CN115877006A - 卵巢癌相关的生物标志物及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种卵巢癌的生物标志物，所述生物标志物为自身抗体组合或自身抗体与肿瘤抗原的组合。本发明还提供用于检测该生物标志物的重组抗原组合或重组抗原与重组抗体的组合、包含该组合的试剂盒，以及相应的检测或诊断方法。
Description
技术领域
本发明涉及生物技术和医学诊断领域，具体而言，本发明涉及一种卵巢癌的生物标志物、针对其的检测试剂以及相应地它们在卵巢癌检测中的应用。
背景技术
对于一般女性而言，卵巢癌在其一生中发生的可能性约为1.3％；然而，它是所有妇科恶性肿瘤中致死率最高的。卵巢癌的发病率随着年龄的增长而增加，特别是在45岁之后；流行病学统计确诊时的中位年龄为63岁。2018年，全球约有295,414例新确诊患者，并且约有184,799例确诊患者死于卵巢癌。卵巢癌是全球女性因癌症死亡的第八大原因。
由下面的一组数据可以容易地理解开展卵巢癌早期检测的必要性：如果卵巢癌在I期(即它只影响到卵巢)时得到有效治疗，那么它的治愈率可以达到90％以上；如果这个疾病发展到II期(即它的影响扩散至骨盆)时得到治疗，那么患者的5年生存率可以达到70％；如果当它发展III或IV期(即它扩散至骨盆以外)时再进行治疗，那么患者的长期生存率约为20％甚至更低。不尽如人意的是，目前只有20％的卵巢癌患者在I至II期时得到及时诊治，大多数患者被确诊时已经发展至III期(51％)和IV期(29％)。总体而言，全球范围内卵巢癌5年生存率在30％至40％之间，这个数字在过去20年间仅仅增长了2％至4％。除此之外，70％的晚期上皮性卵巢癌患者在治疗之后会复发。一旦复发，之后的生存时间非常短。计算机模拟分析显示如果能在卵巢癌发展到临床阶段之前进行早期检测，那么患者生存率将提升10％至30％，从卫生经济学角度来看这是非常合算的。
卵巢癌可以分为上皮性卵巢癌(Epithelial Ovarian Cancers，EOCs)和非上皮性卵巢癌，其中上皮性卵巢癌是最普遍的类型，占所有病例的90％左右。上皮性卵巢癌的细胞来源于覆盖在卵巢、浆膜下包涵性囊肿、或输卵管纤维状末端表面的上皮细胞。这些原本正常的细胞转化为癌细胞后所形成的肿瘤可以分为浆液性瘤、粘液性瘤、子宫内膜样瘤、透明细胞瘤等。上皮性卵巢癌根据临床病理特征可以进一步分为I类和II类EOCs。I类EOCs通常恶性程度低、确诊时为早期、生长缓慢、死亡率较低，病理上通常呈现为低恶性程度的浆液性瘤、子宫内膜样瘤。I类EOCs一般是从良性病变发展而来，例如从子宫内膜异位症。II类EOCs通常恶性程度高、在晚期表现出症状、组织染色的分化程度低，包括高恶性程度的浆液性瘤、癌肉瘤等，它们生长迅速，患者生存率较低。大多数II类EOCs伴随着p53基因突变，除了会发展成盆腔恶性肿瘤，它还会向网膜和肠系膜中转移生长。另有约10％的卵巢癌病例属于非上皮性癌症，它包括生殖细胞瘤、性索间质肿瘤、卵巢肉瘤等。
卵巢癌患者中85％的病例没有遗传方面的风险因素。由于卵巢癌筛查的结果影响后续是否需要外科手术治疗，因此有研究建议检测的阳性预测值(PPV)需要大于10％以平衡筛查所带来的益处和不必要的手术危害，低于10％的PPV被认为是不可接受的。迄今为止，经阴道超声检查(transvaginal ultrasonography，TVUS)和检测血清中癌抗原125(Cancer Antigen 125，CA125)水平是最常见的卵巢癌检测方式，它们或单独、或联合使用。然而，这两种方法都有局限性，使它们不适合筛查一般人群。TVUS的诊断能力较差，据一项正在进行的卵巢癌筛查研究报道，其对原发性卵巢癌和输卵管癌的敏感性为84.9％，特异性为98.2％，但是阳性预测值仅为5.3％；因此，TVUS会建议更多的疑似个体接受手术治疗，但是该手术相关的潜在并发症所带来的危害同样不能忽视。
CA125是粘蛋白家族中的一种高度糖基化的蛋白质，血清中35U/mL的CA125水平可以作为区分健康者和疾病患者的阈值。虽然它可以有效识别80％的晚期卵巢癌疾病患者，但CA125仅在不到50％的早期卵巢癌中升高。使用CA125作为分子指标的另一个问题是它在良性疾病中也升高，包括子宫内膜异位症、肌瘤、盆腔炎；以及在各种其他恶性肿瘤中同样升高。因此，CA125作为识别早期卵巢癌生物标志物的用途是有限的。
所以，还需要发现具有高特异性和灵敏度的新型卵巢癌生物标志物。目前为止，文献中已经报道了30多种卵巢癌的生物标志物。绝大多数是癌组织产生的蛋白质，可以通过血液检测在患者的样本中观察到水平异常。这些蛋白质作为生物标志物的一个主要障碍是无法在癌症发展的早期阶段检测到它们。这是由于早期癌性病变的组织较小，所分泌的蛋白质水平较低；此外血清中蛋白质的动态范围很大(可以达到12个数量级)，这会影响这类低丰度蛋白质的检测。同时，英国卵巢癌筛查联合试验(UKCTOCS)发现现有的卵巢癌筛查方式(包括生物标志物和影像学手段)对降低卵巢癌死亡率的效果并不明显。已知癌症具有异质性。当前筛查的结果说明现有的筛查对恶性程度高、致死率高的卵巢癌并不敏感，没有对卵巢癌患者的病理分级进行区分的能力。
针对肿瘤相关抗原(Tumor-associated antigens，TAAs)的自身抗体(Tumor-associated autoantibodies，TAABs)可以作为更敏感的生物标志物。肿瘤相关抗原是肿瘤组织特异性分泌的异常蛋白质或多肽，它们是因为癌症发展过程中所发生的蛋白质表达失调、突变或异常翻译后修饰而产生的，并进入血液循环系统，最终它们引起自身免疫反应，因此而产生的自身抗体便是TAABs。TAABs具有三种特性使其成为卵巢癌生物标志物的理想候选者。首先，它们可以在疾病的早期阶段被检测到，这是因为TAABs由少量肿瘤自身抗原激活B淋巴细胞就可以产生，并可以通过体液免疫反应导致免疫信号放大。其次，TAABs对其他分子所经历的蛋白质水解和代谢具有天然抗性，这要归因于它们具有大约21天的长半衰期。这种稳定性使针对它们的检测可靠性和重复性更高，促进它们在疾病检测中的使用。最后，自身抗体存在于患者血清中，因此可以通过相对成熟的技术进行分析，并对受检者产生较微小创伤。
