TWI225068B - Anellated steroid compounds having contraceptive and anti-osteoporosis activity - Google Patents

Description

1225068 A7 B7 五、發明説明（1 ) 本發明係關於具有另外與具有雌激素活性之類固醇骨 架的環D連接之E環的類固醇化合物。 對具有雌激素受體親和性之新化合有持續的興趣。該 興趣源自於發現兩個不同的受體副型，將其以ER α及ER /3 命名（參考 Mosselman 等人，FEBS Letters 392(1 996)49-53與ΕΡ_Α_0 79 8 37 8)。對這些受體副型具有選擇性的化 合物有可能提供更多與選擇性雌激素受體有關的治療。例 如，可自人體組織中不同的受體副型分布獲得優勢。其能 夠以較低的雌激素相關副作用的負擔治療。可自選擇性化 合物得利的雌激素相關的醫學治療實例是用於避孕、用於 更年期不適、骨質疏鬆症及雌激素依賴型腫瘤控制的治療 法。 在ΕΡ0 869 1 32中說明具有式⑴之雌激素類固醇化合 物·· Η

經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 虛線鍵代表視需要之雙鍵； R6是 H、=CH2或-CH3或-CH2-CH3; R7是H、Cm-烷基、Cm-烯基或Cm-炔基，其中可將 院基、烯基或炔基以1至3個獨立選自氟或氯原子之基團的 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公H -4 - " 1225068 A7 ______ B7 五、發明説明（2 ) 鹵原子取代；

Rii是H、Cm·院基、（：2·4-烯基、C2.4-炔基或Ci.4-烷叉 基’其中可將烷基、烯基、炔基或烷叉基以丨至3個獨立選 自氟或氯原子之基團的鹵原子取代； E代表與類固醇骨架的碳原子16及17 一起的4至7員環 ’該環具有關於類固醇骨架之α及順式組態，其視需要包 含1或2個內環鍵及以RE取代，其具有各種意義。 在ΕΡ0 869 1 32中進一步揭示可將具有式⑴之類固醇 化合物的任何烷基、烯基、炔基及烷叉基支化或不支化。 如果將^或Rw經由單鍵與類固醇骨架連接時，則類固醇 骨架經取代之碳原子或包含氫原子，或涉入碳-碳雙鍵。 化合物可以包括不同的對掌性中心，並可以對映異構物及 非對映異構物存在。可將羥基以取代基（如醯基或烷基）覆 蓋，以得到根據式I化合物之前體藥物。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 目前發現具有如以上定義之意義的符號與術語之具有 式I之類固醇化合物之特徵在於RE是Θ -羥基，或其前體 藥物意外對組合高雌激素效力之雌激素受體α具有一致更 好的選擇性。這種化合物（以下稱爲本發明化合物）經常不 僅具有非常弱的雌激素受體活性，但是事實上通常是構成 非常高的雌激素受體α選擇性，而且能夠以阻斷雌激素受 體/3爲基準之選擇性治療之雌激素受體^的拮抗劑。本發 明化合物包括在其範圍內的上述對映異構物及非對易異構 物，並且每一個各自的（R)及（S)對映異構物實質上是自由 的，即與小於5%的其它對映異構物結合，以小於2%較佳 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ 297公釐） -5 - 1225068 Α7 Β7 五、發明説明（3 ) ’特別是小於1 %，並且這些以任何比例之對映異構物的 混合物包括含有實質上兩個等量的對映異構物之外消旋混 合物 本發明較佳的具體實施例是如先前定義的類固醇化合 物’並且其進一步的特徵在於116是Η，^是支化或未支化 Cm烷基，Ε環是不具雙鍵之5或6-員環，在其S立體組態 中的位置22上具有羥基，換言之，該組態係關於根據一般 類固醇立體化學通告的意義之類固醇骨架的^組態。 最佳的是根據式2之化合物，其是（7a，16yS，17α ，22S)-7-丙基-16,24-環-19,21-二原膽-1，3,5(10)-三烯-3，17,22-三醇，其具有代號0rg41621 : 請 先 閱 讀 背 之 注 意 事 項 再 填

