TW202409292A - 使用酵素及添加劑的胺基酸及胜肽化合物的製造方法 - Google Patents

Abstract

本發明之一方面，關於一種胺基酸的製造方法，包括在多胜肽、還原劑及以下述式（1）所示之化合物D的存在下，進行下列（i）或（ii）的反應之步驟，其中，該多胜肽含有與以序列識別號1所示之胺基酸序列具有90%以上的相似性的胺基酸序列。 （i）化合物A與化合物B的分子間還原胺化反應，該化合物A選自由具有胺基的化合物及其鹽所組成之群組，化合物B選自由具有羰基的化合物及其鹽所組成之群組， （ii）化合物C的分子內還原胺化反應，該化合物C選自由具有胺基及羰基的化合物及其鹽所組成之群組。

Description

使用酵素及添加劑的胺基酸及胜肽化合物的製造方法

本發明關於使用酵素及添加劑的胺基酸及胜肽化合物的製造方法。

目前已知使用使還原胺化反應進行的酵素（以下稱，還原胺化酵素）從胺及酮酸合成胺基酸的方法。例如，專利文獻1～4揭示，經由還原胺化酵素合成多種胺基酸的技術。 ［先行技術文獻］ ［專利文獻］

專利文獻1：特開2003－319788號公報 專利文獻2：特開2005－095167號公報 專利文獻3：特開2012－080878號公報 專利文獻4：特開2012－080879號公報

［發明所欲解決的問題］

然而，經由還原胺化酵素獲得胺基酸的反應的反應效率未必足夠，需要改善。

本發明以提供效率良好地製造胺基酸的方法為目的。 ［用以解決問題的手段］

本發明，例如，關於下列各發明。 ［1］一種胺基酸的製造方法，包括在多胜肽、還原劑、及以下述式（1）所示之化合物D的存在下，進行下列（i）或（ii）的反應之步驟，其中，該多胜肽含有與以序列識別號1所示之胺基酸序列具有90%以上的相似性的胺基酸序列， （i）化合物A與化合物B的分子間還原胺化反應，該化合物A選自由具有胺基的化合物及其鹽所組成之群組，化合物B選自由具有羰基的化合物及其鹽所組成之群組， （ii）化合物C的分子內還原胺化反應，該化合物C選自由具有胺基及羰基的化合物及其鹽所組成之群組， ［式（1）中， v及w各自獨立表示0或1， v及w之中的任一個以上表示1， T表示碳原子、磷原子、或硫原子， 以下述式（1a）所示之官能基表示＝O、－ORd或羥基， 當v及w皆為1的情形時，複數個存在的以式（1a）所示之2個官能基可相同也可不同， Ra、Rb及Rc各自獨立表示氫原子、C ₁～C ₃烷基、烷胺基、或－CH ₂－ORd， Ra、Rb及Rc之中的任二個以上可與T互相連接共同形成環結構， Rd表示C ₁～C ₃烷基， d、e及f各自獨立表示0或1， d、e及f之中的任一個以上表示1， 當v及w皆為1的情形時，Ra、Rb及Rc的任一個以上為甲基，Ra、Rb及Rc不互相連接、不與T形成環結構， 當Ra、Rb及Rc的任一個以上為甲胺基的情形時，Ra、Rb及Rc不互相連接、不與T形成環結構， 當以式（1a）所示之官能基為羥基、且T為碳原子的情形時，v為1，w為0，d、e及f皆為1，Ra、Rb及Rc皆為氫原子。］。 ［2］如［1］之製造方法，其中，該多胜肽含有與以序列識別號1所示之胺基酸序列具有95%以上的相似性的胺基酸序列。 ［3］如［1］或［2］之製造方法，其中，該多胜肽含有與以序列識別號1所示之胺基酸序列具有98%以上的相似性的胺基酸序列。 ［4］如［1］～［3］任一項之製造方法，其中，該式（1）中，T為磷原子或硫原子，該以式（1a）所示之官能基為＝O，Ra、Rb及Rc皆為甲基。 ［5］如［1］～［3］任一項之製造方法，其中，該化合物D為選自由下列所組成之群組的1個以上的化合物：二甲基亞碸、二甲基碸、二甲氧基乙烷、三甲基氧化膦、N,N－二甲基甲醯胺、N,N－二甲基乙醯胺、四亞甲基亞碸、二乙基亞碸、甲醇、及甲基甲醯胺。 ［6］如［1］～［5］任一項之製造方法，其中，該化合物D為選自由二甲基亞碸、二甲基碸、及三甲基氧化膦所組成之群組的1個以上的化合物。 ［7］如［1］～［6］任一項之製造方法，其中，該化合物D為二甲基亞碸。 ［8］一種胺基酸的製造方法，包括在多胜肽、還原劑、及化合物D’的存在下，進行化合物A與化合物B的分子間還原胺化反應、或化合物C的分子內還原胺化反應之步驟，其中，該多胜肽具有，在至少一個反應條件下，對化合物A與化合物B的分子間還原胺化反應、或化合物C的分子內還原胺化反應的觸媒活性，該化合物A選自由具有胺基的化合物及其鹽所組成之群組，該化合物B選自由具有羰基的化合物及其鹽所組成之群組，該化合物C選自由具有胺基及羰基的化合物及其鹽所組成之群組，該化合物D’為選自由下列所組成之群組的1個以上的化合物：二甲基亞碸、二甲基碸、三甲基氧化膦、二甲氧基乙烷、N,N－二甲基甲醯胺、N,N－二甲基乙醯胺、四亞甲基亞碸、二乙基亞碸、甲醇、及甲基甲醯胺。 ［9］如［8］之製造方法，其中，其中，該化合物D’為選自由二甲基亞碸、二甲基碸、及三甲基氧化膦所組成之群組的1個以上的化合物。 ［10］如［8］或［9］之製造方法，其中，該化合物D’為二甲基亞碸。 ［11］如［1］～［10］任一項之製造方法，其中，該還原劑為選自由下列所組成之群組的1個以上的化合物：還原型菸鹼醯胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADPH）、氧化型菸鹼醯胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADP ⁺）、還原型菸鹼醯胺腺嘌呤二核苷酸（NADH）及氧化型菸鹼醯胺腺嘌呤二核苷酸（NAD ⁺）。 ［12］如［1］～［11］任一項之製造方法，其中，該還原劑為還原型菸鹼醯胺腺嘌呤二核苷酸磷酸。 ［13］如［1］～［12］任一項之製造方法，其中，該多胜肽具有，在至少1個反應條件下，對化合物A與化合物B的分子間還原胺化反應、或化合物C的分子內還原胺化反應的觸媒活性。 ［14］如［1］～［13］任一項之製造方法，其中，該多胜肽含有以序列識別號1所示之胺基酸序列中的1個以上的胺基酸殘基變異的胺基酸序列。 ［15］如［1］～［14］任一項之製造方法，其中，該多胜肽含有以序列識別號8所示、在以X所示的胺基酸殘基為組胺酸殘基的胺基酸序列。 ［16］如［1］～［15］任一項之製造方法，其中，該多胜肽在N端及C端任一端或兩端，含有與以序列識別號1所示之胺基酸序列中的1個胺基酸殘基變異的序列具有90%以上的序列相似性的序列以外的胺基酸序列。 ［17］如［1］～［16］任一項之製造方法，其中，該多胜肽在N端及C端任一端或兩端，含有標籤序列（tag sequence）。 ［18］如［1］～［17］任一項之製造方法，其中，該多胜肽在N端及C端任一端或兩端，含有選自由鏈球菌親生物素蛋白結合胜肽(Streptavidin-binding peptide)標籤序列及His標籤序列所組成之群組的1個以上。 ［19］如［1］～［18］任一項之製造方法，其中，該多胜肽的胺基酸殘基數為300以上400以下。 ［20］如［1］～［19］任一項之製造方法，其中，該步驟為進行該化合物A與該化合物B的分子間還原胺化反應之步驟。 ［21］如［20］之製造方法，其中，該化合物A為選自由以下述式（2）所示之化合物及其鹽所組成之群組的1個以上的化合物： ［式（2）中，R ¹及R ²各自獨立表示氫原子、烷基、烯基、炔基、環烷基、芳基、雜環基、或雜芳基，這些基團可被取代，R ¹及R ²至少一個為氫原子。］。 ［22］如［21］之製造方法，其中，該式（2）中，R ¹為氫原子，R ²為氫原子或烷基。 ［23］如［21］或［22］之製造方法，其中，該式（2）中，R ¹為氫原子，R ²為氫原子、甲基或乙基。 ［24］如［20］～［23］任一項之製造方法，其中，該化合物B為選自由以下述式（3）所示之化合物及其鹽所組成之群組的1個以上的化合物： ［式（3）中，X表示碳原子，Y表示氫原子或以上述式（4）所示之基，n表示0以上2以下的整數，R ⁶表示氫原子、也可被取代的C ₁～C ₆烷基、也可被取代的C ₁～C ₆芳基、也可被取代的構成環的原子數為5以上12以下的雜芳基、含氮原子的基、或含氧原子的基， 式（4）中， 表示與X的鍵結點，m表示0以上6以下的整數，p為0或1，q為0或1，r為0或1，Z ¹表示也可被取代的伸烷基（alkylene）、或碳數1以上6以下含有醚鍵的基，當m為2以上的整數的情形時，複數個存在的Z ¹可相同也可不同，Z ²表示碳原子，R ³、R ⁴及R ⁵各自獨立表示氫原子、也可被取代的C ₁～C ₆烷基、也可被取代的C ₅～C ₁₂芳基、也可被取代的構成環的原子數為5以上12以下的雜芳基、含氮原子的基、或含氧原子的基，R ³、R ⁴及R ⁵之中的任二個以上也可互相連接與Z ²共同形成環結構，此等環結構可為環烷基、芳基、雜環基、或雜芳基，此等基可被取代， R ³、R ⁴及R ⁵也可與Z ²形成雙鍵或三鍵， 當R ³、R ⁴及R ⁵的任一個經由雙鍵或三鍵與Z ²鍵結的情形時，p、q或r任一個以上為0。］。 ［25］如［24］之製造方法，其中，該式（3）中，n為0，R ⁶為氫原子，Y表示C ₃～C ₈環烷基、或C ₆～C ₉芳烷基，該芳烷基也可被C ₁～C ₃烷基或鹵素所取代。 ［26］如［24］或［25］之製造方法，其中，該式（3）中，n為0，R ⁶為氫原子，Y為（2－氯苯基）乙基、苯甲基、或環戊基。 ［27］如［24］～［26］任一項之製造方法，其中，該式（2）中，R ¹為氫原子，R ²為氫原子或甲基，該式（3）中，n及m皆為0，Y為以式（4）所示之基，R ³為（2－氯苯基）甲基，R ⁴、R ⁵及R ⁶皆為氫原子，p、q及r皆為1。 ［28］如［24］～［26］任一項之製造方法，其中，該式（2）中，R ¹為氫原子，R ²為乙基，該式（3）中，n及m皆為0，Y為式以（4）所示之基，R ³為苯基，R ⁴、R ⁵及R ⁶皆為氫原子，p、q及r皆為1。 ［29］如［24］～［26］任一項之製造方法，其中，該式（2）中，R ¹為氫原子，R ²為甲基，該式（3）中，n及m皆為0，Y為以式（4）所示之基，R ³及R ⁴互相連接與Z ²形成環戊烷環，R ⁵及R ⁶皆為氫原子，p、q及r皆為1。 ［30］如［24］～［26］任一項之製造方法，其中，該式（4）中，R ³、R ⁴及R ⁵之中的至少1個不為甲基。 ［31］如［1］～［20］任一項之製造方法，其中，該化合物A為選自由氨、甲胺、乙胺及此等的鹽所組成之群組的1個以上的化合物。 ［32］如［1］～［20］任一項或［31］之製造方法，其中，該化合物B為選自由4－（2－氯苯基）－2－氧代丁酸(4-(2-chlorophenyl)-2-oxobutanoic acid)、苯基丙酮酸(phenylpyruvate)、2－環戊基－2－氧代－乙酸(2-cyclopentyl-2-oxo-acetic acid)及此等的鹽所組成之群組的1個以上的化合物。 ［33］如［1］～［20］任一項或［31］或［32］之製造方法，其中，該化合物A為氨或其鹽、或甲胺或其鹽，該化合物B為4－（2－氯苯基）－2－氧代丁酸或其鹽、或苯基丙酮酸或其鹽。 ［34］如［1］～［20］任一項或［31］或［32］之製造方法，其中，該化合物A為乙胺或其鹽，該化合物B為苯基丙酮酸或其鹽。 ［35］如［1］～［20］任一項或［31］或［32］之製造方法，其中，該化合物A為甲胺或其鹽，該化合物B為2－環戊基－2－氧代－乙酸或其鹽。 ［36］如［1］～［35］任一項之製造方法，其中，在該步驟中，在反應開始的時點的該化合物A的濃度，在反應液的總量中，為100mM以上3000mM以下。 ［37］如［1］～［36］任一項之製造方法，其中，在該步驟中，在反應開始的時點的該化合物B的濃度，在反應液的總量中，為0.001mM以上1000mM以下。 ［38］如［1］～［37］任一項之製造方法，其中，該步驟在反應溶液中的化合物A的濃度對該化合物B的濃度的比為1以上的條件下進行。 ［39］如［1］～［19］任一項之製造方法，其中，該步驟為進行該化合物C的分子內還原胺化反應之步驟。 ［40］如［39］之製造方法，其中，該化合物C為以下述式（5）所示化合物： ［式（5）中，n’表示0以上2以下的整數，R ⁷表示伸烷基、伸烯基、伸炔基、環伸烷基、伸芳基、雜亞環基、或雜伸芳基，此等基可被取代，R ⁸表示氫原子、也可被取代的C ₁～C ₆烷基、也可被取代的C ₁～C ₆芳基、也可被取代的構成環的原子數為5以上12以下的雜芳基、含氮原子的基、或含氧原子的基。］。 ［41］如［1］～［40］任一項之製造方法，其中，在該步驟中，在反應開始的時點的該化合物C的濃度，在反應液的總量中，為0.001mM以上1000mM以下。 ［42］如［1］～［41］任一項之製造方法，其中，在該步驟中，葡萄糖及葡萄糖脫氫酶存在反應溶液中。 ［43］如［1］～［42］任一項之製造方法，其中，該步驟在適當的反應條件下進行。 ［44］如［1］～［43］任一項之製造方法，其中，該步驟在0℃以上50℃以下的溫度條件下進行。 ［45］如［1］～［44］任一項之製造方法，其中，該步驟在7以上11以下的pH條件下進行。 ［46］如［1］～［45］任一項之製造方法，其中，該步驟在下列條件下進行：如果化合物D或化合物D’在25℃且1大氣壓的條件下為液體，反應溶液中的該化合物D或化合物D’的濃度為1v／v%以上或60v／v%以下，如果化合物D或化合物D’在25℃且1大氣壓的條件下為固體，反應溶液中的該化合物D或化合物D’的濃度為1w／v%以上或60v／v%以下。 ［47］如［1］～［46］任一項之製造方法，其中，該步驟在下列條件下進行：該多胜肽的濃度在反應溶液中為0.1μM以上10μM以下。 ［48］如［1］～［47］任一項之製造方法，其中，該步驟在下列條件下進行：該還原劑的濃度在反應溶液中為0.1mM以上100mM以下。 ［49］如［1］～［48］任一項之製造方法，其中，在該化合物D或該化合物D’存在下的反應所生成的胺基酸的產率為，在該化合物D或該化合物D’不存在的條件下的反應所生成的胺基酸的產率的1.2倍以上。 ［50］如［1］～［49］任一項之製造方法，其中，在該步驟中所生成的胺基酸的產率為50%以上。 ［51］如［1］～［50］任一項之製造方法，其中，在該步驟中所生成的胺基酸的產率根據下列條件進行測量： 在反應溶液中，苯基丙酮酸、2－氧代－3－（p－甲苯基）丙酸、或2－環戊基－2－氧代－乙酸為50mM，D（+）－葡萄糖為100mM，氨、甲胺或乙胺為500mM，磷酸緩衝液為100mM，NADPH為1mM，GDH溶液為0.002unit／μL，該多胜肽為2.5μL的濃度，使用該化合物D或化合物D’的情形時，如果化合物D或化合物D’在25℃且1大氣壓的條件下為液體，則化合物D或化合物D’的濃度為20v／v%，如果化合物D或化合物D’在25℃且1大氣壓的條件下為固體，則化合物D或化合物D’的濃度為20w／v%，且在37℃、pH8到9的範圍的條件下，開始反應，經過19個小時，求得經由還原胺化反應所生成的胺基酸的產率。 ［52］如［1］～［51］任一項之製造方法，其中，該多胜肽的觸媒活性根據下列條件進行評估： 在反應溶液中，4－（2－氯苯基）－2－氧代丁酸鈉、苯基丙酮酸鈉、或2－環戊基－2－氧代乙酸鈉為50mM，D（+）－葡萄糖為100mM，甲胺或乙胺為500mM，磷酸緩衝液為100mM，NADPH為1mM，GDH溶液為0.002unit／μL，評估對象多胜肽為2.5μL，化合物D或化合物D’為20v／v%或20w／v%，在25℃或37℃、pH8到9的範圍的條件下，開始反應，經過3個小時或23個小時，求得經由還原胺化反應所生成的胺基酸的產率而進行評估。 ［53］一種胜肽化合物的製造方法，包括下列步驟： （1）經由如［1］～［51］任一項之製造方法，製造胺基酸之步驟；以及 （2）使該胺基酸與1個以上的選自由其他胺基酸及其他胜肽所組成之群組連接，製造胜肽化合物之步驟。 ［54］一種還原胺化反應促進劑，如以下述式（1）所示，促進下列（i）或（ii）的反應： （i）化合物A與化合物B的分子間還原胺化反應，該化合物A選自由具有胺基的化合物及其鹽所組成之群組，化合物B選自由具有羰基的化合物及其鹽所組成之群組， （ii）化合物C的分子內還原胺化反應，該化合物C選自由具有胺基及羰基的化合物及其鹽所組成之群組， ［式（1）中， v及w各自獨立表示0或1， v及w之中的任一個以上表示1， T表示碳原子、磷原子、或硫原子， 以下述式（1a）所示之官能基表示＝O、－ORd或羥基， 當v及w皆為1的情形時，複數個存在的以式（1a）所示之2個官能基可相同也可不同， Ra、Rb及Rc各自獨立表示氫原子、C ₁～C ₃烷基、烷胺基、或－CH ₂－ORd， Ra、Rb及Rc之中的任二個以上可與T互相連接共同形成環結構， Rd表示C ₁～C ₃烷基， d、e及f各自獨立表示0或1， d、e及f之中的任一個以上表示1， 當v及w皆為1的情形時，Ra、Rb及Rc的任一個以上為甲基，Ra、Rb及Rc不互相連接、不與T形成環結構， 當Ra、Rb及Rc的任一個以上為甲胺基的情形時，Ra、Rb及Rc不互相連接、不與T形成環結構， 當以式（1a）所示之官能基為羥基、且T為碳原子的情形時， d、e及f皆為1，Ra、Rb及Rc皆為氫原子。］。 ［55］如［54］之還原胺化反應促進劑，其中，該式（1）中，T為磷原子或硫原子，該以式（1a）所示官能基為＝O，Ra、Rb及Rc皆為甲基。 ［56］如［54］或［55］之還原胺化反應促進劑，其為選自由下列所組成之群組的1個以上的化合物：二甲基亞碸、二甲基碸、二甲氧基乙烷、三甲基氧化膦、N,N－二甲基甲醯胺、N,N－二甲基乙醯胺、四亞甲基亞碸、二乙基亞碸、甲醇、及甲基甲醯胺。 ［57］如［54］～［56］任一項之還原胺化反應促進劑，其為選自由二甲基亞碸、二甲基碸、及三甲基氧化膦所組成之群組的1個以上的化合物。 ［58］如［54］～［57］任一項之還原胺化反應促進劑，其為二甲基亞碸。 ［發明功效］

根據本發明，可提供效率良好地製造胺基酸的方法。

［用以實施發明的形態］

以下對於用以實施本發明之形態進行詳細說明。但是，本發明不限定於下列實施形態。

本說明書中，「1個或複數個」表示1個或2個以上的數量。當「1個或複數個」用於與某基團的取代基相關的敘述時，此用語表示從1個至該基團容許的取代基的最大數的數量。「1個或複數個」具體例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、及／或更大的數量。

本說明書中，表示範圍的「～」包含其兩端值，例如「A～B」表示A以上且B以下的範圍。

本說明書中，「約」與數值組合使用時，表示該數值的+10%及-10%的數值範圍。

本說明書中，「及／或」的意義包含適當組合「及」與「或」的所有組合。具體為，例如「A、B及／或C」包含下列7種變化：（i）A、（ii）B、（iii）C、（iv）A及B、（v）A及C、（vi）B及C、（vii）A、B及C。

本說明書中的「烷基」為從脂肪族烴去除任意的1個氫原子所衍生的一價基，骨架結構中不含有雜原子（碳及氫原子以外的原子）或不飽和的碳－碳鍵，具有含氫及碳原子的烴基或烴基結構的部分集合。烷基不僅有直鏈狀者，也包含支鏈狀者。烷基具體為碳原子數1～20（C ₁～C ₂₀，下述的「C _p～C _q」表示碳原子數為p～q個）的烷基，可如C ₁～C ₁₀烷基，較佳如C ₁～C ₆烷基，更佳如C ₁～C ₃烷基。烷基具體例如甲基、乙基、n－丙基、i－丙基、n－丁基、s－丁基、t－丁基、異丁基（2－甲基丙基）、n－戊基、s－戊基（1－甲基丁基）、t－戊基（1,1－二甲基丙基）、新戊基（2,2－二甲基丙基）、異戊基（3－甲基丁基）、3－戊基（1－乙基丙基）、1,2—二甲基丙基、2－甲基丁基、n－己基、1,1,2－三甲基丙基、1,2,2－三甲基丙基、1,1,2,2－四甲基丙基、1,1－二甲基丁基、1,2－二甲基丁基、1,3－二甲基丁基、2,2－二甲基丁基、2,3－二甲基丁基、3,3－二甲基丁基、1－乙基丁基、2－乙基丁基等。

本說明書中「烯基」為具有至少1個雙鍵（2個鄰接SP ²碳原子）的一價基。根據雙鍵及取代部分（如果存在的話）的配置，雙鍵的幾何學形態可採對側（E）或同側（Z）、順式或反式配置。烯基不只有直鏈狀，也包含支鏈狀。烯基可如C ₂～C ₁₀烯基，較佳如C ₂～C ₆烯基。具體例如乙烯基、烯丙基、1－丙烯基、2－丙烯基、1－丁烯基、2－丁烯基（包含順式、反式）、3－丁烯基、戊烯基、3－甲基－2－丁烯基、己烯基等。

