TWI689518B

TWI689518B - 特異性結合人ｉｌ-１７ａ的分離的單株抗體

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Publication number: TWI689518B
Application number: TW104107806A
Authority: TW
Inventors: 安德列鮑裡索維奇烏裡京; 斯坦尼斯拉夫魯道夫維奇葉夫多基莫夫; 瓦列裡弗拉基米洛維奇索洛維耶夫; 尤利婭謝爾蓋耶夫娜切爾尼; 奧爾加弗拉基米洛夫那宮察洛娃; 德米特裡瓦列裡耶維奇喀爾紮維; 塔季楊娜維尼亞米諾夫娜切爾諾夫斯卡雅; 羅曼阿列克謝耶維奇伊萬諾夫; 德米特裡瓦林基諾維奇莫羅佐夫
Original assignee: 俄商Ｂｉｏｃａｄ股份有限公司
Priority date: 2014-03-14
Filing date: 2015-03-11
Publication date: 2020-04-01
Also published as: RU2014109854A; EA201600276A1; BR112016010513A2; MY175878A; TW201538524A; JP2017508463A; EP3130604A4; CN106795219A; EP3130604A1; MX2016005765A; CN106795219B; EA034854B1; US20170081401A1; JP6647208B2; US10442857B2; RU2577228C2; WO2015137843A1; AR100573A1; ZA201602040B

Abstract

本發明涉及醫學領域，尤其是涉及抗人IL-17的單株抗體領域。更詳細地說，本發明屬於單株抗體IL-17A拮抗劑，其與IL-17抗原表位高親和力結合；本文的抗體在重鏈和輕鏈的高變區包含胺基酸取代。本發明的抗體可以是嵌合的、人源化的或人抗體或其抗原結合片段，而且可用作藥物用於治療自身免疫和炎症性紊亂或細胞增殖和發育異常。本發明還涉及所述抗體的生產方法。

Description

特異性結合人IL-17A的分離的單株抗體

免疫系統的主要功能是保護機體免受感染(例如，病毒或細菌)和惡性腫瘤。系統涉及幾種淋巴和骨髓細胞，如單核細胞、巨噬細胞、樹突細胞、嗜酸性粒細胞，T-細胞，B-細胞和中性粒細胞。這些淋巴和骨髓細胞可誘導被稱為細胞因數的信號蛋白。炎症是免疫應答的一部分，其導致免疫細胞的積累，全身性的或者集中在機體中的某些部分。當對任何外源物質的感染產生應答時，免疫細胞釋放細胞因數，其以它們的順序，調節免疫細胞增殖、發育、分化和遷移。免疫應答能誘導各種病理過程，例如，如果正好發生自身免疫疾病，它引發過度炎症(ref.Abbas et al.(eds.)(2000)Cellular and Molecular Immunology,W.B.Saunders Co.,Philadelphia,Pa.；Oppenheim and Feldmann(eds.)(2001)Cytokine Reference,Academic Press,San Diego,Calif.；von Andrian and Mackay(2000)New Engl.J.Med.343：1020-1034；Davidson and Diamond(2001)New Engl.J.Med.345：340-350)。

目前IL-17家族包括IL-17A、IL-17B、IL-17C、IL-17D、IL-17E和IL-17F。IL-17家族的所有成員都具有4個高度保守的半胱氨酸殘基，其涉及鏈內二硫鍵的形成，和2個或多個也可能涉及的半胱氨酸殘基。IL-17家族的成員與其它已知半胱氨酸的序列沒有相似性。

白細胞介素-17A(IL-17A，也稱為細胞毒性T-淋巴細胞相關抗原-8(CTLA-8)，IL-17)，是一個20-30kDa的同型二聚體細胞因數，其由具有以下抗原識別的記憶性T-細胞產生。白細胞介素-23(IL-23)促進這些T-細胞的生長(McKenzie et al.(2006)Trends Immunol.27(1)：17-23；Langrish et al.(2005)J.Exp.Med.201(2)：233-40)。IL-17A透過兩個受體(IL-17RA和IL-17RC)發揮作用，啟動涉及具有嗜中性粒細胞的過程、炎症性過程和器官損傷的許多分子。該細胞因數是與腫瘤壞死因數(TNF)或白細胞介素1-β(IL-1β)協同作用的，以獲得更顯著的抗炎作用。在許多炎症的治療中，免疫和增殖疾病包括類風濕性關節炎(RA)、骨關節炎、患有RA的患者中的骨關節炎、炎症性纖維化(包括硬皮病、肺纖維化和肝硬化)、齒齦炎、牙周炎或牙周疾病、炎性腸病(例如，克羅恩氏病、潰瘍性結腸炎和炎性腸病)、哮喘(包括變應性哮喘)、變態反應、慢性阻塞性肺疾病(COPD)、多發性硬化症、牛皮癬、癌症，以及其它疾病，其透過阻斷所述受體的抗體或結合抗原的抗體片段企圖降低IL-17A的活性(例如，參見US 2003/0166862,WO 2005/108616,WO 2005/051422和WO 2006/013107)。

目前，開發了幾種抗IL-17抗體，包括AIN457(Abbott Laboratories的secukinumab)、LY2439821(Eli Lilly的Ixekizumab)、SCH9001 17(Merck)和RG4943(Roche)，等等。

例如，美國專利申請號US 2010/0245666描述了在重鏈或輕鏈的一個CDR區含有胺基酸取代的抗IL-17抗體(secukinumab，AIN457)。該抗體與 IL-17是高親和力的，其解離常數KD為約122μM。該申請還公開了使用所述抗體抑制IL-17與合適的抗體結合，尤其用於治療眼色素層炎。目前，所述抗體在進行治療RA、強直性脊柱關節炎、克羅恩氏病、牛皮癬、多發性硬化和臭氧誘導的中性白細胞增多症的臨床試驗。該抗體顯示是安全的，而且在患有RA的患者中顯示46%的功效(Durez et al.,Communication EULAR 2009-RA)。

現有知識也已經公開了抗IL-17的人源化抗體，如WO 2007/070750公開的國際申請中描述的(LY2439821，ixekizumab，Eli Lilly)。所述抗體含有胺基酸取代的重鏈和輕鏈可變區。於是，所述抗體與人IL-17是高親和力的(KD低於約7.0-4.0pM)，而且對人IL-17的koff指數<2×10-5sec-1。抗體在對患有RA的個體中進行靜脈內給藥的安全性、耐受力和功效的臨床研究。(Genoevse et al.,Communication EULAR 2009-RA；Genoevse et al.,Arthritis & Rheumatism,62：929-39,(2010)。

習知技術的狀態有關於其它抗IL-17抗體的資訊：鼠抗人中和性抗體eBio64CAP17(eBioscience)及其衍生物。專利申請US 2009/0175881 A1和US 2008/0269467 A1，以及國際公佈WO 2008/001063 A1和WO 2007/117749 A1中公開了其它的抗IL-17抗體的實例。

因此，考慮到它在炎症區域內的局部擴張，IL-17是一種炎症和自身免疫疾病治療中的新的靶點，其藥物安全性可能高於靶向系統循環促炎性細胞因數如TNF(腫瘤壞死因數)的藥物。基於以上所述，可以得出結論，存在需要具有拮抗或中和IL-17A活性的抗體的需求，其用於治療IL-17A的生物學活性導致或促進不利的生理學結果的疾病和狀況，或者IL-17生物學活性的降低促進需要的治療結果的疾病和狀況，包括炎症性紊亂，細胞增殖和發育紊亂，自身免疫病理學如類風濕性關節炎(RA)和炎症性腸病(IBD)。

使用這些抗體作為藥劑的最大限制是由於它們的免疫原性和親和力。由於大部分單株抗體是在鼠抗體的基礎上獲得的，這些抗體在人類中的常規應用導致對抗體治療的免疫應答的發展(例如，過敏反應)。這些類型的免疫應答最終至少導致缺乏功效，以及最差的情況下可能的過敏性反應。

因此，本發明提供了具有胺基酸取代的抗IL-17抗體，其中要求保護的抗體具有高親和力，改善的溶解性和增加的IC50。

術語定義

“白細胞介素17”，也稱為“IL-17”或“IL-17A”，是一種20-30kD的同型二聚體糖蛋白。人IL-17的基因編碼由155個胺基酸組成的蛋白，且該蛋白具有19個胺基酸信號序列和136個胺基酸成熟片段。以它的天然狀態存在時，全長抗體由4條肽鏈組成的免疫球蛋白(抗體)分子表示：用二硫鍵連接的2條重(H)鏈(大約50-70kD全長)和2條輕(L)鏈(大約25kD全長)。每條鏈的氨基末端區域包括大約100-110或更多個胺基酸的可變區，其主要負責抗原識別。每條鏈的羧基末端區域決定主要負責效應子功能的恆定區。

抗體包括輕鏈和重鏈。重鏈和輕鏈的可變區形成抗原結合中心(位點)。抗體結構呈現於圖19中。

輕鏈分為kappa和lambda，而且具有特異性恆定區。每條輕鏈的特徵在於包括可變的N-末端輕鏈區(本文稱為LCVR或VL)和由單個功能域組成的恆定的輕鏈區(CL)。重鏈區分為γ、δ、α、μ和ε，而且限定免疫球蛋白種類分別為：IgG、IgM、IgA、IgD和IgE；它們中的一些可以另外劃分為亞類(同型)如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2。每種重鏈類型的特徵在於特異性的恆定區Fc。每條重鏈包括可變的N-末端區(本文稱為HCVR或VH)和恆定區CH。恆定的重鏈區由針對IgG、IgD和IgA的3個功能域(CH1、CH2和CH3)和針對IgM和IgE的4個功能域(CH1、CH2、CH3和CH4)組成。HCVR和LCVR也可以劃分為所謂的高變區Rf(互補決定區，CDR)，其被多個保守框架區(FR)打斷。每個HCVR和LCVR都包括從N-末端到C-末端以下列順序定位的3個CDR和FR：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3和FR4。本申請中3條重鏈CDR稱為CDRH1、CDRH2和CDRH3，同時3條輕鏈CDR稱為CDRL1、CDRL2和CDRL3。CDR含有與抗原特異性相互作用的大部分胺基酸殘基。根據本發明，除非另有說明，按照Kabat編碼制對HCVR和LCVR中的CDR殘基進行計數和定位。除非另有說明，本申請包括用於胺基酸的常用字母密碼子。

術語“抗IL-17A抗體”、“抗IL-17的抗體”、“特異性結合白細胞介素IL-17的抗體”和“抗IL-17A的抗體”在本文中可以互換使用，而且涉及特異性結合IL-17A的抗體。

如本文中使用的，與本發明的抗IL-17A單株抗體相關的術語“抗體”(或以簡單的形式：“根據本發明的單株抗體”)，涉及單株抗體。除非本申請中另有說明，如本文中使用的，“單株抗體”涉及獲自齧齒類動物、靈長類動物或駱駝科家族的抗體，優選涉及鼠、猴、駱駝或美洲駝抗體、嵌合抗體、人源化抗體或全人抗體。可以使用習知技術已知的雜交瘤技術、重組技術、噬菌體展示(phage display)技術、合成技術或這些技術的組合或者習知技術熟知的其它技術生產本發明的單株抗體。如本文中使用的，術語“單株抗體”不限於透過雜交瘤技術的方式獲得的抗體。“單株抗體”涉及從單個複製或克隆，包括：例如，任何真核生物、原核生物或噬菌體獲得的抗體。“單株抗體”可以是完整的抗體(具有全部的或全長Fc區)、實際上完整的抗體、包括抗原結合區的抗體部分或片段，例如，Fab片段，Fab’片段或F(ab')2-片段。“Fab”片段包括輕鏈可變區和輕鏈恆定區以及重鏈可變區和第一重鏈恆定區(CH1)。“F(ab')2”抗體片段包括一對Fab 片段，其主要透過位於C-末端區域的鉸鏈胺基酸共價結合。Fv是可變的抗體片段；scFv(單鏈Fv)是抗體的可變片段，其中重鏈和輕鏈片段透過短的接頭肽連接；(scFv)2-片段包括用二硫鍵連接的兩個scFv分子；dsFv-可變片段用另外的分子內二硫鍵穩定。抗體片段之間的其它化學鍵也是本領域狀態下熟知的。

本文中術語“抗體”和“免疫球蛋白”可以互換使用。

每個輕鏈/重鏈對的可變區形成抗體的抗原結合位點。根據本發明，如本文中使用的，“抗原結合區”或“抗原結合位點”或“抗原結合功能域”或“抗原結合中心”可以互換使用，是指包括與抗原相互作用的胺基酸殘基、並且賦予抗體對抗原的特異性和親和力的抗體區域。抗體片段包括保持抗原結合殘基的正確構象必需的框架胺基酸殘基。

