TW202409275A - 用於抑制ｓｎｃａ表現之組合物及方法 - Google Patents
用於抑制ｓｎｃａ表現之組合物及方法 Download PDFInfo
- Publication number
- TW202409275A TW202409275A TW112117718A TW112117718A TW202409275A TW 202409275 A TW202409275 A TW 202409275A TW 112117718 A TW112117718 A TW 112117718A TW 112117718 A TW112117718 A TW 112117718A TW 202409275 A TW202409275 A TW 202409275A
- Authority
- TW
- Taiwan
- Prior art keywords
- seq
- nucleotides
- oligonucleotide
- antisense strand
- sense strand
- Prior art date
Links
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 title claims abstract description 221
- 101150110423 SNCA gene Proteins 0.000 title claims abstract description 178
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 81
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 60
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 title description 12
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 claims abstract description 838
- 230000008685 targeting Effects 0.000 claims abstract description 203
- 230000009368 gene silencing by RNA Effects 0.000 claims abstract description 187
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims abstract description 113
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 claims abstract description 57
- 239000003446 ligand Substances 0.000 claims abstract description 57
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims abstract description 56
- 150000002632 lipids Chemical group 0.000 claims abstract description 48
- 108091030071 RNAI Proteins 0.000 claims abstract 107
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 961
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 934
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 claims description 597
- 108091081021 Sense strand Proteins 0.000 claims description 510
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 claims description 360
- 101000834898 Homo sapiens Alpha-synuclein Proteins 0.000 claims description 311
- 102100026882 Alpha-synuclein Human genes 0.000 claims description 294
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 claims description 162
- 238000012986 modification Methods 0.000 claims description 122
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 121
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 claims description 115
- 230000004048 modification Effects 0.000 claims description 111
- OVRNDRQMDRJTHS-KEWYIRBNSA-N N-acetyl-D-galactosamine Chemical group CC(=O)N[C@H]1C(O)O[C@H](CO)[C@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-KEWYIRBNSA-N 0.000 claims description 83
- 125000000956 methoxy group Chemical group [H]C([H])([H])O* 0.000 claims description 65
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 60
- MBLBDJOUHNCFQT-UHFFFAOYSA-N N-acetyl-D-galactosamine Natural products CC(=O)NC(C=O)C(O)C(O)C(O)CO MBLBDJOUHNCFQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 53
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 48
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 48
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 claims description 48
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims description 47
- 210000000278 spinal cord Anatomy 0.000 claims description 46
- RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-K thiophosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=S RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 45
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 claims description 44
- 238000009472 formulation Methods 0.000 claims description 43
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 claims description 34
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 25
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 24
- NYHBQMYGNKIUIF-UUOKFMHZSA-N Guanosine Chemical compound C1=NC=2C(=O)NC(N)=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O NYHBQMYGNKIUIF-UUOKFMHZSA-N 0.000 claims description 23
- 239000002342 ribonucleoside Substances 0.000 claims description 23
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims description 22
- 125000002467 phosphate group Chemical class [H]OP(=O)(O[H])O[*] 0.000 claims description 22
- 210000001259 mesencephalon Anatomy 0.000 claims description 20
- 208000018737 Parkinson disease Diseases 0.000 claims description 18
- 208000001089 Multiple system atrophy Diseases 0.000 claims description 16
- 230000002490 cerebral effect Effects 0.000 claims description 15
- 210000005230 lumbar spinal cord Anatomy 0.000 claims description 14
- 210000002975 pon Anatomy 0.000 claims description 14
- 210000003523 substantia nigra Anatomy 0.000 claims description 14
- 210000000115 thoracic cavity Anatomy 0.000 claims description 14
- 210000001159 caudate nucleus Anatomy 0.000 claims description 11
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 10
- 210000004885 white matter Anatomy 0.000 claims description 10
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 9
- 210000000133 brain stem Anatomy 0.000 claims description 9
- 210000005153 frontal cortex Anatomy 0.000 claims description 9
- 210000002637 putamen Anatomy 0.000 claims description 9
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 claims description 8
- 210000001320 hippocampus Anatomy 0.000 claims description 8
- 230000001936 parietal effect Effects 0.000 claims description 8
- 230000002123 temporal effect Effects 0.000 claims description 8
- 210000001638 cerebellum Anatomy 0.000 claims description 7
- 210000001103 thalamus Anatomy 0.000 claims description 7
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 6
- 201000002832 Lewy body dementia Diseases 0.000 claims description 5
- 210000003198 cerebellar cortex Anatomy 0.000 claims description 5
- 210000003591 cerebellar nuclei Anatomy 0.000 claims description 5
- 210000000337 motor cortex Anatomy 0.000 claims description 5
- 239000002777 nucleoside Substances 0.000 claims description 5
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 5
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 206010067889 Dementia with Lewy bodies Diseases 0.000 claims description 4
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 claims description 4
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 claims description 4
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 claims description 4
- 210000001905 globus pallidus Anatomy 0.000 claims description 4
- 150000002337 glycosamines Chemical class 0.000 claims description 4
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 4
- 150000003212 purines Chemical class 0.000 claims description 4
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 claims description 4
- PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N Ribose Natural products OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N 0.000 claims description 3
- HMFHBZSHGGEWLO-UHFFFAOYSA-N alpha-D-Furanose-Ribose Natural products OCC1OC(O)C(O)C1O HMFHBZSHGGEWLO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- ZTWTYVWXUKTLCP-UHFFFAOYSA-L ethenyl-dioxido-oxo-$l^{5}-phosphane Chemical compound [O-]P([O-])(=O)C=C ZTWTYVWXUKTLCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 3
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims description 3
- 239000002213 purine nucleotide Substances 0.000 claims description 3
- -1 ribose Nucleoside Chemical class 0.000 claims description 3
- 125000000548 ribosyl group Chemical group C1([C@H](O)[C@H](O)[C@H](O1)CO)* 0.000 claims description 3
- OVRNDRQMDRJTHS-CBQIKETKSA-N N-Acetyl-D-Galactosamine Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@@H](O)O[C@H](CO)[C@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-CBQIKETKSA-N 0.000 claims description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 2
- 229940124447 delivery agent Drugs 0.000 claims description 2
- 125000001183 hydrocarbyl group Chemical group 0.000 claims 6
- 208000009829 Lewy Body Disease Diseases 0.000 claims 1
- 210000000746 body region Anatomy 0.000 claims 1
- 230000008602 contraction Effects 0.000 claims 1
- 229910052731 fluorine Inorganic materials 0.000 claims 1
- 239000011737 fluorine Substances 0.000 claims 1
- 150000003833 nucleoside derivatives Chemical class 0.000 claims 1
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 160
- 238000012228 RNA interference-mediated gene silencing Methods 0.000 description 80
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 46
- 239000002585 base Substances 0.000 description 39
- NPOJQCVWMSKXDN-UHFFFAOYSA-N Dacthal Chemical group COC(=O)C1=C(Cl)C(Cl)=C(C(=O)OC)C(Cl)=C1Cl NPOJQCVWMSKXDN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 34
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 description 33
- 150000002430 hydrocarbons Chemical group 0.000 description 33
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 28
- YIMATHOGWXZHFX-WCTZXXKLSA-N (2r,3r,4r,5r)-5-(hydroxymethyl)-3-(2-methoxyethoxy)oxolane-2,4-diol Chemical compound COCCO[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@H]1O YIMATHOGWXZHFX-WCTZXXKLSA-N 0.000 description 26
- 230000006870 function Effects 0.000 description 23
- 125000005647 linker group Chemical group 0.000 description 23
- 239000004055 small Interfering RNA Substances 0.000 description 20
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 19
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 18
- 238000012230 antisense oligonucleotides Methods 0.000 description 18
- 102000045354 human SNCA Human genes 0.000 description 18
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 18
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 17
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 17
- 239000000074 antisense oligonucleotide Substances 0.000 description 16
- 108020004459 Small interfering RNA Proteins 0.000 description 15
- UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N guanine Chemical compound O=C1NC(N)=NC2=C1N=CN2 UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 14
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 14
- 210000003594 spinal ganglia Anatomy 0.000 description 14
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 12
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 12
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 12
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 11
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 11
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 11
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 11
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 11
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 206010012812 Diffuse cutaneous mastocytosis Diseases 0.000 description 9
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 9
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 9
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 9
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 9
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 9
- 150000003013 phosphoric acid derivatives Chemical class 0.000 description 9
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 9
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 8
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 108091028664 Ribonucleotide Proteins 0.000 description 8
- 101150046432 Tril gene Proteins 0.000 description 8
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 8
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 8
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 8
- 239000002336 ribonucleotide Substances 0.000 description 8
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 8
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 7
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 7
- 239000005547 deoxyribonucleotide Substances 0.000 description 7
- 239000012044 organic layer Substances 0.000 description 7
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 7
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- SJRJJKPEHAURKC-UHFFFAOYSA-N N-Methylmorpholine Chemical compound CN1CCOCC1 SJRJJKPEHAURKC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 6
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 6
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 6
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 6
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 6
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 6
- 229930024421 Adenine Natural products 0.000 description 5
- GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N Adenine Chemical compound NC1=NC=NC2=C1N=CN2 GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 101150075175 Asgr1 gene Proteins 0.000 description 5
- 108700011259 MicroRNAs Proteins 0.000 description 5
- 108091027967 Small hairpin RNA Proteins 0.000 description 5
- ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N Uracil Chemical group O=C1C=CNC(=O)N1 ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- DHKHKXVYLBGOIT-UHFFFAOYSA-N acetaldehyde Diethyl Acetal Natural products CCOC(C)OCC DHKHKXVYLBGOIT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 229960000643 adenine Drugs 0.000 description 5
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 5
- 210000001175 cerebrospinal fluid Anatomy 0.000 description 5
- OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N cytosine Chemical group NC=1C=CNC(=O)N=1 OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 210000003494 hepatocyte Anatomy 0.000 description 5
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 5
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 5
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 5
- 239000002679 microRNA Substances 0.000 description 5
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 150000008300 phosphoramidites Chemical class 0.000 description 5
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 5
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 5
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 5
- 125000002652 ribonucleotide group Chemical group 0.000 description 5
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 5
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 5
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 4
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 4
- 238000011529 RT qPCR Methods 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 108700019146 Transgenes Proteins 0.000 description 4
- 150000001241 acetals Chemical class 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N acetic acid Substances CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 101150084233 ago2 gene Proteins 0.000 description 4
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 4
- 238000005251 capillar electrophoresis Methods 0.000 description 4
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 4
- 238000007385 chemical modification Methods 0.000 description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 4
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 4
- 125000002637 deoxyribonucleotide group Chemical group 0.000 description 4
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 4
- 235000019439 ethyl acetate Nutrition 0.000 description 4
- 238000003197 gene knockdown Methods 0.000 description 4
- 230000002045 lasting effect Effects 0.000 description 4
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 4
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 4
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 description 4
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 4
- RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N thymine Chemical group CC1=CNC(=O)NC1=O RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 4
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 3
- 241000282567 Macaca fascicularis Species 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- BZLVMXJERCGZMT-UHFFFAOYSA-N Methyl tert-butyl ether Chemical compound COC(C)(C)C BZLVMXJERCGZMT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 101100368521 Mus musculus Snca gene Proteins 0.000 description 3
- IMNFDUFMRHMDMM-UHFFFAOYSA-N N-Heptane Chemical compound CCCCCCC IMNFDUFMRHMDMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 101710163270 Nuclease Proteins 0.000 description 3
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000000574 RNA-Induced Silencing Complex Human genes 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 3
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 3
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000012267 brine Substances 0.000 description 3
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 3
- 238000000423 cell based assay Methods 0.000 description 3
- 208000015114 central nervous system disease Diseases 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 3
- 229940104302 cytosine Drugs 0.000 description 3
- 238000013461 design Methods 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 125000005842 heteroatom Chemical group 0.000 description 3
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 3
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 3
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 3
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 3
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 3
- 125000003835 nucleoside group Chemical group 0.000 description 3
- 210000004248 oligodendroglia Anatomy 0.000 description 3
- 238000002515 oligonucleotide synthesis Methods 0.000 description 3
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 3
- 150000004713 phosphodiesters Chemical class 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 3
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 3
- HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M sodium;chloride;hydrate Chemical compound O.[Na+].[Cl-] HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 241000894007 species Species 0.000 description 3
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 3
- 229940035893 uracil Drugs 0.000 description 3
- 210000005166 vasculature Anatomy 0.000 description 3
- VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 4-Dimethylaminopyridine Chemical compound CN(C)C1=CC=NC=C1 VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091023037 Aptamer Proteins 0.000 description 2
- 108010002913 Asialoglycoproteins Proteins 0.000 description 2
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 2
- HMFHBZSHGGEWLO-SOOFDHNKSA-N D-ribofuranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H]1O HMFHBZSHGGEWLO-SOOFDHNKSA-N 0.000 description 2
- VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N Fumaric acid Chemical compound OC(=O)\C=C\C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N 0.000 description 2
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 2
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 2
- 101001024703 Homo sapiens Nck-associated protein 5 Proteins 0.000 description 2
- 101000600434 Homo sapiens Putative uncharacterized protein encoded by MIR7-3HG Proteins 0.000 description 2
- 101100368517 Homo sapiens SNCA gene Proteins 0.000 description 2
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 2
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 2
- LQZMLBORDGWNPD-UHFFFAOYSA-N N-iodosuccinimide Chemical compound IN1C(=O)CCC1=O LQZMLBORDGWNPD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 2
- 102100036946 Nck-associated protein 5 Human genes 0.000 description 2
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 102100032983 Phospholipase D2 Human genes 0.000 description 2
- 102000004160 Phosphoric Monoester Hydrolases Human genes 0.000 description 2
- 108090000608 Phosphoric Monoester Hydrolases Proteins 0.000 description 2
- 102100037401 Putative uncharacterized protein encoded by MIR7-3HG Human genes 0.000 description 2
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010016790 RNA-Induced Silencing Complex Proteins 0.000 description 2
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DRTQHJPVMGBUCF-XVFCMESISA-N Uridine Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C=C1 DRTQHJPVMGBUCF-XVFCMESISA-N 0.000 description 2
- ZEEBGORNQSEQBE-UHFFFAOYSA-N [2-(3-phenylphenoxy)-6-(trifluoromethyl)pyridin-4-yl]methanamine Chemical compound C1(=CC(=CC=C1)OC1=NC(=CC(=C1)CN)C(F)(F)F)C1=CC=CC=C1 ZEEBGORNQSEQBE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- REAYFGLASQTHKB-UHFFFAOYSA-N [2-[3-(1H-pyrazol-4-yl)phenoxy]-6-(trifluoromethyl)pyridin-4-yl]methanamine Chemical compound N1N=CC(=C1)C=1C=C(OC2=NC(=CC(=C2)CN)C(F)(F)F)C=CC=1 REAYFGLASQTHKB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- SAHIZENKTPRYSN-UHFFFAOYSA-N [2-[3-(phenoxymethyl)phenoxy]-6-(trifluoromethyl)pyridin-4-yl]methanamine Chemical compound O(C1=CC=CC=C1)CC=1C=C(OC2=NC(=CC(=C2)CN)C(F)(F)F)C=CC=1 SAHIZENKTPRYSN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N alpha-D-galactose Chemical group OC[C@H]1O[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N 0.000 description 2
- 239000002214 arabinonucleotide Substances 0.000 description 2
- 125000004429 atom Chemical group 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 210000005013 brain tissue Anatomy 0.000 description 2
- 239000008366 buffered solution Substances 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 2
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 2
- 230000007515 enzymatic degradation Effects 0.000 description 2
- 125000001301 ethoxy group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])O* 0.000 description 2
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 2
- 238000003818 flash chromatography Methods 0.000 description 2
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 description 2
- 125000000623 heterocyclic group Chemical group 0.000 description 2
- FUZZWVXGSFPDMH-UHFFFAOYSA-N hexanoic acid Chemical compound CCCCCC(O)=O FUZZWVXGSFPDMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 2
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 description 2
