ2的試驗。Rp-8-pCPT-cGMPs與C3胞外酶購自Sigma-Adrich(St.Louis,Mo,U.S.A.)。高脂肪食品(HFD)為包含60%脂肪能量的基礎純化飼料(具有來自脂肪的60%能量，Blue：58G9 Test Diet；Richmond,VA,U.S.A.)。螢光染色試驗的LDL購自Abcam(Cambridge,UK)，氧化低密度脂蛋白(oxidized LDL,oxLDL)購自Biomedical Technologies Inc.(Stoughton,MA,USA)。以Sigma-Adrich公司(H7039,Sigma-Adrich,St.Louis,MO.U.S.A.)純度

90%的蛋白質擁有2-8 units/mg蛋白質的活性，其分子量約~76kDa的[¹⁴C]3-羥基-3-甲基戊二醯輔酶A還原酶([¹⁴C]HMG CoA reductase)，以測定[¹⁴C]甲羥戊酸的形成。

統計分析

實驗結果皆以平均值加減標準誤差(Mean±SEM)表示。統計間的差異在非配對及配對樣本中分別採用非相依性的配對t-檢驗(Student’s t-test)。當多個治療組與一對照組相比較時，採用單因子變異數分析(one way ANOVA)或雙因子重複測量變異數分析(two way repeated measures ANOVA)。當變異數分析(Analysis of variance,ANOVA)呈現統計學上的差異時，採用Dunnett's或Student-Newman-Keuls檢驗。P值小於0.05表示實驗值具有統計學上顯著性差異。在IBM電腦運用SigmaPlot軟體(版本8.0,Chicago,IL,U.S.A.)和SigmaStat(版本2.03,Chicago,IL,U.S.A.)分析資料和圖表的繪製。

實驗例1：治療脂質代謝紊亂的組合投藥

實驗例2：治療脂質代謝紊亂的組合投藥

實驗例3：治療脂質代謝紊亂的組合投藥

實驗例4：治療脂質代謝紊亂的組合投藥

實驗例5：製備錠劑

依照於1994年10月25日公告的Bechard等人的U.S.Pat.No.5,358,941方法(其全文併入本文做為參考)，分別依量秤取下列各成分，混合後充填於打錠機，製備成錠劑。

實驗例6：治療脂質代謝紊亂的組合投藥

實驗例7：治療脂質代謝紊亂的組合投藥

實驗例8：治療脂質代謝紊亂的組合投藥

實驗例9：治療脂質代謝紊亂的組合投藥

實驗例10：製備錠劑

實驗例11：治療脂質代謝紊亂的組合投藥

實驗例12：治療脂質代謝紊亂的組合投藥

實驗例13：治療脂質代謝紊亂的組合投藥

KMUP-1壞血酸複合物 11.5g

Fluvastatin鈉鹽 4.4g

其他類型實施例

1.一種組合物的用途，其用於製備可緩減動物脂質代謝紊亂的組合物，該組合物包含有效量選自第一類磷酸二酯酶類型5抑制劑與他汀類類似物所組成的藥物組合物的主成分；及藥學上可接受的賦形劑。

2.如實施例1所述的用途，其中脂質代謝紊亂包括非酒精性脂肪肝、過度肥胖(hyperadiposity)、血脂異常症(dyslipidemia)、肝臟脂肪變性(hepatic steaotosis)、高脂肪食品誘發肝臟脂質蓄積、高脂肪食品誘發肥胖、胰島素抗性、高脂肪食品誘發脂質蓄積(lipid accumulation)併發炎症和肝臟損傷的後續症候其組合或其組合型式。

3.如實施例1或2所述的用途，其中動物選自人類、山羊(goat)、羔羊(lamb)、豬(pig)、牛(cow)、雞(chicken)、鴨(duck)等溫血動物其中之一。

4.如實施例1至3中任一實施例所述的用途，其中他汀類類似物選自阿伐他汀(Atorvastatin)、西立伐他汀(Cerivastatin)、氟伐他汀(Fluvastatin)、洛伐他汀(Lovastatin)、美伐他汀(Mevastatin)、普伐他汀(Pravastatin)、羅伐他汀(Rosuvastatin)、辛伐他汀(Simvastatin)和普瑪他汀酸(Pravastatin acid)及其混合或藥學上可接受的鹽類。

