TWI656887B - 脂質體懸浮液及其製備方法與應用 - Google Patents

脂質體懸浮液及其製備方法與應用 Download PDF

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Abstract

本創作提供一種脂質體懸浮液之製備方法，其包括：提供一組成物，該組成物係由磷脂化合物、膽固醇(cholesterol)或其衍生之鹽類、聚乙二醇衍生物以及此等組合所組成之群組；將該組成物與一醇類溶劑混合以形成一混合物；以及，將該混合物以一注入裝置注入於一熱狀態之水相溶液中，並混合攪拌混合物與水相溶液，以形成脂質體懸浮液。本創作藉由調整注入裝置之特定參數以控制脂質體的粒徑(粒徑小於200nm)，再經由單一孔徑的濾膜進行擠壓即可有效地縮小脂質體的粒徑及分佈，以提高脂質體用於大規模製造以及應用之可行性。

Description

脂質體懸浮液及其製備方法與應用
本創作係關於一種脂質體懸浮液之製備方法，尤指一種可降低粒徑分布可單一孔徑過濾、且可大規模生產之脂質體懸浮液之製備方法；本創作亦關於一種由前述製備方法所製得之脂質體懸浮液，其中脂質體懸浮液之脂質體之平均粒徑介於10nm至200nm，且粒徑分布指數係介於0.01至0.5；本創作亦關於一種前述脂質體懸浮液用於包載藥物之方法及其方法所獲得之含藥之脂質體懸浮液。
脂質體係具有由1層以上之脂質雙層所包圍之內相的微細閉合小胞，可將水溶性物質保持於內相中，並將脂溶性物質保持於脂質雙層中。脂質體可做為藥物、化合物、遺傳物質等物質之載劑，並保護包覆於內之物質以避免被體內酵素破壞，並於特定之部位將所包覆之物質由脂質體中釋放出來以達到傳輸或治療之目的。目前臨床研究認為若係藉由脂質體應用於藥物傳遞，以單層脂質體(unilamellar vesicles,UVs)包載藥物能有效將藥物傳輸至腫瘤組織或肝臟細胞等，達到標靶治療之效果。
現有技術製備脂質體之方法包括有水合法(hydration)、超音波處理法(ultrasonification)、逆相蒸發法 (reverse-phase evaporation)、界面活性劑處理法(surfactant treatment)、孔擠壓法(pore extrusion)以及高壓均質法(high pressure homogeni-zation)等，其中如美國專利第6596305號所揭示，係將脂質溶於一與水互溶的有機溶劑後，直接加入水相溶液中並持續攪拌，形成脂質體懸浮液。此方法所配製的脂質溶液濃度在0.03~0.8mg/ml，濃度極低不利於大規模生產，且攪拌過程須維持在高轉速下(2000rpm)操作；此外需重複改變有機溶劑的比例才能篩選出最適當的脂質體粒徑大小，過程繁複，所得之脂質體平均粒徑大，約為200奈米(nm)至300nm。以上數項缺點如高轉速、繁複過程等均不利於大規模量產製造。
如美國專利第5000887號所揭示，其係以一與水互溶的有機溶劑(例如乙醇)溶解脂質，製備脂質溶液，將水相溶液慢慢加入脂質溶液中，再利用逆滲透(reverse osmosis)或是蒸發(evaporation)等方式移除脂質體懸浮液中的有機溶劑以提高水與溶劑的比例，所製得的脂質體之粒徑雖小於等於300nm，但其製備方法複雜且繁瑣，過程中須不斷去除有機溶劑，不利大規模生產。
