CN113116812A - 含抗Trop2抗体-药物偶联物的制剂及其制备方法和应用 - Google Patents

含抗Trop2抗体-药物偶联物的制剂及其制备方法和应用 Download PDF

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Abstract

本发明属于生物制剂领域，提供一种含抗Trop2抗体‑药物偶联物(ADC)的制剂及其制备方法和应用，所述制剂包括：抗Trop2抗体‑药物偶联物、稳定剂、缓冲剂和表面活性剂中的一种或多种。本发明的制剂可有效解决ADC不稳定、易聚集的问题，并具有优异的长期稳定性和加速稳定性。

Description

含抗Trop2抗体-药物偶联物的制剂及其制备方法和应用
技术领域
本发明属于生物制剂领域，涉及一种含抗体-药物偶联物的制剂。
背景技术
抗体-药物偶联物(Antibody-Drug Conjugates，ADC)是由抗体和药物偶联得到的具有 高度有效性和特异性的用于治疗癌症和其它病况的药物，其中抗体部分特异性结合在靶细 胞上的抗原，使得药物可发挥其对靶细胞的细胞毒性或其它治疗效果。抗Trop2抗体-药物 偶联物(抗Trop2-ADC)结合到Trop2受体后，抗Trop2-ADC开始以受体为媒介进行内化， 之后的溶酶体降解过程使其在细胞内释放细胞毒性代谢物。细胞毒性代谢物进而杀伤肿瘤 细胞。对于ADC药物，药物的偶联本身会降低抗体的稳定性，改变其物理化学性质。
本领域对稳定的制剂依然有需求。
发明内容
本发明的目的是提供一种在储藏过程中稳定的含抗Trop2抗体-药物偶联物制剂，以解 决现有技术存在的问题。
一方面，本发明提供一种液体制剂，包括：抗Trop2抗体-药物偶联物；还包括稳定剂、 缓冲剂和表面活性剂中的一种或多种。在一些实施方案中，所述液体制剂pH值为4～7。在 一些实施方案中，所述液体制剂pH值为4.5～6.0。在一些实施方案中，所述液体制剂pH值为4.5～5.6。
在一些实施方案中，本发明提供一种液体制剂，包括：抗Trop2抗体-药物偶联物，其 中所述偶联物的浓度为10mg/ml～50mg/ml；还包括稳定剂、缓冲剂和表面活性剂中的一种 或多种，所述稳定剂的浓度为20mg/ml～80mg/ml，所述缓冲剂的浓度为5mM～60mM；所述表面活性剂的浓度为0.1mg/ml～0.5mg/ml；在一些实施方案中，所述液体制剂pH值为 4.5～6.0。
一方面，在一些实施方案中，本发明提供一种固体制剂，由所述液体制剂冻干而成。
一方面，在一些实施方案中，本发明提供一种固体制剂，包括：抗Trop2抗体-药物偶 联物，其中所述偶联物的质量份数为约10份～约50份；还包括稳定剂、缓冲剂和表面活性 剂中的一种或多种；所述稳定剂的质量份数为约20份～约80份；所述缓冲剂的质量份数为 1份～10份；所述表面活性剂的质量份数为约0.1份～约0.5份。
在一些实施方案中，所述抗Trop2抗体-药物偶联物包含如式Ia的化合物：
Figure BDA0002868767100000021
或其药学上可接受的盐或溶剂合物,
其中
X为氢或卤素；
Y选自氢、C1-C6烷基、C3-C6环烷基和-C(＝O)R5；
R1选自H、-OH、-OC(＝O)R5和-OR5基团；
R2为H或C1-C6烷基；
R3为甲基、-CH2OH或-CH2OC(＝O)R6；
R4为-OH或–SH；
R5为C1-C6烷基或苄基；
R6为C1-C6烷基、苯基或苄基；
R7为氢、C1-C6烷基或氨基酸侧链；
R8为氢或者C1-C6烷基；
n为0、1、2、3、4、5、6、7或8；
p为1-10，如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10，或这些数值中的任何两个值之间的范 围(包括端点)或其中任何值；
Anti-Trop2为抗Trop2抗体。
在一些实施方案中，所述抗Trop2抗体-药物偶联物包含如式Ib的化合物：
Figure BDA0002868767100000022
或其药学上可接受的盐或溶剂合物,
其中
X为氢或卤素；
Y选自氢、C1-C6烷基、C3-C6环烷基和-C(＝O)R5；
R1选自H、-OH、-OC(＝O)R5和-OR5基团；
R2为H或C1-C6烷基；
R3为甲基、-CH2OH或-CH2OC(＝O)R6；
R4为-OH或–SH；
R5为C1-C6烷基或苄基；
R6为C1-C6烷基、苯基或苄基；
R7为氢、C1-C6烷基或氨基酸侧链；
R8为氢或者C1-C6烷基；
p为1-10，如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10，或这些数值中的任何两个值之间的范 围(包括端点)或其中任何值；
Anti-Trop2为抗Trop2抗体。
在一些实施方案中，所述抗Trop2抗体-药物偶联物包含如式Ic的化合物：
Figure BDA0002868767100000031
或其药学上可接受的盐或溶剂合物，
其中，p为1-10，如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10，或这些数值中的任何两个值之 间的范围(包括端点)或其中任何值；
Anti-Trop2为抗Trop2抗体。
在一些实施方案中，p为2-6；在一些实施方案中，p为2-3；在一些实施方案中，p约为2.1。
在一些实施方案中，所述抗Trop2抗体的轻链氨基酸序列如SEQ ID NO:1或SEQ IDNO:3所示，重链氨基酸序列如SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:4所示。在一些实施方案中， 所述抗Trop2抗体表达于CHO细胞中。
在一些实施方案中，所述抗Trop2抗体为抗体A、抗体B和/或抗体C；在一些实施方案中，所述抗Trop2抗体为抗体C。
所述抗体A的轻链氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，重链氨基酸序列如SEQ ID NO:2 所示，并且抗体A表达于悬浮的CHO细胞中，比如由CHO-K1细胞经培养适应悬浮生长 的中国仓鼠卵巢细胞；
抗体B的轻链氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示，重链氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示，并且抗体B表达于悬浮的CHO细胞中，比如由CHO-K1细胞经培养适应悬浮生长的 中国仓鼠卵巢细胞；
抗体C的轻链氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示，重链氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示，并且抗体C的岩藻糖含量为0-5％。在一些实施方案中，抗体C表达于Fut8基因(α-(1,6)-岩藻糖基转移酶基因)被敲除的CHO细胞中，比如CHO-BAT-KF fut8(-/-)细胞，CN109096399A已公开上述细胞。
在一些实施方案中，抗Trop2抗体-药物偶联物为ADC-1，为Ic所示化合物，其中，p为2.1，抗Anti-Trop2抗体为抗体C。
在一些实施方案中，抗Trop2抗体-药物偶联物的质量份数为20份～30份；在一些实施 方案中，抗Trop2抗体-药物偶联物的质量份数为23份～27份；在一些实施方案中，抗Trop2 抗体-药物偶联物的质量份数为25份。
在一些实施方案中，所述稳定剂为海藻糖和/或蔗糖；在一些实施方案中，所述稳定剂 为海藻糖。
在一些实施方案中，所述稳定剂的质量份数为40份～80份；在一些实施方案中，所述 稳定剂的质量份数为50份～70份；在一些实施方案中，所述稳定剂的质量份数为54或60份。
在一些实施方案中，所述缓冲剂为组氨酸-琥珀酸缓冲剂或组氨酸-柠檬酸缓冲剂；在一 些实施方案中，所述缓冲剂为组氨酸-琥珀酸缓冲剂。
在一些实施方案中，所述缓冲剂的质量份数为1份～10份；在一些实施方案中，所述 缓冲剂的质量份数为3份～7份；在一些实施方案中，所述缓冲剂的质量份数为3份～4份。
在一些实施方案中，所述缓冲剂包含质量份数为1.18份的琥珀酸和2.1份的盐酸组氨 酸，其中部分或全部琥珀酸可以以相应量盐的形式存在，部分或全部盐酸组氨酸可以以相 应量组氨酸形式存在。在一些实施方案中，所述缓冲剂包含质量份数为1.18份的琥珀酸和 2.1份的盐酸组氨酸一水合物。
在一些实施方案中，所述表面活性剂为吐温20(即聚山梨酯20)或吐温80(即聚山梨酯80)；在一些实施方案中，所述表面活性剂为吐温80。
在一些实施方案中，表面活性剂的质量份数为0.2份～0.4份；在一些实施方案中，表 面活性剂的质量份数为0.25份～0.35份；在一些实施方案中，表面活性剂的质量份数为约 0.3份。
在一些实施方案中，所述固体制剂包括：质量份数为10份～50份的抗Trop2抗体-药物 偶联物，质量份数为1份～10份的缓冲剂，质量份数为20份～80份的稳定剂，以及质量份 数为0.1份～0.5份的表面活性剂；在一些实施方案中，所述固体制剂包括：质量份数为20 份～30份的抗Trop2抗体-药物偶联物，质量份数为3份～7份的缓冲剂，质量份数为40份～80份的稳定剂，以及质量份数为0.2份～0.4份的表面活性剂；在一些实施方案中，所述固体制剂包括：质量份数为20份～30份的ADC-1，质量份数为3份～7份的组氨酸-琥珀酸缓 冲剂，质量份数为40份～80份的海藻糖，以及质量份数为0.2份～0.4份的吐温80；在一些 实施方案中，所述固体制剂包括：质量份数为23份～27份的ADC-1，质量份数为3份～4 份的组氨酸-琥珀酸缓冲剂，质量份数为50份～70份的海藻糖，以及质量份数为0.25份～0.35 份的吐温80；在一些实施方案中，所述固体制剂包括：质量份数为25份的ADC-1，质量 份数为1.18份的琥珀酸、2.1份盐酸组氨酸，质量份数为54份的海藻糖，以及质量份数为 约0.3份的吐温80；在一些实施方案中，所述固体制剂包括：质量份数为25份的ADC-1， 质量份数为1.18份的琥珀酸、2.1份盐酸组氨酸一水合物，质量份数为60份的海藻糖二水 合物(或质量份数为54份的海藻糖)，以及质量份数为0.3份的吐温80。
在一些实施方案中，所述固体制剂为冻干制剂，其通过将包含所述抗Trop2抗体-药物 偶联物的液体制剂冻干获得。在一些实施方案中，所述冻干制剂为粉末。
一方面，一些实施方案提供包含上文所述抗Trop2抗体-药物偶联物的液体制剂，所述 液体制剂中还包含所述缓冲剂、稳定剂以及表面活性剂中的一种或多种。所述液体制剂可 以用来制备上述冻干制剂，或为将上述冻干制剂复溶后得到的复溶制剂。
在一些实施方案中，所述液体制剂的pH值为4.6～5.6；在一些实施方案中，所述液体 制剂的pH值为4.6～5.2；在一些实施方案中，所述液体制剂的pH值为4.9。
在一些实施方案中，所述液体制剂包括：抗Trop2抗体-药物偶联物，其中所述偶联物 的浓度为10mg/ml～50mg/ml；还包括稳定剂、缓冲剂和表面活性剂中的一种或多种；所述 稳定剂的浓度为20mg/ml～80mg/ml；所述缓冲剂为组氨酸缓冲剂、琥珀酸缓冲剂、柠檬酸 缓冲剂或它们的组合；所述表面活性剂的浓度为0.1mg/ml～0.5mg/ml。
