TW202346336A - Masp-2-標靶抗體及其用途 - Google Patents

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Abstract

本文揭示了抗-MASP-2抗體和抗原結合片段、編碼所述抗體和抗原結合片段的多核苷酸和包含所述抗體和抗原結合片段的藥物組成物。還揭示了本文所描述的抗-MASP-2抗體和抗原結合片段在治療與補體活化有關的病況和病症中的用途。

Description

MASP-2-標靶抗體及其用途
本申請主張2022年3月18日提交的PCT/CN2022/081803專利申請的優先權，其內容透過引用整體併入本文。
本發明涉及分子生物學和免疫學。本文所提供的包括抗-MASP-2-抗體及其在治療與補體活化有關的病況中的用途。
甘露聚糖-結合凝集素-相關絲胺酸蛋白酶2 (MASP-2)是效應因子酶，它是補體凝集素途徑活化所需的。除其在免疫防禦中的基本作用外，當以不適當或不受控的方式活化時，凝集素途徑在多種臨床狀況中有助於組織損傷。然而，標靶凝集素途徑的治療有效的補體抑制劑的開發所取得的成功有限。因此，對於MASP-2-標靶試劑的其它治療選擇的需要仍未滿足。本文所提供的組成物和方法滿足了這些需要並提供了相對優勢。
發明概要
本文提供了特異性結合人MASP-2的抗體或其抗原結合片段，其包括：(1)如Kabat所定義的，(a)輕鏈可變區(VL)，其包含分別具有7、9和11的胺基酸序列的VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3；或者其在VL CDR中具有多至約5個胺基酸替換、添加和/或缺失的變異體；和/或(b)重鏈可變區(VH)，其包含分別具有12、16和18的胺基酸序列的VH CDR1，VH CDR2，VH CDR3；或者其在VH CDR中具有多至約5個胺基酸替換、添加和/或缺失的變異體；或者(2)如IMGT所定義的，(a) VL，其包含分別具有8、10和11的胺基酸序列的VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3；或者其在VL CDR中具有多至約5個胺基酸替換、添加和/或缺失的變異體；和/或(b) VH，其包含分別具有13、17和19的胺基酸序列的VH CDR1，VH CDR2，VH CDR3；或者其在VH CDR中具有多至約5個胺基酸替換、添加和/或缺失的變異體。
在一些實施方式中，本文所提供的抗體或抗原結合片段包含分別具有SEQ ID NO：7、9、11、12、16和18所示的胺基酸序列的VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3、VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3，如Kabat所定義的。
在一些實施方式中，本文所提供的抗體或抗原結合片段包含具有SEQ ID NO：8所示的胺基酸序列的VL CDR1；具有SEQ ID NO：10所示的胺基酸序列的VL CDR2；具有SEQ ID NO：11所示的胺基酸序列的VL CDR3；具有SEQ ID NO：13、14或15所示的胺基酸序列的VH CDR1；具有SEQ ID NO：17所示的胺基酸序列的VH CDR2；和具有SEQ ID NO：19或20所示的胺基酸序列的VH CDR3；如IMGT所定義的。
在一些實施方式中，本文所提供的抗體或抗原結合片段包含VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3、VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3，其具有以下所示的胺基酸序列：(1)分別為SEQ ID NO：8、10、11、13、17和19；(2)分別為SEQ ID NO：8、10、11、14、17和19；(3)分別為SEQ ID NO：8、10、11、15、17和19；(4)分別為SEQ ID NO：8、10、11、13、17和20；(5)分別為SEQ ID NO：8、10、11、14、17和20；或(6)分別為SEQ ID NO：8、10、11、15、17和20。
本文還提供了特異性結合人MASP-2的抗體或其抗原結合片段，其包含：(a)與SEQ ID NO：21所示的胺基酸序列具有至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或100%序列相同性的VL；和/或(b)與SEQ ID NO：22所示的胺基酸序列具有至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或100%序列相同性的VH。
在一些實施方式中，本文所提供的抗體或抗原結合片段包含分別具有SEQ ID NO：21和22所示的胺基酸序列的VL和VH。
本文還提供了特異性結合人MASP-2的抗體或其抗原結合片段，其包含：(a) VL，其包含來自具有SEQ ID NO：21所示的胺基酸序列的VL的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3；和/或(b) VH，其包含來自具有SEQ ID NO：22所示的胺基酸序列的VH的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3。
在一些實施方式中，本文所提供的抗體或抗原結合片段是嵌合抗體或抗原-結合片段、人源化抗體或抗原-結合片段或者人抗體或抗原結合片段。
在一些實施方式中，本文所提供的抗體或抗原結合片段是人源化抗體或抗原結合片段。在一些實施方式中，本文所提供的抗體或抗原結合片段包含：(a)與SEQ ID NO：23所示的胺基酸序列具有至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或100%序列相同性的VL；和/或(b)與SEQ ID NO：24所示的胺基酸序列具有至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或100%序列相同性的VH。在一些實施方式中，本文所提供的抗體或抗原結合片段包含具有SEQ ID NO：23所示的胺基酸序列的VL，和具有選自下列的胺基酸序列的VH：SEQ ID NO：24-32。
在一些實施方式中，本文所提供的抗體或抗原結合片段選自Fab、Fab'、F (ab') 2、Fv、scFv、(scFv) 2、單域抗體(sdAb)和重鏈抗體(HCAb)。
在一些實施方式中，本文所提供的抗體或抗原結合片段是IgG1抗體或其變異體、IgG2抗體或其變異體、IgG3抗體或其變異體或者IgG4抗體或其變異體。
在一些實施方式中，本文提供了IgG4抗體或其變異體。在一些實施方式中，本文所提供的IgG4抗體或變異體包含(1)與SEQ ID NO：33所示的胺基酸序列具有至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或100%序列相同性的輕鏈；和(2)與選自SEQ ID NO：34的胺基酸序列具有至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或100%序列相同性的重鏈。
在一些實施方式中，本文所提供的抗體的重鏈具有選自SEQ ID NO：34-42的胺基酸序列，或其透過提高抗體終未半衰期的一個或多個胺基酸替換修飾的變異體。在一些實施方式中，透過在選自下列的胺基酸殘基處的一個或多個取代修飾重鏈變異體：S228、F234、L235、M252、S254、T256、K288、T307、M428、N434、H435和Y436 (根據EU指數編號)。在一些實施方式中，透過選自下列的胺基酸替換修飾重鏈變異體：i) S228P；ii) F234A和L235A；iii) S228P、F234A和L235A；(iv) T307H和N434A；v) M252Y、S254T和T256E；vi) M428L、N434A和Y436T；vii) S228P、M252Y、S254T和T256E；viii) S228P、F234A、L235A、M252Y、S254T和T256E；ix) S228P、F234A、L235A、T307Q和N434A；和(x) M252Y、S254T、T307H和N434A。
在本文所提供的抗體的一些實施方式中，所述輕鏈具有SEQ ID NO：33所示的胺基酸序列並且所述重鏈具有選自SEQ ID NO：43-74的胺基酸序列。
本文還提供了與本文對於與人MASP-2的結合所描述的抗體或抗原-結合片段競爭的抗體或其抗原結合片段。
在一些實施方式中，本文所提供的抗體或抗原結合片段是雙重特異性抗體或者多重特異性抗體。
在一些實施方式中，本文所提供的抗體或抗原結合片段是單株抗體或抗原結合片段。
在一些實施方式中，本文所提供的抗體或抗原結合片段：(1)以約1 nM或以下的K D結合人MASP-2，如透過表面電漿共振(SPR)所測量的；(2)以約0.1 μg/mL或以下的IC 50阻斷C4活化，如體外測量的；(3)以約0.1 μg/mL或以下的IC 50阻斷C3活化，如體外測量的；(4)以約0.1 μg/mL或以下的IC 50阻斷MAC活化，如體外測量的；(5)不影響補體活化的經典或替代途徑；或者(6)(1)-(5)的任意組合。
在一些實施方式中，本文所提供的抗體或抗原結合片段特異性結合人MASP-2的蛋白酶結構域，其中所述抗體或抗原結合片段：(1)以1 nM或以下的K D結合人MASP-2，如透過SPR所測量的；(2)以0.1 μg/mL或以下的IC 50阻斷C4活化，如體外測量的；(3)以0.1 μg/mL或以下的IC 50阻斷C3活化，如體外測量的；(4)以0.1 μg/mL或以下的IC 50阻斷MAC活化，如體外測量的；(5)不影響補體活化的經典或替代途徑；或者(6)(1)-(5)的任意組合。
在一些實施方式中，本文所提供的抗體或抗原結合片段以0.001-0.01 μg/mL的IC 50阻斷C4活化，如體外測量的。在一些實施方式中，本文所提供的抗體或抗原結合片段在存在5-50%的人血清的情況下以0.1 μg/mL或以下的IC 50阻斷C4活化，如體外測量的。
在一些實施方式中，本文所提供的抗體或抗原結合片段以0.01 nM至1 nM的範圍內的K D結合人MASP-2，如透過SPR所測量的。在一些實施方式中，本文所提供的抗體或抗原結合片段以0.05 nM至0.5 nM的範圍內的K D結合人MASP-2，如透過SPR所測量的。
本文還提供了編碼本文所描述的抗體或抗原結合片段的多核苷酸。本文還提供了包含本文所描述的多核苷酸的載體。本文還提供了包含本文所描述的多核苷酸或者本文所描述的載體的宿主細胞。
本文還提供了包含治療有效量的本文所描述的抗體或抗原結合片段和藥物可用的載體的藥物組成物。
本文還提供了抑制對其有需要的受試者中MASP-2-依賴性補體活化的方法，其包括向所述受試者施用有效量的本文所描述的抗體或抗原結合片段。在一些實施方式中，所述受試者患有與MASP-2-依賴性補體活化有關的疾病或病症。
在一些實施方式中，本文提供了治療對其有需要的受試者中與MASP-2-依賴性補體活化有關的疾病或病症的方法，其包括向所述受試者施用治療有效量的本文所描述的抗體或抗原結合片段。在一些實施方式中，本文所提供的方法還包括向所述受試者施用其它療法。
在本文所提供的方法的一些實施方式中，所述受試者是人。
本文還提供了本文所描述的抗體或抗原結合片段在治療與MASP-2-依賴性補體活化有關的疾病或病症中的用途。
本文還提供了本文所描述的抗體或抗原結合片段用於製備治療與MASP-2-依賴性補體活化有關的疾病或病症的藥劑的用途。
在本文所描述的方法或用途的一些實施方式中，所述疾病或病症為腎臟疾病或病症、血管疾病或病症、皮膚疾病或病症、眼科疾病或病症、神經系統疾病或病症、血液疾病或病症、肌骨胳疾病或病症、泌尿生殖器疾病或病症、代謝疾病或病症、內分泌疾病或病症、胃腸疾病或病症或者肺疾病或病症。
在一些實施方式中，所述疾病或病症是IgA腎病(IgAN)、血栓性微血管病(TMA)、狼瘡腎炎(LN)、膜性腎病(MN)或者C3腎小球病(C3G)。在一些實施方式中，所述疾病或病症是IgAN。在一些實施方式中，所述疾病或病症是TMA。
在一些實施方式中，所述疾病或病症是非典型性溶血性尿毒症候群(aHUS)、與造血幹細胞移植有關的TMA (HSCT-TMA)、血栓性血小板減少性紫癜(TTP)、繼發於癌症的TMA、繼發於化療的TMA或者繼發於移植的TMA。在一些實施方式中，所述疾病或病症是HSCT-TMA。在一些實施方式中，所述疾病或病症是TTP。 發明詳述
本發明揭露提供了新穎抗體，包括特異性結合MASP-2 (例如，人MASP-2)的抗原結合片段。本文還揭示了包含治療有效量的這類抗體或抗原結合片段的藥物組成物。本文還揭示了這類藥物組成物用於治療多種與補體活化有關的病症(例如，IgA腎病)的用途。
