TWI335801B - Feed for fish and use thereof - Google Patents

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1335801 第092103458號專利申請頁 玖、發明說南年 (發明說明應敘明：發明所屬之技術領域、先前 【發明所屬之技術領域】 期：95年5月(⑽） 技術，内容、實拓方式及明式簡單說明） 本發明有關於半耽胺或其鹽類化合物及/或含半耽胺 組成物的用途，其用於飼養水產動物，特別是脊椎水產動 物，更特別為水產養殖魚類。本發明亦有關於飼養魚類的 方法、魚飼料以及製備此飼料的方法。 【先前技術】 發明背景 1〇 纟調節動物的生長方面’生長激素長久以來已經扮演 著重要的角色。例如，在產肉動物施予生長激素將增加其 包括肌肉量的體重。然而，在這些動物中直接使用生長激 素來增加肉產量有許多缺點。第一，來自於不同動物的生 長激素少有同質性，且不同的動物只會對某些特定種類的 I5生長激素作出反應。由於合適的外源性生長激素通常萃取 自月<a下垂體，所以準備足量之合適外源性生長激素來用於 大規模的應用是相當困難且不經濟。雖然外源性生長激素 目前可利用DNA重組技術製備，以此種方式製造的外源性 生長激素依然相當昂貴。第二，對家畜施予外源性生長激 20素通常以直接注射實施，其必然昂貴且在一個如養牛場的 大農場對於管理者而言難以施行。在養殖場的魚類，施打 外源性生長激素則更加困難，因為在一般環境下捕捉以及 監測個別的魚體以及注射適量的生長激素實際上不可能。 第二’控制施藥的劑量以產生精確的預期效果是相當困難 6 1335801

第0 9 2 10 3 4 5 8號專利申請案說明書修正頁 修正日期： 玫、發明說明 的，而過量的外源性生長激素很可能會對動物有害。第四 ’這些殘留的外源性生長激素可能會傳遞至肉類產品並隨 著食用而傳遞至人類。儘管_些科學家關心這些外源性生 長激素對人類的負面影響，進一步的相關研究仍有所需求 〇 有鑑於人口快速成長，包含海產，特別是魚類的各型 食品需求持續增加。最近根據聯合國的估計指出，目前的 海產供應量必須增加七倍才能符合全世界對於海產的需求 10 。造成全世界漁獲量遞減的主要制是過度捕獵以及魚類 棲息地的破壞，只有水產養殖才能符合其需求。然而，許 多魚種的飼養產量由於一些因素受到挑戰或有其妨礙。這 些困難包括了合適品種的筛選及供應，飼養魚類的生長率 及_轉換率的增加’铜料成本的控制，生殖週期的管理 以及疾病的預防。 15 為了在飼養環境中飼養魚類使其體重可快速增加’對 魚類施予外源性生長激素為—種常見的方法。然而，如上 述，對於魚類施予外源性生長激素若非不可能也非常困難 〇 另一種方式是藉由交又盲 種未強化有益的特性以生產 所右人的魚類品種。妷 故些特性通常浮現的相當緩慢且 無法預料。儘管應用交又育 …颏的基因組通常仍然不 匕3所奴之預期效果的基因。 =外可取代傳統筛選及育種的方法，是使用現代 ^ Μ產生能快速成長的基因轉殖魚。特別是，基因 20 % 5. -3修正 年月a , :195年5月補免 第09210345¾專财請案說明書修正頁 玫、發明說明 修正έ期

轉殖魚可以經由運用公；$ A 生物干鑑別、單離以及構成對應 於所欲之特性的基因，舞後錄# & & # '便轉殖延些基因來育種。由此種 現代技術，不存在於备违首A m Λ丄 ”，、類基因組巾之新的特性能夠由不相 關的物種中被轉殖出來，賦予新的而且有益的性狀。然而 5，基因轉殖魚的基因卫程域受制於許多缺點。第-，- 般對於消費基因修飾（GM)舍。的备 1 β 口口的負面影響仍有廣泛的不安 。大規模的產出供人類消費的基因轉殖魚不可避免的會有 巨大的法律及社會意涵。第二，對於人類目前食用的每一 種魚類品種所作的基因修飾品種在經濟上是不可行的。第 10二’基㈣殖魚必須以隔離飼養為前提，若意外地逃離隔 離至自然界_，由於其改良過的對於一般環境的適應性會 使他快速成長，而且會非所欲地排擦他的未經基因改造的 親戚這不僅會以無法想像的方式擾亂生態系統，還會對 於自然中的相關品種的基因組造成污染。如此自然物種的 15排撥以及基因組污染的現象，至少已經見於娃魚。基因轉 殖娃魚通常至少有-般經魚兩倍大的體型和體重，而且明 顯地可以存活地較好。基因轉殖鮭魚和自然鮭魚的交叉品 種已污染了自然環境中鮭魚的基因組。 半胱胺是輔酶Α的組成份，扮演生理上的調節者。半 20胱胺已用於作為飼料中的添加物以促進供肉哺乳動物的生 長。美國專利第4,711，897號揭示了動物飼養方法以及包含 半胱胺的飼料組成物。然而，半胱胺已被確認在—般的室 條件中為非常敏感且不安定的化合物。例如，半胱胺暴 疼在二氣中或者疋南溫中會容易被氧化。半肤胺是相當容 8 1335801 第092103458號專利申請案說明書修正頁 玖、發明說明 修正曰期