本說明書中「炔基」為具有至少1個三鍵（2個鄰接SP碳原子）的一價基。炔基不只有直鏈狀，也包含支鏈狀。炔基可如C ₂～C ₁₀炔基，較佳如C ₂～C ₆炔基。具體例如乙炔基、1－丙炔基、炔丙基、3－丁炔基、戊炔基、己炔基、3－苯基－2－丙炔基、3－（2’－氟苯基）－2－丙炔基、2－羥基－2－丙炔基、3－（3－氟苯基）－2－丙炔基、3－甲基－（5－苯基）－4－戊炔基等。

本說明書中「環烷基」表示飽和或部分飽和的環狀一價脂肪族烴基。環烷基包含單環、雙環、或螺環。環烷基可如C ₃～C ₈環烷基。具體如環丙基、環丁基、環戊基、環己基、環庚基、環辛基、雙環［2.2.1］庚基、螺［3.3］庚基等。

本說明書中「芳基」表示一價的芳香族烴環。芳基可如C ₆～C ₁₀芳基。芳基具體如苯基、萘基（如1－萘基、2－萘基）等。

本說明書中「雜環基」表示除碳原子外還含有1～5個雜原子的非芳香族環狀一價基。雜環基可為環中具有雙鍵及或三鍵，也可為環中的碳原子氧化形成羰基，可為單環也可為縮合環。為縮合環時，也可為苯環、吡啶環、嘧啶環等的芳香環，與環戊烷環、環己烷環等的飽和脂環式環、或四氫吡喃環、二㗁烷（dioxane）環、吡咯烷（pyrrolidine）環等的飽和雜環，形成縮合環。構成環的原子數可為4～10（4～10員雜環基），較佳為4～7（4～7員雜環基）。雜環基具體如氮雜環丁基（azetidinyl）、環氧乙基（oxiranyl）、氧雜環丁基（oxetanyl）、氮雜環丁基、二氫呋喃基、四氫呋喃基、二氫吡喃基、四氫吡喃基、四氫吡啶基、四氫嘧啶基、嗎啉基、硫代嗎啉基、吡咯烷基（pyrrolidinyl）、哌啶基（piperidinyl）、哌嗪基（piperazinyl）、吡唑烷基（pyrazolidinyl）、咪唑啉基（imidazolinyl）、咪唑啶基（imidazolidinyl）、㗁唑啶基（oxazolidinyl）、異㗁唑啶基、四氫噻唑基（thiazolidinyl）、異四氫噻唑基、1,2－噻嗪烷（1,2－thiazinane）、噻二唑啶基（thiadiazolidinyl）、氮雜環丁基、㗁唑烷酮（oxazolidone）、苯併二㗁烷基（benzodioxanyl）、苯併㗁唑基（benzoxazolyl）、二氧環戊基（dioxolanyl）、二㗁烷基（dioxanyl）、四氫吡咯併［1,2－c］咪唑基、硫雜環丁基（thietanyl）、3,6－二氮雜雙環［3.1.1］庚基、2,5－二氮雜雙環［2.2.1］庚基、3－氧雜－8－氮雜雙環［3.2.1］辛基、磺內醯胺（sultams）、2－氧雜螺［3.3］庚基等。

本說明書中「受保護的雜環基」表示前述定義之「雜環基」所含的1個或複數個官能基例如胺基被任意的保護基所保護之基。受保護的雜環基可例如受保護的4～7員雜環基。保護基具體例如Boc、Fmoc、Cbz、Troc、Alloc等。受保護的雜環基具體例如Boc保護的氮雜環丁烷等。

本說明書中「雜亞環基」表示除碳原子外還含有1～5個雜原子、從存在於非芳香族的環的1個碳原子去除2個氫原子的二價基。雜亞環基中的游離原子價也可成為雙鍵的一部分，也可不成為雙鍵的一部分。除碳原子外還含有1～5個雜原子的非芳香族的環可與「雜環基」所述的環相同。雜亞環基較佳例如4～7員雜亞環基，具體例如四氫吡喃－4－亞基、氮雜環丁－3－亞基等。

本說明書中「受保護的雜亞環基」表示前述定義之「雜亞環基」所含的1個或複數個官能基例如胺基被任意的保護基所保護之基。受保護的雜亞環基較佳例如受保護的4～7員雜環基。保護基具體例如Boc、Fmoc、Cbz、Troc、Alloc等。受保護的雜亞環基具體例如Boc保護的氮雜環丁－3－亞基等。

本說明書中「雜芳基」表示除了碳原子外還含有1～5個雜原子的芳香族性環狀一價基。環可為單環，也可為與其他環的縮合環，也可部分飽和。構成環的原子數可為5～12（5～12員雜芳基），較佳為6～10（6～10員雜芳基），更佳為6～7（6～7員雜芳基）。雜芳基具體如呋喃基、噻吩基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、噻唑基、異噻唑基、㗁唑基、異㗁唑基、㗁二唑基、噻二唑基、三唑基、四唑基、吡啶基、嘧啶基、嗒嗪基（pyridazinyl）、吡嗪基（pyrazinyl）、三嗪基、苯併呋喃基、苯併噻吩基、苯併噻二唑基、苯併噻唑基、苯併㗁唑基、苯併㗁二唑基、苯併咪唑基、吲哚基、異吲哚基、吲唑基、喹啉基、異喹啉基、辛啉基（cinnolinyl）、喹唑啉基（quinazolinyl）、喹㗁啉基（quinoxalinyl）、苯併二氧雜環戊基（benzodioxolyl）、吲哚嗪基（indolizinyl）、咪唑併吡啶基等。

本說明書中「烷氧基」表示上述定義之「烷基」鍵結的氧基。烷氧基可如C ₁～C ₆烷氧基。烷氧基具體如甲氧基、乙氧基、1－丙氧基、2－丙氧基、n－丁氧基、i－丁氧基、s－丁氧基、t－丁氧基、戊氧基、3－甲基丁氧基等。

本說明書中「烷硫基」表示上述定義之「烷基」鍵結的硫基。烷硫基可例如C ₁～C ₆烷硫基。烷硫基具體例如甲硫基、乙硫基、1－丙基硫基、2－丙基硫基、n－丁基硫基、i－丁基硫基、s－丁基硫基、t－丁基硫基等。

本說明書中「烯氧基」表示上述定義之「烯基」鍵結的氧基。烯氧基可如C ₂～C ₆烯氧基。烯氧基具體如乙烯氧基、烯丙氧基、1－丙烯氧基、2－丙烯氧基、1－丁烯氧基、2－丁烯氧基（包含順式、反式）、3－丁烯氧基、戊烯氧基、己烯氧基等。

本說明書中「環烷氧基」表示上述定義之「環烷基」鍵結的氧基。環烷氧基可如C ₃～C ₈環烷氧基。環烷氧基具體如環丙氧基、環丁氧基、環戊氧基等。

本說明書中「芳氧基」表示上述定義之「芳基」鍵結的氧基。芳氧基可如C ₆～C ₁₀芳氧基。芳氧基具體如苯氧基、1－萘氧基、2－萘氧基等。

本說明書中「胺基」狹義地表示－NH ₂，廣義地表示－NRR’，此處R及R’獨立選自氫原子、烷基、烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳基、或雜芳基，或者R及R’與該等鍵結的氮原子共同形成環。胺基可如－NH ₂、單C ₁～C ₆烷基胺基、二C ₁～C ₆烷基胺基、4～8員環胺基等。

本說明書中「單烷基胺基」表示上述定義之「胺基」之中R為氫原子且R’為上述定義之「烷基」之基。單烷基胺基可如單C ₁～C ₆烷基胺基，較佳例如單C ₁～C ₃烷基胺基。單烷基胺基的具體例如甲胺基、乙胺基、n－丙基胺基、i－丙基胺基、n－丁基胺基、s－丁基胺基、t－丁基胺基等。

本說明書中「二烷基胺基」表示上述定義之「胺基」之中R及R’獨立為上述定義之「烷基」之基。二烷基胺基可如二C ₁～C ₆烷基胺基，較佳如二C ₁～C ₃烷基胺基。二烷基胺基具體例如二甲基胺基、二乙基胺基等。本說明書中，集合單烷基胺基及二烷基胺基稱為「烷胺基」。例如，「甲胺基」可包含單甲胺基及二甲胺基。

本說明書中「環胺基」表示上述定義之「胺基」之中R及R’與該等鍵結的氮原子共同形成環的基。環胺基可如4～8員環胺基。環胺基具體例如1－氮雜環丁基、1－吡咯烷基、1－哌啶基、1－哌嗪基、4－嗎啉基、3－㗁唑啶基、1,1－二氧硫代嗎啉－4－基、3－氧雜－8－氮雜雙環［3.2.1］辛－8－基等。

本說明書中「受保護的胺基」表示以任意的保護基保護的胺基。受保護的胺基具體例如以Boc、Fmoc、Cbz、Troc、Teoc、Alloc等的保護基保護的胺基。

本說明書中「胺羰基」表示上述定義之「胺基」鍵結的羰基。胺羰基較佳如－CONH ₂、單C ₁～C ₆烷基胺羰基、二C ₁～C ₆烷基胺羰基、4～8員環胺基羰基。胺羰基的具體例如－CONH ₂、二甲基胺羰基、1－氮雜環丁基羰基、1－吡咯烷基羰基、1－哌啶基羰基、1－哌嗪基羰基、4－嗎啉基羰基、3－㗁唑啶基羰基、1,1－二氧硫代嗎啉－4－基羰基、3－氧雜－8－氮雜雙環［3.2.1］辛－8－基羰基等。

本說明書中「烯氧基羰基」表示上述定義之「烯氧基」鍵結的羰基。烯氧基羰基可如C ₂～C ₆烯氧基羰基。烯氧基羰基具體例如乙烯氧基羰基、烯丙氧基羰基、1－丙烯氧基羰基、2－丙烯氧基羰基、1－丁烯氧基羰基、2－丁烯氧基羰基（包含順式、反式）、3－丁烯氧基羰基、戊烯氧基羰基、己烯氧基羰基等。

本說明書中「烷基磺醯基」表示上述定義之「烷基」鍵結的磺醯基。烷基磺醯基可如C ₁～C ₆烷基磺醯基。烷基磺醯基具體如甲基磺醯基等。

本說明書中「羥烷基」表示上述定義之「烷基」的1個或複數個的氫以羥基取代的基。羥烷基可為C ₁～C ₆羥烷基。羥烷基具體如羥甲基、1－羥乙基、2－羥乙基、2－羥基－2－甲基丙基、5－羥戊基等。

本說明書中「鹵烷基」表示上述定義之「烷基」的1個或複數個氫原子以鹵素取代的基。鹵烷基可為C ₁～C ₆鹵烷基，更佳為C ₁～C ₆氟烷基。鹵烷基具體如二氟甲基、三氟甲基、2,2－二氟乙基、2,2,2－三氟乙基、3,3－二氟丙基、4,4－二氟丁基、5,5－二氟戊基等。

本說明書中「氰烷基」表示上述定義之「烷基」的1個或複數個氫原子以氰基取代的基。氰烷基可如C ₁～C ₆氰烷基。氰烷基具體例如氰甲基、2－氰乙基等。

本說明書中「胺烷基」表示上述定義之「烷基」的1個或複數個氫以上述定義之「胺基」取代的基。胺烷基較佳如C ₁～C ₆胺烷基。胺烷基具體例如1－吡啶基甲基、2－（1－哌啶基）乙基、3－（1－哌啶基）丙基、4－胺基丁基等。

本說明書中「羧烷基」表示上述定義之「烷基」的1個或複數個的氫原子以羧基取代的基。羧烷基較佳為C ₂～C ₆羧烷基。羧烷基具體例如羧甲基等。

本說明書中「烯氧基羰烷基」表示上述定義之「烷基」的1個或複數個氫原子以上述定義之「烯氧基羰基」取代的基。烯氧基羰烷基可如C ₂～C ₆烯氧基羰基C ₁～C ₆烷基，較佳如C ₂～C ₆烯氧基羰基C ₁～C ₂烷基。烯氧基羰烷基具體例如烯丙氧基羰甲基、2－（烯丙氧基羰基）乙基等。

本說明書中「烷氧基烷基」表示上述定義之「烷基」的1個或複數個氫原子以上述定義之「烷氧基」取代的基。烷氧基烷基可為C ₁～C ₆烷氧基C ₁～C ₆烷基，較佳為C ₁～C ₆烷氧基C ₁～C ₂烷基。烷氧基烷基具體如甲氧基甲基、乙氧基甲基、1－丙氧基甲基、2－丙氧基甲基、n－丁氧基甲基、i－丁氧基甲基、s－丁氧基甲基、t－丁氧基甲基、戊氧基甲基、3－甲基丁氧基甲基、1－甲氧基乙基、2－甲氧基乙基、2－乙氧基乙基等。

本說明書中「烷硫基烷基」表示上述定義之「烷基」的1個或複數個的氫原子以上述定義之「烷硫基」取代的基。烷硫基烷基可如C ₁～C ₆烷硫基C ₁～C ₆烷基，較佳如C ₁～C ₆烷硫基C ₁～C ₂烷基。烷硫基烷基具體例如甲硫基甲基、乙硫基甲基、1－丙硫基甲基、2－丙硫基甲基、n－丁硫基甲基、i－丁硫基甲基、s－丁硫基甲基、t－丁硫基甲基等。

本說明書中「烯氧基烷基」表示上述定義之「烷基」的1個或複數個氫原子以上述定義之「烯氧基」取代的基。烯氧基烷基可如C ₂～C ₆烯氧基C ₁～C ₆烷基，較佳如C ₁～C ₆烯氧基C ₁～C ₂烷基。烯氧基羰基烷基具體例如乙烯氧基甲基、烯丙氧基甲基等。

本說明書中「環烷基烷基」表示上述定義之「烷基」的1個或複數個的氫原子以上述定義之「環烷基」取代的基。環烷基烷基可為C ₃～C ₈環烷基C ₁～C ₆烷基，較佳為C ₃～C ₆環烷基C ₁～C ₂烷基。環烷基烷基具體例如環丙基甲基、環丁基甲基、環戊基甲基、環己基甲基等。

本說明書中「環烷氧基烷基」表示上述定義之「烷基」的1個或複數個的氫原子以上述定義之「環烷氧基」取代的基。環烷氧基烷基可為C ₃～C ₈環烷氧基C ₁～C ₆烷基，較佳為C ₃～C ₆環烷氧基C ₁～C ₂烷基。環烷氧基烷基具體如環丙氧基甲基、環丁氧基甲基等。

本說明書中「雜環基烷基」表示上述定義之「烷基」的1個或複數個的氫原子以上述定義之「雜環基」取代的基。雜環基烷基可為4～7員雜環基C ₁～C ₆烷基，較佳為4～7員雜芳基C ₁～C ₂烷基。雜環基烷基具體例如2－（四氫－2H－吡喃－4－基）乙基、2－（氮雜環丁－3－基）乙基等。

本說明書中「烷基磺醯基烷基」表示上述定義之「烷基」的1個或複數個的氫原子以上述定義之「烷基磺醯基」取代的基。烷基磺醯基烷基可為C ₁～C ₆烷基磺醯基C ₁～C ₆烷基，較佳為C ₁～C ₆烷基磺醯基C ₁～C ₂烷基。烷基磺醯基烷基具體例如甲基磺醯基甲基、2－（甲基磺醯基）乙基等。

本說明書中「胺羰基烷基」表示上述定義之「烷基」的1個或複數個的氫原子以上述定義之「胺羰基」取代的基。胺羰基烷基可為胺羰基C ₁～C ₆烷基，較佳為胺羰基C ₁～C ₄烷基。胺羰基烷基具體例如甲基胺羰基甲基、二甲基胺羰基甲基、t－丁基胺羰基甲基、1－氮雜環丁基羰基甲基、1－吡咯烷基羰基甲基、1－哌啶基羰基甲基、4－嗎啉基羰基甲基、2－（甲基胺羰基）乙基、2－（二甲基胺羰基）乙基、2－（1－氮雜環丁基羰基）乙基、2－（1－吡咯烷基羰基） 乙基、2－（4－嗎啉基羰基）乙基、3－（二甲基胺羰基）丙基、4－（二甲基胺羰基）丁基等。

本說明書中「芳氧基烷基」表示上述定義之「烷基」的1個或複數個的氫原子以上述定義之「芳氧基」取代的基。芳氧基烷基可為C ₆～C ₁₀芳氧基C ₁～C ₆烷基，較佳為C ₆～C ₁₀芳氧基C ₁～C ₂烷基。芳氧基烷基具體例如苯氧基甲基、2－苯氧基乙基等。

本說明書中「芳烷基（芳基烷基）」表示上述定義之「烷基」的至少1個的氫原子以上述定義之「芳基」取代的基。芳烷基可如C ₇～C ₁₄芳烷基，較佳如C ₇～C ₁₀芳烷基。芳烷基具體例如苯甲基、苯乙基、3－苯基丙基等。

本說明書中「芳烷氧基」表示上述定義之「芳烷基」鍵結的氧基。芳烷氧基可如C ₇～C ₁₄芳烷氧基，較佳如C ₇～C ₁₀芳烷氧基。芳烷氧基具體例如苯甲氧基、苯乙氧基、3－苯基丙氧基等。

本說明書中「芳烷氧基烷基」表示上述定義之「烷基」的1個或複數個的氫原子以上述定義之「芳烷氧基」取代的基。芳烷氧基烷基可為C ₇～C ₁₄芳烷氧基C ₁～C ₆烷基，較佳為C ₇～C ₁₄芳烷氧基C ₁～C ₂烷基。芳烷氧基烷基具體例如苯甲基氧基甲基、1－（苯甲基氧基）乙基等。

本說明書中「雜芳基烷基」表示上述定義之「烷基」的至少1個的氫原子以上述定義之「雜芳基」取代的基。雜芳基烷基可如5～10員雜芳基C ₁～C ₆烷基，較佳為5～10員雜芳基C ₁～C ₂烷基。雜芳基烷基具體例如3－噻吩基甲基、4－噻唑基甲基、2－吡啶基甲基、3－吡啶基甲基、4－吡啶基甲基、2－（2－吡啶基）乙基、2－（3－吡啶基）乙基、2－（4－吡啶基）乙基、2－（6－喹啉基）乙基、2－（7－喹啉基）乙基、2－（6－吲哚基）乙基、2－（5－吲哚基）乙基、2－（5－苯併呋喃基）乙基等。

本說明書中「雜芳基烷氧基」表示上述定義之「雜芳基烷基」鍵結的氧基。雜芳基烷氧基可如5～10員雜芳基C ₁～C ₆烷氧基，較佳為5～10員雜芳基C ₁～C ₂烷氧基。雜芳基烷氧基具體例如3－噻吩基甲氧基、3－吡啶基甲氧基等。

本說明書中「雜芳基烷氧基烷基」表示上述定義之「烷基」的1個或複數個的氫原子以上述定義之「雜芳基烷氧基」取代的基。雜芳基烷氧基烷基可如5～10員雜芳基C ₁～C ₆烷氧基C ₁～C ₆烷基，較佳為5～10員雜芳基C ₁～C ₂烷氧基C ₁～C ₂烷基。雜芳基烷氧基烷基具體例如3－吡啶基甲氧基甲基等。

本說明書中「雜亞環基烷基」表示上述定義之「烷基」的1個或複數個的氫原子以上述定義之「雜亞環基」取代的基。雜亞環基烷基可如4～7員雜亞環基C ₁～C ₆烷基，較佳為4～7員雜亞環基C ₁～C ₂烷基。雜亞環基烷基具體例如四氫－4H－吡喃－4－亞基甲基、氮雜環丁－3－亞基甲基等。

本說明書中「烷氧基烯基」表示上述定義之「烯基」的1個或複數個的氫原子以上述定義之「烷氧基」取代的基。烷氧基烯基可如C ₁～C ₆烷氧基C ₂～C ₆烯基。烷氧基烯基具體例如（E）－4－甲氧基丁－2－烯－1－基等。

本說明書之「胺羰基烯基」表示上述定義之「烯基」的1個或複數個的氫原子以上述定義之「胺羰基」取代的基。胺羰基烯基可如胺羰基C ₂～C ₆烯基。胺羰基烯基具體例如（E）－3－（二甲基胺羰基羰基）－丙－2－烯－1－基等。

本說明書中「鹵烷氧基」表示上述定義之「烷氧基」的1個或複數個氫原子以鹵原子取代的基。鹵烷氧基可為C ₁～C ₆鹵烷氧基。鹵烷氧基具體例如二氟甲氧基、三氟甲氧基、2,2－二氟乙氧基、2,2,2－三氟乙氧基等。

本說明書中「伸烷基」表示從上述「烷基」再去除任意1個氫原子所衍生的二價基。伸烷基可為C ₄～C ₈伸烷基。伸烷基具體例如－CH ₂－、－（CH ₂） ₂－、－（CH ₂） ₃－、－CH（CH ₃）CH ₂－、－C（CH ₃） ₂－、－（CH ₂） ₄－、－CH（CH ₃）CH ₂CH ₂－、－C（CH ₃） ₂CH ₂－、－CH ₂CH（CH ₃）CH ₂－、－CH ₂C（CH ₃） ₂－、－CH ₂CH ₂CH（CH ₃）－、－（CH ₂） ₅－、－（CH ₂） ₆－、－（CH ₂） ₇－、－（CH ₂） ₈－等。

本說明書中「環伸烷基」表示從上述「環烷基」再去除任意1個氫原子所衍生的二價基。環伸烷基可為C ₃～C ₈環伸烷基。環伸烷基具體例如環丙烷－1,2－二基、環丁烷－1,2－二基、環戊烷－1,2－二基、環己烷－1,2－二基等。

本說明書中「伸烯基」表示從上述「烯基」再去除任意1個氫原子所衍生的二價基。根據雙鍵及取代部分（如果存在的話）的配置，雙鍵的幾何學形態可採對側（E）或同側（Z）、順式或反式配置。伸烯基包含直鏈狀或支鏈狀，較佳為C ₂～C ₁₀伸烯基，更佳為C ₂～C ₆伸烯基。

本說明書中「伸炔基」表示從上述「炔基」再去除任意1個氫原子所衍生的二價基。伸炔基包含直鏈狀或支鏈狀，可為C ₂～C ₁₀伸炔基，較佳為C ₂～C ₆伸炔基。

本說明書中「伸芳基」表示從上述「芳基」再去除任意1個氫原子所衍生的二價基。伸芳基可為單環也可為雙環。構成環的原子數無特別限定，較佳為6～10（C6～10伸芳基）。伸芳基具體例如1,2－亞苯基、1,3－亞苯基、1,4－亞苯基、1,2－亞萘基、1,3－亞萘基、1,4－亞萘基等。

本說明書中「雜亞環基」表示從上述「雜環基」再去除任意1個氫原子所衍生的二價基。

本說明書中「雜伸芳基」表示從上述「雜芳基」再去除任意1個氫原子所衍生的二價基。

本說明書中「螺環烷基」表示構成環烷環的1個碳原子為鍵結對象的基團中的碳原子所形成的基。螺環烷基可例如C ₃～C ₈螺環烷基，具體例如螺環丙基、螺環丁基、螺環戊基、螺環己基、螺環庚基、螺環辛基等。

