EA032409B1

EA032409B1 - СОЛЬ КРИСТАЛЛИЧЕСКОГО ПОЛИМОРФА ФОРМЫ 2 N-[1-6-(ЭТИНИЛ-3-ОКСОГЕКСАГИДРОФУРО[3,2-b]ПИРРОЛ-4-КАРБОНИЛ)-3-МЕТИЛБУТИЛ]-4-[5-ФТОР-2-(4-МЕТИЛПИПЕРАЗИНИЛ)ТИАЗОЛ-4-ИЛ]БЕНЗАМИДА, ПОЛЕЗНАЯ В КАЧЕСТВЕ ИНГИБИТОРА ЦИСТЕИНПРОТЕАЗЫ

Info

Publication number: EA032409B1
Application number: EA201690373A
Authority: EA
Inventors: Урсула Грабовска; Лурдес Сальвадоре-Оден; Виктор М. Диас Перес; Эндрю Карр
Original assignee: Медивир Аб
Priority date: 2013-08-13
Filing date: 2014-08-13
Publication date: 2019-05-31
Also published as: MX369144B; EA201690373A1; US9650388B2; KR102271944B1; WO2015022385A1; AU2014307850B8; ZA201600952B; EP3033345B1; MY180170A; SG11201600979SA; US20160194334A1; CN105612160B; CA2920797C; JP2016530260A; EP3033345A1; AU2014307850A8; BR112016003169A2; CN105612160A; HK1218915A1; JP6530752B2

Abstract

Предложен кристаллический полиморф формы 2, состоящий из моногидрохлорида N-[1-6-(этинил-3-оксогексагидрофуро[3,2-b]пиррол-4-карбонил)-3-метилбутил]-4-[5-фтор-2-(4-метилпиперазин-1-ил)тиазол-4-ил]бензамида и моногидрохлорида N-[1-6-(этинил-3-оксогексагидрофуро[3,2-b]пиррол-4-карбонил)-3-метилбутил]-4-[5-фтор-2-(4-метилпиперазин-1-ил)тиазол-4-ил]бензамидгидрата, его применение в качестве медицинского средства и способы его получения

Description

Настоящее изобретение относится к особой кристаллической форме новой соли известного ингибитора цистеинпротеазы Н-[1-6-(этинил-3-оксогексагидрофуро[3,2-Ь]пиррол-4-карбонил)-3-метилбутил]-4[5-фтор-2-(4-метилпиперазин-1-ил)тиазол-4-ил]бензамида. Настоящее изобретение также относится к фармацевтическим композициям, содержащим данную кристаллическую форму, и к их терапевтическому применению, в частности для лечения расстройств, опосредованных катепсином К.

Предпосылки создания изобретения

Папаин надсемейства цистеинпротеаз широко распространен в различных видах, включая млекопитающих, беспозвоночных, простейших, растения и бактерии. Количество ферментов катепсина млекопитающих, включая катепсины В, Г, Н, К, Ь, О и 8, были приписаны к этому надсемейству, и нефизиологическое регулирование их активности было вовлечено в ряд метаболических расстройств, включая артрит, мышечную дистрофию, воспаление, гломерулонефрит и инвазивную опухоль. Патогенные катепсинподобные ферменты включают бактериальные гингипаины, малярийные фальципаины I, II, III и т.д. и цистеинпротеазы из Рпеишосузбз саппи, Тгурапозоша сги/е1 и Ьгисе1, СгйЫШа ГилсикЛа, ЗеЫзЩзоша 8рр.

Нефизиологическое регулирование катепсина К вовлечено в ряд расстройств, включая остеопороз, заболевания десен, такие как гингивит и пародонтит, болезнь Педжета, гиперкальциемию при злокачественных опухолях и метастатические заболевания костей. В связи с его повышенными уровнями в хондрокластах остеоартритической синовиальной оболочки катепсин К вовлечен в заболевания, характеризуемые избыточным разрушением хряща или матрицы, такие как остеоартрит и ревматоидный артрит. Метастазы неопластических клеток обычно экспрессируют высокий уровень протеолитических ферментов, которые разрушают окружающие матрицы. Кроме того, такие заболевания связаны с высоким уровнем метаболизма костных тканей. Поэтому ингибирование катепсина К может помочь в предотвращении вторичных метастазов как путем релаксации внутренних перестроек кости или костной ткани, так и инвазивности раковых клеток.

В международной патентной заявке Ж') 2010/034788 раскрыт ряд ингибиторов цистеинпротеазы, включающий Н-[1-6-(этинил-3-оксогексагидрофуро[3,2-Ь]пиррол-4-карбонил)-3-метилбутил]-4-[5-фтор2-(4-метилпиперазин-1-ил)тиазол-4-ил]бензамид в форме свободного основания, которое описано в настоящем описании в примере 2. Это соединение и его свободное основание называются в настоящем описании соответственно как соединение I и свободное основание соединения I

Свободное основание соединения I.

Как подтверждено на с. 3 Ж') 2010/034788, ингибиторы цистеинпротеазы этой конкретной серии также могут существовать в форме гидратов. В отношении его использования в качестве фармацевтического средства свободное основание соединения I страдает рядом недостатков, связанных с его относительно низкой растворимостью и низкой термостабильностью.

Поэтому существует необходимость в форме соединения I, которая обладает одним или более из следующих свойств:

(1) высокой растворимостью в воде, (й) высокой степенью кристалличности, (ш) хорошей влагоустойчивостью, (ιν) хорошей термостабильностью.

Сущность изобретения

Согласно настоящему изобретению предоставлен кристаллический полиморф формы 2, состоящий из моногидрохлорида Н-[1-6-(этинил-3-оксогексагидрофуро[3,2-Ь]пиррол-4-карбонил)-3-метилбутил]-4[5-фтор-2-(4-метилпиперазин-1-ил)тиазол-4-ил]бензамида и моногидрохлорида Н-[1-6-(этинил-3оксогексагидрофуро[3,2-Ь]пиррол-4-карбонил)-3-метилбутил]-4-[5-фтор-2-(4-метилпиперазин-1-ил)тиазол-4-ил]бензамидгидрата.

Кристаллический полиморф формы 2 имеет улучшенный физико-химический профиль по сравнению со свободным основанием соединения I, с другими солевыми формами соединения I и с другими формами кристаллического полиморфа моногидрохлорида Н-[1-6-(этинил-3-оксогексагидрофуро[3,2Ь]пиррол-4-карбонил)-3-метилбутил]-4-[5-фтор-2-(4-метилпиперазин-1-ил)тиазол-4-ил]бензамида (такими как форма 1 кристаллического полиморфа) и, в частности, характеризуется высокой кристалличностью, хорошей влагоустойчивостью, хорошей термостабильностью и высокой растворимостью в воде. Соответственно он обладает весьма благоприятными свойствами для изготовления фармацевтических продуктов.

Краткое описание фигур

Настоящее изобретение проиллюстрировано со ссылкой на следующие фигуры.

- 1 032409

На фиг. 1 показана порошковая рентгенограмма образца кристаллического полиморфа формы 2.

На фиг. 2 показана порошковая рентгенограмма образца формы кристаллического полиморфа моногидрохлорида Ы-[1-6-(этинил-3-оксогексагидрофуро[3,2-Ь]пиррол-4-карбонил)-3-метилбутил]-4-[5фтор-2-(4-метилпиперазин-1-ил)тиазол-4-ил]бензамида, известного как форма 1 кристаллического полиморфа.

На фиг. 3 показана порошковая рентгенограмма образца кристаллической формы свободного основания соединения I.

На фиг. 4 показан 'Н ЯМР-спектр образца кристаллического полиморфа формы 2, растворенного в растворе ДМСО.

На фиг. 5 показан твердотельный ¹³С ЯМР-спектр образца кристаллического полиморфа формы 2.

На фиг. 6 показан твердотельный ¹³С ЯМР-спектр образца кристаллического полиморфа формы 2 после хранения в течение 1 недели при <2% ОВ.

На фиг. 7 показан твердотельный ¹³С ЯМР-спектр образца кристаллического полиморфа формы 2 после хранения в течение 1 недели при 75% ОВ.

На фиг. 8 показан твердотельный ¹³С ЯМР-спектр образца кристаллического полиморфа формы 2 после хранения в течение 1 недели при 80% ОВ.

На фиг. 9 показаны результаты ЯМР-эксперимента, осуществленного на образце кристаллического полиморфа формы 2, для исследования релаксации характера изменения сигналов ¹³С ЯМР, подвергаемых диагностическому тесту кетона и гидрата.

На фиг. 10 показаны результаты дополнительного ЯМР-эксперимента, осуществленного на образце кристаллического полиморфа формы 2, для определения различия между сигналами, подвергаемыми диагностическому тесту кетона и гидрата.

На фиг. 11 показаны капиллярные диаграммы порошковой дифракции рентгеновских лучей образцов из трех партий кристаллического полиморфа формы 2.

На фиг. 12 показан термический анализ образца кристаллического полиморфа формы 2 (верхний график представляет собой ЭЗС. и нижний график представляет собой ТСА).

На фиг. 13 показан термический анализ образца формы 1 кристаллического полиморфа (верхний график представляет собой ЭЗС. и нижний график представляет собой ТСА).

На фиг. 14 показан термический анализ образца кристаллического свободного основания соединения I (верхний график представляет собой ЭЗС. и нижний график представляет собой ТСА).

На фиг. 15 показан анализ гравиметрической сорбции паров (изображение ЭУ5> изменения массы) образца кристаллического полиморфа формы 2.

На фиг. 16 показан анализ гравиметрической сорбции паров (изображение изотермы ЭУ5>) образца кристаллического полиморфа формы 2.

На фиг. 17 показана диаграмма порошковой дифракции рентгеновских лучей образца кристаллического полиморфа формы 2, полученного с использованием методики примера 17 в больших масштабах.

Подробное описание изобретения

Растворимость в воде (т.е. гидрофильность) является важным физическим свойством фармацевтических средств, которое влияет на их фармакокинетику. Во многих обстоятельствах увеличение растворимости в воде является желательным.

Степень кристалличности является другим важным физическим свойством. В высшей степени кристаллизованные твердые вещества, как правило, проще обрабатывать (например, обладающие более стойкими физическими свойствами) по сравнению с аморфными или частично кристаллизованными твердыми веществами. Кроме того, точная кристаллическая форма может повлиять, например, на скорость растворения и стабильность (например, влагоустойчивость). Кристаллические формы твердых веществ часто имеют низкую растворимость в воде, например, по сравнению с аморфными формами.

Последовательность и надежность при фармацевтическом использовании имеют первостепенное значение как в контексте первоначального производства фармацевтической продукции, так и в последующий период до введения. Таким образом, термостабильность и влагоустойчивость являются важными физическими свойствами фармацевтических средств, поскольку они влияют на то, как агенты могут храниться и обрабатываться. Высокая термостабильность и влагоустойчивость желательны для того, чтобы избежать химических нарушений или изменений физической формы в ходе стадий обработки (например, химического синтеза, формулирования, уменьшения размера (при необходимости)) или при хранении.

- 2 032409

А

моногидрохлорид N-[1-6(этинил-3оксогексагидрофуро[3,2Ь]пиррол-4-карбонил)-3метилбутил]-4-[5-фтор-2(4-метилпиперазин-1ил)тиазол-4-ил]бензамида

моногидрохлорид N-[1-6(этинил-3оксогексагидрофуро[3,2Ь]пиррол-4-карбонил)-3метилбутил]-4-[5-фтор-2-(4метилпиперазин-1-ил)тиазол-4ил]бензамидгидрата

Кристаллический полиморф формы 2 характеризуется имеющейся порошковой рентгенограммой, по существу, такой, как показано на фиг. 1.

Кристаллический полиморф формы 2 существует в виде единой кристаллической фазы, состоящей из двух компонентов (А и В), как проиллюстрировано ниже.

Таким образом, настоящее изобретение предоставляет кристаллический полиморф формы 2, состоящий из моногидрохлорида №[1-6-(этинил-3-оксогексагидрофуро[3,2-Ь]пиррол-4-карбонил)-3метилбутил]-4-[5-фтор-2-(4-метилпиперазин-1-ил)тиазол-4-ил]бензамида и моногидрохлорида N-[1-6(этинил-3 -оксогексагидрофуро [3,2-Ь] пиррол-4-карбонил)-3-метилбутил] -4-[5 -фтор-2-(4-метилпиперазин1-ил)тиазол-4-ил]бензамидгидрата, имеющий диаграмму порошковой дифракции рентгеновских лучей, по существу, такую, как показано на фиг. 1.

Например, эта диаграмма имеет основные пики в положениях 6,8, 12,4, 14,9, 16,7, 17,0, 17,8, 24,1, 24,6, 24,8, 27,2, 28,2, 32,1 (±0,2°, значений 2θ), причем некоторые из этих сигналов характерны для кристаллического полиморфа формы 2.

Таким образом, настоящее изобретение предоставляет кристаллический полиморф формы 2, состоящий из моногидрохлорида №[1-6-(этинил-3-оксогексагидрофуро[3,2-Ь]пиррол-4-карбонил)-3метилбутил]-4-[5-фтор-2-(4-метилпиперазин-1-ил)тиазол-4-ил]бензамида и моногидрохлорида N-[1-6(этинил-3-оксогексагидрофуро[3,2-Ь]пиррол-4-карбонил)-3-метилбутил]-4-[5-фтор-2-(4-метилпиперазин1-ил)тиазол-4-ил]бензамидгидрата, имеющий порошковую рентгенограмму по меньшей мере с тремя (например, тремя, четырьмя, пятью, шестью, семью, восемью, девятью, десятью, одиннадцатью или всеми двенадцатью) сигналами при 6,8, 12,4, 14,9, 16,7, 17,0, 17,8, 24,1, 24,6, 24,8, 27,2, 28,2, 32,1 (±0,2°, значениях 2θ).

Сигналы при 6,8, 12,4, 14,9, 16,7, 17,8, 24,1, 24,6 и 24,8 имеют сравнительно высокую относительную интенсивность (более чем 30% - см. фиг. 1) и поэтому предпочтительно видны по меньшей мере три (например, три, четыре, пять, шесть, семь или все восемь) из этих пиков. Сигналы при 6,8, 14,9, 17,8, 24,1, 24,6 и 24,8 имеют особенно высокую относительную интенсивность (более чем 40% - см. фиг. 1), и поэтому предпочтительно видны по меньшей мере три (например три, четыре, пять или все шесть) из этих пиков.

