TWI525101B - 用於檢測存活素抗體之多肽分子 - Google Patents

Description

用於檢測存活素抗體之多肽分子

本發明關於一種用於檢測抗體之多肽分子，特別是關於一種用於檢測存活素(Survivin)抗體之多肽分子。

隨著人類生活習慣之變遷，惡性腫瘤(Cancer，又稱為Malignant tumor)已成為人類死亡的最大主因。統計報告指出，若能在早期階段診斷出惡性腫瘤，將大幅提升治療效果。因此，人們對於預測或早期診斷出惡性腫瘤的需求與日俱增。

侵入周遭組織或發生轉移情形的腫瘤(Tumor)，稱為惡性腫瘤(Cancer，又稱為Malignant tumor)，一般會影響生理功能，主要包括癌症(Carcinoma)、肉瘤(Sarcoma)、淋巴瘤(lymphoma)、白血病(leukemia)、黑色素瘤(melanoma)、癌肉瘤(carcinosarcoma)、惡性神經膠質瘤(Malignant glioma)。

其中，源於上皮組織的惡性腫瘤稱為癌症。發生於結締組織的惡性腫瘤稱為肉瘤，所稱之結締組織包括纖維組織、脂肪(脂)組織、肌肉、血管、骨骼和軟骨。另外，淋巴瘤及白血病發生於造血組織。黑色素瘤發 生於皮膚細胞。同時發生於上皮組織和結締組織的惡性腫瘤則稱為癌肉瘤。此外，惡性神經膠質瘤是發生在神經組織之惡性腫瘤。

近年來的研究發現，在惡性腫瘤體積發展到可用現代影像學技術檢出前之3~5年，患者血液中已出現高濃度的腫瘤相關抗原(tumor-associated antigen,TAA)自身抗體(Autoantibody)。因此，檢測血液中腫瘤相關抗原自身抗體含量是早期診斷的重點發展方向之一。

腫瘤相關抗原係一種會表現於腫瘤細胞的抗原，且在腫瘤細胞的表現量明顯高於一般正常細胞表現量。被惡性腫瘤病患大量表現的腫瘤相關抗原種類繁多，較常見的包括p53轉錄因子蛋白(p53)、c-Myc蛋白(c-Myc protein,encoded by c-Myc gene)、細胞週期素B1(cyclin B1)、以及存活素(survivin)。

其中，存活素又稱為細胞凋亡抑制因子5(Baculoviral inhibitor of apoptosis repeat-containing 5,BIRC5)，是凋亡抑制因子家族的一員。幾乎所有人類腫瘤細胞中的存活素基因，都處於一種不受調控的狀態，因此，腫瘤細胞都高度表現存活素。在一般正常生理狀態下，人類僅胎兒組織(fetal tissue)會高度表現存活素基因，在已經分化成熟的人類細胞上幾乎檢測不到存活素。基於存活素在腫瘤組織和正常組織間表現量的巨大差異以及其在腫瘤發展中的重要作用，存活素在作為腫瘤預測、預後檢測上受到越來越多的關注。

US7238492揭露一種偵測檢體中存活素蛋白相對含量的方法，用以預測個體是否罹患一惡性腫瘤疾病。首先，從個體中取出腫瘤檢體，細胞破碎後，並進行西方墨點法實驗(Western blot)，最後以多株存活素 抗體或單株存活素抗體偵測檢體中之存活素含量。

然而，這樣的檢測方法存在多種缺失，包括：1)需採集個體的腫瘤檢體，且往往需透過手術方式採集，因而具有侵入性、不便性、危險性等缺點；2)需經破碎細胞及西方墨點法等繁複的步驟，在處理大量檢體時更顯費時費力；3)需比對其他基因表現量，進而測得存活素的相對表現量，增加檢測方法的變數；4)多株抗體之製備耗時耗力，且無法確保具有相同的品質；5)單株抗體之製備耗費極大的成本。

亦即，習知檢測方法具有耗時、成本高、不穩定等缺失，亟需發展一種新穎的檢測試劑，以快速、有效、穩定地預測是否罹患惡性腫瘤疾病。

有鑑於習知技術的缺陷，本發明提供一種製程簡單之存活素多肽分子，可與存活素抗體結合，以檢測個體血液、血漿、或血清中的存活素抗體(即自身抗體)含量，進而預測一惡性腫瘤風險或早期診斷是否罹患一惡性腫瘤。