優選地，根據本發明的抗原結合區或整個抗原結合位點的CDR來源於人類文庫或基本上人類來源的，而且具有改變的特異性胺基酸殘基，例如，用不同的胺基酸殘基取代以便改善抗體的特定特性(例如，它的KD、Koff和IC50)。優選地，本發明的抗體框架區是人類來源的或者基本上人類來源的(至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%人類來源的)。本發明抗體的優選框架區具有相應於人抗體的框架區的胺基酸序列：

重鏈可變區

FR1 QVQLVQSGGGLVQPGGSLRLSCAADG

FR2 WVRQAPGKGLEWVS

FR3 RFTISRDDAKNTLYLQMSSLKTEDTAVYYC

FR4 WGQGTLVTVSS

輕鏈可變區

FR1 QSVLTQPPSVSVAPGKTVTISC

FR2 WYQHLPGTAPKLLIY

FR3 GVPDRFSGSQSGNTASLTISGLQAEDEADYYC

FR4 FGGGTKLTVLGQ

在其它的實施方案中，本發明的抗IL-17抗體的抗原結合位點可以來源於其它的非人物種，包括但不限於，兔、老鼠和倉鼠，或者來源於人類物種。

此外，本發明的“單株抗體”可以由單鏈Fv片段表示，其可以透過連接編碼LCVR-和HCVR-的DNA與接頭序列獲得(參見Pluckthun,The Pharmacology of Monoclonal Antibodies,vol.113,Rosenburg and Moore eds.,Springer-Verlag,New York,p.269-315,1994)。本發明中使用的術語“抗體”包括這樣的片段或部分以及單鏈形式。只要蛋白保留它特異性或優選結合靶(例如，抗原表位或抗原)的能力，它都包括在術語“抗體”中。抗體可以是糖基化的或非糖基化的，都屬於本發明的範圍內。

如本文中使用的，“單株抗體”的群體，指同源的或基本同源的抗體群體(也即，群體中抗體的至少約85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%或96%，但是更優選不低於約97%或98%，或者進一步優選至少99%將在ELISA中競爭相同的抗原/抗原表位，或者考慮到它們的胺基酸序列，進一步優選抗體是相同的)。抗體可以是糖基化的或者非糖基化的，都是屬於本發明的範圍內。如果它們具有相同的胺基酸序列，單株抗體就是同源的，但是它們的翻譯後修飾可以不同(例如，糖基化模式)。

如本文使用的，抗體“變體”指一種分子，其胺基酸序列透過添加、缺失和/或取代親本抗體序列中的一個或多個胺基酸殘基而不同於親本序列。在優選的實施方案中，抗體含有親本抗體的CDR區中的至少一個(例如，從1到約10，優選2、3、4、5、6、7或8)胺基酸插入、缺失和/或取代。考慮到變體抗體的序列，本申請限定同一性或同源性為變體抗體序列中的胺基酸殘基的百分數，其等於序列比對後親本抗體中的殘基數，而且如果需要，切斷以獲得最大的百分數相同序列。變體抗體保留它與親本抗體結合的相同抗原或者優選抗原表位結合的能力，或者優選顯示超過親本抗體的至少一種特性或生物學活性。例如，相較於親本抗體，該抗體優選具有更強的親和力、更長的半衰期、更低的IC50或增強的抑制抗原活性的能力。本申請特別感興趣的變體抗體是，當與親本抗體比較時，顯示活性增加至少2倍，優選至少5倍、10倍或20倍的抗體。

如本文中使用的，“親本”抗體指用於產生變體的胺基酸序列編碼的抗體。親本抗體可以具有來源於羊駝(lama glama)的框架序列，而且優選該框架序列是完全或基本上人類來源的。親本抗體可以來自美洲駝、嵌合的、人源化或人類。

可以使用各種工程技術製備本發明的抗體，包括重組方法，如各種來源的DNA改組。

如本文中使用的，術語“特異性結合”指這種情況，其中涉及特異性結合過程的一方沒有顯著結合除了它的特異性結合伴侶(partners)以外的分子。該術語也適用，如果，例如，本發明的抗體的抗原結合位點對特定的抗原表位是特異性的，該抗原表位由許多抗原攜帶；在這種情況下，具有抗原結合位點的特異性抗體將能特異性結合攜帶不同抗原表位的抗原。因此，本發明的單株抗體特異性結合人IL-17(IL-17A)，但是它不特異性結合人IL-17B、IL-17C、IL-17D、IL-7E和IL-17F。

如本文中使用的，術語“抗原表位”指可以透過抗體的一個或幾個抗原結合位點識別並結合的分子部分。抗原表位元常常包含分子的化學表面活性基團，如：胺基酸或糖側鏈，並具有特異性的三維結構特性，以及特異性的電荷特性。“抑制抗原表位”和/或“中和抗原表位”指，當在完整抗原分子和結合所述抗原表位特異性的抗體的上下文中，導致體內或體外喪失或降低的分子或含有該分子的生物體的活性的抗原表位。

如本文中使用的，術語“抗原表位”還指在動物，優選在哺乳動物，如：老鼠和人體中具有抗原性和/或免疫原性活性的多肽片段。如本文中使用的，術語“抗原性表位”是能特異性結合抗體，而且能透過習知技術熟知的任何技術(例如，透過標準的免疫測定方法)檢測的多肽片段。抗原表位不是免疫原性必需的，但是它們可具有免疫原性。如本文中使用的，“免疫原性表位”限定為在動物中引起抗體應答的多肽片段，如透過習知技術的任何方法測定的。“非線性表位元”或“構象性表位”包含與抗原表位特異性抗體結合的抗原蛋白內的不相鄰多肽(胺基酸)。

如本文中使用的，涉及本發明抗體的術語“生物學特性”、“生物學特徵”、“活性”和“生物學活性”是可以互換使用的，而且包括但不限於：抗原表位/抗原親和力和特異性；體內或體外的和IL-17的能力或者是IL-17拮抗劑的IC50；抗體穩定性和抗體的體內免疫原性。從習知技術鑒定的其它生物學特性或抗體特性包括：例如，交叉反應性(與靶肽的非人同源物或其它蛋白或靶的反應)和在哺乳動物細胞中保持高的蛋白表達水準的能力。可以使用習知技術中公認的方法觀察、測定或評估上述特性或特徵，這些方法包括但不限於：ELISA、競爭性ELISA BIACORE表面胞質基因共振或KINEXA、體外或體內非限制性的中和分析、受體結合、細胞因數或生長因數的產生和/或釋放、信號轉導和從各種來源包括人類、靈長類動物或任何其它來源獲得的組織切片的免疫組織化學研究。

如本文中使用的，術語“抑制”或“中和”，考慮到本發明的抗體活性時，將指顯著抵抗、阻斷、預防、限制、減緩、中斷、破壞、終止、降低或逆轉例如抑制個體的發育或嚴重程度的能力，包括但不限於：生物學活性(如 IL-17的活性)或特性，疾病或狀況。本發明的抗體與IL-17結合導致抑制或中和優選至少20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%或更高的IL-17活性。

如本文中使用的，術語“患者”指哺乳動物，包括但不限於：老鼠、猴、人、家畜哺乳動物、運動哺乳動物和寵物哺乳動物；優選地，該術語用於人。在某個實施方案中，患者優選哺乳動物、優選人，另外地特徵在於IL-17A介導的疾病、紊亂或狀況可以透過降低IL-17的生物學活性而改善。

術語“載體”指能轉運與它連接的其它核酸的核酸分子，包括但不限於：質粒和病毒載體。某些載體能在其被導入的宿主細胞中自主複製，而其它的載體能整合到宿主細胞基因組中病與宿主基因組一起複製。而且，一些載體能介導它們功能性結合的基因的表達。本申請中，這些載體稱為“重組表達載體”(或“表達載體”)；示例性的載體是習知技術熟知的。

如本文中使用的，術語“細胞”、“宿主細胞”、“細胞系”、“細胞培養物”和“生產細胞系”可以互換使用，指單個細胞或細胞培養物，其是本發明的任意分離的多核苷酸或含有編碼本發明的HCVR、LCVR或單株抗體的序列的任意重組載體(多個重組載體)的受體。宿主細胞包括獲自單個宿主細胞的後代；由於天然、偶然或計畫的突變和/或變異，這些後代不必是與原始宿主細胞完全相同的(關於形態或完全DNA互補)。宿主細胞包括用重組載體、表達本發明的多核苷酸的單株抗體或它的重鏈或輕鏈轉化、轉導或感染的細胞。包含本發明的重組載體的宿主細胞(整合到宿主染色體中或者沒有)都稱為“重組宿主細胞”。用於本發明的優選宿主細胞是CHO細胞(例如，ATCC CRL-9096)、NSO細胞、COS細胞(ATCC，例如，CRL-1650、CRL-1651)和Hela(ATCC CCL-2)。用於本發明的另外的宿主細胞包括植物細胞、酵母細胞、其它的哺乳動物細胞和原核細胞。

