TWI415603B

TWI415603B - １，８－辛二醯基苯胺羥胺酸（ｓｕｂｅｒｏｙｌａｎｉｌｉｄｅｈｙｄｒｏｘａｍｉｃａｃｉｄ）之調配物及其製配方法

Info

Publication number: TWI415603B
Application number: TW099119337A
Authority: TW
Inventors: Thomas A Miller; Kimberly Gallagher; Craig Ikeda; Justin Moser; Pavol Rajniak; Qingxi Wang; Brian Sell; Vincent R Capodanno; Benjamin Max Cohen; Robert A Reed; Jeannie Chow Wong; Aaron S Cote; Erik A Dienemann; Cindy Starbuck; Hsien-Hsin Tung
Original assignee: Merck Sharp & Dohme
Priority date: 2005-05-20
Filing date: 2006-05-11
Publication date: 2013-11-21
Also published as: MA28804B1; AR055953A1; WO2006127319A3; MY144613A; KR20080113135A; CA2580367A1; KR100993135B1; NZ594669A; AU2009201652A1; NZ553204A; EP1853245A2; AU2009201650B2; MX2007002047A; IL181070A0; JP5264174B2; JP2011251985A; KR100884500B1; ECSP077263A; JP2008519081A; WO2006127319A2

Description

1,8-辛二醯基苯胺羥胺酸(suberoylanilide hydroxamic acid)之調配物及其製配方法

本發明提供一種具有一特定溶解概況之醫藥組合物或結晶組合物，其包含1,8-辛二醯基苯胺羥胺酸或其醫藥學上可接受之鹽或水合物作為活性成份。本發明提供一種製備該結晶組合物或醫藥組合物之方法。本發明亦提供具有一特定粒徑分佈之組合物。

遍及本申請案之各種公開案可藉由圓括號內之阿拉伯數字來參考。對於此等公開案之全部引用可在本專利說明書結尾且緊接在申請專利範圍之前處發現。

癌症係一種細胞群體對通常支配增殖及分化之控制機制已變得(在不同程度上)沒有回應的病症。多年來存在兩種主要策略用於癌症之化學治療：a)藉由干擾性激素之產生或周邊動作來阻斷激素依賴性腫瘤細胞的增殖；及b)藉由將癌症細胞暴露於細胞毒素物質從而直接將其殺死，該等物質可損害瘤性細胞及正常細胞群體。

亦藉由誘導瘤性細胞(1)之終末分化來嘗試癌症治療。在細胞培養模型中已報導藉由將細胞暴露於多種刺激來進行分化，其包括：環狀AMP及維甲酸(2，3)，阿柔比星(aclarubicin)及其它蒽環黴素(4)。

儘管在腫瘤學領域已取得諸多改進，但是多數實體腫瘤在晚期階段仍不能治癒。在多數狀況下使用細胞毒素治療，然而，其常常導致患者顯著之病態而無顯著之臨床益處。尚須探索治療及控制晚期惡性疾病之較小毒性及較多特異性之試劑。

有大量跡象表明瘤性轉型作用不一定能破壞癌細胞(1，5，6)之分化潛力。存在對增殖之正常調節劑不予回應且在其分化程式表達中出現阻斷之諸多腫瘤細胞實例，且仍可誘導該等腫瘤細胞分化並停止複製。包括若干相對簡單之極性化合物(5，7-9)，維生素D及維甲酸之衍生物(10-12)，類固醇激素(13)，生長因子(6，14)，蛋白酶(15，16)，促癌物(17，18)及DNA或RNA合成之抑制劑(4，19-24)的多種試劑可誘導多種經轉型細胞株及原代人體腫瘤外植體以表達更多分化特徵。

諸如1,8-辛二醯基苯胺羥胺酸(SAHA)之組蛋白脫乙醯基酶抑制劑屬於此類有能力誘導腫瘤細胞生長停滯，分化及/或細胞凋零之試劑(25)。此等化合物目標指向瘤性細胞變成惡性之能力之內在機制，因為該等化合物以有效劑量抑制動物體內腫瘤生長時其看來並不具有毒性(26)。有若干條跡象表明達成細胞內轉錄調節之機制為組蛋白乙醯化作用及脫乙醯化作用(27)。吾人認為通過藉由改變組蛋白對於核小體內螺旋DNA之親和力而引起染色質結構變化時出現此等效果。有五類在核小體內已識別之組蛋白(命名為H1，H2A，H2B，H3及H4)。各核小體在其核心內含有每一組蛋白類型(除H1以外，其單獨存在於核小體結構之外部)的兩個組蛋白。吾人已發現當組蛋白次乙醯化時，該組蛋白對DNA磷酸酯主鏈有較大親和力。此親和力導致DNA與組蛋白緊密結合且致使該DNA難以為轉錄調節要素及系統所獲得。乙醯化狀態通過兩種酶複合物之間的活性平衡來進行調節：組蛋白乙醯基轉移酶(HAT)及組蛋白脫乙醯基酶(HDAC)。次乙醯化狀態被認為抑制了相關DNA之轉錄。此次乙醯化狀態藉由包括HDAC酶之大型多蛋白複合物來催化。詳言之，HDAC已展示出自染色質核心組蛋白中移除乙醯基之催化作用。

已展示SAHA(ZOLINZA^TM (vorinostat))對於治療癌症是有用的，其選擇性誘導瘤性細胞之終末分化，且誘導細胞生長停滯及/或誘導細胞凋零。SAHA對HDAC之抑制作用被認為如藉由X射線晶體學研究表現出之經由與酶的催化部位直接相互作用來進行(28)。HDAC抑制作用之結果不認為對基因體具有一般化效果，而實際上僅影響一小部分基因體(29)。使用藉由HDAC抑制劑培養之惡性細胞株之DNA微陣列所提供的證據展示存在有限(1%-2%)數目之產物發生改變的基因。舉例而言，在培養物中經由HDAC抑制劑處理之細胞展示週期素依賴性激酶抑制劑p21(30)之一致的誘導。此蛋白在細胞週期停滯中起著重要作用。HDAC抑制劑被認為藉由在p21基因區域中擴展組蛋白之高乙醯化狀態，藉此使該基因可為轉錄系統所獲得，從而增加p21之轉錄速率。表達不受HDAC抑制劑影響之基因未展示在區域相關組蛋白之乙醯化作用中的變化(31)。

本發明提供一種具有一特定溶解概況之醫藥組合物，其包含1,8-辛二醯基苯胺羥胺酸或其醫藥學上可接受之鹽或水合物作為活性成份。在一實施例中，與圖1中展示之基準溶解概況比較時該醫藥組合物之活性成份具有至少50至100之相似係數(f2)的活體外溶解概況。本發明亦提供用於經口投藥之醫藥組合物及基於其之單位劑型。

本發明亦提供一種結晶組合物，其包含1,8-辛二醯基苯胺羥胺酸或其醫藥學上可接受之鹽或水合物來作為活性成份，其中與圖2中展示之基準溶解概況比較時約100 mg活性成份具有至少50至100之相似係數(f2)的活體外溶解概況。

本發明亦提供製備該等醫藥組合物之方法。本發明亦提供具有特定粒徑分佈之組合物。

術語"醫藥學上可接受之載劑"意欲包括任何及所有溶劑，分散媒質，塗料，抗細菌劑及抗真菌劑，等張及吸收延緩劑及其類似溶劑(與醫藥上投藥相容)，其可維持醫藥組合物中活性成份之特定溶解速率。合適之載劑描述於最新版Remington's Pharmaceutical Sciences中，該領域中之標準參考文獻，其以引用的方式併入本文中。亦可使用脂質體及諸如不揮發性油之無水媒劑。用於醫藥活性物質之該等媒劑及試劑之用途在此項技術中為熟知。除非任何習知媒劑或試劑與該活性成份不相容，否則在本發明範疇以內涵蓋其在組合物中之用途。輔助活性化合物亦可併入該等組合物中。

術語"f2"或"F2"係指經由新活體外溶解概況對基準活體外溶解概況之逐點比較而測定之相似係數，如等式1中所展示：

R_t 係指用於基準之各時間點(t)溶解之化合物的百分比。T_t 係指用於測試樣本之各時間點(t)溶解之化合物的百分比。n 係指用於計算之時間點之數目。吾人認為50或更高之f₂ 值可反映相似之活體外溶解速率。

為達成本發明之目的，該醫藥組合物之全部活性成份之活體外溶解速率或溶解概況根據實例14中之步驟及條件自全部醫藥組合物中量測。在一實施例中，活體外溶解速率或溶解概況藉由使用一具有一螺旋狀沉降片之USP溶解裝置II(Quality Lab Accessories L.L.C.,Manville,NJ)於900 mL 2.0% Tween中(TCI America,Portland,Oregon)在37±0.5℃溫度下且在攪拌槳以100 rpm旋轉時進行量測。該全部醫藥組合物包括全部活性成份且若該醫藥組合物含有一膠囊殼，載劑，賦形劑，稀釋劑，崩解劑，潤滑劑，黏合劑或描述於下文中醫藥組合物部分之任何額外試劑，則與彼等組份一起進行量測。

為達成本發明之目的，"包含約100 mg活性成份之單口服單位劑型之一部分"之活體外溶解速率或溶解概況藉由自該單口服單位劑型中擷取包含約100 mg活性成份之組合物且使用一具有一螺旋狀沉降片之USP溶解裝置II(Quality Lab Accessories L.L.C.,Manville,NJ)於900 mL 2.0% Tween中(TCI America,Portland,Oregon)在37±0.5℃溫度下且在攪拌槳以100 rpm旋轉時進行量測。若該單口服單位劑型含有一膠囊殼，載劑，賦形劑，稀釋劑，崩解劑，潤滑劑，黏合劑或描述於下文中醫藥組合物部分之任何額外試劑，則與彼等組份一起進行量測。

醫藥組合物中約100 mg活性成份之活體外溶解速率或溶解概況根據實例15中之步驟及條件進行量測。在一實施例中，藉由使用一具有一螺旋狀沉降片之USP溶解裝置II(Quality Lab Accessories L.L.C.,Manville，NJ)於900 mL 2.0% Tween中(TCI America，Portland,Oregon)在37±0.5℃溫度下且在攪拌槳以100 rpm旋轉時進行量測。

為達成本發明之目的，粒徑分佈(各粒徑之體積%)經由一配備有一RODOS粉末分配散統之Sympatec雷射繞射分析器(HELOS H1006,Clausthal-Zellerfeld,Germany)進行量測。該樣本使用0.1 bar氣壓且經由一雷射束進行霧化，且粒徑分佈使用一具有5%-20%之目標遮光度範圍之850或1750-μm焦距透鏡來收集。使用一夫朗和斐(Fraunhofer)光學模型解捲積樣本散射圖案以獲取所得粒徑分佈。

為達成本發明之目的，活性成份之體積%藉由自該醫藥組合物中擷取顆粒內含物(意即，活性成份及賦形劑)，量測顆粒內容物之粒徑分佈(各粒徑之體積%)，減去非活性成份之顆粒之粒徑分佈，且標準化活性成份之體積%來進行量測。活性成份之體積%藉由使該體積%乘以活性成份相對於顆粒內容物之100%/百分比來標準化。

當用於數量情形中時術語"約"係指±10%之特定量。

為達成本發明之目的，對於X射線繞射圖案，視校正，樣本或器具而定，峰在2θ處可上移±0.3度(誤差)。在一實施例中，X射線繞射圖案中所有峰上移+0.3度或上移-0.3度。在誤差以內之X射線繞射圖案或峰被認為係相同或大體上相似。

具有特定溶解速率之組合物：

本發明提供一種醫藥組合物，其包含1,8-辛二醯基苯胺羥胺酸或其醫藥學上可接受之鹽或水合物來作為活性成份，其中該醫藥組合物之全部活性成份在活體外有43%-63%在10分鐘內溶解，66%-86%在30分鐘內溶解及77%-97%在60分鐘內溶解。在一實施例中，該醫藥組合物之全部活性成份在活體外有52%-72%在15分鐘內溶解，66%-86%在30分鐘內溶解及73%-93%在45分鐘內溶解。在另一實施例中，該醫藥組合物之全部活性成份在活體外有43%-63%在10分鐘內溶解，52%-72%在15分鐘內溶解，58%-78%在20分鐘內溶解，66%-86%在30分鐘內溶解，73%-93%在45分鐘內溶解及77%-97%在60分鐘內溶解。在一實施例中，該醫藥組合物之全部活性成份在活體外有46%-60%在10分鐘內溶解，55%-69%在15分鐘內溶解，61%-75%在20分鐘內溶解，69%-83%在30分鐘內溶解，76%-90%在45分鐘內溶解及80%-94%在60分鐘內溶解。在一實施例中，該全部活性成份之至少45%但小於或等於75%在15分鐘內溶解且該全部活性成份之至少75%在60分鐘內溶解。

在另一實施例中，本發明提供一種醫藥組合物，其包含1,8-辛二醯基苯胺羥胺酸或其醫藥學上可接受之鹽或水合物來作為活性成份，其中與圖1中展示之基準溶解概況比較時該醫藥組合物之全部活性成份具有至少50至100之相似係數(f2)的活體外溶解概況。在一實施例中，f2為56至100。在一實施例中，f2為60至100。在一實施例中，f2為65至100。在另一實施例中，f2為80至100。

在一實施例中，該活性成份為結晶體。在另一實施例中，該活性成份為結晶1,8-辛二醯基苯胺羥胺酸。在一特定實施例中，該結晶1,8-辛二醯基苯胺羥胺酸為SAHA形式I且藉由大體上與圖7A中陳述之圖案相似之X射線繞射圖案來表徵。在一實施例中，結晶1,8-辛二醯基苯胺羥胺酸藉由X射線繞射圖案來表徵，該圖案包括在9.0，9.4，17.5，19.4，20.0，24.0，24.4，24.8，25.0，28.0度2θ處之特徵峰。

在一實施例中，SAHA形式I藉由X射線繞射圖案來表徵，該圖案包括在約9.0，9.4，17.5，19.4，20.0，24.0，24.4，24.8，25.0，28.0及43.3度2θ處之特徵峰。在一實施例中，結晶1,8-辛二醯基苯胺羥胺酸藉由X射線繞射圖案來表徵，該圖案包括在9.0，9.4，17.5，19.4，20.0，24.0，24.4，24.8，25.0，28.0，43.3度2θ處之特徵峰且缺少在13.4-14.0及22.7-23.0度2θ處之特徵峰。在一實施例中，結晶1,8-辛二醯基苯胺羥胺酸藉由X射線繞射圖案來表徵，該圖案包括在9.0，9.4，17.5，19.4，20.0，24.0，24.4，24.8，25.0，28.0度2θ處之特徵峰且缺少在13.4-14.0及22.7-23.0度2θ處之特徵峰。在一實施例中，SAHA形式I另外藉由缺少至少一個在約<8.7，10.0-10.2，13.4-14.0，15.0-15.2，17.5-19.0，20.1-20.3，21.1-21.3，22.0.-22.22，22.7-23.0，25.0-25.5，26.0-26.2及27.4-27.6度2θ處之峰來表徵。在另一實施例中，SAHA形式I進一步藉由在約164.4+2.0處具有單一最大值之差示掃描熱量測定(Differential Scanning Calorimetry,DSC)溫譜圖來表徵，如藉由Perkins Elmer DSC 6 Instrument 5所量測。在一實施例中，該結晶1,8-辛二醯基苯胺羥胺酸具有單位晶胞參數a=10.9，b=7.9，c=16.4，α=90°，β=97.8°，γ=90°，空間群P2₁ /n。