易吸濕的。而且，半胱胺直接由口攝取時是不適口的。再 者，直接攝食半胱胺會造成不欲的胃部副作用。由於這些 原因，半胱胺的使用長久以來被限制於以含半胱胺之溶液 直接注射於產肉動物。 因此，特別對於飼養環境中的魚類可增進體重和/或降 低死亡率的用於改善魚類生長及/或健康的組成物及/或方 法仍存在著需求。較佳地，該方法是安全，能被輕易施用 以及不昂貴地施行，而且對環境友善。 本發明的目的就是滿足上述問題，或者至少提供大眾 10 —種有效的選擇。 【發明内容】 發明摘要 依據對於本發明的第一觀點，提供了用於飼養魚類以 15改善其生長及/或健康之含半胱胺組成物的用途其中該 組成物實質上包含1至80重量％的載體。特別是增加魚之 體重的用途。此用途亦可減少由於疾病或不良生存環境所 造成之魚的死亡率。 較佳地，該含半胱胺組成物能藉由一最終的飼料來餵 2〇飼魚類。然而，含半胱胺組成物亦可以其他獨立於任何飼 料的合適方式來施予魚類。 適當地，該組成物實質上可包含】至95重量％之具有 NiVCH2_CH2_SH化學式的半胱胺或其鹽類化合物。^ 。亥組成物可實質上包含3G重量％的半胱胺或其鹽類化 9 1335801 第〇92103458號專利申請案說明書修正頁 玖、發明說明 修正曰期 合物。亦作為一安定劑的載體可被指稱為包藏化合物主材 料組成物，其可選自包括環狀糊精或其衍生物的組群。該 組成物可包含10重量％的載體。 該組成物可包含選自包括增積劑、碎裂劑或對該組成 物提供塗覆之材料的組群的組份。該塗覆材料在室溫條件 中可為固態。該塗覆材料可為勝溶性且僅可在魚的腸内溶 解。該塗覆在該組成物中可表現出多層的結構。該塗覆可 適合在pH為】.5至3.5時保持不溶。 10 最終飼料可包含飼料濃縮劑及/或飼料補充物。該最 終飼料可包含選自包括油菜籽、棉杆、大豆、魚粉、小麥 楚皮、小麥草粉、礦物質、维他命及結著劑之組群之合適 的基礎飼料。該最終飼料實f上可包含3()至i5Qppm的半 胱胺。該最終飼料實質上可包含1(ppm的組成物 。該最終飼料在乾燥狀態下實質上可包含33至i65p㈣的 15 半胱胺。該最終飼料在乾燥狀態下實質上可包含1至 550ppm的組成物。 依據本發明的第二觀點，提供一種飼養魚類的方法， 其包含了以合適的基礎飼料（如前述）來混合含半胱胺組成 物（如前述）’以及由此混合產生之最終飼料來飼養魚類的 20 步驟。 較佳地，該混合可包含直接以該基礎飼料與該組成物 混合。任擇地，該混合可包含製備一含有該含半胱胺組成 物的預混合物，以及隨後以基礎飼料與該預混合物材料混 合以形成最終飼料的步驟。該預混合物材料可藉由混合該 10 第092103458號專利巾玖、發明說明 請案說明書修正頁 修正曰期 拡U修正 年月曰.t、 95年5月夺_充 組成物與-合適的食物原料來製備。作為中間混合物之預 混合物材料㈣途為促㈣合以致使該組成物能更平均地 分布於該最終飼料中。該預混合物材料可具有Κ25重量 %之該组成物的量。較佳地，該預混合物村料可具有10至 20重量％之該組成物的量。 依據本發明的第三觀點’係提供一種飼養魚類的方法 ’其包含_每日個別以含半胱胺或其鹽類化合物或如上述 之含半胱胺組成物，較佳經由—飼料來飼養魚類的步驟。 當魚在其平均體重相當或少於，的發育階段時，該魚適 合以含30纟60ppm的半胱胺或其鹽類化合物、或含_ 至20〇ppm之含半胱胺組成物的飼料來銀飼。當魚在其平 均體重大於5〇〇g的發育階段時，該魚適合以含60至 1卿㈣的半胱胺或其鹽類化合物、或含至·_之 含半胱胺組成物的飼料來银飼。 根據本發明的第四觀點，提供一種包含了含半耽胺組 成物的魚飼料。該組成物可利用為_飼料添加物。該組成 物貫質上可包含！至95重量%之具有啊偶偶化 學式的半胱胺或其鹽類化合物^當地，㈣成物可包含 1至80重的㈣。該載體可選自包括環狀糊精或其衍 生物之組群。 依據本發明的第五觀點，提供了一種製備上述魚飼料 的方法，其包含了—將含半胱按组成物與基礎飼料材料混 合的步驟。 1335801

