WO2015137843A1 - Анти-il-17-антитела, способ их получения и способ применения - Google Patents

Анти-il-17-антитела, способ их получения и способ применения Download PDF

Info

Publication number
WO2015137843A1
WO2015137843A1 PCT/RU2014/000808 RU2014000808W WO2015137843A1 WO 2015137843 A1 WO2015137843 A1 WO 2015137843A1 RU 2014000808 W RU2014000808 W RU 2014000808W WO 2015137843 A1 WO2015137843 A1 WO 2015137843A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
disease
syndrome
amino acid
chronic
autoimmune
Prior art date
Application number
PCT/RU2014/000808
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
Андрей Борисович УЛИТИН
Станислав Рудольфович ЕВДОКИМОВ
Валерий Владимирович СОЛОВЬЕВ
Юлия Сергеевна ЧЕРНЫХ
Ольга Владимировна ГОНЧАРОВА
Дмитрий Валерьевич КОРЖАВИН
Татьяна Вениаминовна ЧЕРНОВСКАЯ
Роман Алексеевич ИВАНОВ
Дмитрий Валентинович МОРОЗОВ
Original Assignee
Закрытое Акционерное Общество "Биокад"
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Закрытое Акционерное Общество "Биокад" filed Critical Закрытое Акционерное Общество "Биокад"
Priority to BR112016010513A priority Critical patent/BR112016010513A2/pt
Priority to EP14885545.5A priority patent/EP3130604A4/en
Priority to EA201600276A priority patent/EA034854B1/ru
Priority to JP2016555518A priority patent/JP6647208B2/ja
Priority to MX2016005765A priority patent/MX2016005765A/es
Priority to CN201480027341.6A priority patent/CN106795219B/zh
Publication of WO2015137843A1 publication Critical patent/WO2015137843A1/ru
Priority to ZA2016/02040A priority patent/ZA201602040B/en
Priority to US15/254,190 priority patent/US10442857B2/en

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/18—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for pancreatic disorders, e.g. pancreatic enzymes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/02—Nasal agents, e.g. decongestants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/06—Antiasthmatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/06—Antipsoriatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/14—Drugs for dermatological disorders for baldness or alopecia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/06—Antigout agents, e.g. antihyperuricemic or uricosuric agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A61P19/10—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease for osteoporosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A61P21/02—Muscle relaxants, e.g. for tetanus or cramps
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A61P21/04—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system for myasthenia gravis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/06—Antimigraine agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
    • A61P25/16—Anti-Parkinson drugs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/18—Antipsychotics, i.e. neuroleptics; Drugs for mania or schizophrenia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/24—Antidepressants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/10—Antimycotics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/16—Antivirals for RNA viruses for influenza or rhinoviruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/08—Antiallergic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P39/00—General protective or antinoxious agents
    • A61P39/02—Antidotes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/14—Drugs for disorders of the endocrine system of the thyroid hormones, e.g. T3, T4
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/06—Antianaemics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/04—Inotropic agents, i.e. stimulants of cardiac contraction; Drugs for heart failure
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/06—Antiarrhythmics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/12—Antihypertensives
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/24—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
    • C07K16/244—Interleukins [IL]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/22—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from camelids, e.g. camel, llama or dromedary
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/33—Crossreactivity, e.g. for species or epitope, or lack of said crossreactivity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/51—Complete heavy chain or Fd fragment, i.e. VH + CH1
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/515—Complete light chain, i.e. VL + CL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/55—Fab or Fab'
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/94—Stability, e.g. half-life, pH, temperature or enzyme-resistance
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Definitions

