FR3048971A1 - Constructions peptidiques bispecifiques et leur utilisation dans le traitement de maladies notamment imflammatoires - Google Patents

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Abstract

L'invention concerne une construction peptidique comprenant au moins un domaine de fixation à une lectine de type C et au moins un domaine de fixation à la molécule TLR2 et possédant un poids moléculaire inférieur à 200 kDa.

Description

CONSTRUCTIONS PEPTIDIQUES BISPECIFIQUES ET LEUR UTILISATION DANS LE TRAITEMENT DE MALADIES NOTAMMENT IMFLAMMATOIRES L’invention a pour objet de nouvelles constructions peptidiques bispécifiques et leur utilisation dans le traitement des maladies inflammatoires, des maladies auto-immunes ou des réactions du greffon contre un hôte.
La modulation positive ou négative de la réponse immune est un objectif poursuivi par de nombreuses équipes aussi bien en cancérologie, en infectiologie qu’en transplantation.
Actuellement, les rejets de greffe d’organe, dus à la défense immunitaire que l’hôte développe vis-à-vis du greffon, sont traités par l’administration d’immunosuppresseurs. Cependant, ces traitements présentent des effets secondaires notables.
Les cellules dendritiques (DCs) sont le pilier de la réponse immunitaire et sont fortement impliquées dans le rejet de greffe. La modulation négative de la réponse immune dans le cadre d’une greffe d’organe via l’éducation des cellules dendritiques du patient receveur, afin qu'elles induisent la tolérance immune du greffon par le système immunitaire, est donc une approche prometteuse. Une telle approche permettrait de réduire considérablement l’utilisation des médicaments immunosuppresseurs et leurs effets indésirables.
Certains microbes sont capables d'agir sur les cellules dendritiques pour que le système immunitaire les tolère et ne provoque pas de réponse immune destructrice. En favorisant cette tolérance, le système immunitaire laisse alors ces microbes se développer. Pour cela, les microorganismes ciblent des récepteurs présents à la surface des cellules dendritiques pour provoquer la synthèse d’interleukine 10 (IL-10), qui un inducteur naturel de la tolérance immune. Cette cytokine est secrétée par différentes cellules (mastocytes, lymphocytes B, lymphocytes T, cellules myéloïdes, cellules dendritiques) mais les cibles majeures des pathogènes sont les cellules dendritiques à cause de leur rôle central dans l’induction de la réponse immune. Ces cellules disposent de nombreux récepteurs de surface dont des récepteurs (Pattern Récognition Receptors, PRR) comme les lectines de type C ou les « Toll like receptors » (TLR) qui lui permettent de reconnaître les antigènes issus des pathogènes et d’y répondre par la sécrétion de cytokines pro-inflammatoires. Les pathogènes vont relarguer des molécules qui, au travers de l’interaction avec ces différents récepteurs, vont faire secréter aux cellules dendritiques des cytokines anti-inflammatoires comme l’IL-10.
Grâce à leurs propriétés plastiques, dues notamment aux cascades des signaux de transduction, les cellules dendritiques peuvent induire, selon le contexte, soit une immunité spécifique, soit une tolérance immune.
Chez l’homme comme dans les modèles murins, il existe une hétérogénéité dans les cellules dendritiques. Ces différentes cellules dendritiques expriment à leur surface des marqueurs communs, comme les lectines de type C et les TLR et l'expression de ces molécules est variable selon la sous-population de cellules dendritiques considérée. Par exemple, chaque sous-population de cellules dendritiques humaine circulantes a un profil de récepteurs lectine de type C particulier (Lundberg et al., 2014, Immunology, 142, 279-288).
Bien qu’on ne sache pas le rôle exact des différentes sous-populations de cellules dendritiques, il est généralement décrit que les cellules de Langerhans sont pro-tolérogènes. Les cellules dendritiques myéloïdes sont également capables d'induire de la tolérance immune, selon notamment leur degré de maturation ou selon les cytokines qu'elles produisent après leur rencontre avec l'antigène. Différents travaux montrent que les cellules dendritiques myéloïdes deviennent tolérogènes lorsque la balance interleukine 12 (IL-12)/interleukine 10 (IL-10) est en faveur de l’IL-10. L’IL-10 inhibe de nombreuses fonctions des cellules aussi bien des lignées myéloïdes (monocytes macrophages, cellules dendritiques) que lymphoïdes (lymphocytes T). Cette cytokine diminue le niveau de maturation des cellules dendritiques ainsi que leur synthèse de cytokines pro-inflammatoires. Sur les lymphocytes ThO en différenciation, elle oriente leur profil vers les lymphocytes T régulateurs (LTreg).
Les cellules dendritiques qui secrétent de l’ILlO sont donc capables d’orienter la réponse immune vers des voies régulatrices comme l’induction de lymphocytes T régulateurs (LTreg). Il existe également une hétérogénéité dans les lymphocytes T régulateurs, puisque ont été décrits des lymphocytes T régulateurs naturels (CD4+, CD25+, Foxp3+) surtout présents dans le thymus et des lymphocytes T régulateurs induits en périphérie. Deux catégories de lymphocytes T régulateurs induits ont été décrites : les lymphocytes T régulateurs Tri IL10+ et les lymphocytes T régulateurs Th3 secrétant du TGFp. Les lymphocytes T régulateurs induits par les DCs-IL10+ sont plutôt de type Tri, mais pas exclusivement, et sont capables d’inhiber une réponse immune naïve comme mémoire. Peu de données sont disponibles sur les propriétés fonctionnelles des lymphocytes T régulateurs induits chez l’homme bien qu’il soit connu que l’absence de ces cellules soit à l’origine de maladies auto-immunes. L’un des buts de l’invention est de fournir des constructions peptidiques induisant un profile pro-tolérogène chez les cellules dendritiques humaines.
Un autre but de l’invention est de fournir des constructions peptidiques capables de cibler différentes sous-populations de cellules dendritiques.
Un autre but de l’invention est de fournir des constructions peptidiques induisant une immunotolérance chez un patient.
Un autre but de l’invention est de fournir de nouvelles compositions pharmaceutiques pour le traitement des maladies inflammatoires, des maladies auto-immunes ou des réactions du greffon contre un hôte.
La présente invention concerne une construction peptidique comprenant au moins un domaine de fixation à une lectine de type C et au moins un domaine de fixation à la molécule TLR2 et possédant un poids moléculaire inférieur à environ 200 kDa.
De façon surprenante, les inventeurs ont trouvé que la création d’un pontage, à l’aide d’une construction peptidique, entre les molécules lectines de type C et les molécules TLR2 présentes sur la surface des cellules dendritiques humaines permet d’induire la sécrétion d’interleukine 10 (IL-10) par ces dernières et permet ainsi d’induire un profil pro-tolérogène chez celles-ci.
Par « construction peptidique », on entend n’importe quelle construction comprenant une partie peptidique constituées d’acides aminés reliés entre eux par des liaisons peptidiques, dans laquelle ladite partie peptidique comporte au moins un domaine de fixation à une lectine de type C et au moins un domaine de fixation à la molécule TLR2. Ce terme englobe en particulier les polypeptides (ou peptides ou protéines) seuls et toute association physique entre deux ou plusieurs polypeptides (ou peptides ou protéines), liés entre eux par des liaisons covalentes telles que les liaisons peptidiques ou des liaisons disulfures de résidus cystéine, des liaisons chimiques ou non covalentes telles que les liaisons hydrogène, les liaisons de van der Waals, les liaisons ioniques et hydrophobes. Ce terme inclut également l’association de un ou plusieurs polypeptides (ou peptides ou protéines) avec un ou plusieurs résidus ou chaînes glucidiques et/ou avec une ou plusieurs molécules de chimiothérapie, telle que l’Emtansine, par des liaisons covalentes ou non covalentes.
Par construction peptidique, on entend également au sens de la présente invention et toutes les fois où ce terme est utilisé dans la présente description, un anticorps, et notamment un anticorps divalent.
Les constructions peptidiques selon la présente invention sont dites glycosylées lorsqu’elles comprennent au moins un résidu glucidique ou au moins une chaîne glucidique.
Au sens de la présente invention, on entend par polypeptide tout polymère d’acides aminés reliés entre eux par des liaisons peptidiques, quelle que soit sa longueur. Ainsi, au sens de la présente invention, le terme polypeptide englobe également les peptides et les protéines.
Par domaine de fixation, on entend tout site capable de se lier avec affinité et de façon spécifique à une autre molécule (antigène).
Par « tout site capable de se lier avec affinité à un antigène », on entend à titre d’illustration tout site pour lequel la constante de dissociation Kd caractérisant l’affinité dudit antigène pour ledit site est inférieure à 10'7M.
Par « lectine de type C », on désigne une protéine capable de se lier à un glucide. Ces protéines ont diverses fonctions et jouent un rôle dans l’adhésion cellulaire, la réponse immunitaire ou l’apoptose.
Les lectines de type C comprennent notamment, sans y être limitées, les molécules CD209, les molécules DCIR, les molécules CD207, les Mannose Receptors (MR) (Sancho et al. 2012, Annu Rev Immunol.30 :491-529.)
Les termes CD209 et DC-SIGN sont employés indifféremment dans la présente description et désignent la même molécule.
Les termes CD207 et langérine sont employés indifféremment dans la présente description et désignent la même molécule.
Par « molécule TLR2 », on entend les récepteurs de type Toll 2. Ces molécules sont des protéines membranaires et jouent un rôle dans le système immunitaire.
La présente invention a pour objet une construction peptidique comprenant la région variable de la chaîne lourde d’un premier anticorps reconnaissant une lectine de type C et la région variable de la chaîne lourde d’un second anticorps reconnaissant la molécule TLR2, ladite construction peptidique possédant un poids moléculaire inférieur à environ 200 kDa. L’invention concerne aussi bien des anticorps constitués uniquement de deux chaînes lourdes que des anticorps constituées de deux chaînes lourdes et deux chaînes légères.
La présente invention a pour objet une construction peptidique comprenant les régions variables de la chaîne lourde et de la chaîne légère d’un premier anticorps reconnaissant une lectine de type C et les régions variables de la chaîne lourde et de la chaîne légère d’un second anticorps reconnaissant la molécule TLR2, ladite construction peptidique possédant un poids moléculaire inférieur à environ 200 kDa.
Dans l’invention, le terme « anticorps » se réfère à une immunoglobuline, protéine multimérique constituée de 4 chaînes participant à la réponse immunitaire acquise.
Les immunoglobulines sont bien connues de l’homme de métier et sont constituées d’un assemblage de deux dimères constitués chacun d’une chaîne lourde et d’une chaîne légère. Le complexe multimérique assemblé par la liaison d’une chaîne légère et d’une chaîne lourde par un pont disulfure entre deux cystéines, les deux chaînes lourdes étant elle-même également reliées entre elles par deux ponts disulfures.
Chacune des chaînes lourdes et des chaînes légères est constituée d’une région constante et d’une région variable. L’assemblage des chaînes qui composent un anticorps permet de définir une structure tridimensionnelle caractéristique en Y, où la base du Y correspond à la région constante Fc qui est reconnue par le complément et les récepteurs Fc, et - l’extrémité des bras du Y correspondent à l’assemblage respectif des régions variables de la chaîne légère et variable de la chaîne lourde.
Plus précisément, chaque chaîne légère est constituée d’une région variable (VL) et d’une région constante (CL). Chaque chaîne lourde est constituée d’une région variable (VH) et d’une région constante constituée de trois domaines constants CH1, CH2 et CH3. Les domaines CH2 et CH3 composent le domaine Fc.
La région variable de la chaîne légère est constituée de trois régions déterminant la reconnaissance de l’antigène (CDR) entourées de quatre domaines charpentes. Le repliement tridimensionnel de la région variable est tel que les 3 CDR sont exposés du même côté de la protéine et permettent la formation d’une structure spécifique reconnaissant un antigène déterminé.
Dans la présente description, les termes « domaine variable » et « région variable » sont utilisés indifféremment. De même, les termes « domaine constant » et « région constante » sont employés indifféremment.
Selon un mode de réalisation particulier, l’invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, possédant un poids moléculaire inférieur à environ 190 kDa, inférieur à environ 180 kDa, inférieur à environ 170 kDa, inférieur à environ 160 kDa ou inférieur à environ 150 kDa.
Selon un autre mode de réalisation particulier, l’invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, possédant un poids moléculaire compris d’environ 55 à environ 200 kDa, d’environ 55 à environ 190 kDa, d’environ 55 à environ 170 kDa, d’environ 55 à environ 160 kDa ou d’environ 55 à environ 150 kDa.
Selon un autre mode de réalisation particulier, l’invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, possédant un poids moléculaire compris d’environ 60 à environ 200 kDa, d’environ 60 à environ 190 kDa, d’environ 60 à environ 170 kDa, d’environ 60 à environ 160 kDa ou d’environ 60 à environ 150 kDa.
Selon un mode de réalisation particulier, l’invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, dépourvue de lipide.
Selon un mode de réalisation particulier, l’invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, comprenant en outre tout ou partie de la région constante d’un troisième anticorps, ledit troisième anticorps étant identique ou différent du premier anticorps ou du second anticorps, ladite tout ou partie de la région constante dudit troisième anticorps permettant d’augmenter la demi-vie de ladite construction peptidique en conditions in vivo.
Selon un autre mode de réalisation particulier, la construction peptidique telle que définie ci-dessus, ne contient pas de région constante d’un troisième anticorps.
Selon un mode de réalisation plus particulier, l’invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, comprenant au moins un domaine de fixation à la molécule CD209 et au moins un domaine de fixation à la molécule TLR2.
Selon un autre mode de réalisation plus particulier, l’invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, comprenant au moins un domaine de fixation à la molécule DCIR et au moins un domaine de fixation à la molécule TLR2.
Selon un autre mode de réalisation plus particulier, l’invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, comprenant au moins un domaine de fixation à la molécule CD207 et au moins un domaine de fixation à la molécule TLR2.
Selon un mode de réalisation particulier, la présente invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, capable d’induire la sécrétion d’interleukine-10 (IL-10) par des cellules qui présentent comme récepteurs de surface la molécule CD209 et la molécule TLR2.
La mise en évidence de la sécrétion d’interleukine 10 par des cellules peut se faire par exemple à l’aide d’un test ELIS A.
Selon un autre mode de réalisation particulier, la présente invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, capable d’induire la sécrétion d’interleukine-10 (IL-10) par des cellules qui présentent comme récepteurs de surface la molécule DCIR et la molécule TLR2.
Selon un autre mode de réalisation particulier, la présente invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, capable d’induire la sécrétion d’interleukine-10 (IL-10) par des cellules qui présentent comme récepteurs de surface la molécule CD207 et la molécule TLR2.
Selon au mode de réalisation, l’invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, capable d’induire un profil pro-tolérogène chez les cellules dendritiques humaines.
Par « induire un profil pro-tolérogène chez les cellules dendritiques humaines», on entend induire, via les cellules dendritiques humaines, une tolérance immunitaire vis-à-vis d’un antigène donné.
Selon un mode de réalisation particulier, la présente invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, capable de se lier à la molécule CD209 et à la molécule TLR2 lorsqu’elle est à la dose de 0,5 pg/mL dans une culture in vitro de 106 cellules dendritiques humaines issues de monocytes/mL dans du milieu de culture (RPMI 1640, 10% SVF (sérum de veau fœtal), 1% glutamine, 1% pénicilline).
Selon un autre mode de réalisation particulier, la présente invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, capable de se lier à la molécule CD209 et à la molécule TLR2 lorsqu’elle est à la dose de 1,0 pg/mL dans une culture in vitro de 106 cellules dendritiques humaines issues de monocytes/mL dans du milieu de culture (RPMI 1640, 10% SVF (sérum de veau fœtal), 1% glutamine, 1% pénicilline).
Selon un autre mode de réalisation particulier, la présente invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, capable de se lier à la molécule CD209 et à la molécule TLR2 lorsqu’elle est à la dose de 1,5 pg/mL dans une culture in vitro de 106 cellules dendritiques humaines issues de monocytes/mL dans du milieu de culture (RPMI 1640, 10% S VF (sérum de veau fœtal), 1% glutamine, 1% pénicilline).
Selon un mode de réalisation particulier, la présente invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, capable de se lier à la molécule DCIR et à la molécule TLR2 lorsqu’elle est à la dose de 0,5 pg/mL dans une culture in vitro de 106 cellules dendritiques humaines issues de monocytes/mL dans du milieu de culture (RPMI 1640, 10% S VF (sérum de veau fœtal), 1% glutamine, 1% pénicilline).
Selon un autre mode de réalisation particulier, la présente invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, capable de se lier à la molécule DCIR et à la molécule TLR2 lorsqu’elle est à la dose de 1,0 pg/mL dans une culture in vitro de 106 cellules dendritiques humaines issues de monocytes/mL dans du milieu de culture (RPMI 1640, 10% S VF (sérum de veau fœtal), 1% glutamine, 1% pénicilline).
Selon un autre mode de réalisation particulier, la présente invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, capable de se lier à la molécule DCIR et à la molécule TLR2 lorsqu’elle est à la dose de 1,5 pg/mL dans une culture in vitro de 106 cellules dendritiques humaines issues de monocytes/mL dans du milieu de culture (RPMI 1640, 10% S VF (sérum de veau fœtal), 1% glutamine, 1% pénicilline).
Selon un mode de réalisation particulier, la présente invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, capable de se lier à la molécule CD207 et à la molécule TLR2 lorsqu’elle est à la dose de 0,5 pg/mL dans une culture in vitro de 106 cellules dendritiques humaines issues de monocytes/mL dans du milieu de culture (RPMI 1640, 10% S VF (sérum de veau fœtal), 1% glutamine, 1% pénicilline).
Selon un autre mode de réalisation particulier, la présente invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, capable de se lier à la molécule CD207 et à la molécule TLR2 lorsqu’elle est à la dose de 1,0 pg/mL dans une culture in vitro de 106 cellules dendritiques humaines issues de monocytes/mL dans du milieu de culture (RPMI 1640, 10% S VF (sérum de veau fœtal), 1% glutamine, 1% pénicilline).
Selon un autre mode de réalisation particulier, la présente invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, capable de se lier à la molécule CD207 et à la molécule TLR2 lorsqu’elle est à la dose de 1,5 pg/mL dans une culture in vitro de 106 cellules dendritiques humaines issues de monocytes/mL dans du milieu de culture (RPMI 1640, 10% S VF (sérum de veau fœtal), 1% glutamine, 1% pénicilline).
Selon un mode de réalisation particulier, la présente invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, capable d’entrer en compétition avec l’anticorps DDX0208 pour la liaison à l’antigène CD209.
Par « entrer en compétition », on entend avoir la capacité d’inhiber la fixation des constructions peptidiques selon la présente invention L’anticorps DDX0208 est un anticorps commercialisé par la société Dendritics. Il s’agit d’un anticorps murin anti-CD209 d’isotype IgG2b,k.
Selon un mode de réalisation particulier, la présente invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, capable d’entrer en compétition avec l’anticorps 0PN-305 pour la liaison à l’antigène TLR2. L’anticorps 0PN-305 est un anticorps humanisés développé par la société Opsona.
Selon un mode de réalisation particulier, la présente invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, capable d’entrer en compétition avec l’anticorps DDX0208 pour la liaison à l’antigène CD209 et avec l’anticorps 0PN-305 pour la liaison à l’antigène TLR2.
Avantageusement, la présente invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, choisie parmi : les scFv en tandem, les diabodies simple chaîne bispécifiques, les diabodies hétérodimériques, les F(ab’)2 bispécifiques, les scFv2-Fc, les anticorps bispécifiques.
Par « scFv », on entend une protéine fusion constituée par la région variable de la chaîne lourde d’une immunoglobuline et la région variable de la chaîne légère de ladite immunoglobuline liées entre elles de manière covalente via un court lien (linker) peptidique, comprenant généralement de 10 à 25 acides aminés.
Par « scFv en tandem », on entend une protéine fusion constituée de deux scFv de spécificité différente liés entre eux de manière covalente via un lien (linker) peptidique.
Par « diabody », on entend un homodimère constitué de deux chaînes peptidiques, elles-mêmes constituées par la région variable de la chaîne lourde d’une immunoglobuline et la région variable de la chaîne légère de ladite immunoglobuline liées entre elles de manière covalente via un lien (linker) peptidique, comprenant généralement 5 acides aminés et trop court pour que les deux régions variables puissent se replier en scFv. Les deux sous-unités du diabody sont liées entre elles par une ou des liaisons faibles, telles que les liaisons hydrophobes, les liaisons hydrogène, les liaisons ioniques ou les liaisons de van der Waals.
Par « diabody hétérodimérique, on entend un hétérodimère constitué de deux chaînes peptidiques : la première sous-unité est constituée par la région variable de la chaîne lourde d’une immunoglobuline fusionnée par un court lien à la région variable de la chaîne légère d’une immunoglobuline de spécificité différente, la seconde sous-unité a la même structure mais l’origine des domaines est inversée. Les deux sous-unités du diabody hétérodimérique sont liées entre elles une ou des liaisons faibles, telles que les liaisons hydrophobes, les liaisons hydrogène, les liaisons ioniques ou les liaisons de van der Waals.
Par « diabody simple chaîne bispécifique », on entend une protéine fusion constituée de quatre domaines variables provenant de deux immunoglobulines de spécificité différente liés entre eux de manière covalente via trois liens (linker) peptidiques, lesdits quatre domaines variables consistant en les domaines variables de la chaîne lourde et de la chaîne légère d’une première immunoglobuline et les domaines variables de la chaîne lourde et légère d’une deuxième immunoglobuline. Les deux domaines variables d’un même anticorps sont disposés au centre de la molécule, tandis que les domaines variables de l’autre anticorps sont situés aux extrémités.
