TWI537260B - 新穎之氰基嘧啶化合物 - Google Patents
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Description
本發明有關於一種新穎之氰基嘧啶化合物、其醫藥組成物以及包含上述化合物的配方。
腺核苷(adenosine)是一種當結合至細胞表面的受體(receptor)時,能抑制許多生理活性的物質。位於細胞表面的腺核苷受體屬於G蛋白耦合性受體家族(G-protein-coupled receptor family),並且分類成A1、A2a、A2b、A3。在其中,腺核苷A1以及腺核苷A3受體和Gi-蛋白耦合,且其活性化的結果造成細胞內c-AMP的水平(level)降低。另外,腺核苷A2a以及腺核苷A2b受體和Gs-蛋白耦合後,其活性化的結果造成細胞內c-AMP的水平升高。已分別複製(clone)上述4種腺核苷受體的亞型(subtype)。
已經有許多的報導是有關可以作用在上述各腺核苷受體亞型的促效劑(agonist)和拮抗劑(antagonist)的研究。在其中,腺核苷A2a受體促效劑不僅表現出有效的降壓(antihypertensive)活性,能有效作為上述藥物,諸如降壓藥、用來治療/預防心臟或腦的缺血性疾病的藥劑,以及抗動脈硬化藥(antiarteriosclerotic),並且表現出眼睛的降壓活性(請參見J. Pharmcol. Exp. Ther. 320-326,1995)。
在WO 2005/105778文件中記載氰基嘧啶化合物為一種腺核苷A2a受體促效劑。然而,WO 2005/105778並未明確地揭露任何一種如本發明之特定氰基嘧啶化合物。
本發明的目的為提供一種安全有效,且具有腺核苷A2a受體促效活性的新穎化合物
本發明人為了達到上述目的廣泛研究的結果,發現下述化合物表現出有效的腺核苷A2a受體促效活性且非常安全。另外,本發明人也發現下述化合物表現出對眼睛的睫狀動脈的血管舒緩作用以及對視網膜神經節細胞的神經保護作用。本發明是以這些發現為基礎,更進一步研究而完成。
本發明提供一種示於下列第1項中的氰基嘧啶化合物,包含該化合物的組成物及配方,該化合物之用途,治療或預防疾病的方法,以及該化合物的製造。
第1項. 一種下式(1)的氰基嘧啶化合物或其鹽,其中R為氫、羥(低級烷基)、鹵代(低級烷基)或(低級烷氧基)羰基-(低級烷基)。
第2項. 如第1項之氰基嘧啶化合物或其鹽,選自包含下列化合物之組群:
(1) N-(4-(6-胺基-5-氰基-2-((6-(3-側氧基-3-(4-(哌啶-4-基甲基)哌-1-基)丙基)吡啶-2-基)甲硫基)-嘧啶-4-基)苯基)乙醯胺;
(2) N-(4-(6-胺基-5-氰基-2-((6-(3-(4-((1-(2-羥乙基)-哌啶-4-基)甲基)哌-1-基)-3-側氧基丙基)吡啶-2-基)甲硫基)嘧啶-4-基)苯基)乙醯胺;
(3) N-(4-(6-胺基-5-氰基-2-((6-(3-(4-((1-(3-羥基-丙基)哌啶-4-基)甲基)哌-1-基)-3-側氧基丙基)-吡啶-2-基)甲硫基)嘧啶-4-基)苯基)乙醯胺;
(4) N-(4-(6-胺基-5-氰基-2-((6-(3-(4-((1-(2-氟乙基)-哌啶-4-基)甲基)哌-1-基)-3-側氧基丙基)吡啶-2-基)甲硫基)嘧啶-4-基)苯基)乙醯胺;以及
(5) N-(4-(6-胺基-5-氰基-2-((6-(3-(4-((1-(2-甲氧基-羰乙基)哌啶-4-基)甲基)哌-1-基)-3-側氧基丙基)吡啶-2-基)甲硫基)嘧啶-4-基)苯基)乙醯胺。
第3項. 一種包含第1項或第2項之化合物或其鹽的醫藥組成物,以及製藥可接受的載體(pharmaceutically acceptable carrier)。
第4項. 一種如第3項之醫藥組成物,係用來治療或預防眼睛疾病。
第5項. 一種如第4項之醫藥組成物,係用來治療或預防青光眼。
第6項. 一種第1項或第2項之化合物或其鹽之用途,係作為腺核苷A2a受體促效劑。
第7項. 一種治療眼睛疾病的方法,包含提供有效劑量之第1項或第2項之化合物或其鹽類給予需要此種治療的動物或人類。
第8項. 一種包含第3項之醫藥組成物的水性液體製劑。
第9項. 如第8項之水性液體製劑,更進一步包含一種或多種添加劑,該添加劑係選自製藥可接受的緩衝液、等張劑(isotonic agent)、防腐劑、助溶劑(solubilizer)以及pH調節劑。
第10項. 如第9項之水性液體製劑,其中緩衝液係選自琥珀酸、硼酸、磷酸、胺基酸及其製藥可接受的鹽類。
第11項. 如第10項之水性液體製劑,其中緩衝液為琥珀酸。
第12項. 如第8項之水性液體製劑,其中等張劑為一種或兩種選自下列組群的等張劑:葡萄醣、山梨醇、甘露醇、氯化鈉、氯化鉀、丙二醇以及甘油。
第13項. 如第9項之水性液體製劑,其中防腐劑係選自氯化苯二甲烴銨(benzalkonium chloride)、氯化苯銨松寧(benzethonium chloride)、苯度溴銨(benzododecinium bromide,BOB)、氯己定葡糖酸鹽(chlorhexidine gluconate)、對位羥基苯甲酸甲酯(Methyl paraoxybenzoate)、對位羥基苯甲酸丙酯(Propyl paraoxybenzoate)、氯丁醇(chlorobutanol)以及苯甲醇(benzyl alcohol)。
第14項. 一種如第8項至第13項中任一項之水性液體製劑,其中pH值約為5.0至9.0者。
上述通式中定義的各基團的具體例子如下。
在此所使用的鹵素原子包括氟、氯、溴以及碘原子。
在此所使用的(低級烷氧基)羰基包括烷氧基羰基(alkoxycarbonyl),其中烷氧基部分(alkoxy moiety)為含1至6個碳的直鏈或分支狀的烷氧基。具體而言,例如包括甲氧基羰基、乙氧基羰基、正-丙氧基羰基、異丙氧基羰基、正-丁氧基羰基、異丁氧基羰基、第三丁氧基羰基、第二丁氧基羰基、正-戊氧基羰基、新戊氧基羰基、正-己氧基羰基、異己氧基羰基、3-甲基戊氧基羰基等等。
在此所使用的鹵代(低級烷基)包括低級烷基(較佳為1至6個碳的直鏈或分支狀的烷基)經1至7個鹵素原子,較佳為1至3個鹵素原子取代者。具體而言,例如包括氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、氯甲基、二氯甲基、三氯甲基、溴甲基、二溴甲基、二氯氟甲基、2,2-二氟乙基、2,2,2-三氟乙基、五氟乙基、2-氟乙基、2-氯乙基、3,3,3-三氟丙基、七氟丙基、2,2,3,3,3-五氟丙基、七氟異丙基、3-氯丙基、2-氯丙基、3-溴丙基、4,4,4-三氟丁基、4,4,4,3,3-五氟丁基、4-氯丁基、4-溴丁基、2-氯丁基、5,5,5-三氟戊基、5-氯戊基、6,6,6-三氟己基、6-氯己基、全氟己基等等。
在此所使用的羥(低級烷基)包括上述低級烷基(較佳為1至6個碳的直鏈或分支狀的烷基)經1至5個羥基,較佳為1至3個羥基取代者。具體而言,例如包括羥基甲基、2-羥基乙基、1-羥基乙基、3-羥基丙基、2,3-二羥基丙基、4-羥基丁基、3,4-二羥基丁基、1,1-二甲基-2-羥基乙基、5-羥基戊基、6-羥基己基、3,3-二甲基-3-羥基丙基、2-甲基-3-羥基丙基、2,3,4-三羥基丁基、全羥基己基(perhydroxyhexyl)等等。
在此所使用的(低級烷氧基)羰基低級烷基包括上述低級烷基(較佳為含1至6個碳的直鏈或分支狀的烷基),具有1至3個(較佳為1至2個)上述(低級烷氧基)羰基(較佳為具有1至6個碳的直鏈或分支狀的烷氧羰基)者。具體而言,例如包括甲氧基羰基甲基、乙氧基羰基甲基、1-甲氧基羰基乙基、2-甲氧基羰基乙基、2-乙氧基羰基乙基、1-乙氧基羰基乙基、2-第三丁氧基羰基乙基、3-甲氧基羰基丙基、3-乙氧基羰基丙基、4-乙氧基羰基丁基、5-異丙氧基羰基戊基、6-正-丙氧基羰基己基、1,1-二甲基-2-正-丁氧基羰基乙基、1-甲基-1-甲氧基羰基乙基、2-甲基-1-甲氧基羰基丙基、2-甲基-3-第三丁氧基羰基丙基、3-甲基-1-甲氧基羰基丁基、二乙氧基羰基甲基、1,2-二乙氧基羰基乙基、2-正-戊氧基羰基乙基、正-己氧基羰基甲基等等。
在上述通式(1)中所表示的嘧啶衍生物可由許多方式製備。例如該等衍生物可根據下述方法1至方法4製備。
其中Ra為羥(低級烷基)、鹵代(低級烷基)或(低級烷氧基)羰(低級烷基),X為鹵素原子或是能完成如同鹵素原子取代反應的基團。
在式(2)的化合物中X表示之鹵素原子,包括氟、氯、溴、碘原子。
以X表示之能完成如同鹵素原子之取代反應的基團,例如包括脫離基(leaving group),諸如(低級烷)磺醯氧基以及芳基磺醯氧基。
此處所使用的(低級烷)磺醯氧基,包括具有1至6個碳的直鏈或分支狀的烷磺醯氧基。具體而言,例如包括甲烷磺醯氧基、乙烷磺醯氧基、異丙烷磺醯氧基、正-丙烷磺醯氧基、正-丁烷磺醯氧基、第三丁烷磺醯氧基、正-戊烷磺醯氧基、正-已烷磺醯氧基等等。
此處所使用的芳基磺醯氧基,例如包括苯基磺醯氧基、萘基磺醯氧基等等。芳基可具有1至3個選自下列組群之取代基,例如:含有1至6個碳的直鏈或分支狀的烷基、含有1至6個碳的直鏈或分支狀的烷氧基、硝基以及鹵素原子。芳基磺醯氧基的具體例子如下,包括例如苯基磺醯氧基、4-甲基苯基磺醯氧基、2-甲基苯基磺醯氧基、4-硝基苯基磺醯氧基、4-甲氧基苯基磺醯氧基、2-硝基苯基磺醯氧基、3-氯苯基磺醯氧基等等。萘基磺醯氧基的具體例子如下,包括例如α-萘基磺醯氧基、β-萘基磺醯氧基等等。
式(1b)的化合物可藉由將化合物(1a)以及化合物(2)反應而製得。
上述反應係在不會對反應有不良影響的常見溶劑中進行,例如水;醇類溶劑諸如甲醇、乙醇、異丙醇、正-丁醇、三氟乙醇以及乙二醇;酮類溶劑諸如丙酮、丁酮;醚類溶劑諸如四氫呋喃、二氧陸圜(dioxane)、二乙醚以及二甘醇二甲醚(diglyme);酯類溶劑諸如乙酸甲酯、乙酸乙酯;非質子極性溶劑(aprotic polar solvent)諸如乙腈、N,N-二甲基甲醯胺以及二甲亞碸;鹵化烴溶劑諸如二氯甲烷以及二氯乙烷;或其他有機溶劑。另外,反應可以在上述常見溶劑的混合物中進行。
上述的反應通常在鹼性化合物的存在下進行。鹼性化合物包含常見的無機鹼和有機鹼。
此處所使用的無機鹼包含例如鹼金屬諸如鈉或鉀;鹼金屬碳酸氫鹽諸如碳酸氫鋰、碳酸氫鈉以及碳酸氫鉀;鹼金屬氫氧化物諸如氫氧化鋰、氫氧化鈉、氫氧化鉀以及氫氧化銫;鹼金屬碳酸鹽諸如碳酸鋰、碳酸鈉、碳酸鉀以及碳酸銫;鹼金屬(低級烷醇鹽)諸如甲醇鈉以及乙醇鈉;鹼金屬氫化物化合物諸如氫化鈉以及氫化鉀等等。
