TWI406943B - 抗-ｉｌ-１２抗體、抗原決定部位、組成物、方法及用途 - Google Patents

抗-ｉｌ-１２抗體、抗原決定部位、組成物、方法及用途 Download PDF

Info

Publication number
TWI406943B
TWI406943B TW094145355A TW94145355A TWI406943B TW I406943 B TWI406943 B TW I406943B TW 094145355 A TW094145355 A TW 094145355A TW 94145355 A TW94145355 A TW 94145355A TW I406943 B TWI406943 B TW I406943B
Authority
TW
Taiwan
Prior art keywords
antibody
seq
amino acid
group
hydrochloride
Prior art date
Application number
TW094145355A
Other languages
English (en)
Other versions
TW200636065A (en
Inventor
Jill Giles-Komar
George Heavner
David M Knight
Jinquan Luo
David Peritt
Bernard Scallon
David Shealy
Original Assignee
Centocor Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Centocor Inc filed Critical Centocor Inc
Publication of TW200636065A publication Critical patent/TW200636065A/zh
Application granted granted Critical
Publication of TWI406943B publication Critical patent/TWI406943B/zh

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/24—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
    • C07K16/244—Interleukins [IL]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/24—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/13—Amines
    • A61K31/135—Amines having aromatic rings, e.g. ketamine, nortriptyline
    • A61K31/137—Arylalkylamines, e.g. amphetamine, epinephrine, salbutamol, ephedrine or methadone
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/56—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/22—Hormones
    • A61K38/27—Growth hormone [GH], i.e. somatotropin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K51/00—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/06—Antiasthmatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/04—Antipruritics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/06—Antipsoriatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A61P21/02—Muscle relaxants, e.g. for tetanus or cramps
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P23/00—Anaesthetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P23/00—Anaesthetics
    • A61P23/02—Local anaesthetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/20—Hypnotics; Sedatives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/16—Otologicals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/04—Anorexiants; Antiobesity agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/08—Antiallergic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/06—Antianaemics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • C07K14/54—Interleukins [IL]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • C07K14/54—Interleukins [IL]
    • C07K14/5434—IL-12
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/10—Immunoglobulins specific features characterized by their source of isolation or production
    • C07K2317/14—Specific host cells or culture conditions, e.g. components, pH or temperature
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/34—Identification of a linear epitope shorter than 20 amino acid residues or of a conformational epitope defined by amino acid residues
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/55—Fab or Fab'
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Anesthesiology (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)