  • the present invention relates to the field of medicine, in particular to the field of monoclonal antibodies against human IL-17.
  • the invention relates to monoclonal antibodies, antagonists of IL-17A, which bind with high affinity to the epitope of IL-17, while the antibodies contain amino acid substitutions in the hypervariable regions of the heavy and light chains.
  • Antibodies according to the invention can be chimeric, humanized or human antibodies, or antigen-binding fragments thereof, and can be used as a medicament for the treatment of autoimmune and inflammatory disorders and cell proliferation and cell development disorders.
  • the invention also relates to methods for producing said antibodies.
  • the main function of the immune system is to protect the body from infections, such as bacteria or viruses, as well as from cancer.
  • This body system includes several types of lymphoid and myeloid cells, such as monocytes, macrophages, dendritic cells, eusinophils, T cells, B cells and neutrophils. Said lymphoid and myeloid cells can produce signaling proteins known as cytokines.
  • the immune response includes inflammation, i.e. accumulation of immune cells systemically or in a specific
  • SUBSTITUTE SHEET (RULE 26) body area.
  • immune cells secrete cytokines, which in turn modulate the proliferation of immune cells, their development, differentiation or migration.
  • the immune response can produce pathological processes, for example, when triggering excess inflammation, as in the case of autoimmune diseases (see, for example, Abbas et al. (Eds.) (2000) Cellular and Molecular Immunology, WB Saunders Co., Philadelphia, Pa .; Oppenheim and Feldmann (eds.) (2001) Cytokine Reference, Academic Press, San Diego, Calif .; von Andrian and Mackay (2000) New Engl. J. Med. 343: 1020-1034; Davidson and Diamond (2001) New Engl. J. Med. 345: 340-350).
  • the IL-17 family of cytokines includes IL-17A, IL-17B, IL-17C, IL-17D, IL-17E, and IL-17F. All members of the IL-17 family have four highly conserved cysteine residues that are involved in the formation of interchain disulfide bonds, and have two or more cysteine residues that can be involved in interchain disulfide bonds. Members of the IL-17 family bear no resemblance to the sequences of any other known cytokines.
  • Interleukin-17A also known as cytotoxic IL-17A
  • T-lymphocyte-associated antigen 8 (CTLA-8), IL-17) is a 20-30 kDa homodimeric cytokine produced by memory T cells, followed by antigen recognition. Growth of such CTL-8, IL-17
  • T cells are stimulated by interleukin-23 (IL-23).
  • IL-23 interleukin-23
  • IL-17A acts through two receptors (IL-17RA and
  • IL-17RC to initiate the production of many molecules involved in processes involving neutrophils, inflammatory processes and organ destruction.
  • This cytokine has a synergistic effect with factor
  • SUBSTITUTE SHEET (RULE 26) tumor necrosis (TNF) or interleukin 1 beta (IL- ⁇ ) to achieve a more significant pro-inflammatory state.
  • TNF tumor necrosis
  • IL- ⁇ interleukin 1 beta
  • RA rheumatoid arthritis
  • osteoarthritis osteoporosis with rheumatoid arthritis
  • inflammatory fibrosis e.g.
  • These antibodies are characterized by high affinity for IL-17, with a dissociation constant K D of approximately 122 ⁇ .
  • K D dissociation constant
  • the use of these antibodies as inhibitors of the binding of IL-17 to the corresponding receptor is also described, in particular for the treatment of uveitis.
  • the described antibody is undergoing clinical trials for the treatment of rheumatoid arthritis, ankylosing spondylitis, disease
  • SUBSTITUTE SHEET (RULE 26) ozone air. This antibody has been shown to be safe to use and effective in treating rheumatoid arthritis in 46% of patients (Durez et al., Communication EULAR 2009-RA).
  • humanized antibodies against IL-17 are disclosed according to the international publication of application WO 2007/070750 (LY2439821, ikzekizumab, Eli Lilly). These antibodies contain variable regions of the heavy and light chains with amino acid substitutions. Moreover, the described antibody is characterized by a strong affinity for binding (KD) of human IL-17, i.e. less than about 7.0-4.0 pM, and a koff excretion rate for human IL-17 of less than 2 ⁇ 10 "5 s " 1 . Antibodies have been clinically tested for safety, tolerability and efficacy when given intravenously to patients with rheumatoid arthritis. (Genoevse et al., Communication EULAR 2009-RA; Genoevse et al, Arthritis & Rheumatism, 62: 929-39, (2010)).
  • IL-17 antibodies to IL-17 are also described in the prior art: mouse anti-human neutralizing antibodies eBio64CAP17 (eBioscience) or derivatives thereof.
  • Other examples of antibodies to IL-17 are disclosed in patent applications US2009 / 0175881A1, US2008 / 0269467A1, and international publications WO2008 / 001063A1, and WO2007 / 117749A1.
  • IL-17 is a new target for the treatment of inflammatory and autoimmune diseases with a potentially greater safety profile than drugs that target pro-inflammatory cytokines of the pulmonary circulation, such as TNF (tumor necrosis factor) )
  • TNF tumor necrosis factor
  • SUBSTITUTE SHEET (RULE 26) antagonistic effect or neutralize the activity of IL-17A for the treatment of disorders, diseases or conditions where the presence of biological activity of IL-17A causes or contributes to an undesirable pathological result, or where a decrease in the biological activity of IL-17A contributes to the desired therapeutic result, including inflammatory disorders, disorders cell proliferation and development; autoimmune disorders such as rheumatoid arthritis (RA), multiple sclerosis (PC), and inflammatory bowel disease (IBD).
  • RA rheumatoid arthritis
  • PC multiple sclerosis
  • IBD inflammatory bowel disease
  • the present invention provides antibodies against IL-17A containing amino acid substitutions, while the proposed antibodies have high affinity and improved solubility, as well as increased 1C 50 .
  • FIG. 1 The foretogram of the resulting protein solution of IL-17A.
  • FIG. 2 The foretogram of the resulting protein solution of IL-17A-Fc.
  • FIG. 3 Gel electrophoresis in 12% SDS-PAGE under reducing conditions (A), non-reducing conditions (B).
  • FIG. 4 The synthesis scheme of combinatorial Fab-llama library.
  • FIG. 5. Phagmid for cloning Fab phage display libraries.
  • FIG. 6 Scheme for the synthesis of combinatorial libraries of hybrid Fab antibodies.
  • FIG. 7 Scheme for the synthesis of combinatorial libraries of hybrid Fab antibodies.
  • FIG. 8 The combination of pools of variable domains.
  • FIG. 9 ELISA screening Fab specific against human IL-17A.
  • FIG. 10 Competitive ELISA screening of Fab candidates blocking the interaction of IL-17A / IL-17R.
  • FIG. 11 Results of koff screening of anti-1b-17A Fab human candidates.
  • FIG. 12 Electrophoregram of the solution BCD085.
  • FIG. 13 The gel-filtration profile of the purified preparation BCD085.
  • FIG. 14 IL-6 Inhibitory ability of BCD085 compared with AIN
  • FIG. 15 The interaction curve of BCD085 with human IL-17.
  • FIG. 16 Interaction curve of BCD085 with macaque IL-17 (Tasas mulatta).
  • FIG. 17 Chromatogram of antibody BCD085 obtained after thermal stress.
  • FIG. 18 Pharmacokinetics of the preparation of antibodies against IL-17A BCD085 with a single subcutaneous administration to rhesus monkeys (Masas mulatta) at a dose of 40 mg / kg.
  • Interleukin 17 also referred to as IL-17 or IL-17A, is a 20-30 kD glycosylated homodimeric protein.
  • the human IL-17 gene encodes a 155 amino acid protein that has a 19 amino acid signal sequence and a 136 amino acid mature segment.
  • a full-sized antibody as it is found in nature, is an immunoglobulin (antibody) molecule that consists of four peptide chains, two heavy (H) chains (approximately 50-70 kD at full length) and two light (L) . chains (approximately 25 kD at full length) interconnected by disulfide bridges.
  • the amino-terminal portion of each chain includes a variable region of approximately 100-1 10 or more amino acids, which are mainly responsible for antigen recognition.
  • the carboxy-terminal part of each chain defines a constant region, mainly responsible for the function of the effector.
  • the antibody consists of several fragments: light and heavy chains.
  • the variable regions of the heavy and light chains form an antigen-binding center (or region).
  • the structure of the antibody is shown in the figure below:
  • Light chains are classified as kappa or lambda and are characterized by a specific constant region. Each light chain consists of a variable region of the ⁇ -terminal light chain (in this application, "LCVR” or “VL”) and a constant region of the light chain, consisting of one domain, CL. Heavy chains are classified as gamma, mu, alpha, delta or epsilon, and they determine the isotype of an antibody, such as IgG, IgM, IgA, IgD and IgE, respectively, and several of them can be further divided into subclasses (isotypes), for example IgGl , IgG2, IgG3, IgG4, IgAl and IgA2.
  • Each type of heavy chain is characterized by a specific constant region, Fc.
  • Each heavy chain consists of a variable region of the ⁇ -terminal heavy chain (“HCVR” or “VH” in this application) and a constant region of the heavy chain, CH.
  • the heavy chain constant region consists of three domains (CHI, CH2, and CH3) for IgG, IgD, and IgA, and 4 domains (CHI, CH2, CH3, and CH4) for IgM and IgE.
  • the HCVR and LCVR regions can be further divided into hypervariability regions called Rf hypervariable regions (CDRs) alternating with
  • Each HCVR and LCVR consists of three CDRs and four FRs arranged in the following order from amino terminus to carboxy terminus: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CO, FR4.
  • 3 CDRs of the heavy chains are designated as “CDRH1, CDRH2 and CDRH3”
  • 3 CDRs of the light chain are designated as “CDRL1, CDRL2 and CDRL3”.
  • CDRs contain most residues that form specific interactions with the antigen.
  • anti-1b-17 antibody “anti-IL-17 antibody”, “antibody specifically binding to enterleukin IL-17” or “anti-1b-17A antibody” are used interchangeably in the context of this application and refer to an antibody that specifically binds to IL-17A.
  • antibody in connection with the anti-1L-17A monoclonal antibody of the invention (or, more simply, the “monoclonal antibody of the invention”), as used herein, refers to a monoclonal antibody.
  • Monoclonal antibodies of the invention can be prepared using, for example, hybridoma techniques well known in the art, as well as recombinant technologies, phage display technologies, synthetic technologies, or combinations of such technologies, or
  • the term "monoclonal antibody”, as used in this application, is not limited to antibodies obtained using hybridoma technology.
  • “Monoclonal antibody” refers to an antibody obtained from a single copy or clone, including, for example, any eukaryotic, prokaryotic or phage clone, and not to a method for its preparation.
  • a “monoclonal antibody” can be an intact antibody (containing a full or full-sized Fc region), a substantially intact antibody, a part or fragment of an antibody containing an antigen binding part, for example, a Fab fragment, a Fab'fragment, or a P (ab ') 2 fragment antibodies.
  • the “Fab” fragment contains the variable and constant domain of the light chain and the variable domain and the first constant domain (CH1) of the heavy chain.
  • the "F (ab ') 2" fragments of the antibody contain a pair of Fab fragments that are mainly covalently linked near their carboxy-ends with hinge amino acids between them: Fv - variable fragment of an antibody (variable fragment), scFv (single chain Fv) - variable fragment of an antibody in which light and heavy chain fragments are linked by a polypeptide linker, (scFv) 2 - fragment consisting of two molecules scFv connected by a disulfide bond, dsFv - var anabel fragment stabilized by an additional intramolecular disulfide bond Other chemical linkages of antibody fragments are also well known in the art.
  • antibody and "immunoglobulin” are used interchangeably in the context of this application.
  • variable regions of each of the light / heavy chain pairs form the antigen binding sites of the antibody.
  • the "antigen binding portion" or the “antigen binding site” or the “antigen binding domain” or the “antigen binding center” form the antigen binding sites of the antibody.
  • SUBSTITUTE SHEET refer, interchangeably, to that part of the antibody molecule that contains amino acid residues that interact with the antigen and give the antibody its specificity and affinity for the antigen.
  • This part of the antibody includes the "frame" amino acid residues necessary to maintain the proper conformation of antigen binding residues.
  • the CDR of the antigen binding site or the entire antigen binding site of the antibodies of the invention is from a human donor library or essentially human from certain amino acid residues altered, for example, substituted by different amino acid residues in order to optimize specific properties of the antibody, for example K D , kof f , 1C 50 .
  • the antibody fragments of the invention are of human origin or essentially human origin (at least 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, or 99% human origin).
  • Preferred framework regions of an antibody of the invention have the following amino acid sequences corresponding to framework regions of a human antibody:
  • variable domain of the heavy chain is variable domain of the heavy chain
  • the antigen binding site of an IL-17 antibody of the invention may be derived from, but not limited to, other non-human species, including a rabbit, rat, or hamster. Alternatively, the antigen binding site may be derived from human species.
  • the "monoclonal antibody” as used in this application may be a single chain Fv fragment that can be obtained by linking DNA encoding LCVR and HCVR to a linker sequence (see Pluckthun, The Pharmacology of Monoclonal Antibodies , vol. 1 13, Rosenburg and Moore eds., Springer-Verlag, New York, p. 269-315, 1994). It is understood that, regardless of whether fragments or parts are indicated, the term “antibody” as used herein includes such fragments or parts as well as single chain forms. As long as the protein retains the ability to specifically or preferentially bind its target (eg, epitope or antigen), it refers to the term “antibody”. Antibodies may or may not be glycosylated, and are within the scope of the invention.
  • a “monoclonal antibody” population refers to a homogeneous or substantially homogeneous antibody population (ie at least about 85, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96%, more preferably at least about 97 or 98% or even more preferably at least 99% of the antibodies in the population will compete in the ELISA for the same antigen or epitope, or more preferably the antibodies are identical in amino acid sequence).
  • Antibodies may or may not be glycolized and still fall within the scope of the invention.
  • Monoclonal antibodies can be homogeneous if they have the same amino acid sequence, although they
  • SUBSTITUTE SHEET (RULE 26) may differ in post-translational modification, such as pattern glycolization.
  • an “embodiment” of an antibody refers in this application to a molecule whose amino acid sequence differs from the amino acid sequence of the “parent” antibody by adding, deleting, and / or replacing one or more amino acid residues in the sequence of the parent antibody.
  • the variant antibody contains at least one amino acid (e.g., from one to about ten and preferably 2, 3, 4, 5, 6, 7, or 8) additive, deletion, and / or substitution in the CDR regions of the parent antibody .
  • Identity or homology with respect to the sequence of the variant antibody is defined in this application as the percentage of amino acid residues in the sequence of the variant antibody identical to the residues of the parent antibody, after aligning the sequences and introducing gaps, if necessary, to achieve the maximum percentage of sequence identity.
  • a variant antibody retains the ability to bind an antigen, or preferably an epitope, to which a parent antibody binds, or preferably has at least one property or biological activity that exceeds that of a parent antibody.
  • the antibody preferably has a stronger binding affinity, a longer half-life, lower 1C 50, or an increased ability to inhibit the biological activity of the antigen than the parent antibody.
  • a variant antibody of particular interest in this application is an antibody exhibiting at least about 2-fold, preferably at least about 5-fold, 10-fold or 20-fold increase in biological activity compared to the parent antibody.
  • a "parent” antibody in this application is an antibody encoded by the amino acid sequence that is used to produce the variant.
  • the parent antibody may have a frame sequence of origin from Lama glama, but preferably the frame sequence is fully or essentially human in origin.
  • the parent antibody may be from a llama, a chimeric, humanized, or human antibody.
  • Antibodies according to the invention can be obtained by various construction techniques, including using recombinant methods, including shuffling DNA obtained from various sources.
  • the term “specifically binds,” as used herein, refers to a situation in which one member of a specific binding pair does not significantly bind molecules other than its specific binding partner (s).
  • the term is also applicable when, for example, the antigen binding domain of an antibody of the invention is specific for a particular epitope that is carried by a number of antigens, in which case a specific antibody having an antigen binding domain will be capable of specific binding of various antigens bearing the epitope.
  • the monoclonal antibody of the invention specifically binds human IL-17 (i.e., IL-17A), while it does not specifically bind human IL-17B, IL-17C, IL-17D, IL-17E, IL-17F .
  • epitope refers to that part of a molecule that is capable of being recognized and bound to an antibody in one or more antigen-binding regions of an antibody. Epitopes often consist of chemically active surface groups of molecules such as amino acids
  • inhibitory epitope and / or “neutralizing epitope” is meant an epitope which, in the context of an intact antigenic molecule and when bound by an antibody specific for the epitope, results in the loss or decrease in the biological activity of the molecule or organism that contains the molecule, in vivo or in vitro.
  • epitope also refers to a portion of a polypeptide that has antigenic and / or immunogenic activity in an animal, preferably a mammal, such as a mouse or human.
  • antigenic epitope is defined as the portion of a polypeptide to which an antibody can specifically bind, as determined by any method well known in the art, for example, by conventional immunoassay. Antigenic epitopes need not be immunogenic, but may also be immunogenic.
  • An “immunogenic epitope”, as used herein, is defined as part of a polypeptide that elicits an antibody response in an animal, as established by any method known in the art.
  • a “non-linear epitope” or “conformational epitope” contains non-contiguous polypeptides (or amino acids) within the antigenic protein with which the antibody specific for the epitope binds.
  • biological property or “biological characteristic” or the terms “activity” or “bioactivity” with respect to an antibody of the invention are used interchangeably herein and include, but are not limited to, epitope / antigenic affinity and specificity, ability neutralize or antagonize IL-17 activity in vivo or in vitro,
  • SUBSTITUTE SHEET (RULE 26) IC 50 , stability of antibodies and immunogenic properties of antibodies in vivo.
  • Other biological properties or characteristics of the antibody identified by the prior art include, for example, cross-reactivity (i.e., with non-human homologs of the target peptide or with other proteins or targets, in general), and the ability to maintain high levels of protein expression in mammalian cells.
  • the above properties or characteristics may be observed, measured or evaluated using methods recognized in the art, including, but not limited to, ELISA analysis, competitive ELISA analysis, BIACORE or KINEXA surface plasmon resonance analysis, in vitro or in vivo neutralization assays, without limitation receptor binding, production and / or secretion of a cytokine or growth factor, signal transduction and immunohistochemistry of tissue sections obtained from various sources, including human, primate or L. Any other source.
  • inhibit or “neutralize,” as used herein, with respect to the activity of an antibody of the invention, means the ability to significantly counteract, inhibit, prevent, limit, slow down, interrupt, destroy, terminate, reduce or reverse for example, the development or severity of what is inhibited, including but not limited to the above, biological activity (eg, activity of IL-17) or a property, disease or condition.
  • Inhibition or neutralization of the activity of IL-17 by binding of an antibody of the invention to IL-17 is preferably at least about 20, 30, 40, 50.60, 70, 80, 90, 95% or higher.
  • patient in this application refers to a mammal, including, but not limited to, mice, monkeys, humans,
  • SUBSTITUTE SHEET mammals, farm animals, mammals, sports animals, and mammals, pets; preferably, the term refers to people.
  • the patient preferably a mammal, preferably a human, is further characterized by a disease or disorder, or condition, mediated by IL-17A, which can be improved by decreasing the bioactivity of IL-17.
  • vector includes a nucleic acid molecule capable of transporting another nucleic acid to which it is bound, including but not limited to plasmids and viral vectors. Certain vectors are capable of autonomous replication in the host cell into which they are introduced, while the remaining vectors can be integrated into the genome of the host cell and, thus, replicated along with the host genome. Moreover, certain vectors are capable of directing the expression of genes with which they are functionally linked. Such vectors are referred to in this application as “recombinant expression vectors" (or, simply, “expression vectors”), and illustrative vectors are well known in the art.
  • cell As used herein, the expressions "cell”, “host cell”, “cell line” and “cell culture”, “cell line as producer” are used interchangeably and include an individual cell or cell culture that is a recipient of any an isolated polynucleotide according to the invention or any recombinant vector (any recombinant vectors) that contain a sequence encoding an HCVR, LCVR or a monoclonal antibody of the invention.
  • Host cells include the offspring of an individual host cell, and the offspring may not
  • a host cell includes cells transformed, transduced or infected with a recombinant vector, or a monoclonal antibody that expresses the polynucleotide of the invention or its light or heavy chain.
  • a host cell that contains a recombinant vector of the invention may also be referred to as a “recombinant host cell.”
  • Preferred host cells for use in the invention are CHO cells (e.g., ATCC CRL-9096), NS0 cells, SP2 / 0 cells, COS cells (ATCC, e.g. CRL-1650, CRL-1651) and HeLa (ATCC CCL-2 )
  • Additional host cells for use in the invention include plant cells, yeast cells, other mammalian cells, and prokaryotic cells.
  • IL-17A mediated disease or disorder includes a disease or disorder associated with abnormal levels of IL-17 in the body or tissues.
  • This disease or disorder can be either infectious or inflammatory in nature, or autoimmune, and can be selected from rheumatoid arthritis, osteoarthritis, juvenile chronic arthritis, septic arthritis, Lyme arthritis, psoriatic arthritis, reactive arthritis, spondylarthropathy, systemic lupus erythematosus , ulcerative colitis, inflammatory bowel disease, insulin-dependent diabetes mellitus, thyroiditis, asthma, allergic diseases, psoriasis, dermatitis, scleroderma, reactions " ransplantat versus host ", organ transplant rejection, acute or chronic immune disease associated with organ transplantation, sarcoidosis, atherosclerosis, disseminated intravascular
  • SUBSTITUTE SHEET (RULE 26) coagulation, Kawasaki disease, Graves disease, nephrotic syndrome, chronic fatigue syndrome, Wegener granulomatosis, Shenlein-Genoch purple, microscopic renal vasculitis, chronic active hepatitis, uveitis, septic shock, toxic shock syndrome, septic syndrome, cachexia, infectious diseases, parasites , acquired immunodeficiency syndrome, acute transverse myelitis, Huntington’s chorea, Parkinson’s disease, Alzheimer's disease, stroke, primary biliary cirrhosis, hemo of anemic anemia, malignant tumors, heart failure, myocardial infarction, Addison’s disease, type I sporadic polyglandular deficiency and type I polyglandular deficiency, Schmidt’s syndrome, adult (acute) respiratory distress syndrome, alopecia, focal alopecia, seronegative arthropathy, aronegative arthropathy, psoriatic arthr
  • SUBSTITUTE SHEET (RULE 26) lung diseases, cryptogenic fibrotic alveolitis, post-inflammatory interstitial lung disease, interstitial pneumonitis associated with connective tissue disease interstitial lung disease associated with mixed connective tissue disease lung disease associated with systemic scleroderma lung disease associated with rheumatoid arthritis of interstitial lung disease, systemic lupus erythematosus pulmonary disease associated with dermatomyositis / polymyosis om lung disease associated with Sjogren's disease lung disease associated with ankylosing spondylitis lung disease, vasculitis diffuse lung disease associated with hemosiderosis lung disease, drug-induced interstitial lung disease, fibrosis associated with radiation fibrosis, bronchiolitis obliterans, chronic eosinophilic pneumonia, lung diseases with lymphocyte infiltration, post-infectious interstitial lung disease, gouty art ita, autoimmune hepatitis, autoimmune hepatitis type
  • SUBSTITUTE SHEET polyarteritis nodosa, acute rheumatic fever, rheumatoid spondylitis, Still's disease, systemic scleroderma, Schengen syndrome, Takayasu disease / arteritis, autoimmune thrombocytopenia, idiopathic thrombocytopenia, autoimmune hypothyroidism, hyperthyroidismosis, hypothyroidismosis, hypothyroidismosis, myxedema, phacogenic uveitis, primary vasculitis, vitiligo, acute liver disease, chronic liver disease, alcohol alcohol-induced irrosis, liver damage, cholestasis, idiosyncratic liver disease, drug-induced hepatitis, non-alcoholic steatohepatitis, allergies and asthma, group B streptococcal infection (GBS), mental disorders (including depression and schizophrenia) mediated by type Th2 and type YO acute and chronic pain (GBS), mental
  • SUBSTITUTE SHEET (RULE 26) arteriosclerosis, arteriovenous fistula, ataxia, atrial fibrillation (permanent or paroxysmal), atrial flutter, atrioventricular block, B-cell lymphoma, bone graft rejection, bone marrow transplant rejection (BMT), blockade of the bundle of His, heart lymphoma, Burkita, Berkitt's lymphoma, stunned heart syndrome, heart tumors, cardiomyopathy, inflammatory responses to cardiopulmonary bypass, cartilage graft rejection, cerebral cortical degeneration, cerebellar disturbances, chaotic or multifocal atrial tachycardia associated with chemotherapy disorders, chronic myelocytic leukemia (CML), chronic alcoholism, chronic inflammatory pathologies, chronic lymphocytic leukemia (CLL), chronic obstructive pulmonary disease, chronic intoxication with salicylates, colorectal carcinoma, colon carcinoma, colon and rectal carcinoma, colon carcinoma , contact dermatitis,
  • SUBSTITUTE SHEET gas gangrene, stomach ulcers, glomerulonephritis, transplant rejection of any organ or tissue, gram-negative sepsis, gram-positive sepsis, granulomas due to intracellular organisms, hairy cell leukemia, Gallervorden-Spatz disease, Hashimoto thyroiditis, hemorrhagic fever, hemorrhoid fever, heart disease, syndrome / thrombolytic thrombocytopenic purpura, blood loss, hepatitis (A), arrhythmias of the bundle of His, HIV infection / HIV neuropathy, disease kin, hyperkinetic motor disorders, hypersensitivity reactions associated with hypersensitivity to pneumonitis, hypertension, hypokinetic motor disorders, examination of the hypothalamic-pituitary-adrenal system, idiopathic Addison’s disease, idiopathic pulmonary fibrosis, mediated by antibodies of cytotoxicity, asthenia, inflammation, infantile influenza A virus, exposure