此處所使用的有機鹼例如包括三烷基胺諸如三甲基胺、三乙基胺以及N-乙基二異丙基胺;吡啶;喹啉;哌啶;咪唑;甲吡啶(picoline);二甲胺基吡啶(dimethylaminopyridine);二甲基苯胺;N-甲基嗎啉;1,5-二氮雜二環[4.3.0]壬-5-烯(DBN);1,4-二氮雜雙環[2.2.2]辛烷(DABCO);1,8-二氮雜雙環[5.4.0]十一-7-烯(DBU)等等。
鹼化合物可以使用單一成分或任何兩種或更多種成分的組合。
此處使用的鹼化合物的量一般是化合物(1a)的0.5至10倍莫耳量,較佳為化合物(1a)的0.5至6倍莫耳量。當鹼化合物是液態時也可以做為溶劑。
上述反應的介質包括可作為反應促進劑的鹼金屬碘化物,適合者諸如碘化鉀以及碘化鈉。
上述方法1中使用之化合物(1a)和化合物(2)的比例至少為1莫耳,較佳為每1莫耳的化合物(1a)使用1至5莫耳的化合物(2)。
反應溫度並無任何限制,反應通常在冷卻狀態、室溫或是加熱狀態下進行。較佳為上述的反應約在室溫下進行1至30小時。
其中R的定義同上述。
化合物(1)可藉由將化合物(3)或其羧基經活化的反應性衍生物與化合物(4)或其亞胺基經活化的反應性衍生物反應而製得。
在化合物(3)中羧基較佳的反應性形式包含酸鹵化物(acid halide)、酸酐、活性醯胺(amide)、活性酯等等。較佳的羧基反應性形式包括酸氯化物(acid chloride);醯基疊氮(acid azide);經取代磷酸的混合酸酐(如二烷基磷酸(dialkyl phosphoric acid)、苯基磷酸(phenyl phosphoric acid)、聯苯基磷酸(diphenyl phosphoric acid)、聯苯甲基磷酸(dibenzyl phosphoric acid)以及鹵代磷酸(halogenated phosphoric acid))、二烷基亞磷酸(dialkyl phosphorous acid)、亞硫酸、硫代硫酸、硫酸、磺酸(如甲磺酸)、脂族酸(如乙酸、丙酸、丁酸、異丁酸、三甲基乙酸、戊酸、異戊酸、2-乙基丁酸、三氯乙酸)或芳香酸(如安息香酸);對稱酸酐;咪唑的活性醯胺、4-取代的咪唑、二甲基吡唑、三唑或是四唑;活性酯(如氰甲基酯、甲氧基甲基酯、二甲基亞胺基甲基酯、乙烯基酯、炔丙基酯、對-硝基苯基酯、2,4-二硝基苯基酯、三氯苯基酯、五氯苯基酯、甲磺醯基苯基酯(mesylphenyl ester)等等)或是與N-羥基化合物(如N,N-二甲基羥胺、1-羥基-2-(1H)-吡啶酮、N-羥基琥珀醯亞胺(N-hydroxysuccinimide)、N-羥基鄰苯二甲醯亞胺(N-hydroxyphthalimide)、1-羥基-1H-苯並三唑等等)所成的酯。可根據化合物(3)的種類從這些反應性衍生物中選擇適當的化合物。
在上述反應中若化合物(3)係使用游離酸或其鹽時,反應較佳係在縮合劑存在下進行。縮合劑包含常見且著名的,例如N,N-二氯己基碳二亞胺;N-環己基-N’-嗎啉基乙基碳二亞胺(N-cyclohexyl-N’-morpholinoethylcarbodiimide);N-環己基-N’-(4-二乙基胺基環己基)碳二亞胺;N,N’-二乙基碳二亞胺;N,N’-二異丙基碳二亞胺;N-乙基-N’-(3-二甲基胺基丙基)碳二亞胺或其鹽酸鹽;N,N’-羰基雙(2-甲基-咪唑);五亞甲基烯酮-N-環己基亞胺(pentamethyleneketene-N-cyclohexylimine);聯苯烯酮-N-環己基亞胺(diphenylketene-N-cyclohexylimine);乙氧基乙炔、1-烷氧基-1-氯乙烯;亞磷酸三烷酯(trialkyl phosphite);聚磷酸乙酯(ethyl polyphosphate);異丙基聚磷酸酯(isopropyl polyphosphate);磷醯氯(phosphorus oxychloride)(磺醯氯);三氯化磷(phosphorus trichloride);聯苯磺醯疊氮(diphenyl sulfonyl azide);亞硫醯氯(thionyl chloride);草醯氯(oxalyl chloride);(低級烷基)鹵代甲酸酯(如氯甲酸乙酯、氯甲酸異丙酯等等);三苯膦;2-乙基-7-羥基苯並異噁唑鎓鹽(2-ethyl-7-hydroxybenzisoxazolium salt);氫氧化2-乙基-5-(間-磺酸基苯基)異噁唑鎓內鹽(2-ethyl-5-(m-sulfophenyl)isoxazolium hydroxide inner salt);苯并三唑-1-基氧基-三-(二甲胺基)鏻六氟磷酸鹽;1-(對-氯苯磺醯基氧基)-6-氯-1H-苯並三唑;維爾斯邁爾試劑(Vilsmeier reagent)係可使N,N-二甲基甲醯胺與亞硫醯氯、二氯化羰(phosgene)、氯甲酸三氯甲酯、磷醯氯等反應而製得。反應更佳係在上述縮合劑存在下,且與活性酯化劑諸如N-羥基琥珀醯亞胺、N-羥基苯二甲醯亞胺、1-羥基-1H-苯並三唑接觸下進行。
化合物(4)中亞胺基的較佳反應性衍生物包括希夫鹼型(Schiff base-type)亞胺基或由化合物(4)和羰基化合物諸如醛類及酮類反應而得的烯胺型(enamine-type)互變異構物(tautomer);由化合物(4)和矽基化合物諸如雙(三甲基矽基)乙醯胺(bis(trimethylsilyl)acetamide)、單(三甲基矽基)乙醯胺以及雙(三甲基矽基)脲反應而得的矽基衍生物(silyl derivative);由化合物(4)和三氯化磷、二氯化羰反應而得的衍生物等等。
反應通常在不會對反應有不良影響的溶劑中進行,例如水;醇類溶劑諸如甲醇、乙醇、異丙醇、正-丁醇、三氟乙醇以及乙二醇;酮類溶劑諸如丙酮、丁酮;醚類溶劑諸如四氫呋喃、二氧陸圜、二乙醚、二異丙醚以及二甘醇二甲醚;酯類溶劑諸如乙酸甲酯和乙酸乙酯;非質子極性溶劑諸如乙腈、N,N-二甲基甲醯胺以及二甲亞碸;烴溶劑諸如正戊烷、正己烷、正庚烷以及環己烷;鹵化烴溶劑諸如二氯甲烷以及二氯乙烷;或其他有機溶劑。另外,反應可以在上述常見溶劑的混合物中進行。
上述的反應可在鹼存在下進行。鹼包括各式各樣已知的無機鹼和有機鹼。此處所使用的無機鹼包括,例如鹼金屬諸如鈉及鉀;鹼金屬碳酸氫鹽諸如碳酸氫鋰、碳酸氫鈉以及碳酸氫鉀;鹼金屬氫氧化物諸如氫氧化鋰、氫氧化鈉、氫氧化鉀以及氫氧化銫;鹼金屬碳酸鹽諸如碳酸鋰、碳酸鈉、碳酸鉀以及碳酸銫;鹼金屬低級烷醇鹽諸如甲醇鈉以及乙醇鈉;鹼金屬氫化物化合物諸如氫化鈉以及氫化鉀等等。此處所使用的有機鹼例如包括為三烷基胺諸如三甲基胺、三乙基胺以及N-乙基二異丙基胺;吡啶;喹啉;哌啶;咪唑;甲吡啶;二甲胺基吡啶;二甲基苯胺;N-甲基嗎啉;1,5-二氮雜二環[4.3.0]壬-5-烯(DBN);1,4-二氮雜雙環[2.2.2]辛烷(DABCO);1,8-二氮雜雙環[5.4.0]十一-7-烯(DBU)等等。並且,當鹼化合物是液態時也可以做為溶劑。鹼化合物可以使用單一成分或是任何兩種或更多種成分的組合。此處使用的鹼化合物的量一般約為每1莫耳化合物(3)使用0.1至10莫耳,較佳為每1莫耳化合物(3)使用0.1至3莫耳。
上述方法2中所用化合物(3)和化合物(4)的比例至少為1莫耳,較佳為每1莫耳的化合物(4)使用1至5莫耳的化合物(3)。
反應溫度並無任何限制,反應通常在冷卻狀態、室溫或是加熱狀態下進行。上述反應較佳為在室溫至100℃下反應30分鐘至30小時,較佳為30分鐘至5小時。
上述反應中作為反應起始材料的化合物(3)是已知的化合物,且化合物的製作流程如下所述(方法4)。
其中W為N-保護基。
化合物(6)可由化合物(3)和化合物(5)經類似方法2的方式反應而製得。再者,化合物(1a)可藉由移除N-保護基而製得。
此處所使用的N-保護基以W表示,包括例如(低級烷氧基)羰基、低級烷醯基、芳基取代的(低級烷基)基團等等。
在此所使用的(低級烷氧基)羰基包括具有1至6個碳的直鏈或分支狀的烷氧羰基。舉例而言,諸如甲氧羰基、乙氧羰基、丙氧羰基、丁氧羰基、第三丁氧基羰基、戊氧羰基、己氧羰基等等。
此處所使用的低級烷醯基包括具有1至6個碳的直鏈或分支狀的烷醯基,例如甲醯基、乙醯基、丙醯基、丁醯基、異丁醯基、戊醯基、第三戊醯基、己醯基等等。
此處所使用的芳基取代的(低級烷基),例如包括苄基、2-苯乙基、1-苯乙基、3-苯丙基、4-苯丁基、5-苯戊基、6-苯己基、二苯甲基、三苯甲基(trityl)等等,以及含有1至6個碳的直鏈或分支狀的烷基,其經1至3個苯基取代。苯基的取代基包括,例如具有1至6個碳的直鏈或分支狀的烷基,其可選擇性的以1至3個選自鹵素原子以及羥基所成組群之基取代者(諸如甲基、乙基、丙基、正-丁基、第二丁基、第三丁基、正-戊基、正-己基、羥甲基、2-羥乙基、1-羥乙基、3-羥丙基、2,3-二羥丙基、4-羥丁基、1,1-二甲基-2-羥乙基、5,3,4-三羥戊基、5-羥戊基(5-hydroxypentyl)、6-羥己基、1-羥異丙基、2-甲基-3-羥丙基、三氟甲基、三氯甲基、氯甲基、溴甲基、氟甲基、碘甲基、二氟甲基、二溴甲基、2-氯乙基、2,2,2-三氟乙基、2,2,2-三氯乙基、3-氯丙基、2,3二氯丙基、4,4,4-三氯丁基、4-氟丁基、5-氯戊基、3-氯-2-甲基丙基、5-溴己基、5,6-二氯己基、3-羥基-2-氯丙基等等);具有1至6個碳的直鏈或分支狀的烷氧基,其可選擇性的以1至3個選自鹵素原子以及羥基所成組群之基取代(如甲氧基、乙氧基、丙氧基、正-丁氧基、第二丁氧基、第三丁氧基、正-戊氧基、正-己氧基、羥甲氧基、2-羥乙氧基、1-羥乙氧基、3-羥丙氧基、2,3-二羥丙氧基、4-羥丁氧基、1,1-二甲基-2-羥乙氧基、5,5,4-三羥戊氧基、5-羥戊氧基、6-羥己氧基、1-羥異丙氧基、2-甲基-3-羥丙氧基、三氟甲氧基、三氯甲氧基、氯甲氧基、溴甲氧基、氟甲氧基、碘甲氧基、二氟甲氧基、二溴甲氧基、2-氯乙氧基、2,2,2-三氟乙氧基、2,2,2-三氯乙氧基、3-氯丙氧基、2,3-二氯丙氧基、4,4,4-三氯丁氧基、4-氟丁氧基、5-氯戊氧基、3-氯-2-甲基丙氧基、5-溴己氧基、5,6-二氯己氧基、3-羥基-2-氯丙氧基等等);以及鹵素原子(如氟、氯、溴、碘原子)。苯基若有兩個或以上的取代基時,取代基可以相同或是不同。
移除N-保護基:W可透過常用的方法,例如是水解反應或是氫化反應進行。反應一般在常見且不會對反應有不良影響的溶劑中進行,例如是水;醇類溶劑諸如甲醇、乙醇、異丙醇、正-丁醇、三氟乙醇以及乙二醇;酮類溶劑諸如丙酮及丁酮;醚類溶劑諸如四氫呋喃、二氧陸圜、二乙醚、二甲氧基乙烷、以及二甘醇二甲醚;酯類溶劑諸如乙酸甲酯及乙酸乙酯;非質子極性溶劑諸如乙腈、N,N-二甲基甲醯胺、二甲亞碸以及N-甲基吡咯烷酮;鹵化烴溶劑諸如二氯甲烷以及二氯乙烷;或其他有機溶劑。另外,反應可以在上述常見溶劑的混合物中進行。
