TW443936B - A molecular sieve material-containing composition for application to a wound to promote wound healing - Google Patents

A molecular sieve material-containing composition for application to a wound to promote wound healing Download PDF

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Description

4439 3 6 Λ7 Ii7 五、發明説明(1 經漭部中决標窣扃月工消费合作社印絮 本發明係有關以分子篩促進傷口癒合之用途,特定_ 之促進慢性傷口(如:靜脈潰癌、糖尿病性潰癌及搏瘡、、責 瘍(壓瘡))之癒合。 ' 目前治療慢性傷口,特定言之常見之如:靜脈清療、 糖尿病性潰瘍及壓瘡之慢性傷口之較佳方法包括吸收性傷 口敷料及簡單加藥之傷口敷料。這些敫料均仍無法提供最 佳之慢性傷口癒合效果。 " GB-A-2259858說明以沸石(一種無機性鋁守酸鹽分子 篩)減少惡臭傷口發出之惡臭之用途,彿石係密封在透氣 包内’含沸石之小包則覆在惡臭傷口之傷口敷料上,以〇及 收傷口散發出之惡臭物質。其中未說明沸石直接施用在傷 口上而與傷口液體接觸之用法。 C.克里斯多夫洛(Christoforou)等人於1996年5月15 至19日在美國馬里蘭州波士頓市舉行之”傷口癒合學會及 歐洲組織修復學會第二次聯合會議”(The 2nd Joint Meeting of the Wound Healing Society and the European Tissue Repair Society)中第H8號公開報告(Poster)令提出生物可 降解性帶正電價之DEAE Sephadex離子交換瓊脂糖小珠 當施用至活體之急性傷口時,對傷口癒合強度有正面效 果。 本發明提供以分子篩材料製備用於施用至傷口以促進 傷口癒合之組合物上之用途。 在不希望受到任何理論的限制下,分子篩材料係藉由 本紙乐尺度適用中國國家榡準(CNS ) Λ4規怙(210X2*^7^人厂 87221Α ---71------疼------1Τ------.^ (請先閲讀背面之注意事項再填5t本頁)
D Λ7 Η 7 五、發明説明( 誚先閱讀背而之注¾事項再4?f本w 吸附傷口液體之間質金屬蛋白酶(MMP,S)而促進慢性傷口 癒合。MMP’s代表-種負責細胞外間質(ECM)成份(如: 基底膜)之蛋白質分解性降解作用之結構與功能上相關之 酵素,MMP之生產與活化作用之調節異常時,會改變 ECM之蛋白質分解作用,導致傷口癒合緩慢。 本發明所採用之分子筛材料為非生物可吸收性較佳。 亦即,該分子篩最好不在活體内降解。反之,某些已知可 與MMP’s結合之生物聚合物(如:骨勝原),當用為傷口 敷料時,由於會於活體内分解及釋出結合之MMp,s,因 而可降低效力。 --=- 較佳者,本發明採用之分子篩材料不在水中或血清中 膨脹。反之,某些以離子交換樹脂為主之生物聚合物卻會 水合形成類似凝膠之母質,會抑制小分子移動,進而抑制 吸收MMP’s之效率。 較佳者,分子篩材料由BET單點(乾物樣本)氮吸附法 測定之比表面積高於250米2/克,以高於5〇〇米2/克 較佳,高於750米2/克最佳。 經Μ部屮决標卑局貝工消费合竹社印裝 較佳者,該分子篩基本上由聚合物粒子組成^較佳 者,聚合物粒子之表面積為至少750米克,至少1〇〇〇 米2/克更佳。某些較佳具體實施例中,分子篩係呈1〇至 150微米大小之粒子型式。 