本說明書中「螺雜環基」表示前述「螺環烷基」中的1個或複數個碳原子被取代為雜原子的基。螺雜環基可例如4～10員螺雜環基。

本說明書之「脂環式環」表示非芳香族烴環。脂環式環可在環中具有不飽和鍵，也可以是具有2個以上的環的多環性的環。又，也可以是構成環的碳原子被氧化形成羰基。脂環式環可如3～8員脂環式環，具體例如環丙烷環、環丁烷環、環戊烷環、環己烷環、環庚烷環、環辛烷環、雙環［2.2.1］庚烷環等。

本說明書之「雜環」表示構成環的原子中宜含有1～5個、較佳含有1～3個雜原子的非芳香族的雜環。雜環也可在環中具有雙鍵及／或三鍵，也可環中的碳原子被氧化形成羰基，也可為單環、縮合環、螺環。構成環的原子數可為3～12（3～12員雜環），較佳為4～8（4～8員雜環）。雜環具體如氮雜環丁烷（azetidine）環、氧雜環丁烷（oxetane）環、四氫呋喃環、四氫吡喃環、嗎啉環、硫代嗎啉環、吡咯烷環、4－氧代吡咯烷環、哌啶環、4－氧代哌啶環、哌嗪環（piperazine）、吡唑烷環（pyrazolidine）、咪唑啶環（imidazolidine）、㗁唑啶環（oxazolidine）、異㗁唑啶環、四氫噻唑環（thiazolidine）、異四氫噻唑環、噻二唑啶環（thiadiazolidine）、㗁唑烷酮環（oxazolidone）、二氧環戊烷環（dioxolane）、二㗁烷環（dioxane）、硫雜環丁烷環（thietane）、八氫吲哚環、環庚亞胺（azocane）環、或此等的飽和雜環中的1個或複數個單鍵被取代為雙鍵或三鍵的環等。

本說明書之「飽和雜環」表示除碳原子外還含有1～5個雜原子、環中不含雙鍵及／或三鍵的非芳香族雜環。飽和雜環也可為單環，也可以和其他環如苯環等的芳環形成縮合環。當飽和雜環形成縮合環的情形時，飽和雜環可如4～7員飽和雜環，具體如氮雜環丁烷（azetidine）環、氧雜環丁烷（oxetane）環、四氫呋喃環、四氫吡喃環、嗎啉環、硫代嗎啉環、吡咯烷環、4－氧代吡咯啶環、哌啶環、4－氧代哌啶環、哌嗪環（piperazine）、吡唑烷環（pyrazolidine）、咪唑啶環（imidazolidine）、㗁唑啶環（oxazolidine）、異㗁唑啶環、四氫噻唑環（thiazolidine）、異四氫噻唑環、噻二唑啶環（thiadiazolidine）、㗁唑烷酮環（oxazolidone）、二氧環戊烷環（dioxolane）、二㗁烷環（dioxane）、硫雜環丁烷環（thietane）、八氫吲哚環、吲哚啉環（indoline）、環庚亞胺（azocane）環等。

［胜肽化合物］ 本說明書中，「胜肽化合物」只要是胺基酸殘基經由醯胺鍵或酯鍵連接的胜肽化合物，沒有特別限定。胜肽化合物的胺基酸殘基數沒有特別限制，例如可為5以上、7以上、8以上、或9以上。又胜肽化合物的胺基酸殘基數例如可為30以下、25以下、15以下、或13以下。胜肽化合物的胺基酸殘基數也可為例如5以上30以下、7以上25以下、8以上15以下、及9以上13以下，也可為11。胜肽化合物也可具有分枝結構。

本說明書中，「胺基酸」包含天然胺基酸、及非天然胺基酸。又，本說明書中，「天然胺基酸」是指Gly、Ala、Ser、Thr、Val、Leu、Ile、Phe、Tyr、Trp、His、Glu、Asp、Gln、Asn、Cys、Met、Lys、Arg、Pro。非天然胺基酸沒有特別限定，例如β－胺基酸、γ－胺基酸、D型胺基酸、N取代胺基酸、α,α－二取代胺基酸、側鏈與天然胺基酸不同的胺基酸等。本說明書中，非天然的N取代胺基酸表示Pro以外的N取代胺基酸。本說明書中的胺基酸允許任意的立體配置。胺基酸的側鏈的選擇沒有特別限制，除了氫原子以外，可自由選自例如烷基、烯基、炔基、芳基、雜芳基、芳烷基、環烷基，這些基之中未鄰接的1個或2個亞甲基也可被氧原子、羰基（－CO－）、或磺醯基（－SO ₂－）所取代。各自也可有取代基，該等取代基也無限制，例如可從含有鹵原子、O原子、S原子、N原子、B原子、Si原子、或P原子的任意取代基之中獨立自由選擇1個或2個以上。亦即，例如也可被取代的烷基、烯基、炔基、芳基、雜芳基、芳烷基、環烷基等。一非限定態樣中，本說明書之胺基酸可為同一分子內具有羧基及胺基的化合物（在此情形，如脯胺酸、羥基脯胺酸的亞胺基酸也包含在胺基酸中）。

胺基酸的主鏈胺基可為未取代（NH ₂基），也可被取代（即，－NHR基：R表示可有取代基的烷基、烯基、炔基、芳基、雜芳基、芳烷基、環烷基，這些基之中未鄰接的1或2個亞甲基可以氧原子、羰基（－CO－）、或磺醯基（－SO ₂－）取代，又也可如脯胺酸使鍵結在N原子的碳鏈和α位的碳原子形成環）。上述R的取代基可與上述胺基酸側鏈的取代基相同選擇。在主鏈胺基被取代的情形時，上述R包含於本說明書之「胺基酸的側鏈」。如此的主鏈胺基被取代的胺基酸，在本說明書稱為「N取代胺基酸」。本說明書之「N取代胺基酸」可例如N－烷基胺基酸、N－C ₁～C ₆烷基胺基酸、N－C ₁～C ₄烷基胺基酸、N－甲基胺基酸及N－乙基胺基酸，但不限定於此等。

本說明書之「胺基酸」包含各自對應的所有同位素。「胺基酸」的同位素為至少1個原子以原子序（質子數）相同、質量數（質子數和中子數的和）不同的原子，以與天然者不同的存在比被取代者。本說明書之「胺基酸」所含的同位素之例，有氫原子、碳原子、氮原子、氧原子、磷原子、硫原子、氟原子、氯原子等，分別包括 ²H、 ³H、 ¹³C、 ¹⁴C、 ¹⁵N、 ¹⁷O、 ¹⁸O、 ³¹P、 ³²P、 ³⁵S、 ¹⁸F、 ³⁶Cl等。

本說明書之含有鹵原子的取代基，例如取代基具有鹵原子的烷基、環烷基、烯基、炔基、芳基、雜芳基、芳烷基等，更具體例如氟烷基、二氟烷基、三氟烷基等。

本說明書之含有氧原子的取代基，例如羥基（－OH）、氧基（－OR）、羰基（－C（＝O）－R）、羧基（－CO ₂H）、氧羰基（－C（＝O）－OR）、羰氧基（－O－C（＝O）－R）、硫羰基（－C（＝O）－SR）、羰硫基（－S－C（＝O）－R）、胺羰基（－C（＝O）－NHR）、羰胺基（－NH－C（＝O）－R）、氧羰基胺基（－NH－C（＝O）－OR）、磺醯基胺基（－NH－SO ₂－R）、胺磺醯基（－SO ₂－NHR）、胺磺醯基胺基（－NH－SO ₂－NHR）、硫羧基（－C（＝O）－SH）、羧羰基（－C（＝O）－CO ₂H）等的基。

氧基（－OR）之例，如烷氧基、環烷氧基、烯氧基、炔氧基、芳氧基、雜芳氧基、芳烷基氧基等。烷氧基可為C ₁～C ₄烷氧基、C ₁～C ₂烷氧基，特別以甲氧基、或乙氧基為佳。

羰基（－C（＝O）－R）之例，如甲醯基（－C（＝O）－H）、烷羰基、環烷基羰基、烯羰基、炔羰基、芳羰基、雜芳基羰基、芳烷基羰基等。

氧羰基（－C（＝O）－OR）之例，如烷氧基羰基、環烷氧基羰基、烯氧基羰基、炔氧基羰基、芳氧基羰基、雜芳氧基羰基、芳烷氧基羰基等。

羰氧基（－O－C（＝O）－R）之例，如烷基羰氧基、環烷基羰氧基、烯基羰氧基、炔基羰氧基、芳基羰氧基、雜芳基羰氧基、芳烷基羰氧基等。

硫羰基（－C（＝O）－SR）之例，如烷基硫羰基、環烷基硫羰基、烯基硫羰基、炔基硫羰基、芳基硫羰基、雜芳基硫羰基、芳烷基硫羰基等。

羰硫基（－S－C（＝O）－R）之例，如烷基羰硫基、環烷基羰硫基、烯基羰硫基、炔基羰硫基、芳基羰硫基、雜芳基羰硫基、芳烷基羰硫基等。

胺羰基（－C（＝O）－NHR）之例，如烷基胺羰基（例如C ₁～C ₆或C ₁～C ₄烷基胺羰基，特別例如乙基胺羰基、甲基胺羰基等）、環烷基胺羰基、烯基胺羰基、炔基胺羰基、芳基胺羰基、雜芳基胺羰基、芳烷基胺羰基等。除這些以外，例如與－C（＝O）－NHR中的N原子鍵結的H原子再以烷基、環烷基、烯基、炔基、芳基、雜芳基、芳烷基取代的化合物。

羰胺基（－NH－C（＝O）－R）之例，如烷基羰胺基、環烷基羰胺基、烯基羰胺基、炔基羰胺基、芳基羰胺基、雜芳基羰胺基、芳烷基羰胺基等。除這些以外，例如與－NH－C（＝O）－R中的N原子鍵結的H原子再以烷基、環烷基、烯基、炔基、芳基、雜芳基、芳烷基取代的化合物。

氧基羰胺基（－NH－C（＝O）－OR）之例，如烷氧基羰胺基、環烷氧基羰胺基、烯氧基羰胺基、炔氧基羰胺基、芳氧基羰胺基、雜芳氧基羰胺基、芳烷氧基羰胺基等。除這些以外，例如與－NH－C（＝O）－OR中的N原子鍵結的H原子再以烷基、環烷基、烯基、炔基、芳基、雜芳基、芳烷基取代的化合物。

磺醯基胺基（－NH－SO ₂－R）之例，如烷基磺醯基胺基、環烷基磺醯基胺基、烯基磺醯基胺基、炔基磺醯基胺基、芳基磺醯基胺基、雜芳基磺醯基胺基、芳烷基磺醯基胺基等。除這些以外，例如與－NH－SO ₂－R中的N原子鍵結的H原子再以烷基、環烷基、烯基、炔基、芳基、雜芳基、芳烷基取代的化合物。

胺基磺醯基（－SO ₂－NHR）之例，如烷基胺基磺醯基、環烷基胺基磺醯基、烯基胺基磺醯基、炔基胺基磺醯基、芳基胺基磺醯基、雜芳基胺基磺醯基、芳烷基胺基磺醯基等。除這些以外，例如與－SO ₂－NHR中的N原子鍵結的H原子再以烷基、環烷基、烯基、炔基、芳基、雜芳基、芳烷基取代的化合物。

胺磺醯基胺基（－NH－SO ₂－NHR）之例，如烷基胺磺醯基胺基、環烷基胺磺醯基胺基、烯基胺磺醯基胺基、炔基胺磺醯基胺基、芳基胺磺醯基胺基、雜芳基胺磺醯基胺基、芳烷基胺磺醯基胺基等。再者，與－NH－SO ₂－NHR中的N原子鍵結的2個H原子也可以被獨立選自由烷基、環烷基、烯基、炔基、芳基、雜芳基、及芳烷基所組成之群組的取代基所取代，又此等的2個取代基也可形成環。

含有S原子的取代基，例如硫醇基（－SH）、硫基（－S－R）、亞磺醯基（－S（＝O）－R）、磺醯基（－SO ₂－R）、磺酸基（－SO ₃H）等的基。

硫基（－S－R）之例，選自烷硫基、環烷基硫基、烯基硫基、炔基硫基、芳基硫基、雜芳基硫基、芳烷基硫基等之中。

磺醯基（－SO ₂－R）之例，如烷基磺醯基、環烷基磺醯基、烯基磺醯基、炔基磺醯基、芳基磺醯基、雜芳基磺醯基、芳烷基磺醯基等。

本說明書中，含有氮原子的取代基，例如疊氮基（－N ₃）、氰基（－CN）、1級胺基（－NH ₂）、2級胺基（－NH－R；也稱為單取代胺基）、3級胺基（－NR（R'）；也稱為二取代胺基）、脒基（－C（＝NH）－NH ₂）、經取代的脒基（－C（＝NR）－NR'R''）、胍基（－NH－C（＝NH）－NH ₂）、經取代的胍基（－NR－C（＝NR'''）－NR'R''）、胺基羰基胺基（－NR－CO－NR'R''）、吡啶基、哌啶基、嗎啉基、氮雜環丁基等的基。

2級胺基（－NH－R；單取代胺基）之例，如烷胺基、環烷基胺基、烯基胺基、炔基胺基、芳基胺基、雜芳基胺基、芳烷基胺基等。烷胺基可為C ₁～C ₆烷基，較佳為C ₁～C ₄烷基，更佳為甲基及乙基。

3級胺基（－NR（R'）；二取代胺基）之例，如烷基（芳烷基）胺基等，具有各自獨立選自烷基、環烷基、烯基、炔基、芳基、雜芳基、芳烷基等之中的任意2個取代基的胺基，也可與此等任意的2個取代基鍵結的氮原子共同形成環。具體例如，二烷基胺基，特別是C ₁－C ₆二烷基胺基、C ₁－C ₄二烷基胺基、二甲基胺基、二乙基胺基等。在本說明書，「C _p－C _q二烷基胺基」是指在胺基有2個C _p－C _q烷基被取代的基，兩個C _p－C _q烷基可相同也可不同。

經取代的脒基（－C（＝NR）－NR'R''）之例，如N原子上的3個取代基R、R'、及R'' 為各自獨立選自烷基、環烷基、烯基、炔基、芳基、雜芳基、芳烷基之中的基，例如烷基（芳烷基）（芳基） 脒基等。

經取代的胍基（－NR－C（＝NR'''）－NR'R''）之例，如R、R'、R''、及R'''為各自獨立選自烷基、環烷基、烯基、炔基、芳基、雜芳基、芳烷基之中的基，或此等形成環的基等。

胺基羰胺基（－NR－CO－NR'R''）之例，如R、R'、及R''為各自獨立選自氫原子、烷基、環烷基、烯基、炔基、芳基、雜芳基、芳烷基之中的基，或此等形成環的基等。

本說明書中，「胜肽殘基」、「胺基酸殘基」分別簡稱為「胜肽」、「胺基酸」。

本說明書中，「對應位點」可用於標記出本實施形態之胜肽的胺基酸序列中，對照以序列識別號1所示的胺基酸序列的胺基酸殘基。為了確定對應位點的比對，可經由使用此技術領域中的技術範圍內的多種方法例如BLAST、BLAST－2、ALIGN、Megalign （DNASTAR） 軟體、或GENETYX（註冊商標）（Genetyx Corporation）等的可公眾獲得的電腦軟體來達成。此技術領域之人士可決定為了取得序列比對的適當參數，該序列比對包含為了達成被比較序列的全長的最大比對所必須的任意演算法。

本說明書中所使用的化合物的鹽，較佳可為化學上或藥學上所容許的鹽。又，該鹽可為該等的溶劑合物，較佳為化學上或藥學上所容許的溶劑合物。化合物的鹽例如包括鹽酸鹽；氫溴酸鹽；氫碘酸鹽；磷酸鹽；膦酸鹽；硫酸鹽；甲烷磺酸鹽、p－甲苯磺酸鹽等的磺酸鹽；乙酸鹽、檸檬酸鹽、蘋果酸鹽、酒石酸鹽、琥珀酸鹽、水楊酸鹽等的羧酸鹽；或鋰鹽、鈉鹽、鉀鹽等的鹼金屬鹽；鎂鹽、鈣鹽等的鹼土金屬鹽；銨鹽、烷基銨鹽、二烷基銨鹽、三烷基銨鹽、四烷基銨鹽等的銨鹽等。

本說明書中，溶劑合物是指化合物與溶劑形成1個分子集團者，如果溶劑是水則稱為水溶液。本揭示之化合物的鹽的溶劑合物較佳為水合物，如此的水合物具體例如1～10的水合物、較佳為1～5的水合物、更佳為1～3的水合物。本揭示之化合物的溶劑合物不只是與水、醇類（例如甲醇、乙醇、1－丙醇、2－丙醇等）、二甲基甲醯胺等的單獨溶劑的溶劑合物，也包括與複數種溶劑的溶劑合物。

［胺基酸的製造方法］ 一實施形態之胺基酸的製造方法，包括在多胜肽、還原劑、及以下述式（1）所示之化合物D的存在下，進行下列（i）或（ii）的反應之步驟（反應步驟），其中，該多胜肽含有與以序列識別號1所示之胺基酸序列具有90%以上的相似性的胺基酸序列。 （i）化合物A與化合物B的分子間還原胺化反應，該化合物A選自由具有胺基的化合物及其鹽所組成之群組，化合物B選自由具有羰基的化合物及其鹽所組成之群組。 （ii）化合物C的分子內還原胺化反應，該化合物C選自由具有胺基及羰基的化合物及其鹽所組成之群組。 此處，經由化合物A所具的胺基、與化合物B所具的羰基之分子間還原胺化反應，或經由化合物C中的胺基及羰基之分子內環原胺化反應，形成具有取代或未取代的胺基的胺基酸。

其他實施形態之胺基酸的製造方法，包括在多胜肽、還原劑、及化合物D’的存在下，進行下列（i）或（ii）的反應之步驟（反應步驟），其中，該多胜肽具有，在至少一個反應條件下，對化合物A與化合物B的分子間還原胺化反應、或化合物C的分子內還原胺化反應的觸媒活性，該化合物A選自由具有胺基的化合物及其鹽所組成之群組，該化合物B選自由具有羰基的化合物及其鹽所組成之群組，該化合物C選自由具有胺基及羰基的化合物及其鹽所組成之群組。 （i）化合物A與化合物B的分子間還原胺化反應，該化合物A選自由具有胺基的化合物及其鹽所組成之群組，化合物B選自由具有羰基的化合物及其鹽所組成之群組。 （ii）化合物C的分子內還原胺化反應，該化合物C選自由具有胺基及羰基的化合物及其鹽所組成之群組。 在該製造方法中，化合物D’為選自由下列所組成之群組的1個以上的化合物：二甲基亞碸、二甲基碸、三甲基氧化膦、二甲氧基乙烷、N,N－二甲基甲醯胺、N,N－二甲基乙醯胺、四亞甲基亞碸、二乙基亞碸、甲醇、及甲基甲醯胺。

＜化合物D及化合物D’＞ 進行環原胺化反應的反應步驟在以下述式（1）所示的化合物D的存在下進行。

式（1）中，v及w各自獨立表示0或1，v及w之中的任一個以上表示1，T表示碳原子、磷原子、或硫原子。

式（1）中，以下述式（1a）所示之官能基表示＝O、－ORd或羥基（－OH）。 此處，當以式（1a）所示之官能基為＝O時，表示T以雙鍵與氧原子鍵結。亦即，當以式（1a）所示之官能基為＝O時，化合物D具有T＝O所示之結構。當以式（1a）所示之官能基為－ORd時，表示T以單鍵與ORd鍵結。亦即，當以式（1a）所示之官能基為－ORd時，化合物D具有T－ORd所示之結構。當以式（1a）所示之官能基為羥基時，表示T直接與羥基鍵結。亦即，當以式（1a）所示之官能基為－OH時，化合物D具有T－OH所示之結構。

當v及w皆為1的情形時，複數個存在的以式（1a）所示之2個官能基可相同也可不同，Ra、Rb及Rc各自獨立表示氫原子、C ₁～C ₃烷基、烷胺基、或－CH ₂－ORd，Ra、Rb及Rc之中的任二個以上可與T互相連接共同形成環結構，Rd表示C ₁～C ₃烷基，d、e及f各自獨立表示0或1，d、e及f之中的任一個以上表示1。

當v及w皆為1的情形時，Ra、Rb及Rc的任一個以上為甲基，Ra、Rb及Rc不互相連接、不與T形成環結構。例如，當v及w皆為1的情形時，T為硫原子，以式（1a）所示之官能基皆為＝O，f為0，Ra及Rb至少一個可為甲基。

當Ra、Rb及Rc的任一個以上為甲胺基的情形時，Ra、Rb及Rc不互相連接、不與T形成環結構。當式（1a）為羥基、且T為碳原子的情形時，d、e及f皆為1，Ra、Rb及Rc皆為氫原子。

化合物D可為，式（1）的T為碳原子之以下述式（1－1）所示之化合物。

以式（1－1）所示之化合物可為，v為1、w為0之以下述式（1－1a）所示之化合物。

在式（1－1a）中，當以式（1a）所示官能基為＝O的情形時，d、e及f之中的二個為1，另一個為0。當以式（1a）所示官能基為＝O的情形時，以式（1－1a）所示化合物可為，d及e為1、且f為0之以下述式（1－1b）所示之化合物。

以式（1－1b）所示之化合物可為，Ra及Rb之一個為氫原子或C ₁～C ₃烷基、且另一個為烷胺基的化合物。又，烷胺基可為單甲基胺基或二甲基胺基。例如，當以式（1－1b）所示之化合物可為N,N－二甲基甲醯胺、N,N－二甲基乙醯胺、或N－甲基甲醯胺。

在式（1－1a）中，當以式（1a）所示官能基為羥基的情形時，d、e及f皆為1。當以式（1a）所示官能基為羥基的情形時，以式（1－1a）所示之化合物可為，d、e及f皆為1的以下述式（1－1c）所示之化合物。

Ra、Rb及Rc各自獨立可為氫原子、或C ₁～C ₃烷基。以式（1－1c）所示之化合物可為Ra、Rb及Rc皆為氫原子的甲醇。

在式（1－1a）中，當以式（1a）所示官能基為－ORd的情形時，可為d、e及f皆為1，Rb及Rc皆為氫原子。當以式（1a）所示官能基為－ORd的情形時，以式（1－1a）所示之化合物可為，d、e及f皆為1、Rb及Rc皆為氫原子的以下述式（1－1d）所示之化合物。在以下述式（1－1d）所示之化合物中，Ra可為－CH ₂－ORd。以下述式（1－1d）所示之化合物可為，Ra為－CH ₂－ORd、Rd皆為－CH ₃的二甲氧基乙烷。

