TWI680971B - 化合物及其作爲β－分泌酶１抑制劑之用途 - Google Patents

化合物及其作爲β－分泌酶１抑制劑之用途 Download PDF

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Abstract

本發明係關於式(I)之化合物
Figure 105112413-A0305-02-0001-2
 或其之立體異構物、互變異構物、或醫藥上可接受的鹽或其之溶劑合物(solvate)，其中X、Y、Z、Q、W、m、u、環
Figure 105112413-A0305-02-0001-4
、R2、R3、R4、R5及R6係如說明書及申請專利範圍中所定義。本發明提供含有式(I)之化合物的醫藥組合物以及治療及/或預防下列病症的方法：唐氏症(Downs syndrome)、β類澱粉蛋白血管病變(β-amyloid angiopathy)、與認知損傷相關之病症(disorder associated with cognitive impairment)、阿茲海默症(Alzheimer’s disease)、記憶喪失、與阿茲海默症相關之注意力不足症(attention deficit symptom)、神經退化性疾病(neurodegenerative diseases)、早發型失智症(pre-senile dementia)、老年失智症(senile dementia)及與帕金森氏症(Parkinson's disease)、阿茲海默症及/或唐氏症相關之失智症、老年性黃斑部病變(age-related macular degeneration,AMD)、青光眼(glaucoma)、嗅覺功能損傷、創傷性腦傷(traumatic brain injury)、漸進式肌肉萎縮症(progressive muscle disease)、第二型糖尿病(Type II diabetes mellitus)及心血管疾病(中風)。

Description

化合物及其作為β-分泌酶1抑制劑之用途 【優先權聲明】
本申請案主張於2016年1月5日提出申請之美國臨時專利申請案第62/274,791號、及於2015年4月21日提出申請之美國臨時專利申請案第62/150,715號之權益，該等美國臨時專利申請案之全文併於此處以供參考。
本發明係關於用於抑制β-分泌酶1(beta-secretase 1，BACE1)的新穎化合物。BACE1酵素參與裂解類澱粉蛋白之前驅蛋白(amyloid precursor protein)，以形成類澱粉蛋白β(amyloid beta,Aβ)胜肽。Aβ之累積及沉積可能導致病症，包括(但不限於)神經退化、失智、及阿茲海默症(Alzheimer’s disease)。BACE1抑制劑可阻斷Aβ之形成、降低可能導致疾病之聚集體(aggregate)形成。
阿茲海默症(AD)之特徵係腦中Aβ胜肽之產生、聚集、及沉積(May等人，J.Neuroscience(2011),31(46)：16507-16516)。根據類澱粉蛋白串聯反應假說(amyloid cascade hypothesis)，Aβ作為可溶性寡聚體、或腦部類澱粉蛋白斑(amyloid plaque)之主要組分，可啟動神經退化性串聯反應(Hardy and Selkoe,2002)。Aβ係藉由一系列的內切蛋白裂解穿膜β-類澱 粉蛋白之前驅蛋白(β-APP)來產生。類澱粉蛋白之前驅蛋白的加工涉及三種蛋白酶(α-分泌酶、β-分泌酶、及γ-分泌酶)。首先，β-分泌酶在Aβ之NH2端裂解APP，以釋放sAPPβ及C99，COOH端片段保持結合在膜上。然後C99更藉由γ-分泌酶加工，以釋放各種Aβ之同功型，其中Aβ42似乎是最致病的(Younkin,1995)。
現有的AD治療係緩和療法。雖然這些藥物可改善AD患者之認知及行為失調，卻無法預防疾病之發展(Farlow,MR等人，2010)。目前在市場上用於治療AD的藥物包括乙醯膽鹼酯酶(acetyl cholinesterase)抑制劑(AChE inhibitor)(Birks,J.,2006)、及N-甲基-D-天門冬胺酸受體(NMDA)之受體拮抗劑(McShane,R.等人，2006)。批准之藥物包括，例如，NMDA受體拮抗劑(例如)美金剛(memantine)(Namenda®，森林製藥股份有限公司(Forrest Pharmaceuticals,Inc.))；AChE抑制劑(例如)多奈派齊(donepezil)(愛憶欣(Aricept®)，輝瑞大藥廠(Pfizer))、卡巴拉汀(rivastigmine)(憶思能(Exelon®)，諾華藥廠(Novartis))、加蘭他敏(galantamine)(利憶靈(Razadyne®、Reminyl®))、及塔克林(tacrine)(Cognex®)(EP2694521 A1)。考慮到疾病之發展、退化特性以及所需減緩惡化的治療結果，雖然所需之結果係不再繼續惡化或甚至顯示緩慢惡化，但不到一半接受AChE抑制劑之患者達到臨床顯著反應，且該效果之期間短暫，通常係6至12個月(Francis等人，J Neurol Neurosurg Psychiatry 1999,137-147)。因此，仍有可停止疾病發展的AD治療之醫療需求未被滿足(Kastenholz等人，Amyloid-Journal of Protein Folding Disorders,2009,16(2)：81-3；WO 2015135474 A1)。
過去臨床研究已研究過數種BACE1抑制劑作為AD的潛在 治療。舉例而言，默克(Merck)曾報導過化合物MK-8931可降低AD患者腦脊液(CSF)中Aβ40、Aβ42及可溶性APPβ(Forman等人，11th International Conference on Alzheimer's & Parkinson's Diseases,Florence,Italy,7th March 2013)。其他例子包括LY2811376(May等人，J.Neurosci(2011),31(46)：16507-16516)及LY2886721(May等人，11th International Conference on Alzheimer's & Parkinson's Diseases,Florence,Italy,7th March 2013)。禮來公司(Eli Lily)的科學家對LY2886721所做之臨床前研究有助於該化合物進入第二期臨床試驗。然而，LY2811376因為在動物毒性研究中產生視網膜毒性而不再繼續進行(May等人，J.of Neuroscience(2011)31(46)：16507-16516)，且LY2886721因人體中產生肝毒性而終止(May等人，J.of Neuroscience(2015)35(3)：1199-1210)。
三種蛋白酶α-分泌酶、β-分泌酶、及γ-分泌酶，因其對Aβ胜肽之產生及調節極其重要，且在生物體外及生物體內為小分子化合物的標靶，而特別受到關注(Strooper等人，Nat.Rev Neurol.(2010)6(2)：99-107.)。α-分泌酶促效劑可增加可溶性APP之生產(例如，the West Victoria Merrill Lynch)。β-分泌酶抑制劑可間接地降低Aβ之生產(例如，AZD-3293、VTP-37948及HPP-854等)。γ-分泌酶抑制劑亦可直接地降低Aβ之生產(例如，Avagacestat、Elnd-007、Semagacestat、MK-0752、及PF-3084014等)。γ-分泌酶調節子(例如，EVP-0962、CHF-5074)藉由調整γ-分泌酶酵素可生產剪力模態(shear mode)，藉此降低Aβ42。然而，γ-分泌酶對其他受質(例如，穿膜受體Notch)之剪力活動並不會顯著地受γ-分泌酶調節子所抑制，因此降低了對其他γ-分泌酶受質相關之訊息路徑的衝擊。
β-分泌酶抑制劑係阻礙β-分泌酶之活性的化合物(參見Cole S.L.and Vassar R.,Mol.Neurodegener.,(2007)2：22；Ghosh A.K.等人，Neurotherapeutics(2008)5：399-408；Querfurth H.W.and LaFerla F.M.,N.Engl.J.Med.(2010)362：329-344；Vassar R.等人，J.Neurochem.,2014,Accepted Article,doi：dx.doi.org/10.1111/jnc.12715)。此包括目前正在或曾經出現在臨床試驗中之β-分泌酶抑制劑(例如，AZD3293、AZD3839、CTS-21166、E2609、HPP854、LY-2886721、LY-2811376、MK-8931、PF-05297909、BI1181181、CNP520、JNJ54861911、RG7129、SCH 1359113、TAK-070)及/或目前正在或曾經出現在臨床前試驗中之β-分泌酶抑制劑(例如，GRL-8234、MBI-3)；及/或等效仿製劑(generic equivalent)、及/或由本技術領域所熟知方法判斷及證實具抑制β-分泌酶活性的其他化合物或分子。本說明書及申請專利範圍所使用的「β-分泌酶抑制劑」可包括一種β-分泌酶抑制劑及多於一種之β-分泌酶抑制劑。
本發明係關於可以調節、調控及抑制BACE1酵素的新穎有機分子。特別是，本發明係關於可用於治療Aβ相關病症的新穎BACE1抑制劑。
本發明化合物擁有數種特徵，如下所詳述：其有效地抑制β-分泌酶活性；其係非P醣蛋白受質(non-pgp substrate)；其展現低風險之心臟毒性；其相對於其他BACE1相關酵素(例如，組織蛋白酶D(cathepsin D)及胃蛋白酶(pepsin))，對BACE表現出良好之選擇性；並且其亦可有效降低哺乳類動物中神經退化性生物指標。
本發明一方面提供了以式(I)代表之化合物；或其醫藥上 可接受之鹽、或其立體異構型態(stereoisomeric forms)、或鏡像異構物(enantiomers)、非鏡像異構物(diastereomers)、互變異構物(tautomers)、兩性離子(zwitterions)、及其醫藥上可接受之鹽：
Figure 105112413-A0202-12-0005-300
 其中，X係不存在或存在，且當存在時，該X係選自由以下所組成之群組：C(O)、C(S)、S(O)2、(CR7R8)n、O、N、NR1、S及S(O)；Y係不存在或存在，且當存在時，該Y係(CR7R8)n；Z係不存在或存在，且當存在時，該Z係選自由以下所組成之群組：烷基、鹵烷基、雜烷基、烯基、炔基、(CR10R11)oNR9(CR12R13)p、(CR10R11)oNR9C(O)(CR12R13)p、(CR10R11)oC(O)NR9(CR12R13)p、(CR10R11)oC(O)(CR12R13)p、(CR10R11)oC(O)O(CR12R13)p、(CR10R11)oOC(O)(CR12R13)p、(CR10R11)oOC(O)NR9(CR12R13)p、(CR10R11)oNR9C(O)O(CR12R13)p、(CR10R11)oNR9C(O)NR9(CR12R13)p、(CR10R11)oO(CR12R13)p、(CR10R11)oS(O)n(CR12R13)p及環烷基；W係不存在或存在，且當存在時，該W係選自由以下所組成之群組：烷基、鹵烷基、雜烷基、烯基、炔基、OR9、O、NR9R10、NR9、C(O)R9、C(O)NR9、NR9C(O)、C(O)OR9、OC(O)R9、COR9R10及雜環烷基；Q係不存在或存在，且當存在時，該Q係選自：O、S、NR1、CR1、(CR14R15)t、C(O)、環烷基、或雜環； 環
Figure 105112413-A0202-12-0005-301
係選自由以下所組成之群組：單環芳基、多環芳基、單環雜 芳基、多環雜芳基、單環碳環、多環碳環、單環雜環、及多環雜環系統；該在Q及X之間的鍵係一單鍵或一雙鍵；R1係選自：氫、烷基、環烷基、鹵烷基、雜烷基、雜鹵烷基或雜炔基；R2係選自：氫、氘、鹵素、氰基(CN)、烷基、環烷基、鹵烷基、雜烷基、芳基、雜芳基、雜鹵烷基或雜炔基；R3係獨立地選自由以下所組成之群組：氫、氘、鹵素、CN、C(O)、烷基、鹵烷基、雜烷基、烯基、炔基、芳基、芳烷基、環烷基、雜芳基、雜芳烷基、及雜環烷基；R4係獨立地選自由以下所組成之群組：氫、氘、鹵素、羥基、CN、烷基、鹵烷基、雜烷基、烯基、炔基、芳基、芳烷基、芳烯基、芳炔基、環烷基、雜芳基、雜芳烷基、雜芳烯基、雜芳炔基及雜環烷基；R5係選自：氫、簡單烷基或一前驅藥物部分，該前驅藥物部分可包括但不限於C(O)R14及CR15R16OC(O)R14；R6係選自：氫、簡單烷基或一前驅藥物部分，該前驅藥物部分可包括但不限於C(O)R17及CR18R19OC(O)R17；R7係獨立地選自：氫、氘、鹵素、簡單烷基或鹵烷基；R8係獨立地選自：氫、氘、鹵素、簡單烷基或鹵烷基；R9係獨立地選自：氫、氘、鹵素、簡單烷基或炔基；R10係獨立地選自：氫、氘、鹵素或簡單烷基；R11係獨立地選自：氫、氘、鹵素或簡單烷基；R12係獨立地選自：氫、氘或簡單烷基；R13係獨立地選自：氫、氘或簡單烷基；R14係3至28碳原子之直鏈或支鏈烷基、單環芳基、多環芳基、單環雜芳基、多環雜芳基、簡單烷基、鹵烷基或雜烷基； R15係獨立地選自：氫、氘、鹵素或簡單烷基；R16係獨立地選自：氫、氘、鹵素或簡單烷基；R17係3至28碳原子之直鏈或支鏈烷基、單環芳基、多環芳基、單環雜芳基或多環雜芳基；R18係獨立地選自：氫、氘、鹵素或簡單烷基；R19係獨立地選自：氫、氘、鹵素或簡單烷基；n係0或更多；m係0或更多；o係0、1、2、或3；p係0、1、2、或3；t係0、1、或2；u係0、1、或2；本發明亦提供醫藥組合物，該醫藥組合物係包含醫療有效量之式(I)化合物，與醫藥上可接受之賦形劑、載劑、或稀釋劑。
式(I)化合物係用作BACE1抑制劑，且可投予來治療與BACE1酵素之異常活性相關的疾病，例如：唐氏症(Downs syndrome)、β類澱粉蛋白血管病變(β-amyloid angiopathy)、與認知損傷相關之病症(disorder associated with cognitive impairment)、阿茲海默症(Alzheimer’s disease)、記憶喪失、與阿茲海默症相關之注意力不足症(attention deficit symptom)、神經退化性疾病(neurodegenerative diseases)、早發型失智症(pre-senile dementia)、老年失智症(senile dementia)及與阿茲海默症、帕金森氏症(Parkinson's disease)及/或唐氏症相關之失智症、老年性黃斑部病變(age-related macular degeneration,AMD)、青光眼(glaucoma)、嗅覺 功能損傷、創傷性腦傷(traumatic brain injury)、漸進式肌肉萎縮症(progressive muscle disease)、第二型糖尿病(Type II diabetes mellitus)及心血管疾病(例如，中風)。
【定義】
如本文所用，術語「烷基」意指具有直鏈或支鏈部分或其組合，且含有1至約20個碳原子的飽和、單價或二價烴部分。支鏈意指一或多個烷基(例如，甲基、乙基、或丙基)係連接至一線性烷基鏈上。烷基之亞 甲基(CH2)可以下列替代：氧、硫、亞碸、氮、羰基、羧基、磺醯基、硫酸酯基、磺酸酯基、醯胺、磺醯胺、二價C3-8環烷基、二價雜環、或二價芳基。烷基可具有一或多個掌性中心(chiral center)。烷基可係未經取代，或視需要經一或多個相同或不相同的取代基取代，各取代基係如本文所述，或獨立地選自由以下所組成之群組：鹵素原子、氰基、羥基、環烷基、胺基、雜環基、芳基、羧酸基、膦酸基、磺酸基、磷酸基、硝基、醯胺基、磺醯胺基、酯基及酮基。
術語「簡單烷基」意指具有直鏈或支鏈部分或其組合，且含有約1至5個碳原子的如上所定義之烷基部分。簡單烷基之非限制性實施例包括甲基、乙基、異丙基、及三級丁基。
如本文所用，術語「碳環」或「環烷基」意指衍生自飽和環狀烴之3至15個碳原子的單價或二價基。碳環基可係單環或多環。碳環基可獨立地經下列取代：鹵素原子、磺醯基C1-8烷基、亞碸C1-8烷基、磺醯胺基、硝基、氰基、OC1-8烷基、SC1-8烷基、C1-8烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、酮基、烷胺基、醯胺基、胺基、芳基、C3-8環烷基、或羥基。適合之單環碳環基的非限制性實施例包括：環丙基、環戊基、環己基、及類似物。適合之多環碳環基的非限制性實施例包括：1-十氫萘、降莰基(norbornyl)、金剛烷基(adamantyl)、及類似物。
如本文所用，術語「環烯基」意指衍生自飽和環烷基之3至8個碳原子的單價或二價基，且具有至少一雙鍵。環烯基可係單環或多環。環烯基可獨立地經下列取代：鹵素原子、磺醯基、亞碸基、硝基、氰基、OC1-6烷基、SC1-6烷基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、酮基、烷胺基、醯胺基、 胺基、芳基、C3-8環烷基、或羥基。適合之單環環烯基的非限制性實施例包括：環戊烯基、環己烯基、環庚烯基、及類似物。適合之多環環烯基的非限制性實施例係：2,3,3a,4,5,6-六氫-1H-茚、1,2,3,4,4a,5,6,8a-八氫萘、及類似物。
如本文所用，術語「鹵素」意指氯、溴、氟、碘原子。
術語「鹵烷基」意指如上所定義之烷基，其中在烷基上的一或多個氫原子係以如上所定義之鹵基替代。
術語「雜烷基」意指如上所定義之烷基部分，其係具有一或多個碳原子(例如，1、2、或3個碳原子)以一或多個相同或不同之雜原子替代，其中連接至剩餘分子之點係透過雜烷基自由基之碳原子。適合之雜原子包括：O、S、S(O)、S(O)2、-NH-、及-N(烷基)-。
術語「雜鹵烷基」意指如上所定義之烷基，其中烷基之亞甲基(CH2)基係以雜原子替代、及一或多個在烷基上之氫原子係以如上所定義之鹵基替代。
如本文所用，術語「烯基」意指衍生自飽和烷基之具有2至10個碳原子的單價或二價烴部分，且具有至少一雙鍵。烯基之亞甲基(CH2)基可以下列替代：氧、硫、亞碸、氮、羰基、羧基、磺醯基、硫酸酯基、磺酸酯基、醯胺、磺醯胺、二價C3-8環烷基、二價雜環、或二價芳基。C2-10烯基可係在E或Z組態中。烯基可係未經取代，或視需要經一或多個相同或不相同的取代基取代，各取代基係如本文所述，或獨立地選自由以下所組成之群組：鹵素原子、羥基、環烷基、胺基、雜環基、芳基、羧酸基、膦酸基、磺酸基、磷酸基、硝基、醯胺基、磺醯胺基、酯基、酮基。適合之烯基的非限制性實施例包括：乙烯基、丙烯基、正丁烯基、3-甲基丁-2-烯基、正戊烯 基、辛烯基、及癸烯基。
如本文所用，術語「炔基」意指衍生自飽和烷基之具有2至10個碳原子的單價或二價烴部分，且具有至少一個三鍵。炔基之亞甲基(CH2)基可以下列替代：氧、硫、亞碸、氮、羰基、羧基、磺醯基、硫酸酯基、磺酸酯基、醯胺、磺醯胺、二價C3-8環烷基、二價雜環、或二價芳基。炔基可係未經取代，或視需要經一或多個相同或不相同的取代基取代，各取代基係如本文所述，或獨立地選自由以下所組成之群組：鹵素原子、羥基、環烷基、胺基、雜環基、芳基、羧酸基、膦酸基、磺酸基、磷酸基、硝基、醯胺基、磺醯胺基、酯基、酮基。適合之炔基的非限制性實施例包括：乙炔基、丙炔基、2-丁炔基、及癸炔基。
術語「雜炔基」意指如上所定義之炔基部分，其具有一或多個碳原子(例如，1、2、或3個碳原子)以一或多個相同或不同之雜原子替代，其中連接至剩餘分子之點係透過雜炔基自由基之碳原子。適合之雜原子包括：O、S、S(O)、S(O)2、-NH-、及-N(烷基)-。
如本文所用，術語「芳基」意指一有機部分，其係衍生自由含有6至10個碳原子的環所組成的芳香烴，且藉由移除一氫原子。芳基可經下列取代：鹵素原子、磺醯基C1-6烷基、亞碸C1-6烷基、磺醯胺基、環羧酸基、C1-6烷基羧酸鹽(酯)基、醯胺基、硝基、氰基、OC1-6烷基、SC1-6烷基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、酮基、酵、烷胺基、胺基、芳基、C3-8環烷基、或羥基。芳基可係單環或多環。適合之芳基的非限制性實施例包括苯基及萘基。
如本文所用，術語「芳烯基」意指衍生自如本文所定義之芳 基及烯基的基團。
如本文所用，術語「芳炔基」意指衍生自如本文所定義之芳基及炔基的基團。
如本文所用，術語「雜芳基」意指5至14員環，其係含有至少一選自以下之雜原子的芳香族：氧、氮、硫、或其至少二者之組合，中斷該碳環結構。雜芳基可係單環或多環。「雜芳基」亦可包括雜芳基稠合至如上所述之芳基。雜芳基之氮原子可視需要氧化，成為對應之N-氧化物。雜芳基環部分可係未經取代，或視需要以下列中一或多者取代：鹵素原子、磺醯基、亞碸基、硝基、氰基、OC1-6烷基、SC1-6烷基、C1-8烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、醯胺基、酮基、烷胺基、胺基、芳基、酯基、酮基、羧酸基、C3-8環烷基、或羥基。適合之雜芳基的非限制性實施例包括：吡啶基、吡嗪基、呋喃基、噻吩基、嘧啶基、異噁唑基、異噻唑基、噁唑基、噻唑基、吡唑基、呋呫基(furazanyl)、吡咯基、三唑基、苯並噻吩基、喹啉基、咪唑基、噻吩並吡啶基、喹唑啉基、噻吩並嘧啶基、吡咯並吡啶基、咪唑並吡啶基、異喹啉基、1H-吲哚基、苯並氮雜吲哚基、二苯並[b,d]苯硫基、苯並[4,5]噻吩並[2,3-b]吡啶基、苯並噻唑基、吡啶並[2,3-b]吲哚嗪基、噻吩並[2,3-d]噁唑基、1H-吡咯並[3,2-b]吡啶基、1H-吡咯並[2,3-b]吡啶基、二苯並[b,d]苯硫基、苯並[4,5]咪唑並[1,2-a]吡啶基、9H-吡啶並[2,3-b]吲哚基、苯並[4,5]噻吩並[2,3-b]吡啶基、苯並呋喃[2,3-b]吡啶基、及類似物。
如本文所用，術語「雜芳烷基」意指衍生自如本文所定義之雜芳基及烷基的基團。
如本文所用，術語「雜芳烯基」意指衍生自如本文所定義之雜芳基及烯基的基團。
如本文所用，術語「雜芳炔基」意指衍生自如本文所定義之雜芳基及炔基的基團。
如本文所用，術語「雜環」意指非芳香族3至10員環，其可係飽和或未飽和，含有中斷該碳環結構的至少一選自以下之雜原子：氧、氮、硫、或其至少二者之組合。雜環可被C(O)中斷；S及N雜原子可被氧化。雜環基可係單環或多環。雜環部分可稠合至一或多個芳基或雜芳基環基。雜環部分可經下列取代：鹵素原子、磺醯基、亞碸基、硝基、氰基、OC1-6烷基、SC1-6烷基、C1-8烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、醯胺基、酮基、烷胺基、胺基、芳基、酯基、酮基、羧酸基、C3-8環烷基、或羥基。適合之單環雜環的非限制性實施例包括：哌啶基、吡咯啶基、嗎啉基、硫代嗎啉基、4-二噁烷基、四氫呋喃基、及類似物。稠合至一或多個芳基或雜芳基之雜環部分的非限制性實施例包括：異吲哚啉、1,2,3,4-四氫喹啉、9,10-二氫吖啶、5,10-二氫苯並[b][1,6]萘啶、二氫苯並哌喃(chromane)、9H-二苯並哌喃(9H-xanthene)、二氫苯並噻喃(thiochromane)、9H-二苯並噻哌喃(9H-thioxanthene)、10H-苯並哌喃並[3,2-c]吡啶、2,3,4,5-四氫-1H-苯並[b]氮雜卓、10,11-二氫-5H-二苯並[b,f]氮雜卓、3-甲基-10,11-二氫-5H-二苯並[b,f]氮雜卓、2,3,4,5-四氫-1H-苯並[e][1,4]二氮雜卓、2,3,4,5-四氫-1H-苯並[b][1,4]二氮雜卓、10,11-二氫-5H-二苯並[b,e][1,4]二氮雜卓、1,2,3,5-四氫苯並[e][1,4]氧氮雜卓、2,3,4,5-四氫苯並[b][1,4]氧氮雜卓、7-甲基-5,11-二氫二苯並[b,e][1,4]氧氮雜卓、1,2,3,5-四氫苯並[e][1,4]硫氮雜卓、2,3,4,5-四氫苯並[b][1,4]硫氮雜卓、5,11-二氫二苯並[b,e][1,4]硫氮雜卓、1,2,3,5-四氫苯並[e][1,4]硫氮雜卓4,4-二氧化物、2,3,4,5-四氫苯並[b][1,4]硫氮雜卓1,1-二氧化物、5,11-二氫二苯並[b,e][1,4]硫氮雜卓10,10-二氧化物、3-甲基-5,11-二氫二苯並[b,e][1,4]硫氮雜卓10,10-二氧化物、(1aS,10bR)-1,1a,6,10b-四氫苯並[b]環丙烷[d]吡啶並[3,2-f]氮雜卓、 (1aS,10bR)-4-氟-1,1a,6,10b-四氫苯並[b]環丙烷[d]吡啶並[3,2-f]氮雜卓、6,11-二氫-5H-苯並[b]吡啶並[3,2-f]氮雜卓、10,11-二氫-5H-苯並[b]吡啶並[3,4-f]氮雜卓、6,7,8,9-四氫-5H-吡啶並[2,3-b]氮雜卓、6,11-二氫-5H-苯並[b]吡啶並[3,2-f]氮雜卓、2-甲基-6,11-二氫-5H-苯並[b]吡啶並[3,2-f]氮雜卓、2,3,4,5-四氫吡啶並[3,2-b][1,4]氧氮雜卓、6,11-二氫苯並[e]吡啶並[3,2-b][1,4]氧氮雜卓、5,11-二氫苯並[b]吡啶並[2,3-e][1,4]氧氮雜卓、2,3,4,5-四氫吡啶並[3,2-b][1,4]硫氮雜卓、6,11-二氫苯並[e]吡啶並[3,2-b][1,4]硫氮雜卓、5,11-二氫苯並[b]吡啶並[2,3-e][1,4]硫氮雜卓、2,3,4,5-四氫吡啶並[3,2-b][1,4]硫氮雜卓1,1-二氧化物、6,11-二氫苯並[e]吡啶並[3,2-b][1,4]硫氮雜卓5,5-二氧化物、5,11-二氫苯並[b]吡啶並[2,3-e][1,4]硫氮雜卓6,6-二氧化物、及類似物。