- 238000007913 intrathecal administration Methods 0.000 description 2
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 2
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 2
- 230000004576 lipid-binding Effects 0.000 description 2
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 2
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 2
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 2
- 239000002808 molecular sieve Substances 0.000 description 2
- 230000003957 neurotransmitter release Effects 0.000 description 2
- 125000004433 nitrogen atom Chemical group N* 0.000 description 2
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 2
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 2
- 125000004430 oxygen atom Chemical group O* 0.000 description 2
- 150000002972 pentoses Chemical class 0.000 description 2
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- 108010002267 phospholipase D2 Proteins 0.000 description 2
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 2
- 229920005862 polyol Polymers 0.000 description 2
- 150000003077 polyols Chemical class 0.000 description 2
- SCVFZCLFOSHCOH-UHFFFAOYSA-M potassium acetate Chemical compound [K+].CC([O-])=O SCVFZCLFOSHCOH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 150000003230 pyrimidines Chemical class 0.000 description 2
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 2
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 2
- URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N sodium aluminosilicate Chemical compound [Na+].[Al+3].[O-][Si]([O-])=O.[O-][Si]([O-])=O URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 229940113082 thymine Drugs 0.000 description 2
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 2
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 2
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 2
- YCESYCIZPBRSAM-FNCVBFRFSA-N (2r,3s,4r,5r)-2-(hydroxymethyl)-5-(3-nitropyrrol-1-yl)oxolane-3,4-diol Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C=C([N+]([O-])=O)C=C1 YCESYCIZPBRSAM-FNCVBFRFSA-N 0.000 description 1
- AKLBZDKCJSROBD-FDYHWXHSSA-N (2r,3s,4r,5r)-2-(hydroxymethyl)-5-(5-nitroindol-1-yl)oxolane-3,4-diol Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C2=CC=C([N+]([O-])=O)C=C2C=C1 AKLBZDKCJSROBD-FDYHWXHSSA-N 0.000 description 1
- MGRVRXRGTBOSHW-UHFFFAOYSA-N (aminomethyl)phosphonic acid Chemical compound NCP(O)(O)=O MGRVRXRGTBOSHW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JBWYRBLDOOOJEU-UHFFFAOYSA-N 1-[chloro-(4-methoxyphenyl)-phenylmethyl]-4-methoxybenzene Chemical compound C1=CC(OC)=CC=C1C(Cl)(C=1C=CC(OC)=CC=1)C1=CC=CC=C1 JBWYRBLDOOOJEU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ASJSAQIRZKANQN-CRCLSJGQSA-N 2-deoxy-D-ribose Chemical class OC[C@@H](O)[C@@H](O)CC=O ASJSAQIRZKANQN-CRCLSJGQSA-N 0.000 description 1
- JWUJQDFVADABEY-UHFFFAOYSA-N 2-methyltetrahydrofuran Chemical compound CC1CCCO1 JWUJQDFVADABEY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960000549 4-dimethylaminophenol Drugs 0.000 description 1
- DEXFNLNNUZKHNO-UHFFFAOYSA-N 6-[3-[4-[2-(2,3-dihydro-1H-inden-2-ylamino)pyrimidin-5-yl]piperidin-1-yl]-3-oxopropyl]-3H-1,3-benzoxazol-2-one Chemical compound C1C(CC2=CC=CC=C12)NC1=NC=C(C=N1)C1CCN(CC1)C(CCC1=CC2=C(NC(O2)=O)C=C1)=O DEXFNLNNUZKHNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100021308 60S ribosomal protein L23 Human genes 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- IYMAXBFPHPZYIK-BQBZGAKWSA-N Arg-Gly-Asp Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O IYMAXBFPHPZYIK-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- 102000008682 Argonaute Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010088141 Argonaute Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000005427 Asialoglycoprotein Receptor Human genes 0.000 description 1
- 102100026292 Asialoglycoprotein receptor 1 Human genes 0.000 description 1
- 101710200897 Asialoglycoprotein receptor 1 Proteins 0.000 description 1
- 102100026293 Asialoglycoprotein receptor 2 Human genes 0.000 description 1
- 101710200901 Asialoglycoprotein receptor 2 Proteins 0.000 description 1
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 208000014644 Brain disease Diseases 0.000 description 1
- 108090000342 C-Type Lectins Proteins 0.000 description 1
- 102000003930 C-Type Lectins Human genes 0.000 description 1
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 102000053642 Catalytic RNA Human genes 0.000 description 1
- 241000700198 Cavia Species 0.000 description 1
- 108010001857 Cell Surface Receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000000844 Cell Surface Receptors Human genes 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- VPAXJOUATWLOPR-UHFFFAOYSA-N Conferone Chemical compound C1=CC(=O)OC2=CC(OCC3C4(C)CCC(=O)C(C)(C)C4CC=C3C)=CC=C21 VPAXJOUATWLOPR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 1
- 241000702421 Dependoparvovirus Species 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 1
- VGGSQFUCUMXWEO-UHFFFAOYSA-N Ethene Chemical compound C=C VGGSQFUCUMXWEO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005977 Ethylene Substances 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 101000941893 Felis catus Leucine-rich repeat and calponin homology domain-containing protein 1 Proteins 0.000 description 1
- 229920001917 Ficoll Polymers 0.000 description 1
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-M Formate Chemical compound [O-]C=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 102100031181 Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Human genes 0.000 description 1
- 239000007821 HATU Substances 0.000 description 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 1
- 101000675833 Homo sapiens 60S ribosomal protein L23 Proteins 0.000 description 1
- 101000780643 Homo sapiens Protein argonaute-2 Proteins 0.000 description 1
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 1
- UGQMRVRMYYASKQ-KQYNXXCUSA-N Inosine Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C2=NC=NC(O)=C2N=C1 UGQMRVRMYYASKQ-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 1
- 229930010555 Inosine Natural products 0.000 description 1
- 108010063045 Lactoferrin Proteins 0.000 description 1
- 102000010445 Lactoferrin Human genes 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N Malonic acid Chemical compound OC(=O)CC(O)=O OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091027974 Mature messenger RNA Proteins 0.000 description 1
- 108010006519 Molecular Chaperones Proteins 0.000 description 1
- 102000005431 Molecular Chaperones Human genes 0.000 description 1
- VHWBWHBJEXGPNM-UHFFFAOYSA-N N(2)-(2,4-dichlorophenyl)-N-(7-{[(2,4-dichlorophenyl)amino]sulfonyl}-1-oxo-1,2-dihydronaphthalen-2-yl)glycinamide Chemical compound ClC1=CC(Cl)=CC=C1NCC(=O)NC1C(=O)C2=CC(S(=O)(=O)NC=3C(=CC(Cl)=CC=3)Cl)=CC=C2C=C1 VHWBWHBJEXGPNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000012902 Nervous system disease Diseases 0.000 description 1
- 208000025966 Neurological disease Diseases 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- ABLZXFCXXLZCGV-UHFFFAOYSA-N Phosphorous acid Chemical class OP(O)=O ABLZXFCXXLZCGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 108010039918 Polylysine Proteins 0.000 description 1
- 229920002685 Polyoxyl 35CastorOil Polymers 0.000 description 1
- 102100034207 Protein argonaute-2 Human genes 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 102000000583 SNARE Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010041948 SNARE Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000700584 Simplexvirus Species 0.000 description 1
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical class [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 1
- 102000004338 Transferrin Human genes 0.000 description 1
- 108090000901 Transferrin Proteins 0.000 description 1
- 102000007238 Transferrin Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010033576 Transferrin Receptors Proteins 0.000 description 1
- 241000700618 Vaccinia virus Species 0.000 description 1
- ABRVLXLNVJHDRQ-UHFFFAOYSA-N [2-pyridin-3-yl-6-(trifluoromethyl)pyridin-4-yl]methanamine Chemical compound FC(C1=CC(=CC(=N1)C=1C=NC=CC=1)CN)(F)F ABRVLXLNVJHDRQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HMNZFMSWFCAGGW-XPWSMXQVSA-N [3-[hydroxy(2-hydroxyethoxy)phosphoryl]oxy-2-[(e)-octadec-9-enoyl]oxypropyl] (e)-octadec-9-enoate Chemical compound CCCCCCCC\C=C\CCCCCCCC(=O)OCC(COP(O)(=O)OCCO)OC(=O)CCCCCCC\C=C\CCCCCCCC HMNZFMSWFCAGGW-XPWSMXQVSA-N 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 125000002015 acyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 230000003044 adaptive effect Effects 0.000 description 1
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 1
- 229910001854 alkali hydroxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000008044 alkali metal hydroxides Chemical class 0.000 description 1
- 108090000185 alpha-Synuclein Proteins 0.000 description 1
- 125000004202 aminomethyl group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 230000003466 anti-cipated effect Effects 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 108010072041 arginyl-glycyl-aspartic acid Proteins 0.000 description 1
- 108010006523 asialoglycoprotein receptor Proteins 0.000 description 1
- 230000003385 bacteriostatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000013542 behavioral therapy Methods 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DRTQHJPVMGBUCF-PSQAKQOGSA-N beta-L-uridine Natural products O[C@H]1[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@@H]1N1C(=O)NC(=O)C=C1 DRTQHJPVMGBUCF-PSQAKQOGSA-N 0.000 description 1
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 239000000090 biomarker Substances 0.000 description 1
- 101150006308 botA gene Proteins 0.000 description 1
- 210000004958 brain cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 210000000234 capsid Anatomy 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000004700 cellular uptake Effects 0.000 description 1
- 235000013330 chicken meat Nutrition 0.000 description 1
- 230000019771 cognition Effects 0.000 description 1
- 239000000084 colloidal system Substances 0.000 description 1
- JECGPMYZUFFYJW-UHFFFAOYSA-N conferone Natural products CC1=CCC2C(C)(C)C(=O)CCC2(C)C1COc3cccc4C=CC(=O)Oc34 JECGPMYZUFFYJW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001268 conjugating effect Effects 0.000 description 1
- 239000013058 crude material Substances 0.000 description 1
- 108010092769 cysteinyl-arginyl-glutamyl-lysyl-alanyl Proteins 0.000 description 1
- 238000005034 decoration Methods 0.000 description 1
- 238000002716 delivery method Methods 0.000 description 1
- 238000003795 desorption Methods 0.000 description 1
- 230000001687 destabilization Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- NAGJZTKCGNOGPW-UHFFFAOYSA-K dioxido-sulfanylidene-sulfido-$l^{5}-phosphane Chemical compound [O-]P([O-])([S-])=S NAGJZTKCGNOGPW-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L dipotassium hydrogen phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000396 dipotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019797 dipotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000002612 dispersion medium Substances 0.000 description 1
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 230000002183 duodenal effect Effects 0.000 description 1
- 230000005684 electric field Effects 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 230000008451 emotion Effects 0.000 description 1
- 210000001163 endosome Anatomy 0.000 description 1
- 102000052116 epidermal growth factor receptor activity proteins Human genes 0.000 description 1
- 108700015053 epidermal growth factor receptor activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 230000005713 exacerbation Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000013613 expression plasmid Substances 0.000 description 1
- 239000003889 eye drop Substances 0.000 description 1
- 229940012356 eye drops Drugs 0.000 description 1
- 230000004438 eyesight Effects 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 239000001530 fumaric acid Substances 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 108020004445 glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 1
- QQHJDPROMQRDLA-UHFFFAOYSA-N hexadecanedioic acid Chemical compound OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC(O)=O QQHJDPROMQRDLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000005965 immune activity Effects 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 229960003786 inosine Drugs 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 239000000543 intermediate Substances 0.000 description 1
- 238000001361 intraarterial administration Methods 0.000 description 1
- 238000000185 intracerebroventricular administration Methods 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 1
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 238000007914 intraventricular administration Methods 0.000 description 1
- 230000002427 irreversible effect Effects 0.000 description 1
- 239000007951 isotonicity adjuster Substances 0.000 description 1
- CSSYQJWUGATIHM-IKGCZBKSSA-N l-phenylalanyl-l-lysyl-l-cysteinyl-l-arginyl-l-arginyl-l-tryptophyl-l-glutaminyl-l-tryptophyl-l-arginyl-l-methionyl-l-lysyl-l-lysyl-l-leucylglycyl-l-alanyl-l-prolyl-l-seryl-l-isoleucyl-l-threonyl-l-cysteinyl-l-valyl-l-arginyl-l-arginyl-l-alanyl-l-phenylal Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 CSSYQJWUGATIHM-IKGCZBKSSA-N 0.000 description 1
- 229940078795 lactoferrin Drugs 0.000 description 1
- 235000021242 lactoferrin Nutrition 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 230000008449 language Effects 0.000 description 1
- 238000001638 lipofection Methods 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 210000005229 liver cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000005228 liver tissue Anatomy 0.000 description 1
- 244000144972 livestock Species 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 238000002483 medication Methods 0.000 description 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 1
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 1
- 230000008172 membrane trafficking Effects 0.000 description 1
- 239000011859 microparticle Substances 0.000 description 1
- 239000004005 microsphere Substances 0.000 description 1
- 239000002480 mineral oil Substances 0.000 description 1
- 235000010446 mineral oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000002991 molded plastic Substances 0.000 description 1
- VYQNWZOUAUKGHI-UHFFFAOYSA-N monobenzone Chemical compound C1=CC(O)=CC=C1OCC1=CC=CC=C1 VYQNWZOUAUKGHI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- YOHYSYJDKVYCJI-UHFFFAOYSA-N n-[3-[[6-[3-(trifluoromethyl)anilino]pyrimidin-4-yl]amino]phenyl]cyclopropanecarboxamide Chemical compound FC(F)(F)C1=CC=CC(NC=2N=CN=C(NC=3C=C(NC(=O)C4CC4)C=CC=3)C=2)=C1 YOHYSYJDKVYCJI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FEHUTHGOLLQBNW-UHFFFAOYSA-N n-[chloro-[di(propan-2-yl)amino]phosphanyl]-n-propan-2-ylpropan-2-amine Chemical compound CC(C)N(C(C)C)P(Cl)N(C(C)C)C(C)C FEHUTHGOLLQBNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002077 nanosphere Substances 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012299 nitrogen atmosphere Substances 0.000 description 1
- QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N nitrogen group Chemical group [N] QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000002220 organoid Anatomy 0.000 description 1
- QUANRIQJNFHVEU-UHFFFAOYSA-N oxirane;propane-1,2,3-triol Chemical compound C1CO1.OCC(O)CO QUANRIQJNFHVEU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- UEZVMMHDMIWARA-UHFFFAOYSA-M phosphonate Chemical compound [O-]P(=O)=O UEZVMMHDMIWARA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 239000008389 polyethoxylated castor oil Substances 0.000 description 1
- 229920000656 polylysine Polymers 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 1
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 1
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 1
- 235000011056 potassium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- MWBOOFOIEFTTHB-UHFFFAOYSA-N propylphosphonous acid Chemical compound CCCP(O)O MWBOOFOIEFTTHB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 1
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002719 pyrimidine nucleotide Substances 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 239000012146 running buffer Substances 0.000 description 1
- 238000007423 screening assay Methods 0.000 description 1
- 239000002002 slurry Substances 0.000 description 1
- 229940126586 small molecule drug Drugs 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- QGMRQYFBGABWDR-UHFFFAOYSA-N sodium;5-ethyl-5-pentan-2-yl-1,3-diazinane-2,4,6-trione Chemical compound [Na+].CCCC(C)C1(CC)C(=O)NC(=O)NC1=O QGMRQYFBGABWDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000004434 sulfur atom Chemical group 0.000 description 1
- 210000000225 synapse Anatomy 0.000 description 1
- 230000000946 synaptic effect Effects 0.000 description 1
- 230000008625 synaptic signaling Effects 0.000 description 1
- 210000002504 synaptic vesicle Anatomy 0.000 description 1
- 230000021966 synaptic vesicle transport Effects 0.000 description 1
- 150000003536 tetrazoles Chemical class 0.000 description 1
- 238000011285 therapeutic regimen Methods 0.000 description 1
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 description 1
- 125000004055 thiomethyl group Chemical group [H]SC([H])([H])* 0.000 description 1
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N trans-butenedioic acid Natural products OC(=O)C=CC(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012581 transferrin Substances 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- 238000011269 treatment regimen Methods 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- ITMCEJHCFYSIIV-UHFFFAOYSA-N triflic acid Chemical compound OS(=O)(=O)C(F)(F)F ITMCEJHCFYSIIV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 1
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 1
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 1
- DRTQHJPVMGBUCF-UHFFFAOYSA-N uracil arabinoside Natural products OC1C(O)C(CO)OC1N1C(=O)NC(=O)C=C1 DRTQHJPVMGBUCF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940045145 uridine Drugs 0.000 description 1
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 1
- 230000028973 vesicle-mediated transport Effects 0.000 description 1
- 230000036642 wellbeing Effects 0.000 description 1
Abstract
本文提供抑制SNCA基因表現之寡核苷酸(例如，RNAi寡核苷酸)，包括結合至靶向配位體(例如，GalNAC部分或脂質部分)之寡核苷酸。亦提供包含該等寡核苷酸之組合物及其用途，具體而言涉及治療與SNCA基因表現相關之疾病、病症及/或疾患之用途。
Description
本揭示案概言之係關於生物學及醫學，且更具體而言本揭示案係關於用於抑制或降低(亦即，調節)α-突觸核蛋白(SNCA)基因表現之寡核苷酸及包含該等寡核苷酸之組合物，以及其用於治療與SNCA基因表現相關之疾病及病症之用途。
突觸為細胞之間的功能區室，其中資訊自腦中之一個細胞傳送至另一個細胞。SNCA為主要存在於腦中之蛋白質，其調控突觸囊泡運輸及神經遞質釋放。在其他功能中，SNCA充當分子伴侶以協助摺疊突觸融合組分(例如，SNARE)。SNCA中改變SNCA功能及表現之突變(例如，插入及錯配)或SNCA之一般異常表現為影響CNS之若干疾病(例如，帕金森氏病(Parkinson's disease)及多系統萎縮)之已知原因。需要靶向SNCA基因以預防此類疾病之策略。
哺乳動物CNS為協同相互作用以實現多種功能之組織(包括細胞)、流體及化學物質之複雜系統，該等功能包括運動、導航、認知、語言、視覺及情感。不幸地，已知有多種CNS疾病及病症(例如，神經病症)且影響或破壞此等功能中之一些或全部。典型地，對CNS疾病及病症之治療一直限於小分子藥物、抗體及/或適應療法或行為療法。持續需要開發與不當基因表現相關之CNS疾病及病症之治療。
為滿足此需要，本揭示案描述用於治療與SNCA基因表現相關之疾
病、病症或疾患之組合物及方法。本揭示案至少部分基於發現有效靶向及降低CNS組織中之SNCA基因表現之RNAi寡核苷酸。具體而言，鑑定SNCA mRNA內之靶序列，且產生結合至此等靶序列並抑制SNCA mRNA表現之寡核苷酸。如本文所證明，寡核苷酸抑制CNS組織中之人類及非人類靈長類動物(NHP)SNCA基因表現。此外，在與帕金森氏病或多系統萎縮相關之CNS組織中，脂質結合之SNCA靶向寡核苷酸降低SNCA mRNA表現。不受理論約束，本文所述之寡核苷酸可用於治療與SNCA基因表現相關之疾病、病症或疾患。
因此，在一些態樣中，本揭示案提供一種用於降低SNCA基因表現之RNAi寡核苷酸，該寡核苷酸包含有義股及反義股，其中該有義股及該反義股形成雙鏈體區域，其中該反義股包含SEQ ID NO：1683-2066中之任一者之SNCA mRNA靶序列的互補區域，且其中該互補區域之長度為至少約15個連續核苷酸。
在前述或相關態樣中之任一者中，有義股之長度為約15至約50個核苷酸。在一些態樣中，有義股之長度為約18至約36個核苷酸。在一些態樣中，反義股之長度為約15至約30個核苷酸。在一些態樣中，反義股之長度為22個核苷酸，且反義股及有義股形成雙鏈體區域，該雙鏈體區域之長度為至少19個核苷酸，視情況長度為至少20個核苷酸。在一些態樣中，互補區域之長度為至少19個連續核苷酸。在一些態樣中，互補區域之長度為至少20個連續核苷酸。
在其他態樣中，本揭示案提供一種用於降低SNCA基因表現之雙股(ds)RNAi寡核苷酸，該寡核苷酸包含：(i)長度為19-30個核苷酸之反義股，其中該反義股包含含有SNCA mRNA靶序列之互補區域的核苷酸序列，其中該互補區域係選自SEQ ID NO：2067-2450，及
(ii)長度為19-50個核苷酸之有義股，該有義股包含該反義股之互補區域，其中該反義股及該有義股為形成不對稱雙鏈體區域之獨立股，該雙鏈體區域在反義股之3'末端具有1-4個核苷酸之懸垂。
在一些態樣中，有義股之3'端包含如S1-L-S2所示之莖環，其中S1與S2互補，且其中L在S1與S2之間形成長度為3-5個核苷酸之環。在一些態樣中，L為三環或四環。在一些態樣中，L為四環。在一些態樣中，四環包含序列5'-GAAA-3'。在一些態樣中，S1及S2之長度為1-10個核苷酸且具有相同長度。在一些態樣中，S1及S2之長度為1個核苷酸、2個核苷酸、3個核苷酸、4個核苷酸、5個核苷酸、6個核苷酸、7個核苷酸、8個核苷酸、9個核苷酸或10個核苷酸。在一些態樣中，S1及S2之長度為6個核苷酸。在一些態樣中，莖環包含序列5'-GCAGCCGAAAGGCUGC-3'(SEQ ID NO：1680)。
在其他態樣中，寡核苷酸包含鈍端。在一些態樣中，鈍端包含有義股之3'端。在一些態樣中，有義股為20至22個核苷酸。在一些態樣中，有義股為20個核苷酸。
在前述或相關態樣中之任一者中，反義股包含長度為一或多個核苷酸之3'懸垂序列。在一些態樣中，懸垂包含嘌呤核苷酸。在一些態樣中，3'懸垂序列之長度為2個核苷酸。在一些態樣中，3'懸垂係選自AA、GG、AG及GA。在一些態樣中，懸垂為GG或AA。在一些態樣中，懸垂為GG。
在前述或相關態樣中之任一者中，寡核苷酸包含至少一個經修飾之核苷酸。在一些態樣中，經修飾之核苷酸包含2'-修飾。在一些態樣中，2'-修飾為選自2'-胺基乙基、2'-氟(2'-F)、2'-O-甲基(2'-OMe)、2'-O-甲氧基乙基及2'-去氧-2'-氟-β-d-阿拉伯糖核酸之修飾。在一些態樣中，修飾為選自2'-F及2'-OMe之2'-修飾。在一些態樣中，有義股之約18%至約23%或18%、19%、20%、21%、22%或23%之核苷酸包含2'-F修飾。在一些態樣中，有義股之約38-43%、38%、
39%、40%、41%、42%或43%之核苷酸包含2'-F修飾。在一些態樣中，反義股之約25%至約35%或25%、26%、27%、28%、29%、30%、31%、32%、33%、34%或35%之核苷酸包含2'-F修飾。在一些態樣中，寡核苷酸之約25%至約35%或25%、26%、27%、28%、29%、30%、31%、32%、33%、34%或35%之核苷酸包含2'-F修飾。在一些態樣中，寡核苷酸之約35%至約45%或35%、36%、37%、38%、39%、40%、41%、42%、43%、44%或45%之核苷酸包含2'-F修飾。在一些態樣中，有義股自5'至3'在位置1-36處包含36個核苷酸，其中位置3、5、8、10、12、13、15及17中之每一者包含2'-F修飾。在一些態樣中，有義股自5'至3'在位置1-20處包含20個核苷酸，其中位置3、5、8、10、12、13、15及17中之每一者包含2'-F修飾。在一些態樣中，反義股自5'至3'在位置1-22處包含22個核苷酸，且其中位置2、3、4、5、7、10、14、16及19中之每一者包含2'-F修飾。在一些態樣中，其餘核苷酸包含2'-OMe修飾。
在前述或相關態樣中之任一者中，寡核苷酸包含至少一個經修飾之核苷酸間鍵聯。在一些態樣中，至少一個經修飾之核苷酸間鍵聯為硫代磷酸酯鍵聯。在一些態樣中，反義股在以下位置包含硫代磷酸酯鍵聯：(i)在位置1與2之間及位置2與3之間；或(ii)在位置1與2之間、位置2與3之間及位置3與4之間，其中位置自5'至3'編號為1-4。在一些態樣中，反義股之長度為22個核苷酸，且反義股在位置20與21之間及位置21與22之間包含硫代磷酸酯鍵聯，其中位置自5'至3'編號為1-22。在一些態樣中，有義股在位置1與2之間包含硫代磷酸酯鍵聯，其中位置自5'至3'編號為1-2。在一些態樣中，有義股之長度為20個核苷酸，且有義股在位置1與2之間、位置18與19之間及位置19與20之間包含硫代磷酸酯鍵聯，其中位置自5'至3'編號為1-20。
在前述或相關態樣中之任一者中，反義股之5'-核苷酸之糖的4'-碳包含磷酸酯類似物。在一些態樣中，磷酸酯類似物為氧甲基膦酸酯、乙烯基膦酸酯
或丙二醯基膦酸酯，視情況其中該磷酸酯類似物為包含4'-氧甲基膦酸酯之4'-磷酸酯類似物。