在進一步描述本發明揭露之前，應理解本發明揭露不局限於本文所述的具體實施方式，並且還應理解本文所使用的術語僅出於描述具體實施方式的目的，並且不意欲限制。 定義
除非在本文中另外定義，否則在本發明揭露中使用的科學和技術術語應具有本領域那些技術人員通常所理解的含義。此外，除非上下文另外要求，否則單數術語應包括複數並且複數術語應包括單數。一般地，結合本文所描述的細胞和組織培養、分子生物學、免疫學、微生物學、遺傳學以及蛋白和核酸化學和雜交所使用的術語以及這些領域的技術是本領域中熟知且常用的那些。
術語“一個”實體是指一個或多個該實體；例如，“一個抗體”應被理解為表示一個或多個抗體。
當在本文中使用時，術語“和/或”將被視為對兩種所指明的特徵或組分中的每一種在具有或不具有另一種的情況下的具體揭露。因此，在本文中，如在短語如“A和/或B”中所使用的術語“和/或”旨在包括“A和B”、“A或B”、(單獨的)“A”；和(單獨的)“B”。同樣地，如在短語如“A、B和/或C”中所使用的術語“和/或”旨在涵蓋以下方面中的每一個：A、B和C；A、B或C；A或C；A或B；B或C；A和C；A和B；B和C；(單獨的) A；(單獨的) B；和(單獨的) C。
如本文所使用的術語“抗體”及其語法等價形式是指透過至少一個抗原結合位址辨識並特異性結合標靶，如蛋白、多肽、肽、碳水化合物、多核苷酸、脂質或任何上述的組合的免疫球蛋白分子，其中所述抗原結合位址通常在所述免疫球蛋白分子的可變區內。如本文所使用的，該術語涵蓋了完整多株抗體、完整單株抗體、單域抗體(sdAb；例如，駱駝抗體、羊駝抗體)、單鏈Fv (scFv)抗體、重鏈抗體(HCAb)、輕鏈抗體(LCAb)、多重特異性抗體、雙重特異性抗體、單特異性抗體、一價抗體和包含抗原結合位址的任何其它修飾的免疫球蛋白分子(例如，雙重可變域免疫球蛋白分子)，只要所述抗體顯示出所期望的生物活性。抗體還包括(但不限於)小鼠抗體、駱駝抗體、嵌合抗體、人源化抗體和人抗體。基於它們分別被稱為α、δ、ε、γ和μ的重鏈恆定域的特性，抗體可以是5類主要免疫球蛋白中的任一種：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM或其亞型(同種型)(例如，IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2)。除非另外明確表明，否則如本文所使用的術語“抗體”包括完整抗體的“抗原結合片段”。如本文所使用的術語“抗原結合片段”是指作為全抗體的抗原決定可變區的全抗體的部分或片段。抗原結合片段的實例包括(但不限於) Fab、Fab'、F (ab') 2、Fv、線性抗體、單鏈抗體分子(例如，scFv)、重鏈抗體(HCAb)、輕鏈抗體(LCAb)、二硫鍵-連接的scFv (dsscFv)、雙鏈抗體、三鏈抗體、四鏈抗體、微抗體、雙重可變域抗體(DVD)、單一可變域抗體(sdAb；例如，駱駝抗體、羊駝抗體)和重鏈抗體的單一可變域(VHH)以及由抗原片段所形成的雙重特異性或多重特異性抗體。“雙重特異性”抗體是具有兩個不同的抗原結合位元點的人工雜交抗體，它辨識並特異性結合兩個不同的標靶。可以透過多種方法產生雙重特異性抗體，其包括融合瘤融合或者Fab'片段的連接。參見，例如，Songsivilai & Lachmann, Clin. Exp. Immunol. 79:315-321 (1990)；Kostelny等人, J. Immunol. 148, 1547-1553 (1992)。
如本文所使用的術語“人源化抗體”是指作為含有最少非人序列的特異性免疫球蛋白鏈、嵌合免疫球蛋白或其片段的未人(例如，鼠科)抗體形式。通常，人源化抗體是人免疫球蛋白。在一些情況下，用來自非人物種的抗體中的對應殘基替換人免疫球蛋白的Fv框架區殘基。在一些情況下，透過來自具有所期望的特異性、親和力和/或結合能力的非人物種(例如，小鼠、大鼠、倉鼠、駱駝)的CDR的殘基替換CDR的殘基。可以透過在Fv框架區中和/或在替換的非人殘基內其它殘基的替換來進一步修飾人源化抗體以改進和最佳化抗體特異性、親和力和/或結合能力。如本文所使用的術語“人抗體”是指透過人產生的抗體或者使用本領域中已知的任何技術製備的具有對應於透過人產生的抗體的胺基酸序列的抗體。
當用於表示抗體時，術語“重鏈”是指約50-70kDa的多肽鏈，其中胺基-末端部分包括約120至130個或更多個胺基酸的可變區並且羧基-末端部分包括恆定區。基於重鏈恆定區的胺基酸序列，恆定區可以是5種不同類型之一，其被稱為α、δ、ε、γ和μ。不同重鏈的尺寸不同：α、δ和γ含有約450個胺基酸，而μ和ε含有約550個胺基酸。當與輕鏈組合時，這些不同類型的重鏈產生了5種熟知的抗體種類，分別為IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，其包括4種IgG亞型，即IgG1、IgG2、IgG3和IgG4。重鏈可以是人重鏈。
當用於表示抗體時，術語“輕鏈”是指約25kDa的多肽鏈，其中胺基-末端部分包括約100至約110個或更多個胺基酸的可變區並且羧基-末端部分包括恆定區。輕鏈的大致長度為211至217個胺基酸。基於恆定域的胺基酸序列，存在兩種不同的類型，其被稱為κ或λ。輕鏈胺基酸序列在本領域中是熟知的。輕鏈可以是人輕鏈。
術語“可變域”或“可變區”是指通常位於輕鏈或重鏈的胺基-末端並且在重鏈中具有約120至130個胺基酸長度，在輕鏈中具有約100至110個胺基酸長度，並且在每個特定抗體對於其特定抗原的結合和特異性中使用的抗體的輕鏈或重鏈部分。不同抗體之間可變域的序列廣泛不同。序列的變化集中在CDR，而可變域中不太變化的部分稱為框架區(FR)。輕鏈和重鏈的CDR主要負責抗體與抗原的相互作用。本文所使用的胺基酸位置編號是根據EU指數進行的，如Kabat等人(1991) Sequences of proteins of immunological interest (U.S. Department of Health and Human Services, Washington, D.C.)第5版中所述。可變區可以是人可變區。
CDR是指免疫球蛋白(Ig或者抗體) VH β-折疊框架的非框架區內的三個高度變異區(H1、H2或H3)之一，或者抗體VL β-折疊框架的非框架區內的三個高度變異區(L1、L2或L3)之一。因此，CDR是散佈在框架區序列內的可變區序列。CDR區對於本領域技術人員來說是熟知的並且已透過多種方法/系統定義。這些系統和/或定義已開發和改進了數年並且包括Kabat、Chothia、IMGT、AbM和Contact。例如，Kabat定義了抗體可變(V)域內最高度變異的區域[Kabat等人, J. Biol. Chem. 252:6609-6616 (1977)；Kabat, Adv. Prot. Chem. 32: 1-75 (1978)]。Chothia定義基於結構環區的位置，其將CDR區序列定義為不是守恆β-折疊框架的部分並因此能夠適應不同構形的那些殘基[Chothia and Lesk, J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)]。兩個術語在本領域中是良好承認的。另外，IMGT系統基於可變區結構內的序列差異度和位置。AbM定義是Kabat和Chothia之間的折衷。Contact定義基於可得的抗體晶體結構的分析。軟體程式(例如，abYsis)是本領域技術人員用於分析抗體序列和確定CDR可用且已知的。已透過多個結構的比較確定了典型抗體可變域內的CDR的位置[Al-Lazikani等人, J. Mol. Biol. 273:927-948 (1997)；Morea等人, Methods 20:267-279 (2000)]。由於在不同的抗體中高度變異區內殘基數目是不同的，因此通常用緊鄰典型可變域編號方案中的殘基編號的a、b、c等對相對於典型位置的其它殘基編號[Al-Lazikani等人, 如上(1997)]。這些命名類似地對於本領域技術人員來說是熟知的。
例如，根據Kabat(高度變異)或Chothia(結構)命名定義的CDR如下表中所示。
Kabat 1 Chothia 2 環位置
VHCDRl 31-35 26-32 連接B和C鏈
VHCDR2 50-65 53-55 連接C’和C’’鏈
VHCDR3 95-102 96-101 連接F和G鏈
VLCDRl 24-34 26-32 連接B和C鏈
VLCDR2 50-56 50-52 連接C’和C’’鏈
VLCDR3 89-97 91-96 連接F和G鏈
1殘基編號按照Kabat等人，如上的命名法則。
2殘基編號按照Chothia等人，如上的命名法則。
還可以將一個或多個CDR共價或非共價引入分子以使其成為免疫黏附素。免疫黏附素可以作為較大的多肽鏈的一部分引入CDR，可以將CDR共價連接至另一多肽鏈，或者可以非共價引入CDR。CDR使得免疫黏附素能夠結合至所關心的特定抗原。可以透過(例如) abysis網址(http://abysis.org/)分析CDR區。
術語“表位”和“抗原決定位”在本文中可互換使用以表示抗體或抗原-結合片段結合的標靶分子表面上的位址，如抗原表面上的局部區域。所述標靶分子可以包含蛋白、胜肽、核酸、碳水化合物或脂質。具有免疫原性活性的表位是在動物中引起免疫反應的標靶分子的一部分。具有抗原性活性的標靶分子的表位是抗體結合的標靶分子的一部分，如透過本領域中熟知的任何方法，包括(例如)透過免疫測定所確定的。抗原性表位不必需是免疫原性的。表位元通常由化學活性表面分子集團(surface groupings of molecules)，如胺基酸或糖側鏈組成，並且具有特定的立體結構特徵以及特定的電荷特徵。術語“表位元”包括線性表位元和構形表位。有助於表位的標靶分子(例如，多肽)區域可以是多肽的鄰接胺基酸或者所述表位可以從標靶分子的兩個或更多個非鄰接區聚集而成。表位可以或可以不是標靶分子的立體表面特徵。蛋白變性時，由鄰接胺基酸形成的表位元(也稱為線性表位元)通常保留，然而由三級折疊形成的表位(也稱為構形表位)通常在蛋白變性時丟失。表位通常包括至少3個，並且更通常地，至少5、6、7或8-10個處於獨特空間構形的胺基酸。
如本文所使用的，術語“特異性結合”表示多肽或分子以比替代物質，包括相關和無關蛋白更頻繁、更快速、更長持續時間、更大親和力或者以上述一些組合與表位元、蛋白或標靶分子相互作用。可以(例如)透過免疫測定、ELISA、生物膜干涉技術(“BLI”)、SPR (例如，Biacore)或者本領域技術人員已知的其它技術辨識特異性結合標靶分子(例如，抗原)的結合部分(例如，抗體)。通常，特異性反應將是背景訊號或噪音的至少兩倍並且可以是背景的大於10倍。有關抗體特異性的討論，參見，例如，Paul主編, 1989, Fundamental Immunology, 第2版, Raven Press, New York, 第332-336頁。特異性結合標靶分子的結合部分可以以比其對不同分子的親和力更高的親和力結合標靶分子。在一些實施方式中，特異性結合標靶分子的結合部分可以以比其對不同分子的親和力大至少20倍、大至少30倍、大至少40倍、大至少50倍、大至少60倍、大至少70倍、大至少80倍、大至少90倍或者大至少100倍的親和力結合所述標靶分子。在一些實施方式中，特異性結合特定標靶分子的結合部分以低親和力結合不同分子，這種親和力過低，從而使用本文所描述的或另外本領域中已知的測定無法檢測結合。在一些實施方式中，“特異性結合”表示(例如)結合部分以約0.1 mM或以下的K D結合分子標靶。在一些實施方式中，“特異性結合”表示多肽或分子以約10 μM或以下或者約1 μM或以下的K D結合標靶。在一些實施方式中，“特異性結合”表示多肽或分子以約0.1 μM或以下，約0.01 μM或以下或者約1 nM或以下的K D結合標靶。由於不同物種中同源蛋白之間的序列相同性，特異性結合可以包括辨識不止一種物種中的蛋白或標靶的多肽或分子。同樣地，由於不同蛋白的多肽序列的某些區域內的同源性，特異性結合可以包括辨識不止一種蛋白或標靶的多肽或分子。應理解，在一些實施方式中，特異性結合第一標靶的結合部分(例如，抗體)可以或可以不特異性結合第二標靶。照此，“特異性結合”不必須要求(儘管它可以包括)排他的結合，即結合至單個標靶。因此，在一些實施方式中，結合部分(例如，抗體)可以特異性結合不止一種標靶。例如，在某些情況下，抗體可以包含兩個相同的抗原結合位址，它們中的每一個特異性結合兩種或更多種蛋白上的相同表位。在某些替代實施方式中，抗體可以是雙重特異性的並且包含至少兩個具有不同特異性的抗原結合位址。