術語“IL-17介導的疾病或紊亂”包括與異常的IL-17機體/組織水準相關的疾病或紊亂。這些疾病或紊亂可以感染炎症或自身免疫，可以選自風濕性關節炎、骨關節炎、青少年慢性關節炎、膿毒性關節炎、萊姆關節炎(Lyme arthritis)、牛皮癬關節炎、反應性關節炎、脊柱關節病、系統性紅斑狼瘡、克羅恩氏病(Crohn’s disease)、潰瘍性結腸炎、炎性腸病、胰島素依賴型糖尿病、甲狀腺炎、哮喘、過敏性病症、牛皮癬、皮炎、系統性硬化症、移植物抗宿主病、移植排斥、與器官移植有關的急性或慢性免疫疾病、肉狀瘤病、動脈粥樣硬化、彌散性血管內凝血、川崎病(Kawasaki disease)、格雷夫斯病(Graves’ disease)、腎病綜合征、慢性疲勞綜合征、壞死性血管炎(Wegener's disease)、過敏性紫癜(Henoch-Schonlein purpura)、伴有腎損害的顯微鏡下多血管炎、慢性活動性肝炎、葡萄膜炎、感染性休克、中毒性休克綜合征、膿毒症綜合征、惡病質、感染、入侵、獲得性免疫缺陷綜合征、急性橫貫性脊髓炎、亨廷頓舞蹈病(Huntington chorea)、帕金森病(Parkinson disease)、阿爾茨海默病(Alzheimer disease)、中風、原發性膽汁性肝硬化、溶血性貧血、惡性腫瘤、心力衰竭、心肌梗死、艾迪生病(Addison disease)、多腺性自身免疫綜合征I型或II型，施密特氏綜合征(Schmidt's syndrome)、急性呼吸窘迫綜合征、脫髮、斑形脫髮、血清反應陰性關節病、關節病、萊特爾氏綜合征(Reiter's syndrome)、牛皮癬性關節病、與潰瘍性結腸炎有關的關節病、腸病性滑膜炎、與衣原體有關的關節病、脊椎關節病、動脈粥樣硬化病、特異反應性過敏、自身免疫性大皰病、天皰瘡、落葉狀天皰瘡、類天皰瘡、線狀IgA疾病、自身免疫性溶血性貧血、Coombs陽性溶血性貧血、獲得性惡性貧血、青少年惡性貧血、肌痛性腦脊髓炎、慢性疲勞綜合征、慢性活動性肝炎症、顱巨細胞動脈炎、原發性硬化性肝炎、隱源性自身免疫性肝炎、愛滋病、愛滋病相關疾病、B型肝炎、C型肝炎、常見變異型免疫缺陷病、擴張型心肌病、女性不育、卵巢功能不全、過早卵巢衰竭、肺纖維化、隱源性致纖維化性肺泡炎、炎症後間質性肺病、間質性肺炎、與間質性肺病相關的結締組織病、與間質性肺病相關的混合性結締組織病、與間質性肺病相關的系統性硬皮病、與間質性肺病相關的類風濕性關節炎、與肺病相關的系統性紅斑狼瘡、與肺病相關的皮肌炎、與肺病相關的多發性肌炎、與肺病相關的乾燥綜合征、與肺病相關的強直性脊椎炎、彌漫性肺血管炎、與肺病相關的血鐵質、藥物引起的間質性肺病、纖維化、輻射誘導的纖維化、閉塞性細支氣管炎、慢性嗜酸細胞性肺炎、伴有淋巴細胞浸潤的肺疾病、感染後間質性肺病變、痛風性關節炎、自身免疫性肝炎、I型自身免疫肝炎、II型自身免疫性肝炎、自身免疫性低血糖症、伴有角質肥厚的B型胰島素抵抗、甲狀旁腺機能減退、急性移植相關的免疫疾病、慢性移植相關的免疫疾病、骨關節病、原發性硬化性膽管炎、I型牛皮癬、II型牛皮癬、特發性白細胞減少症、自身免疫性嗜中性白血球減少症、NOS-腎疾病、腎小球性腎炎、顯微鏡腎下多血管炎、萊姆病(Lyme disease)、盤狀紅斑狼瘡、先天性的NOS男性不育、抗精子免疫、多發性硬化、交感性眼炎、結締組織病繼發的肺動脈高壓症、肺出血腎炎綜合症、結節性多動脈炎的肺表現、急性風濕熱、類風濕性脊椎炎、史提爾氏病(Still's disease)、系統性硬皮病、乾燥綜合征(Sjogren's Syndrome)、關節炎、自身免疫性血小板減少症、特發性血小板減少症、自身免疫性甲狀腺病、甲狀腺機能亢進、自身免疫性甲狀腺機能減退、萎縮性自身免疫性甲狀腺機能減退、原發性粘液水腫、晶狀體抗原性葡萄膜炎、原發性血管炎、白癜風、急性肝病、慢性肝病、酒精性肝硬化、酒精誘導的肝損傷、膽汁鬱積、特質性肝疾病，藥物誘導的肝炎、非酒精性脂肪性肝炎、過敏症、哮喘、B組鏈球菌感染(group B streptococcal infection,GBS)、精神障礙、Th1-或Th2-介導的疾病、急性或慢性疼痛、惡性腫瘤(如：肺癌、乳腺癌、胃癌、膀胱癌、結腸直腸癌、胰腺癌、卵巢癌、前列腺癌或造血系統惡性腫瘤)、無β脂蛋白血症、手足發紺、急性或慢性感染、急性或慢性侵染、急性白血病、急性淋巴細胞白血病、急性骨髓性白血病、急性或慢性細菌感染、急性胰腺炎、急性腎衰竭、腺癌、心房異位、AIDS癡呆綜合征、酒精誘導的肝炎、過敏性結膜炎、過敏性接觸性皮炎、過敏性鼻炎、同種異體移植排斥、α-I抗胰蛋白酶缺乏症、側向肌萎縮性硬化症、貧血、心絞痛、前角細胞變性、抗-CD3治療、抗磷脂綜合征、抗受體的過敏反應、主動脈瘤、外周動脈瘤、主動脈夾層、高動脈壓、冠狀動脈硬化、動靜脈瘺、共濟失調、恆定或陣發性心房纖維性顫動、心房撲動、房室阻斷、B-細胞淋巴瘤、骨移植排斥、骨髓移植排斥、束支傳導阻滯、伯基特淋巴瘤(Burkitt lymphoma)、燒傷、心律失常、心肌頓抑綜合征、心臟腫瘤、心肌病、對旁路的炎性應答、軟骨移植排斥、腦皮層變性、小腦病症、混亂或多灶性房性心動過速、化療所致疾病、慢性粒細胞性白血病、慢性酒精成癮、慢性炎性疾病、慢性淋巴白血病、慢性阻塞性肺病、慢性水楊酸鹽中毒、結腸直腸癌、充血性心臟衰竭、結膜炎、接觸性皮炎、肺心病、冠狀動脈疾病、克雅氏病(Creutzfeldt-Jakob Disease)、培養陰性的膿毒症、囊性纖維化、細胞因數療法誘導的疾病、拳擊運動員的腦病、脫髓鞘病、登革出血熱(dengue hemorrhagic fever)、皮炎、皮膚病、多尿症、糖尿病、糖尿病相關的動脈粥樣硬化血管疾病、彌漫性雷維小體疾病(diffuse Lewy body disease)、充血性擴張型心肌病、基底神經節疾病、中年唐氏綜合征(Down's syndrome in middle age)、中樞神經系統多巴胺阻滯劑誘導的運動障礙、藥物敏感性、濕疹、腦脊髓炎、心內膜炎、內分泌病、會厭炎、EB病毒感染(Epstein-Barr viral infection)、紅痛病、錐體外系病症、小腦病症、家族性嗜血細胞性淋巴組織細胞增生症、胎兒胸腺移植排斥、弗裡德希氏共濟失調(Friedreich's ataxia)、外周動脈疾病、真菌敗血症、產氣性蜂窩組織炎、胃潰瘍、腎小球性腎炎、任何器官或組織的移植排斥、革蘭氏陰性膿毒症、革蘭氏陽性膿毒症、由細胞內生物體引起的肉芽腫、毛細胞白血病、哈-施病(Hallervorden-Spatz disease)、橋本甲狀腺炎 (Hashimoto's thyroiditis)、枯草熱、心臟移植排斥、血色病、血液透析、溶血性尿毒綜合征、血栓性血小板減少性紫癜、出血、甲型肝炎、束支心律失常、HIV感染、HIV神經病、霍奇金病(Hodgkin disease)、運動機能亢進性運動疾病、過敏反應、過敏性相關的肺炎、高血壓、運動機能減退的運動障礙、下丘腦-垂體-腎上腺軸的檢查、特發性艾迪生氏病(idiopathic Addison's disease)、特發性肺纖維化、抗體介導的細胞毒性、衰弱、嬰兒肌肉萎縮、主動脈炎症、流感病毒A、暴露於電離輻射、虹膜睫狀體炎、葡萄膜炎、視神經炎、局部缺血、再灌注誘導的疾病、缺血性中風、幼年型類風濕性關節炎、幼年型脊髓性肌萎縮、卡波濟氏肉瘤(Kaposi's sarcoma)、腎移植排斥、軍團桿菌病、利什曼病、麻風病、皮質脊髓束損傷、脂肪水腫、肝臟移植排斥、淋巴水腫、瘧疾、惡性淋巴瘤、惡性組織細胞病、惡性黑色素瘤、腦膜炎、腦膜炎球菌血症、代謝疾病、特發性疾病、偏頭痛、多系統線粒體疾病、混合性結締組織病、單克隆丙種球蛋白病、多發性骨髓瘤、多系統變性症、重症肌無力、細胞內鳥結核分枝桿菌、結核分枝桿菌、骨髓增生異常綜合征、心肌梗塞、心肌缺血性疾病、鼻咽癌、新生兒慢性肺疾病、腎炎、腎病、神經退行性疾病、神經源性肌萎縮、嗜中性粒細胞減少性發熱、非何傑金氏淋巴瘤(non-Hodgkin’s lymphoma)、腹部主動脈分支閉塞、動脈阻塞性疾病、OKT3治療、睾丸炎、附睾炎、輸精管吻合術、器官腫大、骨質疏鬆症、胰腺移植排斥、胰腺癌、副腫瘤性疾病、腫瘤相關的高鈣血症、甲狀旁腺移植排斥、盆腔炎症性疾病、常年性鼻炎、心包疾病、周邊動脈粥樣硬化疾病、外周血管疾病、腹膜炎、惡性貧、卡氏肺囊蟲肺炎、POEMS綜合征、灌注後綜合征、泵頭綜合征、心臟切開後梗塞後綜合征、子癇前期、進行性核上性麻痹、原發性肺動脈高血壓、放射療法、雷諾氏現象或疾病(Raynaud's phenomenon or disease)、雷諾氏病(Raynoud's disease)、雷弗素姆病(Refsum's disease)、常規窄QRS心動過速、腎血管性高血壓、再灌注損傷、限制性心肌病、肉瘤、硬皮病、老年性舞蹈症、路易體癡呆(Dementia with Lewy bodies)、血清反應陰性關節炎、休克、鐮狀細胞病、皮膚同種異體移植排斥、皮膚變化、小腸移植排斥、實體瘤、特異性心律失常、脊髓性共濟失調、脊髓小腦退化、鏈狀球菌肌炎、小腦結構損傷、亞急性硬化性全腦炎、暈厥、心血管梅毒、全身性過敏反應、綜合全身炎症反應綜合征、全身型幼年類風濕性關節炎、毛細管擴張、血栓閉塞性脈管炎、血小板減少症、外傷、出血、III型超敏反應、IV型超敏反應、不穩定心絞痛、尿毒癥、尿膿毒病、蕁麻疹、心臟瓣膜病、靜脈曲張、血管炎、靜脈疾病、靜脈血栓形成、心室纖維性顫動、病毒感染、真菌感染、病毒性腦炎、無菌性腦膜炎、病毒嗜血細胞綜合征、韋尼克-科爾薩科夫綜合征(Wernicke-Korsakoff syndrome)、威爾遜氏病(Wilson's disease)、任何器官或組織的異種移植排斥、急性冠狀動脈綜合征、急性特發性多神經炎、急性炎症性脫髓鞘性多發性神經病、急性缺血、成人斯蒂爾病(adult-onset Stills disease)、斑形脫髮、過敏性反應、抗磷脂抗體綜合征、再生障礙性貧血、冠狀動脈硬化、特應性濕疹、特應性皮炎、自身免疫皮炎、與鏈球菌感染相關的自身免疫性疾病、自身免疫性腸病、自身免疫性聽力喪失、自身免疫性淋巴細胞增生綜合征、自身免疫性心肌炎、自身免疫性卵巢早衰、瞼炎、支氣管擴張、大皰性類天皰瘡、心血管疾病、災難性抗磷脂綜合征、乳糜瀉、頸椎病、慢性缺血、疤痕性類天皰瘡、多發性硬化、結膜炎、兒童期發作的精神病症、慢性阻塞性肺病、淚囊炎、皮肌炎、糖尿病性視網膜病、椎間盤突出、椎間盤脫出、藥物誘發的免疫性溶血性貧血、心內膜炎、子宮內膜異位症、眼內炎、鞏膜外層炎、紅斑多形物、嚴重紅斑多形物、妊娠期類天皰瘡、吉蘭-巴雷綜合征(Guillain-Barre syndrome，GBS)、枯草熱、休斯綜合症(Hughes syndrome)、特發性帕金森病、特發性間質性肺炎、IgE介導的變態反應、自身免疫性溶血性貧血、包涵體肌炎、傳染性眼部炎性疾病、炎性脫髓鞘病、炎症性心臟病、炎症性腎病、先天性肺纖維化、常見間質性肺炎、虹膜炎、角膜炎、乾燥性角結膜炎、庫斯毛爾病(Kussmaul-Meier病)、蘭德裡麻痹(Landry palsy)、朗格漢斯細胞組織細胞增生症(Langerhans' cell histiocytosis)、大理石狀皮膚病、黃斑變性、顯微鏡下多血管炎、Bechterew病、運動神經元疾病、粘膜類天皰瘡、多發性器官衰竭、重症肌無力、脊髓發育不良綜合征、心肌炎、神經根病症、神經病、非A型肝炎、非B型肝炎、視神經炎、骨質溶解症、卵巢癌、JIA少關節型、外周動脈閉塞性疾病、周圍性血管疾病、周圍動脈疾病、靜脈炎、多發性結節性動脈炎、多軟骨炎、風濕性多肌痛、白發病、多關節型幼年特發性關節炎、多發性內分泌缺陷、多肌炎、風濕性多肌痛、泵後綜合征、原發性帕金森氏綜合征、前列腺癌、直腸癌、造血系統惡性腫瘤(如：白血病、淋巴瘤)、前列腺炎、單純紅細胞再生障礙性貧血、原發性腎上腺機能不足、復發性視神經脊髓炎、心瓣手術後的再狹窄、風濕性心臟病、滑膜炎、痤瘡、膿皰病、股肥大、骨炎、硬皮病、繼發性澱粉樣變性、休克肺、鞏膜炎、坐骨神經痛、繼發性腎上腺機能不足、矽相關的結締組織病、Sneddon-Wilkison病、強直性脊柱炎、Stevens-Johnson綜合征、全身炎症反應綜合征、顱動脈炎、弓形體鼻炎、中毒性表皮壞死松解症、橫貫性脊髓炎、腫瘤壞死因數受體相關的週期性綜合征、I型變態反應、II型糖尿病、蕁麻疹、常見間質性肺炎、血管炎、春季結膜炎、病毒性視網膜炎、Vogt-Koyanagi-Harada綜合征、濕性黃斑變性、傷口癒合相關的關節病、耶爾森氏菌屬相關的關節病、沙門氏菌相關的關節病。

