CN105380949A - 治疗高脂肪食品诱发肝脏脂肪蓄积的组合物 - Google Patents

Abstract

本发明揭示肝脏疾病的治疗方法。该方法步骤包括：提供一肝脏疾患动物；投予足供疗效用量的药物组合物于该动物，其制剂是选自哌嗪基类似物、哌嗪基复合类似物之一所组成的药物组合物。

Description

治疗高脂肪食品诱发肝脏脂肪蓄积的组合物

技术领域

本发明涉及一种哌嗪基类似物的药物组合物与其它活性剂的组合治疗方法(combinationtherapymethod)，能够用于消除高脂肪食品诱发肝脏脂肪蓄积、抑制肥胖过度、非酒精性脂肪肝炎，并可用于该等疾病的治疗。

现有技术

已知咖啡因可经由增加能量消耗、解偶联蛋白1(uncouplingprotein1)令褐色脂肪组织产生热量以及启动肾上腺素等作用，用于肥胖的治疗。然而即使长期间投予麻黄碱/咖啡因的治疗，肌肉解偶联蛋白3(muscle-uncouplingprotein3)的表达并无变化。KMUP-1与西地那非(sildenafil)一样，能增加内皮细胞一氧化氮合成酶(eNOS)/cGMP，但是后者缺乏G蛋白偶合受体(G-protein-couplereceptors,GPCR)拮抗剂的活性。已经证实咖啡摄入量伴随着较低的肝脏疾病罹患率，并降低肝细胞癌、肝硬化的风险。

经由增强eNOS/guanosine3'，5'-环苷(cGMP)途径，包括增加可溶性鸟酸环化酶α1(sGCα1)和蛋白激酶G(PKG)的表达，黄嘌呤结构的KMUP-1已证实，可放松血管和气道平滑肌肉收缩。

对于脂质代谢已知KMUP-1和西地那非可增加cGMP/PKG，可作为磷酸二酯酶类型5A(PDE-5A)抑制剂以及eNOS-增强剂，但其对于肥胖的影响情况未明确。增加cGMP可以促进和降低白色脂肪组织，与对于内脏附睾脂肪垫(visceralepididymalfatpads)不同。事实上在肥胖组织，皮下脂肪组织的脂肪分解可经由eNOS和HSL呈现减少；抑制NOS导致白色组织的脂肪分解呈现增加现象，而添加一氧化氮(NO)造成脂肪分解受到抑制。

发明内容

根据本发明的一构想，本发明揭示一抑制因脂质蓄积引发肝脏疾患的方法。该方法包括步骤：提供一肝脏疾患动物；投予足供疗效用量的药物组合物于该动物，其制剂是选自KMUPs-RX，KMUPs-RX-RX复合化合物之一所组成的药物或是食品组合物。

根据本发明的另一构想，本发明揭示一抑制因脂质蓄积引发肝脏疾患的方法。该方法包括步骤：提供一肝脏疾患动物；经口投予足供疗效用量的药物组合物于该动物，其制剂是选自西地那非类似物(SildenafilAnalogs)，西地那非类似物-RX复合化合物之一所组成的药物或是食品组合物。

根据本发明的另一构想，本发明揭示一治疗肝脏疾病的方法。该方法包括步骤：对于温血动物的疾病患者；投予足供疗效用量，选自哌嗪基类似物(PiperazinylAnalogs)和哌嗪基复合类似物(PiperazinylComplexAnalogs)之一组成物，上述疾病，包括非酒精性脂肪肝、过度肥胖(hyperadiposity)、肝脏脂肪变性(Hepaticsteaotosis)、高脂肪食品诱发肝脏脂质蓄积、炎症反应而脂质蓄积(lipidaccumulation)和其组合。

根据本发明的其它构想，本发明揭示一投予足供疗效用量的哌嗪基类似物以及补充活性化合物(differentactiveagent)于温血动物，以治疗疾病的组合投药(combinationadminister)方法。

根据本发明的其它构想，本发明揭示一治疗疾病的方法。该方法包括步骤：提供一肝脏患者；投予足供疗效用量的药物组合物，其主成分是选自西地那非类似物，西地那非类似物-RX复合化合物之一所组成的药物或是食品组成物。

抑制肝脏疾患的药物组合物，包括选自足供疗效用量如结构式II或III所示KMUPs复合化合物，其中R2和R4各自选自C1～C5烷氧基团、氢原子、硝基和卤素原子；RX包括提供羧酸基团的Statin(他汀)类似物、共聚物(co-polymer)、聚γ-聚麸胺酸衍生物(poly-γ-polyglutamicacidderivative)、D-抗坏血酸(D-ascorbicacid)、L-抗坏血酸(L-ascorbicacid)、DL-抗坏血酸(DL-ascorbicacid)、油酸(oleicacid)、磷酸(phosphoricacid)、柠檬酸(citricacid)、烟碱酸(nicotinicacid)和羧甲基纤维素(sodiumcarboxylmethylcellulose,sodiumCMC)；和-RX为提供羧酸基团的带负电阴离子包括Statin(他汀)类似物、共聚物、聚γ-聚麸胺酸衍生物、D-抗坏血酸、L-抗坏血酸、DL-抗坏血酸、油酸、磷酸、柠檬酸、烟碱酸和羧甲基纤维素；和药学上可接受的赋形剂。

结构式II

结构式III

附图说明

图1是KMUP-1影响喂饲高脂肪食品小鼠的体重

1…HFD组2…预防组

3…治疗组(KMUP-1,2.5mg/200ml)

图2A-2C是肝脏的整体形态

图2A是喂饲HFD小鼠肝脏的整体形态

图2B是KMUP-1影响肝脏的整体形态

图2C是预防组的肝脏整体形态

图3A-3B是KMUP-1影响SR-B1、PKA的表达

图3A是KMUP-1影响喂饲HFD小鼠其SR-B1的表达

1…HFD组2…治疗组

3…预防组(KMUP-1,2.5mg/200ml)

图3B是KMUP-1影响喂饲HFD小鼠其PKA的表达

1…HFD组2…治疗组

3…预防组(KMUP-1,2.5mg/200ml)

图4A-4B是肝脏切片蓄积的组织油滴形态

图4A是油滴的标准

图4B是油滴直径与数目的改变

1…HFD组2…KMUP-1预防组

图5A-5C是发炎肝脏内油滴的形态

图5A是肝脏内油滴与玻璃样透明体的形态

图5B是预防组的形态

图5C是治疗组的形态

图6A-6C是发炎TNF-α的IHC染色

图6A是喂食HFD小鼠的肝脏切片

图6B是治疗组

图6C是预防组

图7A-7E是肝脏内油滴直径与数目的改变

1…HFD组2…治疗组3…预防组

4…直径5…数量

图7A是喂食HFD小鼠于肝脏脂肪变性TNF-α的IHC染色

图7B是喂食HFD小鼠于肝脏脂肪变性MMP-9的IHC染色

图7C是喂食HFD小鼠于肝脏脂肪变性HSL的IHC染色

图7D是喂食HFD小鼠于肝脏脂肪变性p-HSL的IHC染色

图7E是喂食HFD小鼠于肝脏脂肪变性ATGL的IHC染色

图8A-8C是巨噬细胞M1的CD11c染色

图8A是喂食HFD小鼠M1的CD11c染色

图8B是治疗组

图8C是预防组

图9A-9C是巨噬细胞M2的CD209a染色

图9A是喂食HFD小鼠M2的CD209a染色

图9B是治疗组

图9C是预防组

图10A-10B是巨噬细胞M1内油滴直径与数目的改变

1…HFD组2…治疗组3…预防组

4…直径5…数量

图10A是F4/80染色

图10B是CD11c染色

图11A-11B是巨噬细胞M2内油滴直径与数目的改变

1…HFD组2…治疗组3…预防组

4…直径5…数量

图11A是CD206染色

图11B是CD209a染色

图12是KMUP-1于喂食HFD小鼠肝脏附睾脂肪垫的影响

1…对照组左侧附睾脂肪垫

2…对照组右侧附睾脂肪垫

3…治疗组左侧附睾脂肪垫(KMUP-1)

4…治疗组右侧附睾脂肪垫(KMUP-1)

5…对照组附睾脂肪垫6…投予KMUP-1

图13是KMUP-1于喂食HFD小鼠肝脏脂肪细胞直径的影响

1…对照组2…治疗组(KMUP-1)

图14是KMUP-1影响小鼠附睾脂肪垫的eNOS表达

1…对照组2…治疗组(KMUP-1)

图15是KMUP-1影响小鼠附睾脂肪垫的HSL表达

1…对照组2…治疗组(KMUP-1)

图16是KMUP-1影响小鼠附睾脂肪垫的IL-10表达

1…对照组2…治疗组(KMUP-1)

图17是KMUP-1影响小鼠附睾脂肪垫的TNF-α表达

1…对照组2…治疗组(KMUP-1)

图18是KMUP-1影响小鼠肝脏的HMGCoAreductase

1…对照组2…治疗组(KMUP-1,阳性对照)

3…治疗组(KMUP-1,1mg/kg)

4…治疗组(KMUP-1,2.5mg/kg)

5…治疗组(KMUP-1,5mg/kg)

6…治疗组(simvastatin,5mg/kg)

图19是KMUP-1影响小鼠肝脏的ROCKII表达

1…对照组2…治疗组(KMUP-1,阳性对照)

3…治疗组(KMUP-1,1mg/kg)

4…治疗组(KMUP-1,2.5mg/kg)

5…治疗组(KMUP-1,5mg/kg)

6…治疗组(simvastatin,5mg/kg)

图20是KMUP-1影响小鼠肝脏的PPARγ表达

1…对照组2…治疗组(KMUP-1,阳性对照)

3…治疗组(KMUP-1,1mg/kg)

4…治疗组(KMUP-1,2.5mg/kg)

5…治疗组(KMUP-1,5mg/kg)

6…治疗组(simvastatin,5mg/kg)

图21是KMUP-1影响小鼠肝脏的ABCA1表达

1…对照组2…治疗组(KMUP-1,阳性对照)

3…治疗组(KMUP-1,1mg/kg)

4…治疗组(KMUP-1,2.5mg/kg)

5…治疗组(KMUP-1,5mg/kg)

6…治疗组(simvastatin,5mg/kg)

图22A-22B是KMUP-1、simvastatin影响血液的HMGCoAreductase

图22A是KMUP-1影响血液的HMGCoAreductase

1…对照组2…治疗组(KMUP-1,10-9M)

3…治疗组(KMUP-1,10-8M)

4…治疗组(KMUP-1,10-7M)

5…治疗组(KMUP-1,10-6M)

6…治疗组(KMUP-1,10-5M)

图22B是simvastatin影响血液的HMGCoAreductase

1…对照组2…溶媒

3…治疗组(simvastatin,10-9M)

4…治疗组(simvastatin,10-8M)

5…治疗组(simvastatin,10-7M)

6…治疗组(simvastatin,10-6M)

7…治疗组(simvastatin,10-5M)

图23A-23B是KMUP-1、mevalonate影响血液的HMGCoAreductase

图23A是mevalonate影响血液的HMGCoAreductase

1…对照组2…mevalonate,20μM

3…mevalonate,40μM4…mevalonate,60μM

5…mevalonate,80μM6…mevalonate,100μM

图23B是mevalonate+KMUP-1影响血液的HMGCoAreductase

1…对照组2…溶媒

3…治疗组(mevalonate,阳性对照)

4…治疗组(simvastatin,10-5M)

5…治疗组(KMUP-1,10-5M)

图24A-24D是影响RhoA/ROCKII的表达

图24A是C3exoenzyme、Y27632的影响

1…对照组2…溶媒

3…simvastatin,10-5M4…KMUP-1,10-5M

5…C3exoenzyme,5ng/ml

6…Y27632,10-5M

图24B是Rp-8-pCPT-cGMPS的影响

1…对照组2…Rp-8-pCPT-cGMPS(10μM)

3…Rp-8-pCPT-cGMPS(10μM)+KMUP-1(10μM)

图24C是影响PPARγ的表达

1…对照组2…溶媒

3…simvastatin,10-5M4…KMUP-1,10-5M

5…C3exoenzyme,5ng/ml6…Y27632,10-5M

图24D是影响ABCA1的表达

1…对照组2…溶媒

3…simvastatin,10-5M4…KMUP-1,10-5M

5…C3exoenzyme,5ng/ml6…Y27632,10-5M

图25A-25C是影响RhoA/ROCKII的表达

图25A是GGPP的影响

1…对照组2…治疗组(KMUP-1,阳性对照)

3…治疗组(KMUP-1,10-9M)

4…治疗组(KMUP-1,10-8M)

5…治疗组(KMUP-1,10-7M)

6…治疗组(KMUP-1,10-6M)

7…治疗组(KMUP-1,10-5M)

图25B是FPP的影响

1…对照组2…治疗组(KMUP-1,阳性对照)

3…治疗组(KMUP-1,10-9M)

4…治疗组(KMUP-1,10-8M)

5…治疗组(KMUP-1,10-7M)

