TWI459967B

TWI459967B - 人造油體及其製造方法

Info

Publication number: TWI459967B
Application number: TW102121501A
Authority: TW
Inventors: Chian Yuh Lin; Chun Ren Chen; Wan Tesn Liao; Jason T C Tzen; Ming Tsung Chang
Priority date: 2013-06-18
Filing date: 2013-06-18
Publication date: 2014-11-11
Also published as: TW201500057A

Description

人造油體及其製造方法

本發明係有關於一種人造油體及其製造方法，用以增加攜帶疏水性藥物之量及效能，尤其可以非三酸甘油酯為油類，以DOGP磷脂質或以非DOGP磷脂質製造人造油體，使人造油體具備較廣大的配方彈性，更可應付各式各樣化合物的攜帶傳遞需求。

現今的藥物科技發展出許多具有活性的疏水性藥物，但常因藥物溶解度及生體可用率(bioavailability)的問題，使得應用上有極大的限制，如口服雌二醇(estradiol)藥物。

雌二醇乃屬一種雌激素(estrogen)，主要用於荷爾蒙補充療法(hormone replacement therapy)中治療中年女性停經後的症狀，如頭痛、失眠、熱潮紅、心悸、腰痠背痛、注意力不集中及情緒不穩定等；並可用來預防停經後，因荷爾蒙失衡導致的鈣質缺乏，而產生骨質疏鬆甚至骨骼破碎或斷裂的危險。而這類疏水性藥物，口服後由於易受腸胃道及肝臟酵素作用而降解，其最後生體可用率僅不及10%；因此，如何提高疏水性藥物載體之效能，以增加藥物生體可用率有其重要性。

攜帶疏水性藥物之相關技術有微粉末、形成鹽類、無定形、固體分散、環糊精(cyclodextrin)、脂質處方等方法。其中，以脂質處方做為攜帶疏水性藥物的主要技術例如係油溶液、微脂粒(liposomes)、乳劑等，針對此三種技術之特點比較如下：油溶液乃係因其疏水性藥物不溶於水，故用油性液體來溶解疏水性藥物，但能夠溶解藥物的種類及量均有限，而且一般人們較無法接受直接服用油性溶液；此外，其生體可用率也較低。

微脂粒係利用磷脂質形成單圈或多圈之球形胞器，可用來攜帶親水性或疏水性藥物，其最大優點係該磷脂質為細胞膜之成分，故與人體相容，且將藥物保存於形成單圈或多圈之磷脂質內，具有不暴露藥物，減低人體副作用，及保護藥物不被破壞之功能。但因其內外部皆係水相，若使用微脂粒來攜帶疏水性藥物，其能攜帶疏水性藥物之量係極其有限的。

乳劑係利用乳化劑將水相及油相形成水滴在油中(水油型) 或油滴在水中(油水型)之形態，一般口服乳劑，多為油水型，與微脂粒比較，因其油相量較多，其優點係若能尋得適合某一特定疏水性藥物溶解度佳之油相，則可攜帶疏水性藥物之量遠大於微脂粒，但其缺點為此種油相不易尋找，且一般而言，乳劑不安定。目前乳劑研究已從傳統粒徑較大之乳劑進展到粒徑較小之微乳劑，其特點為安定性較佳，吸收較好，能攜帶疏水性藥物之量及種類較多，但不具有微脂粒用磷脂質將藥物保存於其內的優點。

油體乃是近來年本實驗室由芝麻種子萃取出來之天然油體或以人工方法仿造天然油體，修飾而成之人造油體。該天然油體之結構係由一團中性的脂肪(三酸甘油酯)，被一層磷脂質所包覆著，而此層磷脂質的表面嵌滿了油體膜蛋白(oleosin)、油體鈣蛋白、油體固醇蛋白(steroleosin)等，粒徑約2μm左右；而油體的基本成份包括94-98%的三酸甘油酯、0.5-2%的磷脂質及0.5-3.5%的蛋白質。