如本文所使用的術語“結合親和力”一般地表示結合部分和標靶分子(例如，抗原)之間的非共價相互作用的總和強度。結合部分和標靶分子的結合是可逆過程，並且通常將結合親和力報告為平衡解離常數(K D)。K D是解離速率(k off或k d)與結合速率(k on或k a)之比。結合對的K D越低，則親和力越高。測量結合親合力的多種方法在本領域中是已知的，它們中的任一種可以用於本發明揭露的目的。具體的說明性實施方式包括下列。在一些實施方式中，可以透過本領域中已知的測定，例如，透過結合測定測量“K D”或“K D值”。可以在放射性標記的抗原結合測定(RIA)中測量K D[Chen等人,(1999) J. Mol Biol 293:865-881]。還可以透過使用(例如)Gator系統(Probe Life)或者Octet-96系統(Sartorius AG)，使用生物膜干涉測量法(BLI)測量K D或K D值。還可以使用(例如) BIAcoreTM-2000或BIAcoreTM-3000 BIAcore, Inc., Piscataway, NJ，透過使用表面電漿共振測定(SPR)，透過Biacore測量K D或K D值。
如本文所使用的術語“變異體”相對於具有特定序列特徵的蛋白或多肽(“對照蛋白”或“參考多肽”)表示與對照蛋白或參考多肽相比，具有一個或多個[如(例如)約1至約25、約1至約20、約1至約15、約1至約10或者約1至約5個]胺基酸替換、缺失和/或添加的不同的蛋白或多肽。胺基酸序列的變化可以是胺基酸替換。胺基酸序列的變化可以是守恆胺基酸替換。蛋白或多肽的功能性片段或功能性變異體維持了對照蛋白或多肽的基本結構和功能性質。
在本文中可互換使用的術語“多肽”、“胜肽”、“蛋白”以及它們的語法等價形式表示具有任何長度的胺基酸的聚合物，其可以是直鏈或支鏈的。它可以包括非天然或修飾的胺基酸或可以被非胺基酸中斷。還可以透過(例如)二硫鍵形成、醣基化、脂化、乙醯化、磷酸化或者任何其它操作或修飾來修飾多肽、胜肽或蛋白。
在本文中可互換使用術語“多核苷酸”、“核酸”和它們的語法等價形式表示具有任何長度的核苷酸的聚合物並且包括DNA和RNA。所述核苷酸可以是去氧核糖核苷酸、核糖核苷酸、修飾的核苷酸或鹼基和/或它們的類似物，或者可以透過DNA或RNA聚合酶引入聚合物的任何受質。
如本文在兩種或更多種多核苷酸或多肽的背景中所使用的術語“同一的”、“相同性百分比”和它們的語法等價形式表示當出於最大對應性進行比較和比對(如有必要，引入缺口)時且不將任何守恆胺基酸替換認為是序列相同性的一部分，相同或者具有指定百分比的相同的核苷酸或胺基酸殘基的兩條或更多條序列或子序列。可以使用序列比較軟體或演算法或者透過目視檢查測量百分比相同性。可以用於獲得胺基酸或核苷酸序列比對的多種演算法和軟體在本領域中是熟知的。這些包括(但不限於) BLAST、ALIGN、Megalign、BestFit、GCG Wisconsin套裝軟體及其變化形式。在一些實施方式中，本文所提供的兩種多核苷酸或多肽是基本相同的，這表示當出於最大對應性進行比較和比對時，如使用序列比較演算法或透過目視檢查所測量的，它們具有至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%，並且在一些實施方式中，至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或者至少99%的核苷酸或胺基酸殘基相同性。在一些實施方式中，相同性存在於至少約10個殘基、至少約20個殘基、至少約40-60個殘基、至少約60-80個殘基長度或者它們之間的任何整數值的長度的胺基酸序列區域內。在一些實施方式中，在大於60-80個殘基，如至少約80-100個殘基的區域記憶體在相同性，並且在一些實施方式中，序列在所比較的序列全長(如標靶蛋白或抗體的編碼區)上基本相同。在一些實施方式中，在長度至少約10個鹼基，至少約20個鹼基，至少約40-60個鹼基，至少約60-80個鹼基或它們之間的任何整數值的核苷酸序列區域記憶體在相同性。在一些實施方式中，在大於60-80個鹼基，如至少約80-1000個鹼基或更多個鹼基的區域記憶體在相同性，並且在一些實施方式中，序列在所比較的序列全長(如編碼所關心的蛋白的核苷酸序列)上基本相同。
如本文所使用的術語“載體”及其語法等價形式表示用於攜帶基因材料(例如，多核苷酸序列)的媒介物，其可以被引入宿主細胞，在此它可以複製和/或表現。適合使用的載體包括(例如)表現載體、質體、噬菌體載體、病毒載體、附加體和人造染色體，其可以包括對於向宿主細胞的染色體中穩定併入可操作的選擇序列或標記物。另外，所述載體可以包括一個或多個可選擇標記物基因和適當的表現控制序列。可以包括的可選擇標記物基因(例如)提供了抗生素或毒素抗性、補充營養缺陷或者提供培養基中不存在的關鍵營養物。表現控制序列可以包括在本領域中熟知的組成型和誘導型啟動子、轉錄增強子、轉錄終止子等。當共表現兩種或更多種多核苷酸時，兩種多核苷酸可以插入(例如)到單一表現載體或者不同的表現載體中。對於單一載體表現，所述編碼多核苷酸可以操作性地連接至一個公共表現控制序列或者連接至不同的表現控制序列，如一個誘導型啟動子和一個組成型啟動子。可以使用本領域中熟知的方法確認多核苷酸向宿主細胞的引入。本領域技術人員應理解以足夠的量表現所述多核苷酸以產生所期望的產物(例如，如本文所描述的抗-MASP-2抗體或抗原-結合片段)，並且還應理解可以使用本領域中熟知的方法最佳化表現位準以獲得足夠的表現。
如本文所使用的，術語“編碼”及其語法等價形式表示多核苷酸或核酸中的特定核苷酸序列，如基因、cDNA或mRNA用作生物過程中用於具有限定的核苷酸序列(即，rRNA、tRNA和mRNA)或者具有從中所獲得的限定的胺基酸序列和生物學性質的其它聚合物和大分子的合成的範本的固有性質。因此，如果對應於所述基因的mRNA的轉錄和轉譯產生了蛋白，則所述基因編碼所述蛋白。除非另作說明，否則“編碼胺基酸序列的核苷酸序列”包括作為彼此的簡並形式並且編碼相同胺基酸序列的所有核苷酸序列。編碼蛋白和RNA的核苷酸序列可以包括內含子。
“分離的”多肽、胜肽、蛋白、抗體、多核苷酸、載體、細胞或組成物是處於自然界中不存在的形式的多肽、胜肽、蛋白、抗體、多核苷酸、載體、細胞或組成物。分離的多肽、胜肽、蛋白、抗體、多核苷酸、載體、細胞或組成物包括已純化至它們不再處於它們在自然界中存在的形式的程度的那些。在一些實施方式中，分離的多肽、胜肽、蛋白、抗體、多核苷酸、載體、細胞或組成物是基本純的。
如本文所使用的與疾病或病況或者患有疾病或病況的受試者有關的術語“治療”及其語法等價形式表示抑制、消除、降低和/或改善與正在治療的疾病或病症有關的症狀、症狀的嚴重程度和/或症狀頻率的動作。
如本文所使用的術語“施用”及其語法等價形式是指透過本文所述的或者另外如本領域中已知的方法向受試者身體遞送或者導致向受試者身體遞送治療劑或藥物組成物的動作。所述治療劑可以是化合物、多肽、抗體、細胞或細胞群體。施用治療劑或藥物組成物包括開出要向受試者身體遞送的治療劑或藥物組成物的處方。例示性的施用形式包括口服劑量形式，如片劑、膠囊、糖漿、混合懸浮劑；可注射劑量形式，如靜脈內(IV)、肌肉內(IM)或腹膜內(IP)可注射劑量形式；透皮劑量形式，包括乳膏劑、膠凝劑、粉劑或貼片；口腔劑量形式；吸入粉劑、噴霧、混合懸浮劑和直腸栓劑。
如本文所使用的術語“有效量”、“治療有效量”和它們的語法等價形式表示當向所述受試者施用時，單獨或作為藥物組成物的一部分並且以單一劑量或作為一系列劑量的一部分，以能夠對疾病、病症或病況的任何症狀、方面或特徵具有任何可檢測的積極效果的量向受試者施用試劑。可以透過測量相關生理作用確定治療有效量。基於受試者的年齡、體重和一般條件、要治療的病況的嚴重程度以及臨床醫師的判斷等，所需要的確切的量因受試者而異。本領域的技術人員可以使用常規實驗確定任何個體病例中的適當的“有效量”。
術語“藥物可用的載體”或“藥物可用的賦形劑”是指適合於和活性劑一起向個體藥物施用，且不會導致不希望的生物學影響或者以有害方式與所述藥物組成物的任何其它組分相互作用的材料。
如本文所使用的術語“受試者”是指任何動物(例如，哺乳動物)，包括(但不限於)人、非人靈長類動物、犬、貓、齧齒類等，其將是特定治療的受體。受試者可以是人。受試者可以具有特定疾病或病況。
範圍：在整個發明揭露中，本發明的多個方面可以以範圍格式存在。應理解以範圍格式的描述僅是為了方便和簡潔，並且不應將其視為對本發明範圍的刻板限制。因此，對範圍的描述應認為具有具體揭示的所有可能的子範圍以及所述範圍內的各個數值。例如，對範圍，如1至6的描述應認為具有具體揭示的子範圍，如1至3，1至4，1至5，2至4，2至6，3至6等，以及該範圍內的各個數值，例如，1、2、2.7、3、4、5、5.3和6。這是適用的，而無需考慮範圍的寬度。
本文參考GenBank編號、GI號和/或SEQ ID NO描述了例示性基因和多肽。應理解本領域技術人員可以透過參考序列來源，包括(但不限於)GenBank (ncbi.nlm.nih.gov/genbank/)和EMBL (embl.org/)容易地辨識同源序列。 凝集素途徑和 MASP-2
補體系統(CS)是先天免疫的基本部分。它是超過30種辨識、標記和消除微生物病原體以及有害地改變的(例如，凋亡)自體細胞、引發發炎和招募免疫細胞的血漿和細胞表面蛋白的網絡。可以透過3種途徑活化CS。主要透過免疫複合物活化經典途徑，但是它還可以辨識微生物表面以及凋亡和壞死細胞；它有助於消除個體發生期間不必要的突觸；並且它對於免疫複合物和細胞碎片的清除是重要的。凝集素途徑經由多樣的模式辨識分子組(PRM)辨識微生物上的古代表面-暴露分子決定位並且提供對微生物病原體的直接防禦，這不取決於特異的抗體。替代途徑(AP)透過自發低水準活化持續攻擊所有表面，但是它僅高效活化缺少保護性補體調節劑分子的那些。另外，AP為補體活化提供了重要的擴增環。
危險訊號辨識引發途徑-特異的絲胺酸蛋白酶酶原的活化。活化的蛋白酶切割形成表面-結合的C3轉化酶的下游補體組分：用於經典途徑和凝集素途徑的C4b2a以及用於替代途徑的C3bBb。此時，3種活化途徑彙聚至常見的效應因子途徑，從而導致病原體的標記和溶胞、免疫細胞的募集和發炎的引發。
通常，緊密調節補體活化。補體抑制的缺少導致了多種臨床病況的病理機理。在大部分補體-相關疾病中，3種途徑中僅1種的貢獻是主要的。途徑-特異的抑制劑，如途徑-特異的蛋白酶抑制劑可以是選擇性阻斷不受控制的病理途徑，同時使其它兩種途徑的保護功能不受干擾的理想治療劑。
目前已知3種甘露聚糖-結合凝集素-相關絲胺酸蛋白酶(MASP-1、MASP-2和MASP-3)在人血清中與甘露聚糖-結合凝集素(MBL)，也稱為“甘露糖-結合蛋白”結合。MBL-MASP-2複合物借助於MBL與多種多樣的微生物上存在的碳水化合物結構的結合在先天免疫中起重要作用。透過辨識組分與它們各自模式的結合活化MASP-2，並且還可以透過MASP-1活化MASP-2，並隨後將補體組分C4切割成C4a和C4b。在切割產物C4b結合至血漿C2後，C4b-結合的C2成為第二MASP-2-媒介的切割步驟的受質，其將C4b-結合的C2轉化為酵素催化活性的複合物C4bC2a和小C2b切割片段。C4b2a是凝集素途徑的C3轉化C3轉化酶，其將大量血漿組分C3轉化為C3a和C3b。C3b經由硫酯鍵非常接近地結合至任何表面。如果一些C3b片段非常接近地結合至C3轉化酶複合物C4b2a，則該轉化酶改變其特異性以將C5轉化為C5b和C5a，從而形成C5轉化酶複合物C4b2a (C3b) n。儘管該C5轉化酶可以起始膜攻擊複合物或“MAC”的形成，它表示插入並破壞膜的末端5個補體組分的複合物(與C6、C7、C8和C9組合的C5b)(也稱為C5b-9)，但據認為該過程對促進其自身的溶胞不夠有效。然而，透過凝集素途徑所產生的初始C3b調理素形成了用於形成新的替代途徑C3轉化酶和C5轉化酶位址的核，其最終導致大量MAC的形成和溶胞。還存在在不存在C4的情況下活化C3的MASP-2-依賴性C4-旁路活化，其在缺血-再灌注損傷的病理生理學中起重要作用。
照此，如本文所使用的和本領域所理解的，“MASP-2-依賴性補體活化”是指需要MASP-2的補體活化的凝集素途徑。在存在Ca++的情況下發生MASP-2-依賴性補體活化，從而導致凝集素途徑C3轉化酶C4b2a的形成和隨後C3切割產物C3b向C5轉化酶C4b2a (C3b) n的積累，其可以引起調理作用和/或溶胞。
人MASP-2基因位於染色體1p36.3-2上[Stover等人, Cytogenet and Cell Genet 84: 148-149 (1999)]並且包含12個外顯子。透過外顯子2、3、4、6、7、8、9、10、11和12編碼人MASP-2 cDNA。稱為MBL-相關蛋白19 (“MAp19”，也稱為“sMAP”)的20kDa蛋白是從外顯子2、3、4和5產生的，它是含有MASP-2的N末端CUB1-EGF區以及來源於外顯子5的4個其它殘基(EQSL)的非酵素催化蛋白。
