TWI511743B - 抗血清、中和抗體、及含其之醫藥組合物 - Google Patents

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抗血清、中和抗體、及含其之醫藥組合物
本發明關於一種抗犬瘟熱病毒的抗血清、中和抗體、及含其之醫藥組合物；尤指一種以豬作為生產動物的抗血清、中和抗體、及含其之醫藥組合物。
養豬產業是我國農村經濟中很重要的一環。近年來養豬產業轉型為內需型產業後，受豬價、豬隻飼養數量波動、及景氣循環的影響甚鉅。尤其，國際豬肉進口的開放對於豬價的衝擊也削弱了我國養豬產業的獲利。
豬隻除了提供主要蛋白質來源，其毛、骨頭、血液等均可再加工成各式產品。站在提升豬隻的附加價值且進而振興養豬產業的目標上，若能將豬隻血液的應用擴展到醫藥產品如抗血清的生產，其附加價值必然更甚於傳統的食用應用。領域中通常使用馬或牛等大型且血量較多的動物來生產抗血清，使用豬生產抗血清則相對罕見。由於我國養豬產業先進，不論在生產總量和品質上都相當優異，若能在現有規模下發展養豬產業於抗血清的生產，應能減少養豬產業的獲利受到進口豬肉的衝擊。
犬瘟熱是犬科動物的嚴重高傳染病毒性疾病，對於幼犬有很高的致死率，但目前臨床上並沒有藥物可供治療之用。有鑑於飼養犬類動物作為寵物在人類社會中非常普遍，若能以豬作為生產抗犬瘟熱病毒(Canine distemper virus；CDV)之抗血清的生產動物，不僅有助於提高養豬產業的產值，在我國養豬產業既有的規模及品質下，更有助於降低治療犬瘟熱所需的社會成本。
綜上所述，產業中需要一種以豬作為生產動物而製得的抗血清，達到結合養豬產業於醫藥應用以提升其附加價值，並進而降低社會醫療成本的目的。
本發明之一目的為提供一種以豬做為生產動物而製得的抗血清其含其之醫藥組合物，以藉此提升豬的附加價值。
本發明之又一目的為提供一種抗犬瘟熱的中和抗體其含其之醫藥組合物，其係使用豬做為生產動物，因此得以降低生產成本，並進而降低醫療成本。
為達到上述目的，本發明提供一種抗犬瘟熱病毒之抗血清，其係至少由以下步驟製備：(A)提供一病毒細胞混合物，其含有犬瘟熱病毒；(B)施予前述病毒細胞混合物至一豬；及(C)取得前述豬的血清以獲得前述抗血清。
本發明又提供一種抗犬瘟熱病毒之抗血清，其係至少由以下步驟製備：(A)提供一病毒細胞混合物，其含有犬瘟熱病毒；(B)施予前述病毒細胞混合物至一動 物；及(C)取得前述動物的血清以獲得前述抗血清；其中前述病毒細胞混合物進一步含有周邊淋巴細胞；其中前述周邊淋巴細胞的濃度為1×106 至2×106 細胞/ml，其係以前述病毒細胞混合物的總體積為基礎；其中前述周邊淋巴細胞係採集自前述動物。
較佳地，前述病毒細胞混合物係至少由以下步驟製備：提供一宿主細胞群體，其係培養於一培養液中；使一病毒TCID50 力價的病毒液與前述宿主細胞群體共同培養，直至前述宿主細胞群體中60%至70%的細胞發生細胞病變作用；及收集前述宿主細胞群體、前述病毒、及前述培養液以獲得前述病毒細胞混合物。更佳地，前述病毒細胞混合物進一步包含1×106 至2×106 細胞/ml的周邊淋巴細胞，其係以前述病毒細胞混合物的總體積為基礎。較佳地，前述周邊淋巴細胞係採集自前述豬。
較佳地，前述病毒細胞混合物係至少由以下步驟製備：提供一宿主細胞群體，其係培養於一培養液中；使一病毒TCID50 力價的病毒液與前述宿主細胞群體共同培養，直至前述宿主細胞群體中60%至70%的細胞發生細胞病變作用；及收集前述宿主細胞群體、前述病毒、及前述培養液，並與前述周邊淋巴細胞混合，以獲得前述病毒細胞混合物。
較佳地，前述病毒液中所含病毒的濃度為1×104 至5×104 病毒/ml，其係以前述病毒液的總體積為基礎。
較佳地，前述病毒細胞混合物之細胞為B95a細胞、初代小牛腎臟細胞、非洲綠猴腎臟細胞、或其組合。
