CN115721732A - 抗体偶联药物的药物组合物、制剂及其制备方法、用途 - Google Patents

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CN115721732A CN202110994764.7A CN202110994764A CN115721732A CN 115721732 A CN115721732 A CN 115721732A CN 202110994764 A CN202110994764 A CN 202110994764A CN 115721732 A CN115721732 A CN 115721732A
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Abstract

本发明公开了抗体偶联药物的药物组合物、制剂及其制备方法、用途。本发明提供了一种药物组合物，其包括下述组分：5～25mg/mL的F0124‑ADC；7～90mg/mL的蛋白质保护剂；0.05～1.0mg/mL的表面活性剂；5～20mM的缓冲盐；水；所述药物组合物的pH值为5.0～5.5；其中，F0124‑ADC为抗体偶联物。该药物组合物极大改善了药物的生产、储存及使用稳定性，避免了小分子活性物的过早释放；通过长期稳定性实验验证了该配方能满足F0124‑ADC的临床需求；提高了临床使用的安全性。

Description

抗体偶联药物的药物组合物、制剂及其制备方法、用途
技术领域
本发明属于药物制剂领域，具体涉及一种含F0124-ADC抗体偶联药物的药物组合物、制剂及其制备方法、用途。
背景技术
癌症是严重威胁人类生存和社会发展的重大疾病，是中国乃至全世界最严重的公共卫生问题之一。根据2020年美国癌症统计报告(Cancer statistics，2020)显示，美国预计2020年将出现1,806,590新增癌症病例和606,520例癌症死亡病例[1]。根据2019年中国国家癌症中心发布的癌症报告显示，2015年全国新发恶性肿瘤病例约392.9万例，恶性肿瘤发病率为285.83/10万(男性305.47/10万，女性265.21/10万)。同年恶性肿瘤死亡病例约为233.8万，死亡率为170.05/10万(男性210.10/10万，女性128.00/10万)。中国常见的恶性肿瘤为肺癌、胃癌、结直肠癌、肝癌和女性乳腺癌等，前10位发病约占全部恶性肿瘤新发病例的76.70％。肺癌、肝癌、胃癌、食管癌和结直肠癌等是主要的肿瘤死因，前10位死亡病例约占全部恶性肿瘤死亡病例的83.00％。因此，世界卫生组织(World Health Organization，WHO)把攻克癌症列为一项首要任务。
乳腺癌是全球女性最常见的恶性肿瘤，其中三阴性乳腺癌(TNBC)占所有乳腺癌病理类型的10％～20％，多发于绝经前女性，侵袭性强，易转移，预后极差，确诊后的生存期通常不超过20个月，5年生存率不足15％。TNBC对激素疗法和靶向治疗都不敏感，一般按照预后较差的乳腺癌进行常规治疗，标准疗法是术后使用含有蒽环类或紫杉醇类的辅助化疗。因此，研究者们仍在尝试寻找新的机制来对抗耐药后的转移性三阴性乳腺癌。
尿路上皮癌(Urothelial Carcinoma，UC)是起源于尿路上皮的一种多源性的恶性肿瘤，包括肾盂癌、输尿管癌、膀胱癌以及尿道癌，是最常见的泌尿系统肿瘤。其中尿路上皮癌可分为非肌层浸润性尿路上皮癌和肌层浸润性尿路上皮癌。而10％-15％的肌层浸润性尿路上皮癌患者在确诊时已出现转移。对于T3-T4和(或)N+Mo的高危患者5年生存率仅为25％-35％。
人滋养层细胞表面糖蛋白抗原(Trop-2)，又名肿瘤相关钙信号转导子2(TACSTD2)，是TACSTD2基因的蛋白质产物，是在人类癌症中高度表达的I型细胞表面糖蛋白。目前发现Trop-2在胚胎发育和肿瘤细胞增殖转移的过程中具有重要意义。流行病学证明Trop-2与多种肿瘤的发展和预后相关，可成为抗体药物研发的靶点。Trop-2抗体结合Trop-2内吞效率很高，也适合开发抗体偶联药物(Antibody-drug conjugate，ADC)。然而Trop-2在许多健康组织也有较高的表达，包括肾脏、胰腺和肝脏等，靶向Trop-2的ADC药物需要兼顾药效和安全性。
Immunomedics Inc在美国市场推出首个商业化产品TRODELVYTM(Sacituzumabgovitecan-hziy，代号IMMU-132)。TRODELVY由靶向Trop-2的抗体与化疗药物伊利替康的活性代谢物SN-38通过pH敏感性连接子连接而成，药物-抗体比高达7.6:1。美国FDA于2020年4月加速批准TRODELVY上市，用于治疗既往至少接受过两次治疗的转移性三阴性乳腺癌(mTNBC)患者。此次批准是基于一项多中心、单臂、II期临床试验中的肿瘤客观应答率(ORR)和应答持续时间(DoR)数据。108例既往接受过3线(中位数，范围：2～10)治疗的三阴乳腺癌患者的ORR为33.3％(95％CI：24.6％～43.1％)，中位DoR为7.7个月(95％CI：4.9～10.8个月)。
DS-1062为日本第一三共公司利用其自主的ADC技术平台开发的Trop-2 ADC药物，其小分子为喜树碱类药物Exatecan的衍生物。2018年1月第一三共启动I期临床剂量爬坡研究，2018年2月完成第一例患者给药。PF-06664178为辉瑞开发的Trop-2-ADC药物，其小分子为新型auristatin衍生物Aur0101，其活性较MMAE强，2018年1月，I期临床研究结果表明该药在晚期实体瘤中治疗无效果，目前辉瑞已明确终止该药的后续研究。国内开发Trop-2靶点ADC药物进展较快的分别为百奥泰、多禧生物和科伦药业。百奥泰和多禧生物于2019年在国内申报临床试验，科伦药业开发的Trop-2靶点ADC药物于2019年8月获得FDA批准进入临床研究。
抗体药物偶联物(antibody drug conjugate，ADC)把单克隆抗体通过化学接头与具有生物活性的细胞毒素相连，充分利用了抗体对肿瘤细胞特异或高表达抗原结合的特异性和细胞毒素的高效性，避免对正常细胞的毒副作用。这也就意味着，与以往传统的化疗药物相比，抗体药物偶联物能精准地结合肿瘤细胞并降低将对正常细胞的杀伤影响。ADC的治疗理念是利用抗体作为媒介通过结合靶表面抗原并内化的方式将细胞毒性药物递送至肿瘤细胞。
但是，抗体药物，尤其是ADC与其他的化学药物相比，其分子量更大，结构更复杂，容易降解、聚合或发生不希望发生的化学修饰等而变得不稳定。ADC具有比未偶联抗体更复杂的异质的结构，化学药物及接头的引入极大的改变了ADC的理化性质。为了使ADC适合于生产，并且在储存及随后使用过程中能保持稳定性，发挥更好的效果，ADC的稳定制剂研究显得尤为重要ADC制剂处方的开发过程中，除了需要考虑裸抗的稳定性，也要了解小分子药物-linker的化学降解机制，将小分子药物与linker的质量属性一起考虑，找到裸抗、小分子药物和linker都能稳定保存的条件和剂型。本发明描述的ADC药物F0124-ADC在生理条件下，药物活性物SN-38会自发释放，半衰期约为16-20小时。提供一种足够稳定的F0124-ADC的药物(制剂)组合物是该ADC药物进一步开发亟需解决的问题。