Description

抗－IL－12抗體、抗原決定部位、組成物、方法及用途 發明領域
本發明係有關對至少一種IL－12蛋白或其片段具專一性之抗體(包括特定部分或變異體)、以及抗－個體基因型抗體、該等抗體、部分、變異體、及片段之抗原決定部位區，及編碼該等抗－IL－12抗體之核酸、互補核酸、載體、宿主細胞及製造與使用彼等之方法，包括治療用組成物、投與及裝置。
 發明背景
介白素－12(IL－12)係由經二硫鍵結合之35與40 kD糖基化多肽鏈組成之雜二聚體細胞介素。此細胞介素由抗原呈現細胞(包括樹狀細胞、單核白血球、巨噬細胞、B細胞、Langerhans細胞與角質細胞以及天然殺手(NK)細胞)合成及分泌。IL－12傳介各種生物程序，被稱為係NK細胞刺激因子(NKSF)、T細胞刺激因子、胞毒性T－淋巴細胞成熟因子及EBV－轉形之B－細胞株因子(Curfs,J.H.A.J.,et al.,Clinical Microbiology Reviews,10：742－780(1997))。
介白素－12可與在細胞(例如，T細胞、NK細胞)原生質膜上表現之IL－12受體結合，因而改變(例如，引發、防止)生物程序。例如，IL－12與IL－12受體之結合可刺激活化前T細胞與NK細胞之增殖，提高胞毒性T細胞(CTL)、NK細胞與LAK(淋巴激活素活化殺手)細胞之細胞溶解活性，誘發T細胞與NK細胞產生γ干擾素(IFN GAMMA)及誘使原態Th0細胞分化成為產生IFN GAMMA與IL－2之Th1細胞(Trinchieri,G.,Annual Review of Immunology,13：251－276(1995))。特別是，IL－12為產生細胞溶解性細胞(例如，NK、CTL)及進行細胞免疫反應(例如，由Th1細胞傳介之免疫反應)所必需。從而，IL－12於防禦免疫(例如，根除感染)及病理免疫反應(例如，自體免疫性)二者之產生及調控上格外重要(Hendrzak,J.A.and Brunda,M.J.,Laboratory Investigation,72：619－637(1995))。因此，藉由操縱IL－12之活體內生物活性，例如利用抗體，可提高、抑制或防止免疫反應(例如，防禦性或致病性)。
非人哺乳類、嵌合型、多株(例如，抗－血清)及/或單株抗體(Mabs)及片段(例如，其蛋白水解消化或融合蛋白產物)為於一些病例中正在研究試圖治療特定疾病之潛在治療劑。然而，此等抗體或片段投與人類時，會引起免疫反應。此等免疫反應會造成由免疫複合物傳介之自循環中清除抗體或片段，使得重複投與不適於治療，因而減少對病患之治療優勢及限制該抗體或片段之再投與。例如，重複投與含有非人部分之抗體或片段將導致血清疾病及/或過敏性反應。為了避免彼等及其他問題，業界曾進行許多研究，擬減少此等抗體及其部分之免疫原性，包括此項技藝中悉知之嵌合化及擬人化。然而，彼等及其他方法仍會產生具有若干免疫原性、低親和力、或於細胞培養、放大、生產及/或低產量上之問題之抗體或片段。因此，此等抗體或片段較不適用於製造或作為治療用蛋白質之用途。
於是，業界對於提供可克服一或多項彼等問題之抗－IL－12抗體或片段，以及已知抗體或其片段之增進有所需求。
 發明概述
如本文所述及賦能，結合此項技藝中已知，本發明提供單離之人類、抗－IL－12抗體、免疫球蛋白、其片段、切割產物及其他特定部分與變異體，以及抗－IL－12抗體組成物、IL－12抗－個體基因型抗體、該等抗體、部分、變異體、與片段之抗原決定部位區、編碼或互補核酸、載體、宿主細胞、組成物、調配物、裝置、基因轉殖動物、基因轉殖植物、製造及使用彼等之方法。
本發明亦提供藉由改變抗體可變區中之一或多個胺基酸殘基及測試所得抗體組成物之性質而改變抗體之效力/活性(例如，結合)之方法。
於一態樣中，本發明提供包含與編碼專一性抗－IL－12抗體或抗－個體基因型抗體之多核苷酸互補、或雜交之單離核酸分子，包括至少一種特定序列、其功能部位、部分或變異體。本發明進一步提供包含該抗－IL－12抗體核酸分子之重組載體、含有此等核酸及/或重組載體之宿主細胞、以及製造及/或使用此等抗體核酸、載體及/或宿主細胞之方法。
本發明亦提供於宿主細胞中表現至少一種抗－IL－12抗體、或IL－12抗－個體基因型抗體之至少一種方法，該方法包括於使至少一種抗－IL－12抗體以可檢測及/或可回收之量表現之條件下，培養如本文所述之宿主細胞。
本發明亦提供至少一種組成物，其包含(a)如本文所述之單離之抗－IL－12抗體編碼核酸及/或抗體；及(b)適當及/或醫藥上可接受之載劑或稀釋劑。
本發明進一步提供至少一種抗－IL－12抗體方法或組成物，如此項技藝中已知及/或如本文所述，供投與治療有效量(及/或在相關病症之前、之後或發生期間)以調節或治療細胞、組織、器官、動物或病患之至少一種IL－12相關症狀。
本發明亦提供治療或預防有效量之根據本發明之至少一種抗－IL－12抗體之至少一種組成物、遞送裝置及/或方法。
本發明進一步提供至少一種抗－IL－12抗體方法或組成物，如此項技藝中已知及/或如本文所述，供診斷(及/或在相關病症之前、之後或發生期間)細胞、組織、器官、動物或病患之至少一種IL－12相關症狀。
本發明亦提供用於診斷之根據本發明之至少一種抗－IL－12抗體之至少一種組成物、遞送裝置及/或方法。
本發明亦提供一種醫療裝置，其包括至少一種單離之哺乳類抗－IL－12抗體，其中該裝置適用於接觸或投與至少一種抗－IL－12抗體、IL－12抗－個體基因型抗體、核酸分子、化合物、蛋白質、及/或組成物。
本發明亦提供用於人類醫藥或診斷用途之製造用件，該製造用件包括包裝材料及含有溶液或凍乾形式之本發明至少一種單離哺乳類抗－IL－12抗體之容器。該製造用件可視需要具有容器作為遞送裝置或系統之構成要素。
本發明進一步提供本文敘述之任何發明。
發明之詳細說明
本發明提供單離、重組及/或合成之抗－IL－12人類抗體與IL－12抗－個體基因型抗體，以及組成物與包含編碼至少一種抗－IL－12抗體或抗－個體基因型抗體之至少一種多核苷酸之編碼核酸分子。本發明進一步包含，惟不限於，製造及使用此等核酸與抗體及抗－個體基因型抗體之方法，包括診斷及治療用組成物、方法及裝置。
本文所用之「抗－IL－12抗體」、「IL－12抗體」、「抗－IL－12抗體部分」、「抗－IL－12抗體片段」及/或「抗－IL－12抗體變異體」等包括含有由至少部分免疫球蛋白分子組成之分子之任何蛋白質或胜肽，例如惟不限於，可併入本發明抗體中之重或輕鏈之至少一個互補決定區(CDR)或其配位體結合部分、重鏈或輕鏈可變區、重鏈或輕鏈恒定區、基本架構區、或其任何部分、或IL－12受體或結合蛋白之至少一部分。該抗體視需要進一步對特定配位體發生作用，例如惟不限於，調節、降低、增加、拮抗、促效、減輕、緩和、封阻、抑制、消除及/或干擾至少一種IL－12活性或結合，或IL－12受體活性或試管內、原位及/或活體內結合。舉非限制實例而言，適當之本發明抗－IL－12抗體、特定部分或變異體可結合至少一個IL－12分子、或其特定部分、變異體或功能部位。適當之本發明抗－IL－12抗體、特定部分或變異體亦可視需要對至少一種IL－12活性或功能(例如惟不限於，RNA、DNA或蛋白質合成、IL－12釋放、IL－12受體傳訊、膜IL－12裂解、IL－12活性、IL－12產生及/或合成)發生作用。
「抗體」一詞進一步意欲涵蓋抗體、其分解片段、特定部分及變異體，包含抗體模擬物或含有模擬抗體結構及/或功能之部分抗體或其特定片段或部分之抗體，包括單鏈抗體及其片段。功能性片段包含結合於哺乳類IL－12之抗原結合片段。例如，能結合於IL－12或其部分之抗體片段包含，惟不限於，Fab(例如，利用木瓜蛋白酶分解)、Fab’(例如，利用胃蛋白酶分解及部分還原)與F(ab’)2 (例如，利用胃蛋白酶分解)、facb(例如，利用胞漿素分解)、pFc’(例如，利用胃蛋白酶或胞漿素分解)、Fd(例如，利用胃蛋白酶分解、部分還原及再聚集)、Fv或scFv(例如，利用分子生物技術)等片段，均涵蓋於本發明(參閱，例如，Colligan,Immunology，文獻同前)。
此等片段可利用此項技藝中已知及/或如本文所述之酵素裂解、合成或重組技術予以製造。亦可使用已於天然終止部位上游引入一或多個終止密碼子之抗體基因，製造呈各種平截形式之抗體。例如，可設計編碼F(ab’)2 重鏈部分之組合基因，使其包含編碼該重鏈之CH1 功能部位及/或鉸合區域之DNA序列。抗體的各個部分可利用習知技術使其產生化學接合，或可使用遺傳工程技術，製備成為鄰接蛋白質。
本文所用之「人類抗體」一詞係指實質上該蛋白質的每一部分[例如，CDR、基本結構、CL 、CH 功能部位(例如CH 1、CH 2、CH 3)、鉸合區、(VL 、VH )]實際上於人體中不具免疫原性之抗體，其僅具有極小的序列變化或差異。「人類抗體」亦可為衍生自人類胚細胞免疫球蛋白序列或與其密切適配之抗體。人類抗體可包含不為胚細胞免疫球蛋白序編碼之胺基酸殘基(例如，由試管內隨機或位置專一性突變形成或由活體內體細胞突變引起之突變)。通常，此意指人類抗體實質上於人體中不具免疫原性。人類抗體已根據其胺基酸序列相似性被分成數個類別。因此，使用序列相似性搜尋，可選擇具有相似線性序列之抗體作為模板，創造人類抗體。同樣地，標明靈長類(猴、狒狒、黑猩猩等)、嚙齒類(小鼠、大鼠、兔、天竺鼠、倉鼠等)及其他哺乳類之抗體表明該等物種、亞屬、屬、亞科、及科專一性抗體。再者，嵌合型抗體可包含任何上述之組合。此等變化或差異，相較於非改造抗體，視需要及較佳為保留或減少於人體或其他物種中之免疫原性。因此，人類抗體與嵌合型或擬人化抗體有所區隔。
需注意的是，人類抗體可利用能表現功能性重排人類免疫球蛋白(例如，重鏈及/或輕鏈)基因之非人類動物或原核生物或真核生物細胞予以製造。進一步地，當人類抗體為單鏈抗體時，其可包含未於原態人類抗體內發現之連接胜肽。舉例而言，Fv可包含連接胜肽，例如二至約八個甘胺酸或其他胺基酸殘基，其連接重鏈之可變區及輕鏈之可變區。此等連接胜肽被認為係源自人類。
亦可使用單株，較佳為人類或擬人化之雙專一性、雜專一性、雜接合體或類似抗體－對至少兩個不同抗原具有結合專一性之抗體。於本發明之情形下，其中之一者為對至少一種IL－12蛋白之結合專一性；另一者為對任何其他抗原之結合專一性。雙專一性抗體之製法於此項技藝中為已知。傳統上，雙專一性抗體之重組製造法係根據一起表現兩個免疫球蛋白重鏈－輕鏈對，其中該二重鏈具有不同專一性(Milstein and Cuello,Nature 305：537(1983))。由於免疫球蛋白重鏈與輕鏈之隨機搭配，彼等融合瘤(四瘤)產生10種不同抗體分子之潛在混合物，其中僅有一者具有正確之雙專一性結構。此正確分子的純化，通常係利用親和性層析法進行，其步驟相當麻煩，且產率低。類似程序揭示於例如，WO 93/08829；美國專利案：6210668、6193967、6132992、6106833、6060285、6037453、6010902、5989530、5959084、5959083、5932448、5833985、5821333、5807706、5643759、5601819、5582996、5496549、4676980；WO 91/00360、WO 92/00373、EP 03089；Traunecker et al.,EMBO J.10：3655(1991)；Suresh et al.,Methods in Enzymology 121：210(1986)；各者全部內容併入本文以資參考。
本發明方法及組成物中所用之抗－IL－12抗體(亦稱為IL－12抗體)，其特徵為利用高親和性與IL－12蛋白結合，及，視需要且較佳為，具有低毒性。對本發明特別有用者為本發明之抗體、特定片段或變異體，其中諸個別成分，例如可變區、恒定區及基本結構，個別及/或整體地視需要且較佳為具有低免疫原性。可用於本發明之抗體視需要具有之特徵為，能夠長期治療病患而使症狀獲得可預見之緩和以及低及/或可接受之毒性。低或可接受之免疫原性及/或高親和性，以及其他適當性質，有助於達成治療效果。本文中，「低免疫原性」係界定為少於約75%，或較佳為少於約50%之治療病患引起明顯的HAHA、HACA或HAMA反應，及/或於治療病患中，引起低效價(小於約300，較佳為小於約100，經雙抗原酵素免疫試驗之測定)(Elliottet al.,Lancet 344 ：1125－1127(1994)，其全部內容併入本文以資參考)。「低免疫原性」亦可界定為以抗－IL－12抗體治療之病患，於治療期間之建議治療途徑中，少於25%治療病患，較佳為，少於10%之以建議劑量治療之病患出現對抗該抗－IL－12抗體之抗體可滴定量下落。
用途
本發明之單離核酸可用於製造至少一種抗－IL－12抗體或其片段或特定變異體，其可於細胞、組織、器官或動物(包括哺乳類及人類)中用來計量或產生效果，以診斷、監測、調節、治療、緩和、幫助防止至少一種IL－12狀況(選自，惟不限於，免疫失調症或疾病、心血管失調症或疾病、感染性、惡性、及/或神經性失調症或疾病、或其他已知或特定IL－12相關症狀之至少一者)之發生或減少其症狀。
此等方法可包括以有效量之含有至少一種抗－IL－12抗體之組成物或醫藥組成物投與其症狀、效應或機制需要該等調節、治療、緩和、防止或減少之細胞、組織、器官、動物或病患。該有效量可包括每單次(例如，推注)、多次或持續投與之量為約0.001至500毫克/公斤，或每單次、多次或持續投與達成0.01－5000微克/毫升血清之血清濃度，或使用如本文所述或相關技藝中已知之悉知方法完成及測定之其中任何有效範圍或數值。
引用文獻
本文所引用之所有文獻或專利案由於係顯示進行本發明時此項技藝之狀態，及/或對本發明提供說明及賦能，因此其全部內容均併入本文以資參考。文獻係指任何科學性或專利公開案，或得自任何媒體形式之任何其他可用資訊，包括所有經記錄之電子或印刷形式。下述文獻全部內容均併入本文以資參考：Ausubel,et al.,ed.,Current Protocols in Molecular Biology,John Wiley & Sons,Inc.,NY,NY(1987－2001)；Sambrook,et al.,Molecular Cloning：A Laboratory Manual,2n d Edition,Cold Spring Harbor,NY(1989)；Harlow and Lane,antibodies,a Laboratory Manual,Cold Spring Harbor,NY(1989)；Colligan,et al.,eds.,Current Protocols in Immunology,John Wiley & Sons,Inc.,NY(1994－2001)；Colligan et al.,Current Protocols in Protein Science,John Wiley & SonS,NY,NY,(1997－2001)。
本發明抗體－製造及產生
本發明之至少一種抗－IL－12抗體可視需要利用如此項技藝中悉知之細胞株、混合細胞株、胚質永存細胞或胚質永存細胞之轉殖群體予以製造。參閱，例如，Ausubel,et al.,ed.,Current Protocols in Molecular Biology,John Wiley & Sons,Inc.,NY,NY(1987－2001)；Sambrook,et al.,Molecular Cloning：A Laboratory Manual,2n d Edition,Cold Spring Harbor,NY(1989)；Harlow and Lane,antibodies,a Laboratory Manual,Cold Spring Harbor,NY(1989)；Colligan,et al.,eds.,Current Protocols in Immunology,John Wiley & Sons,Inc.,NY(1994－2001)；Colligan et al.,Current Protocols in Protein Science,John Wiley & Sons,NY,NY,(1997－2001)；各者全部內容併入本文以資參考。
對人類IL－12蛋白或其片段具專一性之人類抗體可針對適當免疫抗原，例如單離之IL－12蛋白及/或其部分(包括合成分子，例如合成胜肽)予以培養(raised)。其他專一性或一般哺乳類抗體可同法培養。可使用任何適當技術進行免疫抗原之製備及單株抗體之製造。
於一方法中，融合瘤之製造可利用融合適當胚質永存細胞株(例如，骨髓瘤細胞株例如，惟不限於，Sp2/0、Sp2/0－AG14、NSO、NS1、NS2、AE－1、L.5、L243、P3X63Ag8.653、Sp2 SA3、Sp2 MAI、Sp2 SS1、Sp2 SA5、U937、MLA 144、ACT IV、MOLT4、DA－1、JURKAT、WEHI、K－562、COS、RAJI、NIH 3T3、HL－60、MLA 144、NAMAIWA、NEURO 2A等，或異源骨髓細胞瘤、其融合產物，或自其衍生之任何細胞或融合細胞，或此項技藝中已知之任何其他適當細胞株)(參閱，例如，www.atcc.org、www.lifetech.com.等)與產生抗體之細胞，例如，惟不限於，單離或轉殖之脾臟細胞、周邊血液、淋巴、扁桃腺、或含有細胞之其他免疫或B細胞或表現重或輕鏈恒定或可變或基本結構或CDR序列之任何其他細胞(內源抑或異源核酸，為重組體或係內源之病毒、細菌、藻類、原核生物、兩棲類、昆蟲、爬蟲類、魚、哺乳類、囓齧類、馬、羊、山羊、綿羊、靈長類、真核生物、基因體DNA、cDNA、rDNA、粒線體DNA或RNA、葉綠體DNA或RNA、hnRNA、mRNA、tRNA、單、雙或三股、經雜交等或其任何組合)。參閱，例如，Ausubel，文獻同前，及Colligan,Immunology，文獻同前，第2章，全部內容併入本文以資參考。
產生抗體之細胞亦可從已以所關注抗原進行免疫處理之人類或其他適當動物之周邊血液(或，較佳為脾臟或淋巴節)獲得。亦可使用任何其他適當宿主細胞來表現編碼本發明抗體、其特定片段或變異體之異源或內源核酸。融合細胞(融合瘤)或重組細胞可利用選擇性培養條件或其他適當已知方法予以單離，及利用限度稀釋法或細胞分類、或其他已知方法進行轉殖。可利用適當試驗(例如，ELISA)挑選產生具有所需專一性的抗體之細胞。
可使用產生或單離具有必要專一性的抗體之其他適當方法，包括，惟不限於，此項技藝中已知及/或如本文所述，能產生人類抗體指令系統之自胜肽或蛋白質庫(例如，惟不限於，噬菌體、核糖體、寡核苷酸、RNA、cDNA等)、展示庫[例如，得自Cambridge antibody Technologies,Cambridgeshire,UK；MorphoSys,Martinsreid/Planegg,DE；Biovation,Aberdeen,Scotland,UK；BioInvent,Lund,Sweden；Dyax Corp.,Enzon,Affymax/Biosite；Xoma,Berkeley,CA；Ixsys，參閱，例如，EP 368,684、PCT/GB91/01134；PCT/GB92/01755；PCT/GB92/002240；PCT/GB92/00883；PCT/GB93/00605；US 08/350260(5/12/94)；PCT/GB94/01422；PCT/GB94/02662；PCT/GB97/01835；(CAT/MRC)；WO90/14443；WO90/14424；WO90/14430；PCT/US94/1234；WO92/18619；WO96/07754；(Scripps)；W096/13583、W097/08320(MorphoSys)；W095/16027(Biolnvent)；W088/06630；W090/3809(Dyax)；US 4,704,692(Enzon)；PCT/US91/02989(Affymax)；W089/06283；EP 371 998；EP 550 400；(Xoma)；EP 229 046；PCT/US91/07149(Ixsys)；或隨機產生之胜肽或蛋白質－US 5723323、5763192、5814476、5817483、5824514、5976862、WO86/05803、EP 590 689(Ixsys,現為Applied Molecular Evolution(AME))，各者全部內容併入本文以資參考]選擇重組抗體或依賴免疫處理基因轉殖動物[例如，SCID小鼠，Nguyen et al.,Microbiol.Immunol.41：901－907(1997)；Sandhu et al.,Crit.Rev.Biotechnol.16：95－118(1996)；Eren et al.,Immunol.93：154－161(1998)，各者全部內容併入本文以資參考，以及相關之專利案與申請案]之方法。此等技術包括，惟不限於，核糖體展示(Hanes et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,94：4937－4942(May 1997)；Hanes et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,95：14130－14135(Nov.1998))；單細胞抗體製造技術(例如，經挑選之淋巴細胞抗體方法(”SLAM”)(美國專利案5,627,052、Wen et al.,J.Immunol.17：887－892(1987)；Babcook et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 93：7843－7848(1996))；凝膠微滴及流動細胞計數法(Powell et al.,Biotechnol.8：333－337(1990)；One Cell Systems,Cambridge,MA；Gray et al.,J.Imm.Meth.182：155－163(1995)；Kenny et al.,Bio/Technol.13：787－790(1995))；B細胞選擇法(Steenbakkers et al.,Molec.Biol.Reports 19：125－134(1994)；Jonak et al.,Progress Biotech,Vol.5,In Vitro Immunization in Hybridoma Technology,Borrebaeck,ed.,ElseVier Science Publishers B.V.,Amsterdam,Netherlands(1988))。
亦可使用建造或擬人化非人類抗體或人類抗體之方法，其為此項技藝所悉知。概括而言，擬人化或建造抗體具有得自非人類來源(例如，惟不限於，小鼠、大鼠、兔、非人類靈長類或其他哺乳動物)之一或多個胺基酸殘基。彼等非人類胺基酸殘基被常被稱為「進口」殘基[典型地係得自已知人類序列之「進口」可變、恒定或其他功能部位]之殘基置換。
已知之人類Ig序列揭示於，例如，www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi；www.ncbi.nih.gov/igblast；www.atcc.org/phage/hdb.html；www.mrc－cpe.cam.ac.uk/ALIGNMENTS.php；www.kabatdatabase.com/top.html；ftp.ncbi.nih.gov/repository/kabat；www.sciquest.com；www.abcam.com；www.antibodyresource.com/onlinecomp.html；www.public.iastate.edu/~pedro/research_tools.html；www.whfreeman.com/immunology/CH05/kuby05.htm；www.hhmi.org/grants/lectures/1996/vlab；www.path.cam.ac.uk/~mrc7/mikeimages.html；mcb.harvard.edu/BioLinks/Immunology.html；www.immunologylink.com；pathbox.wustl.edu/~hcenter/index.html；www.appliedbiosystems.com；www.nal.usda.gov/awic/pubs/antibody；www.m.ehime－u.ac.jp/~yasuhito/Elisa.html；www.biodesign.com；www.cancerresearchuk.org；www.biotech.ufl.edu；www.isac－net.org；baserv.uci.kun.nl/~jraats/linksl.html；www.recab.uni－hd.de/immuno.bme.nwu.edu；www.mrc－cpe.cam.ac.uk；www.ibt.unam.mx/vir/V_mice.html；http：//www.bioinf.org.uk/abs；antibody.bath.ac.uk；www.unizh.ch；www.cryst.bbk.ac.uk/~ubcg07s；www.nimr.mrc.ac.uk/CC/ccaewg/ccaewg.html；www.path.cam.ac.uk/~mrc7/humanisation/TAHHP.html；www.ibt.unam.mx/vir/structure/stat_aim.html；www.biosci.missouri.edu/smithgp/index.html；www.jerini.de；Kabat et al.,Sequences of Proteins of Immunological Interest,U.S.Dept.Health(1983)；各者全部內容併入本文以資參考。
如此項技藝中已知，該等進口序列可用於降低免疫原性或減少、提高或修飾結合、親和性、增加率(on－rate)、下降率(off－rate)、抗體親抗原性、專一性、半衰期、或任何其他適當特性。一般而言，CDR殘基對抗原結合有直接及最實質之影響。因此，維持部分或所有非人類或人類CDR序列，而以人類或其他胺基酸置換可變區及恒定區之非人類序列。
抗體亦可視需要擬人化或建造保留對抗原之高度親和性與其他有利之生物性質之人類抗體。欲達此目標，可視需要利用分析親代序列之程序及使用親代與擬人化序列之三度空間模式之各種概念性擬人化產物製備擬人化(或人類)抗體。三度空間免疫球蛋白模式係一般常見可得，且為熟習此項技藝人士所熟知。說明及展示所選擇候選免疫球蛋白序列可信之三度空間組成結構之電腦程式為市售可得。檢閱彼等展示得以分析殘基在候選免疫球蛋白序列之作用上之可能角色，亦即，分析影響候選免疫球蛋白與其抗原結合能力之殘基。以此方式，可從一致及進口序列選定及組合基本架構(FR)殘基，而達成所需抗體特性，例如對標的抗原之親和力增加。
此外，本發明之人類IL－12抗體可包含人類胚細胞輕鏈基本架構。於特定於特定具體實例中，輕鏈胚細胞序列係選自人類VK序列包括，惟不限於，A1、A10、A11、A14、A17、A18、A19、A2、A20、A23、A26、A27、A3、A30、A5、A7、B2、B3、L1、L10、L11、L12、L14、L15、L16、L18、L19、L2、L20、L22、L23、L24、L25、L4/18a、L5、L6、L8、L9、O1、O11、O12、O14、O18、O2、O4、與O8。於特定具體實例中，此輕鏈人類胚細胞基本架構係選自V1－11、V1－13、V1－16、V1－17、V1－18、V1－19、V1－2、V1－20、V1－22、V1－3、V1－4、V1－5、V1－7、V1－9、V2－1、V2－11、V2－13、V2－14、V2－15、V2－17、V2－19、V2－6、V2－7、V2－8、V3－2、V3－3、V3－4、V4－1、V4－2、V4－3、V4－4、V4－6、V5－1、V5－2、V5－4、與V5－6。
於其他具體實例中，本發明之人類IL－12抗體可包含人類胚細胞重鏈基本架構。於特定具體實例中，此重鏈人類胚細胞基本架構係選自VH1－18、VH1－2、VH1－24、VH1－3、VH1－45、VH1－46、VH1－58、VH1－69、VH1－8、VH2－26、VH2－5、VH2－70、VH3－11、VH3－13、VH3－15、VH3－16、VH3－20、VH3－21、VH3－23、VH3－30、VH3－33、VH3－35、VH3－38、VH3－43、VH3－48、VH3－49、VH3－53、VH3－64、VH3－66、VH3－7、VH3－72、VH3－73、VH3－74、VH3－9、VH4－28、VH4－31、VH4－34、VH4－39、VH4－4、VH4－59、VH4－61、VH5－51、VH6－1、與VH7－81。
於特定具體實例中，輕鏈可變區及/或重鏈可變區包含基本架構區或至少部分基本架構區(例如，含有2或3個分區，例如FR2與FR3)。於特定具體實例中，至少FRL1、FRL2、FRL3、或FRL4為完全人類。於其他具體實例中，至少FRH1、FRH2、FRH3、或FRH4係完全人類。於一些具體實例中，至少FRL1、FRL2、FRL3、或FRL4係胚細胞序列(例如，人類胚細胞)或包含用於特定基本架構之人類一致序列(易於自上述已知人類Ig序列來源獲得)。於其他具體實例中，至少FRH1、FRH2、FRH3、或FRH4係胚細胞序列(例如，人類胚細胞)或包含用於特定基本架構之人類一致序列。於較佳具體實例中，基本架構區係完全人類基本架構區。
本發明抗體之擬人化或建造可使用任何已知方法進行，例如惟不限於，見述於下述文獻者：Winter(Jones et al.,Nature 321：522(1986)；Riechmann et al.,Nature 332：323(1988)；Verhoeyen et al.,Science 239：1534(1988))；Sims et al.,J.Immunol.151：2296(1993)；Chothia and Lesk,J.Mol.Biol.196：901(1987)；Carter et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.89：4285(1992)；Presta et al.,J.Immunol.151：2623(1993)；美國專利案：5723323、5976862、5824514、5817483、5814476、5763192、5723323、5,766886、5714352、6204023、6180370、5693762、5530101、5585089、5225539；4816567、PCT/：US98/16280、US96/18978、US91/09630、US91/05939、US94/01234、GB89/01334、GB91/01134、GB92/01755；WO90/14443、WO90/14424、WO90/14430、EP 229246；各者全部內容併入本文以資參考，包括其中引用之文獻。
於特定具體實例中，抗體包含改變後之(例如，突變後之)Fc區域。舉例而言，於某些具體實例中，Fc已改變而減少或提升抗體之效應功能。於某些具體實例中，Fc區域係選自IgM、IgA、IgG、IgE、或其他同型。替代地或附加地，結合胺基酸改造與改變IL－12結合分子Fc區域之Clq結合作用及/或補體依存胞毒功能之一或多個進一步之胺基酸改造可能有用。特別關注之起始多肽可為結合於Clq且展現補體依存胞毒性(CDC)者。具有業已存在的Clq結合活性、視需要進一步具有傳介CDC能力之多肽可經改造俾使提升彼等活性之一或二者。改變Clq及/或修飾其補體依存胞毒功能之胺基酸改造作用見述於，例如，WO0042072，其內容併入本文以資參考。
如上文所揭示，可設計具有改變效應功能之本發明人類IL－12抗體之Fc區域，例如，藉由改造Clq結合作用及/或FcγR結合作用，從而改變補體依存胞毒(CDC)活性及/或抗體依存細胞傳介之胞毒(ADCC)活性。「效應功能」承擔活化或降低生物活性(例如，於對象中)之責任。效應功能之實例包含，惟不限於：Clq結合作用；CDC；Fc受體結合作用；ADCC；吞噬作用；細胞表面受體(例如，B細胞受體；BCR)之向下調節等。此等效應功能可能需要使Fc區域與結合功能部位(例如，抗體可變功能部位)結合，及可使用多種試驗方法(例如，Fc結合試驗、ADCC試驗、CDC試驗等)予以評估。
舉例而言，可產生具有增進之Clq結合作用與增進之FcγRIII結合作用(例如，同時具有增進之ADCC活性與增進之CDC活性)之人類IL－12抗體之變異Fc區域。替代地，若期望效應功能減少或消除，則可建造CDC活性降低及/或ADCC活性降低之變異Fc區域。於其他具體實例中，僅可增加彼等活性之一者，及視需要地，同時降低另一活性(例如，產生具有增進之ADCC活性，惟CDC活性降低之Fc區域變異體，反之亦然)。
於建造中亦可引入Fc突變，以修改其與初生Fc受體(FcRn)之互相作用及增進其藥物動力學性質。具有增進之FcRn結合作用之人類Fc變異體之收集已見述於文獻(Shields et al.,(2001).High resolution mapping of the binding site on human IgG1 for FcγRI,FcγRII,FcγRIII,and FcRn and design of IgG1 variants with improved binding to the FcγR,J.Biol.Chem.276：6591－6604)。
另一類型胺基酸取代係用於改變人類IL－12抗體Fc區域之糖基化模式。Fc區域之糖基化典型地為N－連接型或O－連接型。N－連接型係指碳水化合物基團連接於天冬醯胺殘基之側鏈。O－連接型糖基化係指N－乙醯基半乳糖胺、半乳糖、或木糖等糖類之一者連接於羥基胺基酸，最常見為絲胺酸或蘇胺酸，惟亦可使用5－羥基脯胺酸或5－羥基離胺酸。供碳水化合物基團酵素性連接於天冬醯胺側鏈胜肽序列之識別序列為天冬醯胺－X－絲胺酸及天冬醯胺－X－蘇胺酸，其中X為脯胺酸以外之任何胺基酸。因此，多肽中彼等胜肽序列任一者之存在即產生可能之糖基化位置。
糖基化模式可，例如，藉由刪除存在多肽中之一或多個糖基化位置，及/或增添不存在多肽中之一或多個糖基化位置而予以修改。增添糖基化位置於人類IL－12抗體Fc區域係方便地藉由改變胺基酸序列俾使其含有一或多個上述三胜肽序列(供N－連接型糖基化位置用)而達成。一例示之糖基化變異體於重鏈之殘基Asn 297具有胺基酸取代。亦可藉由在原始多肽序列中增添或以一或多個絲胺酸或蘇胺酸殘基進行取代(供O－連接型糖基化位置用)而予以修改。附加地，將Asn 297更改為Ala可去除一個糖基化位置。
於特定具體實例中，本發明之人類IL－12抗體係於表現β(1,4)－N－乙醯基葡糖胺基轉移酶III(GnT III)之細胞中表現，俾使GnT III添加GlcNAc至人類IL－12抗體。以此等方式製造抗體之方法提供於WO/9954342、WO/03011878、專利公告案20030003097A1、及Umana et al.,Nature Biotechnology,17：176－180,Feb.1999；所有該等文獻全部內容均併入本文以資參考。
抗－IL－12抗體亦可視需要藉由將如本文所述及/或如此項技藝中已知之能產生人類抗體指令系統之基因轉殖動物(例如，小鼠、大鼠、倉鼠、非人類靈長類等)免疫處理而產生。使用適當方法，例如本文敘述之方法，可從該等動物中將產生人類抗－IL－12抗體之細胞單離及胚質永存化。
可產生結合於人類抗原的人類抗體指令系統之基因轉殖小鼠，可利用已知方法予以製造(例如，惟不限於，頒給Lonberg等之美國專利案：5,770,428、5,569,825、5,545,806、5,625,126、5,625,825、5,633,425、5,661,016及5,789,650；Jakobovitset al. WO98/50433；Jakobovitset al. WO98/24893；Lonberget al. WO98/24884；Lonberget al. WO97/13852；Lonberget al. WO94/25585；Kucherlapateet al. WO96/34096；Kucherlapateet al. EP 0463 151 B1；Kucherlapateet al. EP 0710 719 A1；Suraniet al. 美國專利案5,545,807；Bruggemannet al. WO90/04036；Bruggemannet al. EP 0438 474 B1；Lonberget al. EP 0814 259 A2；Lonberget al. GB 2 272 440 A；Lonberget al.Nature 368：856－859(1994)；Tayloret al,Int.Immunol. 6(4)579－591(1994)；Greenet al,Nature Genetics 7：13－21(1994)；Mendezet al.,Nature Genetics 15：146－156(1997)；Tayloret al.,Nucleic Acids Research 20(23)：6287－6295(1992)；Tuaillonet al.,Proc Natl Acad Sci USA 90(8)3720－3724(1993)；Lonberget al.,Int.Rev Immunol 13(1)：65－93(1995)及Fishwaldet al.,Nat Biotechnol 14(7)：845－851(1996)；各者全部內容併入本文以資參考)。概括而言，彼等小鼠含有至少一種轉殖基因，係由得自至少一個人類免疫球蛋白基因座而經功能性重排或可進行功能性重排之DNA所構成。可將此等小鼠中之內源免疫球蛋白基因座瓦解或刪除，以消除該動物產生內源基因編碼的抗體之能力。
使用胜肽展示庫可方便地達成對類似蛋白質或片段具結合專一性的抗體之篩選。此方法包括從大宗胜肽中篩選具有所需功能或結構的個別成員。胜肽展示庫之抗體篩選法為此項技藝中所悉知。所展示之胜肽序列長度可為3至5000或更多個胺基酸，常見長度為5至100個胺基酸，大多為約8至25個胺基酸長。除了產生胜肽庫之直接化學合成方法外，已有數個重組DNA方法被述及，其中一種包括在噬菌體或細胞表面展示胜肽序列，各噬菌體或細胞含有編碼該特定展示胜肽序列之核苷酸序列。該等方法見述於PCT專利公報91/17271、91/18980、91/19818、及93/08278。
產生胜肽庫之其他系統包括試管內化學合成及基因重組方法兩方面。參閱，PCT專利公報92/05258、92/14843、及96/19256。亦參閱，美國專利案5,658,754及5,643,768。胜肽展示庫、載體、及篩選套組可自例如Invitrogen (Carlsbad,CA)及Cambridge antibody Technologies(Cambridgeshire,UK)等廠商購得。參閱，例如，美國專利案：頒給Enzon之4704692、4939666、4946778、5260203、5455030、5518889、5534621、5656730、5763733、5767260、5856456；頒給Dyax之5223409、5403484、5571698、5837500；頒給Affymax之5427908、5580717；頒給Cambridge antibody Technologies之5885793；頒給Genetech之5750373；頒給Xoma之5618920、5595898、5576195、5698435、5693493、5698417；Colligan，文獻同前；Ausubel，文獻同前；或Sambrook，文獻同前；上述各專利案及文獻全部內容均併入本文以資參考。
本發明之抗體亦可利用提供在其奶中產生此等抗體之基因轉殖動物或哺乳動物(例如山羊、牛、馬、綿羊、兔等)至少一種抗－IL－12抗體編碼核酸予以製備。此等動物可使用已知方法提供，參閱，例如，惟不限於，美國專利案5,827,690；5,849,992；4,873,316；5,849,992；5,994,616；5,565,362；5,304,489等；各者全部內容併入本文以資參考。
本發明之抗體附加地可使用至少一種抗－IL－12抗體之編碼核酸予以製備，以提供於植物體或其培養細胞中產生此等抗體、特定部分或變異體之基因轉殖植物及培養植物細胞(例如，惟不限於煙草及玉米)。舉一非限制實例，表現重組蛋白之基因轉殖煙草葉已成功地被用來提供大量重組蛋白，例如，使用誘導啟動子。參閱，例如，Cramer et al.,Curr.Top.Microbol.Immunol.240：95－118(1999)及其中引用之參考文獻。又，基因轉殖玉米已被用來表現商業生產量之哺乳類蛋白質，其生物活性等同於以其他重組系統或自天然來源純化製造者。參閱，例如，Hood et al.,Adv.Exp.Med.Biol.464：127－147(1999)及其中引用之參考文獻。也已自基因轉殖植物種子(包括煙草種子及馬鈴薯塊莖)大量製造抗體，包括抗體片段，例如單鏈抗體(scFv’s)。參閱，例如，Conrad et al.,Plant Mol.Biol.38：101－109(1998)及其中引用之參考文獻。因此，本發明之抗體亦可使用基因轉殖植物，根據已知方法予以製造。亦參閱，例如，Fischer et al.,Biotechnol.Appl.Biochem.30：99－108(Oct.,1999)；Ma et al.,Trends Biotechnol.13：522－7(1995)；Ma et al.,Plant Physiol.109：341－6(1995)；Whitelam et al.,Biochem.Soc.Trans.22：940－944(1994)；及其中引用之參考文獻。以上各參考文獻其全部內容均併入本文以資參考。
本發明之抗體可以寬廣範圍之親和力(KD )結合人類IL－12。於較佳具體實例中，本發明之至少一種人類單株可視需要以高度親和力結合人類IL－12。例如，人類單株抗體可以等於或少於約10－ 7 M之KD ，例如惟不限於，0.1－9.9(或其中任何範圍或數值)x 10－ 7 、10－ 8 、10－ 9 、10－ 1 0 、10－ 1 1 、10－ 1 2 、10－ 1 3 M或其中任何範圍或數值之KD 結合人類IL－12。
抗體對抗原之親和性或抗體親抗原性可使用任何適當方法進行實驗予以測定。參閱，例如，Berzofsky,et al .,“抗體－Antigne Interactions,”InFundamental Immunology ,Paul,W.E.,Ed.,Raven Press：New York,NY(1984)；Kuby,JanisImmunology ,W.H.Freeman and Company：New York,NY(1992)；及其中敘述之方法。在不同條件(例如，鹽濃度、pH)下，所測得特定抗體－抗原相互作用之親和力可能不同。因此，親和力及其他抗原結合參數(例如，KD 、Ka 、Kd )之測定較佳為以抗體與抗原之標準溶液及標準緩衝劑(例如本文所述之緩衝劑)進行。
核酸分子
使用本文提供之資訊，例如，編碼本文揭示的其他序列中之SEQ ID NOS：1、2、3、4、5、6、7、8的輕鏈或重鏈可變或CDR區之至少一者之至少70－100%鄰接胺基酸、其特定片段、變異體或一致序列之核苷酸序列、或包括至少一種彼等序列之寄存載體，可利用本文所述或此項技藝中已知之方法製得編碼至少一種抗－IL－12抗體之本發明核酸分子。
本發明之核酸分子可呈RNA形式，例如mRNA、hnRNA、tRNA或任何其他形式，或呈DNA形式，包括，惟不限於，利用轉殖或合成製造獲得之cDNA及基因體DNA，或其任何組合。此DNA可為三股、雙股或單股，或其任何組合。至少一股DNA或RNA之任何部分可為編碼股，亦為所謂意義股，或可為非編碼股，亦稱為反義股。