水解反應較佳的是在鹼或是包括路易斯酸(Lewis acid)的酸存在下進行。
此處所使用的鹼包括常見的無機鹼和有機鹼。較佳的無機鹼例如包括鹼金屬諸如鈉及鉀;鹼土金屬諸如鎂及鈣;鹼金屬和鹼土金屬的氫氧化物、碳酸鹽或是碳酸氫鹽。較佳的有機鹼包括,例如三烷胺諸如三甲基胺以及三乙基胺;甲吡啶;1,5-二氮雜二環[4.3.0]壬-5-烯等等。
此處所使用的酸包括常見的有機酸和無機酸。較佳的有機酸包括例如脂族酸諸如甲酸、乙酸以及丙酸;以及三鹵乙酸諸如三氯乙酸以及三氟乙酸。較佳的無機酸包括,例如鹽酸、氫溴酸、硫酸、氯化氫、溴化氫等等。此處所使用的路易斯酸包括例如三氟化硼合乙醚(boron trifluoride etherate)、三溴化硼、氯化鋁、氯化鐵等等。
若以鹵乙酸或路易斯酸作為酸使用時,反應較佳是在陽離子清除劑(cation scavenger)諸如苯甲醚以及苯酚(phenol)存在下進行。
此處使用的鹼或酸的量並無限定,用量只要足以水解即可。
反應的溫度一般是在0至120℃,較佳為室溫至100℃,更佳為室溫至80℃。反應時間通常是30分鐘至24小時,較佳為30分鐘至12小時,更佳為1至8小時。
此處進行的氫化反應是使用常見的/已知的氫化反應。常見的氫化反應包括例如化學還原反應、催化還原反應等等。
化學還原反應使用的較佳還原劑包括氫化物諸如碘化氫、硫化氫、氫化鋰鋁、硼氫化鈉以及氰基硼氫化鈉;或是金屬諸如鈦、鋅以及鐵;或是金屬化合物的組合(如氯化鉻俥、乙酸鉻等等)以及有機或無機酸(如甲酸、乙酸、丙酸、三氟乙酸、對甲苯磺酸、鹽酸、氫溴酸等等)。
催化還原反應使用的較佳催化劑包括鉑催化劑諸如鉑板(platinum plate)、海綿狀鉑(spongiform platinum)、鉑黑、鉑膠體(colloidal platinum)、氧化鉑以及鉑絲;鈀催化劑諸如海綿狀鈀、鈀黑、氧化鈀、鈀碳、鈀/硫酸鋇以及鈀/碳酸鋇;鎳催化劑諸如還原鎳、氧化鎳以及雷氏鎳(Raney nickel);鈷催化劑諸如還原鈷以及雷氏鈷(Raney cobalt);鐵催化劑諸如還原鐵等等。
化學還原反應使用的酸為液態時,也可作為溶劑。
催化還原反應所使用之還原劑和催化劑的量可為但不限於一般使用的量。
反應溫度一般為0至120℃,較佳為室溫至100℃,更佳為室溫至80℃。反應時間一般為30分鐘至24小時,較佳為30分鐘至10小時,更佳為30分鐘至4小時。
化合物(3)可由化合物(5)和化合物(6)反應而製得。反應根據參考文獻(E1-sharabsy,S.A.;Abdel Gawad,S. M.;Hussain,S. M.;J.Prakt. Chem.,1989,331(2),207)或其相似的方法而進行。
反應在不會對反應有不良影響的常見溶劑中進行,例如水;醇類溶劑諸如甲醇、乙醇、異丙醇、正-丁醇、三氟乙醇以及乙二醇;酮類溶劑諸如丙酮及丁酮;醚類溶劑諸如四氫呋喃、二氧陸圜、二乙醚以及二甘醇二甲醚;酯類溶劑諸如乙酸甲酯及乙酸乙酯;非質子極性溶劑諸如乙腈、N,N-二甲基甲醯胺以及二甲亞碸;鹵化烴溶劑諸如二氯甲烷以及二氯乙烷;或其他有機溶劑。另外,反應可以在上述常見溶劑的混合物中進行。
上述反應可在催化性化合物不存在或是酸性催化劑的存在下進行。一般而言,較佳的是反應在鹼性化化物的存在下進行。鹼性化合物包括一般的無機鹼和有機鹼。
此處使用的無機鹼包含例如鹼金屬諸如鈉及鉀;鹼金屬碳酸氫鹽諸如碳酸氫鋰、碳酸氫鈉以及碳酸氫鉀;鹼金屬氫氧化物諸如氫氧化鋰、氫氧化鈉、氫氧化鉀以及氫氧化銫;鹼金屬碳酸鹽諸如碳酸鋰、碳酸鈉、碳酸鉀以及碳酸銫;鹼金屬(低烷氧化物)諸如甲醇鈉以及乙醇鈉;鹼金屬氫化物化合物諸如氫化鈉以及氫化鉀等等。
此處所使用的有機鹼例如包括為三烷胺諸如三甲基胺、三乙基胺以及N-乙基二異丙基胺;吡啶;喹啉;哌啶;咪唑;甲吡啶;二甲胺基吡啶;二甲基苯胺;N-甲基嗎啉;DBN;DABCO;DBU等等。
鹼化合物可以使用單一成分或是任何兩種或更多成分的組合。
此處使用的鹼化合物的量一般係催化量至化合物(5)的10倍莫耳量,較佳為等莫耳至化合物(5)的3.5倍莫耳量。當鹼化合物是液態時也可以做為溶劑。
化合物(6)和化合物(5)的比例為對每1莫耳的化合物(6)至少為1莫耳,較佳為每1莫耳的化合物(6)使用1至5莫耳的化合物(5)。
反應溫度並無任何限制,但反應通常在冷卻狀態、室溫或是加熱狀態下進行。較佳為上述的反應可在回流溫度進行1至30小時。
當二氫型態(dihydro-form)的化合物(7)作為中間產物在反應中形成時,化合物(7)可進一步氧化而得到化合物(8)。
化合物(7)的氧化反應可透過在此技術領域經常使用的方法進行。較佳的氧化劑包括例如2,3-二氯-5,6-二氰對苯醌(DDQ)、N-溴琥珀醯亞胺(NBS)等等。
氧化反應通常在不含水或是在不會對反應有不良影響的常見溶劑中進行,例如醇類溶劑諸如甲醇、乙醇、異丙醇、正-丁醇、三氟乙醇以及乙二醇;酮類溶劑諸如丙酮及丁酮;醚類溶劑諸如四氫呋喃、二氧陸圜、二乙醚以及二甘醇二甲醚;酯類溶劑諸如乙酸甲酯以及乙酸乙酯;非質子極性溶劑諸如乙腈、N,N-二甲基甲醯胺以及二甲亞碸;鹵化烴溶劑諸如二氯甲烷以及二氯乙烷;或其他有機溶劑。另外,反應可以在上述常見溶劑的混合物中進行。
此處使用的氧化劑量一般是催化量至超過化合物(7)的莫耳量。
反應溫度並無任何限制,反應通常在冷卻狀態、室溫或是加熱狀態下進行。上述反應較佳可在回流溫度進行0.5至75小時。
上述方法4中的化合物(7)包括在環上有雙鍵位置的異構物。
作為起始材料的化合物(4)是可獲得的已知化合物。
上述方法使用的起始材料可以是其適當的鹽類,以及在每一反應中的期望化合物也可以是適當的鹽類。
上述方法所表示的每一步驟中的期望化合物以及本發明的化合物可根據常見的方法分離或純化,例如以冷卻、過濾、濃縮、萃取等等的方式分離粗製的反應產物,接著以層析法、再結晶等等的方式純化粗製產物。
化合物(1)較佳的鹽類為製藥可接受的鹽類,包括例如與無機鹼所成的鹽類(如鹼金屬鹽諸如鈉鹽以及鉀鹽、鹼土金屬鹽諸如鈣鹽以及鎂鹽)、銨鹽、鹼金屬碳酸鹽(如碳酸鋰、碳酸鉀、碳酸鈉、碳酸銫等等)、鹼金屬碳酸氫鹽(如碳酸氫鋰、碳酸氫鈉、碳酸氫鉀等等),以及鹼金屬氫氧化物(如氫氧化鋰、氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫氧化銫等等);與有機鹼諸如三(低級)烷胺(三甲基胺、三乙基胺、N-乙基二異丙基胺等等)、吡啶、喹啉、哌啶、咪唑、甲吡啶、二甲胺基吡啶、二甲基苯胺、N-(低級)烷基嗎啉(如N-甲基嗎啉等等)、DBN、DBU以及DABCO所成的鹽;與無機酸所成鹽類諸如鹽酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、硫酸鹽、硝酸鹽、磷酸鹽;以及與有機酸所成的鹽類諸如甲酸鹽、乙酸鹽、丙酸鹽、草酸鹽、丙二酸鹽、琥珀酸鹽、反丁烯二酸鹽、順丁烯二酸鹽、乳酸鹽、蘋果酸鹽、檸檬酸鹽、酒石酸鹽、碳酸鹽、苦味酸鹽、甲磺酸鹽、乙磺酸鹽以及對甲苯磺酸鹽、麩胺酸鹽。
上述方法使用的起始材料類似上述化合物(1),可為其鹽類,以及每一反應的期望化合物也可以是其適當的鹽類。
另外,在每個通式中包括起始材料以及期望化合物的溶劑化物(solvate)(如水合物、乙醇合物(ethanolate)以及類似物)。較佳的溶劑化物為水合物。
本發明之式(1)化合物,包括異構物諸如幾何異構物、立體異構體以及光學異構物。
本發明亦包括式(1)化合物中,該化合物之一或更多個原子被一或更多個其同位素取代。可併入本發明化合物的同位素的例子包括,例如氫、碳、氮、氧、硫、氟以及氯的同位素,具體而言,諸如2H、3H、13C、14C、15N、17O、18O、18F、36Cl等等。特定的同位素標記化合物包含上述的同位素以及/或其他原子的同位素,舉例而言,包含放射性同位素諸如3H以及14C的化合物,在化合物以及/或是物質的型態分析(topographical assay)上很有幫助。超重氫標記(即3H)或是C-14標記(即14C)同位素化合物特別受到偏好是由於其容易製備和偵測的緣故。更進一步,具有像重氫(deuterium)(即2H)較重同位素之化合物也被預期具有治療的優點,諸如促進代謝穩定度(如增加在生物體內的半生期)以及減少劑量。具有同位素原子的化合物通常可使用任何可獲得的同位素標定製劑,以上述的方法以及/或是以下的實例而製得。
本發明的化合物及其鹽類具有腺核苷A2a受體促效活性,如此可有效作為哺乳類包括人類的腺核苷A2a受體促效劑。因此,本發明亦提供作為如腺核苷A2a受體促效劑的藥劑之醫藥組成物。
以下,醫藥組成物暫且稱為“本醫藥組成物”。
本發明之醫藥組成物可由一般的製藥配方製備,該配方包含有效量的至少一種選自本發明化合物及其鹽所成組群的化合物,以及一些製藥可接受的載體而製得。本發明醫藥組成物使用之製藥可接受的載體可為固體諸如賦形劑,或是液體例如稀釋劑。載體的舉例包括乳糖、硬脂酸鎂、澱粉、滑石粉、明膠、洋菜、果膠、阿拉伯膠、橄欖油、芝麻油、可可脂、乙二醇、純水等等。
另外,本醫藥組成物可由適合服藥的劑量單位的配方而製得。包括適合口服的固體以及液體配方諸如藥片、藥丸、膠囊、顆粒、粉末,以及液體,也可為非經口服投藥的配方,諸如注射(靜脈注射、肌肉注射等等)、滴眼劑(eye drops)、眼用軟膏(ophthalmic ointment)、栓劑(suppository)、經皮膚的吸收劑(percutaneous absorption agent)以及類似物。特別的是,由於本發明的腺核苷A2a受體促效活性,咸認本發明的醫藥組成物可作為降眼壓劑(intraocular pressure reducing agent),一種治療青光眼或是類似疾病的藥物使用,因此較佳的製藥配方為滴眼劑。
本醫藥組成物可製成水性液,以及更進一步作為眼用醫藥組成物。舉例而言,諸如如下述所製備的水性液配方。
必要的話,可在本發明化合物(包括其鹽類,以下皆同)中選擇性的加入一種或是更多種添加劑,該添加劑係選自製藥可接受的緩衝液、等張劑、防腐劑、助溶劑以及pH調節劑,而期望的水性配方可透過常見的方法製備。
水性液配方所使用的緩衝液例如包括無機酸諸如硼酸以及磷酸;有機酸諸如胺基酸以及琥珀酸;以及其製藥可接受的鹽類。較佳的緩衝液為琥珀酸、磷酸以及磷酸二氫鈉。緩衝液可以是單一成分或是兩種或更多成分的任意組合。
在製程中以琥珀酸或其製藥可接受的鹽類當作緩衝液時,由於活性成分與琥珀酸的鹽有很高的溶解度,因此在長時間的保存下,能夠避免發生活性成分的沈澱。
