TWI673056B - 包含細菌的水凝膠及其製備方法 - Google Patents

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Abstract

本揭示內容提供了一種包含細菌的水凝膠，包含： 水凝膠，細菌，和代謝物。水凝膠包含互相交聯的多個高分子鏈，各高分子鏈包含至少一聚乙二醇鏈。細菌位於水凝膠內，且細菌以該高分子鏈為碳源發酵。代謝物為由細菌以該高分子鏈為碳源發酵時產生，並分布於該膠體中。本揭示內容亦提供一種包含細菌的水凝膠之製備方法。

Description

包含細菌的水凝膠及其製備方法
本揭示內容係關於一種水凝膠，特別是一種內含細菌及其代謝物的水凝膠。
利用細菌之發酵作用以獲得細菌的代謝產物已有很久的歷史，例如培養乳酸菌、醋酸菌、絲狀菌、放線菌等，藉由菌體中的酵素，能將培養基中的基質轉化產出初級代謝物、次級代謝物、小分子活性物質，例如乙醇、乳酸、胺基酸、琥珀酸、丙酮酸、輔酶Q10等。
大多數發酵後的代謝混合物，後續須經分離、萃取、精制、或純化等加工處理步驟，但這些處理過程可能造成其中一些代謝物的流失；或者，有些代謝物的物理化學性質較不穩定，較易揮發、降解、或失去活性。並且後續如需較完整地保留這些代謝物的組成或活性，也須較高的保存技術或成本。
為了改善上述問題，本揭示內容提供一種水凝膠，其將細菌包封於水凝膠內部的三維網狀結構中，並且細 菌可利用水凝膠的膠體成分發酵，產生的代謝物，可直接從水凝膠向外釋放。
本揭示內容之一實施方式為提供一種包含細菌的水凝膠，包含：一水凝膠，包含互相交聯的多個高分子鏈，各該高分子鏈包含至少一聚乙二醇鏈；細菌，位於該水凝膠內，且該細菌以該高分子鏈為碳源發酵；以及代謝物，由該細菌以該高分子鏈為碳源發酵時產生，並分布於該膠體中。
本揭示內容之一實施方式為提供一種水凝膠之製備方法，包含提供或接收一聚合物水溶液，該聚合物水溶液包含具有至少一聚乙二醇鏈的聚合物；將細菌與含有該聚乙二醇鏈的該聚合物水溶液混合；使含有該細菌及該聚乙二醇鏈的該聚合物水溶液發生交聯反應，而形成含有該細菌的一水凝膠；以及培養該水凝膠中的該細菌，其中該細菌以該聚乙二醇鏈的該聚合物為發酵的碳源而產生一代謝物。
100‧‧‧水凝膠
102‧‧‧含PEG鏈之高分子鏈
104‧‧‧水分
106‧‧‧細菌
200‧‧‧水凝膠
202‧‧‧含PEG鏈之高分子鏈
204‧‧‧水分
206‧‧‧細菌
206‧‧‧代謝物
第1A圖繪示根據一些實施方式之水凝膠的示意圖。
第1B圖繪示根據一些實施方式之水凝膠的示意圖。
第2圖為根據一實驗例，菌落數目的直方圖。
第3A圖為根據一實驗例，氣相色譜質譜分析的結果。
第3B圖為根據一實驗例，各短鏈脂肪酸量的直方圖。
第3C圖為根據一實驗例，各短鏈脂肪酸分子的質譜。
第4A圖為根據一實驗例，培養盤上細菌生長的影像。
第4B圖為根據一實驗例，菌落數目之直方圖。
第4C圖為根據一實驗例，培養盤上細菌生長的影像。
第4D圖為根據一實驗例，菌落數目之直方圖。
第5A圖為根據一實驗例，培養盤上細菌生長的影像。
第5B圖為根據一實驗例，菌落數目之直方圖。
第5C圖為根據一實驗例，培養盤上細菌生長的影像
第5D圖為根據一實驗例，菌落數目之直方圖。
第5E圖為根據一實驗例，培養盤上細菌生長的影像。
第5F圖為根據一實驗例，菌落數目之直方圖。
為了使本揭示內容的敘述更加詳盡與完備，下文針對了本揭示內容的實施態樣與具體實施例提出了說明性的描述；但這並非實施或運用本揭示內容具體實施例的唯一形式。以下所揭露的各實施例，在有益的情形下可相互組合或取代，也可在一實施例中附加其他的實施例，而無須進一步的記載或說明。
在以下描述中，將詳細敘述許多特定細節以使讀者能夠充分理解以下的實施例。然而，可在無此等特定細節之情況下實踐本發明之實施例。為簡化圖式，熟知的結構或裝置僅示意性地繪示於圖中。須注意的是，為了清楚地表示圖式的特徵，圖式中各元件的尺寸可能會任意地增加或減少。
請參看第1A圖，為根據一些實施方式之水凝膠示意圖，繪示包封細菌的水凝膠剛形成的結構。水凝膠100由含 有聚乙二醇(PEG)鏈之高分子鏈102經交聯反應而形成，其中含有水分104。細菌106包封於水凝膠100的三維網狀結構中。
請參看第1B圖，為根據一實施方式之水凝膠示意圖，繪示包封細菌的水凝膠開始發酵後的結構。水凝膠200由含PEG鏈之高分子鏈202聚合形成，其中含有水分204。細菌206分解含PEG鏈之高分子鏈202，作為發酵作用的碳源，產生代謝產物208，部分的代謝物208可釋出水凝膠200外。
本揭露內容之實施方式以含聚乙二醇鏈的聚合物(高分子，高分子鏈)形成水凝膠。聚乙二醇是一種水溶性聚醚型高分子，在生物醫學上的應用受到了廣泛的重視，並得到美國食品與藥品管理局(FDA)的認可。聚乙二醇具有很多優點，如低毒性，不凝血性以及生物相容性。聚乙二醇和其他分子耦連或形成共聚物時，聚乙二醇的許多優良性質也會隨之轉移到結合物中。因此，含聚乙二醇基之聚合物是理想的製備水凝膠的基材。