发明内容
本发明针对现有技术中缺乏对于F0124-ADC抗体偶联药物溶解性好、稳定性好的药物(制剂)组合物的问题，提供了一种抗体偶联药物的药物组合、冷冻干燥制剂及制备方法、用途。
本发明通过以下技术方案解决上述技术问题。
ADC药物制剂处方的开发与传统抗体药物类似，但是抗体-小分子偶联的形式会引入新的质量属性，因此在制剂处方的选择过程中需要兼顾单克隆抗体与小分子两者的性质。首先，ADC的主体框架为单克隆抗体，因此在制剂研究过程中需要考虑单抗的稳定性；其次，还要充分考虑到小分子药物对整个ADC理化性质的影响。例如，由于偶联的Payload通常为强疏水性小分子，易导致ADC药物整体的可溶性降低，直接影响药物特性。F0124-ADC制剂在工艺开发过程中发现，F0124-ADC在抗体偶联药物的生产、储存及使用过程中，SN-38极易自发释放，从而影响抗体偶联药物的生产及储存稳定性。同时，由于SN-38的过早脱落会给药物的临床应用带来安全性隐患。本发明提供了一种含F0124-ADC抗体偶联药物的稳定的药物组合物。
本发明提供了一种药物组合物，其包括下述组分：
5～25mg/mL的F0124-ADC；
7～90mg/mL的蛋白质保护剂；
0.05～1.0mg/mL的表面活性剂；
5～20mM的缓冲盐；
水；
所述药物组合物的pH值为5.0～5.5；
其中，F0124-ADC为抗体偶联物，其结构通式为Ab-(L-D)n；Ab为抗人Trop2抗体hRS7、其活性片段或其变体；L为连接基；D为细胞毒性药物SN-38；所述Ab通过所述的L与D连接；n为2～8。
在本发明某一实施方案中，所述的F0124-ADC的结构式如式(I)所示，其简称为ADC-I：
Figure BDA0003233589230000041
(I)，
其中Ab为抗人Trop2抗体hRS7；n可为7-8，优选为7.6。
本发明中，所述F0124-ADC可通过本领域常规方法制得。例如，上述ADC-I可参见文献Clinical Cancer Research,2011,17(10),3157–3169中公开的合成方法制备得到。
本发明中，所述的药物组合物由下述组分组成：
5～25mg/mL的F0124-ADC；
7～90mg/mL的蛋白质保护剂；
0.05～1.0mg/mL的表面活性剂；
5～20mM的缓冲盐；
水；
所述药物组合物的pH值为5.0～5.5；
其中，F0124-ADC的定义如前任一方案所述。
所述的药物组合物的pH值可为5.0或5.5。
所述的药物组合物中，所述的F0124-ADC浓度可为10～20mg/mL，例如10mg/mL或20mg/mL。
所述的药物组合物中，所述的蛋白保护剂的浓度可为7～60mg/mL，例如7mg/mL、30mg/mL、50mg/mL或60mg/mL。
所述的药物组合物中，所述的表面活性剂的浓度可为0.05～0.6mg/mL，例如，例如0.09mg/mL、0.1mg/mL、0.2mg/mL或0.6mg/mL。
所述的药物组合物中，所述的缓冲盐的浓度可为10mM～20mM，例如10mM或20mM。
所述的缓冲盐的种类可为枸橼酸盐缓冲盐、醋酸盐缓冲盐、琥珀酸盐缓冲盐、组氨酸盐缓冲盐、磷酸盐缓冲盐或Bis-Tris缓冲盐，例如琥珀酸盐缓冲盐；所述的Bis-Tris为双(2-羟乙基)氨基(三羟甲基)甲烷。
所述的枸橼酸盐缓冲盐可为包括枸橼酸根离子的缓冲盐，例如枸橼酸-枸橼酸钠缓冲盐、枸橼酸-枸橼酸钾缓冲盐、枸橼酸-枸橼酸钙缓冲盐或枸橼酸-氢氧化钠缓冲盐，又例如枸橼酸-枸橼酸钠缓冲盐。
所述的醋酸盐缓冲盐可为包括醋酸根离子的缓冲盐，例如醋酸-醋酸钠缓冲盐、醋酸-醋酸钾缓冲盐、醋酸-氢氧化钠缓冲盐或醋酸钠-盐酸缓冲盐，又例如醋酸-醋酸钠缓冲盐。
所述的琥珀酸盐缓冲盐可为包括琥珀酸根离子的缓冲盐，例如琥珀酸-琥珀酸钠缓冲盐、琥珀酸组氨酸盐缓冲盐、琥珀酸-琥珀酸钾缓冲盐或琥珀酸-琥珀酸钙盐缓冲盐，又例如琥珀酸-琥珀酸钠。
所述的组氨酸缓冲盐可为组氨酸-盐酸缓冲盐或组氨酸-组氨酸盐酸盐缓冲盐，例如组氨酸-盐酸缓冲盐。
所述的磷酸盐缓冲盐可为包括磷酸二氢根离子的缓冲盐或磷酸一氢根离子的缓冲盐，例如磷酸二氢钾-磷酸氢二钾缓冲盐、磷酸二氢钾-磷酸氢二钠缓冲盐、磷酸二氢钠-磷酸氢二钠缓冲盐或磷酸二氢钠-磷酸氢二钾缓冲盐，又例如磷酸二氢钠-磷酸氢二钠缓冲盐。
所述的Bis-Tris缓冲盐可为Bis-Tris-盐酸缓冲盐。
所述的蛋白质保护剂可为本领域作为药物配制剂中的合适添加剂或赋形剂的碳水化合物，所述的碳水化合物可为糖类物质，所述的糖类物质例如蔗糖、麦芽糖和二水合α,α-海藻糖中的一种或多种，例如蔗糖。
所述的表面活性剂可为非离子型表面活性剂、阴离子表面活性剂和两性离子表面活性剂中的一种或多种。
所述的非离子型表面活性剂可为聚山梨酯、泊洛沙姆(Poloxamer)、曲拉通(Triton)、肉豆蔻酰胺基丙基-二甲胺、棕榈酰胺基丙基-二甲胺、异硬脂酰胺基丙基-二甲胺、聚乙二醇、乙烯和丙二醇的共聚物、和、聚丙二醇中的一种或多种，例如聚山梨酯；所述的聚山梨酯例如聚山梨酯20或聚山梨酯80；所述的泊洛沙姆例如泊洛沙姆188；所述的乙烯和丙二醇的共聚物例如普郎尼克类(Pluronics)；所述的普郎尼克类例如PF68(
Figure BDA0003233589230000051
F-68)。
所述的阴离子表面活性剂可为十二烷基硫酸钠(SDS)、月桂基硫酸钠、辛基糖苷钠、月桂基-肌氨酸、肉豆寇基-肌氨酸、亚油酰基肌氨酸、硬脂酰基-肌氨酸、甲基椰油酰基(cocoyl)牛磺酸钠和甲基油烯基牛磺酸二钠中的一种或多种。
所述的两性离子表面活性剂可为月桂基-磺基甜菜碱、肉豆寇基-磺基甜菜碱、亚油酰(linoleyl-)磺基甜菜碱、硬脂酰-磺基甜菜碱、亚油酰基-甜菜碱、肉豆蔻基-甜菜碱、或鲸蜡基-甜菜碱、月桂酰胺基丙基-甜菜碱、椰油酰胺基丙基-甜菜碱、亚油酰胺基丙基-甜菜碱、肉豆蔻酰胺基丙基-甜菜碱、棕榈酰胺基丙基(palmidopropyl)-甜菜碱和异硬脂酰胺基丙基-甜菜碱中的一种或多种，例如月桂酰胺基丙基-甜菜碱。
本发明中，所述的药物组合物包括下述组分或者由下述组分组成：
10～20mg/mL的F0124-ADC；
7～60mg/mL的蛋白质保护剂；
0.09～0.6mg/mL的表面活性剂；
10～20mM的缓冲盐；
水；
所述药物组合物的pH值为5.0～5.5；
其中，F0124-ADC的定义如前任一方案所述。
本发明中，所述的药物组合物可包括下列任一方案所示的组分或者由下列任一方案所示的组分组成：