I

式 2 ; Org 41621 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 根據本發明的化合物因此能夠更集中於有機體中的雌 激素α或^受體活性，換言之，以選擇性改良其活性。 將前體藥物定義成在接受者體內轉化成根據式I之化 合物（具有1^是/3-羥基）的化合物。値得注意的是在位置 3,17及Ε-環上的羥基可以例如轉化成醚（烷*氧基）或酯， 如醯*氧基、磷酸鹽、硫酸鹽、磺酸鹽或芳族羧酸鹽，於 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（2Κ)，Χ 297公釐） -6 - 1225068 A7 B7 五、發明説明（4 ) 此將以星號（*)表示的基團之碳鏈長度視爲不受到嚴厲的 限制。醯基係衍生自線型或支化鏈烷*，並且芳族羧酸鹽 通常將包含苯基、吡啶烷基或嘧啶基。烷基及醯基長度的 選擇係依據預期的前體藥物特性而定’於是以成較長鏈的 前體藥物（例如，月桂基或己醯基）更適合於持續型釋放及 儲存製品。已知這些取代基會自發水解或以酵素水解成在 化合物骨架上的羥基取代基。與在接受者體內轉化成的化 合物比較，這些前體藥物將具有生物活性。將以前體藥物 轉化成的活性化合物稱爲母體化合物。在作用開始及作用 期間與前體藥物在體內的分布可能不同於母體化合物的這 些特性。 如目前發現的選擇性化合物的醫學治療法與生理學、 醫學及藥學實驗同時是極爲需要的。本發明的觀點是可將 本發明化合物用於以該化合物投予接受者（人類或動物， 以哺乳類較佳）的治療法。以在不同的有機體組織上不同 的α及Θ受體分布提供更以不同的組織作用選擇性干擾之 標的物。已知物種依賴型的雌激素α受體主要表現在陰部 組織及肝組織中，反之，Θ受體主要表現在攝護腺組織、 老鼠膀胱的表皮細胞層、血管內皮皮滑組織細胞及特定的 腦部區域中，如基礎前腦、新皮質及海馬。其中有兩種受 體存在的組織是例如腦下垂體、胸腺、子宮、卵巢及骨骼 〇 本發明化合物的雌激素受體親和性分布使其適合作爲 在減少與雌激素相關的副作用下的改良式雌激素或抗雌激 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ297公釐） 請 先 閱 讀 背 之 注 意 事 項 頁 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1225068 Α7 Β7 五、發明説明（5 ) 素。因此，本發明揭示以選擇性改進雌激素受體活性之方 法’其係藉由使本發明化合物與雌激素接觸。這種方法可 是一種人體或動物體的治療作用，但也可以是一種非醫學 方法。後者的方法可以是一種實驗方法，如用於選擇性化 合物的檢定或在活體外的實驗室方法，以獲得在雌激素受 體或與其交互作用之化合物上的訊息。以這些化合物用於 與選擇性雌激素受體α或Θ相關的避孕、經驗或醫學治療 較佳，如那些用於與雌激素相關的異常、更年期不適、骨 質疏鬆症、心血管異常、腦垂體激素調整的調節作用、退 化性攝護腺肥大、雌激素依賴型腫瘤控制、結腸癌、子宮 內膜異位或中樞神經系統異常的治療或預防。這些選擇性 方法及治療之重要的共同特徵是這些方法及治療包含使得 本發明化合物與雌激素受體接觸。 本發明也關於根據本發明的化合物用於製造與選擇性 雌激素受體α相關的治療及治療與雌激素受體α相關的異 常之藥品的用途，該治療包含以根據本發明的化合物（以 適合的藥學劑型）投予病患。有鑑於根據本發明的化合物 在雌激素受體/3上的拮抗效應，故本發明也提供用於治療 與雌激素受體Θ相關的異常之藥品的製造，該治療包含以 根據本發明的化合物（以適合的藥學劑型）投予病患。 本發明進一步係關於根據本發明的化合物用於製造具 有避孕活性之藥品的用途。因此本發明也包含避孕的醫學 指示，即避孕方法，其包含以該領域中慣用的孕激素類及 雌激素投予個人（婦女或雌性動物），其中雌激素係根據本 請 閱 讀 背 面 之 注 I 項 再 奢 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（2丨0X 297公釐） -8 1225068 Μ ___ Β7 _ 五、發明説明（6 ) 發明的化合物（以適合的藥學劑型）。 最後，本發明係關於根據本發明的化合物用於製造具 有選擇性雌激素活性之藥品的用途，這種藥品通常適合於 具有舒解更年期不適之HRT(激素置換治療法）範圍，特別 是抗骨質疏鬆活性。 本發明化合物的劑量具有與雌激素相關的化合物的正 常規定，例如，每次投予0.01至100毫克的規定。 最終可以製備包括與以上指示的治療劑量相同的數量 規定之本發明化合物量之劑量單位。因此，本發明也關於 包含本發明化合物與一或多種藥學上可接受之輔助劑混合 的藥學組成物。 可以槪括性有機化學技藝及尤其以類固醇化學技藝中 已知的各種方法生產本發明化合物。參考例如：Fried, J. 及 Edwards，J. A.，“Organic Reactions in Steroid Chemistry” ，第 I 及 II 冊，紐約的 Van Nostrand Reinhold Company， 1972年；及 C. Djerassi，“Steroid Reactions”，洛杉磯的 Holden-Day Inc·，1 963年。 關於本發明化合物的合成作用，必須合成具有另外的 16，17弱芳族化環之本發明類化醇。已在ΕΡ0 869 1 32中說 明進行該合成之方法。關於本發明化合物，必須在弱芳族 化環上引入另外的羥基官能。就該目的而言，方便以合成 步驟得到適當位置之雙鍵的這種方式進行弱芳族化反應， 例如，以使用熟知的複分解步驟，於是使用衍生自例如釕 、鉬或鎢之過渡金屬催化劑，使16 α，17 α -雙不飽和片斷 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X297公釐） -9 - 請 先 閲 讀 背 之 注 意 事 項 再