抗體的描述

本發明提供了特異性結合IL-17A的抗體或片段；其中：重鏈可變區(VH)包括3個高變區HCDR 1、HCDR 2和HCDR 3：高變區HCDR 1包括SEQ ID NO：1；高變區HCDR 2包括SEQ ID NO：2；高變區HCDR 3包括SEQ ID NO：3；輕鏈可變區(VL)包括3個高變區LCDR 1、LCDR 2和LCDR 3：高變區LCDR 1 包括SEQ ID NO：4；高變區LCDR 2包括SEQ ID NO：5；高變區LCDR 3包括SEQ ID NO：6。

本發明的優選實施方案涉及含有重鏈可變區(VH)和輕鏈可變區(VL)的單株抗體或片段，所述重鏈可變區(VH)含有：HCDR 1：F-T-F-S-N-Y-A-M-S(SEQ ID NO：7)；HCDR 2：R-I-E-G-G-I-S-S-T-Y(SEQ ID NO：8)；HCDR 3：C-A-V-N-Y-Y-G-M-Y-Y(SEQ ID NO：9)；輕鏈可變區(VL)含有：LCDR 1：T-G-T-S-E-D-V-G-F-G-N-Y(SEQ ID NO：10)；LCDR 2：R-V-N-T-R-P-S(SEQ ID NO：11)；LCDR 3：C-S-S-Y-K-A-G-G-T-Y(SEQ ID NO：12)。

本發明的其它優選實施方案涉及特異性結合人IL-17A的單株抗體或片段，所述單株抗體或片段中含有至少一個可變區，該可變區包括：a)SEQ ID NO：13的重鏈可變區(VH)；b)SEQ ID NO：14的輕鏈可變區(VL)。

本發明的抗體可包括與SEQ ID NO：15相同的重鏈序列。本發明的另一個實施方案是包括胺基酸序列與SEQ ID NO：16相同的輕鏈的抗體。

本發明的抗體包括另外的突變M252Y/S254T/T256E、N434W、N434A、N434F、H433K/N434F/Y436H、H433K/N434F/Y436H+M252Y/S254T/T256E、T307A/E380A/N434A、T250Q/M428L。所述的取代沒有導致抗體與IL-17A結合的能力喪失，但是它們可能導致ADCC(抗體依賴的細胞介導的細胞毒性)降低，或者增加抗體的親和力或其它生物學特性。

本發明的抗體具有改善的生物學特性，尤其是關於IL-17A更好的抑制活性(IC50)，以及增強的聚集穩定性。

本發明還提供了編碼要求的抗體的DNA構建體和含有所述DNA構建體的表達載體，其用於生產本發明的抗體。

而且，本發明提供了包含具有上述DNA的表達載體的細胞系。該細胞系可用于生產本發明的抗體。

藥物組合物

本發明的抗體可以包含在適於在患者中施用的藥物組合物中(請參見實施例14)。本發明的抗體可以單獨施用或者與藥學上可接受的載體、賦形劑和/或稀釋劑聯合施用，以單劑量或者多劑量。開發用於給藥的藥物組合物以滿足選擇的給藥模式；而且正確使用藥學上可接受的稀釋劑、載體和/或賦形劑，如：分散劑、緩衝液、表面活性劑、防腐劑、增溶劑、等滲劑、穩定劑等等(請參見實施例14)。根據例如Remington，The Science and Practice of Pharmacy，第19版，Gennaro，Ed.,Mack Publishing Co.,Easton,PA 1995中說明的標準方法開發了所述組合物，其描述了用於製劑生產的常見技術。

使用標準的給藥技術包括口腔、靜脈內、腹膜內、皮下、肺、經皮、肌內、鼻、頰、舌下或透過栓劑，可以將包含本發明的抗IL-17單株抗體的藥物組合物施用患者，該患者有本文描述的病理的風險或有本文描述的病理。

本發明的藥物組合物優選包含或者是治療有效量的本發明的抗體。“治療有效量”指獲得想要的治療效果所需的劑量和時間週期有效的量。抗體的治療有效量可以根據這些參數而改變，如：疾病狀況、年齡、個體的性別和體重，抗體或它的片段在患者中誘導想要的反應的能力。治療有效量也是抗體的治療利益超過毒性或副作用的量。“預防有效量”指獲得想要的預防效果所需的劑量和時間週期有效的量。由於預防劑量是在疾病之前或者疾病的早期階段用於個體，所以預防有效量一般低於治療有效量。

治療有效量或預防有效量至少是保證患者的治療利益所需的最小劑量，但是低於活性組分的中毒劑量。同時，本發明的抗體的治療有效量是降低哺乳動物，優選人類中IL-17的活性(例如，IL-17R結合)的量，所需哺乳動物中IL-17的存在導致或促進任何不利的病理作用，或者如果IL-17的降低導致哺乳動物優選人類的治療利益的量。

本發明抗體的給藥途徑可以是口腔、腸胃外、吸入或局部。優選地，本發明的抗體可以包含在適用於腸胃外投藥的組合物中。如本文中使用的術語“腸胃外”包括：靜脈內、肌內、皮下、直腸、陰道或腹膜內給藥。靜脈內、腹膜內或皮下注射是優選的給藥途徑。用於這種注射的可接受的藥物載體是習知技術熟知的。

如合適的指南中描述的，藥物組合物在生產和儲存在容器中時應該是無菌和穩定的，其例如以密封小瓶(例如安瓶)或注射器中的形式提供。因此，在製備組合物後可以對藥物組合物進行過濾除菌，或者透過任何其它微生物學合適的方法製備藥物組合物。用於靜脈內輸液的典型組合物可包括250-1000mL液體，如：無菌林格氏溶液、生理鹽水、右旋糖溶液或Hank’s鹽溶液，和治療有效量的(例如，1-100mg/mL或更高的)抗體濃縮物。劑量可以根據疾病類型和嚴重程度而改變。從醫學領域的狀況熟知，用於某個患者的劑量取決於多個因素包括患者的體型、體表面積、年齡、施用的具體化合物、性別、給藥期限和途徑、總體健康狀況以及同事施用的藥物。典型的劑量可以是，例如：0.001-1000μg的範圍；但是低於和高於該示例性範圍的劑量是預期的，特別是考慮到上述參數。每天的腸胃外劑量給藥方式可以是從每天0.1μg/kg到100μg/kg體重，優選從0.3μg/kg到10μg/kg，更優選從1μg/kg到10μg/kg，更優選從0.5μg/kg到10μg/kg體重。可以透過患者的健康狀態定期評估來監控治療過程。對於幾天或更長時間的重複給藥，根據患者的狀況，重複治療直到想要的應答或疾病控制。但是，本文沒有描述的其它劑量給藥方式也可以應用。可以透過單丸劑或多丸劑劑量給藥，或透過抗體的連續輸液來施用合適的劑量，這取決於想要的藥物動力學分解。

所述的抗體假定的特性很大程度上取決於醫生的決定。預期的效果是選擇合適劑量和方式的關鍵因素。本文考慮的參數包括待治療的某種疾病、接受的治療的某種哺乳動物、某個患者的臨床狀況、紊亂起因、給藥位點、某種抗體類型、給藥途徑、給藥模式以及醫學領域熟知的其它因素。

本發明的治療劑可以是冷凍的或凍幹的，並在給藥之前在無菌載體中恢復。凍幹和恢復會導致抗體活性的某些損失。可以調節劑量來補償這種損失。通常，製劑pH從6到8是優選的。

製品

在另一個實施方案中，提供了含有用於治療或預防上述紊亂的材料的製品。

該製品包括裝有包含抗體的藥物組合物的容器，和標籤或包裝說明書。合適的容器包括：例如，小瓶、安瓶、注射器和分析管。容器可以由各種材料製成，如玻璃或塑膠。容器包含治療IL-17A介導的疾病或紊亂有效的本發明的組合物，而且可具有無菌的進入孔(例如：容器可以是靜脈內溶液袋或具有皮下注射針可刺穿的塞子的小瓶)。本發明的抗IL-17A抗體是組合物的活性組分。T標籤或包裝說明書標明組合物用於治療想要的狀況。而且，製品可包含裝有藥學上可接受的緩衝液如磷酸緩衝鹽溶液、林格氏溶液和右旋糖溶液的第二容器。它還可包括來自商業和使用者立場的需要的其它材料，包括其它的緩衝液、稀釋劑、篩檢程式、針、注射器和包裝說明書。

圖1：獲得的Phoretogram IL-17A蛋白溶液，其中：1、酶-未染色的標記；2、應用IMACBioRad之前的基質；3、應用IMACBioRad之後的基質；4、洗滌1；5、洗滌2；6、洗滌3；7、洗脫2.5μL；8、洗脫5μL；9、洗脫10μL。

圖2：獲得的Phoretogram IL-17A-Fc蛋白溶液，其中：1、910鼠-IgG 1μg；2、酶-未染色的標記；3、應用之前的基質10μL；4、應用之後的基質10μL；5、用PBS-吐溫10μL洗滌；6、用PBS 10μL洗滌；7、洗脫第一次10μL；8、洗脫12mL 10μL；9、洗脫12mL 10μL；10、pH 2.5吸附劑10μL洗滌；11、裂解後IL-17-Fc 10μL。

圖3：還原(A)和非還原(B)條件下的12% SDS-PAGE，其中：1、2.5μg AIN457；2、5μg AIN457；3、0μg AIN457；4、酶-未染色的PW標記；5、5μL IgG aIL17 A1CL v4C2P；6、5μL IgG aIL17 A1CL v3E2P；7、5μL IgG aIL17 A1CL v1A2C；8、5μL IgG aIL17 A1CL v7C2P；9、5μL IgG aIL17 A1CL v1D2C；10、5μL IgG aIL17 A1CL v2D2C；11、5μL IgG aIL17 A1CL v4D2P；12、IgG aIL17 A1CL對照。

圖4：合成美洲駝組合抗體Fab文庫的流程圖。

圖5：用於克隆噬菌體展示Fab文庫的噬菌粒。

圖6：合成雜合組合抗體Fab文庫的流程圖。

圖7：合成雜合組合抗體Fab文庫的流程圖。

圖8：可變域池的合併。

圖9：特異性抗人IL-17 Fab的ELISA篩選。

圖10：阻斷IL-17A/IL-17R相互作用的Fab候選物的競爭性ELISA篩選。

圖11：人抗IL-17A Fab候選物的koff篩選的結果。

圖12：BCD085溶液的電泳圖，其中：1、酶未染色的標記；2、BCD085，10μg+βME；3、BCD085，40μg+βME；4、酶未染色的標記；5、BCD085，10μg-βME；6、BCD085，40μg-βME。

圖13：純化的BCD085的大小排阻HPLC模式。

圖14：相較於AIN 457，BCD085的IL-6-抑制活性。

圖15：BCD085與人IL-17的相互作用曲線。

圖16：BCD085與猴IL-17(Macaca mulatta)的相互作用曲線。

圖17：熱脅迫後，用BCD085抗體獲得的色譜圖。

圖18：以40mg/kg的劑量，單次皮下給藥給恒河猴(Macaca mulatta)後的抗IL-17A抗體的藥物動力學模式。

圖19：IgG型抗體的結構。

提供下面實施例的目的僅僅是為了說明性的目的，而不是試圖限制本發明的範圍。

實施例

實施例1

在懸浮的哺乳動物細胞培養物中生產重組抗原和抗體

根據公開的方案，在獲自中國倉鼠卵巢細胞的已建立細胞系(CHO-K1)中生產抗體和抗原[Biotechnol Bioeng.2005 Sep 20；91(6)：670-677,Liao Metal.,2004；Biotechnol Lett.2006 Jun；28(11)：843-848；Biotechnol Bioeng.2003 Nov 5；84(3)：332-342]。使用組成性表達EBNA1蛋白(Epstein-Barr病毒核抗原1)的基因的細胞。使用來自Life Technologies Corporation的無血清培養基，根據製造商的指南，在定軌振盪器上，在燒瓶中進行懸浮培養。為了暫態表達，濃度為2*106/mL的細胞透過線性聚乙烯亞胺(PEI MAX，Polysciences)進行轉染。DNA/PEI比例是1：3-1：10。轉染後5-7天中，將細胞培養物在2000g離心20min，並透過0.22μm篩檢程式進行過濾。透過親合HPLC從培養物液體分離靶蛋白。