如美國專利第4687661號所揭示，其係以一與水互溶、非揮發性的有機溶劑(例如polyhydric alcohols、glycerin esters、benzyl alcohols等)溶解脂質，直接加入水相溶液中混合，攪拌後形成脂質體懸浮液。此專利所製得之脂質體粒徑大小受混合攪拌的方式直接影響，所欲之粒徑愈小，便需愈劇烈或高頻率之攪拌震盪，例如：若以機械攪拌的攪拌葉片混合方式則製得大尺寸的脂質體，若使用 高剪切力的方式(例如均質機)則製得脂質體的粒徑較小，如需製備更小粒徑的脂質體(200nm以下)，得需使用超音波或是高壓均質乳化的方式才有機會達到。此方法所選用之有機溶劑雖屬無毒性，但製程中大多需要高溫操作(90℃以上)才能溶解或是水合脂質，且即便製備過程處於高溫，脂質於溶劑中之溶解度仍然不佳，導致後續形成之脂質體粒徑偏大[平均粒徑約500nm至微米(μm)不等]，且粒徑分佈範圍廣，若欲使用於臨床，必須再進一步處理降低其粒徑並均勻化粒徑分佈，此方法不僅花費大量時間且產出品質及效果不佳，亦不適合用於工業量產製備脂質體。
如美國專利第5077057號所揭示，其係以非質子性溶劑與低級烷醇類的混合溶劑溶解藥物及脂質，再以每分鐘0.5毫升(ml/min)至10ml/min之注入速度以溶解於混合溶劑之藥物及脂質注入水相溶液，並同時搭配250rpm至750rpm高轉速攪拌以形成脂質體懸浮液，此方法所製得之脂質體粒徑分佈廣，其製程中所使用之注入速度慢，且所同時使用的皆係對人體有危害之有機溶劑，如：二甲基亞碸(dimethyl sulfoxide,DMSO)、二甲基甲醯胺(dimethylformamide,DMF)或二甲胺(dimethylamine,DMA)等，不只所製得之脂質體不適合臨床使用，其製程更是難以放大且耗時費力，不適合大規模生產使用。
如美國專利第5008050號所揭示，其係以氯仿(chloroform)溶解所選的混合脂質，然後蒸發去除氯仿而得脂質膜(lipid film)，加入水性溶液進行水合作用，形成複層脂質體(multilamellar vesicles,MLVs)，再將其複層脂質體經 擠壓通過一具有兩片堆疊的聚碳酸酯濾膜的過濾裝置，其中脂質體粒徑大小取決於濾膜孔徑的選擇，且必須再加上施以100psi(磅/平方英吋)至700psi之高壓，才能達到20ml/min至60ml/min的過濾流速，以解決濾膜阻塞的問題。由於高壓操作相對危險、裝置設計複雜，且製備過程須先製得MLVs，再經由擠壓過濾方獲得小單層脂質體(small unilamellar vesicles,SUVs)，加上過濾流速慢而耗時冗長，因此並不適合用於放大製程。
如中華民國專利第I391149號所示，其亦係以氯仿溶解脂質混合物後，再蒸發以去除氯仿以得脂質膜(lipid film)，接著加入水性基質並於71℃至86℃下進行水合以獲得複層脂質體(MLVs)。為了降低脂質體的粒徑，先將上述之脂質體懸浮液進行冷凍解凍或超音波震盪以獲得大單層脂質體(large unilamellar vesicles,LUVs)，再將大單層脂質體進行孔擠壓處理，其中孔擠壓處理須依序通過三種孔徑之聚碳酸脂薄膜(200nm、100nm及50nm)，以獲得小單層脂質體(SUVs)。由於此方法之操作溫度較高，且須經過前處理將複層脂質體製成大單層脂質體，再將大單層脂質體經過三種孔徑濾膜之孔擠壓處理後才能製得小單層脂質體，操作步驟繁複進而拉長製備時間，加上製備成本高，亦不適合大規模生產。