化合物D可為，式（1）中的T為磷原子的以下述式（1－2）所示之化合物。

以式（1－2）所示之化合物可為，v為1、w為0、以式（1a）所示之官能基為＝O的以下述式（1－2a）所示之化合物。

在式（1－2a）中，Ra、Rb及Rc可皆為C ₁～C ₃烷基。以式（1－2a）所示之化合物可為，Ra、Rb及Rc皆為甲基的三甲基氧化膦。

化合物D可為，式（1）中的T為硫原子的以下述式（1－3）所示之化合物。

以式（1－3）所示之化合物可為，v為1、w為0、以式（1a）所示之官能基為＝O、d及e皆為1、f為0的以下述式（1－3a）所示之化合物。

在式（1－3a）中，Ra及Rb可皆為C ₁～C ₃烷基，Ra及Rb也可互相連接與硫原子（S）共同形成環結構。

以式（1－3a）所示之化合物可為，Ra及Rb各自獨立為甲基或乙基。以式（1－3a）所示之化合物可為，Ra及Rb皆為甲基的二甲基亞碸，或Ra及Rb皆為乙基的二乙基亞碸。以式（1－3a）所示之化合物也可為，Ra及Rb皆為C ₁～C ₃烷基、該烷基彼此互相連接與S共同形成環結構的四亞甲基亞碸。

以式（1－3a）所示之化合物可為，v及w皆為1、以式（1a）所示之官能基為＝O、d及e皆為1、f為0的以下述式（1－3b）所示之化合物。

以式（1－3b）所示之化合物為，Ra及Rb的任一個以上為甲基。以式（1－3b）所示之化合物可為，Ra及Rb皆為甲基的二甲基碸。

從可產率更良好地製造胺基酸的觀點，化合物D可為選自由二甲基亞碸、二甲基碸、三甲基氧化膦、二甲氧基乙烷、N,N－二甲基甲醯胺、N,N－二甲基乙醯胺、四亞甲基亞碸、二乙基亞碸、甲醇、及甲基甲醯胺所組成之群組的1個以上的化合物之化合物D’。 從可產率更良好地製造胺基酸的觀點，化合物D或化合物D’可為選自由二甲基亞碸、二甲基碸、及三甲基氧化膦所組成之群組的1個以上，可為二甲基亞碸。

化合物D或化合物D’在25℃且1大氣壓的條件下可為液體或固體，從更加提高胺基酸的製造效率的觀點，在25℃且1大氣壓的條件下可為液體。在25℃且1大氣壓的條件下為液體的化合物D或化合物D’，例如二甲基亞碸、二甲氧基乙烷、N,N－二甲基甲醯胺、N,N－二甲基乙醯胺、甲醇及N－甲基甲醯胺。

＜化合物A＞ 選自由具有胺基的化合物及其鹽所組成之群組的化合物A可為，選自由以下述式（2）所示之化合物及其鹽所組成之群組的1個以上。

式（2）中，R ¹及R ²各自獨立表示氫原子、烷基、烯基、炔基、環烷基、芳基、雜環基、或雜芳基，這些基團也可被取代，R ¹及R ²的任一個以上為氫原子。

式（2）中，R ¹可為氫原子，R ²可為氫原子或C ₁～C ₆烷基，可為氫原子或C ₁～C ₃烷基，可為氫原子、甲基或乙基。

化合物A可為，式（2）中，R ¹及R ²的一個為烷基、另一個為氫原子的烷基胺。烷基胺或其鹽可為選自由甲胺、乙胺及此等的鹽所組成之群組的1個以上。化合物A可為，式（2）中的R ¹及R ²兩者皆為氫原子的氨。化合物A可為選自由氨、甲胺、乙胺及此等的鹽所組成之群組的1個以上。

＜化合物B＞ 選自由具有羰基的化合物及其鹽所組成之群組的化合物B，可為選自由以下述式（3）所示之化合物及其鹽所組成之群組的1個以上。

式（3）中，X表示碳原子，Y表示氫原子、或以上述式（4）所示之基。

n表示0以上2以下的整數。n可為0或1，可為0。

R ⁶表示氫原子、也可被取代的C ₁～C ₆烷基、也可被取代的C ₅～C ₁₂芳基、也可被取代的構成環的原子數為5以上12以下的雜芳基、含氮原子的基、或含氧原子的基。

式（4）中， 表示與X的鍵結點。

m表示0以上6以下的整數。m的下限為0以上，可為1以上、2以上、3以上、4以上、或5以上。m的上限為6以下，可為5以下、4以下、3以下、2以下、或1以下。

p表示0或1，q表示0或1，r表示0或1。

Z ¹表示也可被取代的伸烷基、或碳數1以上6以下的含有醚鍵的基。當m為2以上的整數的情形時，複數個存在的Z ¹可相同也可不同。「含有醚鍵的基」例如以烷氧基、烯丙氧基等所取代的烷基。碳數1以上6以下的含有醚鍵的基的具體例，如甲氧基甲基、乙氧基甲基及烯丙氧基甲基、烯丙氧基乙基、烯丙氧基丙基。

Z ²表示碳原子。

R ³、R ⁴及R ⁵各自獨立表示氫原子、也可被取代的C ₁～C ₆烷基、也可被取代的C ₅～C ₁₂芳基、也可被取代的構成環的原子數為5以上12以下的雜芳基、含氮原子的基、或含氧原子的基。

R ³、R ⁴及R ⁵之中的任二個以上也可互相連接與Z ²共同形成環結構，這些環結構可為環烷基、芳基、雜環基、或雜芳基，這些基可被取代。

R ³、R ⁴及R ⁵也可與Z ²形成雙鍵或三鍵，當R ³、R ⁴及R ⁵的任一個經由雙鍵或三鍵與Z ²鍵結的情形時，p、q或r的任一個以上為0。

式（4）中，R ³、R ⁴及R ⁵之中的至少一個也可不為甲基。

化合物B可為以下述式（3’）所示之化合物。

式（3’）中，Y’表示C ₃～C ₈環烷基、或C ₇～C ₁₀芳烷基，該芳烷基也可被C ₁～C ₃烷基或鹵素所取代。

以式（3’）所示之化合物或其鹽可為選自由4－（2－氯苯基）－2－氧代丁酸、苯基丙酮酸、2－環戊基－2－氧代－乙酸、3－（4,4－二氟環己基）－2－氧代丙酸、2－氧代－3－苯基丁酸、3,3－二甲基－2－氧代丁酸及此等的鹽所組成之群組的1個以上。鹽具體例如鈉鹽、鎂鹽、鉀鹽及鈣鹽等。

化合物A與化合物B的組合可為，式（2）中，R ¹及R ²皆為氫原子的化合物A（氨），或式（2）中，R ¹為氫原子、R ²為甲基的化合物A（甲胺），與式（3）中，n及m皆為0、Y為以式（4）所示之基、R ³為（2－氯苯基）甲基、R ⁴、R ⁵及R ⁶皆為氫原子、p、q及r皆為1的化合物B（4－（2－氯苯基）－2－氧代丁酸），或式（3）中，n及m皆為0、Y為以式（4）所示之基、R ³為苯基、R ⁴、R ⁵及R ⁶皆為氫原子、p、q及r皆為1的化合物B（苯基丙酮酸）之組合；可為式（2）中，R ¹為氫原子、R ²為乙基的化合物A（乙胺），與式（3）中，n及m皆為0、Y為以式（4）所示之基、R ³為苯基，R ⁴、R ⁵及R ⁶皆為氫原子、p、q及r皆為1的化合物B（苯基丙酮酸）之組合；可為式（2）中，R ¹為氫原子、R ²為甲基的化合物A（甲胺），與式（3）中，n及m皆為0、Y為以式（4）所示之基、R ³、R ⁴及Z ²互相連接形成環戊烷環、R ⁵及R ⁶皆為氫原子、p、q及r皆為1的化合物B（2－環戊基－2－氧代－乙酸）之組合。

化合物A與化合物B的組合可為，式（2）中，R ¹為氫原子、R ²為甲基的化合物A（甲胺），與式（3）中，n及m皆為0、Y為以式（4）所示之基、R ³為4,4－二氟環己基、R ⁴、R ⁵及R ⁶皆為氫原子、p、q及r皆為1的化合物B（3－（4,4－二氟環己基）－2－氧代丙酸）之組合。 化合物A與化合物B的組合可為，式（2）中，R ¹及R ²皆為氫原子的化合物A（氨），與式（3）中，n及m皆為0、Y為以式（4）所示之基、R ³為甲基、R ⁴為苯基、R ⁵及R ⁶皆為氫原子、p、q及r皆為1的化合物B（2－氧代－3－苯基丁酸）之組合。 化合物A與化合物B的組合可為，式（2）中，R ¹為氫原子、R ²為甲基的化合物A（甲胺），與式（3）中，n及m皆為0、Y為以式（4）所示之基、R ³、R ⁴及R ⁵皆為甲基、R ⁶為氫原子、p、q及r皆為1的化合物B（3,3－二甲基－2－氧代丁酸）之組合。

＜化合物C＞ 選自由具有胺基及羰基的化合物及其鹽所組成之群組的化合物C，可為以下述式（5）所示之化合物。

n’表示0以上2以下的整數。n可為0或1，可為0。

R ⁷表示伸烷基、伸烯基、伸炔基、環伸烷基、伸芳基、雜亞環基、或雜伸芳基，此等基可被取代。

R ⁸表示氫原子、也可被取代的C ₁～C ₆烷基、也可被取代的C ₁～C ₆芳基、也可被取代的構成環的原子數為5以上12以下的雜芳基、含氮原子的基、或含氧原子的基。

＜多胜肽＞ 多胜肽含有與以序列識別號1所示之胺基酸序列具有90%以上的相似性的胺基酸序列。與以序列識別號1所示之胺基酸序列的相似性可為90%以上、91%以上、92%以上、93%以上、94%以上、95%以上、96%以上、97%以上、98%以上、99%以上或100%。

與以序列識別號1所示之胺基酸序列的相似性可根據Karlin and Altschul的演算法BLAST（Proc.Natl.Acad.Sci.USA（1993）90：5873－7）而確定。基於此演算法，開發稱為BLASTN或BLASTX的演算法（Altschul et al.,J.Mol.Biol.（1990）215：403－10）。在基於BLAST而經由BLASTX分析胺基酸序列的情形時，參數例如為score＝50、Wordlength＝3。在使用BLAST與Gapped BLAST程式的情形時，使用各程式的預設參數。此等的分析方法的具體手法可參考公知的NCBI（Natianal Center for Biotechnology Information）的BLAST（Basic Local Alignment Search Tool）的網站資訊。

本實施形態之多胜肽可為以序列識別號1所示之胺基酸序列中的1個以上的胺基酸殘基變異的多胜肽，可以有1～20個、1～15個、1～10個、1～7個或1～5個的胺基酸殘基的變異。變異的胺基酸殘基可為3個以內，可為2個以內，可為1個。

變異可為選自由取代、缺失及插入所組成之群組的1個以上，可為取代。變異可為保留性變異。保留性變異表示，與變異前的多胜肽相比，如降低目的觸媒活性般的胺基酸殘基的變異。

又，該變異可為，取代為與變異前的胺基酸殘基不同的天然胺基酸的取代。而且，用於該取代的天然胺基酸可為選自由甘胺酸、丙胺酸、絲胺酸、蘇胺酸、纈胺酸、白胺酸、異白胺酸、苯丙胺酸、酪胺酸、色胺酸、組胺酸、麩醯胺酸、天冬醯胺酸、麩胺酸、天冬胺酸、半胱胺酸、甲硫胺酸、賴胺酸、精胺酸、及脯胺酸所組成之群組的1個以上。

本實施形態之多胜肽，可為含有在選自由下列所組成之群組的1個以上的胺基酸殘基的對應位點的胺基酸殘基變異的序列之多胜肽：在以序列識別號1所示之胺基酸序列中，第44位的組胺酸殘基、第117位的苯丙胺酸殘基、第141位的甲硫胺酸殘基、第156位的蘇胺酸殘基、第182位的組胺酸殘基、第186位的麩醯胺酸殘基、第253位的色胺酸殘基、及第260位的賴胺酸；從更進一步提高對還原胺化反應的觸媒活性的觀點，可為含有在選自由下列所組成之群組的1個以上的胺基酸殘基的對應位點的胺基酸殘基變異的序列之多胜肽：第141位的甲硫胺酸殘基、第182位的組胺酸殘基、第253位的色胺酸殘基、及第260位的賴胺酸殘基；再者，可為含有選自由下列所組成之群組的1個以上的胺基酸殘基的對應位點的胺基酸殘基變異的序列之多胜肽：第141位的甲硫胺酸殘基、第253位的色胺酸殘基、及第260位的賴胺酸殘基。

本實施形態之多胜肽，可為含有在以序列識別號1所示之胺基酸序列中第44位的組胺酸殘基的對應位點的胺基酸殘基，取代為組胺酸殘基以外的胺基酸殘基的序列的多胜肽。該多胜肽可為含有以序列識別號2所示之胺基酸序列的多胜肽。序列識別號2中，以X所示之胺基酸殘基為，丙胺酸殘基、天冬胺酸殘基、麩胺酸殘基、苯丙胺酸殘基、甘胺酸殘基、異白胺酸殘基、賴胺酸殘基、白胺酸殘基、甲硫胺酸殘基、天冬醯胺酸殘基、脯胺酸殘基、麩醯胺酸殘基、精胺殘基、絲胺酸殘基、蘇胺酸殘基、纈胺酸殘基、色胺酸殘基或酪胺酸殘基。

從更進一步提高對還原胺化反應的觸媒活性的觀點，可含有在第44位的組胺酸殘基的對應位點的胺基酸殘基，取代為甲硫胺酸殘基的序列。亦即，本實施形態之多胜肽，可含有在以序列識別號1所示之胺基酸序列的第44位的組胺酸殘基的對應位點的胺基酸殘基，取代為甲硫胺酸殘基的胺基酸序列（H44M）。

本實施形態之多胜肽，可為含有在以序列識別號1所示之胺基酸序列的第117位的苯丙胺酸殘基的對應位點的胺基酸殘基，取代為苯丙胺酸殘基以外的胺基酸殘基的序列的多胜肽。該多胜肽可為含有以序列識別號3所示之胺基酸序列的多胜肽。序列識別號3中，以X所示之胺基酸殘基為，丙胺酸殘基、天冬胺酸殘基、麩胺酸殘基、甘胺酸殘基、組胺酸殘基、異白胺酸殘基、賴胺酸殘基、白胺酸殘基、甲硫胺酸殘基、天冬醯胺酸殘基、脯胺酸殘基、麩醯胺酸殘基、精胺殘基、絲胺酸殘基、蘇胺酸殘基、纈胺酸殘基、色胺酸殘基或酪胺酸殘基。

從更進一步提高對還原胺化反應的觸媒活性的觀點，可含有在第117位的苯丙胺酸殘基的對應位點的胺基酸殘基，取代為白胺酸殘基的序列。亦即，本實施形態之多胜肽，可含有在以序列識別號1所示之胺基酸序列的第117位的苯丙胺酸殘基的對應位點的胺基酸殘基，取代為白胺酸殘基的胺基酸序列（F117L）。

本實施形態之多胜肽，可為含有在以序列識別號1所示之胺基酸序列的第141位的甲硫胺酸殘基的對應位點的胺基酸殘基，取代為甲硫胺酸殘基以外的胺基酸殘基的序列的多胜肽。該多胜肽可為含有以序列識別號4所示之胺基酸序列的多胜肽。序列識別號4中，以X所示之胺基酸殘基為，丙胺酸殘基、天冬胺酸殘基、麩胺酸殘基、苯丙胺酸、甘胺酸殘基、組胺酸殘基、異白胺酸殘基、賴胺酸殘基、白胺酸殘基、天冬醯胺酸殘基、脯胺酸殘基、麩醯胺酸殘基、精胺酸殘基、絲胺酸殘基、蘇胺酸殘基、纈胺酸殘基、色胺酸殘基或酪胺酸殘基。

從更進一步提高對還原胺化反應的觸媒活性的觀點，可含有在第141位的甲硫胺酸殘基的對應位點的胺基酸殘基，取代為選自由下列所組成之群組的1個以上的胺基酸殘基的序列：酪胺酸殘基、色胺酸殘基、纈胺酸殘基、蘇胺酸殘基、絲胺酸殘基、精胺酸殘基、白胺酸殘基、賴胺酸殘基、異白胺酸殘基、組胺酸殘基、苯丙胺酸殘基及丙胺酸殘基。亦即，本實施形態之多胜肽，可含有在以序列識別號1所示之胺基酸序列的第141位的甲硫胺酸殘基的對應位點的胺基酸殘基，取代為酪胺酸殘基、色胺酸殘基、纈胺酸殘基、蘇胺酸殘基、絲胺酸殘基、精胺酸殘基、白胺酸殘基、賴胺酸殘基、異白胺酸殘基、組胺酸殘基、苯丙胺酸殘基、或丙胺酸殘基的胺基酸序列（M141Y、M141W、M141V、M141T、M141S、M141R、M141L、M141K、M141I、M141H、M141F或M141A）。而且，可含有在第141位的甲硫胺酸殘基的對應位點的胺基酸殘基，取代為選自由酪胺酸殘基、色胺酸殘基、纈胺酸殘基、賴胺酸殘基、異白胺酸殘基、苯丙胺酸殘基及丙胺酸殘基所組成之群組的1個以上的胺基酸殘基的序列。亦即，本實施形態之多胜肽，可含有在以序列識別號1所示之胺基酸序列的第141位的甲硫胺酸殘基的對應位點的胺基酸殘基，取代為酪胺酸殘基、色胺酸殘基、纈胺酸殘基、賴胺酸殘基、異白胺酸殘基、組胺酸殘基、苯丙胺酸殘基、或丙胺酸殘基的胺基酸序列（M141Y、M141W、M141V、M141K、M141I、M141H、M141F、或M141A）。

本實施形態之多胜肽，可為含有在以序列識別號1所示之胺基酸序列的第156位的蘇胺酸殘基的對應位點的胺基酸殘基，取代為蘇胺酸殘基以外的胺基酸殘基的序列的多胜肽。該多胜肽可為含有以序列識別號5所示之胺基酸序列的多胜肽。序列識別號5中，以X所示之胺基酸殘基為，丙胺酸殘基、天冬胺酸殘基、麩胺酸殘基、苯丙胺酸、甘胺酸殘基、組胺酸殘基、異白胺酸殘基、賴胺酸殘基、白胺酸殘基、天冬醯胺酸殘基、脯胺酸殘基、麩醯胺酸殘基、精胺酸殘基、絲胺酸殘基、蘇胺酸殘基、纈胺酸殘基、色胺酸殘基或酪胺酸殘基。

從更進一步提高對還原胺化反應的觸媒活性的觀點，可含有在第156位的蘇胺酸殘基的對應位點的胺基酸殘基，取代為絲胺酸殘基的序列。亦即，本實施形態之多胜肽，可含有在以序列識別號1所示之胺基酸序列的第156位的蘇胺酸殘基的對應位點的胺基酸殘基，取代為絲胺酸殘基的胺基酸序列（T156S）。

本實施形態之多胜肽，可為含有在以序列識別號1所示之胺基酸序列的第182位的組胺酸殘基的對應位點的胺基酸殘基，取代為組胺酸殘基以外的胺基酸殘基的序列的多胜肽。該多胜肽可為含有以序列識別號6所示之胺基酸序列的多胜肽。序列識別號6中，以X所示之胺基酸殘基為，丙胺酸殘基、天冬胺酸殘基、麩胺酸殘基、苯丙胺酸、甘胺酸殘基、異白胺酸殘基、賴胺酸殘基、白胺酸殘基、甲硫胺酸殘基、天冬醯胺酸殘基、脯胺酸殘基、麩醯胺酸殘基、精胺酸殘基、絲胺酸殘基、蘇胺酸殘基、纈胺酸殘基、色胺酸殘基或酪胺酸殘基。

從更進一步提高對還原胺化反應的觸媒活性的觀點，可含有在第182位的組胺酸殘基的對應位點的胺基酸殘基，取代為選自由下列所組成之群組的1個以上的胺基酸殘基的序列：酪胺酸殘基、麩醯胺酸殘基、甲硫胺酸、白胺酸殘基、甘胺酸殘基、苯丙胺酸殘基及丙胺酸殘基。亦即，本實施形態之多胜肽，可含有在以序列識別號1所示之胺基酸序列的第182位的組胺酸殘基的對應位點的胺基酸殘基，取代為酪胺酸殘基、麩醯胺酸殘基、甲硫胺酸、白胺酸殘基、甘胺酸殘基、苯丙胺酸殘基、或丙胺酸殘基的胺基酸序列（H182Y、H182Q、H182M、H182L、H182G、H182F、或H182A）。而且，可含有在第182位的組胺酸殘基的對應位點的胺基酸殘基，取代為選自由甲硫胺酸殘基、白胺酸殘基及苯丙胺酸殘基所組成之群組的1個以上的胺基酸殘基的序列。亦即，本實施形態之多胜肽，可含有在以序列識別號1所示之胺基酸序列的第182位的組胺酸殘基的對應位點的胺基酸殘基，取代為甲硫胺酸殘基、白胺酸殘基、或苯丙胺酸殘基的胺基酸序列（H182M、H182L、或H182F）。

本實施形態之多胜肽，可為含有在以序列識別號1所示之胺基酸序列的第186位的麩醯胺酸殘基的對應位點的胺基酸殘基，取代為麩醯胺酸殘基以外的胺基酸殘基的序列的多胜肽。該多胜肽可為含有以序列識別號7所示之胺基酸序列的多胜肽。序列識別號7中，以X所示之胺基酸殘基為，丙胺酸殘基、天冬胺酸殘基、麩胺酸殘基、苯丙胺酸、甘胺酸殘基、組胺酸殘基、異白胺酸殘基、賴胺酸殘基、白胺酸殘基、甲硫胺酸殘基、天冬醯胺酸殘基、脯胺酸殘基、精胺酸殘基、絲胺酸殘基、蘇胺酸殘基、纈胺酸殘基、色胺酸殘基或酪胺酸殘基。

從更進一步提高對還原胺化反應的觸媒活性的觀點，可含有在以序列識別號1所示之胺基酸序列的第186位的麩醯胺酸殘基的對應位點的胺基酸殘基，取代為選自由甲硫胺酸殘基及麩胺酸殘基所組成之群組的1個以上的胺基酸殘基的序列。亦即，本實施形態之多胜肽，可含有在以序列識別號1所示之胺基酸序列的第186位的麩醯胺酸殘基的對應位點的胺基酸殘基，取代為甲硫胺酸殘基或麩胺酸殘基的胺基酸序列（Q186M、或Q186E）。

本實施形態之多胜肽，可為含有在以序列識別號1所示之胺基酸序列的第253位的色胺酸殘基的對應位點的胺基酸殘基，取代為色胺酸殘基以外的胺基酸殘基的序列的多胜肽。該多胜肽可為含有以序列識別號8所示之胺基酸序列的多胜肽。序列識別號8中，以X所示之胺基酸殘基為，丙胺酸殘基、天冬胺酸殘基、麩胺酸殘基、苯丙胺酸、甘胺酸殘基、組胺酸殘基、異白胺酸殘基、賴胺酸殘基、白胺酸殘基、甲硫胺酸殘基、天冬醯胺酸殘基、脯胺酸殘基、麩醯胺酸殘基、精胺酸殘基、絲胺酸殘基、蘇胺酸殘基、纈胺酸殘基、或酪胺酸殘基。