方案1：20mg/mL的F0124-ADC、50mg/mL的蔗糖、0.2mg/mL的聚山梨酯20、10mM的琥珀酸盐缓冲盐、水，该药物组合物的pH值为5.0；
方案2：20mg/mL的F0124-ADC、50mg/mL的蔗糖、0.2mg/mL的聚山梨酯20、10mM的琥珀酸盐缓冲盐、水，该药物组合物的pH值为5.5；
方案3：20mg/mL的F0124-ADC、60mg/mL的蔗糖、0.1mg/mL的聚山梨酯20、10mM的琥珀酸盐缓冲盐、水，该药物组合物的pH值为5.0；
方案4：20mg/mL的F0124-ADC、60mg/mL的蔗糖、0.1mg/mL的聚山梨酯20、10mM的琥珀酸盐缓冲盐、水，该药物组合物的pH值为5.5；
方案5：20mg/mL的F0124-ADC、30mg/mL的蔗糖、0.1mg/mL的聚山梨酯20、10mM的醋酸盐缓冲盐、水，该药物组合物的pH值为5.0；
方案6：10mg/mL的F0124-ADC、7mg/mL的海藻糖、0.09mg/mL的聚山梨酯20、20mM的琥珀酸盐缓冲盐、水，该药物组合物的pH值为5.0；
方案7：20mg/mL的F0124-ADC、60mg/mL的蔗糖、0.1mg/mL的聚山梨酯80、10mM的琥珀酸盐缓冲盐、水，该药物组合物的pH值为5.0；
方案8：20mg/mL的F0124-ADC、60mg/mL的蔗糖、0.6mg/mL的聚山梨酯20、10mM的琥珀酸盐缓冲盐、水，该药物组合物的pH值为5.0；
所述方案1～方案8中，F0124-ADC的结构优选为如式(I)所示的化合物(ADC-I)：
Figure BDA0003233589230000071
(I)
其中Ab为抗人Trop2抗体hRS7；n为7-8，优选为7.6。
本发明还提供了一种冷冻干燥制剂，所述的冷冻干燥制剂由如前任一方案所述的药物组合物经冷冻干燥制得。
本发明还提供了一种冷冻干燥制剂，所述的冷冻干燥制剂经溶解后含有如前所述的药物组合物。所述的溶解过程优选采用纯化水、注射用水和生理盐水中的一种或多种，更优选采用注射用水。
本发明还提供了一种药物组合物或冷冻干燥制剂在制备治疗Trop-2阳性肿瘤的药物上的应用，所述的药物组合物和冷冻干燥制剂如前所述。
所述的应用中，所述的Trop-2阳性肿瘤可为乳腺癌或尿路上皮癌；所述的乳腺癌可为三阴性乳腺癌(TNBC)，所述的尿路上皮癌可为肾盂癌、输尿管癌、膀胱癌或尿道癌。
本发明还提供了一种治疗和/或预防Trop-2阳性肿瘤的方法，包括给予所需患者治疗有效量的如前所述的药物组合物或冷冻干燥制剂。
所述的治疗和/或预防Trop-2阳性肿瘤的方法中，所述的Trop-2阳性肿瘤可为乳腺癌或尿路上皮癌；所述的乳腺癌可为三阴性乳腺癌(TNBC)，所述的尿路上皮癌可为肾盂癌、输尿管癌、膀胱癌或尿道癌。
本发明还提供了一种药物制品，其包括容器，该容器中装有如前所述的药物组合物或冷冻干燥制剂。所述容器优选为玻璃瓶或储液袋。
为了更容易理解本发明，以下具体定义了某些技术和科学术语。除非在本文中另有明确定义，本文使用的所有其它技术和科学术语都具有本发明所属领域的一般技术人员通常理解的含义。
“药物组合物”表示含有一种或多种本文所述化合物或其生理学上/可药用的盐或前体药物与其他化学组分的混合物，所述其他组分例如生理学/可药用的载体和赋形剂。药物组合物的目的是促进对生物体的给药，利于活性成分的吸收进而发挥生物活性。本文中，“药物组合物”和“制剂”并不互相排斥。
本发明所述的药物组合物能够达到一种稳定的效果：其中的抗体在贮藏后基本上保留其物理稳定性和/或化学稳定性和/或生物学活性的药物组合物，优选地，药物组合物在贮藏后基本上保留其物理和化学稳定性以及其生物学活性。贮藏期一般基于药物组合物的预定保存期来选择。目前有多种测量蛋白质稳定性的分析技术，可测量在选定温度贮藏选定时间段后的稳定性。
“冷冻干燥制剂”表示液体或溶液形式的药物组合物或液体或溶液制剂真空经冷冻干燥步骤之后获得的制剂。
“抗体药物偶联物(antibody drug conjugate，ADC)”是把单克隆抗体或者抗体片段通过稳定的化学接头化合物与具有生物活性的细胞毒素或具有细胞杀伤活性的小分子药物相连，充分利用了抗体对肿瘤细胞特异或高表达抗原结合的特异性和细胞毒素的高效性，避免对正常细胞的毒副作用。这也就意味着，与以往传统的化疗药物相比，抗体药物偶联物能精准地结合肿瘤细胞并降低将对正常细胞的影响。
“抗体偶联药物F0124-ADC”是指抗Trop2抗体偶联SN38的抗体偶联药物。
“pH值缓冲剂”指通过其酸-碱共轭组分的作用而耐受pH变化的缓冲剂。
WFI：water for injection，注射用水。
术语“治疗”或它的同等表达当用于例如癌症时，指用来减少或消除患者体内癌细胞数目或减轻癌症的症状的程序或过程。癌症或另外的增生性障碍的“治疗”不一定指癌症细胞或其它障碍会实际上被消除，细胞或障碍的数目会实际上被减少或者癌症或其它障碍的症状会实际上被减轻。通常，即使只具有低的成功可能性也会进行治疗癌症的方法，但是考虑到患者的病史和估计的生存预期，其仍然被认为诱导总体有益的作用过程。
“有效量”包含足以改善或预防医学疾病的症状或病症的量。有效量还意指足以允许或促进诊断的量。用于特定患者或兽医学受试者的有效量可依据以下因素而变化：例如，待治疗的病症、患者的总体健康情况、给药的方法途径和剂量以及副作用严重性。有效量可以是避免显著副作用或毒性作用的最大剂量或给药方案。
术语“预防”是指降低发生疾病的风险。
术语“患者”是指已经或即将接受治疗的任何动物，优选哺乳动物，最优选人类。哺乳动物包括但不限于牛、马、羊、猪、猫、狗、小鼠、大鼠、家兔、豚鼠、猴、人类等。
“Tm值”是指蛋白质热变性温度，即一半蛋白去折叠时的温度，此时蛋白的空间结构被破坏，所以Tm值越高，蛋白热稳定性越高。
在不违背本领域常识的基础上，上述各优选条件，可任意组合，即得本发明各较佳实例。
本发明所用试剂和原料均市售可得。
本发明的积极进步效果在于：本发明含有F0124-ADC抗体偶联药物的药物组合物(制剂)极大改善了药物的生产、储存及使用稳定性，避免了小分子活性物的过早释放；通过长期稳定性实验验证了该配方能满足F0124-ADC的临床需求；提高了临床使用的安全性。
附图说明
图1为实施例3中八种处方溶液分别放置在2-8℃的DAR值变化趋势。
图2为实施例3中八种处方溶液分别放置在25℃的DAR值变化趋势。
图3为实施例3中八种处方溶液分别放置在2-8℃的小分子残留变化趋势。
图4为实施例3中八种处方溶液分别放置在25℃的小分子残留变化趋势。
图5为实施例3中八种处方溶液分别放置在2-8℃的CE-SDS高分子杂质变化趋势。
图6为实施例3中八种处方溶液分别放置在25℃的CE-SDS高分子杂质变化趋势。
图7为实施例3中八种处方溶液分别放置在2-8℃的SEC聚合物变化趋势。
图8为实施例3中八种处方溶液分别放置在25℃的SEC聚合物变化趋势。