如中華民國專利第I250877號所揭示，其係使用醇溶劑溶解脂質，形成脂質溶液，再直接加入水相溶液中混合形成脂質體懸浮液，接著將該懸浮液通過操作壓力為40psi至140psi且孔徑為100nm之擠壓處理重複擠壓 10次後，再以50nm的過濾器重複擠壓10次，並以蔗糖水溶液來透析上述之過濾液，由於此方法因起始混合溶液係形成粒徑較大的複層脂質體(MLVs)，故須以較高之壓力擠壓過濾，且製備過程須使用兩種不同孔徑之濾膜歷經兩階段不同濾膜孔徑的擠壓，才能得到大單層脂質體(LUVs)或小單層脂質體(SUVs)，因此製備成本相對較高。
綜上所述，現有技術製備脂質體之製備具過程繁雜、需高壓操作、需多次且不同孔徑之濾膜重覆過濾、製備溫度較高而使生產成本提高，及耗時冗長等缺點，因此並不適合用於脂質體之工業大規模量產。
鑒於現有技術製備脂質體之製備過程繁雜、需高壓操作、需多次且不同孔徑之濾膜重覆過濾、或製備溫度較高而使生產成本提高、耗時冗長，且所製得之脂質體之平均粒徑及分佈係數大等缺點，故本創作之目的在於提供一種適合作為工業量產脂質體懸浮液之製備方法，其中藉由注入裝置調控流速等參數製得單層脂質體(unilamellar vesicles,UVs)，並使用單一孔徑濾膜過濾等簡易之製備步驟及條件，以獲得平均粒徑小且分佈係數小(亦即粒徑單一分布)而適於供作臨床使用及大量製造之脂質體懸浮液。
為達上述目的，本創作提供一種脂質體懸浮液之製備方法，其包括：提供一組成物，該組成物係由磷脂化合物、膽固醇(cholesterol)或其衍生之鹽類、聚乙二醇衍生物以及此等組合所組成之群組，其中該組成物之莫耳比例係3~50：1~50： 1；將該組成物與一醇類溶劑混合以形成一混合物，且該組成物與醇類溶劑之濃度係介於2mM至300mM；以及，將該混合物以一注入裝置注入於一熱狀態之水相溶液中，並混合攪拌混合物與水相溶液，以形成脂質體懸浮液，其中該混合物與該水相溶液的體積比係介於1：2至1：500。
較佳的，所述之該組成物之磷脂化合物、膽固醇或其衍生之鹽類、聚乙二醇衍生物之濃度或體積比例為：4~20：2~10：1。
較佳的，所述之醇類溶劑係低級烷醇類(lower alkanols)。
依據本創作，「低級烷醇類」如此處所指係包括，但不限於甲醇、乙醇、丙醇、異丙醇、丁醇及丙酮。
更佳的，所述之醇類溶劑係乙醇。
較佳的，所述之該組成物之磷脂化合物係選自於由卵磷脂(lecithin)、磷脂醯膽鹼(phosphatidylcholine,PC)、磷脂醯乙醇胺(phosphatidylethanolamines,PE)、胺磷酸甘油酯(phosphoglyceride,PG)、磷脂醯肌醇(phosphatidylinositols,PI)、磷脂酸(phosphatidic acids,PA)，前述化合物的二醯基衍生物(C12-C22)以及此等組合所組成之群組。
較佳的，所述之該組成物之膽固醇或其衍生之鹽類係選自於由膽固醇硫酸鹽(cholesterol sulfate)、膽固醇琥珀酸單酯(cholesterol hemisuccinate)、膽固醇磷酸鹽(cholesterol phosphate)以及此等組合所組成之群組。
較佳的，所述之該組成物之聚乙二醇衍生物係 選自於由聚乙二醇-磷脂醯乙醇胺(polyethylene glycol-phosphatidyl ethanolarmine,PEG-PE)、甲氧基聚乙二醇-磷脂醯乙醇胺[methoxy-poly(ethylene glycol)-phosphatidyl ethanolamine,mPEG-PE]、前述化合物的二醯基衍生物(C12-C22)以及此等組合所組成之群組。