本發明之單離核酸分子可包含由視需要具有一或多個插入序列[例如，惟不限於，至少一重鏈(例如，SEQ ID NOS：1－3)或輕鏈(SEQ ID NOS：4－6)之至少一個CDR(例如CDR1、CDR2及/或CDR3)之至少一特定部分]之開放譯讀架構(ORF)組成之核酸分子；包含抗－IL－12抗體或可變區(例如，SEQ ID NOS：7與8之輕鏈及重鏈可變區)編碼序列之核酸分子；及由實質上與上面敘述者不同，惟由於基因密碼子之簡併，仍編碼如本文所述及/或此項技藝中已知之至少一種抗－IL－12抗體之核苷酸序列組成之核酸分子。當然，基因密碼子為此項技藝中悉知。因此，對熟習此項技藝人士而言，產生編碼本發明專一性抗－IL－12抗體之此等簡併核酸變異體，為例行事宜。參閱，例如，Ausubel,et al.，文獻同前，此等核酸變異體涵蓋於本發明範圍之內。本發明單離核酸分子之非限制實例包括分別編碼HC CDR1、HC CDR2、HC CDR3、LC CDR1、LC CDR2、與LC CDR3之核酸。
如本文所示，由編碼抗－IL－12抗體的核酸組成之本發明核酸分子可包含，惟不限於，其本身編碼抗體片段之胺基酸序列者；整個抗體或其部分之編碼序列；抗體、片段或部分之編碼序列，以及附加序列，例如至少一種訊息前導或融合胜肽之編碼序列，含或不含前述附加編碼序列，例如至少一個插入序列，以及附加之非編碼序列，包含惟不限於，非編碼之5’與3’序列，例如負責轉錄、mRNA加工，包括切片及聚腺苷酸化作用訊息(例如，核糖體結合及mRNA之穩定性)之轉錄、非轉譯序列；編碼附加胺基酸(例如提供附加功能者)之附加編碼序列。因此，編碼抗體之序列可融合於標記序列，例如幫助包含抗體片段或部分之融合抗體純化的胜肽之編碼序列。
與如本文所述之多核苷酸選擇性雜交之多核苷酸
本發明提供於選擇性雜交條件下與本文揭示之多核苷酸雜交之單離核酸。因此，此具體實例之多核苷酸可用於單離、檢測、及/或定量包含此等多核苷酸之核酸。舉例而言，本發明之多核苷酸可用於鑑定、單離、或擴增寄存庫中之部分或全長轉殖體。於一些具體實例中，該等多核苷酸係經單離、或者與得自人類或哺乳類核酸庫的cDNA互補之基因體或cDNA序列。
較佳為，該cDNA庫包含至少80%全長序列，較佳為至少85%或90%全長序列，及更佳為至少95%全長序列。cDNA庫可予以標準化以增加罕見序列之代表性。典型地係(而非專限於)使用低或中度嚴苛雜交條件，及使用相對於互補序列具有較少序列同一性之序列。具有較高同一性之序列可視需要使用中度或高度嚴苛條件。低嚴苛條件容許具有約70%序列同一性的序列之選擇性雜交，及可用於鑑定同源基因序列(orthologous sequences)或形似基因序列(paralogous sequences)。
視需要地，本發明之多核苷酸將編碼由本文所述多核苷酸編碼的抗體之至少一部分。本發明之多核苷酸包含可用於與編碼本發明抗體之多核苷酸選擇性雜交之核酸序列。參閱，例如，Ausubel，文獻同前；ColIigan，文獻同前；各者全部內容併入本文以資參考。
核酸之構築
本發明之單離核酸可使用此項技藝悉知之(a)基因重組方法、(b)合成技術、(c)純化技術、及/或其組合，予以製造。
該核酸可便利地包含除了本發明多核苷酸以外之序列。例如，可於該核酸中插入含有一或多個核酸內切酶限制位置之多轉殖位置，以幫助多該核苷酸之單離。又，可插入可轉譯序列，以幫助本發明之轉譯多核苷酸之單離。例如，六－組胺酸標記序列為本發明蛋白質之純化提供便利之方式。本發明之核酸，不包括編碼序列，視需要為用於轉殖及/或表現本發明多核苷酸之載體、接合子(adapter)或連接子(linker)。
可添加附加序列於此等轉殖及/或表現序列，使其於轉殖及/或表現中之功能最適化，以幫助多核苷酸之單離，或增進多核苷酸之引入細胞中。轉殖載體、表現載體、接合子、及連接子之使用為此項技藝中悉知(參閱，例如，Ausubel，文獻同前；或Sambrook，文獻同前)。
構築核酸之基因重組方法
本發明之單離核酸組成物，例如RNA、cDNA、基因體DNA、或其任何組合，可使用熟習此項技藝者已知之任何轉殖方法，自生物來源獲得。於一些具體實例中，係使用於嚴苛條件下，與本發明多核苷酸選擇性雜交之寡核苷酸探針來鑑定cDNA或基因體DNA庫中之所需序列。RNA之單離、及cDNA與基因體庫之構築，為一般熟習此項技藝者所悉知(參閱，例如，Ausubel，文獻同前；或Sambrook，文獻同前)。
核酸篩選及單離方法
cDNA或基因體庫之篩選可使用以本發明多核苷酸序列為基礎之探針，例如本文所揭示者。可使用探針與基因體DNA或cDNA序列雜交，以於相同或不同生物體中將同源基因單離。熟習此項技藝者將認知，試驗中可使用不同嚴苛程度之雜交；該雜交作用或者洗滌介質可具嚴苛性。當雜交條件較為嚴苛時，則探針與供雙鏈形成的標靶之間，必須存在較高程度之互補性。嚴苛程度可利用溫度、離子強度、pH及存在部分變性溶劑(例如甲醯胺)之一或多者加以控制。例如，雜交之嚴苛性可方便地利用透過，例如，控制甲醯胺的濃度在0%至50%之範圍內改變反應物溶液之極性予以改變。可檢測之結合需要的互補性(序列同一性)程度依雜交介質及/或洗滌介質之嚴苛性而異。該互補性程度適當地為100%，或70－100%，或其中任何範圍或值。然而，應瞭解探針及引子中微小之序列差異可利用減少雜交及/或洗滌介質之嚴苛性予以補償。
RNA或DNA之擴增方法為此項技藝中悉知，可根據本發明之教示及引導，不需過度實驗即可使用。
擴增DNA或RNA之已知方法包含，惟不限於，聚合酶連鎖反應(PCR)及相關擴增方法(參閱，例如，美國專利案：頒給Mullis,et al.之4,683,195、4,683,202、4,800,159、4,965,188；頒給Tabor,et al.之4,795,699及4,921,794；頒給Innis之5,142,033；頒給Wilson,et al.之5,122,464；頒給Innis之5,091,310；頒給Gyllensten,et al.之5,066,584；頒給Gelfand,et a1.之4,889,818；頒給Silver,et al.之4,994,370；頒給Biswas之4,766,067；頒給Ringold之4,656,134)及於標靶序列使用反義RNA作為合成雙股DNA的模板之由RNA傳介之擴增作用(頒給Malek,et al.之美國專利案5,130,238，商標名為NASBA)，該等參考案之全部內容均併入本文以資參考(參閱，例如，Ausubel，文獻同前；或Sambrook，文獻同前)。
舉例而言，可使用聚合酶連鎖反應(PCR)技術直接以基因體DNA或CDNA庫擴增本發明之多核苷酸序列及相關基因。也可使用PCR及其他試管內擴增方法而，例如，轉殖編碼欲表現的蛋白質之核酸序列，製造作為檢測試樣中所需mRNA存在與否用之核酸，以供核酸定序或其他用途。足以引導熟習此項技藝人士進行試管內擴增方法之技術實例見述於Berger，文獻同前，Sambrook，文獻同前，及Ausubel，文獻同前，以及Mullis,et al.之美國專利案4,683,202(1987)；及Innis,et al.,PCR Protocols A Guide to Methods and Applications,Eds.,Academic Press Inc.,San Diego,CA(1990)。市售可得之基因體PCR擴增套組為此項技藝中已知，參閱，例如，Advantage－GC Genomic PCR Kit(Clontech)。此外，例如，T4基因32蛋白(Boehringer Mannheim)可用於改進長PCR產物之產率。
構築核酸之合成方法
本發明之單離核酸亦可利用已知方法(參閱，例如，Ausubel,et al.，文獻同前)，直接以化學合成法製備。化學合成法通常產生單股寡核苷酸，可令其與互補序列雜交，或使用單股作為模板，以DNA聚合酶進行聚合作用而轉化為雙股DNA。熟習此項技藝者將認知，雖然DNA之化學合成法只限制於具有約100或更多個鹼基之序列，惟較長序列可利用接合較短序列製得。
重組表現匣
本發明進一步提供包含本發明核酸之重組表現匣。本發明之核酸序列，例如，編碼本發明抗體的cDNA或基因體序列，可用來構築可被引入至少一種所需宿主細胞中之重組表現匣。重組表現匣典型地包含操作性地連接於轉錄起始調控序列之本發明之多核苷酸，此調控序列引導多核苷酸在意指宿主細胞中之轉錄作用。異源及非異源(亦即，內源)促進子均可用於引導表現本發明之核酸。
於一些具體實例中，可將作為啟動子、促進子或其他元件之單離核酸引入非異源型本發明多核苷酸之適當位置(上游、下游或於插入序列)中，俾使向上或向下調控本發明多核苷酸之表現。例如，可利用變異、刪除及/或取代，對內源啟動子進行活體內或試管內改變。
載體及宿主細胞
本發明亦有關包含本發明單離核酸分子之載體、以該重組載體進行遺傳建造之宿主細胞、及利用此項技藝中悉知之基因重組技術製造至少一種抗－IL－12抗體。參閱，例如，Sambrook,et al.，文獻同前，Ausubel,et al.，文獻同前，各者全部內容併入本文以資參考。
多核苷酸視需要可與含有供於宿主中繁殖用的選定標記之載體接合。概括而言，係將質體載體引入沉澱物，例如磷酸鈣沉澱物、或具有帶電荷脂質之複合物中。如果載體為病毒，則可使用適當封裝細胞株進行試管內封裝，然後轉導入宿主細胞中。
DNA插入應操作性地連接於適當啟動子。表現構築體進一步含有轉錄起始與終止位置，並於轉錄區域中含有供轉譯用之核糖體結合位置。由構築體表現的成熟轉錄本之編碼部分較佳為於被轉譯的mRNA開端包含轉譯起點，而於終端適當部位包含終止密碼子(例如，UAA、UGA或UAG)，以UAA及UAG較適於哺乳類或真核生物細胞表現。
表現載體較佳，惟視需要為，包含至少一個可選擇標記。此等標記包括，例如，惟不限於，胺甲喋呤(MTX)、二氫葉酸還原酶(DHFR，美國專利案4,399,216、4,634,665、4,656,134、4,956,288、5,149,636、及5,179,017)、胺苄青黴素、新黴素(G418)、黴酚酸、或對真核細胞培養物具抗性之麩胺醯胺合成酶(GS，美國專利案5,122,464、5,770,359、及5,827,739)、及用於培養大腸桿菌與其他細菌或原核生物之抗四環素或抗胺苄青黴素基因(上述專利案全部內容均併入本文以資參考)。上述宿主細胞之適當培養基及培養條件於此項技藝為已知。適當載體對於熟習此項技藝者亦為顯見易知。載體構築體之引入宿主細胞中可利用磷酸鈣轉染、DEAE－葡聚醣傳介之轉染、陽離子性脂質傳介之轉染、電穿孔法、轉導、感染或其他已知方法達成。此等方法見述於此項技藝中，例如Sambrook，文獻同前，第1－4及16－18章；Ausubel，文獻同前，第1、9、13、15、16章。
本發明之至少一種抗體可呈經改造之形式(例如融合蛋白)予以表現，且不僅可包含分泌訊號，亦可包含附加之異源功能區域。舉例而言，可添加附加胺基酸區域，特別是帶電荷之胺基酸，至抗體之N端，以於純化期間或接續之處理及貯存期間，增進在宿主細胞中之安定性與持續性。又，可添加胜肽基團至本發明之抗體，以幫助純化。此等區域可於抗體或其至少一片段之最終製備之前予以去除。此等方法見述於許多標準實驗室手冊中，例如，Sambrook，文獻同前，第17.29－17.42及18.1－18.74章；Ausubel，文獻同前，第16、17及18章。
熟習此項技藝人士對於可用於表現本發明蛋白質之編碼核酸的許多表現系統均具備豐富知識。替代地，本發明核酸可利用於含有編碼本發明抗體的內源DNA之宿主細胞中發動(操縱)，而於宿主細胞中表現。此等方法於此項技藝中為悉知，例如，見述於美國專利案5,580,734、5,641,670、5,733,746及5,733,761，其全部內容併入本文以資參考。
用於製造抗體、其特定部分或變異體之細胞培養物實例為哺乳類細胞。哺乳類細胞系常呈單層細胞之形式，惟亦可使用哺乳類細胞懸浮液或生物反應器。此項技藝中已開發出許多能表現完整糖基化蛋白質之適當宿主細胞株，包括COS－1(例如，ATCC CRL 1650)、COS－7(例如，ATCC CRL－1651)、HEK293、BHK21(例如，ATCC CRL－10)、CHO(例如，ATCC CRL 1610)及BSC－1(例如，ATCC CRL－26)等細胞株、Cos－7細胞、CHO細胞、hep g2細胞、P3X63Ag8.653、SP2/0－Ag14、293細胞、HeLa細胞等，彼等可容易地得自，例如，American Type Culture Cpllection(美國菌種保存中心)，Manassas，Va(www.atcc.org)。較佳之宿主細胞包括淋巴樣來源細胞例如骨髓瘤及淋巴瘤細胞。持佳之宿主細胞為P3X63Ag8.653細胞(ATCC寄存編號CRL－1580)及SP2/0－Ag14細胞(ATCC寄存編號CRL－1851)。於一特佳具體實例中，重組細胞為P3X63Ag8.653或SP2/0－Ag14細胞。
彼等細胞之表現載體可包含一或多個下述表現控制序列，例如，惟不限於複製來源；啟動子(例如，晚期或早期SV40啟動子、CMV啟動子(美國專利案5,168,062、5,385,839)、HSV tk啟動子、pgk(磷酸甘油酸激酶)啟動子、EF－1 α啟動子(美國專利案5,266,491)、至少一種人類免疫球蛋白啟動子)；促進子；及/或處理資訊位置，例如核糖體結合位置、RNA接合位置、聚腺苷酸化作用位置(例如，SV40大T Ag多A添加位置)；及轉錄終結子序列。參閱，例如，Ausubel,et al.，文獻同前；Sambrook,et al.，文獻同前。用於製造本發明核酸或蛋白質之其他細胞為已知及/或可購自，例如，American Type Culture Collection Catalogue of細胞Lines and Hybridomas(www.atcc.org)或其他已知之商業來源。
使用真核生物宿主細胞時，典型地係將聚腺苷酸化或轉錄終結子序列併入載體中。終止子序列之實例為得自牛生長激素基因之聚腺苷酸化序列。亦可包含精確接合轉錄本之序列。接合序列之實例為得自SV40之VP1插入序列(Sprague,et al.,J.Virol.45：773－781(1983))。附加地，如此項技藝中已知，可將在宿主細胞中控制複製之基因序列併入載體中。
抗體之純化
抗－IL－12抗體可利用下述悉知方法自重組細胞培養物中回收及純化，該等方法包含，惟不限於，蛋白A純化法、硫酸銨或乙醇沉澱法、酸萃取法、陰離子或陽離子交換層析法、磷酸纖維素層析法、疏水性交互作用層析法、親和層析法、羥磷灰石層析法及外源凝集素層析法。高效能液相層析法(“HPLC”)亦可用於純化。參閱，例如，Colligan,Current Protocols in Immunology，或Current Protocols in蛋白質Science,John Wiley & Sons,NY,NY(1997－2003)，例如，第1、4、6、8、9、10章，各者全部內容併入本文以資參考。
本發明之抗體包含天然純化產物、化學合成製程產物、及以真核生物宿主(包括，例如，酵母、高等植物、昆蟲及哺乳類細胞)利用重組技術製造之產物。視重組製造程序所用宿主而異，本發明抗體可為糖基化或未糖基化，以糖基化者為佳。此等方法見述於許多標準實驗室手冊，例如Sambrook，文獻同前，17.37－17.42節；Ausubel，文獻同前，第10、12、13、16、18與20章；Colligan,蛋白質Science，文獻同前，第12－14章，其所有內容均併入本文以資參考。
抗－IL－12 抗體
根據本發明之抗－IL－12抗體包括含有由至少部分免疫球蛋白分子組成之分子之任何蛋白質或胜肽，例如惟不限於，可併入本發明抗體中之至少一個配位體結合部分(LBP)，例如惟不限於，重或輕鏈之互補決定區(CDR)或其配位體結合部分、重鏈或輕鏈可變區、基本架構區(例如，FR1、FR2、FR3、FR4或其片段，進一步視需要包含至少一個取代、插入或刪除)、重鏈或輕鏈恒定區(例如，包含至少一個CH 1、鉸合區1、鉸合區2、鉸合區3、鉸合區4、CH 2、或CH 3或其片段，進一步視需要包含至少一個取代、插入或刪除)。本發明之抗體可包含或係衍生自任何哺乳類，例如惟不限於，人類、小鼠、兔、大鼠、嚙齒類、靈長類、或其任何組合等。
本發明之單離抗體包含利用任何適當多核苷酸編碼之本文揭示之抗體胺基酸序列，或任何單離或製備之抗體。較佳為，該人類抗體或抗原－結合片段與人類IL－12蛋白結合，因而部分或實質上中和該蛋白質之至少一種生物活性。部分或較佳為實質上中和至少一種IL－12蛋白或片段之至少一種生物活性之抗體、或其特定部分或變異體，可結合蛋白質或片段，因而抑制經由IL－12與IL－12受體結合或經由其他IL－12－依存性或傳介機制傳介之活性。本文所用之「中和抗體」一詞係指視試驗而定，可抑制約20－120%，較佳為至少約10、20、30、40、50、55、60、65、70、75、80、85、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100%或100%以上IL－12－依存性活性之抗體。抗－IL－12抗體抑制IL－12－依存性活性之能力較佳為利用如本文所述及/或此項技藝中已知之至少一種適當之IL－12蛋白或受體試驗予以評估。本發明之人類抗體可為任何類別(IgG、IgA、IgM、IgE、IgD等)或同型，且可包含κ或λ輕鏈。於一具體實例中，人類抗體包含IgG重鏈或界定之片段，例如，同型、IgG1、IgG2、IgG3或IgG4(例如，γ1、γ2、γ3、γ4)之至少一者。此類抗體可如本文所述及/或如此項技藝中已知，利用包含至少一種人類輕鏈(例如，IgG、IgA及IgM)轉殖基因的基因轉殖小鼠或其他基因轉殖非人類哺乳動物予以製備。於另一具體實例中，抗－人類IL－12人類抗體包含IgG1重鏈及IgG1輕鏈。
本發明之至少一種抗體與對至少一種IL－12蛋白、次單元、片段、部分或其任何組合具專一性之至少一個特定之抗原決定部位結合。該至少一個抗原決定部位可包含由至少一部分該蛋白質組成之至少一個抗體結合區域，該抗原決定部位較佳為由該蛋白質之至少一個胞外、可溶、親水性、外部或細胞質部分所組成。該至少一個特定抗原決定部位可包含SEQ ID NO：9鄰接胺基酸的整個特定部分至少1－3個胺基酸之至少一個胺基酸序列之任何組合，例如，胺基酸殘基15、17－21、23、40－43、45－47、54－56與58－62。
概括而言，本發明之人類抗體或抗原結合片段包括抗原結合區域，該抗原結合區域包含至少一個重鏈可變區之至少一個人類互補決定區(CDR1、CDR2及CDR3)或變異體，及至少一個輕鏈可變區之至少一個人類互補決定區(CDR1、CDR2及CDR3)或變異體。該等CDR序列可衍生自人類胚細胞序列或與胚細胞序列密切適配。例如，可使用得自從原始非人類CDRs衍生的合成庫之CDRs。彼等CDRs可利用於原始非人類序列中併入保守性取代而形成。舉一非限制實例而言，該抗體或抗原結合部分或變異體可包含具有選自SEQ ID NOS：1－3組群的胺基酸序列之重鏈CDR3及/或具有選自SEQ ID NOS：4－6組群的胺基酸序列之輕鏈CDR3之至少一者。於一特定具體實例中，抗體或抗原結合片段可具有抗原結合區域，該抗原結合區域包含具有對應CDRs1、2及/或3胺基酸序列之至少一個重鏈CDR(亦即，CDR1、CDR2及/或CDR3)之至少一部分。於另一特定具體實例中，抗體或抗原結合部分或變異體可具有抗原結合區域，該抗原結合區域包含具有對應CDRs1、2及/或3胺基酸序列之至少一個輕鏈CDR(亦即，CDR1、CDR2及/或CDR3)之至少一部分。
此等抗體可利用以習知之重組DNA技術製備及表現(亦即，一或多個)編碼抗體之核酸分子或利用任何其他適當方法，使用習知技術將抗體之不同部分(例如，CDRs、基本架構)化學結合在一起而製備。
抗－IL－12抗體可包含具有經界定的胺基酸序列之至少一個重或輕鏈可變區。例如，於較佳具體實例中，抗－IL－12抗體包含至少一個重鏈可變區域(視需要具有SEQ ID NO：7之胺基酸序列)及/或至少一個輕鏈可變區(視需要具有SEQ ID NO：8之胺基酸序列)之至少一者。與人類IL－12結合及包含經界定之重或輕鏈可變區之抗體可利用此項技藝中已知及/或如本文所述之適當方法製備，例如噬菌體呈現法(Katsube,Y.,et al.,Int J Mol.Med ,1(5)：863－868(1998))或使用基因轉殖動物之方法。例如，可使用人類IL－12或其片段，對含有功能性重排人類免疫球蛋白重鏈轉殖基因及得自人類免疫球蛋白輕鏈基因座而可進行機能性重排的DNA之轉殖基因之基因轉殖小鼠進行免疫處理，而誘發產生抗體。如果需要，則可將產生抗體之細胞單離，如本文所述及/或如此項技藝中已知，可製備融合瘤或其他胚質永存之產生抗體之細胞。替代地，可使用編碼核酸或其部分，於適當宿主細胞中表現抗體、特定部分或變異體。
本發明亦有關抗體、抗原結合片段、免疫球蛋白鏈及含有實質上與本文所述之胺基酸序列相同的序列之胺基酸之CDRs。較佳為，此等抗體或抗原結合片段及含有該等鏈或CDRs之抗體可以高親和力(例如，KD 小於或等於約10－ 9 M)與人類IL－12蛋白結合。實質上與本文所述序列相同之胺基酸序列包括含有保守性胺基酸取代，以及胺基酸刪除及/或插入之序列。保守性胺基酸取代係指一個胺基酸被具有與其化學及/或物理性質(例如，電荷、結構、極性、疏水性/親水性)相同的第二個胺基酸置換。保守性取代包含，惟不限於，下述各組胺基酸間之互相置換：離胺酸(K)、精胺酸(R)與組胺酸(H)；天冬胺酸(D)與麩胺酸(E)；天冬醯胺(N)、麩胺醯胺(Q)、絲胺酸(S)、蘇胺酸(T)、酪胺酸(Y)、K、R、H、D與E；丙胺酸(A)、纈胺酸(V)、白胺酸(L)、異白胺酸(I)、脯胺酸(P)、苯丙胺酸(F)、色胺酸(W)、甲硫胺酸(M)、半胱胺酸(C)與甘胺酸(G)；F、W與Y；C、S與T。
胺基酸密碼
組成本發明抗－IL－12抗體之胺基酸常以縮寫表示；胺基酸名稱可利用標出胺基酸之單字母密碼、三字母密碼、名稱、或此項技藝中悉知之三核苷酸密碼子來表示(參閱Alberts,B.,et al.,Molecular Biology of The細胞,Third Ed.,Garland Publishing,Inc.,New York,1994)：
本發明之抗－IL－12抗體可包含如本文詳述之由於天然突變或者人為操作之一或多個胺基酸取代、刪除或增添。
熟習此項技藝人士可製造的胺基酸取代之個數取決於包括上文敘述之許多因素。一般而言，如本文所詳述，任何指定之抗－IL－12抗體、片段或變異體之胺基酸取代、插入或刪除之個數不多於40、30、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、1個，例如1－30個或其中任何範圍或數值。
功能上不可缺之本發明抗－IL－12抗體中之胺基酸可利用此項技藝中已知之方法予以鑑定，例如位置引導誘變或丙胺酸掃描誘變(例如，Ausubel，文獻同前，第8、15章；Cunningham and Wells,Science 244：1081－1085(1989))。後者之程序係於分子之每一殘基引入單一丙胺酸突變，然後測試所得變異分子之生物活性，例如，惟不限於至少一種IL－12中和活性。對抗體結合作用具重要性之位置亦可利用結構分析法例如結晶化、核磁共振或光親和性標記法(Smith,et al.,J.Mol.Biol.224：899－904(1992)及de Vos,et al.,Science 255：306－312(1992))予以鑑定。涉及IL－12結合之IL－12p40抗體上之殘基已根據IL－12抗體與IL－12 p40抗原之共同結晶結構予以鑑定；彼等示於下文表5。
本發明之抗－IL－12抗體可包含，惟不限於，選自SEQ ID NOS：1、2、3、4、5、6之至少一者之鄰接胺基酸的5個至全部之至少一部分、序列或組合。
本發明之IL－12抗體或特定部分或變異體可包含，惟不限於，選自至少3－5個SEQ ID NO：1之鄰接胺基酸、5－17個SEQ ID NO：2之鄰接胺基酸、5－10個SEQ ID NO：3之鄰接胺基酸、5－11個SEQ ID NO：4之鄰接胺基酸、5－7個SEQ ID NO：5之鄰接胺基酸；5－9個SEQ ID NO：6之鄰接胺基酸；SEQ ID NO：7之Leu21、Lys76、Met83、Ser85之至少一部分、序列或組合。
抗－IL－12抗體可進一步視需要包含至少一種70－100%之SEQ ID NOS：1、2、3、4、5、6、7或8之至少一者之5、17、10、11、7、9、119、或108鄰接胺基酸之多肽。於一具體實例中，免疫球蛋白鏈之胺基酸序列或其部分(例如，可變區、CDR)與SEQ ID NOS：1、2、3、4、5、6、7或8之至少一者之對應鏈之胺基酸序列具有約70－100%同一性(例如，70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100或其中任何範圍或數值)。舉例而言，輕鏈可變區之胺基酸序列SEQ ID NOS：4、5、6、或8之序列比較，或重鏈CDR3之胺基酸序列可與SEQ ID NOS：1、2、3、或7比較。較佳為，使用如此項技藝中已知之適當電腦演算法測得70－100%胺基酸同一性(亦即，90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100或其中任何範圍或數值)。
如此項技藝中已知，「同一性」係兩個或兩個以上多肽序列或兩個或兩個以上多核苷酸序列間利用比較序列測定之關係。於此項技藝中，「同一性」亦意指多肽或多核苷酸序列間利用比對彼等序列串測得之序列相關程度。「同一性」與「相似性」可容易地利用已知方法計算，包括，惟不限於，見述於Computational Molecular Biology,Lesk,A.M.,ed.,Oxford University Press,New York,1988；Biocomputing：Informatics and Genome Projects,Smith,D.W.,ed.,Academic Press,New York,1993；電腦Analysis of 序列Data,Part I,Griffin,A.M.,and Griffin,H.G.,eds.,Humana Press,New Jersey,1994；Sequence Analysis in Molecular Biology,von Heinje,G.,Academic Press,1987；與Sequence Analysis Primer,Gribskov,M.and Devereux,J.,eds.,M Stockton Press,New York,1991；及Carillo,H.,and Lipman,D.,Siam J.Applied Math.,48：1073(1988)之彼等方法。此外，同一性百分比之數值可自使用Vector NTI Suite 8.0(Informax,Frederick,MD)之AlignX構成要素之預設設定值產生之胺基酸與核苷酸序列排比獲得。
測定同一性之較佳方法係經設計以獲得測試序列間之最大適配。測定同一性與相似性之方法被編纂成公開可用之電腦程式。測定兩個序列間之同一性與相似性之較佳電腦程式法包含，惟不限於，GCG程式套裝(Devereux,J.,et al.,Nucleic Acids Research 12(1)：387(1984))；BLASTP、BLASTN、與FASTA(Atschul,S.F.et al.,J.Molec.Biol.215：403－410(1990))。BLAST X程式自NCBI及其他來源(BLAST Manual,Altschul,S.,et al.,NCBINLM NIH Bethesda,Md.20894：Altschul,S.,et al.,J.Mol.Biol.215：403－410(1990))公開可得。亦可使用悉知之Smith Waterman演算法測定同一性。
比較多肽序列之較佳參數包括下文所述者：(1)演算法：Needleman and Wunsch,J.Mol Biol.48：443－453(1970)Comparison matrix：BLOSSUM62 from Hentikoff and Hentikoff,Proc.Natl.Acad.Sci,USA.89：10915－10919(1992)缺口罰分(Gap Penalty)：12缺口長度罰分：4
與彼等參數一起使用之程式係自Genetics Computer Group,Madison Wis之「缺口」程式公開可得。前述參數係供胜肽序列比較用之預設參數(以及終端缺口無罰分)。
比較多核苷酸之較佳參數包括下文所述者：(1)演算法：Needleman and Wunsch,J.Mol Biol.48：443－453(1970)比較基質：適配＝＋10，誤配＝0缺口罰分：50缺口長度罰分：3
可得自：Genetics Computer Group,Madison Wis之「缺口」程式。彼等係供核酸序列比較用之預設參數。
舉例而言，相較於參照序列，多核苷酸序列可能與另一多核苷酸序列完全相同，亦即具100%同一性，或可能包含特定個數之核苷酸變更。此等變更係選自下述組群：至少一種核苷酸刪除、取代(包括轉變及顛換)、或插入；其中該等變更可能發生於參照核苷酸序列之5'或3'端位置或彼等終端位置間之任何位置，個別散置於參照序列核苷酸之間或參照序列內之一或多個鄰接組群中。核苷酸變更個數係將欲比較序列之核苷酸總數乘以各別同一性(除以100)百分比數值，所得積數自SEQ ID NO：A之核苷酸總數中扣除而測得，或以下式表示：n.sub.n.ltorsim.x.sub.n－(x.sub.n.y)，式中n.sub.n係核苷酸變更個數，x.sub.n係SEQ ID NO：A核苷酸總數，y係，例如，70%為0.70、80%為0.80、85%為0.85、90%為0.90、95%為0.95等，及其中x.sub.n與y之任何非整數乘積於自x.sub.n扣除之前，先四捨五入至最接近之整數。
改變編碼SEQ ID NO：7多肽之多核苷酸序列可能引起此編碼序列之無意義、誤義或移碼等突變，因而於該等變更後，改變由多核苷酸編碼之多肽。同樣地，一多肽序列可能與SEQ ID NO：7參照序列完全相同，亦即具100%同一性，或相較於參照序列，可能包含特定個數之胺基酸變更而使同一性百分比小於100%。此等變更係選自下述組群：至少一種胺基酸刪除、取代(包括保守性及非保守性取代)、或插入；其中該等變更可能發生於參照多肽序列之胺基－或羧基終端位置或彼等終端位置間之任何位置，個別散置於參照序列胺基酸之間或參照序列內之一或多個鄰接組群中。針對既定%同一性而言，胺基酸變更個數係將SEQ ID NO：7胺基酸總數乘以各別同一性(除以100)百分比數值，所得積數自SEQ ID NO：7胺基酸總數中扣除而測得，或以下式表示：n.sub.a.ltorsim.x.sub.a－(x.sub.a.y)，式中n.sub.a係胺基酸變更個數，x.sub.a係SEQ ID NO：7胺基酸總數，y係，例如，70%為0.70、80%為0.80、85%為0.85等，及其中x.sub.a與y之任何非整數乘積於自x.sub.a扣除之前，先四捨五入至最接近之整數。
重鏈與輕鏈可變區序列及其部分之例示提供於SEQ ID NOS：1－8。本發明之抗體、或其特定變異體，可包含任何數量之得自本發明抗體之鄰接胺基酸殘基，其中該數量係選自由得自10－100%之抗－IL－12抗體鄰接殘基個數組成之整數組群。視需要地，鄰接胺基酸之此序列長度為約10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、200、210、220、230、240、250或更多個胺基酸，或其中任何範圍或數值。進一步地，此等序列之個數可為選自1至20之任何整數，例如至少2、3、4、或5個。
熟習此項技藝者將察知，本發明包含至少一種具生物活性之本發明抗體。具生物活性之抗體具有天然(非合成)、內源或相關及已知抗體之至少20%、30%、或40%，較佳為至少50%、60%、或70%，最佳為至少80%、90%、或95－100%或100%以上(包括，惟不限於，多達10倍)之比活性。酵素活性及基質專一性之分析與定量方法為熟習此項技藝者所悉知。
於另一態樣中，本發明乃有關如本文所述之人類抗體及抗原結合片段，其係利用有機基團之共價連接而改造者。此等改造作用可產生具有增進藥學動力學性質(例如，增加之活體內半衰期)之抗體或抗原結合片段。該有機基團可為直鏈或分支鏈親水性聚合物基團、脂肪酸基團、或脂肪酸酯基團。於特定具體實例中，親水性聚合物基團可具有約800至約120,000道爾頓之分子量且可為聚鏈烷二醇(例如，聚乙二醇(PEG)、聚丙二醇(PPG))、碳水化合物聚合物、胺基酸聚合物或聚乙烯基吡咯烷酮；脂肪酸基或脂肪酸酯基可含有約八至約四十個碳原子。
本發明經改造之抗體及抗原結合片段可包含直接或間接與抗體共價結合之一或多個有機基團。與本發明抗體或抗原結合片段結合之各有機基團可獨立地為親水性聚合物基團、脂肪酸基團或脂肪酸酯基團。本文所用之「脂肪酸」涵蓋單羧酸及二羧酸。本文所用之「親水性聚合物基團」一詞係指在水中比在辛烷中更易溶解之有機聚合物。例如，多離胺酸在水中比在辛烷中更易溶解。因此，利用共價連接聚離胺酸所改造之抗體涵蓋於本發明範圍之內。適用於改造本發明抗體之親水性聚合物可為直鏈或分支鏈及包含，例如，聚鏈烷二醇[例如，PEG、單甲氧基－聚乙二醇(mPEG)、PPG等]、碳水化合物(例如，葡聚糖、纖維素、寡醣、多醣等)、親水性胺基酸之聚合物(例如多離胺酸、多精胺酸、多天冬胺酸等)、聚環氧鏈烷(例如，聚環氧乙烷、聚環氧丙烷等)及聚乙烯基吡咯烷酮。較佳為，改造本發明抗體之親水性聚合物具有約800至150,000道爾頓之分子量而呈分離之分子實體。例如，可使用PEG5 0 0 0 與PEG2 0 , 0 0 0 ，其中下標字為聚合物之平均分子量，其單位為道爾頓。親水性聚合物基團可被一至約六個烷基、脂肪酸或脂肪酸酯基團取代。被脂肪酸或脂肪酸酯基團取代之親水性聚合物可利用適當方法予以製備。例如，含有胺基之聚合物可偶聯於脂肪酸或脂肪酸酯之羧酸根；脂肪酸或脂肪酸酯上經活化之羧酸根(例如，以N,N－羰基二咪唑活化)可偶聯於聚合物上之羥基。
適用於改造本發明抗體之脂肪酸及脂肪酸酯可為飽和或可含一或多個不飽和單元。適用於改造本發明抗體之脂肪酸包含，例如，正十二烷酸(C1 2 ，月桂酸)、正十四烷酸(C1 4 ，肉荳蔻酸)、正十八烷酸(C1 8 ，硬脂酸)、正廿烷酸(C2 0 ，花生酸)、正廿二烷酸(C2 2 ，山萮酸)、正卅烷酸(C3 0 )、正四十烷酸(C4 0 )、順式－△9－十八烷酸(C1 8 ，油酸)、所有順式－△5,8,11,14－廿碳四烯酸(C2 0 ，花生四烯酸)、辛二酸、十四碳二酸、十八碳二酸、廿二碳二酸等。適當之脂肪酸酯包括含有直鏈或分支鏈低級烷基之二羧酸之單酯，其中低級烷基可含有一至約十二個，較佳為一至約六個，碳原子。
使用適當方法，例如藉由與一或多個改造劑反應，可製備經改造之人類抗體及抗原結合片段。本文所用之「改造劑」係指含有活化基團之適當有機基團(例如，親水性聚合物、脂肪酸、脂肪酸酯)。「活化基團」為，於適當條件下，與第二個化學基團反應，因而於改造劑與該第二化學基團間形成共價鍵之化學基團或官能基。例如，胺反應性活化基團包含親電子基團例如對甲苯磺酸根、甲磺酸根、鹵基(氯基、溴基、氟基、碘基)、N－羥基琥珀醯亞胺基酯類(NHS)等。可與硫醇反應之活性基團包含，例如，順丁烯二醯亞胺、碘乙醯基、丙醯醇基、吡啶基二硫化物、5－硫醇－2－硝基苯甲酸硫醇(TNB－硫醇)等。醛官能基可偶聯於含胺或醯肼之分子，疊氮基可與三價磷基團反應形成磷醯胺酸或磷醯亞胺鍵結。於分子中引入活化基團之適當方法為此項技藝中已知(參閱例如，Hermanson,G.T.,Bioconjugate Techniques ,Academic Press：San Diego,CA(1996))。活化基團可直接結合於有機基團(例如，親水性聚合物、脂肪酸、脂肪酸酯)，或經由連接子基團結合，例如其一或多個碳原子可被例如氧、氮或硫之雜原子置換之二價C1 －C1 2 基團。適當之連接子基團包含，例如，四乙二醇、－(CH2 )3 、－NH－(CH2 )6 －NH－、－(CH2 )2 －NH及－CH2 －O－CH2 －CH2 －O－CH2 －CH2 －O－CH－NH－。含有連接子基團之改造劑可利用，例如，於1－乙基－3－(3－二甲胺基丙基)碳化二亞胺(EDC)存在下，使單－Boc－烷基二胺(例如，單－Boc－伸乙二胺、單－Boc－二胺基己烷)與脂肪酸反應，於游離胺與脂肪酸羧酸根之間形成醯胺鍵予以製造。Boc保護基可利用以三氟乙酸(TFA)處理，自產物中去除而暴露出可與另一所述羧酸根偶聯之初級胺，或可與順丁烯二酸酐反應，所得產物經環化產生該脂肪酸之活化順丁烯二醯亞胺衍生物(參閱，例如Thompson,et al .,WO 92/16221，其全部教示均併入本文以資參考)。
本發明經改造之抗體可利用使人類抗體或抗原結合片段與改造劑反應予以製造。例如，可使用胺反應性改造劑，例如，PEG之NHS酯，使有機基團以非位置專一性之方式與抗體結合。經改造之人類抗體或抗原結合片段亦可利用使抗體或抗原結合片段之二硫鍵(例如鏈內二硫鍵)還原而製備。然後將還原之抗體或抗原結合片段與硫醇反應性改造劑反應，產生本發明之經改造之抗體。含有與本發明抗體之專一性位置結合的有機基團之經改造之人類抗體及抗原結合片段可使用適當方法予以製備，例如逆向蛋白水解法(Fischet al.,Bioconjugate Chem., 3：147－153(1992)；Werlenet al.,Bioconjugate Chem., 5：411－417(1994)；Kumaranet al.,蛋白質Sci. 6(10)：2233－2241(1997)；Itohet al.,Bioorg.Chem., 24(1)：59－68(1996)；Capellaset al.,Biotechnol.Bioeng., 56(4)：456－463(1997))，及敘述於Hermanson,G.T.,Bioconjugate Techniques ,Academic Press：San Diego,CA(1996)中之方法。
抗－IL－12 抗體組成物之抗－個體基因型抗體
除了單株抗－IL－12抗體外，本發明亦有關對該本發明之該等抗體具專一性之抗－個體基因型(抗－Id)抗體。抗－個體基因型抗體為識別通常與另一抗體之抗原結合區域相關的獨特決定子之抗體；其製備係以抗體或其含CDR之區域對相同物種及基因型(例如小鼠品系)之動物進行免疫處理，作為Id抗體來源。經免疫處理之動物將識別及對免疫抗體之個體基因型決定子反應並產生抗－Id抗體。抗－Id抗體亦可作為「免疫原」，於又另一動物中誘導免疫反應，產生所謂抗－抗－Id抗體。
本發明亦提供至少一種抗－IL－12抗體組成物，其包含如本文所述及/或如此項技藝中已知之至少一種、至少兩種、至少三種、至少四種、至少五種、至少六或更多種抗－IL－12抗體，彼等係呈非天然存在的組成物、混合物或形式而提供。此等組成物含有包括選自由70－100% SEQ ID NOS：7或8之鄰接胺基酸組成組群之抗－IL－12抗體胺基酸序列、或其特定片段、功能部位或變異體之至少一或兩種全長、刪除C－及/或N－端之變異體、功能部位、片段、或特定變異體之非天然存在之組成物。較佳之抗－IL－12抗體組成物包含至少一或兩種全長、為含有部分本文所述抗IL－12抗體序列，例如70－100%之SEQ ID NOS：1－6、7、或8、或其特定片段、功能部位或變異體之至少一種CDR或LBP之片段、功能部位或變異體。進一步較佳之組成物包含，例如，40－99%之至少一種70－100%之SEQ ID NOS：1－6、7、或8等，或其特定片段、功能部位或變異體。如此項技藝中已知或如本文所述，此等組成物百分比係以呈液體或乾燥溶液、混合物、懸浮液、乳液、粒劑、粉劑或膠體之重量、容積、濃度、莫耳濃度、或重量莫耳濃度計。
進一步包含具治療活性成分之抗體組成物
本發明之抗體組成物可視需要進一步包含有效量之選自下述之至少一者之至少一種化合物或蛋白質：抗感染藥物、心血管(CV)系統藥物、中樞神經系統(CNS)藥物、自律神經系統(ANS)藥物、呼吸道藥物、胃腸(GI)道藥物、激素藥物、供流體或電解質平衡用藥物、血液學藥物、抗腫瘤劑、免疫調節藥物、眼、耳或鼻用藥物、局部藥物、營養藥物等。該等藥物為此項技藝中悉知，包括本文所呈現之各調配物、徵兆、劑量及投與(參閱，例如，Nursing 2001 Handbook of Drugs,21s t edition,Springhouse Corp.,Springhouse,PA,2001；Health Professional’s Drug Guide 2001,ed.,Shannon,Wilson,Stang,Prentice－Hall,Inc,Upper Saddle River,NJ；Pharmcotherapy Handbook,Wells et al.,ed.,Appleton & Lange Stamford,CT，各者全部內容併入本文以資參考)。
抗感染藥物可為選自下述之至少一者：殺阿米巴用藥或至少一種抗原蟲用藥、驅腸蟲用藥、抗真菌用藥、抗瘧用藥、抗結核用藥或至少一種抗痲瘋用藥、胺基糖苷類、青黴素、頭孢菌素、四環素、磺胺類、氟化喹啉酮類、抗病毒劑、大環內酯抗感染藥物及各式各樣抗感染藥物。CV藥物可為選自下述之至少一者：心肌收縮劑、抗心律不整藥物、抗心絞痛藥物、抗高血壓藥物、降血脂藥物、及各式各樣心血管藥物。CNS藥物可為選自非麻醉性止痛劑之至少一者或選自下述之至少一者：解熱藥、非類固醇類抗發炎藥物、麻醉劑或至少一種鴉片類止痛劑、鎮靜性安眠藥、抗癲癇藥物、抗憂鬱藥物、抗焦慮藥物、抗精神疾病藥物、中樞神經興奮劑、抗巴金森症藥物、及各式各樣中樞神經系藥物。ANS藥物可為選自下述之至少一者：膽鹼能藥物(副交感神經作用劑)、抗膽鹼能劑、腎上腺素能藥物(擬交感神經作用劑)、腎上腺素能封阻劑(交感神經作用劑)、骨骼肌鬆弛劑、及神經肌封阻劑。呼吸道藥物可為選自下述之至少一者：抗組織胺藥物、支氣管擴張劑、袪痰藥或至少一種止咳藥、及各式各樣呼吸道藥物。GI道藥物可為選自下述之至少一者：制酸劑或至少一種吸附劑或至少一種抗胃腸氣脹劑、消化性酵素或至少一種膽結石增溶劑、止瀉劑、瀉藥、止吐劑、及抗潰瘍藥物。激素藥物可為選自下述之至少一者：皮質類固醇、雄激素或至少一種促蛋白合成類固醇、雌激素或至少一種黃體素、促性腺激素、抗糖尿病藥物或至少一種胰高血糖激素、甲狀腺激素、甲狀腺激素拮抗劑、腦下垂體激素、及類副甲狀腺藥物。供流體與電解質平衡用藥物可為選自下述之至少一者：利尿劑、電解質或至少一種替代溶液、酸化劑或至少一種鹼化劑。血液學藥物可為選自下述之至少一者：補血劑、抗凝血劑、血液衍生物、及血栓溶解酵素。抗腫瘤藥物可為選自下述之至少一者：烷基化藥物、抗代謝物、抗菌性抗腫瘤藥物、改變激素平衡之抗腫瘤藥物、及各式各樣抗腫瘤藥物。免疫調節藥物可為選自下述之至少一者：免疫抑制劑、疫苗或至少一種類毒素、抗毒素或至少一種抗蛇毒素、免疫血清、及生物反應改造劑。眼、耳及鼻用藥物可為選自下述之至少一者：眼用抗感染藥物、眼用抗發炎藥物、縮瞳劑、散瞳劑、眼用血管收縮劑、各式各樣眼用、耳用、及鼻用藥物。局部藥物可為選自下述之至少一者：局部抗感染藥物、殺疥蟎藥或至少一種殺虱劑或局部皮質類固醇。營養藥物可為選自下述之至少一者：維生素、礦物質、或熱質(calorics)。參閱，例如，Nursing 2001 Drug Handbook 之內容，文獻同前。