Par « F(ab’)2 bispécifique », on entend un fragment F(ab’)2 dans lequel les deux parties Fab possèdent une spécificité différente.
Par « les scFv2-Fc », on entend une protéine constituée par deux scFv de spécificité différente fusionnés avec le fragment Fc d’une immunoglobuline, lui-même composé des domaines CH2 et CH3 de la chaîne lourde.
Par « anticorps bispécifique », on entend une immunoglobuline dont les deux bras ont une spécificité différente.
Selon un mode de réalisation plus particulier, l’invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, consistant en un scFv en tandem.
Selon un mode de réalisation encore plus particulier, l’invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, consistant en un polypeptide dans lequel les régions variables de la chaîne lourde (VH) et les régions variables de la chaîne légère (VL) correspondant au domaine de fixation à la molécule CD209 et au domaine de fixation à la molécule TLR2 sont disposées, de la position N-terminale à la position C-terminale, dans l’ordre VH(CD209) - VL(CD209) - VH(TLR2) - VL(TLR2).
Une telle construction peptidique comprend ou consiste en un scFv en tandem.
Elle est illustrée de façon non limitative par un scFv en tandem dans lequel la région variable de la chaîne lourde d’un anticorps reconnaissant la molécule CD209 est liée par sa position C-terminale à la position N-terminale de la région variable de la chaîne légère dudit anticorps reconnaissant la molécule CD209 via un lien peptidique, ladite région variable de la chaîne légère dudit anticorps reconnaissant la molécule CD209 est liée par sa position C-terminale à la position N-terminale de la région variable de la chaîne lourde d’un anticorps reconnaissant la molécule TLR2 via un lien peptidique et ladite région variable de la chaîne lourde dudit anticorps reconnaissant la molécule TLR2 est liée par sa position C-terminale à la position N-terminale de la région variable de la chaîne légère dudit anticorps reconnaissant la molécule TLR2 via un lien peptidique.
Un exemple de construction peptidique correspondant à la représentation VH(CD209) - VL(CD209) - VH(TLR2) - VL(TLR2) est un polypeptide de séquence SEQ ID NO : 1. Le polypeptide de séquence SEQ ID NO : 1 est codé par la séquence nucléotidique de séquence SEQ ID NO : 97.
De manière générale, dans la présente description, « les régions variables des chaînes lourdes et légères sont disposées de la position N-terminale à la position C-terminale, dans l’ordre VH1 - VL1 - VH2 - VL2 » signifie que la région VH1 est lié par sa position C-terminale à la position N-terminale de la région VL1 via un lien peptidique de 1 à 30 acides aminés, la région VL1 est liée par sa position C-terminale à la position N-terminale de la région VH2 via un lien peptidique de 1 à 30 acides aminés et la région VH2 est liée par sa position sa position C-terminale à la position N-terminale de la région VL2 via un lien peptidique de 1 à 30 acides aminés.
Selon un autre mode de réalisation, l’invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, consistant en un polypeptide dans lequel les régions variables de la chaîne lourde (VH) et les régions variables de la chaîne légère (VL) correspondant au domaine de fixation à la molécule CD209 et au domaine de fixation à la molécule TLR2 sont disposées, de la position N-terminale à la position C-terminale, dans l’ordre VH(CD209) - VL(CD209) - VL(TLR2) - VH(TLR2).
Une telle construction peptidique comprend ou consiste en un scFv en tandem.
Un exemple de construction peptidique correspondant à la représentation VH(CD209) - VL(CD209) - VL(TLR2) - VH(TLR2) est un polypeptide de séquence SEQ ID NO : 2. Le polypeptide de séquence SEQ ID NO : 2 est codé par la séquence nucléotidique de séquence SEQ ID NO : 98.
Selon un autre mode de réalisation, l’invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, consistant en un polypeptide dans lequel les régions variables de la chaîne lourde (VH) et les régions variables de la chaîne légère (VL) correspondant au domaine de fixation à la molécule CD209 et au domaine de fixation à la molécule TLR2 sont disposées, de la position N-terminale à la position C-terminale, dans l’ordre VL(CD209) - VH(CD209) - VH(TLR2) - VL(TLR2).
Une telle construction peptidique comprend ou consiste en un scFv en tandem.
Un exemple de construction peptidique correspondant à la représentation VL(CD209) - VH(CD209) - VH(TLR2) - VL(TLR2) est un polypeptide de séquence SEQ ID NO : 3. Le polypeptide de séquence SEQ ID NO : 3 est codé par la séquence nucléotidique de séquence SEQ ID NO : 99.
Selon un autre mode de réalisation, l’invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, consistant en un polypeptide dans lequel les régions variables de la chaîne lourde (VH) et les régions variables de la chaîne légère (VL) correspondant au domaine de fixation à la molécule CD209 et au domaine de fixation à la molécule TLR2 sont disposées, de la position N-terminale à la position C-terminale, dans l’ordre VL(CD209) - VH(CD209) - VL(TLR2) - VH(TLR2).
Une telle construction peptidique comprend ou consiste en un scFv en tandem.
Un exemple de construction peptidique correspondant à la représentation VL(CD209) - VH(CD209) - VL(TLR2) - VH(TLR2) est un polypeptide de séquence SEQ ID NO : 4. Le polypeptide de séquence SEQ ID NO : 4 est codé par la séquence nucléotidique de séquence SEQ ID NO : 100.
Selon un autre mode de réalisation, l’invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, consistant en un polypeptide dans lequel les régions variables de la chaîne lourde (VH) et les régions variables de la chaîne légère (VL) correspondant au domaine de fixation à la molécule CD209 et au domaine de fixation à la molécule TLR2 sont disposées, de la position N-terminale à la position C-terminale, dans l’ordre VH(TLR2) - VL(TLR2) - VH(CD209) - VL(CD209).
Une telle construction peptidique comprend ou consiste en un scFv en tandem.
Un exemple de construction peptidique correspondant à la représentation VH(TLR2) - VL(TLR2) - VH(CD209) - VL(CD209) est un polypeptide de séquence SEQ ID NO : 5. Le polypeptide de séquence SEQ ID NO : 5 est codé par la séquence nucléotidique de séquence SEQ ID NO : 101.
Selon un autre mode de réalisation, l’invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, consistant en un polypeptide dans lequel les régions variables de la chaîne lourde (VH) et les régions variables de la chaîne légère (VL) correspondant au domaine de fixation à la molécule CD209 et au domaine de fixation à la molécule TLR2 sont disposées, de la position N-terminale à la position C-terminale, dans l’ordre VH(TLR2) - VL(TLR2) - VL(CD209) - VH(CD209).
Une telle construction peptidique comprend ou consiste en un scFv en tandem.
Un exemple de construction peptidique correspondant à la représentation VH(TLR2) - VL(TLR2) - VL(CD209) - VH(CD209) est un polypeptide de séquence SEQ ID NO : 6. Le polypeptide de séquence SEQ ID NO : 6 est codé par la séquence nucléotidique de séquence SEQ ID NO : 102.
Selon un autre mode de réalisation, l’invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, consistant en un polypeptide dans lequel les régions variables de la chaîne lourde (VH) et les régions variables de la chaîne légère (VL) correspondant au domaine de fixation à la molécule CD209 et au domaine de fixation à la molécule TLR2 sont disposées, de la position N-terminale à la position C-terminale, dans l’ordre VL(TLR2) - VH(TLR2) - VH(CD209) - VL(CD209).
Une telle construction peptidique comprend ou consiste en un scFv en tandem.
Un exemple de construction peptidique correspondant à la représentation VL(TLR2) - VH(TLR2) - VH(CD209) - VL(CD209) est un polypeptide de séquence SEQ ID NO : 7. Le polypeptide de séquence SEQ ID NO : 7 est codé par la séquence nucléotidique de séquence SEQ ID NO : 103.
Selon un autre mode de réalisation, l’invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, consistant en un polypeptide dans lequel les régions variables de la chaîne lourde (VH) et les régions variables de la chaîne légère (VL) correspondant au domaine de fixation à la molécule CD209 et au domaine de fixation à la molécule TLR2 sont disposées, de la position N-terminale à la position C-terminale, dans l’ordre VL(TLR2) - VH(TLR2) - VL(CD209) - VH(CD209).
Une telle construction peptidique comprend ou consiste en un scFv en tandem.
Un exemple de construction peptidique correspondant à la représentation VL(TLR2) - VH(TLR2) - VL(CD209) - VH(CD209) est un polypeptide de séquence SEQ ID NO : 8. Le polypeptide de séquence SEQ ID NO : 8 est codé par la séquence nucléotidique de séquence SEQ ID NO : 104.
Selon un autre mode de réalisation plus particulier, l’invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, consistant en un polypeptide dans lequel les régions variables de la chaîne lourde (VH) et les régions variables de la chaîne légère (VL) correspondant au domaine de fixation à la molécule DCIR et au domaine de fixation à la molécule TLR2 sont disposées, de la position N-terminale à la position C-terminale, dans l’ordre VH(DCIR) - VL (DCIR) - VH(TLR2) - VL(TLR2).
Une telle construction peptidique comprend ou consiste en un scFv en tandem.
Un exemple de construction peptidique correspondant à la représentation VH(DCIR) - VL(DCIR) - VH(TLR2) - VL(TLR2) est un polypeptide de séquence SEQ ID NO : 9. Le polypeptide de séquence SEQ ID NO : 9 est codé par la séquence nucléotidique de séquence SEQ ID NO : 105.
Selon un autre mode de réalisation, l’invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, consistant en un polypeptide dans lequel les régions variables de la chaîne lourde (VH) et les régions variables de la chaîne légère (VL) correspondant au domaine de fixation à la molécule DCIR et au domaine de fixation à la molécule TLR2 sont disposées, de la position N-terminale à la position C-terminale, dans l’ordre VH(DCIR) - VL(DCIR) - VL(TLR2) - VH(TLR2).
Une telle construction peptidique comprend ou consiste en un scFv en tandem.
Un exemple de construction peptidique correspondant à la représentation VH(DCIR) - VL(DCIR) - VL(TLR2) - VH(TLR2) est un polypeptide de séquence SEQ ID NO : 10. Le polypeptide de séquence SEQ ID NO : 10 est codé par la séquence nucléotidique de séquence SEQ ID NO : 106.
Selon un autre mode de réalisation, l’invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, consistant en un polypeptide dans lequel les régions variables de la chaîne lourde (VH) et les régions variables de la chaîne légère (VL) correspondant au domaine de fixation à la molécule DCIR et au domaine de fixation à la molécule TLR2 sont disposées, de la position N-terminale à la position C-terminale, dans l’ordre VL(DCIR) - VH(DCIR) - VH(TLR2) - VL(TLR2).
Une telle construction peptidique comprend ou consiste en un scFv en tandem.
Un exemple de construction peptidique correspondant à la représentation VL(DCIR) - VH(DCIR) - VH(TLR2) - VL(TLR2) est un polypeptide de séquence SEQ ID NO : 11. Le polypeptide de séquence SEQ ID NO : 11 est codé par la séquence nucléotidique de séquence SEQ ID NO : 107.
Selon un autre mode de réalisation, l’invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, consistant en un polypeptide dans lequel les régions variables de la chaîne lourde (VH) et les régions variables de la chaîne légère (VL) correspondant au domaine de fixation à la molécule DCIR et au domaine de fixation à la molécule TLR2 sont disposées, de la position N-terminale à la position C-terminale, dans l’ordre VL (DCIR) - VH(DCIR) - VL(TLR2) - VH(TLR2).
Une telle construction peptidique comprend ou consiste en un scFv en tandem.
Un exemple de construction peptidique correspondant à la représentation VL(DCIR) - VH(DCIR) - VL(TLR2) - VH(TLR2) est un polypeptide de séquence SEQ ID NO : 12. Le polypeptide de séquence SEQ ID NO : 12 est codé par la séquence nucléotidique de séquence SEQ ID NO : 108.
Selon un autre mode de réalisation, l’invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, consistant en un polypeptide dans lequel les régions variables de la chaîne lourde (VH) et les régions variables de la chaîne légère (VL) correspondant au domaine de fixation à la molécule DCIR et au domaine de fixation à la molécule TLR2 sont disposées, de la position N-terminale à la position C-terminale, dans l’ordre VH(TLR2) - VL(TLR2) - VH(DCIR) - VL(DCIR).
Une telle construction peptidique comprend ou consiste en un scFv en tandem.
Un exemple de construction peptidique correspondant à la représentation VH(TLR2) - VL(TLR2) - VH(DCIR) - VL(DCIR) est un polypeptide de séquence SEQ ID NO : 13. Le polypeptide de séquence SEQ ID NO : 13 est codé par la séquence nucléotidique de séquence SEQ ID NO : 109.
Selon un autre mode de réalisation, l’invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, consistant en un polypeptide dans lequel les régions variables de la chaîne lourde (VH) et les régions variables de la chaîne légère (VL) correspondant au domaine de fixation à la molécule DCIR et au domaine de fixation à la molécule TLR2 sont disposées, de la position VH(TLR2) - VL(TLR2) - VL(DCIR) - VH(DCIR).
Une telle construction peptidique comprend ou consiste en un scFv en tandem.
Un exemple de construction peptidique correspondant à la représentation VH(TLR2) - VL(TLR2) - VL(DCIR) - VH(DCIR) est un polypeptide de séquence SEQ ID NO : 14. Le polypeptide de séquence SEQ ID NO : 14 est codé par la séquence nucléotidique de séquence SEQ ID NO : 110.
Selon un autre mode de réalisation, l’invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, consistant en un polypeptide dans lequel les régions variables de la chaîne lourde (VH) et les régions variables de la chaîne légère (VL) correspondant au domaine de fixation à la molécule DCIR et au domaine de fixation à la molécule TLR2 sont disposées, de la position N-terminale à la position C-terminale, dans l’ordre VL(TLR2) - VH(TLR2) - VH(DCIR) - VL(DCIR).
Une telle construction peptidique comprend ou consiste en un scFv en tandem.
Un exemple de construction peptidique correspondant à la représentation VL(TLR2) - VH(TLR2) - VH(DCIR) - VL(DCIR) est un polypeptide de séquence SEQ ID NO : 15. Le polypeptide de séquence SEQ ID NO : 15 est codé par la séquence nucléotidique de séquence SEQ ID NO : 111.
Selon un autre mode de réalisation, l’invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, consistant en un polypeptide dans lequel les régions variables de la chaîne lourde (VH) et les régions variables de la chaîne légère (VL) correspondant au domaine de fixation à la molécule DCIR et au domaine de fixation à la molécule TLR2 sont disposées, de la position N-terminale à la position C-terminale, dans l’ordre VL(TLR2) - VH(TLR2) - VL(DCIR) - VH(DCIR).
Une telle constmction peptidique comprend ou consiste en un scFv en tandem.
Un exemple de construction peptidique correspondant à la représentation VL(TLR2) - VH(TLR2) - VL(DCIR) - VH(DCIR) est un polypeptide de séquence SEQ ID NO : 16. Le polypeptide de séquence SEQ ID NO : 16 est codé par la séquence nucléotidique de séquence SEQ ID NO : 112.
Selon un autre mode de réalisation particulier, l’invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, consistant en un polypeptide dans lequel les régions variables de la chaîne lourde (VH) et les régions variables de la chaîne légère (VL) correspondant au domaine de fixation à la molécule CD207 et au domaine de fixation à la molécule TLR2 sont disposées, de la position N-terminale à la position C-terminale, dans l’ordre VH(CD207) - VL(CD207) - VH(TLR2) - VL(TLR2).
Une telle construction peptidique comprend ou consiste en un scFv en tandem.
Un exemple de construction peptidique correspondant à la représentation VH(CD207) - VL(CD207) - VH(TLR2) - VL(TLR2) est un polypeptide de séquence SEQ ID NO : 17. Le polypeptide de séquence SEQ ID NO : 17 est codé par la séquence nucléotidique de séquence SEQ ID NO : 113.
Selon un autre mode de réalisation, l’invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, consistant en un polypeptide dans lequel les régions variables de la chaîne lourde (VH) et les régions variables de la chaîne légère (VL) correspondant au domaine de fixation à la molécule CD207 et au domaine de fixation à la molécule TLR2 sont disposées, de la position N-terminale à la position C-terminale, dans l’ordre VH(CD207) - VL(CD207) - VL(TLR2) - VH(TLR2).
Une telle construction peptidique comprend ou consiste en un scFv en tandem.
Un exemple de construction peptidique correspondant à la représentation VH(CD207) - VL(CD207) - VL(TLR2) - VH(TLR2) est un polypeptide de séquence SEQ ID NO : 18. Le polypeptide de séquence SEQ ID NO : 18 est codé par la séquence nucléotidique de séquence SEQ ID NO : 114.
Selon un autre mode de réalisation, l’invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, consistant en un polypeptide dans lequel les régions variables de la chaîne lourde (VH) et les régions variables de la chaîne légère (VL) correspondant au domaine de fixation à la molécule CD207 et au domaine de fixation à la molécule TLR2 sont disposées, de la position N-terminale à la position C-terminale, dans l’ordre VL(CD207) - VH(CD207) - VH(TLR2) - VL(TLR2).
Une telle construction peptidique comprend ou consiste en un scFv en tandem.
Un exemple de construction peptidique correspondant à la représentation VL(CD207) - VH(CD207) - VH(TLR2) - VL(TLR2) est un polypeptide de séquence SEQ ID NO : 19. Le polypeptide de séquence SEQ ID NO : 19 est codé par la séquence nucléotidique de séquence SEQ ID NO : 115.
Selon un autre mode de réalisation, l’invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, consistant en un polypeptide dans lequel les régions variables de la chaîne lourde (VH) et les régions variables de la chaîne légère (VL) correspondant au domaine de fixation à la molécule CD207 et au domaine de fixation à la molécule TLR2 sont disposées, de la position N-terminale à la position C-terminale, dans l’ordre VL(CD207) - VH(CD207) - VL(TLR2) - VH(TLR2).
Une telle construction peptidique comprend ou consiste en un scFv en tandem.
Un exemple de construction peptidique correspondant à la représentation VL(CD207) - VH(CD207) - VL(TLR2) - VH(TLR2) est un polypeptide de séquence SEQ ID NO : 20. Le polypeptide de séquence SEQ ID NO : 20 est codé par la séquence nucléotidique de séquence SEQ ID NO : 116.
Selon un autre mode de réalisation, l’invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, consistant en un polypeptide dans lequel les régions variables de la chaîne lourde (VH) et les régions variables de la chaîne légère (VL) correspondant au domaine de fixation à la molécule CD207 et au domaine de fixation à la molécule TLR2 sont disposées, de la position N-terminale à la position C-terminale, dans l’ordre VH(TLR2) - VL(TLR2) - VH(CD207) - VL(CD207).
Une telle construction peptidique comprend ou consiste en un scFv en tandem.
Un exemple de construction peptidique correspondant à la représentation VH(TLR2) - VL(TLR2) - VH(CD207) - VL(CD207) est un polypeptide de séquence SEQ ID NO : 21. Le polypeptide de séquence SEQ ID NO : 21 est codé par la séquence nucléotidique de séquence SEQ ID NO : 117.
Selon un autre mode de réalisation, l’invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, consistant en un polypeptide dans lequel les régions variables de la chaîne lourde (VH) et les régions variables de la chaîne légère (VL) correspondant au domaine de fixation à la molécule CD207 et au domaine de fixation à la molécule TLR2 sont disposées, de la position VH(TLR2) - VL(TLR2) - VL(CD207) - VH(CD207).
Une telle construction peptidique comprend ou consiste en un scFv en tandem.
Un exemple de construction peptidique correspondant à la représentation VH(TLR2) - VL(TLR2) - VL(CD207) - VH(CD207) est un polypeptide de séquence SEQ ID NO : 22. Le polypeptide de séquence SEQ ID NO : 22 est codé par la séquence nucléotidique de séquence SEQ ID NO : 118.
Selon un autre mode de réalisation, l’invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, consistant en un polypeptide dans lequel les régions variables de la chaîne lourde (VH) et les régions variables de la chaîne légère (VL) correspondant au domaine de fixation à la molécule CD207 et au domaine de fixation à la molécule TLR2 sont disposées, de la position N-terminale à la position C-terminale, dans l’ordre VL(TLR2) - VH(TLR2) - VH(CD207) - VL(CD207).
Une telle construction peptidique comprend ou consiste en un scFv en tandem.
Un exemple de construction peptidique correspondant à la représentation VL(TLR2) - VH(TLR2) - VH(CD207) - VL(CD207) est un polypeptide de séquence SEQ ID NO : 23. Le polypeptide de séquence SEQ ID NO : 23 est codé par la séquence nucléotidique de séquence SEQ ID NO : 119.
Selon un autre mode de réalisation, l’invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, consistant en un polypeptide dans lequel les régions variables de la chaîne lourde (VH) et les régions variables de la chaîne légère (VL) correspondant au domaine de fixation à la molécule CD207 et au domaine de fixation à la molécule TLR2 sont disposées, de la position N-terminale à la position C-terminale, dans l’ordre VL(TLR2) - VH(TLR2) - VL(CD207) - VH(CD207).
Une telle construction peptidique comprend ou consiste en un scFv en tandem.
Un exemple de construction peptidique correspondant à la représentation VL(TLR2) - VH(TLR2) - VL(CD207) - VH(CD207) est un polypeptide de séquence SEQ ID NO : 24. Le polypeptide de séquence SEQ ID NO : 24 est codé par la séquence nucléotidique de séquence SEQ ID NO : 120.
