TW202412856A

TW202412856A - 一種含抗體藥物偶聯物的醫藥組成物及其用途

Info

Publication number: TW202412856A
Application number: TW112122427A
Authority: TW
Inventors: 毛東杰
Original assignee: 大陸商上海翰森生物醫藥科技有限公司; 大陸商常州恆邦藥業有限公司; 大陸商江蘇豪森藥業集團有限公司
Priority date: 2022-06-15
Filing date: 2023-06-15
Publication date: 2024-04-01

Abstract

本揭露關於一種含抗體藥物偶聯物的醫藥組成物及其用途。具體而言，本揭露關於一種醫藥組成物，其包含在緩衝液中的抗體藥物偶聯物。本揭露的醫藥組成物具備良好的穩定性。

Description

一種含抗體藥物偶聯物的醫藥組成物及其用途

本揭露屬於藥物製劑領域，具體關於一種包含抗體藥物偶聯物的醫藥組成物，以及其作為抗癌藥物的用途。

這裡的陳述僅提供與本揭露有關的背景信息，而不必然地構成現有技術。

抗體藥物偶聯物(antibody drug conjugate，ADC)將單株抗體或者抗體片段藉由穩定的化學接頭化合物與具有生物活性的細胞毒素相連，充分利用了抗體對腫瘤細胞表面抗原結合的特異性和細胞毒素的高效性，同時又避免了前者療效偏低和後者毒副作用過大等缺陷。這也就意味著，與以往傳統的化療藥物相比，抗體藥物偶聯物能精準地結合腫瘤細胞並降低對正常細胞的影響(Mullard A,(2013)Nature Reviews Drug Discovery,12：329-332；DiJoseph JF,Armellino DC,(2004)Blood,103：1807-1814)。

用於抗體藥物偶聯物的具有細胞毒性的小分子有幾類，其中有一類是喜樹鹼衍生物，它們藉由抑制拓撲異構酶I而具有抗腫瘤作用。報導喜樹鹼衍生物依沙替康(化學名：(1S,9S)-1-胺基-9-乙基-5-氟-2,3-二氫-9-羥基-4-甲基- 1H,12H-苯并[de]吡喃并[3^’,4^’：6,7]咪唑并[1,2-b]喹啉-10,13(9H,15H)-二酮)應用於抗體藥物偶聯物(ADC)的文獻有WO2014057687；Clinical Cancer Research(2016)22(20)：5097-5108；Cancer Sci(2016)107：1039-1046。但仍需進一步開發療效更好的ADC藥物。

但是，ADC具有比抗體更複雜的異質結構，因此，對用於治療目的ADC製劑提出了更大的挑戰。

本揭露提供一種醫藥組成物，其包含抗體藥物偶聯物和緩衝劑，其中該抗體藥物偶聯物具有如下所示的結構：

如上所述的抗體藥物偶聯物參照WO2020063673A1的說明書中第45-47頁中抗體偶聯物實施例9 FADC-2的製備；

其中，

h1702DS為抗B7H3抗體，其來源參照WO2020063673A1中第44頁的抗體h1702DS，包含如SEQ ID NO：1所示的重鏈(WO2020063673A1中的SEQ ID NO：14)和如SEQ ID NO：2(WO2020063673A1中的SEQ ID NO：16)所示的輕鏈：

h1702DS的重鏈胺基酸序列：(SEQ ID NO：1)

h1702DS的輕鏈胺基酸序列：(SEQ ID NO：2)

n為1至10，較佳為1至8，更佳為3至5，更佳為約4；

該醫藥組成物的緩衝劑為琥珀酸鹽緩衝劑、組胺酸緩衝劑，較佳為琥珀酸-琥珀酸鈉鹽、組胺酸-醋酸鹽或組胺酸-鹽酸鹽緩衝劑。

該醫藥組成物的緩衝劑濃度為約15mM至約50mM，較佳為約20mM至約40mM，更佳為約30mM。

該醫藥組成物的pH為約4.5至約6.5，較佳pH為約5.0至約6.0，更佳pH為約5.5至約5.6。

在可選的實施方案中，醫藥組成物中該緩衝劑的pH值約為4.5至約6.5，非限制性的實施例包括約4.5、約4.6、約4.7、約4.8、約4.9、約5.0、約5.1、約5.2、約5.3、約5.4、約5.5、約5.6、約5.7、約5.8、約5.9、約6.0、約6.1、約6.2、約6.3、約6.4、約6.5，以及這些點值之間的任意範圍；較佳為大約5.0至約6.0，更佳為大約5.5至約5.6。

在可選的實施方案中，醫藥組成物中該琥珀酸鹽緩衝劑為琥珀酸-琥珀酸鈉鹽，該組胺酸鹽緩衝液較佳為組胺酸-醋酸鹽或組胺酸-鹽酸鹽緩衝液。

在可選的實施方案中，醫藥組成物還包含表面活性劑。可選自聚山梨酯、聚山梨酯20、聚山梨酯80、聚羥亞烴、Triton、十二烷基磺酸鈉、月桂基磺酸鈉、辛基糖甙鈉、月桂基-磺基甜菜鹼、肉豆蔻基-磺基甜菜鹼、亞油基-磺基甜菜鹼、硬脂基-磺基甜菜鹼、月桂基-肌胺酸、肉豆蔻基-肌胺酸、亞油基-肌胺酸、硬脂基-肌胺酸、亞油基-甜菜鹼、肉豆蔻基-甜菜鹼、鯨蠟基-甜菜鹼、月桂醯胺基丙基-甜菜鹼、柯卡醯胺基丙基-甜菜鹼、亞油醯胺基丙基-甜菜鹼、肉豆蔻醯胺基丙基-甜菜鹼、棕櫚醯胺基丙基-甜菜鹼、異硬脂醯胺基丙基-甜菜鹼、肉豆蔻醯胺基丙基-二甲基胺、棕櫚醯胺基丙基-二甲基胺、異硬脂醯胺基丙基-二甲基胺、甲基可可醯基鈉、甲基油基牛磺酸鈉、聚乙二醇、聚丙二醇和乙烯與丙烯二醇的共聚物等等。較佳的表面活性劑是聚山梨酯80或聚山梨酯20，更佳為聚山梨酯80。

在可選的實施方案中，醫藥組成物中表面活性劑的濃度為約0.01mg/mL至約1.0mg/mL，較佳為約0.05mg/mL至約0.5mg/mL，更佳為約0.1mg/mL至約0.4mg/mL約或約0.2mg/mL至約0.3mg/mL，最佳為約0.2mg/mL，非限制性的實施例包括0.02mg/mL、0.05mg/mL、0.1mg/mL、0.15mg/mL、0.2 mg/mL、0.25mg/mL、0.3mg/mL、0.35mg/mL、0.4mg/mL、0.45mg/mL、0.5mg/mL、0.8mg/mL，以及這些點值之間的任意範圍。

在可選的實施方案中，前述醫藥組成物還包含糖。本揭露的“糖”包含常規組成物(CH₂O)_n及其衍生物，包括單糖，二糖，三糖，多糖，糖醇，還原性糖，非還原性糖等等。該糖可選自葡萄糖，蔗糖，海藻糖，乳糖，果糖，麥芽糖，右旋糖苷，甘油，赤藻糖醇，丙三醇，阿拉伯糖醇，sylitol，山梨糖醇，甘露醇，密裡二糖，松三糖，蜜三糖，甘露三糖，水蘇糖，麥芽糖，乳果糖，麥芽酮糖，山梨醇，麥芽糖醇，乳糖醇，異-麥芽酮糖等等。較佳的糖是非還原性二糖，更佳選自海藻糖、甘露醇或蔗糖，最佳為蔗糖或海藻糖。