Gadducci等人报道了卵巢癌患者的血液循环系统中存在p53蛋白的抗体。使用酶联免疫吸附试验(ELISA)，他们发现术前在30名上皮性卵巢癌I-II期患者中有3名(10.0％)存在血清p53抗体阳性情况，56名III-IV期患者中有15名(26.8％)p53抗体阳性。在分化程度较高的肿瘤患者体内，即使是晚期(III-IV)患者，也未发现p53抗体阳性。然而，在中度和低分化肿瘤患者中观察到p53抗体阳性率为30.6％。Vogl等人进行了一项临床队列研究，包括113名卵巢癌患者、15名交界性肿瘤患者和117名卵巢良性肿瘤患者。使用高度纯化并复性p53蛋白分子进行ELISA分析，发现卵巢癌患者中p53抗体的阳性率为19％(21/113)，而未在卵巢交界性或良性肿瘤患者中观察到p53抗体阳性。这些发现表明，p53抗体对恶性卵巢肿瘤具有高度特异性，并且与卵巢癌恶性程度相关。p53自身抗体是被关注得最早和最多的分子，在卵巢癌的研究中也陆续有其他自身抗体被发现，例如抗HOXB7、抗STIP-1、抗SPAG9和抗IL-8等。同时研究也显示，任何一种单一自身抗体在早期卵巢癌中的阳性率都是有限的，如果将它们单独地应用于早期卵巢癌检测，势必效果不理想。相比之下，同时检测多种自身抗体可以提高灵敏度，而不会显著影响特异性，这已经被广泛接受。除了不同的自身抗体标志物相互结合之外，癌症早检模型还可以将自身抗体标志物与常规肿瘤标志物相结合，例如Lokshin等人将IL-8抗体和CA125测定的结合可以使卵巢癌检测的效能增加，这表明自身抗体应用于早期卵巢癌检测还有很大的潜在价值尚未挖掘。
卵巢癌的相关抗原所引发的自身抗体生成，这一特征可用于鉴定参与卵巢癌发病机制的大量肿瘤抗原分子。除此之外，因此形成的自身抗体库还可以被用于开展卵巢癌的早期检测工作。目前的研究已证明肿瘤自身抗体在卵巢癌肿瘤负荷较低的早期阶段具有临床检测的使用价值，而且肿瘤自身抗体组合可能为诊断筛查测试提供更好的灵敏度和特异性。使用血检的方式进行肿瘤早检是一种简单的、非侵入性的、低成本的免疫测定，有利于在人群中推而广之。
总结以上表明，自身抗原/抗体有可以成为早期卵巢癌的新型标志物。为了开发更有效的卵巢癌抗原/抗体组合标志物，需要进一步的高质量研究在大型独立样本中开展，并可以尝试不同类型的标志物结合使用。还应该在研究中注意的是受试者应该包含较多的早期患者，合理选择对照人群，并需注意研究之间结果的可比较性。
发明内容
早期检测卵巢癌的临床意义在于肿瘤发现的越早期，肿瘤病人的预后情况更好。本发明要解决的技术问题是，开发一种以血液为检测对象即能够敏感地发现早期卵巢癌的检测方法。
为了解决上述技术问题，本发明通过检测卵巢癌患者血液中针对不同靶点的自身抗体以及抗原标志物，最终鉴定出了一组可用于筛查卵巢癌、尤其是早期患者的自身抗体/抗原分子组合。该分子组合作为生物标志物，在特别是早期卵巢癌中有足够高的灵敏度，尤其是在实验的中国人群中；同时还具有足够高的检测特异性。
因此，本发明的一个目的是提供一种卵巢癌的生物标志物，其为自身抗体/抗原组合。
基于该自身抗体/抗原组合作为生物标志物，本发明的另一个目的是提供用于检测该自身抗体/抗原组合的试剂，例如抗原蛋白组合；以及提供该自身抗体/抗原组合或检测试剂在制备用于卵巢癌的患病风险预测、筛查、预后评估、治疗效果监测或复发监测等产品中的用途。
本发明的再一个目的是提供试剂盒以及相应地用于卵巢癌的患病风险预测、筛查、预后评估、治疗效果监测或复发监测等的方法。
本发明的技术方案如下。
一方面，本发明提供一种卵巢癌的生物标志物，所述生物标志物为(i)自身抗体组合或(ii)自身抗体与肿瘤抗原的组合。
在本发明的上下文中，“自身抗体”是指人体内存在的抗相应蛋白或抗原的抗体。在本发明的上下文中，术语“抗原”、“肿瘤抗原”、“肿瘤相关抗原”或“蛋白”可互换使用。本发明所涉及的抗原或蛋白均为本领域已知蛋白。
本发明提供的生物标志物为(i)自身抗体组合，并且所述自身抗体组合包括抗以下肿瘤抗原的自身抗体：TRIM21。
进一步地，所述自身抗体组合还可以包括抗以下肿瘤抗原的自身抗体中的一种或多种(例如两种、三种、四种、五种、六种、七种、八种、九种)：P53、HIP1、Annexin1、GNAS、DBT、Tom1L2、YWHAZ、ZNF768、FXR1。
所述肿瘤抗原为本领域已知蛋白，具有如下登记号(UniProtKB数据库)：
TRIM21：P19474；
P53：P04637；
HIP1：O00291；
Annexin1：P04083；
GNAS：O95467；
DBT：Q5VVL7；
Tom1L2：Q6ZVM7；
YWHAZ：P63104；
ZNF768：Q9H5H4；
FXR1：P51114。
优选地，所述自身抗体组合还可以包括抗以下肿瘤抗原的自身抗体：P53。进一步地，所述自身抗体组合还可以包括抗以下肿瘤抗原的自身抗体：HIP1。进一步地，所述自身抗体组合还可以包括抗以下肿瘤抗原的自身抗体：GNAS。进一步地，所述自身抗体组合还可以包括抗以下肿瘤抗原的自身抗体：DBT。进一步地，所述自身抗体组合还可以包括抗以下肿瘤抗原的自身抗体：Annexin1。进一步地，所述自身抗体组合还可以包括抗以下肿瘤抗原的自身抗体：FXR1、YWHAZ或Tom1l2。
根据本发明的具体实施方式，所述自身抗体组合包括分别抗以下肿瘤抗原的自身抗体：
(1)TRIM21；
(2)TRIM21、P53、HIP1；
(3)TRIM21、P53、HIP1、GNAS；
(4)TRIM21、P53、HIP1、GNAS、DBT；
(5)TRIM21、P53、HIP1、GNAS、DBT、Annexin1；
(6)TRIM21、P53、HIP1、GNAS、DBT、Annexin1、FXR1；
(7)TRIM21、P53、HIP1、GNAS、DBT、Annexin1、YWHAZ；或
(8)TRIM21、P53、HIP1、GNAS、DBT、Annexin1、Tom1l2。
任选地，本发明提供的所述自身抗体组合还可包括分别抗以下肿瘤抗原的自身抗体中的一种或多种：Trim24、MAGEC1、SEC16和PTGFR。
所述肿瘤抗原为本领域已知蛋白，具有如下登记号(UniProtKB数据库)：
Trim24：O15164；
MAGEC1：O60732；
SEC16：O15027；
PTGFR：P43088。
或者，本发明提供的生物标志物为(ii)自身抗体与肿瘤抗原的组合，并且所述自身抗体组合包括抗TRIM21的自身抗体，所述肿瘤抗原包括CA125和HE4。
所述肿瘤抗原为本领域已知蛋白，具有如下登记号(UniProtKB数据库)：
CA125：Q8WXI7；
HE4：Q14508。