Selon un autre mode de réalisation particulier, l’invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, consistant en un diabody simple chaîne bispécifique.
Selon un mode de réalisation plus particulier, l’invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, consistant en un polypeptide dans lequel les régions variables de la chaîne lourde (VH) et les régions variables de la chaîne légère (VL) correspondant au domaine de fixation à la molécule CD209 et au domaine de fixation à la molécule TLR2 sont disposées, de la position N-terminale à la position C-terminale, dans l’ordre VH(CD209) - VH(TLR2) - VL(TLR2) - VL(CD209).
Une telle construction peptidique comprend ou consiste en un diabody simple chaîne bispécifique.
Un exemple de construction peptidique correspondant à la représentation VH(CD209) - VH(TLR2) - VL(TLR2) - VL(CD209) est un polypeptide de séquence SEQ ID NO : 25. Le polypeptide de séquence SEQ ID NO : 25 est codé par la séquence nucléotidique de séquence SEQ ID NO : 121.
Selon un autre mode de réalisation, l’invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, consistant en un polypeptide dans lequel les régions variables de la chaîne lourde (VH) et les régions variables de la chaîne légère (VL) correspondant au domaine de fixation à la molécule CD209 et au domaine de fixation à la molécule TLR2 sont disposées, de la position N-terminale à la position C-terminale, dans l’ordre VH(CD209) - VL(TLR2) - VH(TLR2) - VL(CD209).
Une telle construction peptidique comprend ou consiste en un diabody simple chaîne bispécifique.
Un exemple de construction peptidique correspondant à la représentation VH(CD209) - VL(TLR2) - VH(TLR2) - VL(CD209) est un polypeptide de séquence SEQ ID NO : 26. Le polypeptide de séquence SEQ ID NO : 26 est codé par la séquence nucléotidique de séquence SEQ ID NO : 122.
Selon un autre mode de réalisation, l’invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, consistant en un polypeptide dans lequel les régions variables de la chaîne lourde (VH) et les régions variables de la chaîne légère (VL) correspondant au domaine de fixation à la molécule CD209 et au domaine de fixation à la molécule TLR2 sont disposées, de la position N-terminale à la position C-terminale, dans l’ordre VH(TLR2) - VH(CD209) - VL(CD209) - VL(TLR2).
Une telle construction peptidique comprend ou consiste en un diabody simple chaîne bispécifique.
Un exemple de construction peptidique correspondant à la représentation VH(TLR2) - VH(CD209) - VL(CD209) - VL(TLR2) est un polypeptide de séquence SEQ ID NO : 27. Le polypeptide de séquence SEQ ID NO : 27 est codé par la séquence nucléotidique de séquence SEQ ID NO : 123.
Selon un autre mode de réalisation, l’invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, consistant en un polypeptide dans lequel les régions variables de la chaîne lourde (VH) et les régions variables de la chaîne légère (VL) correspondant au domaine de fixation à la molécule CD209 et au domaine de fixation à la molécule TLR2 sont disposées, de la position N-terminale à la position C-terminale, dans l’ordre VH(TLR2) - VL(CD209) - VH(CD209) - VL(TLR2).
Une telle construction peptidique comprend ou consiste en un diabody simple chaîne bispécifique.
Un exemple de construction peptidique correspondant à la représentation VH(TLR2) - VL(CD209) - VH(CD209) - VL(TLR2) est un polypeptide de séquence SEQ ID NO : 28. Le polypeptide de séquence SEQ ID NO : 28 est codé par la séquence nucléotidique de séquence SEQ ID NO : 124.
Selon un autre mode de réalisation, l’invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, consistant en un polypeptide dans lequel les régions variables de la chaîne lourde (VH) et les régions variables de la chaîne légère (VL) correspondant au domaine de fixation à la molécule CD209 et au domaine de fixation à la molécule TLR2 sont disposées, de la position N-terminale à la position C-terminale, dans l’ordre VL(CD209) - VL(TLR2) - VH(TLR2) - VH(CD209).
Une telle construction peptidique comprend ou consiste en un diabody simple chaîne bispécifique.
Un exemple de construction peptidique correspondant à la représentation VL(CD209) - VL(TLR2) - VH(TLR2) - VH(CD209) est un polypeptide de séquence SEQ ID NO : 29. Le polypeptide de séquence SEQ ID NO : 29 est codé par la séquence nucléotidique de séquence SEQ ID NO : 125.
Selon un autre mode de réalisation, l’invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, consistant en un polypeptide dans lequel les régions variables de la chaîne lourde (VH) et les régions variables de la chaîne légère (VL) correspondant au domaine de fixation à la molécule CD209 et au domaine de fixation à la molécule TLR2 sont disposées, de la position N-terminale à la position C-terminale, dans l’ordre VL(CD209) - VH(TLR2) - VL(TLR2) - VH(CD209).
Une telle construction peptidique comprend ou consiste en un diabody simple chaîne bispécifique.
Un exemple de construction peptidique correspondant à la représentation VL(CD209) - VH(TLR2) - VL(TLR2) - VH(CD209) est un polypeptide de séquence SEQ ID NO : 30. Le polypeptide de séquence SEQ ID NO : 30 est codé par la séquence nucléotidique de séquence SEQ ID NO : 126.
Selon un autre mode de réalisation, l’invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, consistant en un polypeptide dans lequel les régions variables de la chaîne lourde (VH) et les régions variables de la chaîne légère (VL) correspondant au domaine de fixation à la molécule CD209 et au domaine de fixation à la molécule TLR2 sont disposées, de la position N-terminale à la position C-terminale, dans l’ordre VL(TLR2) - VH(CD209) - VL(CD209) -VH(TLR2).
Une telle construction peptidique comprend ou consiste en un diabody simple chaîne bispécifique.
Un exemple de construction peptidique correspondant à la représentation VL(TLR2) - VH(CD209) - VL(CD209) -VH(TLR2) est un polypeptide de séquence SEQ ID NO : 31. Le polypeptide de séquence SEQ ID NO : 31 est codé par la séquence nucléotidique de séquence SEQ ID NO : 127.
Selon un autre mode de réalisation, l’invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, consistant en un polypeptide dans lequel les régions variables de la chaîne lourde (VH) et les régions variables de la chaîne légère (VL) correspondant au domaine de fixation à la molécule CD209 et au domaine de fixation à la molécule TLR2 sont disposées, de la position N-terminale à la position C-terminale, dans l’ordre VL(TLR2) - VL(CD209) - VH(CD209) - VH(TLR2).
Une telle construction peptidique comprend ou consiste en un diabody simple chaîne bispécifique.
Un exemple de construction peptidique correspondant à la représentation VL(TLR2) - VL(CD209) - VH(CD209) - VH(TLR2) est un polypeptide de séquence SEQ ID NO : 32. Le polypeptide de séquence SEQ ID NO : 32 est codé par la séquence nucléotidique de séquence SEQ ID NO : 128
Selon un autre mode de réalisation particulier, l’invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, consistant en un polypeptide dans lequel les régions variables de la chaîne lourde (VH) et les régions variables de la chaîne légère (VL) correspondant au domaine de fixation à la molécule DCIR et au domaine de fixation à la molécule TLR2 sont disposées, de la position N-terminale à la position C-terminale, dans l’ordre VH(DCIR) - VH(TLR2) - VL(TLR2) - VL(DCIR).
Une telle construction peptidique comprend ou consiste en un diabody simple chaîne bispécifique.
Un exemple de construction peptidique correspondant à la représentation VH(DCIR) - VH(TLR2) - VL(TLR2) - VL(DCIR) est un polypeptide de séquence SEQ ID NO : 33. Le polypeptide de séquence SEQ ID NO : 33 est codé par la séquence nucléotidique de séquence SEQ ID NO : 129.
Selon un autre mode de réalisation, l’invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, consistant en un polypeptide dans lequel les régions variables de la chaîne lourde (VH) et les régions variables de la chaîne légère (VL) correspondant au domaine de fixation à la molécule DCIR et au domaine de fixation à la molécule TLR2 sont disposées, de la position N-terminale à la position C-terminale, dans l’ordre VH(DCIR) - VL(TLR2) - VH(TLR2) - VL(DCIR).
Une telle construction peptidique comprend ou consiste en un diabody simple chaîne bispécifique.
Un exemple de construction peptidique correspondant à la représentation VH(DCIR) - VL(TLR2) - VH(TLR2) - VL(DCIR) est un polypeptide de séquence SEQ ID NO : 34. Le polypeptide de séquence SEQ ID NO : 34 est codé par la séquence nucléotidique de séquence SEQ ID NO : 130.
Selon un autre mode de réalisation, l’invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, consistant en un polypeptide dans lequel les régions variables de la chaîne lourde (VH) et les régions variables de la chaîne légère (VL) correspondant au domaine de fixation à la molécule DCIR et au domaine de fixation à la molécule TLR2 sont disposées, de la position N-terminale à la position C-terminale, dans l’ordre VH(TLR2) - VH(DCIR) - VL(DCIR) - VL(TLR2).
Une telle construction peptidique comprend ou consiste en un diabody simple chaîne bispécifique.
Un exemple de construction peptidique correspondant à la représentation VH(TLR2) - VH(DCIR) - VL(DCIR) - VL(TLR2) est un polypeptide de séquence SEQ ID NO : 35. Le polypeptide de séquence SEQ ID NO : 35 est codé par la séquence nucléotidique de séquence SEQ ID NO : 131.
Selon un autre mode de réalisation, l’invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, consistant en un polypeptide dans lequel les régions variables de la chaîne lourde (VH) et les régions variables de la chaîne légère (VL) correspondant au domaine de fixation à la molécule DCIR et au domaine de fixation à la molécule TLR2 sont disposées, de la position N-terminale à la position C-terminale, dans l’ordre VH(TLR2) - VL (DCIR) - VH(DCIR) - VL(TLR2).
Une telle construction peptidique comprend ou consiste en un diabody simple chaîne bispécifique.
Un exemple de construction peptidique correspondant à la représentation VH(TLR2) - VL(DCIR) - VH(DCIR) - VL(TLR2) est un polypeptide de séquence SEQ ID NO : 36. Le polypeptide de séquence SEQ ID NO : 36 est codé par la séquence nucléotidique de séquence SEQ ID NO : 132.
Selon un autre mode de réalisation, l’invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, consistant en un polypeptide dans lequel les régions variables de la chaîne lourde (VH) et les régions variables de la chaîne légère (VL) correspondant au domaine de fixation à la molécule DCIR et au domaine de fixation à la molécule TLR2 sont disposées, de la position N-terminale à la position C-terminale, dans l’ordre VL(DCIR) - VL(TLR2) - VH(TLR2) - VH(DCIR)
Une telle construction peptidique comprend ou consiste en un diabody simple chaîne bispécifique.
Un exemple de construction peptidique correspondant à la représentation VL(DCIR) - VL(TLR2) - VH(TLR2) - VH(DCIR) est un polypeptide de séquence SEQ ID NO : 37. Le polypeptide de séquence SEQ ID NO : 37 est codé par la séquence nucléotidique de séquence SEQ ID NO : 133.
Selon un autre mode de réalisation, l’invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, consistant en un polypeptide dans lequel les régions variables de la chaîne lourde (VH) et les régions variables de la chaîne légère (VL) correspondant au domaine de fixation à la molécule DCIR et au domaine de fixation à la molécule TLR2 sont disposées, de la position N-terminale à la position C-terminale, dans l’ordre VL (DCIR) - VH(TLR2) - VL(TLR2) - VH(DCIR)
Une telle construction peptidique comprend ou consiste en un diabody simple chaîne bispécifique.
Un exemple de construction peptidique correspondant à la représentation VL(DCIR) - VH(TLR2) - VL(TLR2) - VH(DCIR) est un polypeptide de séquence SEQ ID NO : 38. Le polypeptide de séquence SEQ ID NO : 38 est codé par la séquence nucléotidique de séquence SEQ ID NO : 134.
Selon un autre mode de réalisation, l’invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, consistant en un polypeptide dans lequel les régions variables de la chaîne lourde (VH) et les régions variables de la chaîne légère (VL) correspondant au domaine de fixation à la molécule DCIR et au domaine de fixation à la molécule TLR2 sont disposées, de la position N-terminale à la position C-terminale, dans l’ordre VL(TLR2) - VH(DCIR) - VL(DCIR) -VH(TLR2).
Une telle construction peptidique comprend ou consiste en un diabody simple chaîne bispécifique.
Un exemple de construction peptidique correspondant à la représentation VL(TLR2) - VH(DCIR) - VL(DCIR) -VH(TLR2) est un polypeptide de séquence SEQ ID NO : 39. Le polypeptide de séquence SEQ ID NO : 39 est codé par la séquence nucléotidique de séquence SEQ ID NO : 135.
Selon un autre mode de réalisation, l’invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, consistant en un polypeptide dans lequel les régions variables de la chaîne lourde (VH) et les régions variables de la chaîne légère (VL) correspondant au domaine de fixation à la molécule DCIR et au domaine de fixation à la molécule TLR2 sont disposées, de la position N-terminale à la position C-terminale, dans l’ordre VL(TLR2) - VL (DCIR) - VH(DCIR) - VH(TLR2).
Une telle construction peptidique comprend ou consiste en un diabody simple chaîne bispécifique.
Un exemple de construction peptidique correspondant à la représentation VL(TLR2) - VL(DCIR) - VH(DCIR) - VH(TLR2) est un polypeptide de séquence SEQ ID NO : 40. Le polypeptide de séquence SEQ ID NO : 40 est codé par la séquence nucléotidique de séquence SEQ ID NO : 136.
Selon un autre mode de réalisation particulier, l’invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, consistant en un polypeptide dans lequel les régions variables de la chaîne lourde (VH) et les régions variables de la chaîne légère (VL) correspondant au domaine de fixation à la molécule CD207 et au domaine de fixation à la molécule TLR2 sont disposées, de la position N-terminale à la position C-terminale, dans l’ordre VH(CD207) - VH(TLR2) - VL(TLR2) - VL(CD207).
Une telle construction peptidique comprend ou consiste en un diabody simple chaîne bispécifique.
Un exemple de construction peptidique correspondant à la représentation VH(CD207) - VH(TLR2) - VL(TLR2) - VL(CD207) est un polypeptide de séquence SEQ ID NO : 4L Le polypeptide de séquence SEQ ID NO : 41 est codé par la séquence nucléotidique de séquence SEQ ID NO : 137.
Selon un autre mode de réalisation, l’invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, consistant en un polypeptide dans lequel les régions variables de la chaîne lourde (VH) et les régions variables de la chaîne légère (VL) correspondant au domaine de fixation à la molécule CD207 et au domaine de fixation à la molécule TLR2 sont disposées, de la position N-terminale à la position C-terminale, dans l’ordre VH(CD207) - VL(TLR2) - VH(TLR2) - VL(CD207).
Une telle construction peptidique comprend ou consiste en un diabody simple chaîne bispécifique.
Un exemple de construction peptidique correspondant à la représentation VH(CD207) - VL(TLR2) - VH(TLR2) - VL(CD207) est un polypeptide de séquence SEQ ID NO : 42. Le polypeptide de séquence SEQ ID NO : 42 est codé par la séquence nucléotidique de séquence SEQ ID NO : 138.
Selon un autre mode de réalisation, l’invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, consistant en un polypeptide dans lequel les régions variables de la chaîne lourde (VH) et les régions variables de la chaîne légère (VL) correspondant au domaine de fixation à la molécule CD207 et au domaine de fixation à la molécule TLR2 sont disposées, de la position N-terminale à la position C-terminale, dans l’ordre VH(TLR2) - VH(CD207) - VL(CD207) - VL(TLR2).
Une telle construction peptidique comprend ou consiste en un diabody simple chaîne bispécifique.
Un exemple de construction peptidique correspondant à la représentation VH(TLR2) - VH(CD207) - VL(CD207) - VL(TLR2) est un polypeptide de séquence SEQ ID NO : 43. Le polypeptide de séquence SEQ ID NO : 43 est codé par la séquence nucléotidique de séquence SEQ ID NO : 139.
Selon un autre mode de réalisation, l’invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, consistant en un polypeptide dans lequel les régions variables de la chaîne lourde (VH) et les régions variables de la chaîne légère (VL) correspondant au domaine de fixation à la molécule CD207 et au domaine de fixation à la molécule TLR2 sont disposées, de la position N-terminale à la position C-terminale, dans l’ordre VH(TLR2) - VL(CD207) - VH(CD207) - VL(TLR2).
Une telle construction peptidique comprend ou consiste en un diabody simple chaîne bispécifique.
Un exemple de construction peptidique correspondant à la représentation VH(TLR2) - VL(CD207) - VH(CD207) - VL(TLR2) est un polypeptide de séquence SEQ ID NO : 44. Le polypeptide de séquence SEQ ID NO : 44 est codé par la séquence nucléotidique de séquence SEQ ID NO : 140.
Selon un autre mode de réalisation, l’invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, consistant en un polypeptide dans lequel les régions variables de la chaîne lourde (VH) et les régions variables de la chaîne légère (VL) correspondant au domaine de fixation à la molécule CD207 et au domaine de fixation à la molécule TLR2 sont disposées, de la position N-terminale à la position C-terminale, dans l’ordre VL(CD207) - VL(TLR2) - VH(TLR2) - VH(CD207).
Une telle construction peptidique comprend ou consiste en un diabody simple chaîne bispécifique.
Un exemple de construction peptidique correspondant à la représentation VL(CD207) - VL(TLR2) - VH(TLR2) - VH(CD207) est un polypeptide de séquence SEQ ID NO : 45. Le polypeptide de séquence SEQ ID NO : 45 est codé par la séquence nucléotidique de séquence SEQ ID NO : 141.
Selon un autre mode de réalisation, l’invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, consistant en un polypeptide dans lequel les régions variables de la chaîne lourde (VH) et les régions variables de la chaîne légère (VL) correspondant au domaine de fixation à la molécule CD207 et au domaine de fixation à la molécule TLR2 sont disposées, de la position N-terminale à la position C-terminale, dans l’ordre VL(CD207) - VH(TLR2) - VL(TLR2) - VH(CD207).
Une telle construction peptidique comprend ou consiste en un diabody simple chaîne bispécifique.
Un exemple de construction peptidique correspondant à la représentation VL(CD207) - VH(TLR2) - VL(TLR2) - VH(CD207) est un polypeptide de séquence SEQ ID NO : 46. Le polypeptide de séquence SEQ ID NO : 46 est codé par la séquence nucléotidique de séquence SEQ ID NO : 142.
Selon un autre mode de réalisation, l’invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, consistant en un polypeptide dans lequel les régions variables de la chaîne lourde (VH) et les régions variables de la chaîne légère (VL) correspondant au domaine de fixation à la molécule CD207 et au domaine de fixation à la molécule TLR2 sont disposées, de la position N-terminale à la position C-terminale, dans l’ordre VL(TLR2) - VH(CD207) - VL(CD207) -VH(TLR2).
Une telle construction peptidique comprend ou consiste en un diabody simple chaîne bispécifique.
Un exemple de construction peptidique correspondant à la représentation VL(TLR2) - VH(CD207) - VL(CD207) -VH(TLR2) est un polypeptide de séquence SEQ ID NO : 47. Le polypeptide de séquence SEQ ID NO : 47 est codé par la séquence nucléotidique de séquence SEQ ID NO : 143.
Selon un autre mode de réalisation, l’invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, consistant en un polypeptide dans lequel les régions variables de la chaîne lourde (VH) et les régions variables de la chaîne légère (VL) correspondant au domaine de fixation à la molécule CD207 et au domaine de fixation à la molécule TLR2 sont disposées, de la position N-terminale à la position C-terminale, dans l’ordre VL(TLR2) - VL(CD207) - VH(CD207) - VH(TLR2).
Une telle construction peptidique comprend ou consiste en un diabody simple chaîne bispécifique.
Un exemple de construction peptidique correspondant à la représentation VL(TLR2) - VL(CD207) - VH(CD207) - VH(TLR2) est un polypeptide de séquence SEQ ID NO : 48. Le polypeptide de séquence SEQ ID NO : 48 est codé par la séquence nucléotidique de séquence SEQ ID NO : 144.
Selon un autre mode de réalisation particulier, l’invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, consistant en un diabody hétérodimérique.
Selon un mode de réalisation plus particulier, l’invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, consistant en deux polypeptides dans lesquels les régions variables de la chaîne lourde (VH) et les régions variables de la chaîne légère (VL) correspondant au domaine de fixation à la molécule CD209 et au domaine de fixation à la molécule TLR2 sont disposées, de la position N-terminale à la position C-terminale, dans l’ordre VH(CD209) - VH(TLR2) dans le premier polypeptide et dans l’ordre VL(TLR2) - VL(CD209) dans le second polypeptide.
Une telle construction peptidique comprend ou consiste en un diabody hétérodimérique. Les deux polypeptides constituant le diabody hétérodimérique sont liés entre eux par des liaisons faibles, telles que les liaisons hydrophobes, les liaisons hydrogène, les liaisons ioniques ou les liaisons de van der Waals.
Un exemple de construction peptidique correspondant à la représentation VH(CD209) - VH(TLR2) dans le premier polypeptide et VL(TLR2) - VL(CD209) dans le second polypeptide est un diabody hétérodimérique constitué d’un premier polypeptide de séquence SEQ ID NO : 49 et d’un second polypeptide de séquence SEQ ID NO : 50. Le polypeptide de séquence SEQ ID NO : 49 est codé par la séquence nucléotidique de séquence SEQ ID NO : 145. Le polypeptide de séquence SEQ ID NO : 50 est codé par la séquence nucléotidique de séquence SEQ ID NO : 146.