I 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1225068 A7 B7 五、發明説明（7 ) 請 先 閱 讀 背 τέ 之 注 意 事 項 再 填 接近不飽和弱芳族化5-或6-員環。將因此合成的烯烴環先 以立體選擇方式環氧化。其通常可以類似的過酸（以在緩 衝的介質中較佳）或利用在氧化劑（如過氧化氫或特丁基過 氧化氫）存在下的金屬錯合物之催化劑系統進行。在本發 明的案例中，以具有碳酸氫鈉緩衝液之過苯甲酸通常會得 到好的結果。以氫化物試劑可將環氧化物以幾近立體選擇 的還原方式開環成必要的0 -醇。也可以使用硼氫化/氧化 步驟輕易合成羥基。在獲得α _羥基化合物時，則以 Mitsunobu轉化作用會輕易得到希望的/3 -醇。根據需要， 可以與適當的烷基鹵或醯基氯的反應，將羥基化合物轉化 成前體藥物，如烷基醚、醯基酯、磺酸鹽或磷酸鹽。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 以或不以與藥學上可接受之輔助劑組合可以製備包含 一或多種根據本發明化合物之藥學組成物，如在Gennaro 等人（Remmington’s Pharmaceutical Sciencee(第 18 版，Mack publishing Company, 1 990 年），特 SU 參考 Part 8: Pharmaceutical Preparations and Their Manufacture·)的標準 引用文中的說明。可將一或多種根據本發明的化合物與一 或多種藥學上可接受之輔助劑之混合物壓縮成固體劑量單 位，或藥九或藥片，或加工成膠囊或栓劑。以藥學上可接 受之液體的方式也可以使化合物當成溶液、懸浮液或乳液 形式之注射製品或當成噴劑（例如，鼻噴劑）使用。也可以 將本發明化合物容納在植入劑、陰部環、貼片、凝膠及任 何以持續型釋放的其它製品中。預期以使用熟知的添加劑 (如載體、著色劑、聚合性結合劑及類似物）製成劑量單位 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） _ 1225068 A7 B7 五、發明説明（8 ) ，例如，藥片。通常可以使用不干擾活性化合物功能的任 何在藥學上可接受之添加劑。適合於可以投藥的組成物之 載體包括使用適量的乳糖、®粉、纖維素衍生物及類似物 或其混合物。 實例 在方程式I及Π中例證在實例中所使用的合成路徑 。以在這些方程式中的結構式限定用於確定化合物的號碼 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 尺 I張 一紙 本 準 標 家 國 一國 I中 用 I適 釐 公 7 9 2 1225068 A7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） _ 12 - 1225068 A7 B7 五、發明説明（1〇 )

方程式II

經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 本紙張尺度適用中.國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -13- 1225068 A7 ______ B7 五、發明説明（11 ) 化合物2 請 先 閱 讀 背 面 ί 事 項 再 填 寫 本 頁 將在己烷中的12毫升之1.6M BuLi在-50°C下逐滴加入 在5 0毫升無水THF中的5.65毫升乙烯基三丁錫之溶液中。 在另外攪拌0.5小時之後，在-50 °C下加入在20毫升無水 THF中的6.2公克16α-烯丙基，7α-乙基雌酮- 3-0-甲醚（I) 之溶液。一經另外攪拌1 /2小時時，將混合物倒入飽和 NH4C1中，並以醋酸乙酯萃取。將有機相濃縮，繼而以矽 膠色層法提供成爲油之4.2公克2，