图9为实施例3中八种处方溶液冻融后SEC聚合物变化趋势。
图10为实施例4中八种处方冻干品在25℃的DAR值变化趋势。
图11为实施例4中八种处方冻干品在40℃的DAR值变化趋势。
图12为实施例4中八种处方冻干品在25℃的小分子残留变化趋势。
图13为实施例4中八种处方冻干品在40℃的小分子残留变化趋势。
图14为实施例4中八种处方冻干品在25℃的SEC聚合物变化趋势。
图15为实施例4中八种处方冻干品在40℃的SEC聚合物变化趋势。
具体实施方式
下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照商品说明书选择。
缩写：
MES：2-(N-吗啡啉)乙磺酸。
材料与方法：
F0124-ADC：可通过本领域常规方法制得。例如ADC-I可通过文献Clinical CancerResearch,2011,17(10),3157–3169中公开的合成方法制备得到。
主要仪器与试剂：冻干机TELSTAR LyoBeta 6PL；高效液相分析系统WatersE2695；色谱柱TOSOH TSKgel G3000SWXL(5μm,7.8mm×300mm)；毛细管电泳分析系统Beckman Coulter PA800 plus；NanoTemper蛋白稳定性分析仪Prometheus NT.48；库仑法卡氏水分测定仪Metrohm 831 KF Coulometer；多功能酶标仪Molecular DevicesSpectraMax m2e。琥珀酸购自南京化学试剂股份有限公司；蔗糖购自默克公司；组氨酸购自上海协和氨基酸有限公司；聚山梨酯20购自J.T.Baker公司。
差示扫描荧光定量(DSF)：生理状态下的蛋白疏水组分被包裹在分子内部，形成亲水表面以维持稳定。随着外界温度提高蛋白变性从而暴露疏水区域，疏水性荧光染料同暴露的疏水区域结合继而发出荧光，在实时定量PCR系统上运行可获取待测蛋白或不同缓冲液环境下特异的荧光图像(熔解曲线)，由此计算出的Tm(熔解温度)的相对变化即可反映不同蛋白或不同缓冲条件下蛋白疏水区域暴露的快慢(变性快慢)，即Tm越高，蛋白变性所需的温度越高，蛋白稳定性越好。采用NanoDSF技术检测抗体的热稳定性。设定升温速率1℃/min，开始温度25℃，结束温度99℃。依据各抗体的紫外吸收比率变化以及抗体对光的散射强度变化来确定Tm和Tagg。
尺寸排阻色谱法(尺寸排阻色谱法(SEC)纯度分析)：色谱柱，TSKgel G3000SWXL(5μm，7.8mm×300mm)；流动相，0.2mol/L K2HPO4，0.2mol/L KCl，15％异丙醇，pH 5.5；流速，0.6ml/min；上样量：200μg；柱温，25℃；样品池温度，5℃；检测波长，280nm。用Waters E2695高效液相分析系统对实验结果进行数据处理，用面积归一化法计算纯度。
毛细管电泳(CE-SDS)纯度分析：用SDS样品缓冲液(0.1mol/L Tris-HCl缓冲液，含1％SDS，pH9.0)将供试品稀释至1mg/ml，分别吸取95μl稀释的蛋白溶液，2μl 10KDa内标，5μlβ-巯基乙醇，全部加入0.5ml离心管中，旋涡振荡混匀后，置于恒温混匀仪中70℃孵育10分钟，冷却至室温，取100μl，采用Beckman Coulter PA800 plus毛细管电泳分析系统处理样品，带宽：10nm，样品池温度：10℃，毛细管温度：25℃，检测波长：220nm。原始图谱导入Empower软件，按面积归一化法计算。
含水量分析：参考《中华人民共和国药典》2015年版通则0832第一法中库伦滴定法，以卡尔-费休氏反应为基础，应用永停滴定法(《中华人民共和国药典》2015年版通则0701)测定供试品，根据碘和二氧化硫在吡啶和甲醇溶液中与水定量反应的原理来测定水分。将供试品快速捣碎，精密称取20mg左右样品加入水分测定仪中进行反应。每批测定3瓶供试品，每瓶测定2次。
相对结合活性分析：将hTrop2抗原以108ng/ml包被于96孔酶标板中，2-8℃静置过夜。3％BSA室温封闭2小时。将梯度稀释的F0124-ADC样品(20000ng/ml～1.4ng/ml)与生物素化FDA 018抗体等体积混匀后加入酶标板中，竞争结合hTrop2抗原，室温200转孵育1小时。以HRP标记的链霉亲和素为酶联，同上条件孵育1小时。TMB显色，1mol/L H2SO4终止。至于酶标仪m2e中，450nm(检测)/650nm(参比)波长下进行读数。选择四参数拟合方式对数据进行分析。
生物学活性分析：用含10％胎牛血清的RPMI160培养基将Karpas299细胞稀释至5×104/ml，100μl/孔种于96孔细胞培养板中。随后加入梯度稀释的F0124-ADC样品(50ng/ml～0.3ng/ml)。在37℃，5％CO2的培养箱中孵育77小时后，加入30μl/孔的阿尔玛蓝染料，继续孵育19小时。室温混匀半小时后，至于酶标仪m2e中，530nm(激发)/590nm(发射)波长进行读数。选择四参数拟合曲线对结果进行数据分析。
下述实施例中，“琥珀酸盐缓冲盐”均指琥珀酸-琥珀酸钠缓冲盐；“组氨酸盐缓冲盐”均指组氨酸-盐酸缓冲盐；“醋酸盐缓冲盐”均指醋酸-醋酸钠缓冲盐。
实施例1 不同处方的溶液制剂的制备
各药物组合物处方如表1所示，不同处方的溶液制剂制备方法包括下述步骤：
(1)配制置换用渗滤缓冲液：根据各药物组合物处方中缓冲盐的组分和浓度，将琥珀酸或组氨酸，用注射用水溶解，并混合均匀，对于缓冲盐的组分为琥珀酸-琥珀酸钠缓冲盐，加入氢氧化钠调整至pH值符合处方要求，而对于缓冲盐的组分为组氨酸-盐酸缓冲盐的，则加入浓盐酸调整至pH值符合处方要求；
(2)配制稀释缓冲液：根据各药物组合物处方，将除抗体偶联物以外的琥珀酸或组氨酸、保护剂和表面活性剂，用注射用水溶解，并混合均匀，调整其pH值符合处方要求即可；具体到每种药物组合物处方，除了不添加抗体药物偶联物外，其稀释缓冲液中缓冲盐、保护剂和表面活性剂的种类及浓度均与该种药物组合物处方保持一致，例如表1中编号为1的组合物处方的稀释缓冲液中，含有10mM的琥珀酸盐缓冲盐、50mg/mL的蔗糖作为蛋白保护基和0.2mg/mL的聚山梨酯20作为表面活性剂，其pH值为5.0；
(3)为了制备不同处方溶液制剂，将含有抗体偶联物的蛋白溶液(为按照文献Clinical Cancer Research,2011,17(10),3157–3169中公开的合成方法制备而得)通过浓缩渗滤(UF/DF)对渗滤缓冲液进行缓冲液交换，并且在需要时，通过渗滤浓缩成蛋白浓度约20-35mg/ml的抗体偶联物溶液。完成渗滤操作后，将蛋白保护剂(例如蔗糖)溶于渗滤缓冲液中形成浓缩储液添加至抗体偶联物溶液中。然后，再将表面活性剂(如聚山梨酯20)溶于渗滤缓冲液中形成50至200倍浓缩储液添加至抗体偶联物溶液中。最后，用相应的稀释缓冲液将蛋白质浓度调节至约10mg/ml、15mg/ml、20mg/ml或25mg/ml的最终蛋白浓度。
