JPWO2015129858A1 - 新規ヒトtlr2及びヒトtlr4に結合する二重特異的抗体 - Google Patents
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Abstract
Description
[1]以下の(1)又は(2)から選択される、ヒトTLR2及びヒトTLR4に結合する二重特異的抗体。
(1)ヒトTLR2及びヒトTLR4に結合する二重特異的抗体であって、
1)配列番号4のアミノ酸番号1から120までのアミノ酸配列からなる抗ヒトTLR2抗体の重鎖可変領域、及び配列番号6のアミノ酸番号1から113までのアミノ酸配列からなる抗ヒトTLR2抗体の軽鎖可変領域、並びに
2)配列番号4のアミノ酸番号491から609までのアミノ酸配列からなる抗ヒトTLR4抗体の重鎖可変領域、及び配列番号4のアミノ酸番号625から732までのアミノ酸配列からなる抗ヒトTLR4抗体の軽鎖可変領域、
を含む、二重特異的抗体;又は
(2)(1)の二重特異的抗体の翻訳後修飾により生じた二重特異的抗体である、ヒトTLR2及びヒトTLR4に結合する二重特異的抗体。
[2]以下の(1)又は(2)から選択される、[1]に記載の二重特異的抗体。
(1)抗ヒトTLR2抗体及び抗ヒトTLR4抗体フラグメントを含む二重特異的抗体であって、
該抗ヒトTLR2抗体はIgG抗体であり、かつ、配列番号4のアミノ酸番号1から120までのアミノ酸配列からなる抗ヒトTLR2抗体の重鎖可変領域、及び配列番号6のアミノ酸番号1から113までのアミノ酸配列からなる抗ヒトTLR2抗体の軽鎖可変領域を含み、
該抗ヒトTLR4抗体フラグメントは一本鎖可変領域フラグメント(scFv)であり、かつ、配列番号4のアミノ酸番号491から609までのアミノ酸配列からなる抗ヒトTLR4抗体の重鎖可変領域、及び配列番号4のアミノ酸番号625から732までのアミノ酸配列からなる抗ヒトTLR4抗体の軽鎖可変領域を含む、
二重特異的抗体;又は
(2)(1)の二重特異的抗体の翻訳後修飾により生じた二重特異的抗体である、ヒトTLR2及びヒトTLR4に結合する二重特異的抗体。
[3][2]に記載の二重特異的抗体であって、該二重特異的抗体は、抗ヒトTLR2抗体及び抗ヒトTLR4抗体フラグメントを含み、
該抗ヒトTLR2抗体はIgG抗体であり、かつ、配列番号4のアミノ酸番号1から120までのアミノ酸配列からなる抗ヒトTLR2抗体の重鎖可変領域、及び配列番号6のアミノ酸番号1から113までのアミノ酸配列からなる抗ヒトTLR2抗体の軽鎖可変領域を含み、
該抗ヒトTLR4抗体フラグメントはscFvであり、かつ、配列番号4のアミノ酸番号491から609までのアミノ酸配列からなる抗ヒトTLR4抗体の重鎖可変領域、及び配列番号4のアミノ酸番号625から732までのアミノ酸配列からなる抗ヒトTLR4抗体の軽鎖可変領域を含む、
二重特異的抗体。
[4]翻訳後修飾が、抗ヒトTLR2抗体の重鎖可変領域アミノ末端(N末端)のピログルタミル化、抗ヒトTLR2抗体の重鎖カルボキシ末端(C末端)のリジン欠失、及び/又は抗ヒトTLR4抗体フラグメントの重鎖可変領域N末端のピログルタミル化である、[2]に記載の二重特異的抗体。
[5]抗ヒトTLR2抗体がヒトIgγ1定常領域である重鎖定常領域を含む、[2]〜[4]のいずれかに記載の二重特異的抗体。
[6]ヒトIgγ1定常領域がL234A及びL235Aのアミノ酸変異又はL234A、L235A及びI253Aのアミノ酸変異を有するヒトIgγ1定常領域である、[5]に記載の二重特異的抗体。
[7]抗ヒトTLR2抗体がヒトIgκ定常領域である軽鎖定常領域を含む、[2]〜[4]のいずれかに記載の二重特異的抗体。
[8]抗ヒトTLR2抗体がヒトIgγ1定常領域である重鎖定常領域及びヒトIgκ定常領域である軽鎖定常領域を含む、[2]〜[4]のいずれかに記載の二重特異的抗体。
[9]ヒトIgγ1定常領域がL234A及びL235Aのアミノ酸変異又はL234A、L235A及びI253Aのアミノ酸変異を有するヒトIgγ1定常領域である、[8]に記載の二重特異的抗体。
[10]抗ヒトTLR2抗体が、配列番号4のアミノ酸番号1から450までのアミノ酸配列からなる重鎖、及び配列番号6のアミノ酸配列からなる軽鎖を含む、[2]又は[3]に記載の二重特異的抗体。
[11]抗ヒトTLR4抗体フラグメントが、重鎖可変領域のC末端に軽鎖可変領域のN末端がリンカーを介して連結された構造を有するscFvである、[2]〜[10]のいずれかに記載の二重特異的抗体。
[12]抗ヒトTLR4抗体フラグメントが、配列番号4のアミノ酸番号491から732までのアミノ酸配列からなるscFvである、[2]〜[11]のいずれかに記載の二重特異的抗体。
[13]抗ヒトTLR2抗体が、配列番号4のアミノ酸番号1から450までのアミノ酸配列からなる重鎖、及び配列番号6のアミノ酸配列からなる軽鎖を含み、抗ヒトTLR4抗体フラグメントが、配列番号4のアミノ酸番号491から732までのアミノ酸配列からなるscFvである、[2]又は[3]に記載の二重特異的抗体。
[14]抗ヒトTLR2抗体の各重鎖のC末端に抗ヒトTLR4抗体フラグメントのN末端がリンカーを介して連結されている、[2]〜[13]のいずれかに記載の二重特異的抗体。
[15]抗ヒトTLR2抗体の重鎖と抗ヒトTLR4抗体フラグメントを連結するリンカーがGSリンカーからなる、[14]に記載の二重特異的抗体。
[16]GSリンカーが配列番号9のアミノ酸配列からなる、[15]に記載の二重特異的抗体。
[17]抗ヒトTLR2抗体が、配列番号4のアミノ酸番号1から450までのアミノ酸配列からなる重鎖、及び配列番号6のアミノ酸配列からなる軽鎖を含み、抗ヒトTLR4抗体フラグメントが、配列番号4のアミノ酸番号491から732までのアミノ酸配列からなるscFvであり、該抗ヒトTLR2抗体の各重鎖のC末端に該抗ヒトTLR4抗体フラグメントのN末端がリンカーを介して連結されている、[2]又は[3]に記載の二重特異的抗体。
[18]抗ヒトTLR2抗体の重鎖と抗ヒトTLR4抗体フラグメントを連結するリンカーがGSリンカーからなる、[17]に記載の二重特異的抗体。
[19]GSリンカーが配列番号9のアミノ酸配列からなる、[18]に記載の二重特異的抗体。
[20][17]〜[19]のいずれかに記載の二重特異的抗体の翻訳後修飾により生じた二重特異的抗体。
[21][1]に記載の二重特異的抗体の抗ヒトTLR2抗体の重鎖可変領域、抗ヒトTLR2抗体の軽鎖可変領域、抗ヒトTLR4抗体の重鎖可変領域、及び/又は抗ヒトTLR4抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含む、ポリヌクレオチド。
[22][17]〜[19]のいずれかに記載の二重特異的抗体の抗ヒトTLR2抗体の重鎖のC末端に抗ヒトTLR4抗体フラグメントのN末端がリンカーを介して連結されている融合体をコードする塩基配列を含む、ポリヌクレオチド。
[23]配列番号4のアミノ酸配列からなる前記融合体をコードする塩基配列を含む、[22]に記載のポリヌクレオチド。
[24][17]〜[19]のいずれかに記載の二重特異的抗体の抗ヒトTLR2抗体の軽鎖をコードする塩基配列を含む、ポリヌクレオチド。
[25][21]に記載のポリヌクレオチドを含む発現ベクター。
[26][22]、[23]、及び/又は[24]に記載のポリヌクレオチドを含む発現ベクター。
[27]以下の(a)〜(d)からなる群より選択される、[25]に記載の発現ベクターで形質転換された宿主細胞。
(a)配列番号4のアミノ酸番号1から120までのアミノ酸配列からなる抗ヒトTLR2抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド、配列番号4のアミノ酸番号491から609までのアミノ酸配列からなる抗ヒトTLR4抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド、及び配列番号4のアミノ酸番号625から732までのアミノ酸配列からなる抗ヒトTLR4抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターと、配列番号6のアミノ酸番号1から113までのアミノ酸配列からなる抗ヒトTLR2抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された、宿主細胞;
(b)配列番号4のアミノ酸番号1から120までのアミノ酸配列からなる抗ヒトTLR2抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド、配列番号4のアミノ酸番号491から609までのアミノ酸配列からなる抗ヒトTLR4抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド、配列番号4のアミノ酸番号625から732までのアミノ酸配列からなる抗ヒトTLR4抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド、及び配列番号6のアミノ酸番号1から113までのアミノ酸配列からなる抗ヒトTLR2抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された、宿主細胞;
(c)配列番号4のアミノ酸番号1から120までのアミノ酸配列からなる抗ヒトTLR2抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド、配列番号4のアミノ酸番号491から609までのアミノ酸配列からなる抗ヒトTLR4抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド、及び配列番号4のアミノ酸番号625から732までのアミノ酸配列からなる抗ヒトTLR4抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された、宿主細胞;並びに