高分子鏈可為聚乙二醇或聚乙二醇衍生物。聚乙二醇衍生物可由其聚乙二醇的部分或其末端修飾基團通過物理或化學交聯的方式生成聚乙二醇基水凝膠，因此相較於聚乙二醇，具有較多的交聯方式，因而可得到許多構造及功能不同的水凝膠。
根據一些實施方式，含聚乙二醇鏈之高分子鏈可為聚乙二醇(PEG)、聚乙二醇二甲丙烯酸酯(Polyethylene glycol dimethacrylate，簡稱PEG-DMA)、聚乙二醇二丙烯酸酯(Polyethylene glycol diacrylate，簡稱PEG-DA)、聚乙二醇甲基丙烯酸酯(Polyethylene glycol methacrylate，簡稱PEG-MA)、聚乙二醇二丙烯酰胺(Polyethylene glycol diacrylamide，簡稱PEG-DAA)、或其組合。
根據一些實施方式，含聚乙二醇鏈之高分子鏈中所包含的聚乙二醇鏈的分子量可為約250至約10000，例如：分子量約250，500，1000，2000，5000，8000，或10000。
根據一些實施方式，其中含有聚乙二醇鏈之高分子鏈可包含醣類基團，脂質基團，或羧酸基團。並且此羧酸基團、此脂質基團，及此醣類基團鍵結於此聚乙二醇鏈。
根據一實施方式，含有聚乙二醇鏈及醣類基團的高分子鏈可例如Propargyl-PEG5-beta-D-glucose，或PEG5-tetra-Ac-beta-D-glucose。
根據一實施方式，含有聚二醇鏈及羧酸基團之高分子鏈為F68-COOH。
根據一些實施方式，藉由不同的含PEG鏈的衍生物所交聯聚合形成的水凝膠，可篩選特定的可發酵水凝膠的細菌種類，或是產生不同的代謝物。
根據一實施方式，可藉由調整含聚乙二醇鏈之高分子鏈在水溶液的濃度，或接枝其他含碳的分子，以調控水凝膠的硬度、膨潤度、含水量。
在一些實施方式中，於含聚乙二醇鏈之高分子鏈聚合反應前，將混合液注入模具以形成特定形狀或厚度的水 凝膠。例如：由玻璃夾片，矽膠條，與固定夾阻成的U型模具；其中，矽膠條置於玻璃夾片之間，並由固定夾將玻璃夾片與矽膠條夾緊。
根據一些實施方式，交聯反應可以藉由加入引發劑而發生，引發劑可為過氧二硫酸鹽，例如過氧二硫酸鈉，過氧二硫酸鉀，或過氧二硫酸銨。
根據一些實施方式，可於製備水凝膠體時，可加入產生自由基的催化劑，例如：亞硫酸鈉或四甲基乙二胺(N,N,N',N'-tetramethyl-ethane-1,2-diamine，簡稱TEMED)。
根據一實施方式，水凝膠中包含一指示劑成分，例如酚紅，可根據水凝膠內的酸鹼值產生顏色的變化，當酚紅的顏色變為黃色時，可藉此判斷水凝膠內含有細菌發酵產生酸性物質。
根據一實施方式，可利用UV光照射，以引發含聚乙二醇鏈之高分子鏈發生交聯反應而形成水凝膠。例如，將含PEG鏈之高分子鏈(例如PEG-DMA)溶解於水溶液中，之後在溶液中加入光引發劑和菌液，將PEG-DMA/光引發劑/菌液(前趨物)避光攪拌均勻後，注入模具。然後進行紫外光照交聯時，紫外光之照射時間不超過明顯地造成細菌死亡的時間，例如不超過8分鐘。紫外光照射後，含PEG鏈之高分子鏈交聯形成水凝膠並同時將細菌包封於水凝膠中。其中光引發劑為在光照下可產生自由基引發聚合反應的化合物。
根據一實施方式，水凝膠中的細菌種類為與宿 主(例如：人類)共生的菌種，例如：表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis)，或痤瘡丙酸桿菌(Propionibacterium acnes)。
根據一實施方式，水凝膠所包封的細菌為益生菌。益生菌係普遍存在於宿主的皮膚、消化腸胃道、上呼吸道，屬於宿主的正常菌叢與宿主共生，沒有致病性或致病性低，能與致病的病原菌競爭，改善宿主微生物相中菌叢的平衡，因此有益宿主的健康。
根據一實施方式，水凝膠中的細菌具有可分解聚乙二醇鏈的酶，例如：diol dehydratase，PEG acetaldehyde lyase，或其他可分解含PEG鏈之高分子鏈的酶。細菌可能將酶分泌出菌體外，於體外將含PEG鏈轉變為代謝產物；或是細菌可攝入含PEG鏈的高分子鏈的一部分後，在菌體內轉變為代謝產物。
根據一些實施方式，加入細菌可在水凝膠開始聚合前，或開始聚合但未完全凝固為膠體時。
根據一實施方式，將細菌包封於水凝膠後，細菌可開始發酵PEG基水凝膠。
根據一實施方式，可將含細菌之水凝膠儲存於較低的溫度，例如：2℃至10℃。較佳為1至14天，更佳為1至10天，又更佳為1至7天。
根據一實施方式，可將包封細菌的水凝膠置於液態培養基中，以更佳地維持細菌活性。培養細菌的溫度為攝式20℃至攝式40℃，例如20℃至25℃、25℃至30℃、30 ℃至35℃、35℃至40℃。培養時間為12小時至96時，較佳為24至70小時，更佳為48至72小時。培養基成分中含有碳源、氮源、硫源、磷源、無機鹽、微量元素，例如培養基為胰蛋白酶大豆培養基(TSB)，或LB培養基(LB broth)。