进一步地，所述自身抗体与肿瘤抗原的组合还可以包括抗以下肿瘤抗原的自身抗体中的一种或多种(例如两种、三种、四种、五种、六种、七种、八种、九种)：P53、HIP1、Annexin1、GNAS、DBT、Tom1L2、YWHAZ、ZNF768、FXR1。
优选地，所述自身抗体组合与肿瘤抗原的组合还可以包括抗以下肿瘤抗原的自身抗体：P53。进一步地，所述自身抗体与肿瘤抗原的组合还可以包括抗以下肿瘤抗原的自身抗体：HIP1。进一步地，所述自身抗体与肿瘤抗原的组合还可以包括抗以下肿瘤抗原的自身抗体：GNAS。进一步地，所述自身抗体与肿瘤抗原的组合还可以包括抗以下肿瘤抗原的自身抗体：DBT。进一步地，所述自身抗体与肿瘤抗原的组合还可以包括抗以下肿瘤抗原的自身抗体：Annexin1。进一步地，所述自身抗体与肿瘤抗原的组合还可以包括抗以下肿瘤抗原的自身抗体：FXR1、YWHAZ或Tom1l2。
根据本发明的具体实施方式，所述自身抗体与肿瘤抗原的组合包括：
(1)分别抗以下肿瘤抗原的自身抗体：TRIM21；和，肿瘤抗原：CA125、HE4；
(2)分别抗以下肿瘤抗原的自身抗体：TRIM21、P53、HIP1；和，肿瘤抗原：CA125、HE4；
(3)分别抗以下肿瘤抗原的自身抗体：TRIM21、P53、HIP1、GNAS；和，肿瘤抗原：CA125、HE4；
(4)分别抗以下肿瘤抗原的自身抗体：TRIM21、P53、HIP1、GNAS、DBT；和，肿瘤抗原：CA125、HE4；
(5)分别抗以下肿瘤抗原的自身抗体：TRIM21、P53、HIP1、GNAS、DBT、Annexin1；和，肿瘤抗原：CA125、HE4；
(6)分别抗以下肿瘤抗原的自身抗体：TRIM21、P53、HIP1、GNAS、DBT、Annexin1、FXR1；和，肿瘤抗原：CA125、HE4；
(7)分别抗以下肿瘤抗原的自身抗体：TRIM21、P53、HIP1、GNAS、DBT、Annexin1、YWHAZ；和，肿瘤抗原：CA125、HE4；或
(8)分别抗以下肿瘤抗原的自身抗体：TRIM21、P53、HIP1、GNAS、DBT、Annexin1、Tom1l2；和，肿瘤抗原：CA125、HE4。
在本发明的上下文中，所述自身抗体和/或肿瘤抗原为受试者的样本例如全血、血清、血浆、组织或细胞、组织间隙液、脑脊液或尿液中的自身抗体和/或肿瘤抗原；优选地，所述组织或细胞为卵巢癌组织或细胞或者癌旁组织或细胞。
在本发明的上下文中，所述受试者为哺乳动物，优选为灵长类哺乳动物，更优选为人。
在本发明的上下文中，所述自身抗体为IgA(例如IgA1、IgA2)、IgM或IgG(例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4)。
在本发明的上下文中，卵巢癌为任何病理亚型或分期的卵巢癌。优选地，所述卵巢癌按照病理亚型可以为浆液性瘤、粘液性瘤、子宫内膜样瘤、透明细胞瘤，优选浆液性瘤；按照病理分期可以为Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期，优选Ⅰ期、Ⅱ期卵巢癌。
根据本发明，该生物标志物即自身抗体组合或自身抗体与肿瘤抗原的组合可以在受试者的样本(例如血浆或血清)中进行检测。在本发明中，自身抗体或抗原的“存在”或“不存在”与“阳性”或“阴性”可互换使用；对此进行判断为本领域常规技术。例如，可以通过导致该组合中任何自身抗体出现的肿瘤抗原与其之间的抗原抗体特异性反应进行检测。
因此相应地，另一方面，本发明还提供一种用于检测本发明的生物标志物的试剂。
取决于具体技术手段，所述试剂可以是用于酶联免疫吸附法(ELISA)、蛋白/肽段芯片检测、免疫印迹、微珠免疫检测或微流控免疫检测等的试剂。优选地，所述试剂用于通过抗原抗体反应对本发明的生物标志物进行检测，例如通过ELISA或荧光或化学发光免疫检测。
在这一方面，所述试剂可以是(I)重组抗原组合或(II)重组抗原与重组抗体的组合。在本发明中，术语“重组抗原”与术语“重组抗原蛋白”、“重组蛋白”可互换使用。
本发明提供的试剂为(I)重组抗原组合，并且所述重组抗原组合包括以下重组抗原蛋白：TRIM21。
进一步地，所述重组抗原组合还可以包括以下重组抗原蛋白中的一种或多种(例如两种、三种、四种、五种、六种、七种、八种、九种)：P53、HIP1、Annexin1、GNAS、DBT、Tom1L2、YWHAZ、ZNF768、FXR1。
优选地，所述重组抗原组合还可以包括以下重组抗原蛋白：P53。进一步地，所述自身抗体组合还可以包括以下重组抗原蛋白：HIP1。进一步地，所述自身抗体组合还可以包括以下重组抗原蛋白：GNAS。进一步地，所述自身抗体组合还可以包括以下重组抗原蛋白：DBT。进一步地，所述自身抗体组合还可以包括以下重组抗原蛋白：Annexin1。进一步地，所述自身抗体组合还可以包括以下重组抗原蛋白：FXR1、YWHAZ或Tom1l2。
根据本发明的具体实施方式，所述重组抗原组合包括以下重组抗原蛋白：
(1)TRIM21；
(2)TRIM21、P53、HIP1；
(3)TRIM21、P53、HIP1、GNAS；
(4)TRIM21、P53、HIP1、GNAS、DBT；
(5)TRIM21、P53、HIP1、GNAS、DBT、Annexin1；
(6)TRIM21、P53、HIP1、GNAS、DBT、Annexin1、FXR1；
(7)TRIM21、P53、HIP1、GNAS、DBT、Annexin1、YWHAZ；或
(8)TRIM21、P53、HIP1、GNAS、DBT、Annexin1、Tom1l2。
任选地，本发明提供的所述重组抗原组合还可包括以下重组抗原蛋白中的一种或多种：Trim24、MAGEC1、SEC16和PTGFR。
或者，本发明提供的试剂为(II)重组抗原与重组抗体的组合，并且所述重组抗原包括重组抗原蛋白TRIM21，所述重组抗体包括抗CA125抗体和抗HE4抗体。
进一步地，所述重组抗原与重组抗体的组合还可以包括以下重组抗原蛋白的一种或多种(例如两种、三种、四种、五种、六种、七种、八种、九种)：P53、HIP1、Annexin1、GNAS、DBT、Tom1L2、YWHAZ、ZNF768、FXR1。
