TWI388559B - 經取代之芳基磺醯胺類 - Google Patents

Description

經取代之芳基磺醯胺類

本發明涉及取代的芳基磺醯胺和它們的製備方法以及它們在製備治療和/或預防疾病的藥物中的應用，特別是作為抗病毒劑的應用，所述抗病毒劑特別地針對巨細胞病毒。

WO 02/085869描述了作為抗病毒劑的，尤其是針對巨細胞病毒的取代的芳基磺醯胺。

本發明的一個目的是提供用於治療人和動物的病毒感染疾病的新的化合物，其具有相等或改善的抗病毒活性，改善的藥物代謝動力學，尤其是更長的半衰期和/或改善的口服生物利用度，其代謝降解途徑在人和一般的tox－物種諸如大鼠和狗之間沒有明顯不同。

令人驚奇的是，發現在本發明中描述的取代的芳基磺醯胺具有抗病毒活性，顯示改善的藥物代謝動力學性質並且它們的代謝降解途徑在人、大鼠和狗中沒有明顯不同。

本發明涉及下式的化合物 其中A表示下式的基團 其中^＊ 是與吡啶環的碳原子的連接位點和#是與苯環的碳原子的連接位點，R¹ 表示氫，胺基或甲基羰基胺基，R² 表示氫或鹵素，R³ 表示氫、鹵素或氰基，R⁴ 表示氫、鹵素或氰基，R⁵ 表示氫或鹵素，R⁶ 表示氫或鹵素，R⁷ 表示氫、鹵素或C₁ －C₃ －烷基，R⁸ 表示氫、鹵素或C₁ －C₃ －烷基，和其鹽，其溶劑合物和其鹽的溶劑合物。

本發明的化合物是式(I)的化合物及其鹽、其溶劑合物及其鹽的溶劑合物，以及作為示例性實施方案的在下文提及的化合物及其鹽、溶劑合物及其鹽的溶劑合物，如果由式(I)所涵蓋並且在下文提及的化合物還不是鹽、溶劑合物和所述鹽的溶劑合物。

根據它們的結構，本發明的化合物以立體異構型(對映異構體，非對映異構體)存在。因此，本發明涉及對映異構體或非對映異構體及其各自的混合物。從對映異構體和/或非對映異構體的這些混合物中，立體異構純的組分可以以已知方式分離出來是可能的。

如果本發明的化合物可以以互變異構形式存在，本發明包括所有的互變異構形式。

優選用於本發明的目的鹽是本發明的化合物的生理可接受的鹽。然而，本身不適合於藥用但是可以用於例如分離或純化本發明的化合物的鹽也被包括在內。

本發明的化合物的生理可接受的鹽包括無機酸、羧酸和磺酸的酸加成鹽，例如鹽酸、氫溴酸、硫酸、磷酸、甲磺酸、乙磺酸、甲苯磺酸、苯磺酸、萘二磺酸、乙酸、三氟乙酸、丙酸、乳酸、酒石酸、蘋果酸、檸檬酸、富馬酸、馬來酸和苯甲酸的鹽。

本發明的化合物的生理可接受的鹽還包括常用的鹼的鹽，諸如，作為實例，並且優選地鹼金屬鹽(例如，鈉和鉀鹽)，鹼土金屬鹽(例如鈣和鎂鹽)和衍生自氨或具有1－16個碳原子的有機胺的銨鹽，所述有機胺諸如作為實例，並且優選地，乙胺、二乙胺、三乙胺、乙基二異丙胺、單乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、二環已胺、二甲基胺基乙醇、普魯卡因、二苄基胺、N －甲基嗎啉、精氨酸、賴氨酸、乙二胺和N －甲基哌啶。

對於本發明的目的而言，溶劑合物指通過與溶劑分子的配位作用形成固體或液體狀態的複合物的本發明的化合物的那些形式。水合物是溶劑合物的特殊形式，其中配位作用與水發生。

此外，本發明還包括本發明化合物的前藥。術語“前藥”包括這樣的化合物，所述化合物本身可以是具有生物學活性或不具有生物學活性，但是在它們在體內停留期間，被轉化為本發明的化合物(例如通過代謝或水解作用)。

對於本發明的目的而言，除非另外指出，取代基具有下列含義：烷基 表示直鏈或支鏈烷基原子團，其通常具有1－3，特別優選地1－2個碳原子，作為實例並且優選地是甲基、乙基、正丙基和異丙基。

鹵素 表示氟、氯、溴和碘，優選地是氟和氯。

在可以代表A的基團的式中，鄰近存在^＊ 或#的線的終點不表示碳原子或CH₂ －基團，而是與連接A的原子鍵合的成分。

優選式(I)的那些化合物，其中A表示下式的基團 其中^＊ 是與吡啶環的碳原子的連接位點和#是與苯環的碳原子的連接位點，R¹ 表示氫、胺基或甲基羰基胺基，R² ，R³ 和R⁴ 表示氫，R⁵ 表示氫或鹵素，R⁶ 表示氫或鹵素，R⁷ 和R⁸ 表示氫，和其鹽，其溶劑合物和其鹽的溶劑合物。

還優選式(I)的化合物，其中A表示下式的基團 其中^＊ 是與吡啶環的碳原子的連接位點和#是與苯環的碳原子的連接位點，R¹ 表示胺基或甲基羰基胺基，R² ，R³ 和R⁴ 表示氫，R⁵ 表示氫，R⁶ 表示氫或鹵素，R⁷ 和R⁸ 表示氫，和其鹽，其溶劑合物和其鹽的溶劑合物。

還優選式(I)的化合物，其中A表示下式的基團 其中^＊ 是與吡啶環的碳原子的連接位點和#是與苯環的碳原子的連接位點。

還優選式(I)的化合物，其中R¹ 表示胺基。

還優選式(I)的化合物，其中R² 表示氫。

還優選式(I)的化合物，其中R³ 表示氫。

還優選式(I)的化合物，其中R⁴ 表示氫。

還優選式(I)的化合物，其中R⁵ 表示氫。

還優選式(I)的化合物，其中R⁶ 表示氟。

還優選式(I)的化合物，其中R⁵ 表示氫並且R⁶ 表示氟。

還優選式(I)的化合物，其中R⁷ 表示氫。

還優選式(I)的化合物，其中R⁸ 表示氫。

在原子團的各個組合或優選組合中的具體指出的原子團的定義，不管對於所述原子團所指出的特定組合如何，根據需要也被另一組合的原子團的定義所替代。

特別優選兩個或更多上述優選範圍的組合。

本發明還涉及製備式(I)的化合物的方法，其中下式的化合物 與下式的化合物反應 在所述式(II)中，其中A，R¹ ，R² ，R³ ，R⁴ ，R⁵ 和R⁶ 具有上述指定的含義，在所述式(III)中，R⁷ 和R⁸ 具有上述指定的含義，並且X¹ 表示鹵素、優選地是氯或溴，或羥基。

如果X¹ 表示鹵素，反應通常在鹼存在的情況下，優選地在0℃－40℃溫度範圍內，在大氣壓下，在惰性溶劑中進行。

惰性溶劑的實例包括鹵代烴諸如二氯甲烷、三氯甲烷或1,2－二氯乙烷，醚諸如二噁烷、四氫呋喃、1,2－二甲氧基乙烷，或其他溶劑諸如丙酮、二甲基甲醯胺，二甲基乙醯胺，2－丁酮或乙腈，其中優選四氫呋喃或二氯甲烷。

鹼的實例包括鹼金屬碳酸鹽，諸如碳酸銫、碳酸鈉或碳酸鉀，或有機鹼諸如三烷基胺，例如三乙胺或二異丙基乙胺或N －甲基嗎啉、N －甲基哌啶、4－二甲基－胺基吡啶或吡啶，其中優選二異丙基乙胺。

如果X¹ 表示羥基，當合適時在存在鹼下，反應通常在惰性溶劑中，優選地在從0℃到室溫的溫度範圍內，在大氣壓下，在存在脫水劑的情況下進行。

適合的脫水劑的實例包括碳二亞胺諸如N,N' －二乙基－，N,N,' －二丙基－，N,N' －二異丙基－，N,N' －二環己基碳二亞胺，N －(3－二甲基胺基異丙基)－N' －乙基碳二亞胺鹽酸鹽(EDC)(當合適時存在五氟苯酚(PFP))，N －環已基碳二亞胺－N ‘－丙基氧基甲基聚苯乙烯(PS－碳二亞胺)或羰基化合物諸如羰二咪唑，或1,2－噁唑鎓(oxazolium)化合物諸如2－乙基－5－苯基－1,2－噁唑鎓－3－硫酸鹽或2－叔－丁基－5－甲基異噁唑鎓高氯酸鹽，或醯基胺基化合物諸如2－乙氧基－1－乙氧基羰基－1,2－二氫喹啉，或丙烷膦酸酐，或氯甲酸異丁酯，或二(2－氧代－3－噁唑烷基)磷醯氯，或苯并三唑基氧基－三－(二甲基胺基)六氟膦酸鏻，或O－(苯并三唑－1－基)－N,N,N',N' －四甲基脲鎓六氟磷酸鹽(HBTU)，2－(2－氧代－1－(2H)－吡啶基)－1,1,3,3－四甲基脲鎓四氟硼酸鹽(TPTU)或O －(7－氮雜苯并三唑－1－基)－N,N,N',N' －四甲基脲鎓六氟磷酸鹽(HATU)，或1－羥基苯并三唑(HOBt)或苯并三唑－1－基氧基三－(二甲基胺基)六氟膦酸鏻(BOP)，或這些與鹼的混合物。優選地，縮合與HATU進行。