6…治疗组(KMUP-1,10-6M)

7…治疗组(KMUP-1,10-5M)

图25C是simvastatin的影响

1…对照组2…治疗组(simvastatin,阳性对照)

3…治疗组(simvastatin,10-9M)

4…治疗组(simvastatin,10-8M)

5…治疗组(simvastatin,10-7M)

6…治疗组(simvastatin,10-6M)

7…治疗组(simvastatin,10-5M)

图26A-26C是PPARγ的表达

图26A是单独以FPP培养下KMUP-1的影响

1…对照组2…治疗组(KMUP-1,阳性对照)

3…治疗组(KMUP-1,10-9M)

4…治疗组(KMUP-1,10-8M)

5…治疗组(KMUP-1,10-7M)

6…治疗组(KMUP-1,10-6M)

7…治疗组(KMUP-1,10-5M)

图26B是单独以GGPP培养下KMUP-1的影响

1…对照组2…治疗组(KMUP-1,阳性对照)

3…治疗组(KMUP-1,10-9M)

4…治疗组(KMUP-1,10-8M)

5…治疗组(KMUP-1,10-7M)

6…治疗组(KMUP-1,10-6M)

7…治疗组(KMUP-1,10-5M)

图26C是simvastatin的影响

1…对照组2…溶媒

3…治疗组(simvastatin,阳性对照)

4…治疗组(simvastatin,10-9M)

5…治疗组(simvastatin,10-8M)

6…治疗组(simvastatin,10-7M)

7…治疗组(simvastatin,10-6M)

8…治疗组(simvastatin,10-5M)

图27A-27B是PKA的表达

图27A是存在着LDL，KMUP-1的影响

1…LDL对照组2…PKG对照组

3…LDLRs对于LDL4…LDLRs对于PKG

5…LDLR(KMUP-1,10μM)

6…PKG(KMUP-1,10μM)

7…LDLR(KMUP-1,20μM)

8…PKG(KMUP-1,20μM)

9.…LDLR(KMUP-1,40μM)

10.…PKG(KMUP-1,40μM)

图27B是KMUP-1影响着oxLDL

1…对照组2…oxLDL

3…oxLDL(200μg/ml)+KMUP-1(1μM)

4…oxLDL(200μg/ml)+KMUP-1(10μM)

5…oxLDL(200μg/ml)+KMUP-1(100μM)

图28A-28B是KMUP-1影响LDLRs的表达

图28A是1x10-4M浓度KMUP-1的亮视野图(brightFieldimage)

图28B是阴性对照组的荧光

1…LDLR2…亮视野图

图29A-29B是KMUP-1、辛伐他汀影响PKA的表达

图29A是KMUP-1的亮视野图(brightFieldimage)

图29B是辛伐他汀的亮视野图

图30是一般制备过程1与一般制备过程2

图31是小鼠实验流程流程A。

具体实施方式

根据本发明的一构想，哌嗪基类似物和哌嗪基复合类似物均可分为两大类，其一哌嗪基类似物包括由KMUPs化合物和西地那非类似物所组成，而哌嗪基复合类似物包括由KMUPs复合化合物和西地那非类似物复合化合物所组成。而RX是羧酸基团提供者，与KMUPs衍生物或是西地那非类似物的一活性剂相结合，可形成KMUPs复合化合物，或是西地那非类似物复合化合物。KMUPs复合化合物如通式KMUPs-RX所示，西地那非类似物复合化合物亦如通式西地那非类似物-RX所示。

在本发明的适当实施例，采用组合治疗(combinationtherapy)以治疗和/或防止肝脏的疾病。在本发明内详述，该治疗和/或防止所需组合物的制备和投予的方式。KMUPs衍生化合物或西地那非类似物的一活性剂，随具体治疗疾病所需投予的剂型，而采取单独投予或与一个或多个的活性剂一并投予以组合治疗方式发挥疗效。组合治疗包括投予一单一剂型的组合物，该组合物包含如结构式I所示KMUPs衍生化合物或西地那非类似物之一，和一个或更多相同剂型的额外活性剂(differentactiveagent)以及其它不相同投予剂型的额外活性剂，而各个活性剂可依照自己所构建的药物或是食品组成物剂型配方制作。

结构式I

在组合治疗的适当实施例，可能投予KMUPs衍生化合物或西地那非类似物的一活性剂所组成的单一剂型，其中包含额外的活性剂(differentactiveagent)。在其它的适当实施例，分别投予KMUPs衍生化合物或西地那非类似物的一化合物和其它额外的活性剂所组成的制剂；本质上投予的时间相同，例如同时投予，或者不同时间的相继地依序投予。在某些实施例，该组合治疗的投予，采取在疗程的不同时段单一组合制剂各自分开。亦或同时，交错和交替地投予药物或是食品制剂治疗。

在适当的实施例，例如，KMUPs衍生化合物或西地那非类似物的一化合物，于单一配方可采用如片剂或胶囊的口服剂型组成物投予病患，或各自分开的口服剂型组成物。将额外的活性剂制备成各自分开的口服剂型组成物，可于同一时间投予。在组合治疗的适当实施例，可采用适宜的投予途径包括口服(包括颊、舌下含锭)，直肠、鼻腔，呼吸道吸入(例如，液雾、干粉或雾化吸入的配方)、阴道，和注射(包括皮下、肌肉注射、静脉注射和皮下)，局部给药包括但并不仅限于喷剂、雾、气溶胶、液剂、乳液、凝胶、面霜、药膏、糊剂、油膏、乳剂(emulsion)和悬浮液，以口服或注射为佳。较佳的投予途径随着条件与年龄而变化。

可能其是单独投予活性剂原料，较佳为药物制剂剂型的一部分组成。在本发明的制剂，如上所述，包括主成分以及一个或多个可接受的载体和其它额外的治疗成分。载体必须是『药学上可接受』，其意义是与其它成分的配方具备兼容性，且并无和不利于病患。

根据本发明的上述构想，额外的活性剂(differentactiveagent)可能包括本发明的一个或多个其它药用活性剂。在较佳的实施例，本发明的组合物包含活性剂，包括组合对于病症具备疗效的药物。

在较佳的实施例，额外的活性剂包括Statin(他汀)类似物、共聚物(co-polymer)、聚γ-聚麸胺酸衍生物(poly-γ-polyglutamicacidderivative)、D-抗坏血酸(D-ascorbicacid)、L-抗坏血酸(L-ascorbicacid)、DL-抗坏血酸(DL-ascorbicacid)、油酸(oleicacid)、磷酸(phosphoricacid)、柠檬酸(citricacid)、烟碱酸(nicotinicacid)和羧甲基纤维素(sodiumcarboxylmethylcellulose,sodiumCMC)。

将药用活性剂以任何方式投予，至少其中一部分，较佳约1重量％至约100重量％可到达有机体的血液。因此，该活性剂可经由消化道或其它途径投予，例如，经由静脉滴注、皮下注射、肌内注射、吸入或经皮吸收等。

根据本发明的另一构想，揭示足以治疗如人类、山羊(goat)、羔羊(lamb)、猪(pig)、牛(cow)、鸡(chicken)、鸭(duck)等温血动物肝脏疾患的方法，该治疗必需投予上述动物足供疗效用量的哌嗪基类似物和哌嗪基复合的类似物，或药学可接受的盐、溶剂化物、溶剂，或盐或前药。

本发明揭示的药物组合物，包括哌嗪基类似物与哌嗪基复合类似物的活性剂，而该活性剂选自KMUPs衍生物、KMUPs-RX复合化合物、西地那非类似物与西地那非类似物-RX复合化合物之一。

本发明中揭示的一种药物组合物，其活性剂是茶碱基团的本体化合物，亦即KMUPs衍生物，具有增加环磷酸鸟苷(guanosine3'，5'-cyclicmonophosphate，cGMP)进行脂肪生成(adipogenesis)或是脂肪分解(lipoysis)作用，而参与磷酸化激素敏感性脂肪酶/脂肪甘油三酯脂肪酶(phosphorylatedhormone-sensitivetriglayceridelipase/Adiposetriglayceridelipase，p-HSL/ATGL)呈现治疗肝脏疾患的作用。该KMUPs衍生化合物，可经由茶碱化合物与哌嗪基化合物的反应，而后再结晶中间体。哌嗪基类似物、哌嗪基复合类似物拥有良好的溶解性、低毒和安全性。

本发明揭示的较佳药物组合物，包括如结构式I所示的KMUPs衍生物或其盐，其中取代基R2和R4各自选自C1～C5烷氧基团、氢原子、硝基和卤素原子，卤素是选自氟、氯、溴、碘等原子。

结构式I

本发明所揭示较佳的KMUPs衍生物，如结构式I所示为KMUP-1、KMUP-2、KMUP-3、KMUP-4。其中KMUP-1是其中R2取代基为氯原子且R4为氢原子，则其一般化学名为7-[2-[4-(2-氯苯)哌嗪基]乙基]-1,3-二甲基黄嘌呤(7-[2-[4-(2-chlorophenyl)piperazinyl]ethyl]-1,3-dimethylxanthine)。KMUP-2，其一般化学名为7-[2-[4-(2-甲氧基苯基)哌嗪基]乙基]-1,3-二甲基黄嘌呤(7-[2-[4-(2-methoxyphenyl)piperazinyl]ethyl]-1,3-dimethylxanthine)，其中取代基R2为甲氧基基团，且R4为氢原子。KMUP-3，其一般化学名为7-[2-[4-(4-硝基苯基)哌嗪基]乙基]-1,3-二甲基黄嘌呤(7-[2-[4-(4-nitrophenyl)piperazinyl]ethyl]-1,3-dimethylxanthine)，其中取代基R2为氢原子且R4为硝基基团。KMUP-4，其一般化学名为7-[2-[4-(2-硝基苯基)哌嗪基]乙基]-1,3-二甲基黄嘌呤(7-[2-[4-(2-nitrophenyl)piperazinyl]ethyl]-1,3-dimethylxanthine)，其中取代基R2为硝基基团且R4为氢原子。

本发明揭示的KMUPs复合化合物，包括有如结构式II所示的KMUPs-RX或式III所示的KMUPs-RX-RX，其中取代基R2和R4各自选自C1～C5烷氧基团、氢原子、硝基和卤素原子；RX包括提供羧酸基团的Statin(他汀)类似物、共聚物、聚γ-聚麸胺酸衍生物、D-抗坏血酸、L-抗坏血酸、DL-抗坏血酸、油酸、磷酸、柠檬酸、烟碱酸和羧甲基纤维素；和-RX为提供羧酸基团的带负电阴离子包括Statin(他汀)类似物、共聚物、聚γ-聚麸胺酸衍生物、D-抗坏血酸、L-抗坏血酸、DL-抗坏血酸、油酸、磷酸、柠檬酸、烟碱酸和羧甲基纤维素。

结构式II

结构式III

上述他汀类类似物(statinsanalogues)，较佳的药物包括市售的他汀类衍生药物如阿伐他汀(Atorvastatin)、西立伐他汀(Cerivastatin)、氟伐他汀(Fluvastatin)、洛伐他汀(Lovastatin)、美伐他汀(Mevastatin)、普伐他汀(Pravastatin)、罗伐他汀(Rosuvastatin)、辛伐他汀(Simvastatin)和普玛他汀酸(Pravastatinacid)。共聚物(co-polymer)是一种选自包括玻尿酸(hyaluronicacid)、聚丙烯酸(polyacrylicacid)、聚甲基丙烯酸(polymethacrylates,PMMA)、丙烯酸树脂(Eudragit)、葡聚糖硫酸(dextransulfate)、硫酸乙酰肝素(heparansulfate)、聚乳酸(polylacticacid,PLA)、聚乳酸钠(polylacticacidsodium)和聚羟基磺酸钠(polyglycolicacidsodium,PGAsodium)的组成或其组合。聚γ-聚麸胺酸(Poly-γ-polyglutamicacid,γ-PGA)衍生物是选自包括海藻酸钠(alginatesodium)、聚γ-聚麸胺酸钠(γ-PGAsodium)、聚-γ-聚麸胺酸(poly-γ-polyglutamicacid,γ-PGA)和海藻酸钠-聚-赖氨酸-海藻酸钠(alginate-poly-lysine-alginate,APA)的组成或其组合。玻尿酸系一种聚合物，D-葡萄糖醛酸(D-glucuronicacid)和N-乙酰氨基葡萄糖(N-acetylglucosamine,NAG)是以单位的交替地方式加以组成。丙烯酸树脂是一系列由丙烯酸和甲基丙烯酸酯类形成共聚物的商品名。

KMUPs衍生化合物是选自KMUP-1、KMUP-2、KMUP-3、KMUP-4及其药学可接受的盐所组成的一组。较佳的实施例，该药物组合物，更包括至少一个药学上可接受的载体和辅料。

为了达到上述目地，结构式I盐，结构式II和结构式III可以从2-氯基乙基茶碱(2-Chloroethyltheophylline)化合物和哌嗪基(piperazine)取代的化合物经由合成方式加以制备。正如下列实例所述的一般制备过程(generalprocedures)，可制备形成下列结构式I的盐和KMUPs复合化合物。