优选地，所述重组抗原与重组抗体的组合还可以包括以下重组抗原蛋白：P53。进一步地，所述自身抗体与肿瘤抗原的组合还可以包括以下重组抗原蛋白：HIP1。进一步地，所述自身抗体与肿瘤抗原的组合还可以包括以下重组抗原蛋白：GNAS。进一步地，所述自身抗体与肿瘤抗原的组合还可以包括以下重组抗原蛋白：DBT。进一步地，所述自身抗体与肿瘤抗原的组合还可以包括以下重组抗原蛋白：Annexin1。进一步地，所述自身抗体与肿瘤抗原的组合还可以包括以下重组抗原蛋白：FXR1、YWHAZ或Tom1l2。
根据本发明的具体实施方式，所述重组抗原与重组抗体的组合包括：
(1)重组抗原蛋白：TRIM21；和，抗CA125抗体、抗HE4抗体；
(2)重组抗原蛋白：TRIM21、P53、HIP1；和，抗CA125抗体、抗HE4抗体；
(3)重组抗原蛋白：TRIM21、P53、HIP1、GNAS；和，抗CA125抗体、抗HE4抗体；
(4)重组抗原蛋白：TRIM21、P53、HIP1、GNAS、DBT；和，抗CA125抗体、抗HE4抗体；
(5)重组抗原蛋白：TRIM21、P53、HIP1、GNAS、DBT、Annexin1；和，抗CA125抗体、抗HE4抗体；
(6)重组抗原蛋白：TRIM21、P53、HIP1、GNAS、DBT、Annexin1、FXR1；和，抗CA125抗体、抗HE4抗体；
(7)重组抗原蛋白：TRIM21、P53、HIP1、GNAS、DBT、Annexin1、YWHAZ；和，抗CA125抗体、抗HE4抗体；或
(8)重组抗原蛋白：TRIM21、P53、HIP1、GNAS、DBT、Annexin1、Tom1l2；和，抗CA125抗体、抗HE4抗体。
又一方面，本发明提供所述生物标志物或试剂在制备用于卵巢癌的患病风险预测、筛查、预后评估、治疗效果监测或复发监测的产品中的用途，或者在制备用于检测受试者样本中自身抗体和/或肿瘤抗原的浓度的产品中的用途。
在本发明的上下文中，所述样本为受试者的样本例如全血、血清、血浆、组织或细胞、组织间隙液、脑脊液或尿液中的自身抗体和/或肿瘤抗原；其中优选地，所述组织或细胞为卵巢癌组织或细胞或者癌旁组织或细胞。
优选地，所述产品为试剂盒；更优选地，所述试剂盒是用于酶联免疫吸附法(ELISA)、蛋白/肽段芯片检测、免疫印迹、微珠免疫检测或微流控免疫检测等的试剂盒；优选地，所述试剂盒用于通过抗原抗体反应对所述生物标志物进行检测，例如为ELISA试剂盒或荧光或化学发光免疫检测试剂盒。
再一方面，本发明提供一种试剂盒，其包含本发明所述的试剂。
取决于具体技术手段，所述试剂盒可以是用于酶联免疫吸附法(ELISA)、蛋白/肽段芯片检测、免疫印迹、微珠免疫检测或微流控免疫检测等的试剂盒。优选地，所述试剂盒用于通过抗原抗体反应对本发明的生物标志物进行检测，例如为ELISA试剂盒或荧光或化学发光免疫检测试剂盒。
因此，优选地，试剂盒为酶联免疫吸附法(ELISA)检测试剂盒。即，采用该试剂盒，通过酶联免疫吸附法来检测受试者的样本中所述生物标志物是否是阳性的。相应地，所述试剂盒还可包括用于对所述生物标志物进行ELISA检测的所需其他组分，这些均是本领域公知的。出于检测目的，例如，试剂盒中的重组抗原蛋白和/或重组抗体可连接有标签肽，例如His标签、链霉亲和素标签、Myc标签；又如，该试剂盒可以包括固相载体，如具有可固定蛋白和/或抗体的微孔的载体，如酶标板；或者微珠或磁珠固相载体。还可以包括用于将重组抗原蛋白和/或重组抗体固定于固相载体上的吸附蛋白、血液如血清的稀释液、洗涤液、带有酶标记的二抗或者荧光或化学发光的物质的二抗、显色液、终止液等。通过间接或直接包被在固相载体表面的重组抗原蛋白和/或重组抗体，和待测样本中的自身抗体和/或肿瘤抗原进行反应形成抗原-抗体复合物的原理来检测样本中的相应自身抗体和/或肿瘤抗原的浓度。
还一方面，本发明提供一种用于卵巢癌的患病风险预测、筛查、预后评估、治疗效果监测或复发监测的方法，其包括以下步骤：
(1)对来自受试者的样本进行本发明提供的自身抗体组合或者自身抗体与肿瘤抗原的组合中的每个自身抗体和/或肿瘤抗原的定量；
(2)将所述自身抗体和/或肿瘤抗原的量与参考阈值进行比较，在其高于参考阈值时，确定所述受试者具有卵巢癌患病风险、患有卵巢癌、预后不良、治疗效果差或具有复发风险。
在步骤(1)中，所述定量包括采用本发明提供的试剂(即重组抗原组合或重组抗原与重组抗体的组合)或包含该试剂的试剂盒对所述自身抗体组合或者自身抗体与肿瘤抗原的组合中的每个自身抗体和/或重组抗原进行检测。
在步骤(2)中，所述参考阈值可以是来自健康人或健康人群的参照水平；例如，可以被定义为经身体检查确认未患有癌症的人群的平均值加2个标准偏差。
目前已提出采用肿瘤抗原或肿瘤自身抗体作为卵巢癌早期监测方式，但是二者均有不足之处。例如，以肿瘤抗原作为卵巢癌早期检测方式，特异性不高，在其他恶性肿瘤、良性增生和某些炎症情况下也可以观察到；对早期卵巢癌的灵敏度有限，在肝脏和肾脏等的一些良性疾病以及其他癌症也能观察到；抗原水平受肿瘤负荷影响，且单个指标的灵敏度相对较低，在早期筛查中的价值有限。仅以肿瘤自身抗体作为卵巢癌早期检测方式时，则由于肿瘤的异质性，单一自身抗体不能独立作为有力的临床生物标志物；并且，单纯的自身抗体检测灵敏性有限，需要与其他类型的标志物结合，例如抗原，保证特异性的条件下，开发针对卵巢癌的敏感的检测分子组合；此外，不同人种的遗传背景使得分子组合有不同的适用性，因此针对中国人群，即需开发特定的检测组合。
与现有技术相比，本发明提供了一种针对卵巢癌的生物标志物，其为自身抗体组合或者重组抗原与重组抗体的组合。实验证明，本发明的各个技术方案具有如下有益效果：
(1)经实验，本发明提供的自身抗体单独使用时在肿瘤患者的分布灵敏度在4％～16％，处于低灵敏度，当将所述单一自身抗体组合在一起后，灵敏度能从16％上升至40％以上。
(2)发现当自身抗体组合为anti-TRIM21、anti-P53、anti-HIP1、anti-GNAS、anti-DBT、anti-Annexin1和anti-Tom1l2时，在训练列队中其灵敏度能达到55.95％，特异性为84.78％；在验证列队中其灵敏度为53.75％、88.06％。说明本发明所述的自身抗体组合作为生物标志物应用到卵巢癌患者的诊断筛查中，具有较高的重复稳定性。
(3)当在本发明提供的自身抗体组合的基础上加入CA125和HE4作为新的生物标志物组合时，本发明的发明人意外地发现，同时检测卵巢癌患者血清或血浆中本发明所述的自身抗体和抗原CA125以及抗原HE4，具有60％以上的灵敏度和80％以上的特异性。
(4)本发明提供的生物标志物在用于卵巢癌的诊断中无论上皮型卵巢癌还是非上皮型卵巢癌都具有较高的灵敏度和特异性。
