TWI675674B - 醫療器材、細胞培養方法、含氟環狀烯烴聚合物的用途以及含氟環狀烯烴聚合物組成物的用途 - Google Patents
醫療器材、細胞培養方法、含氟環狀烯烴聚合物的用途以及含氟環狀烯烴聚合物組成物的用途 Download PDFInfo
- Publication number
- TWI675674B TWI675674B TW104126178A TW104126178A TWI675674B TW I675674 B TWI675674 B TW I675674B TW 104126178 A TW104126178 A TW 104126178A TW 104126178 A TW104126178 A TW 104126178A TW I675674 B TWI675674 B TW I675674B
- Authority
- TW
- Taiwan
- Prior art keywords
- cells
- fluorine
- substrate
- culture
- cell
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/0068—General culture methods using substrates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
- C08G61/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming a carbon-to-carbon link in the main chain of the macromolecule
- C08G61/02—Macromolecular compounds containing only carbon atoms in the main chain of the macromolecule, e.g. polyxylylenes
- C08G61/04—Macromolecular compounds containing only carbon atoms in the main chain of the macromolecule, e.g. polyxylylenes only aliphatic carbon atoms
- C08G61/06—Macromolecular compounds containing only carbon atoms in the main chain of the macromolecule, e.g. polyxylylenes only aliphatic carbon atoms prepared by ring-opening of carbocyclic compounds
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
- C12M23/00—Constructional details, e.g. recesses, hinges
- C12M23/02—Form or structure of the vessel
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
- C12M23/00—Constructional details, e.g. recesses, hinges
- C12M23/20—Material Coatings
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
- C12M25/00—Means for supporting, enclosing or fixing the microorganisms, e.g. immunocoatings
- C12M25/06—Plates; Walls; Drawers; Multilayer plates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
- C12M47/00—Means for after-treatment of the produced biomass or of the fermentation or metabolic products, e.g. storage of biomass
- C12M47/02—Separating microorganisms from the culture medium; Concentration of biomass
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
- C12M47/00—Means for after-treatment of the produced biomass or of the fermentation or metabolic products, e.g. storage of biomass
- C12M47/04—Cell isolation or sorting
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08L—COMPOSITIONS OF MACROMOLECULAR COMPOUNDS
- C08L65/00—Compositions of macromolecular compounds obtained by reactions forming a carbon-to-carbon link in the main chain; Compositions of derivatives of such polymers
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2533/00—Supports or coatings for cell culture, characterised by material
- C12N2533/30—Synthetic polymers
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2535/00—Supports or coatings for cell culture characterised by topography
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Sustainable Development (AREA)
- Clinical Laboratory Science (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Materials For Medical Uses (AREA)
- Polymerisation Methods In General (AREA)
- Graft Or Block Polymers (AREA)
- Prostheses (AREA)
Abstract
Description
本發明是有關於一種醫療器材、細胞培養方法、含氟環狀烯烴聚合物、含氟環狀烯烴聚合物組成物以及培養細胞。
先前以來,已培養了大量的動植物細胞,且亦正在研究各種形態的培養技術。尤其於生命科學的領域中,細胞培養技術成為開發醫藥品或闡明病態機制(mechanism)等所不可或缺的技術,不僅是研究目的之細胞培養技術,以於生物學、醫學、藥學、免疫學等領域中的利用為目的之工業生產性培養方法亦正在進行各種研究。另外,近年來於醫療等領域中,培養組織細胞並將其用作人工器官、人工齒骨、人工皮膚等的代替組織的研究亦正在盛行。
此種細胞培養通常是於一定的容器中與培養液一起進行培養。關於細胞培養,尤其動物細胞大多數具有附著於物質而培育的黏附依賴性(adhesion-dependent),在進行具有此種黏附依
賴性的細胞的培養時,需要用以使細胞附著的基材(器材)。關於細胞培養用基材,其材料通常主要為聚苯乙烯成形品,對基材的表面實施低溫電漿處理、電暈放電處理等而賦予有親水性的基材已作為皿(schale)、瓶(flask)、多板(multiplate)等培養器材而市售。
然而,作為附著性細胞種的重要性質,已知如下接觸抑制:於使用培養器材來進行細胞培養的情形時,若細胞將培養容器的培養面完全覆蓋,則細胞增殖停止。另外,亦已知如下密度效應:若所播種的細胞濃度過低,則即便是將養分或氧等充分供給於細胞的環境,亦對細胞的黏附或增殖產生影響。進而,細胞顯示出附著於培養容器的培養面並且進行平面增殖的態樣,故尤其作為製作應用於組織培養的細胞增殖形成群體的狀態的細胞片的方法,可使用反覆播種並進行培養的操作(以下簡稱為繼代操作),但操作煩雜,難以無損傷地以良好的再現性培養細胞。
為了解決此種問題,已揭示了以下方法:將經交聯成凝膠、海綿狀的膠原蛋白(collagen)配置於培養基材上,播種纖維母細胞或角化細胞等並進行培養,由此製造培養黏膜.皮膚(專利文獻1),所利用的膠原蛋白種大多為自牛或豬的結締組織溶解、萃取的膠原蛋白,近年來因牛海綿狀腦病(Bovine Spongiform Encephalopathy,BSE)或口蹄疫(Aphtae epizooticae)等問題,於考慮到醫療應用等的情形時其使用變困難。
關於繼代操作,現有技術中通常採用以下方法:為了培
養反覆分裂的附著性細胞,持續進行以下操作:每當於培養容器中將細胞培養適當的時間而增殖至目標細胞濃度時,將細胞自培養面上剝離,將其一部分移換至新的培養容器中(例如專利文獻2、專利文獻3)。專利文獻2中揭示有以下方法:使用具有面積不同的多個培養面的培養容器,自具有最小面積的培養面開始細胞培養,隨著增殖進行,一面利用刮刀將細胞剝離並緩緩將細胞移至面積大的培養面,一面以封閉系統進行培養。另外,揭示有如下繼代操作:將由氣體透過性的樹脂所製作的細胞袋彼此連接,使袋內的培養液混合,由此調整細胞濃度(專利文獻3)。然而,無論為哪種方法,該繼代操作均伴有頻繁的溶液更換等非常煩雜的操作,另外,因進行將附著於基材上的細胞剝離而移換至新的培養容器中的操作,故有使細胞損傷、使增殖形態破壞等潛在性的許多問題。
再者,關於培養細胞的基材表面的性狀及增殖性,已揭示有以培養L細胞(胃腸內分泌細胞)的例子來評價細胞的增殖形態與基材的水接觸角的關係的結果(非專利文獻1)。其中記載:關於水接觸角為43°~116°的範圍的基材,若對自培養開始起經過1小時後的細胞密度進行測量,則與基材的種類無關,使用了水接觸角在60°~70°的範圍內的基材的細胞密度高,細胞的黏附性良好。
另外,最近已提出了使用在細胞所接觸的基材的表面上形成有凹凸結構的基材的培養技術(例如專利文獻4、專利文獻
5)。大多情況下,使用經賦形有凹凸結構的基材的培養顯示出球體(spheroid)培養且細胞以塊狀形態增殖的態樣。然而,賦形有凹凸結構的基材的材料為環烯烴聚合物(專利文獻4)、聚二甲基矽氧烷(專利文獻5)等一直以來已知的細胞黏附性的材料,於利用基材的凹凸結構的球體培養中,即便細胞與基材接觸的面積變小,本質上黏附性的態樣亦不改變而細胞形成支架。藉此,於使所培養的細胞自基材脫離時,有使細胞損傷、使增殖的形態破壞等潛在的問題。進而,於使用賦形有凹凸結構的基材的細胞培養中,關於細胞形成支架方面的有效的凹凸結構的形狀、尺寸已有報告,但並無關於基材表面的水接觸角與黏附性或增殖性的關係的記載。
專利文獻1:日本專利特開2004-147585號公報
專利文獻2:日本專利特開2004-129558號公報
專利文獻3:日本專利特開平7-047105號公報
專利文獻4:國際公開第2007/097121號手冊
專利文獻5:日本專利特開2010-88347號公報
非專利文獻1:Y.玉田(Y.Tamada),Y.五十田(Y.Ikada),「膠體與界面科學雜誌(Journal of Colloid and Interface Science)」(155,334-339(1993)).
本發明的課題在於提供一種醫療器材,其可使接觸或保持於基材的一面上的細胞無損傷地自基材上脫離。
另外,本發明的課題在於提供一種可長期間維持藥物代謝系酵素活性的培養細胞。可認為,可維持藥物代謝系酵素活性的培養細胞可於再生醫療等中較佳地展開,故本發明的意義極為重大。
本發明為以下所示。
(式(1)中,R1~R4中,至少一個為氟、含氟的碳數1~10的烷基、含氟的碳數1~10的烷氧基或含氟的碳數2~10的烷氧
基烷基;於R1~R4為不含氟的基團的情形時,R1~R4是選自氫、碳數1~10的烷基、碳數1~10的烷氧基或碳數2~10的烷氧基烷基中;R1~R4可彼此相同亦可不同;R1~R4亦可相互鍵結而形成環結構)。
(2)如(1)所述的醫療器材,其中接觸或保持細胞的所述一面的水接觸角為70°以上且160°以下。
(3)如(1)或(2)所述的醫療器材,其中接觸或保持細胞的所述一面的水接觸角為70°以上且120°以下。
(4)如(1)所述的醫療器材,其中所述基材的至少與細胞接觸的所述一面具備凹凸結構。
(5)如(4)所述的醫療器材,其中與細胞接觸的所述一面的水接觸角為121°以上且160°以下。
(6)如(1)至(5)中任一項所述的醫療器材,其中所述基材的至少接觸或保持細胞的所述一面是由含有所述含氟環狀烯烴聚合物、光硬化性化合物及光硬化起始劑的含氟環狀烯烴聚合物組成物所構成。
(7)如(6)所述的醫療器材,其中所述含氟環狀烯烴聚合物組成物中的所述含氟環狀烯烴聚合物與所述光硬化性化合物之質量比(含氟環狀烯烴聚合物/光硬化性化合物)為99.9/0.1~50/50。
(8)如(1)至(7)中任一項所述的醫療器材,其是用於對接觸或保持於所述一面上的細胞進行培養。
(9)如(8)所述的醫療器材,其中於細胞培養中,細胞形成群體同時增殖。
(10)如(8)或(9)所述的醫療器材,其中藉由緩衝液使所培養的細胞浮游而自所述一面上脫離。
(11)一種細胞培養方法,包括以下步驟:於如(1)至(10)中任一項所述的醫療器材的所述基材的所述一面上,以於所述一面上接觸或保持的方式播種細胞;培養所述細胞而獲得培養細胞;以及於所述一面上添加緩衝液,使所述培養細胞自所述一面浮游。
(式(1)中,R1~R4中,至少一個為氟、含氟的碳數1~10的烷基、含氟的碳數1~10的烷氧基或含氟的碳數2~10的烷氧
基烷基;於R1~R4為不含氟的基團的情形時,R1~R4是選自氫、碳數1~10的烷基、碳數1~10的烷氧基或碳數2~10的烷氧基烷基中;R1~R4可彼此相同亦可不同;R1~R4亦可相互鍵結而形成環結構)。
(13)一種含氟環狀烯烴聚合物組成物,構成具備基材且使細胞接觸或保持於所述基材的一面上的醫療器材的所述基材的至少使細胞保持的所述一面,並且所述含氟環狀烯烴聚合物組成物含有:含有下述通式(1)所表示的重複結構單元的含氟環狀烯烴聚合物、光硬化性化合物、及光硬化起始劑;
(式(1)中,R1~R4中,至少一個為氟、含氟的碳數1~10的烷基、含氟的碳數1~10的烷氧基或含氟的碳數2~10的烷氧基烷基;於R1~R4為不含氟的基團的情形時,R1~R4是選自氫、
碳數1~10的烷基、碳數1~10的烷氧基或碳數2~10的烷氧基烷基中;R1~R4可彼此相同亦可不同;R1~R4亦可相互鍵結而形成環結構)。
(14)一種培養細胞,維持至少七天的藥物代謝系酵素活性。
本發明可提供一種醫療器材,其可使接觸或保持於基材的一面上的細胞無損傷地自基材上脫離。
上文所述的目的及其他目的、特徵及優點將根據以下將述的較佳實施形態、及隨附於其的以下圖式而更為明瞭。
圖1為浸漬於磷酸緩衝生理食鹽水中而以片狀浮游的小鼠胚胎纖維母細胞。
圖2為利用實施例23中記載的細胞培養容器培養7天的人皮膚纖維母細胞的細胞核及細胞骨架蛋白的螢光顯微鏡照片。
圖3為利用比較例6中記載的TCPS多孔板培養7天的人皮膚纖維母細胞的細胞核及細胞骨架蛋白的螢光顯微鏡照片。
圖4為對利用實施例23中記載的細胞培養容器培養7天的人培養細胞的死滅自身螢光呈色進行觀察的螢光顯微鏡照片。
以下,使用圖式對實施形態加以說明。另外,於所有圖式中,對相同的構成要素標註相同的符號,適當省略說明。
本實施形態的醫療器材為具備基材、且使細胞接觸或保持於該基材的一面上的醫療器材。另外,所述基材的使細胞保持的至少一面是由含有下述通式(1)所表示的重複結構單元的含氟環狀烯烴聚合物所構成。
(式(1)中,R1~R4中,至少一個為氟、含氟的碳數1~10的烷基、含氟的碳數1~10的烷氧基或含氟的碳數2~10的烷氧基烷基。於R1~R4為不含氟的基團的情形時,R1~R4是選自氫、碳數1~10的烷基、碳數1~10的烷氧基或碳數2~10的烷氧基烷基中;R1~R4可彼此相同亦可不同;另外,R1~R4亦可相互鍵結而形成環結構)
另外,於本說明書中,有時將所述烷基(alkyl)、烷氧基(alkoxy)、烷氧基烷基(alkoxy alkyl)等取代基分別記載為烷基(alkyl group)、烷氧基(alkoxy group)、烷氧基烷基(alkoxy alkyl group)。
另外,關於本說明書中的「重複結構單元」,亦可簡單地表述
為「結構單元」。
本發明者重新發現,於使用含有所述通式(1)所表示的重複結構單元的含氟環狀烯烴聚合物、或含有該含氟環狀烯烴聚合物的組成物來形成構成醫療器材的基材的使細胞接觸或保持的一面的情形時,可藉由例如磷酸緩衝生理食鹽水般的緩衝液而使保持於該一面上的細胞容易地浮游。因此,根據本實施形態的所述醫療器材,藉由使用緩衝液使接觸或保持於基材的一面上的細胞浮游,可使細胞無損傷地自基材上脫離。
以下,對本實施形態的醫療器材加以詳細說明。
本實施形態的醫療器材表示具備基材、且以使細胞及/或培養液接觸或保持於基材的一面上的形態而使用的醫療器材。此種醫療器材例如是用於對接觸或保持於基材的一面上的細胞進行培養,或利用接觸或保持於基材的一面上的細胞進行檢查。本實施形態中,例如可列舉培養袋、培養板、培養皿、培養碟、培養瓶、培養管等作為所述醫療器材的例子。於用以培養細胞的醫療器材中,可將所述一面設定為用以培養細胞的培養面。
本實施形態的醫療器材中,基材的使細胞接觸或保持的至少一面是由含有所述通式(1)所表示的重複結構單元的含氟環狀烯烴聚合物所構成。藉此,如上文所述,可獲得可藉由緩衝液而使保持於基材的一面上的細胞、或於一面上經培養的細胞自基材浮游的醫療器材。因此,可使接觸或保持於基材的一面上的細胞無損傷地自基材上脫離。此處,可藉由在基材的一面上添加某
種緩衝液、例如磷酸緩衝生理食鹽水的情形或使基材浸漬於磷酸緩衝生理食鹽水內的情形等而使細胞自基材浮游。
另外,藉由利用含有所述通式(1)所表示的重複結構單元的含氟環狀烯烴聚合物來構成基材的使細胞接觸或保持的至少一面,可實現如下基材:保持於一面上的細胞對於基材形成適度的支架,但另一方面,並未牢固地黏附及附著於該一面上。藉此,可於細胞培養中,使細胞於厚度方向上形成群體同時增殖。
關於此處的於厚度方向上形成群體同時增殖的細胞的形態,例如可藉由亮暗視場顯微鏡、相位差顯微鏡、螢光顯微鏡等對所培養的細胞進行觀察。尤其以螢光呈色試劑將細胞的細胞核或細胞骨架蛋白等依各部位分別染色的能以螢光色進行觀察的螢光顯微鏡觀察適合作為細胞的形態觀察法。
對於通常的用於培養細胞的醫療器材而言,所增殖的細胞黏附或附著於培養面同時增殖,故對於厚度方向,細胞以均勻的平面狀態增殖。於該情形時,若細胞將培養面完全覆蓋,則細胞黏附或附著的支架消失,故因接觸抑制等的影響而妨礙增殖。另一方面,為了有效率地進行細胞培養,考慮到使用反覆播種進行培養的繼代操作,但有時因剝離細胞而移換至新的培養容器中的操作而使細胞損傷。另外,繼代操作伴有頻繁的溶液更換等非常煩雜的操作。
相對於此,根據本實施形態,藉由利用所述通式(1)的含氟環狀烯烴聚合物來構成使細胞保持的基材的一面,可抑制所增殖