  • SUBSTITUTE SHEET (RULE 26) nephritis, nephrosis, neurodegenerative diseases, neurogenic muscle atrophy I, neutropenic fever, non-Hodgkin’s lymphomas, occlusion of the abdominal aorta and its branches, occlusive arterial disorders, OKTZ® therapy, orchitis / epididymitis, orchitis / recurrent procedures after vasectomy, otorrhea, organ pancreatic transplant, pancreatic carcinoma, paraneoplastic syndrome / hypercalcemia with a malignant tumor, parathyroid transplant rejection, inflammatory pelvic diseases, perennial rhinitis, pericardial disease, peripheral arteriosclerotic disease, peripheral vascular disorders, peritonitis, pernicious anemia, pneumonia Pneumocystis carinii, pneumonia, POEMS syndrome (polyneuropathy, organomegaly, endocrinopathy, monoclonal gammopathy syndrome, and monoclonal gamm
  • SUBSTITUTE SHEET (RULE 26) thromboangitis obliterans, thrombocytopenia, toxicity, transplantation, trauma / blood loss, type III hypersensitivity reactions, type IV hypersensitivity, unstable angina, uremia, urosepsis, urticaria, heart valve diseases, varicose veins, vasculitis, venous diseases, venous thrombosis, venous thrombosis, and fungal infections, encephalitis with a high risk of death / aseptic meningitis, hemophagocytic syndrome with a high risk of death, Wernicke-Korsakov syndrome, more Wilson’s illness, xenograft rejection of any organ or tissue, acute coronary syndrome, acute idiopathic polyneuritis, acute inflammatory demyelinating polyradiculoneuropathy, acute ischemia, Still's disease, focal alopecia, anaphylaxis, atherosclerosis syndrome, anthrophosphoplipitis, anemia, art
  • SUBSTITUTE SHEET (RULE 26) fever, Hughes syndrome, idiopathic Parkinson’s disease, idiopathic interstitial pneumonia, mediated IgE allergy, immune hemolytic anemia, inclusion bodies, infectious inflammatory eye disease, inflammatory demyelinating disease, inflammatory heart disease, inflammatory kidney disease, idiopathic pulmonary fibrosis and pulmonary fibrosis ulceris, keratitis, dry keratoconjunctivitis, Kussmaul disease or Kussmaul-Meyer disease, Land paralysis ri, histiocytosis of Langerhans cells, marbled skin syndrome, macular degeneration, microscopic polyangiitis, ankylosing spondylitis, impaired motor neurons, pemphigoid mucous membranes, multiple organ failure, myasthenia gravis, myelodysplastic syndrome, myocarditis, nerve root disorders, neuropathy, non-neuropathy, non hepatitis, optic neuritis,
  • SUBSTITUTE SHEET (RULE 26) Sneddon-Wilkinson dermatosis, ankylosing spondylitis, Stevens-Johnson syndrome, systemic inflammatory response syndrome, temporal arteritis, toxoplasma retinitis, toxic epidermal necrolysis, transverse myelitis, TRAPS (periodic syndrome associated with tumor necrosis factor receptor), type I allergic reaction II, urticaria, common interstitial pneumonia, vasculitis, spring conjunctivitis, viral retinitis, Vogt-Koyanagi-Harada syndrome (VKH syndrome), wet yellow heel degeneration to, wound healing and related arthropathies Yersinia and salmonella.
  • TRAPS peripheral syndrome associated with tumor necrosis factor receptor
  • type I allergic reaction II urticaria
  • urticaria common interstitial pneumonia
  • vasculitis spring conjunctivitis
  • viral retinitis Vogt-Koyanagi
  • V H antibody heavy chain variable domain
  • the hypervariable region of HCDR1 comprises the sequence of SEQ NO: l;
  • the hypervariable region of HCDR2 includes SEQ ID: NO 2, and
  • the hypervariable region of HCDR3 includes SEQ ID NO: 3, and
  • the hypervariable region LCDR1 includes SEQ ID NO: 4,
  • the hypervariable region LCDR2 includes SEQ ID NO: 5 and
  • the hypervariable region of LCDR3 includes SEQ ID NO: 6 in the variable regions of light chains (VL).
  • the antibody is an isolated monoclonal antibody or fragment thereof
  • SUBSTITUTE SHEET (RULE 26) containing the variable domains of the heavy chain VH and light chain VL, where the specified antibody or fragment contains:
  • HCDR1 comprising the sequence F-T-F-S-N-Y-A-M-S (SEQ ID NO: 7);
  • HCDR2 comprising the sequence R-I-E-G-G-I-S-S-T-Y (SEQ ID NO: 8);
  • HCDR3 comprising the sequence C-A-V-N-Y-Y-G-M-Y-Y (SEQ ID NO.- 9);
  • variable region of the light chain VL contains:
  • LCDR1 comprising the sequence T-G-T-S-E-D-V-G-F-G-N-Y (SEQ ID NO: 10);
  • LCDR2 comprising the sequence R-V-N-T-R-P-S (SEQ ID NO:
  • LCDR3 comprising the sequence C-S-S-Y-K-A-G-G-T-Y
  • the antibody is an isolated monoclonal antibody that specifically binds to human IL-17A, or a fragment thereof comprising the variable domains of the heavy chain (VH) and light chain (VL), where the specified antibody or its active the fragment contains at least one variable domain, including:
  • variable domain of the heavy chain (VH) of the antibody which includes the amino acid sequence of SEQ ID NO: 13.
  • variable domain of the light chain (VL) of the antibody which includes the amino acid sequence of SEQ ID NO: 14.
  • the antibody may contain a heavy chain amino acid sequence identical to SEQ ID NO: 15.
  • the antibody comprises a light chain with an amino acid sequence identical to SEQ ID NO: 16.
  • antibodies of the present invention may contain additional mutations M252Y / S254T / T256E, N434W, N434A, N434F, H433K / N434F / Y436H, H433K / N434F / Y436H + M252Y / S254T / T256E, T307A / E34A / E303A / E330 M428L. These substitutions do not lead to a loss of the ability of an antibody to bind IL-17A, but can lead to a decrease in ADCC (antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity) or an increase in the affinity or other biological properties of antibodies.
  • ADCC antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity
  • the antibodies of the present invention have improved biological properties, in particular, better inhibitory ability (IC50) against IL-17A and increased aggregation stability.
  • the invention also provides a DNA construct encoding the antibodies described, as well as an expression vector containing the DNA construct for producing antibodies of the invention.
  • a cell line that contains in the 'cells an expression vector with the DNA described above, which can be used as a producer of antibodies according to this invention.
  • An antibody of the invention may be included in a pharmaceutical composition suitable for administration to a patient (see Example 14).
  • Antibodies of the invention may be administered alone or in combination with a pharmaceutically acceptable carrier, diluent and / or excipient in single or multiple doses.
  • the pharmaceutical compositions for administration are designed to suit the chosen mode of administration, and pharmaceutically acceptable diluents, carriers and / or excipients, such as dispersing agents, buffers, surfactants, preservatives, solubilizing agents, isotonic agents, stabilizers, and the like. used properly (see example 14).
  • compositions have been developed in accordance with traditional methods described in, for example, Remington, The Science and Practice of Pharmacy, 19th Edition, Gennaro, Ed., Mack Publishing Co., Easton, PA 1995, which describes various methods for preparing the compositions, generally known to specialists.
  • a pharmaceutical composition containing an anti-1L-17 monoclonal antibody of the invention can be administered to a patient at risk of development or having a pathology, as described herein, using standard methods of administration, including oral, intravenous, intraperitoneal, subcutaneous, pulmonary, transdermal, intramuscular, intranasal, buccal, sublingual or with the help of suppositories.
  • composition of the invention preferably contains or is a "therapeutically effective amount" of
  • a “therapeutically effective amount” refers to an amount effective at dosages and for periods of time necessary to achieve the desired therapeutic result.
  • a therapeutically effective amount of an antibody can vary depending on factors such as the condition of the disease, the age, gender and weight of the individual, and the ability of the antibody or part of the antibody to elicit the desired response in the individual.
  • a therapeutically effective amount is also an amount in which the therapeutically beneficial effect of the antibody prevails over the toxic or harmful effect.
  • a “prophylactically effective amount” refers to an amount effective at dosages and for periods of time necessary to achieve the desired prophylactic result. Since a prophylactic dose is used for individuals before or at an early stage of the disease, typically a prophylactically effective amount may be less than a therapeutically effective amount.
  • a therapeutically effective or prophylactically effective amount is at least the minimum dose, but less than the toxic dose of the active agent, necessary to provide therapeutic benefit to the patient.
  • a therapeutically effective amount of an antibody of the invention is an amount that, in mammals, preferably humans, reduces the biological activity of IL-17, for example, IL17R binding, where the presence of IL-17 causes or contributes to undesirable pathological effects, or a decrease in IL-17 levels causes a beneficial therapeutic effect in a mammal, preferably a human.
  • the route of administration of the antibodies of the invention may be oral, parenteral, by inhalation, or topical.
  • the antibodies of the invention may be included in a pharmaceutical composition suitable for parenteral administration.
  • parenteral as used herein includes intravenous, intramuscular, subcutaneous, rectal, vaginal or intraperitoneal administration.
  • Advantageous is the introduction by intravenous or intraperitoneal, or subcutaneous injection. Suitable carriers for such injections are directly known in the art.
  • compositions must be sterile and stable under the conditions of manufacture and storage in a container that is provided, including, for example, a hermetically sealed vial (ampoule) or syringe. Therefore, pharmaceutical compositions can be sterile filtered after preparation, or otherwise made microbiologically suitable.
  • a typical intravenous infusion composition may have a volume of 250-1000 ml of liquid, such as sterile Ringer's solution, physiological saline, dextrose solution, and Hank's solution, and a therapeutically effective dose (e.g., 1-100 mg / ml or more) of antibody concentration. The dose may vary depending on the type and severity of the disease.
  • dosages for any of the patients depend on many factors, including patient size, body surface area, age, specific compound to be administered, gender, time and route of administration, general health and other medications that are administered simultaneously.
  • a typical dose may be, for example, in the range of 0.001 to 1000 ⁇ g; however, doses below or above this illustrative range are anticipated, especially considering the above factors.
  • the dosage regimen of daily parenteral administration may be from 0.1 ⁇ g / kg to 100 mg / kg of the total body weight, preferably from 0.3 ⁇ g / kg to 10 mg / kg and more preferably from 1 ⁇ g / kg to 1 mg / kg , even more preferably 0.5 to 10 mg / kg body weight per day.
  • the treatment process can be monitored by periodically evaluating the patient's condition. For repeated administration over several days or longer, depending on the condition of the patient, the treatment is repeated until the desired response is achieved or the symptoms of the disease are suppressed. However, other dosage regimens that are not described in this application may also be used.
  • the desired dosage may be administered by single-pole administration, multiple bolus administrations, or by continuous infusion of an antibody, depending on the pharmacokinetic decay sample that the practitioner wants to achieve.
  • the therapeutic agents of the invention can be frozen or lyophilized and reconstituted before use in a suitable sterile vehicle. Lyophilization and recovery can lead to varying degrees of loss of antibody activity. Dosages may be adjusted to compensate for this loss. In general, pH values of the pharmaceutical composition of 6 to 8 are preferred.
  • the invention provides a finished product containing materials useful for treating or preventing the disorders or conditions described above.
  • the finished product contains a container containing a pharmaceutical composition with an antibody, with a designation and possibly instructions.
  • Suitable containers include, for example, vials, ampoules, syringes, and assay tubes. Containers may be made of a variety of materials, such as glass or polymeric material.
  • the container contains a composition according to the invention, which is effective for treating a disease or disorder mediated by IL-17A, and may have a sterile access (for example, the container may be an intravenous solution bag or a vial having a plug that is permeable for hypodermal injection needles) .
  • the active agent in the composition is an anti-Lb-17 antibody of the invention.
  • the designation on the container and the instructions attached to it indicate that the composition is used to treat the selected disease.
  • the finished product may further comprise a second container containing a pharmaceutically acceptable buffer, such as phosphate buffered saline, Ringer's saline and dextran solution. It may further include other materials desirable from a commercial and consumer point of view, including other buffers, diluents, filters, needles, syringes, and package inserts with instructions for use.
  • Antibodies and antigens were produced in cells of a constant cell line derived from Chinese hamster ovary cells (CHO-K1 line) according to published protocols [Biotechnol Bioeng. 2005 Sep 20; 91 (6): 670-677, Liao Metal., 2004; Biotechnol Lett. 2006 Jun; 28 (l 1): 843-848; Biotechnol Bioeng. 2003 Nov 5; 84 (3): 332-342].
  • a recombinant IL-17A protein containing six His amino acids at the C-terminus of the protein was isolated and purified from the culture fluid using Profmity IMAC Ni-charged resin (from Bio-Rad). Prior to purification, NiCl 2 was added to the culture liquid to a concentration of 1 mM. Next, 5 ml of Profmity IMAC Ni-charged resin was added to the culture fluid and stirred for 1 hour at room temperature.
  • SUBSTITUTE SHEET (RULE 26) The sorbent was transferred to a 5 ml Thermo scientific Polypropylene columns column, washed with 5 column volumes of FSB to wash the non-specific binding components. The bound antigen was eluted using 0.3 M imidazole, pH 8, 150 mM NaCl. Then the protein was transferred to PBS (pH 7.4) using dialysis using SnakeSkin Dialysis Tubing technology, filtered (0.22 ⁇ m), transferred to test tubes and stored at - 70 ° ⁇ . The purity of the resulting protein solution was evaluated using SDS gel electrophoresis (Figure 1).
  • Recombinant protein IL-17A-Fc from the culture fluid was isolated and purified using a Protein A affinity chromatography column.
  • the clarified culture fluid was passed through a 5 ml HiTrap rProtein A Sepharose FF column (GE Healthcare) that was equilibrated with phosphate salt buffer (FSB, pH 7.4). Then the column was washed with 5 column volumes of FSB to wash the non-specific binding components.
  • the bound antigen was eluted using 0.1 M glycine buffer pH 3.
  • the main protein peak of elution was collected and adjusted to neutrality with 1 M Tris buffer (pH 8). All stages were carried out at a flow rate of PO cm / h.
  • the protein was transferred to PBS (pH 7.4) using dialysis using SnakeSkin Dialysis Tubing technology, filtered (0.22 ⁇ m), transferred to tubes and stored at -70 ° C.
  • the purity of the resulting protein solution was evaluated using SDS gel electrophoresis ( Figure 2).
  • IgGl antibodies were purified on a 1 ml Hi Trap rProteinA FF column (GE Healthcare) according to the procedure described above for IL-17A-Fc antigen. The purity of the resulting protein solution was evaluated using SDS-gel electrophoresis (Fig.Z).
  • Lama Glama animal was sequentially immunized 5 times by subcutaneous administration of antigenic material mixed with an equal volume of Freund's complete (in the first injection) or incomplete (in the remaining injections).
  • a mixture of recombinant proteins (0.2 mg of each of the proteins per 1 injection) was used as antigen, one of which was human IL-17A (kit from R&D Systems).
  • the second injection (stage of immunization) was carried out 3 weeks after the first, then three more immunizations were carried out with an interval of two weeks. Blood sampling (50 ml) was performed 5 days after each injection, starting with the third.
  • Blood was diluted 2 times with a solution of PBS containing 1 mm EDTA.
  • 35 ml of the diluted blood solution was layered on Histopaque®-1077 medium (from Sigma) with a density of 1.077 g / ml, volume of 15 ml and centrifugation was carried out for 20 min at 800 g.
  • Mononuclear cells (lymphocytes and monocytes) were selected from the interphase plasma / Histopaque medium, and then washed with a FSB solution containing 1 mM EDTA.
  • RNA concentration was determined using Nanovue (GE Healthcare) and the quality of the isolated RNA was checked by electrophoresis on a 1.5% agarose gel.
  • SUBSTITUTE SHEET (RULE 26) using MMuLV reverse transcriptase and random hexamer oligonucleotides as a seed.
  • variable domain genes flanked by restriction sites using a set of oligonucleotides and the protocols of the authors [J Biol Chem. 1999 Jun 25; 274 (26): 18218-30; WO 2010/001251].
  • connection of the genes of the variable domains of light and heavy chains into one fragment was carried out by sequential restriction, ligation and amplification reactions, according to the scheme shown in Figure 1.
  • the heavy chain genes were connected to the kappa genes and separately to the light chain lambda genes.
  • the calculated number of matrix molecules in all reactions was at least 10 p .
  • the resulting DNA preparation VL-CK-VH was digested with Nhel / Eco911 restriction enzymes and ligated into the original pH 5 phagemid.
  • the structure of the phagemid is shown in FIG. 2.
  • Ligation products were transformed into electrocompetent SS320 strain cells prepared according to protocols [Methods Enzymol. 2000; 328: 333-63].
  • the repertoire of the Kappa derivative Fab library was 5.1 * 10 and lambda 3.7 * 10, respectively.
  • a phage library preparation was prepared according to the procedure described previously [J Mol Biol. 1991 Dec 5; 222 (3): 581-97].
  • Unbound phages were removed during a series of washing cycles using a PBS solution (pH 7.4) -Tween 20 (0.1% v / v). The number of washes increased from the first round to the third round 20-30-40 times, respectively. The remaining phage particles bound were eluted with 100 mM Gly-HCl solution (pH 2.5) for 15 minutes with stirring, then neutralized with 1 M TRIS-HC1 (pH 7.6). Bacteria of E. coli TG1 strain were infected with the obtained phages, then the phages were isolated and used in the next selection cycle.
  • RNA of B lymphocytes from the blood of five hundred and fifty human donors was isolated using the RNeasy Mini Kit according to the proposed protocol (from QIAGEN). The concentration of RNA was determined using the Nanovue kit (from GE Healthcare) and the quality of the isolated RNA was checked by electrophoresis on a 1.5% agarose gel.
  • the reverse transcription reaction was performed using the MMLV RT kit (from Evrogen) according to the recommended protocol using MMuLV reverse transcriptase and random hexamer oligonucleotides as a seed.
  • variable domain gene of the light chain of the clone A1 antibody of the llama with the genes of the variable domains of the human donor heavy chains with the gene of the variable domain of the heavy chain of the antibody of clone A 1 llama in one fragment was carried out by sequential restriction, ligation and amplification reactions according to the scheme shown in FIG. . 6B.
  • the calculated number of molecules of the matrix of genes of human variable domains in all reactions was at least 10 12 .
  • the obtained DNA preparation VL-CK-VH was treated with restriction enzymes Nhel Eco9P and led into the original phagemid pH5. Ligation products were transformed into electrocompetent cells of strain SS320 prepared according to protocols [Methods Enzymol.
  • ELISA ELISA
  • Fab with the published sequence AIN457 (from Novartis) was used as a positive control.
  • wells of ELISA plates (from Nunc ImmunoMaxisorp) were coated with 50 ⁇ l (0.5 ⁇ g / ml in IX coating carbonate buffer) IL-17A-Fc, sealed and incubated overnight at 4 ° C. All subsequent steps were carried out according to the standard ELISA protocol using a high-performance automated platform based on GenetixQ-pix2xt robotic systems (from Molecular Device) and Tesap Freedom EVO 200 (from Tesap).
  • blocking buffer BB 200 ⁇ l of 0.5% nonfat milk in the FSB. The plates were incubated on a shaker for one hour at room temperature. After washing with FSB-Tween, 50 ⁇ l was added
  • the colorimetric signal was developed by adding TMB (100 ⁇ l / well) to saturation (average 3-5 min), then further development was stopped by adding a stop solution (100 ⁇ l / well, 10% sulfuric acid).
  • the color signal was measured at a wavelength of 450 nm using a suitable Tecan-Sunrise tablet reader (from Tesap). The degree of antibody binding was proportional to the production of a color signal.
  • test cell supernatant containing the test Fab was mixed in a non-binding 96-well plate with 50 ⁇ l of 0.4 ⁇ g / ml IL-17A-His6-Flag in 1% milk in PBS-Tween. Incubated for 1 hour at 37 ° C and shaking at 500 rpm.
  • SUBSTITUTE SHEET (RULE 26) stopped by the addition of stop solution (100 mcd / well, 10% sulfuric acid).
  • the color signal was measured at a wavelength of 450 nm using a suitable Tecan-Sunrise tablet reader (from Tesap). The degree of antibody binding was proportional to the production of a color signal.
  • Koff is a screening of anti-1b-17A Fab candidates. Koff - screening was performed using a Pall Forte Bio Octet Red 96 instrument. Anti FABCH1 biosensors were rehydrated for 30 minutes in a working buffer containing 10 mM FSB, pH 7.2-7.4, 0.1% Tween-20, 0.1% BSA. In the test samples of E coli supernatants, a 10x working buffer was added to a final concentration of 1x. Then, anti FABCH1 biosensors were immersed in E. coli supernatants containing Fab fragments of antibody candidates for 12 hours at 4 ° C.
  • Sensors with Fab fragments immobilized on the surface were transferred to wells with a working buffer, where a baseline (60 s) was recorded.
  • the sensors were then transferred to wells with analyte solution (IL-17A, 30 ⁇ g / ml) for association of the antigen-antibody complex (300 s). Then the sensors were returned to the wells containing the working buffer for the subsequent stage of dissociation (300 s).
  • the NK codon randomization technique [Appl Environ Microbiol. 2006 Feb; 72 (2): l 141-7; MAbs.2012 May-Jun; 4 (3): 341 -8] using the Q5® Site-Directed Mutagenesis Kit (from NEB) according to the protocol, using the Al-Fab-pLL plasmid as a template. PCR products were then fractionated on low-melting agarose and purified on columns. After the ligation reaction, DNA was transformed into E. coli expressing strain BL21gold (from Stratagene). The resulting individual clones were expanded under Fab-expression conditions in 96 well plates as previously described.
  • SUBSTITUTE SHEET (RULE 26) Goat anti-Human IgG (Fab ') 2 (HRP) (from Pierce) and TMB + H202 / H2S04 paint with subsequent measurement of optical density at a wavelength of 450 nm.
  • amino acid positions of the CDR regions of antibody regions BCD085 tolerant of substitutions for other amino acids were screened. As a result, it was found that this set of amino acid substitutions did not significantly change the binding strength of the antibody to human I-17. A set of such positions can be used to optimize various properties of a candidate.
  • a stable cell line producing the monoclonal antibody BCO085 was obtained by transfection of the parent
  • SUBSTITUTE SHEET (RULE 26) suspension cell line CHO-S vector constructs containing light and heavy chains of antibodies in an optimized ratio.
  • High level clonal lines (greater than 100 mg / L) were obtained using the ClonePix robotic platform (Molecular Devices).
  • the productivity analysis of the selected clones was carried out on the basis of the Biomek FX robotics automated system (Beckman Coulter) and the Octet RED96 analytical system (Pall Life Sciences).
  • the preparation BCD085 for preclinical studies was run in a 200-liter HyClone single-use bioreactor (Thermoscientific) fermenter.
  • the resulting eluate was kept at acidic pH for 30 minutes for viral inactivation, and then neutralized with a 1M Tris-Osn solution. to a pH value of 6.8.
  • the protein solution was filtered using STERICUP filter systems with a MilliporeExpressPlus® membrane (from PVDF) with a pore diameter of 0.22 ⁇ m.
  • the resulting protein solution was passed through the prepared Q Sepharose FF sorbent (from GE HealthCare), pH 7.0, at a low conductivity value ( ⁇ 2 mS / cm). The purified protein was subjected to antiviral
  • the concentration of the obtained protein was 50 mg / ml or more.
  • the purification result of the obtained protein solution was evaluated using SDS gel electrophoresis ( Figure 1 1).
  • Antibody samples were diluted with FSB buffer, pH 7.5, to a concentration of ⁇ 1 mg / ml.
  • the volume of the injected sample is 10 ⁇ l.
  • the calibration mixture Gel filtration standard (from Bio-Rad), KaT, was previously chromatographed. jYo 151-1901.
  • IL-17 The ability of IL-17 to induce the production of IL-6 by human HT1080 cell line (ATCC: CCL-121) was used to analyze the neutralizing activity of BCD085 against human recombinant IL-17.
  • Cells were grown in DMEM culture medium supplemented with 10% inactivated fetal serum, gentamicin and glutamine. 5 * 10 4 cells per well were seeded in 96-well flat-bottomed cell culture plates. The cells were left to attach for 5 hours.
  • IL-6 production in HT1080 cell culture was proportional to the amount of IL-17 added.
  • the amount of IL-6 released in cell supernatants was determined by ELISA using the DuoSet ELISA developmentsystemhuman IL6 system (from RD System, Cat. N ° DY206).
  • the results of the analysis of the antagonistic properties of candidate BCD085 are shown in FIG. 13 in comparison with AIN457 (anti-1L-17A antibody from Novartis).
  • the average value of 1 ⁇ 5 schreib for this candidate for a series of experiments is 40 ⁇ 15 pM.
  • SUBSTITUTE SHEET (RULE 26) second-generation sensors (from AR2G) according to the standard protocol according to the manufacturer's instructions for the preparation and immobilization of AR2G sensors. The analysis was performed at 30 ° C using an FSB containing 0.1% Tween-20 and 0.1% BSA as a working buffer.
  • BCD085 binds to a recombinant human IL-17A preparation with picomolar affinity, which is a thousand times stronger than the macaque affinity for macaque IL-17A, which has a nanomolar value.
  • the candidate does not interact with rat IL-17A (curves not shown).
  • SUBSTITUTE SHEET (RULE 26) with a particle diameter of 7 ⁇ m, KaT.j 08543. Elution was carried out in the isocratic mode with a mobile phase: 50 mM Na ⁇ E> 6, 0.3 M NaCl, pH 7.0 at a flow rate of 0.5 ml / min. Detection was carried out at wavelengths of 214 and 280 nm. Antibody samples were diluted with FSB buffer, pH 7.5, to a concentration of ⁇ 1 mg / ml. The volume of the injected sample is 10 ⁇ l. The calibration mixture Gel filtration standard (from Bio-Rad), cat. N ° 151-1901.
  • Monoclonal antibody BCD085 against IL-17A was administered once subcutaneously to monkey rhesus monkeys (Masasa mulatta) at a dose of 40 mg / kg. At certain intervals after administration (after 0.5, 1, 3, 6, 12, 24, 36, 48, 60, 72, 96, 120, 168, 264, 336, 432, 504, 672, 840 and 1008 hours ) blood was taken from animals and serum was obtained by the standard method.
  • Serum BCD085 antibody levels were assessed by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) on immobilized human IL-17A (from R&D Systems), where the bound antibody was detected using goat polyclonal antibodies against the Fc fragment of human IgG antibodies (from Pierce-ThermoScientific )
  • BCD085 has a significant prolonged effect or a long circulation time in the blood.
  • the maximum content of monoclonal anti-IL-17A antibody in the blood of animals was observed after 72-168 hours and this level remained for 400 hours and only then a very slow decrease occurred, so that even after 1000 hours the concentration of BCD085 was significantly above the control level.
  • the calculated pharmacokinetic parameters for BCD085 for single subcutaneous administration to monkeys are given in Table 2.
  • Buffer citrate HUMM up to pH 6.0-7.0
  • kits with a dosage form containing an anti-IL-17 antibody composition the pharmaceutical composition prepared according to Example 14 is sealed in 1 ml ampoules or syringes under sterile conditions, labeled and packaged in containers made of plastic or cardboard material.
  • instructions for use are included in the container with the ampoule.

