TWI634127B - 糖鏈加成連接基、含有糖鏈加成連接基部分與生理活性物質部分之化合物或其鹽，及該等之製造方法 - Google Patents

Abstract

本發明之目的係提供一種水溶性之含有載劑連接基部分及生理活性物質部分的化合物或其鹽，且該載劑為生物體分解性者。

本發明發現含有載劑連接基部分及生理活性物質部分之化合物或其鹽，藉由採用糖鏈做為載劑，並著眼於具有特定構造之載劑-連接基的構造而解決上述問題。

Description

糖鏈加成連接基、含有糖鏈加成連接基部分與生理活性物質部分之化合物或其鹽，及該等之製造方法

本發明係關於糖鏈加成連接基、含有糖鏈加成連接基部分及生理活性物質部分之化合物或其鹽、及該等之製造方法。

縱使試圖以生理活性物質做為藥物而投與至生物體，但由於其水溶性低，存在無法進行(充分的)過濾器滅菌之問題。又，欲使生理活性物質溶解於水溶液或從該水溶液所調製之乳液、投與至生物體皆有困難。

為了使生理活性物質等藥物之水溶性提高，正嘗試各種方法。已知，例如，使水溶性高的載劑共價鍵結於藥物而得之載劑-藥物複合物(conjugate)(即所謂的藥物衍生物)。就載劑而言，已知親水性胺基酸序列、聚乙二醇(PEG)等。

然而，由於此等藥物衍生物之立體構造與原來藥物之立體構造不同，所以與原來藥物相較，顯示不同的藥物動態學的特性、免疫原性的特性、毒物學或藥理學的特性等。已知，例 如，在將藥物衍生物做為疫苗之情況，與無修飾之藥物相較，其抗原性一般降低。

又，加成有做為載劑之PEG(PEG化)的藥物具有生 物分解抗性。因此，若將PEG化藥物連續投與至生物體內，則其會蓄積於生物體內，而有可能對生物體產生藥害(專利文獻1)。再者，PEG具有分子量分布(多分散系之性質(polydisperse nature))。 因此，若將藥物PEG化，由於所加成之PEG之鍵結位置或分子量不同，生成多種活性不同的單體異構型(different monomeric isoforms：構造不同的蛋白質)。所生成之該等異構型，在藥物與受體分子之結合上，有時可能彼此競爭(非專利文獻1)。

亦開發藥物與載劑經由連接基部分而鍵結之載劑- 連接基-藥物複合物。其係被設計成在標的處(血中等)，載劑-連接基部分與藥物之間的鍵結會被切斷，釋出藥物本身。在該鍵結之切斷上，使用光或酵素的切斷來激發。然而，對生物體內之標的部位照射光有困難，亦擔心光對生物體造成損傷。又，在酵素性切斷之情況，已知在酵素量，個體間或於投與部位均有很大差異。 所以會有藥物治療之效果發生變化的問題。

因此，在載劑-連接基-藥物複合物(conjugate)方面，為了 使載劑-連接基部分從藥物切斷，嘗試利用藉由連接基內之分子內觸媒作用而自動水解(autohydrolysis)。就該類型之複合物而言，據報告連接基部分係經由來自藥物之胺基而以醯胺鍵鍵結於藥物(專利文獻2)。該複合物之切斷機構係基於：藉由在連接基內形成環狀醯亞胺而環化-藉由活化而切斷醯胺鍵。

[先前技術文獻] [專利文獻]

[專利文獻1]特表2007-530569號公報

[專利文獻2]國際公開第2009/095479號小冊

[非專利文獻]

[非專利文獻1]Barry Byrne et al., Drug Discovery Today, (2007), Vol.12, 319-326頁

[發明之概要]

然而，專利文獻2未著重於載劑之生物分解性。再者，亦未言及載劑-連接基-藥物複合物之水溶性。

本發明之目的係提供含有載劑連接基部分及生理活性物質部分之水溶性化合物或其鹽，其中該載劑為生物分解性者。

本發明者們深入檢討之結果，發現一種含有載劑連接基部分及生理活性物質部分之化合物或其鹽，其藉由採用糖鏈做為載劑，且著重於具有特定構造之載劑-連接基之構造。

亦即，本發明係藉由提供含有糖鏈加成連接基部分及生理活性物質部分之化合物或其鹽而達成目的：該化合物係以下述式(A)表示：R¹-X (A)其中， R¹意指糖鏈加成連接基部分，R¹係以下述式(I)表示： [式(I)中，R²及R³各自獨立，係氫原子、碳數1至16之烷基、或碳數5至16之芳基(但是，R²及R³二者不同時為氫原子)，或者R²及R³與該等所鍵結之氮原子一起形成3至7員之雜環，該烷基、該芳基、或該雜環中之至少1個氫原子被糖鏈、糖鏈加成之胺基酸或糖鏈加成之多肽置換；R⁴各自獨立，係氫原子、碳數1至16之烷基或碳數5至16之芳基；Y係： 其中，R^5A、R^5B，與R^5A所鍵結之碳原子、R^5B所鍵結之碳原子一起形成碳數5至16之芳基、碳數5至16之環烯基、碳數7至13之雙環基、碳數9至14之三環基、碳數6至14之醌、或5至10員之雜環，或者R^5A、R^5B各自獨立，係氫原子、鹵素、氰基、碳數1至4之烷基、碳數1至4之烷氧基、硝基、甲磺醯基、甲苯磺醯基、碳數1至3之醯基、羥基、羧基、胺基、經取代或未經取代之苯基、苯甲基， R^5C、R^5D，與R^5C所鍵結之碳原子、R^5D所鍵結之碳原子一起形成碳數4至16之環烷基、碳數5至16之環烯基、碳數7至13之雙環基、碳數9至14之三環基、或5至10員之雜環；波線表示與X鍵結之部分]；X意指生理活性物質部分，該生理活性物質具有至少1個胺基、羥基、巰基、或羧基；X與R¹之鍵結係位於該至少1個胺基、羥基、巰基、或羧基之鍵結。

又，本發明之化合物或其鹽，於一態樣中，以該R¹係以式(I)表示為較佳，該式(1)為： [式(I)中、R²及R³，與此等所鍵結之氮原子一起形成3至7員之雜環；其中，該雜環係選自氮雜環丙烷、氮雜環丁烷、吡咯啉、吡咯、咪唑、咪唑啉、吡唑、吡唑啉、異唑啉、噻唑啉、異噻唑啉、噻二唑啉、吡咯啶、咪唑啶、吡唑啶、唑啶、異唑啶、噻唑啶、異噻唑啶、噻二唑啶、哌、哌啶、嗎啉、硫嗎啉、噻、四唑、三唑、三唑啶、四唑啶、氮雜環庚烷、二氮雜環庚烷、氮呯及高哌所構成之組群；該雜環中之至少1個氫原子被糖鏈加成之胺基酸或糖鏈加成之多肽置換，該置換係位於「該糖鏈加成之胺基酸或糖鏈加成之多肽」中之胺基酸或多肽之部分的鍵結； R⁴各自獨立，係氫原子、碳數1至16之烷基或碳數5至16之芳基；Y係： 其中，R^5A、R^5B，與R^5A所鍵結之碳原子、R^5B所鍵結之碳原子一起形成碳數5至16之芳基、碳數5至16之環烯基、碳數7至13之雙環基、碳數9至14之三環基、碳數6至14之醌、或5至10員之雜環，或者R^5A、R^5B各自獨立，係氫原子、鹵素、氰基、碳數1至4之烷基、碳數1至4之烷氧基、硝基、甲磺醯基、甲苯磺醯基、碳數1至3之醯基、羥基、羧基、胺基、經取代或未經取代之苯基、苯甲基，R^5C、R^5D，與R^5C所鍵結之碳原子、R^5D所鍵結之碳原子一起形成碳數4至16之環烷基、碳數5至16之環烯基、碳數7至13之雙環基、碳數9至14之三環基、或5至10員之雜環；波線表示與該X之鍵結部分]。

又，本發明之化合物或其鹽，於一態樣中，以該R¹係以下述式(II)表示為較佳，該式(II)為： [式(II)中、R⁴各自獨立，係氫原子、碳數1至16之烷基或碳數5至16 之芳基；Y係： 其中，R^5A、R^5B，與R^5A所鍵結之碳原子、R^5B所鍵結之碳原子一起形成碳數5至16之芳基，或者R^5A、R^5B皆為氫原子；R^5C、R^5D，與R^5C所鍵結之碳原子、R^5D所鍵結之碳原子一起形成環己基或降冰片基；R⁶係糖鏈、糖鏈加成之胺基酸或糖鏈加成之多肽；波線表示與該X鍵結之部分]。

又，本發明之化合物或其鹽，於一態樣中，該生理活性物質具有肽部分，該X與該R¹之鍵結係以下述鍵結為較佳：(1)位於該生理活性物質之該肽部分之N末端之胺基的醯胺鍵結；(2)位於在該生理活性物質之該肽部分之絲胺酸殘基、蘇胺酸殘基或酪胺酸殘基之側鏈所存在之羥基的酯鍵結(但是，限於該生理活性物質之該肽部分具有絲胺酸殘基、蘇胺酸殘基或酪胺酸殘基之情況)；(3)位於在該生理活性物質之該肽部分之天冬胺酸殘基或麩胺酸殘基之側鏈所存在之羧基的酸酐鍵結(但是，限於該生理活性物質之該肽部分具有天冬胺酸殘基或麩胺酸殘基之情況)；(4)位於在該生理活性物質之該肽部分之離胺酸殘基、天冬醯胺酸殘基、精胺酸殘基、組胺酸殘基或色胺酸殘基之側鏈所存在之胺 基的醯胺鍵結(但是，限於該生理活性物質之該肽部分具有離胺酸殘基、天冬醯胺酸殘基、精胺酸殘基、組胺酸殘基或色胺酸殘基之情況)；(5)位於在該生理活性物質之該肽部分之半胱胺酸殘基之側鏈所存在之巰基的硫酯鍵結(但是，限於該生理活性物質之該肽部分具有半胱胺酸殘基之情況)；或(6)位於該生理活性物質之該肽部分之C末端之羧基的酸酐鍵結。

又，本發明之化合物或其鹽，於一態樣中，以下述為較佳：該R¹係以下述式(III)表示： [式(III)中，R⁴各自獨立，係氫原子、碳數1至16之烷基或碳數5至16之芳基；Y係 其中，R^5A、R^5B，與R^5A所鍵結之碳原子、R^5B所鍵結之碳原子一起形成碳數5至16之芳基，或者R^5A、R^5B皆為氫原子，R^5C、R^5D，與R^5C所鍵結之碳原子、R^5D所鍵結之碳原子一起形成環己基或降冰片基； R⁷係-S-CH2-CONH-糖鏈或-CONH-糖鏈；R⁸係氫原子、碳數1至16之醯基、Fmoc基、Boc基、Z基、Troc基、或Alloc基等胺基甲酸酯系保護基、糖鏈、胺基酸、多肽、糖鏈加成之胺基酸、或糖鏈加成之多肽；波線表示鍵結於X之鍵結部分]；該生理活性物質具有至少1個胺基，該X與該R¹之鍵結係位於此至少1個胺基之鍵結。

又，本發明，在一態樣中，較佳係R¹以下述式(IV)表示者： [式(IV)中、R⁴各自獨立，係氫原子、碳數1至16之烷基或碳數5至16之芳基；R⁷係-S-CH2-CONH-糖鏈或-CONH-糖鏈；R⁸係氫原子、碳數1至16之醯基、Fmoc基、Boc基、Z基、Troc基、或Alloc基等胺基甲酸酯系保護基、糖鏈、胺基酸、多肽、糖鏈加成之胺基酸或糖鏈加成之多肽；R⁹各自獨立，係氫原子、鹵素、氰基、碳數1至4之烷基、碳數1至4之烷氧基、硝基、甲磺醯基、甲苯磺醯基、碳數1至3之醯基、羥基、羧基或胺基；波線表示鍵結於X之鍵結部分]； 該生理活性物質具有至少1個胺基，該X與該R¹之鍵結係位於此至少1個胺基之鍵結。

又，本發明之化合物或其鹽，於一態樣中，係以該式(I)、(II)、(III)或(IV)中之4個該R⁴皆係氫原子為較佳。

又，本發明之化合物或其鹽，於一態樣中，以該式(IV)中之至少1個該R⁹係鹵素為較佳。

又，本發明之化合物或其鹽，於一態樣中，以該式(IV)中之4個該R⁹皆係氯為較佳。

又，本發明之化合物或其鹽，於一態樣中，以在該「糖鏈加成之胺基酸或糖鏈加成之多肽」中，糖鏈係鍵結於胺基酸或多肽中之Asn或Cys為較佳。

又，本發明之化合物或其鹽，於一態樣中，以在該「糖鏈加成之胺基酸或糖鏈加成之多肽」中，糖鏈係在未經連接基中介下，與胺基酸或多肽鍵結為較佳。

又，本發明之化合物或其鹽，於一態樣中，以該「糖鏈、糖鏈加成之胺基酸或糖鏈加成之多肽」中之糖鏈係由4個以上糖殘基構成為較佳。

又，本發明之化合物或其鹽，於一態樣中，以該「糖鏈、糖鏈加成之胺基酸或糖鏈加成之多肽」中之糖鏈係雙股複合型糖鏈、3股複合型糖鏈、或4股複合型糖鏈為較佳。

又，本發明之化合物或其鹽，於一態樣中，以該糖鏈係選自二唾液酸基糖鏈、單唾液酸基糖鏈、無唾液酸基糖鏈、二(N-乙醯基葡萄糖胺)(diGlucNac)糖鏈及二甘露糖糖鏈所構成之組群之雙股複合型糖鏈為較佳。

又，本發明之化合物或其鹽，於一態樣中，該「糖鏈、糖鏈加成之胺基酸或糖鏈加成之多肽」中之糖鏈，以下述式： [式中，R¹⁰及R¹¹為相同或相異，表示： ；Ac表示乙醯基]

所表示之糖鏈為較佳。

又，本發明之化合物或其鹽，於一態樣中，以該生理活性物質係低分子生理活性物質或生物體高分子為較佳。

又，本發明之化合物或其鹽，於一態樣中，以該生物體高分子係選自蛋白質、多肽、聚核苷酸、及肽核酸所構成之組群為較佳。

又，本發明之化合物或其鹽，於一態樣中，與無修飾之生理活性物質相較，以具有提高之水溶性為較佳。

又，本發明之化合物或其鹽，於一態樣中，該提高之水溶性，以莫耳濃度計，係以該「無修飾之生理活性物質」之 10至1,000,000倍為較佳。

又，本發明之化合物或其鹽，於一態樣中，以該糖鏈加成連接基部分係依存於pH及/或溫度而以自身做為觸媒之方式被切斷為較佳。

將上述之本發明之一或複數個特徴任意組合而成者，不用說亦為本發明之化合物或其鹽。

本發明，於另一態樣中，提供一種組成物，其中該化合物或其鹽中之糖鏈實質上為一致。

又，本發明之組成物係以醫藥組成物為較佳。

本發明，於另一態樣中，提供一種醫藥組成物，其包含：(I)該化合物或其鹽；及(II)藥理學所容許之載劑。

又，本發明之醫藥組成物，於一態樣中，該生理活性物質，以投與至對象後迅速地發揮活性為較佳。

又，本發明之醫藥組成物，於一態樣中，以用於疫苗接種為較佳。

將上述之本發明之一或複數個特徴任意組合而成者不用說亦為本發明之(醫藥)組成物。

本發明，於另一態樣中，提供一種製造方法，其係含有糖鏈加成連接基部分及生理活性物質部分之化合物或其鹽之製造方法，其中，該生理活性物質包含具有至少一個胺基、羥基、巰基、或羧基之肽部分； 該方法包含以下之步驟：(a)藉由固相合成法，於樹脂上合成該肽部分的步驟；(b)使下述式(I’)所示之連接基部分鍵結於位在步驟(a)中所合成之該肽部分之該「胺基、羥基、巰基、或羧基」的步驟； [式(I’)中，R²及R³各自獨立，係氫原子、碳數1至16之烷基、或碳數5至16之芳基(但是，R²及R³二者不同時為氫原子)，或R²及R³與該等所鍵結之氮原子一起形成3至7員之雜環；R⁴各自獨立，係氫原子、碳數1至16之烷基或碳數5至16之芳基；Y係： 其中，R^5A、R^5B，與R^5A所鍵結之碳原子、R^5B所鍵結之碳原子一起形成碳數5至16之芳基、碳數5至16之環烯基、碳數7至13之雙環基、碳數9至14之三環基、碳數6至14之醌、或5至10員之雜環，或者R^5A、R^5B各自獨立，係氫原子、鹵素、氰基、碳數1至4之烷基、碳數1至4之烷氧基、硝基、甲磺醯基、甲苯磺醯基、碳數1至3之醯基、羥基、羧基、胺基、經取代或未經取代之苯基、苯甲基， R^5C、R^5D，與R^5C所鍵結之碳原子、R^5D所鍵結之碳原子一起形成碳數4至16之環烷基、碳數5至16之環烯基、碳數7至13之雙環基、碳數9至14之三環基、或5至10員之雜環；波線表示與該肽部分之該「胺基、羥基、巰基、或羧基」鍵結之部分]；(c)將藉由步驟(b)而與該肽部分之該「胺基、羥基、巰基、或羧基」鍵結的該連接基部分之R²或R³中之該烷基、該芳基、或該雜環中的至少1個氫原子，以糖鏈、糖鏈加成之胺基酸或糖鏈加成之多肽置換的步驟。

又，本發明，於另一態樣中，提供一種製造方法，其係含有糖鏈加成連接基部分及生理活性物質部分之化合物或其鹽之製造方法，其中，該生理活性物質含有具至少一個胺基、羥基、巰基、或羧基之肽部分；該方法包含藉由脫水縮合而使下述式(I’’)所示之糖鏈加成連接基鍵結於該肽部分中之該「胺基、羥基、巰基、或羧基」， [式(I”)中，R²及R³各自獨立，係氫原子、碳數1至16之烷基、或碳數5至16之芳基(但是，R²及R³二者不同時為氫原子)，或者R²及R³與該等所鍵結之氮原子一起形成3至7員之雜環，該烷基、該芳基、或該雜環中之至少1個氫原子被糖鏈、糖 鏈加成之胺基酸或糖鏈加成之多肽置換；R⁴各自獨立，係氫原子、碳數1至16之烷基或碳數5至16之芳基；Y係： 其中，R^5A、R^5B，與R^5A所鍵結之碳原子、R^5B所鍵結之碳原子一起形成碳數5至16之芳基、碳數5至16之環烯基、碳數7至13之雙環基、碳數9至14之三環基、碳數6至14之醌、或5至10員之雜環，或者R^5A、R^5B各自獨立，係氫原子、鹵素、氰基、碳數1至4之烷基、碳數1至4之烷氧基、硝基、甲磺醯基、甲苯磺醯基、碳數1至3之醯基、羥基、羧基、胺基、經取代或未經取代之苯基、苯甲基；R^5C、R^5D，與R^5C所鍵結之碳原子、R^5D所鍵結之碳原子一起形成碳數4至16之環烷基、碳數5至16之環烯基、碳數7至13之雙環基、碳數9至14之三環基、或5至10員之雜環]。

將上述之本發明之一或複數個特徴任意組合者，不用說亦為本發明之化合物或其鹽之製造方法。

又，本發明，在另一態樣中，提供藉由該任一種製造方法所得到之化合物或其鹽。

又，本發明，在另一態樣中，提供藉由該任一種製造方法所得到之化合物或其鹽。

將上述之本發明之一或複數個特徴任意組合者，不 用說亦為本發明之化合物或其鹽。

本發明，於再一態樣中，提供一種糖鏈加成連接基，其係可用於與具有至少1個胺基、羥基、巰基、或羧基之生理活性物質鍵結的糖鏈加成連接基，該糖鏈加成連接基係以下述式(B)表示：R¹-L (B)其中，R¹意指糖鏈加成連接基部分，R¹係以下述式(I)表示： [式(I)中，R²及R³各自獨立，係氫原子、碳數1至16之烷基、或碳數5至16之芳基(但是，R²及R³二者不同時為氫原子)、或R²及R³與該等所鍵結之氮原子一起形成3至7員之雜環，該烷基、該芳基、或該雜環中之至少1個氫原子被糖鏈、糖鏈加成之胺基酸或糖鏈加成之多肽置換；R⁴各自獨立，係氫原子、碳數1至16之烷基或碳數5至16之芳基；Y係 其中， R^5A、R^5B，與R^5A所鍵結之碳原子、R^5B所鍵結之碳原子一起形成碳數5至16之芳基、碳數5至16之環烯基、碳數7至13之雙環基、碳數9至14之三環基、碳數6至14之醌、或5至10員之雜環，或者R^5A、R^5B各自獨立，係氫原子、鹵素、氰基、碳數1至4之烷基、碳數1至4之烷氧基、硝基、甲磺醯基、甲苯磺醯基、碳數1至3之醯基、羥基、羧基、胺基、經取代或未經取代之苯基、苯甲基，R^5C、R^5D，與R^5C所鍵結之碳原子、R^5D所鍵結之碳原子一起形成碳數4至16之環烷基、碳數5至16之環烯基、碳數7至13之雙環基、碳數9至14之三環基、或5至10員之雜環；波線表示與L鍵結之部分]；L意指脫離基。

將上述之本發明之一或複數個特徴任意組合者，不用說亦為本發明之糖鏈加成連接基。

依照本發明，含有糖鏈加成連接基部分及生理活性物質部分之化合物或其鹽，由於具有羥基雖多，且極性高的糖鏈，與無修飾之生理活性物質相較，具有提高之水溶性。又，由於載劑係具有生物分解性之性質的糖鏈，在投與至生物體時，藥害少。

第1圖係展示溶解於PBS的糖鏈加成(Asn(無唾液酸基)型)連接基-類趨化素(chemerin)9複合物(化合物1)及無修飾之類趨化素9(化合物3)於37℃、pH7.4下，經時之存在量變化的圖。縱軸表 示於波長220nm之吸光度，横軸表示保持時間(分鐘)。箭頭所指之1個尖峰表示糖鏈加成之(Asn(無唾液酸基)型)連接基-類趨化素9複合物(化合物1)。箭頭所指之3個尖峰表示無修飾之類趨化素9。

第2圖係展示溶解於PBS(37℃、pH7.4)的糖鏈加成之(Asn(無唾液酸基)型)連接基-類趨化素9複合物(化合物1)相對於培育時間之濃度(相對濃度)的圖。縱軸表示相對濃度，横軸表示時間(小時)。記載於縱軸之「1之相對濃度」意指已溶解的糖鏈加成(Asn(無唾液酸基)型)連接基-類趨化素9複合物(化合物1)的相對濃度。

第3圖係展示溶解於PBS(37℃、pH7.4)的糖鏈加成(Asn(無唾液酸基)型)連接基-類趨化素9複合物(化合物1)，相對於培育時間之濃度(相對濃度)之自然對數的圖。縱軸表示相對濃度之自然對數(Ln(C/C₀))，横軸表示時間(h)。

第4圖係溶解於0.1M乙酸緩衝液(pH4.0)或以該乙酸緩衝液為基礎所製成之乳液中的糖鏈加成(Asn(無唾液酸基)型)連接基-類趨化素9複合物(化合物1)，於25℃下，相對於培育時間之濃度(相對濃度)的比較圖。縱軸表示相對濃度、横軸表示時間(h)。黒圈之虛線(「於乳液中之1」)及白圈之線(「於乙酸鹽緩衝液中之1)分別表示乳液或0.1M乙酸緩衝液中的糖鏈加成(Asn(無唾液酸基)型)連接基-類趨化素9複合物(化合物1)，相對於培育時間之濃度(相對濃度)。記載於縱軸之「1之相對濃度」意指已溶解的糖鏈加成之(Asn(無唾液酸基)型)連接基-類趨化素9複合物(化合物1)之相對濃度。

[用於實施發明之態樣]

以下，針對本發明之較佳實施態樣加以說明。

在本說明書中，表現：「具有糖鏈加成連接基部分的生理活性物質衍生物」係以與本發明之「含有糖鏈加成連接基部分及生理活性物質部分之化合物或其鹽」相同之意義來使用。又，在本說明書中，用語「複合物」意指使不同的物質(例如，載劑或載劑連接基(糖鏈加成連接基等))鍵結於藥物(生理活性物質等)者。

本發明之糖鏈加成連接基係將做為載劑之糖鏈加成於連接基者。本發明之糖鏈加成連接基可具有2股以上之相同或相異的糖鏈。

在本說明書中，藉由生理活性物質部分(X)與糖鏈加成連接基部分(R¹)鍵結，可形成式(A)「R¹-X」所示之含有糖鏈加成連接基部分及生理活性物質部分之化合物或其鹽。

在本發明中，生理活性物質，藉由使其構造之一部分變化(藉由修飾)，而可與糖鏈加成連接基部分鍵結。不過，一旦糖鏈加成連接基部分被切斷，生理活性物質將游離出。此游離的生理活性物質之構造，以與鍵結於糖鏈加成連接基部分之前(修飾前)之化合物構造相同為較佳。在本說明書中，將未鍵結於糖鏈加成連接基的生理活性物質稱為「無修飾之生理活性物質」。無修飾之生理活性物質，雖然以具有生理活性物質本身原有之藥物動態學的、免疫原性的、毒物學的或藥理學的特性為較佳，不過其特性可被改變、修飾等。本發明之「含有糖鏈加成連接基部分及生理活性物質部分之化合物或其鹽」，以藉由在規定之條件下，糖 鏈加成連接基部分被切斷，釋出無修飾之生理活性物質為較佳。