在可選的實施方案中，前述醫藥組成物中糖的濃度為約25mg/mL至約80mg/mL，較佳為約30mg/mL至約60mg/mL，較佳約40mg/mL，非限制性的實施例包括25mg/mL、30mg/mL、35mg/mL、40mg/mL、45mg/mL、50mg/mL、55mg/mL、60mg/mL、65mg/mL、70mg/mL、75mg/mL、80mg/mL以及這些點值之間的任意範圍，較佳為40mg/mL。

在可選的實施方案中，前述醫藥組成物還包含胺基酸及其鹽，該胺基酸及其鹽較佳選自甘胺酸和精胺酸鹽酸鹽，更佳為甘胺酸。

在可選的實施方案中，前述醫藥組成物中該甘胺酸濃度為約5mg/mL至約10mg/mL，為約5.3mg/mL至約9.8mg/mL，為約6mg/mL至約9mg/mL，較佳為約7mg/mL至約8mg/mL，非限制性的實施例包括6mg/mL、6.5mg/mL、7mg/mL、7.2mg/mL、7.6mg/mL、7.8mg/mL、8mg/mL、8.5mg/mL、9mg/mL以及這些點值之間的任意範圍，最佳為約7.6mg/mL。

在可選的實施方案中，前述醫藥組成物還包含精胺酸鹽酸鹽，該精胺酸鹽酸鹽濃度為約40mM至約80mM，較佳為約50mM至約70mM，非限制性的實施例包括40mM、45mM、50mM、55mM、58mM、60mM、65mM、70mM、75mM和80mM，最佳為約58mM。

在可選的實施方案中，醫藥組成物中該抗體藥物偶聯物濃度為以蛋白濃度計，大約1mg/mL至約100mg/mL，非限制性的實施例包括1mg/mL、10mg/mL、11mg/mL、12mg/mL、13mg/mL、14mg/mL、15mg/mL、16mg/mL、17mg/mL、18mg/mL、19mg/mL、20mg/mL、21mg/mL、22mg/mL、23mg/mL、24mg/mL、25mg/mL、26mg/mL、27mg/mL、28mg/mL、29mg/mL、30mg/mL、40mg/mL、50mg/mL、60mg/mL、70mg/mL、80mg/mL、90mg/mL、100mg/mL以及這些點值之間的任意範圍，較佳為大約10mg/mL至約70mg/mL；更佳為約20mg/mL至約50mg/mL，進一步佳為約20mg/mL至約30mg/mL或約30mg/mL至約50mg/mL，更進一步佳為約20mg/mL或約30mg/mL或約50mg/mL。具體的，非限制性的實施例包括50.1mg/mL、50.2mg/mL、50.3mg/mL、50.4mg/mL、50.5mg/mL、50.6mg/mL、50.7mg/mL、50.8mg/mL、50.81mg/mL、50.82mg/mL、50.83mg/mL、50.84mg/mL、50.85mg/mL、50.86mg/mL、50.87mg/mL、50.88mg/mL、50.89mg/mL、50.9mg/mL、50.9mg/mL、50.91mg/mL、50.92mg/mL、50.93mg/mL、50.94mg/mL、50.95mg/mL、50.96mg/mL、50.97mg/mL、50.98mg/mL、50.99mg/mL、51mg/mL以及這些點值之間的任意範圍。該以蛋白濃度計，是指以抗體藥物偶聯物中的抗體部分的濃度計。

在可選的實施方案中，醫藥組成物中緩衝劑濃度為大約15mM至約50mM，非限制性的實施例包括15mM、16mM、17mM、18mM、19mM、 20mM、30mM、40mM、50mM以及這些點值之間的任意範圍，較佳為大約15mM至約50mM，更佳為大約20mM至約40mM；最佳為約30mM。

在可選的實施方案中，藥物載量(DAR)的範圍可以是每個抗體h1702DS結合細胞毒性藥物的平均數，非限制性的實施例每個抗體h1702DS結合細胞毒性藥物的平均個數約為1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12以及這些點值之間的任意範圍。較佳結合約3至8，約4至8，約5至7，約4至6，更佳約3至5，最佳4.1個細胞毒性藥物。n是小數或整數。

在可選的實施方案中，藥物載量(DAR)為約4。

在可選的實施方案中，該醫藥組成物包含：

(a)約10mg/mL至約70mg/mL的該抗體藥物偶聯物，(b)約0.1mg/mL至約0.8mg/mL的聚山梨酯，(c)約25mg/mL至約80mg/mL的糖，(d)約5mg/mL-10mg/mL甘胺酸和(e)約15mM至約50mM的琥珀酸鹽緩衝劑；該組成物的pH為約5.0-6.0；

較佳地，該醫藥組成物包含如下組分：

(a)約20mg/mL至約70mg/mL的該抗體藥物偶聯物，(b)約0.2mg/mL至約0.8mg/mL的聚山梨酯，(c)約25mg/mL至約80mg/mL的糖，(d)約7mg/mL-8mg/mL甘胺酸和(e)約10mM至約40mM的琥珀酸鹽緩衝劑；該組成物的pH為約5.0-6.0；

更佳地，該醫藥組成物包含如下組分：

(a)約20mg/mL至約50mg/mL的該抗體藥物偶聯物，(b)約0.2mg/mL至約0.8mg/mL的聚山梨酯80，(c)約40mg/mL至約80mg/mL的蔗糖，(d)約7mg/mL 至約8mg/mL甘胺酸和(e)約20mM至約40mM的琥珀酸-琥珀酸鈉鹽，該組成物的pH為約5.0-6.0；

進一步佳地，該醫藥組成物包含如下組分：

(a)約20mg/mL至約30mg/mL的該抗體藥物偶聯物，(b)約0.2mg/mL的聚山梨酯80，(c)約40mg/mL的蔗糖，(d)約7.6mg/mL甘胺酸和(e)約30mM琥珀酸-琥珀酸鈉鹽，該組成物的pH為約5.5-5.6；

(a)約30mg/mL至約50mg/mL的該抗體藥物偶聯物，(b)約0.2mg/mL的聚山梨酯80，(c)約40mg/mL的蔗糖，(d)約7.6mg/mL甘胺酸和(e)約30mM琥珀酸-琥珀酸鈉鹽，該組成物的pH為約5.5-5.6；

更進一步佳地，該醫藥組成物包含如下組分：

(a)約20mg/mL的該抗體藥物偶聯物，(b)約0.2mg/mL的聚山梨酯80，(c)約40mg/mL的蔗糖，(d)約7.6mg/mL甘胺酸和(e)約30mM琥珀酸-琥珀酸鈉鹽，該組成物的pH為約5.5-5.6。

(a)約30mg/mL的該抗體藥物偶聯物，(b)約0.2mg/mL的聚山梨酯80，(c)約40mg/mL的蔗糖，(d)約7.6mg/mL甘胺酸和(e)約30mM琥珀酸-琥珀酸鈉鹽，該組成物的pH為約5.5-5.6。

(a)約50mg/mL的該抗體藥物偶聯物，(b)約0.2mg/mL的聚山梨酯80，(c)約40mg/mL的蔗糖，(d)約7.6mg/mL甘胺酸和(e)約30mM琥珀酸-琥珀酸鈉鹽，該組成物的pH為約5.5-5.6。

在可選的實施方案中，前述任一項的醫藥組成物是液體製劑。

本揭露還提供一種含抗體藥物偶聯物的凍乾製劑，其中該製劑複溶後可形成如上所述的醫藥組成物。

本揭露還提供一種製備含抗體藥物偶聯物的凍乾製劑的方法，其中包括將如上所述的醫藥組成物經冷凍乾燥的步驟。

在可選的實施方案中，製備包含抗體藥物偶聯物的凍乾製劑的方法中該冷凍乾燥依次包括預凍、一次乾燥和二次乾燥的步驟。藉由冷凍製劑和隨後在適於一次乾燥的溫度使水昇華，進行冷凍乾燥。在此條件下，產物溫度低於製劑的低共熔點或坍塌溫度。通常，一次乾燥的溫度範圍為約-30至25℃(假設產物在一次乾燥過程中保持冷凍)。製劑、容納樣品的容器(例如，玻璃小瓶)的大小和類型以及液體的體積決定了乾燥所需的時間，該時間的範圍可為幾小時至幾天(例如40-60小時)。二次乾燥階段可在約0-40℃進行，這主要取決於容器的類型和大小以及採用的蛋白的類型。二次乾燥時間由產物中的期望殘餘水分水平決定，通常需要至少約5小時。通常，低壓凍乾的製劑的含水量小於約5%，較佳小於約3%。壓力可與在一次乾燥步驟中應用的壓力相同，較佳的，二次乾燥的壓力低於一次乾燥。冷凍乾燥條件可以隨製劑和小瓶大小而變化。