鹼的實例包括鹼金屬碳酸鹽，諸如例如碳酸鈉或碳酸鉀或碳酸氫鹽，或有機鹼諸如三烷基胺，例如三乙胺或二異丙基乙胺或N －甲基嗎啉，N －甲基哌啶或4－二甲基胺基吡啶，其中優選二異丙基乙胺。

惰性溶劑的實例包括鹵代烴諸如二氯甲烷或三氯甲烷，烴諸如，例如苯、或硝基甲烷，二噁烷，二甲亞碸，二甲基甲醯胺，乙腈，四氫呋喃，或六甲基磷酸三醯胺，或溶劑的混合物，特別優選二氯甲烷，四氫呋喃或二甲基甲醯胺。

式(III)的化合物是已知的或可以從相應原材料，通過已知方法進行合成。

式(II)的化合物是已知的或可以通過使其中A，R¹ ，R² ，R³ ，R⁴ ，R⁵ 和R⁶ 具有上述指定含義的下式 的化合物與酸反應進行製備。

反應通常優選地在從室溫到溶劑回流的溫度範圍內，在大氣壓下，在極性溶劑中進行。

酸的實例包括鹽酸、氫溴酸、硫酸、磷酸、甲磺酸、乙磺酸、甲苯磺酸、苯磺酸、萘二磺酸或三氟乙酸，特別優選鹽酸。

極性溶劑的實例包括醇諸如甲醇、乙醇、正丙醇、異丙醇、正丁醇或叔丁醇，或四氫呋喃，二噁烷或乙酸，或溶劑的混合物，或溶劑和水的混合物，特別優選乙醇。

式(IV)的化合物是已知的或可以按照下述方法進行製備：[A]使其中R³ ，R⁴ ，R⁵ 和R⁶ 具有上述指定的含義的下式的化合物 與其中R¹ 和R² 具有上述指定的含義的下式的化合物反應， 從而得到其中R¹ ，R² ，R³ ，R⁴ ，R⁵ 和R⁶ 具有上述指定的含義的下式的化合物 或[B]使其中R³ ，R⁴ ，R⁵ 和R⁶ 具有上述指定的含義的下式的化合物 與其中R¹ 和R² 具有上述指定的含義的下式的化合物 反應，以得到其中R¹ ，R² ，R³ ，R⁴ ，R⁵ 和R⁶ 具有上述指定的含義的下式的化合物 或[C]在反應的第一階段，式(Vb)的化合物與其中R¹ 和R² 具有上述指定的含義的下式的化合物反應， 並且在第二階段與氯氧化磷反應，得到其中R¹ ，R² ，R³ ，R⁴ ，R⁵ 和R⁶ 具有上述指定的含義的下式的化合物 或[D]使其中R³ ，R⁴ ，R⁵ 和R⁶ 具有上述指定的含義並且X² 表示鹵素、優選地碘或溴的下式的化合物 與其中R¹ 和R² 具有上述指定的含義的下式的化合物 反應，從而得到其中R¹ ，R² ，R³ ，R⁴ ，R⁵ 和R⁶ 具有上述指定的含義的下式的化合物

在合成的過程中，R¹ 的胺基基團在適合時用本領域技術人員已知的保護基，諸如例如醯基進行保護，其在合成後在本領域技術人員已知的條件下去除。

式(IVa)，(IVb)，(IVc)，和(IVd)的化合物一起形成式(IV)的化合物。

按照方法[A]、[B]和方法[C]的第一階段的反應通常在存在脫水劑的情況下，優選地在從室溫到100℃的溫度範圍內，在大氣壓下，在惰性溶劑中進行。

惰性溶劑的實例包括烴諸如苯或甲苯，或其他溶劑諸如二噁烷，二甲基甲醯胺，二甲亞碸或乙腈，或溶劑的混合物，特別優選二甲基甲醯胺。

脫水劑的實例包括碳二亞胺諸如N,N' －二乙基－，N,N,' －二丙基－，N,N' －二異丙基－，N,N' －二環已基碳二亞胺，N －(3－二甲基胺基異丙基)－N' －乙基碳二亞胺鹽酸鹽(EDC)(當合適時存在五氟苯酚(PFP))，N －環已基碳二亞胺－N‘ －丙基氧基甲基聚苯乙烯(PS－碳二亞胺)或羰基化合物諸如羰二咪唑，或1,2－噁唑鎓化合物諸如2－乙基－5－苯基－1,2－噁唑鎓－3－硫酸鹽或2－叔－丁基－5－甲基異噁唑鎓高氯酸鹽，或醯基胺基化合物諸如2－乙氧基－1－乙氧基羰基－1,2－二氫喹啉，或丙烷膦酸酐，或氯甲酸異丁酯，或二(2－氧代－3－噁唑烷基)磷醯基氯，或苯并三唑基氧基－三－(二甲基胺基)六氟膦酸鏻，或O－(苯并三唑－1－基)－N,N,N',N' 四甲基脲鎓六氟磷酸鹽(HBTU)，2－(2－氧代－1－(2H)－吡啶基)－1,1,3,3四甲基脲鎓四氟硼酸鹽(TPTU)或O－(7－氮雜苯并三唑－1－基)－N,N,N',N' －四甲基脲鎓六氟磷酸鹽(HATU),或1－羥基苯并三唑(HOBt)或苯并三唑－1－基氧基三－(二甲基胺基)六氟膦酸鏻(BOP)，或這些與鹼的混合物。優選地，特別優選羰二咪唑。

按照方法[C]的第二階段的反應通常優選地在從50℃到100℃的溫度範圍內，在大氣壓下，在惰性溶劑中發生。使用溶劑混合物，溶劑和POCl₃ 或純的POCl₃ 的混合物也是可能的。

惰性溶劑的實例包括烴諸如苯或甲苯，或其他溶劑諸如二噁烷，二甲亞碸，二甲基甲醯胺或乙腈，或溶劑的混合物，特別優選二噁烷和/或二甲基甲醯胺。

按照方法[D]的反應通常在存在催化劑時，當適合時存在添加劑，在存在鹼的情況下和合適時在存在三苯膦下，優選地在從室溫到溶劑回流的溫度範圍內，在大氣壓下，在Sonogashira反應條件下，在氫氣下，在惰性和脫氣溶劑中進行(R.R.Tykwins－ki，Angew.Chem.Int.Ed.2003，42，1566－1568，K.Sonogashira in Handbook of organopalladium chemistry for organic synthesis(Ed.E.－I.Negishi)，1133－1178 Wiley－Interscience，New York(2002))。

催化劑的實例包括通常用於Sonogashira反應條件的鈀催化劑，優選這樣的催化劑諸如例如三(二亞苄基丙酮)二鈀，二氯二(三苯膦)鈀，四－三苯膦鈀(0)，鈀(II)－乙酸鹽，1,1’－二[(二苯基膦)二茂鐵]鈀－II－氯化物(1：1)與二氯甲烷的複合物。

添加劑的實例包括銅(I)－碘化物和三苯膦。

鹼的實例包括胺鹼諸如三乙胺。

惰性溶劑的實例包括醚諸如二噁烷，四氫呋喃或1,2－二甲氧基乙烷，烴諸如苯，二甲苯或甲苯，或其他溶劑諸如硝基苯，二甲基甲醯胺，二甲基乙醯胺，二甲亞碸或N－甲基吡咯烷酮，優選這樣的溶劑諸如例如二甲基甲醯胺，二甲基乙醯胺，二甲亞碸或1,2－二甲氧基乙烷。

式(VIa)，(VIb)，(VIc)和(VId)的化合物是已知的或可以從相應的原材料通過已知方法進行合成。

式(Va)，(Vb)和(Vc)的化合物是已知的或可以通過使其中R³ 和R⁴ 具有上述指定的含義，並且X³ 表示鹵素，優選地碘或溴，羥基羰基或氰基的下式的化合物 與其中R⁵ 和R⁶ 具有上述指定的含義的下式的化合物 反應進行製備。