較佳地，前述步驟(B)係以腹腔注射來達成。
較佳地，在進行前述步驟(C)之前，先重複進行前述步驟(B)至少一次。較佳地，每一次前述步驟(B)之間間隔至少2.5周。
較佳地，前述動物為牛、馬、或豬。
較佳地，前述豬為符合無特定病原之飼養標準的豬。
較佳地，前述豬為5周齡至11周齡。
較佳地，前述抗血清具有至少400的抗體力價。
本發明另提供一種抗犬瘟熱病毒之中和抗體，其係純化自前述抗血清。
較佳地，前述中和抗體為抗犬瘟熱病毒之免疫球蛋白G或其F(ab’)2 片段。
本發明再提供一種治療犬瘟熱的醫藥組合物，其包含一5至10mg/ml的蛋白質，其係以前述醫藥組合物的總體積為基礎；其中前述蛋白質包含不小於95%之前述中和抗體，其係以前述蛋白質的總重量為基礎；其中，前述中和抗體的抗體力價為至少400。
較佳地，前述中和抗體的抗體力價為2000至7000。
較佳地，前述醫藥組合物進一步包含一醫藥可接受之載體。
較佳地，前述醫藥可接受之載體為水、玉米澱粉、生理食鹽水、乳糖、葡萄糖、微結晶纖維素、硬脂酸鎂、聚乙烯吡咯酮、羧甲基纖維素或其混合物。
綜上所述，本發明的實驗結果歸納出最適合以豬生產抗血清的抗血清生產步驟。本發明的結果特別適合用 於以豬生產犬瘟熱病毒的抗血清。據此，本發明具有提升養豬產業附加價值，及生產成本低廉的抗血清而有助於降低醫療成本的優點。
第一圖係本說明書實施例二之組別A、組別B、組別C、及組別D的平均抗體力價對試驗週數的曲線圖。
有別於使用抗生素治療細菌感染，通常病毒的感染需要以專一性的抗血清或中和抗體加以控制及治療。抗血清，又稱免疫血清，是指一種含有專一性抗體(中和抗體)的血清；更明確地說，是人或動物經抗原(病毒、細菌或外來蛋白)刺激後，所形成的一種特殊性血清蛋白。這種血清蛋白無論在活體內或活體外皆可專一性地辨識該抗原，並有助於激活免疫反應。
在一個實施態樣中，本發明提供一種抗犬瘟熱病毒的抗血清，其係至少由以下步驟製備：
步驟(A)提供一含有犬瘟熱病毒的病毒細胞混合物
由於病毒僅在宿主體內存活，因此，在使用病毒作為免疫反應誘發物之前，首要將病毒株與一宿主細胞共同培養，使病毒活化、感染並增殖於宿主細胞中。爾後，再收集細胞培養中的宿主細胞及培養液，以連帶地收集感染於細胞中的病毒及釋出於培養液中的病毒。總括地說，收集到的液體為混合有宿主細胞及病毒的混合物， 即本發明所述之病毒細胞混合物。
常用於作為活化病毒或病毒培養之用的宿主細胞包括，但不限於：B95a細胞、初代小牛腎臟細胞、非洲綠猴腎臟細胞、或其組合。
更明確地說，本發明所述之病毒細胞混合物的製備方法為：首先提供一宿主細胞群體，接著將一病毒TCID50 力價的病毒液與前述宿主細胞群體共同培養，直至前述宿主細胞群體中60%至70%的細胞發生細胞病變作用(Cytopathic effect；CPE)後，收集前述宿主細胞群體、前述病毒、及前述培養液而得到本發明之病毒細胞混合物。
前述「病毒TCID50 力價」係指病毒液中的病毒含量足以使前述宿主細胞群體中50%的細胞感染或死亡。較佳地，前述病毒液中所含病毒的濃度為1×104 至5×104 病毒/ml，其係以前述病毒液的總體積為基礎。前述細胞病變作用係指細胞因為病毒的感染而發生異常的生長狀態，例如發生細胞融合現象。
較佳地，本發明之病毒細胞混合物係進一步與一周邊淋巴細胞混合，以進一步提升誘發免疫反應的強度，而得到抗體力價更高的抗血清。為了避免前述周邊淋巴細胞注入抗血清生產動物後，引發該個體的免疫排斥反應，前述周邊淋巴細胞較佳地是收集自預計要進行抗血清生產的動物。更明確地說，預先將即將進行抗血清生產的動物的周邊淋巴細胞分離出來，並與前述製得之病毒細胞混合物加以混合，然後才施予該動物以誘發免疫。較佳地，前述周邊淋巴細胞的濃度為1×106 至2×106 細胞/ml，其係以前述病毒細胞混合物的總體積為基礎。
步驟(B)施予前述病毒細胞混合物至一動物