(4)将所有溶液制剂通过0.22μm除菌过滤器进行无菌过滤，并在无菌条件下填充入2ml无菌冻存管中，密封保存。
实施例2 冷冻干燥制剂的制备
本实施例研究琥珀酸盐缓冲盐、组氨酸盐缓冲盐等缓冲盐以及pH值对冷冻干燥制剂的影响。
冷冻干燥制剂的制备方法如下：
将按实施例1方法制备的如表1药物组合物的溶液制剂无菌分装于西林瓶内，盛有样品的西林瓶置于LyoBeta 6PL冻干机内，开始冻干。按照预设的冻干参数进行冻干，5℃下预冷60min；-5℃预冻90min：-45℃预冻300min；一次干燥温度设定为-22℃，持续时间不少于3000min，真空度控制在0.08～0.18mbar；解析干燥温度设定为30℃，持续时间不少于300min。冻干结束后进行真空压塞。出箱后轧盖。
表1.各药物组合物处方及其冷冻干燥制剂的Tm值和含水量
Figure BDA0003233589230000121
差示扫描荧光定量(DSF)是一种热分析法，是研究蛋白质稳定性的一个重要工具。蛋白质分子的去折叠和疏水部分的暴露会造成荧光染料的荧光变化。在这个方法里，蛋白样品和荧光染料一起孵育，通过线性的升温，监测荧光变化情况，并通过测定蛋白熔融温度(Tm值)来预测蛋白分子在某种制剂体系下的稳定性。
由表1可知，在相同的pH条件下，随着缓冲盐浓度的升高，处方的Tm值均随之降低，表明缓冲盐浓度的升高可能不利于制剂稳定性。同时，在选定范围内，pH的升高可以增加处方的Tm值，预示可能增强制剂的稳定性。因此需对不同pH处方的稳定性进行进一步评估。
实施例3 不同pH下ADC-I溶液制剂稳定性研究
本实施例比较了不同处方pH溶液制剂(处方见表2，按实施例1和2描述的方法制备)，在不同放置温度2-8℃或25℃下，DAR值和小分子残留的变化情况(如表3-表6，图1-4所示)，反映了不同pH下ADC-I溶液制剂稳定性差异。其中，处方E的处方是将国外同类药物Trodelvy处方中的IMMU-132替换为ADC-I而得。结果表明：处方E(pH6.5)以及处方C(pH6.0)下SN-38的脱落要明显强于处方A、D、F、G、H(pH5.0)和处方B(pH5.5)，表现为DAR值的下降以及小分子残留的增加。处方A、D、F、G、H(pH5.0)和处方B(pH5.5)之间的差异不是很明显。同时，随着温度的升高，SN-38脱落的趋势增加的更为明显。因此，为了保证制剂在溶液状态下的长期稳定性，应考虑将其放置在低温下(如-20℃或-80℃)储存、运输。
表2.不同pH药物组合物处方
处方 pH ADC-I 缓冲盐 蛋白保护剂 表面活性剂
A 5.0 20mg/ml 10mM琥珀酸盐 60mg/ml蔗糖 0.1mg/ml聚山梨酯20
B 5.5 20mg/ml 10mM琥珀酸盐 60mg/ml蔗糖 0.1mg/ml聚山梨酯20
C 6.0 20mg/ml 10mM琥珀酸盐 60mg/ml蔗糖 0.1mg/ml聚山梨酯20
D 5.0 20mg/ml 10mM醋酸盐 30mg/ml蔗糖 0.1mg/ml聚山梨酯20
E 6.5 10mg/ml 20mM MES 7mg/ml海藻糖 0.09mg/ml聚山梨酯20
F 5.0 10mg/ml 20mM琥珀酸盐 7mg/ml海藻糖 0.09mg/ml聚山梨酯20
G 5.0 20mg/ml 10mM琥珀酸盐 60mg/ml蔗糖 0.1mg/ml聚山梨酯80
H 5.0 20mg/ml 10mM琥珀酸盐 60mg/ml蔗糖 0.6mg/ml聚山梨酯20
表2中的海藻糖即为二水合α,α-海藻糖。
表3.溶液2-8℃ DAR值变化
天数 处方A 处方B 处方C 处方D 处方E 处方F 处方G 处方H
0 7.48 7.46 7.37 7.35 7.34 7.47 7.46 7.46
1 7.46 7.46 7.32 7.34 7.29 7.46 7.46 7.45
3 7.45 7.45 7.26 7.34 7.17 7.46 7.44 7.45
7 7.47 7.43 7.14 7.34 7 7.46 7.46 7.45
14 7.35 7.33 7.01 7.25 6.58 7.34 7.37 7.33
30 7.27 7.21 6.59 7.19 6.03 7.2 7.28 7.25
60 7.11 7.05 5.88 7.08 5.24 7.08 7.11 7.11
表4.溶液25℃ DAR值变化
天数 处方A 处方B 处方C 处方D 处方E 处方F 处方G 处方H
0 7.48 7.46 7.37 7.35 7.34 7.47 7.46 7.46
1 7.31 7.3 7.08 7.25 6.85 7.32 7.32 7.33
2 7.17 7.14 6.74 7.07 6.44 7.14 7.11 7.11
3 7 7.03 6.49 6.88 6.11 6.95 6.95 6.97
7 6.36 6.29 5.29 6.21 4.82 6.31 6.3 6.35
14 5.33 5.25 3.77 5.14 2.22 5.3 5.1 5.33
表5.溶液2-8℃小分子残留变化(％)
天数 处方A 处方B 处方C 处方D 处方E 处方F 处方G 处方H
0 0.83 0.7 0.94 0.95 0.92 0.81 0.85 0.8
1 0.64 0.68 1.11 0.81 1.21 0.69 0.71 0.66
3 0.89 0.9 1.76 0.99 1.89 0.85 0.91 0.85
7 1.31 1.24 2.82 1.55 3.01 1.33 1.4 1.38
14 2.15 1.87 4.99 2.31 5.45 2.2 2.22 2.2
30 4.08 4.57 9.59 4.3 12.54 4.15 4.18 4.18
60 8.24 9.1 22.45 8.85 32.52 8.45 8.6 8.54
表6.溶液25℃小分子残留变化(％)
天数 处方A 处方B 处方C 处方D 处方E 处方F 处方G 处方H
0 0.83 0.7 0.94 0.95 0.92 0.81 0.85 0.8
1 3.11 2.83 5.4 3.22 6.62 3.01 3.11 3.08
2 5.59 5.24 9.68 5.87 10.59 5.68 5.77 5.74
3 8.26 8.38 15.08 8.46 17.23 8.33 8.4 8.38
7 18.46 19.67 35.07 18.99 43.33 18.75 18.9 18.84
14 33.33 33.98 58.48 35.08 83.38 34.1 35.01 34.22
本实施例还通过CE-SDS和SEC的检测(如表7-表10，图5-8)分别反映了ADC-I在不同处方条件下共价聚体和可溶性聚体的变化情况。结果表明：处方C和处方E下共价聚体增加的趋势要快于其他处方；处方B(pH5.5)下可溶性聚体增加的趋势要稍快于其他制剂处方。同时，聚体增加的趋势随着温度的升高而增加。