水性液製備時使用的緩衝液濃度較佳為能防止pH變動的最低濃度。舉例而言,不超過2%(w/v),較佳為不超過0.6%(w/v),更佳為不超過0.2%(w/v)。
水性液製備時使用的pH調節劑包括例如鹽酸、硫酸、乳酸、乙酸、氫氧化鉀、氫氧化鈉、氫氧化鈣、氫氧化鎂、單乙醇胺、三乙醇胺、二異丙醇胺、三異丙醇胺,以及其製藥可接受的鹽類。較佳的pH調節劑包括鹽酸以及氫氧化鈉。pH調節劑可以使用單一成分或是兩種或更多種成分的任意組合。
製備水性液所使用的等張劑是為了製備水樣液(aqueous tear)的等張液。此處所使用的等張劑為滴眼劑的常用劑型,包括氯化鈉、氯化鉀、硼酸、硼酸鈉(sodium borate)、甘露醇、甘油、丙二醇、聚乙二醇、麥芽糖、蔗糖、山梨醇、葡萄糖等等。較佳的為甘油、葡萄醣、甘露醇、丙二醇以及山梨醇。更佳的為甘油。等張劑可以使用單一成分或是兩種或更多成分的任意組合。
製備時使用甘油作為等張劑,由於甘油不會對活性成分的溶解度有不良影響,因此在長時間保存下,可防止活性成分或其相關物質的沈積。含有等張劑的水性製備液的滲透壓(osmotic pressure)為例如170至460mOsm/kg,較佳為229至372mOsm/kg,更佳為256至316mOsm/kg。
此處所使用的防腐劑例如包括四級銨鹽諸如苯二甲烴銨、苯銨松寧(benzethonium)、苯度銨(benzododecinium);陽離子化合物諸如氯己定(chlorhexidine);對羥基苯甲酸鹽諸如對位羥基苯甲酸甲酯以及對位羥基苯甲酸丙酯(Propyl para-oxybenzoate);以及醇類化合物諸如氯丁醇以及苯甲醇。較佳的防腐劑包括氯化苯二甲烴銨以及苯度溴銨,更佳的為鹽酸苯二甲烴銨以及溴化苯度銨,其中烷鏈僅由12個碳組成者。
必要時,本醫藥組成物可包含助溶劑。此處所使用的助溶劑例如包括聚合物諸如聚乙烯-吡咯啶酮、聚乙二醇(macrogol,polyethylene glycol)、聚乙烯醇以及羥丙基甲基纖維素;界面活性劑諸如聚山梨醇酯、聚氧乙烯氫化蓖麻油(polyoxyethylene hydrogenated castor oil)以及聚氧乙烯聚氧丙烯;多元醇諸如丙二醇;有機酸諸如苯甲酸以及山梨酸;胺基酸諸如天門冬胺酸、組胺酸、甘胺酸以及離胺酸;以及黃嘌呤藥物諸如咖啡鹼。較佳的助溶劑包括聚乙烯吡咯啶酮、聚乙二醇、聚乙烯醇、苯甲酸、山梨酸以及藻酸(alginic acid);特別是聚乙烯吡咯啶酮以及聚乙二醇。助溶劑可以使用單一成分或是兩種或更多成分的任意組合。
含有本發明醫藥組成物的水溶性製備液的pH值約為4至9,較佳的約為5至8,更佳的為6至7,特別佳的為6.3至6.9。
本發明的固體配方適用於口服投藥的諸如藥片、粉末以及顆粒,可透過將本發明的化合物和至少一種的惰性載體(inert carrier)諸如乳糖、甘露醇、蔗糖、羥丙基纖維素、微晶纖維素、澱粉、聚乙烯吡咯啶酮、偏矽酸(meta-silicic)以及鎂鋁酸鹽混合而製得,並且按照常見的方法配藥。製備方法可更進一步配製包含額外的適當添加劑,舉例而言,潤滑劑(lubricant)諸如硬脂酸鎂;分解劑(disintegrator)諸如纖維素羥乙酸鈣(calcium cellulose glycolate);穩定劑諸如乳糖;溶解劑諸如麩胺酸以及天門冬胺酸;以及類似物。可更進一步配藥包含甜味劑、風味劑、香料、保藏劑(preservative agent)以及類似物。必要時,藥片和藥丸可用蔗糖、明膠、羥丙基纖維素以及羥丙基甲基纖維素苯二甲酸酯(hydroxypropylmethyl cellulose phthalate)包裹成糖衣膜或是胃內(intragastric)或腸內(enteric)包覆膜。
適合口服投藥的液態藥劑諸如乳劑、溶液、懸浮液、糖漿以及酏劑(elixir)可透過將本發明的化合物溶解或是分散於一般使用的惰性稀釋劑,諸如純水或是乙醇中。液態藥劑亦可包括助劑(auxiliary agent)諸如潤濕劑(wetting agent)或是懸浮劑(suspending agent)、甜味劑、風味劑、香料、保藏劑以及類似物。
非口服投藥用的注射液包括無菌液(aseptic aqueous)或非水性溶液、懸浮液、乳劑以及類似物。水性注射液可按照一般的方法製備,舉例而言,以注射用蒸餾水及鹽水作為稀釋劑。非水性注射液可按照一般的方法製備,舉例而言,使用稀釋劑或是載體諸如丙二醇、聚乙二醇或是植物油諸如橄欖油;醇類諸如乙醇;聚山梨醇酯80。注射液可進一步包括助劑諸如保藏劑、潤濕劑、乳化劑、分散劑、穩定劑(如乳糖)以及溶解劑(如麩胺酸和天門冬胺酸)。注射液係按照一般方法消毒,舉例而言,以濾菌用濾紙濾除細菌,添加抗微生物劑或是放射線照射諸如伽瑪射線(gamma-ray)。另外,注射液可製備為權宜製備配方,而在使用前將所製備的無菌固體藥劑溶解在無菌水或無菌溶劑中供注射用。
本發明醫藥組成物在不同配方的劑量型,會按照每一案例的情形來決定,根據患者(用藥的對象)的情況判斷該給予何種醫藥組成物、年齡、性別等因素來考量。一般而言,含有本發明醫藥組成物的滴眼劑的劑量可定為,在滴眼劑中所含活性化合物的濃度為0.0001至10%(w/v),較佳為0.001至1.0%(w/v),更佳為0.01至0.3%(w/v),一天中可滴入或是塗抹數次。對於使用者而言,滴眼劑的用量一般為一個成人0.001至1ml。
至於本發明醫藥組成物的口服製劑或是注射液,劑量的用法可訂為給予一個成人每天0.001至1000mg的本發明化合物。每日劑量可以是一天一次投予,但較佳的是一天分成數次。上述的劑量僅是建議量,因此可以增量或是減量。如同上述,劑量的決定最好是每一次根據不同的情況來判定。相對應地,根據情況減少劑量也可以顯示出充分的效果。
本醫藥組成物和化合物具有腺核苷A2a受體促效的多種活性,諸如降眼壓、增加視神經頭(optical nerve head)的血流、保護視神經、血管舒緩作用(vasodilation)、冠狀動脈擴張(coronary dilatation)、降血壓、抑制血小板凝集作用、抗血栓作用(antithrombotic effect)、抗發炎(antiinflammation)、支氣管擴張(bronchiectasis)以及免疫抑制作用(immunosuppression)。
因此本醫藥組成物以及化合物適於作為治療眼睛疾病諸如青光眼(如正常眼壓性青光眼(normal tension glaucoma)、高眼壓性青光眼(ocular hypertension glaucoma)、術後繼發性青光眼(post-surgical secondary glaucoma)等等)、降眼壓、糖尿病性視網膜病變(diabetic retinopathy)、老年性黃斑部病變(age-related macular degeneration,ARDM)、色素性視網膜炎(retinitis pigmentosa,RP)以及由青光眼所引起視網膜的疾病;高血壓;鬱血性心衰竭(congestive heart failure);冠狀動脈疾病(coronary ailment);心絞痛(angina);動脈粥狀硬化症;缺血性心臟病(ischemic heart disease);缺血性腦血管疾病(cerebrovascular ischemia);再灌注性傷害(reperfusion injury);血栓症(thrombosis);癲癇(epilepsy);鼻炎(rhinitis);鼻竇炎(sinusitis);肺氣腫(emphysema);慢性阻塞性肺臟疾病(COPD);氣喘病(asthma);支氣管炎;呼吸道疾病;呼吸道機能不全症候群(respiratory insufficiency syndrome);敗血性休克(septic shock);肺纖維化(pulmonary fibrosis);胃炎(gastritis);轉移性胃炎(metastasis gastritis);潰瘍性結腸炎(ulcerative colitis);克羅恩氏病(Crohn’s disease);發炎性結腸疾病(inflammatory colonic disease);創傷癒合(wound healing);濕疹(eczema);皮膚過敏(cutaneous hypersensitivity);皮膚炎(dermatitis);牛皮癬(psoriasis);慢性類風濕性關節炎(chronic rheumatoid arthritis);糖尿病;多發性硬化症(multiple sclerosis);自體免疫疾病等等。
另外,本醫藥組成物以及化合物能夠作為心肌梗塞的診斷劑。
以下,藉由本發明製備起始化合物的參考例以及製備化合物及配方的實施例以及藥理學的試驗詳細說明本發明,但不以此為限。
以下舉例中所提到的核磁共振儀(NMR)頻譜是在下述的情況下測得。各縮寫符號的定義如下。
裝置:JNM-AL300(JEOL)
內部標準物質:TMS
s:單峰
d:二重峰
t:三重峰
q:四重峰
quint:五重峰
sext:六重峰
將50.0g的2-溴吡啶-6-甲醇溶於250ml的無水N,N-二甲基甲醯胺中。在溶液中加入47.9ml的丙烯酸甲酯、73.9g的四(正-丁基)氯化銨、47.7g的碳酸氫鈉以及50.0g的分子篩3A(1/16),接著在氬氣的環境下於上述溶液中加入2.98g的乙酸鈀(II)。混合物在80℃攪拌5小時。在反應混合物冷卻後,濾除產生的沈澱,將水加入濾液中,以乙酸乙酯萃取。有機層以鹽水清洗,經無水硫酸鎂乾燥以及在真空濃縮,得到50.2g的(E)-3-(6-羥基甲基吡啶-2-基)丙烯酸甲酯。
1H-NMR(CDCl3) 7.72(1H,t,J=7.5Hz),7.68(1H,d,J=15.6Hz),7.32(1H,d,J=7.5Hz),7.21(1H,d,J=7.5Hz),6.97(1H,d,J=15.6Hz),4.78(2H,d,J=4.2Hz),3.85(1H,t,J=4.2Hz),3.83(3H,s).
將50.2g的(E)-3-(6-羥基甲基吡啶-2-基)丙烯酸甲酯溶於502ml的異丙醇中。在溶液中加入2.51g的5%鈀-(活性碳),並且混合物在50℃正常壓力氫氣下攪拌2.5小時。將反應混合物冷卻後濾除催化劑,並且濾液在真空中濃縮得到50.0g的甲基3-(6-羥基甲基吡啶-2-基)丙酸甲酯。
1H-NMR(CDCl3) 7.58(1H,t,J=7.5Hz),7.09(1H,d,J=7.5Hz),7.03(1H,d,J=7.5Hz),4.71(2H,s),4.01(1H,br s),3.69(3H,s),3.15(2H,t,J=7.2Hz),2.81(2H,t,J=7.2Hz).
