TWI648278B - 半胱胺酸蛋白酶抑制劑鹽 - Google Patents

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Abstract

本發明提供形式2結晶多形物，其係由N-[1-6-(乙炔基-3-側氧基-六氫-呋喃并[3,2-b]吡咯-4-羰基)-3-甲基-丁基]-4-[5-氟-2-(4-甲基-六氫吡-1-基)噻唑-4-基]-苯甲醯胺單鹽酸鹽及N-[1-6-(乙炔基-3-側氧基-六氫-呋喃并[3,2-b]吡咯-4-羰基)-3-甲基-丁基]-4-[5-氟-2-(4-甲基-六氫吡

Description

半胱胺酸蛋白酶抑制劑鹽
本發明係關於已知半胱胺酸蛋白酶抑制劑N-[1-6-(乙炔基-3-側氧基-六氫-呋喃并[3,2-b]吡咯-4-羰基)-3-甲基-丁基]-4-[5-氟-2-(4-甲基-六氫吡-1-基)噻唑-4-基]-苯甲醯胺之新穎鹽之特定結晶形式。本發明亦係關於含有該結晶形式之醫藥調配物及其治療用途，特定而言用於治療由組織蛋白酶K介導之病症。
半胱胺酸蛋白酶之木瓜酶超家族廣泛分佈於各個物種中，包含哺乳動物、無脊椎動物、原生動物、植物及細菌。多種哺乳動物組織蛋白酶(包含組織蛋白酶B、F、H、K、L、O及S)已歸於此超家族，且其活性之不適當調控已涉及多種代謝病症，包含關節炎、肌肉萎縮症、發炎、腎小球腎炎及腫瘤侵襲。病原性組織蛋白酶樣酶包含細菌性牙齦菌蛋白酶、瘧原蟲半胱胺酸蛋白酶I、II、III及以下等等以及來自肺胞囊蟲(Pneumocystis carinii)、克氏錐蟲(Trypanosoma cruzei)及布氏錐蟲(Trypanosoma brucei)、短膜蟲(Crithidia fusiculata)、住血吸蟲屬(Schistosoma spp)之半胱胺酸蛋白酶。
組織蛋白酶K之不適當調控已涉及多種病症，包含骨質疏鬆症、牙齦疾病(例如牙齦炎及牙周炎)、柏哲德氏病(Paget’s disease)、惡性病之高鈣血症及轉移性骨疾病。鑒於其在關節炎滑膜之破軟骨細胞中之含量升高，組織蛋白酶K涉及特徵在於過度軟骨或基質退化之疾 病，例如骨關節炎及類風濕性關節炎。轉移性贅瘤細胞通常表現高含量之降解周圍基質之蛋白水解酶。而且，該等疾病與高含量之骨更新相關。因此，抑制組織蛋白酶K可能有助於藉由減弱骨重塑及癌細胞之侵襲力二者來預防繼發性轉移。
國際專利申請案WO2010/034788揭示多種半胱胺酸蛋白酶抑制劑，包含在本文中揭示為實例2之呈游離鹼形式之N-[1-6-(乙炔基-3-側氧基-六氫-呋喃并[3,2-b]吡咯-4-羰基)-3-甲基-丁基]-4-[5-氟-2-(4-甲基-六氫吡-1-基)噻唑-4-基]-苯甲醯胺。此化合物及其游離鹼在本文中分別稱為「化合物I」及「化合物I游離鹼」。
WO2010/034788之第3頁認為，此特定系列之半胱胺酸蛋白酶抑制劑亦可以水合物形式存在。根據其作為醫藥劑之用途，化合物I游離鹼具有多個與其相對較低之水溶解度及較低之熱穩定性相關的缺點。
因此，業內需要具有以下特性中之一或多者之化合物I形式：
(i)高水溶解度
(ii)高結晶度
(iii)良好水分穩定性
(iv)良好熱穩定性。
本發明提供形式2結晶多形物，其係由N-[1-6-(乙炔基-3-側氧基-六氫-呋喃并[3,2-b]吡咯-4-羰基)-3-甲基-丁基]-4-[5-氟-2-(4-甲基-六氫 吡-1-基)噻唑-4-基]-苯甲醯胺單鹽酸鹽及N-[1-6-(乙炔基-3-側氧基-六氫-呋喃并[3,2-b]吡咯-4-羰基)-3-甲基-丁基]-4-[5-氟-2-(4-甲基-六氫吡-1-基)噻唑-4-基]-苯甲醯胺水合單鹽酸鹽組成。
與化合物I游離鹼、化合物I之其他鹽形式及N-[1-6-(乙炔基-3-側氧基-六氫-呋喃并[3,2-b]吡咯-4-羰基)-3-甲基-丁基]-4-[5-氟-2-(4-甲基-六氫吡-1-基)噻唑-4-基]-苯甲醯胺單鹽酸鹽之其他結晶多形物形式(例如形式1結晶多形物)相比，形式2結晶多形物具有經改良之物理化學特徵，且特徵尤其在於高結晶度、良好水分穩定性、良好熱穩定性及高水溶解度。因此，其具有用於製造醫藥產品之極有利特性。
參照以下圖來圖解說明本發明：圖1顯示形式2結晶多形物之樣品之X射線粉末繞射圖案。
圖2顯示N-[1-6-(乙炔基-3-側氧基-六氫-呋喃并[3,2-b]吡咯-4-羰基)-3-甲基-丁基]-4-[5-氟-2-(4-甲基-六氫吡-1-基)噻唑-4-基]-苯甲醯胺單鹽酸鹽之結晶多形物形式(稱為形式1結晶多形物)之樣品的X射線粉末繞射圖案。
圖3顯示化合物I游離鹼之結晶形式之樣品的X射線粉末繞射圖案。
圖4顯示溶於DMSO溶液中之形式2結晶多形物之樣品的1H NMR光譜。
圖5顯示形式2結晶多形物之樣品之固態13C NMR光譜。
圖6顯示在<2% RH下儲存1週後，形式2結晶多形物之樣品之固態13C NMR光譜。
圖7顯示在75% RH下儲存1週後，形式2結晶多形物之樣品之固態13C NMR光譜。
圖8顯示在80% RH下儲存1週後，形式2結晶多形物之樣品之固態 13C NMR光譜。
圖9顯示對形式2結晶多形物之樣品實施之檢查診斷性酮及水合物13C NMR信號的弛豫行為之NMR實驗之結果。
圖10顯示對形式2結晶多形物之樣品實施之鑒定診斷性酮與水合物信號之間的差異之另一NMR實驗之結果。
圖11顯示來自三批次形式2結晶多形物之樣品之毛細管X射線粉末繞射圖案。
圖12顯示形式2結晶多形物之樣品之熱分析(上圖係DSC且下圖係TGA)。
圖13顯示形式1結晶多形物之樣品之熱分析(上圖係DSC且下圖係TGA)。
圖14顯示結晶化合物I游離鹼之樣品之熱分析(上圖係DSC且下圖係TGA)。
圖15顯示形式2結晶多形物之樣品之重量分析蒸汽吸附分析(DVS質量變化曲線)。
圖16顯示形式2結晶多形物之樣品之重量分析蒸汽吸附分析(DVS等溫曲線)。
圖17顯示使用實例17之大規模程序獲得之形式2結晶多形物之樣品的X射線粉末繞射圖案。
水溶解度(即親水性)係醫藥劑之影響其藥物代謝動力學之重要物理特性。在許多情況下，期望增加水溶解度。
結晶度係另一重要物理特性。高度結晶之固體與非晶型或部分結晶固體相比通常易於處理(例如，具有更一致之物理特性)。此外，確切結晶形式可影響例如溶解速率及穩定性(例如水分穩定性)。例如與非晶型形式相比，固體之結晶形式通常具有較低水溶解度。
在初始製造醫藥產品及投與前之後續時段期間二者之背景下，在醫藥應用中之一致性及可靠性至關重要。因此，熱穩定性及水分穩定性係醫藥劑之重要物理特性，此乃因其影響藥劑可能儲存及處理之方式。高熱穩定性及水分穩定性係合意的以避免處理步驟(例如化學合成、調配、減小大小(若需要))期間或儲存期間之化學崩解或物理形式變化。
形式2結晶多形物係以由兩種組份(A及B)組成之單一結晶相存在，如下文所圖解說明。
形式2結晶多形物之特徵在於具有實質上與圖1中所顯示相同之X射線粉末繞射圖案。
因此，本發明提供形式2結晶多形物，其係由N-[1-6-(乙炔基-3-側氧基-六氫-呋喃并[3,2-b]吡咯-4-羰基)-3-甲基-丁基]-4-[5-氟-2-(4-甲基-六氫吡-1-基)噻唑-4-基]-苯甲醯胺單鹽酸鹽及N-[1-6-(乙炔基-3-側氧基-六氫-呋喃并[3,2-b]吡咯-4-羰基)-3-甲基-丁基]-4-[5-氟-2-(4-甲基-六氫吡-1-基)噻唑-4-基]-苯甲醯胺水合單鹽酸鹽組成，其具有實質上與圖1中所顯示相同之X射線粉末繞射圖案。
例如，此圖案在位置6.8、12.4、14.9、16.7、17.0、17.8、24.1、24.6、24.8、27.2、28.2、32.1(±0.2度，2-θ值)處具有主峰，該等信號中之若干為形式2結晶多形物所特有。
因此，本發明提供形式2結晶多形物，其係由N-[1-6-(乙炔基-3-側氧基-六氫-呋喃并[3,2-b]吡咯-4-羰基)-3-甲基-丁基]-4-[5-氟-2-(4-甲基-六氫吡-1-基)噻唑-4-基]-苯甲醯胺單鹽酸鹽及N-[1-6-(乙炔基-3-側氧基-六氫-呋喃并[3,2-b]吡咯-4-羰基)-3-甲基-丁基]-4-[5-氟-2-(4-甲基-六氫吡-1-基)噻唑-4-基]-苯甲醯胺水合單鹽酸鹽組成，其具有在6.8、12.4、14.9、16.7、17.0、17.8、24.1、24.6、24.8、27.2、28.2、32.1(±0.2度，2-θ值)處具有至少3個(例如，3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、10個、11個或所有12個)信號之X射線粉末繞射圖案。
6.8、12.4、14.9、16.7、17.8、24.1、24.6及24.8處之信號具有相當高之相對強度(大於30%-參見圖1)，且因此較佳觀察到該等峰中之至少3者(例如3者、4者、5者、6者、7者或所有8者)。6.8、14.9、17.8、24.1、24.6及24.8處之信號具有尤其高之相對強度(大於40%-參見圖1)，且因此較佳觀察到該等峰中之至少3者(例如3者、4者、5者或所有6者)。
