TWI402077B - 使用抗介白素－２０抗體治療類風濕性關節炎之醫藥組合物 - Google Patents

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Description

使用抗介白素-20抗體治療類風濕性關節炎之醫藥組 合物
本發明係關於一種治療類風濕性關節炎及骨質疏鬆症之方法與醫藥組合物。
介白素-20(IL-20)係屬於介白素-10(IL-10)家族之一種易導致發炎性細胞激素(proinflammatory cytokine)，其參與在許多和發炎反應有關疾病之致病機轉中，例如類風濕性關節炎和骨質疏鬆症。
類風濕性關節炎係一種常見之發炎性關節炎疾病，其主要病癥係由於單核吞噬細胞(mononuclear phagocytes)、淋巴球(lymphocytes)及嗜中性球(neutrophiles)滲入滑液膜(synovial membrane)而引起滑液膜關節內產生之劇烈發炎反應。近期研究更進一步指出，有些細胞激素(cytokines)及趨化激素(chemokines)在類風濕性關節炎之發展形成上扮演極為重要的角色。
另外，骨質疏鬆症之病癥係個體內呈現相對較低之骨質量及骨組織流失，最後導致骨骼之脆弱易碎。目前已知許多因素皆會導致骨組織之淨流失量上升，例如過低量之動情激素(estrogen)、鈣質和維生素D攝取不均衡及發炎反應。
本發明係提供一種將有效劑量之抗介白素-20抗體7E(anti-IL-20 antibody 7E)投予有此需要之個體以治療其類風濕性關節炎或骨質疏鬆症之方法；另外，本發明亦提供一種用以治療類風濕性關節炎或骨質疏鬆症之醫藥組合物，其係包含有效劑量之抗介白素-20抗體7E。在本發明之一實施例中，抗介白素-20抗體7E係為一含有單株抗體7E(monoclonal antibody 7E,mAb 7E)之重鏈變異區(VH )及輕鏈變異區(VL )之抗體，其中單株抗體7E係由寄存於美國菌種保存中心(American Type Culture Collection,ATCC)編號PTA-8687之融合瘤細胞株所分泌之抗體。其中，此抗體可以例如是但不限於單株抗體7E、單株抗體7E之功能性片段(例如F(ab’)2 或Fab)、單鏈抗體(single-chain antibody)或嵌合抗體(chimeric antibody)。另外，在其他實施例中，抗介白素-20抗體7E係可為人類化(humanized)之單株抗體7E。
另外，為對有需要之個體產生較佳的治療效果，在上述治療類風濕性關節炎之方法中，可在給予個體有效劑量之抗介白素-20抗體7E時，同時給予個體有效劑量之依那西普多胜肽(etanercept polypeptide)。在一實施例中，依那西普多胜肽係為包含人類可溶性腫瘤壞死因子(TNF)受體(序列辨識第5號(SEQ ID NO：5)，序列如檢附之序列表所示)及人類免疫球蛋白G1(immunoglobulin G1,IgG1)之Fc成分之融合蛋白。
在本文中所稱「治療」一詞意指施用或給予一種或一種以上之活性劑至一個體，其中個體係為患有類風濕性關節炎、骨質疏鬆症、兩者疾病之一之病癥或具有罹患此兩者疾病之一之傾向而需以治療、治癒、減輕、舒緩、改變、改善、改進或影響此兩者疾病、兩者疾病之病癥或罹患此兩者疾病之傾向為目的者。另外，在本文中所稱個體之「有效劑量」意指每一活性劑為達到治療個體之目的而所需之劑量，其劑量不以單獨使用或和其他一種或一種以上之活性劑組合使用有所不同。一如熟習此項技術者所認知，有效劑量仍會依據投藥方式、輔藥之使用及和其他活性劑之並合使用(co-usage)而變化。
需注意者，本發明之範疇係包括使用抗介白素-20抗體7E並與依那西普多胜肽共同使用以治療類風濕性關節炎及骨質疏鬆症，製備一醫療組合藥物以治療類風濕性關節炎及骨質疏鬆症。
本發明之內容將更詳細地描述於以下實施例中。本發明之其他特徵或優勢亦會藉由下列圖式、多項實施例及申請專利範圍加以詳細說明。
本發明係關於一種使用抗介白素-20抗體7E(anti-IL-20 antibody 7E)治療類風濕性關節炎及骨質疏鬆症之方法。