本發明之糖鏈加成連接基，以不會對於成為鍵結伙 伴之生理活性物質所具有之藥物動態學、免疫原性、毒物學或藥理學的特性等產生不良影響為較佳。

在本說明書中，「生理活性物質」雖無限定，惟意 指對於生物體之生理活動會直接或間接帶來任何作用/影響的物質。生理活性物質可意圖在試管內及活體內使用。此等生理活性物質，縱使其本身為在生物體內無法發揮功能者亦可。此等生理活性物質，在某些態樣，可以與藥物相同之意義來使用。在此等生理活性物質中，不僅包含在做為疫苗或醫藥品上有用者，亦可包含對於生物體之生理活動不會造成直接作用/影響的物質，例如診斷藥。又，在此等生理活性物質中，不僅包含來自天然者，亦可包含使其之一部分缺失、修飾或置換者(亦稱為衍生物)。再者，亦可包含人工合成的物質(例如，藉由重組DNA科技等生物學途徑、或肽固相合成法等化學合成途徑所製造之物質)、或將源自天然之物質之一部分與人工合成物質之一部分融合者。因此，在本發明之生理活性物質中，亦包含，例如，融合有GFP(綠色螢光蛋白質)等報導子(reporter)蛋白質或螢光素等螢光色素之物質。

本發明中之生理活性物質具有至少1個胺基、羥 基、巰基、或羧基。本發明中之生理活性物質，以具有至少1個胺基、羥基、巰基、或羧基之低分子生理活性物質或生物體高分子為較佳。

在本說明書中，「生物體高分子」可意指生理活性 物質之中，高分子之有機化合物。另一方面，「低分子生理活性物 質」可意指生理活性物質之中，低分子之有機化合物。生物體高分子，可為，例如，蛋白質、核酸或多糖類等高分子化合物或其一部分，亦可為人工合成者。又，低分子生理活性物質可為，例如，在生物體內可與生物體高分子相互作用者，亦可為人工合成者。不過，在本說明書中，生物體高分子與低分子生理活性物質，視情況可意指相同者。

本發明之生物體高分子，於一態樣中，以具有至少 1個胺基、羥基、巰基、或羧基之蛋白質、多肽、聚核苷酸、或肽核酸，或者在其構造之一部分中包含蛋白質、多肽、聚核苷酸、或肽核酸者為較佳。在本說明書中，亦將源自蛋白質或多肽之部分稱為「肽部分」。

在本說明書中，「蛋白質」，只要為複數個胺基酸藉 由醯胺鍵而鍵結者，卽無特殊限定，其包含已知的蛋白質、新穎蛋白質、或此等之改變體。在本說明書中，所謂的「改變體」，係將蛋白質以天然或人工的方式部分改變而成之化合物。就此等改變而言，可列舉如：蛋白質之1或複數個胺基酸殘基之，烷基化、醯基化(例如乙醯基化)、醯胺化(例如，蛋白質之C末端之醯胺化)、羧基化、酯形成、二硫鍵形成、糖基化、脂質化、磷酸化、羥基化、脫水縮合或標識成分之鍵結等。或者，關於此等改變體，可列舉使已知蛋白質或新穎蛋白質之構造之一部分缺失、置換或融合而成者等。在做為生理活性物質之生物體高分子係蛋白質之情況，蛋白質，雖無限定，不過可藉由使用例如：固相合成、液相合成、細胞合成、將天然存在者分離抽出之方法等本技術領域人士公知之方法來合成。

在本說明書中，「多肽」及「肽」，原則上可以與蛋 白質相同之意義來使用。但是，多肽及肽，可被用於指稱係蛋白質之構造之一部分的情況，或非採取高次構造之較短胺基酸鏈之情況(亦即，蛋白質之片段)。在本發明中之多肽或肽中，亦可包含，例如：2個胺基酸鍵結而成之二肽、3個胺基酸鍵結而成之三肽、4個胺基酸鍵結而成之四肽、以數目通常為10個以下之胺基酸鍵結而成之寡肽。

在本說明書中，所謂的「胺基酸」，以其最廣的意 義來使用，不僅包含：天然的胺基酸，例如絲胺酸(Ser)、天冬醯胺酸(Asn)、纈胺酸(Val)、白胺酸(Leu)、異白胺酸(Ile)、丙胺酸(Ala)、酪胺酸(Tyr)、甘胺酸(Gly)、離胺酸(Lys)、精胺酸(Arg)、組胺酸(His)、天冬胺酸(Asp)、麩胺酸(Glu)、麩醯胺酸(Gln)、蘇胺酸(Thr)、半胱胺酸(Cys)、甲硫胺酸(Met)、苯基丙胺酸(Phe)、色胺酸(Trp)、脯胺酸(Pro)，亦包含所謂的胺基酸變異體及衍生物之非天然胺基酸。若為本技術領域人士，考量其廣泛定義，當然可理解在本說明書中之胺基酸，可列舉如：L-胺基酸；D-胺基酸；胺基酸變異體、胺基酸衍生物等經化學修飾之胺基酸；正白胺酸、β-丙胺酸、鳥胺酸等非為生物體內蛋白質之構成材料之胺基酸；及本技術領域人士公知之具有胺基酸特性之化學合成的化合物等。 就非天然胺基酸之例子而言，可列舉：α-甲基胺基酸(α-甲基丙胺酸等)、D-胺基酸(D-天冬胺酸、D-麩胺酸等)、組胺酸樣胺基酸(2-胺基-組胺酸、β-羥基-組胺酸、高組胺酸、α-氟甲基-組胺酸、α-甲基-組胺酸等)、於側鏈具有額外亞甲基之胺基酸(「高(homo)」胺基酸)及側鏈中之羧酸官能基被磺酸基置換之胺基酸(半胱胺酸 等)。

在本說明書中之「聚核苷酸」中，雖無限定，惟可 包含：具有2至2000核苷酸序列之單股或雙股的DNA或RNA；單股或雙股之siRNA、miRNA或核酸(DNA或RNA)適體(aptamer)；或此等經化學修飾的化合物。在此等修飾中，雖無限定，惟可列舉：對於此等聚核苷酸之全體或一部分進一步賦予電荷、極性(polarizability)、氫鍵、靜電相互作用、或流動性(fluxionality)，或者以其他化學基修飾。聚核苷酸可為具有20個鹼基對或小於此之尺寸的寡核苷酸。

在本說明書中，「肽核酸」，雖無限定，惟意指將核 酸(DNA或RNA)之糖磷酸骨架變換成N-(2-胺基乙基)甘胺酸骨架而成之修飾核酸。此肽核酸，可藉由本技術領域人士公知之方法進一步修飾。

在本發明中之生物體高分子中，雖非限定於以下， 但於一態樣中，包含：例如副腎皮質刺激激素(ACTH)、催產素(oxytocin)、腺苷脫胺酶、半乳糖苷酶(agalsidase)、α1抗胰蛋白酶、α1蛋白酶抑制劑、阿替普酶(alteplase)、胰澱素(amylin)、普蘭林肽(symlin)、阿尼普酶(anistreplase)、蛇毒絲胺酸蛋白酶(ancrod serine protease)、抗凝血酶III、抗胰蛋白酶、抑肽酶(aprotinin)、天冬醯胺酶(asparaginase)、阿托西班(atosiban)、類鴉片肽(biphalin)、比伐盧定(bivalirudin)、骨形成蛋白質、胰臓胰蛋白抑制劑、鈣黏著素(cadherin)片段、降鈣素(calcitonin)(例如來自鮭魚)、膠原酶、補體C1酯酶抑制劑、芋螺毒素(conotoxin)、細胞激素(cytokin)受體片段、DNase、強啡肽(dynorphin A)、內啡肽(endorphin)、恩夫 韋肽(enfuvirtide)、腦啡肽(enkephalin)、促紅血球生成素(erythropoietin)、促胰島素分泌素(exendin)(促胰島素分泌素-3或促胰島素分泌素-4等)、第VII因子(第VIIa因子)、第VIII因子(第VIIIa因子)、第IX因子、纖溶素(fibrinolysin)、纖維母細胞增殖因子(FGF)、成長激素釋出肽2(GHRP-2)、卵胞刺激激素、短桿菌肽(gramicidin)、葛瑞林(ghrelin)、去醯基型葛瑞林、顆粒球群落刺激因子(G-CSF)、半乳糖苷酶(galactosidase)、胰高血糖素(glucagon)、胰高血糖素樣肽(艾塞那肽(exenatide)、GLP-1、GLP-2等)、葡糖腦苷脂酶(glucocerebrosidase)、顆粒球巨噬細胞群落刺激因子(GM-CSF)、熱休克蛋白質(HSP)、磷脂酶(phospholipase)活化蛋白質(PLAP)、絨毛性性腺刺激激素、血紅素、水蛭素(hirudin)、人類絲胺酸蛋白酶抑制劑、透明質酸(hyaluronidase)、艾杜糖苷酸酶(iduronidase)、免疫球蛋白(IgG Fc領域等)、白血球介素(1α、1β、2、3、4、5、7、8、9、10、11、12、13、14、15、17、18或21等)、IL-1受體拮抗劑(IL-1ra)、胰島素、胰島素樣成長因子、胰島素樣成長因子結合蛋白質(IGFBP)、干擾素(α(α2a、α2b、α2c等)、β(β1a、β1b)、γ(γ1a、γ1b)、λ、ω、ε、κ等)、細胞內接著分子、角質形成細胞增殖因子(KGF)、P-選擇素(selectin)糖蛋白質配體(PSGL)、轉化增殖因子、乳糖酶(lactase)、瘦素(leptin)、亮丙瑞林(leuprolide)、黄體形成激素、利尿肽鈉(ANP、BNP或CNP、或此等之片段)、神經肽Y、胰脂酶(pancrelipase)、胰臓多肽、木瓜蛋白酶(papain)、副甲狀腺激素(parathormon等)、來自血小板之成長因子(PDGF)、胃蛋白酶(pepsin)、肽YY、血小板活化因子乙醯基水解酶(PAF-AH)、催乳素(prolactin)、蛋白質A、蛋白質C、胸腺 肽(thymosin)α1、奧曲肽(octreotide)、腸促胰泌素(secretin)、舍莫瑞林(sermorelin)、可溶性腫瘤壊死因子受體、超氧化物岐化酶(superoxide dismutase)(SOD)、生長激素(somatropin)、(somatoprim)、生長抑素(somatostatin)、鏈激酶(streptokinase)、蔗糖酶(sucrase)、特利加壓素(terlipressin)、破傷風毒素C片段、半乳糖苷酶(tilactase)、凝血素(thrombin)、胸腺肽(thymosin)、甲狀腺刺激激素、促甲狀腺素(thyrotropin)、腫瘍壊死因子(TNF)、TNF受體、組織纖維蛋白溶酶原活化劑(tissue plasminogen activator)(tPA)、甲狀腺激素(降鈣素(calcitonin)等)、尿擴張素(urodilatin)、尿酸氧化酶、尿激酶(urokinase)、使用半抗原(hapten)、抗原等之疫苗(癌疫苗、HIV抗原、A型肝炎疫苗、B型肝炎疫苗(HBs抗原等)、流感疫苗、萊姆病(Lyme)疫苗等)、血管內皮增殖因子(VEGF)、類趨化素(Chemerin))、HER2蛋白質(人類上皮增殖因子受體)、上皮成長因子(EGF)、血管作動性腸道肽、垂體後葉素(vasopressin)、齊考諾肽(ziconotide)、凝集素(lectin)、膽鹼脂酶(cholinesterase)、澱粉酶(amylase)、或胃蛋白酶(pepsin)、或此等之改變體。

在本發明中之低分子生理活性物質中，於一態樣 中，可列舉如：具有至少1個胺基、羥基、巰基、或羧基之，中樞神經系活性劑、抗感染劑、抗過敏劑、免疫調節劑、抗肥胖劑、抗凝血劑、抗糖尿病劑、抗癌劑、抗新生物劑(antineoplastic agent)、抗菌劑、抗真菌劑、鎮痛劑、避孕藥、抗炎症劑、類固醇劑、血管擴張劑、血管收縮劑或心血管促效藥。

在本發明中之低分子生理活性物質中，雖無限定， 惟就一態樣而言，包含，例如，阿卡波糖(acarbose)、阿拉丙酯 (alaproclate)、阿侖膦酸鹽(alendronate)、金剛烷胺(amantadine)、丁胺卡那黴素(amikacin)、阿米庚酸(amineptine)、胺魯米特(aminoglutethimide)、胺磺必利(amisulpride)、胺氯地平(amlodipine)、胺托沙林(amotosalen)、阿莫沙平(amoxapine)、阿莫西林(amoxicillin)、安非他命(amphetamine)、兩性黴素B(amphotericin B)、安比西林(ampicillin)、安普那韋(amprenavir)、胺利酮(amrinone)、阿尼利定(anileridine)、阿可樂寧(apraclonidine)、安普黴素(apramycin)、阿替卡因(articaine)、阿替洛爾(atenolol)、托莫西汀(atomoxetine)、abizahon)、巴氯芬(baclofen)、貝那普利(benazepril)、苯甲絲肼(benserazide)、苯佐卡因(benzocaine)、倍他洛爾(betaxolol)、博來黴素(bleomycin)、溴芬酸(bromfenac)、溴法羅明(brofaromine)、卡維地洛(carvedilol)、卡辛(cassin)、卡西酮(cathinone)、磺胺丁脲(carbutamide)、頭孢胺苯甲(cephalexin)、克林沙星(clinafloxacin)、環丙沙星(ciprofloxacin)、去鐵胺(deferoxamine)、地拉韋啶(delavirdine)、地昔帕明(desipramine)、柔紅黴素(daunorubicin)、右哌甲酯(dexmethylphenidate)、二苯基碸、卓西平(dizocilpine)、多巴胺(dopamine)、多保他命(dobutamine)、多佐胺(dorzolamide)、多柔比星(doxorubicin)、度洛西汀(duloxetine)、依氟鳥胺酸(eflornithine)、依那普利(enalapril)、腎上腺素(epinephrine)、表柔比星(epirubicin)、麥角靈(ergoline)、厄他培南(ertapenem)、艾司洛爾(esmolol)、依諾沙星(enoxacin)、乙胺丁醇(ethambutol)、芬氟拉明(fenfluramine)、非諾多泮(fenoldopam)、非諾特羅(fenoterol)、芬戈莫德(fingolimod)、氟卡胺(flecainide)、氟伏沙明(fluvoxamine)、福沙那韋(fosamprenavir)、夫羅曲坦(frovatriptan)、速尿(furosemide)、氟西汀(fluoxetine)、加 巴噴丁(gabapentin)、加替沙星(gatifloxacin)、吉米沙星(gemifloxacin)、見大黴素(gentamicin)、格帕沙星(grepafloxacin)、己該隱(hexylcain)、肼苯嗒(hydralazine)、氫氯噻(hydrochlorthiazide)、icofungipen、伊達比星(idarubicin)、咪喹莫特(imiquimod)、異丙基腎上腺素(isoproterenol)、伊拉地平(isradipine)、卡那黴素A(kanamycin A)、氯胺酮(ketamine)、拉貝洛爾(labetalol)、拉米夫定(lamivudine)、左布諾洛爾(levobunolol)、左旋多巴(levodopa)、甲狀腺素(levothyroxine)、賴諾普利(lisinopril)、洛美沙星(lomefloxacin)、氯碳頭孢(loracarbef)、麥普替林(maprotiline)、甲氟喹(mefloquine)、美法崙(melphalan)、美金剛(memantine)、美羅培南(meropenem)、美沙拉(mesalazine)、三甲氧苯乙胺(mescaline)、甲基多巴(methyldopa)、亞甲二氧基甲基苯丙胺、美托洛爾(metoprolol)、米那普崙(milnacipran)、米托蒽醌(mitoxantrone)、莫西沙星(moxifloxacin)、去甲腎上腺素(norepinephrine)、諾氟沙星(norfloxacin)、去甲替林(nortriptyline)、新黴素B(neomycin B)、制黴菌素(nystatin)、奧斯他韋(oseltamivir)、帕米膦酸(pamidronate)、帕羅西汀(paroxetine)、帕珠沙星(pazufloxacin)、培美曲塞(pemetrexed)、培哚普利(perindopril)、苯甲嗎啉(phenmetrazine)、苯乙肼(phenelzine)、普瑞巴林(pregbalin)、普魯卡因(procaine)、偽麻黃鹼(pseudoephedrine)、普羅替林(protriptyline)、瑞波西汀(reboxetine)、利托君(ritodrine)、薩巴比星(sabarubicin)、沙丁胺醇(salbutamol)、血清素(serotonin)、舍曲林(sertraline)、西他列汀(sitagliptin)、索他洛爾(sotalol)、壯觀黴素(spectinomycin)、磺胺嘧啶(sulfadazine)、磺胺甲基嘧啶(sulfamerazine)、舍曲林(sertraline)、磺胺林(sulfalene)、磺胺甲唑(sulfamethoxazole)、 他克林(tacrine)、坦索羅辛(tamsulosin)、特布他林(terbutaline)、噻嗎洛爾(timolol)、替羅非班(tirofiban)、妥布黴素(tobramycin)、妥卡尼(tocainide)、托氟沙星(tosufloxacin)、群多普利(trandolapril)、胺甲環酸(tranexamic acid)、反苯環丙胺(tranylcypromine)、三甲曲沙(trimetrexate)、曲伐沙星(trovafloxacin)、伐昔洛韋(valacyclovir)、纈更昔洛韋(valganciclovir)、萬古黴素(vancomycin)、紫黴素(viomycin)、維洛沙(viloxazine)、扎西他濱(zalcitabine)、青黴素(penicillin)、頭孢菌素(cephalosporin)、鏈黴素(streptomycin)、越黴素(destomycin)、春雷黴素(kasugamycin)、泰樂菌素(tylosin)、紅黴素(erythromycin)、竹桃黴素(oleandomycin)、螺旋黴素(spiramycin)、林可黴素(lincomycin)、多黏菌素(colistin)、桿菌肽(bacitracin)、鹽黴素(salinomycin)、莫能菌素(monensin)、拉沙裡菌素(lasalocid)、四環素(tetracycline)、氯黴素(chloramphenicol)、維吉尼亞黴素(virginiamycin)、磺胺地索辛(sulfadimethoxine)、側氧基磷酸、吡咯米酸(piromidic acid)、雙呋脒腙(difurazone)、玉米烯酮(zearalenone)、脫氧雪腐鐮刀菌烯醇(deoxynivalenol)、棒曲黴素(patulin)、煙曲黴毒素(fumonisin)、赭曲黴毒素(ochratoxin)、河豚毒素(tetrodotoxin)、岡田酸(okadaic acid)、麻痺性貝毒(saxitoxin)或膝溝藻毒素(gonyautoxin)等。

本發明中之生理活性物質部分係在生理活性物質所 具有之至少1個胺基、羥基、巰基、或羧基鍵結有糖鏈加成連接基部分或連接基部分(未糖鏈加成之連接基部分)。該胺基係以1級胺基或2級胺基為較佳。

在本說明書中，「糖鏈加成之胺基酸」係鍵結有糖 鏈之胺基酸，糖鏈與胺基酸可不經由連接基中介而鍵結，或經由連接基中介而鍵結。雖然對於糖鏈與胺基酸之鍵結部位無特殊限制，不過以胺基酸鍵結於糖鏈之還原末端為較佳。對於鍵結有糖鏈之胺基酸之種類無特殊限定，可使用天然胺基酸、非天然胺基酸、D-胺基酸之任一種。從糖鏈加成之胺基酸具有與生物體內以糖肽(糖蛋白質)存在者相同或類似之構造的觀點言之，糖鏈加成之胺基酸係以加成N-鍵結型糖鏈者之糖鏈加成Asn；如加成O-鍵結型糖鏈者之糖鏈加成Ser及糖鏈加成Thr為較佳。

在糖鏈及胺基酸係經由連接基中介而鍵結之情況， 從與連接基之鍵結容易性的觀點言之，糖鏈加成之胺基酸的胺基酸，係以天冬胺酸或麩胺酸等分子內具有2個以上羧基的胺基酸；離胺酸、精胺酸、天冬醯胺酸、組胺酸、色胺酸等分子內具有2個以上胺基的胺基酸；絲胺酸、蘇胺酸、酪胺酸等分子內具有羥基的胺基酸；半胱胺酸等分子內具有巰基的胺基酸；天冬醯胺酸、麩醯胺酸等分子內具有醯胺基的胺基酸為較佳。尤其，從反應性之觀點言之，糖鏈加成之胺基酸的胺基酸，以天冬胺酸、麩胺酸、離胺酸、精胺酸、絲胺酸、蘇胺酸、半胱胺酸、天冬醯胺酸、麩醯胺酸為較佳，以半胱胺酸或天冬醯胺酸為更佳。

在糖鏈與胺基酸係經由連接基中介而鍵結之情 況，就連接基而言，可廣泛地使用在本領域中所使用者。可列舉如：-NH-(CH₂)_a-(CO)-CH₂-(式中，a係整數，其只要不會阻礙做為目的之連接基之功能，卽無特殊限定，不過以表示0至4之整數為較佳)； C_1-10聚亞甲基；-CH₂-R-；(式中，R係從選自經取代或未經取代之烷基、經取代或未經取代之烯基、經取代或未經取代之炔基、經取代或未經取代之芳基、經取代或未經取代之碳環基、經取代或未經取代之雜環基所構成之組群之基，脫離1個氫原子而生成之基)；-(CO)-(CH₂)_a-(CO)-(式中，a係整數，其只要不會阻礙做為目的之連接基之功能，卽無特殊限定，不過以表示0至4之整數為較佳)等。

在本發明中之糖鏈加成之胺基酸中，就糖鏈及胺基 酸未經由連接基中介而鍵結之一態樣而言，例如，天冬醯胺酸側鏈之胺基上的氫原子可被糖鏈之還原末端部分置換。在該情況，雖然存在於糖鏈之還原末端的脫離基沒有限定，惟可為，例如，氯、溴或氟等。

在本發明中之糖鏈加成之胺基酸中，就糖鏈及胺基 酸經由連接基鍵結而成之一態樣而言，例如，半胱胺酸側鏈之巰基上之氫原子可經由連接基中介而鍵結於糖鏈之還原末端(例如，連接基係-CH₂-CONH-之情況，糖鏈之還原末端鍵結於該連接基中之氮原子)。在該情況，鍵結於糖鏈之還原末端之連接基的脫離基，雖無限定，惟可為，例如，氯、溴或氟等。

本說明書中之「糖鏈加成之多肽」，只要為將至少 1股糖鏈加成於蛋白質(或多肽或肽)而成之化合物，卽無特殊限定。糖鏈加成之多肽，在本說明書中，可與「糖蛋白質」或「糖肽」互換使用。糖鏈加成之多肽可為包含該糖鏈加成之胺基酸的 多肽。在糖鏈加成之多肽中，糖鏈與胺基酸之鍵結態樣、及構成多肽之胺基酸之種類等，可與本發明中之糖鏈加成之胺基酸同樣地被規定。鍵結於糖鏈之多肽中的胺基酸(殘基)，不限定位在多肽之N末端、C末端，於適當情況，只要為構成多肽的胺基酸(殘基)即可。本發明中之糖鏈加成之多肽中的胺基酸殘基以2至100個胺基酸殘基為較佳，以2至10個胺基酸殘基為更佳。又，在本發明中之糖鏈加成之多肽中，糖鏈與多肽鍵結之部分之胺基酸以外的胺基酸，可較自由地選擇。就一態樣而言，糖鏈與多肽鍵結之部分胺基酸係，例如，天冬醯胺酸、半胱胺酸、麩醯胺酸或離胺酸，而另一方面，本技術領域人士當理解糖鏈與多肽鍵結之部分之胺基酸以外的胺基酸(例如，與(糖鏈加成)連接基部分鍵結之胺基酸)並無特殊限制。

從將本發明之化合物或其鹽投與至生物體內之觀點 而言，構成本發明中之糖鏈加成之胺基酸、或糖鏈加成之多肽的胺基酸係以存在於生物體內之胺基酸為較佳。

在本說明書中，所謂的「糖鏈」除了包含2個以上 單糖(單糖及/或其衍生物)連成之化合物之外，亦包含由1個單糖(單糖及/或其衍生物)所構成之化合物。就此等糖鏈而言，雖無限定，惟可列舉如：生物體中所含有之單糖類及多糖類(葡萄糖、半乳糖、甘露糖、岩藻糖、木糖、N-乙醯基葡萄糖胺、N-乙醯基半乳糖胺、唾液酸或此等之複合體或衍生物)，此外尚有被分解之多糖、糖蛋白質、蛋白多糖、糖胺聚醣、或糖脂質等由複合生物體分子所分解或衍生之糖鏈等。於2個以上單糖連接之情況、各個單糖彼此之間可藉由糖苷鍵結所致之脫水縮合而鍵結。糖鏈可為 直鏈型，亦可為分枝鏈型。