的細胞黏附及附著於基材的一面上。因此,即便不依賴於繼代操作,亦能以於厚度方向上形成群體的方式使細胞增殖。因此,可抑制細胞的損傷的產生或操作的煩雜化,並且進行更有效率的細胞培養。
另外,使用本實施形態的醫療器材所製作的培養細胞為維持至少七天的藥物代謝系酵素活性的培養細胞。即,其為維持與生物體內的細胞增殖大致相同的功能而成長的培養細胞,並未限定性地選擇細胞的種類。或者,可將引起基因突變的概率高的病毒或細菌等極有限的細胞種類除外而正常地培養活細胞。關於該細胞的藥物代謝系酵素活性,所述培養細胞為在不於低溫下保存或進行特殊的培養保存操作(例如於氧過多的條件下保存等)的情況下維持至少七天、較佳為維持10天的藥物代謝系酵素活性的培養細胞。尤佳為維持14天的藥物代謝系酵素活性的培養細胞。另一方面,細胞的形狀無需特別限定,若加以例示,則例如為片狀細胞、群生狀(包括球體)細胞、神經系形態細胞等。尤其於再生醫療的領域中,期望於短期間內維持與生物體細胞相同的藥物代謝系酵素活性,如本實施形態的培養細胞般可較佳地進行生產成為重要的訴求點。
另外,本實施形態的培養細胞可期待於藥物研發(drug discovery)或生物藥品、美容方面亦長期間維持相同的功能,為可成為世界潮流的發明。
另外,藉由利用所述含氟環狀烯烴聚合物來構成基材,
可提高基材的成形性,可實現於工業上具有價值的新的醫療器材。
所謂基材的使細胞接觸或保持的至少一面是由所述含氟環狀烯烴聚合物所構成,例如包括以下情形:於由其他材料所形成的支撐體的一面上貼附由所述含氟環狀烯烴聚合物所構成的膜(亦稱為培養細胞片)而構成基材的情形、或於由其他材料所形成的支撐體的一面上藉由塗佈乾燥來形成由所述含氟環狀烯烴聚合物所構成的塗膜而構成基材的情形、利用由所述含氟環狀烯烴聚合物所構成的成形物來形成基材整體的情形。
另外,亦可提供以棉、布、不織布等將本實施形態的醫療器材上製作的培養細胞覆蓋而積層的積層體。或者,該積層體亦可含浸甘油等保濕劑。即,利用本實施形態的醫療器材所製作的培養細胞亦可用於如下醫療行為:將以積層體的形式設置的覆層剝下,作為再生醫療的用途而直接貼合於患部,然後使膜脫離。
基材的接觸或保持細胞的一面的水接觸角例如可設定為70°以上且160°以下。藉此,可抑制經由培養液的細胞外基質中存在的玻連蛋白(vitronectin)或纖連蛋白(Fibronectin)等蛋白質的家族(附著分子或蛋白質)而引起的細胞對基材的附著或黏附。藉此,藉由將細胞與含有細胞外基質且主成分為水的培養液的親和性適度小的基材用作細胞的培養基材,可使用例如磷酸緩衝生理食鹽水般的緩衝液,使於一面上抑制黏附及附著而增殖的細胞更容易地浮游。因此,於使細胞自基材上脫離時,能更可靠地抑制對細胞產生損傷。另外,於細胞的增殖過程中,更容易以
於厚度方向上形成群體的方式使細胞增殖,可實現更有效率的細胞培養。即,藉由利用具備以所述範圍調整了水接觸角的基材的醫療器材來培養細胞,可保持基材表面、細胞及培養液各自的界面的相互作用,同時抑制細胞對培養器材的附著或密接而形成群體並且增殖。就抑制細胞的損傷的觀點、或進行有效率的細胞培養的觀點而言,所述水接觸角更佳為75°以上且155°以下,尤佳為設定為80°以上且150°以下。
關於基材的一面的水接觸角,於一態樣中,能以基材表面的水接觸角為70°以上且120°以下而較佳地使用,可藉由適當選擇構成基材的一面的材料、或基材的製作方法中的各種條件而控制。就抑制細胞的損傷的觀點、或進行有效率的細胞培養的觀點而言,所述水接觸角更佳為75°以上且115°以下,尤佳為設定為80°以上且110°以下。
另外,於其他態樣中,亦可設定為更高的水接觸角,例如亦可將基材的一面的水接觸角設定於121°~160°的範圍內。為了如此般實現121°~160°的水接觸角,可較佳地使用在基材的一面上形成凹凸結構而進行控制的方法。就抑制細胞的損傷的觀點、或進行有效率的細胞培養的觀點而言,所述水接觸角更佳為123°以上且155°以下,尤佳為設定為125°以上且150°以下。本實施形態中,為了將水接觸角設定為所需範圍,使用含有所述通式(1)所表示的重複結構單元的含氟環狀烯烴聚合物來形成所述基材的一面成為重要的要素之一。
水接觸角的測定可利用以下方法進行:依據日本工業標準JIS-R3257(基板玻璃表面的濡濕性試驗方法),於25℃±5℃、50%±10%的恆溫恆濕條件下,於基材表面上滴加將水滴的形狀視為球形的體積為4μl以下的水滴,藉由靜滴法對水滴剛接觸基材表面後開始1分鐘以內的基材與水滴的接觸界面的角度進行測量。本實施形態中,例如可與用於各種塑膠材料的物性值的數值同樣地,藉由所述方法將水滴剛接觸後開始1分鐘以內的數值作為物性值進行處理。
關於可利用本實施形態的醫療器材來處理的細胞的種類,動物細胞的情況下不拘於浮游系細胞、黏附系細胞,例如可例示:纖維母細胞、間充質幹細胞(Mesenchymal stem cell)、造血幹細胞、神經幹細胞、神經細胞、角膜上皮細胞、口腔黏膜上皮細胞、視網膜色素上皮細胞、齒根膜幹細胞、肌纖維母細胞、心肌細胞、肝細胞、脾內分泌細胞、皮膚角化細胞、皮膚纖維母細胞、源自皮下脂肪的前驅細胞、腎臟細胞、底部毛根鞘細胞、鼻黏膜上皮細胞、血管內皮前驅細胞、血管內皮細胞、血管平滑肌細胞、骨原細胞(osteoblast)、軟骨細胞、骨骼肌細胞、永生細胞(immortalized cell)、癌細胞、角化細胞、胚胎幹細胞(ES細胞)、EB病毒(Epstein-Barr virus,EBV)轉形B細胞、人工多能性幹細胞(iPS細胞)等,更具體可例示:HeLa細胞、CHO細胞、Cos細胞、HL-60細胞、Hs-68細胞、MCF7細胞、Jurkat細胞、Vero細胞、PC-12細胞、K562細胞、L細胞、293細胞、HepG2
細胞、U-937細胞、Caco-2細胞、HT-29細胞、A549細胞、B16細胞、MDCK細胞、BALB/3T3細胞、V79細胞、3T3-L1細胞、NIH/3T3細胞、Raji細胞、NSCLC細胞、A431細胞、Sf9細胞、SH-SY5Y細胞、BHK-21細胞、J774細胞、C2C12細胞、3T3-Swiss albino細胞、MOLT-4細胞、CV-1細胞、F9細胞、MC3T3-E1細胞、HaCaT細胞、L5178Y細胞、HuH-7細胞、Rat1細胞、Saos-2細胞、TIG細胞、CHL細胞、WI-38細胞、MRC-5細胞、Hep3B細胞、SK-N-SH細胞、MIN6細胞、KATO細胞、C3H/10T1/2細胞、DT40細胞、PLC/PRF/5細胞、IMR-90細胞、FM3A細胞等。另外,可為初代細胞或繼代細胞的任一種。
該些細胞的來源可列舉各種生物,例如人、狗、大鼠、小鼠、鳥、豬、牛、昆蟲等的細胞或該些細胞集合而形成的組織、器官、微生物、病毒等,更具體可例示:人子宮頸癌來源、中國倉鼠(Chinese hamster)卵巢來源、CV-1細胞來源、人骨髓性白血病來源、人乳癌來源、人T細胞白血病來源、非洲綠猴(Africa green monkey)腎來源、人副上腎髓質褐色細胞種來源、人骨髓性白血病來源、C3H小鼠皮下組織來源、人胎兒腎來源、人肝癌來源、人組織細胞性白血病來源、人大腸癌來源、人肺癌來源、小鼠黑色素瘤來源、狗腎臟來源、Balb/c小鼠胚胎來源、中國倉鼠(Chinese hamster)肺來源、Swiss3T3來源、NIH Swiss小鼠胚胎來源、人伯基特氏淋巴瘤(Burkitt's lymphoma)來源、人肺非小細胞癌來源、人皮膚表皮樣瘤(Epidermoid Carcinoid)來源、蛾的幼蟲卵
巢來源、敍利亞金倉鼠腎來源、小鼠巨噬細胞來源、小鼠肌肉組織來源、雜系Swiss小鼠胚胎來源、人急性T細胞白血病來源、小鼠EC細胞OTT6050來源、小鼠calvaria來源、人表皮角化細胞來源、DBA/2小鼠胸腺腫瘤來源、人幹細胞癌來源、大鼠結締組織來源、人骨肉瘤來源、人胎兒肺來源、人神經胚細胞瘤來源、小鼠胰島素瘤來源、人胃癌來源、C3H小鼠胚胎來源、雞B細胞白血病來源、小鼠自然產生乳癌來源等。
繼而,對含氟環狀烯烴聚合物加以詳細說明。
(含氟環狀烯烴聚合物)
如上所述,含氟環狀烯烴聚合物含有下述通式(1)所表示的重複結構單元。本實施形態中,可使用該含氟環狀烯烴聚合物形成使細胞接觸或保持於基材的一面上的醫療器材的該基材的至少一面。
(式(1)中,R1~R4中,至少一個為氟、含氟的碳數1~10的烷基、含氟的碳數1~10的烷氧基或含氟的碳數2~10的烷氧
基烷基。於R1~R4為不含氟的基團的情形時,R1~R4是選自氫、碳數1~10的烷基、碳數1~10的烷氧基或碳數2~10的烷氧基烷基中。R1~R4可彼此相同亦可不同。另外,R1~R4亦可相互鍵結而形成環結構)
通式(1)中,R1~R4可例示:氟;氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、三氟乙基、五氟乙基、七氟丙基、六氟異丙基、七氟異丙基、六氟-2-甲基異丙基、全氟-2-甲基異丙基、正全氟丁基、正全氟戊基、全氟環戊基等烷基的一部分或全部的氫經氟取代的烷基等含氟的碳數1~10的烷基;氟甲氧基、二氟甲氧基、三氟甲氧基、三氟乙氧基、五氟乙氧基、七氟丙氧基、六氟異丙氧基、七氟異丙氧基、六氟-2-甲基異丙氧基、全氟-2-甲基異丙氧基、正全氟丁氧基、正全氟戊氧基、全氟環戊氧基等烷氧基的一部分或全部的氫經氟取代的烷氧基等含氟的碳數1~10的烷氧基;或氟甲氧基甲基、二氟甲氧基甲基、三氟甲氧基甲基、三氟乙氧基甲基、五氟乙氧基甲基、七氟丙氧基甲基、六氟異丙氧基甲基、七氟異丙氧基甲基、六氟-2-甲基異丙氧基甲基、全氟-2-甲基異丙氧基甲基、正全氟丁氧基甲基、正全氟戊氧基甲基、全氟環戊氧基甲基等烷氧基烷基的一部分或全部的氫經氟取代的烷氧基烷基等含氟的碳數2~10的烷氧基烷基。
另外,R1~R4亦可相互鍵結而形成環結構,亦可形成全氟環烷基、介隔氧的全氟環醚等環。
進而,不含氟的其他R1~R4可例示:氫;甲基、乙基、丙基、
異丙基、2-甲基異丙基、正丁基、正戊基、環戊基等碳數1~10的烷基;甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、戊氧基等碳數1~10的烷氧基;或甲氧基甲基、乙氧基甲基、丙氧基甲基、丁氧基甲基、戊氧基甲基等碳數2~10的烷氧基烷基。
含氟環狀烯烴聚合物可僅含有通式(1)所表示的結構單元,亦可與通式(1)所表示的結構單元一併而含有其他結構單元。另外,含氟環狀烯烴聚合物亦可含有通式(1)所表示的、且R1~R4的至少一個互不相同的兩種以上的結構單元。
含有通式(1)所表示的重複結構單元的含氟環狀烯烴聚合物的具體例可列舉:聚(1-氟-2-三氟甲基-3,5-伸環戊基乙烯)、聚(1-氟-1-三氟甲基-3,5-伸環戊基乙烯)、聚(1-甲基-1-氟-2-三氟甲基-3,5-伸環戊基乙烯)、聚(1,1-二氟-2-三氟甲基-3,5-伸環戊基乙烯)、聚(1,2-二氟-2-三氟甲基-3,5-伸環戊基乙烯)、聚(1-全氟乙基-3,5-伸環戊基乙烯)、聚(1,1-雙(三氟甲基)-3,5-伸環戊基乙烯)、聚(1,1,2-三氟-2-三氟甲基-3,5-伸環戊基乙烯)、聚(1,2-雙(三氟甲基)-3,5-伸環戊基乙烯)、聚(1-全氟丙基-3,5-伸環戊基乙烯)、聚(1-甲基-2-全氟丙基-3,5-伸環戊基乙烯)、聚(1-丁基-2-全氟丙基-3,5-伸環戊基乙烯)、聚(1-全氟異丙基-3,5-伸環戊基乙烯)、聚(1-甲基-2-全氟異丙基-3,5-伸環戊基乙烯)、聚(1,2-二氟-1,2-雙(三氟甲基)-3,5-伸環戊基乙烯)、聚(1,1,2,2,3,3,3a,6a-八氟環戊基-4,6-伸環戊基乙烯)、聚(1,1,2,2,3,3,4,4,3a,7a-十氟環己基-5,7-伸環戊基乙烯)、聚(1-全氟丁基-3,5-伸環戊基乙烯)、聚(1-全氟-異丁基-3,5-伸
環戊基乙烯)、聚(1-全氟-第三丁基-3,5-伸環戊基乙烯)、聚(1-甲基-2-全氟-異丁基-3,5-伸環戊基乙烯)、聚(1-丁基-2-全氟-異丁基-3,5-伸環戊基乙烯)、聚(1,2-二氟-1-三氟甲基-2-全氟乙基-3,5-伸環戊基乙烯)、聚(1-(1-三氟甲基-2,2,3,3,4,4,5,5-八氟環戊基)-3,5-伸環戊基乙烯)、聚((1,1,2-三氟-2-全氟丁基)-3,5-伸環戊基乙烯)、聚(1,2-二氟-1-三氟甲基-2-全氟丁基-3,5-伸環戊基乙烯)、聚(1-氟-1-全氟乙基-2,2-雙(三氟甲基)-3,5-伸環戊基乙烯)、聚(1,2-二氟-1-全氟丙基-2-三氟甲基-3,5-伸環戊基乙烯)、聚(1-全氟己基-3,5-伸環戊基乙烯)、聚(1-甲基-2-全氟己基-3,5-伸環戊基乙烯)、聚(1-丁基-2-全氟己基-3,5-伸環戊基乙烯)、聚(1-己基-2-全氟己基-3,5-伸環戊基乙烯)、聚(1-辛基-2-全氟己基-3,5-伸環戊基乙烯)、聚(1-全氟庚基-3,5-伸環戊基乙烯)、聚(1-全氟辛基-3,5-伸環戊基乙烯)、聚(1-全氟癸基-3,5-伸環戊基乙烯)、聚(1,1,2-三氟-全氟戊基-3,5-伸環戊基乙烯)、聚(1,2-二氟-1-三氟甲基-2-全氟丁基-3,5-伸環戊基乙烯)、聚(1,1,2-三氟-全氟己基-3,5-伸環戊基乙烯)、聚(1,2-二氟-1-三氟甲基-2-全氟戊基-3,5-伸環戊基乙烯)、聚(1,2-雙(全氟丁基)-3,5-伸環戊基乙烯)、聚(1,2-雙(全氟己基)-3,5-伸環戊基乙烯)、聚(1-甲氧基-2-三氟甲基-3,5-伸環戊基乙烯)、聚(1-第三丁氧基甲基-2-三氟甲基-3,5-伸環戊基乙烯)、聚(1,1,3,3,3a,6a-六氟呋喃基-3,5-伸環戊基乙烯)、聚(1-氟-2-三氟甲氧基-3,5-伸環戊基乙烯)、聚(1-氟-1-三氟甲氧基-3,5-伸環戊基乙烯)、聚(1-甲基-1-氟-2-三氟甲氧基-3,5-伸環戊基乙烯)、聚(1,1-二氟-2-三氟甲氧基-3,5-伸環戊基乙烯)、聚(1,2-
二氟-2-三氟甲氧基-3,5-伸環戊基乙烯)、聚(1-全氟乙氧基-3,5-伸環戊基乙烯)、聚(1,1-雙(三氟甲氧基)-3,5-伸環戊基乙烯)、聚(1,1,2-三氟-2-三氟甲氧基-3,5-伸環戊基乙烯)、聚(1,2-雙(三氟甲氧基)-3,5-伸環戊基乙烯)、聚(1-全氟丙氧基-3,5-伸環戊基乙烯)、聚(1-甲基-2-全氟丙氧基-3,5-伸環戊基乙烯)、聚(1-丁基-2-全氟丙氧基-3,5-伸環戊基乙烯)、聚(1-全氟異丙氧基-3,5-伸環戊基乙烯)、聚(1-甲基-2-全氟異丙氧基-3,5-伸環戊基乙烯)、聚(1,2-二氟-1,2-雙(三氟甲氧基)-3,5-伸環戊基乙烯)、聚(1-全氟丁氧基-3,5-伸環戊基乙烯)、聚(1-全氟異丁氧基-3,5-伸環戊基乙烯)、聚(1-全氟第三丁氧基-3,5-伸環戊基乙烯)、聚(1-甲基-2-全氟-異丁氧基-3,5-伸環戊基乙烯)、聚(1-丁基-2-全氟異丁氧基-3,5-伸環戊基乙烯)、聚(1,2-二氟-1-三氟甲氧基-2-全氟乙氧基-3,5-伸環戊基乙烯)、聚(1,1,2-三氟-2-全氟丁氧基-3,5-伸環戊基乙烯)、聚(1,2-二氟-1-三氟甲氧基-2-全氟丁氧基-3,5-伸環戊基乙烯)、聚(1-氟-1-全氟乙氧基-2,2-雙(三氟甲氧基)-3,5-伸環戊基乙烯)、聚(1,2-二氟-1-全氟丙氧基-2-三氟甲氧基-3,5-伸環戊基乙烯)、聚(1-全氟庚氧基-3,5-伸環戊基乙烯)、聚(1-甲基-2-全氟庚氧基-3,5-伸環戊基乙烯)、聚(1-丁基-2-全氟庚氧基-3,5-伸環戊基乙烯)、聚(1-己基-2-全氟庚氧基-3,5-伸環戊基乙烯)、聚(1-辛基-2-全氟庚氧基-3,5-伸環戊基乙烯)、聚(1-全氟庚氧基-3,5-伸環戊基乙烯)、聚(1-全氟辛氧基-3,5-伸環戊基乙烯)、聚(1-全氟癸氧基-3,5-伸環戊基乙烯)、聚(1,1,2-三氟-全氟戊氧基-3,5-伸環戊基乙烯)、聚(1,2-二氟-1-三氟甲氧基-2-全氟丁氧基
-3,5-伸環戊基乙烯)、聚(1,1,2-三氟-2-全氟庚氧基-3,5-伸環戊基乙烯)、聚(1,2-二氟-1-三氟甲氧基-2-全氟戊基-3,5-伸環戊基乙烯)、聚(1,2-雙(全氟丁氧基)-3,5-伸環戊基乙烯)、聚(1,2-雙(全氟庚氧基)-3,5-伸環戊基乙烯)、聚(1-甲氧基-2-三氟甲氧基-3,5-伸環戊基乙烯)、聚(1-第三丁氧基甲基-2-三氟甲氧基-3,5-伸環戊基乙烯)、聚(1-(2',2',2'-三氟乙氧基)-3,5-伸環戊基乙烯)、聚(1-(2',2',3',3',3'-五氟丙氧基)-3,5-伸環戊基乙烯)、聚(1-甲基-2-(2',2',3',3',3'-五氟丙氧基)-3,5-伸環戊基乙烯)、聚(1-丁基-2-(2',2',3',3',3'-五氟丙氧基)-3,5-伸環戊基乙烯)、聚(1-(1',1',1'-三氟異丙氧基)-3,5-伸環戊基乙烯)、聚(1-甲基-(1',1',1'-三氟異丙氧基)-3,5-伸環戊基乙烯)、聚(1-(2',2',3',3',4',4',4'七氟丁氧基)-3,5-伸環戊基乙烯)、聚(1-(1',1',1'-三氟-異丁氧基)-3,5-伸環戊基乙烯)、聚(1-(1',1',1'-三氟-異丁氧基)-3,5-伸環戊基乙烯)、聚(1-甲基-2-(1',1',1'-三氟-異丁氧基)-3,5-伸環戊基乙烯)、聚(1-丁基-2-(1',1',1'-三氟異丁氧基)-3,5-伸環戊基乙烯)、聚(1,2-二氟-1-三氟甲氧基-2-(2',2',2'-三氟乙氧基)-3,5-伸環戊基乙烯)、聚(1,1,2-三氟-2-(2',2',3',3',4',4',4'-七氟丁氧基)-3,5-伸環戊基乙烯)、聚(1,2-二氟-1-三氟甲氧基-2-(2',2',3',3',4',4',4'-七氟丁氧基)-3,5-伸環戊基乙烯)、聚(1-氟-1-(2',2',2'-三氟乙氧基)-2,2-雙(三氟甲氧基))-3,5-伸環戊基乙烯)、聚(1,2-二氟-1-(2',2',3',3',3'-五氟丙氧基)-2-三氟甲氧基-3,5-伸環戊基乙烯)、聚(1-(2',2',3',3',4',4',5',5',6',6',6'-十一氟庚氧基)-3,5-伸環戊基乙烯)、聚(1-甲基-2-(2',2',3',3',4',4',5',5',6',6',6'-十一氟庚氧基)-3,5-
伸環戊基乙烯)、聚(1-丁基-2-(2',2',3',3',4',4',5',5',6',6',6'-十一氟庚氧基)-3,5-伸環戊基乙烯)、聚(1-己基-2-(2',2',3',3',4',4',5',5',6',6',6'-十一氟庚氧基)-3,5-伸環戊基乙烯)、聚(1-辛基-2-(2',2',3',3',4',4',5',5',6',6',6'-十一氟庚氧基)-3,5-伸環戊基乙烯)、聚(1-(2',2',3',3',4',4',5',5',6',6',7',7',7'-十三氟庚氧基)-3,5-伸環戊基乙烯)、聚(1-(2',2',3',3',4',4',5',5',6',6',7',7',8',8',8'-十五氟辛氧基)-3,5-伸環戊基乙烯)、聚(1-(2',2',3',3',4',4',5',5',6',6',7',7',8',8',9',9',9'-十七氟癸氧基)-3,5-伸環戊基乙烯)、聚(1,1,2-三氟-2-(1',1',1'-三氟異丙氧基)-3,5-伸環戊基乙烯)、聚(1,2-二氟-1-三氟甲氧基-2-(2',2',3',3',4',4',4'-七氟丁氧基)-3,5-伸環戊基乙烯)、聚(1,1,2-三氟-(2',2',3',3',4',4',5',5',6',6',6'-十一氟庚氧基)-3,5-伸環戊基乙烯)、聚(1,2-雙(2',2',3',3',4',4',4'-七氟丁氧基)-3,5-伸環戊基乙烯)、聚(1,2-雙(2',2',3',3',4',4',5',5',6',6',6'-十一氟庚氧基)-3,5-伸環戊基乙烯)、聚(1,2-二氟-1-全氟乙基-2-三氟甲基-3,5-伸環戊基乙烯)、聚(1,2-二氟-1-全氟異丙基-2-三氟甲基-3,5-伸環戊基乙烯)等。