附图说明
以下，结合附图来详细说明本发明的实施方案，其中：
图1为14种自身抗体在训练队列人群中的水平分布散点图。
图2为10种自身抗体在验证队列人群中的水平分布散点图。
图3示出了不同自身抗体组合在训练队列和验证队列中的受试者工作特征曲线(Receiver Operator Characteristic Curve，ROC曲线)；其中：
3A：anti-TRIM21+anti-P53+anti-HIP1+anti-GNAS+anti-DBT+anti-Annexin1+anti-FXR1，训练队列；
3B：anti-TRIM21+anti-P53+anti-HIP1+anti-GNAS+anti-DBT+anti-Annexin1+anti-FXR1，验证队列；
3C：anti-TRIM21+anti-P53+anti-HIP1+anti-GNAS+anti-DBT+anti-Annexin1+anti-YWHAZ，训练队列；
3D：anti-TRIM21+anti-P53+anti-HIP1+anti-GNAS+anti-DBT+anti-Annexin1+anti-YWHAZ，验证队列；
3E：anti-TRIM21+anti-P53+anti-HIP1+anti-GNAS+anti-DBT+anti-Annexin1+anti-Tom1l2，训练队列；
3F：anti-TRIM21+anti-P53+anti-HIP1+anti-GNAS+anti-DBT+anti-Annexin1+anti-Tom1l2，验证队列。
图4示出了2种肿瘤抗原CA125+HE4在验证队列中的ROC曲线。
图5示出了自身抗体与肿瘤抗原的组合在验证队列中的ROC曲线，其中：
5A：anti-TRIM21+anti-P53+anti-HIP1+anti-GNAS+anti-DBT+anti-Annexin1+anti-FXR1+CA125+HE4；
5B：anti-TRIM21+anti-P53+anti-HIP1+anti-GNAS+anti-DBT+anti-Annexin1+anti-YWHAZ+CA125+HE4；
5C：anti-TRIM21+anti-P53+anti-HIP1+anti-GNAS+anti-DBT+anti-Annexin1+anti-Tom1l2+CA125+HE4。
图6示出了自身抗体与肿瘤抗原的组合在不同分型卵巢癌中的ROC曲线，其中：
6A：anti-TRIM21+anti-P53+anti-HIP1+anti-GNAS+anti-DBT+anti-Annexin1+anti-Tom1l2+CA125+HE4，在上皮型卵巢癌中；
6B：anti-TRIM21+anti-P53+anti-HIP1+anti-GNAS+anti-DBT+anti-Annexin1+anti-Tom1l2+CA125+HE4，在非上皮型卵巢癌中。
图7示出了自身抗体与肿瘤抗原的组合在不同病理分级卵巢癌中的ROC曲线，其中：
7A：anti-TRIM21+anti-P53+anti-HIP1+anti-GNAS+anti-DBT+anti-Annexin1+anti-Tom1l2+CA125+HE4，在高级别卵巢癌中；
7B：anti-TRIM21+anti-P53+anti-HIP1+anti-GNAS+anti-DBT+anti-Annexin1+anti-Tom1l2+CA125+HE4，在非高级别卵巢癌中。
图8示出了自身抗体与肿瘤抗原的组合anti-TRIM21+anti-P53+anti-HIP1+anti-GNAS+anti-DBT+anti-Annexin1+anti-Tom1l2+CA125+HE4区分良性疾病和卵巢癌患者的ROC曲线。
具体实施方式
本发明中涉及以下实验操作或定义。应注意，本发明还可采用本领域其他常规技术进行实施，并不仅限于以下实验操作。
(一)重组抗原蛋白的制备
将肿瘤抗原的cDNA片段克隆到含6XHis标记的PET28(a)表达载体上。在抗原的N端或C端，引入链霉亲和素蛋白或类似物(结合生物素的标签蛋白)。获得的重组表达载体转化大肠杆菌进行表达。上清表达的蛋白通过Ni-NTA亲和柱和离子柱进行纯化。当蛋白表达在包涵体内，用6M盐酸胍对蛋白进行变性处理，并在体外按照标准方法进行复性折叠，然后通过6XHis标签进行Ni-NTA亲和柱纯化，获得抗原蛋白。
(二)血清或血浆的制备和保存
卵巢癌患者血清或血浆在患者最初诊断为卵巢癌，尚未接受任何放化疗及手术治疗时收集。血浆或血清按标准临床程序制备，置于-80℃冰箱中长期保存。
(三)ELISA检测
通过酶联免疫吸附测定(ELISA)定量样本中自身抗体标志物的浓度。纯化的肿瘤抗原通过其标签链霉亲和素或类似物固定到微孔表面。微孔预包被生物素标记的牛血清白蛋白(BSA)。血清或血浆样本用磷酸盐缓冲稀释1:110倍，加入微孔进行反应(50毫升/孔)。用洗液冲洗未结合的血清或血浆成分后，每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)偶联的抗-人IgG进行反应。然后加入反应底物TMB(3,3',5,5'-四甲基联苯胺)进行显色。加入终止溶液(1NHCl)，吸光度为450nm单光谱进行酶标仪进行读值(OD)。此时固相载体上带有的酶量与标本中受检物质的量正相关，酶催化底物成为有色产物。根据颜色反应的程度进行该自身抗体的定性或定量。用标准曲线定量血清自身抗体浓度。
通过夹心法酶联免疫吸附测定定量样本中抗原标志物的浓度。将特异性抗体与固相载体连接，形成固相抗体，洗涤除去未结合的抗体及杂质；加受检标本，即血清或血浆样本用磷酸盐缓冲稀释1:110倍，加入微孔进行反应(50毫升/孔)，使之与固相抗体接触反应一段时间，让标本中的抗原与固相载体上的抗体结合，形成固相抗原复合物。洗涤除去其他未结合的物质。加辣根过氧化物酶(HRP)偶联的抗-人IgG进行反应。然后加入反应底物TMB(3,3',5,5'-四甲基联苯胺)进行显色。加入终止溶液(1N HCl)，吸光度为450nm单光谱进行酶标仪进行读值(OD)。此时固相载体上带有的酶量与标本中受检物质的量正相关。夹心式复合物中的酶催化底物成为有色产物。根据颜色反应的程度进行该抗原的定性或定量。
(四)自身抗体和抗原蛋白的临界值(cutoff值)
自身抗体和抗原水平的cutoff值被定义为等于对照组(所述对照组为经身体检查确认未患有癌症的人群)中健康对照队列的平均值加2个标准偏差(SD)。