該至少一種殺阿米巴用藥或抗原蟲用藥可為選自下述之至少一者：阿托伐醌(atovaquone)、鹽酸氯奎寧、磷酸氯奎寧、滅滴靈、鹽酸滅滴靈、及乙磺酸戊烷脒羥。該至少一種驅腸蟲用藥可為選自下述之至少一者：甲苯咪唑、雙羥萘酸噻嘧啶、及噻苯咪唑。該至少一種抗真菌用藥可為選自下述之至少一者：兩性黴素B、兩性黴素B膽固醇硫酸酯複合物、兩性黴素B脂質複合物、兩性黴素B微脂粒、氟康唑(fluconazole)、氟胞嘧啶、灰黃黴素微劑、灰黃黴素超微劑、伊措康唑(itraconazole)、酮康唑(ketoconazole)、制黴菌素、及鹽酸療黴舒。該至少一種抗瘧用藥可為選自下述之至少一者：鹽酸氯奎寧、磷酸氯奎寧、去氧羥四環素、硫酸羥氯奎寧、鹽酸美爾奎寧(mefloquine)、磷酸普來馬奎寧(primaquine)、乙胺嘧啶、及乙胺嘧啶－周效磺胺。該至少一種抗結核用藥或抗痲瘋用藥可為選自下述之至少一者：癩必寧(clofazimine)、環絲胺酸、胺苯碸(dapsone)、鹽酸乙胺丁醇、異煙肼、吡醯胺、利福布丁(rifabutin)、利福平(rifampin)、利福噴汀(rifapentine)、及硫酸鏈黴素。該至少一種胺基糖苷可為選自下述之至少一者：硫酸丁胺卡那黴素、硫酸健大黴素、硫酸新黴素、硫酸鏈黴素、及硫酸妥布黴素(tobramycin)。該至少一種青黴素可為選自下述之至少一者：阿莫西林(amoxcillin)/克拉維酸鉀(clavulanate potassium)、阿莫西林三水合物、安匹西林(ampicillin)、安匹西林鈉、安匹西林三水合物、安匹西林鈉/舒巴坦(sulbactam)鈉、可沙西林(cloxacillin)鈉、二可沙西林鈉、美洛西林(mezlocillin)鈉、那夫西林(nafcillin)鈉、西林(oxacillin)鈉、苄星青黴素G、青黴素G鉀、青黴素G普卡因(procaine)、青黴素G鈉、青黴素V鉀、哌拉西林(piperacillin)鈉、哌拉西林鈉/他唑巴坦(tazobactam)鈉、替卡西林(ticarcillin)二鈉、及替卡西林二鈉/克拉維酸鉀。該至少一種頭孢菌素可為選自下述之至少一者：氯頭孢菌素、羥胺苄頭孢菌素、西華樂林(cefazolin)鈉、頭孢地尼(cefdinir)、鹽酸頭孢吡肟(cefepime)、頭孢克肟(cefixime)、頭孢美唑(cefmetazole)鈉、頭孢尼西(cefonicid)鈉、頭孢酮(cefoperazone)鈉、頭孢噻肟(cefotaxime)鈉、頭孢替坦(cefotetan)二鈉、頭孢西丁(cefoxitin)鈉、頭孢泊普西替(cefpodoxime proxetil)、頭孢丙烯(cefprozil)、頭孢他啶(ceftazidime)、頭孢布坦(ceftibuten)、頭孢唑(ceftizoxime)鈉、第三代頭孢子素鈉、頭孢辛脂(cefuroxime axetil)、頭孢辛(cefuroxime)鈉、鹽酸頭孢胺苄(cephalexin)、頭孢胺苄單水合物、頭孢環己烯、及氯碳頭孢(loracarbef)。該至少一種四環素可為選自下述之至少一者：鹽酸去甲氯四環素、去氧羥四環素鈣、去氧羥四環素半水合半乙醇化物、鹽酸去氧羥四環素、去氧羥四環素單水合物、鹽酸二甲胺四環素、及鹽酸四環素。該至少一種磺胺可為選自下述之至少一者：增效磺胺甲基異唑(co－trimoxazole)、磺胺嘧啶、磺胺甲基異唑、磺胺異唑、及乙醯基磺胺異唑。該至少一種氟化喹啉酮可為選自下述之至少一者：甲磺酸阿拉曲沙辛(alatrofloxacin)、環丙沙辛(ciprofloxacin)、依諾沙辛(enoxacin)、左氧沙辛(levofloxacin)、鹽酸洛美沙辛(lomefloxacin)、萘啶酸、諾沙辛(norfloxacin)、歐沙辛(ofloxacin)、司帕沙辛(sparfloxacin)、及甲磺酸曲瓦沙辛(trovafloxacin)。該至少一種抗病毒劑可為選自下述之至少一者：硫酸阿巴卡韋(abacavir)、環孢子素鈉、鹽酸金剛胺、安普那韋(amprenavir)、西多福韋(cidofovir)、甲磺酸地拉韋錠(delavirdine)、地丹諾辛(didanosine)、依非韋倫(efavirenz)、泛昔洛韋(famciclovir)、福米韋生(fomivirsen)鈉、膦甲酸鈉、更昔洛韋(gancivlovir)、硫酸印地那韋(indinavir)、干安能(lamivudine)、干安能/齊多夫錠(zidovudine)、甲磺酸奈非那韋(nelfinavir)、奈韋拉平(nevirapine)、磷酸奧斯他韋(oseltamivir)、利巴韋林(ribavirin)、鹽酸金剛乙胺、利托那韋(ritonavir)、沙奎那韋(saquinavir)、甲磺酸沙奎那韋、司他夫錠(stavudine)、鹽酸伐昔洛韋(valacyclovir)、扎西他賓(zalcitabine)、扎那米韋(zanamivir)、及齊多夫錠。該至少一種大環內酯抗感染藥物可為選自下述之至少一者：阿奇黴素(azithromycin)、克拉黴素(clarithromycin)、地利黴素(dirithromycin)、紅黴素基底、伊托酸(estolate)紅黴素、乙基琥珀酸紅黴素、乳糖酸紅黴素、及硬脂酸紅黴素。該至少一種各式各樣抗感染藥物可為選自下述之至少一者：胺曲南(aztreonam)、桿菌肽、琥珀酸氯黴素鈉、鹽酸克林黴素(clindamycin)、棕櫚酸鹽酸克林黴素、磷酸克林黴素、伊米培南(imipenem)及席司他丁(cilastatin)鈉、美羅培南(meropenem)、呋喃妥因大結晶、呋喃妥因小結晶、奎奴普丁(quinupristin)/達福普丁(dalfopristin)、鹽酸大觀黴素(spectinomycin)、甲氧苄啶(trimethoprim)、及鹽酸萬古黴素(vancomycin)(參閱，例如，Nursing 2001 Drug Handbook ，第24－214頁)。
該至少一種心肌收縮劑可為選自下述之至少一者：乳酸胺力農(amrinone)、地高辛(digoxin)、及乳酸米力農(milrinone)。該至少一種抗心律不整藥物可為選自下述之至少一者：腺苷、鹽酸乙胺碘呋酮、硫酸阿托品(atropine)、甲苯磺酸溴苄銨、鹽酸帝俠鎮(diltiazem)、丙吡胺(disopyramide)、磷酸丙吡胺、鹽酸艾司洛爾(esmolol)、乙酸氟凱耐(flecainide)、富馬酸伊布替賴(ibutilide)、鹽酸利多卡因(lidocaine)、鹽酸慢心利(mexiletine)、鹽酸莫利西(moricizine)、苯妥英(phenytoin)、苯妥英鈉、鹽酸普魯卡醯胺(procainamide)、鹽酸普羅帕酮(propafenone)、鹽酸心得安(propranolol)、硫酸氫奎尼丁(quinidine)鹽、葡萄糖酸奎尼丁、聚半乳糖醛酸奎尼丁、硫酸奎尼丁、心得怡(sotalol)、鹽酸妥凱耐(tocainide)、及鹽酸異博停(verapamil)。該至少一種抗心絞痛藥物可為選自下述之至少一者：苯磺酸安脈狄平(amlodipidine)、亞硝酸戊酯、鹽酸貝利地(bepridil)、鹽酸帝俠鎮、二硝酸異山梨醇酯、單硝酸異山梨醇酯、萘羥心安(nadolol)、鹽酸尼卡地平(nicardipine)、尼非地平(nifedipine)、硝酸甘油、鹽酸心得安、異博停、鹽酸異博停。該至少一種抗高血壓藥物可為選自下述之至少一者：鹽酸乙丁醯心安(acebutolol)、苯磺酸安脈狄平、壓平樂(atenolol)、鹽酸貝那普利(benazepril)、鹽酸倍他洛爾(β xolol)、富馬酸吡索洛爾(bisoprolol)、坎地沙坦(candesartan cilexetil)、卡托普利(captopril)、鹽酸卡替洛爾(carteolol)、卡維地洛(carvedilol)、可樂寧(clonidine)、鹽酸可樂寧、二氮(diazoxide)、鹽酸帝俠鎮、甲磺酸多沙唑辛(doxazosin)、恩納比爾拉(enalaprilat)、馬來酸恩納比爾、甲磺酸依普羅沙坦(eprosartan)、非洛地平(felodipine)、甲磺酸非諾多畔(fenoldopam)、福辛普利(fosinopril)鈉、乙酸胍那苄(guanabenz)、硫酸胍那綴(guanadrel)、鹽酸胍法辛(guanfacine)、鹽酸肼苯嗒、厄貝沙坦(irbesartan)、伊拉地平(isradipine)、鹽酸拉貝洛爾(la β lol)、利辛普利(lisinopril)、可悅您(losartan)鉀、甲基多巴(methyldopa)、鹽酸甲基多巴酸、號珀酸美多心安(metoprolol)、酒石酸美多心安、米諾地爾(minoxidil)、鹽酸莫昔普利(moexipril)、萘羥心安、鹽酸尼卡地平、尼非地平、尼索地平(nisoldipine)、硝基魯賽(nitroprusside)鈉、硫酸噴布洛爾(penbutolol)、培哚普利(perindopril erbumine)、甲磺酸酚妥拉明(phentolamine)、心得靜(pindolol)、鹽酸哌唑(prazosin)、鹽酸心得安、鹽酸喹那普利(quinapril)、雷米普利(ramipril)、替米沙坦(telmisartan)、鹽酸特拉唑(terazosin)、馬來酸噻嗎洛爾(timolol)、群多普利(trandolapril)、纈沙坦(valsatan)、及鹽酸異博停。該至少一種降血脂藥物可為選自下述之至少一者：阿托伐他汀(atorvastatin)鈣、西利伐他汀(cerivastatin)鈉、消膽胺、鹽酸可列替泊(colestipol)、非諾貝特(fenofibrate)(微米化)、氟伐他汀(fluvastatin)鈉、吉非洛齊(gemfibrozil)、洛伐他汀(lovastatin)、菸鹼酸、普拉伐他汀(pravastatin)鈉、及辛伐他汀(simvastatin)。該至少一種各式各樣CV藥物可為選自下述之至少一者：阿昔單抗(abciximab)、前列地爾(alprostadil)、鹽酸阿布他明(arbutamine)、西洛他唑(cilostazol)、硫酸氫氯吡多雷(clopidogrel)、雙嘧達莫(dipyridamole)、伊替巴泰(eptifibatide)、鹽酸甲氧胺福林、己酮可可豆鹼、鹽酸噻氯匹定(ticlopidine)、及鹽酸替羅非班(tirofiban)(參閱，例如，Nursing 2001 Drug Handbook ，第215－336頁)。
該至少一種非麻醉性止痛劑或解熱藥可為選自下述之至少一者：乙醯胺酚、阿司匹林、三水楊酸膽鹼鎂、二氟苯水楊酸、及水楊酸鎂。該至少一種非類固醇類抗發炎藥物可為選自下述之至少一者：塞勒昔布(celecoxib)、待克菲那(diclofenac)鉀、待克菲那鈉、依托度酸(etodolac)、非諾洛芬(fenoprofen)鈣、氟比洛芬(flurbiprofen)、異丁苯丙酸、消炎痛、消炎痛鈉三水合物、酮洛芬(ketoprofen)、克痛(ketorolac tromethamine)、萘丁美酮(nabumetone)、萘普生(naproxen)、萘普生鈉、奧沙普(oxaprozin)、吡羅昔康(piroxicam)、羅非昔布(rofecoxib)、及舒林酸(sulindac)。該至少一種麻醉劑或鴉片類止痛劑可為選自下述之至少一者：鹽酸阿芬太尼(alfentanil)、鹽酸丁丙諾非(buprenorphine)、環丁甲二羥嗎喃酒石酸鹽、磷酸可待因(codeine)、硫酸可待因、檸檬酸芬太尼(fentanyl)、芬太尼經皮系統、芬太尼經黏膜劑、鹽酸氫嗎啡酮、鹽酸哌替啶、鹽酸美沙酮(methadone)、鹽酸嗎啡、硫酸嗎啡、酒石酸嗎啡、鹽酸納布啡(nalbuphine)、鹽酸羥可酮(oxycodone)、果膠酯酸羥可酮、鹽酸羥嗎啡酮、鹽酸鎮痛新、鹽酸鎮痛新與鹽酸那諾松(naloxone)、乳酸鎮痛新、鹽酸丙氧吩、萘磺酸丙氧吩、鹽酸瑞芬太尼(remifentanil)、檸檬酸舒芬太尼(sufentanil)、及鹽酸曲馬多(tramadol)。該至少一種鎮靜性安眠藥可為選自下述之至少一者：水合氯醛、艾司唑侖(estazolam)、鹽酸氟西畔(flurazepam)、戊巴比妥(pentobarbital)、戊巴比妥鈉、苯巴比妥鈉、司可巴比妥(secobarbital)鈉、替馬西畔(temazepam)、三唑侖(triazolam)、扎來普隆(zaleplon)、及酒石酸唑吡坦(zolpidem)。該至少一種抗癲癇藥物可為選自下述之至少一者：乙醯唑胺鈉、叉癲寧、氯硝西畔(clonazepam)、氯拉酸(clorazepate)二鉀、苯甲二氮、地伐羅司(divalproex)鈉、乙琥胺、磷苯妥英(fosphenytoin)鈉、加巴噴丁(gabapentin)、拉莫三(lamotrigine)、硫酸鎂、苯巴比妥、苯巴比妥鈉、苯妥英、苯妥英鈉、苯妥英鈉(緩釋型)、捕癲酮、鹽酸噻加賓(tiagabine)、托吡酯(topiramate)、丙戊酸鈉、及丙戊酸。該至少一種抗憂鬱藥物可為選自下述之至少一者：鹽酸阿米替林(amitriptyline)、雙羥萘酸阿米替林、阿莫沙平(amoxapine)、鹽酸丁胺苯丙酮、鹽酸西酞普蘭(citalopram)、鹽酸氯米拉明(clomipramine)、鹽酸去鬱敏、鹽酸多慮平、鹽酸氟西汀(fluoxetine)、鹽酸丙咪、雙羥萘酸丙咪、米氮平(mirtazapine)、鹽酸奈法唑酮(nefazodone)、鹽酸去甲替林(nortriptyline)、鹽酸帕羅西汀(paroxetine)、硫酸苯乙肼、鹽酸舍曲林(sertraline)、硫酸反苯環丙胺、馬來酸三甲丙咪、及鹽酸文拉法辛(venlafaxine)。該至少一種抗焦慮藥物可為選自下述之至少一者：阿普唑侖(alprazolam)、鹽酸丁螺旋酮、利眠寧、鹽酸利眠寧、氯拉酸二鉀、苯甲二氮、鹽酸多慮平、恩布尼酸(embonate)羥、鹽酸羥、雙羥萘酸羥、氯羥去甲安定、眠爾通、鹽酸咪達唑侖(midazolam)、奧沙西畔及(oxazepam)。該至少一種抗精神疾病藥物可為選自下述之至少一者：鹽酸氯丙、氯氮平、癸酸氟奮乃靜、庚酸氟奮乃靜、鹽酸氟奮乃靜、氟哌啶酮(haloperidol)、癸酸氟哌啶酮、乳酸氟哌啶酮、鹽酸充塞平(loxapine)、琥珀酸克塞平、苯磺酸美索達(mesoridazine)、鹽酸嗎茚酮、奧氮平(olanzapine)、奮乃靜、哌迷清、氯吡、富馬酸喹硫平(quetiapine)、利培酮(risperidone)、鹽酸甲硫嗒、替沃噻噸(thiothixene)、鹽酸替沃噻噸、及鹽酸三氟拉(trifluoperazine)。該至少一種中樞神經興奮劑可為選自下述之至少一者：硫酸安非他命、咖啡因、硫酸右旋安非他命、鹽酸嗎乙苯吡酮、鹽酸甲基安非他命、鹽酸哌甲酯(methylphenidate)、莫達非尼(modafinil)、匹莫林(pemoline)、及鹽酸芬特明(phentermine)。該至少一種抗巴金森症藥物可為選自下述之至少一者：鹽酸金剛胺、甲磺酸苄托品(benztropine)、鹽酸安克痙、乳酸安克痙、甲磺酸溴麥角環肽、卡比多巴(carbidopa)－左旋多巴(levodopa)、恩他卡朋(entacapone)、左旋多巴、甲磺酸培高利特(pergolide)、二鹽酸普拉克索(pramipexole)、鹽酸羅匹尼羅(ropinirole)、鹽酸司來吉蘭(selegiline)、托卡朋(tolcapone)、及鹽酸苯海索。該至少一種各式各樣中樞神經系藥物可為選自下述之至少一者：鹽酸丁胺苯丙酮、鹽酸多奈培齊(donepezil)、達哌啶醇、馬來酸氟伏沙明(fluovoxamine)、碳酸鋰、檸檬酸鋰、鹽酸那拉曲坦(naratriptan)、尼古丁咀嚼錠(nicotine polacrilex)、尼古丁經皮系統、丙泊酚(propofol)、苯甲酸利扎曲普坦(rizatriptan)、鹽酸西布曲明(sibutramine)單水合物、琥珀酸舒馬普坦(sumatriptan)、鹽酸達可寧(tacrine)、及佐米曲普坦(zolmitriptan)(參閱，例如Nursing 2001 Drug Handbook ，第337－530頁)。
該至少一種膽鹼能藥物(例如，副交感神經作用劑)可為選自下述之至少一者：氯化貝膽鹼(bethanechol chloride)、氯化騰喜龍、溴化新思的明(neostigmine bromide)、甲基硫酸新思的明、水楊酸毒扁豆鹼、及溴化吡啶思的明。該至少一種抗膽鹼能劑可為選自下述之至少一者：硫酸阿品托、鹽酸雙環胺、胃長寧、莨菪鹼、硫酸莨菪鹼、溴化丙胺太林、東莨菪鹼、丁基溴化東莨菪鹼、及氫溴酸東莨菪鹼。該至少一種腎上腺素能藥物(擬交感神經作用劑)可為選自下述之至少一者：鹽酸多巴酚丁胺、鹽酸多巴胺、重酒石酸間羥胺、重酒石酸去甲腎上腺素、鹽酸苯腎上腺素、鹽酸假麻黃鹼、及硫酸甲麻黃鹼。該至少一種腎上腺素能封阻劑(交感神經作用劑)可為選自下述之至少一者：甲磺酸二氫麥角胺、酒石酸麥角胺、馬來酸二甲麥角新鹼、及鹽酸心得安。該至少一種骨骼肌鬆弛劑可為選自下述之至少一者：氯苯胺丁酸、異丙安寧、氯唑沙宗(chlorzoxazone)、鹽酸環苯扎林(cyclobenzaprine)、硝苯呋海因鈉、美索巴莫(methocarbamol)、及鹽酸替扎尼定(tizanidine)。該至少一種神經肌封阻劑可為選自下述之至少一者：苯磺酸阿曲庫銨(atracurium)、苯磺酸順式阿曲庫銨、多庫氯銨(doxacurium chloride)、米庫氯銨(mivacurium chloride)、潘庫溴銨(pancuronium bromide)、哌庫溴銨(pipecuronium bromide)、雷庫溴銨(rapacuronium bromide)、羅庫溴銨(rocuronium bromide)、氯化琥珀膽鹼、氯化筒箭毒鹼、及維庫溴銨(vecuronium bromide)(參閱，例如，Nursing 2001 Drug Handbook ，第531－84頁)。
該至少一種抗組織胺藥物可為選自下述之至少一者：馬來酸溴苯吡胺、鹽酸西替利(cetirizine)、馬來酸氯苯吡胺、富馬酸氯馬斯汀(clemastine)、鹽酸賽庚啶(cyproheptadine)、鹽酸苯海拉明、鹽酸非索非那啶(fexofenadine)、氯雷他啶(loratadine)、鹽酸異丙、茶氯酸異丙、及鹽酸曲普利啶(triprolidine)。該至少一種支氣管擴張劑可為選自下述之至少一者：舒喘寧、硫酸舒喘寧、氨茶鹼、硫酸阿托品、硫酸麻黃鹼、麻黃鹼、重酒石酸麻黃鹼、鹽酸麻黃鹼、溴定喘樂、異丙腎上腺素、鹽酸異丙腎上腺素、硫酸異丙腎上腺素、鹽酸左旋沙丁胺醇、硫酸奧西那林(metaproterenol)、膽茶鹼、乙酸吡布特羅(pirbuterol)、羥萘甲酸史立穩、硫酸間羥叔丁腎上腺素、及茶鹼。該至少一種袪痰藥或止咳藥可為選自下述之至少一者：退咳露、磷酸可待因、硫酸可待因、氫溴酸右美沙芬(dextramethorphan)、鹽酸苯海拉明、愈創甘油醚、及鹽酸氫嗎啡酮。該至少一種各式各樣呼吸道藥物可為選自下述之至少一者：乙醯半胱胺酸、二丙酸氯地米松、貝雷騰(beractant)、布地奈德(budesonide)、卡費騰(calfactant)、色甘酸鈉、阿法鏈道酶、前列環素(epoprostenol)、氟尼縮松(flunisolide)、丙酸氟替卡松(fluticasone)、孟魯司特(montelukast)鈉、奈多羅米(nedocromil)鈉、帕維珠馬(palivizumab)、曲安奈德(triamcinolone acetonide)、扎魯司特(zafirlukast)、及齊留通(zileuton)(參閱，例如，Nursing 2001 Drug Handbook ，第585－642頁)。
該至少一種制酸劑、吸附劑、或抗胃腸氣脹劑可為選自下述之至少一者：碳酸鋁、氫氧化鋁、碳酸鈣、水化鋁酸鎂、氫氧化鎂、氧化鎂、二甲基矽油、及碳酸氫鈉。該至少一種消化性酵素或膽結石增溶劑可為選自下述之至少一者：胰酶、胰脂肪酶、及爾索二醇(ursodiol)。該至少一種止瀉劑可為選自下述之至少一者：綠坡縷石、水楊酸氧鉍、聚卡波非(polyCarbophil)鈣、鹽酸氰苯哌酯與硫酸阿托品、洛哌丁胺(loperamide)、乙酸奧曲肽(octreotide)、鴉片酊劑、及鴉片酊劑(樟腦化)。該至少一種瀉藥可為選自下述之至少一者：比索可啶(bisocodyl)、聚卡波非鈣、藥鼠李皮、藥鼠李皮芳族流浸膏、藥鼠李皮流浸膏、蓖麻油、多庫酯(docusate)鈣、多庫酯鈉、甘油、乳果糖、檸檬酸鎂、氫氧化鎂、硫酸鎂、甲基纖維素、礦物油、聚乙二醇或電解質溶液、洋車前、山扁豆、及磷酸鈉類。該至少一種止吐劑可為選自下述之至少一者：鹽酸氯丙、乘暈寧、甲磺酸多拉司瓊(dolasetron)、屈大麻酚(dronabinol)、鹽酸格拉司瓊(granisetron)、鹽酸敏克靜、鹽酸滅吐靈、鹽酸昂丹司瓊(ondansetron)、奮乃靜、氯吡、乙二磺酸氯吡、馬來酸氯吡、鹽酸異丙、東莨菪鹼、馬來酸吐來抗、及鹽酸曲美苄胺。該至少一種抗潰瘍藥物可為選自下述之至少一者：甲腈咪胍、鹽酸甲腈咪胍、法莫替丁(famotidine)、蘭索拉唑(lansoprazol)、米索前列醇(misoprostol)、尼扎替丁(nizatidine)、奧美拉唑(omeprazole)、雷貝拉唑(rabeprozole)鈉、雷尼替丁(ranitidine)檸檬酸鉍、鹽酸雷尼替丁、及硫糖鋁(參閱，例如，Nursing 2001 Drug Handbook ，第643－95頁)。
該至少一種皮質類固醇可為選自下述之至少一者：倍他米松(β methasone)、乙酸倍他米松或倍他米松磷酸鈉、倍他米松磷酸鈉、乙酸可的松(cortisone)、地塞米松(dexamethasone)、乙酸地塞米松、地塞米松磷酸鈉、乙酸氟氫化可的松、氫化可的松、乙酸氫化可的松、環戊烷丙酸氫化可的松、氫化可的松磷酸鈉、氫化可的松琥珀酸鈉、甲基氫化潑尼松、乙酸甲基氫化潑尼松、甲基氫化潑尼松琥珀酸鈉、氫化潑尼松、乙酸氫化潑尼松、氫化潑尼松磷酸鈉、第三丁基乙酸氫化潑尼松、潑尼松、曲安西龍(triamcinolone)、曲安奈德、及乙酸曲安奈德。該至少一種雄激素或促蛋白合成類固醇可為選自下述之至少一者：達那唑(danazol)、氟氫甲睪酮、甲基睪丸酮、癸酸諾龍(nandrolone)、苯丙酸諾龍、睪丸酮、環戊烷丙酸睪丸酮、庚酸睪丸酮、丙酸睪丸酮、及睪丸酮經皮系統。該至少一種雌激素或黃體素可為選自下述之至少一者：酯化雌激素、雌二醇、環戊烷丙酸雌二醇、雌二醇/乙酸炔諾酮經皮系統、戊酸雌二醇、雌激素(接合型)、雌酮、乙炔基雌二醇、乙炔基雌二醇與去氧孕烯、乙烯基雌二醇與二乙酸炔諾醇、乙烯基雌二醇與去氧孕烯、乙烯基雌二醇與左炔諾孕酮、乙烯基雌二醇與炔諾酮(norethindrone)、乙烯基雌二醇與乙酸炔諾酮、乙烯基雌二醇與諾孕酪(norgestimate)、乙烯基雌二醇與甲基炔諾酮、乙烯基雌二醇與炔諾酮及乙酸鹽與富馬酸亞鐵、左炔諾孕酮、甲孕酮、炔雌醇甲醚與炔諾酮、炔諾酮、乙酸炔諾酮、甲基炔諾酮、及孕酮。該至少一種促性腺激素可為選自下述之至少一者：乙酸加尼瑞克(ganirelix)、乙酸戈那瑞林(gonadorelin)、乙酸組胺瑞林(histrelin)、及尿促性素。該至少一種抗糖尿病藥物或胰高血糖激素可為選自下述之至少一者：阿卡波糖(acarbose)、氯磺丙脲、亞曼瑞、泌樂得、胰高血糖激素、優降糖、胰島素、鹽酸滅糖錠、米格列醇(miglitol)、鹽酸吡格列酮(pioglitazone)、瑞格列奈(repaglinide)、馬來酸羅格列酮(rosiglitazone)、及曲格列酮(troglitazone)。該至少一種甲狀腺激素可為選自下述之至少一者：左甲狀腺素鈉、碘塞羅寧(liothyronine)鈉、利奧曲(liotrix)、及甲狀腺劑。該至少一種甲狀腺激素拮抗劑可為選自下述之至少一者：甲巰咪唑、碘化鉀、碘化鉀(飽和溶液)、丙基硫脲嘧啶、放射性碘(碘化鈉1 3 1 I)、及強碘溶液。該至少一種腦下垂體激素可為選自下述之至少一者：促皮質素、替可克肽、乙酸去胺加壓素、乙酸白脯利特(leuprolide)、長效型促皮質素、人蛋胺生長素、生長激素、及後葉加壓素。該至少一種類副甲狀腺藥物可為選自下述之至少一者：骨化二醇、降鈣素(人類)、降鈣素(鮭魚)、骨化三醇、雙氫速變固醇、及羥乙膦酸二鈉(參閱，例如，Nursing 2001 Drug Handbook ，第696－796頁)。
該至少一種利尿劑可為選自下述之至少一者：乙醯唑胺、乙醯唑胺鈉、鹽酸胺氯吡脒、丁苯氧酸、氯噻酮、利尿酸鈉、利尿酸、速尿、雙氫氯噻、吲達帕胺(indapamide)、甘露糖醇、美托拉宗(metolazone)、安體舒通、托塞米(torsemide)、胺苯喋啶、及尿素。該至少一種電解質或替代溶液可為選自下述之至少一者：乙酸鈣、碳酸鈣、氯化鈣、檸檬酸鈣、葡生酸鈣(calcium glubionate)、葡庚糖酸鈣、葡萄糖酸鈣、乳酸鈣、磷酸氫二鈣、磷酸三鈣、葡聚醣(高分子量)、葡聚醣(低分子量)、羥乙基澱粉、氯化鎂、硫酸鎂、乙酸鉀、碳酸氫鉀、氯化鉀、葡萄糖酸鉀、林格氏注射液、林格氏注射液(乳酸化)、及氯化鈉。該至少一種酸化劑或鹼化劑可為選自下述之至少一者：碳酸氫鈉、乳酸鈉、及胺丁三醇(參閱，例如，Nursing 2001 Drug Handbook ，第797－833頁)。
該至少一種補血劑可為選自下述之至少一者：富馬酸亞鐵、葡萄糖酸亞鐵、硫酸亞鐵、硫酸亞鐵(無水)、葡聚醣鐵、山梨糖醇鐵、多醣－鐵錯合物、及葡萄糖酸鐵鈉錯合物。該至少一種抗凝血劑可為選自下述之至少一者：阿地肝素(ardeparin)鈉、達肝素(dalparin)鈉、達那肝素(danaparoid)鈉、伊諾肝素(enoxaparin)鈉、肝素鈣、肝素鈉、及華法令(warfarin)鈉。該至少一種血液衍生物可為選自下述之至少一者：5%白蛋白、25%白蛋白、抗嗜血因子、抗－抑制劑凝血劑複合物、抗凝血素III(人類)、因子IX(人類)、因子IX複合物、及血漿蛋白質分劃。該至少一種血栓溶解酵素可為選自下述之至少一者：阿替普酶(alteplase)、阿尼普酶(anistreplase)、瑞替普酶(reteplase)(重組體)、鏈球菌激酶、及尿激酶(參閱，例如，Nursing 2001 Drug Handbook ，第834－66頁)。
該至少一種烷基化藥物可為選自下述之至少一者：白血福恩(busulfan)、卡鉑(carboplatin)、卡氮芥、苯丁酸氮芥、順氯胺鉑、環磷醯胺、異環磷醯胺、洛莫司汀(lomustine)、鹽酸氮芥、苯丙胺酸氮芥、鹽酸苯丙胺酸氮芥、鏈佐星(streptozocin)、替莫唑胺(temozolomide)、及塞替派(thiotepa)。該至少一種抗代謝物可為選自下述之至少一者：卡培他濱(capecitabine)、克拉屈濱(cladribine)、阿糖胞苷、氟去氧尿苷、磷酸氟達拉濱(fludarabine)、氟脲嘧啶、羥基脲、巰基嘌呤、胺甲喋呤、胺甲喋呤鈉、及硫代鳥嘌呤。該至少一種抗菌性抗腫瘤藥物可為選自下述之至少一者：硫酸博來黴素、放線菌素D、檸檬酸道諾紅菌素微脂體劑、鹽酸道紅菌素、鹽酸小紅莓、鹽酸小紅莓微脂體劑、鹽酸依匹紅菌素(epirubicin)、鹽酸依達紅菌素(idarubicin)、絲裂黴素、噴司他丁(pentostatin)、普卡黴素(plicamycin)、及伐紅菌素(valrubicin)。該至少一種改變激素平衡之抗腫瘤藥物可為選自下述之至少一者：阿那曲唑(anastrozole)、比卡魯胺(bicalutamide)、雌莫司汀(estramustine)磷酸鈉、依西美坦(exemestane)、氟他胺(flutamide)、乙酸戈舍瑞林(goserelin)、來曲唑(letrozole)、乙酸白脯利特、乙酸甲地孕酮、尼魯米特(nilutamide)、檸檬酸他莫昔芬(tamoxifen)、睪丸內酯、及檸檬酸托瑞米芬(toremifene)。該至少一種各式各樣抗腫瘤藥物可為選自下述之至少一者：卡介苗(BCG)(活性膀胱投與劑)、氮烯咪胺、多西他賽(docetaxel)、依托泊苷(etoposide)、磷酸依托泊苷、鹽酸吉西他濱(gemcitabine)、鹽酸伊利替康(irinotecan)、米托坦(mitotane)、鹽酸米托蒽醌(mitoxantrone)、紫杉醇、培門冬酶(pegaspargase)、卟吩姆(porfimer)鈉、鹽酸甲基苄肼、利妥昔單抗(rituximab)、替尼泊苷(teniposide)、鹽酸拓樸替康(topotecan)、搓杜滋美(trastuzumab)、維生素A酸、硫酸長春鹼、硫酸長春新鹼、及酒石酸長春瑞濱(vinorelbine)(參閱，例如，Nursing 2001 Drug Handbook ，第867－963頁)。
該至少一種免疫抑制劑可為選自下述之至少一者：硫唑嘌呤、巴利昔單抗(basiliximab)、環孢素、達利珠單抗(daclizumab)、淋巴細胞免疫球蛋白、莫羅單抗(muromonab)－CD3、黴酚酸酯腸溶劑、鹽酸黴酚酸酯腸溶劑、西羅莫司(sirolimus)、及他克莫司(tacrolimus)。該至少一種疫苗或類毒素可為選自下述之至少一者：BCG疫苗、霍亂疫苗、白喉與破傷風類毒素(吸附型)、白喉與破傷風類毒素及非細胞性百日咳疫苗(吸附型)、白喉與破傷風類毒素及全細胞性百日咳疫苗、b型嗜血桿菌結合疫苗、A型肝炎疫苗(去活性)、B型肝炎疫苗(重組體)、流行性感冒病毒疫苗1999－2000三價型& B(純化之表面抗原疫苗)、流行性感冒病毒疫苗1999－2000三價型& B(次病毒或純化之次病毒疫苗)、流行性感冒病毒疫苗1999－2000三價型& B(全病毒疫苗)、日本腦炎病毒疫苗(去活性)、萊姆症(Lyme disease)疫苗(重組OspA)、麻疹、腮腺炎與德國麻疹病毒疫苗(活性)、麻疹、腮腺炎及德國麻疹病毒疫苗(活性減毒)、麻疹病毒疫苗(活性減毒)、腦膜炎球菌多醣疫苗、腮腺炎病毒疫苗(活性)、鼠疫疫苗、肺炎球菌疫苗(多價型)、小兒麻痺疫苗(去活性)、小兒麻痺疫苗(活性、口服、三價型)、狂犬病疫苗(吸附型)、狂犬病疫苗(人類雙套細胞)、德國麻疹與腮腺炎病毒疫苗(活性)、德國麻疹病毒疫苗(活性，減毒)、破傷風類毒素(吸附型)、破傷風類毒素(流體型)、傷寒疫苗(口服)、傷寒疫苗(非經腸)、傷寒Vi多醣疫苗、水痘病毒疫苗、及黃熱病疫苗。該至少一種抗毒素或抗蛇毒素可為選自下述之至少一者：黑寡婦蜘蛛抗蛇毒素、響尾蛇抗蛇毒液(多價型)、白喉抗毒素(馬)、及金黃珊瑚蛇(Micrurus fulvius )抗蛇毒素。該至少一種免疫血清可為選自下述之至少一者：巨細胞病毒免疫球蛋白(靜脈內注射劑)、B型肝炎免疫球蛋白(人類)、免疫球蛋白肌內注射劑、免疫球蛋白靜脈內注射劑、狂犬病免疫球蛋白(人類)、呼吸道融合瘤病毒免疫球蛋白靜脈內注射劑(人類)、Rh0 (D)免疫球蛋白(人類)、Rh0 (D)免疫球蛋白靜脈內注射劑(人類)、破傷風免疫球蛋白(人類)、及水痘－帶狀皰疹免疫球蛋白。該至少一種生物反應改造劑可為選自下述之至少一者：阿地白介素(aldesleukin)、阿法依泊汀(epotin alfa)、非格司亭(filgrastim)、乙酸格拉雷美(glatiramer)注射劑、干擾素阿法康(alfacon)－1、干擾素α－2(重組體)、干擾素α－2b(重組體)、干擾素β－1a、干擾素β－1b(重組體)、干擾素γ－1b、鹽酸左旋四咪唑、奧雷白介素(oprelvekin)、及沙格司亭(sargramostim)(參閱，例如，Nursing 2001 Drug Handbook ，第964－1040頁)。
該至少一種眼用抗感染藥物可選自：桿菌肽、氯黴素、鹽酸環丙沙辛、紅黴素、硫酸健大黴素、0.3%歐沙辛、硫酸多黏菌素B、10%胺乙醯鈉、15%磺胺乙醯鈉、30%磺胺乙醯鈉、妥布黴素(tobramycin)、及阿糖腺苷(vidarabine)。該至少一種眼用抗發炎藥物可為選自下述之至少一者：地塞米松、地塞米松磷酸鈉、0.1%待克菲那鈉、氟米龍(fluorometholone)、氟比洛芬鈉、克痛、乙酸氫化潑尼松(懸浮液)、及氫化潑尼松磷酸鈉(溶液)。該至少一種縮瞳劑可為選自下述之至少一者：氯化乙醯膽鹼、胺甲醯膽鹼(眼內)、胺甲醯膽鹼(局部)、碘化艾可硫代磷酸酯(echothiophate iodide)、毛果蕓香鹼、鹽酸毛果蕓香鹼、及硝酸毛果蕓香鹼。該至少一種散瞳劑可為選自下述之至少一者：硫酸阿托品、鹽酸環戊醇胺酯、鹽酸腎上腺素、硼酸腎上腺素酯、氫溴酸後馬托品(homatropine)、鹽酸苯腎上腺素、氫溴酸東莨菪鹼、及托吡卡胺(tropicamide)。該至少一種眼用血管收縮劑可為選自下述之至少一者：鹽酸萘甲唑啉、鹽酸羥間唑啉、及鹽酸四氫唑啉。該至少一種各式各樣眼用藥物可為選自下述之至少一者：鹽酸阿可樂定(apraclonidine)、鹽酸倍他洛爾、酒石酸溴莫尼定(brimonidine)、鹽酸卡替洛爾、鹽酸地匹福林(dipivefrin)、鹽酸多佐胺(dorzolamide)、二富馬酸依美斯汀(emedastine)、螢光素鈉、富馬酸酮替芬(ketotifen)、拉坦前列素(latanoprost)、鹽酸左布諾洛爾(levobunolol)、鹽酸莫替洛爾(metipranolol)、氯化鈉(高滲性)、及馬來酸噻嗎洛爾(timolol)。該至少一種耳用藥物可為選自下述之至少一者：硼酸、過氧化氫脲、氯黴素、及三乙醇胺多肽油酸酯－濃縮物。該至少一種鼻用藥物可為選自下述之至少一者：二丙酸氯地米松、布地奈德、硫酸麻黃鹼、鹽酸腎上腺素、氟尼縮松、丙酸氟替卡松、鹽酸萘甲唑啉、鹽酸羥間唑啉、鹽酸苯腎上腺素、鹽酸四氫唑啉、曲安奈德、及鹽酸丁苄唑啉(參閱，例如，Nursing 2001 Drug Handbook ，第1041－97頁)。
該至少一種局部抗感染藥物可為選自下述之至少一者：環孢子素、兩性黴素B、壬二酸霜劑、桿菌肽、硝酸布康唑(butoconazole)、磷酸克林黴素、克黴唑、硝酸益康唑(econazole)、紅黴素、硫酸健大黴素、酮康唑、乙酸甲磺滅膿、滅滴靈(局部)、硝酸咪康唑(miconazole)、莫匹羅新(mupirocin)、鹽酸萘替芬(naftifine)、硫酸新黴素、呋喃西林、製黴菌素、磺胺嘧啶銀鹽、鹽酸療黴舒、特康唑(terconazole)、鹽酸四環素、噻康唑(tioconazole)、及髮癬退。該至少一種殺疥蟎藥或殺虱劑可為選自下述之至少一者：克羅米通(crotamiton)、林旦(lindane)、百滅靈、及除蟲菊酯。該至少一種局部皮質類固醇可為選自下述之至少一者：二丙酸倍他米松、戊酸倍他米松、丙酸氯氟美松、地奈德(desonide)、去羥米松(desoximetasone)、地塞米松、地塞米松磷酸鈉、二乙酸二氟拉松(diflorasone)、膚輕松(fluocinolone acetonide)、乙酸膚輕松(fluocinonide)、氟氫縮松(flurandrenolide)、丙酸氟替卡松、哈西奈德(halcinonide)、氫化可的松、乙酸氫化可的松、丁酸氫化可的松、戊酸氫化可的松、呋喃甲酸莫米松(mometasone)、及曲安奈德(參閱，例如，Nursing 2001 Drug Handbook ，第1098－1136頁)。
該至少一種維生素或礦物質可為選自下述之至少一者：維生素A、維生素B群、氰鈷胺酸、葉酸、羥鈷胺素、甲醯四氫葉酸鈣、菸鹼酸、菸鹼醯胺、鹽酸吡哆醇、核黃素、鹽酸硫胺素、維生素C、維生素D、膽骨化醇、麥角骨化醇、維生素D類似物、多舍骨化醇(doxercalciferol)、帕利鈣醇(paricalcitol)、維生素E、維生素K類似物、維生素K1 、氟化鈉、氟化鈉(局部)、微量元素、鉻、銅、碘、錳、硒、及鋅。該至少一種熱質可為選自下述之至少一者：胺基酸浸出物(結晶)、於右旋糖中之胺基酸浸出物、帶有電解質之胺基酸浸出物、於右旋糖中之帶有電解質之胺基酸浸出物、用於肝衰竭之胺基酸浸出物、用於高代謝壓力之胺基酸浸出物、用於腎衰竭之胺基酸浸出物、右旋糖、脂肪乳劑、及中鏈三酸甘油酯(參閱，例如，Nursing 2001 Drug Handbook ，第1137－63頁)。
本發明之抗－IL－12抗體組成物可進一步包含接觸或投與需要該等調節、處理或治療之細胞、組織、器官、動物或病患含有至少一種抗－IL－12抗體之任何適當及有效量之至少一種組成物或醫藥組成物，該等組成物或醫藥組成物視需要進一步包含選自於下之至少一者：TNF拮抗劑[例如，惟不限於TNF化學或蛋白質拮抗劑、TNF單株或多株抗體或片段、可溶性TNF受體(例如，p55、p70或p85)或片段、其融合多肽、或小分子TNF拮抗劑，例如，TNF結合蛋白I或II(TBP－1或TBP－II)、內利蒙單抗(nerelimonmab)、因福昔單抗(infliximab)、恩特西普(enteracept)、CDP－571、CDP－870、阿非莫單抗(afelimomab)、來那西普(lenercept)等]、抗風濕藥物[胺甲喋呤、金諾芬(auranofin)、金硫葡糖、硫唑嘌呤、依他西脫(etanercept)、硫代蘋果酸金鈉、硫酸羥基氯奎、來氟米特(leflunomide)、硫氮磺胺啶]、肌肉鬆弛劑、麻醉藥、非類固醇消炎藥物(NSAID)、止痛劑、麻醉劑、鎮靜劑、局部麻醉劑、神經肌肉阻斷劑、抗微生物劑[例如，胺基糖苷、抗真菌藥、抗寄生蟲藥、抗病毒劑、卡巴佩能(carbapenem)、頭孢菌素、氟喹啉酮、大環內酯、青黴素、磺胺、四環素、另一抗微生物劑]、抗牛皮癬劑、皮質類固醇、肌肉增強劑、糖尿病相關藥劑、礦物質、營養劑、甲狀腺劑、維生素、鈣相關激素、止瀉劑、止咳劑、止吐劑、抗潰瘍劑、瀉藥、抗凝血劑、紅血球生成素(例如，阿法依泊汀)、非格司亭(例如，G－CSF、Neupogen)、沙格司亭(GM－CSF、白血球素)、免疫處理、免疫球蛋白、免疫抑制劑(例如，巴利昔單抗、環孢素、達利珠單抗)、生長激素、激素替代藥物、雌激素受體調節劑、散瞳劑、睫狀肌鬆弛劑、烷化劑、抗代謝物、有絲分裂抑制劑、放射性醫藥劑、抗憂鬱藥物、抗躁狂藥物、抗精神病藥物、抗焦慮劑、催眠藥、擬交感神經劑、興奮劑、多奈培齊、達可寧、氣喘藥物、β促效劑、吸入式類固醇、白三烯素抑制劑、甲基黃嘌呤、色甘酸、腎上腺素或類似物、阿法鏈道酶(Pulmozyme)、細胞介素或細胞介素拮抗劑。該等細胞介素之非限制實例包含，惟不限於，任何IL－1至IL－23(例如，IL－1、IL－2等)。適當劑量為此項技藝中悉知。參閱，例如，Wells et al.,eds.,Pharmacotherapy Handbook,2n d Edition,Appleton and Lange,Stamford,CT(2000)；PDR Pharmacopoeia,Tarascon Pocket Pharmacopoeia 2000,Deluxe Edition,Tarascon Publishing,Loma Linda,CA(2000)，各該等文獻全部併入本文以資參考。
此等抗癌或抗感染藥物亦可包含與本發明至少一種抗體相關、結合、一起調配或一起投與之毒素分子，此毒素視需要地作用以選擇性殺害病理細胞或組織。病理細胞可為癌症細胞或其他細胞。此等毒素可為，惟不限於，含有至少一種毒素(例如，選自蓖麻蛋白、白喉毒素、蛇毒毒素、或細菌毒素之至少一者)的功能性胞毒功能部位之純化或重組毒素或毒素片段。毒素一詞亦包含可能引起人類或其他哺乳類任何病理症狀(包括可能造成死亡之毒素休克)之由任何天然存在的突變或重組細菌或病毒產生之內毒素與外毒素。此等毒素包含，惟不限於，腸毒性型大腸桿菌不耐熱型腸毒素(LT)、耐熱型腸毒素(ST)、志賀氏菌屬(Shigella )細胞毒素、產氣單胞菌屬(Aeromonas )腸毒素、中毒性休克症候群毒素－1(TSST－1)、葡萄球菌腸毒素A(SEA)、B(SEB)、或C(SEC)、鏈球菌腸毒素等。該等細菌包含，惟不限於，腸毒性型大腸桿菌(ETEC)、腸道出血型大腸桿菌(例如，血清型0157：H7菌株)、葡萄球菌屬[例如，金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus )、釀膿葡萄球菌(Staphylococcus pyogenes )]、志賀氏菌屬[例如，痢疾桿菌(Shigella dysenteriae )、副痢疾桿菌(Shigella flexneri )、C屬痢疾桿菌(Shigella boydii)、及宋內氏桿菌(Shigella sonnei )]、沙門氏桿菌屬[例如，傷寒桿菌(Salmonella typhi )、霍亂沙門氏桿菌(Salmonella cholerasuis )、腸炎桿菌(Salmonella enteritidis )]、梭狀芽胞桿菌屬[例如，產氣莢膜梭菌(Clostridium perfringens )、困難腸梭菌(Clostridium dificile )、臘腸毒桿菌(Clostridium botulinum )]、彎曲桿菌屬[例如，空腸彎曲桿菌(Campylobacter jejuni )、胚胎彎曲桿菌(Campylobacter fetus )]、螺旋桿菌屬[例如，幽門螺旋桿菌(Helicobacter pylori )]、產氣單胞菌屬[例如，溫和型產氣單胞菌(Aeromonas sobria )、親水性產氣單胞菌(Aeromonas hydrophila )、豬鼠產氣單胞菌(Aeromonas caviae )]、類志賀鄰單胞菌(Plesiomonas shigelloides )、小腸結腸炎耶爾森氏菌(Yersinia enterocolitica )、弧菌屬[例如，霍亂弧菌(Vibrios cholerae )、副溶血弧菌(Vibrios parahemolyticus )]、克雷伯氏菌(Klebsiella )屬、綠膿桿菌(Pseudomonas aeruginosa )、及鏈球菌屬等菌株。參見，例如，Stein,ed.,INTERNAL MEDICINE,3rd ed.,pp 1－13,Little,Brown and Co.,Boston,(1990)；Evans et al.,eds.,Bacterial Infections of Humans：Epidemiology and Control,2d.Ed.,pp 239－254,Plenum Medical Book Co.,New York(1991)；Mandell et al,P rinciples and Practice of Infectious Diseases,3d.Ed.,Churchill Livingstone,New York(1990)；Berkow et al,eds.,The Merck Manual ,16th edition,Merck and Co.,Rahway,N.J.,1992；Wood et al,FEMS Microbiology Immunology,76：121－134(1991)；Marrack et al,Science,248：705－711(1990)，該等文獻全部併入本文以資參考。
本發明之抗－IL－12抗體化合物、組成物或組合物可進一步包含至少一種任何適當之輔助劑，例如，惟不限於，稀釋劑、黏合劑、安定劑、緩衝劑、鹽類、親脂性溶劑、防腐劑、佐劑等。以醫藥上可接受之輔助劑為佳。此等無菌溶液製法之非限制實例為此項技藝中悉知，例如，惟不限於，Gennaro,Ed.,Remington’s醫藥Sciences ,18t h Edition,Mack Publishging Co.(Easton,PA)1990。如此項技藝中悉知或如本文所述，可依常規選擇適用於抗－IL－12抗體、片段或變異體組成物之投與方式、溶解性及/或安定性之醫藥上可接受之載劑。
用於本發明組成物之醫藥賦形劑及添加劑包含，惟不限於，蛋白質、胜肽、胺基酸、脂質、及碳水化合物(例如，糖類包括單醣、二－、三、四－、及寡醣；衍生糖類例如醛醇、醛糖酸、酯化糖等；及多醣或糖聚合物)，彼等可單獨或組合存在，其單獨或組合用量以重量或容積計為1－99.99%。蛋白質賦形劑之實例包含血清白蛋白，例如人類血清白蛋白(HSA)、重組體人類白蛋白(rHA)、明膠、酪蛋白等。代表性胺基酸/抗體成分，亦具有緩衝能力功能者，包括丙胺酸、甘胺酸、精胺酸、甜菜鹼、組胺酸、麩胺酸、天冬胺酸、半胱胺酸、離胺酸、白胺酸、異白胺酸、纈胺酸、甲硫胺酸、苯丙胺酸、天冬醯胺等。一較佳之胺基酸為甘胺酸。
適用於本發明之碳水化合物賦形劑包含，例如，單醣類例如果糖、麥芽糖、半乳糖、葡萄糖、D－甘露糖、山梨糖等；二醣類例如乳糖、蔗糖、海藻糖、纖維二糖等；多醣類例如棉子糖、麥芽糖糊精、葡聚醣、澱粉等；及醛醇類例如甘露糖醇、木糖醇、麥芽糖醇、乳糖醇、木糖醇山梨糖醇、肌醇等。用於本發明之較佳碳水化合物賦形劑為甘露糖醇、海藻糖、及棉子糖。
抗－IL－12抗體組成物亦可包含緩衝劑或pH調整劑；典型地，緩衝劑為以有機酸或鹼製備之鹽。代表性緩衝劑包括有機酸鹽例如檸檬酸、抗壞血酸、葡萄糖酸、碳酸、酒石酸、琥珀酸、乙酸、或酞酸等之鹽；Tris、胺基三醇鹽酸鹽、或磷酸鹽等緩衝劑。用於本發明組成物之較佳緩衝劑為有機酸鹽，例如檸檬酸鹽。
附加地，本發明抗－IL－12抗體組成物可包含聚合物賦形劑/添加劑，例如聚乙烯吡咯烷酮類、纖維膠類(一種聚合糖)、糊精類(如，環糊精，例如2－羥丙基－β－環糊精)、聚乙二醇類、調味劑、抗微生物劑、增甜劑、抗氧化劑、抗靜電劑、界面活性劑(如，聚山梨醇酯類例如“TWEEN 20”及“TWEEN 80”)、脂質類(例如，磷脂類、脂肪酸類)、類固醇類(例如，膽固醇)、及螯合劑(例如，EDTA)。