(d)配列番号6のアミノ酸番号1から113までのアミノ酸配列からなる抗ヒトTLR2抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された、宿主細胞。
[28]以下の(a)〜(d)からなる群より選択される、[26]に記載の発現ベクターで形質転換された宿主細胞。
(a)[22]又は[23]に記載のポリヌクレオチドを含む発現ベクターと[24]に記載のポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞;
(b)[22]又は[23]に記載のポリヌクレオチドと[24]に記載のポリヌクレオチドとを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞;
(c)[22]又は[23]に記載のポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞;及び
(d)[24]に記載のポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞。
[29]以下の(a)〜(c)からなる群より選択される宿主細胞を培養し、ヒトTLR2及びヒトTLR4に結合する二重特異的抗体を発現させる工程を包含する、ヒトTLR2及びヒトTLR4に結合する二重特異的抗体を生産する方法。
(a)配列番号4のアミノ酸番号1から120までのアミノ酸配列からなる抗ヒトTLR2抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド、配列番号4のアミノ酸番号491から609までのアミノ酸配列からなる抗ヒトTLR4抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド、及び配列番号4のアミノ酸番号625から732までのアミノ酸配列からなる抗ヒトTLR4抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターと、配列番号6のアミノ酸番号1から113までのアミノ酸配列からなる抗ヒトTLR2抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された、宿主細胞;
(b)配列番号4のアミノ酸番号1から120までのアミノ酸配列からなる抗ヒトTLR2抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド、配列番号4のアミノ酸番号491から609までのアミノ酸配列からなる抗ヒトTLR4抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド、配列番号4のアミノ酸番号625から732までのアミノ酸配列からなる抗ヒトTLR4抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド、及び配列番号6のアミノ酸番号1から113までのアミノ酸配列からなる抗ヒトTLR2抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された、宿主細胞;並びに
(c)配列番号4のアミノ酸番号1から120までのアミノ酸配列からなる抗ヒトTLR2抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド、配列番号4のアミノ酸番号491から609までのアミノ酸配列からなる抗ヒトTLR4抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド、及び配列番号4のアミノ酸番号625から732までのアミノ酸配列からなる抗ヒトTLR4抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された、宿主細胞、並びに、配列番号6のアミノ酸番号1から113までのアミノ酸配列からなる抗ヒトTLR2抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された、宿主細胞。
[30]以下の(a)〜(c)からなる群より選択される宿主細胞を培養し、ヒトTLR2及びヒトTLR4に結合する二重特異的抗体を発現させる工程を包含する、ヒトTLR2及びヒトTLR4に結合する二重特異的抗体を生産する方法。
(a)[22]又は[23]に記載のポリヌクレオチドを含む発現ベクターと[24]に記載のポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞;
(b)[22]又は[23]に記載のポリヌクレオチドと[24]に記載のポリヌクレオチドとを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞;及び
(c)[22]又は[23]に記載のポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞、及び、[24]に記載のポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞。
[31][29]に記載の方法で生産されたヒトTLR2及びヒトTLR4に結合する二重特異的抗体。
[32][30]に記載の方法で生産されたヒトTLR2及びヒトTLR4に結合する二重特異的抗体。
[33][1]〜[20]、[31]及び[32]のいずれかに記載の二重特異的抗体及び薬学的に許容される賦形剤を含有する医薬組成物。
[34]免疫炎症性疾患の予防又は治療用医薬組成物である、[33]に記載の医薬組成物。
[35]免疫炎症性疾患が敗血症又は急性膵炎である、[34]に記載の医薬組成物。
[36][1]〜[20]、[31]及び[32]のいずれかに記載の二重特異的抗体の治療有効量を投与する工程を包含する、免疫炎症性疾患を予防又は治療する方法。
[37]免疫炎症性疾患が敗血症又は急性膵炎である、[36]に記載の予防又は治療する方法。
[38]免疫炎症性疾患の予防又は治療に使用するための、[1]〜[20]、[31]及び[32]のいずれかに記載の二重特異的抗体。
[39]免疫炎症性疾患が敗血症又は急性膵炎である、[38]に記載の二重特異的抗体。
[40]免疫炎症性疾患の予防又は治療用医薬組成物製造における[1]〜[20]、[31]及び[32]のいずれかに記載の二重特異的抗体の使用。
[41]免疫炎症性疾患が敗血症又は急性膵炎である、[40]に記載の二重特異的抗体の使用。
[42]以下の(1)又は(2)から選択される、抗ヒトTLR2抗体又はその抗原結合フラグメント。
(1)配列番号8のアミノ酸番号1から120までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域、及び配列番号6のアミノ酸番号1から113までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む、抗ヒトTLR2抗体又はその抗原結合フラグメント;又は
(2)(1)の抗ヒトTLR2抗体又はその抗原結合フラグメントの翻訳後修飾により生じた抗体又はその抗原結合フラグメントである、抗ヒトTLR2抗体又はその抗原結合フラグメント。
[43]配列番号8のアミノ酸番号1から120までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号6のアミノ酸番号1から113までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む、[42]に記載の抗ヒトTLR2抗体又はその抗原結合フラグメント。
[44]配列番号8のアミノ酸番号1から120までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号6のアミノ酸番号1から113までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む抗ヒトTLR2抗体又はその抗原結合フラグメントの翻訳後修飾により生じた抗体又はその抗原結合フラグメントである、[42]に記載の抗ヒトTLR2抗体又はその抗原結合フラグメント。
[45]翻訳後修飾が重鎖可変領域N末端のピログルタミル化及び/又は重鎖C末端のリジン欠失である、[42]又は[44]に記載の抗ヒトTLR2抗体又はその抗原結合フラグメント。
[46]ヒトIgγ1定常領域である重鎖定常領域を含む、[42]〜[45]のいずれかに記載の抗ヒトTLR2抗体又はその抗原結合フラグメント。
[47]ヒトIgγ1定常領域がL234A及びL235Aのアミノ酸変異又はL234A、L235A及びI253Aのアミノ酸変異を有するヒトIgγ1定常領域である、[46]に記載の抗ヒトTLR2抗体又はその抗原結合フラグメント。
[48]ヒトIgκ定常領域である軽鎖定常領域を含む、[42]〜[45]のいずれかに記載の抗ヒトTLR2抗体又はその抗原結合フラグメント。
[49]ヒトIgγ1定常領域である重鎖定常領域及びヒトIgκ定常領域である軽鎖定常領域を含む、[42]〜[44]のいずれかに記載の抗ヒトTLR2抗体又はその抗原結合フラグメント。
[50]ヒトIgγ1定常領域がL234A及びL235A、又はL234A、L235A及びI253Aのアミノ酸変異を有するヒトIgγ1定常領域である、[49]に記載の抗ヒトTLR2抗体又はその抗原結合フラグメント。