Abstract

Настоящее изобретение относится к области медицины, в частности, к области моноклональных антител против IL-17 человека. Более подробно, изобретение относится к моноклональным антителам - антагонистам IL-17A, которые связываются с высокой аффинностью с эпитопом IL-17, при этом антитела содержат аминокислотные замены в гипервариабельных участках тяжелых и легких цепей. Антитела согласно изобретению могут быть химерными, гуманизированными или человеческими антителами, или их антигенсвязывающими фрагментами и могут использоваться в качестве лекарственного средства для лечения аутоиммунных и воспалительных нарушений и нарушений пролиферации и развития клеток. Изобретение также относится к способам получения указанных антител.

Description

АНТИ-1Е-17-АНТИТЕЛА,
СПОСОБ ИХ ПОЛУЧЕНИЯ И СПОСОБ ПРИМЕНЕНИЯ
Область применения
[001] Настоящее изобретение относится к области медицины, в частности, к области моноклональных антител против IL- 17 человека. Более подробно, изобретение относится к моноклональным антителам - антагонистам IL-17A, которые связываются с высокой аффинностью с эпитопом IL-17, при этом антитела содержат аминокислотные замены в гипервариабельных участках тяжелых и легких цепей. Антитела согласно изобретению могут быть химерными, гуманизированными или человеческими антителами, или их антигенсвязывающими фрагментами и могут использоваться в качестве лекарственного средства для лечения аутоиммунных и воспалительных нарушений и нарушений пролиферации и развития клеток. Изобретение также относится к способам получения указанных антител.
Уровень техники
[002] Основной функцией иммунной системы является защита организма от инфекций, например, бактерий или вирусов, а также от раковых новообразований. Данная система организма включает несколько типов лимфоидных и миелоидных клеток, таких как моноциты, макрофаги, дендритные клетки, эузинофилы, Т-клетки, В-клеткй и нейтрофилы. Указанные лимфоидные и миелоидные клетки могут продуцировать сигнальные белки, известные как цитокины. Иммунный ответ включает воспаление, т.е. накопление иммунных клеток системно или в определенном
1
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) участке организма. В ответ на инфекцию или чужеродное вещество, иммунные клетки секретируют цитокины, которые, в свою очередь, модулируют пролиферацию иммунных клеток, их развитие, дифференциацию или миграцию. Иммунный ответ может продуцировать патологические процессы, например, при запуске превышающего норму воспаления, как в случае аутоиммунных заболеваний (см. напр., Abbas et al. (eds.) (2000) Cellular and Molecular Immunology, W.B. Saunders Co., Philadelphia, Pa.; Oppenheim and Feldmann (eds.) (2001) Cytokine Reference, Academic Press, San Diego, Calif.; von Andrian and Mackay (2000) New Engl. J. Med. 343: 1020-1034; Davidson and Diamond (2001) New Engl. J. Med. 345:340- 350).
[003] На сегодня семейство IL-17 цитокинов включает IL-17A, IL-17B, IL-17C, IL-17D, IL-17E и IL-17F. Все члены семейства IL-17 имеют четыре высококонсервативных цистеиновых остатка, которые вовлечены в формирование межцепочечных дисульфидных связей, и имеют два или более цистеиновых остатка, которые могут быть вовлечены в межцепочечные дисульфидные связи. Члены семейства IL-17 не имеют никакого сходства с последовательностями любых других известных цитокинов.
[004] Интерлейкин-17А (IL-17A; также известный как цитотоксичный
Т-лимфоцит-связанный антиген 8 (CTLA-8), IL-17) представляет собой гомодимерный цитокин в 20-30 кДа, продуцируемый Т-клетками памяти с последующим распознаванием антигена. Рост таких
Т-клеток стимулируется интерлейкином-23 (IL-23). (см. напр., McKenzie et al.
(2006) Trends Immunol. 27(1): 17-23; Langrish et al. (2005) J. Exp. Med.
201(2):233-40). IL-17A действует посредством двух рецепторов (IL- 17RA и
IL-17RC) для инициации выработки многих молекул, вовлеченных в процессы с участием нейтрофилов, воспалительные процессы и разрушение органов. Этот цитокин обладает синергическим действием с фактором
2
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) некроза опухоли (ФНО) или интерлейкином 1 -бета (IL-Ι β) для достижения более значимого провоспалительного состояния. Для лечения множества воспалительных, иммунных и пролиферативных состояний, включая ревматоидный артрит (РА), остеоартрит, остеопороз при ревматоидном артрите, воспалительный фиброз (напр.. склеродерма, фиброз легких и цирроз), гингивит, парондотоз или пародонтальные заболевания, воспалительные заболевания кишечника (напр. Болезнь Крона, язвенный колит и воспалительное заболевание кишечника), астма (включая аллергическую астму), аллергии, хроническое обструктивное заболевание легких (ХОЗЛ), рассеянный склероз, псориаз и .рак, и другие, было предложено снижать активность IL-17A с помощью антител или антиген- связывающих фрагментов антител, которые являются в данном случае антагонистами этих рецепторов, (см., напр., US 2003/0166862, WO 2005/108616, WO 2005/051422, и WO 2006/013107).
[005] В настоящее время создано несколько видов антител против IL- 17, в частности, антитела против IL-17A, включая AIN457 (секукинумаб, Эбботт Лэборетриз), LY2439821 (икзекизумаб, Эли Лилли), SCH9001 17 (Мерк), RG4943 (Рош), и другие.
[005] Так, в заявке на патент США US 2010/0245666 описываются антитела против IL-17 (секукинумаб, AIN457), содержащие в одном из CDR участков тяжелой или легкой цепи замену аминокислоты или ее делецию.
Данные антитела характеризуются высокой аффинностью к IL-17, при этом константа диссоциации KD составляет примерно 122μΜ. Также описано применение данных антител в качестве ингибиторов связывания IL-17 с соответствующим рецептором, в частности, для лечения увеита. В настоящее время описанное антитело проходит клинические исследования по лечению ревматоидного артрита, анкилозирующей спондилоартропатии, болезни
Крона, псориаза, рассеянного склероза и нейтрофилии, индуцированной
3
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) озоном воздуха. Было показано, что это антитело безопасно при применении и эффективно в лечении ревматоидного артрита у 46% пациентов (Durez et al., Communication EULAR 2009-RA).
[006] Также в предшествующем уровне техники раскрыты гуманизированные антитела против IL-17 согласно международной публикации заявки WO 2007/070750 (LY2439821, икзекизумаб, Эли Лилли). Данные антитела содержат вариабельные участки тяжелой и легкой цепей с аминокислотными заменами. При этом описанное антитело характеризуется сильным сродством к связыванию (KD) IL-17 человека, т.е. меньше чем приблизительно 7,0-4,0 пМ, и коэффициентом выведения koff для IL-17 человека меньше чем 2 < 10"5 с"1. Антитела проходили клинические испытания на безопасность, переносимость и эффективность при внутривенном введении пациентам с ревматоидными артритом. (Genoevse et al., Communication EULAR 2009-RA; Genoevse et al, Arthritis & Rheumatism, 62: 929-39, (2010)).
[007] Также в предшествующем уровне техники описаны другие антитела к IL-17: мышиные анти-человеческие нейтрализующие антитела eBio64CAP17 (eBioscience) или их производные. Другие примеры антител к IL-17 раскрыты в заявках на патент US2009/0175881A1 , US2008/0269467A1 , и международных публикациях WO2008/001063A1 , и WO2007/117749А1.
[008] Таким образом, учитывая локализованное распространение в участках воспаления, IL-17 является новой мишенью для лечения воспалительных и аутоиммунных заболеваний с потенциально большим профилем безопасности, чем лекарства, которые нацелены на провоспалительные цитокины большого круга кровообращения, такие как ФНО (фактор некроза опухоли). На основе всего вышесказанного можно заключить, что имеется потребность в антителах, которые обладают
4
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) антагонистическим действием или нейтрализуют активность IL-17A для лечения расстройств, заболеваний или состояний, где присутствие биологической активности IL-17A вызывает или способствует нежелательному патологическому результату, или там, где снижение биологической активности IL-17A способствует желательному терапевтическому результату, включая воспалительные нарушения, нарушения пролиферации и развития клеток, аутоиммунные нарушения, такие как ревматоидный артрит (РА), рассеянный склероз (PC) и воспалительные заболевания кишечника (ВЗК).
[009] Наибольшее ограничение при применении антител в качестве препаратов накладывает иммуногенность антител и их аффинность. Т.к. большинство моноклональных антител получены на основе мышиных, периодическое применение таких антител у людей провидит к развитию иммунного ответа на терапию антителами, например, аллергических реакций. Такие типы иммунного ответа приводят в конечном итоге к потере эффективности при лечении по меньшей мере и, в худшем случае, к возможным анафилактическим реакциям.
[010] Таким образом, согласно настоящему изобретению предложены антитела против IL-17A, содержащие аминокислотные замены, при этом предложенные антитела обладают высокой аффинностью и улучшенной растворимостью, а также повышенной 1С50.
Описание фигур
. [ОН]
Фиг. 1. Форетограмма полученного раствора белка IL-17A.
Фиг. 2. Форетограмма полученного раствора белка IL-17A-Fc.
Фиг. 3. Гель электрофорез в 12% SDS-PAGE в восстанавливающих условиях (А), в невосстанавливающих условиях (В).
5
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) Фиг. 4. Схема синтеза комбинаторной Fab- библиотеки ламы. Фиг. 5. Фагмида для клонирования Fab фаговых дисплейных библиотек.
Фиг. 6. Схема синтеза комбинаторных библиотек гибридных Fab антител.
Фиг. 7. Схема синтеза комбинаторных библиотек гибридных Fab антител.
Фиг. 8. Комбинирование пулов вариабельных доменов.
Фиг. 9. ИФА скрининг Fab, специфических против IL-17A человека.
Фиг. 10. Конкурентный ИФА скрининг Fab-кандидатов, блокирующих взаимодействие IL- 17А /IL- 17R.
Фиг. 11. Результаты koff-скрининга анти-1Ь-17А Fab кандидатов человека.
Фиг. 12. Электрофореграмма раствора BCD085.
Фиг. 13. Гельфильтрационный профиль очищенного препарата BCD085.
Фиг. 14. IL-6 Ингибирующая способность BCD085 в сравнении с AIN
457.
Фиг. 15. Кривая взаимодействия BCD085 с человеческим IL-17.
Фиг. 16. Кривая взаимодействия BCD085 с IL-17 макаки (тасаса mulatta).
Фиг. 17. Хроматограмма антитела BCD085, полученная после проведения термостресса.
Фиг. 18. Фармакокинетика препарата антитела против IL-17A BCD085 при однократном подкожном введении обезьянам макакам резус (Масаса mulatta) в дозе 40 мг/кг.
б
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) Описание изобретения
Определения
[012] "Интерлейкин 17", также указанный как "IL-17" или "IL-17A", является 20-30 кД гликозилированным гомодимерным протеином. Ген IL-17 человека кодирует 155-ти аминокислотный протеин, который имеет 19-ти аминокислотную сигнальную последовательность и 136-ти аминокислотный зрелый сегмент. Полноразмерное антитело в том виде, в котором оно встречается в природе, представляет собой молекулу иммуноглобулина (антитела), которая состоит из четырех пептидных цепей, две тяжелые (Н) цепи (приблизительно 50-70 кД при полной длине) и две легкие (L). цепи (приблизительно 25 кД при полной длине), взаимосвязанных дисульфидными мостиками. Аминоконцевая часть каждой цепи включает вариабельный участок из приблизительно 100-1 10 или более аминокислот, которые в основном отвечают за распознавание антигенов. Карбоксиконцевая часть каждой цепи определяет константный участок, главным образом, отвечающий за функцию эффектора.
[013] Антитело состоит из нескольких фрагментов: легких и тяжелых цепей. Вариабельные участки тяжелых и легких цепей образуют антигенсвязывающий центр (или участок). Строение антитела показано на рисунке ниже:
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26)
[014] Легкие цепи классифицируют как каппа или лямбда и они характеризуются конкретным константным участком. Каждая легкая цепь состоит из вариабельного участка Ν-концевой легкой цепи (в данной заявке "LCVR" или "VL") и константного участка легкой цепи, состоящего из одного домена, CL. Тяжелые цепи классифицируют как гамма, мю, альфа, дельта или эпсилон, и они определяют изотип антитела, такой как IgG, IgM, IgA, IgD и IgE, соответственно, и несколько из них могут быть дополнительно разделены на подклассы (изотипы), например IgGl , IgG2, IgG3, IgG4, IgAl и IgA2. Каждый тип тяжелой цепи характеризуется конкретным константным участком, Fc. Каждая тяжелая цепь состоит из вариабельного участка Ν-концевой тяжелой цепи (в данной заявке "HCVR" или "VH") и константного участка тяжелой цепи, СН. Константный участок тяжелой цепи состоит из трех доменов (CHI, СН2 и СНЗ) для IgG, IgD и IgA и 4 доменов (CHI , СН2, СНЗ и СН4) для IgM и IgE. Участки HCVR и LCVR могут быть дополнительно разделены на участки гипервариабельности, названные Rf- гипервариабельными участками (CDR), перемежающиеся с
8
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) более консервативными участками, названными каркасными участками (FR). Каждый HCVR и LCVR состоит из трех CDR и четырех FR, расположенных в следующем порядке от аминоконца к карбоксиконцу: FR1 , CDR1 , FR2, CDR2, FR3, СО , FR4. В данной заявке 3 CDR тяжелые цепи обозначены как "CDRH1, CDRH2 и CDRH3", а 3 CDR легкой цепи обозначены как "CDRL1 , CDRL2 и CDRL3". CDR содержат большинство остатков, которые образуют специфические взаимодействия с антигеном. Нумерацию и позиционирование CDR-аминокислотных остатков в пределах HCVR и LCVR участков антител согласно данному изобретению осуществляют с хорошо известной номенклатурой Kabat, если не указано иного. В настоящей заявке используется, если не указано иного, общепринятые буквенные обозначения аминокислот.
[015] Термин «анти-1Ь- 17-антитело», «антитело к IL-17», «антитело, специфически связывающееся с йнтерлейкином IL- 17» или «антитело против 1Ь-17А»являются взаимозаменяемы в контексте настоящей заявки и относятся к антителу, которое специфически связывается с IL-17A.
[016] Термин "антитело" в связи с анти-1Ь-17А моноклональным антителом по изобретению (либо упрощенно, "моноклональное антитело по изобретению"), как используется в данной заявке, относится к моноклональному антителу. "Моноклональное антитело", как используется в данной заявке, относится к антителу грызуна, семейства приматов или Camelidae, предпочтительно к антителу мыши, макаки, верблюда или ламы, химерному антителу, гуманизированному антителу или полностью человеческому антителу, если в данной заявке не указано иное. Моноклональные антитела по изобретению могут быть получены с использованием, например, гибридомных методик, хорошо известных из уровня техники, а также рекомбинантных технологий, технологий фагового дисплея, синтетических технологий или комбинаций таких технологий или
9
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) других технологий, хорошо известных из уровня техники. Термин "моноклональное антитело", как его используют в данной заявке, не ограничивается антителами, полученными с помощью гибридомной технологии. "Моноклональное антитело" относится к антителу, полученному из единой копии или клона, включая, например, любой эукариотический, прокариотический или фаговый клон, а не к способу его получения. "Моноклональное антитело" может быть интактным антителом (содержащим полный или полноразмерный Fc-участок), по существу интактным антителом, частью или фрагментом антитела, содержащими антигенсвязующую часть, например Fab-фрагмент, Fab'-фрагмент или Р(аЬ')2-фрагмент антитела. "Fab''-фрагмент содержит вариабельный и константный домен легкой цепи и вариабельный домен и первый константный домен (СН1) тяжелой цепи. "F(ab')2" -фрагменты антитела содержат пару Fab-фрагментов, которые в основном ковалентно связаны возле их карбоксиконцов шарнирными аминокислотами между ними. Fv - вариабельный фрагмент антитела (variable fragment), scFv (single chain Fv) - вариабельный фрагмент анти тела, у которого фрагменты легкой и тяжелой цепи связаны полипептидным линкером, (scFv)2 - фрагмент, состоящий из двух молекул scFv, соединенных дисульфидной связью, dsFv - вариабельный фрагмент, стабилизированный дополнительной внутримолекулярной дисульфидной связью. Другие химические связывания фрагментов антител также хорошо известны из уровня техники.
[017] Термин «антитело» и «иммуноглобулин» являются взаимозаменяемыми в контексте данной заявки.
[018] Вариабельные участки каждой из пар легкая/тяжелая цепь образуют антигенсвязывающие сайты антитела. Как используется в данной заявке, "антигенсвязывающая часть", или "антигенсвязывающий участок", или "антигенсвязывающий домен" или «антигенсвязывающий центр» ю
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) относятся, взаимозаменяемо, к такой части молекулы антитела, которая содержит аминокислотные остатки, взаимодействующие с антигеном и придающие антителу его специфичность и аффинность по отношению к антигену. Эта часть антитела включает "каркасные" аминокислотные остатки, необходимые для поддержания надлежащей конформации антигенсвязывающих остатков.
[019] Предпочтительно CDR антигенсвязывающего участка или весь антигенсвязывающий участок антител по изобретению имеет происхождение из донорской человеческой библиотеки или по существу человеческое происхождение с определенными аминокислотными остатками, измененными, например, замещенными разными аминокислотными остатками с тем, чтобы оптимизировать конкретные свойства антитела, например KD, koff, 1С50. Предпочтительно каркасные участки антитела по изобретению имеют человеческое происхождение или по существу человеческое происхождение (по крайней мере на 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98 или 99% человеческое происхождение). Предпочтительные каркасные участки антитела по изобретению имеют следующие аминокислотные последовательности, соответствующие каркасным участкам антитела человека:
Вариабельный домен тяжелой цепи
FR1 QVQLVQSGGGLVQPGGSLRLSCAADG
FR2 WVRQAPGKGLEWVS
FR3 RFTISRDDAKNTLYLQMSSLKTEDTAVYYC
FR4 WGQGTLVTVSS
Вариабельный домен легкой цепи
FR1 QSVLTQPPSVSVAPGKTVTISC
FR2 WYQHLPGTAPKLLIY
FR3 G VPDRF S GS Q S G T A SLTI S GLQ AEDE AD YYC
FR4 FGGGTKLT VLGQ .
11
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) [020] В других вариантах осуществления антигенсвязывающий участок IL-17-антитела по изобретению может происходить из других нечеловеческих видов, включая кролика, крысу или хомяка, но не ограничиваясь ими. Альтернативно, антигенсвязывающий участок может происходить из человеческих видов.
[021] Кроме того, "моноклональное антитело", как используется в данной заявке, может быть одноцепочечным Fv-фрагментом, который может быть получен путем связывания ДНК, кодирующей LCVR и HCVR, с линкерной последовательностью (см. Pluckthun, The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 1 13, Rosenburg and Moore eds., Springer-Verlag, New York, p. 269-315, 1994). Подразумевается, что вне зависимости от того, указаны ли фрагменты или части, термин "антитело", как используется в данной заявке, включает такие фрагменты или части, а также одноцепочечные формы. До тех пор пока белок сохраняет способность специфического или предпочтительного связывания своей мишени (например, эпитопа или антигена), он относится к термину "антитело". Антитела могут быть гликозилированными, или не быть таковыми, и входят в рамки изобретения.
[022] Популяция "моноклональных антител" относится к гомогенной или по существу гомогенной популяции антител (т.е. по крайней мере приблизительно 85, 90, 91 , 92, 93, 94, 95, 96%, более предпочтительно по крайней мере приблизительно 97 или 98% или еще более предпочтительно по крайней мере 99% антител в популяции будут конкурировать в анализе ELISA за тот же антиген или эпитоп, или более предпочтительно антитела являются идентичными в аминокислотной последовательности). Антитела могут быть, а могут и не быть, гликолизированными и все еще подпадать в объем изобретения. Моноклональные антитела могут быть гомогенными, если они имеют идентичную аминокислотную последовательность, хотя они
12
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) могут отличаться по посттрансляционной модификации, например паттернгликолизации.
[023] "Вариант" антитела относится в данной заявке к молекуле, аминокислотная последовательность которой отличается от аминокислотной последовательности "родительского" антитела путем добавления, делеции и/или замещения одного или более аминокислотных остатков в последовательности родительского антитела. В предпочтительном из вариантов осуществления вариантное антитело содержит по крайней мере одну аминокислотную (например, от одной до приблизительно десяти и предпочтительно 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8) добавку, делецию и/или замещение в CDR-участках родительского антитела. Идентичность или гомологичность относительно последовательности вариантного антитела определена в данной заявке как процент аминокислотных остатков в последовательности вариантного антитела, идентичный остаткам родительского антитела, после выравнивания последовательностей и введения разрывов, при необходимости, для достижения максимального процента идентичности последовательности. Вариантное антитело сохраняет способность связывать антиген или предпочтительно эпитоп, с которым связывается родительское антитело или предпочтительно имеет по крайней мере одно свойство или биологическую активность, которая превосходит аналогичные свойства родительского антитела. Например, антитело предпочтительно обладает более сильной аффинностью связывания, большим периодом полувыведения, более низким 1С50 или повышенной способностью ингибировать биологическую активность антигена, чем родительское антитело. Вариантное антитело, представляющее особый интерес, в данной заявке является антителом, проявляющим по крайней мере приблизительно 2-кратное, предпочтительно по крайней мере приблизительно 5-кратное, 10-кратное или 20-кратное увеличение биологической активности по сравнению с родительским антителом.
13
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) [024] "Родительское" антитело в данной заявке - это антитело, кодированное аминокислотной последовательностью, которая используется для получения варианта. Родительское антитело может иметь каркасную последовательность происхождения из Lama glama, но предпочтительно каркасная последовательность имеет полностью или по существу человеческое происхождение. Родительское антитело может быть из ламы, химерным, гуманизированным или человеческим антителом.
[025] Антитела согласно изобретению могут быть получены различными методиками конструирования, в том числе, с использованием рекомбинантных способов, включая шаффлинг ДНК, полученной из различных источников.
[026] Термин "специфически связывает", как используется в данной заявке, относится к той ситуации, при которой один участник пары специфического связывания не связывает в значительной степени молекулы, отличные от его партнера (партнеров) по специфическому связыванию. Термин также применим, когда, например, антигенсвязывающий домен антитела по изобретению является специфическим для конкретного эпитопа, который переносится рядом антигенов, в таком случае специфическое антитело, имеющее антигенсвязывающий домен, будет способно к специфическому связыванию различных антигенов, несущих эпитоп. Соответственно, моноклональное антитело по изобретению специфически связывает IL-17 человека (т.е. IL-17A), в то время как оно специфически не связывает человеческие IL-17B, IL-17C, IL-17D, IL-17E, IL-17F.
[027] Термин "эпитоп" относится к той части молекулы, которая способна распознаваться и связываться с антителом в одном или более антигенсвязывающих участках антитела. Эпитопы часто состоят из химически активных поверхностных групп молекул, таких как аминокислоты
14
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) или сахарные боковые цепи, и обладают специфическими трехмерными структурными характеристиками, а также специфическими зарядовыми характеристиками. Под "ингибирующим эпитопом" и/или "нейтрализующим эпитопом" подразумевается эпитоп, который в контексте интактной антигенной молекулы и при связывании антителом, специфическим к эпитопу, приводит к утрате или к уменьшению биологической активности молекулы или организма, который содержит молекулу, in vivo или in vitro.
[028] Термин "эпитоп", как используется в данной заявке, кроме того, относится к части полипептида, которая обладает антигенной и/или иммуногенной активностью у животного, предпочтительно млекопитающего, например мыши или человека. Термин "антигенный эпитоп", как используется в данной заявке, определяется как часть полипептида, с которой может специфически связываться антитело, определенная любым способом, хорошо известным из уровня техники, например при помощи традиционного иммунного анализа. Антигенные эпитопы не обязательно должны быть иммуногенными, но могут также быть имуногенными. "Иммуногенный эпитоп", как используется в данной заявке, определяется как часть полипептида, который вызывает отклик антитела у животного, как устанавливается любым способом, известным из уровня техники. "Нелинейный эпитоп" или "конформационный эпитоп" содержат несмежные полипептиды (или аминокислоты) в пределах антигенного протеина, с которым антитело, специфическое к эпитопу, связывается.
[029] Выражения "биологическое свойство" или "биологическая характеристика" или термины "активность" или "биоактивность" по отношению к антителу по изобретению используются в данной заявке как взаимозаменяемые и включают, но не ограничиваются приведенными, эпитоп/антигенную аффинность и специфичность, способность нейтрализовать или быть антагонистом активности IL- 17 in vivo или in vitro,
15
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) IC50, стабильность антитела и иммуногенные свойства антитела in vivo. Остальные идентифицируемые из уровня техники биологические свойства или характеристики антитела включают, например, перекрестную реактивность (т.е. с нечеловеческими гомологами пептида-мишени или с остальными протеинами или мишенями, в общем), и способность сохранять высокие уровни экспрессии протеина в клетках млекопитающих. Вышеуказанные свойства или характеристики могут наблюдаться, измеряться или оцениваться с использованием методик, признанных в уровне техники, включая, но не ограничиваясь приведенными, анализ ELISA, конкурентный анализ ELISA, BIACORE или анализ поверхностного плазмонного резонанса KINEXA, анализы нейтрализации in vitro или in vivo без ограничений, рецепторного связывания, продуцирования и/или секреции цитокина или фактора роста, сигнальную трансдукцию и иммуногистохимию срезов тканей, полученных из различных источников, включая человека, примата или любой другой источник.
[030] Термин "ингибировать" или "нейтрализовать", как используется в данной заявке, по отношению к активности антитела по изобретению, означает способность в значительной степени противодействовать, препятствовать, предотвращать, ограничивать, замедлять, прерывать, уничтожать, прекращать, уменьшать или обращать, например, развитие или тяжесть того, что ингибируют, включая, но не ограничиваясь вышеприведенными, биологическую активность (например, активность IL- 17) или свойство, заболевание или состояние. Ингибирование или нейтрализация активности IL-17 в результате связывания антитела по изобретению с IL-17 составляет предпочтительно по крайней мере приблизительно 20, 30, 40, 50,60, 70, 80, 90, 95% или выше.
[031] Термин "пациент" в данной заявке относится к млекопитающему, включая, но не ограничиваясь приведенными, мышей, обезьян, людей,
16
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) млекопитающих сельскохозяйственных животных, млекопитающих спортивных животных и млекопитающих комнатных животных; предпочтительно термин относится к людям. В определенном из вариантов осуществления пациент, предпочтительно млекопитающее, предпочтительно человек, дополнительно характеризуется заболеванием или расстройством, или состоянием, опосредованными IL- 17A, которые могут быть улучшены путем уменьшения биоактивности IL- 17.
[032] Термин "вектор" включает молекулу нуклеиновой кислоты, способную транспортировать другую нуклеиновую кислоту, с которой она связана, включая плазмиды и вирусные векторы, но не ограничиваясь ими. Определенные векторы способны к автономной репликации в клетке- хозяине, в которую они введены, в то время как остальные векторы могут быть интегрированы в геном клетки-хозяина и, таким образом, реплицированы наряду с геномом-хозяином. Более того, определенные векторы способны направлять экспрессию генов, с которыми они функционально связаны. Такие векторы имеют в данной заявке название "векторы рекомбинантной экспрессии" (или, упрощенно, "векторы экспрессии"), а иллюстративные векторы хорошо известны из уровня техники.
[033] Как используется в данной заявке, выражения "клетка", "клетка- хозяин", "линия клеток" и "клеточная культура", «клеточная линия как продуцент» используются как взаимозаменяемые и включают индивидуальную клетку или клеточную культуру, являющиеся реципиентом любого выделенного полинуклеотида по изобретению или любого рекомбинантного вектора (любых рекомбинантных векторов), которые содержат последовательность, кодирующую HCVR, LCVR или моноклональное антитело по изобретению. Клетки-хозяева включают потомство индивидуальной клетки-хозяина, и потомство может не
17
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) обязательно быть полностью идентичным (по морфологии или полному ДНК комплементу) оригинальной родительской клетке из-за природных, случайных или преднамеренных мутаций и/или изменений. Клетка-хозяин включает клетки, трансформированные, трансдуцированные или инфицированные рекомбинантным вектором, или моноклональное антитело, которое экспрессирует полинуклеотид по изобретению или его легкую или тяжелую цепь. Клетка-хозяин, которая содержит рекомбинантный вектор по изобретению (как стабильно включенный в хромосом-хозяин, так и не включенный), также может называться "рекомбинантной клеткой-хозяином". Предпочтительными клетками-хозяевами для использования в изобретении являются СНО клетки (например, АТСС CRL-9096), NS0 клетки, SP2/0 клетки, COS клетки (АТСС, например, CRL-1650, CRL-1651) и HeLa (АТСС CCL-2). Дополнительные клетки-хозяева для использования в изобретении включают растительные клетки, дрожжевые клетки, другие клетки млекопитающих и прокариотные клетки.
[034] Термин «опосредуемое IL-17A заболевание или нарушение» включает в себя заболевание или нарушение, связанное с аномальными уровнями IL-17 в организме или тканях. Данное заболевание или нарушение может быть как инфекционного или воспалительного характера, так и аутоиммуного, и может быть выбрано из ревматоидного артрита, остеоартрита, ювенильного хронического артрита, септического артрита, артрита Лайма, псориатического артрита, реактивного артрита, спондилоартропатии, системной красной волчанки, болезни Крона, язвенного колита, воспалительного заболевания кишечника, инсулинзависимого сахарного диабета, тиреоидита, астмы, аллергических заболеваний, псориаза, дерматита, склеродермии, реакции "трансплантат против хозяина", отторжения трансплантата органа, острого или хронического иммунного заболевания, связанного с трансплантацией органа, саркоидоза, атеросклероза, диссеминированного внутрисосудистого
