TWI243179B - Novel LHRH antagonists having improved solubility properties - Google Patents

Description

1243179 A7 B7 經濟部智慈財產局肖工消費合作社印製 五、發明説明（彳） 本發明係關於具有改進的溶解度性質之LHRH拮抗 劑，製備此類化合物之方法，內含此類化合物之藥劑，及 使用此藥劑以治療荷爾蒙依存的腫瘤及荷爾蒙-影響的非 惡性病症例如良性的前列腺細胞增殖（BPH)與子宮內膜組 織異位形成。 使用於定義肽類之命名符合IUPAC-IUB委員會在在 生化學的命名（European J. Biochem· 1984，138，9-37)， 其中，符合慣常的表示法，在N端上胺基出現在左而C 端上羧基出現在右。依據本發明LH-RH拮抗劑例如肽類 包括天然及合成的胺基酸，前者包括Ala，Val，Leu，lie ，Ser，Thr，Lys，Arg，Asp，Asn，Glu，Gin，Cys，Met ，P h e，T y r，P r ο，T l· p及H i s。個別的胺基酸殘基之縮寫 個係基於胺基酸的普通名且爲Ala =丙胺酸，Arg =精胺酸 ，Gly =甘胺酸，Leu=白胺酸，Lys =離胺酸，Pal(3) = 3- (3-D比 啶基）丙胺酸，Nal(2) = 3-(2-萘基）-丙胺酸，Phe =苯基丙胺 酸，Cpa = 4-氯苯基丙胺酸，Pro =脯胺酸，Ser =絲胺酸， Thr =蘇胺酸，Τι·ρ =色胺酸，Try =酪胺酸且Sar =肌胺酸。所 有在此記述的胺基酸源自L系列，若未另外提及。例如 D-Nal(2)爲3-(2-萘基）-D-丙胺酸之縮寫且Sei·爲L-絲胺酸 之縮寫。在離胺酸之側鏈上在ε胺基上取代係由置於在 Lys之後的方括弧代表，若縮寫的形式適當。 其他使用的縮寫爲： Ac 乙醯基 Atz 3-胺基-1，2,4-三唑-5-羰基 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 、11 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） -4- 1243179 A7 B7 五、發明説明（2) B 4-(4-甲脒基苯基）胺基- i，4-二酮基丁基

Boc 第三-丁基氧基羰基 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

Bop 苯并三唑基-1-氧基-三（二甲胺基）-鳞六氟磷 酸鹽 DCC 二環己基氰胺 DCM 二氯甲烷

Ddz 二甲氧基苯基-二甲基亞甲基氧基-羰基 (二甲氧基-二甲基-Z) DIC 二異丙基氰胺 DIPEA N，N-二異丙基乙胺 DMF 二甲基甲醯胺

Fmoc 苐基甲基氧基羰基 HF 氫氟酸 HOBt 1-羥基苯并三唑 HPLC 高壓液體色層分析法

Me 甲基 TFA 三氟乙酸 經濟部智慧財產局g(工消費合作社印製 Z 苄基氧基羰基 本發明肽類爲產生黃體-荷爾蒙-釋放荷爾蒙（LH-RH) 之類似物，其帶有下列構造； p-Glu-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2 j [LH-R Η，貢納都瑞（g ο n a d o r e 1 i η)]。 多於於20年，硏究人員已尋找選擇的有效力的LH-RH 十肽之拮抗劑[M. Karten 及 J.E. Rivier，Endocrine 本紙張尺度適用中國國家標準（cns ) A4規格（210x297公釐） -5- 1243179 A7 B7 五、發明説明（3) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

Reviews 7，44-66( 1 9 86)]。對該拮抗劑的高度興趣係基於 其在下列領域中之用途：內分泌學、婦科學、避孕及癌症 。已製備大量的化合物作爲潛在的LH-RH拮抗劑。至今 已發現最有趣的化合物爲那些化合物其構造係LH-RH的 改良構造。 第一系列的有效力的拮抗劑係得自將芳香族的胺基酸 殘基引入位置 1、2、3及6或2、3及6。寫此化合物一 般的方法如下：胺基酸首先指出其佔有胺基酸起初存在 LH-RH的肽鏈位置，此交換發生之位置言己爲上插圖。此外 ，由標記法"LH-RH”表示之後放置此類其中交換已發生的 LH-RH類似物。 已知的拮抗劑爲： [Ac-D-Cpah'D-Trp3,6] LH-RH(D.H. Coy et al·，在： Gross, E.及 Meienhofer, J. (Eds)Peptides ; Proceedings of the 6th American 肽 Symposium, pp. 775-779，Pierce Chem. 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

Co·，Rockville III. ( 1 979) : [Ac-Pro1，D-Cpa2，D-Nal(2)3’6] LH-RH(US Patent No. 4,4 1 9,347)及[Ac-Pro1，D-Cpa2，D-Trp3,6] LH-RH(J. L. Pineda, et al., J. Clin. Endocrinol.

Metab. 56，420，1 983” 爲了改良拮抗劑之作用，將鹼性的胺基酸，例如D-A r g，稍後引入位置 6。例如[A c - D - C p a1 ·2，D - T r p3，D -Arg6，D-Ala10] LH-RH(ORG-30276)(D.H. Coy, et al., Endocrinology 100，1445，1982);及[八。-0^&1(2)1，0-Phe(4-F)2，D-Trp3，D-Arg6] LH-RH(〇RF 1 8260)(J. E. 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -6- 1243179 A7 B7 五、發明説明（4)

Rivier et al.，in : Vickery B.H. Nestor，Jr. J. J·，Hafez，E. S· E (Eds)。LHRH and its Analogs，pp· 11-22 MTP Press ’ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

Lancaster，UK 1984) o 此外有效力的LH-RH拮抗劑描述於W〇92/1 965 1 ’ WO 94/1 9370 ^ WO 92/1 7025 ^ WO 94/1484 1 J WO 94/ 1 33 1 3 ，US-A 5,300,492，US-A 5,140,009，EP 0 41 3 209 A1 及 DE 195 44 21 2 A1。 後者揭示化合物其具有改良的鳥胺酸或離胺酸單位在 位置 6上且其相應於下列分子式；

Ac-D-Nal(2)1-D-Cpa2-D-Pal(3)3 Ser4-Tyr5-D-Xxx6- Leu7-Arg8-Pro9-D-Ala,0-NH2, 其中D-Xxx爲一般的式（VI)之胺基酸基團 -HN-CH-CO-

I (叫 ί ΝΗ

I

CO - R 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 此外已知LH-RH拮抗劑爲安塔瑞（antarelix)、卡尼瑞 (Ganirelix)及賽挫瑞（cetrorelix)。 安塔瑞（antarelix);