哌嗪基取代的化合物(piperazinesubstitutedcompound)

一般制备过程1其中N-Rm取代基选自含氮基团的3元环到8元环，则取代基N-Rm-R1部分结构是选自环氮乙烷环(azirinering,)、吖丁啶环(azetidinering,)、吡咯烷环(pyrrolidinering,)、哌啶环(piperidinering,)、哌嗪环(piperazinylring,)。R1取代基选自氢基、卤素基、C1-C6烷基、C1-C5烷氧基。一般制备过程1的步骤，包括将2-氯基乙基茶碱和哌嗪基取代化合物溶于含水乙醇溶液，参与反应试剂的用量应根据分子重量百分比加以调整。添加一个强大碱性试剂如氢氧化钠(NaOH)或碳酸氢钠(NaHCO3)，使溶液呈现完全碱性或足够碱性后，进行加热3小时的回流过程。经过夜冷却，倾倒出上清液，以真空浓缩脱除溶媒，以1倍量乙醇与3倍量2N盐酸(HCl)的大量溶媒将残留物溶解，保持在50℃至60℃，使饱和溶液的酸碱值为pH1.2。将饱和的溶液依序以活性炭脱色、过滤、过夜及过滤处理可获得KMUP-1HCl的白色晶体。

一般制备过程2包括步骤，将2-氯乙基茶碱和哌嗪基取代化合物溶于含水乙醇溶液，参与反应试剂的用量应根据分子重量百分比加以调整。然后，进行加热3小时的回流过程。经过夜冷却，倾倒出上清液，以真空浓缩脱除溶媒，以1倍量乙醇与3倍量2N盐酸(HCl)的大量溶媒将残留物溶解，保持在50℃至60℃，使饱和溶液的酸碱值为pH1.2。将饱和的溶液依序以活性碳脱色、过滤、过夜及过滤处理可获得KMUP-1HCl的白色晶体。

依照一般制备过程1或2，结构式I的KMUPs衍生物可从2-氯基乙基茶碱化合物和哌嗪基取代化合物，直接地合成。在本发明的较佳实施例，含茶碱基团的衍生物，亦即KMUPs衍生物，经与含有哌嗪基的化合物进行反应后，将此中间体结晶，获得产物。于较佳实施例KMUP-1、KMUP-2、KMUP-3和KMUP-4药学可接受的盐，是柠檬酸盐、烟碱酸盐和盐酸盐。

从而，KMUPs化合物亦可代表KMUPs复合化合物。于较佳实施例，KMUP-1溶于乙醇和γ-聚麸胺酸的混合溶液。在加热反应后，室温下添加甲醇溶解，过夜结晶和过滤后获得KMUP-1-γ-聚麸胺酸复合化合物。依照上述一般制备过程1或2，以充足KMUPs衍生物用量与含羧酸基团的RX参与反应，可获得结构式II的KMUPs复合化合物。而且所述的RX包括Statin(他汀)类似物、共聚物、聚γ-聚麸胺酸衍生物、D-抗坏血酸、L-抗坏血酸、DL-抗坏血酸、油酸、磷酸、柠檬酸、烟碱酸和羧甲基纤维素。运用本发明的制备方法，以其所含充足的羧酸基团当可与KMUPs衍生物参与反应，获得结构式III的KMUPs复合化合物。所合成KMUPs复合化合物，于生物体内可经由化学或是酶的水解作用，呈现前药(pro-drug)及多数治疗功能。结构式II的KMUPs复合化合物亦可以KMUP-RX复合化合物表示，结构式III的KMUPs复合化合物亦可以KMUP-RX-RX复合化合物表示。

较特别的KMUP-RX复合化合物实施例，其中的KMUPs衍生物可拥有多样性，因而KMUP-RX复合化合物包括KMUP-1-阿伐他汀复合化合物、KMUP-2-阿伐他汀复合化合物、KMUP-3-阿伐他汀复合化合物、KMUP-4-阿伐他汀复合化合物；KMUP-1-西立伐他汀复合化合物、KMUP-2-西立伐他汀复合化合物、KMUP-3-西立伐他汀复合化合物、KMUP-4-西立伐他汀复合化合物；KMUP-1-氟伐他汀复合化合物、KMUP-2-氟伐他汀复合化合物、KMUP-3-氟伐他汀复合化合物、KMUP-4-氟伐他汀复合化合物；KMUP-1-洛伐他汀复合化合物、KMUP-2-洛伐他汀复合化合物、KMUP-3-洛伐他汀复合化合物、KMUP-4-洛伐他汀复合化合物；KMUP-1-美伐他汀复合化合物、KMUP-2-美伐他汀复合化合物、KMUP-3-美伐他汀复合化合物、KMUP-4-美伐他汀复合化合物；KMUP-1-普伐他汀复合化合物、KMUP-2-普伐他汀复合化合物、KMUP-3-普伐他汀复合化合物、KMUP-4-普伐他汀复合化合物；KMUP-1-罗伐他汀复合化合物、KMUP-2-罗伐他汀复合化合物、KMUP-3-罗伐他汀复合化合物、KMUP-4-罗伐他汀复合化合物；KMUP-1-辛伐他汀复合化合物、KMUP-2-辛伐他汀复合化合物、KMUP-3-辛伐他汀复合化合物、KMUP-4-辛伐他汀复合化合物；KMUP-1-抗坏血酸复合化合物、KMUP-2-抗坏血酸复合化合物、KMUP-3-抗坏血酸复合化合物、KMUP-4-抗坏血酸复合化合物；KMUP-1-磷酸复合化合物、KMUP-2-磷酸复合化合物、KMUP-3-磷酸复合化合物、KMUP-4-磷酸复合化合物；KMUP-1-羧甲基纤维素复合化合物、KMUP-2-羧甲基纤维素复合化合物、KMUP-3-羧甲基纤维素复合化合物、KMUP-4-羧甲基纤维素复合化合物；KMUP-1-聚丙烯酸复合化合物、KMUP-2-聚丙烯酸复合化合物、KMUP-3-聚丙烯酸复合化合物、KMUP-4-聚丙烯酸复合化合物；KMUP-1-丙烯酸树脂复合化合物、KMUP-2-丙烯酸树脂复合化合物、KMUP-3-丙烯酸树脂复合化合物、KMUP-4-丙烯酸树脂复合化合物；KMUP-1-聚乳酸复合化合物、KMUP-2-聚乳酸复合化合物、KMUP-3-聚乳酸复合化合物、KMUP-4-聚乳酸复合化合物；KMUP-1-聚羟基磺酸复合化合物、KMUP-2-聚羟基磺酸复合化合物、KMUP-3-聚羟基磺酸复合化合物、KMUP-4-聚羟基磺酸复合化合物；KMUP-1-葡聚糖硫酸复合化合物、KMUP-2-葡聚糖硫酸复合化合物、KMUP-3-葡聚糖硫酸复合化合物、KMUP-4-葡聚糖硫酸复合化合物；KMUP-1-硫酸乙酰肝素复合化合物、KMUP-2-硫酸乙酰肝素复合化合物、KMUP-3-硫酸乙酰肝素复合化合物、KMUP-4-硫酸乙酰肝素复合化合物；KMUP-1-海藻酸复合化合物、KMUP-2-海藻酸复合化合物、KMUP-3-海藻酸复合化合物、KMUP-4-海藻酸复合化合物；KMUP-1-聚γ-聚麸胺酸复合化合物、KMUP-2-聚γ-聚麸胺酸复合化合物、KMUP-3-聚γ-聚麸胺酸复合化合物、KMUP-4-聚γ-聚麸胺酸复合化合物；KMUP-1-海藻酸钠-聚-赖氨酸-海藻酸钠复合化合物、KMUP-2-海藻酸钠-聚-赖氨酸-海藻酸钠复合化合物、KMUP-3-海藻酸钠-聚-赖氨酸-海藻酸钠复合化合物、KMUP-4-海藻酸钠-聚-赖氨酸-海藻酸钠复合化合物等等。

又从本发明的额外构想，为获得临床所需的疗效，可将KMUPs衍生物、KMUPs复合化合物、西地那非类似物(SildenafilAnalogs)、西地那非类似物-RX复合化合物，投予温血动物。投予方法可为口服、皮下、注射、肌肉注射，或皮下注射。

较佳的实施例，所谓『西地那非类似化合物』此处是指选自西地那非(Sildenafil)、羟基那猫西地那非(Hydroxyhomosildenafil)、去甲西地那非(Desmethylsildenafil)、红地那非(Acetidenafil)、乌地那非(Udenafil)、伐地那非(Vardenafil)和那猫西地那非(Homosildenafil)的组成。西地那非化合物的化学名为5-[2-乙氧基-5-(4-甲基哌嗪-1-基-磺酰)苯基]-1-甲基-3-n-丙基-1,6-二氢-7H-吡唑并[4,3d]嘧啶-7-酮(5-[2-ethoxy-5-(4-methylpiperazin-1-yl-sulphonyl)phenyl]-1-methyl-3-n-propyl-1,6-dihydro-7H-pyrazolo[4,3d]pyrimidin-7-one)或是1-[[3-(4,7-二氢-1-甲基-7-氧基-3-丙基-1氢-吡唑并[4,3d]嘧啶-5-基)-4-乙氧基苯基]磺酰]-4-甲基哌嗪(1-[[3-(4,7-dihydro-1-methyl-7-oxo-3-propyl-1H-pyrazolo[4,3-d]pyrimidin-5-yl)-4-ethoxy-phenyl]sulfonyl]-4-methylpiperazine)。Hydroxyhomo-Sildenafil化合物的化学名为1-[[3-(6,7-二氢-1-甲基-7-氧基-3-丙基-1氢-吡唑并[4,3d]嘧啶-5-基)-4-乙氧基苯基]磺酰]-4-羟基乙基哌嗪(1-[[3-(6,7-dihydro-1-methyl-7-oxo-3-propyl-1H-pyrazolo[4,3-d]pyrimidin-5-yl)-4-ethoxy-phenyl]sulfonyl]-4-hydroxyethyl-piperazine)。Desmethyl-sildenafil化合物的化学名为5-[2-乙氧基-5-(1-哌嗪磺酰)-苯基]-1,6-二氢-1-甲基-3-丙基-7氢-吡唑并[4,3d]嘧啶-7-酮(5-[2-ethoxy-5-(1-piperazinylsulfonyl)-phenyl]-1,6-dihydro-1-methyl-3-propyl-7H-pyrazolo[4,3-d]pyrimidin-7-one)。红地那非(Acetidenafil)化合物的化学名为5-{2-乙氧基-5-[2-(4-乙基哌嗪-1-基)-乙酰基]苯基}-1-甲基-3-丙基-1,6-二氢-7氢-吡唑并[4,3d]嘧啶-7-酮(5-{2-ethoxy-5-[2-(4-ethylpiperazine-1-yl)-acetyl]phenyl}-1-methyl-3-n-propyl-1,6-dihydro-7H-pyrazolo[4,3-d]pyrimidin-7-one)。乌地那非(Udenafil)化合物的化学名为5-[2-丙氧基-5-(1-甲基-2-吡咯烷乙基酰胺基)苯基]-1-甲基-3-丙基-1,6-二氢-7氢-吡唑并[4,3d]嘧啶-7-酮(5-[2-propyloxy-5-(1-methyl-2-pyrollidinylethylamido-sulfonyl)phenyl]-1-methyl-3-propyl-1,6-dihydro-7H-pyrazolo[4,3-d]pyrimidine-7-one)。那猫西地那非(Homosildenafil)化合物的化学名为5-[2-乙氧基-5-[(4-乙基-1-哌嗪)磺酰苯基]-1,6-二氢-1-甲基-3-丙基-7H-吡唑并[4,3d]嘧啶-7-酮(5-[2-ethoxy-5-[(4-ethyl-1-piperazinyl)sulfonylphenyl]-1,6-dihydro-1-methyl-3-propyl-7H-pyrazolo[4,3-d]pyrimidin-7-one)。

西地那非类似化合物(SildenafilAnalogsderivativecompoundscompound)

从西地那非柠檬酸与西地那非制备西地那非类似物复合化合物(PreparationofSildenafilanalogscomplexcompoundsfromSildenafilcitrateandSildenafil)

西地那非类似物复合化合物，可按照上述的一般制备过程，制备一般结构式的西地那非类似物-RX复合化合物。较佳的实施例，将西地那非柠檬酸溶解和悬浮在氢氧化钠溶液。过滤出柠檬酸钠后，令西地那非碱沉淀，在50℃下添加到等分子重量抗坏血酸的甲醇溶液进行反应。在烧瓶中过夜冷却后，过滤，获得白色沉淀，从乙醇再结晶为西地那非抗坏血酸复合化合物。

在另一实施例，西地那非柠檬酸溶解在蒸馏水，以盐酸溶液调整pH值为7.0，经乙酸乙酯萃取，于水层的柠檬酸、盐酸及氯化钠加以倾除、分离。减压浓缩乙酸乙酯层，获得西地那非碱。在50℃下，将含羧酸基团的RX和西地那非碱溶于甲醇进行反应。静置过夜，经由过滤获得白色沉淀，从乙醇重结晶获得西地那非-RX复合化合物。