Rf 0.47(95/5之甲苯/醋酸乙酯），關於1之Rf 0.65。 NMR(CDCh)5 5.80(m，1，CH 烯丙基），6.07(m，1，CH 乙烯 基），〇.9 8(s，CH3)，0.93(t，3，乙基），3 ·78(s，3，CH3)。 化合物3 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 將0.32公克苄叉參環己基膦基氯化釕（Grubbs複分解 催化劑）加入在80毫升二氯甲烷中的4.2公克2之溶液中。 在攪拌1小時之後，加入另外一份0.3公克催化劑。在反應 完成之後（2小時），將混合物濃縮，並將殘餘物以管柱色 層法純化，以提供3.5公克3，Rf 0.29(8/2之庚烷/醋酸乙酯 ，關於 2之 Rf 0.55)。NMR(CDCh)5 5.72(m，CH = )，6.02(m， 1，C = ), 0.99(s，3，CH3)，0.89(t，3，CH3)，3.77(〇CH3)， 0.92(m，3，CH3)。 化合物4 將在12毫升二氯甲烷中的0.4公克類固醇3與0.5公克 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X297公釐） · 14 - 1225068 A7 B7 五、發明説明（12 ) 請 先 閲 讀 背 面 之 注 意 事 項 再 頁

NaHCCh之混合物以0.34公克間_cl_過苯甲酸處理。在室溫 下攪拌數小時之後，將反應以水稀釋，並以硫代硫酸鈉溶 '液處理’以破壞殘餘的過氧化物。將有機物萃取至醋酸乙 酯中’並最後以色層法純化，以提供110毫克預期的/3 ·環 氧化物4; Rf 0.50(9/1 之甲苯-丙酮）；NMR(CDCh)5 0.98(t， 3，CH3)，〇.92(t，3，CH3)，3.65 + 3.70(2Xm，環氧化物 CH’s) 化合物5 將在3毫升THF中的80毫克類固醇4之溶液與10毫克 LiAlH4回流。在2小時之後，物質已消失。以加入30微升 Na2S〇4飽和溶液及0.20公克Na2S〇4飽中止混合物，攪拌15 分鐘及在C鹽上過濾。將過濾物濃縮，並將殘餘物通過 短的二氧化矽管柱，以得到55毫克5 ; Rf 0.24(9/1之甲苯-丙酮）；NMR(CDCh)5 4.04(m，1，CH〇H)，3.78(s，3，OCH3)， 2.85(m，2，在 C6之 CH2)，0·92(s，3，CH3)。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 化合物ό 將在120毫克類固醇5加入在9毫升DMF中的乙烷硫醇 鈉（以0.7毫升乙烷硫赶及0.27公克之60%NaH分散液製得的 )之溶液中。將混合物回流3小時。接著將反應倒入水中’ 並以醋酸乙酯萃取。以有機物的色層法提供8 0毫克6，熔 點 224-226 °C ; Rf 0.30(8/2之甲苯-丙酮）；NMR(CDCh) 5 4.00(m, 1, CHOH), 7.12(ar, HI), 6.20(ar, H2) ^ 6.54(ar, H4) _ 15- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210x297公釐） 1225068 A7 B7 五、發明説明（13 ) 化合物7 將1.9毫升三甲基甲矽烷基氯在〇°c下加入在20毫升二 氯甲烷及3毫升吡啶中的2.7公克類固醇3之溶液中。在攪 拌1 /2小時之後，將反應倒入水中，並以醋酸乙酯萃取， 以提供3.3公克絕對醇的甲矽氧基衍生物6; Rf 0.8(8/2之庚 烷-丙酮）；NMR(CDC13)(5 0.03(s，9，TMS)，5.68, 5.91(2xs， CH烯烴）。 化合物8 將在25毫升無水THF中的3.2公克7之溶液在下以 在20毫升THF中的2.2毫升甲硼烷-二甲硫複合物之溶液處 理。接著將反應以45 °C攪拌2小時。以小心加入4.5毫升絕 對乙醇，繼而以11毫升之2N NaOH及7.7毫升之30%過氧化 氫的方式破壞過量試劑。將反應攪拌隔夜，以水稀釋及以 醋酸乙酯萃取。將因此獲得的粗產物以管柱色層法純化， 並產生1.7公克預期的α -醇8。Rf 0.36(8/2之庚烷-丙酮）； NMR(CDCh) 5 4.42(m, 1, CHOH), 0.12(s, 9, TMS), 0.79(s, 3，CH3)。 