Ac-D-Nal(2)1-D-Cpa 2-D-Pal(3)3-Ser4 -Tyr5-D-Hci6-Leu7-Lys(iPr)8-Pro9-D-Ala10-NH2 卡尼瑞（Ganirelix);

Ac-D-Nal(2)1-D-Cpa 2-D-Pal(3)3-Ser4-Tyr5-D- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -7 - 1243179 A7 B7 五、發明説明（5) hArg(Et)26-Leu7hArg(Et)2 8-Pro9-D-Ala10-NH2 賽挫瑞（c e t r o r e 1 i x); (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

Ac-D-Nal(2)1-D-Cpa2-D-Pal(3)3-Ser4-Tyr5-D-Cit6-Leu7-

Arg8-Pro9-D-Ala10-NH2 本發明之目標在創造新穎的LH-RH拮抗劑其帶有增 加的酵素穩定性及顯著改進的水中溶解度。 此目的達成係由下列通式（I)之化合物 Α-Χχχ^Χλχ^Χχχ^Χχχ^Χχχ^Χλχ 6-Xxx7-Xxx8-Xxx9-Xxx10-NH2 (I) 其中 A爲乙醯基或3-(4-氟苯基）丙醯基，

Xxx1 爲 D-Nal(l)或 D-Nal(2)，

Xxx2-Xh3 爲 D-Cpa-D-Pal(3)或單鍵，

Xxx4 爲 Ser，

Xxx5 爲 N-Me-Tyr，

Xxx6爲通式（II)之D-Cit，D-Hci或D-胺基酸基團 〇 NH > 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 (CH2)n

I

〇vNH

I R1

(ID 其中n爲數目3或4，其中R1爲具有通式III之基 -(CH2)p.CO-NR2R3 (III) 其中P爲1至4之整數，R2爲氫或烷基且R3爲未取代的或 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -8 - 1243179 A7 B7

五、發明説明（J 6 經取代芳基或雜芳基，或R1爲3-胺基-1，2,4-三唑-5-羰基 或R1爲通式（IV)之環 R4

、、R5 (IV) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) (Vn 其中q爲數目1或2, R4爲氫原子或烷基，R5爲氫 原子或烷基基團且X爲氧或硫原子，

Xxx7 爲 Leu 或 Nle，

Xxx8 爲 Arg 或 Lys(iPr)，

Xxx9 爲 Pro 及

Xxx1Q 爲 Ala、D-Ala 或 Sar， 及其與醫藥學上可接受的酸所形成的鹽類，尤其是乙 酸鹽、甲基東莨萣酸鹽（embonate )及三氟基醋酸鹽。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 在本發明化合物之中，那些尤其較佳者其中Χχχ6爲D-[ ε -N’-(咪唑烷-2-酮-4-基）甲醯基]-Lys，D-(3-胺基-1，2,4-三 唑-5-羰基）-Lys(縮寫爲 D-Lys(Atz))，或 Γ)-[ε -Ν·-4-(4-甲脒 基苯基）-胺基-1，4-二酮基-丁基]-Lys(縮寫爲D-Lys(B))。 此外尤其較佳的本發明化合物爲： Ac-D-Nal(2)1-D-Cpa2-D-Pal(3)3-Ser4-N-Me-Tyr5-D-Hci6-

Nle7-Arg8-Pro9-D-Ala10-NH2,

Ac-D-Nal(2)1-D-Cpa2-D-Pal(3)3-Ser4-N-Me-Tyr5-D-Lys(

Atz)6-Leu7-Arg8-Pro9-D-Ala10-NH2, 本紙張尺度適用中國國家標準（cns ) A4規格（210X297公釐） " "" -9- 1243179 A7 B7 五、發明説明（7)

Ac-D-Nal(2)1-D-Cpa2-D-Pal(3)3-Ser4-N-Me-Tyr5-D-

Lys(B)6-Leu7-Lys(iPr)8-Pro9-D-Ala10-NH2, (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

Ac-D-Nal(2)l-D-Cpa2-D-Pal(3)3-Ser4-N-Me-Tyr5-D-

Lys(B)6-Leu7-Arg8-Pro9-D-Ala10-NH2,

Ac-D-Ne1(2) -D-Cps--D-Psl(3) -Scr -N-Mc-Tyr5-D-Hci6-Nle7-Lys(iPr)8-Pro9-D-Ala10-NH2,

Ac-D-Nal(2),-D-Cpa2-D-Pal(3)3-Ser4-N-Me-Tyr5-D-Hci6-

Nle7-Lys(iPr)8-Pro9-Sar10-NH2,

Ac-D-Nal(2)1-D-Cpa2-D-Pal(3)3^Ser4-N-Me-Tyr5-D-Hci6-

Nle7-Arg8-Pro9-Sar10-NH2, 3-(4-氟苯基）丙醯基-0氺31(1)1-361^-小1^-丁7：^-0-Lys(Atz)6-Leu7-Arg8-Pro9-D-Ala10-NH2,

Ac-D-Nal(2)l-D-Cpa2-D-Pal(3)3-Ser4-N-Me-Tyr5-D-

Lys(B)6-Nle7-Arg8-Pro9-Sarl0-NH2,

Ac-D-Nal(2)1-D-Cpa2-D-Pal(3)3-Ser4-N-Me-Tyr5-D-Lys(B)6-Nle7-Arg8-PiV-Sar10-NH2,及

Ac-D-Nal(2)1-D-Cpa2-D-Pal(3)3-Ser4-N-Me-Tyr5-D- 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

