TWI281412B - Improved method for detecting dysplastic epithelial tissue - Google Patents
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Description
A7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1281412 B7 _ 五、發明說明(1 ) 本發明係關於一種在活體内偵測發育異常之上皮組織之 改良診斷方法。 更特定言之,本發明係關於一種偵測及/或描述癌或癌 前上皮組織之改良診斷方法,且假陽性發生率降低。 根據本發明另一方面,該包括局部塗敷可選擇性將癌及 癌病發生前之上皮組織染色之診斷方法之假陽性發生率可 顯著降低。 熟悉本技^者自以下説明文可以明瞭本發明這些與其它 另外且更特定方面。 已知各種陽離子超活體染料可選擇性將上皮組織之癌細 胞與癌前細胞,以及由於發育障礙,增殖,腫瘤發生與其 它活性表面損害而異常之細胞染色。例如,此種染料揭示 在以下專利資料中:頒予Mashberg之美國專利第4,321,251 號,頒予Tucci等人之美國專利第5,372,801號,頒予 Pomerantz之美國專利第5,882,627號,及Bemal等人之申 請中之國際專利申請案PCT/USOO/〇5387 。亦見Chenz, Chiness Journal of Stomatology (27:44-47)(1992)及 Filurin, Stomatologiia (Russian)(72:44-47)(1993)。同樣在用之其它染 料包括若丹明(rhodamine),歐西安(alcian)藍,孔雀綠,酉分 藏花紅。吖啶黃,焦寧Y,芪藍,及亮綠。同樣可使用之 ”非染料”化合物包括匹尼淀(peonidin),經基硫胺素,天莫 尼(tiemonium)破化物,衣立普替尼(elliptinium)醋酸鹽及吱 雷也尼(furazolium)氣化物0 已顯示此種選擇性染色法之機構包括吸收或使該標記藥 -4- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格(210 X 297公釐) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)
1281412 A7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 五、發明說明(2 ) 劑分子進入該癌細胞或癌前上皮組織之粒線體體内。與正 常細胞比較’,由於該較高電位(在該癌粒線體膜内部上 之負電荷),所以該癌組織粒線體之選擇性染色明顯可 知0 雖然該粒線體標記藥劑亦可暫時將附近的非癌組織染 色,但是,其自該正常組織釋放之速度比自該癌組織之粒 線體釋放速度還快。因此,該癌症之診斷係根據該染料自 動自该正常組織釋放後’在該癌組織中之持續滞留時間而 定。適當選擇塗敷該染料與該組織之診斷觀察間之經過時 間,使該診斷者可以偵測並選擇性描述在正常上皮表面上 之癌組織或癌前組織位置。該程序可以以高準確度(亦 即,假陰性之發生機率很低)鑑定癌及可能產生癌之位 置。然而,由於各病患組織之差異及其它變數(例如,該 診斷者之技術)等等,該診斷技術亦可產生假陽性結果。 雖然假1%性比假陰性結果好的很多,然而,最佳減少假 陽性發生率以避免或減少侵襲性確認測試之必要,並避免 不當地擾亂該病患。 爲了嚐試減少該假陽性發生率,已提議約2週後,重複 該程序,其可以得到治癒非癌症損害或創傷(雖然其並不 具癌性或癌前性,但是其明顯地比正常組織聚集且保留該 染料的時間更長)所需的時間。當然,此種重複操作之方 法的確可避免許多假陽性發生。然而,由於其它原因,仍 可能產生假陽性。 這些染料對於正常組織之該短暫,較不明顯傾向之染色