依據本創作，「注入裝置」如此處所指係可控制流速之注入裝置，其包含至少一注入通道以及一可控制流速的推進裝置；其中至少一注入通道之孔徑不大於10毫米(mm)，較佳不小於18號注射針之內徑0.83毫米，且該至少一注入通道具有單孔或多孔；其中可控制流速的推進裝置包括，但不限於針筒式幫浦、蠕動幫浦、往復式幫浦、氣動推進裝置以及其他推進裝置。
較佳的，所述之熱狀態係指40℃至80℃。
較佳的，所述之該水相溶液係離子溶液，且濃度係介於1毫莫耳(mM)至1莫耳(M)。
更佳的，所述之離子溶液係選自於由氯化鈉(sodium chloride)、聚丙烯酸(polyacrylate)及其鹽類、硫酸軟骨素A(chondroitin sulfate A)及其鹽類、聚乙烯硫酸(polyvinylsulfate)及其鹽類、磷酸(phosphate)及其鹽類、焦磷酸(pyrophosphate)及其鹽類、硫酸(sulfate)及其鹽類、檸檬酸(citrate)及其鹽類、酒石酸(tartarate)及其鹽類、腈基三乙酸(nitrilotiacetate)及其鹽類、乙烯二胺四醋酸(ethylenediarmine tetraacetate)及其鹽類、二乙烯三胺五乙酸(diethylenetriamine pentaacetate)及其鹽類，以及此等之組合所組成之群組。
更佳的，所述之該離子溶液係硫酸鹽類。
更佳的，所述之該硫酸鹽類係硫酸銨。
較佳的，所述之混合物與水相溶液的體積比係介於1：2至1：100。
依據本創作，「混合攪拌混合物與水相溶液」之步驟中，混合攪拌包括，但不限於磁石攪拌、攪拌槳葉片式攪拌、均質攪拌以及其他攪拌設計。
較佳的，所述之混合攪拌混合物與水相溶液之攪拌轉速係介於100rpm至500rpm。
較佳的，所述之將該混合物以一注入裝置注入於一熱狀態之水相溶液之步驟中，該特定裝置之注入流速為每分鐘10毫升(mL/min)至1000mL/min。
更佳的，所述之該特定裝置之注入流速為25mL/min至600mL/min。
本創作更提供一種如前項所述之脂質體懸浮液之製備方法，其更包括令所得之脂質體懸浮液歷經一孔擠壓步驟，該孔擠壓步驟係將含有脂質體懸浮液經過孔徑不大於100奈米(nm)的擠壓器。
較佳的，所述之該孔擠壓步驟係將含有脂質體懸浮液經過孔徑介於10nm至80nm的擠壓器。
更佳的，所述之該孔擠壓步驟之壓力係介於30psi至80psi。
較佳的，所述之該孔擠壓步驟之速率係介於2L/min至10L/min。
本創作再提供一種如前項所述之製備方法所 得之脂質體懸浮液，其中脂質體懸浮液之脂質體之平均粒徑介於10nm至200nm，且粒徑分布指數係介於0.01至0.5。
較佳的，所述之脂質體之平均粒徑介於30nm至120nm，且粒徑分布指數係介於0.03至0.25。
本創作更提供一種如前項所述之脂質體懸浮液用於包載藥物之方法，其包含下列步驟：齊備一藥物；以透析(dialysis)方式去除脂質體懸浮液之溶劑，以獲得複數脂質體；以及，將該藥物與各脂質體相混合並使該藥物被包載於脂質體內。