第092103458號專利申請案說明書修正頁 坎、發明說明 修正^:95年5月 【實施方式】 發明詳述 本發明是基於半胱胺或其鹽類化合物、及/或含半耽 胺組成物的論證，其當由如魚類的水產動物所攝取時具有 5至少增加其體重的活性。在此發現之前，並未暗示或有效 顯示半胱胺可對魚類有此活性。 已經發現類似於哺乳動物的情形，生長激素的分泌對 魚類有所影響。經發現魚類的生長激素釋放抑制激素⑽ 的構造和哺乳動物的類似，該生長激素釋放抑制激素亦抑 ]〇制了魚類生長激素的釋放。已知生長激素調節了魚類的代 謝及營養吸收，並且導致生長及其體重的增加。研究顯示 生長激素促進蛋白質合成且促進魚類體中正向的氮平衡。 魚類的生長激素受體（GHR)廣泛的分佈於不同的組織 ’如肝臟、腦、生殖腺、支氣管、小腸以及腎臟。在生殖 15腺中，生長激素及生長激素受體調整了類固醇的濃度，導 致精子及印子發育的促進。生長激素以及生長激素受體在 支氣管、小腸及腎臟所扮演的角色’是調節魚類體内的滲 透壓。一般相信小腸中生長激素的増加能影響營養的吸收 同日可增加在循％中胺基酸的濃度，導致飼料轉換率的增 2〇加。同時也發現生長激素受體的集中程度在魚類體内的其 他組織令大约為在肝臟中的3至6%。然而，生長激素與生 長激素受體的結合活性在肝臟令和其他組織中是一樣的。 如例示者，魚類的生長激素促進了生長同時調節滲透 壓，且廷些由胰島素生長因子（IGF_1)居中完成。在本發明 12 1335801 第092103458號專利申請案說明書修正頁 % 修正 玖、發明說明 修正日期 中’半胱胺及/或含半胱胺組成物的機制旨在耗盡魚類的 生長激素釋放抑制激素，以便生長激素的漠度能增加以促 進生長。須注意的是，該生長激素係由魚體内產生，而非 外源性生長激素。 5 一般相信半胱胺具有扮演生長促進因子的生理活性。 天然的半胱胺是輔轉A(已知為c〇A_SH或c〇a)的一部份 ，疋泛酸的輔酶形態。在代謝過程中，輔酶Λ扮演著作為 二氫硫酸基或與輔酶Α之氫硫酿基連結之氫硫縣變體的 載m顯示在其他如緒、牛、禽類、山羊以及兔子等 10孤血脊椎動物顯示半胱胺可消耗生長激素釋放抑制激素。 在獲得本發明期間’非預期地發現半胱胺對於魚類同樣也 可消耗生長激素釋放抑制激素。先前相信半胱胺對於生長 激素釋放抑制激素的顯著消耗只對哺乳動物及禽類實質有 效。生長激素釋放抑制激素的消耗增加了魚類血液中生長 15激素的濃度’同時提高了錢其他生長促進因子，包含了 類騰島素生長因子卿])以及騰島素。如同上述解釋生 長激素相彳&可直接促進各種組織生理上的發展。 隨著這些不同之生長促進因子的增加，魚類的消化代 射率相對地上升了。已知魚類的一般蛋白質合成率相對地 20上升，而因此魚類的體重因此而上升得更快速。 各種試驗經導引證明了施予含有含半耽胺組成物之飲 食（或飼料）增進了魚類生長以及體重，一實驗詳述如後。 實驗 13 Ίθ修正 2年5 8月補灾 %第092103458號專利申請案說明書修正頁 玖、發明說明 修正曰期：· 背景資料 實驗經發表以證明魚類以含半胱胺組成物飯飼的效果 ，其詳細敘述於後。用於本實驗之魚品«已知的團頭妨 。有兩組實驗組及兩組控制組。每組有4G至41隻魚。每 —組飼養在分隔的水槽H只水槽的容量^約為 0.聰3。水槽配備自動溫度控制系統，水溫維持在攝氏25 至26度之間。水槽亦配備了嶋統，藉此以規則的間隔 用新鮮m來取代水槽㈣水以料水的新鮮。 10 材料 A ·含半脱胺組成物 用於本實驗之含半胱胺組成物包含3G重量％的半胱胺 、2〇重量％的包藏主化合物材料以及塗覆材料、％重量% 的填充劑、23.9重量％的碎裂劑及結著劑以及〇1重量％的 15香料和香味劑。對於一可行之含半脱胺組成物的特定需求 將進一步在稍後的敘述中說明。 B ·預混合材料 預混合材料係一含有含半胱胺組成物的甲間混合物。 2〇該預混合材料促進隨後與基礎飼料材料的衫。用於製備 預混合材料的組份可選自一適合食品材料組群，其包括胺 基酸、鹽類 '磷以及玉米粉。該預混合材料包含從1()至 2〇重量。/c的含半胱胺組成物，雖然1至25重量％之一較寬 的可行範圍亦被使用。 14 1335801 第092103458號專利申請案說明書修正頁玫、發明說明 修正日期：95年