尚有另一实施例，在50℃下，令西地那非盐酸盐与等分子重量RX的羧酸钠(sodiumcarboxylate)溶于甲醇进行反应。过夜冷却，经由过滤、从乙醇重结晶获得西地那非-RX复合化合物。

上述的碱化制备过程，于一西地那非类似物衍生物的盐酸盐与一RX基团可获得西地那非类似物复合化合物。

术语赋形剂或『药学上可接受的载体或赋形剂』和『生物可用的载体或赋形剂』，于制备的剂型所使用任何适当的化合物，均包括已知的赋形剂如溶剂、分散剂、涂料、抗生素、抗真菌剂和防腐剂或延迟的吸水剂。通常情况下，载体或赋形剂本身不具备疗效。本发明揭露将衍生物和药学上可接受的载体或赋形剂结合的配方，投予于动物或人类，不致于导致意外的产生、过敏或其它不适当的影响。因此，在本发明将药学上可接受的载体或赋形剂与衍生品结合所揭露的配方，适用于人类临床的应用。

经由使用合适的剂型，可以达到治疗的效果。尤其，取决于投予或用药途径例如静脉，口腔和吸入方式或经由鼻、直肠和阴道给药。此等剂型的化合物均可到达病灶细胞。各种疾病的患者每天投予具活性的成分，约0.1毫克至1000毫克。较佳的实施例，患者口服KMUPs衍生物、西地那非类似物或KMUPs复合化合物、西地那非类似物-RX复合化合物单一剂量大约每公斤体重的剂量1-2.5毫克。

依照各配方的需求，无菌注射组成物的载体或赋形剂，可溶解或悬浮于无毒性适用于静脉注射的稀释剂或溶剂的1,3-丁二醇。以及其它可接受的载体如甘露醇或水。此外，固定油(fixingoil)、合成的甘油三酯或双甘油三酯(di-glycerolester)均为常用溶剂。如油酸、橄榄油或蓖麻油和丙三醇衍生物等脂肪酸，尤其是乙酰化类型(oxy-acetylatedtype)，可制备为注射油和天然的药学上可接受油。此等油溶液或悬浮液可能包含长链醇类稀释剂(alcoholdiluent)或分散剂、羧甲基纤维素或类似的分散剂。其它载体如Tween、Spans或其它类似的乳液或药学上可接受的固体、液体或其它生物可用的促进剂，药学上可接受配方的常见表面活性剂。

口服投予组成物采用任何口服可接受的配方，包括胶囊、锭剂、丸剂、乳液、悬浮分散剂、溶剂。一般用于口服制剂的载体，以锭剂为例可能是乳糖，玉米淀粉，润滑剂和镁硬脂酸盐等基本的添加剂。而胶囊使用的稀释剂包括乳糖、干燥的玉米淀粉。制备悬浮液或乳状液配方，其活性成分是悬浮或溶解在乳液或悬浮剂，并根据需要添加适量的甜味剂，香料或色素。

本发明的哌嗪基类似物亦可制备为为皮下、注射、肌肉注射，或关节内、颅内、关节腔内流体和脊髓内注射、动脉注射、胸骨注射、疤痕内注射(intra-lesioninjection)或其它适当的注射投药。

术语『食品组成物(foodcompositions)』将产品和成分，经由口腔摄取，而由胃肠道吸收后，其成分可滋养身体及组织、或令人们恢复劳倦、感官的欢愉。例如茶的食品和饮料，冰淇淋，冷冻的水果和蔬菜，减肥食品和饮料类点心以及膳食替代品(mealsubstitute)或代餐(mealreplacement)。食品组成物可能对于人类的益处：影响新陈代谢、延长寿命、生长状态或胃肠道功能的最佳化、避免肝脏的疾病。

本发明所揭示的药物组合物是以含有哌嗪基团的本体化合物作为活性剂，能从脂肪组织至肝脏移动过程有效地抑制油脂积累，减少脂肪性肝炎和体内的脂肪垫，该药物组合物与经由脂肪消减而降低体重因而保护脂肪性肝炎有关。

棕色脂肪组织的脂肪分解(Lipolysis)是经由生化途径，将储存在脂肪组织油滴(oilglobulets)内的三酸甘油酯(triacylglycerol)加以分解；此种分解三酸甘油酯而生成非酯化脂肪酸(non-esterifiedfattyacids)，能令此等棕色细胞类脂肪组织作为能量的来源。咖啡因经由增强蛋白激酶A(ProteinkinaseA，PKA)，运用磷酸化油滴的包脂滴蛋白(perilipin)而促使激素敏感性脂肪酶(hormone-sensitivetriglayceridelipase，HSL)、磷酸化激素敏感性脂肪酶(p-HSL)或是脂肪甘油三酯脂肪酶(Adiposetriglayceridelipase，ATGL)进行脂肪分解。

G蛋白偶联受体(Gproteincoupledreceptors，GPCRs)是常见的潜在性药理标的，然而目前甚少报告该G蛋白偶联受体拮抗剂，可抑制脂肪组织的分化。而G蛋白偶联受体调控主要激酶的活性，包括促分裂素原活化蛋白激酶(mitogen-activatedproteinkinase，MAPK)、细胞外信号调节激酶(extracellularsignal-regulatedproteinkinases，ERK)和丝裂原活化蛋白激酶激酶1(Mitogen-activatedproteinkinasekinase1，MEK1)，因此GPCR拮抗剂似乎因为能作为脂肪细胞分化或脂肪分解的鉴定标的，而增加其重要性。

经由高脂肪食品(high-fatdiet，HFD)可造成过度肥胖(hyperadiposity)的肝脏脂肪变性(Hepaticsteaotosis)；该类肝脏组织的过度肥胖包括在肝脏因为炎症反应而并发脂质蓄积(lipidaccumulation)，以及导致更严重的肝脏损伤。经由长期食用高脂肪食品，而诱发活性氧簇(reactiveoxygenspecies，ROS)通常生物体亦伴随着呈现的氧化应激状态，而并发造成脂肪性肝炎(steatohepatitis)。高脂肪食品所造成的肥胖，则由于活性氧簇而呈现氧化应激状态，间接地可增加肝细胞的促分裂素原活化蛋白激酶(MAPK)和细胞外信号调节激酶(ERK)的表达。本发明叙述发现被巨噬细胞包围的脂肪细胞，能抑制活性氧簇、抑制炎症的肿瘤坏死因子(tumornecrosisfactoralpha，TNF-α)和基质金属蛋白酶-9(Matrixmetallopeptidase，MMP-9)。

肥胖动物其脂肪组织炎症的特性，受经典激发的巨噬细胞(classicallyactivatedmacrophages，CAM，M1)、M1/M2开关(M1/M2switching)所调控；大多数HFD诱导肝脏炎症可经由巨噬细胞的免疫染色(immunostaining)而呈现。

提高高密度脂蛋白(highdensitylipoprotein,HDL)和降低密度脂蛋白(low-densityoflipoprotein,LDL)含量的疗法，被认为可运用eNOS的激发、增加过氧化物酶体增殖物活化受体γ(peroxisomeproliferatoractivatedreceptorγ,PPARγ)以及抑制清道夫受体B族1型(scavengerreceptorclassBtype1，SR-B1)影响粥样含量。

肝细胞经由甲羟戊酸(mevalonate)生合成异戊二烯化合物的法尼酯焦磷酸(farnesylpyrophosphate,FPP)和香叶基香叶基焦磷酸(geranylgeranylpyrophosphate,GGPP)，而后形成胆固醇的过程，statins类药物可竞争性地抑制3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶(3-hydroxy-3-methylglutaryl-CoAreductase,HMGCoAreductase,HMGR)而减少甲羟戊酸的生成进而影响胆固醇产量。香叶基香叶基焦磷酸的衍生活化RhoA/ROCKII，后续介入PPARγ参与高密度脂蛋白(HDL)的增加。人类转运体亚族成员的一ATP结合盒转运体(ATP-bindingcassettetransporter,ABCA1)，与载脂蛋白A-I(apolipoproteinA-I,ApoA-I)参与着胆固醇流出的调控，此等物质影响着高密度脂蛋白的主要蛋白质成分。

细胞内胆固醇能否稳态存在，部分受PPARs和肝X受体(LiverXreceptor，LXRα)所影响。他汀类药物导致RhoA/ROCK的失活有助于激发LXRα/PPARs以及呈现多效性作用。异戊二烯化合物中间体能影响PPARs和LXRα的激活。而受激的异戊二烯化合物产生FPP和GGPP，其抑制着ABCA1是直接经由LXRα的拮抗作用和四异戊二烯化(geranylgeranylation)的激活而间接经由RhoA。在脂肪储存方面其PPARγ的表达，伴随着炎症的生成。

食用高脂肪食品导致血清甘油三酯(triglyceride,TG)、总胆固醇(totalcholesterol)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL)与对照组(非HFD组)相比较呈现其值大幅增加的现象。投予哌嗪基类似物可显著改善HFD诱导的高胆固醇血症。特别是，高密度脂蛋白胆固醇水平显著增高的KMUP-1和辛伐他汀。

饲料摄取影响着体重增加量、血清内脂肪的状态(Effectsonweightgain,foodintakeandlipidprofilesinserum)

如表一所示，以标准饲料(standarddiet，STD)或是高脂肪饲料(high-fatdiet，HFD)喂饲8周的小鼠，其体重的增加量(weightgain)。为期8周投予高脂肪饲料，则该组小鼠体重的增加量与标准饲料相比较呈现显著地增加现象(p<0.05)。每天经口投予(p.o.)2.5、5毫克/公斤的KMUP-1或是5毫克/公斤的辛伐他汀(simvastatin)，其体重的增加量与高脂肪饲料组相比较均呈现减少现象(p<0.05)。而辛伐他汀降低该体重的增加量以及甘油三酯残留含量，与KMUP-1相比较分别呈现较少或是较多的现象。

喂饲高脂肪饲料组血清的甘油三酯(triglayceride，TG)、总胆固醇(totalcholesterol)、低密度脂蛋白胆固醇(Lowdensitylipoproteincholesterol,LDL)，与标准饲料组相比较呈现显著增加现象。而高脂肪饲料诱发高胆固醇血症(hypercholesterolemia)，经投予KMUP-1可显著地改善。尤其，高密度脂蛋白胆固醇(high-densitylipoproteincholesterol，HDLcholesterol)含量，经投予KMUP-1或是辛伐他汀呈现显著增加。喂饲高脂肪饲料8周的小鼠，于期满到第14周，其饲料摄取量下降，或许尚有些未知因素影响饲料的摄取。

表一

(note)Simva＝辛伐他汀(Simvastatin),

TG＝Triacylglycerol(mg/dl),chol.＝cholesterol(mg/dl),

Tot.chol.＝totalcholesterol(mg/dl),

HDL＝HDLcholesterol(mg/dl),LDL＝LDLcholesterol(mg/dl),

摄取量(g/day)＝每天饲料的摄取量(intake),

起始体重(g)＝initialBody-weight(initialBW),

最终体重(g)＝Body-weight(finalBW),

增加量(g/day)＝每天体重的增加量(BWgain),

KMUP-1-RX复合化合物影响小鼠脂肪的状态(EffectsofKMUP-1-RXonlipidlevelsofmice)

表二

(note)剂量＝Dose(mg/kg)

TG＝Triacylglycerol(mg/dl),chol.＝cholesterol(mg/dl),

Tot.chol.＝totalcholesterol(mg/dl),

HDL＝HDLcholesterol(mg/dl),LDL＝LDLcholesterol(mg/dl),

Simva＝Simvastatin,SimvastatinicAcid

KMUP-1-CMC＝KMUP-1-sodiumcarboxylmethylcellulose

KMUP-1-HA＝KMUP-1-hyaluronicacid

KMUP-1-PAA＝KMUP-1-Polyacrylicacid

KMUP-1-PGA＝KMUP-1-γ-polyglutamicAcid

KMUP-1-PGCA＝polyglycolicacid

肝脏的重量与整体形态的改变(Weightchangesandgrossmorphologyofliver)

让高脂肪饲料小鼠组经由饮用方式投予200毫升含有2.5毫克KMUP-1盐酸盐的液态药物，如图1显示，不论于预防组或是治疗组，均可减少其因喂食高脂肪饲料而增加体重的现象。喂食高脂肪饲料小鼠，如图2A所示肝脏表面可发现大量的白色脂肪组织。于预防组可显著地减少脂肪组织，如图2C所示，与治疗组的肝脏相比较呈现显著现象。

高脂肪饲料诱发肝脏内SR-B1的表达(HFD-inducedSR-B1expressioninliver)

如图3A所示，喂饲高脂肪饲料(HFD)小鼠，饮用KMUP-1液态药物，可发现能抑制HFD诱发肝脏清道夫受体B族1型(scavengerreceptorclassBtype1，SR-B1)的表达。如图3B所示，不论于预防组或是治疗组，均可促进蛋白激酶A/蛋白激酶G(PKA/PKG)的表达。