(五)单个自身抗体和抗原蛋白的阳性、阴性判断
对于每种自身抗体和抗原蛋白测定，阳性反应定义为对样本中自身抗体或抗原蛋白的水平进行定量后，将其与cutoff值进行比较，≥cutoff值为阳性；相应地，阴性反应定义为＜cutoff值为阴性。
(六)自身抗体和/或抗原蛋白组合的阳性判断
由于单个自身抗体和/或单个抗原蛋白的阳性率低，为了增加自身抗体和/或抗原蛋白检出的阳性率，分析结果时联合多个自身抗体和/或联合多个抗原蛋白的结果来判断预测效果。规则是：(1)在样本中检测多个自身抗体，只要有其中一个或者多个自身抗体显示阳性，则判断抗体组合结果为阳性；而如果所有的自身抗体均为阴性，则判断结果为阴性。(2)在样本中检测多个抗原蛋白，只要有其中一个或多个抗原蛋白显示为阳性，则判断结果为阳性；而如果所有的抗原蛋白为阴性，则判断结果为阴性。(3)在样本中同时检测多个自身抗体和多个抗原蛋白，只要其中有一个或多个自身抗体和/或抗原蛋白为阳性，则判断结果为阳性；而如果所有的抗体和抗原蛋白为阴性，则判断结果为阴性。
(七)统计分析方法
使用GraphPad Prism v.6(Graphpad Prism软件，加利福尼亚州圣地亚哥)和针对Windows的IBM SPSS Statistics 23(IBM，纽约，纽约)，使用Mann–Whitney U检验对两组进行了统计学分析。在分析每个参数之间的关系时，执行了Spearman的相关分析。
(八)灵敏度和特异性判断
灵敏度：金标准诊断有病的全部病例中，自身抗体、自身抗体组合、抗原蛋白、抗原蛋白组合和自身抗体与抗原蛋白的组合检测结果为阳性的病例占该全部病例的比例。
特异性：金标准诊断无病的全部受试者中，自身抗体、自身抗体组合、抗原蛋白、抗原蛋白组合和自身抗体与抗原蛋白的组合检测结果为阴性的受试者占该全部受试者的比例。
以下参照具体的实施例来说明本发明。本领域技术人员能够理解，这些实施例仅用于说明本发明，其不以任何方式限制本发明的范围。样本采集已经受试者或患者知情同意，且获得监管部门的批准。
下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的原料、试剂材料等，如无特殊说明，均为市售购买产品。
实施例1患者血清样本中单一自身抗体灵敏度和特异性检测
本实施例包括健康体检人群50例、卵巢癌患者90例和良性卵巢疾病患者40例，作为训练队列，进行自身抗体标志物的筛选。健康体检人群来自不少于3个不同体检中心。所有的卵巢癌患者血清都是在患者诊断为卵巢癌尚未接受任何放化疗及手术治疗时收集的，并在-80℃冰箱保存。卵巢癌患者信息见表1。
表1：训练队列卵巢癌患者特征
将卵巢癌抗原经过表达纯化后包被到96孔板表面，封闭后和稀释1:110倍的90位卵巢癌血清、良性卵巢疾病患者血清或体检对照人群血清反应，接着和抗人IgG抗体-HRP辣根过氧化氢酶反应，然后进行显色反应，并用酶标仪OD450nm波长检测。表2示出检测灵敏度和特异性。
表2：血清样本中单个自身抗体作为卵巢癌标志物的灵敏度和特异性
以上14种自身抗体在肿瘤组和对照组的水平分布散点图见图1。由于肿瘤患者免疫系统的强弱不同，加上肿瘤产生机理多样性，单个肿瘤自身抗体在肿瘤患者的分布灵敏度低，通常只有4％-16％之间。使用Mann Whitney test进行自身抗体在肿瘤组和对照组的水平分布的统计分析，发现抗P53、TRIM21、Annexin1和HIP1的抗体在肿瘤组和对照组的水平分布有显着不同(p<0.05)，其它抗体分子也在卵巢癌组中存在上升趋势。
实施例2单一自身抗体灵敏度和特异性在另一组患者血清样本中的检测
本实施例包括另一组独立的人群，其中健康体检人群75例、卵巢癌患者90例和良性卵巢疾病患者15例，作为验证队列，进行自身抗体标志物的筛选。健康体检人群来自不少于3个不同体检中心。所有的卵巢癌患者血清都是在患者诊断为卵巢癌尚未接受任何放化疗及手术治疗时收集的，并在-80℃冰箱保存。卵巢癌患者信息见表3。
表3：验证队列卵巢癌患者特征
考虑候选自身抗体分子在卵巢癌患者血清中的阳性率、重叠阳性检出、单独阳性贡献，在前一个实施例的基础上，对本实施例的人群筛查了抗P53、TRIM21、HIP1、Annexin1、GNAS、DBT、Tom1L2、YWHAZ、ZNF768、FXR1的自身抗体水平。如图2所示。在这组人群中，候选自身抗体的相对水平在卵巢癌患者血清中同样有上升趋势。
实施例3筛选自身抗体组合
根据单个候选自身抗体在独立人群中的检测情况，本发明的发明人选择特异性大于96％的候选抗体，在保证高特异性的前提下，结合抗体的单独阳性贡献(即排除重叠阳性检出率高的候选分子)，最大限度地使检测模型涵盖更多的卵巢癌患者，形成了不同的自身抗体组合，并使用对应的检测试剂对其进行检测，结果见表4。
表4：卵巢癌自身抗体组合的灵敏度和特异性
进一步地，绘制了三种抗体组合(1.anti-TRIM21+anti-P53+anti-HIP1+anti-GNAS+anti-DBT+anti-Annexin1+anti-FXR1；2.anti-TRIM21+anti-P53+anti-HIP1+anti-GNAS+anti-DBT+anti-Annexin1+anti-YWHAZ；3.anti-TRIM21+anti-P53+anti-HIP1+anti-GNAS+anti-DBT+anti-Annexin1+anti-Tom1l2)在训练队列(实施例1的人群)和验证队列(实施例2的人群)的受试者工作特征(ROC)曲线，如图3所示。
根据约登指数，从上述ROC曲线中计算出了每一种抗体组合检测卵巢癌的最佳灵敏度和特异性，以及曲线下面积(AUC)。Anti-TRIM21+anti-P53+anti-HIP1+anti-GNAS+anti-DBT+anti-Annexin1+anti-FXR1在训练/验证队列中的最佳灵敏度为50.00％/42.22％，特异性为84.44％/88.41％，AUC为0.6563/0.6555；Anti-TRIM21+anti-P53+anti-HIP1+anti-GNAS+anti-DBT+anti-Annexin1+anti-YWHAZ在训练/验证队列中的最佳灵敏度为54.44％/42.68％，特异性为89.13％/91.30％，AUC为0.6822/0.6951；Anti-TRIM21+anti-P53+anti-HIP1+anti-GNAS+anti-DBT+anti-Annexin1+anti-Tom1l2在训练/验证队列中的最佳灵敏度为55.95％/53.75％，特异性为84.78％/88.06％，AUC为0.7013/0.7533。