C.基礎飼料 5 用於實驗中之基礎詞料包含大約2G重量％的油菜軒、 15重量。/。的棉籽、15重量％的大豆、15重量％的魚粉、 重量％的麵皮、19重量％的麥粉、5重量％的礦物質、〇5 重量％的結著劑以及0.5重量％的維生素。然而，亦可使用 其他適合的組份。 D.最終飼料 10 最終飼料包含混合有如該含半胱胺組成物與該預混合 材料的基礎飼料。在實驗中，完全相同的最終飼料類型 及A2用於飼養該等二實驗組（組J及11}的魚。該最終飼料 類型A1及A2係由混合適量之含有含半胱胺組成物之預混 合材料與該基礎飼料所製備。特別是，該最終飼料類型Ai 15及A2係經配製以包含大約200ppm的含半胱胺組成物或 60ppm的半胱胺。然而，一最终飼料實際上可含有一 ι〇〇 至200ppm的含半胱胺組成物或3〇至6〇ppm的半胱胺的可 行範圍。貫際上’具有這些含半胱胺組成物及/或半胱胺漠 度之範圍的最終飼料係特別適合於體重相當於或少於5〇〇g 2〇 的魚。用於體重大於500g的魚，最終飼料較佳地包含200 至500ppm的含半胱胺組成物或6〇至I50ppm的半胱胺。 微量的飼料濃縮物及/或飼料補充物亦可包括於其中以增 進並平衡該最終飼料之營養價值。 實際上，當不使用預混合物時，該含半胱胺組成物可 15 1335801 第092103458號專利申請案說明書修正頁 修正日期：（^紅 t „ 玖、發明說明 95. 5. -3 修正 直接與一基礎飼料混合。 年月日.1 _ 該二控制組（組Ϊ及„)係以不添加該含半耽胺組成物之 完全相同的最终飼料類型B1及B2銀飼。 最終飼料類型A1、A2以及B1、B2之間唯_的差異 在於前者包含所欲量的含半胱胺組成物。 方法 該實驗於2001年1〇月5日至2〇〇1年n月17 ^間 實施。四組魚的個別體重在實驗前後測量。亦紀錄實驗期 10間魚死亡的數目。亦紀錄四組魚所攝取的飼料量。 结果及討論 表1總結該實驗的結果。 15 】6 1335801 第092】 03458號專利申請案說明書修正頁 修正日期：95年5月 玖、發明說明 卜4以修正: 表1 :實驗前後的四組魚 飼料類型 A1 A2 B1 B2 魚組 組1(雜） 釦(控制） 組II(控制） 貫驗前 曰期 2001年10月5曰 2001年10月5曰 2001年10月5曰 200】年10月5曰 魚數目 41 40 40 41 總重(g) 289.7 183.2 207.6 223.1 每隻魚平 均重量(g) 7.06 4.58 5.19 5.44 實驗後 曰期 通年 11月17曰 2001年 11月17曰 2001年 11月17日 2001年 1]月17曰 魚數目 41 40 39 41 總重(g) 558.9 403.0 419.9 381.5 每隻魚平 均重量(g) 13.6 10.10. 10.77 9.3 飼料攝取 量 630.2 582.3 594.6 595.0 總重增加 (g) 269.2 219.8 212.3 222.4 飼料轉換 效率 2.34 2.65 2.80 2.68 死魚數目 0 0 3 (每隻7.5g) 3 存活率(％) 100 100 92.5 92.7 在控制組I中，三隻魚在實驗中死亡，二隻體重相似 的備用魚加入以取代兩隻死魚。在控制組π中，三隻魚在 5 實驗中死亡，三隻體重相似的備用魚加入以取代全部三隻 死魚。 如表1所示，兩試驗組（組I及II)之魚的總體重在實驗 前後分別為 472.9g[=289.7+1 83.2]及 961.9g[=558.9+403.0] 。因此總體重增加489.0g，換算約增加103%的總體重。兩 10 控制組（組I及II)之魚的總體重在實驗前後分別為 17 1335801 第092103458號專利申請案說明書修正頁 修正曰期玖、發明說明 年月日95年5月 瘦充丨 430.7g[207.6+223.1]及 801_4g[419.9+381.5]。因此總體重增 加3 70.7g，換算僅約增加86%的總體重。 兩試驗組（組I及„)之魚的平均體重在實驗前後分別為 5.84g及ll.88g。因此平均體重增加6 〇3g，換算大約增加 5 1〇3%的總體重。兩控制組（組I及II)之魚的平均體重在實 驗前後分別為5.32g及l〇.02g。因此平均體重增加4 7〇g， 換算僅約增加88%的總體重。此顯示在試驗組的魚在增加 體重方面成長至少快了 1 。 因此，可以推論以含半胱胺組成物的飼料餵飼的魚可 10 明顯地生長較快速。 亦發現二試驗組的魚其飼料轉換效率為2·34及2 Μ。 二控制組的魚其飼料轉換效率為2⑽及2 68。相對較低的 飼料轉換效率暗示產生一個單位的體重需要較少量的飼料 。明顯的是’試驗組的魚在轉換飼料成為其體重為較有效 15 率的。 Μ推输…-π言千胱胺組成物的 魚可較有效率地轉換並吸收飼料成為其體重，以及本 之含半胱驗成物可改減生長，㈣是增加其體重。 20

需注意的是水槽狀態一般對於水產工業係相似的 過，相較於野外，該狀態相對較擁梭。因此，在水產 中的—些魚類在此-環境死於疾病或過度擁播並不稀 然而，在二試驗組中的魚在實驗期間並無死亡，但是 控制組中有六隻魚死亡。此明顯的證據㈣飼含半耽 成物的魚在水產養殖—般有較良好之健康，特別是較 18 1335801 第092 ] 03458號專利申請案說明書修正頁 , 修正曰期 玖、發明說明 存活率（或較低的死亡率）。這是重要的，因為增加存活率 意指較高的產量，即較高的產率。 *氺氺 10 當用於以上實驗中的含半胱胺組成物係如上述的組份 ;所製成’依據下列要求所製造的含半恍胺組成物將獲得類 似的結果。在該組成物中二個主要的組份為】至％重量％ 的半胱胺（或其鹽類，如半胱胺氫氯酸鹽或其他藥學上可接 受之酸加成鹽）以及1至80重量％的載體，其為包藏化合 物主材料組成物。半胱胺的化學式為hsch偶哪。此 術語”半耽胺，，於此後意指半胱胺及/或其鹽類化合物。 半胱胺及其鹽類化合物在化學文獻中為已知。半耽胺 鹽的-般化學通式為c2H7Ns.x，其中χ可為阳、 4 '酉石酉文鹽、柳酸鹽等。所利用的半胱胺較佳為 15 樂學上可接受之標準’且其中碳、氨、氮以及硫的含量實 質上分別為31.14重量％、915重量％、ΐ8ΐ6重量％以及 41 ·56 重量 ％。 而含半耽胺組成物中有效的半胱胺含量為1至95重量 ，範圍：較佳為1至75重量%的範圍，更佳可用】至40 20 修正 95年5月才甫充丨 重量％之範圍的半胱胺。半胱胺為該含半胱胺組成物中主 要活性組份之一。麸而 …、而，已確認的是若含半胱胺組成物申 半胱胺的含量超過 重1 /〇，基礎飼料與該組成物混合較 為因難。 定半胱胺的載體或包藏化合物主材料組成物主 要包含環狀糊精及/吱Α / 其何生物，其選自包括下述之組群 】9 書修正頁 修正曰 第092】03458號專利穸請案說明 玫、發明說明 :甲基f環狀糊精(M|CD)、氫丙基3環狀糊精⑽少 CD)、氫乙基4·環狀糊精（HE+CD)、聚環狀糊精、乙基 石-環狀糊精(E+CD)以及支鏈環狀糊精。環狀糊精㈣ 學通式為（<：6〇汨9)„ . ((：6〇5仏)2，且其結構式如下。