從更進一步提高對還原胺化反應的觸媒活性的觀點，可含有在第253位的色胺酸殘基的對應位點的胺基酸殘基，取代為選自由下列所組成之群組的1個以上的胺基酸殘基的序列：酪胺酸殘基、纈胺酸殘基、蘇胺酸殘基、絲胺酸殘基、精胺酸殘基、麩醯胺酸殘基、脯胺酸殘基、天冬醯胺酸殘基、甲硫胺酸、白胺酸殘基、賴胺酸殘基、異白胺酸殘基、組胺酸殘基、苯丙胺酸殘基及丙胺酸殘基。亦即，本實施形態之多胜肽，可含有在以序列識別號1所示之胺基酸序列的第253位的色胺酸殘基的對應位點的胺基酸殘基，取代為酪胺酸殘基、纈胺酸殘基、蘇胺酸殘基、絲胺酸殘基、精胺酸殘基、麩醯胺酸殘基、脯胺酸殘基、天冬醯胺酸殘基、甲硫胺酸、白胺酸殘基、賴胺酸殘基、異白胺酸殘基、組胺酸殘基、苯丙胺酸殘基、或丙胺酸殘基的胺基酸序列（W253Y、W253V、W253T、W253S、W253R、W253Q、W253P、W253N、W253M、W253L、W253K、W253I、W253H、W253F、或W253A）。而且，可含有在第253位的色胺酸殘基的對應位點的胺基酸殘基，取代為選自由白胺酸殘基、異白胺酸殘基及組胺酸殘基所組成之群組的1個以上的胺基酸殘基的序列。亦即，本實施形態之多胜肽，可含有在以序列識別號1所示之胺基酸序列的第253位的色胺酸殘基的對應位點的胺基酸殘基，取代為白胺酸殘基、異白胺酸殘基、或組胺酸殘基的胺基酸序列（W253L、W253I、或W253H）。

本實施形態之多胜肽，可為含有在以序列識別號1所示之胺基酸序列的第260位的賴胺酸殘基的對應位點的胺基酸殘基，取代為賴胺酸殘基以外的胺基酸殘基的序列的多胜肽。該多胜肽可為含有以序列識別號9所示之胺基酸序列的多胜肽。序列識別號9中，以X所示之胺基酸殘基為，丙胺酸殘基、天冬胺酸殘基、麩胺酸殘基、苯丙胺酸、甘胺酸殘基、組胺酸殘基、異白胺酸殘基、白胺酸殘基、甲硫胺酸殘基、天冬醯胺酸殘基、脯胺酸殘基、麩醯胺酸殘基、精胺酸殘基、絲胺酸殘基、蘇胺酸殘基、纈胺酸殘基、色胺酸殘基或酪胺酸殘基。

從更進一步提高對還原胺化反應的觸媒活性的觀點，可含有在第260位的賴胺酸殘基的對應位點的胺基酸殘基，取代為選自由下列所組成之群組的1個以上的胺基酸殘基的序列：酪胺酸殘基、色胺酸殘基、蘇胺酸殘基、絲胺酸殘基、精胺酸殘基、麩醯胺酸殘基、天冬醯胺酸殘基、甲硫胺酸、白胺酸殘基、組胺酸殘基、甘胺酸殘基、苯丙胺酸殘基、麩胺酸殘基及丙胺酸殘基。亦即，本實施形態之多胜肽，可含有在以序列識別號1所示之胺基酸序列的第260位的賴胺酸殘基的對應位點的胺基酸殘基，取代為酪胺酸殘基、色胺酸殘基、蘇胺酸殘基、絲胺酸殘基、精胺酸殘基、麩醯胺酸殘基、天冬醯胺酸殘基、甲硫胺酸、白胺酸殘基、組胺酸殘基、甘胺酸殘基、苯丙胺酸殘基、麩胺酸殘基、或丙胺酸殘基的胺基酸序列（K260Y、K260W、K260T、K260S、K260R、K260Q、K260N、K260M、K260L、K260H、K260G、K260F、K260E、或K260A）。而且，可含有在第260位的賴胺酸殘基的對應位點的胺基酸殘基，取代為選自由麩醯胺酸殘基、甲硫胺酸殘基、麩胺酸殘基、及天冬醯胺酸殘基所組成之群組的1個以上的胺基酸殘基的序列。亦即，本實施形態之多胜肽，可含有在以序列識別號1所示之胺基酸序列的第260位的賴胺酸殘基的對應位點的胺基酸殘基，取代為麩醯胺酸殘基、甲硫胺酸殘基、麩胺酸殘基、或天冬醯胺酸殘基的胺基酸序列（K260Q、K260M、K260E、或K260N）。

本實施形態之多胜肽，可含有以序列識別號4所示、X所示胺基酸殘基為纈胺酸殘基的胺基酸序列a1（變異：M141V）；以序列識別號4所示、以X所示胺基酸殘基為酪胺酸殘基的胺基酸序列a2（變異：M141Y）；以序列識別號6所示、以X所示胺基酸殘基為白胺酸殘基的胺基酸序列a3（變異：H182L）；以序列識別號8所示、以X所示胺基酸殘基為組胺酸殘基的胺基酸序列a4（變異：W253H）；或以序列識別號9所示、以X所示胺基酸殘基為麩胺酸殘基的胺基酸序列a5（變異：K260E）。

本實施形態之多胜肽可含有與胺基酸序列a1、a2、a3、a4、或a5具有90%以上的序列相似性的序列。該序列相似性可為91%以上、92%以上、93%以上、94%以上、95%以上、96%以上、97%以上、98%以上、或99%以上，可為100%。

本實施形態之多胜肽可為含有胺基酸序列a1、a2、a3、a4、或a5中的1個以上的胺基酸殘基變異的序列之多胜肽，可有1～20個、1～15個、1～10個、1～7個或1～5個的胺基酸殘基變異。變異的胺基酸殘基可為3個以內，可為2個以內，可為1個。

本實施形態之多胜肽可為以序列識別號1所示之胺基酸序列中的變異位點為2處以上，可為2處。以下對於變異位點為2處以上的該多胜肽的合適態樣進行說明。

該多胜肽可含有，在以序列識別號1所示之胺基酸序列中的選自由第141位的甲硫胺酸殘基、第182位的組胺酸殘基、及第253位的色胺酸殘基所組成之群組的1個胺基酸殘基的對應位點的胺基酸殘基，作為第一變異位點而變異，在以序列識別號1所示之胺基酸序列中的選自由第182位的組胺酸殘基、第253位的色胺酸殘基、及第260位的賴胺酸殘基所組成之群組，且與作為第一變異位點所變異的胺基酸殘基不同的1個胺基酸殘基的對應位點的胺基酸殘基，作為第二變異位點而變異的序列。

該多胜肽可含有： 在以序列識別號1所示之胺基酸序列中， 第141位的甲硫胺酸殘基及第182位的組胺酸殘基的對應位點的胺基酸殘基變異的序列； 第141位的甲硫胺酸殘基及第253位的色胺酸殘基的對應位點的胺基酸殘基變異的序列； 第141位的甲硫胺酸殘基及第260位的賴胺酸殘基的對應位點的胺基酸殘基變異的序列； 第182位的組胺酸殘基及第253位的色胺酸殘基的對應位點的胺基酸殘基變異的序列； 第182位的組胺酸殘基及第260位的賴胺酸殘基的對應位點的胺基酸殘基變異的序列；或 第253位的色胺酸殘基及第260位的賴胺酸殘基的對應位點的胺基酸殘基變異的序列， 較佳含有： 在以序列識別號1所示之胺基酸序列中， 第141位的甲硫胺酸殘基及第260位的賴胺酸殘基的對應位點的胺基酸殘基變異的序列； 第182位的組胺酸殘基及第260位的賴胺酸殘基的對應位點的胺基酸殘基變異的序列；或 第253位的色胺酸殘基及第260位的賴胺酸殘基的對應位點的胺基酸殘基變異的序列。

該多胜肽可含有，在以序列識別號1所示之胺基酸序列中，第141位的甲硫胺酸殘基的對應位點的胺基酸殘基，取代為選自下列所組成之群組的1個胺基酸的序列：酪胺酸殘基、色胺酸殘基、纈胺酸殘基、蘇胺酸殘基、精胺酸殘基、賴胺酸殘基、異白胺酸殘基、及丙胺酸殘基，較佳含有取代為選自下列所組成之群組的1個胺基酸的序列：酪胺酸殘基、纈胺酸殘基及丙胺酸殘基。

該多胜肽可含有，在以序列識別號1所示之胺基酸序列中，第182位的組胺酸殘基的對應位點的胺基酸殘基，取代為選自下列所組成之群組的1個胺基酸的序列：酪胺酸殘基、甲硫胺酸殘基、白胺酸殘基、及苯丙胺酸殘基，較佳含有取代為選自下列所組成之群組的1個胺基酸的序列：甲硫胺酸殘基及白胺酸殘基。

該多胜肽可含有，在以序列識別號1所示之胺基酸序列中，第253位的色胺酸殘基的對應位點的胺基酸殘基，取代為選自下列所組成之群組的1個胺基酸的序列：酪胺酸殘基、蘇胺酸殘基、絲胺酸殘基、天冬醯胺酸殘基、甲硫胺酸殘基、組胺酸殘基及丙胺酸殘基，較佳含有取代為組胺酸殘基的序列。

該多胜肽可含有，在以序列識別號1所示之胺基酸序列中，第260位的賴胺酸殘基的對應位點的胺基酸殘基，取代為選自下列所組成之群組的1個胺基酸的序列：絲胺酸殘基、麩醯胺酸殘基、天冬醯胺酸殘基、白胺酸殘基、異白胺酸殘基、組胺酸殘基、甘胺酸殘基、苯丙胺酸殘基、麩胺酸殘基及丙胺酸殘基，較佳含有取代為選自下列所組成之群組的1個胺基酸的序列：麩醯胺酸殘基及麩胺酸殘基。

以下，在以序列識別號1所示之胺基酸序列中，第m ¹位的胺基酸殘基X ¹的對應位點的胺基酸殘基，取代為X ¹以外的胺基酸殘基x ¹，且第m ²位的胺基酸殘基X ²的對應位點的胺基酸殘基，取代為X ²以外的胺基酸殘基x ²的序列，記載為X ¹m ¹x ¹_X ²m ²x ²。

例如，在以序列識別號1所示之胺基酸序列中的2個胺基酸殘基變異的序列，可為選自由如下顯示的胺基酸序列所構成的群a1～群a4所組成之群組的胺基酸序列，可為選自由群a1～群a3所組成之群組的胺基酸序列，較佳為選自由群a1～群a2所組成之群組的胺基酸序列，最佳為選自群a1的胺基酸序列。 群a1： M141Y_K260E、H182L_K260Q、M141A_K260E、H182M_K260Q、M141A_K260Q、H182M_K260E、M141V_K260E、W253H_K260E、及H182L_K260E 群a2： M141V_K260Q、W253H_K260Q、W253M_K260E、M141Y_H182M、M141Y_K260Q、H182F_K260Q、M141V_K260F、M141V_H182L、M141V_K260L、M141Y_K260G、H182L_W253H、H182F_K260E、及M141T_K260Q 群a3： M141Y_H182L、W253M_K260Q、M141V_W253M、M141V_K260S、M141V_K260A、M141A_K260F、M141A_K260H、W253A_K260E、M141V_W253A、M141V_W253H、M141K_K260L、M141V_K260G、及M141A_K260L。 群a4： M141W_K260A、M141V_W253Y、M141K_K260G、M141A_K260G、M141A_K260S、M141A_K260N、M141Y_W253H、M141A_K260A、M141K_K260S、W253A_K260Q、M141V_H182M、M141A_K260I、M141T_K260G、W253M_K260L、M141I_W253A、W253T_K260L、M141R_K260G、W253A_K260L、M141K_W253S、M141A_H182L、W253N_K260L、M141K_K260A、M141K_W253M、H182Y_W253A、H182M_W253H、M141R_K260A、H182M_W253A及M141K_W253A。

該多胜肽例如可含有與選自由群a1～群a4所組成之群組的胺基酸序列具有90%以上的序列相似性的序列，可含有與選自由群a1～群a3所組成之群組的胺基酸序列具有90%以上的序列相似性的序列，較佳含有與選自由群a1及群a2所組成之群組的胺基酸序列具有90%以上的序列相似性的序列，最佳含有與選自群a1的胺基酸序列具有90%以上的序列相似性的序列。

該多胜肽可含有選自由群a1～群a4所組成之群組的胺基酸序列，可含有選自由群a1～群a3所組成之群組的胺基酸序列，較佳含有選自由群a1及群a2所組成之群組的胺基酸序列，最佳含有選自群a1的胺基酸序列。

本實施形態之多胜肽，例如可為以序列識別號1所示之胺基酸序列中的變異位點為3處以上，可為3處。以下對於變異位點為3處以上的該多胜肽的合適態樣進行說明。

該多胜肽可含有下列之序列： 在以序列識別號1所示之胺基酸序列中，選自由第141位的甲硫胺酸殘基及第182位的組胺酸殘基所組成之群組的1個胺基酸殘基的對應位點的胺基酸殘基作為第一變異位點而變異； 在以序列識別號1所示之胺基酸序列中，選自由第182位的組胺酸殘基及第253位的色胺酸殘基所組成之群組、且與第一變異位點變異的胺基酸殘基不同的1個胺基酸殘基的對應位點的胺基酸殘基作為第二變異位點而變異； 在以序列識別號1所示之胺基酸序列中，選自由第253位的色胺酸殘基及第260位的賴胺酸殘基所組成之群組、且與第一變異位點及第二變異位點變異的胺基酸殘基不同的1個胺基酸殘基的對應位點的胺基酸殘基作為第三變異位點而變異的序列。

該多胜肽可含有下列之序列： 在以序列識別號1所示之胺基酸序列中， 第141位的甲硫胺酸殘基、第182位的組胺酸殘基、及第253位的色胺酸殘基的對應位點的胺基酸殘基變異的序列， 第141位的甲硫胺酸殘基、第182位的組胺酸殘基、及第260位的賴胺酸殘基的對應位點的胺基酸殘基變異的序列， 第141位的甲硫胺酸殘基、第253位的色胺酸殘基、及第260位的賴胺酸殘基的對應位點的胺基酸殘基變異的序列， 第182位的組胺酸殘基、第253位的色胺酸殘基、及第260位的賴胺酸殘基的對應位點的胺基酸殘基變異的序列， 較佳含有下列之序列： 在以序列識別號1所示之胺基酸序列中， 第141位的甲硫胺酸殘基、第182位的組胺酸殘基、及第260位的賴胺酸殘基的對應位點的胺基酸殘基變異的序列， 第141位的甲硫胺酸殘基、第253位的色胺酸殘基、及第260位的賴胺酸殘基的對應位點的胺基酸殘基變異的序列， 第182位的組胺酸殘基、第253位的色胺酸殘基、及第260位的賴胺酸殘基的對應位點的胺基酸殘基變異的序列。

該多胜肽可含有以序列識別號1所示之胺基酸序列中的變異位點為3處，且在以序列識別號1所示之胺基酸序列中的第141位的甲硫胺酸殘基的對應位點的胺基酸殘基取代為選自由下列所組成之群組的1個胺基酸殘基的序列：酪胺酸殘基、纈胺酸殘基、蘇胺酸殘基、絲胺酸殘基、白胺酸殘基、賴胺酸殘基、異白胺酸殘基、及丙胺酸殘基，較佳含有以序列識別號1所示之胺基酸序列中的變異位點為3處，且在以序列識別號1所示之胺基酸序列中的第141位的甲硫胺酸殘基的對應位點的胺基酸殘基取代為選自由下列所組成之群組的1個胺基酸殘基的序列：酪胺酸殘基、纈胺酸殘基、及異白胺酸殘基。

該多胜肽可含有以序列識別號1所示之胺基酸序列中的變異位點為3處，且在以序列識別號1所示之胺基酸序列中的第182位的組胺酸殘基的對應位點的胺基酸殘基取代為選自由甲硫胺酸殘基、白胺酸殘基、及苯丙胺酸殘基所組成之群組的1個胺基酸殘基的序列，較佳含有以序列識別號1所示之胺基酸序列中的變異位點為3處，且在以序列識別號1所示之胺基酸序列中的第182位的組胺酸殘基的對應位點的胺基酸殘基取代為選自由甲硫胺酸殘基、及白胺酸殘基所組成之群組的1個胺基酸殘基的序列。

該多胜肽可含有以序列識別號1所示之胺基酸序列中的變異位點為3處，且在以序列識別號1所示之胺基酸序列中的第253位的色胺酸殘基的對應位點的胺基酸殘基取代為選自由下列所組成之群組的1個胺基酸殘基的序列：纈胺酸殘基、蘇胺酸殘基、絲胺酸殘基、麩醯胺酸殘基、甲硫胺酸殘基、白胺酸殘基、組胺酸殘基、苯丙胺酸殘基、及麩胺酸殘基，較佳含有以序列識別號1所示之胺基酸序列中的變異位點為3處，且在以序列識別號1所示之胺基酸序列中的第253位的色胺酸殘基的對應位點的胺基酸殘基取代為選自由下列所組成之群組的1個胺基酸殘基的序列：麩醯胺酸殘基、甲硫胺酸殘基、白胺酸殘基、及組胺酸殘基。

該多胜肽可含有以序列識別號1所示之胺基酸序列中的變異位點為3處，且在以序列識別號1所示之胺基酸序列中的第260位的賴胺酸殘基的對應位點的胺基酸殘基取代為選自由麩醯胺酸殘基、及麩胺酸殘基所組成之群組的1個胺基酸殘基的序列。

以下，在以序列識別號1所示之胺基酸序列中，第m ¹位的胺基酸殘基X ¹的對應位點的胺基酸殘基，取代為X ¹以外的胺基酸殘基x ¹，第m ²位的胺基酸殘基X ²的對應位點的胺基酸殘基，取代為X ²以外的胺基酸殘基x ²的序列，且第m ³位的胺基酸殘基X ³的對應位點的胺基酸殘基，取代為X ³以外的胺基酸殘基x ³的序列，記載為X ¹m ¹x ¹_X ²m ²x ²_X ³m ³x ³。

例如，在以序列識別號1所示之胺基酸序列中的3個胺基酸殘基變異的序列，可為選自由如下顯示的胺基酸序列所構成的群b1～群b4所組成之群組的胺基酸序列，可為選自由群b1～群b3所組成之群組的胺基酸序列，較佳為選自由群b1～群b2所組成之群組的胺基酸序列，最佳為選自群b1的胺基酸序列。 群b1： M141Y_H182M_K260E、M141V_W253M_K260E、H182L_W253H_K260E、M141Y_H182M_K260Q、M141V_H182M_K260E、M141V_H182L_K260Q、M141Y_H182L_K260Q、M141V_W253Q_K260E、H182L_W253Q_K260E、M141I_W253H_K260E、M141V_H182L_K260E、M141Y_H182L_K260E、H182L_W253M_K260E、M141V_W253Q_K260Q、M141V_W253H_K260Q、M141V_W253L_K260Q、M141I_W253H_K260Q、及M141V_W253M_K260Q。 群b2： H182M_W253H_K260E、M141V_W253V_K260Q、H182L_W253H_K260Q、M141V_W253H_K260E、H182L_W253Q_K260Q、M141L_W253H_K260E、H182M_W253Q_K260E、M141V_W253F_K260Q、M141V_W253L_K260E、M141V_W253T_K260Q、M141Y_H182F_K260E、H182M_W253M_K260E、H182L_W253M_K260Q、M141Y_W253H_K260E、M141Y_W253Q_K260E、M141V_H182M_K260Q、H182M_W253L_K260E、H182F_W253H_K260E、M141A_H182F_K260Q、M141Y_W253M_K260E、H182M_W253Q_K260Q、及H182M_W253M_K260Q。 群b3： H182L_W253T_K260Q、M141Y_W253S_K260E、M141V_H182F_K260E、M141A_H182M_K260E、M141T_H182L_K260Q、M141Y_W253T_K260E、H182M_W253L_K260Q、M141V_H182F_K260Q、M141S_W253H_K260E、M141T_W253H_K260E、H182M_W253H_K260Q、M141A_H182L_K260Q、H182M_W253F_K260Q、M141A_H182M_K260Q、M141A_W253Q_K260E、M141A_H182L_K260E、M141A_W253H_K260E、M141V_W253E_K260Q、M141A_W253M_K260E、M141A_W253H_K260Q、M141K_H182L_W253H、及M141T_H182M_K260Q。 群b4： M141A_W253M_K260Q、及M141A_H182F_K260E。

該多胜肽例如可含有與選自由群b1～群b4所組成之群組的胺基酸序列具有90%以上的序列相似性的序列，可含有與選自由群b1～群b3所組成之群組的胺基酸序列具有90%以上的序列相似性的序列，較佳含有與選自由群b1及群b2所組成之群組的胺基酸序列具有90%以上的序列相似性的序列，最佳含有與選自群b1的胺基酸序列具有90%以上的序列相似性的序列。

該多胜肽可含有選自由群b1～群b4所組成之群組的胺基酸序列，可含有選自由群b1～群b3所組成之群組的胺基酸序列，較佳含有選自由群b1及群b2所組成之群組的胺基酸序列，最佳含有選自群b1的胺基酸序列。

本實施形態之多胜肽也可與其他多胜肽或蛋白質融合。亦即，本實施形態之多胜肽，可在N端及C端的任一端或兩端，具有與以序列識別號1所示之胺基酸序列的1個胺基酸殘基變異的序列有90%以上的序列相似性的序列以外的胺基酸序列（其他的胺基酸序列）。該其他的胺基酸序列例如可為標籤序列（tag sequence）。

具有該其他的胺基酸序列的多胜肽或蛋白質，例如由數個（例如6個、10個等）的His（組胺酸）殘基所構成的標籤His tag（6X His、10X His等）、含有與鏈球菌親生物素蛋白（Streptavidin）的生物素（Biotin）的結合部位的結合能力的胺基酸序列之連接鏈親和素的胜肽標籤（SBP tag）、GST（Glutathione S－transferases；穀胱甘肽S－轉移酶）、HA（haemagglutinin；血球凝集素）、免疫球蛋白恆定區、β－半乳糖苷酶、MBP（麥芽糖結合蛋白）、FLAG（Hopp, T. P. et al., BioTechnology（1988）6, 1204－1210）、血球凝集素（HA）、人c－myc片段、VSV－GP片段、p18HIV片段、T7－tag、HSV－tag、E－tag、SV40T抗原片段、Ick tag、α－tubulin片段、B－tag、ProteinC片段、Stag、StrepTag、HaloTag等。His tag例如可為以序列識別號12所示之胺基酸序列。SBP tag例如可為以序列識別號13所示之胺基酸序列。

本實施形態之多胜肽，可在N端及C端的任一端或兩端，含有選自由連接鏈親和素的胜肽標籤序列及His tag序列所組成之群組的1個以上，可在C端含有連接鏈親和素的胜肽標籤序列（SBP tag）及His tag序列。