在下列實施利中，「抗介白素-20抗體7E」意指一單株抗體7E(monoclonal antibody 7E,mAb 7E)及其功能性變異體。單株抗體7E是由寄存於美國菌種保存中心(American Type Culture Collection,ATCC,10801 University Boulevard,Manassas,VA 20110-2209,USA)編號PTA-8687融合瘤細胞株所分泌之抗體。此融合瘤細胞株將會在美國專利申請後逕自無條件地公開釋出，並會於美國菌種保存中心中保存，其保存期限係自即日起之五年內，而在維持本專利有效性的前提下，其保存期限係自寄存當日起算至少三十年。
另外，單株抗體7E之功能對等者可為具有下列特性之任一抗體，(1)能和人類介白素-20專一性地結合(2)具有一個和單株抗體7E之重鏈變異區(VH )(序列如檢附序列表中之SEQ ID NO：2所示，其中SEQ ID NO：2序列係由SEQ ID NO：1之核苷酸序列所編碼)至少70%(例如80%、90%或95%)相同之重鏈變異區，同時亦具有一個和單株抗體7E之輕鏈變異區(VL )(序列如檢附序列表中SEQ ID NO：4所示，其中SEQ ID NO：4係由SEQ ID NO：3之核苷酸序列所編碼)至少70%(例如80%、90%或95%)相同之輕鏈變異區。其詳細說明請參考美國專利申請號11/763,812。
承上所述，兩胺基酸序列之同源性百分比(percent homology)係可依照一已知之演算法所決定，其中演算法係於「Karlin and Altschul,Proc,Natl. Acad. Sci. USA 87：2264-2268,1990.」中提出，並於「Karlin and Altschul,Proc,Natl. Acad. Sci. USA 5873-5877,1993.」中作修飾。此演算法之後便成為NBLAST及XBLAST兩程式之演算基礎(Altschul et al.,J.Mol.Biol. 215：403-410,1990.)。BLAST蛋白質搜尋係由XBLAST程式在分數(score)為50及字元長度(wordlength)為30之設定條件下所執行，以獲得多胜肽樣本之同源胺基酸序列。使用在「Altschul et al.,Nucleic Acids Res. 25：3389-3402,1997.」中揭露之間隔BLAST(gapped BLAST)程式以獲得可用作進行序列比較之間隔排比(gapped alignments)結果。當運算BLAST及間隔BLAST程式時，各程式(例如XBLAST及NBLAST)分別使用其預設參數。詳細說明請參考www.ncbi.nih.gov。
單株抗體7E之功能對等者(functional equivalent)可為單株抗體7E在酶分解作用後所產生之片段，例如Fab或F(ab’)2 。其功能對等者亦可為經由遺傳工程產生具有單株抗體7E之重鏈及輕鏈變異區兩區域之抗體產物，其係例如但不限於一段單鏈抗體及一老鼠-人類嵌合抗體。其中，單鏈抗體上之重鏈及輕鏈變異區兩區域係經由連接子(linker)(例如胜肽連接子)共價融合而形成；而嵌合抗體上之重鏈及輕鏈變異區兩區域係分別和人類免疫球蛋白G(IgG)之重鏈及輕鏈之固定區連接而形成。
單株抗體7E之功能對等者亦可為人類化抗體。在本實施例中所稱「人類化抗體」意指由一非人類之抗體，其重鏈變異區及輕鏈變異區之框架區(frame regions，FRs)及固定區(若有)係被人類抗體之框架區及固定區取代而形成者。另外，單株抗體7E之功能對等者亦可為於其重 鏈變異區或輕鏈變異區之框架區上引致突變而產生者。熟悉該項技術者應當瞭解，抗體之抗原專一性係依據其上之互補決定區(complementarity-determining regions，CDRs)來判別，因此，框架區內產生之突變一般不會影響抗體專一性，而判別抗體上之互補決定區或框架區則是根據其重鏈變異區或輕鏈變異區之胺基酸序列來決定，詳細說明請參考www.bioinf.org.uk/abs。本實施例所描述之功能對等者，其結合專一性可使用此技術領域習知之方法進行檢驗，例如酵素免疫分析法(ELISA)或西方墨點分析法(western-blot analysis)。
單株抗體7E及其功能對等者可經由習知方式製備，例如遺傳工程技術或純化上述融合瘤細胞所分泌之抗體。