適用於根據本發明抗－IL－12抗體、部分或變異體組成物之彼等及附加之已知醫藥賦形劑及/或添加劑為此項技藝中已知，例如，“Remington：The Science & Practice of Pharmacy”,19t h ed.,Williams & Williams,(1995)及“Physician’s Desk參照”,52n d ed.,Medical Economics,Montvale,NJ(1998)中所列舉者，該等揭示內容全部併入本文以資參考。較佳載劑或賦形劑物質為碳水化合物(例如，醣類與醛醇類)及緩衝劑(例如，檸檬酸鹽)或聚合物製劑。載劑分子之實例為黏多醣、玻尿酸，彼等可供關節內遞送用。
調配物
如上述，本發明提供安定之調配物，其較佳為包含具有食鹽水或選定鹽之適當緩衝劑、含有防腐劑之防腐溶液與調配物、以及適用於醫藥或獸醫用途之多用途防腐調配物；彼等於醫藥上可接受之調配物中含有至少一種抗－IL－12抗體。防腐調配物於水性稀釋劑中含有至少一種已知防腐劑或視需要之選自下述組群之至少一者：甲酚、間甲酚、對甲酚、鄰甲酚、氯甲酚、苄醇、亞硝酸苯基汞、苯氧乙醇、甲醛、氯丁醇、氯化鎂(例如，六水合物)、烷基(例如，甲基、乙基、丙基、丁基等)對羥苯甲酸酯類、氯化苄烷銨、氯化苄乙氧銨、脫氫乙酸鈉及硫柳汞，或其混合物。可使用如此項技藝中已知之任何適當濃度或混合物，例如0.001－5%，或其中任何範圍或數值，例如，惟不限於，0.001、0.003、0.005、0.009、0.01、0.02、0.03、0.05、0.09、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4.0、4.3、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9，或其中任何範圍或數值。其非限制實例包含，無防腐劑、0.1－2%間甲酚(例如，0.2、0.3、0.4、0.5、0.9、1.0%)、0.1－3%苄醇(例如，0.5、0.9、1.1、1.5、1.9、2.0、2.5%)、0.001－0.5%硫柳汞(例如0.005、0.01)、0.001－2.0%甲酚(例如，0.05、0.25、0.28、0.5、0.9、1.0%)、0.0005－1.0%烷基對羥苯甲酸酯(類)(例如，0.00075、0.0009、0.001、0.002、0.005、0.0075、0.009、0.01、0.02、0.05、0.075、0.09、0.1、0.2、0.3、0.5、0.75、0.9、1.0%)等。
如上述，本發明提供一種製造物件，其包含包裝材料及含有至少一種抗－IL－12抗體之溶液與視需要在水性稀釋劑中之指定緩衝劑及/或防腐劑之至少一個小瓶，其中該包裝材料包含指示該等溶液可保持1、2、3、4、5、6、9、12、18、20、24、30、36、40、48、54、60、66、72小時或更長時間之標籤。本發明進一步包含一種製造物件，其包含包裝材料、含有呈凍乾形式之至少一種抗－IL－12抗體之第一小瓶、及含有指定緩衝劑或防腐劑的水性稀釋劑之第二小瓶，其中該包裝材料包含一標籤，其上指示病患於水性稀釋劑中再組成該至少一種抗－IL－12抗體以形成可保持24小時或更長時間之溶液。
如本文所述或如此項技藝中已知，根據本發明使用之至少一種抗－IL－12抗體可利用重組方法製造，包括得自哺乳類細胞或基因轉殖製劑，或可將得自其他生物來源者予以純化。
於本發明產品中之至少一種抗－IL－12抗體之含量範圍包含再組成後獲得之量(若為濕/乾系統)，濃度為約1.0微克/毫升至約1000毫克/毫升，惟亦可使用較低及較高濃度，彼等濃度係取決於意指遞交載劑，例如，溶液調配物與皮膚貼片、經肺、經黏膜、或滲透或微幫浦等方法所用濃度不同。
較佳為，該水性稀釋劑視需要進一步包含醫藥上可接受之防腐劑。較佳之防腐劑包含選自下述組群者：甲酚、間甲酚、對甲酚、鄰甲酚、氯甲酚、苄醇、烷基(例如，甲基、乙基、丙基、丁基等)對羥苯甲酸酯類、氯化苄烷銨、氯化苄乙氧銨、脫氫乙酸鈉及硫柳汞，或其混合物。調配物中所用防腐劑之濃度為足以獲得抗微生物效果之濃度。此等濃度取決於選定之防腐劑且可容易地由熟習此項技藝者決定。
其他賦形劑，例如，等張劑、緩衝劑、抗氧化劑、防腐增進劑，可視需要及較佳為添加於稀釋劑中。等張劑，例如甘油，常以已知濃度使用。較佳為添加生理上可容忍之緩衝劑以提供增進之pH控制。調配物可涵蓋寬廣之pH範圍，例如約pH 4至約pH 10，較佳範圍為約pH 5至約pH 9，最佳範圍為約6.0至約8.0。本發明調配物較佳為具有介於約6.8與約7.8間之pH。較佳之緩衝劑包括磷酸鹽緩衝劑，最佳為磷酸鈉，特別是磷酸鹽緩衝鹽液(PBS)。
其他添加劑，例如醫藥上可接受之增溶劑如Tween 20(聚氧乙烯(20)山梨聚糖單月桂酸酯)、Tween 40(聚氧乙烯(20)山梨聚糖單棕櫚酸酯)、Tween 80(聚氧乙烯(20)山梨聚糖單油酸酯)、Pluronic F68(聚氧乙烯聚氧丙烯嵌段共聚物)、及PEG(聚乙二醇)或非離子性界面活性劑例如聚山梨糖醇酯20或80或泊洛沙姆(poloxamer)184或188、Pluronic多元醇類、其他嵌段共聚物，及螯合劑例如EDTA與EGTA可視需要添加於調配物或組成物中以減少凝集。彼等添加劑於使用幫浦或塑膠容器投與調配物時特別有用。醫藥上可接受的界面活性劑之存在可減緩蛋白質凝集之傾向。
本發明調配物之製備方法包括使至少一種抗－IL－12抗體與選自下述組群之防腐劑於水性稀釋劑中混合：甲酚、間甲酚、對甲酚、鄰甲酚、氯甲酚、苄醇、烷基(例如，甲基、乙基、丙基、丁基等)對羥苯甲酸酯類、氯化苄烷銨、氯化苄乙氧銨、脫氫乙酸鈉及硫柳汞，或其混合物。該至少一種抗－IL－12抗體與防腐劑於水性稀釋劑中之混合係使用習知溶解及混合程序進行。欲製備適當調配物時，舉例而言，係使於緩衝溶液中之測定量之至少一種抗－IL－12抗體，與於緩衝溶液中之所需防腐劑結合，彼等用量足以提供所需濃度之蛋白質及防腐劑。此程序之各種變化為一般熟習此項技藝者所認知。例如，各成分之添加順序、是否使用附加之添加劑、製備該調配物之溫度與pH，係使所用投與濃度及方式最適化之所有因素。
所請求之調配物可呈澄清溶液或呈雙瓶式(包括第一及第二小瓶，第一小瓶中含有凍乾之至少一種抗－IL－12抗體，欲與第二小瓶中所含之水、於水性稀釋劑中之防腐劑及/或賦形劑，較佳為磷酸鹽緩衝劑及/或食鹽水與選定鹽再組成)提供病患。無論單一溶液瓶或需要再組成之雙瓶均可多次再使用及足以供應單一或多次循環之病患治療，因而可提供較目前所用更為方便之治療方法。
本發明所請求之製造元件係用於即時至24小時或更長時間投與病患。因此，本發明所請求之製造元件為病患提供顯著之優點。本發明調配物可視需要安全地貯存於約2至約40℃之溫度且長期保持蛋白質之生物活性，因而容許於標籤上指示該溶液可於6、12、18、24、36、48、72、或96小時或更長時間保持及/或使用。若使用防腐性稀釋劑，則該標籤可將長達至少1－12個月、半年、一年半、及/或兩年之用途列入。
含有本發明至少一種抗－IL－12抗體之諸溶液可利用於水性稀釋劑中混合至少一種抗體之方法予以製備。混合之進行係使用習知之溶解及混合程序。欲製備適當稀釋劑時，舉例而言，係便於水或緩衝劑中之測定量之至少一種抗體結合，其量足以提供所需濃度之蛋白質及視需要之防腐劑或緩衝劑。此程序之各種變化為一般熟習此項技藝者所認知。例如，各成分之添加順序、是否使用附加之添加劑、製備調配物之溫度與pH，係使所用投與濃度及方式最適化之所有因素。
所請求之產品可呈澄清溶液或呈雙瓶式(包括第一及第二小瓶，第一小瓶中含有凍乾的至少一種抗－IL－12抗體，欲與第二小瓶中所含之水性稀釋劑再組成)提供病患。無論單一溶液瓶或需要再組成之雙瓶均可多次再使用及足以供應單一或多次循環之病患治療，因而可提供較目前所用更為方便之治療方法。
所請求之產品可經由提供藥房、診所、或其他此等機構及場所澄清溶液或雙瓶(包括第一及第二小瓶，第一小瓶中含有凍乾之至少一種抗－IL－12抗體，欲與第二小瓶中所含之水性稀釋劑再組成)而間接提供給病患。此情形下之澄清溶液容量可為1升或甚至更多，提供大貯存器以自其中一或多次取得小量之該至少一種抗體溶液，供裝入由藥房或診提供其客戶及/或病患之小瓶中。
包含單一小瓶系之許可裝置包括遞送溶液用之筆型注射器裝置，例如，由Becton Dickensen(Franklin Lakes,NJ,www.bectondickenson.com)；Disetronic(Burgdorf,Switzerland,www.disetronic.com)；Bioject,Portland,Oregon(www.bioject.com)；National Medicl Products,Weston Medical(Peterborough,UK,www.weston－medical.com)；Medi－Ject Corp(Minneapolis,MN,www.mediject.com)製造或開發之BD Pens、BD Autojector、Humaject、NovoPen、B－DPen、AutoPen、與OptiPen、GenotropinPen、Genotronorm Pen、HumatroPen、Reco－Pen、Roferon Pen、Biojector、Iject、J－tip Needle－Free Injector、Intraject、Medi－Ject、及類似之適當裝置。包含雙瓶系之許可裝置包括於遞送再組成溶液用之濾筒中再組成凍乾藥物之彼等筆型注射器系統，例如HumatroPen。其他適當裝置之實例包括已填充藥物之注射器、自動注射器、無針頭注射器、及無針頭IV輸送器。
本發明所請求之產品包含包裝材料，其除了提供控管當局要求的資訊外，尚提供可使用產品的條件。關於雙瓶、濕/乾產品，本發明包裝材料提供病患於水性稀釋劑中再組成該至少一種抗－IL－12抗體以形成溶液，及於2－24小時或更長時間內使用該溶液等指示。關於單瓶、溶液產品，標籤上指示該溶液可於2－24小時或更長時間內使用。本發明請求之產品係供人類醫藥產品用途。
本發明之調配物可利用使至少一種抗－IL－12抗體與選定之緩衝劑(較佳為含食鹽水或選定鹽之磷酸鹽緩衝劑)混合之方法予以製備。於水性稀釋劑中混合至少一種抗－IL－12抗體與緩衝劑之進行係使用習知之溶解及混合程序。欲製備適當調配物時，舉例而言，係使於水或緩衝劑中之測定量之至少一種抗－IL－12抗體，與於水中之所需緩衝劑結合，彼等用量足以提供所需濃度之蛋白質及緩衝劑。此程序之各種變化為一般熟習此項技藝者所認知。例如，各成分之添加順序、是否使用附加之添加劑、製備調配物之溫度與pH，係使所用投與濃度及方式最適化之所有因素。
所請求之安定或防腐調配物可呈澄清溶液或呈雙瓶式(包括第一及第二小瓶，第一小瓶中含有凍乾的至少一種抗－IL－12抗體，欲與第二小瓶中所含之於水性稀釋劑中之防腐劑或緩衝劑再組成)提供病患。無論單一溶液瓶或需要再組成之雙瓶均可多次再使用及足以供應單一或多次循環之病患治療，因而可提供較目前所用更為方便之治療方法。
安定抗－IL－12抗體之其他調配物或方法可能產生含有該抗體的凍乾粉劑之非澄清溶液。非澄清溶液為含有微粒懸浮液之調配物，該等微粒為含有可變大小及已知為徵球體、微粒、奈米微粒、奈米球體、或脂質體各種結構之抗－IL－12抗體之組成物。如U.S.4,589,330之教示，含有活性劑之此等相當均質、實質上為球體之微粒調配物，可利用使含有活性劑及聚合物之水相與非水相接觸，隨後蒸發該非水相，導使水相中之微粒結合而形成。多孔微粒可使用含有活性劑之第一相及分散於連續溶劑中之聚合物，利用冷凍乾燥法或如U.S.4,818,542教示之稀釋－萃取－沉澱法，從懸浮液中去除該溶劑予以製備。供此等製備用之較佳聚合物為選自下述組群之天然或合成共聚物或聚合物：明膠洋菜、澱粉、阿拉伯半乳聚糖、白蛋白、膠原蛋白、聚乙醇酸、聚乳酸、乙交酯－L(－)內交酯聚(ε－己內酯、聚(ε－己內酯－CO－乳酸)、聚(ε－己內酯－CO－乙醇酸)、聚(β－羥基丁酸)、聚環氧乙烷、聚乙烯、聚(烷基－2－氰基丙烯酸酯)、聚(羥乙基甲基丙烯酸酯)、聚醯胺類、聚(胺基酸)、聚(2－羥乙基DL－天冬醯胺)、聚(酯脲)、聚(L－苯基丙胺酸/乙二醇/1,6－二異氰酸醯己烷)及聚(甲基丙醯酸甲酯)。特佳之聚合物為聚酯類，例如聚乙醇酸、聚乳酸、乙交酯－L(－)內交酯聚(ε－己內酯、聚(ε－己內酯－CO－乳酸)、及聚(ε－己內酯－CO－乙醇酸。用於溶解聚合物及/或活性劑之溶劑包括：水、六氟異丙醇、二氯甲烷、四氫呋喃、己烷、苯、或六氟丙酮倍半水合物。分散含活性劑相與第二相之方法可包括強壓迫使該第一相通過噴嘴之小孔而發生液滴形成作用。
乾燥粉劑調配物可由凍乾法以外之方法產生，例如利用噴霧乾燥法，或利用蒸發之溶劑萃取法，或使結晶組成物沉澱，隨後以一或多個步驟去除水性或非水性溶劑之方法。噴霧乾燥抗體製劑之製備教示於U.S.6,019,968。以抗體為主之乾燥粉劑組成物，可於提供呼吸用乾燥粉劑之條件下，噴霧乾燥於溶劑中之抗體與視需要之賦形劑之溶液或漿狀物而製造。溶劑可包含極性化合物，例如易於乾燥之水與乙醇。抗體安定性可利用在缺氧條件下(例如於氮氣層下)或使用氮氣作為乾燥用氣體進行噴霧乾燥程序而提升。另一相當乾燥之調配物係許多多孔微細結構分散於懸浮液介質中(其典型地含有如WO 9916419教示之氫氟鏈烷推進劑)之分散體。此安定分散體可使用計劑量吸入器投與至病患肺部。用於商業製造噴霧乾燥醫藥物之設備係由Buchi Ltd.或Niro Corp.製造。
如此項技藝中悉知，本文敘述之於安定或防腐調配物或溶液中之至少一種抗－IL－12抗體，可經由多種遞送方法，包括SC或IM注射；經皮、肺、經黏膜、植入、滲透幫浦、匣、微幫浦、或熟習此項技藝者認知之其他方式，根據本發明投與病患。
治療應用
本發明亦提供一種用於調節或治療細胞、組織、器官、動物、或病患之至少一種IL－12相關疾病之方法，如此項技藝中已知或如本文所述，使用本發明之至少一種IL－12抗體，例如，以治療有效量之IL－12抗體投與或使其與細胞、組織、器官、動物、或病患接觸。本發明亦提供一種用於調節或治療細胞、組織、器官、動物、或病患之至少一種IL－12相關疾病之方法，該等疾病包括，惟不限於下述至少一者：肥胖症、免疫相關疾病、心血管疾病、感染性疾病、惡性疾病或神經性疾病。
本發明亦提供用於調節或治療細胞、組織、器官、動物、或病患之至少一種IL－12免疫相關疾病之方法，該等疾病包括，惟不限於下述至少一者：類風濕性關節炎、幼年型類風濕性關節炎、全身性幼年型類風濕性關節炎、牛皮癬性關節炎、僵直性脊椎炎、胃潰瘍、血清陰性關節病變、骨關節炎、骨溶解、骨科植入材料之無菌鬆脫、炎性腸道疾病、潰瘍性結腸炎、全身紅斑性狼瘡、抗磷脂症候群、虹膜睫狀體炎/葡萄膜炎/視神經炎、自發性肺纖維變性、全身性血管炎/韋格內氏肉芽腫病、類肉瘤症、睪丸炎/輸精管接合術程序、過敏性/異位性疾病、氣喘、過敏性鼻炎、濕疹、過敏型接觸性皮膚炎、過敏性結膜炎、過敏性肺炎、移植、器官移植排斥反應、移植物抗宿主疾病、全身性炎症反應症候群、敗血症候群、革蘭氏陽性敗血症、革蘭氏陰性敗血症、培養物陰性敗血症、真菌性敗血症、嗜中性白血球減少造成的發燒、尿性敗血症、腦膜炎雙球菌血症、外傷/出血、灼傷、游離輻射暴露、急性胰臟炎、成人呼吸窘迫症候群、類風濕性關節炎、酒精誘發之肝炎、慢性炎性病變、類肉瘤症、克隆氏症、鐮狀細胞性貧血、糖尿病、腎病、異位性疾病、過敏反應、過敏性鼻炎、花粉熱、常年性鼻炎、結膜炎、子宮內膜異位症、氣喘、蕁麻疹、全身過敏性反應、皮膚炎、惡性貧血、溶血性疾病、血小板減少症、任何器官或組織之移植物排斥反應、腎臟移植排斥反應、心臟移植排斥反應、肝臟移植排斥反應、胰臟移植排斥反應、肺臟移植排斥反應、骨髓移植(BMT)排斥反應、皮膚同種異體移植排斥反應、軟骨移植排斥反應、骨骼移植物排斥反應、小腸移植排斥反應、胎兒胸腺植入物排斥反應、副甲狀腺移植排斥反應、任何器官或組織之異種移植排斥反應、同種異體移植排斥反應、抗－受體過敏性反應、葛瑞夫氏症、雷諾氏症、B型胰島素抗阻性糖尿病、氣喘、重肌無力症、抗體傳介之細胞毒性、III型過敏性反應、POEMS症候群(多神經病變、器官腫大、內分泌病變、單株免疫球蛋白病變、及皮膚變化症候群)、多神經病變、器官腫大、內分泌病變、單株免疫球蛋白病變、皮膚變化症候群、抗磷脂症候群、天皰瘡、硬皮病、混合性結締組織疾病、自發性艾迪生氏症、糖尿病、慢性活動性肝炎、原發型膽汁性肝硬化、白斑病、血管炎、MI後心切開術症候群、IV型過敏、接觸性皮膚炎、過敏性肺炎、同種異體移植排斥反應、由於細胞內有機體造成之肉芽腫、藥物過敏、代謝性/自發性威爾遜氏症、血色素沉著症、α－1－抗胰蛋白酶缺乏症、糖尿病性視網膜病變、橋本氏甲狀腺炎(hashimoto's甲狀腺炎)、骨質疏鬆症、下視丘－腦下垂體－腎上腺軸評估、原發型膽汁性肝硬化、甲狀腺炎、腦脊髓炎、惡病質、囊胞性纖維症、新生兒慢性肺疾、慢性阻塞性肺疾(COPD)、家族性噬血性淋巴組織細胞瘤病、皮膚病症狀、牛皮癬、禿髮症、腎病症候群、腎炎、腎絲球性腎炎、急性腎衰竭、血液透析、尿毒症、毒性、初期子癇、okt3治療、抗－cd3治療、細胞介素治療、化學治療、輻射治療(例如，包括惟不限於，無力、貧血、惡病質等)、慢性水楊酸中毒等。參閱，例如，the Merck Manual,12th－17th Editions,Merck & Company,Rahway,NJ(1972,1977,1982,1987,1992,1999)；Pharmacotherapy Handbook,Wells et al.,eds.,Second Edition,Appleton and Lange,Stamford,Conn.(1998,2000)；各者全部內容併入本文以資參考。
本發明亦提供用於調節或治療細胞、組織、器官、動物、或病患之至少一種心血管疾病之方法，該等疾病包括，惟不限於下述至少一者：心臟頓抑症候群、心肌梗塞、充血性心臟衰竭、中風、缺血性中風、出血、動脈硬化症、動脈粥樣硬化、再狹窄、糖尿病性動脈硬化症、高血壓、動脈性高血壓、腎血管性高血壓、昏厥、休克、心血管系統性梅毒、心臟衰竭、肺原性心臟病、原發性肺動脈高壓症、心律不整、異位性心房搏動、心房撲動、心房纖維性顫動(持續性或陣發性)、灌流後症候群、體外循環炎性反應、雜亂性或多發性心房頻脈、規則性狹窄QRS頻脈、特異性心律不整、心室顫動、希氏(His)束心律不整、房室傳導阻滯、分枝束阻滯、缺血性心肌衰弱症、冠狀動脈疾病、心絞痛、心肌梗塞、心肌症、擴張型充血性心肌症、窄縮性心肌症、心瓣性心臟病、心內膜炎、心包膜疾病、心臟腫瘤、主動脈瘤與周邊動脈瘤、主動脈剝離、主動脈發炎、腹主動脈及其分枝閉塞、周邊血管疾病、閉塞性動脈疾病、周邊動脈粥樣硬化症、血栓閉鎖性血管炎、功能性周邊動脈疾病、雷諾氏(Raynaud)現象與疾病、手足發紺、肢端紅痛症、靜脈疾病、靜脈栓塞、靜脈曲張、動靜脈廔管、淋巴水腫、脂性水腫、不穩定型心絞痛、再灌注傷害、心臟搭橋手術後症候群、缺血性再灌注傷害等。此等方法可視需要包括投與需要該等調節、處理或治療之細胞、組織、器官、動物或病患有效量之包含至少一種抗－IL－12抗體之之組成物或醫藥組成物。
本發明亦提供用於調節或治療細胞、組織、器官、動物、或病患之至少一種IL－12相關感染性疾病之方法，該等疾病包括，惟不限於下述至少一者：急性或慢性細菌性感染、急性及慢性寄生性或感染性過程(包括細菌、病毒及真菌感染)、HIV感染/HIV神經病變、腦膜炎、肝炎(例如，A、B或C型等)、敗血性關節炎、腹膜炎、肺炎、會厭炎、大腸桿菌0157：h7、溶血性尿毒症候群/血栓性血小板低下紫斑症、瘧疾、出血性登革熱、利什曼原蟲症、痳瘋、中毒性休克症候群、鏈球菌性肌炎、氣壞疽、結核桿菌症、鳥型胞內分枝桿菌感染、卡氏肺囊蟲肺炎、盆腔發炎性疾病、睪丸炎/副睪丸炎、退伍軍人桿菌症、萊姆症、a型流行性感冒、EB病毒、病毒相關性噬血症候群、病毒性腦炎/無菌性腦膜炎等。
本發明亦提供用於調節或治療細胞、組織、器官、動物、或病患之至少一種IL－12相關惡性疾病之方法，該等疾病包括，惟不限於下述至少一者：白血病、急性白血病、急性淋巴胚細胞性白血病(ALL)、急性淋巴細胞性白血病、B細胞、T細胞或FAB ALL、急性骨髓白血病(AML)、急性骨髓細胞性白血病、慢性骨髓細胞性白血病(CML)、慢性淋巴細胞性白血病(CLL)、髮狀細胞性白血病、骨髓發育不良症候群(MDS)、淋巴瘤、何杰金氏症(Hodgkin’s disease)、惡性淋巴瘤、非何杰金氏淋巴瘤、伯奇氏淋巴瘤(Burkitt’s lymphoma)、多發性骨髓瘤、卡波西氏肉瘤症(Kaposi’s sarcoma)、大腸直腸癌、胰臟癌、鼻咽癌、惡性組織球增生症、腫瘤伴隨症候群/惡性高血鈣症、硬塊腫瘤、膀胱癌、乳癌、結腸直腸癌、子宮內膜癌、頭癌、頸癌、遺傳性非息肉性癌、何杰金氏淋巴瘤、肝癌、肺癌、非小細胞肺癌、卵巢癌、胰臟癌、前列腺癌、腎細胞癌、睪丸癌、腺癌、肉瘤癌、惡性黑色素瘤、血管瘤、轉移性疾病、與癌症相關之骨質流失、與癌症相關之骨疼痛等。
本發明亦提供用於調節或治療細胞、組織、器官、動物、或病患之至少一種IL－12相關神經性疾病之方法，該等疾病包括，惟不限於下述至少一者：神經退化性疾病、多發性硬化症、偏頭痛、愛滋病失智複合症、髓鞘脫失性疾病例如多發性硬化症與急性橫貫性脊髓炎；錐體外神經及小腦失調症例如皮質脊髓系傷害；腦部基底神經節失調症；運動機能亢進性疾病例如杭丁頓氏舞蹈症(Huntington's Chorea)與老年癡呆症；藥物誘發之運動失調症例如由封阻CNS多巴胺受體藥物誘發之疾病；運動不足性運動失調症例如巴金森氏症；進行性上眼神經核麻痺症；小腦結構性損害；脊髓小腦退化症，例如脊髓性運動失調症、弗利德來氏運動失調症(Friedreich's ataxia)、小腦皮質退化症、多系統退化症(Mencel、Dejerine－Thomas、Shi－Drager、與Machado－Joseph)；全身性失調症[來福山氏症(Refsum's disease)、β脂蛋白血缺乏症、運動失調症、毛細管擴張失調症、與粒線體性多系統退化症]；髓鞘脫失性核心失調症例如多發性硬化症、急性橫貫性脊髓炎；及運動單位失調症例如神經性肌肉萎縮症(前角細胞退化症，例如肌萎縮性脊髓側索硬化症、嬰兒脊髓性肌肉萎縮症與青少年脊髓性肌肉萎縮症)；阿滋海默氏症；中年唐氏症候群(Down's Syndrome)；泛發性路易氏體症；路易氏體型老年癡呆症；韋科氏症候群(Wernicke－Korsakoff syndrome)；慢性酗酒；庫賈氏(Creutzfeldt－Jakob)症；亞急性硬化泛腦炎、何斯巴氏(Hallerrorden－Spatz)症；及拳擊性失智症、神經創傷性傷害(例如，脊椎神經受傷、腦受傷、腦震盪、與重複性腦震盪)；疼痛；炎性疼痛；孤獨症；抑鬱症；中風；認知功能障礙；癲癇等。此等方法可視需要包括對需要此等調節、處理或治療之細胞、組織、器官、動物或病患投與有效量之包含至少一種TNF抗體或特定部分或變異體之至少一種組成物或醫藥組成物。參閱，例如，the Merck Manual,16t h Edition,Merck & Company,Rahway,NJ(1992)。
本發明亦提供用於調節或治療細胞、組織、器官、動物、或病患之至少一種IL－12相關創傷、外傷或組織傷害或相關慢性症狀之方法，該等症狀包括，惟不限於下述至少一者：與口腔外科相關之身體傷害或外傷包括牙周外科處置、拔牙、根管治療、植入人工牙根、使用假牙；或其中創傷係選自下述組群者：無菌創傷、挫傷、切傷、裂傷、非滲透性創傷、開放性創傷、滲透性創傷、貫穿性創傷、刺傷、敗血性創傷、梗塞及皮下創傷；或其中創傷係選自下述組群者：缺血性潰瘍、壓瘡、瘺管、嚴重叮傷、燒燙傷與取移植物處創傷；或其中創傷為鵝口瘡、外傷傷口或與疱疹相關之創傷。
創傷及/或潰瘍通常被發現從皮膚或於黏膜表面突出或為器官梗塞的結果(「中風」)。創傷可能係軟組織缺損或損害或潛在症狀的結果。於本說明書中，「皮膚」一詞係有關動物(包括人類)身體之最外層表面，包括完整或幾乎完整之皮膚以及受傷之皮膚表面。「黏膜」一詞係有關未受傷害或受傷害之動物(例如人類)黏膜，可為口腔、頰、耳、鼻、肺、眼、胃腸、陰道、或直腸黏膜。sore
於本說明書中，「創傷」表示組織結構正常健全性瓦解之身體傷害，其亦意欲涵蓋「瘡」、「損傷」、「壞死」、與「潰瘍」。通常，「瘡」一詞為皮膚或黏膜幾乎任何損傷之通稱；「潰瘍」一詞為器官或組織表面之局部缺損、或鑿孔，係由於壞死組織蛻皮所產生。損傷一般係關於任何組織缺損。壞死與由感染、受傷、發炎或梗塞產生之死組織相關。
本說明書中所用「創傷」一詞代表任何創傷(見下文之創傷分類)及於復原過程之任何特定階段，包括開始任何復原前或甚至產生特定創傷(如外科切開手術)前之階段(預防治療)。可根據本發明預防及/或治療之創傷實例為，例如，無菌創傷、挫傷、切傷、裂傷、非滲透性創傷(亦即，皮膚未被破壞，惟下面結構受傷之創傷)、開放性創傷、滲透性創傷、貫穿性創傷、刺傷、敗血性創傷、皮下創傷等。瘡之實例為褥瘡、鵝口瘡、鉻黃瘡、唇疱疹、壓瘡等。潰瘍之實例為，例如，消化性潰瘍、十二指腸潰瘍、胃潰瘍、痛風性潰瘍、糖尿病性潰瘍、高血壓缺血性潰瘍、鬱血性皮膚潰瘍、腿部裂口瘡(靜脈曲張性潰瘍)、舌下潰瘍、黏膜下潰瘍、症狀性潰瘍、營養性潰瘍、熱帶性潰瘍、及軟下疳[例如，由淋病引致者(包括尿道炎、子宮頸內膜炎與直腸炎)]。可根據本發明成功地治療之與創傷或瘡相關之症狀為燒傷、炭疽病、破傷風、氣性壞疽、猩紅熱(scalatina)、丹毒、鬚瘡、毛囊炎、傳染性膿疱症、或大疱性膿疱症等。「創傷」與「潰瘍」及「創傷」與「瘡」等詞之使用間常有某些重疊，再者，彼等名詞常常隨意使用。因此，如上述，於本說明書中，「創傷」一詞涵蓋「潰瘍」、「損傷」、「瘡」與「梗塞」等名詞，除非另行說明，否則彼等可隨意使用。
根據本發明擬治療之創傷種類亦包含(i)一般性創傷，例如，外科手術、外傷、感染性、缺血性、熱、化學及水泡性創傷；(ii)口腔之特定創傷，例如，拔牙後創傷、根管治療創傷(尤其是與治療囊腫與膿腫相關者)、潰瘍與細菌性、病毒性或自體免疫來源等損傷、機械性、化學性、熱、感染性與苔蘚樣創傷；其詳細實例為疱疹性潰瘍、口腔炎口瘡、急性壞死潰瘍性牙齦炎與口腔燒灼症候群；及(iii)皮膚之創傷，例如，腫瘤、燒傷(例如化學性燒傷、燒燙傷)、損傷(細菌性、病毒性、自體免疫性)、叮傷與外科切開手術創傷。創傷之另一分類方式如下：(i)由於外科切開手術、小擦傷與小叮傷之小組織喪失、或(ii)重大之組織喪失。後一組群包括缺血性潰瘍、壓瘡、瘺管、裂傷、嚴重叮傷、燒燙傷與取移植物處創傷(於軟組織與硬組織中)及梗塞。
與本發明有重要關連性之其他創傷為例如缺血性潰瘍、壓瘡、瘺管、嚴重叮傷、燒燙傷與取移植物處創傷等。缺血性潰瘍與壓瘡通常係僅緩慢復原之創傷，尤其於彼等病例中，改善且更迅速之復原過程對病患當然極為重要。再者，如果復原之進行改善又更迅速，則治療罹患此等創傷病患涉及的成本將明顯地減少。
取移植物處創傷係例如，發生於與從身體的一部分取出硬組織至身體的另一部分(例如移植)相關之創傷。此等手術造成的創傷非常疼痛，因此改善之復原過程將最具價值。本文所用「皮膚」一詞極為廣義，涵蓋皮膚的表皮層－於皮膚表面多少有些受傷之病例中－亦涵蓋皮膚的真皮層。除了角質層外，皮膚的表皮層為最外(上皮)層，皮膚之較深結締組織層稱為真皮。
於上文列舉之IL－12相關疾病中，本發明亦提供用於調節或治療細胞、組織、器官、動物、或病患之克隆氏症、牛皮癬、及多發性硬化症之方法，包括惟不限於免疫相關疾病、心血管疾病、感染性、惡性及/或神經性疾病之至少一者。此等方法可視需要包括投與需要此等調節、處理或治療之細胞、組織、器官、動物或病患有效量之包含至少一種抗－IL－12抗體之至少一種組成物或醫藥組成物。
本發明之任何方法可包括投與需要此等調節、處理或治療之細胞、組織、器官、動物或病患有效量之包含至少一種抗－IL－12抗體之組成物或醫藥組成物。此等方法可視需要進一步包括共同投與或組合療法以治療此等疾病或失調症，其中進一步包括該至少一種抗－IL－12抗體、其特定部分或變異體之投與之前、同時及/或之後，投與選自於下之至少一者：至少一種TNF拮抗劑[例如，惟不限於，TNF化學或蛋白質拮抗劑、TNF單株或多株抗體或片段、可溶性TNF受體(例如，p55、p70或p85)或片段、其融合多肽、或小分子TNF拮抗劑，例如，TNF結合蛋白質I或II(TBP－1或TBP－II)、內利蒙單抗、因福昔單抗、恩特西普(EnbrelT M )、阿達姆拉(adalimulab)(HumiraT M )、CDP－571、CDP－870、阿非莫單抗、來那西普等]、抗風濕藥物[胺甲喋呤、金諾芬、金硫葡糖、硫唑嘌呤、硫代蘋果酸金鈉、硫酸羥基氯奎、來氟米特、硫氮磺胺啶]、肌肉鬆弛劑、麻醉藥、非類固醇消炎藥物(NSAID)、止痛劑、麻醉劑、鎮靜劑、局部麻醉劑、神經肌肉阻斷劑、抗微生物劑[例如，胺基糖苷、抗真菌藥、抗寄生蟲藥、抗病毒劑、卡巴佩能、頭孢菌素、氟喹啉酮、大環內酯、青黴素、磺胺、四環素、另一抗微生物劑]、抗牛皮癬劑、皮質類固醇、肌肉增強劑、糖尿病相關劑、礦物質、營養物質、甲狀腺劑、維生素、鈣相關激素、止瀉劑、止咳劑、止吐劑、抗潰瘍劑、瀉藥、抗凝血劑、紅血球生成素(例如，阿法依泊汀)、非格司亭(例如，G－CSF、Neupogen)、沙格司亭(GM－CSF、白血球素)、免疫、免疫球蛋白、免疫抑制劑(例如，巴利昔單抗、環孢素、達利珠單抗)、生長激素、激素替代藥物、雌激素受體調節劑、散瞳劑、睫狀肌鬆弛劑、烷化劑、抗代謝物、有絲分裂抑制劑、放射性醫藥劑、抗憂鬱藥物、抗躁狂藥物、抗精神病藥物、抗焦慮劑、催眠藥、擬交感神經劑、興奮劑、多奈培齊、達可寧、氣喘藥物、β促效劑、吸入式類固醇、白三烯素抑制劑、甲基黃嘌呤、色甘酸、腎上腺素或類似物、阿法鏈道酶(Pulmozyme)、細胞介素或細胞介素拮抗劑。適當劑量為此項技藝中悉知。參見，例如，Wells et al.,eds.,Pharmacotherapy Handbook,2n d Edition,Appleton and Lange,Stamford,CT(2000)；PDR Pharmacopoeia,Tarascon Pocket Pharmacopoeia 2000,Deluxe Edition,Tarascon Publishing,Loma Linda,CA(2000)；Nursing 2001 Handbook of Drugs,2ls t edition,Springhouse Corp.,Springhouse,PA,2001；Health Professional’s Drug Guide 2001,ed.,Shannon,Wilson,Stang,Prentice－Hall,Inc,Upper Saddle River,NJ.；各該等文獻全部內容併入本文以資參考。
適用於本發明組成物、組合療法、共同投與、裝置及/或方法(進一步包含本發明之至少一種抗體、其特定部分及變異體)之TNF拮抗劑包含，惟不限於，抗TNF抗體(例如，上文界定之至少一種TNF拮抗劑)、其抗原結合片段、及與TNF專一性結合之受體分子；防止及/或抑制TNF合成、TNF釋放或其對標靶細胞的作用之化合物，例如沙利竇邁(thalidomide)、替尼達普(tenidap)、磷酸二酯酶抑制劑[例如，己酮可可豆鹼及咯利普蘭(rolipram)]、A2b腺苷受體促效劑及A2b腺苷受體促進劑；防止及/或抑制TNF受體傳訊作用之化合物，例如有絲分裂原活化蛋白質(MAP)激酶抑制劑；封阻及/或抑制膜TNF裂離之化合物，例如金屬蛋白酶抑制劑；封阻及/或抑制TNF活性之化合物，例如血管收縮素轉化酵素(ACE)抑制劑[例如，卡托普利(captopril)]；及封阻及/或抑制TNF製造及/或合成之化合物，例如MAP激酶抑制劑。
本文所用之「腫瘤壞死因子抗體」、「TNF抗體」、「TNF α抗體」、或其片段等，降低、封阻、抑制、消除或干擾試管內、原位及/或較佳為活體內之TNF α活性。例如，本發明之適當TNF人類抗體可結合TNF α及包含與TNF α專一性結合之抗TNF抗體、其抗原結合片段、及其特定突變體或功能部位。適當之TNF抗體或片段亦可降低、封阻、消除、干擾、防止及/或抑制TNF RNA、DNA或蛋白質合成、TNF釋放、TNF受體傳訊作用、膜TNF裂離、TNF活性、TNF製造及/或合成。
TNF抗體或拮抗劑之實例為嵌合型抗體cA2。可於本發明中使用之單株抗－TNF抗體之附加實例見述於此項技藝[參閱，例如，美國專利案5,231,024；Mller,A.et al .,Cytokine 2 (3)：162－169(1990)；美國申請案07/943,852(1992年9月11日提出申請)；Rathjenet al .,國際專利公告案WO 91/02078(1991年2月21日公告)；Rubinet al., EPO專利公告案0 218 868(1987年4月22日公告)；Yoneet al .,EPO專利公告案0 288 088(1988年10月26日)；Liang,et al .,Biochem.Biophys.Res.Comm.137 ：847－854(1986)；Meager,et al .,Hybridoma 6 ：305－311(1987)；Fendlyet al .,Hybridoma 6 ：359－369(1987)；Bringman,et al .,Hybridoma 6 ：489－507(1987)；及Hirai,et al.,J.Immunol.Meth.96 ：57－62(1987)；該等文獻全部內容併入本文以資參考]。
TNF 受體分子
用於本發明之較佳TNF受體分子為以高親和力與TNF α結合[參閱，例如，Feldmannet al .,國際專利公告案WO 92/07076(1992年4月30日公告)；Schallet al.,Cell 61 ：361－370(1990)；及Loetscheret al.,Cell 61 ：351－359(1990)，該等文獻全部內容併入本文以資參考]及視需要具有低免疫原性者。55 kDa(p55 TNF－R)與75 kDa(p75 TNF－R)TNF細胞表面受體特別可用於本發明。彼等受體之截短型，包含該等受體或其功能性部分之胞外功能部位(ECD)(參閱，例如，Corcoranet al.,Eur.J.Biochem.223 ：831－840(1994))，亦可用於本發明。TNF受體之截短型，包含ECD，已於尿中及血清中呈30 kDa及40 kDa TNF α抑制性結合蛋白被檢測出(Englemann,H.et al.,J.Biol.Chem..265 ：1531－1536(1990))。TNF受體多聚體分子與TNF免疫受體融合分子，及其衍生物與片段或部分，為可用於本發明方法及組成物中的TNF受體分子之附加實例。
用於本發明之TNF受體多聚體分子包含經由一或多個多肽連接子或其他非胜肽連接子[例如聚乙二醇(PEG)]連接的二或多個TNF受體之所有ECD或其功能部分。此等TNF免疫受體融合分子之實例為TNF受體/IgG融合蛋白。TNF免疫受體融合分子及其製法已見述於此項技藝[Lesslaueret al .,Eur.J.Immunol.21 ：2883－2886(1991)；Ashkenaziet al .,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 88 ：10535－10539(1991)；Peppelet al .,J.Exp.Med.174 ：1483－1489(1991)；Kollset al .,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 91 ：215－219(1994)；Butleret al .,Cytokine 6 (6)：616－623(1994)；Bakeret al .,Eur.J.Immunol.24 ：2040－2048(1994)；Beutleret al. ,美國專利案5,447,851；及美國申請案08/442,133(1995年5月16日提出申請)，各該等文獻全部內容併入本文以資參考]。製造免疫受體融合分子之方法亦見述於Caponet al., 美國專利案5,116,964；Caponet al., 美國專利案5,225,538；及Caponet al.,Nature 337 ：525－531(1989)，該等文獻全部內容併入本文以資參考。
細胞介素包含任何已知細胞介素。參閱，例如，CopewithCytokines.com。細胞介素拮抗劑包含，惟不限於，任何抗體、片段或模擬體、任何可溶性受體、片段或模擬體、任何小分子拮抗劑、或其任何組合。
治療處理
本發明之任何方法可包括治療由IL－12傳介的失調症之方法，該方法包括對需要此等調節、處理或治療之細胞、組織、器官、動物或病患投與有效量之含有至少一種抗－IL－12抗體之組成物或醫藥組成物。此等方法可視需要進一步包含用於治療該等疾病或失調症之共同投與或組合療法，其中該至少一種抗－IL－12抗體、其特定部分或變異體之投與進一步包括於其之前、同時、及/或之後，投與選自於下之至少一種藥物：抗感染藥物、心血管(CV)系統藥物、中樞神經系統(CNS)藥物、自律神經系統(ANS)藥物、呼吸道藥物、胃腸(GI)道藥物、激素藥物、供流體或電解質平衡用藥物、血液學藥物、抗腫瘤劑、免疫調節藥物、眼、耳或鼻用藥物、局部藥物、營養藥物等；至少一種TNF拮抗劑(例如，惟不限於TNF抗體或片段、可溶性TNF受體或片段、其融合蛋白或小分子TNF拮抗劑)、抗風濕藥物[胺甲喋呤、金諾芬、金硫葡糖、硫唑嘌呤、恩特西普、硫代蘋果酸金鈉、硫酸羥基氯奎、來氟米待、硫氮磺胺啶]、肌肉鬆弛劑、麻醉藥、非類固醇消炎藥物(NSAID)、止痛劑、麻醉劑、鎮靜劑、局部麻醉劑、神經肌肉阻斷劑、抗微生物劑[例如，胺基糖苷、抗真菌藥、抗寄生蟲藥、抗病毒劑、卡巴佩能、頭孢菌素、氟喹啉酮、大環內酯、青黴素、磺胺、四環素、另一抗微生物劑]、抗牛皮癬劑、皮質類固醇、肌肉增強劑、糖尿病相關劑、礦物質、營養物質、甲狀腺劑、維生素、鈣相關激素、止瀉劑、止咳劑、止吐劑、抗潰瘍劑、瀉藥、抗凝血劑、紅血球生成素(例如，阿法依泊汀)、非格司亭(例如，G－CSF、Neupogen)、沙格司亭(GM－CSF、白血球素)、免疫、免疫球蛋白、免疫抑制劑(例如，巴利昔單抗、環孢素、達利珠單抗)、生長激素、激素替代藥物、雌激素受體調節劑、散瞳劑、睫狀肌鬆弛劑、烷化劑、抗代謝物、有絲分裂抑制劑、放射性醫藥劑、抗憂鬱藥物、抗躁狂藥物、抗精神病藥物、抗焦慮劑、催眠藥、擬交感神經劑、興奮劑、多奈培齊、達可寧、氣喘藥物、β促效劑、吸入式類固醇、白三烯素抑制劑、甲基黃嘌呤、色甘酸、腎上腺素或類似物、阿法鏈道酶(Pulmozyme)、細胞介素或細胞介素拮抗劑。本文呈現之各該等藥物，包括調配物、徵兆、劑量及投與(參閱，例如，Nursing 2001 Handbook of Drugs,21s t edition,Springhouse Corp.,Springhouse,PA,2001；Health Professional’s Drug Guide 2001,ed.,Shannon,Wilson,Stang,Prentice－Hall,Inc,Upper Saddle River,NJ；Pharmcotherapy Handbook,Wells et al.,ed.,Appleton & Lange Stamford,CT；各者全部內容併入本文以資參考)。
典型地，病理症狀之治療藉由投與有效劑量之至少一種抗－IL－12抗體組成物即可達成，視組成物中所含活性劑之比活性而定，平均而言，其劑量為每公斤病患體重每劑為至少約0.01至500毫克之至少一種抗－IL－12抗體，較佳為每公斤病患體重每單次或多次投與至少約0.1至100毫克抗體。或者，有效血清濃度可包含每單次或多次投與0.1至5000微克/毫升血清濃度。適當劑量為醫藥從業者已知及，當然，視特定疾病狀態、投與組成物之比活性、及進行治療的特定病患而不同。有些情形下，為了達到所需治療量，可能需要提供重複投與，亦即，特定偵測或計量劑量之重複個別投與，至達到所需日劑量或效果為止。
較佳劑量可視需要包含0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99及/或100－500毫克/公斤/投與，或其中任何範圍、數值或分率，或每單次或多次投與達到0.1、0.5、0.9、1.0、1.1、1.2、1.5、1.9、2.0、2.5、2.9、3.0、3.5、3.9、4.0、4.5、4.9、5.0、5.5、5.9、6.0、6.5、6.9、7.0、7.5、7.9、8.0、8.5、8.9、9.0、9.5、9.9、10、10.5、10.9、11、11.5、11.9、12、12.5、12.9、13.0、13.5、13.9、14.0、14.5、14.9、15、15.5、15.9、16、16.5、16.9、17、17.5、17.9、18、18.5、18.9、19、19.5、19.9、20、20.5、20.9、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、96、100、200、300、400、500、600、700、800、900、1000、1500、2000、2500、3000、3500、4000、4500、及/或5000微克/毫升血清之血清濃度，或其中任何範圍、數值或分率。
或者，所投與之劑量可視已知因素而不同：例如特定製劑之藥效特徵、其投與方式及途徑；接受者的年齡、健康、及體重；症狀的性質與程度、同時治療之種類、治療頻率、及所需效果。通常，活性成分之劑量每公斤體重可為約0.1至100毫克。欲獲得所需結果，每次投與或持續釋放形式中一般為每公斤體重0.1至50毫克，較佳為約0.1至10毫克。
治療人類或動物之非限制實例可為提供0.01至100毫克/公斤至少一種本發明抗體作為一次或定期劑量，例如，於第1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36’37、38、39、或40天之至少一者，或替代或附加地，於第1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、或52週之至少一者，或替代或附加地，第1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、或20年之至少一者，或其任何組合，使用0.5、0.9、1.0、1.1、1.5、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、40、45、50、60、70、80、90或100毫克/公斤之單一、注入或重複劑量。
適用於內部投與之劑量型(組成物)通常每單位或容器含有約0.001毫克至約500毫克活性成分。於彼等醫藥組成物中，活性成分之含量，以組成物總重計，通常為約0.5－99.999重量%。
供非經腸投與時，可將抗體調配為與醫藥上可接受之非經腸載劑組合或分開提供之溶液、懸浮液、乳液、粒劑、粉劑、或凍乾粉劑。該等載體之實例為水、食鹽水、林格氏溶液、葡萄糖溶液、及1－10%人類血清白蛋白。亦可使用微脂粒及非水性載體例如固定油類。載體或凍乾粉劑可含維持等張性(例如，氯化鈉、甘露糖醇)及化學安定性(例如，緩衝劑及防腐劑)之添加劑。此調配物利用已知或適當技術進行滅菌。
適當醫藥載劑敘述於最新版之Remington’s Pharmaceutical Sciences,A.Osol，其為此領域之標準參考書。
替代投與
根據本發明，可使用許多已知及已開發之方式投與醫藥有效量之本發明之至少一種抗－IL－12抗體。於下文說明書中雖係使用肺部投與，惟亦可根據本發明使用其他方式而獲得適當結果。本發明之抗－IL－12抗體可於載劑中呈溶液、乳液、膠體、或懸浮液、或呈乾燥粉劑，使用適用於吸入法或本文所述或此項技藝中已知之其他方式投與之任何各種裝置及方法予以遞送。
非經腸調配物及投與
供非經腸投與用之調配物可含常見賦形劑無菌水或食鹽水、聚烷二醇例如聚乙二醇、植物來源的油類、氫化萘類等。注射用水性或油性懸浮液可使用適當乳化劑或濕潤劑及懸浮劑，根據已知方法予以製備。注射用之製劑可為無毒、非經口投與之稀釋劑，例如水性溶液或於溶劑中之無菌注射用溶液或懸浮液。至於所用載體或溶劑，容許使用水、林格氏溶液、等張食鹽水等；至於一般溶劑或懸浮溶劑，可使用無菌之不揮發油。欲達彼等目的，可使用任何種類之不揮發油及脂肪酸，包括天然或合成或半合成脂油或脂肪酸；天然或合成或半合成之單－或二－或三－酸甘油酯類。非經腸投與為此項技藝中已知及包含，惟不限於，習知之注射方式、如美國專利案5,851,198敘述之氣壓式無針注射裝置、及如美國專利案5,839,446敘述之雷射穿孔器裝置，其全部內容併入本文以資參考。