反應通常在鹼存在的情況下，優選地在0℃－40℃溫度範圍內，在大氣壓下，在惰性溶劑中進行。

惰性溶劑的實例包括醇諸如甲醇、乙醇、正丙醇、異丙醇、正丁醇或叔丁醇，或四氫呋喃，丙酮，二噁烷或吡啶，或溶劑的混合物，或溶劑和水的混合物，特別優選具有少許水的四氫呋喃或異丙醇。

鹼的實例包括乙酸鈉，乙酸鉀，碳酸鈉，碳酸鉀或胺鹼諸如三乙胺或二異丙基乙胺，特別優選乙酸鈉。

式(VII)和(VIII)的化合物是已知的或可以通過已知方法從相應原材料進行合成。

在備選的方法中，式(IV)的化合物可以以偶聯合成結構單元的不同順序進行製備。

本發明的化合物的製備可以用下列合成方案進行舉例說明。

合成方案1 ：

合成方案2 ：

合成方案3 ：

合成方案4 ：

本發明的化合物顯示未能預料的令人驚奇的效果範圍。它們顯示對皰疹病毒科類的代表(皰疹病毒)，特別是對巨細胞病毒(CMV)，尤其是對人巨細胞病毒(HCMV)具有抗病毒活性。

可以提及的作為實例的適應症的範圍是：1)在AIDS患者中治療和預防HCMV感染(視網膜炎、肺炎、腸胃傳染)。

2)在骨髓和器官移植患者中治療和預防巨細胞病毒感染，所述患者經常發展威脅生命的HCMV肺炎或腦炎，和胃腸道和全身性HCMV感染。

3)在新生兒和嬰幼兒中治療和預防HCMV感染。

4)在懷孕婦女中治療急性HCMV感染。

5)在癌症和癌症治療期間的免疫抑制患者中治療HCMV感染。

6)治療HCMV－陽性的癌症患者，目的是減少HCMV介導的腫瘤進展(參見，J.Cinatl，等，FEMS Microbiology Reviews 2004 ，28，59－77)。

本發明還涉及將本發明的化合物用於治療和/或預防疾病，特別是病毒尤其是上述病毒的感染，以及由其導致的感染性疾病中的應用。病毒感染在下文意味著病毒的感染和由病毒感染所導致的疾病兩者。

本發明還涉及將本發明的化合物用於治療和/或預防疾病，尤其是前述疾病的應用。

本發明還涉及將本發明的化合物用於製備藥物的應用，所述藥物用於治療和/或預防疾病，尤其是前述疾病。

本發明的化合物優選地用於製備藥物，所述藥物用於預防和/或治療皰疹病毒科類的代表引起的感染，特別是巨細胞病毒感染，尤其是人巨細胞病毒的感染。

本發明還涉及通過使用抗病毒有效量的本發明的化合物，治療和/或預防疾病，尤其是前述疾病的方法。

本發明還涉及特別是用於治療和/或預防前述疾病的藥物，所述藥物包括本發明的至少一種化合物和至少一種或多種另外的活性成分。可以作為實例提及並且優選的在所述組合中的適合的活性成分是：抗病毒活性成分諸如纈更昔洛韋，更昔洛韋或阿昔洛韋。

本發明的化合物可以具有全身性和/或局部效果。出於該目的，它們可以以適合的方式進行施用，所述方式諸如，例如通過口服的、腸胃外的、肺的、鼻的、舌下的、舌的、頰的、直腸的、皮膚的、透皮的、結膜的、耳的，局部的途徑，或作為植入物或斯滕特固定模。

對於這些給藥途徑而言，本發明的化合物以適合的給藥形式進行施用是可能的。

適合於口服給藥的是這樣的給藥形式，其按照現有技術發揮功能並且快速地和/或以改進的方式遞送本發明的化合物，並且其包括晶體形式和/或非晶形形式和/或溶解形式的本發明的化合物，諸如，例如片劑(未包被或包被的片劑，例如具有這樣的包衣，所述包衣對胃液具有抗性或延緩溶解或是不溶的並且控制本發明的化合物的釋放)，快速在口腔中崩解的片劑或薄膜/糯米紙囊劑，薄膜/凍幹物(lyophilisates)，膠囊(例如硬或軟明膠膠囊)，糖衣片劑，顆粒劑，微型藥片，粉末，乳劑，混懸劑，氣溶膠或溶液。

腸胃外給藥的發生可以避免吸收步驟(例如，靜脈內、動脈內、心臟內、脊髓內或腰椎內)，或包含吸收(例如，肌內、皮下、皮內、經皮或腹膜內)。

適合於腸胃外給藥的給藥形式特別是，用於注射和輸注的，以溶液、混懸液、乳劑、凍幹物或無菌粉末存在的製劑。

適合於其他給藥途徑的實例是用於吸入的藥物形式(特別是粉末吸氣器，噴霧器)，滴鼻劑，溶液，噴霧劑；可以通過舌、舌下或頰施用的片劑，薄膜/糯米紙囊劑或膠囊；栓劑，用於眼和耳的製劑，陰道膠囊，水性混懸液(洗劑，振搖混合物)，親脂性混懸液，軟膏劑，乳膏劑，透皮治療系統，乳，糊劑，泡沫，撲粉，植入物或斯滕特固定模。

可以將本發明的化合物轉化成為列出的給藥形式。其可以以本身已知的方式通過混合以惰性、非毒性的藥用的賦形劑來進行。這些賦形劑包括，特別是，載體(例如微晶纖維素，乳糖，甘露醇)，溶劑(例如液體聚乙二醇)，乳化劑和分散劑或濕潤劑(例如十二烷基硫酸鈉，聚氧基失水山梨糖醇油酸酯)，黏合劑(例如聚乙烯吡咯烷酮)，合成的和天然的聚合物(例如白蛋白)，穩定劑(例如抗氧化劑諸如抗壞血酸)，顏料(例如無機顏料諸如氧化鐵)或味道和/或氣味矯正劑。

本發明還涉及這樣的藥物和將其用於前述目的應用，所述藥物包括至少一種本發明的化合物，以及通常地一種或多種惰性、非毒性藥用的賦形劑。

以約0.001到10 mg/kg，優選地約0.01到5 mg/kg體重的靜脈內給藥量施用從而獲得有效效果通常被證明有利的，並且口服給藥所用的劑量是約0.01到25 mg/kg，優選地0.1到10 mg/kg體重。

然而，可能需要的是，當需要時偏離提及的量，其具體地作為體重、給藥途徑、對活性成分的個體反應、製備的方式和在施用發生過程中的時間或間隔的函數。因此，在某些情形中以少於前述最少量進行的施用可以是充分的，而在其他情形中，必須超過提及的上限。在更大量的施用的情形中，可以推薦將這些分成一天內的多個單獨劑量。

在下述測試和實施例中的百分比數量是重量百分比，除非另外指出；份是重量份。液體/液體溶液的溶劑比率、稀釋比率和濃縮比率在每種情形中基於體積。

A.實施例

縮寫： Boc 叔丁氧基羰基CDCl₃ 氘氯仿conc. 濃縮的DCI 直接化學電離(在MS中)DCM 二氯甲烷DIEAN,N －二異丙基乙胺DMSO 二甲亞碸DMFN,N －二甲基甲醯胺EDCN －(3－二甲基胺基異丙基)－N '－乙基碳二亞胺鹽酸鹽EE 乙酸乙酯(乙酸乙酯)EI 電子碰撞電離(在MS中)ESI 電霧化電離(在MS中)Fmoc 9－芴基甲氧基羰基h 小時HPLC 高壓，高效液相色譜法HV 高真空LC－MS 偶聯液相色譜法－質譜法LDA 二異丙基胺基化鋰min 分鐘MS 質譜法MTBE 甲基叔丁醚NMR 核磁共振波譜法Pd－C 披鈀碳PyBOP 1－苯并三唑基氧基三吡咯烷鏻六氟磷酸鹽RP－HPLC 反相HPLC R_t 保留時間(在HPLC中)sat. 飽和的THF 四氫呋喃

一般的LC－MS和HPLC法 ：

方法1(LC－MS) ：MS儀器類型：Micromass ZQ，HPLC儀器類型：HP 1100系列；UV DAD；柱：Phenomenex Synergi 2μ Hydro－RP Mercury 20 mm x 4 mm；洗脫劑A：11水＋0.5 ml 50%甲酸，洗脫劑B：11乙腈＋0.5 ml 50%甲酸；梯度：0.0 min 90%A → 2.5 min 30%A → 3.0 min 5%A → 4.5 min 5%A；流速：0.0 min 1 ml/min，2.5 min/3.0 min/4.5 min 2 ml/min；烘箱：50℃；UV檢測：210 nm。