根據一實施方式，PEG基水凝膠於使用時(例如覆蓋在皮膚表面)，其中包封的細菌仍具有活性，因此可持續地發酵，製造代謝物，因此可利用細菌發酵的新鮮產物之組成分，並且有些易降解的產物也可持續在膠體內製造及釋出。
根據一實施方式，亦可選擇性地在發酵產生代謝物後，將水凝膠作滅菌處理，例如可用輻射滅菌(例如UV、X射線、γ射線)，高溫蒸氣濕熱、化學處理(例如酒精)，使水凝膠在使用於人體前，沒有細菌活性，而發酵的代謝物仍保留於水凝膠中。
根據一實施方式，本揭示內容之水凝膠所包含的含聚乙二醇鏈之高分子(高分子鏈，或聚合物)，為細菌選擇性的發酵起始物，換言之，特定的細菌其具有分解及代謝此含聚乙二醇鏈之高分子鏈的酶，才能以此水凝膠發酵。
根據一實施方式，本揭示內容之水凝膠發酵釋出的代謝物成分具有利於宿主的功效，例如可抑制宿主體表或黏膜的病原菌的生長。
根據一實施方式，水凝膠中的代謝物產物包含抗菌的物質，例如細菌素(Bacteriocin)或短鏈脂肪酸，例如：乙酸、丙酸、丁酸、異丁酸、異戊酸。
以下為通過實驗例及實施例闡述本申請之揭示內容，但不構成對本申請之權利範圍的限制。
細菌培養：
細菌以胰蛋白酶大豆培養基(tryptic soy broth，簡稱TSB)(Sigma,St.Louis,MO,USA)培養。隔夜培養後將菌液稀釋100倍，再培養至OD600吸光值為1.0。離心5000xg10分鐘以收集細菌。之後以磷酸鹽緩衝生理食鹽水(phosphate buffered saline，簡稱PBS)清洗，並使細菌懸浮於PBS以做進一步的實驗。
實驗例1：含聚乙二醇鏈之高分子可做為特定細菌的選擇性發酵的碳來源。
實驗方法：測試表皮葡萄球菌(ATCC編號12228)，痤瘡丙酸桿菌(ATCC編號6919)，和USA300(一致病性的抗藥性黃金葡萄球菌菌株)三種細菌，分別培養於不含PEG-DMA的固態培養基，和含PEG-DMA的固態培養基，之後檢視不同實驗條件下各菌種的發酵狀況。
實驗材料：
1.製備養分充足的藻膠培養基，培養基中含有2%重量/體積的藻膠，並添加養分充足培養基成分：10克/升的酵母菌抽出物(Biokar Diagnostics,Beauvais,France)，3克/升TSB，2.5克/升K2HPO4，和1.5克/升KH2PO4)。此外，培養基中添加0.002%重量/體積的 酚紅，酚紅的顏色從紅色或橘紅轉變為黃色表示培養基中產生酸性物質。
2.製備含PEG-DMA之培養基，如前述養分充足的藻膠培養基之配方，並添加2%重量/體積的PEG-DMA(平均分子量為550，型號25852-47-5，Sigma)。PEG-DMA的結構式為，其中n為對應分子量的整數。
將欲測試的細菌加入固態培養基的方式為在製備含培養基之藻膠加熱後，冷卻至約45℃，將細菌加入含培養基之藻膠並混合均勻，之後藻膠凝固後，細菌分布於固態培養基中。細菌數量為每200微升(μl)的固態培養基中有106的菌落形成單位(CFU)。
將細菌培養於V-底的96-孔聚丙烯(polypropylclc,PP)微量盤(Corning®,Corning,NY)。 每一孔的固態培養基體積為200微升。控制組包括培養基僅加PEG-DMA，或僅加細菌。將細菌於37℃培養2天。
實驗結果如下表一，其中「-」表示培養基中無添加成分或細菌，「+」表示培養基中有添加此成分或細菌。表一顯示，表皮葡萄球菌在含有PEG-DMA的培 養中，含酚紅的固態培養基在兩天後轉變為黃色。而在痤瘡丙酸桿菌和USA300的培養中，添加PEG-DMA並不會發酵變為黃色。因此，PEG-DMA選擇性地誘發表皮葡萄球菌的發酵，而不會引起痤瘡丙酸桿菌和USA300的發酵。此外，不同的菌種能製造不同的酶以對特定的基質發酵，表一顯示在這3種細菌中，表皮葡萄球菌具有發酵PEG-DMA的酶。
實驗例2 含單醣基團的PEG鏈分子能做為細菌的選擇性發酵的碳來源。
所測試的含單醣基團的PEG鏈分子為化合物A：propargyl-PEG5-beta-D-glucose(分子量394.4)，結構式如下：
以及化合物B：PEG5-tetra-Ac-beta-D-glucose(分子量562.6)，結構式如下：
實驗方法為將化合物A及化合物B各自添加於固態藻膠培養基，並加入表皮葡萄球菌或痤瘡丙酸桿菌於培養基中培養，之後紀錄培養基中的酚紅指示劑的顏色。
實驗結果如下表二所示，其中「-」表示培養基中無添加此成分，「+」表示培養基中含有此成分。表二顯示，表皮葡萄球菌可發酵化合物A及化合物B，但痤瘡丙酸桿菌則無法發酵化合物A及化合物B。因此，這兩個含單醣基團的PEG鏈分子能做為表皮葡萄球菌的選擇性發酵起始物。
實驗例3 含羧酸基團的PEG鏈分子，能做為細菌的選擇性發酵的碳來源。
