TWI585073B - 擔子菌截短側耳素（ｐｌｅｕｒｏｍｕｔｉｌｉｎ）化合物的結晶形態、含彼之藥學組成物、及彼之製法 - Google Patents

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Description

擔子菌截短側耳素(pleuromutilin)化合物的結晶形態、含彼之藥學組成物、及彼之製法
本發明係關於結晶狀之14-O-{[(4-胺基-2-羥基-環己基)-硫基]-乙醯基}-側耳素(mutilin)，其之新穎製法及其結晶鹽。
擔子菌截短側耳素(pleuromutilin)為下式所示之化合物
是一種(例如)由擔子菌綱側耳菌(Pleurotus mutilus)及帕氏側耳菌(P. passeckerianus)生產的天然抗生素，見(例如)The Merck Index,12th edition,item 7694。
一些具有擔子菌截短側耳素的主要環結構且在主要羥基位置被取代之其他的擔子菌截短側耳素已經被發展為(例如)抗微生物劑。由於顯著的抗微生物活性，一群擔子菌截短側耳素衍生物，如在WO 2008/113089中被揭露的胺基-羥基經取代的環己基硫基乙醯基側耳素的發現令人特別感興趣。如在WO 2008/11089中被描述的，由於證實具有對抗(例如)與呼吸道及皮膚及皮結構感染有關的革蘭氏陽性病原和革蘭氏陰性病原活性，14-O-{[(4-胺基-2-羥基-環己基)-硫基]-乙醯基}-側耳素是特別有用的化合物。對這群化合物的實質純的異構物/非鏡像異構物的製造而言，需要便於工業規模使用且避免使用昂貴的起始原料、對環境有害的試劑及溶劑、或費時及費力的純化步驟的製法。在WO 2008/113089中被描述的製法包含根據個別合成步驟製造的化合物的層析純化，且最終非鏡像異構物係利用不能被工業規模使用的手性高效能液相層析分離。
出人意外地，吾人已經發現結晶狀之中間物在一方面具有意外的化學純化潛力，該化學純化潛力對避免層析純化及分離步驟的製造純的胺基-羥基經取代的環己基硫基乙醯基側耳素的製法來說是重要的。
吾人必須指出14-O-{[(4-胺基-2-羥基-環己基)-硫基]-乙醯基}-側耳素是用於具有在對應的ICH(人用藥物註冊技術要求國際協調會議)指導原則中所定義之管理要求的人類市場之有潛力的新穎藥物。ICH新穎藥物中的雜質指導原則(Q3A(R2))包含下述之限度：
從前述之ICH限度可看出最好分別具有低於0.10%面積的所有的個別未知的雜質及低於0.15%的結構明確的雜質。根據本發明提供之製法使能夠製造在希望的規格範圍內且滿足ICH要求的活性藥物成分(API)。
另一方面來說，更出人意外地，結晶狀中間物造成明顯的手性提濃(chiral enrichment)，該手性提濃在由便宜的外消旋物或手性純度較差的起始原料起始的製造純的立體異構物的製法中具有巨大的優勢。不同於在WO2008/113089中所描述之合成步驟，所描述之製法不涉及任何的既不是常相也不是手性相的層析純化，前述之WO 2008/113089在(例如)實施例1的步驟B中揭露在常相層析後單離出無色非晶形泡沫體狀之非鏡像異構物混合物形式的14-O-{[(4-胺基-2-羥基-環己基)-硫基]-乙醯基}-側耳素。在WO2008/113089的(例如)實施例1A中描述混合物手性層析後單離出無色非晶形泡沫體狀之經分離的純的非鏡像異構物，得到手性純的非鏡像異構物。
然而手性層析不是可以被工業級大規模應用的技術，此外根據WO2008/113089得不到14-O-{[(4-胺基-2-羥基-環己基)-硫基]-乙醯基}-側耳素之結晶鹽。
反之，根據本發明已經發現14-O-{[(4-胺基-2-羥基-環己基)-硫基]-乙醯基}-側耳素的結晶狀之藥學上可接受的鹽，其具有優於先前技藝WO2008/113089中所揭露的非晶形鹽之出人意外且優異的特性；例如出人意外地本發明之結晶鹽的化學安定性被提高超越該非晶形鹽；並且除此之外本發明之結晶鹽顯現出人意外的低吸濕性。
吾人也已經發現製造前述之結晶鹽的製法(其中由14-O-{[(4-胺基-2-羥基-環己基)-硫基]-乙醯基}-側耳素得到單一種立體異構物形式之鹽)和製造作為該結晶鹽之基礎的結晶狀之立體異構純的14-O-{[(4-胺基-2-羥基-環己基)-硫基]-乙醯基}-側耳素的製法。
一方面，本發明提供製造結晶狀之單一種立體異構物形式的式I所示之化合物的方法，其包含：
將式IIa所示之化合物中的胺基
或式IIa所示之化合物和式IIb所示之化合物的混合物中之胺基脫保護
(其中R是胺保護基)，及直接從該反應混合物中或經由在有機溶劑中再結晶而單離出所得到的結晶狀之單一種非鏡像異構物形式的式I所示之化合物。
另一方面，本發明提供結晶狀之單一種立體異構物形式的前面所定義之式I所示之化合物。
式IIa所示之化合物是新穎的且形成本發明之一部分。
另一方面，本發明提供式IIa所示之化合物。
在式I所示之化合物或式IIa所示之化合物中與羥基、胺基和硫基-乙醯基-側耳素基團連結的環己基環的碳原子皆是R組態，從而式I所示之化合物或式IIa所示之化合物代表任意的胺基受保護之14-O-{[(1R,2R,4R)-4-胺基-2-羥基-環己基硫基]-乙醯基}-側耳素。反之，在式Ib所示之化合物
或式IIb所示之化合物中與羥基、胺基和硫基-乙醯基-側耳素基團連結的環己基環的碳原子皆是S組態，從而式IIb所示之化合物代表任意的胺基受保護之14-O-{[(1S,2S,4S)-4-胺基-2-羥基-環己基硫基]-乙醯基}-側耳素。
胺保護基包含精於此藝人士所熟悉之保護基，其可經酸性法、鹼性法、氫化法、氧化法或還原法被除去，例如經由氫解，和以酸、鹼、氫化物、硫化物處理。適當的胺保護基被描述於(例如)T. W. Greene,P. G. M. Wuts,Protective Groups in Organic Synthesis,Wiley-Interscience,4th edition,2007,特別是p. 696-868。
可被便利地用於根據本發明之製法中的胺保護基包含(例如)：
-　苯甲基氧羰基(Cbz)，可被(例如)氫解除去，
-　對甲氧基苯甲基羰基(Moz或MeOZ)，可被(例如)氫解除去，
-　叔丁氧羰基(BOC)，可以(例如)強酸(例如鹽酸、磷酸、或三氟醋酸)處理除去，
-　三氟乙醯基，可以(例如)鹼(例如氫氧化鈉、碳酸鉀、碳酸銫)處理除去，
- 9-芴甲氧羰基(FMOC)，可以(例如)鹼(例如哌啶)處理除去，
-　苯甲基(Bn)，可被(例如)氫解除去，
-　對甲氧基苯甲基(PMB)，可被(例如)氫解除去，
- 3,4-二甲氧基苯甲基(DMPM)，可被(例如)氫解除去，
-　對甲氧基苯基(PMP)，可以(例如)硝酸鈰(IV)銨(CAN)處理除去，
-　甲苯磺醯基(Tos)，可以(例如)濃酸(例如氫溴酸、硫酸)處理除去，或以強還原劑(例如於液態氨中之鈉、萘基鈉)處理除去，
-　與甲苯磺醯胺以外的胺磺醯胺形成之基團(例如包含2-硝基苯磺醯胺(nosyl)或鄰硝基苯硫基(Nps))，可以(例如)碘化釤、氫化三丁基錫處理除去，
-　苯亞甲基，可以(例如)三氟甲磺酸、三氟醋酸、二甲硫醚處理除去，
-　三苯甲基(trityl,Tr)、二甲氧基三苯甲基(DMT)，可以(例如)酸(例如三氟醋酸)處理除去，
吾人較佳為三氟乙醯基或叔丁氧羰基(BOC)。
在三氟乙醯基情形下，鹼例如無機鹼(例如氫氧化鈉、氫氧化鉀、碳酸銫和碳酸鉀)或有機鹼(例如乙醇胺)可被用來把式IIa所示之化合物和式IIb所示之化合物脫保護，得到單一種立體異構物形式的式I所示之化合物。在較佳的體系中，無機鹼(例如氫氧化鈉和碳酸鉀)被使用。
在叔丁氧羰基(BOC)情形下，酸例如無機酸(例如礦酸)或有機酸可被用來把式IIa所示之化合物和式IIb所示之化合物脫保護，得到單一種立體異構物形式的式I所示之化合物。在較佳的體系中，有機酸(例如三氟醋酸(TFA))或礦酸(例如正磷酸)被使用。
或者，與R基團連結形成雜環之氮原子，例如與環己基連結之氮原子是鄰苯二甲醯亞胺基環之一部分；氮原子可以(例如)肼處理除去。在此情形下，氮上之氫原子不存在(見實施例17)。
式IIa所示之化合物的脫保護導致單一種產物形式的式I所示之化合物。在把式IIa所示之化合物與式IIb所示之化合物的混合物脫保護情形下，所得到的式Ia所示之產物與式Ib所示之產物被結晶/再結晶，從混合物中得到式I所示之化合物。
吾人已經發現在胺脫保護反應期間，分別與硫基、羥基和胺基連結之環己基部分的碳原子之立體化學保持和在用作為起始原料的式IIa所示之胺基受保護之化合物與式IIb所示之胺基受保護之化合物中的碳原子之立體化學一樣。
出人意外地，吾人已經發現式I所示之化合物可在單離後結晶，或甚至可直接在把胺基脫保護後所得到之反應混合物中結晶。例如，在有機溶劑(較佳為極性有機溶劑，例如二氯甲烷)中得到的單一種立體異構物形式的式I所示之化合物的溶液被反溶劑(例如醚，例如二異丙醚(DIPE)或甲基叔丁醚(MTBE)，以二異丙醚為宜)處理；或在有機溶劑(較佳為極性有機溶劑，例如二氯甲烷)得到的單一種立體異構物形式的式I所示之化合物的溶液在濃縮後被有機溶劑(較佳為醇，例如正丁醇)處理；或單離出的單一種立體異構物形式的式I所示之化合物粗質材料被置於有機溶劑(例如醚，例如四氫呋喃(THF))中且任意地被反溶劑(例如醚，例如二異丙醚或甲基叔丁醚)處理。單一種立體異構物形式的式I所示之化合物可結晶和可被單離出結晶形式。
結晶簡化單離和單離出的物質之處理且提供進一步純化產物的極佳機會。
根據本發明得到的結晶狀之化合物可被進一步純化，例如在有機溶劑(較佳為醇，例如正丁醇)中再結晶。
(再)結晶可視需要被重複且可以導致高的回收產率與極佳的純化。
在下表1中結晶狀的式I所示之化合物被指出具有出人意外的高純化潛力。
從上表1可清楚看出，式I所示之化合物的純度從在把式IIa所示之化合物脫保護後的87.3%提高到在DCM(二氯甲烷)/DIPE(二異丙醚)中結晶單離出之後的95.0%。經由正丁醇(再)結晶，純度甚至進一步提高到單離出的式I所示之化合物的最後純度99.7%。
下表2顯示被選擇之雜質的除去和從製程母液回收的式I所示之化合物在正丁醇再結晶後的全面純化：
使用晶種可加強和加速結晶。經由本發明中舉例說明的製法可得到晶種。式I所示之化合物的結晶法和再結晶法實現所希望的純度且可以工業規模高度地使用。吾人規避難處理且高價的層析純化且使結晶法和再結晶法可應用於工業上。
更出人意外地，當從式I所示之化合物與式Ib所示之化合物的混合物起始時，化合物I的結晶導致明顯的式I所示之化合物的非鏡像異構提濃。在把式IIa所示之化合物與式IIb所示之化合物的混合物脫保護和所形成的固體在有機溶劑或溶劑混合物(例如二氯甲烷/二異丙醚)中結晶後造成顯著的非鏡像異構提濃。如果在有機溶劑(較佳為使用醇，例如正丁醇)中再結晶的話，非鏡像異構提濃甚至更明顯。
在下表3中結晶狀之式I所示之化合物顯示手性提濃。
從表3易知，從在脫保護步驟中的式IIa所示之化合物與式IIb所示之化合物的非鏡像異構物混合物起始，且經由DCM/DIPE結晶從反應混合物中單離出所形成之產物，得到驚人的式I所示之化合物的手性提濃(59：41)。使所形成之式I所示之化合物與式Ib所示之化合物的手性提濃產物混合物進行正丁醇再結晶，在單離產物中得到大量且更驚人的式I所示之化合物之提濃(93：7)。與含有經提濃的式I所示之化合物的單離產物相反，正丁醇母液幾乎只含有式Ib所示之化合物(84%)。
任意地再結晶可被重複直到達到希望的光學純度為止。
在表1、2和3中顯示之結晶狀的式I所示之化合物的驚人的特性在藥用化合物之製造中極其有用。
本發明提供結晶狀之單一種立體異構物形式的式I所示之化合物。
出人意外地，式I所示之化合物的二種不同的結晶形式被單離出且以X射線粉末繞射鑑定。
另一方面，本發明提供晶型1的14-O-{[(1R,2R,4R)-4-胺基-2-羥基-環己基硫基]-乙醯基}-側耳素，例如該晶型1之X射線粉末繞射圖的特徵為在下列2θ角度具有譜峰(度，±0.2，特別是)：10.6,11.1,12.0,14.3,15.1,16.1,21.1；例如：10.6,11.1,12.0,14.3,15.1,16.1,18.2,19.2,20.7,21.1,21.3,21.8,22.6,23.5,24.7,28.2,30.2。