[51]配列番号8のアミノ酸番号1から450までのアミノ酸配列からなる重鎖、及び配列番号6のアミノ酸配列からなる軽鎖を含む、[42]又は[43]に記載の抗ヒトTLR2抗体。
[52]一本鎖可変領域フラグメント、Fab、Fab’、又はF(ab’)2である、[42]〜[50]のいずれかに記載の抗原結合フラグメント。
[53][51]に記載の抗ヒトTLR2抗体の翻訳後修飾により生じた抗体である、抗ヒトTLR2抗体。
[54]翻訳後修飾が、重鎖可変領域N末端のピログルタミル化及び/又は重鎖C末端のリジン欠失である、[53]に記載の抗ヒトTLR2抗体。
[55]配列番号8のアミノ酸番号1から449までのアミノ酸配列からなる重鎖、及び配列番号6のアミノ酸配列からなる軽鎖を含む、[42]又は[44]に記載の抗ヒトTLR2抗体。
[56]以下の(a)〜(c)からなる群より選択される宿主細胞を培養し、抗ヒトTLR2抗体又はその抗原結合フラグメントを発現させる工程を包含する、抗ヒトTLR2抗体又はその抗原結合フラグメントを生産する方法。
(a)[43]に記載の抗ヒトTLR2抗体又はその抗原結合フラグメントの重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドと該抗体又はその抗原結合フラグメントの軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドとを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞;
(b)[43]に記載の抗ヒトTLR2抗体又はその抗原結合フラグメントの重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターと該抗体又はその抗原結合フラグメントの軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞;並びに
(c)[43]に記載の抗ヒトTLR2抗体又はその抗原結合フラグメントの重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞、及び、該抗体又はその抗原結合フラグメントの軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞。
[57]以下の(a)〜(c)からなる群より選択される宿主細胞を培養し、抗ヒトTLR2抗体を発現させる工程を包含する、抗ヒトTLR2抗体を生産する方法。
(a)[51]に記載の抗ヒトTLR2抗体の重鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドと該抗体の軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドとを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞;
(b)[51]に記載の抗ヒトTLR2抗体の重鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターと該抗体の軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞;並びに
(c)[51]に記載の抗ヒトTLR2抗体の重鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞、及び、該抗体の軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞。
[58][56]に記載の方法で生産された抗ヒトTLR2抗体又はその抗原結合フラグメント。
[59][57]に記載の方法で生産された抗ヒトTLR2抗体。
[60][42]〜[55]、[58]、及び[59]のいずれかに記載の抗ヒトTLR2抗体又はその抗原結合フラグメント及び薬学的に許容される賦形剤を含有する医薬組成物。
[61][43]に記載の抗ヒトTLR2抗体又はその抗原結合フラグメント、[44]に記載の抗ヒトTLR2抗体又はその抗原結合フラグメント、及び、薬学的に許容される賦形剤を含む、医薬組成物。
[62][51]に記載の抗ヒトTLR2抗体、[55]に記載の抗ヒトTLR2抗体、及び、薬学的に許容される賦形剤を含む、医薬組成物。
[63]がんの予防又は治療用医薬組成物である、[60]〜[62]のいずれかに記載の医薬組成物。
[64][42]〜[55]、[58]、及び[59]のいずれかに記載の抗ヒトTLR2抗体又はその抗原結合フラグメントの治療有効量を投与する工程を包含する、がんを予防又は治療する方法。
[65]がんの予防又は治療に使用するための、[42]〜[55]、[58]、及び[59]のいずれかに記載の抗ヒトTLR2抗体又はその抗原結合フラグメント。
[66]がんの予防又は治療用医薬組成物製造における[42]〜[55]、[58]、及び[59]のいずれかに記載の抗ヒトTLR2又はその抗原結合フラグメントの使用。
本明細書中で「ヒトTLR2及びヒトTLR4に結合する二重特異的抗体」とは、ヒトTLR2に対する結合活性及びヒトTLR4に対する結合活性を有する二重特異的抗体を意味し、具体的には、本発明の二重特異的抗体には、以下の特徴を有する二重特異的抗体が含まれる:
ヒトTLR2及びヒトTLR4に結合する二重特異的抗体であって、
1)配列番号4のアミノ酸番号1から120までのアミノ酸配列からなる抗ヒトTLR2抗体の重鎖可変領域、及び配列番号6のアミノ酸番号1から113までのアミノ酸配列からなる抗ヒトTLR2抗体の軽鎖可変領域;並びに
2)配列番号4のアミノ酸番号491から609までのアミノ酸配列からなる抗ヒトTLR4抗体の重鎖可変領域、及び配列番号4のアミノ酸番号625から732までのアミノ酸配列からなる抗ヒトTLR4抗体の軽鎖可変領域、
を含む、二重特異的抗体。
配列番号4のアミノ酸配列からなり、配列番号4のアミノ酸番号1のグルタミン酸がピログルタミン酸に修飾された抗ヒトTLR2抗体重鎖−抗ヒトTLR4抗体scFv融合体、及び配列番号6のアミノ酸配列からなる抗ヒトTLR2抗体の軽鎖を含む、ヒトTLR2及びヒトTLR4に結合する二重特異的抗体。
ヒトTLR2及びヒトTLR4に結合する二重特異的抗体であって、
1)配列番号4のアミノ酸番号31から35までのアミノ酸配列からなるCDR1、配列番号4のアミノ酸番号50から66までのアミノ酸配列からなるCDR2、及び配列番号4のアミノ酸番号99から109までのアミノ酸配列からなるCDR3を含む抗ヒトTLR2抗体の重鎖可変領域、並びに配列番号6のアミノ酸番号24から39までのアミノ酸配列からなるCDR1、配列番号6のアミノ酸番号55から61までのアミノ酸配列からなるCDR2、及び配列番号6のアミノ酸番号94から102までのアミノ酸配列からなるCDR3を含む抗ヒトTLR2抗体の軽鎖可変領域;並びに
2)配列番号4のアミノ酸番号521から525までのアミノ酸配列からなるCDR1、配列番号4のアミノ酸番号540から556までのアミノ酸配列からなるCDR2、及び配列番号4のアミノ酸番号589から598までのアミノ酸配列からなるCDR3を含む抗ヒトTLR4抗体の重鎖可変領域、並びに配列番号4のアミノ酸番号648から658までのアミノ酸配列からなるCDR1、配列番号4のアミノ酸番号674から680までのアミノ酸配列からなるCDR2、及び配列番号4のアミノ酸番号713から721までのアミノ酸配列からなるCDR3を含む抗ヒトTLR4抗体の軽鎖可変領域
を含む、二重特異的抗体。
本発明のポリヌクレオチドには、本発明のヒトTLR2及びヒトTLR4に結合する二重特異的抗体に含まれる抗ヒトTLR2抗体の重鎖可変領域(配列番号4のアミノ酸番号1から120までのアミノ酸配列からなる)をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド、該二重特異的抗体に含まれる抗ヒトTLR2抗体の軽鎖可変領域(配列番号6のアミノ酸番号1から113までのアミノ酸配列からなる)をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド、該二重特異的抗体に含まれる抗ヒトTLR4抗体の重鎖可変領域(配列番号4のアミノ酸番号491から609までのアミノ酸配列からなる)をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド、又は該二重特異的抗体に含まれる抗ヒトTLR4抗体の軽鎖可変領域(配列番号4のアミノ酸番号625から732までのアミノ酸配列からなる)をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドが含まれる。
本発明の発現ベクターには、本発明のヒトTLR2及びヒトTLR4に結合する二重特異的抗体に含まれる抗ヒトTLR2抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド、該二重特異的抗体に含まれる抗ヒトTLR2抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド、該二重特異的抗体に含まれる抗ヒトTLR4抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド、及び/又は該二重特異的抗体に含まれる抗ヒトTLR4抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターであって、本発明のヒトTLR2及びヒトTLR4に結合する二重特異的抗体の生産に使用され得るベクターが含まれる。当該分野において種々のフォーマットの二重特異的抗体及びその生産方法が公知であり、本発明の発現ベクターは、これらの生産方法に従って、発現させる二重特異的抗体のフォーマットに応じて当業者に容易に構築され得る。