在本揭露的一個可選實施例中，將5mL的組成物原液進行凍乾，凍乾程序如下所示：預凍溫度依次為5℃和-45℃，一次乾燥的溫度為-20℃，真空度為10Pa，二次乾燥的溫度為25℃，真空度依次為10Pa和1Pa。

在一些實施方案中，凍乾製劑於2-8℃穩定至少16天，至少1個月，至少3個月，至少6個月，至少12個月，至少18個月或至少24個月。在一些實施方案中，該凍乾製劑於40℃穩定至少7天，至少14天，至少28天或至少30天。

本揭露還提供一種包含抗體藥物偶聯物的凍乾製劑，該凍乾製劑藉由將如上所述的抗體藥物偶聯物的醫藥組成物經冷凍乾燥獲得。

本揭露還提供一種含抗體藥物偶聯物的複溶溶液，其特徵在於該複溶溶液是藉由將如上所述的凍乾製劑經複溶製備獲得。

在可選的實施方案中，該複溶溶液包含：

(a)約10mg/mL至約70mg/mL的該抗體藥物偶聯物，(b)約0.1mg/mL至約0.8mg/mL的聚山梨酯，(c)約25mg/mL至約80mg/mL的糖，(d)約5mg/mL-10mg/mL甘胺酸和(e)約15mM至約50mM的琥珀酸鹽緩衝劑；該複溶溶液的pH為約5.0-6.0；

較佳地，該複溶溶液包含如下組分：

(a)約20mg/mL至約70mg/mL的該抗體藥物偶聯物，(b)約0.2mg/mL至約0.8mg/mL的聚山梨酯，(c)約25mg/mL至約80mg/mL的糖，(d)約7mg/mL至約8mg/mL甘胺酸和(e)約10mM至約40mM的琥珀酸鹽緩衝劑；該組成物的pH為約5.0-6.0；

更佳地，該複溶溶液包含如下組分：

(a)約20mg/mL至約50mg/mL的該抗體藥物偶聯物，(b)約0.2mg/mL至約0.8mg/mL的聚山梨酯80，(c)約40mg/mL至約60mg/mL的蔗糖，(d)約7mg/mL至約8mg/mL甘胺酸和(e)約20mM至約40mM的琥珀酸-琥珀酸鈉鹽，該複溶溶液的pH為約5.0-6.0；

進一步佳地，該複溶溶液包含如下組分：

(a)約20mg/mL至約30mg/mL的該抗體藥物偶聯物，(b)約0.2mg/mL的聚山梨酯80，(c)約40mg/mL的蔗糖，(d)約7.6mg/mL甘胺酸和(e)約30mM琥珀酸-琥珀酸鈉鹽，該組成物的pH為約5.5-5.6；或

(a)約30mg/mL至約50mg/mL的該抗體藥物偶聯物，(b)約0.2mg/mL的聚山梨酯80，(c)約40mg/mL的蔗糖，(d)約7.6mg/mL甘胺酸和(e)約30mM琥珀酸-琥珀酸鈉鹽，該組成物的pH為約5.5-5.6。

更進一步佳地，該複溶溶液包含如下組分：

(a)約20mg/mL的該抗體藥物偶聯物，(b)約0.2mg/mL的聚山梨酯80，(c)約40mg/mL的蔗糖，(d)約7.6mg/mL甘胺酸和(e)約30mM琥珀酸-琥珀酸鈉鹽，該組成物的pH為約5.5-5.6；

(a)約30mg/mL的該抗體藥物偶聯物，(b)約0.2mg/mL的聚山梨酯80，(c)約40mg/mL的蔗糖，(d)約7.6mg/mL甘胺酸和(e)約30mM琥珀酸-琥珀酸鈉鹽，該組成物的pH為約5.5-5.6；

本揭露還提供製備上述複溶溶液的方法，其中包括將前述凍乾製劑經複溶的步驟，其複溶所用溶液選自但不限於注射用水、生理鹽水或葡萄糖溶液。

本揭露還提供一種製品，其包括容器，該容器中裝有如上所述的醫藥組成物、凍乾製劑或複溶溶液。在一些實施方案中，該容器為中性硼矽玻璃管製注射劑瓶。

本揭露還提供前述的醫藥組成物或凍乾製劑或複溶溶液或製品在製備治療或預防腫瘤的藥物中的應用。

本揭露還提供治療疾病的方法，包括提供前述的醫藥組成物或凍乾製劑或複溶溶液或製品。

本揭露還提供作為藥物的前述的醫藥組成物，或凍乾製劑，或複溶溶液，或製品，較佳的，該藥物用於治療或預防腫瘤疾病。

在可選的實施方案中，該疾病或腫瘤為與HER2、HER3、B7H3或EGFR表達相關的癌症。

在可選的實施方案中，該癌症選自乳腺癌、卵巢癌、宮頸癌、子宮癌、前列腺癌、腎癌、尿道癌、膀胱癌、肝癌、胃癌、子宮內膜癌、唾液腺癌、食道癌、黑色素瘤、神經膠質瘤、神經母細胞瘤、肉瘤、肺癌、結腸癌、直腸癌、結直腸癌、白血病、骨癌、皮膚癌、甲狀腺癌、胰腺癌和淋巴瘤。

如所屬技術領域具有通常知識者所熟知的，本揭露中該各個實施方案的一項、一些或所有特性可以進一步組合以形成本揭露的其它實施方案。本揭露的以上實施方案和藉由組合得到的其他實施方案藉由下面的詳述進一步說明。

對ADC的製劑開發而言，即使在低濃度條件下，偶聯過程打開的鏈間二硫鍵也存在被氧化的情況，偶聯的強疏水性毒素也一定程度上影響了抗體的穩定性。若提高濃度，勢必會加劇這一影響，導致ADC更容易聚集/降解，無法穩定存在於低濃度製劑中。我們藉由合理的處方設計和篩選，篩選出合適的高濃度處方，保持ADC的穩定性。並且本發明的高濃度ADC製劑在臨床上可能具有更大的安全治療窗口，同時極大縮短生產時間，減少耗材成本(西林瓶、膠塞、鋁蓋等)，提高醫護人員臨床給藥的便利性。

[發明詳述]

本揭露提供一種更利於生產和給藥，性能穩定的醫藥組成物。其中，不期望的不穩定性可包括下列任何一項或多項：聚集、脫醯胺化(例如Asn脫醯胺化)、氧化(例如Met氧化)、異構化(例如Asp異構化)、剪裁(clipping)/水解/片段化(例如鉸鏈區片段化)、琥珀醯亞胺形成、不成對的半胱胺酸、毒素的解離等。具體地，本揭露所述的醫藥組成物包含抗體藥物偶聯物和緩衝劑。

[術語]

為了更容易理解本揭露，以下具體定義了某些技術和科學術語。除非在本文中另有明確定義，本文使用的所有其它技術和科學術語都具有本揭露所屬技術領域具有通常知識者通常理解的含義。