MASP-2多肽具有686個胺基酸殘基，其包括在分泌後切掉的15個殘基的前導胜肽，從而導致產生人MASP-2的成熟形式(671個胺基酸；SEQ ID NO：1)。MASP-2多肽顯示出類似於MASP-1、MASP-3和C1r和C1s，C1補體系統蛋白酶的分子結構。圖2提供了顯示人MASP-2多肽的結構域結構的示意圖(標記為“hMASP2-FL”)。如所示的，絲胺酸蛋白酶MASP-2由6個不同的結構域組成：(1) N末端C1r/C1s/海膽VEGF/骨形態發生蛋白(或CUB1)結構域(SEQ ID NO：1的aa 1-122)；(2)表皮生長因子(EGF)-樣結構域(SEQ ID NO：1的aa 123-166)；(3)第二CUB結構域(CUB2)(SEQ ID NO：1的aa 167-279)；(4和5)兩種補體控制蛋白(CCP1和CCP2)結構域(CCP1，SEQ ID NO：1的aa 280-345，和CCP2，aa 346-414)；和(6)絲胺酸蛋白酶(SP)結構域(SEQ ID NO：1的aa 415-671)。
TPLGPKWPEPVFGRLASPGFPGEYANDQERRWTLTAPPGYRLRLYFTHFDLELSHLCEYDFVKLSSGAKVLATLCGQESTDTERAPGKDTFYSLGSSLDITFRSDYSNEKPFTGFEAFYAAEDIDECQVAPGEAPTCDHHCHNHLGGFYCSCRAGYVLHRNKRTCSALCSGQVFTQRSGELSSPEYPRPYPKLSSCTYSISLEEGFSVILDFVESFDVETHPETLCPYDFLKIQTDREEHGPFCGKTLPHRIETKSNTVTITFVTDESGDHTGWKIHYTSTAQPCPYPMAPPNGHVSPVQAKYILKDSFSIFCETGYELLQGHLPLKSFTAVCQKDGSWDRPMPACSIVDCGPPDDLPSGRVEYITGPGVTTYKAVIQYSCEETFYTMKVNDGKYVCEADGFWTSSKGEKSLPVCEPVCGLSARTTGGRIYGGQKAKPGDFPWQVLILGGTTAAGALLYDNWVLTAAHAVYEQKHDASALDIRMGTLKRLSPHYTQAWSEAVFIHEGYTHDAGFDNDIALIKLNNKVVINSNITPICLPRKEAESFMRTDDIGTASGWGLTQRGFLARNLMYVDIPIVDHQKCTAAYEKPPYPRGSVTANMLCAGLESGGKDSCRGDSGGALVFLDSETERWFVGGIVSWGSMNCGEAGQYGVYTKVINYIPWIENIISDF (SEQ ID NO：1)
MASP-2多肽具有含有CUB1-EGF-CUB2-CCP1-CCP2結構域的α鏈(重鏈)和含有絲胺酸蛋白酶結構域的β鏈(輕鏈)。CUBl、EGF和CUB2結構域是二聚化所需的並且CUBl、EGF、CUB2和CCPl結構域含有MBP的結合位址。每個MASP-2二聚體結合至兩個MBL次單元[Wallis等人, J. Biol Chem. 279:14065-14073 (2004)]。 抗 -MASP-2 抗體和抗原結合片段
本文提供了特異性結合MASP-2 (例如，人MASP-2)的抗體或其抗原結合片段。在一些實施方式中，本文提供了抗-MASP-2抗體。在一些實施方式中，所述抗體是IgA、IgD、IgE、IgG或IgM抗體。在一些實施方式中，所述抗體是IgA抗體。在一些實施方式中，所述抗體是IgD抗體。在一些實施方式中，所述抗體是IgE抗體。在一些實施方式中，所述抗體是IgG抗體。在一些實施方式中，所述抗體是IgM抗體。在一些實施方式中，本文所提供的抗體可以是IgG1抗體、IgG2抗體、IgG3抗體或IgG4抗體。在一些實施方式中，所述抗體是IgG1抗體。在一些實施方式中，所述抗體是IgG2抗體。在一些實施方式中，所述抗體是IgG3抗體。在一些實施方式中，所述抗體是IgG4抗體。
在一些實施方式中，本文提供了抗-MASP-2抗體的抗原結合片段。在一些實施方式中，本文所提供的抗原結合片段可以是單域抗體(sdAb)、重鏈抗體(HCAb)、Fab、Fab'、F (ab') 2、Fv、單-鏈可變片段(scFv)或(scFv) 2。在一些實施方式中，抗-MASP-2抗體的抗原結合片段是單域抗體(sdAb)。在一些實施方式中，抗-MASP-2抗體的抗原結合片段是重鏈抗體(HCAb)。在一些實施方式中，抗-MASP-2抗體的抗原結合片段是Fab。在一些實施方式中，抗-MASP-2抗體的抗原結合片段是Fab’。在一些實施方式中，抗-MASP-2抗體的抗原結合片段是F (ab’) 2。在一些實施方式中，抗-MASP-2抗體的抗原結合片段是Fv。在一些實施方式中，抗-MASP-2抗體的抗原結合片段是scFv。在一些實施方式中，抗-MASP-2抗體的抗原結合片段是二硫鍵-連接的scFv [(scFv) 2]。在一些實施方式中，抗-MASP-2抗體的抗原結合片段是雙鏈抗體(dAb)。
在一些實施方式中，本文所提供的抗-MASP-2抗體或抗原結合片段包含重組抗體或抗原結合片段。在一些實施方式中，本文所提供的抗-MASP-2抗體或抗原結合片段包含單株抗體或抗原結合片段。在一些實施方式中，本文所提供的抗-MASP-2抗體或抗原結合片段包含多株抗體或抗原結合片段。在一些實施方式中，本文所提供的抗-MASP-2抗體或抗原結合片段包含駱駝科動物(例如，駱駝、單峰駝和美洲駝)抗體或抗原結合片段。在一些實施方式中，本文所提供的抗-MASP-2抗體或抗原結合片段包含嵌合抗體或抗原結合片段。在一些實施方式中，本文所提供的抗-MASP-2抗體或抗原結合片段包含人源化抗體或抗原結合片段。在一些實施方式中，本文所提供的抗-MASP-2抗體或抗原結合片段包含人抗體或抗原結合片段。在一些實施方式中，本文提供了抗-MASP-2人scFv。
在一些實施方式中，本文所提供的抗-MASP-2抗體或抗原結合片段是分離的。在一些實施方式中，本文所提供的抗-MASP-2抗體或抗原結合片段是基本純的。
在一些實施方式中，本文所提供的抗-MASP-2抗體或抗原-結合片段包含多重特異性抗體或抗原-結合片段。在一些實施方式中，本文所提供的抗-MASP-2抗體或抗原-結合片段包含雙重特異性抗體或抗原-結合片段。在一些實施方式中，所述雙重特異性抗體或抗原-結合片段包含本文所提供的抗-MASP-2抗體或抗原-結合片段。在一些實施方式中，所述雙重特異性抗體或抗原-結合片段包含本文所提供的抗-MASP-2 scFv。
在一些實施方式中，本文所提供的抗-MASP-2抗體或抗原-結合片段包含一價抗原結合位址。在一些實施方式中，抗-MASP-2抗體或抗原-結合片段包含單特異性結合位址。在一些實施方式中，抗-MASP-2抗體或抗原-結合片段包含二價結合位址。
在一些實施方式中，抗-MASP-2抗體或抗原-結合片段是單株抗體或抗原-結合片段。可以透過本領域技術人員已知的任何方法製備單株抗體。一種例示性方法是篩選蛋白表現序列庫，例如，噬菌體或核糖體展示序列庫。噬菌體展示描述於(例如) Ladner等人, 美國專利No. 5,223,409；Smith (1985) Science 228:1315-1317；和WO 92/18619。在一些實施方式中，從表現所期望的種的可變區或CDR的噬菌體展示序列庫分離重組單株抗體。可以透過本領域中已知的多種技術實現噬菌體序列庫篩選。
在一些實施方式中，使用本領域技術人員已知的融合瘤方法製備單株抗體。例如，如以上所描述的，使用融合瘤方法，使小鼠、大鼠、兔、倉鼠或其它適合的宿主動物免疫。在一些實施方式中，使淋巴細胞體外免疫。在一些實施方式中，所述免疫抗原是人蛋白或其片段。在一些實施方式中，所述免疫抗原是人蛋白或其片段。
在免疫後，分離淋巴細胞並使用(例如)聚乙二醇與適合的骨髓瘤細胞融合。使用如本領域中已知的特化培養基選擇融合瘤細胞，並且未融合的淋巴細胞和骨髓瘤細胞不會在選擇過程中存活。可以透過多種方法辨識產生抗所選抗原的單株抗體的融合瘤，所述方法包括(但不限於)免疫沉澱、免疫墨點和體外結合測定(例如，流式細胞術、FACS、ELISA、SPR (例如，Biacore)和放射免疫測定)。一旦鑒別了產生具有所期望的特異性、親和力和/或活性的抗體的融合瘤細胞，可以透過極限稀釋或其它技術次選殖所述選殖株。可以使用標準方法在體外培養中或者在動物中作為腹水腫瘤體內增殖融合瘤。可以根據本領域中的標準方法從培養基或腹水流體純化單株抗體，所述標準方法包括(但不限於)親合層析、離子交換層析、凝膠電泳和透析。
在一些實施方式中，使用如本領域技術人員已知的重組DNA技術製備單株抗體。例如，從成熟B細胞或融合瘤細胞分離編碼抗體的多核苷酸，如使用特異性擴增編碼所述抗體的重鏈和輕鏈的基因的寡核苷酸引子透過RT-PCR分離，並使用標準技術確定它們的序列。然後，將編碼所述重鏈和輕鏈的分離的多核苷酸選殖至適合的表現載體，所述表現載體在轉染到宿主細胞，如大腸桿菌( E. coli)、猿COS細胞、中國倉鼠卵巢(CHO)細胞或者不另外產生免疫球蛋白的骨髓瘤細胞中時，產生單株抗體。
在一些實施方式中，透過使用DNA重組技術修飾單株抗體以產生替代抗體。在一些實施方式中，用人抗體的恆定區替代小鼠單株抗體的輕鏈和重鏈的恆定域以產生嵌合抗體。在一些實施方式中，將所述恆定區截短或移除以產生單株抗體所期望的抗體片段。在一些實施方式中，將可變區的定點突變或高密度突變用於最佳化單株抗體的特異性和/或親和力。
在一些實施方式中，抗-MASP-2抗體或抗原-結合片段是人源化抗體或抗原-結合片段。用於產生人源化抗體的多種方法在本領域中是已知的。用於透過人源化抗體實現高親和力結合的方法在本領域中是已知的。這種方法的非限制性實例是可變區的高度突變和表現這些高親和力抗體的細胞的選擇(親合力成熟)。除使用展示序列庫外，具體的抗原(例如，重組MASP-2或其表位)可以用於免疫非人動物，例如，齧齒類。在某些實施方式中，可以使用本領域中已知和/或本文所揭示的方法產生和分離齧齒類抗原結合片段(例如，小鼠抗原結合片段)。在一些實施方式中，可以用抗原(例如，重組MASP-2或其表位)免疫小鼠。
在一些實施方式中，抗-MASP-2抗體或抗原-結合片段是人抗體或抗原-結合片段。可以使用本領域中已知的多種技術製備人抗體。在一些實施方式中，從體外免疫的永生人B淋巴細胞產生人抗體。在一些實施方式中，從分離自免疫個體的淋巴細胞產生人抗體。在任何情況下，可以產生和分離產生抗標靶抗原的抗體的細胞。在一些實施方式中，人抗體選自噬菌體序列庫，其中該噬菌體序列庫表現人抗體。作為另外一種選擇，噬菌體展示技術可以用於從來自未免疫供體的免疫球蛋白可變區基因組庫體外產生人抗體和抗體片段。用於產生和使用抗體噬菌體序列庫的技術在本領域中是熟知的。一旦辨識抗體，本領域中已知的親合力成熟策略，包括(但不限於)鏈改組和定點突變，可以用於產生更高親和力的人抗體。在一些實施方式中，在含有人免疫球蛋白基因座的基因轉殖小鼠中產生人抗體。透過免疫，這些小鼠可以在不存在內源免疫球蛋白生產的情況下產生人抗體的全部組庫。
在一些實施方式中，本文提供了抗-MASP-2抗體選殖株3E10。序列特性如下所述。本文所定義的具體CDR序列通常基於Kabat或IMGT定義。然而，應理解對特定抗體的一個或多個重鏈CDR和/或一個或多個輕鏈CDR的一般提及涵蓋了如本領域技術人員已知的所有CDR定義。 表 1.3E10和人源化3E10的輕鏈可變區CDR (VL CDR)的胺基酸序列
VL CDR1 VL CDR2 VL CDR3
Kabat KSSQNILYSSNQKNLLA (SEQ ID NO：7) WASTRES (SEQ ID NO：9) HQYFSSYT (SEQ ID NO：11)
IMGT QNILYSSNQKNL (SEQ ID NO：8) WAS (SEQ ID NO：10) HQYFSSYT (SEQ ID NO：11)
表 2.3E10和人源化3E10的重鏈可變區CDR (VH CDR)的胺基酸序列
序列 VH CDR1 VH CDR2 VH CDR3
Kabat TYGVH (SEQ ID NO：12) VIWKGGSTDYNAAFMS (SEQ ID NO：16) TLELRRRDYYAMDY (SEQ ID NO：18)
IMGT GFSLTTYG (SEQ ID NO：13) GFTFSTYG (SEQ ID NO：14) GFTLSTYG (SEQ ID NO：15) IWKGGST (SEQ ID NO：17) VKTLELRRRDYYAMDY (SEQ ID NO：19) AKTLELRRRDYYAMDY (SEQ ID NO：20)
對於產生人源化3E10的CDR移植，按照Kabat計數。照此，在人源化後，Kabat CDR保持不變，而一些IMGT CDR顯示出一些變化(1-3個胺基酸替換)。