在前述或相關態樣中之任一者中，寡核苷酸之至少一個核苷酸結合至一或多個靶向配位體。在一些態樣中，各靶向配位體包含碳水化合物、胺基糖、脂質、膽固醇或多肽。在一些態樣中，莖環包含結合至莖環之一或多個核苷酸的一或多個靶向配位體。在一些態樣中，一或多個靶向配位體結合至環之一或多個核苷酸。在一些態樣中，環包含自5'至3'編號為1-4之4個核苷酸，其中位置2、3及4處之核苷酸各自包含一或多個靶向配位體，其中該等靶向配位體相同或不同。在一些態樣中，各靶向配位體包含N-乙醯半乳糖胺(GalNAc)部分。在一些態樣中，GalNAc部分為單價GalNAc部分、二價GalNAc部分、三價GalNAc部分或四價GalNAc部分。在一些態樣中，莖環之L的至多4個核苷酸各自結合至單價GalNAc部分。
在其他態樣中，一或多個靶向配位體為脂質部分。在一些態樣中，脂質部分結合至有義股之5'末端核苷酸。在一些態樣中，脂質部分為烴鏈。在一些態樣中，烴鏈為C8-C30烴鏈。在一些態樣中，烴鏈為C16烴鏈。在一些態樣中，C16烴鏈由以下表示：
。在一些態樣中，脂質部分結合至5'末端核苷酸之核糖環的2'碳。
在前述或相關態樣中之任一者中，互補區域在反義股之核苷酸位置2-8處與SNCA mRNA靶序列完全互補，其中核苷酸位置自5'至3'編號。在一些態樣中，互補區域在反義股之核苷酸位置2-11處與SNCA mRNA靶序列完全互補，其中核苷酸位置自5'至3'編號。
在前述或相關態樣中之任一者中，有義股包含SEQ ID NO：1537-1571
及1681中之任一者之核苷酸序列。在一些態樣中，反義股包含SEQ ID NO：1572-1606中之任一者之核苷酸序列。在一些態樣中，有義股及反義股包含選自由以下組成之群的核苷酸序列：a)分別為SEQ ID NO：1537及1572；b)分別為SEQ ID NO：1538及1573；c)分別為SEQ ID NO：1539及1574；d)分別為SEQ ID NO：1540及1575；e)分別為SEQ ID NO：1541及1576；f)分別為SEQ ID NO：1542及1577；g)分別為SEQ ID NO：1543及1578；h)分別為SEQ ID NO：1544及1579；i)分別為SEQ ID NO：1545及1580；j)分別為SEQ ID NO：1546及1581；k)分別為SEQ ID NO：1547及1582；l)分別為SEQ ID NO：1548及1583；m)分別為SEQ ID NO：1549及1584；n)分別為SEQ ID NO：1550及1585；o)分別為SEQ ID NO：1551及1586；p)分別為SEQ ID NO：1552及1587；q)分別為SEQ ID NO：1553及1588；r)分別為SEQ ID NO：1554及1589；s)分別為SEQ ID NO：1555及1590；t)分別為SEQ ID NO：1556及1591；u)分別為SEQ ID NO：1557及1592；
v)分別為SEQ ID NO：1558及1593；w)分別為SEQ ID NO：1559及1594；x)分別為SEQ ID NO：1560及1595；y)分別為SEQ ID NO：1561及1596；z)分別為SEQ ID NO：1562及1597；aa)分別為SEQ ID NO：1563及1598；bb)分別為SEQ ID NO：1564及1599；cc)分別為SEQ ID NO：1565及1600；dd)分別為SEQ ID NO：1566及1601；ee)分別為SEQ ID NO：1567及1602；ff)分別為SEQ ID NO：1568及1603；gg)分別為SEQ ID NO：1569及1604；hh)分別為SEQ ID NO：1570及1605；ii)分別為SEQ ID NO：1571及1606；及jj)分別為SEQ ID NO：1681及1586。
在一些態樣中，有義股及反義股包含選自由以下組成之群的核苷酸序列：a)分別為SEQ ID NO：1540及1575；b)分別為SEQ ID NO：1544及1579；c)分別為SEQ ID NO：1546及1581；d)分別為SEQ ID NO：1551及1586；e)分別為SEQ ID NO：1552及1587；f)分別為SEQ ID NO：1553及1588；g)分別為SEQ ID NO：1558及1594；
h)分別為SEQ ID NO：1560及1595；i)分別為SEQ ID NO：1564及1599；j)分別為SEQ ID NO：1565及1600；k)分別為SEQ ID NO：1566及1601；l)分別為SEQ ID NO：1570及1605；及m)分別為SEQ ID NO：1681及1586。
在一些態樣中，有義股及反義股包含選自由以下組成之群的核苷酸序列：a)分別為SEQ ID NO：1553及1588；b)分別為SEQ ID NO：1560及1595；c)分別為SEQ ID NO：1564及1599；d)分別為SEQ ID NO：1551及1586；e)分別為SEQ ID NO：1570及1605；及f)分別為SEQ ID NO：1681及1586。
在一些態樣中，有義股包含如SEQ ID NO：1553所示之核苷酸序列，且反義股包含如SEQ ID NO：1588所示之核苷酸序列。在一些態樣中，有義股包含如SEQ ID NO：1560所示之核苷酸序列，且反義股包含如SEQ ID NO：1595所示之核苷酸序列。在一些態樣中，有義股包含如SEQ ID NO：1564所示之核苷酸序列，且反義股包含如SEQ ID NO：1599所示之核苷酸序列。在一些態樣中，有義股包含如SEQ ID NO：1551所示之核苷酸序列，且反義股包含如SEQ ID NO：1586所示之核苷酸序列。在一些態樣中，有義股包含如SEQ ID NO：1570所示之核苷酸序列，且反義股包含如SEQ ID NO：1605所示之核苷酸序列。在一些態樣中，有義股包含如SEQ ID NO：1681所示之核苷酸序列，且反義股包含如SEQ ID NO：1586所示之核苷酸序列。
在前述或相關態樣中之任一者中，反義股之長度為22個核苷酸。在一些態樣中，反義股包含含有選自SEQ ID NO：1588、1595、1599、1586及1605之核苷酸序列的核苷酸序列。在一些態樣中，有義股之長度為36個核苷酸。在一些態樣中，有義股包含含有選自SEQ ID NO：1865、1721、1847、1846及1955之核苷酸序列的核苷酸序列。在一些態樣中，有義股包含選自SEQ ID NO：1553、1560、1564、1551及1570之核苷酸序列。
在前述或相關態樣中之任一者中，有義股包含SEQ ID NO：1607-1641及1682中之任一者之核苷酸序列。在一些態樣中，反義股包含SEQ ID NO：1642-1676中之任一者之核苷酸序列。
在一些態樣中，有義股及反義股包含選自由以下組成之群的核苷酸序列：a)分別為SEQ ID NO：1607及1642；b)分別為SEQ ID NO：1608及1643；c)分別為SEQ ID NO：1609及1644；d)分別為SEQ ID NO：1610及1645；e)分別為SEQ ID NO：1611及1646；f)分別為SEQ ID NO：1612及1647；g)分別為SEQ ID NO：1613及1648；h)分別為SEQ ID NO：1614及1649；i)分別為SEQ ID NO：1615及1650；j)分別為SEQ ID NO：1616及1651；k)分別為SEQ ID NO：1617及1652；l)分別為SEQ ID NO：1618及1653；m)分別為SEQ ID NO：1619及1654；
n)分別為SEQ ID NO：1620及1655；o)分別為SEQ ID NO：1621及1656；p)分別為SEQ ID NO：1622及1657；q)分別為SEQ ID NO：1623及1658；r)分別為SEQ ID NO：1624及1659；s)分別為SEQ ID NO：1625及1660；t)分別為SEQ ID NO：1626及1661；u)分別為SEQ ID NO：1627及1662；v)分別為SEQ ID NO：1628及1663；w)分別為SEQ ID NO：1629及1664；x)分別為SEQ ID NO：1630及1665；y)分別為SEQ ID NO：1631及1666；z)分別為SEQ ID NO：1632及1667；aa)分別為SEQ ID NO：1633及1668；bb)分別為SEQ ID NO：1634及1669；cc)分別為SEQ ID NO：1635及1670；dd)分別為SEQ ID NO：1636及1671；ee)分別為SEQ ID NO：1637及1672；ff)分別為SEQ ID NO：1638及1673；gg)分別為SEQ ID NO：1639及1674；hh)分別為SEQ ID NO：1640及1675；ii)分別為SEQ ID NO：1641及1676；及jj)分別為SEQ ID NO：1682及1656。
在一些態樣中，有義股及反義股包含選自由以下組成之群的核苷酸
序列：a)分別為SEQ ID NO：1610及1645；b)分別為SEQ ID NO：1614及1649；c)分別為SEQ ID NO：1616及1651；d)分別為SEQ ID NO：1621及1656；e)分別為SEQ ID NO：1622及1657；f)分別為SEQ ID NO：1623及1658；g)分別為SEQ ID NO：1629及1664；h)分別為SEQ ID NO：1630及1665；i)分別為SEQ ID NO：1634及1669；j)分別為SEQ ID NO：1635及1670；k)分別為SEQ ID NO：1636及1671；l)分別為SEQ ID NO：1640及1675；及m)分別為SEQ ID NO：1682及1656。
在一些態樣中，有義股及反義股包含選自由以下組成之群的核苷酸序列：a)分別為SEQ ID NO：1623及1658；b)分別為SEQ ID NO：1630及1665；c)分別為SEQ ID NO：1634及1669；d)分別為SEQ ID NO：1621及1656；e)分別為SEQ ID NO：1640及1675；及f)分別為SEQ ID NO：1682及1656。
在一些態樣中，有義股包含如SEQ ID NO：1623所示之核苷酸序列，且反義股包含如SEQ ID NO：1658所示之核苷酸序列。在一些態樣中，有義股包
含如SEQ ID NO：1630所示之核苷酸序列，且反義股包含如SEQ ID NO：1665所示之核苷酸序列。在一些態樣中，有義股包含如SEQ ID NO：1634所示之核苷酸序列，且反義股包含如SEQ ID NO：1669所示之核苷酸序列。在一些態樣中，有義股包含如SEQ ID NO：1621所示之核苷酸序列，且反義股包含如SEQ ID NO：1656所示之核苷酸序列。在一些態樣中，有義股包含如SEQ ID NO：1640所示之核苷酸序列，且反義股包含如SEQ ID NO：1676所示之核苷酸序列。在一些態樣中，有義股包含如SEQ ID NO：1682所示之核苷酸序列，且反義股包含如SEQ ID NO：1656所示之核苷酸序列。
在一些態樣中，有義股包含5'-[mCs][mA][fG][mC][fA][mG][mU][fG][mA][fU][mU][fG][fA][mA][fG][mU][fA][mU][mC][mA][mG][mC][mA][mG][mC][mC][mG][ademA-GalNAc][ademA-GalNAc][ademA-GalNAc][mG][mG][mC][mU][mG][mC]-3'(SEQ ID NO：1623)之序列及所有修飾，且其中反義股包含5'-[Me膦酸酯-4O-mUs][fGs][fA][fU][fA][mC][fU][mU][mC][fA][mA][mU][mC][fA][mC][fU][mG][mC][fU][mGs][mGs][mG]-3'(SEQ ID NO：1658)之序列及所有修飾，其中mC、mA、mG、mU=2'-OMe核糖核苷；fA、fC、fG、fU=2'-F核糖核苷；s=硫代磷酸酯，且其中ademA-GalNAc=
。
在一些態樣中，有義股包含5'-[mAs][mG][fA][mG][fC][mA][mA][fG][mU][fG][mA][fC][fA][mA][fA][mU][fG][mU][mU][mA][mG][mC][mA][mG][mC][mC][mG][ademA-GalNAc][ademA-GalNAc][ademA-GalNAc][mG][mG][mC][mU][mG][mC]-3'(SEQ ID NO：1630)之序列及所有修飾，且其中反義股包含5'-[Me膦酸酯-4O-mUs][fAs][fA][fC][fA][mU][fU][mU][mG][fU][mC][mA][mC][fU][mU][fG][mC][mU][fC][mUs][mGs][mG]-3'(SEQ ID NO：1665)之序列及所有修飾，其中mC、mA、mG、mU=2'-OMe核糖核苷；fA、fC、fG、fU=2'-F核糖核苷；s=硫代磷酸酯，且其中ademA-GalNAc=
。
在一些態樣中，有義股包含5'-[mAs][mG][fU][mC][fA][mU][mG][fA]
[mC][fA][mU][fU][fU][mC][fU][mC][fA][mA][mA][mA][mG][mC][mA][mG][mC][mC][mG][ademA-GalNAc][ademA-GalNAc][ademA-GalNAc][mG][mG][mC][mU][mG][mC]-3'(SEQ ID NO：1634)之序列及所有修飾，且其中反義股包含5'-[Me膦酸酯-4O-mUs][fUs][fU][fU][fG][mA][fG][mA][mA][fA][mU][mG][mU][fC][mA][fU][mG][mA][fC][mUs][mGs][mG]-3'(SEQ ID NO：1669)之序列及所有修飾，其中mC、mA、mG、mU=2'-OMe核糖核苷；fA、fC、fG、fU=2'-F核糖核苷；s=硫代磷酸酯，且其中ademA-GalNAc=
。
在一些態樣中，有義股包含5'-[mCs][mA][fG][mU][fC][mA][mU][fG][mA][fC][mA][fU][fU][mU][fC][mU][fC][mA][mA][mA][mG][mC][mA][mG][mC][mC][mG][ademA-GalNAc][ademA-GalNAc][ademA-GalNAc][mG][mG][mC][mU][mG][mC]-3'(SEQ ID NO：1621)之序列及所有修飾，且其中反義股包含5'-[Me膦酸酯-4O-mUs][fUs][fU][fG][fA][mG][fA][mA][mA][fU][mG][mU][mC][fA][mU][fG][mA][mC][fU][mGs][mGs][mG]-3'(SEQ ID NO：1656)之序列及所有修飾，其中mC、mA、mG、mU=2'-OMe核糖核苷；fA、fC、fG、fU=2'-F核糖核苷；s=硫代磷酸酯，且其中ademA-GalNAc=
。
在一些態樣中，有義股包含5'-[mAs][mG][fU][mU][fG][mU][mU][fA][mG][fU][mG][fA][fU][mU][fU][mG][fC][mU][mA][mA][mG][mC][mA][mG][mC][mC][mG][ademA-GalNAc][ademA-GalNAc][ademA-GalNAc][mG][mG][mC][mU][mG][mC]-3'(SEQ ID NO：1640)之序列及所有修飾，且其中反義股包含5'-[Me膦酸酯-4O-mUs][fUs][fA][fG][fC][mA][fA][mA][mU][fC][mA][mC][mU][fA][mA][fC][mA][mA][fC][mUs][mGs][mG]-3'(SEQ ID NO：1675)之序列及所有修飾，其中mC、mA、mG、mU=2'-OMe核糖核苷；fA、fC、fG、fU=2'-F核糖核苷；s=硫代磷酸酯，且其中ademA-GalNAc=
。
在一些態樣中，有義股包含5'-[ademCs-C16][mA][fG][mU][fC][mA]
[mU][fG][mA][fC][mA][fU][fU][mU][fC][mU][fC][mAs][mAs][mA]-3'(SEQ ID NO：1682)之序列及所有修飾，且其中反義股包含5'-[Me膦酸酯-4O-mUs][fUs][fU][fG][fA][mG][fA][mA][mA][fU][mG][mU][mC][fA][mU][fG][mA][mC][fU][mGs][mGs][mG]-3'(SEQ ID NO：1656)之序列及所有修飾，其中mC、mA、mG、mU=2'-OMe核糖核苷；fA、fC、fG、fU=2'-F核糖核苷；s=硫代磷酸酯，且[ademCs-C16]=
。
在一些態樣中，本揭示案提供一種醫藥組合物，該醫藥組合物包含本文所述之RNAi寡核苷酸及醫藥學上可接受之載劑、遞送劑或賦形劑。
在其他態樣中，本揭示案提供一種用於治療患有與SNCA基因表現相關之疾病、病症或疾患之個體的方法，該方法包括向該個體投與治療有效量之本文所述之RNAi寡核苷酸或其醫藥組合物，從而治療該個體。
在其他態樣中，本揭示案提供一種將寡核苷酸遞送至個體之方法，該方法包括向該個體投與本文所述之醫藥組合物。
在其他態樣中，本揭示案提供一種用於降低細胞、細胞群體或個體中之SNCA基因表現之方法，該方法包括以下步驟：i.使該細胞或該細胞群體與本文所述之RNAi寡核苷酸或醫藥組合物接觸；或ii.向該個體投與本文所述之RNAi寡核苷酸或醫藥組合物。
在一些態樣中，降低SNCA基因表現包括降低SNCA mRNA之量或
水準、SNCA蛋白之量或水準或兩者。在一些態樣中，個體患有與SNCA基因表現相關之疾病、病症或疾患。在一些態樣中，與SNCA表現相關之疾病、病症或疾患為多系統萎縮、路易體失智(dementia with Lewy bodies)或帕金森病(Parkinson disease)。
在前述或相關態樣中之任一者中，本文所述之RNAi寡核苷酸或醫藥組合物，SNCA基因表現在一或多個CNS區域之組織中降低，其中該組織與帕金森病相關。在一些態樣中，與帕金森病相關之組織係選自：殼核、中腦被蓋、黑質、腦橋及髓質。在一些態樣中，SNCA基因表現在一或多個CNS區域之組織中降低，其中該組織與多系統萎縮相關。在一些態樣中，與多系統萎縮相關之組織係選自：尾狀核、殼核、中腦被蓋、黑質、腦橋、小腦皮質、小腦白質、髓質、頸脊髓、胸脊髓及腰脊髓。在一些態樣中，SNCA基因表現在一或多個CNS區域中降低，該一或多個區域係選自：頸脊髓、胸脊髓、腰脊髓、額葉皮質、顳葉皮質、小腦、中腦、枕葉皮質、頂葉皮質、海馬體、尾狀核、丘腦、腦幹、運動皮質、蒼白球、中腦被蓋、黑質、腦橋、小腦白質及小腦齒狀核。在一些態樣中，SNCA基因表現在一或多個CNS區域中降低，該一或多個區域係選自：頸脊髓、胸脊髓、腰脊髓、額葉皮質、顳葉皮質、小腦、中腦、枕葉皮質、頂葉皮質、海馬體、尾狀核、丘腦、腦幹、運動皮質、蒼白球、中腦被蓋、黑質、腦橋、小腦白質、小腦齒狀核、L1背根神經節(DRG)、L2 DRG、L3 DRG、L4 DRG、L5 DRG、L6 DRG、殼核、中腦被蓋、黑質、腦橋、髓質、小腦皮質及小腦白質。
在前述或相關態樣中之任一者中，RNAi寡核苷酸或醫藥組合物與第二組合物或治療劑組合投與。
在其他態樣中，本揭示案提供本文所述之RNAi寡核苷酸或醫藥組合物之用途，該用途係用於製造用以治療與SNCA基因表現相關之疾病、病症或疾患之藥劑。
在其他態樣中，本揭示案提供本文所述之RNAi寡核苷酸或醫藥組合物，該RNAi寡核苷酸或該醫藥組合物係用於或適用於治療與SNCA基因表現相關之疾病、病症或疾患。
在一些態樣中，本揭示案提供一種套組，該套組包含本文所述之RNAi寡核苷酸、視情況存在之醫藥學上可接受之載劑及包裝插頁，該包裝插頁包含用於向患有與SNCA基因表現相關之疾病、病症或疾患之個體投與之說明書。
在前述或相關態樣中之任一者中，與SNCA基因表現相關之疾病、病症或疾患為多系統萎縮、路易體失智及帕金森病。
圖1A及圖1B提供描繪在用GalNAc結合之SNCA寡核苷酸處理後外源性表現人類SNCA之小鼠(流體動力學注射模型)之肝臟中殘留之人類SNCA mRNA之百分比(%)的圖。向CD-1小鼠皮下給與3mg/kg在PBS中調配之指定GalNAc結合之SNCA靶向寡核苷酸。給藥後三天，向小鼠流體動力學注射(HDI)編碼人類SNCA之DNA質體。24小時後自收集之肝臟中確定人類SNCA mRNA之水準。Hs-Mf=構築體為人類及猴SNCA特異性的。Hs-Mf-Mm=構築體為人類、猴及小鼠SNCA特異性的。SNCA-291用作基準對照。
圖2A及圖2B提供描繪基於圖1A-1B中所示之抑制功效選擇之GalNAc結合之SNCA寡核苷酸之劑量反應的圖。如圖1A-1B中所述在CD-1 HDI小鼠中量測肝臟組織中殘留之SNCA mRNA之百分比(%)。在注射0.3mg/kg、1.0mg/kg或3mg/kg指定GalNAc結合之SNCA寡核苷酸後，在兩個群組中確定殘留之mRNA百分比(%)，圖2A及圖2B。Hs-Mf=構築體為人類及猴SNCA特異性的。Hs-Mf-Mm=構築體為人類、猴及小鼠SNCA特異性的。
圖3A-3S提供描繪在用GalNAc結合之SNCA靶向寡核苷酸處理後在NHP之CNS中殘留之非人類靈長類動物(NHP；Mf)SNCA mRNA之百分比(%)的圖。研究第0天及第7天，藉由大池內(i.c.m)注射50mg在人工腦脊髓液(aCSF)中調配之指定GalNAc結合之SNCA靶向寡核苷酸向NHP給藥。相對於aCSF處理之動物中殘留之SNCA mRNA之百分比(%)確定SNCA mRNA之水準。量測之中樞神經組織包括額葉皮質(圖3A)、尾狀核(圖3B)、海馬體(圖3C)、中腦(圖3D)、頂葉皮質(圖3E)、枕葉皮質(圖3F)、丘腦(圖3G)、顳葉皮質(圖3H)、小腦(圖3I)、腦幹(圖3J)、頸脊髓(圖3K)、胸脊髓(圖3L)、腰脊髓(圖3M)、L1背根神經節(DRG)(圖3N)、L2 DRG(圖3O)、L3 DRG(圖3P)、L4 DRG(圖3Q)、L5 DRG(圖3R)及L6 DRG(圖3S)。GaLXC=GalNAc結合之SNCA靶向寡核苷酸。
圖4A-4B提供描繪與帕金森氏病相關之NHP CNS組織中殘留之非人類靈長類動物(NHP；Mf)SNCA mRNA之百分比(%)(圖4A)及寡核苷酸之濃度(圖4B)的圖。向NHP鞘內投與結合至C16脂質之aCSF或SNCA-B15。在投與寡核苷酸後28天收集並分析組織。
圖5A-5B提供描繪與多系統萎縮相關之NHP CNS組織中殘留之非人類靈長類動物(NHP；Mf)SNCA mRNA之百分比(%)(圖5A)及寡核苷酸之濃度(圖5B)的圖。向NHP鞘內投與結合至C16脂質之aCSF或SNCA-B15。在投與寡核苷酸後28天收集並分析組織。
本申請案依據35 U.S.C.§ 119(e)主張2022年5月13日提出申請之美國臨時申請案第63/364,639號之優先權，該臨時申請案以全文引用之方式併入本文中。
根據一些態樣，本揭示案提供降低CNS中之SNCA基因表現之寡核
苷酸。在一些實施例中，本文所提供之寡核苷酸經設計以治療與CNS中之SNCA表現相關之疾病。在其他實施例中，本揭示案提供藉由降低細胞(例如，CNS之細胞)中之SNCA基因表現來治療與SNCA表現相關之疾病的方法。
本揭示案尤其提供抑制SNCA基因表現之寡核苷酸(例如，RNAi寡核苷酸)。在一些實施例中，抑制SNCA基因表現之寡核苷酸靶向SNCA mRNA。
在一些實施例中，本文之寡核苷酸(例如，RNAi寡核苷酸)靶向包含SNCA mRNA之靶序列。在一些實施例中，本文所述之寡核苷酸靶向SNCA mRNA序列內之靶序列。
在一些實施例中，本文所述之寡核苷酸對應於SNCA mRNA序列內之靶序列。在一些實施例中，寡核苷酸或其部分、片段或股(例如，ds RNAi寡核苷酸之反義股或引導股)結合或黏接至包含SNCA mRNA之靶序列，從而抑制SNCA基因表現。
在一些實施例中，寡核苷酸靶向SNCA靶序列以用於活體內抑制SNCA基因表現之目的。在一些實施例中，靶向SNCA靶序列之寡核苷酸抑制SNCA基因表現之量或程度與寡核苷酸之效力相關聯。在一些實施例中，靶向SNCA靶序列之寡核苷酸抑制SNCA基因表現之量或程度與患有用寡核苷酸治療之與SNCA基因表現相關之疾病、病症或疾患之個體或患者中之治療效益的量或程度相關聯。
經由檢查編碼SNCA之mRNA之核苷酸序列，包括多個不同物種(例如，人類、食蟹猴及小鼠；參見例如實例1)之mRNA，以及作為活體外及活體內測試之結果(參見例如實例2-5)，已發現SNCA mRNA之某些核苷酸序列比其他核苷酸序列更易發生基於寡核苷酸之抑制且因此可用作本文之寡核苷酸的靶
序列。在一些實施例中，本文所述之寡核苷酸(例如，RNAi寡核苷酸)之有義股包含SNCA靶序列。在一些實施例中，本文所述之ds寡核苷酸之有義股的一部分或區域包含SNCA靶序列。在一些實施例中，SNCA靶序列包含SEQ ID NO：1683-2066中之任一者之核苷酸序列或由其組成。在一些實施例中，SNCA靶序列包含SEQ ID No：1781、1782、1796、1798、1802、1808、1814、1817、1713、1718、1726、1830、1839、1742、1846、1852、1865、1784、1804、1721、1822、1840、1735、1847、1855、1864、1901、1902、1938、1947、1955、1964、1973及1978中之任一者之核苷酸序列或由其組成。在一些實施例中，SNCA靶序列包含SEQ ID No：1798、1817、1718、1846、1852、1865、1804、1721、1847、1855、1864及1955中之任一者之核苷酸序列或由其組成。在一些實施例中，SNCA靶序列包含SEQ ID NO：1865、1721、1847、1846及1955中之任一者之核苷酸序列或由其組成。在一些實施例中，SNCA靶序列包含SEQ ID NO：1865所示之核苷酸序列。在一些實施例中，SNCA靶序列包含SEQ ID NO：1721所示之核苷酸序列。在一些實施例中，SNCA靶序列包含SEQ ID NO：1847所示之核苷酸序列。在一些實施例中，SNCA靶序列包含SEQ ID NO：1846所示之核苷酸序列。在一些實施例中，SNCA靶序列包含SEQ ID NO：1955所示之核苷酸序列。
在一些實施例中，本文之寡核苷酸具有SNCA mRNA(例如，在SNCA mRNA之靶序列內)之互補區域以用於靶向細胞中之mRNA並抑制其表現之目的。在一些實施例中，寡核苷酸包含具有互補區域之SNCA靶向序列(例如，ds寡核苷酸之反義股或引導股)，該互補區域藉由互補(沃森-克里克(Watson-Crick))鹼基配對結合或黏接至SNCA靶序列。靶向序列或互補區域一般具有適合之長度及鹼基含量，以使寡核苷酸(或其股)能夠結合或黏接至SNCA mRNA以用於抑制其表現之目的。在一些實施例中，靶向序列或互補區域之長度為至少約12
個、至少約13個、至少約14個、至少約15個、至少約16個、至少約17個、至少約18個、至少約19個、至少約20個、至少約21個、至少約22個、至少約23個、至少約24個、至少約25個、至少約26個、至少約27個、至少約28個、至少約29個或至少約30個核苷酸。在一些實施例中，靶向序列或互補區域為至少12個、至少13個、至少14個、至少15個、至少16個、至少17個、至少18個、至少19個或至少20個核苷酸。在一些實施例中，靶向序列或互補區域之長度為約12至約30個(例如，12至30個、12至22個、15至25個、17至21個、18至27個、19至27個或15至30個)核苷酸。在一些實施例中，靶向序列或互補區域之長度為約12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30個核苷酸。在一些實施例中，靶向序列或互補區域之長度為18個核苷酸。在一些實施例中，靶向序列或互補區域之長度為19個核苷酸。在一些實施例中，靶向序列或互補區域之長度為20個核苷酸。在一些實施例中，靶向序列或互補區域之長度為21個核苷酸。在一些實施例中，靶向序列或互補區域之長度為22個核苷酸。在一些實施例中，靶向序列或互補區域之長度為23個核苷酸。在一些實施例中，靶向序列或互補區域之長度為24個核苷酸。在一些實施例中，寡核苷酸包含與SEQ ID NO：1683-2066中之任一者之序列互補之靶向序列或互補區域，且靶向序列或互補區域之長度為18個核苷酸。在一些實施例中，寡核苷酸包含與SEQ ID NO：1683-2066中之任一者之序列互補之靶向序列或互補區域，且靶向序列或互補區域之長度為19個核苷酸。在一些實施例中，寡核苷酸包含與SEQ ID NO：1-384中之任一者之序列互補之靶向序列或互補區域，且靶向序列或互補區域之長度為20個核苷酸。在一些實施例中，寡核苷酸包含與SEQ ID NO：1-384中之任一者之序列互補之靶向序列或互補區域，且靶向序列或互補區域之長度為21個核苷酸。在一些實施例中，寡核苷酸包含與SEQ ID NO：1-384中之任一者之序列互補之靶向序列或互補區域，
且靶向序列或互補區域之長度為22個核苷酸。在一些實施例中，寡核苷酸包含與SEQ ID NO：1-384中之任一者之序列互補之靶向序列或互補區域，且靶向序列或互補區域之長度為23個核苷酸。在一些實施例中，寡核苷酸包含與SEQ ID NO：1-384中之任一者之序列互補之靶向序列或互補區域，且靶向序列或互補區域之長度為24個核苷酸。
在一些實施例中，寡核苷酸包含與SNCA靶序列完全互補之靶向序列或互補區域(例如，ds寡核苷酸之反義股或引導股)。在一些實施例中，靶向序列或互補區域與SNCA靶序列部分互補。在一些實施例中，寡核苷酸包含與SEQ ID NO：1683-2066中之任一者之序列完全互補之靶向序列或互補區域。在一些實施例中，寡核苷酸包含與SEQ ID NO：1683-2066中之任一者之序列部分互補之靶向序列或互補區域。在一些實施例中，寡核苷酸包含與SEQ ID NO：1781、1782、1796、1798、1802、1808、1814、1817、1713、1718、1726、1830、1839、1742、1846、1852、1865、1784、1804、1721、1822、1840、1735、1847、1855、1864、1901、1902、1938、1947、1955、1964、1973及1978中之任一者之序列完全互補之靶向序列或互補區域。在一些實施例中，寡核苷酸包含與SEQ ID NO：1781、1782、1796、1798、1802、1808、1814、1817、1713、1718、1726、1830、1839、1742、1846、1852、1865、1784、1804、1721、1822、1840、1735、1847、1855、1864、1901、1902、1938、1947、1955、1964、1973及1978中之任一者之序列部分互補之靶向序列或互補區域。在一些實施例中，寡核苷酸包含與SEQ ID NO：1798、1817、1718、1846、1852、1865、1804、1721、1847、1855、1864及1955中之任一者之序列完全互補之靶向序列或互補區域。在一些實施例中，寡核苷酸包含與SEQ ID NO：1798、1817、1718、1846、1852、1865、1804、1721、1847、1855、1864及1955中之任一者之序列部分互補之靶向序列或互補區域。在一些實施例中，寡核苷酸包含與SEQ ID NO：1865、1721、1847、1846及1955
中之任一者之序列完全互補之靶向序列或互補區域。在一些實施例中，寡核苷酸包含與SEQ ID NO：1865、1721、1847、1846及1955中之任一者之序列部分互補之靶向序列或互補區域。在一些實施例中，寡核苷酸包含與SEQ ID NO：1865所示之序列完全互補之靶向序列或互補區域。在一些實施例中，寡核苷酸包含與SEQ ID NO：1721所示之序列完全互補之靶向序列或互補區域。在一些實施例中，寡核苷酸包含與SEQ ID NO：1847所示之序列完全互補之靶向序列或互補區域。在一些實施例中，寡核苷酸包含與SEQ ID NO：1846所示之序列完全互補之靶向序列或互補區域。在一些實施例中，寡核苷酸包含與SEQ ID NO：1955所示之序列完全互補之靶向序列或互補區域。在一些實施例中，寡核苷酸包含與SEQ ID NO：1865中之任一者之序列部分互補之靶向序列或互補區域。在一些實施例中，寡核苷酸包含與SEQ ID NO：1721之序列部分互補之靶向序列或互補區域。在一些實施例中，寡核苷酸包含與SEQ ID NO：1847之序列部分互補之靶向序列或互補區域。在一些實施例中，寡核苷酸包含與SEQ ID NO：1846之序列部分互補之靶向序列或互補區域。在一些實施例中，寡核苷酸包含與SEQ ID NO：1955之序列部分互補之靶向序列或互補區域。
在一些實施例中，本文之寡核苷酸包含與包含SNCA mRNA之連續核苷酸序列互補之靶向序列或互補區域，其中該連續核苷酸序列之長度為約12至約30個核苷酸(例如，長度為12至30個、12至28個、12至26個、12至24個、12至20個、12至18個、12至16個、14至22個、16至20個、18至20個或18至19個核苷酸)。在一些實施例中，寡核苷酸包含與包含SNCA mRNA之連續核苷酸序列互補之靶向序列或互補區域，其中該連續核苷酸序列之長度為10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個核苷酸。在一些實施例中，寡核苷酸包含與包含SNCA mRNA之連續核苷酸序列互補之靶向序列或互補區域，其中該連續核苷酸序列之長度為19個核苷酸。在一些實施例中，寡核苷酸
包含與包含SNCA mRNA之連續核苷酸序列互補之靶向序列或互補區域，其中該連續核苷酸序列之長度為20個核苷酸。
在一些實施例中，寡核苷酸包含與SEQ ID NO：1683-2066中之任一者之連續核苷酸序列互補之靶向序列或互補區域，視情況其中該連續核苷酸序列之長度為19個核苷酸。在一些實施例中，寡核苷酸包含與SEQ ID NO：1781、1782、1796、1798、1802、1808、1814、1817、1713、1718、1726、1830、1839、1742、1846、1852、1865、1784、1804、1721、1822、1840、1735、1847、1855、1864、1901、1902、1938、1947、1955、1964、1973及1978中之任一者之連續核苷酸序列互補之靶向序列或互補區域，視情況其中該連續核苷酸序列之長度為19個核苷酸。在一些實施例中，寡核苷酸包含與SEQ ID NO：1798、1817、1718、1846、1852、1865、1804、1721、1847、1855、1864及1955中之任一者之連續核苷酸序列互補之靶向序列或互補區域，視情況其中該連續核苷酸序列之長度為19個核苷酸。在一些實施例中，寡核苷酸包含與SEQ ID NO：1865、1721、1847、1846及1955之連續核苷酸序列互補之靶向序列或互補區域，視情況其中該連續核苷酸序列之長度為19個核苷酸。
在一些實施例中，寡核苷酸(例如，RNAi寡核苷酸)之靶向序列或互補區域與如SEQ ID NO：1683-2066中之任一者所示之連續核苷酸序列互補且跨越反義股之整個長度。在一些實施例中，寡核苷酸之靶向序列或互補區域與如SEQ ID NO：1683-2066中之任一者所示之連續核苷酸序列互補且跨越反義股之整個長度之一部分。在一些實施例中，寡核苷酸包含與跨越如SEQ ID NO：1683-2066中之任一者所示之序列之核苷酸1-20之連續核苷酸段至少部分(例如，完全)互補的互補區域(例如，在ds寡核苷酸之反義股上)。在一些實施例中，寡核苷酸之靶向序列或互補區域與如SEQ ID NO：1-384中之任一者所示之連續核苷酸序列互補且跨越反義股之整個長度。在一些實施例中，寡核苷酸之互補區域與
如SEQ ID NO：1-384中之任一者所示之連續核苷酸序列互補且跨越反義股之整個長度之一部分。在一些實施例中，寡核苷酸包含與跨越如SEQ ID NO：1-384中之任一者所示之序列之核苷酸1至19之連續核苷酸段至少部分(例如，完全)互補的互補區域(例如，在ds寡核苷酸之反義股上)。
在一些實施例中，寡核苷酸包含與相應SNCA靶序列具有一或多個鹼基對(bp)錯配之靶向序列或互補區域。在一些實施例中，靶向序列或互補區域可與相應SNCA靶序列具有至多約1個、至多約2個、至多約3個、至多約4個、至多約5個等錯配，前提條件為靶向序列或互補區域在適當雜交條件下結合或黏接至SNCA mRNA之能力及/或寡核苷酸抑制SNCA基因表現之能力得以維持。或者，在一些實施例中，靶向序列或互補區域包含不多於1個、不多於2個、不多於3個、不多於4個或不多於5個與相應SNCA靶序列之錯配，前提條件為靶向序列或互補區域在適當雜交條件下結合或黏接至SNCA mRNA之能力及/或寡核苷酸抑制SNCA基因表現之能力得以維持。在一些實施例中，寡核苷酸包含與相應靶序列具有1個錯配之靶向序列或互補區域。在一些實施例中，寡核苷酸包含與相應靶序列具有2個錯配之靶向序列或互補區域。在一些實施例中，寡核苷酸包含與相應靶序列具有3個錯配之靶向序列或互補區域。在一些實施例中，寡核苷酸包含與相應靶序列具有4個錯配之靶向序列或互補區域。在一些實施例中，寡核苷酸包含與相應靶序列具有5個錯配之靶向序列或互補區域。在一些實施例中，寡核苷酸包含與相應靶序列具有多於一個錯配(例如，2、3、4、5個或更多個錯配)之靶向序列或互補區域，其中至少2個(例如，所有)錯配連續定位(例如，連續2、3、4、5個或更多個錯配)，或其中錯配散佈於整個靶向序列或互補區域之任何位置。在一些實施例中，寡核苷酸包含與相應靶序列具有多於一個錯配(例如，2、3、4、5個或更多個錯配)之靶向序列或互補區域，其中至少2個(例如，所有)錯配連續定位(例如，連續2、3、4、5個或更多個錯配)，或其中至
少一或多個非錯配鹼基對位於錯配之間，或其組合。
在一些實施例中，寡核苷酸包含與SEQ ID NO：1683-2066中之任一者之連續核苷酸序列互補之靶向序列或互補區域，其中靶向序列或互補區域可與相應SNCA靶序列具有至多約1個、至多約2個、至多約3個、至多約4個、至多約5個等錯配。在一些實施例中，寡核苷酸包含與SEQ ID NO：1683-2066中之任一者之連續核苷酸序列互補之靶向序列或互補區域，其中靶向序列或互補區域可與相應SNCA靶序列具有不多於1個、不多於2個、不多於3個、不多於4個或不多於5個錯配。在一些實施例中，寡核苷酸包含與SEQ ID NO：1781、1782、1796、1798、1802、1808、1814、1817、1713、1718、1726、1830、1839、1742、1846、1852、1865、1784、1804、1721、1822、1840、1735、1847、1855、1864、1901、1902、1938、1947、1955、1964、1973及1978中之任一者之連續核苷酸序列互補之靶向序列或互補區域，其中靶向序列或互補區域可與相應SNCA靶序列具有至多約1個、至多約2個、至多約3個、至多約4個、至多約5個等錯配。在一些實施例中，寡核苷酸包含與SEQ ID NO：1781、1782、1796、1798、1802、1808、1814、1817、1713、1718、1726、1830、1839、1742、1846、1852、1865、1784、1804、1721、1822、1840、1735、1847、1855、1864、1901、1902、1938、1947、1955、1964、1973及1978中之任一者之連續核苷酸序列互補之靶向序列或互補區域，其中靶向序列或互補區域可與相應SNCA靶序列具有不多於1個、不多於2個、不多於3個、不多於4個或不多於5個錯配。在一些實施例中，寡核苷酸包含與SEQ ID NO：1798、1817、1718、1846、1852、1865、1804、1721、1847、1855、1864及1955中之任一者之連續核苷酸序列互補之靶向序列或互補區域，其中靶向序列或互補區域可與相應SNCA靶序列具有至多約1個、至多約2個、至多約3個、至多約4個、至多約5個等錯配。在一些實施例中，寡核苷酸包含與SEQ ID NO：1798、1817、1718、1846、1852、1865、
1804、1721、1847、1855、1864及1955中之任一者之連續核苷酸序列互補之靶向序列或互補區域，其中靶向序列或互補區域可與相應SNCA靶序列具有不多於1個、不多於2個、不多於3個、不多於4個或不多於5個錯配。在一些實施例中，寡核苷酸包含與SEQ ID NO：1865、1721、1847、1846及1955中之任一者之連續核苷酸序列互補之靶向序列或互補區域，其中靶向序列或互補區域可與相應SNCA靶序列具有至多約1個、至多約2個、至多約3個、至多約4個、至多約5個等錯配。在一些實施例中，寡核苷酸包含與SEQ ID NO：1865、1721、1847、1846及1955中之任一者之連續核苷酸序列互補之靶向序列或互補區域，其中靶向序列或互補區域可與相應SNCA靶序列具有不多於1個、不多於2個、不多於3個、不多於4個或不多於5個錯配。在一些實施例中，寡核苷酸包含與SEQ ID NO：1865之連續核苷酸序列互補之靶向序列或互補區域，其中靶向序列或互補區域可與相應SNCA靶序列具有至多約1個、至多約2個、至多約3個、至多約4個、至多約5個等錯配。在一些實施例中，寡核苷酸包含與SEQ ID NO：1865之連續核苷酸序列互補之靶向序列或互補區域，其中靶向序列或互補區域可與相應SNCA靶序列具有不多於1個、不多於2個、不多於3個、不多於4個或不多於5個錯配。在一些實施例中，寡核苷酸包含與SEQ ID NO：1721之連續核苷酸序列互補之靶向序列或互補區域，其中靶向序列或互補區域可與相應SNCA靶序列具有至多約1個、至多約2個、至多約3個、至多約4個、至多約5個等錯配。在一些實施例中，寡核苷酸包含與SEQ ID NO：1721之連續核苷酸序列互補之靶向序列或互補區域，其中靶向序列或互補區域可與相應SNCA靶序列具有不多於1個、不多於2個、不多於3個、不多於4個或不多於5個錯配。在一些實施例中，寡核苷酸包含與SEQ ID NO：1847之連續核苷酸序列互補之靶向序列或互補區域，其中靶向序列或互補區域可與相應SNCA靶序列具有至多約1個、至多約2個、至多約3個、至多約4個、至多約5個等錯配。在一
些實施例中，寡核苷酸包含與SEQ ID NO：1847之連續核苷酸序列互補之靶向序列或互補區域，其中靶向序列或互補區域可與相應SNCA靶序列具有不多於1個、不多於2個、不多於3個、不多於4個或不多於5個錯配。在一些實施例中，寡核苷酸包含與SEQ ID NO：1846之連續核苷酸序列互補之靶向序列或互補區域，其中靶向序列或互補區域可與相應SNCA靶序列具有至多約1個、至多約2個、至多約3個、至多約4個、至多約5個等錯配。在一些實施例中，寡核苷酸包含與SEQ ID NO：1846之連續核苷酸序列互補之靶向序列或互補區域，其中靶向序列或互補區域可與相應SNCA靶序列具有不多於1個、不多於2個、不多於3個、不多於4個或不多於5個錯配。在一些實施例中，寡核苷酸包含與SEQ ID NO：1955之連續核苷酸序列互補之靶向序列或互補區域，其中靶向序列或互補區域可與相應SNCA靶序列具有至多約1個、至多約2個、至多約3個、至多約4個、至多約5個等錯配。在一些實施例中，寡核苷酸包含與SEQ ID NO：1955之連續核苷酸序列互補之靶向序列或互補區域，其中靶向序列或互補區域可與相應SNCA靶序列具有不多於1個、不多於2個、不多於3個、不多於4個或不多於5個錯配。
多種寡核苷酸類型及/或結構可用於在本文之方法中靶向SNCA mRNA，包括但不限於RNAi寡核苷酸、反義寡核苷酸、miRNA等。本文或別處描述之任何寡核苷酸類型皆預期用作框架以併入本文之SNCA mRNA靶向序列以用於抑制SNCA基因表現之目的。
在一些實施例中，本文之寡核苷酸藉由參與切丁酶涉入之上游或下游之RNA干擾(RNAi)路徑(例如，RNAi寡核苷酸)來抑制SNCA基因表現。舉例而言，已開發RNAi寡核苷酸，其中各股具有約19至約25個核苷酸之大小與至少一個具有約1至約5個核苷酸之3'懸垂(參見例如美國專利第8,372,968號)。
亦已開發更長之寡核苷酸，其由切丁酶加工以產生活性RNAi產物(參見例如美國專利第8,883,996號)。進一步工作產生延伸之ds寡核苷酸，其中至少一股之至少一端延伸超出雙鏈體靶向區域，包括其中一股包括熱力學穩定之四環結構的結構(參見例如美國專利第8,513,207號及第8,927,705號，以及國際專利申請公開案第WO 2010/033225號)。此類結構可包括單股(ss)延伸(在分子之一側或兩側)以及ds延伸。
在一些實施例中，寡核苷酸參與切丁酶涉入(例如，切丁酶裂解)之下游的RNAi路徑。在一些實施例中，寡核苷酸在有義股之3'端具有懸垂(例如，長度為1、2或3個核苷酸)。在一些實施例中，寡核苷酸(例如，siRNA)包含與靶mRNA(例如，SNCA mRNA)反義之21個核苷酸之反義股及互補之過客有義股，其中該兩股黏接形成19-bp雙鏈體及在任一個或兩個3'端的2個核苷酸之懸垂。亦預期更長之寡核苷酸設計，包括具有23個核苷酸之反義股及21個核苷酸之過客股的寡核苷酸，其中在分子之右側(有義股之3'端/反義股之5'端)存在鈍端且在分子之左側(有義股之5'端/反義股之3'端)存在兩個核苷酸之3'反義股懸垂。在此類分子中，存在21-bp雙鏈體區域。參見例如美國專利第9,012,138號、第9,012,621號及第9,193,753號。
在一些實施例中，本文之寡核苷酸包含長度均在約17至約36個(例如，17至26個、20至25個或21-23個)核苷酸範圍內之有義股及反義股。在一些實施例中，寡核苷酸包含長度為19-30個核苷酸之反義股及長度為19-50個核苷酸之有義股，其中該反義股及該有義股為形成不對稱雙鏈體區域之獨立股，該雙鏈體區域在反義股之3'末端具有1-4個核苷酸之懸垂。在一些實施例中，寡核苷酸包含長度均在約19至約22個核苷酸範圍內之有義股及反義股。在一些實施例中，有義股及反義股之長度相等。在一些實施例中，寡核苷酸包含有義股及反義股，使得在有義股或反義股任一者上或有義股及反義股兩者上存在3'懸垂。
在一些實施例中，對於具有長度均在約21-23個核苷酸範圍內之有義股及反義股之寡核苷酸，有義股、反義股或兩股上之3'懸垂之長度為1或2個核苷酸。在一些實施例中，寡核苷酸具有22個核苷酸之反義股及20個核苷酸之有義股，其中在分子之右側(有義股之3'端/反義股之5'端)存在鈍端且在分子之左側(有義股之5'端/反義股之3'端)存在2個核苷酸之3'反義股懸垂。在此類分子中，存在20-bp雙鏈體區域。
用於本文之組合物及方法之其他寡核苷酸設計包括：16-mer siRNA(參見例如NUCLEIC ACIDS IN CHEMISTRY AND BIOLOGY,Blackburn(編)，Royal Society of Chemistry,2006)、shRNA(例如，具有19bp或更短之莖；參見例如Moore等人(2010)METHODS MOL.BIOL.629：141-58)、鈍性siRNA(例如，長度為19bp；參見例如Kraynack及Baker(2006)RNA 12：163-76)、不對稱siRNA(aiRNA；參見例如Sun等人(2008)Nat.Biotechnol.26：1379-82)、不對稱較短雙鏈體siRNA(參見例如Chang等人(2009)Mol.Ther.17：725-732)、叉形siRNA(參見例如Hohjoh(2004)FEBS Lett.557：193-98)、單股siRNA(Elsner(2012)Nat.Biotechnol.30：1063)、啞鈴形環狀siRNA(參見例如Abe等人(2007)J.Am.Chem.Soc.129：15108-09)，及小內部分段干擾RNA(siRNA；參見例如Bramsen等人(2007)Nucleic Acids Res.35：5886-97)。在一些實施例中可用於降低或抑制SNCA基因表現之寡核苷酸設計之其他非限制性實例為微小RNA(miRNA)、短髮夾RNA(shRNA)及短siRNA(參見例如Hamilton等人(2002)EMBO J.21：4671-79；亦參見美國專利申請公開案第2009/0099115號)。
此外，在一些實施例中，本文中用於降低或抑制SNCA基因表現之寡核苷酸為ss。此類結構可包括但不限於ss RNAi分子。最近之努力已證明ss RNAi分子之活性(參見例如Matsui等人(2016)Mol.Ther.24：946-955)。然而，在一些實施例中，寡核苷酸為反義寡核苷酸(ASO)。反義寡核苷酸為具有核鹼基序
列之ss寡核苷酸，且當按5'至3'方向書寫或描繪時，該核鹼基序列包含特定核酸之靶向區段之反向補體且經適當修飾(例如，作為間聚體(gapmer))以誘導細胞中RNaseH介導之其靶RNA之裂解或(例如，作為混聚體(mixmer))以抑制細胞中靶mRNA之轉譯。用於本文中之ASO可依此項技術中已知之任何適合之方式進行修飾，包括例如美國專利第9,567,587號中所示(包括例如長度、核鹼基(嘧啶、嘌呤)之糖部分及核鹼基之雜環部分之改變)。此外，ASO數十年來已用於降低特定靶基因之表現(參見例如Bennett等人(2017)Annu.Rev.Pharmacol.57：81-105)。
在一些實施例中，反義寡核苷酸(ASO)與SNCA mRNA共享互補區域。在一些實施例中，ASO靶向鑑定為NM_000345.3之人類SNCA之各個區域。在一些實施例中，ASO之長度為約15至約50個核苷酸。在一些實施例中，ASO之長度為15-25個核苷酸。在一些實施例中，ASO之長度為22個核苷酸。在一些實施例中，ASO與SEQ ID NO：1683-2066中之任一者互補。在一些實施例中，ASO之長度為至少15個連續核苷酸。在一些實施例中，ASO之長度為至少19個連續核苷酸。在一些實施例中，ASO之長度為至少20個連續核苷酸。在一些實施例中，ASO與靶序列相差1、2或3個核苷酸。
