TWI485247B - 產生流感病毒之方法 - Google Patents
產生流感病毒之方法 Download PDFInfo
- Publication number
- TWI485247B TWI485247B TW097137378A TW97137378A TWI485247B TW I485247 B TWI485247 B TW I485247B TW 097137378 A TW097137378 A TW 097137378A TW 97137378 A TW97137378 A TW 97137378A TW I485247 B TWI485247 B TW I485247B
- Authority
- TW
- Taiwan
- Prior art keywords
- influenza
- vaccine
- virus
- egg
- influenza virus
- Prior art date
Links
- 241000700605 Viruses Species 0.000 title claims description 142
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims description 26
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 claims description 157
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 claims description 151
- 101710154606 Hemagglutinin Proteins 0.000 claims description 113
- 101710093908 Outer capsid protein VP4 Proteins 0.000 claims description 113
- 101710135467 Outer capsid protein sigma-1 Proteins 0.000 claims description 113
- 101710176177 Protein A56 Proteins 0.000 claims description 113
- 239000000185 hemagglutinin Substances 0.000 claims description 113
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 claims description 111
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 76
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 65
- 206010022000 influenza Diseases 0.000 claims description 55
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 54
- 239000012530 fluid Substances 0.000 claims description 40
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 40
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 claims description 39
- 206010064097 avian influenza Diseases 0.000 claims description 38
- 208000002979 Influenza in Birds Diseases 0.000 claims description 36
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims description 31
- 229960003971 influenza vaccine Drugs 0.000 claims description 28
- 108010006232 Neuraminidase Proteins 0.000 claims description 26
- 102000005348 Neuraminidase Human genes 0.000 claims description 26
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims description 25
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 claims description 14
- 150000007523 nucleic acids Chemical group 0.000 claims description 12
- 230000013020 embryo development Effects 0.000 claims description 9
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims description 9
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 9
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 claims description 7
- 230000010076 replication Effects 0.000 claims description 7
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims description 5
- 241000371980 Influenza B virus (B/Shanghai/361/2002) Species 0.000 claims description 4
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 claims description 4
- 241000282465 Canis Species 0.000 claims description 3
- 241000238876 Acari Species 0.000 claims description 2
- 241000283073 Equus caballus Species 0.000 claims description 2
- 241000282324 Felis Species 0.000 claims description 2
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 claims description 2
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 claims description 2
- 102000005744 Glycoside Hydrolases Human genes 0.000 claims 1
- 108010031186 Glycoside Hydrolases Proteins 0.000 claims 1
- 241001500351 Influenzavirus A Species 0.000 claims 1
- 241000282331 Mustelidae Species 0.000 claims 1
- 229960001226 live attenuated influenza Drugs 0.000 claims 1
- 230000001537 neural effect Effects 0.000 claims 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 48
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 42
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 35
- 235000013330 chicken meat Nutrition 0.000 description 34
- 210000002969 egg yolk Anatomy 0.000 description 30
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 30
- 241000271566 Aves Species 0.000 description 25
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 23
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 23
- 235000013345 egg yolk Nutrition 0.000 description 20
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 19
- 102000002322 Egg Proteins Human genes 0.000 description 18
- 108010000912 Egg Proteins Proteins 0.000 description 18
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 17
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 16
- 230000035931 haemagglutination Effects 0.000 description 16
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 16
- 241000197306 H1N1 subtype Species 0.000 description 15
- 210000002706 plastid Anatomy 0.000 description 15
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 14
- 241000252870 H3N2 subtype Species 0.000 description 13
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 12
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 12
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 11
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 11
- 244000144977 poultry Species 0.000 description 11
- 208000000666 Fowlpox Diseases 0.000 description 10
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 10
- 235000013594 poultry meat Nutrition 0.000 description 10
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 10
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 9
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 9
- 101150039660 HA gene Proteins 0.000 description 8
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 8
- 229940031551 inactivated vaccine Drugs 0.000 description 8
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 8
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 8
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 8
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 7
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 7
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 7
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 7
- 241001473386 H9N2 subtype Species 0.000 description 6
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 6
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000008774 maternal effect Effects 0.000 description 6
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 6
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 6
- 230000004044 response Effects 0.000 description 6
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 6
- 241000711404 Avian avulavirus 1 Species 0.000 description 5
- 241000700662 Fowlpox virus Species 0.000 description 5
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 5
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 5
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 5
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 5
- 208000002874 Acne Vulgaris Diseases 0.000 description 4
- 241000272525 Anas platyrhynchos Species 0.000 description 4
- 241000272517 Anseriformes Species 0.000 description 4
- 241000701063 Gallid alphaherpesvirus 1 Species 0.000 description 4
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 4
- 206010000496 acne Diseases 0.000 description 4
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 4
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 4
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 4
- 231100000518 lethal Toxicity 0.000 description 4
- 230000001665 lethal effect Effects 0.000 description 4
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 4
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 4
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 4
- 241000272814 Anser sp. Species 0.000 description 3
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 3
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 3