在本實施例所述之抗介白素-20抗體7E在治療類風濕性關節炎及骨質疏鬆症上可單獨使用或和依那西普多胜肽(etanercept polypeptide)組合使用。其中，「依那西普多胜肽」意指一融合蛋白，其包含腫瘤壞死因子(tumor necrosis factor,TNF)之可溶性受體及一免疫球蛋白之Fc成分。在本實施例中，可溶性腫瘤壞死因子受體係為一具有如檢附之序列表中SEQ ID NO：5胺基酸序列或其功能等同於人類可溶性腫瘤壞死因子受體者，其係為一個具有和SEQ ID NO：5胺基酸序列至少85%(例如90%、95%及98%)相同及能與人類腫瘤壞死因子結合之多胜肽。需注意者，依那西普多胜肽之製備可利用習知之重組技術來完成。
當用於治療類風濕性關節炎時，上述之抗體可選擇性地與依那西普多胜肽組合，並進一步地與可接受之醫藥載體混合以形成一醫藥組合物。於此，「可接受的」一詞意指載體必要能和醫藥組合物內之活性成分相包容(並以能穩定活性成分為佳)，且不可在治療過程中危害個體。一般而言，適宜之載體可包括微晶質纖維素(microcrystalline cellulose)、甘露糖醇(mannitol)、葡萄糖、脫脂奶粉、聚乙烯(polyvinylprrolidone)及澱粉，或是上述載體之組合。
對熟悉醫療技術者而言，投予抗介白素-20抗體之醫藥組合物至個體之慣用投藥方式會因待治療之疾病態樣或疾病發生之部位不同而有所變化。以治療類風濕性關節炎來說，含上述抗體之醫藥組合物可經由直接注射之方式投藥於滑液膜關節。另外，此醫藥組合物亦可經由其他慣用之方式投藥，例如皮下注射。此外，投藥之目的亦可利用投予注射型藥物載體之方式來達成，例如投予載有一、三或六個月藥劑之可注射性或生物分解性物質所形成之載體。
注射型醫藥組合物可含有不同載體，例如植物油、二甲基乙醯胺(dimethylactamide)、二甲基甲醯胺(dimethyformamide)、乳酸乙酯(ethyl lactate)、碳酸乙酯(ethyl carbonate)、蔻酸異丙酯(isopropyl myristate)、乙醇及多元醇(如甘油(glycerol)、丙烯乙二醇(propylene glycol)、液態丙烯乙二醇或其他相似物)。以靜脈注射來說，水溶性抗體可藉由點滴方式完成投藥，其係於點滴內裝有包含上述抗體及生理上可接受之輔藥所組成之藥物配方。舉例而言，生理上可接受之輔藥可包括5%之右旋葡萄糖、0.9%之生理食鹽水、林格式液(Ringer’s solution)或其他適宜之輔藥。需注意者，以上述抗體之易溶性鹽型態製成之無菌配方等肌肉內注射針劑，必須溶解於輔藥內再進行投藥，其中輔藥可以是注射用水、0.9%之生理食鹽水或5%之右旋葡萄糖溶液。
以上所述為使本發明所屬之技術領域中具有通常知識者可不經過度實驗即得以實施本發明及其完整內容，而下述之實施例僅為本發明揭露內容之舉例性，而非為限制性者。所有本發明所引用之出版物皆合併作為參考文獻。
實驗例1.使用單株抗體7E治療類風濕性關節炎
患有膠原蛋白引發性關節炎(collagen-induced arthritis,CIA)之老鼠是用來研究人類類風濕性關節炎之良好動物模型，本研究將使用此模型檢驗單株抗體7E對治療該疾病之功效。
八週大之雄性大白鼠(Sprague-Dawley rat)可以下列所述之方法在其體內引發CIA病症。首先，於大白鼠背部給予皮內注射200μl之乳狀液使其產生初始免疫反應，其中該乳狀液是由佛氏完全佐劑(Freund's complete adjuvant)、4毫克/毫升熱殺死之結合分枝桿菌(Arthrogen-CIA Chondrex,Redmond,WA,USA)及牛膠原蛋白第二型(CII;2毫克/毫升溶解於0.05M 醋酸)以體積比1：1：1之量組成。八天後，再於該大白鼠尾之根部給予其皮下注射相同之乳狀液100μl以補強免疫反應。在初始免疫作用發生後第11至第13天之間觀察大白鼠體內之CIA程度。
下列四組大白鼠為本研究之實驗對象：
第一組：健康之大白鼠
第二組：依上述方法引發患有CIA之大白鼠，於CIA發病一週後給予皮下注射磷酸鹽緩衝食鹽水(PBS)，
第三組：患有CIA之大白鼠，於CIA發病一週後給予皮下注射3毫克/公斤之單株抗體7E，及
第四組：患有CIA之大白鼠，於CIA發病一週後給予皮下注射3毫克/公斤之Etanercept(Enebrel，Weyth,USA)
以雙角規形夾測量每一隻已經過藥劑處理之大白鼠的後腳掌厚度(hind-paw thickness)。使用統計軟體Prism 4.0(GraphPad Software,San Diego,CA,USA.)將所獲得之所有初始資料進行統計分析，其後再使用克-瓦二氏單因子等級變異數分析(Kruskal-Wallis Test)對後腳掌厚度之統計數據進行比較。當P值<0.05時認定為有顯著差異。