如本文所用，術語「雜環烷基」意指衍生自如本文所定義之雜環及烷基的基團。
如本文所用，術語「羥基」代表式「OH」之基團。
如本文所用，術語「羰基」代表式「C(O)」之基團。
如本文所用，術語「酮」代表具有聯結至碳原子(例如，C(O)Rx)之羰基的有機化合物，其中Rx可係如上所定義的烷基、芳基、環烷基、環烯基、雜環。
如本文所用，術語「酯」代表具有聯結至碳原子(例如，C(O)ORx)之羰基的有機化合物，其中Rx可係如上所定義的烷基、芳基、環烷基、環烯基、雜環。
如本文所用，術語「胺」代表式「NRxRy」之基團，其中Rx及Ry可係相同或獨立地為如上所定義的H、烷基、芳基、環烷基、環烯基、雜環。
如本文所用，術語「羧基」代表式「C(O)O」之基團。
如本文所用，術語「磺醯基」代表式「SO2」之基團。
如本文所用，術語「硫酸酯基」代表式「O-S(O)2-O」之基團。
如本文所用，術語「磺酸酯基」代表式「S(O)2-O」之基團。
如本文所用，術語「羧酸」代表式「C(O)OH」之基團。
如本文所用，術語「硝基」代表式「NO2」之基團。
如本文所用，術語「氰基」代表式「CN」之基團。
如本文所用，術語「醯胺」代表式「C(O)NRxRy」或「NRxRyC(O)」之基團，其中Rx及Ry可係相同或獨立地為如上所定義的H、烷基、芳基、環烷基、環烯基、雜環。
如本文所用，術語「磺醯胺了代表式「S(O)2NRxRy」之基團，其中Rx及Ry可係相同或獨立地為如上所定義的H、烷基、芳基、環烷基、環烯基、雜環。
如本文所用，術語「亞碸」代表式「S(O)」之基團。
如本文所用，術語「膦酸」代表式「P(O)(OH)2」之基團。
如本文所用，術語「磷酸」代表式「OP(O)(OH)2」之基團。
如本文所用，術語「磺酸」代表式「S(O)2OH」之基團。
如本文所用，式「H」代表氫原子。
如本文所用，式「O」代表氧原子。
如本文所用，式「N」代表氮原子。
如本文所用，式「S」代表硫原子。
第1圖係例示性劑量反應曲線，其係使用AnaSpec BACE1螢光測定法，評估藉由所選BACE1抑制劑之治療，對Aβ胜肽分泌之抑制。
第2圖係例示性劑量反應曲線，其係使用AnaSpec BACE2螢光測定法，評估藉由所選BACE1抑制劑之治療，對Aβ胜肽分泌之抑制。
第3圖顯示所選之BACE1抑制劑，對細胞生產Aβ胜肽所造成的影響。
第4圖顯示使用組織蛋白酶D活性測定法來分析所選用之BACE1抑制劑對組織蛋白酶D的交叉反應性。
第5圖顯示藉由胃蛋白酶測定法呈現所選用之BACE1抑制劑對胃蛋白酶所造成的影響。
第6圖顯示以口服方式投予所選之BACE1抑制劑後，在猴子之腦脊髓液(cerebrospinal fluid，CSF)中神經退化性生物指標Aβ40的量。
第7圖顯示以口服方式投予所選之BACE1抑制劑後，在三隻大鼠之腦脊髓液(CSF)中神經退化性生物指標Aβ40的量。
本發明係關於可以調節、調控及抑制BACE1之新穎有機分子。特別是，本發明係關於可用於治療Aβ相關病症的新穎BACE1抑制劑。
在一方面中，本發明提供以式(I)代表之化合物；或其醫藥上可接受之鹽、或其立體異構型態、或其鏡像異構物、非鏡像異構物、互變異構物、兩性離子、及其醫藥上可接受之鹽：
Figure 105112413-A0202-12-0016-302
 其中，X係不存在或存在，且當存在時，該X係選自由以下所組成之群組：C(O)、C(S)、S(O)2、(CR7R8)n、O、N、NR1、S及S(O)；Y係不存在或存在，且當存在時，該Y係(CR7R8)n，根據一些實施態樣， X及Y一起亦可形成包括
Figure 105112413-A0202-12-0016-303
； Z係不存在或存在，且當存在時，該Z係選自由以下所組成之群組：烷基、鹵烷基、雜烷基、烯基、炔基、(CR10R11)oNR9(CR12R13)p、(CR10R11)oNR9C(O)(CR12R13)p、(CR10R11)oC(O)NR9(CR12R13)p、(CR10R11)oC(O)(CR12R13)p、(CR10R11)oC(O)O(CR12R13)p、(CR10R11)oOC(O)(CR12R13)p、(CR10R11)oOC(O)NR9(CR12R13)p、(CR10R11)oNR9C(O)O(CR12R13)p、(CR10R11)oNR9C(O)NR9(CR12R13)p、(CR10R11)oO(CR12R13)p、(CR10R11)oS(O)n(CR12R13)p及環烷基； W係不存在或存在，且當存在時，該W係選自由以下所組成之群組：烷基、鹵烷基、雜烷基、烯基、炔基、OR9、O、NR9R10、NR9、C(O)R9、C(O)NR9、NR9C(O)、C(O)OR9、OC(O)R9、COR9R10及雜環烷基；Q係不存在或存在，且當存在時，該Q係選自：O、S、NR1、CR1、(CR14R15)t、C(O)或環烷基； 環
Figure 105112413-A0202-12-0017-304
係選自由以下所組成之群組：單環芳基、多環芳基、單環雜 芳基、多環雜芳基、單環碳環、多環碳環、單環雜環、及多環雜環系統；該在Q及X之間的鍵係一單鍵或一雙鍵；R1係選自：氫、烷基、環烷基、鹵烷基、雜烷基、雜鹵烷基或雜炔基；R2係選自：氫、氘、鹵素、CN、烷基、環烷基、鹵烷基、雜烷基、芳基、雜芳基、雜鹵烷基或雜炔基；R3係獨立地選自由以下所組成之群組：氫、氘、鹵素、CN、烷基、鹵烷基、雜烷基、烯基、炔基、芳基、芳烷基、環烷基、雜芳基、雜芳烷基、雜環烷基、及C(O)；R4係獨立地選自由以下所組成之群組：氫、氘、鹵素、羥基、CN、烷基、鹵烷基、雜烷基、烯基、炔基、芳基、芳烷基、芳烯基、芳炔基、環烷基、雜芳基、雜芳烷基、雜芳烯基、雜芳炔基及雜環烷基；R5係選自：氫、簡單烷基或一前驅藥物部分，該前驅藥物部分可包括(但不限於)：C(O)R14及CR15R16OC(O)R14；R6係選自：氫、簡單烷基或一前驅藥物部分，該前驅藥物部分可包括(但不限於)：C(O)R17及CR18R19OC(O)R17；R7係不存在或存在，且當存在時係獨立地選自：氫、氘、鹵素、簡單烷基或鹵烷基；R8係不存在或存在，且當存在時係獨立地選自：氫、氘、鹵素、簡單烷 基或鹵烷基；R9係獨立地選自：氫、氘、鹵素、簡單烷基或炔基；R10係獨立地選自：氫、氘、鹵素或簡單烷基；R11係獨立地選自：氫、氘、鹵素或簡單烷基；R12係獨立地選自：氫、氘或簡單烷基；R13係獨立地選自：氫、氘或簡單烷基；R14係3至28碳原子之直鏈或支鏈烷基、環烷基、雜環烷基、單環芳基、多環芳基、單環雜芳基、多環雜芳基、簡單烷基、鹵烷基或雜烷基；R15係獨立地選自：氫、氘、鹵素、簡單烷基；R16係獨立地選自：氫、氘、鹵素、簡單烷基；R17係3至28碳原子之直鏈或支鏈烷基、環烷基、雜環烷基、單環芳基、多環芳基、單環雜芳基或多環雜芳基；R18係獨立地選自：氫、氘、鹵素、簡單烷基；R19係獨立地選自：氫、氘、鹵素、簡單烷基；n係0或更多；m係0或更多；o係0、1、2、或3；p係0、1、2、或3；t係0、1、或2；以及u係0、1、或2。
熟習本發明所屬技術領域者將認可式(I)之化合物可作為互變異構物及/或立體異構物存在，且所有該等互變異構物及立體異構物係本發明之一部分包含在本文中。該化合物可以下列結構中任一者代表：
Figure 105112413-A0202-12-0019-306
或
Figure 105112413-A0202-12-0019-307
或
Figure 105112413-A0202-12-0019-305
式(I)之較佳化合物包括但不限於下列結構：
Figure 105112413-A0202-12-0019-308
Figure 105112413-A0202-12-0020-309
Figure 105112413-A0202-12-0021-310
Figure 105112413-A0202-12-0022-311
式(I)之較佳化合物亦包括下列式之結構：
Figure 105112413-A0202-12-0023-313
 其中，A係選自一經取代或未經取代之碳或氮；B係選自一經取代或未經取代之碳或氮；C係選自一經取代或未經取代之碳或氮；D係選自一經取代或未經取代之碳或氮；以及E係選自一經取代或未經取代之碳或氮。
式(II)之較佳化合物包括(但不限於)下列結構：
Figure 105112413-A0202-12-0023-312
式(I)之較佳化合物亦包括下列式之結構：
Figure 105112413-A0202-12-0023-314
Figure 105112413-A0202-12-0024-316
 其中，A係選自一經取代或未經取代之碳或氮。
式(III)之較佳化合物包括(但不限於)下列結構：
Figure 105112413-A0202-12-0024-315
式(I)之較佳化合物亦包括下列式之結構：
Figure 105112413-A0202-12-0025-317
 其中，
Figure 105112413-A0202-12-0025-319
係選自：
Figure 105112413-A0202-12-0025-318
Figure 105112413-A0202-12-0026-321
 其中，A係選自：一經取代或未經取代之碳、氧、硫或氮；B係選自：一經取代或未經取代之碳或氮；C係選自：一經取代或未經取代之碳或氮；以及各Ri、Rii、Riii、Riv、及Rv係獨立地為氫、鹵素、氰基、胺基、醯胺基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C2-6烯基、或C2-6炔基、或係一選自以下之部分：C3-10環烷基、C1-10雜環烷基、芳基、及雜芳基，其各視需要經下列單、雙、或三取代：鹵素、硝基、氰基、胺基、醯胺基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C2-6烯基、C2-6炔基、芳基、或雜芳基，或視需要與下列稠合：C3-10環烷基、C1-10雜環烷基、芳基、或雜芳基。
式(IV)之較佳化合物包括(但不限於)下列結構：
Figure 105112413-A0202-12-0026-320
Figure 105112413-A0202-12-0027-322
Figure 105112413-A0202-12-0028-323
Figure 105112413-A0202-12-0029-324
Figure 105112413-A0202-12-0030-325
式(I)之較佳化合物亦包括下列式之結構：
Figure 105112413-A0202-12-0030-328
 其中，
Figure 105112413-A0202-12-0030-326
係選自：
Figure 105112413-A0202-12-0030-327
Figure 105112413-A0202-12-0031-330
 其中，A係選自：一經取代或未經取代之碳或氮；B係選自：一經取代或未經取代之碳或氮；C係選自：一經取代或未經取代之碳或氮；以及各Ri、Rii、Riii、Riv、及Rv係獨立地為氫、鹵素、氰基、胺基、醯胺基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C2-6烯基、或C2-6炔基，或係選自以下之部分：C3-10環烷基、C1-10雜環烷基、芳基、及雜芳基，其各視需要經下列單、雙、或三取代：鹵素、硝基、氰基、胺基、醯胺基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C2-6烯基、C2-6炔基、芳基、或雜芳基，或視需要與下列稠合：C3-10環烷基、C1-10雜環烷基、芳基、或雜芳基。
式(V)之較佳化合物包括(但不限於)下列結構：
Figure 105112413-A0202-12-0031-329
Figure 105112413-A0202-12-0032-331
式(I)之較佳化合物亦包括下列式之結構：
Figure 105112413-A0202-12-0032-332
 其中，
Figure 105112413-A0202-12-0032-333
係選自：
Figure 105112413-A0202-12-0032-334
Figure 105112413-A0202-12-0033-335
 其中，A係選自：一經取代或未經取代之碳或氮；B係選自：一經取代或未經取代之碳或氮；C係選自：一經取代或未經取代之碳或氮；D係選自：一經取代或未經取代之碳或氮；E係選自：一經取代或未經取代之碳或氮；Gi係選自：CH2、O、或SO2；Gii係選自：CH2或O；該在Gi及Gii之間的鍵係一單鍵或一雙鍵；以及各Ri、Rii、Riii、Riv、Rv、Rvi、Rvi、及Rviii係獨立地為氫、鹵素、氰基、胺基、醯胺基、羥基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C2-6烯基、或C2-6炔基，或係選自以下之部分：C3-10環烷基、C1-10雜環烷基、芳基、及雜芳基，其各 視需要經下列單、雙、或三取代：鹵素、硝基、氰基、胺基、醯胺基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C2-6烯基、C2-6炔基、芳基、或雜芳基，或視需要與下列稠合：C3-10環烷基、C1-10雜環烷基、芳基、或雜芳基。根據一些實施例，Rvii及Rviii可以其相連碳原子一起形成羰基。
式(VI)之較佳化合物包括(但不限於)下列結構：
Figure 105112413-A0202-12-0034-336
Figure 105112413-A0202-12-0035-337
Figure 105112413-A0202-12-0036-338
Figure 105112413-A0202-12-0037-339
Figure 105112413-A0202-12-0038-340
Figure 105112413-A0202-12-0039-341
Figure 105112413-A0202-12-0040-342
Figure 105112413-A0202-12-0041-343
Figure 105112413-A0202-12-0042-344
Figure 105112413-A0202-12-0043-345
Figure 105112413-A0202-12-0044-346
Figure 105112413-A0202-12-0045-347
Figure 105112413-A0202-12-0046-348
Figure 105112413-A0202-12-0047-349
Figure 105112413-A0202-12-0048-350
Figure 105112413-A0202-12-0049-351
Figure 105112413-A0202-12-0050-352
Figure 105112413-A0202-12-0051-353
Figure 105112413-A0202-12-0052-354
Figure 105112413-A0202-12-0053-355
Figure 105112413-A0202-12-0054-356
Figure 105112413-A0202-12-0055-357
Figure 105112413-A0202-12-0056-358
Figure 105112413-A0202-12-0057-359
Figure 105112413-A0202-12-0058-360
式(I)之較佳化合物亦包括下列式之結構：
Figure 105112413-A0202-12-0058-361
 其中，X係不存在或存在，且當存在時，該X係選自由以下所組成之群組：C(O)、C(S)、S(O)2、(CR7R8)n、O、N、NR1、S及S(O)；Y係不存在或存在，且當存在時，該Y係選自由以下所組成之群組：(CR7R8)n；Z係不存在或存在，且當存在時，該Z係選自由以下所組成之群組：烷基、鹵烷基、雜烷基、烯基、炔基、(CR10R11)oNR9(CR12R13)p、(CR10R11)oNR9C(O)(CR12R13)p、(CR10R11)oC(O)NR9(CR12R13)p、(CR10R11)oC(O)(CR12R13)p、(CR10R11)oC(O)O(CR12R13)p、(CR10R11)oOC(O)(CR12R13)p、(CR10R11)oOC(O)NR9(CR12R13)p、 (CR10R11)oNR9C(O)O(CR12R13)p、(CR10R11)oNR9C(O)NR9(CR12R13)p、(CR10R11)oO(CR12R13)p、(CR10R11)oS(O)n(CR12R13)p及環烷基；J係不存在或存在，且當存在時，該J係選自：烷基、鹵烷基、C(O)NR1、NR1C(O)、NR7、NR7R8、C(CR7R8)nNR1或NR1C(CR7R8)n；W係不存在或存在，且當存在時，該W係選自由以下所組成之群組：烷基、鹵烷基、雜烷基、烯基、炔基、OR9、O、NR9R10、NR9、CR9、CR9R10、C(O)R9、C(O)NR9、NR9C(O)、C(O)NR9R10、NR9R10C(O)、C(O)OR9、OC(O)R9及雜環烷基；Q係不存在或存在，且當存在時，該Q係選自：O、S、NR1、CR1、(CR14R15)t或C(O)； 環
Figure 105112413-A0202-12-0059-424
係選自由以下所組成之群組：單環芳基、多環芳基、單環 雜芳基、多環雜芳基、單環碳環、多環碳環、單環雜環、及多環雜環系統； 環
Figure 105112413-A0202-12-0059-363
係選自由以下所組成之群組：單環芳基、多環芳基、單環 雜芳基、多環雜芳基、單環碳環、多環碳環、單環雜環、及多環雜環系統；該在Q及X之間的鍵係一單鍵或一雙鍵；R1係選自：氫、烷基、環烷基、鹵烷基、雜烷基、雜鹵烷基或雜炔基；R2係選自：氫、氘、鹵素、CN、烷基、環烷基、鹵烷基、雜烷基、芳基、雜芳基、雜鹵烷基或雜炔基；R3係獨立地選自由以下所組成之群組：氫、氘、鹵素、CN、烷基、鹵烷基、雜烷基、烯基、炔基、芳基、芳烷基、環烷基、雜芳基、雜芳烷基、雜環烷基及C(O)；R4係獨立地選自由以下所組成之群組：氫、氘、鹵素、羥基、CN、烷基、鹵烷基、雜烷基、烯基、炔基、芳基、芳烷基、芳烯基、芳炔基、環烷基、雜芳基、雜芳烷基、雜芳烯基、雜芳炔基及雜環烷基； R5係選自：氫、簡單烷基或一前驅藥物部分，該前驅藥物部分可係選自：C(O)R14或CR15R16OC(O)R14；R6係選自：氫、簡單烷基或一前驅藥物部分，該前驅藥物部分可係選自：C(O)R17或CR18R19OC(O)R17；R7係獨立地選自：氫、氘、鹵素、簡單烷基或鹵烷基；R8係獨立地選自：氫、氘、鹵素、簡單烷基或鹵烷基；R9係獨立地選自：氫、氘、鹵素、簡單烷基或炔基；R10係獨立地選自：氫、氘、鹵素或簡單烷基；R11係獨立地選自：氫、氘、鹵素或簡單烷基；R12係獨立地選自：氫、氘或簡單烷基；R13係獨立地選自：氫、氘或簡單烷基；R14係3至28碳原子之直鏈或支鏈烷基、雜環烷基、環烷基、單環芳基、多環芳基、單環雜芳基、多環雜芳基、簡單烷基、鹵烷基或雜烷基；R15係獨立地選自：氫、氘、鹵素或簡單烷基；R16係獨立地選自：氫、氘、鹵素或簡單烷基；R17係3至28碳原子之直鏈或支鏈烷基、雜環烷基、環烷基、單環芳基、多環芳基、單環雜芳基或多環雜芳基；R18係獨立地選自：氫、氘、鹵素或簡單烷基；R19係獨立地選自：氫、氘、鹵素或簡單烷基；R20係獨立地選自由以下所組成之群組：氫、氘、鹵素、CN、C(O)、烷基、鹵烷基、雜烷基、烯基、炔基、芳基、芳烷基、環烷基、雜芳基、雜芳烷基及雜環烷基；n係0或更多；m係0或更多； o係0、1、2、或3；p係0、1、2、或3；t係0、1、或2；u係0、1、或2；以及k係0、1、或2。
式(VII)之較佳化合物包括(但不限於)下列結構：
Figure 105112413-A0202-12-0061-364
Figure 105112413-A0202-12-0062-365
Figure 105112413-A0202-12-0063-366
Figure 105112413-A0202-12-0064-367
式(I)之化合物可用作β-分泌酶1(BACE1)抑制劑。該等式(I)之化合物將適用於治療BACE1酵素之異常活性的相關疾病，例如：唐氏症、β類澱粉蛋白血管病變、與認知損傷相關之病症、阿茲海默症、記 憶喪失、與阿茲海默症相關之注意力不足症、神經退化性疾病、早發型失智症、老年失智症、與帕金森氏症、阿茲海默症及/或唐氏症相關之失智症、老年性黃斑部病變(AMD)、青光眼、嗅覺功能損傷、創傷性腦傷、漸進式肌肉萎縮症、第二型糖尿病及心血管疾病(中風)。
在一些實施態樣中，本發明係關於如前文所定義之式(I)之化合物及其鹽的用途。用於醫藥組合物中之鹽將為醫藥上可接受的鹽，但其他鹽可用於式(I)化合物的生產中。
如本文所用，「醫藥上可接受的鹽」意指所揭露之化合物的衍生物，其中該親體化合物係藉由製作其酸鹽或鹼鹽來修飾。
醫藥上可接受的鹽的例子包括但不限於：鹼性殘基(例如：胺)之礦鹽或有機酸鹽、酸性殘基(例如：羧酸)之鹼金屬鹽或有機鹽、及類似物。該醫藥上可接受的鹽包括親體化合物型態的習用無毒性鹽或四級銨鹽，例如，來自無毒性無機酸或有機酸。例如，該等習用無毒性鹽包括衍生自無機酸(例如：鹽酸)的那些無毒性鹽。
在一些實施態樣中，本發明亦包括醫藥組合物，該醫藥組合物含有作為活性成分之一或多個本發明化合物，與至少一醫藥上可接受的載劑、稀釋劑、或賦形劑。
在一些實施態樣中，本發明化合物可係藉由口服、非經腸、頰部、陰道、直腸、吸入、吹入、舌下、肌內、皮下、局部、鼻內、腹膜內、胸腔內、靜脈內、硬膜外、硬膜內、及腦室內途徑來投予，及可藉由注射入眼內、玻璃體內、及/或關節來投予。
劑量依投予途徑、疾病之嚴重性、患者之年齡及體重、及由主治醫師針對特定患者確定之最適個體方案及劑量程度通常所考慮的其他因子。
在一些實施態樣中，用於自本發明化合物中製備醫藥組合物的、惰性的、醫藥上可接受的載劑可為固體或液體。固體型製劑包括：粉末、錠劑、可分散顆粒、膠囊、丸劑、及栓劑。
術語組合物意欲包括活性組分或醫藥上可接受的鹽、與醫藥上可接受的載劑之調配物。例如本發明可係藉由本發明所屬技術領域中已知之手段調配成以下之劑型(例如)：錠劑、膠囊、水性或油性溶液、懸浮液、乳液、乳霜、軟膏、凝膠、鼻噴劑、栓劑、用於吸入之細粉或氣溶膠或噴霧劑、及用於非經腸用途(包括靜脈內、肌內或輸液)之滅菌水性或油性溶液、或懸浮液、或滅菌乳液。
液體劑型之組合物包括：溶液、懸浮液、及乳液。活性化合物之滅菌水溶液或水-丙二醇溶液可提及作為適合用於非經腸投予之液體製劑的例子。液體組合物亦可在水性丙烯乙二醇溶液中調配。用於口服投予之水性溶液可藉由在水中溶解活性成分，並視需要添加適合之著色劑、調味劑、穩定劑、及增稠劑來製備。用於口服用途之水性懸浮液可藉由將精細粉碎的活性成分分散於具有黏性材料的水中來製備，該黏性材料係(例如)：天然合成膠、樹脂、甲基纖維素、鈉羧甲基纖維素、及其他醫藥調配領域所知之懸浮劑。
醫藥組合物可係單位劑量劑型。在該等劑型中，該組合物係分成含有適當量之活性成分的單位劑量。該單位劑量劑型可係經包裝的製劑，該包裝含有分離量之製劑，例如，裝在玻璃瓶或安瓿(ampoules)中之錠劑、膠囊、及粉末。單位劑量劑型亦可係膠囊、丸劑、或錠劑本身，或其可係適當數量之任意該等包裝劑型。
組合物可調配來用於任意適合之投予途徑及手段。醫藥上可接受之載劑或稀釋劑包括該等用於適合口服、直腸、鼻腔、局部(包括頰部 及舌下)、陰道、或非經腸(包括皮下、肌內、靜脈內、皮內、硬膜內、硬膜外)投予之調配物中者。調配物可方便地以單位劑型存在，且可藉由醫藥領域所熟知之任意方法製備。
對於固體組合物而言，習用無毒性固體載劑包括，例如，可使用醫藥等級之甘露醇、乳糖、纖維素、纖維素衍生物、澱粉、硬脂酸鎂、糖精鈉、滑石、葡萄糖、蔗糖、鎂、碳酸鹽、及類似物。液體醫藥可投予性組合物可係，例如，藉由將如上所述之活性化合物及視需要加入之醫藥佐劑在載劑(例如，水、食鹽水、含水葡萄糖、甘油、乙醇、及類似物)中溶解、分散等來製備，以藉此形成溶液或懸浮液。如果需要，欲投予之醫藥組合物亦可含有少量無毒性助劑物質，例如濕潤劑或乳化劑、pH緩衝劑、及類似物，例如：乙酸鈉、山梨醇單月桂酸酯(sorbitan monolaurate)、三乙醇胺乙酸鈉、山梨醇單月桂酸酯、三乙醇胺油酸酯等。製備該等劑型之實際方法對熟習本發明所屬技術領域者係已知或明顯的。