較佳的，所述之該藥物係選自於由艾黴素(doxorubicin HCl)、唐黴素(daunorubicin)、吉西他濱(gemcitabine)、奥沙尼喹(oxamniquine)、氟可那挫(fluconazole)、伊曲康唑(itraconazole)、克多可那挫(ketoconazole)、邁可那挫(micronazole)、伊立替康(irinotecan)以及溫諾平(vinorelbine)所組成之群組。
本創作更提供一種含有含藥單層脂質體之懸浮液，其係以前項包載藥物所述之方法所製得，且該懸浮液所含之含藥單層脂質體之平均粒徑小於200nm，且含藥單層脂質體之藥物包覆率達95%以上。
本創作更提供一種製備脂質體懸浮液之系統，包含一混合室、一水相溶液室以及一介於混合室與水相溶液室之間的注入裝置，其中該注入裝置係藉由一第一通道與混合室相連接，該注入裝置更包含：一注入通道以及一 第一推進件，其中該注入通道係位於第一通道與混合室相接之另一端，並相鄰於水相溶液室，且該注入通道係單孔或多孔的注入通道；其中該第一推進件，其係嵌於第一通道，並位於混合室與注入通道之間，以促進混合室之液體經第一通道及注入通道進入水相溶液室中；該水相溶液室包含一攪拌裝置以及一熱維持裝置，其中該攪拌裝置其位於水相溶液室內，其中該熱維持裝置係相鄰於水相溶液室，並係用以維持水相溶液室之溫度。
較佳的，所述之注入裝置之第一推進件包括，但不限於針筒式幫浦、蠕動幫浦、往復式幫浦及氣動推進裝置及其他具推進功能之推進件。
較佳的，所述之水相溶液室之攪拌裝置包括，但不限於磁石、葉片式攪拌器及均質攪拌器及其他具混合攪拌功能之裝置。
較佳的，所述之注入裝置之注入通道的孔徑不大於10毫米(mm)，較佳不小於0.83毫米。
較佳的，所述之注入裝置之注入流速係介於10mL/min至1000mL/min。
更佳的，所述之注入裝置之注入流速係介於25mL/min至600mL/min。
較佳的，所述之水相溶液室之熱維持裝置可使水相溶液室維持於40℃至80℃的熱狀態。
較佳的，所述之系統更包含一擠壓裝置，其係藉由一第二通道與水相溶液室相連接，且擠壓裝置包含：一擠壓器、一第二推進件、一第三通道以及一第三推進件， 其中擠壓器係與第二通道與水相溶液室相接之另一端相連接，並藉由第二通道與水相溶液室相連通，擠壓器更包含一第一濾膜；其中該第二推進件係嵌於第二通道，並位於水相溶液室與擠壓器之間；其中該第三通道，其兩端分別與擠壓器之相對兩端相連接，以形成一循環迴路；其中該第三推進件，其嵌於第三通道，以促進擠壓器與第三通道之循環迴路循環。
較佳的，所述之擠壓器之第一濾膜之孔徑小於100奈米(nm)。
更佳的，所述之擠壓器之第一濾膜之孔徑係介於10nm至80nm。
較佳的，所述之第二推進件所提供之壓力係介於30psi至80psi。
較佳的，所述之擠壓器之速率係介於2L/min至10L/min。
較佳的，所述之擠壓裝置之第二推進件或第三推進件包括，但不限於針筒式幫浦、蠕動幫浦、往復式幫浦及氣動推進裝置及其他具推進功能之推進件。
較佳的，所述之系統更包含一藥物包載裝置，其中該藥物包載裝置係藉由一第四通道與擠壓裝置相連接，且藥物包載裝置包含一透析器、一藥物包載室以及一連接透析器及藥物包載室之第五通道；其中該透析器係與第四通道相對於擠壓器連接之另一端相連接；其中該藥物包載室係藉由第五通道與透析器相連通。
較佳的，所述之系統更包括一過濾裝置，其中 過濾裝置係藉由一第六通道與藥物包載裝置相連接，且過濾裝置包含一過濾器，該過濾器係藉由第六通道與藥物包載室相連通，該過濾器更包括一第二濾膜。
較佳的，所述之第二濾膜之孔徑係200nm。