如下圖表一所顯示，使用單株抗體7E可顯著降低患有CIA大白鼠之後腳掌增厚現象(P<0.05)並且其治療功效接近市售之抗類風濕性關節炎藥物Etanercept(參考Mihara et al.,Br J Pharmacol .,2008,154：153-164)。本結果指出單株抗體7E在治療類風濕性關節炎上具有和Etanercept相似的療效。
下述將檢視單株抗體7E在滑液組織內減少發炎反應媒介物質(inflammatory mediators)表現量之效果。在藥物處理後，分離患有CIA大白鼠膝關節內之滑液組織並將其懸浮於PBS溶液中。然後，將該組織進一步地進行均質化，並在4℃下以3000rpm離心十分鐘，最後再將以此方式獲得之上清液冷凍保存於-80℃以備分析。根據廠商所提供之操作說明，以夾層式ELISA(sandwich ELISA)對TNF-α、介白素-1β(1L-1β)(使用TNF-α及IL-1β套件；R&D Systems,Minneapolis,MN,USA)及介白素-20(使用介白素-20套件；PeproTech Asia/CytoLab,Rehovot,Israel)之表現量進行估量。而在相關的知識領域中已證實，這群發炎媒介物質在患有CIA大白鼠體內皆會被提高表現。
以此檢驗結果指出，和老鼠免疫球蛋白G(mIgG)相比，使用單株抗體7E及Etanercept皆可顯著地降低TNF-α、IL-1β及IL-20之表現量。更詳述之，相對於IgG處理後會在患有CIA大白鼠之滑液組織內所引起比控制組更高表現量之TNF-α、IL-1β及IL-20而言，使用單株抗體7E及Etanercept處理確實可顯著地降低TNF-α、IL-1β及IL-20之表現量。
實驗例2.同時使用單株抗體7E及Etanercept治療類風濕性關節炎
以實施例一中所描述之方法於大白鼠體內引發CIA病症，再將患有CIA之大白鼠隨機分成五組(數目=9)並依照下列表單於其CIA病發後給予一週三次之藥劑處理：
第一組：PBS
第二組：mIgG(Chemicon International,Inc.,Temecula,CA,USA)，
第三組：Etanercept(皮下注射6毫克/公斤)
第四組：單株抗體7E(皮下注射6毫克/公斤)，及
第五組：單株抗體7E(皮下注射3毫克/公斤)及
Etanercept(皮下注射3毫克/公斤)
首先，針對所有經過藥劑處理之大白鼠的後腳掌厚度依實驗例1中所描述之方法進行測量。與單獨以單株抗體7E或Etanercept處理時的結果比較，將兩者同時使用時可以在減少患有CIA大白鼠之後腳掌厚度上提供更加顯著之功效。
再者，利用在Hsu et al.,Arthritis Rheum. 2006,54：2722-2733.中所提出之方法，對大白鼠之每一後腳掌進行監控並對其給予其CIA嚴重性程度評分。一般來說，如果大白鼠之CIA嚴重性評分高於3，則該大白鼠即被認定具有嚴重之後腳掌腫脹，接著，再運用克-瓦二氏單因子等級變異數分析來比較不同組中所獲得之嚴重性評分，以評估結果是否具有統計上之顯著差異。如下圖表2所示，同時以單株抗體7E及Etanercept處理之大白鼠其嚴重性評分之中位數遠低於單獨使用單株抗體7E或Etanercept處理者。而且，此結果具有統計上之顯著差異(P<0.05)。
檢驗所有已經過藥劑處理之CIA大白鼠其是否具有嚴重後腳掌腫脹發生之情況並記錄之，其如圖1所示。出乎意料地，患有CIA之大白鼠以單株抗體7E或Etanercept處理時，其嚴重腫脹之發生率分別由100%降至22%及由100%降至33%，然而，同時使用該兩者時卻可使發生率由100%降至6%。此結果所達到之顯著差異可經由費雪精確檢定法(Fisher’s exact test)分析驗證再次確立，由此可知，同時使用單株抗體7E和Etanercept之組合可以遠比兩者之單獨使用效果更佳。
此外，在使用牛膠原蛋白引發初始免疫反應後之第二十五天，利用放射線影像(radio imaging)檢視患有CIA大白鼠藥劑處理後體內骨質損傷之嚴重性。經由觀察發現患有CIA之大白鼠經PBS及mIgG處理後(即第一及第二組大白鼠)，其後腳掌仍有嚴重之骨質損傷，然而，令人意外地，當利用單株抗體7E、Etanercept或兩者同時使用時(即第三到五組之大白鼠)，其局部腳踝骨質損傷之嚴重性會相對地輕微。而且，其差異在第一及第二及第三到第五組間係為顯著差異(P<0.01-0.05)。此結果可更進一步確認單株抗體7E對於患有CIA之大白鼠可達到和市售藥Etanercept相同之療效，亦可證實單株抗體7E及Etanercept之組合使用可發揮比兩者單獨使用時更佳之效果。