在一些實施方式中，本文所提供的抗-MASP-2抗體或抗原結合片段包含本文所述的抗體中任一個的1、2、3、4、5和/或6個CDR。在一些實施方式中，本文所提供的抗-MASP-2抗體或抗原結合片段包含輕鏈可變區(VL)，其包含1、2和/或3個來自表1的輕鏈CDR (VL CDR)。在一些實施方式中，本文所提供的抗-MASP-2抗體或抗原結合片段包含重鏈可變區(VH)，其包含1、2和/或3個來自表2的重鏈CDR (VH CDR)。在一些實施方式中，本文所提供的抗-MASP-2抗體或抗原結合片段包含1、2和/或3個來自表1的VL CDR和1、2和/或3個來自表2的VH CDR。
在一些實施方式中，本文提供了特異性結合MASP-2的抗體或其抗原結合片段，其包含VL，所述VL包含(1)具有以下胺基酸序列的VL CDR1：SEQ ID NO：7或8；(2)具有以下胺基酸序列的VL CDR2：SEQ ID NO：9或10；或(3)具有以下胺基酸序列的VL CDR3：SEQ ID NO：11；或者其在VL CDR中具有多至約3、約5、約8、約10、約12或約15個胺基酸替換、添加和/或缺失的變異體；和/或VH，所述VH包含(1)具有選自下列的胺基酸序列的VH CDR1：SEQ ID NO：12-15；(2)具有以下胺基酸序列的VH CDR2：SEQ ID NO：16或17；或(3)具有選自下列的胺基酸序列的VH CDR3：SEQ ID NO：18-20；或者其在VH CDR中具有多至約3、約5、約8、約10、約12或約15個胺基酸替換、添加和/或缺失的變異體。
在一些實施方式中，本文提供了特異性結合MASP-2的抗體或其抗原結合片段，其包含VL，所述VL包含(1)具有以下胺基酸序列的VL CDR1：SEQ ID NO：7或8；(2)具有以下胺基酸序列的VL CDR2：SEQ ID NO：9或10；或(3)具有以下胺基酸序列的VL CDR3：SEQ ID NO：11；或者其在VL CDR中具有多至約3、約5、約8、約10、約12或約15個胺基酸替換、添加和/或缺失的變異體。在一些實施方式中，所述變異體在VL CDR中具有約5個胺基酸替換、添加和/或缺失。
在一些實施方式中，本文提供了特異性結合MASP-2的抗體或其抗原結合片段，其包含VL，所述VL包含(1)具有以下胺基酸序列的VL CDR1：SEQ ID NO：7或8；(2)具有以下胺基酸序列的VL CDR2：SEQ ID NO：9或10；和(3)具有以下胺基酸序列的VL CDR3：SEQ ID NO：11；或者其在VL CDR中具有多至約3、約5、約8、約10、約12或約15個胺基酸替換、添加和/或缺失的變異體。在一些實施方式中，所述變異體在VL CDR中具有多至約5個胺基酸替換、添加和/或缺失。
在一些實施方式中，本文提供了特異性結合MASP-2的抗體或其抗原結合片段，其具有VL，其中所述VL包含分別具有SEQ ID NO：7、9和11所示的胺基酸序列的VL CDR1、CDR2和CDR3，如Kabat所定義的；或者其在VL CDR中具有多至約3、約5、約8、約10、約12或約15個胺基酸替換、添加和/或缺失的變異體。在一些實施方式中，所述變異體在VL CDR中具有多至約5個胺基酸替換、添加和/或缺失。在一些實施方式中，本文提供了特異性結合MASP-2的抗體或其抗原結合片段，其具有VL，其中所述VL包含分別具有SEQ ID NO：8、10和11所示的胺基酸序列的VL CDR1、CDR2和CDR3，如IMGT所定義的；或者其在VL CDR中具有多至約3、約5、約8、約10、約12或約15個胺基酸替換、添加和/或缺失的變異體。在一些實施方式中，所述變異體在VL CDR中具有多至約5個胺基酸替換、添加和/或缺失。
在一些實施方式中，本文提供了特異性結合MASP-2的抗體或其抗原結合片段，其包含VH，所述VH包含(1)具有選自下列的胺基酸序列的VH CDR1：SEQ ID NO：12-15；(2)具有以下胺基酸序列的VH CDR2：SEQ ID NO：16或17；或(3)具有選自下列的胺基酸序列的VH CDR3：SEQ ID NO：18-20；或者其在VH CDR中具有多至約3、約5、約8、約10、約12或約15個胺基酸替換、添加和/或缺失的變異體。在一些實施方式中，所述變異體在VH CDR中具有多至約5個胺基酸替換、添加和/或缺失。
在一些實施方式中，本文提供了特異性結合MASP-2的抗體或其抗原結合片段，其包含VH，所述VH包含(1)具有選自下列的胺基酸序列的VH CDR1：SEQ ID NO：12-15；(2)具有以下胺基酸序列的VH CDR2：SEQ ID NO：16或17；和(3)具有選自下列的胺基酸序列的VH CDR3：SEQ ID NO：18-20；或者其在VH CDR中具有多至約3、約5、約8、約10、約12或約15個胺基酸替換、添加和/或缺失的變異體。在一些實施方式中，所述變異體在VH CDR中具有多至約5個胺基酸替換、添加和/或缺失。
在一些實施方式中，本文提供了特異性結合MASP-2的抗體或其抗原結合片段，其具有VH，其中所述VH包含分別具有SEQ ID NO：12、16和18所示的胺基酸序列的VH CDR1、CDR2和CDR3，如Kabat所定義的；或者其在VH CDR中具有多至約3、約5、約8、約10、約12或約15個胺基酸替換、添加和/或缺失的變異體。在一些實施方式中，所述變異體在VH CDR中具有多至約5個胺基酸替換、添加和/或缺失。
在一些實施方式中，本文提供了特異性結合MASP-2的抗體或其抗原結合片段，其具有VH，其中所述VH包含具有下列胺基酸序列的VH CDR1、CDR2和CDR3：(1)分別為SEQ ID NO：13、17和19；(2)分別為SEQ ID NO：14、17和19；(3)分別為SEQ ID NO：15、17和19；(4)分別為SEQ ID NO：13、17和20；(5)分別為SEQ ID NO：14、17和20；或(6)分別為SEQ ID NO：15、17和20；如IMGT所定義的；或者其在VH CDR中具有多至約3、約5、約8、約10、約12或約15個胺基酸替換、添加和/或缺失的變異體。在一些實施方式中，所述變異體在VH CDR中具有多至約5個胺基酸替換、添加和/或缺失。
在一些實施方式中，本文提供了特異性結合MASP-2的抗體或其抗原結合片段，其包含，如Kabat所定義的，(a) VL，其包含分別具有7、9和11所示的胺基酸序列的VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3；或者其在VL CDR中具有多至約3、約5、約8、約10、約12或約15個胺基酸替換、添加和/或缺失的變異體；和/或(b) VH，其包含分別具有12、16和18所示的胺基酸序列的VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3；或者其在VH CDR中具有多至約3、約5、約8、約10、約12或約15個胺基酸替換、添加和/或缺失的變異體。
在一些實施方式中，本文提供了特異性結合MASP-2的抗體或其抗原結合片段，其包含分別具有SEQ ID NO：7、9、11、12、16和18所示的胺基酸序列的VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3、VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3，如Kabat所定義的，或者其在所述CDR中具有多至約3、約5、約8、約10、約12或約15個胺基酸替換、添加和/或缺失的變異體。
在一些實施方式中，本文提供了特異性結合MASP-2的抗體或其抗原結合片段，其包含，如IMGT所定義的(a) VL，其包含分別具有SEQ ID NO：8、10和11所示的胺基酸序列的VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3；或者其在VL CDR中具有多至約3、約5、約8、約10、約12或約15個胺基酸替換、添加和/或缺失的變異體；和/或(b) VH，其包含分別具有13、17和19所示的胺基酸序列的VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3；或者其在VH CDR中具有多至約3、約5、約8、約10、約12或約15個胺基酸替換、添加和/或缺失的變異體。
在一些實施方式中，本文提供了特異性結合MASP-2的抗體或其抗原結合片段，其包含具有SEQ ID NO：8所示的胺基酸序列的VL CDR1；具有SEQ ID NO：10所示的胺基酸序列的VL CDR2；具有SEQ ID NO：11所示的胺基酸序列的VL CDR3；具有SEQ ID NO：13、14或15所示的胺基酸序列的VH CDR1；具有SEQ ID NO：17所示的胺基酸序列的VH CDR2；和具有SEQ ID NO：19或20所示的胺基酸序列的VH CDR3；如IMGT所定義的。
在一些實施方式中，本文提供了特異性結合MASP-2的抗體或其抗原結合片段，其包含分別具有SEQ ID NO：8、10、11、13、17和19所示的胺基酸序列的VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3、VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3，如IMGT所定義的。在一些實施方式中，所述VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3、VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3可以分別具有SEQ ID NO：8、10、11、14、17和19，如IMGT所定義的。在一些實施方式中，所述VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3、VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3可以分別具有SEQ ID NO：8、10、11、15、17和19，如IMGT所定義的。在一些實施方式中，所述VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3、VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3可以分別具有SEQ ID NO：8、10、11、13、17和20，如IMGT所定義的。在一些實施方式中，所述VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3、VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3可以分別具有SEQ ID NO：8、10、11、14、17和20，如IMGT所定義的。在一些實施方式中，所述VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3、VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3可以分別具有SEQ ID NO：8、10、11、15、17和19，如IMGT所定義的。 表 3.抗-MASP-2抗體3E10和人源化3E10的輕鏈可變區(VL)和重鏈可變區(VH)的胺基酸序列
Ab 結構域 序列
3E10 VL DIVMTQTTSSLAVSAGEKVTMSCKSSQNILYSSNQKNLLAWYQQKPGQSPKLLIYWASTRESGVPNRFTGSGSGTDFSLTINSVQPEDLAVYYCHQYFSSYTFGGGTKLEMK (SEQ ID NO：21)
3E10 VH EVQLQQSGPGLVQSSQSLSITCTVSGFSLTTYGVHWVRLSPGKGLEWLGVIWKGGSTDYNAAFMSRLSITKDNSKSEVFFQMNSLQGDDSAIYYCVKTLELRRRDYYAMDYWGQGTSVTVSS (SEQ ID NO：22)
3E10-hu-VL DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQNILYSSNQKNLLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCHQYFSSYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO：23)
3E10-hu-VH-0 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSTYGVHWVRQAPGKGLEWVAVIWKGGSTDYNAAFMSRFTISRDNSKNTIYIQMNSLRAEDTAVYYCAKTLELRRRDYYAMDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO：24)