前述動物係指抗血清生產動物。本發明所用抗血清生產動物可為：牛、馬或豬。當使用豬作為抗血清生產動物時，可達到本發明之提高養豬產業的產值的目的。較佳地，前述豬為5周齡至11周齡。較佳地，所用豬是符合無特定病原(Specific Pathogen Free；SPF)之飼養標準的豬。
前述無特定病原之飼養標準指該動物是飼養於隔離系統中，其允許存在常態微生物，但使特定病原隔離於外，因此該動物沒有附存特定微生物或寄生蟲。更明確地說，本發明所述「符合無特定病原之飼養標準的豬」係經疾病監控而確定無下列病原感染或疾病：典型豬流感(Classical swine fever)、假性狂犬病(Pseudorabies)、豬萎縮性鼻炎(Atrophic rhinitis)、豬肺炎黴漿菌(Mycoplasma hyopneumoniae )、口蹄疫(Foot and mouth disease)、豬痢疾(swine dysentery)、疥瘡(Scabies)、胸膜肺炎放線桿菌(Actinobacillus pleuropneumoniae )、豬生殖與呼吸道綜合症(Porcine reproductive and respiratory syndrome)。
在較佳實施態樣中，前述步驟(B)中所述「施予」是以腹腔注射(IP)的方式來進行。本發明的研究成果證實，當以豬生產抗犬瘟熱抗血清時，腹腔注射為最佳的施予方式。
在較佳實施態樣中，為了增強抗血清生產動物的免 疫反應，在前述步驟(C)之前，重複前述步驟(B)至少一次；更佳地，重複前述步驟(B)兩次。較佳地，每一次前述步驟(B)之間係間隔至少2.5周；更佳地，係間隔2.5至3.5周。舉例來說，在一個實施態樣中，首先進行一次步驟(B)，即，將前述病毒細胞混合物(含有或不含有周邊淋巴細胞)施予一生產抗血清之動物，然後於21天(3周)後重複進行一次步驟(B)。接著，再於21天(3周)後進行另一次步驟(B)。在整個誘發生產抗血清之動物的免疫反應的時程中，於固定時間點採取血液樣本以量測抗體力價，作為是否重複步驟(B)的判斷依據。
步驟(C)取得前述動物的血清以獲得前述抗血清
檢測採集的血液樣本中具有足夠的抗體力價後，即可終止試驗，自前述動物採集血液以純化製得本發明的抗血清。在較佳實施態樣中，於前述步驟(C)中可採取任何領域中習知的手段來分離純化血液樣本中的血清，以取得本發明之純化抗血清。通常而言，純化抗血清是為了儘可能地將血液樣本中非抗體的成分去除，以避免這些成分對血清的功效產生影響。因此，純化的方式也因應欲達成的目的(即，欲保留的成分)而有所不同。舉例來說，領域中常用於純化抗血清的方式大抵上可分為粗提法和精製法兩種。粗提法通常是指硫酸銨鹽析法，而精製法又可區分為特異性法(如，免疫吸附法)即非特異性法(如，葡聚糖凝膠過濾法或離子交換層析法)兩種。
在較佳實施態樣中，於前述步驟(C)中進一步將採集的血液樣本進行熱失活處理(heat inactivation)；更明確 地，將採集的血液樣本於56℃下加熱30分鐘以使血清中的補體失去活性。
在本發明的另一個實施態樣中，進一步自本發明的抗血清中分離純化出本發明的中和抗體。更明確地說，前述中和抗體為為抗犬瘟熱病毒的免疫球蛋白G或其F(ab’)2 片段。將抗血清進一步純化為F(ab’)2 片段的方法可參酌中華民國發明專利申請號第101142962號案，概略而言：
1.將所得血清與pepsin在pH 3.2、37℃下反應2個小時，以將大部分的免疫球蛋白G切除為F(ab’)2 片段。接著，加入14%的硫酸銨(ammoniun sulfate)並攪拌約30分鐘至1個小時，以沉澱去除未反應的免疫球蛋白G及其他雜質；
2.將前述反應後的液體導入SP-Sepharose陽離子交換管柱，再以鹽液純化洗出前述F(ab’)2 片段；