实施例4筛选自身抗体与抗原的组合
目前临床上采用的与卵巢癌相关的生物标志物为CA-125和HE4，本发明的发明人也对验证队列人群进行了这两种卵巢癌抗原标志物的检测。之后将这两种抗原标志物与所建立的抗体组合相结合，建立抗体与抗原搭配的卵巢癌检测模型。抗原检测的ROC曲线如图4所示。
当抗原(CA-125和HE4)与抗体相结合检测时，进一步提升了自身抗体检测卵巢癌的能力。如图5所示，为不同抗体组合与抗原结合时在验证队列的ROC曲线。
根据约登指数，计算了在验证队列单独使用抗体组合，或抗体、抗原结合使用，来检测卵巢癌的最佳检测能力，如表5所示。可以看出，抗原进一步增强了自身抗体对卵巢癌的检测能力。
表5：卵巢癌自身抗体组合、抗原组合、抗体抗原组合的灵敏度和特异性
实施例5抗原与抗体结合的组合对不同分型卵巢癌的检测能力
本发明的发明人对受试患者的组织病理进行分类，将其分为上皮型和非上皮型。对不同类型的患者，分析他们的血清检测数据。利用抗原抗体组合效果最好的一组(anti-TRIM21+anti-P53+anti-HIP1+anti-GNAS+anti-DBT+anti-Annexin1+anti-Tom1l2+CA-125+HE4)，分析其对不同分型卵巢癌的检测能力。如图6和表6所示，特异性为82.5％，灵敏度和曲线下面积相近，该检测模型对不同分型的卵巢癌患者没有显著偏好。
表6：上皮型和非上皮型卵巢癌抗体抗原组合的灵敏度
| 灵敏度(％) | AUC | |
| 上皮型 | 71.74 | 0.8359 |
| 非上皮型 | 61.36 | 0.8236 |
实施例6抗原与抗体结合的组合对不同分期卵巢癌的检测能力
本发明的发明人对受试患者进行分期分类，将其分为早期(I-II期)和晚期(III-IV期)。对不同分期的患者，分析他们的血清检测数据。利用抗原抗体组合效果最好的一组(anti-TRIM21+anti-P53+anti-HIP1+anti-GNAS+anti-DBT+anti-Annexin1+anti-Tom1l2+CA-125+HE4)，分析其对不同分期卵巢癌的检测能力。特异性为83.3％。如表7所示，在灵敏度和曲线下面积方面，该检测模型对晚期卵巢癌患者的检测能力略强于早期患者。
表7：早期和晚期卵巢癌抗体抗原组合的灵敏度
| 灵敏度(％) | AUC | |
| 早期 | 66.67 | 0.7778 |
| 晚期 | 83.33％ | 0.8776 |
实施例7抗原与抗体结合的组合对不同病理分级卵巢癌的检测能力
本发明的发明人对受试患者的病理分级进行分类，将其分为高级别卵巢癌和非高级别卵巢癌。对不同类型的患者，分析他们的血清检测数据。利用抗原抗体组合效果最好的一组(anti-TRIM21+anti-P53+anti-HIP1+anti-GNAS+anti-DBT+anti-Annexin1+anti-Tom1l2+CA-125+HE4)，分析其对不同病理分级卵巢癌的检测能力。如图7和表8所示，该组合对病理分级较高的卵巢癌患者具有更好的检测能力。
表8：高级别和非高级别卵巢癌抗体抗原组合的灵敏度和特异性
实施例8抗原与抗体结合的组合对卵巢癌和良性卵巢疾病的区别能力
本发明的发明人进一步对验证队列的卵巢癌患者和卵巢良性疾病患者的血清检测数据进行分析，发现本发明的抗原抗体结合的组合可以有效地区分卵巢恶性疾病和良性疾病，从而尽早发现卵巢恶性疾病，达到降低卵巢癌致死率的效果。从ROC曲线(图8)可以计算出，当以良性患者作为对照组时，灵敏度为64.63％，特异性为85.71％，曲线下面积达到0.8145。
以上对本发明具体实施方式的描述并不限制本发明，本领域技术人员可以根据本发明作出各种改变或变形，只要不脱离本发明的精神，均应属于本发明所附权利要求的范围。
Claims (15)
1.一种卵巢癌的生物标志物，所述生物标志物为(i)自身抗体组合或(ii)自身抗体与肿瘤抗原的组合。
2.根据权利要求1所述的生物标志物，其特征在于，所述生物标志物为(i)自身抗体组合，并且所述自身抗体组合包括抗以下肿瘤抗原的自身抗体：TRIM21；
优选地，所述自身抗体组合还可以包括抗以下肿瘤抗原的自身抗体中的一种或多种：P53、HIP1、Annexin1、GNAS、DBT、Tom1L2、YWHAZ、ZNF768、FXR1；
进一步优选地，所述自身抗体组合包括分别抗以下肿瘤抗原的自身抗体：
(1)TRIM21；
(2)TRIM21、P53、HIP1；
(3)TRIM21、P53、HIP1、GNAS；
(4)TRIM21、P53、HIP1、GNAS、DBT；
(5)TRIM21、P53、HIP1、GNAS、DBT、Annexin1；
(6)TRIM21、P53、HIP1、GNAS、DBT、Annexin1、FXR1；
(7)TRIM21、P53、HIP1、GNAS、DBT、Annexin1、YWHAZ；或
(8)TRIM21、P53、HIP1、GNAS、DBT、Annexin1、Tom1l2。
3.根据权利要求1或2所述的生物标志物，其特征在于，所述自身抗体组合还包括抗以下肿瘤抗原的自身抗体中的一种或多种：Trim24、MAGEC1、SEC16和PTGFR。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的生物标志物，其特征在于，所述生物标志物为(ii)自身抗体与肿瘤抗原的组合，并且所述自身抗体组合包括抗TRIM21的自身抗体，所述肿瘤抗原包括CA125和HE4；
优选地，所述自身抗体与肿瘤抗原的组合还可以包括抗以下肿瘤抗原的自身抗体中的一种或多种(例如两种、三种、四种、五种、六种、七种、八种、九种)：P53、HIP1、Annexin1、GNAS、DBT、Tom1L2、YWHAZ、ZNF768、FXR1；
进一步优选地，所述自身抗体与肿瘤抗原的组合包括：
(1)分别抗以下肿瘤抗原的自身抗体：TRIM21；和，肿瘤抗原：CA125、HE4；
(2)分别抗以下肿瘤抗原的自身抗体：TRIM21、P53、HIP1；和，肿瘤抗原：CA125、HE4；
(3)分别抗以下肿瘤抗原的自身抗体：TRIM21、P53、HIP1、GNAS；和，肿瘤抗原：CA125、HE4；