化合物9 將在60毫升甲苯中的1.6公克8及1.3公克三苯膦之溶液 在〇 °C下以0 · 8 4公克對-硝基苯甲酸及0 · 8毫升偶氮二羧酸二 衣紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -16 請 先 閱 讀 背 面 之 注 意 事 項 再 寫 本 頁 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1225068 A7 _ B7 _ 五、發明説明（14 ) 乙酯處理。在攪拌1小時之後，反應完成。將混合物倒入 NaHCCh飽和水溶液中，並以醋酸乙酯萃取。以色層法純 化作用提供2.9公克/3 _硝基苯甲酸酯，Rf 0.64(8/2之庚烷-丙酮）；NMR(CDCh) δ 5.34(m， 1，CH〇C(〇）Ar)，0.91(s，3, CH3)，0.95(t，3, CH3)，3.80(s，3，〇CH3)。將該物質溶解在 40毫升THF-甲醇之混合物（1/1之體積/體積）中，並以4毫 升之2N NaOH溶液處理。在攪拌15分鐘之後，將反應倒入 水中，並將產物萃取至醋酸乙酯中。在通過短的二氧化矽 管柱之後，獲得1.3公克/3 -醇9 ; Rf 0.64(8/2之庚烷-丙酮） ;NMR(CDCl3)(5 4.31(m， 1, CHOH)。 化合物1 0 將在60毫升丙酮中的1.3公克9之溶液以2毫升之2N HC1處理。在1小時之後，將混合物以加入NaHCCh中和及 濃縮。將殘餘物以水稀釋，並以醋酸乙酯萃取，以提供 1.0 公克 10 ; Rf 0.10(8/2之庚烷-丙酮）；NMRCCDCh) (5 0.90(t，3，CH3)，0.95(s，3，CH3)，4.48(m，1，CHOH)。 化合物1 1 將在120毫克類固醇l〇加入在9毫升DMF中的乙烷硫 醇鈉（以0.7毫升乙烷硫赶及0.3公克之60%NaH分散液製得 的）之溶液中。將混合物回流3小時。接著將反應倒入水中 ’並以醋酸乙酯萃取。以有機物的色層法提供80毫克1 1， 熔點 1 43- 1 45 °C ; Rf 0.41(7/3 之甲苯-丙酮）；NMR(CDCh)5 請 閲 讀 背 ft 意 事 項 再 寫 本 頁 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -17 1225068 A7 ___ B7 _____ 五、發明説明（15 ) 4.45(m, 1，CHOH)，0.93(s，3，CHs), 0.90(t，3，CHs〇, 6.62 + 7.10(AB, 2, HI,2), 6.53(d, 1，H4)。 化合物1 3 將80毫升無水THF加入在醚中的29毫升之1M嫌丙基 溴化鎂之溶液中，在-50°C下加入在40毫升THF中的1〇公 克7α-丙基，16α-烯丙基雌酮- 3-0-苄醚12。在攪拌1/2小 時之後，允許反應達到室溫，並倒入300毫升飽和水性 NH4C1中。將產物以醋酸乙酯萃取，並以在矽膠上的色層 法純化，以取出立體異構物，提供7.2公克預期的16 α，17 α-二烯丙基衍生物13。Rf 0.26(9/1之庚烷-醋酸乙酯）；Π /3 -烯丙基異構物 Rf 0.45。NMR(CDCh) 5 0.88(t，3，CH3)， 0.96(s，3，CH3)，6.08(m，1，CH 烯丙基），5.80(m，1，CH 烯丙 基），4.95 -5.20(m，4，2xCH2 烯丙基），5.02(CH2〇Bz)。 化合物1 4 將一份4〇毫克苄叉參環己基膦基氯化釕（Grubbs複分 解催化劑）加入在10毫升二氯甲烷中的450毫克13之溶液中 。在攪拌1小時之後，加入另外的400毫克催化劑。在2小 時之後，除去溶劑，並以20毫升甲苯置換，並將混合物在 60°C下與5公克鹼性氧化鋁混合，以吸附催化劑。在C鹽 上過濾及以甲苯與醋酸乙酯萃取之後，獲得400毫克幾乎 純的14 ; Rf 0.34(8/2之庚烷-醋酸乙酯）；H 3 0.45。 NMRCCDCls)^ 5.02(s, 2, CH2O), 5.97(s, 2, CH = CH), 0.97(s, 請 先 閲 讀 背 意 事 項 再 頁 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 本紙張尺度適用中.國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -18 1225068 A7 ___ B7 __ 五、發明説明（16 ) 3，CH3)。 化合物1 5 將8微升吡啶、0.14毫升之30%水性H2〇2及接著2毫克 甲基三氧銶加入在0.5毫升二氯甲烷中的3 40毫克14之溶液 中。在攪拌1小時之後，完成環氧化作用，優先得到預期 的/3 -環氧化物與部份α -異構物。將混合物倒在水及飽和 Na2S2〇3上，並以醋酸乙酯萃取。以色層法提供230毫克15 及8 0毫克不預期的α -環氧化物。