關於含氟環狀烯烴聚合物的分子量,例如以試樣濃度3.0mg/ml~9.0mg/ml藉由凝膠滲透層析儀(Gel Permeation Chromatography,GPC)測定的聚苯乙烯換算的重量平均分子量(Mw)較佳為5,000~1,000,000,更佳為10,000~300,000。藉由將該重量平均分子量(Mw)設定為所述下限值以上,能更可靠地獲得藉由溶液澆鑄法所成形的成形物、或塗佈於基材上的成形物
中不產生由彎曲等外部應力所引起的裂縫等的良好狀態的成形物。另外,藉由將重量平均分子量(Mw)設定為所述上限值以下,可保持容易進行熔融成形的流動性。
再者,本說明書中,以「~」所表示的數值範圍是指包括其上限值及下限值。
另外,重量平均分子量(Mw)與數量平均分子量(Mn)之比即分子量分佈(Mw/Mn)較佳為設定為1.3~5.0,更佳為設定為1.5~4.5,尤佳為設定為1.7~4.0。藉由將該分子量分佈(Mw/Mn)設定為所述下限值以上,可提高利用溶液澆鑄法或熔融成形法等各種成形法所製作的膜或成形物的韌性,更有效地抑制由外部應力所引起的裂縫或破裂的產生。另一方面,藉由將分子量分佈(Mw/Mn)設定為所述上限值以下,可抑制低聚物等尤其是低分子量成分溶出,更可靠地抑制因基材表面的水接觸角變化而妨礙本實施形態的細胞增殖的情況。藉由將重量平均分子量(Mw)及分子量分佈(Mw/Mn)設定為所述範圍,可獲得尤其適合用於細胞培養及利用細胞的檢查的醫療器材。
由示差掃描熱量分析所得的含氟環狀烯烴聚合物的玻璃轉移溫度較佳為設定為50℃~300℃,更佳為設定為80℃~280℃,進而較佳為設定為100℃~250℃。若玻璃轉移溫度為所述範圍,則可進行加熱滅菌處理,另外可於使用環境下維持形狀,進而可較佳地獲得於熔融成形中對加熱溫度具有優異的流動性而製造穩定性良好、色相亦優異的作為用於細胞培養及利用細胞的
檢查的基材的醫療器材。
本實施形態的通式(1)的局部氟化聚合物與全氟化聚合物不同,由於是主鏈為烴且於側鏈上具有氟原子的局部氟化聚合物的結構,故極性大,藉此良好地溶解於作為聚合物合成時的溶劑的通常市售的醚、酮等極性溶劑中,對光硬化性化合物等極性化合物亦顯示出優異的溶解性,並且其成形物對包含聚對苯二甲酸乙二酯(polyethylene terephthalate,PET)、丙烯酸系樹脂等通用樹脂的成形物顯示出優異的密接性,且具有作為氟系聚合物的特徵性的疏水性表面性狀。
繼而,對含氟環狀烯烴聚合物的製造方法加以說明。
藉由將利用以下所記載的製造方法而獲得的包含含氟環狀烯烴聚合物的膜或成形物用作用於細胞培養及利用細胞的檢查的基材,可較佳地獲得以本實施形態的細胞不易黏附及附著為特徵的醫療器材。
(含氟環狀烯烴聚合物的製造方法)
本實施形態中,實質上包含通式(1)所表示的重複結構單元的含氟環狀烯烴聚合物可利用後述方法製造。藉此,可較佳地獲得如下含氟環狀烯烴聚合物,該含氟環狀烯烴聚合物成為本實施形態的以抑制細胞的黏附或附著作為特徵的用於細胞培養及利用細胞的檢查的基材的原料。
具體而言,藉由開環複分解聚合觸媒將下述通式(2)所表示的環狀烯烴單體聚合,將所得的聚合物的主鏈的烯烴部氫化,藉
此可合成含氟環狀烯烴聚合物。
(式(2)中,R1~R4與所述式(1)為相同含意)
再者,只要為不損及本實施形態的效果的範圍,則亦可包含通式(2)所表示的環狀烯烴單體以外的單體。
本實施形態的含有通式(1)所表示的結構單元的含氟環狀烯烴聚合物是使通式(2)所表示的單體進行開環複分解聚合後,將主鏈雙鍵氫化而成的含氟聚合物。開環複分解聚合可較佳地使用Schrock觸媒,亦可使用Grubbs觸媒,藉此可提高對極性單體的聚合觸媒活性,實現工業上優異的製造方法。再者,該些開環複分解聚合觸媒可單獨使用,亦可組合使用兩種以上。另外,亦可使用包含古典的有機過渡金屬錯合物、過渡金屬鹵化物或過渡金屬氧化物與作為助觸媒的路易斯酸的組合的開環複分解聚合觸媒。
環狀烯烴單體的開環複分解聚合中,關於環狀烯烴單體與開環複分解聚合觸媒的莫耳比,於鎢、鉬或釕等的過渡金屬亞烷基觸媒的情況下,相對於過渡金屬亞烷基觸媒1莫耳,較佳為將該
單體設定為100莫耳~30,000莫耳,更佳為設定為1,000莫耳~20,000莫耳。
另外,為了將分子量及其分佈控制於所述範圍內,可使用烯烴或二烯作為鏈轉移劑。烯烴例如可列舉:乙烯、丙烯、1-丁烯、1-戊烯、1-己烯、1-辛烯等α-烯烴或該等的含氟烯烴,進而可列舉:乙烯基三甲基矽烷、烯丙基三甲基矽烷、烯丙基三乙基矽烷、烯丙基三異丙基矽烷等含矽烯烴或該等的含氟及矽烯烴。另外,二烯可列舉:1,4-戊二烯、1,5-己二烯、1,6-庚二烯等非共軛系二烯或該等的含氟非共軛系二烯。該些烯烴、含氟烯烴或二烯可分別單獨使用,亦可併用兩種以上。
關於所述鏈轉移劑的使用量,相對於環狀烯烴單體1莫耳,鏈轉移劑較佳為0.001莫耳~1,000莫耳,更佳為0.01莫耳~100莫耳。另外,相對於過渡金屬亞烷基觸媒1莫耳,鏈轉移劑較佳為0.1莫耳~1,000莫耳,更佳為1莫耳~500莫耳。
另外,環狀烯烴單體的開環複分解聚合可為無溶劑亦可使用溶劑,特別使用的溶劑可列舉:四氫呋喃、二乙醚、二丁醚、二甲氧基乙烷或二噁烷等醚類,乙酸乙酯、乙酸丙酯或乙酸丁酯等酯類,苯、甲苯、二甲苯或乙基苯等芳香族烴,戊烷、己烷或庚烷等脂肪族烴,環戊烷、環己烷、甲基環己烷、二甲基環己烷或十氫萘等脂肪族環狀烴,二氯甲烷、二氯乙烷、二氯乙烯、四氯乙烷、氯苯或三氯苯等鹵化烴,氟苯、二氟苯、六氟苯、三氟甲基苯、六氟間二甲苯等含氟芳香族烴,全氟己烷等含氟脂肪族
烴,全氟環十氫萘等含氟脂肪族環狀烴,或全氟-2-丁基四氫呋喃等含氟醚類。該些溶劑可單獨使用,亦可組合使用兩種以上。
環狀烯烴單體的開環複分解聚合中,環狀烯烴單體相對於單體溶液的濃度雖亦視該單體的反應性及於聚合溶劑中的溶解性而不同,但較佳為5質量%~100質量%,更佳為10質量%~60質量%。另外,反應溫度較佳為-30℃~150℃,更佳為30℃~100℃。另外,反應時間較佳為10分鐘~120小時,更佳為30分鐘~48小時。進而,可利用丁醛等醛類、丙酮等酮類、甲醇等醇類、水等失活劑而停止反應,獲得聚合物的溶液。
本實施形態的環狀烯烴聚合物可藉由以下方式獲得:利用觸媒對使環狀烯烴單體進行開環複分解聚合所得的聚合物的主鏈的烯烴部進行氫化反應。另外,該氫化觸媒只要為不引起所使用的溶劑的氫化反應而可將該聚合物的主鏈的烯烴部氫化的觸媒,則可為勻相系金屬錯合物觸媒亦可為非勻相系的金屬承載觸媒的任一種,勻相系金屬錯合物觸媒例如可列舉:氯三(三苯基膦)銠、二氯三(三苯基膦)鋨、二氯氫化雙(三苯基膦)銥、二氯三(三苯基膦)釕、二氯四(三苯基膦)釕、氯氫化羰基三(三苯基膦)釕、二氯三(三甲基膦)釕等,另外,非勻相系金屬承載觸媒例如可列舉:承載有活性炭的鈀、承載有氧化鋁的鈀、承載有活性炭的銠、承載有氧化鋁的銠、承載有活性炭的釕、承載有氧化鋁的釕等。該些氫化觸媒可單獨使用,或亦可組合使用兩種以上。尤其就細胞培養的觀點而言,可較佳地使用可藉由過濾而簡單地去除的承載有
活性炭的鈀、或承載有氧化鋁的鈀。
於在進行所述主鏈的烯烴部的氫化處理時使用非勻相系或勻相系氫化觸媒的情形時,關於氫化觸媒的使用量,較佳為相對於氫化處理前的聚合物100質量份而氫化觸媒中的金屬成分為5×10-4質量份~100質量份,更佳為1×10-2質量份~30質量份。
用於氫化的溶劑只要將環狀烯烴聚合物溶解且溶劑自身不被氫化,則並無特別限制,例如可列舉:四氫呋喃、二乙醚、二丁醚、二甲氧基乙烷等醚類,乙酸乙酯、乙酸丙酯或乙酸丁酯等酯類,苯、甲苯、二甲苯、乙基苯等芳香族烴,戊烷、己烷、庚烷等脂肪族烴,環戊烷、環己烷、甲基環己烷、二甲基環己烷、十氫萘等脂肪族環狀烴,二氯甲烷、氯仿、二氯乙烷、二氯乙烯、四氯乙烷、氯苯、三氯苯等鹵化烴,氟苯、二氟苯、六氟苯、三氟甲基苯、六氟間二甲苯等含氟芳香族烴,全氟己烷等含氟脂肪族烴,全氟環十氫萘等含氟脂肪族環狀烴,全氟-2-丁基四氫呋喃等含氟醚類等。該些溶劑可單獨使用,亦可組合使用兩種以上。
所述主鏈的烯烴部的氫化反應較佳為氫壓力為常壓~30MPa,更佳為0.5MPa~20MPa,尤佳為2MPa~15MPa。另外,反應溫度較佳為0℃~300℃的溫度,更佳為室溫~250℃,尤佳為50℃~200℃。氫化反應的實施方式並無特別限制,例如可列舉:將觸媒分散或溶解於溶劑中而進行氫化反應的方法;將觸媒填充至管柱等中,將其作為固定相使聚合物溶液流通而進行氫化反應的方法等。
進而,關於主鏈的烯烴部的氫化處理,亦可使氫化處理前的環狀烯烴聚合物的聚合溶液於不良溶劑中析出而分離聚合物後,再次溶解於溶劑中進行氫化處理,亦可於不自聚合溶液中分離聚合物的情況下利用所述氫化觸媒進行氫化處理,並無特別限制。
另外,環狀烯烴聚合物的烯烴部的氫化率較佳為50%以上,更佳為70%~100%,尤佳為90%~100%。藉由將氫化率設定為所述下限值以上,可於烯烴部中抑制由光吸收所引起的劣化或由成形時的加熱所引起的氧化,容易使水接觸角等基材表面的性狀良好。
本實施形態中,於在氫化後的尤其可較佳地使用承載有活性炭的鈀、承載有氧化鋁的鈀等固體觸媒的情形時自聚合物溶液中取得環狀烯烴聚合物的方法並無特別限制,例如可列舉:利用過濾、離心分離、傾析等方法取得聚合物,將反應溶液排出至攪拌下的不良溶劑中的方法;利用在反應溶液中吹入蒸汽的蒸汽汽提等方法使聚合物析出的方法;或藉由加熱等自反應溶液中將溶劑蒸發去除的方法等。
另外,於利用非勻相系金屬承載觸媒來實施氫化反應的情形時,可將合成液過濾而將金屬承載觸媒過濾分離後,利用所述方法取得環狀烯烴聚合物。再者,亦可預先利用傾析、延伸分離等方法使粒徑大的觸媒成分於聚合物溶液中沈降,採取上清液,對將觸媒成分粗去除而所得的溶液進行過濾,利用所述方法
取得環狀烯烴聚合物。尤其較佳為對觸媒成分進行微濾,過濾器的孔徑較佳為10μm~0.05μm,尤佳為10μm~0.1μm,進而較佳為5μm~0.1μm。
然後,對醫療器材的製作方法加以說明。
(使用含氟環狀烯烴聚合物的醫療器材的製作方法)
本實施形態中,對由如所述般製造的含氟環狀烯烴聚合物來製作用於細胞的培養、或細胞的檢查的醫療器材的方法加以記載。例如,可藉由以下所示的方法來製作本實施形態的基材表面的水接觸角為70°以上且120°以下的醫療器材。本實施形態的醫療器材例如具備包含膜或片狀的單層膜的基材、或於其他材料上形成塗膜所得的基材。製作此種基材的方法例如可列舉溶液澆鑄法,該溶液澆鑄法利用使上文中例示的通式(1)所表示的含氟環狀烯烴聚合物溶解於有機溶劑中所得的清漆。
以下,對使用溶液澆鑄法的基材的製作方法加以說明。
首先,如上所述,使上文中例示的通式(1)所表示的含氟環狀烯烴聚合物溶解於有機溶劑中而獲得清漆。
有機溶劑並無特別限制,例如可列舉:六氟間二甲苯、三氟甲苯(benzotrifluoride)、氟苯、二氟苯、六氟苯、三氟甲基苯、雙(三氟甲基)苯等含氟芳香族烴,全氟己烷、全氟辛烷等含氟脂肪族烴,全氟環十氫萘等含氟脂肪族環狀烴,全氟-2-丁基四氫呋喃等含氟醚類,氯仿、氯苯、三氯苯等鹵化烴,四氫呋喃、二丁醚、1,2-二甲氧基乙烷、二噁烷等醚類,乙酸乙酯、乙酸丙酯、
乙酸丁酯等酯類,或甲基乙基酮、甲基異丁基酮、環己酮等酮類等。可自該些有機溶劑中考慮到溶解性、製膜性而選擇。另外,該些有機溶劑可單獨使用,亦可組合使用兩種以上。尤其就製膜性的觀點而言,較佳為於大氣壓下具有70℃以上的沸點的溶劑。藉此,能可靠地抑制蒸發速度變得過快。因此,能可靠地抑制塗佈時因溶劑局部開始乾燥等而產生膜厚精度的劣化或膜表面的不均。
使含氟環狀烯烴聚合物溶解的濃度較佳為1.0質量%~99.0質量%,更佳為5.0質量%~90.0質量%,尤佳為10.0質量%~80.0質量%。濃度亦可考慮到聚合物的溶解性、對過濾製程的適應性、製膜性、膜的膜厚而選擇。
進而,本實施形態中,只要為不損及膜特性的範圍,則視需要亦可添加其他公知的成分。其他成分可列舉:抗老化劑、調平劑、濡濕性改良劑、界面活性劑、塑化劑等改質劑、紫外線吸收劑、防腐劑、抗菌劑等穩定劑、光增感劑、矽烷偶合劑等。
繼而,使利用所述方法製備的清漆通過過濾器而進行過濾。藉此,可自清漆中大幅度地減少聚合物不溶成分、凝膠、異物等,可使作為培養細胞的培養器材、或進行利用細胞的檢查的檢查器材的基材表面平滑,而且可遍及整個面而均勻地形成疏水性表面性狀。
過濾器的孔徑較佳為10μm~0.05μm,尤佳為10μm~0.1μm,進而較佳為5μm~0.1μm。關於過濾的製程,可為自孔
徑大的過濾器向孔徑小的過濾器輸送聚合物溶液的多階段製程,亦可為直接將清漆輸送至孔徑小的過濾器的單一製程。過濾器的材質可包含鐵氟龍(註冊商標)、聚丙烯(Polypropylene,PP)、聚醚碸(Polyether sulfone,PES)、纖維素等有機材料,亦可包含玻璃纖維、金屬等無機材料,只要不對細胞培養造成不良影響,則可根據清漆特性、製程適應性而選擇。
另外,將清漆輸送至過濾器的方法可為利用壓力差的方法,亦可為經由螺桿等藉由機械驅動將清漆輸送至過濾器的方法。進而,過濾的溫度是於考慮到過濾器性能、溶液黏度、聚合物的溶解性的範圍內選擇,較佳為-10℃~200℃,更佳為0℃~150℃,尤佳為室溫~100℃。
如上所述般將清漆過濾後,由清漆來製作膜。於利用溶液澆鑄法來進行製造的情形時,首先,於支撐體上藉由平台塗佈(table coat)、旋塗、浸漬塗佈、模塗、噴霧塗佈、棒塗、輥塗、簾幕式流塗等方法塗佈聚合物溶液(清漆),進行製膜。支撐體可自包含以下材料的支撐體中選擇:不鏽鋼、矽等金屬材料,玻璃、石英等無機材料,聚醯亞胺、聚醯胺、聚酯、聚碳酸酯、聚苯醚、聚苯硫醚、聚丙烯酸酯、聚甲基丙烯酸酯、環氧樹脂、矽酮樹脂等樹脂材料等。
關於塗膜的乾燥,可將澆鑄有溶液的支撐體放置於加熱板上進行加熱乾燥,亦可將澆鑄有溶液的基材放入至經加熱的乾燥爐中進行加熱乾燥,亦可對塗佈膜吹附將空氣、氮氣等氣體加
熱的溫風進行乾燥,亦可利用將該些方法組合的製程進行乾燥。乾燥時的溫度較佳為10℃~250℃,更佳為20℃~220℃,尤佳為30℃~200℃,可考慮到清漆的特性、膜的膜厚、基材的耐熱性而選擇。另外,亦可設定成溫度設定為兩種以上的多階段的乾燥溫度而使塗膜乾燥。乾燥塗膜的時間可自考慮到清漆溶劑的沸點、膜的膜厚、製程要件的條件中選擇。藉此於支撐體上形成膜。
於獲得包含膜或片狀的單層膜的基材的情形時,例如可藉由使膜自支撐體上剝離而製造基材。關於自支撐體上的膜的剝離,可藉由在膜的端部貼附市售的膠帶並對其施加應力進行剝離而進行,亦可藉由使水、溶劑等液體與膜和支撐體的接觸界面接觸,利用支撐體表面與膜的接觸面的表面張力之差將膜剝離而進行。
於在其他材料上形成塗膜而獲得基材的情形時,例如藉由在所述步驟中實施至塗膜的乾燥步驟為止,可製造由支撐體、及包含本實施形態的含氟環狀烯烴聚合物的塗膜所構成的基材。於該情形時,支撐體尤佳為自PET、丙烯酸系樹脂等有機材料或玻璃、矽等無機材料中選擇。
另外,製作構成醫療器材的基材的其他方法可列舉藉由熔融成形法來製作成為基材的膜的方法。藉由熔融成形法來進行膜製造的方法可列舉:使用熔融混練機使所述例示的含氟環狀烯烴聚合物經由T模而製成膜的方法、或膨脹法等。於利用T模的熔融擠出膜製造中,例如可藉由以下方式加工成膜:將視需要調
配有添加劑的環狀烯烴聚合物投入至擠出機中,於較玻璃轉移溫度高較佳為50℃~200℃的溫度、更佳為高80℃~150℃的溫度下進行熔融混練,自T模擠出,利用冷卻輥等將熔融聚合物冷卻。另外,亦可於不損及本發明的效果的範圍內,添加紫外線吸收劑、抗氧化劑、阻燃劑、抗靜電劑、著色劑等添加劑。
使用含氟環狀烯烴聚合物所製作的膜的膜厚較佳為1μm~1000μm,更佳為5μm~500μm,尤佳為10μm~200μm。例如就製作培養袋、培養板、培養皿等用於細胞培養的醫療器材的觀點而言,該些膜厚為較佳範圍。另外,膜的膜厚可根據製作該些器材的製程而設定。
可藉由熱密封(heat seal)法、或利用黏接劑的密封法等,由利用溶液澆鑄法或熔融成形法所製造的膜來製造例如袋、管等形態的醫療器材,另外,亦可利用熔融壓製等方法來製造例如皿等形態的醫療器材。
進而,亦可使用所述例示的含氟環狀烯烴聚合物,藉由例如射出成形、壓製成形、壓縮成形、射出壓縮成形、擠出成形、吹塑成形等方法來製造細胞培養用的皿、多孔板、瓶等培養器材。此時的熔融成形溫度較佳為330℃以下,更佳為300℃以下,尤佳為280℃以下。藉由在該範圍的溫度下將聚合物熔融、成形,能更可靠地抑制伴隨著聚合物的熱分解的黃變、或分解氣體的產生。進而,亦可於不損及本發明的效果的範圍內,添加紫外線吸收劑、抗氧化劑、阻燃劑、抗靜電劑、著色劑等添加劑。
另外,使用本實施形態的含氟環狀烯烴聚合物的醫療器材例如亦可具備以下基材:包含在使細胞保持或接觸的一面上形成有凹凸結構的膜或片狀的單層膜的基材、或於其他材料上以黏接劑或黏著劑等貼附形成有凹凸結構的膜或片狀的單層膜而形成所得的基材,尤其可較佳地用於實現121°~160°的水接觸角。
該凹凸結構的尺寸是賦形有凸凸間距離為40nm~90μm的圖案而成,藉由較佳為設定為60nm~80μm、尤佳為80nm~70μm,可將水接觸角設定為所需的範圍,形狀並無特別限定。
此處,關於凹凸結構,可利用網版印刷、壓花加工、次微米壓印、奈米壓印等各種方法形成凹凸結構。
尤其於利用壓印方法來形成凹凸結構時,可列舉如下溶液澆鑄法:於包含石英、矽、鎳、抗蝕劑等的模具(mold)的各種圖案上,塗佈使例如上文中例示的含有通式(1)所表示的結構單元的含氟環狀烯烴聚合物溶解於有機溶劑中所得的清漆。
以下,對利用溶液澆鑄法由清漆來製作形成有凹凸結構的基材的製作方法加以說明。
首先,利用與上文所述的使用溶液澆鑄法的基材的製作方法相同的方法,使含有通式(1)所表示的結構單元的含氟環狀烯烴聚合物溶解於有機溶劑中而製備清漆,使其通過過濾器而進行過濾。
繼而,使所述清漆與形成有凹凸結構的模具的圖案面接觸,使溶劑蒸發,由此轉印模具的圖案,藉此可獲得形成有凹凸
結構的基材。
用於製作本實施形態的形成有凹凸結構的基材的於表面上形成有微細圖案的模具的基材材質可列舉:鎳、鐵、不鏽鋼、鍺、鈦、矽等金屬材料,玻璃、石英、氧化鋁等無機材料,聚醯亞胺、聚醯胺、聚酯、聚碳酸酯、聚苯醚、聚苯硫醚、聚丙烯酸酯、聚甲基丙烯酸酯、聚芳酯、環氧樹脂、矽酮樹脂等樹脂材料,金剛石、石墨等碳材料等。
使本實施形態的含有通式(1)所表示的結構單元的含氟環狀烯烴聚合物溶解於有機溶劑中而成的清漆與模具接觸的方法並無特別限制,例如可為以下方法的任一種:利用平台塗佈、旋塗、模塗、噴霧塗佈、棒塗、輥塗等方法於模具的微細圖案面上塗佈聚合物溶液(清漆)的方法;或於不鏽鋼、矽等金屬材料、玻璃、石英等無機材料、聚醯亞胺、聚醯胺、聚酯、聚碳酸酯、聚苯醚、聚苯硫醚、聚丙烯酸酯、聚甲基丙烯酸酯、聚芳酯、環氧樹脂、矽酮樹脂等樹脂材料等的基材上,利用平台塗佈、旋塗、模塗、噴霧塗佈、棒塗、輥塗等方法塗佈聚合物溶液,使其被覆模具的微細圖案面而接觸的方法。
具體可列舉以下方法等:(1)包括以下步驟的方法:於具有微細圖案的模具表面上,塗佈包含含氟環狀烯烴聚合物及有機溶劑的溶液(清漆)的步驟;以及使溶劑自所述溶液中蒸發的步驟的方法;(2)包括以下步驟的方法:於支撐體(基材)上塗佈包含含氟環狀烯烴聚合物及有機溶劑的溶液(清漆)的步驟;
以形成有微細圖案的模具表面按壓塗佈層的上表面的步驟;以及使溶劑自所述塗佈層中蒸發的步驟的方法。另外,於(2)的方法中,亦可使溶劑自塗佈層中蒸發後,利用模具進行按壓。
使溶劑自轉印體蒸發、乾燥的溫度通常為10℃~300℃,較佳為50℃~200℃的範圍,壓力通常為133Pa~大氣壓的範圍,進而乾燥時間通常為10分鐘~120小時,較佳為30分鐘~48小時,可於所述範圍內實施蒸發、乾燥。另外,乾燥溫度、壓力及時間亦可於各自的設定中階段性地變化。