人造油體乃係本實驗室根據天然油體的三個基本成份(三酸甘油酯、磷脂質及蛋白質)，以人工的方式製備而成。將三酸甘油酯、DOGP、油體鈣蛋白及緩衝液，以超音波細胞破碎機震盪而成，使分散於水相之油體，其粒徑能比天然油體的液滴粒徑更小，且更穩定。如同微脂粒一般，油體亦具有將藥物保存於磷脂質內之優點；另一方面，該磷脂質內係含三酸甘油酯之油相而非水相，因此，其溶解攜帶藥物量將遠高於微脂粒。

本實驗室已經發現將人造油體分散於水相，可利用油體磷脂質內的三酸甘油酯來溶解攜帶疏水性藥物環孢素(cyclosporine)，而形成一藥物傳遞系統，並增進其生體可用率。目前人造油體在藥物傳遞系統應用上之限制，在於人造油體係以由三酸甘油酯構成的植物油，來溶解攜帶疏水性藥物，故只有少數疏水性藥物能充分溶於該植物油中。

今，發明人即是鑑於上述現有之人造油體組成物上仍具有之缺失進一步研究，於是乃一本孜孜不倦之精神，並藉由其豐富之專業知識及多年之實務經驗所輔佐，而加以改善，並據此研創出本發明。

本發明主要目的除了保有前人造油體的優點，尚突破以三酸甘油酯為油類及以DOGP為磷脂質之油體製造方式的限制，尤其是複合溶劑配方，能針對特定疏水性藥物而設計配方內容，提高其溶解度。

為了達到上述實施目的，本發明人提出一種人造油體及其製造方法，以增加油體攜帶疏水性藥物之量及效能，係至少包括下列步驟：首先，準備包括有20μl至100μl的非三酸甘油酯油類、150μg至750μg的磷脂質、250μg至1250μg的油體鈣蛋白，以及10mM，pH7．5磷酸鈉緩衝溶液至總量1mL之混合液體；接著，將上述混合液體震盪混合均勻，震盪作業以超音波震盪器實施，條件為振幅30%，震盪5~20秒後，再將混合液體冰浴，冰浴時間為4~6分鐘；最後，再重複上述震盪及冰浴步驟至少2次；藉此，即可製造成攜帶疏水性藥物量較多且效能較佳之人造油體。

於本發明一實例中，非三酸甘油酯油類係選自二酸甘油酯、礦物油、界面活性劑，以及親脂性複合溶劑所構成之群組，其中界面活性劑可例如為山梨糖醇酐油酸酯(Span80)。而親脂性複合溶劑是由至少三種成份所組成，其中至少包含10~35%的油、20~55%的助溶劑，以及剩餘重量百分比的界面活性劑或輔界面活性劑或其混合，而親脂性複合溶劑所製備成人造油體之粒徑為65-1000nm。

於本發明一實例中，親脂性複合溶劑係包含有15%蓖麻油、25%聚乙二醇400、30%Cremophor EL，以及30%Egapal CA 210，而疏水性藥物係為雌二醇。

於本發明一實例中，磷脂質例如是DOGP或非DOGP，而非DOGP磷脂質是選自DPGP、DMGP以及DSGP所構成之群組；藉此，可依欲攜帶藥物之不同需求，提供更多製備人造油體之選擇。

(S1)‧‧‧步驟一

(S2)‧‧‧步驟二

(S3)‧‧‧步驟三

第一圖：本發明較佳實例實施之製造方法步驟流程圖。

第二圖：本發明較佳實施例之二酸甘油酯(dioleoylglycerol，Sigma)製備成新型人造油體之照片圖。

第三圖：本發明較佳實施例之不同處方於血液中雌二醇濃度與時間之關係。

本發明之目的及其結構功能上的優點，將依據以下圖面所示之結構，配合具體實施例予以說明，俾使審查委員能對本發明有更深入且具體之瞭解。

值得注意的是，本發明組成物之成分比例已揭示如下，然而熟悉本項技術之人士仍可能基於本發明之揭示而作種種不背離本發明精神之替換及修飾，例如可按相同比例混合製成；因此，本發明之保護範圍應不限於在此所揭示者，而應包括各種不背離本發明之替換及修飾。