式(I)之化合物可用作BACE1抑制劑，且在生物體外顯示抑制β-分泌酶(包括BACE)之活性。已顯示β-分泌酶之抑制劑可有用地阻斷Aβ胜肽之形成及聚集，且可有用地治療有關BACE1酵素之異常活性的疾病，例如：唐氏症、β類澱粉蛋白血管病變、與認知損傷相關之病症、阿茲海默症、記憶喪失、與阿茲海默症相關之注意力不足症、神經退化性疾病、早發型失智症、老年失智症、與帕金森氏症、阿茲海默症及/或唐氏症相關之失智症、老年性黃斑部病變(AMD)、青光眼、嗅覺功能損傷、創傷性腦傷、漸進式肌肉萎縮症、第二型糖尿病及心血管疾病(中風)。
製備方法
本發明亦描述用於製備式(I)之化合物的製程。根據本發明之式(I)化合物可經由類似於熟習合成有機化學領域者所了解之習用方 法製備。下述合成化學方案說明如何製作本發明化合物。
下列實施例僅係用於解釋之目的，且不欲以任何方式限制本發明。熟習本技術領域者將理解可在不超出本發明之精神及範圍下，對下列實施例做變化及修飾。
正如對熟習本技術領域者所顯而易見的，單獨之異構型可藉由以習用方式分離其混合物來獲得。舉例而言，對於非鏡像異構物而言，可採用色層分離法。
化合物名稱、中間物及反應劑名稱係以Chem Bio Draw Ultra version 12.0產生。
在下方實施例中，使用下列縮寫：「AcOH」意指乙酸
「Boc」意指三級丁氧羰基
「Cul」意指碘化亞銅
「DIPEA」意指二異丙基乙胺
「DMA」意指二甲基乙醯胺
「DMAP」意指二甲胺基嘧啶
「DMF」意指二甲基甲醯胺
「EDCI」意指1-[3-(二甲胺基)-丙基]-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽
「HATU」意指(1-[雙(二甲胺基)亞甲基]-1H-1,2,3-三唑並[4,5-b]吡啶3-氧化物六氟磷酸鹽)((1-[Bis(dimethylamino)methylene]-1H-1,2,3-triazolo[4,5-b]pyridinium 3-oxid hexafluorophosphate))
「HBTU」意指(1H-苯並三唑-1-基氧)(二甲胺基)-N,N-二甲基甲脒六氟磷酸鹽((1H-benzotriazol-1-yloxy)(dimethylamino)-N,N-dimethylmethaniminium hexafluorophosphate)
「HPLC」意指高效液相層析法
「LDA」意指二異丙胺鋰
「i-PrOH」意指異丙醇
「KOAc」意指乙酸鉀
「MeOH」意指甲醇
「Mel」意指碘甲烷
「NMP」意指N-甲基吡咯啶酮
「Pd(PPh3)4」意指四(三苯膦)鈀
「Pd2(dba)3」意指三(二苯亞基丙酮)二鈀
「PdCl2(PPh3)2」意指雙(三苯膦)二氯化鈀
「SnBu3」意指三丁基錫烷
「TBAF」意指四丁基氟化銨
「THF」意指四氫呋喃
「TMS」意指四甲基矽烷。
一般而言，化合物的特性分析係根據下列方法來進行：NMR光譜於室溫下紀錄於300或600MHz NMR光譜儀。不論是對內部TMS或溶劑訊號，化學位移係以ppm為標準。
本發明化合物通常係藉由低壓至中壓矽膠層析法純化。
該等化合物的製備方法如下：
實施例1-1
Figure 105112413-A0202-12-0069-368
N-[(甲胺基)硫代甲基]-胺甲酸三級丁酯(實施例1-1)
在氫化鈉(礦物油中60重量%，5.63克，及141.0毫莫耳)及無水THF(300毫升)之混合物中，於0℃下逐滴添加甲酸三級丁酯溶液(15.0克，128毫莫耳)及溶於無水THF(30毫升)之異硫氰酸甲酯溶液(7.38毫升，109毫莫耳)。之後，將該反應混合物緩慢回溫至室溫。接著以水(10毫升)冷卻該反應混合物，及在減壓下蒸發有機溶劑，並以CH2Cl2稀釋殘餘物。然後反應混合物係以飽和液狀NaHCO3溶液清洗，並以CH2Cl2萃取。有機層係以水清洗，以無水MgSO4乾燥，在真空中濃縮，並藉由矽膠管柱層析法純化以給出白色固體(實施例1-1)(15.0克，73%)。
實施例1-2
Figure 105112413-A0202-12-0070-369
2,8-二溴二苯並[b,d]噻吩(實施例1-2)
在二苯並[b,d]噻吩(實施例1-1)(4克，21.73毫莫耳)及CH2Cl2(100毫升)之混合物中，於0℃氮氛圍下添加溴(3.35毫升，65.22毫莫耳)。於室溫下攪拌該反應混合物過夜。在真空中蒐集及濃縮有機層以產出固體產物。使用CH2Cl2使獲得之產物再結晶以給出白色固體狀之標題化合物(實施例1-2)(6.34克，85.33%)。1H NMR(500MHz，CDCl3)δ 8.22(d，J=2Hz，2H)、7.70(d，J=8.5Hz，2H)、7.57(dd，J=8.5，2Hz，2H)。
實施例1-3
Figure 105112413-A0202-12-0070-370
2-溴-8-(丙-1-炔-1基)二苯並[b,d]噻吩(實施例1-3)
在2,8-二溴二苯並[b,d]噻吩(實施例1-2)(4.00克，11.70毫莫耳)、PPh3(0.03克，0.12毫莫耳)、Cul(0.11克，0.58毫莫耳)、PdCl2(PPh3)2(0.1克，0.12毫莫耳)、及三乙胺(80毫升)之混合物中，於室溫下添加三甲基(丙-1-炔-1-基)矽烷(2毫升，17.54毫莫耳)。在20分鐘內於得到的混合物中添加四丁基氟化銨(TBAF)溶液(在THF中1M，26.5毫升)。於80℃下攪拌混合物過夜。以水冷卻反應，並以CH2Cl2萃取。以無水MgSO4蒐集及乾燥有機層，然後在真空中濃縮以產出黑色油狀產物。然後藉由矽膠管柱層析法(100%正己烷、Rf=0.45)純化獲得之產物，以給出標題化合物(實施例1-3)(1.27克，36.08%)。
實施例1-4
Figure 105112413-A0202-12-0071-371
1-(8-(丙-1-炔-1基)二苯並[b,d]噻吩-2-基)乙酮(實施例1-4)
在2-溴-8-(丙-1-炔-1基)二苯並[b,d]噻吩(實施例1-3)(1.00克，3.32毫莫耳)、Pd(PPh3)4(0.38克，0.33毫莫耳)、及N-甲基吡咯啶酮(NMP)(4.00毫升)之混合物中，於室溫下添加三丁基(1-乙氧乙烯基)錫(1.56毫升，4.31毫莫耳)。於130℃、氮氛圍下攪拌混合物1小時。然後反應混合物係以4N HCl(2.5毫升)冷卻，並以CH2Cl2萃取。蒐集有機層，並以無水MgSO4乾燥，然後在真空中濃縮以產出黑色油狀產物。然後藉由矽膠管柱層析法(乙酸乙酯：正己烷=1：15、Rf=0.3)純化獲得之產物，以給出標題化合物(實施例1-4)(0.71克，80.95%)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ 8.71(s， 1H)、8.28(s，1H)、8.06(d，J=8.4Hz，1H)、7-90(d，J=8.4Hz，1H)、7.77(d，J=81Hz，1H)、7.52(d，J=8.4Hz，1H)、2.73(d，J=2.1Hz，3H)、2.12(d，J=2.4Hz，3H)。
實施例1-5
Figure 105112413-A0202-12-0072-372
(R,E)-2-甲基-N-(1-(8-(丙-1-炔-1-基)二苯並[b,d]噻吩-2-基)亞乙基)丙烷-2-亞磺醯胺(實施例1-5)
將1-(8-(丙-1-炔-1基)二苯並[b,d]噻吩-2-基)乙酮(實施例1-4)(2.6克，9.85毫莫耳)、(R)-2-甲丙烷-2-亞磺醯胺(1.78克，14.77毫莫耳)、Ti(OEt)4(4.5毫升，19.70毫莫耳)、及THF(80毫升)之混合物回流(refluxe)過夜。反應係以水冷卻，並以CH2Cl2萃取。濾掉沉澱物，蒐集有機層，並以無水MgSO4乾燥，然後在真空中濃縮以產出黃色油狀產物。然後藉由矽膠管柱層析法(乙酸乙酯：正己烷=1：2、Rf=0.5)純化獲得之黃色油狀產物，以給出標題化合物(實施例1-5)(3.0克，83.10%)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ 8.60(d，J=1.5Hz，1H)、8.23(d，J=1.5Hz，1H)、8.03(dd，J=8.4，1.8Hz，1H)、7.85(dd，J=27.6，8.1Hz，1H)、7.51(dd，J=8.4，1.5Hz，1H)、2.89(s，3H)、2.12(s，3H)、1.37(s，9H)。
實施例1-6
Figure 105112413-A0202-12-0073-373
(S)-3-((R)-1,1-二甲基乙基亞磺醯胺基)-3-(8-(丙-1-炔-1-基)二苯並[b,d]噻吩-2-基)丁酸甲酯(實施例1-6)
於氮氛圍下，將溶於THF(3毫升)之二異丙胺(1.4毫升，9.54毫莫耳)溶液降溫至-78℃，並在其中添加正-BuLi(在己烷中2.5M，3.8毫升，9.54毫莫耳)。攪拌混合物0.5小時。攪拌後，降溫該溶液至-78℃，並添加乙酸甲酯(0.8毫升，9.34毫莫耳)。於-78℃下繼續攪拌得到之溶液0.5小時。在本溶液中添加在THF(10毫升)中之三異丙氧基氯化鈦溶液(4.95克，19.07毫莫耳)並繼續攪拌0.5小時。然後將溶液降溫至-78℃，且將溶於THF(3毫升)之(R,E)-2-甲基-N-(1-(8-(丙-1-炔-1-基)二苯並[b,d]噻吩-2-基)亞乙基)丙烷-2-亞磺醯胺(實施例1-5)(0.7克，1.91毫莫耳)及混合物攪拌1小時。1小時後，反應物係以水冷卻，並以CH2Cl2萃取。濾掉沉澱物，蒐集有機層，並以無水MgSO4乾燥，然後在真空中濃縮以產出黃色油狀產物。然後藉由矽膠管柱層析法(乙酸乙酯：正己烷=1：2、Rf=0.25)純化獲得之黃色油狀產物，以給出標題化合物(實施例1-6)(0.45克，54.16%)。1H NMR(500MHz，CDCl3)δ 8.14(m，2H)、7.77(dd,J=22.5,8.5Hz，2H)、7.54-7.46(m，2H)、5.60(s，1H)、3.62(s，3H)、3.18(q,J=16.5Hz，2H)、2.11(s，3H)、1.85(s，3H)、1.34(s，9H)。
實施例1-7
Figure 105112413-A0202-12-0074-374
(S)-(1,4-二甲基-6-側氧-4--(8-(丙-1-炔-1-基)二苯並[b,d]噻吩-2-基)四氫-2(1H)-亞嘧啶基)胺甲酸(三級丁基)酯(實施例1-7)
在(S)-3-((R)-1,1-二甲基乙基亞磺醯胺基)-3-(8-(丙-1-炔-1-基)二苯並[b,d]噻吩-2-基)丁酸甲酯(實施例1-6)(1.3克，2.95毫莫耳)及MeOH(20毫升)之混合物中，添加氯化氫(在二噁烷中4N，1.47毫升，5.9毫莫耳)。於室溫下攪拌反應混合物1.5小時，且在真空中濃縮以產出在下個步驟中所要使用的無色油。
在溶於DMF(5毫升)之上述無色油溶液中添加二異丙基乙胺(DIPEA)(0.9毫升，8.85毫莫耳)、N-[(甲胺)硫代甲基]胺甲酸三級丁基酯(1.1克，5.9毫莫耳)、及1-[3-(二甲胺基)丙基]-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(0.91克，5.9毫莫耳)。於50℃下攪拌得到之溶液過夜。反應係以水冷卻，並以CH2Cl2萃取。蒐集有機層，並以無水MgSO4乾燥，然後在真空中濃縮以產出白色固體。然後藉由矽膠管柱層析法(乙酸乙酯：正己烷=1：2、Rf=0.4)純化該白色固體，以給出標題化合物(實施例1-7)(1.12克，82.35%)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ 10.47(s，1H)、8.15(d，J=1.5Hz，1H)、8.04(d，J=2.1Hz，1H)、7.83(d，J=8.7Hz，1H)、7.75(d，J=8.4Hz，1H)、7.49-7.39(m，2H)、3.36(d，J=16.2Hz，1H)、3.20(s，3H)、2.99(d，J=16.2Hz，1H)、2.10(s，3H)、1.76(s，3H)、1.47(s，9H)。
實施例1
Figure 105112413-A0202-12-0075-375
(S)-2-亞胺基-3,6-二甲基-6-(8-(丙-1-炔-1-基)二苯並[b,d]噻吩-2-基)四氫嘧啶-4(1H)-酮(實施例1)
在(S)-(1,4-二甲基-6-側氧-4--(8-(丙-1-炔-1-基)二苯並[b,d]噻吩-2-基)四氫-2(1H)-亞嘧啶基)胺甲酸(三級丁基)酯(實施例1-7)(0.8克，1.74毫莫耳)及CH2Cl2(8毫升)之混合物中，添加三氟乙酸(2毫升)。於室溫下攪拌反應混合物2小時，在真空中濃縮，並藉由矽膠管柱層析法(MeOH：CH2Cl2=1：30、Rf=0.2)純化，以給出標題化合物(實施例1)之TFA鹽(0.55克、66.5%)。1H NMR(300MHz，MeOD)δ ppm 8.25(m，2H)、7.93(d，J=8.7Hz，1H)、7.81(d，J=8.7Hz，1H)、7.55-7.44(m，2H)、3.64(d，J=16.5Hz，1H)、3.22(d，J=16.5Hz，1H)、3.16(s，3H)、2.07(s，3H)、1.80(s，3H)。
實施例2-1
Figure 105112413-A0202-12-0075-376
(R,E)-N-(1-(7-甲氧基苯並呋喃-2-基)亞乙基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(實施例2-1)
在溶於無水THF(20毫升)之2-乙醯-7-甲氧基苯並呋喃(2.0克，10.5毫莫耳)溶液裡，添加(R)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(1.34克，11.1毫 莫耳)及鈦酸乙酯(2.1克，11.5毫莫耳)。加熱反應混合物至50℃，並持續17小時。使反應混合物降溫至室溫，並倒在冰上。得到之混合物係經矽藻土墊過濾，且該濾墊係以CH2Cl2清洗。分離有機層，並以CH2Cl2(2x)萃取水層。以MgSO4乾燥合併之有機層，過濾並濃縮。藉由矽膠管柱層析(CH2Cl2)純化粗產物，以給出標題化合物(1.55克，50%產率)。
實施例2-2
Figure 105112413-A0202-12-0076-377
(S)-3-(((R)-三級丁基亞磺醯基)胺基)-3-(7-甲氧基苯並呋喃-2-基)丁酸甲酯(實施例2-2)
將溶於無水THF(15毫升)之LDA溶液(12毫升)於氮氛圍下降溫至-78℃。在經降溫之LDA溶液中，緩緩添加溶於THF(10毫升)之乙酸甲酯(1.8克，24.4毫莫耳)溶液。於-78℃下攪拌得到之溶液45分鐘。然後，反應混合物係以溶於THF(10毫升)之三異丙氧基氯化鈦(8.35克，41.4毫莫耳)溶液處理，並攪拌反應混合物30分鐘。反應混合物係以溶於THF(10毫升)之(R,E)-N-(1-(7-甲氧基苯並呋喃-2-基)亞乙基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(實施例2-1)(1.2克，4.1毫莫耳)溶液逐滴處理。攪拌1小時後，添加飽和水性NH4Cl溶液，並加熱反應混合物至室溫。通過過濾移除固體，且以乙酸乙酯(3x)萃取水層。以鹽水清洗合併之有機萃取物，以MgSO4乾燥，過濾並濃縮。藉由矽膠管柱層析(梯度沖提3：1至1：1之已烷：乙酸乙酯)純化粗產物。濃縮含有沖提物之產物以給出褐色油狀標題化合物(1.02克，68%)。
實施例2-3
Figure 105112413-A0202-12-0077-378
(S)-3-胺基-3-(7-甲氧基苯並呋喃-2-基)丁酸甲酯(實施例2-3)
將溶於CH2Cl2(15毫升)之(S)-3-(((R)-三級丁基亞磺醯基)胺基)-3-(7-甲氧基苯並呋喃-2-基)丁酸甲酯(實施例2-2)(0.92克，25毫莫耳)溶液及MeOH(4毫升)降溫至0~10℃。得到之溶液係以氯化氫(在二噁烷中4N，3.13毫升)處理。於0~10℃下攪拌得到之溶液30分鐘，然後濃縮至乾燥。殘餘物以CH2Cl2(20毫升)處理，並以水萃取兩次。合併之水性萃取物係調整至pH=7，並以CH2Cl2(2x)萃取。合併之有機萃取物係以MgSO4乾燥，過濾並濃縮以給出標題化合物(0.62克，94%產率)。
實施例2-4
Figure 105112413-A0202-12-0077-379
(S,Z)-(4-(7-甲氧基苯並呋喃-2-基)-1,4-二甲基-6-側氧四氫-2(1H)-亞嘧啶基)胺甲酸(三級丁基)酯(實施例2-4)
(S)-3-胺基-3-(7-甲氧基苯並呋喃-2-基)丁酸甲酯(實施例2-3)(0.6克，2.28毫莫耳)係溶解在DMF(10毫升)中。在得到之溶液中添加EDCI(0.66克，3.41毫莫耳)、二異丙基乙胺(1.33克，10.3毫莫耳)、及N-[(甲胺基)硫代甲基]-胺甲酸三級丁酯(實施例1-1)(0.52克，2.73毫莫耳)。於室溫下攪拌反應混合物17小時。然後以水(30毫升)處理反應混合物，並 以乙酸乙酯(3x)萃取。合併之有機萃取物係以水及鹽水清洗，以MgSO4乾燥，過濾並濃縮。藉由矽膠管柱層析(梯度沖提6：1至2：1之已烷：乙酸乙酯)純化粗產物，以給出純白色粉末狀固體之標題化合物(實施例2-4)(0.81克，92%)。
實施例2
Figure 105112413-A0202-12-0078-380
(S)-6-(7-羥基苯並呋喃-2-基)-2-亞胺基-3,6-二甲基四氫嘧啶-4(1H)-酮(實施例2)
將溶於CH2Cl2之(S,Z)-(4-(7-甲氧基苯並呋喃-2-基)-1,4-二甲基-6-側氧四氫-2(1H)-亞嘧啶基)胺甲酸(三級丁基)酯(實施例2-4)(0.43克，1.1毫莫耳)溶液降溫至0~10℃。經降溫之溶液以BBr3(1.39克，5.55毫莫耳)緩緩地處理。於0~10℃下攪拌得到之溶液2小時，然後以飽和水性NaHCO3溶液處理，並將混合物加熱至室溫。蒐集水層，並以CH2Cl2(2x)萃取。合併之有機萃取物以MgSO4乾燥，過濾並濃縮以給出純白色粉末狀固體之標題化合物(0.26克，86.0%)。
實施例3
Figure 105112413-A0202-12-0078-381
(S)-2-亞胺基-6-(7-甲氧基苯並呋喃-2-基)-3,6-二甲基四氫嘧啶-4(1H)-酮(實施例3)
將溶於CH2Cl2(2毫升)之(S,Z)-(4-(7-甲氧基苯並呋喃-2-基)-1,4-二甲基-6-側氧四氫-2(1H)-亞嘧啶基)胺甲酸(三級丁基)酯(實施例2-4)(60毫克，0.15毫莫耳)溶液降溫至0~10℃。以BBr3(46.5毫克，0.19毫莫耳)緩緩處理經降溫溶液。於0~10℃下攪拌得到之溶液10分鐘，然後以飽和水性NaHCO3溶液處理。將反應混合物加熱至室溫。蒐集水層，並以CH2Cl2(2x)萃取。合併之有機萃取物係以MgSO4乾燥，過濾並濃縮以給出粉末狀純白色固體之標題化合物(實施例3)(40毫克，90%產率)。
實施例4-1
Figure 105112413-A0202-12-0079-382
5-(丙-1-炔-1-基)吡啶甲酸甲酯(實施例4-1)
在5-溴吡啶甲酸甲酯(0.58克，2.31毫莫耳)、Cul(0.18克，0.69毫莫耳)、Pd(PPh3)4(0.27克，0.23毫莫耳)、及三甲胺(10毫升)之混合物中，於室溫下添加三甲基(丙-1-炔-1-基)矽烷(0.4毫升，3.47毫莫耳)。在20分鐘內於得到之混合物中添加四丁基氟化銨(TBAF)溶液(在THF中1M，4.29毫升)。於室溫下攪拌混合物過夜。反應係以水冷卻，並以CH2Cl2萃取。蒐集有機層，並以MgSO4乾燥，在真空中濃縮以產出黑色油狀產物。藉由矽膠管柱層析法(乙酸乙酯：正己烷=1：2、Rf=0.4)純化獲得之產物，以給出標題化合物(實施例4-1)(0.31克，75.61%)。
實施例4-2
Figure 105112413-A0202-12-0079-383
 實施例4-2
5-(丙-1-炔-1-基)吡啶羧酸(實施例4-2)
將5-(丙-1-炔-1-基)吡啶甲酸甲酯(實施例4-1)(1克，5.71毫莫耳)、4N LiOH(1.86毫升，7.43毫莫耳)、及二噁烷(15毫升)之混合物於40℃下攪拌3小時。反應係以4N HCl(3.8毫升，14.86毫莫耳)冷卻，並以CH2Cl2萃取。蒐集有機層，以無水MgSO4乾燥，並在真空中濃縮以產出用於下個步驟的無色固體狀標題化合物(實施例4-2)(0.45克，48.91%)。1H NMR(300MHz，MeOD)δ 8.59(t，J=0.9Hz，1H)、8.07(dd，J=8.1，0.6Hz，1H)、7.91(dd，J=8.1，2.1Hz，1H)、2.09(s，3H)。
實施例4-3
Figure 105112413-A0202-12-0080-384
1-(5-胺基-2-氯苯基)乙酮(實施例4-3)
將1-(2-氯-5-硝苯基)乙酮(0.5克，2.51毫莫耳)、Fe粉末(0.41克，7.53毫莫耳)、NH4Cl(0.27克，5.02毫莫耳)、iPrOH(20毫升)、及H2O(5毫升)之混合物回流3小時。濾掉不可溶之沉澱物，以CH2Cl2萃取有機層，以無水MgSO4乾燥，並在真空中濃縮以產出黃色油狀產物。藉由矽膠管柱層析法(乙酸乙酯：正己烷=1：2、Rf=0.3)純化獲得之黃色油，以給出標題化合物(實施例4-3)(0.35克，83.33%)。
實施例4-4
Figure 105112413-A0202-12-0080-385
 實施例4-4
N-(3-乙醯基-4-氯苯基)-5-(丙-1-炔-1-基)吡啶醯胺(實施例4-4)
在5-(丙-1-炔-1-基)吡啶羧酸(實施例4-2)(0.4克，2.48毫莫耳)、(1H-苯並三唑-1-基氧)(二甲胺基)-N,N-二甲基甲脒六氟磷酸鹽(HBTU)(1.88克，4.96毫莫耳)、二甲胺基嘧啶(DMAP)(0.91克，7.44毫莫耳)、及CH2Cl2(15毫升)之混合物中，添加1-(5-胺基-2-氯苯基)乙酮(實施例4-3)(0.5克，2.98毫莫耳)。於室溫下攪拌混合物過夜。反應係以水冷卻，並以CH2Cl2萃取。蒐集有機層，以無水MgSO4乾燥，並在真空中濃縮以產出黃色固體狀產物。然後藉由矽膠管柱層析法(乙酸乙酯：正己烷=1：2、Rf=0.65)純化黃色固體，以給出標題化合物(實施例4-4)(0.67克，85.90%)。1H NMR(500MHz，CDCl3)δ 10.00(s，1H)、8.57(d，J=1.5Hz，1H)、8.18(d，J=8Hz，1H)、7.92-7.84(m，3H)、7.41(d，J=8.5Hz，1H)、2.66(s，3H)、2.11(s，3H)。
實施例4-5
Figure 105112413-A0202-12-0081-386
(R,E)-N-(3-(1-((三級丁基亞磺醯基)亞胺基)乙基)-4-氯苯基)-5-(丙-1-炔-1-基)吡啶醯胺(實施例4-5)
將N-(3-乙醯基-4-氯苯基)-5-(丙-1-炔-1-基)吡啶醯胺(實施例4-4)(0.62克，1.99毫莫耳)、(R)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(0.48克，3.98毫莫耳)、Ti(OEt)4(1.4毫升，5.97毫莫耳)、及THF(30毫升)之混合物回流過夜。反應係以水冷卻，並以CH2Cl2萃取。濾掉沉澱物，蒐集有機層，以無水 MgSO4乾燥，並在真空中濃縮以生產黃色油狀產物。藉由矽膠管柱層析法(乙酸乙酯：正己烷=1：2、Rf=0.5)純化獲得之黃色油，以給出標題化合物(實施例4-5)(0.65克，79.27%)。
實施例4-6
Figure 105112413-A0202-12-0082-387
(S)-3-(((R)-三級丁基亞磺醯基)胺基)-3-(2-氯-5-(5-(丙-1-炔-1-基)吡啶醯胺)苯基)丁酸甲酯(實施例4-6)
將溶於THF(15毫升)之二異丙胺(0.95毫升、9.40毫莫耳)溶液於氮氛圍下降溫至-78℃，並在其中添加正-BuLi(在己烷中2.5M，3.8毫升，9.54毫莫耳)。攪拌混合物0.5小時。攪拌後，將溶液降溫至-78℃，並添加乙酸甲酯(0.7毫升，9.24毫莫耳)。於-78℃下繼續攪拌得到之溶液0.5小時。然後在該溶液中添加溶於THF(10毫升)之三異丙氧基氯化鈦(4.88克，18.80毫莫耳)溶液，並繼續攪拌0.5小時。在攪拌後，將溶液降溫至-78℃，並將溶於THF(5毫升)之(R,E)-N-(3-(1-((三級丁基亞磺醯基)亞胺基)乙基)-4-氯苯基)-5-(丙-1-炔-1-基)吡啶醯胺(實施例4-5)(0.65克，1.57毫莫耳)及混合物攪拌1小時。然後反應係以水冷卻，並以CH2Cl2萃取。濾掉沉澱物，蒐集有機層，以無水MgSO4乾燥，並在真空中濃縮以生產黃色固體。藉由矽膠管柱層析法(乙酸乙酯：正己烷=1：1、Rf=0.25)純化獲得之黃色固體，以給出標題化合物(實施例4-6)(0.4克，52.63%)。1H NMR(300MHz，MeOD)δ 8.64(t，J=1.2Hz，1H)、8.31(t，J=2.1Hz，1H)、8.14(m，1H)、7.93(dd，J=8.1，2.1Hz，1H)、7.69-7.65(m，1H)、7.38(d，J= 8.7Hz，1H)、3.72(dd，J=16.5，2.1Hz，1H)、3.58(s，3H)、3.19(d，J=16.5Hz，1H)、2.10(s，3H)、1.96(s，3H)、1.31(d，J=0.9Hz，9H)。