Rf 0.36(95/5之甲苯-醋酸 乙酯，參考用之 Rf 化合物 14: 0.39)。NMR(CDCl3)(5 3.31， 3.38(m，2，CH(〇）CH)。 化合物1 6 將在20毫升無水THF中的4.2公克15與350毫克LiAlH4 之混合物回流2小時。接著將混合物冷卻，並接著以1毫升 飽和水性Na2S〇4、28毫升醋酸乙酯及8公克Na2S〇4處理。 在室溫下攪拌1 /2小時之後，將反應在C鹽上過濾，並將 過濾物濃縮及色層分離，以提供3.4公克16，熔點147-148 °C ，Rf 0.20(8/2 之甲苯-醋酸乙酯；Rf 23: 0.55)。 NMR(CDCh)“.25(寬 s，1，CH〇H)，0.90(s，3, CH3)，0.86(t， 3，CtL·)，5.02(s，2，〇CH2Ar)。 化合物1 5 將8微升吡啶、0.14毫升之30%水性h2〇2及接著2毫克 請 先 閱 讀 背 面 之 注 意 事 項 再 !· 頁 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -19 1225068 A7 _________ B7 五、發明説明（17 ) (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 甲基三氧銶加入在0.5毫升二氯甲烷中的340毫克14之溶液 中。在攪拌1小時之後，完成環氧化作用，優先得到預期 的Θ -環氧化物與部份α -異構物。將混合物倒在水及飽和 Na2S2〇3上，並以醋酸乙酯萃取。以色層法提供230毫克15 及80毫克不預期的α-環氧化物。Rf 0.36(95/5之甲苯-醋酸 乙酯，參考用之Rf化合物14: 0·39)。NMR(CDCl3)(5 3.31， 3.38(m，2，CH(〇）CH)。 化合物 17; =(7α，16y8，17α，22S)-7-丙基-16,24_環-l9,21-二原膽-l，3,5(10)-三烯-3，17,22-三醇 將在200毫升乙醇中的3.3公克16在300毫克之5%Pd/C 存在下氫化。在反應完成之後，將催化劑在C鹽上過濾 ，並將溶劑濃縮。將殘餘物以醚及接著以水濕磨，以提供 1.7公克17，熔點1 46- 147 °C，Rf 0.53(1/1之甲苯-醋酸乙酯 ;Rr 16: 0.60)。NMR(CDCh) ά 4.26(寬 s，1，CHOH), 7,14, 6·62(ΑΒ，2，HI, H2)，6.54(d，H4)。 在活體外的雌激素活性試驗 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 在利用人類雌激素受體α或Θ之結合檢定及轉激活檢 定中測試化合物之雌激素受體活性。 利用與來自重組體中國大頰鼠卵巢（CHO)細胞之細胞 質人類雌激素受體α或/3之競爭結合評估與用於在以人類 雌激素受體a (hER α )或/3 (hER 0 )穩定轉染之重組體CHO 細胞之細胞溶質存在下的雌激素受體^或/3之（17 Θ )-雌 二醇（Ε2)比較之試驗化合物的相對結合親和性（ = RBA)(效 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐) ，20 _ 1225068 A7 _ B7 _ 五、發明説明（18 ) 力比例）。 請 先 閱 讀 背 之 注 意 事 項 再 填 舄 本 頁 在以人類雌激素受體a (hERa )或；8 (hER0 )、老鼠催 產素促進劑（RO)及蟲螢光素酶受體基因（LUC)穩定共轉染 之重組體中國大頰鼠卵巢（CHO)細胞之活體外的生物檢定 中測定化合物的雌激素及抗雌激素活性。以刺激經由雌激 素受體hERa或hER冷介入之酵素蟲螢光素酶之轉激活作 用之試驗化合物的雌激素激動轉激活作用（效力比例）與標 準的雌激素雌二醇比較。以（17 Θ )-雌二醇抑制經由雌激 素受體hERa或hER/3介入之酵素蟲螢光素酶之轉激活作 用之試驗化合物的抗雌激素活性（效力比例）與標準的ICI 164.384( = (7α，17/3 )·Ν· 丁基-3，17-二羥基-N-甲基雌-l,3,5(10)-三烯-7-十二烷醯胺）比較。 結果· 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 -21 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X297公釐） 1225068 A7 B7 五、發明説明（19 ) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