本発明の形質転換された宿主細胞は、本発明の発現ベクターで形質転換されている限り、特に限定されるものではないが、例えば、IgG(TLR2)−scFv(TLR4)である本発明の二重特異的抗体を生産するために使用される、本発明の形質転換された宿主細胞として、該二重特異的抗体に含まれる抗ヒトTLR2抗体の重鎖可変領域、該二重特異的抗体に含まれる抗ヒトTLR4抗体の重鎖可変領域、及び該二重特異的抗体に含まれる抗ヒトTLR4抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドと、該二重特異的抗体に含まれる抗ヒトTLR2抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドのいずれか又は両方を含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞が挙げられる。
(a)配列番号4のアミノ酸番号1から120までのアミノ酸配列からなる抗ヒトTLR2抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド、配列番号4のアミノ酸番号491から609までのアミノ酸配列からなる抗ヒトTLR4抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド、及び配列番号4のアミノ酸番号625から732までのアミノ酸配列からなる抗ヒトTLR4抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターと、配列番号6のアミノ酸番号1から113までのアミノ酸配列からなる抗ヒトTLR2抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された、宿主細胞;
(b)配列番号4のアミノ酸番号1から120までのアミノ酸配列からなる抗ヒトTLR2抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド、配列番号4のアミノ酸番号491から609までのアミノ酸配列からなる抗ヒトTLR4抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド、配列番号4のアミノ酸番号625から732までのアミノ酸配列からなる抗ヒトTLR4抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド、及び配列番号6のアミノ酸番号1から113までのアミノ酸配列からなる抗ヒトTLR2抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された、宿主細胞;
(c)配列番号4のアミノ酸番号1から120までのアミノ酸配列からなる抗ヒトTLR2抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド、配列番号4のアミノ酸番号491から609までのアミノ酸配列からなる抗ヒトTLR4抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド、及び配列番号4のアミノ酸番号625から732までのアミノ酸配列からなる抗ヒトTLR4抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された、宿主細胞;並びに
(d)配列番号6のアミノ酸番号1から113までのアミノ酸配列からなる抗ヒトTLR2抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された、宿主細胞。
(a)配列番号4のアミノ酸番号1から450までのアミノ酸配列からなる抗ヒトTLR2抗体の重鎖のC末端に配列番号4のアミノ酸番号491から732までのアミノ酸配列からなる抗ヒトTLR4抗体フラグメントのN末端がリンカーを介して連結されている抗ヒトTLR2抗体重鎖−抗ヒトTLR4抗体scFv融合体をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターと、配列番号6のアミノ酸配列からなる抗ヒトTLR2抗体の軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された、宿主細胞;
(b)配列番号4のアミノ酸番号1から450までのアミノ酸配列からなる抗ヒトTLR2抗体の重鎖のC末端に配列番号4のアミノ酸番号491から732までのアミノ酸配列からなる抗ヒトTLR4抗体フラグメントのN末端がリンカーを介して連結されている抗ヒトTLR2抗体重鎖−抗ヒトTLR4抗体scFv融合体をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドと配列番号6のアミノ酸配列からなる抗ヒトTLR2抗体の軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された、宿主細胞。
(c)配列番号4のアミノ酸番号1から450までのアミノ酸配列からなる抗ヒトTLR2抗体の重鎖のC末端に配列番号4のアミノ酸番号491から732までのアミノ酸配列からなる抗ヒトTLR4抗体フラグメントのN末端がリンカーを介して連結されている抗ヒトTLR2抗体重鎖−抗ヒトTLR4抗体scFv融合体をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された、宿主細胞;及び
(d)配列番号6のアミノ酸配列からなる抗ヒトTLR2抗体の軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された、宿主細胞。
(a)配列番号4のアミノ酸配列からなる抗ヒトTLR2抗体重鎖−抗ヒトTLR4抗体scFv融合体をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターと、配列番号6のアミノ酸配列からなる抗ヒトTLR2抗体の軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された、宿主細胞;
(b)配列番号4のアミノ酸配列からなる抗ヒトTLR2抗体重鎖−抗ヒトTLR4抗体scFv融合体をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドと配列番号6のアミノ酸配列からなる抗ヒトTLR2抗体の軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された、宿主細胞;
(c)配列番号4のアミノ酸配列からなる抗ヒトTLR2抗体重鎖−抗ヒトTLR4抗体scFv融合体をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された、宿主細胞;及び
(d)配列番号6のアミノ酸配列からなる抗ヒトTLR2抗体の軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された、宿主細胞。
本発明のヒトTLR2及びヒトTLR4に結合する二重特異的抗体を生産する方法は、本発明の形質転換された宿主細胞を培養し、ヒトTLR2及びヒトTLR4に結合する二重特異的抗体を発現させる工程を包含している限り、特に限定されるものではない。該方法で使用される好ましい宿主細胞としては、前述の好ましい本発明の形質転換された宿主細胞が挙げられる。
(a)配列番号4のアミノ酸番号1から120までのアミノ酸配列からなる抗ヒトTLR2抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド、配列番号4のアミノ酸番号491から609までのアミノ酸配列からなる抗ヒトTLR4抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド、及び配列番号4のアミノ酸番号625から732までのアミノ酸配列からなる抗ヒトTLR4抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターと、配列番号6のアミノ酸番号1から113までのアミノ酸配列からなる抗ヒトTLR2抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された、宿主細胞;
(b)配列番号4のアミノ酸番号1から120までのアミノ酸配列からなる抗ヒトTLR2抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド、配列番号4のアミノ酸番号491から609までのアミノ酸配列からなる抗ヒトTLR4抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド、配列番号4のアミノ酸番号625から732までのアミノ酸配列からなる抗ヒトTLR4抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド、及び配列番号6のアミノ酸番号1から113までのアミノ酸配列からなる抗ヒトTLR2抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された、宿主細胞;並びに