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000252866 H7N1 subtype Species 0.000 description 3
- 241000252863 H7N3 subtype Species 0.000 description 3
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 3
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 3
- NWGKJDSIEKMTRX-AAZCQSIUSA-N Sorbitan monooleate Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OC[C@@H](O)[C@H]1OC[C@H](O)[C@H]1O NWGKJDSIEKMTRX-AAZCQSIUSA-N 0.000 description 3
- 108700005078 Synthetic Genes Proteins 0.000 description 3
- 241000700618 Vaccinia virus Species 0.000 description 3
- 206010046865 Vaccinia virus infection Diseases 0.000 description 3
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 3
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 3
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 3
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 3
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 3
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 3
- VEZXCJBBBCKRPI-UHFFFAOYSA-N beta-propiolactone Chemical compound O=C1CCO1 VEZXCJBBBCKRPI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229940023860 canarypox virus HIV vaccine Drugs 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 210000003837 chick embryo Anatomy 0.000 description 3
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 3
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 3
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 3
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 3
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 3
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 3
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 3
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 3
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 3
- 229940057995 liquid paraffin Drugs 0.000 description 3
- 229940124590 live attenuated vaccine Drugs 0.000 description 3
- 229940023012 live-attenuated vaccine Drugs 0.000 description 3
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 3
- 239000000244 polyoxyethylene sorbitan monooleate Substances 0.000 description 3
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 3
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 3
- 229940068968 polysorbate 80 Drugs 0.000 description 3
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 3
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 3
- 230000001932 seasonal effect Effects 0.000 description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- 229950004959 sorbitan oleate Drugs 0.000 description 3
- 241000701447 unidentified baculovirus Species 0.000 description 3
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 3
- 208000007089 vaccinia Diseases 0.000 description 3
- 239000007762 w/o emulsion Substances 0.000 description 3
- ASWBNKHCZGQVJV-UHFFFAOYSA-N (3-hexadecanoyloxy-2-hydroxypropyl) 2-(trimethylazaniumyl)ethyl phosphate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(O)COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C ASWBNKHCZGQVJV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000711573 Coronaviridae Species 0.000 description 2
- 241000186216 Corynebacterium Species 0.000 description 2
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 2
- 241001473385 H5N1 subtype Species 0.000 description 2
- 241000252843 H5N2 subtype Species 0.000 description 2
- 241000252868 H7N7 subtype Species 0.000 description 2
- 206010061598 Immunodeficiency Diseases 0.000 description 2
- 208000029462 Immunodeficiency disease Diseases 0.000 description 2
- 241000711450 Infectious bronchitis virus Species 0.000 description 2
- 241000712431 Influenza A virus Species 0.000 description 2
- 101710128560 Initiator protein NS1 Proteins 0.000 description 2
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 2
- 208000010359 Newcastle Disease Diseases 0.000 description 2
- 101710144127 Non-structural protein 1 Proteins 0.000 description 2
- 241000286209 Phasianidae Species 0.000 description 2
- 229920002651 Polysorbate 85 Polymers 0.000 description 2
- 241000287219 Serinus canaria Species 0.000 description 2
- 108010003533 Viral Envelope Proteins Proteins 0.000 description 2
- RGCKGOZRHPZPFP-UHFFFAOYSA-N alizarin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C3=C(O)C(O)=CC=C3C(=O)C2=C1 RGCKGOZRHPZPFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- AZDRQVAHHNSJOQ-UHFFFAOYSA-N alumane Chemical class [AlH3] AZDRQVAHHNSJOQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 2
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 2
- 239000003651 drinking water Substances 0.000 description 2
- 235000020188 drinking water Nutrition 0.000 description 2
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 2
- 230000007813 immunodeficiency Effects 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 208000037797 influenza A Diseases 0.000 description 2
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 2
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 210000004779 membrane envelope Anatomy 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 229940031346 monovalent vaccine Drugs 0.000 description 2
- 229940031348 multivalent vaccine Drugs 0.000 description 2
- 230000017448 oviposition Effects 0.000 description 2
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 2
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 2
- 230000007918 pathogenicity Effects 0.000 description 2
- 229940113171 polysorbate 85 Drugs 0.000 description 2
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 description 2
- 229960000380 propiolactone Drugs 0.000 description 2
- 239000001397 quillaja saponaria molina bark Substances 0.000 description 2
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 2
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 2
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 2
- 229930182490 saponin Natural products 0.000 description 2
- 150000007949 saponins Chemical class 0.000 description 2
- 238000005507 spraying Methods 0.000 description 2
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 2
- 210000003501 vero cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000029812 viral genome replication Effects 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CUNWUEBNSZSNRX-RKGWDQTMSA-N (2r,3r,4r,5s)-hexane-1,2,3,4,5,6-hexol;(z)-octadec-9-enoic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO.OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO.CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(O)=O.CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(O)=O.CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(O)=O CUNWUEBNSZSNRX-RKGWDQTMSA-N 0.000 description 1
- 238000011725 BALB/c mouse Methods 0.000 description 1
- 208000027312 Bursal disease Diseases 0.000 description 1
- 241000272834 Cairina moschata Species 0.000 description 1
- 102000019034 Chemokines Human genes 0.000 description 1
- 108010012236 Chemokines Proteins 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 1
- 108010046331 Deoxyribodipyrimidine photo-lyase Proteins 0.000 description 1
- 241000282323 Felidae Species 0.000 description 1
- 241000701796 Fowl aviadenovirus 1 Species 0.000 description 1
- 241000701047 Gallid alphaherpesvirus 2 Species 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 102000004457 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 description 1
- 108010017213 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 1
- 241000197305 H1N2 subtype Species 0.000 description 1
- 241001231806 H5N9 subtype Species 0.000 description 1
- 241000252871 H6N2 subtype Species 0.000 description 1
- 241000252864 H7N2 subtype Species 0.000 description 1