又，在本說明書中，「糖鏈」亦包含糖鏈之衍生物。 就糖鏈之衍生物而言，雖可列舉如：構成糖鏈之糖係具有羧基的糖(例如，C1位被氧化而成為羧酸的醛糖酸(aldonic acid)(例如，D-葡萄糖被氧化而成之D-葡萄糖酸)、末端之C原子成為羧酸的糖醛酸(uronic acid)(D-葡萄糖被氧化而成之D-葡萄糖醛酸))、具有胺基或胺基之衍生物(例如，乙醯基化胺基)的糖(例如，N-乙醯基-D-葡萄糖胺、N-乙醯基-D-半乳糖胺等)、具有胺基及羧基二者的糖(例如，N-乙醯基神經胺酸(唾液酸)、N-乙醯基胞壁酸等)、脫氧化的糖(例如，2-脫氧-D-核糖)、含有硫酸基的硫酸化糖、含有磷酸基的磷酸化糖等糖鏈，不過不限於此等。

本發明中之糖鏈，於一態樣中，可為在生物體內以 複合糖質(糖蛋白質(或糖多肽)、蛋白多糖、或糖脂質等)存在的糖鏈。或者於另一態樣中，可為在生物體內非以複合糖質存在的糖質。

在生物體內以複合糖質存在的糖鏈，從所謂將本發 明之化合物或其鹽投與至生物體內之觀點而言為較佳。就此類糖鏈而言，雖無限定，惟可列舉：在生物體內呈糖蛋白質之形式且係鍵結於蛋白質之糖鏈的N-鍵結型糖鏈、O-鍵結型糖鏈等。在鍵結有O-鍵結型糖鏈之糖蛋白質中，N-乙醯基半乳糖胺(GalNAc)、N-乙醯基葡萄糖胺(GlcNAc)、木糖、或岩藻糖等係以O-糖苷鍵鍵結於肽之Ser或Thr，然後於其上進一步加成糖鏈。就N-鍵結型糖鏈而言，可列舉如：高甘露糖(high mannose)型、複合(complex)型、混成(hybrid)型，以複合型為較佳。

就在本發明中所使用之較佳複合型糖鏈而言，可列 舉如下述式： [式中，R¹⁰及R¹¹，相同或相異，表示： ；Ac表示乙醯基]所示之糖鏈。

於一態樣中，本發明中之「糖鏈加成之胺基酸或糖 鏈加成之多肽」中之糖鏈，係以由4個以上，例如5個以上，7個以上，尤其是9個以上，11個以上之糖構成之糖鏈為較佳。本發明者驚異地發現：構成加成糖鏈的糖數目越多，本發明之化合物或其鹽之水溶性越提高，另一方面，亦不會影響其半減期。

於一較佳態樣中，本發明中之糖鏈加成之胺基酸或 糖鏈加成之多肽中之糖鏈係雙股複合型(換言之，糖鏈成為2分枝之2分枝型複合型)糖鏈。雖無限定，惟所謂的複合型糖鏈包含2種以上之單糖，且以具有下文所示之基本構造及Galβ1-4GlcNAc所示之乳糖胺構造為特徵。

雖無限定，惟所謂的雙股複合型糖鏈意指於基本構 造之末端之2個甘露糖，分別鍵結有由0至3個糖所構成之單股糖鏈者。就雙股複合型糖鏈而言，以例如示於以下之二唾液酸基糖鏈： 示於以下之單唾液酸基糖鏈： 示於以下之無唾液酸基糖鏈： 示於以下之二(N-乙醯基葡萄糖胺)糖鏈： 示於以下之二甘露糖糖鏈： 等為較佳。

又，在另一態樣中，於本發明中之複合型糖鏈中， 除包含上述之雙股複合型糖鏈之外，亦可包含3股鏈之複合型糖鏈(3分岐型複合型糖鏈)、4股鏈之複合型糖鏈(4分岐型複合型糖鏈)。雖無限定，惟就，例如，3股鏈、4股鏈之複合型糖鏈而言，可列舉：示於下文之三唾液酸基糖鏈： 示於下文之四唾液酸基糖鏈：

再者，就3股鏈複合型糖鏈及4股鏈複合型糖鏈而言，亦可列舉從此等三唾液酸基糖鏈或四唾液酸基糖鏈之非還原末端，刪除1或複數個糖而成之糖鏈。

在另一態樣中，本發明中之糖鏈可為高甘露糖型糖鏈。在本發明中所使用之高甘露糖型糖鏈，係在上述複合型糖鏈之基本構造上，進一步鍵結有2個以上甘露糖而成之糖鏈。雖然如哺乳類之高甘露糖型糖鏈，以含有5至9個甘露糖的糖鏈為較佳，不過如酵母之高甘露糖型糖鏈，可為含有更多甘露糖的糖鏈。就在本發明中較佳使用之高甘露糖型糖鏈而言，可列舉如：示於以下之高甘露糖-5(M-5)： 示於以下之高甘露糖-9(M-9)： 等。

在另一態樣中，本發明中之糖鏈可為具有直鏈構造之糖鏈。就該糖鏈而言，可列舉如：寡透明質酸。本發明中之寡透明質酸，雖無限定，不過可為N-乙醯基葡萄糖胺及葡萄糖醛酸以4至32個糖，較佳4至16個糖，更佳4至8個糖之量，交互地鍵結於直鏈上而成之糖鏈。可用於本發明中之寡透明質酸之中，就特佳者而言，在將N-乙醯基葡萄糖胺及葡萄糖醛酸所構成之單位當做1單位之情況，可列舉2單位(4糖)以上8單位(16糖)以下之糖鏈，以2單位(4糖)至4單位(8糖)為更佳，以2單位(4糖)為最佳。

就在本發明中較佳使用之透明質酸而言，可列舉如：示於以下之4糖之寡透明質酸： 示於以下之8糖之寡透明質酸： 等。

再者，於另一態樣中，關於本發明中之複合型糖鏈，亦可列舉加成各種糖(例如，岩藻糖)者。例如，在糖鏈(雙股複合型糖鏈、3股鏈複合型糖鏈、4股鏈複合型糖鏈等)之非還原末端之N-乙醯基葡萄糖胺，可加成至少1個以上之岩藻糖。

雖然沒有限定，不過就加成有岩藻糖之複合型糖鏈(含岩藻糖之複合型糖鏈)而言，可列舉如：示於以下之含岩藻糖之複合型糖鏈：

再者，亦可列舉從此等含岩藻糖之複合型糖鏈之非還原末端刪除1或複數個糖而成之糖鏈。

又，在另一態樣中，關於本發明中之複合型糖鏈， 典型地，亦可列舉以下述式表示之具有聚乳糖胺構造或唾液酸聚乳糖胺構造之糖鏈。

(式中，n為2至3之整數)、 (式中，n為2至3之整數)。

再者，亦可列舉如：從具有此等聚乳糖胺構造或唾液酸基聚乳糖胺構造之糖鏈的非還原末端刪除1或複數個糖而成之糖鏈。

在本發明中，於雙股複合型糖鏈、3股鏈複合型糖 鏈、4股鏈複合型糖鏈、高甘露糖型糖鏈、寡透明質酸、含岩藻糖之複合型糖鏈、具有聚乳糖胺構造之糖鏈、具有唾液酸基聚乳糖胺構造之糖鏈中，除包含在本說明書中以化學式具體表示者之外，亦包含鍵結樣式與以化學式所示之例子不同者，此等糖鏈亦適合被用做本發明中之糖鏈。就此等糖鏈而言，可列舉如：在二唾液酸基糖鏈或單唾液酸基糖鏈中唾液酸與半乳糖以(α2→3)鍵結而鍵結者等。

在上述所列舉之糖鏈中，構成此等之各糖殘基的羥 基及/或羧基可被保護基保護。就保護基而言，可為例如：為了保護糖殘基之羥基及/或羧基而藉由化學反應所導入之本技術領域人士公知之保護基。更具體而言，雖非限定於以下者，惟可列舉如：烷基(甲基、乙基等)、苯甲基、醯基(乙醯基、苯甲醯基、三甲基乙醯基等)、三級丁基二甲基矽基、三級丁基二苯基矽基、苯甲醯基、烯丙基等。

在本發明中，若考量在醫藥品等之製造領域之適用 性，而從避免抗原性等問題之觀點言之，較佳的糖鏈，可列舉如：與在人類體內以與蛋白質鍵結之糖蛋白質形式存在之糖鏈(例如，在「FEBS LETTERS Vol.50，No.3，Feb.1975」中記載之糖鏈)具有相同構造的糖鏈(構成糖之種類及此等之鍵結樣式均相同的糖鏈)、或從其非還原末端刪除1或複數個糖而成之糖鏈，如下述表1至4中記載之糖鏈。

在一較佳態樣中，於本發明中之糖鏈、糖鏈加成之 胺基酸或糖鏈加成之多肽中之糖鏈之構造，實質上係一致的。所謂「糖鏈、糖鏈加成之胺基酸或糖鏈加成之多肽中之糖鏈之構造實質上係一致」，意指在將本發明之化合物或其鹽、及本發明之糖鏈加成連接基中的糖鏈彼此比較之情況，構成糖鏈之各糖的種類、鍵結順序、及糖間的鍵結樣式實質上係一致；或者在將本發明之化合物或其鹽、及本發明之糖鏈加成連接基中的糖鏈加成之胺基酸及/或糖鏈加成之多肽彼此比較之情況，該胺基酸及/或該多肽中之糖鏈加成部位、構成糖鏈之各糖之種類、鍵結順序、及糖間之鍵結樣式實質上係一致。其中，所謂「實質上係一致」係指至少90%以上，較佳95%以上，更佳99%以上之糖鏈之構造係一致。於一更佳態樣中，不僅是糖鏈，本發明中之糖鏈加成之胺基酸及/或糖鏈加成之多肽的構造實質上亦係一致。所謂「糖鏈加成之胺基酸及/或糖鏈加成之多肽之構造實質上係一致」係指本發明之化合物或其鹽、或本發明之糖鏈加成連接基中，糖鏈、糖鏈加成之胺基酸及/或糖鏈加成之多肽之種類、構造等實質上係相同。 其中，所謂「實質上係相同」意指至少90%以上，較佳95%以上，更佳99%以上之糖鏈加成之胺基酸及/或糖鏈加成之多肽之構造係一致。縱使在本發明中之糖鏈加成連接基上存在2股以上之糖鏈的情況(換言之，同一化合物中存在複數股糖鏈之情況)、及包含於本發明之組成物或醫藥組成物中之，含有糖鏈加成連接基部分及生理活性物質部分之化合物或其鹽係複數種之情況(換言之，存在複數種化合物或其鹽之情況)，所有糖鏈、糖鏈加成之胺基酸及/或糖鏈加成之多肽中之所有糖鏈的構造係以實質上一致為較佳。在此等情況，進一步而言，所有糖鏈加成之胺基酸及/ 或糖鏈加成之多肽之構造係以實質上一致為更佳。糖鏈係一致的糖鏈加成之胺基酸及糖鏈加成之多肽，品質恆定，於醫藥品之製造、分析檢定等領域中為特佳。一致的糖鏈的比率，可藉由使用，例如，HPLC、毛細管電泳、NMR、質量分析等之方法來測定。再者。本發明中之糖鏈加成連接基或鍵結於連接基(具有未鍵結糖鏈之構造)之生理活性物質係以用相同鍵結樣式來鍵結為較佳。

在本發明中所使用之胺基酸序列及/或糖鏈係實質 上一致的，糖鏈加成之胺基酸或糖鏈加成之多肽，可藉著在固相合成、液相合成、經由細胞合成、分離抽出天然存在者之方法等本技術領域人士公知之肽製造方法中，插入糖鏈加成步驟而製造。關於此等糖鏈加成之胺基酸或糖鏈加成之多肽之製造方法，可參照，例如，國際公開第2010/021126號小冊、國際公開第2004/005330號小冊、國際公開2009/153960號小冊、日本特開2001-302695號、國際公開第2005/095331號小冊、日本特開2009-242372號、Biochimica et Biophysica Acta 1526(2001)242-248頁等。

關於糖鏈之製造方法，可參照，例如，國際公開第 03/008431號小冊、國際公開第2004/058984號小冊、國際公開第2004/008431號小冊、國際公開第2004/058824號小冊、國際公開第2004/070046號小冊、國際公開第2007/011055號小冊等。

雖無特殊限定，但於一態樣中，可用於本發明之糖 鏈加成之多肽，亦包含：將未鍵結於胺基酸之糖鏈直接或經由連接基中介鍵結於胺基酸、或多肽上之胺基酸而成之糖鏈加成之胺基酸或糖鏈加成之多肽；在糖鏈加成之胺基酸或糖鏈加成之多肽 中，藉由在加成的糖鏈上進一步加成糖或糖鏈，並使已加成之糖鏈伸長而得之糖鏈加成之胺基酸或糖鏈加成之多肽；使1或複數個(例如，2個至30個，以2個至10個為較佳)胺基酸鍵結於糖鏈加成之胺基酸之，例如，胺基及/或羧基，然後使其與胺基酸或多肽連結而成之糖鏈加成之多肽；使胺基酸所鍵結之糖鏈經由連接基中介鍵結於多肽上之胺基酸而成之糖鏈加成之多肽等。

又，藉由用糖轉移酵素將各種糖(例如，岩藻糖等) 轉移至本發明中之糖鏈加成之胺基酸或糖鏈加成之多肽，可有效率地得到所期望之具有糖鏈構造之糖鏈加成之胺基酸或糖鏈加成之多肽。例如，藉由用糖轉移酵素(例如，岩藻糖轉移酵素)轉移岩藻糖，可得到含岩藻糖之具有期望糖鏈構造的糖鏈加成之胺基酸或糖鏈加成之多肽。又，依存於所使用之糖轉移酵素，可得到鍵結樣式不同之具有期望糖鏈構造的糖鏈加成之胺基酸或糖鏈加成之多肽。

就岩藻糖而言。可使用一般市售之岩藻糖或化學合 成者。

就岩藻糖轉移酵素而言，可使用一般市售者、來自 天然者、藉由基因重組所生產者，可視所轉移之岩藻糖之種類而適宜選擇。具體而言，可列舉：使岩藻糖轉移至糖鏈天冬醯胺酸之非還原末端側之N-乙醯基葡萄糖胺的岩藻糖轉移酶V(人類，重組體、來自血漿、來自血清、來自乳汁、來自肝臓)等。又，使用岩藻糖水解酵素，並藉由pH調整等取代平衡，可使岩藻糖轉移。

在本發明中，關於糖鏈加成連接基、糖鏈加成連接 基部分、連接基、或連接基部分中之各取代基，進一步說明於下：

[關於R²及/或R³]

R²及R³各自獨立，係氫原子、碳數1至16之烷基、或碳數5至16之芳基(但是，R²及R³二者不同時為氫原子)，或者R²及R³與該等所鍵結之氮原子一起形成3至7員之雜環。雖然沒有限定，不過於一較佳實施態樣中，R²及R³與該等所鍵結之氮原子一起形成3至7員之雜環。

在R²及R³，與該等所鍵結之氮原子一起形成3至7 員之雜環之情況，3至7員之雜環可含有達最大數目之雙鍵，除了R²及R³各自鄰接之氮原子之外，可具有選自硫原子、氧原子及氮原子所構成之組群的雜原子。於一態樣中，雜原子係以選自硫原子、氧原子及氮原子所構成之組群者為較佳。雖無限定，不過前述3至7員之雜環，以選自氮雜環丙烷、氮雜環丁烷、吡咯啉(2-吡咯啉、3-吡咯啉等)、吡咯、咪唑、咪唑啉、吡唑、吡唑啉、異唑啉(3-異唑啉、4-異唑啉等)、噻唑啉(4-噻唑啉等)、異噻唑啉、噻二唑啉、吡咯啶、咪唑啶、吡唑啶、唑啶、異唑啶、噻唑啶、異噻唑啶、噻二唑啶、哌、哌啶、嗎啉、硫嗎啉、噻、四唑、三唑、三唑啶、四唑啶、氮雜環庚烷、二氮雜環庚烷、氮呯及高哌所構成之組群為較佳。

於一態樣中，前述3至7員之雜環，於其可取代之 位置上可具有1個以上之取代基。就取代基而言，雖無限定，惟可列舉：碳數1至16之烷基、碳數2至16之烯基、碳數2至16之炔基、碳數5至16之芳基、碳數3至8之環烷基、碳數3至8之環烯基、羥基、巰基、氰基、胺甲醯基、羧基、碳數1至4之烷氧基羰基(例如甲氧基羰基、乙氧基羰基等)、鹵素、 -(OA¹)n-OA²[A¹係碳數1至4之伸烷基，A²係碳數1至4之烷基，n係0至3之整數]所示之基(例如甲氧基、乙氧基、丙氧基、異丙氧基、丁氧基、異丁氧基、二級丁氧基、三級丁氧基、乙氧基乙氧基、甲氧基乙氧基乙氧基等)、苯氧基、鹵代苯氧基(例如鄰-、間-或對-氯苯氧基、鄰-、間-或對-溴苯氧基等)、碳數1至4之烷硫基(例如甲硫基、乙硫基、正丙硫基、異丙硫基、正丁硫基、三級丁硫基等)、苯硫基、碳數1至4之烷基亞磺醯基(例如甲基亞磺醯基、乙基亞磺醯基等)、碳數1至4之烷基磺醯基(例如甲基磺醯基、乙基磺醯基等)、碳數1至10之鹵代烷基(例如二氟甲基、三氟甲基、三氟乙基、三氯乙基等)、甲醯基、碳數1至5之烷醯基(例如乙醯基等)、苯甲醯基等。再者，並無限定，可列舉：未經取代或經取代之胺基，即碳數1至6之烷醯基胺基(例如乙醯基胺基、丙醯基胺基等)、碳數1至16之烷基胺基(例如係甲基胺基、乙基胺基、正丙基胺基、異丙基胺基、正丁基胺基、異丁基胺基、二級丁基胺基、三級丁基胺基、戊基胺基、己基胺基、庚基胺基、辛基胺基、壬基胺基、癸基胺基、十一基胺基、十二基胺基、十三基胺基、十四基胺基、十五基胺基、十六基胺基等，其中，此等烷基可經羥基取代)、碳數1至4之二烷基胺基(例如二甲基胺基、二乙基胺基、N-甲基-N-乙基胺基、N-甲基-N-丙基胺基等)等。

R²及/或R³，為碳數1至16之烷基之情況，碳數1 至16之烷基可為經取代或未經取代之直鏈狀或分枝鏈狀之脂肪族烴基。就碳數1至16之烷基之例子而言，可列舉：甲基、乙基、正丙基、正丁基、正戊基、正己基、正庚基、正辛基、正壬基、正癸基、正十一基、正十二基、正十三基、正十四基、正十五基、 正十六基。就為分枝鏈狀之脂肪族烴基之「碳數1至16之烷基」之例子而言，可列舉：異丁基、異癸基、2-乙基己基、2-辛基-十二基、新戊基、或三級丁基。就在直鏈狀或分枝鏈狀之脂肪族烴基中之1或複數個取代基之例子而言，其各自獨立，可列舉：碳數1至10之烷氧基(例如，甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基等)、胺基、羥基、巰基、羧基、或鹵素原子(例如，氟、氯、溴、碘)。

於一態樣中，R²及/或R³係碳數1至16之烷基之情 況，以經取代或未經取代之碳數1至10之烷基為較佳。於一更佳態樣中，可為經取代或未經取代之碳數1至7之烷基。

R²及/或R³，在係碳數5至16之芳基之情況，碳數 5至16之芳基可為經取代或未經取代之芳基。就芳基之1或複數個氫原子被置換之情況的取代基之例子而言，其係各自獨立，可列舉：碳數1至4之烷基、碳數1至4之烷氧基(例如，甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基等)、胺基、羥基、巰基、羧基、鹵素原子(例如，氟、氯、溴、碘)、碳數1至4之鹵烷基(例如氯甲基)。 就經取代或未經取代之芳基之例子而言，雖無限定，惟可列舉：苯基、聯苯基、萘基、蒽基、菲基、蒽基、鄰-甲苯基、間-甲苯基、對-甲苯基、二甲苯基、乙基苯基或苯甲基。

於一態樣中，R²及/或R³係碳數5至16之芳基之情 況，係以經取代或未經取代之碳數5至10之芳基為較佳。於一更佳之態樣中，可為經取代或未經取代之碳數5至8之芳基，例如，苯基、鄰-甲苯基、間-甲苯基、對-甲苯基或苯甲基。

[關於R⁴]

R⁴各自獨立，係氫原子、碳數1至16之烷基或碳數5至16 之芳基。

R⁴之1或複數個係碳數1至16之烷基之情況，可 與上文針對R²及/或R³所述之碳數1至16之烷基相同。

於一態樣中，R⁴之1或複數個係碳數1至16之烷 基之情況，係以經取代或未經取代之碳數1至10之烷基為較佳。 在一更佳之態樣中，可為經取代或未經取代之碳數1至5之烷基，例如，甲基、乙基、丙基。

R⁴之1或複數個係碳數5至16之芳基之情況，可 與上文針對R²及/或R³所述之碳數5至16之芳基相同。

於一態樣中，R⁴之1或複數個係碳數5至16之芳 基之情況，係以經取代或未經取代之碳數5至10之芳基為較佳。 在一更佳態樣中，可為經取代或未經取代之碳數5至8之芳基，例如，苯基、鄰-甲苯基、間-甲苯基、對-甲苯基或苯甲基。

R⁴，其可全部相同，或其中3個R⁴係相同。或者， 其所鍵結之碳原子不同且鄰接之2個前述R⁴之兩者、鍵結於相同碳原子之2個前述R⁴之兩者、或所鍵結之碳原子不同且呈對向之2個前述R⁴之兩者，可為相同。

以4個前述R⁴之至少1個係氫原子為較佳，以4 個前述R⁴之任意至少2個係氫原子為更佳，以4個前述R⁴之任意至少3個係氫原子為進一步更佳，以4個前述R⁴皆係氫原子為最佳。

[關於Y]

Y係： 其中，R^5A、R^5B，與R^5A所鍵結之碳原子、R^5B所鍵結之碳原子一起形成碳數5至16之芳基、碳數5至16之環烯基、碳數7至13之雙環基、碳數9至14之三環基、碳數6至14之醌、或5至10員之雜環，或者R^5A、R^5B各自獨立，係氫原子、鹵素、氰基、碳數1至4之烷基、碳數1至4之烷氧基、硝基、甲磺醯基、甲苯磺醯基、碳數1至3之醯基、羥基、羧基、胺基、經取代或未經取代之苯基、苯甲基，R^5C、R^5D，可與R^5C所鍵結之碳原子、R^5D所鍵結之碳原子一起形成碳數4至16之環烷基、碳數5至16之環烯基、碳數7至13之雙環基、碳數9至14之三環基、或5至10員之雜環。

在一較佳態樣中，在本發明中之糖鏈加成連接基、糖鏈加成連接基部分、或連接基部分中，Y係： 其中，R^5A、R^5B，與R^5A所鍵結之碳原子、R^5B所鍵結之碳原子一起形成碳數5至16之芳基，或者R^5A、R^5B皆係氫原子，R^5C、R^5D，可與R^5C所鍵結之碳原子、R^5D所鍵結之碳原子一起形成環己基或降冰片基。

[關於R^5A及/或R^5B]

R^5A、R^5B，與R^5A所鍵結之碳原子、R^5B所鍵結之碳原子一起形 成碳數5至16之芳基、碳數5至16之環烯基、碳數7至13之雙環基、碳數9至14之三環基、碳數6至14之醌、或5至10員之雜環，或者R^5A、R^5B各自獨立，係氫原子、鹵素、氰基、碳數1至4之烷基、碳數1至4之烷氧基、硝基、甲磺醯基、甲苯磺醯基、碳數1至3之醯基、羥基、羧基、胺基、經取代或未經取代之苯基、苯甲基。

R^5A、R^5B，在與R^5A所鍵結之碳原子、R^5B所鍵結之碳 原子一起形成碳數5至16之芳基之情況，碳數5至16之芳基可與上文針對R²及/或R³所述之碳數5至16之芳基相同。

於一態樣中，R^5A、R^5B，在與R^5A所鍵結之碳原子、 R^5B所鍵結之碳原子一起形成碳數5至16之芳基之情況，係以經取代或未經取代之碳數5至10之芳基為較佳。於一更佳態樣中，可為經取代或未經取代之碳數5至8之芳基，例如，苯基、鄰-甲苯基、間-甲苯基、對-甲苯基或苯甲基。

R^5A、R^5B，在與R^5A所鍵結之碳原子、R^5B所鍵結之 碳原子一起形成碳數5至16之環烯基之情況，碳數5至16之環烯基可為經取代或未經取代之環烯基。就未經取代之環烯基之例子而言，雖無限定，惟可列舉：下文針對R^5C、R^5D所述之碳數4至16之環烷基，其具有1個以上雙鍵等不飽和鍵者。可列舉如：環戊烯基、環己烯基、環庚烯基、環辛烯基、環壬烯基、環癸烯基、環十一烯基、環十二烯基、環十三烯基、環十四烯基、環十五烯基、或環十六烯基。就在環烯基之1或複數個氫原子被置換之情況的取代基之例子而言，各自獨立，可列舉：碳數1至4之烷基、碳數1至4之烷氧基(例如，甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁 氧基等)、胺基、羥基、巰基、羧基、鹵素原子(例如，氟、氯、溴、碘)、或碳數1至4之鹵烷基(例如氯甲基)。

於一態樣中，R^5A、R^5B，在與R^5A所鍵結之碳原子、 R^5B所鍵結之碳原子一起形成碳數5至16之環烯基之情況，係以經取代或未經取代之碳數5至10之環烯基為較佳。於一更佳態樣中，可為經取代或未經取代之碳數5至8之環烯基，例如，環己烯基。