實施例4-7
Figure 105112413-A0202-12-0083-388
(S,Z)-(4-(2-氯-5-(5-(丙-1-炔-1-基)吡啶醯胺)苯基)-1,4-二甲基-6-側氧四氫-2(1H)-亞嘧啶基)胺甲酸(三級丁基)酯(實施例4-7)
在(S)-3-(((R)-三級丁基亞磺醯基)胺基)-3-(2-氯-5-(5-(丙-1-炔-1-基)吡啶醯胺)苯基)丁酸甲酯(實施例4-6)(0.35克，0.71毫莫耳)及MeOH(10毫升)之混合物中，添加氯化氫(在二噁烷中4N，0.4毫升，1.43毫莫耳)。於室溫下攪拌反應混合物1.5小時，並在真空中濃縮以產出用於下個步驟中之無色油狀產物。
在溶於DMF(5毫升)之上述材料的溶液中，添加二異丙基乙胺(DIPEA)(0.21毫升，2.13毫莫耳)、N-[(甲胺基)硫代甲基]-胺甲酸三級丁酯(實施例1-1)(0.2克，1.07毫莫耳)、及1-[3-(二甲胺基)丙基]-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(0.17克，1.07毫莫耳)。於50℃下攪拌得到之溶液過夜。反應係以水冷卻，並以CH2Cl2萃取。蒐集有機層，以無水MgSO4乾燥，並在真空中濃縮以產出黃色固體。藉由矽膠管柱層析法(乙酸乙酯：正己烷=1：2、Rf=0.5)純化黃色產物，以給出標題化合物(實施例4-7)(0.32克，88.89%)。
實施例4
Figure 105112413-A0202-12-0084-389
(S)-N-(4-氯-3-(2-亞胺基-1,4-二甲基-6-側氧六氫嘧啶-4-基)苯基)-5-(丙-1-炔-1-基)吡啶醯胺(實施例4)
在(S,Z)-(4-(2-氯-5-(5-(丙-1-炔-1-基)吡啶醯胺)苯基)-1,4-二甲基-6-側氧四氫-2(1H)-亞嘧啶基)胺甲酸(三級丁基)酯(實施例4-7)(0.3克，0.59毫莫耳)、及CH2Cl2(4毫升)之混合物中，添加三氟乙酸(1毫升)。於室溫下攪拌反應混合物2小時，在真空中濃縮，並藉由矽膠管柱層析法(MeOH：CH2Cl2=1：15、Rf=0.3)純化，以給出標題化合物(0.11克，45.83%)。1H NMR(300MHz，MeOD)δ 8.64(t，J=0.9Hz，1H)、8.14-8.11(m，2H)、7.94(dd，J=8.1，2.1Hz，1H)、7.70(dd，J=8.7，2.4Hz，1H)、7.48(d，J=8.7Hz，1H)、3.91(d，J=16.8Hz，2H)、3.19(s，3H)、2.10(s，3H)、1.90(s，3H)。
實施例5-1
Figure 105112413-A0202-12-0084-390
1-(5-胺基-2-氟苯基)乙酮(實施例5-1)
將1-(2-氟-5-硝苯基)乙酮(0.3克，1.64毫莫耳)、Fe粉末(0.27克，4.92毫莫耳)、NH4Cl(0.17克，3.28毫莫耳)、iPrOH(12.8毫升)、及H2O(3.2毫升)之混合物回流3小時。濾掉不可溶之沉澱物，以CH2Cl2萃取有機 層，以無水MgSO4乾燥，並在真空中濃縮以產出黃色油狀產物。藉由矽膠管柱層析法(乙酸乙酯：正己烷=1：2、Rf=0.3)純化獲得之黃色油，以給出標題化合物(0.19克，76%)。
實施例5-2
Figure 105112413-A0202-12-0085-391
N-(3-乙醯基-4-氟苯基)-5-(丙-1-炔-1-基)吡啶醯胺(實施例5-2)
在5-(丙-1炔-1基)吡啶羧酸(0.5克，3.11毫莫耳)、HBTU(2.36克，6.22毫莫耳)、二甲胺基嘧啶(DMAP)(1.14克，9.33毫莫耳)、及CH2Cl2(15毫升)之混合物中，添加1-(5-胺基-2-氟苯基)乙酮(實施例5-1)(0.58克，3.73毫莫耳)。於室溫下攪拌混合物過夜。反應係以水冷卻，並以CH2Cl2萃取。蒐集有機層，以無水MgSO4乾燥，並在真空中濃縮以產出黃色固體產物。藉由矽膠管柱層析法(乙酸乙酯：正己烷=1：2、Rf=0.65)純化獲得之黃色固體，以給出標題化合物(實施例5-2)(0.77克，83.70%)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ 10.03(s，1H)、8.57(t，J=1.2Hz，1H)、8.28-8.22(m，1H)、8.18(dd，J=8.1，0.9Hz，1H)、7.95(dd，J=6，3Hz，1H)、7.85(dd，J=8.1，2.1Hz，1H)、7.25-7.14(m，1H)、2.66(d，J=4.8Hz，3H)、2.11(s，3H)。
實施例5-3
Figure 105112413-A0202-12-0085-392
 實施例5-3
(R,E)-N-(3-(1-((三級丁基亞磺醯基)亞胺基)乙基)-4-氟苯基)-5-(丙-1-炔-1-基)吡啶醯胺(實施例5-3)
將N-(3-乙醯基-4-氟苯基)-5-(丙-1-炔-1-基)吡啶醯胺(實施例5-2)(0.75克，2.53毫莫耳)、(R)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(0.61克，5.06毫莫耳)、Ti(OEt)4(1.73毫升，7.59毫莫耳)、及THF(40毫升)之混合物回流過夜。反應係以水冷卻，並以CH2Cl2萃取。濾掉沉澱物，蒐集有機層，以無水MgSO4乾燥，並在真空中濃縮以得到黃色油狀產物。藉由矽膠管柱層析法(乙酸乙酯：正己烷=1：2、Rf=0.5)純化獲得之產物，以給出標題化合物(實施例5-3)(0.82克，81.19%)。
實施例5-4
Figure 105112413-A0202-12-0086-393
(S)-3-(((R)-三級丁基亞磺醯基)胺基)-3-(2-氟-5-(5-(丙-1-炔-1-基)吡啶醯胺)苯基)丁酸甲酯(實施例5-4)
將溶於THF(5毫升)之二異丙胺(1.2毫升，12.06毫莫耳)溶液，於氮氛圍下降溫至-78℃，並在其中添加正-BuLi(在己烷中2.5M，4.8毫升，12.06毫莫耳)。攪拌混合物0.5小時。在攪拌後，將溶液降溫至-78℃，並添加乙酸甲酯(0.9毫升，11.83毫莫耳)。於-78℃下繼續攪拌得到之溶液0.5小時。然後在此溶液中添加溶於THF(15毫升)之三異丙氧基氯化鈦(6.26克，24.06毫莫耳)溶液，並攪拌0.5小時。然後將溶液降溫至-78℃，並將溶於THF(5毫升)之(R,E)-N-(3-(1-((三級丁基亞磺醯基)亞胺基)乙基)-4-氟苯 基)-5-(丙-1-炔-1-基)吡啶醯胺(實施例5-3)(0.8克，2.01毫莫耳)及混合物攪拌1小時。反應係以水冷卻，並以CH2Cl2萃取。濾掉沉澱物，蒐集有機層，以無水MgSO4乾燥，並在真空中濃縮以產出黃色固體。藉由矽膠管柱層析法(乙酸乙酯：正己烷=1：1、Rf=0.25)純化獲得之黃色固體，以給出標題化合物(實施例5-4)(0.52克，54.74%)。
實施例5-5
Figure 105112413-A0202-12-0087-394
(S,Z)-(4-(2-氟-5-(5-(丙-1-炔-1-基)吡啶醯胺)苯基)-1,4-二甲基-6-側氧四氫-2(1H)-亞嘧啶基)胺甲酸(三級丁基)酯(實施例5-5)
在(S)-3-(((R)-三級丁基亞磺醯基)胺基)-3-(2-氟-5-(5-(丙-1-炔-1-基)吡啶醯胺)苯基)丁酸甲酯(實施例5-4)(0.5克，1.06毫莫耳)及MeOH(15毫升)之混合物中，添加氯化氫(在二噁烷中4N，0.53毫升，2.12毫莫耳)。在室溫下攪拌反應混合物1.5小時，然後在真空中濃縮以產出用於下個步驟的無色油狀產物。
在溶於DMF(5毫升)之上述材料的溶液中，添加二異丙基乙胺(DIPEA)(0.32毫升，3.18毫莫耳)、N-[(甲胺基)硫代甲基]-胺甲酸三級丁酯(實施例1-1)(0.4克，2.12毫莫耳)、及1-[3-(二甲胺基)丙基]-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(0.33克，2.12毫莫耳)。於50℃下攪拌得到之溶液過夜。反應係以水冷卻，並以CH2Cl2萃取。蒐集有機層，以無水MgSO4乾燥，並在真空中濃縮以產出黃色固體。藉由矽膠管柱層析法(乙酸乙酯：正己烷=1：2、 Rf=0.5)純化獲得之黃色固體，以給出標題化合物(實施例5-5)(0.4克，76.92%)。
實施例5
Figure 105112413-A0202-12-0088-395
(S)-N-(4-氟-3-(2-亞胺基-1,4-二甲基-6-側氧六氫嘧啶-4-基)苯基)-5-(丙-1-炔-1-基)吡啶醯胺(實施例5)
在(S,Z)-(4-(2-氟-5-(5-(丙-1-炔-1-基)吡啶醯胺)苯基)-1,4-二甲基-6-側氧四氫-2(1H)-亞嘧啶基)胺甲酸(三級丁基)酯(實施例5-5)(0.35克，0.71毫莫耳)及CH2Cl2(4毫升)之混合物中，添加三氟乙酸(TFA)(1毫升)。於室溫下攪拌反應混合物2小時，在真空中濃縮，並藉由矽膠管柱層析法(MeOH：CH2Cl2=1：15、Rf=0.3)純化，以給出標題化合物(實施例5)(0.15克，53.57%)。1H NMR(300MHz，MeOD)δ ppm 8.65(t，J=1.2Hz，1H)、8.12(dd，J=8.1，0.9Hz，1H)、7.98-7.93(m，2H)、7.71-7.66(m，1H)、7.21(dd，J=12，9Hz，1H)、3.50(d，J=16.5Hz，1H)、3.18(m，4H)、2.10(s，3H)、1.80(s，3H)。
實施例14-1
Figure 105112413-A0202-12-0088-396
2,8-二苯並(b,d)呋喃(實施例14-1)
在二苯並(b,d)呋喃(4克，23.8毫莫耳)及CH2Cl2(100毫升)之混合物中，於0℃、氮氛圍下添加溴(3.66毫升，71.4毫莫耳)。於室溫下攪拌反應混合物過夜。蒐集有機層，並在真空中濃縮，以產出固體產物。使用CH2Cl2來再結晶獲得之產物，以給出白色固體狀之化合物(實施例14-1)(5.85克，75.7%)。
實施例14-2
Figure 105112413-A0202-12-0089-397
2-溴-8-(丙-1-炔-1基)二苯並(b,d)呋喃(實施例14-2)
在(實施例14-1)(4.00克，12.3毫莫耳)、PPh3(0.03克，0.12毫莫耳)、Cul(0.47克，2.46毫莫耳)、PdCl2(PPh3)2(0.1克，0.12毫莫耳)、及三乙胺(80毫升)之混合物中，於室溫下添加三甲基(丙-1-炔-1-基)矽烷(2.1毫升，18.5毫莫耳)。於20分鐘內，在得到之溶液中添加四丁基氟化銨(TBAF)溶液(在THF中1M，28.5毫升)。於80℃下攪拌混合物過夜。反應係以水冷卻、以CH2Cl2萃取。蒐集有機層，以無水MgSO4乾燥，並在真空中濃縮，以產出黑色油狀產物。然後藉由矽膠管柱層析法(100%正己烷、Rf=0.45)純化獲得之產物，以給出標題化合物(實施例14-2)(1.05克，29.9%)。
實施例14-3
Figure 105112413-A0202-12-0089-398
1-(8(丙-1-炔-1基)二苯並(b,d)呋喃-2-基)乙酮(實施例14-3)
在(實施例14-2)(1.00克，3.51毫莫耳)、Pd(PPh3)4(0.41克，0.35毫莫耳)、及N-甲基吡咯啶酮(NMP)(4.00毫升)之混合物中，於室溫下添加三丁基(1-乙氧乙烯基)錫(1.52毫升，4.21毫莫耳)。於130℃、氮氛圍下攪拌混合物1小時。然後反應混合物係以4N HCl(2.50毫升)冷卻、並以CH2Cl2萃取。蒐集有機層，以無水MgSO4乾燥，並在真空中濃縮，以產出黑色油狀產物。然後藉由矽膠管柱層析法(乙酸乙酯：正己烷=1：15、Rf=0.3)純化獲得之產物，以給出標題化合物(實施例14-3)(0.53克，60.92%)。
實施例14-4
Figure 105112413-A0202-12-0090-399
(R,E)-2-甲基-N-(1-(8(丙-1-炔-1基)二苯並(b,d)呋喃-2-基)亞乙基)丙烷-2-磺醯胺(實施例14-4)
將(實施例14-3)(0.75克，3.02毫莫耳)、(R)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(0.73克，6.04毫莫耳)、Ti(OEt)4(2.1毫升，9.06毫莫耳)、及THF(80毫升)之混合物回流過夜。反應係以水冷卻，並以CH2Cl2萃取。濾掉沉澱物，蒐集有機層，以無水MgSO4乾燥，並在真空中濃縮，以得到黃色油狀產物。然後藉由矽膠管柱層析法(乙酸乙酯：正己烷=1：2、Rf=0.5)純化獲得之產物，以給出標題化合物(實施例14-4)(0.62克，58.5%)。
實施例14-5
Figure 105112413-A0202-12-0091-400
(S)-3-((R)-1,1-二甲基乙基亞磺醯胺基)-3-(8-(丙-1-炔-1-基)二苯並(b,d)呋喃-2-基)丁酸甲酯(實施例14-5)
在溶於THF(3毫升)之二異丙胺(1.5毫升，13.7毫莫耳)溶液中，於-78℃、氮氛圍下添加正-Buli(在己烷中2.5M，5.48毫升，13.7毫莫耳)。攪拌混合物0.5小時。在攪拌後，將溶液降溫至-78℃，並添加乙酸甲酯(1.1毫升，13.7毫莫耳)。在-78℃下繼續攪拌得到之溶液0.5小時。然後在此溶液中添加溶於THF(10毫升)之三異丙氧基氯化鈦(4.74克，18.2毫莫耳)溶液並繼續攪拌0.5小時。將溶液降溫至-78℃，並添加溶於THF(3毫升)之(實施例14-4)(0.8克，2.28毫莫耳)，且攪拌該混合物1小時。在1小時後，反應係以水冷卻、並以CH2Cl2萃取。濾掉沉澱物，蒐集有機層，以無水MgSO4乾燥，並在真空中濃縮，以得到黃色油狀產物。然後藉由矽膠管柱層析法(乙酸乙酯：正己烷=1：2、Rf=0.25)純化獲得之黃色產物，以給出標題化合物(實施例14-5)(0.45克，49.5%)。1H NMR(500MHz，CDCl3)δ 7.96(s，2H)、7.52-7.47(m，4H)、5.65(s，1H)、3.61(s，3H)、2.09(s，3H)、2.04(s，2H)、1.84(s，3H)、1.34(s，9H)。
實施例14-6
Figure 105112413-A0202-12-0091-401
(S)-(1,4-二甲基-6-側氧-4-(8-(丙-1-炔-1-基)二苯並b,d]呋喃2-基)四氫-2(1H)-亞嘧啶基)胺甲酸(三級丁基)酯(實施例14-6)
在(實施例14-5)(0.5克，1.17毫莫耳)及MeOH(20.0毫升)之混合物中，添加氯化氫(二噁烷中4N，0.6毫升，2.35毫莫耳)。於室溫下攪拌反應混合物1.5小時，並在真空中濃縮以產出用於下個步驟的無色油狀產物。
在溶於DMF(5毫升)之上述材料的溶液中，添加二異丙基乙胺(DIPEA)(0.4毫升，3.51毫莫耳)、N-[(甲胺基)硫代甲基]-胺甲酸三級丁酯(實施例1-1)(0.45克，2.35毫莫耳)、及1-[3-(二甲胺基)丙基]-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(EDCl)(0.36克，2.35毫莫耳)。於50℃下攪拌得到之溶液過夜。反應係以水冷卻、並以CH2Cl2萃取。蒐集有機層，以無水MgSO4乾燥，並在真空中濃縮，以得到白色固體。然後藉由矽膠管柱層析法(乙酸乙酯：正己烷=1：2、Rf=0.4)純化獲得之產物，以給出標題化合物(實施例14-6)(0.27克，51.92%)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ 8.01(s，1H)、7.87(d，J=2.1Hz，1H)、7.59-7.42(m，4H)、3.36(d，J=15.5Hz，1H)、3.25(s，3H)、3.00(d，J=16.2Hz，1H)、2.13(s，3H)、1.80(s，3H)、1.62(s，9H)。
實施例14
Figure 105112413-A0202-12-0092-402
(S)-2-亞胺基-3,6-二甲基-6-(8-(丙-1-炔-1-基)二苯並[b,d]呋喃-2-基)四氫嘧啶 -4(1H)-酮(實施例14)
在(實施例14-6)(0.45克，1.01毫莫耳)、及CH2Cl2(8毫升)之混合物中，添加三氟乙酸(TFA)(2毫升)。於室溫下攪拌反應混合物2小時，在真空中濃縮，並藉由矽膠管柱層析法(MeOH：CH2Cl2=1：30、Rf=0.2)純化，以給出(實施例14)(0.22克，66.7%)。1H NMR(300MHz，MeOD)δ ppm 8.13(d，J=1.8Hz，1H)、8.11(d，J=8.1Hz，1H)、7.68-7.51(m，4H)、3.63(d，J=16.5Hz，1H)、3.23(d，J=16.2Hz，1H)、3.21(s，3H)、2.09(s，3H)、1.83(s，3H)。ESIMS：m/z 346.15(M+H)+；HPLC：99.1%。
實施例24-1
Figure 105112413-A0202-12-0093-403
3-溴-5-(丙-1-炔-1基)吡啶(實施例24-1)
在3,5-二溴吡啶(0.5克，2.12毫莫耳)、PPh3(0.03克，0.11毫莫耳)、CuI(0.02克，0.11毫莫耳)、PdCl2(PPh3)2(0.7克，0.11毫莫耳)、及三乙胺(15毫升)之混合物中，於室溫下添加三甲基(丙-1-炔-1-基)矽烷(0.24毫升，2.12毫莫耳)。在20分鐘內，在得到之混合物中添加TBAF溶液(在四氫呋喃中1M，2.7毫升)。於室溫下攪拌混合物3小時。反應係以水冷卻，並以CH2Cl2萃取。蒐集有機層，以無水MgSO4乾燥，並在真空中濃縮，以產出黑色油狀產物。藉由矽膠管柱層析法(乙酸乙酯：正己烷=1：15、Rf=0.6)純化獲得之黑色油，以給出標題化合物(實施例24-1)(0.35克，84.6%)。1H NMR(500MHz，CDCl3)δ 8.53(s，1H)、8.50(s，1H)、7.79(t，J =1.5Hz，1H)、2.06(s，3H)。
實施例24-2
Figure 105112413-A0202-12-0094-404
(E)-4-(5-(丙-1-炔-1基)吡啶-3基)丁-3-烯-2-酮(實施例24-2)
在3-溴-5-(丙-1-炔-1基)吡啶(實施例24-1)(0.3克，1.53毫莫耳)、Pd2(dba)3(0.15克，0.16毫莫耳)、四氟硼酸三-三級丁基膦(0.02克，0.08毫莫耳)、三乙胺(0.5毫升，4.74毫莫耳)、NaHCO3(0.4克，4.74毫莫耳)、及二甲基甲醯胺(5毫升)之混合物中，添加甲基乙烯基酮(0.25毫升，3.16毫莫耳)。於100℃下攪拌反應混合物3小時。反應係以水冷卻，並以CH2Cl2萃取。蒐集有機層，以無水MgSO4乾燥，並在真空中濃縮，以得到黑色油狀產物。藉由矽膠管柱層析法(乙酸乙酯：正己烷=1：2、Rf=0.2)純化獲得之產物，以給出標題化合物(實施例24-2)(0.15克，53.57%)。1H NMR(500MHz，CDCl3)δ 8.63(s，1H)、8.59(s，1H)、7.89(s，1H)、7.44(d，J=16.5Hz，1H)、6.78(d，J=16Hz，1H)、2.39(s，3H)、2.09(s，3H)。
實施例24-3
Figure 105112413-A0202-12-0094-405
(R)-2-甲基-N-((2E,3E)-4-(5-(丙-1-炔-1-基)吡啶-3-基)亞丁-3-烯-2-基)丙烷-2-亞磺醯胺(實施例24-3)
將(E)-4-(5-(丙-1-炔-1基)吡啶-3基)丁-3-烯-2-酮(實施例24- 2)(1.7克，9.19毫莫耳)、(R)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(1.3克，18.38毫莫耳)、Ti(OEt)4(3.5毫升，27.57毫莫耳)、及四氫呋喃(50毫升)之混合物回流過夜。反應係以水冷卻，並以CH2Cl2萃取。濾掉沉澱物，蒐集有機層，並以無水MgSO4乾燥，然後在真空中濃縮以產出黃色油狀產物。然後藉由矽膠管柱層析法(乙酸乙酯：正己烷=1：2、Rf=0.5)純化獲得之產物，以給出標題化合物(實施例24-3)(2.33克，87.92%)。
實施例24-4
Figure 105112413-A0202-12-0095-406
(S,E)-3-(((R)-三級丁基亞磺醯基)胺基)-3-甲基-5-(5-(丙-1-炔-1-基)吡啶-3-基)戊-4-烯酸甲酯(實施例24-4)
將溶於THF(2毫升)之二異丙基胺(0.42毫升，4.14毫莫耳)溶液於氮氛圍下降溫至-78℃，並於其中添加正-BuLi(在己烷中2.5M，1.6毫升，4.14毫莫耳)。攪拌混合物0.5小時。攪拌後，將溶液降溫至-78℃，並添加乙酸甲酯(0.3毫升，4.10毫莫耳)。於-78℃下繼續攪拌得到之溶液0.5小時。然後在本溶液中添加溶於THF(10毫升)之三異丙氧基氯化鈦(1.8克，6.9毫莫耳)溶液並繼續攪拌0.5小時。將溶液降溫至-78℃，且將溶於THF(2毫升)之(R)-2-甲基-N-((2E,3E)-4-(5-(丙-1-炔-1-基)吡啶-3-基)亞丁-3-烯-2-基)丙烷-2-亞磺醯胺(實施例24-3)(0.2克，0.69毫莫耳)及混合物攪拌1小時。反應係以水冷卻，並以CH2Cl2萃取。濾掉沉澱物，蒐集有機層，並以無水MgSO4乾燥，然後在真空中濃縮以產出黃色固體。然後藉由矽膠管柱層析法(乙酸乙酯：正己烷=1：2、Rf=0.25)純化獲得之固體，以給出標題化合 物(實施例24-4)(0.12克，48%)。1H NMR(300MHz，MeOD)δ 8.47(d，J=1.8Hz，1H)、8.39(d，J=1.8Hz，1H)、7.88(d，J=1.8Hz，1H)、6.65(d，J=16.2Hz，1H)、6.53(d，J=16.2Hz，1H)、3.68(s，3H)、2.81(s，2H)、2.08(s，3H)、1.65(s，3H)、1.27(s，9H)。
實施例24-5
Figure 105112413-A0202-12-0096-407
(S)-(1,4-二甲基-6-側氧-4-((E)-2-(5-(丙-1-炔-1-基)吡啶-3-基)乙烯基)四氫-2(1H)-亞嘧啶基)胺甲酸(三級丁基)酯(實施例24-5)
在(S,E)-3-(((R)-三級丁基亞磺醯基)胺基)-3-甲基-5-(5-(丙-1-炔-1-基)吡啶-3-基)戊-4-烯酸甲酯(實施例24-4)(0.5克，1.38毫莫耳)及MeOH(15毫升)之混合物中，添加氯化氫(在二噁烷中4N，0.7毫升，2.76毫莫耳)。於室溫下攪拌反應混合物1.5小時，並在真空中濃縮以得到用於下個步驟之無色油狀產物。
在溶於DMF(5毫升)之上述材料的溶液中，添加DIPEA(0.42毫升，4.14毫莫耳)、N-[(甲胺基)硫代甲基]-胺甲酸三級丁酯(實施例1-1)(0.31克，1.66毫莫耳)、及1-[3-(二甲胺基)丙基]-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(0.26克，1.66毫莫耳)。於50℃下攪拌得到之溶液過夜。反應係以水冷卻，並以CH2Cl2萃取。蒐集有機層，以無水MgSO4乾燥，並在真空中濃縮，以產出黃色固體。藉由矽膠管柱層析法(乙酸乙酯：正己烷=2：1、Rf=0.35)純化獲得之黃色固體，以給出標題化合物(實施例24-5)(0.44克，83.02%)。1H NMR(500MHz，CDCl3)δ 10.05(s，1H)、8.48(d，J=2Hz，1H)、 8.41(d，J=2Hz，1H)、7.64(s，1H)、6.42(d，J=16Hz，1H)、6.17(d，J=16Hz，1H)、3.27(s，3H)、2.86(d，J=16Hz，1H)、2.76(d，J=16Hz，1H)、2.06(s，3H)、1.53(s，12H)。
實施例24
Figure 105112413-A0202-12-0097-408
(S,E)-2-亞胺基-3,6-二甲基-6-(2-(5-(丙-1-炔-1-基)吡啶-3-基)乙烯基)四氫嘧啶-4(1H)-酮(實施例24)
在(S)-(1,4-二甲基-6-側氧-4-((E)-2-(5-(丙-1-炔-1-基)吡啶-3-基)乙烯基)四氫-2(1H)-亞嘧啶基)胺甲酸三級丁酯(實施例24-5)(0.25克，0.65毫莫耳)及CH2Cl2(4毫升)之混合物中，添加三氟乙酸(TFA)(1毫升)。於室溫下攪拌反應混合物2小時，在真空中濃縮，並藉由矽膠管柱層析法(乙酸乙酯：正己烷=2：1、Rf=0.2)純化，以給出標題化合物(實施例24)(0.12克，66.67%)。1H NMR(300MHz，MeOD)δ 8.42(d，J=19.2Hz，2H)、7.89(t，J=1.8Hz，1H)、6.57(d，J=16.2Hz，1H)、6.47(d，J=16.2Hz，1H)、3.26(s，3H)、3.04(q，J=16.5Hz，2H)、2.05(s，3H)、1.57(s，3H)。