再者，使用配備有高解析度及低劑量X光掃描器之1076microCT-40系統進行分析評估，其顯微斷層掃描(microcomputed tomographic analysis)之結果顯示單株抗體7E之單獨使用或其和Etanercept之組合使用皆可達到減緩患有CIA之大白鼠的骨質損傷之功效。於此，掃描器中的X光管操作設定為：48千伏特(kV)之光子能量(photon energy)、200微安培(μA)電流及在0.5微米(mm)厚度濾光鏡下曝光1180毫秒，影像像素尺寸設定17.20微米，且設定掃描時間大約為15分鐘，其後將掃描所得之影像進行標準化重建，將每一脛骨樣本之資料組利用軟體(CTAn；Skyscan)重新抽樣，以使每一樣本皆可以用相同之方式定位。其餘之狀態設定則於分析過程中皆維持一致，例如閾值(threshold)。另外，骨內礦物質密度(bone mineral density)係為一種三維之骨質特徵參數，其係利用50片之連續切片進行分析所得，再將其結果和mIgG控制組分別透過電腦換成之百分比對價值(percentage versus values)之形式進行比較。
將患有CIA之大白鼠以PBS或mIgG處理後，取出其脛骨，將脛骨和健康控制組大白鼠體內所得之完整關節進行比較，發現前者呈現顯著之骨質損傷。然而，再同時比較患有CIA之大白鼠分別經單株抗體7E或mIgG處理後之情況，發現單株抗體7E確能減輕骨質流失此一病癥，而相對於單獨使用單株抗體7E或Etanercept，若同時使用此兩者則更能發揮治療功效。
除此之外，骨內礦物質密度係為一種可以用來評估疾病嚴重性之量化參數。在本實驗例中，將每一隻經藥劑處理後之大白鼠皆以上述之方法偵測其骨內礦物密度，結果發現，相對於mIgG處理之大白鼠，以單株抗體7E處理可以顯著地抑制大白鼠之骨質流失(P<0.05)，而當同時給予患有CIA之大白鼠單株抗體7E及Etanercept時更可以急遽地提升保護效果(P<0.01)。由腳踝關節所獲得之顯微斷層掃描結果亦可以支持放射方法所得之資料。
最後，檢驗患有CIA之大白鼠同時以單株抗體7E及Etanercept處理後其體內之TNF-α、IL-1β及IL-20之表現量，所得之結果顯示這些細胞激素之表現量皆會因此藥劑處理而被顯著地降低。
總結來說，上述之實驗結果論證使用單株抗體7E治療CIA是有效的，並且能夠透過降低關節炎之嚴重性及抑制骨質流失來達成。結果亦指出單株抗體7E及Etanercept之組合功效遠高於此兩者之單獨使用。
實驗例3.以單株抗體7E治療骨質疏鬆症
首先，引入十四週大之雌性BALB/C老鼠(台南國立成功大學實驗動物中心)，並飼養於受調控之實驗室環境中使其適應四天。老鼠以每三隻為單位分配於一個聚碳酸酯之牢籠中，該牢籠則置於一恆溫濕度(20-25℃及40-45%)之房間內。設定光暗循環為12小時光亮12小時黑暗，並供應其可自由取用之食物及水源。其後，使用50毫克/公斤的戊巴比妥(pentobarbital;Sigma-Aldrich,St. Louis,MO,USA)進行一般性麻醉下，接著對所有老鼠進行背部卵巢切除(dorsal ovariectomized,OVX)或假手術(falsely operated)(Sham控制組)兩者擇一。所謂之Sham控制組係指經由手術將兩側之卵巢暴露於肉眼可見之情況下，之後不經移除卵巢之動作而直接給予縫合。手術完成後靜待一週，待老鼠恢復之後隨機將其分成六組：
第一組：Sham控制組(數目=5)
第二組：無進一步處理之OVX老鼠
第三組：以mIgG 3毫克/公斤/3天(Chemicon International,Inc.,Temecula,CA,USA)處理之OVX老鼠(數目=7)
第四組：以17β-雌二醇10微克/公斤/天(17β-estradiol)(Sigma-Aldrich,St. Louis,MO,USA.)處理之OVX老鼠(數目=6)
第五組：以單株抗體7E(3毫克/公斤/3天)處理之OVX老鼠(數目=5)，及
第六組：以單株抗體7E(6毫克/公斤/3天)處理之OVX老鼠(數目=5)