另外，本發明提供一種製備成本較低且易於保存之存活素多肽分子，使所製備出的檢測試劑及免疫酵素測定套組易於保存。

本發明亦提供一種便於檢測之試劑及免疫酵素測定套組，以增加使用之便利性及快速性。

本發明再提供一種可同時檢測多種腫瘤疾病之測試劑及免疫酵素測定套組，以整體評估身體是否發生惡性腫瘤相關疾病。

於一較佳實施例中，本發明提供一種抗體結合分子，可與一腫瘤相關抗原之一抗體結合；其中，該抗體結合分子之長度為25-40個胺基酸，且該抗體結合分子之序列包含SEQ ID NO：1至3之至少一者。

於一較佳實施例中，該抗體結合分子之序列長度為30至35個胺基酸。

於一較佳實施例中，該腫瘤相關抗原係存活素(Survivin)。

於一較佳實施例中，該抗體結合分子序列中的脯胺酸(Proline)數量為0至2個。

於一較佳實施例中，該抗體結合分子序列中的麩胺酸(Glutamic acid)數量為0至4個，抑或是，其序列中的半胱胺酸(Cysteine)數量為0至2個。

於一較佳實施例中，該抗體結合分子係線性多肽分子，抑或是，該抗體結合分子於一水溶液或一血漿中不形成阿爾法螺旋(alpha helix)結構。

於一較佳實施例中，該抗體結合分子與該抗體間的結合力，大於該抗體與一洗滌緩衝液間的作用力。

本發明更提供一種檢測試劑，包含一抗體結合分子，該抗體結合分子之長度為25-40個胺基酸，且該抗體結合分子之序列包含SEQ ID NO：1至3之至少一者。

於一較佳實施例中，該抗體結合分子可與一腫瘤相關抗原之一抗體結合，抑或是，該抗體結合分子可與一存活素之一抗體結合。

於一較佳實施例中，該檢測試劑之用途，係用於檢測一血液，一血漿，或一血清中的一腫瘤相關抗原之抗體含量。

本發明再提供一種免疫酵素測定套組(ELISA Kit)，包含一試劑；其中，該試劑中更包含一抗體結合分子，該抗體結合分子之長度為25-40個胺基酸，且該抗體結合分子之序列包含SEQ ID NO：1至3之至少一者。

於一較佳實施例中，該試劑係一乙酸溶液。

於一較佳實施例中，該試劑中之該抗體結合分子及該乙酸溶液之比例係5mg：1mL。

於一較佳實施例中，該試劑中之該抗體結合分子濃度為0.75μg/mL~5mg/mL。

本發明又提供一種免疫酵素測定套組(ELISA Kit)，包含一多孔盤；其中，該多孔盤中包含一抗體結合分子，該抗體結合分子之長度為25-40個胺基酸，且該抗體結合分子之序列包含SEQ ID NO：1至3之至少一者。

於一較佳實施例中，該免疫酵素測定套組可用於預測一惡性腫瘤風險或用於早期診斷是否罹患一惡性腫瘤。

於一較佳實施例中，該惡性腫瘤係肺癌或子宮頸癌。

於一較佳實施例中，該免疫酵素測定套組可用於同時預測至少2種惡性腫瘤風險或用於同時篩檢是否罹患至少2種惡性腫瘤。

於一較佳實施例中，該2種惡性腫瘤係肺癌及子宮頸癌。

以下係提供利用本發明之實施例之詳細說明書，以及本發明之技術及特點。然本實施例並非用以限定本發明，任何熟悉此技術者，在不脫離本發明之精神和範圍內，當可作各種之更動與潤飾。

鑑於習知技術的限制及缺陷，本發明提供至少一種抗體結合分子，可與一腫瘤相關抗原之抗體結合。較佳者，本發明提供至少一種存活素抗體結合分子，可與存活素之抗體結合，以檢測個體血液、血漿、或血清中的存活素抗體(即自身抗體)含量，進而預測一惡性腫瘤風險或早期診斷是否罹患一惡性腫瘤。