在一些实施方案中，所述液体制剂中，缓冲剂的浓度为1mg/ml～10mg/ml；在一些实施 方案中，所述缓冲剂的浓度为3mg/ml～7mg/ml；在一些实施方案中，所述缓冲剂的浓度为 3mg/ml～4mg/ml。在一些实施方案中，所述缓冲剂包含浓度为1.18mg/ml的琥珀酸和2.1mg/ml的盐酸组氨酸。在一些实施方案中，所述缓冲剂包含浓度为1.18mg/ml(即10mM)的琥珀酸和2.1mg/ml(即10mM)的盐酸组氨酸一水合物。
在一些实施方案中，所述液体制剂中，缓冲剂的浓度为10mM～60mM；在一些实施方案中，所述液体制剂中，缓冲剂的浓度为20mM～40mM；在一些实施方案中，所述液体制 剂中，缓冲剂的浓度为约20mM。在一些实施方案中，所述液体制剂中，缓冲剂为约10mM 琥珀酸缓冲液和约10mM组氨酸缓冲液。
在一些实施方案中，所述液体制剂包含：10mg/ml～50mg/ml的抗Trop2抗体-药物偶联 物，5mM～30mM的缓冲剂，20mg/ml～80mg/ml的稳定剂，以及0.1mg/ml～0.5mg/ml的表面 活性剂。在一些实施方案中，所述液体制剂包含：25mg/ml的抗Trop2抗体-药物偶联物，1.18mg/ml的琥珀酸，2.1mg/ml的盐酸组氨酸，54mg/ml的海藻糖，0.3mg/ml的吐温80，pH 为4.6-5.2。在一些实施方案中，所述液体制剂包含：25mg/ml的抗Trop2抗体-药物偶联物，1.18mg/ml的琥珀酸，2.1mg/ml的盐酸组氨酸一水合物，60mg/ml的海藻糖二水合物，0.3mg/ml的吐温80，pH为4.6-5.2。在一些实施方案中，所述液体制剂包含：25mg/ml的 抗Trop2抗体-药物偶联物，1.18mg/ml的琥珀酸，2.1mg/ml的盐酸组氨酸，158mM的海藻 糖，0.3mg/ml的吐温80，用氢氧化钠调pH至4.6-5.2。在一些实施方案中，所述液体制剂 包含：25mg/ml的ADC-1，1.18mg/ml的琥珀酸，2.1mg/ml的盐酸组氨酸，54mg/ml的海藻 糖，0.3mg/ml的吐温80，pH为4.6-5.2。在一些实施方案中，所述液体制剂包含：25mg/ml 的ADC-1，1.18mg/ml的琥珀酸，2.1mg/ml的盐酸组氨酸一水合物，54mg/ml的海藻糖， 0.3mg/ml的吐温80，pH为4.6-5.2。在一些实施方案中，所述液体制剂包含：25mg/ml的 ADC-1，1.18mg/ml的琥珀酸，2.1mg/ml的盐酸组氨酸，60mg/ml的海藻糖二水合物，0.3mg/ml 的吐温80，pH为4.6-5.2。在一些实施方案中，所述液体制剂包含：25mg/ml的ADC-1， 1.18mg/ml的琥珀酸，2.1mg/ml的盐酸组氨酸一水合物，60mg/ml的海藻糖二水合物， 0.3mg/ml的吐温80，pH为4.6-5.2。在一些实施方案中，所述液体制剂包括，25mg/ml的 抗Trop2抗体-药物偶联物，10mM的琥珀酸，10mM的盐酸组氨酸，158mM的海藻糖， 0.3mg/ml的吐温80，用氢氧化钠调pH至4.6-5.2。
本发明提供一种制备所述的固体制剂的方法，其中，包括：
1)配制：取抗Trop2抗体-药物偶联物、稳定剂、缓冲剂、表面活性剂，溶解于水中至规定量，并调整pH值至规定值，得到液体制剂；
2)冻干：将液体制剂进行冻干，得到所述的固体制剂。
在一些实施方案中，冻干的步骤包括预冻、退火、一次干燥、二次干燥。
并提供一种复溶制剂，其中，所述复溶制剂通过用药学上可接受的溶剂对所述的冻干 制剂(即固体制剂)进行重构获得。
在一些实施方案中，所述复溶制剂包括：抗Trop2抗体-药物偶联物，其中所述偶联物 的浓度为10mg/ml～50mg/ml；还包括稳定剂、缓冲剂和表面活性剂中的一种或多种；所述 稳定剂的浓度为20mg/ml～80mg/ml；所述缓冲剂为组氨酸缓冲剂、琥珀酸缓冲剂、柠檬酸 缓冲剂或它们的组合；所述表面活性剂的浓度为0.1mg/ml～0.5mg/ml。
在一些实施方案中，所述复溶制剂中，缓冲剂的浓度为10mM～60mM；在一些实施方案中，所述复溶制剂中，缓冲剂的浓度为20mM～40mM；在一些实施方案中，所述复溶制 剂中，缓冲剂的浓度为约20mM。
在一些实施方案中，所述复溶制剂包含：10mg/ml～50mg/ml的抗Trop2抗体-药物偶联 物，5mM～30mM的缓冲剂，20mg/ml～80mg/ml的稳定剂，以及0.1mg/ml～0.5mg/ml的表面 活性剂。在一些实施方案中，所述复溶制剂包含：25mg/ml的ADC-1，1.18mg/ml的琥珀酸，2.1mg/ml的盐酸组氨酸，54mg/ml的海藻糖，0.3mg/ml的吐温80，pH为4.6-5.2。在一些 实施方案中，所述复溶制剂包含：25mg/ml的ADC-1，1.18mg/ml的琥珀酸，2.1mg/ml的 盐酸组氨酸一水合物，60mg/ml的海藻糖二水合物，0.3mg/ml的吐温80，pH为4.6-5.2。
本发明的固体制剂可有效解决ADC不稳定、易聚集的问题，并具有优异的长期稳定性 和加速稳定性。
本发明的固体制剂在冻干后、复溶后、以及复溶配伍稀释后，各项指标变化不大，结 合活性也在正常范围内，稳定性好，适合长期保存。在冻干制剂在重构后，ADC保持稳定，不易形成聚集体或颗粒。
本发明提供所述的固体制剂在制备用于预防和/或治疗Trop2阳性疾病的药物中的应用。 在一些实施方案中，本发明提供一种试剂盒，试剂盒包括所述液体制剂或固体制剂，以及 用于指导有需要患者给药的说明书。另提供一种预防和/或治疗Trop2阳性疾病的方法，包 括向需要的患者注射有效量的所述复溶制剂或液体制剂。在一些实施方案中，所述Trop2 阳性疾病包括但不限于三阴性乳腺癌、胶质母细胞瘤、成神经管细胞瘤、非小细胞肺癌、 小细胞肺癌、上皮癌、乳腺癌、头颈癌、肾癌、卵巢癌、胃癌、卡波西肉瘤、胰腺癌和肺癌、宫颈癌、结肠直肠癌、食管癌、口腔鳞状细胞癌、前列腺癌、甲状腺癌、膀胱癌、神 经胶质瘤、肝胆管癌、结肠直肠癌、T细胞淋巴瘤。在一些实施方案中，所述Trop2阳性 疾病包括但不限于非小细胞肺癌、小细胞肺癌、上皮癌。
附图说明
图1：不同样品SEC-HPLC单体纯度随时间的变化趋势；
图2：不同样品SEC-HPLC聚体随时间的变化趋势；
图3：不同样品SEC-HPLC片段随时间的变化趋势；
图4：不同样品HIC-HPLC主峰(D2)含量随时间的变化趋势；
图5：不同pH样品SEC-HPLC单体纯度随时间的变化趋势；
图6：不同pH样品SEC-HPLC聚体含量随时间的变化趋势；
图7：不同pH样品HIC-HPLC主峰含量随时间的变化趋势；
图8：样品在不同缓冲液中SEC-HPLC单体纯度随时间的变化趋势；
图9：样品在不同缓冲液中SEC-HPLC聚体随时间的变化趋势；
图10：样品在不同缓冲液中SEC-HPLC片段随时间的变化趋势；
图11：样品在不同缓冲液中HIC-HPLC主峰含量随时间的变化趋势；
图12：不同稳定剂样品SEC-HPLC单体纯度随时间的变化趋势；
图13：不同稳定剂样品SEC-HPLC聚体随时间的变化趋势；
图14：不同稳定剂样品HIC-HPLC主峰含量随时间的变化趋势；
图15：不同表面活性剂样品配伍后的微粒数(≥25μm)(个/ml)；
图16：不同表面活性剂样品配伍后的微粒数(≥10μm)(个/ml)。
具体实施方案
下面将通过具体实施方案来说明本发明，但本发明的内容不限于此。
需要说明的是，本发明中，涉及到液体制剂组分的“％”指重量体积(w/v)百分比，其中重量单位可以为g，体积单位可以为ml。比如溶液中含1％稳定剂表示100ml溶液中含有1g稳定剂，或稳定剂含量为0.01g/ml。
术语“约”当在数值之前使用时指示这个值可以在合理的范围内变化，诸如在规定值 的±10％、±5％或±1％以内。“约x”包括“x”。
如本文所用的术语“有效量”或“治疗有效量”指的是正在施用的药剂的足够量，其将使正在治疗的疾病或病状的一个或多个症状减轻至一定程度。结果可以是疾病的征象、症状或病因的减少和/或缓和，或生物系统的任何其它所需的改变。举例来说，用于治疗用途的“有效量”是提供疾病症状的临床上显著的减少而无过度的不良副作用所需要的包括如本文所公开的制剂的量。“有效量”或“治疗有效量”可能因患者，正在治疗的病状，正 在治疗的病状的严重性，以及处方医师的判断而异。
如本文所用的关于配方、固体制剂或成分的术语“可接受的”或“医药学上可接受的” 意味着对所治疗的患者的一般健康状况不具有持续的有害影响或并不消除化合物的生物活 性或特性，并且是相对无毒的。
ADC可以形成广泛多种医药学上可接受的盐，包括但不限于：与有机酸形成的酸加成 盐，这种有机酸包括但不限于脂肪族单羧酸和二羧酸、苯基取代的烷酸、羟基烷酸、烷二酸、芳香酸、脂肪族和芳香族磺酸、氨基酸等等，例如乙酸、三氟乙酸、丙酸、乙醇酸、 丙酮酸、草酸、马来酸、丙二酸、琥珀酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、肉桂酸、 扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、对甲苯磺酸、水杨酸，等等；与无机酸反应形成的酸加成盐， 这种无机酸包括盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸、氢碘酸、氢氟酸、亚磷酸，等等；及 与金属离子(例如，碱金属离子(例如钠或钾)、碱土金属离子(例如钙或镁)或铝离子) 或者与有机碱如二乙醇胺、三乙醇胺、N-甲基葡糖胺等等形成的盐。
如本文所用的术语“个体”或“患者”指的是作为治疗、观测或实验的目标的动物。仅举例来说，患者可以是(但不限于)哺乳动物，包括(但不限于)人类。
本发明所述的“质量份数”是指相等单位质量情况下的数值，单位质量即每份的质量， 可以是任何适合的质量。如每份是1g时，单位质量就是1g/份，此时20份即为20g；单 位质量也可以是1kg/份或1mg/份。此外，单位质量不仅限于整数，例如可以为0.5g/份， 此时20份即为10g。
术语“缓冲剂”，在一些文献中，也被称为缓冲系统或缓冲体系，其包括但不限于有机 酸盐，如琥珀酸、醋酸、柠檬酸，抗坏血酸，葡糖酸，碳酸，酒石酸或苯二甲酸及其盐；Tris，thomethamine盐酸盐，或磷酸盐缓冲剂。此外，氨基酸及其盐也可以用作缓冲剂。本发明中的缓冲剂，可以是一种，如组氨酸缓冲剂、琥珀酸缓冲剂、柠檬酸缓冲剂等；也可 以是多种，当涉及多种缓冲剂组成时，采用“-”表示，如组氨酸-琥珀酸缓冲剂，表示由组 氨酸缓冲剂和琥珀酸缓冲剂组成；组氨酸-柠檬酸缓冲剂，表示由组氨酸缓冲剂和柠檬酸缓 冲剂组成等。应当注意，以组氨酸-琥珀酸缓冲剂为例，并非表示该缓冲剂由组氨酸单体和 琥珀酸单体组成，而是表示该缓冲剂由组成组氨酸缓冲剂的酸(或碱)和/或盐，以及组成 琥珀酸缓冲剂的酸(或碱)和/或盐组成；如可以由组氨酸和琥珀酸钠组成，可以由盐酸组 氨酸和琥珀酸组成，可以由盐酸组氨酸和琥珀酸钠组成，可以由组氨酸、盐酸组氨酸、琥 珀酸和琥珀酸钠组成等。在一些实施方案中，组氨酸-琥珀酸缓冲剂由盐酸组氨酸和琥珀酸 钠组成。
本发明中缓冲剂的量，是指组成缓冲剂的缓冲体系中缓冲对的总量。在一些实施方案 中，采用摩尔浓度作为缓冲剂的量的单位，其数值指缓冲剂的缓冲体系中缓冲对的摩尔浓 度。如，由盐酸组氨酸和琥珀酸组成的组氨酸-琥珀酸缓冲剂作为缓冲剂时，给定浓度的组 氨酸-琥珀酸缓冲剂(如20mM)是盐酸组氨酸和琥珀酸的组合浓度(如盐酸组氨酸为10mM， 琥珀酸为10mM。)