做為正控制組之17β-雌二醇，其使用劑量係依據已知可對OVX老鼠達到治療效果之先前方法決定之。詳細說明請參考Cano et al.,Osteoporos Int . 2008,Jun;19(6)：793-800.。
兩個月後解剖各組老鼠進行觀察。將每一隻老鼠之脛骨於無菌環境下經由取出、清理並移除附著之軟性組織等手續，最後存放於3.7%之甲醛中。完成後依照上述實驗例2中之方法進行顯微斷層掃描及分析骨內礦物質密度。
依據本實驗例獲得之結果顯示，第二及第三組老鼠(無處理或以mIgG處理)之骨質損害程度遠高於第四到第六組(分別以17β-雌二醇、單株抗體7E 3毫克/公斤及單株抗體7E 6毫克/公斤處理)，代表單株抗體7E具有和17β-雌二醇相似之降低OVX老鼠骨質流失之療效。再者，相對於Sham控制組或經mIgG處理後之OVX老鼠，以單株抗體7E或17β-雌二醇處理者皆具有遠高出前兩者之骨內礦物質密度。總括來說，本結果證實利用單株抗體7E可透過減少骨質流失之方式來有效治療骨質疏鬆症。
以上所述僅為舉例性，而非為限制性者。任何未脫離本發明之精神與範疇，而對其進行之等效修改或變更，均應包含於後附之申請專利範圍中。
<110> 國立成功大學
<120> 使用抗介白素-20抗體治療類風濕性關節炎之醫藥組合物
<150>
<151>
<160> 5
<210> 1
<211> 363
<212> DNA
<213> 人類
<220>
<221> V_region
<223> 單株抗體7E之重鏈變異區
<400> 1
<210> 2
<211> 121
<212> PRT
<213> 人類
<400> 2
<210> 3
<211> 339
<212> DNA
<213> 人類
<220>
<221> V_region
<223> 單株抗體7E之輕鏈變異區
<400> 3
<210> 4
<211> 113
<212> PRT
<213> 人類
<400> 4
<210> 5
<211> 161
<212> PRT
<213> 人類
<400> 5
圖1為一數據圖表，其顯示依據不同條件處理下，健康老鼠及患有CIA老鼠其後腳掌腫脹之發生率；以及
圖2A、2B及2C為一組數據圖表，其顯示依據不同條件處理下，健康老鼠及膠蛋白誘發關節炎之老鼠體內TNF-α、介白素-20及介白素-1β之表現量。

Claims (7)

  1. 一種用於治療類風濕性關節炎之醫藥組合物，其包含有效劑量之一抗介白素-20抗體7E(anti-IL-20 antibody 7E)及有效劑量之一依那西普多胜肽(etanercept polypeptide)，該抗介白素-20抗體7E的重鏈變異區與SEQ ID NO：2之胺基酸序列至少70%相同，該抗介白素-20抗體7E的輕鏈變異區與SEQ ID NO：4之胺基酸序列至少70%相同，其中該醫藥組合物係投予有此需要之一個體。
  2. 如申請專利範圍第1項所述之用於治療類風濕性關節炎之醫藥組合物，其中該抗介白素-20抗體7E為一含有由寄存於美國菌種保存中心編號PTA-8687融合瘤細胞株所產生之單株抗體7E之重鏈及輕鏈變異區之抗體。
  3. 如申請專利範圍第2項所述之用於治療類風濕性關節炎之醫藥組合物，其中該抗介白素-20抗體7E為一單株抗體7E。
  4. 如申請專利範圍第2項所述之用於治療類風濕性關節炎之醫藥組合物，其中該抗介白素-20抗體7E為單株抗體7E之一功能性片段。
  5. 如申請專利範圍第2項所述之用於治療類風濕性關節炎之醫藥組合物，其中該抗介白素-20抗體7E為一單鏈抗體或一嵌合抗體。
  6. 如申請專利範圍第1項所述之用於治療類風濕性關節 炎之醫藥組合物，其中該抗介白素-20抗體7E為一人類化抗體。
  7. 如申請專利範圍第1項所述之用於治療類風濕性關節炎之醫藥組合物，其中該依那西普多胜肽為一含有人類可溶性腫瘤壞死因子(TNF)受體及人類免疫球蛋白G1(IgG1)之Fc成分之融合蛋白，該抗介白素-20抗體7E為一含有由寄存於美國菌種保存中心編號PTA-8687融合瘤細胞株所產生之單株抗體7E之重鏈及輕鏈變異區之抗體，該抗介白素-20抗體7E為一人類化抗體。