3.將前述洗出液導入切向流過濾系統(Tangential FlowFiltration Systems，TFF)(30k)，以將其濃縮至固定體積，接著，再使用連續透析過濾法(continuous dialysis-filtration)更換10倍體積的組成緩衝液(formulation buffer)，並同時去除30k以下雜質成份。
4.最後進行透析濃縮，以將經前述TFF系統回收之樣品經0.22μm過濾膜進行無菌過濾，而取得產物。
較佳地，前述中和抗體的純度為不小於95%，即，自前述抗血清中純化所得的蛋白質總量中，本發明的中和抗體佔有不小於95%的含量。
較佳地，本發明抗血清及/或中和抗體具有至少400 的抗體力價；更佳地，具有2000至7000的抗體力價；又更佳地，具有5000至7000的抗體力價。
在本發明的另一個實施態樣中，以前述中和抗體製備一種治療犬瘟熱的醫藥組合物。前述醫藥組合物包含一5至10mg/ml的蛋白質，其係以前述醫藥組合物的總體積為基礎；其中前述蛋白質包含不小於95wt%之前述中和抗體，其係以前述蛋白質的總重量為基礎。
較佳地，前述抗血清或前述中和抗體的抗體力價為至少400；更佳地，為2000至7000；又更佳地，為5000至7000。
較佳地，前述醫藥組合物進一步包含一醫藥可接受之載體。較佳地，前述醫藥可接受之載體為水、生理食鹽水、玉米澱粉、乳糖、葡萄糖、微結晶纖維素、硬脂酸鎂、聚乙烯吡咯酮、羧甲基纖維素或其混合物。
以下實施例將記載本發明的研究結果及特定實施態樣，以使發明所屬技術領域中具有通常知識者更容易理解本發明的精神。需注意的是，以下內容僅屬示範性質，而不應對本發明的申請專利範圍產生限制。
實施例一：製備本發明之病毒細胞混合物
本實施例中使用臺灣大學闕玲玲教授分離的犬瘟熱病毒株(NTU311)來進行實驗，並使用B95a細胞株(ATCC® CRL-1612)作為犬瘟熱病毒的宿主細胞。
首先，將B95a細胞株培養於DMEM細胞培養液 (150T培養瓶)中直至85至90% confluency。接著，在去除上清液之後，加入犬瘟熱病毒液(NTU311；5ml；力價TCID50 104 /ml)，並於37℃下感作60分鐘。然後，加入30ml的含有2% FBS的DMEM細胞培養液繼續培養2至3天。於此期間，當觀察到60-70%的細胞產生細胞病變作用(融合現象)時，收集所有細胞及培養液(連帶收集了其中的病毒)，即獲得本發明之細胞病毒混合物。
若欲加入周邊淋巴細胞，則先以抗凝採血管取得實驗豬隻的血液(10ml)，然後加入10ml的PBS加以均勻混合為血液/PBS混合液。接著，緩慢地將前述血液/PBS混合液加入含有15ml之周邊淋巴細胞分離液(Ficoll-Paque® ；Pharmacia Biotech)的無菌離心管中。然後，於20℃下離心30分鐘(400g)。離心後，移去上層液，將中層液體移入另一個乾淨的無菌離心管中，並加入10ml的PBS。輕微搖晃均勻後離心15分鐘(20℃；60至100g)。去除上清液後，再加入10ml的PBS重複一次搖晃均勻及離心步驟。接著，去除上清液，加入5ml之含有10%FBS及抗生素的DMEM培養液，並使離心管中的細胞懸浮於培養液中，即獲得一周邊淋巴細胞懸浮液。最後，將所得周邊淋巴細胞懸浮液與前述病毒細胞混合物混合，使其中含有約1×106 至2×106 細胞/ml的周邊淋巴細胞。
實施例二：免疫誘發實驗設計及結果
本實施例將以豬作為抗血清生產動物，以實施例一中製得之含有或不含周邊淋巴細胞的病毒細胞混合物 進行免疫誘發，以取得具足夠抗體力價的抗血清。
本實施例取得13頭SPF豬(品種：Landrace)及6頭一般家豬(品種：Landrace；後簡稱家豬)，並依據豬種(SPF豬或家豬)、抗原施予方式(皮下注射或腹腔注射)、抗原(含有或不含周邊淋巴細胞的病毒細胞混合物)將其劃分為5個組別進行試驗。如下表一中所示。
實驗中採集之血液經於56℃下加熱30分鐘以去除血清中的補體之後，以下列方式進行抗體力價的檢測。