泊洛沙姆(F 68)，又稱Poly(ethylene glycol)-block-poly(propylene glycol)-block-poly(ethylene glycol)，為含有PEG鏈之高分子。F68(分子量約8400，型號：412325， SIGMA-ALDRICH)的結構如下：
將F68末端的羥基(-OH基團)修飾為羧酸(-COOH基團)，結構式如下：
將產生的具有羧酸基的F68(F68-COOH)添加至TSB培養液，與痤瘡丙酸桿菌一起培養，以下表三為實驗的條件及結果，其中「-」表示無添加此成分或細菌，「+」表示有添加此成分或細菌。
以上結果顯示，當培養液中存在F68-COOH時，痤瘡丙酸桿菌可將F68-COOH代謝產生酸性的代謝產物。因此，對於痤瘡丙酸桿菌，F68-COOH為一選擇性的發酵起始物。
實驗例4 雙層膠體重疊試驗，測試表皮葡萄球菌發酵PEG-DMA對USA300的生長的影響。
實驗步驟：配製養分充足的藻膠培養基，其中含有2%重量/體積的藻膠。將培養基加熱，冷卻至45℃後，加入USA300細菌，添加的菌量為每200微升內含USA300的數目為105CFU。
實驗組為固態培養基中添加2%PEG-DMA，對照組為未添加PEG-DMA的固態培養基。以V-底的96孔PP微量盤培養細胞，每一孔加200微升含USA300菌的培養基。表皮葡萄球菌塗佈在含USA300的固態培養基的上表面，塗佈量為20微升的PBS內含細菌數目105CFU。
於37℃培養兩天後，拍攝每一個培養孔的藻膠影像，計算在固態培養基中USA300的菌落數(計算大於0.005mm2的菌落)，以ImageJ軟體(NIH,Bethesda,MD,USA)計數。
請參看第2圖，為固態培養基中USA300之菌落數目的直方圖，數字為3次獨立實驗的平均值加減標準差，圖式中的「**」符號表示雙尾t-檢定的p值小於0.01。
第2圖顯示，含有PEG-DMA的培養基中USA300的菌落數目，明顯少於在不含PEG-DMA的培養基中USA300的菌落數目。因此，PEG-DMA之存在能促進表皮葡萄球菌抑制USA300的生長。並且生長在固態培養基上的表皮葡萄球菌，能將PEG-DMA發酵，產生抑制USA300生長的成分，其擴散進入固態培養基，所以降低固態培養基中USA300的菌落生長。
實驗例5 將表皮葡萄球菌與PEG-DMA共培 養於液態培養基後，將菌液進行氣相色譜質譜分析。
所用的機器型號Agilent 5890 Series II GC連接5971 MS detector(Agilent Technologies,Inc.,PaloAlto,CA)。
實驗步驟：表皮葡萄球菌(ATCC編號12228)培養在添加入2%PEG-DMA的液態培養基。對照組為不含PEG-DMA的液態培養基，於37℃培養兩天。之後以5000 x g的離心力離心10分鐘，收集上清液。以0.22微米(μm)孔徑的濾膜過濾上清液以移除上清液中殘留的細菌。之後以氣相色譜質譜分析檢驗上清液中的短鏈脂肪酸成份，2H7-butyric acid為標準樣品。
由於許多細菌的抑菌發酵成份為短鏈脂肪酸，因此本實驗分析表皮葡萄球菌的代謝PEG-DMA的產物中的短鏈脂肪酸成分。實驗結果顯示，在不含PEG-DMA的培養液的上清液中，僅偵測到極端低的(小於0.1微克/毫升)的短鏈脂肪酸量。請參看第3A圖，氣相色譜質譜分析的結果，顯示表皮葡萄球菌發酵PEG-DMA產生的5個主要的短鏈脂肪酸，分別為醋酸(Ac)，丙酸(PA)，異丁酸(Iso-BA)，丁酸(BA)，和異戊酸(Iso-VA)，其中「*」符號表示為標準樣品(2H7-butyric acid)的峰(peak)。第3B圖為各個短鏈脂肪酸量(單位：微克/毫升)的直方圖，顯示樣品中含有醋酸(592.1微克/毫升)，丙酸(7.8微克/毫升)，異丁酸(8.3微克/毫升)，丁酸(3.8微克/毫升)，異戊酸(11.9微克/毫升)。第3C圖為所辨識的5個短鏈脂肪酸(醋酸、丙酸、異丁酸， 丁酸，和異戊酸)的質譜，例如位在31，43，45，和60m/z值的分子離子符和乙酸的HCO+，CH3CHO+，CH3CO+，CH3COOH質譜。
這些結果顯示表皮葡萄球菌將PEG-DMA發酵代謝成特定的短鏈脂肪酸成分。
實驗例6 以最低殺菌濃度測試(minimum bactericidal concentration，簡稱MBC)短鏈脂肪酸抗USA300的活性。
實驗方法：USA300細菌(106CFU/mL)分別與不同濃度的丁酸或醋酸，在96孔微量盤過夜培養，醋酸和丁酸的測試濃度為0.02mM至100mM，於每一小孔中各加100微升不同濃度的醋酸或丁酸。控制組為僅加PBS。培養後，將USA300與PBS做1：100至1：105的序列稀釋，取5微升的稀釋液塗佈在藻膠盤上，隔夜培養後計算藻膠盤上的菌落數(CFU)。MBC定義為達到99.9%(大於1 log10菌落數/毫升)的殺菌程度。