其中 α -CD n=4 KD n=5 ; 7 _CD n=6。 (%狀糊精係α _D_葡哌喃醣的環狀寡聚物。） 值得注意的是，環狀糊精的石_CD型在使用上係較佳 的’因為其分子内徑約6_8A，使之成爲—特別適合之候選 1〇物來作爲包藏化合物主材料以製備該含半胱胺組成物，這 ’·、·藏‘轾之使用。「環狀糊精」之術語於此後意指環狀 糊精及/或其衍生物。具有安定並保護半耽胺使之免於分 解之〖生貝的任何環狀糊精的衍生物皆可使用。例如，上述 X等袤狀糊精組群的任一或其衍生物皆可使用。當含半胱 月女，且成物中載體的有效量範圍在1 i 80重量％時，較佳的 有效粑圍為！至6〇重量％，且更佳為】至仙重量％之有效 圍的載體亦可使用。所用之載體實際量將取決於在製備 3半胱胺組成物中所用的半胱胺實際量。 °玄3半晄胺組成物亦可包含1至90重量％的填充劑， 20 1335801 95. 5. 年月日# ·· 95年5月補充 第0921〇3458號專利申請案說明書修正頁 修正曰期 玖、發明說明 然而較佳有效量的範圍為1至60重量。/〇，且更佳有效量範 圍為1至40重量％的填充劑亦可用於該組成物中。實際用 量將取決於半胱胺以及包藏化合物主材料的實際用量。 該填充劑可選自包括經粉末化之纖維素 '澱粉以及硫 5酸約（如CaS〇4 · 2&0)的組群。需注意若該填充劑在含半 胱胺組成物中的量超過90重量。/。，主要活性組份的量將因 而降低’且該含半胱胺組成物將變得無效。 該含半胱胺組成物亦可包含5至50重量％的碎裂劑以 及結著劑’然而較佳為1〇至40重量％的有效範圍，以及 10更佳為1 5至3 5重量。/〇的有效範圍亦可使用。其實際用量 將取决於所用的半胱胺、載體以及其他組份的實際量。 該結著劑以及碎裂劑可選自包括羥丙基澱粉、微生物 溱酸鹽、微晶化纖維素及澱粉的組群。經確認的是若該組 成物中碎裂劑及結著劑的量少於5重量％，所產生之該組 15成物的顆粒將缺乏所需的硬度。此外，該組成物的製造將 變的非常的困難。然而，若該碎裂劑以及結著劑的量多於 50重i %，產生的組成物將有過度的硬度，此特別在若該 纤裂劑以及結著劑之混合物中其結著劑之量表現大部分時 。此將造成該組成物在魚的腸道難以吸收。 2〇 ^ s玄含半胱胺組成物亦可包含〇 〇5至〇.3重量％之可為 香精的香味以及氣味劑。 s玄含半胱胺組成物亦可包含1至2〇重量％的塗覆材料 然而較佳的可行範圍為1至15重量％，更佳的可行範圍 -主10重量％。其實際含量取決於半胱胺、載體以及其 21 1335801 第092】03458號專利申請案說明書修正頁玖、發明說明 修正日期

10 15 他組份的實㈣量。該等塗«料在-般室溫狀況下為g 狀且較佳在如腸内之驗性環境可溶解之腸祕者。該等塗 覆材料可選自包括纖維素醋酸態輯酷、㈣醋酸耿酸: 、甲基纖維素㈣s旨、源自㈣之葡萄糖或果糖衍生物、 丙稀與f基丙烯共聚物、聚甲基乙稀龍、馬來軒共聚物的 部分醋化物質、甲殼蟲穋以及甲酸明勝的組群。該等塗覆 ㈣可在PH為1>5至3.5的酸性環境下仍為不溶。已確定 ，是’若塗覆材料的含料少於】重量％，組成物的顆粒不 能由作為保護層的塗覆材料所完全塗覆。該含半胱胺組成 物因此在由小腸吸收進人動物或本文職述之水產養殖魚 類的血流之前就會分解。另一方面，若該塗覆材料的含量 超過15重量％ ’該組成物巾的活性組份將無法有效地從該 組成物中釋出。因此無法獲得預期的生長調節。無論如何 ，已確認的是在用於改善所飼養之水產養殖魚類的生長及/ 或健康，特別是增加其體重時’包含1〇〇至5〇〇ppm之該 組成物（或30至75ppm半胱胺）的飼料是有效的。

用於本發明所述之含半胱胺組成物係為每個具有實質 上較佳為〇,28至〇.90mm直徑的小顆粒形式。這些顆粒係 利用微膠囊化法製備。該方法涉及利用具有包藏特性之巨 2 Q 大分子的物質。可利用的物質為前述之載體（其主要包含環 狀糊精）。該載體係作為包入半胱胺分子之分子膠囊的巨大 子物貝’藉此組成物中的半耽胺得以被保護並與環境中 的光、熱、空氣以及水分隔離。半胱胺的安定性因此得以 保留。用於微膠囊化法之載體較佳為具有6至12個葡萄糖