(請先閱讀背面之注音?事項再填寫本頁) 4 ----·—---^訂--------線赢 1281412 A7 _______Β7 五、發明説明(3 ) :—~" 係由於該染料與上皮組織之該細胞外基質(”ECM。組份結 合所致。然而該染料雖然實際進入癌細胞及癌前細胞之粒 線體内,但是只暫時與該ECM組份(尤其,纖維網蛋白) 結合。 陽離子染料及其它粒線體標記藥劑與ECm組份之暫時 結合可能係起因於各種機構當中一或多種反應。因此,可 矣工由靜笔吸引使该粒線體標記藥劑暫時與帶負電荷之Ecm 蛋白質結合。而且,在該ECM蛋白質與該標記藥劑之雜 %蛋白質(其不含水)間可進行疏水相互反應。可經由使該 標圮藥劑之各邵份與帶有中性電荷之ECM蛋白質結合以 產生其它非專一性結合作用。甚至在上皮細胞間之該緊密 結合外(例如,該上皮表面上,以及在癌細胞間及其下 面),粒線體標記藥劑與ECM蛋白質會產生此種暫時結合 現象。 可經由使用非毒性兩親性蛋白質預處理該標記藥劑欲塗 敷之該上皮區大規模避免該粒線體標記藥劑與ECM蛋白 負之不想要暫時結合現象。該兩親性蛋白質可進入各種與 該ECM蛋白質結合之機構中,因此,當稍後塗敷該粒線 體標記藥劑時,可暫時使ECM蛋白質不能與該粒線體標 記藥劑結合。此種使用兩親性蛋白質預處理該上皮之方法 可明顯減少經由該粒線體標記藥劑與ECM蛋白質之暫時 結合所產生之假陽性反應發生率,並可明顯減少其後在該 正常上皮上出現”已染色,,區,其可能會誤認為是癌組織或 癌前組織。
65593-960105.DOC 1紙張尺度適用中國國家標準(CMS) A4規格(210X297公釐) ' --一 1281412
被塗敷作為預處理劑之㈣親性蛋白質之正確性質並不 具尚度重要性。所有黏多酷類皆具兩親性。然而,為了便 於處理及塗敷,目前較佳採用蛋白(可溶於水)或球蛋白 (可溶於稀鹽溶液)。例%,可有效使用血清白蛋白及牛奶 蛋白質(例如’酪蛋白)。亦可有效使用穀麩蛋白,例如, —-_ 五、發明説明( •I夕白蛋白與醇洛破蛋白(可溶於水性醇)及麥穀蛋白(可 溶於稀酸與稀鹼,清潔劑或還原劑)。 以下實例係說明本發明之目前較佳實施方法,熟悉本技 蟄人瞭解並承認只要不達背本發明基本概念,可修飾該程 序。因此’這些實例並不視為對於本發明該範圍(其只經 由該附加申請專利範圍定義)之限制。 實例1 &處理組合物之製法 製備以下兩親性蛋白質預處理組合物: 組份 重I % 血清白蛋白 30 無菌水 68.5 調味劑(IFF Raspberry IC563457) 0.5 防腐劑(苯甲酸鈉) 1·0 65593-960105.DOC -7- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) Α4规格(210 X 297公釐) A7
1281412 五、發明說明(5 ) 實例2 TBO染色組合物之製法 製備具有以下組成之甲苯胺藍〇 ("TBO”)染色組合物: 組伤 重量% TBO !.〇〇 調味劑(IFF Raspberry IC563457) 〇 2〇 缓衝劑(醋酸鈉三水合物) 2 45 防腐劑(過氧化氫30%) 〇 41 醋酸 4.61 乙醇 7.48 83.85 實例3 前漱洗及後漱洗溶液之製法^ 製備1重量醋酸之純水,苯甲酸鈉防腐劑及木每調味劑 之前漱洗與後漱洗溶液。 實例4 臨床$己錄 以圍兜覆蓋該患者以保護衣服。可預期有咳出物,所以 提供該患者一個10盎司杯子,其可以在感染性廢容器中 經處理,或可以將該内容物直接倒入洗物槽之中央排水管 中以避免將該洗物槽染色。覆蓋可能會被染色之環境表面 或物件,或自該區域移除。 不必使用任何儀器(其可能使軟組織產生割痕或傷痕), (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) MW—l·——訂-----.—% 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製