實驗結果請參看第4A至第4D圖。第4A及第4C圖為細菌生長的影像圖。第4B圖及第4D圖為量化的直方圖，根據三次獨立的結果，顯示平均值加減標準差。符號「***」表示雙尾t-檢定的p值小於0.001。UD為檢測不到(undetectable)。
實驗結果顯示丁酸的MBC值和醋酸的MBC值為10mM，且兩種酸完全抑制USA300的濃度為50mM。
先前已知丙酸可在試管中及活體中抑制USA300的生長。丙酸抗USA300的活性源自於它降低USA300細胞內pH值的能力。本實驗分析乙酸和丁酸，其為表皮葡萄球菌發酵PEG-DMA所產生的含量較高的短鏈脂肪酸，因此於體外(in vitro)檢驗乙酸和丁酸這兩種成分之抑制USA-300的活性。實驗的結果顯示這2種短鏈脂肪酸，具有良好的抑制USA300生長之功效。
實驗例7 包封於PEG-DMA水凝膠的表皮葡萄球菌可發酵PEG-DMA。
水凝膠製作方法：將10%重量/體積的PEG-DMA(平均分子量為550，型號25852-47-5，Sigma)溶解於水中，之後加入0.002%重量/體積的酚紅以作為指示劑，0.001%的過氧二硫酸銨(APS)作為提供自由基的引發劑，以及表皮葡萄球菌(2 x 108CFU/毫升)，將這些成分混合均勻。之後加入TEMED作為自由基反應的催化劑，使PEG-DMA交聯形成水凝膠，且表皮葡萄球菌也包封於水凝膠中。此外，製備控制組水凝膠，例如：沒有添加表皮葡萄球菌的水凝膠，不含表皮葡萄球菌的丙烯醯胺水凝膠(acrylamide hydrogel)，以及包封表皮葡萄球菌的丙烯醯胺水凝膠。
之後將水凝膠置入含TBS的液態培養基中，於37℃培養3天。
以下表四顯示，培養兩天後水凝膠的呈色，酚紅的顏色與水凝膠內的發酵作用有關。其中，符號「-」 表示水凝膠中沒有表皮葡萄球菌，符號「+」表示水凝膠中包封表皮葡萄球菌。表四顯示包封表皮葡萄球菌PEG-DMA水凝膠，水凝膠中酚紅的顏色從橘紅變為黃色，而丙烯醯胺水凝膠及不含細菌的水凝膠則無此現象。因此，表皮葡萄球菌能代謝水凝膠中的PEG-DMA。
實驗例8 含表皮葡萄球菌之PEG-DMA水凝膠抑制小鼠皮膚傷口中的USA300細菌。
小鼠實驗執行於加州大學聖地牙哥分校(UCSD)。UCSC倫理委員會按照動物照顧和使用委員會(IACUC)的協議(編號：S10058)核准這項研究。
水凝膠製作方法：將10%重量/體積的PEG-DMA(平均分子量為550，型號25852-47-5，Sigma)溶解於水中，之後加入0.001%重量/體積的過氧二硫酸銨(APS)作為提供自由基的引發劑，表皮葡萄球菌(每毫升的混合液中含2 x 108CFU)，混合均勻。之後加入TEMED作為自由基反應的催化劑，使PEG-DMA交聯形成水凝膠，且表皮葡萄球菌也包封於水凝膠中。之後將水凝膠靜置於含TBS之液態培養基中。此外製備不含表皮葡萄球菌的PEG-DMA水凝膠，不含細菌的丙烯醯胺水凝膠，以及包封 表皮葡萄球菌的丙烯醯胺水凝膠。
實驗所用的動物為2至3個月大的ICR(Institute of Cancer Research)母小鼠(Harlan Labs,Placentia,CA,USA)。以異氟烷(isoflurane)麻醉小鼠後，以電動剪刀在小鼠的背部皮膚左右兩側製造2道各1mm長的傷口，分別為第一道傷口，和第二道傷口。之後為了模擬抗耐甲氧苯青黴素金黃色葡萄球菌(MRSA)的感染，以含USA300之緩衝溶液(108CFU溶於10微升PBS)加在傷口上。
實驗組為小鼠感染USA300菌10分鐘後，覆蓋PEG-DMA水凝膠(不含表皮葡萄球菌)於第一道傷口上，以及覆蓋包封表皮葡萄球菌之PEG-DMA的水凝膠在同一隻小鼠的第二道傷口上。
對照組1為小鼠感染USA300菌10分鐘後，第一道傷口上沒有覆蓋水凝膠，以及覆蓋PEG-DMA水凝膠(不含表皮葡萄球菌)在同一隻小鼠的第二道傷口上。
對照組2為小鼠感染USA300菌10分鐘後，覆蓋丙烯醯胺水凝膠(不含表皮葡萄球菌)於第一道傷口上，以及覆蓋包封表皮葡萄球菌之丙烯醯胺水凝膠在同一隻小鼠的第二道傷口上。
一共執行3次獨立實驗，其中每次每組小鼠數目為3隻。所有使用小鼠的實驗皆操作於生物安全性等級2(BSL-2)的設施中。
為了計算USA300的數目，於感染後24小時後，切下小鼠傷口處的皮膚。切下的皮膚以組織研磨器在500微升PBS緩衝液中均質化。將均質化的組織液作序列稀釋，塗佈在含酚紅之甘露醇鹽藻膠(mannitol salt agar，簡稱MSA)培養盤(BD,Sparks,MD,USA)。將培養盤於37℃培養24小時，之後計算培養盤上的菌落數目，其中黃色菌落視為USA300菌落。
請參看第5A圖至第5F圖，其中第5A圖、第5C圖、第5E圖為各序列稀釋濃度之細菌生長的影像。第5B圖、第5D圖、第5F圖為為3次獨立實驗，每組各3隻小鼠的量化結果，顯示USA300的菌落數目(黃色菌落數目)的平均值加減標準差。符號「***」表示雙尾t-檢定的p值小於0.001。