方法2(LC－MS) ：儀器：具有HPLC Agilent系列1100的Micromass Quattro LCZ；柱：Phenomenex Synergi 2μ Hydro－RP Mercury 20 mm x 4 mm；洗脫劑A：11水＋0.5 ml 50%甲酸，洗脫劑B：11乙腈＋0.5 ml 50%甲酸；梯度：0.0 min 90%A → 2.5 min 30%A → 3.0 min 5%A → 4.5 min 5%A；流速：0.0 min 1 ml/min，2.5 min/3.0 min/4.5 min 2 ml/min；烘箱：50℃；UV檢測：208－400 nm。

方法3(LC－MS) ：MS儀器類型：Micromass ZQ；HPLC儀器類型：Waters Alliance 2795；柱：Phenomenex Synergi 2μ Hydro－RP Mercury 20 mm x 4 mm；洗脫劑A：11水＋0.5 ml 50%甲酸，洗脫劑B：11乙腈＋0.5 ml 50%甲酸；梯度：0.0 min 90%A → 2.5 min 30%A → 3.0 min 5%A → 4.5 min 5%A；流速：0.0 min 1 ml/min，2.5 min/3.0 min/4.5 min 2 ml/min；烘箱：50℃；UV檢測：210 nm。

方法4(LC－MS) ：儀器：具有HPLC Agilent系列1100的Micromass Platform LCZ；柱：Thermo Hypersil GOLD 3μ 20 mm x 4 mm；洗脫劑A：11水＋0.5 ml 50%甲酸，洗脫劑B：11乙腈＋0.5 ml 50%甲酸；梯度：0.0 min 100%A → 0.2 min 100%A → 2.9 min 30%A → 3.1 min 10%A → 5.5 min 10%A；烘箱：50℃；流速：0.8 ml/min；UV檢測：210 nm。

方法5(HPLC) ：儀器：具有DAD檢測的HP 1100；柱：Kromasil RP－18，60 mm x 2 mm，3.5 μm；洗脫劑A：5 ml高氯酸/1水，洗脫劑B：乙腈；梯度：0 min 2%B，0.5 min 2%B，4.5 min 90%B，9 min 90%B，9.2 min 2%B，10 min 2%B；流速：0.75 ml/min；烘箱30℃；UV檢測：210 nm。

方法6(HPLC) ：儀器：具有DAD檢測的HP 1100；柱：Kromasil RP－18，60 mm x 2 mm，3.5 μm；洗脫劑A：5 ml高氯酸/1水，洗脫劑B：乙腈；梯度：0 min 2%B，0.5 min 2%B，4.5 min 90%B，6.5 min 90%B，6.7 min 2%B，7.5min 2%B；流速：0.75 ml/min；烘箱30℃；UV檢測：210 nm。

方法7(LC/MS) ：MS儀器類型：Micromass ZQ；HPLC儀器類型：HP 1100系列；UV DAD；柱：Phenomenex Gemini 3μ 30 mm x 3.00 mm；洗脫劑A：11水＋0.5 ml 50%甲酸，洗脫劑B：11乙腈＋0.5 ml 50%甲酸；梯度：0.0 min 90%A → 2.5 min 30%A → 3.0 min 5%A → 4.5 min 5%A；流速：0.0 min 1 ml/min，2.5 min/3.0 min/4.5 min 2 ml/min；烘箱：50℃；UV檢測：210 nm。

起始化合物 實施例1A

4－(苄硫基)苄腈

將氫化鈉(5 g 60%在油中的分散體)用已烷洗滌並在真空下乾燥。將殘餘物在無水DMF(100 ml)中於0℃進行勻漿並將苄硫醇(14.82 g)在30分鐘內逐滴加入。隨後，在室溫將反應混合物攪拌30分鐘。小心加入4－氟苄腈(14.45 g)並攪拌反應混合物直到原材料已經徹底反應(HPLC對照，約3 h)。將反應混合物傾倒在冰水(400 ml)上並攪拌5分鐘。通過過濾收集產物，用水洗滌(3次)並在篩檢程式上乾燥。將粗制產物從環己烷進行再結晶，通過過濾收集並用石油醚洗滌，進行乾燥。獲得23.04 g(理論值的86%)的產物。

LC－MS(方法1)：R_t ＝2.85 min MS(ESI)：m/z＝226[M＋H]^＋

實施例2A

4－(苄硫基)－N'－羥基苯并甲醯亞胺醯胺(carboximidamide)

在無水乙醇(10 ml)中提供4－(苄硫基)苄腈(23.00 g)和羥基胺鹽酸鹽(10.66 g)，並加入三乙胺(17 ml)。首先將反應混合物在50℃攪拌30分鐘，接著在回流下加熱2小時。隨後，加入水直到溶液變得混濁。將反應混合物冷卻到室溫，將得到固體通過過濾來收集。用水洗滌固體，接著在乾燥烘箱中於85℃進行乾燥。從正丁醇中再結晶粗制產物，通過過濾收集結晶產物，用二乙醚洗滌，並在乾燥烘箱中於65℃進行乾燥。獲得固體形式的23.40 g(理論值的88%)的產物。

LC－MS(方法1)：R_t ＝1.79 min MS(ESI)：m/z＝229[M＋H]^＋

實施例3A

N－(6－{3－[4－(苄硫基)苯基]－1,2,4－噁二唑－5－基}吡啶－2－基)乙醯胺

將1,1－羰二咪唑(15.16 g)以小份緩慢加入到在無水DMF(75 ml)中的6－乙醯胺基吡啶－2－羧酸(16.84 g)(氣體放出)。將得到的溶液在室溫攪拌1.5小時。接著加入4－(苄硫基)－N'－羥基苯并甲醯亞胺醯胺(23.00 g)並在室溫攪拌反應混合物直到原材料反應完全(約3小時)。將反應混合物加熱到100℃並攪拌2小時。隨後加入水直到溶液變得輕度混濁，將得到的反應混合物冷卻到室溫。通過過濾收集粗制產物，將其用水洗滌3次，並在乾燥烘箱中於65℃進行乾燥。獲得24.42 g(理論值的67%)的固體形式的產物。

LC－MS(方法1)：R_t ＝2.98 min MS(ESI)：m/z＝403[M＋H]^＋

¹ H－NMR(400 MHz,DMSO－d₆ )：δ＝10.96(s,1H)，8.38(d,1H)，8.08(t,1H)，8.02－7.95(m,3H)，7.53(d,2H)，7.43(d,2H)，7.35－7.21(m,3H)，4.36(s,2H)，2.15(s,3H)。

實施例4A

6－{3－[4－(苄硫基)苯基]－1,2,4－噁二唑－5－基}吡啶－2－胺鹽酸鹽

將水(50 ml)和濃鹽酸(50 ml)加入到在乙醇(150 ml)中的N－(6－{3－[4－(苄硫基)苯基]－1,2,4－噁二唑－5－基}吡啶－2－基)乙醯胺(40.55 g)中。將反應混合物在回流下加熱直到原材料已經完全反應(約3小時)，隨後冷卻到室溫。通過過濾收集固體，用乙醇洗滌3次並在真空烘箱中於80℃乾燥。獲得固體形式的的36.60 g(理論值的92%)的產物。

LC－MS(方法2)：R_t ＝2.76 min MS(ESI)：m/z＝361[M＋H]^＋

¹ H－NMR(400 MHz,DMSO－d₆ )：δ＝7.95(d,2H)，7.73(t,1H)，7.53(d,2H)，7.51(m,1H)，7.42(d,2H)，7.30(t,2H)，7.25(m,1H)，6.85(d,1H)，4.38(s,2H)。

實施例5A

4－[5－(6－胺基吡啶－2－基)－1,2,4－噁二唑－3－基]苯并磺醯氯

將6－{3－[4－(苄硫基)苯基]－1,2,4－噁二唑－5－基}吡啶－2－胺(35.95 g)在冰浴中，在乙酸(200 ml)和水(100 ml)的混合物中冷卻到5℃。將氯逐漸引入直到原材料已經完全反應(HPLC對照)其中溫度必須不超過10℃。將反應混合物在5℃攪拌15 min，接著用冰水(200 ml)稀釋。將粗制產物通過過濾收集，用冰水(三次)和二乙醚(三次)洗滌，並隨後在真空下乾燥。獲得26.00 g(理論值的85%)固體形式的產物。