首先，本發明製造出一種人造油體，以增加油體攜帶疏水性藥物之量及效能。其組成物包括有20μl至100μl的非三酸甘油酯油類、150μg至750μg的磷脂質、250μg至1250μg的油體鈣蛋白，以及10mM，pH7.5磷酸鈉緩衝溶液至總量1mL之混合液體。組成物所述之磷脂質可以係1，2-二油-sn-甘油基-3-磷酯膽鹼(1，2-Dioleoyl-sn-glycero-3-phosphocholine，DOGP)或非DOGP化合物，而非DOGP化合物係選自1，2-Dipalmitoyl-sn-glycero-3-phosphocholine(DPGP)、1，2-Dimyristoyl-sn-glycero-3-phosphocholine(DMGP)以及1，2-Distearoyl-sn-glycero-3-phosphocholine(DSGP)所構成之群組；另，非三酸甘油酯油類係選自二酸甘油酯、礦物油、界面活性劑Span80(EP級，日本試藥工業株式會社)，以及親脂性複合溶劑所構成之群組。若以親脂性複合溶劑為油類，其配方係由至少三種成份所組成，其中至少包含10~35%的油、20~55%的助溶劑，以及剩餘重量百分比的界面活性劑或輔界面活性劑或其混合，其中，對於疏水性藥物可例如為雌二醇，親脂性複合溶劑最佳係包含有15%蓖麻油、25%聚乙二醇400(PEG 400)、30%Cremophor EL，以及30%Egapal CA 210；而親脂性複合溶劑所製備成人造油體之粒徑為65-1000nm，其中較佳粒徑係為65-400nm，更佳粒徑係為65-200nm。

其次，請參照第一圖所示，為本發明人造油體之製造方法之較佳實施例的步驟流程圖，係主要包括有下列步驟：步驟一(S1)：準備包括有20μl至100μl的非三酸甘油酯油類、150μg至750μg的磷脂質、250μg至1250μg的油體鈣蛋白，以及10mM，pH7.5磷酸鈉緩衝溶液至總量1mL之混合液體。於本發明之一具體實例中，首先，取16.9mL磷酸(H₃ PO₄ )加入純水至400mL，成為磷酸水溶液，再取氫氧化鈉(NaOH)約10g加入純水至100mL(濃度約2N)，再慢慢加入前述磷酸水溶液，將pH值調至pH7.5，並加入純水至500mL，此為50倍原液，取上述原液2mL加入純水稀釋至100mL，即為10mM磷酸鈉緩衝溶液；接著，取250μg油體鈣蛋白加入於500μl之磷酸鈉緩衝溶液(10mM，pH7.5)中；再者，取磷脂質100mg溶於6.66mL氯仿(chloroform)，再從中取出10ul到試管(eppendorf)，於抽氣櫃中抽乾，約可分裝成666管，每管磷脂質為150ug；將上述有250μg油體鈣蛋白之500μl磷酸鈉緩衝溶液、480μl磷酸鈉緩衝溶液，以及20μl油類(如三酸甘油酯或複合溶劑配方)加入150ug磷脂質中，總體積為1mL，其中，油類中可溶有藥物如雌二醇；步驟二(S2)：將上述混合液體以震盪混合器(VortexMixer，VX100，Labnet)混合均勻並震盪，其中震盪作業係以超音波震盪器(Ultrasonic Procssor，VC-750)實施，而超音波震盪之最佳條件為振幅30%，震盪15秒後再將混合液體冰浴，最佳冰浴時間係為5分鐘；以及步驟三(S3)：將上述超音波震盪冰浴作業重複少2次，最佳次數係為3次，即可形成人造油體。若欲以該製造完成之人造油體攜帶藥品，則將欲攜帶藥品溶於油相內。

此外，藉由下述製備出含親脂性複合溶劑之人造油體的具體實施例，可進一步證明本發明之製程可實際應用之範圍，但不意欲以任何形式限制本發明之範圍。

親脂性複合溶劑係由至少三種成份所組成，包含10~35%的蓖麻油、20~55%的助溶劑聚乙二醇400或丙二醇(Propylene glycol)，以及剩餘重量百分比的界面活性劑Cremophor EL和Egapal CA 210，其親脂性複合溶劑之具體實施例可參照下表：