(c)配列番号4のアミノ酸番号1から120までのアミノ酸配列からなる抗ヒトTLR2抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド、配列番号4のアミノ酸番号491から609までのアミノ酸配列からなる抗ヒトTLR4抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド、及び配列番号4のアミノ酸番号625から732までのアミノ酸配列からなる抗ヒトTLR4抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された、宿主細胞、並びに、配列番号6のアミノ酸番号1から113までのアミノ酸配列からなる抗ヒトTLR2抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された、宿主細胞。
(a)配列番号4のアミノ酸番号1から450までのアミノ酸配列からなる抗ヒトTLR2抗体の重鎖のC末端に配列番号4のアミノ酸番号491から732までのアミノ酸配列からなる抗ヒトTLR4抗体フラグメントのN末端がリンカーを介して連結されている抗ヒトTLR2抗体重鎖−抗ヒトTLR4抗体scFv融合体をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターと、配列番号6のアミノ酸配列からなる抗ヒトTLR2抗体の軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された、宿主細胞;
(b)配列番号4のアミノ酸番号1から450までのアミノ酸配列からなる抗ヒトTLR2抗体の重鎖のC末端に配列番号4のアミノ酸番号491から732までのアミノ酸配列からなる抗ヒトTLR4抗体フラグメントのN末端がリンカーを介して連結されている抗ヒトTLR2抗体重鎖−抗ヒトTLR4抗体scFv融合体をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドと配列番号6のアミノ酸配列からなる抗ヒトTLR2抗体の軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された、宿主細胞;並びに
(c)配列番号4のアミノ酸番号1から450までのアミノ酸配列からなる抗ヒトTLR2抗体の重鎖のC末端に配列番号4のアミノ酸番号491から732までのアミノ酸配列からなる抗ヒトTLR4抗体フラグメントのN末端がリンカーを介して連結されている抗ヒトTLR2抗体重鎖−抗ヒトTLR4抗体scFv融合体をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された、宿主細胞、及び、配列番号6のアミノ酸配列からなる抗ヒトTLR2抗体の軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された、宿主細胞。
(a)配列番号4のアミノ酸配列からなる抗ヒトTLR2抗体重鎖−抗ヒトTLR4抗体scFv融合体をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターと、配列番号6のアミノ酸配列からなる抗ヒトTLR2抗体の軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された、宿主細胞;
(b)配列番号4のアミノ酸配列からなる抗ヒトTLR2抗体重鎖−抗ヒトTLR4抗体scFv融合体をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドと配列番号6のアミノ酸配列からなる抗ヒトTLR2抗体の軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された、宿主細胞;及び
(c)配列番号4のアミノ酸配列からなる抗ヒトTLR2抗体重鎖−抗ヒトTLR4抗体scFv融合体をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された、宿主細胞、及び、配列番号6のアミノ酸配列からなる抗ヒトTLR2抗体の軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された、宿主細胞。
本発明の医薬組成物には、本発明のヒトTLR2及びヒトTLR4に結合する二重特異的抗体及び薬学的に許容される賦形剤を含有する医薬組成物が含まれる。本発明の医薬組成物は、当該分野において通常用いられている賦形剤、即ち、薬剤用賦形剤や薬剤用担体等を用いて、通常使用される方法によって調製することができる。これら医薬組成物の剤型の例としては、例えば、注射剤、点滴用剤等の非経口剤が挙げられ、静脈内投与、皮下投与等により投与することができる。また、製剤化にあたっては、薬学的に許容される範囲で、これら剤型に応じた担体や添加剤を使用することができる。
1)配列番号4のアミノ酸番号1から120までのアミノ酸配列からなる抗ヒトTLR2抗体の重鎖可変領域、及び配列番号6のアミノ酸番号1から113までのアミノ酸配列からなる抗ヒトTLR2抗体の軽鎖可変領域、並びに
2)配列番号4のアミノ酸番号491から609までのアミノ酸配列からなる抗ヒトTLR4抗体の重鎖可変領域、及び配列番号4のアミノ酸番号625から732までのアミノ酸配列からなる抗ヒトTLR4抗体の軽鎖可変領域、
を含む、ヒトTLR2及びヒトTLR4に結合する二重特異的抗体、並びに、
該二重特異的抗体の翻訳後修飾により生じた二重特異的抗体である、ヒトTLR2及びヒトTLR4に結合する二重特異的抗体、
を含有する医薬組成物。
(1)配列番号4のアミノ酸配列からなり、アミノ酸番号1のグルタミン酸がピログルタミン酸に修飾された抗ヒトTLR2抗体重鎖−抗ヒトTLR4抗体scFv融合体、及び配列番号6のアミノ酸配列からなる抗ヒトTLR2抗体の軽鎖を含む、ヒトTLR2及びヒトTLR4に結合する二重特異的抗体。
(2)配列番号4のアミノ酸配列からなる抗ヒトTLR2抗体重鎖−抗ヒトTLR4抗体scFv融合体、及び配列番号6のアミノ酸配列からなる抗ヒトTLR2抗体の軽鎖を含む、ヒトTLR2及びヒトTLR4に結合する二重特異的抗体。
配列番号4に示されるアミノ酸配列からなる抗ヒトTLR2抗体重鎖−抗ヒトTLR4抗体scFv融合体及び配列番号6に示されるアミノ酸配列からなる抗ヒトTLR2抗体の軽鎖を含むヒトTLR2及びヒトTLR4に結合する二重特異的抗体、及び、薬学的に許容される賦形剤を含む、医薬組成物。
本発明は、配列番号8のアミノ酸番号31から35までのアミノ酸配列からなるCDR1、配列番号8のアミノ酸番号50から66までのアミノ酸配列からなるCDR2、及び配列番号8のアミノ酸番号99から109までのアミノ酸配列からなるCDR3を含む抗ヒトTLR2抗体の重鎖可変領域、並びに、配列番号6のアミノ酸番号24から39までのアミノ酸配列からなるCDR1、配列番号6のアミノ酸番号55から61までのアミノ酸配列からなるCDR2、及び配列番号6のアミノ酸番号94から102までのアミノ酸配列からなるCDR3を含む抗ヒトTLR2抗体の軽鎖可変領域を含む、抗ヒトTLR2抗体又はその抗原結合フラグメントを包含する。
配列番号8のアミノ酸番号1から450までのアミノ酸配列からなる重鎖、及び配列番号6のアミノ酸配列からなる軽鎖を含む抗ヒトTLR2抗体。
配列番号8のアミノ酸番号1から449までのアミノ酸配列からなる重鎖、及び配列番号6のアミノ酸配列からなる軽鎖を含む抗ヒトTLR2抗体。
配列番号8のアミノ酸番号1から120までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号6のアミノ酸番号1から113までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む抗ヒトTLR2抗体又はその抗原結合フラグメント、並びに、該抗体又はその抗原結合フラグメントの翻訳後修飾により生じた抗体又はその抗原結合フラグメントである、抗ヒトTLR2抗体又はその抗原結合フラグメントを含有する医薬組成物。
(1)配列番号8のアミノ酸番号1から449までのアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号6に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖を含む、抗ヒトTLR2抗体。
(2)配列番号8に示されるアミノ酸配列からなり、アミノ酸番号1のグルタミン酸がピログルタミン酸に修飾された重鎖及び配列番号6に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖を含む、抗ヒトTLR2抗体。
(3)配列番号8のアミノ酸番号1から449までのアミノ酸配列からなり、アミノ酸番号1のグルタミン酸がピログルタミン酸に修飾された重鎖及び配列番号6に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖を含む、抗ヒトTLR2抗体。
(4)配列番号8に示されるアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号6に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖を含む、抗ヒトTLR2抗体。
配列番号8のアミノ酸番号1から450までのアミノ酸配列からなる重鎖、及び配列番号6のアミノ酸配列からなる軽鎖を含む抗ヒトTLR2抗体、配列番号8のアミノ酸番号1から449までのアミノ酸配列からなる重鎖、及び配列番号6のアミノ酸配列からなる軽鎖を含む抗ヒトTLR2抗体、及び、薬学的に許容される賦形剤を含む、医薬組成物。