在一些態樣中，本揭示案提供用於靶向SNCA mRNA且抑制SNCA基因表現(例如，經由RNAi路徑)之ds RNAi寡核苷酸，該等寡核苷酸包含有義股(在本文中亦稱作過客股)及反義股(在本文中亦稱作引導股)。在一些實施例中，有義股及反義股為獨立股且不共價連接。在一些實施例中，有義股與反義股共價連接。在一些實施例中，有義股及反義股形成雙鏈體區域，其中有義股及反義股或其一部分以互補方式(例如，藉由沃森-克里克鹼基配對)彼此結合。
在一些實施例中，有義股具有第一區域(R1)及第二區域(R2)，其中R2包含第一亞區域(S1)、環(L)(諸如四環(tetraL)或三環(triL))及第二亞區域(S2)，其
中L位於S1與S2之間，且其中S1及S2形成第二雙鏈體(D2)。D2可具有各種長度。在一些實施例中，D2之長度為約1至約6bp。在一些實施例中，D2之長度為2-6、3-6、4-6、5-6、1-5、2-5、3-5或4-5bp。在一些實施例中，D2之長度為1、2、3、4、5或6bp。在一些實施例中，D2之長度為6bp。
在一些實施例中，有義股之R1及反義股形成第一雙鏈體(D1)。在一些實施例中，D1之長度為至少約15個(例如，至少15個、至少16個、至少17個、至少18個、至少19個、至少20個或至少21個)核苷酸。在一些實施例中，D1之長度在約12至約30個核苷酸之範圍內(例如，長度為12至30個、12至27個、15至22個、18至22個、18至25個、18至27個、18至30個或21至30個核苷酸)。在一些實施例中，D1之長度為至少12個核苷酸(例如，長度為至少12個、至少15個、至少20個、至少25個或至少30個核苷酸)。在一些實施例中，D1之長度為12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30個核苷酸。在一些實施例中，D1之長度為19個核苷酸。在一些實施例中，D1之長度為20個核苷酸。在一些實施例中，包含有義股及反義股之D1不跨越有義股及/或反義股之整個長度。在一些實施例中，包含有義股及反義股之D1跨越有義股或反義股任一者或兩者之整個長度。在某些實施例中，包含有義股及反義股之D1跨越有義股或反義股兩者之整個長度。
在一些實施例中，有義股之長度為36個核苷酸且位置自5'至3'編號為1-36。在一些實施例中，反義股之長度為22個核苷酸且位置自5'至3'編號為1-22。在一些實施例中，本文所述之位置編號遵循此編號格式。
在一些實施例中，寡核苷酸包含具有SEQ ID NO：1-384中之任一者之序列的有義股及包含SEQ ID NO：385-768中之任一者之互補序列的反義股。在一些實施例中，寡核苷酸包含具有SEQ ID NO：1683-2066之序列的有義股及包含SEQ ID NO：2067-2450中之任一者之互補序列的反義股。
在一些實施例中，寡核苷酸包含具有SEQ ID NO：1537-1571中之任一者之序列的有義股及包含SEQ ID NO：1572-1606中之任一者之互補序列的反義股。在一些實施例中，寡核苷酸包含具有SEQ ID NO：1537-1571及1681中之任一者之序列的有義股及包含SEQ ID NO：1572-1606中之任一者之互補序列的反義股。
在一些實施例中，寡核苷酸包含有義股及反義股，該有義股及該反義股包含選自以下之核苷酸序列：a)分別為SEQ ID NO：1537及1572；b)分別為SEQ ID NO：1538及1573；c)分別為SEQ ID NO：1539及1574；d)分別為SEQ ID NO：1540及1575；e)分別為SEQ ID NO：1541及1576；f)分別為SEQ ID NO：1542及1577；g)分別為SEQ ID NO：1543及1578；h)分別為SEQ ID NO：1544及1579；i)分別為SEQ ID NO：1545及1580；j)分別為SEQ ID NO：1546及1581；k)分別為SEQ ID NO：1547及1582；l)分別為SEQ ID NO：1548及1583；m)分別為SEQ ID NO：1549及1584；n)分別為SEQ ID NO：1550及1585；o)分別為SEQ ID NO：1551及1586；p)分別為SEQ ID NO：1552及1587；q)分別為SEQ ID NO：1553及1588；
r)分別為SEQ ID NO：1554及1589；s)分別為SEQ ID NO：1555及1590；t)分別為SEQ ID NO：1556及1591；u)分別為SEQ ID NO：1557及1592；v)分別為SEQ ID NO：1558及1593；w)分別為SEQ ID NO：1559及1594；x)分別為SEQ ID NO：1560及1595；y)分別為SEQ ID NO：1561及1596；z)分別為SEQ ID NO：1562及1597；aa)分別為SEQ ID NO：1563及1598；bb)分別為SEQ ID NO：1564及1599；cc)分別為SEQ ID NO：1565及1600；dd)分別為SEQ ID NO：1566及1601；ee)分別為SEQ ID NO：1567及1602；ff)分別為SEQ ID NO：1568及1603；gg)分別為SEQ ID NO：1569及1604；hh)分別為SEQ ID NO：1570及1605；ii)分別為SEQ ID NO：1571及1606；及jj)分別為SEQ ID NO：1681及1586。
在一些實施例中，寡核苷酸包含有義股及反義股，該有義股及該反義股包含選自以下之核苷酸序列：a)分別為SEQ ID NO：1540及1575；b)分別為SEQ ID NO：1544及1579；c)分別為SEQ ID NO：1546及1581；
d)分別為SEQ ID NO：1551及1586；e)分別為SEQ ID NO：1552及1587；f)分別為SEQ ID NO：1553及1588；g)分別為SEQ ID NO：1558及1594；h)分別為SEQ ID NO：1560及1595；i)分別為SEQ ID NO：1564及1599；j)分別為SEQ ID NO：1565及1600；k)分別為SEQ ID NO：1566及1601；l)分別為SEQ ID NO：1570及1605；及m)分別為SEQ ID NO：1681及1586。
在一些實施例中，寡核苷酸包含有義股及反義股，該有義股及該反義股包含選自以下之核苷酸序列：a)分別為SEQ ID NO：1553及1588；b)分別為SEQ ID NO：1560及1595；c)分別為SEQ ID NO：1564及1599；d)分別為SEQ ID NO：1551及1586；e)分別為SEQ ID NO：1570及1605；及f)分別為SEQ ID NO：1681及1586。
在一些實施例中，有義股包含SEQ ID NO：1553之序列，且反義股包含SEQ ID NO：1588之序列。在一些實施例中，有義股包含SEQ ID NO：1560之序列，且反義股包含SEQ ID NO：1595之序列。在一些實施例中，有義股包含SEQ ID NO：1564之序列，且反義股包含SEQ ID NO：1599之序列。在一些實施例中，有義股包含SEQ ID NO：1551之序列，且反義股包含SEQ ID NO：1586之序列。在一些實施例中，有義股包含SEQ ID NO：1570之序列，且反義股包含
SEQ ID NO：1605之序列。在一些實施例中，有義股包含SEQ ID NO：1681之序列，且反義股包含SEQ ID NO：1586之序列。
應了解，在一些實施例中，在描述寡核苷酸(例如，RNAi寡核苷酸)或其他核酸之結構時可參考序列表中呈現之序列。在此類實施例中，實際寡核苷酸或其他核酸當與指定序列相比時可具有一或多個替代性核苷酸(例如，DNA核苷酸之RNA對應物或RNA核苷酸之DNA對應物)及/或一或多個經修飾之核苷酸及/或一或多個經修飾之核苷酸間鍵聯及/或一或多個其他修飾，同時保留與指定序列基本上相同或相似之互補特性。
在一些實施例中，本文之RNAi寡核苷酸包含25個核苷酸之有義股及27個核苷酸之反義股，該反義股當由切丁酶作用時產生併入成熟RNA誘導型緘默化複合體(RISC)中之反義股。在一些實施例中，25個核苷酸之有義股包含選自SEQ ID NO：1-384之序列。在一些實施例中，27個核苷酸之反義股包含選自SEQ ID NO：385-768之序列。在一些實施例中，有義股長於27個核苷酸(例如，28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50個核苷酸)。在一些實施例中，有義股長於25個核苷酸(例如，26、27、28、29或30個核苷酸)。在一些實施例中，有義股包含選自SEQ ID NO：1683-2066之核苷酸序列，其中該核苷酸序列長於27個核苷酸(例如，28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50個核苷酸)。在一些實施例中，有義股包含選自SEQ ID NO：1683-2066之核苷酸序列，其中該核苷酸序列長於25個核苷酸(例如，26、27、28、29或30個核苷酸)。
在一些實施例中，寡核苷酸具有一個5'端，該5'端當與另一個5'端相比時在熱力學上較不穩定。在一些實施例中，提供不對稱RNAi寡核苷酸，該寡核苷酸在有義股之3'端包含鈍端且在反義股之3'端包含3'懸垂。在一些實施例
中，反義股上之3'懸垂之長度為約1至約8個核苷酸(例如，長度為1、2、3、4、5、6、7或8個核苷酸)。典型地，寡核苷酸在反義股之3'端具有兩個核苷酸之懸垂。然而，可能有其他懸垂。在一些實施例中，懸垂為3'懸垂，其包括介於1個與6個核苷酸之間的長度，視情況為1至5個、1至4個、1至3個、1至2個、2至6個、2至5個、2至4個、2至3個、3至6個、3至5個、3至4個、4至6個、4至5個、5至6個核苷酸，或1、2、3、4、5或6個核苷酸。在其他實施例中，懸垂為5'懸垂，其長度介於1個與6個核苷酸之間，視情況為1至5個、1至4個、1至3個、1至2個、2至6個、2至5個、2至4個、2至3個、3至6個、3至5個、3至4個、4至6個、4至5個、5至6個核苷酸，或1、2、3、4、5或6個核苷酸。
在一些實施例中，反義股之3'端上之兩個末端核苷酸經修飾。在一些實施例中，反義股之3'端上之兩個末端核苷酸與靶mRNA(例如，SNCA mRNA)互補。在一些實施例中，反義股之3'端上之兩個末端核苷酸與靶mRNA不互補。在一些實施例中，寡核苷酸之反義股之3'端上的兩個末端核苷酸未配對。在一些實施例中，寡核苷酸之反義股之3'端上的兩個末端核苷酸包含未配對之GG。在一些實施例中，寡核苷酸之反義股之3'端上的兩個末端核苷酸與靶mRNA不互補。在一些實施例中，寡核苷酸之各3'端上之兩個末端核苷酸為GG。典型地，ds寡核苷酸之各3'端上之兩個末端GG核苷酸中之一或兩者與靶mRNA不互補。在一些實施例中，寡核苷酸之各3'端上之兩個末端核苷酸為GG。在一些實施例中，寡核苷酸之各3'端上之兩個末端GG核苷酸中之一或兩者與靶mRNA不互補。在一些實施例中，寡核苷酸包含與SEQ ID NO：2067-2045中之任一者之連續核苷酸序列互補之靶向序列或互補區域，其中寡核苷酸之反義股之3'端上的兩個末端核苷酸包含未配對之GG。在一些實施例中，寡核苷酸包含反義股，該反義股包含選自SEQ ID NO：2067-2450之核苷酸序列，其中寡核苷酸之反義
股之3'端上的兩個末端核苷酸包含未配對之GG。在一些實施例中，寡核苷酸包含有義股，該有義股包含選自SEQ ID NO：1683-2066之核苷酸序列；及反義股，該反義股包含選自SEQ ID NO：2067-2450之核苷酸序列，其中寡核苷酸之反義股之3'端上的兩個末端核苷酸包含未配對之GG。
在一些實施例中，在構成本文之寡核苷酸之有義股與反義股之間存在一或多個(例如1、2、3、4或5個)錯配。若在有義股與反義股之間存在多於一個錯配，則其可連續定位(例如，連續2個、3個或更多個)，或可散佈於整個互補區域中。在一些實施例中，有義股之3'端含有一或多個錯配。在一個實施例中，在有義股之3'端併入兩個錯配。在一些實施例中，寡核苷酸之有義股之3'端之區段的鹼基錯配或去穩定化改良或增加寡核苷酸之效力。
在一些實施例中，寡核苷酸包含有義股及反義股，該有義股及該反義股包含選自以下之核苷酸序列：a)分別為SEQ ID NO：1537及1572；b)分別為SEQ ID NO：1538及1573；c)分別為SEQ ID NO：1539及1574；d)分別為SEQ ID NO：1540及1575；e)分別為SEQ ID NO：1541及1576；f)分別為SEQ ID NO：1542及1577；g)分別為SEQ ID NO：1543及1578；h)分別為SEQ ID NO：1544及1579；i)分別為SEQ ID NO：1545及1580；j)分別為SEQ ID NO：1546及1581；k)分別為SEQ ID NO：1547及1582；l)分別為SEQ ID NO：1548及1583；
m)分別為SEQ ID NO：1549及1584；n)分別為SEQ ID NO：1550及1585；o)分別為SEQ ID NO：1551及1586；p)分別為SEQ ID NO：1552及1587；q)分別為SEQ ID NO：1553及1588；r)分別為SEQ ID NO：1554及1589；s)分別為SEQ ID NO：1555及1590；t)分別為SEQ ID NO：1556及1591；u)分別為SEQ ID NO：1557及1592；v)分別為SEQ ID NO：1558及1593；w)分別為SEQ ID NO：1559及1594；x)分別為SEQ ID NO：1560及1595；y)分別為SEQ ID NO：1561及1596；z)分別為SEQ ID NO：1562及1597；aa)分別為SEQ ID NO：1563及1598；bb)分別為SEQ ID NO：1564及1599；cc)分別為SEQ ID NO：1565及1600；dd)分別為SEQ ID NO：1566及1601；ee)分別為SEQ ID NO：1567及1602；ff)分別為SEQ ID NO：1568及1603；gg)分別為SEQ ID NO：1569及1604；hh)分別為SEQ ID NO：1570及1605；ii)分別為SEQ ID NO：1571及1606；及jj)分別為SEQ ID NO：1681及1586，
其中在有義股與反義股之間存在一或多個(例如，1、2、3、4或5個)錯配。
在一些實施例中，寡核苷酸包含有義股及反義股，該有義股及該反義股包含選自以下之核苷酸序列：a)分別為SEQ ID NO：1540及1575；b)分別為SEQ ID NO：1544及1579；c)分別為SEQ ID NO：1546及1581；d)分別為SEQ ID NO：1551及1586；e)分別為SEQ ID NO：1552及1587；f)分別為SEQ ID NO：1553及1588；g)分別為SEQ ID NO：1558及1594；h)分別為SEQ ID NO：1560及1595；i)分別為SEQ ID NO：1564及1599；j)分別為SEQ ID NO：1565及1600；k)分別為SEQ ID NO：1566及1601；l)分別為SEQ ID NO：1570及1605；及m)分別為SEQ ID NO：1681及1586，其中在有義股與反義股之間存在一或多個(例如，1、2、3、4或5個)錯配。
在一些實施例中，寡核苷酸包含有義股及反義股，該有義股及該反義股包含選自以下之序列：a)分別為SEQ ID NO：1553及1588；b)分別為SEQ ID NO：1560及1595；c)分別為SEQ ID NO：1564及1599；d)分別為SEQ ID NO：1551及1586；e)分別為SEQ ID NO：1570及1605；及
f)分別為SEQ ID NO：1681及1586，其中在有義股與反義股之間存在一或多個(例如，1、2、3、4或5個)錯配。
反義股
在一些實施例中，寡核苷酸之反義股稱作「引導股」，其與RISC嚙合且結合至Argonaute蛋白，諸如Ago2，或者嚙合或結合至一或多個類似因子，且指導靶基因之緘默化。在一些實施例中，與反義股互補之有義股稱作「過客股」。
在一些實施例中，寡核苷酸包含長度為至多約50個核苷酸(例如，長度為至多50個、至多40個、至多35個、至多30個、至多27個、至多25個、至多21個、至多19個、至多17個、至多15個或至多12個核苷酸)之反義股。在一些實施例中，寡核苷酸包含長度為至少約12個核苷酸(例如，長度為至少12個、至少15個、至少19個、至少21個、至少22個、至少25個、至少27個、至少30個、至少35個或至少38個核苷酸)之反義股。在一些實施例中，反義股之長度在約12至約40個(例如，12至40個、12至36個、12至32個、12至28個、15至40個、15至36個、15至32個、15至30個、15至28個、17至22個、17至25個、19至27個、19至30個、20至40個、22至40個、25至40個或32至40個)核苷酸之範圍內。在一些實施例中，寡核苷酸包含長度為15至30個核苷酸之反義。在一些實施例中，本文所揭示之寡核苷酸中之任一者之反義股的長度為12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39或40個核苷酸。在一些實施例中，反義股之長度為22個核苷酸。
在一些實施例中，反義股包含如SEQ ID NO：1683-2066中之任一者所示之序列或由其組成。在一些實施例中，反義股包含至少約12個(例如，至少12個、至少13個、至少14個、至少15個、至少16個、至少17個、至少18
個、至少19個、至少20個、至少21個、至少22個或至少23個)如SEQ ID NO：2067-2450中之任一者所示之連續核苷酸序列。在一些實施例中，反義股包含如SEQ ID NO：385-768中之任一者所示之序列或由其組成。在一些實施例中，反義股包含至少約12個(例如，至少12個、至少13個、至少14個、至少15個、至少16個、至少17個、至少18個、至少19個、至少20個、至少21個、至少22個或至少23個)如SEQ ID NO：385-768中之任一者所示之連續核苷酸序列。在一些實施例中，反義股包含如SEQ ID NO：1572-1606中之任一者所示之序列或由其組成。在一些實施例中，反義股包含至少約12個(例如，至少12個、至少13個、至少14個、至少15個、至少16個、至少17個、至少18個、至少19個、至少20個、至少21個、至少22個或至少23個)如SEQ ID NO：1572-1606中之任一者所示之連續核苷酸序列。在一些實施例中，反義股包含如SEQ ID NO：2067-2450中之任一者所示之序列或由其組成。在一些實施例中，反義股包含至少約12個(例如，至少12個、至少13個、至少14個、至少15個、至少16個、至少17個、至少18個、至少19個、至少20個、至少21個、至少22個或至少23個)如SEQ ID NO：2067-2450中之任一者所示之連續核苷酸序列。在一些實施例中，反義股包含如SEQ ID NO：1575、1579、1581、1586、1587、1588、1594、1595、1599、1600、1601、1605及1586中之任一者所示之序列或由其組成。在一些實施例中，反義股包含至少約12個(例如，至少12個、至少13個、至少14個、至少15個、至少16個、至少17個、至少18個、至少19個、至少20個、至少21個、至少22個或至少23個)如SEQ ID NO：1575、1579、1581、1586、1587、1588、1594、1595、1599、1600、1601、1605及1586中之任一者所示之連續核苷酸序列。在一些實施例中，反義股包含如SEQ ID NO：1588、1595、1599、1586及1605中之任一者所示之序列或由其組成。在一些實施例中，反義股包含至少約12個(例如，至少12個、至少13個、至少14個、至少15個、至
少16個、至少17個、至少18個、至少19個、至少20個、至少21個、至少22個或至少23個)如SEQ ID NO：1588、1595、1599、1586及1605中之任一者所示之連續核苷酸序列。
有義股
在一些實施例中，寡核苷酸包含如SEQ ID NO：1683-2066中之任一者所示之有義股序列。在一些實施例中，有義股包含至少約12個(例如，至少13個、至少14個、至少15個、至少16個、至少17個、至少18個、至少19個、至少20個、至少21個、至少22個或至少23個)如SEQ ID NO：1683-2066中之任一者所示之連續核苷酸序列。在一些實施例中，有義股包含如SEQ ID NO：1-384中之任一者所示之序列。在一些實施例中，有義股包含至少約12個(例如，至少13個、至少14個、至少15個、至少16個、至少17個、至少18個、至少19個、至少20個、至少21個、至少22個或至少23個)如SEQ ID NO：1-384中之任一者所示之連續核苷酸序列。在一些實施例中，有義股包含如SEQ ID NO：1537-1571中之任一者所示之序列。在一些實施例中，有義股包含如SEQ ID NO：1537-1571及1681中之任一者所示之序列。在一些實施例中，有義股為SEQ ID NO：1681。在一些實施例中，有義股包含至少約12個(例如，至少13個、至少14個、至少15個、至少16個、至少17個、至少18個、至少19個、至少20個、至少21個、至少22個或至少23個)如SEQ ID NO：1537-1571中之任一者所示之連續核苷酸序列。在一些實施例中，有義股包含如SEQ ID NO：1781、1782、1796、1798、1802、1808、1814、1817、1713、1718、1726、1830、1839、1742、1846、1852、1865、1784、1804、1721、1822、1840、1735、1847、1855、1864、1901、1902、1938、1947、1955、1964、1973及1978中之任一者所示之序列。在一些實施例中，有義股包含至少約12個(例如，至少13個、至少14個、至少15個、至少16個、至少17個、至少18個、至少19個、至少20個、至少21
個、至少22個或至少23個)如SEQ ID NO：1781、1782、1796、1798、1802、1808、1814、1817、1713、1718、1726、1830、1839、1742、1846、1852、1865、1784、1804、1721、1822、1840、1735、1847、1855、1864、1901、1902、1938、1947、1955、1964、1973及1978中之任一者所示之連續核苷酸序列。在一些實施例中，有義股包含如SEQ ID NO：1540、1544、1546、1551、1552、1553、1558、1560、1564、1565、1566及1570中之任一者所示之序列。在一些實施例中，有義股包含至少約12個(例如，至少13個、至少14個、至少15個、至少16個、至少17個、至少18個、至少19個、至少20個、至少21個、至少22個或至少23個)如SEQ ID NO：1540、1544、1546、1551、1552、1553、1558、1560、1564、1565、1566及1570中之任一者所示之連續核苷酸序列。在一些實施例中，有義股包含如SEQ ID NO：1553、1560、1564、1551及1570中之任一者所示之序列。在一些實施例中，有義股包含至少約12個(例如，至少13個、至少14個、至少15個、至少16個、至少17個、至少18個、至少19個、至少20個、至少21個、至少22個或至少23個)如SEQ ID NO：1553、1560、1564、1551及1570中之任一者所示之連續核苷酸序列。
在一些實施例中，寡核苷酸包含如SEQ ID NO：1540、1544、1546、1551、1552、1553、1558、1560、1564、1565、1566、1570及1681中之任一者所示之有義股序列。在一些實施例中，有義股包含至少約12個(例如，至少13個、至少14個、至少15個、至少16個、至少17個、至少18個、至少19個、至少20個、至少21個、至少22個或至少23個)如SEQ ID NO：1540、1544、1546、1551、1552、1553、1558、1560、1564、1565、1566、1570及1681中之任一者所示之連續核苷酸序列。在一些實施例中，有義股包含如SEQ ID NO：1553、1560、1564、1551、1570及1681中之任一者所示之序列。在一些實施例中，有義股包含至少約12個(例如，至少13個、至少14個、至少15個、至少
16個、至少17個、至少18個、至少19個、至少20個、至少21個、至少22個或至少23個)如SEQ ID NO：1553、1560、1564、1551、1570及1681中之任一者所示之連續核苷酸序列。
在一些實施例中，有義股之長度為至多約50個核苷酸(例如，長度為至多50個、至多40個、至多36個、至多30個、至多27個、至多25個、至多21個、至多19個、至多17個或至多12個核苷酸)。在一些實施例中，有義股之長度為至少約12個核苷酸(例如，長度為至少12個、至少15個、至少19個、至少21個、至少25個、至少27個、至少30個、至少36個或至少38個核苷酸)。在一些實施例中，有義股之長度在約12至約50個(例如，12至50個、12至40個、12至36個、12至32個、12至28個、15至40個、15至36個、15至32個、15至28個、17至21個、17至25個、19至27個、19至30個、20至40個、22至40個、25至40個或32至40個)核苷酸之範圍內。在一些實施例中，有義股之長度為15至50個核苷酸。在一些實施例中，有義股之長度為18至36個核苷酸。在一些實施例中，有義股之長度為12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50個核苷酸。在一些實施例中，有義股之長度為36個核苷酸。
在一些實施例中，有義股在其3'端包含莖環結構。在一些實施例中，莖環由股內鹼基配對形成。在一些實施例中，有義股在其5'端包含莖環結構。在一些實施例中，莖環之莖包含長度為2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14個核苷酸之雙鏈體。在一些實施例中，莖環之莖包含長度為2個核苷酸之雙鏈體。在一些實施例中，莖環之莖包含長度為3個核苷酸之雙鏈體。在一些實施例中，莖環之莖包含長度為4個核苷酸之雙鏈體。在一些實施例中，莖環之莖包含長度為5個核苷酸之雙鏈體。在一些實施例中，莖環之莖包含長度為6個核
苷酸之雙鏈體。在一些實施例中，莖環之莖包含長度為7個核苷酸之雙鏈體。在一些實施例中，莖環之莖包含長度為8個核苷酸之雙鏈體。在一些實施例中，莖環之莖包含長度為9個核苷酸之雙鏈體。在一些實施例中，莖環之莖包含長度為10個核苷酸之雙鏈體。在一些實施例中，莖環之莖包含長度為11個核苷酸之雙鏈體。在一些實施例中，莖環之莖包含長度為12個核苷酸之雙鏈體。在一些實施例中，莖環之莖包含長度為13個核苷酸之雙鏈體。在一些實施例中，莖環之莖包含長度為14個核苷酸之雙鏈體。
在一些實施例中，莖環提供針對降解(例如，酶促降解)之寡核苷酸保護，促進或改良靶向及/或遞送至靶細胞、組織或器官(例如，肝臟或腦)，或兩者。舉例而言，在一些實施例中，莖環之環提供包含一或多個修飾之核苷酸，該一或多個修飾促進、改良或增加靶向靶mRNA(例如，SNCA mRNA)、對靶基因表現(例如，SNCA基因表現)之抑制及/或遞送至靶細胞、組織或器官(例如，CNS)，或其組合。在一些實施例中，莖環本身或對莖環之修飾實質上不影響寡核苷酸之固有基因表現抑制活性，但促進、改良或增加穩定性(例如，提供針對降解之保護)及/或寡核苷酸向靶細胞、組織或器官(例如，CNS)之遞送。在某些實施例中，寡核苷酸包含有義股，該有義股包含(例如，在其3'端)如下所示之莖環：S1-L-S2，其中S1與S2互補，且其中L在S1與S2之間形成長度為至多約10個核苷酸(例如，長度為3、4、5、6、7、8、9或10個核苷酸)之單股環。在一些實施例中，環(L)之長度為3個核苷酸(例如，三環或triL)。在一些實施例中，環(L)之長度為4個核苷酸(例如，四環或tetraL)。在一些實施例中，環(L)之長度為5個核苷酸(例如，五環或pentaL)。在一些實施例中，環(L)之長度為6個核苷酸(例如，六環或hexaL)。在一些實施例中，環(L)之長度為7個核苷酸(例如，七環或heptaL)。在一些實施例中，環(L)之長度為8個核苷酸(例如，八環或octaL)。在一些實施例中，環(L)之長度為9個核苷酸(例如，九環或nonaL)。在一些實施例
中，環(L)之長度為10個核苷酸(例如，十環或decaL)。
在一些實施例中，寡核苷酸包含與SEQ ID NO：1683-2066中之任一者之連續核苷酸序列互補之靶向序列或互補區域，且寡核苷酸包含有義股，該有義股包含(例如，在其3'端)如下所示之莖環：S1-L-S2，其中S1與S2互補，且其中L在S1與S2之間形成長度為至多約10個核苷酸(例如，長度為3、4、5、6、7、8、9或10個核苷酸)之ss環。在一些實施例中，寡核苷酸包含與SEQ ID NO：1683-2066中之任一者之連續核苷酸序列互補之靶向序列或互補區域，且寡核苷酸包含有義股，該有義股包含(例如，在其3'端)如下所示之莖環：S1-L-S2，其中S1與S2互補，且其中L在S1與S2之間形成長度為4個核苷酸之ss環。在一些實施例中，具有如上文所述之結構S1-L-S2之莖環的環(L)為如美國專利第10,131,912號中所述之tetraL(例如，在帶切口之四環結構內)，該專利以引用之方式併入本文中。在一些實施例中，寡核苷酸包含與SEQ ID NO：1683-2066中之任一者之連續核苷酸序列互補之靶向序列或互補區域及tetraL。在一些態樣中，四環包含序列5'-GAAA-3'。在一些態樣中，莖環包含序列5'-GCAGCCGAAAGGCUGC-3'(SEQ ID NO：1680)。
在其他實施例中，環(L)為triL。在一些實施例中，寡核苷酸包含與SEQ ID NO：1683-2066中之任一者之連續核苷酸序列互補之靶向序列或互補區域及triL。在一些實施例中，triL包含核糖核苷酸、去氧核糖核苷酸、經修飾之核苷酸、遞送配位體及其組合。
雙鏈體長度
在一些實施例中，在有義股與反義股之間形成之雙鏈體的長度為至少約12個(例如，至少15個、至少16個、至少17個、至少18個、至少19個、至少20個或至少21個)核苷酸。在一些實施例中，雙鏈體之長度在約12至約30個核苷酸之範圍內(例如，長度為12至30個、12至27個、12至22個、15至25
個、18至30個、18至22個、18至25個、18至27個、18至30個、19至30個或21至30個核苷酸)。在一些實施例中，雙鏈體之長度為12、13、14、15、16、17、18、19、29、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30個核苷酸。在一些實施例中，雙鏈體之長度為12個核苷酸。在一些實施例中，雙鏈體之長度為13個核苷酸。在一些實施例中，雙鏈體之長度為14個核苷酸。在一些實施例中，雙鏈體之長度為15個核苷酸。在一些實施例中，雙鏈體之長度為16個核苷酸。在一些實施例中，雙鏈體之長度為17個核苷酸。在一些實施例中，雙鏈體之長度為18個核苷酸。在一些實施例中，雙鏈體之長度為19個核苷酸。在一些實施例中，雙鏈體之長度為20個核苷酸。在一些實施例中，雙鏈體之長度為21個核苷酸。在一些實施例中，雙鏈體之長度為22個核苷酸。在一些實施例中，雙鏈體之長度為23個核苷酸。在一些實施例中，所形成之雙鏈體之長度為24個核苷酸。在一些實施例中，雙鏈體之長度為25個核苷酸。在一些實施例中，雙鏈體之長度為26個核苷酸。在一些實施例中，雙鏈體之長度為27個核苷酸。在一些實施例中，雙鏈體之長度為28個核苷酸。在一些實施例中，雙鏈體之長度為29個核苷酸。在一些實施例中，雙鏈體之長度為30個核苷酸。在一些實施例中，雙鏈體不跨越有義股及/或反義股之整個長度。在一些實施例中，雙鏈體跨越有義股或反義股任一者之整個長度。在一些實施例中，雙鏈體跨越有義股及反義股兩者之整個長度。
在一些實施例中，有義股及反義股包含選自由以下組成之群的核苷酸序列：a)分別為SEQ ID NO：1537及1572；b)分別為SEQ ID NO：1538及1573；c)分別為SEQ ID NO：1539及1574；d)分別為SEQ ID NO：1540及1575；
e)分別為SEQ ID NO：1541及1576；f)分別為SEQ ID NO：1542及1577；g)分別為SEQ ID NO：1543及1578；h)分別為SEQ ID NO：1544及1579；i)分別為SEQ ID NO：1545及1580；j)分別為SEQ ID NO：1546及1581；k)分別為SEQ ID NO：1547及1582；l)分別為SEQ ID NO：1548及1583；m)分別為SEQ ID NO：1549及1584；n)分別為SEQ ID NO：1550及1585；o)分別為SEQ ID NO：1551及1586；p)分別為SEQ ID NO：1552及1587；q)分別為SEQ ID NO：1553及1588；r)分別為SEQ ID NO：1554及1589；s)分別為SEQ ID NO：1555及1590；t)分別為SEQ ID NO：1556及1591；u)分別為SEQ ID NO：1557及1592；v)分別為SEQ ID NO：1558及1593；w)分別為SEQ ID NO：1559及1594；x)分別為SEQ ID NO：1560及1595；y)分別為SEQ ID NO：1561及1596；z)分別為SEQ ID NO：1562及1597；aa)分別為SEQ ID NO：1563及1598；bb)分別為SEQ ID NO：1564及1599；
cc)分別為SEQ ID NO：1565及1600；dd)分別為SEQ ID NO：1566及1601；ee)分別為SEQ ID NO：1567及1602；ff)分別為SEQ ID NO：1568及1603；gg)分別為SEQ ID NO：1569及1604；hh)分別為SEQ ID NO：1570及1605；ii)分別為SEQ ID NO：1571及1606；及jj)分別為SEQ ID NO：1681及1586，其中在有義股與反義股之間形成之雙鏈體的長度在約12至約30個核苷酸之範圍內(例如，長度為12至30個、12至27個、12至22個、15至25個、18至30個、18至22個、18至25個、18至27個、18至30個、19至30個或21至30個核苷酸)。
在一些實施例中，有義股及反義股包含選自由以下組成之群的核苷酸序列：a)分別為SEQ ID NO：1540及1575；b)分別為SEQ ID NO：1544及1579；c)分別為SEQ ID NO：1546及1581；d)分別為SEQ ID NO：1551及1586；e)分別為SEQ ID NO：1552及1587；f)分別為SEQ ID NO：1553及1588；g)分別為SEQ ID NO：1558及1594；h)分別為SEQ ID NO：1560及1595；i)分別為SEQ ID NO：1564及1599；j)分別為SEQ ID NO：1565及1600；
k)分別為SEQ ID NO：1566及1601；l)分別為SEQ ID NO：1570及1605；及m)分別為SEQ ID NO：1681及1586，其中在有義股與反義股之間形成之雙鏈體的長度在約12至約30個核苷酸之範圍內(例如，長度為12至30個、12至27個、12至22個、15至25個、18至30個、18至22個、18至25個、18至27個、18至30個、19至30個或21至30個核苷酸)。
在一些實施例中，有義股及反義股包含選自由以下組成之群的核苷酸序列：a)分別為SEQ ID NO：1553及1588；b)分別為SEQ ID NO：1560及1595；c)分別為SEQ ID NO：1564及1599；d)分別為SEQ ID NO：1551及1586；e)分別為SEQ ID NO：1570及1605；及f)分別為SEQ ID NO：1681及1586，其中在有義股與反義股之間形成之雙鏈體的長度在約12至約30個核苷酸之範圍內(例如，長度為12至30個、12至27個、12至22個、15至25個、18至30個、18至22個、18至25個、18至27個、18至30個、19至30個或21至30個核苷酸)。
在一些實施例中，寡核苷酸(例如，RNAi寡核苷酸)包含有義股及反義股，其中任一股或兩股之末端包含鈍端。在一些實施例中，寡核苷酸包含有義股及反義股，該有義股及該反義股為形成不對稱雙鏈體區域之獨立股，該雙鏈體區域在反義股之3'末端具有懸垂。在一些實施例中，寡核苷酸包含有義股及反義
股，其中任一股或兩股之末端包含含有一或多個核苷酸之懸垂。在一些實施例中，構成懸垂之一或多個核苷酸為未配對之核苷酸。在一些實施例中，本文之寡核苷酸包含有義股及反義股，其中該有義股之3'末端及該反義股之5'末端包含鈍端。在一些實施例中，寡核苷酸包含有義股及反義股，其中該有義股之5'末端及該反義股之3'末端包含鈍端。
在一些實施例中，寡核苷酸包含有義股及反義股，其中任一股或兩股之3'末端包含含有一或多個核苷酸之3'懸垂。在一些實施例中，寡核苷酸包含有義股及反義股，其中該有義股包含含有一或多個核苷酸之3'懸垂。在一些實施例中，寡核苷酸包含有義股及反義股，其中該反義股包含含有一或多個核苷酸之3'懸垂。在一些實施例中，寡核苷酸包含有義股及反義股，其中該有義股及該反義股兩者均包含含有一或多個核苷酸之3'懸垂。
在一些實施例中，3'懸垂之長度為約1至約20個核苷酸(例如，長度為約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或約20個核苷酸)。在一些實施例中，3'懸垂之長度為約1至19個、1至18個、1至17個、1至16個、1至15個、1至14個、1至13個、1至12個、1至11個、1至10個、1至9個、1至8個、1至7個、1至6個、1至5個、1至4個、1至3個或1至2個核苷酸。在一些實施例中，3'懸垂之長度為1個核苷酸。在一些實施例中，3'懸垂之長度為2個核苷酸。在一些實施例中，3'懸垂之長度為3個核苷酸。在一些實施例中，3'懸垂之長度為4個核苷酸。在一些實施例中，3'懸垂之長度為5個核苷酸。在一些實施例中，3'懸垂之長度為6個核苷酸。在一些實施例中，3'懸垂之長度為7個核苷酸。在一些實施例中，3'懸垂之長度為8個核苷酸。在一些實施例中，3'懸垂之長度為9個核苷酸。在一些實施例中，3'懸垂之長度為10個核苷酸。在一些實施例中，3'懸垂之長度為11個核苷酸。在一些實施例中，3'懸垂之長度為12個核苷酸。在一些實施例中，3'懸垂之長度
為13個核苷酸。在一些實施例中，3'懸垂之長度為14個核苷酸。在一些實施例中，3'懸垂之長度為15個核苷酸。在一些實施例中，3'懸垂之長度為16個核苷酸。在一些實施例中，3'懸垂之長度為17個核苷酸。在一些實施例中，3'懸垂之長度為18個核苷酸。在一些實施例中，3'懸垂之長度為19個核苷酸。在一些實施例中，3'懸垂之長度為20個核苷酸。
在一些實施例中，寡核苷酸包含有義股及反義股，其中該有義股及該反義股包含選自由以下組成之群的核苷酸序列：a)分別為SEQ ID NO：1537及1572；b)分別為SEQ ID NO：1538及1573；c)分別為SEQ ID NO：1539及1574；d)分別為SEQ ID NO：1540及1575；e)分別為SEQ ID NO：1541及1576；f)分別為SEQ ID NO：1542及1577；g)分別為SEQ ID NO：1543及1578；h)分別為SEQ ID NO：1544及1579；i)分別為SEQ ID NO：1545及1580；j)分別為SEQ ID NO：1546及1581；k)分別為SEQ ID NO：1547及1582；l)分別為SEQ ID NO：1548及1583；m)分別為SEQ ID NO：1549及1584；n)分別為SEQ ID NO：1550及1585；o)分別為SEQ ID NO：1551及1586；p)分別為SEQ ID NO：1552及1587；q)分別為SEQ ID NO：1553及1588；
r)分別為SEQ ID NO：1554及1589；s)分別為SEQ ID NO：1555及1590；t)分別為SEQ ID NO：1556及1591；u)分別為SEQ ID NO：1557及1592；v)分別為SEQ ID NO：1558及1593；w)分別為SEQ ID NO：1559及1594；x)分別為SEQ ID NO：1560及1595；y)分別為SEQ ID NO：1561及1596；z)分別為SEQ ID NO：1562及1597；aa)分別為SEQ ID NO：1563及1598；bb)分別為SEQ ID NO：1564及1599；cc)分別為SEQ ID NO：1565及1600；dd)分別為SEQ ID NO：1566及1601；ee)分別為SEQ ID NO：1567及1602；ff)分別為SEQ ID NO：1568及1603；gg)分別為SEQ ID NO：1569及1604；hh)分別為SEQ ID NO：1570及1605；ii)分別為SEQ ID NO：1571及1606；及jj)分別為SEQ ID NO：1681及1586，其中反義股包含長度為約1至約20個核苷酸(例如，長度為約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或約20個核苷酸)之3'懸垂，視情況其中該3'懸垂之長度為2個核苷酸。
在一些實施例中，寡核苷酸包含有義股及反義股，其中該有義股及該反義股包含選自由以下組成之群的核苷酸序列：
a)分別為SEQ ID NO：1540及1575；b)分別為SEQ ID NO：1544及1579；c)分別為SEQ ID NO：1546及1581；d)分別為SEQ ID NO：1551及1586；e)分別為SEQ ID NO：1552及1587；f)分別為SEQ ID NO：1553及1588；g)分別為SEQ ID NO：1558及1594；h)分別為SEQ ID NO：1560及1595；i)分別為SEQ ID NO：1564及1599；j)分別為SEQ ID NO：1565及1600；k)分別為SEQ ID NO：1566及1601；l)分別為SEQ ID NO：1570及1605；及m)分別為SEQ ID NO：1681及1586，且其中反義股包含長度為約1至約20個核苷酸(例如，長度為約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或約20個核苷酸)之3'懸垂，視情況其中該3'懸垂之長度為2個核苷酸。
在一些實施例中，寡核苷酸包含有義股及反義股，其中該有義股及該反義股包含選自由以下組成之群的核苷酸序列：a)分別為SEQ ID NO：1553及1588；b)分別為SEQ ID NO：1560及1595；c)分別為SEQ ID NO：1564及1599；d)分別為SEQ ID NO：1551及1586；e)分別為SEQ ID NO：1570及1605；及f)分別為SEQ ID NO：1681及1586，
其中反義股包含長度為約1至約20個核苷酸(例如，長度為約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或約20個核苷酸)之3'懸垂，視情況其中該3'懸垂之長度為2個核苷酸。
在一些實施例中，寡核苷酸包含有義股及反義股，其中該有義股包含含有一或多個核苷酸之5'懸垂。
在一些實施例中，寡核苷酸包含有義股及反義股，其中該有義股及該反義股包含選自由以下組成之群的核苷酸序列：a)分別為SEQ ID NO：1540及1575；b)分別為SEQ ID NO：1544及1579；c)分別為SEQ ID NO：1546及1581；d)分別為SEQ ID NO：1551及1586；e)分別為SEQ ID NO：1552及1587；f)分別為SEQ ID NO：1553及1588；g)分別為SEQ ID NO：1558及1594；h)分別為SEQ ID NO：1560及1595；i)分別為SEQ ID NO：1564及1599；j)分別為SEQ ID NO：1565及1600；k)分別為SEQ ID NO：1566及1601；l)分別為SEQ ID NO：1570及1605；及m)分別為SEQ ID NO：1681及1586，其中反義股包含長度為約1至約20個核苷酸(例如，長度為約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或約20個核苷酸)之5'懸垂，視情況其中該5'懸垂之長度為2個核苷酸。
在一些實施例中，寡核苷酸包含有義股及反義股，其中該有義股及
該反義股包含選自由以下組成之群的核苷酸序列：a)分別為SEQ ID NO：1553及1588；b)分別為SEQ ID NO：1560及1595；c)分別為SEQ ID NO：1564及1599；d)分別為SEQ ID NO：1551及1586；e)分別為SEQ ID NO：1570及1605；及f)分別為SEQ ID NO：1681及1586，其中反義股包含長度為約1至約20個核苷酸(例如，長度為約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或約20個核苷酸)之5'懸垂，視情況其中該5'懸垂之長度為2個核苷酸。
在一些實施例中，構成有義股及/或反義股之3'末端或5'末端之一或多個(例如，2、3、4、5個或更多個)核苷酸經修飾。舉例而言，在一些實施例中，反義股之3'末端之一或兩個末端核苷酸經修飾。在一些實施例中，反義股之3'末端之最後一個核苷酸經修飾(例如包含2'修飾，例如2'-O-甲氧基乙基)。在一些實施例中，反義股之3'末端之最後一或兩個末端核苷酸與標靶互補。在一些實施例中，反義股之3'末端之最後一或兩個核苷酸與標靶不互補。
在一些實施例中，寡核苷酸包含有義股及反義股，其中該有義股之3'末端包含本文所述之莖環，且該反義股之3'末端包含3'懸垂。在一些實施例中，寡核苷酸包含形成帶切口之tetraL結構之有義股及反義股，其中該有義股之3'末端包含莖環，其中環(L)為本文所述之tetraL，且其中該反義股之3'末端包含本文所述之3'懸垂。在一些實施例中，3'懸垂之長度為2個核苷酸。在一些實施例中，構成3'懸垂之2個核苷酸均包含鳥嘌呤(G)核鹼基。典型地，構成反義股之3'懸垂之核苷酸中之一或兩者與靶mRNA不互補。
在一些實施例中，寡核苷酸包含修飾。寡核苷酸(例如，RNAi寡核苷酸)可依各種方式進行修飾，以改良或控制特異性、穩定性、遞送、生物可用度、對核酸酶降解之抗性、免疫原性、鹼基配對特性、RNA分佈及細胞攝取以及與治療研究用途相關之其他特徵。
在一些實施例中，修飾為經修飾之糖。在一些實施例中，修飾為5'末端磷酸酯基團。在一些實施例中，修飾為經修飾之核苷間鍵聯。在一些實施例中，修飾為經修飾之鹼基。在一些實施例中，修飾為可逆修飾。在一些實施例中，寡核苷酸可包含本文所述之修飾中之任一者或其任何組合。舉例而言，在一些實施例中，寡核苷酸包含至少一個經修飾之糖、5'末端磷酸酯基團、至少一個經修飾之核苷間鍵聯、至少一個經修飾之鹼基及至少一個可逆修飾。
在一些實施例中，寡核苷酸包含至少一個經修飾之糖、5'末端磷酸酯基團、至少一個經修飾之核苷酸間鍵聯及至少一個經修飾之鹼基。在一些實施例中，寡核苷酸之有義股及反義股包含選自由以下組成之群的核苷酸序列：a)分別為SEQ ID NO：1537及1572；b)分別為SEQ ID NO：1538及1573；c)分別為SEQ ID NO：1539及1574；d)分別為SEQ ID NO：1540及1575；e)分別為SEQ ID NO：1541及1576；f)分別為SEQ ID NO：1542及1577；g)分別為SEQ ID NO：1543及1578；h)分別為SEQ ID NO：1544及1579；i)分別為SEQ ID NO：1545及1580；j)分別為SEQ ID NO：1546及1581；k)分別為SEQ ID NO：1547及1582；
l)分別為SEQ ID NO：1548及1583；m)分別為SEQ ID NO：1549及1584；n)分別為SEQ ID NO：1550及1585；o)分別為SEQ ID NO：1551及1586；p)分別為SEQ ID NO：1552及1587；q)分別為SEQ ID NO：1553及1588；r)分別為SEQ ID NO：1554及1589；s)分別為SEQ ID NO：1555及1590；t)分別為SEQ ID NO：1556及1591；u)分別為SEQ ID NO：1557及1592；v)分別為SEQ ID NO：1558及1593；w)分別為SEQ ID NO：1559及1594；x)分別為SEQ ID NO：1560及1595；y)分別為SEQ ID NO：1561及1596；z)分別為SEQ ID NO：1562及1597；aa)分別為SEQ ID NO：1563及1598；bb)分別為SEQ ID NO：1564及1599；cc)分別為SEQ ID NO：1565及1600；dd)分別為SEQ ID NO：1566及1601；ee)分別為SEQ ID NO：1567及1602；ff)分別為SEQ ID NO：1568及1603；gg)分別為SEQ ID NO：1569及1604；hh)分別為SEQ ID NO：1570及1605；ii)分別為SEQ ID NO：1571及1606；及
jj)分別為SEQ ID NO：1681及1586，其中寡核苷酸包含至少一個經修飾之糖、5'末端磷酸酯基團、至少一個經修飾之核苷酸間鍵聯及至少一個經修飾之鹼基。
在一些實施例中，有義股及反義股包含選自由以下組成之群的核苷酸序列：a)分別為SEQ ID NO：1540及1575；b)分別為SEQ ID NO：1544及1579；c)分別為SEQ ID NO：1546及1581；d)分別為SEQ ID NO：1551及1586；e)分別為SEQ ID NO：1552及1587；f)分別為SEQ ID NO：1553及1588；g)分別為SEQ ID NO：1558及1594；h)分別為SEQ ID NO：1560及1595；i)分別為SEQ ID NO：1564及1599；j)分別為SEQ ID NO：1565及1600；k)分別為SEQ ID NO：1566及1601；l)分別為SEQ ID NO：1570及1605；及m)分別為SEQ ID NO：1681及1586，其中寡核苷酸包含至少一個經修飾之糖、5'末端磷酸酯基團、至少一個經修飾之核苷酸間鍵聯及至少一個經修飾之鹼基。