5.如實施例1至4中任一實施例所述的用途，其中第一類磷酸二酯酶類型5抑制劑選自哌嗪類似物和哌嗪基複合類似物。

6.如實施例1至5中任一實施例所述的用途，其中哌嗪類似物選自KMUPs衍生物和西地那非(Sildenafil)類似物，而哌嗪基複合類似物(Piperazinyl Complex Analogue)選自KMUPs衍生物複合物和西地那非類似物複合物；而RX為羧酸基團提供者，選自D-抗壞血酸(D-ascorbic acid)、 L-抗壞血酸(L-ascorbic acid)、DL-抗壞血酸(DL-ascorbic acid)、油酸(oleic acid)、磷酸(phosphoric acid)、檸檬酸(citric acid)、菸鹼酸(nicotinic acid)、羧甲基纖維素鈉(sodium carboxyl methylcellulose,sodium CMC)、玻尿酸(hyaluronic acid)、聚丙烯酸(polyacrylic acid，PAA)、聚甲基丙烯酸甲酯(polymethylmethacrylates,PMMA)、丙烯酸樹脂(Eudragit)、葡聚糖硫酸(dextran sulfate)、硫酸乙醯肝素(heparan sulfate)、聚乳酸或聚乳酸酯(polylactide,PLA)、聚乳酸鈉、聚羥基磺酸鈉(polyglycolic acid sodium,PGCA sodium)、聚-γ-聚麩胺酸鈉(sodium γ-polyglutamate,poly-γ-polyglutamic acid sodium,γ-PGA sodium)、γ-聚麩胺酸、海藻酸鈉-聚-1-離胺酸-海藻酸鈉(alginate-poly-1-lysine-alginate,APA)和聚γ-聚麩胺酸衍生物(poly-γ-polyglutamic acid derivative)及其群組其中之一。

7.如實施例1至6中任一實施例所述的用途，其中KMUPs衍生物選自KMUP-1、KMUP-2、KMUP-3、KMUP-4及其藥學上可接受的鹽類的群組其中之一。

8.一種組合物的用途，其用於製備可緩減動物脂質代謝紊亂的組合物，該組合物包含有效量選自第二類磷酸二酯酶類型5抑制劑與他汀類類似物所組成的藥物組合物的主成分；及藥學上可接受的賦形劑。

9.如實施例8所述的用途，其中第二類磷酸二酯酶類型5抑制劑選自阿伐那非(Avanafil)、Benzamidenafil、Dasantafil、雙嘧達莫(Dipyridamole)、E4021、淫羊藿苷(Icariin)、Rolipram、Piclamilast、他達拉非(Tadalafil)、苯氮嘌呤酮(Zaprinast)所組成的群組其中之一。

10.如實施例8或9所述的用途，其中脂質代謝紊亂包括非酒精性脂肪肝、過度肥胖(hyperadiposity)、血脂異常症(dyslipidemia)、肝臟脂肪變性(hepatic steaotosis)、高脂肪食品誘發肝臟脂質蓄積、高脂肪食品誘發肥胖、胰島素抗性、高脂肪食品誘發脂質蓄積(lipid accumulation)併發炎症和肝臟損傷的後續症候其組合或其組合型式。

11.如8至10中任一實施例所述的用途，其中動物選自人類、山羊(goat)、羔羊(lamb)、豬(pig)、牛(cow)、雞(chicken)、鴨(duck)等溫血動物其中之一。

12.一種可緩減動物脂質代謝紊亂的組合物，包含：藥學上可接受的載體；以及有效量選自第一類磷酸二酯酶類型5抑制劑以及有效量選自他汀類類似物的群組；其中第一類磷酸二酯酶類型5抑制劑選自哌嗪類似物和哌嗪基複合類似物。

13.如實施例12所述的組合物，其中他汀類類似物選自阿伐他汀(Atorvastatin)、西立伐他汀(Cerivastatin)、氟伐他汀(Fluvastatin)、洛伐他汀(Lovastatin)、美伐他汀(Mevastatin)、普伐他汀(Pravastatin)、羅伐他汀(Rosuvastatin)、辛伐他汀(Simvastatin)和普瑪他汀酸(Pravastatinacid)及其組合以及其藥學上可接受的鹽類。