当業者であれば、当該分野で公知の方法を用いて、ヒトTLR2及びヒトTLR4に結合する二重特異的抗体、抗ヒトTLR2抗体又はその抗原結合フラグメントを、他のペプチド又は蛋白質を融合した融合抗体として作製することや、修飾剤を結合させた修飾抗体として作製することも可能である。本発明のヒトTLR2及びヒトTLR4に結合する二重特異的抗体、抗ヒトTLR2抗体又はその抗原結合フラグメントには、このような融合体や修飾体の形態の抗体又は抗原結合フラグメントも含まれる。本発明のヒトTLR2及びヒトTLR4に結合する二重特異的抗体が融合抗体としてヒトTLR2及びヒトTLR4への結合活性を有している、或いは本発明の抗ヒトTLR2抗体又はその抗原結合フラグメントが融合抗体としてヒトTLR2への結合活性を有している限り、融合に用いられる他のペプチド又は蛋白質は特に限定されず、例えば、ヒト血清アルブミン、各種タグペプチド、人工ヘリックスモチーフペプチド、マルトース結合蛋白質、グルタチオンSトランスフェラーゼ、各種毒素、その他多量体化を促進しうるペプチド又は蛋白質等が挙げられる。本発明のヒトTLR2及びヒトTLR4に結合する二重特異的抗体が融合抗体としてヒトTLR2及びヒトTLR4への結合活性を有している、或いは本発明の抗ヒトTLR2抗体又はその抗原結合フラグメントが修飾抗体としてヒトTLR2への結合活性を有している限り、修飾に用いられる修飾剤は特に限定されず、例えば、ポリエチレングリコール、糖鎖、リン脂質、リポソーム、低分子化合物等が挙げられる。
ヒトモノクローナル抗体開発技術「ベロシミューン」(VelocImmune antibody technology;Regeneron社(米国特許6596541号))マウスを用いて抗ヒトTLR2抗体を作製した。ベロシミューンマウスに、免疫反応を惹起するアジュバントと共に、ヒトTLR2蛋白質(R&D systems社、2616‐TR‐050)を免疫した。常法に従い、免疫したマウスの脾臓やリンパ節等を摘出しリンパ球を収集し、これをマウスミエローマ細胞SP2/0(ATCC:CRL−1581)と細胞融合することでハイブリドーマを作製した。モノクローン化を行い無血清培地であるCDハイブリドーマメディウム(ライフテクノロジーズ社)で培養した。得られた培養上清からプロテインGカラム(GEヘルスケア社)を用いて抗体を精製した。ベロシミューン技術では、内因性の免疫グロブリン重鎖及び軽鎖の可変領域が対応するヒト可変領域で置換されたトランスジェニックマウスを用いるため、得られた抗体は、ヒト抗体の可変領域とマウス抗体の定常領域を有する抗体(キメラ抗体とも称する)である。
実施例1で同定した抗ヒトTLR2抗体の中和活性を評価するために、ヒトTLR2を内在的に発現するヒト単球系細胞であるTHP1−xBlue細胞を用いて、TLR2/6アゴニストであるPam2CSK4誘発アルカリフォスファターゼ(AP)産生阻害アッセイを実施した。
抗ヒトTLR2抗体31−5F5−2F3を産生するハイブリドーマから抗体の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子の配列を解析し、配列決定を行った。
実施例3で作製した抗体は、可変領域がヒト由来であり、定常領域がマウス由来の抗体である。そこで、哺乳細胞発現用ベクターGSベクター(Lonza社)を用いて、重鎖及び軽鎖の両遺伝子を含む発現ベクターを構築し、完全ヒト型抗体を作製した。具体的には、31−5F5−2F3.m1の抗体の重鎖可変領域遺伝子の5’側にシグナル配列(Nigel Whittleら、Protein Engineering、1987、Vol.1、No.6、p.499−505.)をコードする遺伝子を、そして3’側にヒトIgγ1定常領域遺伝子(配列番号7の塩基番号361から1350までの塩基配列からなる)をそれぞれ繋げ、この重鎖遺伝子をGSベクターpEE6.4に挿入した。また軽鎖可変領域遺伝子の5’側にシグナル配列(Nigel Whittleら、前出)をコードする遺伝子を、そして3’側にヒトκ鎖の定常領域遺伝子(配列番号5の塩基番号340から657までの塩基配列からなる)をそれぞれ繋げ、この軽鎖遺伝子をGSベクターpEE12.4に挿入した。
実施例4で作製した完全ヒト型31−5F5−2F3.m1のヒトTLR2への結合活性を評価するために、SPR解析を実施した。
実施例4で作製した完全ヒト型31−5F5−2F3.m1のヒトTLR2に対する中和活性を評価するために、THP1−xBlue細胞を用いて、Pam2CSK4誘発AP産生阻害アッセイを実施した。THP1−xBlue細胞(Invivogen社、thpx−sp)を、5×104cells/ウェルとなるように、96ウェルプレート(ベクトンディッキンソン社)に75μL/ウェルにてRPMI1640培地(ライフテクノロジーズ社)下で播種した。細胞播種後すぐに、855nMから2.19pMの範囲で9段階にRPMI1640培地で希釈した完全ヒト型31−5F5−2F3.m1を25μL添加し、37℃、5%CO2条件下で30分間培養した。さらに、RPMI1640培地で希釈したPam2CSK4(Invivogen社、tlrl−pm2s;最終濃度100ng/mL)を25μL添加した。コントロールとして、抗体の代わりにRPMI1640培地を添加したウェル、Pam2CSK4の代わりにRPMI1640培地を添加したウェルをそれぞれ準備した。一晩37℃、5%CO2条件下で培養した後、培養上清を回収し、培養上清に含まれるAP濃度を市販のQuanti−Blue(Invivogen社)を用いて測定した。さらに抗体のPam2CSK4誘発AP産生に対するIC50値を算出した。IC50値算出にあたっては、抗体の代わりにRPMI1640培地を添加したウェルを0%抑制コントロールとし、Pam2CSK4の代わりにRPMI1640培地を添加したウェルを100%抑制コントロールとして設定した。4パラメーターロジスティック曲線当てはめにより、IC50値を算出した。
実施例4で作製した完全ヒト型31−5F5−2F3.m1のヒトTLR2に対する中和活性を評価するために、THP1−xBlue細胞を用いて、Pam2CSK4誘発AP産生阻害アッセイを実施した。比較抗体として、抗ヒトTLR2抗体である、T2.5(特許文献1)及びOPN305(特許文献3)を使用した。
抗ヒトTLR2抗体(IgG抗体)と抗ヒトTLR4抗体一本鎖可変領域フラグメント(scFv)を含む、2種の抗ヒトTLR2及び抗ヒトTLR4二重特異的抗体を作製した。本実施例で作製した二重特異的抗体は、前述のIgG(TLR2)−scFv(TLR4)型の二重特異的抗体であり、抗ヒトTLR2抗体の各重鎖のC末端に抗ヒトTLR4抗体scFvのN末端がリンカーを介して連結された構造を有する(図1)。
実施例8で作製した2種の二重特異的抗体のヒトTLR2及びヒトTLR4に対する各々の結合活性を評価するために、ヒトTLR2蛋白質及びヒトTLR4/MD2蛋白質を用いて、ELISAを行った。マキシソープ384ウェルプレートクリアー(サーモフィッシャーサイエンティフィック社)に、PBS(ライフテクノロジーズ社、10010−023)で10μg/mLの濃度に希釈したヒトTLR2蛋白質(R&D systems社、2616−TR−050)を、15μL/ウェル添加し、室温で1時間固相化した。同様にヒトTLR4/MD2蛋白質(R&D systems社、3146−TM/CF)を10μg/mLで15μL/ウェル添加し、室温で1時間固相化した。1時間後に洗浄液(0.05% Tween−20含有トリス緩衝生理食塩水(TBS))で3回ウェルを洗浄し、Blocking One(ナカライテスク社、03953−95)を100μL/ウェル添加し室温で1時間ブロッキングを行った。再び洗浄液で3回洗浄し、実施例8で作製した2種の二重特異的抗体をヒトTLR2蛋白質を固相化したウェル、ヒトTLR4/MD2蛋白質を固相化したウェルそれぞれに対して15μL/ウェル添加した。これらの抗体の希釈はPBS及びBlocking Oneを等量混合した反応緩衝液を用いて行い、75.0nMから4.47fMまで13段階に希釈した。室温で1時間静置した後に、洗浄液で3回洗浄を行った。Human IgG−heavy and light chain cross−adsorbed Antibody(BETHYL社、A80−219P)を4000倍に反応緩衝液で希釈したものを15μL/ウェル添加し、室温で1時間静置した。洗浄液で3回洗浄し、TMB PEROXIDASE SUBSTRATE ELISA(MOSS社、#TMBE−500)を15μL/ウェル添加した。ヒトTLR2蛋白質を固相化したウェルは15分後に1M硫酸(和光純薬工業社、198−09595)を15μL/ウェル添加して反応を停止した。ヒトTLR4/MD2蛋白質を固相化したウェルは5分後に1M硫酸を15μL/ウェル添加して反応を停止した。Safire2(TECAN社)で吸光度450nmを測定し、ヒトTLR2蛋白質及びヒトTLR4/MD2蛋白質に対する各抗体のEC50値をそれぞれ算出した。EC50値算出にあたっては、縦軸を測定値、横軸を抗体濃度値で描いたグラフ上のシグモイド曲線の形状から、抗体濃度の上昇に伴い測定値が収束値に達したと判断できる各抗体の測定値の最大値を100%、抗体濃度の下降に伴い測定値が収束値に達したと判断できる各抗体の測定値の最小値を0%に設定した。4パラメーターロジスティック曲線当てはめにより算出したEC50値を次に示す(表1、表2)。
表1:ヒトTLR2蛋白質に対する結合活性
実施例8で作製した二重特異的抗体の中和活性を評価するために、ヒトTLR2及びヒトTLR4/MD2を内在的に発現するヒト末梢血単核球を用いて、緑膿菌死菌誘発TNFα産生阻害アッセイを実施した。緑膿菌Pseudomonas aeruginosaは敗血症の原因菌の一つであり、ヒト末梢血単核球上のTLR2とTLR4を刺激しTNFαを産生することが知られている(Scand.J.Immunol.、2008、Vol.67、No.2、p.193−203)。
表3:正常ヒト末梢血単核球緑膿菌死菌誘発TNFα産生阻害活性