Lys(B)6-Nle7-Lys(iPr)8-Pro9-Sar10-NH2 及與上述的醫藥學上可接受的酸所形成的鹽類。 本發明化合物可使用於治療荷爾蒙依賴性的腫瘤，尤 其是前列腺癌或乳房癌，且亦可用於治療須要LH-RH荷 爾蒙抑制治療之非惡性的疾病。爲此，彼可混合以一般的 載劑及賦形劑且調製爲藥劑。 式（I)化合物之合成的進行可由標準的片段縮合或由依 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -10- 1243179 Α7 Β7 五、發明説明（8) (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 據麥瑞菲（Merrifield)作固相合成其合成係接續另一項使用 已醯化的D-離胺酸在側鏈上帶有通式V-COOH羧酸，或 經由在D -離胺酸6之側鏈上之醯胺鍵結將十肽單位與適 當的羧酸反應。據此，於製程中引入V-co-基團可在三 個不同之位置執行：在縮合個別的單位以生成肽之前，於 在肽鏈上加入離胺酸或鳥胺酸之後，但在縮合下一單位之 前或於縮合所有單位之後。 分子式爲（I)的化合物其合成依據已知的方法，例如 由純固相技藝，部分固相技藝（所謂的片段縮合）或由標準 的溶液偶合（參見 M. Bodanszky，"Principles of Peptide Synthesis"，Springer Verlag 1 9 84) o 例如固相合成之方法描述於教科書"Solid Phase Peptide Synthesis”，J.M· Stewart 及 J.D· Young，Pierce Chem. Company，Rockford，III，1984，及在 G. Barany 及 R.B. MerrifielcTThe Peptides"，Ch. 1，ρρ· 1 -285，1 979， 經濟部智慈財產局g(工消費合作社印製 A c a d e m i c P r e s s I n c。標準的溶液合成詳細描述於 "Methoden der Organischen Chemie [有機化學之方法 ](Houben-Weyl)，Synthese von Peptiden,f [Synthesis of Peptide] E. Wijnsch (Editor)1974，Georg Thieme Verlag， Stuttgart，FRG o 此逐步合成的進行，例如由首先共價地鍵結羧基端基 胺基酸（其α -胺基係經保護的）到不溶的支持物上而此支 持物係一般用於此的，去除此胺基酸的^ -胺基保護基， 經由其羧基將如此得到的自由胺基鍵結到下一個經保護的 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X29*7公釐） -11 - 1243179 Α7 Β7 五、發明説明（9) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 胺基酸，且以正確的序列步驟由此方式鍵結將要合成的肽 上的一般的胺基酸，且於鍵結所有胺基酸之後自支持物上 去除完成的肽，且進一步地去除任何其可能存在的副功能 保護基。此逐步縮合係以慣常的方式進行，由相應的、通 常經保護的胺基酸作合成。 個別的胺基酸之間的胺基酸鍵結其執行係依據此領域 一般的方法；那些尤其適當者爲： • 在二環己基氰胺或二異丙基氰胺（DCC，DIC)存在下 的對稱酐方法 • 一般的氰胺方法 • 氰胺/羥基苯并三唑方法 (參見 The Peptides，Vol 2，Ed. E. Gross 及 J. Meienhofer) o 在片段偶合中，疊氮化物偶合，其進行中無消旋作用 ，或可較佳地使用DCC-1-羥基苯并三唑或DCC-3-羥基-4-酮基-3,4-二氫-1，2,3-苯并三嗪方法。亦可使用片段上的活 化酯類。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 N-保護的胺基酸之酯，例如N-羥基琥珀醯亞胺酯類 或2,4,5-三氯苯基酯類，尤其是高度適用於胺基酸的逐步 縮合。胺基水解可非常有效地由N-羥基化合物催化，而 此N-羥基化合物帶有大約乙酸的酸度，例如1-羥基苯并 三口坐〇 本身存在的中間體胺基保護基係由氫化反應移除，例 如苄氧基羰基基團（=Z基團）或基團其可由弱酸移除。α- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X297公釐） -12- 1243179 Α7 Β7 五、發明説明（1(^ 胺基適當的保護基例如： (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 第三丁基氧基羰基、苐基甲基-氧基羰基、碳苯甲醯 氧基或碳苯并硫基團（若適當的在各案例中具有對-溴-或 對-硝基苄基基團）、三氟乙醯基、酞醯基團、鄰-硝基苯 氧基乙醯基、三苯甲基、對-甲苯磺醯基、苄基、在苯核 經取代之苄基基團（對-溴-或對-硝基苄基基團）及α -苯基 乙基基團。在此亦可參考 Ρ. Green stein and Milton Winitz， Chemistry of Amino Acids，New York 1961，John Wiley 及 Sons，Inc.，Volume 2，例如第883頁以及下列等， "Principles of Ppetide Synthesis"，Springer Verlag 1984， "Solid Phase Peptide Synthesis1·，J. M. Stewart 及 J. D. Young，Pierce Chem. Company j Rockford ? III j 1984 » G.

Bar any and R. B. Merrifield "The Peptides" j Ch. 1 » pp. 1-285，1979，Academic Press Inc.，以及 The Peptides，

Volume 2，Ed. E. Gross 及 J. Maienhofer，Academic Press ，New York。此類保護基爲基本上亦適用於進一步地保護 對應的胺基酸之功能性側基團（0H基團，NH2基團）。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 在此羥基基團（絲胺酸，蘇胺酸）宜經由苄基及相似的 基團保護。此外不在α -位置的胺基（例如胺基在ω -位置 ，精胺酸的胍基）宜作正交保護。 排除經由R^CO-基團改良之離胺酸或鳥胺酸，個別 的胺基酸單位係商業上可得到的。製備後者化合物之方法 可能的路線如下： 1.將α -羧酸基團醯胺化。 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（2丨0>< 297公釐) · -13- 1243179 經濟部智慧財產局g(工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（d 2. ε -胺基係經以Z基團保護的。 3. α -胺基係經由Boc基團保護，其係具有相對於稍 後去除胺基保護基結果之選擇性。 4. 移除在胺基上之Z基團。 5. 將所欲求之基團R4-CO-引入在ε-胺基上。 6. 移除在胺基上的Boc基團。 7. 以Z基團提供予α -胺基。 將離胺酸上的胺基與適當的羧酸反應而引入RICO-基團，其適當的製作法係基本上相同於如上述之鍵結胺基 酸的方法。但是縮合時使用氰胺，例如1-乙基-3-(3-二甲 胺基-丙基）氰胺，及1-羥基苯并三唑尤其是較佳的。 鍵結胺基酸的反應發生在惰性溶劑或懸浮劑其一般用 於此領域者（例如二氯甲烷），若須要可加入二曱基甲醯胺 ，以改良溶解度。 適當的合成的支持物爲不溶的聚合物例如小珠形式的 聚苯乙烯樹脂，其可腫脹在有機溶劑中（例如聚苯乙烯及 1 %二乙烯苯之共聚物）。合成經保護的十肽醯胺於甲基二 苯甲基胺樹脂（MBHA樹脂，即於聚苯乙烯樹脂提供以甲 基二苯甲基胺基團）上合成經保護的十肽醯胺，其給予所 欲求之肽的C-端醯胺功能，於自支持物上作HF切除之 後，其可依據下列流程進行： 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（2!〇X297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