本案存活素抗體結合分子可以為存活素重組蛋白(Survivin Recombinant)、存活素表位(Epitope)多肽分子、或存活素表位(Epitope)線性多肽分子。但基於製備存活素重組蛋白需要經過載體構建、轉染、表達、篩選、純化等繁瑣的過程，耗時耗力，且蛋白空間結構複雜，抗原表位不易暴露，可能會大幅降低抗原抗體結合的特異性等原因，較佳者，以存活素表位線性多肽分子為宜。

由於抗原抗體在空間結構和空間構型上互補，兩者之結合實際上只發生在抗原表位(Epitope)和抗體結合位(Paratope)之間。因此，僅抗原表位片段就可以代表整個蛋白與抗體結合的狀態及親和特性。依發明人多年之經驗及研究結果，認為應能從存活素的序列及結構中，找出存活素表位，並從眾多存活素表位序列中篩選出適當的「存活素表位線性多肽分 子」，以發展快速、有效、穩定的惡性腫瘤檢測試劑及惡性腫瘤免疫酵素測定套組(ELISA Kit)。

存活素表位線性多肽分子的設計：發明人利用生物資訊學分析存活素之胺基酸序列，再經多個表位預測軟體比較抗原性相關參數，進而挑選出候選序列。較佳者，該些候選序列之長度為25~40個胺基酸，抑或是，較佳者，該些候選序列之長度為30~35個胺基酸。

免疫酵素測定法(ELISA)具高度靈敏性，因此對胺基酸序列分子的穩定性要求極高。發明人進一步遵循以下7個原則篩選候選序列：

1)選擇不形成阿爾法螺旋(alpha helix)結構的序列。較佳者，於一水溶液或一血漿中不形成阿爾法螺旋結構。

2)兩端的肽段比中間的排列合理。

3)避免蛋白內部重複。

4)避免同源性強的肽段。

5)序列中儘量避免半胱胺酸(Cysteine)和麩胺酸(Glutamic acid)。較佳者，序列中的麩胺酸(Glutamic acid)數量為0至4個，抑或是，較佳者，序列中的半胱胺酸(Cysteine)數量為0至2個。

6)避免過多的脯胺酸(Proline)，但序列中具有1-2個脯胺酸利於肽鏈結構穩定，對產生特異性抗體有益。較佳者，序列中的脯胺酸(Proline)數量為0至2個。

7)較佳者，須含有第二型人類白血球抗原(Human leukocyte antigen class II，簡稱HLA class II)系統的限制性表位元，包括HLA-DR、HLA-DP、以及HLA-DQ的限制性表位。這些表位可被90%以上華人群體的第二型人類白血球抗原系統所識別。

發明人最後篩選出下列三種存活素表位線性多肽分子，依序為序列表中的SEQ ID NO：1~3：

製備存活素表位線性多肽分子：以化學法合成該些存活素表位線性多肽分子。較佳者，純度須大於95%。較佳者，pH值大於7。可委託胜肽合成服務公司合成該些存活素表位線性多肽分子，例如委託明欣生物科技有限公司(地址：台北市南港區園區街3號10樓之1；電話：02-26557128；網址：http：//www.missionbio.com.tw/)製備該3種存活素表位線性多肽分子。

將合成的存活素表位線性多肽分子溶於67%的乙酸中(5mg存活素表位線性多肽分子/1mL之67%乙酸)，於-20℃之低溫冰箱中保存。

存活素表位線性多肽分子結合性分析：利用免疫酵素測定法(ELISA)進行本案三種存活素表位線性多肽分子與存活素抗體間的結合性。

首先，以0.01M PBS(pH7.0~7.4)將各種包被液濃度調整成7.5~12.5μg/mL。0.01M PBS係1公升去離子水中包含0.2964g NaH₂PO₄‧2H₂O、2.9g Na₂HPO₄‧12H₂O、8g NaCl。較佳者，該0.01M PBS中包含0.1% NaN₃。