在一些實施例中，有義股及反義股包含選自由以下組成之群的核苷酸序列：a)分別為SEQ ID NO：1553及1588；b)分別為SEQ ID NO：1560及1595；
c)分別為SEQ ID NO：1564及1599；d)分別為SEQ ID NO：1551及1586；e)分別為SEQ ID NO：1570及1605；及f)分別為SEQ ID NO：1681及1586，其中寡核苷酸包含至少一個經修飾之糖、5'末端磷酸酯基團、至少一個經修飾之核苷酸間鍵聯及至少一個經修飾之鹼基。
寡核苷酸上之修飾數目及彼等核苷酸修飾之位置可能影響寡核苷酸之特性。舉例而言，寡核苷酸可藉由將其包含於脂質奈米粒子(LNP)或類似載劑中而在活體內遞送。然而，當寡核苷酸不受LNP或類似載劑保護時，至少一些核苷酸經修飾可為有利的。因此，在一些實施例中，寡核苷酸之所有或實質上所有核苷酸經修飾。在一些實施例中，多於一半之核苷酸經修飾。在一些實施例中，少於一半之核苷酸經修飾。在一些實施例中，構成寡核苷酸之所有核苷酸之糖部分在2'位置處經修飾。修飾可為可逆的或不可逆的。在一些實施例中，寡核苷酸具有足以促成所需特徵(例如，防止酶促降解、在活體內投與後靶向所需細胞之能力及/或熱力學穩定性)之數目及類型之經修飾核苷酸。
糖修飾
在一些實施例中，寡核苷酸包含經修飾之糖。在一些實施例中，經修飾之糖(本文中亦稱作糖類似物)包括經修飾之去氧核糖或核糖部分，例如，其中一或多個修飾在糖之2'、3'、4'及/或5'碳位置處發生。在一些實施例中，經修飾之糖亦可包括非天然替代性碳結構，諸如存在於以下中之彼等：鎖核酸(「LNA」；參見例如Koshkin等人(1998)Tetrahedon 54：3607-30)、非鎖核酸(「UNA」；參見例如Snead等人(2013)Mol.Ther-Nucl.Acids 2：e103)及橋聯核酸(「BNA」；參見例如Imanishi及Obika(2002)Chem Commun.(Camb)21：1653-59)。
在一些實施例中，糖中之核苷酸修飾包括2'-修飾。在一些實施例中，
2'-修飾可為2'-O-炔丙基、2'-O-丙胺、2'-胺基、2'-乙基、2'-F、2'-胺基乙基(EA)、2'-OMe、2'-O-甲氧基乙基(2'-MOE)、2'-O-[2-(甲基胺基)-2-側氧基乙基](2'-O-NMA)或2'-去氧-2'-氟-β-d-阿拉伯糖核酸(2'-FANA)。在一些實施例中，修飾為2'-F、2'-OMe或2'-MOE。在一些實施例中，經修飾之糖包含糖環之修飾，其可包含糖環之一或多個碳之修飾。舉例而言，核苷酸之糖的修飾可包括糖之2'-氧連接至糖之1'-碳或4'-碳，或2'-氧經由伸乙基或亞甲基橋連接至1'-碳或4'-碳。在一些實施例中，經修飾之核苷酸具有缺乏2'-碳至3'-碳鍵之無環糖。在一些實施例中，經修飾之核苷酸具有硫醇基(例如，在糖之4'-位置處)。
在一些實施例中，寡核苷酸包含至少約1個經修飾之核苷酸(例如，至少1個、至少5個、至少10個、至少15個、至少20個、至少25個、至少30個、至少35個、至少40個、至少45個、至少50個、至少55個、至少60個或更多個)。在一些實施例中，寡核苷酸之有義股包含至少約1個經修飾之核苷酸(例如，至少1個、至少5個、至少10個、至少15個、至少20個、至少25個、至少30個、至少35個或更多個)。在一些實施例中，寡核苷酸之反義股包含至少約1個經修飾之核苷酸(例如，至少1個、至少5個、至少10個、至少15個、至少20個或更多個)。
在一些實施例中，有義股之所有核苷酸經修飾。在一些實施例中，反義股之所有核苷酸經修飾。在一些實施例中，所有核苷酸(亦即，有義股及反義股兩者)經修飾。在一些實施例中，經修飾之核苷酸包含2'-修飾(例如，2'-F或2'-OMe、2'-MOE及2'-去氧-2'-氟-β-d-阿拉伯糖核酸)。在一些實施例中，經修飾之核苷酸包含2'-修飾(例如，2'-F或2'-OMe)。
在一些實施例中，本揭示案提供具有不同修飾模式之寡核苷酸。在一些實施例中，寡核苷酸包含具有如實例及序列表中所列之修飾模式的有義股序列及具有如實例及序列表中所列之修飾模式的反義股。
在一些實施例中，寡核苷酸包含具有經2'-F修飾之核苷酸之反義股。在其他實施例中，寡核苷酸包含具有經2'-F及2'-OMe修飾之核苷酸之反義股。在一些實施例中，寡核苷酸包含具有經2'-F修飾之核苷酸之有義股。在其他實施例中，寡核苷酸包含具有經2'-F及2'-OMe修飾之核苷酸之有義股。
在一些實施例中，寡核苷酸包含有義股，其中有義股之約10%至約15%或10%、11%、12%、13%、14%或15%之核苷酸包含2'-F修飾。在一些實施例中，寡核苷酸包含有義股，其中約18%至約23%或18%、19%、20%、21%、22%或23%之核苷酸包含2'-F修飾。在一些實施例中，寡核苷酸包含有義股，其中約38%至約43%或38%、39%、40%、41%、42%或43%之核苷酸包含2'-F修飾。在一些實施例中，有義股之約11%之核苷酸包含2-F修飾。在一些實施例中，有義股之約22%之核苷酸包含2-F修飾。在一些實施例中，有義股之約40%之核苷酸包含2-F修飾。
在一些實施例中，寡核苷酸包含反義股，其中約25%至約35%或25%、26%、27%、28%、29%、30%、31%、32%、33%、34%或35%之核苷酸包含2'-F修飾。在一些實施例中，反義股之約32%之核苷酸包含2'-F修飾。在一些實施例中，寡核苷酸具有約15%至約25%或15%、16%、17%、18%、19%、20%、21%、22%、23%、24%或25%之包含2'-F修飾之核苷酸。在一些實施例中，寡核苷酸具有約35%至約45%或35%、36%、37%、38%、39%、40%、41%、42%、43%、44%或45%之包含2'-F修飾之核苷酸。在一些實施例中，約19%之核苷酸包含2'-F修飾。在一些實施例中，約29%之核苷酸包含2'-F修飾。在一些實施例中，約40%之核苷酸包含2'-F修飾。
在一些實施例中，36個核苷酸之有義股之位置8、9、10或11中之一或多者經2'-F基團修飾。在一些實施例中，包含莖環之有義股之位置8、9、10或11中之一或多者經2'-F基團修飾。在一些實施例中，36個核苷酸之有義股
之位置1-7及12-20之每個核苷酸處的糖部分經2'-OMe修飾。在一些實施例中，包含莖環之有義股之位置1-7及12-20之每個核苷酸處的糖部分經2'-OMe修飾。在一些實施例中，有義股中之位置1-7及12-36之每個核苷酸處的糖部分經2'-OMe修飾。
在一些實施例中，有義股之位置3、5、8、10、12、13、15及17中之一或多者經2'-F基團修飾。
在一些實施例中，反義股具有在糖部分之2'-位置處經2'-F修飾之3個核苷酸。在一些實施例中，反義股之位置2、5及14處之糖部分及視情況位置1、3、7及10處之至多3個核苷酸經2'-F修飾。在一些實施例中，反義股之位置2、5及14處之糖部分及視情況位置3、4、7及10處之至多3個核苷酸經2'-F修飾。在其他實施例中，反義股之位置2、5及14中之每個位置處之糖部分經2'-F修飾。在其他實施例中，反義股之位置1、2、5及14中之每個位置處之糖部分經2'-F修飾。在其他實施例中，反義股之位置2、4、5及14中之每個位置處之糖部分經2'-F修飾。在其他實施例中，反義股之位置1、2、3、5、7及14中之每個位置處之糖部分經2'-F修飾。在其他實施例中，反義股之位置2、3、4、5、7及14中之每個位置處之糖部分經2'-F修飾。在另一個實施例中，反義股之位置1、2、3、5、10及14中之每個位置處之糖部分經2'-F修飾。在其他實施例中，反義股之位置2、3、4、5、10及14中之每個位置處之糖部分經2'-F修飾。在另一個實施例中，反義股之位置2、3、5、7、10及14中之每個位置處之糖部分經2'-F修飾。在其他實施例中，與36個核苷酸之有義股形成雙鏈體之反義股之位置2、3、4、5、7、10及14中之每個位置處之糖部分經2'-F修飾。在一些實施例中，與包含莖環之有義股形成雙鏈體之反義股之位置2、3、4、5、7、10及14中之每個位置處之糖部分經2'-F修飾。
在一些實施例中，寡核苷酸包含反義股，該反義股具有在位置2及
14處經2'-F修飾之糖部分。在一些實施例中，寡核苷酸包含反義股，該反義股具有在位置2、5及14處經2'-F修飾之糖部分。在一些實施例中，寡核苷酸包含反義股，該反義股具有在位置1、2、5及14處經2'-F修飾之糖部分。在一些實施例中，寡核苷酸包含反義股，該反義股具有在位置2、4、5及14處經2'-F修飾之糖部分。在一些實施例中，寡核苷酸包含反義股，該反義股具有在位置1、2、3、5、7及14處經2'-F修飾之糖部分。在一些實施例中，寡核苷酸包含反義股，該反義股具有在位置2、3、4、5、7及14處經2'-F修飾之糖部分。在一些實施例中，寡核苷酸包含反義股，該反義股具有在位置1、2、3、5、10及14處經2'-F修飾之糖部分。在一些實施例中，寡核苷酸包含反義股，該反義股具有在位置2、3、4、5、10及14處經2'-F修飾之糖部分。在一些實施例中，寡核苷酸包含36個核苷酸之有義股及反義股，其中該反義股包含在位置2、3、4、5、7、10及14處經2'-F修飾之糖部分。在一些實施例中，寡核苷酸包含含有莖環之有義股及反義股，其中該反義股包含在位置2、3、4、5、7、10及14處經2'-F修飾之糖部分。在一些實施例中，寡核苷酸包含反義股，該反義股具有在位置2、3、4、5、7、10、14、16及19處經2'-F修飾之糖部分。
在一些實施例中，寡核苷酸包含反義股，該反義股具有在位置2、5及14處之每個核苷酸經2'-F修飾之糖部分及反義股之每個其餘核苷酸經選自由以下組成之群的修飾進行修飾之糖部分：2'-O-炔丙基、2'-O-丙胺、2'-胺基、2'-乙基、EA、2'-OMe、2'-MOE、2'-O-NMA及2'-FANA。
在一些實施例中，寡核苷酸包含反義股，該反義股具有在位置1、2、5及14處之每個核苷酸經2'-F修飾之糖部分及反義股之每個其餘核苷酸經選自由以下組成之群的修飾進行修飾之糖部分：2'-O-炔丙基、2'-O-丙胺、2'-胺基、2'-乙基、EA、2'-OMe、2'-MOE、2'-O-NMA及2'-FANA。
在一些實施例中，寡核苷酸包含反義股，該反義股具有在位置2、4、
5及14處之每個核苷酸經2'-F修飾之糖部分及反義股之每個其餘核苷酸經選自由以下組成之群的修飾進行修飾之糖部分：2'-O-炔丙基、2'-O-丙胺、2'-胺基、2'-乙基、EA、2'-OMe、2'-MOE、2'-O-NMA及2'-FANA。
在一些實施例中，寡核苷酸包含反義股，該反義股具有在位置1、2、3、5、7及14處之每個核苷酸經2'-F修飾之糖部分及反義股之每個其餘核苷酸經選自由以下組成之群的修飾進行修飾之糖部分：2'-O-炔丙基、2'-O-丙胺、2'-胺基、2'-乙基、EA、2'-OMe、2'-MOE、2'-O-NMA及2'-FANA。
在一些實施例中，寡核苷酸包含反義股，該反義股具有在位置2、3、4、5、7及14處之每個核苷酸經2'-F修飾之糖部分及反義股之每個其餘核苷酸經選自由以下組成之群的修飾進行修飾之糖部分：2'-O-炔丙基、2'-O-丙胺、2'-胺基、2'-乙基、EA、2'-OMe、2'-MOE、2'-O-NMA及2'-FANA。
在一些實施例中，寡核苷酸包含反義股，該反義股具有在位置1、2、3、5、10及14處之每個核苷酸經2'-F修飾之糖部分及反義股之每個其餘核苷酸經選自由以下組成之群的修飾進行修飾之糖部分：2'-O-炔丙基、2'-O-丙胺、2'-胺基、2'-乙基、EA、2'-OMe、2'-MOE、2'-O-NMA及2'-FANA。
在一些實施例中，寡核苷酸包含反義股，該反義股具有在位置2、3、4、5、10及14處之每個核苷酸經2'-F修飾之糖部分及反義股之每個其餘核苷酸經選自由以下組成之群的修飾進行修飾之糖部分：2'-O-炔丙基、2'-O-丙胺、2'-胺基、2'-乙基、EA、2'-OMe、2'-MOE、2'-O-NMA及2'-FANA。
在一些實施例中，寡核苷酸包含反義股，該反義股具有在位置2、3、5、7、10及14處之每個核苷酸經2'-F修飾之糖部分及反義股之每個其餘核苷酸經選自由以下組成之群的修飾進行修飾之糖部分：2'-O-炔丙基、2'-O-丙胺、2'-胺基、2'-乙基、EA、2'-OMe、2'-MOE、2'-O-NMA及2'-FANA。
在一些實施例中，寡核苷酸包含36個核苷酸之有義股及反義股，其
中該反義股包含在位置2、3、4、5、7、10及14處經2'-F修飾之糖部分及反義股之每個其餘核苷酸經選自由以下組成之群的修飾進行修飾之糖部分：2'-O-炔丙基、2'-O-丙胺、2'-胺基、2'-乙基、EA、2'-OMe、2'-MOE、2'-O-NMA及2'-FANA。在一些實施例中，寡核苷酸包含含有莖環之有義股及反義股，其中該反義股包含在位置2、3、4、5、7、10及14處經2'-F修飾之糖部分及反義股之每個其餘核苷酸經選自由以下組成之群的修飾進行修飾之糖部分：2'-O-炔丙基、2'-O-丙胺、2'-胺基、2'-乙基、EA、2'-OMe、2'-MOE、2'-O-NMA及2'-FANA。
在一些實施例中，寡核苷酸包含反義股，該反義股具有在位置2、3、4、5、7、10、14、16及19處之每個核苷酸經2'-F修飾之糖部分及反義股之每個其餘核苷酸經選自由以下組成之群的修飾進行修飾之糖部分：2'-O-炔丙基、2'-O-丙胺、2'-胺基、2'-乙基、EA、2'-OMe、2'-MOE、2'-O-NMA及2'-FANA。
在一些實施例中，寡核苷酸包含反義股，該反義股具有在位置1、位置2、位置3、位置4、位置5、位置6、位置7、位置8、位置9、位置10、位置11、位置12、位置13、位置14、位置15、位置16、位置17、位置18、位置19、位置20、位置21或位置22處經2'-F修飾之糖部分。
在一些實施例中，寡核苷酸包含反義股，該反義股具有在位置1、位置2、位置3、位置4、位置5、位置6、位置7、位置8、位置9、位置10、位置11、位置12、位置13、位置14、位置15、位置16、位置17、位置18、位置19、位置20、位置21或位置22處經2'-OMe修飾之糖部分。
在一些實施例中，寡核苷酸包含反義股，該反義股具有在位置1、位置2、位置3、位置4、位置5、位置6、位置7、位置8、位置9、位置10、位置11、位置12、位置13、位置14、位置15、位置16、位置17、位置18、位置19、位置20、位置21或位置22處經選自由以下組成之群的修飾進行修飾之糖部分：2'-O-炔丙基、2'-O-丙胺、2'-胺基、2'-乙基、EA、2'-OMe、2'-MOE、2'-O-
NMA及2'-FANA。
在一些實施例中，寡核苷酸包含36個核苷酸之有義股，該有義股具有在位置8-11處經2'-F修飾之糖部分。在一些實施例中，寡核苷酸包含有義股，該有義股包含莖環及在位置8-11處經2'-F修飾之糖部分。在一些實施例中，寡核苷酸包含36個核苷酸之有義股，該有義股具有在位置1-7及12-17或12-20處經2'-OMe修飾之糖部分。在一些實施例中，寡核苷酸包含有義股，該有義股包含莖環及在位置1-7及12-17或12-20處經2'-OMe修飾之糖部分。在一些實施例中，寡核苷酸包含36個核苷酸之有義股，該有義股具有在位置1-7及12-17、12-20或12-22處經2'-OMe修飾之糖部分。在一些實施例中，寡核苷酸包含有義股，該有義股包含莖環及在位置1-7及12-17、12-20或12-22處經2'-OMe修飾之糖部分。在一些實施例中，寡核苷酸包含36個核苷酸之有義股，該有義股具有在有義股之位置1-7及12-17或12-20處之每個核苷酸經選自由以下組成之群的修飾進行修飾之糖部分：2'-O-炔丙基、2'-O-丙胺、2'-胺基、2'-乙基、EA、2'-OMe、2'-MOE、2'-O-NMA及2'-FANA。在一些實施例中，寡核苷酸包含有義股，該有義股包含莖環且具有在有義股之位置1-7及12-17或12-20處之每個核苷酸經選自由以下組成之群的修飾進行修飾之糖部分：2'-O-炔丙基、2'-O-丙胺、2'-胺基、2'-乙基、EA、2'-OMe、2'-MOE、2'-O-NMA及2'-FANA。在一些實施例中，寡核苷酸包含36個核苷酸之有義股，該有義股具有在有義股之位置1-7及12-17、12-20或12-22處之每個核苷酸經選自由以下組成之群的修飾進行修飾之糖部分：2'-O-炔丙基、2'-O-丙胺、2'-胺基、2'-乙基、EA、2'-OMe、2'-MOE、2'-O-NMA及2'-FANA。在一些實施例中，寡核苷酸包含有義股，該有義股包含莖環及在有義股之位置1-7及12-17、12-20或12-22處之每個核苷酸經選自由以下組成之群的修飾進行修飾之糖部分：2'-O-炔丙基、2'-O-丙胺、2'-胺基、2'-乙基、EA、2'-OMe、2'-MOE、2'-O-NMA及2'-FANA。
在一些實施例中，寡核苷酸包含有義股，該有義股具有在位置3、5、8、10、12、13、15及17處經2'-F修飾之糖部分。在一些實施例中，寡核苷酸包含有義股，該有義股具有在位置1、2、4、6、7、9、11、14、16及18-20處經2'-OMe修飾之糖部分。在一些實施例中，寡核苷酸包含有義股，該有義股具有在有義股之位置1、2、4、6、7、9、11、14、16及18-20處之每個核苷酸經選自由以下組成之群的修飾進行修飾之糖部分：2'-O-炔丙基、2'-O-丙胺、2'-胺基、2'-乙基、EA、2'-OMe、2'-MOE、2'-O-NMA及2'-FANA。在一些實施例中，寡核苷酸包含有義股，該有義股具有在有義股之位置1-7及12-17、12-20或12-22處之每個核苷酸經選自由以下組成之群的修飾進行修飾之糖部分：2'-O-炔丙基、2'-O-丙胺、2'-胺基、2'-乙基、EA、2'-OMe、2'-MOE、2'-O-NMA及2'-FANA。
在一些實施例中，寡核苷酸包含有義股，該有義股具有在位置1、位置2、位置3、位置4、位置5、位置6、位置7、位置8、位置9、位置10、位置11、位置12、位置13、位置14、位置15、位置16、位置17、位置18、位置19、位置20、位置21、位置22、位置23、位置24、位置25、位置26、位置27、位置28、位置29、位置30、位置31、位置32、位置33、位置34、位置35或位置36處經2'-F修飾之糖部分。
在一些實施例中，寡核苷酸包含有義股，該有義股具有在位置1、位置2、位置3、位置4、位置5、位置6、位置7、位置8、位置9、位置10、位置11、位置12、位置13、位置14、位置15、位置16、位置17、位置18、位置19、位置20、位置21、位置22、位置23、位置24、位置25、位置26、位置27、位置28、位置29、位置30、位置31、位置32、位置33、位置34、位置35或位置36處經2'-OMe修飾之糖部分。
在一些實施例中，寡核苷酸包含有義股，該有義股具有在位置1、位置2、位置3、位置4、位置5、位置6、位置7、位置8、位置9、位置10、位
置11、位置12、位置13、位置14、位置15、位置16、位置17、位置18、位置19、位置20、位置21、位置22、位置23、位置24、位置25、位置26、位置27、位置28、位置29、位置30、位置31、位置32、位置33、位置34、位置35或位置36處經選自由以下組成之群的修飾進行修飾之糖部分：2'-O-炔丙基、2'-O-丙胺、2'-胺基、2'-乙基、EA、2'-OMe、2'-MOE、2'-O-NMA及2'-FANA。
在一些實施例中，寡核苷酸包含反義股，該反義股具有在反義股之位置2、3、4、5、7、10及14處之每個核苷酸經2'-F修飾之糖部分及反義股之每個其餘核苷酸經選自由以下組成之群的修飾進行修飾之糖部分：2'-O-炔丙基、2'-O-丙胺、2'-胺基、2'-乙基、EA、2'-OMe、2'-MOE、2'-O-NMA及2'-FANA；及有義股，該有義股具有在有義股之位置8-11處之每個核苷酸經2'-F修飾之糖部分及有義股之每個其餘核苷酸經選自由以下組成之群的修飾進行修飾之糖部分：2'-O-炔丙基、2'-O-丙胺、2'-胺基、2'-乙基、EA、2'-OMe、2'-MOE、2'-O-NMA及2'-FANA。在一些實施例中，寡核苷酸包含反義股，該反義股具有在反義股之位置2、3、4、5、7、10及14處之每個核苷酸經2'-F修飾之糖部分及反義股之每個其餘核苷酸經選自由以下組成之群的修飾進行修飾之糖部分：2'-O-炔丙基、2'-O-丙胺、2'-胺基、2'-乙基、EA、2'-OMe、2'-MOE、2'-O-NMA及2'-FANA；及有義股，該有義股具有莖環及在有義股之位置8-11處之每個核苷酸經2'-F修飾之糖部分及有義股之每個其餘核苷酸經選自由以下組成之群的修飾進行修飾之糖部分：2'-O-炔丙基、2'-O-丙胺、2'-胺基、2'-乙基、2'-EA、2'-OMe、2'-MOE、2'-O-NMA及2'-FANA。
在一些實施例中，寡核苷酸包含反義股，該反義股具有在反義股之位置2、3、4、5、7、10、14、16及19處之每個核苷酸經2'-F修飾之糖部分及反義股之每個其餘核苷酸經選自由以下組成之群的修飾進行修飾之糖部分：2'-O-炔丙基、2'-O-丙胺、2'-胺基、2'-乙基、EA、2'-OMe、2'-MOE、2'-O-NMA及
2'-FANA；及有義股，該有義股具有在有義股之位置3、5、8、10、12、13、15及17處之每個核苷酸經2'-F修飾之糖部分及有義股之每個其餘核苷酸經選自由以下組成之群的修飾進行修飾之糖部分：2'-O-炔丙基、2'-O-丙胺、2'-胺基、2'-乙基、EA、2'-OMe、2'-MOE、2'-O-NMA及2'-FANA。
在一些實施例中，寡核苷酸之有義股及反義股包含選自由以下組成之群的核苷酸序列：a)分別為SEQ ID NO：1537及1572；b)分別為SEQ ID NO：1538及1573；c)分別為SEQ ID NO：1539及1574；d)分別為SEQ ID NO：1540及1575；e)分別為SEQ ID NO：1541及1576；f)分別為SEQ ID NO：1542及1577；g)分別為SEQ ID NO：1543及1578；h)分別為SEQ ID NO：1544及1579；i)分別為SEQ ID NO：1545及1580；j)分別為SEQ ID NO：1546及1581；k)分別為SEQ ID NO：1547及1582；l)分別為SEQ ID NO：1548及1583；m)分別為SEQ ID NO：1549及1584；n)分別為SEQ ID NO：1550及1585；o)分別為SEQ ID NO：1551及1586；p)分別為SEQ ID NO：1552及1587；q)分別為SEQ ID NO：1553及1588；r)分別為SEQ ID NO：1554及1589；
s)分別為SEQ ID NO：1555及1590；t)分別為SEQ ID NO：1556及1591；u)分別為SEQ ID NO：1557及1592；v)分別為SEQ ID NO：1558及1593；w)分別為SEQ ID NO：1559及1594；x)分別為SEQ ID NO：1560及1595；y)分別為SEQ ID NO：1561及1596；z)分別為SEQ ID NO：1562及1597；aa)分別為SEQ ID NO：1563及1598；bb)分別為SEQ ID NO：1564及1599；cc)分別為SEQ ID NO：1565及1600；dd)分別為SEQ ID NO：1566及1601；ee)分別為SEQ ID NO：1567及1602；ff)分別為SEQ ID NO：1568及1603；gg)分別為SEQ ID NO：1569及1604；hh)分別為SEQ ID NO：1570及1605；ii)分別為SEQ ID NO：1571及1606；及jj)分別為SEQ ID NO：1681及1586，其中有義股之位置3、5、8、10、12、13、15或17中之一或多者經2'-F基團修飾。
在一些實施例中，寡核苷酸之有義股及反義股包含選自由以下組成之群的核苷酸序列：a)分別為SEQ ID NO：1540及1575；b)分別為SEQ ID NO：1544及1579；
c)分別為SEQ ID NO：1546及1581；d)分別為SEQ ID NO：1551及1586；e)分別為SEQ ID NO：1552及1587；f)分別為SEQ ID NO：1553及1588；g)分別為SEQ ID NO：1558及1594；h)分別為SEQ ID NO：1560及1595；i)分別為SEQ ID NO：1564及1599；j)分別為SEQ ID NO：1565及1600；k)分別為SEQ ID NO：1566及1601；l)分別為SEQ ID NO：1570及1605；及m)分別為SEQ ID NO：1681及1586，其中有義股之位置3、5、8、10、12、13、15或17中之一或多者經2'-F基團修飾。
在一些實施例中，寡核苷酸之有義股及反義股包含選自由以下組成之群的核苷酸序列：a)分別為SEQ ID NO：1553及1588；b)分別為SEQ ID NO：1560及1595；c)分別為SEQ ID NO：1564及1599；d)分別為SEQ ID NO：1551及1586；e)分別為SEQ ID NO：1570及1605；及f)分別為SEQ ID NO：1681及1586，其中有義股之位置3、5、8、10、12、13、15或17中之一或多者經2'-F基團修飾。
5'-末端磷酸酯
在一些實施例中，本文所述之寡核苷酸(例如，RNAi寡核苷酸)包含有義股及反義股，其中該反義股包含5'末端磷酸酯。在一些實施例中，5'末端磷酸酯基團增強與Ago2之相互作用。然而，包含5'-磷酸酯基團之寡核苷酸可能易於經由磷酸酯酶或其他酶降解，此可能限制其活體內生物可用度。在一些實施例中，寡核苷酸包括對此種降解具有抗性之5'-磷酸酯類似物。在一些實施例中，磷酸酯類似物為氧甲基膦酸酯、乙烯基膦酸酯或丙二醯基膦酸酯或其組合。在某些實施例中，寡核苷酸股之5'端附接至模擬天然5'-磷酸酯基團(「磷酸酯模擬物」)之靜電及空間特性之化學部分。
在一些實施例中，寡核苷酸在糖之4'-碳位置處具有磷酸酯類似物(稱作「4'-磷酸酯類似物」)。參見例如國際專利申請公開案第WO 2018/045317號。在一些實施例中，寡核苷酸在5'末端核苷酸處包含4'-磷酸酯類似物。在一些實施例中，磷酸酯類似物為氧甲基膦酸酯，其中氧甲基之氧原子結合至糖部分(例如，在其4'-碳處)或其類似物。在其他實施例中，4'-磷酸酯類似物為硫甲基膦酸酯或胺基甲基膦酸酯，其中硫甲基之硫原子或胺基甲基之氮原子結合至糖部分或其類似物之4'-碳。在某些實施例中，4'-磷酸酯類似物為氧甲基膦酸酯。在一些實施例中，氧甲基膦酸酯由式-O-CH2-PO(OH)2、-O-CH2-PO(OR)2或-O-CH2-POOH(R)表示，其中R係獨立地選自H、CH3、烷基、CH2CH2CN、CH2OCOC(CH3)3、CH2OCH2CH2Si(CH3)3或保護基。在某些實施例中，烷基為CH2CH3。更典型地，R係獨立地選自H、CH3或CH2CH3。在一些實施例中，R為CH3。在一些實施例中，4'-磷酸酯類似物為4'-氧甲基膦酸酯。在一些實施例中，具有4'-膦酸酯類似物之經修飾核苷酸為尿苷。在一些實施例中，經修飾之核苷酸為4'-O-單甲基膦酸酯-2'-O-甲基尿苷。
在一些實施例中，寡核苷酸之有義股及反義股包含選自由以下組成之群的核苷酸序列：
a)分別為SEQ ID NO：1537及1572；b)分別為SEQ ID NO：1538及1573；c)分別為SEQ ID NO：1539及1574；d)分別為SEQ ID NO：1540及1575；e)分別為SEQ ID NO：1541及1576；f)分別為SEQ ID NO：1542及1577；g)分別為SEQ ID NO：1543及1578；h)分別為SEQ ID NO：1544及1579；i)分別為SEQ ID NO：1545及1580；j)分別為SEQ ID NO：1546及1581；k)分別為SEQ ID NO：1547及1582；l)分別為SEQ ID NO：1548及1583；m)分別為SEQ ID NO：1549及1584；n)分別為SEQ ID NO：1550及1585；o)分別為SEQ ID NO：1551及1586；p)分別為SEQ ID NO：1552及1587；q)分別為SEQ ID NO：1553及1588；r)分別為SEQ ID NO：1554及1589；s)分別為SEQ ID NO：1555及1590；t)分別為SEQ ID NO：1556及1591；u)分別為SEQ ID NO：1557及1592；v)分別為SEQ ID NO：1558及1593；w)分別為SEQ ID NO：1559及1594；x)分別為SEQ ID NO：1560及1595；
y)分別為SEQ ID NO：1561及1596；z)分別為SEQ ID NO：1562及1597；aa)分別為SEQ ID NO：1563及1598；bb)分別為SEQ ID NO：1564及1599；cc)分別為SEQ ID NO：1565及1600；dd)分別為SEQ ID NO：1566及1601；ee)分別為SEQ ID NO：1567及1602；ff)分別為SEQ ID NO：1568及1603；gg)分別為SEQ ID NO：1569及1604；hh)分別為SEQ ID NO：1570及1605；ii)分別為SEQ ID NO：1571及1606；及jj)分別為SEQ ID NO：1681及1586，其中寡核苷酸包含5'-末端磷酸酯，視情況為5'-末端磷酸酯類似物。
在一些實施例中，寡核苷酸之有義股及反義股包含選自由以下組成之群的核苷酸序列：a)分別為SEQ ID NO：1540及1575；b)分別為SEQ ID NO：1544及1579；c)分別為SEQ ID NO：1546及1581；d)分別為SEQ ID NO：1551及1586；e)分別為SEQ ID NO：1552及1587；f)分別為SEQ ID NO：1553及1588；g)分別為SEQ ID NO：1558及1594；h)分別為SEQ ID NO：1560及1595；i)分別為SEQ ID NO：1564及1599；
j)分別為SEQ ID NO：1565及1600；k)分別為SEQ ID NO：1566及1601；l)分別為SEQ ID NO：1570及1605；及m)分別為SEQ ID NO：1681及1586，其中寡核苷酸包含5'-末端磷酸酯，視情況為5'-末端磷酸酯類似物。
在一些實施例中，寡核苷酸之有義股及反義股包含選自由以下組成之群的核苷酸序列：a)分別為SEQ ID NO：1553及1588；b)分別為SEQ ID NO：1560及1595；c)分別為SEQ ID NO：1564及1599；d)分別為SEQ ID NO：1551及1586；e)分別為SEQ ID NO：1570及1605；及f)分別為SEQ ID NO：1681及1586，其中寡核苷酸包含5'-末端磷酸酯，視情況為5'-末端磷酸酯類似物。
在一些實施例中，寡核苷酸包含在5'末端核苷酸處包含4'-磷酸酯類似物之反義股，其中5'末端核苷酸包含以下結構：
4'-O-單甲基膦酸酯-2'-O-甲基尿苷硫代磷酸酯[Me膦酸酯-4O-mUs]。
經修飾之核苷酸間鍵聯
在一些實施例中，寡核苷酸(例如，RNAi寡核苷酸)包含經修飾之核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，磷酸酯修飾或取代會產生包含至少約1個(例如，至少1個、至少2個、至少3個、至少4個或至少5個)經修飾之核苷酸間鍵聯的寡核苷酸。在一些實施例中，寡核苷酸包含約1至約10個(例如，1至10個、2至8個、4至6個、3至10個、5至10個、1至5個、1至3個或1至2個)經修飾之核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，寡核苷酸包含1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個經修飾之核苷酸間鍵聯。
經修飾之核苷酸間鍵聯可為二硫代磷酸酯鍵聯、硫代磷酸酯鍵聯、磷酸三酯鍵聯、硫羰基烷基膦酸酯鍵聯、硫羰基烷基磷酸三酯鍵聯、亞磷醯胺鍵聯、膦酸酯鍵聯或硼烷磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，至少一個經修飾之核苷酸間鍵聯為硫代磷酸酯鍵聯。
在一些實施例中，寡核苷酸在有義股之位置1與2、反義股之位置1與2、反義股之位置2與3、反義股之位置3與4、反義股之位置20與21及反義股之位置21與22中之一或多者之間具有硫代磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，寡核苷酸在有義股之位置1與2、反義股之位置1與2、反義股之位置2與3、反義股之位置20與21及反義股之位置21與22中之每一者之間具有硫代磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，寡核苷酸在以下中之每一者之間具有硫代磷酸酯鍵聯：(i)有義股之位置1與2；及(ii)反義股之位置1與2、位置2與3、位置3與4、位置20與21及位置21與22。
在一些實施例中，寡核苷酸之有義股及反義股包含選自由以下組成之群的核苷酸序列：a)分別為SEQ ID NO：1537及1572；b)分別為SEQ ID NO：1538及1573；c)分別為SEQ ID NO：1539及1574；d)分別為SEQ ID NO：1540及1575；e)分別為SEQ ID NO：1541及1576；f)分別為SEQ ID NO：1542及1577；g)分別為SEQ ID NO：1543及1578；h)分別為SEQ ID NO：1544及1579；i)分別為SEQ ID NO：1545及1580；j)分別為SEQ ID NO：1546及1581；k)分別為SEQ ID NO：1547及1582；l)分別為SEQ ID NO：1548及1583；m)分別為SEQ ID NO：1549及1584；n)分別為SEQ ID NO：1550及1585；
o)分別為SEQ ID NO：1551及1586；p)分別為SEQ ID NO：1552及1587；q)分別為SEQ ID NO：1553及1588；r)分別為SEQ ID NO：1554及1589；s)分別為SEQ ID NO：1555及1590；t)分別為SEQ ID NO：1556及1591；u)分別為SEQ ID NO：1557及1592；v)分別為SEQ ID NO：1558及1593；w)分別為SEQ ID NO：1559及1594；x)分別為SEQ ID NO：1560及1595；y)分別為SEQ ID NO：1561及1596；z)分別為SEQ ID NO：1562及1597；aa)分別為SEQ ID NO：1563及1598；bb)分別為SEQ ID NO：1564及1599；cc)分別為SEQ ID NO：1565及1600；dd)分別為SEQ ID NO：1566及1601；ee)分別為SEQ ID NO：1567及1602；ff)分別為SEQ ID NO：1568及1603；gg)分別為SEQ ID NO：1569及1604；hh)分別為SEQ ID NO：1570及1605；ii)分別為SEQ ID NO：1571及1606；及jj)分別為SEQ ID NO：1681及1586，其中寡核苷酸包含經修飾之核苷酸間鍵聯。
在一些實施例中，寡核苷酸之有義股及反義股包含選自由以下組成
之群的核苷酸序列：a)分別為SEQ ID NO：1540及1575；b)分別為SEQ ID NO：1544及1579；c)分別為SEQ ID NO：1546及1581；d)分別為SEQ ID NO：1551及1586；e)分別為SEQ ID NO：1552及1587；f)分別為SEQ ID NO：1553及1588；g)分別為SEQ ID NO：1558及1594；h)分別為SEQ ID NO：1560及1595；i)分別為SEQ ID NO：1564及1599；j)分別為SEQ ID NO：1565及1600；k)分別為SEQ ID NO：1566及1601；l)分別為SEQ ID NO：1570及1605；及m)分別為SEQ ID NO：1681及1586，其中寡核苷酸包含經修飾之核苷酸間鍵聯。
在一些實施例中，寡核苷酸之有義股及反義股包含選自由以下組成之群的核苷酸序列：a)分別為SEQ ID NO：1553及1588；b)分別為SEQ ID NO：1560及1595；c)分別為SEQ ID NO：1564及1599；d)分別為SEQ ID NO：1551及1586；e)分別為SEQ ID NO：1570及1605；及f)分別為SEQ ID NO：1681及1586，其中寡核苷酸包含經修飾之核苷酸間鍵聯。
鹼基修飾
在一些實施例中，本文之寡核苷酸(例如，RNAi寡核苷酸)具有一或多個經修飾之核鹼基。在一些實施例中，經修飾之核鹼基(本文中亦稱作鹼基類似物)在核苷酸糖部分之1'位置處連接。在某些實施例中，經修飾之核鹼基為含氮鹼基。在某些實施例中，經修飾之核鹼基不含氮原子。參見例如美國專利申請公開案第2008/0274462號。在一些實施例中，經修飾之核苷酸包含通用鹼基。在一些實施例中，經修飾之核苷酸不含核鹼基(無鹼基)。
在一些實施例中，寡核苷酸之有義股及反義股包含選自由以下組成之群的核苷酸序列：a)分別為SEQ ID NO：1537及1572；b)分別為SEQ ID NO：1538及1573；c)分別為SEQ ID NO：1539及1574；d)分別為SEQ ID NO：1540及1575；e)分別為SEQ ID NO：1541及1576；f)分別為SEQ ID NO：1542及1577；g)分別為SEQ ID NO：1543及1578；h)分別為SEQ ID NO：1544及1579；i)分別為SEQ ID NO：1545及1580；j)分別為SEQ ID NO：1546及1581；k)分別為SEQ ID NO：1547及1582；l)分別為SEQ ID NO：1548及1583；m)分別為SEQ ID NO：1549及1584；n)分別為SEQ ID NO：1550及1585；o)分別為SEQ ID NO：1551及1586；
p)分別為SEQ ID NO：1552及1587；q)分別為SEQ ID NO：1553及1588；r)分別為SEQ ID NO：1554及1589；s)分別為SEQ ID NO：1555及1590；t)分別為SEQ ID NO：1556及1591；u)分別為SEQ ID NO：1557及1592；v)分別為SEQ ID NO：1558及1593；w)分別為SEQ ID NO：1559及1594；x)分別為SEQ ID NO：1560及1595；y)分別為SEQ ID NO：1561及1596；z)分別為SEQ ID NO：1562及1597；aa)分別為SEQ ID NO：1563及1598；bb)分別為SEQ ID NO：1564及1599；cc)分別為SEQ ID NO：1565及1600；dd)分別為SEQ ID NO：1566及1601；ee)分別為SEQ ID NO：1567及1602；ff)分別為SEQ ID NO：1568及1603；gg)分別為SEQ ID NO：1569及1604；hh)分別為SEQ ID NO：1570及1605；ii)分別為SEQ ID NO：1571及1606；及jj)分別為SEQ ID NO：1681及1586，其中寡核苷酸包含一或多個經修飾之核鹼基。
在一些實施例中，寡核苷酸之有義股及反義股包含選自由以下組成之群的核苷酸序列：
a)分別為SEQ ID NO：1540及1575；b)分別為SEQ ID NO：1544及1579；c)分別為SEQ ID NO：1546及1581；d)分別為SEQ ID NO：1551及1586；e)分別為SEQ ID NO：1552及1587；f)分別為SEQ ID NO：1553及1588；g)分別為SEQ ID NO：1558及1594；h)分別為SEQ ID NO：1560及1595；i)分別為SEQ ID NO：1564及1599；j)分別為SEQ ID NO：1565及1600；k)分別為SEQ ID NO：1566及1601；l)分別為SEQ ID NO：1570及1605；及m)分別為SEQ ID NO：1681及1586，其中寡核苷酸包含一或多個經修飾之核鹼基。
在一些實施例中，寡核苷酸之有義股及反義股包含選自由以下組成之群的核苷酸序列：a)分別為SEQ ID NO：1553及1588；b)分別為SEQ ID NO：1560及1595；c)分別為SEQ ID NO：1564及1599；d)分別為SEQ ID NO：1551及1586；e)分別為SEQ ID NO：1570及1605；及f)分別為SEQ ID NO：1681及1586，其中寡核苷酸包含一或多個經修飾之核鹼基。
在一些實施例中，通用鹼基為位於經修飾之核苷酸中之核苷酸糖部
分之1'位置或核苷酸糖部分取代中之等效位置處的雜環部分，當存在於雙鏈體中時，其可與多於一種類型之鹼基相對定位而不會實質上改變雙鏈體之結構。在一些實施例中，相較於與靶核酸完全互補之參考ss核酸(例如，寡核苷酸)，含有通用鹼基之ss核酸與靶核酸形成雙鏈體，該雙鏈體之Tm低於與互補核酸形成之雙鏈體。在一些實施例中，當與其中通用鹼基已經某個鹼基置換以產生單個錯配之參考ss核酸相比時，含有通用鹼基之ss核酸與靶核酸形成雙鏈體，該雙鏈體之Tm高於與包含錯配鹼基之核酸形成之雙鏈體。
通用結合核苷酸之非限制性實例包括但不限於肌苷、1-β-D-核糖呋喃糖基-5-硝基吲哚及/或1-β-D-核糖呋喃糖基-3-硝基吡咯(參見美國專利申請公開案第2007/0254362號；Van Aerschot等人(1995)Nucleic Acids Res.23：4363-4370；Loakes等人(1995)Nucleic Acids Res.23：2361-66；以及Loakes及Brown(1994)Nucleic Acids Res.22：4039-43)。
在一些實施例中，希望將寡核苷酸(例如，RNAi寡核苷酸)靶向一或多個細胞或一或多個器官。此種策略可幫助避免在其他器官中不合需要之作用，或避免寡核苷酸對不會得益於寡核苷酸之細胞、組織或器官之過度損失。因此，在一些實施例中，寡核苷酸經修飾以促進靶向及/或遞送至特定組織、細胞或器官(例如，以促進寡核苷酸向CNS之遞送)。在一些實施例中，寡核苷酸包含結合至一或多個靶向配位體之至少一個核苷酸(例如，1、2、3、4、5、6個或更多個核苷酸)。在一些實施例中，寡核苷酸之有義股及反義股包含選自由以下組成之群的核苷酸序列：a)分別為SEQ ID NO：1537及1572；b)分別為SEQ ID NO：1538及1573；c)分別為SEQ ID NO：1539及1574；
d)分別為SEQ ID NO：1540及1575；e)分別為SEQ ID NO：1541及1576；f)分別為SEQ ID NO：1542及1577；g)分別為SEQ ID NO：1543及1578；h)分別為SEQ ID NO：1544及1579；i)分別為SEQ ID NO：1545及1580；j)分別為SEQ ID NO：1546及1581；k)分別為SEQ ID NO：1547及1582；l)分別為SEQ ID NO：1548及1583；m)分別為SEQ ID NO：1549及1584；n)分別為SEQ ID NO：1550及1585；o)分別為SEQ ID NO：1551及1586；p)分別為SEQ ID NO：1552及1587；q)分別為SEQ ID NO：1553及1588；r)分別為SEQ ID NO：1554及1589；s)分別為SEQ ID NO：1555及1590；t)分別為SEQ ID NO：1556及1591；u)分別為SEQ ID NO：1557及1592；v)分別為SEQ ID NO：1558及1593；w)分別為SEQ ID NO：1559及1594；x)分別為SEQ ID NO：1560及1595；y)分別為SEQ ID NO：1561及1596；z)分別為SEQ ID NO：1562及1597；aa)分別為SEQ ID NO：1563及1598；
bb)分別為SEQ ID NO：1564及1599；cc)分別為SEQ ID NO：1565及1600；dd)分別為SEQ ID NO：1566及1601；ee)分別為SEQ ID NO：1567及1602；ff)分別為SEQ ID NO：1568及1603；gg)分別為SEQ ID NO：1569及1604；hh)分別為SEQ ID NO：1570及1605；ii)分別為SEQ ID NO：1571及1606；及jj)分別為SEQ ID NO：1681及1586，其中寡核苷酸包含結合至至少一個核苷酸之靶向配位體。
在一些實施例中，寡核苷酸包含結合至一或多個靶向配位體之至少一個核苷酸(例如，1、2、3、4、5、6個或更多個核苷酸)。在一些實施例中，寡核苷酸之有義股及反義股包含選自由以下組成之群的核苷酸序列：a)分別為SEQ ID NO：1540及1575；b)分別為SEQ ID NO：1544及1579；c)分別為SEQ ID NO：1546及1581；d)分別為SEQ ID NO：1551及1586；e)分別為SEQ ID NO：1552及1587；f)分別為SEQ ID NO：1553及1588；g)分別為SEQ ID NO：1558及1594；h)分別為SEQ ID NO：1560及1595；i)分別為SEQ ID NO：1564及1599；j)分別為SEQ ID NO：1565及1600；k)分別為SEQ ID NO：1566及1601；
l)分別為SEQ ID NO：1570及1605；及m)分別為SEQ ID NO：1681及1586，其中寡核苷酸包含結合至至少一個核苷酸之靶向配位體。
在一些實施例中，寡核苷酸包含結合至一或多個靶向配位體之至少一個核苷酸(例如，1、2、3、4、5、6個或更多個核苷酸)。在一些實施例中，寡核苷酸之有義股及反義股包含選自由以下組成之群的核苷酸序列：a)分別為SEQ ID NO：1553及1588；b)分別為SEQ ID NO：1560及1595；c)分別為SEQ ID NO：1564及1599；d)分別為SEQ ID NO：1551及1586；e)分別為SEQ ID NO：1570及1605；及f)分別為SEQ ID NO：1681及1586，其中寡核苷酸包含結合至至少一個核苷酸之靶向配位體。
在一些實施例中，靶向配位體包含碳水化合物、胺基糖、膽固醇、肽、多肽，或蛋白質或蛋白質之一部分(例如，抗體或抗體片段)。在一些實施例中，靶向配位體為適體。舉例而言，靶向配位體可為用於靶向腫瘤脈管系統或神經膠質瘤細胞之RGD肽、靶向腫瘤脈管系統或造口之CREKA肽、轉鐵蛋白、乳鐵蛋白，或靶向CNS脈管系統上表現之轉鐵蛋白受體的適體，或靶向神經膠質瘤細胞上之EGFR的抗EGFR抗體。在某些實施例中，靶向配位體為一或多個GalNAc部分。在一些實施例中，靶向配位體為一或多個脂質部分。
在一些實施例中，寡核苷酸之1個或多個(例如，1、2、3、4、5或6個)核苷酸各自結合至獨立之靶向配位體。在一些實施例中，寡核苷酸之2至4個核苷酸各自結合至獨立之靶向配位體。在一些實施例中，靶向配位體結合至有義股或反義股之任一端之2至4個核苷酸(例如，靶向配位體結合至有義股或反
義股之5'或3'端之2至4個核苷酸懸垂或延伸)，使得靶向配位體類似於牙刷之刷毛且寡核苷酸類似於牙刷。舉例而言，寡核苷酸可在有義股之5'或3'端任一端包含莖環，且莖環之1、2、3或4個核苷酸可個別地結合至靶向配位體。在一些實施例中，寡核苷酸在有義股之3'端包含莖環，其中莖環之環包含triL或tetraL，且其中構成triL或tetraL之3或4個核苷酸分別個別地結合至靶向配位體。在一些實施例中，寡核苷酸包含在其3'端之鈍端及結合至至少一個核苷酸之一或多個靶向配位體。在一些實施例中，寡核苷酸包含在其3'端之鈍端及結合至有義股之5'末端核苷酸之一或多個靶向配位體。
GalNAc結合
GalNAc為ASGPR之高親和力配位體，ASGPR主要在肝細胞之血竇表面上表現，且在結合、內化及後續清除含有末端半乳糖或GalNAc殘基之循環醣蛋白(去唾液酸醣蛋白)中起主要作用。GalNAc部分與本文之寡核苷酸(例如，RNAi寡核苷酸)的結合(間接或直接)可用於將寡核苷酸靶向細胞上表現之ASGPR。在一些實施例中，寡核苷酸結合至至少一或多個GalNAc部分，其中該等GalNAc部分將寡核苷酸靶向人類肝臟細胞(例如，人類肝細胞)上表現之ASGPR。在一些實施例中，GalNAc部分將寡核苷酸靶向肝臟。
在一些實施例中，寡核苷酸直接或間接結合至單價GalNAc。在一些實施例中，寡核苷酸直接或間接結合至多於一個單價GalNAc(亦即，結合至2、3或4個單價GalNAc部分，且典型地結合至3或4個單價GalNAc部分)。在一些實施例中，寡核苷酸結合至一或多個二價GalNAc、三價GalNAc或四價GalNAc部分。在一些實施例中，二價、三價或四價GalNAc部分經由分支連接子結合至寡核苷酸。在一些實施例中，單價GalNAc部分結合至第一個核苷酸，且二價、三價或四價GalNAc部分經由分支連接子結合至第二個核苷酸。
在一些實施例中，寡核苷酸之1個或多個(例如，1、2、3、4、5或6
個)核苷酸各自結合至GalNAc部分。在一些實施例中，tetraL之2至4個核苷酸各自結合至獨立之GalNAc。在一些實施例中，triL之1至3個核苷酸各自結合至獨立之GalNAc。在一些實施例中，靶向配位體結合至有義股或反義股之任一端之2至4個核苷酸(例如，配位體結合至有義股或反義股之5'或3'端之2至4個核苷酸懸垂或延伸)，使得GalNAc部分類似於牙刷之刷毛且寡核苷酸類似於牙刷。在一些實施例中，GalNAc部分結合至有義股之核苷酸。舉例而言，4個GalNAc部分可結合至有義股之tetraL中之核苷酸，其中各GalNAc部分結合至1個核苷酸。
在一些實施例中，寡核苷酸包含tetraL，其中tetraL為腺嘌呤(A)及鳥嘌呤(G)核苷酸之任何組合。在一些實施例中，tetraL包含經由本文所述之任何連接子附接至四環之任何一或多個鳥嘌呤(G)核苷酸之單價GalNAc部分，如下文所描繪(X=雜原子)：