Selon un autre mode de réalisation, l’invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, consistant en deux polypeptides dans lesquels les régions variables de la chaîne lourde (VH) et les régions variables de la chaîne légère (VL) correspondant au domaine de fixation à la molécule CD209 et au domaine de fixation à la molécule TLR2 sont disposées, de la position N-terminale à la position C-terminale, dans l’ordre VH(CD209) - VL(TLR2) dans le premier polypeptide et dans l’ordre VH(TLR2) - VL(CD209) dans le second polypeptide.
Une telle construction peptidique comprend ou consiste en un diabody hétérodimérique.
Un exemple de construction peptidique correspondant à la représentation VH(CD209) - VL(TLR2) dans le premier polypeptide et VH(TLR2) - VL(CD209) dans le second polypeptide est un diabody hétérodimérique constitué d’un premier polypeptide de séquence SEQ ID NO : 51 et d’un second polypeptide de séquence SEQ ID NO : 52. Le polypeptide de séquence SEQ ID NO : 51 est codé par la séquence nucléotidique de séquence SEQ ID NO : 147. Le polypeptide de séquence SEQ ID NO : 52 est codé par la séquence nucléotidique de séquence SEQ ID NO : 148.
Selon un autre mode de réalisation, l’invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, consistant en deux polypeptides dans lesquels les régions variables de la chaîne lourde (VH) et les régions variables de la chaîne légère (VL) correspondant au domaine de fixation à la molécule CD209 et au domaine de fixation à la molécule TLR2 sont disposées, de la position N-terminale à la position C-terminale, dans l’ordre VH(TLR2) - VH(CD209) dans le premier polypeptide et dans l’ordre VL(CD209) - VL(TLR2) dans le second polypeptide.
Une telle construction peptidique comprend ou consiste en un diabody hétérodimérique.
Un exemple de construction peptidique correspondant à la représentation VH(TLR2) - VH(CD209) dans le premier polypeptide et VL(CD209) - VL(TLR2) dans le second polypeptide est un diabody hétérodimérique constitué d’un premier polypeptide de séquence SEQ ID NO : 53 et d’un second polypeptide de séquence SEQ ID NO : 54. Le polypeptide de séquence SEQ ID NO : 53 est codé par la séquence nucléotidique de séquence SEQ ID NO : 149. Le polypeptide de séquence SEQ ID NO : 54 est codé par la séquence nucléotidique de séquence SEQ ID NO : 150.
Selon un autre mode de réalisation, l’invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, consistant en deux polypeptides dans lesquels les régions variables de la chaîne lourde (VH) et les régions variables de la chaîne légère (VL) correspondant au domaine de fixation à la molécule CD209 et au domaine de fixation à la molécule TLR2 sont disposées, de la position N-terminale à la position C-terminale, dans l’ordre VH(TLR2) - VL(CD209) dans le premier polypeptide et dans l’ordre VH(CD209) - VL(TLR2) dans le second polypeptide.
Une telle construction peptidique comprend ou consiste en un diabody hétérodimérique.
Un exemple de construction peptidique correspondant à la représentation VH(TLR2) - VL(CD209) dans le premier polypeptide et VH(CD209) - VL(TLR2) dans le second polypeptide est un diabody hétérodimérique constitué d’un premier polypeptide de séquence SEQ ID NO : 55 et d’un second polypeptide de séquence SEQ ID NO : 56. Le polypeptide de séquence SEQ ID NO : 55 est codé par la séquence nucléotidique de séquence SEQ ID NO : 151. Le polypeptide de séquence SEQ ID NO : 56 est codé par la séquence nucléotidique de séquence SEQ ID NO : 152.
Selon un autre mode de réalisation, l’invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, consistant en deux polypeptides dans lesquels les régions variables de la chaîne lourde (VH) et les régions variables de la chaîne légère (VL) correspondant au domaine de fixation à la molécule CD209 et au domaine de fixation à la molécule TLR2 sont disposées, de la position N-terminale à la position C-terminale, dans l’ordre VL(CD209) - VL(TLR2) dans le premier polypeptide et dans l’ordre VH(TLR2) - VH(CD209) dans le second polypeptide.
Une telle construction peptidique comprend ou consiste en un diabody hétérodimérique.
Un exemple de construction peptidique correspondant à la représentation VL(CD209) - VL(TLR2) dans le premier polypeptide et VH(TLR2) - VH(CD209) dans le second polypeptide est un diabody hétérodimérique constitué d’un premier polypeptide de séquence SEQ ID NO : 57 et d’un second polypeptide de séquence SEQ ID NO : 58. Le polypeptide de séquence SEQ ID NO : 57 est codé par la séquence nucléotidique de séquence SEQ ID NO : 153. Le polypeptide de séquence SEQ ID NO : 58 est codé par la séquence nucléotidique de séquence SEQ ID NO : 154.
Selon un autre mode de réalisation, l’invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, consistant en deux polypeptides dans lesquels les régions variables de la chaîne lourde (VH) et les régions variables de la chaîne légère (VL) correspondant au domaine de fixation à la molécule CD209 et au domaine de fixation à la molécule TLR2 sont disposées, de la position N-terminale à la position C-terminale, dans l’ordre VL(CD209) - VH(TLR2) dans le premier polypeptide et dans l’ordre VL(TLR2) - VH(CD209) dans le second polypeptide.
Une telle construction peptidique comprend ou consiste en un diabody hétérodimérique.
Un exemple de construction peptidique correspondant à la représentation VL(CD209) - VH(TLR2) dans le premier polypeptide et VL(TLR2) - VH(CD209) dans le second polypeptide est un diabody hétérodimérique constitué d’un premier polypeptide de séquence SEQ ID NO : 59 et d’un second polypeptide de séquence SEQ ID NO : 60. Le polypeptide de séquence SEQ ID NO : 59 est codé par la séquence nucléotidique de séquence SEQ ID NO : 155. Le polypeptide de séquence SEQ ID NO : 60 est codé par la séquence nucléotidique de séquence SEQ ID NO : 156.
Selon un autre mode de réalisation, l’invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, consistant en deux polypeptides dans lesquels les régions variables de la chaîne lourde (VH) et les régions variables de la chaîne légère (VL) correspondant au domaine de fixation à la molécule CD209 et au domaine de fixation à la molécule TLR2 sont disposées, de la position N-terminale à la position C-terminale, dans l’ordre VL(TLR2) - VH(CD209) dans le premier polypeptide et dans l’ordre VL(CD209) -VH(TLR2) dans le second polypeptide.
Une telle construction peptidique comprend ou consiste en un diabody hétérodimérique.
Un exemple de construction peptidique correspondant à la représentation VL(TLR2) - VH(CD209) dans le premier polypeptide et VL(CD209) -VH(TLR2) dans le second polypeptide est un diabody hétérodimérique constitué d’un premier polypeptide de séquence SEQ ID NO : 61 et d’un second polypeptide de séquence SEQ ID NO : 62. Le polypeptide de séquence SEQ ID NO : 61 est codé par la séquence nucléotidique de séquence SEQ ID NO : 157. Le polypeptide de séquence SEQ ID NO : 62 est codé par la séquence nucléotidique de séquence SEQ ID NO : 158.
Selon un autre mode de réalisation, l’invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, consistant en deux polypeptides dans lesquels les régions variables de la chaîne lourde (VH) et les régions variables de la chaîne légère (VL) correspondant au domaine de fixation à la molécule CD209 et au domaine de fixation à la molécule TLR2 sont disposées, de la position N-terminale à la position C-terminale, dans l’ordre VL(TLR2) - VL(CD209) dans le premier polypeptide et dans l’ordre VH(CD209) - VH(TLR2) dans le second polypeptide.
Une telle construction peptidique comprend ou consiste en un diabody hétérodimérique.
Un exemple de construction peptidique correspondant à la représentation VL(TLR2) - VL(CD209) dans le premier polypeptide et VH(CD209) - VH(TLR2) dans le second polypeptide est un diabody hétérodimérique constitué d’un premier polypeptide de séquence SEQ ID NO : 63 et d’un second polypeptide de séquence SEQ ID NO : 64. Le polypeptide de séquence SEQ ID NO : 63 est codé par la séquence nucléotidique de séquence SEQ ID NO : 159. Le polypeptide de séquence SEQ ID NO : 64 est codé par la séquence nucléotidique de séquence SEQ ID NO : 160.
Selon un autre mode de réalisation particulier, l’invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, consistant en deux polypeptides dans lesquels les régions variables de la chaîne lourde (VH) et les régions variables de la chaîne légère (VL) correspondant au domaine de fixation à la molécule DCIR et au domaine de fixation à la molécule TLR2 sont disposées, de la position N-terminale à la position C-terminale, dans l’ordre VH(DCIR) - VH(TLR2) dans le premier polypeptide et dans l’ordre VL(TLR2) - VL(DCIR) dans le second polypeptide.
Une telle construction peptidique comprend ou consiste en un diabody hétérodimérique.
Un exemple de construction peptidique correspondant à la représentation VH(DCIR) - VH(TLR2) dans le premier polypeptide et VL(TLR2) - VL(DCIR) dans le second polypeptide est un diabody hétérodimérique constitué d’un premier polypeptide de séquence SEQID NO : 65 et d’un second polypeptide de séquence SEQ ID NO : 66. Le polypeptide de séquence SEQ ID NO : 65 est codé par la séquence nucléotidique de séquence SEQ ID NO : 161. Le polypeptide de séquence SEQ ID NO : 66 est codé par la séquence nucléotidique de séquence SEQ ID NO : 162.
Selon un autre mode de réalisation, l’invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, consistant en deux polypeptides dans lesquels les régions variables de la chaîne lourde (VH) et les régions variables de la chaîne légère (VL) correspondant au domaine de fixation à la molécule DCIR et au domaine de fixation à la molécule TLR2 sont disposées, de la position N-terminale à la position C-terminale, dans l’ordre VH(DCIR) - VL(TLR2) dans le premier polypeptide et dans l’ordre VH(TLR2) - VL(DCIR) dans le second polypeptide.
Une telle construction peptidique comprend ou consiste en un diabody hétérodimérique.
Un exemple de construction peptidique correspondant à la représentation VH(DCIR) - VL(TLR2) dans le premier polypeptide et VH(TLR2) - VL(DCIR) dans le second polypeptide est un diabody hétérodimérique constitué d’un premier polypeptide de séquence SEQ ID NO : 67 et d’un second polypeptide de séquence SEQ ID NO : 68. Le polypeptide de séquence SEQ ID NO : 67 est codé par la séquence nucléotidique de séquence SEQ ID NO : 163. Le polypeptide de séquence SEQ ID NO : 68 est codé par la séquence nucléotidique de séquence SEQ ID NO : 164.
Selon un autre mode de réalisation, l’invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, consistant en deux polypeptides dans lesquels les régions variables de la chaîne lourde (VH) et les régions variables de la chaîne légère (VL) correspondant au domaine de fixation à la molécule DCIR et au domaine de fixation à la molécule TLR2 sont disposées, de la position N-terminale à la position C-terminale, dans l’ordre VH(TLR2) - VH(DCIR) dans le premier polypeptide et dans l’ordre VL(DCIR) - VL(TLR2) dans le second polypeptide.
Une telle construction peptidique comprend ou consiste en un diabody hétérodimérique.
Un exemple de construction peptidique correspondant à la représentation VH(TLR2) - VH(DCIR) dans le premier polypeptide et VL(DCIR) - VL(TLR2) dans le second polypeptide est un diabody hétérodimérique constitué d’un premier polypeptide de séquence SEQ ID NO : 69 et d’un second polypeptide de séquence SEQ ID NO : 70. Le polypeptide de séquence SEQ ID NO : 69 est codé par la séquence nucléotidique de séquence SEQ ID NO : 165. Le polypeptide de séquence SEQ ID NO : 70 est codé par la séquence nucléotidique de séquence SEQ ID NO : 166.
Selon un autre mode de réalisation, l’invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, consistant en deux polypeptides dans lesquels les régions variables de la chaîne lourde (VH) et les régions variables de la chaîne légère (VL) correspondant au domaine de fixation à la molécule DCIR et au domaine de fixation à la molécule TLR2 sont disposées, de la position N-terminale à la position C-terminale, dans l’ordre VH(TLR2) - VL(DCIR) dans le premier polypeptide et dans l’ordre VH(DCIR) - VL(TLR2) dans le second polypeptide.
Une telle construction peptidique comprend ou consiste en un diabody hétérodimérique.
Un exemple de construction peptidique correspondant à la représentation VH(TLR2) - VL(DCIR) dans le premier polypeptide et VH(DCIR) - VL(TLR2) dans le second polypeptide est un diabody hétérodimérique constitué d’un premier polypeptide de séquence SEQ ID NO : 71 et d’un second polypeptide de séquence SEQ ID NO : 72. Le polypeptide de séquence SEQ ID NO : 71 est codé par la séquence nucléotidique de séquence SEQ ID NO : 167. Le polypeptide de séquence SEQ ID NO : 72 est codé par la séquence nucléotidique de séquence SEQ ID NO : 168.
Selon un autre mode de réalisation, l’invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, consistant en deux polypeptides dans lesquels les régions variables de la chaîne lourde (VH) et les régions variables de la chaîne légère (VL) correspondant au domaine de fixation à la molécule DCIR et au domaine de fixation à la molécule TLR2 sont disposées, de la position N-terminale à la position C-terminale, dans l’ordre VL(DCIR) - VL(TLR2) dans le premier polypeptide et dans l’ordre VH(TLR2) - VH(DCIR) dans le second polypeptide.
Une telle construction peptidique comprend ou consiste en un diabody hétérodimérique.
Un exemple de construction peptidique correspondant à la représentation VL(DCIR) - VL(TLR2) dans le premier polypeptide et VH(TLR2) - VH(DCIR) dans le second polypeptide est un diabody hétérodimérique constitué d’un premier polypeptide de séquence SEQ ID NO : 73 et d’un second polypeptide de séquence SEQ ID NO : 74. Le polypeptide de séquence SEQ ID NO : 73 est codé par la séquence nucléotidique de séquence SEQ ID NO : 169. Le polypeptide de séquence SEQ ID NO : 74 est codé par la séquence nucléotidique de séquence SEQ ID NO : 170.
Selon un autre mode de réalisation, l’invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, consistant en deux polypeptides dans lesquels les régions variables de la chaîne lourde (VH) et les régions variables de la chaîne légère (VL) correspondant au domaine de fixation à la molécule DCIR et au domaine de fixation à la molécule TLR2 sont disposées, de la position N-terminale à la position C-terminale, dans l’ordre VL(DCIR) - VH(TLR2) dans le premier polypeptide et dans l’ordre VL(TLR2) - VH(DCIR) dans le second polypeptide.
Une telle construction peptidique comprend ou consiste en un diabody hétérodimérique.
Un exemple de construction peptidique correspondant à la représentation VL(DCIR) - VH(TLR2) dans le premier polypeptide et VL(TLR2) - VH(DCIR) dans le second polypeptide est un diabody hétérodimérique constitué d’un premier polypeptide de séquence SEQ ID NO : 75 et d’un second polypeptide de séquence SEQ ID NO : 76. Le polypeptide de séquence SEQ ID NO : 75 est codé par la séquence nucléotidique de séquence SEQ ID NO : 171. Le polypeptide de séquence SEQ ID NO : 76 est codé par la séquence nucléotidique de séquence SEQ ID NO : 172.
Selon un autre mode de réalisation, l’invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, consistant en deux polypeptides dans lesquels les régions variables de la chaîne lourde (VH) et les régions variables de la chaîne légère (VL) correspondant au domaine de fixation à la molécule DCIR et au domaine de fixation à la molécule TLR2 sont disposées, de la position N-terminale à la position C-terminale, dans l’ordre VL(TLR2) - VH(DCIR) dans le premier polypeptide et dans l’ordre VL(DCIR) -VH(TLR2) dans le second polypeptide.
Une telle construction peptidique comprend ou consiste en un diabody hétérodimérique.
Un exemple de construction peptidique correspondant à la représentation VL(TLR2) - VH(DCIR) dans le premier polypeptide et VL(DCIR) -VH(TLR2) dans le second polypeptide est un diabody hétérodimérique constitué d’un premier polypeptide de séquence SEQ ID NO : 77 et d’un second polypeptide de séquence SEQ ID NO : 78. Le polypeptide de séquence SEQ ID NO : 77 est codé par la séquence nucléotidique de séquence SEQ ID NO : 173. Le polypeptide de séquence SEQ ID NO : 78 est codé par la séquence nucléotidique de séquence SEQ ID NO : 174.
Selon un autre mode de réalisation, l’invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, consistant en deux polypeptides dans lesquels les régions variables de la chaîne lourde (VH) et les régions variables de la chaîne légère (VL) correspondant au domaine de fixation à la molécule DCIR et au domaine de fixation à la molécule TLR2 sont disposées, de la position N-terminale à la position C-terminale, dans l’ordre VL(TLR2) - VL(DCIR) dans le premier polypeptide et dans l’ordre VH(DCIR) - VH(TLR2) dans le second polypeptide.
Une telle construction peptidique comprend ou consiste en un diabody hétérodimérique.
Un exemple de construction peptidique correspondant à la représentation VL(TLR2) - VL(DCIR) dans le premier polypeptide et VH(DCIR) - VH(TLR2) dans le second polypeptide est un diabody hétérodimérique constitué d’un premier polypeptide de séquence SEQ ID NO : 79 et d’un second polypeptide de séquence SEQ ID NO : 80. Le polypeptide de séquence SEQ ID NO : 79 est codé par la séquence nucléotidique de séquence SEQ ID NO : 175. Le polypeptide de séquence SEQ ID NO : 80 est codé par la séquence nucléotidique de séquence SEQ ID NO : 176.
Selon un autre mode de réalisation particulier, l’invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, consistant en deux polypeptides dans lesquels les régions variables de la chaîne lourde (VH) et les régions variables de la chaîne légère (VL) correspondant au domaine de fixation à la molécule CD207 et au domaine de fixation à la molécule TLR2 sont disposées, de la position N-terminale à la position C-terminale, dans l’ordre VH(CD207) - VH(TLR2) dans le premier polypeptide et dans l’ordre VL(TLR2) - VL(CD207) dans le second polypeptide.
Une telle construction peptidique comprend ou consiste en un diabody hétérodimérique.
Un exemple de construction peptidique correspondant à la représentation VH(CD207) - VH(TLR2) dans le premier polypeptide et VL(TLR2) - VL(CD207) dans le second polypeptide est un diabody hétérodimérique constitué d’un premier polypeptide de séquence SEQ ID NO : 81 et d’un second polypeptide de séquence SEQ ID NO : 82. Le polypeptide de séquence SEQ ID NO : 81 est codé par la séquence nucléotidique de séquence SEQ ID NO : 177. Le polypeptide de séquence SEQ ID NO : 82 est codé par la séquence nucléotidique de séquence SEQ ID NO : 178.
Selon un autre mode de réalisation, l’invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, consistant en deux polypeptides dans lesquels les régions variables de la chaîne lourde (VH) et les régions variables de la chaîne légère (VL) correspondant au domaine de fixation à la molécule CD207 et au domaine de fixation à la molécule TLR2 sont disposées, de la position N-terminale à la position C-terminale, dans l’ordre VH(CD207) - VL(TLR2) dans le premier polypeptide et dans l’ordre VH(TLR2) - VL(CD207) dans le second polypeptide.
Une telle construction peptidique comprend ou consiste en un diabody hétérodimérique.
Un exemple de construction peptidique correspondant à la représentation VH(CD207) - VL(TLR2) dans le premier polypeptide et VH(TLR2) - VL(CD207) dans le second polypeptide est un diabody hétérodimérique constitué d’un premier polypeptide de séquence SEQ ID NO : 83 et d’un second polypeptide de séquence SEQ ID NO : 84. Le polypeptide de séquence SEQ ID NO : 83 est codé par la séquence nucléotidique de séquence SEQ ID NO : 179. Le polypeptide de séquence SEQ ID NO : 84 est codé par la séquence nucléotidique de séquence SEQ ID NO : 180.
Selon un autre mode de réalisation, l’invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, consistant en deux polypeptides dans lesquels les régions variables de la chaîne lourde (VH) et les régions variables de la chaîne légère (VL) correspondant au domaine de fixation à la molécule CD207 et au domaine de fixation à la molécule TLR2 sont disposées, de la position N-terminale à la position C-terminale, dans l’ordre VH(TLR2) - VH(CD207) dans le premier polypeptide et dans l’ordre VL(CD207) - VL(TLR2) dans le second polypeptide.
Une telle construction peptidique comprend ou consiste en un diabody hétérodimérique.
Un exemple de construction peptidique correspondant à la représentation VH(TLR2) - VH(CD207) dans le premier polypeptide et VL(CD207) - VL(TLR2) dans le second polypeptide est un diabody hétérodimérique constitué d’un premier polypeptide de séquence SEQID NO : 85 et d’un second polypeptide de séquence SEQ ID NO : 86. Le polypeptide de séquence SEQ ID NO : 85 est codé par la séquence nucléotidique de séquence SEQ ID NO : 181. Le polypeptide de séquence SEQ ID NO : 86 est codé par la séquence nucléotidique de séquence SEQ ID NO : 182.