正常ヒト末梢血単核球(Lonza社、CC−2702)を384ウェルプレート(ヌンク社)に1×104Cells/ウェルとなるように、終濃度10%に適宜調製したヒト血清(Lonza社、14−490E)を含むRPMI1640培地(ライフテクノロジーズ社)を用いて30μL/ウェルで播種した。その後すぐに2.500μMから20.00fMの範囲で12段階にRPMI1640培地で希釈した精製完全ヒト型ICU−1−Igγ1又は完全ヒト型ICU−1−Igγ1−LAshを10μL添加した。また比較抗体として7.758μMから52.96fMの範囲で13段階にRPMI1640培地で希釈した精製抗ヒトTLR4抗体1E11.C2E3(特許文献6)及び抗ヒトTLR2抗体OPN305(特許文献3)の混合溶液10μLを添加した。その後37℃、5%CO2条件下で30分間培養した。さらに、臨床分離株の大腸菌Escherichia coli(21006)の加熱処理死菌をRPMI1640培地で希釈して、終濃度1×106CFU/mLとなるように10μL添加した。コントロールとして、抗体の代わりにRPMI1640培地を添加したウェル、大腸菌死菌の代わりにRPMI1640培地を添加したウェルをそれぞれ準備した。37℃、5%CO2条件下で一晩培養した後、培養上清を回収し、培養上清に含まれるTNFα濃度を市販のAlphaLISA TNFαキット(パーキンエルマー社)を用いて測定した。さらに各抗体の大腸菌死菌誘発TNFα産生に対するIC50値を算出した。IC50値算出にあたっては、抗体の代わりにRPMI1640培地を添加したウェルを0%抑制コントロールとし、大腸菌死菌の代わりにRPMI1640培地を添加したウェルを100%抑制コントロールとして設定した。4パラメーターロジスティック曲線当てはめにより算出したIC50値を次に示す(表4、図3)。
表4:正常ヒト末梢血単核球大腸菌死菌誘発TNFα産生阻害活性
Claims (42)
- 以下の(1)又は(2)から選択される、ヒトTLR2及びヒトTLR4に結合する二重特異的抗体。
(1)ヒトTLR2及びヒトTLR4に結合する二重特異的抗体であって、
1)配列番号4のアミノ酸番号1から120までのアミノ酸配列からなる抗ヒトTLR2抗体の重鎖可変領域、及び配列番号6のアミノ酸番号1から113までのアミノ酸配列からなる抗ヒトTLR2抗体の軽鎖可変領域、並びに
2)配列番号4のアミノ酸番号491から609までのアミノ酸配列からなる抗ヒトTLR4抗体の重鎖可変領域、及び配列番号4のアミノ酸番号625から732までのアミノ酸配列からなる抗ヒトTLR4抗体の軽鎖可変領域、
を含む、二重特異的抗体;又は
(2)(1)の二重特異的抗体の翻訳後修飾により生じた二重特異的抗体である、ヒトTLR2及びヒトTLR4に結合する二重特異的抗体。 - 以下の(1)又は(2)から選択される、請求項1に記載の二重特異的抗体。
(1)抗ヒトTLR2抗体及び抗ヒトTLR4抗体フラグメントを含む二重特異的抗体であって、
該抗ヒトTLR2抗体はIgG抗体であり、かつ、配列番号4のアミノ酸番号1から120までのアミノ酸配列からなる抗ヒトTLR2抗体の重鎖可変領域、及び配列番号6のアミノ酸番号1から113までのアミノ酸配列からなる抗ヒトTLR2抗体の軽鎖可変領域を含み、
該抗ヒトTLR4抗体フラグメントは一本鎖可変領域フラグメント(scFv)であり、かつ、配列番号4のアミノ酸番号491から609までのアミノ酸配列からなる抗ヒトTLR4抗体の重鎖可変領域、及び配列番号4のアミノ酸番号625から732までのアミノ酸配列からなる抗ヒトTLR4抗体の軽鎖可変領域を含む、
二重特異的抗体;又は
(2)(1)の二重特異的抗体の翻訳後修飾により生じた二重特異的抗体である、ヒトTLR2及びヒトTLR4に結合する二重特異的抗体。 - 請求項2に記載の二重特異的抗体であって、該二重特異的抗体は、抗ヒトTLR2抗体及び抗ヒトTLR4抗体フラグメントを含み、
該抗ヒトTLR2抗体はIgG抗体であり、かつ、配列番号4のアミノ酸番号1から120までのアミノ酸配列からなる抗ヒトTLR2抗体の重鎖可変領域、及び配列番号6のアミノ酸番号1から113までのアミノ酸配列からなる抗ヒトTLR2抗体の軽鎖可変領域を含み、
該抗ヒトTLR4抗体フラグメントはscFvであり、かつ、配列番号4のアミノ酸番号491から609までのアミノ酸配列からなる抗ヒトTLR4抗体の重鎖可変領域、及び配列番号4のアミノ酸番号625から732までのアミノ酸配列からなる抗ヒトTLR4抗体の軽鎖可変領域を含む、
二重特異的抗体。 - 翻訳後修飾が、抗ヒトTLR2抗体の重鎖可変領域アミノ末端(N末端)のピログルタミル化、抗ヒトTLR2抗体の重鎖カルボキシ末端(C末端)のリジン欠失、及び/又は抗ヒトTLR4抗体フラグメントの重鎖可変領域N末端のピログルタミル化である、請求項2に記載の二重特異的抗体。
- 抗ヒトTLR2抗体がヒトIgγ1定常領域である重鎖定常領域を含む、請求項2〜4のいずれかに記載の二重特異的抗体。
- ヒトIgγ1定常領域がL234A及びL235Aのアミノ酸変異又はL234A、L235A及びI253Aのアミノ酸変異を有するヒトIgγ1定常領域である、請求項5に記載の二重特異的抗体。
- 抗ヒトTLR2抗体がヒトIgκ定常領域である軽鎖定常領域を含む、請求項2〜4のいずれかに記載の二重特異的抗体。
- 抗ヒトTLR2抗体がヒトIgγ1定常領域である重鎖定常領域及びヒトIgκ定常領域である軽鎖定常領域を含む、請求項2〜4のいずれかに記載の二重特異的抗体。
- ヒトIgγ1定常領域がL234A及びL235Aのアミノ酸変異又はL234A、L235A及びI253Aのアミノ酸変異を有するヒトIgγ1定常領域である、請求項8に記載の二重特異的抗体。
- 抗ヒトTLR2抗体が、配列番号4のアミノ酸番号1から450までのアミノ酸配列からなる重鎖、及び配列番号6のアミノ酸配列からなる軽鎖を含む、請求項2又は3に記載の二重特異的抗体。
- 抗ヒトTLR4抗体フラグメントが、重鎖可変領域のC末端に軽鎖可変領域のN末端がリンカーを介して連結された構造を有するscFvである、請求項2〜10のいずれかに記載の二重特異的抗体。
- 抗ヒトTLR4抗体フラグメントが、配列番号4のアミノ酸番号491から732までのアミノ酸配列からなるscFvである、請求項2〜11のいずれかに記載の二重特異的抗体。
- 抗ヒトTLR2抗体が、配列番号4のアミノ酸番号1から450までのアミノ酸配列からなる重鎖、及び配列番号6のアミノ酸配列からなる軽鎖を含み、抗ヒトTLR4抗体フラグメントが、配列番号4のアミノ酸番号491から732までのアミノ酸配列からなるscFvである、請求項2又は3に記載の二重特異的抗体。
- 抗ヒトTLR2抗体の各重鎖のC末端に抗ヒトTLR4抗体フラグメントのN末端がリンカーを介して連結されている、請求項2〜13のいずれかに記載の二重特異的抗体。
- 抗ヒトTLR2抗体の重鎖と抗ヒトTLR4抗体フラグメントを連結するリンカーがGSリンカーからなる、請求項14に記載の二重特異的抗体。
- GSリンカーが配列番号9のアミノ酸配列からなる、請求項15に記載の二重特異的抗体。
- 抗ヒトTLR2抗体が、配列番号4のアミノ酸番号1から450までのアミノ酸配列からなる重鎖、及び配列番号6のアミノ酸配列からなる軽鎖を含み、抗ヒトTLR4抗体フラグメントが、配列番号4のアミノ酸番号491から732までのアミノ酸配列からなるscFvであり、該抗ヒトTLR2抗体の各重鎖のC末端に該抗ヒトTLR4抗体フラグメントのN末端がリンカーを介して連結されている、請求項2又は3に記載の二重特異的抗体。
- 抗ヒトTLR2抗体の重鎖と抗ヒトTLR4抗体フラグメントを連結するリンカーがGSリンカーからなる、請求項17に記載の二重特異的抗体。
- GSリンカーが配列番号9のアミノ酸配列からなる、請求項18に記載の二重特異的抗体。
- 請求項17〜19のいずれかに記載の二重特異的抗体の翻訳後修飾により生じた二重特異的抗体。
- 請求項1に記載の二重特異的抗体の抗ヒトTLR2抗体の重鎖可変領域、抗ヒトTLR2抗体の軽鎖可変領域、抗ヒトTLR4抗体の重鎖可変領域、及び/又は抗ヒトTLR4抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含む、ポリヌクレオチド。
- 請求項17〜19のいずれかに記載の二重特異的抗体の抗ヒトTLR2抗体の重鎖のC末端に抗ヒトTLR4抗体フラグメントのN末端がリンカーを介して連結されている融合体をコードする塩基配列を含む、ポリヌクレオチド。
- 配列番号4のアミノ酸配列からなる前記融合体をコードする塩基配列を含む、請求項22に記載のポリヌクレオチド。
- 請求項17〜19のいずれかに記載の二重特異的抗体の抗ヒトTLR2抗体の軽鎖をコードする塩基配列を含む、ポリヌクレオチド。
- 請求項21に記載のポリヌクレオチドを含む発現ベクター。
- 請求項22、23、及び/又は24に記載のポリヌクレオチドを含む発現ベクター。
- 以下の(a)〜(d)からなる群より選択される、請求項25に記載の発現ベクターで形質転換された宿主細胞。
(a)配列番号4のアミノ酸番号1から120までのアミノ酸配列からなる抗ヒトTLR2抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド、配列番号4のアミノ酸番号491から609までのアミノ酸配列からなる抗ヒトTLR4抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド、及び配列番号4のアミノ酸番号625から732までのアミノ酸配列からなる抗ヒトTLR4抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターと、配列番号6のアミノ酸番号1から113までのアミノ酸配列からなる抗ヒトTLR2抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された、宿主細胞;