首先，先以非三酸甘油酯之親脂性液體來製備人造油體，接著以非DOGP的磷脂質製備人造油體，再接著以複合溶劑製備人造油體，最後並以含一疏水性藥物雌二醇複合溶劑配方為例子，將含雌二醇之各種處方，以每公斤體重5毫克的雌二醇之劑量，以餵食管餵食雄性SD大鼠(Sprague-Dawley rats，樂斯科生物科技股有限公司)。依餵食後不同時間點，分別是0、0.5、1、2、4、8、12，以及16小時，以麻醉藥愛可寧吸入劑(Isoflurane，寶齡富錦生技股份有限公司)麻醉SD大鼠，再進行眼窩(obital sinus)採血，並以酵素免疫分析法(Enzyme immunoassay，EIA)定量血液中之疏水性雌二醇藥物濃度，來評估比較本發明新型人造油體配方與目前傳統人造油體配方作為疏水性藥物載體的效能。

製造油體步驟如下：準備包括有20μl至100μl的油類、150μg至750μg的磷脂質、250μg至1250μg的油體鈣蛋白，以及10mM，pH7.5磷酸鈉緩衝溶液適量至總量1mL；接著，將上述成分混合均勻並震盪，其中震盪作業係以超音波震盪器實施，而超音波震盪之最佳條件為振幅30%，於室溫震盪15秒後再將混合液體冰浴5分鐘；最後，再重複2次上述震盪及冰浴步驟，即完成人造油體(請參閱第二圖)。

本人造油體具體實施例之不同處方標示如下：處方一：僅溶有雌二醇之篦麻油(Castor Oil，Acros)溶液；處方二：由溶有雌二醇的篦麻油、DOGP及油體鈣蛋白構成之傳統人造油體；處方三：由不含油體鈣蛋白，只含溶有雌二醇的篦麻油與DOGP構成之不完整人造油體；處方四：由含有雌二醇親脂性複合溶劑、油體鈣蛋白及DOGP構成的新型人造油體；以及處方五：由不含有雌二醇的親脂性複合溶劑、DOGP及油體鈣蛋白構成的新型人造油體。

本具體實施例中，比較新型人造油體配方與目前傳統人造油體配方作為疏水性藥物載體的結果，請參閱第三圖，不同處方的血液中雌二醇濃度與時間之關係顯示，處方一之血液中雌二醇濃度為最低，曲線下面積最小，含有雌二醇的油溶液進入胃腸道後，受膽汁乳化作用形成乳劑，但因雌二醇易受胃腸道酵素破壞及肝臟代謝，故血中濃度最低。

處方二之血液中雌二醇濃度較高，可能是因油體鈣蛋白及磷脂質的保護作用，使得雌二醇吸收前多少避掉胃腸道酵素之破壞，且其粒徑比處方一形成乳劑的液滴較小，故較順利的被腸壁吸收。

處方三中雌二醇雖然有磷脂質之保護作用，但缺少油體鈣蛋白之人造油體結構較不穩定，且粒徑明顯地比含有油體鈣蛋白的人造油體大，吸收效能較差。

處方四之血液中雌二醇濃度最高，曲線下面積最大，比處方二更高出許多，可理解地，除了有油體鈣蛋白及磷脂質的保護作用之外，主要的可能原因為處方四人造油體之粒徑(約68.3±0.3nm.)明顯地較處方一~三人造油體之粒徑小，而能經由腸道之M細胞所吞噬後進入淋巴管，以達到全身的血液循環。故顯示新型人造油體配方，可針對疏水性藥物如雌二醇，提高其溶解度，並增加其生體可用率。

處方五為處方四的對照組，證明空白新型人造油體對血液中雌二醇濃度沒有影響。

由上述之實施說明可知，本發明與現有技術相較之下，本發明一樣具有之前人造油體，能保護疏水性藥物於磷脂質及蛋白質內部的優點，且本發明突破以前油體只能溶解攜帶少數疏水性藥物的限制，尤其是具以下優點：