本揭露將申請WO2020063673中的全部內容引入本申請。

“抗體藥物偶聯物(antibody drug conjugate，ADC)是把抗體藉由連接單元與具有生物活性的細胞毒素或具有細胞殺傷活性的小分子藥物相連。

“載藥量”也稱藥物抗體比例(Drug-to-Antibody Ratio，DAR)，即ADC中每個抗體所偶聯的藥物的平均數量。其可在例如每個抗體偶聯約1至約10個藥物的範圍內，並且在某些實施例中，在每個抗體偶聯約1至約8個藥物的範圍內，較佳選自2-8、2-7、2-6、2-5、2-4、3-4、3-5、5-6、5-7、5-8和6-8的範圍。示例性的，載藥量可以為1、2、3、4、5、6、7、8、9、10的均值。本揭露的ADC通式包括與前述一定範圍內的藥物偶聯的抗體的集合。在本揭露的實施方式中，載藥量可表示為n。可用常規方法如UV/可見光光譜法，質譜，ELISA試驗和HPLC測定載藥量。

術語“接頭單元”或“連接片段”或“連接單元”是指一端與抗體或其抗原結合片段連接而另一端與藥物相連的化學結構片段或鍵，也可以連接其他接頭後再與藥物相連。

接頭，包括延伸物、間隔物和胺基酸單元，可以藉由本領域已知方法合成，諸如US2005-0238649A1中所記載的。接頭可以是便於在細胞中釋放藥物的“可切割接頭”。例如，可使用酸不穩定接頭(例如腙)、蛋白酶敏感(例如肽酶敏感)接頭、光不穩定接頭、二甲基接頭、或含二硫化物接頭(Chari等，Cancer Research 52：127-131(1992)；美國專利No.5,208,020)。

可以用以下非限制性方法控制細胞毒性藥物的載量，包括：

(1)控制連接試劑和單抗的莫耳比，

(2)控制反應時間和溫度，

(3)選擇不同的反應試劑。

本揭露所用胺基酸三字母代碼和單字母代碼如J.biol.chem,243,p3558(1968)中所述。

本揭露所述的“抗體”以最廣義使用，並且涵蓋各種抗體結構，包括但不限於全長抗體和抗體片段(或抗原結合片段，或抗原結合部分)，只要它們展現出期望的抗原結合活性。通常，天然的完整抗體由兩條相同的重鏈和兩條相同的輕鏈藉由鏈間二硫鍵連接而成的四肽鏈結構。

本揭露工程化的抗體或抗原結合片段可用常規方法製備和純化。比如，編碼重鏈和輕鏈的cDNA序列，可以選殖並重組至GS表達載體。重組的免疫球蛋白表達載體可以穩定地轉染CHO細胞。作為一種更推薦的現有技術，哺乳動物類表達系統會導致抗體的糖基化，特別是在Fc區的高度保守N端位點。陽性的株在生物反應器的無血清培養基中擴大培養以生產抗體。分泌了抗體的培養液可以用常規技術純化。比如，用含調整過的緩衝液的A或G Sepharose FF管柱進行純化。洗去非特異性結合的組分。再用pH梯度法沖提結合的抗體，用SDS-PAGE檢測抗體片段，收集。抗體可用常規方法進行過濾濃縮。可溶的混合物和多聚體，也可以用常規方法去除，比如分子篩、離子交換。得到的產物需立即冷凍，如-70℃，或者凍乾。

“緩衝劑”指藉由其酸-鹼共軛組分的作用而耐受pH變化的緩衝劑。將pH控制在適當範圍中的緩衝劑的例子包括醋酸鹽、琥珀酸鹽、葡萄糖酸鹽、組胺酸鹽、草酸鹽、乳酸鹽、磷酸鹽、枸櫞酸鹽、酒石酸鹽、延胡索酸鹽、甘胺醯甘胺酸和其它有機酸緩衝劑。

“組胺酸鹽緩衝劑”是包含組胺酸根離子的緩衝劑。組胺酸鹽緩衝劑的實例包括組胺酸-鹽酸鹽，組胺酸-醋酸鹽，組胺酸-磷酸鹽，組胺酸-硫酸鹽等緩衝劑，較佳組胺酸-醋酸鹽緩衝劑，組胺酸-醋酸鹽緩衝劑是組胺酸與醋酸配製而成，組胺酸鹽酸鹽緩衝劑是組胺酸與鹽酸配製而成。

“枸櫞酸鹽緩衝劑”是包括枸櫞酸根離子的緩衝劑。枸櫞酸鹽緩衝劑的實例包括枸櫞酸-枸櫞酸鈉、枸櫞酸-枸櫞酸鉀、枸櫞酸-枸櫞酸鈣、枸櫞酸-枸櫞酸鎂等。較佳的枸櫞酸鹽緩衝劑是枸櫞酸-枸櫞酸鈉。

“琥珀酸鹽緩衝劑”是包括琥珀酸根離子的緩衝劑。琥珀酸鹽緩衝劑的實例包括琥珀酸-琥珀酸鈉鹽、琥珀酸-琥珀酸鉀、琥珀酸-琥珀酸鈣鹽等。較佳的琥珀酸鹽緩衝劑是琥珀酸-琥珀酸鈉鹽。示例性的，該琥珀酸-琥珀酸鈉可由琥鉑酸與氫氧化鈉配製而成，或由琥鉑酸與琥珀酸鈉鹽配製而成。

“磷酸鹽緩衝劑”是包括磷酸根離子的緩衝劑。磷酸鹽緩衝劑的實例包括磷酸氫二鈉-磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉-磷酸二氫鉀、磷酸氫二鈉-枸櫞酸等。較佳的磷酸鹽緩衝劑是磷酸氫二鈉-磷酸二氫鈉。

“醋酸鹽緩衝劑”是包括醋酸根離子的緩衝劑。醋酸鹽緩衝劑的實例包括醋酸-醋酸鈉、醋酸組胺酸鹽、醋酸-醋酸鉀、醋酸醋酸鈣、醋酸-醋酸鎂等。較佳的醋酸鹽緩衝劑是醋酸-醋酸鈉。

“醫藥組成物”表示含有一種或多種本文所述抗體藥物偶聯物或其生理學上/可藥用的鹽或前體藥物與其他化學組分的混合物，該其他組分例如生理學/可藥用的載體和賦形劑。醫藥組成物的目的是保持抗體活性成分的穩定性，促進對生物體的給藥，利於活性成分的吸收進而發揮生物活性。

本揭露中，“醫藥組成物”和“製劑”並不互相排斥。

本揭露中所述醫藥組成物的溶液形式，若無特殊說明，其中的溶劑均為水。

“凍乾製劑”表示液體或溶液形式的醫藥組成物或液體或溶液製劑經真空冷凍乾燥步驟之後獲得的製劑或醫藥組成物。

本文所用術語“約”、“大約”是指數值在由所屬技術領域具有通常知識者所測定的具體值的可接受誤差範圍內，該數值部分取決於怎樣測量或測定(即測量體系的限度)。例如，在本領域每一次實行中“約”可意味著在1內或超過1的標準差。或者，“約”或“基本上包含”可意味著至多20%的範圍。此外，特別對於生物學系統或過程而言，該術語可意味著至多一個數量級或數值的至多5倍。除非另外說明，否則當具體值在本申請和申請專利範圍中出現時，“約”或“基本上包含”的含義應該假定為在該具體值的可接受誤差範圍內。

本揭露所述的醫藥組成物能夠達到一種穩定的效果：其中的抗體藥物偶聯物在貯藏後基本上保留其物理穩定性和/或化學穩定性和/或生物學活性的醫藥組成物，較佳地，醫藥組成物在貯藏後基本上保留其物理和化學穩定性以及其生物學活性。貯藏期一般基於醫藥組成物的預定保存期來選擇。目前有多種測量蛋白質穩定性的分析技術，可測量在選定溫度貯藏選定時間段後的穩定性。