替代遞送
本發明進一步有關利用下述遞送方式投與至少一種抗－IL－12抗體：非經腸、經皮下、肌內、靜脈內、關節內、支氣管內、腹內、囊內、軟骨內、腔內、體腔內、小腦內、腦室內、結腸內、頸管內、胃內、肝內、心肌內、骨內、骨盆內、內包內、腹膜內、胸膜內、前列腺內、肺內、直腸內、腎內、視網膜內、椎管內、滑膜內、胸內、子宮內、膀胱內、病灶內、椎注、陰道內、直腸、頰、舌下、鼻內、或經皮等方式。可製備至少一種抗－IL－12抗體組成物特別是呈液體溶液或懸浮液形式，供非經腸(皮下、肌內或靜脈內)或任何其他投與用；特別是呈半固體形式(例如，惟不限於，霜劑及栓劑)，供陰道或直腸投與用；特別是呈錠劑或膠囊形式，供頰內或舌下投與用；特別是呈粉劑、鼻滴劑、氣溶膠或特定製劑形式，供經鼻投與用；或特別是呈凝膠、軟膏、洗液、懸浮液或貼片遞送系形式[其中含有化學促進劑例如二甲亞碸，以將皮膚結構改質或增加皮膚貼片之藥物濃度[Junginger,et al.In“Drug Permeation Enhancement”；Hsieh,D.S.,Eds.,pp.59－90(Marcel Dekker,Inc.New York 1994，其全部內容併入本文以資參考)；或含有氧化劑俾使含蛋白質及胜肽之調配物施敷於皮膚(WO 98/53847)，或施加電場產生短暫遞送路徑(例如電穿孔法)；或增加帶電藥物透過皮膚之運動性(例如離子導入法)；或使用超音波(例如超音波導入法)(美國專利案4,309,989與4,767,402)]，供經皮投與用(上述專利案及文獻全部內容併入本文以資參考)。
肺/鼻投與
供肺部投與時，較佳為，遞送有效粒度之至少一種抗－IL－12抗體組成物到達肺或竇之下呼吸道。根據本發明，可利用此項技藝中已知供吸入投與治療劑用之任何各種吸入或鼻用裝置來遞送至少一種抗－IL－12抗體。能將氣溶膠化之調配物沉積於病患竇腔或肺泡中之彼等裝置包括計劑量之吸入器、霧化器、乾粉發生器、噴霧器等。適用於引導抗體之經肺或鼻投與之其他裝置亦為此項技藝中已知。所有此等裝置均可使用適用於將抗體分佈於氣溶膠中供投與用之調配物。此等氣溶膠可由溶液(水性或非水性)或固體顆粒組成。
計劑量吸入器如Ventolin計劑量吸入器，通常使用推進劑氣體，及於吸氣時需要促動(參閱，例如，WO 94/16970、WO 98/35888)。乾燥粉劑吸入器如TurbuhalerT M (Astra)、Rotahaler(Glaxo)、Diskus(Glaxo)、SpirosT M 吸入器(Dura)、由Inhale Therapeutics銷售之裝置、及Spinhaler粉劑吸入器(Fisons)，係使用混合粉劑之呼吸促動(美國專利案4668218 Astra、EP 237507 Astra、WO 97/25086 Glaxo、WO 94/08552 Dura、美國專利案5458135 Inhale、WO 94/06498 Fisons，全部內谷併入本文以資參考)。霧化器如AERxT M Aradigm、Ultravent噴霧器(Mallinckrodt)、及Acorn II霧化器(Marquest Medical Products)(美國專利案5404871 Aradigm、WO 97/22376)，上述參考文獻全部內容併入本文以資參考，係自溶液中產生氣溶膠；計劑量吸入器、乾粉吸入器等則係產生小顆粒氣溶膠。彼等市售可得吸入裝置之詳細實例意欲作為適用於實施本發明之代表性特定裝置，而不擬對本發明範圍構成侷限。
較佳為，含有至少一種抗－IL－12抗體之組成物係藉由乾粉吸入器或噴霧器遞送。投與本發明至少一種抗體用之吸入裝置有數項需要之特徵，例如，經由該吸入裝置之遞送係有利可靠、可再現、及精確。為了呼吸性良好，吸入裝置可視需要遞送小的(例如小於約10微米，較佳為約1－5微米)乾燥顆粒。
呈噴霧劑投與IL－12 抗體組成物
於加壓下，使含有至少一種抗－IL－12抗體之懸浮液或溶液強行通過噴嘴，即可製造包含IL－12抗體組成物之噴霧劑。可選定噴嘴大小與構型、施加之壓力、及液體饋料率，以達成所需輸出量及粒度。亦可產生電噴霧法，例如，將電場與毛細管或噴嘴饋料結合。由噴霧器遞送之至少一種抗－IL－12抗體組成物之顆粒以具有小於約10微米之粒度為有利，較佳在約1微米至約5微米之範圍內，最佳為約2微米至約3微米。
適於供噴霧器使用之含至少一種抗－IL－12抗體組成物之調配物典型地於水性溶液中含有濃度為每毫升或每克溶液約0.1毫克至約100毫克之至少一種抗－IL－12抗體組成物，或其中任何範圍或數值，例如，惟不限於，0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、40、45、50、60、70、80、90或100毫克/毫升或毫克/克。調配物中可包含製劑例如賦形劑、緩衝劑、等張劑、防腐劑、界面活性劑、及，較佳為，鋅。調配物中亦可包含賦形劑或抗體組成物之安定用劑，例如緩衝劑、還原劑、膨鬆蛋白、或碳水化合物。用於調配抗體組成物之膨鬆蛋白包括白蛋白、魚精蛋白等。用於調配抗體組成物之典型碳水化合物包括蔗糖、甘露糖醇、乳糖、海藻糖、葡萄糖等。抗體組成物調配物亦可包含界面活性劑，其可減少或預防於形成氣溶膠時由於溶液霧化引起抗體組成物表面誘發之聚集。可使用多種界面活性劑，例如聚氧乙烯脂肪酸酯類與醇類、及聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸酯類，其用量通常為調配物之0.001與14重量%之間。達本發明目的尤佳之界面活性劑為聚氧乙烯山梨聚糖單油酸酯、聚山梨糖醇酯80、聚山梨糖醇酯20等。此項技藝中已知之用於調配蛋白質(例如IL－12抗體)之附加製劑亦可包含於調配物中。
利用霧化器投與IL－12 抗體組成物
本發明抗體組成物可利用霧化器，例如噴射霧化器或超音波霧化器投與。典型地，於噴射霧化器中，係使用壓縮空氣源，通過小孔產生高速空氣噴射。越過噴嘴的氣體膨脹時，即產生低壓區域而牽引含抗體組成物的溶液通過與液體儲槽連接的毛細管。液體流從毛細管出來時，即被剪切成不安定之絲狀物及小滴，產生氣溶膠。可使用一系列構型、流速、及擋板種類，以指定之噴射霧器達成所需之效能特性。於超音波霧化器中，係使用高頻電能，典型地為使用壓電轉換器，以產生振動、機械能量。此能量直接或透過連接流體傳達至含抗體組成物之調配物，產生含有抗體組成物之氣溶膠。由霧化器遞送之含抗體組成物之顆粒以具有小於約10微米之粒度為有利，較佳為在約1微米至約5微米之範圍內，最佳為約2微米至約3微米。
適於供噴射或超音波霧化器使用之含至少一種抗－IL－12抗體之調配物典型地包含濃度為每毫升溶液約0.1毫克至約100毫克之至少一種抗－IL－12抗體。調配物可包含製劑例如賦形劑、緩衝劑、等張劑、防腐劑、界面活性劑、及，較佳為，鋅。調配物亦可包含賦形劑或該至少一種抗－IL－12抗體組成物之安定用劑，例如緩衝劑、還原劑、膨鬆蛋白、或碳水化合物。用於調配至少一種抗－IL－12抗體組成物之膨鬆蛋白包括白蛋白、魚精蛋白等。用於調配至少一種抗－IL－12抗體組成物之碳水化合物包括蔗糖、甘露糖醇、乳糖、海藻糖、葡萄糖等。該至少一種抗－IL－12抗體調配物亦可包含界面活性劑，其可減少或預防於形成氣溶膠時由於溶液霧化引起該至少一種抗－IL－12抗體表面誘發之聚集。可使用多種界面活性劑，例如聚氧乙烯脂肪酸酯類與醇頪、及聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸酯類。其用量通常為調配物之0.001與4重量%之間。達本發明目的尤佳之界面活性劑為聚氧乙烯山梨聚糖單油酸酯、聚山梨糖醇酯80、聚山梨糖醇酯20等。此項技藝中已知之用於調配蛋白質(例如抗體蛋白質)之附加製劑亦可包含於調配物中。
利用計劑量吸入器投與IL－12 抗體組成物
於計劑量吸入器(MDI)中，一圓筒內含有推進劑、至少一種抗－IL－12抗體、及任何賦形劑或其他添加劑，成為包含液態壓縮氣體之混合物。促動計量閥即釋放呈氣溶膠之混合物，其中較佳為含有粒度小於約10微米，較佳為約1微米至約5微米，最佳為約2微米至約3微米之顆粒。欲獲得所需氣溶膠粒度，可藉由使用以此項技藝中已知之多種方法(包括噴射－研磨法、噴霧乾燥法、臨界點縮合法等)製造之含抗體組成物之調配物。較佳之計劑量吸入器包括由3M或Glaxo製造及使用氫氟碳推進劑者。供計劑量吸入器裝置使用之含至少一種抗－IL－12抗體之調配物通常包括於非水性介質中呈懸浮液(例如，藉界面活性劑之助懸浮於推進劑中)之含至少一種抗－IL－12抗體之細切粉劑。推進劑可為供此目的使用之任何習知材質，例如氯氟碳、氫氯氟碳、氫氟碳、或烴、包括三氯氟甲烷、二氯二氟甲烷、二氯四氟乙醇及1,1,1,2－四氟乙烷、HFA－134a(氫氟鏈烷－134a)、HFA－227(氫氟鏈烷－227)等。推進劑較佳為氫氟碳。界面活性劑可經選定，俾使該至少一種抗－IL－12抗體於推進劑中呈安定之懸浮液，以保護活性劑對抗化學降解等。適當界面活性劑包含山梨聚糖三油酸酯、大豆卵磷脂、油酸等。於一些情形下，溶液氣溶膠較佳為使用溶劑，例如乙醇。此項技藝中已知之用於調配蛋白質之附加製劑亦可包含於調配物中。熟習此項技藝者將認知，本發明方法亦可經由本文未敘述之裝置，利用至少一種抗－IL－12抗體組成物之肺部投與而達成。
口服調配物及投與
經口投與之調配物依賴共同投與佐劑(例如，間苯二酚及非離子性界面活性劑例如聚氧乙烯油基醚與正十六基聚乙烯醚)而人為增加小腸壁之滲透性，以及共同投與酵素性抑制劑(例如，胰蛋白酶抑制劑、二異丙基氟磷酸酯(DFF)及抑肽酶)而抑制酵素性降解。於U.S.6,309,663中教示意欲經口、頰、黏膜、鼻、肺、陰道、或直腸投與遞送包括蛋白質與抗體及至少兩種界面活性劑之組合的親水製劑之調配物。供經口投與之固體劑量型活性組成化合物可與至少一種添加劑混合，包括蔗糖、乳糖、纖維素、甘露糖醇、海藻糖、蜜三糖、麥芽糖醇、糊精、澱粉、洋菜、海藻酸鹽、幾丁質、幾丁聚糖、果膠、黃耆膠、阿拉伯膠、明膠、膠原蛋白、酪蛋白、白蛋白、合成或半合成聚合物、及甘油酯。彼等劑量型亦可含有其他種類添加劑，例如，失活稀釋劑、潤滑劑例如硬脂酸鎂、對羥苯甲酸酯、防腐劑例如山梨酸、抗壞血酸、α－生育酚、抗氧化劑例如半胱胺酸、崩解劑、黏合劑、增稠劑、緩衝劑、甜味劑、調味劑、芳香劑等。
錠劑及丸劑可進一步加工成為包衣製劑。供經口投與之液體製劑包含容許供醫藥用途之乳液、糖漿、酏劑、懸浮液及溶液製劑。彼等製劑可含有於該領域一般使用之失活稀釋劑，例如水。微脂粒已被述為係胰島素及肝素之藥物遞送系(美國專利案4,239,754)。近來，含混合胺基酸的人工聚合物(類蛋白)之微球體已被用來遞送藥劑(美國專利案4,925,673)。再者，如此項技藝中已知，敘述於美國專利案5,879,681及美國專利案5,871,753之載劑化合物被用來遞送具生物活性之口服製劑。
黏膜調配物及投與
供經口投與包封於一或多種生物相容性聚合物或共聚物賦形劑(較佳為生物降解性聚合物或共聚物)中之生物活性劑之調配物由於組合的微膠囊大小適當而產生達到毛囊淋巴集結[亦為所謂動物之「派亞氏淋巴叢(Peyer's patch)」或"GALT"]且為其所吸收之製劑，不因為其通過胃腸道而喪失有效性。類似之毛囊淋巴集結可於支氣管(BALT)及大腸中發現。上述組織一般被稱為黏膜相關性淋巴網狀組織(MALT)。供經黏膜表面吸收時，投與至少一種抗－IL－12抗體之組成物及方法包括一種乳液，其中含有許多次微米顆粒、黏膜黏附性大分子、生物活性胜肽、及水性連續相，係藉由達成乳液顆粒之黏膜黏附性而促進通過黏膜表面之吸收性(美國專利案5,514,670)。適用於施用本發明乳液之黏膜表面可包含角膜、結合膜、頰、舌下、鼻、陰道、肺、胃、腸、及直腸等投與途徑。供陰道或直腸投與之調配物，例如栓劑，可含有例如聚伸烷二醇類、凡士林、可可脂等作為賦形劑。供鼻內投與之調配物可為固體及含有，例如，乳糖作為賦形劑或可為水性或油性鼻滴劑溶液。供頰內投與之賦形劑包含糖、硬脂酸鈣、硬脂酸鎂、預糊化之澱粉等(美國專利案5,849,695)。
經皮調配物及投與
供經皮投與時，係將該至少一種抗－IL－12抗體包封於例如微脂粒、聚合奈米微粒、微粒劑、微膠囊、或微球體(除非另行敘述，否則總稱為微粒劑)之遞送裝置中。有許多適當裝置為已知，包括由合成聚合物例如聚羥基酸如聚乳酸、聚乙醇酸及其共聚物、聚正酯類、聚酐類、及聚磷腈類，和天然聚合物例如膠原蛋白、多胺基酸、白蛋白及其他蛋白質、海藻酸鹽及其他多醣，及其組合物製成之微粒劑(美國專利案5,814,599)。
長期投與及調配物
有時需要長時期遞送病患本發明化合物，例如，單一投與一週至一年，則可使用多種緩釋、積貯或植入之劑量型。例如，該劑量型可含有於體液中具有低溶解度之化合物之醫藥上可接受之無毒鹽，例如，(a)與多元鹼性酸例如磷酸、硫酸、檸檬酸、酒石酸、鞣酸、雙羥萘酸、海藻酸、多麩酸、萘單－或二－磺酸、多半乳糖醛酸等形成之酸加成鹽；(b)與多價金屬陽離子例如鋅、鈣、鉍、鋇、鎂、鋁、銅、鈷、鎳、鎘等形成之鹽，或與得自例如N,N’－二苄基－伸乙二胺或伸乙二胺之有機陽離子形成之鹽；或(c)(a)與(b)之組合物，例如鞣酸鋅鹽。附加地，本發明化合物或，較佳為，例如前文剛敘述之溶解性相當低之鹽，可調配於適於供注射用之凝膠(例如，具有芝麻油之單硬脂酸鋁凝膠)中。特佳之鹽為鋅鹽、鞣酸鋅鹽、雙羥萘酸鹽等。供注射用之另一類緩釋積貯調配物則含有分散之化合物或鹽，以供封裝於緩慢降解、無毒、非抗原性聚合物例如美國專利案3,773,919敘述之聚乳酸/聚乙醇酸聚合物中。特別於供動物用時，亦可於膽固醇基質矽質片中調配本發明化合物或，較佳為，例如上文敘述之溶解性相當低之鹽。其他緩釋、積貯或植入調配物，例如氣體或液體微脂粒，為文獻中已知(美國專利案5,770,222及"Sustained and Controlled釋放Drug Delivery Systems",J.R.Robinson ed.,Marcel Dekker,Inc.,N.Y.,1978)。
經概括敘述本發明後，茲參照下文實例將更瞭解本發明，惟該等實例僅供說明之用而不擬構成侷限。
 實例1：IL－12 抗體在哺乳類細胞中之轉殖與表現
典型的哺乳類表現載體含有傳介mRNA起動轉錄之至少一個啟動子元件、抗體編碼序列、及終止轉錄作用與轉錄本之聚腺苷酸化作用需要的訊號。其他元件包括促進子、Kozak序列及側接供RNA接合用的供體位置與受體位置之介入序列。使用得自SV40之早期及後期啟動子、得自反轉錄病毒之長終端重複區域(LTRS)例如RSV、HTLVI、HIVI及巨細胞病毒之早期啟動子(CMV)，可達成高效率之轉錄作用。然而，亦可使用細胞元件(例如，人類肌動蛋白啟動子)。用於實施本發明之適當表現載體包括，例如pIRESlneo、pRetro－Off、pRetro－On、PLXSN或pLNCX(Clonetech Labs,Palo Alto,CA)、pcDNA3.1(＋/－)、pcDNA/Zeo(＋/－)或pcDNA3.1/Hygro(＋/－)(Invitrogen)、PSVL與PMSG(Pharmacia,Uppsala,Sweden)、pRSVcat(ATCC 37152)、pSV2dhfr(ATCC 37146)及pBC12MI(ATCC 67109)等載體。可使用之哺乳類宿主細胞包括人類Hela 293、H9與Jurkat細胞、小鼠NIH3T3與C127細胞、Cos 1、Cos 7與CV1、鵪鶉QC1－3細胞、小鼠L細胞及中國倉鼠卵巢(CHO)細胞。替代地，可使基因在含有將該基因整併入染色體中之穩定細胞株中表現。與可選擇標記例如dhfr、gpt、新黴素、或效高黴素之共轉染可用來鑑定及單離轉染細胞。
亦可擴增該轉染基因以表現大量經編碼之抗體。DHFR(二氫葉酸還原酶)標記可用來開發帶有數百或甚至數千套所關注基因之細胞株。另一有用之選擇標記為酵素麩胺醯胺合成酶(GS)(Murphy,et al.,Biochem.J.227：277－279(1991)；Bebbington,et al.,Bio/Technology 10：169－175(1992))。使用彼等標記，使哺乳類細胞於選擇性培養基中生長，挑選出具最高抗性之細胞。彼等細胞株含有整併入染色體中之擴增基因。中國倉鼠卵巢(CHO)與NSO細胞常被用來生產抗體。
表現載體pC1與pC4含有勞氏肉瘤病毒之強啟動子(LTR)(Cullen,et al.,Molec.Cell.Biol.5：438－447(1985))加上CMV－促進子之片段(Boshart et al.,Cell 41：521－530(1985))。多個轉殖位置，例如，BamHI、XbaI及Asp718等限制酶切割位置，有助於所關注基因之轉殖。該等載體除了含有大鼠前胰島素原基因之3’插入序列外，尚含有聚腺苷酸化作用及終止訊號。
於CHO細胞中之轉殖及表現
使用pC4載體表現IL－12抗體。質體pC4為質體pSV2－dhfr(ATCC存取編號37146)之衍生物。該質體含有受SV40早期啟動子控制之小鼠DHFR基因。使用彼等質體轉染之缺乏二氫葉酸還原酶活性之中國倉鼠卵巢細胞或其他細胞可於補充化療劑胺甲喋呤之選擇性培養基(例如，α－ MEM，Life Technologies,Gaithersburg,MD)中生長挑選。DHFR基因在胺甲喋呤(MTX)抗性細胞株中之擴增作用已被充分記載(參閱，例如，F.W.Alt,et al.,J.Biol.Chem.253：1357－1370(1978)；J.L.Hamlin and C.Ma,Biochem.et Biophys.Acta 1097：107－143(1990)；及M.J.Page and M.A.Sydenham,Biotechnology 9：64－68(1991))。於增加MTX濃度中生長之細胞由於DHFR基因擴增結果，大量生產標靶酵素，DHFR，而逐漸形成對該藥物之抗性。若有第二個基因連接於該DHFR基因，則通常會被一起擴增及大量表現。於此項技藝中已知此方法可用來開發攜帶1,000套以上該擴增基因之細胞株。接著，於移除該胺甲喋呤後，即獲得含有整併入宿主的一個或一個以上染色體中的擴增基因之細胞株。
除了勞氏肉瘤病毒之強啟動子(LTR)以外之其他高效率啟動子亦可用來表現，例如，人類b－肌動蛋白啟動子、SV40早期或後期啟動子或得自其他反轉錄病毒(例如HIV與HTLVI)之長終端重複區域。可使用Clontech公司之Tet－Off與Tet－On基因表現系統與類似系統，以正規方法於哺乳類細胞中表現IL－12(M.Gossen,and H.Bujard,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 89：5547－5551(1992))。至於mRNA之聚腺苷酸化作用，亦可使用其他訊號(例如，得自人類生長激素或血球蛋白基因者)。帶有整併入染色體中之所關注基因之穩定細胞株也可利用與可選擇標記(例如gpt、G418或效高黴素)之共轉染予以挑選。較有利的作法是開始即使用一種以上之可選擇標記，例如，G418加上胺甲喋呤。以限制切割酵素分解質體pC4，然後利用此項技藝中已知之程序，使用小牛腸內磷酸酯酶去磷酸化。接著以1%瓊脂糖膠單離載體。
根據已知方法步驟，使用編碼完整IL－12抗體之DNA序列，分別相當於本發明IL－12抗體之HC與LC CDR區。經單離之編碼適當人類恒定區(亦即，HC與LC區)之核酸亦用於此構築體。
接著使用T4 DNA接合酶接合單離之可變及恒定區編碼DNA與去磷酸化之載體，然後轉形到大腸桿菌HB101或XL－1 Blue細胞，使用例如限制酶分析法，鑑定含有插入質體pC4中的片段之細菌。
使用缺乏活性DHFR基因之中國倉鼠卵巢(CHO)細胞進行轉染。利用微脂粒感染法(lipofectin)，使5微克表現質體pC4與0.5微克質體pSV2－neo進行共轉染。質體pSV2neo含有優勢選擇標記，此neo基因得自Tn5，係編碼賦與包括G418的一群抗生素抗性之酵素。將細胞接種於補充1微克/毫升G418之α－ MEM中。2天後，以胰蛋白酶處理細胞，再接種於融合瘤轉殖盤(Greiner,Germany)之補充10、25、或50奈克/毫升胺甲喋呤加1微克/毫升G418之α－ MEM中。約10－14天後，單一轉殖株以胰蛋白酶處理，然後接種於使用不同胺甲喋呤濃度(50 nM、100 nM、200 nM、400 nM、800 nM)之6槽式培養盤或10毫升培養瓶中。接著將生長於最高濃度胺甲喋呤之轉殖株移入含有更高胺甲喋呤濃度(1 mM、2 mM、5 mM、10 mM、20 mM)之新6槽式培養盤中。重複相同步驟直到獲得在100－200 mM濃度生長之轉殖株。分析所需基因產物之表現，例如，利用SDS－PAGE及西方墨點法或利用逆相HPLC分析法。
實例2：抗－IL－12p35 及抗－IL－12/23p40 抗體對鼠類實驗性自體免疫腦脊髓炎(EAE) 治療效力之比較 概述
進行此套研究以調查IL－12或IL－12/IL－23專一性中和作用對小鼠模式之多發性硬化症、實驗性自體免疫腦脊髓炎(EAE)之治療效力。於誘導疾病之前、疾病發作之前、或發生疾病之後，投與對IL－12之p35次單元或IL－12與IL－23共享的p40次單元具專一性之中和大鼠抗－小鼠單株抗體(mAbs)。所有情形下，只有抗－p40展示治療潛力。彼等數據暗示IL－23為此自體免疫模式中發病之主要促成者。
縮寫表：IL 介白素mAb 單株抗體EAE 實驗性自體免疫腦脊髓炎Th T輔助細胞IFN γ γ干擾素cs 臨床記分MBP 髓鞘基本蛋白質PK 藥物動力學
引言
具生物活性之IL－12呈雜二聚體存在，其係由35(p35)與40(p40)千道爾頓兩個共價連接之次單元所組成。數項證據已證明IL－12可誘發強力之Th1免疫反應，其特徵為從CD4＋ 細胞中產生IFN γ及IL－2。一般相信，不適當之Th1反應，從而IL－12表現，與許多由免疫傳介之疾病(例如多發性硬化症、類風濕性關節炎、炎性腸道疾病、胰島素依賴型糖尿病、與葡萄膜炎)相關。於動物模式中顯示，IL－12中和作用可改善由免疫傳介之疾病。然而，彼等研究係經由其p40次單元而中和IL－12。近來IL－23(1)被述為係共享p40次單元之雜二聚體細胞介素，使得先前之發現係由於IL－12活性或者IL－23活性之決定格外重要。因此，乃於小鼠模式之自體免疫、實驗性自體免疫腦脊髓炎(EAE)中，比較p35與p40之專一中和作用。具IL－12p35專一性之中和抗體對於EAE之進展沒有影響。對照之下，具有抗－p40 mAb之IL－12及IL－23二者之中和作用則會抑制EAE臨床症狀，無論抗體係於Th1分化之前或之後投與均然。此數據暗示抗－p40對EAE之治療活性完全係基於IL－23之中和作用。
材料與方法 小鼠
藥物動力學分析係使用C3H/HEB/FEJ母小鼠(Jackson Laboratories,Bar Harbor,ME)。EAE研究則使用6－8週齡之B10.PL(H－2u )母小鼠(購自Jackson Laboratories)。所有動物均於被認可之實驗流程下，根據IACUC指導方針飼養。
抗體
C17.8(大鼠抗－小鼠IL－12/IL－23p40，IgG2a)與C18.2(大鼠抗小鼠IL－12p35，IgG2a)融合瘤由Dr.Giorgio Trinchieri and the Wistar Institute(Philadelphia，PA)提供。腹水係於Harlan Bioproducts(Indianapolis,IN)產生，並利用蛋白質G親和性法予以純化。
大鼠抗－小鼠抗體之血清PK
個別稱量C3H/HEB/FEJ母小鼠(大約20－25克)體重，並經腹膜內投與單次5毫克/公斤劑量之1 2 5 I標記抗體(C17.8、C18.2)，每公斤小鼠體重使用10毫升恒定劑量。於30分鐘、6與24小時、4、7、11及18天，自麻醉小鼠之後眼窩抽血。令血液試樣於室溫靜置至少30分鐘，但不超過1小時，然後於大約2,500－3,500 rpm離心10－15分鐘。取各血清試樣大約50微升，使用LKB Compugamma 1282計數器(Wallac,Gaithersburg,MD)測定1 2 5 I。注射物亦取10毫升進行計數測定。計算各時間點之平均注入計數分率，乘上注入抗體之總毫克數，決定各時間點殘留於血清中總毫克數。數據以血清中mAb之平均毫克數＋/－ s.d.表示，各組有5－10隻動物。
EAE誘發及記分
為了誘發EAE，在B10.PL母小鼠背上四個部位經皮下注射結合200微克天竺鼠－MBP(Sigma)之總共100微升CFA[含有200微克結核桿菌(Mycobacterium tuberculosis )牙買加菌株]。在免疫處理之同時及48小時後，亦使小鼠i.p.接受於0.2毫升PBS中之200微克百日咳毒素(List Biological,Campbell,CA)。於指示之天數，使小鼠經i.p.注射接受於PBS中稀釋至100毫克/公斤(C18.2)或20毫克/公斤(C17.8)之C17.8(抗－IL－12p40)或C18.2(抗－IL－12p35)單株抗體。對照組小鼠接受於PBS中之20毫克/公斤PBS或Rat IgG(Biosource)。
表露臨床症狀(cs)之動物依下述方法記分：尾巴軟弱不強直或尾巴強直但步伐蹣跚1；尾巴軟弱不強直且步伐蹣跚(運動失調)2；運動失調及局部四肢麻痺2.5；一肢完全麻痺3；一肢完全麻痺及第二肢局部麻痺3.5；兩肢完全麻痺4；垂死4.5；死亡5。記分5之動物於其餘實驗不列入平均每日cs分析中。算出各組之每日cs記分平均值，並敘述平均發生率、發作日、最高急性cs、累計cs、cs/天、復發數及復發嚴重度±sem。計算個別動物每日臨床記分總和之平均值，得到各組之平均累計cs。Cs/天係將累計cs除以動物留在研究中之日數。測定平均發作日時，於分析中未形成EAE之動物不列入計算。測定平均最高cs時，未形成EAE之動物記分歸「0」並列入分析。復發之界定為至少2個觀察日維持臨床記分完全點數下降，隨後至少2個觀察日維持臨床記分完全點數增加。
結果與討論 抗－p35與抗－p40抗體真有完全相同之藥物動力學性質
為了確立抗－p40與抗－p35抗體之清除率，對正常小鼠進行單次5毫克/公斤劑量之1 2 5 I標記抗體注射，並於投與抗體後，測量循環系統中之諸含量11天。抗－p35與抗－p40具有重疊之藥物動力學性質，證明正常小鼠(2)之清除率完全相同。各單株抗體之預測清除率為大約7－10天。此雖係單次劑量PK研究，惟彼等數據支撐活體內研究中每週一次之用藥。
誘發EAE之前，惟有抗－p40處理具防禦性
為了確定IL－12及IL－23在免疫傳介疾病中之相對角色，發明人使用供多發性硬化症、復發型實驗性自體免疫腦脊髓炎(EAE)研究用之鼠類模式。使用於佐劑中之髓鞘基本蛋白質(MBP)進行EAE誘導後，B10.PL小鼠典型地展現最初之麻痺發作(急性疾病)，接著部分或完全恢復及透過多次復發及/或慢性EAE而進展。長久以來均假設EAE係依賴IL－12表現，因為一般相信IL－12為Th0分化成為Th1之主要介質。然而，為了區分IL－23於EAE誘導中之潛在角色，於進行EAE免疫處理前一天(第－1天)，即確立抗－p40(IL－12及IL－23)或抗－p35(惟有IL－12)抗體之中和濃度。疾病之發作於各動物之間可能不同；因此，於7及14天後重複處理，以確保在T1分化期間抗－p35與IL－p40抗體存在。數項試管內中和作用研究已證明抗－40 mAb於中和IL－12時，比抗－p35 mAb更具5倍效力(數據未示出)。因此，於所有EAE實驗中，均將抗－p35 mAb之濃度調成比抗－p40高5倍。於兩個分別實驗中，以Rat IgG同型對照組抗體(20毫克/公斤)或抗－p35(100毫克/公斤)處理之小鼠未顯示對疾病之防禦作用。值得注意的是，與具有EAE之未經處理小鼠比較下，不具專一性的對照組抗體(Rat IgG)之周邊投與並未改變疾病之臨床進程。此兩項研究中，以抗－p40 mAb(20毫克/公斤)處理之小鼠展現EAE臨床症狀之幾乎完全抑制。明顯地，疾病之抑制延伸到EAE誘導後經過70天的預期抗體清除速率之後。於各實驗中，以抗－p40處理之動物只有一隻顯示連續兩天之EAE臨床症狀，各實驗均證明發作較晚及明顯降低之急性臨床記分、累計臨床記分、及疾病未復發(表1)。彼等結果證明IL－12及IL－23經由共享的p40次單元之中和作用而提供對EAE之幾乎完全防禦作用。對照之下，只經由抗－p35之IL－12專一性中和作用並不具效力。彼等數據強力暗示EAE不是由IL－12傳介。
疾病發作之前，惟有抗－p40處理具防禦性
雖然預防性處理使小鼠完全防禦EAE，惟尚需測定一旦於活體內建立Th1族群，IL－12專一性中和作用是否仍具防禦性。因此，另一套實驗中，於EAE誘導10天後，惟於疾病發作之前，以對照組抗體(Rat IgG)、抗－p35、或抗－p40單株抗體處理小鼠。由於典型免疫反應於7天之內發生，所以此時間點應反映出抗－IL－12或抗－IL－23 mAbs對分化的Th1細胞之效力。EAE發作於各動物之間可能不同；因此，於7及14天後重複處理，以確保疾病發作期間抗－p35與IL－p40抗體存在。於兩個分別實驗中，相較於未經處理之EAE小鼠，以同型對照組抗體(20毫克/公斤)或抗－p35(100毫克/公斤)處理之小鼠未能防禦疾病；然而，以抗－p40 mAb(20毫克/公斤)處理之小鼠則明顯地防禦EAE。如先前敘述之研究所示，EAE誘導後經過70天清除周邊投與抗體需要的時間之後，仍觀察到疾病抑制。慮及抗體係直到Th1分化後(第10天)才投與，則於任何組別中，疾病發生率、發作日、及最高急性臨床記分並無不同(表2)即不足為奇。然而，於兩項實驗中，接受抗－p40之小鼠明顯地展現較低之累計臨床記分、每日臨床記分、及復發嚴重性。
建立EAE期間，惟有抗－p40處理具防禦性
最困難、惟臨床上關係重大地，任何治療之障礙為抑制已建立之疾病。因此另一套實驗係使小鼠進行EAE之免疫處理，一旦疾病發生後，即分成不同之處理組別。於誘導EAE大約30天後，小鼠已進展經過疾病之急性期。此時，將動物分組，使其具有可比較之累計臨床記分及每日臨床記分。7及14天後重複處理，以確保彼等抗體於從急性轉為慢性或緩和－復發疾病期間具有有效之中和濃度。相較於同型對照組抗體(20毫克/公斤)或抗－p35(100毫克/公斤)處理動物，惟有抗－p40(20毫克/公斤)處理組改善疾病；EAE誘導80天後，仍觀察到疾病抑制。兩項實驗中，從第1天處理至第80天之分析證明，接受抗－p40之小鼠展現較低之累計臨床記分、每日臨床記分、及處理後之最低臨床記分。彼等數據暗示，IL－23不僅很可能傳介Th1分化(表1)及誘導EAE(表2)，亦促成慢性免疫－傳介(例如，自體免疫)反應(表3)之作用期。因此，抗－p40處理可於免疫－傳介疾病進展之任何時間提供治療。
結論
IL－12於免疫作用上的角色之瞭解一直係以IL－12之p40次單元為基礎。因此，於動物模式自體免疫疾病中，進行IL－12專一性p35次單元與IL－12與IL－23之間共享的p40次單元中和作用之並列式比較。任何時間點投與mAb時，經由抗－p40之中和作用明顯地抑制EAE；而IL－12專一性中和作用全然無效。因此，發明人之數據顯示，IL－12並未促成此自體免疫模式，而IL－23被預期為自體免疫T細胞反應較主要之介質。
實例3： 中和p40 之抗原決定部位 概述
根據Fab/IL－12複合物之晶體結構，決定中和抗體(p40 mAb)對抗IL－12與IL－23人類p40次單元之抗原決定部位。此抗原決定部位位於人類IL－12 p40次單元之D1功能部位(殘基1－88)。此區域遠離p40/p35分界面，被預期於IL－23之p40次單元上亦有用。涉及抗原－抗體結合之殘基為非連續性(表4)，包含獨特之構形抗原決定部位。對抗此抗原決定部位或其部分及鄰近區域之抗體將導致封阻經由p40次單元之此部分傳介之IL－12與IL－23功能。
引言
指引對抗人類IL－12之完全人類單株抗體(p40 mAb)已證實為IL－12與IL－23功能之強力中和劑。頃已證實p40 mAb結合於p40次單元，並封阻此二細胞介素與其受體之結合。由於p40次單元為IL－12與IL－23所共有，因此IL－12與p40 mAb間之相互作用細節界定重要之共有中和抗原決定部位，其可能為細胞介素－受體相互作用機制吐露一些訊息。
根據p40 Fab/IL－12晶體結構決定抗原決定部位
從培養之哺乳類細胞株中產生p40 mAb，並利用蛋白A管柱進行純化。於37℃，在活化培養基(0.03M磷酸鈉、0.15M NaCl、0.01M EDTA、0.0072M L－半胱胺酸，pH 7.0)中，以木瓜蛋白酶(每毫克IgG 0.25單位木瓜蛋白酶)分解p40 mAb(70毫克)2小時。利用Surface－Enhanced Laser脫附游離(SELDI)質譜法偵測該分解作用；以碘乙醯胺(0.5M)終止分解；利用固定化蛋白G移除Fc；進一步於Superdex 200 16/60管柱上利用凝膠過濾法純化p40 Fab。總共獲得44毫克純化p40 Fab，其純度以SDS－PAGE進行分析。
從大量表現p40與p35次單元之穩定轉染細胞株培養物中產生重組人類IL－12，並以p40 mAb親和性管柱純化。收集蛋白溶離份，以10 mM Tris、100 mM NaCl(pH 7.4)進行透析，濃縮成為2.5毫克/毫升。於37℃，氬氣下，以脫糖基化酵素[PNGase F、Sialadase、O－糖化內切酶、α－,β－半乳糖苷酶、α－甘露糖苷酶、岩藻糖苷酶(約5mU－10U/100微克蛋白)]之數個組合物培育3天，使IL－12脫糖基化。
使脫糖基化之IL－12與過量p40 Fab混合。於10mM Tris、50mM NaCl(pH 7.4)中，利用分級排除層析法純化該IL－12/p40 Fab複合物。濃縮單離複合物至大約4毫克/毫升。以1：1容積比使上述蛋白複合物溶液與含50mM Tris(pH 7.0)、16% PEG 3350之貯存溶液結合，利用直立式擴散結晶法使IL－12/p40 Fab複合物結晶化。於16℃，兩週內，出現大小一般為50－150微米之立方體、角錐形、或桿狀結晶。
收取該等結晶，將其浸於母液加上30%乙二醇中，於液態氮中急速冷凍，供收集射線數據用。在Advanced Photon Source(APS),Argonne National Laboratory,(Axas－ComCat)收集繞射極限為2.8之最佳數據組[360度，0.5度/幀(frame)，每幀曝光10秒)。繞射數據以Denzo and ScalePack(Otwinowski & Minor,Methods Enzymol. 276：307－326)處理。此結晶型之空間群為P21 21 21 ，晶格常數a＝116.8、b＝55.77、c＝182.96、及α＝β＝γ＝90°。獨立反射(independent reflections)有27,141個，於3.0，數據約90%完整(I/σ＝5.2，Rs y m ＝9%)。
如CNX(Accelrys,CA)所執行，利用分子置換法解析晶體結構。IL－12之搜尋模式為公告之IL－12結構(PDB code 1F45)，p40 Fab為根據Fab晶體結構之同源模式(PDB code 1VGE)。視覺檢查IL－12與p40 Fab之分子模式，並使用XtalView手動調整；使用CNX進行構造精確化；以InsightII(Accelrys,CA)確認該等分子模式。呈緞帶圖像的IL－12/p40 Fab結合複合物之分子結構示於圖1。
呈表面及緞帶圖像之分子表面p40 mAb結合位置(p40抗原決定部位)如圖2所示。根據一般公認慣例，該等結合抗原決定部位殘基係界定為具有於抗體任何原子4內之任何原子之任何暴露於表面之p40殘基(相對溶劑可接觸性0.1或0.1以上)。該等表面可接觸性係使用預設參數，以ICM(Molsoft,CA)計算。構成IL－12 p40上之p40 mAb結合抗原決定部位之殘基，以及其表面暴露面積(sf)與相對可接觸性(sf比)均列於表4。[於此領域中，蛋白質內胺基酸殘基之暴露表面面積之界定已充分被公認。特別是，使半徑1.4A之水分子沿著蛋白質表面滾動，對於特定殘基，利用此項計算獲得之面積值被指定為該殘基之暴露表面面積。亦可獲得充分延伸構形中之胺基酸之總表面面積。表面可接觸性(sf比)則為該暴露表面面積對標準表面面積之比。此二數值在一起即提供一殘基是否暴露於蛋白質表面之概念。顯然，只有暴露於表面之殘基涉及與其他分子(例如抗體)之結合。然而，於本說明書中，申請人不需要針對一切多作說明。]
從表4及圖2(右圖)明顯看出，p40上之結合位置不具連續性及構成分佈於不規則表面之大數量表面暴露殘基。抗體－抗原相互作用湮沒IL－12與p40 mAb可接觸表面之總計1758 2 。該等相互作用似乎由三個鹽橋支配：R59(H)－E59(p40)、R98(H)－E45(p40)與R99(H)－D62(p40)。同時，由於疏水性或凡得瓦爾力亦促成抗體－抗原相互作用。
根據本文共結晶結構鑑定之涉及IL－12結合作用之IL－12p40抗體上之殘基示於下文表5。具有p40次單元4A內任何原子之抗－p40抗體之所有表面暴露殘基被視為係彼等結合殘基之一部分。彼等殘基之任何一或多者之保守性變化均可能產生具有類似效力之突變抗體。Ymp hgdi保守性取代之實例包括，惟不限於，VH(例如，SEQ ID NO：7)中之R59K、R98K與R99K及VL(例如，SEQ ID NO：8)中之D1E。
又，可進行表5所示各位置之飽和突變法(例如，將野生型(WT)胺基酸序列變更為可能除了半胱胺酸以外之任何其他胺基酸)以確認導使所得抗體具有增加、減少或實質上相似活性(例如，結合)之諸突變。所得抗體與p40次單元之結合作用可根據任何適當結合試驗予以測試。例如，可使用飽和突變法，以產生多少有些效力之抗體或具有不同性質[亦即由可變區序列變化(例如，可變區之大小或其他結構性變化)造成的效力以外之性質]之等效抗體。
亦可使用一個以上之取代，例如各實驗之二、三、或更多個位置，進行飽和突變法。此可呈個別轉殖株或基因庫進行，隨後以適當版式(例如噬菌體呈現法)予以選擇或篩選。再者，可結合表5中諸位置之期望調控活性之個別或組合突變以製造具有類似或更佳效力之附加之組合突變體。
優點
p40 mAb結合位置係遠離p40/p35結合位置(圖1)。IL－23之p19次單元於進化上與IL－12之p35相關，具有顯著之序列同源性。p19很可能以類似p35之方式與p40結合。因此，p40 mAb結合區域亦係遠離IL－23中之p40/p19相互作用區。本發明所鑑定之抗原決定部位於IL－12與IL－23二者中同樣有效；因此，p40 mAb可積極封阻此二細胞介素之功能乃預料中之事。
IL－12(p40/p35)及IL－23(p40/p19)以類似方式與其個別受體(IL－12Rβ1/β2及IL－12Rβ1/IL－23R)相互作用。 彼等誘發類似之傳訊級聯。然而，細胞介素－受體相互作用之細節並未於分子層次清楚界定。新界定之p40 mAb抗原決定部位可代表IL－12族細胞介素與其共有受體(IL－12Rβ1)間相互作用之生物學上之重要位置。因此，此抗原決定部位係使用單株抗體、胜肽、重組蛋白、小分子及其他天然或合成製劑治療介入之重要標靶。
實例4： 使用突變分析之IL－12p40 上p40 mAb 抗原決定部位定位 概述
進行IL－12p40突變體與p40 mAb之ELISA結合作用以證實結合之抗原決定部位。根據p40 Fab/IL－12複合物之晶體結構，產生7個單一突變體及2個雙突變體。該等突變殘基係位於p40次單元功能部位I(D1)中之p40 Fab接觸區。相對結合親和性證實，三個帶負電殘基，E45、E59與D62，對與p40 mAb之結合相互作用有重大貢獻。其他殘基，M23、L40與S43，具有較少惟可察覺之貢獻。此突變分析證實，p40 mAb識別p40次單元之功能部位I，及E45、E59、D62、M23、L40、與S43等殘基為結合抗原決定部位之一部分。
材料與方法
此研究中使用七個人類p40單一突變體，M23T、L40T、S43R、E45A、E45R、E59R、與D62R，及兩個雙突變體，S43R/E45A與S43R/E45R；以野生型人類p40，WThu－p40，作為對照組。於HEK293E細胞中轉染表現該等p40突變體；上澄液供結合試驗用。
簡言之，於室溫，以5微升捕捉單株抗體(5微克/毫升)被覆MSD高結合盤(Meso Scale Discovery，MD)1小時。該捕捉單株抗體識別p40次單元，惟不與p40 mAb競爭。於各槽添加150微升5% MSD Blocker A緩衝液，於室溫培育1小時。以0.1 M HEPES緩衝液(pH 7.4)洗滌諸盤三次。彼等裝填蛋白之ELISA諸盤以25微升不同之過渡性表現p40突變體上澄液(以0.1 M HEPES緩衝液，pH 7.4進行1：10之稀釋)於室溫培育1小時。以0.1 M HEPES緩衝液(pH 7.4)洗滌諸盤三次。分配25微升不同濃度(0至20微克/毫升不等)之MSD Sulfo－TAG標記p40 mAb至諸微型槽。於室溫振盪培育2小時後，以0.1 M HEPES緩衝液(pH 7.4)洗滌諸盤3次。分配150微升經稀釋之MSD Read緩衝液至各槽，以SECTOR成像機(MSD)分析諸盤。
結果
如圖3所示，相較於野生型p40，E45R、E59R、與D62R各顯著減少突變蛋白p40與p40 mAb之結合親和性。相較於E45R，E45A對於結合作用具有重大惟較不引人注目之影響。M23T、L40T與S43R對於結合作用各具有中度之影響。
利用捕捉試驗，進一步分析p40 mAb與不同突變蛋白之相對結合親和性。如圖4所示，E45R、E59R與D62R各幾乎完全徹底破壞抗原結合。於界面中之其他突變，M23T、L40T與S43R，各減少大約40%結合作用。E45A減少約70%結合作用。
很清楚地，本發明可利用除了前文說明書與實例中特別敘述以外之方法實施。鑑於前述教示，本發明之許多修飾與變化屬可能，因此，均隸屬本發明範圍之內
a 臨床記分(cs)b 累計記分(cs)
如說明書中所述處理小鼠，自EAE誘導後第0至70天進行臨床記分分析。所示數據為每組平均值±s.e.m.。
a臨床記分(cs)b 累計記分(cs)
於第10、17、及24天處理小鼠，自EAE誘導後第0至70天進行臨床記分分析。所示數據為每組平均值±s.e.m.。
a 於第一天處理時每組之平均臨床記分(Tx)b 臨床記分(cs)
圖1顯示呈緞帶圖像之IL－12/p40 Fab結合複合物之分子結構。
圖2顯示呈表面及緞帶圖像之分子表面所示之p40 mAb結合位置(抗原決定部位)。為了清楚表示，將D1功能部位與Fv從複合物結構單離出來。p40之D1功能部位示出分子表面；Fab之Fv部分以緞帶顯示。左圖：從抗體結合部位(亦即抗原決定部位)向下觀看。中圖：從左圖視野約90°觀看。右圖：抗原決定部位殘基之緞帶圖像。
圖3顯示與各種p40單一突變體結合的IL－12 p40抗體之ELISA評估結果。
圖4顯示p40 mAb與不同p40突變蛋白之相對結合親和性。
<110>森托克公司 /centocor,Inc.金吉兒 /Giles－Komar,Jill漢喬治 /Heavner,George奈大衛 /Knight,David M.羅金泉 /Luo,Jinquan皮瑞特 /Peritt,David史克隆 /Scallon,Bernard薛艾利 /Shealy,David <120>抗－IL－12抗體、抗原決定部位、組成物、方法及用途 <130> CEN5087 PCT <140> <141> <150> 60/637,819 <151> 2004－12－21 <160> 9 <170> PatentIn Ver 3.1 <210> 1 <211> 5 <212> PRT <213>智人 <400> 1<210> 2 <211> 17 <212> PRT <213>智人 <400> 2<210> 3 <211> 10 <212> PRT <213>智人 <400> 3<210> 4 <211> 11 <212> PRT <213>智人 <400> 4<210> 5 <211> 7 <212> PRT <213>智人 <400> 5<210> 6 <211> 9 <212> PRT <213>智人 <400> 6<210> 7 <211> 119 <212> PRT <213>智人 <400> 7<210> 8 <211> 108 <212> PRT <213>智人 <400> 8 <210> 9 <211> 503 <212> PRT <213>智人 <400> 9