-14- 1243179 A7 B7 五、發明説明（d 成草案 階段 功能 溶劑/藥劑（v/v) 時間 1 沖洗 甲醇 2 x2分鐘 2 沖洗 DCM 3 x3分鐘 3 除去 DCM/TFA(1 ; 1) 1 X 3 0分鐘 4_ 沖洗 異丙醇 2 x2分鐘 5_ 沖洗 甲醇 2 x2分鐘 6 沖洗 DCM 2 X 3分鐘 7 中和 DCM/DIPEA(9 : 1) 3 x5分鐘 8 沖洗 甲醇 2 x2分鐘 9 沖洗 DCM 3 x3分鐘 10 停止 在 DCM + DIC + H〇Bt 中力口入 Boc-As 11 偶合 DCM，視需要地DCM/DCF 約90分鐘 12 沖洗 甲醇 13 x2分鐘 13 沖洗 DCM 1 2 X 3分鐘 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 N a -Boc-保護的胺基酸係慣常地在三倍莫耳過量的二 異丙基氰胺（DIC)及1-羥基苯并-三唑（H〇Bt)(在 CH2C12/DMF中）存在下，偶合90分鐘，且此Boc-保護的 基團由50%三氟乙酸（TFA)在CH2Cu中作用半小時而移除 。爲查驗轉變是否完整，可使用依據克萊斯登 (Christensen)的克洛雷（chloranil)測試及凱設（Kaiser’s)的水 合苯并戊三酮測試。在CHaCl 2中用五倍過量的乙醯基咪 唑作乙醯化而阻塞不含胺基的基團之功能。在樹脂上合成 月太的反應步驟序列係採用如上流程。爲去除樹脂結合的肽 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -15- 1243179 A7 B7 五、發明説明（^ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 類，將固相合成相應的終產物在真空下以p2〇5乾燥，且 在（TC以500倍過量的HF /苯甲醚ίο: 1/v; V處理60分 鐘。 於真空下蒸餾HF及苯甲醚之後，由使用無水乙醚淸 洗並攪拌而得到白色固體肽醯胺，且去除聚合物支持物可 額外地得到肽醯胺，其執行係使用50%強的水溶性乙酸淸 洗。在真空下小心濃縮乙酸溶液，可得到相應呈高黏性油 的肽類，.於冷卻下加入絕對乙醚中之後可將其轉換爲白色 固體。 進一步純化係使用製備型高壓液體色層分析法（HPLC) 以慣常的程序方法執行。 經濟部智慧財產局Μ工消費合作社印製 將肽類轉變爲其酸式加成鹽類可由已知方式執行使其 本身與酸反應。相反地，自由肽類可得自其酸式加成鹽類 與鹼之反應。肽甲基東莨萣酸酯其製備可由肽的三氟乙酸 鹽類（TFA鹽類）與自由甲基東莨萣酸（甲基東莨萣酸）或對 應的甲基東莨萣酸的二鈉鹽反應。爲此，將肽TFA鹽水 溶液中以甲基東莨萣酸二鈉鹽溶液處理，在極性非質子的 介質中，較佳者爲二甲基乙醯胺，且分離出所形成的淡黃 色的沈澱物。 以下實施例係用以說明本發明而非用以限制本發明。 實施例1

Ac-D-Nal(2)l-D-Cpa2-D-Pal(3)3-Ser4-N-Me-Tyr5-D-Hci6-Nle7-

Arg8-Pro9-D-Ala10-NH2 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X297公釐） -16- 1243179 A7 B7 五、發明説明（j (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) [i 51 ]將賽挫瑞（cetrorelix)碘化（Amershan ; 80.5 Bq/fmol比活性）。將反應混合物以高效能液體色層分析 法使用交換相純化，將賽挫瑞（c e t r 〇 r e 1 i X)作單碘化而得 到而不含未標記的肽。約80%的[125 I ]賽挫瑞（cetrorelix) 能與特定的受體結合。 受體結合測定係於如描述於（Beckers et al.，1 995)生 理的症狀之下，使用完整的細胞進行。快長滿的LTK·細 胞穩定轉染培養，其表現人類LHRH受體，與 &(：1/?丨（137毫莫耳濃度仏01，2.7毫莫耳濃度1((：1，8.1 毫莫耳濃度Na2HP〇4，11.47毫莫耳濃度KH2P〇4)/l mm EDTA反應而分離，且由離心收集。將細胞沈澱塊再懸浮 於結合緩衝溶液（DMEM不含H2C〇3，帶有 4.5 g/Ι的葡萄 糖，1〇毫莫耳濃度1^068 0117.5，〇.5%(質量/體積）；63八， 1运/1崔西桿菌素，0.12/133丁1，0.1%(質量/體積）仏％) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 中。爲作置換測定，將0.25 X 106細胞/100 /z 1反應與 大約 225 pM 的[1251]-賽挫瑞（cetrorelix)(比活性 5-10 X 1〇5 dpm/pmol)及各種濃度的未標記的本發明化合物作爲競爭 者。將細胞懸浮液在100 // 1的結合培養液中且在400 // 1 測定管中分層，200 // 1的84%體積比的矽酮油（Merck型 5 5 0)/1 6%體積比的石蠟油。於在37°C以緩慢、連續振動反 應1 h之後’由使用 9000 rpm(轉子型HTA13.8; Heraeus Sepatec，Osterode /德國）離心2分鐘將細胞自反應培養液 中分離出。將內含細胞沈澱塊的管內上端切除。然後以計 數T放射線分析細胞沈澱塊及上淸液。非專一結合的材料 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -25- 1243179 A7 B7 五、發明説明（ 用量之測定，在最終濃度1 # Μ，包括未標記的賽挫瑞 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) (cetrorelix)，且典型地S總結合材料的1〇%。使用EBDA/ 配體分析程式（B i 〇 s 〇 f t v 3 · 0)進行結合數據的分析。 方法2. 拮抗活性的功能測定 此測定之進行，提供一些改良，如描述於Beckers，T.， Reilander, H., Hilgard, P. ( 1 997) "Characterization of gonadototropin-releasing hormone analogsbased on a sensitive cellular luciferase reporter gene assay"，Analyt·

Biochem· 251，17-23(Beckers et al.，1997)。每孔 10,000 細胞，其表現人類LHRH受體及蟲螢光素酶報導基因， 在切片機（microtitre )板上培養24 h，使用DMEM附添加 劑及l%(v ; v)的FCSi。然後對細胞刺激以1 nM [D-TrP6] LHRH共6 h。在刺激之前加入本發明化合物拮抗劑且於 結束時將細胞水解以對細胞的Luc活性定量。由使用Hill 模式（Programme EDX 2.0 取自 C· Grunwald， 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A r z n e i m i 11 e 1 w e r k D r e s d e η)以非線性回歸分析法進行劑量-效應曲線計算IC5〇値。