本发明所述的制剂可以用所述辅料或其水合物配制。比如海藻糖，可以是无水海藻糖， 也可以是海藻糖水合物，如海藻糖二水合物。如所述的“5.4％海藻糖”，为5.4g海藻糖(或 相应量的海藻糖水合物(如6g海藻糖二水合物))溶解在溶剂里形成100ml溶液，有特别说 明的除外。
适于偶联连接子的药物是本领域各种已知的或可预见的细胞毒性试剂，包括抗有丝分 裂细胞毒药物和DNA裂解细胞毒药物。在一些实施方案中，药物为抗有丝分裂细胞毒药物。 在一些实施方案中，抗Trop2抗体-药物偶联物(以下简称ADC)中的药物可以是美登素或 其衍生物，也可以是其它有肿瘤细胞毒性的化合物，如喜树碱或其衍生物，澳瑞他汀类似 物等。在一些实施方案中，药物为DM1。美登醇类似物及衍生物可包括美登素及美登素类 似物，它们可以按照已知方法从天然源分离、使用生物技术制造(见如：Yu等，99PNAS7968-7973(2002))、或按照已知方法合成制备(见如：Cassady等，Chem.Pharm.Bull. 52(1)1-26(2004))。取决于连接子的类型，美登醇上的很多位置可用作连接位置。例如，对 于形成酯键，C-3位置具有羟基、C-14位置为羟甲基修饰、C-15位置为羟基修饰以及C-20 位置具有羟基都是合适的。
在一些实施方案中，ADC的抗体，其能特异性的作用于滋养层细胞表面糖蛋白抗原2。 在一些实施方案中，抗Trop2抗体为抗体A、抗体B和/或抗体C。在一些实施方案中，抗 体A的轻链包括SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列，重链包括SEQ ID NO:2所示的氨基酸 序列；抗体B和抗体C的轻链包括SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列，重链包括SEQ ID NO: 4所示的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗体A的氨基酸序列和抗体B的氨基酸序列表 达于悬浮的CHO细胞中，该细胞系为中华仓鼠卵巢细胞系CHO-K1(ATCC#CCL-61)驯化后 适应悬浮生长而来。抗体C的氨基酸序列表达于CHO-BAT-KF fut8(-/-)细胞中。在一些实 施方案中，抗Trop2抗体为抗体C。
各序列编号对应的序列如表1所示。
表1
Figure BDA0002868767100000091
Figure BDA0002868767100000101
抗Trop2抗体与药物通过连接子偶联，得到ADC。适用于本发明的连接子包括可断裂 连接子和不可断裂连接子。其中，可断裂连接子通常具有特殊的敏感型结构，这种连接子 在正常环境下稳定，在肿瘤环境下，能够断裂，进而释放药物，以起到治疗作用。常见的可断裂连接子有蛋白酶敏感型的连接子多含有蛋白酶可识别断裂的二肽键，多见为缬氨酸- 瓜氨酸连接子(val-cit)；还有酸敏感型连接子，多为含有腙键的连接子；另外一种为谷胱 甘肽敏感型连接子，通常含有谷胱甘肽可还原的二硫键。不可断裂连接子在细胞内代谢后 仍保持完整。含有此类连接子的抗体-药物偶联物，需要经过溶酶体降解，才能释放出细胞 毒分子。与可断裂连接子相比，不可断裂连接子在循环系统中，具有良好的稳定性。在一 些实施方案中，连接子为不可断裂连接子。
在一些实施方案中，抗Trop2抗体-药物偶联物包含如式Ia或Ib的化合物：
Figure BDA0002868767100000111
或其药学上可接受的盐或溶剂合物，
其中
X为氢或卤素；
Y选自氢、C1-C6烷基、C3-C6环烷基和-C(＝O)R5；
R1选自H、-OH、-OC(＝O)R5和-OR5基团；
R2为H或C1-C6烷基；
R3为甲基、-CH2OH或-CH2OC(＝O)R6；
R4为-OH或–SH；
R5为C1-C6烷基或苄基；
R6为C1-C6烷基、苯基或苄基；
R7为氢、C1-C6烷基或氨基酸侧链；
R8为氢或者C1-C6烷基；
n为0、1、2、3、4、5、6、7或8；
p为1-10；
Anti-Trop2为抗Trop2抗体。
在一些实施方案中，抗Trop2抗体-药物偶联物包含如式Ic的化合物：
Figure BDA0002868767100000121
或其药学上可接受的盐或溶剂合物，其中，p为1-10；Anti-Trop2为抗Trop2抗体。在 一些实施方案中，Anti-Trop2为抗体C。
药物抗体偶联比(DAR)为偶联物中药物与抗体的摩尔比。在一些实施方案中，DAR选 自1、2、3、4、5、6、7、8、9或10；在一些实施方案中，DAR选自2、3、4、5或6； 在一些实施方案中，DAR选自2。
p为ADC的平均DAR。在一些实施方案中，p为1-10；在一些实施方案中，p为2-6； 在一些实施方案中，p为2-3；在一些实施方案中，p约为2.1。在一些实施方案中，ADC 为式Ic所示的结构，其中Anti-Trop2为抗体C，p约为2.1，该ADC为文中描述的ADC-1。
在一些实施方案中，本发明提供一种固体制剂，包括：ADC，其中ADC的质量份数为约10份～约50份；还包括稳定剂、缓冲剂和表面活性剂中的一种或多种；稳定剂的质量份数为约20份～约80份；缓冲剂为组氨酸缓冲剂、琥珀酸缓冲剂、柠檬酸缓冲剂或它们的组合；表面活性剂的质量份数为约0.1份～约0.5份。
在一些实施方案中，ADC的质量份数为约20份～约30份；在一些实施方案中，ADC的质量份数为23份～27份；在一些实施方案中，ADC的质量份数为约25份。在一些实施 方案中，ADC的质量份数约为约10份、约20份、约23份、约25份、约27份、约30、 约40份、约50份或任意两个质量份数之间的范围，包括端点值。
在一些实施方案中，ADC为ADC-1；在一些实施方案中，ADC-1的质量份数为约20 份～约30份；在一些实施方案中，ADC-1的质量份数为约23份～约27份；在一些实施方 案中，ADC-1的质量份数为约25份。
在一些实施方案中，稳定剂的质量份数为约40份～约80份；在一些实施方案中，稳定 剂的质量份数为约50份～约70份；在一些实施方案中，稳定剂的质量份数为约54份。在一些实施方案中，稳定剂的质量份数为约20份、约40份、约50份、约54份、约60份、 约70份、约80份或任意两个质量份数之间的范围，包括端点值。
在一些实施方案中，稳定剂为海藻糖及其水合物和蔗糖及其水合物中的一种或多种； 在一些实施方案中，稳定剂为海藻糖。在一些实施方案中，稳定剂为质量份数50份～70份 的海藻糖；在一些实施方案中，稳定剂为质量份数约54份的海藻糖或约60份的海藻糖二水合物。
在一些实施方案中，缓冲剂为组氨酸缓冲剂、琥珀酸缓冲剂、柠檬酸缓冲剂或它们的 组合。在一些实施方案中，缓冲剂为组氨酸-琥珀酸缓冲剂或组氨酸-柠檬酸缓冲剂；在一些 实施方案中，缓冲剂为组氨酸-琥珀酸缓冲剂。应理解，本申请中缓冲剂(例如组氨酸缓冲 剂、枸橼酸缓冲剂、琥珀酸缓冲剂)与酸(如盐酸)或碱(如NaOH或KOH)配合使用， 形成缓冲体系。缓冲体系可以是弱酸及其盐的体系，也可以是弱碱及其盐的体系，视具体 使用缓冲剂而定。本申请中无论所述缓冲剂处于酸和/或盐的形式，当提及缓冲剂的质量份 数或摩尔浓度时，均以其总酸根离子计。比如，当缓冲体系为琥珀酸(HOOCCH2CH2COOH) 缓冲剂，无论其中琥珀酸以HOOCCH2CH2COOH，HOOCCH2CH2COO-和/或 -OOCCH2CH2COO-的形式存在，琥珀酸缓冲剂的量指HOOCCH2CH2COOH， HOOCCH2CH2COO-和-OOCCH2CH2COO-的总量以其酸根离子-OOCCH2CH2COO-计。当缓 冲体系为组氨酸-琥珀酸缓冲剂，缓冲剂的质量份数为琥珀酸的质量份数与盐酸组氨酸的质 量份数的总和。
在一些实施方案中，缓冲剂的质量份数为约1份～约10份；在一些实施方案中，缓冲 剂的质量份数为约3份～约7份；在一些实施方案中，缓冲剂的质量份数为约3份～约4份。 在一些实施方案中，缓冲剂包含质量份数约为1.18份的琥珀酸和约2.1份的盐酸组氨酸。 在一些实施方案中，缓冲剂包含质量份数约为1.18份的琥珀酸和约2.1份的盐酸组氨酸一 水合物。
在一些实施方案中，表面活性剂的质量份数为约0.2份～约0.4份；在一些实施方案中， 表面活性剂的质量份数为约0.25份～约0.35份；在一些实施方案中，表面活性剂的质量份 数约为约0.3份。在一些实施方案中，表面活性剂的质量份数为约0.1份、约0.2份、约0.25 份、0.3份、约0.35份、约0.4份、约0.5份或任意两个质量份数之间的范围，包括端点值。
在一些实施方案中，表面活性剂为吐温20或吐温80；在一些实施方案中，表面活性剂为吐温80。在一些实施方案中，表面活性剂为质量份数约0.25份～约0.35份的吐温80；在一些实施方案中，表面活性剂为质量份数约0.3份的吐温80。
在一些实施方案中，固体制剂包括：质量份数为约10份～约50份的ADC(比如ADC-1)， 质量份数为约1份～约10份的缓冲剂(比如组氨酸-琥珀酸缓冲剂或组氨酸-柠檬酸缓冲剂)， 质量份数为约20份～约80份的稳定剂(比如海藻糖或蔗糖或其水合物)，以及质量份数为 约0.1份～约0.5份的表面活性剂(比如吐温20或吐温80)。
在一些实施方案中，固体制剂包括：质量份数为约20份～约30份的ADC(比如ADC-1)， 质量份数为约3份～约7份的缓冲剂(比如组氨酸-琥珀酸缓冲剂或组氨酸-柠檬酸缓冲剂)， 质量份数为约40份～约80份的稳定剂(比如海藻糖或蔗糖或其水合物)，以及质量份数为 约0.2份～约0.4份的表面活性剂(比如吐温20或吐温80)。
在一些实施方案中，固体制剂包括：质量份数为约23份～约27份的ADC(比如ADC-1)， 质量份数为约3份～约4份的缓冲剂(比如组氨酸-琥珀酸缓冲剂或组氨酸-柠檬酸缓冲剂)， 质量份数为约50份～约70份的稳定剂(比如海藻糖或蔗糖或其水合物)，以及质量份数为 约0.25份～约0.35份的表面活性剂(比如吐温20或吐温80)。
在一些实施方案中，固体制剂包括：质量份数为约25份的ADC(比如ADC-1)，质量份数为约3.3份(或约3.28份)的缓冲剂(比如组氨酸-琥珀酸缓冲剂或组氨酸-柠檬酸缓冲剂)，质量份数为约54份(或约60份)的稳定剂(比如海藻糖或蔗糖或其水合物)，以及 质量份数为约0.3份的表面活性剂(比如吐温20或吐温80)。
在一些实施方案中，固体制剂包括：质量份数为约20份～约30份的ADC-1，质量份数为约3份～约7份的柠檬酸-盐酸组氨酸缓冲剂，质量份数为约40份～约80份的蔗糖，以及质量份数为约0.2份～约0.4份的吐温20。
在一些实施方案中，固体制剂包括：质量份数为约20份～约30份的ADC-1，质量份数为约3份～约7份的组氨酸-琥珀酸缓冲剂，质量份数为约40份～约80份的海藻糖，以及质量份数为约0.2份～约0.4份的吐温80。
在一些实施方案中，固体制剂包括：质量份数为约23份～约27份的ADC-1，质量份数为约3份～约4份的组氨酸-琥珀酸缓冲剂，质量份数为50份～70份的海藻糖，以及质量份数为约0.25份～约0.35份的吐温80。
在一些实施方案中，固体制剂包括：质量份数为约25份的ADC-1，质量份数为约1.18 份的琥珀酸，质量份数为约2.1份盐酸组氨酸，质量份数为约54份的海藻糖，以及质量份 数为约0.3份的吐温80。
在一些实施方案中，固体制剂包括：质量份数为约25份的ADC-1，质量份数为约1.18 份的琥珀酸，质量份数为约2.1份盐酸组氨酸，质量份数为约60份的海藻糖二水合物，以 及质量份数为约0.3份的吐温80。