肝脏内油滴的量测(Measurementofoilglobuletsinliver)

如图4A底部所示，10、25、50和100μm油滴的直径标准。估计各油滴相对应的直径为6、21、24和25μm，如图4B显示，直径变化和油滴数目的分布情况。油滴的计数采取从直径较大到较小的顺序进行观察。

肝脏组织的苏木精-伊红染色(H&Estainingofliver)

如图5A所示从喂食14周高脂肪饲料小鼠所分离的发炎肝脏组织，与图5B喂食高脂肪饲料以及KMUP-1预防组小鼠的红棕色肝脏组织相比较，整体肝脏呈现大量的白色脂肪组织。如图5所示苏木精-伊红(Hematoxylinandeosin，H&E)染色的肝脏切片细胞，而不论是以高脂肪饲料喂饲的治疗组(图5B)或预防组(图5C)，其小鼠肝脏可运用有机溶剂清洗呈现大空泡的脂肪球(macrovesicularfatglobules)。喂食高脂肪饲料的肥胖小鼠，从第8周起投予2.5毫克浓度KMUP-1到14周共6周治疗组，如图5B白色箭头所示大空泡的脂肪球，亦可发现玻璃样透明体(Mallory'shyalinebodies)。而图5C所示，以2.5毫克/千克浓度投予KMUP-1预处理6周/14周，其脂肪球减少，玻璃样透明体几乎消失。

炎症的TNF-α和MMP-9的IHC染色(IHCstainingofinflammatoryTNF-αandMMP-9insteatohepatitis)

如图6B所示，喂食高脂肪饲料小鼠以2.5毫克/千克浓度KMUP-1投予14周的预防组，或图6C所示6周的治疗组，经免疫组织化学染色(immunohistochemistry，IHC)的肝脏组织切片，呈现些抑制肿瘤坏死因子-α(tumornecrosisfactoralpha，TNF-α)的作用。

肿瘤坏死因子-α的深棕色抗体应答，于预防组或治疗组呈现不一样的遮蔽现象，其中油滴几乎消失，然而如图7A所示应答色泽并无大幅度地减少，显示抗发炎作用不彰。基质金属蛋白酶-9(Matrixmetallopeptidase9，MMP-9)的深棕色抗体应答，如图7B所示于治疗组亦呈现遮蔽现象，油滴于治疗组亦几乎消失。油滴直径变化和数目的分布，于预防组或治疗组呈现大幅度地减少。于阴性对照组，投予KMUP-1的预防组或治疗组，即使不再增加抗体，喂食高脂肪饲料小鼠的肝脏组织切片内油滴呈现几乎消失现象。

以IHC染色的脂肪性肝炎HSL/p-HSL/ATGL(IHCstainingofHSL/p-HSL/ATGLinsteatohepatitis)

喂食高脂肪饲料小鼠的肝脏组织切片，如图7C、图7D所示，对照组的促使激素敏感性脂肪酶/磷酸化激素敏感性脂肪酶(HSL/p-HSL)呈现深棕色，显示包含大量的发炎性蛋白质或酶，如发炎性基质金属蛋白酶-9/肿瘤坏死因子-α，失活的促使激素敏感性脂肪酶/p-HSL/内脂肪甘油三酯脂肪酶(ATGL)，白色油滴的肥胖过度以及肥胖肝脏生成的活性氧簇(ROS)产物。预防组或治疗组，其白色油滴减少，是因为KMUP-1活化p-HSL产生脂肪分解，但是并非完全是HSL所造成脂解的结果。投予KMUP-1的治疗组或预防组，部分可增加HSL，亦可经由活化ATGL同时改变些p-HSL现象。如图7E所示，HSL同时改变油滴数量和直径。抗体应答伴随着多数油滴数量的改变，经染色的p-HSL在预防组比治疗组更显著，表明KMUP-1抑制脂肪性肝炎的主要角色p-HSL比HSL还突出。

同样地抗体应答和油滴数量数变化，经染色的ATGL，显示KMUP-1诱发脂解抑制脂肪性肝炎，在预防组与治疗组相比较，ATGL是重要角色。

经免疫组织化学染色脂肪肝炎的2种巨噬细胞(IHCstainingoftype1ortype2macrophages(M1orM2)insteatohepatitis)

如图所示以F4/80和CD11c(图8)染料进行经典启动的巨噬细胞(M1)的免疫组织化学染色，以CD206和CD209a(图9)染料进行替代启动的巨噬细胞(M2)的免疫组织化学染色。其中CD209a染色，是极敏感的抗体应答。喂食高脂肪饲料小鼠的肝脏组织，可发现大量的白色油滴，显示过度肥胖(hyperadiposity)导致脂肪性肝炎。该白色油滴受背景颜色的干扰，而影响对比差异的区分程度。巨噬细胞M1内的油滴数量及直径显现于图10A、图10B，中央为KMUP-1的治疗组，右侧为预防组。所有标本经免疫组织化学染色(IHC)的图像，于相同的光照条件进行光镜观察。对于巨噬细胞M1或M2型的所有抗体应答，经计算机计算颜色强度，平均区分为4类型饱和度。如图10A、图10B、图11A以及图11B所示，预防组的油滴直径变化和治疗组相比较，呈现显著差异。

附睾脂肪垫的苏木精-伊红染色(H&Estainingoffatpads)

喂食高脂肪饲料诱发小鼠的肥厚/增生白细胞类型附睾脂肪垫(epididymalfatpad)，经苏木精-伊红(H&E)染色的切片，显示投予2.5毫克/千克浓度KMUP-1的预防组，可呈现抑制效果。如图12所示，喂食高脂肪饲料的附睾脂肪垫重量呈现增加，投予KMUP-1进行14周的治疗组，可减少其重量。如图13显示，KMUP-1每天投予2.5毫克/公斤浓度的预防组，其附睾脂肪垫重量以及脂肪细胞直径均呈现显著地减少现象。

经免疫组织化学染色附睾脂肪垫的eNOS/HSL以及IL-10/TNF-α(IHCstainingofeNOS/HSLandIL-10/TNF-αinepididymalfatpads)

喂食高脂肪饲料进行为期14周诱发的脂肪组织，经免疫组织化学(IHC)染色如图所示分别为eNOS(图14)、HSL(图15)、白细胞介素-10(IL-10，图16)，肿瘤坏死因数-α(TNF-α，图17)。每天投予2.5毫克/千克浓度KMUP-1的预防组，可抑制eNOS、TNF-α，而增加HSL、IL-10分别显示能改变附睾脂肪垫的免疫应答。

高脂肪饲料诱发肝脏内SR-B1、HMGCoAreductase、ROCKII、PPARγ与ABCA1的表达(HFD-inducedHMGCoAreductase,ROCKII,PPARγandABCA1expressioninliver)

喂饲高脂肪饲料老鼠8周后，经口强饲KMUP-1和辛伐他汀能影响3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶(HMGCoAreductase)受高脂肪饲料减少的表达。喂饲高脂肪饲料老鼠与标准饲料组相比较，该还原酶的表达呈现减少现象。经口投予2.5、5毫克/公斤浓度的KMUP-1(图18)和5毫克/千克浓度的辛伐他汀(simvastatin)，如图19所示，均可显著地可逆肝脏内受到高脂肪饲料而降低3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶的表达。此外KMUP-1亦能激活喂饲高脂肪饲料小鼠肝脏内PPARγ(图20)、ABCA1(图21)的表达，令其ROCKII失活。

HepG2细胞血清/生理食盐水和甲羟戊酸诱导HMGCoAreductase的表达(Serum/vehicleandmevalonate-inducedHMGCoAreductaseexpression)

以含血清/生理食盐水的培养基培养HepG2细胞，投予KMUP-1(图22A)、或10-9～10-5M辛伐他汀(图22B)培养24小时，与生理食盐水或溶液的对照组相比较，KMUP-1或辛伐他汀均随着浓度的增加，3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶的表达亦呈现依存性增加。于HepG2细胞培养基添加60、80、100μM的甲羟戊酸(mevalonate)，如图23A所示随着浓度的增加3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶的表达下降呈现依存性现象。以100μM甲羟戊酸，能大幅抑制3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶的表达；以甲羟戊酸与10-5M浓度的KMUP-1的组合，如图23B所示能逆转该抑制作用，显示3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶最终产物回馈(end-productfeedback)的调节现象。

肝细胞内RhoA/ROCKII的失活与eNOS表达的增加(RhoA/ROCKIIinactivationandeNOS-enhancement)

在肝细胞的RhoA激酶从膜转移到细胞液内的现象，随投予KMUP-1的浓度呈现依存性地抑制。ROCKII是RhoA在肝细胞信号传递的下游蛋白受器(downstreameffector)。随KMUP-1或10-9-10-5M浓度的辛伐他汀，经由限制RhoA的转移，ROCKII蛋白的表达呈现依赖性地降低作用现象。肝细胞内RhoA/ROCKII的失活，同时增加eNOS的表达亦随KMUP-1浓度呈现依存性。

增加PPARγ/ABCA1/ApoA-I/LXRα的表达(IncreasedPPARγ/ABCA1/ApoA-I/LXRα)

投予KMUP-1与10-9-10-5M浓度的辛伐他汀，可增加肝细胞内PPARγ，ABCA1的表达，显示影响脂质代谢从肝细胞朝向着形成高密度脂蛋白胆固醇(HDL)的方向进行。KMUP-1随其减少小鼠体重增加量，增加PPARγ的表达2～3倍，于表一显示PPARγ激活KMUP-1参与着小鼠体重增加量的减少过程。肝细胞内，与10-9-10-5M浓度的辛伐他汀，均可随浓度呈现依赖性地增加载脂蛋白A-I(apolipoproteinA-I，ApoA-I)与肝X受体α(liverXreceptorsα，LXRα)的表达。

cGMP途径与RhoA/ROCKII(cGMP-pathwayandRhoA/ROCKII)

如图24A所示5μg/ml的RhoA激酶拮抗剂C3胞外酶(C3exoenzyme)以及10μM的ROCK拮抗剂Y27632均可令ROCKII的表达失活，而经由10μM的cGMP拮抗剂Rp-8-pCPT-cGMPs(8-(p-chloro-phenylthio)guanosine-3,5-monophosphorothioate)可令其的表达增加，若并用10μM的KMUP-1则呈现抑制作用，如图24B所示，上述作用涉及肝细胞内cGMP信号传递途径的参与。此外KMUP-1、辛伐他汀、C3胞外酶以及Y27632，均能增加PPARγ(图24C)与ABCA1(图24D)的表达。KMUP-1尚可增加PPARγ平行于体重增加量的下降，显示在表一体重增加量的下降方面，PPARγ具有重要的作用。

GGPP与FPP可导致RhoA/ROCKII的激活(RhoA/ROCKIIactivationinthepresenceofGGPPandFPP)

肝细胞内，如图25A、图25B所示，运用香叶基香叶基焦磷酸(geranylgeranylpyrophosphat，GGPP)和焦磷酸法尼酯(Farnesylpyrophosphate，FPP)，KMUP-1可削弱其中RhoA与ROCKII的表达。而如图25C所示，辛伐他汀则不能经由外源性GGPP或FPP，令ROCKII失活。

外源性GGPP或FPP可减少PPARγ与ABCA1的表达(ExogenousGGPPorFPPdecreasesPPARγandABCA1)

单独以FPP或GGPP培养HepG2细胞，可抑制PPARγ与ABCA1的表达。如图26A、图26B所示，不论于FPP或GGPP的培养基内投予10-9-10-5M浓度的KMUP-1，则反转此现象，可恢复PPARγ与ABCA1的表达。但在10μM的GGPP培养基内添加内辛伐他汀，如图26C所示，无法使PPARγ的形成获得还原。

[14C]甲羟戊酸的生合成(Biosynthesisof[14C]mevalonate)

10μM的KMUP-1不能减少[14C]甲羟戊酸的形成。相反地辛伐他汀与溶媒对照组相比较，可增加[14C]甲羟戊酸的形成达86.6±4.2％。以Sigma-Adrich公司90％以上纯度的[14C]3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶([14C]HMGCoAreductase)，以20units/mg的用量用于测定[14C]甲羟戊酸的形成。

肝脏LDLRs的免疫组织化学染色与PKG/PKA的表达(IHCofLDLRsandexpressionofPKG/PKA)

喂食高脂肪饲料诱发的肝脏，其低密度脂蛋白受体(Lowdensitylipoproteinreceptor，LDLRs)的表达，可经由LDLRs免疫组织化学染色法(IHCstainingmethods)进行评估。不论喂食高脂肪饲料的预防组或是治疗组，投予2毫克/200毫升KMUP-1HCl的液态药物，其肝脏的低密度脂蛋白受体均呈现增加现象。经由于高脂肪饲料饲养小鼠肝脏，运用西方墨点法比较LDLRs与PKA/PKG的表达。肝脏内存在着低密度脂蛋白受体(500μg/mL)，投予KMUP-1(10,20,40M)如图27A所示，无法呈现显著影响其PKA蛋白表达的现象。该高脂血症的病理模型，却可增加PKG的表达。然而200μg/mL氧化低密度脂蛋白(oxidizedlowdensitylipoprotein,oxidizedLDL,oxLDL)诱发减少PKA蛋白的表达，如图27B所示，投予KMUP-1(1,10,100μM)，可呈现反转现象。