在一特定實施例中，該結晶1,8-辛二醯基苯胺羥胺酸為SAHA形式IV且藉由X射線繞射圖案來表徵，該圖案包括在約8.8，9.3，11.0，12.4，17.4，19.4，22.4，22.9，23.83，24.2，24.8，25.8，27.0，27.8，28.4度2θ處之特徵峰。

在一實施例中，本發明提供一種單膠囊，其包含約100 mg 1,8-辛二醯基苯胺羥胺酸或其醫藥學上可接受之鹽或水合物來作為活性成份，其中該全部活性成份之活體外溶解概況藉由該全部活性成份之至少45%但小於或等於75%在15分鐘內溶解且該全部活性成份之至少75%在60分鐘內溶解來表徵，其中該活性成份為結晶1,8-辛二醯基苯胺羥胺酸且藉由X射線繞射圖案來表徵，該圖案包括在9.0、9.4、17.5、19.4、20.0、24.0、24.4、24.8、25.0、28.0度2θ處之特徵峰且缺少在13.4-14.0及22.7-23.0度2θ處之特徵峰。

在另一實施例中，本發明提供一種單膠囊，其包含約100 mg 1,8-辛二醯基苯胺羥胺酸或其醫藥學上可接受之鹽或水合物來作為活性成份，其中與圖1中展示之基準溶解概況比較時該全部活性成份具有至少50至100之相似係數(f2)的活體外溶解概況，其中該活性成份為結晶1,8-辛二醯基苯胺羥胺酸且藉由X射線繞射圖案來表徵，該圖案包括在9.0、9.4、17.5、19.4、20.0、24.0、24.4、24.8、25.0、28.0度2θ處之特徵峰且缺少在13.4-14.0及22.7-23.0度2θ處之特徵峰。

在又一實施例中，本發明提供一種單膠囊，其包含約100 mg之1,8-辛二醯基苯胺羥胺酸或其醫藥學上可接受之鹽或水合物來作為活性成份，其中該全部活性成份之活體外溶解概況藉由43%-63%在10分鐘內溶解，66%-86%在30分鐘內溶解及77%-97%在60分鐘內溶解來表徵，其中該活性成份為結晶1,8-辛二醯基苯胺羥胺酸且藉由X射線繞射圖案來表徵，該圖案包括在9.0、9.4、17.5、19.4、20.0、24.0、24.4、24.8、25.0、28.0度2θ處之特徵峰且缺少在13.4-14.0及22.7-23.0度2θ處之特徵峰。

本發明亦提供一種單口服單位劑型，其包含約120 mg至約600 mg之1,8-辛二醯基苯胺羥胺酸或其醫藥學上可接受之鹽或水合物來作為活性成份，其中與圖1中展示之基準溶解概況比較時該包含約100 mg活性成份之單位劑型部分具有至少50至100之相似係數(f2)的活體外溶解概況。在一實施例中，與圖1中展示之基準溶解概況比較時該活體外溶解概況具有至少70至100之相似係數(f2)。在一實施例中，該活性成份為結晶1,8-辛二醯基苯胺羥胺酸且藉由X射線繞射圖案來表徵，該圖案包括在9.0、9.4、17.5、19.4、20.0、24.0、24.4、24.8、25.0、28.0度2θ處之特徵峰且缺少在13.4-14.0及22.7-23.0度2θ處之特徵峰。

本發明亦提供一種結晶組合物，其包含1,8-辛二醯基苯胺羥胺酸或其醫藥學上可接受之鹽或水合物來作為活性成份，其中與圖2中展示之基準溶解概況比較時約100 mg之活性成份具有至少50至100之相似係數(f2)的活體外溶解概況。此結晶組合物為該醫藥組合物之前驅體。在該醫藥組合物為膠囊形式之情況下，該結晶組合物為在包囊之前具有或不具有賦形劑之活性成份。在一實施例中，該活性成份為結晶1,8-辛二醯基苯胺羥胺酸且藉由X射線繞射圖案來表徵，該圖案包括在9.0、9.4、17.5、19.4、20.0、24.0、24.4、24.8、25.0、28.0度2θ處之特徵峰且缺少在13.4-14.0及22.7-23.0度2θ處之特徵峰。

該活性成份可為任何結晶形式，其限制條件為該活性成份顆粒須展示特定溶解速率。該活性成份亦可為非結晶形式。該等活性成份顆粒可為微米尺寸化(或可為聚結)顆粒，粉末，油，油性懸浮液或任何其它固體形式。

在上述組合物之特定實施例中，該活性成份為1,8-辛二醯基苯胺羥胺酸。

本發明亦包含醫藥組合物，其包含SAHA與無機鹼(例如氫氧化鈉，氫氧化鉀，氫氧化銨，氫氧化鈣或氫氧化鐵)及有機鹼(諸如異丙胺，三甲胺，2-乙基胺基乙醇，組胺酸，普魯卡因(procaine)及其類似物)形成之醫藥學上可接受之鹽。

本發明亦包含醫藥組合物，其包含SAHA之水合物。術語"水合物"包括(但不限於)半水合物，一水合物，二水合物，三水合物及其類似水合物。

具有特定粒徑分佈之組合物：

本發明亦提供一種醫藥組合物，其包含1,8-辛二醯基苯胺羥胺酸或其醫藥學上可接受之鹽或水合物來作為活性成份，其中約90微米至110微米至約120微米至250微米之粒徑之體積%增加，在約120微米至250微米處到達最高峰且在該峰之後降低。在一實施例中，與其它粒徑之體積%相比較該峰為最高體積%。

在一實施例中，具有約90微米至110微米粒徑之活性成份之體積%在約2.0%至約10%範圍內，且具有約120微米至250微米粒徑之活性成份之體積%在約4.0%至約12%範圍內。在一實施例中，具有約90微米至110微米粒徑之活性成份之體積%在約3.0%至約9%範圍內，且具有約120微米至250微米粒徑之活性成份之體積%在約5.0%至約11.5%範圍內。

在另一實施例中，具有約90微米至110微米粒徑之顆粒之體積%在約5.5%至約8.0%範圍內，且具有約120微米至250微米粒徑之顆粒之體積%在約6.5%至約9.0%範圍內。

在一實施例中，具有約90微米至110微米粒徑之顆粒之體積%在約6.0%至約7.5%範圍內，且具有約120微米至250微米粒徑之顆粒之體積%在約7.0%至約8.5%範圍內。

在一實施例中，具有小於約105微米粒徑之活性成份之體積%為約45%-85%且具有大於約105微米粒徑之活性成份之體積%為約55%-15%。

在一實施例中，對於粒徑約20微米至25微米至約35微米至40微米之活性成份之體積%,峰在約35微米至40微米處增加且在該峰之後降低。在一實施例中，具有約20微米至25微米粒徑之活性成份之體積%在約1.0%至約4%範圍內，且具有約35微米至40微米粒徑之活性成份之體積%在約3.0%至約7%範圍內。

在一實施例中，該活性成份為結晶體。在另一實施例中，該活性成份為結晶1,8-辛二醯基苯胺羥胺酸。在一特定實施例中，該結晶1,8-辛二醯基苯胺羥胺酸為SAHA形式I且藉由大體上與圖7A中陳述之圖案相似之X射線繞射圖案來表徵。在一實施例中，結晶1,8-辛二醯基苯胺羥胺酸藉由X射線繞射圖案來表徵，該圖案包括在9.0、9.4、17.5、19.4、20.0、24.0、24.4、24.8、25.0、28.0度2θ處之特徵峰。

在一實施例中，SAHA形式I藉由X射線繞射圖案來表徵，該圖案包括在約9.0、9.4、17.5、19.4、20.0、24.0、24.4、24.8、25.0、28.0及43.3度2θ處之特徵峰。在一實施例中，結晶1,8-辛二醯基苯胺羥胺酸藉由X射線繞射圖案來表徵，該圖案包括在9.0、9.4、17.5、19.4、20.0、24.0、24.4、24.8、25.0、28.0、43.3度2θ處之特徵峰且缺少在13.4-14.0及22.7-23.0度2θ處之特徵峰。在一實施例中，結晶1,8-辛二醯基苯胺羥胺酸藉由X射線繞射圖案來表徵，該圖案包括在9.0、9.4、17.5、19.4、20.0、24.0、24.4、24.8、25.0、28.0度20處之特徵峰且缺少在13.4-14.0及22.7-23.0度2θ處之特徵峰。在一實施例中，SAHA形式I另外藉由缺少至少一個在約<8.7，10.0-10.2、13.4-14.0、15.0-15.2、17.5-19.0、20.1-20.3、21.1-21.3、22.0-22.22、22.7-23.0、25.0-25.5、26.0-26.2及27.4-27.6度2θ處之峰來表徵。在另一實施例中，SAHA形式I進一步藉由在約164.4±2.0處具有單一最大值之差示掃描熱量測定(Differential Scanning Calorimetry,DSC)溫譜圖來表徵，如藉由Perkins Elmer DSC 6 Instrument 5所量測。在一實施例中，該結晶1,8-辛二醯基苯胺羥胺酸具有單位晶胞參數a=10.9、b=7.9、c=16.4、α=90°、β=97.8°、γ=90°，空間群P2₁ /n。

在一特定實施例中，該結晶1,8-辛二醯基苯胺羥胺酸為SAHA形式IV且藉由X射線繞射圖案來表徵，該圖案包括在約8.8、9.3、11.0、12.4、17.4、19.4、22.4、22.9、23.83、24.2、24.8、25.8、27.0、27.8、28.4度2θ處之特徵峰。

醫藥組合物：

該活性成份可併入用於經口投藥之醫藥組合物中。該活性成份視情況可與醫藥學上可接受之載劑或賦形劑合倂。

在一實施例中，該醫藥學上可接受之載劑為固體顆粒形式。通常用作載劑或稀釋劑之任何惰性賦形劑可用於本發明之調配物中，諸如(例如)膠，澱粉，糖，纖維素材料，丙烯酸酯或其混合物。在一實施例中，該稀釋劑為微晶纖維素。該等組合物可進一步包含崩解劑(例如聚羥甲基纖維素鈉)及潤滑劑(例如硬脂酸鎂)，且另外可包含一或多種添加劑，其選自黏合劑，緩衝劑，蛋白酶抑制劑，界面活性劑，助溶劑，增塑劑，乳化劑，穩定劑，增黏劑，甜味劑，成膜劑或其任何組合。此外，本發明之組合物可為受控釋放或立即釋放調配物之形式。

在一實施例中，本文所描述之醫藥組合物可進一步包含微晶纖維素，聚羥甲基纖維素鈉及硬脂酸鎂。可改變調配物中活性成份及各種賦形劑之百分比。舉例而言，該組合物可包含在約20重量%至90重量%之間，在約50重量%至80重量%之間或在約60重量%至70重量%之間的活性成份。此外，該組合物可包含在約10重量%至70重量%之間，在約20重量%至40重量%之間或在約25重量%至35重量%之間的微晶纖維素作為載劑或稀釋劑。此外，該組合物可包含在約1重量%至30重量%之間，在約1重量%至10重量%之間或在約2重量%至5重量%之間的聚羥甲基纖維素鈉作為崩解劑。此外，該組合物可包含在約0.1重量%至5重量%之間或在約0.5重量%至1.5重量%之間的硬脂酸鎂作為潤滑劑。

在一實施例中，本發明之醫藥組合物為約50重量%-80重量%之活性成份；約20重量%-40重量%之微晶纖維素；約1重量%-10重量%之聚羥甲基纖維素鈉；及約0.1重量%-5重量%之硬脂酸鎂。在另一實施例中，本發明之醫藥組合物為約60重量%-70重量%之活性成份；約25重量%-35重量%之微晶纖維素；約2重量%-5重量%之聚羥甲基纖維素鈉；及約0.5重量%-1.5重量%之硬脂酸鎂。在一實施例中，所描述之醫藥組合物包含約50 mg-200 mg或50 mg-600 mg之SAHA形式I。

本發明之現有實施例為明膠膠囊中含有之SAHA與微晶纖維素，NF(Avicel Ph 101)，聚羥甲基纖維素鈉，NF(AC-Di-Sol)及硬脂酸鎂，NF之固體調配物。另一實施例為醫藥組合物，其包含約100 mg活性成份，約44.3 mg微晶纖維素，約4.5 mg聚羥甲基纖維素鈉，約1.2 mg硬脂酸鎂。

在一實施例中，該等醫藥組合物經口投藥，且由此以適合經口投藥之形式調配，意即，作為固體或液體形式。合適之固體口服調配物包括(例如)錠劑，膠囊，丸劑，顆粒，片粒及其類似物。合適之液體口服調配物包括(例如)乳狀液，油及其類似物。在本發明一實施例中，將該組合物調配於膠囊中。根據此實施例，本發明之組合物除包含活性成份及惰性載劑或稀釋劑之外還包含一種硬質明膠膠囊。

固體載劑/稀釋劑包括(但不限於)膠，澱粉(例如，玉米澱粉，預膠凝化澱粉)，糖(例如，乳糖，甘露糖醇，蔗糖，右旋糖)，纖維素材料(例如，微晶纖維素)，丙烯酸酯(例如，聚丙烯酸甲酯)，碳酸鈣，氧化鎂，滑石粉或其混合物。

對於液體調配物，醫藥學上可接受之載劑可為非水溶液，懸浮液，乳狀液或油。非水溶劑之實例為丙二醇，聚乙二醇及諸如油酸乙酯之可注射有機酯。油之實例為彼等石油，動物油，植物油或源於合成之油，(例如)花生油，豆油，礦物油，橄欖油，向日葵籽油及魚肝油。懸浮液亦可包括下列組份：不揮發性油，聚乙二醇，甘油，丙二醇或其它合成溶劑；抗菌劑，如苄醇或對羥基苯甲酸甲酯；抗氧化劑，諸如抗壞血酸或亞硫酸氫鈉；螯合劑，諸如乙二胺四乙酸(EDTA)。

另外，該等組合物可進一步包含黏合劑(例如，阿拉伯膠，玉米澱粉，明膠，聚羧乙烯製劑，乙基纖維素，瓜爾膠，羥基丙基纖維素，羥基丙基甲基纖維素，聚乙烯吡咯酮)；崩解劑(例如，玉米澱粉，土豆澱粉，褐藻酸，二氧化矽，聚羥甲基纖維素鈉，交聯聚乙烯吡咯酮，瓜爾膠，羥基乙酸澱粉鈉，澱粉羥基乙酸鈉)；清潔劑(例如，吐溫(Tween)20，吐溫(Tween)80，泊洛尼克(Pluronic)F68，膽汁酸鹽)；蛋白酶抑制劑；界面活性劑(例如，月桂基硫酸鈉)；滲透增強劑；助溶劑(例如甘油，聚乙二醇)；助流劑(例如，膠狀二氧化矽)；抗氧化劑(例如，抗壞血酸，焦亞硫酸鈉，丁基化羥基大茴香醚)；穩定劑(例如，羥基丙基纖維素，羥基丙基甲基纖維素)；黏度增強劑(例如，聚羧乙烯製劑，膠狀二氧化矽，乙基纖維素，瓜爾膠)；甜味劑(例如，蔗糖，阿斯巴甜，檸檬酸)；調味劑(例如，胡椒薄荷，水楊酸甲酯或橙味劑)；防腐劑(例如，硫柳汞，苄醇，對羥基苯甲酸酯)；潤滑劑(例如，硬脂酸，硬脂酸鎂，聚乙二醇，月桂基硫酸鈉)；助流劑(例如，膠狀二氧化矽)；增塑劑(例如，鄰苯二甲酸二乙酯，檸檬酸三乙酯)；乳化劑(例如，聚羧乙烯製劑，羥基丙基纖維素，月桂基硫酸鈉)，聚合物塗料(例如，泊洛沙姆(poloxamer)或保麗視明(poloxamine))；塗層及薄膜形成劑(例如，乙基纖維素，丙烯酸酯，聚丙烯酸甲酯)及/或佐劑。