表7.溶液2-8℃ SEC聚合体(％)
天数 处方A 处方B 处方C 处方D 处方E 处方F 处方G 处方H
0 1.3 1.4 1.3 1.4 1.3 1.3 1.3 1.3
1 1.3 1.5 1.4 1.4 1.4 1.3 1.4 1.4
3 1.3 1.6 1.3 1.4 1.5 1.4 1.4 1.5
7 1.4 1.7 1.4 1.4 1.5 1.4 1.4 1.5
14 1.5 1.8 1.4 1.5 1.5 1.4 1.5 1.6
30 1.5 2.1 1.5 1.5 1.7 1.6 1.6 1.6
60 1.6 2.4 1.6 1.6 1.6 1.6 1.7 1.7
表8.溶液25℃ SEC聚合体(％)
天数 处方A 处方B 处方C 处方D 处方E 处方F 处方G 处方H
0 1.3 1.4 1.3 1.4 1.4 1.3 1.3 1.3
1 1.4 2 1.4 1.4 1.4 1.5 1.6 1.6
2 1.6 2.3 1.6 1.6 1.7 1.5 1.6 1.7
3 1.8 2.6 1.6 1.7 1.8 2 1.9 1.9
7 2 3.4 1.8 2 1.9 2 2.2 2.1
14 2.3 4.1 1.8 2.1 2 2.3 2.5 2.5
表9.溶液2-8℃ CE-SDS高分子量杂质总和(％)
天数 处方A 处方B 处方C 处方D 处方E 处方F 处方G 处方H
0 3.5 3.7 4 4 4.1 3.7 3.6 3.6
1 4 3.7 4.1 4 4.2 3.7 3.7 3.8
3 4 3.8 4.3 4.1 4.4 3.8 3.7 3.8
7 3.9 3.9 4.4 4.1 4.5 3.8 3.8 4
14 4 4.1 4.6 4.2 4.6 3.8 3.8 3.8
30 3.9 4.2 4.5 4.1 4.7 3.9 3.8 4
表10.溶液25℃ CE-SDS高分子量杂质总和(％)
天数 处方A 处方B 处方C 处方D 处方E 处方F 处方G 处方H
0 3.5 3.7 4 4 4.1 3.7 3.6 3.6
1 4.4 4.3 4.8 4.5 4.8 4.4 4.4 4.4
2 4.6 4.7 5.2 5.2 5.2 4.8 5 4.8
3 4.8 4.9 5.6 5.1 5.5 4.8 5 4.8
7 5.9 6 6.2 6.2 6.9 6 6.1 6
14 7.2 7.2 8.4 8.1 9.2 7.4 7.8 7.7
本实施例还考察了不同制剂处方10次冻融后样品聚体变化的趋势(如表11，图9)。结果表明：10次冻融未造成聚体的增加；不同制剂处方聚体变化的趋势没有明显差异。
表11.冻融次数对SEC聚合体的影响(％)
次数 处方A 处方B 处方C 处方D 处方E 处方F 处方G 处方H
0 1.3 1.4 1.3 1.3 1.4 1.3 1.3 1.3
5 1.2 1.4 1.3 1.3 1.3 1.3 1.4 1.4
10 1.2 1.5 1.4 1.3 1.4 1.3 1.3 1.3
实施例4 不同pH下ADC-I冻干制剂稳定性研究
本实施例比较了表2所列的不同处方pH冻干制剂放置在不同温度下，DAR值和小分子残留的变化情况，反映了不同pH下ADC-I冻干制剂稳定性差异。不同制剂处方冻干后的样品水分残留都在3％以下，满足中国药典对冻干制剂的相关要求。不过，相比于其他处方冻干后完整、均匀的粉饼外观，处方E冻干后失去完整饼状外观，表现出部分塌陷，说明两种处方的赋形效果不理想。结果表明：相比于溶液制剂，冻干制剂极大提高了样品的稳定性。从DAR值(如表12-表13，图10-11所示)和小分子残留(如表14-表15，图12-13所示)结果可以看出，从小分子药物端的稳定性来看，处方A、D、F、G、H(pH5.0)和处方B(pH5.5)要优于其他处方。
表12.冻干品25℃ DAR值变化
天数 处方A 处方B 处方C 处方D 处方E 处方F 处方G 处方H
0 7.43 7.39 7.4 7.12 7.14 7.4 7.41 7.44
1 7.44 7.44 7.41 7.14 7.14 7.41 7.4 7.42
3 7.48 7.39 7.41 7.14 7.15 7.38 7.4 7.41
7 7.44 7.41 7.42 7.16 7.16 7.38 7.38 7.41
14 7.48 7.39 7.4 7.15 7.16 7.4 7.38 7.41
30 7.42 7.39 7.4 7.18 7.15 7.38 7.38 7.4
60 7.49 7.46 7.41 7.21 7.22 7.39 7.39 7.4
表13.冻干品40℃ DAR值变化
天数 处方A 处方B 处方C 处方D 处方E 处方F 处方G 处方H
0 7.43 7.39 7.4 7.12 7.14 7.4 7.41 7.44
1 7.46 7.43 7.41 7.14 7.14 7.42 7.41 7.42
3 7.47 7.42 7.41 7.14 7.15 7.42 7.4 7.42
7 7.45 7.44 7.44 7.13 7.15 7.43 7.41 7.42
14 7.44 7.41 7.42 7.18 7.16 7.42 7.41 7.42
30 7.39 7.37 7.38 7.18 7.15 7.4 7.4 7.4
60 7.39 7.43 7.39 7.2 7.18 7.38 7.36 7.38
表14.冻干品25℃小分子残留变化(％)
天数 处方A 处方B 处方C 处方D 处方E 处方F 处方G 处方H
0 1.25 1.09 1.11 1.67 1.7 1.08 1.11 1.08
1 1.04 1.06 1.07 1.68 1.71 1.09 1.11 1.09
3 1.11 1.06 1.04 1.68 1.75 1.11 1.13 1.09
7 1.13 1.09 1.06 1.7 1.72 1.18 1.15 1.11
14 1.18 1.18 1.07 1.71 1.8 1.18 1.15 1.11
30 1.2 1.27 1.04 1.76 1.88 1.2 1.17 1.15
60 1.29 1.59 1.25 1.99 2.59 1.3 1.29 1.29
表15.冻干品40℃小分子残留变化(％)
天数 处方A 处方B 处方C 处方D 处方E 处方F 处方G 处方H
0 1.25 1.09 1.11 1.67 1.7 1.08 1.11 1.08
1 1.12 1.1 1.07 1.68 1.7 1.18 1.2 1.19
3 1.12 1.19 1.08 1.69 1.78 1.18 1.2 1.21
7 1.28 1.26 1.11 1.77 1.9 1.33 1.31 1.35
14 1.41 1.35 1.21 1.89 2.01 1.44 1.4 1.48