细胞内LDLRs/PKA/HSL的荧光染色(FluoroscentstainingofcellularLDLRs/PKA/HSL)

投予不同浓度的KMUP-1、辛伐他汀处理24小时，进行肝脏HepG2细胞的荧光(fluorencent)染色。如图28A显示，其结果是随着KMUP-1浓度10-6、10-5M而10-4M或是10-5M浓度辛伐他汀(simvastatin)的增加，如图28B显示，低密度脂蛋白受体(LDLR)的绿色荧光呈现增加现象。该HepG2细胞绿色荧光增加量与未投予KMUP-1处理的对照组进行比较，KMUP-1随超过10-4M浓度，绿色染色反而呈现不明原因的衰退于HepG2细胞KMUP-1浓度接近可运用的范围。于HepG2细胞投予KMUP-1(图29A)或是辛伐他汀(图29B)处理，则显示PKA与HSL的绿色荧光增加其免疫活性亦增加。而KMUP-1无法显著地影响PKG蛋白的免疫活性。

PPAR/eNOS在脂肪的分解受KMUP-1所调控，而导致HSL和p-HSL的增加。

表三

表四

综上所述，KMUP-1可改善高脂肪食品所造成的血脂异常症(dyslipidemia)。其比较simvastatin降低脂肪，以及促使激素敏感性脂肪酶(HSL)转移脂肪的肝脏内机制。以高脂肪饲料喂食C57BL/6J雄性小鼠8周后，每天经口投予1,2.5,5mg/kg的KMUP-1，或是2.5mg/kg的simvastatin，进行实验。KMUP-1可降低血清与肝脏的甘油三酯、总胆固醇、低密度脂蛋白，增加HDL/HMGR/ROCKII/PPAR/ABCA1的表达，以及降低小鼠喂食高脂肪饲料8周后肝脏/体重的增加量。经由饮用方式投予200毫升蒸馏水含有2.5毫克KMUP-1盐酸盐的液态药物1-14周或是8-14周，可降低喂食高脂肪饲料小鼠的肝脏/体重重量增加量与清道夫受体B族1型(SR-B1)、PKA/PKG的表达，以及增加低密度脂蛋白受体(LDLRs)/PKA的免疫活性。以血清或是外源性甲羟戊酸培养HepG2肝脏细胞，10-7～10-5M浓度的KMUP-1，可经由回馈(feedback)的调节现象呈现逆转3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶的表达，以及共存的ABCA1/ApoA-I/LXR/PPARγ表达，外源性香叶基香叶基焦磷酸(GGPP)和法尼酯焦磷酸(FPP)诱发RhoA/ROCKII的失活。cGMP拮抗剂逆转KMUP-1诱发ROCKII的失活，显示其介入cGMP/eNOS的途径。存在着LDL，KMUP-1可增加PKG与LDLRs，补充氧化态低密度脂蛋白(oxidizedLDL，oxLDL)则减少PKA。辛伐他汀足以显著地抑制[14C]甲羟戊酸的生合成，KMUP-1则无此作用。反之，KMUP-1经由外源性香叶基香叶基焦磷酸(GGPP)和法尼酯焦磷酸(FPP)，造成ROCKII的失活。此外KMUP-1，经由增加PPARγ/LXR/ABCA1/Apo-I的表达改善高密度脂蛋白，抑制清道夫受体B族1型的表达，同时增加LDLRs/PKA/PKG/HSL的表达，因而经由低密度脂蛋白受体移除低密度脂蛋白，经由活化促使激素敏感性脂肪酶令甘油三酯水解。当然KMUPs-RX复合化合物于生物体内是以经由改善PPAR/SR-B1/LDLRs/PKA/PKG/HSL以及多数因子呈现消除肥胖作用。

材料和方法(MaterialsandMethods)

实验动物(Animals)

如流程A所示于8周的实验，21～22g重C57BL/6J雄性小鼠，禁食后以高脂肪饲料(HFD)饲养8周的高脂血症模式。于该2个月的实验，小鼠于实验前禁食一夜，以高脂肪饲料(HFD)代替标准饲料(standarddiet，STD)，然后随机分为5组，2只对照组和3只治疗组，每组各6只小鼠。对照组喂饲一般标准饲料或高脂肪饲料，而治疗组喂饲高脂肪饲料，并每天强饲投予2.5,5mg/kg的KMUP-1HCl、5mg/kg的simvastatin或其它待测药物。于体重增加后进行生化分析。每天投予1mg/kg的KMUP-1HCl于预防组，收集肝脏测定3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶(3-hydroxy-3-methylglutaryl-CoAreductase,HMGCoAreductase,HMGR)的表达。

于14周的实验小鼠，从第1周喂饲高脂肪饲料至第14周。于该3个月的实验，经由饮用方式分别于14周或是后期6周期间，或是喂饲高脂肪饲料的肥胖小鼠，投予200毫升含有2.5毫克KMUP-1盐酸盐的液态药物。预防组5只小鼠从第1周至第14周，治疗组从第8周至第14周的后期6周期间，自由地饮用自来水。自来水作为常态矿物质营养。

于高雄医学大学动物实验中心的日夜循环系统喂养上述动物。动物的全部照顾方式及实验室的使用规定，遵守高雄医学大学委员会的核准指南，且依照美国国家卫生研究院的动物照顾与使用协议。

血液的生化分析(Biochemicalanalysisofserum)

如流程A所示2个月内喂饲3天饲料后量测小鼠的平均重量。每组小鼠体重的增加量、血清脂肪含量(plasmalipidlevels)，均加以测量体并与对照组进行比较。小鼠心脏穿刺后，以90克(BenchtopCentrifuge,U.S.A.)速度将收集的血液离心，分离血清，随后于-80℃冻结，运用日立临床分析仪7070(HitachiClinicalAnalyzer7070，日本)，以默克公司(Merck&Co.，Kenilworth,NJ,Co.USA)的试剂，进行生化分析。运用临床常用方式量测小鼠血清的甘油三酯(Triglyceride)、总胆固醇(totalcholesterol)、低密度脂蛋白固醇(low-densitylipoproteincholesterol，LDLcholesterol)、高密度脂蛋白固醇(high-densitylipoproteincholesterol，HDLcholesterol)。动物肝脏，经分离切片后量测肝脏的甘油三酯。

细胞培养(Cellculture)

购自美国菌种保藏中心(AmericanTypeCultureCollection(ATCC；Manassas,VA,U.S.A.)的HepG2细胞培养于基础培养基(Dulbecco'ModifiedEagle'Medium,DMEM)。该基础培养基包含5％热灭活的胎牛血清(FetalBovineSerum，FBS)、100U/mL盘林西尼(penicillin)、100μg/mL链霉素(streptomycin)。细胞生长环境为37℃饱和湿度空气的20％氧气(20％O2,v/v)、5％二氧化碳(5％CO2)培养箱。KMUP-1盐酸盐溶于蒸馏水，辛伐他汀(simvastatin)溶于丙二醇(propyleneglycol)投于培养基培养24小时后，进行蛋白质萃取。分别加入含溶媒或蒸馏水最终浓度的辛伐他汀或KMUP-1盐酸盐培养细胞后，观察在丙二醇或介质内，3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶(HMGR)的表达变化低于0.1％。

西方墨点法分析HepG2细胞以及肝脏的蛋白质表现(WesternblottinganalysisofproteinexpressioninHepG2cellsandliver)

以各种浓度的药物培养HepG2细胞后，经冷却胎牛血清洗涤2次，以终止反应，收集细胞。以冰冷溶解缓冲溶液(lysisbuffer)以及Sigma-Aldrich公司(Sigma-Aldrich,St.Louis,MO,U.S.A.)的蛋白酶抑制剂，将整个细胞溶解并均质化。以90,000克速度将均质化的血液离心，回收上清液作为细胞蛋白质总量(totalcellularprotein)。依照BioChain公司(BioChainInstituteInc.,Hayward,CA,U.S.A.)细胞胞浆及膜(CytosolNuclearMembrane,CNM)萃取蛋白质划分试剂(compartmentproteinextractionkit)方法，进行HepG2细胞的细胞质以及细胞膜制备。所有分馏的蛋白溶液，储存于-80℃待用。以药物衡量蛋白质的表达含量，培养与治疗24小时后的总蛋白，经萃取后，运用如前述西方蛋白印迹方法进行分析。

SR-B1、HMGCoAreductase、PPARγ与ROCKII的表达(theexpressionofSR-B1,HMGCoAreductase,PPARγandROCKII)

经分离的肝脏，切成小片后置入萃取缓冲液(extractionbuffer)，于20,000g离心30分钟，以萃取肝脏的蛋白质。萃取缓冲液的组成为pH值为7.0的10mM三羟甲基氨基甲烷(Tris)、2mM的苯甲基磺酰氟(phenylmethylsulfonylfluoride，PMSF)、140mM的氯化钠、5mM的二硫苏糖醇(Dithiothreitol，DTT)、0.5％的NP-40裂解液、0.05mM的抑肽素(pepstatinA)和0.2mM的亮肽素(leupeptin)。获得的蛋白质萃取物，煮沸成为4：1比例的检品缓冲液。检品缓冲液的组成为100mMpH值为6.8的三羟甲基氨基甲烷(Tris)、20％的甘油(glycerol)、4％的十二烷基硫酸钠(SodiumDodecylSulfate，SDS)、0.2％的溴酚蓝(bromophenolblue)。运用10％十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶(SDS-polyacrylamidegel)，以100V、40mA，将20μg蛋白质进行电泳(Electrophoresis)1小时。

分离蛋白质经3次离心，清除上层脂肪杂质，以5％脱脂奶粉转印至聚偏氟乙烯(PolyvinylideneDifluoride，PVDF)膜，以90分钟100V阻隔不具非特异性的IgGs，以培养特异性蛋白质的抗体。运用带有碱性磷酸酶1:1000标记的抗山羊、抗小鼠的抗体培养该印迹1小时。以量测SR-B1、3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶，PPAR与ROCKII的表达。

3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶活化与[14C]甲羟戊酸的形成(HMGCoAreductaseactivityand[14C]mevalonateformation)

于大肠杆菌(H7039,Sigma-Adrich,Mo,U.S.A.)，进行人类基因重组的3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶表达的实验。运用10％十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶(SDS-polyacrylamidegel)纯度≥90％的蛋白质，拥有2-8units/mg蛋白质的活性，其分子量约76kDa，以测定[14C]3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶的形成量。于37℃，将KMUP-1、辛伐他汀等药物预培养于含有35ng/ml酶的pH7.5磷酸缓冲液。实验最初添加2.5μM[14C]3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶另行培养20分钟，于添加1N盐酸终止反应。经由管柱移除等分试样，以测定[14C]甲羟戊酸的形成(riceraRCo.Ltd.,Taipei,Taiwan)。

cGMP的途径与RhoA/ROCKII(cGMPpathwayandRhoA/ROCKII)

RhoA激酶拮抗剂5μg/ml的C3胞外酶(exoenzyme)和ROCK拮抗剂10μM的Y27632，溶于10％丙烯乙二醇(popyleneglycol)，能令ROCKII失活，分别将其添加于细胞培养液24小时。进行ROCKII的表达量测，并于HepG2细胞量测PPARγ、ABCA-1相关的表达。

将10μM的环磷酸鸟嘌呤核苷(cGMP)拮抗剂Rp-8-pCPT-cGMPs，溶于10％丙二醇能增加ROCKII活性，而Rp-8-pCPT-cGMPs诱导ROCKII活性的现象可被KMUP-1所抑制。于HepG2细胞以Rp-8-pCPT-cGMPs预培养30分钟作为对照组，再添加10μM的KMUP-1培养24小时。

肝脏内LDLRs的免疫组织化学染色(ImmunohistochemistrystainingofLDLRsinliver)

以10％的福尔马林(formalin)固定肝脏组织24小时，并经石蜡(paraffin)包埋。将石蜡包埋的肝脏组织切成厚4μm的切片，先热封再以二甲苯脱蜡，其后以梯次浓度的乙醇加以脱水，蒸馏水进行洗涤。最后，组织切片进行过碘酸希夫瓦(PeriodicAcid-Schiff，PAS)和苏木素染液(Mayer’shematoxylin)的染色。