Сигналы при 13,5, 19,0 и 23,9 (±0,2°, значениях 2θ) также имеют особенно высокую относительную интенсивность (более чем 40% - см. фиг. 1), и поэтому предпочтительно видны все три из этих пиков.

Кристаллический полиморф формы 2, полученный в широком масштабе согласно примеру 17, имеет порошковую рентгенограмму, по существу, такую, как показано на фиг. 17, которая хорошо согласуется с рентгенограммой, показанной на фиг. 1.

Подходящий кристаллический полиморф формы 2 имеет порошковую рентгенограмму, на которой отсутствуют сигналы, имеющие относительную интенсивность 10% или более при 3,9, 7,5 и 9,2 (±0,2°, значениях 2θ), которые присутствуют в спектре формы 1 кристаллического полиморфа (см. фиг. 2).

Кристаллический полиморф формы 2 кристаллизуется в ромбическую кристаллическую систему и характеризуется наличием Р212121 пространственной группы при температуре около 294°К и/или размерами элементарной ячейки а=7,5 А, Ь=15,3 А, с=26,3 А при температуре около 294°К.

Таким образом, настоящее изобретение предоставляет кристаллический полиморф формы 2, состоящий из моногидрохлорида №[1-6-(этинил-3-оксогексагидрофуро[3,2-Ь]пиррол-4-карбонил)-3метилбутил]-4-[5-фтор-2-(4-метилпиперазин-1-ил)тиазол-4-ил]бензамида и моногидрохлорида N-[1-6(этинил-3-оксогексагидрофуро[3,2-Ь]пиррол-4-карбонил)-3-метилбутил]-4-[5-фтор-2-(4-метилпиперазин1-ил)тиазол-4-ил]бензамидгидрата, где кристаллический полиморф формы 2 характеризуется наличием Р212121 пространственной группы при температуре около 294°К и/или размерами элементарной ячейки а=7,5 А, Ь=15,3 А, с=26,3 А при температуре около 294°К.

Несмотря на то, что кристаллический полиморф формы 2 состоит из двух различных структурных единиц (моногидрохлоридной формы кетона и гидрата соединения I) форма 2 полиморфа существует в виде единой кристаллической фазы. В пределах единой кристаллической фазы количественное отношение кетонной формы (А) в кристалле может быть больше, чем количественное отношение гидратной формы (В). В одном из вариантов осуществления молярное отношение кетонной формы к гидратной форме составляет от около 1:1 до около 4:1, например от около 1,2:1 до около 3:1, такое как около 50:50,

- 3 032409

51:49, 52:48, 53:47, 54:46, 55:45, 56:44, 57:43, 58:42, 59:41, 60:40, 61:39, 62:38, 63:37, 64:36, 65:35, 66:34, 67:33, 68:32, 69:31, 70:30, 71:29, 72:28, 73:27, 74:26, 75:25, 76:24, 77:23, 78:22, 79:21 или 80:20. В другом варианте осуществления молярное отношение кетонной формы к гидратной форме составляет от около 4:1 до около 5:1, например, 80:20, 81:19, 82:18, 83:17 или 84:16.

Таким образом, в одном аспекте настоящее изобретение предоставляет кристаллический полиморф формы 2, состоящий из моногидрохлорида №[1-6-(этинил-3-оксогексагидрофуро[3,2-Ь]пиррол-4карбонил)-3-метилбутил]-4-[5-фтор-2-(4-метилпиперазин-1-ил)тиазол-4-ил]бензамида и моногидрохлорида N-[1 -6-(этинил-3-оксогексагидрофуро [3,2-Ь] пиррол-4-карбонил)-3-метилбутил] -4-[5-фтор-2-(4метилпиперазин-1-ил)тиазол-4-ил]бензамидгидрата, где молярное отношение моногидрохлорида N-[1-6(этинил-3-оксогексагидрофуро[3,2-Ь]пиррол-4-карбонил)-3-метилбутил]-4-[5-фтор-2-(4-метилпиперазин1 -ил)тиазол-4-ил]бензамида к моногидрохлориду N-[1 -6-(этинил-3-оксогексагидрофуро[3,2-Ь]пиррол-4карбонил)-3-метилбутил]-4-[5-фтор-2-(4-метилпиперазин-1-ил)тиазол-4-ил]бензамидгидрата составляет от около 1:1 до около 4:1, например от около 1,2:1 до около 3:1, такое как около 50:50, 51:49, 52:48, 53:47, 54:46, 55:45, 56:44, 57:43, 58:42, 59:41, 60:40, 61:39, 62:38, 63:37, 64:36, 65:35, 66:34, 67:33, 68:32, 69:31, 70:30, 71:29, 72:28, 73:27, 74:26, 75:25, 76:24, 77:23, 78:22, 79:21 или 80:20. В другом аспекте настоящее изобретение предоставляет кристаллический полиморф формы 2, состоящий из моногидрохлорида N-[1 -6-(этинил-3-оксогексагидрофуро [3,2-Ь] пиррол-4-карбонил)-3-метилбутил] -4-[5-фтор-2-(4метилпиперазин-1-ил)тиазол-4-ил]бензамида и моногидрохлорида №[1-6-(этинил-3-оксогексагидрофуро [3,2-Ь] пиррол-4-карбонил)-3-метилбутил] -4-[5 -фтор-2-(4-метилпиперазин-1 -ил)тиазол-4-ил] бензамидгидрата, где молярное отношение моногидрохлорида №[1-6-(этинил-3-оксогексагидрофуро[3,2Ь]пиррол-4-карбонил)-3-метилбутил]-4-[5-фтор-2-(4-метилпиперазин-1-ил)тиазол-4-ил]бензамида к моногидрохлориду N-[1 -6-(этинил-3 -оксогексагидрофуро [3,2-Ь] пиррол-4-карбонил)-3-метилбутил] -4-[5фтор-2-(4-метилпиперазин-1-ил)тиазол-4-ил]бензамидгидрата составляет от около 4:1 до около 5:1, такое как 80:20, 81:19, 82:18, 83:17 или 84:16.

Отношение кетонной формы к гидратной форме может быть определено ¹³С ЯМР- или ¹Н ЯМРанализом, предпочтительно анализом твердотельного ¹³С ЯМР. Кристаллический полиморф формы 2, полученный согласно примеру 5, определяли на наличие отношения кетон:гидрат 67:33 (определенное анализом твердотельного ¹³С ЯМР, см. пример 11). Кристаллический полиморф формы 2, полученный согласно примеру 17, определяли на наличие отношения кетон:гидрат 82:18 (определенное анализом ¹Н ЯМР). Однако в случае, когда кристаллический полиморф формы 2, полученный различными способами, определяли на наличие различных отношений кетон:гидрат, диаграммы дифракции рентгеновских лучей, полученные из образцов данных веществ, были, по существу, одинаковыми, указывая на то, что точное отношение кетон:гидрат в форме 2 полиморфа не является ключевой особенностью характеристики вещества.

Как более подробно обсуждено в примерах, авторы настоящего изобретения идентифицировали другую кристаллическую полиморфную форму моногидрохлорида №[1-6-(этинил-3оксогексагидрофуро[3,2-Ь]пиррол-4-карбонил)-3-метилбутил]-4-[5-фтор-2-(4-метилпиперазин-1-ил)тиазол-4-ил]бензамида, которая может быть получена одним из способов, описанных в примере 8. Эта форма, называемая в данном описании как форма 1 кристаллического полиморфа, имеет порошковую рентгенограмму, по существу, такую, как показано на фиг. 2. Отношение кетона к гидрату в форме 1 кристаллического полиморфа не определяли.

Форма 1 кристаллического полиморфа обладает гораздо менее привлекательными свойствами, чем кристаллический полиморф формы 2, являясь менее термостабильной и менее растворимой в воде, и не составляет аспект настоящего изобретения.

Следует отметить, что номенклатура соединений, описанных в данном описании, может различаться. Свободное основание соединения I описано в данном описании как №[1-6-(этинил-3оксогексагидрофуро[3,2-Ь]пиррол-4-карбонил)-3-метилбутил]-4-[5-фтор-2-(4-метилпиперазин-1-ил)тиазол-4-ил]бензамид, но может быть также названо как №((8)-1-((3а8,6К,6аК)-6-этинил-3-оксотетрагидро2Н-фуро[3,2-Ь]пиррол-4(5Н)-ил)-4-метил-1-оксопентан-2-ил)-4-(5-фтор-2-(4-метилпиперазин-1-ил)тиазол-4-ил)бензамид. Во избежание сомнений оба названия соединения относятся к одной и той же химической структуре

Расхождение в составных названиях возникают из-за наличия двух разных конвенций для обозначения следующих бициклических фрагментов:

о

- 4 032409

Данный фрагмент может быть назван как 3-оксогексагидрофуро[3,2-Ь]пиррол или 3оксотетрагидро-2Н-фуро[3,2-Ь]пиррол. Во избежание сомнений оба названия относятся к одной и той же структуре.

Соответствующий кристаллический полиморф формы 2 имеет порошковую рентгенограмму, на которой отсутствуют сигналы, имеющие относительную интенсивность 10% или более при 4,0, 8,0, 20,8 и 22,7 (±0,2°, значениях 2θ), которые появляются в спектре кристаллической формы свободного основания (см. фиг. 3). Недостатки свободного основания соединения I были уже приведены и включают низкую растворимость в воде и низкую термостабильность.

Термин относительная интенсивность следует понимать как обозначение интенсивности, данной в процентах, как интенсивность сигнала высокой интенсивности в спектре, проиллюстрированном на фиг. 1-3.

Кристаллический полиморф формы 2 является необычным по структуре, поскольку он состоит из двух химических составляющих кетона и гидрата, той же самой кристаллической фазы в соотношении около 1:1 до около 4:1 или до около 5:1, например соотношении 2:1 или 82:18. Как описано в примере 11 и проиллюстрировано на фиг. 5-8, удивительно, отношение кетона к гидрату не изменяется, когда образцы кристаллического полиморфа формы 2 хранили при разных значениях относительной влажности. Кроме того, дополнительные эксперименты твердотельного ЯМР для определения релаксации зависимости спектра, не предоставили каких-либо свидетельств, что кетонные и гидратные формы находятся в различных фазах (пример 11 и фиг. 9 и 10). Анализ на гигроскопичность, использующий гравиметрическую сорбцию паров (пример 15), подтвердил удивительные выводы экспериментов твердотельного ЯМР (пример 11), что данная кристаллическая форма не подвергается риску изменения при воздействии влажности. Также обнаружено, что кристаллический полиморф формы 2 обладает существенно большей термостабильностью при сравнении с кристаллическим свободным основанием и формой 1 кристаллического полиморфа, а также очень высокой растворимостью.

Свободное основание соединения I может быть получено способом, представленным в νΟ 2010/034788 (содержание которого включено в настоящее описание посредством ссылки во всей его полноте) - см. пример 1.

Способ, который в основном подходит для получения свободного основания соединения I в крупном масштабе, описан в примере 16.

Моногидрохлорид N-[1 -6-(этинил-3 -оксогексагидрофуро [3,2-Ь]пиррол-4-карбонил)-3 -метилбутил] 4-[5-фтор-2-(4-метилпиперазин-1-ил)тиазол-4-ил]бензамида (моногидрохлоридная соль свободного основания соединения I) может быть получен взаимодействием свободного основания соединения I с хлористоводородной кислотой.

Различные способы получения кристаллического полиморфа формы 2 определены, как включающие:

(a) кристаллизацию из раствора в ацетоне, в частности, при медленном охлаждении (например, охлаждении от 50 до 20°С при 0,1°С/мин);

(b) кристаллизацию из раствора в РА, в частности, при циклическом изменении температуры. Подходящий температурный цикл включает цикличность от 50 до 0°С с 1-часовым линейным изменением;

(c) кристаллизацию из раствора в ацетоне, ГРАс, ЕЮАс или МЕК, в частности ,при циклическом изменении температуры. Подходящий температурный цикл включает цикличность от 50 и 20°С с 1часовым линейным изменением.

Таким образом, способ получения кристаллического полиморфа формы 2 включает взаимодействие свободного основания N-[1 -6-(этинил-3 -оксогексагидрофуро [3,2-Ь]пиррол-4-карбонил)-3 -метилбутил] -4[5-фтор-2-(4-метилпиперазин-1-ил)тиазол-4-ил]бензамида с хлористоводородной кислотой в присутствии растворителя, выбранного из ацетона, РА, РАс. ЕЮАс, ТГФ и МЕК (особенно ацетона) и кристаллизацию кристаллической формы из указанного растворителя. Кристаллизация может быть осуществлена в условиях медленного охлаждения или циклического изменения температуры.

В некоторых вариантах осуществления может быть предпочтительным получать кристаллический полиморф формы 2 способом, включающим кристаллизацию кристаллического полиморфа формы 2 из раствора моногидрохлорида N-[1 -6-(этинил-3 -оксогексагидрофуро [3,2-Ь]пиррол-4-карбонил)-3 метилбутил]-4-[5-фтор-2-(4-метилпиперазин-1-ил)тиазол-4-ил]бензамида в растворителе (например, в одном из приведенных выше) в присутствии затравочного количества кристаллического полиморфа формы 2.

Альтернативный пример способа включает затравку раствора свободного основания соединения I в ацетоне небольшим количеством кристаллического полиморфа формы 2 и добавление раствора хлористоводородной кислоты в ацетоне. Подходящей температурой для взаимодействия свободного основания соединения I с НС1 является примерно 50°С с последующим охлаждением до 5°С при 0,1°С/мин для активизации кристаллизации.

Кристаллизация может быть активизирована использованием антирастворителя, например ТВМЕ.

Таким образом, другой пример способа получения кристаллического полиморфа формы 2 включает кристаллизацию из раствора РА, ТГФ или ацетона с использованием ТВМЕ в качестве антирастворите

- 5 032409 ля.