實施例50
Figure 105112413-A0202-12-0097-409
(S)-6-(7-(丁-2-炔-1-基氧)苯並呋喃-2-基)-2-亞胺基-3,6-二甲基四氫嘧啶- 4(1H)-酮(實施例50)
在溶於無水CH2Cl2(5毫升)之(S)-6-(7-羥基苯並呋喃-2-基)-2-亞胺基-3,6-二甲基四氫嘧啶-4(1H)-酮(實施例2)(260毫克，0.95毫莫耳)溶液中，添加三乙胺(288毫克，2.85毫莫耳)。將溶液降溫至0~10℃，並1-溴-2-丁炔(190毫克，1.43毫莫耳)緩緩處理。於0~10℃下攪拌得到之溶液10分鐘。將反應混合物加熱至室溫，然後攪拌17小時。以水稀釋反應混合物，並以乙酸乙酯(3x)萃取。以水及鹽水清洗合併之有機萃取物，並以MgSO4乾燥，過濾並濃縮。藉由矽膠管柱層析(梯度沖提15：1至9：1之CH2Cl2：MeOH)純化粗產物，以給出粉末狀淺黃色固體之標題化合物(實施例50)(65毫克，21%產率)。
實施例71-1
Figure 105112413-A0202-12-0098-410
2-氯-4-氟-N-甲氧基-N-甲基-5-硝苯甲醯胺(實施例71-1)
在溶於CH2Cl2(500毫升)之2-氯-4-氟-5-硝苯甲酸(20.0克，91.3毫莫耳)溶液中，添加DIPEA(22.6毫升，137.0毫莫耳)、N,O-二甲基羥胺鹽酸鹽(10.7克，109.6毫莫耳)及HATU(52.1克，137.0毫莫耳)。於室溫下攪拌反應混合物過夜。然後以H2O(500毫升)稀釋混合物，並分離有機層。以CH2Cl2(150毫升x2)萃取水層，以鹽水清洗合併之有機層，然後以無水Na2SO4乾燥並濃縮。以矽膠(石油醚/乙酸乙酯=30/1~10/1)純化殘留物，以給出黃色固體狀之標題化合物(實施例71-1)(20.0克，83.3%)。
實施例71-2
Figure 105112413-A0202-12-0099-411
4-((4-溴苯基)硫基)-2-氯-N-甲氧基-N-甲基-5-硝苯甲醯胺(實施例71-2)
於-78℃、氬氛圍下，在溶於MeOH(500毫升)之4-溴苯硫酚(14.5克，76.7毫莫耳)溶液中，添加NaH(4.6克，115.1毫莫耳，60%油分散液)，並攪拌混合物30分鐘。然後逐滴添加溶於MeOH(100毫升)之2-氯-4-氟-N-甲氧基-N-甲基-5-硝苯甲醯胺(實施例71-1)(20.0克，76.3毫莫耳)溶液。添加後，於-78℃、氬氛圍下攪拌得到之混合物3小時。反應混合物係以H2O(500毫升)冷卻、並以乙酸乙酯(300毫升x3)萃取。以鹽水清洗合併之有機層，並以無水Na2SO4乾燥及濃縮，以給出黃色固體狀之標題化合物(實施例71-2)(30.0克，90.9%)。LCMS：[M+1]：431.0。
實施例71-3
Figure 105112413-A0202-12-0099-412
5-胺基-4-((4-溴苯基)硫基)-2-氯-N-甲氧基-N-甲基苯甲醯胺(實施例71-3)
在溶於AcOH(1000毫升)之4-((4-溴苯基)硫基)-2-氯-N-甲氧基-N-甲基-5-硝苯甲醯胺(實施例71-2)(30.0克，69.5毫莫耳)溶液中，添加Zn粉塵(22.6克，347.5毫莫耳)，於室溫下攪拌混合物過夜。然後以H2O(1500毫升)稀釋得到之混合物，以EA(500毫升x3)萃取。以鹽水清洗合併之有機層，以無水Na2SO4乾燥及濃縮。以矽膠(石油醚/乙酸乙酯=5/1~3/1，含有0.5%(體積/體積)NH4OH)純化殘留物，以給出淺棕色絮狀固體之標題化合物(實施例71-3)(20.0克，71.6%)。LCMS：[M+1]：401.0。
實施例71-4
Figure 105112413-A0202-12-0100-413
8-溴-3-氯-N-甲氧基-N-甲基二苯並[b,d]噻吩-2-羧醯胺(實施例71-4)
將5-胺基-4-((4-溴苯基)硫基)-2-氯-N-甲氧基-N-甲基苯甲醯胺(實施例71-3)(20.0克，49.8毫莫耳)溶解在HCl(6M，400毫升)中。將反應混合物降溫至低於5℃。保持溫度低於5℃，在反應混合物中緩緩添加亞硝酸鈉(5.2克，74.7毫莫耳)。添加後，於低於5℃下攪拌反應混合物30分鐘。然後，在其中添加四氟硼酸鈉(10.9克，99.6毫莫耳)，並於低於5℃下繼續攪拌30分鐘。於35℃~40℃下，添加上述重氮化溶液(diazotized solution)至溶於硫酸(0.1M，800毫升)中之氧化銅(I)(14.2克，99.6毫莫耳)經攪拌溶液中。攪拌反應混合物50分鐘。添加乙酸乙酯至反應混合物中，並濾掉無機化合物。然後藉由乙酸乙酯(400毫升x3)萃取濾液。以水清洗有機層，並接著以鹽水清洗，然後在真空下濃縮以給出棕色固體。經由矽膠(石油醚/乙酸乙酯=5/1)純化該棕色固體，以給出淺黃色固體狀之標題化合物(實施例71-4)(1.1克，5.7%)。LCMS：[M+1]：384.0。
實施例71-5
Figure 105112413-A0202-12-0100-414
1-(8-溴-3-氯二苯並[b,d]噻吩-2-基)乙酮(實施例71-5)
在溶於THF(60毫升)之8-溴-3-氯-N-甲氧基-N-甲基二苯並[b,d]噻吩-2-羧醯胺(實施例71-4)(1.1克，2.86毫莫耳)溶液中，於0℃下逐 滴添加MeMgBr(1.1毫升，3.43毫莫耳，在THF中3M)。添加後，於室溫下攪拌混合物4小時。然後反應混合物係以飽和水性NH4Cl(200毫升)溶液冷卻，並以乙酸乙酯(150毫升x2)萃取。以鹽水清洗合併之有機層，然後以無水Na2SO4乾燥並濃縮，以給出土黃色固體狀之標題化合物(實施例71-5)(900毫克，92.8%)。
實施例71-6
Figure 105112413-A0202-12-0101-415
1-(3-氯-8-(丙-1-炔-1-基)二苯並[b,d]噻吩-2-基)乙酮(實施例71-6)
在1-(8-溴-3-氯二苯並[b,d]噻吩-2-基)乙酮(實施例71-5)(760毫克，2.249毫莫耳)及溶於二噁烷(20毫升)之Pd(PPh3)4(260毫克，0.2249毫莫耳)的混合物中，於室溫下添加三丁基(丙-1-炔基)錫烷(891毫克，2.698毫莫耳)。於110℃、N2下攪拌混合物過夜。反應係以水冷卻，並以CH2Cl2(30毫升x2)萃取。蒐集有機層，並以無水MgSO4乾燥，然後在真空中濃縮以產出黑色油狀產物。藉由矽膠管柱層析法(100%正己烷、Rf=0.45)純化該黑色油狀產物，以給出標題化合物(實施例71-6)(520毫克，77.6%)。
實施例71-7
Figure 105112413-A0202-12-0101-416
(R,E)-N-(1-(3-氯-8-(丙-1-炔-1-基)二苯並[b,d]噻吩-2-基)亞乙基)-2-甲基丙烷 -2-亞磺醯胺(實施例71-7)
將1-(3-氯-8-(丙-1-炔-1-基)二苯並[b,d]噻吩-2-基)乙酮(實施例71-6)(520毫克，1.745毫莫耳)、(R)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(317毫克，2.617毫莫耳)、Ti(OEt)4(796毫克，3.49毫莫耳)及THF(5毫升)之混合物回流過夜。反應混合物係以水冷卻，並以CH2Cl2(20毫升x3)萃取。濾掉沉澱物，並蒐集有機層，以無水MgSO4乾燥，在真空中濃縮以產出黃色油狀粗產物。藉由矽膠管柱層析法(乙酸乙酯：正己烷=1：2、Rf=0.5)純化該黃色油狀粗產物，以給出標題化合物(實施例71-7)(480毫克，68.8%)。
實施例71-8
Figure 105112413-A0202-12-0102-417
(S)-3-(((R)-三級丁基亞磺醯基)胺基)-3-(3-氯-8-(丙-1-炔-1-基)二苯並[b,d]噻吩-2-基)丁酸甲酯(實施例71-8)
於-78℃、氮氛圍下，在溶於THF(6毫升)之LDA(6毫升，12毫莫耳，2M)溶液中，添加乙酸甲酯(888毫克，12毫莫耳)。於-78℃下，繼續攪拌得到之溶液0.5小時。在此反應混合物中添加三異丙氧基氯化鈦(12毫升，12毫莫耳，在THF中1M)，並繼續攪拌0.5小時。然後將得到之混合物降溫至-78℃，並添加溶於THF(4毫升)中之(R,E)-N-(1-(3-氯-8-(丙-1-炔-1-基)二苯並[b,d]噻吩-2-基)亞乙基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(實施例71-7)(480毫克，1.197毫莫耳)，攪拌該混合物1小時。反應混合物係以飽和NH4Cl溶液冷卻，並以CH2Cl2萃取。濾掉沉澱物，並蒐集有機層，以無水MgSO4乾 燥，在真空中濃縮以給出黃色固體。藉由製備性薄層層析法(preparative-thin layer chromatography，prep-TLC)(乙酸乙酯：正己烷=1：2、Rf=0.25)純化該黃色固體，以給出標題化合物(實施例71-8)(310毫克，54.5%)。
實施例71-9
Figure 105112413-A0202-12-0103-418
(S)-(4-(3-氯-8-(丙-1-炔-1-基)二苯並[b,d]噻吩-2-基)-1,4-二甲基-6-側氧-1,4,5,6-四氫嘧啶-2-基)胺甲酸(三級丁基)酯(實施例71-9)
在(S)-3-(((R)-三級丁基亞磺醯基)胺基)-3-(3-氯-8-(丙-1-炔-1-基)二苯並[b,d]噻吩-2-基)丁酸甲酯(實施例71-8)(310毫克，0.653毫莫耳)及乙腈(4毫升)之混合物中，添加氯化氫(在二噁烷中4N，2毫升，4毫莫耳)。於室溫下攪拌反應混合物1小時，並在真空中濃縮以產出無色油狀中間物((S)-3-胺基-3-(3-氯8-(丙-1-炔基)二苯並[b,d]噻吩-2-基)丁酸甲酯鹽酸鹽)，該中間物係用於下個步驟中。在溶於DMF(4毫升)之上述中間物溶液中，添加DIPEA(253毫克，1.958毫莫耳)、N-[(甲胺基)硫代甲基]-胺甲酸三級丁酯(實施例1-1)(248毫克，1.305毫莫耳)、及EDCI HCl(251毫克，1.305毫莫耳)。於50℃下攪拌得到之溶液過夜。以水(10毫升)冷卻反應混合物，並以CH2Cl2(20毫升x3)萃取。蒐集有機層，並以無水MgSO4乾燥，在真空中濃縮以產出白色固體粗產物。藉由製備性薄層層析法(乙酸乙酯：正己烷=1：3、Rf=0.4)純化該白色固體粗產物，以給出標題化合物(實施例71-9)(290毫克，89.7%)。
實施例71
Figure 105112413-A0202-12-0104-244
(S)-2-胺基-6-(3-氯-8-(丙-1-炔-1-基)二苯並[b,d]噻吩-2-基)-3,6-二甲基-5,6-二氫嘧啶-4(3H)-酮(實施例71)
在(S)-(4-(3-氯-8-(丙-1-炔-1-基)二苯並[b,d]噻吩-2-基)-1,4-二甲基-6-側氧-1,4,5,6-四氫嘧啶-2-基)胺甲酸(三級丁基)酯(實施例71-9)(290毫克，0.586毫莫耳)及乙腈(4毫升)之混合物中，添加HCl/二噁烷(2毫升，4M)。於室溫下攪拌反應混合物4小時。濃縮混合物，並藉由高效液相層析法(preparative-high performance liquid chromatography，prep-HPLC)純化，以給出標題化合物(實施例71)(142毫克，61%)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ ppm 8.32(s，1H)、8.07(s，1H)、7.77(s，1H)、7.65(d，J=8.4Hz，1H)、7.39(d，J=9.2Hz，1H)、3.48(d，J=18.2Hz，1H)、3.10(s，3H)、3.03(d，J=19.1Hz，1H)、2.03(s，3H)、1.73(s，3H)。
實施例79
Figure 105112413-A0202-12-0104-245
(S)-2-胺基-6-(5,5-二氧代-8-(丙-1-炔-1-基)二苯並[b,d]噻吩-2-基)-3,6-二甲基-5,6-二氫嘧啶-4(3H)-酮(實施例79)
在溶於乙腈(3毫升)之(S)-2-亞胺基-3,6-二甲基-6-(8-(丙-1- 炔-1-基)二苯並[b,d]噻吩-2-基)四氫嘧啶-4(1H)-酮(實施例1)(20毫克，0.0554毫莫耳)的經攪拌溶液中，添加溶於CH2Cl2(5.0毫升)之m-CPBA(28.7毫克，0.1662毫莫耳)溶液。於室溫下持續攪拌混合物過夜(16小時)。透過減壓蒸發得到之混合物，並經由製備性高效液相層析法純化固體殘留物，以給出白色固體狀之標題化合物(實施例79)(10毫克，產率46%)。LCMS：[M+1]：394.1。1H NMR(400MHz，DMSO)：δ 8.37-8.31(m，2H)、7.95-7.93(m，2H)、7.80(m，1H)、7.623-7.603(m，1H)、3.04(s，3H)、2.943-2.932(m，2H)、2.15(s，3H)、1.43(s，3H)。
實施例80
Figure 105112413-A0202-12-0105-246
(6S)-2-胺基-3,6-二甲基-6-(5-氧代-8-(丙-1-炔-1-基)二苯並[b,d]噻吩-2-基)-5,6-二氫嘧啶-4(3H)-酮(實施例80)
在溶於乙腈(3毫升)之(S)-2-亞胺基-3,6-二甲基-6-(8-(丙-1-炔-1-基)二苯並[b,d]噻吩-2-基)四氫嘧啶-4(1H)-酮(實施例1)(20毫克，0.0554毫莫耳)的經攪拌溶液中，添加溶於CH2Cl2(5.0毫升)之m-CPBA(28.7毫克，0.1662毫莫耳)溶液。於室溫下持續攪拌混合物2小時。以2毫升飽和Na2SO4冷卻反應。得到之混合物以CH2Cl2(20毫升)稀釋，以鹽水(10毫升x3)清洗，以無水硫酸鈉乾燥有機層，然後透過減壓蒸發。透過製備性高效液相層析法純化固體殘留物，以給出白色固體狀之標題化合物(實施例80)(7毫克，產率33%)。LCMS：[M+1]：378.1。1H NMR(400MHz，CDCl3)： δ 7.92-7.76(m，4H)、7.56-7.47(m，2H)、3.16(s，3H)、2.97-2.83(m，2H)、2.11-2.10(m，3H)、1.54(s，3H)。
實施例86-1
Figure 105112413-A0202-12-0106-247
(S)-(4-(8-(3-甲氧基丙-1-炔-1-基)二苯並[b,d]噻吩-2-基)-1,4-二甲基-6-側氧-1,4,5,6-四氫嘧啶-2-基)胺甲酸(三級丁基)酯(實施例86-1)
將溶於DMF(5毫升)中之(S)-(4-(8-溴二苯並[b,d]噻吩-2-基)-1,4-二甲基-6-側氧-1,4,5,6-四氫嘧啶-2-基)胺甲酸(三級丁基)酯(1克，2毫莫耳)、3-甲氧基丙-1-炔(550毫克，10毫莫耳)、Pd(OAc)2(224毫克，0.2毫莫耳)、PPh3(500毫克，0.2毫莫耳)、CuI(380毫克，0.2毫莫耳)、三乙基胺(2克，20毫莫耳)的混合物，於90℃下、微波下攪拌2小時。添加乙酸乙酯(50毫升)，並以水(20毫升x2)清洗。濃縮有機層，並藉由全自動快速色層分離純化系統(combiflash)(石油醚：乙酸乙酯=2：1，正相矽膠，UV254)純化殘留物，以給出白色固體狀標題化合物(實施例86-1)(60毫克，6%)。LC-MS[M-55]+=436。
實施例86
Figure 105112413-A0202-12-0106-248
(S)-2-胺基-6-(8-(3-甲氧丙-1-炔-1-基)二苯並[b,d]噻吩-2-基)-3,6-二甲基-5,6-二氫嘧啶-4(3H)-酮(實施例86)
添加(S)-(4-(8-(3-甲氧基丙-1-炔-1-基)二苯並[b,d]噻吩-2-基)-1,4-二甲基-6-側氧-1,4,5,6-四氫嘧啶-2-基)胺甲酸(三級丁基)酯(實施例86-1)(50毫克，0.1毫莫耳)至CH2Cl2(3毫升)及溶於二噁烷中4M之HCl(3毫升)的混合物中。攪拌得到之混合物1小時。濃縮，並藉由製備性高效液相層析法純化殘留物，以給出白色固體狀之標題化合物(實施例86)(15毫克，38%)。LC-MS：[M+H]+=392。1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ ppm 8.52(s，1H)、8.50(s，1H)、8.05-8.03(d，J=8Hz，1H)、7.97-7.95(d，J=8Hz，1H)、7.68-7.66(d，J=8Hz，1H)、7.56-7.57(m，1H)、6.00(br，1H)、4.39(s，2H)、3.39(s，3H)、3.00(s，3H)、3.01-3.00(m，1H)、2.50-2.49(m，1H)、1.46(s，3H)。
實施例87-1
Figure 105112413-A0202-12-0107-250
1-(8-(3-(苄氧基)丙-1-炔-1-基)二苯並[b,d]噻吩-2-基)乙酮(實施例87-1)
將溶於三乙胺(50毫升)中之1-(8-溴二苯並[b,d]噻吩-2-基)乙酮(800毫克，2.61毫莫耳)、((丙-2-炔基氧基)甲基)苯(1.6克，10.9毫莫耳)、Pd(PPh3)Cl2(420毫克，0.59毫莫耳)、CuI(200毫克，1.04毫莫耳)中之混合物，於100℃下攪拌16小時。添加乙酸乙酯(100毫升)，以水(50毫升x2)清洗，乾燥並濃縮。藉由全自動快速色層分離純化系統(石油醚：乙 酸乙酯=10：1，正相矽膠，UV254)純化殘留物，以給出白色固體狀標題化合物(實施例87-1)(600毫克，62%)。LC-MS：[M+H]+=371。
實施例87-2
Figure 105112413-A0202-12-0108-251
(R,E)-N-(1-(8-(3-(苄氧基)丙-1-炔-1-基)二苯並[b,d]噻吩-2-基)亞乙基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(實施例87-2)
將溶於THF(25毫升)之1-(8-(3-(苄氧基)丙-1-炔-1-基)二苯並[b,d]噻吩-2-基)乙-1-酮(實施例87-1)(400毫克，1.08毫莫耳)、(R)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(400毫克，3.3毫莫耳)、Ti(OEt)4(1.2克，5.2毫莫耳)的混合物在回流時攪拌，16小時。添加水(25毫升)，以乙酸乙酯(50毫升x2)。乾燥並濃縮有機層。藉由全自動快速色層分離純化系統(石油醚：乙酸乙酯=5：1，正相矽膠，UV254)純化殘留物，以給出白色固體狀標題化合物(實施例87-2)(260毫克，50.8%)。LC-MS：[M+H]+=474。
實施例87-3
Figure 105112413-A0202-12-0108-252
(S)-3-(8-(3-(苄氧基)丙-1-炔-1-基)二苯並[b,d]噻吩-2-基)-3-(((R)-三級丁基亞 磺醯基)胺基)丁酸甲酯(實施例87-3)
於-78℃、氮氛圍下，在溶於THF(5毫升)之LDA(2.75毫升，5.5毫莫耳，2M)溶液中，添加乙酸甲酯(407毫克，5.5毫莫耳)。於-78℃下，繼續攪拌得到之溶液0.5小時。在此溶液中添加三異丙氧基氯化鈦(5.5毫升，5.5毫莫耳，在THF中1M)，並繼續攪拌0.5小時。然後將得到之混合物降溫至-78℃，並添加溶於THF(4毫升)之(R,E)-N-(1-(8-(3-(苄氧基)丙-1-炔-1-基)二苯並[b,d]噻吩-2-基)亞乙基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(實施例87-2)(260毫克，0.55毫莫耳)，攪拌混合物1小時。反應混合物係以飽和NH4Cl溶液冷卻，並以CH2Cl2萃取。濾掉沉澱物，並蒐集有機層，以無水MgSO4乾燥，在真空中濃縮以給出黃色固體。藉由製備性薄層層析法(乙酸乙酯：正己烷=1：2)純化該黃色固體，以給出標題化合物(實施例87-3)(230毫克，76%)。LC-MS：[M+Na]+=570。
實施例87-4
Figure 105112413-A0202-12-0109-253
(S)-3-胺基-3-(8-(3-(苄氧基)丙-1-炔-1-基)二苯並[b,d]噻吩-2-基)丁酸甲酯鹽酸鹽(實施例87-4)
在(S)-3-(8-(3-(苄氧基)丙-1-炔-1-基)二苯並[b,d]噻吩-2-基)-3-(((R)-三級丁基亞磺醯基)胺基)丁酸甲酯(實施例87-3)(230毫克，0.42毫莫耳)及乙腈(4毫升)之混合物中，添加氯化氫(在二噁烷中4N，2毫升，4毫莫耳)。於室溫下攪拌反應混合物1小時，並在真空中濃縮以給出用於下 個步驟中之黃色固體狀標題化合物(實施例87-4)。
實施例87-5
Figure 105112413-A0202-12-0110-255
(S)-(4-(8-(3-(苄氧基)丙-1-炔-1-基)二苯並[b,d]噻吩-2-基)-1,4-二甲基-6-側氧-1,4,5,6-四氫嘧啶-2-基)胺甲酸(三級丁基)酯(實施例87-5)
在溶於DMF(4毫升)之(S)-3-胺基-3-(8-(3-(苄氧基)丙-1-炔-1-基)二苯並[b,d]噻吩-2-基)丁酸甲酯鹽酸鹽(實施例87-4)(201毫克，0.42毫莫耳)溶液中，添加DIPEA(280毫克，2.10毫莫耳)、N-[(甲基胺基)硫代甲基]胺甲酸三級丁酯(160毫克，0.84毫莫耳)及EDCI HCl(161毫克，0.84毫莫耳)。於50℃下攪拌得到之溶液過夜。反應混合物係以水(10毫升)冷卻，並以CH2Cl2(20毫升x3)萃取。蒐集有機層，以無水MgSO4乾燥，在真空中濃縮以給出白色固體狀粗產物。藉由製備性薄層層析法(乙酸乙酯：正己烷=1：3)純化該白色固體狀粗產物，以給出標題化合物(實施例87-5)(130毫克，55%)。
實施例87
Figure 105112413-A0202-12-0110-257
(S)-2-胺基-6-(8-(3-羥基丙-1-炔-1-基)二苯並[b,d]噻吩-2-基)-3,6-二甲基-5,6- 二氫嘧啶-4(3H)-酮(實施例87)
於-78℃下，添加BBr3(0.2毫升)至溶於CH2Cl2(15毫升)之(S)-(4-(8-(3-(苄氧基)丙-1-炔-1-基)二苯並[b,d]噻吩-2-基)-1,4-二甲基-6-側氧-1,4,5,6-四氫嘧啶-2-基)胺甲酸(三級丁基)酯(實施例87-5)(110毫克，0.194毫莫耳)溶液中，並攪拌30分鐘。以NaHCO3溶液冷卻，以乙酸乙酯(50毫升x2)萃取。濃縮有機層，並藉由製備性高效液相層析法純化殘留物，以給出標題化合物(實施例87)(10毫克，13.9%)。LC-MS：[M+H]+=378。1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ ppm 8.24(s，1H)、7.85(s，1H)、7.71-7.74(d，1H)、7.61-7.63(d，1H)、7.47-7.49(t，1H)、7.32-7.35(m，1H)、4.5(s，2H)、3.24-3.21(d，1H)、3.20(s，3H)、2.87-2.91(d，1H)、1.62(s，3H)。
實施例94-1
Figure 105112413-A0202-12-0111-258
1-(3-溴-4-((4-(三氟甲基)苯基)硫基)苯基)乙-1-酮(實施例94-1)
在溶於DMF(10毫升)之4-(三氟甲基)苯硫酚(750毫克，4.209毫莫耳)、1-(3-溴-4-氟苯基)乙酮(913毫克、4.209毫莫耳)溶液中，添加K2CO3(697毫克，5.051毫莫耳)。於90℃、氮氛圍下持續攪拌混合物16小時。以二乙醚(20毫升)稀釋得到之混合物，清洗(水、鹽水)，乾燥(MgSO4)，並在真空下濃縮。透過矽膠管住層析純化，以石油醚：乙酸乙酯=10：1沖提，給出黃色固體狀之標題化合物(實施例94-1)(354毫克，產率20.5%)。LCMS：[M+1]：377.0。
實施例94-2
Figure 105112413-A0202-12-0112-259
1-(3-溴-4-((4-(三氟甲基)苯基)亞磺醯基)苯基)乙-1-酮(實施例94-2)
在溶於CH2Cl2(27毫升)之1-(3-溴-4-((4-(三氟甲基)苯基)硫基)苯基)乙-1-酮(實施例94-1)(546毫克，1.455毫莫耳)的經攪拌溶液中，於0℃下逐滴添加溶於CH2Cl2(55毫升)之m-CPBA(295毫克，85%，1.455毫莫耳)溶液。於0℃下持續攪拌混合物1小時。以碳酸氫鈉溶液及亞硫酸鈉溶液清洗得到之混合物。以無水硫酸鈉乾燥有機相，蒸發，並以管柱層析法與沖提(石油醚：乙酸乙酯=8：1)純化，以給出淺黃色油狀標題化合物(實施例94-2)(469毫克，產率=81%)。LCMS：[M+1]：392.0。