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 1
- 241001272567 Hominoidea Species 0.000 description 1
- 101000611183 Homo sapiens Tumor necrosis factor Proteins 0.000 description 1
- 241000598171 Human adenovirus sp. Species 0.000 description 1
- 241000702626 Infectious bursal disease virus Species 0.000 description 1
- 241000713196 Influenza B virus Species 0.000 description 1
- 108010002352 Interleukin-1 Proteins 0.000 description 1
- 108010065805 Interleukin-12 Proteins 0.000 description 1
- 108090000171 Interleukin-18 Proteins 0.000 description 1
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 1
- 108090001090 Lectins Proteins 0.000 description 1
- 102000004856 Lectins Human genes 0.000 description 1
- 241001502481 Meleagrid alphaherpesvirus 1 Species 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 241000272458 Numididae Species 0.000 description 1
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 1
- 241000237502 Ostreidae Species 0.000 description 1
- 244000236658 Paeonia lactiflora Species 0.000 description 1
- 235000008598 Paeonia lactiflora Nutrition 0.000 description 1
- 241000287127 Passeridae Species 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 239000004147 Sorbitan trioleate Substances 0.000 description 1
- PRXRUNOAOLTIEF-ADSICKODSA-N Sorbitan trioleate Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OC[C@@H](OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC)[C@H]1OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC PRXRUNOAOLTIEF-ADSICKODSA-N 0.000 description 1
- 240000006394 Sorghum bicolor Species 0.000 description 1
- 235000011684 Sorghum saccharatum Nutrition 0.000 description 1
- 241000271567 Struthioniformes Species 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 241000725681 Swine influenza virus Species 0.000 description 1
- 206010057040 Temperature intolerance Diseases 0.000 description 1
- 206010044302 Tracheitis Diseases 0.000 description 1
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 1
- 210000004507 artificial chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 238000000889 atomisation Methods 0.000 description 1
- 229940031567 attenuated vaccine Drugs 0.000 description 1
- 108010029566 avian influenza A virus hemagglutinin Proteins 0.000 description 1
- WXNRAKRZUCLRBP-UHFFFAOYSA-N avridine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCCN(CCCN(CCO)CCO)CCCCCCCCCCCCCCCCCC WXNRAKRZUCLRBP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229950010555 avridine Drugs 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 1
- 229940031416 bivalent vaccine Drugs 0.000 description 1
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000007969 cellular immunity Effects 0.000 description 1
- 230000036755 cellular response Effects 0.000 description 1
- 210000003850 cellular structure Anatomy 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 230000035601 cold sensitivity Effects 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 229940028617 conventional vaccine Drugs 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 description 1
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 1
- 230000008034 disappearance Effects 0.000 description 1
- 210000003278 egg shell Anatomy 0.000 description 1
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 230000029142 excretion Effects 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 239000000446 fuel Substances 0.000 description 1
- 125000001475 halogen functional group Chemical group 0.000 description 1
- 230000008543 heat sensitivity Effects 0.000 description 1
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 1
- 150000002466 imines Chemical class 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 1
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 238000007689 inspection Methods 0.000 description 1
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 1
- 201000009837 laryngotracheitis Diseases 0.000 description 1
- 239000002523 lectin Substances 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 230000002101 lytic effect Effects 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 244000000010 microbial pathogen Species 0.000 description 1
- 238000001823 molecular biology technique Methods 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 1
- 239000007764 o/w emulsion Substances 0.000 description 1
- 235000020636 oyster Nutrition 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 229920001983 poloxamer Polymers 0.000 description 1
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 1
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 1
- 229950008882 polysorbate Drugs 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000003362 replicative effect Effects 0.000 description 1
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 description 1
- 230000008593 response to virus Effects 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 238000005096 rolling process Methods 0.000 description 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 230000000405 serological effect Effects 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 229960005078 sorbitan sesquioleate Drugs 0.000 description 1
- 235000019337 sorbitan trioleate Nutrition 0.000 description 1
- 229960000391 sorbitan trioleate Drugs 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 239000010902 straw Substances 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 229940031626 subunit vaccine Drugs 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 230000005030 transcription termination Effects 0.000 description 1
- 230000001960 triggered effect Effects 0.000 description 1
- 229940031418 trivalent vaccine Drugs 0.000 description 1
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 1
- 230000002485 urinary effect Effects 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
- A61K39/145—Orthomyxoviridae, e.g. influenza virus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
- A61P31/16—Antivirals for RNA viruses for influenza or rhinoviruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/525—Virus
- A61K2039/5252—Virus inactivated (killed)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/525—Virus
- A61K2039/5256—Virus expressing foreign proteins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/55—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the host/recipient, e.g. newborn with maternal antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
- C12N2710/00011—Details
- C12N2710/24011—Poxviridae
- C12N2710/24111—Orthopoxvirus, e.g. vaccinia virus, variola
- C12N2710/24141—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
- C12N2710/24143—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
- C12N2760/00011—Details
- C12N2760/16011—Orthomyxoviridae
- C12N2760/16111—Influenzavirus A, i.e. influenza A virus
- C12N2760/16134—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
- C12N2760/00011—Details
- C12N2760/16011—Orthomyxoviridae
- C12N2760/16111—Influenzavirus A, i.e. influenza A virus
- C12N2760/16161—Methods of inactivation or attenuation
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Virology (AREA)
- Immunology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Mycology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Oncology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
本發明係關於一種使用來源於針對流感經免疫之母雞的蛋來產生流感病毒之方法以及該方法用於製造流感疫苗之用途。
目前已知三種類型之流感病毒(A、B及C)，A型病毒負責動物及人類病狀，而B型及C型病毒特別對人類具病原性。根據為病毒包膜之主要醣蛋白之血球凝集素(HA)及神經胺糖酸苷酶(NA)的抗原結構將該等A型病毒再分為亞型。產生十六種HA亞型(H1至H16)及9種NA亞型(N1至N9)。因此，A型病毒之亞型由存在於病毒包膜中之HA亞型及NA亞型來定義。野鳥構成所有流感A亞型之儲存宿主。某些亞型之A型流感病毒地方性地或流行性地(每年流行)感染家禽(各種亞型，包括H5N1及H9N2)、馬(主要為H3N8)、豬(主要為H1N1、H3N2及H1N2)以及人類(主要為H1N1及H3N2)。犬、貓及其他野生物種亦可偶爾感染上某些亞型(犬為H3N8及H5N1；貓為H5N1)。