其中，實驗抗原包被液1係包含本案SEQ ID NO：1之存活素表位線性多肽分子。實驗抗原包被液2係本案SEQ ID NO：2之存活素表位線性多肽分子。實驗抗原包被液3係本案SEQ ID NO：3之存活素表位線性多肽分子。正對照抗原包被液係存活素重組蛋白(Cat.No.4160-50,BioVision)。負對照抗原包被液係依一種山羊(Goat)蛋白設計而成的線性多肽分子，與人存活素無同源性，故不應與存活素抗體交叉結合。

將上述各種包被液分別包被(Coating)於多孔盤，每孔100μL，於4℃環境靜置隔夜(Overnight)。較佳者，該多孔盤為96孔盤，但不以此為限。以96孔盤(Cat.No.224-0096,COSTAR)為例，於A列的2個孔中包被實驗抗原包被液1，是為實驗抗原組1。於B列的2個孔中包被實驗抗原包被液2，是為實驗抗原組2。於C列的2個孔中包被實驗抗原包被液3，是為實驗抗原組3。於D列的2個孔中包被正對照抗原包被液，是為正對照抗原組。於E列的2個孔中包被負對照抗原包被液，是為負對照抗原組。於F列的2個孔中包被0.01M PBS(pH7.0~7.4)，是為負對照組。

以0.01M PBS(另外添加0.05% TWEEN-20)清洗3次。亦即，以洗滌緩衝液清洗3次。

利用樣品稀釋分析液(去離子水中添加0.01M PBS及1% BSA)將人類存活素多株抗體(Cat.No.2803,Cell Signaling Technology)稀釋 100~500倍，每孔加入100μL，25℃培養2~3小時。

以0.01M PBS(另外添加0.005% TWEEN-20)清洗3遍。亦即，以洗滌緩衝液清洗3次。其中，存活素表位線性多肽分子與存活素多株抗體間的結合力，大於存活素多株抗體與該洗滌緩衝液間的作用力，因此不會被洗滌緩衝液沖洗掉。

加入200μL帶有辣根過氧化酶(Horseradish peroxidase，HRP)的羊抗兔IgG抗體(Sigma)，25℃培養2小時。

以0.01M PBS清洗後，加入100μL 3,3',5,5'-四甲基聯苯胺(TMB；Invtrogen)，室溫避光15~30分鐘。

加入50μL 10% H₂SO₄終止反應，並檢測吸光值(OD值)。檢測波長為450nm，參考波長為630nm，須於10分鐘內完成檢測。

將各組吸光值扣除負對照組之吸光值後，分別分析實驗抗原組1、2、3與負對照抗原組間是否均有顯著差異(p<0.01)，正對照抗原組與負對照抗原組間是否有顯著差異(p<0.001)。

存活素表位線性多肽分子檢測惡性腫瘤效果分析：

A、樣本收集：收集271份肺癌患者血漿樣品及227例年齡與性別完全匹配的健康人血清樣本，用於肺癌研究。收集249份婦科腫瘤患者血漿樣品及112例年齡完全匹配的女性健康人血漿樣品，用於婦科腫瘤研究。腫瘤患者的臨床診斷符合國際疾病分類標準ICD-10。在收集的檢體中，健康組與肺癌組在性別、年齡匹配，具有可比性(P>0.05)。

其中，271名肺癌患者中，包含113例肺鱗狀細胞癌(Lung Squamous Cell Carcinoma)患者以及176例腺癌(Adenocarcinoma)患者。249份婦科腫瘤患者中則包含152例乳腺癌(Breast Cancer)患者及97例子宮頸癌(Cervical Cancer)患者。

B、檢測方式：利用上述免疫酵素測定法(ELISA)檢測惡性腫瘤病患自身抗體含量。檢測惡性腫瘤病患自身抗體之步驟、方法與上述存活素表位線性多肽分子結合性分析之方法大致相同，步驟如下：首先，將本案SEQ ID NO：1、2、3存活素表位線性多肽分子溶解後，以等比例混合。以0.01M PBS(pH7.0~7.4)將該存活素表位線性多肽分子混合液之濃度調整成7.5~12.5μg/mL。較佳者，該0.01M PBS中包含0.1% NaN₃。