另一方面，本發明提供晶型2的14-O-{[(1R,2R,4R)-4-胺基-2-羥基-環己基硫基]-乙醯基}-側耳素(1：1正丁醇溶劑合物形式)，例如該晶型2之X射線粉末繞射圖的特徵為在下列2θ角度具有譜峰(度，±0.2，特別是)：9.8,11.1,13.1,14.1,17.6,19.7,22.2；例如：9.6,9.8,11.1,13.1,14.1,16.0,17.6,19.7,22.2,22.7,23.0。
晶型2的14-O-{[(1R,2R,4R)-4-胺基-2-羥基-環己基硫基]-乙醯基}-側耳素之正丁醇含量介於10和18重量百分率(w/w%)之間，通常介於11和14重量百分率(w/w%)之間。
式I所示之化合物宜以鹽(例如藥學上可接受之鹽)形式被單離出。該鹽宜為銨鹽，即與環己基環連結的胺基之酸加成鹽，其包含醋酸鹽、乳酸鹽(例如L-乳酸鹽)、或順丁烯二酸鹽(例如順丁烯二酸氫鹽)。
另一方面，本發明提供單一種立體異構物形式與鹽(例如結晶鹽)形式的式I所示之化合物，其中式I所示之化合物是單一種立體異構物形式；該鹽宜為醋酸鹽、乳酸鹽(例如L-乳酸鹽)、或順丁烯二酸鹽(例如順丁烯二酸氫鹽)。
根據本發明得到的式I所示之單一種立體異構物形式(例如鹽形式)的結晶狀化合物可用於藥學組成物。
另一方面，本發明提供藥學組成物，其含有結晶狀的14-O-{[((1R,2R,4R)-4-胺基-2-羥基-環己基)硫基]乙醯基}側耳素，或含有14-O-{[((1R,2R,4R)-4-胺基-2-羥基-環己基)硫基]乙醯基}側耳素之任意結晶狀的醋酸鹽、乳酸鹽、或順丁烯二酸氫鹽作為活性成份，且併用藥學上可接受的載體或稀釋劑。
經由把酸加到式I所示之化合物的游離鹼可將所得到之游離形式與單一種立體異構物形式的式I所示之化合物轉變成鹽。例如式I所示之化合物可被有機溶劑溶解或懸浮，或以溶於或懸浮於有機溶劑之形式被得到，有機溶劑宜為溶劑或溶劑混合物，例如醇(例如甲醇、乙醇)；鹵代烴(例如二氯甲烷)；醚(例如四氫呋喃)；醋酸酯(例如醋酸甲酯、醋酸乙酯、醋酸丙酯、醋酸異丙酯)；醇與醋酸酯之溶劑混合物(例如甲醇/醋酸異丙酯)；鹵代烴與醋酸酯之溶劑混合物(例如二氯甲烷/醋酸異丙酯)；醚與醋酸酯之溶劑混合物(例如四氫呋喃/醋酸異丙酯)，把酸加到前述所得到之混合物中，該酸例如有機酸或無機(礦)酸，例如醋酸、乳酸(例如L-乳酸鹽)、順丁烯二酸。可得到且可單離出鹽(例如結晶鹽)形式的式I所示之化合物。
吾人已經發現在鹽形成步驟中與硫基、羥基或胺基連結之環己基環的碳原子之立體化學被保留且保持和游離形式的式I所示之化合物的碳原子之立體化學一樣。
在WO 2008/113089的實施例I和Ia中分別描述之單離藥學活性化合物是有利的；但根據本發明單離出結晶鹽形式(例如結晶鹽形式的式I所示之化合物)甚至更有利許多。例如根據本發明之結晶鹽的純度增進與驚人的安定性增進對製造畜用及人用之藥學組成物來說很重要且有用。式I所示之化合物的結晶鹽在對應的非晶形形式上顯示增進的安定性且被單離出≧90%(例如甚至≧95%)的化學純度與手性純度。
下表4顯示化合物I之對應的結晶鹽與非晶形鹽之比較的安定性數據。
對活體內利用率(例如口服利用率)而言，藥學活性化合物之溶解度是一種重要的特性。對靜脈施用而言，所選擇的形式(例如鹽)之溶解度也非常重要且希望具有無複雜的技術或賦形劑的配方。
本發明之結晶狀醋酸鹽、乳酸鹽和順丁烯二酸(氫)鹽在水與水基溶媒(例如0.9%氯化鈉溶液)中或在生物相關媒液(例如FaSSIF(在禁食下的模擬腸液)與FeSSIF(在飽食下的模擬腸液))中的溶解度出人意外地高，使得本發明之結晶鹽在製藥上更加可行。
14-O-{[(4-胺基-2-羥基-環己基)-硫基]-乙醯基}側耳素之抗微生物(例如抗細菌)活性被概述於WO2008/113089。舉例來說，本發明之化合物(例如式I所示之化合物)顯現抗革蘭氏陽性菌的抗微生物(例如抗細菌)活性，例如凝固酶陽性葡萄球菌(例如金黃色葡萄球菌)與鏈球菌(例如肺炎鏈球菌)，例如顯現抗金黃色葡萄球菌ATCC49951與肺炎鏈球菌ATCC49619之低於0.4pg/ml的最低抑菌濃度(MIC)。最低抑菌濃度(MIC)係根據臨床與實驗室標準協會標準的建議測定。
另一方面，本發明提供晶型A的結晶狀14-O-{[(1R,2R,4R)-4-胺基-2-羥基-環己基硫基]-乙醯基}-側耳素醋酸鹽，(例如)該晶型A之X射線粉末繞射圖的特徵為在下列2θ角度具有譜峰(度，±0.2，特別是)：7.0,7.7,11.6,12.1,12.6,13.5,13.7,15.4,15.7,16.9,17.3,19.0,19.9,21.1,23.4,24.2,24.4；例如：7.0,7.7,11.6,12.1,12.6,13.5,13.7,14.1,15.4,15.7,16.5,16.9,17.3,19.0,19.6,19.9,20.1,21.1,22.2,22.5,23.4,24.2,24.4,26.7,29.1,29.6,31.0。
另一方面，本發明提供晶型B的結晶狀14-O-{[(1R,2R,4R)-4-胺基-2-羥基-環己基硫基]-乙醯基}-側耳素醋酸鹽，(例如)該晶型B之X射線粉末繞射圖的特徵為在下列2θ角度具有譜峰(度，±0.2，特別是)：10.3,10.7,12.7,14.3,15.5,16.0,17.2,19.5,20.6,22.9；例如：9.0,10.3,10.7,12.7,14.3,15.5,16.0,17.2,19.5,20.6,21.7,22.3,22.7,22.9,24.4。
另一方面，本發明提供晶型1的結晶狀14-O-{[(1R,2R,4R)-4-胺基-2-羥基-環己基硫基]-乙醯基}-側耳素L-乳酸鹽，(例如)該晶型1之X射線粉末繞射圖的特徵為在下列2θ角度具有譜峰(度，±0.2，特別是)：7.0,11.6,12.0,12.5,13.4,13.6,13.9,15.3,16.8,18.8,19.5,19.8,20.9,23.3,23.9,24.2；例如：7.0,7.6,11.6,12.0,12.5,13.4,13.6,13.9,15.3,15.5,16.8,17.2,18.8,19.5,19.8,20.0,20.9,22.0,22.4,22.7,23.3,23.9,24.2,25.3,28.9,29.4,30.8。
另一方面，本發明提供晶型1的14-O-{[(1R,2R,4R)-4-胺基-2-羥基-環己基硫基]-乙醯基}-側耳素順丁烯二酸氫鹽，(例如)該晶型1之X射線粉末繞射圖的特徵為在下列2θ角度具有譜峰(度，±0.2，特別是)：7.0,11.3,11.7,12.5,13.5,13.8,15.3,16.7,18.3,19.4,19.7,21.1,22.2,23.8,23.9；例如：7.0,11.3,11.7,12.5,13.3,13.5,13.8,14.1,15.3,16.7,17.2,18.0,18.3,19.4,19.7,20.4,21.1,21.9,22.2,22.8,23.8,23.9,24.9,27.1,27.8,28.7,29.3,30.6,30.8。
(結晶狀)游離鹼形式的式I所示之化合物顯現和(結晶狀)鹽形式的本發明之化合物同樣大小等級的藥學活性，例如抗微生物活性。
視情況而定，例如根據(例如類似)慣用之方法，可製造單一種立體異構物形式的式IIa所示之化合物或式IIa所示之化合物與式IIb所示之化合物的混合物。合宜地，單一種立體異構物形式的式IIa所示之化合物或式IIa所示之化合物與式IIb所示之化合物的混合物係經由下述製造：把式IIIa所示之胺基-羥基-硫醇基-環己基化合物或式IIIa所示之化合物與式IIIb所示之化合物的混合物(其中胺基受胺保護基保護)與經活化的14-O-乙醯基-側耳素偶合。
另一方面，本發明提供根據本發明之製法，其中式IIa所示之化合物或式IIa所示之化合物與式IIb所示之化合物的混合物係經由下述得到：令式IIIa所示之化合物
，或式IIIa所示之化合物和式IIIb所示之化合物的混合物
(其中R如同前面所定義者)分別與下式所示之經活化的14-O-AKT-乙醯基-側耳素偶合，
其中AKT是活化基團，任意地是甲磺醯基、苯磺醯基、甲苯磺醯基，或-O-AKT是鹵素，任意地14-O-AKT-乙醯基-側耳素是下式所示之化合物
，及單離出從反應混合物得到的式IIa所示之化合物，或式IIa所示之化合物與式IIb所示之化合物的混合物。
式IIIa所示之化合物(其中R如同前面所定義者)是新穎的且形成本發明之一部分。
另一方面，本發明提供單一種立體異構物形式的式IIIa所示之化合物。
在式IIIa所示之化合物中與羥基、胺基和硫基連結的環己基環的碳原子皆是R組態，從而式IIIa所示之化合物代表任意的胺基受保護之(1R,2R,4R)-4-胺基-2-羥基-1-硫醇基-環己烷；和在式IIIb所示之化合物中與羥基、胺基和硫基連結的環己基環的碳原子皆是S組態，從而式IIIb所示之化合物代表任意的胺基受保護之(1S,2S,4S)-4-胺基-2-羥基-1-硫醇基-環己烷。
式IIIa所示之化合物或式IIIa所示之化合物與式IIIb所示之化合物的混合物(其中R如同前面所定義者)分別與經活化的14-O-AKT-乙醯基-側耳素(其中AKT如同前面所定義者)偶合，以得到式IIa所示之化合物或式IIa所示之化合物與式IIb所示之化合物的混合物(其中R如同前面所定義者)的偶合反應可視情況而定，例如根據(例如類似)慣用之方法(例如)，在眾所周知的偶合反應之標準條件下進行，該標準條件是例如在鹼(例如強無機鹼，像氫氧化物，例如氫氧化鈉)存在下，例如在二相系統中，而且如果反應是在二相系統中進行的話，宜在觸媒(例如相轉移觸媒，例如氯化苯甲基三丁銨)存在下進行。偶合反應也可以是在鹼(較佳為有機鹼，例如DBU(1,8-二氮雜雙環[5.4.0]十一-7-烯))存在下在單一種溶劑系統中進行，該溶劑是例如有機溶劑，例如鹵代烴(例如氯苯、二氯甲烷)、芳族溶劑(例如甲苯)、腈(例如乙腈)或醚(例如甲基叔丁醚、四氫呋喃)。
合宜地偶合反應是在下列情況進行：在有機溶劑(例如非極性溶劑(例如醚，例如甲基叔丁醚(MTBE))或極性溶劑(例如鹵代烴，例如二氯甲烷)中；在鹼水溶液(例如氫氧化鈉水溶液)存在下之或在鹼(例如DBU(1,8-二氮雜雙環[5.4.0]十一-7-烯)、DBN(1,5-二氮雜雙環[4.3.0]壬-5-烯))的存在下於有機溶劑中，當使用鹼水溶液的情況，較佳在相轉移觸媒(例如氯化苯甲基三丁銨)的存在下。
吾人已經發現在偶合反應期間與硫基、羥基和胺基連結的環己基部分的碳原子之立體化學被保留且保持和分別用作為起始原料之式IIIa所示之化合物與式IIIb所示之化合物的碳原子之立體化學一樣。
單一種立體異構物形式的式IIIa所示之化合物或式IIIa所示之化合物與式IIIb所示之化合物的混合物可視情況而定分別例如根據(例如類似)慣用之方法製造。合宜地式IIIa所示之化合物或式IIIa所示之化合物與式IIIb所示之化合物的混合物分別經由把胺基-羥基-硫醇基環己烷(其中胺基與硫醇基皆受保護)中的硫醇官能基脫保護而製造。
另一方面，本發明提供根據本發明之製法，其中式IIIa所示之化合物或式IIIa所示之化合物與式IIIb所示之化合物的混合物經由下述得到：分別令式IVa所示之化合物中的硫醇官能基
或式IVa所示之化合物和式IVb所示之化合物的混合物中的硫醇官能基脫保護
(其中R如同前面所定義者且R1是硫醇保護基)，及單離出分別從反應混合物得到的式IIIa所示之化合物或式IIIa所示之化合物和式IIIb所示之化合物的混合物。
例如在根據本發明之式IVa所示之化合物和式IVb所示之化合物中的R1之意義中的硫醇保護基包含：例如
- (C1-6)烷基，其中烷基任意地進一步經取代，例如被(C6-12)芳基(例如苯基)，例如三苯甲基進一步取代；可(例如)以強酸或硝酸銀處理除去，
- (C1-6)烷羰基(例如乙醯基)，可(例如)以鹼(例如甲醇鈉)處理除去，
- (C6-12)芳羰基(例如苯甲醯基)，可(例如)以還原劑(例如氫化二異丁鋁(DIBAL))或以鹼(例如肼)處理除去，宜為-C(=O)-(C6-12)芳基；較宜為苯甲醯基。
適當的硫保護基被描述於(例如)T. W. Greene,P. G. M. Wuts,Protective Groups in Organic Synthesis,Wiley-Interscience,4th Edition,2007，特別是p. 647-695。