本實施形態之多胜肽，可具有：以序列識別號4所示、以X所示之胺基酸殘基為纈胺酸殘基的胺基酸序列a1（變異：M141V）；以序列識別號4所示、以X所示之胺基酸殘基為酪胺酸殘基的胺基酸序列a2（變異：M141Y）；以序列識別號6所示、以X所示之胺基酸殘基為白胺酸殘基的胺基酸序列a3（變異：M182L）；以序列識別號8所示、以X所示之胺基酸殘基為組胺酸殘基的胺基酸序列a4（變異：W253H）；或以序列識別號9所示、以X所示之胺基酸殘基為麩胺酸殘基的胺基酸序列a5（變異：K260E）；及標籤序列。本實施形態之多胜肽，除了具有胺基酸序列a1、a2、a3、a4、或a5、及標籤序列外，可具有連接胺基酸序列a1、a2、a3、a4、或a5、及標籤序列的連接子序列（Linker sequence）。連接子序列例如可具有GGSS或GGS所示之胺基酸序列。

一實施形態之多胜肽可為，由胺基酸序列a1、a2、a3、a4、或a5，與連接於胺基酸序列a1、a2、a3、a4、或a5的C端的胺基酸序列：GGSS所示之連接子序列，與連接該連接子序列的以序列識別號12所示之His tag所構成的多胜肽X1。多胜肽X1中可有1個以上的胺基酸殘基變異，可有1～20個、1～15個、1～10個、1～7個、或1～5個的胺基酸殘基變異。多胜肽X1中，變異的胺基酸殘基可為3個以內，可為2個以內，可為1個。

一實施形態之多胜肽可為，由胺基酸序列a1、a2、a3、a4、或a5，與連接於胺基酸序列a1、a2、a3、a4、或a5的C端的以序列識別號13所示之SBP tag，與以序列識別號12所示之His tag，與連接His tag及SBP tag的胺基酸序列GGS所示之連接子序列所構成的多胜肽X2。多胜肽X2中可有1個以上的胺基酸殘基變異，可有1～20個、1～15個、1～10個、1～7個、或1～5個的胺基酸殘基變異。多胜肽X2中變異的胺基酸殘基可為3個以內，可為2個以內，可為1個。

本實施形態之多胜肽也可與其他多胜肽作為混合物使用，也可以分離、生成的狀態使用。在與其他多胜肽作為混合物使用的情形，可經由分離、生成目的產物之步驟而獲得目的胺基酸。

當本實施形態之多胜肽為單體存在的情形時，胺基酸殘基數可為300以上、310以上、320以上、或325以上、330。又可為400以下、390以下、380以下、或375以下。

又，當該其他胺基酸序列未加成於N端及C端的任一端的情形時，本實施形態之多胜肽的胺基酸殘基數可為300以上、310以上、320以上、或325以上，可為330。又可為360以下、350以下、340以下、或335以下。

再者，當該其他胺基酸序列加成於N端及C端任一端或兩端的情形時，本實施形態之多胜肽的胺基酸殘基數可為340以上、350以上、360以上、或370以上，可為374。又可為400以下、390以下、380以下、或375以下。

又，本實施形態之多胜肽可為單體使用，也可以2個以上的單體彼此締合的形態使用。再者，本實施形態之多胜肽可為同源二聚物（Homodimer）。

當本實施形態之多胜肽為同源二聚體的情形時，胺基酸殘基數是作為單體存在時的2倍。

一態樣中，多胜肽在至少一個反應條件下，具有對化合物A與化合物B之分子間還原胺化反應、或化合物C之分子內還原胺化反應的觸媒活性。

觸媒活性的測量可使用化合物A為甲胺、且化合物B為4－（2－氯苯基）－2－氧代磷苯二甲酸鈉之組合。在此情形，可將MeHph（2－Cl）合成活性作為指標來評估多胜肽的觸媒活性。

另一態樣中，觸媒活性的測量可使用化合物A為乙胺、且化合物B為苯丙酮酸鈉之組合。在此情形，可將EtPhe合成活性作為指標來評估多胜肽的觸媒活性。

另一態樣中，觸媒活性的測量可使用化合物A為甲胺、且化合物B為2－環戊基－2－氧代乙酸鈉之組合。在此情形，可將MeGly（cPent）合成活性作為指標來評估多胜肽的觸媒活性。

另一態樣中，觸媒活性的測量可使用化合物A為氨、且化合物B為苯丙酮酸之組合。在此情形，可將Phe合成活性作為指標來評估多胜肽的觸媒活性。

一態樣中，多胜肽的觸媒活性可使用實施例所記載的反應條件來評估。例如，反應溶液中在反應開始時的各化合物的濃度可為：化合物B或其鹽為50mM，D（+）－葡萄糖為100mM，化合物A或其鹽為500mM，磷酸緩衝液為100mM，NADPH為1mM，GDH溶液為0.002unit／μL，評估對象多胜肽為2.5μM，化合物D或化合物D’為20v／v%或20w／v%。

一實施形態中，觸媒活性的評估可透過下述來進行評估：在反應溶液中，4－（2－氯苯基）－2－氧代丁酸鈉、苯基丙酮酸鈉、或2－環戊基－2－氧代乙酸鈉為50mM，D（+）－葡萄糖為100mM，甲胺或乙胺為500mM，磷酸緩衝液為100mM，NADPH為1mM，GDH溶液為0.002unit／μL，評估對象多胜肽為2.5μM，化合物D或化合物D’為20v／v%或20w／v%，在25℃或37℃，pH8到9的範圍的條件下，開始反應，經過3小時或23小時的還原胺化反應，求得所生成的胺基酸的產率。

觸媒活性是根據經由還原胺化反應所生成的胺基酸（以下稱為「目的產物」）的產量來計算。目的產物的產量可使用液相層析質量分析儀（LCMS）來測量。具體可為後述實施例所記載之條件測量者。

本實施形態之多胜肽，例如可經由依常規方法培養作為轉形體的重組細胞，從培養所得的培養物分離或純化目的多胜肽而獲得之方法所製造。又，所製造之多胜肽也可從培養所得的培養物不經過分離及純化、或只進行粗純化的狀態使用。

從培養物獲得目的多胜肽之方法可使用一般使用的分離、純化方法。分離、純化方法例如鹽析、溶劑沉澱法等的利用溶解度的方法；透析、超過濾、凝膠過濾、十二基硫酸鈉－聚丙烯醯胺凝膠電泳等的利用分子量的差異的方法；離子交換層析法或羥基磷灰石層析法等的利用電荷的方法；親和性層析法等的利用特異性親和性的方法；逆相高效液相層析法等的利用疏水性的差異的方法；等電點電泳等的利用等電點的差異的方法等。

在目的多胜肽存在所培養的重組細胞（大腸桿菌等）的周質或細胞質內的情形時，將培養物進行過濾或離心等的常規方法，收集菌體或細胞，使懸浮於適當的緩衝液，以例如超音波或溶菌酶及冷凍溶解等的方法，破壞細胞等的細胞壁及／或細胞膜後，以離心或過濾等的方法，獲得含有目的多胜肽的分層。使用Triton ^TM－X100等的界面活性劑使該分層可溶化，獲得粗溶液。之後使用如之前舉例的常規方法，從該粗溶液分離及純化目的多胜肽。

本實施形態之多胜肽可使用上述公知的基因重組技術來製作，但一般可如下調製。首先，以含有野生型多胜肽基因的質體作為鑄模，使用其引子經由PCR在特定位置及特定胺基酸導入定點突變，以限制酶分解鑄模質體後，轉形於大腸桿菌等，選殖目的之導入變異的質體。

在導入第二個胺基酸變異的情形時，接著將在特定位置導入變異的質體作為鑄模，同上述重複使用引子的定點突變的導入，構築編碼二胺基酸取代物的質體DNA。如再導入胺基酸變異也可同樣進行。

將所製作的DNA與編碼乳糖抑制子（Laci）的質體pREP4等同時轉形於大腸桿菌BL21株等，分離培養所得的轉形株後，以IPTG誘導表現。之後使所得菌株破碎，經由使上清液通過利用His tag的親和性管柱等，純化目的多胜肽。

或者，也可經由下述方法調製。亦即，基因合成編碼目的多胜肽的鹼基序列，重組於表現載體後，利用蛋白質表現、各種的純化標籤，經由親和性管柱純化目的多胜肽。

本實施形態之多胜肽的製造方法不限於上述方法，可使用公知的點突變技術或基因合成技術、經由限制酶導入變異片段的方法等、各種的基因操作技術，表現也不限於大腸桿菌，也可使用動物細胞或無細胞轉譯系統。又，純化方法也不限於利用多組胺酸（polyhistidine）的親和性管柱，可使用各種的胜肽標籤或純化管柱。

＜還原劑＞ 還原劑可為選自由還原型菸鹼醯胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADPH）、氧化型菸鹼醯胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADP ⁺）、還原型菸鹼醯胺腺嘌呤二核苷酸（NADH）及氧化型菸鹼醯胺腺嘌呤二核苷酸（NAD ⁺）所組成之群組的1個以上。一實施形態中，還原劑可為NADPH。

再者，可共同添加例如葡萄糖脫氫酶（GDH）及葡萄糖、甲酸脫氫酶與甲酸、乙醇脫氫酶與乙醇、胺基酸脫氫酶與胺基酸、以及有機酸脫氫酶（蘋果酸脫氫酶等）及有機酸等，使NADP ⁺及NAD ⁺分別還原成NADPH及NADH的添加劑。亦即，在反應步驟中，可進一步存在各種添加劑，也可進一步存在葡萄糖及葡萄糖脫氫酶。

例如，在使用NADPH作為還原劑的情形時，因為可以降低NADHP的使用量，所以可使用將反應液中所生成的NADP ⁺（氧化型菸鹼醯胺腺嘌呤二核苷酸磷酸）還原成NADPH的反應劑。該反應劑例如葡萄糖與GDH（葡萄糖脫氫酶）的組合。在使用NADPH、與葡萄糖及GDH的情形時，可降低NADPH的使用量至觸媒量。

＜反應步驟＞ 反應步驟在含有多胜肽、還原劑、化合物D、與化合物A及化合物B、或化合物C的反應液中進行。反應液可含有溶劑（但排除對應化合物D的化合物）等的其他成分。溶劑可為水或緩衝液。緩衝液例如磷酸緩衝液、CHES（N－環己基－2－胺基乙烷磺酸）、Tris（叁羥甲基胺基甲烷）、Bicine（N,N－二（2－羥乙基）甘胺酸）。反應步驟可在適當的反應條件下進行。「適當的反應條件」是指該多胜肽可發揮觸媒活性的條件。

反應步驟可在0℃以上50℃以下的溫度條件下進行。該溫度的下限可為0℃以上、10℃以上或20℃以上。該溫度的上限可為50℃以下、40℃以下、或30℃以下。該溫度可為例如0℃以上50℃以下、10℃以上40℃以下、或20℃以上30℃以下。又，該溫度在一態樣中可為25℃，也可為16℃。又，該溫度的下限可為30℃以上。該溫度的上限為40℃以下。該溫度例如可為30℃以上40℃以下。又，該溫度可為37℃。反應溫度也可階段性的、或連續性的變化。

反應步驟可在7以上11以下的pH條件下進行。該pH的下限可為7以上、7.5以上、8以上、或8.5以上。該pH的上限可為11以下、10以下、9.5以下、或9以下。該pH例如可為pH7以上11以下、8以上10以下、或8.5以上9.5以下。又，該pH在一態樣中可為8，可為9。又此處所謂的pH是指在反應開始的時點的反應液中的pH，反應中容許pH變動。反應中的pH變動可為2以內，可為1.5以內，可為1以內。

反應步驟中，在反應液的總量中，在反應開始的時點的化合物A的濃度可為10mM以上3000mM以下。在反應液的總量中，化合物A的濃度的下限可為10mM以上、100mM以上、300mM以上、500mM以上、700mM以上、900mM以上、1100mM以上、1300mM以上、1500mM以上、或1700mM以上。在反應液的總量中，化合物A的濃度的上限可為3000mM以下、2500mM以下、或2000mM以下。在反應液的總量中，化合物A的濃度可為10mM以上3000mM以下、或500mM以上2000mM以下。又，在一態樣中，在反應液的總量中，化合物A的濃度可為500mM，可為1750mM。

反應步驟中，在反應液的總量中，在反應開始的時點的化合物B或化合物C的濃度可為0.001mM以上1000mM以下。

在反應液的總量中，在反應開始的時點的化合物B的濃度可為10mM以上500mM以下。在反應液的總量中，在反應開始的時點的化合物B的濃度的下限可為10mM以上、30mM以上、50mM以上、100mM以上、150mM以上、200mM以上、250mM以上、300mM以上、或330mM以上。在反應液的總量中，在反應開始的時點的化合物B的濃度的上限可為500mM以下、450mM以下、400mM以下、或380mM以下。在反應液的總量中，在反應開始的時點的化合物B的濃度可為10mM以上500mM以下、或300mM以上400mM以下。在一態樣中，在反應液的總量中，在反應開始的時點的化合物B的濃度可為50mM，可為350mM。

在反應液的總量中，在反應開始的時點的化合物C的濃度可為10mM以上500mM以下。在反應液的總量中，在反應開始的時點的化合物C的濃度的下限可為10mM以上、30mM以上、50mM以上、100mM以上、150mM以上、200mM以上、250mM以上、300mM以上、或330mM以上。在反應液的總量中，在反應開始的時點的化合物C的濃度的上限可為500mM以下、450mM以下、400mM以下、或380mM以下。在反應液的總量中，在反應開始的時點的化合物C的濃度可為10mM以上500mM以下、或300mM以上400mM以下。在一態樣中，在反應液的總量中，在反應開始的時點的化合物C的濃度可為50mM，可為350mM。

在反應步驟中，在反應液的總量中，在反應開始的時點，化合物A的莫耳數對化合物B的莫耳數的比（化合物A的莫耳數／化合物B的莫耳數）可為1以上。在反應液的總量中，在反應開始的時點，化合物A的莫耳數對化合物B的莫耳數的比的下限，可為1以上、3以上、5以上、8以上、或9以上。在反應液的總量中，在反應開始的時點，化合物A的莫耳數對化合物B的莫耳數的比的上限，可為100以下、50以下、30以下、20以下、或15以下。在反應液的總量中，在反應開始的時點，化合物A的莫耳數對化合物B的莫耳數的比，可為5或10。

當化合物D或化合物D’在25℃且1大氣壓的條件下為液體的情形時，反應步驟可在反應溶液中的化合物D或化合物D’的濃度為1v／v%以上60v／v%以下的條件下進行。從更加提高產率的觀點，反應溶液中的化合物D或化合物D’的濃度的下限，可為1v／v%以上、5v／v%以上、10v／v%以上、20v／v%以上、30v／v%以上、或40v／v%以上。從更加提高產率的觀點，反應溶液中的化合物D或化合物D’的濃度的上限，可為60v／v%以下、50v／v%以下、或40v／v%以下。在一態樣中，反溶液中的化合物D或化合物D’的濃度可為20v／v%，可為10v／v%。反應溶液中的化合物D或化合物D’的濃度表示在反應開始的時點，在反應溶液中化合物D或化合物D’的濃度。

當化合物D或化合物D’在25℃且1大氣壓的條件下為固體的情形時，反應步驟可在反應溶液中的化合物D或化合物D’的濃度為1w／v%以上60w／v%以下的條件下進行。從更加提高產率的觀點，反應溶液中的化合物D或化合物D’的濃度的下限，可為1w／v%以上、5w／v%以上、10w／v%以上、20w／v%以上、30w／v%以上、或40w／v%以上。從更加提高產率的觀點，反應溶液中的化合物D或化合物D’的濃度的上限，可為60w／v%以下、50w／v%以下、或40w／v%以下。在一態樣中，反應溶液中的化合物D或化合物D’的濃度可為20w／v%，可為10w／v%。反應溶液中的化合物D或化合物D’的濃度表示在反應開始的時點，在反應溶液中化合物D或化合物D’的濃度。

反應步驟可在反應溶液中的多胜肽濃度為0.1μM以上10μM以下的條件下進行。反應溶液中的多胜肽濃度的下限可為0.5μM以上、1.0μM以上、1.5μM以上、2.0μM以上、2.3μM以上、或2.4μM以上。反應溶液中的多胜肽濃度的上限可為10μM以下、5μM以下、4μM以下、3μM以下、2.7μM以下、或2.6μM以下。在一態樣中，反應溶液中的多胜肽濃度可為2.5μM。

反應步驟可在反應溶液中的還原劑濃度為0.1mM以上100mM以下的條件下進行。反應溶液中的還原劑濃度的下限可為0.1mM以上、0.2mM以上、0.4mM以上、0.6mM以上、0.8mM以上、或1mM以上。反應溶液中的還原劑濃度的上限可為100mM以下、80mM以下、60mM以下、40mM以下、20mM以下、或10mM以下。在一態樣中，反應溶液中的還原劑濃度可為1mM，可為2mM。

由化合物D或化合物D’存在下的反應所生成的胺基酸的產率可為，在化合物D或化合物D’不存在的條件下的反應步驟所生成的胺基酸的產率的1.2倍以上，可為1.3倍以上、1.4倍以上、1.5倍以上、1.6倍以上、1.7倍以上、或1.8倍以上，可為10倍以下、9倍以下、8倍以下、7倍以下、6倍以下、5倍以下、4倍以下、3倍以下、或2倍以下。由化合物D或化合物D’存在下的反應所生成的胺基酸的產率可為，在化合物D或化合物D’不存在的條件下的反應步驟中所生成的胺基酸的產率的幾倍，可在任意的反應溫度、任意的反應時間測量，例如可在25℃或37℃中從反應開始的時點經過1小時、3小時、或23小時的兩個條件下計算出目的產物的產率比。具體可為，由化合物D或化合物D’存在下的反應所生成的胺基酸的產率，除以在化合物D或化合物D’不存在的條件下的反應步驟所生成的胺基酸的產率。又，可從在25℃中從反應開始的時點經過3小時的產率來計算。

在反應步驟中所生成的胺基酸產率可為15%以上，可為30%以上、50%以上、60%以上、70%以上、80%以上、90%以上、93%以上、或95%以上，可為100%以下、99%以下、98%以下、97%以下、或96%以下。

在反應步驟中所生成的胺基酸產率可根據下列條件進行測量。 在反應溶液中，苯基丙酮酸、2－氧代－3－（p－甲苯基）丙酸、或2－環戊基－2－氧代－乙酸為50mM，D（+）－葡萄糖為100mM，氨、甲胺或乙胺為500mM，磷酸緩衝液為100mM，NADPH為1mM，GDH溶液為0.002unit／μL，該多胜肽為2.5μM的濃度，使用該化合物D或化合物D’的情形時，如果化合物D或化合物D’在25℃且1大氣壓的條件下為液體，則化合物D或化合物D’的濃度為20v／v%，如果化合物D或化合物D’在25℃且1大氣壓的條件下為固體，則化合物D或化合物D’的濃度為20w／v%，且在37℃、pH8到9的範圍的條件下，開始反應，經過19個小時，求得經由還原胺化反應所生成的胺基酸的產率。

本說明書中，反應開始的時點是指，在反應步驟進行化合物A與化合物B的分子間還原胺化反應的步驟之情形時，在系統中添加化合物A、化合物B、本說明書揭示之多胜肽、及還原劑的時點中的較晚者，在反應步驟進行化合物C的分子內還原胺化反應的步驟之情形時，在系統中添加化合物C、本說明書揭示之多胜肽、及還原劑的時點中的較晚者。

在反應步驟所生成的胺基酸的產率根據下示方法計算。首先，將反應溶液、及另外調製的檢量線樣本（具有與目的產物相同結構或顯示相同的UV吸收波長的結構之化合物）進行LCMS分析，分別取得UV圖、或萃取離子層析圖。從獲自反應溶液的UV圖或萃取離子層析圖，分別獲得來自目的產物的UV峰面積或MS峰面積。相同地，從檢量線樣本獲得標準品的UV峰面積或MS峰面積。基於檢量線樣本所含的標準品的濃度、及與UV峰面積或MS峰面積的對應關係，從UV峰面積或MS峰面積計算出反應溶液所含的目的產物的濃度。當反應溶液中的化合物B或化合物C全部轉換成目的產物的情形時，認為反應溶液中的目的產物的濃度與在反應開始的時點的反應溶液中的化合物B或化合物C的濃度相等。實際上，透過將反應溶液中所含的目的產物的濃度，除以在反應開始的時點的反應溶液中的化合物B或化合物C的濃度，來計算產率。 又，關於反應產率，也可在校正各化合物的吸光係數的比後，經由下式計算（在本說明書中，以該方法所求得的反應產率稱為反應轉換率）。 式：反應轉換率（%）＝S ₁／（（S ₂／8.0）+S ₁）×100 該式中，S ₁表示目的產物的UV峰面積。S ₂表示化合物B或化合物C的UV峰面積。

［胜肽化合物的製造方法］ 本實施形態之胜肽化合物的製造方法包含下列步驟。 （1）經由上述的胺基酸的製造方法，製造胺基酸之步驟；及 （2）使該胺基酸與選自由其他胺基酸及其他胜肽所組成之群組的1個以上連接，製造胜肽化合物之步驟。

製造胜肽化合物的步驟可在水性溶劑中或在水性溶劑與有機溶劑的混合液中進行。水性溶劑可為水或緩衝液。緩衝液例如磷酸緩衝液、CHES（N－環己基－2－胺基乙烷磺酸）、Tris（叁羥甲基胺基甲烷）、Bicine（N,N－二（2－羥乙基）甘胺酸）。有機溶劑例如二甲基亞碸。

［還原胺化反應促進劑］ 本實施形態之還原胺化反應促進劑可為，如以上述式（1）所示，促進下列（i）或（ii）的反應的化合物。 （i）化合物A與化合物B的分子間還原胺化反應，該化合物A選自由具有胺基的化合物及其鹽所組成之群組，化合物B選自由具有羰基的化合物及其鹽所組成之群組， （ii）化合物C的分子內還原胺化反應，該化合物C選自由具有胺基及羰基的化合物及其鹽所組成之群組。

還原胺化反應促進劑的具體態樣可適用在胺基酸的製造方法所述之態樣。

還原胺化反應促進劑可為選自由二甲基亞碸、二甲基碸、二甲氧基乙烷、三甲基氧化膦、N,N－二甲基甲醯胺、N,N－二甲基乙醯胺、四亞甲基亞碸、二乙基亞碸、甲醇、及甲基甲醯胺所組成之群組的1個以上，可為選自由二甲基亞碸、二甲基碸、及三甲基氧化膦所組成之群組的1個以上，可為二甲基亞碸。

上述之本發明也可視為用於促進上述（i）或上述（ii）的還原胺化反應的以上述式（1）所示之化合物的使用。又，上述之本發明也可視為用於促進上述（i）或上述（ii）的還原胺化反應的以上述式（1）所示之化合物。又，上述之本發明也可視為用於上述（i）或上述（ii）的還原胺化反應的促進劑的製造之以上述式（1）所示之化合物的使用（應用）。此等的具體態樣可適用在胺基酸的製造方法所述之態樣。