以0.01M PBS(pH7.0~7.4)將正對照抗原及負對照抗原之濃度分別調整成15~20μg/mL。較佳者，該0.01M PBS中包含0.1% NaN₃。

將各種包被液分別包被(Coating)於多孔盤，每孔100μL，4℃隔夜(Overnight)。較佳者，該多孔盤為96孔盤，但不以此為限。以96孔盤(Cat.No.224-0096,COSTAR)為例，於A列的2個孔中包被存活素表位線性多肽分子混合液，是為實驗抗原組。於B列的2個孔中包被正對照抗原包被液，是為正對照抗原組。於C列的2個孔中包被負對照抗原包被液，是為負對照抗原組。於D列的2個孔中包被0.01M PBS(pH7.0~7.4)，是為負對照組。

以0.01M PBS(另外添加0.05% TWEEN-20)清洗3遍。

利用樣品稀釋分析液(去離子水中添加0.01M PBS及1% BSA)將惡性腫瘤病患之血漿稀釋100~500倍，每孔加入100μL，25℃培養2~3小時。

以0.01M PBS(另外添加0.005% TWEEN-20)清洗3遍。加入200μL帶有辣根過氧化酶(Horseradish peroxidase，HRP)的羊抗人IgG抗體(Sigma)，25℃培養2小時。

以0.01M PBS清洗後，加入100μL 3,3',5,5'-四甲基聯苯胺(TMB；Invtrogen)，室溫避光15~30分鐘。

加入50μL 10% H₂SO₄終止反應，並檢測吸光值(OD值)。檢測波長為450nm，參考波長為630nm。

C、數據分析方式：採用特異結合指數(Specific binding index,SBI)判定存活素表位線性多肽分子與血漿自身抗體的結合程度。

SBI=[實驗抗原組吸光值-負對照組吸光值]/[負對照抗原組吸光值-負對照組吸光值]。

採用Z檢定方法(Z test)分析惡性腫瘤病患血清樣本的SBI值與健康人血清樣本的SBI值之間是否有差異。

D、實驗結果：肺癌實驗結果：請參閱表一。肺鱗狀細胞癌患者血漿中存活素IgG抗體明顯高於健康組，Z=3.19，具有統計差異(p<0.0007)。腺癌患者血漿中存活素IgG抗體明顯高於健康組，Z=4.11，具有統計差異(p<0.0001)。整體比較後發現，肺癌患者(肺鱗狀細胞癌及腺癌)血漿中存活素IgG抗體高於健康組，Z=4.74，具有統計差異(p<0.0001)。

以上結果充分顯示，利用本案存活素表位線性多肽分子所篩檢出的自身抗体含量，在肺癌患者與健康人之間具有顯著的統計差異。因此，本案存活素表位線性多肽分子可用於預測一惡性腫瘤風險或用於早期診斷是否罹患一惡性腫瘤。

婦科惡性腫瘤實驗結果：請參閱表二。乳腺癌患者血漿中存活素IgG抗體明顯高於健康組，Z=2.07，具有統計差異(p<0.0191)。子宮頸癌患者血漿中存活素IgG抗體明顯高於健康組，Z=4.82，具有統計差異(p<0.0001)。

以上結果充分顯示，利用本案存活素表位線性多肽分子所篩檢出的自身抗体含量，在婦科惡性腫瘤患者與健康人之間具有顯著的統計差異。因此，本案存活素表位線性多肽分子可用於預測一惡性腫瘤風險或用於早期診斷是否罹患一惡性腫瘤。

存活素表位線性多肽分子檢測準確性分析：

A、檢測方式：以接收者操作特徵曲線(Receiver operating characteristic curve,ROC)評估存活素表位線性多肽分子檢測效果。本分析中，接收者操作特徵曲線是依序設定不同的閾值，並將SBI高於閾值的人之檢測結果定義為陽性，SBI低於閾值的人之檢測結果定義為陰性。