較佳的，所述之系統更包括一與過濾裝置相連接之收集裝置，該收集裝置係藉由一第七通道與過濾裝置相連接，且包含一收集器，其該收集器可藉由第七通道與過濾裝置之過濾器相連通。
本創作藉由調整注入裝置之特定參數以控制脂質體的粒徑(粒徑小於200nm)，由於注入裝置即可製備粒徑小之單層脂質體，因此後續孔擠壓步驟所使用壓力不需要太高，且擠壓過濾之流速快，進而於短時間內即能過濾大量脂質體懸浮液；再者該孔擠壓步驟只需通過單一孔徑的濾膜即可有效地縮小脂質體的粒徑及分佈，相較於先前技術之製備過程繁雜、操作環境嚴苛如需要高溫高壓的操作、產出品質及效果不佳、所需成本高及耗時冗長，本創作方法相對簡易、節省時間、成本低且製備環境易於提供，具備工業製造大量生產的可行性。
圖1為本創作之脂質體懸浮液之製備方法之步驟流程圖。
本創作將由下列的實施例做為進一步說明，這些實施例並不限制本創作前面所揭示的內容。熟習本創作之技藝者，可以做些許之改良與修飾，但不脫離本創作之 範疇。
實施例1 注入流速對於脂質體粒徑大小之影響
取33公克(g)硫酸銨溶於水中並定量至1公升(L)，加熱至60℃備用。將4.8g氫化大豆磷脂質(hydrogenated soybean phosphatidylcholine，HSPC)、1.6g甲氧基聚乙二醇磷脂酰乙醇胺(methoxypolyethylene glycol 2000,MPEG-DSPE 2000)、1.6g膽固醇與75毫升(mL)乙醇於60℃下攪拌溶解，以形成均勻混合液。將混合液以一注入裝置注入以磁石持續攪拌的硫酸銨水溶液中，其中攪拌速率為200rpm，注入裝置選用18號注射針，並以蠕動幫浦控制注入流速分別為25ml/min、100ml/min、150ml/min、200ml/min、250ml/min及300ml/min以比較流速對於粒徑大小之影響；持續攪拌10分鐘後，以形成一脂質體懸浮液。以粒徑分析儀(particle size analyzer)(型號為Beckman Coulter公司之Delsa Nano)分析脂質體粒徑。
結果如表1所示，注入速度越快，所得之脂質體之粒徑越小。
實施例2 放大規模(scale-up)測試
取495g的硫酸銨溶於水中並定量至15L，並裝至一水夾套的葉片式攪拌桶內並加熱至60℃備用。另取57.5g氫化大豆磷脂質、19.2g甲氧基聚乙二醇磷脂酰乙醇胺、19.2g膽固醇與1000ml乙醇於60℃下攪拌溶解，形成均勻混合溶液。將脂質混合溶液用多孔注入裝置注入60℃持續攪拌的硫酸銨水溶液中，其中注入裝置選用18號注射針，攪拌速率控制在150rpm，並以蠕動幫浦控制注入流速為每孔300ml/min，持續攪拌10分鐘，以形成一脂質體懸浮液。取一小量樣品以粒徑分析儀分析粒徑大小，檢測結果顯示樣品內脂質體的平均粒徑為91nm，粒徑分布指數(PDI)為0.18。
實施例3 脂質體懸浮液歷經單一孔擠壓步驟
將實施例2所製備而得之脂質體懸浮液，經過一擠壓過濾裝置並連接兩個20L壓力桶進行孔擠壓步驟，過濾膜係50nm的聚碳酸酯薄膜，擠壓過濾之壓力係介於40psi至60psi、過濾流速係介於2L/min至10L/min，重複擠壓約10次至30次，較佳為12次至18次，以完成脂質體整粒程序。以粒徑分析儀分析粒徑大小，檢測結果顯示樣品內脂質體的平均粒徑為80nm，粒徑分布指數(PDI)為0.07。
實施例4 兩階段孔擠壓步驟