Claims (17)

  1. 一種用於製造單離之具有至少兩個互補決定區(CDRs)之哺乳類抗-IL-12抗體之方法，其中該抗體結合至部分IL-12蛋白，其對應於選自由SEQ ID NO：9胺基酸序列殘基15、17-21、23、40-43、45-47、54-56與58-62所組成組群之至少一個胺基酸殘基，該方法包括以含有SEQ ID NO：9胺基酸序列殘基15、17-21、23、40-43、45-47、54-56與58-62之SEQ ID NO：9胺基酸序列蛋白質變異體淘選，並自該動物回收該抗體。
  2. 一種單離之哺乳類抗-IL-12抗體，其包含SEQ ID NO：7之重鏈可變區胺基酸序列及SEQ ID NO：8之輕鏈可變區胺基酸序列，其中SEQ ID NO：7之胺基酸殘基28、31、32、33、57、59、98、99、100、101、102、與103及SEQ ID NO：8之胺基酸殘基1、30、32、49、56、92、93、與94以外之一或多個可變區殘基被不同胺基酸取代。
  3. 一種單離之哺乳類抗-IL-12抗體，其含有SEQ ID NO：7之重鏈可變區胺基酸序列及SEQ ID NO：8之輕鏈可變區胺基酸序列，其中SEQ ID NO：7之胺基酸殘基28、31、32、33、57、59、98、99、100、101、102、與103及SEQ ID NO：8之胺基酸殘基1、30、32、49、56、92、 93、與94之一或多個可變區殘基進行保守性取代。
  4. 如申請專利範圍第3項之抗-IL-12抗體，其中該保守性取代包括SEQ ID NO：7之R59K、SEQ ID NO：7之R98K、SEQ ID NO：7之R99K、及SEQ ID NO：8之D1E之一或多者。
  5. 一種單離之哺乳類抗-IL-12抗體，其包含SEQ ID NOS：1、2及3之胺基酸序列的重鏈互補決定區(CDR)及SEQ ID NOS：4、5及6之胺基酸序列的輕鏈CDR，其中除了下列胺基酸殘基以外：SEQ ID NO：1之1、2及3個；SEQ ID NO：2之8及10個；SEQ ID NO：3之1-5個；SEQ ID NO：4之7及9個；SEQ ID NO：5之7個；及SEQ ID NO：6之4-6個，一或多個CDR殘基被不同胺基酸取代。
  6. 一種單離之哺乳類抗-IL-12抗體，其包含SEQ ID NOS：1、2及3之胺基酸序列的重鏈互補決定區(CDR)及SEQ ID NOS：4、5及6之胺基酸序列的輕鏈CDR，其中一或多個下列胺基酸殘基之CDR殘基進行保守性取代：SEQ ID NO：1之1、2及3個； SEQ ID NO：2之8及10個；SEQ ID NO：3之1-5個；SEQ ID NO：4之7及9個；SEQ ID NO：5之7個；及SEQ ID NO：6之4-6個。
  7. 如申請專利範圍第6項之抗-IL-12抗體，其中該保守性取代包括SEQ ID NO：2之R8K與SEQ ID NO：3之R1K之一或二者。
  8. 一種用於改變包含SEQ ID NO：7之重鏈可變區胺基酸序列與SEQ ID NO：8之輕鏈可變區胺基酸序列之單離哺乳類抗-IL-12抗體之活性之方法，其包括以不同胺基酸殘基取代SEQ ID NO：7之胺基酸殘基28、31、32、33、57、59、98、99、100、101、102、與103及SEQ ID NO：8之胺基酸殘基1、30、32、49、56、92、93、與94之一或多個可變區殘基。
  9. 根據申請專利範圍第8項之方法，進一步包括測試具有所得重鏈與輕鏈可變區序列之抗體活性之步驟。
  10. 一種抗體，係利用根據申請專利範圍第8項之方法製得。
  11. 一種用於改變包含SEQ ID NO：1、2及3之重鏈互補決定區(CDR)胺基酸序列與SEQ ID NO：4、5及6之輕鏈CDR胺基酸序列之單離哺乳類抗-IL-12抗體之活性之方法，其包括以不同胺基酸殘基取代一或多個下列胺基酸殘基之CDR殘基：SEQ ID NO：1之1、2及3個；SEQ ID NO：2之8及10個；SEQ ID NO：3之1-5個；SEQ ID NO：4之7及9個；SEQ ID NO：5之7個；及SEQ ID NO：6之4-6個。
  12. 根據申請專利範圍第11項之方法，進一步包括測試具有所得重鏈與輕鏈可變區序列之抗體活性之步驟。
  13. 一種抗體，係利用根據申請專利範圍第11項之方法製得。
  14. 一種單離抗體，其包含至少兩個互補決定區(CDRs)，其中該抗體與與根據申請專利範圍第2至7項中任一項之單離抗體完整結合。
  15. 一種組成物，其包含根據申請專利範圍第2至7項中任一項之單離之哺乳類抗-IL-12抗體，及至少一種醫藥上 可接受之載劑或稀釋劑。
  16. 根據申請專利範圍第15項之組成物，其進一步包括含有效量之至少一種選自下列化合物或蛋白質之至少一種組成物：TNF拮抗劑、抗風濕藥劑、肌肉鬆弛劑、麻醉劑、非類固醇抗炎性藥物、止痛劑、麻醉劑、鎮靜劑、局部麻醉劑、神經肌肉封阻劑、抗微生物劑、抗牛皮癬劑、皮質類固醇、肌肉增強劑、促紅血球生成素、免疫處理、免疫球蛋白、免疫抑制劑、生長激素、激素替代藥物、放射性藥劑、抗抑鬱劑、抗精神病藥物、興奮劑、氣喘藥物、β促效劑、吸入性類固醇、腎上腺素或類似物、細胞介素、及細胞介素拮抗劑。
  17. 一種醫療裝置，其包含根據申請專利範圍第2至7項中任一項之單離之哺乳類抗-IL-12抗體。
TW094145355A 2004-12-21 2005-12-20 抗-ｉｌ-１２抗體、抗原決定部位、組成物、方法及用途 TWI406943B (zh)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US63781904P 2004-12-21 2004-12-21