在一些實施例中，tetraL具有經由本文所述之任何連接子附接至tetraL之任何一或多個腺嘌呤核苷酸之單價GalNAc，如下文所描繪(X=雜原子)：
在一些實施例中，寡核苷酸包含附接至鳥嘌呤(G)核苷酸之單價GalNAc，稱作[ademG-GalNAc]或2'-胺基二乙氧基甲醇-鳥嘌呤-GalNAc，如下文所描繪：
在一些實施例中，寡核苷酸包含附接至腺嘌呤(A)核苷酸之單價GalNAc，稱作[ademA-GalNAc]或2'-胺基二乙氧基甲醇-腺嘌呤-GalNAc，如下文所描繪：
對於自5'至3'包含核苷酸序列GAAA之環(L=連接子，X=雜原子)，下文展示此種結合之一個實例，其中示出莖附接點。此種環可存在於例如表4及表5中列出之有義股中任一者之有義股之位置27-30處。在化學式中，
用於描述與寡核苷酸股之附接點。
可使用適當方法或化學(例如，點擊化學)將靶向配位體連接至核苷酸。在一些實施例中，使用點擊連接子將靶向配位體結合至核苷酸。在一些實施例中，基於縮醛之連接子用於將靶向配位體結合至本文所述之寡核苷酸中之任一者之核苷酸。基於縮醛之連接子揭示於例如國際專利申請公開案第WO 2016/100401號中。在一些實施例中，連接子為不穩定連接子。然而，在其他實施例中，連接子為穩定的。下文展示自5'至3'包含核苷酸GAAA之環的實例，其中使用縮醛連接子將GalNAc部分附接至環之3或4個核苷酸。此種環可存在於例如表4及表5中列出之有義股中之任一者之位置27-30處。在化學式中，
為與寡核苷酸股之附接點：
，或
如所提及，可使用各種適當方法或化學合成技術(例如，點擊化學)將靶向配位體連接至核苷酸。在一些實施例中，使用點擊連接子將靶向配位體結合至核苷酸。在一些實施例中，基於縮醛之連接子用於將靶向配位體結合至本文所述之寡核苷酸中之任一者之核苷酸。基於縮醛之連接子揭示於例如國際專利申請公開案第WO 2016/100401號中。在一些實施例中，連接子為不穩定連接子。然而，在其他實施例中，連接子為穩定連接子。
在一些實施例中，在靶向配位體(例如，GalNAc部分)與RNAi寡核苷酸之間提供雙鏈體延伸(例如，長度為至多3、4、5或6bp)。在一些實施例中，寡核苷酸不具有與其結合之GalNAc。
在一些實施例中，寡核苷酸之有義股及反義股包含選自由以下組成之群的核苷酸序列：
a)分別為SEQ ID NO：1537及1572；b)分別為SEQ ID NO：1538及1573；c)分別為SEQ ID NO：1539及1574；d)分別為SEQ ID NO：1540及1575；e)分別為SEQ ID NO：1541及1576；f)分別為SEQ ID NO：1542及1577；g)分別為SEQ ID NO：1543及1578；h)分別為SEQ ID NO：1544及1579；i)分別為SEQ ID NO：1545及1580；j)分別為SEQ ID NO：1546及1581；k)分別為SEQ ID NO：1547及1582；l)分別為SEQ ID NO：1548及1583；m)分別為SEQ ID NO：1549及1584；n)分別為SEQ ID NO：1550及1585；o)分別為SEQ ID NO：1551及1586；p)分別為SEQ ID NO：1552及1587；q)分別為SEQ ID NO：1553及1588；r)分別為SEQ ID NO：1554及1589；s)分別為SEQ ID NO：1555及1590；t)分別為SEQ ID NO：1556及1591；u)分別為SEQ ID NO：1557及1592；v)分別為SEQ ID NO：1558及1593；w)分別為SEQ ID NO：1559及1594；x)分別為SEQ ID NO：1560及1595；
y)分別為SEQ ID NO：1561及1596；z)分別為SEQ ID NO：1562及1597；aa)分別為SEQ ID NO：1563及1598；bb)分別為SEQ ID NO：1564及1599；cc)分別為SEQ ID NO：1565及1600；dd)分別為SEQ ID NO：1566及1601；ee)分別為SEQ ID NO：1567及1602；ff)分別為SEQ ID NO：1568及1603；gg)分別為SEQ ID NO：1569及1604；hh)分別為SEQ ID NO：1570及1605；ii)分別為SEQ ID NO：1571及1606；及jj)分別為SEQ ID NO：1681及1586，其中寡核苷酸包含至少一個結合至核苷酸之GalNAc部分。
在一些實施例中，寡核苷酸之有義股及反義股包含選自由以下組成之群的核苷酸序列：a)分別為SEQ ID NO：1540及1575；b)分別為SEQ ID NO：1544及1579；c)分別為SEQ ID NO：1546及1581；d)分別為SEQ ID NO：1551及1586；e)分別為SEQ ID NO：1552及1587；f)分別為SEQ ID NO：1553及1588；g)分別為SEQ ID NO：1558及1594；h)分別為SEQ ID NO：1560及1595；i)分別為SEQ ID NO：1564及1599；
j)分別為SEQ ID NO：1565及1600；k)分別為SEQ ID NO：1566及1601；l)分別為SEQ ID NO：1570及1605；及m)分別為SEQ ID NO：1681及1586，其中寡核苷酸包含至少一個結合至核苷酸之GalNAc部分。
在一些實施例中，寡核苷酸之有義股及反義股包含選自由以下組成之群的核苷酸序列：a)分別為SEQ ID NO：1553及1588；b)分別為SEQ ID NO：1560及1595；c)分別為SEQ ID NO：1564及1599；d)分別為SEQ ID NO：1551及1586；e)分別為SEQ ID NO：1570及1605；及f)分別為SEQ ID NO：1681及1586，其中寡核苷酸包含至少一個結合至核苷酸之GalNAc部分。
脂質結合
在一些實施例中，一或多個脂質部分結合至有義股之5'末端核苷酸。在一些實施例中，一或多個脂質部分結合至腺嘌呤核苷酸。在一些實施例中，一或多個脂質部分結合至鳥嘌呤核苷酸。在一些實施例中，一或多個脂質部分結合至胞嘧啶核苷酸。在一些實施例中，一或多個脂質部分結合至胸腺嘧啶(T)核苷酸。在一些實施例中，一或多個脂質部分結合至尿嘧啶(U)核苷酸。
在一些實施例中，脂質部分為烴鏈。在一些實施例中，烴鏈為飽和的。在其他實施例中，烴鏈為不飽和的。在一些實施例中，烴鏈為分支鏈。在其他實施例中，烴鏈為直鏈。在一些實施例中，脂質部分為C8-C30烴鏈。在某些實施例中，脂質部分為C8：0、C10：0、C11：0、C12：0、C14：0、C16：0、C17：0、C18：0、C18：1、
C18：2、C22：5、C22：0、C24：0、C26：0、C22：6、C24：1、二醯基C16：0或二醯基C18：1。在一些實施例中，脂質部分為C16烴鏈。在一些實施例中，C16烴鏈表示為：
在一些實施例中，有義股之長度為20-22個核苷酸且脂質部分結合至有義股之5'末端核苷酸。在一些實施例中，有義股之長度為20-22個核苷酸且烴鏈結合至有義股之5'末端核苷酸。在一些實施例中，有義股之長度為20-22個核苷酸且C14-C22烴鏈結合至有義股之5'末端核苷酸。在一些實施例中，有義股之長度為20-22個核苷酸且C16烴鏈結合至有義股之5'末端核苷酸。在一些實施例中，有義股之長度為20個核苷酸且脂質部分結合至有義股之5'末端核苷酸。在一些實施例中，有義股之長度為20個核苷酸且烴鏈結合至有義股之5'末端核苷酸。在一些實施例中，有義股之長度為20個核苷酸且C14-C22烴鏈結合至有義股之5'末端核苷酸。在一些實施例中，有義股之長度為20個核苷酸且C16烴鏈結合至有義股之5'末端核苷酸。
在一些實施例中，寡核苷酸包含(i)長度為20-22個核苷酸之有義股；(ii)包含長度為一或多個核苷酸之3'懸垂序列之反義股；(iii)包含有義股之3'端之鈍端；及(iv)結合至有義股之5'末端核苷酸之脂質部分。在一些實施例中，寡核苷酸包含(i)長度為20-22個核苷酸之有義股；(ii)包含長度為一或多個核苷酸之3'懸垂序列之反義股；(iii)包含有義股之3'端之鈍端；及(iv)結合至有義股之5'末端核苷酸之烴鏈。在一些實施例中，寡核苷酸包含(i)長度為20-22個核苷酸之有義股；(ii)包含長度為一或多個核苷酸之3'懸垂序列之反義股；(iii)包含有義股之3'端之鈍端；及(iv)結合至有義股之5'末端核苷酸之C14-C22烴鏈。在一些實施例中，寡核苷酸包含(i)長度為20-22個核苷酸之有義股；(ii)包含長度為一或多個核苷酸之3'懸垂序列之反義股；(iii)包含有義股之3'端之鈍端；及(iv)結合至有義股
之5'末端核苷酸之C16烴鏈。
在一些實施例中，寡核苷酸包含(i)長度為20個核苷酸之有義股；(ii)長度為22個核苷酸且包含長度為兩個核苷酸之3'懸垂序列之反義股；(iii)包含有義股之3'端之鈍端；及(iv)結合至有義股之5'末端核苷酸之脂質部分。在一些實施例中，寡核苷酸包含(i)長度為20個核苷酸之有義股；(ii)長度為22個核苷酸且包含長度為兩個核苷酸之3'懸垂序列之反義股；(iii)包含有義股之3'端之鈍端；及(iv)結合至有義股之5'末端核苷酸之烴鏈。在一些實施例中，寡核苷酸包含(i)長度為20個核苷酸之有義股；(ii)長度為22個核苷酸且包含長度為2個核苷酸之3'懸垂序列之反義股；(iii)包含有義股之3'端之鈍端；及(iv)結合至有義股之5'末端核苷酸之C14-C22烴鏈。在一些實施例中，寡核苷酸包含(i)長度為20個核苷酸之有義股；(ii)長度為22個核苷酸且包含長度為2個核苷酸之3'懸垂序列之反義股；(iii)包含有義股之3'端之鈍端；及(iv)結合至有義股之5'末端核苷酸之C16烴鏈。
在一些實施例中，寡核苷酸包含(i)19-30個核苷酸之反義股，該反義股包含SNCA mRNA靶序列之互補區域，該靶序列係選自SEQ ID NO：1781、1782、1796、1798、1802、1808、1814、1817、1713、1718、1726、1830、1839、1742、1846、1852、1865、1784、1804、1721、1822、1840、1735、1847、1855、1864、1901、1902、1938、1947、1955、1964、1973及1978；(ii)19-25個核苷酸之有義股，該有義股與反義股形成雙鏈體區域；及(iii)結合至有義股之5'末端核苷酸之脂質部分。在一些實施例中，寡核苷酸包含(i)19-30個核苷酸之反義股，該反義股包含SNCA mRNA靶序列之互補區域，該靶序列係選自SEQ ID NO：1798、1817、1718、1846、1852、1865、1804、1721、1847、1855、1864及1955；(ii)19-25個核苷酸之有義股，該有義股與反義股形成雙鏈體區域；及(iii)結合至有義股之5'末端核苷酸之脂質部分。在一些實施例中，寡核苷酸包含(i)19-30個
核苷酸之反義股，該反義股包含SNCA mRNA靶序列之互補區域，該靶序列係選自SEQ ID NO：1865、1721、1847、1846及1955；(ii)19-25個核苷酸之有義股，該有義股與反義股形成雙鏈體區域；及(iii)結合至有義股之5'末端核苷酸之脂質部分。
在一些實施例中，寡核苷酸包含(i)19-30個核苷酸之反義股，該反義股包含SNCA mRNA靶序列之互補區域，該靶序列係選自SEQ ID NO：1781、1782、1796、1798、1802、1808、1814、1817、1713、1718、1726、1830、1839、1742、1846、1852、1865、1784、1804、1721、1822、1840、1735、1847、1855、1864、1901、1902、1938、1947、1955、1964、1973及1978；(ii)19-25個核苷酸之有義股，該有義股與反義股形成雙鏈體區域；及(iii)結合至有義股之5'末端核苷酸之烴鏈。在一些實施例中，寡核苷酸包含(i)19-30個核苷酸之反義股，該反義股包含SNCA mRNA靶序列之互補區域，該靶序列係選自SEQ ID NO：1798、1817、1718、1846、1852、1865、1804、1721、1847、1855、1864及1955；(ii)19-25個核苷酸之有義股，該有義股與反義股形成雙鏈體區域；及(iii)結合至有義股之5'末端核苷酸之烴鏈。在一些實施例中，寡核苷酸包含(i)19-30個核苷酸之反義股，該反義股包含SNCA mRNA靶序列之互補區域，該靶序列係選自SEQ ID NO：1865、1721、1847、1846及1955；(ii)19-25個核苷酸之有義股，該有義股與反義股形成雙鏈體區域；及(iii)結合至有義股之5'末端核苷酸之烴鏈。
在一些實施例中，寡核苷酸包含(i)19-30個核苷酸之反義股，該反義股包含SNCA mRNA靶序列之互補區域，該靶序列係選自SEQ ID NO：1781、1782、1796、1798、1802、1808、1814、1817、1713、1718、1726、1830、1839、1742、1846、1852、1865、1784、1804、1721、1822、1840、1735、1847、1855、1864、1901、1902、1938、1947、1955、1964、1973及1978；(ii)19-25個核苷酸之有義股，該有義股與反義股形成雙鏈體區域；及(iii)結合至有義股之5'末端
核苷酸之C14-C22烴鏈。在一些實施例中，寡核苷酸包含(i)19-30個核苷酸之反義股，該反義股包含SNCA mRNA靶序列之互補區域，該靶序列係選自SEQ ID NO：1798、1817、1718、1846、1852、1865、1804、1721、1847、1855、1864及1955；(ii)19-25個核苷酸之有義股，該有義股與反義股形成雙鏈體區域；及(iii)結合至有義股之5'末端核苷酸之C14-C22烴鏈。在一些實施例中，寡核苷酸包含(i)19-30個核苷酸之反義股，該反義股包含SNCA mRNA靶序列之互補區域，該靶序列係選自SEQ ID NO：1865、1721、1847、1846及1955；(ii)19-25個核苷酸之有義股，該有義股與反義股形成雙鏈體區域；及(iii)結合至有義股之5'末端核苷酸之C14-C22烴鏈。
在一些實施例中，寡核苷酸包含(i)19-30個核苷酸之反義股，該反義股包含SNCA mRNA靶序列之互補區域，該靶序列係選自SEQ ID NO：1781、1782、1796、1798、1802、1808、1814、1817、1713、1718、1726、1830、1839、1742、1846、1852、1865、1784、1804、1721、1822、1840、1735、1847、1855、1864、1901、1902、1938、1947、1955、1964、1973及1978；(ii)19-25個核苷酸之有義股，該有義股與反義股形成雙鏈體區域；及(iii)結合至有義股之5'末端核苷酸之C16烴鏈。在一些實施例中，寡核苷酸包含(i)19-30個核苷酸之反義股，該反義股包含SNCA mRNA靶序列之互補區域，該靶序列係選自SEQ ID NO：1798、1817、1718、1846、1852、1865、1804、1721、1847、1855、1864及1955；(ii)19-25個核苷酸之有義股，該有義股與反義股形成雙鏈體區域；及(iii)結合至有義股之5'末端核苷酸之C16烴鏈。在一些實施例中，寡核苷酸包含(i)19-30個核苷酸之反義股，該反義股包含SNCA mRNA靶序列之互補區域，該靶序列係選自SEQ ID NO：1865、1721、1847、1846及1955；(ii)19-25個核苷酸之有義股，該有義股與反義股形成雙鏈體區域；及(iii)結合至有義股之5'末端核苷酸之C16烴鏈。
在一些實施例中，寡核苷酸包含含有SEQ ID NO：1681之核苷酸序列之有義股及含有SEQ ID NO：1586之核苷酸序列之反義股，其中該有義股包含結合至有義股之5'末端核苷酸之脂質部分。在一些實施例中，寡核苷酸包含含有SEQ ID NO：1681之核苷酸序列之有義股及含有SEQ ID NO：1586之核苷酸序列之反義股，其中該有義股包含結合至有義股之5'末端核苷酸之烴鏈。在一些實施例中，寡核苷酸包含含有SEQ ID NO：1681之核苷酸序列之有義股及含有SEQ ID NO：1586之核苷酸序列之反義股，其中該有義股包含結合至有義股之5'末端核苷酸之C14-C22烴鏈。在一些實施例中，寡核苷酸包含含有SEQ ID NO：1681之核苷酸序列之有義股及含有SEQ ID NO：1586之核苷酸序列之反義股，其中該有義股包含結合至有義股之5'末端核苷酸之C16烴鏈。
在一些實施例中，用於降低SNCA基因表現之SNCA靶向RNAi寡核苷酸包含有義股及反義股，其中構成有義股及反義股之所有核苷酸經修飾，其中該反義股包含SEQ ID NO：1683-2066中之任一者之SNCA mRNA靶序列的互補區域，且其中該互補區域之長度為至少15個連續核苷酸。在一些實施例中，反義股之5'末端核苷酸包含4'-O-單甲基膦酸酯-2'-O-甲基尿苷[Me膦酸酯-4O-mU]，如本文所述。在一些實施例中，反義股之5'末端核苷酸包含硫代磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，反義股及有義股包含一或多個2'-F修飾及2'-OMe修飾之核苷酸及至少一個硫代磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，反義股包含4個硫代磷酸酯鍵聯且有義股包含1個硫代磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，反義股包含5個硫代磷酸酯鍵聯且有義股包含1個硫代磷酸酯鍵聯。
在一些實施例中，寡核苷酸包含具有SEQ ID NO：1683-2066中之任一者之序列的有義股及包含選自SEQ ID NO：2067-2450中之任一者之互補序列的反義股。
在一些實施例中，寡核苷酸包含具有SEQ ID NO：1-384中之任一者之序列的有義股及包含選自SEQ ID NO：385-768中之任一者之互補序列的反義股。
在一些實施例中，寡核苷酸包含具有SEQ ID NO：1537-1571中之任一者之序列的有義股及包含選自SEQ ID NO：1572-1606中之任一者之互補序列的反義股。
在一些實施例中，寡核苷酸包含具有SEQ ID NO：1537-1571及1681中之任一者之序列的有義股及包含選自SEQ ID NO：1572-1606中之任一者之互補序列的反義股。
在一些實施例中，寡核苷酸由具有SEQ ID NO：1537-1571中之任一者之序列的有義股及包含選自SEQ ID NO：1572-1606中之任一者之互補序列的反義股組成。
在一些實施例中，寡核苷酸由具有SEQ ID NO：1537-1571及1681中之任一者之序列的有義股及包含選自SEQ ID NO：1572-1606中之任一者之互補序列的反義股組成。
在一些實施例中，寡核苷酸用於降低SNCA基因表現且包含：36個核苷酸之有義股，該有義股包含在位置3、5、8、10、12、13、15及17處經2'-F修飾之核苷酸；在位置1、2、4、6、7、9、11、14、16、18-27及31-36處經2'-OMe修飾之核苷酸；在位置28、29及30處經GalNAc結合之核苷酸；及在位置1與2之間的硫代磷酸酯鍵聯；及22個核苷酸之反義股，該反義股包含在位置2、3、4、5、7、10、14、16及19處經2'-F修飾之核苷酸；在位置1、6、8、9、11、12、13、15、17、18及20-22處之2'-OMe；在位置1與2、位置2與3、位置20與21及位置21與22之間的硫代磷酸酯鍵聯；及在位置1處之5'末端核苷酸，其包含4'-磷酸酯類似物，視
情況其中該5'末端核苷酸包含4'-O-單甲基膦酸酯-2'-O-甲基尿苷[Me膦酸酯-4O-mU]；其中反義股之位置1-20與有義股之位置1-20形成雙鏈體區域，其中有義股之位置21-36形成莖環，其中位置27-30形成莖環之環，視情況其中位置27-30包含tetraL，其中反義股之位置21及22包含懸垂，且其中有義股及反義股包含選自由以下組成之群的核苷酸序列：a)分別為SEQ ID NO：1537及1572；b)分別為SEQ ID NO：1538及1573；c)分別為SEQ ID NO：1539及1574；d)分別為SEQ ID NO：1540及1575；e)分別為SEQ ID NO：1541及1576；f)分別為SEQ ID NO：1542及1577；g)分別為SEQ ID NO：1543及1578；h)分別為SEQ ID NO：1544及1579；i)分別為SEQ ID NO：1545及1580；j)分別為SEQ ID NO：1546及1581；k)分別為SEQ ID NO：1547及1582；l)分別為SEQ ID NO：1548及1583；m)分別為SEQ ID NO：1549及1584；n)分別為SEQ ID NO：1550及1585；o)分別為SEQ ID NO：1551及1586；p)分別為SEQ ID NO：1552及1587；q)分別為SEQ ID NO：1553及1588；r)分別為SEQ ID NO：1554及1589；s)分別為SEQ ID NO：1555及1590；
t)分別為SEQ ID NO：1556及1591；u)分別為SEQ ID NO：1557及1592；v)分別為SEQ ID NO：1558及1593；w)分別為SEQ ID NO：1559及1594；x)分別為SEQ ID NO：1560及1595；y)分別為SEQ ID NO：1561及1596；z)分別為SEQ ID NO：1562及1597；aa)分別為SEQ ID NO：1563及1598；bb)分別為SEQ ID NO：1564及1599；cc)分別為SEQ ID NO：1565及1600；dd)分別為SEQ ID NO：1566及1601；ee)分別為SEQ ID NO：1567及1602；ff)分別為SEQ ID NO：1568及1603；gg)分別為SEQ ID NO：1569及1604；hh)分別為SEQ ID NO：1570及1605；及ii)分別為SEQ ID NO：1571及1606。
在一些實施例中，寡核苷酸用於降低SNCA基因表現且包含：36個核苷酸之有義股，該有義股包含在位置3、5、8、10、12、13、15及17處經2'-F修飾之核苷酸；在位置1、2、4、6、7、9、11、14、16、18-27及31-36處經2'-OMe修飾之核苷酸；在位置28、29及30處經GalNAc結合之核苷酸；及在位置1與2之間的硫代磷酸酯鍵聯；及22個核苷酸之反義股，該反義股包含在位置2、3、4、5、7、10、14、16及19處經2'-F修飾之核苷酸；在位置1、6、8、9、11、12、13、15、17、18及20-22處之2'-OMe；在位置1與2、位置2與3、位置20與21及位置21與22之間的
硫代磷酸酯鍵聯；及在位置1處之5'末端核苷酸，其包含4'-磷酸酯類似物，視情況其中該5'末端核苷酸包含4'-O-單甲基膦酸酯-2'-O-甲基尿苷[Me膦酸酯-4O-mU]；其中反義股之位置1-20與有義股之位置1-20形成雙鏈體區域，其中有義股之位置21-36形成莖環，其中位置27-30形成莖環之環，視情況其中位置27-30包含tetraL，其中反義股之位置21及22包含懸垂，且其中有義股及反義股包含選自由以下組成之群的核苷酸序列：a)分別為SEQ ID NO：1540及1575；b)分別為SEQ ID NO：1544及1579；c)分別為SEQ ID NO：1546及1581；d)分別為SEQ ID NO：1551及1586；e)分別為SEQ ID NO：1552及1587；f)分別為SEQ ID NO：1553及1588；g)分別為SEQ ID NO：1558及1594；h)分別為SEQ ID NO：1560及1595；i)分別為SEQ ID NO：1564及1599；j)分別為SEQ ID NO：1565及1600；k)分別為SEQ ID NO：1566及1601；及l)分別為SEQ ID NO：1570及1605。
在一些實施例中，寡核苷酸用於降低SNCA基因表現且包含：36個核苷酸之有義股，該有義股包含在位置3、5、8、10、12、13、15及17處經2'-F修飾之核苷酸；在位置1、2、4、6、7、9、11、14、16、18-27及31-36處經2'-OMe修飾之核苷酸；在位置28、29及30處經GalNAc結合之核苷酸；及在位置1與2之間的硫代磷酸酯鍵聯；及22個核苷酸之反義股，該反義股包含在位置2、3、4、5、7、10、14、16及19
處經2'-F修飾之核苷酸；在位置1、6、8、9、11、12、13、15、17、18及20-22處之2'-OMe；在位置1與2、位置2與3、位置20與21及位置21與22之間的硫代磷酸酯鍵聯；及在位置1處之5'末端核苷酸，其包含4'-磷酸酯類似物，視情況其中該5'末端核苷酸包含4'-O-單甲基膦酸酯-2'-O-甲基尿苷[Me膦酸酯-4O-mU]；其中反義股之位置1-20與有義股之位置1-20形成雙鏈體區域，其中有義股之位置21-36形成莖環，其中位置27-30形成莖環之環，視情況其中位置27-30包含tetraL，其中反義股之位置21及22包含懸垂，且其中有義股及反義股包含選自由以下組成之群的核苷酸序列：a)分別為SEQ ID NO：1553及1588；b)分別為SEQ ID NO：1560及1595；c)分別為SEQ ID NO：1564及1599；d)分別為SEQ ID NO：1551及1586；及e)分別為SEQ ID NO：1570及1605。
在一些實施例中，寡核苷酸用於降低SNCA基因表現且包含：20個核苷酸之有義股，該有義股包含在位置3、5、8、10、12、13、15及17處經2'-F修飾之核苷酸；在位置2、4、6、7、9、11、14、16及18-20處經2'-OMe修飾之核苷酸；結合至位置1處之核苷酸的C16烴鏈；及在位置1與2之間、位置18與19之間及位置19與20之間的硫代磷酸酯鍵聯；及22個核苷酸之反義股，該反義股包含在位置2、3、4、5、7、10、14、16及19處經2'-F修飾之核苷酸；在位置1、6、8、9、11、12、13、15、17、18及20-22處之2'-OMe；在位置1與2、位置2與3、位置20與21及位置21與22之間的硫代磷酸酯鍵聯；及在位置1處之5'末端核苷酸，其包含4'-磷酸酯類似物，視情況其中該5'末端核苷酸包含4'-O-單甲基膦酸酯-2'-O-甲基尿苷[Me膦酸酯-4O-mU]；其中反義股之位置1-20與有義股之位置1-20形成雙鏈體區域，其中反義
股之位置21及22包含懸垂，且其中有義股及反義股分別包含SEQ ID NO：1681及1586之核苷酸序列。
在一些實施例中，寡核苷酸用於降低SNCA基因表現且包含含有如SEQ ID NO：1553所示之核苷酸序列之有義股及含有如SEQ ID NO：1588所示之核苷酸序列之反義股。在一些實施例中，寡核苷酸用於降低SNCA基因表現且包含含有如SEQ ID NO：1560所示之核苷酸序列之有義股及含有如SEQ ID NO：1595所示之核苷酸序列之反義股。在一些實施例中，寡核苷酸用於降低SNCA基因表現且包含含有如SEQ ID NO：1564所示之核苷酸序列之有義股及含有如SEQ ID NO：1599所示之核苷酸序列之反義股。在一些實施例中，寡核苷酸用於降低SNCA基因表現且包含含有如SEQ ID NO：1551所示之核苷酸序列之有義股及含有如SEQ ID NO：1586所示之核苷酸序列之反義股。在一些實施例中，寡核苷酸用於降低SNCA基因表現且包含含有如SEQ ID NO：1570所示之核苷酸序列之有義股及含有如SEQ ID NO：1605所示之核苷酸序列之反義股。在一些實施例中，寡核苷酸用於降低SNCA基因表現且包含含有如SEQ ID NO：1681所示之核苷酸序列之有義股及含有如SEQ ID NO：1586所示之核苷酸序列之反義股。
在一些實施例中，寡核苷酸用於降低SNCA基因表現且包含(i)長度為19-30個核苷酸之反義股，其中該反義股包含含有SNCA mRNA靶序列之互補區域的核苷酸序列，其中該互補區域如SEQ ID NO：1865所示；及(ii)長度為19-50個核苷酸之有義股，該有義股包含反義股之互補區域，其中反義股及有義股為形成不對稱雙鏈體區域之獨立股，該雙鏈體區域在反義股之3'末端具有1-4個核苷酸之懸垂。
在一些實施例中，寡核苷酸用於降低SNCA基因表現且包含(i)長度為19-30個核苷酸之反義股，其中該反義股包含含有SNCA mRNA靶序列之互
補區域的核苷酸序列，其中該互補區域如SEQ ID NO：1721所示；及(ii)長度為19-50個核苷酸之有義股，該有義股包含反義股之互補區域，其中反義股及有義股為形成不對稱雙鏈體區域之獨立股，該雙鏈體區域在反義股之3'末端具有1-4個核苷酸之懸垂。
在一些實施例中，寡核苷酸用於降低SNCA表現且包含(i)長度為19-30個核苷酸之反義股，其中該反義股包含含有SNCA mRNA靶序列之互補區域的核苷酸序列，其中該互補區域如SEQ ID NO：1847所示；及(ii)長度為19-50個核苷酸之有義股，該有義股包含反義股之互補區域，其中反義股及有義股為形成不對稱雙鏈體區域之獨立股，該雙鏈體區域在反義股之3'末端具有1-4個核苷酸之懸垂。
在一些實施例中，寡核苷酸用於降低SNCA基因表現且包含(i)長度為19-30個核苷酸之反義股，其中該反義股包含含有SNCA mRNA靶序列之互補區域的核苷酸序列，其中該互補區域如SEQ ID NO：1846所示；及(ii)長度為19-50個核苷酸之有義股，該有義股包含反義股之互補區域，其中反義股及有義股為形成不對稱雙鏈體區域之獨立股，該雙鏈體區域在反義股之3'末端具有1-4個核苷酸之懸垂。
在一些實施例中，寡核苷酸用於降低SNCA基因表現且包含(i)長度為19-30個核苷酸之反義股，其中該反義股包含含有SNCA mRNA靶序列之互補區域的核苷酸序列，其中該互補區域如SEQ ID NO：1955所示；及(ii)長度為19-50個核苷酸之有義股，該有義股包含反義股之互補區域，其中反義股及有義股為形成不對稱雙鏈體區域之獨立股，該雙鏈體區域在反義股之3'末端具有1-4個核苷酸之懸垂。
在一些實施例中，寡核苷酸用於降低SNCA基因表現且包含(i)長度為19-30個核苷酸之反義股，其中該反義股包含含有SNCA mRNA靶序列之互
補區域的核苷酸序列，其中該互補區域如SEQ ID NO：1865所示；及(ii)長度為19-50個核苷酸之有義股，該有義股包含反義股之互補區域及3'末端之莖環，其中該莖環如S1-L-S2所示，其中S1與S2互補，且其中L在S1與S2之間形成長度為3至5個核苷酸之環，其中反義股及有義股為形成不對稱雙鏈體區域之獨立股，該雙鏈體區域在反義股之3'末端具有1-4個核苷酸之懸垂。
在一些實施例中，寡核苷酸用於降低SNCA基因表現且包含(i)長度為19-30個核苷酸之反義股，其中該反義股包含含有SNCA mRNA靶序列之互補區域的核苷酸序列，其中該互補區域如SEQ ID NO：1721所示；及(ii)長度為19-50個核苷酸之有義股，該有義股包含反義股之互補區域及3'末端之莖環，其中該莖環如S1-L-S2所示，其中S1與S2互補，且其中L在S1與S2之間形成長度為3至5個核苷酸之環，其中反義股及有義股為形成不對稱雙鏈體區域之獨立股，該雙鏈體區域在反義股之3'末端具有1-4個核苷酸之懸垂。
在一些實施例中，寡核苷酸用於降低SNCA基因表現且包含(i)長度為19-30個核苷酸之反義股，其中該反義股包含含有SNCA mRNA靶序列之互補區域的核苷酸序列，其中該互補區域如SEQ ID NO：1847所示；及(ii)長度為19-50個核苷酸之有義股，該有義股包含反義股之互補區域及3'末端之莖環，其中該莖環如S1-L-S2所示，其中S1與S2互補，且其中L在S1與S2之間形成長度為3至5個核苷酸之環，其中反義股及有義股為形成不對稱雙鏈體區域之獨立股，該雙鏈體區域在反義股之3'末端具有1-4個核苷酸之懸垂。
在一些實施例中，寡核苷酸用於降低SNCA基因表現且包含(i)長度為19-30個核苷酸之反義股，其中該反義股包含含有SNCA mRNA靶序列之互補區域的核苷酸序列，其中該互補區域如SEQ ID NO：1846所示；及(ii)長度為19-50個核苷酸之有義股，該有義股包含反義股之互補區域及3'末端之莖環，其中該莖環如S1-L-S2所示，其中S1與S2互補，且其中L在S1與S2之間形成
長度為3至5個核苷酸之環，其中反義股及有義股為形成不對稱雙鏈體區域之獨立股，該雙鏈體區域在反義股之3'末端具有1-4個核苷酸之懸垂。
在一些實施例中，寡核苷酸用於降低SNCA基因表現且包含(i)長度為19-30個核苷酸之反義股，其中該反義股包含含有SNCA mRNA靶序列之互補區域的核苷酸序列，其中該互補區域如SEQ ID NO：1955所示；及(ii)長度為19-50個核苷酸之有義股，該有義股包含反義股之互補區域及3'末端之莖環，其中該莖環如S1-L-S2所示，其中S1與S2互補，且其中L在S1與S2之間形成長度為3至5個核苷酸之環，其中反義股及有義股為形成不對稱雙鏈體區域之獨立股，該雙鏈體區域在反義股之3'末端具有1-4個核苷酸之懸垂。
在一些實施例中，寡核苷酸用於降低SNCA基因表現且包含(i)長度為19-30個核苷酸之反義股，其中該反義股包含含有SNCA mRNA靶序列之互補區域的核苷酸序列，其中該互補區域如SEQ ID NO：1846所示；及(ii)長度為19-25個核苷酸之有義股，該有義股包含反義股之互補區域，其中寡核苷酸包含含有有義股之3'端之鈍端，且其中反義股及有義股為形成不對稱雙鏈體區域之獨立股，該雙鏈體區域在反義股之3'末端具有1-4個核苷酸之懸垂。
在一些實施例中，寡核苷酸用於降低SNCA基因表現且包含(i)長度為19-30個核苷酸之反義股，其中該反義股包含含有SNCA mRNA靶序列之互補區域的核苷酸序列，其中該互補區域如SEQ ID NO：1865所示；及(ii)長度為19-50個核苷酸之有義股，該有義股包含反義股之互補區域，其中反義股之互補區域如SEQ ID NO：2249所示，且其中反義股及有義股為形成不對稱雙鏈體區域之獨立股，該雙鏈體區域在反義股之3'末端具有1-4個核苷酸之懸垂。
在一些實施例中，寡核苷酸用於降低SNCA基因表現且包含(i)長度為19-30個核苷酸之反義股，其中該反義股包含含有SNCA mRNA靶序列之互補區域的核苷酸序列，其中該互補區域如SEQ ID NO：1721所示；及(ii)長度為
19-50個核苷酸之有義股，該有義股包含反義股之互補區域，其中反義股之互補區域如SEQ ID NO：2105所示，且其中反義股及有義股為形成不對稱雙鏈體區域之獨立股，該雙鏈體區域在反義股之3'末端具有1-4個核苷酸之懸垂。
在一些實施例中，寡核苷酸用於降低SNCA基因表現且包含(i)長度為19-30個核苷酸之反義股，其中該反義股包含含有SNCA mRNA靶序列之互補區域的核苷酸序列，其中該互補區域如SEQ ID NO：1847所示；及(ii)長度為19-50個核苷酸之有義股，該有義股包含反義股之互補區域，其中反義股之互補區域如SEQ ID NO：2231所示，且其中反義股及有義股為形成不對稱雙鏈體區域之獨立股，該雙鏈體區域在反義股之3'末端具有1-4個核苷酸之懸垂。
在一些實施例中，寡核苷酸用於降低SNCA基因表現且包含(i)長度為19-30個核苷酸之反義股，其中該反義股包含含有SNCA mRNA靶序列之互補區域的核苷酸序列，其中該互補區域如SEQ ID NO：1846所示；及(ii)長度為19-50個核苷酸之有義股，該有義股包含反義股之互補區域，其中反義股之互補區域如SEQ ID NO：2230所示，且其中反義股及有義股為形成不對稱雙鏈體區域之獨立股，該雙鏈體區域在反義股之3'末端具有1-4個核苷酸之懸垂。
在一些實施例中，寡核苷酸用於降低SNCA基因表現且包含(i)長度為19-30個核苷酸之反義股，其中該反義股包含含有SNCA mRNA靶序列之互補區域的核苷酸序列，其中該互補區域如SEQ ID NO：1955所示；及(ii)長度為19-50個核苷酸之有義股，該有義股包含反義股之互補區域，其中反義股之互補區域如SEQ ID NO：2339所示，且其中反義股及有義股為形成不對稱雙鏈體區域之獨立股，該雙鏈體區域在反義股之3'末端具有1-4個核苷酸之懸垂。
在一些實施例中，寡核苷酸用於降低SNCA基因表現且包含(i)長度為19-30個核苷酸之反義股，其中該反義股包含含有SNCA mRNA靶序列之互補區域的核苷酸序列，其中該互補區域如SEQ ID NO：1865所示；及(ii)長度為19-
50個核苷酸之有義股，該有義股包含反義股之互補區域及3'末端之莖環，其中反義股之互補區域如SEQ ID NO：2249所示，其中該莖環如S1-L-S2所示，其中S1與S2互補，且其中L在S1與S2之間形成長度為3至5個核苷酸之環，其中反義股及有義股為形成不對稱雙鏈體區域之獨立股，該雙鏈體區域在反義股之3'末端具有1-4個核苷酸之懸垂。
在一些實施例中，寡核苷酸用於降低SNCA基因表現且包含(i)長度為19-30個核苷酸之反義股，其中該反義股包含含有SNCA mRNA靶序列之互補區域的核苷酸序列，其中該互補區域如SEQ ID NO：1721所示；及(ii)長度為19-50個核苷酸之有義股，該有義股包含反義股之互補區域及3'末端之莖環，其中反義股之互補區域如SEQ ID NO：2105所示，其中該莖環如S1-L-S2所示，其中S1與S2互補，且其中L在S1與S2之間形成長度為3至5個核苷酸之環，其中反義股及有義股為形成不對稱雙鏈體區域之獨立股，該雙鏈體區域在反義股之3'末端具有1-4個核苷酸之懸垂。
在一些實施例中，寡核苷酸用於降低SNCA基因表現且包含(i)長度為19-30個核苷酸之反義股，其中該反義股包含含有SNCA mRNA靶序列之互補區域的核苷酸序列，其中該互補區域如SEQ ID NO：1847所示；及(ii)長度為19-50個核苷酸之有義股，該有義股包含反義股之互補區域及3'末端之莖環，其中反義股之互補區域如SEQ ID NO：2231所示，其中該莖環如S1-L-S2所示，其中S1與S2互補，且其中L在S1與S2之間形成長度為3至5個核苷酸之環，其中反義股及有義股為形成不對稱雙鏈體區域之獨立股，該雙鏈體區域在反義股之3'末端具有1-4個核苷酸之懸垂。
在一些實施例中，寡核苷酸用於降低SNCA基因表現且包含(i)長度為19-30個核苷酸之反義股，其中該反義股包含含有SNCA mRNA靶序列之互補區域的核苷酸序列，其中該互補區域如SEQ ID NO：1846所示；及(ii)長度為
19-50個核苷酸之有義股，該有義股包含反義股之互補區域及3'末端之莖環，其中反義股之互補區域如SEQ ID NO：2230所示，其中該莖環如S1-L-S2所示，其中S1與S2互補，且其中L在S1與S2之間形成長度為3至5個核苷酸之環，其中反義股及有義股為形成不對稱雙鏈體區域之獨立股，該雙鏈體區域在反義股之3'末端具有1-4個核苷酸之懸垂。
在一些實施例中，寡核苷酸用於降低SNCA基因表現且包含(i)長度為19-30個核苷酸之反義股，其中該反義股包含含有SNCA mRNA靶序列之互補區域的核苷酸序列，其中該互補區域如SEQ ID NO：1955所示；及(ii)長度為19-50個核苷酸之有義股，該有義股包含反義股之互補區域及3'末端之莖環，其中反義股之互補區域如SEQ ID NO：2339所示，其中該莖環如S1-L-S2所示，其中S1與S2互補，且其中L在S1與S2之間形成長度為3至5個核苷酸之環，其中反義股及有義股為形成不對稱雙鏈體區域之獨立股，該雙鏈體區域在反義股之3'末端具有1-4個核苷酸之懸垂。
在一些實施例中，寡核苷酸用於降低SNCA基因表現且包含(i)長度為19-30個核苷酸之反義股，其中該反義股包含含有SNCA mRNA靶序列之互補區域的核苷酸序列，其中該互補區域如SEQ ID NO：1846所示；及(ii)長度為19-25個核苷酸之有義股，該有義股包含反義股之互補區域，其中反義股之互補區域如SEQ ID NO：2230所示，其中寡核苷酸包含含有有義股之3'端之鈍端，且其中反義股及有義股為形成不對稱雙鏈體區域之獨立股，該雙鏈體區域在反義股之3'末端具有1-4個核苷酸之懸垂。
在一些實施例中，寡核苷酸用於降低SNCA基因表現且包含根據以下之有義股及反義股：有義股：5'-mX-S-mX-fX-mX-fX-mX-mX-fX-mX-fX-mX-fX-fX-mX-fX-mX-fX-mX-mX-mX-mX-mX-mX-mX-mX-mX-mX-[ademX-GalNAcl[ademX-
GalNAc][ademX-GalNAc]-mX-mX-mX-mX-mX-mX-3'；雜交至：反義股：5'-[Me膦酸酯-4O-mX]-S-fX-S-fX-fX-fX-mX-fX-mX-mX-fX-mX-mX-mX-fX-mX-fX-mX-mX-fX-mX-S-mX-S-mX-3'；其中mX=經2'-OMe修飾之核苷酸，fX=經2'-F修飾之核苷酸，-S-=硫代磷酸酯鍵聯，-=磷酸二酯鍵聯，[Me膦酸酯-4O-mX]=經4'-O-單甲基膦酸酯-2'-O-甲基修飾之核苷酸，且ademX-GalNAc=附接至核苷酸之GalNAc。
在一些實施例中，寡核苷酸用於降低SNCA基因表現且包含根據以下之有義股及反義股：有義股：5'-[AdemX-L]-S-mX-fX-mX-fX-mX-mX-fX-mX-fX-mX-fX-fX-mX-fX-mX-fX-mX-S-mX-S-mX-3'；雜交至：反義股：5'-[Me膦酸酯-4O-mX]-S-fX-S-fX-fX-fX-mX-fX-mX-mX-fX-mX-mX-mX-fX-mX-fX-mX-mX-fX-mX-S-mX-S-mX-3'；其中mX=經2'-OMe修飾之核苷酸，fX=經2'-F修飾之核苷酸，-S-=硫代磷酸酯鍵聯，-=磷酸二酯鍵聯，[Me膦酸酯-4O-mX]=經4'-O-單甲基膦酸酯-2'-O-甲基修飾之核苷酸，且ademX-L=附接至核苷酸之脂質部分。
在一些實施例中，寡核苷酸用於降低SNCA基因表現且包含根據以下之有義股及反義股：有義股：5'-[AdemX-C16]-S-mX-fX-mX-fX-mX-mX-fX-mX-fX-mX-fX-fX-mX-fX-mX-fX-mX-S-mX-S-mX-3'；雜交至：反義股：5'-[Me膦酸酯-4O-mX]-S-fX-S-fX-fX-fX-mX-fX-mX-mX-fX-mX-mX-mX-fX-mX-fX-mX-mX-fX-mX-S-mX-S-mX-3'；其中mX=經2'-OMe修飾之核苷酸，fX=經2'-F修飾之核苷酸，-S-=硫代磷酸酯鍵聯，-=磷酸二酯鍵聯，[Me膦酸酯-4O-mX]=經4'-O-單甲基膦酸酯-2'-O-甲基修飾之核苷酸，且ademX-C16=附接至核苷酸之C16烴鏈。
在一些實施例中，寡核苷酸用於降低SNCA基因表現且包含有義股及反義股，該有義股及該反義股包含選自由以下組成之群的核苷酸序列：a)分別為SEQ ID NO：1607及1642；b)分別為SEQ ID NO：1608及1643；c)分別為SEQ ID NO：1609及1644；d)分別為SEQ ID NO：1610及1645；e)分別為SEQ ID NO：1611及1646；f)分別為SEQ ID NO：1612及1647；g)分別為SEQ ID NO：1613及1648；h)分別為SEQ ID NO：1614及1649；i)分別為SEQ ID NO：1615及1650；j)分別為SEQ ID NO：1616及1651；k)分別為SEQ ID NO：1617及1652；l)分別為SEQ ID NO：1618及1653；m)分別為SEQ ID NO：1619及1654；n)分別為SEQ ID NO：1620及1655；o)分別為SEQ ID NO：1621及1656；p)分別為SEQ ID NO：1622及1657；q)分別為SEQ ID NO：1623及1658；r)分別為SEQ ID NO：1624及1659；s)分別為SEQ ID NO：1625及1660；t)分別為SEQ ID NO：1626及1661；u)分別為SEQ ID NO：1627及1662；v)分別為SEQ ID NO：1628及1663；
w)分別為SEQ ID NO：1629及1664；x)分別為SEQ ID NO：1630及1665；y)分別為SEQ ID NO：1631及1666；z)分別為SEQ ID NO：1632及1667；aa)分別為SEQ ID NO：1633及1668；bb)分別為SEQ ID NO：1634及1669；cc)分別為SEQ ID NO：1635及1670；dd)分別為SEQ ID NO：1636及1671；ee)分別為SEQ ID NO：1637及1672；ff)分別為SEQ ID NO：1638及1673；gg)分別為SEQ ID NO：1639及1674；hh)分別為SEQ ID NO：1640及1675；ii)分別為SEQ ID NO：1641及1676；及jj)分別為SEQ ID NO：1682及1656。
在一些實施例中，寡核苷酸用於降低SNCA基因表現且包含有義股及反義股，該有義股及該反義股包含選自由以下組成之群的核苷酸序列：a)分別為SEQ ID NO：1610及1645；b)分別為SEQ ID NO：1614及1649；c)分別為SEQ ID NO：1616及1651；d)分別為SEQ ID NO：1621及1656；e)分別為SEQ ID NO：1622及1657；f)分別為SEQ ID NO：1623及1658；g)分別為SEQ ID NO：1629及1664；h)分別為SEQ ID NO：1630及1665；
i)分別為SEQ ID NO：1634及1669；j)分別為SEQ ID NO：1635及1670；k)分別為SEQ ID NO：1636及1671；l)分別為SEQ ID NO：1640及1675；及m)分別為SEQ ID NO：1682及1656。
在一些實施例中，寡核苷酸用於降低SNCA基因表現且包含有義股及反義股，該有義股及該反義股包含選自由以下組成之群的核苷酸序列：a)分別為SEQ ID NO：1623及1658；b)分別為SEQ ID NO：1630及1665；c)分別為SEQ ID NO：1634及1669；d)分別為SEQ ID NO：1621及1656；e)分別為SEQ ID NO：1640及1675；及f)分別為SEQ ID NO：1682及1656。
在一些實施例中，寡核苷酸用於降低SNCA基因表現且包含含有如SEQ ID NO：1623所示之核苷酸序列之有義股及含有如SEQ ID NO：1658所示之核苷酸序列之反義股。在一些實施例中，寡核苷酸用於降低SNCA基因表現且包含含有如SEQ ID NO：1630所示之核苷酸序列之有義股及含有如SEQ ID NO：1665所示之核苷酸序列之反義股。在一些實施例中，寡核苷酸用於降低SNCA基因表現且包含含有如SEQ ID NO：1634所示之核苷酸序列之有義股及含有如SEQ ID NO：1669所示之核苷酸序列之反義股。在一些實施例中，寡核苷酸用於降低SNCA基因表現且包含含有如SEQ ID NO：1621所示之核苷酸序列之有義股及含有如SEQ ID NO：1656所示之核苷酸序列之反義股。在一些實施例中，寡核苷酸用於降低SNCA基因表現且包含含有如SEQ ID NO：1640所示之核苷酸序列之有義股及含有如SEQ ID NO：1675所示之核苷酸序列之反義股。在一些
實施例中，寡核苷酸用於降低SNCA基因表現且包含含有如SEQ ID NO：1682所示之核苷酸序列之有義股及含有如SEQ ID NO：1656所示之核苷酸序列之反義股。
已開發多種調配物以促進寡核苷酸之使用。舉例而言，可使用使降解最小化、促進遞送及/或攝取或為調配物中之寡核苷酸提供另一種有益特性之調配物將寡核苷酸(例如，RNAi寡核苷酸)遞送至個體或細胞環境。在一些實施例中，調配物為包含降低SNCA基因表現之寡核苷酸之組合物。可適當調配此類組合物，使得當向靶細胞之直接環境中或全身投與至個體時，足夠部分之寡核苷酸進入細胞以降低SNCA基因表現。任何種類之適合寡核苷酸調配物皆可用於遞送用於降低SNCA基因表現之寡核苷酸。在一些實施例中，寡核苷酸於緩衝溶液，諸如磷酸鹽緩衝鹽水溶液、脂質體、膠束結構及衣殼中調配。在其他實施例中，寡核苷酸於緩衝溶液，諸如磷酸鹽緩衝鹽水溶液中調配。
寡核苷酸與陽離子脂質之調配物可用於促進寡核苷酸轉染至細胞中。舉例而言，可使用陽離子脂質，諸如脂質轉染蛋白(lipofectin)、陽離子甘油衍生物及聚陽離子分子(例如，聚離胺酸)。適合之脂質包括寡染胺(Oligofectamine)、脂染胺(Lipofectamine)(Life Technologies)、NC388(Ribozyme Pharmaceuticals,Inc.；Boulder,CO)或FuGene 6(Roche)，所有該等脂質皆可根據製造商之說明書使用。在一些實施例中，寡核苷酸不與促進轉染至細胞中之組分一起調配。
因此，在一些實施例中，調配物包含脂質奈米粒子。在一些實施例中，脂質奈米粒子包含脂質體、脂質、脂質複合物、微球、微粒、奈米球或奈米粒子，或可依其他方式調配以用於向有需要之個體之細胞、組織、器官或身體投與(參見例如Remington：THE SCIENCE AND PRACTICE OF PHARMACY，第22版，
Pharmaceutical Press,2013)。
在一些實施例中，調配物包含賦形劑，其賦予組合物改良之穩定性、改良之吸收、改良之溶解度及/或活性成分之治療增強。在一些實施例中，賦形劑為緩沖劑(例如，檸檬酸鈉、磷酸鈉、tris鹼或氫氧化鈉)或媒劑(例如，緩衝溶液、石蠟脂、二甲亞砜或礦物油)。在一些實施例中，將寡核苷酸凍乾以延長其保質期，接著在使用(例如，向個體投與)前製成溶液。因此，賦形劑可為凍乾保護劑(例如，甘露糖醇、乳糖、聚乙二醇或聚乙烯吡咯啶酮)或崩解溫度調節劑(例如，葡聚醣、FicollTM或明膠)。
在一些實施例中，調配物為與其預期投與途徑相容之醫藥組合物。投與途徑之實例包括但不限於非經腸(例如，靜脈內、肌內、腹膜內、皮內、皮下)、經口(例如，吸入)、經皮(例如，局部)、經黏膜及直腸投與。