在式IVa所示之化合物中與羥基、胺基和硫基連結的環己基環的碳原子皆是R組態，從而式IVa所示之化合物代表胺基與硫基受保護之(1R,2R,4R)-4-胺基-2-羥基-1-硫醇基-環己烷；和在式IVb所示之化合物中與羥基、胺基和硫基連結的環己基環的碳原子皆是S組態，從而式IVb所示之化合物代表胺基與硫基受保護之(1S,2S,4S)-4-胺基-2-羥基-1-硫醇基-環己烷。
吾人已經發現在硫基脫保護反應期間與硫基、羥基和胺基連結的環己基部分的碳原子之立體化學被保留且保持和分別用作為起始原料的式IVa所示之化合物與式IVb所示之化合物的碳原子之立體化學一樣。
硫基脫保護反應之進行視情況而定，(例如)使用裂解劑(例如水合肼)。脫保護反應之進行是在有機溶劑中，例如鹵代烴(例如氯苯、二氯甲烷)、芳族溶劑(例如甲苯)、腈(例如乙腈)或醚(例如甲基叔丁醚、四氫呋喃)。為了使二硫化物之形成最少，脫保護任意地在抗氧化劑或還原劑(例如二硫代蘇糖醇(DTT))存在下進行。
式IVa所示之化合物或式IVa所示之化合物和式IVb所示之化合物的混合物可視情況而定，分別以(例如)類似慣用之方法或本發明中所描述之方法(例如在實施例部分中的方法)得到。
另一方面，本發明提供：
-　製造單一種立體異構物形式的式I所示之化合物的方法，其包含分別使用單一種立體異構物形式的式IIa所示之化合物或式IIa所示之化合物和式IIb所示之化合物的混合物，和/或包含分別使用單一種立體異構物形式的式IIIa所示之化合物或式IIIa所示之化合物和式IIIb所示之化合物的混合物，和/或分別使用單一種立體異構物形式的式IVa所示之化合物或式IVa所示之化合物和式IVb所示之化合物的混合物作為中間物，和
-　用作為製造單一種立體異構物形式的式I所示之化合物的製法中的中間物之單一種立體異構物形式的式IIa所示之化合物，和/或單一種立體異構物形式的式IIIa所示之化合物，和/或單一種立體異構物形式的式IVa所示之化合物。
另一方面，本發明提供製造單一種立體異構物形式的式I所示之化合物的方法，其包含：令單一種立體異構物形式的式IIIa所示之化合物或式IIIa所示之化合物和式IIIb所示之化合物的混合物(其中R如同前面所定義者)分別與經活化的14-O-AKT-乙醯基-側耳素偶合，其中AKT是活化基團，例如甲磺醯基、苯磺醯基或甲苯磺醯基，或-O-AKT是鹵素，合宜地AKT是甲苯磺醯基基團，例如式Tos-PLEU所示之化合物，分別得到式IIa所示之化合物或式IIa所示之化合物和式IIb所示之化合物的混合物(其中R如同前面所定義者)，任意地單離出分別從反應混合物得到的單一種立體異構物形式的式IIa所示之化合物或式IIa所示之化合物和式IIb所示之化合物的混合物(其中R如同前面所定義者)，分別把所得到之單一種立體異構物形式的式IIa所示之化合物，式IIa所示之化合物和式IIb所示之化合物的混合物(其中R如同前面所定義者)中的胺官能基脫保護，任意地經由再結晶從反應混合物單離出任意地為鹽形式的單一種立體異構物形式的式I所示之化合物，和視需要把所得到的游離形式的單一種立體異構物形式的式I所示之化合物轉變成鹽形式的單一種立體異構物形式的式I所示之化合物，或反之亦然；其中任意地把在單一種立體異構物形式的式IVa所示之化合物或在式IVa所示之化合物和式IVb所示之化合物的混合物(其中R和R1如同前面所定義者)中的硫醇官能基脫保護，分別得到單一種立體異構物形式的式IIIa所示之化合物或式IIIa所示之化合物和式IIIb所示之化合物的混合物(其中R如同前面所定義者)。
慣用之胺保護基(較佳為三氟乙醯基或叔丁氧羰基)可用作為在式IIa、IIb、IIIa、IIIb、IVa或IVb所示之化合物中的胺保護基。視情況而定，在式IIa、IIb、IIIa、IIIb、IVa或IVb所示之化合物中的胺保護基R可以被下述之方式改變：與胺基連結的環己基環的碳原子例如經由胺基脫保護及接著被不同的胺保護基保護而不會改變碳原子之組態，即不會改變其之立體化學。
本發明之製法使能夠單離出結晶狀之單一種立體異構物形式的式I所示之化合物。在一方面，在由手性純的起始原料開始時本發明之製法控制立體化學且產生單一種立體異構物形式之產物，不需要憑藉複雜的方法(像層析，例如常相層析或手性相層析，例如手性高效能液相層析)來分開非鏡像異構物與區域異構物(regio isomer)之混合物(例如在WO 2008/113089中所描述者)，這對可以工業規模應用之製法而言是大優勢。結晶狀之式I所示之化合物的發現是關鍵發明且使能夠完美地控制化學純度。從經濟觀點需要不錯/良好的產率且純度之控制對活性藥物成分(API)的最終品質來說是必要的方面來看，本發明之製法(式I所示之化合物的結晶形式之實測的令人滿意的產率)非常適於製造藥劑。
另一方面，根據本發明之製法經由結晶狀之化合物I的出人意外的特性甚至更驚人地再控制式I所示之化合物的手性純度。結晶狀之化合物I的出人意外的特性使能夠由更便宜的非鏡像異構物混合物起始。憑藉單離出結晶狀之固體形式的化合物I且把不需要的非鏡像異構物排除到母液來控制式I所示之化合物的手性純度。
在WO 2008/113089中完全未描述結晶狀之式I所示之化合物的存在。在WO 2008/113089的實施例1的步驟B中單離出非晶形泡沫體狀之14-O-{[(1R,2R,4R)-4-胺基-2-羥基-環己基硫基]-乙醯基)-側耳素(本發明之化合物I)和14-O-{[(1S,2S,4S)-4-胺基-2-羥基-環己基硫基]-乙醯基}-側耳素的混合物。在WO 2008/113089中的實施例1A描述經由手性層析把非鏡像異構物分開，和再次單離出非晶形泡沫體狀之分開的14-O-{[(1R,2R,4R)-4-胺基-2-羥基-環己基硫基]-乙醯基}-側耳素(本發明之化合物I)和14-O-{[(1S,2S,4S)-4-胺基-2-羥基-環己基硫基]-乙醯基}-側耳素(本發明之化合物Ib)。
控制化合物I的化學純度與手性純度的結晶狀之化合物I的出人意外的特性非常適於製造投服予人或動物之藥學活性化合物。
本發明進一步係關於14-O-{[(1R,2R,4R)-4-胺基-2-羥基-環己基硫基]-乙醯基}-側耳素醋酸鹽、L-乳酸鹽或順丁烯二酸氫鹽之新穎的結晶形式。使用結晶法在具有成鹽劑的有機媒液中可以把14-O-{[(1R,2R,4R)-4-胺基-2-羥基-環己基硫基]-乙醯基}-側耳素轉變為結晶鹽形式。使用晶種可以加強與加速製造新穎的結晶鹽之程序。晶種可以經由舉例說明的製法得到。
吾人已經發現本發明之結晶鹽保持與游離形式的單一種立體異構物形式的式I所示之化合物相同的立體化學。根據本發明之結晶鹽具有明顯地意外的優勢，即優於對應的非晶形鹽形式之增強的安定性(例如從表4顯而易見)。
此外且有點出人意外地，本發明之結晶鹽(較佳為晶型B的L-乳酸鹽和醋酸鹽)介於相對濕度水平之間的吸濕性小，即介於0到80%相對濕度之間，其具有低於2%的吸水性，使結晶鹽的優異的化學安定性可適用於製藥。
本發明之結晶鹽具有希望的且前後一致的化學純度與手性純度，具有和非晶形的冷凍乾燥形式相比更佳的安定性，有利於貯藏與製造藥學組成物。在此之前，例如在WO 2008/113089中，沒有式I所示之化合物的結晶鹽形式被描述。
總而言之，式I所示之化合物的結晶鹽形式具有優異的純度且實測的安定性，不僅優於非晶形的鹽形式，而且已經被證明在一般的貯藏條件範圍內絕對可適用於製藥。
本發明所使用之“單一種立體異構物形式”指出化合物顯現多於或等於90%之指示的立體化學之非鏡像異構物過量或鏡像異構物過量的形式。
特別地，本發明之合宜的化合物包括實施例1到17之化合物，例如選自下列所組成的群組之化合物：[(1R,3R,4R)-3-羥基-4-硫醇基-環己基]-胺甲酸叔丁酯，14-O-{[(1R,2R,4R)-4-叔丁氧羰基胺基-2-羥基-環己基-硫基]-乙醯基}-側耳素，晶型1的14-O-{[(1R,2R,4R)-4-胺基-2-羥基-環己基硫基]-乙醯基}-側耳素，晶型2的14-O-{[(1R,2R,4R)-4-胺基-2-羥基-環己基硫基]-乙醯基}-側耳素，2,2,2-三氟-N-[(1R,3R,4R)-3-羥基-4-硫醇基-環己基]-乙醯胺，14-O-{[(1R,2R,4R)-4-[(2,2,2-三氟-乙醯基)-胺基]-2-羥基-環己基-硫基]-乙醯基}-側耳素，晶型A的14-O-{[(1R,2R,4R)-4-胺基-2-羥基-環己基-硫基]-乙醯基}-側耳素醋酸鹽，晶型B的14-O-{[(1R,2R,4R)-4-胺基-2-羥基-環己基-硫基]-乙醯基}-側耳素醋酸鹽，晶型1的14-O-{[(1R,2R,4R)-4-胺基-2-羥基-環己基硫基]-乙醯基}-側耳素L-乳酸鹽，晶型1的14-O-{[(1R,2R,4R)-4-胺基-2-羥基-環己基硫基]-乙醯基}-側耳素順丁烯二酸氫鹽，14-O-{[(1R,2R,4R)-4-乙氧羰基胺基-2-羥基-環己基-硫基]-乙醯基}-側耳素，和14-O-{[(1R,2R,4R)-2-羥基-4-(鄰苯二甲醯亞胺-N-基)-環己基-硫基]-乙醯基}-側耳素。
由手性前驅物IIa、IIIa和IVa起始合成式I所示之化合物的製法被概述於下面反應圖1：
在反應圖1中R代表前述所定義之胺保護基且R1代表前述所定義之硫保護基。
由IIa與IIb之混合物、IIIa與IIIb之混合物、和IVa與IVb之混合物起始合成式I所示之化合物的製法被概述於下面反應圖2：
在反應圖2中R代表胺保護基且R1代表硫保護基(R和R1係如上所定義)。
在本說明書中之實施例和反應圖1、2、3、4、5與6內使用下述之縮寫字：
℃　攝氏溫度
1H NMR　質子核磁共振光譜
13C NMR　碳核磁共振光譜
[α]D　在589 nm的比旋光角度
BnBu3NCl　氯化苯甲基三丁銨
BOC　叔丁氧羰基
d　日
DCM　二氯甲烷
DIBAL　氫化二異丁鋁
DBN　1,5-二氮雜雙環[4.3.0]壬-5-烯
DBU　1,8-二氮雜雙環[5.4.0]十一-7-烯
DIPE　二異丙醚
DMF　N,N-二甲基甲醯胺
DMSO　二甲亞碸
DMTF　二甲基硫代甲醯胺
DPPA　二苯基磷醯疊氮化物
DTT　1,4-二硫代-DL-蘇糖醇
ESI　電噴霧離子化
EtOAc　醋酸乙酯
GF　玻璃纖維
h　小時
heptane　庚烷
HPLC　高效能液相層析
KF　卡費雪(Karl Fischer)水分測定法
M　莫耳濃度
mCPBA　間氯過氧苯甲酸
MTBE　甲基叔丁醚
min　分鐘
MS　質譜
m/z　質荷比
t-BuOH　叔丁醇
Bu4NCl　氯化四丁銨
PhCOSH　硫代苯甲酸
rt　室溫
TLC　薄層層析
TEA,Et3N　三乙胺
TFA　三氟醋酸
THF　四氫呋喃
Wt　重量
w/w　重量/重量
XRPD　X射線粉末繞射
在實施例中指出的“去重量分析(strip weight assay)”被定義為以下述之方式測定一批或整批的等分試樣之內容物：除去溶劑並以高效能液相層析或NMR測定內容物(使用內標法或外標法和/或把化合物減去已知的雜質)。在採用等分試樣情形下實施後插到總質量/體積。
在實施例中指出的“簡短清洗(line rinse)”是使用適當的溶劑使產物和原料之損失最低的系統清洗。
Tos-PLEU是下式所示之化合物
PLEU是下式所示之基團
任何的本發明所提供之化合物在本說明書中被表示成“(根據)本發明之化合物”，任何的本發明所提供之製法在本說明書中被表示成“(根據)本發明之製法”。
任何的本發明之化合物可視情況而定以例如類似慣用之方法或本發明中所描述之方法得到。
在下面實施例中，所有的溫度皆是未校正的攝氏溫度(℃)。所使用之縮寫字如前面之指示(在反應圖2的後面)。
實施例1 [(1R,3R,4R)-3-羥基-4-硫醇基-環己基]-胺甲酸叔丁酯
把3.94 kg的{(1R,2R,4R)-4-[(叔丁氧羰基)-胺基]-2-羥基-環己基}-苯-硫代羧酸酯和37 L的二氯甲烷裝入容器中，在15到25℃下攪拌所得到之混合物。於混合物中加入0.39 kg的1,4-二硫代-DL-蘇糖醇(10% wt)，以2 L的二氯甲烷清洗。於所得到之混合物中加入0.84 kg的水合肼。在18到22℃下攪拌所得到之混合物3小時，接著以高效能液相層析測定反應。在反應完全後立即加入39 L的1 M磷酸溶液，攪拌所得到之混合物15到30分鐘。分開所形成之二相，依序以39 L的1 M磷酸溶液和39 L的1%氯化鈉水溶液清洗所得到之有機相。在低於40℃下在真空中濃縮所得到之有機相，於濃縮物中加入20 L的二氯甲烷，再次濃縮所得到之混合物。於所得到之濃縮物中加入8 L的二氯甲烷，濃縮所得到之混合物到乾。得到2.89 kg的白色固體狀之[(1R,3R,4R)-3-羥基-4-硫醇基-環己基]-胺甲酸叔丁酯。