В частности, такой способ может включать сначала образование моногидрохлорида Ν-[1-6-(3τηηηλ-

3- оксогексагидрофуро[3,2-Ь]пиррол-4-карбонил)-3-метилбутил]-4-[5-фтор-2-(4-метилпиперазин-1-ил)тиазол-4-ил]бензамида путем обработки раствора свободного основания соединения I в ацетоне с помощью НС1 в ацетоне, затравку небольшим количеством кристаллического полиморфа формы 2 и добавление ТВМЕ в качестве антирастворителя. Указанные стадии обычно осуществляют при температуре около 50°С с последующим охлаждением (как указано до 12°С).

Таким образом, в одном из вариантов осуществления предоставлен кристаллический полиморф формы 2, полученный перекристаллизацией из ацетона при медленном охлаждении (например, охлаждение от 50 до 20°С при 0,1°С/мин).

Способ, который является особенно подходящим для получения кристаллического полиморфа формы 2 в крупном масштабе (как подробно описано в примере 17), включает быстрое нагревание свободного основания соединения I в ацетоне, ТВМЕ и НС1 до 50°С. Полученный раствор затем затравливают небольшим количеством кристаллического полиморфа формы 2, что вызывает осаждение кристаллического полиморфа формы 2, которое дополнительно индуцируют добавлением ацетона и ТВМЕ в качестве антирастворителей. Полученную в результате суспензию затем быстро охлаждают до 10°С.

Таким образом, в одном из вариантов осуществления настоящее изобретение предоставляет способ получения кристаллического полиморфа формы 2, включающий:

(1) взаимодействие свободного основания №[1-6-(этинил-3-оксогексагндрофуро[3,2-Ь]пнррол-4карбонил)-3-метилбутил]-4-[5-фтор-2-(4-метилпиперазин-1-ил)тиазол-4-ил]бензамида с хлористоводородной кислотой в присутствии ацетона и ТВМЕ;

(и) затравку данного раствора кристаллическим полиморфом формы 2 и (ш) индуцирование кристаллизации добавлением ацетона и ТВМЕ.

Приведенные выше способы приводят к получению кристаллического полиморфа формы 2. Таким образом, в одном из вариантов осуществления предоставлен кристаллический полиморф формы 2, полученный способом, описанным выше.

Как отмечено выше, моногидрохлорид №[1-6-(этинил-3-оксогексагидрофуро[3,2-Ь]пнррол-4карбонил)-3-метилбутил]-4-[5-фтор-2-(4-метилпиперазин-1-ил)тиазол-4-ил]бензамида существует в некоторых представляющих меньший интерес полиморфных формах, которые могут быть получены следующими способами:

моногидрохлорид N-[1 -6-(этинил-3 -оксогексагидрофуро [3,2-Ь]пиррол-4-карбонил)-3 -метилбутил] -

4- [5-фтор-2-(4-метилпиперазин-1-ил)тиазол-4-ил]бензамида в аморфной форме может быть получен обработкой раствора свободного основания соединения I в 1РАс раствором хлористоводородной кислоты в диоксане при КТ;

моногидрохлорид N-[1 -6-(этинил-3 -оксогексагидрофуро [3,2-Ь]пиррол-4-карбонил)-3 -метилбутил] 4-[5-фтор-2-(4-метилпиперазин-1-ил)тиазол-4-ил]бензамида в кристаллической полиморфной форме 1 может быть получен кристаллизацией охлаждением из горячего ТГФ (например, при 50°С) (например, 4 об.) в присутствии воды (1% об./об.) с охлаждением.

Соответственно при получении кристаллического полиморфа формы 2 следует избегать условий, в которых образуются эти другие нежелательные формы.

Можно ожидать, что кристаллический полиморф формы 2 может быть использован при лечении расстройств, опосредованных катепсином К.

В другом аспекте настоящего изобретения предоставлено применение кристаллического полиморфа формы 2 в качестве медицинского средства. Также предоставлено применение кристаллического полиморфа формы 2 при производстве медицинского средства для лечения расстройств, опосредованных катепсином К. Дополнительно предоставлен способ лечения расстройства, опосредованного катепсином К, включающий введение безопасного и эффективного количества кристаллического полиморфа формы 2.

В одном из вариантов осуществления подходящий уровень дозирования для кристаллического полиморфа формы 2 составляет интервал 0,01-100 мкМ, такой как 0,01-10 или 0,1-25 мкМ.

Особые расстройства, которые могут быть опосредованы катепсином К, включают остеопороз;

заболевания десен, такие как гингивит и пародонтит;

болезнь Педжета;

гиперкальциемию при злокачественных опухолях;

метастатические заболевания костей, например рак костей, включая неоплазию;

заболевания, характеризуемые избыточным разрушением хряща или матрицы, такие как остеоартрит и ревматоидный артрит;

и боль.

Расстройства при остеопорозе, метастатическом заболевании костей, таком как рак костей, остеоартрите и ревматоидном артрите, особенно при остеопорозе или остеоартрите, представляют особенный интерес.

Таким образом, в одном из вариантов осуществления расстройством, опосредованным катепсином

- 6 032409

К, является остеопороз. В другом варианте осуществления расстройством, опосредованным катепсином К, является метастатическое заболевание костей, например рак костей, включая неоплазию. В другом варианте осуществления расстройством, опосредованным катепсином К, является остеоартрит. В другом варианте осуществления расстройством, опосредованным катепсином К, является ревматоидный артрит.

Хотя кристаллический полиморф формы 2 может быть введен отдельно, обычно он будет представлен в виде фармацевтической композиции. Такая композиция будет содержать кристаллический полиморф формы 2 вместе с одним или более фармацевтически приемлемыми эксципиентами. Указанные фармацевтически приемлемые эксципиенты должны быть подходящими для введения и быть совместимыми с другими ингредиентами данной композиции.

Дополнительным аспектом настоящего изобретения поэтому является фармацевтическая композиция, содержащая кристаллический полиморф формы 2 и один или более фармацевтически приемлемых разбавителей или носителей.

Композиции включают такие, которые подходят для перорального, ректального, назального, локального (включая буккальное и подъязычное), вагинального или парентерального (включая подкожное, внутримышечное введение, внутривенное и внутрикожное) введения. Подходящей фармацевтической композицией является состав для перорального введения. Композиции обычно могут быть предоставлены в единичной дозированной форме (например, в форме таблеток и капсул длительного высвобождения) и могут быть получены любым из способов, известных в области фармацевтики.

Такие способы включают стадию объединения кристаллического полиморфа формы 2 с одним или более фармацевтически приемлемыми разбавителями или носителями. Как правило, композиции получают путем равномерного и тесного объединения кристаллического полиморфа формы 2 с жидкими носителями или мелко измельченными твердыми носителями или обоими и последующего при необходимости формования данного продукта.

В дополнительном аспекте предоставлен способ получения фармацевтической композиции, включающий объединение кристаллического полиморфа формы 2 с одним или более фармацевтически приемлемыми разбавителями или носителями.

Соответствующим образом разовая доза (фармацевтической композиции, содержащей кристаллический полиморф формы 2) будет содержать около 25-200 мг кристаллического полиморфа формы 2 в зависимости от предполагаемого показания и режима дозирования, такого как около 50-100 или 75-125 мг. При остеопорозе показанная дозированная единица около 100 мг обычно удобна при ОЭ (ежедневном) режиме дозирования. В одном из вариантов осуществления фармацевтическая композиция содержит кристаллический полиморф формы 2 и один или более фармацевтически приемлемых разбавителей или носителей в соотношении (мас./мас.) от около 1:2 до 1:100, таком как от около 1:2 до 1:50, от около 1:2 до 1:20 или от около 1:3 до 1:10 (кристаллический полиморф формы 2:один или более фармацевтически приемлемых разбавителей или носителей).

Режим дозирования для продуктов, содержащих кристаллический полиморф формы 2, будет, как правило, выбираться врачом, принимая во внимание обычные факторы состояния пациента и предполагаемые показания. Предусмотрены обычные режимы ΒΙΌ (дважды в день) и ΤΙΌ (трижды в день). Однако ΌΜΡΚ (лекарственный метаболизм и фармакокинетика) кристаллического полиморфа формы 2 и соединения I поддаются ОЭ режиму дозирования, который является преимущественным не только с точки зрения соблюдения пациентом, но также потому, что один день дозирования дает возможность происходить суточному импульсному выбросу РТН, способствуя анаболическому костному росту. Соответственно аспект настоящего изобретения предоставляет адаптированную дозированную единицу для ОЭ введения и подходящую для показаний, таких как остеопороз, такую как дозированная единица, содержащая примерно 100 мг кристаллического полиморфа формы 2 и один или более фармацевтически приемлемых носителей или эксципиентов.

Составы для перорального введения в настоящем изобретении могут быть предоставлены в виде дискретных единиц, таких как капсулы, облатки или таблетки, каждая из которых содержит заданное количество активного ингредиента; как порошок или гранулы; как раствор или суспензия активного ингредиента в водной жидкости или неводной жидкости или как жидкая эмульсия масло-в-воде или жидкая эмульсия вода-в-масле и как болюс, и т.д.

Что касается композиций для перорального введения (например, таблеток и капсул), термин эксципиент включает связующие агенты, например сироп, камедь, желатин, сорбит, трагакант, поливинилпирролидон (повидон), метилцеллюлозу, этилцеллюлозу, натрийкарбоксиметилцеллюлозу, гидроксипропилметилцеллюлозу, сахарозу и крахмал; наполнители и носители, например кукурузный крахмал, желатин, лактозу, сахарозу, микрокристаллическую целлюлозу, каолин, маннит, диалюминийфосфат, хлорид натрия и альгиновую кислоту; и смазывающие вещества, такие как стеарат магния, стеарат натрия и другие стеараты металлов, глицеринстеарат стеариновой кислоты, жидкие силиконы, тальк, воски, масла и коллоидный диоксид кремния. Также могут быть использованы придающие вкус вещества, такие как мята перечная, винтергреновое масло, ароматизаторы вишни или подобные. Могут потребоваться для добавления придающие окраску вещества, чтобы сделать лекарственные формы легко идентифицируемыми. На таблетки также могут быть нанесены покрытия способами, хорошо известными в данной об

- 7 032409 ласти техники.

Таблетку можно изготовить прессованием или формованием литьем, необязательно с одним или более вспомогательными ингредиентами. Спрессованные таблетки могут быть получены прессованием в подходящей машине кристаллического полиморфа формы 2 в свободной текучей форме, такой как порошок или гранулы, необязательно смешанной со связующим, смазывающим веществом, инертным разбавителем, консервантом, поверхностно-активным или диспергирующим веществом. Формованные таблетки могут быть изготовлены формованием литьем в подходящей машине смеси порошкообразного соединения, смоченной жидким инертным разбавителем. Таблетки могут быть необязательно покрытыми или с риской и могут быть сформулированы таким образом, чтобы обеспечивать медленное или контролируемое высвобождение активного вещества.

Другие сформулированные составы, подходящие для перорального введения, включают таблетки для рассасывания, содержащие кристаллический полиморф формы 2 на ароматизированной основе, обычно на сахарозе и камеди или трагаканте; пастилки, содержащие кристаллический полиморф формы 2 в инертной основе, такой как желатин и глицерин, или сахарозе и камеди; и ополаскиватели для полости рта, содержащие кристаллический полиморф формы 2 в подходящем жидком носителе.

Соответствующие уровни дозирования для кристаллического полиморфа формы 2 будут зависеть от данного показания и индивидуальности пациента, подвергаемого лечению. Подходящие дозировки могут быть определены по данным обычных испытаний на животных. Обычно желательными и достижимыми являются дозировки, обеспечивающие внутриклеточные (для ингибирования физиологических протеаз надсемейства папаина) концентрации порядка 0,01-100 мкМ, такие как 0,01-10 или 0,1-25 мкМ.

При использовании в качестве медицинского средства преимущественным для кристаллического полиморфа формы 2 может быть введение в комбинации с одним или более дополнительными фармацевтически активными средствами. Такие дополнительные фармацевтически активные средства соответственно будут выбраны в зависимости от расстройства, подвергаемого лечению. Кристаллический полиморф формы 2 и дополнительное фармацевтически активное средство могут быть введены одновременно, последовательно или в различное время одними и теми же или различными путями введения.

Когда соответствующие режимы введения возможны, кристаллический полиморф формы 2 и дополнительное фармацевтически активное средство могут быть сформулированы вместе в фармацевтическую комбинацию.

Кристаллический полиморф формы 2, например, может быть использован в комбинации с известными средствами, полезными при лечении или предотвращении остеопороза, индуцированного глюкокортикоидами остеопороза, болезни Педжета, аномально повышенных внутренних перестроек кости или костной ткани, заболеваний пародонта, потери зубов, переломов костей, атеросклероза, ожирения, паразитарных инфекций, ревматоидного артрита, артроза, перипротезного остеолиза, недостаточного остеогенеза, метастатических заболеваний костей, гиперкальциемии при злокачественных новообразованиях и множественной миеломы. Поэтому комбинации кристаллического полиморфа формы 2 с другими средствами, полезными при лечении или предотвращении остеопороза или других костных расстройств, считаются входящими в объем настоящего изобретения.

Специалист в данной области техники сможет установить, какая комбинация средств будет полезна, основываясь на конкретных характеристиках лекарственных средств и затрагиваемой болезни. Такие средства включают следующие: органические бисфосфонаты; модуляторы эстрогеновых рецепторов; модуляторы андрогенных рецепторов; ингибиторы протонных остеокластов АТФазы; ингибиторы НМОСоА-редуктазы; антагонисты рецепторов интегрина; витамин Ό или его аналоги, анаболические средства остеобластов, такие как РТН; селективный ингибитор циклооксигеназы-2 (СОХ-2 ингибитор); ингибиторы интерлейкина-1-бета; ЬОХ/СОХ ингибиторы, КАИКЬ ингибиторы; антитела против склеростина и их фармацевтически приемлемые соли и смеси.

Модуляторы андрогенных рецепторов относятся к соединениям, которые препятствуют или ингибируют связывание андрогенов с рецептором, независимо от механизма. Примеры модуляторов андрогенных рецепторов включают финастерид и другие ингибиторы 5сс-редуктазы, нилютамид, флутамид, бикалютамид, лиарозол и абиратерона ацетат.