在一實施例中，與載劑一起製備該活性成份，該等載劑將保護化合物抵禦自體內快速消除，諸如受控釋放調配物，其包括植入及微膠囊傳遞系統。可使用生物可降解，生物相容性聚合物，諸如乙烯醋酸乙烯酯，聚酸酐，聚乙醇酸，膠原蛋白，聚原酸酯及聚乳酸。該等調配物之製備方法對彼等熟習此項技術者將變得顯而易見。該等材料亦可自Alza Corporation及Nova Pharmaceuticals,Inc商業獲得。脂質懸浮液(包括脂質體，其目標為用對於病毒抗原之單株抗體感染細胞)亦可用作醫藥學上可接受之載劑。此等載劑可根據彼等熟習此項技術者已知之方法來製備，例如在美國專利第4,522,811號中所描述。

含有活性組份之醫藥組合物之製備在此項技術中完全知曉，(例如)可藉由混合，粒化或錠劑形成方法。該活性治療成份常常與醫藥學上可接受且與該活性成份相容之賦形劑混合。對於經口投藥，該等活性劑與常用於此目的之添加劑混合，諸如媒劑，穩定劑或惰性稀釋劑，且藉由常用方法轉化成投藥之合適形式，諸如錠劑，塗覆錠劑，硬質或軟質明膠膠囊，含水溶液，酒精性溶液或油性溶液及如上文詳述之類似物。

在一實施例中，該等口服組合物以單位劑型進行調配從而易於投藥且使劑量均勻。如本文中使用之單位劑型係指適合作為單一劑量用於待治療病人之實體離散單元；各單元含有經計算以與所需醫藥載劑相關聯產生所需治療效果之預定量活性成份。本發明之單位劑型之規格受制於且直接取決於該活性成份之獨有特徵及將達成之特定治療效果，及混配該活性化合物以治療個體之技術中的固有限制。在某些實施例中，單位劑型含有約600 mg、550 mg、500 mg、450 mg、400 mg、350 mg、300 mg、250 mg、200 mg、150 mg、110 mg、105 mg、100 mg、95 mg、90 mg、85 mg、80 mg、75 mg、70 mg、65 mg、60 mg、55 mg、50 mg、45 mg或40 mg之活性成份。在一實施例中，該活性成份之量為約100 mg。

該等醫藥組合物可與投藥指示一同包括在一容器，封裝或分配器中。在一實施例中，該醫藥組合物為單一膠囊，其中活性成份之量為約100 mg。在一實施例中，該醫藥組合物為兩個膠囊，其中各膠囊含有約50 mg活性成份。

製備具有特定溶解速率之組合物之方法：

本發明提供一種製備結晶組合物之方法，該結晶組合物包含1,8-辛二醯基苯胺羥胺酸或其醫藥學上可接受之鹽或水合物來作為活性成份，其中與圖2中展示之基準溶解概況比較時約100 mg之活性成份具有至少50至100之相似係數(f2)的活體外溶解概況，該方法包含下列步驟：

(a)　結晶至少兩批次該活性成份；且

(b)　摻合至少兩批次結晶活性成份以製備該結晶組合物。

在一替代方法中，該結晶組合物藉由下列步驟製備：

(a)　研磨或濕式研磨結晶活性成份以製備至少一個第一批次結晶活性成份；

(b)　結晶該活性成份以製備至少一個在尺寸上大於經研磨或濕式研磨之結晶活性成份之第二批次結晶活性成份；

(c)　摻合至少一個第一批次與至少一個第二批次結晶活性成份以製備該結晶組合物。

接著可進一步加工該結晶組合物以製備醫藥組合物，其中與圖1中展示之基準溶解概況比較時該全部活性成份具有至少50至100之相似係數(f2)的活體外溶解概況。此可藉由施加壓力至該結晶組合物來完成，例如藉由封裝該等具有或不具有賦形劑之結晶組合物。歸因於在該膠囊封裝製程期間所承受之壓力，使該活性成份之顆粒出現破損，其影響粒徑分佈，藉此影響溶解速率。顆粒破損量可受膠囊密度影響，而該膠囊密度受壓實頂桿類型及膠囊填充重量影響。

因此，在另一實施例中，本發明提供一種製備醫藥組合物之方法，該醫藥組合物包含1,8-辛二醯基苯胺羥胺酸或其醫藥學上可接受之鹽或水合物來作為活性成份，其中與圖1中展示之基準溶解概況比較時該醫藥組合物之全部活性成份具有至少50至100之相似係數(f2)的活體外溶解概況，該方法包含下列步驟：

(a)　結晶至少兩批次該活性成份；

(b)　摻合至少兩批次結晶活性成份；且

(c)　自經摻合之兩批次結晶活性成份製備該醫藥組合物。

在一實施例中，自有機溶劑或有機溶劑與水之混合物中活性成份或粗活性成份之結晶來製備該結晶活性成份。在一實施例中，該有機溶劑為一或多種甲醇，乙醇，乙腈，異丙醇及乙酸。在一實施例中，該有機溶劑為乙醇。在一實施例中，該混合物包含約40%-99%乙醇。在一實施例中，該混合物包含約40%-99%乙醇及60%-1%水。在一實施例中，步驟(c)藉由封裝一部分經摻合之結晶活性成份來進行。

在一替代方法中，該醫藥組合物藉由下列步驟製備：

(c)　摻合至少一個第一批次與至少一個第二批次結晶活性成份；且

(d)　自該經摻合之第一批次與第二批次結晶活性成份製備該醫藥組合物。

在一實施例中，第一批次結晶活性成份具有小於約50 μm之平均粒徑且第二批次結晶活性成份具有大於約130 μm之平均粒徑。在另一實施例中，該第一批次結晶活性成份具有小於約50 μm之平均粒徑且該第二批次結晶活性成份具有在約120 μm至160 μm範圍內之平均粒徑。在一特定實施例中，95%之第一批次結晶活性成份小於約100 μm。在一實施例中，95%之第二批次結晶小於約300 μm。在一實施例中，步驟(d)藉由封裝一部分經摻合之結晶活性成份來進行。

在一實施例中，該第一批次結晶成份具有小於約60 μm之平均粒徑且該第二批次結晶活性成份具有在約100 μm-250 μm之平均粒徑。在另一實施例中，該第一批次結晶成份具有在約25 μm至45 μm範圍內之平均粒徑且該第二批次結晶活性成份具有在約130 μm至180 μm範圍內之平均粒徑。

在一實施例中，自有機溶劑或有機溶劑與水之混合物中活性成份或粗活性成份之結晶來製備該結晶活性成份。在一實施例中，該有機溶劑為一或多種甲醇，乙醇，乙腈，異丙醇及乙酸。在一實施例中，該有機溶劑為乙醇。在一實施例中，該混合物包含約40%-99%乙醇。在一實施例中，該混合物包含約40%-99%乙醇及60%-1%水。

在另一實施例之步驟(c)中，使約40%-95%之第二批次結晶活性成份與約60%-5%之第一批次經研磨之結晶活性成份摻合。

在上述方法之一實施例中，該結晶步驟涉及接種。在上述方法之另一實施例中，該摻合比率藉由使用一封裝破損模型及一溶解模型之電腦模擬程式進行測定。在一實施例中，將該摻合比率最優化以獲得具有與圖1中展示之基準溶解速率概況相似之SAHA溶解速率概況的組合物。

本發明亦提供一種製備1,8-辛二醯基苯胺羥胺酸或其醫藥學上可接受之鹽或水合物之再結晶活性成份的方法，該方法包含下列步驟：

(a)　提供結晶活性成份至有機溶劑，水或其混合物中以形成漿料；

(b)　加熱該漿料以形成2%-30%未溶解之結晶活性成份；且

(c)　冷卻該漿料以獲得再結晶活性成份。

在一實施例中，步驟(a)中之結晶活性成份具有小於約60μm之平均粒徑。

在另一實施例中，該結晶活性成份藉由下列步驟來製備：

(i)添加結晶活性成份至有機溶劑，水或其混合物中以形成晶種漿料；且

(ii)濕式研磨該漿料以達成經濕式研磨之結晶活性成份。

在另一實施例中，該結晶活性成份藉由乾式研磨結晶活性成份之步驟來製備。在又一實施例中，該結晶活性成份在羥胺存在下獲得。

在一實施例之步驟(a)中，使用40%-99%乙醇與60%-1%水之混合物。在另一實施例之步驟(b)中，將該漿料加熱至60℃-75℃約1-3小時。在又一實施例中，步驟(c)藉由在約15至72小時內自60℃-75℃冷卻至25℃-5℃來進行。

在另一實施例中，該等上述方法進一步包含將約40%-95%再結晶活性成份與具有小於約60μm平均粒徑之約60%-5%結晶活性成份摻合。

本發明亦提供一種製備1,8-辛二醯基苯胺羥胺酸之結晶活性成份之方法，該方法包含下列步驟：

(a)　提供結晶活性成份至40%-99%乙醇與60%-1%水之混合物中以形成漿料；

(b)　加熱該漿料以形成2%-30%未溶解之結晶活性成份；

(c)　冷卻該漿料以獲得再結晶活性成份；且

(d)　將約40%-95%再結晶活性成份與具有小於約60 μm平均粒徑之約60%-5%結晶活性成份摻合。

(a)　添加結晶活性成份至有機溶劑或有機溶劑與水之混合物中以形成漿料；

(b)　濕式研磨該漿料以達成具有小於約50 μm平均粒徑之結晶活性成份；

(c)　加熱經濕式研磨之漿料以形成約5%-30%之晶種床；且

(d)　冷卻該漿料至25℃以下以獲得再結晶活性成份。

在一實施例之步驟(a)中，該混合物含有乙醇及水，詳言之為約40%-95%之乙醇。在一特定實施例中，可使用約1:1醇與水之混合物。在另一特定實施例中，可使用約9：1乙醇與水之混合物。在一實施例中，於濕式研磨步驟之後，至少80%-95%或在另一實施例中，95%之結晶活性成份具有小於約100 μm的粒徑。

在一實施例中，步驟(c)形成約10%-20%之晶種床。在一特定實施例中，步驟(c)形成約15%之晶種床。在一實施例中，步驟(c)藉由在60℃-70℃加熱經濕式研磨之漿料約1-3小時來達成。在另一實施例中，步驟(c)藉由在63℃-66℃加熱經濕式研磨之漿料約1-3小時來達成。在一特定實施例中，步驟(c)藉由在64℃-65℃加熱經濕式研磨之漿料約1-3小時來達成。

在一實施例中，步驟(d)藉由在約15至30小時內自60℃-70℃冷卻至25℃-5℃來進行。在一實施例中，步驟(d)藉由在約15至30小時內自64℃-65℃冷卻至20℃-5℃來進行。該冷卻方法可涉及使在特定時間週期內降低溫度與在特定時間週期內維持該溫度相組合。

該等上述方法可進一步包含將再結晶活性成份與藉由等同於步驟(a)及步驟(b)之步驟製備的經濕式研磨之結晶活性成份摻合的步驟。經濕式研磨之結晶活性成份可自步驟(b)之經濕式研磨之材料部分中得到。或者，該經濕式研磨之結晶活性成份可根據步驟(a)及步驟(b)獨立製備。因此，與再結晶活性成份之結晶條件相比較，該經濕式研磨之結晶活性成份可在相同或不同溶劑或混合物中製備。該摻合比率可由電腦模擬程式確定。在一實施例中，該摻合比率為60%-80%之再結晶活性成份及40%-20%經濕式研磨之結晶活性成份。在一特定實施例中，該摻合比率為約70%之再結晶活性成份及約30%之經濕式研磨之結晶活性成份。在另一特定實施例之步驟(a)中，使用9：1或1:1之乙醇與水之混合物，且該摻合比率為70%之再結晶活性成份及約30%之經濕式研磨之結晶活性成份。

(a)　提供結晶活性成份至有機溶劑，水或其混合物中以在第一容器中形成漿料；

(b)　加熱該第一容器中之漿料以大體上溶解所有結晶活性成份；

(c)　將步驟(b)之第一容器中之內容物冷卻至使該溶液過飽和的溫度；

(d)　添加該結晶活性成份之晶種至步驟(c)之內容物中；

(e)　使步驟(d)之內容物在與步驟(c)相同溫度下老化；

(f)　冷卻步驟(e)中之內容物以獲得再結晶活性成份。

在一實施例中，步驟(d)包含下列步驟：

(i)提供結晶活性成份於有機溶劑，水或其混合物中以形成晶種漿料；

(ii)加熱且老化該晶種漿料以溶解一部分晶種；

(iii)將步驟(ii)之內容物冷卻至與步驟(c)相同之溫度；

(iv)將步驟(iii)之晶種漿料轉移至第一容器中。

在一實施例中，步驟(i)之結晶活性成份具有小於約60μm之平均粒徑。在另一實施例中，步驟(i)藉由下列步驟製得：

(v)添加結晶活性成份至有機溶劑，水或其混合物中以形成晶種漿料；

(vi)濕式研磨該漿料以達成經濕式研磨之結晶活性成份。

在另一實施例中，步驟(i)藉由下列步驟製得：

(v)乾式研磨結晶活性成份；

(vi)添加該經乾式研磨之結晶活性成份至有機溶劑，水或其混合物中以形成晶種漿料。

在又一實施例中，於步驟(vi)之後且於步驟(d)之前進一步包含分離，清洗及乾燥經濕式研磨之結晶活性成份的步驟。

在一實施例中，步驟(a)之結晶活性成份在羥胺存在下獲得。在另一實施例中，在步驟(a)及步驟(i)中使用40%-99%乙醇與60%-1%水之混合物。在又一實施例中，在步驟(a)及步驟(i)中使用比率為49：51至51：49之乙醇與水之混合物。

在一實施例之步驟(b)中，在最小15 psig壓力下將該漿料加熱至60℃-75℃。在另一實施例之步驟(b)中，在最小15 psig壓力下將該漿料加熱至67℃-70℃。

在一實施例之步驟(c)中，將該等內容物冷卻至60℃-65℃。在另一實施例之步驟(c)中，將該等內容物冷卻至61℃-63℃。

在一實施例之步驟(ii)中，將該晶種漿料加熱至62℃-66℃。在另一實施例之步驟(ii)中，將該晶種漿料加熱至64℃-65℃。

在一實施例中，步驟(f)藉由在約15至72小時內自60℃至70℃冷卻至25℃至-5℃來進行。在另一實施例中，步驟(f)藉由在約15至72小時內自60℃至64℃冷卻至0℃至10℃來進行。