18
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) свертывания, болезни Кавасаки, болезни Грэйвса, нефротического синдрома, синдрома хронической усталости, гранулематоза Вегенера, пурпуры Шенлейна-Геноха, микроскопического васкулита почек, хронического активного гепатита, увеита, септического шока, синдрома токсического шока, септического синдрома, кахексии, инфекционных заболеваний, паразитарных заболеваний, синдрома приобретенного иммунодефицита, острого поперечного миелита, хореи Гентингтона, болезни Паркинсона, болезни Альцгеймера, инсульта, первичного билиарного цирроза, гемолитической анемии, злокачественных опухолей, сердечной недостаточности, инфаркта миокарда, болезни Аддисона, спорадического полигландулярного дефицита типа I и полигландулярного дефицита типа И, синдрома Шмидта, взрослого (острого) респираторного дистресс-синдрома, алопеции, очаговой алопеции, серонегативной артропатии, артропатии, болезни Рейтера, псориатической артропатии, связанной с язвенным колитом артропатии, энтеропатического синовита, связанной с хламидиями, иерсиниями и сальмонеллами артропатии, спондилоартропатии, атероматозного заболевания/артериосклероза, атопической аллергии, аутоиммунного буллезного заболевания, пемфигуса обыкновенного, листовидного пемфигуса, пемфигоида, болезни линейных IgA, аутоиммунной гемолитической анемии, Кумбс-положительной гемолитической анемии, приобретенной перниционзой анемии, ювенильной перниционзой анемии, миалгического энцефалита/ синдрома хронической усталости, хронического кожно-слизистого кандидоза, гигантоклеточного артериита, первичного склерозирующего гепатита, криптогенного аутоиммунного гепатита, синдрома приобретенного иммунодефицита, связанных с приобретенным иммунодефицитом заболеваний, гепатита В, гепатита С, вариабельного неклассифицируемого иммунодефицита (вариабельной неклассифицируемой гипогаммаглобулинемии), кардиомиопатии с дилятацией, женского бесплодия, недостаточности яичников, преждевременного угасания функции яичников, фиброзного
19
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) заболевания легких, криптогенного фиброзного альвеолита, поствоспалительного интерстициального заболевания легких, интерстициального пневмонита, связанного с болезнью соединительной ткани интерстициального заболевания легких, связанного со смешанной болезнью соединительной ткани заболевания легких, связанного с системной склеродермией заболевания легких, связанного с ревматоидным артритом интерстициального заболевания легких, связанного с системной красной волчанкой заболевания легких, связанного с дерматомиозитом/полимиозитом заболевания легких, связанного с болезнью Шегрена заболевания легких, связанного с анкилозирующим спондилитом заболевания легких, васкулитного диффузного заболевания легких, связанного с гемосидерозом заболевания легких, индуцированного лекарственным средством интерстициального заболевания легких, фиброза, связанного с радиацией фиброза, облитерирующего бронхиолита, хронической эозинофильной пневмонии, заболевания легких с инфильтрацией лимфоцитов, постинфекционного интерстициального заболевания легких, подагрического артрита, аутоиммунного гепатита, аутоиммунного гепатита I типа (классического аутоиммунного или люпоидного гепатита), аутоиммунного гепатита II типа (гепатита, связанного с антителом против LKM), опосредуемой аутоиммунным заболеванием гипогликемии, устойчивости к инсулину типа В с акантокератодермией, гипопаратиреоза, острого иммунного заболевания, связанного с трансплантацией органа, хронического иммунного заболевания, связанного с трансплантацией органа, остеоартроза, первичного склерозирующего холангита, псориаза I типа, псориаза II типа, идиопатической лейкопении, аутоиммунной нейтропении, NOS-болезни почек, гломерулонефрита, микроскопического васкулита почек, болезни Лайма, дискоидной красной волчанки, идиопатического или NOS-мужского бесплодия, аутоиммунитета к сперматозоидам, рассеянного склероза (все подтипы), симпатической офтальмии, легочной гипертензии, вторичной для болезни соединительной ткани, синдрома Гудпасчера, легочного проявления
20
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) узелкового полиартериита, острой ревматической атаки, ревматоидного спондилита, болезни Стилла, системной склеродермии, синдрома Шенгрена, болезни/артериита Такаясу, аутоиммунной тромбоцитопении, идиопатической тромбоцитопении, аутоиммунного заболевания щитовидной железы, гипертиреоидизма, зобного аутоиммунного гипотиреоза (болезнь Хашимото), атрофического аутоиммунного гипотиреоза, первичной микседемы, факогенного увеита, первичного васкулита, витилиго, острого заболевания печени, хронического заболевания печени, алкогольного цирроза, индуцированного алкоголем повреждения печени, холестаза, идиосинкразического заболевания печени, индуцированного лекарственным средством гепатита, неалкогольного стеатогепатита, аллергии и астмы, стрептококковой инфекции группы В (GBS), психических расстройств (включая депрессию и шизофрению), опосредуемых типом Th2 и типом ТЫ заболеваний, острой и хронической боли (различные формы боли), и злокачественных опухолей, таких как рак легкого, молочной железы, желудка, мочевого пузыря, толстого кишечника, поджелудочной железы, яичника, предстательной железы и прямой кишки и гемопоэтические злокачественные опухоли (лейкоз и лимфома), абеталипопротеинемии, акроцианоза, острых и хронических паразитарных и инфекционных процессов, острого лейкоза, острого лимфобластного лейкоза, острого миелоидного лейкоза, острой или хронической бактериальной инфекции, острого панкреатита, острой почечной недостаточности, аденокарцином, эктопической систолы предсердий, СГШД-дементного комплекса, индуцированного алкоголем гепатита, аллергического конъюнктивита, аллергического контактного дерматита, аллергического ринита, отторжения аллотрансплантата, дефицита альфа- 1 -антитрипсина, бокового амиотрофическего склероза, анемии, стенокардии, дегенерации клеток передних рогов спинного мозга, терапию против CD3, антифосфолипидного синдрома, реакций гиперчувствительности против рецепторов, аортальных и периферических аневризм, расслоения аорты, артериальной гипертензии,
21
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) артериосклероза, артериовенозного свища, атаксии, фибрилляции предсердий (постоянной или пароксизмальной), трепетания предсердий, атриовентрикулярной блокады, В-клеточной лимфомы, отторжения трансплантата кости, отторжения трансплантата костного мозга (ВМТ), блокады пучка Гиса, лимфомы Беркитта, ожогов, аритмий сердца, синдрома оглушения сердца, опухолей сердца, кардиомиопатии, воспалительных ответов на искусственное кровообращение, отторжения трансплантата хряща, дегенерации коры головного мозга, нарушений мозжечка, хаотической или многоочаговой тахикардии предсердий, связанных с химиотерапией нарушений, хронического миелоцитарного лейкоза (CML), хронического алкоголизма, хронических воспалительных патологий, хронического лимфоцитарного лейкоза (CLL), хронического обструктивного заболевания легких, хронической интоксикации салицилатами, карциномы ободочной и прямой кишки, застойной сердечной недостаточности, конъюнктивита, контактного дерматита, легочного сердца, болезни коронарных артерий, болезни Крейтцфельда-Якоба, культурально- негативного сепсиса, кистозного фиброза, связанных с цитокиновой терапией нарушений, деменции боксеров, демиелинизирующих заболеваний, геморрагической лихорадки денге, дерматита, дерматологических состояний, диабета, сахарного диабета, диабетического атеросклеротического заболевания, диффузного заболевания с тельцами Леви, застойной кардиомиопатии с дилятацией, нарушений базальных ганглиев, синдрома Дауна в среднем возрасте, двигательных нарушений, индуцированных лекарственным средством, которое блокирует дофаминовые рецепторы ЦНС, чувствительности к лекарственным средствам, экземы, энцефаломиелита, эндокардита, эндокринопатии, эпиглоттита, инфекции вирусом Эпштейна- Барр, эритромелалгии, экстрапирамидальных и мозжечковых нарушений, семейного гематофагоцитарного лимфогистиоцитоза, отторжения имплантата эмбрионального тимуса, наследственной атаксии Фридрейха, функциональных нарушений периферических артерий, грибкового сепсиса,
22
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) газовой гангрены, язвы желудка, гломерулонефрита, отторжения трансплантата любого органа или ткани, грамотрицательного сепсиса, грамположительного сепсиса, гранулем вследствие внутриклеточных организмов, волосатоклеточного лейкоза, болезни Галлервордена-Шпатца, тиреоидита Хашимото, сенной лихорадки, отторжения трансплантата сердца, гемахроматоза, гемодиализа, гемолитическоого уремического синдрома/тромболитической тромбоцитопенической пурпуры, кровопотери, гепатита (А), аритмий пучка Гиса, ВИЧ-инфекции/ВИЧ-невропатии, болезни Ходжкина, гиперкинетических двигательных нарушений, реакций гиперчувствительности, связанного с гиперчувствительностью пневмонита, гипертензии, гипокинетических двигательных нарушений, обследования гипоталамо-гипофизарно-надпочечниковой системы, идиопатической болезни Аддисона, идиопатическоого фиброза легких, опосредуемой антителами цитотоксичности, астении, младенческой спинальной мышечной атрофии, воспаления аорты, вируса гриппа а, облучения ионизирующей радиацией, иридоциклита/увеита/оптического неврита, повреждения при ишемии-реперфузии, ишемического инсульта, ювенильного ревматоидного артрита, ювенильной спинальной мышечной атрофии, саркомы Капоши, отторжения трансплантата почки, легионеллеза, лейшманиоза, лепры, повреждений кортикоспинальной системы, жирового отека, отторжения трансплантата печени, лимфатического отека, малярии, злокачественной лимфомы, злокачественного гистиоцитоза, злокачественной меланомы, менингита, менингококкемии, метаболических/идиопатических заболеваний, мигрени, митохондриального полисистемного нарушения, смешанной болезни соединительной ткани, моноклональной гаммапатии, множественной миеломы, полисистемной дегенерации (Менцеля, Дежерина- Тома, Шая-Дрейджера и Мачадо-Джозефа), миастении, внутриклеточных Mycobacterium avium, Mycobacterium tuberculosis, миелодиспластического синдрома, инфаркта миокарда, ишемических нарушений миокарда, карциномы носоглотки, хронического заболевания легких новорожденных,
23
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) нефрита, нефроза, нейродегенеративных заболеваний, нейрогенных мышечных атрофий I, нейтропенической лихорадки, неходжкинских лимфом, окклюзии брюшного отдела аорты и ее ветвей, окклюзионных нарушений артерий, терапии ОКТЗ®, орхита/эпидидимита, орхита/возвратных процедур после вазэктомии, органомегалии, остеопороза, отторжения трансплантата поджелудочной железы, карциномы поджелудочной железы, паранеопластического синдрома/гиперкальцемии при злокачественной опухоли, отторжения трансплантата паращитовидной железы, воспалительного заболевания органов таза, круглогодичного ринита, заболевания перикарда, периферического артериосклеротического заболевания, периферических сосудистых нарушений, перитонита, пернициозной анемии, пневмонии Pneumocystis carinii, пневмонии, синдрома POEMS (полиневропатия, органомегалия, эндокринопатия, моноклональная гаммапатия и синдром кожных изменений), постперфузионного синдрома, синдрома после искусственного кровообращения, посткардиотомного синдрома после инфаркта миокарда, преэклампсии, прогрессирующего супрануклеарного паралича, первичной гипертензии легких, лучевой терапии, феномена и болезни Рейно, болезни Рейно, болезни Рефсума, регулярной тахикардии с узким комплексом QRS, вазоренальной гипертензии, реперфузионного повреждения, рестриктивной кардиомиопатии, сарком, склеродермии, сенильной хореи, сенильной деменции с тельцами Леви, серонегативных артропатий, шока, серповидноклеточной анемии, отторжения аллотрансплантата кожи, синдрома кожных изменений, отторжения трансплантата тонкого кишечника, солидных опухолей, специфических аритмий, спинальной атаксии, спиномозжечковых дегенераций, стрептококкового миозита, структурных повреждений мозжечка, подострого склерозирующего панэнцефалита, обмороков, сифилиса сердечно-сосудистой системы, системной анафилаксии, синдрома системного воспалительного ответа, ювенильного ревматоидного артрита с системным началом, Т-клеточного или FAB ALL, телеангиэктазии,
24
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) облитерирующего тромбоангита, тромбоцитопении, токсичности, трансплантации, травмы/кровопотери, реакций гиперчувствительности типа III, гиперчувствительности типа IV, нестабильной стенокардии, уремии, уросепсиса, крапивницы, заболеваний клапанов сердца, варикоза вен, васкулита, заболеваний вен, венозного тромбоза, фибрилляции желудочков, вирусных и грибковых инфекций, энцефалита с высоким риском смертельного исхода/асептического менингита, гемофагоцитарного синдрома с высоким риском смертельного исхода, синдрома Вернике-Корсакова, болезни Вилсона, отторжения ксенотрансплантата любого органа или ткани, острого коронарного синдрома, острого идиопатического полиневрита, острой воспалительной демиелинизирующей полирадикулоневропатии, острой ишемии, болезни Стилла взрослых, очаговой алопеции, анафилаксии, синдрома антифосфолипидных антител, апластической анемии, артериосклероза, атопической экземы, атопического дерматита, аутоиммунного дерматита, аутоиммунного нарушения, связанного со стрептококковой инфекцией, аутоиммунной энтеропатии, аутоиммунной потери слуха, аутоиммунного лимфопролиферативного синдрома, аутоиммунного миокардита, аутоиммунного преждевременного угасания функции яичников, блефарита, бронхоэктазов, буллезного пемфигоида, сердечно-сосудистого заболевания, катастрофического антифосфолипидного синдрома, глютеиновой болезни, шейного спондилеза, хронической ишемии, рубцового пемфигоида, клинически изолированного синдрома (cis) с риском рассеянного склероза, конъюнктивита, психиатрического нарушения с началом в детском возрасте, хронического обструктивного заболевания легких, дакриоцистита, дерматомиозита, диабетической ретинопатии, сахарного диабета, грыжи межпозвоночного диска, пролапса межпозвоночного диска, индуцированной лекарственным средством иммунной гемолитической анемии, эндокардита, эндометриоза, эндофтальмита, эписклерита, полиформной эритемы, тяжелой полиформной эритемы, гестационного пемфигоида, синдрома Гийена-Барре,сенной
25
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) лихорадки, синдрома Хьюза, идиопатической болезни Паркинсона, идиопатической интерстициальной пневмонии, опосредуемой IgE аллергии, иммунной гемолитической анемии, миозита с тельцами включения, инфекционного воспалительного заболевания глаз, воспалительного демиелинизирующего заболевания, воспалительного заболевания сердца, воспалительного заболевания почек, идиопатического пневмосклероза/ йдиопатического легочного фиброза, ирита, кератита, сухого кератоконъюнктивита, болезни Куссмауля или болезни Куссмауля-Мейера, паралича Ландри, гистиоцитоза клеток Лангерганса, синдрома мраморной кожи, дегенерации желтого пятна, микроскопического полиангиита, болезни Бехтерева, нарушений двигательных нейронов, пемфигоида слизистых оболочек, полиорганной недостаточности, миастении, миелодиспластического синдрома, миокардита, нарушений корешков нервов, невропатии, не-А не-В гепатита, оптического неврита, остеолизиса, рака яичника, олигоартикулярного ювенильного ревматоидного артрита, окклюзионого заболевания периферических артерий, заболевания периферических сосудов, заболевания периферических артерий (PAD), флебита, узелкового полиартериита (или нодозного полиартериита), полихондрита, ревматической полимиалгии, полиоза, полиартикулярного ювенильного ревматоидного артрита, синдрома полиэндокринной недостаточности, полимиозита, ревматической полимиалгии (PM ), синдрома после искусственного кровообращения, первичного паркинсонизма, рака предстательной железы и прямой кишки и гемопоэтических злокачественных опухолей (лейкоз и лимфому), простатита, истинной эритроцитарной аплазии, первичной недостаточности надпочечников, рецидивирующего оптического нейромиелита, рестеноза, ревматической болезни сердца, SAPHO (синовит, акне, пустулез, гиперостоз и остеит), склеродермии, вторичного амилоидоза, шокового легкого, склерита, ишиаса, вторичной недостаточности надпочечников, связанного с кремнийорганичёскими соединениями заболевания соединительных тканей,
26
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) дерматоза Снеддона-Уилкинсона, анкилозирующего спондилита, синдрома Стивенса-Джонсона, синдрома системного воспалительного ответа, височного артериита, токсоплазменного ретинита, токсического эпидермального некролиза, поперечного миелита, TRAPS (связанный с рецептором фактора некроза опухоли периодический синдром), аллергической реакции I типа, диабета типа II, крапивницы, обычной интерстициальной пневмонии, васкулита, весеннего конъюнктивита, вирусного ретинита, синдрома Фогта-Коянаги-Харада (синдром VKH), влажной дегенерации желтого пятна, заживления ран и связанной с иерсиниями и сальмонеллами артропатии.
Подробное описание антител
[035] Согласно настоящему изобретению, предложены антитела или их фрагменты, специфически связывающиеся с IL-17A, при этом вариабельный домен тяжелой цепи (VH) антитела содержит 3 гипервариабельных участка HCDR1, HCDR2 и HCDR3:
Гипервариабельный участок HCDR1 включает последовательность SEQ NO: l ;
Гипервариабельный участок HCDR2 включает SEQ ID: NO 2, и
Гипервариабельный участок HCDR3 включает SEQ ID NO: 3, и
И 3 гипервариабельных участка LCDR1, LCDR2 и LCDR3 :
Гипервариабельный участок LCDR1 включает SEQ ID NO: 4,
Гипервариабельный участок LCDR2 включает SEQ ID NO: 5 и
Гипервариабельный участок LCDR3 включает SEQ ID NO: 6 в вариабельных областях легких цепей (VL).
[036] В предпочтительных вариантах реализации изобретения антитело представляет собой выделенное моноклональное антитело или его фрагмент,
27
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) содержащий вариабельные домены тяжелой цепи VH и легкой, цепи VL, где указанное антитело или фрагмент содержит:
HCDR1 , включающий последовательность F-T-F-S-N-Y-A-M-S (SEQ ID NO: 7);
HCDR2, включающий последовательность R-I-E-G-G-I-S-S-T-Y (SEQ ID NO: 8);
HCDR3, включающий последовательность C-A-V-N-Y-Y-G-M-Y-Y (SEQ ID NO.- 9);
а вариабельная область легкой цепи VL содержит:
LCDR1 , включающий последовательность T-G-T-S-E-D-V-G-F-G-N-Y (SEQ ID NO: 10);
LCDR2, включающий последовательность R-V-N-T-R-P-S (SEQ ID NO:
И)
LCDR3, включающий последовательность C-S-S-Y-K-A-G-G-T-Y
(SEQ ID NO: 12).
[037] Еще в одном предпочтительном варианте реализации изобретения антитело представляет собой выделенное моноклональное антитело, специфически связывающееся с IL-17A человека, или его фрагмент, содержащий вариабельные домены тяжелой цепи (VH) и легкой цепи (VL), где указанное антитело или его активный фрагмент содержит по меньшей мере один вариабельный домен, включающий:
а) вариабельный домен тяжелой цепи (VH) антитела, который включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 13.
б) вариабельный домен легкой цепи (VL) антитела, который включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 14.
[038] Также антитело может содержать аминокислотную последовательность тяжелой цепи, идентичную SEQ ID NO: 15. Еще в одном
28
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) варианте реализации антитело содержит легкую цепь с аминокислотной последовательностью, идентичной SEQ ID NO: 16.
[039] Также антитела согласно настоящему изобретению могут содержать дополнительные мутации M252Y/S254T/T256E, N434W, N434A, N434F, H433K/N434F/Y436H, H433K/N434F/Y436H+M252Y/S254T/T256E, T307A/E380A/N434A, T250Q/M428L. Указанные замены не приводят к потере способности антитела связывать IL-17A, но могут приводить к снижению ADCC (антитело-зависимой клеточно-опосредованной цитотоксичности) или увеличению аффинности или других биологических свойств антител.
[040] Антитела согласно настоящему изобретению обладают улучшенными биологическими свойствами, в частности, лучшей ингибирующей способностью (IC50) в отношении IL-17A и повышенной агрегационной стабильностью.
[041] Также, согласно изобретению предложена конструкция ДНК, кодирующая описанные антитела, а также экспрессионный вектор, содержащий указанную конструкцию ДНК, для получения антител согласно изобретению.
[042] Кроме того, предложена клеточная линия, содержащая в' клетках экспрессионный вектор с ДНК, описанной выше, которая может быть использована в качестве продуцента антитела согласно данному изобретению.
29
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) Фармацевтические композиции
[043] Антитело по изобретению может быть включено в фармацевтическую композицию, пригодную для введения пациенту (см., Пример 14). Антитела по изобретению могут быть введены отдельно или в комбинации с фармацевтически приемлемым носителем, разбавителем и/или наполнителем в однократных или многократных дозах. Фармацевтические композиции для введения разработаны таким образом, чтобы соответствовать выбранному режиму введения, а фармацевтически приемлемые разбавители, носители и/или наполнители, такие как диспергирующие агенты, буфера, поверхностноактивные вещества, консерванты, солюбилизирующие агенты, изотонические агенты, стабилизаторы и т.п. использованы должным образом (см. пример 14). Указанные композиции разработаны в соответствии с традиционными методами, приведенными в, например, Remington, The Science and Practice of Pharmacy, 19th Edition, Gennaro, Ed., Mack Publishing Co., Easton, PA 1995, где описаны различные методы получения композиций, в общем известных специалистам.
[044] Фармацевтическая композиция, содержащая анти-1Ь-17 моноклональное антитело по изобретению, может быть введена пациенту, имеющему риск развития или имеющему патологии, как описано в данной заявке, с использованием стандартных методов введения, включая пероральное, внутривенное, интраперитонеальное, подкожное, легочное, трансдермальное, внутримышечное, интраназальное, буккальное, сублингвальное или при помощи суппозиториев.
[045] Фармацевтическая композиция по изобретению предпочтительно содержит или является "терапевтически эффективным количеством" зо
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) антитела по изобретению. "Терапевтически эффективное количество" относится к количеству, эффективному при дозировках и на протяжении периодов времени, необходимого для достижения желаемого терапевтического результата. Терапевтически эффективное количество антитела может варьироваться в зависимости от таких факторов, как состояние болезни, возраст, пол и вес индивидуума, и способности антитела или части антитела вызывать желательную реакцию у индивидуума. Терапевтически эффективное количество также представляет собой количество, при котором терапевтически полезный эффект антитела преобладает над токсическим или вредным эффектом. "Профилактически эффективное количество" относится к количеству, эффективному при дозировках и на протяжении периодов времени, необходимых для достижения желательного профилактического результата. Поскольку профилактическую дозу используют для индивидуумов до или на ранней стадии заболевания, то, типично, профилактически эффективное количество может быть меньшим, чем терапевтически эффективное количество.
[046] Терапевтически эффективное или профилактически эффективное количество представляет собой, по крайней мере, минимальную дозу, но меньшую, чем токсическая доза активного агента, необходимую для обеспечения терапевтической пользы пациенту. С другой стороны, терапевтически эффективное количество антитела по изобретению представляет собой количество, которое у млекопитающих, предпочтительно людей, снижает биологическую активность IL-17, например связывание IL17R, где присутствие IL-17 вызывает или способствует нежелательным патологическим эффектам, или снижение уровней IL-17 вызывает благоприятный терапевтический эффект у млекопитающего, предпочтительно человека.
31
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) [047] Путь введения антитела по изобретению может быть пероральным, парентеральным, путем ингаляции или местным. Предпочтительно антитела по изобретению могут быть включены в фармацевтическую композицию, пригодную для парентерального введения. Термин "парентеральный", как используется в данной заявке, включает внутривенное, внутримышечное, подкожное, ректальное, вагинальное или интраперитонеальное введение. Преимущественным является введение путем внутривенной или интраперитонеальной, или подкожной инъекции. Подходящие носители для таких инъекций непосредственно известны из уровня техники.
[048] Фармацевтическая композиция, как указано в соответствующих руководствах, должна быть стерильной и стабильной в условиях производства и хранения в контейнере, который обеспечивается, включая, например, герметично закрытый флакон (ампула) или шприц. Поэтому фармацевтические композиции могут быть стерильно профильтрованными после получения состава либо сделаны микробиологически пригодными иным образом. Типичная композиция для внутривенной инфузии может иметь объем в 250-1000 мл жидкости, такой как стерильный раствор Рингера, физиологический раствор, раствор декстрозы и раствор Хенка, и терапевтически эффективную дозу (например, 1 -100 мг/мл или более) концентрации антитела. Доза может варьировать в зависимости от вида и тяжести заболевания. Как хорошо известно из уровня техники в области медицины, дозировки для любого из пациентов зависят от многих факторов, включая размеры пациента, площадь поверхности тела, возраст, конкретное соединение, предназначенное для введения, пол, время и путь введения, общее состояние здоровья и другие лекарства, которые вводят одновременно. Типичная доза может находиться, например, в диапазоне 0,001 - 1000 мкг; однако, предвидятся дозы, находящиеся ниже или выше этого иллюстративного диапазона, особенно учитывая вышеуказанные факторы.
32
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) Режим дозировок ежедневного парентерального введения может составлять от 0,1 мкг/кг до 100 мг/кг от общей массы тела, предпочтительно от 0,3 мкг/кг до 10 мг/кг и более предпочтительно от 1 мкг/кг до 1 мг/кг, даже более предпочтительно от 0,5 до 10 мг/кг массы тела в день. Процесс лечения можно контролировать путем периодической оценки состояния пациента. Для повторного введения в течение нескольких дней или дольше в зависимости от состояния пациента лечение повторяют до достижения желаемого ответа или подавления симптомов болезни. Однако также могут применяться другие режимы дозировок, которые не описаны в данной заявке. Желаемая дозировка может быть введена путем одноболюсного введения, множественных болюсных введений или путем непрерывного инфузионного введения антитела в зависимости от образца фармакокинетического распада, которого хочет достигнуть практикующий специалист.
[049] Эти предположительные количества антитела в сильной степени зависят от решения терапевта. Ключевым фактором выбора соответствующей дозы и режима является желаемый результат. Факторы, рассматриваемые в данном контексте, включают конкретное заболевание, которое лечат, конкретное млекопитающее, которое лечат, клиническое состояние отдельного пациента, причину расстройства, место введения антитела, конкретный вид антитела, способ введения, режим введения и остальные факторы, известные практикующим специалистам-медикам.
[050] Терапевтические агенты по изобретению могут быть заморожены либо лиофилизированы и восстановлены перед применением в подходящем стерильном носителе. Лиофилизирование и восстановление могут приводить к различным степеням потери активности антитела. Дозировки могут быть скореектированы для компенсации этой потери. В общем случае, преимущественными являются значения рН фармацевтической композиции от 6 до 8 .
зз
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) Готовые изделия
[051] В другом из вариантов осуществления по изобретению обеспечивается готовое изделие, содержащее материалы, полезные для лечения или профилактики расстройств или состояний, описанных выше.
[052] Готовое изделие содержит контейнер, содержащий фармацевтическую композицию с антителом, с обозначением и возможно инструкцию. Подходящие контейнеры включают, например, флаконы, ампулы, шприцы и аналитические пробирки. Контейнеры могут быть сделаны из ряда материалов, таких как стекло или полимерный материал. Контейнер содержит композицию согласно изобретению, которая является эффективной для лечения заболевания или нарушения, опосредованного IL- 17А, и может иметь выход со стерильным доступом (например, контейнер может быть пакетом для внутривенного раствора или флаконом, имеющим пробку, проницаемую для гиподермальной иглы для инъекций). Активный агент в композиции является анти-1Ь-17-антителом согласно изобретению. Обозначение на контейнере и инструкция, присоединенная к нему, указывает на то, что композицию применяют для лечения выбранного заболевания. Готовое изделие может дополнительно содержать второй контейнер, содержащий фармацевтически приемлемый буфер, такой как фосфатно- буферный раствор, раствор Рингера и раствор декстрана. Он может дополнительно включать другие материалы, желательные с коммерческой и потребительской точки зрения, включая другие буферы, разбавители, фильтры, иглы, шприцы и вкладыши в упаковку с инструкциями по применению.
[053] Следующие примеры приведены только в иллюстративных целях и не предназначены для ограничения области данного изобретения.
34
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) Примеры
Пример 1
Продукция рекомбинантных антигенов и антител в суспензионной культуре клеток млекопитающих
[054] Антитела и антигены продуцировали в клетках постоянной клеточной линии, полученной из клеток яичника китайского хомячка (линия СНО-К1 ), согласно опубликованным протоколам [Biotechnol Bioeng. 2005 Sep 20; 91(6):670-677, Liao Metal., 2004; Biotechnol Lett. 2006 Jun;28(l 1):843- 848; Biotechnol Bioeng. 2003 Nov 5;84(3):332-342]. Использовали клетки, конститутивно экспрессирующие ген белка EBNA1 (Epstein-Barrvirus nuclear antigen 1). Суспензионное культивирование осуществляли в колбах на орбитальном шейкере, с использованием бессывороточных сред производства компании Life Technologies Corporation и согласно инструкциям производителя. Для транзиентной экспрессии клетки в концентрации 2* 106/мл трансфецировали с помощью линейного полиэтиленимина (ПЭИ «МАХ», компания «Polysciences»). Соотношение ДНК/ПЭИ составляло 1 :3-1 : 10. Через 5-7 дней после трансфекции культуральную среду центрифугировали при 2000g в течение 20 минут и фильтровали через фильтр с размером пор 0,22 мкм. Целевые белки выделяли из культуральной жидкости с помощью аффинной хроматографии.