R^5A、R^5B，在與R^5A所鍵結之碳原子、R^5B所鍵結之 碳原子一起形成碳數7至13之雙環基之情況，碳數7至13之雙環基可為經取代或未經取代之雙環基。就未經取代之雙環基之例子而言，並無限定，可具有1個以上雙鍵等不飽和鍵，視情況，可具有1或複數個雜原子。又，較佳地，雙環之各環可含有3至6員。就雙環之1或複數個氫原子被置換之情況的取代基之例子而言，各自獨立，可列舉：碳數1至4之烷基、碳數1至4之烷氧基(例如，甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基等)、胺基、羥基、巰基、羰基、羧基、鹵素原子(例如，氟、氯、溴、碘)、或碳數1至4之鹵烷基(例如氯甲基)。就碳數7至13之雙環基之例子而言，雖無限定，惟可列舉：柑橘環基、萘基。

於一態樣中，R^5A、R^5B，與R^5A所鍵結之碳原子、 R^5B所鍵結之碳原子一起形成碳數7至13之雙環基之情況，可為經取代或未經取代之碳數7至10之雙環基，例如，萘基。

R^5A、R^5B，在與R^5A所鍵結之碳原子、R^5B所鍵結之 碳原子一起形成碳數9至14之三環基之情況，碳數9至14之三環基可為經取代或未經取代之三環基。就未經取代之三環基之例 子而言，雖無限定，惟可具有1個以上之雙鍵等不飽和鍵，視情況，可具有1或複數個雜原子。又，較佳地，三環之各環可含有3至6員。就三環之1或複數個氫原子被置換之情況的取代基之例子而言，各自獨立，可列舉：碳數1至4之烷基、碳數1至4之烷氧基(例如，甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基等)、胺基、羥基、巰基、羰基、羧基、鹵素原子(例如，氟、氯、溴、碘)、或碳數1至4之鹵烷基(例如氯甲基)。就碳數9至14之三環基之例子而言，並無限定，可列舉：蒽基、菲基(phenanthryl)、二氫苊基(acenaphthenyl)、苊基(acenaphthylenyl)、茀基(fluorenyl)、此等之衍生物，例如此等之氫化物。

於一態樣中，R^5A、R^5B，在與R^5A所鍵結之碳原子、 R^5B所鍵結之碳原子一起形成碳數9至14之三環基之情況，係以經取代或未經取代之碳數12至14之三環基為較佳。在一更佳態樣中，可為經取代或未經取代之碳數14之三環基，例如，菲基。

R^5A、R^5B，在與R^5A所鍵結之碳原子、R^5B所鍵結之 碳原子一起形成碳數6至14之醌之情況，碳數6至14之醌可為經取代或未經取代之醌。就未經取代之醌之例子而言，雖無限定，惟可列舉：苯醌、蒽醌、萘醌。在醌中，亦包含係屬如鄰-苯醌、對-苯醌等異構物之關係者。就醌之1或複數個氫原子被置換之情況的取代基之例子而言，各自獨立，可列舉：碳數1至4之烷基、碳數1至4之烷氧基(例如，甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基等)、胺基、羥基、巰基、羰基、羧基、鹵素原子(例如，氟、氯、溴、碘)、或碳數1至4之鹵烷基(例如氯甲基)。

於一態樣中，R^5A、R^5B，在與R^5A所鍵結之碳原子、 R^5B所鍵結之碳原子一起形成碳數6至14之醌之情況，係以經取代或未經取代之碳數6至10之醌為較佳。在一更佳一態樣中，可為經取代或未經取代之碳數6之醌，例如，苯醌。

R^5A、R^5B，在與R^5A所鍵結之碳原子、R^5B所鍵結之 碳原子一起形成5至10員之雜環之情況，5至10員之雜環可為經取代或未經取代之雜環。就未經取代之雜環之例子而言，並無限定，可含有達最大數目之雙鍵，而且可具有1或複數個選自包含氮原子、硫原子、氧原子及氮原子之組群的雜原子。又，視情況，可為具有1或複數個雜原子之二環系或三環系(在該情況，具有1或複數個雜原子之二環系或三環系之雜環可為，例如，上述碳數7至13之雙環基或碳數9至14之三環基)。就雜環之例子而言，雖無限定，惟可列舉：吡唑環、吡咯環、呋喃環、噻吩環、咪唑環、噻唑環、異噻唑環、唑環、異唑環、吡啶環、吡環、嘧啶環或嗒環。就雜環之1或複數個氫原子被置換之情況的取代基之例子而言，各自獨立，可列舉：碳數1至4之烷基、碳數1至4之烷氧基(例如，甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基等)、胺基、羥基、巰基、羰基、羧基、鹵素原子(例如，氟、氯、溴、碘)、或碳數1至4之鹵烷基(例如氯甲基)。

於一態樣中，R^5A、R^5B，在與R^5A所鍵結之碳原子、 R^5B所鍵結之碳原子一起形成5至10員之雜環之情況，係以經取代或未經取代之5至8員之雜環為較佳。於一更佳態樣中，可為經取代或未經取代之5至7員之雜環，例如，吡啶環。

R^5A、R^5B，在未與R^5A所鍵結之碳原子、R^5B所鍵結之碳原子一起形成環之情況，R^5A、R^5B各自獨立，可為氫原子、 鹵素、氰基、碳數1至4之烷基、碳數1至4之烷氧基、硝基、甲磺醯基、甲苯磺醯基、碳數1至3之醯基、羥基、羧基、胺基、經取代或未經取代之苯基、苯甲基。就經取代之苯基之例子而言、雖無限定，不過可為鄰-甲苯基、間-甲苯基或對-甲苯基。又，就碳數1至3之醯基而言，以甲醯基、乙醯基為較佳。於一較佳態樣中，R^5A、R^5B，在未與R^5A所鍵結之碳原子、R^5B所鍵結之碳原子一起形成環之情況，R^5A、R^5B各自獨立，係氫原子、甲基、乙基、丙基、苯基。於一更佳態樣中，R^5A、R^5B皆為氫原子、甲基或苯基。

[關於R^5C及/或R^5D]

R^5C、R^5D，在與R^5C所鍵結之碳原子、R^5D所鍵結之碳原子一起形成碳數4至16之環烷基之情況，碳數4至16之環烷基可為經取代或未經取代之環烷基。就未經取代之環烷基之例子而言，雖無限定，惟可列舉：環丁基、環戊基、環己基、環庚基、環辛基、環壬基、環癸基、環十一基、環十二基、環十三基、環十四基、環十五基、或環十六基。就環烷基之1或複數個氫原子被置換之情況的取代基之例子而言，各自獨立，可列舉：碳數1至4之烷基、碳數1至4之烷氧基(例如，甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基等)、胺基、羥基、巰基、羧基、鹵素原子(例如，氟、氯、溴、碘)、或碳數1至4之鹵烷基(例如氯甲基)。

於一態樣中，R^5C、R^5D，在與R^5C所鍵結之碳原子、R^5D所鍵結之碳原子一起形成碳數4至16之環烷基之情況，係以經取代或未經取代之碳數4至10之環烷基為較佳。於一更佳態樣中，可為經取代或未經取代之碳數4至8之環烷基，例如，環戊 基、環己基、環庚基。

R^5C、R^5D，在與R^5C所鍵結之碳原子、R^5D所鍵結之碳原子一起形成碳數5至16之環烯基之情況，碳數5至16之環烯基可與上文針對R^5A及/或R^5B所述之碳數5至16之環烯基相同。

於一態樣中，R^5C、R^5D，在與R^5C所鍵結之碳原子、R^5D所鍵結之碳原子一起形成碳數5至16之環烯基之情況，係以經取代或未經取代之碳數5至10之環烯基為較佳。於一更佳態樣中，可為經取代或未經取代之碳數5至8之環烯基，例如，環己烯基。

R^5C、R^5D，在與R^5C所鍵結之碳原子、R^5D所鍵結之碳原子一起形成碳數7至13之雙環基之情況，碳數7至13之雙環基可與上文針對R^5A及/或R^5B所述之碳數7至13之雙環基相同。

於一態樣中，R^5C、R^5D，在與R^5C所鍵結之碳原子、R^5D所鍵結之碳原子一起形成碳數7至13之雙環基之情況，係以經取代或未經取代之碳數7至10之雙環基為較佳。於一更佳態樣中，可為經取代或未經取代之碳數7至9之雙環基，例如，降冰片基、六氯降冰片基。

R^5C、R^5D，在與R^5C所鍵結之碳原子、R^5D所鍵結之碳原子一起形成碳數9至14之三環基之情況，碳數9至14之三環基可與上文針對R^5A及/或R^5B所述之碳數9至14之三環基相同。

於一態樣中，R^5C、R^5D，在與R^5C所鍵結之碳原子、R^5D所鍵結之碳原子一起形成碳數9至14之三環基之情況，係以經取代或未經取代之碳數12至14之三環基為較佳。於一更佳態樣中，可為經取代或未經取代之碳數14之三環基，例如，十四氫 菲基。

R^5C、R^5D，在與R^5C所鍵結之碳原子、R^5D所鍵結之 碳原子一起形成5至10員之雜環之情況，5至10員之雜環可與上文針對R^5A及/或R^5B所述之5至10員之雜環相同。

於一態樣中，R^5C、R^5D，在與R^5C所鍵結之碳原子、 R^5D所鍵結之碳原子一起形成5至10員之雜環之情況，係以經取代或未經取代之5至8員雜環為較佳。於一更佳態樣中，可為經取代或未經取代之5至7員雜環，例如，環氧基環己基。

[關於R⁸、R^8A、R^8’]

R⁸係氫原子、碳數1至16之醯基、Fmoc基、Boc基、Z基、Troc基、或Alloc基等胺基甲酸酯系保護基；或者胺基酸、多肽、糖鏈、糖鏈加成之胺基酸、或糖鏈加成之多肽。於一特定態樣中，R⁸可為氫原子、碳數1至16之醯基、Fmoc基、Boc基、Z基、Troc基、或Alloc基。R^8A係碳數1至16之醯基、Fmoc基、Boc基、Z基、Troc基、或Alloc基等保護基。R⁸’係碳數1至16之醯基、Fmoc基、Boc基、Z基、Troc基、或Alloc基等保護基。

R⁸、R^8A或R^8’為碳數1至16之醯基之情況，碳數1 至16之醯基可為經取代或未經取代之醯基。就經取代或未經取代之醯基之例子而言，雖無限定，惟可列舉：甲醯基、乙醯基、甲基羰基、乙基羰基、正丙基羰基、異丙基羰基、正丁基羰基、異丁基羰基、二級丁基羰基、三級丁基羰基、正戊基羰基、異戊基羰基、新戊基羰基、2-甲基丁基羰基、苯甲醯基、1-萘甲醯基、2-萘甲醯基、甲基苯甲醯基、乙基苯甲醯基、甲苯基羰基、丙基苯甲醯基、4-三級丁基苯甲醯基、硝基苯甲基羰基、3-丁氧基-2-萘 甲醯基、桂皮醯基。

於一較佳態樣中，R⁸、R^8A或R^8’為碳數1至16之 醯基之情況，可各為甲醯基、乙醯基。

於一較佳態樣中，R⁸存在之情況，為了使本發明之 化合物或其鹽在酸性條件下(例如pH1至pH6)安定化，R⁸係碳數1至16之醯基、Fmoc基、Boc基、Z基、Troc基、或Alloc基等保護基。

[關於R⁹]

R⁹，各自獨立，為氫原子、鹵素、氰基、碳數1至4之烷基、碳數1至4之烷氧基、硝基、甲磺醯基、甲苯磺醯基、碳數1至3之醯基、羥基、羧基或胺基。

R⁹之1或複數個係鹵素之情況，係以氟、氯、溴或 碘為較佳。

R⁹之1或複數個係碳數1至3之醯基之情況，可為 經取代或未經取代之醯基。就未經取代之醯基之例子而言，並無限定，可列舉：甲醯基、乙醯基、丙醯基。於一較佳態樣中，R⁹之1或複數個為碳數1至3之醯基之情況，可為甲醯基、乙醯基。

R⁹之1或複數個係碳數1至4之烷基之情況，可為 經取代或未經取代之烷基。就未經取代之烷基之例子而言，可列舉：甲基、乙基、丙基、丁基。於一較佳態樣中，R⁹之1或複數個係碳數1至4之烷基之情況，可為甲基或乙基。

R⁹之1或複數個係碳數1至4之烷氧基之情況，可 為經取代或未經取代之烷氧基。就未經取代之烷氧基之例子而言，可列舉：甲氧基、乙氧基、正丙氧基、正丁氧基。於一較佳 態樣中，R⁹之1或複數個係碳數1至4之烷氧基之情況，可為甲氧基或乙氧基。

本發明者驚異地發現，在使糖鏈加成連接基部分從 本發明之含有糖鏈加成連接基部分及生理活性物質部分之化合物或其鹽快速地切斷，而使生理活性物質快速地游離之情況，前述R⁹係以電子吸引性基為較佳。因此，於一較佳實施態樣中，使糖鏈加成連接基部分從本發明之化合物或其鹽快速地切斷，而使生理活性物質快速地游離之情況，4個前述R⁹之至少1個，可獨立地被鹵素、氰基、硝基、甲磺醯基(甲烷磺醯基)、甲苯磺醯基(對-甲苯磺醯基)或碳數1至3之醯基置換。

同樣地，於另一較佳實施態樣中，在本發明中之糖鏈加成連接基、糖鏈加成連接基部分、或連接基部分中，R^5A、R^5B，與R^5A所鍵結之碳原子、R^5B所鍵結之碳原子一起形成碳數5至16之芳基、碳數5至16之環烯基、碳數7至13之雙環基、碳數9至14之三環基、碳數6至14之醌、或5至10員之雜環之情況，或者R^5C、R^5D，與R^5C所鍵結之碳原子、R^5D所鍵結之碳原子一起形成碳數4至16之環烷基、碳數5至16之環烯基、碳數7至13之雙環基、碳數9至14之三環基、或5至10員之雜環之情況，存在於此等環上之至少1個氫原子可獨立地被鹵素、氰基、硝基、甲磺醯基(甲烷磺醯基)、甲苯磺醯基(對-甲苯磺醯基)或碳數1至3之醯基置換。

在使糖鏈加成連接基部分之切斷更進一步加速之情 況，以前述親電子性基較多為較佳。又，親電子性基係以鹵素為較佳，係以氯為更佳。

因此，於一較佳實施態樣中，本發明之化合物或其 鹽、或本發明之糖鏈加成連接基中，可使用達到標的環境(例如血中)後，快速發揮藥理活性等的生理活性物質。

於本發明中之糖鏈加成連接基部分中，在氫原子被 糖鏈加成之胺基酸或糖鏈加成之多肽置換之情況，以被前述糖鏈加成之胺基酸中之胺基酸之部分置換，或者構成前述糖鏈加成之多肽中之該多肽的胺基酸之部分置換為較佳。此等置換，只要為本技術領域人士公知之鍵結態樣，即無限定。

於一較佳態樣中，本發明中之糖鏈、糖鏈加成之胺 基酸及/或糖鏈加成之多肽，可藉由鍵結於「存在於糖鏈加成連接基部分之氮原子、碳原子及/或硫原子等」的至少1個氫原子被置換而鍵結。

舉例言之，本發明中之糖鏈加成連接基部分係以前述式(I)表示之情況：R²或R³係氫原子之情況(R²及R³二者不同時為氫原子)，該氫原子部分，可被糖鏈加成之胺基酸或糖鏈加成之多肽置換；或R²及/或R³係碳數1至16之烷基、或碳數5至16之芳基，或者R²及R³與該等所鍵結之氮原子一起形成3至7員之雜環之情況，在鍵結於前述烷基、前述芳基、或前述雜環之至少1個氫原子之部分，可被糖鏈、糖鏈加成之胺基酸或糖鏈加成之多肽置換。

例如，前述R²係甲基之情況，該甲基(-CH₃)中之至少1個氫原子可被糖鏈加成之胺基酸或糖鏈加成之多肽置換。或者例如，前述R²及前述R³與該等所鍵結之氮原子一起形成哌之情況，鍵結於該哌之環構造上之氮原子的氫原子可被糖鏈加成之胺基酸 或糖鏈加成之多肽置換。

以鍵結於「存在於前述烷基、前述芳基、或前述雜環之氮原子」的至少1個氫原子被糖鏈、糖鏈加成之胺基酸或糖鏈加成之多肽置換為較佳。以鍵結於「存在於前述烷基、前述芳基、或前述雜環之氮原子」的至少1個氫原子被糖鏈加成之胺基酸或糖鏈加成之多肽置換為更佳；以該置換係在該「糖鏈加成之胺基酸或糖鏈加成之多肽」中之胺基酸或多肽部分中之鍵結又更佳。

舉例言之，本發明中之糖鏈加成連接基部分係以前述式(II)表示之情況：R⁶之糖鏈、糖鏈加成之胺基酸或糖鏈加成之多肽係鍵結於前述式(II)中之哌之環構造上的氮原子。於一態樣中，以R⁶係糖鏈加成之胺基酸或糖鏈加成之多肽為較佳，在該情況，雖無限定，不過R⁶與氮原子之鍵結，係以在該「糖鏈加成之胺基酸或糖鏈加成之多肽」中之胺基酸或多肽部分中之鍵結為較佳。

舉例言之，本發明中之糖鏈加成連接基部分係以前述式(III)或前述式(IV)表示之情況：藉由採用R⁷係-S-CH₂-CONH-糖鏈或-CONH-糖鏈者，前述式(III)或前述式(IV)所示之本發明中之糖鏈加成連接基部分包含糖鏈構造。又，在前述糖鏈加成連接基部分進一步包含其他糖鏈之情況，R⁸亦係糖鏈、糖鏈加成之胺基酸或糖鏈加成之多肽，且可鍵結於前述式(III)或前述式(IV)中之R⁸所鍵結之氮原子。

雖無限定，不過可利用來自R⁸所鍵結之氮原子的胺基親核性，將例如：氫原子、或碳數1至16之醯基、Fmoc基、Boc基、Z基、Troc基、或Alloc基等保護基之R⁸以糖鏈、糖鏈加成之胺 基酸或糖鏈加成之多肽置換。雖無限定，被置換之R⁸係糖鏈加成之胺基酸或糖鏈加成之多肽之情況，該置換係以在該「糖鏈加成之胺基酸或糖鏈加成之多肽」中之胺基酸或多肽部分中之鍵結為較佳。不用說，可首先將氫原子、或碳數1至16之醯基、Fmoc基、Boc基、Z基、Troc基、或Alloc基等保護基之R⁸用胺基酸或多肽置換後，再用本技術領域人士周知之方法將糖鏈加成在所置換的胺基酸或多肽上。

於一態樣中，本發明中之糖鏈加成之胺基酸，可藉 由存在於該胺基酸之主鏈之羧基中的-OH部分與來自糖鏈加成連接基部分的前述氫原子進行脫水縮合反應，而鍵結於糖鏈加成連接基部分。或者於另一態樣中，糖鏈加成之胺基酸中，該胺基酸係絲胺酸、蘇胺酸或酪胺酸之情況，可藉由存在於該胺基酸側鏈的羥基與前述氫原子進行脫水縮合反應而鍵結。或者於再一態樣中，糖鏈加成之胺基酸中，該胺基酸係天冬胺酸或麩胺酸之情況，可藉由存在於該胺基酸側鏈之羧基中的-OH部分與前述氫原子進行脫水縮合反應而鍵結。

於一態樣中，本發明中之糖鏈加成之多肽，可藉由使構成該多肽C末端之胺基酸之羧基中的-OH部分與來自糖鏈加成連接基部分之前述氫原子進行脫水縮合反應而鍵結。或者於另一態樣中，糖鏈加成之多肽，在構成該多肽之胺基酸殘基包含絲胺酸殘基、蘇胺酸殘基或酪胺酸殘基之情況，可藉由使存在於該胺基酸殘基側鏈的羥基與前述氫原子進行脫水縮合反應而鍵結。或者於再一態樣中，糖鏈加成之多肽，在構成該多肽之胺基酸殘基包含天冬胺酸殘基或麩胺酸殘基之情況，可藉由使存在於該胺 基酸殘基之側鏈之羧基中的-OH部分與前述氫原子進行脫水縮合反應而鍵結。

於本發明中，R⁷，可經由-S-CH₂-CONH-部分或-CONH- 部分中介，鍵結於糖鏈之任一部分(例如還原末端)。糖鏈係鍵結於-S-CH₂-CONH-或-CONH-之氮原子。R⁷係-S-CH₂-CONH-糖鏈之情況，-CH₂-CONH-表示連接基，而且以硫原子來自半胱胺酸為較佳。R⁷係-CONH-糖鏈之情況，以-CONH-來自天冬醯胺酸為較佳。

本發明之糖鏈加成連接基，可鍵結於生理活性物質 所具有之至少1個胺基、羥基、巰基、或羧基。其鍵結之態樣，雖然只要為本技術領域人士公知之態樣，將無限定，不過以在生理活性物質具有胺基之情況藉由醯胺鍵而鍵結，在生理活性物質具有羥基之情況藉由酯鍵而鍵結，在生理活性物質具有巰基之情況，藉由硫酯鍵而鍵結，在生理活性物質具有羧基之情況藉由酸酐鍵而鍵結為較佳。在本發明中之生理活性物質係低分子生理活性物質或生物體高分子之情況中，其之鍵結態樣亦為相同。

生理活性物質係聚核苷酸，或者在其一部分含有聚 核苷酸之情況，雖無限定，不過可經由其所具有之胺基或羥基中介，藉著醯胺鍵或酯鍵與本發明之糖鏈加成連接基鍵結。

生理活性物質係肽核酸，或者在其一部分含有肽核 酸之情況，雖無限定，不過可經由其所具有之胺基或羧基中介，以醯胺鍵與本發明之糖鏈加成連接基鍵結而鍵結。

生理活性物質係蛋白質或多肽，或者在其一部分中 含有肽部分之情況，雖無限定，不過可經由其所具有之胺基、羥基、巰基、或羧基中介，以醯胺鍵、酯鍵、硫酯鍵或酸酐鍵與本 發明之糖鏈加成連接基鍵結而鍵結。

於一較佳實施態樣中，本發明中之生理活性物質係 蛋白質或多肽，其以下列為較佳：(I)於N末端具有來自胺基酸之胺基；或(II)含有於側鏈具有羥基之絲胺酸殘基、蘇胺酸殘基或酪胺酸殘基；或(III)含有於側鏈具有羧基之天冬胺酸殘基或麩胺酸殘基；或(IV)含有於側鏈具有胺基之離胺酸殘基、天冬醯胺酸殘基、精胺酸殘基、組胺酸殘基或色胺酸殘基；或(V)含有於側鏈具有巰基之半胱胺酸殘基；或(VI)於C末端具有來自胺基酸之羧基。

天冬胺酸可為D-天冬胺酸。又，麩胺酸可為D-麩胺酸。同樣亦可採用其他人造胺基酸。

於此實施態樣中，生理活性物質部分與糖鏈加成連接基部分之鍵結係以下列為較佳：(1)位於前述生理活性物質之N末端之胺基的醯胺鍵結；(2)位於在前述生理活性物質之絲胺酸殘基、蘇胺酸殘基或酪胺酸殘基之側鏈所存在之羥基的酯鍵結(但是，限於前述生理活性物質具有絲胺酸殘基、蘇胺酸殘基或酪胺酸殘基之情況)；(3)位於在前述生理活性物質之天冬胺酸殘基或麩胺酸殘基之側鏈所存在之羧基(具體而言，-COOH基中之OH部分)的酸酐鍵結(但是，限於前述生理活性物質具有天冬胺酸殘基或麩胺酸殘基之情況)；(4)位於在前述生理活性物質之離胺酸殘基、天冬醯胺酸殘基、精 胺酸殘基、組胺酸殘基或色胺酸殘基之側鏈所存在之胺基的醯胺鍵結(但是，限於前述生理活性物質具有離胺酸殘基、天冬醯胺酸殘基、精胺酸殘基、組胺酸殘基或色胺酸殘基之情況)；(5)位於在前述生理活性物質之半胱胺酸殘基之側鏈所存在之巰基的硫酯鍵結(但是，限於前述生理活性物質具有半胱胺酸殘基之情況)；或(6)位於前述生理活性物質之C末端之羧基的酸酐鍵結。

前述(1)、(4)之情況，生理活性物質部分與糖鏈加成連接基部分，藉由鍵結而經由-NH-部分連接；前述(2)、(3)、(6)之情況，生理活性物質部分與糖鏈加成連接基部分，藉由鍵結而經由-O-部分連接；前述(5)之情況、生理活性物質部分與糖鏈加成連接基部分，藉由鍵結而經由-S-部分連接。