22 1335801 第092103458號專利申請案說明書修正頁 95. 5. 修正 玫、發明晒 “日期 分子的壤狀多糖化合物，該環狀多醣化合物係藉由在芽胞 柃囷屬之存在下令環狀糊精糖轉移酶與澱粉反應 而產生。以急性、亞急性以及慢性毒性試驗的不同研究顯 示這些巨大分子物質是無毒的。 5 隨微膠囊化製程之後，每一顆粒可塗覆至少一層且較 佳為多層之上述的塗覆材料。以下提供製備如本發明之含 半胱胺組成物的方法，以一較佳實施例詳述之。 在主要為氮栽1的大乳環境下，在一經聚四氟乙婦連結 且配備有一個聚四氟乙烯塗覆攪拌器之有套反應器中添加 1〇 4〇8〇g的75重量％之溶於乙醇中的半胱胺氫氣酸溶液。所 用的半胱胺之純度、熔點與燃燒殘留物較佳分別為98%或 更南' 66至7〇t以及0.05%或更低。接著同樣在氮氣之保 濩下，將1200g的冷-環糊精加至該反應器中。（/?-環糊精 之品質係依據食物添加劑之要求。特別地，乾燥基礎純度 15仏超過98% ;乾燥之重量損失係低於10.0% ;燃燒殘留物 仏低於〇.2°/° ;重金屬之含量係低於lOppm ;砷含量係低於 2ppm) 〇 该混合物接著於40°C加熱歷時3小時。接著終止加熱 ’且持續攪拌兩小時，由此所産生的産物在經過一 4〇至 20 50 c之溫度真空乾燥後，予以研磨處理並篩析通經一個網 師（例如40-篩孔）。可能會與該組成物之組份相接觸的所有 儀°卩件，較佳地應為不銹鋼所製成。在一乾燥環境之保 遑下，於一個槽式混合器中加入42〇〇g(乾重）之經進行過上 述包藏製程的半胱胺、26〇〇g的填充劑以及1200g的碎裂 23 第092 ] 03458號專利申請案說明書修正頁 ϋ日修正 玖、發明說明 & _ 劑與1700g的結著劑。該等組份接著經徹底混合，一適量 之無水乙醇可加入並與之混合。所產生的混合物呈現—具 有中度硬度之軟質料，藉此可以手掌輕握而將之塑形爲一 個球體。經塑形成球體之該產±之混合物可接著利用—輕 5觸而令其散開。 "亥&物在氮氣保濩下以一個造粒機予以切粒後，所 産生之小顆粒被立即地送至一流體床乾燥器，並接著在— 實質真空之環境内’以4〇 i赃之溫度下將之乾燥。腸 >谷性塗覆材料接而藉由一個利用下列配方之方法來製備： 1〇 的纖維素醋酸酞酸酯' 2.4ml的聚乙二醇對苯二甲酸酯 、33.0ml的乙酸乙酯與33 6mi的乙酸異丙酯。上述所得之 該形成的顆粒，在氮氣的保護下係均一地以至少一層但 較佳為多層的上述腸溶性塗覆材料塗覆。換言之，在每一 6玄組成物之生成顆粒的塗覆材料係以一多層結構存在著。 15 °亥腸'谷性塗覆材料係為僅能在一鹼性環境下溶解的。這可 防止S 6亥組成物仍存於該動物胃中時，半胱胺過早地自該 組成物中逸出。半胱胺可不利地刺激動物的胃之胃黏膜。 本案含半胱胺組成物所産生之顆粒接著在一實質真空乾燥 器中，以40°C至50。〇之溫度經乾燥完全。於是，所有的溶 20 劑被移除。 所産生之顆粒接著冷卻至室溫，利用一個懸臂式雙螺 才疋混合器將微膠囊與一適量之調味劑和氣味劑混合。該含 半胱胺組成物係為一種内部具有半胱胺氫氣酸鹽與環狀糊 精，且其外部以該腸溶性塗覆材料塗覆的微膠囊。所生成 24 1335801 第092103458號專利申請案說明書修正頁 年月曰正

玖、發明說明 ^ S 之組成物會呈現具有平滑外表、良好流動性質且易與各種 動物飼料相混合的小顆粒（或微粒）形狀。該組成物之每— 顆粒的直徑較佳為〇.28 i請丨脑。該組成物亦具有優良 的安定性。已發現當該組成物以密封塑踢袋包裝，並儲存 5於-涼爽、黑暗與乾燥的地方歷時_年之後，其特性維持 不變。因此，該組成物符合作爲一飼料添加劑之要求。 具有上述之特定構成之組成物具有許多超過半耽胺本 身之功能性優點。首先’含於該組成物中的半胱胺活性在 經製造之後仍可維持著。這是重要的，因為諸如該組成物 10的飼㈣加财使用之前可儲存—段相當長之時間。第二 ’該組成物不會對經該組成物傲食的魚類引起任何顯著的 田1J作用。第三’該組成物的活性不僅在貯存期間維持著， 更重要的是可以維持至該組成物抵達魚的腸時。第四，該 .且成物可以-大規模基礎且有成本效率的方式容易地施用 15至大量詞養的水產養殖魚類，因爲它可容易地與任一種合 適的基本飼料相混合。根本不需要分開的操作程序或注射 〇 上述揭不之的各參考文獻的内容，國際專利公開案第 WO02M8110號（申請案第pCT/Ep〇1/14628號）及中國大陸 2〇專利a開案第1358499號（申請案號第〇〇1321〇72號）以及 未公開的英國專利申請案第〇2〇3991 5號，包括在此引述 的參考文獻在此全部併入參考。須注意許多變化、修飾以 及進一步的具體實施係為可能的，因此所有變化、修飾以 及具體實施係視為本發明之範圍内。 25 1335801