Luc活性定量之進行係本質上重複如描述於（ PromegaTechnica 1 Bulletins #10 1/1 61)使用相應的蟲螢光素 酶測定系統（Promega E4030)。由於加入共酵素A(CoA)， 蟲螢光基-CoA之氧化反應發生其在動力學上係有利的。 於自微量滴定盤去除培養液之後，由加入1〇〇 # 1的水解 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -26- 1243179 A7 B7 五、發明説明（ 緩衝溶液（25毫莫耳濃度三-磷酸鹽pH 7.8，2毫莫耳濃度 二硫蘇糖醇、2毫莫耳濃度1，2-二胺基環己烷-N，N，N’，N’-四乙酸（CDTA)，10%(v ; v)甘油，1%(ν ; v)Triton X-100) 而使細胞溶解。於在室溫下反應1 5分鐘之後，將1 Ο // 1 的細胞水解液轉移至適用於發光偵測（Dynatech)的白色微 量滴定盤。此酵素的反應係由加入下列而起始 ：50//1 的測定緩衝溶液（20毫莫耳濃度tdcine pH 7.8，1.07毫莫 耳濃度的（“£(：〇3)4]\/^(〇幻2，2.67毫莫耳濃度]\/^3〇4，0.1 毫莫耳濃度伸乙基二胺四乙酸（EDTA)，33.3毫莫耳濃度 二硫蘇糖醇、270 // Μ輔酵素A，470 // Μ發光蟲 (Photinus pyralis)營光素，530 // M rATPNas)。於一分鐘 之後，以半生期在五分鐘的信號作總時間一秒之冷光測定 ，使用 EG&G Berthold MicroLumat LB 96 P。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局工消費合作社印製 以此方式，得到下列在試管內之數據，Kd爲結合親 和力且IC^爲功能性活性且pM占微微莫耳每公升： 化合物 Κ〇[ρΜ] IC5〇[pM] 賽挫瑞（cetrorelix) 170(21) 198(5) 實施例1 η · d. 242(3) (乙酸鹽） 實施例2 181(1) 684(2) 實施例3 154(1) 492(2) 實施例6 n. d. 221(2) 實施例7 η. d. 1300(1) 實施例8 I η · d · 11400(1) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -27- 1243179 A7 B7 五、發明説明（ 實施例 9 In.d. 1 4700( 1) n. d.= 未孭[J定 ()=獨立實驗之數目 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) •A衣. 訂 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -28- 附件：第89104093號專利申請案中文說明書修正179 民國92年7月2日呈 申請曰期 89年 3月 7曰 案 號 89104093 類 別 (以上各攔由本局填註）

JL |舞!專利説明書 呉有驭艮的]容解度性質之新穎的L H R Η拮抗劑 發明 新型 名稱 發明 創作< 申請人 中文 英 文 姓 名 國 籍 住、居所 姓 名 (名稱） 國 籍 住、居所 (事務所） 代表人 姓 名

Novel LHRH antagonists having improved solubility propert (1) 麥可·桕恩德 Bernd, Michael (2) 伯哈德•卡斯契 Kutscher, Bernhard (2)艾克哈德♦ 0S特 Gunther, Eckhard (1) 德國法蘭克福♦京待斯堡林蔭大道五十二號 Gunthersburgallee 52, D-60316 Frankfurt, Germany (2) 德國曼圖•史崔斯曼街九號 Stresemannstrasse 9, D-63477 Maintal, Germany ®德國曼泰維格街一七六號 Wingertstrasse 176, D-63477 Maintal, Germany

(1)辛塔瑞斯有限公司 Zentaris GmbH ⑴德國 (1)德國法蘭克福威思幕勒街四十五號 Weismullerstrasse 45, D-60314 Frankfurt, Germany (1)岡特·諾沃德 NauwaId, Gunter 賽門♦高普夫特Gopfert, Simone 本紙張尺度逍用中國國家櫺隼（CNS ) A4坑格（210 X 297公釐） es 裝 訂 I 4 線 1243179 申請曰期 89 年 3 月 7日 案 號 89104093 類 別 (以上各撊由本局填註） 0；：ί Α4 C4 备』專利説明書 發明 一、名稱 新型 中文 英文 姓 名 ⑻辦得•羅米斯Romeis, Peter Ο P瑪士 ♦瑞士曼 Reissmann, Thomas ® 湯瑪斯•貝客司Beckers, ihomas 國 籍 W)德國蓋豪森慕爾藍路十六號 - 發明， —、 人 Muhlrainstr· 16， 63571 Gelnhausen, Germany 創作 住、居所 〇德國法蘭克福馬波恩路四十四號 Massbornstr* 44, 60437 Frankfurt, Germany β)德國法蘭克福•帕薩凡特二十六號 Passavantstr· 26, D-60596 Frankfurt, Germany 姓 名 (名稱） 國 藉 三、申請人 住、居所 (事務所） 代表人 姓 名 訂 本紙張尺度適用中國國家榡卒（CMS ). Α4規格（210X 297公釐）

裝

線 1243179 93· 附件2:第89104093號專利申請案 中文說明書替換頁 民國93年4月6曰呈 五、發明説明（14 ) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 此合成之進行係依據固相流程（Peptide Synthesis Protocol，p.l 1)並作 DIC/H〇Bt偶合，起始自3.3 g的 MBHA樹脂（荷載密度1.08毫莫耳/g)。於使用HF自聚合 物支持物切除之後，得到3.4 g的粗肽’其係以製備型 Η P L C的標準方法純化。於後續的冷凍乾燥後，得到1.43 g的HPLC-均勻產物，其實驗式爲C72H96N”〇mC1，具有正 確的尸人8-1^:1 45 8.7 (¥ + 11 + )(計算値：1 457.7)，及對應的 ]H-NMR 光譜。 1HNMR(500 MHz，D2〇/DMS〇-d6， 5 以 ppm 計）： 8.7至7.2，數個m，芳族Η及不完全交換的NH ; 6.92 及 6.58，2d，2x2H，芳族 H p-C卜Phe ; 5.2 至 3.5，數 個m，Ca-H及芳族H; 3.2至2.6，數個m，芳族CA-H 2.1至0.7，數個m，殘存的脂族Η ; 1.70，s，3H，乙醯 基；1.20，（1，311，0冷-11八12;0.8，111，（：5-111^11。 實施例 2