本發明中之生理活性物質具有肽部分之情況，生理活性物質部分與糖鏈加成連接基部分之鍵結之態樣，可與在生理活性物質係蛋白質或多肽之情況中所述之前述鍵結之態樣相同。

本發明之化合物或其鹽，加成於連接基部分之糖鏈之數目越多，其水溶性越提高；由於發現其之半減期沒有變化，所以認為糖鏈之存在不會干涉連接基部分從本發明之化合物或其鹽切斷。因此，在本發明中，糖鏈加成連接基部分與生理活性物質部分經由醯胺鍵而連接之情況，藉由切斷該醯胺鍵而切斷糖鏈加成連接基的機構，雖無意被理論約束，不過認為係基於在國際公開第2009/095479號小冊中所報告者。又，在該文獻中，有關相當於本發明中之糖鏈加成連接基部分或連接基部分中之取代基Y 的構造，具體揭示包含多樣構造(例如：以 所表示之構造等)的(載劑)連接基部分，亦具體揭示：該(載劑)連接基部分被切斷，而釋出/生成無修飾的藥物。再者，在該文獻中亦報告：「載劑-連接基-藥物複合物」中之載劑-連接基部分之切斷與藥物釋出速度在活體/試管中具有正相關關係。因此，本技術領域人士當理解本發明之化合物或其鹽中之糖鏈加成連接基部分之切斷與生理活性物質之釋出速度在活體/試管中具有正相關關係。

因此，於一極佳態樣中，以本發明中之糖鏈加成連 接基部分之切斷，在活體/試管中具有正相關關係為特徴。於一極佳實施態樣中，本發明之化合物或其鹽、及本發明之糖鏈加成連接基，由於具有糖鏈，亦可容易地溶解於活體環境(體液、例如，血液、淋巴液等)中。

又，在本發明中，糖鏈加成連接基部分與生理活性 物質部分經由酯鍵而連接之情況，該鍵結之切斷機構，雖無意被理論約束，不過認為係基於在Chem．Pharm．Bull．(2008)，Vol.56，1515-1520頁)中所報告者。

在本說明書中，「糖鏈加成連接基」，可以糖鏈加成 連接基部分(R¹)與脫離基L鍵結而成之式(B)「R¹-L」來表示，就其本身而言，可安定存在。本發明之糖鏈加成連接基可為意圖與具有至少一個胺基、羥基、巰基、或羧基之生理活性物質鍵結者。

本發明之糖鏈加成連接基，於一實施態樣中，以下述式(B)表示：R¹-L (B)其中，R¹意指糖鏈加成連接基部分，其定義係如上述；L意指脫離基；其中，以鍵結於「前述烷基、前述芳基、或存在於前述雜環之氮原子」的至少1個氫原子被糖鏈加成之胺基酸或糖鏈加成之多肽置換為較佳；以該置換係在該「糖鏈加成之胺基酸或糖鏈加成之多肽」中之胺基酸或多肽部分中之鍵結為更佳。

前述L表示可與糖鏈加成連接基部分(R¹)鍵結之基。脫離基L之態樣及脫離反應，只要為本技術領域人士公知者，卽無特殊限定。可使用，例如：如在國際公開第2009/095479號小冊中所揭示的脫離基。前述L，雖無限定，不過於一態樣中，可為氯、溴、氟、硝基苯氧基、咪唑基、N-羥基琥珀醯亞胺基、N-羥基苯并三唑基、N-羥基偶氮苯并三唑基、五氟苯氧基、2-硫酮基-噻唑啶基或N-羥基磺酸基琥珀醯亞胺基。

本發明之糖鏈加成連接基，在低溫(例如-80℃至4℃，以-80℃至-30℃為較佳)條件下可安定保存。再者，可藉由脫離反應將脫離基L從糖鏈加成連接基除去，然後以上述態樣，使其與生理活性物質鍵結。

本發明之糖鏈加成連接基，可使用本技術領域人士周知之方法，回收「包含糖鏈加成連接基部分及生理活性物質部分之化合物或其鹽」之中被自行切斷的糖鏈加成連接基部分，然 後再加以利用。

合成的、或回收的本發明之糖鏈加成連接基係以式 (I”)表示之糖鏈加成連接基之情況，藉由前述糖鏈加成連接基中之游離羧酸，與生理活性物質所具有之至少1個胺基、羥基、巰基、或羧基進行脫水縮合反應，使本發明之糖鏈加成連接基與生理活性物質鍵結，可製造本發明之化合物或其鹽。

或者只合成本發明中之連接基部分，接著使糖鏈、 糖鏈加成之胺基酸及/或糖鏈加成之多肽鍵結於連接基部分而製成糖鏈加成連接基部分。可以另外的途徑，使藉由從生物體抽出、表現、或化學合成等而得到之蛋白質或多肽等生理活性物質鍵結於所製造之糖鏈加成連接基。例如，在Bioconjugate Chem.(2007),Vol.18,1869-1878頁中報告：使蛋白質以醯胺鍵鍵結於以對-硝基苯基活化的PEG修飾連接基，得到PEG修飾連接基-蛋白質複合物，於還原條件下(硫醇存在下)，從該複合物切斷PEG修飾部分及連接基部分，生成無修飾之蛋白質。又，在日本特表2007-528354號公報中報告：以用N-羥基琥珀醯亞胺基活化之PEG修飾連接基修飾肽/蛋白質，經由2條不同路徑合成使肽/蛋白質以醯胺鍵鍵結於PEG修飾連接基而成之EG-S-MAL-FMS-NH-肽/蛋白質結合物，在生理的條件下，PEG修飾連接基部分會被切斷，得到無修飾之肽/蛋白質。此等技術文獻係說明：雖然載劑連接基部分與藥物以醯胺鍵鍵結，不過藉由連接基之分解，藥物本身被釋出。本技術領域人士根據本說明書及此等文獻之教示，當可理解如何合成、利用本發明之糖鏈加成連接基。

糖鏈加成連接基部分若從本發明之化合物或其鹽切 斷，於被切斷之糖鏈加成連接基中，與具有至少一個胺基、羥基、巰基、或羧基之生理活性物質部分鍵結的部分係具有-OH基。換言之，剛從本發明之包含糖鏈加成連接基部分及生理活性物質部分之化合物或其鹽切斷後之糖鏈加成連接基，可為在本說明書中以式(I”)所表示之糖鏈加成連接基。

在本發明中，糖鏈加成連接基中之「連接基」(具 有未鍵結糖鏈之構造)，可在未鍵結有糖鏈之狀態下製造。其製造方法、製造條件等，雖無限定，不過可藉由，例如，來自二羧酸酐(例如，酞酸酐)之二羧酸中之游離羧基與二胺(例如，N-(2-胺基乙基)哌)中之游離胺基(-NH₂)縮合而合成。二羧酸酐、二胺，雖無限定，不過可與在後述形成糖鏈加成連接基的單元中可使用之二羧酸酐、二胺相同。在使用二羧酸酐及二胺製造前述連接基(具有未鍵結有糖鏈之構造)之情況，可依照後述使用形成糖鏈加成連接基的單元來製造糖鏈加成連接基的方法/步驟來合成。依據為目標之最終糖鏈加成連接基的構造，本技術領域人士可適當選擇反應條件、反應化合物等，合成多種連接基。

在本發明中，使連接基部分鍵結於生理活性物質之 方法、反應條件等，雖無限定，不過本技術領域人士當可理解可適當參酌在例如，國際公開第2009/095479號小冊中所記載之製造方法、製造條件等進行。

於一態樣中，本發明之含有糖鏈加成連接基部分及 生理活性物質部分之化合物或其鹽，可利用液相合成法或固相合成法來合成。例如，在利用固相合成法之情況，本發明之含有糖鏈加成連接基部分及生理活性物質部分之化合物或其鹽，可藉由 包含下列之步驟來合成：(A)將生理活性物質固定於適當樹脂之步驟；(B)使連接基藉由醯胺鍵、酯鍵、硫酯鍵或酸酐鍵鍵結於該生理活性物質所具有之至少1個胺基、羥基、巰基、或羧基之步驟；(C)接著，使連接基鍵結於糖鏈、糖鏈加成之胺基酸及/或糖鏈加成之多肽的步驟。

於一實施態樣中，以下述步驟(B’)代替前述步驟(B)：(B’)該生理活性物質所具有之至少1個游離的胺基、羥基、巰基、或羧基部分，藉由醯胺鍵、酯鍵、硫酯鍵或酸酐鍵與第1連接基部分(二羧酸酐(例如酞酸酐))縮合，然後，藉由該第1連接基部分中之游離羧基，與第2連接基部分(二胺(例如N-(2-胺基乙基)哌))中之游離胺基縮合，可得到具有期望之連接基部分之生理活性物質。本技術領域人士，藉由適當選擇反應條件、待反應之構成連接基一部分的化合物等，並接著使其縮合於生理活性物質，即可合成具有期望連接基部分之生理活性物質。

於另一態樣中，在生理活性物質係蛋白質或多肽，或者在其一部分中包含肽部分之情況，於前述步驟(B)或前述步驟(B’)之前，在前述步驟(A)中，可藉由固相合成法，在適當的樹脂上合成蛋白質或多肽。藉由固相合成法合成蛋白質或多肽之方法，只要為本技術領域人士周知之方法，即無限定。

組合有「藉由固相合成法合成蛋白質或多肽之方法」的本發明之化合物或其鹽之製造方法，例如可如以下之方式進行。

首先，(1)使具有羥基之樹脂(resin)的羥基與以脂溶 性保護基保護胺基之胺基酸的羧基進行酯化反應。在該情況，由於以脂溶性保護基保護胺基酸之胺基，所以可防止胺基酸彼此間自行縮合，而係於樹脂的羥基與胺基酸的羧基之間發生酯化反應。

接著，(2)將在步驟(1)中所得到之酯的脂溶性保護基脫離，形成游離胺基；(3)使上述游離胺基與以脂溶性保護基保護胺基之另一胺基酸的羧基進行醯胺化反應；(4)步驟(3)之後，使脂溶性保護基脫離，形成游離胺基；(5)視需要藉由反覆進行步驟(3)及(4)之步驟，可得到所期望數目之胺基酸連結而成之多肽。

在步驟(5)中得到之多肽，一端鍵結於樹脂，於另一端具有游離胺基。然後，(6)將具有目的構造之連接基以醯胺鍵、酯鍵、硫酯鍵或酸酐鍵與鍵結於樹脂之前述多肽的游離胺基部分鍵結；(7)使前述連接基部分之規定取代基中之至少1個氫原子被糖鏈、糖鏈加成之胺基酸及/或糖鏈加成之多肽置換；(8)用酸切斷在步驟(1)中所形成之酯鍵。

藉由包含此等(1)至(8)之步驟之製造方法，可製造所期望之具有糖鏈、糖鏈加成之胺基酸及/或糖鏈加成之多肽部分的連接基部分-多肽化合物。

或者於前述步驟(6)之後，(7’)使前述連接基部分之規定取代基中的至少1個氫原子被胺基酸及/或多肽置換； (8’)用酸切斷在步驟(1)中所形成之酯鍵，得到所期望之具備胺基酸及/或多肽部分的連接基部分-多肽化合物；(9’)使糖鏈加成於前述化合物之胺基酸及/或多肽部分。

藉由包含此等(1)至(6)及(7’)至(9’)之步驟的製造方法，可製造所期望之具備糖鏈、糖鏈加成之胺基酸及/或糖鏈加成之多肽部分的連接基部分-多肽化合物。

於此等情況中，就固相樹脂(resin)而言，通常，只要為固相合成中所使用之樹脂即可，可使用如：胺基-PEGA樹脂(Merck公司製)、Wang樹脂(Merck公司製)、HMPA-PEGA樹脂(Merck公司製)或2-氯三苯甲基氯樹脂(Merck公司製)等。

又，在胺基-PEGA樹脂與胺基酸之間可存在連接基，就此等連接基而言，可列舉如：4-羥基甲基苯氧基乙酸(HMPA)、4-(4-羥基甲基-3-甲氧基苯氧基)-丁基乙酸(HMPB)等。

就脂溶性保護基而言，雖可列舉如：9-茀基甲氧基羰基(Fmoc)、三級丁基氧基羰基(Boc)、苯甲基氧基羰基(Z)、2,2,2-三氯乙氧基羰基(Troc)、烯丙基氧基羰基(Alloc)等含羰基之基；乙醯基(Ac)等醯基；烯丙基；苯甲基等保護基，不過未特別限定於此。

在導入脂溶性保護基方面，例如於導入Fmoc基之情況，可藉由加入碳酸9-茀基甲酯-N-琥珀醯亞胺酯及碳酸氫鈉進行反應而導入。反應可於0至50℃，較佳於室溫，進行約1至5小時。

就以脂溶性保護基保護的胺基酸而言，可使用以上述方法保護上述胺基酸者。又，亦可使用市售者。例如，可列舉 Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Cys(Acm)-OH、Fmoc-Cys(tButhio)-OH、Fmoc-Cys(Trt)-OH、Fmoc-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-His(Trt)-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Met-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Gln(Trt)-OH、Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-Trp(Boc)-OH、Fmoc-Tyr(tBu)-OH。

就酯化觸媒而言，可使用例如1-三甲基苯磺醯基-3- 硝基-1,2,4-三唑(MSNT)、二環己基碳化二亞胺(DCC)、1,3-二異丙基碳化二亞胺(DIC)等公知之脫水縮合劑。胺基酸與脫水縮合劑之使用比率，相對於前者1重量份，後者通常可為1至10重量份，以2至5重量份為較佳。

酯化反應，以例如，藉由在固相管柱中加入樹脂， 用溶劑洗淨該樹脂，之後加入胺基酸溶液而進行為較佳。就洗淨用溶劑而言，可列舉如：二甲基甲醯胺(DMF)、2-丙醇、二氯甲烷等。就溶解胺基酸之溶劑而言，可列舉如：二甲基亞碸(DMSO)、DMF、二氯甲烷等。酯化反應以於0至50℃，較佳於室溫，進行約10分鐘至30小時，較佳約15分鐘至24小時。酯化反應之後，以使用乙酸酐等將固相上之未反應官能基乙醯基化而封阻為較佳。

脂溶性保護基之脫離，可藉由用例如鹼處理而進 行。就鹼而言，可列舉如：哌啶、嗎啉等。此時，以於溶劑存在下進行為較佳。就溶劑而言，可列舉如：DMSO、DMF、甲醇等。

游離胺基與經脂溶性保護基保護胺基氮之任意胺基 酸/多肽中之羧基的醯胺化反應，以於活化劑及溶劑存在下進行為較佳。

就活化劑而言，可列舉如：二環己基碳化二亞胺 (DCC)、1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳化二亞胺/鹽酸鹽(WSC/HCl)、二苯基磷醯基疊氮化物(DPPA)、羰基二咪唑(CDI)、氰基膦酸二乙酯(DEPC)、1,3-二異丙基碳化二亞胺(DIC)、苯并三唑-1-基氧基-參吡咯啶基鏻六氟磷酸鹽(PyBOP)、3-二乙氧基磷醯基氧基-1,2,3-苯并三-4(3H)-酮(DEPBT)、1-羥基苯并三唑(HOBt)、羥基琥珀醯亞胺(HOSu)、二甲基胺基吡啶(DMAP)、1-羥基-7-氮雜苯并三唑(HOAt)、3-羥基-4-側氧基-3,4-二氫-5-氮雜苯并-1,2,3-三(HODhbt)、羥基酞醯亞胺(HOPht)、五氟酚(Pfp-OH)、2-(1H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲鎓六氟磷酸鹽(HBTU)、O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲鎓六氟膦酸鹽(HATU)、O-(6-氯-1H-苯并三唑-1-基)-N,N,N’,N’-四甲基脲鎓六氟磷酸鹽(HCTU)、O-苯并三唑-1-基-1,1,3,3-四甲基脲鎓四氟硼酸鹽(TBTU)等。

活化劑之使用量，相對於以脂溶性保護基保護胺基 氮之任意胺基酸/多肽，係1至20當量，以1至10當量為較佳，以1至5當量為更佳。

雖然反應可只用上述活化劑來進行，不過以併用胺 做為補助劑為較佳。就胺而言，可使用如：二異丙基乙基胺(DIPEA)、N-乙基嗎啉(NEM)、N-甲基嗎啉(NMM)、N-甲基咪唑(NMI)、2,4,6-三甲基吡啶等。補助劑之使用量，相對於以脂溶性保護基保護胺基氮之任意胺基酸/多肽，係1至20當量，以1至10當量為較佳，以1至5當量為更佳。

就溶劑而言，可列舉如：DMSO、DMF、二氯甲烷 等。反應係於0至50℃，較佳於室溫，進行約10分鐘至30小時，以進行約15分鐘至24小時為較佳。其間，使用乙酸酐等使固相上未反應之胺基進行乙醯基化而封阻為較佳。脂溶性保護基之脫離，可用與上述同樣的方式進行。

為了從樹脂切斷肽鏈，以用酸處理為較佳。就酸而 言，可列舉如：三氟乙酸(TFA)、氟化氫(HF)等。此時，由於有時會從使用於胺基酸之脂溶性保護基及樹脂上之連接基生成反應性高之陽離子物種，為了捕獲該陽離子物種，以添加親核性試藥為較佳。就親核性試藥而言，可列舉三異丙基矽烷(TIS)、酚、甲基苯基硫醚、乙二硫醇(EDT)等。

藉由化學合成、生物合成或購入等而獲得之生理活 性物質(例如，多肽)與連接基之縮合反應之條件，雖無特殊限定，不過根據本技術領域人士周知之方法可適當選擇來進行。例如，可依次使形成糖鏈加成連接基的單元(例如，二羧酸、二胺及糖鏈、糖鏈加成之胺基酸及/或糖鏈加成之多肽)作用於生理活性物質。在該情況，首先導入二羧酸，接著對前述二羧酸中之一羧酸經由醯胺鍵導入二胺，最後對前述二胺之另一胺基，經由醯胺鍵導入糖鏈、糖鏈加成之胺基酸及/或糖鏈加成之多肽。於二胺中之前述其他胺基，例如在用於形成經取代或未經取代之3至7員之雜環之情況，與糖鏈加成之胺基酸及/或糖鏈加成之多肽進行醯胺鍵結之胺基，可為來自3至7員之雜環構造的胺基。上述二羧酸之導入，可藉由，例如，於吡啶等鹼存在下，使二羧酸之酸酐與，例如，上述二胺中之游離胺基反應而進行。前述二胺之導入，可 藉由，例如，於上述活化劑及係上述補助劑之胺存在下，使前述二胺與二羧酸中的游離羧基縮合而進行。就上述反應之溶劑而言，可列舉如：DMSO、DMF、二氯甲烷等。此時，雖無限定，惟反應可在0至50℃，較佳於室溫下，進行約10分鐘至30小時，較佳約15分鐘至24小時。

雖無限定，不過對於前述二羧酸之酸酐，可例示， 例如，以下之化合物。例如，就具有芳基環之二羧酸之酸酐而言，可列舉：

例如，就做為具有環烷基環之二羧酸之酸酐而言，可列舉： 。例如，就具有環烯基環之二羧酸之酸酐而言，可列舉：

例如，就具有雜環之二羧酸之酸酐而言，可列舉：

例如，就具有雙環基之二羧酸之酸酐而言，可列舉：

例如，就具有三環基之二羧酸之酸酐而言，可列舉：

例如，就具有醌構造之二羧酸之酸酐而言，可列舉：

就其他例子而言，可列舉如：以下之二羧酸之酸酐：

關於本發明中之糖鏈加成連接基、糖鏈加成連接基部分、或連接基部分中之取代基Y，在R^5A、R^5B，與R^5A所鍵結之碳原子、R^5B所鍵結之碳原子一起形成碳數5至16之芳基、碳數5至16之環烯基、碳數7至13之雙環基、碳數9至14之三環基、碳數6至14之醌、或5至10員之雜環之情況，或者R^5C、R^5D，與R^5C所鍵結之碳原子、R^5D所鍵結之碳原子一起形成碳數4至16之環烷基、碳數5至16之環烯基、碳數7至13之雙環基、碳數9至14之三環基、或5至10員之雜環之情況，Y之構造，相當於，例如，除去上文具體所示之多樣二羧酸之酸酐中之C(=O)-O-C(=O)的構造部分。例如，使用酞酸酐做為二羧酸酐，製造本發明之化合物或其鹽、或本發明之糖鏈加成連接基、或連接基(具有未鍵結糖鏈之構造)之情況，酞酸酐之中，於下述式中虛線所圍繞之苯基環部分(亦即，酞酸酐之中，除去 C(=O)-O-C(=O)之構造部分)相當於取代基Y之構造。

只要為本技術領域人士，當可理解在多種二羧酸之酸酐中，除去C(=O)-O-C(=O)之構造部分可被導入做為糖鏈加成連接基或構成連接基部分之一部分。

前述二胺，並無限定，可為經取代或未經取代之伸乙二胺。存在於伸乙二胺中之胺基以外的1個或複數個氫原子被置換之情況，可被碳數1至16之烷基或碳數5至16之芳基置換。在前述經取代或未經取代之伸乙二胺中，該胺基之一者，可用於經取代或未經取代之3至7員之雜環的形成。在該情況，就此等二胺而言，可使用市售者，或者以本技術領域人士周知之方法來合成。雖無限定，惟可列舉如：分別以下列化學構造式所列舉的二胺衍生物：N-(2-胺基乙基)咪唑啶： N-(2-胺基乙基)哌： 4-(2-胺基乙基)-1,4-二氮雜環庚烷： N-(2-胺基丙基)哌： 4-(2-胺基乙基)哌-2-酮： 1-(2-胺基乙基)-哌啶-3-醇： 1-(2,5-二甲基哌-1-基)丙-2-胺：

又，前述經取代或未經取代之3至7員之雜環，可與上文針對取代基R²及/或R³所述之經取代或未經取代之3至7員雜環相同。

於一實施態樣中，本發明中之以式(I)表示之糖鏈加 成連接基部分中的R²及/或R³係碳數1至16之烷基之情況，可在該烷基上導入，例如，胺基、羧基、羥基、巰基等官能基，然後在該官能基部分導入，例如，糖鏈、胺基酸、多肽、糖鏈加成之胺基酸或糖鏈加成之多肽。例如，可依照本技術領域人士周知之方法，藉由化學合成在前述烷基上之任意位置導入前述官能基。 雖無限定，前述胺基可藉由醯胺鍵，前述羧基可藉由醯胺鍵或酯鍵，前述羥基可藉由酯鍵或醚鍵，前述巰基可藉由硫醚鍵或硫酯鍵，而鍵結，例如：可與糖鏈加成之胺基酸及/或糖鏈加成之多肽鍵結。

例如，就相當於本發明中之以式(I)表示之糖鏈加成連接基部分中之R²及/或R³的部分具有碳數1至16之烷基，且導入有胺基之前述伸乙二胺衍生物而言，可例示以下之衍生物(二胺衍生物)：3-(2-胺基乙基胺基)丙基胺： 參(2-胺基乙基)胺： 或例如，就相當於本發明中之以式(I)表示之糖鏈加成連接基部分中之R²及/或R³部分具有碳數1至16之烷基，且導入有羧基之前述伸乙二胺衍生物而言，可例示以下之衍生物：[(2-胺基乙基)胺基]乙酸： 或例如，就相當於本發明中之以式(I)表示之糖鏈加成連接基部分中之R²及/或R³部分具有碳數1至16之烷基，且導入有羥基之前述伸乙二胺衍生物而言，可例示以下之衍生物： 3-(2-胺基乙基胺基)丙醇： N,N-雙(2-羥基乙基)伸乙二胺： 或例如，就相當於本發明中之以式(I)表示之糖鏈加成連接基部分中之R²及/或R³部分具有碳數1至16之烷基，且導入有巰基之前述伸乙二胺衍生物而言，可例示以下之衍生物： 2-(2-胺基乙基胺基)乙硫醇：

在相當於本發明中之其他糖鏈加成連接基或連接基中之R²及/或R³部分中存在碳數1至16之烷基的情況，本技術領域人士對於，例如：糖鏈、胺基酸、多肽、糖鏈加成之胺基酸及/或糖鏈加成之多肽的導入，亦可同樣地理解。

同樣地，在另一實施態樣中，於本發明中以式(I)表示之糖鏈加成連接基部分中之R²及/或R³係碳數5至16之芳基 之情況，於該芳基上可導入，例如，胺基、羧基、羥基、巰基等官能基，在該官能基部分中，可導入，例如，糖鏈、胺基酸、多肽、糖鏈加成之胺基酸或糖鏈加成之多肽。例如，可依照本技術領域人士周知之方法，藉由化學合成將前述官能基導入前述芳基上之任意位置。雖無限定，不過前述胺基可藉由醯胺鍵，前述羧基可藉由醯胺鍵或酯鍵，前述羥基可藉由酯鍵或醚鍵，前述巰基可藉由硫醚鍵或硫酯鍵，而可與例如糖鏈加成之胺基酸及/或糖鏈加成之多肽鍵結。

例如，就在相當於本發明之以式(I)表示之糖鏈加成連接基部分之R²及/或R³的部分具有碳數5至16之芳基，且導入有胺基之前述伸乙二胺衍生物而言，可例示以下之衍生物：N-(2-胺基乙基)-1,4-苯二胺： N-(2-胺基乙基)-1,2-苯二胺： N-(2-胺基乙基)-1,3-苯二胺： 或者，例如，就在相當於本發明之以式(I)表示之糖鏈加成連接基 部分之R²及/或R³的部分中具有碳數5至16之芳基，且導入有羧基之前述伸乙二胺衍生物而言，可例示以下之衍生物：4-[(2-胺基乙基)胺基]-苯甲酸： 或者，例如，就在相當於本發明之以式(I)表示之糖鏈加成連接基部分之R²及/或R³的部分中具有碳數5至16之芳基，且導入有羥基之前述伸乙二胺衍生物而言，可例示以下之衍生物：4-[(2-胺基乙基)胺基]-酚：