其中，惡性腫瘤患者檢測結果為陽性者，進一步定義為真陽性。惡性腫瘤患者檢測結果為陰性者，進一步定義為偽陰性。

健康者檢測結果為陽性者，進一步定義為偽陽性。健康者檢測結果為陰性者，進一步定義為真陰性。

統計每一種閾值所得出的真陽性比例(TPR)以及偽陽性比例(FPR)。例如，在第n個閾值下，統計出的真陽性比例為TPRn，偽陽性比例為FPRn。將(FPR1,TPR1)、(FPR2,TPR2)、(FPR3,TPR3)...等座標位置依序畫在接收者操作特徵曲線圖中。其中，接收者操作特徵曲線圖之橫座標為偽陽性比例(FPR)，縱座標為真陽性比例(TPR)。

將接收者操作特徵曲線進行積分，以求得接收者操作特徵曲線下面積(Area under the curve,AUC)，進而能評估試驗之準確性。AUC數值越接近1.0者，代表診斷準確度越好，越接近0者，代表準確性越差。若AUC數值為1，表示檢測之準確性為100%。若AUC數值為0，表示檢測之準確性為0%。一般被市場採用之檢測方法，AUC均大於0.5。

B、實驗結果：

肺癌實驗結果：請參閱表一。依肺鱗狀細胞癌群組及其匹配健康群組SBI值所畫出的ROC曲線，其曲線下之面積為0.64±0.045，95%信賴區間為0.56~0.73。依腺癌群組及其匹配健康群組SBI值所畫出的ROC曲線，其曲線下之面積為0.68±0.044，95%信賴區間為0.59~0.76。整體分析後發現，依肺癌患者(肺鱗狀細胞癌及腺癌)及其匹配健康群組SBI值所畫出的ROC曲線，其曲線下之面積為0.66±0.034，95%信賴區間為0.59~0.73。

以上結果顯示，利用本案存活素表位線性多肽分子檢測是否罹患肺癌，其曲線下之面積均大於0.5。因此，本案之檢測方式具有相當的準確性及應用價值。

婦科惡性腫瘤實驗結果：請參閱表二。依乳腺癌群組及其匹配健康群組SBI值所畫出的ROC曲線，其曲線下之面積為0.57±0.034，95%信賴區間為0.50~0.64。依子宮頸癌群組及其匹配健康群組SBI值所畫出的ROC曲線，其曲線下之面積為0.67±0.036，95%信賴區間為0.60~0.74。

以上結果顯示，利用本案存活素表位線性多肽分子檢測是否罹患婦科惡性腫瘤相關疾病，其曲線下之面積均大於0.5，因此，本案之檢測方式具有相當的準確性及應用價值。

存活素表位線性多肽分子檢定方法之最適閾值：

依接收者操作特徵曲線上各個點的分布情形，選取最適之檢測閾值，使檢測方法具有高靈敏度(高靈敏度即真陽性比例高)，同時具有高特異性(特異性高即真陰性比例高)。

較佳者，本檢測方式之最適閾值為SBI=2，亦即檢測所得之SBI值高於2時，檢測結果為陽性，可能具有罹患惡性腫瘤之風險或已罹患惡性腫瘤。反之，SBI低於2時，其檢測結果為陰性，該次檢測並未發現罹患惡性腫瘤的風險。

應能理解的是，亦可選擇接收者操作特徵曲線上其他點所對應之閾值，作為區分陽性或陰性之閾值。

請參閱表一。以SBI=2作為閾值進行檢測時，肺鱗狀細胞癌之檢測靈敏度達39.7%，特異性達90.4%，且腺癌之檢測靈敏度達35.8%，特異性達90.4%。整體肺癌之檢測靈敏度達37.8%，特異性達90.4%。

請再參閱表二。以SBI=2作為閾值進行檢測，乳腺癌之檢測靈敏度達20.5%，特異性達90%，且子宮頸癌之檢測靈敏度達23.4%，特異性達90%。

本發明所述的存活素表位線性多肽分子可用於製備預測腫瘤早期診斷試劑或免疫酵素測定套組(ELISA Kit)，以檢測個體血液、血清或血漿中自身抗體含量。較佳者，用於預測或檢測肺癌、乳腺癌、或子宮頸癌。若檢測到的自身抗體含量升高，代表該個體之存活素蛋白表現量增加，亦即，預測出個體可能出現原發性或繼發性腫瘤。