在獸醫領域中，家禽飼養場及更尤其小雞、仔雞、母雞及公雞就數目而言代表易受流感病毒感染之最大群體。亞型H5及H7之禽流感病毒株可具有兩種病變型：低致病性(或LP)病變型及高致病性(或HP)病變型。HP病毒株造成禽流感且來源於尤其在血球凝集素裂解位點(存在多個鹼性胺基酸)處突變/插入後之LP病毒株H5及H7。直至現在，在飼養場強烈推薦嚴格衛生措施及定期防治以便預防禽流感，及尤其H5及H7亞型之感染。
在人類中，推薦針對造成根據年數在不同程度上實質存在之流行病之季節性循環病毒株進行免疫接種。大多數當前疫苗係使用含胚雞蛋產生，此等蛋係經三種不同流感病毒株(兩種病毒株為具有H3N2及H1N1亞型之A型流感病毒且一種病毒株為B型病毒)感染。使用尚未針對流感經免疫之母雞的蛋以便防止可對病毒複製有害之任何干涉現象。事實上已知母體抗體在蛋中度過一定時間後轉移至小雞且在生命最初數天期間保護其免受微生物感染，但回過來，若在仍然存在針對微生物病原體之保護性母體抗體時過早地針對此病原體使小雞免疫，則其造成免疫性缺乏。H. Stone等人(1992,Avian Dis. 36:1048-1051)已展示可藉由接種來源於針對新城雞瘟病毒(Newcastle disease virus，NDV)經免疫之母雞的蛋黃而針對新城雞瘟(Newcastle disease)使新生小雞被動免疫。然而，若在投與蛋黃後，用NDV病毒使小雞免疫，則觀察到對疫苗之免疫反應降低。根據Hamal等人之研究(2006,Poultry Science 65:1364-1372)亦已知，保護性母體抗體轉移至新生小雞之速率、尤其針對NDV病毒或傳染性支氣管炎病毒(infectious bronchitis virus，IBV)之抗體的轉移率係介於30%與40%(在三天齡小雞之血液中循環之母雞血漿中的抗體量之百分比)之間，此指示大量母體抗體扣留於蛋中。此係藉由J.R. Beck等人之研究(2003,Avian Dis. 47:1196-1199)證實，該研究展示在用不活化流感病毒株使母雞免疫後約3週，所有蛋含有抗-HA抗體。最後，根據Fontaine等人之研究(1963,Pathobiologie,11/9：611-613)已知，若給含胚蛋接種抗流感血清，則保護雞蛋免受流感病毒感染。所有此等理由使得熟習此項技術者認為，若使用針對流感經免疫之母雞的蛋，則該等雞蛋將由於針對流感之母體抗體轉移至雞蛋中而變得不會產生流感病毒。
自21世紀初以來，禽流感對家禽飼養場之經濟影響不停地隨大批毀壞整個家禽飼養場之高觸染性及致病性禽類病毒株的出現而增加。高致病性病毒株之HA的分類展示幾乎所有HA均具有H5或H7亞型。現在擔心具有H5或H7亞型之病毒株將適應於人類且可能造成在人類中廣泛流行之真正流感；已報導公認經分離之涉及此等亞型之人類流感的嚴重病例。
面對可能不再一直確保用於製造流感疫苗之蛋供應的危險，產生針對流感之疫苗的新穎方法目前集中到細胞培養系統之使用上。
然而，仍然存在對能夠在任何情況下、在短時期內且以極大量產生用於製造流感疫苗之流感病毒的需要。本發明藉由描述一種針對所有期望基於使用來源於預先針對流感經免疫之母雞的蛋產生病毒之方法來滿足此需要。
本發明之標的事實上為：一種產生流感病毒之方法，其中：
a.向母雞投與流感疫苗，
b.自該等經免疫之母雞取得蛋，
c.觸發胚胎發生過程，
d.藉由將流感病毒接種至尿囊腔中來感染該等含胚蛋，
e.於允許病毒複製之溫度及濕度條件下培養受感染之含胚蛋，及
f.收穫含有病毒之尿囊液。
較佳地，該疫苗保護母雞抵禦禽流感。
通常，該流感疫苗在其組合物中包含呈蛋白質及/或編碼此蛋白質之基因的形式之流感病毒之血球凝集素。
根據一態樣，流感疫苗之組合物含有完整不活化流感病毒。
根據另一態樣，流感疫苗之組合物含有來源於完整流感病毒之產物。
根據另一態樣，疫苗之組合物亦含有佐劑。
在另一態樣中，流感疫苗之組合物含有減毒流感病毒。
根據另一模式，流感疫苗包含含有編碼流感病毒之血球凝集素之核酸片段的載體。
根據另一態樣，疫苗之組合物亦含有佐劑。
較佳地，該載體為痘病毒。
在一特定態樣中，該載體亦包含編碼流感病毒之神經胺糖酸苷酶的核酸片段。
根據本發明方法之一實施例，用來針對流感使母雞免疫之疫苗組合物中所含的呈蛋白質及/或編碼此蛋白質之基因的形式之流感病毒血球凝集素，及用來感染經免疫母雞之含胚蛋的尿囊腔之流感病毒之血球凝集素具有不同亞型。
根據另一實施例，用來針對流感使母雞免疫之疫苗組合物中所含的呈蛋白質及/或編碼此蛋白質之基因的形式之流感病毒血球凝集素，及用來感染經免疫母雞之含胚蛋的尿囊腔之流感病毒之血球凝集素具有相同亞型。
根據另一實施例，用來針對流感使母雞免疫之疫苗組合物中所含的呈蛋白質及/或編碼此蛋白質之基因的形式之流感病毒血球凝集素，及用來感染經免疫母雞之含胚蛋的尿囊腔之流感病毒之血球凝集素相同。
根據另一實施例，用來針對流感使母雞免疫之疫苗組合物中所含的流感病毒與用來感染經免疫母雞之含胚蛋之尿囊腔的流感病毒相同。
在一尤其較佳實施例中，用來針對流感使母雞免疫之疫苗組合物中所含的呈蛋白質及/或編碼此蛋白質之基因的形式之流感病毒血球凝集素，及用來感染經免疫母雞之含胚蛋的尿囊腔之流感病毒之血球凝集素具有H5、H6、H7或H9亞型。
在另一尤其較佳實施例中，用來針對流感使母雞免疫之疫苗組合物中所含的呈蛋白質及/或編碼此蛋白質之基因的形式之流感病毒血球凝集素，及用來感染經免疫母雞之含胚蛋的尿囊腔之流感病毒之血球凝集素具有H5或H7亞型。
在一特定態樣中，根據本發明之方法包含另一病毒純化步驟。
在另一特定態樣中，根據本發明之方法包含另一病毒不活化步驟。
本發明亦係關於一種使用根據本發明之方法獲得的流感疫苗。
本發明之標的亦為根據本發明之方法用於製造用於預防流感之疫苗的用途。
在一特定態樣中，根據本發明方法之用途用以製造用於預防廣泛流行性人類流感之疫苗。
在另一特定態樣中，根據本發明方法之用途用以製造用於預防流行性人類流感之疫苗。
在另一態樣中，根據本發明方法之用途用以製造用於預防馬科之成員、豬科之成員、犬科之成員、貓科之成員、鼬類及禽類物種之流感的疫苗。
本發明之標的亦為針對流感經免疫之母雞的蛋用於產生流感病毒之用途。
最後，本發明之標的為針對流感經免疫之母雞的蛋用於製造流感疫苗之用途。
在一態樣中，經免疫之母雞的蛋含有針對流感病毒之血球凝集素的抗體。
在另一態樣中，經免疫之母雞的蛋含有針對H5、H6、H7或H9亞型之抗體。
片語"流感病毒"表示來源於野生型病毒株之流感病毒及來源於重配病毒株之流感病毒，該重配病毒株由一或多個野生型病毒株之基因組區段與因其在蛋中之強生長潛力而選擇之"母"病毒株的重配產生。重配病毒株獲得"母"病毒株之特徵，但至少保持野生型病毒株之HA及NA的特徵，此意謂藉助於總體比對程式所測定，重配病毒株之HA及NA之蛋白質結構相對於野生型病毒株之HA及NA的一致性為至少95%、較佳至少98%、更佳至少99%且甚至更佳100%。重配病毒株可藉由用野生型病毒株及"母"病毒株共感染敏感性細胞，隨後藉由選擇所需重配病毒株之適當方法來獲得。如WO 01/83794及WO 03/091401及Proc. Nat. Acad. Sci. USA 96:9345-9350(1999)中所述，其亦可藉由自野生型病毒株及"母"病毒株之核酸的反向遺傳學且在多質體表現系統中表現來獲得。在高致病性H5及H7病毒株之情況下，可進行對包含多個鹼性胺基酸之裂解位點的修飾以便使重配病毒株呈低致病性。
為便於表述，術語"疫苗病毒株"或"疫苗病毒"無差異地用於表示用於製造流感疫苗之流感病毒；類似地，術語"感染病毒株"或"感染病毒"用於表示用於感染生物材料(蛋、動物)之流感病毒。
此外，術語"經免疫母雞之蛋"用於表示來源於已預先免疫且與公雞接觸之母雞的已受精雞蛋。
一般而言，用於母雞之免疫接種的流感疫苗可由任何流感病毒株製造。疫苗病毒株可為A型病毒，且亦可為B型或C型病毒。當其為A型病毒株時，該病毒可為HA之任何亞型及/或NA之任何亞型。其可(例如)為目前造成流行性人類A型流感之具有H1N1或H3N2亞型的病毒株。
用流感病毒使母雞免疫存在巨大優點，其限制條件為免疫接種賦予抵禦禽流感之保護。
禽流感可被忽視或特徵可為一組表現，通常為一組呼吸及/或腸過程，一組不同程度大之強度，其在不同程度上損害母雞之一般狀態且當病毒株具高致病性時可導致動物死亡。禽流感通常導致產蛋活動減少或甚至消失。屬於H6N2或H9N2或甚至H5或H7亞型之低致病性病毒株通常造成輕度形式之禽流感，通常導致產蛋量降低或消失，但死亡率不高。另一方面，屬於H5及H7亞型(尤其H5N1、H5N2、H5N9、H7N1、H7N4或H7N7)之高致病性病毒株具高毒性且在母雞飼養場中引起極高度死亡率。
HA為在產生抵禦流感之保護性免疫力中所必需的抗原。用於根據本發明之方法中的疫苗至少包含呈蛋白質及/或編碼此蛋白質之基因的形式之流感病毒之HA。
術語"基因"意欲意謂對應於開放閱讀框架(open reading phase)且編碼蛋白質之核苷酸序列。將受表現調控序列(啟動子、增強子、聚腺苷酸化信號、轉錄終止子等)控制之基因插入載體(尤其質體或病毒)之核酸中。
此可能涉及人類流感病毒株之HA，但其對母雞不具致病性。較佳地，其含有所關注之HA，亦即具有與造成禽流感且設法使母雞免疫所針對並保護母雞所抵禦之病毒株之HA相同的亞型。較佳地，藉助於總體比對程式(諸如Blast程式)測定，存在於疫苗中之HA之蛋白質序列與需要保護母雞抵禦之病毒株之HA的蛋白質序列之間的一致性程度為至少80%，較佳至少90%，且甚至更佳至少95%。通常，包含HA之疫苗呈含有完整不活化流感病毒或來源於完整不活化流感病毒之產物之組合物的形式。
表述"來源於完整不活化病毒之產物"意欲意謂由病毒株製備且至少包含該病毒株之HA的不活化(亦即非傳染性)疫苗組合物。來源於完整病毒株之產物可為斷裂(或分裂)病毒且在此情況下係指"分裂"疫苗。另一來源於完整病毒株之產物為呈原樣或與已使用提取及純化方法獲得之NA締合之此病毒株之HA，且在此情況下係指"次單位"疫苗(EP 0 776 362)。HA亦可經二次整合至病毒顆粒中。含有完整不活化流感病毒或來源於完整不活化病毒之產物的疫苗組合物亦可含有一或多種佐劑或佐劑調配物。作為非限制性佐劑調配物之一實例，提及油包水或水包油乳液，諸如MF59乳液(由M. Powell及M. Newman編著之Vaccine Design-The Subunit and Adjuvant Approach,Plenum Press,1995第183頁)，基於脂質體之調配物，及基於MPL之調配物(由M. Powell及M. Newman編著之Vaccine Design-The Subunit and Adjuvant Approach,Plenum Press,1995第1186-187頁)、基於阿夫立定(avridine)之調配物(由M. Powell及M. Newman編著之Vaccine Design-The Subunit and Adjuvant Approach,Plenum Press,1995第148頁)、基於溴化二甲基二-十八烷基銨之調配物(由M. Powell及M. Newman編著之Vaccine Design-The Subunit and Adjuvant Approach,Plenum Press,1995第157頁)、基於短棒狀桿菌(Corynebacterium parvum)之調配物、基於皂角苷之調配物、基於溶血卵磷脂之調配物、基於泊洛尼克(pluronic)衍生物之調配物(Hunter H.等人1991,vaccine,9:250-256)(由M. Powell及 M. Newman編著之Vaccine Design-The Subunit and Adjuvant Approach,Plenum Press,1995第200頁及第297-311頁)、基於鋁鹽或基於其組合之調配物(由M. Powell及M. Newman編著之Vaccine Design-The Subunit and Adjuvant Approach,Plenum Press,1995第249-276頁)。較佳地，該等油包水乳液包含液體石蠟、親水性界面活性劑(諸如聚山梨醇酯80或聚山梨醇酯85)及親脂性界面活性劑(諸如脫水山梨糖醇油酸酯或脫水山梨糖醇三油酸酯)。用於母雞之乳液的實例描述於下列文獻中：Stone等人(1983,Avian Dis.,27:688-697;1993;Avian Dis.,37:399-405;1991,Avian Dis.,35:8-16)；M. Brugh等人(1983,Am. J;Vet. Res.,44:72-75)；Woodward L.等人(1985,Vaccine,3:137-144)；(由M. Powell及M. Newman編著之Vaccine Design-The Subunit and Adjuvant Approach,Plenum Press,1995第219頁)。疫苗病毒株通常來源於已在母雞、火雞、鴨、鵝或其他禽類物種中分離出之野生型病毒株，此病毒株最通常對母雞具低致病性。作為用於製備供保護母雞抵禦禽流感H5或H7亞型用之疫苗的分離株(野生型病毒株)之一實例，提及A/火雞/威斯康星/68或A/小雞/意大利/22A/98分離株，其為具有H5N9亞型之病毒株；A/火雞/英格蘭/N-28/73、A/小雞/墨西哥/238/94/CPA、A/小雞/墨西哥/232/94/CPA或A/鴨/波茨坦(Potsdam)/1402/86分離株，其為具有H5N2亞型之病毒株；A/鵝/廣東/1/1996分離株，其為具有H5N1亞型之HP病毒株；A/小雞/意大利/AG-473/1999或A/小雞/意大利/1067/1999分離株，其為具有H7N1亞型之病毒株；A/小雞/巴基斯坦/95分離株，其為具有H7N3亞型之HP病毒株；及A/鴨/波茨坦/15/80分離株，其為具有H7N7亞型之病毒株。作為用於保護家禽抵禦禽流感H9亞型之H9N2病毒株之一實例，提及A/小雞/伊朗/AV12221/98及A/小雞/UAE/415/99分離株。作為用於保護母雞抵禦禽流感H6亞型之H6N2病毒株之一實例，提及A/火雞/意大利/90分離株。用於製造疫苗之疫苗病毒株亦可為尤其藉由反向遺傳學獲得之野生型病毒株的重配株。尤其提及Re-1疫苗病毒株，其為藉由H5N1野生型病毒株A/鵝/廣東/1/96與"母"病毒株A/PR/8/34之反向重組獲得的重配病毒株，其在蛋中繁殖得極好(Tian等人，2005,Virology,341:153-162)。藉由反向遺傳學獲得之重配病毒株的另一實例為藉由遺傳重配獲得且含有A/小雞/越南/C58/04H5N1病毒株之H5血球凝集素、A/鴨/德國/1215/73 H2N3病毒株之神經胺糖酸苷酶及A/PR/8/34"母"病毒株之內部基因的H5N3病毒株(Webster等人，2006,Virology,351:301-311)。
針對禽流感之疫苗通常含有單一不活化流感病毒株之病毒(單價疫苗)，但在某些情況下可有利地使用含有若干種不活化流感病毒株之多價疫苗。此尤其為基於H7N1及H5N9病毒株之疫苗，其為含有不活化疫苗病毒株A/小雞/意大利/22A/98(H5N9)及A/小雞/意大利/1067/1999(H7N1)之油包水乳液。該等不活化疫苗亦可含有不同價數，例如針對H9N2禽流感及新城雞瘟之二價疫苗。通常非經腸投與(肌肉內或皮下)不活化疫苗。其亦可以噴霧形式投與，如在由Investigacion Aplicada銷售之Aerovac AI疫苗的情況下，該疫苗含有不活化疫苗病毒株A/小雞/墨西哥/232/94/CPA(H5N2)。免疫接種流程通常包含間隔2至4週之一次或兩次投藥。所投與之疫苗劑量根據動物之年齡而變化，但通常含有10μl至200μl在不活化前具有108
EID50
/ml至1010
EID50
/ml之效價之尿囊液的等效物。疫苗劑量通常以在0.05ml至1ml範圍內之體積投與。不活化禽流感疫苗之製備係由H. Stone(1987,Avian Dis. 31:483-490)描述。在疫苗病毒株HA亞型與造成致病性禽流感之病毒株之HA的亞型相同之範圍內，且根據藉助於總體比對程式所測定，兩種HA之蛋白質序列之間的一致性程度為約80%至90%，抵禦禽流感之臨床症狀(發病率及死亡率)所獲得之保護率通常大於80%，且較佳大於90%。此係由M. Bublot等人，2007,Avian Dis. 51:332-337之研究證實，該研究展示疫苗病毒株HA之蛋白質序列與致病性感染病毒株HA之蛋白質序列之間大約80%至90%的一致性程度足以獲得此保護率。此外，為了獲得此保護率，疫苗病毒株之NA亞型不必與致病性感染病毒株之NA亞型相同。此外，禽流感疫苗大大降低用傳染性病毒激發之經免疫之動物體內病毒的排泄，此由在口腔及泄殖腔樣品中觀察到的病毒負荷極明顯之降低所證實(M. Bublot等人，2007,Avian Dis. 51:332-337)。禽流感疫苗之另一有益作用在於降低病毒在母雞飼養場中之擴散。