(b)　濕式研磨該漿料以達成具有小於約50 μm之平均粒徑之結晶活性成份；

(c)　加熱該經濕式研磨之漿料至60℃至70℃以製備晶種漿料；

(d)　提供結晶活性成份於有機溶劑或有機溶劑與水之混合物中；

(e)　加熱步驟(d)中之材料以溶解該結晶活性成份；

(f)　冷卻步驟(e)中之材料以獲得過飽和溶液而不具有晶核生成；

(g)　將步驟(c)中之晶種漿料轉移至該過飽和溶液中；且(h)　將步驟(g)中之材料冷卻至25℃以下。

在一實施例之步驟(a)及步驟(d)中，使用含有乙醇及水之混合物，詳言之為約40%-95%之乙醇。在一特定實施例中，使用約1:1乙醇與水之混合物。在另一特定實施例中，使用約9:1乙醇與水之混合物。在步驟(a)或步驟(d)中所使用之有機溶劑之百分比可相同或不同。舉例而言，在步驟(a)中，可使用約40%-100%乙醇，同時在步驟(d)中可使用約1:1或9：1乙醇與水之混合物。在一實施例中，在濕式研磨步驟之後，至少80%-95%或95%之結晶活性成份具有小於約100 μm的粒徑。

在一實施例中，步驟(c)形成約10%-20%之晶種床。在一特定實施例中，步驟(c)形成約15%之晶種床。在另一實施例中，將該經濕式研磨之漿料加熱至63℃-67℃。在又一實施例中，在20-25 psig下將該經濕式研磨之漿料加熱至62℃-66℃且冷卻至61℃-63℃。在又一實施例中，加熱該經濕式研磨之漿料以溶解50%之晶種固體。

在一實施例之步驟(e)中，在65℃-75℃下加熱。在一特定實施例之步驟(e)中，在67℃-70℃下加熱。在一實施例之步驟(e)中，在20-25 psig壓力下進行加熱。在另一實施例之步驟(f)中，在60℃-65℃下冷卻。在又一實施例中之步驟(e)中，在61℃至63℃下冷卻。

在另一實施例中，於步驟(g)之後且於步驟(h)之前，混合物在61℃-63℃下老化2小時。在一實施例之步驟(h)中，在26小時內經由三個線性步驟達成冷卻。

本發明亦提供製備1,8-辛二醯基苯胺羥胺酸之再結晶活性成份的方法，該方法包含下列步驟：

(a)　提供結晶活性成份至40%-99%乙醇與60%-1%水之混合物中以於第一容器中形成漿料；

(c)　冷卻步驟(b)之第一容器中之內容物以使該溶液過飽和；

(d)　添加該結晶活性成份至步驟(c)之內容物中；

(e)　使步驟(d)之內容物在與步驟(c)相同溫度下老化；

(f)　冷卻步驟(e)中之內容物以獲得再結晶活性成份。

在上述方法之一特定實施例中，該活性成份為1,8-辛二醯基苯胺羥胺酸。在一實施例中，該結晶活性成份為SAHA形式I。

經由有機溶劑結晶：

在一特定實施例中，該結晶活性成份或再結晶活性成份自有機溶劑或水與有機溶劑之混合物中結晶而得。該有機溶劑可為諸如甲醇，乙醇或異丙醇之醇。在一實施例中，該有機溶劑為一或多種甲醇，乙醇，乙腈，異丙醇及醋酸。在一實施例中，該有機溶劑為乙醇。

在另一實施例中，有機溶劑與水之混合物包含約1%-99%之有機溶劑及約99%-1%之水。在另一實施例中，該混合物包含40%-99%乙醇及60%-1%之水。在一實施例中，該混合物包含約15%-85%有機溶劑及約1%-15%水。在一特定實施例中，該混合物包含約85%有機溶劑及約15%水。在另一特定實施例中，該混合物包含1:1乙醇及水。在又一實施例中，該混合物包含9：1乙醇及水。本文中描述之有機溶劑與水之比率或百分比以體積計。

在一特定實施例中，有機溶劑與水之混合物為醇與水(例如甲醇/水，乙醇/水，異丙醇/水及其類似物)。然而，本文中描述之結晶方法可在易於由一熟習有機合成技術者加以選擇之任何合適之溶劑或溶劑混合物中進行，其對熟習此項技術者將變得顯而易見。如本文中使用之合適之有機溶劑可包括(舉例說明且無限制)氯化溶劑，烴溶劑，醚溶劑，極性質子溶劑及極性非質子溶劑。合適之鹵化溶劑包括(但不限於)四氯化碳、二氯溴甲烷、氯二溴甲烷、三溴甲烷、三氯甲烷、溴氯甲烷、二溴甲烷、丁基氯、二氯甲烷、四氯乙烯、三氯乙烯、1,1,1-三氯乙烷、1,1,2-三氯乙烷、1,1-二氯乙烷、1,2-二氯乙烷、2-氯丙烷、六氟苯、1,2,4-三氯苯、鄰二氯苯、氯苯、氟苯、氟三氯甲烷、氯三氟甲烷、溴三氟甲烷、四氟化碳、二氯氟甲烷、二氟氯甲烷、三氟甲烷、1,2-二氯四氟乙烷及六氟乙烷。合適之烴溶劑包括(但不限於)苯、環己烷、戊烷、己烷、甲苯、環庚烷、甲基環己烷、庚烷、乙基苯、間二甲苯、鄰二甲苯或對二甲苯、辛烷、茚滿、壬烷。合適之醚溶劑包括(但不限於)二甲氧甲烷、四氫呋喃、1,3-二噁烷、1,4-二噁烷、呋喃、二乙醚，乙二醇二甲醚、乙二醇二乙醚、二乙二醇二甲醚、二乙二醇二乙醚、三乙二醇二異丙醚、大茴香醚或第三丁基甲基醚。

合適之極性質子溶劑包括(但不限於)甲醇、乙醇、2-硝基乙醇、2-氟乙醇、2,2,2-三氟乙醇、乙二醇、1-丙醇、2-丙醇、2-甲氧基乙醇、1-丁醇、2-丁醇、異丁醇、第三丁醇、2-乙氧基乙醇、二乙二醇、1-戊醇、2-戊醇或3-戊醇、新戊醇、第三戊醇、二乙二醇單甲醚、二乙二醇單乙醚、環己醇、苄醇、苯酚及甘油。合適之極性非質子溶劑包括(但不限於)二甲基甲醯胺(DMF)、二甲基乙醯胺(DMAC)、1,3-二甲基-3,4,5,6-四氫-2(1H)-幷嘧啶酮(DMPU)、1,3-二甲基-2-咪唑啶酮(DMI)、N-甲基吡咯啶酮(NMP)、甲醯胺、N-甲基乙醯胺、N-甲基甲醯胺、乙腈(ACN)、二甲基亞碸、丙腈、甲酸乙酯、乙酸甲酯、六氯丙酮,丙酮、乙基甲基酮、乙酸乙酯、乙酸異丙酯、乙酸第三丁酯、環丁碸、N,N-二甲基丙醯胺、硝基甲烷、硝基苯、六甲基磷醯三胺。

投藥方法：

在本文描述之所有方法中，該醫藥組合物可以一明膠膠囊形式經口投藥。該組合物可根據本文描述之方法一天一次，一天兩次或一天三次以單位劑量投藥。

接著連續重複該每日投藥達若干天乃至若干年的時間。口服治療可在該患者一週乃至一生之中持續進行。在一實施例中，在進行投藥達五個連續日之後可評估以測定該患者是否需要進一步投藥。可連續或間歇進行投藥，意即，治療數個連續日之後緊接著是一段休息期。

本發明之醫藥組合物可以介於25 mg/m² 至4000 mg/m² 之間，例如約25-1000 mg、50-1000 mg、100 mg、200 mg、300 mg、400 mg、600 mg、800 mg、1000 mg及其類似劑量之總日服劑量經口投藥。通常對患者投藥高達400 mg時，該化合物可以單一劑量形式投藥。對於較高總劑量(意即，大於400 mg)，可將該總劑量分為多個劑量，例如一天兩次，一天三次或其類似用法或在一天中分散在等時間段中。舉例而言，兩個劑量(例如每次500 mg)可分開12小時投藥以達成每天1000 mg的總劑量。

在一實施例中，SAHA係以200 mg的總日服劑量投藥予患者。在另一實施例中，SAHA係以400 mg的總日服劑量投藥予患者。在又一實施例中，SAHA係以600 mg的總日服劑量投藥予患者。

在一實施例中，投藥予患者之活性成份的量應小於將在患者體內引發毒性的量。在某些實施例中，投藥予患者之活性成份的量應小於將在患者血漿中導致該化合物濃度等於或超過該化合物毒性劑量的量。在一實施例中，使患者血漿中活性成份之濃度維持在約10 nM至約5000 nM之間。在本發明之實際應用中應投藥予患者之活性成份的最佳量將視所使用之特定化合物及所治療之癌症類型而定。

組合治療：

本發明之方法亦可包含最初投予患者抗癌試劑而使病人體內之瘤性細胞抵禦抗癌試劑且繼而投予有效劑量之本發明之任何組合物，以有效地選擇性誘導終末分化，細胞生長停滯及/或該等細胞之凋零。

抗癌試劑可為諸多化學治療試劑之一，諸如烷基化劑，抗代謝物，激素劑，抗生素，秋水仙鹼，長春花屬生物鹼，左旋門冬醯胺酶，丙卡巴肼(procarbazine)，羥基脲，米托坦(mitotane)，亞硝基脲或咪唑羧醯胺。合適試劑為彼等促進微管蛋白退極化之試劑。在一實施例中，該抗癌試劑為秋水仙鹼或長春花屬生物鹼；長春鹼或長春新鹼。在抗癌試劑為長春新鹼之實施例中，該等細胞較佳經處理以使得其抵禦約濃度為約5 mg/ml之長春新鹼。致使該等細胞抵禦抗癌試劑之處理可藉由使該等細胞與該試劑接觸至少3至5天的時間來實現。使所得細胞與上述任何化合物之接觸係如先前所描述般進行。除上述化學治療試劑之外，該等化合物亦可與放射性治療一同投藥。

烷基化劑：

烷基化劑與親核性殘基，諸如用於DNA製備之核苷酸前驅體上的化學個體反應。其藉由烷基化此等核苷酸且阻止其組裝至DNA中來影響細胞分裂過程。

烷基化劑之實例包括(但不限於)雙氯乙胺(氮芥，例如，苯丁酸氮芥(chlorambucil)，環磷醯胺(cyclophosphamide)，異環磷醯胺(ifosfamide)，鹽酸氮芥(mechlorethamine)，美法侖(melphalan)，尿嘧啶氮芥(uracil mustard))，伸乙亞胺(例如，噻替哌(thiotepa))，烷基酮磺酸鹽(例如，白消安(busulfan))，亞硝基脲(例如，卡莫斯汀(carmustine)，洛莫司汀(lomustine)，鏈硝脲(streptozocin))，非典型烷基化劑(六甲蜜胺(altretamine)，達卡巴嗪(dacarbazine)及丙卡巴肼(procarbazine))，鉑化合物(卡鉑(carboplastin)及順鉑(cisplatin))。此等化合物與磷酸鹽，胺基，羥基，氫硫基，羧基及咪唑基團反應。

在生理條件下，此等藥物離子化且產生附著於易受感染之核酸及蛋白質之陽離子，其導致細胞週期停滯及/或細胞死亡。由於該等烷基化劑發揮其活性係與細胞週期之特定階段無關，因此其為細胞週期階段非特異性試劑。氮芥及烷基酮磺酸鹽對抵禦G1或M階段中之細胞最為有效。亞硝基脲，氮芥及伸乙亞胺削弱自G1及S階段至M階段之進展。Chabner及Collins編(1990)，"Cancer Chemotherapy: Principles and Practice",Philadelphia: JB Lippincott。

該等烷基化劑對廣泛範圍之瘤性疾病起著積極作用，其在治療白血病及淋巴瘤及實體腫瘤中具有顯著活性。此組臨床藥物常規用於治療急性及慢性白血病；霍奇金氏(Hodgkin)症；非霍奇金氏淋巴瘤；多發性骨髓瘤，原發性腦腫瘤，乳房癌，卵巢癌，睾丸癌，肺癌，膀胱癌，子宮頸癌，頭頸部癌及惡性黑色素瘤。

所有烷基化劑共有之主要毒性為骨髓抑制性。另外，普遍出現不同程度之腸胃反作用及與特定化合物相關聯之多種器官毒性。Black and Livingston(1990)Drugs 39：489-501；及39：652-673。

抗生素：

抗生素(例如，細胞毒性抗生素)藉由直接抑制DNA或RNA合成來作用且有效遍及該細胞週期。抗生素試劑之實例包括蒽環黴素(例如，阿黴素(doxorubicin)，道諾黴素(daunorubicin)，表柔比星(epirubicin)，黃膽素(idarubicin)及蒽二酮(anthracenedione))，絲裂黴素C(mitomycin C)，博萊黴素(bleomycin)，放線菌素(dactinomycin)，普利卡托黴素(plicatomycin)。此等抗生素試劑藉由將不同細胞組份作為目標來干擾細胞生長。舉例而言，一般認為蒽環黴素在轉錄活性DNA區域內干擾了DNA拓撲異構酶II之活性，其導致DNA鏈切斷。

一般認為博萊黴素與鐵螯合且形成活化複合物，接著其與DNA鹼基結合並導致鏈切斷及細胞死亡。

抗生素試劑已在一系列瘤性疾病中用作治療劑，該等疾病包括乳房癌，肺癌，胃及甲狀腺癌，淋巴瘤，骨髓性白血病，骨髓瘤及肉瘤。此組中蒽環黴素之主要毒性為骨髓抑制性，尤其為粒細胞減少。黏膜炎常常伴有粒細胞減少且嚴重性與骨髓抑制程度緊密相關。亦有與蒽環黴素之高劑量投藥相關聯之顯著的心臟毒性。

抗代謝試劑：

抗代謝試劑(意即，抗代謝藥物)係一組干擾對癌細胞生理及增殖至關重要之代謝過程之藥物。活性增殖癌細胞需要連續合成大量核酸，蛋白質，脂質及其它重要的細胞組份。

諸多抗代謝藥物抑制合成嘌呤或嘧啶核苷或抑制DNA複製酶。一些抗代謝藥物亦干擾合成核糖核苷及RNA及/或胺基酸代謝以及蛋白質合成。藉由干擾合成重要之細胞組份，抗代謝藥物可使癌細胞生長延緩或停滯。抗代謝藥物之實例包括(但不限於)氟尿嘧啶(fluorouracil,5-FU)，氟尿苷(floxuridine,5-FUdR)，甲胺喋呤(methotrexate)，亞葉酸(leucovorin)，羥基脲(hydroxyurea)，硫鳥嘌呤(thioguanine,6-TG)，巰基嘌呤(mercaptopurine,6-MP)，阿糖胞苷(cytarabine)，噴司他丁(pentostatin)，氟達拉賓磷酸鹽(fludarabine phosphate)，克拉屈濱(cladribine,2-CDA)，門冬醯胺酶(asparaginase)及吉西他濱(gemcitabine)。

抗代謝試劑已廣泛用於治療若干普通形式之癌症，其包括結腸癌，直腸癌，乳房癌，肝癌，胃癌及胰腺癌，惡性黑色素瘤，急性及慢性白血病，毛細胞白血病。抗代謝藥物治療之諸多反作用由在諸如骨髓或腸胃黏膜之有絲分裂活性組織中抑制細胞增殖而產生。經由此等試劑治療之患者一般要經歷骨髓抑制，口炎，痢疾及脫髮，Chen及Grem(1992),Curr. Opin. Oncol.,4：1089-1098。