穩定的製劑是在下述情況下沒有觀察到顯著變化的製劑：在冷藏溫度(2-8℃)保存至少3個月、較佳6個月、更佳1年，且甚至更佳地多達2年。另外，穩定的液體製劑包括這樣的液體製劑：其在包括25℃的溫度保存包括1個月、3個月、6個月在內的時段後表現出期望的特徵。穩定性的典型的例子：藉由SEC-HPLC測得，通常不超過約10%、較佳不超過約5%的抗體單體發生聚集或降解。藉由視覺分析，製劑是淡黃色近無色澄明液體或者無色，或澄清至稍微乳白色。該製劑的濃度、pH和重量克分子滲透壓濃度具有不超過±10%變化。通常觀察到不超過約10%、較佳不超過約5%的減少。通常形成不超過約10%、較佳不超過約5%的聚集。

如果在目檢顏色和/或澄清度後，或者藉由UV光散射、尺寸排阻色譜法(SEC)和動態光散射(DLS)測得，抗體藥物偶聯物沒有顯示出顯著的聚集增加、沉澱和/或變性，那麼該抗體藥物偶聯物在藥物製劑中“保留它的物理穩定性”。蛋白構象的變化可以藉由螢光光譜法(其確定蛋白三級結構)和藉由FTIR光譜法(其確定蛋白二級結構)來評價。

如果抗體藥物偶聯物沒有顯示出顯著的化學改變，那麼該抗體在藥物製劑中“保留它的化學穩定性”。藉由檢測和定量化學上改變的形式的蛋白，可以評估化學穩定性。經常改變蛋白化學結構的降解過程包括水解或截短(藉由諸如尺寸排阻色譜法和CE-SDS等方法來評價)、氧化(藉由諸如與質譜法或MALDI/TOF/MS結合的肽譜法等方法來評價)、脫醯胺作用(藉由諸如離子交換色譜法、毛細管等電聚焦、肽譜法、異天冬胺酸測量等方法來評價)和異構化(藉由測量異天冬胺酸含量、肽譜法等來評價)。

如果抗體藥物偶聯物在給定時間的生物活性是在製備藥物製劑時表現出的生物活性的預定範圍內，那麼該抗體藥物偶聯物在藥物製劑中“保留它的生物活性”。

“視需要”或“視需要地”意味著隨後所描述地事件或環境可以但不必發生，該說明包括該事件或環境發生或不發生的場合。例如，“視需要包含1-3個抗體重鏈可變區”意味著特定序列的抗體重鏈可變區可以但不必須存在。

“取代的”指基團中的一個或多個氫原子，較佳為最多5個，更佳為1~3個氫原子彼此獨立地被相應數目的取代基取代。不言而喻，取代基僅處在它們的可能的化學位置，所屬技術領域具有通常知識者能夠在不付出過多努力的情況下確定(藉由實驗或理論)可能或不可能的取代。例如，具有游離氫的胺基或羥基與具有不飽和(如烯屬)鍵的碳原子結合時可能是不穩定的。

常規的醫藥組成物的製備見中國藥典。

術語“載體”用於本揭露的藥物，是指能改變藥物進入人體的方式和在體內的分佈、控制藥物的釋放速度並將藥物輸送到靶向器官的體系。藥物載體釋放和靶向系統能夠減少藥物降解及損失，降低副作用，提高生物利用度。如可作為載體的高分子表面活性劑由於其獨特的兩親性結構，可以進行自組裝，形成各種形式的聚集體，較佳的實例如膠束、微乳液、凝膠、液晶、囊泡等。這些聚集體具有包載藥物分子的能力，同時又對膜有良好的滲透性，可以作為優良的藥物載體。

“給予”和“處理”當應用於動物、人、實驗受試者、細胞、組織、器官或生物流體時，是指外源性藥物、治療劑、診斷劑或組成物與動物、人、受試者、細胞、組織、器官或生物流體的接觸。“給予”和“處理”可以指例如治療、藥物代謝動力學、診斷、研究和實驗方法。細胞的處理包括試劑與細胞的接觸，以及試劑與流體的接觸，其中該流體與細胞接觸。“給予”和“處理”還意指藉由試劑、診斷、結合組成物或藉由另一種細胞體外和離體處理例如細胞。“處理”當應用於人、獸醫學或研究受試者時，是指治療處理、預防或預防性措施，研究和診斷應用。

“治療”意指給予患者內用或外用治療劑，例如包含本揭露的任一種結合化合物的組成物，該患者具有一種或多種疾病症狀，而已知該治療劑對這些症狀具有治療作用。通常，在受治療患者或群體中以有效緩解一種或多種疾病症狀的量給予治療劑，以誘導這類症狀退化或抑制這類症狀發展到任何臨床可測量的程度。有效緩解任何具體疾病症狀的治療劑的量(也稱作“治療有效量”可根據多種因素變化，例如患者的疾病狀態、年齡和體重，以及藥物在患者產生需要療效的能力。藉由醫生或其它專業衛生保健人士通常用於評價該症狀的嚴重性或進展狀況的任何臨床檢測方法，可評價疾病症狀是否已被減輕。儘管本揭露的實施方案(例如治療方法或製品)在緩解每個目標疾病症狀方面可能無效，但是根據本領域已知的任何統計學檢驗方法如Student t檢驗、卡方檢驗、依據Mann和Whitney的U檢驗、Kruskal-Wallis檢驗(H檢驗)、Jonckheere-Terpstra檢驗和Wilcoxon檢驗確定，其在統計學顯著數目的患者中應當減輕目標疾病症狀。

“有效量”包含足以改善或預防醫學疾病的症狀或病症的量。有效量還意指足以允許或促進診斷的量。用於特定患者或獸醫學受試者的有效量可依據以下因素而變化：例如，待治療的病症、患者的總體健康情況、給藥的方法途徑和劑量以及副作用嚴重性。有效量可以是避免顯著副作用或毒性作用的最大劑量或給藥方案。

“置換”是指溶解抗體蛋白的溶劑體系的置換，例如，使用穩定製劑的緩衝體系經物理操作方式將含抗體蛋白的高鹽或高滲溶劑體系置換，從而使抗體蛋白存在於穩定製劑中。所稱物理操作方式包括但不限於超濾、透析或離心後複溶。

以下結合實施例進一步描述本揭露，但這些實施例並非是對本揭露範圍的限制。本揭露實施例中未註明具體條件的實驗方法，通常按照常規條件，如參照冷泉港實驗室出版的《抗體技術實驗手冊》，《分子選殖手冊》；或按照原料或商品製造廠商所建議的條件。未註明具體來源的試劑，為市場購買的常規試劑。

[生物學評價]

一、抗B7H3-ADC製劑ADC-1的製備

本揭露的抗B7H3-ADC結構如下：

先用pH 5.0醋酸-醋酸鈉緩衝液(0.98L，30mM)稀釋裸抗溶液h1702DS(6.43L，1.39mmol)，然後依次加入EDTA溶液(0.57L，29mmol)，pH 8.2組胺酸-醋酸-Tris溶液(1.47L，20mM)和Tris溶液(0.2L，1M)，充分混勻後，加入三(2-羧乙基)膦(TCEP)溶液(1.78L，3.06mmol)，混勻後於12℃下反應2小時，反應結束後加入醋酸調節其pH至6.0。

先將0.57L DMSO溶劑加入上述反應液，然後將化合物5-A溶液(參照WO2020063673A1說明書實施例5的5-A進行製備，該化合物5-A溶於DMSO，6.58g，6.12mmol)滴加至反應液中，充分混勻後，於12℃下反應1小時。反應結束後，加入醋酸調節其反應液至pH 5.0。反應液經陽離子層析(管柱填料Capto SimpAct，沖提相50mM醋酸-醋酸鈉+240mM NaCl，pH5.5)純化後，再經超濾換液，即得本揭露B7H3-ADC抗體藥物偶聯物的示例性產物ADC-1。

採用RP-HPLC檢測DAR值，n為4.1。

二、製劑

製劑製備與檢測過程中使用的設備及結果計算方法如下：

1)SEC分子排阻色譜法：

根據凝膠孔隙的孔徑大小與高分子樣品分子的線團尺寸間的相對關係而對溶質進行分離的分析的方法。

SEC%(SEC單體含量百分比)=A單體/A總*100%(A單體為樣品中主峰單體的峰面積，A總為所有峰面積之和。)