Ac-D-Nal(2)1-D-Cpa2-D-Pal(3)3-Ser4-N-Me-Tyr5-D-Lys(B)6- 經濟部智慈財產局員工消費合作社印製

Leu7-Lys(iPr)8-Pro9-D-Ala10-NH2 此合成進行依據流程（Peptide Synthesis Protocol ’ p.ll)並作 DIC/H〇Bt偶合，起始自4.0 g的MBHA樹脂（ 荷載密度1.1 1毫莫耳/g)。於使用HF自聚合物支持物切 除之後，得到4.87 g的粗肽，其係以製備型HPLC的標準 方法純化。於後續的冷凍乾燥後，得到0.93 g的HPLC-均 勻產物，在B0P作爲偶合試劑之存在下將其與4-甲脒基 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐） -17- 1243179 93. A7 B7 五、發明説明（15 ) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 苯胺基-4-酮基丁酸反應以生成所欲求之化合物。於HPLC 新鮮純化之後，得到148毫克的目標化合物，其實驗式爲 CwHh2N]7〇i5C1，其具有正確的 ESI-MS: 1 647.6(M + H + )(計 算値：1 645.8)，及對應的1H-NMR光譜。 W-NMRGOO MHz，DMS〇-d6，ά 以 ppm 計）： 10.4，s，1H 及 9.13，s，2H，及 8.94，s’ 2H，4-甲脒基 苯胺之NH ; 8.6至7·35，數個m，芳族H及NH ; 7.22及 7.18，2d，4H，芳族 H (pCl)Phe ； 6.95 及 6.58，2d，4H， 芳族H Tyr ; 5.2至3.5，數個m，C α -Η及脂族Η ; 3· 3 至 2· 4，數個 m，C/3-H 及 N-CH3; 2.1 至 1.1，數個 ηι， 殘存的脂族Η ; 1.68，s，3Η，乙醯基；1.20，d，3Η， C/3-H Ala; 0.83， dd， 6H， C5-H Leu。 實施例3

Ac-D-Nal(2)1-D-Cpa2-D-Pal(3)3-Ser4-N-Me-Tyr5-D-Lys(B)6-

Leu7-Arg8-Pro9-D-Ala10-NH2 經濟部智慧財產局員工涓費合作社印製 此合成進行依據固相流程（Peptide Synthesis Protocol ，p.l 1)並作 DIC/H〇Bt偶合，起始自4.0 g的MBHA樹脂 (荷載密度0.97毫莫耳/g)。於使用HF自聚合物支持物切 除之後，得到4.0 g的粗肽，其係以製備型HPLC的標準 方法純化。於後續的冷凍乾燥後，得到1.39 g的HPLC-均 勻產物，在BOP作爲偶合試劑之存在下將其與4-甲眯基 苯胺基-4-酮基丁酸反應以生成所欲求之化合物。於HPLC 新鮮純化之後，得到440毫克的目標之化合物，其實驗式 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -18- 1243179 B7 五、發明説明（16 ) 爲 C82H106N19〇15C1，具有正確的 ESI-MS : 1 63 2.7 (M + H + )(計 算値：163 1.7)，且對應的NMR光譜。 UMRGOO MHz，DMS〇-d6，5 以 ppm 計）：10.4，s ，1H及9. 15，s，2H，及9. 0，s，2H，4 -甲脒基苯胺之 NH; 8.60，m，2H，芳族 Η; 8.3 至 7.2，數個 m，芳族 Η 及 ΝΗ ; 7.27 及 7·20，2d，4Η，芳族 H (pCl)Phe ; 6.96 及 6.60，2d，4Η，芳族 H Tyr; 5.2 至 3.5，數個 m，Ca-H 及脂族 Η; 3.2 至 2.4，數個 m，CyS-H 及 N-CHs; 2. 1 至 1 · 1，數個 m，殘存的脂族Η ; 1.7 0，s，3 Η，乙醯基； 1.20， d， 3H， C/3-HAla;0.85，dd，6H，C5-HLeu。 實施例 4

Ac-D-Nal(2)1-D^Cpa2-D-Pal(3)3-Ser4-N-Me^Tyr5-D-Hc ι 6-Nle 7-Lys(iPr)8-Pro9-D-Ala10-NH2 此合成進行依據固相流程（Peptide Synthesis Protocol ，Ρ·11)並作 DIC/HOBt偶合，起始自2.5 g的MBHA樹脂 (荷載密度1.08毫莫耳/g)。於使用HF自聚合物支持物切 除之後，得到2.78 g的粗肽，其係以製備型HPLC的標準 方法純化。於後續的冷凍乾燥後，得到400毫克的HPLC-均勻產物，其實驗式爲C^HmNMO^Cl，具有正確的ESI-MS : 1 472·6(Μ + Η + )(計算値：1471.7)，及對應的】H-NMR 光譜。 H-NMR(500 MHz，D2〇/DMS〇-d6 ’ <5 以 ppm 計）：8.62 ，m，2H，8.30 j m，2H，7.80，m，4H，7.66，s，1H， 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X297公釐） L * -- (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 -19- 1243179 Α7 —_ 67 _ 五、發明説明（17 ) 7·47，m，2H，7.36，d，1H，芳族 Η ; 7.25 及 7.20， 2 d，4Η，芳族 H (pCl)Phe ; 6.96 及 6.63，2d，4Η，芳族 H hr ; 5· 10 至 4.0，數個 m，C α -Η 及脂族 Η ; 3.75 至 2·65，數個 m，CyS -Η 及 N-CH3 ; 2.1 至 1.05，數個 m，殘 存的脂族 Η; 1.74，s，3H，乙醯基；1.23，（1,311，（：；5-HAla; 1.20，m，CH3 異丙基；0.8，m，3Η，C(5-HNle。 貫施例5

Ac-D-Nal(2)1-D-Cpa2-D-Pal(3)3-Ser4-N-Me-Tyr5.D-Hc i 6-Nle 7-LyS(iPr)8-Pro9-Sar10-NH2 此合成進彳了依據固相流程（Peptide Synthesis Protocol ，Ρ·11)並作 DIC/H〇Bt偶合，起始自2.5 g的ΜΒΗΑ樹脂 (荷載密度1.08毫莫耳/g)。於使用HF自聚合物支持物切 除之後，得到2.74 g的粗肽，其係以製備型HPLC的標準 方法純化。於後續的冷凍乾燥後，得到840毫克的HPLC-均勻產物，其實驗式爲C^H^N^OmCI，具有正確的ESI-MS : 1 472·6(Μ + Η + )(計算値：1471.7)，及對應的 j-NMR 光譜。 】H-NMR(500 MHz，D2〇/DMS〇-d6，（5 以 ppm 計）； 8.6，m，2H，8.3，m，2H，7.85，m，2H，7.8，m，2H， 7.65，s，1H，7.46，m，2H，7.35 ’ d，1H，芳族 H ; 7.2 3 及 7.17，2 d，4H，芳族 H (pCl)Phe; 7·〇 及 6.6，2d，4H，芳 族 H Tyr ; 5.10 至 3.8，數個 m，C α 及脂族 Η ; 3.75 至 2.6，數個 m，C/3-H 及 N-CHs’ 2.2 至 1.〇5’ 數個 πι，殘 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210X 297公釐） -20 - 1243179 A7 B7 五、發明説明（18 ) 存的脂族 H; 1.70，s，3H，乙醯基；1.23，0，3^^(：/5- H Ala; 1.20，m，CH3 異丙基；〇.8，m，3H，C(5_H Nle ο (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 實施例6 3-(4-氟苯基）丙醯基-D-Nal(l)l-Ser、N-Me-Tyr 5-D-