激素劑：

激素劑係一組調節其目標器官生長及發展之藥物。多數激素劑為性類固醇及其衍生物及其類似物，諸如雌激素，孕激素，抗雌激素，雄激素，抗雄激素及黃體酮。此等激素劑可用作性類固醇受體之拮抗劑以下調受體表達及重要基因之轉錄。該等激素劑之實例為合成雌激素(例如，己烯雌酚(diethylstibestrol))，抗雌激素(例如，它莫西芬(tamoxifen)，托瑞米芬(toremifene)，氟甲睾醇(fluoxymesterol)及雷諾昔酚(raloxifene))，抗雄激素(比卡魯胺(bicalutamide)，尼魯米特(nilutamide)，氟他胺(flutamide))，芳香化酶抑制劑(例如，胺魯米特(aminoglutethimide)，安美達錠(anastrozole)及四唑(tetrazole))，促黃體激素釋放激素(LHRH)類似物，酮康唑(ketoconazole)，醋酸戈舍瑞林(goserelin acetate)，亮丙瑞林(leuprolide)，醋酸甲地孕酮(megestrol acetate)及米非司酮(mifepristone)。

激素劑用於治療乳房癌，前列腺癌，黑色素瘤及脊膜瘤。由於經由類固醇受體對激素之主要作用進行調節，因此60%受體陽性乳房癌對第一線激素療法有回應且少於10%受體陰性腫瘤有回應。與激素劑相關聯之主要副作用為潮紅。常見表現為骨痛，皮膚損傷周圍紅斑及誘發性高血鈣急劇增加。

具體言之，由於此等癌症發生在暴露於不受孕激素對抗之高量雌激素之女性身上，因此孕激素用於治療子宮內膜癌。

抗雄激素主要用於治療激素依賴性前列腺癌。其用於減少睪固酮含量，且藉此抑制腫瘤生長。

乳房癌之激素治療涉及降低瘤性乳房細胞中雌激素受體之雌激素依賴性活化的程度。抗雌激素藉由與雌激素受體結合來作用且阻止輔助活化子之募集，由此抑制雌激素訊號。

LHRH類似物用於治療前列腺癌以減少睪固酮含量並因此減少腫瘤生長。

芳香化酶抑制劑藉由抑制激素合成所需之酶來作用。在絕經後女性體內，雌激素主要來源係經由芳香化酶轉化雄烯二酮而得。

植物衍生試劑：

植物衍生試劑係一組衍生自植物或基於試劑之分子結構進行改良之藥物。其藉由阻止細胞分裂所必需之細胞組份之裝配來抑制細胞複製。

植物衍生試劑之實例包括長春花鹼類(例如，長春新鹼(vincristine)，長春鹼(vinblastine)，長春地辛(vindesine)，長春利定(vinzolidine)及長春瑞濱(vinorelbine))，鬼臼毒素類(例如，依託泊苷(etoposide,VP-16)及替尼泊苷(teniposide,VM-26))，紫杉烷類(例如，太平洋紫杉醇(paclitaxel)及歐洲紫杉醇(docetaxel))。此等植物衍生試劑一般充當與微管蛋白結合且抑制有絲分裂之抗有絲分裂試劑。咸信諸如依託泊苷之鬼臼毒素類藉由與拓撲異構酶II相互作用而導致DNA鏈切斷來干擾DNA合成。

植物衍生試劑用於治療諸多形式之癌症。舉例而言，長春新鹼用於治療白血病，霍奇金氏(Hodgkin)及非霍奇金氏淋巴瘤以及兒童神經母細胞瘤，橫紋肌肉瘤及腎母細胞瘤(Wilms瘤)。長春鹼用於抵禦淋巴瘤，睾丸癌，腎細胞癌，蕈樣真菌病及卡波西氏(Kaposi)肉瘤。歐洲紫杉醇已展示抵禦晚期乳房癌，非小細胞肺癌(NSCLC)及卵巢癌之顯著活性。

依託泊苷對抵禦廣泛範圍之贅瘤起著積極作用，其對小細胞肺癌，睾丸癌及NSCLC回應最為積極。

植物衍生試劑對受治療患者造成顯著之副作用。長春花鹼類顯示了不同的臨床毒性範圍。長春花鹼類之副作用包括神經毒性，血小板功能變化，骨髓抑制性及白細胞減少症。太平洋紫杉醇導致劑量限制嗜中性白血球減少症且相對保存其它造血細胞株。表鬼臼毒素之主要毒性為血液性(嗜中性白血球減少症及血小板減少症)。

其它副作用包括短暫性肝酶異常，脫髮，過敏反應及周邊神經病。

生物試劑：

生物試劑係一組當單獨使用或與化學療法及/或放射療法組合使用時可引起癌症/腫瘤衰退之生物分子。生物試劑之實例包括免疫調節蛋白質，諸如細胞因子，抵禦腫瘤抗原之單株抗體，腫瘤抑制基因及癌症疫苗。

細胞因子具有意義深遠之免疫調節活性。一些諸如介白素-2(IL-2，阿地白介素(aldesleukin))及干擾素-α(IFN-α)之細胞因子表現出抗腫瘤活性且已證實可治療具有轉移性腎細胞癌及轉移性.惡性黑色素瘤之患者。IL-2係對經T-細胞調節之免疫回應極其重要之T-細胞生長因子。咸信IL-2對一些患者之選擇性抗腫瘤效應係經細胞調節而在自身與非自身之間加以區別之免疫回應的結果。

干擾素-α包括多於23個具有重疊活性之相關亞型。IFN-α已表現出抵禦諸多實體及血液科惡性疾病之活性，後者看來尤其敏感。

干擾素之實例包括干擾素-α，干擾素-β(纖維母細胞干擾素)及干擾素-γ(纖維母細胞干擾素)。其它細胞激素之實例包括紅血球生成素(依泊汀-α(epoietin-α))，粒細胞-CSF(非格斯亭(filgrastin))及顆粒球巨噬細胞-CSF(沙格司亭(sargramostim))。除細胞激素之外，其它免疫調節試劑還包括卡介苗(bacillus Calmette-Guerin)，左旋咪唑(levamisole)及奧曲肽(octreotide)，模擬天然產生之生長抑制激素之效應的長效八肽。

此外，抗癌治療可包含藉由具有在腫瘤注射疫苗法中使用之抗體及試劑之免疫療法而進行的治療。在此類療法中之主要藥物為抗體，單獨或承載(例如)癌細胞之毒素或化學治療劑/細胞毒素。抵禦腫瘤抗原之單株抗體係抵禦由腫瘤表達之抗原(較佳為腫瘤特異性抗原)所引起的抗體。舉例而言，培養單株抗體(曲妥珠單抗(trastuzumab))抵禦在一些包括轉移性乳房癌之乳房腫瘤中過度表達之人類表皮生長因子受體2(HER2)。HER2蛋白質之過度表達與臨床中愈多侵襲性疾病及愈差之預後相關聯。用作單一試劑以用於治療具有轉移性乳房癌之患者，而乳房癌之腫瘤過度表達HER2蛋白質。

抵禦腫瘤抗原之單株抗體之另一實例為(利妥昔單抗)，培養該抗體以抵禦淋巴瘤細胞上之CD20且選擇性損傷正常細胞及惡性CD20+未成熟B細胞及成熟B細胞。

RITUXAN用作單一試劑以用於治療具有復發型或難治癒之低度或濾泡性CD20+B細胞非霍奇金氏淋巴瘤的患者。(吉妥單抗(gemtuzumab ozogamicin))及(阿來組單抗(alemtuzumab))係可使用之抵禦腫瘤抗原之單株抗體的進一步實例。

腫瘤抑制基因係起抑制細胞生長及分裂週期之作用並由此阻止瘤形成之發展的基因。腫瘤抑制基因中之突變導致該細胞忽略一或多種抑制訊號之網路的組份，其克服細胞週期檢驗點且導致受控細胞生長-癌症之較高速率。腫瘤抑制基因之實例包括Duc-4，NF-1，NF-2，RB，p53，WT1，BRCA1及BRCA2。

DPC4涉及胰腺癌且加入抑制細胞分裂之細胞質路徑中。NF-1碼用於抑制Ras之蛋白質中，該蛋白質係一種細胞質抑制蛋白質。NF-1涉及神經系統之神經纖維瘤及嗜鉻細胞瘤以及骨髓白血病。NF-2編碼一種涉及神經系統之脊膜瘤，神經鞘瘤及室管膜瘤之核蛋白質。RB碼用於pRB蛋白質，該蛋白質係一種作為細胞週期之主要抑制劑的核蛋白質。RB涉及視網膜母細胞瘤以及骨癌，小細胞肺癌及乳房癌。P53碼用於p53蛋白質，該蛋白質調節細胞分裂且可誘導細胞凋零。p53之突變及/或失活可在廣泛範圍之癌症中發現。WTI涉及腎臟之腎母細胞瘤(Wilms瘤)。BRCA1涉及乳房癌及卵巢癌，且BRCA2涉及乳房癌。可將腫瘤抑制基因轉移至腫瘤細胞中，其中該抑制基因將發揮其腫瘤抑制作用。

癌症疫苗為一組誘導體內對腫瘤特異性免疫回應之試劑。多數尚處於研究與發展及臨床試驗中之癌症疫苗為腫瘤相關抗原(TAAs)。TAAs係存在於腫瘤細胞內且在正常細胞中相對缺少或減少之結構(意即，蛋白質，酶或碳水化合物)。由於完全為該腫瘤細胞所獨有，因此TAAs為免疫系統提供目標以識別且導致其毀滅。TAAs之實例包括神經結醣脂(GM2)，前列腺特異性抗原(PSA)，α-甲胎蛋白(AFP)，癌胚抗原(CEA)(由結腸癌及其它腺癌製備，例如乳房癌，肺癌，胃癌及胰腺癌)，黑色素瘤相關抗原(MART-1，gap100，MAGE1,3-酪胺酸酶)，乳突病毒E6及E7片段，自體性腫瘤細胞及同種異體腫瘤細胞之所有細胞或部分/溶胞物。

其它療法：

除傳統細胞毒素療法及激素療法用於治療癌症之外，最新發展已介紹額外之療法用於治療癌症。舉例而言，基因療法之諸多形式正經受臨床前試驗或臨床試驗。

另外，當前正處於發展之中的方法係基於腫瘤血管形成(血管新生)之抑制作用。此概念目的在於切斷腫瘤的由新建腫瘤血管系統提供之營養及氧氣供應。

另外，癌症療法亦藉由誘導瘤性細胞之終末分化來嘗試。合適之分化試劑包括在任何一或多篇下列參考文獻中所揭示之化合物：

a)極性化合物(Marks等人(1987)；Friend,C.，Scher,W.，Holland,J. W. 及Sato,T.(1971)Proc. Natl.Acad. Sci.(USA)68：378-382；Tanaka,M.，Levy,J.，Terada,M.，Breslow,R.，Rifkind,R. A.及Marks,P. A.(1975)Proc. Natl. Acad. Sci.(USA)72：1003-1006；Reuben,R.C.，Wife,R. L.，Breslow,R.，Rifkind,R. A.及Marks,P. A.(1976)Proc. Natl. Acad. Sci.(USA)73：862-866)；

b)維生素D之衍生物及視黃酸(Abe,E.，Miyaura,C.，Sakagami,H.，Takeda,M.，Konno,K.，Yamazaki,T.，Yoshika,S.及Suda,T.(1981)Proc. Natl. Acad. Sci.(USA)78:4990-4994；Schwartz,E. L.，Snoddy,J. R.，Kreutter,D.，Rasmussen,H.及Sartorelli,A. C.(1983)Proc. Am. Assoc. Cancer Res. 24：18；Tanenaga,K.，HoZumi,M.及Sakagami,Y.(1980)Cancer Res. 40：914-919)；

c)類固醇激素(Lotem,J.及Sachs,L.(1975)1nt. J. Cancer 15：731-740)；

d)生長因子(Sachs,L.(1978)Nature(Lond.)274：535,Metcalf,D.(1985)Science,229：16-22)；

e)蛋白酶(Scher,W.，Scher,B. M.及Waxman,S.(1983)Exp. Hematol. 11：490-498；Scher,W.，Scher,B. M.及Waxman,S.(1982)Biochem. & Biophys. Res. Comm. 109：348-354)；

f)腫瘤啟動子(Huberman,E.及Callaham,M. F.(1979)Proc. Natl. Acad. Sci.(USA)76：1293-1297；Lottem,J.及Sachs,L.(1979)Proc. Natl. Acad. Sci.(USA)76：5158-5162)；及

g)DNA或RNA合成抑制劑(Schwartz,E. L.及Sartorelli,A. C.(1982)Cancer Res. 42：2651-2655；Terada,M.，Epner,E，,Nudel,U.,Salmon,J.,Fibach,E.,Rifkind,R. A.及Marks,P. A.(1978)Proc. Natl. Acad. Sci.(USA)75：2795-2799；Morin,M. J.及Sartorelli,A. C.(1984)Cancer Res. 44：2807-2812；Schwartz,E. L.，Brown,B. J.,Nierenberg,M.，Marsh,J. C.及Sartorelli,A. C.(1983)Cancer Res. 43：2725-2730；Sugano,H.，Furusawa,M.，Kawaguchi,T.及Ikawa,Y.(1973)Bibl. Hematol. 39：943-954；Ebert,P. S.，Wars,I.及Buell,D. N.(1976)Cancer Res. 36：1809-1813；Hayashi,M.，Okabe,J.及Hozumi,M.(1979)Gann 70：235-238)。

本發明之醫藥組合物與上文描述之任何抗癌試劑之組合及其用途均在本發明範疇以內。

治療方法：

本發明亦提供治療具有瘤性細胞增殖特徵之腫瘤患者之方法，該方法包含將有效劑量之上述本發明之任何組合物投藥予患者，而該等組合物對於選擇性誘導該等瘤性細胞之終末分化且藉此抑制其增殖係有效的。

本發明之方法意欲治療具有癌症之人類患者。然而，亦可能該方法對治療其它哺乳動物之癌症將係有效的。癌症包括(但不限於)藉由瘤性細胞增殖引起之任何癌症，諸如肺癌，急性淋巴骨髓瘤，霍奇金氏淋巴瘤，非霍奇金氏淋巴瘤，膀胱黑色素瘤，腎臟癌，乳房癌，前列腺癌，卵巢癌或結直腸癌。