根據本發明方法之另一實施例，用於使母雞免疫之疫苗呈包含來源於減毒流感病毒株之病毒的組合物之形式。疫苗病毒株通常呈重配株之形式，其在表現所關注HA及其次所關注NA的野生型病毒株與適冷及/或溫度敏感性"母"病毒株之間的遺傳重配後進行選擇。該重配株為於其表面上表現HA及其次所關注NA，同時保留"母"病毒株之與其僅在低於鳥類內部溫度之狹窄溫度限度內複製的能力有關之表型特徵的病毒株。結果，在向母雞投與後，疫苗病毒株以有限方式且局部地複製。獲得此等重配病毒株之方法為熟習此項技術者所熟知且尤其描述於WO 03/091401與WO 2006/063053及2002,Vaccine 20:2082-2090中。疫苗之投藥通常藉由霧化進行。另一產生減毒病毒株之方法在於截斷編碼NS1蛋白質之基因(Richt J.A.等人，Vaccination of pigs against swine influenza viruses by using an NS1-truncated modified live-virus vaccine,2006,J. Virol.,80:11009-18；Quinlivan M.等人，Attenuation of equine influenza viruses through truncations of the NS1 protein,2005,J. Virol.,79:8431-9)。
疫苗病毒株可藉由任何方法，使用諸如Vero細胞、MDCK細胞、PER.C6細胞或小雞胚細胞(CEK、PCJ)之細胞上的培養技術及/或使用含胚蛋上之習知產生方法來產生。收穫、純化病毒及適當時使病毒不活化之方法亦為熟習此項技術者所熟知。
根據本發明方法之另一實施例，疫苗在活體外表現系統中產生呈蛋白質形式。舉例而言，HA可以在昆蟲細胞中使用重組桿狀病毒之表現系統產生(Crawford J.等人，Baculovirus-derived hemagglutinin vaccines protect against lethal influenza infections by avian H5 and H7 subtypes,1999,Vaccine,17:2265-74)。血球凝集素亦可在活體外以"病毒樣顆粒"(virus-like particles，VLPs)(Prel A.等人，Assessment of the protection afforded by triple baculovirus recombinant coexpressing H5,N3,M1 proteins against a homologous H5N3 low-pathogenicity avian influenza virus challenge in Muscovy ducks,2007,Avian Dis.,51:484-9；Pushko P.等人，Influenza virus-like particles comprised of the HA,NA,and M1 proteins of H9N2 influenza virus induce protective immune responses in BALB/c mice,2005,Vaccine,23:5751-9)或基於反轉錄病毒之假型(pseudotype)(Szecsi J.等人，2006,Virol. J.,3:70)的形式表現。將活體外產生之蛋白質或所產生之病毒顆粒大致純化，接著佐以各種佐劑，諸如不活化疫苗中所用之佐劑。
根據本發明方法之另一實施例，流感疫苗包含一種含有編碼流感病毒HA之核酸片段的載體。
術語"載體"係指可在生物體、細胞或細胞組份中繁殖及/或轉移之核酸結構。其特別包括能夠自主複製或可整合至宿主細胞之染色體中的質體、病毒、噬菌體、原病毒、噬菌粒(phagemids)及人工染色體。
表述"包含編碼流感病毒HA之核酸片段的載體"意欲意謂含有編碼所關注HA的核酸且在引入禽類細胞後在此細胞中表現HA之載體。其可為表現所關注HA的質體，但其通常為在其基因組中含有編碼所關注HA的核酸且在受感染細胞中表現所關注HA的病毒載體。編碼HA之核酸整合至病毒載體之基因組中通常藉由分子生物學技術、尤其遺傳重組、選殖、反向遺傳學等來進行。HA可能或可能不在病毒載體之表面上表現。較佳地，病毒載體通常已藉由活體外多次繼代或藉由使某些基因缺失來減毒以使載體病毒在禽類細胞中之複製受到充分限制且對母雞之一般狀態無影響並因此視為非致病性。作為病毒載體之一實例，提及禽類副黏病毒(Ge J.,等人，Newcastle disease virus-based live attenuated vaccine completely protects chickens and mice from lethal challenge of homologous and heterologous H5N1 avian influenza viruses,2007,J Virol.,81:150-8)；火雞疱疹病毒(turkey herpesvirus，HVT)或馬立克氏病(Marek's disease)疱疹病毒(Sondermeijer等人，1993,Vaccine,11,349-358)；傳染性喉氣管炎病毒(infectious laryngotracheitis virus，ILTV)(Veits J.，等人，Deletion of the non-essential UL0 gene of infectious laryngotracheitis (ILT) virus leads to attenuation in chickens,and UL0 mutants expressing influenza virus haemagglutinin(H7) protect against ILT and fowl plague,2003,J Gen. Virol.,84:3343-52；Luschow D.等人，Protection of chickens from lethal avian influenza A virus infection by live-virus vaccination with infectious laryngotracheitis virus recombinants expressing the hemagglutinin(H5) gene, 2001,Vaccine,19:4249-59)；腺病毒(Francois A.等人，Avian adenovirus CELO recombinants expressing VP2 of infectious bursal disease virus induce protection against bursal disease in chickens,2004,Vaccine,22:2351-60；Gao W.等人，Protection of mice and poultry from lethal H5N1 avian influenza virus through adenovirus-based immunization,2006,J Virol.,80:1959-64；Toro H.等人，Protective avian influenza in ovo vaccination with non-replicating human adenovirus vector,2007,Vaccine,25:2886-91)；冠狀病毒(Cavanagh,2007,Vet Res. 38:281-97；Eriksson,2006,Clin. Dev. Immunol. 13:353-60)，但較佳使用用於使母雞免疫之痘病毒，尤其牛痘病毒、NYVAC(經缺失牛痘病毒)、牛痘病毒MVA病毒株，尤其鳥痘，特別為金絲雀痘、ALVAC(減毒金絲雀痘)、鵪鶉痘、火雞痘、麻雀痘且最尤其為禽痘、TROVAC(減毒禽痘)，其尤其描述於AU 701599B與AU 701781B及US 5,756,103中。適當時，減毒病毒載體僅表現所關注之HA：所涉及之疫苗尤其為含有表現H5N8流感病毒株(A/火雞/愛爾蘭/1378/83)之HA之TROVAC禽痘載體的疫苗。在其他情況下，減毒病毒載體表現所關注HA以及所關注NA兩者，諸如2003,Avian Pathology,32:25-32中所描述之重組痘病毒，其表現來源於H5N1流感病毒株之HA及NA兩者。所關注NA為具有與設法使母雞免疫所針對且保護母雞所抵禦之病毒株之NA相同的亞型之NA。在其他情況下，減毒載體表現若干種屬於不同亞型之所關注HA，如在2006,Vaccine,24:4304-4311中所描述之重組痘病毒的情況下，該重組痘病毒表現H5及H7亞型兩者。此等載體之免疫原性能力可進一步藉由將編碼發揮免疫刺激能力之細胞因子及/或趨化因子的基因引入其中來增強，該等細胞因子及/或趨化因子諸如IL-1、IFN、CSF、GM-CSF、IL-2、IL-12、IL-18或TNF 5(2006,Vaccine,24:4304-4311)。亦可向基於編碼流感病毒HA之載體的疫苗中添加佐劑以便增強其免疫原性。
含有病毒載體之疫苗組合物可藉由各種途徑投與，其尤其視載體而定：例如，刺穿翅基膜(痘病毒載體)，使用針或不使用針經由肌肉內、皮下或經皮途徑(任何載體)，經由卵內途徑(在17至19天含胚蛋中；例如，HVT/馬立克及腺病毒載體)，經由眼或口鼻途徑，藉由噴霧，或以飲用水形式(副黏病毒、冠狀病毒、腺病毒載體)，以間隔至少15天之一次或兩次注射形式。所投與之疫苗劑量為約1 log10
至7 log10
50%感染單位，對於禽痘載體而言較佳劑量為2 log10
至4 log10
。基於病毒載體之免疫接種與使用完整不活化或減毒流感病毒之習知免疫接種相比的優點在於以下事實，經免疫之動物可不同於受感染動物。此外，使用病毒載體進行免疫接種促進產生可增強動物之保護的細胞免疫力。如2007,Avian Dis.,51:325-331及2007,Avian Dis.,51:498-500中所說明，母雞所獲得之保護的程度及病毒在家禽飼養場中擴散之降低具有與使用含有不活化流感病毒之習知疫苗所觀察到相同的量級。
當母雞之免疫接種包含若干次注射時，第一次投藥中所用之疫苗可與第二次注射或後續注射中所用之疫苗不同。可使用兩種不同減毒病毒載體，例如在第一次免疫接種中使用表現所關注HA的重組ALVAC載體且在後續免疫接種中使用表現相同所關注HA的重組TROVAC或NYVAC載體以使得針對ALVAC載體之抗體反應並不阻止母雞細胞受重組TROVAC或NYVAC載體感染且因此並不阻止HA在受感染細胞中表現。亦有可能使用"初免-加強(prime boost)"方法，其在於在第一次注射中使用表現HA之減毒病毒載體且在加強注射中使用含有例如一或多種屬於與第一次免疫接種中所用之HA相同亞型之不活化疫苗病毒株的疫苗，或者以相反順序進行該過程。最後，有可能在第一次注射中使用表現所關注HA的質體進行DNA免疫接種，隨後使用含有表現屬於與第一次免疫接種中所用之HA相同亞型或與第一次免疫接種中所用之HA相同的不活化疫苗病毒株及/或減毒病毒載體之疫苗進行加強注射。
無論所投與之疫苗的類型或所採用之免疫接種流程為何，均十分快速地提供對母雞抵禦禽流感之保護，通常在投與疫苗劑量後7至14天之時期內。然而，為確保對母雞在其整個產蛋活動期間(持續約一年)抵禦禽流感之保護，推薦一次或兩次加強免疫接種，其在第一次疫苗投藥後3至16週時期內進行。若干種使用不活化疫苗之免疫接種流程可用於產蛋母雞：例如，2次注射，第一次在3至6週齡且第二次在臨開始產蛋前之16至19週齡，或3次注射，第一次在約2至4週，第二次在稍後3至4週且第三次在臨開始產蛋前之16至19週齡。亦可在產蛋期間投與加強劑。在使用2種不同疫苗之"初免-加強"流程中，可在1天齡時用基於禽痘載體之疫苗使小雞免疫；其隨後接受使用含有不活化流感病毒之疫苗進行一次(在臨開始產蛋前之16至19週齡)或兩次(在臨開始產蛋前之3至6週齡及16至19週齡)免疫接種。
在實施根據本發明之方法時，確保保護母雞抵禦流感後，較佳自母雞取得蛋，其通常在投與疫苗後7至18天時期內進行(Bublot M.等人(2006,Annals of the New York Academy of Sciences 1081:193-201)；Van der Goot等人(2005,Proc. Natl. Acad. Sc.,102:18141-6)；Ellis等人(Avian Pathol. 2004,33,405-412))。
儘管存在流感抗體，尤其針對HA之抗體，及尤其阻斷流感病毒滲入敏感性細胞之抑制血球凝集(IHA)的抗體，但用於自來源於針對流感經免疫之母雞的含胚蛋產生流感病毒之方法為習知的。使用來源於較佳在受控環境下飼養之經免疫母雞的9至14天含胚蛋。以下列方法控制胚胎發生過程：使用在介於10℃與20℃之間、較佳介於16℃與18℃之間的溫度下保存一般不超過產出後一週之時期的蛋。藉由將蛋於37.5℃±1℃之溫度下在具有70±10%之相對濕度的潮濕室中培養介於9與14天之間的時期來觸發胚胎發生過程。藉由對光檢查來選擇含胚蛋，且用少量(約0.1ml至0.2ml)通常介於2 log10
TCID50
與7 log10
TCID50
之間的病毒劑量感染其尿囊腔。使病毒歷時通常在1至4天之時期範圍內(視病毒株之毒性而定)且於亦可根據病毒株之表型及其冷或熱適應之程度而變化的溫度下繁殖。用於繁殖流感病毒之溫度一般在28℃至39℃之範圍內且通常在33℃至39℃之溫度範圍內。接著收穫傳染性尿囊液且根據其所欲用途來加工。
可使用此方法來產生HA亞型不同於用於使母雞免疫之疫苗中所含的HA之亞型之流感病毒。此情形為(例如)使用不活化H5N9病毒使母雞免疫以便保護母雞抵禦H5禽流感，同時用H1N1或H3N2流感病毒或甚至B型流感病毒感染此等母雞之蛋以便製備針對當前人類流感之流行性形式的疫苗。根據本發明方法之一變化形式，使用經免疫母雞之含胚蛋所產生的流感病毒之HA亞型具有不同於用於使母雞免疫之HA的亞型，但另一方面，所產生之流感病毒的NA具有與疫苗中所用之病毒的NA相同之亞型。此情形為(例如)使用不活化H5N1病毒株或表現H5及N1之重組痘病毒使母雞免疫以便保護母雞抵禦禽流感，同時用H1N1病毒株感染經免疫母雞的含胚蛋。
根據本發明方法之另一模式，以經免疫母雞的含胚蛋所產生之流感病毒之HA具有與用於使母雞免疫之疫苗中所含的HA相同之亞型。此情形為(例如)使用不活化H5N1病毒或表現H5之重組痘病毒使母雞免疫，同時用H5N1或H5N9流感病毒感染經免疫母雞的蛋。儘管蛋中存在"亞型"特異性交叉反應性抗-HA抗體(此情形為疫苗組合物中所含之HA具有與感染經免疫母雞的含胚蛋之流感病毒株之HA相同的亞型)，但此對病毒複製無負面影響。
此外，甚至更令人驚訝地，在用於感染經免疫母雞的含胚蛋之流感病毒與用於使此等母雞免疫之流感病毒之間存在完全一致性的情況下，此複製不受影響。在此情況下，此反映在於蛋中存在一組抗-HA抗體，該抗體甚至更廣泛，因為發現亞型特異性交叉反應性抗-HA抗體及對病毒株具高度特異性之抗-HA抗體(亦稱為病毒株特異性抗體)兩者(參見實例3)。與普遍公認之看法相反，蛋中存在流感抗體且尤其存在抗-HA抗體並不因此影響流感病毒之複製。在來源於針對流感經免疫之母雞的蛋之受感染尿囊液中收穫之病毒及/或血球凝集抗原的量與在來源於未經免疫之母雞的蛋之受感染尿囊液中收穫之彼等量具有相同量級(參見實例1及2)。
根據本發明之方法亦可用於製造重配病毒株。在此情況下，在第一步驟中，使用野生型病毒株及在含胚蛋中良好複製之母病毒株(例如A/PR/8/34病毒株)共同感染來自經免疫母雞的含胚蛋。在第二步驟中，收集主要含有重配株與母病毒株之混合物，而不能夠複製之野生型病毒株通常量極少的受感染尿囊液。接著根據熟習此項技術者所熟知之方法，使用連續選殖步驟，藉由在各選殖步驟將所收穫之傳染性尿囊液與對A/PR/8/34具特異性之抗-HA及抗-NA抗體混合來選擇同時表現A/PR/8/34病毒株之表型特徵(亦即其在含胚蛋中能夠良好複製)及野生型病毒株之HA以及NA的重配病毒株。為製備活減毒病毒疫苗，亦有可能製造適冷及熱敏性重配病毒株。在此情況下，在第一步驟中，使用野生型病毒株及具有適冷及熱敏性之表現特徵的母病毒株共同感染來自經免疫母雞的含胚蛋。在此情況下，用於培養受感染蛋之溫度為低於常溫之溫度(該溫度通常低於35℃，或甚至低於30℃)。在第二步驟中，收集主要含有重配株與母病毒株之混合物(因為冷敏性野生型病毒株並未複製)的受感染尿囊液。接著根據熟習此項技術者所熟知之方法，使用連續選殖步驟，藉由在各選殖步驟將所收穫之傳染性尿囊液與對母病毒株具特異性之抗-HA及抗-NA抗體混合來選擇同時表現母病毒株之表型特徵(尤其適冷性及/或其感溫性)及野生型病毒株之HA以及NA的重配株。
執行本發明之方法作為用於製備意欲供保護母雞之育種群及更通常保護家禽(鴨、火雞、鵝等)之育種群抵禦禽流感的疫苗之第一線方案。牽涉於無症狀或輕度形式之禽流感中之病毒株可為任何亞型，且尤其為H9N2、H6N2、H7N2、H7N3或H7N1亞型。其並不引起育種群之任何實質死亡率，但可使產蛋量暫時減少。牽涉於引起育種群之實質死亡率的嚴重形式之禽流感中之高致病性病毒株通常屬於H5及H7亞型，且尤其為H5N1、H5N2、H5N8、H5N9、H7N1、H7N3、H7N4或H7N7。
通常，本發明方法之步驟a)中用於針對禽流感使母雞免疫之疫苗組合物中所含的流感病毒血球凝集素及該方法之步驟c)中用於感染含胚蛋之病毒的血球凝集素具有相同亞型且尤其選自H5、H6、H7及H9亞型，因為其為造成禽流感之病毒株中主要發現之亞型。
在一特定態樣中，本發明方法之步驟a)中用於針對禽流感使母雞免疫之疫苗組合物中所含的流感病毒血球凝集素及該方法之步驟c)中用於感染含胚蛋之病毒的血球凝集素具有相同亞型且尤其選自H5及H7亞型，因為其為造成嚴重形式之禽流感及人類流感之病毒株中發現之亞型。已表徵之造成嚴重形式之禽流感及/或人類流感的病毒株通常屬於H5N1、H5N2、H7N1、H7N3或H7N7亞型。
因此，極其明確地，本發明之標的為：一種產生流感病毒之方法，其中：
a.用不活化流感病毒使母雞免疫，其中該病毒之血球凝集素具有H5或H7亞型，
b.自該等經免疫母雞取得蛋，
c.觸發胚胎發生過程，
d.藉由將與用於免疫接種之流感病毒相同的流感病毒引入含胚蛋之尿囊腔中來感染含胚蛋，
e.於允許病毒複製之溫度及濕度條件下培養受感染之含胚蛋，及