13.5、19.0及23.9(±0.2度，2-θ值)處之信號亦具有尤其高之相對強度(大於40%-參見圖1)，且因此較佳觀察到該等峰中之全部3者。
根據實例17以大規模製備之形式2結晶多形物具有實質上如圖17中所顯示之X射線粉末繞射圖案，此與圖1中所顯示之圖案非常一致。
適宜地，形式2結晶多形物具有X射線粉末繞射圖案，該圖案不具在形式1結晶多形物之光譜中出現之在3.9、7.5及9.2(±0.2度，2-θ值)處具有10%或更大之相對強度的信號(參見圖2)。
形式2結晶多形物在斜方晶體系統中結晶，且特徵在於在約294K之溫度下具有P212121空間群及/或在約294K之溫度下具有a=7.5Å、b=15.3Å、c=26.3Å之晶胞尺寸。
因此，本發明提供形式2結晶多形物，其係由N-[1-6-(乙炔基-3- 側氧基-六氫-呋喃并[3,2-b]吡咯-4-羰基)-3-甲基-丁基]-4-[5-氟-2-(4-甲基-六氫吡-1-基)噻唑-4-基]-苯甲醯胺單鹽酸鹽及N-[1-6-(乙炔基-3-側氧基-六氫-呋喃并[3,2-b]吡咯-4-羰基)-3-甲基-丁基]-4-[5-氟-2-(4-甲基-六氫吡-1-基)噻唑-4-基]-苯甲醯胺水合單鹽酸鹽組成，其中形式2結晶多形物之特徵在於在約294K之溫度下具有P212121空間群及/或在約294K之溫度下具有a=7.5Å、b=15.3Å、c=26.3Å之晶胞尺寸。
儘管形式2結晶多形物係由兩種不同的化學實體(化合物I單鹽酸鹽之酮及水合物形式)組成之事實，但形式2多形物係以單一結晶相存在。在單一結晶相內，晶體中酮形式(A)之比例可大於水合物形式(B)之比例。在一實施例中，酮形式對水合物形式之莫耳比為約1：1至約4：1，例如約1.2：1至約3：1，例如約50：50、51：49、：52：48、53：47、54：46、55：45、56：44、57：43、58：42、59：41、60：40、61：39、62：38、63：37、64：36、65：35、66：34、67：33、68：32、69：31、70：30、71：29、72：28、73：27、74：26、75：25、76：24、77：23、78：22、79：21或80：20。在另一實施例中，酮形式對水合物形式之莫耳比為約4：1至約5：1，例如80：20、81：19、82：18、83：17或84：16。
因此，在一態樣中，本發明提供形式2結晶多形物，其係由N-[1-6-(乙炔基-3-側氧基-六氫-呋喃并[3,2-b]吡咯-4-羰基)-3-甲基-丁基]-4-[5-氟-2-(4-甲基-六氫吡-1-基)噻唑-4-基]-苯甲醯胺單鹽酸鹽及N-[1-6-(乙炔基-3-側氧基-六氫-呋喃并[3,2-b]吡咯-4-羰基)-3-甲基-丁基]-4-[5-氟-2-(4-甲基-六氫吡-1-基)噻唑-4-基]-苯甲醯胺水合單鹽酸鹽組成，其中N-[1-6-(乙炔基-3-側氧基-六氫-呋喃并[3,2-b]吡咯-4-羰基)-3-甲基-丁基]-4-[5-氟-2-(4-甲基-六氫吡-1-基)噻唑-4-基]-苯甲醯胺單鹽酸鹽對N-[1-6-(乙炔基-3-側氧基-六氫-呋喃并[3,2-b]吡咯-4-羰基)-3-甲基-丁基]-4-[5-氟-2-(4-甲基-六氫吡-1-基)噻唑-4-基]-苯甲醯胺水 合單鹽酸鹽之莫耳比為約1：1至約4：1，例如約1.2：1至約3：1，例如約50：50、51：49、：52：48、53：47、54：46、55：45、56：44、57：43、58：42、59：41、60：40、61：39、62：38、63：37、64：36、65：35、66：34、67：33、68：32、69：31、70：30、71：29、72：28、73：27、74：26、75：25、76：24、77：23、78：22、79：21或80：20。在另一態樣中，本發明提供形式2結晶多形物，其係由N-[1-6-(乙炔基-3-側氧基-六氫-呋喃并[3,2-b]吡咯-4-羰基)-3-甲基-丁基]-4-[5-氟-2-(4-甲基-六氫吡-1-基)噻唑-4-基]-苯甲醯胺單鹽酸鹽及N-[1-6-(乙炔基-3-側氧基-六氫-呋喃并[3,2-b]吡咯-4-羰基)-3-甲基-丁基]-4-[5-氟-2-(4-甲基-六氫吡-1-基)噻唑-4-基]-苯甲醯胺水合單鹽酸鹽組成，其中N-[1-6-(乙炔基-3-側氧基-六氫-呋喃并[3,2-b]吡咯-4-羰基)-3-甲基-丁基]-4-[5-氟-2-(4-甲基-六氫吡-1-基)噻唑-4-基]-苯甲醯胺單鹽酸鹽對N-[1-6-(乙炔基-3-側氧基-六氫-呋喃并[3,2-b]吡咯-4-羰基)-3-甲基-丁基]-4-[5-氟-2-(4-甲基-六氫吡-1-基)噻唑-4-基]-苯甲醯胺水合單鹽酸鹽之莫耳比為約4：1至約5：1，例如80：20、81：19、82：18、83：17或84：16。
酮對水合物形式之比率可藉由13C NMR或1H NMR分析、較佳藉由固態13C NMR分析來測定。根據實例5製備之形式2結晶多形物經測定具有67：33之酮：水合物比率(藉由固態13C NMR分析來測定，參見實例11)。根據實例17製備之形式2結晶多形物經測定具有82：18之酮：水合物比率(藉由1H NMR分析來測定)。然而，在經由不同方法製備之形式2結晶多形物經測定具有不同酮：水合物比率之情形下，對材料之樣品獲得之X射線繞射圖案實質上相同，此指示形式2多形物中酮：水合物之確切比率並非該材料之關鍵特有特徵。
如實例中更詳細論述，本發明者已鑒定出N-[1-6-(乙炔基-3-側氧基-六氫-呋喃并[3,2-b]吡咯-4-羰基)-3-甲基-丁基]-4-[5-氟-2-(4-甲基-六氫吡-1-基)噻唑-4-基]-苯甲醯胺單鹽酸鹽之另一結晶多形物形 式，其可根據實例8中所闡述之一種方法來製備。此形式(在本文中稱為「形式1結晶多形物」)具有實質上與圖2中所顯示相同之X射線粉末繞射圖案。未測定形式1結晶多形物中酮對水合物之比率。形式1結晶多形物具有遠小於形式2結晶多形物之吸引特性、熱穩定性及水溶性，且不形成本發明之態樣。
應注意，本文所闡述化合物之命名可有所變化。化合物I游離鹼在本文中闡述為N-[1-6-(乙炔基-3-側氧基-六氫-呋喃并[3,2-b]吡咯-4-羰基)-3-甲基-丁基]-4-[5-氟-2-(4-甲基-六氫吡-1-基)噻唑-4-基]-苯甲醯胺，但亦可稱為N-((S)-1-((3aS,6R,6aR)-6-乙炔基-3-側氧基四氫-2H-呋喃并[3,2-b]吡咯-4(5H)-基)-4-甲基-1-側氧基戊-2-基)-4-(5-氟-2-(4-甲基六氫吡-1-基)噻唑-4-基)苯甲醯胺。為避免疑問，兩個化合物名稱係指以下同一化學結構：
化合物命名之發散係因存在兩種用於命名以下二環單元之不同慣例而出現：
該單元可稱為「3-側氧基-六氫-呋喃并[3,2-b]吡咯」或「3-側氧基四氫-2H-呋喃并[3,2-b]吡咯」。為避免疑問，兩個名稱係指同一結構。
適宜地，形式2結晶多形物具有X射線粉末繞射圖案，該圖案不具在結晶游離鹼形式之光譜中出現之在4.0、8.0、20.8及22.7(±0.2 度，2-θ值)處具有10%或更大之相對強度的信號(參見圖3)。已提及化合物I游離鹼之缺點，且包含低水溶解度及低熱穩定性。
術語「相對強度」應理解為意指以佔光譜中最高強度之信號之強度的百分比給出之強度，如圖1至3中所圖解說明。
形式2結晶多形物之結構不同之處在於，其係由在同一結晶相中比率為約1：1至約4：1、例如比率為2：1之兩個化學實體-酮及水合物組成。令人驚奇的是，如實例11中所闡述及圖5-8中所圖解說明，當將形式2結晶多形物之樣品儲存在不同相對濕度下時，酮對水合物之比率並未發生變化。此外，測定光譜之弛豫依賴性之其他固相NMR實驗並不提供酮及水合物形式處在不同相之證據(實例11及圖9及10)。使用重量分析蒸汽吸附之吸濕性分析(實例15)確認固態NMR實驗(實例11)之令人驚奇的發現，即結晶形式並不具有濕度介導之變化風險。亦發現與結晶游離鹼及形式1結晶多形物相比，形式2結晶多形物具有顯著較高之熱穩定性以及極高溶解度。
化合物I游離鹼可藉由WO2010/034788(其內容之全文皆以引用方式併入本文中)中所教示之方法來製備-參見實例1。
尤其適於大規模製備化合物I游離鹼之方法闡述於實例16中。
N-[1-6-(乙炔基-3-側氧基-六氫-呋喃并[3,2-b]吡咯-4-羰基)-3-甲基-丁基]-4-[5-氟-2-(4-甲基-六氫吡-1-基)噻唑-4-基]-苯甲醯胺單鹽酸鹽(化合物I游離鹼之單鹽酸鹽)可藉由使化合物I游離鹼與鹽酸反應來製備。