[055] Рекомбинантный белок IL-17A, содержащий шесть аминокислот His на С-конце белка, выделили и очистили из культуральной жидкости, используя смолу Profmity IMAC Ni-charged (от компании Bio-Rad). До очистки в культуральную жидкость добавили NiCl2 до концентрации 1мМ. Далее добавили в культуральную жидкость 5 мл смолы Profmity IMAC Ni- charged и перемешивали на качалке 1 час при комнатной температуре.
35
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) Перенесли сорбент на колонку Thermo scientific Polypropylene columns объемом 5 мл, промыли 5 колоночными объемами ФСБ, чтобы вымыть неспецифически связывающие компоненты. Связанный антиген элюировали, используя 0,3 М имидазол, рН 8, 150мМ NaCl. Далее белок перевели в ФСБ (рН 7,4) с помощью диализа, используя технологию SnakeSkin Dialysis Tubing, профильтровали (0,22 мкм), перенесли в пробирки и хранили при - 70°С. Чистоту полученного раствора белка оценивали с помощью SDS-гель- электрофореза (Фиг.1).
[056] Рекомбинантный белок IL-17A-Fc из культуральной жидкости выделили и очистили, используя колонку для аффинной хроматографии протеин А. Осветленную культуральную жидкость пропускали через колонку HiTrap rProtein A Sepharose FF объемом 5 мл (GE Healthcare), которая была уравновешена фосфатно-солевым буфером (ФСБ, рН 7,4). Затем колонку промыли 5 колоночными объемами ФСБ, чтобы вымыть неспецифически связывающие компоненты. Связанный антиген элюировали, используя 0,1 М глициновый буфер рН 3. Главный протеиновый пик элюции собрали и довели его рН до нейтральности с помощью 1 М буфера Tris (рН 8). Все стадии проводили при скорости потока ПО см/ч. Далее белок перевели в ФСБ (рН 7,4) с помощью диализа, используя технологию SnakeSkin Dialysis Tubing, профильтровали (0,22 мкм), перенесли в пробирки и хранили при -70°С. Чистоту полученного раствора белка оценили с помощью SDS-гель- электрофореза (Фиг.2).
[057] Антитела IgGl очищали на колонке Hi Trap rProteinA FF объемом 1 мл (GE Healthcare) согласно методике, описанной выше для антигена IL- 17A-Fc. Чистоту полученного раствора белка оценивали с помощью SDS- гель-электрофореза (Фиг.З).
36
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) Пример 2
Иммунизация ламы IL-17A человека и создание Fab библиотеки фаговых антител ламы
[058] Животное Lama Glama последовательно иммунизировали 5 раз путем подкожного введения антигенного материала, смешанного с равным объемом полного (в при первой инъекции) или неполного (при остальных инъекциях) адъюванта Фрейнда. В качестве антигена использовали смесь рекомбинантных белков (по 0,2 мг каждого из белков на 1 инъекцию), одним из которых был человеческий IL-17A (набор от R&D Systems). Вторую инъекцию (стадию иммунизации) проводили через 3 недели после первой, затем с интервалом в две недели проводили еще три иммунизации. Взятие крови (50 мл) проводили через 5 дней после каждой инъекции, начиная с третьей.
[059] Кровь разводили в 2 раза раствором ФСБ, содержащим 1 мМ ЭДТА. 35 мл разбавленного раствора крови наслаивали на среду Histopaque® -1077 (от Sigma) с плотностью 1 ,077 г/мл объемом 15 мл и проводили центрифугирование в течение 20 мин при 800g. Мононуклеарные клетки (лимфоциты и моноциты) отбирали из интерфазной зоны плазма/среда Histopaque, после чего промывали раствором ФСБ, содержащим 1 мМ ЭДТА.
[060] Суммарную РНК мононуклеарных клеток ламы выделяли с помощью набора RNeasy Mini Kit согласно предлагаемому протоколу (QIAGEN). Концентрацию РНК определяли с помощью Nanovue (GE Healthcare) и проверяли качество выделенной РНК с помощью электрофореза в 1 ,5%-ном агарозном геле.
[061] Реакцию обратной транскрипции проводили с использованием набора MMLV RT kit (от Evrogen) согласно рекомендуемому протоколу с
37
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) использованием обратной транскриптазы MMuLV и рандом-гексамерных олигонуклеотидов в качестве затравки.
[062] Продукты обратной транскрипции использовали в качестве матрицы в двухступенчатой полимеразной цепной реакции для получения генов вариабельных доменов, фланкированных сайтами рестрикции, с использованием набора олигонуклеотидов и протоколам авторов [J Biol Chem. 1999 Jun 25; 274(26): 18218-30; WO 2010/001251]. Далее, соединение генов вариабельных доменов легких и тяжелых цепей в один фрагмент проводили путем последовательных реакций рестрикции, лигирования и амплификации, согласно схеме, приведенной на Рис 1. Гены тяжелых цепей соединяли с генами каппа и отдельно с генами лямбда легких цепей. При этом расчетное количество молекул матрицы во всех реакциях составляло не менее 10п . Полученный ДНК препарат VL-CK-VH обрабатывали рестриктазами Nhel /Есо911 и лигировали в оригинальную фагмиду рН 5. Строение фагмиды показано на Фиг. 2. Продукты лигирования трансформировали в электрокомпетентные клетки щтамма SS320, приготовленные согласно протоколам [Methods Enzymol. 2000; 328: 333-63].
о
Репертуар производной каппа Fab библиотеки составил 5,1 * 10 и лямбда 3,7* 10 , соответственно. Препарат фага наивных библиотек был приготовлен согласно процедуре, описанной ранее [J Mol Biol. 1991 Dec 5;222(3):581-97].
Пример 3
Селекция Fab-библиотек фаговых антител
[063] Специфичные анти-1 7А фаговые Fab-антитела выделяли из фаговой Fab-дисплейной библиотеки на рекомбинантном IL- 17A человека (набор от R&D Systems), осуществляя серии циклов селекции, как описано ранее (J Biol Chem. 1999 Jun 25; 274(26): 18218-30; Nat Biotechnol. 1996 Mar; 14(3):309-14; J Mol Biol.1991 Dec 5;222(3): 581-97). Для осуществления
38
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) селекции методом пэннинга, IL-17A человека в 50 мМ карбонатном буфере (рН 9,5) адсорбировали в течение ночи при 4°С на поверхности сорбирующих пробирок HighSorb (Nunc). Пробирки промывали ФСБ (рН 7,4), затем блокировали раствором ФСБ (рН 7,4) - обезжиренное молоко (0,5% мас./об.) в течение 1 ч. Далее, 2-4 мл раствора фагов в ФСБ (рН 7,4) - обезжиренное молоко (0,5% мас./об.), в концентрации 10 фаговых частиц на мл добавляли в пробирку с антигеном и инкубировали в течение 1 ч при перемешивании. Несвязавшиеся фаги удаляли в ходе серий циклов промывки с использованием раствора ФСБ (рН 7,4) -Твин 20 (0, 1% об./об.). Количество отмывок увеличивали от первого раунда к треьему раунду 20-30-40 раз, соответственно. Оставшиеся связанными фаговые частицы элюировали 100 мМ раствором Gly-HCl (рН 2,5) в течении 15 мин при перемешивании, затем нейтрализовали 1 М TRIS-HC1 (рН 7.6). Бактерии штамма Е. coli TG1 инфицировали полученными фагами, затем фаги выделяли и использовали в следующем цикле селекции.
Пример 4
Конструирование библиотек химерных Fab фаговых антител
[064] Суммарную РНК В-лимфоцитов из крови пятисот пятидесяти человеческих доноров выделяли с помощью набора RNeasy Mini Kit согласно предлагаемому протоколу (от QIAGEN). Концентрацию РНК определяли с помощью набора Nanovue (от GE Healthcare) и проверяли качество выделенной РНК с помощью электрофореза в 1 ,5%-ном агарозном геле.
Реакцию обратной транскрипции проводили с использованием набора MMLV RT kit (от Evrogen) согласно рекомендуемому протоколу с использованием обратной транскриптазы MMuLV и рандо -гексамерных олигонуклеотидов в качестве затравки.
39
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) [065] Продукты обратной транскрипции использовали в качестве матрицы в двухступенчатой полимеразной цепной реакции для получения генов вариабельных доменов, фланкированных сайтами рестрикции, с использованием набора олигонуклеотидов и протоколам авторов [J Biol Chem. 1999 Jun 25; 274(26): 18218-30]. Создание химерных Fab, специфичных против IL-17A, проводили согласно технологии, описанной в международной публикации WO93/06213, на основе оригинальной фагмиды рН5, описанной выше. Для этого, соединение генов вариабельных доменов легких цепей доноров человека с геном вариабельного домена тяжелой цепи антитела А1 ламы в один фрагмент проводили путем последовательных реакций рестрикции, лигирования и амплификации, согласно схеме, приведенной на Фиг. 6А. Аналогично, соединение гена вариабельного домена легкой цепи антитела клона А1 ламы с генами вариабельных доменов тяжелых цепей доноров человека с геном вариабельного домена тяжелой цепи антитела клона А 1 ламы в один фрагмент проводили путем последовательных реакций рестрикции, лигирования и амплификации, согласно схеме, приведенной на Фиг. 6В. При этом расчетное количество молекул матрицы генов вариабельных доменов человека во всех реакциях составляло не менее 1012. Полученный ДНК препарат VL-CK-VH обрабатывали рестриктазами Nhel Есо9П и лидировали в оригинальную фагмиду рН5. Продукты лигирования трансформировали в электрокомпетентные клетки штамма SS320, приготовленные согласно протоколам [Methods Enzymol. 2000;328: 333-63.]. Репертуар химерной Fab-библиотеки chAlVH/hVL на основе тяжелой цепи клона А1 и смешанных каппа и лямбда цепей человека составил 2,8* 109 трансформантов. Репертуар химерной Fab-библиотек chAlVL/hVH на основе легкой цепи клона А1 и тяжелых цепей человека составил 1 ,1 * 1010. Препараты фага химерных Fab-библиотек были приготовлены согласно процедуре, описанной ранее [J Mol Biol. 1991 Dec 5;222(3): 581-97].
40
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) [066] Селекции полученных фаговых химерных Fab-библиотек проводили в условиях аналогичных, описанным выше (см. селекция фаговых Fab библиотек).
[067] После второго раунда селекции на IL-17A, обе библиотеки показали значительное обогащение. Результирующие пулы клонов обогащенных химерных Fab-библиотек были использованы в качестве источника для комбинации генов вариабельных доменов VH и VK/VL человека специфичных против IL-17A.
Пример 5
Конструирование библиотеки Fab фаговых антител человека, специфичных против IL-17A
[068] Для создания Fab-фаговых антител человека, специфичных против IL-17A, пулы клонов из обогащенных химерных Fab-библиотек были использованы в качестве источника для комбинации генов вариабельных доменов VH и УКУУЬчеловека, специфичных против IL- 17 А. Для этого гены легких цепей человека были амплифицированы со специфическими праймерами из обогащенной после второго раунда библиотеки chAlVH/hVL, а гены гены тяжелых цепей человека были амплифицированы со специфическими праймерами из обогащенной после второго раунда библиотеки chAlVL/hVH. Оба пула генов варибельных доменов цепей человека были комбинированы последовательно реакцией рестрикции с рестриктазой Sfil, лигирования и амплификации, согласно схеме, приведенной на Фиг. 7. Полученный ДНК препарат VL-CK-VH обрабатывали рестриктазами Nhel /Есо911 и лигировали в оригинальную фагмиду рН5. Продукты лигирования трансформировали в электрокомпетентные клетки щтамма SS320, приготовленные согласно протоколам [Methods Enzymol. 2000;328: 333-63]. Репертуар Fab-библиотеки
41
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) на основе тяжелых и легких цепей человека составил 8,6* 108. Препараты фага химерных Fab-библиотек былы приготовлены согласно процедуре, описанной ранее [Mol Biol. 1991 Dec 5;222(3): 581 -97].
[069] Селекции полученных фаговых химерных Fab-библиотек проводили в условиях аналогичных, описанным выше (см. селекция фаговых Fab-библиотек).
[070] После второго раунда селекции на IL-17A, проведенный ИФА анализ препарата поликлонального фага показал значительное обогащение. Результирующий пул клонов, обогащенных Fab человека, специфичных против IL-17A, был реклонирован в экспрессионную плазмиду.
Пример 6А
Анализ специфического связывания Fab с IL-17A-Fc человека
[071] ИФА (ELISA) используют для измерения связывания исследуемых Fab-фрагментов с IL-17A человека. В качестве позитивного контроля использовали Fab с опубликованной последовательностью AIN457 (от Novartis). Для анализа специфического связывания лунки планшетов ELISA (от Nunc ImmunoMaxisorp) покрывали 50 мкл (0,5 мкг/мл в IX покрывающем карбонатном буфере ) IL-17A-Fc, герметично закрывали и инкубировали в течение ночи при 4°С. Все последующие этапы проводили по стандартному ИФА протоколу с использованием высокопроизводительной автоматизированной платформы на базе роботизированных систем GenetixQ-pix2xt (от Molecular Device) и Тесап Freedom EVO 200 (от Тесап). Для блокирования неспецифического связывания добавляют блокирующий буфер ВВ (200 мкл 0,5% нежирного молока в ФСБ). Планшеты инкубировали на шейкере в течение часа при комнатной температуре. После отмывок ФСБ-Твином добавляли по 50 мкл
42
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) на лунку тестируемого клеточного супернатанта, содержащего исследуемый Fab, смешанного с равным объемом ВВ. Планшеты снова инкубировали, встряхивая, один час при комнатной температуре, после чего каждую лунку планшетов пять раз промывали буфером ФСБ-Твин. После промывания добавляли (50 мкл/лунку) анти-человеческого Fab HRP-конъюгированного вторичного антитела (от Pierce-Thermo Scientific) в соотношении 1 :5000 в ФСБ-Твин. Планшеты встряхивали на ротационном шейкере (50 мин, комнатная температура) и промывали пять раз буфером ФСБ-Твин, как описано выше. Колориметрический сигнал развивали добавлением ТМВ (100 мкл/лунку) до насыщения (в среднем 3-5 мин), затем дальнейшее развитие останавливали добавлением стопового раствора (100 мкл/лунку, 10% серная кислота). Цветовой сигнал измеряли при длине волны 450 нм, используя подходящий планшет-ридер Tecan-Sunrise (от Тесап). Степень связывания антитела была пропорциональна продуцированию цветового сигнала.
[072] Для примера приведены результаты ИФА скрининга с одного планшета Fab - ламы, после второго раунда селекции (Фиг. 8). На приведенной гистограмме можно видеть ряд позитивных клонов, давших сигнал выше или ниже контрольного Fab (AIN457) (отмечен красным) или вообще не взаимодействующих с иммобилизованным антигеном (значения в интервале 0,1-0,2 отн.ед.).
Пример 6Б
Конкурентный ИФА анализ блокирования взаимодействия IL17A лиганда и IL17R рецептора
[073] Конкурентный ИФА (ELISA) был использован для проверки антагонистической способности отобранных ранее специфичных Fab против IL-17A-Fc человека. В качестве позитивного контроля антагониста использовали Fab с опубликованной последовательностью AIN457 (от
43
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) Novartis). Рецептор IL-17RA-Fc (от R&D Systems) иммобилизовали в лунки планшетов ELISA (от Nunc Immuno Maxisorp) no 50 мкл с концентрацией 1 мкг/мл в IX покрывающем карбонатном буфере и инкубировали в течение ночи при 4°С. Все последующие этапы проводили по стандартным ИФА протоколам с использованием высокопроизводительной автоматизированной платформы на базе роботизированных систем GenetixQ-pix2xt (от Molecular Device) и Tecan FreedomEVO 200 (от Тесап). Для блокирования неспецифического связывания добавляли блокирующий буфер ВВ (200 мкл 0,5% нежирного молока в ФСБ). Планшеты инкубировали на шейкере в течение часа при комнатной температуре.
[074] Параллельно 50 мкл тестируемого клеточного супернатанта, содержащего исследуемый Fab, смешивали в несвязывающем 96-луночном планшете с 50 мкл IL- 17A-His6-Flag с концентрацией 0,4 мкг/мл в 1% молоке на ФСБ-Твин. Инкубировали 1 час при 37°С и шейкинге при 500 об/мин.
[075] После отмывок от ВВ планшета, содержащего IL-17RA-Fc рецептор, туда переносили описанную выше реакционную смесь Fab и IL- 17A-His6-Flag лиганда в расчете 90 мкл на лунку. Планшеты снова инкубировали, встряхивая, 45 мин при комнатной температуре, после чего каждую лунку планшетов пять раз промывали буфером ФСБ-Твин. Добавляли 50 мкл/лунку анти-FLAG мышиного М2 антитела (от Sigma) при концентрации 1 мкг/мл. Инкубировали 45 мин при комнатной температуре, после чего каждую лунку планшетов пять раз промывали буфером ФСБ- Твин. Добавляли 50 мкл/лунку антимышиного-IgG HRP-конъюгированного вторичного антитела (от Pierce-ThermoScientific) в разведении 1 :5000 в ФСБ- Твин. Планшеты встряхивали на ротационном шейкере 45 мин при комнатной температуре и промывали пять раз буфером ФСБ-Твин, как описано выше. Колориметрический сигнал развивали добавлением ТМВ (100 мкл/лунку) до насыщения (в среднем 3-5 мин), затем дальнейшее развитие
44
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) останавливали добавлением стопового раствора (100 мкд/лунку, 10% серная кислота). Цветовой сигнал измеряли при длине волны 450 нм, используя подходящий планшет-ридер Tecan-Sunrise (от Тесап). Степень связывания антитела была пропорциональна продуцированию цветового сигнала.
[076] Для примера приведены результаты ИФА скрининга с одного планшета Fab-ламы, после второго раунда селекции (Фиг. 9). Можно видеть ряд позитивных клонов, давших сигнал блокирования соизмеримый (значения в интервале 0,05-0, 1 отн.ед) с контрольным Fab (AIN457) (отмеченный красным) или не блокирующих взаимодействие IL- 17 A/IL- 17R с сигналом на уровне контролей прямого взаимодействия лиганда и рецептора (отмечен темно-синим).
Пример 7
Сравнительный скрининг анти-1Ь-17А Fab кандидатов человека по koff
[077] Koff представляет собой скрининг анти-1Ь-17А Fab-кандидатов. Koff - скрининг производился с использованием прибора Pall Forte Bio Octet Red 96. Анти FABCH1 биосенсоры в течение 30 минут регидратировались в рабочем буфере, содержащем 10 мМ ФСБ, рН 7.2-7.4, 0.1 % Твин-20, 0,1% БСА. В исследуемые образцы супернатантов Е coli добавляли 10х-рабочий буфер до конечной концентрации 1х. Затем анти FABCH1 биосенсоры погружались в супернатанты Е. coli, содержащие Fab-фрагменты кандидатов антител, на 12 часов при 4°С. Сенсоры с иммобилизованными на поверхности Fab - фрагментами переносились в лунки с рабочим буфером, где прописывалась базовая линия (60 с). Далее сенсоры переносились в лунки с раствором аналита (IL-17A, 30 мкг/мл) для ассоциации комплекса антиген-антитело (300 с). Затем сенсоры возвращали в лунки, содержащие рабочий буфер, для последующей стадии диссоциации (300 с). После
45
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) каждого эксперимента использованные сенсоры регенерировались путем трехкратного помещения их в буфер для регенерации (Gly-HCl, рН 1 ,7) после чего могли быть использованы в следующем эксперименте. Анализ полученных кривых проводился с помощью программного обеспечения Octet Data Analysis (версия 7.0) согласно стандартной процедуре с использованием модели взаимодействия 1 : 1.
[078] Результаты koff-скрининга анти-ГЕ- 17А Fab кандидатов человека представлены на Фиг. 10.
Пример 8
Сканирующий мутагенез CDR вариабельных доменов и выбор более высокоаффинного кандидата
[079] Для введения мутаций в индивидуальные позиции CDR-участков кандидата была использована методика NK кодоновой рандомизации [Appl Environ Microbiol. 2006 Feb;72(2): l 141-7; MAbs.2012 May-Jun;4(3):341 -8] с помощью Q5® Site-Directed Mutagenesis Kit (от NEB) согласно протоколу, в качестве матрицы используя плазмиду Al-Fab-pLL. Продукты ПЦР после фракционировали на легкоплавкой агарозе и очищали на колонках. После реакции лигирования ДНК трансформировали в E.coli экспрессирующий штамм BL21gold (от Stratagene). Полученные индивидуальные клоны наращивали в условиях Fab-экспрессии в 96 луночных планшетах, как описано ранее. Супернатанты, содержащие мутантные Fab, анализировали в условиях ИФА, описанных ранее, с использованием высокопроизводительной автоматизированной платформы на базе роботизированных систем Genetix Q-pix2xt и Tecan Freedom EVO200. Концентрация иммобилизованного IL-17A составляла 0,2 мкг/мл. Окрашивание связанных Fab проводили с разведенным 1 :5000 конъюгатом
46
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) Goat anti-Human IgG (Fab')2 (HRP) (от Pierce) и краской ТМБ+Н202/ H2S04 с последующим измерением оптической плотности при длине волны 450 нм.
[080] Результаты сканирующего мутагенеза представлены в Табл. 1. В таблице приведены замены в позициях CDR регионов, которые соответствуют не более чем на 30% уменьшению сигнала связывания мутантных Fab с IL-17A человека в сравнении с "дикой" последовательностью. Таким образом, эти индивидуальные мутанты или любые их комбинации являются объектом изобретения согласно данной заявке.
[081] Табл.1 Результаты сканирующего мутагенеза
Figure imgf000049_0001
47
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) 8
Figure imgf000050_0001
[082] Таким образом, проведен скрининг аминокислотных позиций CDR регионов антител BCD085 толерантных к заменам на другие аминокислоты. В результате обнаружено, что данный набор аминокислотных замен значительно не меняют силы связывания антитела с 1Ь-17Ачеловека. Набор таких позиций может быть использован для оптимизации различных свойств кандидата.
Пример 9
Создание стабильной клеточной линии, продукция и очистка антитела
[083] Стабильная клеточная линия продуцент моноклонального антитела ВСО085была получена путем трансфекции родительской
48
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) суспензионной клеточной линии CHO-S векторными конструкциями, содержащими легкие и тяжелые цепи антитела в оптимизированном соотношении. Клональные линии с высоким уровнем (более 100 мг/л) были получены с использованием роботизированной платформы ClonePix (Molecular Devices). Анализ продуктивности отобранных клонов проводился на базе автоматизированной системы Biomek FX robotics (Beckman Coulter) и аналитической системы Octet RED96 (Pall Life Sciences). Для культивирования продуцента использовали бессывороточные среды, не содержащие белков животного происхождения. Наработку препарата BCD085 для предклинических исследований проводили в ферментере HyClone single-use bioreactor (Thermoscientific) рабочим объемом 200 л.
[084] Фильтрацию культуральной жидкости проводили через глубинный фильтр "Zeta Plus Maximizer 4516701 60М02" с помощью перистальтического насоса. Первичную очистку антитела проводили на аффинном сорбенте с белком A MabSelect (от GE Healthcare Life Sciences). Осветленную глубинной фильтрацией культуральную жидкость наносили на сорбент, уравновешенный буфером, содержащем 50 мМ HCl-Трис (рН 7.5) и 150 мМ NaCl. После нанесения сорбент промывали буфером уравновешивания с последующей промывкой HCl-Трис с низкой кондуктивностью. Элюировали белок буфером Gly-HCl (рН 3.5). Полученный элюат выдерживали в кислом рН в течение 30 минут для вирусной инактивации, а затем нейтрализовали 1М раствором Трис-осн. до значения рН 6.8. Белковый раствор после доведения рН фильтровали при помощи фильтрующих систем STERICUP с мембраной MilliporeExpressPlus® (от PVDF) с диаметром пор 0,22 мкм. Для финальной очистки от ДНК, белков продуцента, а также отщепленного лиганда аффинного сорбента, полученный раствор белка пропускали через подготовленный сорбент Q Sepharose FF (от GE HealthCare), рН 7.0, при низком значении кондуктивности (<2мС/см ). Очищенный белок подвергали противовирусной
49
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) фильтрации с использованием фильтра для вирусной фильтрации «UltiporeVF filter» (от PALL), концентрированию и диафильтрации против конечного буфера, содержащего His/HisHCl
(рН 6.0-6.5), Твин-80 и трегалозу.. Концентрация полученного белка составляла 50 мг/мл и более. Результат очистки полученного раствора белка оценили с помощью SDS-гель-электрофореза (Фиг.1 1).
[085] Кроме того, оценивали агрегационный состав препарата ВЭЖХ гель фильтрацией.
[086] Хроматографию проводили на системе ВЭЖХ Agilent 1 100 на колонке Tosoh TSK-Gel G3000SWXL 7.8 мм х 30 см, кат. JYS 08541 с предколонкой Tosoh TSKgel Guard SWXL 6.0 мм x 4.0 см, с диаметром частиц 7 мкм, KaT.No 08543. Элюирование проводилось в изократическом режиме подвижной фазой: 50 мМ Na< 6, 0,3 М NaCl, рН 7.0, на скорости потока 0,5 мл/мин. Детектирование проводилось на длинах волн 214 и 280 нм. Образцы антител были разведены буфером ФСБ, рН 7.5, до концентрации ~1 мг/мл. Объем вводимой пробы - 10 мкл. Предварительно была хроматографирована калибровочная смесь Gel filtration standard (от Bio- Rad), KaT. jYo 151- 1901.
[086] Результаты гельфильтрационного анализа приведены на фиг. 13. Содержание агрегатов в субстанции BCD085 составило 0,312%.
50
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) Пример 10
Клеточный тест блокирования функции IL-17A индуцировать продукцию IL-6
[087] Способность IL-17 индуцировать производство IL-6 человеческими клетками линии НТ1080 (ATCC:CCL-121) использовали для анализа нейтрализующей активности BCD085 в отношении человеческого рекомбинантного IL-17. Клетки выращивали в питательной среде ДМЕМ с добавлением 10 % инактивированной эмбриональной сыворотки, гентамицином и глутамином. По 5* 104 клеток на лунку высевали в 96-луночные плоскодонные планшеты для культуры клеток. Оставляли клетки прикрепиться в течение 5 часов. Смесь рекомбинантного 40 нг/мл IL-17 и 20 нг/мл ФНО-α инкубировали с разведениями антитела BCD085 в течение часа при 37° С. Затем смесь цитокина и антитела добавляли к клеткам и оставляли на ночь. Производство IL-6 в культуре клеток НТ1080 было пропорционально добавленному количеству IL- 17. Количество высвобожденного IL-6 в клеточных супернатантах определяли методом ELISA с помощью системы «DuoSet ELISA developmentsystemhuman IL6» (от RD System, Cat. N° DY206). Результаты анализа антагонистических свойств кандидата BCD085 приведены на фиг.13 в сравнении с AIN457 (анти-1Ь-17А антитело от Novartis). Средняя величина 1С5о для этого кандидата про серии опытов составляет 40±15 пМ.
Пример 11
Определение аффинности BCD085 к IL-17A из различных видов организмов
[088] Анализ аффинности связывания BCD085 к IL-17A человека, макаки и крысы производился на приборе OctetRed 96 (от ForteBio). BCD085 был неспецифически иммобилизован на поверхность аминореактивных
51
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) сенсоров второго поколения (от AR2G) по стандартному протоколу согласно инструкции производителя, для подготовки и иммобилизации AR2G сенсоров. Анализ был произведен при 30°С с использованием ФСБ, содержащим 0,1% Твин-20 и 0, 1% БСА в качестве рабочего буфера.
[089] Титрование IL-17A человека, макаки и крысы производили с использованием рабочего буфера от концентрации 126 нМ до 2 нМ с шагом 2.
[090] Кривые связывания с вычетом референсного сигнала анализировали с помощью программного обеспечения Octet Data Analysis (версия 7.0) согласно стандартной процедуре с использованием модели взаимодействия 1 : 1. Результаты приведены на фиг. 14А и 14В.
[091] BCD085 связывается с рекомбинантным препаратом IL-17A человека с пикомолярной аффиностью, что в тысячу раз сильнее по сравнению с аффиностью к IL-17A макаки, имеющую наномолярную величину. Кроме того, кандидат не взаимодействует с IL- 17A крысы (кривые не приведены).
Пример 12
Определение агрегационной стабильности BCD085 в условиях термостресса
[092] Препарат антитела BCD085 с концентрацией 9 мг/мл в ФСБ буфере прогревался в течении 6 часов при температуре 50°С. Определение агрегации после термостресса проводили методом гель-фильтрационной высокоэффективной хроматографии. Хроматографию проводили на системе ВЭЖХ (Agilent) 1 100 на колонке Tosoh TSK-Gel G3000SWXL, 7.8 мм х 30 см, кат. No 08541 с предколонкой Tosoh TSKgel Guard SWXL, 6.0 мм x 4.0 см, с
52
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) диаметром частиц 7 мкм, KaT.j 08543. Элюирование проводилось в изократическом режиме подвижной фазой: 50 мМ Na<E>6, 0,3 М NaCl, рН 7.0 на скорости потока 0,5 мл/мин. Детектирование проводилось на длинах волн 214 и 280 нм. Образцы антител были разведены буфером ФСБ, рН 7.5, до концентрации ~1 мг/мл. Объем вводимой пробы - 10 мкл. Предварительно была хроматографирована калибровочная смесь Gel filtration standard (от Bio-Rad), кат. N° 151-1901.
[093] Представленные на Фиг.15 результаты показывают, что антитело BCD085 стабильно в условиях термостресса, где образование агрегатов составило менее 5%.
Пример 13
Исследование фармакокинетики моноклонального антитела BCD085 против IL-17A при однократном подкожном введении обезьянам
[094] Моноклональное антитело BCD085 против IL-17A вводили однократно подкожно обезьянам макакам резус (Масаса mulatta) в дозе 40 мг/кг. Через определенные промежутки времени после введения (через 0,5, 1 , 3, 6, 12, 24, 36, 48, 60, 72, 96, 120, 168, 264, 336, 432, 504, 672, 840 и 1008 часов) у животных отбирали кровь и получали сыворотку стандартным методом. Уровень антитела BCD085 в сыворотке крови оценивался с помощью метода твердофазного иммуноферментного анализа (ИФА), на иммобилизованном IL-17A человека (от R&D Systems), где связанное антитело детектировалось с использованием поликлональных антител козы против Fc-фрагмента IgG антител человека (от Pierce-ThermoScientific).
[095] Результаты определения концентрации моноклонального антитела против IL-17A в сыворотках после однократного подкожного введения обезьянам представлены на Фиг.16. Из результатов следует, что
53
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) BCD085 обладает значительным пролонгированным эффектом или длительным временем циркуляции в крови. При однократном подкожном введении препарата, максимальное содержание моноклонального антитела против IL-17A в крови животных наблюдалось через 72- 168 часов и этот уровень сохранялся в течение 400 часов и только затем происходило очень медленное снижение, так, что даже после 1000 часов концентрация BCD085 была значительно выше контрольного уровня. Расчетные фармакокинетические параметры для BCD085 при однократном подкожном введении обезьянам приведены в Табл.2. Из представленных результатов видно, что величина клиренса (С1) заявляемого моноклонального антитела против IL-17A составляла 0.25±0.08 мл/час/кг, что обеспечивало его длительную циркуляцию в крови (более 42 дней). Время пребывания в организме и период полувыведения моноклональногоантитела против IL-17A составляли в среднем 946±374 час и 632±253 час, соответственно.
[096] Табл. 2 Основные фармакокинетические параметры для заявляемого моноклонального антител против IL-17 при однократном подкожном введении обезьянам в дозе 40 мг/кг
Figure imgf000056_0001
54
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) Пример 14
Получение фармацевтической композиции, содержащей антитела согласно изобретению
[097]
Концентрация антитела к IL- 17 10-50 мг/мл
(BCD085)
Буфер цитратный ЮмМ до рН 6,0-7,0
Хлорид натрия 50-150 мМ
Сахароза, трегалоза 0,3-0,5%
Вода для инъекций до 1 мл.
Пример 15
Набор, содержащий фармацевтическую композицию с
антителами
[098] Для выпуска наборов с лекарственной формой, содержащей композицию с антителами против IL-17, фармацевтическую композицию, полученную согласно примеру 14 запаивают в ампулы или шприцы объемом 1 мл в стерильных условиях, маркируют и упаковывают в контейнеры из пластикового или картонного материала.
[099] Также в контейнер с ампулой вкладывают инструкцию по применению.
55
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26)