Publications (2)

Publication Number Publication Date
TW200636065A TW200636065A (en) 2006-10-16
TWI406943B true TWI406943B (zh) 2013-09-01

Family

ID=36602254

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
TW094145355A TWI406943B (zh) 2004-12-21 2005-12-20 抗-ｉｌ-１２抗體、抗原決定部位、組成物、方法及用途

Country Status (22)

Country Link
US (8) US8080247B2 (zh)
EP (1) EP1836294A4 (zh)
JP (1) JP2008523842A (zh)
KR (1) KR20070094927A (zh)
CN (1) CN101120087A (zh)
AR (1) AR051805A1 (zh)
AU (1) AU2005319278A1 (zh)
BR (1) BRPI0515858A (zh)
CA (1) CA2591813A1 (zh)
CR (1) CR9265A (zh)
EA (1) EA016022B1 (zh)
IL (1) IL183939A0 (zh)
MY (1) MY157915A (zh)
NI (1) NI200700155A (zh)
NO (1) NO20073778L (zh)
NZ (2) NZ583153A (zh)
PE (1) PE20061115A1 (zh)
SG (1) SG158150A1 (zh)
TW (1) TWI406943B (zh)
UY (1) UY29291A1 (zh)
WO (1) WO2006069036A2 (zh)
ZA (1) ZA200706036B (zh)

Families Citing this family (33)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6706264B1 (en) * 1994-03-14 2004-03-16 Genetics Institute, Llc Use of IL-12 antagonists in the treatment of conditions promoted by an increase in levels of IFN-y
US7883704B2 (en) * 1999-03-25 2011-02-08 Abbott Gmbh & Co. Kg Methods for inhibiting the activity of the P40 subunit of human IL-12
US6914128B1 (en) 1999-03-25 2005-07-05 Abbott Gmbh & Co. Kg Human antibodies that bind human IL-12 and methods for producing
US7736650B2 (en) * 2004-12-21 2010-06-15 Centocor, Inc. Anti-IL-12 antibody based vectors, host cells, and methods of production and uses
TW201444869A (zh) * 2005-06-30 2014-12-01 Abbvie Inc Ｉｌ-１２／ｐ４０結合蛋白
PT1933869E (pt) 2005-09-01 2009-12-24 Schering Corp Utilização de antagonistas de il-23 e il-para tratar a doença inflamatória ocular auto-imune
HUE033630T2 (en) * 2006-10-02 2017-12-28 Squibb & Sons Llc CXCR4 binding human antibodies and their use
MX2009004351A (es) 2006-10-27 2009-05-12 Abbott Biotech Ltd Anticuerpos anti-htnfalfa cristalinos.
CN104524567A (zh) 2007-01-16 2015-04-22 阿布维公司 用于治疗银屑病的方法
MX2009010361A (es) * 2007-03-29 2009-10-16 Abbott Lab Anticuerpos il-12 anti-humanos cristalinos.
US8753839B2 (en) 2007-08-08 2014-06-17 Abbvie Inc. Compositions and methods for crystallizing antibodies
EP2205276A4 (en) * 2007-09-28 2012-08-15 Janssen Biotech Inc ANTI-IL-12 / 23P40 ANTIBODIES, EPITOPES, FORMULATIONS, COMPOSITIONS, METHODS AND USES
US8975382B2 (en) 2007-11-27 2015-03-10 Ablynx N.V. Amino acid sequences directed against HER2 and polypeptides comprising the same for the treatment of cancers and/or tumors
TW201513883A (zh) 2008-03-18 2015-04-16 Abbvie Inc 治療牛皮癬的方法
AR073060A1 (es) 2008-08-14 2010-10-13 Arana Therapeutic Ltd Anticuerpos anti-il-12/il-23
KR20140048229A (ko) * 2009-09-14 2014-04-23 애브비 인코포레이티드 건선을 치료하는 방법
JO3244B1 (ar) 2009-10-26 2018-03-08 Amgen Inc بروتينات ربط مستضادات il – 23 البشرية
TWI505838B (zh) * 2010-01-20 2015-11-01 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Stabilized antibody solution containing
JP2014506132A (ja) * 2011-01-07 2014-03-13 アッヴィ・インコーポレイテッド 抗ｉｌ−１２／ｉｌ−２３抗体およびその使用
CN105572380A (zh) * 2014-11-06 2016-05-11 上海市东方医院 Il-12在诊断和治疗非小细胞肺癌远处转移中的应用
JP6871876B2 (ja) * 2015-03-11 2021-05-19 ラッシュ ユニヴァーシティ メディカル センター がんを治療するための組成物と方法
RU2757314C2 (ru) 2016-01-22 2021-10-13 Мерк Шарп И Доум Корп. Антитела против фактора свертывания xi
TWI752964B (zh) 2016-06-14 2022-01-21 美商默沙東藥廠 抗凝血因子ｘｉ抗體
WO2018038243A1 (ja) * 2016-08-25 2018-03-01 Ｊｃｒファーマ株式会社 抗体融合蛋白質の製造方法
TW201922780A (zh) * 2017-09-25 2019-06-16 美商健生生物科技公司 以抗ｉｌ１２／ｉｌ２３抗體治療狼瘡之安全且有效之方法
CN109813897A (zh) * 2017-11-18 2019-05-28 镇江亿特生物科技发展有限公司 盐酸可乐定快速时间分辨荧光免疫层析定量检测试纸条
WO2019220412A2 (en) 2018-05-18 2019-11-21 Janssen Biotech, Inc. Safe and effective method of treating lupus with anti-il12/il23 antibody
US11744866B2 (en) 2020-03-18 2023-09-05 Sabine Hazan Methods of preventing and treating COVID-19 infection with probiotics
US11253534B2 (en) 2020-03-23 2022-02-22 Sabine Hazan Method of preventing COVID-19 infection
US11278520B2 (en) 2020-03-31 2022-03-22 Sabine Hazan Method of preventing COVID-19 infection
CN111549834B (zh) * 2020-05-17 2021-08-10 福建金鼎建筑发展有限公司 一种基于地表水渗透的基坑开挖模型试验装置及使用方法
WO2023004282A2 (en) 2021-07-19 2023-01-26 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Il12 receptor agonists and methods of use thereof
CN114468015B (zh) * 2022-03-15 2023-10-17 重庆大学 一种高肉粘性的胶原肠衣及其制备方法和用途

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20030157105A1 (en) * 2001-05-30 2003-08-21 Carton Jill M. Anti-p40 immunglobulin derived proteins, compositions, methods and uses

Family Cites Families (19)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE68926859T2 (de) 1988-11-10 1997-02-13 Genetics Inst Natürlicher killerzellen-stimulationsfaktor
US5811523A (en) * 1988-11-10 1998-09-22 Trinchieri; Giorgio Antibodies to natural killer stimulatory factor
US5457038A (en) * 1988-11-10 1995-10-10 Genetics Institute, Inc. Natural killer stimulatory factor
ATE368112T1 (de) 1989-12-22 2007-08-15 Hoffmann La Roche Zytotoxischer lymphozyten-reifefaktor 40kd untereinheit und monoklonale antikörper spezifisch dafür
US5780597A (en) * 1989-12-22 1998-07-14 Hoffmann-La Roche Inc. Monoclonal antibodies to cytotoxic lymphocyte maturation factor
DE4315127A1 (de) * 1993-05-07 1994-11-10 Behringwerke Ag Arzneimittel enthaltend die Untereinheit p40 von Interleukin-12
ZA95960B (en) * 1994-03-14 1995-10-10 Genetics Inst Use of interleukin-12 antagonists in the treatment of autoimmune diseases
BR9507505A (pt) 1994-04-22 1997-09-02 Corixa Corp Molécula de dna isolada vetor de expressão recombinante célula hospedeira método para preparar um polipeptídeo que estimula uma resposta imunológica th1 em células mononucleares do sangue periférico obtidas a partir de um individuo infectado com leishmania polipeptídeo método para avaliar a capacidade de um paciente de gerar uma resposta imunológica método para melhorar uma resposta imunológica celular e/ou humoral a um antígeno de um paciente método para estimular a produção de anticorpos em um
US5891680A (en) * 1995-02-08 1999-04-06 Whitehead Institute For Biomedical Research Bioactive fusion proteins comprising the p35 and p40 subunits of IL-12
EP1978033A3 (en) 1995-04-27 2008-12-24 Amgen Fremont Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US5853697A (en) 1995-10-25 1998-12-29 The United States Of America, As Represented By The Department Of Health & Human Services Methods of treating established colitis using antibodies against IL-12
AU6150498A (en) * 1997-02-07 1998-08-26 Wistar Institute, The Methods and compositions for the inhibition of interleukin-12 production
US6060284A (en) * 1997-07-25 2000-05-09 Schering Corporation DNA encoding interleukin-B30
TR200002145T2 (tr) 1998-01-23 2000-11-21 F.Hoffmann-La Roche Ag İnsan IL-12'ye karşı antikorlar
KR20140094647A (ko) 1999-03-25 2014-07-30 아비에 도이치란트 게엠베하 운트 콤파니 카게 사람 ｉｌ-12에 결합하는 사람 항체 및 이의 제조방법
US6914128B1 (en) * 1999-03-25 2005-07-05 Abbott Gmbh & Co. Kg Human antibodies that bind human IL-12 and methods for producing
WO2001019373A2 (en) 1999-09-17 2001-03-22 Basf Aktiengesellschaft Methods and compositions for modulating responsiveness to corticosteroids
US6902734B2 (en) * 2000-08-07 2005-06-07 Centocor, Inc. Anti-IL-12 antibodies and compositions thereof
KR100708398B1 (ko) 2002-03-22 2007-04-18 (주) 에이프로젠 인간화 항체 및 이의 제조방법

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20030157105A1 (en) * 2001-05-30 2003-08-21 Carton Jill M. Anti-p40 immunglobulin derived proteins, compositions, methods and uses

Also Published As

Publication number Publication date
US20130129617A1 (en) 2013-05-23
EA016022B1 (ru) 2012-01-30
US8894990B2 (en) 2014-11-25
US20160319014A1 (en) 2016-11-03
NZ555658A (en) 2010-04-30
SG158150A1 (en) 2010-01-29
AU2005319278A1 (en) 2006-06-29
EP1836294A4 (en) 2009-06-17
US9862766B2 (en) 2018-01-09
PE20061115A1 (es) 2006-10-12
WO2006069036A2 (en) 2006-06-29
CR9265A (es) 2009-01-16
NO20073778L (no) 2007-09-18
US9605067B2 (en) 2017-03-28
BRPI0515858A (pt) 2008-08-12
US20190085069A1 (en) 2019-03-21
KR20070094927A (ko) 2007-09-27
JP2008523842A (ja) 2008-07-10
WO2006069036A3 (en) 2007-07-26
UY29291A1 (es) 2006-03-31
US20090202549A1 (en) 2009-08-13
IL183939A0 (en) 2008-12-29
CN101120087A (zh) 2008-02-06
US20180079809A1 (en) 2018-03-22
US20150030608A1 (en) 2015-01-29
US20120207670A1 (en) 2012-08-16
EA200701363A1 (ru) 2007-12-28
ZA200706036B (en) 2009-01-28
EP1836294A2 (en) 2007-09-26
AR051805A1 (es) 2007-02-07
NI200700155A (es) 2008-05-07
US20170157247A1 (en) 2017-06-08
TW200636065A (en) 2006-10-16
NZ583153A (en) 2011-06-30
US9428579B2 (en) 2016-08-30
US8329170B2 (en) 2012-12-11
MY157915A (en) 2016-08-15
CA2591813A1 (en) 2006-06-29
US8080247B2 (en) 2011-12-20

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US10576150B2 (en) Anti-IL-23 antibodies
TWI406943B (zh) 抗-ｉｌ-１２抗體、抗原決定部位、組成物、方法及用途
TWI445546B (zh) 抗-ｉｌ-６抗體，組成物，方法及用途
EP1971366B1 (en) Human anti-il-23 antibodies, compositions, methods and uses
US20090181027A1 (en) Anti-IL-12/23p40 Antibodies, Epitopes, Formulations, Compositions, Methods and Uses
AU2020200404A1 (en) Anti-IL-12 antibodies, epitopes, compositions, methods and uses
AU2012203565A1 (en) Anti-IL-12 antibodies, epitopes, compositions, methods and uses
BRPI0612728A2 (pt) anticorpos de anti-il-23p19, composições, métodos e usos