第5A圖及第5B圖顯示以包封表皮葡萄球菌的PEG-DMA水凝膠覆蓋傷口，USA300的菌落數目(7.5±1.2 x 105CFU)，明顯少於以PEG-DMA水凝膠覆蓋傷口處的USA300的菌落數目(5.0±1.5 x 105CFU)。這證明包封表皮葡萄球菌的PEG-DMA水凝膠具有在傷口處抑制抗藥性病原菌USA300生長之益生菌的活性。
第5C圖及第5D圖顯示對照組1之實驗結果，未包封細菌的PEG-DMA水凝膠(PEG Hydrogel)並不會降低傷口中的USA300生長，這顯示PEG-DMA水凝膠本身並未影響傷口中USA300的定殖。第5D圖中「ns」代表統計結果之差異為不顯著(not significant)。
第5E圖及第5F圖顯示對照組2之實驗結果，丙 烯醯胺水凝膠(Acrylamide Gel)有無包封表皮葡萄球菌，對於傷口中的USA300的生長，沒有顯著差異。第5F圖中「ns」代表統計結果之差異為不顯著(not significant)。
以上這些結果顯示，水凝膠中的PEG-DMA發酵後，具有能抑制傷口中的病原菌USA300的生長的功效。
本揭示內容之有益效果：
本揭示內容之水凝膠，可以保持大量的水分在膠體的三維結構中，並維持一定的形狀，因此，將水凝膠作為載體，於使用時可提供或維持所覆蓋之處的濕度，並將水凝膠中含有的功效分子成分緩釋出來。
本揭示內容之以PEG為基底之水凝膠，可作為碳源豐富的微環境，不但可讓細菌存活在其中，更誘導細菌利用含PEG鏈的高分子鏈(聚合物)當作碳的來源進行發酵，釋放出發酵的功能性產物。例如本揭示內容之實驗例顯示包封表皮葡萄球菌之PEG-DMA水凝膠，特異性發酵PEG-DMA代謝成特定的短鏈脂肪酸並具有良好的抗菌效果。短鏈脂肪酸一般是具2至6個碳原子的脂肪酸，也稱為揮發性脂肪酸，為具有短的半衰期為能被快速代謝的揮發性化合物。短鏈脂肪酸除了可抑制病原菌的生長，對於宿主細胞，短鏈脂肪酸為class I和class II的組蛋白去乙醯酶(HDAC)的抑制劑，並且可抑制發炎反應。
因此本揭示內容之水凝膠之一用途為可作為一種新型的抗菌水凝膠，應用於生物醫學領域，例如皮膚 保養品(例如：面膜，凝膠)，或是醫療材料(例如敷料、貼片)。
宿主身上的不同的細菌種類會製造不同的特定的酶以代謝特定的碳源。大部分皮膚共生的細菌包括表皮葡萄球菌，痤瘡丙酸桿菌，和致病的黃金葡萄球菌會代謝同樣的碳源，例如葡萄糖為短鏈脂肪酸。為了得到最大的存活率，共生的細菌和致病的葡萄球菌可能經由發酵葡萄糖產生短鏈脂肪酸，互相排擠。一但致病黃金葡萄球菌克服這些干擾存活，感染會加速，對宿主造成危害。而本揭示內容之實施例顯示藉由選擇性的發酵起始物(SFI)以特異性地驅動表皮葡萄球菌的發酵，因此可放大表皮葡萄球菌對抗致病的黃金葡萄球菌的益生菌效應。
抗耐甲氧苯青黴素金黃色葡萄球菌(Methicillin-resistant Staphylococcus aureus，簡稱MRSA)或稱多重抗藥金黃色葡萄球菌(Multiple-resistant Staphylococcus aureus)，是金黃色葡萄球菌的一獨特菌株，對幾乎所有青黴素類抗生素具有抗藥性，包括甲氧苯青黴素(Methicillin)及其他抗β內醯胺酶的青黴素。MRSA首次發現於1961年的英國，目前已廣泛散播，在醫院中此細菌更被稱為「超級細菌」。
切開傷口引流是抗耐甲氧苯青黴素金黃色葡萄球菌感染病人的治療措施，這些病人通常也被施加抗生素作為輔助治療。然而，對於多重抗藥性細菌使用抗生素治療， 細菌可能演化出中和這些抗生素的能力。換言之，使用抗生素，提高了產生抗藥性細菌的風險，並且非專一性地也殺死其他與宿主共生的細菌菌種。
本揭示內容之水凝膠，可應用於作為抗生素治療時之佐劑，以減少抗生素的使用量，因此減少產生抗藥性細菌的機會，以及減少對非病原性共生菌的殺菌效果。
本揭示內容之水凝膠，亦可應用於經皮給藥的貼片劑型。經皮給藥的投藥系統可長效緩慢的釋放功效分子於皮膚。但是一些具功效的細菌二次代謝物半衰期短，因此藉由活性細菌在膠體中的發酵作用，可以持續性地產生及釋放具功效分子。
雖然本揭示內容已以實施方式揭露如上，然其並非用以限定本發明，任何熟習此技藝者，在不脫離本發明之精神和範圍內，當可作各種之更動與潤飾，因此本發明之保護範圍當視後附之申請專利範圍所界定者為準。

Claims (14)

  1. 一種水凝膠，包含：一膠體，包含水分和一三維網狀結構，所述三維網狀結構包含互相交聯的多個高分子鏈，所述高分子鏈包含至少一聚乙二醇鏈，所述高分子鏈為聚乙二醇、聚乙二醇二甲丙烯酸酯、聚乙二醇二丙烯酸酯、聚乙二醇甲基丙烯酸酯、聚乙二醇二丙烯酰胺、或其組合；皮膚益生菌，包封於該膠體的所述三維網狀結構中，且位於所述互相交聯的多個高分子鏈之間，且所述皮膚益生菌以所述互相交聯的多個高分子鏈為碳源發酵，其中所述皮膚益生菌為表皮葡萄球菌；以及代謝物，由所述皮膚益生菌以所述互相交聯的多個高分子鏈為碳源發酵時產生，並分布於該膠體中。
  2. 如請求項1所述之水凝膠，其中該高分子鏈的分子量為約250至約10000。