3E10-hu-VH-6 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTLSTYGVHWVRQAPGKGLEWLGVIWKGGSTDYNAAFMSRLTISKDNSKNTVYIQMNSLRAEDTAVYYCAKTLELRRRDYYAMDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO：25)
3E10-hu-VH-7-1 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTLSTYGVHWVRQAPGKGLEWLGVIWKGGSTDYNAAFMSRLTISKDNSKSTVYIQMNSLRAEDTAVYYCAKTLELRRRDYYAMDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO：26)
3E10-hu-VH-7-2 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTLSTYGVHWVRQAPGKGLEWLGVIWKGGSTDYNAAFMSRLTISKDNSKNTVYIQMNSLRAEDTAVYYCVKTLELRRRDYYAMDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO：27)
3E10-hu-VH-8 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFSLTTYGVHWVRQAPGKGLEWLGVIWKGGSTDYNAAFMSRLTISKDNSKNTVYIQMNSLRAEDTAVYYCAKTLELRRRDYYAMDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO：28)
3E10-hu-VH-9 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFSLTTYGVHWVRQAPGKGLEWLGVIWKGGSTDYNAAFMSRLTISKDNSKSTVYIQMNSLRAEDTAVYYCAKTLELRRRDYYAMDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO：29)
3E10-hu-VH-10 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFSLTTYGVHWVRQAPGKGLEWLGVIWKGGSTDYNAAFMSRLTISKDNSKSTVYIQMNSLRAEDTAVYYCVKTLELRRRDYYAMDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO：30)
3E10-hu-VH-11 QVQLVESGGGVVQPGRSLRISCAASGFSLTTYGVHWVRQAPGKGLEWLGVIWKGGSTDYNAAFMSRLTISKDNSKSTVYIQMNSLRAEDTAVYYCVKTLELRRRDYYAMDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO：31)
3E10-hu-VH-12 QVQLVESGGGVVQPGRSLRISCAVSGFSLTTYGVHWVRQAPGKGLEWLGVIWKGGSTDYNAAFMSRLTISKDNSKSTVYIQMNSLRAEDTAVYYCVKTLELRRRDYYAMDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO：32)
在一些實施方式中，本文提供了特異性結合MASP-2的抗體或其抗原結合片段，其包含VL，所述VL與SEQ ID NO：21所示的胺基酸序列具有至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%的序列相同性。在一些實施方式中，本文提供了特異性結合MASP-2的抗體或其抗原結合片段，其包含VH，所述VH與SEQ ID NO：22所示的胺基酸序列具有至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%的序列相同性。
在一些實施方式中，本文提供了特異性結合MASP-2的抗體或其抗原結合片段，其包含：(a) VL，所述VL與SEQ ID NO：21所示的胺基酸序列具有至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%的序列相同性；和(b) VH，所述VH與SEQ ID NO：22所示的胺基酸序列具有至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%的序列相同性。在一些實施方式中，本文提供了特異性結合MASP-2的抗體或其抗原結合片段，其包含VL和VH，其中所述VL和VH分別具有SEQ ID NO：21和22所示的胺基酸序列。
在一些實施方式中，本文提供了特異性結合MASP-2的抗體或其抗原結合片段，其包含VL，其中所述VL與SEQ ID NO：21具有至少80%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%的序列相同性。在一些實施方式中，所述抗-MASP-2抗體或其抗原結合片段具有與SEQ ID NO：21具有至少85%序列相同性的VL。在一些實施方式中，所述抗-MASP-2抗體或其抗原結合片段具有與SEQ ID NO：21具有至少90%序列相同性的VL。在一些實施方式中，所述抗-MASP-2抗體或其抗原結合片段具有與SEQ ID NO：21具有至少95%序列相同性的VL。在一些實施方式中，所述抗-MASP-2抗體或其抗原結合片段具有與SEQ ID NO：21具有至少98%序列相同性的VL。在一些實施方式中，本文提供了特異性結合MASP-2的抗體或其抗原結合片段，其包含具有SEQ ID NO：21所示的胺基酸序列的VL。
在一些實施方式中，本文提供了特異性結合MASP-2的抗體或其抗原結合片段，其包含VH，其中所述VH與SEQ ID NO：22具有至少80%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%的序列相同性。在一些實施方式中，所述抗-MASP-2抗體或其抗原結合片段具有與SEQ ID NO：22具有至少85%序列相同性的VH。在一些實施方式中，所述抗-MASP-2抗體或其抗原結合片段具有與SEQ ID NO：22具有至少90%序列相同性的VH。在一些實施方式中，所述抗-MASP-2抗體或其抗原結合片段具有與SEQ ID NO：22具有至少95%序列相同性的VH。在一些實施方式中，所述抗-MASP-2抗體或其抗原結合片段具有與SEQ ID NO：22具有至少98%序列相同性的VH。在一些實施方式中，本文提供了特異性結合MASP-2的抗體或其抗原結合片段，其包含具有SEQ ID NO：22所示的胺基酸序列的VH。
在一些實施方式中，抗-MASP-2抗體或其抗原-結合片段包含人源化抗體或抗原-結合片段。在一些實施方式中，抗-MASP-2抗體或其抗原-結合片段包含來自本文所描述的抗體或抗原-結合片段的VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3、VH CDR1、VH CDR2和/或VH CDR3。在一些實施方式中，抗-MASP-2抗體或其抗原-結合片段包含本文所描述的抗-MASP-2抗體或抗原-結合片段的變異體。抗-MASP-2抗體或抗原-結合片段的變異體可以在抗-MASP-2抗體或抗原-結合片段中包含1至30個胺基酸替換、添加和/或缺失。抗-MASP-2抗體或抗原-結合片段的變異體可以在抗-MASP-2抗體或抗原-結合片段中包含1至25個胺基酸替換、添加和/或缺失。在一些實施方式中，抗-MASP-2抗體或抗原-結合片段的變異體在抗-MASP-2抗體或抗原-結合片段中包含1至20個替換、添加和/或缺失。在一些實施方式中，抗-MASP-2抗體或抗原-結合片段的變異體在抗-MASP-2抗體或抗原-結合片段中包含1至15個替換、添加和/或缺失。在一些實施方式中，抗-MASP-2抗體或抗原-結合片段的變異體在抗-MASP-2抗體或抗原-結合片段中包含1至10個替換、添加和/或缺失。在一些實施方式中，抗-MASP-2抗體或抗原-結合片段的變異體在抗-MASP-2抗體或抗原-結合片段中包含1至5個守恆胺基酸替換、添加和/或缺失。在一些實施方式中，抗-MASP-2抗體或抗原-結合片段的變異體在抗-MASP-2抗體或抗原-結合片段中包含1至3個胺基酸替換、添加和/或缺失。在一些實施方式中，所述胺基酸替換、添加和/或缺失是守恆胺基酸替換。在一些實施方式中，所述守恆胺基酸替換在所述抗體或抗原-結合片段的CDR中。在一些實施方式中，所述守恆胺基酸替換不在所述抗體或抗原-結合片段的CDR中。在一些實施方式中，所述守恆胺基酸替換在所述抗體或抗原-結合片段的框架區中。
在一些實施方式中，本文提供了特異性結合MASP-2的人源化抗體或其抗原結合片段，其包含:(a) VL，所述VL與SEQ ID NO：23的胺基酸序列具有至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%的序列相同性；和(b) VH，所述VH與SEQ ID NO：24的胺基酸序列具有至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%的序列相同性。在一些實施方式中，本文提供了特異性結合MASP-2的抗體或其抗原結合片段，其包含VL和VH，其中所述VL和VH分別具有SEQ ID NO：23和24所示的胺基酸序列。在一些實施方式中，VL和VH分別具有SEQ ID NO：23和25所示的胺基酸序列。在一些實施方式中，VL和VH分別具有SEQ ID NO：23和26所示的胺基酸序列。在一些實施方式中，VL和VH分別具有SEQ ID NO：23和27所示的胺基酸序列。在一些實施方式中，VL和VH分別具有SEQ ID NO：23和28所示的胺基酸序列。在一些實施方式中，VL和VH分別具有SEQ ID NO：23和29所示的胺基酸序列。在一些實施方式中，VL和VH分別具有SEQ ID NO：23和30所示的胺基酸序列。在一些實施方式中，VL和VH分別具有SEQ ID NO：23和31所示的胺基酸序列。在一些實施方式中，VL和VH分別具有SEQ ID NO：23和32所示的胺基酸序列。
在一些實施方式中，本文提供了特異性結合MASP-2的人源化抗體或其抗原結合片段，其包含VL，其中所述VL與SEQ ID NO：23具有至少80%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%的序列相同性。所述人源化抗-MASP-2抗體或其抗原結合片段可以具有與SEQ ID NO：23具有至少85%序列相同性的VL。所述人源化抗-MASP-2抗體或其抗原結合片段可以具有與SEQ ID NO：23具有至少90%序列相同性的VL。所述人源化抗-MASP-2抗體或其抗原結合片段可以具有與SEQ ID NO：23具有至少95%序列相同性的VL。所述人源化抗-MASP-2抗體或其抗原結合片段可以具有與SEQ ID NO：23具有至少98%序列相同性的VL。在一些實施方式中，本文提供了特異性結合MASP-2的人源化抗體或其抗原結合片段，其包含具有SEQ ID NO：23所示的胺基酸序列的VL。
在一些實施方式中，本文提供了特異性結合MASP-2的人源化抗體或其抗原結合片段，其包含VH，其中所述VH與SEQ ID NO：24具有至少80%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%的序列相同性。所述人源化抗-MASP-2抗體或其抗原結合片段可以具有與SEQ ID NO：24具有至少85%序列相同性的VH。所述人源化抗-MASP-2抗體或其抗原結合片段可以具有與SEQ ID NO：24具有至少90%序列相同性的VH。所述人源化抗-MASP-2抗體或其抗原結合片段可以具有與SEQ ID NO：24具有至少95%序列相同性的VH。所述人源化抗-MASP-2抗體或其抗原結合片段可以具有與SEQ ID NO：24具有至少98%序列相同性的VH。在一些實施方式中，本文提供了特異性結合MASP-2的人源化抗體或其抗原結合片段，其包含具有SEQ ID NO：24所示的胺基酸序列的VH。