Lys(Atz)6-Leu7-Ai.g8-Pro9 -D-Ala]0-NH2 此合成進行依據固相流程（Peptide Synthesis Protocol ，ρ·11)並作DIC/H〇Bt偶合，起始自9.2 g的ΜΒΗΑ樹脂 (荷載密度1.08毫莫耳/g)。於使用Hf自聚合物支持物切 除之後，得到5.8 g的粗肽，其係以製備型HPLC的標準 方法純化。於後續的冷凍乾燥後，得到2.0 g的HPLC-均 勻未取代的八肽，在B0P作爲偶合試劑之存在下將其0.4 毫莫耳與0.5毫莫耳的3-胺基-1，2,4-三唑基-5-羧酸反應， 以生成7 90毫克所欲求之化合物的粗產物。於HPLC新 鮮純化之後，得到200毫克的目標之化合物，其實驗式爲 C64H86NI7〇12F，具有正確的 FAB-MS ; 1 304.6(M + H + )(計算 値·· 1 303.6)。 】H-NMR(500 MHz，D2〇/DMS〇-d6，<5 以 ppm 計） 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 8·14，m，1H，7.90，m，1H，7·80，m，1H，7·50，m ’ 2H，7.35，m，2H，7.0，m，6H，7.63，m，2H，芳族 H; 5.0，m，1H，4.83，m，2H，4.41，m，1H，4.3 0- 4.05

，數個m，4H，Ca-H; 3·66至2.25，數個m，脂族及芳 族支鏈 Η; 2.95，s，及 2.75，s’ N- Me; 2.05 至 1.1’ 數 個 in，殘存的脂族 Η; 1.20’ d’ C/3-H A]a; 0.75’ m’ 6H -21 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 1243179 A7 B7 五、發明説明（19 ) ’ C δ - H L e u。 實施例7

Ac-D-Nal(2)1-D-Cpa2-D-Pal(3)3-Ser4-N-Me-Tyr5-D-Lys(B 广 Nle 7~Arg 8-Pro9-Sar 10-NH2 十肽之合成係在聚合物支持物上進行，此支持物荷載 密度爲0.55毫莫耳/g(胺基甲基-取代樹脂，Fmoc保護’ 型 D- 1 675，Bachem)。將離胺酸偶合以 Fmoc-D-Lys(Boc)-〇H，且使用20%六氫吡啶/DMF移除Fmoc保護基。於同 時去除所有支鏈保護基且自聚合物支持物之後，使用製備 型HPLC純化此粗肽。於冷凍乾燥之後，得到98.5%純度 的十肽。 以4-(4-胺基酚）胺基-1，4-二酮基丁酸取代D-離胺酸的 e氮，其進行係使用PyBop在DMF中而加入DIPEA。使 用製備型HPLC對所分離出的粗肽進行純化。於後續的冷 凍乾燥後得到約99 %純產物（三氟基醋酸鹽），其實驗式爲 C82 Hi〇6 Cl N19〇15，其具有正確的 FAB-MS 在 1 63 2(M + H)( 計算値：1 63 1.7 8096)。 實施例8

Ac-D»Nal(2)1-D-Cpa2-D-Pal(3)3-Ser4-N-Me-Tyr5-D-Lys(B )、

Nle'Arg、Pro9- D-Ala】〇-NH2 十肽之合成係在聚合物支持物上進行，此支持物荷載 密度爲0.55毫莫耳/g(胺基甲基-取代樹脂，Fmoc保護， 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） L ^ -- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 >22 - 1243179 Μ ______Β7 五、發明説明（2〇 ) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 型 D-1675，Bachem)。將離胺酸偶合以 Fmoc-D-Lys(Boc)-〇H ’且使用20%六氫吡啶/DMF移除Fmoc保護基。於同 時去除所有支鏈保護基且自聚合物支持物之後，此分離出 的粗肽其純度約71 %(HPLC)，其可進一步地反應而不須純 化。 以4-(4-胺基酚）胺基-1,4-二酮基丁酸對D-離胺酸進行 支鏈取代，使用PyBop在DMF中而加入DIPEA。使用製 備型HPLC純化此分離的粗肽。於後續的冷凍乾燥後，得 到 9 8.8%純產物（三氟基醋酸鹽），其實驗式爲 C82H1〇6C1Ni9〇m，其具有正確的 FAB-MS 在 1 63 2(M + H)(計 算値：1631.78096)。 實施例9

Ac-D-Nal(2) -D-Cpa2-D-Pal(3)3-Ser4-N-Me-Tyr5-D-Lys(B )6 -Nle7-Lys(iPr)8-Pro9-D-Ala,0-NH2 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 十肽之合成係在聚合物支持物上進行，此支持物荷載 密度爲0.55毫莫耳/g(胺基甲基-取代樹脂，Fmoc保護， 型 D- 1 67 5，Bachem)。將離胺酸偶合以 Fmoc_D-Lys(B〇c)-〇H，且使用20%六氫吡啶/DMF移除Fmoc保護基。於同 時去除所有支鏈保護基且自聚合物支持物之後，使用製備 型Η P L C純化此粗肽（濃度約5 9 %，Η P L C)。於冷凍乾燥之 後，得到9 5 %純度的十肽。 以4 - (4 -胺基酚）胺基-1,4 -二酮基丁酸對D -離胺酸進行 支鏈取代，使用PyBop在DMF中而加入DIPEA。使用製 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） -23- 1243179 kl _____B7 五、發明説明（21 ) (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 備型Η P L C純化此分離出的粗肽。於後續的冷凍乾燥後， 得到 96.6%純產物（三氟基醋酸鹽），其實驗式爲 C8 5H]12ClNi7〇15，其具有正確的 FAB-MS 在 1646(Μ + Η)(計 算値：1645.8218)。 依據本發明的式I化合物係硏究其受體結合。其方法 極近於描述在86。1^1161&1.,£111-.：1.8丨〇〇1^111.231，5 35 -5 4 3 ( 1 9 9 5 )。依據如上揭不合成得到的賽挫瑞（c e t r 〇 r e 1 i X)經 以[]25I]碘化（Amersham;比活性 80·5 Bq/fmol)，使用碘 濟（Iod o Gen) (Pierce)。將反應混合物以逆相高效能液體色 層分析法純化，得到單碘化賽挫林而不含未標記的肽。在 各案例中，約80 %的[125 I]-賽挫林與未標記的本發明化合 物適用於特定的受體結合。 使用下列方法1及2可測試本發明化合物在試管內之 作用，以[]251 ]-賽挫瑞（ceuorehx)(方法1)測定在結合測 定中的結合親和力，且以瑞普透（t r i p t ο 1· e 1 i η)作爲促效劑 刺激（方法2)作功能性活性測定。 方法1 . 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 受體結合測定係依據 B e c k e 1· s，T., M a r h e i n e k e , Κ .， Reildnder, H., Hilgard P. ( 1 9 9 5 )M S e 1 e c 11 ο n and characterization of mammalian cell lines with stable over expression of human p 11 υ i y a r y for go n ado liber in (GnRH)n Ein' J. Biochem. 231，5 3 5 -5 4 3。 就硏究受體結合，使用碘濟（IodoGen)試劑（Pierce)與 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -24-