  3. 如請求項1所述之水凝膠，其中該高分子鏈更包含一羧酸基團、一脂質基團、或一醣類基團，且該羧酸基團、該脂質基團及該醣類基團鍵結於該聚乙二醇鏈。
  4. 如請求項1所述之水凝膠，其中所述代謝物包含具有2至6個碳原子的短鏈脂肪酸。
  5. 如請求項1所述之水凝膠，其中該高分子鏈包含聚乙二醇二甲丙烯酸酯。
  6. 如請求項1所述之水凝膠，其中該高分子鏈更包含醣類基團。
  7. 如請求項1所述之水凝膠，其中該高分子鏈更包含一羧酸基團。
  8. 一種水凝膠之製備方法，包含：提供或接收一聚合物水溶液，該聚合物水溶液包含多個高分子鏈，各所述高分子鏈具有聚乙二醇鏈，所述高分子鏈為聚乙二醇、聚乙二醇二甲丙烯酸酯、聚乙二醇二丙烯酸酯、聚乙二醇甲基丙烯酸酯、聚乙二醇二丙烯酰胺、或其組合；將皮膚益生菌與該聚合物水溶液混合，形成一混合液，其中所述皮膚益生菌為表皮葡萄球菌；使該混合液中的該多個高分子鏈發生交聯反應，而形成一膠體，該膠體包含互相交聯的所述多個高分子鏈，且所述皮膚益生菌位於該膠體內之所述互相交聯的所述多個高分子鏈之間；以及培養該膠體內的所述皮膚益生菌，其中所述皮膚益生菌以所述互相交聯的高分子鏈為發酵的碳源而產生代謝物。
  9. 如請求項8所述之水凝膠之製備方法，其中該高分子鏈更包含一羧酸基團、一脂質基團或一醣類基團，且該羧酸基團、該脂質基團及該醣類基團鍵結於該聚乙二醇鏈。
  10. 如請求項8所述之水凝膠之製備方法，其中使該混合液中的所述多個高分子鏈發生交聯反應包含：加入過氧二硫酸鹽以及四甲基乙二胺(TEMED)於該混合液中。
  11. 如請求項8所述之水凝膠之製備方法，其中該高分子鏈的分子量為約250至約10000。
  12. 如請求項8所述之水凝膠之製備方法，其中使該混合液中的所述多個高分子鏈發生交聯反應包含：加入一光引發劑於該混合液中，而形成一前驅物；以及以紫外光照射該前驅物，而形成該水凝膠。
  13. 如請求項8所述之水凝膠之製備方法，其中所述代謝物包含具2至6個碳原子的短鏈脂肪酸。
  14. 如請求項8所述之水凝膠之製備方法，更包含將該水凝膠培養於一含養分的基質中。
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Families Citing this family (20)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB0808376D0 (en) 2008-05-08 2008-06-18 Bristol Myers Squibb Co Wound dressing
GB0817796D0 (en) 2008-09-29 2008-11-05 Convatec Inc wound dressing
GB201020236D0 (en) 2010-11-30 2011-01-12 Convatec Technologies Inc A composition for detecting biofilms on viable tissues
CN103347561B (zh) 2010-12-08 2016-09-07 康沃特克科技公司 用于评估伤口分泌液的集成系统
CA2819549C (en) 2010-12-08 2019-09-10 Convatec Technologies Inc. Wound exudate system accessory
GB201115182D0 (en) 2011-09-02 2011-10-19 Trio Healthcare Ltd Skin contact material
GB2497406A (en) 2011-11-29 2013-06-12 Webtec Converting Llc Dressing with a perforated binder layer
AU2013366038A1 (en) 2012-12-20 2015-07-16 Convatec Technologies Inc. Processing of chemically modified cellulosic fibres
WO2017212345A2 (en) 2016-03-30 2017-12-14 Synovo Gmbh Detecting microbial infection in wounds
CA3019558A1 (en) 2016-03-30 2017-10-05 Convatec Technologies Inc. Detecting microbial infections in wounds
MX2019000239A (es) 2016-07-08 2019-09-06 Convatec Technologies Inc Sistema de presion negativa flexible.