LC－MS(方法3)：R_t ＝2.22 min MS(ESI)：m/z＝337[M＋H]^＋

實施例6A

2－氯－5－氟－1,3－二硝基苯

將DMF(10 ml)和亞硫醯氯(14 ml)連續加入到在苯(50 ml)中的4－氟－2,6－二硝基苯酚(26.00 g)中。將得到的溶液在室溫攪拌5分鐘(中間體沉澱物)，接著在回流下加熱1.5小時(或直到原材料已經反應完全)。將反應混合物冷卻到室溫，濃縮並將殘餘物傾倒在冰/水上。將沉澱物通過過濾收集，用水洗滌三次，並乾燥。在從乙醇中再結晶後，獲得23.50 g的晶體形式的(理論值的83%)的產物。

¹ H－NMR(400 MHz,DMSO－d₆ )：δ＝8.56(d,2H)。

實施例7A

5－氟－1,3－胺基苯

將三乙胺(12.6 ml)和鈀(10%在碳上)(6.0 g)加入到在甲醇(450 ml)中的2－氯－5－氟－1,3－二硝基苯(10.00 g)中。將反應混合物在3 bar的氫壓力下，在室溫進行氫化直到原材料已經反應完全(2小時)。將該批量通過C鹽(celite)過濾並進行濃縮。將所述殘餘物吸收在DCM(150 ml)中並用10%的檸檬酸溶液進行處理。隨後用2N氫氧化鈉溶液將水相調節到鹼性pH，並用DCM(三次每次100 ml)提取。將有機相通過硫酸鈉進行乾燥並濃縮。獲得5.0 g(理論值的88%)油形式的產物。

LC－MS(方法4)：R_t ＝0.58 min MS(ESI)：m/z＝127[M＋H]^＋

實施例8A

N－(3－胺基－5－氟苯基)－1－氰基環丙烷羧醯胺

將1,1－羰二咪唑(3.29 g)加入到在THF中的1－氰基環丙烷羧酸(2.05 g)中，並將得到的溶液在室溫攪拌45分鐘。加入5－氟－1,3－胺基苯(3.00 g)並將混合物再攪拌2.5 h。隨後，濃縮反應溶液，將殘餘物吸收在DCM(150 ml)中，並用水洗滌。用DCM提取水相兩次。合併有機提取物，通過硫酸鈉乾燥並進行濃縮。將殘餘物在矽膠上(洗脫劑DCM到DCM－甲醇50：1)進行色譜分離。在濃縮相關級分後，分離2.35 g(理論值的58%)的產物。

LC－MS(方法1)：R_t ＝1.31 min MS(ESI)：m/z＝220[M＋H]^＋

實施例9A

N－(3－{[(4－氰基苯基)磺醯基]胺基}苯基)乙醯胺

在室溫，將3'－胺基N－乙醯苯胺(13.54 g)溶解在2－丙醇(200 ml)中，並加入乙酸鈉(8.51 g)在水(100 ml)中的溶液。加入4－氰基－苯并磺醯氯(20.0 g)，並將反應混合物加熱到30℃，並在室溫攪拌3小時。將該批量傾倒在冰上(250 ml)，通過過濾收集得到的固體，用水(三次)洗滌，接著在乾燥烘箱中進行乾燥。獲得27.8 g的固體形式的(理論值的98%)產物。

LC－MS(方法1)：R_t ＝1.79 min MS(ESI)：m/z＝316[M＋H]^＋

¹ H－NMR(400 MHz,DMSO－d₆ )：δ＝10.52(s,1H)，9.94(s,1H)，8.05(d,2H)，7.90(d,2H)，7.46(s,1H)，7.27(d,1H)，7.13(t,1H)，6.72(d,1H)，2.00(s,3H)。

實施例10A

N－{3－[({4－[(Z)－胺基(羥基亞胺基)甲基]苯基}磺醯基)胺基]苯基}乙醯胺

在乙醇(190ml)中提供N－(3－{[(4－氰基苯基)磺醯基]胺基}苯基)乙醯胺(27.00 g)，隨後加入羥基胺鹽酸鹽(7.14 g)和三乙胺(14.0 ml)。將反應混合物在50℃攪拌2小時，接著將其傾倒在冰上，通過過濾收集，並在真空下乾燥。獲得25.78 g(理論值的86%)的固體形式的產物。

LC－MS(方法1)：R_t ＝1.14 min MS(ESI)：m/z＝349[M＋H]^＋

實施例11A

N－(6－{3－[4－({[3－(乙醯基胺基)苯基]胺基}磺醯基)苯基]－1,2,4－噁二唑－5－基}吡啶－2－基)乙醯胺

將溶解在二噁烷(100 ml)中的1,1－羰二咪唑(9.78 g)逐滴加入在二噁烷(100 ml)和DMF(60 ml)的混合物中的6－乙醯基胺基吡啶－2－羧酸(10.86 g)中，並將所述混合物在室溫攪拌3小時。接著，加入固體形式的N－{3－[({4－[(Z)－胺基(羥基亞胺基)甲基]苯基}磺醯基)胺基]苯基}乙醯胺，並將反應混合物在室溫攪拌16 h。隨後，將反應混合物在100℃攪拌4小時，接著將其傾倒在冰/水上。將產物放置10分鐘，通過過濾收集，用水洗滌(三次)，在真空烘箱中乾燥。獲得25.55 g(理論值的90%)的固體形式的產物。

HPLC(方法5)：R_t ＝4.03 min MS(ESI)：m/z＝493[M＋H]^＋

實施例12A

N－(3－胺基苯基)－4－[5－(6－胺基吡啶－2－基)－1,2,4－噁二唑－3－基]苯并磺醯胺

將15%鹽酸(150 ml)加入到在乙醇(200 ml)中的N－(6－{3－[4－({[3－(乙醯基胺基)苯基]胺基}磺醯基)苯基]－1,2,4－噁二唑－5－基}吡啶－2－基)乙醯胺(20.00 g)中。將反應混合物在回流下攪拌6小時，接著用10%的氫氧化鈉溶液將pH在加熱情況下調節到pH 4。將反應混合物冷卻到5℃並攪拌16小時。粗制產物通過空吸過濾進行收集，用水洗滌(2次)，接著進行乾燥。獲得12.73 g(理論值的77%)固體形式的產物。

HPLC(方法5)：R_t ＝3.53 min MS(ESI)：m/z＝409[M＋H]^＋

¹ H－NMR(300 MHz,DMSO－d₆ )：δ＝10.16(br s,1H)，8.23(d,2H)，7.97(d,2H)，7.63(t,1H)，7.45(d,1H)，6.85(t,1H)，6.74(d,1H)，6.58(br s,2H)，6.42(s,1H)，6.28(t,1H)，5.44(br s,2H)。

實施例13A

N－(6－溴吡啶－2－基)乙醯胺

在二氯甲烷(80 ml)中提供2－胺基－6－溴吡啶(5.40 g)和乙醯氯(2.66 ml)並將其冷卻到0℃。接著，逐滴加入三乙胺(6.53ml)，隨後將所述混合物加溫到室溫，同時攪拌。將10%的碳酸氫鈉溶液加入到該批量中，並將該批量用二氯甲烷進行提取。有機相用水和飽和的氯化鈉溶液洗滌，通過硫酸鈉進行乾燥，並濃縮。在急驟色譜法分離(flash chromato－graphy)(洗脫劑二氯甲烷/甲醇1：0，500：1)後，獲得5.84 g(理論值的86%)的產物。

HPLC(方法6)：R_t ＝3.66 min MS(DCI/NH₃ )：m/z＝215和217[M＋H]^＋ ，232和234[M＋NH₄ ]^＋ ，249和251[M＋NH₄ ＋NH₃ ]^＋

¹ H－NMR(400 MHz,DMSO－d₆ )：δ＝10.79(s,1H,NH)，8.08(d,1H)，7.71(t,1H)，7.31(d,1H)，2.09(s,3H)。

實施例14A

N－[6－(3－羥基－3－甲基丁－1－炔－1－基)吡啶－2－基]乙醯胺

在二乙胺(50 ml)中提供N－(6－溴吡啶－2－基)乙醯胺(5.84 g)。在加入2－甲基－3－丁炔－2－醇(2.51 g)，二(三苯膦)鈀(II)氯化物(381 mg)和碘化銅(I)(52 mg)後，將所述混合物在室溫攪拌2小時。接著，將該批量進行濃縮和急驟色譜法分離(洗脫劑二氯甲烷/甲醇200：1，100：1，50：1)。獲得5.20 g(理論值的88%)的產物。

HPLC(方法6)：R_t ＝3.30 min MS(方法M－40，DCI/NH₃ )：m/z＝219[M＋H]^＋

¹ H－NMR(400 MHz,DMSO－d₆ )：δ＝10.68(s,1H,NH)，8.05(d,1H)，7.75(t,1H)，7.14(d,1H)，5.55(s,1H,OH)，2.07(s,3H)，1.46(s,6H)。