本說明書中使用下列簡稱。 ［表1］ ［表2］ ［實施例］

本發明經由下列實施例進一步舉例，但不限於此等。

LCMS的分析條件如下。 LCMS方法 條件名稱：FA05 裝置：Waters Acquity UPLC／SQD 管柱（I.D.×長度 （mm），粒徑（μm））：Aldrich Ascentis Express C18（2.1×50，2.7） 移動相：A） 0.1% FA H ₂O，B） 0.1% FA MeCN 梯度（A／B）：95／5～0／100（1.0分鐘） 0／100（0.4分鐘） 流速（ml／分）：1 管柱溫度：35℃ 波長：210－400nm PDA total

條件名稱：TFA00 裝置：Waters H class 管柱（I.D. ×長度 （mm），粒徑（μm））：ACQUITY UPLC HSS T3（2.1×50，1.8） 移動相：A） 0.05% TFA H ₂O，B） 0.05% TFA MeCN 梯度（A／B）：100／0～2／98（5.0分鐘） 2／98（1.0分鐘） 100／0（0.01分鐘） 100／0（2.0分鐘） 流速（ml／分）：0.5 管柱溫度：30℃ 波長：197nm

條件名稱：TFA00－QDa 裝置：Waters H class／QDa 管柱（I.D. ×長度 （mm），粒徑（μm））：ACQUITY UPLC HSS T3（2.1×50，1.8） 移動相：A） 0.05% TFA H ₂O，B） 0.05% TFA MeCN 梯度（A／B）：100／0～2／98（5.0分鐘）2／98（1.0分鐘） 100／0（0.01分鐘） 100／0（2.0分鐘） 流速（ml／分）：0.5 管柱溫度：30℃ 波長：197nm

對於未特別記載之試劑從商業供給者購入。

調製例1：野生型NMAADH－C－His調製 對於以序列識別號1，合成在C端加成連接子序列（GGSS）及His tag序列（HHHHHH）的基因，選殖（cloning）到大腸桿菌表現用載體。將此表現載體轉形至BL21（DE3）大腸桿菌，進行培養。以超音波破碎的細胞上清液，使用鎳管柱，純化目的蛋白質。將該蛋白質溶液進行透析作業（50mM Tris鹽酸鹽、10%甘油、150mM氯化鈉、pH8.0），作成最終調製品（序列識別號10，野生型NMAADH－His）。

序列識別號1： MRVPFTELQSLLQAIFQRHGCSEAVARVLAHNCASAQRDGAHSHGVFRMPGYVSTLASGWVDGQATPQVSDVAAGYVRVDAAGGFAQPALAAARELLVAKARSAGIAVLAIHNSHHFAALWPDVEPFAEEGLVALSVVNSMTCVVPHGARKPLFGTNPIAFAAPCAEHDPIVFDMATSAMAHGDVQIAARAGQQLPEGMGVDADGQPTTDPKAILEGGALLPFGGHKGSALSMMVELLAAALTGGHFSWEFDWSGHPGAKTPWTGQLIIVIDPGKAEGQRFAQRSRELVEHMQAVGLTRMPGERRYREREVAEEEGVAVTEQELKGLKELLG

序列識別號10： MRVPFTELQSLLQAIFQRHGCSEAVARVLAHNCASAQRDGAHSHGVFRMPGYVSTLASGWVDGQATPQVSDVAAGYVRVDAAGGFAQPALAAARELLVAKARSAGIAVLAIHNSHHFAALWPDVEPFAEEGLVALSVVNSMTCVVPHGARKPLFGTNPIAFAAPCAEHDPIVFDMATSAMAHGDVQIAARAGQQLPEGMGVDADGQPTTDPKAILEGGALLPFGGHKGSALSMMVELLAAALTGGHFSWEFDWSGHPGAKTPWTGQLIIVIDPGKAEGQRFAQRSRELVEHMQAVGLTRMPGERRYREREVAEEEGVAVTEQELKGLKELLGGGSSHHHHHH

調製例2：W253H－SBP－His調製 對於以序列識別號8所示、X為His的胺基酸序列，合成在C端加成鏈球菌親生物素蛋白結合胜肽(Streptavidin-binding peptide)標籤序列（GTDEKTTGWRGGHVVEGLAGELEQLRARLEHHPQ）、連接子序列（GGS）及His tag序列（HHHHHH）的基因，選殖到大腸桿菌表現用載體。將此表現載體導入BL21（DE3）大腸桿菌（Novagen），使用Overnight Express Instant TB 培養基 （Novagen），在18℃培養2天，使目的蛋白質表現。

離心收集所得的菌體，以超音波使菌體破碎。離心裂解物（lysate）使其分層，經由使用cOmplete His－Tag Purification Resin（Roche）的親和性層析法，純化上清液分層。收集含有目的蛋白質的分層後，以50mM Tris鹽酸（pH8.0）／150mM氯化鈉／10%甘油透析樣本，作成最終調製品（序列識別號11，W253H）。

以序列識別號8所示、X為His的胺基酸序列： MRVPFTELQSLLQAIFQRHGCSEAVARVLAHNCASAQRDGAHSHGVFRMPGYVSTLASGWVDGQATPQVSDVAAGYVRVDAAGGFAQPALAAARELLVAKARSAGIAVLAIHNSHHFAALWPDVEPFAEEGLVALSVVNSMTCVVPHGARKPLFGTNPIAFAAPCAEHDPIVFDMATSAMAHGDVQIAARAGQQLPEGMGVDADGQPTTDPKAILEGGALLPFGGHKGSALSMMVELLAAALTGGHFSWEFDHSGHPGAKTPWTGQLIIVIDPGKAEGQRFAQRSRELVEHMQAVGLTRMPGERRYREREVAEEEGVAVTEQELKGLKELLG

序列識別號11： MRVPFTELQSLLQAIFQRHGCSEAVARVLAHNCASAQRDGAHSHGVFRMPGYVSTLASGWVDGQATPQVSDVAAGYVRVDAAGGFAQPALAAARELLVAKARSAGIAVLAIHNSHHFAALWPDVEPFAEEGLVALSVVNSMTCVVPHGARKPLFGTNPIAFAAPCAEHDPIVFDMATSAMAHGDVQIAARAGQQLPEGMGVDADGQPTTDPKAILEGGALLPFGGHKGSALSMMVELLAAALTGGHFSWEFDHSGHPGAKTPWTGQLIIVIDPGKAEGQRFAQRSRELVEHMQAVGLTRMPGERRYREREVAEEEGVAVTEQELKGLKELLGGTDEKTTGWRGGHVVEGLAGELEQLRARLEHHPQGGSHHHHHH

調製例3：修飾NMAADH－SBP－His調製 對於各種修飾酵素序列（序列識別號14～17），合成C端加成鏈球菌親生物素蛋白結合胜肽標籤序列（GTDEKTTGWRGGHVVEGLAGELEQLRARLEHHPQ）、連接子序列（GGS）及His tag序列（HHHHHH）的基因，選殖到大腸桿菌表現用載體。將此表現載體導入BL21（DE3）大腸桿菌（Novagen），使用Overnight Express Instant TB Medium（Novagen），在18℃培養2天，使目的蛋白質表現。

離心收集所得的菌體，以超音波使菌體破碎。離心裂解物使其分層，經由使用Ni Sepharose 6 Fast Flow（Cytiva）的親和性層析法，純化上清液分層。收集含有目的蛋白質的分層後，作成最終調製品（序列識別號18，M141V_W253Q_K260E－SBP－His；序列識別號19，M141I_W253H_K260E－SBP－His；序列識別號20，M141V_W253L_K260Q－SBP－His；序列識別號21，M141V_W253L_K260E－SBP－His）。

序列識別號14： MRVPFTELQSLLQAIFQRHGCSEAVARVLAHNCASAQRDGAHSHGVFRMPGYVSTLASGWVDGQATPQVSDVAAGYVRVDAAGGFAQPALAAARELLVAKARSAGIAVLAIHNSHHFAALWPDVEPFAEEGLVALSVVNSVTCVVPHGARKPLFGTNPIAFAAPCAEHDPIVFDMATSAMAHGDVQIAARAGQQLPEGMGVDADGQPTTDPKAILEGGALLPFGGHKGSALSMMVELLAAALTGGHFSWEFDQSGHPGAETPWTGQLIIVIDPGKAEGQRFAQRSRELVEHMQAVGLTRMPGERRYREREVAEEEGVAVTEQELKGLKELLG

序列識別號15： MRVPFTELQSLLQAIFQRHGCSEAVARVLAHNCASAQRDGAHSHGVFRMPGYVSTLASGWVDGQATPQVSDVAAGYVRVDAAGGFAQPALAAARELLVAKARSAGIAVLAIHNSHHFAALWPDVEPFAEEGLVALSVVNSITCVVPHGARKPLFGTNPIAFAAPCAEHDPIVFDMATSAMAHGDVQIAARAGQQLPEGMGVDADGQPTTDPKAILEGGALLPFGGHKGSALSMMVELLAAALTGGHFSWEFDHSGHPGAETPWTGQLIIVIDPGKAEGQRFAQRSRELVEHMQAVGLTRMPGERRYREREVAEEEGVAVTEQELKGLKELLG

序列識別號16： MRVPFTELQSLLQAIFQRHGCSEAVARVLAHNCASAQRDGAHSHGVFRMPGYVSTLASGWVDGQATPQVSDVAAGYVRVDAAGGFAQPALAAARELLVAKARSAGIAVLAIHNSHHFAALWPDVEPFAEEGLVALSVVNSVTCVVPHGARKPLFGTNPIAFAAPCAEHDPIVFDMATSAMAHGDVQIAARAGQQLPEGMGVDADGQPTTDPKAILEGGALLPFGGHKGSALSMMVELLAAALTGGHFSWEFDLSGHPGAQTPWTGQLIIVIDPGKAEGQRFAQRSRELVEHMQAVGLTRMPGERRYREREVAEEEGVAVTEQELKGLKELLG

序列識別號17： MRVPFTELQSLLQAIFQRHGCSEAVARVLAHNCASAQRDGAHSHGVFRMPGYVSTLASGWVDGQATPQVSDVAAGYVRVDAAGGFAQPALAAARELLVAKARSAGIAVLAIHNSHHFAALWPDVEPFAEEGLVALSVVNSVTCVVPHGARKPLFGTNPIAFAAPCAEHDPIVFDMATSAMAHGDVQIAARAGQQLPEGMGVDADGQPTTDPKAILEGGALLPFGGHKGSALSMMVELLAAALTGGHFSWEFDLSGHPGAETPWTGQLIIVIDPGKAEGQRFAQRSRELVEHMQAVGLTRMPGERRYREREVAEEEGVAVTEQELKGLKELLG

序列識別號18： MRVPFTELQSLLQAIFQRHGCSEAVARVLAHNCASAQRDGAHSHGVFRMPGYVSTLASGWVDGQATPQVSDVAAGYVRVDAAGGFAQPALAAARELLVAKARSAGIAVLAIHNSHHFAALWPDVEPFAEEGLVALSVVNSVTCVVPHGARKPLFGTNPIAFAAPCAEHDPIVFDMATSAMAHGDVQIAARAGQQLPEGMGVDADGQPTTDPKAILEGGALLPFGGHKGSALSMMVELLAAALTGGHFSWEFDQSGHPGAETPWTGQLIIVIDPGKAEGQRFAQRSRELVEHMQAVGLTRMPGERRYREREVAEEEGVAVTEQELKGLKELLGGTDEKTTGWRGGHVVEGLAGELEQLRARLEHHPQGGSHHHHHH

序列識別號19： MRVPFTELQSLLQAIFQRHGCSEAVARVLAHNCASAQRDGAHSHGVFRMPGYVSTLASGWVDGQATPQVSDVAAGYVRVDAAGGFAQPALAAARELLVAKARSAGIAVLAIHNSHHFAALWPDVEPFAEEGLVALSVVNSITCVVPHGARKPLFGTNPIAFAAPCAEHDPIVFDMATSAMAHGDVQIAARAGQQLPEGMGVDADGQPTTDPKAILEGGALLPFGGHKGSALSMMVELLAAALTGGHFSWEFDHSGHPGAETPWTGQLIIVIDPGKAEGQRFAQRSRELVEHMQAVGLTRMPGERRYREREVAEEEGVAVTEQELKGLKELLGGTDEKTTGWRGGHVVEGLAGELEQLRARLEHHPQGGSHHHHHH

序列識別號20： MRVPFTELQSLLQAIFQRHGCSEAVARVLAHNCASAQRDGAHSHGVFRMPGYVSTLASGWVDGQATPQVSDVAAGYVRVDAAGGFAQPALAAARELLVAKARSAGIAVLAIHNSHHFAALWPDVEPFAEEGLVALSVVNSVTCVVPHGARKPLFGTNPIAFAAPCAEHDPIVFDMATSAMAHGDVQIAARAGQQLPEGMGVDADGQPTTDPKAILEGGALLPFGGHKGSALSMMVELLAAALTGGHFSWEFDLSGHPGAQTPWTGQLIIVIDPGKAEGQRFAQRSRELVEHMQAVGLTRMPGERRYREREVAEEEGVAVTEQELKGLKELLGGTDEKTTGWRGGHVVEGLAGELEQLRARLEHHPQGGSHHHHHH

序列識別號21： MRVPFTELQSLLQAIFQRHGCSEAVARVLAHNCASAQRDGAHSHGVFRMPGYVSTLASGWVDGQATPQVSDVAAGYVRVDAAGGFAQPALAAARELLVAKARSAGIAVLAIHNSHHFAALWPDVEPFAEEGLVALSVVNSVTCVVPHGARKPLFGTNPIAFAAPCAEHDPIVFDMATSAMAHGDVQIAARAGQQLPEGMGVDADGQPTTDPKAILEGGALLPFGGHKGSALSMMVELLAAALTGGHFSWEFDLSGHPGAETPWTGQLIIVIDPGKAEGQRFAQRSRELVEHMQAVGLTRMPGERRYREREVAEEEGVAVTEQELKGLKELLGGTDEKTTGWRGGHVVEGLAGELEQLRARLEHHPQGGSHHHHHH

本實施例中使用下列試劑。 ［表3］

下列試劑如下實施事先調製、使用。

［表4］

合成例1：原料中間物（E）－4－（2－氯苯基）－2－氧代丁－3－烯酸的合成 在1N氫氧化鈉水溶液（60ml）與乙醇（3ml）的混合溶液，0℃下加入丙酮酸鈉（2.42g，0.022mol）後，以20分鐘以上滴入2－氯苯甲醛（2.25ml，0.02mol），在0℃攪拌反應液2小時。之後，在反應液加入水（160ml），以甲苯（100ml）洗淨。在0℃下在所得的水層滴入5N鹽酸至pH為1，將此溶液攪拌30分鐘。過濾收集溶液中所產生的析出物，以冷水洗淨該析出物。加熱減壓乾燥所得的濕式固體，獲得（E）－4－（2－氯苯基）－2－氧代丁－3－烯酸（2.7g，0.013mol，64%產率）。 LCMS（ESI）m／z＝209.0（M－H） ^－滯留時間：0.52分（分析條件FA05）

合成例2：原料4－（2－氯苯基）－2－氧代丁酸鈉的合成 在氫氛圍氣下，室溫攪拌（E）－4－（2－氯苯基）－2－氧代丁－3－烯酸（1.00g，4.75mol）與鈀／碳（0.20g，1.88mol）的甲醇（20ml）與二苯硫醚（7.97μl，0.047mmol）的懸浮液1小時。過濾反應液後，在減壓條件下濃縮所得濾液。在所得殘渣加入1N氫氧化鈉水溶液（15ml），以甲苯（15ml）洗淨（2次）。0℃下攪拌水層30分鐘後，過濾收集溶液中所產生的析出物，以冷水洗淨該析出物。加熱減壓乾燥所得的濕式固體，獲得4－（2－氯苯基）－2－氧代丁酸鈉（847mg，3.61mmol，75%產率）。 LCMS（ESI）m／z＝211.0（M－H） ^－滯留時間：0.59分（分析條件FA05）

評估例1－1：在MeHph（2－Cl）合成中的添加劑的評估1－1 調製4－（2－氯苯基）－2－氧代丁酸鈉（終濃度50mM）、D（+）－葡萄糖（終濃度100mM）、甲胺溶液（終濃度500mM）、磷酸緩衝液（終濃度0.1M）、NADPH溶液（終濃度1mM）、GDH溶液（終濃度0.002unit／μL）、表5記載之任一添加劑（為DMSO、NMP、甲醯胺、3－甲基－2－㗁唑烷酮（3－methyl－2－oxazolidinone）、㗁唑烷酮（oxazolidinone）、乙醇、二㗁烷（dioxane）、NMP、2－丙醇、MeCN、THF、TMSO ₂時，對反應溶液為20v／v%，為Me ₃PO、DMSO ₂、DESO ₂時，對反應溶液為20w／v%）、野生型NMAADH－C－His（終濃度2.5μM）、超純水的混合溶液（pH8－9），在25℃或37℃進行3小時培養。作為比較條件，在無添加劑（0v／v%）的條件中，添加超純水取代添加劑。

在培養後的反應溶液，添加反應溶液的19倍量的含有鹽酸的DMSO溶液，使氯化氫的添加終濃度成為300mM。使所得溶液通過0.45μm的PTFE膜過濾器（Cosmospin Filter H，Nacalai Tesque），作為LCMS分析用樣本，進行LCMS測量（分析條件：FA05）。計算出目的物MeHph（2－Cl）的254nm的UV峰面積，求得反應產率。結果顯示於表5。 LCMS（ESI）m／z＝228.1（M+H） ⁺滯留時間：0.38分（分析條件FA05）

［表5］

評估例1－2：在MeHph（2－Cl）合成中的添加劑的評估1－2 除了使用表6記載的添加劑（20v／v%）、將3小時培養時的溫度（反應溫度）調整為25℃以外，同評估例1－2，進行評估。結果顯示於表6。 ［表6］

評估例2：添加劑的添加量的評估 以評估例1相同的反應條件，在25℃或37℃，只改變作為添加劑的DMSO的含量對反應溶液為0v／v%到40v／v%，評估添加量對反應的影響。在0v／v%的條件中，添加超純水取代添加劑。評估反應3小時後的產率。以評估例1相同的方法，調製LCMS分析用樣本，實施LCMS測量（分析條件：FA05）。計算出目的物MeHph（2－Cl）的254nm的UV峰面積，求得反應產率。結果顯示於表7。 LCMS（ESI） m／z＝228.1（M+H） ⁺滯留時間：0.38分（分析條件FA05）

［表7］

評估例3：在EtPhe合成中的添加劑的添加效果的評估 以評估例1的反應的相同條件，使用苯基丙酮酸（終濃度50mM）取代4－（2－氯苯基）－2－氧代丁酸鈉（終濃度50mM），使用乙胺溶液（終濃度500mM）取代甲胺溶液（終濃度500mM），以對反應溶液總量為20v／v%之方式作為添加劑添加DMSO，實施反應的評估。以評估例1相同的方法，調製LCMS分析用樣本，進行LCMS測量（分析條件：FA05）。計算出目的物EtPhe的254nm的UV峰面積，求得反應產率。求得此時在反應溫度25℃及37℃的兩個條件中的3小時後及23小時後的反應產率。結果顯示於表8。 LCMS（ESI） m／z＝194.1（M+H） ⁺滯留時間：0.30分（分析條件FA05） ［表8］

評估例4：在MeGly（cPent）合成中的添加劑的添加效果的評估 以評估例1的反應的相同條件，使用2－環戊基－2－氧代乙酸鈉（終濃度50mM）取代4－（2－氯苯基）－2－氧代丁酸鈉（終濃度50mM），以對反應溶液總量為20v／v%之方式，作為添加劑添加DMSO，實施反應的評估。反應評估求得在反應溫度25℃及37℃的兩個條件中24小時後的反應產率。在培養後的反應溶液，添加反應溶液的7倍量的鹽酸水溶液，使氯化氫的添加終濃度為200mM。使所得溶液通過0.45μm的PTFE膜過濾器（Cosmospin Filter H，Nacalai Tesque），作為LCMS分析用樣本，實施LCMS測量（分析條件：FA05）。計算出目的物MeGly（cPent）的158.1（M+H） ⁺的質譜峰面積，求得反應產率。結果顯示於表9。 LCMS（ESI） m／z＝158.1（M+H） ⁺滯留時間：0.23分（分析條件FA05） ［表9］

評估例5：使用修飾酵素NMAADH（W253H）的反應例 以評估例1的反應的相同條件，使用調製例2所調製的W253H－SBP－His溶液取代野生型NMAADH－C－His，實施反應的評估。反應評估在反應溫度25℃及37℃的兩個條件中的3小時後進行評估。以評估例1相同的方法，調製LCMS分析用樣本，實施LCMS測量（分析條件：FA05）。計算出目的物MeHph（2－Cl）的254nm的UV峰面積，求得反應產率。結果顯示於表10。 LCMS（ESI）m／z＝228.1（M+H） ⁺滯留時間：0.38分（分析條件FA05） ［表10］

評估例6：在MeHph（2－Cl）合成中的添加劑的評估2 調製4－（2－氯苯基）－2－氧代丁酸鈉（終濃度10mM）、D（+）－葡萄糖（終濃度20mM）、甲胺溶液（終濃度100mM）、磷酸緩衝液（終濃度0.1M）、NADPH溶液（終濃度1mM）、GDH溶液（終濃度0.002unit／μL）、添加劑DMSO（20v／v%）、野生型NMAADH－C－His（終濃度2.5μM）、超純水的混合溶液，在25℃培養1小時。作為比較條件，在無添加劑（0v／v%）的條件中，添加超純水取代添加劑。

在培養後的反應溶液，添加反應溶液的7倍量的含有鹽酸的DMSO溶液，使氯化氫的添加終濃度成為300mM。使所得溶液通過0.45μm的PTFE膜過濾器（Cosmospin Filter H，Nacalai Tesque），作為LCMS分析用樣本，實施LCMS測量（分析條件：FA05）。計算出目的物MeHph（2－Cl）的254nm的UV峰面積，求得反應產率。結果顯示於表11。 LCMS（ESI） m／z＝228.1（M+H） ⁺滯留時間：0.38分（分析條件FA05） ［表11］

評估例7：在使用修飾酵素NMAADH（W253H）的MeGly（cPent）合成中的添加劑的評估 將2－環戊基－2－氧代乙酸鈉（終濃度100mM）、D（+）－葡萄糖（終濃度200mM）、甲胺鹽酸鹽（終濃度500mM）、NADPH溶液（終濃度2.0mM）、N,N－二（2－羥乙基）甘胺酸（終濃度100mM）溶解於蒸餾水，添加添加劑DMSO（0～40v／v%）後，以5M氫氧化鈉水溶液調整為pH8.8～8.9。加入GDH溶液（0.10units／μL，1×TNG溶液，終濃度0.0040units／μL）、修飾型NMAADH W253H－SBP－His溶液（0.67mM，終濃度5.0μM），在25℃進行24小時培養。