本實施形態中包括以下步驟:使溶劑蒸發而於模具上形成轉印體後,將該轉印體剝離。轉印體的剝離較佳為於玻璃轉移溫度以下的溫度下進行,進而更佳為於(玻璃轉移溫度-20℃)以下的溫度下剝離,藉此可高精度地保持形成於轉印體上的圖案形狀且容易地剝離。關於剝離的方法,可藉由剝離自模具脫模,或亦可利用浸漬、噴霧等方法使模具及轉印體與例如水等介質接觸後,利用表面張力進行剝離。另外,亦可於轉印體背面上貼附樹脂材料或玻璃等無機材料並於支撐體上剝離該基板。
另外,本實施形態的形成有凹凸結構的使細胞保持或接觸的所述一面的基材亦可藉由以下方式而獲得:使包含含有通式(1)所表示的結構單元的含氟環狀烯烴聚合物的膜與模具的圖案面接觸並進行按壓,藉此轉印模具的圖案。
例如較佳為於膜上壓接經加熱至玻璃轉移溫度以上的模具的方法、或將膜加熱至玻璃轉移溫度以上而使模具壓接的方
法、或將膜及模具加熱至玻璃轉移溫度以上而壓接模具的方法,加熱溫度為玻璃轉移溫度~(玻璃轉移溫度+100℃)的範圍,較佳為(玻璃轉移溫度+5℃)~(玻璃轉移溫度+50℃),另外,壓接壓力通常為1MPa~100MPa,較佳為1MPa~60MPa的範圍。藉此,可高精度地形成轉印體上形成的圖案形狀。
藉由壓接而形成於模具上的轉印體的剝離較佳為於玻璃轉移溫度以下的溫度下進行,進而更佳為於(玻璃轉移溫度-20℃)以下的溫度下剝離。藉此,可高精度地保持形成於轉印體上的圖案形狀並容易地脫離。關於剝離的方法,可藉由剝離而自模具剝離,或者亦可利用浸漬、噴霧等方法使模具及轉印體與例如水等介質接觸後,利用表面張力進行剝離。另外,亦可於轉印體背面上貼附樹脂材料或玻璃等無機材料而於支撐體上剝離該基板。
進而可列舉:藉由熔融成形法來製作成為形成有凹凸結構的基材的膜的方法。關於利用熔融成形法來進行膜製造的方法,可列舉使用熔融混練機使所述例示的含氟環狀烯烴聚合物經由T模而製成膜的方法。於利用T模的熔融擠出膜製造中,例如將視需要而調配有添加劑的環狀烯烴聚合物投入至擠出機中,於較玻璃轉移溫度高較佳為50℃~200℃的溫度、更佳為高80℃~150℃的溫度下熔融混練,自T模擠出,利用冷卻輥傳送,同時將經加熱至聚合物的玻璃轉移溫度以上的於表面上具有微細圖案的輥形狀的模具按壓於膜上,由此加工成形成有凹凸結構的膜。關
於此時的於表面上具有微細圖案的輥的加熱溫度,能以與所述藉由將膜與模具加熱壓接而形成凹凸結構時的加熱溫度相同的範圍而使用。另外,亦可於不損及本發明的效果的範圍內,添加紫外線吸收劑、抗氧化劑、阻燃劑、抗靜電劑、著色劑等添加劑。
使用含氟環狀烯烴聚合物所製作的形成有凹凸結構的使細胞保持或接觸的所述一面的基材的膜的膜厚較佳為1μm~1000μm,更佳為5μm~500μm,尤佳為10μm~200μm。例如就製作培養袋、培養板、培養皿等用於細胞培養的醫療器材的觀點而言,該些膜厚成為較佳範圍。另外,膜的膜厚可根據製作該些器材的製程而設定。
可藉由熱密封法或利用黏接劑的密封法等,由利用溶液澆鑄法、加熱壓接法或熔融成形法所製造的形成有凹凸結構的膜或片來製造例如袋、管等形態的醫療器材。另外,亦可製造如下形態的醫療器材:於由聚苯乙烯、聚乙烯、金屬等其他材料所製作的例如皿、多孔板、瓶等醫療器材的使細胞保持或接觸的基材的表面上,貼附有本實施形態的形成有凹凸結構的膜或片。
(使用含氟環狀烯烴聚合物組成物的醫療器材的製作方法)
繼而,對本實施形態中由含氟環狀烯烴聚合物組成物來製作用於細胞的培養、或細胞的檢查的醫療器材的方法加以記載。例如,可藉由以下所示的方法來製作本實施形態的基材表面的水接觸角為70°以上且120°以下的醫療器材。
含氟環狀烯烴聚合物組成物含有所述例示的通式(1)所表示的含氟環狀烯烴聚合物(以下亦稱為含氟環狀烯烴聚合物(A))、光硬化性化合物(B)及光硬化起始劑(C)。根據本實施形態,可使用此種含氟環狀烯烴聚合物組成物來形成使細胞接觸或保持於基材的一面上的醫療器材的該基材的至少一面。
藉此,可表現出與各種構件的牢固的密接性,並且可對細胞培養袋或板等各種培養器材的接觸或保持細胞的基材表面的性狀進行改質,可提供一種可抑制細胞的黏附及附著而使所述細胞增殖的醫療器材。
本實施形態的醫療器材例如具備包含膜或片狀的單層膜的基材、或於其他材料上形成塗膜所得的基材。製作此種基材的方法例如可列舉溶液澆鑄法,該溶液澆鑄法利用使含有含氟環狀烯烴聚合物(A)的含氟環狀烯烴聚合物組成物溶解於有機溶劑中所得的清漆。
以下,對使用溶液澆鑄法的基材的製作方法加以說明。
首先,如上所述,使含有含氟環狀烯烴聚合物(A)的含氟環狀烯烴聚合物組成物溶解於有機溶劑中而獲得清漆。
本實施形態的含氟環狀烯烴聚合物組成物的清漆例如是藉由以下方式獲得:將含氟環狀烯烴聚合物(A)預先以任意的濃度製備成溶液,於其中以含氟環狀烯烴聚合物(A)與後述光硬化性化合物(B)之質量比(A)/(B)成為較佳為99.9/0.1~50/50、更佳為99.9/0.1~55/45、尤佳為99.9/0.1~60/40的方式添加光硬
化性化合物(B),進行混合。
製備含氟環狀烯烴聚合物組成物時所用的有機溶劑並無特別限制,例如可列舉:六氟間二甲苯、三氟甲苯、氟苯、二氟苯、六氟苯、三氟甲基苯、雙(三氟甲基)苯等含氟芳香族烴,全氟己烷、全氟辛烷等含氟脂肪族烴,全氟環十氫萘等含氟脂肪族環狀烴,全氟-2-丁基四氫呋喃等含氟醚類,氯仿、氯苯、三氯苯等鹵化烴,四氫呋喃、二丁醚、1,2-二甲氧基乙烷、二噁烷、丙二醇單甲醚、二丙二醇單甲醚、丙二醇單甲基醚乙酸酯等醚類,乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸丁酯等酯類,或甲基乙基酮、甲基異丁基酮、環己酮等酮類,甲醇、乙醇、異丙醇、2-甲氧基乙醇、3-甲氧基丙醇等醇類等。該些有機溶劑中,可考慮到溶解性、製膜性而選擇。另外,該些有機溶劑可單獨使用,亦可組合使用兩種以上。尤其就製膜性的觀點而言,較佳為於大氣壓下具有70℃以上的沸點的溶劑。藉此,能可靠地抑制蒸發速度變得過快。因此,能可靠地抑制於塗佈時因溶劑局部開始乾燥等而產生膜厚精度的劣化或膜表面的不均。
再者,含氟環狀烯烴聚合物組成物中,視需要亦可添加含氟環狀烯烴聚合物(A)、光硬化性化合物(B)及光硬化起始劑(C)以外的其他公知的成分。此種成分例如可列舉:抗老化劑、調平劑、濡濕性改良劑、界面活性劑、塑化劑等改質劑、紫外線吸收劑、防腐劑、抗菌劑等穩定劑、光增感劑、矽烷偶合劑等。
(光硬化性化合物(B))
含氟環狀烯烴聚合物組成物中,含氟環狀烯烴聚合物(A)與光硬化性化合物(B)之質量比(A)/(B)較佳為99.9/0.1~50/50,更佳為99.9/0.1~55/45,進而較佳為99.9/0.1~60/40。光硬化性化合物(B)可列舉具有反應性雙鍵基的化合物、可進行陽離子聚合的開環聚合性化合物等。就在進行塗佈而使用時在硬化後伴隨著體積收縮而出現的基材變形得以抑制、或與含氟環狀烯烴聚合物(A)的相容性的觀點而言,較佳為選擇可進行陽離子聚合的開環聚合性化合物。
具有反應性雙鍵基的化合物及可進行陽離子聚合的開環聚合性化合物可於一分子中具有一個反應性基,亦可具有多個反應性基。另外,光硬化性化合物(B)中,亦可將反應性基數不同的化合物以任意的比例混合使用。進而,亦可將具有反應性雙鍵基的化合物與可進行陽離子聚合的開環聚合性化合物以任意的比例混合,將混合物用作光硬化性化合物(B)。藉此,可使本實施形態的含氟環狀烯烴聚合物組成物以良好的尺寸精度且牢固地與包含其他材料的構件密接。另外,可較佳地獲得可表現出本實施形態的效果的作為用於細胞培養、或檢查細胞的基材的醫療器材。
光硬化性化合物(B)中,可進行陽離子聚合的開環聚合性化合物例如有:環氧化環己烯、氧化二環戊二烯、二氧化檸檬烯、二氧化-4-乙烯基環己烯、3,4-環氧環己基甲基-3',4'-環氧環己烷羧酸酯、己二酸二(3,4-環氧環己基)酯、(3,4-環氧環己基)甲
醇、(3,4-環氧-6-甲基環己基)甲基-3,4-環氧-6-甲基環己烷羧酸酯、伸乙基-1,2-二(3,4-環氧環己烷羧酸)酯、(3,4-環氧環己基)乙基三甲氧基矽烷、苯基縮水甘油醚、二環己基-3,3'-二環氧化物、二環氧化-1,7-辛二烯、雙酚A型環氧樹脂、鹵化雙酚A型環氧樹脂、雙酚F型環氧樹脂、鄰甲酚酚醛清漆型環氧樹脂、間甲酚酚醛清漆型環氧樹脂、對甲酚酚醛清漆型環氧樹脂、苯酚酚醛清漆型環氧樹脂、多元醇的聚縮水甘油醚、3,4-環氧環己烯基甲基-3',4'-環氧環己烯羧酸酯等脂環式環氧樹脂或氫化雙酚A的縮水甘油醚等環氧化合物等環氧化合物類;進而3-甲基-3-(丁氧基甲基)氧雜環丁烷、3-甲基-3-(戊氧基甲基)氧雜環丁烷、3-甲基-3-(己氧基甲基)氧雜環丁烷、3-甲基-3-(2-乙基己氧基甲基)氧雜環丁烷、3-甲基-3-(辛氧基甲基)氧雜環丁烷、3-甲基-3-(癸氧基甲基)氧雜環丁烷、3-甲基-3-(十二烷氧基甲基)氧雜環丁烷、3-甲基-3-(苯氧基甲基)氧雜環丁烷、3-乙基-3-(丁氧基甲基)氧雜環丁烷、3-乙基-3-(戊氧基甲基)氧雜環丁烷、3-乙基-3-(己氧基甲基)氧雜環丁烷、3-乙基-3-(2-乙基己氧基甲基)氧雜環丁烷、3-乙基-3-(辛氧基甲基)氧雜環丁烷、3-乙基-3-(癸氧基甲基)氧雜環丁烷、3-乙基-3-(十二烷氧基甲基)氧雜環丁烷、3-(環己氧基甲基)氧雜環丁烷、3-甲基-3-(環己氧基甲基)氧雜環丁烷、3-乙基-3-(環己氧基甲基)氧雜環丁烷、3-乙基-3-(苯氧基甲基)氧雜環丁烷、3,3-二甲基氧雜環丁烷、3-羥基甲基氧雜環丁烷、3-甲基-3-羥基甲基氧雜環丁烷、3-乙基-3-羥基甲基氧雜環丁烷、3-乙基-3-苯氧基甲基氧雜環丁烷、3-正丙基-3-
羥基甲基氧雜環丁烷、3-異丙基-3-羥基甲基氧雜環丁烷、3-正丁基-3-羥基甲基氧雜環丁烷、3-異丁基-3-羥基甲基氧雜環丁烷、3-第二丁基-3-羥基甲基氧雜環丁烷、3-第三丁基-3-羥基甲基氧雜環丁烷、3-乙基-3-(2-乙基己基)氧雜環丁烷等,具有兩個以上的氧雜環丁基的化合物可列舉:雙(3-乙基-3-氧雜環丁基甲基)醚、1,2-雙[(3-乙基-3-氧雜環丁基甲氧基)]乙烷、1,3-雙[(3-乙基-3-氧雜環丁基甲氧基)]丙烷、1,3-雙[(3-乙基-3-氧雜環丁基甲氧基)]-2,2-二甲基-丙烷、1,4-雙(3-乙基-3-氧雜環丁基甲氧基)丁烷、1,6-雙(3-乙基-3-氧雜環丁基甲氧基)己烷、1,4-雙[(3-甲基-3-氧雜環丁基)甲氧基]苯、1,3-雙[(3-甲基-3-氧雜環丁基)甲氧基]苯、1,4-雙{[(3-甲基-3-氧雜環丁基)甲氧基]甲基}苯、1,4-雙{[(3-甲基-3-氧雜環丁基)甲氧基]甲基}環己烷、4,4'-雙{[(3-甲基-3-氧雜環丁基)甲氧基]甲基}聯苯、4,4'-雙{[(3-甲基-3-氧雜環丁基)甲氧基]甲基}雙環己烷、2,3-雙[(3-甲基-3-氧雜環丁基)甲氧基]雙環[2.2.1]庚烷、2,5-雙[(3-甲基-3-氧雜環丁基)甲氧基]雙環[2.2.1]庚烷、2,6-雙[(3-甲基-3-氧雜環丁基)甲氧基]雙環[2.2.1]庚烷、1,4-雙[(3-乙基-3-氧雜環丁基)甲氧基]苯、1,3-雙[(3-乙基-3-氧雜環丁基)甲氧基]苯、1,4-雙{[(3-乙基-3-氧雜環丁基)甲氧基]甲基}苯、1,4-雙{[(3-乙基-3-氧雜環丁基)甲氧基]甲基}環己烷、4,4'-雙{[(3-乙基-3-氧雜環丁基)甲氧基]甲基}聯苯、4,4'-雙{[(3-乙基-3-氧雜環丁基)甲氧基]甲基}雙環己烷、2,3-雙[(3-乙基-3-氧雜環丁基)甲氧基]雙環[2.2.1]庚烷、2,5-雙[(3-乙基-3-氧雜環丁基)甲氧基]雙環[2.2.1]庚烷、2,6-雙[(3-乙基-3-氧雜環
丁基)甲氧基]雙環[2.2.1]庚烷等氧雜環丁烷化合物類。該些化合物可單獨使用,亦可組合使用兩種以上。
另外,光硬化性化合物(B)中,具有反應性雙鍵基的化合物例如可列舉:氟二烯(CF2=CFOCF2CF2CF=CF2、CF2=CFOCF2CF(CF3)CF=CF2、CF2=CFCF2C(OH)(CF3)CH2CH=CH2、CF2=CFCF2C(OH)(CF3)CH=CH2、CF2=CFCF2C(CF3)(OCH2OCH3)CH2CH=CH2、CF2=CFCH2C(C(CF3)2OH)(CF3)CH2CH=CH2等)等烯烴類;降冰片烯、降冰片二烯等環狀烯烴類;環己基甲基乙烯醚、異丁基乙烯醚、環己基乙烯醚、乙基乙烯醚等烷基乙烯醚類;乙酸乙烯酯等乙烯基酯類;(甲基)丙烯酸、丙烯酸苯氧基乙基酯、丙烯酸苄酯、丙烯酸硬脂酯、丙烯酸月桂酯、丙烯酸-2-乙基己酯、丙烯酸烯丙酯、1,3-丁二醇二丙烯酸酯、1,4-丁二醇二丙烯酸酯、1,6-己二醇二丙烯酸酯、三羥甲基丙烷三丙烯酸酯、季戊四醇三丙烯酸酯、二季戊四醇六丙烯酸酯、丙烯酸乙氧基乙酯、丙烯酸甲氧基乙酯、丙烯酸縮水甘油酯、丙烯酸四氫糠酯、二乙二醇二丙烯酸酯、新戊二醇二丙烯酸酯、聚氧乙二醇二丙烯酸酯、三丙二醇二丙烯酸酯、丙烯酸-2-羥基乙酯、丙烯酸-2-羥基丙酯、4-羥基丁基乙烯醚、丙烯酸-N,N-二乙基胺基乙酯、丙烯酸-N,N-二甲基胺基乙酯、N-乙烯基吡咯啶酮、甲基丙烯酸二甲基胺基乙酯等(甲基)丙烯酸及其衍生物或該等的含氟丙烯酸酯類等。該些化合物可單獨使用,或
亦可組合使用兩種以上。
(光硬化起始劑(C))
光硬化起始劑(光聚合起始劑)(C)可列舉藉由光的照射而生成陽離子的光陽離子起始劑、藉由光的照射而生成自由基的光自由基起始劑等。相對於光硬化性化合物(B)100質量份,光硬化起始劑(C)的使用量較佳為0.05質量份以上,更佳為0.1質量份~10質量份。
光硬化起始劑(C)中,藉由光的照射而生成陽離子的光陽離子起始劑只要為藉由光照射而引發所述可進行陽離子聚合的開環聚合性化合物類的陽離子聚合的化合物,則並無特別限定,例如較佳為如鎓陽離子與成對的陰離子的鎓鹽般進行光反應而釋出路易斯酸的化合物。
鎓陽離子的具體例可列舉:二苯基錪、4-甲氧基二苯基錪、雙(4-甲基苯基)錪、雙(4-第三丁基苯基)錪、雙(十二烷基苯基)錪、三苯基鋶、二苯基-4-硫代苯氧基苯基鋶、雙[4-(二苯基二氫硫基)-苯基]硫醚、雙[4-(二(4-(2-羥基乙基)苯基)鋶基)-苯基]硫醚、η5-2,4-(環戊二烯基)[1,2,3,4,5,6-η-(甲基乙基)苯]-鐵(1+)等。另外,除了鎓陽離子以外,可列舉過氯酸根離子、三氟甲磺酸根離子、甲苯磺酸根離子、三硝基甲苯磺酸根離子等。另外,該些光陽離子起始劑可單獨使用,亦可組合使用兩種以上。
另一方面,陰離子的具體例可列舉:四氟硼酸鹽、六氟磷酸鹽、六氟銻酸鹽、六氟砷酸鹽、六氯銻酸鹽、四(氟苯基)硼酸鹽、
四(二氟苯基)硼酸鹽、四(三氟苯基)硼酸鹽、四(四氟苯基)硼酸鹽、四(五氟苯基)硼酸鹽、四(全氟苯基)硼酸鹽、四(三氟甲基苯基)硼酸鹽、四[二(三氟甲基)苯基]硼酸鹽等。另外,該些光陽離子起始劑可單獨使用,亦可組合使用兩種以上。
可進而較佳地使用的光陽離子起始劑的具體例例如可列舉:豔佳固(Irgacure)250(巴斯夫(BASF)公司製造)、豔佳固(Irgacure)784(巴斯夫(BASF)公司製造)、艾薩固(Esacure)1064(寧博迪(Lamberti)公司製造)、WPI-124(和光純藥工業公司製造)、塞拉萊(CYRAURE)UVI 6990(日本聯合碳化物(Union Carbite Japan)公司製造)、CPI-100P(三亞普羅(San-apro)公司製造)、艾迪科奧普托馬(Adeka Optomer)SP-172(艾迪科(ADEKA)公司製造)、艾迪科奧普托馬(Adeka Optomer)SP-170(艾迪科(ADEKA)公司製造)、艾迪科奧普托馬(Adeka Optomer)SP-152(艾迪科(ADEKA)公司製造)、艾迪科奧普托馬(Adeka Optomer)SP-150(艾迪科(ADEKA)公司製造)。另外,該些光陽離子起始劑可單獨使用,亦可組合使用兩種以上。
另外,光硬化起始劑(C)中,藉由光的照射而生成自由基的光自由基起始劑例如可列舉:苯乙酮、對第三丁基三氯苯乙酮、氯苯乙酮、2,2-二乙氧基苯乙酮、羥基苯乙酮、2,2-二甲氧基-2'-苯基苯乙酮、2-胺基苯乙酮、二烷基胺基苯乙酮等苯乙酮類;安息香、安息香甲醚、安息香乙醚、安息香異丙醚、安息香異丁醚、1-羥基環己基苯基酮、2-羥基-2-甲基-1-苯基-2-甲基丙烷-1-
酮、1-(4-異丙基苯基)-2-羥基-2-甲基丙烷-1-酮等安息香類;二苯甲酮、苯甲醯基苯甲酸、苯甲醯基苯甲酸甲酯、鄰苯甲醯基苯甲酸甲酯、4-苯基二苯甲酮、羥基二苯甲酮、羥基丙基二苯甲酮、丙烯酸二苯甲酮、4,4'-雙(二甲基胺基)二苯甲酮等二苯甲酮類;噻噸酮、2-氯噻噸酮、2-甲基噻噸酮、二乙基噻噸酮、二甲基噻噸酮等噻噸酮類;全氟(第三丁基過氧化物)、過氧化全氟苯甲醯等氟系過氧化物類;α-醯基肟酯、苄基-(鄰乙氧基羰基)-α-單肟、醯基膦氧化物、乙醛酸酯、3-酮基香豆素、2-乙基蒽醌、樟腦醌、硫化四甲基秋蘭姆、偶氮雙異丁腈、過氧化苯甲醯、二烷基過氧化物、過氧化三甲基乙酸第三丁酯等。
可進而較佳地使用的光自由基起始劑的具體例例如可列舉:豔佳固(Irgacure)651(巴斯夫(BASF)公司製造)、豔佳固(Irgacure)184(巴斯夫(BASF)公司製造)、達羅固(Darocure)1173(巴斯夫(BASF)公司製造)、二苯甲酮、4-苯基二苯甲酮、豔佳固(Irgacure)500(巴斯夫(BASF)公司製造)、豔佳固(Irgacure)2959(巴斯夫(BASF)公司製造)、豔佳固(Irgacure)127(巴斯夫(BASF)公司製造)、豔佳固(Irgacure)907(巴斯夫(BASF)公司製造)、豔佳固(Irgacure)369(巴斯夫(BASF)公司製造)、豔佳固(Irgacure)1300(巴斯夫(BASF)公司製造)、豔佳固(Irgacure)819(巴斯夫(BASF)公司製造)、豔佳固(Irgacure)1800(巴斯夫(BASF)公司製造)、達羅固(Darocure)TPO(巴斯夫(BASF)公司製造)、達羅固(Darocure)4265(巴斯夫(BASF)
公司製造)、豔佳固(Irgacure)OXE01(巴斯夫(BASF)公司製造)、豔佳固(Irgacure)OXE02(巴斯夫(BASF)公司製造)、艾薩固(Esacure)KT55(寧博迪(Lamberti)公司製造)、艾薩固(Esacure)KIP150(寧博迪(Lamberti)公司製造)、艾薩固(Esacure)KIP100F(寧博迪(Lamberti)公司製造)、艾薩固(Esacure)KT37(寧博迪(Lamberti)公司製造)、艾薩固(Esacure)-KT046(寧博迪(Lamberti)公司製造)、艾薩固(Esacure)1001M(寧博迪(Lamberti)公司製造)、艾薩固(Esacure)KIP/EM(寧博迪(Lamberti)公司製造)、艾薩固(Esacure)DP250(寧博迪(Lamberti)公司製造)、艾薩固(Esacure)KB1(寧博迪(Lamberti)公司製造)、2,4-二乙基噻噸酮。該些具體例中,可進而較佳地使用的光自由基聚合起始劑可列舉:豔佳固(Irgacure)184(巴斯夫(BASF)公司製造)、達羅固(Darocure)1173(巴斯夫(BASF)公司製造)、豔佳固(Irgacure)500(巴斯夫(BASF)公司製造)、豔佳固(Irgacure)819(巴斯夫(BASF)公司製造)、達羅固(Darocure)TPO(巴斯夫(BASF)公司製造)、艾薩固(Esacure)KIP100F(寧博迪(Lamberti)公司製造)、艾薩固(Esacure)KT37(寧博迪(Lamberti)公司製造)及艾薩固(Esacure)-KTO46(寧博迪(Lamberti)公司製造)。另外,該些光自由基起始劑可單獨使用,亦可組合使用兩種以上。
光硬化性化合物(B)及光硬化起始劑(C)能以含有該些物質的光硬化性組成物的形式使用。光硬化性組成物可將光硬
化起始劑(C)溶解於所述光硬化性化合物(B)中而獲得,亦可將光硬化性化合物(B)與光硬化起始劑(C)一併溶解於有機溶劑中而獲得。進而,視需要亦可添加其他公知的成分、例如抗老化劑、調平劑、濡濕性改良劑、界面活性劑、塑化劑等改質劑、紫外線吸收劑、防腐劑、抗菌劑等穩定劑、光增感劑、矽烷偶合劑等作為第3成分。