在一些實施方式中，本文提供了特異性結合MASP-2的人源化抗體或其抗原結合片段，其包含VH，其中所述VH與SEQ ID NO：25具有至少80%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%的序列相同性。所述人源化抗-MASP-2抗體或其抗原結合片段可以具有與SEQ ID NO：25具有至少85%序列相同性的VH。所述人源化抗-MASP-2抗體或其抗原結合片段可以具有與SEQ ID NO：25具有至少90%序列相同性的VH。所述人源化抗-MASP-2抗體或其抗原結合片段可以具有與SEQ ID NO：25具有至少95%序列相同性的VH。所述人源化抗-MASP-2抗體或其抗原結合片段可以具有與SEQ ID NO：25具有至少98%序列相同性的VH。在一些實施方式中，本文提供了特異性結合MASP-2的人源化抗體或其抗原結合片段，其包含具有SEQ ID NO：25所示的胺基酸序列的VH。
在一些實施方式中，本文提供了特異性結合MASP-2的人源化抗體或其抗原結合片段，其包含VH，其中所述VH與SEQ ID NO：26具有至少80%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%的序列相同性。所述人源化抗-MASP-2抗體或其抗原結合片段可以具有與SEQ ID NO：26具有至少85%序列相同性的VH。所述人源化抗-MASP-2抗體或其抗原結合片段可以具有與SEQ ID NO：26具有至少90%序列相同性的VH。所述人源化抗-MASP-2抗體或其抗原結合片段可以具有與SEQ ID NO：26具有至少95%序列相同性的VH。所述人源化抗-MASP-2抗體或其抗原結合片段可以具有與SEQ ID NO：26具有至少98%序列相同性的VH。在一些實施方式中，本文提供了特異性結合MASP-2的人源化抗體或其抗原結合片段，其包含具有SEQ ID NO：26所示的胺基酸序列的VH。
在一些實施方式中，本文提供了特異性結合MASP-2的人源化抗體或其抗原結合片段，其包含VH，其中所述VH與SEQ ID NO：27具有至少80%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%的序列相同性。所述人源化抗-MASP-2抗體或其抗原結合片段可以具有與SEQ ID NO：27具有至少85%序列相同性的VH。所述人源化抗-MASP-2抗體或其抗原結合片段可以具有與SEQ ID NO：27具有至少90%序列相同性的VH。所述人源化抗-MASP-2抗體或其抗原結合片段可以具有與SEQ ID NO：27具有至少95%序列相同性的VH。所述人源化抗-MASP-2抗體或其抗原結合片段可以具有與SEQ ID NO：27具有至少98%序列相同性的VH。在一些實施方式中，本文提供了特異性結合MASP-2的人源化抗體或其抗原結合片段，其包含具有SEQ ID NO：27所示的胺基酸序列的VH。
在一些實施方式中，本文提供了特異性結合MASP-2的人源化抗體或其抗原結合片段，其包含VH，其中所述VH與SEQ ID NO：28具有至少80%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%的序列相同性。所述人源化抗-MASP-2抗體或其抗原結合片段可以具有與SEQ ID NO：28具有至少85%序列相同性的VH。所述人源化抗-MASP-2抗體或其抗原結合片段可以具有與SEQ ID NO：28具有至少90%序列相同性的VH。所述人源化抗-MASP-2抗體或其抗原結合片段可以具有與SEQ ID NO：28具有至少95%序列相同性的VH。所述人源化抗-MASP-2抗體或其抗原結合片段可以具有與SEQ ID NO：28具有至少98%序列相同性的VH。在一些實施方式中，本文提供了特異性結合MASP-2的人源化抗體或其抗原結合片段，其包含具有SEQ ID NO：28所示的胺基酸序列的VH。
在一些實施方式中，本文提供了特異性結合MASP-2的人源化抗體或其抗原結合片段，其包含VH，其中所述VH與SEQ ID NO：29具有至少80%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%的序列相同性。所述人源化抗-MASP-2抗體或其抗原結合片段可以具有與SEQ ID NO：29具有至少85%序列相同性的VH。所述人源化抗-MASP-2抗體或其抗原結合片段可以具有與SEQ ID NO：29具有至少90%序列相同性的VH。所述人源化抗-MASP-2抗體或其抗原結合片段可以具有與SEQ ID NO：29具有至少95%序列相同性的VH。所述人源化抗-MASP-2抗體或其抗原結合片段可以具有與SEQ ID NO：29具有至少98%序列相同性的VH。在一些實施方式中，本文提供了特異性結合MASP-2的人源化抗體或其抗原結合片段，其包含具有SEQ ID NO：29所示的胺基酸序列的VH。
在一些實施方式中，本文提供了特異性結合MASP-2的人源化抗體或其抗原結合片段，其包含VH，其中所述VH與SEQ ID NO：30具有至少80%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%的序列相同性。所述人源化抗-MASP-2抗體或其抗原結合片段可以具有與SEQ ID NO：30具有至少85%序列相同性的VH。所述人源化抗-MASP-2抗體或其抗原結合片段可以具有與SEQ ID NO：30具有至少90%序列相同性的VH。所述人源化抗-MASP-2抗體或其抗原結合片段可以具有與SEQ ID NO：30具有至少95%序列相同性的VH。所述人源化抗-MASP-2抗體或其抗原結合片段可以具有與SEQ ID NO：30具有至少98%序列相同性的VH。在一些實施方式中，本文提供了特異性結合MASP-2的人源化抗體或其抗原結合片段，其包含具有SEQ ID NO：30所示的胺基酸序列的VH。
在一些實施方式中，本文提供了特異性結合MASP-2的人源化抗體或其抗原結合片段，其包含VH，其中所述VH與SEQ ID NO：31具有至少80%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%的序列相同性。所述人源化抗-MASP-2抗體或其抗原結合片段可以具有與SEQ ID NO：31具有至少85%序列相同性的VH。所述人源化抗-MASP-2抗體或其抗原結合片段可以具有與SEQ ID NO：31具有至少90%序列相同性的VH。所述人源化抗-MASP-2抗體或其抗原結合片段可以具有與SEQ ID NO：31具有至少95%序列相同性的VH。所述人源化抗-MASP-2抗體或其抗原結合片段可以具有與SEQ ID NO：31具有至少98%序列相同性的VH。在一些實施方式中，本文提供了特異性結合MASP-2的人源化抗體或其抗原結合片段，其包含具有SEQ ID NO：31所示的胺基酸序列的VH。
在一些實施方式中，本文提供了特異性結合MASP-2的人源化抗體或其抗原結合片段，其包含VH，其中所述VH與SEQ ID NO：32具有至少80%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%的序列相同性。所述人源化抗-MASP-2抗體或其抗原結合片段可以具有與SEQ ID NO：32具有至少85%序列相同性的VH。所述人源化抗-MASP-2抗體或其抗原結合片段可以具有與SEQ ID NO：32具有至少90%序列相同性的VH。所述人源化抗-MASP-2抗體或其抗原結合片段可以具有與SEQ ID NO：32具有至少95%序列相同性的VH。所述人源化抗-MASP-2抗體或其抗原結合片段可以具有與SEQ ID NO：32具有至少98%序列相同性的VH。在一些實施方式中，本文提供了特異性結合MASP-2的人源化抗體或其抗原結合片段，其包含具有SEQ ID NO：32所示的胺基酸序列的VH。
抗-MASP-2抗體或其抗原結合片段可以包含本文所揭示的任何VL和本文所揭示的任何VH的組合。在一些實施方式中，透過連接子連接VL和VH。所述連接子可以是柔性連接子或剛性連接子。在一些實施方式中，所述連接子具有胺基酸序列(GGGGS) n，n=1、2、3、4或5 (SEQ ID NO：77)。在一些實施方式中，所述連接子具有胺基酸序列(EAAAK) n，n=1、2、3、4或5 (SEQ ID NO：78)。在一些實施方式中，所述連接子具有胺基酸序列(PA) nP，nP=1、2、3、4或5 (SEQ ID NO：79)。
在一些實施方式中，本文提供了特異性結合MASP-2的抗體或其抗原結合片段，其包含(a) VL，所述VL包含來自具有SEQ ID NO：21或23所示的胺基酸序列的VL的VL CDR 1、2和3；和/或(b) VH，所述VH包含來自具有選自SEQ ID NO：22和24-32的胺基酸序列的VH的VH CDR 1、2和3。
在一些實施方式中，本文提供了特異性結合MASP-2的抗體或其抗原結合片段，其包含VL，其中所述VL包含來自具有SEQ ID NO：21所示的胺基酸序列的VL的VL CDR 1、2和3。在一些實施方式中，本文提供了特異性結合MASP-2的抗體或其抗原結合片段，其包含VL，其中所述VL包含來自具有SEQ ID NO：23所示的胺基酸序列的VL的VL CDR 1、2和3。
在一些實施方式中，本文提供了特異性結合MASP-2的人源化抗體或其抗原結合片段，其包含VH，其中所述VH包含來自具有SEQ ID NO：22所示的胺基酸序列的VH的VH CDR 1、2和3。在一些實施方式中，本文提供了特異性結合MASP-2的抗體或其抗原結合片段，其包含VH，其中所述VH包含來自具有SEQ ID NO：24所示的胺基酸序列的VH的VH CDR 1、2和3。在一些實施方式中，本文提供了特異性結合MASP-2的抗體或其抗原結合片段，其包含VH，其中所述VH包含來自具有SEQ ID NO：25所示的胺基酸序列的VH的VH CDR 1、2和3。在一些實施方式中，本文提供了特異性結合MASP-2的抗體或其抗原結合片段，其包含VH，其中所述VH包含來自具有SEQ ID NO：26所示的胺基酸序列的VH的VH CDR 1、2和3。在一些實施方式中，本文提供了特異性結合MASP-2的抗體或其抗原結合片段，其包含VH，其中所述VH包含來自具有SEQ ID NO：27所示的胺基酸序列的VH的VH CDR 1、2和3。在一些實施方式中，本文提供了特異性結合MASP-2的抗體或其抗原結合片段，其包含VH，其中所述VH包含來自具有SEQ ID NO：28所示的胺基酸序列的VH的VH CDR 1、2和3。在一些實施方式中，本文提供了特異性結合MASP-2的抗體或其抗原結合片段，其包含VH，其中所述VH包含來自具有SEQ ID NO：29所示的胺基酸序列的VH的VH CDR 1、2和3。在一些實施方式中，本文提供了特異性結合MASP-2的抗體或其抗原結合片段，其包含VH，其中所述VH包含來自具有SEQ ID NO：30所示的胺基酸序列的VH的VH CDR 1、2和3。在一些實施方式中，本文提供了特異性結合MASP-2的抗體或其抗原結合片段，其包含VH，其中所述VH包含來自具有SEQ ID NO：31所示的胺基酸序列的VH的VH CDR 1、2和3。在一些實施方式中，本文提供了特異性結合MASP-2的抗體或其抗原結合片段，其包含VH，其中所述VH包含來自具有SEQ ID NO：32所示的胺基酸序列的VH的VH CDR 1、2和3。
在一些實施方式中，本文提供了特異性結合MASP-2的抗體或其抗原結合片段，其包含VL和VH，其中所述VL包含來自具有SEQ ID NO：21所示的胺基酸序列的VL的VL CDR1、CDR2和CDR3，並且所述VH包含來自具有SEQ ID NO：22所示的胺基酸序列的VH的VH CDR1、CDR2和CDR3。在一些實施方式中，本文提供了特異性結合MASP-2的抗體或其抗原結合片段，其包含VL和VH，其中所述VL包含來自具有SEQ ID NO：23所示的胺基酸序列的VL的VL CDR1、CDR2和CDR3，並且所述VH包含來自具有SEQ ID NO：24所示的胺基酸序列的VH的VH CDR1、CDR2和CDR3。在一些實施方式中，所述VL包含來自具有SEQ ID NO：23所示的胺基酸序列的VL的VL CDR1、CDR2和CDR3，並且所述VH包含來自具有SEQ ID NO：25所示的胺基酸序列的VH的VH CDR1、CDR2和CDR3。在一些實施方式中，所述VL包含來自具有SEQ ID NO：23所示的胺基酸序列的VL的VL CDR1、CDR2和CDR3，並且所述VH包含來自具有SEQ ID NO：26所示的胺基酸序列的VH的VH CDR1、CDR2和CDR3。在一些實施方式中，所述VL包含來自具有SEQ ID NO：23所示的胺基酸序列的VL的VL CDR1、CDR2和CDR3，並且所述VH包含來自具有SEQ ID NO：27所示的胺基酸序列的VH的VH CDR1、CDR2和CDR3。在一些實施方式中，所述VL包含來自具有SEQ ID NO：23所示的胺基酸序列的VL的VL CDR1、CDR2和CDR3，並且所述VH包含來自具有SEQ ID NO：28所示的胺基酸序列的VH的VH CDR1、CDR2和CDR3。在一些實施方式中，所述VL包含來自具有SEQ ID NO：23所示的胺基酸序列的VL的VL CDR1、CDR2和CDR3，並且所述VH包含來自具有SEQ ID NO：29所示的胺基酸序列的VH的VH CDR1、CDR2和CDR3。在一些實施方式中，所述VL包含來自具有SEQ ID NO：23所示的胺基酸序列的VL的VL CDR1、CDR2和CDR3，並且所述VH包含來自具有SEQ ID NO：30所示的胺基酸序列的VH的VH CDR1、CDR2和CDR3。在一些實施方式中，所述VL包含來自具有SEQ ID NO：23所示的胺基酸序列的VL的VL CDR1、CDR2和CDR3，並且所述VH包含來自具有SEQ ID NO：31所示的胺基酸序列的VH的VH CDR1、CDR2和CDR3。在一些實施方式中，所述VL包含來自具有SEQ ID NO：23所示的胺基酸序列的VL的VL CDR1、CDR2和CDR3，並且所述VH包含來自具有SEQ ID NO：32所示的胺基酸序列的VH的VH CDR1、CDR2和CDR3。