Ингибиторы протонных остеокластов АТФазы относятся к ингибитору протонной АТФазы, которая обнаруживается на апикальной мембране остеокластов и, как сообщалось, играет значительную роль в процессе полной резорбции кости. Этот протонный насос представляет собой привлекательную мишень для создания ингибиторов резорбции костей, которые будут потенциально полезны для лечения и предотвращения остеопороза и связанных с метаболизмом заболеваний (см. С. Раппа с1 а1., 8с1ссИус ίηΙιίόίΙοίΈ о£ 1йс О81еос1а81 уасио1ат ρτοΐοη АТРакс ак иоуе1 Ьоие аийтскотрЦус адспк ΌΌΤ, 4: 163-172 (1999)), которая включена в данное описание посредством ссылки во всей ее полноте.

Ингибиторы НМО-СоА редуктазы относятся к ингибиторам 3-гидрокси-3-метилглутарил СоА редуктазы. Соединения, которые обладают ингибирующей активностью в отношении НМО-СоА редуктазы, могут быть легко определены с использованием анализов, хорошо известных в данной области. Например, см. анализы, описанные или цитируемые в патенте США 4231938 на с. 6 и \УО 84/02131 на с. 3033. Термины ингибитор НМО-СоА редуктазы и ингибитор !О-СоА редуктазы имеют такие же значе

- 8 032409 ния, как используется в данном описании.

Примеры ингибиторов НМС-СоЛ редуктазы, которые могут быть использованы, включают, но, не ограничиваясь ими, ловастатин (МЕУАСОК; см. патенты США 4231938, 4294926 и 4319039), симвастатин-19 (2ОСОК); см. патенты США 4444784, 4820850 и 4916239), правастатин (РКАУАСНОЬ; см. патенты США 4346227, 4537859, 4410629, 5030447 и 5180589), флувастатин (ЬЕ§СОЬ); см. патенты США 5354772, 4911165, 4929437, 5189164, 5118853, 5290946 и 5356896), аторвастатин (1.ПТГОК; см. патенты США 5273995, 4681893, 5489691 и 5342952) и серивастатин (также известный как ривастатин и ΒΑΥСНОЬ; см. патент США 5177080). Структурные формулы этих и дополнительных ингибиторов НМССоА редуктазы, которые могут быть использованы в настоящих способах, описаны на с. 87 М. Υαίραηί. С’1ю1с51сго1 Ьо\\'спп§ Игидв , СНешЩгу & 1пйи81гу, рр. 85-89 (5 ЕеЬгиагу 1996) и в патентах США 4782084 и 4885314. Термин ингибитор НМС-СоА редуктазы, как используется в данном описании, включает все фармацевтически приемлемые лактонные и открытые кислотные формы (т.е. когда лактоновое кольцо открыто, формируется свободная кислота), а также солевые и сложноэфирные формы соединений, которые обладают ингибирующей НМС-СоА редуктазу активностью, и поэтому применение таких солевых, сложноэфирных, открытых кислотных и лактонных форм включено в объем настоящего изобретения.

В ингибиторах НМС-СоА редуктазы, где может существовать открытая кислотная форма, солевые и сложноэфирные формы предпочтительно могут быть сформированы из открытой кислоты, и все такие формы включены в значение термина ингибитор НМС-СоА редуктазы, как используется в данном описании.

Предпочтительно ингибитор НМС-СоА редуктазы выбран из ловастатина и симвастатина и наиболее предпочтительно из симвастатина. В данном описании термин фармацевтически приемлемые соли, что касается ингибитора НМС-СоА редуктазы, должны означать нетоксичные соли соединений, применяемых в настоящем изобретении, которые, как правило, получают взаимодействием свободной кислоты с подходящим органическим или неорганическим основанием, особенно с таким, которое образовано из катионов, таких как катионы натрия, калия, алюминия, кальция, лития, магния, цинка и тетраметиламмония, а также соли, образованные из аминов, таких как аммиак, этилендиамин, Ν-метилглюкамин, лизин, аргинин, орнитин, холин, Ν,Ν'-дибензилэтилендиамин, хлорпрокаин, диэтаноламин, прокаин, Νбензилфенетиламин, 1-п-хлорбензил-2-пирролидин-1'-ил-метилбензимидазол, диэтиламин, пиперазин и трис(гидроксиметил)аминометан. Следующие примеры солевых форм ингибиторов НМС-СоА редуктазы могут включать, но, не ограничиваясь ими, ацетат, бензолсульфонат, бензоат, бикарбонат, бисульфат, битартрат, борат, бромид, кальцийэдетат, камзилат, карбонат, хлорид, клавуланат, цитрат, дигидрохлорид, эдетат, эдисилат, эстолат, эсилат, фумарат, глюцептат, глюконат, глутамат, гликоллиларсанилат, гексилрезорцинат, гидрабамин, гидробромид, гидрохлорид, гидроксинаптоат, йодид, изотионат, лактат, лактобионат, лаурат, малат, малеат, манделат, мезилат, метилсульфат, мукат, напзилат, нитрат, олеат, оксалат, памаоат, палмитат, пантотенат, фосфат/дифосфат, полигалактуронат, салицилат, стеарат, субацетат, сукцинат, таннат, тартрат, теоклат, тозилат, триэтилйодид и валерат.

Сложноэфирные производные описываемых соединений ингибиторов НМС-СоА редуктазы могут действовать в качестве пролекарств, которые, когда всасываются в кровь теплокровных животных, могут расщепляться таким образом, что высвобождают форму лекарственного средства и дают возможность лекарственному средству проявить улучшенную терапевтическую эффективность.

Как использовано выше, антагонисты рецепторов интегрина относятся к соединениям, которые селективно вызывают антагонизм, ингибируют или противодействуют связыванию физиологического лиганда с альфа-у-бета-3 интегрином, к соединениям, которые селективно вызывают антагонизм, ингибируют или противодействуют связыванию физиологического лиганда с альфа-у-бета-5 интегрином, к соединениям, которые вызывают антагонизм, ингибируют или противодействуют связыванию физиологического лиганда как с альфа-у-бета-3 интегрином, так и альфа-у-бета-5 интегрином, и к соединениям, которые вызывают антагонизм, ингибируют или противодействуют активности особого(ых) интегрина(ов), экспрессированного(ых) на капиллярных эндотелиальных клетках. Данный термин также относятся к антагонистам альфа-у-бета-6, альфа-у-бета-8, альфа-1-бета-1, альфа-2-бета-1, альфа-6-бета-1 и альфа-6-бета-4 интегринов. Данный термин также относятся к антагонистам любой комбинации альфа-убета-3, альфа-у-бета-5, альфа-у-бета-6, альфа-у-бета-8, альфа-1-бета-1, альфа-2-бета-1, альфа-5-бета-1, альфа-6-бета-1 и альфа-6-бета-4 интегринов. Н.К Ьойе и соавторы в РНА8 И8А 96: 1591-1596 (1999) обследовали синергические эффекты между антиангиогенными антагонистами альфа-ν интегрина и слитым белком опухольспецифического антитела цитокинов (интерлейкин-2) при радикальном удалении метастатической опухоли. Их результаты показали, что такая комбинация имеет потенциал при лечении рака и роста метастатических опухолей. Антагонисты рецептора альфа-\'-бета-3 интегрина ингибируют резорбцию костей по собственному новому механизму, отличному от всех доступных в настоящее время лекарственных средств. Интегрины являются гетеродимерными трансмембранными рецепторами адгезии, которая опосредована клетка-клеточным и клетка-матричным взаимодействием. Субъединицы альфа-т-бета-3 интегрина нековалентно взаимодействуют и связывают лиганды внеклеточного матрикса двухвалентным катионзависимым образом. Наиболее распространенным интегрином на остеокластах

- 9 032409 является альфа-у-бета-3 (>107/остеокласт), который, как представляется, играет скоростьлимитирующую роль в структуре цитоскелета, важной для поляризации и миграции клеток. Антагонистический эффект альфа-у-бета-3 выбран из ингибирования резорбции костей, ингибирования рестеноза, ингибирования макулярной дегенерации, ингибирования артрита и ингибирования рака и роста метастазов.

Анаболические средства остеобластов относятся к средствам, которые строят костную ткань, таким как РТН. Прерывистое введение паратиреоидного гормона (РТН) или его аминоконцевого фрагмента и аналогов показано для предотвращения, остановки, вызывания обратного развития частичной костной потери и стимулирования формирования костной ткани в организме человека и животных. Для обсуждения можно сослаться на 1).Ш. Иетр§!ег е! а1., АпаЬойе ае!юп§ о£ рага!йуго1б йогтопе оп Ьопе, Епбосг Кеу 14: 690-709 (1993). Исследования показали клинические преимущества паратиреоидного гормона в стимулировании и формировании костной ткани, тем самым увеличивая костную массу и ее силу. О результатах сообщалось КМ. Иеег е! а1., в Νο'\ν Епд I Меб 344 1434-1441 (2001).

Селективный ингибитор циклооксигеназы-2, или ингибитор СОХ-2, относится к типу нестероидных противовоспалительных лекарственных средств (Ν8ΑΙΏ), которые ингибируют СОХ-2 коэнзим, что приводит к боли и воспалениям в организме. Неограничивающие примеры ингибиторов СОХ-2 включают целекоксиб, эторикоксиб, парекоксиб, рофекоксиб, лунарикоксиб и валдекоксиб.

Кроме того, паратиреоидный гормонсвязанный белковый фрагмент или аналог, такой как РТНгР (136), продемонстрировал мощный кальциурический эффект (см. М.А. 8уеб е! а1., Рага!йуго1б йогтопеге1а!еб рго!ет-(1-36) 8!1ти1а!е§ гепа1 !иЬи1аг еа1ешт геаЬзогрЕоп ш погта1 йитап уо1ип!еег§: 1трНеа!юп8 £ог !йе ра!йо§епе§18 о£ йитога1 йурегеа1еет1а о£ тайдпапеу, .1С1М 86: 1525-1531 (2001)) и может также иметь потенциал в качестве анаболического средства для лечения остеопороза.

Предпочтительная комбинация согласно настоящему изобретению включает совместное дозирование кристаллического полиморфа формы 2 одновременно или последовательно с паратиреоидным гормоном (РТН) или его фрагментом, таким как РТНгР (1-36).

В одном из вариантов осуществления кристаллический полиморф формы 2 и одно или более фармацевтически активных средств оба вводят перорально. В другом варианте осуществления кристаллический полиморф формы 2 вводят перорально, и одно или более фармацевтически активных средств вводят посредством внутривенного введения.

Специалисту в данной области техники будет понятно, что термин лечение также может распространяться на профилактику.

Аббревиатуры

ΙΡΑ изопропиловый спирт

1РАс Изопропилацетат

ЭСМ Дихлорметан

ТВМЕ простой трет-бутилметиловый эфир

МЕК метилэтилкетон (2-бутанон)

ΜΙΒΚ Метилизобутилкетон

ТГФ Тетрагидрофуран

ТЕА трифторуксусная кислота

ОВ относительная влажность

КТ комнатная температура (обычно 20°С) ч Час мин Минута

Примеры

Общие методы.

Порошковая дифракция рентгеновских лучей (ХКРИ).

ХКРИ дифрактограммы снимали или на дифрактометре Вгикег АХ8 С2 ΘΑΏΏ8, либо Вгикег АХ8 Ώ8 Абуапее.

Диаграммы порошковой дифракции рентгеновских лучей на дифрактометре Вгикег АХ8 С2 САИП8 снимали с использованием Си Κα излучения (40 кВ, 40 мА), автоматизированной ХУ/ ступени, лазерного видеомикроскопа для автодозаторного позиционирования и детектора Н18!аг 2-мерной площади. Рентгеновская оптика состояла из одного СоЬе1 многослойного зеркала в сочетании с точечным коллиматором 0,3 мм.

Расходимость пучка, т.е. эффективный размер рентгеновского пучка на образце, составляла около 4 мм. Режим непрерывного сканирования θ-θ работал на расстоянии детектора от образца 20 см, которое дает эффективный диапазон 2Θ 3,2-29,7°. Как правило, образец должен подвергаться облучению рентгеновским пучком в течение 120 с.

Образцы, обработанные при температуре окружающей среды, получали в виде плоских образцов с использованием порошка, как получено без измельчения. Приблизительно 1-2 мг образца слегка прижи

- 10 032409 мали предметным стеклом для получения ровной поверхности.

Диаграммы порошковой дифракции рентгеновских лучей образцов, снятые на дифрактометре Вгикег АХ8 Ό8 Абуапсе, снимали с использованием Си Κα излучения (40 кВ, 40 мА), θ-2θ гониометра, отклонения У4 и приемных щелей, Се монохроматора и детектора Ьуихеуе. Данные собирали в угловом диапазоне 2-42° 2Θ при использовании шагового размера 0,05° 2Θ и времени сбора 0,5 с/шаг.

Образцы, обработанные при температуре окружающей среды, получали в виде плоских образцов с использованием порошка, как получено. Образцом аккуратно заполняли полости, прорезанные в полированных силиконовых пластинах с нулевым удерживанием фона (510).

Образцы, обработанные при температуре окружающей среды, получали в виде плоских образцов с использованием порошка, как получено без измельчения. Приблизительно 25-50 мг образца аккуратно заполняли полости, прорезанные в полированных кремниевых пластинах с нулевым удерживанием фона (510), диаметром 12 мм, глубиной 0,5 мм (Тйе Сет Эидоик 1652 Ргтсекоп Опус, РепикуКаша Зкаке Со11еде, РА 16803, ИЗА).

ХРРЭ капиллярные исследования проводили с использованием дифрактометра Вгикег Ό8 высокого разрешения с использованием указанных выше параметров. Полученные данные обрабатывали с использованием программного обеспечения Окйгас Р1и§ ΧΚΌ Соттапбег ν2.6.1 и визуализировали с использованием программного обеспечения ΩίΓΓπκ Р1и§ ЕУА ν 13.0.0.2 или ν15.0.0.0. Все образцы (капилляры) были закрыты и обработаны при комнатной температуре.

¹Н ЯМР (жидкофазный).

Спектр жидкофазного ЯМР снимали на приборе Вгикег 400ΜΗζ, оборудованном автодозатором и контролирующей ΌΚΧ400 панелью. Автоматизированные эксперименты проводили с использованием регистрирующего устройства ΙΟΟΝ-ЯМР ν4.0.7 совместно с Торкрш ν1.3 на основе стандарта Вгикег для проводимых экспериментов. Для нестандартной спектроскопии данные получали только с помощью Торкрт.