30 1.71 1.65 1.42 2.21 2.32 1.8 1.78 1.89
60 2.84 1.92 2.52 3.22 3.4 2.91 2.9 3.02
冻干样品的SEC结果(如表16-表17，图14-15所示)表明：加速条件下，所有制剂处方条件聚体增加的趋势差异不明显，制剂冻干有效防止了聚体的形成。
表16.冻干品25℃ SEC聚合体(％)
天数 处方A 处方B 处方C 处方D 处方E 处方F 处方G 处方H
0 1.3 1.8 1.4 1.5 1.7 1.3 1.3 1.4
1 1.4 1.8 1.5 1.6 1.6 1.4 1.4 1.4
3 1.5 1.8 1.5 1.6 1.6 1.5 1.5 1.6
7 1.5 1.9 1.5 1.6 1.7 1.5 1.5 1.6
14 1.5 1.9 1.5 1.6 1.7 1.6 1.6 1.7
30 1.6 2 1.6 1.7 1.7 1.6 1.7 1.7
60 1.5 1.9 1.6 1.6 1.7 1.6 1.7 1.7
表17.冻干品40℃ SEC聚合体(％)
天数 处方A 处方B 处方C 处方D 处方E 处方F 处方G 处方H
0 1.3 1.8 1.4 1.5 1.7 1.3 1.3 1.4
1 1.5 1.9 1.6 1.6 1.8 1.7 1.5 1.6
3 1.6 2 1.6 1.7 1.8 1.7 1.6 1.7
7 1.8 2.1 1.8 1.9 2.1 1.8 1.8 1.8
14 1.9 2.3 1.9 2 2.1 1.8 1.8 1.9
30 2.3 2.7 2.1 2.4 2.4 2.5 2.4 2.5
60 3.4 3.6 2.7 3.2 3 3.3 3.2 3.5
实施例5 药物组合物的冻/融稳定性
药物组合物的配方如下：20mg/mL ADC-I，10mM琥珀酸盐缓冲盐、60mg/ml蔗糖、0.1mg/ml聚山梨酯20、pH5.0。具体制备方法与实施例1相同。
生物大分子样品在冻融过程中，由于液态水的性质(如电离常数、介电常数、氢键、疏水相互作用)随温度的改变产生变化。从而导致蛋白质结构产生可逆的变化。同时在水冻结为冰的过程中，会产生蛋白质低温浓缩和脱水的作用。其他冻结过程引起的应力包括冰界面的形成、pH值的变化和相分离。这些应力可能导致蛋白质结构发生不可逆的变化，可能对抗体偶联物的天然结构、聚集状态及活性等造成影响。将前述药物组合物分别进行0、5、10个冻融循环，并用DAR、SEC、非还原CE-SDS、生物学活性、相对结合活性以及游离小分子残留等检项进行表征。其表征结果如下表18所示，表明反复冻融对该药物组合物的稳定性没有影响。
表18.药物组合物反复冻融稳定性分析
Figure BDA0003233589230000181
实施例6 冷冻干燥制剂的制备
药物组合物的配方如下：20mg/mL ADC-I，10mM琥珀酸盐缓冲盐、60mg/ml蔗糖、0.1mg/ml聚山梨酯20、pH5.0。具体制备方法与实施例2相同。具体原料如下表：
表19.冷冻干燥制剂的药物组合物的原料组成
成分名称 功能 每小瓶量
ADC-I 活性物质 100mg
琥珀酸盐缓冲盐 缓冲剂 5.9mg的琥珀酸+2.25mg的氢氧化钠
蔗糖 稳定剂 300mg
聚山梨酯20 表面活性剂 0.5mg
注射用水 媒介 使药物组合物终体积为5mL
将药物组合物按照实施例2的制备方法制得冷冻干燥制剂。用5mL无菌注射用水(WFI)重构冷冻干燥制剂，获得用于注射的20mg/mL的ADC-I溶液。冷冻干燥制剂经5mL无菌注射用水重构后，每1mL溶液中包含的各组分的浓度分别为：20mg/mL ADC-I，10mM琥珀酸盐缓冲盐、60mg/ml蔗糖、0.1mg/ml聚山梨酯20，且重构后溶液的pH值为5.0。
冷冻干燥制剂(制剂包含缓冲剂、糖、表面活性剂、和抗体药物偶联物)用于单次使用，且不含防腐剂。用0.9％的生理盐水(氯化钠注射液，USP)稀释重构的药品用于通过输液的剂量施用。
实施例7 冻干干燥制剂在2-8℃的长期稳定性
以上述实施例6制备的稳定的冷冻干燥制剂在2-8℃下进行长期稳定性实验，分别于第0、3、6、9、12个月时间点用WFI重构之后检测。并用分子排阻色谱法SEC，非还原CE-SDS、游离小分子含量、水分、抗体偶联药物含量、药物抗体偶联比、生物学活性和相对结合活性进行表征。结果(如表20所示)表明，ADC-I成品各质量属性均无明显变化，稳定性良好。
表20.冻干制剂长期稳定性(2-8℃)
Figure BDA0003233589230000191
实施例8.冻干干燥制剂在25℃的加速稳定性
以上述实施例6制备的稳定的冷冻干燥制剂在25℃下进行加速稳定性实验，分别于第0、1、2、3及6个月时间点用WFI重构之后检测。并用分子排阻色谱法SEC，非还原CE-SDS、游离小分子含量、抗体偶联药物含量、药物抗体偶联比、生物学活性和相对结合活性进行表征。
结果(如表21所示)表明：ADC-I成品在25℃温度条件下放置6个月，纯度(分子排阻色谱法SEC，非还原CE-SDS)、游离小分子含量、抗体偶联药物含量及药物抗体偶联比等理化属性无显著变化；生物学活性和相对结合活性均无明显变化趋势。
表21.冻干制剂加速稳定性(25℃)
Figure BDA0003233589230000201
虽然以上描述了本发明的具体实施方式，但是本领域的技术人员应当理解，这些仅是举例说明，在不背离本发明的原理和实质的前提下，可以对这些实施方式做出多种变更或修改。因此，本发明的保护范围由所附权利要求书限定。

Claims (10)

1.一种药物组合物，其特征在于，其包括下述组分：
5～25mg/mL的F0124-ADC；
7～90mg/mL的蛋白质保护剂；
0.05～1.0mg/mL的表面活性剂；
5～20mM的缓冲盐；
水；
所述药物组合物的pH值为5.0～5.5；
其中，F0124-ADC为抗体偶联物，其结构通式为Ab-(L-D)n；Ab为抗人Trop2抗体hRS7、其活性片段或其变体；L为连接基；D为细胞毒性药物SN-38；所述Ab通过所述的L与D连接；n为2～8。
2.如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，所述的药物组合物满足以下条件中的一种或多种：
(1)所述的F0124-ADC的结构式如式(I)所示，其简称为ADC-I：
Figure FDA0003233589220000011
其中Ab为抗人Trop2抗体hRS7；n为7-8，优选7.6；
(2)所述的药物组合物的pH值为5.0或5.5；
(3)所述的F0124-ADC浓度为10～20mg/mL，例如10mg/mL或20mg/mL；
(4)所述的蛋白保护剂的浓度为7～60mg/mL，例如7mg/mL、30mg/mL、50mg/mL或60mg/mL；
(5)所述的表面活性剂的浓度为0.05～0.6mg/mL，例如0.09mg/mL、0.1mg/mL、0.2mg/mL或0.6mg/mL；