1H NMR(200 MHz,DMSO-d6,ppm) δ 6.79(d,J=7.8Hz,1H),4.99(d,J=5.8Hz,1H),3.34-3.24(m,1H),3.14-3.04(m,1H),2.37(d,J=3.8 Hz,1H),2.00-1.89(m,1H),1.87-1.82(m,1H),1.73-1.67(m,1H),1.47-1.04(m,12H)
實施例2 22-O-甲苯磺醯基擔子菌截短側耳素
22-O-甲苯磺醯基擔子菌截短側耳素是一種來自文獻的知名化合物。不過製造步驟被略述於後。
在10到15℃下花20分鐘以9.1 L的5.7 M氫氧化鈉水溶液處理13.0 kg的擔子菌截短側耳素和6.57 kg的4-甲苯磺醯氯之42.1 L的二氯甲烷溶液，保持溫度低於25℃。加熱所形成的灰白色懸浮液到回流狀態達20小時，經由高效能液相層析測定反應直到反應完全為止。在反應完全後立即冷卻所得到之混合物到20至30℃，以52 L的二氯甲烷稀釋，在15到25℃下攪拌10分鐘，分開所得到之層。以52 L的水清洗所得到之有機層數次直到水層之pH值低於9。濃縮所得到之有機層到4倍份量，與52 L的二氯甲烷共沸蒸餾乾燥2次。於所得到之溶液中逐滴加入52 L的庚烷，在低於40℃下濃縮所得到之溶液到大約4倍份量。於所得到之濃縮物中加入52 L的庚烷，在20到25℃下攪拌所形成之懸浮液達2到2.5小時，過濾，以39 L的庚烷清洗所得到之濾餅，在濾器上抽乾。在低於40℃下在真空中乾燥固體至少12小時。得到16.9 kg的白色固體狀之22-O-甲苯磺醯基擔子菌截短側耳素。
1H NMR(200 MHz,DMSO-d6,ppm,尤其是) δ 7.81(d,2H),7.47(d,2H),6.14-6.0(m,1H),5.54(d,J=7.8Hz,1H),5.08-4.99(m,2H),4.70(AB,J=16.2Hz,2H),3.41(d,J=5.2Hz,1H),2.41(s,4H),1.04(s,3H),0.81(d,3H),0.51(d,3H)
實施例3 14-O-{[(1R,2R,4R)-4-叔丁氧羰基胺基-2-羥基-環己基-硫基]-乙醯基}-側耳素
把4.75 kg的甲苯磺醯基擔子菌截短側耳素(Tos-PLEU)和44.4 L的甲基叔丁醚裝入容器中，於所得到之混合物中加入0.31 kg的氯化苯甲基三丁銨，以2.4 L的甲基叔丁醚清洗。於所得到之混合物中加入20 L的1 M氫氧化鈉水溶液和2.84 kg的[(1R,3R,4R)-3-羥基-4-硫醇基-環己基]-胺甲酸叔丁酯，在17到23℃下攪拌所得到之混合物3小時。以高效能液相層析測定反應，在反應完全後立即分開所形成之二層，把下方的水層移走。以下述清洗所得到之有機相：19 L的1 M氫氧化鈉水溶液、2×20 L的0.1 M磷酸、20 L的10%碳酸氫鈉水溶液、和2×20 L的水。濃縮所得到之有機液，將濃縮物置於7.46 kg的2-丙醇中，在低於40℃下在真空中再次濃縮及乾燥所得到之混合物。得到6.66 kg的白色泡沫體狀之14-O-{[(1R,2R,4R)-4-叔丁氧羰基胺基-2-羥基-環己基-硫基]-乙醯基}-側耳素。
1H NMR(200 MHz,DMSO-d6,ppm,尤其是) δ 6.78(d,J=7.8Hz,1H),6.22-6.08(m,1H),5.55(d,J=7.8Hz,1H),5.13-5.02(m,2H),4.95(d,J=5Hz,1H),4.52(d,J=6Hz,1H),3.36(AB,J=15Hz,2H),2.40(s,寬峰,1H),2.15-2.0(m,3H),1.9-1.8(m,1H),1.35(s,9H),0.81(d,J=7Hz,3H),0.62(d,J=6.6Hz,3H)
MS(ESI,g/mol): m/z 653[M+2Na]+
實施例4 晶型2的14-O-{[(1R,2R,4R)-4-胺基-2-羥基-環己基硫基]-乙醯基}-側耳素
步驟A：晶型1的14-O-{[(1R,2R,4R)-4-胺基-2-羥基-環己基硫基]-乙醯基}-側耳素
把6.6 kg的14-O-{[(1R,2R,4R)-4-叔丁氧羰基胺基-2-羥基-環己基-硫基]-乙醯基}-側耳素和13.2 L的異丙醇裝入容器中，在20到25℃下攪拌。加入11.20 kg的85%磷酸，加熱所得到之混合物到大約50℃至少16小時。經由高效能液相層析分析所得到之混合物到反應完全。在反應完全後立即冷卻混合物到20到25℃，加入52 L的二氯甲烷。冷卻所得到之混合物到0到5℃，在低於25℃下花1小時加入51 L的30%碳酸鉀水溶液。加溫所得到之混合物到室溫，攪拌30分鐘，測定水層之pH值。在低於25℃下於所得到之混合物中加入15 L的30%碳酸鉀水溶液，在15到25℃下攪拌所得到之混合物30分鐘，分開所得到之二相。以51 L的二氯甲烷萃取所得到之水相，以51 L的純水清洗合併的有機相。濃縮所得到之混合物到25 L體積，加入33.6 kg的二氯甲烷，濃縮所得到之混合物到25 L。於所得到之濃縮物中加入33.6 kg的二氯甲烷，濃縮所得到之混合物到10 L。冷卻所得到之濃縮物到18到22℃，花1小時加入50 L的二異丙醚。在15到25℃下攪拌所得到之漿料至少2小時，過濾，以10 L的二異丙醚清洗所得到之固體，乾燥。得到3.79 kg的晶型1的14-O-{[(1R,2R,4R)-4-胺基-2-羥基-環己基硫基]-乙醯基}-側耳素。
步驟B：晶型2的14-O-{[(1R,2R,4R)-4-胺基-2-羥基-環己基硫基]-乙醯基}-側耳素
為了進一步純化，把來自步驟A的14-O-{[(1R,2R,4R)-4-胺基-2-羥基-環己基硫基]-乙醯基}-側耳素和18.75 L的正丁醇加熱到88到92℃直到完全溶解，攪拌30到60分鐘。花至少2小時冷卻所得到之混合物到40到45℃，在此溫度下攪拌2小時。過濾所得到之混合物，依序以3.75 L的正丁醇和3.75 L的甲基叔丁醚清洗所得到之沈澱物。重複該純化步驟，在低於40℃下在真空中乾燥所得到之產物。得到3.27 kg的白色固體狀之晶型2的結晶狀之14-O-{[(1R,2R,4R)-4-胺基-2-羥基-環己基硫基]-乙醯基}-側耳素。
1H NMR(400 MHz,CDCl3,ppm,尤其是) δ 6.51-6.44(m,1H),5.78(d,J=8Hz,1H),5.38-5.20(m,2H),3.48-3.40(m,1H),3.36(d,J=7Hz,1H),3.25(AB,J=15Hz,2H),2.92-2.82(m,1H),2.6-2.5(m,1H),1.45(s,3H),1.20(s,3H),0.88(d,J=7Hz,3 H),0.73(d,J=8Hz,3H)
MS(ESI,g/mol): m/z 508[M+H]+
實施例5 晶型1的14-O-{[(1R,2R,4R)-4-胺基-2-羥基-環己基硫基]-乙醯基}-側耳素
在15到25℃下於900 g的14-O-{[(1R,2R,4R)-4-叔丁氧羰基胺基-2-羥基-環己基-硫基]-乙醯基}-側耳素之9 L的二氯甲烷溶液中加入1.8 L的三氟醋酸，攪拌所形成之溶液2小時。在反應完全後在真空中濃縮反應混合物，把所得到之濃縮物和總共9 L的二氯甲烷共沸蒸餾乾燥。令所得到之濃縮物溶於4.5 L的二氯甲烷，冷卻所得到之溶液到0到5℃，以3.6 L的2.5 M碳酸鉀水溶液調整pH值到11。加溫所得到之二相混合物到15到20℃，攪拌5到10分鐘。分開所得到之層，以1.8 L的二氯甲烷萃取所得到之水相，合併所得到之有機相，以2.3 L的水清洗，在硫酸鈉上乾燥，在低於40℃下在真空中濃縮到乾。得到粗製的14-O-{[(1R,2R,4R)-4-胺基-2-羥基-環己基-硫基]-乙醯基}-側耳素。產量：744 g
為了進一步純化，下述之步驟被進行：
於744 g的粗製的14-O-{[(1R,2R,4R)-4-胺基-2-羥基-環己基-硫基]-乙醯基}-側耳素中加入2.23 L的四氫呋喃，在15到25℃下攪拌所形成之懸浮液60分鐘。於所得到之混合物中花15到30分鐘加入7.44 L的甲基叔丁醚，熟化所得到之懸浮液60分鐘，在氮氣下過濾。以總共3 L的甲基叔丁醚清洗所收集的固體，在氮氣下在濾器上抽乾1.5小時。得到626 g的晶型1的14-O-{[(1R,2R,4R)-4-胺基-2-羥基-環己基-硫基]-乙醯基}-側耳素。
1H NMR圖確定14-O-{[(1R,2R,4R)-4-胺基-2-羥基-環己基硫基]-乙醯基}-側耳素之結構。14-O-{[(1R,2R,4R)-4-胺基-2-羥基-環己基硫基]-乙醯基}-側耳素之NMR圖被描述於實施例4。
實施例6 14-O-{[(1R,2R,4R)-4-[(2,2,2-三氟乙醯基)-胺基-2-羥基-環己基-硫基]-乙醯基}-側耳素 步驟1
把45.3 g的{(1R,2R,4R)-4-[(2,2,2-三氟-乙醯基)-胺基]-2-羥基-環己基}-苯-硫代羧酸酯和453 ml的二氯甲烷裝入燒瓶中，在15到25℃下以氬氣把所得到之混合物脫氣25分鐘。於所得到之混合物中逐滴加入12.79 g的水合肼，接著以90.6 ml的二氯甲烷簡短清洗。在20到25℃下攪拌所得到之混合物2小時，經由薄層層析測定反應直到反應完全為止。在反應完全後立即冷卻所得到之混合物到15到20℃，以158.6 ml的2 M鹽酸清洗。分開所得到之相，把所得到之水相倒回燒瓶中，加入158.6 ml的飽和氯化鈉水溶液，以2×78.8 ml的二氯甲烷反萃取所得到之混合物。以90.6 ml的飽和氯化鈉水溶液清洗經複合的所得到之有機相，在低於40℃下在真空中濃縮所得到之有機層到2倍份量。於所得到之濃縮物中加入226.5 ml的二氯甲烷，濃縮所得到之混合物到2倍份量。於所得到之濃縮物中加入362.4 ml的二氯甲烷。
把所得到之混合物進行去重量分析測定2,2,2-三氟-N-[(1R,3R,4R)-3-羥基-4-硫醇基-環己基]-乙醯胺之含量，且測定出產量為27.1 g。
以氬氣把前述的所得到之2,2,2-三氟-N-[(1R,3R,4R)-3-羥基-4-硫醇基-環己基]-乙醯胺溶液(含有27.1 g)脫氣。加入56.5 g的甲苯磺醯基擔子菌截短側耳素，接著以54.3 ml的二氯甲烷簡短清洗，在20到25℃下攪拌所得到之混合物15分鐘。於所得到之混合物中花30分鐘加入34.0 g的DBU(1,8-二氮雜雙環[5.4.0]十一-7-烯)之34 ml的二氯甲烷溶液，在20到25℃下攪拌所得到之混合物1小時直到反應完全。依序以2×222.5 ml的2 M硫酸和2×222.5 ml的5%碳酸氫鈉水溶液清洗所得到之混合物，在40℃下在真空中濃縮所得到之混合物到乾。得到72.7 g的灰白色白色泡沫體狀之14-O-{[(1R,2R,4R)-[(2,2,2-三氟乙醯基)-胺基-2-羥基-環己基-硫基]-乙醯基}-側耳素。
1H NMR(200 MHz,DMSO-d6,ppm,尤其是) δ 9.31(d,1H,),6.15(dd,J=17.8 Hz,J=11.1 Hz,1H),5.55(d,J=7.8 Hz,1H),5.17-5.02(m,3H,H-20),5.53(d,J=5.8Hz,1H),3.80-3.60(m,1H),3.50-3.20(m,4H),2.65-2.41(m,2H),2.29-1.84(m,6H),1.80-1.40(m,6H),1.40-1.17(m,9H),1.17-0.95(m,5H),0.82(d,J=6.8 Hz,3H),0.63(d,J=5.8 Hz,3H)
步驟2
步驟A：2,2,2-三氟-N-[(1R,3R,4R)-3-羥基-4-硫醇基-環己基]-乙醯胺
把5.79g的{(1R,2R,4R)-4-[(2,2,2-三氟-乙醯基)-胺基]-2-羥基-環己基}-苯-硫代羧酸酯溶於81 ml的二氯甲烷，加入1.67 g(1.62 ml)的水合肼，在室溫下攪拌所形成之溶液3.5小時。於所得到之混合物中加入40 ml的1 M鹽酸，強力攪拌所得到之二相混合物10分鐘。分開二相，以40 ml的1 M鹽酸清洗所得到之有機相。以氯化鈉使合併的所得到之水層飽和，以30 ml的二氯甲烷清洗；在無水硫酸鈉上乾燥合併的所得到之有機相，濃縮到乾。得到3.41 g的無色結晶狀之2,2,2-三氟-N-[(1R,3R,4R)-3-羥基-4-硫醇基-環己基]-乙醯胺。