Selon un autre mode de réalisation, l’invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, consistant en deux polypeptides dans lesquels les régions variables de la chaîne lourde (VH) et les régions variables de la chaîne légère (VL) correspondant au domaine de fixation à la molécule CD207 et au domaine de fixation à la molécule TLR2 sont disposées, de la position N-terminale à la position C-terminale, dans l’ordre VH(TLR2) - VL(CD207) dans le premier polypeptide et dans l’ordre VH(CD207) - VL(TLR2) dans le second polypeptide.
Une telle construction peptidique comprend ou consiste en un diabody hétérodimérique.
Un exemple de construction peptidique correspondant à la représentation VH(TLR2) - VL(CD207) dans le premier polypeptide et VH(CD207) - VL(TLR2) dans le second polypeptide est un diabody hétérodimérique constitué d’un premier polypeptide de séquence SEQ ID NO : 87 et d’un second polypeptide de séquence SEQ ID NO : 88. Le polypeptide de séquence SEQ ID NO : 87 est codé par la séquence nucléotidique de séquence SEQ ID NO : 183. Le polypeptide de séquence SEQ ID NO : 88 est codé par la séquence nucléotidique de séquence SEQ ID NO : 184.
Selon un autre mode de réalisation, l’invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, consistant en deux polypeptides dans lesquels les régions variables de la chaîne lourde (VH) et les régions variables de la chaîne légère (VL) correspondant au domaine de fixation à la molécule CD207 et au domaine de fixation à la molécule TLR2 sont disposées, de la position N-terminale à la position C-terminale, dans l’ordre VL(CD207) - VL(TLR2) dans le premier polypeptide et dans l’ordre VH(TLR2) - VH(CD207) dans le second polypeptide.
Une telle construction peptidique comprend ou consiste en un diabody hétérodimérique.
Un exemple de construction peptidique correspondant à la représentation VL(CD207) - VL(TLR2) dans le premier polypeptide et VH(TLR2) - VH(CD207) dans le second polypeptide est un diabody hétérodimérique constitué d’un premier polypeptide de séquence SEQ ID NO : 89 et d’un second polypeptide de séquence SEQ ID NO : 90. Le polypeptide de séquence SEQ ID NO : 89 est codé par la séquence nucléotidique de séquence SEQ ID NO : 185. Le polypeptide de séquence SEQ ID NO : 90 est codé par la séquence nucléotidique de séquence SEQ ID NO : 186.
Selon un autre mode de réalisation, l’invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, consistant en deux polypeptides dans lesquels les régions variables de la chaîne lourde (VH) et les régions variables de la chaîne légère (VL) correspondant au domaine de fixation à la molécule CD207 et au domaine de fixation à la molécule TLR2 sont disposées, de la position N-terminale à la position C-terminale, dans l’ordre VL(CD207) - VH(TLR2) dans le premier polypeptide et dans l’ordre VL(TLR2) - VH(CD207) dans le second polypeptide.
Une telle construction peptidique comprend ou consiste en un diabody hétérodimérique.
Un exemple de construction peptidique correspondant à la représentation VL(CD207) - VH(TLR2) dans le premier polypeptide et VL(TLR2) - VH(CD207) dans le second polypeptide est un diabody hétérodimérique constitué d’un premier polypeptide de séquence SEQ ID NO : 91 et d’un second polypeptide de séquence SEQ ID NO : 92. Le polypeptide de séquence SEQ ID NO : 91 est codé par la séquence nucléotidique de séquence SEQ ID NO : 187. Le polypeptide de séquence SEQ ID NO : 92 est codé par la séquence nucléotidique de séquence SEQ ID NO : 188.
Selon un autre mode de réalisation, l’invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, consistant en deux polypeptides dans lesquels les régions variables de la chaîne lourde (VH) et les régions variables de la chaîne légère (VL) correspondant au domaine de fixation à la molécule CD207 et au domaine de fixation à la molécule TLR2 sont disposées, de la position N-terminale à la position C-terminale, dans l’ordre VL(TLR2) - VH(CD207) dans le premier polypeptide et dans l’ordre VL(CD207) -VH(TLR2) dans le second polypeptide.
Une telle construction peptidique comprend ou consiste en un diabody hétérodimérique.
Un exemple de construction peptidique correspondant à la représentation VL(TLR2) - VH(CD207) dans le premier polypeptide et VL(CD207) -VH(TLR2) dans le second polypeptide est un diabody hétérodimérique constitué d’un premier polypeptide de séquence SEQ ID NO : 93 et d’un second polypeptide de séquence SEQ ID NO : 94. Le polypeptide de séquence SEQ ID NO : 93 est codé par la séquence nucléotidique de séquence SEQ ID NO : 189. Le polypeptide de séquence SEQ ID NO : 94 est codé par la séquence nucléotidique de séquence SEQ ID NO : 190.
Selon un autre mode de réalisation, l’invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, consistant en deux polypeptides dans lesquels les régions variables de la chaîne lourde (VH) et les régions variables de la chaîne légère (VL) correspondant au domaine de fixation à la molécule CD207 et au domaine de fixation à la molécule TLR2 sont disposées, de la position N-terminale à la position C-terminale, dans l’ordre VL(TLR2) - VL(CD207) dans le premier polypeptide et dans l’ordre VH(CD207) - VH(TLR2) dans le second polypeptide.
Une telle construction peptidique comprend ou consiste en un diabody hétérodimérique.
Un exemple de construction peptidique correspondant à la représentation VL(TLR2) - VL(CD207) dans le premier polypeptide et VH(CD207) - VH(TLR2) dans le second polypeptide est un diabody hétérodimérique constitué d’un premier polypeptide de séquence SEQ ID NO : 95 et d’un second polypeptide de séquence SEQ ID NO : 96. Le polypeptide de séquence SEQ ID NO : 95 est codé par la séquence nucléotidique de séquence SEQ ID NO : 191. Le polypeptide de séquence SEQ ID NO : 96 est codé par la séquence nucléotidique de séquence SEQ ID NO : 192.
Selon un mode de réalisation particulier, la présente invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, comprenant un CDR possédant au moins 95% d’identité avec la séquence d’acides aminés SEQ ID NO: 193, sous réserve que la construction peptidique conserve sa capacité d’induire la sécrétion d’interleukine-10.
Selon un mode de réalisation particulier, la présente invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, comprenant un CDR possédant au moins 95% d’identité avec la séquence d’acides aminés SEQ ID NO: 194, sous réserve que la construction peptidique conserve sa capacité d’induire la sécrétion d’interleukine-10.
Selon un mode de réalisation particulier, la présente invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, comprenant un CDR possédant au moins 95% d’identité avec la séquence d’acides aminés SEQ ID NO: 195, sous réserve que la construction peptidique conserve sa capacité d’induire la sécrétion d’interleukine-10.
Selon un mode de réalisation particulier, la présente invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, comprenant un CDR possédant au moins 95% d’identité avec la séquence d’acides aminés SEQ ID NO: 196, sous réserve que la construction peptidique conserve sa capacité d’induire la sécrétion d’interleukine-10.
Selon un mode de réalisation particulier, la présente invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, comprenant un CDR possédant au moins 95% d’identité avec la séquence d’acides aminés S-A-S, sous réserve que la construction peptidique conserve sa capacité d’induire la sécrétion d’interleukine-10.
La nomenclature utilisée pour décrire les séquences peptidiques est la nomenclature internationale utilisant le code à une lettre et où l'extrémité amino-terminale est présentée à gauche et l'extrémité carboxy-terminale est présentée à droite. Les tirets « - » représentent des liaisons peptidiques communes liant les acides aminés des séquences.
Selon un mode de réalisation particulier, la présente invention concerne une construction peptidique telle que défini ci-dessus, comprenant un CDR possédant au moins 95% d’identité avec la séquence d’acides aminés SEQ ID NO: 198, sous réserve que la construction peptidique conserve sa capacité d’induire la sécrétion d’interleukine-10.
Selon un mode de réalisation particulier, la présente invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, comprenant un CDR possédant au moins 95% d’identité avec la séquence d’acides aminés SEQ ID NO: 199, sous réserve que la construction peptidique conserve sa capacité d’induire la sécrétion d’interleukine-10.
Selon un mode de réalisation particulier, la présente invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, comprenant un CDR possédant au moins 95% d’identité avec la séquence d’acides aminés SEQ ID NO: 200, sous réserve que la construction peptidique conserve sa capacité d’induire la sécrétion d’interleukine-10.
Selon un mode de réalisation particulier, la présente invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, comprenant un CDR possédant au moins 95% d’identité avec la séquence d’acides aminés SEQ ID NO: 201, sous réserve que la construction peptidique conserve sa capacité d’induire la sécrétion d’interleukine-10.
Selon un mode de réalisation particulier, la présente invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, comprenant un CDR possédant au moins 95% d’identité avec la séquence d’acides aminés SEQ ID NO: 202, sous réserve que la construction peptidique conserve sa capacité d’induire la sécrétion d’interleukine-10.
Selon un mode de réalisation particulier, la présente invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, comprenant un CDR possédant au moins 95% d’identité avec la séquence d’acides aminés SEQ ID NO: 203, sous réserve que la construction peptidique conserve sa capacité d’induire la sécrétion d’interleukine-10.
Selon un mode de réalisation particulier, la présente invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, comprenant un CDR possédant au moins 95% d’identité avec la séquence d’acides aminés SEQ ID NO: 204, sous réserve que la construction peptidique conserve sa capacité d’induire la sécrétion d’interleukine-10.
Selon un mode de réalisation particulier, la présente invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, comprenant un CDR possédant au moins 95% d’identité avec la séquence d’acides aminés SEQ ID NO: 193, un CDR possédant au moins 95% d’identité avec la séquence d’acides aminés SEQ ID NO: 194, un CDR possédant au moins 95% d’identité avec la séquence d’acides aminés SEQ ID NO: 195, un CDR possédant au moins 95% d’identité avec la séquence d’acides aminés SEQ ID NO: 196, un CDR possédant au moins 95% d’identité avec la séquence d’acides aminés S-A-S , un CDR possédant au moins 95% d’identité avec la séquence d’acides aminés SEQ ID NO: 198, un CDR possédant au moins 95% d’identité avec la séquence d’acides aminés SEQ ID NO: 199, un CDR possédant au moins 95% d’identité avec la séquence d’acides aminés SEQ ID NO: 200, un CDR possédant au moins 95% d’identité avec la séquence d’acides aminés SEQ ID NO: 201, un CDR possédant au moins 95% d’identité avec la séquence d’acides aminés SEQ ID NO: 202, un CDR possédant au moins 95% d’identité avec la séquence d’acides aminés SEQ ID NO: 203 et un CDR possédant au moins 95% d’identité avec la séquence d’acides aminés SEQ ID NO: 204, sous réserve que la construction peptidique conserve sa capacité d’induire la sécrétion d’interleukine-10.
Selon un mode de réalisation particulier, la présente invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, comprenant un CDR consistant en la séquence d’acides aminés SEQ ID NO: 193.
Selon un mode de réalisation particulier, la présente invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, comprenant un CDR consistant en la séquence d’acides aminés SEQ ID NO: 194.
Selon un mode de réalisation particulier, la présente invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, comprenant un CDR consistant en la séquence d’acides aminés SEQ ID NO: 195.
Selon un mode de réalisation particulier, la présente invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, comprenant un CDR consistant en la séquence d’acides aminés SEQ ID NO: 196.
Selon un mode de réalisation particulier, la présente invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, comprenant un CDR consistant en la séquence d’acides aminés S-A-S.
Selon un mode de réalisation particulier, la présente invention concerne une construction peptidique telle que défini ci-dessus, comprenant un CDR consistant en la séquence d’acides aminés SEQ ID NO: 198.
Selon un mode de réalisation particulier, la présente invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, comprenant un CDR consistant en la séquence d’acides aminés SEQ ID NO: 199.
Selon un mode de réalisation particulier, la présente invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, comprenant un CDR consistant en la séquence d’acides aminés SEQ ID NO: 200.
Selon un mode de réalisation particulier, la présente invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, comprenant un CDR consistant en la séquence d’acides aminés SEQ ID NO: 201.
Selon un mode de réalisation particulier, la présente invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, comprenant un CDR consistant en la séquence d’acides aminés SEQ ID NO: 202.
Selon un mode de réalisation particulier, la présente invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, comprenant un CDR consistant en la séquence d’acides aminés SEQ ID NO: 203.
Selon un mode de réalisation particulier, la présente invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, comprenant un CDR consistant en la séquence d’acides aminés SEQ ID NO: 204.
Selon un mode de réalisation encore plus particulier, la présente invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, comprenant un CDR consistant en la séquence d’acides aminés SEQ ID NO: 193, un CDR consistant en la séquence d’acides aminés SEQ ID NO: 194, un CDR consistant en la séquence d’acides aminés SEQ ID NO: 195, un CDR consistant en la séquence d’acides aminés SEQ ID NO: 196, un CDR consistant en la séquence d’acides aminés S-A-S, un CDR consistant en la séquence d’acides aminés SEQ ID NO: 198, un CDR consistant en la séquence d’acides aminés SEQ ID NO: 199, un CDR consistant en la séquence d’acides aminés SEQ ID NO: 200, un CDR consistant en la séquence d’acides aminés SEQ ID NO: 201, un CDR consistant en la séquence d’acides aminés SEQ ID NO: 202, un CDR consistant en la séquence d’acides aminés SEQ ID NO: 203 et un CDR consistant en la séquence d’acides aminés SEQ ID NO: 204.
Selon un mode de réalisation particulier, la présente invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, comprenant un CDR possédant au moins 95% d’identité avec la séquence d’acides aminés SEQ ID NO: 211, sous réserve que la construction peptidique conserve sa capacité d’induire la sécrétion d’interleukine-10.
Selon un mode de réalisation particulier, la présente invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, comprenant un CDR possédant au moins 95% d’identité avec la séquence d’acides aminés SEQ ID NO: 212, sous réserve que la construction peptidique conserve sa capacité d’induire la sécrétion d’interleukine-10.
Selon un mode de réalisation particulier, la présente invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, comprenant un CDR possédant au moins 95% d’identité avec la séquence d’acides aminés SEQ ID NO: 213, sous réserve que la construction peptidique conserve sa capacité d’induire la sécrétion d’interleukine-10.
Selon un mode de réalisation particulier, la présente invention concerne une construction peptidique telle que défini ci-dessus, comprenant un CDR possédant au moins 95% d’identité avec la séquence d’acides aminés SEQ ID NO: 214, sous réserve que la construction peptidique conserve sa capacité d’induire la sécrétion d’interleukine-10.
Selon un mode de réalisation particulier, la présente invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, comprenant un CDR possédant au moins 95% d’identité avec la séquence d’acides aminés G-T-K, sous réserve que la construction peptidique conserve sa capacité d’induire la sécrétion d’interleukine-10.
Selon un mode de réalisation particulier, la présente invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, comprenant un CDR possédant au moins 95% d’identité avec la séquence d’acides aminés SEQ ID NO: 215, sous réserve que la construction peptidique conserve sa capacité d’induire la sécrétion d’interleukine-10.
Selon un mode de réalisation plus particulier, la présente invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, comprenant un CDR possédant au moins 95% d’identité avec la séquence d’acides aminés SEQ ID NO: 211, un CDR possédant au moins 95% d’identité avec la séquence d’acides aminés SEQ ID NO: 212, un CDR possédant au moins 95% d’identité avec la séquence d’acides aminés SEQ ID NO: 213, un CDR possédant au moins 95% d’identité avec la séquence d’acides aminés SEQ ID NO: 214, un CDR possédant au moins 95% d’identité avec la séquence d’acides aminés G-T-K, un CDR possédant au moins 95% d’identité avec la séquence d’acides aminés SEQ ID NO: 215, un CDR possédant au moins 95% d’identité avec la séquence d’acides aminés SEQ ID NO: 199, un CDR possédant au moins 95% d’identité avec la séquence d’acides aminés SEQ ID NO: 200, un CDR possédant au moins 95% d’identité avec la séquence d’acides aminés SEQ ID NO: 201, un CDR possédant au moins 95% d’identité avec la séquence d’acides aminés SEQ ID NO: 202, un CDR possédant au moins 95% d’identité avec la séquence d’acides aminés SEQ Π) NO: 203 et un CDR possédant au moins 95% d’identité avec la séquence d’acides aminés SEQ ID NO: 204, sous réserve que la construction peptidique conserve sa capacité d’induire la sécrétion d’interleukine-10.
Selon un mode de réalisation particulier, la présente invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, comprenant un CDR consistant en la séquence d’acides aminés SEQ ID NO: 211.
Selon un mode de réalisation particulier, la présente invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, comprenant un CDR consistant en la séquence d’acides aminés SEQ ID NO: 212.
Selon un mode de réalisation particulier, la présente invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, comprenant un CDR consistant en la séquence d’acides aminés SEQID NO: 213.
Selon un mode de réalisation particulier, la présente invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, comprenant un CDR consistant en la séquence d’acides aminés SEQ ID NO: 214.
Selon un mode de réalisation particulier, la présente invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, comprenant un CDR consistant en la séquence d’acides aminés G-T-K.
Selon un mode de réalisation particulier, la présente invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, comprenant un CDR consistant en la séquence d’acides aminés SEQ ID NO: 215.
Selon un mode de réalisation encore plus particulier, la présente invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, comprenant un CDR consistant en la séquence d’acides aminés SEQ ID NO: 211, un CDR consistant en la séquence d’acides aminés SEQ ID NO: 212, un CDR consistant en la séquence d’acides aminés SEQ ID NO: 213, un CDR consistant en la séquence d’acides aminés SEQ ID NO: 214, un CDR consistant en la séquence d’acides aminés G-T-K, un CDR consistant en la séquence d’acides aminés SEQ ID NO: 215, un CDR consistant en la séquence d’acides aminés SEQ ID NO: 199, un CDR consistant en la séquence d’acides aminés SEQ ID NO: 200, un CDR consistant en la séquence d’acides aminés SEQ ID NO: 201, un CDR consistant en la séquence d’acides aminés SEQ ID NO: 202, un CDR consistant en la séquence d’acides aminés SEQ ID NO: 203 et un CDR consistant en la séquence d’acides aminés SEQ ID NO: 204.
Selon un mode de réalisation particulier, la présente invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, comprenant un CDR possédant au moins 95% d’identité avec la séquence d’acides aminés SEQ ID NO: 216, sous réserve que la construction peptidique conserve sa capacité d’induire la sécrétion d’interleukine-10.
Selon un mode de réalisation particulier, la présente invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, comprenant un CDR possédant au moins 95% d’identité avec la séquence d’acides aminés SEQ ID NO: 217, sous réserve que la construction peptidique conserve sa capacité d’induire la sécrétion d’interleukine-10.
Selon un mode de réalisation particulier, la présente invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, comprenant un CDR possédant au moins 95% d’identité avec la séquence d’acides aminés SEQ ID NO: 218, sous réserve que la construction peptidique conserve sa capacité d’induire la sécrétion d’interleukine-10.
Selon un mode de réalisation particulier, la présente invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, comprenant un CDR possédant au moins 95% d’identité avec la séquence d’acides aminés SEQ ID NO: 219, sous réserve que la construction peptidique conserve sa capacité d’induire la sécrétion d’interleukine-10.
Selon un mode de réalisation particulier, la présente invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, comprenant un CDR possédant au moins 95% d’identité avec la séquence d’acides aminés W-M-S, sous réserve que la construction peptidique conserve sa capacité d’induire la sécrétion d’interleukine-10.
Selon un mode de réalisation particulier, la présente invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, comprenant un CDR possédant au moins 95% d’identité avec la séquence d’acides aminés SEQ ID NO: 220, sous réserve que la construction peptidique conserve sa capacité d’induire la sécrétion d’interleukine-10.
Selon un autre mode de réalisation, la présente invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, comprenant un CDR possédant au moins 95% d’identité avec la séquence d’acides aminés SEQ ID NO: 216, un CDR possédant au moins 95% d’identité avec la séquence d’acides aminés SEQ ID NO: 217, un CDR possédant au moins 95% d’identité avec la séquence d’acides aminés SEQ ID NO: 218, un CDR possédant au moins 95% d’identité avec la séquence d’acides aminés SEQ ID NO: 219, un CDR possédant au moins 95% d’identité avec la séquence d’acides aminés W-M-S , un CDR possédant au moins 95% d’identité avec la séquence d’acides aminés SEQ ID NO: 220, un CDR possédant au moins 95% d’identité avec la séquence d’acides aminés SEQ ID NO: 199, un CDR possédant au moins 95% d’identité avec la séquence d’acides aminés SEQ ID NO: 200, un CDR possédant au moins 95% d’identité avec la séquence d’acides aminés SEQ ID NO: 201, un CDR possédant au moins 95% d’identité avec la séquence d’acides aminés SEQ ID NO: 202, un CDR possédant au moins 95% d’identité avec la séquence d’acides aminés SEQ ID NO: 203 et un CDR possédant au moins 95% d’identité avec la séquence d’acides aminés SEQ ID NO: 204, sous réserve que la construction peptidique conserve sa capacité d’induire la sécrétion d’interleukine-10.
Selon un mode de réalisation particulier, la présente invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, comprenant un CDR consistant en la séquence d’acides aminés SEQ ID NO: 216.
Selon un mode de réalisation particulier, la présente invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, comprenant un CDR consistant en la séquence d’acides aminés SEQ ID NO: 217.
Selon un mode de réalisation particulier, la présente invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, comprenant un CDR consistant en la séquence d’acides aminés SEQ ID NO: 218.
Selon un mode de réalisation particulier, la présente invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, comprenant un CDR consistant en la séquence d’acides aminés SEQ ID NO: 219.