Образцы получали в ДМСО-б₆, если не указано иное. Автономный анализ осуществляли с использованием Торкрт ν1.3 или АСЭ ЗресМападег ν12.5.

¹³С ЯМР (твердотельный).

Данный анализ осуществляли с использованием прибора Уапап νΝΜΚ8, работающего при 100,56 МГц для ¹³С (399,88 МГц для 1Н) и 376,24 МГц для ¹⁹Е с 4 мм (в.д. ротора) с вращением образца под магическим углом. Спектр углерод-13 снимали с образца с использованием технологии кроссполяризации при вращении образца под магическим углом (СРМАЗ) без и с дипольными фазовыми сдвигами (прерывистая развязка). Соответствующие установленные условия создавали с помощью набора коротких пробных измерений: рецикл 5 с, время контакта 5 мс. Использовали только образец со скоростью вращения 10,0 кГц с двухимпульсной фазомодуляцией (ТРРМ) 1Н развязкой (в радиочастотной области, приблизительно эквивалентной 75 кГц). Образец запускали, как получен, и при температуре окружающей среды зонда (-30°С на этой скорости вращения). Спектры указаны относительно чистого тетраметилсилана (путем установки линии высокой частоты адамантана при 38,5 м.д.). Спектр ¹⁹Е получали прямым возбуждением после 3,6 мкс импульса 90°, с 60 с задержкой релаксации водородных связей, на скорости вращения 14 кГц и без 1Н развязки. Спектр указан относительно СЕС13.

Данный анализ осуществляли с использованием прибора Уапап νΝΜΚ8, работающего при 100,56 МГц для ¹³С (399,88 МГц для 1Н) и под 6 мм (в.д. ротора) магическим углом вращения пробы. Спектр углерод-13 записывали с образца с использованием методики кроссполяризации с магическим углом вращения (СРМАЗ). Соответствующие установленные условия создавали с помощью набора коротких пробных измерений: рецикл 4 с, время контакта 3 мс. Образец со скоростью вращения 6,8 кГц использовали в ходе двухимпульсной фазомодуляции (ТРРМ) ¹Н развязки (в радиочастотной области приблизительно эквивалентной 54 кГц). Низкую скорость вращения использовали в данном случае по сравнению с предварительными значениями измерений, поскольку в спектрах присутствуют боковые полосы частот вращения, но они, по существу, не препятствуют ключевым сигналам центральных полос. Спектры указывали относительно чистого тетраметилсилана (путем установки линии высокой частоты адамантана при 38,5 м.д.).

Термодинамическая растворимость в воде.

Растворимость в воде определяли соответствующим суспендированием соединения в воде для получения конечной максимальной концентрации >10 мг-мл^-1, свободной от родительской формы соединения. Суспензию уравновешивали при 25°С в течение 24 ч, затем измеряли рН. Суспензию затем фильтровали через стеклянный волокнистый фильтр С в 96-луночный планшет. Фильтрат затем разводили фактором 101. Количественный анализ осуществляли ВЭЖХ со ссылкой на стандартный раствор приблизительно 0,25 мг-мл^-1 в ДМСО. Вводили различные объемы стандартного разведенного и неразведенного растворов образца. Растворимость рассчитывали с использованием областей пиков, определенных интеграцией пиков, обнаруженных при том же самом времени удерживания, как и основной пик, при введении стандартной пробы.

- 11 032409

Таблица 1 Параметры метода ВЭЖХ для измерений растворимости

Анализ проводили на системе Адйеи! серии НР1100, оснащенной детектором на диодной матрице и с использованием Сйеш81а11ои программного обеспечения νΒ.02.01-8Κ1.

Дифференциальная сканирующая колометрия (И8С).

Данные И8С снимали на приборе МеШег И8С 823е, оснащенном 34-позиционным автодозатором (образцов). Прибор откалибровали для энергетики и температуры с использованием сертифицированного индия. Как правило, 0,5-3 мг каждого из образцов в алюминиевой кювете с игольчатыми отверстиями нагревали при 10°С/мин от 25 до 300°С. Образец выдерживали в токе азота при 50 мл/мин.

Программное обеспечение 8ТЛКе ν9.20 использовали для контроля прибора и данных анализа. Термогравиметрический анализ (ТОЛ).

Данные ТОА снимали на приборе МеШег ΤΘΆ/8ΌΤΆ 851е, оснащенном 34-позиционным автодозатором. Прибор откалибровали для температуры с использованием сертифицированного индия. Как правило, 5-30 мг каждого из образцов размещали в предварительно взвешенном алюминиевом тигеле и нагревали при 10°С/мин от температуры окружающей среды до 400°С. Образец выдерживали в токе азота при 50 мл/мин.

Программное обеспечение 8ТАКе ν9.20 использовали для контроля прибора и данных анализа.

Гравиметрическая сорбция паров (ОУ8).

Сорбционные изотермы получали с использованием сорбционного анализатора влажности 8М8 ИУ8 Шпизю, контролируемого ИУ8 Σηΐππδκ Соп!го1 программным обеспечением ν1.0.0.30. Температуру образца поддерживали при 25°С контрольным прибором. Влажность контролировали путем смешивания потоков сухого и влажного азота при общей скорости потока 200 мл/мин. Относительную влажность измеряли калиброванным ротронным зондом (динамический диапазон 1,0-100% ОВ), расположенным вблизи образца. Изменение массы (релаксация массы) образца как функция % ОВ, постоянно мониторили микровзвешиванием (точность ±0,005 мг).

Как правило, 5-20 мг образца помещали во взвешенный сетчатый конус из нержавеющей стали при температуре окружающей среды. Образец загружали и выгружали при 40% ОВ и 25°С (обычно комнатные условия). Изотерму сорбционной влажности получали, как указано ниже (2 сканирования, давая 1 полный цикл). Стандартную изотерму получали при 25°С при 10% интервалах ОВ в диапазоне около 090% ОВ. Данные анализа приведены в Мюгозой Ехсе1 с использованием пакета ИУ8 для анализов У6.0.0.7.

- 12 032409

Таблица 2

Параметры способов 8Μ8 ΌΥ8 истинных экспериментов

Параметры	Значения
Адсорбция - Сканирование 1	40-90
Десорбция/Адсорбция - Сканирование 2	90-0,0-40
Интервалы (% ОВ)	10
Число сканирований	2
Скорость потока (мл/мин)	200
Температура (°С)	25
Стабильность (°С/мин)	0,2
Время сорбции (часы)	6 час время ожидания

Образец записывали после завершения анализа изотермы и повторного анализа посредством рентгеноструктурного анализа (ΧΚΡΌ).

Пример 1. Синтез свободного основания Н-[1-6-(этинил-3-оксогексагидрофуро[3,2-Ь]пиррол-4карбонил)-3-метилбутил]-4-[5-фтор-2-(4-метилпиперазин-1-ил)тиазол-4-ил]бензамида (свободное основание соединения I)

Соединение X получали, как описано в примере 2 ^О 2010/034788.

Раствор соединения X (89,6 г, 146 ммоль) концентрировали в вакууме при 50°С с получением 100 г масла. Полученное масло растворяли в толуоле (250 мл), и растворитель удаляли отгонкой в вакууме при 50-55°С. Эту операцию повторяли еще раз. Остаток растворяли в метиленхлориде (70 мл).

3-Литровый, 3-горлый, круглодонный реактор загружали трифторуксусной кислотой (800 мл) и охлаждали до -5±2°С. Реактор вакуумировали до менее чем 100 мбар, и вакуум заполняли азотом. Раствор соединения X в метиленхлориде добавляли к охлажденной трифторуксусной кислоте около 10 мин, поддерживая при этом температуру при -5±2°С. Делительную воронку промывали метиленхлоридом (20 мл). Охлаждение удаляли, и реакционной температуре давали возможность подняться до температуры окружающей среды. Реакционную смесь перемешивали в течение 16 ч при температуре окружающей среды до точки, в которой по данным мониторинга посредством ВЭЖХ было показано >99,0% преобразование.

Добавляли толуол (900 мл) и гексаны (900 мл) и перемешивали в течение 1-3 мин. Фазам давали разделиться. Нижнюю фазу, содержащую соль трифторуксусной кислоты соединения I, сохраняли, в то время как верхнюю фазу отбрасывали. Нижнюю фазу перемешивали с толуолом (900 мл) и гексанами (900 мл) в течение 5 мин. Фазам давали разделиться. Верхнюю фазу отбрасывали. Нижнюю фазу разбавляли метиленхлоридом (700 мл). 6-Литровый, 3-горлый, круглодонный реактор загружали 20% К₂НРО₄(водный двухосновный фосфат калия) (4 л) и метиленхлорид (700 мл). Полученную смесь охлаждали до 0°С, и добавляли метиленхлоридный раствор соли трифторуксусной кислоты соединения I для гашения смеси, поддерживая при этом температуру 2-10°С. Фазам давали разделиться, и органическую фазу сохраняли. Водную фазу экстрагировали метиленхлоридом (2x700 мл).

Объединенные органические фазы последовательно промывали 10% К₂НРО₄ (водный двухосновный фосфат калия) (2x500 мл). Объединенные органические фазы нагревали до 35°С и сушили над сульфатом магния (50 г) в течение 20 мин при 35°С. Суспензию фильтровали, и осадок на фильтре промывали метиленхлоридом (35°С, 500 мл). Фильтрат концентрировали в вакууме досуха при 35-45°С. Остаток после выпаривания растворяли в метиленхлориде (100 мл). По каплям добавляли ТВМЕ (300 мл). Продукт начинал кристаллизоваться при стоянии. Полученную смесь концентрировали в вакууме при 35°С до 150 мл дистиллята, который собирали. В данный момент получали тонкую суспензию. Дополнительно по каплям добавляли ТВМЕ (450 мл), в результате образовывалась желтая суспензия. Данную суспензию охлаждали до 5°С и перемешивали при этой температуре в течение 16 ч. Суспензию фильтровали, и осадок на фильтре промывали ТВМЕ (200 мл).

Осадок на фильтре сушили в вакууме при 30°С в течение 6 ч с получением 55,3 г (65%) свободного основания соединения I. Чистота по данным ВЭЖХ составляла 96,8%.

Как обсуждено выше, свободное основание соединения I также может существовать в форме гидрата.

Аморфная форма свободного основания может быть преобразована в кристаллическую форму свободного основания способом, включающим ее суспендирование в 3 объемах смеси 98:2 ГРА:вода при

- 13 032409

50°С в течение 1 ч.

Порошковая рентгенограмма образца кристаллического свободного основания соединения I показана на фиг. 3.

Пример 2. Получение различных солевых форм свободного основания соединения I.

Предпринимались попытки получить различные солевые формы свободного основания соединения I. Чтобы сделать это, было решено использовать две системы растворителей: одна с номинально сухим растворителем и одна с избытком добавленной воды. После рассмотрения свойств соединения I 1РАс был выбран в качестве основного сухого растворителя, и МШК был выбран в качестве второго растворителя.

Экспериментальная методика.

В каждую из 364 мл стеклянных пробирок точно отвешивали 30 мг свободного основания соединения I. В часть из этих пробирок добавляли 3,0 мл ШАс, и в другую часть добавляли 3 мл МШК и 30 мкл деионизированной воды. В каждую из данных пробирок затем добавляли кислоту, показанную в табл. 3: Таблица 3

Кислоты, использованные в эксперименте по образованию соли

Детали	ТРАс (А)	ΜίΒΚ+1% воды (В)
Индекс 1 2 3 4 5 6 7 8 9	Кислота Хлористоводородная кислота Серная кислота Серная кислота Толуолсульфоновая кислота Метансульфоновая кислота Ь-аспарагиновая кислота Ь-аспарагиновая кислота Малеиновая кислота Фосфорная кислота	Добавление в виде 1М раствор в ТГФ 1М раствор в ТГФ 1М раствор в ТГФ 1М раствор в ЕДОН 1М раствор в ТГФ твердое вещество твердое вещество 1М раствор в ТГФ 1М раствор в ТГФ	Стехиометрия моно моно геми моно моно моно геми моно моно	Масса ΑΡΙ (мг) 29, 0 34.4 28, 6 29, 1 29, 6 30, 9 28.4 29, 0 25, 8	Количество добавленной кислоты 51 мкл 61 мкл 2 5 мкл 51 мкл 52 мкл 7 мг 4 мг 51 мкл 4 5 мкл	Масса ΑΡΙ (мг) 28, 6 31.7 30,4 31,0 31, 6 29, 3 30, 0 31,3 34.7	Количество добавленной кислоты 50 мкл 5 6 мкл 2 7 мкл 55 мкл 5 6 мкл 7 мг 3 мг 55 мкл 61 мкл
10	Ь-винная кислота	1М раствор в ТГФ	моно	26, 0	4 6 мкл	28,0	4 9 мкл
11	фумаровая кислота	0,5М раствор в 1: 1 ТГФ:МеОН	моно	29, 5	104 мкл	31,0	109 мкл
12	лимонная кислота	1М раствор в ТГФ	моно	28,1	50 мкл	32,4	57 мкл
13	И-глюкуроновая кислота	твердое вещество	моно	26, 8	9 мг	31,7	11 мг
14	Ь-Яблочная кислота	1М раствор в ТГФ	моно	32,5	57 мкл	33, 6	59 мкл
15	Ь-Молочная кислота	1М раствор в ТГФ	моно	31,0	55 мкл	29, 8	53 мкл
16	Ь-аскорбиновая кислота	1М раствор в воде	моно	26, 5	4 7 мкл	29, 4	52 мкл
17	Янтарная кислота	1М раствор в ТГФ	моно	31,4	55 мкл	27,2	4 8 мкл
18	Уксусная кислота	1М раствор в ТГФ	моно	35, 2	62 мкл	30, 6	54 мкл

Пробирки ШАс экспериментов затем инкубировали при температуре от температуры окружающей среды до 50°С (изменяя указанную температуру каждые 4 ч), в то время как пробирки МШК экспериментов инкубировали при КТ. Спустя 24 ч пробирки осматривали и отмечали внешний вид. Во многих пробирках МШК экспериментов были сформированы смолы, поэтому эти пробирки переносили в инкубатор с температурой окружающей среды/50°С.