f.收穫含有病毒之尿囊液。
當受感染尿囊液意欲用於產生流感疫苗時，根據本發明之方法通常包含另一純化病毒株之步驟且視情況隨後或之前為使用熟習此項技術者所熟知之方法(諸如FR 2201079或FR 1538322中所述之彼等方法)使病毒不活化之步驟。
該純化可為簡短的且可能限於在通常已使受感染尿囊液澄清後藉由離心濃縮病毒之步驟。純化可補充有例如藉助於蔗糖密度梯度進行之區帶離心步驟(EP 0 7760362)。亦可進行層析法以便純化病毒。由此獲得組成完整不活化疫苗或減毒疫苗之組合物的經純化完整病毒之懸浮液。
藉由習知方法，使用β-丙內酯(E. Budowsky等人1991,Vaccine,9:319-325；1991,Vaccine,9：398-402;1993,Vaccine,11:343-348)、伸乙亞胺或衍生物(D. King 1991,Avian Dis. 35:505-514)或甲醛(EP 0 776 0362)進行病毒懸浮液之不活化。
基於完整不活化病毒之疫苗組合物可用一或多種佐劑進行調配。儘管通常此等疫苗可用鋁鹽或於油包水或水包油乳液(在禽流感疫苗之情況下)中進行調配，但通常使用由液體石蠟、親水性界面活性劑(諸如聚山梨醇酯80、聚山梨醇酯83或聚山梨醇酯85)及親脂性界面活性劑(諸如脫水山梨糖醇油酸酯、脫水山梨糖醇倍半油酸酯或脫水山梨糖醇三油酸酯)構成之油包水乳液。可使用任何能夠增強針對流感之體液及/或細胞反應的佐劑。作為非限制性佐劑調配物之一實例，提及MF59乳液，基於脂質體之調配物，及基於MPL、短棒狀桿菌、皂角苷、溶血卵磷脂、泊洛尼克衍生物或其組合之調配物。
經純化病毒懸浮液亦可經歷後續處理。可根據熟習此項技術者所熟知之方法使用清潔劑或脂質溶劑使病毒懸浮液斷裂，以便製造(例如)基於斷裂或分裂病毒、病毒顆粒之疫苗或含有流感病毒血球凝集素之次單位疫苗。此等疫苗可類似地用一或多種佐劑進行調配。
藉助於根據本發明之方法獲得的疫苗係用於保護人類及動物抵禦流感。
在獸醫領域中，疫苗主要用於禽流感預防領域，但其亦可用於預防或減輕馬科之成員(尤其馬)、犬科之成員(尤其犬)、貓科之成員(尤其貓)、豬科之成員(尤其豬)、鼬類(尤其貂及白鼬)及禽類物種(尤其母雞、鴨、火雞、鵪鶉、珍珠雞、鵝及鴕鳥)之流感症狀及/或病毒分泌。當疫苗組合物含有完整不活化病毒株或衍生產物時，其通常經皮下或肌肉內、或視情況以霧化物質之形式在家禽育種群中投與。當疫苗呈活減毒病毒之形式時，其通常經口鼻、藉由噴霧、於飲用水中或以眼用滴劑形式投與。免疫接種流程通常提供注射或相繼進行注射及加強。所投與之疫苗劑量視動物之體型及年齡而定。其通常含有介於20μl與200μl之間的在不活化之前具有108
EID50
/ml至1010
EID50
/ml之效價的尿囊液，其以介於0.05ml與1ml之間的體積注射。
在人類中，疫苗用於流行性流感及廣泛流行性流感預防之領域。雖然流行性流感侵襲已藉由與一種(或多種)流感病毒株接觸(藉由經其感染)或藉由用其免疫接種而敏化之人類群體，該病毒株與造成流行病之病毒株的HA存在抗原性關係且人類群體中存在一定免疫力，但即使其僅部分有效，廣泛流行性流感仍會侵襲未對新病毒株敏化之人類群體，因為此新病毒株之HA與先前循環病毒株無抗原性關係或抗原性關係過低。
流行性流感疫苗意欲供保護人類群體抵禦由與已循環之先前病毒株具有抗原性關係的循環季節性流感病毒株所引起之季節性流感形式。目前，造成流行性流感之流感病毒株為A型且屬於H1N1或H3N2亞型或為B型。廣泛流行性流感疫苗意欲供保護人類群體抵禦就HA而言與先前循環病毒株無抗原性關係之新流感病毒株。
流行性或廣泛流行性流感疫苗可呈活減毒疫苗或不活化疫苗之形式，但不活化疫苗較佳用於預防廣泛流行性流感。疫苗可呈單價疫苗(由單一流感病毒株製備之疫苗)或多價疫苗(由若干種流感病毒株製備之疫苗)之形式。流行性流感疫苗之組合物目前呈由H3N2及H1N1病毒株及由B型病毒株製備之三價疫苗的形式。不活化疫苗通常呈完整病毒、斷裂病毒(分裂病毒)或病毒顆粒之形式，或呈含有HA之次單位形式，且視情況含有一或多種佐劑，諸如上文所提及之彼等佐劑。雖然活減毒疫苗通常經口或經鼻投與以便促進產生黏膜免疫力，但不活化疫苗可非經腸(肌肉內或皮下)、皮內或甚至經黏膜(鼻內)、或甚至藉由組合兩種不同投藥途徑來投與，如WO 01/22992中所述。免疫接種流程通常提供注射或相繼進行注射及加強。所投與之疫苗劑量視個體之年齡及存在或不存在佐劑而定。通常，疫苗劑量含有疫苗中所含之各疫苗病毒株之15μg HA的等效物。當向疫苗中添加佐劑時，此劑量可降至約1μg至2μg HA，或在老年個體或罹患免疫缺乏症之個體中增加至30μg HA或甚至更多。
最後，本發明之標的為：來自針對流感經免疫之母雞的蛋用於產生流感病毒或用於製造流感疫苗之用途。
下列實例以非限制性方式說明本發明之各種實施例。
圖1表示供體質體pJY1394.1之完整核苷酸序列。
圖2表示供體質體pJY1394.1中之插入物的核苷酸序列，其包含側接插入基因座F8之臂，以及H6牛痘啟動子，隨後為在裂解位點處經修飾之編碼A/小雞/印尼/7/03病毒株之HA的合成基因。
此等序列之各種來源為以下來源：1至53：包含M13F引子之序列(加下劃線)的選殖質體之部分序列。
54至1483：側接TROVAC禽痘載體之基因組中的F8插入基因座之"左臂"之序列。
1484至1568：介於左臂與H6啟動子之間的連接子序列。
1569至1692：牛痘病毒H6啟動子之序列。
1693至3387：A/小雞/印尼/7/03病毒株之經修飾之合成HA基因的序列；胺基酸序列在核苷酸序列上方使用每胺基酸之單字母代碼指示。
3388至3414：HA基因與右臂之間的包含禽痘早期基因之TTTTTAT轉錄終止序列的連接子序列。
3415至4790：側接TROVAC禽痘載體之基因組中的F8插入基因座之"右臂"之序列。
4791至4885：包含M13R引子之序列(加下劃線)的選殖質體之部分序列。
vFP2211為重組禽痘病毒，其基因組中已插入一個編碼A/小雞/印尼/7/03H5N1病毒株之血球凝集素(HA)的合成基因。合成該HA基因以便獲得一個編碼與GenBank核苷酸序列資料庫中參考編號EF473080下(或GenPept蛋白質序列資料庫中參考編號ABO30346下)所述的A/小雞/印尼/7/03病毒株之天然序列一致(除裂解位點外)之胺基酸序列的開放閱讀框架。位於位置339與347(對應於高致病性病毒株之裂解位點)之間的RERRRKKRG胺基酸序列以RE----TRG序列替換。此修飾之裂解位點對應於亞型H5之低致病性病毒株之裂解位點。
在第一步驟中，建構一個供體質體pJY1394.1，其包含該經修飾之合成HA基因在H6牛痘啟動子控制下(Taylor J.等人，Vaccine,1988,6:504-508；Guo P.等人，J. Virol.,1989,63:4189-4198；Perkus M.等人，J. Virol.,1989,63:3829-3836)且與F8插入基因座之側接臂毗連以允許該HA基因插入禽痘載體基因組之F8插入基因座中。F8插入基因座對應於編碼Srinivasan及Tripathy(2005,Veterinary Micro-biology 108:215-223)所述之光解酶的禽痘基因；此基因亦以名稱FPV158描述於禽痘基因組之完整序列中(GenBank，參考編號AF198100)。將HA基因及H6啟動子插入F8基因座中造成FPV158基因自重組禽痘病毒基因組中缺失。質體pJY1394.1之完整核苷酸序列以及一系列毗連HA基因之核苷酸序列(其亦出現於該質體之完整序列中)分別描述於圖1及2中。
接著藉由質體pJY1394.1之側接臂與禽痘基因組之間的雙重重組獲得重組病毒vFP2211。對此而言，將原生小雞胚細胞使用以NotI線性化之質體pJY1394.1轉染且以親本禽痘病毒株(TROVAC載體)感染(病毒感染劑量為10)。TROVAC載體來源於由Merial生產針對小雞體內之禽痘之Diftosec疫苗的疫苗病毒株。藉由溶胞空斑與用於偵測所插入HA基因之探針的特異性雜交來選擇重組病毒。接著在滾動瓶中於小雞胚細胞上產生由此分離之vFP2211。
根據等效於由H. Stone(1987,Avian Dis. 31:483-490)所述之方法的方法製備由以下各物組成之不活化H5N9疫苗：低致病性A/小雞/意大利/22A/98 H5N9病毒株(由Ilaria Capua之實驗室(Istituto Zooprofilattico Sperimentale delle Venezie,Laboratorio Virologia,Padua,Italy)提供)，其由含胚蛋產生且經β-丙內酯(BPL)不活化；及由液體石蠟、脫水山梨糖醇油酸酯及聚山梨醇酯80構成之油包水乳液。乳液之界面活性劑混合物的HLB(親脂親水平衡)具有5.3之值。疫苗劑量相當於60μl在不活化之前具有108.9
EID50
/ml之效價的尿囊液。
形成兩組(G1及G2)1天(D0)來航雞(Leghorn chick)，其具有"無特定病原體(specific pathogen free，SPF)"狀態。將以下免疫接種流程應用於G1組：1天(D0)小雞在頸基部使用胰島素注射器皮下接受0.2ml具有3.0 log10
CCID50
/0.2ml之效價的vFP2211之病毒懸浮液。在8週(W8)齡時，辨識小雞之性別。保持約25隻小母雞及16公雞且放在一起。在17週(W17)齡時，其接受0.5ml體積之單價不活化H5N9疫苗之疫苗劑量的加強注射。
將以下免疫接種流程應用於G2組：3週齡SPF小雞藉由肌肉內(IM)注射在叉骨中使用胰島素注射器接受0.3ml體積之單價不活化H5N9疫苗的疫苗劑量。在8週(W8)時，辨識小雞之性別。保持約25隻小母雞及16公雞且放在一起。在17週(W17)齡時，其接受0.5ml體積之單價不活化H5N9疫苗之疫苗劑量的加強注射。
對來自在40-41(測試2)及49-50(測試3)週齡時產蛋之G1組母雞的蛋及來自在26-27(測試1)、40-41(測試2)及49-50(測試3)週齡時產蛋之G2組母雞的蛋評估重配疫苗病毒株A/新喀里多尼亞/20/99(xPR8)(稱為A/新喀里多尼亞/20/99IVR-116(H1N1))及A/紐約/55/04(xPR8)(稱為A/紐約/55/04X-157(H3N2))的複製能力。平行地，以相同方式對來源於未經免疫之SPF母雞(對照組)的對照蛋評估病毒株A/新喀里多尼亞/20/99(xPR8)(H1N1)及A/紐約/55/04(xPR8)(H3N2)之複製能力。
將在一週內所產之所有蛋保存在溫度控制室(12℃至15℃)中。將相同測試且來源於相同動物組中之蛋集中在一起且接著藉由將該等蛋於37-38℃下在相對濕度為約70-80%之室中培養10天來觸發胚胎發生過程。培養10天後，藉助於對光檢查裝置檢查各蛋中胚胎之生命力，且用十字精確定位尿囊腔。將相同測試且來源於相同動物組中之含胚蛋以8隻蛋為一組集中在一起。在消毒後於十字位準處用以200μl體積注射之相同感染劑量的流感病毒感染同一組之含胚蛋，且隨後刺穿蛋殼。測試102
、103
及104
EID50
(50%蛋感染劑量)之感染劑量的A/新喀里多尼亞/20/99(xPR8)(H1N1)及A/紐約/55/04(xPR8)(H3N2)病毒。對測試1及2之蛋測試每隻蛋103
及104
EID50
之感染劑量。對測試3之蛋測試每隻蛋102
及103
EID50
之感染劑量。接著將受感染之含胚蛋於34℃下在相對濕度為80%之室中培養48小時，且接著置於+4℃下隔夜。接著自各蛋取出受感染尿囊液。藉由量測HAU(血球凝集單位)效價來對所取得之各尿囊液評估感染效價。使用火雞紅血球來量測用A/紐約/55/04(xPR8)(H3N2)病毒株感染之尿囊液的HAU效價。使用母雞紅血球來量測用A/新喀里多尼亞/20/99(xPR8)(H1N1)感染之尿囊液的HAU效價。HAU效價由在0.5%母雞或火雞紅血球於磷酸鹽緩衝液中之懸浮液存在下展示可見血球凝集的受感染尿囊液之最後稀釋度之倒數表示。
表I及II中給出在來源於各種經免疫及未經免疫之母雞組的蛋中所獲得之HAU效價之平均值，其與注射至蛋中之病毒之感染劑量有關且與對蛋取樣之時間有關。表I：在尿囊液中獲得之血球凝集效價，其與所用之A/新喀里多尼亞/20/99(xPR8)(H1N1)之感染劑量、蛋來源(G1、G2、未經免疫之對照組)及產蛋時刻有關(測試1、測試2、測試3)。
表I及II中所獲得之結果展示，來源於經免疫母雞(G1及G2)之蛋的尿囊液之HAU效價之平均值等於來源於未經免疫母雞之蛋的尿囊液之HAU效價之平均值。
進行統計分析以便研究免疫接種及劑量因素。將HAU之個別值轉化為log2
且接著使用方差模型進行分析。使用用於減小規模之測試來測試方差不均勻性，用該模型之殘數執行(SAS v8.2軟體)。
對HAU效價之個別值進行之統計分析展示不存在免疫效應。亦不存在任何與用於感染蛋之病毒之劑量相關的效應。HAU效價在所研究之產蛋時期期間(26週(測試1)至50週(測試3)範圍內)實質上不波動。
用於使母雞免疫之方案與實例1中所用之方案相同。
該感染方案與實例1中所用之方案相同，其例外為下列修改：使用來源於Laboratoire Istituto Zooprofilattico Sperimentale delle Venezie,Laboratorio Virologia,Padua,Italy之低致病性A/小雞/意大利/22A/98(H5N9)禽病毒株及減毒廣泛流行性重配疫苗病毒株A/越南/1194/04 NIBRG14(H5N1)感染蛋。後一病毒株由國家生物學標準及控制研究所(National Institute for Biological Standards and Control,NIBSC)實驗室(South Mimms,Potters Bar,Herts EN6 3QG,UK)提供且藉由反向遺傳學獲得，如由C.Nicolson等人，Generation of influenza vaccine viruses on Vero cells by reverse genetics：an H5N1 candidate vaccine strain produced under a quality system,2005,Vaccine,23:2943-2952所述。
對此兩種病毒株測試102
、103
、104
及105
EID50
(50%蛋感染劑量)之感染劑量。對測試1之蛋測試每隻蛋103
、104
及105
EID50
之感染劑量。對測試2之蛋測試每隻蛋104
及105
EID50
之感染劑量。對測試3之蛋測試每隻蛋102
及103
EID50
之感染劑量。
使用母雞紅血球來量測用A/小雞/意大利/22A/98(H5N9)或A/越南/1194/04 NIBRG14(H5N1)感染之尿囊液的HAU效價。
表III及IV中給出在來源於各種經免疫及未經免疫之母雞組的蛋中所獲得之HAU效價，其與注射至蛋中之病毒之感染劑量有關且與取蛋之時間有關。
*：以由各條件下所包括之8隻蛋之尿囊液所獲得的8種HAU效價/50μ1之幾何平均值之形式表示的血球凝集效價(HAU)。NA：不適用
表III及IV中所給出之結果以及統計分析展示，來源於經免疫母雞(G1及G2)之蛋的尿囊液之HAU效價類似於未經免疫母雞之蛋的尿囊液之HAU效價，甚至在使用與用於感染來源於此等母雞之含胚蛋(在用A/小雞/意大利/22A/98(H5N9)病毒株免疫之G1及G2組的情況下)的病毒株相同之病毒株使母雞免疫的情形下亦如此。不存在與用於感染蛋之病毒的劑量相關之效應。HAU效價在所研究之產蛋時期期間(26週(測試1)至50週(測試3)範圍內)實質上不波動。
如實例1進行統計分析。
根據段落1.1.1)中所述之方案量測來自用A/小雞/意大利/22A/98(H5N9)病毒株免疫之G1及G2組母雞的蛋中抗-H5抗體之存在。平行地，亦分析來自未經免疫母雞(對照組)之蛋的蛋黃中之抗-H5反應。
分析在測試1(W26-27)、2(W40-41)及3(W49-50)之時刻取得之蛋的蛋黃(或蛋黃液)中之抗-H5反應。在胚胎發生之前(D0)及胚胎發生之後(D10)(亦即在於37℃下培養10天之階段後)進行對測試1之蛋的蛋黃中之抗-H5反應的分析。僅在胚胎發生之後(D10)進行對測試2及3之蛋之蛋黃中的抗-H5反應之分析。亦對來源於未經免疫母雞的蛋進行相同分析(參見段落3.2.2))。亦研究胚胎發生後(D10)測試2之蛋之尿囊液中的抗-H5反應。藉由使用吸管以拋棄式吸頭吸取來移出蛋黃。除將蛋黃冷凍保存而不預稀釋之測試1外，將測試2及3之蛋黃及尿囊液於磷酸鹽緩衝液中預稀釋至1/5，隨後冷凍。將經稀釋蛋黃及尿囊液冷凍保存直至使用藉由在A/小雞/意大利/22A/98(H5N9)病毒株存在下進行之母雞紅血球之血球凝集抑制(inhibition of hemagglutination，IHA)的檢定方法來進行的抗-H5抗體檢定之時刻。該檢定係基於特別針對病毒之HA之中和抗體抑制病毒之"血球凝集"活性的能力。在此測試中，使用由NISBC提供之抗-A/越南/1194/04綿羊血清作為陽性對照且使用未處理小鼠血清作為陰性對照。在圓錐底微量培養板中進行對樣品(經稀釋蛋黃或尿囊液)之連續兩倍稀釋以便獲得每孔50μl各稀釋液。將50μl效價為4血球凝集單位(4HAU)且來源於用由Ilaria Capua之實驗室(Istituto Zooprofilattico Sperimentale delle Venezie,Laboratorio Virologia,Padua,Italy)提供之A/小雞/意大利/22A/98(H5N9)病毒株感染的澄清尿囊液之病毒懸浮液添加至各孔中。使此液體於實驗室溫度下培養1小時，隨後添加50μl之母雞紅血球於磷酸鹽緩衝液中之0.5%溶液。使其於+4℃下靜置1小時後，讀取測試結果。藉由微孔底部存在紅斑反映血球凝集抑制之存在，同時藉由微孔中存在粉紅色光暈反映血球凝集之存在。IHA抗體效價係由在微孔中未觀察到血球凝集之最後稀釋度的倒數表示。