1H NMR(200 MHz,DMSO-d6,ppm,尤其是) δ 9,31(d,J=7,2Hz,1H),5,12(d,J=5,1Hz,1H),3,82-3,6(m,1H),3,24-3,09(m,1H),2,62-2,5(m,1H),2,40(s,寬峰,1H),2,03-1,84(m,2H),1,74-1,71(m,1H),1,47-1,21(m,3H)
步驟B：14-O-{[(1R,2R,4R)-[(2,2,2-三氟-乙醯基)-胺基]-2-羥基-環己基-硫基]-乙醯基}-側耳素
把5.91 g的2,2,2-三氟-N-[(1R,3R,4R)-3-羥基-4-硫醇基-環己基]-乙醯胺和11.78 g的甲苯磺醯基擔子菌截短側耳素溶於82.5 ml的二氯甲烷，以氬氣把所得到之溶液脫氣20分鐘。於所得到之混合物中花30分鐘加入6.91 g的DBU(1,8-二氮雜雙環[5.4.0]十一-7-烯)之27.5 ml的二氯甲烷溶液。經由薄層層析檢驗，在反應完全後立即於所得到之混合物中加入25 ml的2 M鹽酸，強力攪拌所得到之混合物10分鐘。分開所得到之相，依序以12.5 ml的2 M鹽酸和25 ml的5%碳酸氫鈉溶液清洗所得到之有機相，在無水硫酸鈉上乾燥，過濾。在真空中從所得到之濾液中蒸發出溶劑。得到16.8 g的無色泡沫體狀之14-O-{[(1R,2R,4R)-4-[(2,2,2-三氟-乙醯基)-胺基]-2-羥基-環己基-硫基]-乙醯基}-側耳素(含有DBU(1,8-二氮雜雙環[5.4.0]十一-7-烯)甲苯磺酸鹽和殘留的二氯甲烷)。
1H NMR圖確定14-O-{[(1R,2R,4R)-4-[(2,2,2-三氟-乙醯基)-胺基]-2-羥基-環己基-硫基]-乙醯基}-側耳素之結構。14-O-{[(1R,2R,4R)-4-[(2,2,2-三氟-乙醯基)-胺基]-2-羥基-環己基-硫基]-乙醯基}-側耳素之NMR圖被描述於實施例6的步驟1。
實施例7 晶型2的14-O-{[(1R,2R,4R)-4-胺基-2-羥基-環己基硫基]-乙醯基}-側耳素
把72.7 g粗製的14-O-{[(1R,2R,4R)-4-[(2,2,2-三氟-乙醯基)-胺基-2-羥基-環己基-硫基]-乙醯基}-側耳素、419.9 ml的甲醇和168 ml的水裝入燒瓶中，加溫所得到之混合物到40到45℃。於所得到之混合物中加入67.3 g的碳酸鉀，在40到45℃下攪拌所得到之混合物5小時。經由高效能液相層析測定反應直到反應完全為止，在反應完全後立即冷卻所得到之混合物到20到25℃，加入588 ml的二氯甲烷和588 ml的2 M磷酸，在20到25℃下攪拌所得到之混合物15分鐘。二相式過濾所得到之混合物，分開，以588 ml的1 M磷酸萃取所得到之有機層。分開所得到之相，於合併的所得到之含水(產物)層中加入588 ml的二氯甲烷，冷卻所得到之混合物到10到15℃。在低於25℃下於所得到之混合物中逐滴加入6 M氫氧化鈉直到pH值達到9以上(需要275 ml)。二相式過濾所得到之混合物，分開所得到之層。在低於40℃下在真空中濃縮所得到之有機(產物)層到大約5倍份量，加入176 ml的二氯甲烷，在低於40℃下在真空中濃縮所得到之混合物到2倍份量。於所得到之濃縮物中逐滴加入323.5 ml的正丁醇，在低於40℃下在真空中濃縮所得到之混合物到5倍份量，在20到25℃下攪拌所得到之濃縮物2小時。過濾所得到之混合物，以117.6 ml的正丁醇清洗所得到之沈澱物，在40℃下在真空中乾燥所得到之固體整夜，得到44.2 g的晶型2的14-O-{[(1R,2R,4R)-4-胺基-2-羥基-環己基硫基]-乙醯基}-側耳素。
把44.2 g的粗製的14-O-{[(1R,2R,4R)-4-胺基-2-羥基-環己基硫基]-乙醯基}-側耳素裝入清潔的容器中，加入221 ml的正丁醇。加熱所得到之混合物到88到92℃，攪拌40分鐘，花3小時以穩定的速率冷卻到40到45℃，攪拌2小時。過濾所得到之混合物，依序以44.2 ml的正丁醇和44.2 ml的甲基叔丁醚清洗，在低於40℃下在真空中乾燥。得到37.6 g的白色結晶固體狀之晶型2的14-O-{[(1R,2R,4R)-4-胺基-2-羥基-環己基硫基]-乙醯基}-側耳素。
1H NMR圖確定14-O-{[(1R,2R,4R)-4-胺基-2-羥基-環己基硫基]-乙醯基}-側耳素之結構。14-O-{[(1R,2R,4R)-4-胺基-2-羥基-環己基硫基]-乙醯基}-側耳素之NMR圖被描述於實施例4。
實施例8 [(1R,3R,4R)-3-羥基-4-硫醇基-環己基]-胺甲酸叔丁酯和[(1S,3S,4S)-3-羥基-4-硫醇基-環己基]-胺甲酸叔丁酯
把7.22 g的{(1R,2R,4R)-4-[(叔丁氧羰基)-胺基]-2-羥基-環己基}-苯-硫代羧酸酯和{(1S,2S,4S)-4-[(叔丁氧羰基)-胺基]-2-羥基-環己基}-苯-硫代羧酸酯之混合物和72 ml的二氯甲烷裝入燒瓶中，在15到25℃下攪拌所得到之混合物。花20分鐘用氬氣把所得到之混合物脫氣。於所得到之混合物中加入0.72 g的1,4-二硫代-DL-蘇糖醇，逐滴加入1.5 g的水合肼。經由薄層層析測定反應直到反應完全為止。在反應完全(2.5小時)後立即於所得到之混合物中加入72 ml的1 M磷酸溶液，攪拌所得到之混合物15分鐘。分開所形成之相，依序以72 ml的1 M磷酸和72 ml的1%氯化鈉溶液清洗下方的有機相，在10 g的無水硫酸鎂上乾燥，過濾，以2×10 ml的二氯甲烷清洗固體。
在低於或等於40℃下在真空中濃縮所得到之混合物。得到5.01 g的白色固體狀之[(1R,3R,4R)-3-羥基-4-硫醇基-環己基]-胺甲酸叔丁酯和[(1S,3S,4S)-3-羥基-4-硫醇基-環己基]-胺甲酸叔丁酯之混合物。
1H NMR(200 MHz,DMSO-d6,ppm,尤其是) δ 6.79(d,J=7.8Hz,1H),5.01(d,J=5.6Hz,1H),3.40-3.20(m,1H),3.1-3.0(m,1H),2,38(d,J=3.8Hz,1H),2.01-1.78(m,2H),1.73-1.61(m,1H),1.47-1.01(m,12H)
實施例9 14-O-{[(1R,2R,4R)-4-叔丁氧羰基胺基-2-羥基-環己基-硫基]-乙醯基}-側耳素和14-O-{[(1S,2S,4S)-4-叔丁氧羰基胺基-2-羥基-環己基-硫基]-乙醯基}-側耳素
把9.68 g的甲苯磺醯基擔子菌截短側耳素和101 ml的甲基叔丁醚裝入燒瓶中，在室溫下用氬氣把所得到之混合物脫氣5到10分鐘。在攪拌下於所得到之混合物中加入0.64 g的氯化苯甲基三丁銨、4.72 g的[(1R,3R,4R)-3-羥基-4-硫醇基-環己基]-胺甲酸叔丁酯和[(1S,3S,4S)-3-羥基-4-硫醇基-環己基]-胺甲酸叔丁酯之混合物和40 ml的1 M氫氧化鈉水溶液。在20到25℃下攪拌所得到之混合物，經由高效能液相層析測定反應直到反應完全為止。在反應完全(1小時)後立即分開所得到之層，把下方的水層移走。以下述清洗所得到之有機相：40 ml的1 M氫氧化鈉水溶液、2×40 ml的0.1 M磷酸、40 ml的10%碳酸氫鈉溶液、和40 ml的水。濃縮所得到之有機液，在低於或等於40℃下在真空中乾燥。得到11.88 g的白色泡沫體狀之14-O-{[(1R,2R,4R)-4-叔丁氧羰基胺基-2-羥基-環己基-硫基]-乙醯基}-側耳素和14-O-{[(1S,2S,4S)-4-叔丁氧羰基胺基-2-羥基-環己基-硫基]-乙醯基}-側耳素之混合物(殘留的溶劑校正)。
1H NMR(200 MHz,DMSO-d6,ppm,尤其是) δ 6.79(d,J=7.8Hz,1H),6.22-6.07(m,1H),5.55(d,J=8Hz,1H),5.12-4.96(m,3H),4.54(d,J=6Hz,1H),3.55-3.24(m,4H),2.54-2.50(m,1H),2.41(s,寬峰,1H),2.23-1.80(m,5H),1.71-1.56(m,3H),1.56-1.43(m,2H),1.42-1.31(m,14H),1.31-1.18(m,4H),1.10-0.91(m,5H),0.82(d,J=6.6Hz,3H),0.63(d,J=5.8Hz,3H)
實施例10 晶型2的14-O-{[(1R,2R,4R)-4-胺基-2-羥基-環己基硫基]-乙醯基}-側耳素
把10.69 g的14-O-{[(1R,2R,4R)-4-叔丁氧羰基胺基-2-羥基-環己基-硫基]-乙醯基}-側耳素和14-O-{[(1S,2S,4S)-4-叔丁氧羰基胺基-2-羥基-環己基-硫基]-乙醯基}-側耳素之混合物(已校正殘留的溶劑)和24 ml的異丙醇裝入燒瓶中，攪拌所得到之混合物。於所得到之混合物中加入12 ml的85%磷酸，加熱所得到之混合物到50℃整夜。經由高效能液相層析測定反應，在反應完全後立即冷卻所得到之混合物到室溫，加入119 ml的二氯甲烷。冷卻所得到之混合物到0到5℃，花1小時逐滴加入119 ml的30%碳酸鉀水溶液。加溫所得到之混合物到室溫，沉降。分開所形成之相，把下方的所得到之有機(產物)層移走。以119 ml的二氯甲烷萃取所得到之水層(測得pH 10)，以119 ml的水清洗合併的所得到之有機相。濃縮所得到之有機相到大約5倍份量，加入59 ml的二氯甲烷，濃縮所得到之混合物到大約5倍份量。於所得到之濃縮物中加入59 ml的二氯甲烷，濃縮所得到之混合物到2倍份量。
在攪拌下於所得到之濃縮物中花1小時逐滴加入119 ml的二異丙醚。得到黏稠油質之沈澱物，其在大約1小時後變成白色結晶。在15到25℃下攪拌所得到之混合物2小時，過濾，以24 ml的二異丙醚清洗所得到之沈澱物，在濾器上抽乾。得到8.28 g的固體狀之14-O-{[(1R,2R,4R)-4-胺基-2-羥基-環己基硫基]-乙醯基}-側耳素和14-O-{[(1S,2S,4S)-4-胺基-2-羥基-環己基硫基]-乙醯基}-側耳素(59：41)之混合物(未校正殘留的溶劑)。
把8.28 g的所得到之粗製的混合物和41 ml的正丁醇裝入燒瓶中，在攪拌下加熱所得到之混合物到88到92℃達30分鐘。花大約3小時冷卻所得到之混合物到室溫。在大約50℃觀察到開始沈澱，在室溫下攪拌所得到之混合物整夜。過濾所得到之混合物，依序以16.6 ml的正丁醇和16.6 ml的甲基叔丁醚清洗所得到之沈澱物，在低於或等於40℃下在真空中乾燥。得到4.27 g的白色結晶固體狀之晶型2的14-O-{[(1R,2R,4R)-4-胺基-2-羥基-環己基硫基]-乙醯基}-側耳素。經由手性高效能液相層析測定光學純度是93%，經由RP HPLC測定化學純度是99.14面積%。
除此之外，經確認之14-O-{[(1R,2R,4R)-4-胺基-2-羥基-環己基硫基]-乙醯基}-側耳素的樣本之旋光度和前述所得到之14-O-{[(1R,2R,4R)-4-胺基-2-羥基-環己基硫基]-乙醯基}-側耳素之旋光度的比較也確定手性純度；([α]D(CHCl3)=+24.9°，相對於經確認的樣本之+25.9°)。
把正丁醇再結晶所產生之母液蒸發到乾，得到3.67 g的白色泡沫體狀之14-O-{[(1S,2S,4S)-4-胺基-2-羥基-環己基硫基]-乙醯基}-側耳素和14-O-{[(1R,2R,4R)-4-胺基-2-羥基-環己基硫基]-乙醯基}-側耳素之混合物(經由手性高效能液相層析測定為84.0：16.0)。
1H NMR圖確定14-O-{[(1R,2R,4R)-4-胺基-2-羥基-環己基硫基]-乙醯基}-側耳素之結構。14-O-{[(1R,2R,4R)-4-胺基-2-羥基-環己基硫基]-乙醯基}-側耳素之NMR圖被描述於實施例4。
實施例11 晶型A的14-O-{[(1R,2R,4R)-4-胺基-2-羥基-環己基-硫基]-乙醯基}-側耳素醋酸鹽