同實施例2、3之步驟，相同條件下製備脂質體懸浮液，唯擠壓步驟分為兩階段進行，首先選用孔徑100nm的聚碳酸酯過濾膜，擠壓過濾之壓力係介於40psi至60psi，重複擠壓10次後，再以孔徑50nm的聚碳酸酯濾 膜進行擠壓過濾，重複10次。以粒徑分析儀分析粒徑大小，檢測結果顯示樣品內脂質體的平均粒徑為85nm，粒徑分布指數(PDI)為0.09。
實施例5 兩階段孔擠壓步驟但無注入步驟
取33g硫酸銨溶於水中並定量至1公升(L)，加熱至60℃備用。將4.8g氫化大豆磷脂質、1.6g甲氧基聚乙二醇磷脂酰乙醇胺、1.6g膽固醇與75mL乙醇於60℃下攪拌溶解，以形成均勻混合液。將混合液直接加入硫酸銨水溶液中，持續攪拌10分鐘後，以形成一脂質體懸浮液。取該脂質體懸浮液以一擠壓過濾裝置進行孔擠壓處理，首先選用孔徑100nm的聚碳酸酯過濾膜，擠壓過濾之壓力係介於60psi至90psi控制過濾流速，重複擠壓10次，再以孔徑50nm的聚碳酸酯濾膜進行擠壓過濾，重複10次。以粒徑分析儀分析粒徑大小，檢測結果顯示樣品內脂質體的平均粒徑為115nm，粒徑分布指數(PDI)為0.11。
於以下表2比較實施例2(僅使用注入裝置注入混合液)、3(使用注入裝置注入混合液以及單一孔徑擠壓步驟)、4(使用注入裝置注入混合液以及兩階段孔擠壓步驟)、5(僅兩階段孔擠壓步驟)所得之脂質體之粒徑大小、粒徑分布指數以及擠壓過濾之壓力。
藉由使用注入裝置注入混合液即可製備粒徑單一分佈的脂質體，且粒徑更可達100nm以下，更佳的是加上單一孔徑的擠壓過濾程序，使得粒徑分布更佳窄化，尺寸更為均一。也由於前端使用注入裝置注入混合液之步驟即可達粒徑小之目標，後續擠壓過濾的程序可在相對低壓下操作，並維持高的過濾速度，於相同時間內比先前技術之方法能產出更大量、品質更佳，且適於供做臨床使用之脂質體，利於大規模生產之應用。
實施例6 製備含有含藥單層脂質體之懸浮液
取實施例3所製備而得之已歷經孔擠壓步驟之脂質體懸浮液於室溫下進行透析，以45L的9wt%蔗糖溶液置換該懸浮溶液中的乙醇及硫酸銨，形成脂質體內含硫酸銨、外懸浮於蔗糖溶液的包覆條件，最終收集約4.5L的脂質體懸浮液備用。齊備18.9g的組胺酸(histidine)溶於9wt%蔗糖溶液，並定量至450ml後待用；取12.0g的艾黴素(doxorubicin HCl)，加入上述之脂質體懸浮液，在加熱環境下均勻攪拌約15分鐘，並加入組銨酸溶液均勻混合，之後利用熱交換器裝置冷卻此含藥之脂質體懸浮液至室溫，完成藥物包覆。最後再以9wt%蔗糖溶液稀釋定量至6L，經無菌過濾後分裝於無菌玻璃小瓶，以製成每瓶含有2mg/ml艾黴素之脂質體注射針劑產品。

Claims (16)

  1. 一種脂質體懸浮液之製備方法，其包含下列步驟：提供一組成物，該組成物係由磷脂化合物、膽固醇(cholesterol)或其衍生之鹽類、聚乙二醇衍生物(polyethylene glycol derivative)以及此等組合所組成之群組，其中該組成物之莫耳比例係3~50：1~50：1；將該組成物與一醇類溶劑混合以形成一混合物，且該組成物與醇類溶劑之濃度係介於2mM至300mM；以及，將該混合物以一注入裝置注入於一預定溫度之水相溶液中，該注入裝置之注入流速為每分鐘10毫升(mL/min)至1000mL/min，該預定溫度係指40℃至80℃，並混合攪拌混合物與水相溶液，以形成脂質體懸浮液，其中該混合物與該水相溶液的體積比係介於1：2至1：500。