在D0，未經免疫組之所分析之8隻蛋黃中的8隻在IHA測試中呈陰性，而來源於第2組之8隻蛋黃中的6隻在IHA測試中呈陽性，此指示存在抗-H5抗體。
在D10，未經免疫組之所分析之4隻蛋黃中的4隻在IHA測試中呈陰性，而來源於第2組之4隻蛋黃中的4隻在IHA測試中呈陽性。
在D10，未經免疫組之所分析之5隻蛋黃中的5隻在IHA測試中呈陰性，而來源於第1組之5隻蛋黃中的4隻及來源於第2組之5隻蛋黃中的4隻在IHA測試中呈陽性，此指示此等組中存在抗-H5抗體。所獲得之IHA效價的個別值在表V中給出。
另一方面，來源於第1及第2組之所有尿囊液在IHA測試中均呈陰性，此意謂尿囊液中不存在可偵測到之抑制H5N9流感病毒之血球凝集的抗體。
在D10，未經免疫組之所分析之5隻蛋黃中的5隻在IHA測試中呈陰性，而來源於第1組之5隻蛋黃中的5隻在IHA測試中呈陽性。
IHA效價之個別值在表VI中給出。
總之，根據實例2及3之結果，在3個測試之蛋黃中揭示出之母體抗-H5N9抗體的存在對用H5N1或H5N9病毒株感染之尿囊液的病毒生產力無影響。
在28及36週齡時自第1及第2組經免疫母雞取得血液樣品。在第27及第37週收集此等母雞所產之蛋以便評估母體抗體轉移至蛋黃中之重要性。藉助於血球凝集抑制測試使用與不活化疫苗病毒株同源的A/小雞/意大利/22A/98H5N9病毒株作為抗原來評估抗-H5抗體反應。結果在表VII中以log10
形式表示。
*血球凝集抑制性抗體效價之幾何平均值，以log10
±標準偏差形式表示(每組所測試之樣品數)**對蛋黃測試之最低稀釋度為1/10(1log10
)；為計算平均值及標準偏差，將在1/10稀釋度下呈陰性之蛋的值置於0.7log10
。
此等結果證實母體抗體傳輸至第1及第2組經免疫母雞所產的蛋之蛋黃中。
蛋黃中之同源抗-H5N9抗體效價(表VII)高於異源抗-H5N9效價(表VIII)，但此差異並無統計學意義。
在第28及第29週期間取得在3及17週齡時用不活化H5N9疫苗(A/小雞/意大利/22A/98病毒株)免疫兩次之第2組母雞的蛋(約220-230隻)。將此等蛋於受控溫度(介於12℃與15℃之間)下儲存後於37℃下培養11天。對光檢查蛋以確認胚具有良好存活力後，用0.2ml具有9.68log10
EID50
/ml之效價之H5N9病毒株的儲備病毒溶液之稀釋液(接種物)於尿囊腔中給蛋接種。形成七組約30隻蛋。用下列接種物之稀釋液給四個組(G1至G4)接種：10-5
、10-4
、10-3
及10-2
。給其他三個組(G5至G7)用接種物之10-3
稀釋液接種。接種後，於37℃±1.5℃、70%±10%濕度下培養蛋。培養20h後，對光檢查蛋以便除去因接種產生之死蛋且接著於相同條件下將其再培養。接種後四十二小時，將蛋置於低溫下，隨後收穫尿囊液。將第1至第4組蛋之尿囊液彙集(每組一個流體池)。將4組蛋之尿囊液儲存於-70℃下，隨後根據血球凝集單位及50%蛋感染劑量(EID50
)加以滴定。
結果在表IX中給出。
此等結果展示各組之間的效價極類似且因此接種物之稀釋度不存在影響。此外，所獲得之效價極高且與由不具有母體抗-H5N9抗體之蛋所獲得的彼等效價(歷史實驗資料)相當。因此，此等結果證實，於所測試之條件下，蛋中存在母體抗體並不干擾相同亞型之流感病毒的產生。
圖1表示供體質體pJY1394.1之完整核苷酸序列。
圖2表示供體質體pJY1394.1中之插入物的核苷酸序列，其包含側接插入基因座F8之臂，以及H6牛痘啟動子，隨後為在裂解位點處經修飾之編碼A/小雞/印尼/7/03病毒株之HA的合成基因。
Claims (26)
- 一種產生流感病毒之方法，其中：a.自經流感疫苗免疫之母雞取得蛋；b.觸發該等蛋中胚胎發生過程；c.藉由將流感病毒接種至尿囊腔中來感染該等含胚雞蛋；d.該等受感染之含胚雞蛋在允許該病毒複製之溫度及濕度條件下培養；及e.收穫含有該病毒之尿囊液。
- 如請求項1之方法，其中該流感疫苗在其組合物中包含流感病毒之血球凝集素之蛋白質形式及/或編碼此蛋白質之基因形式。
- 如請求項2之方法，其中該流感疫苗保護該等母雞抵禦禽流感。
- 如請求項2之方法，其中該流感疫苗之組合物含有完整不活化流感病毒或活減毒流感病毒。
- 如請求項2之方法，其中該流感疫苗之組合物含有來源於完整不活化流感病毒之產物。
- 如請求項4或5之方法，其中該疫苗之組合物亦含有佐劑。
- 如請求項2之方法，其中該流感疫苗包含一種含有編碼流感病毒之血球凝集素之核酸片段的載體。
- 如請求項7之方法，其中該載體為痘病毒。
- 如請求項8之方法，其中該載體亦包含一個編碼流感病 毒之神經胺糖酸苷酶(neuraminidase)的核酸片段。
- 如請求項7至9中任一項之方法，其中該疫苗之組合物亦含有佐劑。
- 如請求項2之方法，其中投與該等母雞之該疫苗組合物中所含呈蛋白質形式及/或編碼此蛋白質之基因形式之該流感病毒血球凝集素，及用於感染該等免疫母雞之含胚蛋的尿囊腔之該流感病毒之該血球凝集素具有不同亞型。
- 如請求項2之方法，其中投與該等母雞之該疫苗組合物中所含呈蛋白質形式及/或編碼此蛋白質之基因形式之該流感病毒血球凝集素，及用於感染該等免疫母雞之含胚蛋的尿囊腔之該流感病毒之該血球凝集素具有相同亞型。
- 如請求項2之方法，其中投與該等母雞之該疫苗組合物中所含呈蛋白質形式及/或編碼此蛋白質之基因形式之該流感病毒血球凝集素，及用於感染該等免疫母雞之含胚蛋的尿囊腔之該流感病毒之該血球凝集素相同。
- 如請求項4之方法，其中投與該等母雞之該疫苗組合物中所含的該流感病毒與用於感染該等免疫母雞之含胚蛋的尿囊腔之該流感病毒相同。
- 如請求項2之方法，其中投與該等母雞之該疫苗組合物中所含呈蛋白質形式及/或編碼此蛋白質之基因形式之該流感病毒血球凝集素，及用於感染該等免疫母雞之含胚蛋的尿囊腔之該流感病毒之該血球凝集素係選自具有 H5、H6、H7及H9亞型之血球凝集素之群。
- 如請求項15之方法，其中投與該等母雞之該疫苗組合物中所含呈蛋白質形式及/或編碼此蛋白質之基因形式之該流感病毒血球凝集素，及用於感染該等免疫母雞之含胚蛋的尿囊腔之該流感病毒之該血球凝集素具有相同亞型。
- 如請求項16之方法，其中投與該等母雞之該疫苗組合物中所含呈蛋白質形式及/或編碼此蛋白質之基因形式之該流感病毒血球凝集素，及用於感染該等免疫母雞之含胚蛋的尿囊腔之該流感病毒之該血球凝集素相同。
- 如請求項1之方法，其包含另一個病毒純化步驟。
- 如請求項18之方法，其包含另一個病毒不活化步驟。
- 一種如請求項1、18及19中任一項之方法之用途，其係用於製造用於預防廣泛流行性(pandemic)人類流感之疫苗。
- 一種如請求項1、18及19中任一項之方法之用途，其係用於製造用於預防流行性人類流感之疫苗。
- 一種如請求項1、18及19中任一項之方法之用途，其係用於製造用於預防馬科之成員、豬科之成員、犬科之成員、貓科之成員、鼬類(mustelids)及禽類之流感的疫苗。
- 一種經免疫抵抗流感之母雞之蛋的用途，其係用於產生流感病毒。
- 一種經免疫抵抗流感之母雞之蛋的用途，其係用於製造 流感疫苗。
- 如請求項24之蛋的用途，其中該等蛋含有對抗流感病毒之血球凝集素的抗體。
- 如請求項25之蛋的用途，其中該等蛋含有對抗H5、H6、H7或H9亞型之抗體。
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FR0757884A FR2921387B1 (fr) | 2007-09-26 | 2007-09-26 | Procede de production du virus de la grippe |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| TW200923093A TW200923093A (en) | 2009-06-01 |
| TWI485247B true TWI485247B (zh) | 2015-05-21 |
Family
ID=39146849
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| TW097137378A TWI485247B (zh) | 2007-09-26 | 2008-09-26 | 產生流感病毒之方法 |
Country Status (17)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US7871807B2 (zh) |
| EP (1) | EP2195420B1 (zh) |
| JP (1) | JP5537429B2 (zh) |
| KR (1) | KR101744014B1 (zh) |
| CN (1) | CN101809144B (zh) |
| AR (1) | AR068541A1 (zh) |
| AU (1) | AU2008313576B2 (zh) |
| BR (1) | BRPI0817247A2 (zh) |
| CA (1) | CA2700288C (zh) |
| ES (1) | ES2541551T3 (zh) |
| FR (1) | FR2921387B1 (zh) |
| IL (1) | IL204361A (zh) |
| MX (1) | MX2010003202A (zh) |
| RU (1) | RU2484136C2 (zh) |
| TW (1) | TWI485247B (zh) |
| WO (1) | WO2009050390A2 (zh) |
| ZA (1) | ZA201001480B (zh) |
Families Citing this family (44)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7960139B2 (en) | 2007-03-23 | 2011-06-14 | Academia Sinica | Alkynyl sugar analogs for the labeling and visualization of glycoconjugates in cells |
| DK2318832T3 (da) | 2008-07-15 | 2014-01-20 | Academia Sinica | Glycan-arrays på PTFE-lignende aluminiumcoatede objektglas og relaterede fremgangsmåder |
| US20140205619A1 (en) * | 2008-11-28 | 2014-07-24 | Biolex Therapeutics, Inc. | Recombinant avian influenza vaccine and uses thereof |
| US20140205993A1 (en) * | 2013-01-18 | 2014-07-24 | Biolex Therapeutics, Inc. | Recombinant avian influenza vaccine and uses thereof |
| EP2413962A1 (en) | 2009-03-30 | 2012-02-08 | Mount Sinai School of Medicine | Influenza virus vaccines and uses thereof |
| WO2010138564A1 (en) | 2009-05-26 | 2010-12-02 | Mount Sinai School Of Medicine Of New York University | Monoclonal antibodies against influenza virus generated by cyclical administration and uses thereof |
| US10087236B2 (en) | 2009-12-02 | 2018-10-02 | Academia Sinica | Methods for modifying human antibodies by glycan engineering |
| US11377485B2 (en) | 2009-12-02 | 2022-07-05 | Academia Sinica | Methods for modifying human antibodies by glycan engineering |
| EP2536425B1 (en) | 2010-02-18 | 2019-06-19 | Icahn School of Medicine at Mount Sinai | Vaccines for use in the prophylaxis and treatment of influenza virus disease |
| CA2792537A1 (en) | 2010-03-30 | 2011-10-06 | Mount Sinai School Of Medicine | Influenza virus vaccines and uses thereof |
| WO2011130332A1 (en) * | 2010-04-12 | 2011-10-20 | Academia Sinica | Glycan arrays for high throughput screening of viruses |
| EA201490659A1 (ru) | 2011-09-20 | 2014-11-28 | Маунт Синай Скул Оф Медсин | Вакцины против вируса гриппа и их применения |
| CN102586194B (zh) * | 2011-12-01 | 2013-08-14 | 哈药集团生物疫苗有限公司 | H9亚型禽流感病毒Vero细胞适应株及其应用 |
| US10130714B2 (en) | 2012-04-14 | 2018-11-20 | Academia Sinica | Enhanced anti-influenza agents conjugated with anti-inflammatory activity |
| AU2013306098A1 (en) | 2012-08-18 | 2015-02-12 | Academia Sinica | Cell-permeable probes for identification and imaging of sialidases |
| KR20150104117A (ko) | 2012-12-18 | 2015-09-14 | 이칸 스쿨 오브 메디슨 엣 마운트 시나이 | 인플루엔자 바이러스 백신 및 그의 용도 |
| US9908930B2 (en) | 2013-03-14 | 2018-03-06 | Icahn School Of Medicine At Mount Sinai | Antibodies against influenza virus hemagglutinin and uses thereof |
| WO2014210397A1 (en) | 2013-06-26 | 2014-12-31 | Academia Sinica | Rm2 antigens and use thereof |
| US9981030B2 (en) | 2013-06-27 | 2018-05-29 | Academia Sinica | Glycan conjugates and use thereof |
| CA2923579C (en) | 2013-09-06 | 2023-09-05 | Academia Sinica | Human inkt cell activation using glycolipids with altered glycosyl groups |
| CN103736088B (zh) * | 2013-11-08 | 2015-07-15 | 广东大华农动物保健品股份有限公司 | 一种禽流感h9亚型灭活疫苗及其制备方法和应用 |
| US10150818B2 (en) | 2014-01-16 | 2018-12-11 | Academia Sinica | Compositions and methods for treatment and detection of cancers |
| KR20160104727A (ko) | 2014-01-16 | 2016-09-05 | 아카데미아 시니카 | 암의 치료 및 검출을 위한 조성물 및 방법 |
| JP6562942B2 (ja) | 2014-03-27 | 2019-08-28 | アカデミア シニカＡｃａｄｅｍｉａ Ｓｉｎｉｃａ | 反応性標識化合物およびその使用 |
| FI3149045T3 (fi) | 2014-05-27 | 2023-03-20 | Academia Sinica | Koostumuksia ja menetelmiä, jotka liittyvät yleisglykoformeihin vasta-aineiden parannettua tehokkuutta varten |
| TWI679020B (zh) | 2014-05-27 | 2019-12-11 | 中央研究院 | 抗ｈｅｒ２醣抗體及其用途 |