Selon un mode de réalisation particulier, la présente invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, comprenant un CDR consistant en la séquence d’acides aminés W-M-S.
Selon un mode de réalisation particulier, la présente invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, comprenant un CDR consistant en la séquence d’acides aminés SEQ ID NO: 220.
Selon un mode de réalisation plus particulier, la présente invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, comprenant un CDR consistant en la séquence d’acides aminés SEQ ID NO: 216, un CDR consistant en la séquence d’acides aminés SEQ ID NO: 217, un CDR consistant en la séquence d’acides aminés SEQ ID NO: 218, un CDR consistant en la séquence d’acides aminés SEQ ID NO: 219, un CDR consistant en la séquence d’acides aminés W-M-S, un CDR consistant en la séquence d’acides aminés SEQ ID NO: 220, un CDR consistant en la séquence d’acides aminés SEQ ID NO: 199, un CDR consistant en la séquence d’acides aminés SEQ ID NO: 200, un CDR consistant en la séquence d’acides aminés SEQ ID NO: 201, un CDR consistant en la séquence d’acides aminés SEQ ID NO: 202, un CDR consistant en la séquence d’acides aminés SEQ ID NO: 203 et un CDR consistant en la séquence d’acides aminés SEQ ID NO: 204.
Selon un mode de réalisation particulier, la présente invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, comprenant en outre le domaine D3 de l’albumine humaine.
Par « domaine D3 de l’albumine humaine », on entend le domaine DIII 381-585 (AA) de la sérum albumine humaine (HSA).
Selon un mode de réalisation particulier, la présente invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, comprenant en outre le fragment Fc d’une immunoglobuline IgGl humaine.
Le fragment Fc d’une immunoglobuline IgGl humaine est constitué des domaines CH2 et CH3 de la chaîne lourde de ladite immunoglobuline.
Selon un mode de réalisation particulier, la présente invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, consistant en un polypeptide comprenant ou consistant en une séquence d’acides aminés possédant au moins 90% d’identité, au moins 91% d’identité, au moins 92% d’identité, au moins 93% d’identité, au moins 94% d’identité, au moins 95% d’identité, au moins 96% d’identité, au moins 97% d’identité, au moins 98% d’identité ou au moins 99% d’identité avec la séquence d’acides aminés SEQ ID NO : 205.
Le polypeptide de séquence SEQ ID NO : 205 est appelé TD3PH dans la présente description.
Selon un mode de réalisation encore plus particulier, la présente invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, consistant en un polypeptide comprenant ou consistant la séquence d’acides aminés SEQ ID NO : 205.
Selon un autre mode de réalisation, la présente invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, consistant en un polypeptide comprenant ou consistant en une séquence d’acides aminés possédant au moins 90% d’identité, au moins 91% d’identité, au moins 92% d’identité, au moins 93% d’identité, au moins 94% d’identité, au moins 95% d’identité, au moins 96% d’identité, au moins 97% d’identité, au moins 98% d’identité ou au moins 99% d’identité avec la séquence d’acides aminés SEQ ID NO : 206.
Le polypeptide de séquence SEQ ID NO : 206 est appelé T3DH dans la présente description.
Selon un mode de réalisation encore plus particulier, la présente invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, consistant en un polypeptide comprenant ou consistant en la séquence d’acides aminés SEQ ID NO : 206.
Selon un autre mode de réalisation, la présente invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, consistant en un polypeptide comprenant ou consistant en une séquence d’acides aminés possédant au moins 90% d’identité, au moins 91% d’identité, au moins 92% d’identité, au moins 93% d’identité, au moins 94% d’identité, au moins 95% d’identité, au moins 96% d’identité, au moins 97% d’identité, au moins 98% d’identité ou au moins 99% d’identité avec la séquence d’acides aminés SEQ ID NO : 207.
Le polypeptide de séquence SEQ ID NO : 207 est appelé BicT03 dans la présente description.
Selon un mode de réalisation encore plus particulier, la présente invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, consistant en un polypeptide comprenant ou consistant en la séquence d’acides aminés SEQ ID NO : 207.
Selon un autre mode de réalisation, la présente invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, consistant en un polypeptide comprenant ou consistant en une séquence d’acides aminés possédant au moins 90% d’identité, au moins 91% d’identité, au moins 92% d’identité, au moins 93% d’identité, au moins 94% d’identité, au moins 95% d’identité, au moins 96% d’identité, au moins 97% d’identité, au moins 98% d’identité ou au moins 99% d’identité avec la séquence d’acides aminés SEQ ID NO : 208.
Le polypeptide de séquence SEQ ID NO : 208 est appelé BicT04 dans la présente description.
Selon un mode de réalisation encore plus particulier, la présente invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, consistant en un polypeptide comprenant ou consistant en la séquence d’acides aminés SEQ ID NO : 208.
Selon un autre mode de réalisation, la présente invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, consistant en un polypeptide comprenant ou consistant en une séquence d’acides aminés possédant au moins 90% d’identité, au moins 91% d’identité, au moins 92% d’identité, au moins 93% d’identité, au moins 94% d’identité, au moins 95% d’identité, au moins 96% d’identité, au moins 97% d’identité, au moins 98% d’identité ou au moins 99% d’identité avec la séquence d’acides aminés SEQ ID NO : 209.
Le polypeptide de séquence SEQ ID NO : 209 est appelé BicT05 dans la présente description.
Selon un mode de réalisation encore plus particulier, la présente invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, consistant en un polypeptide comprenant ou consistant en la séquence d’acides aminés SEQ ID NO : 209.
Selon un autre mode de réalisation, la présente invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, consistant en un polypeptide comprenant ou consistant en une séquence d’acides aminés possédant au moins 90% d’identité, au moins 91% d’identité, au moins 92% d’identité, au moins 93% d’identité, au moins 94% d’identité, au moins 95% d’identité, au moins 96% d’identité, au moins 97% d’identité, au moins 98% d’identité ou au moins 99% d’identité avec la séquence d’acides aminés SEQ ID NO : 210.
Le polypeptide de séquence SEQ ID NO : 210 est appelé BicT06 dans la présente description.
Selon un mode de réalisation encore plus particulier, la présente invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, consistant en un polypeptide comprenant ou consistant en la séquence d’acides aminés SEQ ID NO : 210.
La présente invention concerne également une construction peptidique comprenant la région variable de la chaîne lourde (VHH) d’un premier anticorps reconnaissant une lectine de type C et la région variable de la chaîne lourde (VHH) d’un second anticorps reconnaissant la molécule TLR2, ladite construction peptidique étant dépourvue de région variable de chaîne légère. Dans ce mode de réalisation, ledit premier anticorps reconnaissant une lectine de type C et ledit second anticorps reconnaissant la molécule TLR2 sont des anticorps de camélidés, constitués de deux chaînes lourdes et dépourvus de chaîne légère. Les chaînes lourdes de ces anticorps comportent un domaine variable (VHH) et un domaine constant.
Selon un autre aspect, l’invention concerne une composition pharmaceutique comprenant à titre de substance active une construction peptidique telle que définie ci-dessus, éventuellement en association avec un véhicule pharmacologiquement acceptable.
Selon un mode de réalisation particulier, l’invention concerne une composition pharmaceutique comprenant une construction peptidique telle que définie ci-dessus et éventuellement un ou plusieurs excipients pharmacologiquement acceptables.
Selon un mode de réalisation particulier, l’invention concerne une composition pharmaceutique telle que définie ci-dessus, dans laquelle ladite construction peptidique est administrable à une dose comprise de 5 à 1200 mg/kg.
Selon un mode de réalisation encore plus particulier, l’invention concerne une composition pharmaceutique telle que définie ci-dessus, dans laquelle ladite construction peptidique est administrable à une dose comprise de 5 à 50 mg/kg, de 50 à 200 mg/kg, de 200 à 600 mg/kg ou de 600 à 1200 mg/kg.
Selon un mode de réalisation particulier, l’invention concerne une composition pharmaceutique telle que définie ci-dessus, dans laquelle ladite construction peptidique se présente sous une dose unitaire de 350 mg à 85 g.
Selon un mode de réalisation particulier, l’invention concerne une composition pharmaceutique telle que définie ci-dessus, dans laquelle ladite construction peptidique se présente sous une dose unitaire de 350 à 3500 mg, de 3500 mg à 14 g, de 14 g à 42 g ou de 42 g à 85g.
La composition pharmaceutique de l’invention peut être administrée par toute voie d’administration appropriée, par exemple par voie parentérale, orale, sublinguale, vaginale, rectale, transdermale, de préférence par injection intraveineuse, sous-cutanée ou intradermique. Une injection intramusculaire, intrapéritonéale, intrasynoviale, intrathécale ou intratumorale est aussi possible. Les injections peuvent être réalisées sous forme de bolus, ou par perfusion continue.
Les préparations pour une administration parentérale peuvent inclure des solutions aqueuses ou non-aqueuses stériles, des suspensions ou des émulsions. Des exemples de solvants non-aqueux sont le propylène glycol, le polyéthylène glycol, des huiles végétales, telle que l'huile d'olive, ou des esters organiques injectables tels que l'éthyl oléate. Des véhicules aqueux comprennent l'eau, des solutions alcool/eau, des émulsions ou des suspensions.
Selon un mode de réalisation particulier, l’invention concerne une composition pharmaceutique telle que définie ci-dessus, pour une administration par voie intraveineuse.
Selon un autre aspect, l’invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, pour son utilisation dans le traitement des maladies inflammatoires, des maladies auto-immunes ou des réactions du greffon contre un hôte.
Selon un mode de réalisation particulier, l’invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, pour son utilisation dans le traitement des maladies inflammatoires appartenant au groupe constitué de la maladie de Crohn, la goutte, les vascularites et le syndrome TRAPS.
Selon un autre mode de réalisation particulier, l’invention concerne une construction peptidique telle que définie ci-dessus, pour son utilisation dans le traitement des maladies auto-immunes appartenant au groupe constitué du Lupus, le syndrome de Sjôgren, la sclérodermie, le diabète insulino-dépendent (DID), la thyroïdite et la maladie cœliaque.
DESCRIPTION DES FIGURES
Figure 1 A: La figure 1 A représente l’induction de la maturation des cellules dendritiques par le zymosan (zym), la construction peptidique TD3PH de séquence SEQ Π) NO : 205 ou la construction peptidique T3DH de séquence SEQ DD NO : 206. 6
Les cellules dendritiques (10 cellules/mL) ont été mises en culture en présence de la construction peptidique (TD3PH à 1,5 pg/ml ou T3DH à 0,5 pg/mL) ou du zymosan (zym) à la concentration de 0,5 pg/mL, pendant 48h. La maturation sur les cellules dendritiques DC-SIGN+ a été évaluée par l’expression du marqueur CD86 mesurée par cytométrie en flux. iDC= cellules dendritiques immatures. MFI (Mean of Fluorescence Intensity) = Intensité de fluorescence moyenne ; MFI-MFI isotype = valeur MFI à laquelle est soustraite la valeur MFI du témoin isotype control.
Les données expérimentales ont été représentées sous forme de moyenne ± l’erreur standard à la moyenne (SEM)
Figure 1 B: La figure 1 B représente l’induction de la maturation des cellules dendritiques par le zymosan (zym), la construction peptidique TD3PH ou la construction peptidique T3DH. 6
Les cellules dendritiques (10 cellules/mL) ont été mises en culture en présence de la construction peptidique (TD3PH à 1,5 pg/ml ou T3DH à 0,5 pg/mL) ou du zymosan (zym) à la concentration de 0,5 pg/mL, pendant 48h. La maturation sur les cellules dendritiques DC-SIGN+ a été évaluée par l’expression du marqueur CD25 mesurée par cytométrie en flux. iDC= cellules dendritiques immatures. MFI (Mean of Fluorescence Intensity) = Intensité de fluorescence moyenne ; MFI-MFI isotype = valeur MFI à laquelle est soustraite la valeur MFI du témoin isotype control.
Les données expérimentales ont été représentées sous forme de moyenne ± l’erreur standard à la moyenne (SEM)
Figure 1 C: La figure 1 C représente l’induction de la maturation des cellules dendritiques par le zymosan (zym), la construction peptidique TD3PH ou la construction peptidique T3DH. 6
Les cellules dendritiques (10 cellules/mL) ont été mises en culture en présence de la construction peptidique (TD3PH à 1,5 pg/ml ou T3DH à 0,5 pg/mL) ou du zymosan (zym) à la concentration de 0,5 pg/mL, pendant 48h. La maturation sur les cellules dendritiques DC-SIGN+ a été évaluée par l’expression du marqueur CD83 mesurée par cytométrie en flux. iDC= cellules dendritiques immatures. MFI (Mean of Fluorescence Intensity) = Intensité de fluorescence moyenne ; MFI-MFI isotype = valeur MFI à laquelle est soustraite la valeur MFI du témoin isotype control.
Les données expérimentales ont été représentées sous forme de moyenne ± l’erreur standard à la moyenne (SEM)
Figure 2 A : La figure 2 A représente la synthèse d’interleukine 10 (IL-10) par les cellules dendritiques après 48h en présence de zymosan ou de la construction peptidique TD3PH. 6
Les cellules dendritiques (10 cellules/mL) ont été mises en culture en présence de la construction peptidique (TD3PH à 1,5 pg/mL) ou du zymosan (0,5 pg/mL) pendant 48h. L’IL-10 a été dosé dans les surnageants à l’aide d’un kit ELISA eBiosciences selon les indications du fournisseur. iDC= cellules dendritiques immatures.
Les données expérimentales ont été représentées sous forme de médiane.
Figure 2 B : La figure 2 B représente la synthèse d’interleukine 10 (IL-10) par les cellules dendritiques après 48h en présence de zymosan ou de la construction peptidique T3DH. 6
Les cellules dendritiques (10 cellules/mL) ont été mises en culture en présence de la construction peptidique (T3DH à 0,5 pg/mL) ou du zymosan (0,5 pg/mL) pendant 48h. L’IL-10 a été dosé dans les surnageants à l’aide d’un kit ELISA eBiosciences selon les indications du fournisseur. iDC= cellules dendritiques immatures.
Les données expérimentales ont été représentées sous forme de médiane.
Figure 3 A : La figure 3 A représente la synthèse d’interféron-γ (IFN-γ) par les cellules dendritiques après 48h en présence de zymosan ou de la construction peptidique TD3PH. 6
Les cellules dendritiques (10 cellules/mL) ont été mises en culture en présence de la construction peptidique (TD3PH à 0,5 pg/mL) ou du zymosan (0,5 pg/mL) pendant 48h. L’IFN-γ a été dosé dans les surnageants à l’aide d’un kit ELISA eBiosciences selon les indications du fournisseur. iDC= cellules dendritiques immatures.
Les données expérimentales ont été représentées sous forme de médiane.
Figure 3 B : La figure 3 B représente la synthèse d’interféron-γ (IFN-γ) par les cellules dendritiques après 48h en présence de zymosan ou de la construction peptidique T3DH. 6
Les cellules dendritiques (10 cellules/mL) ont été mises en culture en présence de la construction peptidique (T3DH à 0,5 pg/mL) ou du zymosan (0,5 pg/mL) pendant 48h. L’IFN-γ a été dosé dans les surnageants à l’aide d’un kit ELISA eBiosciences selon les indications du fournisseur. iDC= cellules dendritiques immatures.
Les données expérimentales ont été représentées sous forme de médiane.
Figure 4 A : La figure 4 A représente la synthèse d’interleukine 10 (IL-10) intracellulaire par les cellules dendritiques en présence de LPS, en présence de la construction peptidique TD3PH ou en présence de LPS et de la construction peptidique TD3PH (LPS + TD3PH).
Les cellules dendritiques (106 cellules/mL) ont été mises en culture soit en présence de LPS (25 ng/mL), soit en présence de TD3PH (à 1,5 pg/mL), soit en présence du LPS (25 ng/mL) pendant 30 min avant l’addition de la construction peptidique TD3PH (à 1,5 pg/mL), pendant 48h. L’IL-10 a été évalué à 24h par marquage intracellulaire sur les cellules dendritiques DC-SIGN+. iDC= cellules dendritiques immatures. MFI = Mean of fluorescence intensity Les données expérimentales ont été représentées sous forme de moyenne ± l’erreur standard à la moyenne (SEM)
Figure 4 B : La figure 4 B représente la concentration dans le surnageant d’interleukine 10 (IL-10) synthétisé par les cellules dendritiques en présence de LPS, en présence de la construction peptidique T3DH, en présence de la construction peptidique TD3PH, en présence de LPS et de la construction peptidique T3DH (LPS + T3DH) ou en présence de LPS et de la construction peptidique TD3PH (LPS + TD3PH). 6
Les cellules dendritiques (10 cellules/mL) ont été mises en culture soit en présence de LPS (25 ng/mL), soit en présence de la construction peptidique (T3DH à 0,5 pg/mL ou TD3PH à 1,5 pg/mL), soit en présence du LPS (25 ng/ml) pendant 30 min avant l’addition de la construction peptidique (TD3PH à 1,5 pg/mL ou T3DH à 0,5 pg/mL), pendant 48h. L’IL-10 est dosé dans les surnageants de 48h à l’aide d’un kit ELIS A eBiosciences selon les indications du fournisseur. iDC= cellules dendritiques immatures.
Les données expérimentales ont été représentées sous forme de moyenne ± l’erreur standard à la moyenne (SEM)
EXEMPLES
Exemple 1 : Matériel et Méthodes 1. Construction des séquences des constructions peptidiques 1.1. Séquençage des anticorps d’intérêt
Parmi les anticorps de la banque Dendritics, les domaines variables VH (région variable de la chaîne lourde) et VL (région variable de la chaîne légère) des anticorps ayant une haute affinité pour les cellules dendritiques ou ayant un effet sur la synthèse d’IL-10 par les cellules dendritiques ont été séquencés. L’affinité des anticorps pour les cellules dendritiques a été mesurée par cytométrie en flux : les anticorps ont d’abord subi une dilution, puis la fixation des anticorps sur les cellules dendritiques a été mise en évidence par cytométrie en flux et les anticorps dont la fixation a été mise en évidence à la plus forte dilution ont été choisis. A partir de l’ARNm de l’hybridome correspondant aux anticorps sélectionnés et d’une RT-PCR, l’ADNc des domaines variables lourd (VH) et léger (VL) ont été amplifiés à partir de jeux d’amorces appropriées (Dendritics ou IPVBAI). Les produits PCR ont ensuite été séquencés (par la société GATC Biotech). 1.2. Construction des séquences de constructions peptidiques
Les séquences des domaines VH et VL de deux anticorps monoclonaux de spécificité différente peuvent être associées de manières différentes, notamment en scFv en tandem (exemple : VL1-VH1-VH2-VL2)· Les constructions des séquences des constructions peptidiques ont été réalisées par synthèse de gènes (Thermo Fisher Scientific GeneArt®) avec des codons optimisés. Les constructions ont été faites de telle sorte que la séquence d’un scFv puisse être facilement remplacée par une autre afin d’avoir rapidement de nombreux couples bispécifiques différents. Les gènes ont ensuite été insérés dans le vecteur d’expression procaryote pSWl (PMID: 23680984) ou le vecteur d’expression eucaryote pMT BIP (Thermo Fisher). Toutes ces constructions peuvent être marquées par des marqueurs histidine, Streptagll, etc... 1.3. Production dans un système procaryote ou eucaryote
Les constructions peptidiques bispécifiques ont été produites dans un système d’expression procaryote. Des bactéries Escherichia coli HB2151, transformées avec le plasmide pSWl-Tandem (plasmide pSWl dans lequel a été inséré le gène de la construction peptidique), ont été mises en culture pendant 16 h à 37°C. 0,5 mL de préculture ont ensuite servi à ensemencer 500 mL de milieu 2xTY contenant 50 pg/mL d'ampicilline. Les bactéries ont été incubées à 37°C, sous agitation. En phase stationnaire, les bactéries ont été induites avec 0,84 mM d'IPTG pendant 16 h sous une agitation lente à 16°C. Les bactéries ont été récupérées par centrifugation à 5 000g pendant 20 min. Les protéines périplasmiques ont alors été isolées par un choc osmotique en plaçant les bactéries pendant 15 min à 4°C dans 10 mL de tampon Tris-HCl 30 mM, EDTA ImM, sucrose 20 %, pH 8,5 puis en ajoutant 15 mL du même tampon dilué au quart pendant 30 min. Les bactéries ont ensuite été centrifugées à 10 000 g pendant 15 min. Le surnageant, contenant les protéines périplasmiques, a ensuite été dialysé de façon extensive contre du tampon PBS (NaCl 0,14 M, KC1 2,7 mM, KH2PO4 1,5 mM, Na2HP04 8 mM, pH 7,4).
Alternativement, différents scFv en tandem sont produits dans la lignée de cellules de Drosophila Schneider 2. Les cellules sont co-transfectées avec les vecteurs recombinants et un vecteur de sélection (BCP HYGRO) en utilisant un kit de transfection au phosphate de calcium (Invitrogen), pour générer des lignées cellulaires stables comme décrit précédemment (Khaznadji étal., Expression of functional hypodermin A, a serine protease from Hypoderma lineatum (Diptera, Oestridae), in Schneider 2 cells, Exp. Parasitol., 2003, vol 104, n°l-2, pp 33-39).