實施例15A

N－(6－乙炔基吡啶－2－基)乙醯胺

在甲苯(50 ml)中提供N－[6－(3－羥基－3－甲基丁－1－炔－1－基)吡啶－2－基]乙醯胺(5.20 g)，加入氫化鈉(95 mg)，並將混合物在120℃攪拌1.5小時。將該批量濃縮，用水稀釋殘餘物，並用乙酸乙酯提取。有機相通過硫酸鈉進行乾燥，濃縮，和急驟色譜法分離(洗脫劑二氯甲烷/甲醇1：0，500：1，200：1，100：1)。獲得1.75 g(理論值的43%)的產物。

HPLC(方法6)：R_t ＝3.18 min MS(方法M－40,DCI/NH₃ )：m/z＝161[M＋H]^＋ ，178[M＋NH₄ ]^＋

¹ H－NMR(400 MHz,DMSO－d₆ )：δ＝10.68(s,1H,NH)，8.10(d,1H)，7.78(t,1H)，7.26(d,1H)，4.31(s,1H)，2.08(s,3H)。

實施例16A

N－(3－{[(4－碘代苯基)磺醯基]胺基}苯基)乙醯胺

在異丙醇(100 ml)中提供4－碘代苄基磺醯氯(10.0 g)，加入溶解在少量水中的乙酸鈉(3.12 g)，並在室溫將混合物攪拌30分鐘。接著，加入N－(3－胺基苯基)乙醯胺(4.96 g)，再將混合物攪拌過夜。將該批量用水和飽和的氯化鈉溶液稀釋，用乙酸乙酯提取。將有機相通過硫酸鈉乾燥，濃縮並進行急驟色譜法分離(洗脫劑二氯甲烷/甲醇1：0，100：1，80：1)^。 獲得9.62 g(理論值的70%)。

HPLC(方法6)：R_t ＝4.14 min MS(ES＋，ES－)：m/z＝417[M＋H]^＋ ，415[M－H]^－

¹ H－NMR(400 MHz,DMSO－d₆ )：δ＝10.31(s,1H,NH)，9.91(s,1H,NH)，7.93(d,2H)，7.51(d,2H)，7.45(s,1H)，7.26(d,1H)，7.12(t,1H)，6.73(d,1H)，2.00(s,3H)。

實施例17A

N－(6－{[4－({[3－(乙醯基胺基)苯基]胺基}磺醯基)苯基]乙炔基}吡啶－2－基)乙醯胺

在氬氣下，在DMF中提供N－(3－{[(4－碘代苯基)磺醯基]胺基}苯基)乙醯胺(4.60 g)，四(三苯膦)鈀(0)(1.28 g)和碘化銅(I)(421 mg)，加入N－(6－乙炔基吡啶－2－基)乙醯胺(2.66 g)和三乙胺(15.4 ml)，將混合物在室溫攪拌2小時。接著，將混合物用水稀釋，提取到二氯甲烷中，將有機相進行乾燥和急驟色譜法分離(洗脫劑二氯甲烷/甲醇1：0，200：1，100：1，50：1，30：1)。獲得3.56 g(理論值的48%)的產物。

HPLC(方法6)：R_t ＝3.86 min MS(ES＋，ES－)：m/z＝449[M＋H]^＋ ，447[M－H]^－

¹ H－NMR(400 MHz,DMSO－d₆ )：δ＝10.76(s,1H,NH)，10.38(s,1H,NH)，9.93(s,1H,NH)，8.13(d,1H)，7.88－7.78(m,3H)，7.73(d,2H)，7.48(s,1H)，7.37(d,1H)，7.26(d,1H)，7.12(t,1H)，6.76(d,1H)，2.09(s,3H)，2.00(s,3H)。

實施例18A

N－(3－胺基苯基)－4－[(6－胺基吡啶－2－基)乙炔基]苯并磺醯胺二鹽酸鹽

在乙醇(45 ml)中提供N－(6－{[4－({[3－(乙醯基胺基)苯基]胺基}磺醯基)苯基]乙炔基}吡啶－2－基)乙醯胺(3.12 g)，加入20%鹽酸(45 ml)並將混合物在60℃攪拌3小時。將該批量濃縮，並將殘餘物與乙腈一起攪拌。在通過空吸過濾收集後，進一步用乙腈洗滌，並在高真空下乾燥，獲得3.45 g(定量的)的產物。

HPLC(方法6)：R_t ＝3.65 min MS(ES＋，ES－)：m/z＝365[M＋H]^＋ ，363[M－H]^－

¹ H－NMR(400 MHz,DMSO－d₆ )：δ＝10.70(s,1H,NH)，7.91－7.78(m,5H)，7.24(t,1H)，7.09(d,1H)，7.02(s,1H)，6.96－6.83(m,3H)。

實施例19A

4－[5－(6－乙醯基胺基吡啶－2－基)－1,2,4－噁二唑－3－基]苯并磺醯氯

將N－(6－{3－[4－(苄硫基)苯基]－1,2,4－噁二唑－5－基}吡啶－2－基)乙醯胺(11.55 g)在冰浴中，在乙酸(80 ml)和水(50 ml)的混合物中攪拌，並將其冷卻到5℃。逐漸引入氯直到所述原材料已經反應完全(HPLC對照)，其中溫度必須不超過10℃。將反應混合物在5℃攪拌15分鐘，接著用冰水(100 ml)稀釋。通過過濾收集粗制產物，用冰水(三次)和二乙醚(三次)洗滌，隨後在真空下乾燥。獲得固體形式的9.60 g(理論值的88%)的產物。

LC－MS(方法3)：R_t ＝2.31 min MS(ESI)：m/z＝379[M＋H]^＋

示範性實施方案 實施例1

N－{3－[({4－[5－(6－胺基吡啶－2－基)－1,2,4－噁二唑－3－基]苯基}磺醯基)胺基]－5－氟苯基}－1－氰基環丙烷羧醯胺

將N－(3－胺基－5－氟苯基)－1－氰基環丙烷羧醯胺(2.46 g)加到在無水吡啶(120 ml)中的4－[5－(6－胺基吡啶－2－基)－1,2,4－噁二唑－3－基]苯并磺醯氯(3.78 g)裏。將得到的溶液在室溫下攪拌18 h並隨後倒入冰/水上。通過過濾收集粗制產物，將其用水洗滌並乾燥。在矽膠上層析(二氯甲烷至二氯甲烷/甲醇50：1)和濃縮相應級分後，分離出2.28 g(理論值的40%)的產物。

LC－MS(方法3)：R_t ＝2.07 min MS(ESI)：m/z＝520[M＋H]^＋

¹ H－NMR(400 MHz,DMSO－d₆ )：δ＝8.37(d,2H)，8.01(d,2H)，7.64(t,1H)，7.45(d,1H)，7.35(s,1H)，7.21(br d,1H)，6.73(d,1H)，6.68(br d,1H)，6.56(br s,2H)，1.65(s,4H)。

實施例2

N－{3－[({4－[5－(6－胺基吡啶－2－基)－1,2,4－噁二唑－3－基]苯基}磺醯基)胺基]苯基}－1－氰基環丙烷羧醯胺

在無水DMF(110 ml)中進行提供N－(3－胺基苯基)－4－[5－(6－胺基吡啶－2－基)－1,2,4－噁二唑－3－基]苯并磺醯胺(4.50 g)，添加HATU(6.28 g)，1－氰基環－丙烷羧酸(2.45 g)和N,N－二異丙基乙胺(2.90 ml)並在室溫於氬氣下將反應混合物攪拌1 h，隨後進行濃縮。將殘餘物在矽膠上層析(洗脫劑二氯甲烷/甲醇100：1到20：1)。濃縮相應的級分後，分離出4.99 g(理論值的90%)的產物。

LC－MS(方法2)：R_t ＝2.13 min MS(ESI)：m/z＝502[M＋H]^＋

¹ H－NMR(400 MHz,DMSO－d₆ )：δ＝10.47(s,1H)，10.06(s,1H)，8.23(d,2H)，7.97(d,2H)，7.64(t,1H)，7.53(s,1H)，7.45(d,1H)，7.28(d,1H)，7.17(t,1H)，6.84(d,1H)，6.73(d,1H)，1.65(s,4H)。

實施例3

N－{3－[({4－[5－(6－胺基吡啶－2－基)－1,2,4－噁二唑－3－基]苯基}磺醯基)胺基]－2－甲基苯基}－1－氰基環丙烷羧醯胺

與實施例2類似，由3’－胺基－2’－甲基－苯基乙醯胺進行製備。

LC－MS(方法3)：R_t ＝1.91 min MS(ESI)：m/z＝516[M＋H]^＋

¹ H－NMR(400 MHz,DMSO－d₆ )：δ＝9.91(s,1H)，9.67(s,1H)，8.26(d,2H)，7.87(d,2H)，7.65(t,1H)，7.47(d,1H)，7.10(m,2H)，6.84(dd,1H)，6.76(d,1H)，1.91(s,3H)，1.63(m,4H)。