在一些實施例中，調配物經調配以用於投與至CNS中。在一些實施例中，調配物經調配以用於投與至腦脊髓液中。在一些實施例中，調配物經調配以用於投與至脊髓。在一些實施例中，調配物經調配以用於鞘內投與。在一些實施例中，調配物經調配以用於投與至腦。在一些實施例中，調配物經調配以用於腦室內投與。在一些實施例中，調配物經調配以用於腦幹。在一些實施例中，調配物經調配以用於大池內投與。
適用於可注射用途之醫藥組合物包括無菌水溶液(在水溶性之情況下)或分散液及用於臨時製備無菌可注射溶液或分散液之無菌粉末。對於靜脈內投與，適合之載劑包括生理鹽水、抑菌水、Cremophor ELTM(BASF；Parsippany,NJ)或磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)。載劑可為溶劑或分散介質，其含有例如水、乙醇、多元醇(例如，甘油、丙二醇及液體聚乙二醇及類似物)及其適合之混合物。在許多情況下，較佳地，組合物中包括等張劑，例如，糖、多元醇(諸如甘露糖醇、山梨糖醇)、氯化鈉。可藉由將所需量之寡核苷酸與上文所列舉之一種成分或成
分之組合一起併入所選溶劑中，視需要繼之以過濾滅菌來製備無菌可注射溶液。
在一些實施例中，調配物可含有至少約0.1%之寡核苷酸或更多，但活性成分之百分比可介於總組合物重量或體積之約1%至約80%之間或更多。諸如溶解度、生物可用度、生物半衰期、投與途徑、產品保質期以及其他藥理學考慮因素之因素將由製備此類醫藥調配物之技術人員所預期，且因此可能需要多種劑量及治療方案。
在一些實施例中，接觸或遞送至細胞或細胞群體之方法包括投與有效量之寡核苷酸(例如，RNAi寡核苷酸)以降低SNCA基因表現。在一些實施例中，藉由量測細胞中SNCA mRNA、SNCA蛋白、SNCA活性或其組合之量或水準的降低來確定SNCA基因表現之降低。該等方法包括本文所述及一般熟習此項技術者已知之彼等。
在一些實施例中，降低CNS中之SNCA基因表現之方法包括投與有效量之寡核苷酸(例如，RNAi寡核苷酸)以降低SNCA基因表現。在一些實施方式中，CNS包括腦及脊髓。在一些實施例中，SNCA基因表現在至少一個腦區域中降低，該至少一個腦區域包括但不限於頸脊髓、胸脊髓、腰脊髓、額葉皮質、顳葉皮質、小腦、中腦、枕葉皮質、頂葉皮質、海馬體、尾狀核、丘腦及腦幹。在一些實施例中，SNCA基因表現在至少一個脊髓區域中降低，該至少一個脊髓區域包括但不限於頸脊髓、胸脊髓及腰脊髓。在一些實施例中，SNCA基因表現在至少一個腦區域及至少一個脊髓區域中降低。在一些實施例中，SNCA基因表現在以下至少一者中降低：頸脊髓、胸脊髓、腰脊髓、額葉皮質、顳葉皮質、小腦、中腦、枕葉皮質、頂葉皮質、海馬體、尾狀核、丘腦、腦幹、運動皮質、蒼白球、中腦被蓋、黑質、腦橋、小腦白質及小腦齒狀核。在一些實施例中，SNCA
基因表現在腰脊髓、胸脊髓及頸脊髓中之至少一者中降低。在一些實施例中，SNCA基因表現在與帕金森氏病相關之腦及/或脊髓組織中降低。在一些實施例中，與帕金森氏病相關之組織包括但不限於殼核、中腦被蓋、黑質、腦橋及髓質。在一些實施例中，SNCA基因表現在與多系統萎縮相關之腦及/或脊髓組織中降低。在一些實施例中，與帕金森氏病相關之組織包括但不限於尾狀核、殼核、中腦被蓋、黑質、腦橋、小腦皮質、小腦白質、髓質、頸脊髓、胸脊髓及腰脊髓。
在一些實施例中，在投與寡核苷酸或包含其之調配物後，SNCA基因表現降低持續約1週至約12週。在一些實施例中，在投與寡核苷酸或調配物後，SNCA基因表現降低持續1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12週。在一些實施例中，在投與寡核苷酸或調配物後，SNCA基因表現降低持續約1個月至約4個月。在一些實施例中，在投與寡核苷酸或調配物後，SNCA基因表現降低持續約1個月至約6個月。在一些實施例中，在投與寡核苷酸或調配物後，SNCA基因表現降低持續1、2、3或4個月。在一些實施例中，在投與寡核苷酸或調配物後，SNCA基因表現降低持續1、2、3、4、5或6個月。在一些實施例中，在投與寡核苷酸或調配物後，SNCA基因表現降低持續約7天至約91天。在一些實施例中，在投與寡核苷酸或調配物後，SNCA基因表現降低持續7、14、21、28、35、42、49、56、63、70、77、84或91天。
在一些實施例中，在投與寡核苷酸或調配物後，SNCA基因表現在至少一個腦區域及/或至少一個脊髓區域中降低持續約1至約12週。在一些實施例中，在投與寡核苷酸或調配物後，SNCA基因表現在至少一個腦區域及/或至少一個脊髓區域中降低持續1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12週。在一些實施例中，在投與寡核苷酸或調配物後，SNCA基因表現在至少一個腦區域及/或至少一個脊髓區域中降低持續約1個月至約4個月。在一些實施例中，在投與寡核苷酸或調配物後，SNCA基因表現在至少一個腦區域及/或至少一個脊髓區域
中降低持續約1個月至約6個月。在一些實施例中，在投與寡核苷酸或調配物後，SNCA基因表現在至少一個腦區域及/或至少一個脊髓區域中降低持續1、2、3或4個月。在一些實施例中，在投與寡核苷酸或調配物後，SNCA基因表現在至少一個腦區域及/或至少一個脊髓區域中降低持續1、2、3、4、5或6個月。在一些實施例中，在投與寡核苷酸或調配物後，SNCA基因表現在至少一個腦區域及/或至少一個脊髓區域中降低持續約7天至約91天。在一些實施例中，在投與寡核苷酸或調配物後，SNCA基因表現在至少一個腦區域及/或至少一個脊髓區域中降低持續7、14、21、28、35、42、49、56、63、70、77、84或91天。
本文之方法可用於任何適當細胞類型。在一些實施例中，細胞類型為表現SNCA mRNA之任何細胞(例如，寡樹突細胞)。在一些實施例中，細胞類型為自個體獲得之原代細胞。在一些實施例中，原代細胞已經歷有限次數之傳代，使得細胞實質上維持天然表型特性。在一些實施例中，寡核苷酸所遞送之細胞為離體或活體外的(亦即，可遞送至培養中之細胞或細胞所處之生物體)。
在一些實施例中，使用此項技術中已知之核酸遞送方法將寡核苷酸遞送至細胞或細胞群體，該方法包括但不限於注射含有寡核苷酸之溶液或醫藥組合物(亦即，調配物)，由寡核苷酸覆蓋之粒子進行轟擊，將細胞或細胞群體暴露於含有寡核苷酸之溶液，或在寡核苷酸存在下對細胞膜進行電穿孔。可使用此項技術中已知的用於將寡核苷酸遞送至細胞之其他方法，諸如脂質介導之載體轉運、化學介導之轉運及陽離子脂質體轉染，諸如磷酸鈣及其他。
在一些實施例中，藉由評價與SNCA基因表現相關之細胞或細胞群體之一或多種分子、特性或特徵之檢定或技術，或藉由評價直接指示細胞或細胞群體中之SNCA基因表現之分子(例如，SNCA mRNA或SNCA蛋白)的檢定或技術來確定SNCA基因表現之降低。在一些實施例中，藉由將與寡核苷酸接觸之細胞或細胞群體中之SNCA基因表現與對照細胞或細胞群體(例如，未接觸寡核苷
酸或接觸對照寡核苷酸之細胞或細胞群體)相比較來評價寡核苷酸降低SNCA基因表現之程度。在一些實施例中，對照細胞或細胞群體中SNCA基因表現之對照量或水準為預定的，使得對照量或水準不需要在進行檢定或技術之每個實例中量測。預定水準或值可採用多種形式。在一些實施例中，預定水準或值可為單個截止值，諸如中值或平均值。
在一些實施例中，使寡核苷酸與細胞或細胞群體接觸或將寡核苷酸遞送至細胞或細胞群體促使SNCA基因表現降低。在一些實施例中，SNCA基因表現之降低係相對於未接觸寡核苷酸或接觸對照寡核苷酸之細胞或細胞群體中SNCA基因表現之對照量或水準。在一些實施例中，相對於SNCA基因表現之對照量或水準，SNCA基因表現之降低為約1%或更低、約5%或更低、約10%或更低、約15%或更低、約20%或更低、約25%或更低、約30%或更低、約35%或更低、約40%或更低、約45%或更低、約50%或更低、約55%或更低、約60%或更低、約70%或更低、約80%或更低或約90%或更低。在一些實施例中，SNCA基因表現之對照量或水準為尚未接觸寡核苷酸之細胞或細胞群體中SNCA mRNA及/或SNCA蛋白及/或SNCA活性/功能之量或水準。在一些實施例中，在任何有限之時間段或時間量(例如，分鐘、小時、天、週、月)之後評估根據本文之方法將寡核苷酸遞送至細胞或細胞群體之效果。舉例而言，在一些實施例中，在使寡核苷酸與細胞或細胞群體接觸或將寡核苷酸遞送至細胞或細胞群體之後至少約4小時、約8小時、約12小時、約18小時、約24小時；或至少約1天、約2天、約3天、約4天、約5天、約6天、約7天、約8天、約9天、約10天、約11天、約12天、約13天、約14天、約21天、約28天、約35天、約42天、約49天、約56天、約63天、約70天、約77天或約84天或更長時間，在細胞或細胞群體中確定SNCA基因表現。在一些實施例中，在使寡核苷酸與細胞或細胞群體接觸或將寡核苷酸遞送至細胞或細胞群體之後至少約1個月、
約2個月、約3個月、約4個月、約5個月或約6個月或更長時間，在細胞或細胞群體中確定SNCA基因表現。
在一些實施例中，寡核苷酸以轉殖基因之形式遞送，該轉殖基因經工程改造以在細胞中表現寡核苷酸或包含寡核苷酸之股(例如，其有義股及反義股)。在一些實施例中，使用經工程改造以表現任何寡核苷酸之轉殖基因來遞送寡核苷酸。可使用病毒載體(例如，腺病毒、反轉錄病毒、牛痘病毒、痘病毒、腺相關病毒或單純疱疹病毒)或非病毒載體(例如，質體或合成mRNA)來遞送轉殖基因。在一些實施例中，可將轉殖基因直接注射至個體。
亦提供用於或適用於治療將受益於降低SNCA基因表現之個體(例如，患有與SNCA表現相關之疾病、病症或疾患之人)的寡核苷酸(例如，RNAi寡核苷酸)。在一些態樣中，本揭示案提供用於或適用於治療患有與SNCA表現相關之疾病、病症或疾患之個體的寡核苷酸。亦提供用於或適用於製造用以治療與SNCA基因表現相關之疾病、病症或疾患之藥劑或調配物/醫藥組合物的寡核苷酸。在一些實施例中，使用或適於使用之寡核苷酸靶向SNCA mRNA且降低SNCA基因表現(例如，經由RNAi路徑)。在一些實施例中，使用或適於使用之寡核苷酸靶向SNCA mRNA且降低SNCA mRNA、SNCA蛋白及/或SNCA活性/功能之量或水準。
另外，在本文之方法的一些實施例中，選擇患有與SNCA表現相關之疾病、病症或疾患或易患該疾病、病症或疾患之個體以用寡核苷酸或調配物治療。在一些實施例中，該方法包括選擇具有與SNCA基因表現相關之疾病、病症或疾患之標誌物(例如，生物標誌物)或易患該疾病、病症或疾患之個體，該標誌物諸如但不限於SNCA mRNA、SNCA蛋白、SNCA活性/功能或其組合。同樣地且如下文詳述，方法之一些實施例包括諸如以下之步驟：量測或獲得SNCA基
因表現之標誌物的基線值，接著將所獲得之此值與一或多個其他基線值或在向個體投與寡核苷酸後獲得之值相比較以評估治療之有效性。
本文提供用寡核苷酸或調配物治療患有、疑似患有或有風險患上與SNCA基因表現相關之疾病、病症或疾患之個體的方法。在一些態樣中，本文提供使用寡核苷酸或調配物治療與SNCA基因表現相關之疾病、病症或疾患或減弱其發作或進展的方法。在其他態樣中，本文提供使用寡核苷酸或調配物在患有與SNCA基因表現相關之疾病、病症或疾患之個體中達成一或多種治療效益的方法。在一些實施例中，藉由投與治療有效量之任何一或多種本文所提供之寡核苷酸來治療個體。在一些實施例中，治療包括降低SNCA基因表現。在一些實施例中，以治療方式治療個體。在其他實施例中，以預防方式治療個體。
在本文之方法的一些實施例中，向患有與SNCA表現相關之疾病、病症或疾患之個體投與寡核苷酸或包含該寡核苷酸之醫藥組合物，使得個體中之SNCA基因表現降低，從而治療該個體。在一些實施例中，個體中SNCA mRNA之量或水準降低。在一些實施例中，個體中SNCA蛋白之量或水準降低。在其他實施例中，個體中SNCA活性/功能之量或水準降低。
在一些實施例中，向患有與SNCA基因表現相關之疾病、病症或疾患之個體投與寡核苷酸或包含該寡核苷酸之醫藥組合物/調配物，使得當與投與寡核苷酸或醫藥組合物之前的SNCA表現相比時，個體中之SNCA表現降低至少約30%、約35%、約40%、約45%、約50%、約55%、約60%、約65%、約70%、約75%、約80%、約85%、約90%、約95%、約99%或大於99%。在本文之方法的一些實施例中，向患有與SNCA基因表現相關之疾病、病症或疾患之個體投與寡核苷酸或醫藥組合物，使得當與投與寡核苷酸或醫藥組合物之前的SNCA表現相比時，個體中之SNCA表現降低至少約30%、約35%、約40%、約45%、約50%、約55%、約60%、約65%、約70%、約75%、約80%、約85%、
約90%、約95%、約99%或大於99%，持續約1週至約12週、約1個月至約6個月或約7天至約91天。在一些實施例中，當與未接受寡核苷酸或醫藥組合物或接受對照寡核苷酸、醫藥組合物或治療之個體(例如，參考或對照個體)中之SNCA表現相比時，個體中之SNCA表現降低至少約30%、約35%、約40%、約45%、約50%、約55%、約60%、約65%、約70%、約75%、約80%、約85%、約90%、約95%、約99%或大於99%。在一些實施例中，當與未接受寡核苷酸或醫藥組合物或接受對照寡核苷酸、醫藥組合物或治療之個體(例如，參考或對照個體)中之SNCA表現相比時，個體中之SNCA表現降低至少約30%、約35%、約40%、約45%、約50%、約55%、約60%、約65%、約70%、約75%、約80%、約85%、約90%、約95%、約99%或大於99%，持續約1週至約12週、約1個月至約6個月或約7天至約91天。
在本文之方法的一些實施例中，向患有與SNCA基因表現相關之疾病、病症或疾患之個體投與寡核苷酸或醫藥組合物，使得當與投與寡核苷酸或醫藥組合物之前的SNCA mRNA之量或水準相比時，個體中SNCA mRNA之量或水準降低至少約30%、約35%、約40%、約45%、約50%、約55%、約60%、約65%、約70%、約75%、約80%、約85%、約90%、約95%、約99%或大於99%。在本文之方法的一些實施例中，向患有與SNCA基因表現相關之疾病、病症或疾患之個體投與寡核苷酸或醫藥組合物，使得當與投與寡核苷酸或醫藥組合物之前的SNCA mRNA之量或水準相比時，個體中SNCA mRNA之量或水準降低至少約30%、約35%、約40%、約45%、約50%、約55%、約60%、約65%、約70%、約75%、約80%、約85%、約90%、約95%、約99%或大於99%，持續約1週至約12週、約1個月至約6個月或約7天至約91天。在一些實施例中，當與未接受寡核苷酸或醫藥組合物或接受對照寡核苷酸、醫藥組合物或治療之個體(例如，參考或對照個體)中SNCA mRNA之量或水準相比時，個體中
SNCA mRNA之量或水準降低至少約30%、約35%、約40%、約45%、約50%、約55%、約60%、約65%、約70%、約75%、約80%、約85%、約90%、約95%、約99%或大於99%。在一些實施例中，當與未接受寡核苷酸或醫藥組合物或接受對照寡核苷酸、醫藥組合物或治療之個體(例如，參考或對照個體)中SNCA mRNA之量或水準相比時，個體中SNCA mRNA之量或水準降低至少約30%、約35%、約40%、約45%、約50%、約55%、約60%、約65%、約70%、約75%、約80%、約85%、約90%、約95%、約99%或大於99%，持續約1週至約12週、約1個月至約6個月或約7天至約91天。
在本文之方法的一些實施例中，向患有與SNCA基因表現相關之疾病、病症或疾患之個體投與寡核苷酸或醫藥組合物，使得當與投與寡核苷酸或醫藥組合物之前的SNCA蛋白之量或水準相比時，個體中SNCA蛋白之量或水準降低至少約30%、約35%、約40%、約45%、約50%、約55%、約60%、約65%、約70%、約75%、約80%、約85%、約90%、約95%、約99%或大於99%。在本文之方法的一些實施例中，向患有與SNCA基因表現相關之疾病、病症或疾患之個體投與寡核苷酸或醫藥組合物，使得當與投與寡核苷酸或醫藥組合物之前的SNCA蛋白之量或水準相比時，個體中SNCA蛋白之量或水準降低至少約30%、約35%、約40%、約45%、約50%、約55%、約60%、約65%、約70%、約75%、約80%、約85%、約90%、約95%、約99%或大於99%，持續約1週至約12週、約1個月至約6個月或約7天至約91天。在一些實施例中，當與未接受寡核苷酸或醫藥組合物或接受對照寡核苷酸、醫藥組合物或治療之個體(例如，參考或對照個體)中SNCA蛋白之量或水準相比時，個體中SNCA蛋白之量或水準降低至少約30%、約35%、約40%、約45%、約50%、約55%、約60%、約65%、約70%、約75%、約80%、約85%、約90%、約95%、約99%或大於99%。在一些實施例中，當與未接受寡核苷酸或醫藥組合物或接受對照寡核苷酸、
醫藥組合物或治療之個體(例如，參考或對照個體)中SNCA蛋白之量或水準相比時，個體中SNCA蛋白之量或水準降低至少約30%、約35%、約40%、約45%、約50%、約55%、約60%、約65%、約70%、約75%、約80%、約85%、約90%、約95%、約99%或大於99%，持續約1週至約12週、約1個月至約6個月或約7天至約91天。
在本文之方法的一些實施例中，向患有與SNCA基因表現相關之疾病、病症或疾患之個體投與寡核苷酸或醫藥組合物，使得當與投與寡核苷酸或醫藥組合物之前的SNCA活性/功能之量或水準相比時，個體中SNCA活性/功能之量或水準降低至少約30%、約35%、約40%、約45%、約50%、約55%、約60%、約65%、約70%、約75%、約80%、約85%、約90%、約95%、約99%或大於99%。在本文之方法的一些實施例中，向患有與SNCA基因表現相關之疾病、病症或疾患之個體投與寡核苷酸或醫藥組合物，使得當與投與寡核苷酸或醫藥組合物之前的SNCA活性/功能之量或水準相比時，個體中SNCA活性/功能之量或水準降低至少約30%、約35%、約40%、約45%、約50%、約55%、約60%、約65%、約70%、約75%、約80%、約85%、約90%、約95%、約99%或大於99%，持續約1週至約12週、約1個月至約6個月或約7天至約91天。在一些實施例中，當與未接受寡核苷酸或醫藥組合物或接受對照寡核苷酸、醫藥組合物或治療之個體(例如，參考或對照個體)中SNCA活性/功能之量或水準相比時，個體中SNCA活性/功能之量或水準降低至少約30%、約35%、約40%、約45%、約50%、約55%、約60%、約65%、約70%、約75%、約80%、約85%、約90%、約95%、約99%或大於99%。在一些實施例中，當與未接受寡核苷酸或醫藥組合物或接受對照寡核苷酸、醫藥組合物或治療之個體(例如，參考或對照個體)中SNCA活性/功能之量或水準相比時，個體中SNCA活性/功能之量或水準降低至少約30%、約35%、約40%、約45%、約50%、約55%、約60%、約
65%、約70%、約75%、約80%、約85%、約90%、約95%、約99%或大於99%，持續約1週至約12週、約1個月至約6個月或約7天至約91天。
用於確定個體中或來自個體之樣品中之SNCA基因表現(諸如SNCA表現)、SNCA mRNA之量或水準、SNCA蛋白之量或水準及/或SNCA活性/功能之量或水準的適合方法在此項技術中為已知的。此外，本文所闡述之實例說明用於確定SNCA基因表現之示例性方法。
在一些實施例中，自個體獲得或分離之細胞(例如，寡樹突細胞)、細胞群體或一組細胞(例如，類器官)、器官(例如，額葉皮質)、血液或其部分(例如，血漿)、組織(例如，腦組織)、樣品(例如，腦活檢樣品)或任何其他生物材料中之SNCA基因表現(諸如SNCA表現)、SNCA mRNA之量或水準、SNCA蛋白之量或水準、SNCA活性/功能之量或水準或其任何組合降低。在一些實施例中，自個體獲得或分離之多於一種類型之細胞(例如，寡樹突細胞及一或多種其他類型之細胞)、多於一組細胞、多於一種器官(例如，腦及一或多種其他器官)、多於一种血液部分(例如，血漿及一或多種其他血液部分)、多於一種類型之組織(例如，腦組織及一或多種其他類型之組織)、多於一種類型之樣品(例如，腦活檢樣品及一或多種其他類型之活檢樣品)中之SNCA表現、SNCA mRNA之量或水準、SNCA蛋白之量或水準、SNCA活性/功能之量或水準或其任何組合降低。在一些實施例中，頸脊髓、胸脊髓、腰脊髓、額葉皮質、顳葉皮質、小腦、中腦、枕葉皮質、頂葉皮質、海馬體、尾狀核、丘腦、腦幹、運動皮質、蒼白球、中腦被蓋、黑質、腦橋、小腦白質及小腦齒狀核中之一或多者中之SNCA表現、SNCA mRNA之量或水準、SNCA蛋白之量或水準、SNCA活性/功能之量或水準或其任何組合降低。在一些實施例中，與帕金森氏病相關之腦及/或脊髓組織中之SNCA表現、SNCA mRNA之量或水準、SNCA蛋白之量或水準、SNCA活性/功能之量或水準或其任何組合降低。在一些實施例中，與帕金森氏病相關之組織包括但不限於殼
核、中腦被蓋、黑質、腦橋及髓質。在一些實施例中，與多系統萎縮相關之腦及/或脊髓組織中之SNCA表現、SNCA mRNA之量或水準、SNCA蛋白之量或水準、SNCA活性/功能之量或水準或其任何組合降低。在一些實施例中，與多系統萎縮相關之組織包括但不限於尾狀核、殼核、中腦被蓋、黑質、腦橋、小腦皮質、小腦白質、髓質、頸脊髓、胸脊髓及腰脊髓。
與SNCA基因表現相關之疾病、病症或疾患之實例包括多系統萎縮、路易體失智及帕金森病。
由於其高度特異性，本文之寡核苷酸特異性靶向細胞、組織或器官(例如，腦)之靶基因的SNCA mRNA。在預防疾病中，靶基因可為引發或維持疾病所需或已鑑定為與感染疾病之較高風險相關之基因。在治療疾病中，可使寡核苷酸與展現或負責介導疾病之細胞、組織或器官(例如，腦)接觸。舉例而言，可使與SNCA基因表現相關之疾病、病症或疾患相關之野生型(亦即，原生)或突變基因之全部或部分實質上相同的寡核苷酸接觸所關注之細胞或組織類型(諸如寡樹突細胞或其他腦細胞)或引入其中。
在一些實施例中，SNCA可來自任何哺乳動物(諸如人類)且可根據本文所述之方法緘默化。
本文之方法典型地涉及向個體投與治療有效量之寡核苷酸，亦即，能夠產生期望治療結果之量。治療上可接受之量可為可依治療方式治療疾病、病症或疾患之量。針對任何一名個體之適當量/劑量將取決於某些因素，包括個體之體型、體表面積、年齡、待投與之特定組合物、組合物中之活性成分、投與時間及途徑、一般健康狀況及同時投與之其他藥物。
在一些實施例中，經腸(例如，經口、藉由胃飼管、藉由十二指腸飼管、經由胃造口術或經直腸)、非經腸(例如，皮下注射、靜脈內注射或輸注、動脈內注射或輸注、骨內輸注、肌內注射、腦內注射、腦室內注射、鞘內)、局部
(例如，表皮、吸入、經由滴眼劑或經黏膜)或藉由直接注射至靶器官(例如，個體之腦)中，向個體投與本文之寡核苷酸或組合物中之任一者。典型地，靜脈內或皮下投與寡核苷酸或組合物。在一些實施例中，向腦脊髓液投與寡核苷酸或組合物。在一些實施例中，鞘內投與寡核苷酸或組合物。在一些實施例中，腦室內投與寡核苷酸或組合物。在一些實施例中，藉由大池內注射投與寡核苷酸或組合物。
作為一組非限制性實例，將典型地每季度(每三個月一次)、每兩月(每兩個月一次)、每月或每週投與寡核苷酸。舉例而言，可每週或以兩週或三週之時間間隔投與寡核苷酸。或者，可每天投與寡核苷酸。在一些實施例中，向個體投與一或多個負載劑量之寡核苷酸，繼而投與一或多個維持劑量之寡核苷酸。
在一些實施例中，待治療之個體為人類或非人類靈長類動物或其他哺乳動物個體。其他示例性個體包括家養動物，諸如犬及貓；牲畜，諸如馬、牛、豬、綿羊、山羊及雞；及動物，諸如小鼠、大鼠、天竺鼠及倉鼠。
在一些實施例中，提供一種包含本文所述之寡核苷酸(例如，RNAi寡核苷酸)及其使用說明書之套組。在一些實施例中，套組包含寡核苷酸及含有套組及/或其任何組分之使用說明書的包裝插頁。在一些實施例中，套組在適合之容器中包含寡核苷酸、一或多種對照及此項技術中熟知之各種緩衝液、試劑、酶及其他標準成分。在一些實施例中，容器包括至少一個小瓶、孔、試管、燒瓶、瓶、注射器或其他容器工具，寡核苷酸置於其中且在一些情況下經適當等分。在提供額外組分之一些實施例中，套組含有此種組分置於其中之額外容器。套組亦可包括用於在密閉空間中容納寡核苷酸及任何其他試劑以用於商業銷售之工具。此類容器可包括射出成型或吹塑成型之塑膠容器，其中保留所需小瓶。容器及/或套組可包括帶有使用說明書及/或警告之標籤。
在一些實施例中，套組包含寡核苷酸及醫藥學上可接受之載劑或醫藥組合物，及用於在有需要之個體中治療與SNCA基因表現相關之疾病、病症或疾患或延緩其進展的說明書。
在一些實施例中，套組包含寡核苷酸及醫藥學上可接受之載劑或醫藥組合物，及用於向腦脊髓液投與寡核苷酸或醫藥組合物以降低有需要之個體之至少一個腦區域及/或至少一個脊髓區域中之SNCA基因表現的說明書。
如本文所用，「近似」或「約」當應用於一或多個所關注之值時，係指類似於所敘述之參考值的值。在某些實施例中，除非另有規定或自上下文另外顯而易見(除非此種數值將超過可能值之100%)，否則「約」係指處於在任一方向上(大於或小於)所敘述之參考值之25%、20%、19%、18%、17%、16%、15%、14%、13%、12%、11%、10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%、1%或更小值以內之值的範圍。
如本文所用，「投與(administer/administering/administration)」及類似術語係指以藥理學上有用(例如，以治療個體之疾病、病症或疾患)之方式向個體提供物質(例如，寡核苷酸)。
如本文所用，「去唾液酸醣蛋白受體」或「ASGPR」係指由主要48kDa次單元(ASGPR-1)及次要40kDa次單元(ASGPR-2)形成之對分C型凝集素。ASGPR主要在肝細胞之血竇表面上表現，且在含有末端半乳糖或GalNAc殘基之循環醣蛋白(去唾液酸醣蛋白)之結合、內化及後續清除中起主要作用。
如本文所用，「減弱(attenuate/attenuating/attenuation)」及類似術語係指減少或有效阻止。作為一個非限制性實例，本文之一或多種治療可減少或有效阻止個體中與SNCA基因表現相關之疾病、病症或疾患的發作或進展。此種減弱可由以下例示：例如，與SNCA基因表現相關之疾病之一或多個方面(例如，症
狀、組織特徵及細胞、炎性或免疫活性等)減少，未偵測到疾病、病症或疾患之一或多個方面之進展(惡化)，或在個體中未偵測到可能以其他方式預期之疾病之方面。
如本文所用，「互補」係指兩個核苷酸之間(例如，在兩個相對核酸上或在單股核酸之相對區域上)的結構關係，此允許兩個核苷酸彼此形成鹼基對。舉例而言，與相對核酸之嘧啶核苷酸互補之一個核酸之嘌呤核苷酸可藉由彼此形成氫鍵而一起鹼基配對。在一些實施例中，互補核苷酸可按沃森-克里克方式或按允許形成穩定雙鏈體之任何其他方式鹼基配對。在一些實施例中，兩個核酸可具有多個核苷酸之區域，該等區域彼此互補以形成互補區域，如本文所述。
如本文所用，「去氧核糖核苷酸」係指當與核糖核苷酸相比時，在其戊糖之2'位置處具有替代羥基之氫的核苷酸。經修飾之去氧核糖核苷酸為除2'位置以外具有一或多個原子修飾或取代之去氧核糖核苷酸，包括糖、磷酸酯基團或鹼基內部或本身之修飾或取代。
如本文所用，「雙股寡核苷酸」或「ds寡核苷酸」係指實質上呈雙鏈體形式之寡核苷酸。在一些實施例中，在共價分離之核酸股之核苷酸之反平行序列之間形成ds寡核苷酸之雙鏈體區域之互補鹼基配對。在一些實施例中，在共價連接之核酸股之核苷酸之反平行序列之間形成ds寡核苷酸之雙鏈體區域之互補鹼基配對。在一些實施例中，由摺疊(例如，經由髮夾)之單股核酸形成ds寡核苷酸之雙鏈體區域之互補鹼基配對，以提供一起鹼基配對之核苷酸之互補反平行序列。在一些實施例中，ds寡核苷酸包含彼此完全呈雙鏈體之兩股共價分離之核酸。然而，在其他實施例中，ds寡核苷酸包含部分呈雙鏈體(例如，在一端或兩端具有懸垂)之兩股共價分離之核酸。在一些實施例中，ds寡核苷酸包含部分互補之核苷酸之反平行序列，且因此可具有一或多個錯配，其可包括內部錯配或末端錯配。
如本文所用，關於核酸(例如，寡核苷酸)之「雙鏈體」係指經由核苷酸之兩個反平行序列之互補鹼基配對形成的結構。
如本文所用，「賦形劑」係指可包含於組合物中之非治療劑，例如，以提供或有助於所需稠度或穩定作用。
如本文所用，「不穩定連接子」係指可裂解(例如，藉由酸性pH)之連接子。「相當穩定之連接子」係指不可裂解之連接子。
如本文所用，「環」係指核酸(例如，寡核苷酸)之未配對區域，其兩側為核酸之兩個反平行區域，該兩個反平行區域彼此充分互補，使得在適當雜交條件下(例如，在磷酸鹽緩衝液中、在細胞中)，位於未配對區域兩側之兩個反平行區域雜交形成雙鏈體(稱作「莖」)。
如本文所用，「經修飾之核苷酸間鍵聯」係指當與包含磷酸二酯鍵之參考核苷酸間鍵聯相比時具有一或多個化學修飾之核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，經修飾之核苷酸為非天然存在之鍵聯。典型地，經修飾之核苷酸間鍵聯賦予其中存在經修飾之核苷酸間鍵聯之核酸一或多種期望特性。舉例而言，經修飾之核苷酸可改良熱穩定性、抗降解性、核酸酶抗性、溶解度、生物可用度、生物活性、降低之免疫原性等。
如本文所用，「經修飾之核苷酸」係指與選自以下之相應參考核苷酸相比具有一或多個化學修飾之核苷酸：腺嘌呤核糖核苷酸、鳥嘌呤核糖核苷酸、胞嘧啶核糖核苷酸、尿嘧啶核糖核苷酸、腺嘌呤去氧核糖核苷酸、鳥嘌呤去氧核糖核苷酸、胞嘧啶去氧核糖核苷酸及胸苷去氧核糖核苷酸。在一些實施例中，經修飾之核苷酸為非天然存在之核苷酸。在一些實施例中，經修飾之核苷酸在其糖、核鹼基及/或磷酸酯基團中具有一或多個化學修飾。在一些實施例中，經修飾之核苷酸具有一或多個結合至相應參考核苷酸之化學部分。典型地，經修飾之核苷酸賦予其中存在經修飾之核苷酸之核酸一或多種期望特性。舉例而言，經修
飾之核苷酸可改良熱穩定性、抗降解性、核酸酶抗性、溶解度、生物可用度、生物活性、降低之免疫原性等。
如本文所用，「帶切口之四環結構」或「帶切口之tetraL結構」係指寡核苷酸(例如，RNAi寡核苷酸)之結構，其特徵為獨立之有義(過客)股及反義(引導)股，其中有義股具有反義股之互補區域，且其中至少一股，一般為有義股，具有經配置以穩定在至少一股內形成之相鄰莖區的tetraL。
如本文所用，「寡核苷酸」係指短核酸(例如，長度小於約100個核苷酸)。寡核苷酸可為ss或ds。寡核苷酸可能具有或可能不具有雙鏈體區域。作為一組非限制性實例，寡核苷酸可為但不限於小干擾RNA(siRNA)、微小RNA(miRNA)、短髮夾RNA(shRNA)、切丁酶受質干擾RNA(dsiRNA)、反義寡核苷酸、短siRNA或ss siRNA。在一些實施例中，寡核苷酸為ds寡核苷酸且為RNAi寡核苷酸。
如本文所用，「懸垂」係指由一個股或區域延伸超過互補股之末端產生之末端非鹼基配對核苷酸，該一個股或區域與該互補股形成雙鏈體。在一些實施例中，懸垂包含在ds寡核苷酸之5'末端或3'末端處自雙鏈體區域延伸之一或多個未配對核苷酸。在某些實施例中，懸垂為ds寡核苷酸之反義股或有義股上之3'或5'懸垂。
如本文所用，「磷酸酯類似物」係指模擬磷酸酯基團之靜電及/或空間特性之化學部分。在一些實施例中，磷酸酯類似物位於寡核苷酸之5'末端核苷酸處以替代常常易於酶促移除之5'-磷酸酯。在一些實施例中，5'-磷酸酯類似物含有磷酸酯酶抗性鍵聯。磷酸酯類似物之實例包括但不限於5'膦酸酯，諸如5'亞甲基膦酸酯(5'-MP)及5'-(E)-乙烯基膦酸酯(5'-VP)。在一些實施例中，寡核苷酸在5'末端核苷酸處具有在糖之4'-碳位置處的磷酸酯類似物(稱作「4'-磷酸酯類似物」)。4'-磷酸酯類似物之實例為氧甲基膦酸酯，其中氧甲基之氧原子結合至糖
部分(例如，在其4'-碳處)或其類似物。參見例如美國臨時專利申請案第62/383,207號(2016年9月2日提交)及第62/393,401號(2016年9月12日提交)。已針對寡核苷酸之5'端開發其他修飾(參見例如國際專利申請案第WO 2011/133871號；美國專利第8,927,513號；及Prakash等人(2015)Nucleic Acids Res.43：2993-3011)。
如本文所用，「SNCA」係指突觸核蛋白α。SNCA大量存在於大腦中，且抑制磷脂酶D2。其在再突觸信號傳導及膜運輸中起作用。編碼野生型人類SNCA之mRNA如SEQ ID NO：1677所示。編碼小鼠SNCA之mRNA如SEQ ID NO：1678所示。編碼猴SNCA之mRNA如SEQ ID NO：1679所示。
如本文所用，基因(例如，SNCA)之「表現降低」係指當與適當參考(例如，參考細胞、細胞群體、樣品或個體)相比時，細胞、細胞群體、樣品或個體中由基因編碼之RNA轉錄物(例如，SNCA mRNA)或蛋白質之量或水準減少及/或基因及/或蛋白質之活性/功能的量或水準減少。舉例而言，使細胞與寡核苷酸(例如，包含具有與包含SNCA mRNA之核苷酸序列互補之核苷酸序列之反義股的寡核苷酸，諸如RNAi寡核苷酸)接觸之行為可使得當與未用寡核苷酸處理之細胞相比時，SNCA mRNA、SNCA蛋白及/或SNCA活性/功能之量或水準減少(例如，經由RNAi路徑使SNCA mRNA失活及/或降解)。類似地且如本文所用，「降低表現」係指使基因(例如，SNCA)之表現降低之行為。
如本文所用，「SNCA基因表現降低」係指當與適當參考(例如，參考細胞、細胞群體、樣品或個體)相比時，細胞、細胞群體、樣品或個體中SNCA mRNA、SNCA蛋白及/或SNCA活性/功能之量或水準減少。
如本文所用，「互補區域」係指核酸(例如，ds寡核苷酸)之核苷酸之序列，其與核苷酸之反平行序列充分互補，以允許在適當雜交條件下(例如，在磷酸鹽緩衝液中、在細胞中等等)，核苷酸之兩個序列之間進行雜交。在一些實
施例中，寡核苷酸包含具有mRNA靶序列之互補區域之靶向序列。
如本文所用，「核糖核苷酸」係指具有呈戊糖形式之核糖的核苷酸，在其2'位置處含有羥基。「經修飾之核糖核苷酸」係指除2'位置以外具有一或多個原子修飾或取代之核糖核苷酸，包括核糖、磷酸酯基團或鹼基內部或本身之修飾或取代。
如本文所用，「RNAi寡核苷酸」係指(a)具有有義股及反義股之ds寡核苷酸，其中反義股或反義股之一部分由Argonaute 2(Ago2)核酸內切酶用於靶mRNA(例如，SNCA mRNA)之裂解中，或(b)具有單個反義股之ss寡核苷酸，其中彼反義股(或彼反義股之一部分)由Ago2核酸內切酶用於靶mRNA(例如，SNCA mRNA)之裂解中。
如本文所用，「股」係指經由核苷酸間鍵聯(例如，磷酸二酯鍵聯或硫代磷酸酯鍵聯)連接在一起之單個連續核苷酸序列。在一些實施例中，股具有兩個自由端(例如，5'端及3'端)。
如本文所用，「個體(subject)」意指任何哺乳動物，包括小鼠、兔及人類。在一個實施例中，個體為人類或NHP。此外，「個體(individual)」或「患者」可與「個體(subject)」互換使用。
如本文所用，「合成」係指人工合成(例如使用機器，諸如固態核酸合成器)或以其他方式不來源於通常產生分子之天然來源(例如，細胞或生物體)的核酸或其他分子。
如本文所用，「靶向配位體」係指選擇性結合至所關注之組織或細胞之同源分子(例如，受體)，且可結合至另一種物質以達成將另一種物質靶向所關注之組織或細胞之目的的分子(例如，碳水化合物、胺基糖、膽固醇或多肽)。舉例而言，在一些實施例中，靶向配位體可結合至寡核苷酸以達成將寡核苷酸靶向所關注之特定組織或細胞之目的。在一些實施例中，靶向配位體選擇性結合至細
胞表面受體。因此，在一些實施例中，靶向配位體當結合至寡核苷酸時，經由選擇性結合至細胞表面上表現之受體及包含寡核苷酸、靶向配位體及受體之複合物之細胞的核內體內化來促進寡核苷酸遞送至特定細胞中。在一些實施例中，靶向配位體經由連接子結合至寡核苷酸，該連接子在細胞內化之後或期間裂解，使得寡核苷酸自細胞中之靶向配位體釋放。
如本文所用，「四環」或「tetraL」係指增加由核苷酸之側翼序列雜交形成之相鄰雙鏈體之穩定性的環。穩定性之增加為可偵測的，此係因為相鄰莖雙鏈體之解鏈溫度(Tm)之增加高於平均而言自一組具有可比長度且由隨機選擇之核苷酸序列組成之環預期的相鄰莖雙鏈體之Tm。舉例而言，tetraL可在10mM NaHPO4中向包含長度為至少2個鹼基對(bp)之雙鏈體的髮夾賦予至少約50℃、至少約55℃、至少約56℃、至少約58℃、至少約60℃、至少約65℃或至少約75℃之Tm。在一些實施例中，tetraL可藉由堆疊相互作用穩定相鄰莖雙鏈體中之bp。另外，tetraL中核苷酸之間的相互作用包括但不限於非沃森-克里克鹼基配對、堆疊相互作用、氫鍵結及接觸相互作用(Cheong等人(1990)Nature 346：680-682；以及Heus及Pardi(1991)Science 253：191-94)。在一些實施例中，tetraL包含3至6個核苷酸或由其組成且典型地為4至5個核苷酸。在某些實施例中，tetraL包含3、4、5或6個核苷酸或由其組成，該等核苷酸可能經修飾或可能未經修飾(例如，其可能結合或可能不結合至靶向部分)。在某些實施例中，tetraL包含3、4、5或6個核苷酸或由其組成，該等核苷酸可能經修飾或可能未經修飾(例如，其可能結合或可能不結合至靶向配位體)。在一個實施例中，tetraL由4個核苷酸組成。任何核苷酸皆可用於tetraL中，且可使用此類核苷酸之標準IUPAC-IUB符號，如Cornish-Bowden(1985)Nucleic Acids Res.13：3021-30中所述。舉例而言，字母「N」可用於意謂任何鹼基皆可在彼位置處，字母「R」可用於顯示A(腺嘌呤)或G(鳥嘌呤)可在彼位置處，且「B」可用於顯示C(胞嘧啶)、G(鳥
嘌呤)、T(胸腺嘧啶)或U(尿嘧啶)可在彼位置處。四環之實例包括四環之UNCG家族(例如，UUCG)、四環之GNRA家族(例如，GAAA)及CUUG四環(Woese等人(1990)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 87：8467-71；及Antao等人(1991)Nucleic Acids Res.19：5901-05)。DNA四環之實例包括四環之d(GNNA)家族(例如，d(GTTA))、四環之d(GNRA)家族、四環之d(GNAB)家族、四環之d(CNNG)家族及四環之d(TNCG)家族(例如，d(TTCG))。參見例如Nakano等人(2002)Biochem.41：4281-92；Shinji等人(2000)Nippon Kagakkai Koen Yokoshu 78：731。在一些實施例中，tetraL含於帶缺口之tetraL結構內。
如本文所用，「治療」或「醫治」係指例如藉由向有需要之個體投與治療劑(例如本文之寡核苷酸，諸如RNAi寡核苷酸)而向該個體提供照護之行為，以達成關於現有疾患(例如，疾病、病症)改善個體之健康及/或福祉之目的或者預防或降低疾患發生之可能性。在一些實施例中，治療涉及降低個體經歷之疾患(例如，疾病、病症)之至少一種徵象、症狀或促成因素之頻率或嚴重性。
寡核苷酸合成及純化
使用本文所述之方法化學合成前述實例中所述之寡核苷酸(亦即，RNAi寡核苷酸)。一般而言，除使用已知亞磷醯胺合成(參見例如Hughes及Ellington(2017)Cold Spring Harb Perspect Biol.9(1)：a023812；Beaucage及Caruthers(1981)Tetrahedron Lett.22：1859-62)以外，使用如針對19-23mer siRNA所述之固相寡核苷酸合成方法(參見例如Scaringe等人(1990)Nucleic Acids Res.18：5433-5441及Usman等人(1987)J.Am.Chem.Soc.109：7845-45；亦參見美國專利第5,804,683號、第5,831,071號、第5,998,203號、第6,008,400號、第6,111,086號、第6,117,657號、第6,353,098號、第6,362,323號、第6,437,117號及第
6,469,158號)合成RNAi寡核苷酸。將具有19mer核心序列之dsRNAi寡核苷酸格式化為具有25mer有義股及27mer反義股之構築體，以允許由RNAi機器進行加工。19mer核心序列與SNCA mRNA中之區域互補。
根據標準方法(Integrated DNA Technologies；Coralville,IA)合成個別RNA股且進行HPLC純化。舉例而言，使用固相亞磷醯胺化學合成RNA寡核苷酸，進行去保護，且使用標準技術(Damha及Olgivie(1993)Methods Mol.Biol.20：81-114；Wincott等人(1995)Nucleic Acids Res.23：2677-84)在NAP-5管柱(Amersham Pharmacia Biotech；Piscataway,NJ)上去鹽。使用離子交換高效液相層析(IE-HPLC)在Amersham Source 15Q管柱(1.0cm×25cm；Amersham Pharmacia Biotech)上使用15分鐘階梯線性梯度純化寡聚物。梯度自90：10緩衝液A：B至52：48緩衝液A：B變化，其中緩衝液A為100mM Tris pH 8.5且緩衝液B為100mM Tris pH 8.5、1M NaCl。在260nm處監測樣品，且收集對應於全長寡核苷酸種類之峰，匯集，在NAP-5管柱上去鹽並凍乾。
藉由毛細管電泳(CE)在Beckman PACE 5000(Beckman Coulter,Inc.；Fullerton,CA)上確定各寡聚物之純度。CE毛細管具有100μm內徑且含有ssDNA 100R凝膠(Beckman-Coulter)。典型地，將約0.6nmol寡核苷酸注入毛細管中，在444V/cm之電場中運行，且由260nm處之UV吸光度進行偵測。變性Tris-硼酸鹽-7M-脲電泳緩衝液購自Beckman-Coulter。獲得如由CE評估為至少90%純以用於下文所述之實驗的寡核糖核苷酸。遵循製造商之推薦方案，藉由基質輔助雷射脫附游離飛行時間(MALDI-TOF)質譜法在Voyager DETM生物光譜工作站(Applied Biosystems；Foster City,CA)上驗證化合物身份。獲得所有寡聚物之相對分子質量，通常在預期分子質量之0.2%以內。
製備雙鏈體
將ss RNA寡聚物再懸浮(例如，以100μM濃度)於由100mM乙酸
鉀、30mM HEPES(pH 7.5)組成之雙鏈體緩衝液中。將互補之有義股及反義股以等莫耳量混合以得到例如50μM雙鏈體之最終溶液。將樣品在RNA緩衝液(IDT)中加熱至100℃持續5分鐘，且在使用前冷卻至室溫。將RNAi寡核苷酸儲存於-20℃下。將ss RNA寡聚物在-80℃下凍乾或於無核酸酶之水中儲存。
SNCA編碼SNCA，一種抑制磷脂酶D2之神經元蛋白。SNCA參與突觸囊泡運輸及神經遞質釋放之調控。SNCA之異常表現可導致多種腦部疾病，包括但不限於帕金森病及多系統萎縮。鑑定並產生能夠抑制SNCA mRNA表現之寡核苷酸。
SNCA mRNA靶序列之鍵定
為產生SNCA靶向RNAi寡核苷酸，使用基於電腦之演算法以計算方式鑑定適合於檢定RNAi路徑對SNCA表現之抑制的SNCA mRNA靶序列。該演算法提供RNAi寡核苷酸反義股序列，各序列具有人類(Hs)或鼠類(Mm)mRNA(例如，分別為SEQ ID NO：1677及1678；表1)之適合SNCA mRNA靶序列之互補區域。歸因於跨物種之序列保守性，針對人類SNCA mRNA鑑定之一些SNCA mRNA靶序列與鼠類(mM)SNCA mRNA(SEQ ID NO：1678；表1；亦即，雙重通用)及/或猴(Mf)SNCA mRNA(SEQ ID NO：1679；表1；亦即，三重通用)之相應SNCA mRNA靶序列同源。預測包含具有核苷酸序列相似性之同源SNCA mRNA靶序列之互補區域的SNCA靶向RNAi寡核苷酸具有靶向同源SNCA mRNA(例如，人類SNCA及猴SNCA mRNA)之能力。
如實例1中所述產生RNAi寡核苷酸(格式化為DsiRNA寡核苷酸)用於活體外評價。以相同修飾模式產生各DsiRNA，且各自具有獨特引導股，該引導股具有由演算法鑑定之SNCA靶序列之互補區域。有義及反義DsiRNA之修飾包括以下(X-任何核苷酸；m-經2'-OMe修飾之核苷酸；r-經核糖基修飾之核苷酸)：
有義股：5' rXmXrXmXrXrXrXrXrXrXrXrXrXmXrXmXrXrXrXrXrXrXrXXX 3'
反義股：3' mXmXmXrXmXrXrXrXrXrXrXrXrXrXmXrXmXrXrXrXrXrXrXmXmXmXmX 5'
基於活體外細胞之檢定
使用基於活體外細胞之檢定量測表2中各經修飾之DsiRNA減少SNCA mRNA之能力。簡言之，在多孔細胞培養板之獨立孔中用表2中所列之各DsiRNA以0.5nM(第1階段)或所選DsiRNA以0.5nM、0.1nM及0.02nM(第2階段)轉染表現內源性人類SNCA之人類Huh7細胞(肝細胞株)。在用經修飾之DsiRNA轉染後將細胞維持24小時，接著使用基於TAQMAN®之qPCR檢定確定來自經轉染細胞之剩餘SNCA mRNA的量，該檢定使用以下引子：正向：AGG GTG TTC TCT ATG TAG GCT(SEQ ID NO：2451)；反向：ACT GCT CCT CCA ACA TTT GTC(SEQ ID NO：2452)；探針：TGCTCTTTG/ZEN/GTCTTCTCAG CCACTG(SEQ ID NO：2453)。如表2中所示，檢定引子對之剩餘mRNA%。當與模擬轉染之細胞相比時，DsiRNA使得小於或等於13%之SNCA mRNA殘留於DsiRNA轉染之細胞中，應視為DsiRNA「命中」。評價表2中所列之DsiRNA抑制SNCA基因表現之能力的基於Huh7細胞之檢定鑑定若干候選DsiRNA。
總之，此等結果顯示經設計以靶向人類SNCA mRNA之DsiRNA抑制細胞中之SNCA基因表現，如由DsiRNA轉染之細胞中SNCA mRNA之量相對於對照細胞減少所確定。此等結果證明包含DsiRNA之核苷酸序列可用於產生RNAi寡核苷酸以抑制SNCA基因表現。此外，此等結果證明多個SNCA mRNA靶序列適用於RNAi介導之SNCA基因表現的抑制。
實例2中之活體外篩選檢定驗證SNCA靶向RNAi寡核苷酸敲低靶SNCA mRNA之能力。為進一步評價SNCA靶向RNAi寡核苷酸抑制SNCA mRNA表現之能力，產生GalNAc結合之SNCA靶向RNAi寡核苷酸以確認活體內敲低。
具體而言，實例2中鑑定之DsiRNA之子組用於產生相應ds RNAi寡核苷酸，其包含具有36-mer過客股及22-mer引導股(表4及表5)之帶切口之tetraL GalNAc結合結構(本文中稱作「GalNAc結合之SNCA寡核苷酸」或「GalNAc-SNCA寡核苷酸」)。此外，包含有義股及反義股之核苷酸序列具有不同模式之經修飾核苷酸及硫代磷酸酯鍵聯。將三個包含tetraL之核苷酸各自結合至GalNAc部分(CAS#14131-60-3)。修飾模式如下說明：
有義股：5'-mX-S-mX-fX-mX-fX-mX-mX-fX-mX-fX-mX-fX-fX-mX-fX-mX-fX-mX-mX-mX-mX-mX-mX-mX-mX-mX-mX-[ademX-GalNAc][ademX-GalNAc][ademX-GalNAc]-mX-mX-mX-mX-mX-mX-3'
雜交至：
反義股：5'-Me膦酸酯-4O-mX-S-fX-S-fX-fX-fX-mX-fX-mX-mX-fX-mX-mX-mX-fX-mX-fX-mX-mX-fX-mX-S-mX-S-mX-3'(修飾關鍵符：表3)。
或者，表示為：有義股：5'-[mXs][mX][fX][mX][fX][mX][mX][fX][mX][fX][mX][fX][fX][mX][fX][mX][fX][mX][mX][mX][mX][mX][mX][mX][mX][mX][mX][ademX-GalNAc][ademX-GalNAc][ademX-GalNAc][mX][mX][mX][mX][mX][mX]-3'
雜交至：反義股：5'-[Me膦酸酯-4O-mXs][fXs][fX][fX][fX][mX][fX][mX][mX][fX][mX][mX][mX][fX][mX][fX][mX][mX][fX][mXs][mXs][mX]-3'(修飾關鍵符：表3)。
GalNAc結合之SNCA靶向寡核苷酸用於流體動力學注射(HDI)小鼠模型中以確認RNAi寡核苷酸活體內敲低SNCA基因表現之能力。在經工程改造以在小鼠肝臟之肝細胞中瞬時表現人類SNCA mRNA之小鼠中評價表4及表5中所列之GalNAc結合之SNCA靶向寡核苷酸。簡言之，向6-8週齡之雌性CD-1小鼠皮下投與在PBS中調配之3mg/kg劑量之指定GalNAc結合之SNCA靶向寡核苷酸。向對照組之小鼠(n=5)僅投與PBS。三天(72小時)後，在普遍存在之
巨細胞病毒(CMV)啟動子序列控制下，用編碼完整人類SNCA(SEQ ID NO：1677)(10μg)之DNA質體對小鼠進行HDI。引入DNA質體後一天，收集來自HDI小鼠之肝臟樣品。對來源於此等HDI小鼠之總RNA進行qRT-PCR分析以確定人類SNCA mRNA水準，如實例2中所述。使用DNA質體上包括之NeoR基因對該等值進行轉染效率正規化。基準對照SNCA-291用於確認成功敲低。
圖1A及圖1B中之結果證明經設計以靶向人類SNCA mRNA之GalNAc結合之SNCA寡核苷酸(分別如表4及表5中所示)成功抑制HDI小鼠中之人類SNCA mRNA表現，如由用GalNAc結合之SNCA寡核苷酸處理之HDI小鼠之肝臟樣品中之人類SNCA mRNA表現量相對於僅用PBS處理之對照HDI小鼠減少所確定。
為進一步評價GalNAc結合之SNCA RNAi寡核苷酸抑制SNCA表現之能力，進行劑量反應研究。具體而言，在獨立處理組中，將所選GalNAc結合之SNCA RNAi寡核苷酸(表6及表7)在PBS中調配，且以0.3mg/kg、1mg/kg或3mg/kg之劑量向CD-1小鼠皮下投與。如實例3中所述，在寡核苷酸給藥後3天向小鼠投與人類SNCA DNA表現質體，且在24小時後收集肝臟以用於qRT-PCR分析。如圖2A及圖2B中所示，所有經測試之GalNAc結合之SNCA RNAi寡核苷酸皆以劑量依賴性方式抑制人類SNCA基因表現。強效GalNAc結合之SNCA寡核苷酸(亦即，SNCA-244、SNCA-429、SNCA-751、SNCA-752、SNCA-800、SNCA-801及SNCA1003)在1mg/kg下使SNCA mRNA減少約50%或更多且在3mg/kg下甚至進一步減少。選擇所選構築體以用於非人類靈長類動物中之進一步研究。