| JP2017518989A (ja) | 2014-05-27 | 2017-07-13 | アカデミア シニカＡｃａｄｅｍｉａ Ｓｉｎｉｃａ | 抗ｃｄ２０糖操作抗体群およびその使用 |
| US10118969B2 (en) | 2014-05-27 | 2018-11-06 | Academia Sinica | Compositions and methods relating to universal glycoforms for enhanced antibody efficacy |
| CA2950433A1 (en) | 2014-05-28 | 2015-12-03 | Academia Sinica | Anti-tnf-alpha glycoantibodies and uses thereof |
| US9879042B2 (en) | 2014-09-08 | 2018-01-30 | Academia Sinica | Human iNKT cell activation using glycolipids |
| US10495645B2 (en) | 2015-01-16 | 2019-12-03 | Academia Sinica | Cancer markers and methods of use thereof |
| US9975965B2 (en) | 2015-01-16 | 2018-05-22 | Academia Sinica | Compositions and methods for treatment and detection of cancers |
| WO2016118937A1 (en) | 2015-01-23 | 2016-07-28 | Icahn School Of Medicine At Mount Sinai | Influenza virus vaccination regimens |
| TWI736523B (zh) | 2015-01-24 | 2021-08-21 | 中央研究院 | 新穎聚醣結合物及其使用方法 |
| US10336784B2 (en) | 2016-03-08 | 2019-07-02 | Academia Sinica | Methods for modular synthesis of N-glycans and arrays thereof |
| WO2017218624A1 (en) | 2016-06-15 | 2017-12-21 | Icahn School Of Medicine At Mount Sinai | Influenza virus hemagglutinin proteins and uses thereof |
| KR101879936B1 (ko) * | 2016-06-17 | 2018-07-19 | 건국대학교 산학협력단 | 신규한 조류 인플루엔자 h5n9 재조합 바이러스 및 이를 포함하는 백신 조성물 |
| KR102588027B1 (ko) | 2016-08-22 | 2023-10-12 | 초 파마 인크. | 항체, 결합 단편 및 사용 방법 |
| JOP20190088A1 (ar) * | 2016-10-21 | 2019-04-21 | Us Agriculture | نواقل مؤتلفة للتعبير عن مولدات مضاد فيروس انفلونزا الطيور و استخداماتها |
| CN108653724B (zh) * | 2017-04-01 | 2020-11-27 | 普莱柯生物工程股份有限公司 | 一种用于预防禽减蛋综合征的疫苗组合物、及其制备方法和应用 |
| EP3606555A4 (en) | 2017-04-07 | 2021-08-04 | Icahn School of Medicine at Mount Sinai | INFLUENZA VIRUS TYPE B ANTI-NEURAMINIDASE ANTIBODIES AND THEIR USES |
| JP7084627B2 (ja) * | 2018-06-06 | 2022-06-15 | 株式会社マナＨｓコーポレーション | ウイルス感染症予防用組成物 |
| JPWO2021107013A1 (zh) * | 2019-11-29 | 2021-06-03 | ||
| CN114184797B (zh) * | 2021-12-06 | 2024-06-14 | 辽宁成大生物股份有限公司 | 一种流感病毒裂解疫苗单价原液血凝素的检测方法 |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SU1535543A1 (ru) * | 1988-04-05 | 1990-01-15 | Всесоюзный научно-исследовательский институт гриппа | Способ получени гриппозного диагностикума |
| RU2080124C1 (ru) * | 1995-10-19 | 1997-05-27 | Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт вакцин и сывороток | Способ получения живой гриппозной вакцины |
| EP0848956A1 (en) * | 1996-12-17 | 1998-06-24 | Dimminaco Ag/Sa/Ltd. | In ovo vaccination against Newcastle Disease |
| US6682754B2 (en) * | 1999-11-24 | 2004-01-27 | Willmar Poultry Company, Inc. | Ovo delivery of an immunogen containing implant |
| DE10133664A1 (de) * | 2001-07-11 | 2003-02-06 | Henkel Kgaa | Verfahren zur Untersuchung von dermalen Klebstoffabrissen |
| RU2290205C1 (ru) * | 2005-09-13 | 2006-12-27 | Федеральное государственное унитарное предприятие "Научно-производственное объединение по медицинским иммунологическим препаратам "МИКРОГЕН" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Способ получения живой вакцины для профилактики гриппа |
-
2007
- 2007-09-26 FR FR0757884A patent/FR2921387B1/fr not_active Expired - Fee Related
-
2008
- 2008-09-24 AR ARP080104139A patent/AR068541A1/es unknown
- 2008-09-26 KR KR1020107008659A patent/KR101744014B1/ko active IP Right Grant
- 2008-09-26 BR BRPI0817247-1A patent/BRPI0817247A2/pt not_active Application Discontinuation
- 2008-09-26 EP EP08840554.3A patent/EP2195420B1/fr active Active
- 2008-09-26 CA CA2700288A patent/CA2700288C/en active Active
- 2008-09-26 US US12/238,740 patent/US7871807B2/en active Active
- 2008-09-26 CN CN2008801089689A patent/CN101809144B/zh active Active
- 2008-09-26 AU AU2008313576A patent/AU2008313576B2/en not_active Ceased
- 2008-09-26 RU RU2010116187/10A patent/RU2484136C2/ru active
- 2008-09-26 TW TW097137378A patent/TWI485247B/zh not_active IP Right Cessation
- 2008-09-26 JP JP2010526347A patent/JP5537429B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2008-09-26 ES ES08840554.3T patent/ES2541551T3/es active Active
- 2008-09-26 WO PCT/FR2008/051730 patent/WO2009050390A2/fr active Application Filing
- 2008-09-26 MX MX2010003202A patent/MX2010003202A/es active IP Right Grant
-
2010
- 2010-03-01 ZA ZA2010/01480A patent/ZA201001480B/en unknown
- 2010-03-08 IL IL204361A patent/IL204361A/en active IP Right Grant
- 2010-12-07 US US12/962,375 patent/US20110212129A1/en not_active Abandoned
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| David E. Swayne, Michael L. Perdue, Joan R. Beck, Maricarmen Garcia1, David L. Suarez, "Vaccines protect chickens against H5 highly pathogenic avian infuenza in the face of genetic changes in field viruses over multiple years" Veterinary Microbiology 2000, 74, 165-172 M.D. Wareing.,"Live attenuated vaccines against influenza; an historical review" Vaccine 2001, 19, 3320–3330 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| BRPI0817247A2 (pt) | 2015-06-16 |
| EP2195420A2 (fr) | 2010-06-16 |
| CA2700288A1 (en) | 2009-04-23 |
| KR20100090241A (ko) | 2010-08-13 |
| ZA201001480B (en) | 2011-05-25 |
| AU2008313576A1 (en) | 2009-04-23 |
| WO2009050390A2 (fr) | 2009-04-23 |
| FR2921387B1 (fr) | 2012-04-20 |
| US20110212129A1 (en) | 2011-09-01 |
| JP5537429B2 (ja) | 2014-07-02 |
| RU2010116187A (ru) | 2011-11-10 |
| CN101809144B (zh) | 2013-12-25 |
| CN101809144A (zh) | 2010-08-18 |
| AR068541A1 (es) | 2009-11-18 |
| KR101744014B1 (ko) | 2017-07-04 |
| WO2009050390A3 (fr) | 2009-06-11 |
| IL204361A (en) | 2013-06-27 |
| RU2484136C2 (ru) | 2013-06-10 |
| AU2008313576B2 (en) | 2014-01-23 |
| TW200923093A (en) | 2009-06-01 |
| US7871807B2 (en) | 2011-01-18 |
| CA2700288C (en) | 2019-11-12 |
| EP2195420B1 (fr) | 2015-04-08 |
| MX2010003202A (es) | 2010-04-09 |
| JP2010539918A (ja) | 2010-12-24 |
| FR2921387A1 (fr) | 2009-03-27 |
| US20090081255A1 (en) | 2009-03-26 |
| ES2541551T3 (es) | 2015-07-21 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| TWI485247B (zh) | 產生流感病毒之方法 | |
| Swayne et al. | Strategies and challenges for eliciting immunity against avian influenza virus in birds | |
| Paillot et al. | Vaccination against equine influenza: quid novi? | |
| Lee et al. | Avian influenza virus: prospects for prevention and control by vaccination | |
| KR101715418B1 (ko) | 뉴캐슬 질환 바이러스-벡터를 이용한 조류 백신 | |
| US8475807B2 (en) | Avian influenza virus live attenuated vaccine and uses thereof | |
| US8986987B2 (en) | Herpesvirus of turkeys vectored vaccine against avian influenza in poultry | |
| TWI733680B (zh) | 不活化犬流感疫苗及其製造方法與用途 | |
| US20150056245A1 (en) | Recombinant inactivated viral vector vaccine | |
| MX2014001754A (es) | Vacunas contra influenza h5. | |
| RU2736788C1 (ru) | Штамм A/chiken/Kostroma/3175/17 H5N2 вируса гриппа птиц подтипа H5N2 Infuenza A virus рода Alphainfluenzavirus для контроля антигенной и иммуногенной активности вакцин против гриппа птиц и для изготовления антигенсодержащих диагностикумов | |
| US20220009970A1 (en) | Immunogenic composition against avian influenza virus h5 subtype | |
| RU2507256C2 (ru) | Штамм вируса гриппа а/17/mallard/нидерланды/00/95(h7n3) для производства живой и производства инактивированной гриппозных вакцин | |
| RU2809084C2 (ru) | Иммуногенная композиция против вируса птичьего гриппа подтипа h5 | |
| EP1923070A1 (en) | Vaccine for vaccinating feline against influenza virus | |
| WO2008059018A2 (en) | Vaccine for vaccinating felines and canines against influenza virus | |
| WO2007065967A1 (en) | A vaccine suitable for use against the next influenza a pandemia |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | Annulment or lapse of patent due to non-payment of fees |