將50.0g的3-(6-羥基甲基吡啶-2-基)丙酸甲酯溶於1000ml的乙酸乙酯中。在溶液中加入53.5ml的三乙基胺,並且混合物在冰溫下攪拌10分鐘。在混合物中以10分鐘逐滴加入23.8ml的甲磺醯氯,所得混合物在冰溫下攪拌30分鐘。在反應混合物中加入水,將混合物移至分液漏斗,並以飽和碳酸氫鈉水溶液和鹽水清洗,經無水硫酸鎂乾燥,在真空下濃縮得到63.0g的3-(6-甲磺醯基氧基甲基吡啶-2-基)丙酸甲酯。
1H-NMR(CDCl3) 7.63(1H,t,J=7.5Hz),7.26(1H,d,J=7.5Hz),7.19(1H,d,J=7.5Hz),5.28(2H,s),3.67(3H,s),3.12(2H,t,J=7.2Hz),3.07(3H,s),2.79(2H,t,J=7.2Hz).
將1000g的4-乙醯胺-苯甲醛溶於16000ml的乙醇中。在混合物中加入607g的丙二腈(malononitrile)以及40g的哌啶,所得混合物在回流下攪拌2小時。將反應混合物冷卻至室溫,然後攪拌30分鐘。沈澱的結晶收集於濾紙上,以2000ml的乙醇清洗,並乾燥得到1049g N-[4-(2,2-二氰乙烯基)苯基]乙醯胺的黃色粉末。
將7.0g的3-(6-甲磺醯基氧基甲基吡啶-2-基)丙酸甲酯溶於75ml的甲醇中,並隨後加入1.85g的硫脲(thiourea)。混合物回流1.5小時。將反應混合物冷卻後,加入10.7ml的三乙基胺,並且攪拌混合物一陣子。隨後,加入75ml的甲醇、4.33g上述的N-[4-(2,2-二氰乙烯基)苯基]乙醯胺以及3.67g的N-溴琥珀醯亞胺,並且攪拌混合物1小時。將沈澱的結晶物收集於濾紙上,以40ml的甲醇清洗,並乾燥得到5.5g的3-{6-[4-(4-乙醯胺基苯基)-6-胺基-5-氰基嘧啶-2-基硫甲基]吡啶-2-基}丙酸甲酯。
1H-NMR(DMSO-d6) 10.23(1H,s),8.20-7.60(2H,br s),7.83(2H,d,J=8.7Hz),7.72(2H,d,J=8.7Hz),7.63(1H,t,J=7.8Hz),7.35(1H,d,J=7.8Hz),7.15(1H,d,J=7.8Hz),4.45(2H,s),3.57(3H,s),2.96(2H,t,J=7.2Hz),2.74(2H,t,J=7.2Hz),2.09(3H,s).
將5g的3-{6-[4-(4-乙醯胺基苯基)-6-胺基-5-氰基嘧啶-2-基硫甲基]吡啶-2-基}丙酸甲酯懸浮於150ml的50%含水乙腈中。在懸浮液中加入1.35g的氫氧化鋰單水合物,並且混合物在室溫下攪拌1小時。接著,將4.11g的檸檬酸溶於20ml水的水溶液緩緩加入反應混合物中,反應混合物在室溫下另攪拌2小時。將沈澱的結晶物收集於濾紙上,以75ml的水清洗,並乾燥得到5g的3-{6-[4-(4-乙醯胺基苯基)-6-胺基-5-氰基嘧啶-2-基硫甲基]吡啶-2-基}丙酸。
1H-NMR(DMSO-d6) 10.25(1H,s),7.84(2H,d,J=8.7Hz),7.72(2H,d,J=8.7Hz),7.64(1H,t,J=7.8Hz),7.36(1H,d,J=7.8Hz),7.16(1H,d,J=7.8Hz),4.47(2H,s),2.95(2H,t,J=7.2Hz),2.65(2H,t,J=7.2Hz),2.09(3H,s).
將10g的1-第三丁氧基羰基-4-哌啶基甲醇溶於150ml的乙酸乙酯中。在溶液中加入12.8ml的三乙基胺,混合物在冰溫下攪拌一陣子。在混合物中緩緩滴入5.4ml的甲磺醯氯,且反應混合物在冰溫下攪拌30分鐘。在反應混合物中加入水,將反應混合物移至分液漏斗,以50ml的水清洗,並以50ml的乙酸乙酯萃取,共2次。合併的有機層經無水硫酸鎂乾燥並在真空中濃縮。殘留物溶於200ml的乙腈中,並在溶液中加入18g的哌。混合物在回流下攪拌3小時,反應混合物在真空中濃縮,接著濾除沈澱的哌。在濾液中加入50ml的鹽水和50ml的乙酸乙酯,混合物攪拌整夜。將混合物移至分液漏斗中並分離有機層,以50ml的鹽水清洗(兩次),並在真空中濃縮。將殘留物加至50ml的水中,並以1N的鹽酸在冰溫下中和。加入100ml的乙酸乙酯,且攪拌混合物一陣子。將混合物移至分液漏斗並分離水層。水層在冰溫下以5N的氫氧化鈉強力鹼化。混合物以乙酸乙酯萃取,以無水硫酸鎂乾燥並在真空中濃縮,得到9.96g的1-第三丁氧基羰基-4-(哌-1-基)甲基哌啶。
1H-NMR(CDCl3) 4.11-4.05(2H,m),2.87(4H,t,J=4.8Hz),2.72-2.64(2H,m),2.36(4H,br s),2.14(2H,d,J=6.9Hz),1.74-1.65(3H,m),1.45(9H,m),1.13-0.99(2H,m).
將2.16g的3-{6-[4-(4-乙醯胺基苯基)-6-胺基-5-氰基嘧啶-2-基硫甲基]吡啶-2-基}丙酸懸浮於44ml的丙酮中。在懸浮液中依序加入781mg的1-羥基-1H-苯並三唑、1.1g的1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽以及1.5g的1-第三丁氧基羰基-4-(哌-1-基)甲基哌啶,且混合物回流1小時。在真空中移除丙酮,接著加入30ml的乙酸乙酯以及30ml的水,並攪拌混合物30分鐘。將混合物移至分液漏斗,依序以飽和的碳酸氫鈉水溶液和鹽水清洗,經無水硫酸鎂乾燥並在真空中濃縮。將殘留物完全溶解於25ml的甲醇中,接著在冰溫下將0.85ml的濃鹽酸緩緩地滴入,且混合物在室溫攪拌1小時。然後,再加入50ml的乙醇,混合物在50℃攪拌1小時。待反應混合物冷卻後,將沈澱的結晶收集於濾紙上,並乾燥得到2.95g的4-((4-(3-(6-((4-(4-乙醯胺基苯基)-6-胺基-5-氰基嘧啶-2-基硫基)甲基)吡啶-2-基)丙醯基)哌-1-基)甲基)-1-第三丁氧基羰基哌啶二鹽酸鹽。
1H-NMR(DMSO-d6) 10.30(1H,s) 10.15(1H,br-s) 8.00-7.81(4H,m) 7.72(2H,d,J=8.7Hz) 7.65(1H,br-s) 7.40(1H,br-s) 4.57(2H,s) 4.36-4.31(1H,m) 4.02-3.89(3H,m) 3.70-3.30(8H,m) 3.17-2.73(8H,m) 2.09(3H,s) 1.99(1H,m) 1.78-1.73(2H,m) 1.39(9H,s).
在40g的4-((4-(3-(6-((4-(4-乙醯胺基苯基)-6-胺基-5-氰基嘧啶-2-基硫基)甲基)吡啶-2-基)丙醯基)哌-1-基)甲基)-1-第三丁氧基羰基哌啶二鹽酸鹽中加入400ml的氯化氫[1mol/L於乙酸乙酯],且混合物在室溫中攪拌24小時。沈澱物收集於濾紙上,並以80ml的乙酸乙酯清洗。將沈澱物乾燥得到白色粗製的結晶。將粗製的結晶在室溫下溶於245ml的水中並過濾。在濾液中緩緩加入875ml的丙酮,將混合物和其晶種攪拌6小時。沈澱的結晶物收集於濾紙上,以140ml的丙酮清洗,接著乾燥得到29.8g的N-(4-(6-胺基-5-氰基-2-((6-(3-側氧基-3-(4-(哌啶-4-基甲基)哌-1-基)丙基)吡啶-2-基)甲硫基)-嘧啶-4-基)苯基)乙醯胺三鹽酸鹽。
1H-NMR(DMSO-d6) 11.23(1H,br-s) 10.43(1H,s) 9.05(1H,br-s) 8.93(1H,br-s) 8.30(1H,t,J=7.8Hz) 7.96(1H,d,J=7.8Hz) 7.81(2H,d,J=8.7Hz) 7.78-7.73(3H,m) 4.77(2H,s) 4.36-4.31(1H,m) 4.02-3.74(3H,m) 3.53-3.45(2H,m) 3.26-3.23(5H,m) 3.02-2.81(8H,m) 2.10-1.91(6H,m) 1.50-1.39(2H,m).
將1.01g的N-(4-(6-胺基-5-氰基-2-((6-(3-側氧基-3-(4-(哌啶-4-基甲基)哌-1-基)丙基)吡啶-2-基)甲硫基)-嘧啶-4-基)苯基)乙醯胺三鹽酸鹽溶於15ml無水的N,N-二甲基甲醯胺中。在溶液中加入186μl的2-氯乙醇、0.6ml的三乙基胺、386mg的碳酸鉀以及300mg的碘化鈉,並且混合物在50℃下攪拌3小時。反應混合物在減壓狀態下濃縮,且殘留物以矽膠管柱層析(二氯甲烷:甲醇:28%氨水=100:10:1)純化,得到220mg的N-(4-(6-胺基-5-氰基-2-((6-(3--(4-((1-(2-羥乙基)哌啶-4-基)甲基)哌-1-基)-3-側氧基丙基)吡啶-2-基)甲硫基)嘧啶-4-基)苯基)乙醯胺。將化合物溶於5ml的甲醇中,並加入38.8mg的順丁烯二酸。攪拌混合物一陣子。溶液在真空中濃縮得到250mg的N-(4-(6-胺基-5-氰基-2-((6-(3-(4-((1-(2-羥乙基)-哌啶-4-基)甲基)哌-1-基)-3-側氧基丙基)-吡啶-2-基)甲硫基)嘧啶-4-基)苯基)乙醯胺順丁烯二酸鹽。
1H-NMR(DMSO-d6) 10.25(1H,s) 7.83(2H,d,J=8.7Hz) 7.71(2H,d,J=8.7Hz) 7.63(1H,t,J=7.5Hz) 7.35(1H,d,J=7.5Hz) 7.15(1H,d,J=7.5Hz),6.04(2H,s) 5.76(1H,br-s) 4.47-4.35(4H,m) 3.71(2H,br-s) 3.45-3.32(9H,m) 3.11(2H,br-s) 2.97-2.87(4H,m) 2.73-2.69(2H,m) 2.36-2.19(3H,m) 2.09(3H,s) 1.88-1.83(3H,m) 1.35-1.31(2H,m).
下列實施例3至實施例5係按照實施例2的相似步驟製備。
將3.4g的4-(4-(3-(6-(4-胺基-6-(4-胺基苯基)-5-氰基嘧啶-2-基硫基)甲基)吡啶-2-基)丙醯基)哌-1-基)甲基)哌啶-1-羧酸第三丁酯(6-1)溶於68ml的二氯甲烷中。在冰溫下於溶液中加入1.4ml的三乙基胺,且攪拌混合物一陣子。將532μl乙醯基-D3氯緩緩滴入溶液中,且在室溫下攪拌溶液整夜。再加入水並將混合物移至分液漏斗。水層以二氯甲烷萃取(兩次),合併的有機層經無水硫酸鎂乾燥並在真空下濃縮。殘留物以矽膠管柱層析(二氯甲烷:甲醇=25:1)純化,得到3.1g的4-(4-(3-(6-(4-(4-乙醯-D3-胺基苯基)-6-胺基-5-氰基嘧啶-2-基硫基)甲基)吡啶-2-基)丙醯基)哌-1-基)甲基)哌啶-1-羧酸第三丁酯。將化合物完全溶解於20ml的甲醇中,在冰溫下緩緩滴入1.7ml的濃鹽酸,混合物在室溫下攪拌3小時。接著,加入40ml的乙醇並在50℃攪拌混合物1小時。待反應混合物冷卻後,以濾紙收集沈澱的結晶,並乾燥得到2.06g的4-(4-(3-(6-(4-(4-乙醯-D3-胺基苯基)-6-胺基-5-氰基嘧啶-2-基硫基)甲基)吡啶-2-基)-丙醯基)哌-1-基)甲基)哌啶-1-羧酸第三丁酯二鹽酸鹽(6-2)。
1H-NMR(DMSO-d6) 10.29(1H,s) 10.15(1H,br-s) 8.00-7.90(1H,m) 7.82(2H,d,J=8.7Hz) 7.73(2H,d,J=8.7Hz) 7.59(1H,m) 7.40(1H,m) 4.57(2H,s) 4.36-4.31(1H,m) 4.02-3.89(3H,m) 3.70-3.30(8H,m) 3.17-2.73(8H,m) 1.99(1H,m) 1.78-1.73(2H,m) 1.39(9H,s).