在Profinity IMAC Ni-電荷的樹脂(Bio-Rad)上，從培養物液體分離並純化重組IL-17A蛋白，其C-末端區含有6個組氨酸。純化過程之前，添加NiCl2到培養物液體達到濃度為1mM。然後添加5mL Profinity IMAC Ni-電荷的樹脂到培養物液體中，並在振盪器上室溫下混合1h。將吸附劑轉入到5mL Thermo scientific聚丙烯柱上，並用5倍柱體積的PBS洗滌，以除去非特異性結合的組分。用0.3M咪唑(pH 8)和150mM NaCL洗脫結合的抗原。然後透過蛇皮透析管技術將蛋白透析到PBS(pH 7.4)中，過濾(0.22μm)，轉移到管中，並於-70℃儲存。透過SDS-PAGE評估獲得的蛋白的純度(圖1)。

在用於親和HPLC的A蛋白柱上，從細胞培養物分離並純化重組IL-17A-Fc蛋白。澄清的培養物液體透過用PBS(pH 7.4)平衡的5mL HiTrap rProtein A瓊脂糖凝膠FF柱(GE Healthcare)。然後用5倍體積的PBS洗滌柱子，以除去未結合的組分。結合的抗原用0.1M甘氨酸緩衝液pH 3洗脫。收集主要的蛋白洗脫峰，並用1M Tris-緩衝液(pH 8)產生中性pH。整個階段在11-cm/h流速下進行。然後使用蛇皮透析管技術將分離的蛋白透析到PBS(pH 7.4)中，過濾，轉移到管中，並於-70℃儲存。透過SDS-PAGE評估獲得的蛋白的純度(圖2)。

根據用於IL-17A-Fc的上述過程，在1mL Hi Trap rProteinA FF柱(GE Healthcare)上純化IgG1抗體。透過SDS-PAGE評估獲得的蛋白的純度(圖3)。

實施例2

用人IL-17A免疫接種美洲駝並產生噬菌體顯示的美洲駝抗體的Fab文庫

透過皮下給藥混合等體積完全(第一次注射)或不完全弗氏佐劑的抗原材料，連續免疫5次Lama Glama。重組蛋白的混合物(每次注射0.2mg每種蛋白)用作抗原，其中一個是人IL-17A(來自R & D Systems的試劑盒)。第一次注射之後3周進行第二次注射(免疫接種階段)；以2周的間隔進行3次更多的免疫接種。從第一次注射開始，每次注射之後5(周？)收集血樣(50mL)。

用含有1mM EDTA的PBS將血液稀釋2倍。然後35mL稀釋的血液在15mL Histopaque®-1077培養基(Sigma，密度為1.077g/mL)上分層，並在800g下離心20min。從血漿/Histopaque培養基介面區篩選單核細胞(淋巴細胞和單細胞)，並用包含1mM EDTA的PBS洗滌。

使用RNeasy Mini試劑盒，根據方案(QIAGEN)，從單核美洲駝細胞分離總RNA。使用Nanovue(GE Healthcare)進行RNA濃度分析；透過1.5%瓊脂糖凝膠電泳檢測分離的RNA的質量。

使用MMLV RT試劑盒(Evrogen)，根據推薦的方案，用MMuLV逆轉錄酶和隨機六聚體引物進行逆轉錄反應。

逆轉錄產物用作二階段聚合酶鏈式反應中的基質，以獲得旁臨為限制性位元點的變體結構域的基因；使用寡核苷酸試劑盒和方案，透過[J Biol Chem.1999 Jun 25；274(26)：18218-30；WO 2010/001251]進行反應。另外，透過連續的限制性酶切、連接和擴增反應，如圖4中所示，將編碼輕鏈和重鏈的可變域的基因組裝成一個片段。重鏈基因分別與κ和λ輕鏈基因連接。在這種情況下，在所有反應中評估的基質分子數不少於1011。用NheI/Eco91I限制性內切酶處理獲得的DNA產物(VL-CK-VH)，並連接到原始的噬菌粒pH 5。圖5中呈現了噬菌粒結構。將連接產物轉化到根據該方案[Methods Enzymol.，2000；328： 333-63]製備的SS320電感受態細胞中。構建的κ和λFab文庫的全部分別為5.1*108和3.7*108。根據以前描述的程序[J Mol Biol.1991 Dec 5；222(3)：581-97]製備純的噬菌體展示文庫的產物。

實施例3

篩選噬菌體展示抗體的Fab文庫

使用重組人IL-17A(來自R&D Systems的試劑盒)，從噬菌體Fab展示文庫篩選特異性抗IL-17A噬菌體展示Fab抗體；如J Biol Chem.1999 Jun 25；274(26)：18218-30；Nat Biotechnol.1996 Mar；14(3)：309-14；J Mol Biol.1991 Dec 5；222(3)：581-97中所述的進行一系列篩選循環。為了進行透過panning方法的篩選過程，50mM碳酸鹽緩衝液(pH 9.5)中的人IL-17A在HighSorb管(Nunc)表面於4℃吸附過夜。而且，用PBS(pH 7.4)洗滌管，然後用含有PBS(pH 7.4)-無脂牛奶(0.5%重量/體積)的溶液封閉1h。然後將PBS(pH 7.4)-無脂牛奶(0.5% w/vol)中的2-4mL噬菌體溶液(1012噬菌體顆粒/mL)轉移到帶有抗原的管中，並將該系統攪拌孵育1h。透過用PBS(pH 7.4)-吐溫20(0.1% vol./vol.)進行一系列洗滌循環除去未結合的噬菌體。洗滌循環的數量分別從第一輪增加到第三輪-20-30-40次。攪拌下，用100mM Gly-HCl溶液(pH 2.5)，15min洗脫保持結合的噬菌體顆粒，然後用1M TRIS-HCl(pH 7.6)中和。用獲得的噬菌體感染E.coli TG1細菌；分離進一步的噬菌體，並用於接下來的循環中。

實施例4

嵌合噬菌體展示抗體Fab文庫的產生

使用RNeasy Mini試劑盒，根據其方案(QIAGEN)，分離從550個個體收集的來自血液的總B-淋巴細胞RNA。使用Nanovue試劑盒(GE Healthcare)進行RNA濃度分析，同時透過1.5%瓊脂糖凝膠電泳檢測分離的RNA的質量。使用MMLV RT試劑盒(Evrogen)，根據推薦的方案，利用MMuLV逆轉錄酶和隨機六聚體引物進行逆轉錄反應。

逆轉錄產物用作二階段聚合酶鏈式反應中的基質，以獲得旁臨為限制性位元點的變體結構域基因；使用來自J Biol Chem.1999 Jun 25；274(26)：18218-30的寡核苷酸試劑盒和方案進行反應。使用國際公開WO 93/06213中描述的技術，並基於上述的原始噬菌體粒pH 5，對特異性抗IL-17A的嵌合Fab進行工程化。為了該目的，透過連續的限制、連接和擴增反應，如流程圖中所示(圖6)，將人供體輕鏈可變域的基因和美洲駝抗體A1重鏈可變域的基因連接到一個片段中。類似地，透過連續的限制性酶切、連接和擴增反應，如圖7中所示，將美洲駝抗體A1輕鏈可變域的基因、人供體重鏈可變域的基因和美洲駝抗體A1重鏈可變域的基因連接到一個片段中。在所有反應中評估的人可變域基因的基質分子數不少於1012。用限制性酶NheI/Eco91I處理獲得的DNA製品VL-CK-VH，並連接到原始的噬菌粒pH 5。將連接產物轉化到根據[Methods Enzymol.，2000；328：333-63]中所述的方案製備的電感受態SS320細胞中。基於A1克隆的重鏈和混合κ和λ人鏈的整個嵌合Fab文庫chA1VH/hVL包括2.8*109個轉化體。根據[J Mol Biol.1991 Dec 5；222(3)：581-97]中描述的程序製備來自嵌合的Fab文庫的噬菌體製品。

在與上述那些相同的條件下(指噬菌體展示Fab文庫)，進行獲得的噬菌體展示嵌合Fab文庫的篩選。

在對IL-17A進行第二輪篩選後，兩個文庫都證實顯著的富集。從富集的嵌合Fab文庫得到的合併克隆用作特異性抗IL-17A的人可變域基因VH和VK/VL組合的來源。

實施例5

噬菌體展示人Fab噬菌體抗IL-17A抗體文庫的工程化

為了構建抗IL-17A的人Fab噬菌體抗體，來自富集的嵌合Fab文庫的合併克隆用作特異性抗體IL-17A的人VH和VK/VL變體功能域的基因整合的來源。在這點上，在第二輪後，用特異性引物從chA1VH/hVL文庫擴增人輕鏈的基因，但是在第二輪後，用特異性引物從chA1VL/hVH文庫擴增擴增人重鏈的基因。透過用SfiI限制性酶酶切、連接和擴增，根據圖8中所示的模式，連續合併人鏈可變域的兩個池。獲得的VL-CK-VH DNA產物用NheI/Eco91I限制性酶處理，並連接到原始的噬菌粒pH 5中。將連接產物轉化到根據[Methods Enzymol.2000；328：333-63]製備的電感受態SS320細胞中。全部的人重鏈和輕鏈的Fab文庫是8.6*108。根據以前描述的程序[Mol Biol.1991 Dec 5；222(3)：581-97]獲得噬菌體展示嵌合Fab文庫的製品。

在與描述用於篩選噬菌體Fab文庫相同的條件下，進行獲得的噬菌體嵌合Fab文庫的篩選。

在對IL-17A進行第二輪篩選後，對多克隆噬菌體產物進行的ELISA顯示顯著的富集。用人Fab富集並特異性抗IL-17A的得到的合併的克隆，再克隆到表達質粒中。

實施例6A

特異性結合人IL-17A-Fc的Fab的分析

ELISA用於檢測研究的Fab片段與人IL-17A的結合。具有公開的AIN 457序列(Novartis)的Fab用作陽性對照。用50μL(0.5μg/mL，1X包被碳酸鹽緩衝液中的)IL-17A-Fc包被ELISA平板孔(Nunc ImmunoMaxisorp)，密封關閉，並於4℃孵育過夜。根據標準的ELISA方案，用高性能系統如GenetixQ-pix2xt(Molecular Devices)和Tecan Freedom EVO 200(Tecan)進行所有另外的階段。透過添加封閉緩衝液BB(PBS中的200μL 0.5%無脂牛奶)封閉非特異性結合。平板在室溫下振盪器上孵育1h。用PBS-吐溫洗滌後，用混有等體積BB的50μL含有檢測Fab的細胞上清液包被每個孔。平板在室溫下振盪器上孵育1h；每個平板孔進一步用PBS-吐溫緩衝液洗滌5次。洗滌後，用PBS-吐溫中的抗人Fab HRP-綴合的第二抗體(Pierce-ThermoScientific)(1：5000)包被每個孔(50μL/孔)。把平板轉移到旋轉振盪器中(室溫下50min)，然後如上所述用PBS-吐溫洗滌5次。透過添加TMB(100μL/孔)直到飽和(平均3-5min)獲得比色信號；透過添加終止溶液(100μL/孔，10%硫酸)阻斷進一步的顯色。使用合適的Tecan-Sunrise平板讀數器(Tecan)測定450nm處的吸光度。抗體結合與產生的信號成比例。

例如，圖9顯示了第二輪篩選後，從具有美洲駝Fab的一個平板獲得的ELISA結果。該長條圖顯示了具有高於或低於對照Fab(AIN457)的信號的陽性克隆數(以紅色標記)，或沒有與固定的抗原結合的克隆數(0.1-0.2相對單位)。

實施例6B

阻斷IL-17A配體與IL-17R受體相互作用的競爭性ELISA

競爭性ELISA技術用於檢測前面篩選的特異性抗人IL-17A-Fc的Fab的拮抗能力。具有公開的AIN457序列(Novartis)的Fab用作陽性拮抗劑對照。用50μL/孔IL-17RA-Fc受體(R&D Systems；1X包被碳酸鹽緩衝液中的1μg/mL溶液)包被ELISA平板孔，並於4℃孵育過夜。根據標準的ELISA方案，用高性能系統如GenetixQ-pix2xt(Molecular Devices)和Tecan Freedom EVO 200(Tecan)進行所有另外的階段。透過添加封閉緩衝液BB(PBS中的200μL 0.5%無脂牛奶)封閉非特異性結合。平板在室溫下振盪器上孵育1h。並行地，使未結合96孔平板中的50μL含有檢測Fab的細胞緩衝液與50μL IL-17A-His6-Flag(0.4μg/mL，用PBS-吐溫稀釋的1%牛奶中的)混合。平板於37℃在振盪器上以500rpm孵育1h。