本發明在下列實驗細節部分之實例中進行說明。此部分經陳述以助於理解本發明但不欲，且不應解釋為以任何方式限制如下文之申請專利範圍中所陳述之本發明。

實驗細節部分：

實例1SAHA形式I之合成

SAHA形式I可根據下文概述之方法或藉由任何修正及其變體來合成。

SAHA合成

步驟1-合成辛醯苯胺酸：

在一22 L燒瓶中加入3,500 g(20.09莫耳)辛二酸，且加熱使該酸熔化。將溫度升至175℃，且接著添加2,040 g(21.92莫耳)苯胺。將溫度升至190℃且維持該溫度20分鐘。將熔融物倒進一Nalgene槽中，該槽含有4,017 g氫氧化鉀溶解於50 L水中。添加該熔融物之後攪拌該混合物20分鐘。以相同比例重複該反應，且將第二熔融物倒進相同氫氧化鉀溶液中。在該混合物徹底攪拌之後，將攪拌器關閉，且允許將該混合物靜置。接著將該混合物經由一矽藻土墊片(4,200 g)過濾(過濾該產物以移除中性副產物(源自由苯胺在辛二酸兩端攻擊)。濾液中含有產物鹽，且亦含有未反應之辛二酸鹽。由於過濾非常緩慢，須持續若干天，因此允許該混合物靜置)。使用5 L濃鹽酸酸化該濾液；攪拌該混合物一個小時，且接著允許隔夜靜置。藉由過濾收集產物，且在漏斗上用去離子水洗滌(4×5 L)。將濕濾餅放進一具有44 L去離子水之72 L燒瓶中，加熱該混合物至50℃，且藉由熱過濾將該固體分離(所需產物經在熱水中具有較高溶解性之辛二酸污染。進行若干次熱研磨以移除辛二酸。產物藉由NMR檢測[D₆ DMSO]以監控移除辛二酸)。用44 L水在50℃下重複熱研磨。再次藉由過濾將產物分離，且用4 L熱水沖洗。使用一Nash泵作為真空源(該Nash泵為液體環形泵(水)且產生約29英吋汞柱之真空)在真空烘箱中於65℃下乾燥超過一週。使用間歇性氬氣淨化有助於將水帶出)；獲得4,182.8 g辛醯苯胺酸。

該產物仍含有少量辛二酸；因此熱過濾在65℃下分批進行，一次使用約300 g產物。各部分經過濾，且經由額外熱水(總共約6 L)徹底沖洗。將此重複以淨化整批產物。藉此自該產物中將辛二酸完全移除。在燒瓶中將該固體產物與6L甲醇/水(1：2)組合且攪拌，且接著藉由過濾而分離並在過濾器上空氣乾燥超過一週。將其放入盤中且使用Nash泵及氬氣滲移在真空烘箱中於65℃下乾燥45小時。最終產物重量為3,278.4g(32.7%產率)。

步驟2-合成辛醯苯胺酸甲酯：

向一安置有一機械攪拌器及冷凝器之50 L燒瓶中放入3,229 g源自先前步驟之辛醯苯胺酸，20 L甲醇及398.7 g Dowex 50WX2-400樹脂。加熱該混合物至回流且維持回流18小時。將該混合物過濾以移除樹脂珠粒，且在一旋轉式汽化器上將濾液汽化得到殘餘物。

將源自旋轉式汽化器之殘餘物轉移至一安置有一冷凝器及機械攪拌器之50 L燒瓶中。向該燒瓶中添加6 L甲醇，且加熱該混合物以生成溶液。接著添加2 L去離子水且停止加熱。該經攪拌之混合物允許加以冷卻，且接著將該燒瓶放入一冰水浴中並使該混合物冷卻。藉由過濾分離固體產物，且將濾餅用4 L冷甲醇/水(1:1)沖洗。使用一Nash泵在真空烘箱中於45℃下乾燥該產物總共64小時以生成2,850.2 g(84%產率)辛醯苯胺酸甲酯，CSL貨號# 98-794-92-3 1。

步驟3-合成粗SAHA

向一安置有一機械攪拌器，熱電偶及用於惰性氣氛之進口之50 L燒瓶中添加1,451.9 g鹽酸羥胺，19 L無水甲醇及3.93 L 30%甲氧化鈉於甲醇中之溶液。接著將該燒瓶裝入2,748.0 g辛醯苯胺酸甲酯，緊接著裝入1.9 L 30%甲氧化鈉於甲醇中之溶液。允許將該混合物攪拌16小時10分鐘。將大約一半之反應混合物自反應燒瓶(燒瓶1)轉移至一安置有一機械攪拌器之50 L燒瓶(燒瓶2)中。接著添加27 L去離子水至燒瓶1中且將該混合物攪拌10分鐘。使用一pH計測量pH，該pH為11.56。藉由添加100 ml 30%甲氧化鈉於甲醇中之溶液將該混合物之pH調節至12.02；藉此生成澄清溶液(此時該反應混合物含有少量固體。調節pH以生成澄清溶液，其中沉澱作用使產物自溶液中沉澱出來)。將燒瓶2中之反應混合物以相同方式稀釋；添加27 L去離子水且藉由添加100 ml 30%甲氧化鈉於甲醇中之溶液至該混合物中來調節pH以生成12.01之pH(澄清溶液)。

藉由添加冰醋酸使各燒瓶中反應混合物酸化以使產物沉澱。燒瓶1中最終pH為8.98且燒瓶2中最終pH為8.70。藉由使用一Buchner漏斗及濾布來過濾分離源自兩個燒瓶之產物。將濾餅用15 L去離子水沖洗，且將該漏斗覆蓋並使產物部分在真空下於漏斗上乾燥15.5小時。將產物移除且放入五個玻璃盤中。將該等盤放入一真空烘箱中且將產物乾燥至恆定重量。第一乾燥時段為使用一Nash泵作為真空源及氬氣滲移於60℃下乾燥22小時。將該等盤自真空烘箱中移除並稱重。將該等盤送回烘箱中並使用一油泵作為真空源且無氬氣滲移將產物乾燥額外4小時10分鐘。將該物質包裝在雙4-研磨聚乙烯袋中，且放入一塑膠外容器中。取樣後最終重量為2633.4 g(95.6%)。

步驟4-藉由粗SAHA之再結晶來製備SAHA形式I：

將粗SAHA自甲醇/水中再結晶。向一安置有一機械攪拌器，熱電偶，冷凝器及用於惰性氣氛之進口之50 L燒瓶中裝入待結晶的粗SAHA(2,525.7 g)，緊接著裝入2,625 ml去離子水及15,755 ml甲醇。加熱該物質至回流以生成溶液。接著添加5,250 ml去離子水至該反應混合物中。停止加熱，且允許該混合物冷卻。當該混合物充分冷卻以使得燒瓶可安全手持(28℃)，將該燒瓶自加熱套中移出，且放入一用作冷卻槽之盆中。添加冰/水至該盆中以使該混合物冷卻至-5℃。將該混合物維持在該溫度以下2小時。藉由過濾分離該產物，且將濾餅用1.5 L冷甲醇/水(2：1)沖洗。將該漏斗覆蓋且將產物在真空下部分乾燥1.75小時。將該產物自漏斗中移除且放入6個玻璃盤中。將該等盤放入一真空烘箱中，且使用一Nash泵作為真空源並使用氬氣滲移將該產物於60℃下乾燥64.75小時。將該等盤移出並稱重，且接著將該等盤送回烘箱中於60℃下乾燥額外4小時以達到恆定重量。用於第二乾燥時段之真空源為一油泵，且不使用氬氣滲移。將該物質包裝在雙4-研磨聚乙烯袋中，且放入一塑膠外容器中。取樣後最終重量為2,540.9 g(92.5%)。

在其它實施例中，粗SAHA使用下列條件進行結晶：

所有此等反應條件用於製備SAHA多晶型物I。

實 例1A製備SAHA形式I

步驟1：8-苯胺基-8-氧辛酸；辛醯苯胺酸(化合物3)

將辛二酸(化合物1，174.2 g,1.0莫耳)，苯胺(化合物2，85.8-94.9 g)及甲苯(0.1-0.2 L)組合，經加熱至回流且回流最少60小時。在回流時藉由以10%氫氧化鈉溶液調節pH至11來將該反應中止。將水相分離。將該有機層與甲苯(0.11-0.13 L)及水(0.3-0.4 L)組合，且分離該水層。將源自萃取之水層與甲苯(0.11-0.13 L)組合，靜置，且接著分離。使該水層在60℃-70℃下經由甲苯(0.2-0.3 L)萃取兩次。在20℃-30℃下使用鹽酸及10%氫氧化鈉溶液(如需要)調節該水層至5.8-6.2之pH。將該批次過濾，用冷卻水(0.2-0.3 L)洗滌且接著用冷卻異丙醇洗滌。將濕濾餅在最高65℃於真空下乾燥以獲得辛醯苯胺酸。

步驟2：8-苯胺基-8-氧辛酸甲酯；辛醯苯胺酸甲酯(化合物4)

將辛醯苯胺酸(化合物3,249.3 g,1.0莫耳)與甲醇(0.4-0.5 L)組合且加熱至45℃-55℃。使用鹽酸調節pH至2，且將該批次溫度維持在45℃-55℃直至反應完成。以去離子水(0.1-0.2 L)中止該反應。將該批次冷卻至25℃-30℃並接種以誘導結晶，且接著冷卻至0-10℃。將該批次過濾，且在0-10℃用50:50(v/v)甲醇/水溶液(0.28-0.34 L)洗滌濾餅。將濕濾餅在最高46℃於真空下乾燥以獲得辛醯苯胺酸甲酯。

步驟3：N-羥基-N'-苯基辛二醯胺；伏立司他(vorinostat)(化合物5)

將辛醯苯胺酸甲酯(化合物4,263.3 g,1.0莫耳)與2 M羥胺游離鹼溶液(0.8-1.0 L)組合。當維持該批次在最高20℃時，用甲氧化鈉於甲醇中之溶液(如需要)將表觀pH調節至10.5。當使用甲氧化鈉於甲醇中之溶液維持該批次在最高20℃且表觀pH10.5時，將該批次老化。在老化期間，添加羥胺游離鹼溶液(0.5-0.6 L)，且將該批次維持在最高20℃且表觀pH10.5直至反應完成。當維持該批次溫度在20℃-35℃時藉由添加該批次至水中(0.9-1.1 L)來中止反應，且將該批次水含量調節至35%-45%。使用冰醋酸及碳酸鈉(如需要)調節pH至8.8-9.2。將該批次冷卻至0-10℃歷經5-10小時。將該批次過濾且在0-10℃用55:45(v/v)甲醇/水溶液(0.45-0.6 L)洗滌濾餅。將濕濾餅在真空條件下乾燥直至水含量為35%。

將伏立司他(vorinostat)粗濕濾餅(264.32 g,1.0莫耳)與變性乙醇(1308-1599 g)及水(167-204 g)組合。將鹽酸羥胺(>9莫耳當量)及甲氧化鈉於甲醇中之溶液(>9莫耳當量)添加至漿料中，且將該批次加熱至70℃-80℃。過濾該溶液且接著藉由緩慢冷卻至0-10℃來結晶。將該批次過濾且用冷4:1(v/v)變性乙醇/水洗滌濾餅。將濕濾餅在最高45℃於真空下乾燥。

步驟4：N-羥基-N'-苯基辛二醯胺-伏立司他(vorinostat)-細粒(化合物6)

使伏立司他(vorinostat)(化合物5,264.3 g,1.0莫耳)在50:50(v/v)乙醇/水溶液(最少2.8 L)中形成漿料。當將該批次溫度維持在7℃-30℃時，將伏立司他(vorinostat)漿料濕研磨成平均尺寸為25 μm-45 μm。過濾最終漿料且將濕濾餅用0-40℃水(最少0.8 L)洗滌。將濕濾餅在最高55℃於真空條件下乾燥至最高水含量為0.2%(w/w)以獲得伏立司他(vorinostat)-細粒藥物。

步驟5：N-羥基-N'-苯基辛二醯胺-伏立司他(vorinostat)-粗粒(化合物7)

使伏立司他(vorinostat)(化合物5,264.3 g,1.0莫耳)在50:50(v/v)乙醇/水溶液(4.9-5.5 L)中形成漿料。在最小15 psig壓力下，將該漿料加熱至65-70℃以溶解且接著冷卻至60-64℃。當維持該批次溫度不變時，將晶種漿料轉移至該批次中。在61-63℃下使該批次老化最少2小時。藉由控制夾套溫度以三個步驟使該批次冷卻：(1)以0.35-0.78℃/小時至55℃;(2)以0.83-2.00℃/小時至45℃；及(3)以2.00-4.44℃/小時至-5℃至25℃。最終漿料在-5℃至25℃下老化約1小時且接著過濾。將濕濾餅用水(最少0.8 L)洗滌。將濕濾餅在最高55℃於真空條件下乾燥以獲得伏立司他(vorinostat)-細粒藥物。

該晶種漿料藉由組合伏立司他(vorinostat)-細粒乾濾餅(97.8-116.3 g,0.37-0.44莫耳)與50:50(v/v)乙醇/水溶液(1.0-1.2 L)來製備。在最小15 psig壓力下，將該晶種漿料加熱至62℃-66℃，老化約0.5小時且接著冷卻至60-64℃。

實例2於1:1乙醇/水中產生經濕式研磨之小顆粒

懸浮於1:1(體積比)EtOH/水溶劑混合物中之SAHA多晶型物I結晶體之漿料濃度在50 mg/gram至150 mg/gram(結晶/溶劑混合物)範圍內。當溫度維持在室溫時，該漿料經由具有特級刀片之IKA-Works Rotor-Stator高剪切均化器T50型以20-30 m/s進行濕式研磨，直至SAHA之平均粒徑小於50 μm且95%小於100 μm。將經濕式研磨之漿料於室溫下過濾且經由1:1 EtOH/水溶劑混合物洗滌。接著將該濕濾餅在40℃下乾燥。如藉由下文中Microtrac方法所量測，經濕式研磨之物質之最終平均粒徑小於50 μm。

粒徑使用一SRA-150鐳射繞射粒徑分析器進行分析，該分析器由Microtrac Inc.製造。該分析器配備有一ASVR(Automatic Small Volume Recirculator，自動小體積重複循環器)。異鏈烷烴G(ISOPAR G)中0.25重量%卵磷脂用作分散液。為各樣本記錄三次運行且計算平均分佈。粒徑分佈(PSD)被作為體積分佈進行分析。基於體積之平均粒徑及95%<值已有所報導。

實例2A於1:1乙醇/水中大比例產生經濕式研磨之小顆粒

於20℃-25℃將56.4 kg SAHA多晶型物I結晶體裝入610 kg(10.8 kg溶劑/kg SAHA)50%(體積/體積)200標準強度精密乙醇與水溶液("50/50 EtOH/水")。該漿料(約700 L)經由一裝有特級發電機之IKA Works濕式研磨機再循環直至達到穩態粒徑分佈。其條件如下：DR3-6，23 m/s轉子尖端速度，30-35 Lpm，3 gen，-70轉換(一轉換為通過一gen之一批次體積)。

將該濕濾餅過濾，用水洗滌(總共3 kg/kg，約170 kg)且於40℃-45℃下真空乾燥。接著篩選乾濾餅(595 μm篩)且包裝作為"精細API"。

實例3 於1:1乙醇/水中生長平均粒徑為150 μm之大結晶體

將25公克SAHA多晶型物I結晶體及388公克1:1乙醇/水溶劑混合物裝入一500 ml具有一玻璃攪拌器之夾套樹脂鍋內。遵循實例2之步驟，在室溫下濕式研磨該漿料以使粒徑小於50 μm。將經濕式研磨之漿料加熱至65℃以溶解約85%之固體。將經加熱之漿料於65℃下老化1-3小時以形成一約15%之晶種床。將該漿料在20 psig壓力下於樹脂鍋中混合，且攪拌器速度在400-700 rpm範圍內。