在一些实施方案中，固体制剂包括：质量份数为约25份的ADC-1，质量份数为约1.18 份的琥珀酸，质量份数为约2.1份盐酸组氨酸一水合物，质量份数为约60份的海藻糖二水 合物，以及质量份数为约0.3份的吐温80。
在一些实施方案中，所述固体制剂的pH(比如在加水或生理盐水溶解后)约为4.5-6.0。 在一些实施方案中，所述固体制剂的pH(比如在加水或生理盐水溶解后)约为4.6-5.6。在 一些实施方案中，所述固体制剂的pH(比如在加水或生理盐水溶解后)约为4.6-5.2。
在一些实施方案中，以上所述固体制剂还包含一定量的Na+或K+，用于与缓冲剂形成 缓冲体系，调节pH，比如约0.1份-约1份的Na+，约0.2份-约0.5份的Na+，或约0.25份 -约0.3份的Na+。
在一些实施方案中，固体制剂为粉末。在一些实施方案中，固体制剂为冻干制剂。
在一些实施方案中，固体制剂的规格(即可以装入一个容器(比如一个药瓶或者药袋) 的剂量)为约40～约200mg的ADC，约80～约120mg的ADC，约92～约108mg的ADC， 或约100mg的ADC。在一些实施方案中，固体制剂的规格为约40mg、约80mg、约92mg、 约100mg、约108mg、约120mg、约200mg的ADC，或任何两个数字之间的范围，包括 端点值。
在一些实施方案中，固体制剂包括：约40～约200mg的ADC，约4～约40mg的缓冲剂，80～320mg的稳定剂，以及质量份数为约0.4～约2mg的表面活性剂。
在一些实施方案中，固体制剂包括：约80～约120mg的ADC-1，约12～约28mg的组氨酸-琥珀酸缓冲剂，约160～约320mg的海藻糖，以及约0.8～约1.6mg的吐温80。
在一些实施方案中，固体制剂包括：质量份数为约92～约108mg的ADC-1，约12～约16mg的组氨酸-琥珀酸缓冲剂，约200～约280mg的海藻糖，以及质量份数为约1～约1.4mg的吐温80。
在一些实施方案中，固体制剂包括：约100mg的ADC-1，约4.72mg的琥珀酸，约8.4mg的盐酸组氨酸，约216mg的海藻糖，以及约1.2mg的吐温80。
在一些实施方案中，固体制剂包括：约100mg的ADC-1，约4.72mg的琥珀酸，约8.4mg的盐酸组氨酸，约240mg的海藻糖二水合物，以及约1.2mg的吐温80。
在一些实施方案中，固体制剂包括：约100mg的ADC-1，约4.72mg的琥珀酸，约8.4mg的盐酸组氨酸一水合物，约240mg的海藻糖二水合物，以及约1.2mg的吐温80。在一些实 施方案中，以上所述固体制剂还包含一定量的Na+或K+，比如约0.5mg～约4mg的Na+， 约1mg～约2mg的Na+，或约1mg～约1.2mg的Na+。
在一些实施方案中，在向患者给药时，将每一个容器含的剂量溶于足够量的注射用溶 剂(比如注射用水或生理盐水)以得到约4ml溶液。
在一些实施方案中，固体制剂为冻干制剂，其通过将包含ADC的液体制剂冻干获得， 液体制剂中还包含缓冲剂、稳定剂以及表面活性剂中的一种或多种，及溶剂，比如水，如 注射用水。
在一些实施方案中，本发明提供一种液体制剂。在一些实施方案中，所述液体制剂可 以用来制备上述冻干制剂。在一些实施方案中，所述液体制剂为将上述冻干制剂复溶后得 到的复溶制剂。
在一些实施方案中，所述液体制剂包括：ADC，其中ADC的浓度为约10mg/ml～约50mg/ml；还包括稳定剂、缓冲剂和表面活性剂中的一种或多种；稳定剂的浓度为约 20mg/ml～约80mg/ml；缓冲剂为组氨酸缓冲剂、琥珀酸缓冲剂、柠檬酸缓冲剂或它们的组 合；表面活性剂的浓度为约0.1mg/ml～约0.5mg/ml。
在一些实施方案中，液体制剂的ADC的浓度为约20mg/ml～约30mg/ml；在一些实施方案中，ADC的浓度为约23mg/ml～约27mg/ml；在一些实施方案中，ADC的浓度为约 25mg/ml。在一些实施方案中，ADC的浓度约为约10mg/ml、约20mg/ml、约23mg/ml、约 25mg/ml、约27mg/ml、约30mg/ml、约40mg/ml、约50mg/ml或任意两个浓度之间的范围， 包括端点值。
在一些实施方案中，液体制剂的ADC为ADC-1；在一些实施方案中，ADC-1的浓度 为约20mg/ml～约30mg/ml；在一些实施方案中，ADC-1的浓度为约23mg/ml～约27mg/ml； 在一些实施方案中，ADC-1的浓度为约25mg/ml。
在一些实施方案中，采用稳定剂对液体制剂中的ADC进行保护。在一些实施方案中稳 定剂选择糖类，在一些实施方案中为非还原性糖和/或山梨醇，在一些实施方案中为选蔗糖 和/或海藻糖。在一些实施方案中为海藻糖。在制剂预冻过程中，这些稳定剂使制剂在此过 程中形成玻璃态，包括其中可结晶成分，一方面消除了缓冲剂成分结晶的可能性，从而消 除pH的偏移而起到保护蛋白的作用，另一方面形成的玻璃态对蛋白在低温和失水时的稳 定性也起到关键的作用，但同时，在本申请的一些实施方案中，稳定剂同时充当冻干制剂 的填充剂，为冻干制剂提供一定的结构，进一步提高在长期贮存时ADC的稳定性。填充剂 除了是上述的稳定剂外，还可以是甘氨酸、甘露醇等。
对于稳定剂的浓度，过低起不到足够的保护效果。无限增高的稳定剂浓度则导致冷冻 干燥过程中一次干燥时间的延长或失败和二次干燥后水分的无法清除，故稳定剂的浓度控 制在能维持蛋白的稳定性并能在冷冻干燥过程中形成良好的“蛋糕”状形态。在一些实施方 案中，液体制剂的稳定剂的浓度为约40mg/ml～约80mg/ml；在一些实施方案中，稳定剂的 浓度为约50mg/ml～约70mg/ml；在一些实施方案中，稳定剂的浓度为约54mg/ml。在一些 实施方案中，稳定剂的浓度约为约20mg/ml、约40mg/ml、约50mg/ml、约54mg/ml、约60mg/ml、约70mg/ml、约80mg/ml或任意两个浓度之间的范围，包括端点值。在一些实施 方案中，稳定剂为浓度约50mg/ml～约70mg/ml的海藻糖；在一些实施方案中，稳定剂为浓 度约54mg/ml的海藻糖；在一些实施方案中，稳定剂为浓度约60mg/ml的海藻糖二水合物。
固体状态下，海藻糖通常以海藻糖二水合物存在的，所以在一些实施方式中，配制制 剂时采用海藻糖二水合物，也可以采用其他形式的海藻糖配制。
在一些实施方案中，稳定剂为浓度约106mM～约212mM的海藻糖；在一些实施方案中， 稳定剂为浓度约132mM～约185mM的海藻糖；在一些实施方案中，稳定剂为浓度约158mM的海藻糖。
在一些实施方案中，缓冲剂选自组氨酸缓冲剂、柠檬酸缓冲剂和琥珀酸缓冲剂，也可 以是上述缓冲剂中的任意两种的组合，如组氨酸缓冲剂和琥珀酸缓冲剂混合的缓冲剂，亦 或是上述三种组合的缓冲剂。液体制剂在冻干形成冻干制剂的过程中，需要经过低温冷冻， 再进行抽真空处理，升华冷冻中的水分，再恢复温度和气压，从而得到冻干制剂。期间，随着水从液体变成固体的过程中，可能会引发缓冲剂的析出和pH的改变，进而影响了ADC的稳定性。这些缓冲剂在目标pH值下有较好的缓冲能力，且冷冻过程中，pH变化不大， 降低ADC的降解。在一些实施方案中，缓冲剂为琥珀酸缓冲剂和组氨酸缓冲剂的组合。在 一些实施方案中，缓冲剂为组氨酸-琥珀酸缓冲剂。在一些实施方案中，缓冲剂为组氨酸- 琥珀酸缓冲剂时，缓冲剂的浓度为琥珀酸的浓度与盐酸组氨酸的浓度的总和。
对于缓冲剂的浓度，浓度过低时，缓冲能力较弱，起不到明显的保护效果；而浓度过 高时，在冷冻的过程中，容易析出，从而影响溶液中的pH值，进而影响ADC的稳定性。
在一些实施方案中，缓冲剂的浓度为约1mg/ml～约10mg/ml；在一些实施方案中，缓 冲剂的浓度为约3mg/ml～约7mg/ml；在一些实施方案中，缓冲剂的浓度为约3mg/ml～约4mg/ml。在一些实施方案中，缓冲剂包含浓度为约1.18mg/ml的琥珀酸和约2.1mg/ml的盐酸组氨酸。在一些实施方案中，缓冲剂包含浓度为约1.18mg/ml的琥珀酸和约2.1mg/ml的盐酸组氨酸一水合物。
在一些实施方案中，液体制剂的缓冲剂的浓度为约10mM～约60mM；在一些实施方案 中，缓冲剂的浓度为约16mM～约40mM；在一些实施方案中，缓冲剂的浓度为约16mM～ 约24mM。在一些实施方案中，缓冲剂包含浓度为约10mM的琥珀酸缓冲剂和约10mM的 组氨酸缓冲剂。在一些实施方案中，缓冲剂包含浓度为约10mM的琥珀酸和约10mM的盐 酸组氨酸。
在一些实施方案中，液体制剂含表面活性剂。在一些实施方案中，表面活性剂为非离 子表面活性剂，如吐温20、吐温80和泊洛沙姆(如泊洛沙姆188)等。在一些实施方案中，表面活性剂为吐温20和/或吐温80。在一些实施方案中，表面活性剂为吐温80。在一些实 施方案中，这些表面活性剂的加入，降低表面张力，限制蛋白的聚合。
在一些实施方案中，液体制剂的表面活性剂的浓度为0.2mg/ml～约0.4mg/ml；在一些 实施方案中，表面活性剂的浓度为约0.25mg/ml～约0.35mg/ml；在一些实施方案中，表面 活性剂的浓度约为0.3mg/ml。在一些实施方案中，表面活性剂的浓度为约0.1mg/ml、约 0.2mg/ml、约0.25mg/ml、约0.3mg/ml、约0.35mg/ml、约0.4mg/ml、约0.5mg/ml或任意两个浓度之间的范围，包括端点值。在一些实施方案中，所述表面活性剂提高ADC的稳定性。
在一些实施方案中，表面活性剂浓度为约0.25mg/ml～约0.35mg/ml的吐温80；在一些 实施方案中，表面活性剂为浓度约0.3mg/ml的吐温80。
在一些实施方案中，采用所述液体制剂以药学上可接受的溶剂作为载体，例如无菌药 用级注射用水或盐水、无菌注射用水、抑菌注射用水等注射用水。在一些实施方案中，采 用注射用水对冻干前的液体制剂中的组分，如ADC、缓冲剂、稳定剂和/或表面活性剂进行 配制成特定浓度的溶液时，按处方量计算得到所需量的固体，混合后加入一定量的注射用 水溶解；若处方中有粘稠液体，再按处方量计算得到所需量的粘稠液体，混合后加入一定 量的注射用水进行分散；再将上述的溶液混合，调节pH即得。在一些实施方案中，各组分分别用注射用水进行溶解分散，再将得到的溶液进行混合，调节浓度和pH值即得。
在一些实施方案中，液体制剂包括：约10mg/ml～约50mg/ml的ADC(比如ADC-1)，约10mM～约60mM的缓冲剂(比如组氨酸-琥珀酸缓冲剂或组氨酸-柠檬酸缓冲剂)，约 20mg/ml～约80mg/ml的稳定剂(比如海藻糖或蔗糖)，以及约0.1mg/ml～约0.5mg/ml的表 面活性剂(比如吐温20或吐温80)。
在一些实施方案中，液体制剂包括：约20mg/ml～约30mg/ml的ADC(比如ADC-1)，约16mM～约40mM的缓冲剂(比如组氨酸-琥珀酸缓冲剂或组氨酸-柠檬酸缓冲剂)，约 40mg/ml～约80mg/ml的稳定剂(比如海藻糖或蔗糖)，以及约0.2mg/ml～约0.4mg/ml的表 面活性剂(比如吐温20或吐温80)。
在一些实施方案中，液体制剂包括：约23mg/ml～约27mg/ml的ADC(比如ADC-1)，约16mM～约24mM的缓冲剂(比如组氨酸-琥珀酸缓冲剂或组氨酸-柠檬酸缓冲剂)，约 50mg/ml～约70mg/ml的稳定剂(比如海藻糖或蔗糖)，以及约0.25mg/ml～约0.35mg/ml的 表面活性剂(比如吐温20或吐温80)。
在一些实施方案中，液体制剂包括：约25mg/ml的ADC(比如ADC-1)，约20mM的 缓冲剂(比如组氨酸-琥珀酸缓冲剂或组氨酸-柠檬酸缓冲剂)，约54或60mg/ml的稳定剂(比如海藻糖或蔗糖或其水合物)，以及约0.3mg/ml的表面活性剂(比如吐温20或吐温80)。