用於製備光硬化性組成物的有機溶劑並無特別限制,例如可列舉:六氟間二甲苯、三氟甲苯、氟苯、二氟苯、六氟苯、三氟甲基苯、雙(三氟甲基)苯等含氟芳香族烴,全氟己烷、全氟辛烷等含氟脂肪族烴,全氟環十氫萘等含氟脂肪族環狀烴,全氟-2-丁基四氫呋喃等含氟醚類,氯仿、氯苯、三氯苯等鹵化烴,四氫呋喃、二丁醚、1,2-二甲氧基乙烷、二噁烷、丙二醇單甲醚、二丙二醇單甲醚、丙二醇單甲醚乙酸酯等醚類,乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸丁酯等酯類,或甲基乙基酮、甲基異丁基酮、環己酮等酮類,甲醇、乙醇、異丙醇、2-甲氧基乙醇、3-甲氧基丙醇等醇類等。該些有機溶劑中,可考慮到溶解性、製膜性而選擇,與溶解含氟環狀烯烴聚合物(A)的有機溶劑可相同亦可不同,亦可將兩種以上組合使用。尤其就製膜性的觀點而言,較佳為於大氣壓下具有70℃以上的沸點的溶劑。藉此,能可靠地抑制蒸發速度變得過快。因此,能可靠地抑制於塗佈時因溶劑局部開始乾燥等而產生膜厚精度的劣化或膜表面的不均。
本實施形態的含氟環狀烯烴聚合物組成物使用在主鏈
中具有烴結構、在側鏈中具有含氟脂肪族環結構的特定的含氟環狀烯烴聚合物,故極性大且與光硬化性化合物及光硬化起始劑的相容性良好,亦可製作硬化後的形態為透明形狀的基材。另外,藉由為以含氟環狀烯烴聚合物作為基質的材料,可將基材表面的水接觸角保持於70°~160°。藉此,可抑制用於各種細胞的培養或各種細胞的檢查的細胞黏附或附著於包含含氟環狀烯烴聚合物組成物的基材上而使所述細胞增殖。
另外,關於含氟環狀烯烴聚合物組成物的硬化後的形態,藉由光硬化性化合物形成三維的網狀結構,可將表面硬度改質得硬。因此,可改善安裝於醫療器材等的情形時的損傷性,於用作用於細胞培養或細胞的檢查的基材時,能以良好的便利性使用。
繼而,使利用所述方法製備的清漆通過過濾器而進行過濾。藉此,可自清漆中大幅度地減少聚合物不溶成分、凝膠、異物等,可使作為培養細胞的培養器材的基材表面平滑,而且遍及整個面而均勻地形成疏水性表面性狀。
過濾器的孔徑較佳為10μm~0.05μm,尤佳為10μm~0.1μm,進而較佳為5μm~0.1μm。關於過濾的製程,可為自孔徑大的過濾器向孔徑小的過濾器輸送聚合物溶液的多階段製程,亦可為直接向孔徑小的過濾器輸送清漆的單一製程。過濾器的材質可包含鐵氟龍(註冊商標)、PP、PES、纖維素等有機材料,亦可包含玻璃纖維、金屬等無機材料,只要不對細胞培養造成不良影響,則可根據清漆特性、製程適應性而選擇。
另外,向過濾器輸送清漆的方法可為利用壓力差的方法,亦可為經由螺桿等藉由機械驅動向過濾器輸送清漆的方法。進而,過濾的溫度是在考慮到過濾器性能、溶液黏度、光硬化性化合物的熱穩定性、聚合物的溶解性的範圍內選擇,較佳為-10℃~200℃,更佳為0℃~150℃,尤佳為室溫~100℃的範圍。
如上文所述般將清漆過濾後,由清漆來製作膜。於利用溶液澆鑄法進行製造的情形時,首先於支撐體上利用平台塗佈、旋塗、浸漬塗佈、模塗、噴霧塗佈、棒塗、輥塗、簾幕式流塗等方法塗佈聚合物溶液(清漆),進行製膜。支撐體可列舉包含以下材料的支撐體:不鏽鋼、矽等金屬材料,玻璃、石英等無機材料,聚醯亞胺、聚醯胺、聚酯、聚碳酸酯、聚苯醚、聚苯硫醚、聚丙烯酸酯、聚甲基丙烯酸酯、環氧樹脂、矽酮樹脂等樹脂材料等。
關於塗膜的乾燥,可將澆鑄有溶液的基材放置於加熱板上進行加熱乾燥,亦可將澆鑄有溶液的支撐體放入至經加熱的乾燥爐中進行加熱乾燥,亦可對塗佈膜吹附將空氣、氮氣等氣體加熱的溫風進行乾燥,亦可利用將該些方法組合的製程進行乾燥。乾燥時的溫度較佳為10℃~250℃,更佳為20℃~220℃,尤佳為30℃~200℃,可考慮到清漆的特性、膜的膜厚、基材的耐熱性而選擇。另外,亦可設定成溫度設定為兩種以上的多階段的乾燥溫度而使塗膜乾燥。乾燥塗膜的時間可自考慮到清漆溶劑的沸點、膜的膜厚、製程要件的條件中選擇。藉此於支撐體上形成膜。
繼而,對所得的膜進行UV照射步驟,使光硬化性化合
物(B)硬化。另外,UV照射步驟亦可兼帶滅菌。關於照射光,只要可藉由對光硬化起始劑(C)照射光而賦予引起自由基反應或離子反應的能量,則並無特別限定。該光源可使用波長400nm以下的光線,例如低壓水銀燈、中壓水銀燈、高壓水銀燈、超高壓水銀燈、化學燈、黑光燈、微波激發水銀燈及金屬鹵化物燈、i射線、G射線、KrF準分子雷射光、ArF準分子雷射光。
對包含含氟環狀烯烴聚合物組成物的所述膜的照射強度是依各目標產品而分別控制,並無特別限定。例如,較佳為對於後述光硬化起始劑(C)的活化而言有效的光波長範圍(視光硬化起始劑(C)而不同,例如可使用300nm~420nm的光)的光照射強度為0.1mW/cm2~100mW/cm2。藉由將照射強度設定為0.1mW/cm2以上,能可靠地抑制反應時間變得過長。另一方面,藉由將照射強度設定為100mW/cm2以下,能更可靠地抑制以下情況:因自燈輻射的熱及組成物的聚合時的發熱而產生所得的硬化物的凝聚力降低或黃變或者支撐體的劣化。
該光的照射時間是依各目標產品而分別控制,並無特別限定,可將以光波長範圍內的光照射強度與光照射時間之積的形式表示的累計光量設定為例如3mJ/cm2~1000mJ/cm2。更佳為5mJ/cm2~500mJ/cm2,尤佳為10mJ/cm2~300mJ/cm2。藉由將累計光量設定為所述下限值以上,可由光聚合起始劑(C)充分產生活性種,提高所得的硬化物的特性。另一方面,藉由將累計光量設定為所述上限值以下,可有助於提高生產性。另外,有時亦較
佳為併用加熱以促進聚合反應。另外,照射光而使硬化性樹脂硬化的情形的溫度通常較佳為0℃~150℃,更佳為0℃~60℃。
於獲得包含膜或片狀的單層膜的基材的情形時,例如可藉由使膜自支撐體上剝離而製造基材。關於自支撐體的膜的剝離,可藉由在膜的端部貼附市售的膠帶並對其施加應力進行剝離而進行,亦可藉由使水、溶劑等液體與膜和支撐體的接觸界面接觸,利用支撐體表面與膜的接觸面的表面張力之差將膜剝離而進行。
於在其他材料上形成塗膜而獲得基材的情形時,例如藉由在所述步驟中實施至塗膜的乾燥步驟為止,可製造由支撐體、及包含本實施形態的含氟環狀烯烴聚合物的塗膜所構成的基材。於該情形時,支撐體尤佳為自PET、丙烯酸系樹脂等有機材料或玻璃、矽等無機材料中選擇。
將含氟環狀烯烴聚合物組成物於支撐體上製膜並進行加熱,繼而照射光使其硬化所得的硬化膜的膜厚並無特別限制,較佳為1μm~10mm,更佳為5μm~1mm,進而較佳為10μm~0.5mm。若為該些範圍,則可獲得自支撐的單層膜或塗膜。另外,光硬化時的體積收縮小而亦能可靠地抑制基材的變形。另外,例如就製作培養袋、培養板、培養皿等用於細胞培養的醫療器材的觀點而言,所述膜厚成為較佳範圍。另外,膜的膜厚可根據製作該些器材的製程而設定。
進而,使用本實施形態的含氟環狀烯烴聚合物組成物的
醫療器材例如亦可具備以下基材:包含膜或片狀的單層膜的基材,所述膜或片狀的單層膜於使細胞保持或接觸的一面上,形成有包含本實施形態的含氟環狀烯烴聚合物組成物的凹凸結構;或於其他材料上以黏接劑或黏著劑等貼附形成有凹凸結構的膜或片狀的單層膜而形成所得的基材,尤其可較佳地用於實現121°~160°的水接觸角。
該凹凸結構的尺寸是賦形有凸凸間距離為40nm~90μm的圖案而成,藉由設定為較佳為60nm~80μm、尤佳為80nm~70μm,可將水接觸角設定為所需的範圍,形狀並無特別限定。
此處,關於凹凸結構,可利用網版印刷、壓花加工、次微米壓印、奈米壓印等各種方法形成凹凸結構。
尤其於利用壓印方法來形成凹凸結構時,可列舉溶液澆鑄法,該溶液澆鑄法於包含石英、矽、鎳、抗蝕劑等的模具的各種圖案上塗佈清漆,該清漆例如是使上文中例示的作為含氟環狀烯烴聚合物組成物的通式(1)所表示的含氟環狀烯烴聚合物(A)、光硬化性化合物(B)及光硬化起始劑(C)溶解於有機溶劑中而獲得。
首先,與上文中例示的方法同樣地使通式(1)所表示的含氟環狀烯烴聚合物(A)、光硬化性化合物(B)及光硬化起始劑(C)溶解於有機溶劑中,使所得的溶液通過過濾器進行過濾而製備清漆。
繼而,使包含所述含氟環狀烯烴聚合物組成物的溶液
(清漆)與形成有凹凸結構的模具的圖案面接觸,使溶劑蒸發,進行UV照射並進行剝離,藉此可獲得形成有轉印了模具的圖案的凹凸結構的基材。
具體而言,可列舉以下方法等:(1)包括以下步驟的方法:於具有微細圖案的模具表面上塗佈包含含氟環狀烯烴聚合物組成物及有機溶劑的溶液(清漆)的步驟;以及使溶劑自所述溶液中蒸發的步驟;(2)包括以下步驟的方法:於支撐體(基材)上塗佈包含含氟環狀烯烴聚合物組成物及有機溶劑的溶液(清漆)的步驟;以形成有微細圖案的模具表面按壓塗佈層的上表面的步驟;以及使溶劑自所述塗佈層中蒸發的步驟,無論為哪一方法,均於使模具與含氟環狀烯烴聚合物組成物接觸後經由UV照射步驟,進行剝離,由此獲得形成有凹凸結構的基材。另外,(2)的方法中,亦可於使溶劑自塗佈層中蒸發後,以模具進行按壓。
用於製作本實施形態的形成有凹凸結構的基材的於表面上形成有微細圖案的模具的基材的材質、使模具與包含含氟環狀烯烴聚合物組成物的清漆接觸的方法、以及塗膜的乾燥方法並無特別限制,可與上文所述的由將含氟環狀烯烴聚合物溶解於有機溶劑中的清漆來製作形成有凹凸結構的基材的方法同樣地進行。
繼而,對形成於模具上的含氟環狀烯烴聚合物組成物進行UV照射步驟,使光硬化性化合物(B)硬化。另外,UV照射步驟亦可兼帶滅菌。於UV照射步驟中,光源、照射強度、照射
時間、照射時的溫度各條件並無特別限制,可利用與上文所述的由含氟環狀烯烴聚合物組成物製作基材的方法相同的方法來進行。
於獲得包含膜或片狀的單層膜的基材的情形時,可藉由在UV照射後使膜自模具上剝離而製造基材。關於自支撐體的膜的剝離,可藉由在膜的端部貼附市售的膠帶並對其施加應力進行剝離而進行,亦可藉由使水、溶劑等液體與膜和支撐體的接觸界面接觸,利用支撐體表面與膜的接觸面的表面張力之差將膜剝離而進行。
於獲得其他於支撐體(基材)上形成有塗膜的基材的情形時,例如於所述步驟中實施至塗佈於支撐體上的塗膜的乾燥步驟為止,於支撐體上塗佈含氟環狀烯烴聚合物組成物,其中所述塗膜形成有凹凸結構。繼而,使模具的圖案面與含氟環狀烯烴聚合物組成物的塗佈面接觸,視需要進行壓接,進行UV照射、剝離,藉此可製造於支撐體上形成有包含本實施形態的含氟環狀烯烴聚合物組成物的形成有凹凸結構的塗膜的基材。於該情形時,支撐體尤佳為選自聚對苯二甲酸乙二酯(PET)、丙烯酸系樹脂等有機材料或玻璃、矽、鋁等無機材料中。
使模具的圖案面與含氟環狀烯烴聚合物組成物的塗佈面接觸時的壓力是於0.01MPa~5MPa、較佳為0.05MPa~4MPa、更佳為0.1MPa~3MPa的範圍內使用,可進行壓接同時進行UV照射,亦可利用層壓機(laminator)等壓接裝置壓接後進行
UV照射。藉此,與圖案的形狀、尺寸無關,可製作以高精度轉印有模具的圖案的用以使細胞保持或接觸的具有凹凸結構的基材。
將含氟環狀烯烴聚合物組成物於支撐體上製膜並進行加熱,視需要壓接後,照射光進行硬化所得的硬化膜的膜厚並無特別限制,較佳為1μm~10mm,更佳為5μm~1mm,進而較佳為10μm~0.5mm。若為該些範圍,則可獲得自支撐的單層膜或支撐體上的塗膜。另外,光硬化時的體積收縮小,亦能以良好的精度轉印圖案並且可靠地抑制基材的變形。另外,例如就製作培養袋、培養板、培養皿等用於細胞培養的醫療器材的觀點而言,所述膜厚成為較佳範圍。進而,膜的膜厚可根據製作該些器材的製程而設定。
可藉由熱密封法或利用黏接劑的密封法等,利用由含氟環狀烯烴聚合物組成物所製造的膜或片來製造例如袋、管等形態的醫療器材。另外,亦可製作如下形態的醫療器材:於由聚苯乙烯、聚乙烯、金屬等其他材料製作的例如皿、多孔板、瓶等醫療器材的使細胞保持或接觸的基材的表面上,貼附有本實施形態的膜或片。
繼而,對使用本實施形態的醫療器材的細胞培養方法加以說明。
(細胞培養方法)
本實施形態的細胞培養方法包括以下步驟:於構成本實施形態的醫療器材的基材的一面上,以接觸或保持於該一面上的方式
播種細胞的步驟;對該細胞進行培養而獲得培養細胞的步驟;以及於所述一面上添加緩衝液,使所述培養細胞自所述一面浮游的步驟。藉此,可使培養細胞無損傷地自基材上脫離,且可實現可有效率地增殖的細胞培養。
本實施形態中,作為細胞培養的形態,可於醫療器材內播種細胞後,以靜置狀態培養浮游細胞。這一形態可藉由以下方式實現:基材的接觸或保持細胞的一面是由本實施形態的含氟環狀烯烴聚合物、或含氟環狀烯烴聚合物組成物所構成,尤其可藉由該一面的水接觸角為70°~160°的情形而較佳地實現。另外,亦可考慮到細胞的形態或增殖性施以振動而進行培養,亦可一面使培養液流動一面培養,亦可一面攪拌一面培養,並無特別限制。該等中,考慮到細胞的特性、裝置的形態、生產性而較佳地選擇。無論為哪一形態,均利用本實施形態的醫療器材來培養細胞,藉此可抑制細胞對培養器材的附著或密接而形成群體並且增殖。
關於培養方法,可使用將本實施形態的基材加工成與各種培養方法相應的容器的醫療器材,利用例如靜置培養、旋轉培養、微載體培養、回旋培養、球體培養、凝膠內培養、三維載體培養、加壓循環培養等方法來實施細胞培養。該等中,考慮到細胞的特性、培養形態或生產性而較佳地選擇,可單獨使用亦可併用兩種以上。
該些各種培養方法的溫度較佳為35℃~40℃,更佳為36℃~38℃,尤佳為36.5℃~37.5℃。另外,壓力較佳為0.02MPa
~0.5MPa,更佳為0.05MPa~0.3MPa,尤佳為0.08MPa~0.2MPa。進而,氫離子指數(pH)較佳為8~6,更佳為7.5~6.5。
使用本實施形態的醫療器材作為培養器材時的滅菌方法例如可列舉:浸漬於醇等中的濕式滅菌,利用環氧乙烷的氣體滅菌,紫外線滅菌,放射線滅菌,利用高溫、高壓的水蒸氣的高壓釜滅菌,用於不可直接接觸蒸氣的乾熱滅菌、適於含有對熱不穩定的成分的基材的過濾滅菌等。該等中,於不損及本發明的效果的範圍內考慮到製程適合性而較佳地選擇,亦可將兩種以上的滅菌方法組合使用。
另外,用於培養的培養基的種類不依賴於液狀、凝膠狀、固形(粉末)等形態,可根據細胞的特性、培養形態而選擇,例如可列舉:BME培養基、MEM培養基、DMEM培養基、199培養基、RPMI培養基、Ham F10培養基、Ham F12培養基、MCDB104培養基、MCDB107培養基、MCDB131培養基、MCDB151培養基、MCDB170培養基、MCDB 202培養基、RITC80-7培養基、MCDB153培養基等。該些培養基可單獨使用亦可混合使用兩種以上,進而亦可與源自人、狗、大鼠、小鼠、鳥、豬、牛等生物的血清混合使用。
進而,亦可根據細胞培養的目的,於不損及本發明的效果的範圍內,將例如層連結蛋白-5(laminin-5)、層連結蛋白-511、層連結蛋白-521等膠原蛋白、本實施形態的含氟環狀烯烴聚合物、或含氟環狀烯烴聚合物組成物等塗敷於本實施形態的所述基
材的內壁、或者接觸或保持細胞的一面的一部分或整個面上而使用。該些物質可單獨使用或混合使用兩種以上。另外,本實施形態中,可根據細胞的種類、培養細胞的應用而選擇細胞的培養液或緩衝液,螢光色素或細胞的固定試劑亦可自由地選擇。
進而,培養或使所培養的細胞浮游而自基材上脫離時所用的緩衝液只要於細胞增殖的過程中不使體系內的氫離子指數(pH)變化即可,通常例如磷酸緩衝液、磷酸緩衝生理食鹽水、鹽酸緩衝液、乙酸緩衝液、檸檬酸緩衝液、硼酸緩衝液、酒石酸緩衝液、Tris緩衝液、Tris-鹽酸緩衝液、乙二胺四乙酸緩衝液、Tris-EDTA緩衝液、Tris-乙酸EDTA緩衝液、Tris-硼酸EDTA緩衝液、濃縮SSC緩衝液、濃縮SSPE緩衝液、檸檬酸鈉緩衝液、碳酸重碳酸緩衝液、硼酸鈉緩衝液、馬來酸緩衝液、CABS緩衝液、哌啶緩衝液、甘胺酸緩衝液、蘋果酸緩衝液、甲酸緩衝液、琥珀酸緩衝液、丙酸緩衝液、哌嗪緩衝液、吡啶緩衝液、卡可基酸(Cacodylic acid)緩衝液、MES緩衝液、組胺酸緩衝液、乙醇胺緩衝液、ADA緩衝液、碳酸緩衝液、ACES緩衝液、PIPES緩衝液、咪唑緩衝液、Bis-Tris-丙烷緩衝液、BES緩衝液、MOPS緩衝液、HEPES緩衝液、TES緩衝液、MOPSO緩衝液、MOBS緩衝液、DIPSO緩衝液、TAPSO緩衝液、TEA緩衝液、焦磷酸緩衝液、HEPPSO緩衝液、POPSO緩衝液、Tricine緩衝液、肼緩衝液、雙甘氨肽緩衝液、EPPS緩衝液、Bicine緩衝液、HEPBS緩衝液、TAPS緩衝液、AMPD緩衝液、TABS緩衝液、AMPSO緩衝液、牛磺酸
緩衝液、CHES緩衝液、甘胺酸緩衝液、氫氧化銨緩衝液、CAPSO緩衝液、甲基胺緩衝液、CAPS緩衝液等可單獨或含有胰蛋白酶(trypsin)、胃蛋白酶(pepsin)、凝乳酶(rennet)、胰凝乳蛋白酶(chymotrypsin)、彈性蛋白酶(elastase)、NADPH去氫酶(dehydrogenase)或NADH去氫酶等酵素而使用,
較佳為磷酸緩衝液、磷酸緩衝生理食鹽水、鹽酸緩衝液、乙酸緩衝液、檸檬酸緩衝液、硼酸緩衝液、酒石酸緩衝液、Tris緩衝液、Tris-鹽酸緩衝液、乙二胺四乙酸緩衝液、Tris-EDTA緩衝液、Tris-乙酸EDTA緩衝液、Tris-硼酸EDTA緩衝液、濃縮SSC緩衝液、濃縮SSPE緩衝液、檸檬酸鈉緩衝液、碳酸重碳酸緩衝液、硼酸鈉緩衝液、馬來酸緩衝液等可單獨或含有胰蛋白酶、胃蛋白酶、凝乳酶、胰凝乳蛋白酶、彈性蛋白酶、NADPH去氫酶或NADH去氫酶等酵素而使用。
進而較佳為可將磷酸緩衝液、磷酸緩衝生理食鹽水、Tris-鹽酸緩衝液、乙二胺四乙酸緩衝液、Tris-EDTA緩衝液、Tris-乙酸EDTA緩衝液、Tris-硼酸EDTA緩衝液、濃縮SSC緩衝液、濃縮SSPE緩衝液、檸檬酸鈉緩衝液、碳酸重碳酸緩衝液、硼酸鈉緩衝液等單獨使用或使其含有胰蛋白酶、胃蛋白酶、凝乳酶、胰凝乳蛋白酶、彈性蛋白酶、NADPH去氫酶或NADH去氫酶等酵素而使用。
本發明者進行了潛心研究,結果發現了以下現象:於使用本實施形態的培養器材,培養例如小鼠胚胎纖維母細胞並採取
細胞以進行檢查的過程中,例如若添加磷酸緩衝生理食鹽水般的緩衝液,則細胞以自然浮游的狀態自基材上脫離。即,根據本實施形態,藉由使用包含特定的含氟環狀烯烴聚合物、或含氟環狀烯烴聚合物組成物的培養器材來進行細胞培養,可實現如下的優異細胞培養方法:細胞浮游而形成群體同時增殖,使增殖的細胞浮游,可將細胞無損傷地自基材脫離。
再者,本發明不限定於上文所述的實施形態,可達成本發明的目的之範圍內的變形、改良等包括在本發明中。
以下,於實施例中說明本發明,但本發明不受該些例子的任何限定。再者,以下記載實施例中的聚合物分析值測定方法、細胞的處理方法、培養器材的滅菌方法及培養評價方法。
[重量平均分子量(Mw)、分子量分佈(Mw/Mn)]
於下述條件下使用凝膠滲透層析儀(GPC),藉由聚苯乙烯標準來校正分子量,並測定溶解於四氫呋喃(THF)或三氟甲基苯(TFT)中的聚合物的重量平均分子量(Mw)及數量平均分子量(Mn)。
檢測器:日本分光公司製造的RI-2031及875-UV或威斯泰克(Viscotec)公司製造的Model 270,串聯管柱:索得克斯(Shodex)K-806M、804、803、802.5,管柱溫度:40℃,流量:1.0ml/分,試樣濃度:3.0mg/ml~9.0mg/ml
[玻璃轉移溫度]
使用島津製作所公司製造的DSC-50,將測定試樣於氮氣環境下以10℃/分的升溫速度加熱並進行測定。
[水接觸角測定]
使用協和界面科學公司製造的固體表面能量分析裝置CA-XE型,依據JISR3257(基板玻璃表面的濡濕性試驗方法)於基材表面上滴加2μl的水滴,藉由靜滴法於水滴接觸基材表面開始1分鐘以內測定接觸角。
[UV硬化]
在進行塗佈膜的硬化時,作為光源,使用CCS公司製造的UV的照射裝置照射波長365nm的發光二極體(Light Emitting Diode,LED)光,或使用工程系統(Engineering System)公司製造的UV式壓印裝置照射375nm的LED光,進行硬化。