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Families Citing this family (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8454956B2 (en) * 2009-08-31 2013-06-04 National Cheng Kung University Methods for treating rheumatoid arthritis and osteoporosis with anti-IL-20 antibodies
US9127066B2 (en) * 2010-04-16 2015-09-08 National Cheng Kung University Methods for treating osteoporosis with anti-IL-20 receptor antibodies
US8535674B2 (en) 2010-06-15 2013-09-17 National Cheng Kung University Treating breast cancer and inhibiting cancer-associated bone loss with anti-IL-20 antibody
US8597647B1 (en) * 2012-05-22 2013-12-03 National Cheng Kung University Humanized anti-IL-20 antibody and uses thereof
US9221904B2 (en) 2012-07-19 2015-12-29 National Cheng Kung University Treatment of osteoarthritis using IL-20 antagonists
US8603470B1 (en) 2012-08-07 2013-12-10 National Cheng Kung University Use of IL-20 antagonists for treating liver diseases
US8852588B2 (en) 2012-08-07 2014-10-07 National Cheng Kung University Treating allergic airway disorders using anti-IL-20 receptor antibodies
US9512218B2 (en) 2013-06-17 2016-12-06 National Cheng Kung University Use of IL-20 antagonists for alleviating spinal cord injury
US20160130340A1 (en) * 2013-10-07 2016-05-12 Alderbio Holdings Llc Dosing regimens using anti-il-6 antibodies for the treatment of rheumatoid and psoriatic arthritis
US9982043B2 (en) 2016-06-03 2018-05-29 National Cheng Kung University Use of IL-20 antagonists for treating pancreatic cancer

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20030148955A1 (en) * 1999-04-19 2003-08-07 Pluenneke John D. Soluble tumor necrosis factor receptor treatment of medical disorders
US20060142550A1 (en) * 2003-05-23 2006-06-29 Chi-Mei Medical Center Antibodies to interleukin-20 and method for inhibiting interleukin-20 induced cell proliferation

Family Cites Families (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5605690A (en) * 1989-09-05 1997-02-25 Immunex Corporation Methods of lowering active TNF-α levels in mammals using tumor necrosis factor receptor