已確定用於製備形式2結晶多形物之多種方法，其包含：(a)尤其藉由緩慢冷卻(例如以0.1℃/min自50℃冷卻至20℃)自丙酮中之溶液結晶；(b)尤其藉由溫度循環自IPA中之溶液結晶。適宜溫度循環涉及以1h斜坡在50℃與0℃之間循環； (c)尤其藉由溫度循環自丙酮、IPAc、EtOAc或MEK中之溶液結晶。適宜溫度循環涉及以1h斜坡在50℃與20℃之間循環。
因此，製備形式2結晶多形物之方法包括，在選自丙酮、IPA、IPAc、EtOAc、THF及MEK(尤其丙酮)之溶劑存在下，使N-[1-6-(乙炔基-3-側氧基-六氫-呋喃并[3,2-b]吡咯-4-羰基)-3-甲基-丁基]-4-[5-氟-2-(4-甲基-六氫吡-1-基)噻唑-4-基]-苯甲醯胺游離鹼與鹽酸反應，及使結晶形式自該溶劑結晶。結晶可在緩慢冷卻或溫度循環條件下實施。
在一些實施例中，較佳可藉由包括以下步驟之製程產生形式2結晶多形物：在晶種量之形式2結晶多形物存在下，使形式2結晶多形物自N-[1-6-(乙炔基-3-側氧基-六氫-呋喃并[3,2-b]吡咯-4-羰基)-3-甲基-丁基]-4-[5-氟-2-(4-甲基-六氫吡-1-基)噻唑-4-基]-苯甲醯胺單鹽酸鹽於溶劑(例如上文所提及者)中之溶液結晶。
替代實例製程涉及使用少量形式2結晶多形物對化合物I游離鹼於丙酮中之溶液加晶種，及添加鹽酸於丙酮中之溶液。適用於化合物I游離鹼與HCl反應之溫度為約50℃，且隨後以0.1℃/min冷卻至5℃以促進結晶。
可藉由使用反溶劑(例如TBME)來促進結晶。
因此，製備形式2結晶多形物之另一實例製程涉及使用TBME作為反溶劑，自IPA、THF或丙酮之溶液中結晶。
特定而言，此一製程可涉及首先形成N-[1-6-(乙炔基-3-側氧基-六氫-呋喃并[3,2-b]吡咯-4-羰基)-3-甲基-丁基]-4-[5-氟-2-(4-甲基-六氫吡-1-基)噻唑-4-基]-苯甲醯胺單鹽酸鹽，其係藉由使用含於丙酮中之HCl處理化合物I游離鹼於丙酮中之溶液，使用少量形式2結晶多形物作為晶種並添加TBME作為反溶劑。該等步驟通常係在約50℃下進行，然後冷卻(即12℃)。
因此，在一實施例中，提供藉由緩慢冷卻(例如以0.1℃/min自50 ℃冷卻至20℃)自丙酮中再結晶時獲得之形式2結晶多形物。
尤其適於大規模製備形式2結晶多形物(如實例17中所詳細闡述)之製程涉及將化合物I游離鹼於丙酮、TBME及HCl中之溶液快速加熱至50℃。然後使用少量形式2結晶多形物作為晶種加至溶液中以誘發形式2結晶多形物沈澱，藉由添加丙酮及TBME作為反溶劑進一步誘發沈澱。然後將所得懸浮液快速冷卻至10℃。
因此，在一實施例中，本發明提供製備形式2結晶多形物之方法，其包括：(i)在丙酮及TBME存在下，使N-[1-6-(乙炔基-3-側氧基-六氫-呋喃并[3,2-b]吡咯-4-羰基)-3-甲基-丁基]-4-[5-氟-2-(4-甲基-六氫吡-1-基)噻唑-4-基]-苯甲醯胺游離鹼與鹽酸反應；(ii)使用形式2結晶多形物作為晶種加至溶液中；及(iii)藉由添加丙酮及TBME誘發結晶。
上文所提及之製程產生形式2結晶多形物。因此，在一實施例中，提供可藉由上文所闡述之方法獲得之形式2結晶多形物。
如上所述，N-[1-6-(乙炔基-3-側氧基-六氫-呋喃并[3,2-b]吡咯-4-羰基)-3-甲基-丁基]-4-[5-氟-2-(4-甲基-六氫吡-1-基)噻唑-4-基]-苯甲醯胺單鹽酸鹽係以某些較不利之多形物形式存在，其可藉由以下方法來製備：呈非晶型形式之N-[1-6-(乙炔基-3-側氧基-六氫-呋喃并[3,2-b]吡咯-4-羰基)-3-甲基-丁基]-4-[5-氟-2-(4-甲基-六氫吡-1-基)噻唑-4-基]-苯甲醯胺單鹽酸鹽可藉由在室溫下使用鹽酸於二噁烷中之溶液處理化合物I游離鹼於IPAc中之溶液來製備。
呈結晶形式1多形物形式之N-[1-6-(乙炔基-3-側氧基-六氫-呋喃并[3,2-b]吡咯-4-羰基)-3-甲基-丁基]-4-[5-氟-2-(4-甲基-六氫吡-1-基)噻唑-4-基]-苯甲醯胺單鹽酸鹽可藉由在水(1% v/v)存在下藉由冷卻自熱 THF(例如在50℃下)(例如4份體積量)中結晶來製備。
因此，在製備形式2結晶多形物中應避免產生該等其他不期望形式之條件。
預期形式2結晶多形物可用於治療由組織蛋白酶K介導之病症。
在本發明之另一態樣中，提供形式2結晶多形物作為藥劑之用途。亦提供形式2結晶多形物之用途，其用於製造用來治療由組織蛋白酶K介導之病症的藥劑。另外提供治療由組織蛋白酶K介導之病症之方法，其包括投與安全且有效量之形式2結晶多形物。
在一實施例中，形式2結晶多形物之適宜劑量值為0.01-100μM，例如0.01-10μM或0.1-25μM。
可由組織蛋白酶K介導之特定病症包含：骨質疏鬆症；牙齦疾病，例如牙齦炎及牙周炎；柏哲德氏病；惡性病之高鈣血症；轉移性骨疾病，例如骨癌，包含贅瘤；特徵在於過度軟骨或基質退化之疾病，例如骨關節炎及類風濕性關節炎；及疼痛。
骨質疏鬆症、轉移性骨疾病(例如骨癌)、骨關節炎及類風濕性關節炎、尤其骨質疏鬆症或骨關節炎之病症尤其受關注。
因此，在一實施例中，由組織蛋白酶K介導之病症係骨質疏鬆症。在另一實施例中，由組織蛋白酶K介導之病症係轉移性骨疾病，例如骨癌，包含贅瘤。在另一實施例中，由組織蛋白酶K介導之病症係骨關節炎。在另一實施例中，由組織蛋白酶K介導之病症係類風濕性關節炎。
儘管可單獨投與形式2結晶多形物，但其通常係以醫藥組合物之部分呈現。此一組合物將包括形式2結晶多形物以及一或多種醫藥上可接受之賦形劑。該等醫藥上可接受之賦形劑適於投與且可與組合物之其他成份相容。
因此，本發明之另一態樣係包括形式2結晶多形物及一或多種醫藥上可接受之稀釋劑或載劑之醫藥組合物。
該等組合物包含彼等適於經口、經直腸、經鼻、經局部(包含頰側及舌下)、陰道或非經腸(包含皮下、肌內、靜脈內及皮內)投與。適宜地，醫藥組合物係經口投與之調配物。該等組合物可方便地以單位劑型(例如，片劑及緩釋膠囊)呈現，且可藉由醫藥技術中已知之任一方法來製備。
該等方法包含使形式2結晶多形物與一或多種醫藥上可接受之稀釋劑或載劑結合之步驟。通常，組合物可藉由使形式2結晶多形物與液體載劑或精細固體載劑或二者均勻並充分地結合、且然後(若需要)使該產物成型來製備。
在另一態樣中提供製備醫藥組合物之方法，其包括使形式2結晶多形物與一或多種醫藥上可接受之稀釋劑或載劑結合。
適宜地，端視預期適應症及投用方案，(包括形式2結晶多形物之醫藥組合物之)單一劑量將包括約25-200mg形式2結晶多形物，例如約50-100mg或75-125mg。對於骨質疏鬆症適應症，約100mg之劑量單位對於QD投用方案而言通常較為方便。在一實施例中，醫藥組合物包括形式2結晶多形物及一或多種醫藥上可接受之稀釋劑或載劑，其比率(重量/重量)介於約1：2與1：100之間，例如介於約1：2與1：50之間、介於約1：2與1：20之間或介於約1：3與1：10之間(形式2結晶多形物：一或多種醫藥上可接受之稀釋劑或載劑)。
包括形式2結晶多形物之產品之投用方案通常係由醫師考慮患者 狀態及預期適應症之習用要素來選擇。可設想習用BID及TID。然而，形式2結晶多形物及化合物I之DMPK(藥物代謝及藥物代謝動力學)適用於QD劑量方案，此不僅自患者順從性角度來看係有利的，且亦由於單一每日投用允許出現一日PTH峰值，由此促進同化骨生長而係有利的。因此，本發明之態樣提供適用於QD投與、且適用於適應症(例如骨質疏鬆症)之劑量單位，例如含有約100mg形式2結晶多形物及一或多種醫藥上可接受之載劑或賦形劑之劑量單位。
本發明中用於經口投與之調配物可以下列形式呈現：各自含有預定量之活性劑之離散單位，例如膠囊、藥丸或錠劑；粉末或顆粒；活性劑於水性液體或非水性液體中之溶液或懸浮液；或水包油液體乳液或油包水液體乳液及濃注等。
對於經口投與之組合物(例如錠劑及膠囊)，術語賦形劑包含：黏合劑，例如糖漿、阿拉伯樹膠、明膠、山梨醇、黃蓍膠、聚乙烯吡咯啶酮(帕維酮(Povidone))、甲基纖維素、乙基纖維素、羧甲基纖維素鈉、羥丙基甲基纖維素、蔗糖及澱粉；填充劑及載劑，例如玉米澱粉、明膠、乳糖、蔗糖、微晶纖維素、高嶺土(kaolin)、甘露醇、磷酸二鈣、氯化鈉及海藻酸；及潤滑劑，例如硬脂酸鎂、硬脂酸鈉及其他金屬硬脂酸鹽、甘油硬脂酸酯硬脂酸、聚矽氧流體、滑石粉、蠟、油及膠質二氧化矽。亦可使用矯味劑，例如薄荷、冬青油、櫻桃矯味劑或諸如此類。可期望添加著色劑來製備可容易鑒定之劑型。錠劑亦可藉由業內熟知之方法進行包衣。
可藉由壓製或模製視情況使用一種或多種輔助成份來製備錠劑。可藉由在適宜機器中壓縮自由流動形式(例如粉末或顆粒)之形式2結晶非晶型物來製備壓製錠劑，該形式2結晶非晶型物視情況與黏合劑、潤滑劑、惰性稀釋劑、防腐劑、表面活性劑或分散劑混合。可藉由在適宜機器中模製經惰性液體稀釋劑潤濕之粉末化合物之混合物來 製備模製錠劑。可視情況對該等錠劑進行包衣或刻痕並可經調配以提供活性成份之緩慢或控制釋放。