为动物肝脏LDLRs，进行免疫组织化学染色(Immunohistochemistry，IHC)。让动物经由饮用方式投予含有2.5毫克/200毫升KMUP-1盐酸盐的液态药物，1-14周或8-14周后，如上述方法制作的肝脏组织切片。将抗原浸泡于蔬菜蒸锅，其中放置pH9.0的靶标赋活溶液(Dakotargetretrievalsolution)，令已脱蜡的切片进行抗原性修复，随的以含3.0％过氧化氢的甲醇溶液，抑制内源性过氧化物酶活性。在4℃恒湿试验箱，以含特异性主要抗体过夜培养肝脏组织切片。以DAKO公司(DAKO,Carpinteria,CA,U.S.A.)检测系统试剂(DAKOREALEnVisionTMDetectionSystemkit)进行检测，然后用苏木精进行复染。经由尼康显微镜(EclipseTE200S)获得图像。

于外源性LDL下LDLRs的表达与荧光染色(ExpressionandfluorescencestainingofLDLRsinthepresenceofexogenousLDL)

于存在着500μg/ml外源性LDLRs，运用HepG2细胞以检测外源性低密度脂蛋白(LDLRs)细胞蛋白的表达。4℃下过夜培养，于HepG2细胞的LDLRs表达，以绿色荧光染料氟硼二吡咯(4,4-二氟-1,3,5,7,8-五甲基-4-硼-3A,4A-二氮杂-S-茚烯，4,4-difluorro-1,3,5,7,8-penta-methyl-4-bora-3a,4a-diaza-s-indacene，Bodipy493/503)和二级抗体共轭的红色Cy3，可加以检测。而氟硼二吡咯(BODIPY-)和低密度脂蛋白-图像，更能以图像分析得知LDLRs位置。上述图像，是经由尼康显微镜(EclipseTE200-S)获得且进行分析。

PKA/PKG的表达与PKA/HSL的免疫活性(ExpressionofPKA/PKGandimmunoreactivityofPKA/HSL)

于HepG2细胞，添加待测化合物培养24小时，运用免疫印迹法衡量PKA/PKG的蛋白表达，或荧光染色法衡量PKA/PKG和HSL的免疫活性，更添加或无添加200μg/ml的氧化型低密度脂蛋白(oxidizedLDL，oxLDL)结合图像扫描，以评估待测化合物可否影响PKA。

量测脂肪性肝炎的油滴直径与数量(Measurementofhepaticoilglobuletdiameter)

在全肝切片以白色条纹作为直径100μM的显微镜观测标准，借助计算机软件(微软，美国)以测量照片中油滴的直径，并以美国惠普(HP)打印机打印。油滴直径和细胞数目的增加，表示肝脏脂肪变性增多，即脂肪性肝炎(steaotohepatitis)。相对地，直径和脂肪细胞的数量减少，显示脂肪性肝炎的形成受到抑制。在全肝切片，以尼康EclipseTE200-S显微镜观察油滴。

肝脏和附睾脂肪垫经苏木精-伊红染色(H&Estainingofliverandepididymalfatpads)

小鼠肝脏、附睾脂肪垫组织及下肢主动脉以10％福尔马林固定24小时后，经石蜡包埋。将石蜡包埋的肾皮质组织切成4μm厚标本，经热封、二甲苯脱蜡，梯度酒精脱水，用蒸馏水轻轻地冲洗。最后以过碘酸雪夫氏染色(periodicacid-schiffstain)和改良的苏木精溶液(Mayer，shematoxylinsolution)进行染色切片。

MMP-9/TNFα、HSL/p-HSL/ATGL以及eNOS/IL-10的免疫组织化学染色(IHCstainingofMMP-9/TNFα,HSL/p-HSL/ATGLandeNOS/IL-10)

对于脱蜡切片的基质金属蛋白酶-9(MMP-9)/肿瘤坏死因子(TNF-α)、促使激素敏感性脂肪酶(HSL)/p-HSL/脂肪甘油三酯脂肪酶(ATGL)、eNOS和白细胞介素-10(IL-10)的抗原修复(antigenretrieval)，是以在蔬菜蒸锅(vegetablesteamer)内含pH9.0赋活溶液(Dakotargetretrievalsolution)进行，再以含3.0％过氧化氢(H2O2)的甲醇溶液，抑制其内源性过氧化物酶活性，而后进行免疫组织化学染色(IHC)。切片以特定的主要抗体，在4℃恒温箱(humidifiedchamber)培养过夜。使用的抗体包括经1:50稀释兔多克隆抗eNOS(Abcam,Cambridge,UK)，或经1:50稀释CellSignaling(USA)公司活化半胱胺酸蛋白酶蛋白-3兔单克隆抗体(rabbitmonoclonalanti-cleavedcaspase-3)。使用DAKO公司检测试剂(DAKOREALEnVisionTMDetectionSystemkit)检测切片，再经苏木素(hematoxylin)复染。以尼康显微镜(NikonEclipseTE200-S)观察图像。

量测脂肪性肝炎的油滴直径与数量(Measurementofoilglobuletdiameterandnumberinsteatohepatitis)

经由苏木精-伊红(H&E)与免疫组织化学染色(IHC)的肝脏，可在显微镜下观察，用于评估油滴直径与数量。在全肝切片以白色条纹作为直径100μM的显微镜观测标准，借助计算机软件(微软，美国)以测量照片中油滴的直径，并以美国惠普(HP)打印机打印。油滴直径和细胞数目的增加，表示肝脏脂肪变性增多，即脂肪性肝炎(steaotohepatitis)。相对地，直径和脂肪细胞的数量减少，显示脂肪性肝炎的形成受到抑制。在全肝切片，以尼康EclipseTE200-S显微镜观察油滴。

试剂(Materialsandreagents)

运用辣根过氧化物酶(horseradishperoxidase)–共轭二次抗体和随后的增强化学发光(EnhancedChemiluminescence，ECL)检测(GEHealthcareBio-SciencesCorp.,Piscataway,NJ,U.S.A.)，令免疫反应的结合带呈现可视化。免疫印迹分析使用的抗体包括抗ROCKII的抗小鼠或抗兔单株抗体(MouseorrabbitmonoclonalantibodyforROCKII，Upstate,LakePlacid,NY,U.S.A.)、抗RhoA(SantaCruze,Biotechnology,SantaCruz,CA,U.S.A.)、抗HMGCoAreductase(Upstate,LakePlacid,NY,U.S.A.)、抗PPARγ(Abcam,Cambridge,UK)、抗ABCA-1(CellSignaling,Boston,MA,U.S.A.)、抗ApoA-I(Abcam,Cambridge,UK)、抗LXRα(SantaCruze,Biotechnology,SantaCruz,CA,U.S.A.)、抗LDLR(Abcam,Cambridge,UK)、抗HSL(CellSignaling,Boston,MA,U.S.A.)、抗p-HSL(CellSignaling,NY,U.S.A.)、抗eNOS(Abcam,Cambridge,UK)、抗MMP-9(Abcam,Cambridge,UK)、抗TNF(Abcam,Cambridge,UK)、抗IL-10(Abcam,Cambridge,UK)和加载控制蛋白β-肌动蛋白(Sigma-Adrich,St.Louis,MO,U.S.A.)。以兔多克隆抗体进行识别PPARγ1与PPARγ2，Rp-8-pCPT-cGMPs与C3胞外酶购自Sigma-Adrich公司(Sigma-Adrich,St.Louis,Mo,U.S.A.)。高脂肪食品(HFD)含60％脂肪能源的基础纯化饲料(W/60％energyfromfat,Blue:58G9TestDiet；LabDiet,St.Louis,Missouri,U.S.A.)。荧光染色试验，LDL购自Abcam公司(Abcam,Cambridge,UK)氧化态低密度脂蛋白(oxidizedLDL，oxLDL)购自BiomedicalTechnologiesInc.(Stoughton,MA,USA)。以Sigma-Adrich公司纯度≥90％的蛋白质，拥有2-8units/mg蛋白质的活性，其分子量约～76kDa的[14C]3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶([14C]HMGCoAreductase)，以测定[14C]甲羟戊酸的形成。

统计分析(Statisticalanalysis)

实验结果，皆以平均值加减标准误(Mean±SEM)表示。统计间的差异，在非配对及配对样本中分别采用非相依性的Student’st-test。当多个治疗组与对照组相比较，采用单因子变异数分析(onewayANOVA)，或双因子重复测量变异数分析(twowayrepeatedmeasuresANOVA)。当变异数分析(Analysisofvariance，ANOVA)呈现统计学差异时，采用Dunnett's或Student-Newman-Keulstest。P值小于0.05，表示实验值具有统计学上显著性差异。资料和图面的分析，在IBM计算机运用SigmaPlot软件(版本8.0，Chicago,IL,U.S.A.)和SigmaStat(版本2.03，Chicago,IL,U.S.A.)。

实施例一合成氯基乙基哌嗪(Preparationofchloroethylpiperazine)

取3％对甲苯磺酸(p-toluenesulphonicacid)100mL、30mg的1-溴-2氯乙烷(1-bromo-2-chloroethane)与10g的1-(2-氯苯基)哌嗪(1-(2-chlorophenyl)piperazine)溶于300mL二甲苯(xylene)的混合溶液，经加热到140-145℃回流20小时，以氯仿：甲醇(8：2)溶剂系统的薄层色谱法展开，以监测反应的进行。完全反应后冷却到30℃，再冷却至0-5℃，令产品结晶形成类白色晶体7.8克。

实施例二制备7-[2-[4-(2-氯苯)哌嗪基]乙基]-1,3-二甲基黄嘌呤盐酸复合化合物(7-[2-[4-(2-chlorobenzene)piperazinyl]ethyl]-1,3-dimethylxanthineHClcomplex,KMUP-1HClcomplex)

将30mg的氯乙基哌嗪基溶于3％的对甲苯磺酸(p-toluenesulphonicacid)100mL和10g的茶碱(theophylline)溶于300mL乙腈的溶液相混合，加热到80-82℃回流20小时。以氯仿：甲醇(9:1)溶剂系统的薄层色谱法展开，以监测反应的进行。完全反应后，冷却到50℃并过滤。以常压蒸馏(atmosphericdistillation)除去乙腈后，加入300mL甲苯(toluene)溶解残渣，形成清澈液体。以20％氢氧化钠溶液(2x50mL)洗涤甲苯溶液两次，在50℃再以2％盐水(2x50mL)冲洗两次，令其碱化。添加15％异丙醇盐酸盐(isopropylalcoholHCl)80mL，调整溶液pH到2-2.5，令盐沉淀。经过滤，以甲醇再结晶成7.4克白色结晶的7-[2-[4-(2-氯苯)哌嗪]乙基]-1,3-二甲基黄嘌呤。

实施例三制备KMUP-3盐酸盐复合物(KMUP-3HClcomplex)

秤取KMUP-3(8.3g)溶于混合着乙醇(10mL)与1N盐酸(60mL)的溶液，于50℃下反应20分钟。室温下添加乙醇，放置过夜进行结晶，过滤获得KMUP-3盐酸盐复合物(6.4g)。

实施例四制备KMUP-1-γ-聚麸胺酸复合物(KMUP-1-γ-Polyglutamicacidcomplex)

方法1；取20g聚麸胺酸钠(sodiumγ-polyglutamicacid)悬浮于蒸馏水，添加溶于100mL甲醇溶液的16gKMUP-1HCl，一并置入三颈反应瓶回流反应1小时。冷却后，将沉淀溶于100mL的甲醇，静置过夜再结晶。经过滤获得35.6g的KMUP-1聚麸胺酸复合化合物结晶。

方法2；取16g的KMUP-1HCl溶于100mL的甲醇，添加20g的聚麸胺酸钠先行溶于100mL的甲醇，一并置入三颈反应瓶回流反应1小时。冷却过滤后，以100mL的甲醇再结晶，获得35.8g的KMUP-1-γ-聚麸胺酸复合化合物结晶。

实施例五制备KMUP-3-烟碱酸复合物

秤取KMUP-3(8.3g)溶于混合着乙醇(10mL)与烟碱酸(2.4g)的溶液，于50℃下反应20分钟。室温下添加乙醇，放置过夜进行结晶，过滤获得KMUP-3-烟碱酸复合物(8.3g)。

实施例六制备KMUP-1-辛伐他汀复合物

秤取KMUP-1(8.3g)溶于混合着乙醇(10mL)与1N盐酸(60mL)的溶液，于50℃下反应10分钟。室温下添加乙醇，放置过夜进行结晶，过滤获得KMUP-1盐酸盐复合物(7.4g)。再将KMUP-1盐酸盐复合物溶于乙醇(150mL)待用。

反应瓶内置入磁力搅拌器，将溶于50mL乙醇与4.2g辛伐他汀(Simvastatin)的混合液倾入反应瓶，再添加含有氢氧化钠的水溶液(4g/60ml)以及上述KMUP-1盐酸盐的乙醇溶液，在室温下反应20分钟。令混合溶液于50℃下反应20分钟，经快速过滤，静置1小时结晶后，过滤获得KMUP-1-辛伐他汀复合物(KMUP-1-Simvastatinicacidcomplex)。

实施例七制备KMUP-2-聚丙烯酸复合物

秤取KMUP-2HCl(8g)溶于混合着乙醇(10mL)与聚丙烯酸酸钠(2.5g)的溶液，一并置入三颈反应瓶回流反应1小时。冷却后，将沉淀物溶于100mL的甲醇，静置再结晶。经过滤获得7.4g的KMUP-2-聚丙烯酸复合物(KMUP-2-polyacrylicacidcomplex)结晶。