SEC測定用儀器：安捷倫1260；柱子：waters，XBrige BEH200Å SEC(300×7.8mm 3.5μm)

2)CE毛細管凝膠電泳：

將凝膠移到毛細管中作為支持介質進行的一種電泳，並在一定的電壓下根據樣品分子量的大小進行分離的方法。

還原CE純度百分比=A主峰/A總*100%(A主峰為樣品中輕鏈主峰+重鏈主峰的峰面積，A總為所有峰面積之和。

CE測定用儀器：Beckman型號plus800

3)濁度測定：

光線透過水層時受到阻礙的程度，表示水層對於光線散射和吸收的能力，不僅與懸浮物的含量有關，而且還與顆粒成分、大小、形狀及其表面的反射性能有關。藉由對比同一蛋白樣品相同濃度且同一波長(近紫外和可見光波長區域)吸收值，吸收值越大說明濁度越大，樣品中蛋白分子聚集傾向越明顯。測定儀器為多功能酶標儀(Molecular Devices M5)，相同體積樣品加入96孔板讀取吸光度值。

4)滲透壓測定：

冰點法測定滲透壓，以冰點下降值與溶液的莫耳濃度成正比例關係為基礎，採用高靈敏度感溫元件，測定溶液結冰點，藉由電量轉化為滲透壓。儀器廠家羅澤Loser，型號OM815.

5)蛋白濃度測定：

本揭露中的抗體藥物偶聯物濃度以蛋白的濃度計，即以抗體藥物偶聯物中抗體部分的濃度計。

因為抗體藥物偶聯物中的毒素在蛋白特徵吸收波長280nm下有吸收，同時該毒素在370nm下也有吸收，故用以下公式對上述蛋白濃度進行計算：

A_280nm=(C_drug×E_drug-280+C_mAb×E_mAb-280)×l

A_370nm=C_drug×E_drug-370×l

取

即：

式中，A_280nm：供試品溶液單份樣品在光程為1cm時在280nm波長處的吸光度平均值；

A_370nm：供試品溶液單份樣品在光程為1cm時在370nm波長處的吸光度平均值；

E_mAb-280：蛋白在280nm波長處的質量消光係數，為1.532g^-1cm^-1L；

E_drug-280：毒素在280nm波長處的質量消光係數，5.17g^-1cm^-1L；

E_drug-370：毒素在370nm波長處的質量消光係數，17.89g^-1cm^-1L；

R：毒素消光係數在370nm和280nm的比值，為3.46；

C_mAb：蛋白的濃度，mg/mL；

l：光程長度，cm(此處光程為1cm)。

若供試液經過稀釋，則蛋白濃度為：C(mg/mL)=C_mAb×N，N為稀釋倍數。

蛋白濃度測定儀器：紫外可見分光光度計，型號：Nano Drop One。

6)載藥量計算(反相高效液相色譜法，RP-HPLC)

1、試劑和儀器：

HPLC系統：Waters H-Class超高效液相色譜儀UPLC系統

檢測器：TUV檢測器(測量波長：280nm)

色譜管柱：BioResolve RP mAb Polyphenyl(2.7μm 4.6*150mm)

2、檢測條件：

管柱溫度：80℃

流速：1.0mL/分鐘

流動相A：0.1%甲酸+0.025%三氟乙酸(TFA)水溶液。

流動相B：0.1% FA+0.025%三氟乙酸(TFA)乙腈溶液。

梯度程序：27.0%B-45.0%B(0.00分鐘-12.00分鐘)，45.0%B-80.0%B(12.00分鐘-13.00分鐘)，80.0%B-80.0%B(13.00分鐘-15.00分鐘)，27.0%B-27.0%B(15.04分鐘-20.00分鐘)，

注入樣品量：5.0μL

3、數據分析

與不結合藥物的抗體輕鏈(L₀)和抗體重鏈(H₀)相比，結合藥物的輕鏈(結合1個藥物的輕鏈：L₁)和結合藥物的重鏈(結合1個藥物的重鏈：H₁，結合2個藥物的重鏈：H₂，結合3個藥物的重鏈：H₃，結合4個藥物的重鏈：H₄)的疏水性與其結合藥物的數目成正比例的增加，並且保留時間延長。因此，可以以L₀、L₁、 H₀、H₁、H₂、H₃和H₄的順序進行分別沖提。作為比較L₀和H₀之間的保留時間的結果，將檢測峰分配給L₀、L₁、H₀、H₁、H₂、H₃和H₄中的任何一個。

由於藥物接頭吸收UV，根據以下表達式，使用輕鏈、重鏈和藥物接頭的莫耳吸光係數，根據結合的藥物的數目，對所得的峰面積進行校正。計算公式如下：

輕鏈(εLC-280)/(εLC-280+連接藥物數*εdrug-280)

重鏈(εHC-280)/(εHC-280+連接藥物數*εdrug-280)

備註：εLC-280：輕鏈在280nm的莫耳消光係數；

εHC-28：重鏈在280nm的莫耳消光係數；

εdrug-280：毒素在280nm的莫耳消光係數。

表1 反相色譜載藥量計算表

HC校正峰面積總和=H₀校正峰面積+H₁校正峰面積+H₂校正峰面積+H₃校正峰面積+H₄校正峰面積，計算出該ADC藥的載藥量如下：

實施例1：抗B7H3-ADC抗體製劑緩衝體系和pH篩選

使用下列緩衝液，配製含60mg/mL蔗糖和0.2mg/ml聚山梨酯80(簡稱：PS80)，ADC-1的蛋白濃度為20mg/mL的抗B7H3-ADC製劑，其中緩衝液如下：

1)10mM枸櫞酸-枸櫞酸鈉鹽(簡稱：CA)，pH5.0；

2)10mM琥珀酸-琥珀酸鈉鹽(簡稱：SA)，pH5.0；

3)10mM SA，pH 5.5；

4)10mM組胺酸-鹽酸鹽(簡稱：His)，pH5.5；

5)10mM His，pH6.0；

6)10mM His，pH6.5；

7)10mM組胺酸-醋酸鹽(簡稱：His-AA)，pH5.0；

8)10mM His-AA，pH5.5；

9)10mM磷酸氫二鈉-磷酸二氫鈉鹽(簡稱：PB)，pH6.5。

製備完成的製劑過濾，灌裝，加塞，軋蓋。考察樣品在強制降解條件下(40℃ M1，即40℃高溫條件下放置1個月；300rpm振搖D10，即振搖10天)的穩定性，並以外觀、SEC和還原CE-SDS為評價指標，考察製劑穩定性。實驗結果見表2。

振搖D10強制降解條件下，SA和His-AA緩衝體系的蛋白製劑外觀優於CA、His和PB體系，SA、His-AA、CA、His緩衝體系純度項之間沒有明顯差異且優於PB體系；40℃ M1強制降解條件下，SA和His-AA緩衝體系的蛋白製劑外觀優於CA和PB體系。綜合考慮，較佳SA和His-AA作為B7H3-ADC製劑緩衝體系進行後續處方篩選，較佳pH值為5.0-5.5，更佳5.5。

表2 pH和緩衝體系篩選實驗結果

實施例2：抗B7H3-ADC抗體製劑中表面活性劑篩選

使用10mM SA，pH5.0緩衝體系，配製含60mg/ml蔗糖，ADC-1的蛋白濃度為20mg/mL的不同種類和濃度的表面活性劑的抗B7H3-ADC製劑。具體如下：

1)0.2mg/mL聚山梨酯80(簡稱：PS80)；

2)0.4mg/mL PS80；

3)0.2mg/mL聚山梨酯20(簡稱：PS20)。

製備完成的製劑過濾，灌裝，加塞，軋蓋。將樣品置於振搖(25℃，300rpm，6天)、凍融(-35℃-2~8℃)5個循環和高溫(40℃ M1)條件下，以外觀、SEC、還原R-CE為評價指標，考察製劑穩定性。實驗結果見表3。