適於經口投與之其他調配物包含菱形錠劑，其包括矯味基底(通常為蔗糖及阿拉伯樹膠或黃蓍膠)中之形式2結晶多形物；軟錠劑，其包括惰性基底(例如明膠及甘油或蔗糖及阿拉伯樹膠)中之形式2結晶多形物；及漱口水，其包括適宜液體載劑中之形式2結晶多形物。
形式2結晶多形物之適宜劑量值將端視適應症及接收治療之個體患者而定。適宜劑量可藉由習用動物試驗來確定。提供約0.01-100μM、例如0.01-10μM或0.1-25μM之細胞內(用於抑制木瓜酶超家族之生理蛋白酶)濃度之劑量通常期望且可達成。
當用作藥劑時，可有利地投與形式2結晶多形物與一或多種其他醫藥活性劑之組合。該等其他醫藥活性劑將端視欲治療之病症來適宜地選擇。形式2結晶多形物與另一醫藥活性劑可同時、依序或在不同時間經由相同或不同途徑投與。
當適宜投與方案可行時，形式2結晶多形物與另一醫藥活性劑可以醫藥組合調配在一起。
形式2結晶多形物可與例如已知可用於治療或預防以下疾病之藥劑組合使用：骨質疏鬆症、糖皮質素誘導之骨質疏鬆症、柏哲德氏病、骨更新異常增加、牙周病、牙齒損失、骨折、動脈粥樣硬化、肥胖症、寄生蟲感染、類風濕性關節炎、骨關節炎、假體周圍骨溶解、骨發生不全、轉移性骨疾病、惡性病之高鈣血症及多發性骨髓瘤。因此，認為形式2結晶多形物與可用於治療或預防骨質疏鬆症或其他骨病症之其他藥劑之組合在本發明之範疇內。
熟習此項技術者應能夠基於該等藥物之特定特徵及所涉及疾病辨別出可使用哪種藥劑組合。該等藥劑包含以下各項：有機雙膦酸鹽；雌激素受體調節劑；雄性激素受體調節劑；破骨細胞質子ATP酶 抑制劑；HMG-CoA還原酶抑制劑；整合素受體拮抗劑；維生素D或其類似物、成骨細胞同化劑(例如PTH)；選擇性環氧合酶-2抑制劑(COX-2抑制劑)；介白素-1-β抑制劑；LOX/COX抑制劑、RANKL抑制劑；抗骨硬化素(sclerostin)抗體及其醫藥上可接受之鹽及混合物。
「雄性激素受體調節劑」係指干擾或抑制雄性激素與受體結合(與作用機制無關)之化合物。雄性激素受體調節劑之實例包括非那雄胺(finasteride)及其他5cc-還原酶抑制劑、尼魯米特(nilutamide)、氟他胺(flutamide)、比卡魯胺(bicalutamide)、利阿唑(liarozole)及乙酸阿比特龍(abiraterone acetate)。
「破骨細胞質子ATP酶抑制劑」係指在破骨細胞之頂膜上發現、且已經報導在骨再吸收過程中起重要作用之質子ATP酶之抑制劑。此質子幫浦代表用於設計可潛在地用於治療及預防骨質疏鬆症及相關代謝疾病之骨再吸收抑制劑的吸引性靶。參見C.Farina等人，「Selective inhibitors of the osteoclast vacuolar proton ATPase as novel bone antiresorptive agents」，DDT,4：163-172(1999)，該文獻之全文以引用方式併入本文中。
「HMG-CoA還原酶抑制劑」係指3-羥基-3-甲基戊二醯基CoA還原酶之抑制劑。對HMG-CoA還原酶具有抑制活性之化合物可容易地藉由使用業內熟知之分析來鑒定。例如，參見美國專利4,231,938第6行及WO 84/02131第30-33頁中所闡述或引用之分析。術語「HMG-CoA還原酶抑制劑」及「IG-CoA還原酶抑制劑」當用於本文中時具有相同含義。
可使用之HMG-CoA還原酶抑制劑之實例包含(但不限於)洛伐他汀(lovastatin)(MEVACOR；參見美國專利第4,231,938號、第4,294,926號及第4,319,039號)、辛伐他汀(simvastatin)-19(ZOCOR)；參見美國專利第4,444,784號、第4,820,850號及第4,916,239號)、普伐 他汀(pravastatin)(PRAVACHOL；參見美國專利第4,346,227號、第4,537,859號、第4,410,629號、第5,030,447號及第5,180,589號)、氟伐他汀(fluvastatin)(LESCOL)；參見美國專利第5,354,772號、第4,911,165號、第4,929,437號、第5,189,164號、第5,118,853號、第5,290,946號及第5,356,896號)、阿托伐他汀(atorvastatin)(LIPITOR；參見美國專利第5,273,995號、第4,681,893號、第5,489,691號及第5,342,952號)及西立伐他汀(cerivastatin)(亦稱為瑞伐他汀(rivastatin)及BAYCHOL；參見美國專利第5,177,080號)。可用於本發明方法中之該等及其他HMG-CoA還原酶抑制劑之結構式闡述於M.Yalpani，「Cholesterol Lowering Drugs」，Chemistry & Industry，第85-89頁(1996年2月5日)之第87頁及美國專利第4,782,084號及第4,885,314號中。如本文所使用之術語HMG-CoA還原酶抑制劑包含具有HMG-CoA還原酶抑制活性之化合物的所有醫藥上可接受之內酯及開環酸形式(即，其中內酯環打開以形成游離酸)以及鹽及酯形式，且因此該等鹽、酯、開環酸及內酯形式之使用包含在本發明之範疇內。
在其中可存在開環酸形式之HMG-CoA還原酶抑制劑中，較佳可自開環酸形成鹽及酯形式，且所有該等形式皆包含在如本文所使用之術語「HMG-CoA還原酶抑制劑」之含義內。較佳地，HMG-CoA還原酶抑制劑係選自洛伐他汀及辛伐他汀，且最佳辛伐他汀。在此處，關於HMG-CoA還原酶抑制劑之術語「醫藥上可接受之鹽」應意指本發明中所採用之化合物之非毒性鹽，該等鹽通常係藉由使游離酸與適宜有機或無機鹼反應來製備，尤其自陽離子(例如鈉、鉀、鋁、鈣、鋰、鎂、鋅及四甲基銨)形成之彼等以及彼等自胺(例如氨、乙二胺、N-甲基葡萄糖胺、離胺酸、精胺酸、鳥胺酸、膽鹼、N,N'-二苄基乙二胺、氯普魯卡因(chloroprocaine)、二乙醇胺、普魯卡因、N-苄基苯乙胺、1-對-氯苄基-2-吡咯啶-1'-基-甲基苯并咪唑、二乙胺、六氫吡 及叁(羥甲基)胺基甲烷)形成之鹽。HMG-CoA還原酶抑制劑之鹽形式之其他實例可包含(但不限於)乙酸鹽、苯磺酸鹽、苯甲酸鹽、碳酸氫鹽、硫酸氫鹽、酒石酸氫鹽、硼酸鹽、溴化物、依地酸鈣(calcium edetate)、樟腦磺酸鹽、碳酸鹽、氯化物、克拉維酸鹽(clavulanate)、檸檬酸鹽、二鹽酸鹽、依地酸鹽、乙二磺酸鹽、依託酸鹽(estolate)、乙磺酸鹽、富馬酸鹽、葡庚糖酸鹽、葡萄糖酸鹽、麩胺酸鹽、乙醇醯基對胺基苯砷酸鹽、己雷瑣辛鹽(hexyl resorcinate)、哈胺、氫溴酸鹽、鹽酸鹽、羥基萘酸鹽、碘化物、異硫代羥酸鹽、乳酸鹽、乳糖酸鹽、月桂酸鹽、蘋果酸鹽、馬來酸鹽、扁桃酸鹽、甲磺酸鹽、甲基硫酸鹽、黏酸鹽、萘磺酸鹽、硝酸鹽、油酸鹽、草酸鹽、雙羥萘酸鹽、棕櫚酸鹽、泛酸鹽、磷酸鹽/二磷酸鹽、聚半乳糖醛酸鹽、水楊酸鹽、硬脂酸鹽、次乙酸鹽、琥珀酸鹽、鞣酸鹽、酒石酸鹽、茶氯酸鹽、甲苯磺酸鹽、三乙基碘化物及戊酸鹽。
所闡述HMG-CoA還原酶抑制劑化合物之酯衍生物可用作在吸收至溫血動物之血流中時可以此一方式裂解以釋放藥物形式且容許藥物提供經改良之治療功效之前藥。
如上文所使用，「整合素受體拮抗劑」係指選擇性拮抗、抑制或抵消生理配體與以下各項之結合之化合物：α-v-β-3整合素，選擇性拮抗、抑制或抵消生理配體與α-v-β-5整合素之結合之化合物，拮抗、抑制或抵消生理配體與α-v-β-3整合素及α-v-β-5整合素二者之結合之化合物以及拮抗、抑制或抵消在毛細管內皮細胞上表現之特定整合素活性的化合物。該術語亦指α-v-β-6、α-v-β-8、α-1-β-1、α-2-β-1、α-6-β-1及α-6-β-4整合素之拮抗劑。該術語亦指α-v-β-3、α-v-β-5、α-v-β-6、α-v-β-8、α-1-β-1、α-2-β-1、α-5-β-1、α-6-β-1及α-6-β-4整合素之任一組合之拮抗劑。H.N.Lode及同事在PNAS USA 96：1591-1596(1999)中已觀察到在消滅自發腫瘤轉移中抗血管產生性α-v整合素拮抗 劑與腫瘤特異性抗體-細胞介素(介白素-2)融合蛋白之間之協同效應。其結果表明此組合具有治療癌症及轉移性腫瘤生長之潛能。α-v-β-3整合素受體拮抗劑經由與所有當前可用藥物不同之新穎作用機制抑制骨再吸收。整合素係介導細胞-細胞及細胞基質相互作用之異源二聚體跨膜黏著受體。α-v-β-3整合素亞單位非共價地相互作用且以二價陽離子依賴性方式結合細胞外基質配體。破骨細胞上之最豐富整合素係α-v-β-3(>107/破骨細胞)，其似乎在對細胞遷移及極化至關重要之細胞支架組織中起限速作用。α-v-β-3拮抗效應係選自抑制骨再吸收、抑制再狹窄、抑制黃斑退化、抑制關節炎以及抑制癌症及轉移性生長。