實施例94-3
Figure 105112413-A0202-12-0112-260
1-(5-氧代-8-(三氟甲基)二苯並[b,d]噻吩-2-基)乙-1-酮(實施例94-3)
在溶於DMA(12毫升)之1-(3-溴-4-((4-(三氟甲基)苯基)亞磺醯基)苯基)乙-1-酮(實施例94-2)(459毫克，1.2毫莫耳)溶液中，懸浮Pd(OAc)2(8毫克，0.036毫莫耳)及KOAc(235毫克，2.4毫莫耳)。於130℃下持續攪拌混合物5小時。將得到之混合物降溫至室溫，並以CH2Cl2(50毫升)稀釋，然後以矽藻土過濾。以鹽水清洗濾液，以MgSO4乾燥，並在真空下濃縮。透過管柱層析與沖提(石油醚：乙酸乙酯=3：1)純化固體殘留物，以給出白 色固體狀之標題化合物(實施例94-3)(396毫克，產率=100%)。LCMS：[M+1]：311.1。
實施例94-4
Figure 105112413-A0202-12-0113-261
1-(8-(三氟甲基)二苯並[b,d]噻吩-2-基)乙-1-酮(實施例94-4)
在溶於CH2Cl2(5毫升)之1-(5-氧代-8-(三氟甲基)二苯並[b,d]噻吩-2-基)乙-1-酮(實施例94-3)(380毫克，1.226毫莫耳)、KI(610毫克，3.667毫莫耳)的經攪拌溶液中，於0℃下逐滴添加溶於CH2Cl2(55毫升)之m-CPBA(295毫克，85%1.455毫莫耳)的HCl/1,4-二噁烷(4M，1.5毫升，6.0毫莫耳)溶液。於0℃下持續攪拌混合物30分鐘。以CH2Cl2稀釋得到之混合物，以碳酸氫鈉溶液及亞硫酸鈉溶液清洗。以無水硫酸鈉乾燥有機相，蒸發以給出淺黃色固體狀標題化合物(實施例94-4)(360毫克，產率=100%)。LCMS：[M+1]：295.1。
實施例94-5
Figure 105112413-A0202-12-0113-262
(R,E)-2-甲基-N-(1-(8-(三氟甲基)二苯並[b,d]噻吩-2-基)亞乙基)丙烷-2-亞磺醯胺(實施例94-5)
在溶於THF(10毫升)之1-(8-(三氟甲基)二苯並[b,d]噻吩-2- 基)乙-1-酮(實施例94-4)(360毫克，1.226毫莫耳)、(R)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(223毫克，1.839毫莫耳)的經攪拌溶液中，添加Ti(OEt)4(0.77毫升，839毫克，3.678毫莫耳)。於氮氛圍下，持續攪拌及回流混合物8小時。將得到之混合物降溫至室溫，以水冷卻並以矽藻土過濾。濾液係以MgSO4乾燥並蒸發。透過矽膠管柱層析與沖提(石油醚：乙酸乙酯=1：1)純化固體殘留物，以給出淺黃色固體狀之標題化合物(實施例94-5)(347毫克，產率=70%)。LCMS：[M+1]：398.1。
實施例94-6
Figure 105112413-A0202-12-0114-263
(S)-3-((R)-1,1-二甲基乙基亞磺醯胺基)-3-(8-(三氟甲基)二苯並[b,d]噻吩-2-基)丁酸甲酯(實施例94-6)
在三頸燒瓶內、氬氛圍下，在溶於無水THF(1.2毫升)之無水乙酸甲酯(0.5毫升，435毫克，5.876毫莫耳)溶液中，於-78℃下添加LAD(2.9毫升，2M，5.876毫莫耳)。於-78℃下持續攪拌混合物30分鐘，然後添加ClTi(OiPr)3(1M，5.9毫升，5.0503毫莫耳)，於-78℃下持續攪拌得到之混合物30分鐘。然後添加溶於THF(1.2毫升)之(R,E)-2-甲基-N-(1-(8-(三氟甲基)二苯並[b,d]噻吩-2-基)亞乙基)丙烷-2-亞磺醯胺(實施例94-5)(200毫克，0.5876毫莫耳)之溶液。於-78℃下持續攪拌混合物1小時。於-78℃下，以水冷卻得到之混合物，然後過濾，濾液係以無水硫酸鎂乾燥，並透過減壓蒸發。透過矽膠管柱層析法與沖提(石油醚：乙酸乙酯=1：1)純化固體殘留物， 以得到白色泡沫狀固體之標題化合物(實施例94-6)(193毫克，產率=81%)。LCMS：[M+1]：472.1。
實施例94-7
Figure 105112413-A0202-12-0115-264
(S)-3-胺基-3-(8-(三氟甲基)二苯並[b,d]噻吩-2-基)丁酸甲酯(實施例94-7)
在溶於CH2Cl2(6毫升)之(S)-3-((R)-1,1-二甲基乙基亞磺醯胺基)-3-(8-(三氟甲基)二苯並[b,d]噻吩-2-基)丁酸甲酯(實施例94-6)(50毫克，0.1060毫莫耳)的經攪拌溶液中，添加HCl/1,4-二噁烷(4M，4毫升，16.0毫莫耳)。於室溫下持續攪拌混合物1小時。蒸發得到之混合物以給出白色固體狀之標題化合物(實施例94-7)(39毫克，產率=100%)。LCMS：[M-NH2]：351.1。
實施例94-8
Figure 105112413-A0202-12-0115-265
(S)-(1,4-二甲基-6-側氧-4-(8-(三氟甲基)二苯並[b,d]噻吩-2-基)-1,4,5,6-四氫嘧啶-2-基)胺甲酸(三級丁基)酯(實施例94-8)
在溶於DMF(5.0毫升)之(S)-3-胺基-3-(8-(三氟甲基)二苯並[b,d]噻吩-2-基)丁酸甲酯(實施例94-7)(39毫克，0.1060毫莫耳)、N-(甲基硫代胺甲醯基)胺甲酸三級丁酯(40毫克，0.2120毫莫耳)、EDCI(40毫克， 0.2120毫莫耳)的經攪拌溶液中，添加DIPEA(68毫克，0.530毫莫耳)。於50℃下持續攪拌混合物16小時。以乙酸乙酯稀釋得到之混合物，以水、鹽水清洗。以無水硫酸鎂乾燥有機相，並蒸發。透過矽膠管柱層析以石油醚：乙酸乙酯=4：1沖提，來純化固體殘留物，以得到淺黃色固體狀之標題化合物(實施例94-8)(40毫克，產率=77%)。LCMS：[M+1]：492.2。
實施例94
Figure 105112413-A0202-12-0116-266
(S)-2-胺基-3,6-二甲基-6-(8-(三氟甲基)二苯並[b,d]噻吩-2-基)-5,6-二氫嘧啶-4(3H)-酮(實施例94)
在溶於CH2Cl2(3毫升)之(S)-(1,4-二甲基-6-側氧-4-(8-(三氟甲基)二苯並[b,d]噻吩-2-基)-1,4,5,6-四氫嘧啶-2-基)胺甲酸(三級丁基)酯(實施例94-8)(40毫克，0.0815毫莫耳)的經攪拌溶液中，添加HCl/1,4-二噁烷(4M，3毫升，12.0毫莫耳)。於室溫下持續攪拌混合物16小時。蒸發得到之混合物，並透過製備性逆相高效液相層析法(prep-RP-HPLC)純化，以給出白色固體狀之標題化合物(實施例94)(10.9毫克，產率=34%)。LCMS：[M+1]：392.1、1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ 8.69(s，1 H)、8.44(s，1 H)、8.27(s，1 H)、7.97-7.88(dd，J1=8.4Hz，J2=8.4Hz，2 H)、7.72(d，J=8.4Hz，1 H)、7.58-7.55(dd，J1=1.6Hz，J2=2.0Hz，1 H)、3.58(d，J=16.4Hz，1 H)、3.08(d，J=16.4Hz，1 H)、1.83(s，3 H)、3.27(s，3 H)。
實施例100-1
Figure 105112413-A0202-12-0117-267
(R)-3-((R)-1,1-甲基乙基亞磺醯胺基)-2,2-二氟-3-(8-(丙-1-炔-1-基)二苯並[b,d]噻吩-2-基)丁酸乙酯(實施例100-1)
在溶於水(3.00毫升)之鋅(0.20克，3.27毫莫耳)及氯化銅(I)(0.10克，1.09毫莫耳)混合物中，添加2N HCl(1.00毫升)，然後移除水相並以丙酮清洗三次。以THF(10.0毫升)及溴二氟乙酸乙酯(0.60毫升，2.72毫莫耳)處理混合物，藉由熱風器加熱3分鐘，並以溶於THF(5.00毫升)之(R,E)-2-甲基-N-(1-(8-(丙-1-炔-1-基)二苯並[b,d]噻吩-2-基)亞乙基)丙烷-2-亞磺醯胺(實施例1-5)(0.20克，0.52毫莫耳)處理。於室溫下攪拌得到之反應混合物1.5小時。以矽藻土過濾混合物，且在真空下濃縮有機層，並藉由管柱層析法(乙酸乙酯/正己烷=1：2)純化，以給出標題化合物(實施例100-1)(0.12克，46.9%)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ 8.31(d，J=1.5Hz，1H)、8.17(d，J=1.2Hz，1H)、7.89(d，J=13.2Hz，1H)、7.82(d，J=7.8Hz，1H)、7.68(dd，J=0.9，8.4Hz，1H)、7.55(dd，J=1.5，8.4Hz，1H)、4.68(s，1H)、4.30-4.19(m，2H)、2.15(s，6H)、1.37(s，9H)、1.21(t，J=7.2Hz，3H)。
實施例100-2
Figure 105112413-A0202-12-0117-269
 實施例100-2
(R)-N-((R)-3,3-二氟-4-羥基-2-(8-(丙-1-炔-1-基)二苯並[b,d]噻吩-2-基)丁烷-2-基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(實施例100-2)
在溶於無水THF(15毫升)之(R)-3-((R)-1,1-甲基乙基亞磺醯胺基)-2,2-二氟-3-(8-(丙-1-炔-1-基)二苯並[b,d]噻吩-2-基)丁酸乙酯(實施例100-1)(1克，2.03毫莫耳)溶液中，逐滴添加溶於THF(4毫升，4.06毫莫耳)之1M LiBH4。於0℃下攪拌反應混合物1.5小時。反應係以水冷卻，並以乙酸乙酯(3x200毫升)萃取。以無水MgSO4乾燥有機層，過濾並濃縮。藉由管柱層析法(乙酸乙酯/正己烷=1：2)純化殘留物，以給出標題化合物(實施例100-2)(0.73克，77.66%)。1H NMR(300MHz，CD3OD)δ 8.42(s，1H)、8.19(d，J=1.2Hz，1H)、7.91(d，J=8.7,21.9Hz，1H)、7.84(d，J=8.4Hz，1H)、7.75(d，J=9.0Hz，1H)、7.48(dd，J=1.5，8.4Hz，1H)、4.02-3.69(m，2H)、2.10(s，3H)、2.07(s，3H)、1.31(s，9H)。
實施例100-3
Figure 105112413-A0202-12-0118-270
(R)-3-胺基-2,2-二氟-3-(8-(丙-1-炔-1-基)二苯並[b,d]噻吩-2-基)丁酸(實施例100-3)
在溶於MeOH(15.0毫升)之(R)-N-((R)-3,3-二氟-4-羥基-2-(8-(丙-1-炔-1-基)二苯並[b,d]噻吩-2-基)丁烷-2-基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(實施例100-2)(0.50克，1.08毫莫耳)溶液中，添加HCl(在二噁烷中4N，0.50 毫升)。於室溫下攪拌反應混合物1.5小時，並在真空下濃縮以給出標題化合物(實施例100-3)(0.30克,78.9%)。1H NMR(300MHz，CD3OD)δ 8.57(d，J=1.5Hz，1H)、8.39(d，J=1.2Hz，1H)、8.11(d，J=8.7Hz，1H)、7.92(d，J=8.7Hz，1H)、7.78(dd，J=1.5，8.4Hz，1H)、7.57(dd，J=1.8，8.4Hz，1H)、3.90(s，2H)、2.12(s，6H)。
實施例100
Figure 105112413-A0202-12-0119-271
(R)-5,5-二氟-4-甲基-4-(8-(丙-1-炔-1-基)二苯並[b,d]噻吩-2-基)-1,3-氧氮雜環己烷-2-亞胺(實施例100)
在溶於乙醇(10.0毫升)之(R)-3-胺基-2,2-二氟-3-(8-(丙-1-炔-1-基)二苯並[b,d]噻吩-2-基)丁酸(實施例100-3)(0.30克，0.84毫莫耳)溶液中，添加溴化氰(0.17克，1.68毫莫耳)，並於80℃下攪拌過夜。在減壓下濃縮混合物。以乙酸乙酯及水萃取殘留物。以無水MgSO4乾燥有機層，過濾並濃縮。藉由管柱層析(乙酸乙酯/正己烷=1：2)純化殘留物，以給出標題化合物(實施例100)(0.11克，35.5%)。1H NMR(300MHz，CD3OD)δ 8.42(s，1H)、8.29(s，1H)、8.19(d，J=0.6Hz，1H)、7.85(d，J=5.1Hz，1H)、7.78(d，J=4.8Hz，1H)、7.63(d，J=4.8Hz，1H)、7.43(dd，J=0.9，4.8Hz，1H)、4.29-4.23(m，1H)、4.05-3.98(m，1H)、2.01(s，3H)、1.75(d，J=1.2Hz，3H)。ESI MS：m/z 371(M+H)+；HPLC：98.3%。
實施例103-1
Figure 105112413-A0202-12-0120-272
2-甲基-2-(甲基磺醯基)丙腈(實施例103-1)
在溶於THF(25毫升)之2-(甲基磺醯基)-乙腈(1克，8.4毫莫耳)的經攪拌溶液中，於0℃下緩緩添加NaH(0.7克，在礦物油中60%，16.8毫莫耳)。20分鐘後，添加Mel(2.4克，16.8毫莫耳)。使混合物加溫過夜(16小時)。以H2O(10毫升)冷卻，並蒸發THF。以乙酸乙酯(25毫升x3)萃取水性溶液。以鹽水(50毫升)清洗合併之有機萃取物，並濃縮。將殘留物與己烷/乙醚一起研磨，以給出標題化合物(實施例103-1)(600毫克，48%)。
實施例103-2
Figure 105112413-A0202-12-0120-273
(R)-N-((R)-1-((2-氰基丙烷-2-基)磺醯基)-2-(8-(丙-1-炔-1-基)二苯並[b,d]噻吩-2-基)丙烷-2-基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(實施例103-2)
在溶於四氫呋喃(10毫升)之2-甲基-2-(甲基磺醯基)丙腈(實施例103-1)(765毫克，5.20毫莫耳)的經攪拌溶液中，於-78℃下添加正丁基鋰(在己烷中2.5M，2.6毫升，6.42毫莫耳)。30分鐘後，添加溶於THF(10毫升)之(R,E)-2-甲基-N-(1-(8-(丙-1-炔-1-基)二苯並[b,d]噻吩-2-基)亞乙基)丙烷-2-亞磺醯胺(實施例1-5)(800毫克，2.17毫莫耳)。於-78℃下額外攪拌混合物2小時，以飽和水性NH4Cl(25毫升)及水(30毫升)冷卻。以乙酸乙酯 (100毫升x2)萃取。濃縮合併之有機萃取物。藉由快速層析法(flash chromatography)(在己烷中0至70%乙酸乙酯)純化殘留物，以給出白色固體狀標題化合物(實施例103-2)(350毫克，31%)。
實施例103-3
Figure 105112413-A0202-12-0121-274
(R)-2-((2-胺基-2-(8-(丙-1-炔-1-基)二苯並[b,d]噻吩-2-基)丙基)磺醯基)-2-甲基丙腈(實施例103-3)
將溶於MeOH(20毫升)之(R)-N-((R)-1-((2-氰基丙烷-2-基)磺醯基)-2-(8-(丙-1-炔-1-基)二苯並[b,d]噻吩-2-基)丙烷-2-基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(實施例103-2)(300毫克，0.58毫莫耳)溶液及溶於二噁烷之HCl溶液(4M，2.5毫升)，於室溫下攪拌1小時。濃縮混合物，將殘留物與乙醚一起研磨以給出白色固體。添加乙酸乙酯(50毫升)，以Na2CO3溶液清洗，乾燥並濃縮有機層，以給出白色固體狀之標題化合物(實施例103-3)(240毫克，95%)。
實施例103
Figure 105112413-A0202-12-0121-423
(R)-5-胺基-3,6,6-三甲基-3-(8-(丙-1-炔-1-基)二苯並[b,d]噻吩-2-基)-3,6-二氫-2H-1,4-噻嗪1,1-二氧化物
將溶於乙醇(20毫升)之化合物(實施例103-3)(240毫克，0.59毫莫耳)、CuCl(87毫克，0.88毫莫耳)的混合物在回流時加熱4小時。過濾並濃縮反應混合物。藉由全自動快速色層分離純化系統(CH2Cl2：CH3OH=15：1，正相矽膠，UV254)純化殘留物，以給出白色固體狀標題化合物(實施例103)(70毫克，29%)。LCMS：[M+1]：411。1H NMR(400MHz，DMSO)：δ 8.52(S，1H)、8.40(s，1H)、7.99-7.92(m，2H)、7.70-7.68(d，J=8.4Hz，1H)、7.49-7.47(d，J=8.0Hz，1H)、6.06(br，2H)、3.90-3.87(d，J=14.4Hz，1H)、3.62-3.59(d，J=14.4Hz，1H)、2.10-2.08(d，J=11.2Hz，3H)、1.65(s，1H)、1.58(s，1H)、1.47(s，3H)。
實施例109-1
Figure 105112413-A0202-12-0122-275
2,4-二氟-N-甲氧基-N-甲基-5-硝苯甲醯胺(實施例109-1)
在溶於CH2Cl2(350毫升)之2,4-二氟-5-硝苯甲酸(11.0克，54.2毫莫耳)溶液中，添加DIPEA(13.4毫升，81.3毫莫耳)、N,O-二甲基羥胺鹽酸鹽(6.3克，65.0毫莫耳)、及HATU(30.9克，81.3毫莫耳)。於室溫下攪拌混合物過夜，然後以H2O(500毫升)稀釋混合物，並分離有機層。以CH2Cl2(150毫升)萃取水層，並以鹽水清洗合併之有機層，以無水NaSO4乾燥並濃縮。經由矽膠(石油醚/乙酸乙酯=30/1~15/1)純化殘留物以給出黃色油狀之標題化合物(實施例109-1)(12.0克，90.2%)。LCMS：[M+1]=247.1。
實施例109-2
Figure 105112413-A0202-12-0123-276
4-((4-溴苯基)硫基)-2-氟-N-甲氧基-N-甲基-5-硝苯甲醯胺(實施例109-2)
在溶於MeOH(200毫升)之4-溴苯硫酚(7.7克，40.7毫莫耳)溶液中，於-78℃、氬氛圍下添加NaH(2.4克，61.0毫莫耳，60%油分散液)。攪拌混合物30分鐘，然後逐滴加入溶於MeOH(50毫升)之2,4-二氟-N-甲氧基-N-甲基-5-硝苯甲醯胺(實施例109-1)(10.0克，40.7毫莫耳)溶液。添加後，於-78℃、氬氛圍下攪拌得到之混合物3小時。然後反應溶液係以H2O(300毫升)冷卻，並以乙酸乙酯(300毫升x2)萃取。以鹽水清洗合併之有機層，並以無水Na2SO4乾燥及濃縮，以給出黃色固體狀之標題化合物(實施例109-2)(15.0克，88.7%)。LCMS：[M+1]=415.0。
實施例109-3
Figure 105112413-A0202-12-0123-420
5-胺基-4-((4-溴苯基)硫基)-2-氟-N-甲氧基-N-甲基苯甲醯胺(實施例109-3)
在溶於AcOH(200毫升)之4-((4-溴苯基)硫基)-2-氟-N-甲氧基-N-甲基-5-硝苯甲醯胺(實施例109-2)(10.0克，24.1毫莫耳)溶液中，添加Zn粉塵(7.8克，120.5毫莫耳)。於室溫下攪拌混合物過夜。然後以H2O(300毫升)稀釋混合物，並以乙酸乙酯萃取(150毫升x3)，以鹽水清洗合併之有機層，以無水Na2SO4乾燥並濃縮，以給出7.0克之淺棕色油狀粗標題化合物(實施例109-3)。LCMS：[M+1]=385.0。
實施例109-4
Figure 105112413-A0202-12-0124-277
8-溴-3-氟-N-甲氧基-N-甲基二苯並[b,d]噻吩-2-羧醯胺(實施例109-4)
將5-胺基-4-((4-溴苯基)硫基)-2-氟-N-甲氧基-N-甲基苯甲醯胺(實施例109-3)(7.0克，18.2毫莫耳)溶解於HCl中(體積/體積=1：1，140毫升)。將得到之混合物降溫至低於5℃。在此反應混合物中，緩緩添加亞硝酸鈉(1.9克，27.3毫莫耳)，並維持添加後之溫度低於5℃，於5℃下攪拌反應物30分鐘。然後，在上述混合物中添加氟硼酸鈉(4.0克，36.4毫莫耳)，並於5℃下繼續攪拌30分鐘。然後於35℃~400℃下，添加上述重氮化溶液至溶於0.1N硫酸(500毫升)之氧化銅(I)(5.2克，36.4毫莫耳)的經攪拌溶液中。攪拌反應混合物50分鐘。添加乙酸乙酯至反應混合物中，並濾掉無機化合物。然後以乙酸乙酯(150毫升x3)萃取濾液。以水清洗有機量(organic volume)，並接著以鹽水清洗有機量，然後在真空下濃縮。透過矽膠(石油醚/乙酸乙酯=5/1)純化棕色固體，以給出純白色固體狀之標題化合物(實施例109-4)(850毫克，二步驟產率：9.6%)。LCMS：[M+1]=368.0。
實施例109-5
Figure 105112413-A0202-12-0124-278
1-(8-溴-3-氟二苯並[b,d]噻吩-2-基)乙酮(實施例109-5)
在溶於THF(60毫升)之8-溴-3-氟-N-甲氧基-N-甲基二苯並[b,d]噻吩-2-羧醯胺(實施例109-4)(850毫克，2.3毫莫耳)溶液中，於0℃下逐滴添加MeMgBr(3.8毫升，11.5毫莫耳，在THF中3M)。添加後，於室溫下攪拌混合物4小時，然後反應混合物係以飽和水性NH4Cl(100毫升)冷卻，並以乙酸乙酯(100毫升x2)萃取。以鹽水清洗合併之有機層，以無水Na2SO4乾燥並濃縮，以給出純白色固體狀之標題化合物(實施例109-5)(700克，93.8%)。
實施例109-6
Figure 105112413-A0202-12-0125-279
1-(3-氟-8-(丙-1-炔-1-基)二苯並[b,d]噻吩-2-基)乙酮(實施例109-6)
於100℃下，將溶於二噁烷(100毫升)之1-(8-溴-3-氟二苯並[b,d]噻吩-2-基)乙酮(實施例109-5)(1.5克，4.6毫莫耳)、三丁基(丙-1-炔基)錫烷(2.3克，6.9毫莫耳)、Pd(PPh3)4(500毫克，0.46毫莫耳)的混合物攪拌16小時。濃縮反應混合物，藉由全自動快速色層分離純化系統(石油醚：乙酸乙酯=5：1，正相矽膠，UV254)純化殘留物，以給出白色固體狀標題化合物(實施例109-6)(800毫克，61%)。LC-MS：[M+H]+=283。
實施例109-7
Figure 105112413-A0202-12-0125-280
(R,E)-N-(1-(3-氟-8-(丙-1-炔-1-基)二苯並[b,d]噻吩-2-基)亞乙基)-2-甲基丙烷 -2-亞磺醯胺(實施例109-7)
將溶於THF(25毫升)之1-(3-氟-8-(丙-1-炔-1-基)二苯並[b,d]噻吩-2-基)乙酮(實施例109-6)(650毫克，2.3毫莫耳)、(R)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(836毫克，6.9毫莫耳)、Ti(OEt)4(2.6克，11.5毫莫耳)的混合物在回流時攪拌16小時。添加水(25毫升)，並以乙酸乙酯(50毫升x2)萃取。乾燥並濃縮有機層。藉由全自動快速色層分離純化系統(石油醚：乙酸乙酯=5：1，正相矽膠，UV254)純化殘留物，以給出白色固體狀標題化合物(實施例109-7)(800毫克，90%)。LC-MS：[M+H]+=386。
實施例109-8
Figure 105112413-A0202-12-0126-281
(R)-N-((R)-1-((2-氰基丙烷-2-基)磺醯基)-2-(3-氟-8-(丙-1-炔-1-基)二苯並[b,d]噻吩-2-基)丙烷-2-基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(實施例109-8)
於-78℃下，在溶於四氫呋喃(10毫升)之2-甲基-2-(甲基磺醯基)丙腈(實施例103-1)(228毫克，1.56毫莫耳)的經攪拌溶液中，添加正丁基鋰(在己烷中2.5M，0.6毫升，1.56毫莫耳)。30分鐘後，添加溶於THF(10毫升)之(R,E)-N-(1-(3-氟-8-(丙-1-炔-1-基)二苯並[b,d]噻吩-2-基)亞乙基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(實施例109-7)(300毫克，0.78毫莫耳)溶液。於-78℃下額外攪拌混合物2小時，然後以飽和水性NH4Cl(25毫升)及水(30毫升)冷卻。以乙酸乙酯(100毫升x2)萃取得到之混合物。濃縮合併之有機萃取物。藉由快速層析法(在己烷中0至70%乙酸乙酯)純化殘留物，以 給出白色固體狀之標題化合物(實施例109-8)(300毫克，73%)。LC-MS：[M+H]+=533。
實施例109-9
Figure 105112413-A0202-12-0127-282
(R)-2-((2-胺基-2-(3-氟-8-(丙-1-炔-1-基)二苯並[b,d]噻吩-2-基)丙基)磺醯基)-2-甲基丙腈(實施例109-9)