[關於細胞種及培養液]
使用小鼠胚胎纖維母細胞(以下簡稱為BALB/3T3細胞),於含有10%小牛血清(Calf Bovine Serum,CBS)、高葡萄糖、D-MEM培養基(含有L-谷胺酸、酚紅、丙酮酸鈉)的溶液(以下亦稱為BAL8/3T3細胞液)中,進行所有的繼代培養及細胞增殖性試驗。
[細胞的解凍]
將經冷凍的細胞懸浮液浸漬於37℃水浴(water bath)中進行解凍,於經解凍的細胞懸浮液中添加經冰上冷卻的10%小牛血清D-MEM培養基並進行離心分離。離心後,將上清液去除,藉由輕敲(tapping)使細胞塊鬆開後,添加在37℃水浴中經保溫的10%
小牛血清D-MEM培養基。利用血球計算盤對細胞數進行計數,使用在水浴中經保溫的10%小牛血清D-MEM培養基製備細胞懸浮液,於培養瓶中播種細胞後,於加濕恆溫箱(incubator)中進行培養。
[細胞的繼代]
自加濕恆溫箱中取出培養瓶,利用抽氣器(aspirator)將培養基去除,添加在37℃水浴中經保溫的杜貝可(Dulbecco)PBS(-),利用抽氣器將上清液去除。再次進行相同的操作後,添加在37℃水浴中經保溫的0.025w/v%胰蛋白酶-EDTA溶液並於加濕恆溫箱內靜置後,添加10%小牛血清D-MEM培養基,將剝離的細胞回收並移至離心管(centrifuge tube)中進行離心分離,將上清液液去除,藉由輕敲將細胞塊鬆開後,添加10%小牛血清D-MEM培養基。利用血球計算盤對細胞數進行計數後,以10%小牛血清D-MEM培養基製備細胞懸浮液,於培養瓶中播種細胞,於加濕恆溫箱中進行培養。於實施例中記載的細胞增殖性評價中,使用繼代數為3代~20代的細胞。
[細胞培養器材的滅菌方法]
將以直徑15mm切出的圓形的培養膜放置於TCPS多孔板(康寧(Corning)公司製造)孔部,添加70%乙醇水溶液浸漬40分鐘~1小時後,將70%乙醇水溶液去除,於杜貝可(Dulbecco)PBS(-)中浸漬15分鐘~40分鐘。繼而將PBS(-)去除,將培養器材翻過來,進行相同的操作,對培養器材的表面及背面進行滅菌
處理。滅菌處理結束後,於無塵實驗台(clean bench)內乾燥一夜。
[細胞懸浮液的製備]
對於在25cm2培養瓶中成為約60%融合(Confluent)狀態的BALB/3T3細胞,利用與所述細胞的繼代操作相同的方法以0.025w/v%胰蛋白酶-EDTA進行處理而剝離。利用血球計算盤對細胞數進行計數,以10%小牛血清D-MEM培養基製備7500cells/mL的細胞懸浮液。
[細胞增殖性的評價]
將培養開始後經過1天、3天及7天後的TCPS多孔板自加濕恆溫箱中取出,去除培養基,添加10%WST-8(Cell Counting Kit-8)/10%小牛血清D-MEM培養基的混合溶液,於加濕恆溫箱中培養3小時。其後,將200μl的培養基移至96孔板中,利用讀板儀(SPECTRA max PLUS384,分子儀器(Molecular Devices)公司製造)測定波長450nm的吸光度。各培養器材的細胞增殖性是根據吸光度的經時變化來確認。
[顯著差異檢定]
對於各種培養器材,準備9個播種有細胞的樣品進行培養,藉由Prism 6 for Windows(註冊商標)6.01(MDF公司製造)對吸光度的測定結果進行數值分析,算出結果的平均值作為吸光度,對標準偏差標註±的符號作為偏差的範圍。
[螢光顯微鏡觀察]
自經7天細胞培養的容器中去除培養基,添加4%戊二醛/磷
酸緩衝液靜置1小時後,將4%戊二醛/磷酸緩衝液去除。其後,以滅菌水清洗,使用Image-iT Fixation/Permeabilization套組(生命科學(lifescience)公司製造)對細胞核及細胞骨架蛋白進行染色而製備用於螢光顯微鏡觀察的試樣。螢光顯微鏡觀察是使用一體式(all in one)螢光顯微鏡BZ-X700(基恩斯(Keyence)公司製造)。
[製造例1]聚合物1
於5,5,6-三氟-6-(三氟甲基)雙環[2.2.1]庚-2-烯(100g)與1-己烯(0.268g)的四氫呋喃溶液中,添加Mo(N-2,6-Pri 2C6H3)(CHCMe2Ph)(OBut)2(50mg)的四氫呋喃溶液,於70℃下進行開環複分解聚合。藉由鈀氧化鋁(5g)於160℃下對所得的聚合物的烯烴部進行氫化反應,獲得聚(1,1,2-三氟-2-三氟甲基-3,5-伸環戊基乙烯)的四氫呋喃溶液。利用孔徑5μm的過濾器對該溶液進行加壓過濾而將鈀氧化鋁去除,將所得的溶液添加至甲醇中,將白色的聚合物過濾分離,乾燥而獲得99g的聚合物1。所得的聚合物1含有所述通式(1)所表示的重複結構單元。另外,氫化率為100%,重量平均分子量(Mw)為83000,分子量分佈(Mw/Mn)為1.73,玻璃轉移溫度為109℃。
[製造例2]培養膜1
將製造例1中合成的聚合物1以30質量%的濃度溶解於甲基異丁基酮中,利用孔徑1μm的過濾器對該溶液進行加壓過濾,繼而以0.1μm的過濾器進行過濾而製備聚合物1的甲基異丁基酮溶
液。然後,將聚合物1的甲基異丁基酮溶液塗佈於玻璃基板上,使用敷料器均勻塗佈後,於140℃下乾燥60分鐘並進行剝離,由此製作厚度60μm的膜。膜的水接觸角於15秒時為93.6°。進而,經過10分鐘後為88.1°,於直至水滴消失的時間內未見變化。
[製造例3]培養膜2
使用棒塗機將製造例2中製備的聚合物1的甲基異丁基酮溶液均勻塗佈於作為塗佈基材的PET膜(魯米拉(Lumirror),東麗(Toray))上,於100℃下乾燥20分鐘,放置冷卻至室溫為止,製作塗膜的厚度為5μm的培養膜2。膜的水接觸角於15秒時為93.7°。進而,經過10分鐘後為87.7°,於直至水滴消失的時間內未見變化。
[製造例4]培養膜3
將塗佈基材變更為壓克力膜(壓克力普蘭(Acryprene),三菱麗陽),將塗佈後的乾燥條件變更為90℃、40分鐘,除此以外,利用與製造例3相同的方法製作塗膜的厚度為5μm的培養膜3。膜的水接觸角於15秒時為94.1°。進而,經過10分鐘後為88.0°,於直至水滴消失的時間內未見變化。
[製造例5]培養膜4
於以30質量%的濃度溶解有製造例1中合成的作為含氟環狀烯烴聚合物(A)的聚合物1的100g甲基異丁基酮溶液中,添加7.5g的作為光硬化性化合物(B)的3-乙基-3{[(3-乙基氧雜環丁烷-3-基)甲氧基]甲基}氧雜環丁烷與二環氧化-1,7-辛二烯之質量
比9/1的混合物[(A)/(B)=80/20]、及0.4g的作為光聚合起始劑(C)的光陽離子起始劑(艾迪科奧普托馬(Adeka Optomer)SP-172,旭電化公司製造),製備溶液,利用孔徑1μm的過濾器進行加壓過濾,繼而利用0.1μm的過濾器進行過濾,製備聚合物1與光硬化性化合物及光硬化起始劑的甲基異丁基酮溶液。繼而,塗佈於作為塗佈基材的PET膜(魯米拉(Lumirror),東麗(Toray))上,使用棒塗機均勻地塗佈,於100℃下乾燥10分鐘,放置冷卻至室溫後,以200mJ/cm2的光量進行UV照射而使硬化樹脂硬化,製作塗佈厚度為5μm的培養膜4。塗佈面的水接觸角於15秒時為88.1°。進而,經過10分鐘後為84.9°,於直至水滴消失的時間內未見變化。
[製造例6]培養膜5
將作為含氟環狀烯烴聚合物(A)的聚合物1、與作為光硬化性化合物(B)的3-乙基-3{[(3-乙基氧雜環丁烷-3-基)甲氧基]甲基}氧雜環丁烷與二環氧化-1,7-辛二烯之質量比9/1的混合物的質量比變更為[(A)/(B)=60/40],除此以外,利用與製造例5相同的方法製作塗佈厚度5μm的培養膜5。塗佈面的水接觸角於15秒時為84.2°。進而,經過10分鐘後為81.3°,於直至水滴消失的時間內未見變化。
[製造例7]培養膜6
將塗佈基材變更為壓克力膜(壓克力普蘭(Acryprene),三菱麗陽),將塗佈後的乾燥條件變更為90℃、40分鐘,除此以外,
利用與製造例6相同的方法製作塗膜的厚度為5μm的培養膜6。膜的水接觸角於15秒時為84.3°。進而,經過10分鐘後為81.0°,於直至水滴消失的時間內未見變化。
[製造例8]培養膜7
於製造例1中合成的聚合物1中添加0.5質量%的作為耐熱抗氧化劑的蘇米萊澤(Sumilizer)GP(住友化學公司製造),藉由造粒機製成顆粒後,使用明邦(Meiho)製造的小型射出成型機Micro-1,將加熱混練部的溫度設定為260℃、模具的溫度設定為90℃,於射出速度20mm/sec、射出壓力40MPa的條件下製作直徑20mm×厚度3mm的培養膜7。基材表面的水接觸角於15秒時為94.0°。進而,經過10分鐘後為88.4°,於直至水滴消失的時間內未見變化。
[實施例1]
將製造例2中製作的經滅菌的培養膜1放置於24孔TCPS多孔板的孔部底面,利用滅菌潤滑油(東麗-道康寧(Toray-Dow Corning)公司製造)與不鏽鋼(Stainless Steel,SUS)製O-環(內徑11mm)密接而加以固定後,將BALB/3T3細胞液(1mL)播種於培養膜1上。將該操作實施9次,準備樣本數為9個的樣品。其後,加蓋並移動至加濕恆溫箱中,於庫內溫度37℃、二氧化碳濃度5%的滅菌空氣下開始培養。
於利用WST-8法的細胞增殖性的評價中,經過1天後的吸光度為0.10±0.02,經過3天後為0.35±0.08,經過7天後為
0.73±0.24。吸光度相對於經過天數而直線增大,即便經過7天,增殖性亦未見變化。另外,若對經7天培養的細胞進行顯微鏡觀察,則細胞以片狀以於厚度方向上形成群體的狀態增殖,若添加磷酸緩衝生理食鹽水,則以保持片狀形態的狀態而浮游。
[實施例2]
利用與實施例1相同的方法將製造例3中製作的經滅菌的培養膜2固定於24孔TCPS多孔板上,播種經解凍的BALB/3T3細胞液(1mL)。將該操作重複9次,準備樣本數為9個的樣品。其後,加蓋並移至恆溫箱中,於庫內溫度37℃、二氧化碳濃度5%的滅菌空氣下開始培養。
於利用WST-8法的細胞增殖性的評價中,經過1天後的吸光度為0.11±0.02,經過3天後為0.36±0.05,經過7天後為0.78±0.13。吸光度相對於經過天數而直線增大,即便經過7天,增殖性亦未見變化。另外,若對經7天培養的細胞進行顯微鏡觀察,則細胞以片狀以於厚度方向上形成群體的狀態增殖,若添加磷酸緩衝生理食鹽水,則以保持片狀形態的狀態浮游。
[實施例3]
利用與實施例1相同的方法將製造例4中製作的經滅菌的培養膜3固定於24孔TCPS多孔板上,播種經解凍的BALB/3T3細胞液(1mL)。將該操作重複9次,準備樣本數為9個的樣品。其後,加蓋並移至恆溫箱中,於庫內溫度37℃、二氧化碳濃度5%的滅菌空氣下開始培養。
於利用WST-8法的細胞增殖性的評價中,經過1天後的吸光度為0.11±0.04,經過3天後為0.38±0.04,經過7天後為0.83±0.11。吸光度相對於經過天數而直線增大,即便經過7天,增殖性亦未見變化。另外,若對經7天培養的細胞進行顯微鏡觀察,則細胞以片狀以於厚度方向上形成群體的狀態增殖,若添加磷酸緩衝生理食鹽水,則以保持片狀形態的狀態浮游。
[實施例4]
利用與實施例1相同的方法將製造例5中製作的經滅菌的培養膜4固定於24孔TCPS多孔板上,播種經解凍的BALB/3T3細胞液(1mL)。將該操作重複9次,準備樣本數為9個的樣品。其後,加蓋並移至恆溫箱中,於庫內溫度37℃、二氧化碳濃度5%的滅菌空氣下開始培養。
於利用WST-8法的細胞增殖性的評價中,經過1天後的吸光度為0.11±0.03,經過3天後為0.23±0.04,經過7天後為0.51±0.11。吸光度相對於經過天數而直線增大,即便經過7天,增殖性亦未見變化。另外,若對經7天培養的細胞進行顯微鏡觀察,則細胞以片狀以於厚度方向上形成群體的狀態增殖,若添加磷酸緩衝生理食鹽水,則以保持片狀形態的狀態浮游。
[實施例5]
利用與實施例1相同的方法將製造例6中製作的經滅菌的培養膜5固定於24孔TCPS多孔板上,播種經解凍的BALB/3T3細胞液(1mL)。將該操作重複9次,準備樣本數為9個的樣品。其
後,加蓋並移至恆溫箱中,於庫內溫度37℃、二氧化碳濃度5%的滅菌空氣下開始培養。
於利用WST-8法的細胞增殖性的評價中,經過1天後的吸光度為0.11±0.02,經過3天後為0.27±0.04,經過7天後為0.55±0.18。吸光度相對於經過天數而直線增大,即便經過7天,增殖性亦未見變化。另外,若對經7天培養的細胞進行顯微鏡觀察,則細胞以片狀以於厚度方向上形成群體的狀態增殖,若添加磷酸緩衝生理食鹽水,則以保持片狀形態的狀態浮游。
[實施例6]
利用與實施例1相同的方法將製造例7中製作的經滅菌的培養膜6固定於24孔TCPS多孔板上,播種經解凍的BALB/3T3細胞液(1mL)。將該操作重複9次,準備樣本數為9個的樣品。其後,加蓋並移至恆溫箱中,於庫內溫度37℃、二氧化碳濃度5%的滅菌空氣下開始培養。
於利用WST-8法的細胞增殖性的評價中,經過1天後的吸光度為0.11±0.04,經過3天後為0.23±0.02,經過7天後為0.53±0.13。吸光度相對於經過天數而直線增大,即便經過7天,增殖性亦未見變化。另外,若對經7天培養的細胞進行顯微鏡觀察,則細胞以片狀以於厚度方向上形成群體的狀態增殖,若添加磷酸緩衝生理食鹽水,則以保持片狀形態的狀態浮游。
[實施例7]
將製造例8中製作的經滅菌的培養膜7放置於24孔TCPS多
孔板的孔部底面,利用滅菌潤滑油(東麗-道康寧(Toray-Dow Corning)製造)與SUS製O-環(內徑16mm)密接而加以固定後,將經解凍的BALB/3T3細胞液(1mL)播種於培養膜7上。將該操作實施9次,準備樣本數為9個的樣品。其後,加蓋並移至恆溫箱中,於庫內溫度37℃、二氧化碳濃度5%的滅菌空氣下開始培養。
於利用WST-8法的細胞增殖性的評價中,經過1天後的吸光度為0.11±0.05,經過3天後為0.42±0.15,經過7天後為0.96±0.06。吸光度相對於經過天數而直線增大,即便經過7天,增殖性亦未見變化。另外,若對經7天培養的細胞進行顯微鏡觀察,則細胞以片狀以於厚度方向上形成群體的狀態增殖,若添加磷酸緩衝生理食鹽水,則以保持片狀形態的狀態浮游。
[實施例8]
除了將含氟環狀烯烴單體的種類變更為5,6-二氟-5-五氟乙基-6-三氟甲基雙環[2.2.1]庚-2-烯以外,利用與製造例1相同的方法獲得97g的聚合物2。所得的聚合物2含有所述通式(1)所表示的重複結構單元。另外,氫化率為100%,重量平均分子量(Mw)為91000,分子量分佈(Mw/Mn)為1.93,玻璃轉移溫度為104℃。
繼而,藉由與製造例2相同的方法製作厚度55μm的培養膜8。膜的水接觸角於15秒時為101.6°。進而,經過10分鐘後為99.7°,於直至水滴消失的時間內未見變化。
關於利用培養膜8的藉由與實施例1相同的方法實施的
BALB/3T3細胞的培養,於利用WST-8法的細胞增殖性的評價中,經過1天後的吸光度為0.10±0.01,經過3天後為0.33±0.05,經過7天後為0.74±0.17。吸光度相對於經過天數而直線增大,即便經過7天,增殖性亦未見變化。另外,若對經7天培養的細胞進行顯微鏡觀察,則細胞以片狀以於厚度方向上形成群體的狀態增殖,若添加磷酸緩衝生理食鹽水,則以保持片狀形態的狀態浮游。
[實施例9]
利用與製造例5相同的方法,將作為含氟環狀烯烴聚合物(A)的實施例8中製造的聚合物2、與作為光硬化性化合物(B)的3-乙基-3{[(3-乙基氧雜環丁烷-3-基)甲氧基]甲基}氧雜環丁烷與二環氧化-1,7-辛二烯之質量比9/1的混合物混合,製備[質量比(A)/(B)=80/20]的組成物。繼而,塗佈於PET膜(魯米拉(Lumirror),東麗(Toray))上,製作培養膜9。膜的水接觸角於15秒時為95.3°。進而,經過10分鐘後為94.9°,於直至水滴消失的時間內未見變化。
關於利用培養膜9的藉由與實施例1相同的方法實施的BALB/3T3細胞的培養,於利用WST-8法的細胞增殖性的評價中,經過1天後的吸光度為0.10±0.01,經過3天後為0.25±0.07,經過7天後為0.60±0.13。吸光度相對於經過天數而直線增大,即便經過7天,增殖性亦未見變化。另外,若對經7天培養的細胞進行顯微鏡觀察,則細胞以片狀以於厚度方向上形成群體的狀態增殖,若添加磷酸緩衝生理食鹽水,則以保持片狀形態的狀態浮游。
[實施例10]
除了將含氟環狀烯烴單體的種類變更為5,6-二氟-5-七氟異丙基-6-三氟甲基雙環[2.2.1]庚-2-烯以外,藉由與製造例1相同的方法獲得98g的聚合物3。所得的聚合物3含有所述通式(1)所表示的重複結構單元。另外,氫化率為100%,重量平均分子量(Mw)為142000,分子量分佈(Mw/Mn)為1.40,玻璃轉移溫度為137℃。
繼而,藉由與製造例2相同的方法製作厚度58μm的培養膜10。膜的水接觸角於15秒時為103.9°。進而,經過10分鐘後為102.2°,於直至水滴消失的時間內未見變化。
關於利用培養膜10的藉由與實施例1相同的方法實施的BALB/3T3細胞的培養,於利用WST-8法的細胞增殖性的評價中,經過1天後的吸光度為0.11±0.03,經過3天後為0.32±0.03,經過7天後為0.79±0.21。吸光度相對於經過天數而直線增大,即便經過7天,增殖性亦未見變化。另外,若對經7天培養的細胞進行顯微鏡觀察,則細胞以片狀以於厚度方向上形成群體的狀態增殖,若添加磷酸緩衝生理食鹽水,則以保持片狀形態的狀態浮游。
[製造例9]培養膜13
將製造例1中合成的聚合物1以30質量%的濃度溶解於甲基異丁基酮中,利用孔徑1μm的過濾器對該溶液進行加壓過濾,繼而利用0.1μm的過濾器進行過濾,製備聚合物1的甲基異丁基酮溶液。繼而,於具有直徑150nm、間距250nm的孔形狀的尺寸為
4cm×4cm的鎳模具上塗佈聚合物1的甲基異丁基酮溶液,使用敷料器均勻塗佈後,於140℃下乾燥60分鐘並進行剝離,由此製作厚度50μm的柱(pillar)形狀的培養膜13。培養膜13的水接觸角(經過15秒時)為147.0°。
[製造例10]培養膜14
將製造例9中使用的聚合物1的甲基異丁基酮溶液塗佈於線寬200nm、間距400nm且以線與間隙為2μm的週期縱橫最密填充排列的尺寸為5cm×5cm的矽模具上,使用敷料器均勻地塗佈後,於140℃下乾燥60分鐘並進行剝離,由此製作厚度50μm的孔形狀的培養膜14。培養膜14的水接觸角(經過15秒時)為136.0°。
[製造例11]培養膜15
將製造例9中使用的聚合物1的甲基異丁基酮溶液塗佈於具有直徑150nm、間距250nm的柱形狀的尺寸為4cm×4cm的鎳模具上,使用敷料器均勻地塗佈後,於140℃下乾燥60分鐘並進行剝離,由此製作厚度50μm的孔形狀的培養膜15。培養膜15的水接觸角(經過15秒時)為124.3°。
[製造例12]培養膜16
對於將製造例9中使用的聚合物1的甲基異丁基酮溶液,將聚合物1的甲基異丁基酮溶液塗佈於具有直徑為25μm的圓頂形狀的反轉圖案的尺寸為4cm×4cm的石英模具上,使用敷料器均勻地塗佈後,於140℃下乾燥60分鐘並進行剝離,由此製作厚度
60μm的圓頂形狀的培養膜16。培養膜16的水接觸角(經過15秒時)為127.3°。
[製造例13]培養膜17
於以30質量%的濃度溶解有製造例1中合成的聚合物1的100g甲基異丁基酮溶液中,添加20g作為光硬化性化合物(B)的3-乙基-3{[(3-乙基氧雜環丁烷-3-基)甲氧基]甲基}氧雜環丁烷與二環氧化-1,7-辛二烯之質量比9/1的混合物[(A)/(B)=60/40]、及0.8g作為光硬化起始劑(C)的(艾迪科奧普托馬(Adeka Optomer)SP-172,艾迪科(ADEKA)公司製造),製備溶液,利用孔徑1μm的過濾器進行加壓過濾,繼而利用0.1μm的過濾器進行過濾而製備光硬化性組成物1。繼而,使用敷料器將光硬化性組成物1均勻地塗佈於製造例12中使用的石英模具上後,於140℃下進行30分鐘乾燥,自塗佈面的背面以200mJ/cm2的累計光量照射波長365nm的UV光,其後自模具進行剝離,由此製作厚度60μm的圓頂形狀的培養膜17。培養膜17的水接觸角(經過15秒時)為129.5°。