在2.0g的4-(4-(3-(6-(4-(4-乙醯-D3-胺基苯基)-6-胺基-5-氰基嘧啶-2-基硫基)甲基)吡啶-2-基)-丙醯基)哌-1-基)甲基)哌啶-1-羧酸第三丁酯二鹽酸鹽(6-2)中加入20ml的氯化氫[1mol/L於乙酸乙酯],混合物在室溫下攪拌41小時。以濾紙收集沈澱物並用4.0ml的乙酸乙酯清洗。將粗製的結晶在室溫下溶於10ml的水中並過濾。在濾液中緩緩加入40ml的丙酮,混合物和其晶種攪拌2小時。以濾紙收集沈澱的結晶,用4ml的丙酮清洗,接著乾燥得到1.75g的N-(4-(6-胺基-5-氰基-2-(6-(3-側氧基-3-(4-(哌啶-4-基甲基)哌-1-基)丙基)吡啶-2-基)甲硫基)嘧啶-4-基)苯基)乙醯-D3-胺三鹽酸鹽(6-3)。
1H-NMR(DMSO-d6) 11.06(1H,br-s) 10.38(1H,s) 8.94-8.81(2H,m) 8.16(1H,t,J=7.8Hz) 7.83-7.80(3H,m) 7.75(2H,d,J=8.7Hz) 7.64(1H,d,J=7.8Hz) 4.70(2H,s) 4.36-4.31(1H,m) 4.02-3.74(3H,m) 3.53-3.45(2H,m) 3.26-3.23(5H,m) 3.02-2.81(8H,m) 2.10-1.91(3H,m) 1.50-1.39(2H,m).
將5g的4-硝基苯甲-D4酸溶於100ml的甲醇中。在溶液中加入1.0ml的濃鹽酸,將混合物回流15小時。反應混合物在真空中濃縮,接著在殘留物中加入水。以二氯乙烷萃取混合物。以碳酸氫鈉水溶液清洗有機層,經無水硫酸鎂乾燥,在真空中濃縮得到5.3g的4-硝基苯甲酸甲酯-2,3,5,6-D4(7-2)。
1H-NMR(CDCl3) 3.99(3H,s).
將5.3g的4-硝基苯甲酸甲酯-2,3,5,6-D4(7-2)懸浮於53ml的二氧陸圜及53ml水的混合溶液中。在懸浮液中加入9.4g的硼氫化鈉,且混合物在室溫下攪拌6小時。反應完成後,反應混合物以5N HCl稍微酸化,移至分液漏斗中。以乙酸乙酯萃取水層,合併的有機層經無水硫酸鎂乾燥,在真空下濃縮得到3.75g的4-硝基苯甲基-2,3,5,6-D4醇(7-3)。
1H-NMR(DMSO-d6) 5.53(1H,t,J=5.7Hz) 4.64(2H,d,J=5.7Hz).
將3.75g的4-硝基苯甲基-2,3,5,6-D4醇(7-3)溶於37ml乙酸乙酯及10ml二甲基甲醯胺的混合溶液中。在溶液中加入400mg的5%鈀-(活性碳),且混合物在大氣氫氣壓下攪拌6小時。在反應完成後,以濾紙濾除催化劑,濾液在真空中濃縮,得到2.65g的4-胺基苯甲基-2,3,5,6-D4醇(7-4)。
1H-NMR(CDCl3) 4.56(2H,s).
將2.65g的4-胺基苯甲基-2,3,5,6-D4醇(7-4)溶於53ml的乙酸乙酯中。在冰溫下於溶液中加入12.9ml的三乙基胺,攪拌混合物一陣子。接著再緩緩滴入5.5ml的乙醯氯,攪拌混合物1小時。在反應完成後,於反應混合物中加入水,將混合物移至分液漏斗中。以乙酸乙酯萃取水層,合併的有機層經無水硫酸鎂乾燥,在真空中濃縮得到4.28g的4-乙醯胺基苯甲基-2,3,5,6-D4乙酸酯(7-5)。
1H-NMR(DMSO-d6) 4.99(2H,s) 2.09(6H,s).
將4.28g的4-乙醯胺基苯甲基-2,3,5,6-D4乙酸酯溶於80ml的甲醇中。在溶液中加入2.9g的碳酸鉀,攪拌混合物1.5小時。在反應完成後,過濾反應混合物。濾液在真空中濃縮得到3.4g的N-(4-(羥基甲基)苯基-2,3,5,6-D4)乙醯胺(7-6)。
1H-NMR(DMSO-d6) 10.07(1H,s) 4.42(2H,s) 2.02(3H,s).
將3.4g的N-(4-(羥基甲基)苯基-2,3,5,6-D4)乙醯胺(7-6)溶於68ml的二甲基甲醯胺中。在溶液中加入17g的二氧化錳,在60℃下攪拌混合物6小時。反應完成後,過濾反應混合物。在濾液中加入水,並用乙酸乙酯萃取混合物。有機層經無水硫酸鎂乾燥並在真空中濃縮,得到2.5g的N-(4-甲醯基苯基-2,3,5,6-D4)乙醯胺(7-7)。
1H-NMR(CDCl3) 9.93(1H,s) 7.50(1H,br-s) 2.23(3H,m).
將2.5g的N-(4-甲醯基苯基-2,3,5,6-D4)乙醯胺(7-7)溶於50ml的乙醇中。在溶液中加入1.1g的丙二腈以及2滴的哌啶,且在室溫下攪拌混合物8小時。以濾紙收集沈澱的結晶,以乙醇清洗,並乾燥得到2.1g的N-(4-(2,2-二氰乙烯基)苯基-2,3,5,6-D4)乙醯胺(7-8)。
1H-NMR(DMSO-d6) 10.52(1H,s) 8.37(1H,s) 2.12(3H,s).
在20ml的乙醇溶液中溶解276mg的金屬鈉,並加入760mg的硫脲,且在室溫下攪拌混合物1小時。接著,將2.1g的N-(4-(2,2-二氰乙烯基)苯基-2,3,5,6-D4)乙醯胺(7-8)加入其中,且將混合物回流攪拌3小時。反應完成後,在減壓狀態下移除乙醇。將殘留物溶於溫水中,用乙酸微酸化。將沈澱物收集於濾紙上並乾燥,得到2.91g的N-(4-(6-胺基-5-氰基-2-巰基-3,4-二氫嘧啶-4-基)苯基-2,3,5,6-D4)乙醯胺(7-9)。
1H-NMR(DMSO-d6) 9.99(1H,s) 9.69(1H,s) 6.13(2H,m) 4.93(1H,s) 2.07(3H,s).
將2.91g的N-(4-(6-胺基-5-氰基-2-巰基-3,4-二氫嘧啶-4-基)苯基-2,3,5,6-D4)乙醯胺(7-9)溶於60ml的二甲基甲醯胺中。在溶液中加入2.73g的3-(6-甲磺醯基氧基甲基吡啶-2-基)丙酸甲酯以及2.76g的碳酸鉀,在室溫下攪拌混合物整夜。接著,加入1.77g的N-溴琥珀醯亞胺,另攪拌混合物1小時。在反應完成後,於反應混合物中加入水,以乙酸乙酯萃取混合物。有機層經無水硫酸鎂乾燥,並在真空中濃縮。以矽膠管柱層析(二氯甲烷:甲醇=20:1)純化殘留物,得到3.52g的3-(6-(4-(4-乙醯胺基苯基-2,3,5,6-D4)-6-胺基-5-氰基嘧啶-2-基硫甲基)吡啶-2-基)丙酸甲酯(7-10)。
1H-NMR(DMSO-d6) 10.26(1H,s) 7.63(1H,t,J=7.8Hz) 7.36(1H,d,J=7.8Hz) 7.16(1H,d,J=7.8Hz) 4.46(2H,s) 3.57(3H,s) 2.99(2H,t,J=7.2Hz) 2.73(2H,t,J=7.2Hz) 2.09(3H,s).
將3.52g的3-(6-(4-(4-乙醯胺基苯基-2,3,5,6-D4)-6-胺基-5-氰基嘧啶-2-基硫甲基)吡啶-2-基)丙酸甲酯(7-10)懸浮於100ml的50%含水乙腈中。在懸浮液中加入331mg的氫氧化鋰單水合物,並且將混合物回流2時。接著,將1.59g的檸檬酸溶於10ml水的水溶液緩緩加入反應混合物中,且反應混合物在50℃下攪拌1小時。將反應混合物冷卻後,以濾紙收集沈澱的結晶,用水清洗,並乾燥得到2.29g的3-(6-(4-(4-乙醯胺基苯基-2,3,5,6-D4)-6-胺基-5-氰基嘧啶-2-基硫甲基)吡啶-2-基)丙酸(7-11)。
1H-NMR(DMSO-d6) 10.25(1H,s),7.64(1H,t,J=7.8Hz),7.36(1H,d,J=7.8Hz),7.16(1H,d,J=7.8Hz) 4.46(2H,s) 2.92(2H,t,J=7.2Hz) 2.65(2H,t,J=7.2Hz) 2.09(3H,s).
將2.29g的3-(6-(4-(4-乙醯胺基苯基-2,3,5,6-D4)-6-胺基-5-氰基嘧啶-2-基硫甲基)吡啶-2-基)丙酸(7-11)懸浮於46ml的丙酮中。在懸浮液中依序加入820mg的1-羥基-1H-苯並三唑、1.16g的1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽以及1.43g的4-哌-1-基甲基-哌啶-1-羧酸第三丁酯,且混合物回流1小時。在真空中移除丙酮,接著加入23ml的乙酸乙酯以及23ml的水,並攪拌混合物30分鐘。將混合物移至分液漏斗。依序以飽和的碳酸氫鈉水溶液和鹽水清洗有機層,經無水硫酸鎂乾燥並在真空中濃縮。在殘留物完全溶解於22.5ml的甲醇後,接著在冰溫下將1.43ml的濃鹽酸緩緩地滴入,且混合物在室溫攪拌1小時。然後,再加入45ml的乙醇,混合物在50℃攪拌1小時。將反應混合物冷卻後,將沈澱的結晶收集於濾紙上,並乾燥得到2.35g的4-(4-(3-(6-(4-(4-乙醯胺基苯基-2,3,5,6-D4)-6-胺基-5-氰基嘧啶-2-基硫基)甲基)吡啶-2-基)丙醯基)哌-1-基)甲基)哌啶-1-羧酸第三丁酯二鹽酸鹽(7-12)。
1H-NMR(DMSO-d6) 10.30(1H,s) 7.95(1H,m) 7.65(1H,m) 7.45(1H,m) 4.59(2H,s) 4.40-4.31(1H,m) 4.10-3.85(3H,m) 3.70-3.30(8H,m) 3.17-2.73(8H,m) 2.09(3H,s) 1.99(1H,m) 1.78-1.74(2H,m) 1.39(9H,s).