本技術領域人士，對於在相當於本發明之其他糖鏈加成連接基或連接基中之R²及/或R³的部分中存在碳數5至16之芳基的情況中，例如，糖鏈、胺基酸、多肽、糖鏈加成之胺基酸及/或糖鏈加成之多肽的導入，亦可同樣地理解。

本發明中之以式(I)表示之糖鏈加成連接基部分中之R²及/或R³，係碳數1至16之烷基或碳數5至16之芳基，或者R²及R³與該等所鍵結之氮原子可一起形成3至7員之雜環，且在前述烷基、前述芳基或前述雜環上導入有巰基之情況，雖無限定，不過可直接鍵結鹵乙醯基化(例如溴乙醯基化)複合型糖鏈衍生物(或鹵代乙醯胺化複合型糖鏈衍生物)等。

同樣地，本技術領域人士當可理解：本發明中之以 式(I)表示之糖鏈加成連接基部分中之R²及/或R³係碳數1至16之烷基或碳數5至16之芳基，或者R²及R³與該等所鍵結之氮原子可一起形成3至7員之雜環，而且鍵結於其上之糖鏈加成之胺基酸或糖鏈加成之多肽中之該糖鏈為，例如，鹵乙醯基化複合型糖鏈衍生物等糖鏈的情況，該糖鏈部分可不經由胺基酸部分或多肽部分中介，直接鍵結於前述糖鏈加成連接基部分。

鹵乙醯基化複合型糖鏈衍生物(或鹵乙醯胺化複合 型糖鏈衍生物)係，例如，將鍵結於複合型天冬醯胺酸鍵結型糖鏈之1位之碳的羥基，用-NH-(CH₂)_a-(CO)-CH₂X(X係鹵素原子；a係整數，雖然只要不阻礙目的連接基功能，將無限定，不過以表示0至4之整數為較佳)置換之化合物。

於一態樣中，將鍵結於生理活性物質之連接基部分 之規定取代基中的至少1個氫原子，以糖鏈、糖鏈加成之胺基酸(胺基酸可為，例如，天冬醯胺酸)及/或糖鏈加成之多肽(可為該多肽中之天冬醯胺酸殘基)置換的反應條件，雖無限定，不過可根據本技術領域人士周知之方法適當選擇而進行。例如，可於上述活性化劑及為上述補助劑之胺的存在下，使糖鏈、糖鏈加成之胺基酸及/或糖鏈加成之多肽反應。

於另一態樣中，將鍵結於生理活性物質之連接基部 分之規定取代基中之至少1個氫原子用胺基酸(例如半胱胺酸)及/或多肽部分(可為在該多肽中之半胱胺酸殘基)置換之反應條件，雖無限定，不過可根據本技術領域人士周知之方法適當選擇而進行。例如，其可藉由固相合成法、液相合成法等，在糖鏈加成之位置導入Cys而實施。在此情況中，於所置換的胺基酸及/或多肽 上進一步加成糖鏈的反應條件，雖無限定，不過可根據本技術領域人士周知之方法適當選擇而進行。例如，藉由使鹵乙醯基化複合型糖鏈衍生物，與在上述中所得到之包含無保護Cys的化合物反應，可使糖鏈與無保護Cys的巰基反應，而鍵結於該化合物。 上述反應，以在磷酸緩衝液、Tris-鹽酸緩衝液、檸檬酸緩衝液、或此等之混合溶液中，通常於0至80℃，較佳於10至60℃，更佳於15至35℃進行為較佳。反應時間，雖無限定，不過通常為10分鐘至24小時，以通常為約30分鐘至5小時為較佳。反應終了後，可用適宜、公知的方法(例如，HPLC)精製。再者，鹵乙醯基化可為，例如，氯乙醯基化、溴乙醯基化、碘乙醯基化等。所謂鹵乙醯基化複合型糖鏈衍生物可意指例如：雙股複合型糖鏈、3股複合型糖鏈或4股複合型糖鏈等複合型糖鏈被鹵乙醯基化者。 糖鏈之鹵乙醯基化之方法及態樣，可參照，例如，國際公開第2005/10053號小冊(US2007060543(A1))等，為本技術領域人士所公知。

於一實施態樣中，在本發明之含有糖鏈加成連接基 部分及生理活性物質部分之化合物或其鹽之製造方法中所使用之連接基部分係以前述之式(I’)表示(式中，各取代基及波線係規定於上文)。

其中，以鍵結於「存在於前述烷基、前述芳基、或前述雜環中之氮原子」的至少1個氫原子被糖鏈加成之胺基酸或糖鏈加成之多肽置換為較佳；該置換，又以位於該「糖鏈加成之胺基酸或糖鏈加成之多肽」中之胺基酸或多肽部分中之鍵結為更佳。

於一較佳實施態樣中，雖無限定，不過在本發明之 含有糖鏈加成連接基部分及生理活性物質部分之化合物或其鹽之製造方法中所用的連接基部分，可用以下述式(II’)表示之連接基部分代替前述之以式(I’)表示之連接基部分， [式(II’)中，R⁴、Y及波線係分別如在上述中之規定；R⁶’係氫原子]。

在此情況，為了得到糖鏈加成連接基部分，將前述連接基部分之R⁶’之氫原子以糖鏈、糖鏈加成之胺基酸或糖鏈加成之多肽進一步置換(其中，於一態樣中，將前述連接基部分之R⁶’之氫原子以糖鏈加成之胺基酸或糖鏈加成之多肽置換為較佳；該置換，雖無限定，不過係以在「糖鏈加成之胺基酸或糖鏈加成之多肽」中之胺基酸或多肽部分中之鍵結為較佳)。

於一較佳實施態樣中，雖無限定，前述以式(II’)表示之連接基部分之R⁶’中之氫原子可被糖鏈加成之天冬醯胺酸(該天冬醯胺酸之主鏈之胺基可藉由保護基保護)置換，且可具有以式(IIIa)表示之糖鏈加成連接基部分的構造。

[式(IIIa)中， R⁴、Y及波線分別係如上述中之規定；R^7A係-CONH-糖鏈；R^8A係碳數1至16之醯基、Fmoc基、Boc基、Z基、Troc基、或Alloc基等保護基)

再者，可將前述R^8A之保護基用氫原子、胺基酸、多肽、糖鏈、糖鏈加成之胺基酸或糖鏈加成之多肽置換。於一態樣中，R^8A係糖鏈加成之胺基酸或糖鏈加成之多肽時，R^8A與氮原子之鍵結係以在該「糖鏈加成之胺基酸或糖鏈加成之多肽」中之胺基酸或多肽部分中之鍵結為較佳。

或者在另一較佳實施態樣中，雖無限定，以前述式(II’)表示之連接基部分之R⁶’之氫原子可被主鏈之胺基以保護基保護的半胱胺酸置換，且可具有以式(III’)表示之連接基部分的構造。

[式(III’)中、R⁴、Y及波線分別係如在上述中之規定；R⁷’係-SH；R⁸’係碳數1至16之醯基、Fmoc基、Boc基、Z基、Troc基、或Alloc基等保護基)。

其中，可將前述R⁸’之保護基進一步用氫原子、胺基酸、多肽、糖鏈、糖鏈加成之胺基酸或糖鏈加成之多肽置換。 於一態樣中，R⁸’係糖鏈加成之胺基酸或糖鏈加成之多肽時，R⁸’與氮原子之鍵結，係以在該「糖鏈加成之胺基酸或糖鏈加成之多肽」中之胺基酸或多肽部分中之鍵結為較佳。

又，藉由將前述R⁷’之-SH中的氫原子用-CH₂-CONH-糖鏈置換，可形成糖鏈加成連接基部分。

於一實施態樣中，本發明以提供藉由上述任一製造 方法可得(obtainable)之化合物或其鹽為較佳。所謂可得到之化合物或其鹽，不限於藉由上述任一製造方法所製造者，藉由其他製造方法所製造者亦可。

於另一實施態樣中，本發明以提供藉由上述任一製 造方法所得到(obtained)之化合物或其鹽為較佳。

於一較佳態樣中，藉由利用本發明之糖鏈加成連接 基，不論生理活性物質是否為難溶性，就本發明之含有糖鏈加成連接基部分及生理活性物質部分之化合物或其鹽而言，可容易地將生理活性物質溶解於水溶液、或從水溶液所調製成的乳液中。 該溶解後，藉由該糖鏈加成連接基部分被切斷，可以釋出無修飾之生理活性物質。

於一較佳態樣中，本發明中之糖鏈加成連接基部 分，可不依存酵素或光而從本發明之含有糖鏈加成連接基部分及生理活性物質部分之化合物或其鹽切斷。亦即，該糖鏈加成連接基部分，藉由其分子內觸媒作用，可藉由自動水解從該「含有糖鏈加成連接基部分及生理活性物質部分之化合物或其鹽」切斷。 不過，就該切斷而言，並無意排除，例如，藉由存在於生物體內之酵素切斷(例如，醯胺鍵結之情況，酵素可列舉醯胺酶；酯鍵結 之情況，酵素可列舉酯酶)等生物學的切斷或光等化學的切斷。

於本說明書中，所謂「自行切斷」或「以本身做為 觸媒進行切斷」，意指在本發明之含有糖鏈加成連接基部分及生理活性物質部分之化合物或其鹽中，藉由連接基部分內之分子內觸媒作用而活化，使糖鏈加成連接基部分-生理活性物質部分的鍵結藉由自動水解(不需要酵素或光等外來要因之水解)而切斷。

於一較佳實施態樣中，本發明之化合物或其鹽溶解 於水溶液或乳液中後，具有依存於pH及/或溫度，糖鏈加成連接基部分之切斷加速之特徴(pH及/或溫度依存性切斷)。本發明之化合物或其鹽、及本發明之糖鏈加成連接基，例如，可於低溫(例如-80℃至4℃)及/或低pH(例如pH1至pH4)保存。又，使糖鏈加成連接基部分鍵結於生理活性物質，而調製「含有糖鏈加成連接基部分及生理活性物質部分之化合物或其鹽」的步驟，可於，例如，低溫(例如0℃至25℃)及/或低pH(例如pH1至pH7)進行。藉由將糖鏈加成之胺基酸之N末端的胺基用碳數1至16之醯基、Fmoc基、Boc基、Z基、Troc基、或Alloc基等保護，可使本發明之含有糖鏈加成連接基部分及生理活性物質部分之化合物或其鹽及本發明之糖鏈加成連接基安定化。

本發明之化合物或其鹽以在接近生理條件的溫度及 pH(例如，哺乳動物之生物體內之生理環境或與其接近之環境，例如35℃至43℃，pH6.8至7.8等)使用為較佳。

於一較佳實施態樣中，藉由使用本發明之化合物或 其鹽，可使生理活性物質有效率地溶解於水溶液、或從水溶液所調製之乳液。因此，於一較佳態樣中，藉由使用本發明之化合物 或其鹽，甚至水溶性低(難溶性)的生理活性物質，也可進行過濾器滅菌。再者，於另一較佳態樣中，藉由使用本發明之化合物或其鹽，甚至水溶性低的生理活性物質，亦可投與至生物體。

於另一較佳實施態樣中，藉由使用本發明之化合物 或其鹽，縱使是水溶性高的生理活性物質，亦可以高效率溶解於水溶液、或從水溶液調製成之乳液。因此，本發明之優點在於：在含有高價生理活性物質之製劑調製或製劑投與過程中，可降低因物質之不溶性等所導致之「損失」。

又，於一其他較佳實施態樣中，藉由適當選擇事先 已知在溶劑中之半減期的本發明之糖鏈加成連接基，將可控制在試管內環境或在活體環境中被釋出之無修飾生理活性物質之釋出時間、時序(timing)。例如，投與至生物體內後，在將想要於期望部位迅速發揮效果之生理活性物質之送達亦為有利。

於一特佳實施態樣中，本發明之含有糖鏈加成連接 基部分及生理活性物質部分之化合物或其鹽，與無修飾之生理活性物質相較，可提供提高的水溶性。前述提高的水溶性，雖無限定，不過以莫耳濃度計，係以2倍至1,000,000倍為較佳，係以10倍至1,000,000倍為更佳，係以100倍至1,000,000倍為更佳。本技術領域人士，依生理活性物質之用途及目的，可適當選擇具有必要溶解性之本發明之含有糖鏈加成連接基部分及生理活性物質部分之化合物或其鹽或本發明之糖鏈加成連接基。

為了決定本發明之含有糖鏈加成連接基部分及生理 活性物質部分之化合物或其鹽、或無修飾之生理活性物質的溶解度所需要的莫耳吸光係數(比吸光度)，可藉由本技術領域人士公 知之方法來決定，例如，以用胺基酸組成分析或氮定量法等方法測定而已知蛋白質濃度之溶液做為試料，藉由紫外線可視光分光光度法(例如，於280nm等紫外線可視光區域之波長)來決定。

本發明之組成物，除了含有1種以上之本發明之化 合物或其鹽之外，含有任意1種以上之其他成分(活性成分或不活性成分)。本發明之組成物之使用，雖無特殊限定，不過可使用，例如，檢定分析系統(例如在試管內之檢定分析系統等)。又，本發明之醫藥組成物係適於醫藥用途之組成物，係使用通常所用的充填劑、增量劑、黏合劑、濕潤劑、崩散劑、表面活性劑、潤滑劑等稀釋劑或賦形劑，製劑化成通常之醫藥組成物之形式者。就此等醫藥組成物而言，雖無限定，惟可列舉如：錠劑、丸劑、散劑、液劑、懸浮劑、乳劑、顆粒劑、膠囊劑、栓劑、注射劑等。 做為醫藥組成物之對象的醫藥用途，可為以組成物中所含之生理活性物質(呈生理活性物質部分)涉及之疾患、疾病做為對象者。 例如，生理活性物質係GLP-1或其衍生物之情況，做為對象之醫藥用途可為糖尿病等。關於其他醫藥用途，在合併考量各生理活性物質所涉及之疾患、疾病的種類下，本技術領域人士當可以同樣方式理解。

在本說明書中，所謂藥理學上容許的載劑，沒有特 殊限制。亦可藉由調配藥理學上容許的載劑，影響本發明之化合物或其鹽之吸收性及血中濃度，而帶來體內動態的變化。

特佳地，使用抗原做為生理活性物質之情況，本發明之化合物或其鹽及含有該化合物之本發明醫藥組成物亦可利用做為疫苗。於一較佳態樣中，例如，縱使為難溶性之抗原，做成 本發明之化合物或其鹽則可溶解於水溶液或乳液中；又，在生物體內，切斷糖鏈加成連接基部分後，可釋出無修飾之抗原。本發明之化合物或其鹽及糖鏈加成連接基以可利用於肽疫苗等各種疫苗之開發為較佳。

於本說明書中，疫苗(亦被稱為免疫原性組成物)意 指在接種於動物之時，可產生免疫應答(response)的物質。疫苗含有抗原，或可表現抗原，藉此，可誘導對抗原之免疫應答。本發明之醫藥組成物用做疫苗之情況，不僅可用於病毒感染、細菌感染(敗血症等)、傳染病之預防或治療，亦可用於與免疫應答有關之任何疾患，例如癌、自體免疫疾患(例如，I型糖尿病、多發性硬化症、風濕關節炎等)之治療等。

所謂抗原係含有1個或其以上之抗原決定部位之分 子，只要為可刺激宿主之免疫系統並誘導抗原特異性免疫應答者皆可。免疫應答可為體液性免疫應答及/或細胞性免疫應答。雖然即使約3個至數個(例如5個、6個)之胺基酸，即可成為1個抗原決定部位，不過，蛋白質中之1個抗原決定部位通常包含7至15個胺基酸、例如8、9、10、12或14個胺基酸。抗原，於一態樣中，係以肽或抗原決定部位為較佳。在將抗原用於癌之治療之情況，該肽亦被稱為癌肽。

又，可將本發明之醫藥組成物(包含用做疫苗之情 況)投與至生物體。就該投與方法而言，沒有特殊限制，係依各種製劑形態、患者之年齡、性別、疾患之狀態、其他條件以適合的方法來投與。就錠劑、丸劑、液劑、懸浮劑、乳劑、顆粒劑及膠囊劑之情況的投與方法而言，可列舉如：經口投與。又，在注射 劑之情況，可單獨，或與葡萄糖、胺基酸等通常的補液混合，投與至靜脈內、肌肉內、皮內、皮下或腹腔內。在栓劑之情況，投與至直腸內。本發明之醫藥組成物，在做為疫苗使用之情況，可皮下注射、肌肉內注射、經口、打印式(stamp)、皮內注射等。

本發明之醫藥組成物(包含做為疫苗使用之情況)之 投與量，可依用法、患者之年齡、性別、疾患之程度、其他條件而適當選擇。投與次數，可依用法、患者之年齡、性別、疾患之程度、其他條件而適宜選擇，例如，3次/1日、2次/1日、1次/1日、再者，依其血中安定性，亦可選擇較少頻率之投與次數(例如，1次/週，1次/月等)。本發明之醫藥組成物，藉由糖鏈連接基部分之切斷慢慢發生，可提供生理活性物質緩釋性。或者，本發明之醫藥組成物，藉由糖鏈連接基部分之切斷迅速發生，可提供生理活性物質速效性。

又，於此一態樣中，本發明亦關於糖鏈加成連接 基、或含有糖鏈加成連接基部分及生理活性物質部分之化合物或其鹽中之生理活性物質在對象疾患、疾病之治療或預防用醫藥之製造上的使用。或者於另一態樣中，本發明亦關於糖鏈加成連接基、或含有糖鏈加成連接基部分及生理活性物質部分之化合物或其鹽中之生理活性物質，在對象疾患、疾病之治療或預防等的使用。

本發明之糖鏈加成連接基，藉由將具有生物分解性之糖鏈加成於連接基，與加成PEG之情況相比，可減輕對於生物體之不良影響。其結果，可期待對於生物體之長期間投與。

在本說明書中之水溶液，只要為物質(例如乙酸)溶 解於水而成之液體即可，以本技術領域人士公知或新穎的全部水溶液為對象。

在本說明書中之乳液，雖無限定，不過只要為可從 水溶液調製者，任一者皆可。就乳液而言，雖然沒有限定，但可為水中油滴(O/W型)乳液或油中水滴(W/O型)乳液。在水溶液中分散乳化的方法，可使用本技術領域人士公知之方法。

所謂投與(適用)本發明之化合物或其鹽、或本發明 之醫藥組成物之對象，雖無限定，不過包含動物(人類、非人類哺乳動物(例如，小鼠、大鼠、犬、貓、兔、牛、馬、綿羊、山羊、豬等)或非哺乳動物(例如，魚類、爬蟲類、兩棲類或鳥類))、植物、昆蟲、細菌、或來自此等之細胞(包含培養細胞)、組織或器官等。 或者，該對象可為人造環境(例如試管內反應系統等)。本發明中之對象以人類為較佳。

在本說明書中所用之用語係用於說明特定之實施態 樣，而非意圖限定發明。

又，在本說明書中所用之「含有」用語，係排除上 下文語意上應做明顯不同理解的情況，而意圖表示所記載事項(構件、步驟、要素或數字等)之存在，但不排除其以外之事項(構件、步驟、要素或數字等)之存在。

於一態樣中，雖無限定，不過本發明之含有糖鏈加 成連接基部分及生理活性物質部分之化合物或其鹽，可實質上由生理活性物質部分及糖鏈加成連接基部分構成(換言之，在不影響本發明之基本、本質構成的態樣中，可具有其他成分)，或者只由生理活性物質部分及糖鏈加成連接基部分構成。

除非有不同的定義，本文所用之全部用語(包含技 術用語及科學用語)，與本發明所屬技術領域的人士所廣泛理解者具有相同意義。在本文中所用之用語，除非明示不同的定義，否則應被解釋成與本說明書及關連技術領域中之意義符合的意義，而不應被解釋成理想化、或過度形式化之意義。

本發明之實施態樣，有時會參照模式圖來說明，不過為模式圖之情況，為了明確地說明，有時會被誇張表現。

第1、第2等用語係用於表現多種要素，不過此等要素應被理解成不受此等用語限定。此等用語僅係用於將一個要素與其他要素區別，例如，將第1要素記載成第2要素，同樣地，將第2要素記載成第1要素，均不會脫離本發明之範圍。

在本說明書中，例如，以「碳數1至16之烷基」表現之情況，本技術領域人士當理解該表現係個別具體地指出碳數為1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15或16之烷基。

於本說明書中，用於表示成分含量及數值範圍的全部數值，只要無特別明示，均被解釋成包含用語「約」之意義。例如，所謂「10倍」，只要無特別明示，應被理解成意指「約10倍」。

在本說明書中所引用之文獻，其之全部揭示內容應被視作可援用於本說明書中，本技術領域人士當可理解：依照本說明書之上下文語意，可在不脫離本發明之精神及範圍下，將此等先前技術文獻中之相關揭示內容做為本說明書之一部分而加以援用。

在下文中，藉由參照實施例詳細地說明本發明。然而，本發明可藉由各種各樣的態樣具現化，不可被解釋成限於本文所記載之實施例。

[實施例]

本實施例中所使用之簡稱的一部分如以下說明：Ac：乙醯(基)

AcOH：乙酸

Alloc：烯丙氧基羰基

Asn：天冬醯胺酸

Boc：三級丁基氧基羰基

Cys：半胱胺酸

DIC：二異丙基碳化二亞胺

DIPEA：N,N-二異丙基乙胺

DMF：N,N-二甲基甲醯胺

DMSO：二甲基亞碸

DTT：二硫蘇糖醇

ESI-MS：電噴離子化(Electro Spray Ionization)質量分析

Fmoc(基)：9-茀基甲基氧基羰基(基)

GlcNAc：N-乙醯基葡萄糖胺

HCTU：O-(6-氯-1H-苯并三唑-1-基)-N,N,N’,N’-四甲基脲鎓六氟磷酸鹽

HMPB：4-羥基甲基-3-甲氧基苯氧基丁酸

HOBt：1-羥基苯并三唑

HPLC：高速液體層析

H₂O：水

Leu：白胺酸或白胺酸殘基

ln2：log_e2

MSNT：1-(均三甲苯-2-磺醯基)-3-硝基-1,2,4-三唑

PBS：磷酸緩衝生理食鹽水

Pbf：2,2,4,6,7-五甲基二氫苯并呋喃-5-磺醯基

tBu：三級丁基

TBTU：O-(1H-苯并三唑-1-基)N,N,N’,N’-四甲基脲鎓

TFA：三氟乙酸

Trt：三苯甲基

<實施例1> (糖鏈加成(Asn(無唾液酸基)型)連接基-類趨化素9複合物(化合物1)之合成及糖鏈加成連接基部分的切斷評價)

為了開發可進一步提高生理活性物質溶解性的連接基，嘗試將水溶性高之糖鏈加成於連接基，而合成由糖鏈加成連接基及肽所構成之新穎化合物。就糖鏈而言，使用無唾液酸基糖鏈，就肽而言，使用類趨化素9(Chemerin9)。以如後述之方式，合成由加成無唾液酸基糖鏈之連接基及肽所構成之化合物(糖鏈加成(Asn(無唾液酸基)型)連接基-類趨化素9複合物(化合物1(序列編號6))。

就生理活性物質之例而言，係選擇鏈長較短之類趨化素9(Chemerin 9)。類趨化素9(9殘基，序列：YFPGQFAFS)相當於美國公開專利2003/096299之序列表之序列編號31(18胺基酸殘基)中，4至12號之胺基酸殘基。類趨化素9由於具有為G蛋白 質耦合型受體之ChemR23促效劑活性，可做為免疫疾患、炎症性疾患、糖尿病之治療及/或預防劑。不過，已知由於在生物體內會被蛋白質分解酵素分解，所以非常不安定(特開2010-229093號公報)。其之製造方法、反應條件及溫度等為公知，本領域技術人士雖然明瞭，惟亦可依照前述文獻記載之方法合成類趨化素9。

(糖鏈加成(Fmoc-Asn(無唾液酸基)型)連接基-類趨化素9複合物(化合物7)之合成)

為了合成糖鏈加成(Asn(無唾液酸基)型)連接基-類趨化素9複合物(化合物1)，首先，如以下方式合成糖鏈加成(Fmoc-Asn(無唾液酸基)型)連接基-類趨化素9複合物(化合物7)(序列編號5)。

(式中，R表示上述之化學式)。

於固相合成用管柱中，取用胺基-PEGA樹脂(Merck公司製)(200μmol)，並以DMF洗淨。添加已加入HMPB(121.2mg， 0.504mmol)、TBTU(161.7mg，0.504mmol)、及N-乙基嗎啉(57.3μL，0.495mmol)之DMF(5.0mL)溶液，並於室溫振動3小時。用DMF及二氯甲烷洗淨後，添加已加入Fmoc-Ser(tBu)-OH(383.1mg，1.00mmol)、MSNT(296.4mg，1.00mmol)、及N-甲基咪唑(55.8μL，0.700mmol)之二氯甲烷(10mL)，並於室溫振動3小時。用二氯甲烷及DMF洗淨後，依序添加DMF(4mL)、吡啶(1.2mL)、及乙酸酐(189μL，2.00mmol)，並於室溫振動。1小時後，將樹脂用DMF及二氯甲烷洗淨。

在上文所得到之樹脂之中，將其一部分(100μmol) 之Fmoc基，用DMF中之20%哌啶處理15分鐘而除去。用DMF洗淨後，使用Prelude(商標)肽合成機，依照藉由Fmoc法之肽固相合成法，將經tBu及Trt保護之類趨化素9於樹脂上合成。縮合反應係使用HCTU做為縮合劑，於DMF中進行。