La purification et la détection des constructions peptidiques ont été réalisées via un drapeau Histidine ou via l’interaction spécifique avec la protéine L. Cette interaction peut être naturel pour certain scFv, mais peut être également acquise après mutation (Lakhrif et al., A method to confer Protein L binding ability to any antibody fragment, MAbs., 2016, vol 8, n°2, pp 379-388). La purification sur gel de protéine L-agarose est rapide et homogène. En résumé, le périplasme bactérien ou le surnageant de culture a été incubé avec 1 mL de gel protéine L-agarose pendant lh30 à température ambiante puis déposé dans une microcolonne. Après lavage avec 15 mL de tampon PBS, l'élution des protéines retenues sur le gel a été faite avec une solution de glycine-HCl 0,1 M à pH 2,0. Les fractions éluées ont ensuite été dialysées à 4°C contre du tampon PBS puis filtrée sur 0,2 pm et conservées à 4°C. 2. Isolement des monocytes humains à partir de cellules mononuclées du sang périphérique (PBMC) par tri sélectif de CD14+
Les PBMC sont issus du sang obtenu par cytaphérèse de donneurs sains ayant signé un consentement éclairé à l’EFS-Centre Atlantique. Le sang a été centrifugé 25 min à 1000g sans frein, puis l’anneau formé par les lymphocytes a été récupéré et un gradient de Ficoll a été réalisé (Ficoll Hypaque, d=l,077, centrifugation 20 minutes à 900g sans frein). Les PBMC ont ensuite été récupérées, lavés dans du RPMI (Roswell Park Memorial Institute medium) et comptés.
Un tri de cellules CD 14+ a été effectué à partir des PB MC. Les cellules (au nombre de 500.106) ont été incubées pendant 15 minutes à 4°C avec des billes magnétiques anti-CD14+ dans un volume de tampon MACS® (Miltenyi) (PBS, 2% SVF (sérum de veau fœtal), 2 mM EDTA (Gibco)). Puis les cellules ont été centrifugées 5 minutes à 600g et le culot a été repris avec du tampon MACS. La suspension cellulaire a été déposée sur une colonne aimantée LS (Miltenyi), la fraction non adhérente (CD14-) a été récupérée. La colonne a été lavée trois fois. La colonne a alors été séparée de l’aimant, rapidement du tampon MACS a été ajouté et le piston a été utilisé sous pression pour récupérer la fraction adhérente. Les cellules ont été centrifugées, reprises dans du milieu complet et comptées. Ces CD14+ ont été mises en flasques dans un milieu complet enrichi en cytokines (interleukine 4 (IL-4) et GM-CSF), afin d’être différenciées. Le milieu complet (MC) est composé de RPMI (Gibco) auquel est ajouté 10% de SVF (sérum de veau fœtal, Gibco), 1% de L-Glutamine (Gibco) et 1% de pénicilline/streptomycine (Gibco). Les cytokines IL-4 (30 ng/mL) (R&D System, Lille, France) et GM-CSF (1000 U/mL) (Sigma, Saint Quentin Fallainer, France) pour 50.106 monocytes, ont été ajoutées au milieu complet. La différenciation a duré 5-6 jours durant lesquels les cellules ont été incubées à 37°c, sous 5% de CO2. La maturation a été effectuée au terme des 5-6 jours, les cellules dendritiques ont ensuite été incubées avec les agents de maturation (LPS, construction peptidique, zymosan) pendant 48h. Le LPS (Sigma) est ajouté à 50 ng/mL final, la construction peptidique est ajoutée à différentes concentrations et le Zymosan (Sigma) à 0,5 pg/mL final. La maturation est évaluée par marquage en cytométrie par l’expression des marqueurs de maturation. 3. Marquages de surface des cellules dendritiques
Un marquage de surface des cellules dendritiques a été réalisé par ajout d’1 pL d’anticorps ou de son isotype -marqué FITC (isothiocyanate de fluorescéine), PE (phycoérythrine), etc., pour 500 000 cellules. Les différents anticorps ont été ajoutés (anti-DC-SIGN, anti-CD83, anti-CD86, anti-CD25) sur les cellules dendritiques et une incubation de 30 minutes à l’obscurité a été réalisée. Suite à cela, un volume de 200 pL de PBS complémenté par 0,1 % d’Azide a été ajouté, puis une centrifugation (5 minutes, 600g, 20°C) a été effectuée. Le culot a alors été repris par un volume de 100 pL de PBS puis les cellules ont été analysées par cytométrie en flux. Les anticorps anti-CD83, anti-CD25 et anti-CD86 marqués par un fluorochrome proviennent de chez BD Pharmigen. Le marquage par l’anticorps anti-DC-SIGN permet l’analyse en cytométrie, ces dernières étant faites sur une fenêtre de cellules dendritiques DC-SIGN+. 4. Marquage intracellulaire de l’IL-10
Les cellules dendritiques traitées par l’ajout de LPS, construction peptidique ou Zymosan ont été incubées pendant 4 heures à 37°C, sous 5% CO2 avec du GolgiStop® (kit BD) qui inhibe les sécrétions. Les cellules ont ensuite été lavées avec du PB S et 1 pL d’anticorps anti-CD83 (BD Pharmingen) ou de l’isotype contrôle a été ajouté dans chaque puits. L’ajout de l’anticorps anti-CD83 permettra de faire une fenêtre pour l’analyse en cytométrie afin d’analyser uniquement les cellules dendritiques. La plaque a été placée à 4°C dans l’obscurité pendant 30 minutes. Après deux lavages, le culot a été repris dans une solution de Cytofix/Cytoperm® (kit BD) qui perméabilise et fixe les cellules. Après une incubation de 20 minutes à 4°C, les cellules ont été lavées 2 fois par ajout de 100 μΐ de BD PermWash® (kit BD) suivi d’une centrifugation de 5 minutes à 600g. Puis, 1 pL d‘anticorps anti-IL-10 (BD "Pharmingen) ou de l’isotype contrôle correspondant a été ajouté puis incubé pendant 30 minutes à 4°C dans le noir. Après 2 lavages avec la solution BD PermWash®, les cellules ont été reprises dans 100 pL de PBS et analysées au cytomètre en flux (Canto BD).
5. Dosage des cytokines par ELISA
Les concentrations en cytokines (IL-10, interféron γ (IFN-γ), interleukine 12 (IL-12)) présentes dans les surnageants de culture des cellules dendritiques traitées (par LPS, Zymosan, construction peptidique aux concentrations décrites dans les figures) et maturées pendant 48h ont été déterminées par un test ELISA (eBioscience) selon les indications du fabricant. Les cytokines recombinantes IL10, IL12 et IFN-γ permettant de réaliser les courbes standard proviennent de chez eBioscience. Les échantillons ont été déposés en duplicate et les concentrations ont été déterminées par comparaison avec les courbes standard obtenues avec les étalons. Les densités optiques ont été mesurées à une longueur d’onde de 450 nm. 6. Tests statistiques L’analyse statistique a été effectuée à l’aide du logiciel EXCELL-STAT. Les données ont été comparées par un test non paramétrique de Mann Whitney. 7. Test d’affinité et de compétition 7.1. Test d’affinité
Les cellules dendritiques ont été incubées avec la construction peptidique (tandem) à différentes concentrations : à la concentration finale de 0,5 pg/mL et à la concentration finale de 1,5 pg/mL, pendant 48 heures à 37°C. La fixation de la construction peptidique sur les cellules a été révélée grâce à un anticorps anti-histidine marqué au PE (R&D). Les incubations avec l’anticorps anti-histidine ont été faites pendant des temps variés (30 min à 4h) et à des températures différentes (4° C et 37°C). La fixation de l’anticorps anti-histidine a été mise en évidence en cytométrie. 7.2. Test de compétition
Des anticorps anti-TLR2 (20 pg/mL final) (R&D) ou anti-DC-SIGN (Dendritics) (3 pg/ml final) ont été mis en compétition avec la construction peptidique TD3PH ou T3DH. Ces anticorps ont été incubés avec les cellules 30 min à 37°C avant de rajouter la construction peptidique TD3PH ou T3DH à 1,5 pg/ml final pour une incubation de lh30 à 4°C et 37°C. La fixation de la construction peptidique sur les cellules a été révélée grâce à un anticorps anti-histidine marqué au PE (R&D). Les incubations avec l’anticorps anti-histidine ont été faites pendant des temps variés (30 min à 4h) et à des températures différentes (4° C et 37°C). La fixation de l’anticorps anti-histidine a été mise en évidence en cytométrie en flux (Canto BD). 8. MLR (réaction mixte lymphocytaire) 8.1. Isolement des cellules CD4+/CD25- par tri magnétique
Les lymphocytes T CD4+ sont issus soit des PBMC humains, soit de la fraction négative de la purification des cellules CD14+. Ils ont été isolés par sélection positive en utilisant des billes magnétiques recouvertes d'un anticorps anti-CD4 issues du kit Dynal (CD4 Positive Isolation Kit, Dynal, Compïègne, France). Les cellules ont été incubées avec les billes dans du PBS, 2% SVF et 2 mM EDTA pendant 20 min à 4°C. Après plusieurs lavages, des anticorps DETACHaBEAD® (Thermo Fisher Scientific) ont été ajoutés et incubés pendant 45 min à température ambiante pour détacher les billes des cellules. Les lymphocytes T CD4+ purifiés ont été lavés et comptés. Une fraction de ces cellules a été analysée en cytométrie de flux pour évaluer la pureté de ces cellules. Pour les co-cultures de 5 jours des lymphocytes T CD4+ CD25' ont été isolés. Afin d’éliminer les lymphocytes T CD4+ CD25+, les LT CD4+ ont été marqués pendant 20 min à 4°C avec un anticorps anti-CD25 (IgG de souris, BD Biosciences). Après le lavage de l’anticorps excédentaire, les cellules ont été mises en présence de billes magnétiques couplées à des anticorps anti-IgG de souris (CELLection® Pan Mouse IgG Kit, Dynal). Les deux populations de lymphocytes T ont été séparées grâce à un aimant. Les lymphocytes T CD4+ CD25- ont été récupérés, comptés et mis en culture avec les cellules dendritiques. Une fraction de ces cellules CD4+ a été analysée en cytométrie de flux pour évaluer la pureté de ces cellules. 8.2. Marquage des cellules CD4+ et évaluation de leur prolifération
La prolifération des cellules CD4+ CD25- mises en présence des cellules dendritiques a été évaluée par marquage au CFSE (succinimidyl ester de carboxyfluorescéine). Les CD4+ à marquer ont été comptées au bleu de trypan, lavées et mises dans une solution RPMI + 10% SVF. Une solution de CFSE (Molecular Probe-Fluka, Invitrogen) à 6 μΜ préparée extemporanément dans du PBS a été ajoutée sur une concentration de 10.106 cellules/mL et mélangées à un ratio de 1 :1 en volume (concentration finale en CFSE de 3 μΜ). Les cellules ont été incubées dans le noir pendant 30 minutes à 37° C dans le bain marie en remuant la solution régulièrement pour avoir un marquage homogène. Pour arrêter le marquage, une solution de RPMI + 10% SVF a été ajoutée. Les cellules ont été lavées 3 fois avec un volume de milieu RPMI + 10% SVF supérieur de 20 fois au volume d’incubation. Les cellules ont ensuite été analysées au cytomètre pour vérifier la qualité du marquage à J0 et mises en culture. Pour la MLR, les cellules dendritiques traitées et maturées ont été mises en culture avec des lymphocytes T CD4+CD25- marqués au CFSE, selon un ratio 1 cellule dendritique/ 3 cellules CD4+. Après 5 jours de culture, les cellules ont été récupérées et le marquage CFSE a été mesuré par cytométrie en flux. La prolifération a été analysée après 4, 5 et 6 jours de culture.
Exemple 2 : Construction et production de la construction peptidique TD3PH de séquence SEQ Π) NO : 205
Le gène codant la construction peptidique TD3PH a été synthétisé via le service Thermo Fisher Scientific GeneArt® avec des codons optimisés. Il a ensuite été inséré dans le vecteur d’expression pSWl.
Des bactéries Escherichia coli HB2151 ont été transformées avec le plasmide pSWl contenant le gène de la construction peptidique TD3PH.
Les protéines ont été produites en système procaryote et ont été extraites du périplasme par un choc osmotique.
La purification de la construction peptidique a été réalisée via l’interaction spécifique avec la protéine L.
Exemple 3 : Construction et production de la construction peptidique T3DH de séquence SEQ ID NO : 206
Le gène codant la construction peptidique TD3PH a été synthétisé via le service Thermo Fisher Scientific GeneArt® avec des codons optimisés. Il a ensuite été inséré dans le vecteur d’expression pSWl.
Des bactéries Escherichia coli HB2151 ont été transformées avec le plasmide pSWl contenant le gène de la construction peptidique T3DH.
Les protéines ont été produites en système procaryote et ont été extraites du périplasme par un choc osmotique.
La purification de la construction peptidique a été réalisée via un drapeau Histidine.
Exemple 4 : Construction et production de la construction peptidique BicT03 de séquence SEQ ID NO : 207
Le gène codant la construction peptidique BicT03 a été synthétisé via le service Thermo Fisher Scientific GeneArt® avec des codons optimisés. Il a ensuite été inséré dans le vecteur d’expression pMT Bip.
Des cellules S2 de Drosophila melanogaster ont été transfectées avec le plasmide pMT Bip contenant le gène de la construction peptidique BicT03.
Les protéines ont été produites en système eucaryote et ont été extraites du surnageant de culture.
La purification de la construction peptidique a été réalisée via l’interaction spécifique avec la protéine L.
Exemple 5 : Construction et production de la construction peptidique BicT04 de séquence SEQ ID NO : 208
Le gène codant la construction peptidique BicT04 a été synthétisé via le service Thermo Fisher Scientific GeneArt® avec des codons optimisés. Il a ensuite été inséré dans le vecteur d’expression pMT Bip.
Des cellules S2 de Drosophila melanogaster ont été transfectées avec le plasmide pMT Bip contenant le gène de la construction peptidique BicT04.
Les protéines ont été produites en système eucaryote et ont été extraites du surnageant de culture.
La purification de la construction peptidique a été réalisée via l’interaction spécifique avec la protéine L.
Exemple 6 : Construction et production de la construction peptidique BicT05 de séquence SEQ ID NO : 209
Le gène codant la construction peptidique BicT05 a été synthétisé via le service Thermo Fisher Scientific GeneArt® avec des codons optimisés. Il a ensuite été inséré dans le vecteur d’expression pMT Bip.
Des cellules S2 de Drosophila melanogaster ont été transfectées avec le plasmide pMT Bip contenant le gène de la construction peptidique BicT05.
Les protéines ont été produites en système eucaryote et ont été extraites du surnageant de culture.
La purification de la construction peptidique a été réalisée via l’interaction spécifique avec la protéine L.
Exemple 7 : Construction et production de la construction peptidique BicT06 de séquence SEQ Π) NO : 210
Le gène codant la construction peptidique BicT06 a été synthétisé via le service Thermo Fisher Scientific GeneArt® avec des codons optimisés. Il a ensuite été inséré dans le vecteur d’expression pMT Bip.
Des cellules S2 de Drosophila melanogaster ont été transfectées avec le plasmide pMT Bip contenant le gène de la construction peptidique BicT06.
Les protéines ont été produites en système eucaryote et ont été extraites du surnageant de culture.
La purification de la construction peptidique a été réalisée via l’interaction spécifique avec la protéine L.
Exemple 8 : Construction et production de la construction peptidique BicTOO de séquence SEQ ID NO : 197
Le gène codant la construction peptidique BicTOO a été synthétisé via le service Thermo Fisher Scientific GeneArt® avec des codons optimisés. Il a ensuite été inséré dans le vecteur d’expression pMT Bip.
Des cellules S2 de Drosophila melanogaster ont été transfectées avec le plasmide pMT Bip contenant le gène de la construction peptidique BicTOO.
Les protéines ont été produites en système eucaryote et ont été extraites du surnageant de culture.
La purification de la construction peptidique a été réalisée via l’interaction spécifique avec la protéine L.
Exemple 9 : Effet de la construction peptidique TD3PH de séquence SEQ Π) NO : 205 sur l’induction de la maturation des cellules dendritiques
Des cellules CD 14+ obtenus à partir de PBMC issus du sang de donneurs sains ont été différenciées en cellules dendritiques pendant 5-6 jours. Au terme de cette différenciation, du TD3PH a été ajouté à la concentration de 1,5 pg/mL. Les cellules en présence de TD3PH ont été cultivées pendant 48h puis la maturation est évaluée par marquage en cytométrie par l’expression des marqueurs de maturation CD83, CD86 et CD25.
Les résultats sont présentés en Figure 1 A, Figure 1 B et Figure 1 C.
La construction peptidique TD3PH de séquence SEQ ID NO : 205 induit la maturation des cellules dendritiques, mesurée par l’expression des marqueurs CD86, CD83, CD25, de façon égale ou supérieure à la stimulation par le zymosan.
Exemple 10 : Effet de la construction peptidique T3DH de séquence SEQ ID NO : 206 sur l’induction de la maturation des cellules dendritiques
Des cellules CD14+ obtenus à partir de PBMC issus du sang de donneurs sains ont été différenciées en cellules dendritiques pendant 5-6 jours. Au terme de cette différenciation, du T3DH a été ajouté à la concentration de 0,5 pg/mL. Les cellules en présence de TD3PH ont été cultivées pendant 48h puis la maturation est évaluée par marquage en cytométrie par l’expression des marqueurs de maturation CD83, CD86 et CD25.
Les résultats sont présentés en Figure 1 A, Figure 1 B et Figure 1 C.
La construction peptidique T3DH de séquence SEQ ID NO : 206 induit la maturation des cellules dendritiques, mesurée par l’expression des marqueurs CD86, CD83, CD25, de façon égale ou supérieure à la stimulation par le zymosan.
Exemple 11 : Efficacité de la construction TD3PH de séquence SEQ Π) NO : 205 pour l’induction de la synthèse d’interleukine 10 (IL-10) intracellulaire par les cellules dendritiques
Les cellules dendritiques ont été traitées pendant 48h par l’ajout de TD3PH à la concentration de 1,5 pg/mL, par l’ajout de LPS à la concentration de 25 ng/mL ou par l’ajout de LPS (25 ng/mL) 30 minutes avant l’ajout de TD3PH (1,5 pg/mL).
La synthèse d’interleukine 10 a été évaluée par marquage intracellulaire.
Les résultats sont présentés en Figure 4 A.
La synthèse d’IL-10 par les cellules dendritiques traitées par à la fois le LPS et la construction peptidique TD3PH est supérieure à celle des cellules traitées par le LPS seul. La construction peptidique TD3PH maintient sa capacité à activer la synthèse d’IL-10 par les cellules dendritiques en présence de LPS (pro-inflammatoire).
Exemple 11 : Efficacité de la construction TD3PH de séquence SEQ ID NO : 205 pour l’induction de la synthèse d’interleukine 10 (IL-10) par les cellules dendritiques
Les cellules dendritiques ont été traitées pendant 48h par l’ajout de TD3PH à la concentration de 1,5 pg/mL, par l’ajout de de zymosan à la concentration 0,5 pg/mL, par l’ajout de LPS à la concentration de 25 ng/mL ou par l’ajout de LPS (25 ng/mL) 30 minutes avant l’ajout de TD3PH (1,5 pg/mL). La concentration en interleukine 10 présent dans le surnageant de culture des cellules dendritiques a été mesurée par un test ELISA.
Les résultats sont présentés en moyenne des duplicates dans les Figures 2 A et 4 B.
La construction peptidique TD3PH induit la synthèse d’IL-10 par les cellules dendritiques de façon égale à la stimulation par le zymosan.
La synthèse d’IL-10 par les cellules dendritiques traitées par à la fois le LPS et la construction peptidique TD3PH est supérieure à celle des cellules traitées par le LPS seul. La construction peptidique maintient sa capacité à activer la synthèse d’IL-10 par les cellules dendritiques en présence de LPS (pro-inflammatoire).
Exemple 12 : Efficacité de la construction T3DH de séquence SEQ ID NO : 206 pour l’induction de la synthèse d’interleukine 10 (IL-10) par les cellules dendritiques
Les cellules dendritiques ont été traitées pendant 48h par l’ajout de T3DH à la concentration de 0,5 pg/mL, par l’ajout de de zymosan à la concentration 0,5 pg/mL, par l’ajout de LPS à la concentration de 25 ng/mL ou par l’ajout de LPS (25 ng/mL) 30 minutes avant l’ajout de T3DH (0,5 pg/mL). La concentration en interleukine 10 présent dans le surnageant de culture des cellules dendritiques a été mesurée par un test ELISA.
Les résultats sont présentés en moyenne des duplicates dans les Figures 2 B et 4 B.
La construction peptidique T3DH induit la synthèse d’IL-10 par les cellules dendritiques de façon supérieure à la stimulation par le zymosan.
La synthèse d’IL-10 par les cellules dendritiques traitées par à la fois le LPS et la construction peptidique T3DH est supérieure à celle des cellules traitées par le LPS seul. La construction peptidique maintient sa capacité à activer la synthèse d’IL-10 par les cellules dendritiques en présence de LPS (pro-inflammatoire).
Exemple 13 : Effet de la construction peptidique TD3PH de séquence SEQ ID NO : 205 pour l’induction de la synthèse d’interféron-γ (IFN-γ) par les cellules dendritiques
Les cellules dendritiques ont été traitées pendant 48h par l’ajout de TD3PH à la concentration de 1,5 pg/mL ou par l’ajout de de zymosan à la concentration 0,5 pg/mL. La concentration en interféron-γ présent dans le surnageant de culture des cellules dendritiques a été mesurée par un test ELISA.
Les résultats sont présentés en moyenne des duplicates dans la Figure 3 A.
La construction peptidique TD3PH n’induit pas la synthèse d’IFN-γ par les cellules dendritiques, de façon égale ou supérieure aux cellules dendritiques non stimulées.