經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1281412 Δ7 Α7 __ Β7 五、發明說明(6) 進行目視口腔癌檢查。將軟組織及牙齒之外觀做記號。 該患者使用約15亳升該前漱洗溶液漱洗口腔約2〇秒並 吐出以移除過量唾液,並得到一致性的口腔環境。然後以 额外前漱洗溶液重覆該步騾。 然後該患者以水漱洗並漱口約20秒,並吐掉。 接著該患者以約50耄升該蛋白質預處理組合物漱洗並 漱口約30秒’並吐掉除了遠患者先保留該蛋白質預處理 組合物在口中約2分鐘,然後才吐掉不同外,重複前述步 驟。 然後該患者以30毫升該TBO溶液漱洗並嗷口一分鐘, 並吐掉。 接著該患者以15耄升該後漱洗漱洗,並吐捽。重復該 該步驟。 然後該患者以水漱洗並嗷口數2 0秒鐘,並吐掉。接著 重複該步騾。 然後使用適合之軟組織檢查技術(其包括收縮法,若需 要’則使用均衡的照明法及放大法)進行該口腔之目视觀 察。記錄具有殘留藍色著色之可疑損害之位置,大小,形 態,顏色及表面性質。 使獲得之具有殘留藍色著色之任何組織樣本接受正常癌 偵測組織程序檢查。沒有發現”假陽性”樣本。 實例5 甚^它蛋白質之用i 除了實例1該蛋白質預處理溶液包含球蛋白,瞎蛋白, 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格(210 X 297公愛) - --------丨麋·! (請先閱讀背面之注咅3事項再填寫本頁) 1281412 A7 B7 五、發明說明(7 ) 穀麩蛋白白蛋白,小麥醇溶穀蛋白及麥穀蛋白(在適合藥 理學上可接受溶液中)及適合調味劑不同外,重複實例1-4 之程序。獲得相同結果。 實例6 其它粒線體標記染料之用途 除了所使用該染色染料爲Azure B,Azure C,brilliant cresyl Blue, Rhodamine, Alcian Blue, Malachite Green, Phenosafranin, Acriflavine,Pyronine Y,Toluylene Blue,Brilliant Green,Peonidin, Oxythiamine,天莫尼破化物,衣立普替尼醋酸鹽及吱雷唑尼 氯化物不同處,重複實例1-5之程序。獲得相同結果。 已説明本發明,其方式可以使熟悉本技藝者暸解並實踐 本發明,並已確認其目前較佳具體實施例。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)
-----r---*訂卜-------線J 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格(21〇 X 297公釐) .> —y f l*^* 5 、^... 1. 中請T涵’ 89.8.9. 案 號 089116023 類 別 (以上各攔由本局填註)
n A A4 C4 中文說明書替換頁(96年1月) f|專利説明書 -、雲』名稱 中 文 偵測發育異常之上皮組織之改良方法 英 文 "IMPROVED METHOD FOR DETECTING DYSPLASTIC EPITHELIAL TISSUE” 姓 名 道格拉斯D.伯克特 美國 國 籍 住、居所 美國亞歷桑那州費尼克斯市東幽克里路4736 號 裝 姓 名 (名稱) 美商辛拉公司 美國 國 籍 三、申請人 住、居所 (事務所) 美國亞歷桑那州費尼克斯市北第7街5 22 7 號 喬瑟夫亨斯 代表人 姓 名
655^3-960105.k)C 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐)
Claims (1)
- A BCD 1281伞 1@9116023號專利申請案 中文申請專利範圍替換本(96年1月) 々、申請專利範圍 1. 一種偵測發育異常上皮組織之方法,其包括局部性塗 敷粒線體標記藥劑至可疑組織之位置上,其中該粒線 體標記藥劑可選擇性將癌細胞及癌前細胞染色;並於 塗敷粒線體標記藥劑前塗敷兩親性蛋白質至該位置上 以結合細胞外基質蛋白質,減少由粒線體標記藥劑染 色過程中所導致的假陽性發生率。 65593-960105.DOC -1- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公釐)
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