在上文所得到之樹脂中，將其一部分(70μmol)之 Fmoc基，用DMF中之20%哌啶處理而除去，得到鍵結有經tBu及Trt保護之類趨化素9的樹脂(化合物12)(序列編號2)。用DMF及二氯甲烷洗淨後，依序添加酞酸酐(phthalic anhydride)(104mg，0.702mmol)、二氯甲烷(2.1mL)、吡啶(126μL)，並於室溫振動3小時。用二氯甲烷及DMF洗淨後，添加HOBt(47.3mg，0.35mmol)之DMF(1.75mL)溶液及DIC(51.2μL，0.33mmol)，並於室溫振動。 15分鐘後，添加N-(2-胺基乙基)哌(46.1μL，0.35mmol)，並於室溫振動1小時。用DMF洗淨後，重複此縮合操作1次後，用DMF洗淨，藉此得到鍵結有經tBu及Trt保護之類趨化素9及連接基部分的樹脂(化合物13)(序列編號3)。

所得到之樹脂(化合物13)之中，於其一部分(20μmol)中，依序添加下述化學式： 所示之Fmoc-Asn(無唾液酸基)-OH(化合物14)(75mg，38μmol)、DMSO-DMF(1/1，v/v，833μL)溶液、TBTU(16.1mg，50μmol)、及DIPEA(13.1μL，75.2μmol)，並於室溫振動4.5小時。用DMF及二氯甲烷洗淨，得到鍵結有具經tBu及Trt保護之類趨化素9之化合物的樹脂(化合物15)(序列編號4)。在樹脂(化合物15)中，添加TFA：水：三異丙基矽烷：乙二硫醇(體積份分別為90：2.5：5：2.5)，並於室溫振動3小時。於濾液中添加冷卻的二乙基醚，得到為沉澱之化合物。將前述化合物使用HPLC[管柱：SHISEIDO CAPCELL PAK C18 UG-120(5μm)、φ20x250mm，流速：7.0mL/分鐘，溶離液A：0.1%TFA水溶液，溶離液B：0.09%TFA/10%水/90%乙腈，梯度A：B=65：35→40：60(30分鐘)，以直線濃度梯度溶出]精製，得到糖鏈加成(Fmoc-Asn(無唾液酸基)型)連接基-類趨化素9複合物(化合物7)(8.6mg)。

ESI-MS：(C₁₄₉H₂₀₁N₁₉O₆₄)之(m/z)計算值：[M+3H]³⁺ 1094.4、[M+4H]⁴⁺ 821.1；實測值：1094.4、821.1。

<實施例2> (糖鏈加成(Asn(無唾液酸基)型)連接基-類趨化素9複合物(化合物1)之合成)

(式中，R表示上述之化學式)。

將糖鏈加成(Fmoc-Asn(無唾液酸基)型)連接基-類趨 化素9複合物(化合物7)(4.0mg，1.2μmol)以20%哌啶/DMF溶液(60μL)處理5分鐘，將Fmoc基脫保護。添加乙酸(57.5μL)及0.1%TFA水溶液(1300μL)後，使用HPLC[管柱：SHISEIDO CAPCELL PAK C18 UG-120(5μm)，φ4.6x250mm；流速：0.7mL/分鐘；溶離液A：0.1%TFA水溶液，溶離液B：0.09%TFA/10%水/90%乙腈，梯度A：B=80：20→50：50(30分鐘)以直線濃度梯度溶出]精製，得到糖鏈加成(Asn(無唾液酸基)型)連接基-類趨化素9複合物(化合物1)(3.5mg，1.1μmol，92%)。

ESI-MS：C₁₃₄H₁₉₁N₁₉O₆₂之(m/z)計算值：[M+3H]³⁺ 1020.4、[M+4H]⁴⁺ 765.6；實測值：1020.4、765.6。

<實施例3> (糖鏈加成(Asn(無唾液酸基)型)連接基-類趨化素9複合物(化合物1)的糖鏈加成連接基部分於水溶液中的切斷評價) (a．糖鏈加成(Asn(無唾液酸基)型)連接基-類趨化素9複合物(化合物1)藉由自行切斷而游離生成無修飾類趨化素9)

繼而，追蹤在如上述所得到之糖鏈加成(Asn(無唾液酸基)型)連接基-類趨化素9複合物(化合物1)中，加成有糖鏈之連接基部分於水溶液中以本身為觸媒之切斷舉動。以下展現其之反應。

(式中，R表示上述之化學式)。

如以下方式進行切斷舉動之追蹤。

使凍結乾燥之糖鏈加成(Asn(無唾液酸基)型)連接基-類趨化素9複合物(化合物1)溶解於PBS溶液(37℃，pH7.4，350μL)後，於37℃靜置，進行培育。然後，以一定之時間間隔，將溶解有糖鏈加成之(Asn(無唾液酸基)型)連接基-類趨化素9複合物(化合物1)的PBS溶液(28μL)取樣，於取樣之溶液中添加0.5%TFA水溶液(28μL)後，使該溶液凍結。在即將進行HPLC分析之前融解所得到之溶液，注射50μL，進行HPLC[管柱：SHISEIDO CAPCELL PAK C18 UG-120(5μm)，φ4.6x250mm，流速：0.7mL/分鐘；溶離液A：0.1%TFA水溶液，溶離液B：0.09%TFA/10%水/90%乙腈，以梯度 A：B=77：23→50：50(20分鐘)之直線濃度梯度溶出]分析。化合物之檢測係使用二極體陣列檢測器，檢測波長設定為220nm。從HPLC層析及ESI-MS之解析，確認隨著時間經過，糖鏈加成連接基部分的切斷進行，無修飾之類趨化素9(化合物3)(序列編號1)游離出(第1圖之箭號3所指示之峰)。在試驗開始6小時後，糖鏈加成(Asn(無唾液酸基)型)連接基-類趨化素9複合物(化合物1)幾乎不存在，無修飾之類趨化素9(化合物3)存在多量。

6小時後，進行反應液之HPLC[管柱：SHISEIDO CAPCELL PAK C18 UG-120(5μm)，φ4.6x250mm，流速：0.7mL/分鐘；溶離液A：0.1%TFA水溶液，溶離液B：0.09%TFA/10%水/90%乙腈，以梯度A：B=95：5→95：5(8分鐘)繼而A：B=95：5→5：95(20分鐘)進行直線濃度梯度溶出]分析。其結果，確認於保持時間9.6分鐘時為糖鏈加成連接基部分(化合物2)之峰。

化合物2之ESI-MS：C₈₀H₁₂₇N₉O₅₀之(m/z)計算值：[M+2H]²⁺ 1007.9、[M+3H]³⁺ 672.3；實測值：1007.9、672.2。

藉由將第1圖之箭號1所示之峰面積(相當於糖鏈 加成(Asn(無唾液酸基)型)連接基-類趨化素9複合物(化合物1))對培育時間作圖，算出糖鏈加成(Asn(無唾液酸基)型)連接基-類趨化素9複合物(化合物1)相對於時間的濃度(相對濃度C/C₀)(第2圖)，再者，將該相對濃度之自然對數對培育時間作圖，得到直線狀之圖形(第3圖)(其中，C₀表示化合物1之初濃度，C表示任意時間之化合物1的濃度。)。第3圖顯示糖鏈加成連接基之切斷速度為一次反應。

因此，藉由將第3圖所得到之直線圖形的斜率k代 入下述式：t_1/2=ln2/k(k為直線圖形之斜率)，算出起始物質(糖鏈加成(Asn(無唾液酸基)型)連接基-類趨化素9複合物(化合物1))之消失半減期t_1/2。消失半減期為1.2小時。

(c．糖鏈加成(Asn(無唾液酸基)型)連接基-類趨化素9複合物(化合物1)之溫度及pH依存性)

繼而，在各種溫度(4℃、25℃、37℃)及pH(pH4.0、pH7.4)條件下，觀察糖鏈加成(Asn(無唾液酸基)型)連接基-類趨化素9複合物(化合物1)中糖鏈加成連接基部分以本身為觸媒之切斷。

若比較相同溫度之半減期，可發現pH越高，糖鏈加成連接基部分的切斷越快(編號(entry)1與4之比較(37℃)、編號2與5之比較(25℃)、編號3與6之比較(4℃))。

再者，若比較相同pH之半減期，可發現溫度越高，糖鏈加成連接基部分的切斷越快(編號1、2、3之比較(pH4.0)、編號4、5、 6之比較(pH7.4))。

從此等結果，本發明人發現(i)溫度、(ii)pH越高，可促進糖鏈加成連接基部分的切斷。

於是，為了進一步調查化合物之構造與糖鏈加成連接基部分之以本身為觸媒之切斷的相關關係，如以下方式合成複數個化合物。

<實施例4> (糖鏈加成(Cys(GlcNAc)型)連接基-類趨化素9複合物(化合物4)之合成)

(式中，R表示上述之化學式)。

在鍵結有經tBu及Trt保護之類趨化素9及連接基 部分之樹脂(化合物13)(50μmol)中，添加已加有Fmoc-Cys(Trt)-OH(146.8mg，0.251mmol)、HOBt(33.8mg，0.250mmol)、及DIC(36.6μL，0.238mmol)之DMF(1.25mL)溶液，並於室溫振動1小時，進行縮合操作。用DMF洗淨後，重複此縮合操作1次。用DMF及二氯甲烷洗淨後，以適當量添加TFA：水：三異丙基矽烷：乙二硫醇(體 積份分別為90：2.5：5：2.5)，並於室溫振動3小時。然後，進行樹脂之過濾。在濾液中添加冷卻之二乙基醚，得到為沉澱之化合物。將所得到之前述化合物使用HPLC[管柱：SHISEIDO CAPCELL PAK C18 UG-120(5μm)、φ20x250mm，流速：7.0mL/分鐘；溶離液A：0.1%TFA水溶液，溶離液B：0.09%TFA/10%水/90%乙腈；以梯度A：B=50：50→42.7：57.3(22分鐘)進行直線濃度梯度溶出]精製，得到化合物16(序列編號7)(6.6mg)。

ESI-MS：C₈₆H₉₈N₁₄O₁₈S之(m/z)計算值：[M+2H]²⁺ 824.4；實測值824.4。

將化合物16(6.6mg，4.0μmol)溶解於20%哌啶/DMF 溶液(1.0mL)，將Fmoc基脫保護。添加乙酸(1.0mL)及0.1%TFA水(2.0mL)後，使用HPLC[管柱：SHISEIDO CAPCELL PAK C18 UG-120(5μm)，φ4.6x250mm，流速：0.7mL/分鐘；溶離液A：0.1%TFA水溶液，溶離液B：0.09%TFA/10%水/90%乙腈；以梯度A：B=70：30→50：50(30分鐘)進行直線濃度梯度溶出]精製，得到化合物17(序列編號8)(3.4mg，2.4μmol，60%)。

ESI-MS：C₇₁H₈₈N₁₄O₁₆S之(m/z)計算值：[M+2H]²⁺ 713.3；實測值：713.3。

將所得到之化合物17(2.2mg，1.5μmol)、及以下述化學式： 所表示之GlcNAc與2-溴乙醯胺之脫水縮合物(化合物18)(2.7mg，7.9μmol)溶解於含4.9mM DTT之50mM磷酸緩衝液(pH7.4，316μL)中，使其於室溫反應50分鐘。將反應溶液使用HPLC[管柱：SHISEIDO CAPCELL PAK C18 UG-120(5μm)，φ20x250mm，流速：7.0mL/分鐘；溶離液A：0.1%TFA水溶液，溶離液B：0.09%TFA/10%水/90%乙腈；以梯度A：B=75：25→45：55(20分鐘)進行直線濃度梯度溶出]精製，得到糖鏈加成(Cys(GlcNAc)型)連接基-類趨化素9複合物(化合物4)(序列編號9)(1.8mg，1.1μmol，收率73%)。

ESI-MS：C₈₁H₁₀₄N₁₆O₂₂S之(m/z)計算值：[M+2H]²⁺ 843.4；實測值：843.4。

<實施例5> (糖鏈加成(Cys(無唾液酸基)型)連接基-類趨化素9複合物(化合物5)之合成)

除了將用於合成實施例4中之糖鏈加成(Cys(GlcNAc)型)連接基-類趨化素9複合物(化合物4)的GlcNAc與2-溴乙醯胺之脫水縮合物(化合物18)，使用下述化學式： 所示之無唾液酸基糖鏈與2-溴乙醯胺脫水縮合物(化合物19)代替以外，以與合成糖鏈加成(Cys(GlcNAc)型)連接基-類趨化素9複合物(化合物4)同樣的方式進行反應，得到糖鏈加成(Cys(無唾液酸基) 型)連接基-類趨化素9複合物(化合物5)(序列編號10)。

ESI-MS：C₁₃₅H₁₉₃N₁₉O₆₂S之(m/z)計算值：[M+2H]²⁺ 1553.1、[M+3H]³⁺ 1035.7；實測值：1553.2、1035.8。

所合成之糖鏈加成(Cys(無唾液酸基)型)連接基-類趨化素9複合物(化合物5)的化學式如以下所示： 式中，R表示以下之化學式。

<實施例6> (糖鏈加成(Cys(二唾液酸基)型)連接基-類趨化素9複合物(化合物6)之合成)

除了將用於合成實施例4中之糖鏈加成(Cys(GlcNAc)型)連接 基-類趨化素9複合物(化合物4)的GlcNAc與2-溴乙醯胺之脫水縮合物(化合物18)，使用以下述化學式： 所表示之二唾液酸基糖鏈與2-溴乙醯胺之脫水縮合物(化合物20)代替以外，以與合成糖鏈加成(Cys(GlcNAc)型)連接基-類趨化素9複合物(化合物4)同樣的方式進行反應，得到糖鏈加成(Cys(二唾液酸基)型)連接基-類趨化素9複合物(化合物6)(序列編號11)。

ESI-MS：C₁₅₇H₂₂₇N₂₁O₇₈S之(m/z)計算值：[M+3H]³⁺ 1229.8、[M+4H]⁴⁺ 922.6；實測值：1229.8、922.6。

所合成之糖鏈加成(Cys(二唾液酸基)型)連接基-類趨化素9複合物(化合物6)的化學式如以下所示。

式中，R表示以下之化學式：

<實施例7> (糖鏈加成(Fmoc-Cys(二唾液酸基)型)連接基-類趨化素9複合物(化合物8)之合成)

將在合成實施例4之糖鏈加成(Cys(GlcNAc)型)連接基-類趨化素9複合物(化合物4)之過程中所得到的化合物16(0.4mg，0.24μmol)、及在合成實施例6之糖鏈加成(Cys(二唾液酸基)型)連接基-類趨化素9複合物(化合物6)時亦使用之二唾液酸基糖鏈與2-溴乙醯胺的脫水縮合物(化合物20)(0.9mg，0.38μmol)溶解於含7M胍鹽酸鹽的0.2M磷酸緩衝液(pH7.4，56μL)中，並於室溫反應2.5小時。將反應溶液使用HPLC[管柱：SHISEIDO CAPCELL PAK C18 UG-120(5μm)，φ4.6x250mm，流速：0.7mL/分鐘；溶離液A：0.1%TFA水溶液，溶離液B：0.09%TFA/10%水/90%乙腈；以梯度A：B=60：40→40：60(20分鐘)進行直線濃度梯度溶出]精製，得到糖鏈加成(Fmoc-Cys(二唾液酸基)型)連接基-類趨化素9複合物(化合物8)(序列編號12)(0.9mg，0.23μmol，收率96%)。

ESI-MS：C₁₇₂H₂₃₇N₂₁O₈₀S之(m/z)計算值：[M+3H]³⁺ 1303.8、[M+4H]⁴⁺ 978.1；實測值：1308.8、978.1。

所合成之糖鏈加成(Fmoc-Cys(二唾液酸基)型)連接 基-類趨化素9複合物(化合物8)之化學式如以下所示： 式中，R表示以下之化學式：

<實施例8> (糖鏈加成(Ac-Asn(無唾液酸基)型)連接基-類趨化素9複合物(化合物9)之合成)

(式中，R表示上述之化學式)。

將鍵結有經tBu及Trt保護之類趨化素9與連接基 部分之樹脂(化合物15)(15μmol)的Fmoc基，藉由以DMF中之20%之哌啶處理而除去。用DMF洗淨後，添加加有乙酸(4.3μL)、HOBt(10.1mg，75μmol)、及DIC(11.0μL，71μmol)的DMF溶液(375μL)，並於室溫振動1小時，進行縮合操作。用DMF洗淨後， 重複該縮合操作1次。用DMF及二氯甲烷洗淨後，以適當量添加TFA：水：三異丙基矽烷：乙二硫醇(體積份分別為90：2.5：5：2.5)，並於室溫振動3小時。然後，進行樹脂之過濾。在濾液中添加冷卻之二乙基醚，得到為沉澱之化合物。將所得到之化合物使用HPLC[管柱：SHISEIDO CAPCELL PAK C18 UG-120(5μm)，φ20x250mm，流速：7.0mL/分鐘，溶離液A：0.1%TFA水溶液，溶離液B：0.09%TFA/10%水/90%乙腈，以梯度A：B=75：25→67：33(8分鐘)進行直線濃度梯度溶出]精製，得到糖鏈加成(Ac-Asn(無唾液酸基)型)連接基-類趨化素9複合物(化合物9)(序列編號13)(5.0mg)。

ESI-MS：C₁₃₆H₁₉₃N₁₉O₆₃之(m/z)計算值：[M+2H]²⁺ 1551.1、[M+3H]³⁺ 1034.4；實測值：1551.1、1034.4。

<實施例9> (糖鏈加成(Asn(無唾液酸基)-四氯酞醯基型)連接基-類趨化素9複合物(化合物10)之合成)

以如實施例1記載之方式合成糖鏈加成之(Fmoc-Asn(無唾液酸基)型)連接基-類趨化素9複合物(化合物7)後，在以如實施例2記載之方式合成糖鏈加成(Asn(無唾液酸基)型)連接基-類趨化素9複合物(化合物1)之過程中，藉由使用四氯酞酸酐代替酞酸酐，得到糖鏈加成(Asn(無唾液酸基)-四氯酞醯基型)連接基-類趨化素9複合物(化合物10)(序列編號14)。

ESI-MS：C₁₃₄H₁₈₇C₁₄N₁₉O₆₂之(m/z)計算值：[M+2H]²⁺ 1598.0、[M+3H]³⁺ 1065.7；實測值：1598.0、1065.7。

所合成之糖鏈加成(Asn(無唾液酸基)-四氯酞醯基型)連接基- 類趨化素9複合物(化合物10)的化學式如以下所示： 式中，R表示以下之化學式。

<實施例10> (所合成之各種糖鏈加成連接基-類趨化素9複合物的切斷評價)

將在上述實施例中所合成之糖鏈加成連接基-類趨化素9複合物之模式性構造示於以下： (其中，Asn(asialo)型(1)表示糖鏈加成(Asn(無唾液酸基)型)連接基-類趨化素9複合物(化合物1)，Cys(GlcNAc)型(4)表示糖鏈加成(Cys(GlcNAc)型)連接基-類趨化素9複合物(化合物4)，Cys(asialo)型(5)表示糖鏈加成(Cys(無唾液酸基)型)連接基-類趨化素9複合物(化合物5)，Cys(disialo)型(6)表示糖鏈加成(Cys(二唾液酸基)型)連接基-類趨化素9複合物(化合物6)，Fmoc-Asn(asialo)型(7)表示糖鏈加成(Fmoc-Asn(無唾液酸基)型)連接基-類趨化素9複合物(化合物7)， Fmoc-Cys(disialo)型(8)表示糖鏈加成(Fmoc-Cys(二唾液酸基)型)連接基-類趨化素9複合物(化合物8)，Ac-Asn(asialo)型(9)表示糖鏈加成(Ac-Asn(無唾液酸基)型)連接基-類趨化素9複合物(化合物9)，Asn(asiealo)-四氯酞醯基型(10)表示糖鏈加成(Asn(無唾液酸基)-四氯酞醯基型)連接基-類趨化素9複合物(化合物10)， 表示天冬醯胺酸，且在該天冬醯胺酸本身之側鏈的胺基部分與無唾液酸基糖鏈鍵結，且在該天冬醯胺酸本身之主鏈的羧基部分與連接基部分鍵結， 表示半胱胺酸，且該半胱胺酸自身之側鏈的巰基部分，經由基：-CH₂-CONH-中介，與無唾液酸基糖鏈、二唾液酸基糖鏈或GlcNAc鍵結，且在該半胱胺酸本身之主鏈的羧基部分與連接基部分鍵結)。

觀察所合成之糖鏈加成連接基-類趨化素9複合物(化合物1)、(化合物4)至(化合物10)中之糖鏈加成連接基部分以本身為觸媒的切斷。使用與實施例3記載之方法同樣的方法進行各實驗。其結果，確認所合成之糖鏈加成連接基-類趨化素9複合物，全部於溶液中游離生成無修飾的類趨化素9。又，決定各糖鏈加成連接基-類趨化素9複合物的消失半減期。將半減期示於以下。

Asn(無唾液酸基)型(1)及Cys(無唾液酸基)型(5)之半 減期，在pH4.0及pH7.4兩者下，大致為類似的時間。從此結果，本發明人發現加成於糖鏈之胺基酸殘基的變化，對於糖鏈加成連接基的切斷速度未賦予大的影響。

Cys(GlcNAc)型(4)、Cys(無唾液酸基)型(5)、及Cys(二 唾液酸基)型(6)之半減期，為彼此類似之時間。從此結果，本發明人發現糖鏈加成連接基中之糖鏈的尺寸，對於糖鏈加成連接基之切斷效率並無大的影響。因此，只要為本領域技術人士，應可理解即使利用加成具有更大尺寸之糖鏈的連接基，在生物體內亦可使無修飾之生理活性物質游離生成。

加成於糖鏈之天冬醯胺酸之N末端經Fmoc基保護 的Fmoc-Asn(無唾液酸基)型(7)，與該天冬醯胺酸之N末端未經保護的Asn(無唾液酸基)型(1)比較，在pH4.0及pH7.4二者下，切斷時間變得遲緩。同樣地，加成於糖鏈之半胱胺酸之N末端經Fmoc 基保護的Fmoc-Cys(二唾液酸基)型(8)，與該半胱胺酸之N末端未經保護之Cys(二唾液酸基)型(6)比較，在pH4.0及pH7.4二者下，切斷時間變得遲緩。加成於糖鏈之天冬醯胺酸之N末端經乙醯基保護之Ac-Asn(無唾液酸基)型(9)的半減期，與該天冬醯胺酸之N末端未經保護之Asn(無唾液酸基)型(1)比較，在pH7.4下，半減期並無太大差異。另一方面，於pH4.0下之半減期則延長接近3倍。 Ac-Asn(無唾液酸基)型(9)於pH4.0下之半減期，與Fmoc-Asn(無唾液酸基)型(7)之半減期非常類似。從此等結果，本發明人發現藉由保護加成於糖鏈之胺基酸N末端的胺基，可提高於酸性條件下(例如pH4.0)之糖鏈加成連接基-生理活性物質複合物的安定性。

Asn(無唾液酸基)-四氯酞醯基型(10)之半減期，於 PBS(37℃，pH7.4)中為15.3分鐘(約0.25小時)。若將Asn(無唾液酸基)-四氯酞醯基型(10)之半減期，與酞醯基未經氯原子置換之Asn(無唾液酸基)型(1)的半減期比較，只有約5分之1。亦即，本發明人發現在糖鏈加成連接基部分中，將酞醯基置換為四氯酞醯基，糖鏈加成連接基部分以本身為觸媒的切斷可加快約5倍。雖不想受理論限制，然而研判此係在該酞醯基中，藉由將芳香環上之氫原子置換為具電子吸引性的氯原子，使得與肽鍵結之羰基碳的電子密度降低，而容易受到氮所致之親核攻撃。若為本領域技術人士，應可理解藉由賦予此等化合物之構造上特性，投與至生物體內後，可成為適於迅速發揮活性的生理活性物質。

又，Asn(無唾液酸基)-四氯酞醯基型(10)之水溶液中 的半減期，在PBS(37℃，pH7.4)中為15.3分鐘(約0.25小時)，另一方面，在乙酸緩衝液(25℃，pH4.0)中為4.5小時。從此等半減 期之差異，可理解藉由將含本發明之糖鏈加成連接基部分與生理活性物質部分之化合物，於pH4.0，室溫(例如25℃)調製後，投與至生物體內(例如pH7.4，例如37℃)，可迅速且可控制地游離生成無修飾之生理活性物質。

<實施例11> (糖鏈加成連接基-類趨化素9複合物的糖鏈加成連接基部分於乳液中的切斷評價)

在使抗原液與乳液混合做為疫苗並投與至生物體內之情況，可期待抗原殘存於疫苗注射部位之效果，及緩釋效果。再者，本發明中之糖鏈加成連接基部分不僅於水溶液，即使於乳液中，藉由檢討從含有糖鏈加成連接基部分及生理活性物質部分之化合物或其鹽之自行切斷，可檢討本發明之含有糖鏈加成連接基部分及生理活性物質部分之化合物或其鹽是否可應用於肽疫苗等各種疫苗的開發。從水溶液調製之乳液中，本發明之含有糖鏈加成連接基部分及生理活性物質部分之化合物或其鹽的安定性，如以下方式，與乙酸緩衝液之情況比較。