(b)配列番号4のアミノ酸番号1から120までのアミノ酸配列からなる抗ヒトTLR2抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド、配列番号4のアミノ酸番号491から609までのアミノ酸配列からなる抗ヒトTLR4抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド、配列番号4のアミノ酸番号625から732までのアミノ酸配列からなる抗ヒトTLR4抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド、及び配列番号6のアミノ酸番号1から113までのアミノ酸配列からなる抗ヒトTLR2抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された、宿主細胞;
(c)配列番号4のアミノ酸番号1から120までのアミノ酸配列からなる抗ヒトTLR2抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド、配列番号4のアミノ酸番号491から609までのアミノ酸配列からなる抗ヒトTLR4抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド、及び配列番号4のアミノ酸番号625から732までのアミノ酸配列からなる抗ヒトTLR4抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された、宿主細胞;並びに
(d)配列番号6のアミノ酸番号1から113までのアミノ酸配列からなる抗ヒトTLR2抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された、宿主細胞。 - 以下の(a)〜(d)からなる群より選択される、請求項25に記載の発現ベクターで形質転換された宿主細胞。
(a)請求項22又は23に記載のポリヌクレオチドを含む発現ベクターと請求項24に記載のポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞;
(b)請求項22又は23に記載のポリヌクレオチドと請求項24に記載のポリヌクレオチドとを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞;
(c)請求項22又は23に記載のポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞;及び
(d)請求項24に記載のポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞。 - 以下の(a)〜(c)からなる群より選択される宿主細胞を培養し、ヒトTLR2及びヒトTLR4に結合する二重特異的抗体を発現させる工程を包含する、ヒトTLR2及びヒトTLR4に結合する二重特異的抗体を生産する方法。
(a)配列番号4のアミノ酸番号1から120までのアミノ酸配列からなる抗ヒトTLR2抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド、配列番号4のアミノ酸番号491から609までのアミノ酸配列からなる抗ヒトTLR4抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド、及び配列番号4のアミノ酸番号625から732までのアミノ酸配列からなる抗ヒトTLR4抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターと、配列番号6のアミノ酸番号1から113までのアミノ酸配列からなる抗ヒトTLR2抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された、宿主細胞;
(b)配列番号4のアミノ酸番号1から120までのアミノ酸配列からなる抗ヒトTLR2抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド、配列番号4のアミノ酸番号491から609までのアミノ酸配列からなる抗ヒトTLR4抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド、配列番号4のアミノ酸番号625から732までのアミノ酸配列からなる抗ヒトTLR4抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド、及び配列番号6のアミノ酸番号1から113までのアミノ酸配列からなる抗ヒトTLR2抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された、宿主細胞;並びに
(c)配列番号4のアミノ酸番号1から120までのアミノ酸配列からなる抗ヒトTLR2抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド、配列番号4のアミノ酸番号491から609までのアミノ酸配列からなる抗ヒトTLR4抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド、及び配列番号4のアミノ酸番号625から732までのアミノ酸配列からなる抗ヒトTLR4抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された、宿主細胞、及び、配列番号6のアミノ酸番号1から113までのアミノ酸配列からなる抗ヒトTLR2抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された、宿主細胞。 - 以下の(a)〜(c)からなる群より選択される宿主細胞を培養し、ヒトTLR2及びヒトTLR4に結合する二重特異的抗体を発現させる工程を包含する、抗ヒトTLR2及びヒトTLR4に結合する二重特異的抗体を生産する方法。
(a)請求項22又は23に記載のポリヌクレオチドを含む発現ベクターと請求項24に記載のポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞;
(b)請求項22又は23に記載のポリヌクレオチドと請求項24に記載のポリヌクレオチドとを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞;及び
(c)請求項22又は23に記載のポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞、及び、請求項24に記載のポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞。 - 請求項29に記載の方法で生産されたヒトTLR2及びヒトTLR4に結合する二重特異的抗体。
- 請求項30に記載の方法で生産されたヒトTLR2及びヒトTLR4に結合する二重特異的抗体。
- 請求項1〜20、31及び32のいずれかに記載の二重特異的抗体及び薬学的に許容される賦形剤を含有する医薬組成物。
- 免疫炎症性疾患の予防又は治療用医薬組成物である、請求項33に記載の医薬組成物。
- 免疫炎症性疾患が敗血症又は急性膵炎である、請求項34に記載の医薬組成物。
- 請求項1〜20、31及び32のいずれかに記載の二重特異的抗体の治療有効量を投与する工程を包含する、免疫炎症性疾患を予防又は治療する方法。
- 免疫炎症性疾患が敗血症又は急性膵炎である、請求項36に記載の予防又は治療する方法。
- 免疫炎症性疾患の予防又は治療に使用するための、請求項1〜20、31及び32のいずれかに記載の二重特異的抗体。
- 免疫炎症性疾患が敗血症又は急性膵炎である、請求項38に記載の二重特異的抗体。
- 免疫炎症性疾患の予防又は治療用医薬組成物製造における請求項1〜20、31及び32のいずれかに記載の二重特異的抗体の使用。
- 免疫炎症性疾患が敗血症又は急性膵炎である、請求項40に記載の二重特異的抗体の使用。
- ヒトTLR2及びヒトTLR4に結合する二重特異的抗体であって、
1)配列番号4のアミノ酸番号31から35までのアミノ酸配列からなるCDR1、配列番号4のアミノ酸番号50から66までのアミノ酸配列からなるCDR2、及び配列番号4のアミノ酸番号99から109までのアミノ酸配列からなるCDR3を含む抗ヒトTLR2抗体の重鎖可変領域、並びに配列番号6のアミノ酸番号24から39までのアミノ酸配列からなるCDR1、配列番号6のアミノ酸番号55から61までのアミノ酸配列からなるCDR2、及び配列番号6のアミノ酸番号94から102までのアミノ酸配列からなるCDR3を含む抗ヒトTLR2抗体の軽鎖可変領域;並びに
2)配列番号4のアミノ酸番号521から525までのアミノ酸配列からなるCDR1、配列番号4のアミノ酸番号540から556までのアミノ酸配列からなるCDR2、及び配列番号4のアミノ酸番号589から598までのアミノ酸配列からなるCDR3を含む抗ヒトTLR4抗体の重鎖可変領域、並びに配列番号4のアミノ酸番号648から658までのアミノ酸配列からなるCDR1、配列番号4のアミノ酸番号674から680までのアミノ酸配列からなるCDR2、及び配列番号4のアミノ酸番号713から721までのアミノ酸配列からなるCDR3を含む抗ヒトTLR4抗体の軽鎖可変領域
を含む、二重特異的抗体。
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