在一些实施方案中，液体制剂包括：约20mg/ml～约30mg/ml的ADC-1，约16mM～约40mM的柠檬酸～盐酸组氨酸缓冲剂，约40mg/ml～约80mg/ml的蔗糖，以及约0.2mg/ml～ 约0.4mg/ml的吐温20。
在一些实施方案中，液体制剂包括：约20mg/ml～约30mg/ml的ADC-1，约16mM～约40mM的组氨酸-琥珀酸缓冲剂，约40mg/ml～约80mg/ml的海藻糖，以及约0.2mg/ml～约0.4mg/ml的吐温80。
在一些实施方案中，液体制剂包括：约23mg/ml～约27mg/ml的ADC-1，约16mM～约24mM的组氨酸-琥珀酸缓冲剂，约50mg/ml～约70mg/ml的海藻糖，以及约0.25mg/ml～约0.35mg/ml的吐温80。
在一些实施方案中，液体制剂包括：约20mg/ml～40mg/ml的ADC-1，约5～20mM的琥珀酸和/或盐，约5～20mM组氨酸和/或盐，约40mg/ml～80mg/ml的海藻糖，以及约 0.1mg/ml～0.5mg/ml的吐温80。
在一些实施方案中，液体制剂包括：约20mg/ml～30mg/ml的ADC-1，约5～15mM的琥珀酸和/或盐，约5～15mM组氨酸和/或盐，约50mg/ml～70mg/ml的海藻糖，以及约 0.2mg/ml～0.4mg/ml的吐温80。
在一些实施方案中，液体制剂包括：约25mg/ml的ADC-1，约10mM的琥珀酸和/或盐，约10mM组氨酸和/或盐，约54mg/ml的海藻糖，以及约0.3mg/ml的吐温80。
在一些实施方案中，液体制剂包括：约25mg/ml的ADC-1，约10mM的琥珀酸，约 10mM盐酸组氨酸，约54mg/ml的海藻糖，以及约0.3mg/ml的吐温80。
在一些实施方案中，液体制剂的pH值为约4.5～约6.0；在一些实施方案中，液体制剂 的pH值为约4.5～约5.6；在一些实施方案中，液体制剂的pH值为约4.6～5.2；在一些实施 方案中，液体制剂的pH值为4.9±0.3。在一些实施方案中，pH是通过加入适量NaOH或KOH调节的。
在一些实施方案中，液体制剂包括：ADC，其中偶联物的浓度为约10mg/ml～约50mg/ml； 还包括稳定剂、缓冲剂和表面活性剂中的一种或多种；稳定剂的浓度为约20mg/ml～约 80mg/ml；缓冲剂为组氨酸缓冲剂、琥珀酸缓冲剂、柠檬酸缓冲剂或它们的组合；表面活性 剂的浓度为约0.1mg/ml～约0.5mg/ml。
在一些实施方案中，液体制剂中，缓冲剂的浓度为约5mM～约30mM；在一些实施方案 中，液体制剂中，缓冲剂的浓度为约10mM～约20mM；在一些实施方案中，液体制剂中， 缓冲剂的浓度为约10mM。
在一些实施方案中，液体制剂包含：约10mg/ml～约50mg/ml的ADC，约5mM～约30mM的缓冲剂，约20mg/ml～约80mg/ml的稳定剂，以及约0.1mg/ml～约0.5mg/ml的表面活性剂。在一些实施方案中，液体制剂包含：约25mg/ml的ADC-1，约1.18mg/ml的琥珀酸，约 2.1mg/ml的盐酸组氨酸，约60mg/ml的海藻糖二水合物，约0.3mg/ml的吐温80，pH为约 4.6-约5.2。在一些实施方案中，液体制剂包含：约25mg/ml的ADC-1，约1.18mg/ml的琥 珀酸，约2.1mg/ml的盐酸组氨酸一水合物，约60mg/ml的海藻糖二水合物，约0.3mg/ml 的吐温80，pH为约4.6-约5.2。
另一方面，本发明提供一种制备的固体制剂的方法，其中，包括：
1)配制：取ADC、稳定剂、缓冲剂、表面活性剂，溶解于水中至规定量，并调整pH 值至规定值，如4.5～6.0，得到液体制剂；
2)冻干：将液体制剂进行冻干，得到的固体制剂。
冻干或冷冻干燥是从液体制剂制备固体制剂的常用方法，通常将含有水和/或其他溶剂 的制剂快速降温(比如-30℃或更低)至冷冻，然后在密封的情况下降低压力，使制剂中的 冷冻水和/或其他溶剂直接从固相升华到气相，从而去除水或其他溶剂而得到通常为粉末的 固体制剂。冻干通常使用冻干机进行。在一些实施方案中，冻干的步骤包括预冻、退火、 一次干燥、二次干燥。
另一方面，本发明提供固体制剂在制备用于预防和/或治疗Trop2阳性疾病的药物中的 应用。在一些实施方案中，Trop2阳性疾病包括但不限于增殖性、炎症性或免疫性疾病或病 症。在一些实施方案中，Trop2阳性疾病包括但不限于三阴性乳腺癌、胶质母细胞瘤、成神 经管细胞瘤、上皮癌、乳腺癌、头颈癌、肾癌、卵巢癌、胃癌、卡波西肉瘤、胰腺癌和肺癌、宫颈癌、结肠直肠癌、食管癌、口腔鳞状细胞癌、前列腺癌、甲状腺癌、膀胱癌、神 经胶质瘤、肝胆管癌、结肠直肠癌、T细胞淋巴瘤。在一些实施方案中，上述固体制剂在 制备用于预防和/或治疗上皮癌的药物中的应用。在应用本发明的固体制剂时，给予患者药 物前，先用药学上可接受的溶剂对固体制剂进行溶解，重构得到复溶制剂，再进行给药。 溶剂包括无菌药用级注射用水或盐水、无菌注射用水、抑菌注射用水等。
另一方面，本文提供一种治疗癌症的方法，包括向需要治疗的患者给予有效量的ADC 的复溶制剂或液体制剂。在一些实施方案中，通过在药学上可接受的溶剂(无菌药用级注 射用水或盐水、无菌注射用水、抑菌注射用水等)中重构前述实施方案中任一个的固体制 剂获得的复溶制剂。
本发明提供的一种复溶制剂，其中，复溶制剂通过用药学上可接受的溶剂对上述的固 体制剂进行重构获得。该复溶制剂可以用来预防和/或治疗Trop2阳性疾病，比如增殖性、 炎症性或免疫性疾病或病症，比如上皮癌。
在一些实施方案中，重构的复溶制剂包括：ADC，其中偶联物的浓度为约10mg/ml～约 50mg/ml；还包括稳定剂、缓冲剂和表面活性剂中的一种或多种；稳定剂的浓度为约20mg/ml～约80mg/ml；缓冲剂为组氨酸缓冲剂、琥珀酸缓冲剂、柠檬酸缓冲剂或它们的组合；表面活性剂的浓度为约0.1mg/ml～约0.5mg/ml。
在一些实施方案中，复溶制剂中，缓冲剂的浓度为约5mM～约30mM；在一些实施方案 中，复溶制剂中，缓冲剂的浓度为约10mM～约20mM；在一些实施方案中，复溶制剂中， 缓冲剂的浓度为约20mM。
在一些实施方案中，复溶制剂包含：约10mg/ml～约50mg/ml的ADC，约5mM～约30mM的缓冲剂，约20mg/ml～约80mg/ml的稳定剂，以及约0.1mg/ml～约0.5mg/ml的表面活性剂。在一些实施方案中，复溶制剂包含：约25mg/ml的ADC-1，约1.18mg/ml的琥珀酸，约 2.1mg/ml的盐酸组氨酸，约60mg/ml的海藻糖二水合物，约0.3mg/ml的吐温80，pH为约 4.6-约5.2，其中部分或全部琥珀酸可以以相应量盐的形式存在，部分或全部盐酸组氨酸可 以以相应量组氨酸形式存在。在一些实施方案中，复溶制剂包含：约25mg/ml的ADC-1， 约1.18mg/ml的琥珀酸，约2.1mg/ml的盐酸组氨酸一水合物，约60mg/ml的海藻糖二水合 物，约0.3mg/ml的吐温80，pH为约4.6-约5.2。
在一些实施方案中，使用时，用溶剂(如无菌注射用水)对固体制剂进行溶解重构，得到复溶制剂，常用的重构后的ADC浓度为约25mg/ml。必要时，可用等渗溶液(如0.9％ 注射用NaCl溶液)对复溶制剂进行稀释使用。在一些实施方案中，稀释后ADC浓度为约 0.1mg/ml-约5mg/ml或约0.5mg/ml-约5mg/ml。重构后的复溶制剂以及稀释后的制剂均为 注射制剂，一般为静脉输注。
在一些实施方案中，针对Trop2阳性疾病，如三阴性乳腺癌、上皮癌等，ADC的用量为约0.2mg/kg～约10mg/kg。在一些实施方案中，ADC的单位剂量约为约0.2mg/kg，或约0.5mg/kg，或约1mg/kg，或约2mg/kg，或约4mg/kg，或约6mg/kg，或约8mg/kg，或约10mg/kg，或任意两个剂量之间的范围值，包括端点值。
在一些实施方案中，给药周期为14-28天，比如20-22天，或21天，即分别每14-28天，比如每20-22天，或每21天，给予患者一次所述的ADC单位剂量。
在一些实施方案中，患者为Trop2阳性晚期实体瘤患者。
在一些实施方案中，对制备得到的固体制剂进行低温(4℃)和室温(25℃)的稳定性 实验。通过本发明制备得到的固体制剂，能够在低温和室温下贮存3个月、6个月、9个月、12个月、18个月甚至24个月，保持稳定。与0个月相比，ADC发生极少数的蛋白聚合； 平均DAR保持稳定；蛋白没有降解迹象；采用无菌注射用水重构后，在不溶性微粒方面也 保持良好的表现。
在一些实施方案中，采用0.9％的生理盐水对重构后的复溶制剂进行配伍稀释成高浓度 制剂(约5mg/ml)和低浓度制剂(约0.5mg/ml)。进行配伍稀释后的ADC溶液室温放置2 小时、6小时甚至24小时，均表现出良好的稳定性。分子排阻色谱(SEC-HPLC，或SEC) 测定发现平均百分比主峰保持大于99％，在不溶性微粒方面也保持良好的表现。
在一些实施方案中，对固体制剂复溶后的复溶制剂进行低温(4℃)和室温(25℃)的 稳定性实验。通过本发明制备得到的复溶制剂，能够在低温和室温下放置6小时、24小时甚至48小时，保持稳定。
为了开发出稳定的、不易聚集的抗Trop2抗体药物偶联物制剂，本发明提供一种抗Trop2 抗体药物偶联物固体制剂。在一些实施方案中，该固体制剂可通过冻干经低温除去ADC中 的水分制得，使ADC在保存时保持稳定。
在一些实施方案中，ADC-1通过L-3AA-MDC(制备方法见专利CN 201310081867.X)与抗体C偶联得到。将抗体C用溶液A(20mM磷酸钠，100mM NaCl和2mM EDTA，pH 为7.4)稀释至8.0mg/ml，然后用过量的三(2-羧乙基)膦(TCEP)完全还原。在37℃孵 育一小时以上，用溶液B(10mM琥珀酸，2mM EDTA，pH为7.4)超滤浓缩换液。巯基抗体 值通过测定吸光度确定，通过巯基与DTNB(5,5'-二硫代双(2-硝基苯甲酸)，Aldrich公司) 的反应物，然后测定412nm处的吸收值来确定巯基的浓度。随后，使用过量的硫酸铜 (CuSO4)或脱氢抗坏血酸(dHAA)进行氧化，抗体链间二硫键重新连接，而突变位点的 半胱氨酸则被保留下来。
偶联反应时DMA的浓度为10％-30％。L-3AA-MDC与巯基数的比率为1-2:1.0(摩尔当 量)。将L-3AA-MDC加入已还原的抗体中，室温搅拌3小时后，加入5mM半胱氨酸继续 搅拌0.5-3小时。反应混合物经阳离子交换柱纯化，产品经超滤浓缩换液后用0.22微米的 滤器过滤，-80℃保存。ADC-1可以通过紫外吸收测得浓度，通过尺寸排阻色谱测定聚集率， 通过反向高效液相色谱法测定偶联药物比率。
以下实施例中，如无特别说明，所使用的试剂和仪器为本领域常规试剂和仪器，可通 过商购的方式获得；所使用的方法为本领域常规技术方法，本领域技术人员根据实施例的 内容可以毫无疑义地实施所述方法并获得相应的结果。
以下实验中所使用的方法可以如下所示：
SEC-HPLC的分析方法：
1)用液相色谱系统和TOSOH生物科技TSK-GEL G3000SWXL色谱柱(柱规格为 7.8*300mm，5μm)。柱温设定为室温，流速0.5ml/min，平衡30-60min至基线平稳。
2)进样，记录色谱图，积分后按照峰面积归一法计算供试液的单体或多聚体百分含量。
HIC-HPLC的分析方法：
1)液相色谱系统和色谱柱