cnM iid A m « 蘅s 礙G 截 r- Csl >160 >120 >115 >260 wo % 胺〜 巍Ξ C<1 ο — un 16/<0·1 12/<0.1 1 1·5/<0·1 16/cO.l 1 11/0.2 in ^ M w 1 8.6/0.3 20/5.2 18/14 17/8.7 42/13.9 16.3/0.4 6-環 (n=l) 或5-環 ! (n = 0) 6-環1 m 1 m 1 ν〇 m 1 m 1 m 1 κ κ C3H7 1 CHs 1 C2H5 <Ν u 卜 κ CO U 式3化合物 < PQ r-H II 0 Q E(=17n) IX·

ISI 寸 30 蝦AI(I (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -22 - 1225068 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 ___B7 __五、發明説明（20 ) 化合物1 7在拮抗劑檢定中具有<0.1 /67之選擇性比例 Er a /Er β ο 根據式3的先前技藝之化合物，但是不具有22-千基及 具有R7 α -丙基、Rh氫及6-員Έ-環，將其以（7 α，16冷，17 α )_7_ 丙基-16,24-環-19，2 卜二原膽-1,3,5(10)-三烯- 3,17-二 醇命名，並在結合檢定中具有15/7之Er a /Er /3比例及在 激動劑轉激活檢定中具有0.3/<0.1。 避免在老鼠中以卵巢切除術誘發之骨流失之試驗（抗 骨質疏鬆活性） 緒言 老鼠的卵巢切除術會因爲雌激素不足誘發骨流失。以 投予雌激素化合物避免該效應。利用該試驗評估在卵巢切 除（OVX)之老鼠中的抗骨質疏鬆活性。可以末梢定量計算 之局部X射線檢法（pQCT)或以X-射線圖的定量分析可以 評估在骨質上的效應。以血漿骨惩素（osteocalcin)及尿脫 氧吡啶并啉、鈣及磷提供在骨頭代謝上的訊息。以子宮重 量的增加及體重與胸腺重量的降低反映出雌激素效應。 試驗動物 以225-250公克成熟的 Wistar處女母鼠。3匕&4·· Hsd/Cpd:Wu，SPF-bred by Harlan，CPB，Zeist，荷蘭。 請 先 閲 讀 背 之 注 意 事 項 再 填 寫 本 頁 實驗 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -23 1225068 A7 ___ B7 五、發明説明（21 ) 請 先 閲 讀 背 之 注 意 事 項 再 在實驗的第1天，將老鼠稱重及以體重分配在籠以內 ，於是以體重最輕的老鼠放在第一個籠子內，並以最重的 老鼠放在最後一個籠子內。以隨意處理這些老鼠。在醚麻 醉下進行模擬手術及卵巢切除術。在自麻醉恢復之後的24 小時之內，以每天1或2次投予參考化合物或試驗化合物， 經4週。在此期間，以每週稱取老鼠重量。在4週之後，進 行驗屍。在驗屍時，將老鼠以醚麻醉，並自腹腔主動脈收 集血液。解剖雙股骨、椎骨（L1L2L3L4)(視需要）、子宮、 胸腺、肝、腎、腎上腺、甲狀腺及腦下垂體腺。在驗屍日 的新鮮組織上以pQCT進行右股骨的骨礦物質密度及幾何 學的測量。以pQCT(末梢定量計算之局部X射線檢法機器 ;XCT960A，Stractec，Birkenfeld，德國）測量股骨之幹骺 端的小梁骨礦物質密度（FBMDDIS毫克/立方公分）。 結果的說明 卵巢切除術會造成在統計學上明顯降低的末梢骨密度 及股骨的幹骺端的骨體積，並造成在統計學上明顯增加的 血漿骨鈣素及尿脫氧吡啶并啉値（PS 0.05，2程A VOVA)。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 在與卵巢切除的控制組比較時，當末梢股骨的平均骨 密度値明顯降低時，則將試驗化合物視爲活性化合物。在 尿脫氧吡啶并啉値上的化合物效應反映出骨吸回效應，在 血漿骨鈣素値上的效應反映出骨重組效應，並可以有助於 了解作用機制。 最低的活性劑量（MAD)是達到骨礦物質密度之平均比 24 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ297公釐） 1225068 A7 ________ B7 _ 五、發明説明（22 ) 例差異介於40至60%之間的劑量。 引用交 請 先 閲 讀 背 之 注 意 事 項 再

Wronski T.J.及 Yen C.F.: The ovariectomised rat as an animal mode for postmenopausal bone loss. Cell and M a t e r i a 1 s，S u p p . 1 ( 1 9 9 1 ): 6 9 - 7 6 o

Yamazaki I.及 Yamaguchi H.: Characteristics of an ovariectomised osteopenic rat model. J. Bone Min. Res. 4(1989): 12-22 。