含有IL-17RA-Fc受體的平板用BB溶液洗滌後，用Fab and IL-17A-His6-Flag的反應混合物以每孔90μL的含量對其進行包被。平板在室溫下在振盪器上孵育5min。然後用PBS-吐溫緩衝液將每個孔洗滌5次。添加另外的50μL/孔的1μg/mL抗FLAG鼠M2抗體(Singma)，並將平板在室溫下孵育45min。孵育後，每個平板孔用PBS-吐溫洗滌5次，而且每個孔用50μL抗鼠-IgG HRP綴合的第二抗體(Pierce-ThermoScientific)包被，其用PBS-吐溫以1：5000稀釋。平板在室溫下於旋轉振盪器上孵育45min，並用PBS-吐溫洗滌5次，如上所述。透過添加TMB(100μL/孔)直到飽和(平均3-5min)獲得比色信號；透過添加終止溶液(100μL/孔，10%硫酸)阻斷進一步的顯色。使用合適的Tecan-Sunrise平板讀數器(Tecan)測定450nm處的吸光度。抗體結合與產生的信號成比例。

例如，圖10顯示了第二輪篩選後，從具有美洲駝Fab的一個平板獲得的ELISA結果。該長條圖顯示了具有與對照Fab(AIN457，以紅色標記)相當的信號(0.05-0.1相對單位)陽性克隆數，或沒有阻斷的IL-17A/IL-17R相互作用的克隆數(信號與用直接配體-受體相互作用的對照獲得的相似，以深藍色標記)。

實施例7

人抗IL-17A Fab候選物的比較koff-篩選

進行抗17A Fab候選物的Koff-篩選。使用Pall Forte Bio Octet Red 96系統進行Koff-篩選。抗FABCH1生物感測器在含有10mM PBS(pH 7.2-7.4)、0.1%吐溫-20和0.1% BSA的工作緩衝液中再水化30min。添加10x工作緩衝液到E.coli上清液的檢測樣品中達到1x終濃度。然後將抗FABCH1生物感測器浸泡到含有候選抗體的Fab片段E.coli上清液中，並在4℃的溫度下孵育12h。將用Fab片段包被的感測器轉移到具有工作緩衝液的孔中，記錄基線(60秒)。然後將感測器轉移到具有分析溶液(IL-17A,30μg/mL)的孔中，以實現抗原-抗體結合(300秒)。然後，將感測器返回到具有工作緩衝液的孔中進行進一步解離(300秒)。每次檢測後對使用的感測器進行再生：將它們置於再生緩衝液(Gly-HCl,pH 1.7)中3 次，然後其可用於進一步的實驗。使用Octet Data Analysis(版本7.0)，根據標準程序，利用1：1的相互作用模型分析獲得曲線。

圖11顯示了抗IL-17A Fab人候選物的koff-篩選獲得的結果。

實施例8

可變域CDR的掃描誘變和高親和力候選物的篩選

透過NNK隨機技術[Appl Environ Microbiol.2006 Feb；72(2)：1141-7；MAbs.2012 May-Jun；4(3)：341-8]，使用Q5®位點直接誘變試劑盒(_OT NEB)，根據其方案，插入突變到候選物的CDR的單個位置中。A1-Fab-pLL質粒用作基質。PCR產物在低熔點瓊脂糖上分級，並在合適的柱子上純化。連接後，將DNA轉化到E.coli表達菌株BL21gold(Stratagene)中。如上所述，然後在96孔板中透過Fab表達收穫獲得的單個克隆。在上述條件下，使用高性能的Genetix Q-pix2xt和Tecan Freedom EVO200系統透過ELISA分析含有突變Fab臂的上清液。固定的IL-17A的濃度是0.2μg/mL。結合的Fab臂用1：5000稀釋的山羊抗人IgG(Fab')2(HRP)綴合物(Pierce)和TMB+H2O2/H2SO4染料進行染色；在450nm波長處測定吸光度。

表1中呈現了透過掃描誘變獲得的結果。該表顯示了CDR內的取代，與野生型序列相比較，其相應於突變的Fab/人IL-17A結合信號的

30%減少。因此，這種單個突變或其任意組合都屬於本發明。

因此，對耐受胺基酸取代的BCD085抗體CDR胺基酸位置進行篩選。證實目前的胺基酸取代物件沒有顯著改變抗體與人IL-17A的結合。所述取代物件可用於改善各種候選物的特性。

實施例9

穩定細胞系的工程化，抗體的生產和純化

透過用包含最佳比例的抗體輕鏈和重鏈的載體轉染親本懸浮液CHO-S細胞系，獲得生產BCD085抗體的穩定細胞系。使用ClonePix robotic平臺(Molecular Devices)獲得了高水準的克隆系(超過100mg/L)。透過Biomek FX robotics(Beckman Coulter)和Octet RED96分析系統(Pall Life Sciences)分析選擇的克隆的生產力。在不含動物來源蛋白的無血清培養基中培養生產系。用於臨床前研究的BCD085在200L操作體積的HyClone一次性生物反應器(Thermoscientific)中積累。

培養物液體透過裝有蠕動泵的Zeta Plus Maximizer 4516701 60M02深度篩檢程式進行過濾。在MabSelect Protein A親和基質(GE Healthcare Life Sciences)上進行抗體的初級純化。透過深度過濾澄清後，將培養物液體用於吸附劑，其用含有50mM HCl-Tris(pH 7.5)和150mM NaCL的緩衝液平衡。然後用平衡緩衝液洗滌吸附劑，接著用低傳導性的HCl-Tris洗滌。使用Gly-HCL緩衝液(pH 3.5)進行蛋白洗脫。為了病毒滅活的目的，將收集的洗脫物暴露於酸性pH 30min，然後用1M鹼性Tris中和到pH 6.8。當達到合適的pH時，用MilliporeExpressPlus® 0.22μm膜(PVDF)，在STERICUP系統上對蛋白溶液進行過濾。透過使蛋白溶液在低的傳導性下(<2毫秒/cm2)，流過製備的Q Sepharose FF (GE HealthCare)，pH 7.0，進行最終的純化以除去DNA、宿主細胞蛋白和釋放的親和吸附劑的配體。純化的蛋白然後在UltiporVF篩檢程式(PALL)上進行除去病毒的過濾，濃縮，並對含有His/HisHCL(pH 6.0-6.5)、吐溫-80和海藻糖的最終緩衝液進行滲濾。蛋白濃度為50mg/mL或者更高。透過SDS-PAGE評估獲得的蛋白的純度(圖12)。

另外，透過大小排阻HPLC評估產物的聚集組合物(圖13)。

使用Agilent 1100系統和Tosoh TSK-Gel G3000SWXL 7.8mm×30cm柱(Cat.No.08541)與Tosoh TSKgel Guard SWXL 6.0mm×4.0cm預先柱(particles of 7μm,Cat.No.08543)進行色譜分析。用214nm和280nm波長處的檢測，在0.5mL/min流速下，用含有50mM磷酸鈉緩衝液和0.3M NaCL(pH 7.0)的流動相進行等度洗脫。用PBS(pH 7.5)稀釋抗體樣品到~1mg/mL的濃度。注射體積為10μL。凝膠過濾標準混合物(Bio-Rad,Cat.No.151-1901)用於在檢測之前對柱子進行校準。

圖14呈現了透過大小排阻HPLC獲得的結果。BCD085基質中的聚集量是0.312%。

實施例10

阻斷IL-17A誘導IL-6產生的能力的細胞檢測

IL-17透過人HT1080細胞(ATCC：CCL-121)誘導IL-6產生的能力用於分析BCD085關於人重組IL-17的中和能力。細胞生長於DMEM培養基上，其添加有10%滅活的胎牛血清、慶大黴素和穀氨醯胺。5*104細胞/孔的等分試樣植于96孔培養板中。允許細胞附著5h。40ng/mL重組IL-17和20ng/mL TNF-α的混合物用BCD085稀釋液在37℃下孵育1h。然後添加細胞因數/抗體混合物到細胞中，並保持過夜。透過HT1080細胞培養物產生IL-6與添加的IL-17的含量成比例。透過ELISA技術，使用DuoSet ELISA Development System Human IL6(RD System, Cat.No.DY206)評估細胞上清液樣品中釋放的IL-6的量。圖14中顯示了，與AIN 457(Novartis的抗IL-17A抗體)相比較，從BCD085候選物的拮抗特性評估獲得的結果。從一系列實驗獲得的該候選物的平均IC50為40±15pM。

實施例11

檢測BCD085對來自不同生物體的IL-17A的親和力

在OctetRed 96(ForteBio)上分析BCD085結合人、猴和鼠IL-17A的親和力。根據製造商的手冊中描述的標準方案，把BCD085非特異性固定到胺反應性第二代感測器(AR2G)的表面。在30℃的溫度，使用具有0.1%吐溫-20和0.1% BSA的PBS作為工作緩衝液進行檢測。

用工作緩衝液滴定人、猴和鼠IL-17A，從126nM到2nM的濃度，以2的增量。

使用Octet Data Analysis軟體(版本7.0)，根據標準程序，使用1：1相互作用模型，分析結合曲線(減去參考信號後)。圖15和16呈現了結果。

BCD085以皮摩爾親和力結合人IL-17A，其比與猴IL-17A的納摩爾親和力強1000倍。而且，該候選物不與鼠IL-17A相互作用(沒有提供曲線)。

實施例12

檢測BCD085在熱脅迫下的聚集能力

PBS中的9mg/mL的BCD085製品在50℃的溫度下加熱6h。透過大小排阻HPLC評估熱脅迫後的聚集。用Tosoh TSK-Gel G3000SWXL柱(7.8mm×30cm,Cat.No.08541)和Tosoh TSKgel Guard SWXL預先柱(6.0mm×4.0cm,7μm particles,Cat.No.08543)，在Agilent 1100系統上進行色譜分析。用214nm和280nm波長處的檢測，在0.5mL/min流速下，用含有50mM磷酸鈉緩衝液和0.3M NaCL(pH 7.0)的流動相進行等度洗脫。用PBS(pH 7.5)稀釋抗體樣品到~1 mg/mL的濃度。注射體積為10μL。凝膠過濾標準混合物(Bio-Rad,Cat.No.151-1901)用於在檢測之前對柱子進行校準。

圖17中顯示的結果表明BCD085在熱脅迫下是穩定的：聚集量低於5%。

實施例13

在單劑量皮下施用給猴後，BCD085單克隆抗IL-17A抗體的藥物動力學研究

以40mg/kg的劑量，單次皮下注射把單克隆抗IL-17A抗體BCD085施用給恒河猴(Macaca mulatta)。以規定的時間間隔(給藥0.5、1、3、6、12、24、36、48、60、72、96、120、168、264、336、432、504、672、840和1008小時後)，選擇動物血液樣品，並透過標準程序獲得血清。透過ELISA，對固定的人IL-17A(R & D Systems)評估BCD085抗體的血清水準，其中使用抗人IgG的Fc片段的多克隆山羊抗體(Pierce-ThermoScientific)檢測結合的抗體。

圖18中顯示了，單劑量皮下施用給猴後，從抗IL-17A單株抗體血清濃縮物的分析獲得的結果。這表明BCD085顯示顯著的長期效應，也即在血液中循環很長時間。單劑量皮下給藥後，在72-168小時內觀察到動物血清中最高難度的抗IL-17A單株抗體，同時該水準保持400小時，然後僅僅非常緩慢地降低，甚至在1000小時後，BCD085濃度顯著高於基線。單劑量皮下施用給猴後，評估的BCD085的PK參數列於表2中。能夠看出本發明的單克隆抗IL-17A抗體的清除(CL)是0.25±0.08mL/h/kg，其確保了它的長期血液循環(超過42天)。抗IL-17A單株抗體的平均滯留時間和清除半衰期分別是946±374h和632±253h。

實施例14

含有本發明抗體的藥學組合物

實施例15

含有抗體藥物組合物的試劑盒

透過將根據實施例14獲得的藥物組合物無菌密封到1mL安瓶或注射器中，然後貼標籤並裝入到塑膠或紙板箱容器中，來生產包括含有抗IL-17抗體的藥物組合物的試劑盒。

帶有安瓶的容器還包括包裝說明書。

<110> BIOCAD股份有限公司(Closed Joint Stock Company"BIOCAD")

<120> 特異性結合人IL-17A的分離的單株抗體

<130>

<140> TW104107806

<141> 2015-03-11

<150> 俄羅斯聯邦RU2014109854

<151> 2014-03-14

<160> 16

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 9

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> 變體(variant)

<222> (5)..(5)

<223> Xaa可為Asn、Asp、Lys、Leu、Pro或Thr

<220>

<221> 變體(variant)

<222> (6)..(6)

<223> Xaa可為Tyr或Phe

<220>

<221> 變體(variant)

<222> (7)..(7)