(6)所述的缓冲盐的浓度为10mM～20mM，例如10mM或20mM；
(7)所述的缓冲盐的种类为枸橼酸盐缓冲盐、醋酸盐缓冲盐、琥珀酸盐缓冲盐、组氨酸盐缓冲盐、磷酸盐缓冲盐或Bis-Tris缓冲盐，例如琥珀酸盐缓冲盐；所述的Bis-Tris为双(2-羟乙基)氨基(三羟甲基)甲烷；
(8)所述的蛋白质保护剂为碳水化合物，所述的碳水化合物可为糖类物质；
(9)所述的表面活性剂为非离子型表面活性剂、阴离子表面活性剂和两性离子表面活性剂中的一种或多种。
3.如权利要求2所述的药物组合物，其特征在于，所述的药物组合物满足以下条件中的一种或多种：
(1)所述的枸橼酸盐缓冲盐为包括枸橼酸根离子的缓冲盐，例如枸橼酸-枸橼酸钠缓冲盐、枸橼酸-枸橼酸钾缓冲盐、枸橼酸-枸橼酸钙缓冲盐或枸橼酸-氢氧化钠缓冲盐，又例如枸橼酸-枸橼酸钠缓冲盐；
(2)所述的醋酸盐缓冲盐为包括醋酸根离子的缓冲盐，例如醋酸-醋酸钠缓冲盐、醋酸-醋酸钾缓冲盐、醋酸-氢氧化钠缓冲盐或醋酸钠-盐酸缓冲盐，又例如醋酸-醋酸钠缓冲盐；
(3)所述的琥珀酸盐缓冲盐为包括琥珀酸根离子的缓冲盐，例如琥珀酸-琥珀酸钠缓冲盐、琥珀酸组氨酸盐缓冲盐、琥珀酸-琥珀酸钾缓冲盐或琥珀酸-琥珀酸钙盐缓冲盐，又例如琥珀酸-琥珀酸钠；
(4)所述的组氨酸缓冲盐为组氨酸-盐酸缓冲盐或组氨酸-组氨酸盐酸盐缓冲盐，例如组氨酸-盐酸缓冲盐；
(5)所述的磷酸盐缓冲盐为包括磷酸二氢根离子的缓冲盐或磷酸一氢根离子的缓冲盐，例如磷酸二氢钾-磷酸氢二钾缓冲盐、磷酸二氢钾-磷酸氢二钠缓冲盐、磷酸二氢钠-磷酸氢二钠缓冲盐或磷酸二氢钠-磷酸氢二钾缓冲盐，又例如磷酸二氢钠-磷酸氢二钠缓冲盐；
(6)所述的Bis-Tris缓冲盐为Bis-Tris-盐酸缓冲盐；
(7)所述的糖类物质为蔗糖、麦芽糖和二水合α,α-海藻糖中的一种或多种，例如蔗糖；
(8)所述的非离子型表面活性剂为聚山梨酯、泊洛沙姆、曲拉通、肉豆蔻酰胺基丙基-二甲胺、棕榈酰胺基丙基-二甲胺、异硬脂酰胺基丙基-二甲胺、聚乙二醇、乙烯和丙二醇的共聚物、和、聚丙二醇中的一种或多种；例如聚山梨酯；所述的聚山梨酯例如聚山梨酯20或聚山梨酯80；所述的泊洛沙姆例如泊洛沙姆188；所述的乙烯和丙二醇的共聚物例如普郎尼克类；所述的普郎尼克类例如PF68；
(9)所述的阴离子表面活性剂为十二烷基硫酸钠、月桂基硫酸钠、辛基糖苷钠、月桂基-肌氨酸、肉豆寇基-肌氨酸、亚油酰基肌氨酸、硬脂酰基-肌氨酸、甲基椰油酰基牛磺酸钠和甲基油烯基牛磺酸二钠中的一种或多种；
(10)所述的两性离子表面活性剂为月桂基-磺基甜菜碱、肉豆寇基-磺基甜菜碱、亚油酰磺基甜菜碱、硬脂酰-磺基甜菜碱、亚油酰基-甜菜碱、肉豆蔻基-甜菜碱、或鲸蜡基-甜菜碱、月桂酰胺基丙基-甜菜碱、椰油酰胺基丙基-甜菜碱、亚油酰胺基丙基-甜菜碱、肉豆蔻酰胺基丙基-甜菜碱、棕榈酰胺基丙基-甜菜碱和异硬脂酰胺基丙基-甜菜碱中的一种或多种；例如月桂酰胺基丙基-甜菜碱。
4.如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，所述的药物组合物包括下述组分或者由下述组分组成：
5～25mg/mL的F0124-ADC；
7～90mg/mL的蛋白质保护剂；
0.05～1.0mg/mL的表面活性剂；
5～20mM的缓冲盐；
水；
所述药物组合物的pH值为5.0～5.5；
其中，F0124-ADC的定义如权利要求1或2所述。
5.如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，所述的药物组合物包括下述组分或者由下述组分组成：
10～20mg/mL的F0124-ADC；
7～60mg/mL的蛋白质保护剂；
0.09～0.6mg/mL的表面活性剂；
10～20mM的缓冲盐；
水；
所述药物组合物的pH值为5.0～5.5；
其中，F0124-ADC的定义如权利要求1或2所述。
6.如权利要求1-5任一项所述的药物组合物，其特征在于，所述的药物组合物包括下列任一方案所示的组分或者由下列任一方案所示的组分组成：
方案1：20mg/mL的F0124-ADC、50mg/mL的蔗糖、0.2mg/mL的聚山梨酯20、10mM的琥珀酸盐缓冲盐、水，该药物组合物的pH值为5.0；
方案2：20mg/mL的F0124-ADC、50mg/mL的蔗糖、0.2mg/mL的聚山梨酯20、10mM的琥珀酸盐缓冲盐、水，该药物组合物的pH值为5.5；
方案3：20mg/mL的F0124-ADC、60mg/mL的蔗糖、0.1mg/mL的聚山梨酯20、10mM的琥珀酸盐缓冲盐、水，该药物组合物的pH值为5.0；
方案4：20mg/mL的F0124-ADC、60mg/mL的蔗糖、0.1mg/mL的聚山梨酯20、10mM的琥珀酸盐缓冲盐、水，该药物组合物的pH值为5.5；
方案5：20mg/mL的F0124-ADC、30mg/mL的蔗糖、0.1mg/mL的聚山梨酯20、10mM的醋酸盐缓冲盐、水，该药物组合物的pH值为5.0；
方案6：10mg/mL的F0124-ADC、7mg/mL的海藻糖、0.09mg/mL的聚山梨酯20、20mM的琥珀酸盐缓冲盐、水，该药物组合物的pH值为5.0；
方案7：20mg/mL的F0124-ADC、60mg/mL的蔗糖、0.1mg/mL的聚山梨酯80、10mM的琥珀酸盐缓冲盐、水，该药物组合物的pH值为5.0；
方案8：20mg/mL的F0124-ADC、60mg/mL的蔗糖、0.6mg/mL的聚山梨酯20、10mM的琥珀酸盐缓冲盐、水，该药物组合物的pH值为5.0；
所述方案1～方案8中，F0124-ADC的结构优选为如式(I)所示的化合物：
Figure FDA0003233589220000041
其中Ab为抗人Trop2抗体hRS7；n为7-8，优选为7.6。
7.一种冷冻干燥制剂，其特征在于，所述的冷冻干燥制剂由如权利要求1-6任一项所述的药物组合物经冷冻干燥制得。
8.一种冷冻干燥制剂，其特征在于，所述的冷冻干燥制剂经溶解后含有如权利要求1-6任一项所述的药物组合物；所述的溶解过程优选采用纯化水、注射用水和生理盐水中的一种或多种，更优选采用注射用水。
9.一种药物组合物或冷冻干燥制剂在制备治疗Trop-2阳性肿瘤的药物中的应用，所述的药物组合物如权利要求1-6任一项所述；所述的冷冻干燥制剂如权利要求7或8所述；
较佳地，所述的应用中，所述的Trop-2阳性肿瘤为乳腺癌或尿路上皮癌；所述的乳腺癌可为三阴性乳腺癌，所述的尿路上皮癌可为肾盂癌、输尿管癌、膀胱癌或尿道癌。
10.一种药物制品，其特征在于，其包括容器，该容器中装有药物组合物或冷冻干燥制剂，所述的药物组合物如权利要求1-6任一项所述；所述的冷冻干燥制剂如权利要求7或8所述；
较佳地，所述容器为玻璃瓶或储液袋。
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