波长：280nm；柱温40℃；流速0.3ml/min，平衡约30min至基线平稳。
2)样品检测和数据处理
采用液相数据分析软件对检测的色谱图进行积分，以空白对照溶液基线为参照，积分 起始时间至终止时间为18分钟至48分钟。采用面积归一化法，用D表示DAR，数值表示抗体偶联的药物个数(即DAR的值)计算未偶联抗体(D0)、偶联一个药物的抗体(D1)、 偶联两个药物的抗体(D2)的峰面积的百分含量。
CE-SDS(NR)的分析方法：
毛细管电泳仪采用Beckman的PA800 plus，样品进样后，记录色谱图，积分处理数据， 采用面积归一化方法计算单体峰的百分含量。
相对结合活性检测方法：
1)包被：取适量96孔酶标板，向中间60个反应孔中每孔加入包被液100μL(Trop2蛋白用PBS稀释至0.5μg/ml，混匀，现配现用)，4℃包被过夜(16h～20h)。
2)封闭：用自动洗板机重复洗板3遍，每孔300μL洗板液，然后向每个反应孔中加入封闭液250μL，37℃孵育2h。
3)样品配制：
3.1)对照品稀释
取对照品适量，加入PBS稀释至1mg/ml，总体积400μL混匀；从中移取20μL加入 预先加有480μL PBS的EP管中；混匀后从中移取25μL加入预先加有975μL PBS的EP 管中，混匀即得1μg/ml的对照品溶液。混匀后将溶液加至稀释板第2列孔中，每孔260μL， 3个复孔，每个稀释度用移液枪吹打混匀。得ADC浓度为1000ng/ml、500ng/ml、250ng/ml、 125ng/ml、62.5ng/ml、31.2ng/ml、15.6ng/ml、7.8ng/ml、3.9ng/ml、1.9ng/ml的梯度溶液。
3.2)待测样品：
取供试品原液或三支注射剂适量，分别用PBS稀释至1mg/ml，总体积400μL。原液取3次平行稀释3份；注射剂每支取适量进行稀释，共3份稀释液。然后同对照品方法进 行稀释。
4)加样：将封闭好的酶标板取出，重复洗板3遍，每孔300μL洗板液。取各浓度的 对照品溶液和供试品溶液各100μL加入相应的反应孔，每个浓度设三个复孔，37℃孵育1 h。
5)加酶标二抗：取出酶标板，反复洗板5遍，每孔300μL洗板液。向反应孔中加入HRP标记的羊抗人IgG-Fc抗体稀释液，每孔100μL，37℃孵育1h。
6)显色：取出酶标板，重复洗板8遍，每孔300μL洗板液。向反应孔中加入TMB 显色液，每孔100μL，室温(25±2℃)避光显色10～15min。
7)终止：向每个反应孔中加入2M硫酸溶液50μL终止显色反应，然后于30min内 进行读数。
8)读板：设定波长为450nm，用酶标仪自带分析软件进行读数，对所得读数以四参数方程曲线模型进行拟合，方程为y＝(A-D)/(1+(x/C)^B)+D，其中A为吸光值下限，B代表曲线斜率，C为最大反应值一半对应的抗体浓度(EC50)，D为吸光值上限。
9)结果计算：按如下公式结算结果
Figure BDA0002868767100000221
以下实施例的抗Trop2-药物偶联物以ADC-1为例。
实施例1：pH值范围筛选
选取pH覆盖4.5～6.5范围的两种缓冲液：组氨酸缓冲液(His)和琥珀酸缓冲液(HPS)， 制备出pH为His5.5、His6.0、His6.5、HPS4.5、HPS5.0、HPS5.5的六组溶液样品，其中， 每组溶液中抗Trop2抗体的浓度为12.5mg/ml。将样品分装后置于40℃条件下进行高温试 验，于第0天、第1周、第2周、第3周取样，进行SEC-HPLC、HIC-HPLC检测。
从图1～图3可以看出，六组样品在高温条件下考察3周后，单体纯度均有所下降，聚 体和片段含量增加，说明聚合和片段化是抗Trop2抗体偶联物的主要降解途径之一。在相 同试验条件下，六组样品在SEC-HPLC单体纯度方面的稳定性有显著差异；图中，His55表示His5.5，His60表示His6.0，His65表示His6.5，HPS45表示HPS4.5，HPS50表示His5.0，HPS55表示His5.5。
具体而言，从SEC-HPLC单体纯度数据作图结果可以看出，6组样品的SEC单体纯度均呈现下降趋势，但是各组的下降幅度有明显区别， His55>HPS45>His60>HPS50>His65>HPS55，表明样品在pH≤6.0的His缓冲液中单体纯度 稳定性较好。
从SEC聚体数据作图结果可以看出，His缓冲液的三个pH从低到高，聚体的增加明显， HPS缓冲液也是同样情况，说明pH低较好；6组样品的SEC聚体均呈现上升趋势，HPS45组和His55组的上升趋势较缓，优于His60优于其他组， His55＝HPS45>His60>HPS50>His65>HPS55，表明样品在pH≤6.0的His缓冲液中产生的聚 体较少。
从SEC片段数据作图结果可以看出，HPS45明显较其他组差，表明样品在pH 4.5的HPS缓冲液中产生的片段较多，故样品在琥珀酸缓冲液中pH应选择大于4.5的范围。
从图4可知，抗Trop2抗体偶联物在pH≤5.5时，HIC稳定性较好，当pH＞5.5时，样品的HIC主峰含量下降较快，稳定性较差。相同试验条件下，六组样品在HIC-HPLC主峰 含量方面的稳定性有明显差异。从HIC-HPLC主峰含量数据作图结果可以看出，HPS45、 HPS50、HPS55、His55优于His60和His65，HPS45>HPS50>HPS55>His55>His60>His65， 表明样品在pH≤5.5的缓冲液中，HIC主峰含量稳定性较好。
综合SEC-HPLC和HIC-HPLC的结果，高温(40℃)条件下，pH范围在4.5<pH<5.5 时，抗Trop2抗体偶联物的稳定性较好。
实施例2：pH值优化筛选试验
已确定抗Trop2抗体偶联物在pH5.0附近的组氨酸或琥珀酸缓冲液中稳定性较好，现 对抗Trop2抗体偶联物进行pH值优化筛选试验。制备出6个pH梯度的制剂处方：组氨酸 -琥珀酸缓冲液(pH4.6)、组氨酸-琥珀酸缓冲液(pH4.8)、组氨酸-琥珀酸缓冲液(pH5.0)、 组氨酸-琥珀酸缓冲液(pH5.2)、组氨酸-琥珀酸缓冲液(pH5.4)、组氨酸-琥珀酸缓冲液(pH5.6)。组氨酸缓冲液与琥珀酸缓冲液的摩尔浓度比为1:1。抗Trop2抗体偶联物浓度均调整至10mg/ml，将样品置于40℃条件下进行高温试验，于第0天、第1周、第2周、第 3周、第4周取样，分别进行SEC-HPLC、HIC-HPLC检测，结果见图5、图6和图7。
经过4周的高温试验，六组样品的单体纯度都有下降，聚体含量也有增加。相同试验 条件下，六组样品在SEC-HPLC单体纯度方面的稳定性差异明显。
从图5的SEC-HPLC单体纯度数据图可知，六组样品的变化趋势基本一致。在高温条件下放置4周后，样品的单体纯度下降明显。同一时间点，在单体纯度方面，六组样品有 差异。pH5.6组样品SEC-HPLC单体纯度较差。
从图6的SEC-HPLC聚体数据图可知，六组样品的变化趋势一致，都有不同程度的上升。在高温条件下放置4周后，样品的聚体增长明显。同一时间点，在SEC-HPLC聚体方 面，六组样品有显著差异。pH在4.6-5.2之间，SEC-HPLC聚体增长幅度较小。
从HIC-HPLC数据结果分析可知，在高温条件下，随着时间的延长，蛋白的HIC-HPLC主峰含量有所下降。相同试验条件下，六组样品在HIC-HPLC主峰含量方面的稳定性有显 著差异。从图7的HIC-HPLC主峰含量变化趋势图可以看出，目的蛋白在高温下不稳定， 随着时间的延长，六组样品的主峰含量均有不同程度的下降，pH在4.6-5.2时，样品的 HIC-HPLC主峰下降较缓，稳定性较好。
综合SEC-HPLC及HIC-HPLC的结果可知，缓冲液的pH在4.6～5.2时，样品抗 Trop2-ADC的稳定性较好。
从实验结果可知，pH值是本品抗Trop2-ADC制剂处方中的一个关键因子。样品在不同pH值的缓冲液中表现出不同的稳定性，但当pH值在某一个范围内波动时，并不会对目 的蛋白的质量产生显著性的影响。且考虑到长期稳定性考察要求以及产业化要求，制剂pH 值必须提供一个有效的范围，而非一个固定值。综合以上研究初步判定，在组氨酸-琥珀酸 缓冲体系中pH 4.6～5.2范围内，样品抗Trop2-ADC的稳定性较好。
实施例3：缓冲剂筛选试验
已确定本发明的抗Trop2抗体偶联物在pH 4.5-5.5范围条件下稳定性较好，故选取缓冲 能力范围在pH5.0附近的缓冲液进行筛选试验。制备5种不同的缓冲液：琥珀酸-琥珀酸钠 缓冲液(HPS)、柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液(NMS)、琥珀酸-柠檬酸缓冲液(HPSNMS)、组氨酸-琥珀酸缓冲液(HisHPS)、组氨酸-柠檬酸缓冲液(HisNMS)。各组溶液中，抗Trop2 抗体偶联物的浓度为11mg/ml，溶液pH值为5.0，分装，置于40℃条件下进行高温试验， 于第0天、第1周、第2周、第3周、第4周取样，分别进行SEC-HPLC、HIC-HPLC检 测。
经过4周的高温试验，五组样品的聚体、片段各有不同程度的增加，单体纯度则都有 下降。相同试验条件下，五组样品在SEC-HPLC单体纯度方面的稳定性有显著差异。
从图8的SEC-HPLC单体纯度数据图分析可知，五组样品的变化趋势基本一致，但是下降幅度有显著差异。在高温条件下放置4周后，在单体纯度方面，HisHPS缓冲液优于HisNMS缓冲液优于HPS缓冲液优于其他组。
从图9的SEC-HPLC聚体数据图分析可知，五组样品的聚体含量变化趋势基本一致。在高温条件下放置4周后，各组中多聚体略有增加，从增长幅度来看，HisHPS缓冲液优于HisNMS缓冲液优于HPS缓冲液优于其他组。
从图10的SEC-HPLC片段数据图分析可知，五组样品的片段变化趋势基本一致。在高温条件下放置4周后，样品的片段均有所增加，其中，HisHPS缓冲液优于HisNMS缓冲 液优于其他组。
从HIC-HPLC数据分析结果可知，在高温条件下，随着时间的延长，5组样品的主峰含量均有不同程度的下降。相同试验条件下，五组样品在HIC-HPLC主峰含量方面的稳定 性有显著差异(图11)。其中，NMS缓冲液、HPSNMS缓冲液、HisNMS缓冲液较好，优 于其他组。
综合SEC-HPLC及HIC-HPLC的结果可知，高温(40℃)环境下，样品在HisHPS缓 冲液中，SEC-HPLC稳定性很好，HIC-HPLC稳定性也不错；而NMS缓冲液，在SEC-HPLC 稳定性方面表现较差，故选择HisHPS作为抗Trop2-ADC的制剂缓冲体系。
实施例4：稳定剂种类筛选试验
分别制备含蔗糖、海藻糖、甘露醇、甘氨酸、山梨醇等五种稳定剂的ADC-1溶液，具体配方见表2。本实施例中海藻糖重量百分比是以海藻糖二水合物的重量计算的百分比。
表2：不同稳定剂制剂配方
Figure BDA0002868767100000251
试验方案如下：
1、高温实验
在高温(40℃)条件下，加有稳定剂的样品与未加稳定剂的样品进行对比试验，考察 样品质量的变化情况，于第0天(0d)、第1周(1w)、第2周(2w)、第3周(3w)、第4 周(4w)取样进行SEC-HPLC、HIC-HPLC检测。结果见表3。
表3：不同稳定剂样品SEC-HPLC、HIC-HPLC随着时间的变化情况
Figure BDA0002868767100000252
Figure BDA0002868767100000261
*样品名称：“-”前的数字表示表2中的配方序号，“-”后的数字和字母表示实验时间， 如4w表示4周.