  2. 如請求項1所述之製備方法，其中將該混合物以一注入裝置注入於該預定溫度之水相溶液之步驟中，該注入裝置包含至少一注入通道以及一可控制流速的推進裝置。
  3. 如請求項2所述之製備方法，其中至少一注入通道之孔徑不大於10毫米(mm)。
  4. 如請求項2所述之製備方法，其中該推進裝置係選自於由幫浦、氣動推進裝置及其他具推進功能裝置所組成之群組。
  5. 如請求項1所述之製備方法，其中該水相溶液係離子溶液，且濃度係介於1毫莫耳(mM)至1莫耳(M)。
  6. 如請求項5所述之製備方法，其中離子溶液係選自由氯化鈉(sodium chloride)、聚丙烯酸(polyacrylate)及其鹽類、硫酸軟骨素A(chondroitin sulfate A)及其鹽類、聚乙烯硫酸(polyvinylsulfate)及其鹽類、磷酸(phosphate)及其鹽類、焦磷酸(pyrophosphate)及其鹽類、硫酸(sulfate)及其鹽類、檸檬酸(citrate)及其鹽類、酒石酸(tartarate)及其鹽類、腈基三乙酸(nitrilotiacetate)及其鹽類、乙烯二胺四醋酸(ethylenediamine tetraacetate)及其鹽類、二乙烯三胺五乙酸(diethylenetriamine pentaacetate)及其鹽類，以及此等之組合所組成之群組。
  7. 如請求項1所述之製備方法，其中混合物與水相溶液的體積比係介於1：2至1：100。
  8. 如請求項1所述之製備方法，其中混合攪拌混合物與水相溶液之攪拌轉速係介於100rpm至500rpm。
  9. 一種如請求項1至8任一項所述之脂質體懸浮液之製備方法，其更包括令所得之脂質體懸浮液歷經一孔擠壓步驟，該孔擠壓步驟係將含有脂質體懸浮液經過孔徑不大於100奈米(nm)的擠壓器。
  10. 如請求項9所述之製備方法，其中該孔擠壓步驟係將含有脂質體懸浮液經過孔徑介於10nm至80nm的擠壓器。
  11. 如請求項9所述之製備方法，其中該孔擠壓步驟之壓力係介於30psi至80psi。
  12. 如請求項9所述之製備方法，其中該孔擠壓步驟之速率係介於2L/min至10L/min。
  13. 一種如請求項1至12任一項所述之製備方法所得之脂質體懸浮液，其中脂質體懸浮液之脂質體之平均粒徑介於10nm至200nm，且粒徑分布指數係介於0.01至0.5。
  14. 一種如請求項13所述之脂質體懸浮液用於包載藥物之方法，其包含下列步驟：齊備一藥物；以透析(dialysis)方式去除脂質體懸浮液之溶劑，以獲得複數脂質體；以及，將該藥物與各脂質體相混合並使該藥物被包載於脂質體內。
  15. 如請求項14所述之方法，其中該藥物係選自於由艾黴素(doxorubicin HCl)、唐黴素(daunorubicin)、吉西他濱(gemcitabine)、奥沙尼喹(oxamniquine)、氟可那挫(fluconazole)、伊曲康唑(itraconazole)、克多可那挫(ketoconazole)、邁可那挫(micronazole)、伊立替康(irinotecan)以及溫諾平(vinorelbine)所組成之群組。
  16. 一種含有含藥單層脂質體之懸浮液，其係以請求項14或15所述之方法所製得，且該懸浮液所含之含藥單層脂質體之平均粒徑小於200nm。
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