接著將該批次緩慢冷卻至5℃：在10小時內自65℃至55℃；在10小時內自55℃至45℃；在8小時內自45℃至5℃。經冷卻之批次在5℃下老化一個小時以達到小於5 mg/g之目標上層濃度，詳言之為3 mg/g。將該批次漿料過濾且於5℃下經由1:1 EtOH/水溶劑混合物洗滌。將濕濾餅在40℃於真空下乾燥。根據Microtrac方法量測，乾濾餅具有約150 μm之最終粒徑且95%粒徑<300 μm。

實例3A於1:1乙醇/水中生長大結晶體

將13.4 kg伏立司他(vorinostat)及134 kg 1:1(v/v)乙醇與水之溶液組合。濕式研磨所得漿料以使95%之平均尺寸<100 μm。添加額外20 kg 1:1溶液且在20 psig氮氣壓力下將該批次加熱至69℃-71℃且老化3小時以形成一晶種床。當維持20 psig壓力時，將該批次歷經8小時冷卻至64℃-66℃；歷經4小時至59℃-61℃；歷經4小時至49℃-51℃；接著歷經6小時至14℃-16℃。將該批次過濾且使濾餅經由總共大約80 kg水洗滌。將該批次於最高55℃下真空乾燥。

實例4於1:1乙醇/水中生長具有140 μm平均粒徑之大結晶體

將7.5公克SAHA多晶型物I結晶體及70.7公克1:1 EtOH/水溶劑混合物裝入一晶種製備容器(500 ml夾套樹脂鍋)中。遵循上述實例2之步驟，在室溫下濕式研磨該晶種漿料以使粒徑小於50 μm。將該晶種漿料加熱至63℃-67℃且老化歷經30分鐘乃至2小時。

在一獨立結晶器中(1公升夾套樹脂鍋)裝入17.5公克SAHA多晶型物I結晶體及317.3公克1:1 EtOH/水溶劑混合物。加熱該結晶器至67℃-70℃以首先溶解所有固體SAHA結晶體，且接著冷卻至60℃-65℃以保持略微過飽和溶液。

將源自晶種製備容器之晶種漿料轉移至結晶器中。將該漿料在20 psig壓力下於樹脂鍋內混合，且攪拌器速度範圍類似於實例3。根據實例3中之冷卻曲線將該批次漿料緩慢冷卻至5℃。將該批次漿料過濾且於5℃經由1:1 EtOH/水溶劑混合物洗滌。將濕濾餅在40℃於真空下乾燥。乾濾餅具有約140 μm之最終粒徑且95%粒徑<280 μm。

實例4A於1:1乙醇/水中大比例生長大結晶體

將21.7 kg源自實例2A之"精細API"乾濾餅(占總的28.6%,0.40當量.w.r.t基準)及213 kg 50/50 EtOH/水溶液(3.93 kg溶劑/kg SAHA基準)裝入容器＃1-晶種製備槽中。將54.2 kg SAHA多晶型物I結晶體(占總的71.4%,1.00當量，基準)及990 kg 50/50 EtOH/水(18.24 kg溶劑/kg SAHA基準)裝入容器＃2-結晶器中。使該結晶器經受20-25 psig壓力且當維持壓力時加熱內容物至67℃-70℃以完全溶解結晶SAHA。接著冷卻該等內容物至61℃-63℃以使溶液過飽和。在結晶器中之老化製程期間，使該晶種製備槽經受20-25 psig壓力，當維持壓力時將該晶種漿料加熱至64℃，老化30分鐘以溶解約一半晶種固體，且接著冷卻至61℃-63℃。

當維持容器溫度不變時將該熱晶種漿料自晶種製備槽中快速轉移至結晶器中(不沖洗)。使結晶器中氮氣壓力再次形成至20-25 psig且將該批次在61℃-63℃下老化2小時。以三個線性步驟歷經26小時將該批次冷卻至5℃：(1)歷經10小時自62℃至55℃；(2)歷經6小時自55℃至45℃；及(3)歷經10小時自45℃至5℃。將該批次老化1小時且接著將濕濾餅過濾且用水洗滌(總共3 kg/kg SAHA，約163 kg)，且在40℃-45℃下經真空乾燥。將源自此再結晶方法之乾濾餅外包裝為"API"。將粗API與精細API以70/30比率摻合。

結晶器中SAHA多晶型物I結晶體可藉由添加8.7 kg SAHA至72 kg 9：1(v/v)乙醇與水溶液中來製備。裝入25 g鹽酸羥胺，緊接著裝入350 g 1N氫氧化鈉水溶液。將所得漿料加熱至69.5℃-71.5℃且老化45分鐘以溶解該批次且降低鄰辛醯苯胺SAHA雜質含量。將該批次歷經2小時冷卻至4℃且在0℃-10℃下老化2小時。將該批次過濾且將濾餅經由總共大約60 kg水洗滌。將該批次在最高55℃下真空乾燥以製備8.0 kg伏立司他(vorinostat)。

實例5生成經濕式研磨之小顆粒批次288

使SAHA多晶型物I結晶體以50 mg/g至150 mg/g之漿料濃度(結晶體/溶劑混合物)懸浮在乙醇水溶液中(體積比為100%乙醇至50%乙醇於水中)。當維持溫度在室溫時，使該漿料經由具有特級刀片之IKA-Works Rotor-Stator高剪切均化器T50型以20-35 m/s進行濕式研磨，直至SAHA之平均粒徑小於50 μm且95%小於100 μm。將經濕式研磨之漿料過濾且在室溫下經由EtOH/水溶劑混合物洗滌。接著將該濕濾餅在40℃下乾燥。如藉由上文所描述之Microtrac方法所量測，該經濕式研磨之物質之最終平均粒徑小於50 μm。

實例6生長大結晶體批次283

將24公克SAHA多晶型物I結晶體及205 ml 9:1乙醇/水溶劑混合物裝入一500 ml具有一玻璃攪拌器之夾套樹脂鍋中。遵循實例1之步驟，在室溫下濕式研磨該漿料以使粒徑小於50 μm。將經濕式研磨之漿料加熱至65℃以溶解約85%之固體。經加熱之漿料在64℃-65℃下老化1-3小時以形成約15%之晶種床。將該漿料以100-300 rpm範圍之攪拌速度進行混合。

接著使該批次經由一個熱-冷循環冷卻至20℃：在2小時內自65℃至55℃，維持55℃1小時；歷經約30分鐘自55℃至65℃，在65℃下老化1小時；在5小時內自65℃至40℃；在4小時內自40℃至30℃；歷經6小時自30℃至20℃。將該經冷卻之批次在20℃下老化一個小時。將該批次漿料過濾且在20℃下經由9:1 EtOH/水溶劑混合物洗滌。將濕濾餅在40℃於真空下乾燥。經Microtrac方法量測，乾濾餅具有約150 μm之最終粒徑且95%粒徑<300 μm。

實例7X射線粉末繞射分析

X射線粉末繞射分析對於根據實例1-6獲得之SAHA形式I且對於藉由下文中表2詳述之方法製備之SAHA形式II-V來進行。

X射線繞射分析：

該等樣本在Siemens D500自動粉末繞射計(Siemens D500 Automated Powder Diffractometer，儀器ID第LD-301-4號)上進行分析，其根據產商指示之標準操作程序EQ-27,Rev.12進行操作。該繞射計配備有一石墨單色器及一在50 kV，40 mA下操作之Cu(λ=1.54 A)X射線源。使用NBS雲母標準(SRM675)進行2-θ(two- theta)校正。該等樣本使用下列儀器參數進行分析：

量測範圍：4-40 2-θ

步長：0.05

量測時間/步驟：1.2秒

根據產商指示之標準操作程序MIC-7,Rev. 2(章節3.1.2)使用一零背景樣本盤(#1)進行樣本製備。在用輕臼與槌研磨以確保均質性之後對該等樣本進行處理。

圖7A-E描述用於SAHA形式I-V之X射線繞射圖。X射線繞射圖之相應資料存在於下表3-7中：

SAHA形式I之X射線粉末繞射圖案亦使用一具有一銅Kα輻射(波長1.542)之X'PERT Pro Phillips X射線繞射計進行收集。顯著之2θ位置連同d-間距一起概述於表3A中。

實例8 熔點分析

對於SAHA形式I-V進行熔點分析。

實例9示差掃描熱量測定分析

對於SAHA形式I-V進行示差掃描熱量測定(DSC)分析。

設備：

所用標準鋁質DSC樣本盤及蓋子為Perkin Elmer(部件#0219-0041，或均等物)。

所用樣本封盤器附件為Perkin Elmer標準鋁質封盤器或均等物。

所用示差掃描熱量計為Perkin Elmer DSC 6或均等物。

所用微量天平為Perkin Elmer AD-4 Autobalance或均等物。

軟體-Pyris或其它合適之熱量分析軟體。

示差掃描熱量計條件：

淨化氣　氮氣(約20 mL/min)

冷卻試劑　自來水

烘箱溫度程序　以10.0℃/分鐘自50℃加熱至觀測熔解溫度以上至少30℃。

資料解釋：

測定峰溫度及熔解起始溫度。觀測峰形以用於出現一個以上熔解溫度之任何指示。

多個樣本之結果概述於表9中：

取決於加熱速率(意即進行DSC分析所用掃描速率)，所用校準標準，儀器校準，相對濕度，且取決於化學純度，所分析之各SAHA之吸熱性可變化。對於任何給定樣本，觀測吸熱性亦可在儀器與儀器之間有所不同；然而其一般在本文界定範圍內，但條件為儀器經類似校準。

實例10電腦模擬模型之發展

模型發展程序

在封裝期間，該等SAHA結晶體經受源自壓實頂桿壓力之破損。SAHA溶解及破損模型之第一部份為發展溶解及破損模型。兩種模型組合用於計算破損量及破損結晶體之後續溶解度，且評估及最優化不同批次之模型參數。

發展程序可概述如下。第一，在封裝之前量測SAHA形式I結晶體之粒徑分佈(PSD)及分佈曲線。藉由組合多分散粉末與結晶體之固有溶解阻力[32，33]及薄膜阻力[34]來研發多分散粉末之溶解模型。溶解模型參數包括固有溶解常數及非球形結晶體之形狀因子。溶解模型之參數係藉由使該等模型溶液符合SAHA形式I結晶體之實驗性溶解概況來評估。

將該等SAHA結晶體與賦形劑一同進行封裝。評估用於各實驗條件之膠囊內容物之密度。量測源自膠囊之SAHA溶解概況。當與封裝前SAHA結晶體之溶解比較時，觀測到溶解加速。溶解加速證實結晶體在封裝期間破損。

發展封裝期間SAHA結晶體之破損模型[35，36]。破損模型參數包括破損率常數及破損率指數。採用破損模型以用於計算封裝期間破損後之PSD，假定破損率常數與破損率指數組合。採用溶解模型以計算具有所算得PSD的破損結晶體之溶解概況。將電腦算得之SAHA溶解概況與用於膠囊之實驗SAHA溶解概況作比較。對於破損率常數與指數之不同組合重複此段之程序直至發現最佳擬合為止。該程序亦重複用於不同批次具有不同PSD之SAHA結晶體中且用於不同封裝條件中。

吾人發現最優化溶解模型參數可滿意地描述具有不同PSD之所有批次之溶解性。該等參數係用於預測封裝之前及之後SAHA結晶體的溶解性。吾人發現最優化之破損率指數且其可用於所有批次之破損模型中。

用於各批次及各封裝條件之最優化破損率常數係與既定封裝條件下之膠囊密度有關。在增加膠囊密度與所有相關封裝條件及批次之破損率常數之間發現近似於線性之依賴性，如圖11中所說明。

預測程序

在破損及溶解模型發展與模型參數最優化之後，該經組合之破損及溶解模型可用於預測新SAHA批次之溶解概況且用於封裝條件之最優化。唯一需要之資訊為新批次之PSD。

預測程序可概述如下。首先，在封裝之前量測新批次之PSD且假定膠囊密度。膠囊密度與破損率常數間之相互關係用於計算破損率常數。

將該電腦算得之破損率常數與該最優化之破損率指數一同引入破損模型以模擬封裝期間之破損且計算封裝後破損結晶體之新PSD。

將新PSD引入該溶解模型中且模擬SAHA自膠囊中溶解之概況。將模擬溶解概況與目標基準曲線相比較。以新膠囊密度重複進行該程序直至發現模擬曲線與目標間之最佳擬合為止。最佳膠囊密度直接決定最佳封裝條件。

實例11摻合SAHA結晶體

上述預測程序可用於確定不同結晶批次之摻合比率以獲得與基準類似之溶解概況。

最佳化大結晶體批次283與經濕式研磨之結晶體批次288之摻合比率

數學模型用於預測較大結晶體批次283與經濕式研磨之結晶體批次288之最佳摻合物。首先，目標在於發現給定條件(膠囊密度)下所製備之膠囊之最佳摻合且接著發現不同封裝條件之最穩固摻合。圖8中展示膠囊密度=0.8之最佳化實例。圖9中展示不同膠囊密度之預測F2值之依賴性。圖9展示預測F2測試值隨膠囊密度降低而增加(膠囊密度降低導致破損程度降低)。在封裝製程期間，經濕式研磨之結晶體幾乎不展示破損。由此推斷最穩固摻合組合物(不同條件下所製備之膠囊間之F2變化最小)含有30%之批次288結晶體與70%之批次283結晶體。

圖10中呈現源自含有30%之批次288結晶體與70%之批次283結晶體的摻合物所製備之膠囊的實驗溶解曲線。

摻合結晶批次

類似之電腦模擬方法可用於摻合來自不同結晶批次之SAHA結晶體。視不同批次結晶體之粒徑而定，可慮及各批次之破損常數。使用以上電腦模擬方法，藉由摻合21.2%之批次1002DRW，18.0%之批次1008D，34.4%之批次1002E，10.0%之批次1004E及16.4%之批次1006D來產生膠囊貨號0683_007A001。

不藉助於電腦模擬摻合批次1001E及批次1003E SAHA多晶型物I結晶體，且將其以2:1比率摻合以產生膠囊貨號6001.004。

實例12粉末摻合SAHA結晶體

粉末摻合物

首先將25.0 Kg摻合SAHA多晶型物I結晶體經由30目篩(600 μm)篩分。隨後將所得SAHA，11.1 Kg微晶纖維素(Avicel PH-101)及1.13 Kg交聯羧甲纖維素鈉裝填於141.6 L V-摻混機，113 L手提式摻混機或尺寸及類型相當之另一摻混機中。對於V-摻混機而言，將所得物質以大約25 rpm混合成均質歷時大約8分鐘。對於手提式摻混機而言，將所得物質以大約12 rpm混合成均質歷時大約17分鐘。

粉末摻合潤滑

將293.0 g硬脂酸鎂(植物級)經由30目篩(600 μm)篩分且將其裝填至具有摻合型粉末混合物之V-摻混機中。將所得混合物以大約25 rpm摻合至均質歷時大約8分鐘。亦將293.0 g硬脂酸鎂(植物級)經由60目篩(250 μm)篩分且將其裝填至具有摻合型粉末混合物之手提式摻混機中。將所得混合物以大約12 rpm摻合至均質歷時大約17分鐘。

表10中概括膠囊中原料之物理性質。

實例13封裝SAHA膠囊

封裝/重量選別

使用H＆K封裝機，經拋光之壓實頂桿或經氮化鉻塗覆之壓實頂桿及"3"號膠囊封裝經潤滑之粉末混合物至所要膠囊重量。使用膠囊拋光機對經填充之膠囊進行拋光且隨後使用重量選別機選別重量以達成適當之重量限制範圍。表11概括了封裝機設置。