在50到55℃下於615 g的14-O-{[(1R,2R,4R)-4-胺基-2-羥基-環己基-硫基]-乙醯基}-側耳素之12.3 L的醋酸甲酯懸浮液中加入62 ml的水，透過玻璃纖維濾紙來淨化所形成之渾濁溶液。加熱所得到之濾液到50到55℃(透明溶液)，加入123 ml的醋酸，在50到55℃下攪拌所得到之混合物25分鐘。花80分鐘冷卻到15到25℃，又花60分鐘冷卻到0到5℃。在0到5℃下把所得到之懸浮液熟化80分鐘，過濾，以3.08 L的醋酸甲酯清洗濾餅。在氮氣下在濾紙上抽乾濾餅2小時。得到574.1 g的白色結晶細粉狀之晶型A的14-O-{[(1R,2R,4R)-4-胺基-2-羥基-環己基-硫基]-乙醯基}-側耳素醋酸鹽。
1H NMR圖確定14-O-{[(1R,2R,4R)-4-胺基-2-羥基-環己基-硫基]-乙醯基}-側耳素醋酸鹽之結構。14-O-{[(1R,2R,4R)-4-胺基-2-羥基-環己基-硫基]-乙醯基}-側耳素醋酸鹽之NMR圖被描述於實施例12。
實施例12 晶型B的14-O-{[(1R,2R,4R)-4-胺基-2-羥基-環己基-硫基]-乙醯基}-側耳素醋酸鹽
步驟1
於3260 g的14-O-{[(1R,2R,4R)-4-胺基-2-羥基-環己基-硫基]-乙醯基}-側耳素之56.8 L的醋酸異丙酯懸浮液中加入10 g的晶型B的14-O-{[(1R,2R,4R)-4-胺基-2-羥基-環己基-硫基]-乙醯基}-側耳素晶種。不加入晶種結晶也會發生。在20到25℃下攪拌所形成之懸浮液多於或等於10分鐘。於所得到之混合物中加入353 ml的醋酸，在20到25℃下攪拌所得到之混合物1小時，經由X射線粉末繞射測定反應完全和多晶型。在20到25℃下攪拌所得到之懸浮液1小時，過濾，以每次2.84 L的醋酸異丙酯清洗所得到之濾餅2次。在50℃下在真空中乾燥所得到之固體至少12小時。得到3.15 kg的白色結晶固體狀之晶型B的14-O-{[(1R,2R,4R)-4-胺基-2-羥基-環己基-硫基]-乙醯基}-側耳素醋酸鹽。
步驟2
把2.00 g的14-O-{[(1R,2R,4R)-4-胺基-2-羥基-環己基-硫基]-乙醯基}-側耳素溶於6 ml的甲醇。於所得到之混合物中一次性地加入0.338 ml的醋酸，攪拌所得到之溶液15分鐘。於所得到之混合物中花30分鐘加入30 ml的醋酸異丙酯並且在此期間內攪拌所形成之懸浮液。加熱所得到之漿料到30℃，蒸餾除去15倍份量，以醋酸異丙酯洗除3次(每次3倍份量)。過濾所得到之漿料，單離出所得到之白色沈澱物，以醋酸異丙酯清洗，乾燥整夜。得到1.74 g的白色結晶固體狀之晶型B的{[(1R,2R,4R)-4-胺基-2-羥基-環己基-硫基]-乙醯基}-側耳素醋酸鹽。
1H NMR(500 MHz,DMSO-d6,ppm,尤其是) δ 6.16-6.10(m,1H),5.54(d,J=8.3Hz,1H),5.09-5.02(m,2H),3.42(d,J=6Hz,1H),3.37(AB,J=15Hz,2H),3.29-3.25(m,1H),2.77-2.67(m,1H),2.55-2.5(m,1H),2.40(s,寬峰,1H),2.23-2.12(m,1H),2.12-2.03(m,3H),2.03-1.95(m,1H),1.94-1.85(m,1H),1.77(s,3H),1.77-1.71(m,1H),1.7-1.57(m,2H),1.52-1.43(m,1H),1.43-1.37(m,1H),1.36(s,3H),1.37-0.96(m,10H),0.81(d,J=7Hz,3H),0.62(d,J=7Hz,3H)
實施例13 晶型1的14-O-{[(1R,2R,4R)-4-胺基-2-羥基-環己基硫基]-乙醯基}-側耳素L-乳酸鹽
把22 g的14-O-{[(1R,2R,4R)-4-胺基-2-羥基-環己基-硫基]-乙醯基}-側耳素和1.1 L的醋酸乙酯裝入容器中。加熱所得到之懸浮液到50℃並且保持50℃直到溶解為止。於所得到之混合物中加入1當量的98%L-乳酸，花3小時逐步地冷卻所得到之混合物到25℃。
任意地加入14-O-{[(1R,2R,4R)-4-胺基-2-羥基-環己基-硫基]-乙醯基}-側耳素L-乳酸鹽晶種。不加入晶種結晶也會發生。在20到25℃下攪拌所形成之懸浮液整夜，冷卻到5℃達1小時。過濾單離出所得到之沈澱物，在40℃下在真空中乾燥整夜。得到23.7 g的晶型1的14-O-{[(1R,2R,4R)-4-胺基-2-羥基-環己基-硫基]-乙醯基}-側耳素L-乳酸鹽。
1H NMR(400 MHz,DMSO-d6,ppm,尤其是) δ 6.13(dd,J=11和18Hz,1H),5.54(d,J=8Hz,1H),5.10-5.01(m,2H),4.53(d,寬峰,1H),3.60(dd,J=7和14Hz,1H),3.40(AB,J=15Hz,2H),2.93(m,1H),2.55-2.48(m,1H),2.39(s,寬峰,1H),1.36(s,3H),1.09(d,J=7Hz,3H),1.04(s,3H),0.81(d,J=7Hz,3H),0.61(d,J=7Hz,3H)。
實施例14 晶型1的14-O-{[(1R,2R,4R)-4-胺基-2-羥基-環己基硫基]-乙醯基}-側耳素順丁烯二酸氫鹽
把5.5 g的14-O-{[(1R,2R,4R)-4-胺基-2-羥基-環己基-硫基]-乙醯基}-側耳素和110 ml的醋酸乙酯裝入燒瓶中。加熱所得到之懸浮液到80℃並且保持80℃直到溶解為止。於所得到之混合物中加入10.8 ml的1 M順丁烯二酸之四氫呋喃溶液，在攪拌下冷卻所得到之混合物到室溫整夜。
任意地加入14-O-{[(1R,2R,4R)-4-胺基-2-羥基-環己基-硫基]-乙醯基}-側耳素順丁烯二酸氫鹽晶種。不加入晶種結晶也會發生。過濾單離出6.16 g的晶型1的結晶狀之14-O-{[(1R,2R,4R)-4-胺基-2-羥基-環己基-硫基]-乙醯基}-側耳素順丁烯二酸氫鹽，在真空中乾燥6小時。
1H NMR(400 MHz,DMSO-d-6,ppm,尤其是) δ 6.13(dd,J=11和18Hz,1H),6.00(s,2H),5.54(d,J=8Hz,1H),5.10-5.01(m,2H),4.54(d,J=6Hz,1H),3.40(AB,J=15Hz,2H),3.05(m,1H),2.56-2.49(m,1H),2.40(s,寬峰,1H),1.36(s,3H),1.05(s,3H),0.81(d,J=7Hz,3H),0.61(d,J=7Hz,3H).
交換在式I所示之化合物中的胺保護基R的製法被顯示於下面反應圖3：
在反應圖3中，R代表前述所定義之胺保護基。
實施例15 14-O-{[(1R,2R,4R)-4-[(2,2,2-三氟乙醯基)-胺基-2-羥基-環己基-硫基]-乙醯基}-側耳素
在室溫下把1 g的14-O-{[(1R,2R,4R)-4-胺基-2-羥基-環己基-硫基]-乙醯基}-側耳素和10 ml的二氯甲烷裝入燒瓶中，攪拌所得到之混合物。於所得到之混合物中依序逐滴加入0.41 ml的三乙胺和0.29 ml的三氟醋酸酐，攪拌所得到之混合物直到反應完全為止(經由薄層層析測定)。依序以10 ml的0.1 M鹽酸、10 ml的5%碳酸氫鈉溶液和10 ml的水清洗所得到之混合物，濃縮到乾。得到1.20 g的泡沫體狀之14-O-{[(1R,2R,4R)-4-[(2,2,2-三氟乙醯基)-胺基-2-羥基-環己基-硫基]-乙醯基}-側耳素。
1H NMR圖確定14-O-{[(1R,2R,4R)-4-[(2,2,2-三氟乙醯基)-胺基-2-羥基-環己基-硫基]-乙醯基}-側耳素之結構。14-O-{[(1R,2R,4R)-4-[(2,2,2-三氟乙醯基)-胺基-2-羥基-環己基-硫基]-乙醯基}-側耳素之NMR圖被描述於實施例6。
實施例16 14-O-{[(1R,2R,4R)-4-乙氧羰基胺基-2-羥基-環己基-硫基]-乙醯基}-側耳素
在室溫下把1 g的14-O-{[(1R,2R,4R)-4-胺基-2-羥基-環己基-硫基]-乙醯基}-側耳素和10 ml的二氯甲烷裝入燒瓶中，攪拌所得到之混合物。於所得到之混合物中依序逐滴加入0.41 ml的三乙胺和0.2 ml的氯甲酸乙酯，攪拌所得到之混合物直到反應完全為止(經由薄層層析測定)。依序以10 ml的0.1 M鹽酸、10 ml的5%碳酸氫鈉溶液和10 ml的水清洗所得到之混合物，濃縮到乾。得到1.05 g的泡沫體狀之14-O-{[(1R,2R,4R)-4-乙氧羰基胺基-2-羥基-環己基-硫基]-乙醯基}-側耳素。
1H NMR(400 MHz,DMSO-d-6,ppm,尤其是) δ 7.07(d,J=7.6Hz,1H),6.16(dd,J=17.6 Hz,J=11.0 Hz,1H),5.55(d,1H,J=8.0 Hz),5.13-4.96(m,3H),4.54(d,1H,J=5.8Hz),4.00-3.89(q,2H),3.56-3.14(m,5H),2.51-2.36(m,2H),2.18-1.80(m,5H),1.80-1.40(m,5H),1.40-0.88(m,17H),0.82(d,J=6.8 Hz,3H),0.63(d,J=5.8 Hz,3H)。
實施例17 14-O-{[(1R,2R,4R)-2-羥基-4-(鄰苯二甲醯亞胺-N-基)-環己基-硫基]-乙醯基}-側耳素
在室溫下把1 g的14-O-{[(1R,2R,4R)-4-胺基-2-羥基-環己基-硫基]-乙醯基}-側耳素和40 ml的甲苯裝入燒瓶中，攪拌所得到之混合物。於所得到之混合物中依序逐滴加入0.41 ml的三乙胺和0.30 g的鄰苯二甲酸酐，加熱所得到之混合物到回流狀態，在Dean-Stark條件下除去水直到反應完全為止(經由高效能液相層析測定)。依序以10 ml的0.1 M鹽酸、10 ml的5%碳酸氫鈉溶液和10 ml的水清洗所得到之混合物，在硫酸鈉上乾燥，濃縮到乾。得到0.87 g的淺白色結晶狀之14-O-{[(1R,2R,4R)-2-羥基-4-(鄰苯二甲醯亞胺-N-基)-環己基-硫基]-乙醯基}-側耳素。
1H NMR(400 MHz,DMSO-d-6,ppm,尤其是) δ 7.9-7.7(m,4H),6.17(dd,J=17.6 Hz,J=11.2 Hz,1H),5.58(d,1H,J=7.8 Hz),5.16-5.06(m,3H),4.54(d,1H,J=6.0Hz),4.13-4.01(m,1H),3.62-3.29(m,4H),2.69-2.60(m,1H),2.43(m,1H),2.30-1.80(m,8H),1.80-1.15(m,12H),1.1-0.9(m,4H),0.83(d,J=6.6 Hz,3H),0.65(d,J=5.8 Hz,3H)。
可用於製造式IIIa所示之化合物的式IVa所示之起始原料的製法被概述於下面反應圖4。
在反應圖4中，R代表前述所定義之胺保護基且R1代表前述所定義之硫保護基。
實施例18 {(1R,2R,4R)-4-[(叔丁氧羰基)-胺基]-2-羥基-環己基}-苯-硫代羧酸酯 步驟A：環己-3-烯-1(R)-胺甲酸叔丁酯 A.　環己-3-烯-1-甲酸鹽之形成
把1000 g外消旋的環己-3-烯-1-甲酸裝入燒瓶中，加入5倍份量的丙酮。攪拌所得到之混合物，加熱到55到60℃，攪拌30分鐘。於所得到之混合物中花大約25分鐘逐滴加入960.5 g的(S)-(-)-α-甲基苯甲胺(在2倍份量的丙酮中)。得到透明橙色溶液，慢慢地冷卻。在53℃開始結晶(在30分鐘後)。在49℃結晶完全(在大約1小時後)。以冰浴花3小時冷卻所得到之混合物到室溫，接著在室溫下攪拌1.5小時。過濾出所得到之沈澱物，以丙酮清洗。得到在前面反應圖中所陳述之環己-3-烯-1-甲酸　α-甲基苯甲胺鹽。
產量(濕重)：1966.9 g；旋光度：20[α]D=+8.05°(c=1,甲醇)
B.　鹽之離析
把在步驟A所陳述之1966.9 g(濕重)的鹽和3.8倍份量的丙酮裝入10 L容器中，加熱所得到之混合物到55到60℃。當產物已經溶解時，攪拌所得到之混合物15分鐘，接著慢慢地冷卻到室溫。在1小時又10分鐘後開始結晶(53℃)。花4.5小時冷卻所得到之混合物到20到25℃，在室溫下攪拌1.5小時。過濾出所得到之沈澱物，以丙酮清洗。得到富含R組態異構物之環己-3-烯-1-甲酸　α-甲基苯甲胺鹽。產量(濕重)：1143 g；旋光度：20[α]D=+20.65°(c=1,甲醇)。
重複步驟B直到達到希望的旋光度(20[α]D>40°)為止。