實驗結果顯示，在放置條件下，0.2mg/mL PS80、0.4mg/mL PS80和0.2mg/mL PS20組間外觀和純度項無顯著差異。

表3 製劑中表面活性劑篩選實驗結果

實施例3：抗B7H3-ADC抗體製劑糖的篩選

使用10mM SA，pH5.0緩衝體系，配製含0.2mg/mL聚山梨酯80，ADC-1的蛋白濃度為20mg/mL的抗B7H3-ADC製劑。不同糖如下：

1)60mg/mL蔗糖；

2)60mg/mL海藻糖；

3)50mg/mL甘露醇。

製備完成的製劑過濾，灌裝，加塞，軋蓋。考察樣品在強制降解條件下(振搖D6，即振搖6天；FT 5Cycle，即-35℃-2~8℃凍融5個循環)的穩定性，並以SEC為評價指標，考察製劑穩定性。實驗結果見表4。

實驗數據顯示，在振搖D6和FT5C強制降解條件下，蔗糖和海藻糖組的SEC純度項優於甘露醇組。後續在10mM SA pH5.0的緩衝液中製備包含20mg/mL抗體，60mg/mL蔗糖，和0.2mg/mL PS80的抗B7H3-ADC抗體製劑，將製劑樣品進行凍乾，凍乾後外觀底部塌陷，後面繼續進行優化，將蔗糖由60mg/mL降為40mg/mL。

表4 輔料篩選實驗結果

實施例4：抗B7H3-ADC抗體製劑中滲透壓調節劑篩選

使用10mM SA，pH5.5緩衝體系，配製含40mg/mL蔗糖，0.2mg/mL PS80，ADC-1的蛋白濃度為20mg/mL的抗B7H3-ADC製劑。藉由提高離子強度和滲透壓調節劑篩選，使製劑滲透壓控制在等滲範圍內(270-330mosm)。

使用30mM SA，pH5.5緩衝體系，配製含40mg/mL蔗糖，0.2mg/mL PS80，ADC-1的蛋白濃度為20mg/mL的不同種類等滲滲透壓調節劑的抗B7H3-ADC製劑。具體如下：

1)58mM精胺酸鹽酸鹽；

2)7.6mg/mL甘胺酸；

製備完成的製劑過濾，灌裝，半加塞，凍乾。凍乾程序如下表5：

表5 凍乾程序

考察凍乾後樣品在強制降解條件下(40℃ D23，即40℃高溫條件下放置23天)的穩定性，並以外觀、SEC和還原R-CE為評價指標，考察製劑穩定性。實驗結果見表6。

40℃ D23強制降解條件下，各組間純度項無顯著性差異，甘胺酸組的外觀明顯優於精胺酸鹽酸鹽組。當樣品中含40mg/mL蔗糖和7.6mg/mL甘胺酸的製劑滲透壓為300mOsm左右，因此較佳甘胺酸濃度為7.6mg/mL。使用滲透壓調節劑甘胺酸，當其濃度在5.3mg/mL-9.8mg/mL時，製劑滲透壓控制在等滲範圍內。

表6 製劑中滲透壓調節劑篩選實驗結果

實施例5：抗B7H3-ADC抗體製劑中蛋白濃度的篩選

使用30mM SA，pH5.5緩衝體系，配製含40mg/mL蔗糖，0.2mg/mL PS80，7.6mg/mL甘胺酸的不同蛋白濃度的抗B7H3-ADC製劑。具體如下：

1)20mg/mL ADC-1

2)50mg/mL ADC-1

3)60mg/mL ADC-1

4)70mg/mL ADC-1

製備完成的製劑過濾，灌裝，加塞，軋蓋。將樣品置於振搖(25℃，300rpm，6天)、凍融(-35℃-2~8℃)5個循環和高溫(40℃ M1)條件下，以外觀、SEC、DAR值為評價指標，考察製劑穩定性。實驗結果見表7。

實驗結果顯示，在放置條件下，20mg/mL ADC-1、50mg/mL ADC-1、60mg/mL ADC-1和70mg/mL ADC-1組間外觀、純度項和毒素載荷無顯著差異。

表7 製劑中表面活性劑篩選實驗結果

實施例6：抗B7H3-ADC抗體製劑穩定性實驗

製備含ADC-1的蛋白濃度20mg/mL，30mM琥珀酸-琥珀酸鈉鹽(SA)pH5.5，40mg/mL蔗糖，7.6mg/mL甘胺酸和0.2mg/mL PS80的抗B7H3-ADC製劑。

將製備好的製劑過濾，灌裝，加塞，軋蓋。考察樣品在強制降解條件(-35℃-2~8℃凍融5個循環，或振搖8天)及長期放置(2~8℃16天)條件下，以外觀、SEC和還原R-CE為評價指標，考察製劑穩定性。實驗結果見表8。

實驗結果顯示，從外觀看在各強制降解條件下保持澄明，純度項無明顯差異，具有較好的穩定性。

表8 製劑穩定性實驗結果

實施例7：B7H3-ADC製劑處方優化實驗

優化實驗一：

包含7.6mg/mL甘胺酸，40mg/ml蔗糖的抗B7H3-ADC製劑，以30mM琥珀酸-琥珀酸鈉鹽(SA)的pH值、ADC-1的蛋白濃度和PS80濃度為變量，進行DOE實驗設計。DOE、實驗因子及水平設為：pH值5~6、ADC-1的蛋白濃度10~30mg/mL、PS80濃度0.1~0.3mg/mL，設計一系列處方(見表9)。凍乾樣品藉由40℃高溫條件下，放置一個月的強制降解實驗，以外觀、SEC為評價指標，結果見表9。

結果顯示，40℃高溫條件下放置一個月，各處方外觀均澄明，純度項SEC組間無明顯差異。因此B7H3-ADC樣品在pH值5~6、ADC-1的蛋白濃度10~30mg/mL、PS80濃度0.1~0.3mg/mL，範圍內均具有良好的穩定性。

表9 DOE處方篩選實驗處方設計

表10 DOE篩選實驗結果

優化實驗二：

在30mM SA，pH5.5的琥珀酸-琥珀酸鈉鹽緩衝液，ADC-1的蛋白濃度為50mg/mL，40mg/mL蔗糖，7.6mg/mL甘胺酸和0.2mg/mL PS80的抗B7H3-ADC製劑基礎上，以緩衝液濃度、pH值、蔗糖濃度、甘胺酸濃度、PS80濃度、ADC-1的蛋白濃度為變量，設計一系列處方(見表11)。凍乾樣品藉由40℃高溫條件下，放置一個月的強制降解實驗，以外觀、SEC純度和DAR值為評價指標，結果見表12。

結果顯示，40℃高溫條件下放置一個月，各處方外觀均澄明，純度項SEC以及DAR毒素載荷組間無明顯差異。因此B7H3-ADC樣品在SA濃度20~30mM、pH值5.0~5.5、ADC-1的蛋白濃度20~70mg/mL、蔗糖濃度40~80mg/mL、PS80濃度0.2~0.8mg/mL範圍內均具有良好的穩定性。

表11 DOE處方篩選實驗處方設計

表12 DOE篩選實驗結果

實施例8：抗B7H3-ADC抗體製劑的凍乾

在30mM SA，pH5.5的琥珀酸-琥珀酸鈉鹽緩衝液中製備包含ADC-1的蛋白濃度為20mg/mL，40mg/mL蔗糖，7.6mg/mL甘胺酸和0.2mg/mL PS80的抗B7H3-ADC抗體製劑。將製劑樣品進行凍乾，凍乾程序為預凍、一次乾燥和二次乾燥，凍乾程序見表13。凍乾程序結束後，真空加塞。將凍乾前後樣品，以外觀、SEC、R-CE為評價指標，結果見表14結果表明，複溶溶液可保持液體製劑良好的性能。