簡單地說，先於96孔盤的每一個孔(well)中加入100μl之含2% FBS的DMEM細胞培養液。接著，於96孔盤最下層的H列的孔中分別加入100μl的未稀釋之待測血清。然後，以十二爪微量吸管將孔中的待測血清和DMEM細胞培養液均勻混合為一混合液，再將其中的100μl混合液移入G列相對位置的孔中。以此方式將待測血清連續稀釋(2X serial dilution)，最後，從A列孔中移出100μl混合液丟棄。
接著，將標準病毒以含有2% FBS的DMEM細胞培養液作適當稀釋，製得病毒濃度為100 TCID50 /50μ L(即2×103 TCID50 /ml)的標準病毒稀釋液。於前述96孔盤的每一個孔中加入100μl的前述標準病毒稀釋液，並置於37℃、5%的二氧化碳培養箱中感作1小時。於作用5-7天後於顯微鏡下觀察細胞病變作用。
每次試驗均需設置對照組，包括細胞對照組、陽性血清對照組、血清對照組(測試該批血清是否具細胞毒性)、陰性血清對照組、及病毒對照組。細胞對照組：對照細胞的位置，加入200μl之含有2% FBS的DMEM細胞培養液。陽性血清對照組：以已知中和抗體力價的血清作為陽性對照。其操作方法與前述檢測血清的操作方法相同。血清對照組：用以測知該批測試血清是否有細胞毒性，將100μl的血清加入100μl的含有2% FBS的DMEM細胞培養液，置於37℃的恆溫箱中感作1小時，其餘步驟如前述。陰性血清對照組：使用SPF豬隻(或CDV抗體陰性的狗)的血清作為陰性對照血清，其操作方法與前述檢測血清的操作方法相同。病毒對照組：使用於中和抗體試驗之病毒稀釋液，需檢定力價是否合乎要求，病毒液以2X連續稀釋，然後取100μl加入B95-8細胞中，以計算病毒力價。
[組別A]
試驗進行的日程為：於第0周時，以皮下注射的方式施予5ml的CDV抗原，再於2周後以相同的方式施予5ml的CDV抗原。分別於實驗進行的第0周、第2周、第4周、及第8周採血進行抗體力價的檢測。結果如下表二中所記載。
由表二中記載可知，以皮下注射進行家豬的免疫誘發無法取得具足夠抗體力價的抗血清。
[組別B]
試驗進行的日程為：於第0周時，以腹腔注射的方式施予一瓶150T(實施例一中所製得者)的CDV抗原。於2周後以相同的方式及劑量施予CDV抗原。再於2周後(實驗第4周)以相同的方式及劑量施予CDV抗原。
分別於實驗進行的第0周、第2周、第4周、第7周、第9周、及第13周採血進行抗體力價的檢測。結果如下表三中所記載。
根據表三中所列結果可知，4頭家豬中有一半可以順利獲得具足夠抗體力價(≧400)的抗血清。
[組別C、D、及E]
試驗進行的日程如下表四中所示；其中，組別E為控制組，其未經免疫誘發，且係與組別C及組別D同居飼養。
將試驗第1天、第42天(約6周)、第64天(約8周)、及第71天(約10周)所得抗體力價記錄於下表五。
進一步將組別C及組別D所得數據的平均值列於下表六。
由表五及表六的數據可知，相較於使用病毒細胞混合物，使用含有周邊淋巴細胞的病毒細胞混合物進行免疫誘發，可獲得抗體力價更高的抗血清。此外，與組別C及組別D同居飼養的控制組(組別E)未見任何抗體反應，顯示以豬生產犬瘟熱病毒的抗血清並不會使犬瘟熱病毒感染其他健康的豬隻。事實上，於本試驗進行中，亦持續追蹤及記錄所有豬隻的健康狀況，而根據紀錄，不論是組別C、組別D、及組別E，都未有任何感染犬 瘟熱的病徵出現。
請參第一圖，其係將各組別的平均抗體力價繪出，以加以對照比較。由圖中數據可知，組別C(SPF豬；腹腔注射；PBL-CDV)具有最高的抗體力價。而雖然組別B(家豬；腹腔注射；CDV)的抗體力價不如組別C和組別D來得高，但大抵上仍可以具有接近或超過400的抗體力價，已足夠於臨床上的應用。
實施例三：本發明抗血清(中和抗體)於治療犬瘟熱之應用