从表3中数据分析可知，经过4周的高温试验，六组样品的SEC-HPLC聚体段随着时间的增长各有不同程度的增加(图13)，单体纯度都有下降(图12)。相同试验条件下，六 组样品在SEC-HPLC单体纯度方面的稳定性有略微差异。
从图12的SEC-HPLC单体纯度数据图分析可知，六组样品的变化趋势基本一致，但是下降幅度略有不同，除4号和6号配方略低外，其他组单体纯度差异不大。
从图13的SEC-HPLC聚体数据作图分析可知，六组样品的聚体含量变化趋势基本一致。从图13分析可知，在高温条件下放置4周后，样品的多聚体略有增加，从增长幅度来 看，4号和6号略差。
从图14的HIC-HPLC主峰含量变化趋势图可以看出，在40℃高温条件下，随着时间的延长，样品的HIC-HPLC主峰含量均有所下降，相同试验条件下，六组样品在HIC-HPLC 主峰含量方面的稳定性有较大差异。随着时间的增加，6组样品的主峰含量均有不同程度 的下降，从下降幅度来看，1、2号较好，4号最差。
2、冻干后样品的高温试验
对加有稳定剂的样品进行冻干，在高温(40℃)条件下进行对比试验，考察样品质量 的变化情况，于第30天(30d)取样进行SEC-HPLC、HIC-HPLC检测，并与未高温的样 品进行对比，结果见表4。
表4：不同稳定剂样品SEC-HPLC、HIC-HPLC随着时间的变化情况
Figure BDA0002868767100000271
从表4中数据分析可知，经过30天的高温试验，五组样品的SEC聚体随着时间的增长有不同程度的增加，单体纯度则都有下降。相同试验条件下，五组样品在SEC-HPLC单 体纯度方面的稳定性差异明显，3号和4号处方的SEC-HPLC稳定性较差，表5的微粒数 据也显示3号和4号较差。从HIC-HPLC数据来看，4号和5号处方稳定性较差。
表5：不同稳定剂样品复溶后的微粒情况
Figure BDA0002868767100000272
综合以上实验结果，选取生物单抗制剂中比较常用的海藻糖作为本制剂处方中的稳定 剂，蔗糖可作为备选稳定剂。
实施例5：表面活性剂含量筛选试验—与生理盐水相容性试验
本发明的固体制剂临床上需要与生理盐水配伍给药，故进行此相容性试验，以确定表 面活性剂浓度为多少时，能有效提高蛋白的稳定性。
本实施例制备含不同浓度、不同种类表面活性剂的ADC样品溶液，具体配方见表6，各组溶液中的ADC浓度为25mg/ml。分别取相同体积含不同浓度表面活性剂的样品溶液， 按配伍比例(4ml样品：100ml生理盐水)加入到0.9％氯化钠溶液中，轻微、充分混匀后 观察其性状，并对放置2h后的蛋白溶液进行不溶性微粒检测。检测结果见表7，图15和 图16。
表6：不同配方蛋白溶液
Figure BDA0002868767100000281
％表示质量体积比，g/100ml
表7：ADC样品溶液在生理盐水中的微粒变化情况
Figure BDA0002868767100000282
对表7中微粒均值数据进行作图，得图15和图16：
从图15和图16中结果可以看出，未加表面活性剂的Z0组微粒数最高，而加有表面活 性剂的样品的微粒数普遍较低，且表面活性剂含量高一些时，微粒数略低。但当表面活性 剂浓度到达一定程度后，样品的微粒数变化不大。辅料中表面活性剂的量也不宜过高，结 合市售单抗制剂中表面活性剂的用量，本品选择常用的吐温80，含量可定为0.03％。
实施例6：固体制剂的制备
综合以上所有试验的结果，本产品的液体制剂的一种具体成分和含量为：10mM琥珀酸、 10mM盐酸组氨酸(或10mM盐酸组氨酸一水合物)、6％海藻糖二水合物(即158mM)、0.03％吐温80，用氢氧化钠调pH至4.9±0.3。其制备方式为：取抗Trop2抗体-美登素偶联物100g，琥珀酸4.72g，盐酸组氨酸8.4g(这里盐酸组氨酸指的是盐酸组氨酸一水合物)， 海藻糖二水合物240g和吐温80 1.2g，加水制备成4L溶液，以NaOH调节pH值至4.9±0.3。
将上述液体制剂冻干，得到固体制剂。
实施例7：固体制剂的性能检测
以实施例6制备的固体制剂进行实验。将溶液在-80℃冷冻24h后，在25℃放置24h为一次冻融。对冻融后的样品进行SEC-HPLC、HIC-HPLC、CE-SDS(NR)、结合活性等 检测，结果见表8和表9。
表8：实施例6固体制剂样品冻融5次的SEC-HPLC、HIC-HPLC结果
Figure BDA0002868767100000291
*样品名称中的DR表示冻融，数字表示次数。如DR1表示冻融1次。
从表8中数据可以看出，5次冻融后，样品的SEC和HIC数据变化不大，稳定性较好。
表9：实施例6固体制剂样品冻融5次的CE-SDS(NR)、结合活性结果
Figure BDA0002868767100000292
*HHLL表示是抗体含有两条重链和两条轻链，HHL表示抗体含有两条重链和一条轻链，fraction表示是片段。
从表9中数据可以看出，5次冻融后，样品的CE-SDS(NR)数据变化不大，结合活 性都在正常范围，稳定性较好。
实施例8：固体制剂冻干前后稳定剂的影响
根据表10的内容配制不同的制剂溶液，其中ADC含量为25mg/ml，pH值5.0，进行冻干，对冻干后的样品进行复溶，检测不溶性微粒、SEC-HPLC、HIC-HPLC等质量属性，检 测结果见表11。
表10：冻干实验涉及的固体制剂配方
Figure BDA0002868767100000301
表11：冻干样品复溶后检测数据
Figure BDA0002868767100000302
表11中，3、4号样品的SEC-HPLC单体纯度在冻干后略有下降，1号的稳定剂是6％蔗糖，2号是6％海藻糖，3号4％甘露醇，4号2％甘氨酸，5号4％山梨醇。本品制剂处方 最终选择用海藻糖(2号)作为稳定剂，它在冻干前后的质量属性变化很小，复溶时间短， 不溶性微粒检测结果也符合规定。
实施例9：样品复溶后稳定性试验
将实施例6制备的固体制剂复溶，复溶浓度25mg/ml。将复溶后的溶液分别置于25℃ 和4℃条件下进行试验。在25℃条件下，分别于第6h、24h和48h取样检测；在4℃条件 下，分别于第6h、24h和48h取样检测。检测项目包括外观、可见异物、pH、ADC浓度、 不溶性微粒、SEC-HPLC、IEC-HPLC、CE-SDS(R)、CE-SDS(NR)、HIC-HPLC、PR-HPLC、 毒素残留、生物活性、结合活性等，检测结果与第0h进行对比，结果见表12、表13。
表12：冻干粉复溶后稳定性试验(4℃)
Figure BDA0002868767100000311
注：外观标准为本品为白色或微黄色块状疏松体；可见异物标准为无可见异物检出；毒素 残留标准为细菌内毒素<2EU/ml；N/A表示无检测结果。
表13：冻干粉复溶后稳定性试验(25℃)
Figure BDA0002868767100000312
Figure BDA0002868767100000321
注：外观标准为本品为白色或微黄色块状疏松体；可见异物标准为无可见异物检出；毒素 残留标准为细菌内毒素<2EU/ml；N/A表示无检测结果。
结果显示，复溶后的样品在25℃和4℃放置48小时，与第0小时相比，样品的外观、可见异物、pH、ADC浓度、SEC-HPLC、IEC-HPLC、CE-SDS(R)、CE-SDS(NR)、HIC-HPLC、 PR-HPLC、毒素残留、生物活性、结合活性等质量属性没有发生明显变化，说明复溶后的 样品在25℃和4℃在条件下可放置48小时。从无菌安全方面考虑，复溶的样品应立即使用， 如不立即使用，复溶后可在2-8℃冰箱内储存6小时，不宜冻结或摇晃。
实施例10：给药稀释稳定性试验
本品在临床上采用静脉滴注，需要用氯化钠注射液稀释后才能用于患者身上。因此， 需要进行配伍试验及给药过程稳定性试验。
将实施例6的固体制剂与0.9％氯化钠注射液进行配伍试验。
实验方法：取实施例6的固体制剂(规格：100mg/瓶)，用无菌注射用水4ml复溶，混匀后静置，抽取一定量的药品，转移至一个含0.9％氯化钠注射液的容器，通过轻轻倒置混匀稀释溶液，最终稀释溶液浓度在0.5mg/ml至5mg/ml间。
取本品制剂，用氯化钠注射液分别稀释至ADC浓度为0.5mg/ml和5.0mg/ml，轻轻倒置瓶子使其混合均匀，将混合溶液分别置于4℃和25℃条件下进行试验。在4℃条件下， 分别于第2h，6h，24h取样检测；在25℃条件下分别于第2h，6h，24h取样检测。检测 项目包括外观、可见异物、pH值、稀释后ADC浓度、不溶性微粒、渗透压、SEC-HPLC 单体纯度、IEC-HPLC、CE-SDS(R)、CE-SDS(NR)、HIC-HPLC、PR-HPLC、毒素残留、 相对生物学活性、结合活性，检测结果与第0h进行比较。结果见表14，表15。
表14：制剂稀释稳定性试验(0.5mg/ml)
Figure BDA0002868767100000331
从表14可以看出，样品经生理盐水稀释至0.5mg/ml后，其外观、可见异物、pH值、稀释后ADC浓度、不溶性微粒、渗透压、SEC-HPLC单体纯度、CE-SDS(R)、CE-SDS (NR)、HIC-HPLC、PR-HPLC、毒素残留、相对生物学活性、结合活性都没有发生明显变 化。
表15：制剂稀释稳定性试验(5mg/ml)
Figure BDA0002868767100000332
Figure BDA0002868767100000341
从表14和表15可知，本品与氯化钠注射液混合稀释后，分别在4℃条件下放置24h，在25℃条件下放置24h，混合溶液澄清透明，没有可见异物，稀释液的pH值和ADC浓度 均没有发生明显变化，不溶性微粒的检测数据略有波动，但没有出现逐渐增多的趋势，且 检测数据均没有超过标准。说明本品能与0.9％氯化钠溶液配伍，在4℃下放置24h及25℃ 放置24h，本品的质量能保持稳定。
实施例11：固体制剂的稳定性试验
将实施例6制备的固体制剂分别置于25℃和4℃条件下进行试验。在25℃条件下，分 别于第1月、2月、3月、6月、9月和12月取样，使用注射用水复溶再检测，复溶浓度 25mg/ml；在4℃条件下，分别于3月、6月、9月、12月、18月和24月取样，使用注射 用水复溶再检测，复溶浓度25mg/ml。检测项目包括外观、可见异物、pH、ADC浓度、不 溶性微粒、SEC-HPLC、IEC-HPLC、CE-SDS(R)、CE-SDS(NR)、HIC-HPLC、PR-HPLC、 毒素残留、生物活性、结合活性等，检测结果与第0h进行对比，结果见表16、表17。
表16：冻干粉复溶后稳定性试验(4℃)
Figure BDA0002868767100000342
Figure BDA0002868767100000351
注：外观标准为本品为白色或微黄色块状疏松体；可见异物标准为无可见异物检出；毒素 残留标准为细菌内毒素<2EU/ml；N/A表示无检测结果。
表17：冻干粉复溶后稳定性试验(25℃)
Figure BDA0002868767100000352
Figure BDA0002868767100000361
注：外观标准为本品为白色或微黄色块状疏松体；可见异物标准为无可见异物检出；毒素 残留标准为细菌内毒素<2EU/ml；N/A表示无检测结果。
结果显示，固体制剂在25℃放置12个月的样品，以及在4℃条件下放置24个月的样品，与第0小时相比，样品的外观、可见异物、pH、ADC浓度、SEC-HPLC、IEC-HPLC、 CE-SDS(R)、CE-SDS(NR)、HIC-HPLC、PR-HPLC、毒素残留、生物活性、结合活性等 质量属性没有发生明显变化，说明本发明制备的固体制剂能够在25℃条件下放置12个月， 或者在4℃条件下放置24个月，仍保持稳定。
序列表
<110> 百奥泰生物制药股份有限公司
<120> 含抗Trop2抗体-药物偶联物的制剂及其制备方法和应用
<130> DSP1F204176JW
<150> CN201911400721.0
<151> 2019-12-30
<160> 4
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗体A轻链序列
<400> 1
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Ile Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ile Thr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 2
<211> 451
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗体A重链序列
<400> 2
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Gly Met Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Lys Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Thr Asp Asp Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Ala Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Ile Ser Ser Leu Lys Ala Asp Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Phe Gly Ser Ser Tyr Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala
130 135 140
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
180 185 190
Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His