Exemple 14 : Effet de la construction peptidique T3DH de séquence SEQ ID NO : 206 pour l’induction de la synthèse d’interféron-γ (IFN-γ) par les cellules dendritiques
Les cellules dendritiques ont été traitées pendant 48h par l’ajout de T3DH à la concentration de 0,5 pg/mL ou par l’ajout de de zymosan à la concentration 0,5 pg/mL, La concentration en interféron-γ présent dans le surnageant de culture des cellules dendritiques a été mesurée par un test ELISA.
Les résultats sont présentés en moyenne des duplicates dans la Figure 3 B.
La construction peptidique T3DH n’induit pas la synthèse d’IFN-γ par les cellules dendritiques, de façon égale ou supérieure aux cellules dendritiques non stimulées.
Exemple 15 : Test d’affinité pour la construction peptidique TD3PH de séquence SEQ ID NO : 205
Les cellules dendritiques ont été incubées avec la construction peptidique TD3PH à la concentration de 0,5 pg/mL ou de 1,5 pg/mL pendant 48h à 37°C.
La fixation de la construction peptidique TD3PH sur les cellules dendritiques a été révélée par cytométrie à l’aide d’un anticorps anti-histidine marqué à la phycoérythrine (PE).
Exemple 16 : Test d’affinité pour la construction peptidique T3DH de séquence SEQ ID NO : 206
Les cellules dendritiques sont incubées avec la construction peptidique T3DH pendant 48h à 37°C.
La fixation de la construction peptidique T3DH sur les cellules dendritiques est révélée par cytométrie à l’aide d’un anticorps anti-histidine marqué à la phycoérythrine (PE).
Exemple 17 : Test de compétition pour la construction peptidique TD3PH de séquence SEQ ID NO : 205
Des anticorps anti-TLR2 (à la concentration de 20 pg/mL final) (R&D) ou anti-DC-SIGN (Dendritics) (à la concentration de 3 pg/ml final) ont été mis en compétition avec la construction peptidique TD3PH (à la concentration de 1,5 pg/mL final).
La fixation de la construction peptidique TD3PH sur les cellules dendritiques a été révélée par cytométrie à l’aide d’un anticorps anti-histidine marqué à la phycoérythrine (PE).
Exemple 18 : Test de compétition pour la construction peptidique T3DH de séquence SEQ ID NO : 206
Des anticorps anti-TLR2 (à la concentration de 20 pg/mL final) (R&D) ou anti-DC-SIGN (Dendritics) (à la concentration de 3 pg/ml final) ont été mis en compétition avec la construction peptidique T3DH (à la concentration de 1,5 pg/mL final).
La fixation de la construction peptidique T3DH sur les cellules dendritiques a été révélée par cytométrie à l’aide d’un anticorps anti-histidine marqué à la phycoérythrine (PE).

Claims (15)

  1. REVENDICATIONS
    1. Construction peptidique comprenant la région variable de la chaîne lourde d’un premier anticorps reconnaissant une lectine de type C et la région variable de la. chaîne lourde d’un second anticorps reconnaissant la molécule TLR2, et notamment comprenant les régions variables de la chaîne lourde et de la chaîne légère d’un premier anticorps reconnaissant une lectine de type C et les régions variables de la chaîne lourde et de la chaîne légère d’un second anticorps reconnaissant la molécule TLR2, ladite construction peptidique possédant un poids moléculaire inférieur à 200 kDa.
  2. 2. Construction peptidique selon la revendication 1, comprenant en outre tout ou partie de la région constante d’un troisième anticorps, ledit troisième anticorps étant identique ou différent du premier anticorps ou du second anticorps, lesdits tout ou partie de la région constante dudit troisième anticorps permettant d’augmenter la demi-vie de ladite construction peptidique en condition in vivo.
  3. 3. Construction peptidique selon la revendication 1, ne contenant pas de région constante d’un troisième anticorps.
  4. 4. Construction peptidique selon l’une des revendications 1 à 3, comprenant au moins un domaine de fixation à la molécule CD209 et au moins un domaine de fixation à la molécule TLR2, ou au moins un domaine de fixation à la molécule DCDR. et au moins un domaine de fixation à la molécule TLR2, ou au moins un domaine de fixation à la molécule CD207 et au moins un domaine de fixation à la molécule TLR2.
  5. 5. Construction peptidique selon l’une des revendications 1 à 4, choisie parmi : les scFv en tandem, les diabodies simple chaîne bispécifiques, les diabodies hétérodimériques, les F(ab’)2 bispécifiques, les scFvj-Fc, lès anticorps bispécifiques.
  6. 6. Construction peptidique selon la revendication 4 ou 5, consistant en un polypeptide dans lequel les régions variables de la chaîne lourde (VH) et les régions variables de la chaîne légère (VL) correspondant au domaine de fixation à la molécule CD209 et au domaine de fixation à la molécule ILR2 sont disposées, de la position N-terminale à la position C-terminale, dans l’un des ordres suivants : VH(CD209) - VL(CD209) - VH(TLR2) - VL(TLR2), VH(CD209) - VL(CD209) - VL(TLR2) - VH(TLR2), VL(CD209) - VH(CD209) - VH(TLR2) - VL(TLR2), VL(CD209) - VH(CD209) - VL(TLR2) - VH(TLR2), VH(TLR2) - VL(TLR2) - VH(CD209) - VL(CD209), VH(TLR2) - VL(TLR2) - VL(CD209) - VH(CD209), VL(TLR2) - VH(TLR2) - VH(CD209) - VL(CD209), VL(TLR2) - VH(TLR2) - VL(CD209) - VH(CD209), VH(CD209) - VH(TLR2) - VL(TLR2) - VL(CD209), VH(CD209) - VL(TLR2) - VH(TLR2) - VL(CD209), VH(TLR2) - VH(CD209) - VL(CD209) - VL(TLR2), VH(TLK2) - VL(CD209) - VH(CD209) - VL(TLR2), VL(CD209) - VL(TLR2) - VH(TLR2) - VH(CD209), VL(CD209) - VH(TLR2) - VL(TLR2) - VH(CD209), VL(TLR2) - VH(CD209) - VL(CD209) -VH(ILR2), ou VL(TLR2) - VL(CD209) - VH(CD209) - VH(TLR2).
  7. 7. Construction peptidique selon la revendication 4 ou 5, consistant en deux polypeptides dans lesquels les régions variables de la chaîne lourde (VH) et les régions variables de la chaîne légère (VL) correspondant au domaine de fixation à la molécule CD209 et au domaine de fixation à la molécule TLR2 sont disposées, de la position N-terminale à la position C-terminale, dans l’un des ordres suivants : VH(CD209) - VH(TLR2) dans le premier polypeptide et VL(TLR2) - VL(CD209) dans le second polypeptide, VH(CD209) - VL(TLR2) dans le premier polypeptide et VH(TLR2) - VL(CD209) dans le second polypeptide, VH(TLR2) - VH(CD209) dans le premier polypeptide et VL(CD209) - VL(TLR2) dans le second polypeptide, VH(TLR2) - VL(CD209) dans le premier polypeptide et VH(CD209) - VL(TLR2) dans le second polypeptide, VL(CD209) - VL(TLR2) dans le premier polypeptide et VH(TLR2) - VH(CD209) dans le second polypeptide, VL(CD209) - VH(TLR2) dans le premier polypeptide et VLÇTLR2) - VH(CD209) dans le second polypeptide, VLÇTLR2) - VH(CD209) dans le premier polypeptide et VL(CD209) -VH(TLJR2) dans le second polypeptide, ou VL(TLR2) - VL(CD209) dans le premier polypeptide et VH(CD209) - VH(TLR2) dans le second polypeptide.
  8. 8. Construction peptidique selon la revendication 4 ou 5, consistant en un polypeptide dans lequel les régions variables de la chaîne lourde (VH) et les régions variables de la chaîne légère (VL) correspondant au domaine de fixation à la molécule DCIR et au domaine de fixation à la molécule TLR2 sont disposées, de la position N-terminale à la position C-terminale, dans l’un des ordres suivants : VH(DCIR) - VL(DCIR) - VH(TLR2) - VL(TLR2), VH(DCIR) - VL(DCIR) - VL(TLR2) - VH(TLR2), VL(DCIR) - VH(DCIR) - VH(TLR2) - VLÇTLR2), VLÇDCIR) - VH(DCIR) - VL(TLR2) - VHÇTLR2), VH(TLR2) - VL(TLR2) - VHÇDCIR) - VL(DCIR), VH(TLR2) - VL(TLR2) -VLÇDCIR) -VH(DCIR), VL(TLR2) - VH(TLR2) - VH(DCIR) - VL(DC1R), VL(TLR2) - VH(TLR2) - VL(DCIR) - VH(DCIR), VH(DCIR) - VH(TLR2) - VL(TLR2) - VL(DCIR), VH(DCIR) - VL(TLR2) - VH(TLR2) - VL(DCIR), VH(TLR2) - VH(DCIR) - VLÇDCIR) - VLÇTLR2), VH(TLR2) - VL(DCIR) - VH(DCIR) - VL(TLR2), VLÇDCIR) - VLÇTLR2) - VHÇTLR2) - VHÇDCIR), VLÇDCIR) - VHÇTLR2) - VLÇTLR2) - VHÇDCIR), VLÇTLR2) - VHÇDCIR) - VLÇDCIR) -VHÇTLR2), ou VLÇTLR2) - VLÇDCIR) - VHÇDCIR) - VHÇTLR2).
  9. 9. Construction peptidique selon la revendication 4 ou 5, consistant en deux polypeptides dans lesquels les régions variables de la chaîne lourde (VH) et les régions variables de la chaîne légère (VL) correspondant au domaine de fixation à la molécule DCIR et au domaine de fixation à la molécule TLR2 sont disposées, de la position N-terminale à la position C-terminale, dans l’un des ordres suivants : VH(DCIR) - VH(TLR2) dans le premier polypeptide et VL(TLR2) - VL(DCIR) dans le second polypeptide, VH(DCIR) - VL(TLR2) dans le premier polypeptide et VH(TLR2) - VL(DCIR) dans le second polypeptide, VH(TLR2) - VH(DCIR) dans le premier polypeptide et VL(DCIR) - VL(TLR2) dans le second polypeptide, VH(TLR2) - VL(DCIR) dans le premier polypeptide et VH(DCIR) - VL(TLR2) dans le second polypeptide, VL(DC1R) - VL(TLR2) dans le premier polypeptide et VH(TLR2) - VH(DCIR) dans le second polypeptide, VL(DCIR) - VH(TLR2) dans le premier polypeptide et VL(TLR2) - VH(DCIR) dans le second polypeptide, VL(TLR2) - VH(DCIR) dans le premier polypeptide et VL(DCIR) -VH(TLR2) dans le second polypeptide, ou VL(TLR2) - VL(DCIR) dans le premier polypeptide et VH(DCIR) - VH(TLR2) dans le second polypeptide.
  10. 10. Construction peptidique selon la revendication 4 ou 5, consistant en un polypeptide dans lequel les régions variables de la chaîne lourde (VH) et les régions variables de la chaîne légère (VL) correspondant au domaine dé fixation à la molécule CD207 et au domaine de fixation à la molécule TLR2 sont disposées, de la position N-terminale à la position C-terminale, dans l’un des ordres suivants ; VH(CD207) - VL(CD207) - VH(TLR2) - VL(TLR2), VH(CD207) - VL(CD207) - VL(TLR2) - VH(TLR2), VL(CD207) - VH(CD207) - VH(TLR2) - VL(TLR2), VL(CD207) - VH(CD207) - VL(TLR2) - VH(TLR2), VH(TLR2) - VL(TLR2) - VH(CD207) - VL(CD207), VH(TLR2) - VL(TLR2) - VL(CD207) - VH(CD207)S VL(TLR2) - VH(TLR2) - VH(CD207) - VL(CD207), VL(TLR2) - VH(TLR2) - VL(CD207) - VH(CD207), VH(CD207) - VH(TLR2) - VL(TLR2) - VL(CD207), VH(CD207) - VL(TLR2) - VH(TLR2) - VL(CD207), VH(TLR2) - VH(CD207) - VL(CD207) - VL(TLR2), VH(TLR2) - VL(CD207) - VH(CD207) - VL(TLR2), VL(CD207) - VL(TLR2) - VH(TLR2) - VH(CD207), VL(CD207) - VH(TLR2) - VL(TLR2) - VH(CD207), VL(TLR2) - VH(CD207) - VL(CD207) -VH(TLR2), ou VL(TLR2) - VL(CD207) - VH(CD207) - VH(TLR2).
  11. 11. Construction peptidique selon la revendication 4 ou 5, consistant en deux polypeptides dans lesquels les régions variables de la chaîne lourde (VH) et les régions variables de la chaîne légère (VL) correspondant au domaine de fixation à la molécule CD207 et au domaine de fixation à la molécule TLR2 sont disposéess de la position N-terminaie à la position C-terminale, dans l’un des ordres suivants : VH(CD207) - VH(TLR2) dans le premier polypeptide et VL(TLR2) - VL(CD207) dans le second polypeptide, VH(CD207) - VL(TLR2) dans le premier polypeptide et VH(TLR2) - VL(CD207) dans le second polypeptide, VH(TLR2) - VH(CD207) dans le premier polypeptide et VL(CD207) - VL(TLR2) dans le second polypeptide, VH(TLR2) - VL(CD207) dans le premier polypeptide et VH(CD207) - VL(TLR2) dans le second polypeptide, VL(CD207) - VL(TLR2) dans le premier polypeptide et VH(TLR2) - VH(CD207) dans le second polypeptide, VL(CD207) - VH(TLR2) dans le premier polypeptide et VL(TLR2) - VH(CD207) dans le second polypeptide, VL(TLR2) - VH(CD207) dans le premier polypeptide et VL(CD207) -VH(TLR2) dans le second polypeptide, ou VL(TLR2) - VL(CD207) dans le premier polypeptide et VH(CD207) - VH(TLR2) dans le second polypeptide.
  12. 12, Construction peptidique selon Tune des revendications 1 à 7, comprenant un CDR possédant au moins 95% d’identité avec la séquence d’acides aminés SEQID NO: 193, un CDR possédant au moins 95% d’identité avec la séquence d’acides aminés SEQ ID NO: 194, un CDR possédant au moins 95% d’identité avec la séquence d’acides aminés SEQ ID NO: 195, un CDR possédant au moins 95% d’identité avec la séquence d’acides aminés SEQ ID NO: 196, un CDR possédant au moins 95% d’identité avec la séquence d’acides aminés S-A-S, un CDR possédant au moins 95% d’identité avec la séquence d’acides aminés SEQ ID NO: 198, un CDR possédant au moins 95% d’identité avec la séquence d’acides aminés SEQ ID NO; 199, un CDR possédant au moins 95% d’identité avec la séquence d’acides aminés SEQ ID NO: 200, un CDR possédant au moins 95% d’identité avec la séquence d’acides aminés SEQ ID NO: 201, un CDR possédant au moins 95% d’identité avec la séquence d’acides aminés SEQ ID NO: 202, un CDR possédant au moins 95% d’identité avec la séquence d’acides aminés SEQ ID NO: 203 et un CDR possédant au moins 95% d’identité avec la séquence d’acides aminés SEQ ID NO: 204, sous réserve que la construction peptidique conserve sa capacité d’induire la sécrétion d’interleukme-10.
  13. 13. Construction peptidique selon l’une des revendications 1 à 5, consistant en un polypeptide comprenant ou consistant la séquence d’acides aminés SEQ ID NO : 205, ou en un polypeptide comprenant ou consistant en la séquence d’acides aminés SEQ ID NO : 206, ou en un polypeptide comprenant ou consistant en la séquence d’acides aminés SEQ ID NO : 207, ou en un polypeptide comprenant ou consistant en la séquence d’acides aminés SEQ ID NO : 208, ou en un polypeptide comprenant ou consistant en la séquence d’acides aminés SEQ ID NO: 209, ou en un polypeptide comprenant ou consistant en la séquence d’acides aminés SEQ ID NO : 210.
  14. 14. Composition pharmaceutique comprenant à titre de substance active une construction peptidique telle que définie selon l’une des revendications 1 à 13, éventuellement en association avec un véhicule phaimacologiquement acceptable.
  15. 15. Construction peptidique selon l’une des revendications 1 à 13, pour son utilisation dans le traitement des maladies inflammatoires, telles que la maladie de Crohn, la goutte, les vascularites ou le syndrome TRAPS, des maladies auto-immunes, telles que le Lupus, le syndrome de Sjôgren, la sclérodermie, le diabète insulino-dépendent (DID), la thyroïdite ou la maladie cœliaque, ou des réactions du greffon contre un hôte.
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Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA2941014A1 (fr) * 2014-02-28 2015-09-03 Astellas Pharma Inc. Nouvel anticorps bispecifique se liant au tlr2 humain et au tlr4 humain

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
IE20090514A1 (en) * 2009-07-06 2011-02-16 Opsona Therapeutics Ltd Humanised antibodies and uses therof

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA2941014A1 (fr) * 2014-02-28 2015-09-03 Astellas Pharma Inc. Nouvel anticorps bispecifique se liant au tlr2 humain et au tlr4 humain

Non-Patent Citations (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ALT M ET AL: "Novel tetravalent and bispecific IgG-like antibody molecules combining single-chain diabodies with the immunoglobulin gamma1 Fc or CH3 region", FEBS LETTERS, ELSEVIER, AMSTERDAM, NL, vol. 454, no. 1-2, 2 July 1999 (1999-07-02), pages 90 - 94, XP027291954, ISSN: 0014-5793, [retrieved on 19990702] *
DILLON STEPHANIE ET AL: "Yeast zymosan, a stimulus for TLR2 and dectin-1, induces regulatory antigen-presenting cells and immunological tolerance", JOURNAL OF CLINICAL INVESTIGATION, AMERICAN SOCIETY FOR CLINICAL INVESTIGATION, US, vol. 116, no. 4, 1 April 2006 (2006-04-01), pages 916 - 928, XP002602206, ISSN: 0021-9738, DOI: 10.1172/JCI27203 *
HOARAU CYRILLE ET AL: "Supernatant from Bifidobacterium Differentially Modulates Transduction Signaling Pathways for Biological Functions of Human Dendritic Cells", PLOS ONE, PUBLIC LIBRARY OF SCIENCE, US, vol. 3, no. 7, 1 July 2008 (2008-07-01), pages e2753 - 1, XP009139666, ISSN: 1932-6203 *
HOARAU ET AL: "Supernatant of Bifidobacterium breve induces dendritic cell maturation, activation, and survival through a Toll-like receptor 2 pathway", JOURNAL OF ALLERGY AND CLINICAL IMMUNOLOGY, ELSEVIER, AMSTERDAM, NL, vol. 117, no. 3, 1 March 2006 (2006-03-01), pages 696 - 702, XP005396922, ISSN: 0091-6749, DOI: 10.1016/J.JACI.2005.10.043 *
HONGMEI LI ET AL: "Low dose zymosan ameliorates both chronic and relapsing experimental autoimmune encephalomyelitis", JOURNAL OF NEUROIMMUNOLOGY., vol. 254, no. 1-2, 1 January 2013 (2013-01-01), NL, pages 28 - 38, XP055328181, ISSN: 0165-5728, DOI: 10.1016/j.jneuroim.2012.08.013 *
HORNIG NORA ET AL: "Production of bispecific antibodies: diabodies and tandem scFv", 1 January 2012, ANTIBODY ENGINEERING : METHODS AND PROTOCOLS, HUMANA PRESS, USA, PAGE(S) 713 - 727, ISBN: 978-1-61779-973-0, XP009175661 *
IVY M DAMBUZA ET AL: "C-type lectins in immunity: recent developments", CURRENT OPINION IN IMMUNOLOGY., vol. 32, 1 February 2015 (2015-02-01), GB, pages 21 - 27, XP055328552, ISSN: 0952-7915, DOI: 10.1016/j.coi.2014.12.002 *
KORN T ET AL: "Recombinant bispecific antibodies for the targeting of adenoviruses to CEA-expressing tumour cells: a comparative analysis of bacterially expressed single-chain diabody and tandem scFv", JOURNAL OF GENE MEDICINE, JOHN WILEY & SONS, INC, US, vol. 6, no. 6, 1 January 2004 (2004-01-01), pages 642 - 651, XP003005521, ISSN: 1099-498X, DOI: 10.1002/JGM.555 *
P. KONIECZNA ET AL: "Bifidobacterium infantis 35624 administration induces Foxp3 T regulatory cells in human peripheral blood: potential role for myeloid and plasmacytoid dendritic cells", GUT, vol. 61, no. 3, 3 November 2011 (2011-11-03), pages 354 - 366, XP055032736, ISSN: 0017-5749, DOI: 10.1136/gutjnl-2011-300936 *
SANCHO D ET AL: "Signaling by Myeloid C-Type Lectin Receptors in Immunity and Homeostasis", ANNUAL REVIEW OF IMMUNOLOGY, ANNUAL REVIEWS INC, US, vol. 30, 1 January 2012 (2012-01-01), pages 491 - 529, XP002693450, ISSN: 0732-0582, [retrieved on 20120106], DOI: 10.1146/ANNUREV.IMMUNOL-031210-101352 *
SUBHA KARUMUTHIL-MELETHIL ET AL: "TLR2- and Dectin 1-Associated Innate Immune Response Modulates T-Cell Response to Pancreatic [beta]-Cell Antigen and Prevents Type 1 Diabetes", DIABETES, vol. 64, no. 4, 24 April 2015 (2015-04-24), US, pages 1341 - 1357, XP055327466, ISSN: 0012-1797, DOI: 10.2337/db14-1145 *

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