表13 凍乾程序

表14 凍乾前後實驗結果

Claims

一種醫藥組成物，包含抗體藥物偶聯物和緩衝劑，其特徵在於，該抗體藥物偶聯物具有如下所示的結構：

其中，

h1702DS為抗B7H3抗體，包含如SEQ ID NO：1所示的重鏈和如SEQ ID NO：2所示的輕鏈；

n為1至10，較佳為1至8，更佳為3至5，更佳為約4；

該醫藥組成物的緩衝劑為琥珀酸鹽緩衝劑、組胺酸鹽緩衝劑，較佳為琥珀酸-琥珀酸鈉鹽、組胺酸-醋酸鹽。
如請求項1所述的醫藥組成物，其中，該緩衝劑的濃度為約10mM至約50mM，較佳為約20mM至約40mM，更佳為約30mM。
如請求項1或2所述的醫藥組成物，其中，該醫藥組成物的pH為約4.5至6.5，較佳pH為約5.0至6.0，更佳pH為約5.5至5.6。
如請求項1至3中任一項所述的醫藥組成物，其中，該醫藥組成物還包含表面活性劑，該表面活性劑較佳為聚山梨酯，更佳為聚山梨酯80或聚山梨酯20，最佳為聚山梨酯80。
如請求項4所述的醫藥組成物，其中，該表面活性劑濃度為約0.01mg/mL至約1.0mg/mL，較佳為約0.2mg/mL至約0.8mg/mL，更佳為約0.2mg/mL。
如請求項1至5中任一項所述的醫藥組成物，其中，該醫藥組成物還包含糖；較佳地，該糖選自蔗糖、甘露醇和海藻糖；更佳地，該糖為蔗糖或海藻糖。
如請求項6所述的醫藥組成物，其中，該糖濃度為約25mg/mL至約80mg/mL，較佳為約40mg/mL至約60mg/mL，更佳為約40mg/mL。
如請求項1至7中任一項所述的醫藥組成物，其中，該醫藥組成物還包含胺基酸或胺基酸鹽，該胺基酸或胺基酸鹽選自甘胺酸和精胺酸鹽酸鹽，較佳為甘胺酸。
如請求項8所述的醫藥組成物，其中，該胺基酸或胺基酸鹽濃度為約5mg/mL至約10mg/mL；較佳為約7mg/mL至約8mg/mL；更佳為約7.6mg/mL。
如請求項1至9中任一項所述的醫藥組成物，其中，該抗體藥物偶聯物濃度為以蛋白濃度計，約10mg/mL至約70mg/mL，較佳為約20mg/mL至約50mg/mL，更佳為約20mg/mL至約30mg/mL或約30mg/mL至約50mg/mL，進一步佳為約20mg/mL或約30mg/mL或約50mg/mL。
如請求項1至10中任一項所述的醫藥組成物，其中，包含如下組分：

(a)以蛋白濃度計，約20mg/mL至約70mg/mL的該抗體藥物偶聯物，(b)約0.2mg/mL至約0.8mg/mL的聚山梨酯，(c)約25mg/mL至約80mg/mL的糖， (d)約7mg/mL至約8mg/mL甘胺酸和(e)約10mM至約40mM的琥珀酸鹽緩衝劑；該組成物的pH為約5.0-6.0；

較佳地，該醫藥組成物包含如下組分：

(a)以蛋白濃度計，約20mg/mL至約50mg/mL的該抗體藥物偶聯物，(b)約0.2mg/mL至約0.8mg/mL的聚山梨酯80，(c)約40mg/mL至約80mg/mL的蔗糖，(d)約7.6mg/mL甘胺酸和(e)約30mM琥珀酸-琥珀酸鈉鹽，該組成物的pH為約5.5-5.6；

更佳的，該醫藥組成物包含如下組分：

(a)以蛋白濃度計，約20mg/mL至約30mg/mL的該抗體藥物偶聯物，(b)約0.2mg/mL的聚山梨酯80，(c)約40mg/mL的蔗糖，(d)約7.6mg/mL甘胺酸和(e)約30mM琥珀酸-琥珀酸鈉鹽，該組成物的pH為約5.5-5.6；

(a)以蛋白濃度計，約30mg/mL至約50mg/mL的該抗體藥物偶聯物，(b)約0.2mg/mL的聚山梨酯80，(c)約40mg/mL的蔗糖，(d)約7.6mg/mL甘胺酸和(e)約30mM琥珀酸-琥珀酸鈉鹽，該組成物的pH為約5.5-5.6。
一種含抗體藥物偶聯物的凍乾製劑，其特徵在於，該凍乾製劑複溶後可形成如請求項1至11中任一項所述的醫藥組成物。
一種製備含抗體藥物偶聯物的凍乾製劑的方法，其特徵在於，包括將如請求項1至11中任一項所述的醫藥組成物經冷凍乾燥的步驟。
一種含抗體藥物偶聯物的凍乾製劑，其特徵在於，該凍乾製劑藉由將如請求項1至11中任一項所述的醫藥組成物經冷凍乾燥獲得。
一種含抗體藥物偶聯物的複溶溶液，其特徵在於，該複溶溶液是藉由將如請求項12或14所述的凍乾製劑經複溶製備獲得，複溶溶液包含如下組分：

(a)以蛋白濃度計，約20mg/mL至約70mg/mL的該抗體藥物偶聯物，(b)約0.2mg/mL至約0.8mg/mL的聚山梨酯，(c)約25mg/mL至約80mg/mL的糖，(d)約7mg/mL至約8mg/mL甘胺酸和(e)約10mM至約40mM的琥珀酸鹽緩衝劑；該組成物的pH為約5.0-6.0；

較佳地，該複溶溶液包含如下組分：

(a)以蛋白濃度計，約20mg/mL至約50mg/mL的該抗體藥物偶聯物，(b)約0.2mg/mL至約0.8mg/mL的聚山梨酯80，(c)約40mg/mL至約80mg/mL的蔗糖，(d)約7.6mg/mL甘胺酸和(e)約30mM琥珀酸-琥珀酸鈉鹽，該組成物的pH為約5.5-5.6；

更佳地，該複溶溶液包含如下組分：

(a)以蛋白濃度計，約20mg/mL至約30mg/mL的該抗體藥物偶聯物，(b)約0.2mg/mL的聚山梨酯80，(c)約40mg/mL的蔗糖，(d)約7.6mg/mL甘胺酸和(e)約30mM琥珀酸-琥珀酸鈉鹽，該組成物的pH為約5.5-5.6；

(a)以蛋白濃度計，約30mg/mL至約50mg/mL的該抗體藥物偶聯物，(b)約0.2mg/mL的聚山梨酯80，(c)約40mg/mL的蔗糖，(d)約7.6mg/mL甘胺酸和(e)約30mM琥珀酸-琥珀酸鈉鹽，該組成物的pH為約5.5-5.6。
一種製品，其中，包括容器，該容器中裝有如如請求項1至11中任一項所述的醫藥組成物、如請求項12或14所述的凍乾製劑或如請求項15所述的複溶溶液。
一種如請求項1至11中任一項所述的醫藥組成物、如請求項12或14所述的凍乾製劑、如請求項15所述的複溶溶液或如請求項16所述製品在製備治療疾病的藥物中的用途；較佳地，該疾病為與B7H3表達相關的癌症；更佳地，該癌症選自乳腺癌、卵巢癌、宮頸癌、子宮癌、前列腺癌、腎癌、尿道癌、膀胱癌、肝癌、胃癌、子宮內膜癌、唾液腺癌、食道癌、黑色素瘤、神經膠質瘤、神經母細胞瘤、肉瘤、肺癌、結腸癌、直腸癌、結直腸癌、白血病、骨癌、皮膚癌、甲狀腺癌、胰腺癌和淋巴瘤。