「成骨細胞同化劑」係指造骨之藥劑，例如PTH。已顯示，在動物及人類中間歇性投與甲狀旁腺激素(PTH)或其胺基末端片段及類似物會預防、阻止、部分逆轉骨損失並刺激骨形成。關於論述提及D.W.Dempster等人，「Anabolic actions of parathyroid hormone on bone」，Endocr Rev 14：690-709(1993)。研究已展示甲狀旁腺激素在刺激骨形成且由此增加骨質量及強度中之臨床益處。結果由RM Neer等人報告於New Eng J Med 344 1434-1441(2001)中。
「選擇性環氧合酶-2抑制劑」或COX-2抑制劑係指抑制導致身體疼痛及發炎之COX-2輔酶之一種非類固醇抗發炎藥物(NSAID)類型。COX-2抑制劑之非限制性實例包含：塞來考昔(celecoxib)、依託考昔(etoricoxib)、帕瑞考昔(parecoxib)、羅非考昔(rofecoxib)、拉莫考昔(lumaricoxib)及伐地考昔(valdecoxib)。
此外，甲狀旁腺激素相關之蛋白片段或類似物(例如PTHrP(1-36))已展示強效抗鈣尿效應；參見M.A.Syed等人，「Parathyroid hormone-related protein-(1-36)stimulates renal tubular calcium reabsorption in normal human volunteers：implications for the pathogenesis of humoral hypercalcemia of malignancy」，JCEM 86： 1525-1531(2001)，且亦可具有作為同化劑治療骨質疏鬆症之潛能。
本發明之較佳組合包括形式2結晶多形物與甲狀旁腺激素(PTH)或其片段(例如PTHrP(1-36))之同時或依序共投用。
在一實施例中，形式2結晶多形物及一或多種醫藥活性劑皆係經口投與。在另一實施例中，形式2結晶多形物係經口投與且一或多種醫藥活性劑係經由靜脈內投與來投與。
彼等熟習此項技術者將意識到術語治療亦可延伸至涵蓋預防。
縮寫
實例 一般方法 X射線粉末繞射(XRPD)
在Bruker AXS C2 GADDS或Bruker AXS D8 Advance繞射儀上收集XRPD繞射圖。
在Bruker AXS C2 GADDS繞射儀上使用Cu Kα輻射(40kV,40 mA)、自動XYZ座標台、用於自動樣品定位之雷射視頻顯微鏡及HiStar 2維區域檢測器獲取X射線粉末繞射圖案。X射線光學組件係由與0.3mm之針孔準直器耦合之單一Göbel多層反射鏡組成。
樣品之光束發散度(即X射線光束之有效大小)為約4mm。θ-θ連續掃描模式經採用具有給出3.2°-29.7°之有效2θ範圍之20cm之樣品檢測器距離。樣品通常可於X射線光束下暴露120秒。
使用如接收原樣而未研磨之粉末將環境條件下操作之樣品製備為平板樣本。將約1-2mg樣品輕輕地壓在玻璃載片上以獲得平坦表面。
使用Cu Kα輻射(40kV,40mA)、θ-2θ測角器、V4發散度及接收狹縫、Ge單色儀及Lynxeye檢測器，在Bruker AXS D8 Advance繞射儀上獲取樣品的X射線粉末繞射圖案。在2°至42° 2θ之角度範圍內使用0.05° 2θ之步長及0.5秒/步之收集時間收集數據。
使用呈接收原樣之粉末製備成平板樣本，作為環境條件下操作之樣品。小心將樣品填裝於切割成拋光零背景(510)矽晶圓之凹孔中。
使用呈接收原樣而未研磨之粉末製備成平板樣本，作為環境條件下操作之樣品。小心取約25-50mg樣品填裝於切割成拋光零背景(510)矽晶圓之12mm直徑、0.5mm深之凹孔中(The Gem Dugout,1652 Princeton Drive,Pennsylvania State College,PA 16803,USA)。
使用高解析度Bruker D8繞射儀，使用上文所闡述之參數進行XRPD毛細管研究法。使用Diffrac Plus XRD Commander v2.6.1軟體處理數據，且使用Diffrac Plus EVA v 13.0.0.2或v15.0.0.0軟體影像化。將所有樣品(毛細管)密封且在室溫下操作。
1 H NMR(溶液相)
在配備有自動取樣器之Bruker 400MHz儀器上收集溶液相NMR 光譜，且藉由DRX400控制台控制。使用標準Bruker負載實驗，使用藉由Topspin v1.3操作之ICON-NMR v4.0.7獲取自動化實驗。對於非例行光譜學而言，僅經由使用Topspin獲取數據。
除非另有說明，否則樣品皆係在DMSO-d 6 中製備。使用Topspin v1.3或ACD SpecManager v12.5實施離線分析。
13 C NMR(固態)
使用在100.56MHz下操作(對於13C)(1H使用399.88MHz)及376.24MHz下操作(針對19F)之Varian VNMRS儀器與4mm(轉子外徑)魔角旋轉探針實施該分析。使用不具及具偶極相移(間雜去耦合)之交叉極化魔角旋轉(CPMAS)技術記錄樣品之碳-13光譜。使用一系列短試驗量測建立適宜獲取條件：再循環5s，接觸時間5ms。使用10.0kHz之樣品旋轉速率以及兩脈衝相調節(TPPM)之1H去耦合(在約等效於75kHz之射頻場下)。以接收原樣且在環境探測溫度下(在此旋轉速率下約為30℃)操作樣品。參照關於純淨四甲基矽烷之光譜(藉由將來自金剛烷之高頻線設定為38.5ppm)。19F光譜係在3.6μs 90°脈衝後以60s弛豫延遲在14kHz之旋轉速率下且不使用1H去耦合，藉由直接激發來獲得。參照相對於CFCl3之光譜。
使用在100.56MHz下操作(對於13C)(399.88MHz對於1H)之Varian VNMRS儀器及6mm(轉子o.d.)魔角旋轉探針實施該分析。使用交叉極化魔角旋轉(CPMAS)技術記錄樣品之碳-13光譜。使用一系列短試驗量測建立適宜獲取條件：再循環4s，接觸時間3ms。使用6.8kHz之樣品旋轉速率以及兩脈衝相調節(TPPM)之1H去耦合(在約等效於54kHz之射頻場下)。此處所使用與前述量測相比較低之旋轉速率意味著在光譜中存在旋轉邊帶，但該等邊帶並不顯著干擾關鍵中心帶信號。參照關於純淨四甲基矽烷之光譜(藉由將來自金剛烷之高頻線設定為38.5ppm)。
熱力學水溶解度
藉由將足夠化合物懸浮於水中以獲得10mg.ml-1之母體游離形式之化合物的最大最終濃度來測定水溶解度。在25℃下將懸浮液平衡24小時，然後量測pH。然後經由玻璃纖維C過濾器將懸浮液過濾至96孔板中。隨後將濾液稀釋101倍。參照DMSO中之約0.25mg.ml-1標準溶液藉由HPLC進行定量。注射不同體積之標準、經稀釋及未經稀釋樣品溶液。使用藉由對與標準注射中之主要峰相同之滯留時間下發現之峰進行積分測定的峰面積計算溶解度。
在配備有二極體陣列檢測器且使用ChemStation軟體vB.02.01- SR1之Agilent HP1100系列系統上實施分析。
差示掃描量熱(DSC)
在配備有34位自動取樣器之Mettler DSC 823e上收集DSC數據。使用合格銦針對能量及溫度對儀器進行校準。通常，將針孔鋁盤中之0.5-3mg每一樣品以10℃/min自25℃加熱至300℃。在樣品上方維持50ml/min之氮吹掃。
儀器控制及數據分析軟體為STARe v9.20。
熱重分析(TGA)
在配備有34位自動取樣器之Mettler TGA/SDTA 851e上收集TGA數據。使用合格銦針對能量及溫度對儀器進行校準。通常將5-30mg每一樣品裝載至預稱量之鋁坩堝上並以10℃/min自環境溫度加熱至400℃。在樣品上方維持50mL/min之氮吹掃。
儀器控制及數據分析軟體為STARe v9.20。
重量分析蒸汽吸附(GVS)
使用藉由DVS固有控制軟體v1.0.0.30控制之SMS DVS固有水分吸附分析儀獲得吸附等溫線。藉由儀器控制將樣品溫度維持在25℃下。藉由混合乾與濕氮流控制濕度，總流速為200ml/min。藉由位於樣品附近之經校準Rotronic探針量測相對濕度(動態範圍為1.0%-100% RH)。藉由微量天平(精確度±0.005mg)持續監測隨RH%變化之樣品之重量變化(質量弛豫)。
通常在環境條件下將5-20mg樣品放置於配衡之絲網不銹鋼籃中。在40% RH及25℃(典型室內條件)下裝載及卸載樣品。如下文所概述實施水分吸附等溫線(2次掃描獲得1個完整循環)。在25℃下以10% RH間隔在0-90% RH範圍內實施標準等溫線。使用DVS分析組v6.0.0.7於Microsoft Excel中進行數據分析。
表-2用於SMSDVS固有實驗之方法參數
在完成等溫線後回收樣品並藉由XRPD重新分析。
實例1-N-[1-6-(乙炔基-3-側氧基-六氫-呋喃并[3,2-b]吡咯-4-羰基)-3-甲基-丁基]-4-[5-氟-2-(4-甲基-六氫吡 -1-基)噻唑-4-基]-苯甲醯胺游離鹼(化合物I游離鹼)之合成.