玖、發明說明 【圖式簡單說明】 無。 5 【圖式之主要元件代表符號表】 無0 26

Claims (1)

1. δ|ΐα 2i 拾、申請專利範圍 L 補充 第92103458號專利申請案申請專利範圍替換本 修正曰期：99年1〇月 1 · 種供魚類食用的魚類傲飼組成物，其包含： (I) 實質上為1至95wt%之具有NH2-CH2_CH2-SH化 學式的半耽胺或其鹽類； (II) 實質上為1至80wt%之用於該半胱胺的載體該 載體係選自於由環狀糊精與其衍生物所構成的組群， 该載體係為該半胱胺或其鹽類或該組成物之副作用減 少劑及/或安定劑；以及 (ill) 一塗覆材料，該塗覆材料係為該半胱胺或其鹽類 之保護劑俾使該組成物直到到達魚類之腸時維持有效 〇 2. 如申請專利範圍第丄項之魚類健飼組成物，其中該組 成物可與一最終飼料材料組合以製造一最终铜料來傲 飼魚類。 3. 如申請專利範圍第i項之魚類傲铜組成物其中該組 成物實質上含有30wt%的該半胱胺或其鹽類。 4. 如申明專利範圍第i項之魚類傲飼組成物，其中該組 成物實質上含有20wt%的該載體。 5. 如申請專利範圍第！項之魚類館飼組成物其中該組 成物進-步包含選自包括有增積劑、填充劑、碎裂劑 以及結著劑之組群的組份。 6. 如申請專利範圍第】項之束類餘甸組成物，其中該塗 覆材料係為腸溶性塗覆材科。 27 1335801 拾、申請專利範圍 7. 如申請專利範圍第1項之魚類餵飼組成物，其中該塗 覆材料在室溫下為固狀。 8. 如申請專利範圍第1項之魚類餵飼組成物，其中該塗 覆材料在魚類之腸内PH7以上係為可溶的。 9·如申請專利範圍第1項之魚類餵飼組成物，其中該塗 覆材料在該組成物中係以一多層結構提供。 io.如申請專利範圍第1項之魚類餵飼組成物，其中該塗 覆材料在pH約1.5至3.5的範圍内係為不溶的。 11 · 一種魚飼料，其包含： 一魚類餵飼組成物，其具有實質上為！至95wt%之具 有NKHs-CH^SH化學式的半胱胺或其鹽類；實質 上為1至80wt%之用於該半胱胺的載體，該載體係選 自於由環狀糊精與其衍生物所構成的組群，該載體係 為該半胱胺或其鹽類或該組成物之副作用減少劑及/或 安定劑；以及一塗覆材料，該塗覆材料係為該半胱胺 或其鹽類之保護劑俾使該組成物直到到達魚類之腸時 仍維持有效；以及 —最終飼料材料； 該魚飼料於其内具有實質上為30至165Ppm的該半胱 胺或其鹽類；或實質上為1〇〇 1 55〇ppm的該魚類餵 飼組成物。 ί2.如申請專利範圍第n項之魚飼料，其中該最終飼料 材料包含選自於由油菜籽、棉抒、黃豆、魚粉、小麥 麵皮、小麥草粉、礦物質、維他命及結著劑所構成組 28 1335801 拾、申請專利範圍 群之基礎飼料。 I3·如申請專利範圍第11項之魚飼料，其中該魚飼料實 質上含有50至i5〇ppm的該半胱胺或其鹽類。 14. 如申請專利範圍第13項之魚飼料，其中該魚飼料實 5 質上含有60PPm的該半胱胺或其鹽類。 15. 如申請專利範圍第u項之魚飼料，其中該魚飼料於 其内實質上含有100至5〇〇ppm的該組成物。 16. 如申請專利範圍第15項之魚飼料其中該魚飼料於 其内實質上含有200ppm的該組成物。 1〇 I7.如申請專利範圍第11項之魚飼料，其中該魚飼料實 質上含有33至165ppm的該半胱胺或其鹽類，該魚飼 料係為一乾燥魚飼料。 18. 如申請專利範圍第17項之魚飼料其中該魚飼料實 質上含有11〇至55〇ppm的該組成物，該魚飼料係為 15 一乾燥魚飼料。 19. 一種飼養魚類、增加魚之體重並減少魚之死亡率的非 治療方法，該方法包含： (1)提供一魚類餵飼組成物，該魚類餵飼組成物具有 實質上為1至95wt%之具有NH2-CH2_CH2-SH化學式 的半胱胺或其鹽類，實質上為1至8〇wt%之用於該半 胱胺的載體，該載體係選自於由環狀糊精與其衍生物 所構成的組群，該載體係為該半胱胺或其鹽類或該組 成物之副作用減少劑及/或安定劑；以及一塗覆材料， 該塗覆材料係為該半胱胺或其鹽類之保護劑俾使該組 29 拾、申請專利範圍 成物直到到達魚類之腸時仍維持有效； (II) 混合該組成物與一用於魚類之基礎飼料以形成— 最終飼料；以及 (III) 以該最終飼料餵飼魚類； 其中該最終飼料含有實質上為3G至165PPm的該半胱 胺或其鹽類；或實質上為1〇〇至55〇ppm的該組成物。 20.如申請專利範圍第19項的方法，其中該混合包含直 接將該組成物與該基礎飼料混合。 &如申請專利範圍第19項的方法，其中該混合進_步 包含首先製備一包括該組成物的預混合材料，以及接 著將該預混合材料與該基礎飼料混合來形成該最終飼 料。 22. 如申請專利範圍第21項的方法，其進一步包含藉由 將該組成物與一食物材料混合來製備該預混合材料， 該食物材料係選自於由胺基酸、鹽類、磷、玉米粉以 及其等之組合所構成之組群。 23. 如申請專利範圍第21項的方法，其中該預混合材料 具有1至25wt%含量的該組成物。 24. 如申請專利範圍第23項的方法，其中該預混合材料 具有10至20wt%含量的該組成物。 25. 如申請專利範圍第19項的方法，其進一步包含當节 魚類係在發育階段而該魚類之平均體重相當或少於 5〇〇g時，以該最終飼料來餵飼該魚類，該最終飼料實 質上含有30至60ppm之該半胱胺或其鹽類。 30 1335801 拾、申請專利範圍 26_如申請專利範圍第19項的方法，其進一步包含當該 魚類係在發育階段而其平均體重相當或少於5〇〇g時 ’以該最終飼料來餵飼該魚類，該最終飼料實質上含 有100至200ρρηι之該魚類餵飼組成物。 5 27.如申請專利範圍第19項的方法，其進一步包含當該 魚類係在發育階段而該魚類之平均體重大於5〇〇g時 ，以該最終飼料來餵飼該魚類，該最終飼料實質上含 有60至150ppm之該半胱胺或其鹽類。 28. 如申請專利範圍第19項的方法，其進一步包含當該 0 魚類係在發育階段而該魚類之平均體重大於500g時 ，以該最終飼料來餵飼該魚類，該最終飼料實質上含 有200至500ppm之該組成物。 29. —種製備魚飼料的方法，其包含一第一步驟係提供一 魚類飼料組成物，其具有實質上為1至95wt%之具有 5 NHyCHyCHrSH化學式的半胱胺或其鹽類；實質上 為1至80wt%之用於該半胱胺的載體，其中該載體係 選自包括有環狀糊精或其衍生物之組群，該載體係為 該半胱胺或其鹽類或該組成物之副作用減少劑及/或安 定劑；以及一塗覆材料，該塗覆材料係為該半胱胺或 丨其鹽類之保護劑俾使該組成物直到到達魚類之腸時仍 維持有效；且接著混合該組成物與一基礎飼料或一最 終飼料材料。 30. —種組成物用於經由一最終飼料來增加魚之體重的用 途，其中該組成物包含：⑴具有NH2_CH2_CH2_SH化 31 1335801 拾、申請專利範圍 干式的半胱胺或其鹽類，或含有半胱胺之組成物；⑻ 一載體H塗覆材料’其係至少用於安定該半耽胺 或其鹽類，其中該最終飼料實質上包含3〇至μ— 的該半胱胺，A⑽至5G()ppm的該含有半胱胺之組 成物。