實施例4

N－{3－[({4－[(6－胺基吡啶－2－基)乙炔基]苯基}磺醯基)胺基]苯基}－1－氰基環丙烷羧醯胺鹽酸鹽

將N－(3－胺基苯基)－4－[(6－胺基吡啶－2－基)乙炔基]苯并磺醯胺二鹽酸鹽(750 mg)，1－氰基環丙酸(229 mg)，HATU(783 mg)和N,N－二異丙基乙胺(1.04 ml)在室溫下於無水DMF(7 ml)中攪拌過夜。直接通過製備HPLC(洗脫劑水(用1%鹽酸)/乙腈，流速50 ml/min)純化該批次並且獲得400 mg(理論值的47%)產物。

HPLC(方法6)：R_t ＝3.87 min MS(ES＋，ES－)：m/z＝458[M－HCl＋H]^＋ ，456[M－HCl－H]^－

¹ H－NMR(400 MHz,DMSO－d₆ )：δ＝10.45(s,1H,NH)，10.07(s,1H,NH)，7.83(d,2H)，7.79－7.66(m,3H)，7.51(s,1H)，7.27(d,1H)，7.17(t,1H)，7.01(d,1H)，6.82(d,2H)，1.65(s,4H)。

實施例5

N－{3－[({4－[5－(6－乙醯基胺基吡啶－2－基)－1,2,4－噁二唑－3－基]苯基}磺醯基)胺基]－5－氟苯基}－1－氰基環丙烷羧醯胺

將N－(3－胺基－5－氟苯基)－1－氰基環丙烷羧醯胺(100 mg)添加到在無水吡啶(2 ml)中的4－[5－(6－乙醯基胺基吡啶－2－基)－1,2,4－噁二唑－3－基]苯并磺醯氯(148 mg)中。在室溫下將得到的溶液攪拌18 h並且隨後倒在冰/水上。通過過濾收集粗制產物，用水洗滌並進行乾燥。在製備RP－HPLC(洗脫劑乙腈：水梯度)和濃縮相應級分後，分離出53 mg(理論值的24%)的產物。

LC－MS(方法7)：R_t ＝2.46 min MS(ESI)：m/z＝562[M＋H]^＋

¹ H－NMR(400 MHz,DMSO－d₆ )：δ＝10.99(s,1H)，10.78(s,1H)，10.26(s,1H)，8.40(d,1H)，8.17(d,2H)，8.06(m,4H)，7.37(s,1H)，7.21(d,1H)，6.68(d,1H)，2.15(s,3H)，1.66(s,4H)。

B.生理活性的評估

本發明的化合物的體外活性可以在下列測定中顯示： 抗－HCMV(抗人巨細胞病毒)致細胞病性測試 將測試化合物作為在二甲亞碸(DMSO)中的50毫摩(mM)溶液使用。將更昔洛韋用作參比化合物。在將2 μl的50,5,0.5和0.05 mM DMSO的貯存溶液分別加入在第2行A－H中的98 μl的細胞培養基小份中以進行一式兩份測定後，用50 μl的培養基小份進行1：2稀釋，直到96孔板的第11行。在第1行和第12行中的每個孔包含50 μl的培養基。接著將150 μl的1×10⁴ 細胞(人包皮成纖維細胞[NHDF])的混懸液吸移入每只孔中(第1行＝細胞對照)，在第2－12行中，加入HCMV感染和未感染的NHDF細胞的混合物(M.O.I.＝0.001－0.003)，即每1000個未感染細胞中1－3個感染細胞。第12行(不含物質)充當病毒對照。最終的測試濃度是250－0.0005 μM。在37℃/5%CO₂ 中對所述板溫育6天，即直到在病毒對照中所有的細胞被感染(100%致細胞病性作用[CPE])。接著，通過加入福馬林和吉姆薩染液的混合物將孔進行固定和染色(30分鐘)，用雙蒸水進行洗滌並於50℃在乾燥烘箱中進行乾燥。使用高架顯微鏡視覺評估所述板(來自Technomara的噬斑倍增器)。

可以從測試板中獲得下列資料：CC₅₀ (NHDF)＝以μM表示的物質濃度，在該濃度上與未處理的細胞對照相比，沒有觀察到對細胞具有細胞抑制作用；EC₅₀ (HCMV)＝以μM表示的物質濃度，與未處理的病毒對照相比，其抑制CPE(細胞致病性作用)達50%；SI(選擇性指數)＝CC₅₀ (NHDF)/EC₅₀ (HCMV)。

本發明化合物作用的代表性體外資料顯示在表A中：

本發明的化合物用於治療HCMV感染的適合性可以在下列動物模型中顯示： HCMV異種移植物Gelfoam 模型 動物 ：5－6周齡的免疫缺陷小鼠(16－20 g)，Fox Chase SCID－NOD或NOD.CB17－Prkdc/J，獲自商業飼種者(Taconic M&B，Denmark；Jackson，USA)。在無菌條件(包括墊料和食物)下將動物隔離飼養。

病毒培養 ：將人巨細胞病毒(HCMV)，Davis或AD169毒株體外培養在人胚包皮成纖維細胞(NHDF細胞)上。在用0.01－0.03的感染複數(M.O.I)感染NHDF細胞後，5－10天後，收穫病毒感染的細胞並且將其於－80℃在存在基本必需培養基(MEM)、20%胎牛血清(FCS)(v/v)，1%穀氨醯胺(v/v)，具有10%DMSO的1%Pen/Srep(v/v)的情況下進行貯存。在將病毒感染的細胞系列稀釋10倍後，在用吉姆薩甲醛溶液固定和染色後，在匯合NHDF細胞的24孔板上測定滴度。

海綿的製備、移植、處理和評估 ：將1×1×1 cm大小的膠原海綿(Gelfoam；Peasel & Lorey，訂單號407534；K.T.Chong等，Abstracts of 39^th Interscience Conference on Antimicrobial Agents and Chemotherapy，1999，第439頁)最初用磷酸緩衝鹽溶液(PBS)濕潤，通過排氣來將捕獲的氣泡去除，接著貯存在MEM，10% FCS(v/v)，1%穀氨醯胺(v/v)，1%Pen/Srep(v/v)中。在感染後3小時，將1x 10⁶ 病毒感染的NHDF細胞(用HCMV Davis或HCMV AD169感染，M.O.I＝0.03)進行脫附，並在20 μl的MEM，10% FCS(v/v),1%的穀氨醯胺(v/v)，1% Pen/Strep(v/v)中逐滴加入潮濕海綿中。將海綿溫育3－4小時以便讓細胞吸附。隨後，在加入培養基(MEM，10% FCS(v/v)，1%穀氨醯胺(v/v)，1%Pen/Srep(v/v))後，將海綿溫育過夜。對於移植而言，用阿佛丁或氯胺酮/賽拉嗪/aze－promazine混合物對所述免疫缺陷小鼠進行麻醉，使用剃鬚刀將背部的毛皮去除，將表皮打開1－2 cm，將未載入的和濕潤的海綿移植在脊背部皮膚下。在移植後4－6小時，用組織膠黏劑或夾子閉合外科傷口，可以對小鼠進行第一次處理(在手術當天進行一次處理)。在隨後的日子，在8天時期內進行一天3次(7.00 h和14.00 h和19.00 h)、一天2次(8 h和18 h)或一天一次(9 h)的物質的口服處理。每日劑量是例如1或3或10或30或100 mg/kg體重，施用體積是10 ml/kg體重。將物質以具有2% DMSO或另外協助所述物質溶解性的適合的混合物的0.5%濃度的tylose混懸液/PBS的形式進行配製，所述適合的混合物例如2%乙醇，2.5% solutol，95.5%PBS。移植後10天和最後一次施用物質後約16小時，將動物無痛處死並且去除海綿。通過膠原酶(330 U/1.5 ml)消化，從海綿中釋放病毒感染的細胞並且將其於－140℃在存在MEM，10%FCS(v/v)，1%的穀氨醯胺(v/v)，1%Pen/Strep(v/v)，10% DMSO的情況下貯存。在將病毒感染的細胞系列稀釋10倍後，在用吉姆薩甲醛溶液固定和染色後，在匯合NHDF細胞的24孔板上測定滴度，進行評價。測定與安慰劑處理的對照組相比，在物質處理後，感染細胞或感染病毒顆粒(感染中心測定)的數量。統計學評估通過適合的電腦程式，諸如GraphPad Prism進行。