採樣培養中的反應溶液50μL，添加甲醇750μL、1M鹽酸200μL。將所得溶液以0.5μm的PTFE膜過濾器（DISMIC，ADVANTEC）過濾，作為LC分析用樣本，實施LC測量（分析條件：TFA00）。計算出在LC的197nm的UV峰面積，根據下式X，校正各化合物的吸光係數的比，算出反應轉換率。反應轉換率的變化顯示於表12。 滯留時間：1.1分（分析條件：TFA00） 又，將所得溶液進行LCMS測量（分析條件TFA00－QDa），確認MeGly（cPent）的MS峰。 滯留時間：1.5分（分析條件：TFA00－QDa） LCMS（ESI） m／z＝158.1（M+H） ⁺式X：反應轉換率（%）＝S _1a／（（S _2a／8.0）+S _1a）×100 式X中，S _1a表示MeGly（cPent）的UV峰面積。S _2a表示2－環戊基－2－氧代乙酸鈉的UV峰面積。 ［表12］

評估例8：在Phe合成中的添加劑的評估 以評估例1的反應相同的條件，使用苯基丙酮酸（終濃度50mM）取代4－（2－氯苯基）－2－氧代丁酸鈉（終濃度50mM），使用氨溶液（終濃度500mM）取代甲胺溶液（終濃度500mM），以對反應溶液總量為20v／v%之方式，作為添加劑添加DMSO，實施反應的評估。作為比較條件，在無添加劑（0v／v%）的條件中，添加超純水取代添加劑。以評估例1相同的方法，調製LCMS分析用樣本，實施LCMS測量（分析條件：FA05）。計算出目的物Phe的254nm的UV峰面積，求得反應產率。求得此時在反應溫度25℃及37℃的兩個條件中的3小時後及5小時後的反應產率。結果顯示於表13。 LCMS（ESI） m／z＝166.1（M+H） ⁺滯留時間：0.27分（分析條件FA05） ［表13］

評估例9：在使用修飾酵素NMAADH（W253H）的Phe合成中的添加劑的評估 調製苯基丙酮酸（終濃度50mM）、D（+）－葡萄糖（終濃度100mM）、氨溶液（終濃度500mM）、N,N－二（2－羥乙基）甘胺酸緩衝液（終濃度0.1M）、NADPH溶液（終濃度1mM）、GDH溶液（終濃度0.002unit／μL）、添加劑DMSO（對反應溶液為20v／v%）、修飾型NMAADH W253H－SBP－His溶液（終濃度2.5μM）、超純水的混合溶液（pH8－9），在25℃進行培養，實施反應的評估。作為比較條件，在無添加劑（0v／v%）的條件中，添加超純水取代添加劑。以評估例1相同的方法，調製LCMS分析用樣本，實施LCMS測量（分析條件：FA05）。計算出目的物Phe的254nm的UV峰面積，求得反應產率。求得此時在反應溫度25℃中的3小時後及5小時後的反應產率。結果顯示於表14。 LCMS（ESI） m／z＝166.1（M+H） ⁺滯留時間：0.27分（分析條件FA05） ［表14］

評估例10：在MeHph（2－Cl）合成中的添加劑的評估3 調製4－（2－氯苯基）－2－氧代丁酸鈉（終濃度50mM）、D（+）－葡萄糖（終濃度100mM）、甲胺溶液（終濃度500mM）、N,N－二（2－羥乙基）甘胺酸緩衝液（終濃度0.1M）、NADPH溶液（終濃度1mM）、GDH溶液（終濃度0.002unit／μL）、添加劑DMSO（20v／v%）、修飾型NMAADH－W253H－SBP－His溶液（終濃度2.5μM）、超純水的混合溶液，在16℃進行1小時培養。作為比較條件，在無添加劑（0v／v%）的條件中，添加超純水取代添加劑。

在培養後的反應溶液，添加反應溶液的19倍量的含有鹽酸的DMSO溶液，使氯化氫的添加終濃度成為300mM。使所得溶液通過0.45μm的PTFE膜過濾器（Cosmospin Filter H，Nacalai Tesque），作為LCMS分析用樣本，實施LCMS測量（分析條件：FA05）。計算出目的物MeHph（2－Cl）的254nm的UV峰面積，求得反應產率。結果顯示於表15。 LCMS（ESI） m／z＝228.1（M+H） ⁺滯留時間：0.38分（分析條件FA05） ［表15］

評估例11：在使用修飾型酵素NMAADH的EtPhe合成中的添加劑的評估 調製苯基丙酮酸（終濃度50mM）、D（+）－葡萄糖（終濃度100mM）、乙胺溶液（終濃度500mM）、N,N－二（2－羥乙基）甘胺酸緩衝液（終濃度0.1M）、NADPH溶液（終濃度1mM）、GDH溶液（終濃度0.002unit／μL）、添加劑DMSO（對反應溶液為20v／v%）、各種修飾型NMAADH－SBP－His溶液（終濃度2.5μM）、超純水的混合溶液（pH8－9），在37℃進行培養，進行反應的評估。又，分別使用調製例2及調製例3所調製的5種（M141V_W253Q_K260E－SBP－His溶液、M141I_W253H_K260E－SBP－His溶液、M141V_W253L_K260Q－SBP－His溶液、M141V_W253L_K260E－SBP－His溶液、W253H－SBP－His溶液）作為修飾型NMAADH－SBP－His溶液，進行評估。作為比較條件，在無添加劑（0v／v%）的條件中，添加超純水取代添加劑。以評估例1相同的方法，調製LCMS分析用樣本，實施LCMS測量（分析條件：FA05）。計算出目的物EtPhe的254nm的UV峰面積，求得反應產率。求得此時在反應溫度37℃中的2小時後、4小時後及24小時後的反應產率。結果顯示於表16至表20。 LCMS（ESI） m／z＝194.1（M+H） ⁺滯留時間：0.30分（分析條件FA05） ［表16］ ［表17］ ［表18］ ［表19］ ［表20］

評估例12：在使用修飾型酵素NMAADH的（S）－3－（4,4－二氟環己基）－2－（甲基胺基）丙酸合成中的添加劑的評估 調製3－（4,4－二氟環己基）－2－氧代丙酸（終濃度50mM）、D（+）－葡萄糖（終濃度100mM）、甲胺溶液（終濃度500mM）、N,N－二（2－羥乙基）甘胺酸緩衝液（終濃度0.1M）、NADPH溶液（終濃度1mM）、GDH溶液（終濃度0.002unit／μL）、添加劑DMSO（20v／v%）、修飾型NMAADH W253H－SBP－His溶液（終濃度2.5μM）、超純水的混合溶液，在37℃進行1小時培養。作為比較條件，在無添加劑（0v／v%）的條件中，添加超純水取代添加劑。

在培養後的反應溶液，添加反應溶液的3倍量的鹽酸水溶液，使氯化氫的添加終濃度為200mM。使所得溶液通過0.45μm的PTFE膜過濾器（Cosmospin Filter H，Nacalai Tesque），作為LCMS分析用樣本，實施LCMS測量（分析條件：FA05）。計算出目的物（S）－3－（4,4－二氟環己基）－2－（甲基胺基）丙酸的222.1（M+H） ⁺的質譜峰面積，求得反應產率。結果顯示於表21。 LCMS（ESI） m／z＝222.1（M+H） ⁺滯留時間：0.36分（分析條件FA05） ［表21］

合成例3：在使用修飾酵素W253H－SBP－His 及添加劑（二甲基亞碸）的（2S,3S）－2－胺基－3－苯基－丁酸的合成 在本實施例中使用下列試劑。未記載的試劑使用表3之試劑。 ［表22］

試藥名	CAS登錄編號	供應商
2-氧代-3-苯基丁酸鈉	125116-72-5	Chemieliva Pharmaceutical
5mol/L鹽酸	7647-01-0	FUJIFILM Wako Pure Chemical Corporation
(2S,3R)-2-胺基-3-苯基-丁酸鹽酸鹽	143251-58-5	J&W Pharmlab
(2S,3S)-2-胺基-3-苯基-丁酸鹽酸鹽	53331-55-8	J&W Pharmlab
(2R,3R)-2-胺基-3-苯基-丁酸鹽酸鹽	143251-57-4	J&W Pharmlab

¹H－NMR分析使用下列機器、氘代溶劑測量。 機器：AVANCE III HD 400 SMART－BBFO probe（400MHz，Bruker） 氘代溶劑：三氟酸－d ₁

本實施例中使用下列簡稱。 ［表23］

簡稱	化合物
(Ⅰ)	反應所得之化合物:(2S,3S)-2-胺基-3-苯基-丁酸
(Ⅱ)	標準品化合物:(2S,3R)-2-胺基-3-苯基-丁酸鹽酸鹽
(Ⅲ)	標準品化合物:(2S,3S)-2-胺基-3-苯基-丁酸鹽酸鹽
(Ⅳ)	標準品化合物:(2R,3R)-2-胺基-3-苯基-丁酸鹽酸鹽

2－氧代－3－苯基丁酸鈉                       (2S,3S)-2-胺基-3-苯基-丁酸(I) 調製2－氧代－3－苯基丁酸鈉（終濃度50mM）、D（+）－葡萄糖（終濃度100mM）、氨溶液（終濃度500mM）、N,N－二（2－羥乙基）甘胺酸緩衝液（終濃度0.1M）、NADPH溶液（終濃度1mM）、GDH溶液（終濃度0.002unit／μL）、添加劑DMSO（20v／v%）、調製例2所調製的修飾酵素W253H－SBP－His溶液（終濃度20μM）、超純水的混合溶液，在37℃進行47小時培養。 在培養後的反應溶液，添加600μL的5mol／L鹽酸，使所得溶液以逆相矽膠柱層析法（0.1%甲酸水溶液／0.1%甲酸乙腈溶液＝100／0 → 95／5）純化，獲得（2S,3S）－2－胺基－3－苯基－丁酸（I）（16.5mg，18%）。 LCMS（ESI） m／z＝180.1（M+H） ⁺滯留時間：0.31分（分析條件FA05） ¹H－NMR（400MHz, 三氟酸(Trifluoroacid)－d ₁, 298K）δ7.32－7.21（3H, m）, 7.18－7.16（2H, m）, 4.94（1H, d, J＝5.6Hz）, 3.55－3.48（1H, m）, 1.45（1H, d, J＝6.8Hz） 比較本反應所得的化合物（2S,3S）－2－胺基－3－苯基－丁酸（I）、與購入的標準品化合物（2S,3R）－2－胺基－3－苯基－丁酸鹽酸鹽（II）、（2S,3S）－2－胺基－3－苯基－丁酸鹽酸鹽（III）、及（2R,3R）－2－胺基－3－苯基－丁酸鹽酸鹽（IV）的 ¹H－NMR、掌性HPLC分析數據，確認所得化合物的立體結構。 從 ¹H－NMR分析中具特徵的第2個及第3個的質子峰的比較結果（第1圖）及掌性HPLC分析的比較結果（第1圖及表24），確認本反應所得的化合物（I）的結構為（2S,3S）－2－胺基－3－苯基－丁酸。

掌性HPLC分析條件如下。 裝置：SHIMADZU Nexera X3 管柱：（I.D.×長度（mm），粒徑（μm））：DAICEL社 CHIRALPAK ZWIX（+）（3.0×150，3.0） 移動相：含有50mM甲酸及25mM二乙胺，MeOH：MeCN：H ₂O（49：49：2，v／v）溶液 洗提法：等位（isocratic） 分析時間：10分鐘 流速（ml／分）：0.5 管柱溫度：25℃ 波長：254nm

第2圖及表24中的（V）是將購入的標準品化合物（III）、（IV）以（III）：（IV）＝7：3的比例混合調製。 ［表24］

合成例4：在使用修飾酵素W253H－SBP－His 及添加劑（二甲基亞碸）的（S）－3,3－二甲基－2－（甲基胺基）丁酸的合成 LC／MS以下列分析條件實施。 HPLC方法 裝置：Waters AQUITY UPLC H－Class／QDa 管柱：ACQUITY UPLC HSS T3 2.1×50mm，1.8μm 溶劑：A）0.05%TFA－H ₂O，B）0.05%TFA－CH ₃CN 梯度：0%B（0min）→98%B（5.0min）→98%B（6.0min）→0%B（6.01min）→0%B（8.0min） 流量：0.5mL／min 注入量：0.5μl 溫度：30℃ 波長：197nm

本實施例中使用下表記載的試劑。未記載的試劑使用表3之試劑。 ［表25］

試藥名	CAS登錄編號	供應商
3,3-二甲基-2-氧代丁酸	815-17-8	東京化成工業
(S)-2-胺基-3,3-二甲基丁酸	20859-02-3	東京化成工業
甲胺鹽酸鹽	593-51-1	東京化成工業
50w/v%氫氧化鈉水溶液	1310-73-2	FUJIFILM Wako Pure Chemical Corporation
氧化菸鹼醯胺胺腺嘌呤二核苷酸磷酸	1184-16-3	Oriental Yeast India Pvt. Ltd.
D-葡萄糖脫氫酶(CDX-901)	9028-53-9	Codexis
濃鹽酸	7647-01-0	FUJIFILM Wako Pure Chemical Corporation

將氧化型菸鹼醯胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（50mg）溶解於0.4mol／L的N,N－二（2－羥乙基）甘胺酸溶液（1.0mL，pH9.0），調製氧化型菸鹼醯胺腺嘌呤二核苷酸磷酸溶液（A液）。 將D－葡萄糖脫氫酶（50mg）溶解於0.4mol／L的N,N－二（2－羥乙基）甘胺酸溶液（1.0mL，pH9.0），調製D－葡萄糖脫氫酶溶液（B液）。 將3,3－二甲基－2－氧代丁酸（50mg，0.38mmol）、N,N－二（2－羥乙基）甘胺酸（130mg，0.77mmol）、甲胺鹽酸鹽（130mg，1.9mmol）、及D－葡萄糖（140mg，0.77mmol）溶解於蒸餾水（0.80mL）及二甲基亞碸（0.20mL）。加入50w／v%的氫氧化鈉水溶液（88μL），調整為pH9.0，作為基質溶液（C液）。 在C液加入A液（59μL，3.8μmol）、及B液（10μL，1.0wt%），加入修飾酵素溶液（1.0～100wt%，分別添加，作成73.3mg／ml的溶液），在外溫25℃攪拌17小時後，在外溫37℃震盪24小時。 以（S）－2－胺基－3,3－二甲基丁酸為標準品，從LC／MS的197nm的UV吸收峰面積，計算反應液中的（S）－3,3－二甲基－2－（甲基胺基）丁酸的產率。結果顯示於表26。 ［表26］

無

［第1圖］第1圖為顯示在實施例之反應所得的化合物（2S, 3S）－2－胺基－3－苯基－丁酸（I）、購入的標準品化合物（2S, 3R）－2－胺基－3－苯基－丁酸鹽酸鹽（II）、及（2S, 3S）－2－胺基－3－苯基－丁酸鹽酸鹽（III）的 ¹H－NMR測量圖譜之圖。 ［第2圖］第2圖為顯示在實施例之反應所得的化合物（2S, 3S）－2－胺基－3－苯基－丁酸（I）、及購入的標準品化合物（III）與（IV）以（III）：（IV）＝7：3的比例混合所調製的混合物（V）的掌性HPLC分析數據之圖。

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Claims (15)

1. 一種胺基酸的製造方法，包括在多胜肽、還原劑、及以下述式（1）所示之化合物D的存在下，進行下列（i）或（ii）的反應之步驟，其中，該多胜肽含有與以序列識別號1所示之胺基酸序列具有90%以上的相似性的胺基酸序列， （i）化合物A與化合物B的分子間還原胺化反應，該化合物A選自由具有胺基的化合物及其鹽所組成之群組，化合物B選自由具有羰基的化合物及其鹽所組成之群組， （ii）化合物C的分子內還原胺化反應，該化合物C選自由具有胺基及羰基的化合物及其鹽所組成之群組， ［式（1）中， v及w各自獨立表示0或1， v及w之中的任一個以上表示1， T表示碳原子、磷原子、或硫原子， 以下述式（1a）所示之官能基表示＝O、－ORd或羥基， 當v及w皆為1的情形時，複數個存在的以式（1a）所示之2個官能基可相同也可不同， Ra、Rb及Rc各自獨立表示氫原子、C ₁～C ₃烷基、烷胺基、或－CH ₂－ORd， Ra、Rb及Rc之中的任二個以上可與T互相連接共同形成環結構， Rd表示C ₁～C ₃烷基， d、e及f各自獨立表示0或1， d、e及f之中的任一個以上表示1， 當v及w皆為1的情形時，Ra、Rb及Rc的任一個以上為甲基，Ra、Rb及Rc不互相連接、不與T形成環結構， 當Ra、Rb及Rc的任一個以上為甲胺基的情形時，Ra、Rb及Rc不互相連接、不與T形成環結構， 當以式（1a）所示之官能基為羥基、且T為碳原子的情形時，v為1，w為0，d、e及f皆為1，Ra、Rb及Rc皆為氫原子］。
2. 如請求項1之製造方法，其中， 該式（1）中， T為磷原子或硫原子， 以該式（1a）所示之官能基為＝O， Ra、Rb及Rc皆為甲基。
3. 如請求項1或2之製造方法，其中，該化合物D為二甲基亞碸。
4. 一種胺基酸的製造方法，包括在多胜肽、還原劑、及化合物D’的存在下，進行化合物A與化合物B的分子間還原胺化反應、或化合物C的分子內還原胺化反應之步驟，其中， 該多胜肽具有，在至少一個反應條件下，對該化合物A與該化合物B的分子間還原胺化反應、或該化合物C的分子內還原胺化反應的觸媒活性， 該化合物A選自由具有胺基的化合物及其鹽所組成之群組， 該化合物B選自由具有羰基的化合物及其鹽所組成之群組， 該化合物C選自由具有胺基及羰基的化合物及其鹽所組成之群組， 該化合物D’為選自由下列所組成之群組的1個以上的化合物：二甲基亞碸、二甲基碸、三甲基氧化膦、二甲氧基乙烷、N,N－二甲基甲醯胺、N,N－二甲基乙醯胺、四亞甲基亞碸、二乙基亞碸、甲醇、及甲基甲醯胺。
5. 如請求項4之製造方法，其中，該化合物D’為選自由二甲基亞碸、二甲基碸、及三甲基氧化膦所組成之群組的1個以上的化合物。
6. 如請求項4或5之製造方法，其中，該化合物D’為二甲基亞碸。
7. 如請求項1～6任一項之製造方法，其中，該化合物A為選自由以下述式（2）所示之化合物及其鹽所組成之群組的1個以上的化合物： ［式（2）中， R ¹及R ²各自獨立表示氫原子、烷基、烯基、炔基、環烷基、芳基、雜環基、或雜芳基，這些基團可被取代，R ¹及R ²至少一個為氫原子］。
8. 如請求項7之製造方法，其中，該式（2）中，R ¹為氫原子，R ²為烷基。
9. 如請求項7或8之製造方法，其中，該式（2）中，R ¹為氫原子，R ²為甲基或乙基。
10. 如請求項1～9任一項之製造方法，其中，該化合物B為選自由以下述式（3）所示之化合物及其鹽所組成之群組的1個以上的化合物： ［式（3）中， X表示碳原子， Y表示氫原子或以上述式（4）所示之基， n表示0以上2以下的整數， R ⁶表示氫原子、也可被取代的C ₁～C ₆烷基、也可被取代的C ₁～C ₆芳基、也可被取代的構成環的原子數為5以上12以下的雜芳基、含氮原子的基、或含氧原子的基， 式（4）中， 表示與X的鍵結點， m表示0以上6以下的整數， p為0或1， q為0或1， r為0或1， Z ¹表示也可被取代的伸烷基、或碳數1以上6以下含有醚鍵的基，當m為2以上的整數的情形時，複數個存在的Z ¹可相同也可不同， Z ²表示碳原子， R ³、R ⁴及R ⁵各自獨立表示氫原子、也可被取代的C ₁～C ₆烷基、也可被取代的C ₅～C ₁₂芳基、也可被取代的構成環的原子數為5以上12以下的雜芳基、含氮原子的基、或含氧原子的基， R ³、R ⁴及R ⁵之中的任二個以上也可互相連接與Z ²共同形成環結構，此等環結構可為環烷基、芳基、雜環基、或雜芳基，此等基可被取代， R ³、R ⁴及R ⁵也可與Z ²形成雙鍵或三鍵，當R ³、R ⁴及R ⁵的任一個經由雙鍵或三鍵與Z ²鍵結的情形時，p、q或r任一個以上為0］。
11. 如請求項10之製造方法，其中，該式（3）中，n為0，R ⁶為氫原子，Y表示C ₃～C ₈環烷基、或C ₆～C ₉芳烷基，該芳烷基也可被C ₁～C ₃烷基或鹵素所取代。
12. 如請求項10或11之製造方法，其中，該式（3）中，n為0，R ⁶為氫原子，Y為（2－氯苯基）乙基、苯甲基、或環戊基。
13. 如請求項1～12任一項之製造方法，其中，該步驟在適當的反應條件下進行。
14. 一種胜肽化合物的製造方法，包括下列步驟： （1）經由如請求項1～13任一項之製造方法，製造胺基酸之步驟；以及 （2）使該胺基酸與選自由其他胺基酸及其他胜肽所組成之群組的1者以上連接，製造胜肽化合物之步驟。
15. 一種還原胺化反應促進劑，如以下述式（1）所示，促進下列（i）或（ii）的反應： （i）化合物A與化合物B的分子間還原胺化反應，該化合物A選自由具有胺基的化合物及其鹽所組成之群組，化合物B選自由具有羰基的化合物及其鹽所組成之群組， （ii）化合物C的分子內還原胺化反應，該化合物C選自由具有胺基及羰基的化合物及其鹽所組成之群組， ［式（1）中， v及w各自獨立表示0或1， v及w之中的任一個以上表示1， T表示碳原子、磷原子、或硫原子， 以下述式（1a）所示之官能基表示＝O、－ORd或羥基， 當v及w皆為1的情形時，複數個存在的以式（1a）所示之2個官能基可相同也可不同， Ra、Rb及Rc各自獨立表示氫原子、C ₁～C ₃烷基、烷胺基、或－CH ₂－ORd， Ra、Rb及Rc之中的任二個以上可與T互相連接共同形成環結構， Rd表示C ₁～C ₃烷基， d、e及f各自獨立表示0或1， d、e及f之中的任一個以上表示1， 當v及w皆為1的情形時，Ra、Rb及Rc的任一個以上為甲基，Ra、Rb及Rc不互相連接、不與T形成環結構， 當Ra、Rb及Rc的任一個以上為甲胺基的情形時，Ra、Rb及Rc不互相連接、不與T形成環結構， 當以式（1a）所示之官能基為羥基、且T為碳原子的情形時， d、e及f皆為1，Ra、Rb及Rc皆為氫原子］。