在(R)-N-((R)-1-((2-氰基丙烷-2-基)磺醯基)-2-(3-氟-8-(丙-1-炔-1-基)二苯並[b,d]噻吩-2-基)丙烷-2-基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(實施例109-8)(300毫克，0.56毫莫耳)及乙腈(4毫升)之混合物中，添加氯化氫(在二噁烷中4N，2毫升，4毫莫耳)。於室溫下攪拌反應混合物1小時，並在真空下濃縮，以給出用於下個步驟中的黃色固體狀標題化合物(實施例109-9)。
實施例109
Figure 105112413-A0202-12-0127-283
((R)-5-胺基-3-(3-氟-8-(丙-1-炔-1-基)二苯並[b,d]噻吩-2-基)-3,6,6-三甲基-3,6-二氫-2H-1,4-噻嗪1,1-二氧化物)(實施例109)
將溶於乙醇(20毫升)之(R)-2-((2-胺基-2-(3-氟-8-(丙-1-炔-1-基)二苯並[b,d]噻吩-2-基)丙基)磺醯基)-2-甲基丙腈(實施例109-9)(220毫 克，0.51毫莫耳)及CuCl(51毫克，0.51毫莫耳)的混合物在回流時攪拌4小時。過濾並濃縮反應混合物。藉由製備性高效液相層析法純化殘留物，以給出白色固體狀之標題化合物(實施例109)(102毫克，49%)。LC-MS：[M+H]+=429。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ ppm 8.19-8.17(d，J=8.0Hz，1H)、8.13(s，1H)、7.73-7.71(d，J=8.0Hz，1H)、7.56-7.53(d，J=12.0Hz，1H)、7.47-7.45(d，J=8.0Hz，1H)、3.81-3.69(m，2H)、2.09(s，3H)、1.98(s，3H)、1.81(s，3H)、1.72(s，3H)。
實施例131-1
Figure 105112413-A0202-12-0128-284
1-(甲基磺醯基)環丁腈(實施例131-1)
在溶於DMF(40.0毫升)之2-(甲基磺醯基)-乙腈(2.00克，16.8毫莫耳)、氯化苯三乙基銨(0.19克，0.84毫莫耳)及碳酸鉀(5.88克，42.0毫莫耳)的混合物中，於10℃下，逐滴添加1,3二溴丙烷(0.17毫升，16.8毫莫耳)。將反應混合物加溫至室溫，同時持續攪拌3小時，並以水冷卻。藉由乙酸乙酯萃取有機層，以水清洗，以無水MgSO4乾燥，在真空下濃縮以得到黃色油狀產物。然後藉由矽膠管柱層析法(在己烷中10%乙酸乙酯)純化獲得之產物，以得出標題化合物(實施例131-1)(1.65克，62.0%)。
實施例131-2
Figure 105112413-A0202-12-0128-285
(R)-N-((R)-1-((1-氰基環丁基)磺醯基)-2-(8-(丙-1-炔-1-基)二苯並[b,d]噻吩-2-基)丙烷-2-基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(實施例131-2)
在溶於四氫呋喃(40.0毫升)之1-(甲基磺醯基)環丁腈(實施例131-1)(1.16克，7.35毫莫耳)的經攪拌溶液中，於-78℃下添加正丁基鋰(在己烷中2.5M，3.00毫升，7.50毫莫耳)。30分鐘後，添加溶於THF之化合物(實施例1-5)(0.99克，2.69毫莫耳)溶液。於-78℃下額外攪拌混合物2小時，以飽和NH4Cl溶液冷卻，並以乙酸乙酯萃取。蒐集有機層，以無水MgSO4乾燥，並在真空下濃縮以得到黃色油狀產物。然後藉由矽膠管柱層析法(在己烷中40%乙酸乙酯)純化獲得之產物，以得出標題化合物(實施例131-2)(0.39克，28.0%)。
實施例131-3
Figure 105112413-A0202-12-0129-286
(R)-1-((2-胺基-2-(8-(丙-1-炔-1-基)二苯並[b,d]噻吩-2-基)丙基)磺醯基)環丁腈(實施例131-3)
在(實施例131-2)(0.30克，0.57毫莫耳)及THF(20.0毫升)之混合物中，添加氯化氫(在二噁烷中4N，0.90毫升，3.60毫莫耳)。於室溫下攪拌反應混合物1.5小時，並在真空下濃縮，以產出用於下個步驟中的無色油狀標題化合物(實施例131-3)。
實施例131
Figure 105112413-A0202-12-0130-287
(R)-9-亞胺基-7-甲基-7-(8-(丙-1-炔-1-基)-4a,9b-二氫二苯並[b,d]噻吩-2-基)-5-硫雜-8-氮雜螺[3.5]壬烷5,5-二氧化物(實施例131)
將溶於乙醇(30.0毫升)之化合物(實施例131-3)(0.23克，0.54毫莫耳)、CuCl(0.09克，0.90毫莫耳)的混合物，在回流時加熱4小時。透過沸石過濾反應混合物，並濃縮濾液。使用二氯甲烷再溶解濃縮物，並以過量之水及鹽水清洗。蒐集有機層，以MgSO4乾燥，並在真空下濃縮以得到固體化合物。然後藉由矽膠管柱層析法(在二氯甲烷中2%甲醇)純化獲得之產物，以給出純白色固體狀之標題化合物(實施例131)(0.07克，30%)。1H NMR(300MHz，CH3OD)：δ 8.27(S，1H)、8.21(s，1H)、7.83-7.75(m，2H)、7.53(d，J=9.0Hz，1H)、7.41(d，J=9.0Hz，1H)、3.67-3.54(m，2H)、2.83-2.61(m，4H)、2.55-2.12(m，2H)、2.07(s，3H)、1.81(s，3H)、分析數據：ESI-MS：m/z 423.1194[M+H]+、分子式：C23H22N2O2S2、及HPLC：99.5%。
實施例205-1
Figure 105112413-A0202-12-0130-288
2-溴-8-(2,2,2-三氟乙氧基)二苯並[b,d]噻吩(實施例205-1)
於室溫下，在三氟乙醇(14.1毫升，176毫莫耳)中溶解鈉 (0.53克，23毫莫耳)。然後藉由添加30毫升之NMP均勻化反應混合物。接著添加(實施例1-2)(6.00克，17.6毫莫耳)及溴化銅(I)(0.25克，1.76毫莫耳)。於250℃下回流反應混合物4小時。然後，反應混合物係以4N HCl(15.0毫升)冷卻，並以CH2Cl2萃取。蒐集有機層，以無水MgSO4乾燥，並在真空下濃縮以得到黃色油狀產物。然後藉由矽膠管柱層析法(在己烷中2%乙酸乙酯)純化獲得之產物，以給出標題化合物(實施例205-1)(3.88克，61%)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ 8.10(d，J=3.0Hz，1H)、7.68(d，J=9.0Hz，1H)、7.61(d，J=6.0Hz，1H)、7.50(m，2H)、7.10(dd，J=3.0，9.0Hz，1H)、4.47-4.39(m，2H)。
實施例205-2
Figure 105112413-A0202-12-0131-289
1-(8-(2,2,2-三氟乙氧基)二苯並[b,d]噻吩-2-基)乙酮(實施例205-2)
在(實施例205-1)(3.80克，10.5毫莫耳)、Pd(PPh3)4(1.22克，1.05毫莫耳)及N-甲基吡咯酮(NMP)(30.0毫升)之混合物中，於室溫下添加三丁基(1-乙氧乙烯基)錫(5.69克，15.8毫莫耳)。在130℃、氮氛圍下攪拌混合物3小時。然後反應混合物係以4N HCl冷卻，並以CH2Cl2萃取。蒐集有機層，以無水MgSO4乾燥，並在真空下濃縮以得到黑色油狀產物。然後藉由矽膠管柱層析法(在己烷中10%乙酸乙酯)純化獲得之產物，以給出標題化合物(實施例205-2)(2.20克，65%)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ 8.69(d，J=3.0Hz，1H)、8.06(d，J=9.0Hz，1H)、7.91(d，J=9.0Hz，1H)、7.87-7.74(m，2H)、7.20(dd，J=3.0，9.0Hz，1H)、4.57-4.49(m， 2H)、2.75(s，3H)。
實施例205-3
Figure 105112413-A0202-12-0132-291
(R,E)-N-(1-(8-(2,2,2-三氟乙氧基)二苯並[b,d]噻吩-2-基)亞乙基)丙烷-2-亞磺醯胺(實施例205-3)
將(實施例205-2)(1.00克，3.10毫莫耳)、(R)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(1.27克，9.30毫莫耳)、Ti(OEt)4(4.25克，18.6毫莫耳)及THF(30.0毫升)之混合物回流過夜。反應係以水冷卻，並以CH2Cl2萃取。濾掉沉澱物，蒐集有機層，以無水MgSO4乾燥，並在真空下濃縮以得到黃色油狀產物。然後藉由矽膠管柱層析法(在己烷中25%乙酸乙酯)純化產物，以給出標題化合物(實施例205-3)(1.08克，82.0%)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ 8.56(d，J=3.0Hz，1H)、8.04(d，J=9.0Hz，1H)、7.86(d，J=9.0Hz，1H)、7.77(d，J=9.0Hz，1H)、7.71(d，J=3.0Hz，1H)、7.17(dd，J=3.0，9.0Hz，1H)、4.57-4.49(m，2H)、2.90(s，3H)、1.39(s，9H)。
實施例205-4
Figure 105112413-A0202-12-0132-292
(R)-N-((R)-1-((2-氰基丙烷-2-基)磺醯基)-2-(8-(2,2,2-三氟乙氧基)二苯並[b,d] 噻吩-2-基)丙烷-2-基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(實施例205-4)
在溶於四氫呋喃(25毫升)之2-甲基-2-(甲基磺醯基)-丙腈(0.77克，5.25毫莫耳)的經攪拌溶液中，於-78℃下添加正丁基鋰(在己烷中2.5M，2.10毫升，5.25毫莫耳)。30分鐘後，添加溶於THF之化合物(實施例205-3)(0.90克，2.10毫莫耳)溶液。於-78℃下額外攪拌混合物2小時，以水冷卻，並以乙酸乙酯萃取。蒐集有機層，以無水MgSO4乾燥，並在真空下濃縮以得到黃色油狀產物。然後藉由矽膠管柱層析法(在己烷中40%乙酸乙酯)純化獲得之產物，以給出標題化合物(實施例205-4)(0.58克，48%)。1H NMR(300MHz，CDCl3)：δ 8.23(s，1H)、7.85(d，J=9.0Hz，1H)、7.75(d，J=9.0Hz，1H)、7.64-7.57(m，2H)、7.13(dd，J=3.0，9.0Hz，1H)、4.52-4.09(m，2H)、4.15-4.04(m，2H)、2.12(s，3H)、1.80(s，3H)、1.68(s，3H)、1.34(s，9H)。
實施例205-5
Figure 105112413-A0202-12-0133-293
(R)-2-((2-胺基-2-(8-(2,2,2-三氟乙氧基)二苯並[b,d]噻吩-2-基)丙基)磺醯基)-2-甲基丙腈(實施例205-5)
在(實施例205-4)(0.55克，0.96毫莫耳)及THF(25.0毫升)之混合物中，添加氯化氫(在二噁烷中4N，1.50毫升，5.74毫莫耳)。於室溫下攪拌反應混合物1.5小時，並在真空下濃縮以產出用於下個步驟中的無色油狀(實施例205-5)。
實施例205
Figure 105112413-A0202-12-0134-294
(5R)-3-亞胺基-2,2,5-三甲基-5-(8-(2,2,2-三氟乙氧基)-4a,9b-二氫二苯並[b,d]噻吩-2-基)硫代嗎啉1,1-二氧化物(實施例205)
將溶於乙醇(30毫升)之化合物(實施例205-5)(0.45克，0.96毫莫耳)、CuCl(0.14克，1.44毫莫耳)的混合物，在回流時加熱4小時。透過沸石過濾反應混合物，並濃縮濾液。使用二氯甲烷再溶解濃縮物，並以過量之水及鹽水清洗。蒐集有機層，以無水MgSO4乾燥，並在真空下濃縮以得到固體產物。然後藉由矽膠管柱層析法(在二氯甲烷中2%甲醇)純化獲得之產物，以給出純白色固體(實施例205)(70毫克，15%)。1H NMR(300MHz，CH3OD)：δ 8.34(s，1H)、7.95(s，1H)、7.88-7.81(m，2H)、7.59(dd J=3.0；9.0Hz，1H)、7.24-7.21(m，1H)、4.76-4.68(m，2H)、3.77(d，J=15Hz，1H)、3.63(d，J=15Hz，1H)、1.89(s，3H)、1.74(s，3H)、1.68(s，3H)。分析數據：ESI-MS：m/z 471.004[M+H]+、分子式：C21H21F3N2O3S2、及HPLC：100%。
測定法
I.效力測定法
a. β-分泌酶活性測定法
聚集在患有阿茲海默症(AD)之患者腦中的Aβ胜肽之產生，取決於類澱粉蛋白之前驅蛋白(APP)的連續兩次切割。藉由β-分泌酶(β-位類澱粉蛋白之前驅蛋白切割酶1(BACE1))進行APP的胞外切割產生可溶 性片段，且隨後藉由γ-分泌酶釋放連接於細胞之C-端片段。已知BACE1抑制劑可充分地進入腦中，以降低Aβ胜肽之量。因此BACE1之抑制劑已顯現為用於治療AD之抗類澱粉蛋白療法的關鍵目標。建立體外測定法以使用IC50值偵測β-分泌酶活性，該IC50值係定義為抑制50%之BACE1活性所需的BACE1抑制劑濃度。
使用來自AnaSpec(加利福尼亞州費利蒙)之BACE1活性測定套組，以藉由AnaSpec BACE1螢光測定法來測得所選之BACE1抑制劑的效力。以1倍測定緩衝液(1份1倍測定緩衝液、及1份含有0.1%聚山梨醇酯20的TBS)稀釋重組β-分泌酶酵素至1：200。在黑色96-孔微量盤之各孔中，添加40微升體積的酵素。
將BACE1抑制劑自溶於DMSO之10mM儲備濃縮液，依序稀釋進DMSO中。經依序稀釋之抑制劑係在96-孔聚丙烯盤(測定稀釋盤)中，以1倍測定緩衝液稀釋至1：100。測試之BACE1抑制劑的最終濃度係300nM、100nM、30nM、10nM、3nM、1nM、0.3nM及0.00nM。抑制劑之劑量反應係以一式兩份進行。
然後添加來自測定稀釋盤之10微升體積抑制劑、對照組抑制劑LY2886721、或抑制劑媒介物(inhibitor vehicle)至含有BACE1的黑色96-孔微量盤之各孔中。
在黑色96-孔微量盤之各孔中，添加使用測定緩衝液稀釋至1：100的50微升β-分泌酶受質(Hylite Fluor 488)。輕輕地混和反應劑，並放置該測定盤至POLARstar螢光盤式分析儀，設定激發波長在485奈米，及發射波長在520奈米。設定該盤式分析儀在30分鐘間每5分鐘讀取數值，或使用30分鐘終端數值。
使用適當的一級積分速率方程式(integrated first-order rate equation)以擬合(fit)在30至40分鐘之蒐集期間內所累積之數據。然後測得所選之根據本發明實施例的BACE1抑制劑的IC50值，並在下方表1中說明。第1圖顯示例示性劑量反應曲線，評估藉由以所選之化合物(實施例1)處理，對Aβ胜肽分泌之抑制，其中實施例1之IC50值係30.25±3.98nM。
Figure 105112413-A0202-12-0136-92
使用來自AnaSpec(加利福尼亞州費利蒙)之BACE2活性測定套組，以藉由AnaSpec BACE2螢光測定法來測得所選之化合物的效力。在黑色96-孔微量盤之各孔中，首先添加50微升之使用測定緩衝液稀釋至1：100的β-分泌酶受質(Hylite Fluor 488)。
將化合物自溶於DMSO之10mM儲備濃縮液，依序稀釋(1：2)進DMSO中。經依序稀釋之抑制劑係在96-孔聚丙烯盤(測定稀釋盤)中，以1倍測定緩衝液稀釋至1：100。該等測試之化合物的最終濃度係300nM、150nM、75nM、37.5nM、18.75nM、9.375nM、4.688nM、2.344nM、1.172nM、0.586nM及0.293nM。
然後添加來自測定稀釋盤之10微升體積抑制劑、對照組抑制劑LY2886721、或抑制劑媒介物至黑色96-孔微量盤之各孔中。
以測定緩衝液稀釋重組BACE2，且BACE2之最終濃度係10.6nM。在黑色96-孔微量盤之各孔中，添加40微升體積的酵素。
輕輕地混和反應劑，並放置該測定盤至POLARstar螢光盤式分析儀，設定激發波長在485奈米，及發射波長在520奈米。設定該盤式分析儀在30分鐘間每5分鐘讀取數值，或使用30分鐘終端數值。
使用適當的一級積分速率方程式，以擬合在30至40分鐘之蒐集期間內所累積之數據。抑制劑之劑量反應係以一式兩份進行。
然後測得所選之根據本發明之實施例的BACE2抑制劑的IC50值，並在下方表1及第2圖中說明。第2圖顯示例示性劑量反應曲線，評估藉由以所選之化合物(實施例71)處理，對Aβ胜肽分泌之抑制，其中實施例71之BACE2 IC50值係23.76±1.52nM。
b.細胞生產Aβ測定法
Aβ係33至42-胺基酸之蛋白分解後胜肽，作為類澱粉蛋白之 前驅蛋白(APP)被BACE1及γ-分泌酶連續切割的結果而產生。後續之證據指出，該等Aβ胜肽之同功型在腦中的聚集及沉積，導致AD之神經退化及失智型。有兩種主要之Aβ同功型，作為生物標記被監測，以早期獲悉Aβ之聚集：Aβ40及Aβ42。增加的Aβ胜肽於胞外堆積，導致形成Aβ胜肽寡聚體、腦部類澱粉蛋白斑、神經退化、及最終導致腦中風，其在AD之神經病症特點中全都扮演重要之角色。
如下製備用於細胞生產Aβ測定法的反應劑。
將7PA2 CHO細胞(授權自Dennis Selkoe博士之實驗室)以每0.1微升完全培養基(含有10%胎牛血清之DMEM培養基、L-麩醯胺酸、盤尼西林/鏈黴素、及200微克/毫升之G418)50,000個細胞的密度，接種到96-孔盤中。在完全培養基中培養細胞16-18小時，並抽出及拋棄該培養基。添加具有藥物濃度範圍自0.01nM至100nM之含有測試物或正對照組(LY2886721)的新鮮完全培養基，或僅完全培養基(對照組)，12小時，並直接測定細胞培養基，或以完全細胞培養基稀釋後冷凍於-80℃下，直到可使用MSD多工電化學冷光免疫測定法(multiplex electrochemiluminescence immunoassay)來測定Aβ38、Aβ40、及Aβ42之量。
在Meso Scale Discovery(MSD)多工電化學冷光免疫測定法中，在黑盤上添加150微升之稀釋劑35至各孔中，以封盤黏膜(adhesive plate seal)密封該盤，並於室溫下培養同時搖晃1小時。清洗，然後添加偵測抗體溶液及樣本。以至少150微升/孔之清洗緩衝液清洗該盤3次。添加25微升之偵測抗體溶液至各孔中。然後每孔中添加25微升之稀釋樣品、校正品、或對照組。以封盤黏膜密封該盤，並於室溫下培養同時搖晃2小時。在培養後，以至少150微升/孔之清洗緩衝液清洗該盤3次。添加150微升之2倍Read Buffer T至各孔中。在MSD成像器上讀取該盤。不需要在讀取該盤前，在讀 取緩衝液中培養。
藉由與細胞一同培養一段時間，來篩選本發明之BACE1抑制劑對細胞生產Aβ胜肽的效果(表1)。透過體外測定法，預期本發明化合物可顯著地使細胞減少生產一些Aβ胜肽的同功型。第3圖顯示所選之BACE1抑制劑(實施例109)對細胞生產Aβ胜肽的效果，其中實施例109之細胞Aβ40IC50(nM)係5.50±1.95nM。
II.選擇性測定法
a.組織蛋白酶D活性測定法
組織蛋白酶D(Cathepsin D，Cat D)係哺乳類天門冬胺酸蛋白酶家族之重要胞內成員，且被認為參與胞內及胞外蛋白質之正常降解。因此抑制Cat D可導致不需要之病症狀態。Cat D在生物活性胜肽之產生、外源抗體之加工中扮演一角色，但其對β-類澱粉蛋白之前驅蛋白影響較小。發展Cat D活性測定法可用來測定選自β-分泌酶活性測定法之化合物的任何潛在的交叉反應，並測定對BACE1抑制劑之選擇性。記述Cat D活性來評估目標選擇率(Cat D IC50/BACE1 IC50)。
如下製備用於組織蛋白酶D測定法之反應劑。
將冷凍儲存之2.0微升等分人類重組組織蛋白酶D樣品進行解凍，並添加42微升酵素緩衝液(0.1M NaOAC、0.2M NaCl，pH 3.5)，於37℃下培養30分鐘。30分鐘後，為直接用於組織蛋白酶D測定法，以含有5.0mM DTT之酵素緩衝液進一步稀釋酵素至4.4毫升之最終體積。
供給組織蛋白酶D之7-甲氧豆香素-標記胜肽受質(ES010)，係以溶於DMSO中之6.2mM儲液的形式提供。為用於組織蛋白酶D測定法，以DMSO稀釋該6.2mM儲液至1.55mM儲液。以反應緩衝液(0.1M NaOAC、0.2M NaCl、0.1%聚山梨醇酯20、5.0mM DTT，pH3.5)進一步稀釋溶於DMSO 中之1.55mM胜肽儲液至1：100，以產生用於測定法之15.5μM儲液。
將所選之BACE1活性化合物秤重並溶於DMSO至30mM濃度。以DMSO 1：2連續稀釋所選之BACE1活性化合物以產生DMSO中15、7.5、3.75、1.875、0.938、0.469、0.234、0.117、0.059、0.029mM之濃度，做為用於組織蛋白酶D測定法之1,000倍儲液。將不含化合物之DMSO當作組織蛋白酶D測定法之DMSO媒介對照組。對各測試化合物，吸取(pipette)30微升之各稀釋液進96-孔聚丙烯盤的個別孔中。標記該聚丙烯盤為DMSO稀釋盤，並製作測試化合物在盤中的位置圖。
來自DMSO稀釋盤之測試化合物，在其可以被添加至組織蛋白酶D測定盤前，需要以反應緩衝液進行1：100之稀釋。為完成測試化合物之1：100稀釋，自DMSO稀釋盤中吸取2.0微升的各濃度之各測試化合物(使用經校正多通道移液管以準確地分配2.0微升之體積)，至新的96-孔聚丙烯盤，使用為DMSO稀釋盤所製之盤位置圖。該96-孔盤用作抑制劑稀釋盤。之後，吸取198微升之反應緩衝液進抑制劑稀釋盤之各孔中(使用經校正多通道移液管(multichannel pipette)以準確地遞送198微升之體積)，且藉由輕輕地上下吸取混和吸取之測試化合物。
胃蛋白酶抑制劑A(pepstatin A)之1.0mM儲液係溶於DMSO中，並等分成5.0微升之樣品進行-20℃的冷凍儲存。一旦解凍，馬上添加45微升之DMSO(1：10稀釋)，以製出溶於DMSO之胃蛋白酶抑制劑A 100μM儲液。進一步以DMSO 1：10稀釋該100μM胃蛋白酶抑制劑A儲液，以製出溶於DMSO之10μM儲液。以DMSO 1：2連續稀釋該10μM儲液，以製出溶於DMSO之5、2.5、1.25、0.625、0.313、0.156、0.078、0.039、0.0195、0.0098μM儲液。添加溶於DMSO之胃蛋白酶抑制劑A儲液至DMSO稀釋盤，並在抑制劑稀釋盤上增加胃蛋白酶抑制劑A的繪製位置。將DMSO稀釋盤之胃蛋白 酶抑制劑A吸取至抑制劑稀釋盤，並如上對測試抑制劑所描述般以反應緩衝劑1：100稀釋。
以下列步驟進行胃蛋白酶D抑制測定法。
將欲測試的各濃度抑制劑(BACE1活性化合物)及胃蛋白酶抑制劑A(抑制劑對照劑)由抑制劑稀釋盤吸取10微升體積，至純黑96-孔測定盤中，其中該等抑制劑係以反應緩衝液1：100稀釋(見上述)。
之後，添加50微升體積之15.5μM胜肽受質(ES010)至組織蛋白酶D測定盤之各孔中，並藉由使用多通道移液管上下吸取與測試抑制劑混和。
藉由添加40微升之重組人類組織蛋白酶D(見上述)至測定盤開始反應，且立刻以每分鐘1,500轉(rpm)(450 x g)離心該盤1分鐘，以移除任何可能干擾組織蛋白酶D活性之螢光量測的氣泡。
放置測定盤進螢光盤分析儀，設定激發波長為320奈米，且設定發射波長為405奈米。在30分鐘之蒐集期間每分鐘蒐集一次讀值。
使用線性迴歸分析來擬合線性之時程數據，並使用經計算之斜率作為初始速率。對於非線性之時程數據，使用一級積分速率(first order rate)方程式以擬合在30至40分鐘之蒐集期間內所累積之數據。
然後測定所選之根據本發明實施例的BACE1之Cat D活性及目標選擇率(Cat D IC50/BACE1 IC50)。在下方表2及第4圖中說明該數值。第4圖顯示藉由組織蛋白D活性測定法測得，所選之BACE1抑制劑(實施例103)的交叉反應性。
Figure 105112413-A0202-12-0141-93
Figure 105112413-A0202-12-0142-94
b.胃蛋白酶活性測定法
大部分之天門冬胺酸蛋白酶屬於胃蛋白酶結構超家族，具有相似的一級及三級結構，及接近相同的催化裝置。這些蛋白酶係作為單鍊酶原(proenzyme)合成，例如對於胃蛋白酶，可為胃蛋白酶原(pepsinogen)。然後在活化的過程中切掉前片段(prosegment)，且蛋白酶部分亦可能被如組織蛋白酶D，被加工成雙鍊或更多鍊。胃蛋白酶係胃中一種主要之酵素，其參與胞內及胞外蛋白之正常降解。因此，抑制胃蛋白酶可能導致不需要的病症狀態。
以DMSO製備實驗抑制劑化合物的30mM儲液。藉由以DMSO進行30mM儲液之3倍稀釋(30微升之30mM儲液：60微升DMSO)，來製備10mM濃度之抑制劑。在稀釋盤上以10倍連續稀釋10mM及30mM儲液。