在2.35g的4-(4-(3-(6-(4-(4-乙醯胺基苯基-2,3,5,6-D4)-6-胺基-5-氰基嘧啶-2-基硫基)甲基)吡啶-2-基)丙醯基)哌-1-基)甲基)哌啶-1-羧酸第三丁酯二鹽酸鹽(7-12)中加入23ml的氯化氫[1mol/L於乙酸乙酯],且混合物在室溫中攪拌24小時。沈澱物收集於濾紙上,並以4.7ml的乙酸乙酯清洗。將粗製的結晶在室溫下溶於10ml的水中並過濾。在濾液中緩緩加入40ml的丙酮,混合物和其晶種攪拌2小時。沈澱的結晶物收集於濾紙上,以4.7ml的丙酮清洗,接著乾燥得到1.93g的N-(4-(6-胺基-5-氰基-2-(6-(3-側氧基-3-(4-(哌啶-4-基甲基)哌-1-基)丙基)吡啶-2-基)甲硫基)-嘧啶-4-基)苯基-2,3,5,6-D4)乙醯胺三鹽酸鹽(7-13)。
1H-NMR(DMSO-d6) 11.04(1H,br-s) 10.38(1H,s) 8.92-8.80(2H,m) 8.10(1H,m) 7.79(1H,m) 7.59(1H,m) 4.67(2H,s) 4.37-4.33(1H,m) 4.07-4.03(1H,m) 3.70-2.82(17H,m) 2.10-1.98(6H,m) 1.48-1.37(2H,m).
以下,呈示下述化合物的製程作為參考例。
將230mg的3-(6-(4-(4-乙醯胺基苯基)-6-胺基-5-氰基嘧啶-2-基硫甲基)吡啶-2-基)丙酸(8-1)懸浮於20ml的乙腈中。在溶液中加入2ml的5N鹽酸,混合物在60℃下攪拌整夜。將反應混合物冷卻後,緩緩加入檸檬酸水溶液以中和反應混合物。將沈澱的結晶收集於濾紙上,以乙醇清洗,並乾燥得到150mg的3-(6-(4-胺基-6-(4-胺基苯基)-5-氰基嘧啶-2-基硫甲基)吡啶-2-基)丙酸(8-2)。
1H-NMR(DMSO-d6) 7.83(2H,d,J=8.7Hz)7.74(1H,t,J=7.5Hz) 7.30(1H,d,J=7.5Hz) 7.12(1H,d,J=7.5Hz) 6.61(2H,d,J=8.7Hz) 5.90(2H,br-s) 4.44(2H,s) 2.91(2H,t,J=7.5Hz) 2.48(2H,t,J=7.5Hz).
將2.58g的3-(6-(4-胺基-6-(4-胺基苯基)-5-氰基嘧啶-2-基硫甲基)吡啶-2-基)丙酸(8-2)懸浮於50ml的丙酮中。在懸浮液中依序加入1.28g的1-羥基-1H-苯並三唑、1.8g的1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)-碳二亞胺鹽酸鹽以及1.8g的4-哌-1-基甲基-哌啶-1-羧酸第三丁酯,且混合物回流1小時。在真空中移除丙酮,接著加入30ml的乙酸乙酯以及30ml的水,並攪拌混合物30分鐘。將混合物移至分液漏斗。依序以飽和的碳酸氫鈉水溶液和鹽水清洗有機層,經無水硫酸鎂乾燥並在真空中濃縮。以矽膠管柱層析(二氯甲烷:甲醇:28%氨水=100:10:1)純化殘留物,得到3.9g的4-(4-(3-(6-(4-胺基-6-(4-胺基苯基)-5-氰基嘧啶-2-基硫基)甲基),比啶-2-基)丙醯基)哌-1-基)甲基)哌啶-1-羧酸第三丁酯(8-3)。
1H-NMR(CDCl3) 7.95(2H,d,J=8.7Hz) 7.50(1H,t,J=7.5Hz) 7.28(1H,d,J=7.5Hz) 7.08(1H,d,J=7.5Hz) 6.71(2H,d,J=8.7Hz) 5.70(2H,br-s) 4.51(2H,s) 4.16-4.09(4H,m) 3.59(2H,t,J=4.8Hz) 3.45(2H,t,J=4.8Hz) 3.13(2H,t,J=7.5Hz) 2.80(2H,t,J=7.5Hz) 2.75-2.65(2H,m) 2.34-2.30(4H,m) 2.13(2H,d,J=7.2Hz) 1.72-1.64(1H,m) 1.46(9H,s) 1.07-1.02(2H,m).
在3.6g的4-(4-(3-(6-(4-胺基-6-(4-胺基苯基)-5-氰基嘧啶-2-基硫基)甲基)吡啶-2-基)丙醯基)哌-1-基)甲基)哌啶-1-羧酸第三丁酯(8-3)中加入54ml的氯化氫[1mol/L在乙酸乙酯中],且混合物在室溫中攪拌24小時。將沈澱物收集於濾紙上,並以乙酸乙酯清洗。接著乾燥得到4.3g的4-胺基-6-(4-胺基苯基)-2-(6-(3-側氧基-3-(4-(哌啶-4-基甲基)哌-1-基)丙基)吡啶-2-基)甲硫基)嘧啶-5-甲腈四鹽酸鹽(8-4)。
1H-NMR(DMSO-d6) 11.23(1H,br-s) 9.05(1H,br-s) 8.93(1H,br-s) 8.30(1H,t,J=7.5Hz) 7.79-7.68(4H,m) 6.92(2H,d,J=8.7Hz) 4.77(2H,s) 4.40-4.31(8H,m) 3.36-3.18(4H,m) 3.02-2.75(6H,m) 2.21-1.98(3H,m) 1.52-1.34(2H,m).
以下,呈示下述化合物的製程作為參考例。
1.37g的3-(6-羥甲基吡啶-2-基)丙酸甲酯(9-1)溶於15ml的二氯甲烷中,並於其中緩緩加入1.46g溶在二氯甲烷的間氯過苯甲酸溶液,攪拌混合物2小時。依序以10%亞硫酸鈉水溶液、碳酸氫鈉水溶液以及水清洗反應溶液。有機層經無水硫酸鎂乾燥,得到880mg的3-(6-羥甲基-1-氧基-吡啶-2-基)丙酸甲酯(9-2)。
1H-NMR(CDCl3) 7.48-7.29(1H,m) 7.25-7.22(2H,m) 5.01(1H,m) 4.80(2H,S) 3.67(3H,s) 3.23(2H,t,J=7.2Hz) 2.87(2H,t,J=7.2Hz).
將1.52g硫脲懸浮於15ml的乙醇中,然後加入2.12g的碳酸鈉,在60℃攪拌混合物30分鐘。接著,加入4.22g的N-(4-(2,2-二氰乙烯基)苯基)乙醯胺(9-3),且將混合物在回流下攪拌5小時。在反應完成後,於減壓狀態下移除乙醇。殘留物溶於溫水中,並以乙酸微酸化。沈澱的結晶以濾紙收集,並乾燥得到1.87g的N-(4-(6-胺基-5-氰基-2-巰基嘧啶-4-基)苯基)乙醯胺(9-4)。
1H-NMR(DMSO-d6) 10.29(1H,s) 7.73(2H,d,J=8.7Hz) 7.64(2H,d,J=8.7Hz) 2.09(3H,s).
將880mg的3-(6-羥甲基-1-氧基-吡啶-2-基)丙酸甲酯(9-4)溶於18ml的二氯甲烷中。在溶液中加入1.15ml的三乙基胺,且混合物在冰溫下攪拌10分鐘。緩緩滴入0.48ml的甲磺醯氯,並且混合物在冰溫下攪拌30分鐘。在反應混合物中加入水,將混合物移至分液漏斗。以飽和的碳酸氫鈉水溶液和鹽水清洗有機層。接著,有機層經無水硫酸鎂乾燥,得到3-(6-甲磺醯基氧基甲基-1-氧基-吡啶-2-基)丙酸甲酯。然後,將化合物溶解於10ml的二甲基甲醯胺中,並加入1.14g的N-(4-(6-胺基-5-氰基-2-巰基嘧啶-4-基)苯基)乙醯胺以及1.1g的碳酸鉀,且混合物在室溫下攪拌整夜。在反應完成後,將水加入溶液中。將沈澱物收集於濾紙上,並乾燥得到580mg的3-{6-[4-(4-乙醯胺基苯基)-6-胺基-5-氰基嘧啶-2-基硫甲基]-1-氧基-吡啶-2-基}丙酸甲酯(9-5)。
1H-NMR(DMSO-d6) 10.26(1H,s) 7.83(2H,d,J=8.7Hz) 7.74-7.69(3H,m) 7.37(1H,d,J=7.8Hz) 7.23(1H,t,J=7.8Hz) 4.50(2H,s) 3.59(3H,s) 3.05(2H,t,J=7.2Hz) 2.76(2H,t,J=7.2Hz) 2.09(3H,s).
將580mg的3-{6-[4-(4-乙醯胺基苯基)-6-胺基-5-氰基嘧啶-2-基硫甲基]-1-氧基-吡啶-2-基}丙酸甲酯(9-5)懸浮於17ml的50%含水乙腈中,在懸浮液中加入53mg的氫氧化鋰單水合物,且混合物在80℃攪拌2小時。接著,加入253mg的檸檬酸,並且混合物在50℃攪拌1小時。待反應物冷卻後,以濾紙收集沈澱的結晶,用水清洗,並乾燥得到540mg的3-{6-[4-(4-乙醯胺基苯基)-6-胺基-5-氰基嘧啶-2-基硫甲基]-1-氧基-吡啶-2-基}丙酸(9-6)。
1H-NMR(DMSO-d6) 10.25(1H,s) 7.83(2H,d,J=8.7Hz) 7.74-7.68(3H,m) 7.37(1H,d,J=7.8Hz) 7.23(1H,t,J=7.8Hz) 4.50(2H,s) 3.02(2H,t,J=7.2Hz) 2.67(2H,t,J=7.2Hz) 2.09(3H,s).
將520mg的3-{6-[4-(4-乙醯胺基苯基)-6-胺基-5-氰基嘧啶-2-基硫甲基]-1-氧基-吡啶-2-基}丙酸(9-6)溶於10ml丙酮和10ml二甲基甲醯胺的混合溶液中。在溶液中依序加入224mg的1-羥基-1H-苯並三唑、318mg的1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)-碳二亞胺鹽酸鹽以及315mg的4-哌-1-基甲基-哌啶-1-羧酸第三丁酯,且混合物回流2小時。在真空中移除丙酮,接著加入乙酸乙酯和水,並攪拌混合物30分鐘。將混合物移至分液漏斗,依序以飽和的碳酸氫鈉水溶液和鹽水清洗有機層,經無水硫酸鎂乾燥,並在真空中濃縮。以矽膠管柱層析(二氯甲烷:甲醇=50:1)純化殘留物,得到470mg的4-(4-(3-(6-(4-(4-乙醯胺基苯基)-6-胺基-5-氰基嘧啶-2-基硫基)甲基)-1-氧基-吡啶-2-基)丙醯基)哌-1-基)甲基)哌啶-1-羧酸第三丁酯(9-7)。
1H-NMR(CDCl3) 7.98(2H,d,J=8.7Hz) 7.69-7.61(3H,m) 7.43(1H,dd,J=7.8,1.8Hz) 7.31(1H,dd,J=7.8,1.8Hz) 7.09(1H,t,J=7.8Hz) 5.75(2H,s) 4.65(2H,s) 4.12-4.00(2H,m) 3.55(2H,br-s) 3.46(2H,br-s) 3.24(2H,t,J=7.2Hz) 2.87(2H,t,J=7.2Hz) 2.71-2.63(2H,m) 2.32-2.29(4H,m) 2.23(3H,s) 2.11(2H,d,J=6.9Hz) 1.71-1.67(3H,m) 1.46(9H,s) 1.07-0.97(2H,m).
在450mg的4-(4-(3-(6-(4-(4-乙醯胺基苯基)-6-胺基-5-氰基嘧啶-2-基硫基)甲基)-1-氧基-吡啶-2-基)丙醯基)哌-1-基)甲基)哌啶-1-羧酸第三丁酯中加入4.5ml的氯化氫[1mol/L在乙酸乙酯中],且混合物在室溫中攪拌24小時。將沈澱物收集於濾紙上,以乙酸乙酯清洗,並乾燥得到白色粗製的結晶。將粗製的結晶在室溫下溶於2.5ml的水中並過濾。在濾液中緩緩加入10ml的丙酮,混合物和其晶種攪拌6小時。將沈澱的結晶物收集於濾紙上,以丙酮清洗,接著乾燥得到230mg的N-(4-(6-胺基-5-氰基-2-((6-(3-側氧基-3-(4-(哌啶-4-基甲基)哌-1-基)丙基)-1-氧基-吡啶-2-基)甲硫基)嘧啶-4-基)苯基)乙醯胺三鹽酸鹽。
1H-NMR(DMSO-d6) 10.65(1H,m) 10.33(1H,s) 8.80-8.66(2H,m) 7.82(2H,d,J=8.7Hz) 7.75-7.69(3H,m) 7.43(1H,d,J=7.8Hz) 7.25(1H,t,J=7.8Hz) 4.50(2H,s) 4.42-4.38(1H,m) 4.18-4.09(1H,m) 3.74-3.25(8H,m) 3.08-3.01(4H,m) 2.87-2.70(4H,m) 2.09(3H,s) 2.08-1.97(2H,m) 1.47-1.39(2H,m).