使凍結乾燥之糖鏈加成(Asn(無唾液酸基)型)連接基 -類趨化素9複合物(化合物1)溶解於0.1M乙酸緩衝液(pH4.0，25℃，175μL)後，將175μL之為礦油系佐劑之MONTANIDE ISA 206 VG(SEPPIC公司製)添加於該乙酸緩衝液中。繼而，將混合物藉由渦旋激烈地攪拌，使乳液形成。於37℃靜置及培育後，以一定之時間間隔，注射28μL之糖鏈加成(Asn(無唾液酸基)型)連接基-類趨化素9複合物(化合物1)之乳液，進行HPLC分析，追蹤糖鏈加成連接基部分相對於時間的切斷反應。

就對照群而言，使凍結乾燥之糖鏈加成(Asn(無唾液 酸基)型)連接基-類趨化素9複合物(化合物1)溶解於0.1M乙酸緩衝液(25℃，pH4.0，350μL)後，於37℃靜置並培育。然後，以一定之時間間隔，注射28μL之糖鏈加成(Asn(無唾液酸基)型)連接基-類趨化素9複合物(化合物1)的乙酸緩衝液，進行HPLC分析。

從HPLC層析及ESI-MS分析，確認即使於乳液中， 隨時間經過，糖鏈加成連接基部分會被切斷，而游離出無修飾之類趨化素9。

對於乳液溶液及乙酸緩衝液之各個，藉由將在HPLC 層析中相當於糖鏈加成(Asn(無唾液酸基)型)連接基-類趨化素9複合物(化合物1)的峰面積對培育時間作圖，算出糖鏈加成(Asn(無唾液酸基)型)連接基-類趨化素9複合物(化合物1)相對於培育時間之相對濃度，並比較二者(第4圖)。結果確認即使於乳液中，糖鏈加成連接基部分的切斷係以與緩衝液中同樣之速度進行。

因此，若為本領域技術人士，應可理解藉由使用本 發明之具有糖鏈加成連接基部分的生理活性物質衍生物，即使在由水溶液所調製之乳液中，亦能以與在水溶液中同樣之速度，釋出無修飾之生理活性物質。亦即，本發明之糖鏈加成連接基部分顯然可被利用做為生理活性物質之疫苗。

<實施例12> (糖鏈加成(Asn(無唾液酸基)型)連接基-HER2_8-16複合物(化合物11)之合成、糖鏈加成連接基部分的切斷評價、及溶解度評價)

如上述，本發明之具有糖鏈加成連接基部分的生理活性物質衍生物，由於亦能以乳液形式使用，可利用於各種疫苗之開發。 再者，就例示而言，本發明人製成亦可使用做為腫瘤抗原肽之HER2_8-16與糖鏈加成連接基的複合物。其中，HER2_8-16(序列：RWGLLLALL)，係HER(人類上皮增殖因子受體：Human Epidermal Growth Factor Receptor)家族之一即HER2/neu蛋白質的胺基酸序列中相當於第8至16胺基酸殘基的肽。HER2_8-16亦稱為密碼HE1，具有結合於HLA(人類白血球抗原分子：Human Leukocyte Antigen)之一即HLA-A24的能力，由於藉由經HLA中介之抗原提示，可誘導細胞傷害性T細胞(CTL)，被鑑定為可做腫瘤疫苗候補肽(參照國際公開第2005/007694號小冊等)。

(糖鏈加成(Asn(無唾液酸基)型)連接基-HER2_8-16複合物(化合物11)之合成)

本發明人合成具有以下模式之構造之由加成無唾液酸基糖鏈之連接基及肽所構成的化合物(即糖鏈加成(Asn(無唾液酸基)型)連接基-HER2_8-16複合物(化合物11))。

(式中， 如上述所規定)。

於固相合成用管柱中取用胺基-PEGA樹脂(200μmol)，並以DMF洗淨。添加已加有HMPB(120.2mg，0.500mmol)、TBTU (160.6mg，0.500mmol)、及N-乙基嗎啉(57.3μL，0.495mmol)之DMF(5.0mL)溶液，並於室溫振動3小時。用DMF及二氯甲烷洗淨後，在所得到之樹脂之一部分(100μmol)中，添加已加有Fmoc-Leu-OH(176.7mg，0.500mmol)、MSNT(148.2mg，0.500mmol)、及N-甲基咪唑(27.9μL，0.35mmol)之二氯甲烷(5mL)溶液，並於室溫振動3小時。用二氯甲烷及DMF洗淨後，依序添加DMF(4mL)、吡啶(1.2mL)、及乙酸酐(189μL，2.00mmol)，並於室溫振動。1小時後，將樹脂用DMF及二氯甲烷洗淨。

將該Fmoc基藉由用DMF中之20%的哌啶處理15 分鐘而除去。以DMF洗淨後，使用Prelude(商標)肽合成機，依照採用Fmoc法之肽固相合成法，合成為鍵結於下述式(21)所示之樹脂之狀態的經保護HER2_8-16肽(序列編號16)。縮合反應係使用HCTU做為縮合劑，於DMF中進行。

在所得到之樹脂(化合物21)中，將其一部分(50μmol) 中之Fmoc基，藉由以DMF中之20%的哌啶處理20分鐘而除去，得到經保護之鍵結有肽的樹脂。以DMF及二氯甲烷洗淨後，依序添加酞酸酐(75.7mg，0.511mmol)、二氯甲烷(1.5mL)、吡啶(90μL)，並於室溫振動3小時。以二氯甲烷及DMF洗淨後，添加HOBt(33.8mg，0.25mmol)之DMF(1.25mL)溶液及DIC(36.6μL，0.238 mmol)，並於室溫振動。15分鐘後，添加N-(2-胺基乙基)哌(330μL，2.51mmol)，並於室溫振動1小時。以DMF洗淨後，依序添加以下述化學式： 表示之Fmoc-Asn(無唾液酸基)-OH(化合物14)(186mg，94.1μmol)、DMSO-DMF(1/1，v/v，2.1mL)溶液、TBTU(40.5mg，0.126mmol)、及DIPEA(33μL，0.19mmol)，並於室溫振動12小時。依序以DMF、二氯甲烷、及DMF洗淨後，藉由用DMF中之20%的哌啶處理15分鐘，將Fmoc基除去。用DMF及二氯甲烷洗淨後，於樹脂中添加TFA：水：三異丙基矽烷：乙二硫醇(體積份分別為90：2.5：5：2.5)，並於室溫振動3小時。在濾液中添加冷卻之二乙基醚，得到為沉澱之化合物。將前述化合物使用HPLC[管柱：SHISEIDO CAPCELL PAK C18 UG-120(5μm)，φ20x250mm，流速：7.0mL/分鐘；溶離液A：0.1%TFA水溶液，溶離液B：0.09%TFA/10%水/90%乙腈，以梯度A：B=60：40→55.5：44.5(11分鐘)進行直線濃度梯度溶出]精製，得到糖鏈加成(Asn(無唾液酸基)型)連接基-HER2_8-16複合物(化合物11)(序列編號17)(11.1mg)。

ESI-MS：C₁₃₂H₂₁₂N₂₂O₅₉之(m/z)計算值：[M+2H]²⁺ 1525.7、[M+3H]³⁺ 1017.5、[M+4H]⁴⁺ 763.4；實測值：1525.7、1017.5、763.4。

將所合成之糖鏈加成(Asn(無唾液酸基)型)連接基 -HER2_8-16複合物(化合物11)的化學式示於以下： 式中，R表示以下之化學式。

(糖鏈加成(Asn(無唾液酸基)型)連接基-HER2_8-16複合物(化合物11)的糖鏈加成連接基部分於水溶液中的切斷評價)

繼而，追蹤所得到之糖鏈加成(Asn(無唾液酸基)型)連接基-HER2_8-16複合物(化合物11)中之糖鏈加成連接基部分於水溶液中以本身為觸媒的切斷舉動。

以與實施例3記載之方法同樣地進行切斷舉動之追 蹤。亦即，使凍結乾燥之糖鏈加成(Asn(無唾液酸基)型)連接基-HER2_8-16複合物(化合物11)溶解於PBS(pH7.4)或0.1M乙酸緩衝液(pH4.0)後，於25℃或37℃靜置及培育。然後，以一定之時間間隔，分別將溶解有糖鏈加成(Asn(無唾液酸基)型)連接基-HER2_8-16複合物(化合物11)的PBS溶液或0.1M乙酸緩衝液，以一定量注射，並進行HPLC分析。從HPLC層析及ESI-MS之解析，確認隨時間 經過，於水溶液中糖鏈加成連接基部分被切斷，生成無修飾之HER2_8-16(序列編號15)。將在各種條件下，糖鏈加成(Asn(無唾液酸基)型)連接基-HER2_8-16複合物(化合物11)之消失半減期示於以下。

若與相同溫度下之半減期比較，發現pH越高，糖鏈加成連接基部分之切斷越快速(編號1與3之比較(37℃)、編號2與4之比較(25℃))。再者，若比較相同pH下之半減期，發現溫度越高，糖鏈加成連接基部分的切斷越快速(編號1與2之比較(pH4.0)、編號3與4之比較(pH7.4))。

從此等結果，與糖鏈加成連接基-類趨化素9複合 物之情況中所觀察的結果同樣地，本發明人發現(i)溫度、(ii)pH越高，越可促進糖鏈加成連接基部分的切斷。

因此，若為本領域技術人士應可理解，藉由合併鑑識表5至7之結果，本發明中之具有糖鏈加成連接基部分的生理活性物質係依存於溫度及/或pH，藉由糖鏈加成連接基部分被切斷，可使無修飾之生理活性物質生成。

(糖鏈加成(Asn(無唾液酸基)型)連接基-HER2_8-16複合物(化合物11)之溶解度評價)

在使用本發明中之具有糖鏈加成連接基部分之生理活性物質衍生物的情況，評價水溶性提高之效果。就一例而言，係使用HER2_8-16做為生理活性物質。

在不同微量管中分別秤取糖鏈加成連接基-HER2_8-16 複合物(化合物11)及HER2_8-16肽，各為約3.5mg及約3.5mg。在各個微量管中，各添加30μL之0.1%TFA水溶液。將此等微量管於25℃振動15分鐘後，於25℃，以16100xg離心10分鐘。繼而，在此等微量管中，分別測定上清液於280nm的吸光度，從所得到之值，分別算出糖鏈加成連接基-HER2_8-16複合物(化合物11)及HER2_8-16肽的濃度，決定溶解度。

其中，糖鏈加成連接基-HER2_8-16複合物(化合物11)於280nm之莫耳吸光係數係用以下之方法求得。亦即，將化合物11之溶液，各以等量分注於5支試管中，凍結乾燥後，使用其中3支試管，進行胺基酸組成分析，求取樣本含量。又，在前述5支中之1支試管中，添加1mL之0.1%TFA水溶液，測定此時糖鏈加成連接基-HER2_8-16複合物(化合物11)於280nm的吸光度。將該280nm之吸光度，藉由除以胺基酸組成分析所求取之濃度而求得。其結果，糖鏈加成連接基-HER2_8-16複合物(化合物11)於280nm之莫耳吸光係數ε_M為5922。

HER2_8-16肽(序列編號15)於280nm之莫耳吸光係數ε_M，係使用以下之式算出(C.N.Pace et al.,Prot.Sci.,1995,4,2411-2423頁)。

ε_M=Trp×5500+Tyr×1490+Cystine×125[A₂₈₀/mol/cm]

其中，Trp表示色胺酸殘基之數，Tyr表示酪胺酸殘基之數，Cystine表示二硫鍵結之數。HER2_8-16肽(胺基酸序列：RWGLLLALL)， 由於包含1個色胺酸殘基，於280nm之莫耳吸光係數ε_M為5500。

此結果，未鍵結有糖鏈加成連接基的HER2_8-16肽在 0.1%TFA水溶液中的溶解度，為0.21mg/mL(2.0×10²μM))。此時，可用目視確認微量管中HER2_8-16肽之沉澱。另一方面，確認糖鏈加成(Asn(無唾液酸基)型)連接基-HER2_8-16複合物(化合物11)在0.1%TFA水溶液中之溶解度為100mg/mL以上。令人驚訝地，即使為116mg/mL之濃度(3.8×10⁴μM)，亦無法確認有糖鏈加成(Asn(無唾液酸基)型)連接基-HER2_8-16複合物(化合物11)的沉澱。從此等結果，令人驚奇地判定HER2_8-16肽之水溶性，藉由鍵結本發明之糖鏈加成(Asn(無唾液酸基)型)連接基，就以莫耳濃度來比較而言，可提高190倍以上。

因此，本發明人發現藉由使用本發明之含有糖鏈加 成連接基部分及生理活性物質部分之化合物或其鹽，與無修飾之生理活性物質比較，可有意義地改善在水溶液或乳液中的溶解度。

<110> 糖鎖工學研究所股份有限公司

<120> 糖鏈加成連接基、含有糖鏈加成連接基部分與生理活性物質部分之化合物或其 鹽，及該等之製造方法

<130> OCKP1202-TW

<150> JP2012-256947

<151> 2012/11/22

<160> 17

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 9

<212> PRT

<213> 智人

<400> 1

<210> 2

<211> 9

<212> PRT

<213> 人造序列

<220>

<223> 化學合成的

<220>

<221> 結合

<222> (1)..(1)

<223> 三級丁基

<220>

<221> 結合

<222> (5)..(5)

<223> 三苯甲基

<220>

<221> 結合

<222> (9)..(9)

<223> 三級丁基

<220>

<221> 結合

<222> (9)..(9)

<223> 樹脂

<400> 2

<210> 3

<211> 9

<212> PRT

<213> 人造序列

<220>

<223> 化學合成的

<220>

<221> 結合

<222> (1)..(1)

<223> 三級丁基

<220>

<221> 結合

<222> (1)..(1)

<223> 酞醯基型-連接基部分

<220>

<221> 結合

<222> (5)..(5)

<223> 三苯甲基

<220>

<221> 結合

<222> (9)..(9)

<223> 三級丁基

<220>

<221> 結合

<222> (9)..(9)

<223> 樹脂

<400> 3

<210> 4

<211> 9

<212> PRT

<213> 人造序列

<220>

<223> 化學合成的

<220>

<221> 結合

<222> (1)..(1)

<223> 三級丁基

<220>

<221> 結合

<222> (1)..(1)

<223> Fmoc-Asn(無唾液酸基)型-酞醯基型連接基部分

<220>

<221> 結合

<222> (5)..(5)

<223> 三苯甲基

<220>

<221> 結合

<222> (9)..(9)

<223> 三級丁基

<220>

<221> 結合

<222> (9)..(9)

<223> 樹脂

<400> 4

<210> 5

<211> 9

<212> PRT

<213> 人造序列

<220>

<223> 化學合成的

<220>

<221> 結合

<222> (1)..(1)

<223> Fmoc-Asn(無唾液酸基)型-酞醯基型連接基部分

<400> 5

<210> 6

<211> 9

<212> PRT

<213> 人造序列

<220>

<223> 化學合成的

<220>

<221> 結合

<222> (1)..(1)

<223> Fmoc-Asn(無唾液酸基)型-酞醯基型連接基部分

<400> 6

<210> 7

<211> 9

<212> PRT

<213> 人造序列

<220>

<223> 化學合成的

<220>

<221> 結合

<222> (1)..(1)

<223> Fmoc-Cys型-酞醯基型連接基部分

<400> 7

<210> 8

<211> 9

<212> PRT

<213> 人造序列

<220>

<223> 化學合成的

<220>

<221> 結合

<222> (1)..(1)

<223> Cys型-酞醯基型連接基部分

<400> 8

<210> 9

<211> 9

<212> PRT

<213> 人造序列

<220>

<223> 化學合成的

<220>

<221> 結合

<222> (1)..(1)

<223> Cys(GlcNAc)型-酞醯基型連接基部分

<400> 9

<210> 10

<211> 9

<212> PRT

<213> 人造序列

<220>

<223> 化學合成的

<220>

<221> 結合

<222> (1)..(1)

<223> Cys(無唾液酸基)型-酞醯基型連接基部分

<400> 10

<210> 11

<211> 9

<212> PRT

<213> 人造序列

<220>

<223> 化學合成的

<220>

<221> 結合

<222> (1)..(1)

<223> Cys(二唾液酸基)型-酞醯基型連接基部分

<400> 11

<210> 12

<211> 9

<212> PRT

<213> 人造序列

<220>

<223> 化學合成的

<220>

<221> 結合

<222> (1)..(1)

<223> Fmoc-Cys(二唾液酸基)型-酞醯基型連接基部分

<400> 12

<210> 13

<211> 9

<212> PRT

<213> 人造序列

<220>

<223> 化學合成的

<220>

<221> 結合

<222> (1)..(1)

<223> Ac-Asn(無唾液酸基)型-酞醯基型連接基部分

<400> 13

<210> 14

<211> 9

<212> PRT

<213> 人造序列

<220>

<223> 化學合成的

<220>

<221> 結合

<222> (1)..(1)

<223> Asn(無唾液酸基)型-四氯酞醯基型連接基部分

<400> 14

<210> 15

<211> 9

<212> PRT

<213> 人造序列

<220>

<223> 化學合成的

<400> 15

<210> 16

<211> 9

<212> PRT

<213> 人造序列

<220>

<223> 化學合成的

<220>

<221> 結合

<222> (1)..(1)

<223> Fmoc基

<220>

<221> 結合

<222> (1)..(1)

<223> Pbf基

<220>

<221> 結合

<222> (2)..(2)

<223> Boc基

<400> 16

<210> 17

<211> 9

<212> PRT

<213> 人造序列

<220>

<223> 化學合成的

<220>

<221> 結合

<222> (1)..(1)

<223> Asn(無唾液酸基)型-酞醯基型連接基部分

<400> 17

Claims (22)

1. 一種含有糖鏈加成連接基部分及生理活性物質部分之化合物或其鹽，該化合物係以下述式(A)表示：R¹-X (A)其中，R¹意指糖鏈加成連接基部分，R¹係以下述式(IV)表示：

   

   [式(IV)中，R⁴各自獨立，係氫原子、碳數1至16之烷基或碳數5至16之芳基；R⁷係-S-CH₂-CONH-糖鏈或-CONH-糖鏈；R⁸係氫原子、碳數1至16之醯基、Fmoc基、Boc基、Z基、Troc基、Alloc基、胺基甲酸酯系保護基、糖鏈、胺基酸、多肽、糖鏈加成之胺基酸或糖鏈加成之多肽；R⁹各自獨立，係氫原子、鹵素、氰基、碳數1至4之烷基、碳數1至4之烷氧基、硝基、甲磺醯基、甲苯磺醯基、碳數1至3之醯基、羥基、羧基或胺基；波線表示與X鍵結之部分]；X意指生理活性物質部分，該生理活性物質具有至少1個胺基；該X與R¹之鍵結係位於該至少1個胺基之鍵結。
2. 如申請專利範圍第1項所述之化合物或其鹽，其中4個該R⁴均係氫原子。
3. 如申請專利範圍第1項所述之化合物或其鹽，其中至少1個該R⁹係鹵素。
4. 如申請專利範圍第1項所述之化合物或其鹽，其中4個該R⁹均係氯。
5. 如申請專利範圍第1項所述之化合物或其鹽，其中該「糖鏈加成之胺基酸或糖鏈加成之多肽」中，糖鏈係與胺基酸或多肽中之Asn或Cys鍵結。
6. 如申請專利範圍第1項所述之化合物或其鹽，其中該「糖鏈加成之胺基酸或糖鏈加成之多肽」中，糖鏈係未經連接基中介而與胺基酸或多肽鍵結。
7. 如申請專利範圍第1項所述之化合物或其鹽，其中該「糖鏈、糖鏈加成之胺基酸或糖鏈加成之多肽」中之糖鏈，係由4個以上之糖殘基構成。
8. 如申請專利範圍第1項所述之化合物或其鹽，其中該「糖鏈、糖鏈加成之胺基酸或糖鏈加成之多肽」中之糖鏈，係雙股複合型糖鏈、3股複合型糖鏈、或4股複合型糖鏈。
9. 如申請專利範圍第8項所述之化合物或其鹽，其中該糖鏈係選自二唾液酸基糖鏈、單唾液酸基糖鏈、無唾液酸基糖鏈、二(N-乙醯基葡萄糖胺)糖鏈及二甘露糖糖鏈所構成之組群中的雙股複合型糖鏈。
10. 如申請專利範圍第1項所述之化合物或其鹽，其中該「糖鏈、糖鏈加成之胺基酸或糖鏈加成之多肽」中之糖鏈，係以下述式表示之糖鏈：

    

    [式中，R¹⁰及R¹¹，相同或相異，表示

    

    ；Ac表示乙醯基]。
11. 如申請專利範圍第1項所述之化合物或其鹽，其中該生理活性物質係低分子生理活性物質或生物體高分子。
12. 如申請專利範圍第11項所述之化合物或其鹽，其中該生物體高分子係選自蛋白質、多肽、聚核苷酸及肽核酸所構成之組群。
13. 如申請專利範圍第1項所述之化合物或其鹽，其與無修飾之生理活性物質比較，具有提高的水溶性。
14. 如申請專利範圍第13項所述之化合物或其鹽，其中該提高之水溶性，以莫耳濃度計，為該「無修飾之生理活性物質」之10至1,000,000倍。
15. 如申請專利範圍第1項所述之化合物或其鹽，其中該糖鏈加成連接基部分依存於pH及/或溫度，而以自身做為觸媒之方式被切斷。
16. 一種組成物，其含有如申請專利範圍第1至15項中任一項所述之化合物或其鹽，其中該化合物或其鹽中之糖鏈實質上為一致。
17. 一種醫藥組成物，其包含：(I)如申請專利範圍第1至15項中任一項所述之化合物或其鹽、及(II)藥理學上可容許之載劑。
18. 如申請專利範圍第17項所述之醫藥組成物，其中該生理活性物質於投與至對象後迅速地發揮活性。
19. 如申請專利範圍第17或18項所述之醫藥組成物，其係使用於疫苗接種。
20. 一種製造方法，其係含有糖鏈加成連接基部分及生理活性物質部分之化合物或其鹽的製造方法，其中，該生理活性物質包含具有至少1個胺基、羥基、巰基、或羧基之肽部分，該製造方法包含以下之步驟：(a)藉由固相合成法，於樹脂上合成該肽部分的步驟，(b)使步驟(a)中所合成之該肽部分中之該「胺基、羥基、巰基、或羧基」，與以下述式(IV)表示之連接基部分鍵結的步驟；

    

    [式(IV)中，R⁴各自獨立，係氫原子、碳數1至16之烷基或碳數5至16之芳基；R⁷係-S-CH₂-CONH-糖鏈或-CONH-糖鏈；R⁸係氫原子、碳數1至16之醯基、Fmoc基、Boc基、Z基、Troc基、Alloc基、胺基甲酸酯系保護基、糖鏈、胺基酸、多肽、糖鏈加成之胺基酸或糖鏈加成之多肽；R⁹各自獨立，係氫原子、鹵素、氰基、碳數1至4之烷基、碳數1至4之烷氧基、硝基、甲磺醯基、甲苯磺醯基、碳數1至3之醯基、羥基、羧基或胺基；波線表示該肽部分與該「胺基、羥基、巰基、或羧基」之鍵結部分]。
21. 一種製造方法，其係含有糖鏈加成連接基部分及生理活性物質部分之化合物或其鹽的製造方法，其中，該生理活性物質包含具有至少1個胺基、羥基、巰基、或羧基之肽部分；以下述式(IV)表示之糖鏈加成連接基藉由脫水縮合而鍵結於該肽部分中之該「胺基、羥基、巰基、或羧基」，

    

    [式(IV)中，R⁴各自獨立，係氫原子、碳數1至16之烷基或碳數5至16之芳基；R⁷係-S-CH₂-CONH-糖鏈或-CONH-糖鏈；R⁸係氫原子、碳數1至16之醯基、Fmoc基、Boc基、Z基、Troc基、Alloc基、胺基甲酸酯系保護基、糖鏈、胺基酸、多肽、糖鏈加成之胺基酸或糖鏈加成之多肽；R⁹各自獨立，係氫原子、鹵素、氰基、碳數1至4之烷基、碳數1至4之烷氧基、硝基、甲磺醯基、甲苯磺醯基、碳數1至3之醯基、羥基、羧基或胺基；波線表示鍵結之部分]。
22. 一種糖鏈加成連接基，其係用於與具有至少1個胺基、羥基、巰基、或羧基之生理活性物質鍵結的糖鏈加成連接基，該糖鏈加成連接基係以下述式(B)表示：R¹-L (B)其中，R¹意指糖鏈加成連接基部分，R¹以下述式(IV)表示：

    

    [式(IV)中，R⁴各自獨立，係氫原子、碳數1至16之烷基或碳數5至16之芳基；R⁷係-S-CH₂-CONH-糖鏈或-CONH-糖鏈；R⁸係氫原子、碳數1至16之醯基、Fmoc基、Boc基、Z基、Troc基、Alloc基、胺基甲酸酯系保護基、糖鏈、胺基酸、多肽、糖鏈加成之胺基酸或糖鏈加成之多肽；R⁹各自獨立，係氫原子、鹵素、氰基、碳數1至4之烷基、碳數1至4之烷氧基、硝基、甲磺醯基、甲苯磺醯基、碳數1至3之醯基、羥基、羧基或胺基；波線表示與L之鍵結部分]；L意指脫離基。