(4)分别抗以下肿瘤抗原的自身抗体：TRIM21、P53、HIP1、GNAS、DBT；和，肿瘤抗原：CA125、HE4；
(5)分别抗以下肿瘤抗原的自身抗体：TRIM21、P53、HIP1、GNAS、DBT、Annexin1；和，肿瘤抗原：CA125、HE4；
(6)分别抗以下肿瘤抗原的自身抗体：TRIM21、P53、HIP1、GNAS、DBT、Annexin1、FXR1；和，肿瘤抗原：CA125、HE4；
(7)分别抗以下肿瘤抗原的自身抗体：TRIM21、P53、HIP1、GNAS、DBT、Annexin1、YWHAZ；和，肿瘤抗原：CA125、HE4；或
(8)分别抗以下肿瘤抗原的自身抗体：TRIM21、P53、HIP1、GNAS、DBT、Annexin1、Tom1l2；和，肿瘤抗原：CA125、HE4。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的生物标志物，其特征在于，所述自身抗体和/或肿瘤抗原为受试者的样本例如全血、血清、血浆、组织或细胞、组织间隙液、脑脊液或尿液中的自身抗体；优选地，所述组织或细胞为卵巢癌组织或细胞或者癌旁组织或细胞；
优选地，所述受试者为哺乳动物，优选为灵长类哺乳动物，更优选为人；
优选地，所述自身抗体为IgA、IgM或IgG；
优选地，所述卵巢癌为任何病理亚型或分期的卵巢癌；优选地，所述卵巢癌按照病理亚型可以为浆液性瘤、粘液性瘤、子宫内膜样瘤、透明细胞瘤，优选浆液性瘤；按照病理分期可以为Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期，优选Ⅰ期、Ⅱ期卵巢癌。
6.一种用于检测如权利要求1至5中任一项所述的生物标志物的试剂。
7.根据权利要求6所述的试剂，其特征在于，所述试剂是用于酶联免疫吸附法(ELISA)、蛋白/肽段芯片检测、免疫印迹、微珠免疫检测或微流控免疫检测的试剂；
优选地，所述试剂用于通过抗原抗体反应对所述生物标志物进行检测，例如通过ELISA或荧光或化学发光免疫检测。
8.根据权利要求6或7所述的试剂，其特征在于，所述试剂为(I)重组抗原组合或(II)重组抗原与重组抗体的组合。
9.根据权利要求6至8中任一项所述的试剂，其特征在于，所述试剂为(I)重组抗原组合，并且所述重组抗原组合包括以下重组抗原蛋白：TRIM21；
优选地，所述重组抗原组合还可以包括以下重组抗原蛋白中的一种或多种：P53、HIP1、Annexin1、GNAS、DBT、Tom1L2、YWHAZ、ZNF768、FXR1；
进一步优选地，所述重组抗原组合包括以下重组抗原蛋白：
(1)TRIM21；
(2)TRIM21、P53、HIP1；
(3)TRIM21、P53、HIP1、GNAS；
(4)TRIM21、P53、HIP1、GNAS、DBT；
(5)TRIM21、P53、HIP1、GNAS、DBT、Annexin1；
(6)TRIM21、P53、HIP1、GNAS、DBT、Annexin1、FXR1；
(7)TRIM21、P53、HIP1、GNAS、DBT、Annexin1、YWHAZ；或
(8)TRIM21、P53、HIP1、GNAS、DBT、Annexin1、Tom1l2。
10.根据权利要求6至9中任一项所述的试剂，其特征在于，所述重组抗原组合还包括以下重组抗原蛋白中的一种或多种：Trim24、MAGEC1、SEC16和PTGFR。
11.根据权利要求6至10中任一项所述的试剂，其特征在于，所述试剂为(II)重组抗原与重组抗体的组合，并且所述重组抗原包括重组抗原蛋白TRIM21，所述重组抗体包括抗CA125抗体和抗HE4抗体；
优选地，所述重组抗原与重组抗体的组合还可以包括以下重组抗原蛋白的一种或多种：P53、HIP1、Annexin1、GNAS、DBT、Tom1L2、YWHAZ、ZNF768、FXR1；
进一步优选地，所述重组抗原与重组抗体的组合包括：
(1)重组抗原蛋白：TRIM21；和，抗CA125抗体、抗HE4抗体；
(2)重组抗原蛋白：TRIM21、P53、HIP1；和，抗CA125抗体、抗HE4抗体；
(3)重组抗原蛋白：TRIM21、P53、HIP1、GNAS；和，抗CA125抗体、抗HE4抗体；
(4)重组抗原蛋白：TRIM21、P53、HIP1、GNAS、DBT；和，抗CA125抗体、抗HE4抗体；
(5)重组抗原蛋白：TRIM21、P53、HIP1、GNAS、DBT、Annexin1；和，抗CA125抗体、抗HE4抗体；
(6)重组抗原蛋白：TRIM21、P53、HIP1、GNAS、DBT、Annexin1、FXR1；和，抗CA125抗体、抗HE4抗体；
(7)重组抗原蛋白：TRIM21、P53、HIP1、GNAS、DBT、Annexin1、YWHAZ；和，抗CA125抗体、抗HE4抗体；或
(8)重组抗原蛋白：TRIM21、P53、HIP1、GNAS、DBT、Annexin1、Tom1l2；和，抗CA125抗体、抗HE4抗体。
12.如权利要求1至5中任一项所述的生物标志物或如权利要求6至11中任一项所述的试剂在制备用于卵巢癌的患病风险预测、筛查、预后评估、治疗效果监测或复发监测的产品中的用途，或者在制备用于检测受试者样本中自身抗体和/或肿瘤抗原的浓度的产品中的用途。
13.根据权利要求12所述的用途，其特征在于，所述样本为受试者的样本例如全血、血清、血浆、组织或细胞、组织间隙液、脑脊液或尿液中的自身抗体和/或肿瘤抗原；其中优选地，所述组织或细胞为卵巢癌组织或细胞或者癌旁组织或细胞；
优选地，所述产品为试剂盒；
进一步优选地，所述试剂盒是用于酶联免疫吸附法(ELISA)、蛋白/肽段芯片检测、免疫印迹、微珠免疫检测或微流控免疫检测的试剂盒；优选地，所述试剂盒用于通过抗原抗体反应对所述生物标志物进行检测，例如为ELISA试剂盒或荧光或化学发光免疫检测试剂盒。
14.一种试剂盒，其包含权利要求6至11中任一项所述的试剂。
15.根据权利要求14所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒是用于酶联免疫吸附法(ELISA)、蛋白/肽段芯片检测、免疫印迹、微珠免疫检测或微流控免疫检测的试剂盒；优选地，所述试剂盒用于通过抗原抗体反应对所述生物标志物进行检测，例如为ELISA试剂盒或荧光或化学发光免疫检测试剂盒。
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