<223> Xaa可為Ala、Gly、Asn、Ser、Thr或Val

<220>

<221> 變體(variant)

<222> (8)..(8)

<223> Xaa可為Met或Ile

<220>

<221> 變體(variant)

<222> (9)..(9)

<223> Xaa可為Ser、Gly、Asn或Thr

<400> 1

<210> 2

<211> 11

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> 變體(variant)

<222> (1)..(1)

<223> Xaa可為Arg、Gly、Ile、Leu、Met或Ser

<220>

<221> 變體(variant)

<222> (3)..(3)

<223> Xaa可為Asp或Glu

<220>

<221> 變體(variant)

<222> (4)..(4)

<223> Xaa可為Gly或Met

<220>

<221> 變體(variant)

<222> (5)..(5)

<223> Xaa可為Gly、Leu、Arg或Val

<220>

<221> 變體(variant)

<222> (6)..(6)

<223> Xaa可為Ile或Leu

<220>

<221> 變體(variant)

<222> (8)..(8)

<223> Xaa可為Ser、Thr、Leu、Arg或Trp

<220>

<221> 變體(variant)

<222> (9)..(9)

<223> Xaa可為Ser、Thr、Ser或Tyr

<220>

<221> 變體(variant)

<222> (10)..(10)

<223> Xaa可為Ser、Thr、Leu、Arg或Trp

<220>

<221> 變體(variant)

<222> (11)..(11)

<223> Xaa可為Tyr、Thr、Leu、Arg或Lys

<400> 2

<210> 3

<211> 10

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> 變體(variant)

<222> (3)..(3)

<223> Xaa可為Arg、Val、Ala或Ile

<220>

<221> 變體(variant)

<222> (4)..(4)

<223> Xaa可為Asn、Glu、Leu、Ser、Thr或Val

<220>

<221> 變體(variant)

<222> (6)..(6)

<223> Xaa可為Tyr、Phe或Val

<220>

<221> 變體(variant)

<222> (7)..(7)

<223> Xaa可為Gly或Ser

<220>

<221> 變體(variant)

<222> (8)..(8)

<223> Xaa可為Met、Ala、Phe、Leu、Pro或Tyr

<220>

<221> 變體(variant)

<222> (9)..(9)

<223> Xaa可為Tyr、Phe、His、Ile、Ser或Trp

<220>

<221> 變體(variant)

<222> (10)..(10)

<223> Xaa可為Tyr、Ala、Ile、Asn、Arg、Ser或Val

<400> 3

<210> 4

<211> 12

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> 變體(variant)

<222> (5)..(5)

<223> Xaa可為Glu、Asn或Arg

<220>

<221> 變體(variant)

<222> (6)..(6)

<223> Xaa可為Asp、Ser或Thr

<220>

<221> 變體(variant)

<222> (7)..(7)

<223> Xaa可為Val、Leu或Arg

<220>

<221> 變體(variant)

<222> (8)..(8)

<223> Xaa可為Gly或Val

<220>

<221> 變體(variant)

<222> (9)..(9)

<223> Xaa可為Tyr、Phe、Leu、Ser、Thr或Val

<220>

<221> 變體(variant)

<222> (10)..(10)

<223> Xaa可為Gly、Leu或Val

<220>

<221> 變體(variant)

<222> (11)..(11)

<223> Xaa可為Asn、Ser、Pro或Arg

<220>

<221> 變體(variant)

<222> (12)..(12)

<223> Xaa可為Tyr、Trp、Ala或Leu

<400> 4

<210> 5

<211> 7

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> 變體(variant)

<222> (1)..(1)

<223> Xaa可為Arg、Glu或Leu

<220>

<221> 變體(variant)

<222> (2)..(2)

<223> Xaa可為Val、Ser或Leu

<220>

<221> 變體(variant)

<222> (3)..(3)

<223> Xaa可為Asn或Gly

<220>

<221> 變體(variant)

<222> (4)..(4)

<223> Xaa可為Thr、Ile、Lys、Leu、Arg或Trp

<400> 5

<210> 6

<211> 10

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> 變體(variant)

<222> (2)..(2)

<223> Xaa可為Ser或Ala

<220>

<221> 變體(variant)

<222> (3)..(3)

<223> Xaa可為Ser、Gly或Thr

<220>

<221> 變體(variant)

<222> (4)..(4)

<223> Xaa可為Tyr、Phe、Ala或Ile

<220>

<221> 變體(variant)

<222> (5)..(5)

<223> Xaa可為Lys或Arg

<220>

<221> 變體(variant)

<222> (6)..(6)

<223> Xaa可為Ala或Ser

<220>

<221> 變體(variant)

<222> (7)..(7)

<223> Xaa可為Gly或Phe

<220>

<221> 變體(variant)

<222> (8)..(8)

<223> Xaa可為Gly或His

<220>

<221> 變體(variant)

<222> (9)..(9)

<223> Xaa可為Thr

<220>

<221> 變體(variant)

<222> (10)..(10)