195 200 205
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys
210 215 220
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
225 230 235 240
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
245 250 255
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
260 265 270
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
275 280 285
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
290 295 300
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
305 310 315 320
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
325 330 335
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
340 345 350
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser
355 360 365
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
370 375 380
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
385 390 395 400
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
405 410 415
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
420 425 430
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
435 440 445
Pro Gly Lys
450
<210> 3
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗体B和抗体C轻链序列
<400> 3
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Ile Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ile Thr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 4
<211> 451
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗体B和抗体C重链序列
<400> 4
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Gly Met Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Lys Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Thr Asp Asp Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Ala Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Ile Ser Ser Leu Lys Ala Asp Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Phe Gly Ser Ser Tyr Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Cys Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala
130 135 140
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
180 185 190
Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His
195 200 205
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys
210 215 220
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
225 230 235 240
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
245 250 255
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
260 265 270
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
275 280 285
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
290 295 300
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
305 310 315 320
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
325 330 335
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
340 345 350
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser
355 360 365
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
370 375 380
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
385 390 395 400
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
405 410 415
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
420 425 430
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
435 440 445
Pro Gly Lys
450

Claims (20)

1.一种液体制剂，包括：抗Trop2抗体-药物偶联物，其中所述偶联物的浓度为10mg/ml～50mg/ml；还包括稳定剂、缓冲剂和表面活性剂中的一种或多种，所述稳定剂的浓度为20mg/ml～80mg/ml，所述缓冲剂的浓度为5mM～60mM；所述表面活性剂的浓度为0.1mg/ml～0.5mg/ml；优选地，所述液体制剂pH值为4～7。
2.根据权利要求1所述的液体制剂，其中，所述稳定剂为海藻糖和/或蔗糖；所述缓冲剂为组氨酸缓冲剂、琥珀酸缓冲剂、柠檬酸缓冲剂或它们的组合，优选地，所述缓冲剂为组氨酸-琥珀酸缓冲剂或组氨酸-柠檬酸缓冲剂；所述表面活性剂为吐温20或吐温80。
3.根据权利要求2所述的液体制剂，其中，所述液体制剂包括，25mg/ml的抗Trop2抗体-药物偶联物，1.18mg/ml的琥珀酸，2.1mg/ml的盐酸组氨酸，158mM的海藻糖，0.3mg/ml的吐温80，用氢氧化钠调pH至4.6-5.2。
4.根据权利要求2所述的液体制剂，其中，所述液体制剂包括，25mg/ml的抗Trop2抗体-药物偶联物，1.18mg/ml的琥珀酸，2.1mg/ml盐酸组氨酸一水合物，158mM的海藻糖，0.3mg/ml的吐温80，用氢氧化钠调pH至4.6-5.2。
5.根据权利要求2所述的液体制剂，其中，所述液体制剂包括，25mg/ml的抗Trop2抗体-药物偶联物，10mM的琥珀酸，10mM的盐酸组氨酸，158mM的海藻糖，0.3mg/ml的吐温80，用氢氧化钠调pH至4.6-5.2。
6.一种固体制剂，由权利要求1～5任一项所述的液体制剂冻干获得。
7.一种固体制剂，包括：抗Trop2抗体-药物偶联物，其中所述偶联物的质量份数为10份～50份，优选20份～30份，更优选23～27份；还包括稳定剂、缓冲剂和表面活性剂中的一种或多种；所述稳定剂的质量份数为20份～80份，优选40份～80份，更优选50份～70份；所述缓冲剂的质量份数为1份～10份，优选3份～7份，更优选3份～4份；所述表面活性剂的质量份数为0.1份～0.5份，优选0.2～0.4份，更优选0.25份～0.35份。
8.根据权利要求7所述的固体制剂，其中，所述稳定剂为海藻糖和/或蔗糖或其水合物；所述缓冲剂为组氨酸缓冲剂、琥珀酸缓冲剂、柠檬酸缓冲剂或它们的组合，优选地，所述缓冲剂为组氨酸-琥珀酸缓冲剂或组氨酸-柠檬酸缓冲剂；所述表面活性剂为吐温20或吐温80。
9.根据权利要求8所述的固体制剂，其中，所述固体制剂包括：以质量份数计，25份抗Trop2抗体-药物偶联物，54份海藻糖，1.18份的琥珀酸和2.1份的盐酸组氨酸和0.3份吐温80。
10.根据权利要求8所述的固体制剂，其中，所述固体制剂包括：以质量份数计，25份抗Trop2抗体-药物偶联物，60份海藻糖二水合物，1.18份的琥珀酸和2.1份的盐酸组氨酸一水合物和0.3份吐温80。
11.一种复溶制剂，通过用药学上可接受的溶剂对权利要求6～10中任一项所述的固体制剂进行重构获得。
12.权利要求1～5任一项所述的液体制剂、权利要求6～10任一项所述的固体制剂或权利要求11所述的复溶制剂在制备用于预防和/或治疗Trop2阳性疾病的药物中的应用。
13.根据权利要求12所述的应用，其中，所述Trop2阳性疾病选自三阴性乳腺癌、胶质母细胞瘤、成神经管细胞瘤、非小细胞肺癌、小细胞肺癌、上皮癌、乳腺癌、头颈癌、肾癌、卵巢癌、胃癌、卡波西肉瘤、胰腺癌和肺癌、宫颈癌、结肠直肠癌、食管癌、口腔鳞状细胞癌、前列腺癌、甲状腺癌、膀胱癌、神经胶质瘤、肝胆管癌、结肠直肠癌、T细胞淋巴瘤。
14.一种制备权利要求6～10任一项所述的固体制剂的方法，包括：
1)配制：取抗Trop2抗体-药物偶联物、稳定剂、缓冲剂、表面活性剂，溶解于水中至规定量，并调整pH值至4.5～6.0，得到液体制剂；
2)冻干：将液体制剂进行冻干，得到所述的固体制剂。
15.根据权利要求1～5任一项所述的液体制剂、权利要求6～10任一项所述的固体制剂、权利要求11所述的复溶制剂、权利要求12或13所述的应用、或权利要求14所述的方法，其中，所述抗Trop2抗体-药物偶联物为如式Ia的化合物：
Figure FDA0002868767090000021
或其药学上可接受的盐或溶剂合物，其中
X为氢或卤素；
Y选自氢、C1-C6烷基、C3-C6环烷基和-C(＝O)R5；
R1选自H、-OH、-OC(＝O)R5和-OR5基团；
R2为H或C1-C6烷基；
R3为甲基、-CH2OH或-CH2OC(＝O)R6；
R4为-OH或–SH；
R5为C1-C6烷基或苄基；
R6为C1-C6烷基、苯基或苄基；
R7为氢、C1-C6烷基或氨基酸侧链；
R8为氢或者C1-C6烷基；
n为0、1、2、3、4、5、6、7或8；
p为1-10；
Anti-Trop2为抗Trop2抗体。
16.根据权利要求15所述的液体制剂、所述的固体制剂、所述的复溶制剂、所述的应用、或所述的方法，其中，所述抗Trop2抗体为抗体A、抗体B和/或抗体C。
17.根据权利要求1～5任一项所述的液体制剂、权利要求6～10任一项所述的固体制剂、权利要求11所述的复溶制剂、权利要求12或13所述的应用、或权利要求14所述的方法，其中，所述抗Trop2抗体-药物偶联物为如式Ic的化合物：
Figure FDA0002868767090000031
或其药学上可接受的盐或溶剂合物，其中，p约为2.1，Anti-Trop2为抗体C。
18.根据权利要求15-17任一项所述的液体制剂、所述的固体制剂、所述的复溶制剂、所述的应用或所述的方法，其中
所述抗体A的轻链氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，重链氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示；或
所述抗体B的轻链氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示，重链氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示；或
所述抗体C的轻链氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示，重链氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示。
19.根据权利要求18所述的液体制剂、所述的固体制剂、所述的复溶制剂、所述的应用或所述的方法，其中，所述抗体A由CHO细胞表达；或
所述抗体B由CHO细胞表达；或
所述抗体C的岩藻糖含量为0-5％。
20.根据权利要求18所述的液体制剂、所述的固体制剂、所述的复溶制剂、所述的应用或所述的方法，其中，所述抗体C由敲除α-(1,6)-岩藻糖基转移酶基因的细胞表达。
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