藥物代謝動力學研究 活性化合物的藥物代謝動力學在經由施用路徑向三隻雄性Wistar大鼠靜脈內或口服施用從靜脈內的1 mg/kg和口服的3 mg/kg範圍內的劑量後進行研究。為了使重複移去血液成為可能，在實驗前一天，將導管植入動物的頸靜脈。將物質作為溶液通過靜脈內以及口服進行施用。其中，在大多數情形中，對於靜脈內施用，使用血漿製劑(具有1－2%乙醇或DMSO的大鼠血漿，2 ml/kg)，對於口服施用，使用PEG製劑(10%乙醇，40% PEG 400，50%水，5 ml/kg)。

在施用活性物質後，在24小時內通過導管將血液樣品收集到包含肝素的樣品管中。隨後，為了去除血液，將血液樣品進行離心，並將血漿上清液移取到Eppendorf管中。將血漿樣品貯存在至少－15℃，直到進行分析。

為了研究，將樣品解凍。接著，通過添加包含內標的乙腈來沉澱樣品蛋白質。作為內標，選擇來自相同結構種類的物質，其在結構上與所述活性化合物盡可能得類似。為了製備校準樣品，將不同濃度的活性物質添加到空血漿的等份試樣中，並且這些與未知樣品一起進行後處理(work up)。另外，製備具有三種不同濃度的質量對照樣品，其作用是驗證分析方法。

通過具有質譜檢測的高效液相色譜(LC/MS－MS)來進行在樣品中的活性物質的測定。在未知樣品中的活性物質的濃度通過使用windows的程式Concalc(CCW，Integrierte Labordatensysteme，2.5或更新版本，Bayer AG)來與校準曲線比較它們的峰高或面積進行確定。隨後，在程式KINCALC，version 2.50.02(Bayer AG，2001)的協助下，使用非房室(non－compartimental)分析，通過根據動物的具體情況隨時間的血漿濃度發展計算藥物代謝動力學參數。

在大鼠中顯示理想的改善的藥物代謝動力學曲線的化合物隨後在施用於小鼠和狗後進行藥物代謝動力學研究。基於所有的這些資料，通過按照Boxenbaum的種間放大對人藥物代謝動力學進行初步估計。

可以從這些測試中獲得下列資料：V_ss ＝分佈體積；CL＝消除速度；t_1/2 ＝半衰期；AUC＝在藥物－濃度時間曲線下的總面積；C_max ＝最大濃度；F＝生物利用度；將在單一靜脈內和口服施用於雄性Wistar大鼠(n＝3/時間點或n＝3，resp.)後的實施例1中的化合物的藥物代謝動力學參數顯示在表B中。本發明的化合物顯示改善的藥物代謝動力學性質。

代謝物的鑑定 活性化合物在種間的不同代謝可以對其可發展性具有很大的影響。目的是發現這樣的物質，其在人和通常的tox物種諸如例如大鼠和狗的代謝降解途徑中沒有明顯的不同。對於這種新的活性物質，首先將其在體外與大鼠、狗和人的肝微粒體一起溫育從而比較I期代謝。隨後，將仍舊令人感興趣的化合物另外在大鼠和人的肝細胞中進行溫育從而獲得完全的肝I期和II期代謝並且比較它。

所有的新活性化合物在20 μM的濃度下進行溫育。為此，製備在乙腈中具有2 mM濃度的貯存溶液，接著將其吸移到溫育批次中，進行1：100的稀釋從而在該批次中具有最大值1%的乙腈。肝微粒體在37℃，在50 mM磷酸鉀緩衝液pH 7.4中，與和不與NADPH－產生系統一起進行溫育，所述NADPH－產生系統由1 mM NADP^＋ ，10 mM葡糖－6－磷酸和1單位的葡糖－6－脫氫酶組成。還將原代肝細胞在Williams E培養基中的混懸液中於37℃進行溫育。在0－4 h的溫育時間後，用乙腈(終濃度約為30%)終止溫育批次，並且在約15000 x g將蛋白質離心除去。以這種方式終止的樣品直接進行分析或在－20℃貯存直到進行分析。

使用具有紫外線和質譜檢測的高效液相色譜(HPLC－UV－MS)進行分析。為此，使用適合的C18反相柱和乙腈與10 mM的甲酸銨的可變混合物一起對溫育樣品的上清液進行色譜法分離。與質譜資料相關的UV－色譜圖用於鑑定代謝物。以這種方式產生的各個被研究物種的代謝物模式被進行比較並且用於鑑定物種的不同。

C。藥物組合物的示範性實施方案

可以將本發明的化合物以下列方式轉化為藥物製劑： 片劑 ： 組成 ：100 mg的實施例1的化合物，50 mg的乳糖(一水合物)，50 mg的玉米澱粉(天然的)，10 mg的聚乙烯吡咯烷酮(PVP 25)(BASF，Ludwig－shafen，德國)和2 mg的硬脂酸鎂。

片劑重量212 mg。直徑8 mm，曲率半徑12 mm。

製備 ：將活性成分、乳糖和澱粉的混合物用PVP在水中的5%濃度的溶液(m/m)成粒。接著，乾燥所述顆粒，並將其混合以硬脂酸鎂達5分鐘。使用常規的壓片機(見上述關於片劑的形成)壓縮該混合物。用於所述壓縮的壓縮力的指導是15 kN。

可以口服施用的混懸劑 ： 組成 ：1000 mg的實施例1的化合物，1000 mg的乙醇(96%)，400 mg的Rhodigel(FMC，賓夕法尼亞州，USA的黃原膠)和99 g的水。

10 ml的口服混懸劑等價於100 mg的本發明化合物的單一劑量。

製備 ：將Rhodigel懸浮在乙醇中，並將活性成分加入混懸液中。在攪拌過程中，加入水。將所述混合物攪拌約6小時直到Rhodigel溶脹完全。

可以靜脈內施用的溶液劑： 組成 ：10－500 mg的實施例1的化合物，15 g的聚乙二醇400和250 g的注射用水。

製備 ：將實施例1的化合物與聚乙二醇400一起溶解於水中，伴隨攪拌。通過過濾(孔徑0.22 μm)來對溶液進行滅菌，並將其在無菌條件下分配到熱滅菌的輸液瓶中。用輸注塞和捲曲帽來封閉後者。

Claims (8)

1. 一種下式的化合物， 其中A 表示下式的基團， 其中* 是與吡啶環的碳原子的連接位點和# 是與苯環的碳原子的連接位點，R¹ 表示氫，胺基或甲基羰基胺基，R² 表示氫或鹵素，R³ 表示氫，鹵素或氰基，R⁴ 表示氫，鹵素或氰基，R⁵ 表示氫或鹵素，R⁶ 表示氫或鹵素，R⁷ 表示氫，鹵素或C₁ -C₃ -烷基， R⁸ 表示氫，鹵素或C₁ -C₃ -烷基，或其鹽。
2. 根據申請專利範圍第1項的化合物，其特徵在於A 表示下式的基團 其中* 是與吡啶環的碳原子的連接位點和# 是與苯環的碳原子的連接位點，R¹ 表示氫，胺基或甲基羰基胺基，R² ，R³ 和R⁴ 表示氫，R⁵ 表示氫或鹵素，R⁶ 表示氫或鹵素，R⁷ 和R⁸ 表示氫，或其鹽。
3. 根據申請專利範圍第1項或第2項的化合物，其特徵在於A 表示下式的基團 其中* 是與吡啶環的碳原子的連接位點和# 是與苯環的碳原子的連接位點，R¹ 表示胺基或甲基羰基胺基， R² ，R³ 和R⁴ 表示氫，R⁵ 表示氫，R⁶ 表示氫或鹵素，R⁷ 和R⁸ 表示氫，或其鹽。
4. 根據申請專利範圍第1-3項中任一項的化合物，其用於治療和/或預防人巨細胞病毒(HCMV)感染。
5. 一種製備根據申請專利範圍第1項的式(I)的化合物的方法，其特徵在於將其中A，R¹ ，R² ，R³ ，R⁴ ，R⁵ 和R⁶ 具有申請專利範圍第1項所示含義的下式的化合物 與其中R⁷ 和R⁸ 具有在申請專利範圍第1項中指出的含義並且X¹ 表示鹵素、優選地氯或溴，或羥基的下式的化合物反應
6. 一種包含根據申請專利範圍第1-3項中任一項的化合物的藥物，其組合以惰性、非毒性的藥用賦形劑。
7. 根據申請專利範圍第6項的藥物，其用於治療和/或預防人巨細胞病毒(HCMV)感染。
8. 一種根據申請專利範圍第1-3項中任一項的化合物用於製備用於治療和/或預防人巨細胞病毒(HCMV)感染的藥物的用途。