C.　環己-3-烯-1(R)-甲酸
在20到25℃下把579.6 g的環己-3-烯-1(R)-甲酸(S)-(-)-α-甲基苯甲胺鹽和5倍份量的甲基叔丁醚裝入燒瓶中，攪拌所得到之混合物。於所得到之混合物中加入10倍份量的1 M鹽酸，攪拌所得到之混合物5到10分鐘，形成二層。分開所得到之二層，以甲基叔丁醚萃取水層。合併所得到之有機層，以鹽水清洗。在硫酸鈉上乾燥所得到之有機層，過濾，以甲基叔丁醚清洗所得到之濾餅。在真空中從所得到之濾液中除去溶劑。得到透明油體狀之環己-3-烯-1(R)-甲酸。
產量：301.78 g
旋光度：20[α]D=+83.1°(c=1,三氯甲烷)
環己-3-烯-1(R)-甲酸可以類似在下述中所揭露之方法得到：Schwartz,H. M.;et al. JACS 1978,100,5199-5203。
D.　得到環己-3-烯-1(R)-胺甲酸叔丁酯之庫爾提斯重排反應(Curtius Rearrangement)
在20到25℃下把305 g的環己-3-烯-1(R)-甲酸和10倍份量的甲苯裝入燒瓶中，攪拌所得到之混合物。於所得到之混合物中花15分鐘逐滴加入1.1當量的三乙胺，攪拌所得到之混合物20分鐘。於所得到之混合物中花大約20分鐘逐滴加入1.05當量的DPPA(二苯基磷醯疊氮化物)，溫度升高到95℃(放熱反應)伴隨劇烈的氣體逸出。攪拌所得到之混合物15分鐘，加熱到回流狀態。經由1H NMR測定反應的進展直到反應完全為止。花35分鐘冷卻所得到之混合物到80℃，花10分鐘逐滴加入5當量的叔丁醇，接著加入7.65 g的氯化亞銅。加溫所得到之混合物到100℃，攪拌40分鐘。經由1H NMR測定反應的進展直到反應完全為止。冷卻所得到之混合物，花10分鐘加入5倍份量的飽和碳酸氫鈉水溶液。攪拌所得到之混合物20分鐘，留置整夜。過濾所得到之混合物，以甲苯清洗殘留的固體2次。分開有機層，以甲苯清洗水層2次。合併全部的所得到之有機層，以水清洗，在真空中除去溶劑。得到淡棕色固體狀之環己-3-烯-1(R)-胺甲酸叔丁酯。粗製物產量：479.7 g。
把所得到之粗製的環己-3-烯-1(R)-胺甲酸叔丁酯層析。對160 g的粗製物而言，把管柱塞入1.5 kg的矽膠，使用2.5 L的環己烷，以砂蓋住頂部。把粗製物加入0.8 L的5%醋酸乙酯/環己烷中。以下述之梯度系統把該管柱快速層析，收集每一次分離的餾份：
2%醋酸乙酯/環己烷(9×0.8 L餾份)
5%醋酸乙酯/環己烷(7×0.8 L餾份)
10%醋酸乙酯/環己烷(4×0.8 L餾份)
層析後的總產率：理論值81.3%
1H NMR(CDCl3,500 MHz,ppm): δ 5.64-5.67(m,1H),5.56-5-60(m,1H),4.54(s,寬峰,1H),3.77(s,寬峰,1H),2.32-2.34(m,1H),2.07-2.17(m,2H),1.81-1.87(m,2H),1.48-1.56(m,1H),1.44(s,9H)
13C NMR(CDCl3,500 MHz,ppm):): δ 155.3,126.9,124.5,79.1,45.7,32.1,28.4,23.6
步驟B：(1R,3R,6S)-(7-氧雜-雙環[4.1.0]庚-3-基)胺甲酸叔丁酯
把4500 g的間氯過氧苯甲酸(70%)和24 L的二氯甲烷裝入容器中，冷卻所得到之混合物到15℃。把溫度保持在15到25℃，花大約30分鐘逐滴加入3000 g的環己-3-烯-1(R)-胺甲酸叔丁酯(在4.5 L的二氯甲烷中)。於所得到之混合物中加入1.5 L的二氯甲烷，在20到25℃下攪拌所得到之混合物1小時，加熱到回流狀態(40℃)達2小時。經由1H NMR檢驗，在反應完全後立即冷卻混合物到-5到0℃，攪拌整夜，過濾出所得到之固體沈澱物，以二氯甲烷清洗。以下述清洗所得到之濾液：10%硫代硫酸鈉水溶液(為了除去過氧化物)、10%碳酸氫鈉水溶液(直到水相之pH值大於7為止)和水。濃縮所得到之有機相至最少的體積，加入15 L的甲苯，濃縮所得到之混合物至最少的體積。重複此洗除程序2次。得到2.63 kg的(1R,3R,6S)-(7-氧雜-雙環[4.1.0]庚-3-基)-胺甲酸叔丁酯之甲苯溶液(殘留的mCBA和甲苯校正後的產量是2.05 kg)。
1H NMR(200 MHz,CDCl3,ppm) δ 4.85(d,J=7Hz,1H),3.6-3.54(m,1H),3.10(s,寬峰,2H),2.23-1.99(m,2H),1.92-1.67(m,2H),1.54-1.27(m,11H)
步驟C：{(1R,2R,4R)-4-[(叔丁氧羰基)-胺基]-2-羥基-環己基}-苯-硫代羧酸酯
把來自前面步驟B之2630 g(校正後是2050 g)的(1R,3R,6S)-(7-氧雜-雙環[4.1.0]庚-3-基)胺甲酸叔丁酯之甲苯溶液(溶液重：15.44 kg)和3.1 L的甲苯裝入容器中，在15到25℃下攪拌所得到之混合物。於所得到之混合物中逐滴加入1.44 L的硫代苯甲酸(10%)。把溫度保持在低於30℃。一次性地加入1.9 L的甲苯和85.3 g的一水合氯化四丁銨，停止外部溫度控制，所得到之混合物放熱。加熱所得到之混合物到40到45℃，攪拌4小時。經由薄層層析和1H NMR檢驗，在反應完全後立即冷卻混合物到15到20℃，以5%碳酸氫鈉水溶液清洗2次，以水清洗2次。在真空中濃縮所得到之有機層至最少的體積。加入10.25 L的甲苯，濃縮所得到之混合物至最少的體積。重複前述之程序，測定所得到之乾重。後面的漿料之份量皆與此乾重成比例。
在攪拌下於所得到之粗製濃縮物中加入0.5倍份量的甲苯，在15到25℃下攪拌所得到之混合物30分鐘。於所得到之混合物中花15分鐘逐滴加入0.5倍份量的庚烷，在15到25℃下攪拌所得到之混合物40分鐘。過濾所得到之固體，以0.25倍份量的1：1甲苯-庚烷清洗，接著以0.5倍份量的1：1甲苯-庚烷進行漿料清洗，接著以0.25倍份量的1：1甲苯-庚烷進行置換清洗。
此步驟把不需要的區域異構物(regioisomer)和硫代苯甲酸的量降低到不會被1H NMR偵測到。單離出所得到之固體，在30℃下在真空中乾燥。得到1090 g的白色固體狀之{(1R,2R,4R)-4-[(叔丁氧羰基)-胺基]-2-羥基-環己基}-苯-硫代羧酸酯。
H NMR(200 MHz,DMSO-d6,ppm) δ 7.92-7.87(m,2H),7.71-7.63(m,1H),7.58-7.,49(m,2H),6.85(d,J=8Hz,1H),5.11(d,J=5.6Hz,1H),3.49-3.25(m,3H),2.12-1.95(m,2H),1.79-1.69(m,1H),1.54-1.14(m,12H)
另一種得到可用於製造式IIIa所示之化合物的式IVa所示之起始原料的(縮短)製法被概述於下面反應圖5：
其中R代表前述所定義之胺保護基且R1代表前述所定義之硫保護基。
實施例19 {(1R,2R,4R)-4-[(2,2,2-三氟乙醯基)-胺基]-2-羥基-環己基}-苯-硫代羧酸酯
步驟A：N-(環己-3-烯-1(R)-基)-2,2,2,-三氟-乙醯胺
在20到25℃下把50 g的3-環己烯-1(R)-甲酸和425 ml的氯苯裝入燒瓶中，攪拌所得到之混合物。於所得到之混合物中依序逐滴加入110 ml的三乙胺和25 ml的氯苯。加溫所得到之混合物到78到82℃，以控制劑量方式加入109.2 g的DPPA(二苯基磷醯疊氮化物)，保持溫度在80到90℃，穩定的氣體逸出，以20 ml的氯苯簡短清洗。在78到82℃下攪拌所得到之混合物1小時直到經由薄層層析測定反應完全為止。冷卻所得到之混合物到大約70℃，保持溫度在70到80℃，逐滴加入226 g的三氟醋酸之34 ml的氯苯溶液，接著加入1.57 g的氯化亞銅，以25 ml的氯苯簡短清洗。在90到95℃下攪拌所得到之混合物2小時，經由薄層層析測定反應直到反應完全為止。冷卻所得到之混合物到15到25℃，加入375 ml的20%碳酸鉀水溶液，攪拌所得到之混合物15分鐘。分開所得到之層，於所得到之上方的有機層中加入375 ml的20%碳酸鉀水溶液。通過矽藻土過濾所得到之混合物以除去殘留的固體，以50 ml的氯苯清洗矽藻土。分開所得到之層，以250 ml的氯苯反萃取合併的所得到之下方的水層，以500 ml的0.5 M磷酸清洗合併的所得到之有機相。以300 ml的氯苯反萃取所得到之水層，以500 ml的5%氯化鈉水溶液清洗合併的所得到之有機相。
進行去重量分析以測定在下面環氧化步驟B中使用的N-(環己-3-烯-1(R)-基)-2,2,2,-三氟-乙醯胺含量。所得到之氯苯溶液含有69.52 g的N-(環己-3-烯-1(R)-基)-2,2,2,-三氟-乙醯胺。
1H NMR(200 MHz,D6-DMSO,ppm) δ 9.33(d,1H),5.69-5.56(m,2H),3.82(s,寬峰,1H),2.25-1.96(m,4H),1.81-1.74(m,1H),1.66-1.58(m,1H)
MS(ESI,g/mol): m/z 194[M+H]+
步驟B：2,2,2,-三氟-N-(1R,3R,6S)-(7-氧雜-雙環[4.1.0]庚-3-基)-乙醯胺
保持溫度低於30℃，於含有經冷卻(10到15℃)的69.5 g的步驟A之N-(環己-3-烯-1(R)-基)-2,2,2,-三氟-乙醯胺溶液的容器中分批裝入106.5 g的間氯過氧苯甲酸(70%)，以69.5 ml的氯苯清洗。在20到25℃下攪拌所得到之混合物1小時，經由薄層層析測定反應直到反應完全為止。在反應完全後立即冷卻所得到之混合物到0到-5℃，攪拌30分鐘，過濾出所得到之固體沈澱物(mCBA)，以2×34.8 ml的氯苯清洗。以347.6 ml的10%硫代硫酸鈉溶液清洗所得到之濾液除去過氧化物，以208.6 ml的氯苯反萃取所得到之水層。以347.6 ml的5%碳酸氫鈉溶液清洗合併的所得到之有機層(確保水相之pH值大於7)，以208.6 ml的氯苯反萃取所得到之水層。以347.6 ml的水清洗合併的有機層。
進行去重量分析以測定2,2,2,-三氟-N-(1R,3R,6S)-(7-氧雜-雙環[4.1.0]庚-3-基)-乙醯胺含量。所得到之氯苯溶液含有58.64 g的2,2,2,-三氟-N-(1R,3R,6S)-(7-氧雜-雙環[4.1.0]庚-3-基)-乙醯胺，其含有大約11%的反式環氧化物，此有機溶液被用於下面步驟C(開環反應)。
1H NMR(400 MHz,D6-DMSO,ppm) δ 9.21(d,J=7.2 Hz,1H),3.80-3.52(m,1H),3.10-3.09(m,2H),2.22-1.66(m,4H),2.03-2.10(m,1H),1.91-1.78(m,1H),1.76-1.68(m,1H),1.52-1.30(m,2H)
MS(ESI,g/mol): m/z 208[MH]-
步驟C：{(1R,2R,4R)-4-[(2,2,2-三氟-乙醯基)-胺基]-2-羥基-環己基}-苯-硫代羧酸酯
把含有58.64 g的2,2,2,-三氟-N-(1R,3R,6S)-(7-氧雜-雙環[4.1.0]庚-3-基)-乙醯胺的來自步驟B之氯苯溶液濃縮到大約5倍份量(根據環氧化物)。在15到25℃下以氬氣把所得到之濃縮物脫氣30分鐘，調整溫度到15到20℃。於所得到之混合物中逐滴加入58.1 g的硫代苯甲酸(90%)(確保溫度低於30℃)。於所得到之混合物中加入17.6 ml的氯苯作簡短清洗，在低於30℃下分批加入2.49 g的一水合氯化四丁銨。加熱所得到之混合物到40到45℃，攪拌，經由薄層層析測定直到反應完全為止。在反應完全後立即冷卻所得到之混合物到0到5℃，攪拌1小時，過濾，以2×58.64 ml的氯苯清洗所得到之濾餅。在低於40℃下在真空中乾燥所得到之固體。得到45.5 g的固體狀之{(1R,2R,4R)-4-[(2,2,2-三氟-乙醯基)-胺基]-2-羥基-環己基}-苯-硫代羧酸酯。
1H NMR(400 MHz,DMSO-d6,ppm) δ 9.38(s,1H),7.91(m,2H),7.68(m,1H),7.55(m,2H),5.23(s,1H),3.80(m,1H),3.55-3.49(m,1H),3.41-3.34(m,1H),2.13-2.03(m,2H),1.82-1.79(m,1H),1.60-1.38(m,3H).