KR20190028725A (ko) 2016-07-08 2019-03-19 컨바텍 테크놀러지스 인크 체액 흐름 감지
TW201805036A (zh) 2016-07-08 2018-02-16 美商康瓦鐵克科技股份有限公司 流體收集裝置
WO2019089596A1 (en) * 2017-10-30 2019-05-09 Lawrence Livermore National Security, Llc Polymeric encapsulation of whole cells as bioreactors
US11331221B2 (en) 2019-12-27 2022-05-17 Convatec Limited Negative pressure wound dressing
US11771819B2 (en) 2019-12-27 2023-10-03 Convatec Limited Low profile filter devices suitable for use in negative pressure wound therapy systems
CN111704802A (zh) * 2020-07-09 2020-09-25 中国科学院大学温州研究院(温州生物材料与工程研究所) 一种益生菌代谢产物基水凝胶及其制备方法
CN114874935A (zh) * 2022-04-26 2022-08-09 南京北极光生物科技有限公司 一种高活性的益生菌制剂组合物及其制备方法
GB2623078A (en) * 2022-10-03 2024-04-10 Univ Brunel Prevention and/or treatment of wound infection
CN116083240B (zh) * 2023-04-07 2023-08-29 深圳市第二人民医院(深圳市转化医学研究院) 工程化细菌及其制备方法和应用

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103230619A (zh) * 2013-05-15 2013-08-07 南京斯瑞奇医疗用品有限公司 复合水凝胶敷料及其制备方法
CN103327966A (zh) * 2010-11-15 2013-09-25 新泽西鲁特格斯州立大学 用于防止hiv传播的基于peg纳米载体的多功能生物可降解水凝胶

Family Cites Families (20)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2000078141A1 (en) 1999-06-23 2000-12-28 The Dial Corporation Antibacterial compositions
US8541021B2 (en) * 2001-05-01 2013-09-24 A.V. Topchiev Institute Of Petrochemical Synthesis Hydrogel compositions demonstrating phase separation on contact with aqueous media
US20030175824A1 (en) 2002-01-22 2003-09-18 The Penn State Research Foundation Drug candidate screening systems based on micropatterned hydrogels and microfluidic systems
US7419593B2 (en) * 2003-11-19 2008-09-02 Amcol International Corp. Bioremediation mat and method of manufacture and use
ES2235642B2 (es) * 2003-12-18 2006-03-01 Gat Formulation Gmbh Proceso de multi-microencapsulacion continuo para la mejora de la estabilidad y almacenamiento de ingredientes biologicamente activos.
US20100120127A1 (en) * 2004-11-15 2010-05-13 Drm, Dr. Müller Ag Method for removing bacteria from a fermentation broth
US8734823B2 (en) * 2005-12-14 2014-05-27 The Invention Science Fund I, Llc Device including altered microorganisms, and methods and systems of use
US8682619B2 (en) * 2005-12-14 2014-03-25 The Invention Science Fund I, Llc Device including altered microorganisms, and methods and systems of use
RU2009127718A (ru) * 2006-12-19 2011-01-27 Ферросан А/С (Dk) Раневой или тканевой перевязочный материал, содержащий молочнокислые бактерии
CN101641121A (zh) * 2006-12-19 2010-02-03 弗罗桑公司 包含乳酸菌的伤口或组织敷料
US8367109B2 (en) * 2008-04-09 2013-02-05 Brookhaven Science Associates, Llc Microbes encapsulated within crosslinkable polymers
DE102008063821A1 (de) * 2008-12-19 2010-06-24 Philipps-Universität Marburg Elektrogesponnene Polymerfasern umfassend Partikel aus Bakterien enthaltenden Hydrogelen
TWM446986U (zh) * 2012-07-13 2013-02-11 Hon Hai Prec Ind Co Ltd 電連接器
CN105899947A (zh) 2013-09-04 2016-08-24 克雷多生物医学私人有限公司 分析测试装置、试剂盒和使用方法
CN103755981A (zh) * 2014-01-14 2014-04-30 西北大学 一种用作皮肤填充材料的水凝胶及其制备方法
NL2013203B1 (en) * 2014-07-17 2016-05-19 Univ Delft Tech Process for the production of cementious material.
CN104099283B (zh) * 2014-07-22 2017-01-18 张维 一种温敏水凝胶微生物培养基及其制备方法
MX2017013562A (es) * 2015-04-23 2018-05-28 Kaleido Biosciences Inc Reguladores de microbioma y usos relacionados de los mismos.
CA2983236A1 (en) * 2015-04-23 2016-10-27 Kaleido Biosciences, Inc. Glycan therapeutics and methods of treatment
EP3334437A1 (en) * 2015-08-25 2018-06-20 Kaleido Biosciences, Inc. Glycan compositions and uses thereof

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103327966A (zh) * 2010-11-15 2013-09-25 新泽西鲁特格斯州立大学 用于防止hiv传播的基于peg纳米载体的多功能生物可降解水凝胶
CN103230619A (zh) * 2013-05-15 2013-08-07 南京斯瑞奇医疗用品有限公司 复合水凝胶敷料及其制备方法

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
「Biointeractive hydrogel」, materialtoday DECEMBER 2005 VOLUME 8 NUMBER 12
「Biointeractive hydrogel」, materialtoday DECEMBER 2005 VOLUME 8 NUMBER 12 J Microb Biochem Technol published online 2016 Jun 19;8(4): 259-265 *
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