1.本發明以非三酸甘油酯(例如二酸甘油酯類、礦物油)為油類，也能與油體鈣蛋白、磷脂質、以及磷酸鈉緩衝溶液形成油體，且形成油體大小與以三酸甘油酯類(例如植物油)所形成油體之大小相似。藉此，油體的組成選擇性增加，可適用的藥物範圍亦擴大。

2.以非DOGP為磷脂質亦可提供更多製備油體的選擇，而增加油體作為藥物傳遞系統的應用性。

3.以親脂性複合溶劑為油類製作油體，能針對不同疏水性藥物而設計配方內容(例如不同種類及比例之油類、助溶劑、界面活性劑及輔界面活性劑)，提高藥物溶解度，例如原本10mg雌激素需在90℃溫度下才能以0.4mL篦麻油溶解，但於處方4親脂性複合溶劑中，其組成請參閱上表樣本2，在室溫下即可以0.4mL溶解10mg雌激素；並且複合溶劑與油體鈣蛋白、磷脂質，以及磷酸鈉緩衝溶液形成之油體體積比以非複合溶劑所形成之油體體積小，故藥效能達到更好。

綜上所述，本發明之人造油體組成物及其製造方法，的確能藉由上述所揭露之實施例，達到所預期之使用功效，且本發明亦未曾公開於申請前，誠已完全符合專利法之規定與要求。爰依法提出發明專利之申請，懇請惠予審查，並賜准專利，則實感德便。

惟，上述所揭之圖示及說明，僅為本發明之較佳實施例，非為限定本發明之保護範圍；大凡熟悉該項技藝之人士，其所依本發明之特徵範疇，所作之其它等效變化或修飾，皆應視為不脫離本發明之設計範疇。

(S1)‧‧‧步驟一

(S2)‧‧‧步驟二

(S3)‧‧‧步驟三

Claims

一種人造油體，係增加油體攜帶疏水性藥物之量及效能，包括有20μl至100μl的非三酸甘油酯油類、150μg至750μg的磷脂質、250μg至1250μg的油體鈣蛋白，以及10mM，pH7．5磷酸鈉緩衝溶液至總量1mL之混合液體；其中，該非三酸甘油酯油類係選自二酸甘油酯、礦物油、界面活性劑Span80，以及親脂性複合溶劑所構成之群組。
如申請專利範圍第1項所述之人造油體，該磷脂質係DOGP或非DOGP化合物。
如申請專利範圍第2項所述之人造油體，該非DOGP化合物係選自DPGP、DMGP以及DSGP所構成之群組。
如申請專利範圍第1項所述之人造油體，該親脂性複合溶劑係由至少三種成份所組成，其中至少包含10~35%的油、20~55%的助溶劑，以及剩餘重量百分比的界面活性劑或輔界面活性劑或其混合。
如申請專利範圍第4項所述之人造油體，該親脂性複合溶劑係包含有15%蓖麻油、25%聚乙二醇400(PEG 400)、30%Cremophor EL，以及30%Egapal CA 210，而該疏水性藥物係為雌二醇。
如申請專利範圍第1項所述之人造油體，該親脂性複合溶劑所製備成該人造油體之粒徑為65-1000nm。
一種人造油體之製造方法，其包括下列步驟：步驟一：準備有20μl至100μl的非三酸甘油酯油類、150μg至750μg的磷脂質、250μg至1250μg的油體鈣蛋白，以及10mM，pH7．5磷酸鈉緩衝溶液至總量1mL之混合液體；其中，該非三酸甘油酯油類係選自二酸甘油酯、礦物油、界面活性劑Span80，以及親脂性複合溶劑所構成之群組；步驟二：將上述混合液體混合均勻，於震盪作業完成將該混合液體冰浴；以及步驟三：將步驟二震盪冰浴作業重複至少2次，即可形成人造油體。
如申請專利範圍第7項所述之人造油體之製造方法，其中該震盪作業係以超音波震盪器實施，而該震盪作業條件為振幅30%，震盪5~20秒。
如申請專利範圍第7項所述之人造油體之製造方法，其中該步驟二係將該混合液體冰浴4~6分鐘。