MS(ESI,g/mol): m/z 348.0[M+H]+
用於製造式IIIa所示之化合物與式IIIb所示之化合物之混合物的式IVa所示之化合物與式IVb所示之化合物的混合物之起始原料的製法被概述於下面反應圖6。
其中R代表前述所定義之胺保護基且R1代表前述所定義之硫保護基。
實施例20 {(1R,2R,4R)-4-[(叔丁氧羰基)-胺基]-2-羥基-環己基}-苯-硫代羧酸酯和{(1S,2S,4S)-4-[(叔丁氧羰基)-胺基]-2-羥基-環己基}-苯-硫代羧酸酯 步驟A：環己-3-烯-1(R)-胺甲酸叔丁酯和環己-3-烯-1(S)-胺甲酸叔丁酯
在20到25℃下把50.0 g的3-環己烯-1-甲酸和500 ml的甲苯裝入2L燒瓶中，攪拌所得到之混合物，花15分鐘逐滴加入60.7 ml的三乙胺，接著花20分鐘逐滴加入89.7 ml的DPPA(二苯基磷醯疊氮化物)(氣體逸出，放熱到大約50℃)。於所得到之混合物中加入50 ml的甲苯作簡短清洗。加熱所得到之混合物到回流狀態，攪拌直到經由薄層層析和1H NMR測定反應完全為止。證實在1小時後反應完全。冷卻所得到之混合物到80℃，花10分鐘逐滴加入186 ml的叔丁醇，接著加入1.26 g的氯化亞銅，加熱所得到之混合物到回流狀態。經由1H NMR測定證實在1小時後反應完全。冷卻所得到之混合物到20到25℃，花5到10分鐘加入250 ml的飽和碳酸氫鈉溶液。攪拌所得到之混合物30分鐘，過濾除去殘留的固體，以25 ml的甲苯清洗固體。分開層，以2×150 ml的甲苯萃取水層。合併有機層，以150 ml的水清洗，在真空中濃縮。得到79.8 g的棕色固體狀之環己-3-烯-1(R)-胺甲酸叔丁酯和環己-3-烯-1(S)-胺甲酸叔丁酯的混合物。
旋光度：[α]D(三氯甲烷)=0°。
經由管柱層析純化：
經由管柱層析純化粗製的環己-3-烯-1(R)-胺甲酸叔丁酯和環己-3-烯-1(S)-胺甲酸叔丁酯的混合物(洗提液：環己烷/醋酸乙酯9：1)。
把所需要的透明餾份鑑別與合併。在真空中濃縮得到所需要之產物。得到60.88 g的白色固體狀之環己-3-烯-1(R)-胺甲酸叔丁酯和環己-3-烯-1(S)-胺甲酸叔丁酯的混合物。
旋光度：[α]D(三氯甲烷)=0°。
1H NMR(200 MHz,CDCl3,ppm) δ 5.69-5.53(m,2H),4.55(s,寬峰,1H),3.76(s,寬峰,1H),2.41-2.30(m,1H),2.12-2.08(m,2H),1.91-1.76(m,2H),1.6-1.48(m,1H),1.43(s,9H)
步驟B：(1R,3R,6S)-(7-氧雜-雙環[4.1.0]庚-3-基)-胺甲酸叔丁酯和(1S,3S,6R)-(7-氧雜-雙環[4.1.0]庚-3-基)-胺甲酸叔丁酯
把45 g的間氯過氧苯甲酸(70%)和240 ml的二氯甲烷裝入1 L燒瓶中，冷卻所得到之混合物到10到15℃。於所得到之混合物中花大約30分鐘逐滴加入30.0 g的環己-3-烯-1(R)-胺甲酸叔丁酯和環己-3-烯-1(S)-胺甲酸叔丁酯之45 ml的二氯甲烷溶液(確保溫度低於25℃)。於所得到之混合物中加入15 ml的二氯甲烷作簡短清洗，在室溫下攪拌所得到之混合物1小時，加熱到回流狀態(40℃)達2小時，經由高效能液相層析和薄層層析測定直到反應完全為止。在反應完全後立即冷卻所得到之混合物到0到5℃，攪拌30分鐘，過濾出所得到之固體沈澱物(mCBA)，以2×15 ml的二氯甲烷清洗。依序以下述清洗所得到之濾液：3×150 ml的10%硫代硫酸鈉水溶液(除去過氧化物)、3×150 ml的飽和碳酸氫鈉溶液(確保pH值大於7，記錄的pH值為8到9)、2×150 ml的水。濃縮所得到之有機層，加入150 ml的甲苯，濃縮所得到之混合物。於所得到之濃縮物中加入150 ml的甲苯，濃縮所得到之混合物到乾，加入甲苯到大約2倍份量，在下一個步驟使用前把所得到之混合物保存於冰箱中。
得到25.73 g的(1R,3R,6S)-(7-氧雜-雙環[4.1.0]庚-3-基)-胺甲酸叔丁酯和(1S,3S,6R)-(7-氧雜-雙環[4.1.0]庚-3-基)-胺甲酸叔丁酯之混合物(把整批蒸發到乾，稱重，經由NMR分析測定環氧化物、mCBA和甲苯之含量)。該物質中仍含有mCBA和甲苯。經由1H NMR測定順式：反式比是100：0。
旋光度：[α]D(三氯甲烷)=0°。
1H NMR(200 MHz,CDCl3,ppm) δ δ 4.82(s,寬峰,1H),3.63-3.54(m,1H),3.13(s,2H)2.26-2.03(m,2H),1.96-1.70(m,2H),1.49-1.28(m,11H)
步驟C：{(1R,2R,4R)-4-[(叔丁氧羰基)-胺基]-2-羥基-環己基}-苯-硫代羧酸酯和{(1S,2S,4S)-4-[(叔丁氧羰基)-胺基]-2-羥基-環己基}-苯-硫代羧酸酯
把在步驟B中得到之含有20.1 g的(1R,3R,6S)-(7-氧雜-雙環[4.1.0]庚-3-基)-胺甲酸叔丁酯和(1S,3S,6R)-(7-氧雜-雙環[4.1.0]庚-3-基)-胺甲酸叔丁酯的產物溶液和60 ml的甲苯裝入燒瓶中，在15到25℃下攪拌所得到之混合物，把15 ml的硫代苯甲酸溶化，逐滴加入所得到之混合物中(確保溫度低於30℃)。於所得到之混合物中加入18 ml的甲苯作簡短清洗，一次性地加入0.8 g的一水合氯化四丁銨，停止外部的溫度控制，所得到之混合物放熱。加熱所得到之混合物到40到45℃，經由薄層層析測定直到反應完全為止。在反應完全(3小時)後立即冷卻所得到之混合物到室溫，依序以2×101 ml的5%碳酸氫鈉溶液和2×101 ml的水清洗2次。在真空中濃縮所得到之有機層至最少的體積。加入101 ml的甲苯，濃縮所得到之混合物至最少的體積。重複此程序，於所得到之混合物中加入101 ml的甲苯，濃縮混合物到大約40 ml。經由卡費雪水分測定法分析含水量(0.04%)。於所得到之混合物中加入101 ml的甲苯，濃縮所得到之混合物到乾。
粗製物之產量：35.29 g
於所得到之粗製物中加入17.6 ml的甲苯，在攪拌下冷卻所得到之混合物到10到15℃(固體沈澱出)。攪拌所得到之漿料45分鐘。於所得到之混合物中逐滴加入17.6 ml的庚烷，攪拌所得到之混合物1小時。過濾所得到之混合物，把所得到之固體抽乾，以8.8 ml的1：1甲苯-庚烷作置換清洗，接著以17.6 ml的1：1甲苯-庚烷作漿料清洗，此步驟把不需要的區域異構物(regioisomer)的量降低到不會被NMR分析偵測到。在低於或等於40℃下在真空中乾燥所得到之固體。得到8.24 g的灰白色固體狀之{(1R,2R,4R)-4-[(叔丁氧羰基)-胺基]-2-羥基-環己基}-苯-硫代羧酸酯和{(1S,2S,4S)-4-[(叔丁氧羰基)-胺基]-2-羥基-環己基}-苯-硫代羧酸酯之混合物。
旋光度：[α]D(三氯甲烷)=0°。
1H NMR(200 MHz,DMSO-d6,ppm) δ 7.91-7.87(m,2H),7.70-7.50(m,3H),6.85(d,J=6Hz,1H),5.13(d,J=5,6Hz,1H),3.50-3.26(m,3H),2.13-1.96(m,2H),1.79-1.69(m,1H),1.54-1.15(m,12H)
圖1顯示晶型1的14-O-{[(1R,2R,4R)-4-胺基-2-羥基-環己基硫基]-乙醯基}-側耳素之粉末繞射圖。
圖2顯示晶型2的14-O-{[(1R,2R,4R)-4-胺基-2-羥基-環己基硫基]-乙醯基}-側耳素之粉末繞射圖。
圖3顯示晶型A的14-O-{[(1R,2R,4R)-4-胺基-2-羥基-環己基硫基]-乙醯基}-側耳素醋酸鹽之粉末繞射圖。
圖4顯示晶型B的14-O-{[(1R,2R,4R)-4-胺基-2-羥基-環己基硫基]-乙醯基}-側耳素醋酸鹽之粉末繞射圖。
圖5顯示晶型1的14-O-{[(1R,2R,4R)-4-胺基-2-羥基-環己基硫基]-乙醯基}-側耳素L-乳酸鹽之粉末繞射圖。
圖6顯示晶型1的14-O-{[(1R,2R,4R)-4-胺基-2-羥基-環己基硫基]-乙醯基}-側耳素順丁烯二酸氫鹽之粉末繞射圖。

Claims (17)

  1. 一種式I所示的化合物的結晶形態， 其係呈游離形式、或結晶狀溶劑合物形式、或結晶鹽形式之結晶狀的單一種立體異構物形式，其係選自下列：晶型1，其特徵為X射線粉末繞射圖在下列2θ角度(±0.2)具有譜峰：10.6、11.1、12.0、14.3、15.1、16.1、21.1；晶型2的正丁醇溶劑合物，其特徵為X射線粉末繞射圖在下列2θ角度(±0.2)具有譜峰：9.8、11.1、13.1、14.1、17.6、19.7、22.2；晶型A的醋酸鹽，其特徵為X射線粉末繞射圖在下列2θ角度(±0.2)具有譜峰7.0、7.7、11.6、12.1、12.6、13.5、13.7、15.4、15.7、16.9、17.3、19.0、19.9、21.1、23.4、24.2、24.4；晶型B的醋酸鹽，其特徵為X射線粉末繞射圖在下列2θ角度(±0.2)具有譜峰：10.3、10.7、12.7、14.3、15.5、16.0、17.2、19.5、20.6、22.9；晶型1的L-乳酸鹽，其特徵為X射線粉末繞射圖在下列 2θ角度(±0.2)具有譜峰：7.0、11.6、12.0、12.5、13.4、13.6、13.9、15.3、16.8、18.8、19.5、19.8、20.9、23.3、23.9、24.2；和晶型1的順丁烯二酸氫鹽，其特徵為X射線粉末繞射圖在下列2θ角度(±0.2)具有譜峰：7.0、11.3、11.7、12.5、13.5、13.8、15.3、16.7、18.3、19.4、19.7、21.1、22.2、23.8、23.9。
  2. 如申請專利範圍第1項之化合物的結晶形態，其係晶型1。
  3. 如申請專利範圍第2項之化合物的結晶形態，其中該化合物的特徵為X射線粉末繞射圖在下列2θ角度(±0.2)具有譜峰：10.6、11.1、12.0、14.3、15.1、16.1、18.2、19.2、20.7、21.1、21.3、21.8、22.6、23.5、24.7、28.2、30.2。
  4. 如申請專利範圍第1項之化合物的結晶形態，其係晶型2的正丁醇溶劑合物。
  5. 如申請專利範圍第4項之化合物的結晶形態，其中該化合物的特徵為X射線粉末繞射圖在下列2θ角度(±0.2)具有譜峰：9.6、9.8、11.1、13.1、14.1、16.0、17.6、19.7、22.2、22.7、23.0。
  6. 如申請專利範圍第1項之化合物的結晶形態，其係呈結晶鹽形式。
  7. 如申請專利範圍第6項之化合物的結晶形態，其是醋酸鹽、乳酸鹽、或順丁烯二酸氫鹽。
  8. 如申請專利範圍第1項之化合物的結晶形態，其係晶型A的醋酸鹽。
  9. 如申請專利範圍第8項之化合物的結晶形態，其中該化合物的特徵為X射線粉末繞射圖在下列2θ角度(±0.2)具有譜峰：7.0、7.7、11.6、12.1、12.6、13.5、13.7、14.1、15.4、15.7、16.5、16.9、17.3、19.0、19.6、19.9、20.1、21.1、22.2、22.5、23.4、24.2、24.4、26.7、29.1、29.6、31.0。
  10. 如申請專利範圍第1項之化合物的結晶形態，其係晶型B的醋酸鹽。
  11. 如申請專利範圍第10項之化合物的結晶形態，其中該化合物的特徵為X射線粉末繞射圖在下列2θ角度(±0.2)具有譜峰：9.0、10.3、10.7、12.7、14.3、15.5、16.0、17.2、19.5、20.6、21.7、22.3、22.7、22.9、24.4。
  12. 如申請專利範圍第1項之化合物的結晶形態，其係晶型1的L-乳酸鹽。
  13. 如申請專利範圍第12項之化合物的結晶形態，其中該化合物的特徵為X射線粉末繞射圖在下列2θ角度(±0.2)具有譜峰：7.0、7.6、11.6、12.0、12.5、13.4、13.6、13.9、15.3、15.5、16.8、17.2、18.8、19.5、19.8、20.0、20.9、22.0、22.4、22.7、23.3、23.9、24.2、25.3、28.9、29.4、30.8。
  14. 如申請專利範圍第1項之化合物的結晶形態，其係晶型1的順丁烯二酸氫鹽。
  15. 如申請專利範圍第14項之化合物的結晶形態，其中該化合物的特徵為X射線粉末繞射圖在下列2θ角度(±0.2)具有譜峰：7.0、11.3、11.7、12.5、13.3、13.5、13.8、14.1、15.3、16.7、17.2、18.0、18.3、19.4、19.7、20.4、21.1、21.9、22.2、22.8、23.8、23.9、24.9、27.1、27.8、28.7、29.3、30.6、30.8。
  16. 一種藥學組成物，其包含作為活性成份之如申請專利範圍第1至15項中任一項之化合物的結晶形態，且併用藥學上可接受的載體或稀釋劑。
  17. 一種製備式I所示的化合物的結晶形態之方法， 其係呈如申請專利範圍第1項所定義之結晶狀的單一種立體異構物形式，該方法包含：將式IIa所示之化合物中的胺基 或式IIa所示之化合物和式IIb所示之化合物的混合物中之胺基脫保護 (其中R是胺保護基)，及直接從該反應混合物中或經由在有機溶劑中再結晶而單離出所得到的如申請專利範圍第1項所定義之呈結晶狀的單一種非鏡像異構物形式之式I所示的化合物。
TW100117950A 2010-05-26 2011-05-23 擔子菌截短側耳素（ｐｌｅｕｒｏｍｕｔｉｌｉｎ）化合物的結晶形態、含彼之藥學組成物、及彼之製法 TWI585073B (zh)

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