Claims (1)

1. A8 B8 C8 D8 六、申請專利範圍 附件：（A ) 附件4:第89104093號專利申請案 中文申請專利範圍替換本 民國93年4月6日呈 1. 一種如通式 （I)之化合物 Α»Χχχ1-Χχχ2-Χχχ3-Χχχ4-Χχχ5-Χχχ6-Χχχ7.Χχχ8-Χχχ9-Χχχ10-ΝΗ2 (I) 其中 Α爲乙醯基或3-(4-氟苯基）丙醯基基團， Xxx1 爲 D-Nal(l)或 D-Nal(2)， Xxx2-Xxx3 M D-Cpa-D-Pal(3)或單鍵， X x x4 爲 S e r， Xxx5 M N-Me-Tyr， Xxx6爲D-Hci或通式（II)之D-胺基酸基團 〇 NH

   (CH2)n NH (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 、1T_ 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 其中n爲數目3或4，其中R]爲具有通式III之基團 -(CH2)p>CO-NR2R3 (III) 其中P爲1至4之整數，R2爲氫及R3爲經脒基取 代的苯基，或R1爲3-胺基-1,2,心三唑-5-羰基， Xxx7 爲 Leu 或 Nle， 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210 X 297公釐） 1243179 A8 B8 C8 D8 々、申請專利範圍 Xxx8 爲 Arg 或 Lys(iPr)， Xxx9 爲 Pro，及 Xxx10 M Ala、D-Ala 或 Sar ’ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 及其與醫藥學上可接受的酸所形成的鹽。 2. 如申請專利範圍第1項之化合物，其中該鹽爲乙 酸鹽、三氟基醋酸鹽或甲基東莨萣酸鹽（em bo n ate )。 3. 如申請專利範圍第1或2項之化合物，其中Χχχ6 爲〇-(3-胺基-1,2,4-三唑-5-羰基）-1^(縮寫爲]>1^8(人丨2)) 或D-U -Ν·-4-(4-甲脒基·苯基）胺基-1,4-二酮基丁基]-Lys( 縮寫爲 D-Lys(B))。 4. 如申請專利範圍第1項之化合物，其具有如下分 子式： Ac-D-Nal(2)、D-Cpa2-D-Pal(3)3-Ser4-N-Me-Tyr5-D-Hci6-Nle7-Arg8-Pro9-D-Ala10-NH2。 5. 如申請專利範圍第1項之化合物，其具有如下分 子式： Ac-D-Nal(2)1-D-Cpa2-D-Pal(3)3-Ser4-N-Me-Tyr5-D-Lys(B)、Leu7-Lys(iPi.)、Pro9-D-Ala】〇-NH2。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 6. 如申請專利範圍第1項之化合物，其具如下分子 式： Ac-D-Nal(2)1-D-Cpa2-D-Pal(3)3-Ser4-N-Me-Tyr5-D-Lys(B)、Leu7-Arg8-Pro9-D-Ala]0-NH2。 7 ·如申請專利範圍第1項之化合物，其具有如下分 子式： 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 一。 ABCD 1243179 六、申請專利範圍 Ac-D-Nal(2)1-D-Cpa2-D-Pal(3)3-Ser^N-Me-Tyr5-D-Hci6- Nle7-Lys(iPr)、Pro9-D-A]ai〇-NH2。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 8 .如申請專利範圍第1項之化合物，其具如下分子 式： Ac-D-Nal(2),-D-Cpa2-D-Pal(3)3-Ser4>N-Me-Tyr--D-Hci6- NleLLysUPO^PiV-Sani^。 9. 如申請專利範圍第1項之化合物，其如下其分子 式： 3-(4-氟苯基）丙醯基-0-化1(1)1461人^\^-丁¥1人1> Lys(Atz)6-Leu7-Arg8-Pro9-D-Ala】〇-NH2。 10. 如申請專利範圍第1項之化合物，其具有如下分 子式： Ac-D-Nal(2)1-D-Cpa2-D-Pal(3)3-Ser4-N-Me-Tyr5-D^ LysW'Nle^ArgS-Pro'SanH^。 11. 如申請專利範圍第1項之化合物，其具如下分子 式： Ac-D-Nal(2)]-D-Cpa2-D-Pal(3)3-Ser、N-Me-Tyr、l> Lys(B)6-Nle7-Arg、Pro9-D-Ala】0-NH2。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 12. 如申請專利範圍第1項之化合物，其具有如下分 子式： Ac-D-Nal(2)1-D-Cpa2-D-Pal(3)3-Ser4-N-Me-Tyr5-D^ Lys(B)6-Nle、Lys(iPr)8-Pro9-SaiJ°‘NH2。 13· —種用於治療荷爾蒙依賴性腫瘤及受荷爾蒙影響 的非惡性的疾病之藥學組合物，其包含一種如申請專利範 本紙張尺度適用中國國家禕準（CNS ) A4規格（2I0X297公釐） -3 - 1243179 A8 B8 C8 D8 六、申請專利範圍 圍第1至1 2項中任一項之化合物。 14· 一種製備如申請專利範圍第1項之通式（I)化 合物的方法，其中根據習用的方法於固相上或溶液中由具 有適當的保護基之XxXm的單元合成出片段（其中瓜爲1 至10之整數，且Xx)c]係經乙醯化），然後利用斷片偶合 法將各片段聯結於固相，於完成偶合之後，使用習用的方 法在單位Χχχ1(3上作醯胺化反應而將通式（I)化合物自 固相上移除。 1 5 ·如申請專利範圍第1至1 2項中任一項之化合物 ，其是用於製造用以治療荷爾蒙依賴性腫瘤，尤其是前列 腺癌或乳房癌，及治療需要LH-RH荷爾蒙抑制治療的患 者之非惡性疾病的藥物。 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐）-4 -