实施例八制备KMUP-1-坏血酸复合物

反应瓶内置入磁力搅拌器，将KMUP-1(KMUP-1base)溶于混合着100mL乙醇与等摩尔数坏血酸的乙醇溶液倾入反应瓶，于50℃下反应20分钟，冷却后，获得白色沉淀物，经过滤移除氯化钠。在室温下，再添加100mL甲醇以溶解沉淀物，静置再结晶。经过滤获得16.8g的KMUP-1-坏血酸复合物结晶。

实施例九制备KMUP-2-油酸复合物

秤取8.5g油酸钠(sodiumoleicacid)悬浮于蒸馏水，添加溶于100mL甲醇的12.1gKMUP-2HCl溶液，一并置入三颈反应瓶回流反应1小时。冷却后，将沉淀溶于100mL的甲醇，静置过夜再结晶。经过滤获得16.3g的KMUP-2-油酸复合化合物结晶。

实施例十制备KMUP-3-抗坏血酸复合物

秤取8.5g的KMUP-3HCl溶于100mL乙醇，与3.9g的坏血酸钠一并置入三颈反应瓶回流反应1小时。冷却后，经过滤获得沉淀物。再结晶后，获得9.7g的KMUP-3-抗坏血酸复合化合物(KMUP-3ascorbatecomplex)结晶。

实施例十一制备Sildenafil-CMC复合物

秤取3.6g的羧甲基纤维素钠(sodiumCMC)，先行悬浮于蒸馏水，再混合乙醇待用。反应瓶内置入磁力搅拌器，将13.2gSildenafilcitrate溶于混合100mL乙醇的30mL水溶液一并倾入反应瓶，再添加上述羧甲基纤维素钠的乙醇溶液。于50℃下令混合溶液反应20分钟，冷却后获得沉淀物，经过滤将柠檬酸钠移除。在室温下再添加100mL甲醇以溶解沉淀物，静置过夜再结晶。经滤获得10.4g的Sildenafil-CMC复合物结晶。

实施例十二制备锭剂

依照美国专利第5,358,941号方法，分别依量秤取下列各成分，混和后充填于打锭机，制备成锭剂。

KMUP-3-柠檬酸复合物140mg

乳糖qs

玉米粉qs

实施例十三制备锭剂

依照美国专利(U.S.Pat.)第5,358,941号方法，分别依量秤取下列各成分，混和后充填于打锭机，制备成锭剂。

西地那非(Sildenafil)坏血酸复合物50mg

乳糖qs

玉米粉qs

其它实施例

1.一种组合物的用途，其是用于制备可缓减动物肝脏疾病的组合物，该组合物包含选自一有效量如式(II)、式(III)所示的主成分，其中式(II)

式(III)

R2与R4可分别选自以下所组成的群组：氢基、卤素、胺基、硝基的取代基；碳数1-5烷基的取代基；碳数1-5烷氧基的取代基；RX其选自以下所组成含羧酸基团群组之一：Statin(他汀)类似物、共聚物、聚γ-聚麸胺酸衍生物、D-抗坏血酸、L-抗坏血酸、DL-抗坏血酸、油酸、磷酸(phosphoricacid)、柠檬酸、烟碱酸和羧甲基纤维素；以及-RX可为上述基团带负电的阴离子。

2.如上述实施例的的用途，其中Statin类药物选自阿托伐他汀、西立伐他汀、氟伐他汀、罗瓦斯达汀、美伐他汀、普伐他汀、瑞舒伐它汀、以及辛伐他汀。

3.如上述实施例的的用途，其中共聚物包括玻尿酸、聚丙烯酸、聚甲基丙烯酸、丙烯酸树脂、葡聚糖硫酸、硫酸乙酰肝素、聚乳酸、聚乳酸钠和聚羟基磺酸钠的组成或其组合。

4.如上述实施例的的用途，其中聚γ-聚麸胺酸衍生物包括海藻酸钠、聚γ-聚麸胺酸钠、聚-γ-聚麸胺酸和海藻酸钠-聚-赖氨酸-海藻酸钠的组成或其组合。

5.如上述实施例的的用途，其中肝脏疾病包括非酒精性脂肪肝、过度肥胖、肝脏脂肪变性、高脂肪食品诱发肝脏脂质蓄积、炎症反应而脂质蓄积或其组合。

6.如上述实施例的的用途，其中动物包括人类、山羊、羔羊、猪、牛、鸡、鸭等温血动物。

7.一种组合投药的用途，其是运用组合投药以缓减动物肝脏疾病，该组合投药包含:选自KMUPs衍生化合物、西地那非类似物之一所组成的组成物；补充活性化合物；和药学上可接受的赋形剂；其中KMUPs衍生化合物选自KMUP-1、KMUP-2、KMUP-3、KMUP-4之一。

8.一种缓减动物肝脏疾病的组合物，包含:药学上可接受的载体；以及一有效量如式(I)所示结构的主成分，其中R2与R4可分别选自以下所组成的群组：

式(I)

氢基、卤素、胺基、硝基的取代基；碳数1-5烷基的取代基；碳数1-5烷氧基的取代基；RX其选自以下所组成含羧酸基团群组之一：RX其选自以下所组成含羧酸基团群组之一：Statin(他汀)类似物、共聚物、聚γ-聚麸胺酸衍生物、D-抗坏血酸、L-抗坏血酸、DL-抗坏血酸、油酸、磷酸、柠檬酸、烟碱酸和羧甲基纤维素；以及-RX可为上述基团带负电的阴离子。

9.一种缓减动物肝脏疾病的组合物，包含:西地那非类似物；和药学上可接受的赋形剂。

10.如上述实施例的组合物，其中西地那非类似物选自西地那非(Sildenafil)、羟基那猫西地那非(Hydroxyhomosildenafil)、去甲西地那非(Desmethylsildenafil)、红地那非(Acetidenafil)、乌地那非(Udenafil)、伐地那非(Vardenafil)和那猫西地那非(Homosildenafil)之一。

11一种缓减动物肝脏疾病的组合物，包含:西地那非类似物；补充活性化合物；和药学上可接受的赋形剂。

12.如上述实施例的组合物，其中西地那非类似物选自西地那非、羟基那猫西地那非(Hydroxyhomosildenafil)、去甲西地那非(Desmethylsildenafil)、红地那非(Acetidenafil)、乌地那非(Udenafil)、伐地那非(Vardenafil)和那猫西地那非(Homosildenafil)之一。

13.如上述实施例的组合物，其中补充活性化合物选自以下所组成含羧酸基团群组之一：Statin(他汀)类似物、共聚物、聚γ-聚麸胺酸衍生物、D-抗坏血酸、L-抗坏血酸、DL-抗坏血酸、油酸、磷酸、柠檬酸、烟碱酸和羧甲基纤维素。

14.一种缓减动物肝脏疾病的组合物，包含:KMUPs衍生化合物；和药学上可接受的赋形剂。

15.如上述实施例的组合物，其中KMUPs衍生化合物选自KMUP-1、KMUP-2、KMUP-3、KMUP-4之一。

16.一种组合物的用途，其是用于制备可缓减动物肝脏疾病的组合物，该组合物包含选自一有效量KMUPs衍生化合物的主成分；和药学上可接受的赋形剂。

17.一种组合物的用途，其是用于制备可缓减动物肝脏疾病的组合物，该组合物包含选自一有效量KMUPs衍生化合物的主成分；和药学上可接受的赋形剂。

18.一种组合物的用途，其是用于制备可缓减动物肝脏疾病的组合物，该组合物包含选自一有效量西地那非、羟基那猫西地那非(Hydroxyhomosildenafil)、去甲西地那非(Desmethylsildenafil)、红地那非(Acetidenafil)、乌地那非(Udenafil)、伐地那非(Vardenafil)和那猫西地那非(Homosildenafil)之一。

19.一种组合投药的方法，其是用以缓减动物肝脏疾病，该组合投药包含:选自KMUPs衍生化合物之一；补充活性化合物；和药学上可接受的赋形剂。

20.一种组合投药的方法，其是用以缓减动物肝脏疾病，该组合投药包含:选自西地那非类似物之一；补充活性化合物；和药学上可接受的赋形剂。

21.一种缓减动物肝脏疾病的组合物，包含:选自KMUPs衍生化合物之一；补充活性化合物；和药学上可接受的赋形剂。

22.一种缓减动物肝脏疾病的组合物，其包含:选自西地那非类似物之一；补充活性化合物；和药学上可接受的赋形剂。

23.一种缓减动物肝脏疾病的组合物，其包含:投予动物具疗效用量的主成物以及补充活性化合物。

24.如上述实施例的组合物，其中主成物选自KMUPs衍生化合物、西地那非类似物之一。

参考文献

1.DaiZK,etal..(2014)XanthineDerivativeKMUP-1ReducesInflammationandHyperalgesiainaBilateralChronicConstrictionInjuryModelbySuppressingMAPKandNFκBActivation.MolPharm.,11,1621-1631.

2.BivalacquaTJ,etal.(2013)Sildenafilcitrate-restoredeNOSandPDE5regulationinsicklecellmousepenispreventsPriapismviacontrolofoxidative/nitrosativestress.PLoSONE8:e68028.doi:10.1371/journal.pone.0068028.

3.ChungHH,etal.(2010)ThexanthinederivativeKMUP-1inhibitsmodelsofpulmonaryarteryhypertensionviaincreasedNOandcGMP-dependentinhibitionofRhoA/Rhokinase.BrJPharmacol160:971–986.

4.ChungHH,etal.(2010)KMUP-1inhibitspulmonaryarteryproliferationbytargetingserotoninreceptors/transporterandNOsynthase,inactivatingRhoAandsuppressingAKT/ERKphosphorylation.VascularPharmacology53:239-249.

Claims (10)

1.一种组合物的用途，是用于制备可缓减动物肝脏疾病的组合物，其特征在于，该组合物包含:选自KMUPs衍生化合物、KMUPs-RX复合化合物、西地那非类似物衍生化合物、西地那非类似物衍生化合物-RX复合化合物之一所组成具疗效用量的组成物；

KMUPs衍生化合物选自KMUP-1、KMUP-2、KMUP-3、KMUP-4之一；

RX包括提供羧酸基团的他汀类似物、共聚物、聚γ-聚麸胺酸衍生物、D-抗坏血酸、L-抗坏血酸、DL-抗坏血酸、油酸、磷酸、柠檬酸、烟碱酸和羧甲基纤维素；和

-RX为提供羧酸基团的带负电阴离子包括他汀类似物、共聚物、聚γ-聚麸胺酸衍生物、D-抗坏血酸、L-抗坏血酸、DL-抗坏血酸、油酸、磷酸、柠檬酸、烟碱酸和羧甲基纤维素。

2.如权利要求1所述的用途，其特征在于，共聚物包括玻尿酸、聚丙烯酸、聚甲基丙烯酸、丙烯酸树脂、葡聚糖硫酸、硫酸乙酰肝素、聚乳酸、聚乳酸钠和聚羟基磺酸钠的组成或其组合。

3.如权利要求1所述的用途，其特征在于，西地那非类似物衍生化合物选自西地那非、羟基那猫西地那非、去甲西地那非、红地那非、乌地那非、伐地那非和那猫西地那非之一。

4.如权利要求1所述的用途，其特征在于，肝脏疾病包括非酒精性脂肪肝、过度肥胖、肝脏脂肪变性、高脂肪食品诱发肝脏脂质蓄积、炎症反应而脂质蓄积或其组合。

5.如权利要求1所述的用途，其特征在于，动物包括人类、山羊、羔羊、猪、牛、鸡、鸭等温血动物。

6.一种缓减肝脏疾病组合物，其特征在于，其是以组合投药方式投予动物具疗效用量的组成物，该组合物包含:选自KMUPs衍生化合物、西地那非类似物衍生化合物之一所组成的组成物；

和补充活性化合物；

其中KMUPs衍生化合物选自KMUP-1、KMUP-2、KMUP-3、KMUP-4之一。

7.如权利要求6所述的组合物，其特征在于，补充活性化合物包括他汀类似物、共聚物、聚γ-聚麸胺酸衍生物、D-抗坏血酸、L-抗坏血酸、DL-抗坏血酸、油酸、磷酸、柠檬酸、烟碱酸和羧甲基纤维素。

8.如权利要求6所述的组合物，其特征在于，西地那非类似物衍生化合物选自西地那非、羟基那猫西地那非、去甲西地那非、红地那非、乌地那非、伐地那非和那猫西地那非之一。

9.如权利要求6所述的组合物，其特征在于，肝脏疾病包括非酒精性脂肪肝、过度肥胖、肝脏脂肪变性、高脂肪食品诱发肝脏脂质蓄积、炎症反应而脂质蓄积或其组合。

10.如权利要求6所述的组合物，其特征在于，动物包括人类、山羊、羔羊、猪、牛、鸡、鸭等温血动物。