Пробирки снова осматривали спустя дополнительные 24 ч и отмечали внешний вид. Полученные твердые вещества отфильтровывали и анализировали с помощью ΧΚΡΌ. Любую из пробирок, не содер- 14 032409 жащую твердого вещества в этот момент, открывали и давали возможность испаряться до любого образовавшегося в результате твердого вещества, анализируемого с помощью ΧΚΡΌ.

Результаты.

Результаты суммированы в табл. 4 и 5 ниже. С помощью 1РАс экспериментов было получено в общей сложности 12 твердых веществ; три из которых были идентифицированы как включающие кислоты, одно представляло собой частично кристаллическую НС1 соль, и восемь представляли собой аморфные твердые вещества.

Только четыре твердых вещества было выделено из М1ВК экспериментов: два включали кислоты и два коричневые аморфные твердые вещества.

Таблица 4

Скринирование солей экспериментов, проводимых в 1РАс

Детали	24 ч	48 ч	Выделенное твердое вещество
Индекс	Кислота	Стехиометрия	Осмотр	Действия	Осмотр	Действия	Описание	ΧΚΡϋ
1А	Хлористоводородная кислота	моно	Мутная суспензия, некоторая смолистость	нет	Мутная суспензия, некоторая смолистость	фильтрация	не совсем белый порошок	частично кристаллическое
2А	Серная кислота	моно	тонкая суспензия	нет	тонкая суспензия	фильтрация	не совсем белый порошок	аморфное
ЗА	Серная кислота	геми	тонкая суспензия	нет	тонкая суспензия	фильтрация	не совсем белый порошок	аморфное
4А	Толуолсульфоновая кислота	моно	смола	нет	смола	медленное упаривание	н/а	н/а
5А	Метансульфоновая кислота	моно	комковатая суспензия	нет	комковатая суспензия	фильтрация	не совсем белый порошок	аморфное
6А	Ь-аспарагиновая кислота	МОНО	небольшое количество твердого вещества в прозрачном растворе	нет	небольшое количество твердого вещества в прозрачном растворе	фильтрация	не совсем белый порошок	включена кислота
7А	Ь-аспарагиновая кислота	геми	небольшое количество твердого вещества в прозрачном растворе	нет	небольшое количество твердого вещества в прозрачном растворе	фильтрация	не совсем белый порошок	включена кислота
8А	Малеиновая кислота	моно	смолистое твердое вещество, прозрачный раствор	нет	смолистое твердое вещество, прозрачный раствор	фильтрация	оранжевокоричневый порошок	аморфное
9А	Фосфорная кислота	моно	тонкая суспензия	нет	тонкая суспензия	фильтрация	не совсем белый порошок	аморфное
10А	Ь-винная кислота	моно	тонкая суспензия	нет	тонкая суспензия	фильтрация	не совсем белый порошок	аморфное

- 15 032409

НА	фумаровая кислота	МОНО	прозрачный раствор	нет	небольшое количество твердого вещества	медленное упаривание	н/а	н/а
12А	лимонная кислота	моно	комковатая суспензия	нет	комковатая суспензия	фильтрация	не совсем белый порошок	аморфное
13А	Ό-глюкуроновая кислота	моно	комковатая суспензия	нет	комковатая суспензия	фильтрация	не совсем белый порошок	включена кислота
			смолистое		смолистое
			твердое		твердое		оранжево-
14А	Ь-Яблочная кислота	моно	вещество,	нет	вещество,	фильтрация	коричневый	аморфное
			прозрачный		прозрачный		порошок
			раствор		раствор
			небольшое		небольшое
			количество		количество
15А	Ь-Молочная кислота	моно	твердого вещества в	нет	твердого вещества в	медленное упаривание	н/а	н/а
			прозрачном		прозрачном
			растворе		растворе
16А	Ь-аскорбиновая кислота	моно	смола	нет	смола	медленное упаривание	н/а	н/а
17А	Янтарная кислота	моно	прозрачный раствор	нет	прозрачный раствор	медленное упаривание	н/а	н/а
			небольшое		небольшое
			количество		количество
18А	Уксусная кислота	моно	твердого вещества в	нет	твердого вещества в	медленное упаривание	н/а	н/а
			прозрачном		прозрачном
			растворе		растворе

Таблица 5

Скринирование солей экспериментов, проводимых в М1ВК+1% воды

Детали	24	ч	48	ч	Выделенное твердое вещество
Индекс	Кислота	Стехиометрия	Осмотр	Действия	Осмотр	Действия	Описание	Форма
1В	Хлористоводородная кислота	моно	смола	Перевод в 25/50°С	смола	медленное упаривание	н/а	н/а
2В	Серная кислота	моно	смола	Перевод в 25/50°С	смола	медленное упаривание	н/а	н/а
ЗВ	Серная кислота	геми	смола	Перевод в 25/50°С	смола	медленное упаривание	н/а	н/а
4В	Толуолсульфоновая кислота	моно	смола	Перевод в 25/50°С	смола	медленное упаривание	н/а	н/а
5В	Метансульфоновая кислота	МОНО	смола	Перевод в 25/50°С	смола	медленное упаривание	н/а	н/а

6В	Ь-аспарагиновая кислота	МОНО	небольшое количество твердого вещества в прозрачном растворе	Перевод в 25/50°С	небольшое количество твердого вещества в прозрачном растворе	медленное упаривание	не совсем белое твердое вещество	включена кислота
7В	Ь-аспарагиновая кислота	геми	небольшое количество твердого вещества в прозрачном растворе	Перевод в 25/50°С	небольшое количество твердого вещества в прозрачном растворе	медленное упаривание	не совсем белое твердое вещество	включена кислота
8В	Малеиновая кислота	МОНО	смола	Перевод в 25/50°С	смола	медленное упаривание	н/а	н/а
9В	Фосфорная кислота	моно	смола	Перевод в 25/50°С	смола	медленное упаривание	н/а	н/а
10В	Ь-винная кислота	моно	смола	Перевод в 25/50°С	смола	медленное упаривание	н/а	н/а
11В	фумаровая кислота	моно	прозрачный раствор	Перевод в 25/50°С	прозрачный раствор	медленное упаривание	н/а	н/а
12В	лимонная кислота	моно	смола	Перевод в 25/50°С	смола	медленное упаривание	н/а	н/а
13В	Ό-глюкуроновая кислота	моно	смола	Перевод в 25/50°С	смола	медленное упаривание	н/а	н/а
14В	Ь-Яблочная кислота	моно	смола	Перевод в 25/50°С	смола	медленное упаривание	н/а	н/а
15В	Ь-Молочная кислота	моно	некоторая СМОЛИСТОСТЬ/ зоте твердое вещество	Перевод в 25/50°С	некоторая смолистость, некоторое количество твердого вещества	медленное упаривание	н/а	н/а
16В	Ь-аскорбиновая кислота	моно	масло	Перевод в 25/50°С	масло	медленное упаривание	н/а	н/а
17В	Янтарная кислота	моно	небольшое количество твердого вещества в прозрачном растворе	Перевод в 25/50°С	небольшое количество твердого вещества в прозрачном растворе	фильтрация	Ьгота порошок	аморфное
18В	Уксусная кислота	моно	небольшое количество твердого вещества в прозрачном растворе	Перевод в 25/50°С	небольшое количество твердого вещества в прозрачном растворе	фильтрация	Ьгсмп порошок	аморфное

Все образцы, которые подвергались упариванию и претерпели неудачу при получении какого-либо твердого вещества, забирали в 500 мкл МЕК и добавляли 5 мкл воды. Пробирки затем инкубировали при температуре от температуры окружающей среды до 50°С в течение двух дней, по прошествии которых в любом из образцов указанных пробирок по-прежнему отсутствовало твердое вещество. Пробирки открывали и давали возможность испаряться, при этом все давали коричневую смолу.

Пример 3. Дополнительное исследование сульфатной и мезилатной солевых форм свободного основания соединения I.

В каждую из двух 10 мл стеклянных пробирок точно отвешивали по 100 мг свободного основания соединения I. Затем в каждую добавляли 10,0 мл 1РАс с последующим добавлением 1 экв. либо серной кислоты (в виде 1М раствора в ТГФ), или метансульфоновой кислоты (в виде 1М раствора в ТГФ). В обоих случаях при добавлении кислоты образовывался белый пушистый осадок. Пробирки инкубировали при температуре от температуры окружающей среды до 50°С в течение 72 ч при цикличности каждые 4 ч. Твердые вещества затем отфильтровывали и сушили на воздухе.

Примерно 10 мг аморфной сульфатной соли отвешивали в каждую из шести пробирок и то же самое делали с мезилатной солью. В каждую пробирку добавляли 100 мкл соответствующего растворителя, показанного в табл. 6. Пробирки затем инкубировали при температуре от температуры окружающей среды до 50°С в течение ночи, и любые твердые вещества затем отфильтровывали и анализировали с помощью ΧΚΡΌ.

- 17 032409

Таблица 6

Условия созревания аморфных сульфатных и мезилатных солей

Детали	Серная кислота (А)	Метансульфоновая	кислота (В)
Индекс	Растворитель	Осмотр	ΧΚΡϋ	Осмотр	ΧΚΡϋ
АИС704-43-1	МеСИ	смолистое твердое вещество	н/а	раствор	н/а
АИС704-43-2	ТГФ	смола/масло	н/а	смола/масло	н/а
АИС704-43-3	1,4-диоксан	суспензия	кристаллическое вещество	смола/масло	н/а
АИС704-43-4	МЕК	смола	н/а	смола/масло	н/а
АИС704-43-5	ТВМЕ	комковатое твердое вещество	аморфное вещество	комковатое твердое вещество	аморфное вещество
АИС704-43-6	ЕГОАс	смола	н/а	смола	н/а

Хотя твердые вещества, выделенные из ТВМЕ, оба были аморфными, сульфатная соль, созревшая в 1,4-диоксане, показала новую картину кристаллической дифракции. ТОЛ анализ кристаллического вещества, полученного в результате данного способа, показал, что оно является сольватом кристаллического диоксана и поэтому будет иметь ограниченное использование.

На основании результатов примеров 2 и 3 для дальнейшего исследования сначала была взята гидрохлоридная соль.

Пример 4. Синтез кристаллического полиморфа формы 2 из свободного основания соединения I

Свободное основание соединения I (99,2 мг) отвешивали в реакционную трубку и добавляли ацетон (2,0 мл) с получением прозрачного раствора после короткого перемешивания. Затем добавляли 37% НС1 (14 мкл в виде раствора в 1,0 мл ацетона), и образовавшийся в результате прозрачный раствор перемешивали при 50°С в течение 1 ч, по истечении которого образовывался белый осадок. Содержимое реакционной трубки охлаждали до 20°С при 0,1°С/мин и затем перемешивали при 20°С в течение дополнительных 8 ч. Присутствующее твердое вещество выделяли фильтрованием и сушили в вакууме при 60°С в течение ночи с получением 65 мг (61%) не совсем белого твердого вещества. Продукт определяли как кристаллический полиморф формы 2.

Пример 5. Синтез кристаллического полиморфа формы 2 из свободного основания соединения I (альтернативный способ с использованием антирастворителя и затравки).

1-Литровый, 3-горлый, круглодонный реактор вакуумировали до менее чем 100 мбар, и вакуум заполняли азотом. Реактор затем загружали ацетоном (164 мл, 128,9 г) и свободным основанием соединения I (70 ммоль; 41 г). Полученную суспензию нагревали на водяной бане до 50°С и перемешивали при этой температура до образования прозрачного раствора свободного основания соединения I. Добавляли концентрированную хлористоводородную кислоту (37%) (6,90 г, 70 ммоль, 1,0 экв.) около 3 мин. Полученный прозрачный раствор перемешивали в течение 1 мин с последующей затравкой кристаллическим полиморфом формы 2 (~20 мг). Сразу начиналось осаждение, но ему давали возможность созреть перемешиванием полученной суспензии при 50°С в течение 30 мин. Добавляли простой третбутилметиловый эфир (410 мл, 303,8 г) при 48±2°С около 19 мин. Полученную суспензию затем охлаждали до 22°С около 2 ч и перемешивали при этой температура в течение 2 ч, перед охлаждением до 12°С и перемешиванием при 12°С в течение 20 мин. Полученную суспензию фильтровали, и осадок на фильтре промывали смесью ацетон/простой трет-бутилметиловый эфир (1:2) (120 мл), затем простым третбутилметиловым эфиром (120 мл). Осадок на фильтре сушили в вакууме при 50°С в течение 64 ч с получением 42,09 г (96%) кристаллического полиморфа формы 2. По данным ВЭЖХ чистота составляла 97,4%.

Вещество, полученное с применением данного способа, использовали при тестировании, описанном в примерах 11 и 12. Аналогичные эксперименты проводили с использованием РА и ТГФ в качестве растворителя, и результаты показаны в табл. 7.

- 18 032409

Таблица 7

Растворитель	Выход	Чистота по данным ВЭЖХ	Кристаллическая форма (ΧΚΡϋ)
ΙΡΑ	75%	98,5%	Кристаллический полиморф формы 2
ТГФ	96%	97,1%	Кристаллический полиморф формы 2

Пример 6. Синтез кристаллического полиморфа формы 2 из свободного основания соединения I (дополнительный альтернативный способ с использованием затравки).

Свободное основание соединения I (1,696 г) отвешивали в реакционную трубку и добавляли ацетон (10,0 мл). Реакционную трубку нагревали до 50°С при перемешивании на магнитной мешалке с образованием в результате прозрачного раствора. Полученный раствор затравляли кристаллическим полиморфом формы 2 (10 мг). Затем готовили раствор 37% НС1 (237 мкл) в ацетоне (10,0 мл). Полученный раствор кислоты затем добавляли 2,5 мл порциями в реакционную трубку. После перемешивания при 50°С в течение 1 ч образовавшуюся тонкую суспензию охлаждали до 5°С при 0,1°С/мин и перемешивали при этой температура в течение 48 ч. Присутствующее твердое вещество затем выделяли фильтрованием и промывали ацетоном, который был охлажден до 0°С (2x10 мл). Полученное твердое вещество затем сушили в вакууме при 60°С в течение 24 ч перед характеризацией с получением указанного в заголовке продукта (1,51 г, 83%) в виде не совсем белого порошка. Порошковую рентгенограмму образца данного продукта получали, как описано в примере 9 и показано на фиг. 1.