表12中說明最終SAHA膠囊組合物。使用膠囊重量變化為±10%目標膠囊重量之認同限度對該等膠囊進行重量選別。典型批次之膠囊重量變化為目標膠囊重量之±4%。

實例14量測SAHA膠囊之溶解速率

使用USP溶解裝置II(VK 7000,Varian Inc.,Cary,NC)評估SAHA自硬明膠膠囊溶解之溶解速率。將各膠囊置放於螺旋狀沉降片(Quality Lab Accessories L.L.C.,Manville,NJ)中且在37±0.5℃溫度下將其傳遞至含有900 mL 2.0%吐溫(Tween)(TCI America,Portland,Oregon)之容器中。攪拌槳以100 rpm之速率攪拌且以特定時間間隔經由裝備有35 μm全流式過濾器(Varian Inc.,Cary,NC)之自動取樣器(VK 8000,Varian Inc.,Cary,NC)取樣。

繼而藉由高效液相層析(Agilent 1100系列，Agilent Technologies Inc.,Wilmington,DE)對樣品進行SAHA檢定。使用Phenomenex Luna C8(2)(100×4.6 mm)5 μm粒徑柱，1:1甲醇/0.1%三氟乙酸(試劑級，Fisher)之流動相及242 nm之偵測波長進行層析分析。

賦形劑，膠囊殼及水分幾乎不影響SAHA膠囊內容物之溶解速率。然而，SAHA之粒徑分佈影響該溶解速率。

表13，14及圖15中說明SAHA自膠囊內容物溶解之溶解速率概況。圖1中說明SAHA自參考膠囊貨號0683_004A001溶解之溶解速率概況。將膠囊貨號0683_004A001用作參考來計算來自不同膠囊批次之SAHA之F2因子。

實例15量測SAHA API之溶解速率

在封裝之前使用USP溶解裝置II(VK 7000,Varian Inc.,Cary,NC)評估100 mg SAHA API之溶解速率。在37±0.5℃之溫度下，將約100 mg SAHA傳遞至含有900 mL 2.0%吐溫(Tween)(TCI America,Portland,Oregon)之容器中。攪拌槳以100 rpm之速率旋轉且以特定時間間隔經由裝備有35 μm全流式過濾器(Varian Inc.,Cary,NC)之自動取樣器(VK 8000,Varian Inc.,Cary,NC)取樣。

繼而，藉由高效液相層析(Agilent 1100系列，Agilent Technologies Inc.,Wilmington,DE)對樣品進行SAHA檢定。使用Phenomenex Luna C8(2)(100×4.6 mm)5 μm粒徑柱，1:1甲醇/0.1%三氟乙酸(試劑級，Fisher)之流動相及242 nm之偵測波長進行層析分析。

SAHA API批次之溶解速率概況在表15及圖6中有所說明。

實例16粒徑分佈之量測

摻合型SAHA結晶體(活性醫藥成份：API)，潤滑性調配摻合物及膠囊內容物之粒徑量測經由配備有一RODOS粉末分散系統之Sympatec雷射繞射分析器(HELOS H1006,Clausthal-Zellerfeld,Germany)來測定。

將大約150 mg樣本手動傳送至該系統並使用0.1 bar氣壓經由雷射束霧化。資料使用一850或1750-μm焦距透鏡來收集且目標遮光度範圍為5%-20%。使用一Fraunhofer光學模型解捲積該樣本散射圖案以獲取所得粒徑分佈。

SAHA膠囊內容物之粒徑分佈在表16及圖3中有所說明。封裝之前SAHA API批次之粒徑分佈在表17及圖4中有所說明。使用API 288(30%經濕式研磨)與283(70%大結晶體)之摻合物製備之SAHA膠囊的粒徑分佈在表18中有所說明。源自使用經濕式研磨之結晶體與大結晶體之不同摻合物製備的膠囊之SAHA之標準化粒徑分佈在表19及圖12中得以描述。使用30%經濕式研磨之結晶體與70%大結晶體製備之貨號C0666001 SAHA膠囊的粒徑分佈在表20及圖13中有所說明。使用30%經濕式研磨之結晶體與70%大結晶體製備之貨號C0667001 SAHA膠囊的粒徑分佈在表21及圖14中有所說明。

實例17患者研究

此階段I研究在晚期癌症患者中進行，該項研究評價投藥400 mg q.d.口服伏立司他(vorinostat)之安全性及耐受性；伏立司他(vorinostat)之單劑量及多劑量血清藥物動力學(PK)；及標準高脂肪食物對單劑量伏立司他(vorinostat)PK的效果。患者在第1天(禁食)及第5天(在標準高脂肪食物之後)接受單劑量400 mg伏立司他(vorinostat)且在此兩天中於給藥後48小時PK取樣。接著，患者接受第7天至第28天(給藥22天)一天一次服用400 mg伏立司他(vorinostat)。在第28天，伏立司他(vorinostat)在標準高脂肪食物之後投藥且在給藥後24小時PK取樣。在經登記之23名患者中，可評估23人之第1天PK，20人之第5天PK及14人之第28天PK。伏立司他(vorinostat)之表觀時間很短。高脂肪食物與少量增加伏立司他(vorinostat)之吸收程度且適度降低伏立司他(vorinostat)之吸收速率相關。在觀測到多數病人進食狀態下血清中伏立司他(vorinostat)之可偵測含量之前觀測到至少15分鐘的停滯時間，且T_max 被延遲。在伏立司他(vorinostat)多劑量投藥之後，血清濃度時間概況類似於彼等單劑量投藥之概況。在多劑量投藥之後的最低濃度一般在定量極限以下，其係與短的表觀終端一致的。總而言之，伏立司他(vorinostat)之短期投藥對具有晚期癌症之患者而言一般易於耐受。當與高脂肪食物一起投藥時，伏立司他(vorinostat)展示了很短的，類似於處在單劑量與多劑量投藥之間的血清濃度時間概況及略微降低之吸收速率。

fe=尿液中無變化排出之劑量分率。

*22天每天一次。

幾何平均數比率。

幾何平均數。

^§ 單劑量進食/單劑量禁食。

積累比率：AUC_{0-24 hr} 多劑量進食/AUC_0-24hr 單劑量進食。

線性比率：AUC_{0-24 hr} 多劑量進食/AUC_0-∞ 單劑量進食。

^# 中值。

**多劑量進食/單劑量進食。

調和平均。

算術平均(單劑量禁食n=22，單劑量進食n=21，多劑量進食n=12)。

雖然本發明已引用其實施例進行特定展示及描述，但是彼等熟習此項技術者將理解在形式及細節中可作出多種改變而不脫離本發明所描述之涵義。另外，本發明之範疇藉由下列申請專利範圍來界定。

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圖1展示源自基準膠囊貨號0683_004A001之SAHA之溶解概況。該等膠囊含有約100 mg活性成份SAHA及賦形劑。

圖2展示封裝之前基準SAHA API批號1007D(摻合型SAHA結晶體)之溶解概況。量測基於約100 mg SAHA之溶解概況。

圖3展示本發明之醫藥膠囊之膠囊內容物的粒徑分佈。該等膠囊含有約100 mg活性成份SAHA及賦形劑。

圖4展示源自封裝之前不同批次之活性成份SAHA(API)的粒徑分佈。

圖5展示源自本發明之醫藥膠囊之SAHA的溶解概況，該等膠囊含有約100 mg活性成份SAHA及賦形劑。

圖6展示封裝之前SAHA API批次(摻合型SAHA結晶體)之溶解概況。量測基於約100 mg SAHA之溶解概況。

圖7展示SAHA之X射線繞射圖。圖7A-E: SAHA形式I-V。

圖8展示基準樣本(目標)，膠囊288及283之由電腦模型預測之溶解概況(曲線)及實驗溶解概況(由圓點，三角及方形指示)。

圖9展示關於與API 283摻合用於不同膠囊密度之API 288之分率的f2值。

圖10展示封裝條件對於膠囊中SAHA溶解性的影響，該等膠囊由含有30%經濕式研磨之API 288及70%未經研磨之API 283的摻合物而製得。

圖11展示破損率常數與膠囊內容物密度之間的相互關係。

圖12展示源自不同批次SAHA膠囊之活性成份(API)之標準化粒徑分佈。

圖13展示源自貨號C0666001之膠囊內容物之粒徑分佈。

圖14展示源自貨號C0667001之膠囊內容物之粒徑分佈。

圖15展示分別在禁食狀態及高脂肪膳食下投予單口服劑量之後的伏立司他(vorinostat)之平均血清濃度。

圖16展示在高脂肪膳食下投予400 mg單或多口服劑量之後的伏立司他(vorinostat)之平均血清濃度。

(無元件符號說明)

Claims

一種製備醫藥組合物之方法，其中該醫藥組合物包含1,8-辛二醯基苯胺羥胺酸或其醫藥學上可接受之鹽類或水合物作為活性成分，且其中與活體外10分鐘溶解52.7%、15分鐘溶解61.7%、20分鐘溶解67.7%、30分鐘溶解75.5%、45分鐘溶解82.6%及60分鐘溶解87.0%之基準溶解概況比較時，約100毫克之該醫藥組合物活性成份具有相似係數(f2)(similarity factor(f2))為至少50至100之活體外溶解概況，該方法包含下列步驟：(a)　將約60%至5%之具有小於約60μm平均粒徑之第一批次結晶活性成分與約40%至95%之具有約100至250μm平均粒徑之第二批次結晶活性成分混合；及(b)　包膠一部分經混合之結晶活性成分以製備該醫藥組合物。
如請求項1之方法，其中該第一批次結晶活性成分具有小於約50μm之平均粒徑，且第二批次結晶活性成分具有約120至160μm之平均粒徑。
如請求項1之方法，其中該第一批次結晶活性成分具有小於約50μm之平均粒徑，且第二批次結晶活性成分具有大於約130之平均粒徑。
如請求項1之方法，其中95%之第一批次結晶活性成分小於約100μm且95%之第二批次結晶活性成分小於約300μm。
如請求項1之方法，其中步驟a)為將約40%至20%之具有約25至45μm平均粒徑之第一批次結晶活性成分與約60%至80%之具有約130至180μm平均粒徑之第二批次結晶活性成分混合。
如請求項1之方法，其中步驟a)為將約30%之具有約25至45μm平均粒徑之第一批次結晶活性成分與約70%之具有約130至180μm平均粒徑之第二批次結晶活性成分混合。
如請求項1至6中任一項之方法，其中該活性成分為1,8-辛二醯基苯胺羥胺酸。
如請求項7之方法，其中與活體外10分鐘溶解52.7%、15分鐘溶解61.7%、20分鐘溶解67.7%、30分鐘溶解75.5%、45分鐘溶解82.6%及60分鐘溶解87.0%之基準溶解概況比較時，約100毫克之該醫藥組合物活性成份具有相似係數(f2)為至少56至100之活體外溶解概況。
一種製備1,8-辛二醯基苯胺羥胺酸再結晶活性成分或其醫藥學上可接受之鹽類或水合物之方法，其包含下列步驟：(a)　提供結晶活性成分至有機溶劑、水或其混合物中以形成漿料；(b)　加熱該漿料以形成2%至30%未溶解之結晶活性成分；及(c)　冷卻該漿料以獲得再結晶活性成分。
如請求項9之方法，其中步驟(a)之結晶活性成分具有小於約60μm之平均粒徑。
如請求項9之方法，其中該結晶活性成分係以如下步驟製備：(i)　添加結晶活性成分至有機溶劑、水或其混合物中以形成晶種漿料；及(ii)　濕式研磨該漿料以獲得經濕式研磨之結晶活性成分。
如請求項9之方法，其中該結晶活性成分係經乾式研磨結晶活性成分之步驟製備。
如請求項9之方法，其中該結晶活性成分係在羥胺存在下獲得。
如請求項9至13中任一項之方法，其中步驟(a)中使用40%至99%乙醇與60%至1%水之混合物。
如請求項14之方法，其中步驟(b)中之漿料經加熱至60至75℃約1至3小時。
如請求項15之方法，其中步驟(c)係於約15至72小時內從60至75℃冷卻至25至-5℃而進行冷卻。
如請求項16之方法，其中該活性成分為1,8-辛二醯基苯胺羥胺酸。
一種製備1,8-辛二醯基苯胺羥胺酸再結晶活性成分或其醫藥學上可接受之鹽類或水合物之方法，其包含下列步驟：(a)　提供結晶活性成分至有機溶劑、水或其混合物中以於第一容器中形成漿料；(b)　加熱該第一容器中之漿料以大體上溶解所有結晶活性成分；(c)　冷卻步驟(b)之第一容器中之內容物至使該溶液過飽和之溫度；(d)　添加結晶活性成分之晶種至步驟(c)之內容物中；(e)　使步驟(d)之內容物在與步驟(c)相同溫度下熟化；及(f)　冷卻步驟(e)之內容物以獲得再結晶活性成分。
如請求項18之方法，其中步驟(d)包含下列步驟：(i)　提供結晶活性成分至有機溶劑、水或其混合物中以形成晶種漿料；(ii)　加熱並老化晶種漿料以溶解一部分晶種；(iii)冷卻步驟(ii)之內容物至與步驟(c)相同溫度；及(iv)將步驟(iii)之晶種漿料轉移至第一容器。
如請求項19之方法，其中步驟(i)之結晶活性成分具有小於約60μm之平均粒徑。
如請求項19之方法，其中步驟(i)係以如下步驟製備：(v)　添加結晶活性成分至有機溶劑、水或其混合物中以形成晶種漿料；及(vi)濕式研磨該漿料以獲得經濕式研磨之結晶活性成分。
如請求項19之方法，其中步驟(i)係以如下步驟製備：(v)　乾式研磨結晶活性成分；及(vi)添加該經乾式研磨結晶活性成分至有機溶劑、水或其混合物中以形成晶種漿料。
如請求項19之方法，其中於步驟(vi)後、步驟(d)前，另包含分離、洗滌及乾燥該經濕式研磨之結晶活性成分之步驟。
如請求項18之方法，其中步驟(a)之結晶活性成分係在羥胺存在下獲得。
如請求項19之方法，其中步驟(a)及(i)中使用40%至99%乙醇與60%至1%水之混合物。
如請求項25之方法，其中步驟(a)及(i)中使用呈49:51至51:49比率之乙醇與水混合物。
如請求項26之方法，其中步驟(b)中之漿料於至少15psig壓力下加熱至60至75℃。
如請求項26之方法，其中步驟(b)中之漿料於至少15psig壓力下加熱至67至70℃。
如請求項26至28中任一項之方法，其中步驟(c)中之內容物係冷卻至60至65℃。
如請求項26至28中任一項之方法，其中步驟(c)中之內容物係冷卻至61至63℃。
如請求項29之方法，其中步驟(ii)中之晶種漿料經加熱至62至66℃。
如請求項30之方法，其中步驟(ii)中之晶種漿料經加熱至64至65℃。
如請求項31之方法，其中步驟(f)係於約15至72小時內從60至75℃冷卻至25至-5℃而進行冷卻。
如請求項32之方法，其中步驟(f)係於約15至72小時內從60至64℃冷卻至0至10℃而進行冷卻。
如請求項34之方法，其中該活性成分為1,8-辛二醯基苯胺羥胺酸。