化合物X係如WO2010/034788實例2中所闡述來製備。
在50℃下在真空中濃縮化合物X(89.6g,146mmol)之溶液以獲得100g油狀物。將油狀物溶解於甲苯(250mL)中，且在50℃-55℃下藉由在真空中蒸餾移除溶劑。將此步驟再重複一次。將殘餘物溶解於二氯甲烷(70mL)中。
向3L 3頸圓底反應器中裝填三氟乙酸(800mL)，且冷卻至-5℃±2℃。將反應器抽真空至小於100毫巴，並用氮釋放真空。經10分鐘將化合物X於二氯甲烷中之溶液添加至冷卻三氟乙酸中，同時將溫度保持在-5℃±2℃下。用二氯甲烷(20mL)沖洗添加漏斗。移除冷卻，且 使反應溫度達到環境溫度。在環境溫度下將反應物攪拌16h，此時藉助HPLC之在製控制顯示99.0%轉化。
添加甲苯(900mL)及庚烷(900mL)，且攪拌1-3分鐘。分離各相。保留含有化合物I之三氟乙酸鹽之下部相，同時丟棄下部相。將下部相與甲苯(900mL)及庚烷(900mL)一起攪拌5分鐘。分離各相。丟棄上部相。用二氯甲烷(700mL)稀釋下部相。向6L 3頸圓底反應器中裝填20% K2HPO4(磷酸氫二鉀水溶液)(4L)及二氯甲烷(700mL)。將此混合物冷卻至0℃，且將化合物I之三氟乙酸鹽之二氯甲烷溶液添加至驟冷混合物中，同時將溫度保持在2℃-10℃。分離各相，並保留有機相。用二氯甲烷(2×700mL)萃取水相。
相繼用10% K2HPO4(磷酸氫二鉀水溶液)(2×500mL)洗滌合併之有機相。將合併之有機相加熱至35℃，且在35℃下用硫酸鎂(50g)乾燥20分鐘。過濾懸浮液，並用二氯甲烷(35℃,500mL)洗滌濾餅。在35℃-45℃下在真空中將濾液濃縮至乾燥。將蒸發殘餘物溶解於二氯甲烷(100mL)中。逐滴添加TBME(300mL)。靜置時產物開始結晶。在35℃下在真空中濃縮混合物直至收集到150mL餾出物。此時，獲得稀懸浮液。逐滴添加額外TBME(450mL)，獲得黃色懸浮液。將懸浮液冷卻至5℃，且在此溫度下攪拌16h。過濾懸浮液，並用TBME(200mL)洗滌濾餅。在30℃下在真空中將濾餅乾燥6h以獲得55.3g(65%)化合物I游離鹼。HPLC純度為96.8%。
如上文所論述，化合物I游離鹼亦可以水合物形式存在。
可藉由涉及在50℃下經1h將其在3份體積量98：2 IPA：水中製成漿液之製程，將游離鹼之非晶型形式轉化成游離鹼之結晶形式。
結晶化合物I游離鹼之樣品之XRPD繞射圖顯示於圖3中。
實例2-化合物I游離鹼之各種鹽形式之製備
嘗試製備化合物I游離鹼之各種鹽形式。為達成此目的，決定利 用兩種溶劑系統：一者使用標稱乾燥之溶劑，且一者添加過量水。考慮到化合物I之特性，選擇IPAc作為基礎乾燥溶劑，且選擇MIBK作為第二溶劑。
實驗程序
向每一364mL玻璃瓶中準確稱量約30mg化合物I游離鹼。向該等瓶中之一半中添加3.0mL IPAc，且向另一半中添加3mL MIBK及30μL去離子水。然後向每一瓶中添加表3中所顯示之酸：
然後在環境與50℃之間(每4小時在每一溫度之間切換)培育IPAc實驗，同時在室溫下培育MIBK實驗。24h後，檢查瓶且觀察外觀。許多MIBK實驗已形成膠狀物，因此將該等瓶轉移至環境/50℃培育器。
再保持24h後再檢查瓶且觀察外觀。過濾掉所獲得之固體且藉由XRPD分析。此時打開不含固體之任何瓶之蓋且允許蒸發，藉由XRPD分析任何所得固體。
結果
結果概述於下表4及5中。IPAc實驗產生總共12種經分離固體；該等固體中之三者鑒定為輸入酸，一者係部分結晶HCl鹽且八者係非晶型固體。
自MIBK實驗僅分離出四種固體；兩種輸入酸及兩種棕色非晶型固體。
將已經蒸發且無法獲得任何固體之所有樣品溶解於500μL MEK中，且添加5μL水。然後在環境與50℃之間將瓶培育兩天，此後在任一樣品中仍不存在固體。打開瓶蓋且允許蒸發，皆獲得棕色膠狀物。
實例3-化合物I游離鹼之硫酸鹽及甲磺酸鹽形式之進一步研究
10mL玻璃瓶中之每一者中稱量約100mg化合物I游離鹼。然後各自添加10.0mL IPAc，隨後添加1當量硫酸(呈THF中之1M溶液形式)或甲磺酸(呈THF中之1M溶液形式)。在兩種情形下，在添加酸後形成鬆散白色沈澱。在環境與50℃之間將瓶培育72h，每四小時循環一次。然後過濾掉固體且空氣乾燥。
將約10mg非晶型硫酸鹽稱量至六個瓶中之每一者中，且對甲磺酸鹽實施相同處理。向每一瓶中添加100μL表6中所顯示之相關溶劑。然後在環境與50℃之間將瓶培育過夜，隨後過濾掉任何固體且藉由XRPD分析。
儘管自TBME分離之固體皆為非晶型，但在1,4-二噁烷中成熟之硫酸鹽顯示新穎結晶繞射圖案。藉由此製程產生之結晶材料之TGA分析揭露其係結晶二噁烷溶劑合物，且因此具有有限應用。
基於實例2及3之結果，將鹽酸鹽用於進一步研究。
實例4-自化合物I游離鹼合成形式2結晶多形物
將化合物I游離鹼(99.2mg)稱量至反應管中且添加丙酮(2.0mL)，短暫攪拌後獲得澄清溶液。然後添加37% HCl(14μL，呈1.0mL丙酮中之溶液形式)，且在50℃下將所得澄清溶液攪拌1h，此後形成白色沈澱。將反應管以0.1℃/分鐘冷卻至20℃，且然後在20℃下再攪拌8小時。藉由過濾分離所存在固體且在60℃下在真空下乾燥過夜，以獲得65mg(61%)灰白色固體。產物經測定為形式2結晶多形物。
實例5-自化合物I游離鹼合成形式2結晶多形物(涉及反溶劑及加晶種之替代方法)
將1L 3頸圓底反應器抽真空至小於100毫巴，且用氮釋放真空。然後向反應器中裝填丙酮(164mL,128.9g)及化合物I游離鹼(70mmol；41g)。在水浴上將懸浮液加熱至50℃且在此溫度下攪拌，直至獲得化合物I游離鹼之澄清溶液。經3min添加濃鹽酸(37%)(6.90g,70mmol,1.0當量)。將澄清溶液攪拌1min，然後使用形式2結晶多形物(約20mg)加晶種。立即開始沈澱，但允許藉由在50℃下將懸浮液攪拌30min來「成熟」。在48℃±2℃下經19min添加第三丁基甲基醚(410mL,303.8g)。然後經2h將懸浮液冷卻至22℃，並在此溫度下攪拌2h，然後冷卻至12℃且在12℃下攪拌20min。過濾懸浮液，並用丙酮/第三丁基甲基醚(1：2)(120mL)洗滌濾餅，然後用第三丁基甲基醚(120mL)洗滌。在50℃下在真空中將濾餅乾燥64h，以獲得42.09g(96%)形式2結晶多形物。HPLC純度為97.4%。
將使用此製程產生之材料用於實例11及12中所闡述之測試中。
使用IPA及THF作為溶劑實施類似實驗且結果顯示於表7中。
實例6-自化合物I游離鹼合成形式2結晶多形物(涉及加晶種之另一替代方法)
將化合物I游離鹼(1.696g)稱量至反應管中且添加丙酮(10.0mL)。藉由磁力攪拌將反應管加熱至50℃，獲得澄清溶液。然後使用形式2結晶多形物(10mg)作為晶種加至溶液中。然後於丙酮(10.0mL)中製得37% HCl(237μL)之溶液。然後將此酸溶液以2.5mL一份添加 至反應管中。在50℃下攪拌1h後，將所得精細懸浮液以0.1℃/min冷卻至5℃，且在此溫度下攪拌48h。然後藉由過濾分離所存在固體，並用已冷卻至0℃之丙酮(2×10mL)洗滌。然後在60℃下在真空下將此固體乾燥24h，隨後進行表徵，以獲得灰白色粉末狀標題產物(1.51g,83%)。如實例9中所闡述獲得此材料之樣品之XRPD繞射圖且顯示於圖1中。
將來自此製程之材料用於實例13、14及15中所闡述之測試。
參考實例7-N-[1-6-(乙炔基-3-側氧基-六氫-呋喃并[3,2-b]吡咯-4-羰基)-3-甲基-丁基]-4-[5-氟-2-(4-甲基-六氫吡 -1-基)噻唑-4-基]-苯甲醯胺單鹽酸鹽-非晶型形式之合成
在以下實驗中製備N-[1-6-(乙炔基-3-側氧基-六氫-呋喃并[3,2-b]吡咯-4-羰基)-3-甲基-丁基]-4-[5-氟-2-(4-甲基-六氫吡-1-基)噻唑-4-基]-苯甲醯胺單鹽酸鹽之非晶型形式： 將化合物I游離鹼(502mg)溶解於乙酸異丙基酯(10mL)中以獲得金色澄清溶液。用二噁烷中之4M HCl(214μl,1.0當量)處理溶液，此引起精細白色固體立即沈澱。在真空中濃縮固體至產生灰白色精細乾燥粉末。XRPD分析顯示材料為非晶型(數據未顯示)。對於游離鹼，單鹽酸鹽亦可以水合物形式存在。然而，未測定非晶型形式中酮：水合物之比率。
參考實例8-N-[1-6-(乙炔基-3-側氧基-六氫-呋喃并[3,2-b]吡咯-4-羰基)-3-甲基-丁基]-4-[5-氟-2-(4-甲基-六氫吡 -1-基)噻唑-4-基]-苯甲醯胺單鹽酸鹽-形式1結晶多形物之合成