較佳者,由水銀孔率計測定聚合物粒子之令間孔直徑 小於1.0微米’以小於0 25微米更佳,小於〇3微米最 -4 - 本紙张尺度刺巾關緖_. ( eNS ) ΛUUt, ( 210x297^·W~) Η ^4393 五、發明説明(3 ) 佳。 較佳者,聚合物粒子包含直徑範圍在0.1至5.0毫 求’以1.0至5.0毫米較佳之小珠。此等小珠可自市面上 作為分子篩或作為HPLC固相之商品購得。 較佳者,聚合物粒子包括聚苯乙烯,且更佳者,聚合 物粒子基本上由交鏈聚苯乙烯組成。高度多孔性交鏈聚苯 乙稀粒子宜自英國普洛賴國際公司(Purolite, International Limited, Cowbridge Road, Pontyclun, Mid-Glamorgan, U.K.) 之註冊商標PUROSEP及MACRONETS商品取得。此等 材料之合成法已說明於例如:SU-A-434757及SU-A· 804647。此等材料可於化學工程界中用為排除液體中雜質 之分子筛’但迄今尚未建議用於傷口敷料。 多孔性交鏈聚笨乙烯粒子之形成法係於弗利德_克拉 夫特(Friedel_Cratts)觸媒之存在下,於有機溶劑中,以雙 官能性交鏈劑處理聚苯乙烯或其與〇·3至2%二乙烯苯之 共聚物。所得之交鏈劑經洗滌及乾燥’產生吸收性粒子。 較佳之雙官能性交鏈劑包括對苯二甲基二氣、單氣二曱基 醚及二甲基甲醛。較佳之弗利德一克拉夫特觸媒包括三氣 化鐵、三氣化鋁、四氣化錫及二氯化鋅。較佳有機溶劑包 括二氣乙烷、四氣乙烧及硝基苯。 k佳者,分子篩係包埋在完全或部份由織物、不織物 或編織物布料形成之容器中。更佳者,分子篩係包埋在完 全由該布料形成之封套、長筒或袋子中。較佳布料為較適 -5 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNii ) Λ 4 。y -- I n I — I— ^ I I 訂 — ^ (邻先閱讀背面之注意事項再堺-".本頁) 勉滅部中央標準局貝工消费合作社印裝 經满部中央標嗥局只工消费合作社印聚 Λ7 H? 五、發明説明(4 ) ~ 合加熱密封之紡織結合性不織布,非附著性尼龍布料。所 得之含分子篩材料之"茶包"直接施用在傷口表面,使分子 篩材料直接接觸傷口液體。 其他較佳具體實施例中,分子篩材料係勻散在吸收性 傷口敷料之連續固相中。合適材料包括海綿材料,如:說 明於US-A-3157524或WO85/04413之交鏈冷凍乾燥骨膠 原海綿。其他較佳具體實施例中,分子篩材料係勻散在非 生物可降解之吸收性母質中,如:來自嬌生醫藥產品公司 (Johnson & Johnson Medical, Inc.),註冊商標為 TIELLE 之 聚腺境海絲。 較佳者,一層分子篩材料與多層傷口敷料之其他層組 合。更佳者,多層傷口敷料殺菌,包裝在細菌不可通透之 容器内,如:塑膠層壓薄袋中。 根據本發明’分子篩材料係施用在傷口上,以慢性傷 口較佳,如:靜脈潰瘍、糖尿病性潰瘍、或褥瘡潰瘍,使 傷口液體直接與分子薛材料接觸。 本發明之明確具體實施例將利用例如:下列附圖更詳 細說明,其中: 里1.出示人類急性傷口液體在使用及不使用(對照組) 選用之分子篩材料及離子交換樹脂培養後所檢測到之 ΜΜΡ活性量; 遇出示自圖1所採用之分子篩及離子交換樹脂經蛋 白酶萃取ΜΜΡ後’在SDS-樣本緩衝液中檢測到之ΜΜΡ -6 - 本紙浪尺度適用中國國家榡维-(CNS > Λ4規;)¾ ( 210χ297ϋΓ] ^ 訂-—,I 1 i 1 線 (請先間讀背而之注意亨項再4H本 44393 β Α7 Η7 經沪部中央標涞局負工消费合作社印裝 五、發明説明(5 活性量。 方法一 依下列方法製備具有極高内表面積及均勻孔大小之交 鏈聚苯乙烯分子篩: 添加2.6克_莫耳)Sncl〆100毫升四氣乙院溶液 至含104克(1莫耳)聚笨乙稀及〇76克(〇〇1莫耳)二甲基 甲酿之7QQ毫升相同溶劑溶液中。混合物均勻餅,保持 在室溫下5小時。打破所形成之凝膠’以 丙網及咖阳混合物,㈣Ηα,及水依=務再然 後乾燥凝膠。 實例1 根據本發明所採用之傷口敷料之製法如下:
取 ~ 自普洛賴公司(pur〇lite Company)之 PUROSEP (RTM)深色交鏈微孔聚苯乙烯小珠樣本利用熱封法密封在 尼龍布料袋中。製成許多個含15G、298及558毫克小珠 之此等”茶包"。 實例2 來自人類急性傷口液體之pro MMP2及pro MMP9與 實例1中製備之傷口敷料之結合程度依下列方法分析: 取實例1之袋子浸入2.5毫升乳房切除術急性傷口液 體之1,10稀釋液樣本中。樣本與傷口液體於周溫下振盪 接觸3小時後’取出,以SDS緩衝液潤洗"茶包,'。 然後依C.豪森(Heussen)及E.B.、道德(Dowdle)述於 本紙張尺度顧巾襲h碑(CNS) --* f— I— 訂 I 線 (請先間讀背面之注意事項再填"本頁) 44393 :: Λ7 五、發明説明(6 )
Anal. Biochem. 102 : 196-202 (1980)之方法,採用明膠 SDS聚丙稀酿胺凝勝電泳(酶分析法Zym〇graphy)分析留在 傷口液體中之專一性MMP酶原之活性,該文獻已併為本 文之參考文獻。 利用OPTILAB (RTM)系統測定因蛋白酶活性而致凝 膠上出現空白之各區域之面積。重覆各實驗3次(n=3), 並採用史都登氏測驗(Student’s test)統計分析結果,其中p 小於或等於0.05。其結果如下: ("先間讀背而之注意亊項再續.Ϊ:本否) 敷 料 Pro 9相對於 對照組之% Pro 2相對於 對照組之% 尼龍 100 100 尼龍+ 158毫克小珠 71 60 尼龍+ 298毫克小珠 57 34 尼龍+ 558毫克小珠 18.3 8.9 --11 經确部中央標率局员工消费合作社印聚 依下列方法,定性分析MMP與分子篩之結合強度。 取出袋子’加至5毫升MMP緩衝液中,振盪1小時,試 圖洗掉”茶包”上結合之蛋白質。由SDS-PAGE凝膠顯示, 洗液中沒有蛋白酶活性。 然後以2.5毫升如下組成之樣本緩衝液處理”茶包,,: 6.3毫升0.5m Tris/HCl ρΗ6·8缓衝液,2至5毫升甘油, 0.5克十二烷基磺酸酯鈉(SDS),16·2毫升水。此以強力清 潔劑為主之緩衝液亦無法自分子篩上溶出任何強力結合之 本紙張尺度適用中國國家標皁(CNS ) Λ4规彳M )
經漪部中央標卑局只工消费合作社印裝 <、發明説明(7 ) MMP 〇 賁例3 依下列方法’進行一系列分子篩及離子交換樹脂小珠 材料與MMP之結合作用之比較試驗: 選用下列材料進行試驗:
Purposep (RTM)深色;pUr〇sep (RTM)淺色;HISIV (RTM)IOOO 沸石;AG. 50W 沸石;HISIV (RTM)3000 沸 石;明膠瓊脂糖小珠;QEA Sephadex (RTM)固體瓊脂糖 小珠,由法馬藥廢(Pharmacia Ltd.)供應;DEAE Sephadex (RTM)固體瓊脂糖小珠由法馬藥廠供應;DEAE瓊脂糖小 珠;及Dextran S04小珠。 取100毫克各材料樣本置入微離心管中,添加稀釋 1 : 15之急性傷口液體(於MMP緩衝液中稀釋之切除乳房 傷口液體)。試管於室溫下’於環繞式混合機上’以第6 段速度振盪培養3小時。之後’試管於離心機中’依 1300rpm旋轉’收集上澄液,存放在~20°C下。依實例2 所述進行明膠SDS聚丙烯醯胺凝膠電泳法’分析20微升 上澄液中殘留之pro MMP2及pro MMP9活性’結果示於 圖1。 