由Tocris Bioscience取得10毫克之胃蛋白酶抑制劑A的凍乾粉末。使用DMSO將該粉末加水復原(reconstitute)至10mM濃度，等分後儲存於-20℃下。在使用前解凍40微升體積之10mM儲液。在稀釋盤上以10倍連續稀釋10mM及3mM儲液。
使用多通道移液管，自稀釋盤中吸取2微升體積之經稀釋樣品，至新的96-孔聚丙烯盤。添加198微升之測定緩衝液(100倍稀釋)至含有化合物的各孔中，並充分混和。
藉由以活化緩衝液(50mM檸檬酸鈉，pH 2.5)10倍體積稀 釋濃縮液(0.88毫克/毫升)，將重組人類胃蛋白酶原A(20微克)在用於測定前先進行活化，且於室溫下培養該胃蛋白酶原15分鐘。在15分鐘之培養後，以測定緩衝液(50mM檸檬酸鈉、0.5M氯化鈉，pH 4.0)500倍稀釋活化之酵素，使酵素濃度達0.176微克/毫升。
藉由以測定緩衝液100倍稀釋ES002受質之2mM儲液(60微升之受質：5940微升之測定緩衝液)至20μM濃度，來製備受質。在進行測定前將該受質以室溫避光方式保存
使用多通道移液管將10微升之各化合物，由測定緩衝液稀釋盤轉移至黑色96孔盤的對應列。在添加化合物後，接著添加40微升之重組人類胃蛋白酶抑制劑A至含有抑制劑之各孔。
在添加酵素後，添加50微升體積之受質至各孔。每個孔中之反應混合物(100微升)含有0.088微克/毫升之酵素、10μM之受質、及測試化合物。立刻密封該盤，並在以Polar Star盤式分析儀讀取前，於室溫下放置於設定為350rpm之震盪器上大約30秒。該Polar Star盤式分析儀係設定為激發波長320奈米、發射波長405奈米。在大約25分鐘內，每41秒讀值一次。
然後測定所選之根據本發明實施例的BACE1抑制劑的胃蛋白酶活性及目標選擇率(胃蛋白酶IC50/BACE1 IC50)。在下方表3及第5圖說明該數值。第5圖顯示藉由胃蛋白酶活性測定法測得，所選之BACE1抑制劑(實施例109)的交叉反應性。
Figure 105112413-A0202-12-0143-95
III.其他體外測定法
a.鉀離子通道hERG測定法
hERG基因(human ether-à-go-go related gene)編碼在哺乳類心臟上之內向整流電壓調控鉀離子通道(inward rectifying voltage gated potassium channel)，該鉀離子通道參與心肌之再極化及放鬆。阻斷hERG電流會造成QT間隔延長，導致致命性心律不整(potential lethal ventricular tachyarrhythmia)，亦稱作心臟扭轉型室性心動過速(Torsade de Pointes，TdP)。許多被撤銷之藥物的心臟毒性效應，係藉由QT間隔的延長而證實。此測定法測定研發藥物與鉀離子通道間可能的交互作用，以測定心臟毒性的風險。
如下進行[3H]阿斯咪唑(astemizole)結合測定法： 所有結合測定法皆以111.1微升之總體積進行，其由100微升之緩衝液(10mM HEPES、pH 7.4、130mM NaCl、5mM KCl、0.8mM MgCl2、1mM NaEGTA、10mM葡萄糖、0.1% BSA、10微克膜懸浮液)、1.1微升之測試化合物或媒介物、10微升之具有最終濃度1.5nM的[3H]阿斯咪唑所組成，並於25℃下培養60分鐘。
藉由快速在GF/B玻璃纖維過濾墊上過濾、在0.3%聚乙烯亞胺中預浸泡、並以冰的清洗緩衝液(25mM Tris-HCl、pH 7.4、130mM NaCl、5mM KCl、0.8mM MgCl2、0.05mM CaCl2、0.1% BSA)清洗過濾墊4次來中止結合。
至於非專一性結合測定法，其係藉由10μM阿斯咪唑定義。非專一性結合意指將使用過量(即，200~1000倍或更高)之未標記配體。在該測定法中，其係在10μM阿斯咪唑或測試化合物存在下評估。於25℃下培養通道蛋白60分鐘，過濾並清洗。然後計數濾液以測定專一性結合之[3H]阿 斯咪唑。當篩選化合物時，其濃度係10μM，並每次進行非專一性結合測定法。
藉由液體閃爍計數器(liquid scintillation counter)計數在該二測定法中的放射活性(radioactivity)。
然後藉由放射性配體結合測定法(radioligand binding assays)，測定所選之根據本發明實施例的BACE1抑制劑的所選化合物活性。在下方表4說明該數值。
Figure 105112413-A0202-12-0145-96
b.使用MDCK-hMDR1單層膜之體外滲透性研究
將馬丁達比犬腎(Madin-Darby canine kidney，MDCK)細胞以人類MDR1基因轉染(MDCK-MDR1)，來建立人類P-醣蛋白(P-glycoprotein，Pgp)受質及抑制劑之特徵，係廣泛的用於運輸研究中，以辨識作為該排出蛋白(efflux protein)之受質的候選藥物。該細胞運輸模式(在MDR1-MDCK細胞中)係用來了解藥物排出之機制，並藉由血腦屏障(blood brain barrier，BBB)中一種重要之排出運輸蛋白(efflux transporter)Pgp來凸顯藥物滲透性之早期潛在問題。Pgp排出率係通過該單層膜之淨流量。如果排出率大於2，一般認為該化合物可能係Pgp受質，限制了化合物的腦部穿透，對CNS治療而言並不理想。
如下測量滲透性及排出率： 將MDCK-hMDR1細胞(100,000細胞/孔)接種在康寧(Corning)12-孔轉移盤(transwell plate)上。在上邊(A-邊)及底側邊(B-邊)之培養基體積分別係0.5毫升及1.5毫升。在生長培養基中培養細胞大約5天，以使其在濾膜上形成細胞單層膜。在此時，細胞完全成熟且表現P-醣蛋白，具有增加之跨上皮電阻(trans-epithelial electrical resistance，TEER)。每48小時換一次培養基，且在實驗的那天於實驗前換培養基。測量TEER，以在研究前確保細胞單層膜之品質，且最小阻力係200Ω‧平方公分。以預熱之HBSS緩衝液清洗MDCK-hMDR1細胞三次，且在添加測試化合物前，於37℃下在HBSS緩衝液中(在A-邊及B-邊中之體積分別係0.5毫升及1.5毫升)預培養MDCK-hMDR1單層膜30分鐘。再次測量TEER，且最小阻力係200Ω‧平方公分。
為評估A→B滲透性，自A-邊之腔室抽出HBSS緩衝液，並隨後添加0.5毫升之溶於HBSS緩衝液的測試化合物或正對照組至A-邊之腔室。對各化合物進行三次所有之實驗(n=3)。於37℃下培養細胞2小時，並在培養後自供給邊(A-邊)及接收邊(B-邊)腔室蒐集樣品。使用LC-MS/MS分析培養基中藥物的濃度。
為評估B→A滲透性，細胞培養係以上述之相同方法製備。自B-邊之腔室抽出HBSS緩衝液，並隨後添加1.5毫升之溶於HBSS緩衝液的測試化合物或正對照組至B-邊之腔室。在此例中，A-邊係接收邊。於37℃下培養細胞2小時，並蒐集樣品。
排出率係作為測試化合物穿透MDCK-hMDR1單層膜之滲透速率而被計算，其係用以測定滲透係數(Papp)，該滲透係數可用來預測測試化合物在體內之吸收。在獲得Papp(A→B)及Papp(B→A)之值後，可使用下列方程式計算排出率：排出率(Efflux Ratio，ER)=Papp(B→A)/Papp(A→B)。
然後藉由使用MDCK-hMDR1單層膜，測定所選之根據本發明實施例的BACE1抑制劑的所選化合物之吸收(表5)。
Figure 105112413-A0202-12-0147-97
Figure 105112413-A0202-12-0148-98
c. Caco-2滲透率測定法
分化極化之Caco-2細胞(一種人類結腸癌細胞株)在其細胞膜上表現廣泛之運輸蛋白，模仿腸之內皮細胞。雙向之Caco-2滲透性測定法被認為係口服投予藥物之體外預測體內人類腸滲透性的業界參考標準。進行該測定，其中測量上邊至底側邊方向及底側邊至上邊方向的化合物運輸。結果一般以排出率報告(即，Papp(B→A)/Papp(A→B))，其中Papp係表面滲透率(apparent permeability)。如果排出率大於2，則意指發生藥物排出。
IV.哺乳類中效果研究
某些Aβ胜肽(Aβ)之同功型，例如Aβ38、Aβ40、及Aβ42已確立為反應BACE1活性之相關生物標記，且已開發來建立不同細胞測定法及動物模式間的轉換關係(translational relationship)。在此效果研究中，哺乳類係用來評估以BACE1抑制劑降低Aβ。在臨床裝置中，血漿及腦脊髓液(CSF)係可以評估之部分，以測量可溶性Aβ的量，來測定目標之數據圖。分析血漿及CSF中之Aβ量係重要的，其與腦中Aβ量的變化相關。在靜脈注射或口服投予BACE1抑制劑後，調查BACE1抑制劑之濃度及其時間依賴型血漿、CSF、及腦中Aβ量的降低。
a.小鼠、大鼠及猴子研究中使用的調配物：
製備用於動物研究之媒介物及測試物溶液的製程及操作說明係如下：
(i).用於靜脈注射(IV)投予之調配物：10%(體積/體積)二甲基乙醯胺(DMA)、5%(體積/體積)聚乙二醇15羥基硬脂酸酯(Solutol)、及85%(體積/體積)生理食鹽水。使化合物溶於DMA及Solutol中，接著添加水性溶液至最終體積，來製備測試物溶液。
(ii).用於口服(PO)投予之調配物：5%(體積/體積)聚乙二醇400(PEG 400)+95%(體積/體積)之1%(重量/體積)溶於水的甲基纖維素(methyl cellulose)(甲基纖維素之黏度於20℃，cPa.s為350.0-550.0時係20克/升)。使化合物溶於PEG 400中，接著添加水性溶液至最終體積，來製備測試物溶液。
(iii).用於PO投予之調配物：5%(體積/體積)PEG 400+0.1%(體積/體積)聚山梨醇酯80(Tween 80)+20%(重量/體積)羥基丙基-β-環糊精(HP-β-CD)：藉由將化合物溶於PEG 400及Tween 80中，接著添加水性溶液至最終體積，來製備測試物溶液。
(iv).用於PO投予之調配物：10%(體積/體積)PEG 400+0.2%(體積/體積)Tween 80+10%(重量/體積)HP-β-CD：藉由將化合物溶於PEG 400及Tween 80中，接著添加HP-β-CD水溶液至最終體積，來製備測試物溶液。
用於效果研究之製備製程的細節係如下所列：在猴子效果研究中，BACE1抑制劑之口服調配物(20毫克/公斤之劑量，2毫克/毫升之濃度)
1)秤重101.39毫克之欲測試之BACE1抑制劑加至乾淨的小玻璃瓶；
2)添加2.826毫升PEG 400至上述含有化合物之管中。接著渦流攪拌(vortexed)5分鐘，並音波震動45分鐘；
3)添加53.688毫升之1% MC水溶液至上述含有化合物之管中。接著渦流攪拌4分鐘，並音波震動4分鐘；以及
4)藉由使用1N NaOH調整pH值至生理值範圍。
在大鼠效果研究中，BACE1抑制劑之口服調配物(20毫克/公斤之劑量，4毫克/毫升之濃度)之製備製程與在猴子研究中相似。
b.在猴子體內之功效研究
數個研究顯示，在人類與靈長類中，藥物進入CNS之過程較為相似。因此，於非人類靈長類(non-human primate)研究AG化合物之CSF分布，可預期AG化合物在人類體內之CSF分布。為了探討BACE1化合物之機制，進行體內研究用以測試化合物。所選之BACE1化合物，在CSF中相較於基線量能顯著降低Aβ。進行猴子Aβ降低之研究通常耗時3週。
在單次口服投予所選之BACE1抑制劑至雄性馬來猴後，測定神經退化生物標記之時程數據圖。透過隱靜脈(saphenous vein)或頭靜脈(cephalic vein)在0小時(投藥前)、投藥後0.5、1、3、6、8、12、及24小時，自所有動物蒐集血液樣品，將該血液樣品蒐集進含有乙二胺四乙酸鉀(K2EDTA)的試管中。透過在枕骨大孔(foramina occipital magnum)預先置入之套管，在0小時(投藥前)、投藥後3、6、12、及24小時蒐集CSF樣品。
藉由於4℃下離心自血液分離出血漿，並儲存於-80℃直到分析。根據製造商之使用說明使用MSD多工電化學冷光免疫測定法定量CSF中Aβ38、Aβ40、及Aβ42之生物標記。首先以150微升之稀釋劑35(Diluent 35)於室溫下進行1小時阻斷作用，同時持續以600rpm震盪該盤。以200微升清洗緩衝液清洗三次後，添加25微升之1倍偵測抗體溶液及Aβ40阻斷劑、25微升之7種標準液、0標準液及4倍稀釋樣品至測定盤。將該盤置於室溫下以600rpm震盪，使盤內反應持續2小時。結束後，即以清洗緩衝液清洗該盤三次，並在添加150微升之2倍讀取緩衝液T後，立刻置入高通量多蛋白檢測儀(Sector Imager 6000(MSD))中讀取。參考各單獨胜肽之標準曲線，使用SoftMax Pro GXP 5.4.4計算Aβ濃度，並以皮克/毫升表示。
結果顯示，三種神經退化生物標記Aβ38、Aβ40、及Aβ42於CSF的量，皆受到所選之BACE1抑制劑顯著地抑制。第6圖顯示，在以20毫克/ 公斤之劑量單次口服投予所選之化合物(實施例72)後，在猴子CSF中的神經退化性生物標記Aβ40。口服投予所選之化合物後，在猴子體內的Aβ40抑制結果係顯示於下方表6中。
Figure 105112413-A0202-12-0151-99
c.在大鼠體內的功效研究
在單次口服投予所選之BACE1抑制劑至史-道二氏大鼠(Sprague Dawley rat)後，測定相似的神經退化生物標記之時程數據圖。
結果顯示，三種神經退化生物標記Aβ38、Aβ40、及Aβ42於CSF的量，皆受到所選之BACE1抑制劑顯著地抑制。第7圖顯示，在以20毫克/公斤之劑量單次口服投予所選之化合物(實施例109)後，在三隻大鼠之CSF中的神經退化性生物標記Aβ40。
d.在基因轉殖AD動物體內的功效研究
為了探討Aβ毒性之形成與AD相關症狀的關聯性，分析了最廣泛研究之AD模式中的一種，基因轉殖Tg2576(APP K670N/M671L)小鼠，其特徵係過度生產及沉積Aβ蛋白。在瑞典型家族性AD(Swedish familial AD，SFAD)中，APP突變係位在Aβ胜肽胺基端的遠端，並導致二個胺基酸的置換：K670N及M671L。該等突變增加了BACE對APP的蛋白水解速度。基因轉殖AD小鼠過度生產突變之APP，發展出與人類腦中相似的病症。此 外，三重基因轉殖小鼠模式(APP/早老素(PS)/濤蛋白(Tau)(3xTgAPP，APP(swe)/PS1(M146V)/MAPT(P301L))小鼠)表現Aβ及tau病症二者，模擬人類之AD。該等模式係經基因修飾，以在腦中生產更多之Aβ。累積之Aβ與記憶喪失有關。使用記憶功能評估測定法來測定效果，該記憶功能評估測定法包括莫氏水迷津(Morris water maze)、放射狀迷津(radial arm maze)、放射狀水迷津(radial arm water maze)等。
雖然前述對本發明之描述可使具有通常知識者製作及使用其現在認為最好之模式，具有通常知識者應了解並知道存在有本文所述之特定實施態樣、方法、及實施例的變異、組合、及等效物。因此本發明不應被上述實施態樣、方法、及實施例所限制，而係限於本發明範圍及精神內之所有實施態樣及方法。
Figure 105112413-A0202-11-0003-299

Claims (6)

  1. 一種如式(VI)之化合物：
    Figure 105112413-A0305-02-0156-1
     其中，該式(VI)化合物係選自以下群組：(S)-2-亞胺基-3,6-二甲基-6-(8-(丙-1-炔-1-基)二苯並[b,d]噻吩-2-基)四氫嘧啶-4(1H)-酮；(S,Z)-N-(1,4-二甲基-6-側氧-4-(8-(丙-1-炔-1-基)二苯並[b,d]噻吩-2-基)四氫-2(1H)-亞嘧啶基)苯甲醯胺；(S)-1-苯甲醯基-2-亞胺基-3,6-二甲基-6-(8-(丙-1-炔-1-基)二苯並[b,d]噻吩-2-基)四氫嘧啶-4(1H)-酮；(S,Z)-苯甲酸((1,4-二甲基-6-側氧-4-(8-(丙-1-炔-1-基)二苯並[b,d]噻吩-2-基)四氫-2(1H)-亞嘧啶基)胺基)甲酯；(S)-苯甲酸(2-亞胺基-3,6-二甲基-4-側氧-6-(8-(丙-1-炔-1-基)二苯並[b,d]噻吩-2-基)四氫嘧啶-1(2H)-基)甲酯；(S,Z)-N-(1,4-二甲基-6-側氧-4-(8-(丙-1-炔-1-基)二苯並[b,d]噻吩-2-基)四氫-2(1H)-亞嘧啶基)十六醯胺；(S,Z)-十二酸((1,4-二甲基-6-側氧-4-(8-(丙-1-炔-1-基)二苯並[b,d]噻吩-2-基)四氫-2(1H)-亞嘧啶基)胺基)甲酯；(S)-2-亞胺基-3,6-二甲基-1-十六醯基-6-(8-(丙-1-炔-1-基)二苯並[b,d]噻吩-2-基)四氫嘧啶-4(1H)-酮； (S)-十二酸(2-亞胺基-3,6-二甲基-4-側氧-6-(8-(丙-1-炔-1-基)二苯並[b,d]噻吩-2-基)四氫嘧啶-1(2H)-基)甲酯；(S)-2-亞胺基-3,6-二甲基-6-(8-(丙-1-炔-1-基)二苯並[b,d]呋喃-2-基)四氫嘧啶-4(1H)-酮；(R)-3-亞胺基-2,2,5-三甲基-5-(7-甲基-10,11-二氫-5H-二苯並[b,f]氮雜卓-3-基)硫代嗎啉1,1-二氧化物；(R)-3-亞胺基-2,2,5-三甲基-5-(2-甲基-6,11-二氫-5H-苯並[b]吡啶並[3,2-f]氮雜卓-9-基)硫代嗎啉1,1-二氧化物；(R)-5-(7氟-10,11-二氫-5H-二苯並[b,f]氮雜卓-3-基)-3-亞胺基-2,2,5-三甲基硫代嗎啉1,1-二氧化物；(R)-3-亞胺基-2,2,5-三甲基-5-(7-甲基-5,11-二氫二苯並[b,e][1,4]氧氮雜卓-3-基)硫代嗎啉1,1-二氧化物；(R)-3-亞胺基-2,2,5-三甲基-5-(3-甲基-5,11-二氫二苯並[b,e][1,4]氧氮雜卓-7-基)硫代嗎啉1,1-二氧化物；(R)-7-(5-亞胺基-3,6,6-三甲基-1,1-二氧硫代嗎啉-3-基)-3-甲基-5,11-二氫二苯並[b,e][1,4]硫氮雜卓10,10-二氧化物；(R)-5-((1aS,10bR)-4-氟-1,1a,6,10b-四氫苯並[b]環丙烷[d]吡啶並[3,2-f]氮雜卓-8-基)-3-亞胺基-2,2,5-三甲基硫代嗎啉1,1-二氧化物；(R)-5-(2-氟-7-甲基-5H-二苯並[b,f]氮雜卓-3-基)-3-亞胺基-2,2,5-三甲基硫代嗎啉1,1-二氧化物；(R)-3-亞胺基-2,2,5-三甲基-5-(7-甲基-10,11-二氫-5H-二苯並[b,f]氮雜卓-3-基)硫代嗎啉1,1-二氧化物；(S)-6-(3-氯-8-(丙-1-炔-1-基)二苯並[b,d]噻吩-2-基)-2-亞胺基-3,6-二甲基四氫嘧啶-4(1H)-酮； (S)-6-(3-氟-8-(丙-1-炔-1-基)二苯並[b,d]噻吩-2-基)-2-亞胺基-3,6-二甲基四氫嘧啶-4(1H)-酮；(S)-6-(9-氟-8-(丙-1-炔-1-基)二苯並[b,d]噻吩-2-基)-2-亞胺基-3,6-二甲基四氫嘧啶-4(1H)-酮；(S)-6-(5,5-二氧代-8-(丙-1-炔-1-基)二苯並[b,d]噻吩-2-基)-2-亞胺基-3,6-二甲基四氫嘧啶-4(1H)-酮；(6S)-2-亞胺基-3,6-二甲基-6-(5-氧代-8-(丙-1-炔-1-基)二苯並[b,d]噻吩-2-基)四氫嘧啶-4(1H)-酮；(S)-6-(9,9-二甲基-6-(丙-1-炔-1-基)-9H-芴-3-基)-2-亞胺基-3,6-二甲基四氫嘧啶-4(1H)-酮；(S)-6-(9,9-二氟-6-(丙-1-炔-1-基)-9H-芴-3-基)-2-亞胺基-3,6-二甲基四氫嘧啶-4(1H)-酮；(S)-8-(2-亞胺基-1,4-二甲基-6-側氧六氫嘧啶-4-基)二苯並[b,d]噻吩-2-甲腈；(S)-2-亞胺基-6-(8-(3-甲氧丙-1-炔-1-基)二苯並[b,d]噻吩-2-基)-3,6-二甲基四氫嘧啶-4(1H)-酮；(S)-6-(8-(3-羥基丙-1-炔-1-基)二苯並[b,d]噻吩-2-基)-2-亞胺基-3,6-二甲基四氫嘧啶-4(1H)-酮；(S)-6-(8-溴二苯並[b,d]噻吩-2-基)-2-亞胺基-3,6-二甲基四氫嘧啶-4(1H)-酮；(S)-2-亞胺基-3,6-二甲基-6-(8-丙基二苯並[b,d]噻吩-2-基)四氫嘧啶-4(1H)-酮；(S)-6-(8-環丙基二苯並[b,d]噻吩-2-基)-2-亞胺基-3,6-二甲基四氫嘧啶-4(1H)-酮； (S)-8-(2-亞胺基-1,4-二甲基-6-側氧六氫嘧啶-4-基)二苯並[b,d]噻吩-2-甲醯胺；(S)-6-(8-(二乙基胺基)二苯並[b,d]噻吩-2-基)-2-亞胺基-3,6-二甲基四氫嘧啶-4(1H)-酮；(S)-2-亞胺基-3,6-二甲基-6-(8-(三氟甲基)二苯並[b,d]噻吩-2-基)四氫嘧啶-4(1H)-酮；(R)-6-環丙基-2-亞胺基-3-甲基-6-(8-(丙-1-炔-1-基)二苯並[b,d]噻吩-2-基)四氫嘧啶-4(1H)-酮；(R)-5,5-二氟-4-甲基-4-(8-(丙-1-炔-1-基)二苯並[b,d]噻吩-2-基)-1,3-氧氮雜環己烷-2-亞胺；(R)-3-亞胺基-2,2,5-三甲基-5-(8-(丙-1-炔-1-基)二苯並[b,d]噻吩-2-基)硫代嗎啉1,1-二氧化物；(R)-3-亞胺基-2,5-二甲基-5-(8-(丙-1-炔-1-基)二苯並[b,d]噻吩-2-基)-1,2,4-噻二嗪烷1,1-二氧化物；(S)-3-(2,2-二氟乙基)-2-亞胺基-6-甲基-6-(8-(丙-1-炔-1-基)二苯並[b,d]噻吩-2-基)四氫嘧啶-4(1H)-酮；(S)-2-亞胺基-3-(2-甲氧乙基)-6-甲基-6-(8-(丙-1-炔-1-基)二苯並[b,d]噻吩-2-基)四氫嘧啶-4(1H)-酮；(R)-5-(3-氟-8-(丙-1-炔-1-基)二苯並[b,d]噻吩-2-基)-3-亞胺基-2,2,5-三甲基硫代嗎啉1,1-二氧化物；(R)-3-亞胺基-1,5-二甲基-5-(8-(丙-1-炔-1-基)二苯並[b,d]噻吩-2-基)哌嗪-2-酮；(R)-5-(4-氟-8-(丙-1-炔-1-基)二苯並[b,d]噻吩-2-基)-3-亞胺基-2,2,5-三甲基硫代嗎啉1,1-二氧化物； (R)-5-(7-氟-8-(丙-1-炔-1-基)二苯並[b,d]噻吩-2-基)-3-亞胺基-2,2,5-三甲基硫代嗎啉1,1-二氧化物；(R)-10-亞胺基-8-甲基-8-(8-(丙-1-炔-1-基)二苯並[b,d]噻吩-2-基)-6-硫雜-9-氮雜螺[4.5]癸烷6,6-二氧化物；(R)-8-亞胺基-6-甲基-6-(8-(丙-1-炔-1-基)二苯並[b,d]噻吩-2-基)-4-硫雜-7-氮雜螺[2.5]辛烷4,4-二氧化物；((R,E)-3-亞胺基-2,2,5-三甲基-5-(8-(丙-1-烯-1-基)二苯並[b,d]噻吩-2-基)硫代嗎啉1,1-二氧化物；及(R)-6-(7-氟-8-(丙-1-炔-1-基)二苯並[b,d]噻吩-2-基)-8-亞胺基-6-甲基-4-硫雜-7-氮雜螺[2.5]辛烷4,4-二氧化物；其立體異構物、互變異構物、游離鹼或醫藥上可接受之鹽。
  2. 一種醫藥組合物，其係包含一治療有效量之如請求項1所述之化合物及一醫藥上可接受之賦形劑。
  3. 一種使用如請求項1所述之化合物於製備一藥劑的用途，其中，該藥劑係用於抑制BACE1之活性。
  4. 一種使用如請求項1所述之化合物於製備一藥劑的用途，其中，該藥劑係用於治療一β類澱粉蛋白相關病症。
  5. 如請求項4所述之用途，其中，該β類澱粉蛋白相關病症係：唐氏症(Downs syndrome)、β類澱粉蛋白血管病變(β-amyloid angiopathy)、與認知損傷相關之病症(disorder associated with cognitive impairment)、阿茲海默症(Alzheimer’s disease)、記憶喪失、與阿茲海默症相關之注意力不足症(attention deficit symptom)、神經退化性疾病(neurodegenerative diseases)、早發型失智症(pre-senile dementia)、老年失智症(genile dementia)及與阿茲海默症、帕金森氏症(Parkinson's disease)及/或 唐氏症相關之失智症、老年性黃斑部病變(age-related macular degeneration,AMD)、青光眼(glaucoma)、嗅覺功能損傷、創傷性腦傷(traumatic brain injury)、漸進式肌肉萎縮症(progressive muscle disease)、第二型糖尿病(Type II diabetes mellitus)及心血管疾病(中風)。
  6. 一種使用如請求項1所述之化合物於製備一藥劑的用途，其中，該藥劑係用於治療阿茲海默症。
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