[實施例11]
對製造例9中製作的培養膜13進行滅菌,以圖案面為上方而放置於24孔TCPS多孔板的孔部底面,利用滅菌潤滑油(東麗-道康寧(Toray-Dow Corning)公司製造)與SUS製O-環(內徑11mm)密接而加以固定後,將BALB/3T3細胞液(1mL)播種於培養膜13的圖案面上。將該操作實施9次,準備樣本數為9個的
樣品。其後,加蓋並移至加濕恆溫箱中,於庫內溫度37℃、二氧化碳濃度5%的滅菌空氣下開始培養。
於利用WST-8法的細胞增殖性的評價中,經過1天後的吸光度為0.10±0.03,經過3天後為0.33±0.06,經過7天後為0.68±0.09。吸光度相對於經過天數而直線增大,即便經過7天,增殖性亦未見變化。另外,若對經7天培養的細胞進行顯微鏡觀察,則細胞以於厚度方向上形成群體的狀態增殖,若添加磷酸緩衝生理食鹽水,則以保持群體形成的形態的狀態浮游。
[實施例12]
對製造例10中製作的培養膜14進行滅菌,利用與實施例1相同的方法固定於24孔TCPS多孔板上,將經解凍的BALB/3T3細胞液(1mL)播種於培養膜14的圖案面上。將該操作重複9次,準備樣本數為9個的樣品。其後,加蓋並移至恆溫箱中,於庫內溫度37℃、二氧化碳濃度5%的滅菌空氣下開始培養。
於利用WST-8法的細胞增殖性的評價中,經過1天後的吸光度為0.10±0.01,經過3天後為0.32±0.06,經過7天後為0.67±0.10。吸光度相對於經過天數而直線增大,即便經過7天,增殖性亦未見變化。另外,若對經7天培養的細胞進行顯微鏡觀察,則細胞以於厚度方向上形成群體的狀態增殖,若添加磷酸緩衝生理食鹽水,則以保持群體形成的形態的狀態浮游。
[實施例13]
對製造例11中製作的培養膜15進行滅菌,利用與實施例1
相同的方法固定於24孔TCPS多孔板上,將經解凍的BALB/3T3細胞液(1mL)播種於培養膜15的圖案面上。將該操作重複9次,準備樣本數為9個的樣品。其後,加蓋並移至恆溫箱中,於庫內溫度37℃、二氧化碳濃度5%的滅菌空氣下開始培養。
於利用WST-8法的細胞增殖性的評價中,經過1天後的吸光度為0.10±0.02,經過3天後為0.34±0.03,經過7天後為0.70±0.09。吸光度相對於經過天數而直線增大,即便經過7天,增殖性亦未見變化。另外,若對經7天培養的細胞進行顯微鏡觀察,則細胞以於厚度方向上形成群體的狀態增殖,若添加磷酸緩衝生理食鹽水,則以保持群體形成的形態的狀態浮游。
[實施例14]
對製造例12中製作的培養膜16進行滅菌,利用與實施例1相同的方法固定於24孔TCPS多孔板上,將經解凍的BALB/3T3細胞液(1mL)播種於培養膜16的圖案面上。將該操作重複9次,準備樣本數為9個的樣品。其後,加蓋並移至恆溫箱中,於庫內溫度37℃、二氧化碳濃度5%的滅菌空氣下開始培養。
於利用WST-8法的細胞增殖性的評價中,經過1天後的吸光度為0.09±0.02,經過3天後為0.32±0.03,經過7天後為0.66±0.08。吸光度相對於經過天數而直線增大,即便經過7天,增殖性亦未見變化。另外,若對經7天培養的細胞進行顯微鏡觀察,則細胞以於厚度方向上形成群體的狀態增殖,若添加磷酸緩衝生理食鹽水,則以保持群體形成的形態的狀態浮游。
[實施例15]
對製造例13中製作的培養膜17進行滅菌,利用與實施例1相同的方法固定於24孔TCPS多孔板上,將經解凍的BALB/3T3細胞液(1mL)播種於培養膜17的圖案面上。將該操作重複9次,準備樣本數為9個的樣品。其後,加蓋並移至恆溫箱中,於庫內溫度37℃、二氧化碳濃度5%的滅菌空氣下開始培養。
於利用WST-8法的細胞增殖性的評價中,經過1天後的吸光度為0.10±0.04,經過3天後為0.26±0.02,經過7天後為0.52±0.12。吸光度相對於經過天數而直線增大,即便經過7天,增殖性亦未見變化。另外,若對經7天培養的細胞進行顯微鏡觀察,則細胞以於厚度方向上形成群體的狀態增殖,若添加磷酸緩衝生理食鹽水,則以保持群體形成的形態的狀態浮游。
[實施例16]
使用實施例8中製造的聚合物2,藉由與製造例9相同的方法製作厚度55μm的柱形狀的培養膜18。培養膜18的水接觸角(經過15秒時)為150.5°。
關於使用培養膜18並藉由與實施例1相同的方法實施的BALB/3T3細胞的培養,於利用WST-8法的細胞增殖性的評價中,經過1天後的吸光度為0.10±0.03,經過3天後為0.32±0.03,經過7天後為0.72±0.10。吸光度相對於經過天數而直線增大,即便經過7天,增殖性亦未見變化。另外,若對經7天培養的細胞進行顯微鏡觀察,則細胞以於厚度方向上形成群體的狀態增殖,若添
加磷酸緩衝生理食鹽水,則以保持群體形成的形態的狀態浮游。
[實施例17]
使用實施例10中製造的聚合物3,將模具變更為製造例11中使用的柱形狀的鎳模具,除此以外,藉由與製造例9相同的方法製作厚度58μm的孔形狀的培養膜19。培養膜19的水接觸角(經過15秒時)為130.3°。
關於利用培養膜19的藉由與實施例1相同的方法實施的BALB/3T3細胞的培養,於利用WST-8法的細胞增殖性的評價中,經過1天後的吸光度為0.09±0.02,經過3天後為0.32±0.04,經過7天後為0.78±0.19。吸光度相對於經過天數而直線增大,即便經過7天,增殖性亦未見變化。另外,若對經7天培養的細胞進行顯微鏡觀察,則細胞以於厚度方向上形成群體的狀態增殖,若添加磷酸緩衝生理食鹽水,則以保持群體形成的形態的狀態浮游。
[實施例18]
使由製造例1中合成的聚合物1所製作的厚度50μm的膜被覆於製造例9中使用的孔形狀的鎳模具的圖案面上,加熱至150℃以10MPa進行熱壓接,將該狀態保持5秒鐘。冷卻至50℃後,使模具脫離而製作柱形狀的培養膜20。培養膜20的水接觸角(經過15秒時)為148.1°。
關於使用培養膜20並藉由與實施例1相同的方法實施的BALB/3T3細胞的培養,於利用WST-8法的細胞增殖性的評價中,經過1天後的吸光度為0.11±0.03,經過3天後為0.39±0.04,經過
7天後為0.81±0.11。吸光度相對於經過天數而直線增大,即便經過7天,增殖性亦未見變化。另外,若對經7天培養的細胞進行顯微鏡觀察,則細胞以於厚度方向上形成群體的狀態增殖,若添加磷酸緩衝生理食鹽水,則以保持群體形成的形態的狀態浮游。
[實施例19]
將製造例13中製備的光硬化性組成物1[(A)/(B)=60/40]旋塗於PET膜上,於100℃下加熱1分鐘後,以製造例9中使用的孔形狀的鎳模具的圖案面與光硬化性組成物1的塗佈面接觸的方式被覆PET膜,一面以0.3MPa的壓力進行壓接一面以200mJ/cm2的累計光量照射波長375nm的UV光。繼而,自鎳模具將PET膜剝離,製作於PET膜的表面上形成有柱形狀的培養膜21。培養膜21的水接觸角(經過15秒時)為146.9°。
關於利用培養膜21的藉由與實施例1相同的方法實施的BALB/3T3細胞的培養,於利用WST-8法的細胞增殖性的評價中,經過1天後的吸光度為0.11±0.02,經過3天後為0.26±0.03,經過7天後為0.53±0.10。吸光度相對於經過天數而直線增大,即便經過7天,增殖性亦未見變化。另外,若對經7天培養的細胞進行顯微鏡觀察,則細胞以於厚度方向上形成群體的狀態增殖,若添加磷酸緩衝生理食鹽水,則以保持群體形成的形態的狀態浮游。
[實施例20]
將細胞種變更為人皮膚纖維母細胞(以下簡稱為Hs-68細胞),藉由與小鼠胚胎纖維母細胞相同的方法進行細胞的解凍、繼
代,製備懸浮液,以10%小牛血清D-MEM培養基製備7500cells/mL的細胞懸浮液。
繼而,使用製造例2中製作的經滅菌的培養膜1,藉由與實施例1相同的方法播種經解凍的Hs-68細胞液(1mL)。將該操作重複9次,準備樣本數為9個的樣品。其後,加蓋並移至恆溫箱中,於庫內溫度37℃、二氧化碳濃度5%的滅菌空氣下開始培養。
於利用WST-8法的細胞增殖性的評價中,經過1天後的吸光度為0.34±0.07,經過3天後為1.55±0.10,經過7天後為4.27±0.16。吸光度相對於經過天數而直線增大,即便經過7天,增殖性亦未見變化。另外,若對經7天培養的細胞進行顯微鏡觀察,則細胞以片狀以於厚度方向上形成群體的狀態增殖,若添加含有胰蛋白酶的磷酸緩衝生理食鹽水,則以保持片狀形態的狀態浮游。
若利用該培養細胞的NADPH去氫酶進行藥物代謝系酵素活性評價,則幾乎為100%,得知具有與生態系相同的藥物代謝系酵素活性。進而,若觀察自身螢光,則同樣地確認到100%的培養細胞為活細胞。
[實施例21]
使用製造例6中製作的經滅菌的培養膜5,藉由與實施例20相同的方法播種經解凍的Hs-68細胞液(1mL)。將該操作重複9次,準備樣本數為9個的樣品。其後,加蓋並移至恆溫箱中,於庫內溫度37℃、二氧化碳濃度5%的滅菌空氣下開始培養。
於利用WST-8法的細胞增殖牲的評價中,經過1天後的吸光
度為0.31±0.03,經過3天後為1.49±0.09,經過7天後為3.77±0.19。吸光度相對於經過天數而直線增大,即便經過7天,增殖性亦未見變化。另外,若對經7天培養的細胞進行顯微鏡觀察,則細胞以片狀以於厚度方向上形成群體的狀態增殖,若添加含有胰蛋白酶的磷酸緩衝生理食鹽水,則以保持片狀形態的狀態浮游。
若利用該培養細胞的NADPH去氫酶進行藥物代謝系酵素活性評價,則幾乎為100%,得知具有與生態系相同的藥物代謝系酵素活性。進而,若觀察自身螢光,則同樣地確認到100%的培養細胞為活細胞。
[實施例22]
使用實施例10中記載的經滅菌的培養膜10,藉由與實施例20相同的方法播種經解凍的Hs-68細胞液(1mL)。將該操作重複9次,準備樣本數為9個的樣品。其後,加蓋並移至恆溫箱中,於庫內溫度37℃、二氧化碳濃度5%的滅菌空氣下開始培養。
於利用WST-8法的細胞增殖性的評價中,經過1天後的吸光度為0.33±0.04,經過3天後為1.53±0.05,經過7天後為4.17±0.11。吸光度相對於經過天數而直線增大,即便經過7天,增殖性亦未見變化。另外,若對經7天培養的細胞進行顯微鏡觀察,則細胞以片狀以於厚度方向上形成群體的狀態增殖,若添加含有胰蛋白酶的磷酸緩衝生理食鹽水,則以保持片狀形態的狀態浮游。
若利用該培養細胞的NADPH去氫酶來進行藥物代謝系酵素活性評價,則幾乎為100%,得知具有與生態系相同的藥物代謝系
酵素活性。進而,若觀察自身螢光,則同樣地確認到100%的培養細胞為活細胞。
[實施例23]
將6孔TCPS多孔板(康寧(Corning)公司製造)的凹部底面切除,將製造例2中製作的膜1貼附於所有6孔的凹部底面而製作細胞培養容器,藉由乙醇進行滅菌處理。
繼而,將細胞液的量變更為10mL,除此以外,藉由與實施例20相同的方法播種經解凍的Hs-68細胞液。將該操作重複9次,準備樣本數為9個的樣品。其後,加蓋並移至恆溫箱中,於庫內溫度37℃、二氧化碳濃度5%的滅菌空氣下開始培養。
於利用WST-8法的細胞增殖性的評價中,經過1天後的吸光度為0.52±0.03,經過3天後為1.70±0.03,經過7天後為4.35±0.09。吸光度相對於經過天數而直線增大,即便經過7天,增殖性亦未見變化。另外,若對經7天培養的細胞進行顯微鏡觀察,則細胞以片狀以於厚度方向上形成群體的狀態增殖,若添加含有胰蛋白酶的磷酸緩衝生理食鹽水,則以保持片狀形態的狀態浮游。
進而,若利用螢光呈色試劑對經7天培養的細胞進行染色並對細胞核及細胞骨架蛋白的形態進行螢光顯微鏡觀察,則以如下形態而觀察到:呈藍色螢光色(圖2的白色部)的細胞核及呈綠色螢光色(圖2的灰色部)的細胞骨架蛋白形成二維地伴有密度不均、並且三維地於厚度方向上細胞重疊的狀態的群體(圖2參照)。
若利用該培養細胞的NADPH去氫酶來進行藥物代謝系酵素活性評價,則幾乎為100%,得知具有與生態系相同的藥物代謝系酵素活性。進而,即便觀察自身螢光,亦基本上未觀察到螢光,同樣地確認到99.98%的培養細胞為活細胞(參照圖4)。
[實施例24]
使用實施例13中記載的經滅菌的培養膜15,藉由與實施例20相同的方法播種經解凍的Hs-68細胞液(1mL)。將該操作重複9次,準備樣本數為9個的樣品。其後,加蓋並移至恆溫箱中,於庫內溫度37℃、二氧化碳濃度5%的滅菌空氣下開始培養。
於利用WST-8法的細胞增殖性的評價中,經過1天後的吸光度為0.25±0.02,經過3天後為0.78±0.04,經過7天後為1.80±0.09。吸光度相對於經過天數而直線增大,即便經過7天,增殖性亦未見變化。另外,若對經7天培養的細胞進行顯微鏡觀察,則細胞以於厚度方向上形成群體的狀態增殖,若添加含有胰蛋白酶的磷酸緩衝生理食鹽水,則以保持片狀形態的狀態浮游。
若利用該培養細胞的NADPH去氫酶來進行藥物代謝系酵素活性評價,則幾乎為100%,得知具有與生態系相同的藥物代謝系酵素活性。進而,若觀察自身螢光,則同樣地確認到100%的培養細胞為活細胞。
[比較例1]
於經γ射線滅菌的24孔TCPS多孔板(康寧(Corning)製造,水接觸角於15秒後為46.1°。進而於10分鐘後為11.2°)的
孔部底面播種經解凍的BALB/3T3細胞液(1mL)。將該操作重複9次,準備樣本數為9個的樣品。其後,加蓋並移至恆溫箱中,於庫內溫度37℃、二氧化碳濃度5%的滅菌空氣下開始培養。
於利用WST-8法的細胞增殖性的評價中,經過1天後的吸光度為0.27±0.03,經過3天後為1.08±0.11,經過7天後為1.51±0.23。吸光度相對於經過天數而顯示出逐漸衰減的傾向,與經過天數相對應的細胞增殖的程度變小。另外,若對經7天培養的細胞進行顯微鏡觀察,則細胞以片狀於厚度方向上以均勻的平面狀態增殖,即便添加磷酸緩衝生理食鹽水,形態亦不變化而未浮游。
[比較例2]
與實施例的培養膜的處理法同樣地將低密度聚乙烯膜(三井化學製造,水接觸角於15秒後為96.8°。進而於10分鐘後為59.5°)切出並進行滅菌處理。繼而,藉由與實施例1相同的方法培養BALB/3T3細胞。
於利用WST-8法的細胞增殖性的評價中,經過1天後的吸光度為0.22±0.02,經過3天後為0.71±0.09,經過7天後為1.11±0.18。吸光度相對於經過天數而顯示出逐漸衰減的傾向,與經過天數相對應的細胞增殖的程度變小。另外,若對經7天培養的細胞進行顯微鏡觀察,則細胞以片狀於厚度方向上以均勻的平面狀態增殖,即便添加磷酸緩衝生理食鹽水,形態亦不變化而未浮游。
[比較例3]
將製造例1中記載的單體變更為5-甲基-雙環[2.2.1]庚-2-烯(20.0g)及8-甲基-四環[4.4.0.12,5.17,10]-3-十二烯(32.2g),將溶劑變更為環己烷,除此以外,藉由與製造例1相同的方法獲得聚(1-甲基-伸環戊基乙烯)與聚(3-甲基-三環[4.3.0.12,5]伸癸基乙烯)的環己烷溶液。利用孔徑5μm的過濾器對該溶液進行加壓過濾,將溶液添加至甲醇中,將白色的聚合物過濾分離,進行乾燥而獲得51g的聚合物4。氫化率為100%,重量平均分子量(Mw)為82000,分子量分佈(Mw/Mn)為2.26,玻璃轉移溫度為104℃。
繼而,除了將溶劑變更為環己烷以外,藉由與製造例2相同的方法製作厚度55μm的培養膜11。膜的水接觸角於15秒時為92.1°。進而,經過10分鐘後為55.4°,水接觸角變化。進而,藉由與實施例1相同的方法培養BALB/3T3細胞。
於利用WST-8法的細胞增殖性的評價中,經過1天後的吸光度為0.20±0.04,經過3天後為0.51±0.10,經過7天後為0.85±0.13。吸光度相對於經過天數而顯示出逐漸衰減的傾向,與經過天數相對應的細胞增殖的程度變小。另外,若對經7天培養的細胞進行顯微鏡觀察,則細胞以片狀於厚度方向上以均勻的平面狀態增殖,即便添加磷酸緩衝生理食鹽水,形態亦不變化而未浮游。
[比較例4]
將鐵氟龍(註冊商標)AF1600(奧德里奇(Aldrich)製造)
的粉末於200℃的加熱條件下熱壓製而製作厚度200μm的培養膜12,與實施例的培養膜的處理法同樣地切出並進行滅菌處理。基材製作時的水接觸角於15秒後為111.6°。進而,於10分鐘後為110.3°。繼而,藉由與實施例1相同的方法培養BALB/3T3細胞。
於利用WST-8法的細胞增殖性的評價中,經過1天後的吸光度為0.06±0.02,經過3天後為0.14±0.11,經過7天後為0.18±0.09。吸光度相對於經過天數而顯示出逐漸衰減的傾向,與經過天數相對應的細胞增殖的程度變小。另外,若對經7天培養的細胞進行顯微鏡觀察,則細胞以點狀增殖,即便添加磷酸緩衝生理食鹽水,形態亦不變化而未浮游。
[比較例5]
於經滅菌的24孔奈米培養板(nano culture plate)(S公司製造,水接觸角(經過15秒時)為125°)的孔部底面的圖案面上播種經解凍的BALB/3T3細胞液(1mL)。將該操作重複9次,準備樣本數為9個的樣品。其後,加蓋並移至恆溫箱中,於庫內溫度37℃、二氧化碳濃度5%的滅菌空氣下開始培養。
於利用WST-8法的細胞增殖性的評價中,經過1天後的吸光度為0.07±0.03,經過3天後為0.09±0.02,經過7天後為0.10±0.09。吸光度相對於經過天數而顯示出逐漸衰減的傾向,與經過天數相對應的細胞增殖的程度變小。另外,若對經7天培養的細胞進行顯微鏡觀察,則細胞於厚度方向上形成群體而增殖,即便添加磷酸緩衝生理食鹽水,形態亦不變化而未浮游。
[比較例6]
除了將細胞懸浮液變更為Hs-68細胞液(10mL)以外,與比較例1同樣地於恆溫箱的庫內溫度37℃、二氧化碳濃度5%的滅菌空氣下開始培養。
於利用WST-8法的細胞增殖性的評價中,經過1天後的吸光度為0.33±0.06,經過3天後為1.49±0.11,經過7天後為3.10±0.13。吸光度相對於經過天數而顯示出逐漸衰減的傾向,與經過天數相對應的細胞增殖的程度變小。另外,若對經7天培養的細胞進行顯微鏡觀察,則細胞以片狀增殖,若添加含有胰蛋白酶的磷酸緩衝生理食鹽水,則形態亦不變化而未浮游。
繼而,若利用螢光呈色試劑對經7天培養的細胞進行染色並對細胞核及細胞骨架蛋白的形態進行螢光顯微鏡觀察,則觀察到呈藍色螢光色(圖3的白色部)的細胞核及呈綠色螢光色(圖3的灰色部)的細胞骨架蛋白二維地擴展的片形狀的螢光呈色分佈(參照圖3)。無法確認到利用實施例23中記載的細胞培養容器進行培養的Hs-68細胞中可見的於厚度方向上細胞重疊的群體形成。
若利用該培養細胞的NADPH去氫酶進行藥物代謝系酵素活性評價,則幾乎為0%,但得知具有與生態系相同的藥物代謝系酵素活性。進而,自身螢光觀察時,無法利用經γ射線滅菌的24孔TCPS多孔板的螢光吸收來進行測定,僅可藉由酵素活性評價來實證。
本申請案主張以於2014年8月13日提出申請的日本專
利申請案特願2014-164912號及於2015年2月4日提出申請的日本專利申請案特願2015-019996號為基礎的優先權,將其揭示的所有內容併入至本文中。
Claims (13)
- 一種醫療器材,具備基材且使細胞接觸或保持於所述基材的一面上,並且所述基材的至少保持細胞的所述一面是由含有下述通式(1)所表示的重複結構單元的含氟環狀烯烴聚合物所構成,(式(1)中,R1~R4中,至少一個為氟、含氟的碳數1~10的烷基、含氟的碳數1~10的烷氧基或含氟的碳數2~10的烷氧基烷基;於R1~R4為不含氟的基團的情形時,R1~R4是選自氫、碳數1~10的烷基、碳數1~10的烷氧基或碳數2~10的烷氧基烷基中;R1~R4可彼此相同亦可不同;R1~R4亦可相互鍵結而形成環結構)。
- 如申請專利範圍第1項所述的醫療器材,其中接觸或保持細胞的所述一面的水接觸角為70°以上且160°以下。
- 如申請專利範圍第1項所述的醫療器材,其中接觸或保持細胞的所述一面的水接觸角為70°以上且120°以下。