圖1所示之結果證明與分子篩材料培養之傷口液體樣 本中之MMP活性顯著下降。此下降現象以表面積高(高於 8〇〇米2/克)之交鏈聚苯乙烯PUROSEP小珠之表現最顯 著。 -9 - ® is1®^CNS} Λ4^#, (210 心97“) I ϋ i n In 1 ~Λί^I 訂 11y (对先閱讀背而之注意事項再峨於'本莨〕 8 經漓部中央標莩局負工消f合作社印聚 Λ7 H? 五、發明説明(8 ) 在各試管中殘留之殘質中,各添加0.5毫升MMP緩 衝液’於環繞式混合機上短暫混合。再次如前述旋轉離心 試管’並收集上澄液。此洗滌步驟應可使各殘質樣本釋出 任何微弱結合之蛋白酶。 最後’在各試管之各殘留殘質中添加0.5毫升樣本緩 衝液(如上述定義”於環繞式混合機上短暫混合。 此等試管於4°C下,在振盪器上溫和混合一夜。然後 測定上澄液(萃液)中pro MMP2與pro MMP9活性,以評 估MMP與各種材料之結合強度。 取20微升萃液通過SDS-PAGE明膠酵素分析法,並 採用影像分析系統,測定NIH影像密度,分析蛋白酶所 造成之空白區域。數值以SDS-PAGE凝膠上空白明膠之 像素表示。 由圖2可見,可自經處理之沸石分子篩中萃出一些 MMP,但MMP與PUROSEP分子篩之結合作用太強,無 法利用此方法萃取。 含上述分子筛之傷口敷料可直接施用至慢性傷口表 面,以改善傷口癒口。因此,本發明另一方面提供—種治 療傷口之方法,尤指慢性傷口如:靜脈潰瘍、壓瘡或糖尿 病性潰瘍,其係在傷口上施用含分子篩材料之傷口敷料。 相關技藝專家讀者咸了解本附錄之申請專利範圍内之 許多其他具體實施例。 -10 - _ -. — — ’ " ^ - 本紙張尺度㈤巾料(0^7^现格(21〇χ2^ν>ί,4 ) ----------t------訂------線 (誚1閱讀背而之>.#.意事項再填'於:..本頁)

Claims (1)

  1. 443 443
    A8 B8 C8 D8 範圍 I年89’3* 充丨 專利申請案第87114129號 ROC Patent Appln. No.87114129 修正之申請專利範圍中文本-附件(一) Amended Claims in Chinese-EncL(I) (民國89年3月22日送呈) (Submitted on March 22 ,2000 ) 1. 一種供施用至傷口以促進傷口癒合之含分子篩材料的组 成物,其中分子篩材料係選自微孔性聚合物小珠及沸 石。 2. 根據申請專利範圍第1項之组成物,其中分子篩材料包 含不在水中膨脹之非生物可降解之聚合物。 3. 根據申請專利範圍第2項之組成物,其中分子篩材料包 含交鏈聚苯乙烯小珠。 4. 根據申請專利範圍第1至3項中任一項之組成物,其中 分子篩材料採用BET單點(乾物樣本)氮吸附測定法測定 之比表面積大於250米2/克。 5. 根據申請專利範圍第4項之組成物,其中該比表面積大 於400米2/克。 6. 根據申請專利範圍第1至3項中任一項之組成物,其中 分子篩材料係勻散在吸收性傷口敷料中。 7. 根據申請專利範圍第1至3項中任一項之組成物,其中 該組合物係供施用於選自下列之慢性傷口:靜脈潰癌、 糖尿病性潰瘍及褥瘡潰瘍。 -11 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格(210 X 297公釐) n .^1 ^1· f .^1 .^1 r It i ] n .^1 I (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 87221B
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