因此，本發明之存活素表位線性多肽分子可以用於製備一種用於預測腫瘤發生或復發危險性的試劑或免疫酵素測定套組，益於臨床醫生進行腫瘤之早期診斷。

本案免疫酵素測定套組包含多孔盤，且該多孔盤中包被有SEQ ID NO：1、2、或3之存活素表位線性多肽分子。較佳者，該多孔盤係96孔盤。較佳者，該免疫酵素測定套組更包括選自下列各表之試劑：

該免疫酵素測定套組可用於同時預測至少2種惡性腫瘤風險或用於同時篩檢是否罹患至少2種惡性腫瘤。例如，個體對於是否罹患肺癌及子宮頸癌有疑慮時，可透過本發明之免疫酵素測定套組整體評估是否罹患惡性腫瘤或具有罹患惡性腫瘤之風險，利於同時排除罹患肺癌及子宮頸癌之疑慮。

可被同時檢測的惡性腫瘤可以是例如乳腺癌(Breast Cancer)、子宮頸癌(Cervical Cancer)、胰臟癌(Pancreas Cancer)、食道癌(Esophagus Cancer)、淋巴瘤(Lymphoma)、白血病(Leukemia)、黑色素瘤(Melanoma)、癌肉瘤(Carcinosarcoma)、惡性神經膠質瘤(Malignant glioma)、肺鱗狀細胞癌(Lung Squamous Cell Carcinoma)、腺癌(Adenocarcinoma)、腺泡狀腺癌(Acinar adenocarcinoma)、膽管癌(Cholangiocarcinoma)、黏液性癌(Mucinous Carcinoma)、子宮內膜癌(Endometrial Cancer)、脂肪肉瘤(Liposarcoma)、血管肉瘤(Angiosarcoma)、白血病性肉瘤(Leukosarcoma)，但不以此為限。

應能理解的是，人類惡性腫瘤細胞都高度表現存活素蛋白而使血液中含有大量存活素抗體，因此，本案之免疫酵素測定套組及存活素表位線性多肽分子所能檢測之惡性腫瘤(Cancer)類別，應涵蓋各種惡性腫瘤疾病，亦即，不以上述所提及者為限。

以上所述僅為本發明之較佳實施例，並非用以限定本發明之申請專利範圍，因此凡其它未脫離本發明所揭示之精神下所完成之各種更動或潤飾等，均應包含於本案之申請專利範圍內。

以下序列的胺基酸係由左到右以胺基到羧基的方向表示。

<110> 光輝生命醫學股份有限公司

<120> 用於檢測存活素抗體之多肽分子

<160> 3

<210> 1

<211> 35

<212> PRT

<213> 人工序列

<220> PEPTIDE

<223> 用於檢測存活素抗體

<400> 1

<210> 2

<211> 30

<212> PRT

<213> 人工序列

<220> PEPTIDE

<223> 用於檢測存活素抗體

<400> 2

<210> 3

<211> 33

<212> PRT

<213> 人工序列

<220> PEPTIDE

<223> 用於檢測存活素抗體

<400> 3

Claims (19)