Claims

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
1. Выделенное моноклональное антитело, специфически связывающееся с IL -17А человека, или его фрагмент, содержащий вариабельные области тяжелой цепи (VH) и легкой цепи (VL),
где указанное антитело или его фрагмент содержит:
а) вариабельный домен тяжелой цепи (VH) антитела, который содержит 3 гипервариабельных участка HCDR1 , HCDR2 и HCDR3, где
HCDR1 включает аминокислотную последовательность, представленную SEQ ID NO: 1 :
F-T-F-S-X31-X32-X33-X34 - Х35 (согласно номенклатуре Kabat), где
ХЗ 1 представляет собой аминокислоту, выбранную из группы, включающей
N, D, К, L, Р или Т;
Х32 представляет собой аминокислоту, выбранную из группы, включающей Y H F;
ХЗЗ представляет собой аминокислоту, выбранную из группы, включающей A, G, N, S, Т или V; .
Х34 представляет собой аминокислоту, выбранную из группы, включающей М и 1;
Х35 представляет собой аминокислоту, выбранную из группы, включающей S, G, N или Т;
HCDR2 включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2:
Х50 -I - Х52- Х52а - X52b- X53-G-X55-X56-X57-X58
Х50 представляет собой аминокислоту, выбранную из группы, включающей R, G, I, L, М и S;
Х52 представляет собой аминокислоту, выбранную из группы, включающей D H E;
Х52а представляет собой аминокислоту, выбранную из группы, включающей G H M;
56
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) X52b представляет собой аминокислоту, выбранную из группы, включающей G, L, R и V;
Х53 представляет собой аминокислоту, выбранную из группы, включающей I и L;
Х55 представляет собой аминокислоту, выбранную из группы, включающей S, T, L, R H W;
Х56 представляет собой аминокислоту, выбранную из группы, включающей S, Т, S и Y;
Х57представляет собой аминокислоту, выбранную из группы, включающей S,T, L, R H W;
Х58представляет собой аминокислоту, выбранную из группы, включающей Y, Т, L и К;
HCDR3 включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 3 :
С-А- Х94-Х95- Y- Х97-Х98-Х99-Х100-Х100а, где
Х94 представляет собой аминокислоту, выбранную из группы, включающей R, V, А и I;
Х95 представляет собой аминокислоту, выбранную из группы, включающей N, Е, L, S, Т и V;
Х97 представляет собой аминокислоту, выбранную из группы, включающей Y, F и V;
Х98 представляет собой аминокислоту, выбранную из группы, включающей G и S;
Х99 представляет собой аминокислоту, выбранную из группы, включающей М, A, F, L, Р и Y;
XI 00 представляет собой аминокислоту, выбранную из группы, включающей Y, F, Н, I, S и W;
XI 00а представляет собой аминокислоту, выбранную из группы, включающей Y, A, I, N, R, S и V;
57
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) б) вариабельный домен легкой цепи (VL) антитела, который содержит 3 гипервариабельных участка LCDR1 , LCDR2 и LCDR3 , где
LCDR1 включает аминокислотную последовательность представленную SEQ ID NO:4:
T-G-T-S-X28-X29-X30-X3 1-Х32-ХЗЗ-Х34-Х35, где,
Х28 представляет собой аминокислоту, выбранную из группы, включающей
E, N и R;
Х29 представляет собой аминокислоту, выбранную из группы, включающей D, S и Т;
Х30 представляет собой аминокислоту, выбранную из группы, включающей V, L и R;
ХЗ 1 представляет собой аминокислоту, выбранную из группы, включающей G H V;
Х32 представляет собой аминокислоту, выбранную из группы, включающей
F, Y, L, S, Т и V;
ХЗЗ представляет собой аминокислоту, выбранную из группы, включающей
G, L и V;
Х34 представляет собой аминокислоту, выбранную из группы, включающей N, S, Р и R;
Х35 представляет собой аминокислоту, выбранную из группы, включающей Y, W, А и L;
LCDR2 включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5 :
X50-X51-X52-X53-R-P-S, где
Х50 представляет собой аминокислоту, выбранную из группы, включающей R, E H L,
Х51 представляет собой аминокислоту, выбранную из группы, включающей V, S и L,
58
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) X52 представляет собой аминокислоту, выбранную из группы, включающей N H G;
Х53 представляет собой аминокислоту, выбранную из группы, включающей Т, I, К, L, R и W;
LCDR3 включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6: ' С-Х89-Х90-Х91 -Х92-Х93 -Х94-Х95 -X95a-X95b, где
ιΧ89 представляет собой аминокислоту, выбранную из группы, включающей S и А;
Х90 представляет собой аминокислоту, выбранную из группы, включающей S, G и Т;
Х91 представляет собой аминокислоту, выбранную из группы, включающей Y, F, А и I;
Х92представляет собой аминокислоту, выбранную из группы, включающейК и- R;
Х93 представляет собой аминокислоту, выбранную из группы, включающей A H S;
Х94 представляет собой аминокислоту, выбранную из группы, включающей G и F;
Х95 представляет собой аминокислоту, выбранную из группы, включающей О и Н;
Х95а представляет собой аминокислоту, выбранную из группы, включающей Т;
Х95Ь представляет собой аминокислоту, выбранную из группы, включающей Y, I, L H W.
2. Выделенное моноклональное антитело по П.1 или его фрагмент, содержащий вариабельные домены тяжелой цепи VH и легкой цепи VL, где указанное антитело или фрагмент содержит:
59
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) HCDR1, включающий последовательность F-T-F-S-N-Y-A-M-S (SEQ ID NO:
7) ;
HCDR2, включающий последовательность R-I-E-G-G-I-S-S-T-Y (SEQ ID NO:
8) ;
HCDR3, включающий последовательность C-A-V-N-Y-Y-G-M-Y-Y (SEQ ID NO: 9);
а вариабельная область легкой цепи VL содержит:
LCDR1, включающий последовательность T-G-T-S-E-D-V-G-F-G-N-Y (SEQ ID NO: 10);
LCDR2, включающий последовательность R-V-N-T-R-P-S (SEQ ID NO: 1 1) LCDR3, включающий последовательность C-S-S-Y-K-A-G-G-T-Y (SEQ ID NO: 12).
3. Выделенное моноклональное антитело, специфически связывающееся с IL- 17А человека, или его фрагмент, содержащий вариабельные домены тяжелой цепи (VH) и легкой цепи (VL), где указанное антитело или его активный фрагмент содержит по меньшей мере один вариабельный домен, включающий:
а) вариабельный домен тяжелой цепи (VH) антитела, который включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 13.
б) вариабельный домен легкой цепи (VL) антитела, который включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 14.
4. Выделенное моноклональное антитело, специфически связывающееся с IL- 17А человека, или его фрагмент, содержащий вариабельные домены тяжелой цепи (VH) и легкой цепи (VL), где указанные вариабельные домены включают аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную описанным последовательностям по п.З.
60
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26)
5. Выделенное моноклональное антитело, специфически связывающееся с IL- 17 А человека, или его фрагмент, содержащий вариабельные домены тяжелой цепи (VH) и легкой цепи (VL), где указанные вариабельные домены включают аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 95% идентичную описанным последовательностям по п.З.
6. Выделенное моноклональное антитело, специфически связывающееся с IL- 17 А человека, или его фрагмент, содержащий вариабельные домены тяжелой цепи (VH) и легкой цепи (VL), где указанные вариабельные домены включают аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 99% идентичную описанным последовательностям по п.З.
7 Фрагмент антитела, включающий вариабельные домены по п. 1-6, где указанный фрагмент выбран из группы, включающей F(ab')2, F(ab)2, Fab', Fab.
8. Фрагмент антитела, включающий вариабельные домены по п. 1-6, где указанный фрагмент выбран из группы, включающей Fv и scFv.
9. Выделенное моноклональное антитело или фрагмент антитела по п.1-6, где указанное антитело представляет собой гуманизированное антитело или антитело человека.
10. Выделенное моноклональное антитело по п. 1 -6, отличающееся тем, что представляет собой IgGl , или IgG2, или IgG3, или IgG4, или IgA или IgD, или IgY.
11. Выделенное моноклональное антитело по п. 1-6, имеющее аффинность связывания с IL-17A человека с KD не более 10" 10 М .
61
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26)
12. Выделенное моноклональное антитело по п. 1 -6, отличающееся тем, что кинетическая константа ассоциации kon(l/Ms) для IL-17A человека составляет не менее 105 1/Мс.
13. Выделенное моноклональное антитело по п. 1-6, отличающееся тем, что кинетическая константа диссоциации dis(l/s) для IL-17A человека составляет не более 10"5 1/с.
14. Выделенное моноклональное антитело по п. 1 -6, способное ингибировать не менее чем на 50% активность IL-17A человека.
15. Выделенное моноклональное антитело по п. 1-6, отличающееся тем, что его продуцируют в клетках млекопитающих, дрожжевых или бактериальных клетках.
16. Выделенное моноклональное антитело по п. 1-6, отличающееся тем, что дополнительно содержит модификации (аминокислотную замену) в Fc- регионе M252Y/S254T/T256E.
17. Выделенное моноклональное антитело по п. 1 -6, отличающееся тем, что дополнительно содержит модификацию N434W в Fc-регионе.
18. Выделенное моноклональное антитело по п. 1-6, отличающееся тем, что дополнительно содержит модификацию N434A в Fc-регионе.
19. Выделенное моноклональное антитело по п. 1 -6, отличающееся тем, что дополнительно содержит модификацию N434F в Fc-регионе.
20. Выделенное моноклональное антитело по п. 1-6, отличающееся тем, что дополнительно содержит модификации H433K/N434F/Y436H в Fc-регионе.
62
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26)
21. Выделенное моноклональное антитело по п. 1-6, отличающееся тем, что дополнительно содержит модификации
H433K/N434F/Y436H+M252Y/S254T/T256E в Fc-регионе.
22. Выделенное моноклональное антитело по п. 1-6, отличающееся тем, что дополнительно содержит модификации T307A/E380A/N434A в Fc-регионе.
23. Выделенное моноклональное антитело по п. 1-6, отличающееся тем, что дополнительно содержит модификации T250Q/M428L в Fc-регионе.
24. Выделенное моноклональное антитело по п. 1-6, отличающееся тем, что характеризуется полной аминокислотной последовательностью тяжелой цепи SEQ ID NO: 15.
25. Выделенное моноклональное антитело по п. 1-6, отличающееся тем, что характеризуется полной аминокислотной последовательностью легкой цепи SEQ ID NO: 16.
26. Fab фрагмент антитела по п. 1-6, продуцируемый в клетках млекопитающих, дрожжевых или бактериальных клетках.
27. Fab' фрагмент антитела по п. 1 -6, продуцируемый в клетках млекопитающих, дрожжевых или бактериальных клетках.
28. Fv фрагмент (вариабельный фрагмент) антитела по п. 1-6, продуцируемый в клетках млекопитающих, дрожжевых или бактериальных клетках.
63
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26)
29. F(ab')2 фрагмент антитела по п. 1-6, продуцируемый в клетках млекопитающих, дрожжевых или бактериальных клетках.
30. F(ab)2 фрагмент антитела по п. 1 -6, продуцируемый в клетках млекопитающих, дрожжевых или бактериальных клетках.
31. scFv фрагмент (одноцепочечный Fv-фрагмент) антитела по п. 1-6, продуцируемый в клетках млекопитающих, дрожжевых или бактериальных клетках.
32. Фрагмент антитела по п. 26-31 , содержащий любую химическую модификацию, улучшающую фармакокинетические свойства исходного фрагмента.
33. Конструкция ДНК, кодирующая антитело по любому из пп.1 - 6 и 9-25 или его фрагмент по любому из пп. 26 - 31.
34. Экспрессионный вектор, содержащий одну или несколько ДНК (конструкций ДНК, последовательностей ДНК) по любому из пп.1 - 6 и 9-25 или его фрагмент по любому из пп. 26 - 31.
35. Клеточная линия, содержащая в клетках вектор по п. 34 и способная продуцировать антитела по любому из пп. 1 - 6 и 9-25 или его фрагмента по любому из пп. 26 - 31.
36. Способ получения моноклонального антитела по любому из пп.1 - 6 и 9- 25 или его фрагмент по любому из пп. 26 - 31 , заключающийся в культивировании клетки-хозяина по п. 35, в культуральной среде в условиях, достаточных для получения указанного антитела или его фрагмента, с
64
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) последующим выделением и очисткой полученного антитела или его активного фрагмента.
37. Фармацевтическая композиция, содержащая антитела по любому из пп.1 - 6 и 9-25 или его фрагмент по любому из пп. 26 - 31 , в сочетании с одним или несколькими фармацевтически приемлемыми эксципиентами, разбавителями или носителями.
38. Фармацевтическая композиция по п. 37, содержащая дополнительные действующие вещества, выбранные из б локаторов ФНО-α или других антител к IL-17A.
39. Фармацевтическая композиция по п. 37, предназначенная для лечения опосредуемого IL-17A заболевания или нарушения.
40. Фармацевтическая композиция по п. 39, где опосредуемое IL-17A заболевание или нарушение выбрано из ревматоидного артрита, остеоартрита, ювенильного хронического артрита, септического артрита, артрита Лайма, псориатического артрита, реактивного артрита, спондилоартропатии, системной красной волчанки, болезни Крона, язвенного колита, воспалительного заболевания кишечника, инсулинзависимого сахарного диабета, тиреоидита, астмы, аллергических заболеваний, псориаза, дерматита, склеродермии, реакции "трансплантат против хозяина", отторжения трансплантата органа, острого или хронического иммунного заболевания, связанного с трансплантацией органа, саркоидоза, атеросклероза, диссеминированного внутрисосудистого свертывания, болезни Кавасаки, болезни Грэйвса, нефротического синдрома, синдрома хронической усталости, гранулематоза Вегенера, пурпуры Шенлейна-Геноха, микроскопического васкулита почек, хронического активного гепатита, увеита, септического шока, синдрома токсического
65
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) шока, септического синдрома, кахексии, инфекционных заболеваний, паразитарных заболеваний, синдрома приобретенного иммунодефицита, острого поперечного миелита, хореи Гентингтона, болезни Паркинсона, болезни Альцгеймера, инсульта, первичного билиарного цирроза, гемолитической анемии, злокачественных опухолей, сердечной недостаточности, инфаркта миокарда, болезни Аддисона, спорадического полигландулярного дефицита типа I и полигландулярного дефицита типа II, синдрома Шмидта, взрослого (острого) респираторного дистресс-синдрома, алопеции, очаговой алопеции, серонегативной артропатии, артропатии, болезни Рейтера, псориатической артропатии, связанной с язвенным колитом артропатии, энтеропатического синовита, связанной с хламидиями, иерсиниями и сальмонеллами артропатии, спондилоартропатии, атероматозного заболевания/артериосклероза, атопической аллергии, аутоиммунного буллезного заболевания, пемфигуса обыкновенного, листовидного пемфигуса, пемфигоида, болезни линейных IgA, аутоиммунной гемолитической анемии, Кумбс-положительной гемолитической анемии, приобретенной перниционзой анемии, ювенильной перниционзой анемии, миалгического энцефалита/ синдрома хронической усталости, хронического кожно-слизистого кандидоза, гигантоклеточного артериита, первичного склерозирующего гепатита, криптогенного аутоиммунного гепатита, синдрома приобретенного иммунодефицита, связанных с приобретенным иммунодефицитом заболеваний, гепатита В, гепатита С, вариабельного неклассифицируемого иммунодефицита (вариабельной неклассифицируемой гипогаммаглобулинемии), кардиомиопатии с дилятацией, женского бесплодия, недостаточности яичников, преждевременного угасания функции яичников, фиброзного заболевания легких, криптогенного фиброзного альвеолита, поствоспалительного интерстициального заболевания легких, интерстициального пневмонита, связанного с болезнью соединительной ткани интерстициального заболевания легких, связанного со смешанной
66
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) болезнью соединительной ткани заболевания легких, связанного с системной склеродермией заболевания легких, связанного с ревматоидным артритом интерстициального заболевания легких, связанного с системной красной волчанкой заболевания легких, связанного с дерматомиозитом/полимиозитом заболевания легких, связанного с болезнью Шегрена заболевания легких, связанного с анкилозирующим спондилитом заболевания легких, васкулитного диффузного заболевания легких, связанного с гемосидерозом заболевания легких, индуцированного лекарственным средством интерстициального заболевания легких, фиброза, связанного с радиацией фиброза, облитерирующего бронхиолита, хронической эозинофильной пневмонии, заболевания легких с инфильтрацией лимфоцитов, постинфекционного интерстициального заболевания легких, подагрического артрита, аутоиммунного гепатита, аутоиммунного гепатита I типа (классического аутоиммунного или люпоидного гепатита), аутоиммунного гепатита II типа (гепатита, связанного с антителом против LKM), опосредуемой аутоиммунным заболеванием гипогликемии, устойчивости к инсулину типа В с акантокератодермией, гипопаратиреоза, острого иммунного заболевания, связанного с трансплантацией органа, хронического иммунного заболевания, связанного с трансплантацией органа, остеоартроза, первичного склерозирующего холангита, псориаза I типа, псориаза II типа, идиопатической лейкопении, аутоиммунной нейтропении, NOS-болезни почек, гломерулонефрита, микроскопического васкулита почек, болезни Лайма, дискоидной красной волчанки, идиопатического или NOS-мужского бесплодия, аутоиммунитетак сперматозоидам, рассеянного склероза (все подтипы), симпатической офтальмии, легочной гипертензии, вторичной для болезни соединительной ткани, синдрома Гудпасчера, легочного проявления узелкового полиартериита, острой ревматической атаки, ревматоидного спондилита, болезни Стилла, системной склеродермии, синдрома Шенгрена, болезни/артериита Такаясу, аутоиммунной тромбоцитопении, идиопатической тромбоцитопении, аутоиммунного заболевания щитовидной
67
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) железы, гипертиреоидизма, зобного аутоиммунного гипотиреоза (болезнь Хашимото), атрофического аутоиммунного гипотиреоза, первичной микседемы, факогенного увеита, первичного васкулита, витилиго, острогозаболевания печени, хронического заболевания печени, алкогольного цирроза, индуцированного алкоголем повреждения печени, холестаза, идиосинкразического заболевания печени, индуцированного лекарственным средством гепатита, неалкогольного стеатогепатита, аллергии и астмы, стрептококковой инфекции группы В (GBS), психических расстройств (включая депрессию и шизофрению), опосредуемых типом Th2 и типом ТЫ заболеваний, острой и хронической боли (различные формы боли), и злокачественных опухолей, таких как рак легкого, молочной железы, желудка, мочевого пузыря, толстого кишечника, поджелудочной железы, яичника, предстательной железы и прямой кишки и гемопоэтические злокачественные опухоли (лейкоз и лимфома), абеталипопротеинемии, акроцианоза, острых и хронических паразитарных и инфекционных процессов, острого лейкоза, острого лимфобластного лейкоза, острого миелоидного лейкоза, острой или хронической бактериальной инфекции, острого панкреатита, острой почечной недостаточности, аденокарцином, эктопической систолы предсердий, СПИД-дементного комплекса, индуцированного алкоголем гепатита, аллергического конъюнктивита, аллергического контактного дерматита, аллергического ринита, отторжения аллотрансплантата, дефицита альфа- 1 -антитрипсина, бокового амиотрофическего склероза, анемии, стенокардии, дегенерации клеток передних рогов спинного мозга, терапию против CD3, антифосфолипидного синдрома, реакций гиперчувствительности против рецепторов, аортальных и периферических аневризм, расслоения аорты, артериальной гипертензии, артериосклероза, артериовенозного свища, атаксии, фибрилляции предсердий (постоянной или пароксизмальной), трепетания предсердий, атриовентрикулярной блокады, В-клеточной лимфомы, отторжения трансплантата кости, отторжения трансплантата костного мозга (ВМТ),
68
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) блокады пучка Гиса, лимфомы Беркитта, ожогов, аритмий сердца, синдрома оглушения сердца, опухолей сердца, кардиомиопатии, воспалительных ответов на искусственное кровообращение, отторжения трансплантата хряща, дегенерации коры головного мозга, нарушений мозжечка, хаотической или многоочаговой тахикардии предсердий, связанных с химиотерапией нарушений, хронического миелоцитарного лейкоза (CML), хронического алкоголизма, хронических воспалительных патологий, хронического лимфоцитарного лейкоза (ХЛЛ), хронического обструктивного заболевания легких (ХОЗЛ), хронической интоксикации салицилатами, карциномы ободочной и прямой кишки, застойной сердечной недостаточности, конъюнктивита, контактного дерматита, легочного сердца, болезни коронарных артерий, болезни Крейтцфельда-Якоба, культурально- негативного сепсиса, кистозного фиброза, связанных с цитокиновой терапией нарушений, деменции боксеров, демиелинизирующих заболеваний, геморрагической лихорадки денге, дерматита, дерматологических состояний, диабета, сахарного диабета, диабетического атеросклеротического заболевания, диффузного заболевания с тельцами Леви, застойной кардиомиопатии с дилятацией, нарушений базальных ганглиев, синдрома Дауна в среднем возрасте, двигательных нарушений, индуцированных лекарственным средством, которое блокирует дофаминовые рецепторы ЦНС, чувствительности к лекарственным средствам, экземы, энцефаломиелита, эндокардита, эндокринопатии, эпиглоттита, инфекции вирусом Эпштейна- Барр, эритромелалгии, экстрапирамидальных и мозжечковых нарушений, семейного гематофагоцитарного лимфогистиоцитоза, отторжения имплантата эмбрионального тимуса, наследственной атаксии Фридрейха, функциональных нарушений периферических артерий, грибкового сепсиса, газовой гангрены, язвы желудка, гломерулонефрита, отторжения трансплантата любого органа или ткани, грамотрицательного сепсиса, грамположительного сепсиса, гранулем вследствие внутриклеточных организмов, волосатоклеточного лейкоза, болезни Галлервордена-Шпатца,
69
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) тиреоидита Хашимото, сенной лихорадки, отторжения трансплантата сердца, гемахроматоза, гемодиализа, гемолитическоого уремического синдрома/тромболитической тромбоцитопенической пурпуры, кровопотери, гепатита (А), аритмий пучка Гиса, ВИЧ-инфекции/ВИЧ-невропатии, болезни Ходжкина, гиперкинетических двигательных нарушений, реакций гиперчувствительности, связанного с гиперчувствительностью пневмонита, гипертензии, гипокинетических двигательных нарушений, обследования гипоталамо-гипофизарно-надпочечниковой системы, идиопатической болезни Аддисона, идиопатическоого фиброза легких, опосредуемой антителами цитотоксичности, астении, младенческой спинальной мышечной атрофии, воспаления аорты, вируса гриппа А, облучения ионизирующей радиацией, иридоциклита/увеита/оптического неврита, повреждения при ишемии-реперфузии, ишемического инсульта, ювенильного ревматоидного артрита, ювенильной спинальной мышечной атрофии, саркомы Капоши, отторжения трансплантата почки, легионеллеза, лейшманиоза, лепры, повреждений кортикоспинальной системы, жирового отека, отторжения трансплантата печени, лимфатического отека, малярии, злокачественной лимфомы, злокачественного гистиоцитоза, злокачественной меланомы, менингита, менингококкемии, метаболических/идиопатических заболеваний, мигрени, митохондриального полисистемного нарушения, смешанной болезни соединительной ткани, моноклональной гаммапатии, множественной миеломы, полисистемной дегенерации (Менцеля, Дежерина- Тома, Шая-Дрейджера и Мачадо-Джозефа), миастении, внутриклеточных Mycobacterium avium, Mycobacterium tuberculosis, миелодиспластического синдрома, инфаркта миокарда, ишемических нарушений миокарда, карциномы носоглотки, хронического заболевания легких новорожденных, нефрита, нефроза, нейродегенеративных заболеваний, нейрогенных мышечных атрофий I, нейтропенической лихорадки, неходжкинских лимфом, окклюзии брюшного отдела аорты и ее ветвей, окклюзионных нарушений артерий, терапии ОКТЗ®, орхита/эпидидимита,
70
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) орхита/возвратных процедур после вазэктомии, органомегалии, остеопороза, отторжения трансплантата поджелудочной железы, карциномы поджелудочной железы, паранеопластического синдрома/гиперкальцемии при злокачественной опухоли, отторжения трансплантата паращитовидной железы, воспалительного заболевания органов таза, круглогодичного ринита, заболевания перикарда, периферического артериосклеротического заболевания, периферических сосудистых нарушений, перитонита, пернициозной анемии, пневмонии Pneumocystis carinii, пневмонии, синдрома POEMS (полиневропатия, органомегалия, эндокринопатия, моноклональная гаммапатия и синдром кожных изменений), постперфузионного синдрома, синдрома после искусственного кровообращения, посткардиотомного синдрома после инфаркта миокарда, преэклампсии, прогрессирующего супрануклеарного паралича, первичной гипертензии легких, лучевой терапии, феномена и болезни Рейно, болезни Рейно, болезни Рефсума, регулярной тахикардии с узким комплексом QRS, вазоренальной гипертензии, реперфузионного повреждения, рестриктивной кардиомиопатии, сарком, склеродермии, сенильной хореи, сенильной деменции с тельцами Леви, серонегативных артропатий, шока, серповидноклеточной анемии, отторжения аллотрансплантата кожи, синдрома кожных изменений, отторжения трансплантата тонкого кишечника, солидных опухолей, специфических аритмий, спинальной атаксии, спиномозжечковых дегенераций, стрептококкового миозита, структурных повреждений мозжечка, подострого склерозирующего панэнцефалита, обмороков, сифилиса сердечно-сосудистой системы, системной анафилаксии, синдрома системного воспалительного ответа, ювенильного ревматоидного артрита с системным началом, Т-клеточного или FAB ALL, телеангиэктазии, облитерирующего тромбоангита, тромбоцитопении, токсичности, трансплантации, травмы/кровопотери, реакций гиперчувствительности типа III, гиперчувствительности типа IV, нестабильной стенокардии, уремии, уросепсиса, крапивницы, заболеваний клапанов сердца, варикоза вен,
71
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) васкулита, заболеваний вен, венозного тромбоза, фибрилляции желудочков, вирусных и грибковых инфекций, энцефалита с высоким риском смертельного исхода/асептического менингита, гемофагоцитарного синдрома с высоким риском смертельного исхода, синдрома Вернике-Корсакова, болезни Вилсона, отторжения ксенотрансплантата любого органа или ткани, острого коронарного синдрома, острого идиопатического полиневрита, острой воспалительной демиелинизирующей полирадикулоневропатии, острой ишемии, болезни Стилла взрослых, очаговой алопеции, анафилаксии, синдрома антифосфолипидных антител, апластической анемии, артериосклероза, атопической экземы, атопического дерматита, аутоиммунного дерматита, аутоиммунногонарушения, связанного со стрептококковой инфекцией, аутоиммунной энтеропатии, аутоиммунной потери слуха, аутоиммунного лимфопролиферативного синдрома, аутоиммунного миокардита, аутоиммунного преждевременного угасания функции яичников, блефарита, бронхоэктазов, буллезного пемфигоида, сердечно-сосудистого заболевания, катастрофического антифосфолипидного синдрома, глютеиновой болезни, шейного спондилеза, хронической ишемии, рубцового пемфигоида, клинически изолированного синдрома (cis) с риском рассеянного склероза, конъюнктивита, психиатрического нарушения с началом в детском возрасте, хронического обструктивного заболевания легких (ХОЗЛ), дакриоцистита, дерматомиозита, диабетической ретинопатии, сахарного диабета, грыжи межпозвоночного диска, пролапса межпозвоночного диска, индуцированной лекарственным средством иммунной гемолитической анемии, эндокардита, эндометриоза, эндофтальмита, эписклерита, полиформной эритемы, тяжелой полиформной эритемы, гестационного пемфигоида, синдрома Гийена-Барре,сенной лихорадки, синдрома Хьюза, идиопатической болезни Паркинсона, идиопатической интерстициальной пневмонии, опосредуемой IgE аллергии, иммунной гемолитической анемии, миозита с тельцами включения, инфекционного воспалительного заболевания глаз, воспалительного
72
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) демиелинизирующего заболевания, воспалительного заболевания сердца, воспалительного заболевания почек, идиопатического пневмосклероза/ идиопатического легочного фиброза, ирита, кератита, сухого кератоконъюнктивита, болезни Куссмауля или болезни уссмауля-Мейера, паралича Ландри, гйстиоцитоза клеток Лангерганса, синдрома мраморной кожи, дегенерации желтого пятна, микроскопического полиангиита, болезни Бехтерева, нарушений двигательных нейронов, пемфигоида слизистых оболочек, полиорганной недостаточности, миастении, миелодиспластического синдрома, миокардита, нарушений корешков нервов, невропатии, не-А не-В гепатита, оптического неврита, остеолизиса, рака яичника, олигоартикулярного ювенильного ревматоидного артрита, окклюзионого заболевания периферических артерий, заболевания периферических сосудов, заболевания периферических артерий (PAD), флебита, узелкового полиартериита (или нодозного полиартериита), полихондрита, ревматической полимиалгии, полиоза, полиартикулярного ювенильного ревматоидного артрита, синдрома полиэндокринной недостаточности, полимиозита, ревматической полимиалгии (PMR), синдрома после искусственного кровообращения, первичного паркинсонизма, рака предстательной железы и прямой кишки и гемопоэтических злокачественных опухолей (лейкоз и лимфому), простатита, истинной эритроцитарной аплазии, первичной недостаточности надпочечников, рецидивирующего оптического нейромиелита, рестеноза, ревматической болезни сердца, SAPHO (синовит, акне, пустулез, гиперостоз и остеит), склеродермии, вторичного амилоидоза, шокового легкого, склерита, ишиаса, вторичной недостаточности надпочечников, связанного с кремнийорганическими соединениями заболевания соединительных тканей, дерматоза Снеддона-Уилкинсона, анкилозирующего спондилита, синдрома Стивенса-Джонсона, синдрома системного воспалительного ответа, височного артериита, токсоплазменного ретинита, токсического эпидермального некролиза, поперечного миелита, TRAPS (связанный с
73
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) рецептором фактора некроза опухоли периодический синдром), аллергической реакции I типа, диабета типа II, крапивницы, обычной интерстициальной пневмонии (UIP), васкулита, весеннего конъюнктивита, вирусного ретинита, синдрома Фогта-Коянаги-Харада (синдром VKH), влажной дегенерации желтого пятна, заживления ран и связанной с иерсиниями и сальмонеллами артропатии.
41. Способ лечения опосредованного IL-17A заболевания или нарушения, включающий введение выделенного антитела по любому из пп.1 - 6 и 9-25 или его фрагмента по любому из пп. 26 - 31 пациенту, нуждающемуся в таком лечении, в терапевтически эффективном количестве.
42. Способ лечения по п. 41 , отличающийся тем, что указанное опосредованное IL-17 заболевание или нарушение выбирают из выбранного из ревматоидного артрита, остеоартрита, ювенильного хронического артрита, септического артрита, артрита Лайма, псориатического артрита, реактивного артрита, спондилоартропатии, системной красной волчанки, болезни Крона, язвенного колита, воспалительного заболевания кишечника, инсулинзависимого сахарного диабета, тиреоидита, астмы, аллергических заболеваний, псориаза, дерматита, склеродермии, реакции "трансплантат против хозяина", отторжения трансплантата органа, острого или хронического иммунного заболевания, связанного с трансплантацией органа, саркоидоза, атеросклероза, диссеминированного внутрисосудистого свертывания, болезни Кавасаки, болезни Грэйвса, нефротического синдрома, синдрома хронической усталости, гранулематоза Вегенера, пурпуры Шенлейна-Геноха, микроскопического васкулита почек, хронического активного гепатита, увеита, септического шока, синдрома токсического шока, септического синдрома, кахексии, инфекционных заболеваний, паразитарных заболеваний, синдрома приобретенного иммунодефицита, острого поперечного миелита, хореи Гентингтона, болезни Паркинсона,
74
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) болезни Альцгеймера, инсульта, первичного билиарного цирроза, гемолитической анемии, злокачественных опухолей, сердечной недостаточности, инфаркта миокарда, болезни Аддисона, спорадического полигландулярного дефицита типа I и полигландулярного дефицита типа II, синдрома Шмидта, взрослого (острого) респираторного дистресс-синдрома, алопеции, очаговой алопеции, серонегативной артропатии, артропатии, болезни Рейтера, псориатической артропатии, связанной с язвенным колитом артропатии, энтеропатического синовита, связанной с хламидиями, иерсиниями и сальмонеллами артропатии, спондилоартропатии, атероматозного заболевания/артериосклероза, атопической аллергии, аутоиммунного буллезного заболевания, пемфигуса обыкновенного, листовидного пемфигуса, пемфигоида, болезни линейных IgA, аутоиммунной гемолитической анемии, Кумбс-положительной гемолитической анемии, приобретенной перниционзой анемии, ювенильной перниционзой анемии, миалгического энцефалита/синдрома хронической усталости, хронического кожно-слизистого кандидоза, гигантоклеточного артериита, первичного склерозирующего гепатита, криптогенного аутоиммунного гепатита, синдрома приобретенного иммунодефицита, связанных с приобретенным иммунодефицитом заболеваний, гепатита В, гепатита С, вариабельного неклассифицируемого иммунодефицита (вариабельной неклассифицируемой гипогаммаглобулинемии), кардиомиопатии с дилятацией, женского бесплодия, недостаточности яичников, преждевременного угасания функции яичников, фиброзного заболевания легких, криптогенного фиброзного альвеолита, поствоспалительного интерстициального заболевания легких, интерстициального пневмонита, связанного с болезнью соединительной ткани интерстициального заболевания легких, связанного со смешанной болезнью соединительной ткани заболевания легких, связанного с системной склеродермией заболевания легких, связанного с ревматоидным артритом интерстициального заболевания легких, связанного с системной красной
75
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) волчанкой заболевания легких, связанного с дерматомиозитом/полимиозитом заболевания легких, связанного с болезнью Шегрена заболевания легких, связанного с анкилозирующим спондилитом заболевания легких, васкулитного диффузного заболевания легких, связанного с гемосидерозом заболевания легких, индуцированного лекарственным средством интерстициального заболевания легких, фиброза, связанного с радиацией фиброза, облитерирующего бронхиолита, хронической эозинофильной пневмонии, заболевания легких с инфильтрацией лимфоцитов, постинфекционного интерстициального заболевания легких, подагрического артрита, аутоиммунного гепатита, аутоиммунного гепатита I типа (классического аутоиммунного или люпоидного гепатита), аутоиммунного гепатита II типа (гепатита, связанного с антителом против LKM), Опосредуемой аутоиммунным заболеванием гипогликемии, устойчивости к инсулину типа В с акантокератодермией, гипопаратиреоза, острого иммунного заболевания, связанного с трансплантацией органа, хронического иммунного заболевания, связанного с трансплантацией органа, остеоартроза, первичного склерозирующего холангита, псориаза I типа, псориаза II типа, идиопатической лейкопении, аутоиммунной нейтропении, NOS-болезни почек, гломерулонефрита, микроскопического васкулита почек, болезни Лайма, дискоидной красной волчанки, идиопатического или NOS-мужского бесплодия, аутоиммунитета к сперматозоидам, рассеянного склероза (все подтипы), симпатической офтальмии, легочной гипертензии, вторичной для болезни соединительной ткани, синдрома Гудпасчера, легочного проявления узелкового полиартериита, острой ревматической атаки, ревматоидного спондилита, болезни Стилла, системной склеродермии, синдрома Шенгрена, болезни/артериита Такаясу, аутоиммунной тромбоцитопении, идиопатической тромбоцитопении, аутоиммунного заболевания щитовидной железы, гипертиреоидизма, зобного аутоиммунного гипотиреоза (болезнь Хашимото), атрофического аутоиммунного гипотиреоза, первичной микседемы, факогенного увеита, первичного васкулита, витилиго, острого
76
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) заболевания печени, хронического заболевания печени, алкогольного цирроза, индуцированного алкоголем повреждения печени, холестаза, идиосинкразического заболевания печени, индуцированного лекарственным средством гепатита, неалкогольного стеатогепатита, аллергии и астмы, стрептококковой инфекции группы В (GBS), психических расстройств (включая депрессию и шизофрению), опосредуемых типом Th2 и типом ТЫ заболеваний, острой и хронической боли (различные формы боли), и злокачественных опухолей, таких как рак легкого, молочной железы, желудка, мочевого пузыря, толстого кишечника, поджелудочной железы, яичника, предстательной железы и прямой кишки и гемопоэтические злокачественные опухоли (лейкоз и лимфома), абеталипопротеинемии, акроцианоза, острых и хронических паразитарных и инфекционных процессов, острого лейкоза, острого лимфобластного лейкоза, острого миелоидного лейкоза, острой или хронической бактериальной инфекции, острого панкреатита, острой почечной недостаточности, аденокарцином, эктопической систолы предсердий, СПИД-дементного комплекса, индуцированного алкоголем гепатита, аллергического конъюнктивита, аллергического контактного дерматита, аллергического ринита, отторжения аллотрансплантата, дефицита альфа- 1 -антитрипсина, бокового амиотрофическего склероза, анемии, стенокардии, дегенерации клеток передних рогов спинного мозга, терапию против CD3, антифосфолипидного синдрома, реакций гиперчувствительности против рецепторов, аортальных и периферических аневризм, расслоения аорты, артериальной гипертензии, артериосклероза, артериовенозного свища, атаксии, фибрилляции предсердий (постоянной или пароксизмальной), трепетания предсердий, атриовентрикулярной блокады, В-клеточной лимфомы, отторжения трансплантата кости, отторжения трансплантата костного мозга (ВМТ), блокады пучка Гиса, лимфомы Беркитта, ожогов, аритмий сердца, синдрома оглушения сердца, опухолей сердца, кардиомиопатии, воспалительных ответов на искусственное кровообращение, отторжения трансплантата
77
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) хряща, дегенерации коры головного мозга, нарушений мозжечка, хаотической или многоочаговой тахикардии предсердий, связанных с химиотерапией нарушений, хронического миелоцитарного лейкоза (ХМЛ), хронического алкоголизма, хронических воспалительных патологий, хронического лимфоцитарного лейкоза (ХЛЛ), хронического обструктивного заболевания легких (ХОЗЛ), хронической интоксикации салицилатами, карциномы ободочной и прямой кишки, застойной сердечной недостаточности, конъюнктивита, контактного дерматита, легочного сердца, болезни коронарных артерий, болезни Крейтцфельда-Якоба, культурально- негативного сепсиса, кистозного фиброза, связанных с цитокиновой терапией нарушений, деменции боксеров, демиелинизирующих заболеваний, геморрагической лихорадки денге, дерматита, дерматологических состояний, диабета, сахарного диабета, диабетического атеросклеротического заболевания, диффузного заболевания с тельцами Леви, застойной кардиомиопатии с дилятацией, нарушений базальных ганглиев, синдрома Дауна в среднем возрасте, двигательных нарушений, индуцированных лекарственным средством, которое блокирует дофаминовые рецепторы ЦНС, чувствительности к лекарственным средствам, экземы, энцефаломиелита, эндокардита, эндокринопатии, эпиглоттита, инфекции вирусом Эпштейна- Барр, эритромелалгии, экстрапирамидальных и мозжечковых нарушений, семейного гематофагоцитарного лимфогистиоцитоза, отторжения имплантата эмбрионального тимуса, наследственной атаксии Фридрейха, функциональных нарушений периферических артерий, грибкового сепсиса, газовой гангрены, язвы желудка, гломерулонефрита, отторжения трансплантата любого органа или ткани, грамотрицательного сепсиса, грамположительного сепсиса, гранулем вследствие внутриклеточных организмов, волосатоклеточного лейкоза, болезни Галлервордена-Шпатца, тиреоидита Хашимото, сенной лихорадки, отторжения трансплантата сердца, гемахроматоза, гемодиализа, гемолитическоого уремического синдрома/тромболитической тромбоцитопенической пурпуры, кровопотери,
78
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) гепатита (А), аритмий пучка Гиса, ВИЧ-инфекции/ВИЧ-невропатии, болезни Ходжкина, гиперкинетических двигательных нарушений, реакций гиперчувствительности, связанного с гиперчувствительностью пневмонита, гипертензии, гипокинетических двигательных нарушений, обследования гипоталамо-гипофизарно-надпочечниковой системы, идиопатической болезни Аддисона, идиопатическоого фиброза легких, опосредуемой антителами цитотоксичности, астении, младенческой спинальной мышечной атрофии, воспаления аорты, вируса гриппа а, облучения ионизирующей радиацией, иридоциклита/увеита/оптического неврита, повреждения при ишемии-реперфузии, ишемического инсульта, ювенильного ревматоидного артрита, ювенильной спинальной мышечной атрофии, саркомы Капоши, отторжения трансплантата почки, легионеллеза, лейшманиоза, лепры, повреждений кортикоспинальной системы, жирового отека, отторжения трансплантата печени, лимфатического отека, малярии, злокачественной лимфомы, злокачественного гистиоцитоза, злокачественной меланомы, менингита, менингококкемии, метабол ических/идиопатических заболеваний, мигрени, митохондриального полисистемного нарушения, смешанной болезни соединительной ткани, моноклональной гаммапатии, множественной миеломы, полисистемной дегенерации (Менцеля, Дежерина- Тома, Шая-Дрейджера и Мачадо-Джозефа), миастении, внутриклеточных Mycobacterium avium, Mycobacterium tuberculosis, миелодиспластического синдрома, инфаркта миокарда, ишемических нарушений миокарда, карциномы носоглотки, хронического заболевания легких новорожденных, нефрита, нефроза, нейродегенеративных заболеваний, нейрогенных мышечных атрофий I, нейтропенической лихорадки, неходжкинских лимфом, окклюзии брюшного отдела аорты и ее ветвей, окклюзионных нарушений артерий, терапии ОКТЗ®, орхита/эпидидимита, орхита/возвратных процедур после вазэктомии, органомегалии, остеопороза, отторжения трансплантата поджелудочной железы, карциномы поджелудочной железы, паранеопластического синдрома/гиперкальцемии
79
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) при злокачественной опухоли, отторжения трансплантата паращитовидной железы, воспалительного заболевания органов таза, круглогодичного ринита, заболевания перикарда, периферического артериосклеротического заболевания, периферических сосудистых нарушений, перитонита, пернициозной анемии, пневмонии Pneumocystis carinii, пневмонии, синдрома POEMS (полиневропатия, органомегалия, эндокринопатия, моноклональная гаммапатия и синдром кожных изменений), постперфузионного синдрома, синдрома после искусственного кровообращения, посткардиотомного синдрома после инфаркта миокарда, преэклампсии, прогрессирующего супрануклеарного паралича, первичной гипертензии легких, лучевой терапии, феномена и болезни Рейно, болезни Рейно, болезни Рефсума, регулярной тахикардии с узким комплексом QRS, вазоренальной гипертензии, реперфузионного повреждения, рестриктивной кардиомиопатии, сарком, склеродермии, сенильной хореи, сенильной деменции с тельцами Леви, серонегативных артропатий, шока, серповидноклеточной анемии, отторжения аллотрансплантата кожи, синдрома кожных изменений, отторжения трансплантата тонкого кишечника, солидных опухолей, специфических аритмий, спинальной атаксии, спиномозжечковых дегенераций, стрептококкового миозита, структурных повреждений мозжечка, подострого склерозирующего панэнцефалита, обмороков, сифилиса сердечно-сосудистой системы, системной анафилаксии, синдрома системного воспалительного ответа, ювенильного ревматоидного артрита с системным началом, Т-клеточного или FAB ALL, телеангиэктазии, облитерирующего тромбоангита, тромбоцитопении, токсичности, трансплантации, травмы/кровопотери, реакций гиперчувствительности типа III, гиперчувствительности типа IV, нестабильной стенокардии, уремии, уросепсиса, крапивницы, заболеваний клапанов сердца, варикоза вен, васкулита, заболеваний вен, венозного тромбоза, фибрилляции желудочков, вирусных и грибковых инфекций, энцефалита с высоким риском смертельного исхода/асептического менингита, гемофагоцитарного синдрома
80
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) с высоким риском смертельного исхода, синдрома Вернике-Корсакова, болезни Вилсона, отторжения ксенотрансплантата любого органа или ткани, острого коронарного синдрома, острого идиопатического полиневрита, острой воспалительной демиелинизирующей полирадикулоневропатии, острой ишемии, болезни Стилла взрослых, очаговой алопеции, анафилаксии, синдрома антифосфолипидных антител, апластической анемии, артериосклероза, атопической экземы, атопического дерматита, аутоиммунного дерматита, аутоиммунного нарушения, связанного со стрептококковой инфекцией, аутоиммунной энтеропатии, аутоиммунной потери слуха, аутоиммунного лимфопролиферативного синдрома, аутоиммунного миокардита, аутоиммунного преждевременного угасания функции яичников, блефарита, бронхоэктазов, буллезного пемфигоида, сердечно-сосудистого заболевания, катастрофического антифосфолипидного синдрома, глютеиновой болезни, шейного спондилеза, хронической ишемии, рубцового пемфигоида, клинически изолированного синдрома (cis) с риском рассеянного склероза, конъюнктивита, психиатрического нарушения с началом в детском возрасте, хронического обструктивного заболевания легких (ХОЗЛ), дакриоцистита, дерматомиозита, диабетической ретинопатии, сахарного диабета, грыжи межпозвоночного диска, пролапса межпозвоночного диска, индуцированной лекарственным средством иммунной гемолитической анемии, эндокардита, эндометриоза, эндофтальмита, эписклерита, полиформной эритемы, тяжелой полиформной эритемы, гестационного пемфигоида, синдрома Гийена-Барре,сенной лихорадки, синдрома Хьюза, идиопатической болезни Паркинсона, идиопатической интерстициальной пневмонии, опосредуемой IgE аллергии, иммунной гемолитической анемии, миозита с тельцами включения, инфекционного воспалительного заболевания глаз, воспалительного демиелинизирующего заболевания, воспалительного заболевания сердца, воспалительного заболевания почек, идиопатического пневмосклероза/ идиопатического легочного фиброза, ирита, кератита, сухого
81
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) кератоконъюнктивита, болезни Куссмауля или болезни Куссмауля-Мейера, паралича Ландри, гистиоцитоза клеток Лангерганса, синдрома мраморной кожи, дегенерации желтого пятна, микроскопического полиангиита, болезни Бехтерева, нарушений двигательных нейронов, пемфигоида слизистых оболочек, полиорганной недостаточности, миастении, миелодиспластического синдрома, миокардита, нарушений корешков нервов, невропатии, не-А не-В гепатита, оптического неврита, остеолизиса, рака яичника, олигоартикулярного ювенильного ревматоидного артрита, окклюзионого заболевания периферических артерий, заболевания периферических сосудов, заболевания периферических артерий (ЗПА), флебита, узелкового полиартериита (или нодозного полиартериита), полихондрита, ревматической полимиалгии, полиоза, полиартикулярного ювенильного ревматоидного артрита, синдрома полиэндокринной недостаточности, полимиозита, ревматической полимиалгии (РПМ), синдрома после искусственного кровообращения, первичного паркинсонизма, рака предстательной железы и прямой кишки и гемопоэтических злокачественных опухолей (лейкоз и лимфому), простатита, истинной эритроцитарной аплазии, первичной недостаточности надпочечников, рецидивирующего оптического нейромиелита, рестеноза, ревматической болезни сердца, SAPHO (синовит, акне, пустулез, гиперостоз и остеит), склеродермии, вторичного амилоидоза, шокового легкого, склерита, ишиаса, вторичной недостаточности надпочечников, связанного с кремнийорганическими соединениями заболевания соединительных тканей, дерматоза Снеддона-Уилкинсона, анкилозирующего спондилита, синдрома Стивенса-Джонсона (SJS), синдрома системного воспалительного ответа, височного артериита, токсоплазменного ретинита, токсического эпидермального некролиза, поперечного миелита, TRAPS (связанный с рецептором фактора некроза опухоли периодический синдром), аллергической реакции I типа, диабета типа И, крапивницы, обычной интерстициальной пневмонии, васкулита, весеннего конъюнктивита,
82
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) вирусного ретинита, синдрома Фогта-Коянаги-Харада (синдром VKH), влажной дегенерации желтого пятна, заживления ран и связанной с иерсиниями и сальмонеллами артропатии.
43. Способ лечения по п. 41, дополнительно включающий введение блокаторов ФНО-α или других антител к IL- 17 А.
83
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26)
PCT/RU2014/000808 2014-03-14 2014-10-27 Анти-il-17-антитела, способ их получения и способ применения WO2015137843A1 (ru)