   10 31_ —種含有半胱胺之組成物用於製造一藥物用以經由一 最終飼料來傲飼魚類以減少由於疾病或不良生存環境 所造成之魚的死亡率或改良魚之徤康的用途其中該 組成物包含：⑴具有NH2-CH2-CH2-SH化學式的半胱 胺或其鹽類；以及（ii) 一載體及/或一塗覆材料，其係 用於安定該半胱胺或其鹽類，且其中該最終飼料實質 上包含30至15〇ppm的該半胱胺，或10〇至5〇0ppm 的該含有半胱胺之組成物。 32_如申請專利範圍第30或3 1項之用途，其中該組成物 15 包含該載體及該塗覆材料。 33. 如申請專利範圍第32項之用途，其中該組成物包含 實質上為1至95wt%之該半耽胺或其鹽類。 34. 如申請專利範圍第32項之用途，其中該組成物實質 上包含3 Owt%的該半胱胺或其鹽類。 20 35.如申請專利範圍第32項之用途，其中該組成物包含1 至80wt%之該載體。 36. 如申請專利範圍第33項之用途，其中該組成物包含 20wt%之該載體。 37. 如申請專利範圍第32項之用途’其中該組成物進一 32 1335801 拾、申請專利範圍 步包含選自包括有増積劑、填充劑、碎裂劑以及結著 劑之組群的組份。 38.如申請專利範圍第32項之用途，其中該塗覆材料在 室溫狀態下為固狀。 5 39·如申請專利範圍第32項之用途’其中該塗覆材料係 為腸溶性而可溶於魚類之腸内。 40·如申請專利範圍第32項之用途，其中該塗覆材料在 該組成物中係表現一多層結構。 41. 如申請專利範圍第32項之用途，其中該塗覆材料係 0 適合在PH1·5至3.5保持不溶的。 42. 如申請專利範圍第32項之用途，其中該最終飼料進 一步包含飼料濃縮物及/或飼料補充物。 43 ·如申請專利範圍第32項之用途，其中該最終飼料包 含選自包括有油菜籽、棉籽、黃豆、魚粉、小麥麵皮 5 、小麥草粉' 礦物質、維他命及結著劑之組群的合適 基礎飼料。 44.如申請專利範圍第32項之用途，其中該最終飼料實 質上包含60ppm之該半胱胺或200ppm的該組成物。 45·如申請專利範圍第32項之用途，其中該最終飼料於 〇 其乾燥狀態實質上包含33至165ppm的該半胱胺，或 110至550ppm的該組成物。 33