14.如實施例12或13所述的組合物，其中哌嗪類似物選自KMUPs衍生物和西地那非(Sildenafil)類似物，而哌嗪基複合類似物(Piperazinyl Complex Analogue)選自KMUPs衍生物複合物和西地那非類似物複合物；而RX為羧酸基團提供者，選自D-抗壞血酸(D-ascorbic acid)、L-抗壞血酸(L-ascorbic acid)、DL-抗壞血酸(DL-ascorbic acid)、油酸(oleic acid)、磷酸(phosphoric acid)、檸檬酸(citric acid)、菸鹼酸(nicotinic acid)、羧甲基纖維素鈉(sodium carboxyl methylcellulose,sodium CMC)、玻尿酸(hyaluronic acid)、聚丙烯酸(polyacrylic acid,PAA)、聚甲基丙烯酸甲酯(polymethylmethacrylates,PMMA)、丙烯酸樹脂(Eudragit)、葡聚糖硫酸(dextran sulfate)、硫酸乙醯肝素(heparan sulfate)、聚乳酸或聚乳酸酯 (polylactide,PLA)、聚乳酸鈉、聚羥基磺酸鈉(polyglycolic acid sodium,PGCA sodium)、聚-γ-聚麩胺酸鈉(sodium γ-polyglutamate,poly-γ-polyglutamic acid sodium,γ-PGA sodium)、γ-聚麩胺酸、海藻酸鈉-聚-1-離胺酸-海藻酸鈉(alginate-poly-1-lysine-alginate,APA)和聚γ-聚麩胺酸衍生物(poly-γ-polyglutamic acid derivative)所組成的群組其中之一。

15.如實施例12至14中任一實施例所述的組合物，其中KMUPs衍生物選自KMUP-1、KMUP-2、KMUP-3、KMUP-4及其藥學上可接受的鹽類的群組其中之一。

16.如實施例12至15中任一實施例所述的組合物，其中脂質代謝紊亂包括非酒精性脂肪肝、過度肥胖(hyperadiposity)、血脂異常症(dyslipidemia)、肝臟脂肪變性(hepatic steaotosis)、高脂肪食品誘發肝臟脂質蓄積、高脂肪食品誘發肥胖、胰島素抗性、高脂肪食品誘發脂質蓄積(lipid accumulation)併發炎症和肝臟損傷的後續症候其組合或其組合型式。

17.如實施例12至16中任一實施例所述的組合物，其中動物選自人類、山羊(goat)、羔羊(lamb)、豬(pig)、牛(cow)、雞(chicken)、鴨(duck)等溫血動物其中之一。

18.如實施例12至17中任一實施例所述的組合物，其中第二類磷酸二酯酶類型5抑制劑選自阿伐那非(Avanafil)、Benzamidenafil、Dasantafil、雙嘧達莫(Dipyridamole)、E4021、淫羊藿苷(Icariin)、Rolipram、Piclamilast、他達拉非(Tadalafil)、苯氮嘌呤酮(Zaprinast)所組成的群組其中之一。

19.一種可緩減動物脂質代謝紊亂的組合物，包含：藥學上可接受的載體；以及有效量選自第二類磷酸二酯酶類型5抑制劑以及有效量選自他汀類類似物的群組。

20.一種組合物的用途，其用於製備可緩減動物脂質代謝紊亂的組合物，該組合物包含有效量個別選自第一類及第二類磷酸二酯酶類型5抑制劑與他汀類類似物所組成的藥物組合物的主成分；以及藥學上可接受的賦形劑；其中第一類磷酸二酯酶類型5抑制劑選自哌嗪類似物和哌嗪基複合類似物其中之一，第二類磷酸二酯酶類型5抑制劑選自阿伐那非(Avanafil)、Benzamidenafil、Dasantafil、雙嘧達莫(Dipyridamole)、E4021、淫羊藿苷(Icariin)、Rolipram、Piclamilast、他達拉非(Tadalafil)、苯氮嘌呤酮(Zaprinast)所組成的群組其中之一。