Priority Applications (8)

Application Number Priority Date Filing Date Title
BR112016010513A BR112016010513A2 (pt) 2014-03-14 2014-10-27 anticorpos anti-il-17, método de produção e uso dos mesmos
EP14885545.5A EP3130604A4 (en) 2014-03-14 2014-10-27 Anti-il-17 antibodies, method for producing same and method for using same
EA201600276A EA034854B1 (ru) 2014-03-14 2014-10-27 Анти-il-17-антитела, способ их получения и способ применения
JP2016555518A JP6647208B2 (ja) 2014-03-14 2014-10-27 抗ｉｌ−１７抗体、その生産および使用のための方法
MX2016005765A MX2016005765A (es) 2014-03-14 2014-10-27 Anticuerpos anti-il-17, un metodo para producir y utilizar los mismos.
CN201480027341.6A CN106795219B (zh) 2014-03-14 2014-10-27 抗il-17抗体及其生产和使用的方法
ZA2016/02040A ZA201602040B (en) 2014-03-14 2016-03-29 Anti-il-17 antibodies, a method for producing and using thereof
US15/254,190 US10442857B2 (en) 2014-03-14 2016-09-01 Anti-IL-17 antibodies

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2014109854 2014-03-14
RU2014109854/10A RU2577228C2 (ru) 2014-03-14 2014-03-14 Анти-il-17-антитела, способ их получения и способ применения

Related Child Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
US15/254,190 Continuation US10442857B2 (en) 2014-03-14 2016-09-01 Anti-IL-17 antibodies

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2015137843A1 true WO2015137843A1 (ru) 2015-09-17

Family

ID=54072148

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/RU2014/000808 WO2015137843A1 (ru) 2014-03-14 2014-10-27 Анти-il-17-антитела, способ их получения и способ применения

Country Status (13)

Country Link
US (1) US10442857B2 (ru)
EP (1) EP3130604A4 (ru)
JP (1) JP6647208B2 (ru)
CN (1) CN106795219B (ru)
AR (1) AR100573A1 (ru)
BR (1) BR112016010513A2 (ru)
EA (1) EA034854B1 (ru)
MX (1) MX2016005765A (ru)
MY (1) MY175878A (ru)
RU (1) RU2577228C2 (ru)
TW (1) TWI689518B (ru)
WO (1) WO2015137843A1 (ru)
ZA (1) ZA201602040B (ru)

Cited By (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2017215524A1 (zh) * 2016-06-12 2017-12-21 三生国健药业（上海）股份有限公司 抗人白细胞介素-17a单克隆抗体、其制备方法和应用
WO2018050028A1 (zh) * 2016-09-14 2018-03-22 北京韩美药品有限公司 一种能够特异性地结合il-17a的抗体及其功能片段
WO2019061962A1 (zh) * 2017-09-30 2019-04-04 华博生物医药技术（上海）有限公司 一种抗白介素17a的抗体、其制备方法和应用
EP3689907A1 (en) 2019-01-31 2020-08-05 Numab Therapeutics AG Antibodies targeting il-17a and methods of use thereof
WO2020157305A1 (en) 2019-01-31 2020-08-06 Numab Therapeutics AG Multispecific antibodies having specificity for tnfa and il-17a, antibodies targeting il-17a, and methods of use thereof
CN112513078A (zh) * 2018-07-31 2021-03-16 沈为群 抗il-17a抗体及其用途
CN113166239A (zh) * 2018-12-12 2021-07-23 上海君实生物医药科技股份有限公司 抗il-17a抗体及其应用

Families Citing this family (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
MX2017011600A (es) * 2015-03-10 2018-06-13 Sorrento Therapeutics Inc Terapeuticos de anticuerpo que enlazan antigeno de membrana especifico de prostata.
CN108359011B (zh) * 2017-07-21 2019-06-25 华博生物医药技术（上海）有限公司 靶向于白介素17a的抗体、其制备方法和应用
CA3089709A1 (en) 2018-01-29 2019-08-01 The Regents Of The University Of California Therapies and methods to treat tlr2-mediated diseases and disorders
CN108333373B (zh) * 2018-03-28 2021-04-27 徐昉 血清炎症因子的应用
CN110551215A (zh) * 2018-05-30 2019-12-10 中山康方生物医药有限公司 抗白细胞介素-17a抗体、其药物组合物及其用途
RU2754760C2 (ru) * 2019-04-02 2021-09-07 Закрытое Акционерное Общество "Биокад" Водная фармацевтическая композиция анти-il17a антитела и ее применение
CN116063493B (zh) * 2022-07-22 2023-09-01 贵州省赛尔生物科技有限公司 包含抗体和间充质干细胞外泌体的药物组合物及其制备方法

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2007149032A1 (en) * 2006-06-23 2007-12-27 Astrazeneca Ab Antibody molecules for human il-17
WO2008021156A2 (en) * 2006-08-11 2008-02-21 Schering Corporation Antibodies to il-17a
US20130131319A1 (en) * 2010-03-30 2013-05-23 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Antibodies with modified affinity to fcrn that promote antigen clearance

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2007070750A1 (en) * 2005-12-13 2007-06-21 Eli Lilly And Company Anti-il-17 antibodies
WO2007106769A2 (en) * 2006-03-10 2007-09-20 Zymogenetics, Inc. Antibodies that bind both il-17a and il-17f and methods of using the same
CA2655372A1 (en) * 2006-06-13 2007-12-21 Zymogenetics, Inc. Il-17 and il-23 antagonists and methods of using the same
GB0612928D0 (en) * 2006-06-29 2006-08-09 Ucb Sa Biological products
EP2601217B1 (en) * 2010-08-05 2017-06-14 AnaptysBio, Inc. Antibodies directed against il-17
CN107029234A (zh) * 2010-10-08 2017-08-11 诺华有限公司 利用il‑17拮抗剂治疗牛皮癣的方法

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2007149032A1 (en) * 2006-06-23 2007-12-27 Astrazeneca Ab Antibody molecules for human il-17
WO2008021156A2 (en) * 2006-08-11 2008-02-21 Schering Corporation Antibodies to il-17a
US20130131319A1 (en) * 2010-03-30 2013-05-23 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Antibodies with modified affinity to fcrn that promote antigen clearance

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
CHEN GANG ET AL.: "In vitro scanning saturation mutagenesis of all the specificity determining residues in an antibody binding site.", PROTEIN ENGINEERING, vol. 12, no. 4, 1999, pages 349 - 356, XP003001853 *

Cited By (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2017215524A1 (zh) * 2016-06-12 2017-12-21 三生国健药业（上海）股份有限公司 抗人白细胞介素-17a单克隆抗体、其制备方法和应用
JP2019525730A (ja) * 2016-06-12 2019-09-12 三生国健薬業（上海）股▲ふん▼有限公司Ｓｕｎｓｈｉｎｅ Ｇｕｏｊｉａｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔ Ｉｃａｌ（Ｓｈａｎｇｈａｉ）Ｃｏ．，Ｌｔｄ 抗ヒトインターロイキン−１７ａモノクローナル抗体、その製造方法及び用途
WO2018050028A1 (zh) * 2016-09-14 2018-03-22 北京韩美药品有限公司 一种能够特异性地结合il-17a的抗体及其功能片段
US11072651B2 (en) 2016-09-14 2021-07-27 Beijing Hanmi Pharm. Co., Ltd. Antibody specifically binding to IL-17A, encoding nucleic acid, and method of using the antibody
WO2019061962A1 (zh) * 2017-09-30 2019-04-04 华博生物医药技术（上海）有限公司 一种抗白介素17a的抗体、其制备方法和应用
CN112513078A (zh) * 2018-07-31 2021-03-16 沈为群 抗il-17a抗体及其用途
CN113166239A (zh) * 2018-12-12 2021-07-23 上海君实生物医药科技股份有限公司 抗il-17a抗体及其应用
EP3689907A1 (en) 2019-01-31 2020-08-05 Numab Therapeutics AG Antibodies targeting il-17a and methods of use thereof
WO2020157305A1 (en) 2019-01-31 2020-08-06 Numab Therapeutics AG Multispecific antibodies having specificity for tnfa and il-17a, antibodies targeting il-17a, and methods of use thereof
CN113631574A (zh) * 2019-01-31 2021-11-09 努玛治疗有限公司 对TNFα和IL-17A具有特异性的多特异性抗体、靶向IL-17A的抗体及其使用方法

Also Published As

Publication number Publication date
EP3130604A1 (en) 2017-02-15
EA201600276A1 (ru) 2017-04-28
CN106795219B (zh) 2021-07-09
RU2577228C2 (ru) 2016-03-10
EA034854B1 (ru) 2020-03-30
AR100573A1 (es) 2016-10-19
CN106795219A (zh) 2017-05-31
US10442857B2 (en) 2019-10-15
JP2017508463A (ja) 2017-03-30
EP3130604A4 (en) 2017-11-01
MX2016005765A (es) 2017-01-05
RU2014109854A (ru) 2015-09-20
ZA201602040B (en) 2017-02-22
JP6647208B2 (ja) 2020-02-14
MY175878A (en) 2020-07-14
TW201538524A (zh) 2015-10-16
TWI689518B (zh) 2020-04-01
BR112016010513A2 (pt) 2017-12-05
US20170081401A1 (en) 2017-03-23

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RU2577228C2 (ru) Анти-il-17-антитела, способ их получения и способ применения
CN103596979B (zh) 针对cd70的抗体
JP7206303B2 (ja) 可変ドメインｖｌおよびｖｈｈ誘導体に基づく高アフィニティおよび凝集耐性抗体
CN101512008A (zh) 白介素-13结合蛋白
CN106573053B (zh) 干扰素α和ω抗体拮抗剂
CN110114370B (zh) 能够与人白细胞介素-6受体结合的抗体或其抗原结合片段
AU2016404449A1 (en) Trispecific antibodies against IL-17A, IL-17F and another proinflammatory molecule
AU2020407279A1 (en) Multi-specific antibody with binding specificity for human IL-13 and IL-17
OA19502A (en) Antibody Or An Antigen-Binding Fragment Thereof Capable Of Binding To A Human Receptor Of Interleukin-6.
OA19281A (en) Trispecific antibodies against II-17A, II-17F and another proinflammatory molecule.

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 14885545

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 16099537

Country of ref document: CO

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 201600276

Country of ref document: EA

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: MX/A/2016/005765

Country of ref document: MX

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 2016555518

Country of ref document: JP

Kind code of ref document: A

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

REEP Request for entry into the european phase

Ref document number: 2014885545

Country of ref document: EP

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 2014885545

Country of ref document: EP

REG Reference to national code

Ref country code: BR

Ref legal event code: B01A

Ref document number: 112016010513

Country of ref document: BR

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 112016010513

Country of ref document: BR

Kind code of ref document: A2

Effective date: 20160510