檢定在HDI小鼠研究中鑑定之有效GalNAc結合之SNCA靶向寡核苷酸在NHP中之抑制作用。具體而言，在非原初食蟹猴(Macaca fascicularis)中評價表8中所列之GalNAc結合之SNCA靶向寡核苷酸。各群組有2名雄性及2名雌性個體。在研究第0天及第7天，經由大池內(i.c.m.)注射以50mg之劑量於1.6mL人工腦脊髓液(aCSF)中投與GalNAc結合之SNCA靶向寡核苷酸。
在研究第14天，收集CNS組織且進行qRT-PCR分析，以量測寡核苷酸處理之猴相對於用相當體積之aCSF處理之彼等猴中的SNCA mRNA。為使數據正規化，相對於2個參考基因RPL23及GAPDH進行量測(兩者之間的幾何
平均值用作中靶KD之設定點)。以下購自Integrated DNA Technologies之SYBR檢定用於評價基因表現：正向：ACAGTGG CTGAGAAGACCAA(SEQ ID NO：2454)，反向：CTCCCTCCACTGTCTTCTGG(SEQ ID NO：2455)；及探針：ACCCGTCACCACCGCTCCTCC(SEQ ID NO：2456)。
如圖3A-3S中所示(第14天)，用GalNAc結合之SNCA靶向寡核苷酸處理NHP抑制若干CNS區域中之SNCA基因表現，如由來自寡核苷酸處理之NHP之腦樣品中之SNCA mRNA的量相對於用aCSF處理之NHP減少所確定。若干GalNAc結合之SNCA靶向寡核苷酸降低整個CNS中之SNCA基因表現。SNCA-801及SNCA-751在額葉皮質、海馬體、頂葉皮質、枕葉皮質、顳葉皮質、腦幹、頸脊髓、胸脊髓及腰脊髓中特別有效且使SNCA mRNA減少至少50%。此等結果證明用GalNAc結合之SNCA靶向寡核苷酸處理NHP減少CNS中之SNCA mRNA的量。
為進一步研究靶向SNCA之寡核苷酸之功效，在NHP中評估脂質結合之寡核苷酸。具體而言，基於上述研究選擇SNCA-0751，且將有義股格式化為20mer有義股，其中脂質結合至5'末端核苷酸。此構築體稱作SNCA-B15，具有20mer有義股及22mer反義股(分別為SEQ ID NO：1682及1656)。脂質結合之寡核苷酸之化學修飾模式如下提供：
有義股：5'-[ademX-C16]-S-mX-fX-mX-fX-mX-mX-fX-mX-fX-mX-fX-fX-mX-fX-mX-fX-mX-S-mX-S-mX-3'
雜交至：反義股：5'-[Me膦酸酯-4O-mX]-S-fX-S-fX-fX-fX-mX-fX-mX-mX-fX-mX-mX-mX-fX-mX-fX-mX-mX-fX-mX-S-mX-S-mX3'(修飾關鍵符：表3)。
或者，表示為：
有義股：5'-[ademXs-C16][mX][fX][mX][fX][mX][mX][fX][mX][fX][mX][fX][fX][mX][fX][mX][fX][mXs][mXs][mX]-3'
雜交至：反義股：5'-[Me膦酸酯-4O-mXs][fXs][fX][fX][fX][mX][fX][mX][mX][fX][mX][mX][mX][fX][mX][fX][mX][mX][fX][mXs][mXs][mX]-3'(修飾關鍵符：表3)。
脂質結合
使用在合成器上使用亞磷醯胺化學進行寡核苷酸合成之文獻中已知之標準程序合成脂質結合之鈍端寡核苷酸(參見Matteucci及Caruthers(1981)Tetrahedron Lett.21：719-221；Beaucage及Caruthers(1981)Tetrahedron Lett.22：1859-622)。
1Matteucci MD,Caruthers MH.The synthesis of oligodeoxypyrimidines on a polymer support.Tetrahedron Lett.1980；21(8)：719-722。
2Beaucage SL,Caruthers MH.Deoxynucleoside phosphoramidites-A new class of key intermediates for deoxypolynucleotides.Tetrahedron Lett.1981；22(20)：1859-1862。
使用如下所示之亞磷醯胺合成進行脂質部分與SNCA靶向寡核苷酸之結合：
合成甲酸2-(2-((((6aR,8R,9R,9aR)-8-(6-苯甲醯胺基-9H-嘌呤-9-基)-2,2,4,4-四異丙基四氫-6H-呋喃并[3,2-f][1,3,5,2,4]三氧雜二矽環辛-9-基)氧基)甲氧基)乙氧基)乙-1-銨(1-6)
在10℃下用吡啶(11mL，134.67mmol)及四異丙基二矽氧烷二氯化物(22.63mL，70.75mmol)處理化合物1-1(25.00g，67.38mmol)於20mL DMF中之溶液。在25℃下攪拌所得混合物3小時，且用20%檸檬酸(50mL)淬滅。用EtOAc(3X50mL)萃取水層，且在真空中濃縮經合併之有機層。使粗殘餘物自MTBE與正庚烷(1：15，320mL)之混合物中再結晶，得到呈白色油性固體狀之化合物1-2(37.20g，90%)。
用AcOH(20mL，317.20mmol)及Ac2O(15mL，156.68mmol)處理化合物1-2(37.00g，60.33mmol)於20mL DMSO中之溶液。在25℃下攪拌混合物15小時。用EtOAc(100mL)稀釋反應物，且用飽和K2CO3(50mL)淬滅。用EtOAc(3X50mL)萃取水層。濃縮經合併之有機層且用ACN(30mL)再結晶，得到呈白色固體狀之化合物1-3(15.65g，38.4%)。
在25℃下用Fmoc-胺基-乙氧基乙醇(11.67g，35.66mmol)處理化合物1-3(20.00g，29.72mmol)於120mL DCM中之溶液。攪拌混合物，得到澄清
溶液，接著用4Å分子篩(20.0g)、N-碘丁二醯亞胺(8.02g，35.66mmol)及TfOH(5.25mL，59.44mmol)處理。在30℃下攪拌混合物，直至HPLC分析指示化合物1-3消耗量>95%。用TEA(6mL)淬滅反應物且過濾。用EtOAc稀釋濾液，用飽和NaHCO3(2X100mL)、飽和Na2SO3(2X100mL)及水(2X100mL)洗滌且在真空中濃縮，得到呈黃色固體狀之粗化合物1-4(26.34g，93.9%)，其未經進一步純化即直接用於下一步驟。
在5℃下用DBU(7.00mL，45.08mmol)處理化合物1-4(26.34g，27.62mmol)於DCM/水(10：7，170mL)之混合物中之溶液。在5-25℃下攪拌混合物1小時。接著分離有機層，用水(100mL)洗滌，且用DCM(130mL)稀釋。用反丁烯二酸(7.05g，60.76mmol)及4Å分子篩(26.34g)分四份處理溶液。攪拌混合物1小時，濃縮，且自MTBE與DCM(5：1)之混合物中再結晶，得到呈白色固體狀之化合物1-6(14.74g，62.9%)：1H NMR(400MHz,d 6 -DMSO)8.73(s,1H),8.58(s,1H),8.15-8.02(m,2H),7.65-7.60(m,1H),7.59-7.51(m,2H),6.52(s,2H),6.15(s,1H),5.08-4.90(m,3H),4.83-4.78(m,1H),4.15-3.90(m,3H),3.79-3.65(m,2H),2.98-2.85(m,6H),1.20-0.95(m,28H)。
合成(2R,3R,4R,5R)-5-(6-苯甲醯胺基-9H-嘌呤-9-基)-2-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-4-((2-(2-[脂質]-醯胺基乙氧基)乙氧基)甲氧基)四氫呋喃-3-基(2-氰基乙基)二異丙基亞磷醯胺(2-4a至2-4e)
用冰冷K2HPO4水溶液(6%，100mL)及鹽水(20%，2X100mL)洗滌化合物1-6(50.00g，59.01mmol)於150mL 2-甲基四氫呋喃中之溶液。分離有機層，且在0℃下用己酸(10.33mL，82.61mmol)、HATU(33.66g，88.52mmol)及DMAP(10.81g，147.52mmol)處理。將所得混合物升溫至25℃且攪拌1小時。用水(2X100mL)、鹽水(100mL)洗滌溶液，且在真空中濃縮，得到粗殘餘物。矽膠急驟層析(1：1己烷/丙酮)得到呈白色固體狀之化合物2-1a(34.95g，71.5%)。
在10℃下用三乙胺三氫氟酸鹽(20.61mL，126.58mmol)逐滴處理化合物2-1a(34.95g，42.19mmol)及TEA(9.28mL，126.58mmol)於80mL THF中之混合物。將混合物升溫至25℃且攪拌2小時。濃縮反應物，溶解於DCM(100mL)中，且用飽和NaHCO3(5X20mL)及鹽水(50mL)洗滌。在真空中濃縮有機層，得到粗化合物2-2a(24.72g，99%)，其未經進一步純化即直接用於下一步驟。
用N-甲基嗎啉(18.54mL，168.67mmol)及DMTr-Cl(15.69g，46.38
mmol)處理化合物2-2a(24.72g，42.18mmol)於50mL DCM中之溶液。在25℃下攪拌混合物2小時，且用飽和NaHCO3(50mL)淬滅。分離有機層，用水洗滌，且濃縮，得到漿狀粗物質。矽膠急驟層析(1：1己烷/丙酮)得到呈白色固體狀之化合物2-3a(30.05g，33.8mmol，79.9%)。
在氮氣氛圍下用N-甲基嗎啉(3.10mL，28.17mmol)及四唑(0.67mL，14.09mmol)處理化合物2-3a(25.00g，28.17mmol)於50mL DCM中之溶液。將雙(二異丙基胺基)氯膦(9.02g，33.80mmol)逐滴添加至溶液中，且在25℃下攪拌所得混合物4小時。用水(15mL)淬滅反應物，且用DCM(3X50mL)萃取水層。用飽和NaHCO3(50mL)洗滌經合併之有機層，濃縮得到粗固體，使其自DCM/MTBE/正己烷(1：4：40)之混合物中再結晶，得到呈白色固體狀之化合物2-4a(25.52g，83.4%)：1H NMR(400MHz,d 6 -DMSO)11.25(s,1H),8.65-8.60(m,2 H),8.09-8.02(m,2H),7.71(s,1H),7.67-7.60(m,1H),7.59-7.51(m,2H),7.38-7.34(m,2H),7.30-7.25(m,7H),6.85-6.79(m,4H),6.23-6.20(m,1H),5.23-5.14(m,1H),4.80-4.69(m,3H),4.33-4.23(m,2H),3.90-3.78(m,1H),3.75(s,6H),3.74-3.52(m,3H),3.50-3.20(m,6H),3.14-3.09(m,2H),3.09(s,1H),2.82-2.80(m,1H),2.65-2.60(m,1H),2.05-1.96(m,2H),1.50-1.39(m,2H),1.31-1.10(m,14H),1.08-1.05(m,2 H),0.85-0.79(m,3H)；31P NMR(162MHz,d 6 -DMSO)149.43,149.18。
使用上文針對化合物2-4a所述之類似程序製備化合物2-4b、2-4c、2-4d及2-4e。獲得呈白色固體狀之化合物2-4b(25.50g，85.4%)：1H NMR(400MHz,d 6 -DMSO)11.23(s,1H),8.65-8.60(m,2 H),8.05-8.02(m,2H),7.73-7.70(m,1H),7.67-7.60(m,1H),7.59-7.51(m,2H),7.38-7.34(m,2H),7.30-7.25(m,7H),6.89-6.80(m,4H),6.21-6.15(m,1H),5.23-5.17(m,1H),4.80-4.69(m,3H),4.40-4.21(m,2H),3.91-3.80(m,1H),3.74(s,6H),3.74-3.52(m,3H),3.50-3.20(m,6H),3.14-3.09(m,2H),3.09(s,1H),2.83-2.79(m,1H),2.68-2.62(m,1H),2.05-1.97(m,2H),1.50-
1.38(m,2H),1.31-1.10(m,18H),1.08-1.05(m,2H),0.85-0.78(m,3H)；31P NMR(162MHz,d 6 -DMSO)149.43,149.19。
獲得呈灰白色固體狀之化合物2-4c(36.60g，66.3%)：1H NMR(400MHz,d 6 -DMSO)11.22(s,1H),8.64-8.59(m,2H),8.05-8.00(m,2H),7.73-7.70(m,1H),7.67-7.60(m,1H),7.59-7.51(m,2H),7.38-7.34(m,2H),7.30-7.25(m,7H),6.89-6.80(m,4H),6.21-6.15(m,1H),5.25-5.17(m,1H),4.80-4.69(m,3H),4.40-4.21(m,2H),3.91-3.80(m,1H),3.74(s,6H),3.74-3.50(m,3H),3.50-3.20(m,6H),3.14-3.09(m,2H),3.09(s,1H),2.83-2.79(m,1H),2.68-2.62(m,1H),2.05-1.99(m,2H),1.50-1.38(m,2H),1.33-1.12(m,38H),1.08-1.05(m,2 H),0.86-0.80(m,3H)；31P NMR(162MHz,d 6 -DMSO)149.42,149.17。
獲得呈灰白色固體狀之化合物2-4d(26.60g，72.9%)：1H NMR(400MHz,d 6 -DMSO)11.22(s,1H),8.64-8.59(m,2H),8.05-8.00(m,2H),7.73-7.70(m,1H),7.67-7.60(m,1H),7.59-7.51(m,2H),7.38-7.33(m,2H),7.30-7.25(m,7H),6.89-6.80(m,4H),6.21-6.15(m,1H),5.22-5.17(m,1H),4.80-4.69(m,3H),4.40-4.21(m,2H),3.91-3.80(m,1H),3.74(s,6H),3.74-3.52(m,3H),3.50-3.20(m,6H),3.14-3.09(m,2H),3.09(s,1H),2.83-2.79(m,1H),2.68-2.62(m,1H),2.05-1.99(m,2H),1.50-1.38(m,2H),1.35-1.08(m,38H),1.08-1.05(m,2 H),0.85-0.79(m,3H)；31P NMR(162MHz,d 6 -DMSO)149.47,149.22。
獲得呈白色固體狀之化合物2-4e(38.10g，54.0%)：1H NMR(400MHz,d 6 -DMSO)11.21(s,1H),8.64-8.59(m,2H),8.05-8.00(m,2H),7.73-7.70(m,1H),7.67-7.60(m,1H),7.59-7.51(m,2H),7.38-7.34(m,2H),7.30-7.25(m,7H),6.89-6.80(m,4H),6.21-6.15(m,1H),5.23-5.17(m,1H),4.80-4.69(m,3H),4.40-4.21(m,2H),3.91-3.80(m,1H),3.73(s,6H),3.74-3.52(m,3H),3.47-3.22(m,6H),3.14-3.09(m,2H),3.09(s,1H),2.83-2.79(m,1H),2.68-2.62(m,1H),2.05-1.99(m,2H),1.50-
1.38(m,2H),1.35-1.06(m,46H),1.08-1.06(m,2 H),0.85-0.77(m,3H)；31P NMR(162MHz,d 6 -DMSO)149.41,149.15。
NHP研究
經由L1腰椎輸注向NHP(n=4)鞘內投與37.5mg脂質結合之SNCA-B15(見表9)。aCSF用作對照。
投與後28天，收集CNS組織以確定寡核苷酸之濃度及SCNA基因表現之水準。帕金森氏病(PD)為運動障礙，其特徵為震顫、運動緩慢、肌肉僵硬、行走不穩及/或失去平衡；而多系統萎縮(MSA)為罕見病症，其影響自主神經功能，諸如血壓、呼吸及膀胱控制，以及運動功能。因此，獨立地分析與PD或MSA相關之CNS組織。
如圖4A中所示，使用脂質結合之SNCA-B15，SNCA基因表現在與AD相關之組織中降低，該等組織包括殼核、中腦被蓋、黑質、腦橋及髓質。如上述實例中所述確定SNCA基因表現。圖4B展示在28天後組織中脂質結合之SNCA-B15之濃度。此等結果指示在與PD相關之組織中脂質結合之SNCA靶向寡核苷酸具有增強之效力。
同樣地且如圖5A中所示，使用脂質結合之SNCA-B15，SNCA基因表現在與MSA相關之組織中降低，該等組織包括殼核、中腦被蓋、黑質、腦橋、小腦白質、髓質、頸脊髓、胸脊髓及腰脊髓。如上述實例中所述確定SNCA基因表現。圖5B展示在28天後組織中脂質結合之SNCA-B15之濃度。此等結果指示在與MSA相關之組織中脂質結合之SNCA靶向寡核苷酸具有增強之效力。
以下核酸及/或胺基酸序列在本揭示案中提及且在下文提供以供參考。
TW202409275A_112117718_SEQL.xml
Claims (114)
- 一種用於降低SNCA基因表現之RNAi寡核苷酸，該寡核苷酸包含有義股及反義股，其中該有義股及該反義股形成雙鏈體區域，其中該反義股包含SEQ ID NO：1683-2066中之任一者之SNCA mRNA靶序列的互補區域，且其中該互補區域之長度為至少15個連續核苷酸。
- 如請求項1之RNAi寡核苷酸，其中該有義股之長度為15至50個核苷酸。
- 如請求項1或2之RNAi寡核苷酸，其中該有義股之長度為18至36個核苷酸。
- 如請求項1至3中任一項之RNAi寡核苷酸，其中該反義股之長度為15至30個核苷酸。
- 如請求項1至4中任一項之RNAi寡核苷酸，其中該反義股之長度為22個核苷酸，且其中反義股及該有義股形成雙鏈體區域，該雙鏈體區域之長度為至少19個核苷酸，視情況長度為至少20個核苷酸。
- 如請求項1至5中任一項之RNAi寡核苷酸，其中該互補區域之長度為至少19個連續核苷酸。
- 如請求項1至6中任一項之RNAi寡核苷酸，其中該互補區域之長度為至少20個連續核苷酸。
- 一種用於降低SNCA基因表現之雙股RNAi寡核苷酸，該寡核苷酸包含：(i)長度為19-30個核苷酸之反義股，其中該反義股包含含有SNCA mRNA靶序列之互補區域的核苷酸序列，其中該互補區域係選自SEQ ID NO：2067-2450，及(ii)長度為19-50個核苷酸之有義股，該有義股包含該反義股之互補區 域，其中該反義股及該有義股為形成不對稱雙鏈體區域之獨立股，該雙鏈體區域在該反義股之3'末端具有1-4個核苷酸之懸垂。
- 如請求項1至8中任一項之RNAi寡核苷酸，其中該有義股之3'端包含如S1-L-S2所示之莖環，其中S1與S2互補，且其中L在S1與S2之間形成長度為3-5個核苷酸之環。
- 如請求項9之RNAi寡核苷酸，其中L為三環或四環。
- 如請求項10之RNAi寡核苷酸，其中L為四環。
- 如請求項11之RNAi寡核苷酸，其中該四環包含序列5'-GAAA-3'。
- 如請求項9至12中任一項之RNAi寡核苷酸，其中該S1及該S2之長度為1-10個核苷酸且具有相同長度。
- 如請求項13之RNAi寡核苷酸，其中S1及S2之長度為1個核苷酸、2個核苷酸、3個核苷酸、4個核苷酸、5個核苷酸、6個核苷酸、7個核苷酸、8個核苷酸、9個核苷酸或10個核苷酸。
- 如請求項14之RNAi寡核苷酸，其中S1及S2之長度為6個核苷酸。
- 如請求項9至15中任一項之RNAi寡核苷酸，其中該莖環包含序列5'-GCAGCCGAAAGGCUGC-3'(SEQ ID NO：1680)。
- 如請求項1至8中任一項之RNAi寡核苷酸，其中該寡核苷酸包含鈍端。
- 如請求項17之RNAi寡核苷酸，其中該鈍端包含該有義股之3'端。
- 如請求項17至18中任一項之RNAi寡核苷酸，其中該有義股為20-22個核苷酸。
- 如請求項19之RNAi寡核苷酸，其中該有義股為20個核苷酸。
- 如請求項1至20中任一項之RNAi寡核苷酸，其中該反義股包含長度為一或多個核苷酸之3'懸垂序列。
- 如請求項21之RNAi寡核苷酸，其中該懸垂包含嘌呤核苷酸。
- 如請求項21或22之RNAi寡核苷酸，其中該3'懸垂序列之長度為2個核苷酸。
- 如請求項23之RNAi寡核苷酸，其中該3'懸垂係選自AA、GG、AG及GA。
- 如請求項24之RNAi寡核苷酸，其中該懸垂為GG或AA。
- 如請求項25之RNAi寡核苷酸，其中該懸垂為GG。
- 如前述請求項中任一項之RNAi寡核苷酸，其中該寡核苷酸包含至少一個經修飾之核苷酸。
- 如請求項27之RNAi寡核苷酸，其中該經修飾之核苷酸包含2'-修飾。
- 如請求項28之RNAi寡核苷酸，其中該2'-修飾為選自2'-胺基乙基、2'-氟、2'-O-甲基、2'-O-甲氧基乙基及2'-去氧-2'-氟-β-d-阿拉伯糖核酸之修飾。
- 如請求項28至29中任一項之RNAi寡核苷酸，其中該修飾為選自2'-氟及2'-O-甲基之2'-修飾。
- 如請求項29至30中任一項之RNAi寡核苷酸，其中該有義股之約18%至約23%或18%、19%、20%、21%、22%或23%之核苷酸包含該2'-氟修飾。
- 如請求項29至30中任一項之RNAi寡核苷酸，其中該有義股之約38%至約43%或38%、39%、40%、41%、42%或43%之核苷酸包含該2'- 氟修飾。
- 如請求項29至32中任一項之RNAi寡核苷酸，其中該反義股之約25%至約35%或25%、26%、27%、28%、29%、30%、31%、32%、33%、34%或35%之核苷酸包含該2'-氟修飾。
- 如請求項29至33中任一項之RNAi寡核苷酸，其中該寡核苷酸之約25%至約35%或25%、26%、27%、28%、29%、30%、31%、32%、33%、34%或35%之核苷酸包含該2'-氟修飾。
- 如請求項29至33中任一項之RNAi寡核苷酸，其中該寡核苷酸之約35-45%、35%、36%、37%、38%、39%、40%、41%、42%、43%、44%或45%之核苷酸包含該2'-氟修飾。
- 如請求項29至35中任一項之RNAi寡核苷酸，其中該有義股自5'至3'在位置1-36處包含36個核苷酸，其中位置3、5、8、10、12、13、15及17中之每一者包含該2'-氟修飾。
- 如請求項29至35中任一項之RNAi寡核苷酸，其中該有義股自5'至3'在位置1-20處包含20個核苷酸，其中位置3、5、8、10、12、13、15及17中之每一者包含該2'-氟修飾。
- 如請求項29至37中任一項之RNAi寡核苷酸，其中該反義股自5'至3'在位置1-22處包含22個核苷酸，且其中位置2、3、4、5、7、10、14、16及19中之每一者包含該2'-氟修飾。
- 如請求項31至38中任一項之RNAi寡核苷酸，其中其餘核苷酸包含該2'-O-甲基修飾。
- 如前述請求項中任一項之RNAi寡核苷酸，其中該寡核苷酸包含至少一個經修飾之核苷酸間鍵聯。
- 如請求項40之RNAi寡核苷酸，其中該至少一個經修飾之核苷 酸間鍵聯為硫代磷酸酯鍵聯。
- 如請求項41之RNAi寡核苷酸，其中該反義股在以下位置包含該硫代磷酸酯鍵聯：(i)在位置1與2之間及位置2與3之間；或(ii)在位置1與2之間、位置2與3之間及位置3與4之間，且其中位置自5'至3'編號為1-4。
- 如請求項41或42之RNAi寡核苷酸，其中該反義股之長度為22個核苷酸，且其中該反義股在位置20與21之間及位置21與22之間包含該硫代磷酸酯鍵聯，且其中位置自5'至3'編號為1-22。
- 如請求項41至43中任一項之RNAi寡核苷酸，其中該有義股在位置1與2之間包含該硫代磷酸酯鍵聯，且其中位置自5'至3'編號為1-2。
- 如請求項41至43中任一項之RNAi寡核苷酸，其中該有義股之長度為20個核苷酸，其中該有義股在位置1與2之間、位置18與19之間及位置19與20之間包含該硫代磷酸酯鍵聯，且其中位置自5'至3'編號為1-20。
- 如前述請求項中任一項之RNAi寡核苷酸，其中該反義股之5'-核苷酸之糖的4'-碳包含磷酸酯類似物。
- 如請求項46之RNAi寡核苷酸，其中該磷酸酯類似物為氧甲基膦酸酯、乙烯基膦酸酯或丙二醯基膦酸酯，視情況其中該磷酸酯類似物為包含4'-氧甲基膦酸酯之4'-磷酸酯類似物。
- 如前述請求項中任一項之RNAi寡核苷酸，其中該寡核苷酸之至少一個核苷酸結合至一或多個靶向配位體。
- 如請求項48之RNAi寡核苷酸，其中各靶向配位體包含碳水化合物、胺基糖、脂質、膽固醇或多肽。
- 如請求項9至16及21至49中任一項之RNAi寡核苷酸，其中 該莖環包含結合至該莖環之一或多個核苷酸的一或多個靶向配位體。
- 如請求項50之RNAi寡核苷酸，其中該一或多個靶向配位體結合至該環(L)之一或多個核苷酸。
- 如請求項51之RNAi寡核苷酸，其中該環(L)包含自5'至3'編號為1-4之4個核苷酸，其中位置2、3及4處之核苷酸各自包含一或多個靶向配位體，且其中該等靶向配位體相同或不同。
- 如請求項52之RNAi寡核苷酸，其中各靶向配位體包含N-乙醯半乳糖胺(GalNAc)部分。
- 如請求項53之RNAi寡核苷酸，其中該GalNac部分為單價GalNAc部分、二價GalNAc部分、三價GalNAc部分或四價GalNAc部分。
- 如請求項9至16及21至54中任一項之RNAi寡核苷酸，其中該莖環之環(L)的至多4個核苷酸各自結合至單價GalNAc部分。
- 如請求項17至48中任一項之RNAi寡核苷酸，其中該一或多個靶向配位體為脂質部分。
- 如請求項56之RNAi寡核苷酸，其中該脂質部分結合至該有義股之5'末端核苷酸。
- 如請求項56或57之RNAi寡核苷酸，其中該脂質部分為烴鏈。
- 如請求項58之RNAi寡核苷酸，其中該烴鏈為C8-C30烴鏈。
- 如請求項58或59之RNAi寡核苷酸，其中該烴鏈為C16烴鏈。
- 如請求項60之RNAi寡核苷酸，其中該C16烴鏈表示為：
- 如請求項56至61中任一項之RNAi寡核苷酸，其中該脂質部分結合至該5'末端核苷酸之核糖環之2'碳。
- 如請求項1至62中任一項之RNAi寡核苷酸，其中該互補區域在該反義股之核苷酸位置2-8處與該SNCA mRNA靶序列完全互補，且其中核苷酸位置自5'至3'編號。
- 如請求項1至62中任一項之RNAi寡核苷酸，其中該互補區域在該反義股之核苷酸位置2-11處與該SNCA mRNA靶序列完全互補，且其中核苷酸位置自5'至3'編號。
- 如請求項1至64中任一項之RNAi寡核苷酸，其中該有義股包含SEQ ID NO：1537-1571及1681中之任一者之核苷酸序列。
- 如請求項1至65中任一項之RNAi寡核苷酸，其中該反義股包含SEQ ID NO：1572-1606中之任一者之核苷酸序列。
- 如請求項1至66中任一項之RNAi寡核苷酸，其中該有義股及該反義股包含選自由以下組成之群的核苷酸序列：a)分別為SEQ ID NO：1537及1572；b)分別為SEQ ID NO：1538及1573；c)分別為SEQ ID NO：1539及1574；d)分別為SEQ ID NO：1540及1575；e)分別為SEQ ID NO：1541及1576；f)分別為SEQ ID NO：1542及1577；g)分別為SEQ ID NO：1543及1578；h)分別為SEQ ID NO：1544及1579；i)分別為SEQ ID NO：1545及1580；j)分別為SEQ ID NO：1546及1581；k)分別為SEQ ID NO：1547及1582；l)分別為SEQ ID NO：1548及1583； m)分別為SEQ ID NO：1549及1584；n)分別為SEQ ID NO：1550及1585；o)分別為SEQ ID NO：1551及1586；p)分別為SEQ ID NO：1552及1587；q)分別為SEQ ID NO：1553及1588；r)分別為SEQ ID NO：1554及1589；s)分別為SEQ ID NO：1555及1590；t)分別為SEQ ID NO：1556及1591；u)分別為SEQ ID NO：1557及1592；v)分別為SEQ ID NO：1558及1593；w)分別為SEQ ID NO：1559及1594；x)分別為SEQ ID NO：1560及1595；y)分別為SEQ ID NO：1561及1596；z)分別為SEQ ID NO：1562及1597；aa)分別為SEQ ID NO：1563及1598；bb)分別為SEQ ID NO：1564及1599；cc)分別為SEQ ID NO：1565及1600；dd)分別為SEQ ID NO：1566及1601；ee)分別為SEQ ID NO：1567及1602；ff)分別為SEQ ID NO：1568及1603；gg)分別為SEQ ID NO：1569及1604；hh)分別為SEQ ID NO：1570及1605；ii)分別為SEQ ID NO：1571及1606；及jj)分別為SEQ ID NO：1681及1586。
- 如請求項1至66中任一項之RNAi寡核苷酸，其中該有義股及該反義股包含選自由以下組成之群的核苷酸序列：a)分別為SEQ ID NO：1540及1575；b)分別為SEQ ID NO：1544及1579；c)分別為SEQ ID NO：1546及1581；d)分別為SEQ ID NO：1551及1586；e)分別為SEQ ID NO：1552及1587；f)分別為SEQ ID NO：1553及1588；g)分別為SEQ ID NO：1558及1594；h)分別為SEQ ID NO：1560及1595；i)分別為SEQ ID NO：1564及1599；j)分別為SEQ ID NO：1565及1600；k)分別為SEQ ID NO：1566及1601；l)分別為SEQ ID NO：1570及1605；及m)分別為SEQ ID NO：1681及1586。
- 如請求項1至66中任一項之RNAi寡核苷酸，其中該有義股及該反義股包含選自由以下組成之群的核苷酸序列：a)分別為SEQ ID NO：1553及1588；b)分別為SEQ ID NO：1560及1595；c)分別為SEQ ID NO：1564及1599；d)分別為SEQ ID NO：1551及1586；e)分別為SEQ ID NO：1570及1605；及f)分別為SEQ ID NO：1681及1586。
- 如請求項1至66中任一項之RNAi寡核苷酸，其中該有義股包 含如SEQ ID NO：1553所示之核苷酸序列，且其中該反義股包含如SEQ ID NO：1588所示之核苷酸序列。
- 如請求項1至66中任一項之RNAi寡核苷酸，其中該有義股包含如SEQ ID NO：1560所示之核苷酸序列，且其中該反義股包含如SEQ ID NO：1595所示之核苷酸序列。
- 如請求項1至66中任一項之RNAi寡核苷酸，其中該有義股包含如SEQ ID NO：1564所示之核苷酸序列，且其中該反義股包含如SEQ ID NO：1599所示之核苷酸序列。
- 如請求項1至66中任一項之RNAi寡核苷酸，其中該有義股包含如SEQ ID NO：1551所示之核苷酸序列，且其中該反義股包含如SEQ ID NO：1586所示之核苷酸序列。
- 如請求項1至66中任一項之RNAi寡核苷酸，其中該有義股包含如SEQ ID NO：1570所示之核苷酸序列，且其中該反義股包含如SEQ ID NO：1605所示之核苷酸序列。
- 如請求項1至66中任一項之RNAi寡核苷酸，其中該有義股包含如SEQ ID NO：1681所示之核苷酸序列，且其中該反義股包含如SEQ ID NO：1586所示之核苷酸序列。
- 如請求項1至64中任一項之RNAi寡核苷酸，其中該反義股之長度為22個核苷酸。
- 如請求項76之RNAi寡核苷酸，其中該反義股包含選自SEQ ID NO：1588、1595、1599、1586及1605之核苷酸序列。
- 如請求項1至64及76至77中任一項之RNAi寡核苷酸，其中該有義股包含選自SEQ ID NO：1865、1721、1847、1846及1955之核苷酸序列。
- 如請求項1至64及76至78中任一項之RNAi寡核苷酸，其中該有義股之長度為36個核苷酸。
- 如請求項79之RNAi寡核苷酸，其中該有義股包含選自SEQ ID NO：1553、1560、1564、1551及1570之核苷酸序列。
- 如請求項1至64中任一項之RNAi寡核苷酸，其中該有義股包含SEQ ID NO：1607-1641及1682中之任一者之核苷酸序列。
- 如請求項1至64及81中任一項之RNAi寡核苷酸，其中該反義股包含SEQ ID NO：1642-1676中之任一者之核苷酸序列。
- 如請求項1至64中任一項之RNAi寡核苷酸，其中該有義股及該反義股包含選自由以下組成之群的核苷酸序列：a)分別為SEQ ID NO：1607及1642；b)分別為SEQ ID NO：1608及1643；c)分別為SEQ ID NO：1609及1644；d)分別為SEQ ID NO：1610及1645；e)分別為SEQ ID NO：1611及1646；f)分別為SEQ ID NO：1612及1647；g)分別為SEQ ID NO：1613及1648；h)分別為SEQ ID NO：1614及1649；i)分別為SEQ ID NO：1615及1650；j)分別為SEQ ID NO：1616及1651；k)分別為SEQ ID NO：1617及1652；l)分別為SEQ ID NO：1618及1653；m)分別為SEQ ID NO：1619及1654；n)分別為SEQ ID NO：1620及1655； o)分別為SEQ ID NO：1621及1656；p)分別為SEQ ID NO：1622及1657；q)分別為SEQ ID NO：1623及1658；r)分別為SEQ ID NO：1624及1659；s)分別為SEQ ID NO：1625及1660；t)分別為SEQ ID NO：1626及1661；u)分別為SEQ ID NO：1627及1662；v)分別為SEQ ID NO：1628及1663；w)分別為SEQ ID NO：1629及1664；x)分別為SEQ ID NO：1630及1665；y)分別為SEQ ID NO：1631及1666；z)分別為SEQ ID NO：1632及1667；aa)分別為SEQ ID NO：1633及1668；bb)分別為SEQ ID NO：1634及1669；cc)分別為SEQ ID NO：1635及1670；dd)分別為SEQ ID NO：1636及1671；ee)分別為SEQ ID NO：1637及1672；ff)分別為SEQ ID NO：1638及1673；gg)分別為SEQ ID NO：1639及1674；hh)分別為SEQ ID NO：1640及1675；ii)分別為SEQ ID NO：1641及1676；及jj)分別為SEQ ID NO：1682及1656。
- 如請求項1至64中任一項之RNAi寡核苷酸，其中該有義股及該反義股包含選自由以下組成之群的核苷酸序列： a)分別為SEQ ID NO：1610及1645；b)分別為SEQ ID NO：1614及1649；c)分別為SEQ ID NO：1616及1651；d)分別為SEQ ID NO：1621及1656；e)分別為SEQ ID NO：1622及1657；f)分別為SEQ ID NO：1623及1658；g)分別為SEQ ID NO：1629及1664；h)分別為SEQ ID NO：1630及1665；i)分別為SEQ ID NO：1634及1669；j)分別為SEQ ID NO：1635及1670；k)分別為SEQ ID NO：1636及1671；l)分別為SEQ ID NO：1640及1675；及m)分別為SEQ ID NO：1682及1656。
- 如請求項1至64中任一項之RNAi寡核苷酸，其中該有義股及該反義股包含選自由以下組成之群的核苷酸序列：a)分別為SEQ ID NO：1623及1658；b)分別為SEQ ID NO：1630及1665；c)分別為SEQ ID NO：1634及1669；d)分別為SEQ ID NO：1621及1656；e)分別為SEQ ID NO：1640及1675；及f)分別為SEQ ID NO：1682及1656。
- 如請求項1至64中任一項之RNAi寡核苷酸，其中該有義股包含如SEQ ID NO：1623所示之核苷酸序列，且其中該反義股包含如SEQ ID NO：1658所示之核苷酸序列。
- 如請求項1至64中任一項之RNAi寡核苷酸，其中該有義股包含如SEQ ID NO：1630所示之核苷酸序列，且其中該反義股包含如SEQ ID NO：1665所示之核苷酸序列。
- 如請求項1至64中任一項之RNAi寡核苷酸，其中該有義股包含如SEQ ID NO：1634所示之核苷酸序列，且其中該反義股包含如SEQ ID NO：1669所示之核苷酸序列。
- 如請求項1至64中任一項之RNAi寡核苷酸，其中該有義股包含如SEQ ID NO：1621所示之核苷酸序列，且其中該反義股包含如SEQ ID NO：1656所示之核苷酸序列。
- 如請求項1至64中任一項之RNAi寡核苷酸，其中該有義股包含如SEQ ID NO：1640所示之核苷酸序列，且其中該反義股包含如SEQ ID NO：1676所示之核苷酸序列。
- 如請求項1至64中任一項之RNAi寡核苷酸，其中該有義股包含如SEQ ID NO：1682所示之核苷酸序列，且其中該反義股包含如SEQ ID NO：1656所示之核苷酸序列。
- 如請求項1之RNAi寡核苷酸，其中該有義股包含序列5'-[mCs][mA][fG][mC][fA][mG][mU][fG][mA][fU][mU][fG][fA][mA][fG][mU][fA][mU][mC][mA][mG][mC][mA][mG][mC][mC][mG][ademA-GalNAc][ademA-GalNAc][ademA-GalNAc][mG][mG][mC][mU][mG][mC]-3'(SEQ ID NO：1623)，其中該反義股包含序列5'-[Me膦酸酯-4O-mUs][fGs][fA][fU][fA][mC][fU][mU][mC][fA][mA][mU][mC][fA][mC][fU][mG][mC][fU][mGs][mGs][mG]-3'(SEQ ID NO：1658)，且其中mC、mA、mG、mU=2'-OMe核糖核苷；fA、fC、fG、fU=2'-F核糖核苷；s=硫代磷酸酯，且其中ademA-GalNAc=。
- 如請求項1之RNAi寡核苷酸，其中該有義股包含序列5'-[mAs][mG][fA][mG][fC][mA][mA][fG][mU][fG][mA][fC][fA][mA][fA][mU][fG][mU][mU][mA][mG][mC][mA][mG][mC][mC][mG][ademA-GalNAc][ademA-GalNAc][ademA-GalNAc][mG][mG][mC][mU][mG][mC]-3'(SEQ ID NO：1630)，其中該反義股包含序列5'-[Me膦酸酯-4O-mUs][fAs][fA][fC][fA][mU][fU][mU][mG][fU][mC][mA][mC][fU][mU][fG][mC][mU][fC][mUs][mGs][mG]-3'(SEQ ID NO：1665)，且其中mC、mA、mG、mU=2'-OMe核糖核苷；fA、fC、fG、fU=2'-F核糖核苷；s=硫代磷酸酯，且其中ademA-GalNAc=。
- 如請求項1之RNAi寡核苷酸，其中該有義股包含序列5'-[mAs][mG][fU][mC][fA][mU][mG][fA][mC][fA][mU][fU][fU][mC][fU][mC][fA][mA][mA][mA][mG][mC][mA][mG][mC][mC][mG][ademA-GalNAc][ademA-GalNAc][ademA-GalNAc][mG][mG][mC][mU][mG][mC]-3’(SEQ ID NO：1634)，其中該反義股包含序列5'-[Me膦酸酯-4O-mUs][fUs][fU][fU][fG][mA][fG][mA][mA][fA][mU][mG][mU][fC][mA][fU][mG][mA][fC][mUs][mGs][mG]-3'(SEQ ID NO：1669)，且其中mC、mA、mG、mU=2'-OMe核糖核苷；fA、fC、fG、fU=2'-F核糖核苷；s=硫代磷酸酯，且其中ademA-GalNAc=。
- 如請求項1之RNAi寡核苷酸，其中該有義股包含序列5'-[mCs][mA][fG][mU][fC][mA][mU][fG][mA][fC][mA][fU][fU][mU][fC][mU][fC][mA][mA][mA][mG][mC][mA][mG][mC][mC][mG][ademA-GalNAc][ademA-GalNAc][ademA-GalNAc][mG][mG][mC][mU][mG][mC]-3'(SEQ ID NO：1621)，其中該反義股包含序列5'-[Me膦酸酯-4O-mUs][fUs][fU][fG][fA][mG][fA][mA][mA][fU][mG][mU][mC][fA][mU][fG][mA][mC][fU][mGs][mGs][mG]-3'(SEQ ID NO：1656)，且其中mC、mA、mG、mU=2'-OMe核糖核苷；fA、fC、fG、fU=2'-F核糖核苷；s=硫代磷酸酯，且其中ademA-GalNAc=。
- 如請求項1之RNAi寡核苷酸，其中該有義股包含序列5'-[mAs][mG][fU][mU][fG][mU][mU][fA][mG][fU][mG][fA][fU][mU][fU][mG][fC][mU][mA][mA][mG][mC][mA][mG][mC][mC][mG][ademA-GalNAc][ademA-GalNAc][ademA-GalNAc][mG][mG][mC][mU][mG][mC]-3'(SEQ ID NO：1640)，其中該反義股包含序列5'-[Me膦酸酯-4O-mUs][fUs][fA][fG][fC][mA][fA][mA][mU][fC][mA][mC][mU][fA][mA][fC][mA][mA][fC][mUs][mGs][mG]-3'(SEQ ID NO：1675)，且其中mC、mA、mG、mU=2'-OMe核糖核苷；fA、fC、fG、fU=2'-F核糖核苷；s=硫代磷酸酯，且其中ademA-GalNAc=。
- 如請求項1之RNAi寡核苷酸，其中該有義股包含序列5'-[ademCs-C16][mA][fG][mU][fC][mA][mU][fG][mA][fC][mA][fU][fU][mU][fC][mU][fC][mAs][mAs][mA]-3'(SEQ ID NO：1682)，其中該反義股包含序列5'-[Me膦酸酯-4O-mUs][fUs][fU][fG][fA][mG][fA][mA][mA][fU][mG][mU][mC][fA][mU][fG][mA][mC][fU][mGs][mGs][mG]-3'(SEQ ID NO：1656)，且其中mC、mA、mG、mU=2'-OMe核糖核苷；fA、fC、fG、fU=2'-F核糖核苷；s=硫代磷酸酯，且[ademCs-C16]=。
- 一種醫藥組合物，該醫藥組合物包含如請求項1至97中任一項之RNAi寡核苷酸，及醫藥學上可接受之載劑、遞送劑或賦形劑。
- 一種用於治療患有與SNCA基因表現相關之疾病、病症或疾患之個體的方法，該方法包括向該個體投與治療有效量之如請求項1至97中任一項之RNAi寡核苷酸或如請求項98之醫藥組合物，從而治療該個體。
- 一種將寡核苷酸遞送至個體之方法，該方法包括向該個體投與如請求項98之醫藥組合物。
- 一種用於降低細胞、細胞群體或個體中之SNCA基因表現之方法，該方法包括以下步驟：i.使該細胞或該細胞群體與如請求項1至97中任一項之RNAi寡核苷酸或如請求項98之醫藥組合物接觸；或ii.向該個體投與如請求項1至97中任一項之RNAi寡核苷酸或如請求項98之醫藥組合物。
- 如請求項101之方法，其中降低SNCA基因表現包括降低SNCA mRNA之量或水準、SNCA蛋白之量或水準、SNCA活性/功能或其組合。
- 如請求項101或102之方法，其中該個體患有與SNCA基因表現相關之疾病、病症或疾患。
- 如請求項99或103之方法，其中該與SNCA基因表現相關之疾病、病症或疾患為多系統萎縮、路易體失智(dementia with Lewy bodies)或帕金森病(Parkinson disease)。
- 如請求項99至104中任一項之方法，其中SNCA基因表現在中樞神經系統(CNS)之一或多個區域之組織中降低，且其中該組織與帕金森病相關。
- 如請求項105之方法，其中與帕金森病相關之組織係選自：殼核、中腦被蓋、黑質、腦橋及髓質。
- 如請求項99至104中任一項之方法，其中SNCA基因表現在中樞神經系統(CNS)之一或多個區域之組織中降低，且其中該組織與多系統萎縮相關。
- 如請求項107之方法，其中與多系統萎縮相關之組織係選自：尾狀核、殼核、中腦被蓋、黑質、腦橋、小腦皮質、小腦白質、髓質、頸脊髓、胸脊髓及腰脊髓。
- 如請求項99至104中任一項之方法，其中SNCA基因表現在中樞神經系統(CNS)之一或多個區域中降低，該一或多個區域係選自：頸脊髓、胸脊髓、腰脊髓、額葉皮質、顳葉皮質、小腦、中腦、枕葉皮質、頂葉皮質、海馬體、尾狀核、丘腦、腦幹、運動皮質、蒼白球、中腦被蓋、黑質、腦橋、小腦白質及小腦齒狀核。
- 如請求項99至109中任一項之方法，其中該RNAi寡核苷酸或該醫藥組合物與第二組合物或治療劑組合投與。
- 一種如請求項1至97中任一項之RNAi寡核苷酸或如請求項98之醫藥組合物的用途，其係用於製造用以治療與SNCA基因表現相關之疾病、病症或疾患之藥劑。
- 如請求項1至97中任一項之RNAi寡核苷酸或如請求項98之醫藥組合物，其係用於或適用於治療與SNCA基因表現相關之疾病、病症或疾患。
- 一種套組，該套組包含如請求項1至97中任一項之RNAi寡核苷酸、視情況存在之醫藥學上可接受之載劑及包裝插頁，該包裝插頁包含用於向患有與SNCA基因表現相關之疾病、病症或疾患之個體投與之說明書。
- 如請求項111之用途、如請求項112之供使用或適於使用之RNAi寡核苷酸或醫藥組合物或如請求項113之套組，其中該與SNCA基因表現相關之疾病、病症或疾患為多系統萎縮、路易體失智及帕金森病。
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US63/364,639 | 2022-05-13 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| TW202409275A true TW202409275A (zh) | 2024-03-01 |
Family
ID=
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CA3190481A1 (en) | Compositions and methods for inhibiting plp1 expression | |
| US20220340909A1 (en) | Compositions and methods for inhibiting ketohexokinase (khk) | |
| TW202220673A (zh) | 抑制ｌｐａ表現之組合物及方法 | |
| KR20220156880A (ko) | Angptl3 발현을 저해하기 위한 조성물 및 방법 | |
| BR112021012516A2 (pt) | Composições e métodos para inibir a expressão de hmgb1 | |
| TW202333750A (zh) | ＲＮＡｉ寡核苷酸共軛體 | |
| TW202228729A (zh) | 選擇性遞送寡核苷酸至膠細胞 | |
| TW202409275A (zh) | 用於抑制ｓｎｃａ表現之組合物及方法 | |
| US20230416743A1 (en) | Compositions and methods for inhibiting snca expression | |
| US20230416742A1 (en) | Compositions and methods for inhibiting mapt expression | |
| JP7463621B2 (ja) | ミトコンドリアアミドキシム還元成分１（ｍａｒｃ１）発現を阻害するための組成物および方法 | |
| US20240002858A1 (en) | Compositions and methods for inhibiting transmembrane serine protease 6 (tmprss6) expression | |
| US20220364098A1 (en) | Compositions and methods for modulating pnpla3 expression | |
| TW202308662A (zh) | 用於靶定中樞神經系統的神經元之脂質結合物 | |
| TW202330920A (zh) | 用於調節ａｐｏｃ３表現之組合物及方法 | |
| TW202345873A (zh) | 調節ｓｃａｐ活性之組合物及方法 | |
| TW202340462A (zh) | 靶定中樞神經系統的寡樹突細胞之脂質結合物 | |
| TW202335674A (zh) | 靶定中樞神經系統的星狀細胞之脂質結合物 | |
| TW202246502A (zh) | 抑制中樞神經系統中的基因表現之組成物及方法 | |
| CN116615541A (zh) | 用于抑制plp1表达的组合物和方法 | |
| TW202305136A (zh) | 用於抑制核受體次家族1組別h成員3（nr1h3）表現之組成物與方法 | |
| CN117280031A (zh) | 用于抑制核受体亚家族1组h成员3（nr1h3）表达的组合物和方法 | |
| CN117597444A (zh) | 用于靶向中枢神经系统的神经元的脂质缀合 |