US6649779B2 (en) * 1997-05-02 2003-11-18 Wyeth Estrenes
US6610286B2 (en) * 1999-12-23 2003-08-26 Zymogenetics, Inc. Method for treating inflammation using soluble receptors to interleukin-20
US7122632B2 (en) * 1999-12-23 2006-10-17 Zymogenetics, Inc. Soluble Interleukin-20 receptor
US20050143333A1 (en) * 2001-05-18 2005-06-30 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of interleukin and interleukin receptor gene expression using short interfering nucleic acid (SINA)
US20040235808A1 (en) * 2001-09-21 2004-11-25 Jiabing Wang Androstanes as androgen receptor modulators
JP2005511593A (ja) * 2001-11-08 2005-04-28 メルク　エンド　カムパニー　インコーポレーテッド 骨粗鬆症を治療するための組成物及び方法
WO2005052001A2 (en) * 2003-11-21 2005-06-09 Zymogenetics, Inc. Anti-il-20 receptor antibodies and binding partners and methods of using in inflammation
AU2006212807A1 (en) * 2005-02-08 2006-08-17 Zymogenetics, Inc. Anti-IL-20, anti-IL-22 and anti-IL-22RA antibodies and binding partners and methods of using in inflammation
US7611705B2 (en) * 2007-06-15 2009-11-03 National Cheng Kung University Anti-IL-20 antibody and its use in treating IL-20 associated inflammatory diseases

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20030148955A1 (en) * 1999-04-19 2003-08-07 Pluenneke John D. Soluble tumor necrosis factor receptor treatment of medical disorders
US20060142550A1 (en) * 2003-05-23 2006-06-29 Chi-Mei Medical Center Antibodies to interleukin-20 and method for inhibiting interleukin-20 induced cell proliferation

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Wei CC, et al. "IL-20: biological functions and clinical implications" Journal of Biomedical Science 2006;13(5):601-612. *

Also Published As

Publication number Publication date
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