在以下實驗中製備具有不同於形式2結晶多形物之XRPD繞射圖之N-[1-6-(乙炔基-3-側氧基-六氫-呋喃并[3,2-b]吡咯-4-羰基)-3-甲基-丁基]-4-[5-氟-2-(4-甲基-六氫吡-1-基)噻唑-4-基]-苯甲醯胺單鹽酸鹽之結晶形式(即形式1結晶多形物)： 將200mg化合物I游離鹼溶解於THF中，且在50℃下添加3當量HCl(37% HCl，於1份體積量THF中製得)。在50℃下靜置1h後，添加70μL水，且將溶液冷卻至環境溫度。在50℃下在真空下乾燥藉由過濾分離後獲得之結晶固體。未測定形式II多形物中酮：水合物之比率。此材料之樣品之XRPD繞射圖顯示於圖2中。
製備N-[1-6-(乙炔基-3-側氧基-六氫-呋喃并[3,2-b]吡咯-4-羰基)-3-甲基-丁基]-4-[5-氟-2-(4-甲基-六氫吡-1-基)噻唑-4-基]-苯甲醯胺單鹽酸鹽之形式1結晶多形物之替代方法涉及以0.1℃/min將含有1%水(v/v)之4體積THF中之50℃溶液冷卻至20℃。
實例9-化合物I游離鹼、形式2結晶多形物及形式1結晶多形物之XRPD分析
使用一般方法中所闡述之方法進行結晶化合物I游離鹼以及形式I及形式II結晶多形物之XRPD分析。結果顯示於圖1、2及3以及下表8-10中。所有材料如XRPD繞射圖所顯示為結晶。
實例10-形式2結晶多形物之樣品之溶液相 1 H NMR分析
使用一般方法中所闡述之方法實施形式2結晶多形物之1H NMR分析。所得光譜顯示於圖4中，自其可明瞭形式2結晶多形物之樣品係以酮-水合物平衡存在。
實例11-形式2結晶多形物之固態 13 C NMR結構分析
使用實例5之方法產生之形式2結晶多形物之樣品之13C固態NMR光譜圖解說明於圖5中。基於208ppm(酮)及102ppm(水合物)信號之 積分，酮：水合物比率經測定為67：33。
光譜之環境依賴性
在將樣品於<2%之相對濕度下儲存一週後，記錄圖6中所圖解說明之13C固態NMR光譜。酮佔酮/水合物信號之總強度的67%(即酮：水合物比率為67：33)。在將樣品於75% RH下儲存一週後，記錄圖7中所顯示之13C固態NMR光譜。酮佔信號之67%。在80℃下記錄圖8中所顯示之13C固態NMR光譜，且獲得68%之酮含量。因此，可觀察到酮對水合物之比率在不同環境條件下不會發生變化。
光譜之弛豫依賴性
通常，若樣品係組份之混合物，則應可改變NMR獲取條件以有利於彼等組份中之一者或其他者。只要每一組份之弛豫行為不同，此將獲得成功。可使用1H旋轉晶格弛豫時間(T1(H))作為一種該「過濾器」之基礎，且使用以旋轉框時間(T1Q(H))表示之1H旋轉晶格弛豫作為另一者之基礎。後者往往對組份之間之差異最敏感。
使用延遲接觸CP實驗來尋找與診斷性酮(208ppm)及水合物(103ppm)信號相關之差異。結果顯示於圖9中。在實驗誤差內，兩種信號之行為相同。因此，並不存在酮與水合物組份處在不同相之證據(儘管慮及兩種形式之分子之其餘部分之相似性，但仍無法排除弛豫行為一致相同)。
若無法區分T1Q行為，則T1將不可能顯示任何差異。無論如何，實施短系列量測來檢查此差異。圖10顯示反轉回復CP量測之結果，其在頂部顯示完整信號，且在其下方顯示嘗試對信號調零之結果。而且，不存在酮與水合物信號之行為存在任何差異之證據。
因此，可推斷出酮及水合物形式在晶體中處於同一相中。
實例12-形式2結晶多形物之毛細管XRPD結構分析
遵循上文一般程序中所闡釋之方法，獲得三批次形式2結晶多形 物之毛細管XRPD數據。疊加繞射圖圖解說明於圖11中，其中可觀察到三組數據皆相同，此指示各批次之間之一致性及再現性。
將來自三批次之數據編入索引以確定結晶材料之晶胞參數。Pawley擬合結果概述於表11中。
結果確認三組粉末數據與同一結晶結構相關，此乃因其展示相同圖案。總之，觀察到經計算特徵與觀察特徵之間之Pawley擬合值非常一致，且第3批顯示最佳結果。
主要在第1批中觀察到之細微差異可與一系列人為現象相關，該等人為現象可歸於：結構缺陷、一種化學實體之無序構型、雛晶之錯位。
發現形式2結晶多形物之晶體系統為斜方(多重性X4)，且經測定在不對稱晶胞(740Å3)中可容納一個分子及一個氯離子。
基於指示酮對水合物比率為約1：1至約4：1、例如2：1之固態NMR，以下中之任一者：
-兩個化學實體可在同一相中以約1：1至約4：1、例如2：1之比率互換結晶；或
-存在共晶體，其中兩個化學實體在同一相中以規則重複模式結晶
-存在密集物，其中酮晶體對水合物晶體之比率為約1：1至約4：1，例如2：1。
後一選擇與實例11及實例12之結果不一致，此推斷出酮及水合物形式處在同一相中，而第二選擇在已知僅一種分子處在不對稱單元中時不可行，因此可推斷出兩個化學實體可在同一相中以約1：1至約4：1、例如2：1之比率互換結晶。
實例13-化合物I游離鹼及形式2結晶多形物之熱力學水溶解度
使用一般方法中所闡述之方法來測定化合物I游離鹼及形式2結晶多形物之熱力學水溶解度。結果顯示於下表12中：
該等結果顯示，與甚至呈非晶型形式之化合物I游離鹼之較差溶解度及形式1結晶多形物之相當差之溶解度相比，形式2結晶多形物具有極高水溶解度。
實例14-化合物I游離鹼、形式2結晶多形物及形式1結晶多形物之熱分析
使用一般方法中所闡述之方法藉由DSC及TGA進行形式2結晶多形物(使用實例6中之方法獲得之樣品)之熱分析。
自圖12上圖可觀察到，該物質具有良好熱穩定性，且具有少量質量損失直至在160℃下開始降解。此明顯優於在160℃以下顯示兩種不同的質量損失之形式1結晶多形物(圖13)，且亦優於在低於110℃之溫度下顯示質量損失(可能為水)之結晶化合物I游離鹼(圖14)，此指示該兩種形式將更難以處理。
實例15-形式2結晶多形物之重量分析蒸汽吸附
使用一般方法中所闡述之方法進行形式2結晶多形物(使用實例6 中之方法獲得之樣品)之重量分析蒸汽吸附分析。結果顯示於圖15及16中。該等圖顯示該物質在0-90% RH範圍內吸收約2.2%水且此水攝取係可逆的。因此，該物質似乎並不具有濕度介導之形式變化的風險，且看上去其可在寬RH範圍內進行處理。
實例16-N-[1-6-(乙炔基-3-側氧基-六氫-呋喃并[3,2-b]吡咯-4-羰基)-3-甲基-丁基]-4-[5-氟-2-(4-甲基-六氫吡 -1-基)噻唑-4-基]-苯甲醯胺游離鹼(化合物I游離鹼)之大規模合成
化合物X係如WO2010/034788實例2中所闡述來製備。
將化合物X(9.500kg,15.5mol)之溶液轉移至反應器，且藉由在減壓下蒸餾移除溶劑。添加甲苯(2×23.0kg)，且真空中在減壓下移除。將蒸發殘餘物溶解於二氯甲烷(17kg)中，且在10℃下將所得溶液添加至三氟乙酸(70.8kg)及純化水(0.500kg)之混合物中。將所得混合物加熱至22℃並在此溫度下攪拌，直至獲得化合物X至化合物I游離鹼之99.5%的轉化(HPLC)。然後在0℃下將反應混合物添加至正庚烷(97.0kg)及第三丁基甲基醚(105.6kg)之混合物中。在0℃下攪拌後，藉由過濾分離材料且用正庚烷(38.6kg)及第三丁基甲基醚(38.6kg)之混合物洗滌。
將濕材料溶解於二氯甲烷(204.0kg)中且用20% K2HPO4水溶液(pH 7.5)洗滌。將有機相冷卻至15℃，且施加至自矽膠60(40-63μM)(55.5kg)、二氯甲烷(202.7kg)及丙酮(13.4kg)製備之管柱。用以下各項溶析管柱：1)第三丁基甲基醚(132.0kg)中之20% v/v丙酮(35.0 kg)，2)第三丁基甲基醚(124.0kg)中之50% v/v丙酮(131.5kg)，及3)丙酮(875.0kg)。將含有期望產物之溶析部分(使用TLC及HPLC測定)蒸發至約90L之體積。然後添加第三丁基甲基醚(64.5kg)及純化水(1.585kg)並持續蒸餾。當達到約50L之體積時，添加第三丁基甲基醚(32.0kg)及純化水(1.635kg)。將懸浮液冷卻至2℃且在此溫度下攪拌。藉由過濾分離產物，用第三丁基甲基醚(27.0kg)洗滌且在30℃下在真空下乾燥至少10小時，以獲得6.5kg(72%)化合物I游離鹼。
實例17-自化合物I游離鹼大規模合成形式2結晶多形物
將化合物I游離鹼(6.325kg,10.8mol)添加至丙酮(25.50kg)及TBME(2.40kg)之混合物中。添加37%鹽酸(0.960kg,9.74mol)，且將懸浮液儘可能快地加熱至50℃，以獲得澄清溶液。使用形式2結晶多形物(12g)作為晶種加至溶液中，且在50℃下攪拌。觀察到形式2結晶多形物沈澱。藉由在50℃下添加以下物質誘導進一步沈澱：1)TBME(9.75kg)中之50% v/v丙酮(10.25kg)，且然後2)TBME(65.0kg)。將所得懸浮液儘可能快地冷卻至10℃，且在此溫度下攪拌20min後過濾產物，首先用TBME(10.25kg)中之29% v/v丙酮(4.50kg)洗滌，且然後用TBME(14.50kg)洗滌。在50℃下在真空下將產物乾燥至少20小時，以獲得6.0kg(89%)形式2結晶多形物。