本實施例將實際應用本發明抗血清於治療犬瘟熱。首先將實施例二中組別C所得之抗血清純化為F(ab’)2 片段，而製得抗體力價為6400、蛋白質含量為8mg/ml、純度為>95wt%的中和抗體混合液，即該中和抗體混合液中含有8mg/ml的F(ab’)2 抗體片段，而其中有超過95wt%為抗犬瘟熱病毒之F(ab’)2 抗體片段。
本實施例共取得8頭確診感染犬瘟熱的病犬(品系：混血種)，其中4頭判定為輕症病犬，另外4頭判定為重症病犬。以靜脈注射將本發明中和抗體施予前述病犬，其施予方式為每隔一天注射一次，連續注射三次；其中輕症病犬的每次劑量為8ml，而重症病犬的每次劑量為16ml。實驗結果如下表七中所列。
從實驗結果可知，8頭病犬中有6頭得以康復，。綜合而言，本發明中和抗體的治癒率達75%，評估為具有臨床治療效果。
所屬領域之技術人員當可了解，在不違背本發明精神下，依據本案實施態樣所能進行的各種變化。因此，顯見所列之實施態樣並非用以限制本發明，而是企圖在所附申請專利範圍的定義下，涵蓋於本發明的精神與範疇中所做的修改。

Claims (16)

  1. 一種製備抗犬瘟熱病毒之抗血清的方法，其包含以下步驟：(A)提供一病毒細胞混合物，其含有犬瘟熱病毒；(B)施予前述病毒細胞混合物至一豬；及(C)取得前述豬的血清以獲得前述抗血清；其中前述步驟(B)係以腹腔注射來達成。
  2. 如申請專利範圍第1項所述之方法，其中前述病毒細胞混合物係至少由以下步驟製備：提供一宿主細胞群體，其係培養於一培養液中；使一病毒TCID50 力價的病毒液與前述宿主細胞群體共同培養，直至前述宿主細胞群體中60%至70%的細胞發生細胞病變作用；及收集前述宿主細胞群體、前述病毒、及前述培養液以獲得前述病毒細胞混合物。
  3. 如申請專利範圍第2項所述之方法，其中前述病毒液中所含病毒的濃度為1×104 至5×104 病毒/ml，其係以前述病毒液的總體積為基礎。
  4. 如申請專利範圍第2項所述之方法，其中前述病毒細胞混合物之細胞為B95a細胞、初代小牛腎臟細胞、非洲綠猴腎臟細胞、或其組合。
  5. 如申請專利範圍第4項所述之方法，其中前述病毒細胞混合物進一步包含1×106 至2×106 細胞/ml的周邊淋巴細胞，其係以前述病毒細胞混合物的總體積為基礎。
  6. 如申請專利範圍第5項所述之方法，其中前述周邊淋巴細胞係採集自前述豬。
  7. 如申請專利範圍第1項所述之方法，其中前述豬為符合無特定病原之飼養標準的豬。
  8. 如申請專利範圍第1項所述之方法，其中前述豬的豬齡為5周齡至11周齡。
  9. 如申請專利範圍第1項所述之方法，其在進行前述步驟(C)之前，先重複進行前述步驟(B)至少一次。
  10. 如申請專利範圍第9項所述之方法，其中每一次前述步驟(B)之間間隔至少2.5周。
  11. 如申請專利範圍第1項所述之方法，其具有至少400的抗體力價。
  12. 一種抗犬瘟熱病毒之中和抗體，其係純化自如申請專利範圍第1至11項任一項所述之方法所製得的抗血清，其係為抗犬瘟熱病毒的F(ab’)2 片段。
  13. 一種治療犬瘟熱的醫藥組合物，其包含一5至10mg/ml的蛋白質，其係以前述醫藥組合物的總體積為基礎；其中前述蛋白質包含不小於95wt%之如申請專利範圍第12項所述之中和抗體，其係以前述蛋白質的總重量為基礎；其中，前述中和抗體的抗體力價為至少400。
  14. 如申請專利範圍第13項所述之醫藥組合物，其中前述中和抗體的抗體力價為2000至7000。
  15. 如申請專利範圍第13項所述之醫藥組合物，其進一步包含一醫藥可接受之載體。
  16. 如申請專利範圍第15項所述之醫藥組合物，其中前述醫 藥可接受之載體為水、生理食鹽水、玉米澱粉、乳糖、葡萄糖、微結晶纖維素、硬脂酸鎂、聚乙烯吡咯酮、羧甲基纖維素或其混合物。
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