Вещество, полученное по данному способу, использовали для тестирования, описанного в примерах 13, 14 и 15.

Ссылочный пример 7. Синтез моногидрохлорида Х-[1-6-(этинил-3-оксогексагидрофуро[3,2Ь]пиррол-4-карбонил)-3-метилбутил]-4-[5-фтор-2-(4-метилпиперазин-1-ил)тиазол-4-ил]бензамида в аморфной форме.

Аморфную форму моногидрохлорида К-[1-6-(этинил-3-оксогексагидрофуро[3,2-Ь]пиррол-4карбонил)-3-метилбутил]-4-[5-фтор-2-(4-метилпиперазин-1-ил)тиазол-4-ил]бензамида получали согласно следующему эксперименту:

Свободное основание соединения I (502 мг) растворяли в изопропилацетате (10 мл) с получением прозрачного золотистого раствора. Данный раствор обрабатывали 4М НС1 в диоксане (214 мкл, 1,0 экв.), что индуцировало немедленное осаждение тонкого белого твердого вещества. Данное твердое вещество концентрировали в вакууме до образования тонкого не совсем белого порошка, который сушили. ΧΚΡΌанализ показал, что данное вещество является аморфным (данные не показаны). Как и для свободного основания, данная моногидрохлоридная соль также может существовать в форме гидрата. Однако отношение кетон:гидрат в данной аморфной форме не определялось.

Ссылочный пример 8. Синтез моногидрохлорида Х-[1-6-(этинил-3-оксогексагидрофуро[3,2Ь]пиррол-4-карбонил)-3-метилбутил]-4-[5-фтор-2-(4-метилпиперазин-1-ил)тиазол-4-ил]бензамида в форме 1 кристаллического полиморфа.

Кристаллическую форму моногидрохлорида Х-[1-6-(этинил-3-оксогексагидрофуро[3,2-Ь]пиррол-4карбонил)-3-метилбутил]-4-[5-фтор-2-(4-метилпиперазин-1-ил)тиазол-4-ил]бензамида с ΧΚΡΌдифрактограммой, отличной от кристаллического полиморфа формы 2, - названного формой 1 кристаллического полиморфа - получали согласно следующему эксперименту:

200 мг свободного основания соединения I растворяли в ТГФ и добавляли 3 экв. НС1 (изготовленный раствор 37% НС1 в 1 об. ТГФ) при 50°С. Спустя 1 ч выстаивания при 50°С добавляли 70 мкл воды, и полученный раствор охлаждали до температуры окружающей среды. Полученное в результате кристаллическое твердое вещество, которое выделяли фильтрованием, сушили в вакууме при 50°С. Отношение кетон:гидрат в форме 2 полиморфа не определяли. ΧΚΡΌ-дифрактограмма образца данного вещества показана на фиг. 2.

Альтернативный способ получения кристаллического полиморфа формы 1 моногидрохлорида N-[16-(этинил-3-оксогексагидрофуро[3,2-Ь]пиррол-4-карбонил)-3-метилбутил]-4-[5-фтор-2-(4-метилпиперазин-1-ил)тиазол-4-ил]бензамида включает охлаждение 50°С-ного раствора в 4 объемах ТГФ с 1% воды (об./об.) до 20°С при 0,1°С/мин.

Пример 9. ΧΚΡΌ-анализ свободного основания соединения I, кристаллического полиморфа формы 2 и кристаллического полиморфа формы 1.

ΧΚΡΌ-анализ кристаллического свободного основания соединения I и кристаллических полиморфов формы 1 и формы 2 проводили с применением метода, описанного в разделе Основные методы. Результаты показаны на фиг. 1, 2 и 3 и табл. 8-10 ниже. Все вещества являются кристаллическими, как показано на дифрактограммах ΧΚΡΌ.

- 19 032409

Таблица 8

Перечень пиков, соответствующих фиг. 1 (образец кристаллического полиморфа формы . 2)

Угол (2-Тета°)	Относит. интенсивность	Угол (2-Тета°)	Относит. интенсивность	Угол (2-Тета°)	Относит. интенсивность
6, 8	54,0	20,3	25, 5	28,2	14,1
8,9	14,7	21,2	39, 3	29, 1	20, 9
11,7	43, 0	21,5	28,5	29, 6	19, 0
12,1	57,8	22,1	13,2	29, 9	10, 1
12,4	34,3	23,3	25, 0	30,3	9, 1
13,5	59, 5	23, 9	49, 4	31,5	11, 6
14,9	68,7	24,1	96, 5	32,1	16, 5
15, 5	33,7	24, 6	49, 0
16, 7	39, 9	24,8	71,1
17,0	28,9	25,5	32,5
17,8	100, 0	26,0	13,3
19, 0	70, 1	26,6	33,3
19, 5	38,8	27,2	19, 3

Таблица 9

Перечень пиков, соответствующих фиг. 2 (образец кристаллического полиморфа формы 1)

Угол (2-Тета°)	Относит. интенсивность	Угол (2-Тета°)	Относит. интенсивность	Угол (2-Тета°)	Относит. интенсивность
3, 9	69, 3	18,4	20,4	23, 1	7,3
7,5	19, 7	18,9	12,0	23, 6	8, 1
9, 2	100, 0	19, 2	14, 8	25, 2	41,1
11,8	20,5	19, 7	15, 8	25, 4	30, 8
13, 1	10, 9	20, 1	21,3	26,3	12,0
14, 6	32,3	21,0	15, 8	26, 8	8, 6
15, 3	13, 0	22,0	6, 9	29, 3	12,1
15, 7	29, 7	22, 6	7,5

Таблица 10

Перечень пиков, соответствующих фиг. 3 (образец кристаллического свободного основания соединения I)

Угол (2-Тета°)	Относит. интенсивность	Угол (2-Тета°)	Относит. интенсивность	Угол (2-Тета°)	Относит. интенсивность
4,0	100, 0	17,4	18,9	22,7	43, 1
8,0	19, 9	18,0	15, 8	23, 1	8,2
11,3	13, 9	18,2	17,2	23,4	7,9
12,0	34, 9	18,7	30,2	24,0	6, 7
13,5	22,3	19, 6	14,4	25, 3	27, 6
13, 9	12,4	20,2	20,4	26, 0	9, 0
14,4	5, 0	20,4	30, 9	26,5	7,4
15, 3	7,7	20, 8	34,1
16, 0	9, 3	21, 6	10,7

Пример 10. Жидкофазный ¹Н ЯМР-анализ образца кристаллического полиморфа формы 2.

¹Н ЯМР-анализ кристаллического полиморфа формы 2 осуществляли с использованием метода, описанного в разделе Общие методы. Полученный спектр показан на фиг. 4, из которого очевидно, что образец кристаллического полиморфа формы 2 находится в кетон-гидратном равновесии.

Пример 11. Твердотельный ¹³С ЯМР структурный анализ кристаллического полиморфа формы 2.

Твердотельный спектр ¹³С ЯМР образца кристаллического полиморфа формы 2, полученный с применением метода примера 5, проиллюстрирован на фиг. 5. На основе интеграции 208 м.д. (кетон) и 102 м.д. (гидрат) сигналов отношение кетон:гидрат определяли как 67:33.

Зависимость спектра от окружающих условий.

Твердотельный спектр ¹³С ЯМР, проиллюстрированный на фиг. 6, записывали после того, как образец выдерживали при относительной влажности <2% в течение одной недели. Из общей интенсивности сигналов кетон/гидрат счет сигналов кетона составлял 67% от общего (т.е. отношение кетон:гидрат 67:33). Твердотельный спектр ¹³С ЯМР, показанный на фиг. 7, записывали после того, как образец выдерживали при 75% ОВ в течение одной недели. Счет сигналов кетона составлял 67%. Твердотельный спектр ¹³С ЯМР, показанный на фиг. 8, записывали при 80°С и дал содержание кетона 68%. Таким образом, это показывает, что отношение кетона к гидрату не изменяется при воздействии различных внешних

- 20 032409 окружающих условий.

Зависимость спектра от релаксации водородных связей.

Как правило, если образец представляет собой смесь компонентов, тогда будет возможно изменение спектра ЯМР при влиянии различных внешних окружающих условий в пользу одного или другого из этих компонентов. Это будет успешным, поскольку характер изменения релаксации водородных связей является различным для каждого из компонентов. Время ¹Н спин-решеточной релаксации (Т^Н)) может быть использовано в качестве основы для одного из таких фильтров, и время ¹Н спин-решеточной релаксации во вращающейся системе (Т ^(Н)) в качестве основы для других. Последний, как правило, наиболее чувствителен к различиям между компонентами.

Замедленный контакт СР эксперимента использовали для поиска различий сигналов, связанных с подвергаемым диагностическому тесту кетоном (208 м.д.) и гидратом (103 м.д.). Результаты показаны на фиг. 9.

В рамках экспериментальной ошибки характер изменения обоих сигналов был таким же. Таким образом, было установлено, что нет свидетельств, что кетонный и гидратный компоненты находятся в различных фазах (хотя, учитывая сходство в остальной части молекулы в двух формах, это не может играть роль в случайном характере релаксации изменения).

Если характер изменения Т ₁р является неотличимым, вряд ли что Т₁ должен показывать какие-либо различия. Тем не менее, осуществляли серию коротких измерений для проверки этого. На фиг. 10 показаны результаты инверсии восстановления СР измерения, показывающего полный сигнал в верхней части и с попыткой обнуления сигнала в нижней части. Опять же нет каких-либо свидетельств о какой-либо разнице в характере изменения сигналов гидрата и кетона.

Следовательно, можно сделать вывод, что кетонная и гидратная формы находятся в той же самой фазе в кристалле.

Пример 12. Капиллярный ΧΚΡΌ структурный анализ кристаллического полиморфа формы 2.

Следуя методам, изложенным выше в разделе Общие методы, данные капиллярной ΧΚΡΌ получали из трех партий кристаллического полиморфа формы 2. Фоновые дифрактограммы проиллюстрированы на фиг. 11, на которых можно видеть, что три набора данных были идентичны, указывая на сопоставимость и воспроизводимость между партиями.

Данные из трех партий индексировали в отношении определения параметров ячейки кристаллического вещества. Результаты сопоставления по Ра\\^;1еу суммированы в табл. 11.

Таблица 11

№ партии	Параметры ячейки(а, Ь, с в А)	Объем АЗ	Фит Рам1еу
1	7,49/15,33/26,24	3017,3	2, 65
2	7,49/15,31/26,25	3013,9	1,73
3	7,49/15,30/26,25	3009,3	1,46

Полученные результаты подтверждают, что данные по трем наборам порошков относятся к такой же кристаллической структуре, как отображено на сходных диаграммах. В основном значения фита Ра\\1еу наблюдались в хорошей согласованности с расчетом и наблюдаемыми профилями с партией № 3, показавшей лучшие результаты. Тонкие различия, наблюдаемые главным образом в партии № 1, могут быть связаны с серией аномалий, которые можно отнести к структурным дефектам, нарушениям конфигураций одного из химических образований, дислокации в кристаллите.

Кристаллическая система кристаллического полиморфа формы 2 была обнаружена как ромбическая (мультиплетность Х4) и было установлено, что одна молекула и один хлоридный ион могут быть размещены в асимметричной ячейке (740А³).

На основе твердотельного ЯМР, указывающего на соотношения от около 1:1 до около 4:1, например 2:1 кетона к гидрату, либо оба химических образования кристаллизуются попеременно в той же самой фазе в соотношении от около 1:1 до около 4:1, например 2:1; или сокристалл существует в обоих химических образованиях, кристаллизованных в регулярном повторяющемся рисунке в той же самой фазе, причем конгломерат существует в отношении от около 1:1 до около 4:1, например 2:1 кристаллов кетона к кристаллам гидрата.

Последний вариант не соответствует результатам примера 11 и примера 12, которые приводят к выводу, что кетонная и гидратная формы находятся в той же самой фазе, хотя второй вариант не представляется возможным, поскольку только одна молекула, как известно, должна быть в асимметричном блоке, поэтому можно сделать вывод, что оба химических образования кристаллизуются попеременно в той же самой фазе в соотношении от около 1:1 до около 4:1, например 2:1.

Пример 13. Термодинамическая растворимость в воде свободного основания соединения I и кристаллического полиморфа формы 2.

Термодинамическую растворимость в воде свободного основания соединения I и кристаллического полиморфа формы 2 определяли с использованием метода, описанного в разделе Общие методы. Ре- 21 032409 зультаты показаны в табл. 12

Таблица 12

Форма	Растворимость в воде
Свободное основание (аморфное)	0,3 мг/мл при рН 5,8
НС1 (кристаллический полиморф формы 2)	82 мг/мл при рН 3,5
НС1 (форма 1 кристаллического полиморфа)	19 мг/мл при рН 4,0

Эти результаты показывают, что кристаллический полиморф формы 2 обладает очень высокой растворимостью в воде по сравнению с плохой растворимостью свободного основания соединения I даже в аморфной форме и сравнительно плохой растворимостью формы 1 кристаллического полиморфа.

Пример 14. Термические анализы свободного основания соединения I, кристаллического полиморфа формы 2 и кристаллического полиморфа формы 1.

Термические анализы кристаллического полиморфа формы 2 (образец, полученный с использованием способа примера 6) с помощью И8С и ТСА проводили с использованием метода, описанного в разделе Общие методы. Из фиг. 12, верхний график, можно видеть, что вещество обладает хорошей термостабильностью, с небольшой потерей массы до разложения, начинающегося при 160°С.

Оно бесспорно превосходит форму 1 кристаллического полиморфа (фиг. 13), которая показывает две собственные потери массы ниже 160°С, а также превосходит кристаллическое свободное основание соединения I (фиг. 14), которое показывает потерю массы (вероятно, воды) при температуре ниже 110°С, указывая но то, что эти две формы будут вызывать больше трудностей при обработке.

Пример 15. Гравиметрическая сорбция паров кристаллического полиморфа формы 2.