Ederveen A.G.H.及 Kloosterboer H. J.: Tibolone， a steroid with a tissue-specific hormonal profile, completely prevents ovariectomy-induced bone loss in sexually mature rats. J. Bone & Mineral Research Vol 14, ppl 963- 1 970, 1 990 ° 結果： 化合物17(〇rg 41621):骨質疏鬆試驗口服30微克/公 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 斤 先前技藝的化合物（7α，16/3，17α )-7·丙基-16,24-環-19,2卜二原膽-1,3,5(10)-三烯-3，17_二醇：每次口服190微 克/公斤。 在活體內的雌激素活性試驗 以在 F · A11 e η，L · A · D 〇 i s y，J · A m e r · M e d. A s s 〇 c · 8 1， 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210x297公釐） -25 - 1225068 A7 ____ B7___ 五、發明説明（23 ) 8 1 9 - 8 2 1 ( 1 9 3 2)中說明的A11 e n D 〇 i s y試驗的方式測定在活 體內的雌激素活性。 結果 * 化合物17(Org 41621) : Allen Doisy經皮下5微克/公斤 ，口服30微克/公斤。 先前技藝的化合物（7a，16^，17a )-7-丙基-16,24-環_ 19,2 卜二原膽-1,3,5(10)-三烯 _3，17·二醇：Allen Doisy 經皮 下24微克/公斤，口服125微克/公斤。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 26 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐)

Claims (1)

1225068 公告衣 A8 B8 C8 L-，_.丨_丨_丨丨丨 1 -1........ ..........II丨 Γ TTfir.丨一 D8 六、申請專利範圍

1,正- 丨補先附件：二第90109186號修正後無劃線乏中文申請專利範圍替換本 民國93年7月9日呈 1. 一種具有式（I)之類固醇化合物：

OH 式 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 、1T 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 其中： 虛線鍵代表視需要之雙鍵； R6是 H、=CH2或-CH3或-CH2-CH3; R7是Η、C^-烷基、C2-5-烯基或C2.5-炔基，其中可將烷 基、烯基或炔基以1至3個獨立選自氟或氯原子之基團的鹵 原子取代； Rn是H、Ci“-烷基、Cy烯基、C^-炔基或Cy烷叉基 ，其中可將烷基、烯基、炔基或烷叉基以1至3個獨立選自 氟或氯原子之基團的鹵原子取代； E代表與類固醇骨架的碳原子16及丨7—起的4至7員環， 該環具有關於類固醇骨架之α及順式組態，其視需要包含i 本紙張尺度適用中國國家樵準（CNS ) A4規格（2】0X297公釐） 1225068 A8 B8 C8 _ D8 六、申請專利範圍 或2個內環鍵； 或其前藥。 2.根據申請專利範圍第1項之類固醇化合物，其特徵在 於R6是Η，1^7是C!.3烷基，E-環是在S立體組態中的位置22 上具有羥基之無雙鍵的5或6員環。 3·根據申請專利範圍第1或2項之類固醇化合物，其特徵 在於化合物係根據以（7 α，16冷，17 a，22S)-7-丙基-16,24-環-19,21-二原膽-1，3,5(10)-三烯-3，17,22-三醇命名之式2 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

訂 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 4. 根據申請專利範圍第1或2項之類固醇化合物，其係用 於選擇性修飾雌激素受體之活性，因而係用於預防或治療 更年期前後或更年期後之不適及避孕治療。 5. —種用於以選擇性改進雌激素受體活性之非醫療方法 ，其係使得申請專利範圍第1-3項中任一項之化合物與雌激 素受體接觸。 6·根據申請專利範圍第5項之方法，其特徵在於該方法 係以選擇性改進雌激素受體α活性，其係使得根據申請專 本紙張I度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ297公釐） ~ : 1225068 8 8 8 8 ABCD 六、申請專利範圍 利範圍第1-3項中任一項之化合物與雌激素受體^接觸。 7·根據申請專利範圍第5項之方法，其特徵在於該方法 係以選擇性改進雌激素受體Θ活性，其係使得根據申請專 利範圍第1 - 3項中任一項之化合物與雌激素受體沒接觸。 8.根據申請專利範圍第1或2項之類固醇化合物，其在製 造與選擇性雌激素受體有關的治療之藥品的用途。 9·根據申請專利範圍第8項之類固醇化合物，其與選擇 性雌激素受體有關的治療是預防或治療更年期前後或更年 期後之不適。 10·根據申請專利範圍第8項之類固醇化合物，其與選擇 性雌激素受體有關的治療是避孕治療。 11 · 一種用於預防或治療更年期前後或更年期後之不適 或治療避孕之藥學組成物，其包含申請專利範圍第1-3項中 任一項之化合物及藥學上可接受之輔助劑。 ------ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ297公釐）