<223> Xaa可為Tyr、Ile、Leu或Trp

<400> 6

<210> 7

<211> 9

<212> PRT

<213> 智人

<400> 7

<210> 8

<211> 10

<212> PRT

<213> 智人

<400> 8

<210> 9

<211> 10

<212> PRT

<213> 智人

<400> 9

<210> 10

<211> 12

<212> PRT

<213> 智人

<400> 10

<210> 11

<211> 7

<212> PRT

<213> 智人

<400> 11

<210> 12

<211> 10

<212> PRT

<213> 智人

<400> 12

<210> 13

<211> 117

<212> PRT

<213> 智人

<400> 13

<210> 14

<211> 112

<212> PRT

<213> 智人

<400> 14

<210> 15

<211> 447

<212> PRT

<213> 智人

<400> 15

<210> 16

<211> 216

<212> PRT

<213> 智人

<400> 16

Claims

一種特異性結合人IL-17A的分離的單株抗體或片段，其中所述單株抗體或片段中含有至少一個可變區，該可變區包括：a)包含SEQ ID NO：13所示胺基酸序列的重鏈可變區(V_H)；b)包含SEQ ID NO：14所示胺基酸序列的輕鏈可變區(V_L)。
如請求項1所述的單株抗體或片段，其中所述片段選自F(ab’)2、F(ab)2、Fab’和Fab。
如請求項1所述的單株抗體或片段，其中所述片段選自Fv和scFv。
如請求項1-2任一項所述的單株抗體或片段，其中所述單株抗體是人源化抗體或人抗體。
如請求項1所述的單株抗體或片段，其中所述單株抗體是IgG1或IgG2或IgG3或IgG4或IgA或IgD或IgY。
如請求項1所述的單株抗體或片段，其中所述單株抗體與人IL-17A的結合親和力(the binding affinity)為K_D
10^-10M。
如請求項1所述的單株抗體或片段，其中所述單株抗體與人IL-17A的動力學締合常數(the kinetic association constant)kon為至少10⁵1/Msec(1/Ms)。
如請求項1所述的單株抗體或片段，其中所述單株抗體與人IL-17A的動力學解離常數(the kinetic dissociation constant)dis為至多10^-51/sec(1/s)。
如請求項1所述的單株抗體或片段，其中所述單株抗體對人IL-17A的抑制活性不低於50%。
如請求項1所述的單株抗體或片段，其中所述單株抗體由哺乳動物、酵母或細菌細胞產生。
如請求項1所述的單株抗體或片段，其中所述單株抗體在Fc區域含有額外的M252Y/S254T/T256E胺基酸取代修飾。
如請求項1所述的單株抗體或片段，其中所述單株抗體在Fc區域含有額外的N434W胺基酸取代修飾。
如請求項1所述的單株抗體或片段，其中所述單株抗體在Fc區域含有額外的N434A胺基酸取代修飾。
如請求項1所述的單株抗體或片段，其中所述單株抗體在Fc區域含有額外的N434F胺基酸取代修飾。
如請求項1所述的單株抗體或片段，其中所述單株抗體在Fc區域含有額外的H433K/N434F/Y436H胺基酸取代修飾。
如請求項1所述的單株抗體或片段，其中所述單株抗體在Fc區域含有額外的H433K/N434F/Y436H+M252Y/S254T/T256E胺基酸取代修飾。
如請求項1所述的單株抗體或片段，其中所述單株抗體在Fc區域含有額外的T307A/E380A/N434A胺基酸取代修飾。
如請求項1所述的單株抗體或片段，其中所述單株抗體在Fc區域含有額外的T250Q/M428L胺基酸取代修飾。
如請求項1所述的單株抗體或片段，其中所述單株抗體具有SEQ ID NO：15所示的全長重鏈序列。
如請求項1所述的單株抗體或片段，其中所述單株抗體具有SEQ ID NO：16所示的全長輕鏈序列。
一種編碼如請求項1所述的單株抗體或片段的DNA構建體。
一種含有一種或幾種編碼如請求項1所述的單株抗體或片段的DNA構建體或/和DNA序列的表達載體。
一種含有用於表達如請求項22所述的單株抗體或片段的表達載體的宿主細胞。
一種生產如請求項1所述的單株抗體或片段的方法，其中在適於獲得所述單株抗體或片段的條件下，在培養基中培養如請求項23所述的宿主細胞，並進一步分離和純化所述單株抗體或片段。
一種包含如請求項1所述的單株抗體或片段及一種或幾種藥學上可接受的載體、賦形劑或稀釋劑的藥物組合物。
如請求項25所述的藥物組合物，進一步包含選自TNF-α抑制劑或任何其他抗IL-17A抗體的活性藥物成分。
一種如請求項25所述的藥物組合物用於製備治療IL-17A介導的疾病或紊亂的藥物的用途。
如請求項27所述的用途，其中IL-17A介導的疾病或紊亂選自風濕性關節炎、骨關節炎、青少年慢性關節炎、膿毒性關節炎、萊姆關節炎(Lyme arthritis)、牛皮癬關節炎、反應性關節炎、脊柱關節病、系統性紅斑狼瘡、克羅恩氏病(Crohn’s disease)、潰瘍性結腸炎、炎性腸病、胰島素依賴型糖尿病、甲狀腺炎、哮喘、過敏性病症、牛皮癬、皮炎、系統性硬化症、移植物抗宿主病、移植排斥、與器官移植有關的急性或慢性免疫疾病、肉狀瘤病、動脈粥樣硬化、彌散性血管內凝血、川崎病(Kawasaki disease)、格雷夫斯病(Graves’ disease)、腎病綜合征、慢性疲勞綜合征、壞死性血管炎(Wegener's disease)、過敏性紫癜(Henoch-Schonlein purpura)、伴有腎損害的顯微鏡下多血管炎、慢性活動性肝炎、葡萄膜炎、感染性休克、中毒性休克綜合征、膿毒症綜合征、惡病質、感染、入侵、獲得性免疫缺陷綜合征、急性橫貫性脊髓炎、亨廷頓舞蹈病(Huntington chorea)、帕金森病(Parkinson disease)、阿爾茨海默病(Alzheimer disease)、中風、原發性膽汁性肝硬化、溶血性貧血、惡性腫瘤、心力衰竭、心肌梗死、艾迪生病(Addison disease)、多腺性自身免疫綜合征I型或II型、施密特氏綜合征(Schmidt's syndrome)、急性呼吸窘迫綜合征、脫髮、斑形脫髮、血清反應陰性關節病、關節病、萊特爾氏綜合征(Reiter's syndrome)、牛皮癬性關節病、與潰瘍性結腸炎有關的關節病、腸病性滑膜炎、與衣原體有關的關節病、脊椎關節病、動脈粥樣硬化病、特異反應性過敏、自身免疫性大皰病、天皰瘡、落葉狀天皰瘡、類天皰瘡、線狀IgA疾病、自身免疫性溶血性貧血、Coombs陽性溶血性貧血、獲得性惡性貧血、青少年惡性貧血、肌痛性腦脊髓炎、慢性疲勞綜合征、慢性活動性肝炎症、顱巨細胞動脈炎、原發性硬化性肝炎、隱源性自身免疫性肝炎、愛滋病、B型肝炎、C型肝炎、常見變異型免疫缺陷病、擴張型心肌病、女性不育、卵巢功能不全、過早卵巢衰竭、肺纖維化、隱源性致纖維化性肺泡炎、炎症後間質性肺病、間質性肺炎、與間質性肺病相關的結締組織病、與間質性肺病相關的混合性結締組織病、與間質性肺病相關的系統性硬皮病、與間質性肺病相關的類風濕性關節炎、與肺病相關的系統性紅斑狼瘡、與肺病相關的皮肌炎、與肺病相關的多發性肌炎、與肺病相關的乾燥綜合征、與肺病相關的強直性脊椎炎，彌漫性肺血管炎、與肺病相關的血鐵質、藥物引起的間質性肺病、纖維化、輻射誘導的纖維化、閉塞性細支氣管炎、慢性嗜酸細胞性肺炎、伴有淋巴細胞浸潤的肺疾病、感染後間質性肺病變、痛風性關節炎、自身免疫性肝炎、I型自身免疫肝炎、II型自身免疫性肝炎、自身免疫性低血糖症、伴有角質肥厚的B型胰島素抵抗、甲狀旁腺機能減退、急性移植相關的免疫疾病、慢性移植相關的免疫疾病、骨關節病、原發性硬化性膽管炎、I型牛皮癬、II型牛皮癬、特發性白細胞減少症、自身免疫性嗜中性白血球減少症、NOS-腎疾病、腎小球性腎炎、顯微鏡腎下多血管炎、萊姆病(Lyme disease)、盤狀紅斑狼瘡、先天性的NOS男性不育、抗精子免疫、多發性硬化、交感性眼炎、結締組織病繼發的肺動脈高壓症、肺出血腎炎綜合症、結節性多動脈炎的肺表現、急性風濕熱、類風濕性脊椎炎、史提爾氏病(Still's disease)、系統性硬皮病、乾燥綜合征(Sjogren's Syndrome)、關節炎、自身免疫性血小板減少症、特發性血小板減少症、自身免疫性甲狀腺病、甲狀腺機能亢進、自身免疫性甲狀腺機能減退、萎縮性自身免疫性甲狀腺機能減退、原發性粘液水腫、晶狀體抗原性葡萄膜炎、原發性血管炎、白癜風、急性肝病、慢性肝病、酒精性肝硬化、酒精誘導的肝損傷、膽汁鬱積、特質性肝疾病，藥物誘導的肝炎、非酒精性脂肪性肝炎、過敏症、哮喘、B組鏈球菌感染(group B streptococcal infection,GBS)、精神障礙、Th1-或Th2-介導的疾病、急性或慢性疼痛、惡性腫瘤、無β脂蛋白血症、手足發紺、急性或慢性感染、急性或慢性侵染、急性白血病、急性淋巴細胞白血病、急性骨髓性白血病、急性或慢性細菌感染、急性胰腺炎、急性腎衰竭、腺癌、心房異位、AIDS癡呆綜合征、酒精誘導的肝炎、過敏性結膜炎、過敏性接觸性皮炎、過敏性鼻炎、同種異體移植排斥、α-I抗胰蛋白酶缺乏症、側向肌萎縮性硬化症、貧血、心絞痛、前角細胞變性、抗-CD3治療、抗磷脂綜合征、抗受體的過敏反應、主動脈瘤、外周動脈瘤、主動脈夾層、高動脈壓、冠狀動脈硬化、動靜脈瘺、共濟失調、恆定或陣發性心房纖維性顫動、心房撲動、房室阻斷、B-細胞淋巴瘤、骨移植排斥、骨髓移植排斥、束支傳導阻滯、伯基特淋巴瘤(Burkitt lymphoma)、燒傷、心律失常、心肌頓抑綜合征、心臟腫瘤、心肌病、對旁路的炎性應答、軟骨移植排斥、腦皮層變性、小腦病症、混亂或多灶性房性心動過速、化療所致疾病、慢性粒細胞性白血病、慢性酒精成癮、慢性炎性疾病、慢性淋巴白血病、慢性阻塞性肺病、慢性水楊酸鹽中毒、結腸直腸癌、充血性心臟衰竭、結膜炎、接觸性皮炎、肺心病、冠狀動脈疾病、克雅氏病(Creutzfeldt-Jakob Disease)、培養陰性的膿毒症、囊性纖維化、細胞因數療法誘導的疾病、拳擊運動員的腦病、脫髓鞘病、登革出血熱(dengue hemorrhagic fever)、皮炎、皮膚病、多尿症、糖尿病、糖尿病相關的動脈粥樣硬化血管疾病、彌漫性雷維小體疾病 (diffuse Lewy body disease)、充血性擴張型心肌病、基底神經節疾病、中年唐氏綜合征(Down's syndrome in middle age)、中樞神經系統多巴胺阻滯劑誘導的運動障礙、藥物敏感性、濕疹、腦脊髓炎、心內膜炎、內分泌病、會厭炎、EB病毒感染(Epstein-Barr viral infection)、紅痛病、錐體外系病症、小腦病症、家族性嗜血細胞性淋巴組織細胞增生症、胎兒胸腺移植排斥、弗裡德希氏共濟失調(Friedreich's ataxia)、外周動脈疾病、真菌敗血症、產氣性蜂窩組織炎、胃潰瘍、腎小球性腎炎、任何器官或組織的移植排斥、革蘭氏陰性膿毒症、革蘭氏陽性膿毒症、由細胞內生物體引起的肉芽腫、毛細胞白血病、哈-施病(Hallervorden-Spatz disease)、橋本甲狀腺炎(Hashimoto's thyroiditis)、枯草熱、心臟移植排斥、血色病、血液透析、溶血性尿毒綜合征、血栓性血小板減少性紫癜、出血、甲型肝炎、束支心律失常、HIV感染、HIV神經病、霍奇金病(Hodgkin disease)、運動機能亢進性運動疾病、過敏反應、過敏性相關的肺炎、高血壓、運動機能減退的運動障礙、下丘腦-垂體-腎上腺軸的檢查、特發性艾迪生氏病(idiopathic Addison's disease)、特發性肺纖維化、抗體介導的細胞毒性、衰弱、嬰兒肌肉萎縮、主動脈炎症、流感病毒A、暴露於電離輻射、虹膜睫狀體炎、葡萄膜炎、視神經炎、局部缺血、再灌注誘導的疾病、缺血性中風、幼年型類風濕性關節炎、幼年型脊髓性肌萎縮、卡波濟氏肉瘤(Kaposi's sarcoma)、腎移植排斥、軍團桿菌病、利什曼病、麻風病、皮質脊髓束損傷、脂肪水腫、肝臟移植排斥、淋巴水腫、瘧疾、惡性淋巴瘤、惡性組織細胞病、惡性黑色素瘤、腦膜炎、腦膜炎球菌血症、代謝疾病、特發性疾病、偏頭痛、多系統線粒體疾病、混合性結締組織病、單克隆丙種球蛋白病、多發性骨髓瘤、多系統變性症、重症肌無力、細胞內鳥結核分枝桿菌、結核分枝桿菌、骨髓增生異常綜合征、心肌梗塞、心肌缺血性疾病、鼻咽癌、新生兒慢性肺疾病、腎炎、腎病、神經退行性疾病、神經源性肌萎縮、嗜中性粒細胞減少性發熱、非何傑金氏淋巴瘤 (non-Hodgkin’s lymphoma)、腹部主動脈分支閉塞、動脈阻塞性疾病、OKT3治療、睾丸炎、附睾炎、輸精管吻合術、器官腫大、骨質疏鬆症、胰腺移植排斥、胰腺癌、副腫瘤性疾病、腫瘤相關的高鈣血症、甲狀旁腺移植排斥、盆腔炎症性疾病、常年性鼻炎、心包疾病、周邊動脈粥樣硬化疾病、外周血管疾病、腹膜炎、惡性貧、卡氏肺囊蟲肺炎、POEMS綜合征、灌注後綜合征、泵頭綜合征、心臟切開後梗塞後綜合征、子癇前期、進行性核上性麻痹、原發性肺動脈高血壓、放射療法、雷諾氏現象或疾病(Raynaud's phenomenon or disease)、雷諾氏病(Raynoud's disease)、雷弗素姆病(Refsum's disease)、常規窄QRS心動過速、腎血管性高血壓、再灌注損傷、限制性心肌病、肉瘤、硬皮病、老年性舞蹈症、路易體癡呆(Dementia with Lewy bodies)、血清反應陰性關節炎、休克、鐮狀細胞病、皮膚同種異體移植排斥、皮膚變化、小腸移植排斥、實體瘤、特異性心律失常、脊髓性共濟失調、脊髓小腦退化、鏈狀球菌肌炎、小腦結構損傷、亞急性硬化性全腦炎、暈厥、心血管梅毒、全身性過敏反應、綜合全身炎症反應綜合征、全身型幼年類風濕性關節炎、毛細管擴張、血栓閉塞性脈管炎、血小板減少症、外傷、出血、III型超敏反應、IV型超敏反應、不穩定心絞痛、尿毒癥、尿膿毒病、蕁麻疹、心臟瓣膜病、靜脈曲張、血管炎、靜脈疾病、靜脈血栓形成、心室纖維性顫動、病毒感染、真菌感染、病毒性腦炎、無菌性腦膜炎、病毒嗜血細胞綜合征、韋尼克-科爾薩科夫綜合征(Wernicke-Korsakoff syndrome)、威爾遜氏病(Wilson's disease)、任何器官或組織的異種移植排斥、急性冠狀動脈綜合征、急性特發性多神經炎、急性炎症性脫髓鞘性多發性神經病、急性缺血、成人斯蒂爾病(adult-onset Stills disease)、斑形脫髮、過敏性反應、抗磷脂抗體綜合征、再生障礙性貧血、冠狀動脈硬化、特應性濕疹、特應性皮炎、自身免疫皮炎、與鏈球菌感染相關的自身免疫性疾病、自身免疫性腸病、自身免疫性聽力喪失、自身免疫性淋巴細胞增生綜合征、自身免疫性心肌炎、自身免疫性卵巢早衰、瞼炎、支氣管擴張、大皰性類天皰瘡、心血管疾病、災難性抗磷脂綜合征、乳糜瀉、頸椎病、慢性缺血、疤痕性類天皰瘡、多發性硬化、結膜炎、兒童期發作的精神病症、慢性阻塞性肺病、淚囊炎、皮肌炎、糖尿病性視網膜病、椎間盤突出、椎間盤脫出、藥物誘發的免疫性溶血性貧血、心內膜炎、子宮內膜異位症、眼內炎、鞏膜外層炎、紅斑多形物、嚴重紅斑多形物、妊娠期類天皰瘡、吉蘭-巴雷綜合征(Guillain-Barre syndrome，GBS)、枯草熱、休斯綜合症(Hughes syndrome)、特發性帕金森病、特發性間質性肺炎、IgE介導的變態反應、自身免疫性溶血性貧血、包涵體肌炎、傳染性眼部炎性疾病、炎性脫髓鞘病、炎症性心臟病、炎症性腎病、先天性肺纖維化、常見間質性肺炎、虹膜炎、角膜炎、乾燥性角結膜炎、庫斯毛爾病(Kussmaul-Meier病)、蘭德裡麻痹(Landry palsy)、朗格漢斯細胞組織細胞增生症(Langerhans' cell histiocytosis)、大理石狀皮膚病、黃斑變性、顯微鏡下多血管炎、Bechterew病、運動神經元疾病、粘膜類天皰瘡、多發性器官衰竭、重症肌無力、脊髓發育不良綜合征、心肌炎、神經根病症、神經病、非A型肝炎、非B型肝炎、視神經炎、骨質溶解症、卵巢癌、JIA少關節型、外周動脈閉塞性疾病、周圍性血管疾病、周圍動脈疾病、靜脈炎、多發性結節性動脈炎、多軟骨炎、風濕性多肌痛、白發病、多關節型幼年特發性關節炎、多發性內分泌缺陷、多肌炎、風濕性多肌痛、泵後綜合征、原發性帕金森氏綜合征、前列腺癌、直腸癌、造血系統惡性腫瘤、前列腺炎、單純紅細胞再生障礙性貧血、原發性腎上腺機能不足、復發性視神經脊髓炎、心瓣手術後的再狹窄、風濕性心臟病、滑膜炎、痤瘡、膿皰病、股肥大、骨炎、硬皮病、繼發性澱粉樣變性、休克肺、鞏膜炎、坐骨神經痛、繼發性腎上腺機能不足、矽相關的結締組織病、Sneddon-Wilkison病、強直性脊柱炎、Stevens-Johnson綜合征、全身炎症反應綜合征、顱動脈炎、弓形體鼻炎、中毒性表皮壞死松解症、橫貫性脊髓炎、腫瘤壞死因數受體相關的週期性綜合征、I型變態反應、II型糖尿病、蕁麻疹、常見間質性肺炎、血管炎、春季結膜炎、病毒性視網膜炎、Vogt-Koyanagi-Harada綜合征、濕性黃斑變性、傷口癒合相關的關節病、耶爾森氏菌屬相關的關節病、沙門氏菌相關的關節病。