1. 一種抗體結合分子組成物，可與至少一腫瘤相關抗原之一抗體結合，該抗體結合分子組成物包含：一第一抗體結合分子，該第一抗體結合分子之序列包含SEQ ID NO：1；一第二抗體結合分子，該第二抗體結合分子之序列包含SEQ ID NO：2；以及一第三抗體結合分子，該第三抗體結合分子之序列包含SEQ ID NO：3；其中，該第一抗體結合分子、該第二抗體結合分子、以及該第三抗體結合分子之序列長度均為30-40個胺基酸。
2. 如申請專利範圍第1項所述之抗體結合分子組成物，該第一抗體結合分子、該第二抗體結合分子、以及該第三抗體結合分子之序列長度均為30至35個胺基酸。
3. 如申請專利範圍第1項所述之抗體結合分子組成物，其中該腫瘤相關抗原係存活素(Survivin)。
4. 如申請專利範圍第1項所述之抗體結合分子組成物，該第一抗體結合分子、該第二抗體結合分子、以及該第三抗體結合分子之序列中的脯胺酸(Proline)數量均為0至2個。
5. 如申請專利範圍第1項所述之抗體結合分子組成物，該第一抗體結合分子、該第二抗體結合分子、以及該第三抗體結合分子之序列中的麩胺酸(Glutamic acid)數量均為0至4個，抑或是，該第一抗體結合分子、該第二抗體結合分子、以及該第三抗體結合分子之序列中的半胱胺酸(Cysteine)數量均為0至2個。
6. 如申請專利範圍第1項所述之抗體結合分子組成物，該第一抗體結合分子、該第二抗體結合分子、以及該第三抗體結合分子均為線性多肽分子，抑或是，該第一抗體結合分子、該第二抗體結合分子、以及該第三抗體結合分子於一水溶液或一血漿中均不形成阿爾法螺旋(alpha helix)結構。
7. 如申請專利範圍第2項所述之抗體結合分子組成物，該第一抗體結合分子、該第二抗體結合分子、或該第三抗體結合分子中的其中一者與該抗體間的結合力，大於該抗體與一洗滌緩衝液間的作用力。
8. 一種檢測試劑，包含：一第一抗體結合分子，該第一抗體結合分子之序列包含SEQ ID NO：1；一第二抗體結合分子，該第二抗體結合分子之序列包含SEQ ID NO：2；以及一第三抗體結合分子，該第三抗體結合分子之序列包含SEQ ID NO：3；其中，該第一抗體結合分子、該第二抗體結合分子、以及該第三抗體結合分子之序列長度均為30-40個胺基酸。
9. 如申請專利範圍第8項所述之檢測試劑，其中該第一抗體結合分子、該第二抗體結合分子、以及該第三抗體結合分子之至少一者可與一腫瘤相關抗原之一抗體結合，抑或是，該第一抗體結合分子、該第二抗體結合分子、以及該第三抗體結合分子之至少一者可與一存活素之一抗體結合。
10. 如申請專利範圍第8或9項所述之檢測試劑，係用於檢測一血液，一血漿，或一血清中的一腫瘤相關抗原之抗體含量。
11. 一種免疫酵素測定套組(ELISA Kit)，包含一試劑；其中，該試劑中更包含：一第一抗體結合分子，該第一抗體結合分子之序列包含SEQ ID NO：1；一第二抗體結合分子，該第二抗體結合分子之序列包含SEQ ID NO：2；以及一第三抗體結合分子，該第三抗體結合分子之序列包含SEQ ID NO：3；且該第一抗體結合分子、該第二抗體結合分子、以及該第三抗體結合分子之序列長度均為30-40個胺基酸。
12. 如申請專利範圍第11項所述之免疫酵素測定套組，該試劑係一乙酸溶液。
13. 如申請專利範圍第12項所述之免疫酵素測定套組，該試劑中之該些抗體結合分子及該乙酸溶液之比例係5mg：1mL。
14. 如申請專利範圍第11項所述之免疫酵素測定套組，該試劑中之該些抗體結合分子濃度為0.75μg/mL~5mg/mL。
15. 一種免疫酵素測定套組(ELISA Kit)，包含一多孔盤；其中，該多孔盤中包含：一第一抗體結合分子，該第一抗體結合分子之序列包含SEQ ID NO：1；一第二抗體結合分子，該第二抗體結合分子之序列包含SEQ ID NO：2；以及一第三抗體結合分子，該第三抗體結合分子之序列包含SEQ ID NO：3；且該第一抗體結合分子、該第二抗體結合分子、以及該第三抗體結合分子之序列長度均為30-40個胺基酸。
16. 如申請專利範圍第11或15項所述之免疫酵素測定套組，可用於預測一惡性腫瘤風險或用於早期診斷是否罹患一惡性腫瘤。
17. 如申請專利範圍第16項所述之免疫酵素測定套組，其中該惡性腫瘤係肺癌或婦科惡性腫瘤。
18. 如申請專利範圍第11或15項所述之免疫酵素測定套組，可用於同時預測至少2種惡性腫瘤風險或用於同時篩檢是否罹患至少2種惡性腫瘤。
19. 如申請專利範圍第18項所述之免疫酵素測定套組，其中該2種惡性腫瘤係肺癌及婦科惡性腫瘤。