21.一種組合物，包含：藥學上可接受的載體；有效量個別選自第一類及第二類磷酸二酯酶類型5抑制劑與他汀類類似物所組成的藥物組合物的主成分；以及藥學上可接受的賦形劑；其中第一類磷酸二酯酶類型5抑制劑選自哌嗪類似物和哌嗪基複合類似物其中之一，第二類磷酸二酯酶類型5抑制劑選自阿伐那非(Avanafil)、Benzamidenafil、Dasantafil、雙嘧達莫(Dipyridamole)、E4021、淫羊藿苷(Icariin)、Rolipram、Piclamilast、他達拉非(Tadalafil)、苯氮嘌呤酮(Zaprinast)所組成的群組其中之一。

參考文獻

1. Dai Z.-K., et al., (2014) Xanthine Derivative KMUP-1 Reduces Inflammation and Hyperalgesia in a Bilateral Chronic Constriction Injury Model by Suppressing MAPK and NFκBActivation. Mol. Pharm., 11, 1621-1631.

2. Bivalacqua T. J., et al., (2013) Sildenafil citrate-restored eNOS and PDE5 regulation in sickle cell mouse penis prevents Priapism via control of oxidative/nitrosative stress. PLoSONE, 8: e68028.

3. Chung H.-H., et al., (2010) The xanthine derivative KMUP-1 inhibits models of pulmonary artery hypertension via increased NO and cGMP-dependent inhibition of RhoA/Rho kinase. Br. J. Pharmacol. 160, 971-986.

4. Chung H.-H., et al., (2010) KMUP-1 inhibits pulmonary artery proliferation by targeting serotonin receptors/transporter and NO synthase, inactivating RhoA and suppressing AKT/ERK phosphorylation. Vascu. Pharmacol. 53, 239-249.

5. Kuo, K.-K., et al., (2015) Xanthine-based KMUP-1 Improves HDL via PPARγ/SR-B1, LDL via LDLRs, and HSL via PKA/PKG for Hepatic Fat Loss. J. Lipid Res. 56(11): 2070-2084.

6. Das, A., et al., (2015) PDE5 Inhibitors as Therapeutics for Heart Disease, Diabetes and Cancer. Pharmacol. Ther. 147: 12-21.

Claims

一種組合物的用途，其係用於製備可緩減動物脂質代謝紊亂的組合物，該組合物由下列成分所組成：一有效量選自一第二類磷酸二酯酶類型5抑制劑及一他汀類類似物所組成的藥物組合物的主成分；以及一藥學上可接受的賦形劑，其中該第二類磷酸二酯酶類型5抑制劑選自阿伐那非(Avanafil)、Benzamidenafil、Dasantafil、雙嘧達莫(Dipyridamole)、E4021、淫羊藿苷(Icariin)、Rolipram、Piclamilast、他達拉非(Tadalafil)及苯氮嘌呤酮(Zaprinast)所組成群組其中之一，且該他汀類類似物包括至少阿伐他汀(Atorvastatin)、西立伐他汀(Cerivastatin)、氟伐他汀(Fluvastatin)、洛伐他汀(Lovastatin)、美伐他汀(Mevastatin)、普伐他汀(Pravastatin)、羅伐他汀(Rosuvastatin)、辛伐他汀(Simvastatin)及普瑪他汀酸(Pravastatin acid)及該等他汀類類似物的藥學上可接受的鹽類其中之一。
如申請專利範圍第1項所述的用途，其中該脂質代謝紊亂包括至少非酒精性脂肪肝、過度肥胖(hyperadiposity)、血脂異常症(dyslipidemia)、肝臟脂肪變性(hepatic steaotosis)、高脂肪食品誘發肝臟脂質蓄積、高脂肪食品誘發肥胖、胰島素抗性、高脂肪食品誘發脂質蓄積(lipid accumulation)併發炎症或肝臟損傷的後續症候及其組合其中之一。
如申請專利範圍第1項所述的用途，其中該動物為一溫血動物，該溫血動物包括至少人類、山羊(goat)、羔羊(lamb)、豬(pig)、牛(cow)、雞(chicken)及鴨(duck)所組成的群組其中之一。