此材料之樣品之XRPD繞射圖顯示於圖17中。1H NMR分析(未顯示；500MHz Bruker機器，DMSO d6，溫度298℃，NOESY，1d/zg30信號脈衝)指示酮對水合物之比率為82：18。
實例中所揭示結果之概述
形式2結晶多形物係以由N-[1-6-(乙炔基-3-側氧基-六氫-呋喃并[3,2-b]吡咯-4-羰基)-3-甲基-丁基]-4-[5-氟-2-(4-甲基-六氫吡-1-基)噻唑-4-基]-苯甲醯胺單鹽酸鹽及N-[1-6-(乙炔基-3-側氧基-六氫-呋喃并[3,2-b]吡咯-4-羰基)-3-甲基-丁基]-4-[5-氟-2-(4-甲基-六氫吡-1-基)噻唑-4-基]-苯甲醯胺水合單鹽酸鹽組成之單一結晶相存在。
令人驚奇的是，未觀察到酮及水合物形式在於不同相對濕度之條件下暴露時相互轉化，此指示酮對水合物形式之比率穩定。
形式2結晶多形物具有良好水溶解度及良好水分及熱穩定性。
形式2結晶多形物之水溶解度及熱穩定性比形式1結晶多形物及化合物I之游離鹼形式(甚至在呈結晶形式時)明顯有利。
嘗試製備化合物I游離鹼之其他鹽之結晶形式通常未獲得成功。
大規模製程(實例16及17)產生良好產率及純度之化合物I游離鹼及形式2結晶多形物，由此確認形成化合物之方法較為穩健。
本申請案中所提及之所有參考文獻(包含專利及專利申請案)儘可能全面地以引用方式併入本文中。
在整個說明書及隨附申請專利範圍中，除非上下文另有要求，否則詞語「包括(comprise)」或變化形式(例如「包括(comprises及comprising)」)應理解為意指包含所述整數、步驟、整數群組或步驟群組，但並不排除任一其他整數、步驟、整數群組或步驟群組。
可使用本說明書及申請專利範圍形成其部分之申請案作為相對於任何後續申請案之優先權之基礎。該後續申請案之申請專利範圍可針對本文所闡述之任一特徵或特徵之組合。其可採取產物、組合物、 製程或用途請求項形式，且可包含例如(但不限於)以下申請專利範圍。

Claims (21)

  1. 一種形式2結晶多形物，其係由N-[1-6-(乙炔基-3-側氧基-六氫-呋喃并[3,2-b]吡咯-4-羰基)-3-甲基-丁基]-4-[5-氟-2-(4-甲基-六氫吡
    Figure TWI648278B_C0001
    -1-基)噻唑-4-基]-苯甲醯胺單鹽酸鹽及N-[1-6-(乙炔基-3-側氧基-六氫-呋喃并[3,2-b]吡咯-4-羰基)-3-甲基-丁基]-4-[5-氟-2-(4-甲基-六氫吡
    Figure TWI648278B_C0002
    -1-基)噻唑-4-基]-苯甲醯胺水合單鹽酸鹽組成，其中該形式2結晶多形物之XRPD圖案含有3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、10個、11個或所有12個選自6.8、12.4、14.9、16.7、17.0、17.8、24.1、24.6、24.8、27.2、28.2、32.1(±0.2度、2-θ值)之峰。
  2. 一種醫藥組合物，其包括如請求項1之形式2結晶多形物及一或多種醫藥上可接受之稀釋劑或載劑。
  3. 一種醫藥組合，其包括如請求項1之形式2結晶多形物及另一醫藥活性劑。
  4. 一種如請求項1之形式2結晶多形物之用途，其用於製備用來治療選自由以下組成之列表之病症的藥劑：骨質疏鬆症；牙齦疾病；柏哲德氏病(Paget’s disease)；惡性病之高鈣血症；轉移性骨疾病；特徵在於過度軟骨或基質退化之疾病；及疼痛。
  5. 如請求項4之形式2結晶多形物之用途，其中該病症係骨質疏鬆症。
  6. 如請求項4之形式2結晶多形物之用途，其中該病症係轉移性骨疾病。
  7. 如請求項4之形式2結晶多形物之用途，其中該病症係骨關節炎。
  8. 如請求項4之形式2結晶多形物之用途，其中該病症係類風濕性關節炎。
  9. 如請求項4之形式2結晶多形物之用途，其中如請求項1之形式2結晶多形物係與一或多種其他醫藥活性劑組合投與。
  10. 如請求項9之形式2結晶多形物之用途，其中該一或多種其他醫藥活性劑係選自有機雙膦酸鹽；雌激素受體調節劑；雄性激素受體調節劑；破骨細胞質子ATP酶抑制劑；HMG-CoA還原酶抑制劑；整合素受體拮抗劑；維生素D；成骨細胞同化劑；選擇性環氧合酶-2抑制劑(COX-2抑制劑)；介白素-1-β抑制劑；LOX/COX抑制劑、RANKL抑制劑；抗骨硬化素(sclerostin)抗體及其醫藥上可接受之鹽及混合物。
  11. 一種製備如請求項1之形式2結晶多形物之方法，其包括在選自丙酮、IPA、IPAc EtOAc、THF及MEK之溶劑存在下，使N-[1-6-(乙炔基-3-側氧基-六氫-呋喃并[3,2-b]吡咯-4-羰基)-3-甲基-丁基]-4-[5-氟-2-(4-甲基-六氫吡
    Figure TWI648278B_C0003
    -1-基)噻唑-4-基]-苯甲醯胺游離鹼與鹽酸反應，及使該形式2結晶多形物自該溶劑中結晶。
  12. 如請求項11之方法，其中該溶劑係丙酮。
  13. 如請求項11之方法，其中該結晶係在緩慢冷卻或溫度循環之條件下實施。
  14. 如請求項11之方法，其中該結晶係在晶種量之如請求項1之形式2結晶多形物存在下實施。
  15. 如請求項11之方法，其中係藉由使用反溶劑來促進該結晶。
  16. 一種製備如請求項1之形式2結晶多形物之方法，其包括：(i)在丙酮及TBME存在下，使N-[1-6-(乙炔基-3-側氧基-六氫-呋喃并[3,2-b]吡咯-4-羰基)-3-甲基-丁基]-4-[5-氟-2-(4-甲基-六氫吡
    Figure TWI648278B_C0004
    -1-基)噻唑-4-基]-苯甲醯胺游離鹼與鹽酸反應；(ii)使用形式2結晶多形物作為晶種添加至該溶液中；及(iii)藉由添加丙酮及TBME誘發結晶。
  17. 一種形式2結晶多形物，其係藉由如請求項11至16中任一項之方法獲得，其中該形式2結晶多形物具有含有3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、10個、11個或所有12個選自6.8、12.4、14.9、16.7、17.0、17.8、24.1、24.6、24.8、27.2、28.2、32.1(±0.2度、2-θ值)之峰之XRPD圖案。
  18. 如請求項1之形式2結晶多形物，其係由N-[1-6-(乙炔基-3-側氧基-六氫-呋喃并[3,2-b]吡咯-4-羰基)-3-甲基-丁基]-4-[5-氟-2-(4-甲基-六氫吡
    Figure TWI648278B_C0005
    -1-基)噻唑-4-基]-苯甲醯胺單鹽酸鹽及N-[1-6-(乙炔基-3-側氧基-六氫-呋喃并[3,2-b]吡咯-4-羰基)-3-甲基-丁基]-4-[5-氟-2-(4-甲基-六氫吡
    Figure TWI648278B_C0006
    -1-基)噻唑-4-基]-苯甲醯胺水合單鹽酸鹽組成，該材料呈其形式2結晶多形物的形式且具有實質上如圖1中所顯示之XRPD圖案。
  19. 一種材料，其係由N-[1-6-(乙炔基-3-側氧基-六氫-呋喃并[3,2-b]吡咯-4-羰基)-3-甲基-丁基]-4-[5-氟-2-(4-甲基-六氫吡
    Figure TWI648278B_C0007
    -1-基)噻唑-4-基]-苯甲醯胺單鹽酸鹽及N-[1-6-(乙炔基-3-側氧基-六氫-呋喃并[3,2-b]吡咯-4-羰基)-3-甲基-丁基]-4-[5-氟-2-(4-甲基-六氫吡
    Figure TWI648278B_C0008
    -1-基)噻唑-4-基]-苯甲醯胺水合單鹽酸鹽組成，該材料呈其形式2結晶多形物之形式且具有含有3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、10個、11個或所有12個選自6.8、12.4、14.9、16.7、17.0、17.8、24.1、24.6、24.8、27.2、28.2、32.1(±0.2度、2-θ值)之峰之XRPD圖案。
  20. 如請求項1之形式2結晶多形物，其具有含有3個、4個、5個、6個、7個或所有8個選自6.8、12.4、14.9、16.7、17.8、24.1、24.6及24.8(±0.2度、2-θ值)之峰的XRPD圖案。
  21. 如請求項1之形式2結晶多形物，其具有含有3個、4個、5個或所有6個選自6.8、14.9、17.8、24.1、24.6及24.8(±0.2度、2-θ值)之峰的XRPD圖案。
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