以下為包含本發明化合物的醫藥組成物的實施例。
在5L的不銹鋼燒杯中加入約4.5kg的純水。加入130g濃縮甘油作為等張劑以及3.5g的琥珀酸作為緩衝液,攪拌混合物至溶解。接著,加入0.5g的N-(4-(6-胺基-5-氰基-2-((6-(3-側氧基-3-(4-(哌啶-4-基甲基)哌-1-基)丙基)吡啶-2-基)甲硫基)-嘧啶-4-基)苯基)乙醯胺(實施例1的化合物),並攪拌混合物至溶解。在溶液中加入0.3g的苯度溴銨作為防腐劑,並輕輕地攪拌混合物,目視確認完全溶解。在溶液中緩緩地加入4%(w/w)氫氧化鈉將pH調整至6.6。在調整pH之後,在溶液中加水至總重為5.0kg,並輕輕攪拌溶液。將溶液無菌過濾,接著將濾液無菌填充入滴眼劑的瓶子中並將瓶子封好。
實施例9的醫藥組成物是以類似實施例8的方式製備,但使用3.00g的磷酸二氫鈉取代琥珀酸作為緩衝液。
實施例10的醫藥組成物是以類似實施例8的方式製備,但使用275g的葡萄糖取代濃縮甘油作為等張劑。
實施例11的醫藥組成物是以類似實施例8的方式製備,但使用255g的甘露醇取代濃縮甘油作為等張劑。
實施例12的醫藥組成物是以類似實施例8的方式製備,但使用68g的濃縮甘油以及50g的丙二醇取代濃縮甘油作為等張劑。
實施例13的醫藥組成物是以類似實施例8的方式製備,但使用105g的濃縮甘油以及43g的山梨醇取代濃縮甘油作為等張劑。
實施例14的醫藥組成物是以類似實施例8的方式製備,但使用50g的丙二醇、100g的甘露醇以及43g的山梨醇取代濃縮甘油作為等張劑。
實施例15的醫藥組成物是以類似實施例8的方式製備,但使用0.5g的氯化苯二甲烴銨取代苯度溴銨作為防腐劑。
接著,描述使用本發明化合物的藥理試驗例。
測試參照以下的參考文獻(Klotz k.N. et al.,Naunyn-Schmiedeberg’s Arch. Pharmacol.,(1998) 357,1-9;Shryock J.C. et al.,Molecular Pharmacology,(1998) 53,886-893)所揭露的方法進行。
測試所使用的細胞為表現腺核苷A2a受體的HEK293細胞(人類)(PerkinElmer Life Science,Code No. RBHA2AC)。
使用含有10%FBS(胎牛血清)以及1mM丙酮酸鈉(sodium pyruvate)Dulbecco’s modified Eagles培養基的(DMEM)作為培養液。
將細胞置於96孔盤中(1×105/孔)並培養整夜。在移除上層液後,在每一孔中加入含有20mM HEPES的0.1mlDMEM培養液(不含FBS)、0.1mM的3-異丁基-1-甲基黃嘌呤(IBMX),以及2單位/mL的腺核苷去胺酶(adenosine deaminase),並在37℃培養30分鐘。接著,在每一孔中加入0.1ml含有預定濃度測試化合物的DMSO溶液的培養液,再培養額外的30分鐘。在移除上層液後,加入溶細胞性溶液(cytolytic solution)以抑制反應。使用c-AMP酵素免疫分析(EIA)系統(Amersham Biosciences,Code No. RPN225)測定每一孔中的c-AMP量。
使用CGS-21680((2-對-羧乙基)苯乙胺基-5’-N-乙基甲醯胺基腺苷鹽酸鹽),(Sigma,code C141)當作參考化合物重複同樣的分析。
將在參考培養基中由1μM參考化合物所導致的c-AMP合成量定義為100%。測定在每一測試培養基中c-AMP的合成量,以每一測試化合物之預定濃度計算產生50%c-AMP量的濃度,定義為EC50值。
使用在上述實施例中製備的本發明化合物所獲得的上述測試結果,列示於下表中。
使用兔子角膜上皮細胞(KURABO)作為測試細胞。將兔子角膜上皮細胞置於96孔盤中,並加入實施例1之化合物,樣品培養60分鐘。接著,樣品以日光模擬機(SOL500)的UVA(3.5mW/cm2)照射70分鐘。之後,以緩衝液清洗細胞,經過24小時,以中性紅吸收分析(neutral red uptake assay)測試細胞存活率。
結果表示於第1圖。在添加實施例1化合物(0.25、0.5以及1mM)並以日光模擬機照射後,細胞的存活率分別為106.3%、115.0%以及100.7%,因此並未觀測到任何細胞存活率的降低。
從上述的結果明白顯示,由於本發明化合物即使在室外的陽光下,使用高濃度,亦未顯示任何細胞毒性,因此,本發明製劑可以使用高劑量。並且,本發明製劑為可安全使用的藥劑。
眼睛循環失調發生於青光眼、色素性視網膜炎、黃斑部病變、缺血性視神經病變、視網膜動脈阻塞、視網膜靜脈阻塞、糖尿病性視網膜病變以及虹膜睫狀體炎。特別是,發生於視神經頭的循環失調被視作青光眼的重要因素。
眼睛血流有兩個主要的循環系統。其中之一路徑是經由睫狀動脈,另一路徑是經由中央視網膜動脈。睫狀動脈通往脈絡膜、視神經頭、虹膜以及睫狀體的動脈。另一方面,中央視網膜動脈通往視網膜動脈以及一部份往視神經頭小動脈的視網膜動脈分支。
實施例1化合物舒緩睫狀動脈而視為改善眼睛的血流。因此,寄望實施例1化合物作為治療眼睛疾病,諸如青光眼、色素性視網膜炎、黃斑部病變、缺血性視神經病變、視網膜動脈阻塞、視網膜靜脈阻塞、糖尿病性視網膜病以及虹膜睫狀體炎的有效藥物。
以靜脈注射過量的戊巴比妥鈉使兔子犧牲,摘除眼睛並分離出睫狀動脈。睫狀動脈上切出2mm長度的血管環,並在顯微鏡觀測下放置到Danish多肌動描記器系統(Danish multi myograph system)610M(Danish myo techmology)。血管以克氏液(Krebs’solution)和5%二氧化碳及95%氧在37℃維持平衡狀態。
為了確認血管的內皮層傷害,以100μM碳醯膽鹼(carbachol)測試睫狀動脈的舒緩作用。如果碳醯膽鹼引起的舒緩作用超過30%,而血管的內皮層沒有受到傷害者,即用於實驗。
在以高鉀離子(K+)-克氏液收縮睫狀動脈後,將0.3μM至300μM的實施例1化合物持續通入腔體中,以Myodaq(Danish myo techmology)測量張力。
結果表示於下表及第2圖中。實施例1化合物係劑量依存性的舒緩了兔子睫狀動脈,其EC50值為17.0μM。因此,結論是實施例1化合物對於睫狀動脈有舒緩作用。
青光眼為一種會導致眼盲的眼睛疾病,視網膜神經節細胞(RGC)係選擇性的受損。接著視神經受損,最後終於產生視野缺損。睫狀動脈阻塞、睫狀靜脈阻塞以及缺血性視神經病變也都是有關視神經損害的眼睛疾病。另外,色素性視網膜炎、黃斑部病變以及Leber氏視神經病變(Leber’s hereditary optic neuropathy)為關於視網膜神經細胞受損害的眼睛疾病。
實施例1化合物顯示對於視網膜神經節細胞的保護效果,期望使用作為治療像睫狀動脈阻塞、睫狀靜脈阻塞、糖尿病性視網膜病、缺血性視神經病變、色素性視網膜炎、黃斑部病變以及Leber氏視神經病變等眼睛疾病的神經保護藥劑。
實驗係根據(Invest Opthalmol Vis Sci. 39:972-981,1998)所記載的方法進行。
從7天大的Long evans大鼠摘除眼睛,從眼睛將視網膜分離。將視網膜在含有15U/mL木瓜酶(papain)的神經基本培養液(Neurobasal medium)中在37℃下培養30分鐘使之解離,而備妥視網膜懸浮液。
視網膜懸浮液在室溫下於抗-SIRP抗體(Chemicon)-塗覆燒瓶中培養30分鐘。將未附著的細胞移置到抗-thy-1抗體(Chemicon)-塗覆燒瓶中。該細胞在室溫培養30分鐘。最後將附著在燒瓶的細胞以神經基本培養液清洗。在以800rpm離心5分鐘後,製備經純化的RGC。將細胞接種在已經塗覆聚L-離胺酸(Poly-L-lysine)以及laminin(層黏連蛋白)的玻璃蓋玻片。將經純化的RGC培養在含有B27補充劑、1mM麩醯胺(glutamine)50ng/mL CNTF、10μM氟斯克寧(Forskolin)的神經基本培養液中。培養基保持在37℃,含有5%二氧化碳以及95%氧的增濕環境下。在接種細胞後,立刻以BDNF(50ng/mL)或是最終濃度分別為0nM(控制組)、3nM、10nM或是30nM的實施例1化合物處理。
以計數染色的RGC決定細胞存活(細胞存活率)。在培養細胞5天後,以1μM酯化鈣黃綠素(Calcein-AM)(分子探針)染色RGC。以螢光顯微鏡計數RGC的數目。以控制組為0%以及BDNF組為100%,計算出細胞存活的比例(細胞存活率)。
結果顯示於下表以及第3圖。實施例1化合物顯示出和劑量依存性的細胞存活。此結果表示實施例1化合物對RGC有神經保護的效果。
數據=平均數±標準差
以控制組為0%以及BDNF組為100%,計算出細胞存活。
第1圖為在兔子角膜上皮細胞中分別加入0.25、0.5以及1mM濃度之實施例1的化合物之細胞存活率。
第2圖為關於實施例1化合物對兔子睫狀動脈的影響。
第3圖為關於實施例1化合物對兔子網膜神經節細胞的影響。
該代表圖無元件符號及其所代表之意義。
Claims (14)
- 一種下式(1)的氰基嘧啶化合物或其鹽類,
- 如申請專利範圍第1項之氰基嘧啶化合物或其鹽,其中,該化合物係N-(4-(6-胺基-5-氰基-2-((6-(3-側氧基-3-(4-(哌啶-4-基甲基)哌-1-基)丙基)吡啶-2-基)甲硫基)-嘧啶-4-基)苯基)乙醯胺。
- 一種醫藥組成物,係包含申請專利範圍第1項或第2項之化合物或其鹽,以及製藥可接受的載體者。
- 如申請專利範圍第3項之醫藥組成物,係用來治療眼睛疾病。
- 一種如申請專利範圍第4項之醫藥組成物,係用來治療青光眼。
- 一種申請專利範圍第1項或第2項之化合物或其鹽之用途,係用為製備腺核苷A2a受體促效劑。
- 一種如申請專利範圍第1或2項所述之化合物或其鹽之用途,該用途係製備用於治療眼睛疾病之醫藥組成物。
- 一種水性液體製劑,係包含申請專利範圍第3項之醫藥組成物。
- 如申請專利範圍第8項之水性液體製劑,係進一步包含一種或多種選自製藥可接受的緩衝液、等張劑、防腐劑、助溶劑以及pH調節劑之添加劑者。
- 如申請專利範圍第9項之水性液體製劑,其中,緩衝液係選自琥珀酸、硼酸、磷酸、胺基酸及其製藥可接受的鹽。
- 如申請專利範圍第10項之水性液體製劑,其中,緩衝液為琥珀酸。
- 如申請專利範圍第8項之水性液體製劑,其中,等張劑為一種或兩種選自下列組群的等張劑:葡萄醣、山梨醇、甘露醇、氯化鈉、氯化鉀、丙二醇以及甘油。
- 如申請專利範圍第9項之水性液體製劑,其中,防腐劑係選自氯化苯二甲烴銨、氯化苯銨松寧(benzethonium chloride)、苯度溴銨(benzododecinium bromide)、氯己定葡糖酸鹽(chlorhexidine gluconate)、對位羥基苯甲酸甲酯、對位羥基苯甲酸丙酯、氯丁醇以及苯甲醇。
- 如申請專利範圍第8項至第13項中任一項之水性液體製劑,其中,pH為5.0至9.0者。
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