Анализ гравиметрической сорбции паров кристаллического полиморфа формы 2 (образец, полученный с использованием способа примера 6) проводили с использованием метода, описанного в разделе Общие методы. Результаты показаны на фиг. 15 и 16. Эти фигуры показывают, что данное вещество поглощает приблизительно 2,2% воды при ОВ в диапазоне примерно 0-90%, и что это поглощение воды реверсируется. Таким образом, данное вещество не поддается риску влияния влажности на изменение формы и что, как кажется, оно может быть обработано при широком диапазоне значений ОВ.

Пример 16. Крупномасштабный синтез свободного основания И-[1-6-(этинил-3-оксогексагидрофуро[3,2-Ь]пиррол-4-карбонил)-3-метилбутил]-4-[5-фтор-2-(4-метилпиперазин-1-ил)тиазол-4ил]бензамида (свободное основание соединения I)

Соединение X получали, как описано в примере 2 Ж) 2010/034788.

Раствор соединения X (9,500 кг, 15,5 моль) переносили в реактор, и растворители удаляли дистилляцией при пониженном давлении. Добавляли толуол (2x23,0 кг) и удаляли в вакууме при пониженном давлении. Остаток после выпаривания растворяли в дихлорметане (17 кг), и образовавшийся в результате раствор добавляли к смеси трифторуксусной кислоты (70,8 кг) и очищенной воды (0,500 кг) при 10°С. Образовавшуюся в результате смесь нагревали до 22°С и перемешивали при этой температура до >99,5% преобразования (ВЭЖХ) соединения X в свободное основание соединения I. Реакционную смесь затем добавляли к смеси н-гептана (97,0 кг) и простого трет-бутилметилового эфира (105,6 кг) при 0°С. После перемешивания при 0°С полученное вещество отделяли фильтрованием и промывали смесью н-гептана (38,6 кг) и простого трет-бутилметилового эфира (38,6 кг).

Влажное вещество растворяли в дихлорметане (204,0 кг) и промывали 20%-ным водным К₂НРО₄при рН 7,5. Органическую фазу охлаждали до 15°С, и наносили на колонку из силикагеля 60 (40-63 мкМ) (55,5 кг) метиленхлорид (202,7 кг) и ацетон (13,4 кг). Колонку элюировали: 1) 20% об./об. ацетоном (35,0 кг) в простом трет-бутилметиловом эфире (132,0 кг), 2) 50% об./об. ацетоном (131,5 кг) в простом третбутилметиловом эфире (124,0 кг) и 3) ацетоном (875,0 кг). Элюированные фракции, содержащие требуемый продукт (определенные с использованием ТСХ и ВЭЖХ), упаривали до объема приблизительно 90 л. Затем добавляли простой трет-бутилметиловый эфир (64,5 кг) и очищенную воду (1,585 кг), и продолжали отгонку. Когда объем становился равным приблизительно 50 л, добавляли простой третбутилметиловый эфир (32,0 кг) и очищенную воду (1,635 кг). Полученную суспензию охлаждали до 2°С и перемешивали при этой температуре. Продукт выделяли фильтрованием, промывали простым третбутилметиловым эфиром (27,0 кг) и сушили в вакууме при 30°С по меньшей мере в течение 10 ч с получением 6,5 кг (72%) свободного основания соединения I.

Пример 17. Крупномасштабный синтез кристаллического полиморфа формы 2 свободного основания соединения I.

- 22 032409

Свободное основание соединения I (6,325 кг, 10,8 моль) добавляли к смеси ацетона (25,50 кг) и ТВМЕ (2,40 кг). Добавляли 37%-ную хлористоводородную кислоту (0,960 кг, 9,74 моль), и полученную суспензию как можно быстрее нагревали до 50°С до получения прозрачного раствора. Полученный раствор затравливали кристаллическим полиморфом формы 2 (12 г) и перемешивали при 50°С. Наблюдалось осаждение кристаллического полиморфа формы 2. Дополнительное осаждение индуцировали добавлением при 50°С:1) 50% об./об. ацетона (10,25 кг) в ТВМЕ (9,75 кг) и затем 2) ТВМЕ (65,0 кг). Полученную в результате суспензию как можно быстрее охлаждали до 10°С, и после перемешивания в течение 20 мин при этой температуре продукт отфильтровывали, промывали сначала 29% об./об. ацетоном (4,50 кг) в ТВМЕ (10,25 кг) и затем ТВМЕ (14,50 кг). Продукт сушили в вакууме при 50°С по меньшей мере в течение 20 ч с получением 6,0 кг (89%) кристаллического полиморфа формы 2.

ΧΒΡΌ-дифрактограмма образца полученного вещества показана на фиг. 17. ¹Н ЯМР-анализ (не показан; 500 МГц Вгикег шасЫпе, ДМСО с!₆, температура 298°С, ΝΘΕ8Υ, 1ά/ζ§30 сигнальный импульс) указывал, что отношение кетона к гидрату составляло 82:18.

Суммирование результатов, описанных в данных примерах.

Кристаллических полиморф формы 2 существует в виде единой кристаллической фазы, состоящей как из моногидрохлорида №[1-6-(этинил-3-оксогексагидрофуро[3,2-Ь]пиррол-4-карбонил)-3метилбутил]-4-[5-фтор-2-(4-метилпиперазин-1-ил)тиазол-4-ил]бензамида, так и моногидрохлорида N-[16-(этинил-3-оксогексагидрофуро[3,2-Ь]пиррол-4-карбонил)-3-метилбутил]-4-[5-фтор-2-(4-метилпиперазин-1-ил)тиазол-4-ил]бензамидгидрата.

Удивительно, кетонная и гидратная формы не наблюдались в условиях взаимопревращающего воздействия различных значений относительной влажности, указывая на то, что отношение кетонной к гидратной форме остается стабильным.

Кристаллический полиморф формы 2 обладает хорошей растворимостью в воде и хорошей влагоустойчивостью и термостабильностью.

Кристаллический полиморф формы 2 явно превосходит форму 1 кристаллического полиморфа и свободную форму основания соединения I даже в кристаллической форме, что касается растворимости в воде и термостабильности.

Попытки изготовить кристаллические формы других солей свободного основания соединения I, как правило, не увенчались успехом.

Крупномасштабные способы (примеры 16 и 17) производства свободного основания соединения I и кристаллического полиморфа формы 2 с хорошим выходом и чистотой подтвердили тем самым, что методика формирования соединений является надежной.

Все ссылки, приведенные в данном описании, включая патенты и патентные заявки, включены в данное описание посредством ссылки в максимально возможной полноте.

По всему описанию и пунктам формулы изобретения, которые следуют ниже, если контекст не требует иного, слово включать и вариации, такие как состоит из и содержащие, будет пониматься как включение указанного целого числа, стадии, группы целых чисел или группы стадий, но без исключения какого-либо другого целого числа, стадии, группы целых чисел или группы стадий.

Описательная часть настоящей заявки и формула изобретения формируют часть, которая может быть использована в качестве основы для испрашивания приоритета в отношении любой последующей заявки. Пункты формулы изобретения такой последующей заявки могут быть направлены на любой признак или комбинацию признаков, описанных в данном описании. Они могут принимать форму пунктов на продукт, композицию, способ или применение и могут включать в качестве примера, но без ограничения, следующие пункты формулы изобретения.

Claims

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

1. Кристаллический полиморф формы 2, состоящий из моногидрохлорида №[1-6-(этинил-3оксогексагидрофуро[3,2-Ь]пиррол-4-карбонил)-3-метилбутил]-4-[5-фтор-2-(4-метилпиперазин-1ил)тиазол-4-ил]бензамида и моногидрохлорида ^[1-6-(этинил-3-оксогексагидрофуро[3,2-Ь]пиррол-4карбонил)-3-метилбутил]-4-[5-фтор-2-(4-метилпиперазин-1-ил)тиазол-4-ил]бензамидгидрата, сущест

- 23 032409 вующий в виде единой кристаллической формы с молярным соотношением кетонная форма:гидратная форма от 1:4 до 4:1, имеющий порошковую рентгенограмму (ХКРО), содержащую три, четыре, пять, шесть, семь, восемь, девять, десять, одиннадцать или все двенадцать пиков, выбранных из 6,8, 12,4, 14,9, 16,7, 17,0, 17,8, 24,1, 24,6, 24,8, 27,2, 28,2, 32,1 (±0,2°, значений 2Θ).
2. Кристаллический полиморф формы 2 по п.1, существующий в виде единой кристаллической фазы с молярным соотношением кетонная форма:гидратная форма от 1:4 до 4:1, имеющий порошковую рентгенограмму, как показано на фиг. 1.
3. Кристаллический полиморф формы 2 по п.2, имеющий порошковую рентгенограмму (ХКРО), содержащую три, четыре, пять, шесть, семь или все восемь пиков, выбранных из 6,8, 12,4, 14,9, 16,7, 17,8, 24,1, 24,6 и 24,8 (±0,2°, значений 2Θ).
4. Кристаллический полиморф формы 2 по п.3, имеющий порошковую рентгенограмму (ХКРО), содержащую три, четыре, пять или все шесть пиков, выбранных из 6,8, 14,9, 17,8, 24,1, 24,6 и 24,8 (±0,2°, значений 2Θ).
5. Фармацевтическая композиция, содержащая кристаллический полиморф формы 2 по п.1 и один или более фармацевтически приемлемых разбавителей или носителей для лечения расстройства, опосредованного катепсином Κ.
6. Применение кристаллического полиморфа формы 2 по п.1 для лечения расстройств, опосредованных катепсином Κ.
7. Применение кристаллического полиморфа формы 2 по п.6, отличающееся тем, что расстройство выбрано из списка, состоящего из остеопороза;

заболеваний десен, таких как гингивит и пародонтит;

болезни Педжета;

гиперкальциемии при злокачественных опухолях;

метастатических заболеваний костей, таких как рак костей, включая неоплазию;

заболеваний, характеризуемых избыточным разрушением хряща или матрицы, таких как остеоартрит и ревматоидный артрит;

и боли.
8. Применение кристаллического полиморфа формы 2 по п.7, отличающееся тем, что данным расстройством является остеопороз.
9. Применение кристаллического полиморфа формы 2 по п.7, отличающееся тем, что данным расстройством является метастатическое заболевание костей, такое как рак костей, включая неоплазию.
10. Применение кристаллического полиморфа формы 2 по п.7, отличающееся тем, что данным расстройством является остеоартрит.
11. Применение кристаллического полиморфа формы 2 по п.7, отличающееся тем, что данным расстройством является ревматоидный артрит.
12. Способ лечения расстройства, опосредованного катепсином Κ, включающий введение безопасного и эффективного количества кристаллического полиморфа формы 2 по п.1.
13. Способ по п.12, отличающийся тем, что расстройство выбрано из списка, состоящего из остеопороза;

заболеваний десен, таких как гингивит и пародонтит;

болезни Педжета;

гиперкальциемии при злокачественных опухолях;

метастатических заболеваний костей, таких как рак костей, включая неоплазию;

заболеваний, характеризуемых избыточным разрушением хряща или матрицы, таких как остеоартрит и ревматоидный артрит;

и боли.
14. Способ по п.13, отличающийся тем, что данным расстройством является остеопороз.
15. Способ по п.13, отличающийся тем, что данным расстройством является метастатическое заболевание костей, такое как рак костей, включая неоплазию.
16. Способ по п.13, отличающийся тем, что данным расстройством является остеоартрит.
17. Способ по п.13, отличающийся тем, что данным расстройством является ревматоидный артрит.
18. Способ по любому из пп.13-17, отличающийся тем, что кристаллический полиморф формы 2 по п.1 вводят в комбинации с одним или более дополнительными фармацевтически активными средствами, выбранными из органических бисфосфонатов, модуляторов эстрогеновых рецепторов; модуляторов андрогенных рецепторов; ингибиторов протонных остеокластов АТФазы; ингибиторов НМС-СоАредуктазы; антагонистов рецепторов интегрина; витамина Ό или его аналога, анаболических средств остеобластов, таких как РТН; селективных ингибиторов циклооксигеназы-2 (СОХ-2 ингибитор); ингибиторов интерлейкина-1-бета; ЬОХ/СОХ ингибиторов, КАМ<Ь ингибиторов; антител против склеростина.
19. Способ по п.18, отличающийся тем, что кристаллический полиморф формы 2 по п.1 и одно или более фармацевтически активных средств вводят перорально.

- 24 032409
20. Способ по п.18, отличающийся тем, что кристаллический полиморф формы 2 по п.1 вводят перорально, и одно или более дополнительных фармацевтически активных средств, как определено в п.18, вводят посредством внутривенного введения.
21. Способ получения кристаллического полиморфа формы 2 по п.1, включающий взаимодействие свободного основания ^[1-6-(этинил-3-оксогексагидрофуро[3,2-Ь]пиррол-4-карбонил)-3-метилбутил]-4[5-фтор-2-(4-метилпиперазин-1-ил)тиазол-4-ил]бензамида с хлористоводородной кислотой в присутствии растворителя, выбранного из ацетона, ΙΡΑ, 1РАс, ЕЮАс, ТГФ и МЕК, и кристаллизацию кристаллического полиморфа формы 2 из указанного растворителя.
22. Способ по п.21, где растворителем является ацетон.
23. Способ по п.21 или 22, где кристаллизацию проводят в условиях медленного охлаждения или циклического изменения температуры.
24. Способ по любому из пп.21-23, где кристаллизацию проводят в присутствии затравочного количества кристаллического полиморфа формы 2 по п.1.
25. Способ по любому из пп.21-24, где кристаллизацию проводят при использовании антирастворителя, такого как ТВМЕ.
26. Способ получения кристаллического полиморфа формы 2 по п.1, включающий:

(ΐ) взаимодействие свободного основания №[1-6-(этинил-3-оксогексагидрофуро[3,2-Ь]пиррол-4карбонил)-3-метилбутил]-4-[5-фтор-2-(4-метилпиперазин-1-ил)тиазол-4-ил]бензамида с хлористоводородной кислотой в присутствии ацетона и ТВМЕ;

(ΐΐ) затравку данного раствора кристаллическим полиморфом формы 2 и (ϊϊϊ) индуцирование кристаллизации добавлением ацетона и ТВМЕ.
27. Кристаллический полиморф формы 2, полученный способом по любому из пп.21-26.
28. Способ получения фармацевтической композиции по п.5, включающий объединение кристаллического полиморфа формы 2 по п.1 с одним или более фармацевтически приемлемыми разбавителями или носителями.