- 如申請專利範圍第1項所述的醫療器材,其中所述基材的至少與細胞接觸的所述一面具備凹凸結構。
- 如申請專利範圍第4項所述的醫療器材,其中與細胞接觸的所述一面的水接觸角為121°以上且160°以下。
- 如申請專利範圍第1項所述的醫療器材,其中所述基材的至少接觸或保持細胞的所述一面是由含有所述含氟環狀烯烴聚合物、光硬化性化合物及光硬化起始劑的含氟環狀烯烴聚合物組成物所構成。
- 如申請專利範圍第6項所述的醫療器材,其中所述含氟環狀烯烴聚合物組成物中的所述含氟環狀烯烴聚合物與所述光硬化性化合物之質量比(含氟環狀烯烴聚合物/光硬化性化合物)為99.9/0.1~50/50。
- 如申請專利範圍第1項至第7項中任一項所述的醫療器材,其是用於對接觸或保持於所述一面上的細胞進行培養。
- 如申請專利範圍第8項所述的醫療器材,其中於細胞培養中,細胞形成群體同時增殖。
- 如申請專利範圍第8項所述的醫療器材,其中藉由緩衝液使所培養的細胞浮游而自所述一面上脫離。
- 一種細胞培養方法,包括以下步驟:於如申請專利範圍第1項至第10項中任一項所述的醫療器材的所述基材的所述一面上,以接觸或保持於所述一面上的方式播種細胞;對所述細胞進行培養而獲得培養細胞;以及於所述一面上添加緩衝液,使所述培養細胞自所述一面浮游。
- 一種含氟環狀烯烴聚合物的用途,用於構成具備基材且使細胞接觸或保持於所述基材的一面上的醫療器材的所述基材的至少使細胞保持的所述一面,並且所述含氟環狀烯烴聚合物含有下述通式(1)所表示的重複結構單元,(式(1)中,R1~R4中,至少一個為氟、含氟的碳數1~10的烷基、含氟的碳數1~10的烷氧基或含氟的碳數2~10的烷氧基烷基;於R1~R4為不含氟的基團的情形時,R1~R4是選自氫、碳數1~10的烷基、碳數1~10的烷氧基或碳數2~10的烷氧基烷基中;R1~R4可彼此相同亦可不同;R1~R4亦可相互鍵結而形成環結構)。
- 一種含氟環狀烯烴聚合物組成物的用途,用於構成具備基材且使細胞接觸或保持於所述基材的一面上的醫療器材的所述基材的至少使細胞保持的所述一面,並且所述含氟環狀烯烴聚合物組成物含有:含有通式(1)所表示的重複結構單元的含氟環狀烯烴聚合物、光硬化性化合物、以及光硬化起始劑,(式(1)中,R1~R4中,至少一個為氟、含氟的碳數1~10的烷基、含氟的碳數1~10的烷氧基或含氟的碳數2~10的烷氧基烷基;於R1~R4為不含氟的基團的情形時,R1~R4是選自氫、碳數1~10的烷基、碳數1~10的烷氧基或碳數2~10的烷氧基烷基中;R1~R4可彼此相同亦可不同;R1~R4亦可相互鍵結而形成環結構)。
Applications Claiming Priority (4)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2014164912 | 2014-08-13 | ||
JP2014-164912 | 2014-08-13 | ||
JP2015-019996 | 2015-02-04 | ||
JP2015019996 | 2015-02-04 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
TW201605500A TW201605500A (zh) | 2016-02-16 |
TWI675674B true TWI675674B (zh) | 2019-11-01 |
Family
ID=55304193
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
TW104126178A TWI675674B (zh) | 2014-08-13 | 2015-08-12 | 醫療器材、細胞培養方法、含氟環狀烯烴聚合物的用途以及含氟環狀烯烴聚合物組成物的用途 |
Country Status (7)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US11597910B2 (zh) |
EP (1) | EP3181681A4 (zh) |
JP (2) | JP6420838B2 (zh) |
KR (1) | KR101960203B1 (zh) |
CN (1) | CN106661537B (zh) |
TW (1) | TWI675674B (zh) |
WO (1) | WO2016024566A1 (zh) |
Families Citing this family (10)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
ES2580804T3 (es) | 2009-03-03 | 2016-08-26 | The Trustees Of Columbia University In The City Of New York | Métodos, dispositivos y sistemas para ingeniería de tejido óseo utilizando un biorreactor |
JP6414918B2 (ja) * | 2015-03-31 | 2018-10-31 | 三井化学株式会社 | 医療器具、フッ素含有環状オレフィンポリマー、フッ素含有環状オレフィンポリマー組成物、および細胞培養方法 |
JP6912789B2 (ja) * | 2016-03-16 | 2021-08-04 | 株式会社日本触媒 | 神経幹細胞の培養方法、およびニューロスフェロイドの形成方法 |
JP6892299B2 (ja) * | 2016-03-25 | 2021-06-23 | 三井化学株式会社 | 医療器具用部材および医療器具 |
CN110892060B (zh) | 2017-04-07 | 2021-04-06 | 埃皮博恩股份有限公司 | 用于播种和培养的系统和方法 |
JP2018201394A (ja) * | 2017-06-02 | 2018-12-27 | 日本ゼオン株式会社 | 細胞シートの製造方法 |
JPWO2019065149A1 (ja) * | 2017-09-29 | 2020-09-10 | 日本ゼオン株式会社 | 生化学用器具 |
CN107828770A (zh) * | 2017-10-30 | 2018-03-23 | 北京化工大学 | 一种在无纺布上光固化有机磷水解酶方法 |
JP2019154294A (ja) * | 2018-03-12 | 2019-09-19 | 三井化学株式会社 | 医療器具用部材、医療器具および放射線滅菌済み医療器具の製造方法 |
WO2020255905A1 (ja) * | 2019-06-17 | 2020-12-24 | 株式会社住化分析センター | 培養基材および/または培地溶液の評価方法、並びに当該評価方法の利用 |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN102482364A (zh) * | 2009-08-26 | 2012-05-30 | 三井化学株式会社 | 含氟环状烯烃聚合物组合物、由该组合物获得的转印体及其制造方法 |
CN103159914A (zh) * | 2011-12-16 | 2013-06-19 | Jsr株式会社 | 环烯烃类开环共聚物 |
Family Cites Families (18)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH0747105A (ja) | 1993-08-03 | 1995-02-21 | Nissho Corp | 培養液分離操作用接続チューブおよびその使用方法 |
JPH08308562A (ja) * | 1995-05-16 | 1996-11-26 | Sumitomo Bakelite Co Ltd | 動物細胞培養器及びそれを用いる薬物代謝活性の測定方法 |
JP3764959B2 (ja) | 2002-10-10 | 2006-04-12 | 独立行政法人理化学研究所 | 細胞培養用容器および細胞培養方法 |
EP2233564A3 (en) * | 2002-10-30 | 2012-11-21 | Hitachi, Ltd. | Cell culture sheet comprising a functional substrate with a group of columnar micro-pillars and its manufacturing method |
JP4313021B2 (ja) | 2002-10-31 | 2009-08-12 | コージンバイオ株式会社 | 培養粘膜・皮膚の製造法及び培養粘膜・皮膚 |
EP1602383B1 (en) * | 2003-02-06 | 2015-05-27 | Cellseed Inc. | Cell sheets for ectocornea formation, method of producing the same and method of using the same |
KR20120105062A (ko) * | 2003-12-19 | 2012-09-24 | 더 유니버시티 오브 노쓰 캐롤라이나 엣 채플 힐 | 소프트 또는 임프린트 리소그래피를 이용하여 분리된 마이크로- 및 나노- 구조를 제작하는 방법 |
US20050153438A1 (en) * | 2004-01-09 | 2005-07-14 | Akio Shirasu | Vessel for cell culture |
US9056125B2 (en) | 2004-05-17 | 2015-06-16 | Florida State University Research Foundation, Inc. | Films for controlled cell growth and adhesion |
JP4866086B2 (ja) * | 2005-12-27 | 2012-02-01 | 三井化学株式会社 | 組み合わせレンズ、色収差の補正方法 |
KR101362293B1 (ko) | 2006-02-21 | 2014-02-12 | 에스씨아이브이에이엑스 가부시키가이샤 | 세포배양구조체, 세포배양용기, 스페로이드를 갖는 구조체,스페로이드를 갖는 용기 및 이들의 제조방법 |
WO2009009185A2 (en) * | 2007-05-09 | 2009-01-15 | Massachusetts Institute Of Technology | Tunable surfaces |
JP2008306977A (ja) * | 2007-06-14 | 2008-12-25 | Nitto Denko Corp | 細胞培養基材 |
US9428721B2 (en) | 2008-02-06 | 2016-08-30 | Public University Corporation Yokohama City University | Cell culture of fetal liver in layered state in a partitioned micro-space |
JP5578779B2 (ja) | 2008-10-08 | 2014-08-27 | 国立大学法人東北大学 | スフェロイド培養方法及びスフェロイド培養容器 |
KR101454580B1 (ko) * | 2009-06-23 | 2014-10-28 | 가부시키가이샤 히타치세이사쿠쇼 | 배양 기재 |
WO2012141238A1 (ja) | 2011-04-15 | 2012-10-18 | 三菱レイヨン株式会社 | 活性エネルギー線硬化性樹脂組成物、成形品、微細凹凸構造体、撥水性物品、モールド、及び微細凹凸構造体の製造方法 |
JP6414918B2 (ja) | 2015-03-31 | 2018-10-31 | 三井化学株式会社 | 医療器具、フッ素含有環状オレフィンポリマー、フッ素含有環状オレフィンポリマー組成物、および細胞培養方法 |
-
2015
- 2015-08-10 CN CN201580043114.7A patent/CN106661537B/zh active Active
- 2015-08-10 US US15/502,507 patent/US11597910B2/en active Active
- 2015-08-10 EP EP15832009.3A patent/EP3181681A4/en active Pending
- 2015-08-10 WO PCT/JP2015/072631 patent/WO2016024566A1/ja active Application Filing
- 2015-08-10 JP JP2016542576A patent/JP6420838B2/ja active Active
- 2015-08-10 KR KR1020177004697A patent/KR101960203B1/ko active IP Right Grant
- 2015-08-12 TW TW104126178A patent/TWI675674B/zh active
-
2018
- 2018-07-27 JP JP2018141065A patent/JP6580221B2/ja active Active
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN102482364A (zh) * | 2009-08-26 | 2012-05-30 | 三井化学株式会社 | 含氟环状烯烃聚合物组合物、由该组合物获得的转印体及其制造方法 |
CN103159914A (zh) * | 2011-12-16 | 2013-06-19 | Jsr株式会社 | 环烯烃类开环共聚物 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN106661537A (zh) | 2017-05-10 |
EP3181681A1 (en) | 2017-06-21 |
KR101960203B1 (ko) | 2019-03-19 |
KR20170031770A (ko) | 2017-03-21 |
JPWO2016024566A1 (ja) | 2017-04-27 |
CN106661537B (zh) | 2019-06-25 |
US11597910B2 (en) | 2023-03-07 |
TW201605500A (zh) | 2016-02-16 |
JP2019004884A (ja) | 2019-01-17 |
WO2016024566A1 (ja) | 2016-02-18 |
EP3181681A4 (en) | 2018-07-04 |
JP6420838B2 (ja) | 2018-11-07 |
US20170233696A1 (en) | 2017-08-17 |
JP6580221B2 (ja) | 2019-09-25 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
TWI675674B (zh) | 醫療器材、細胞培養方法、含氟環狀烯烴聚合物的用途以及含氟環狀烯烴聚合物組成物的用途 | |
JP6414918B2 (ja) | 医療器具、フッ素含有環状オレフィンポリマー、フッ素含有環状オレフィンポリマー組成物、および細胞培養方法 | |
Ross et al. | Surface engineering the cellular microenvironment via patterning and gradients | |
Zheng et al. | Fabrication of microvascular constructs using high resolution electrohydrodynamic inkjet printing | |
Colak et al. | Biofunctionalized patterned polymer brushes via thiol–ene coupling for the control of cell adhesion and the formation of cell arrays | |
WO2009099552A2 (en) | Cell culture article and screening | |
Yamazoe et al. | Facile cell patterning on an albumin-coated surface | |
Kobel et al. | Micropatterning of hydrogels by soft embossing | |
Turunen et al. | Chemical and topographical patterning of hydrogels for neural cell guidance in vitro | |
Zhu et al. | Three-dimensional printing of bisphenol A-free polycarbonates | |
Li et al. | Creating “living” polymer surfaces to pattern biomolecules and cells on common plastics | |
JP6892299B2 (ja) | 医療器具用部材および医療器具 | |
Lee et al. | Capture and printing of fixed stromal cell membranes for bioactive display on PDMS surfaces | |
JP2015213497A (ja) | ポリイミドを表面に含む細胞培養用基材 | |
JP7219891B2 (ja) | 細胞培養用積層体、医療器具および医療器具の使用方法 | |
JP6973082B2 (ja) | 接着型細胞の培養方法 | |
JP2019154294A (ja) | 医療器具用部材、医療器具および放射線滅菌済み医療器具の製造方法 | |
Ma | Controlling surface properties polymer materials through photodirected thiol-ene wrinkle systems | |
JP2023178108A (ja) | 細胞培養基材 | |
US11608447B2 (en) | Material for cell patterning use | |
Nakamura et al. | Biodegradable Neural Cell Culture Sheet Made of Polyanhydride thin Film with Micro-Trench Structures | |
AU2022289307A1 (en) | Composition for forming coating film, coating film and cell culture container | |
KR20110008951A (ko) | 이온빔을 이용한 이종세포의 패턴 형성 방법 | |
JP2020156348A (ja) | 多能性幹細胞の分化誘導方法 | |
KR20110090852A (ko) | 이온빔을 이용한 이종세포의 패턴 형성 방법 |