在一些實施方式中，本文所提供的抗-MASP-2抗體或其抗原-結合片段是表示為3E10的抗體。在一些實施方式中，本文所提供的抗-MASP-2抗體或其抗原-結合片段具有來自3E10的VL (SEQ ID NO：21)。在一些實施方式中，本文所提供的抗-MASP-2抗體或其抗原-結合片段具有來自3E10的VH (SEQ ID NO：22)。本文所提供的抗-MASP-2抗體或其抗原-結合片段可以具有來自3E10的VL和VH兩者。在一些實施方式中，本文所提供的抗-MASP-2抗體或其抗原-結合片段具有VL，所述VL包含來自來源於3E10的VL (SEQ ID NO：21)的VL CDR 1、2和3。在一些實施方式中，本文所提供的抗-MASP-2抗體或其抗原-結合片段具有VH，所述VH包含來自來源於3E10的VH (SEQ ID NO：22)的VH CDR 1、2和3。本文所提供的抗-MASP-2抗體或其抗原-結合片段可以具有包含VL CDR 1、2和3的VL和包含VH CDR 1、2和3的VH，所述VL CDR 1、2和3和VH CDR 1、2和3分別來自3E10的VL和VH。在一些實施方式中，本文所提供的抗-MASP-2抗體或其抗原-結合片段是3E10的變異體。3E10變異體可以具有作為3E10的VL的變異體的VL，所述變異體在SEQ ID NO：21中具有多至約5個胺基酸替換、添加和/或缺失。3E10變異體可以具有作為3E10的VH的變異體的VH，所述變異體在SEQ ID NO：22中具有多至約5個胺基酸替換、添加和/或缺失。所述胺基酸替換、添加和/或缺失可以處於VH CDR或VL CDR中。在一些實施方式中，所述胺基酸替換、添加和/或缺失不在CDR中。在一些實施方式中，3E10變異體具有多至約5個守恆胺基酸替換。在一些實施方式中，3E10變異體具有多至3個守恆胺基酸替換。在一些實施方式中，本文所提供的抗-MASP-2抗體或其抗原-結合片段是來源於3E10的人源化抗體或抗原-結合片段。在一些實施方式中，本文所提供的抗-MASP-2抗體或其抗原-結合片段是來源於3E10的人抗體或抗原-結合片段。
在一些實施方式中，本文提供了人源化3E10。在一些實施方式中，本文所提供的人源化抗-MASP-2抗體或其抗原-結合片段包含具有SEQ ID NO：23所示的胺基酸序列的VL。在一些實施方式中，本文所提供的人源化抗-MASP-2抗體或其抗原-結合片段包含具有選自SEQ ID NO：24-32的胺基酸序列的VH。在一些實施方式中，本文所提供的人源化抗-MASP-2抗體或其抗原-結合片段包含具有SEQ ID NO：23所示的胺基酸序列的VL和具有選自SEQ ID NO：24-32的胺基酸序列的VH。在一些實施方式中，本文所提供的抗-MASP-2抗體或其抗原-結合片段是本文所提供的人源化3E10的變異體。所述變異體可以具有VL，所述VL是在SEQ ID NO：23所示的胺基酸序列中具有多至約5個胺基酸替換、添加和/或缺失的人源化3E10的VL的變異體。所述變異體可以具有VH，所述VH是在選自SEQ ID NO：24-32的胺基酸序列中具有多至約5個胺基酸替換、添加和/或缺失的人源化3E10的VH的變異體。在一些實施方式中，人源化3E10的變異體具有多至約5個守恆胺基酸替換。
在一些實施方式中，本文還提供了與以上提供的抗體或抗原-結合片段競爭對MASP-2 (例如，人MASP-2)的結合的抗體或抗原結合片段。“與另一種抗體競爭對標靶的結合的”抗體表示(部分或完全)抑制其它抗體與標靶的結合的抗體。可以使用已知的競爭實驗，例如，BIACORE®表面電漿共振(SPR)分析確定兩種抗體是否彼此競爭與標靶的結合，即一種抗體是否抑制其它抗體與標靶的結合並且達到什麼程度。在一些實施方式中，抗-MASP-2抗體或抗原-結合片段與另一種抗體或抗原-結合片段競爭與MASP-2的結合，並且將所述結合抑制至少50%、60%、70%、80%、90%或100%。可以如以下所述進行競爭測定，例如，Ed Harlow and David Lane, Cold Spring Harb Protoc; 2006；doi: l0.H0l/pdb.prot4277或者在Ed Harlow and David Lane的“Using Antibodies”的第11章中，Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, USA 1999。
在一些實施方式中，本文提供了與本文所揭示的抗-MASP-2抗體或抗原-結合片段競爭對人MASP-2的結合的抗體或抗原結合片段。在一些實施方式中，本文提供了與3E10競爭對人MASP-2的結合的抗體或抗原結合片段。在一些實施方式中，本文提供了與本文所揭示的人源化3E10競爭對人MASP-2的結合的抗體或抗原結合片段。
本發明揭露還考慮了與本文所描述的重組、單株、嵌合、人源化和人抗體或其抗體片段基本相同的其它變異體或等價形式。在一些實施方式中，期望改善抗體的結合親和力。在一些實施方式中，期望調節抗體的生物學性質，包括(但不限於)特異性、熱穩定性、表現水準、效應因子功能、醣基化、免疫原性和/或溶解度。本領域技術人員將理解胺基酸變化可以改變抗體的轉譯後過程，如改變醣基化位元點的數目或位置或改變膜錨定特徵。
變化可以是編碼抗體或多肽的一個或多個核苷酸的替換、缺失或插入，其導致與天然抗體或多肽序列相比，胺基酸序列的改變。在一些實施方式中，胺基酸替換可以是由於一個胺基酸被具有類似結構和/或化學性質的另一個胺基酸替換，如白胺酸被絲胺酸替換，例如，守恆胺基酸替換。插入或缺失可以在約1至5個胺基酸的範圍內。在一些實施方式中，替換、缺失或插入包括相對於母體分子，小於25個胺基酸替換、小於20個胺基酸替換、小於15個胺基酸替換、小於10個胺基酸替換、小於5個胺基酸替換、小於4個胺基酸替換、小於3個胺基酸替換或小於2個胺基酸替換。在一些實施方式中，可以透過在序列中系統產生插入、缺失或替換並測試與母體蛋白相比所產生的變異體蛋白的活性，確定生物學有用和/或相關的胺基酸序列中的變化。
在本領域中已知抗體恆定區媒介一些效應因子功能並且這些效應因子功能可以基於抗體同種型改變。例如，補體的C1組分與IgG或IgM抗體的Fc區的結合(結合至抗原)活化補體系統。補體的活化在細胞病原體的調理和溶胞中是重要的。補體活化還刺激發炎反應並且可以參與自體免疫超敏反應。另外，抗體的Fc區可以結合表現Fc受體(FcR)的細胞。存在一些對不同種類的抗體，包括IgG (γ受體)、IgE (ε受體)、IgA (α受體)和IgM (μ受體)特異的Fc受體。抗體對細胞表面上的Fc受體的結合引發了一些重要且多樣的生物學反應，包括抗體塗覆顆粒的吞入和破壞、免疫複合物的清除、殺手細胞對抗體塗覆的標靶細胞的溶胞(稱為抗體-依賴性細胞毒性或ADCC)，發炎介質的釋放、胎盤轉運和免疫球蛋白產生的控制。
在一些實施方式中，本文所描述的抗-MASP-2抗體或抗原-結合片段包含人IgA抗體的至少一個恆定區。在一些實施方式中，本文所描述的抗-MASP-2抗體或抗原-結合片段包含人IgD抗體的至少一個恆定區。在一些實施方式中，本文所描述的抗-MASP-2抗體或抗原-結合片段包含人IgE抗體的至少一個恆定區。在一些實施方式中，本文所描述的抗-MASP-2抗體或抗原-結合片段包含人IgG抗體的至少一個恆定區。在一些實施方式中，本文所描述的抗-MASP-2抗體或抗原-結合片段包含人IgM抗體的至少一個恆定區。在一些實施方式中，本文所描述的抗-MASP-2抗體或抗原-結合片段包含人IgG1抗體的至少一個恆定區。在一些實施方式中，本文所描述的抗-MASP-2抗體或抗原-結合片段包含人IgG2抗體的至少一個恆定區。在一些實施方式中，本文所描述的抗-MASP-2抗體或抗原-結合片段包含人IgG3抗體的至少一個恆定區。在一些實施方式中，本文所描述的抗-MASP-2抗體或抗原-結合片段包含人IgG4抗體的至少一個恆定區。
在一些實施方式中，所述恆定區中的至少一種或多種已修飾或在本文所描述的抗-MASP-2抗體或抗原-結合片段中缺失。在一些實施方式中，所述抗體包含對3個重鏈恆定區(CH1、CH2或CH3)中的一個或多個和/或對輕鏈恆定區(CL)的修飾。在一些實施方式中，所述修飾的抗體的重鏈恆定區包含至少一個人恆定區。在一些實施方式中，所述修飾的抗體的重鏈恆定區包含不止一個人恆定區。在一些實施方式中，對恆定區的修飾包括一個或多個胺基酸在一個或多個區域中的添加、缺失或替換。在一些實施方式中，從修飾抗體的恆定區部分或完全缺失一個或多個區域。在一些實施方式中，已從抗體(ΔCH2建構物)除去整個CH2域。在一些實施方式中，透過短胺基酸間隔臂替代缺失的恆定區，所述短胺基酸間隔臂提供了通常由不存在的恆定區所賦予的一些分子柔性。在一些實施方式中，修飾的抗體包含直接融合至抗體樞紐區的CH3域。在一些實施方式中，修飾的抗體包含插入在樞紐區和修飾的CH2和/或CH3域之間的胜肽間隔臂。
在一些實施方式中，抗-MASP-2抗體或抗原-結合片段包含Fc區。在一些實施方式中，經由樞紐融合Fc區。所述樞紐可以是IgG1樞紐、IgG2樞紐或IgG3樞紐。人IgG1、IgG2、IgG3和IgG4的Fc區的胺基酸序列是本領域那些技術人員已知的。在一些情況下，已在天然抗體中辨識了具有胺基酸變化的Fc區。在一些實施方式中，所述修飾的抗體(例如，修飾的Fc區)提供了改變的效應因子功能，其反過來影響抗體的生物學譜。例如，在一些實施方式中，當它迴圈時，恆定區的缺失或去活化(透過點突變或其它方式)降低了修飾抗體的Fc受體結合。在一些實施方式中，所述恆定區修飾降低了抗體的免疫原性。在一些實施方式中，所述恆定區修飾提高了抗體的血清半衰期。在一些實施方式中，所述恆定區修飾降低了抗體的血清半衰期。在一些實施方式中，所述恆定區修飾降低或移除了抗體的ADCC和/或補體依賴性細胞毒性(CDC)。在一些實施方式中，具有對應IgG2或IgG4殘基的人IgG1 Fc區中的特異性胺基酸替換降低了修飾抗體中的效應因子功能(例如，ADCC和CDC)。在一些實施方式中，抗體不具有一種或多種效應因子功能[例如，“無效應因子(effectorless)”抗體]。在一些實施方式中，所述抗體沒有ADCC活性和/或沒有CDC活性。在一些實施方式中，所述抗體不結合Fc受體和/或補體因數。在一些實施方式中，所述抗體不具有效應因子功能。在一些實施方式中，所述恆定區修飾提高或增強了抗體的ADCC和/或CDC。在一些實施方式中，修飾所述恆定區以消除二硫鍵或者寡醣部分。在一些實施方式中，修飾所述恆定區以添加/替換一個或多個胺基酸以提供一種或多種細胞毒素、寡醣或碳水化合物連接位址。在一些實施方式中，抗-MASP-2抗體或抗原-結合片段包含與天然Fc區相比，在特定胺基酸位置透過替換工程化的變異體Fc區。在一些實施方式中，本文所描述的抗-MASP-2抗體或抗原-結合片段包含IgG1重鏈恆定區，所述IgG1重鏈恆定區包含選自下列的一個或多個胺基酸替換：K214、L234、L235、G237、D356和L358，其根據EU指數編號。K214取代可以是(例如) K214R。L234取代可以是(例如) L234A或L234E。L235取代可以是(例如) L235A或L235E。G237取代可以是(例如) G237A。D356取代可以是(例如) D356E。L358取代可以是(例如) L358M。在一些實施方式中，本文所描述的抗-MASP-2抗體或抗原-結合片段包含IgG1重鏈恆定區，所述IgG1重鏈恆定區包含選自下列的一個或多個胺基酸替換：K214R、L234A、L235E、G237A、D356E和L358M，其根據EU指數編號。在一些實施方式中，所述IgG1重鏈恆定區包含選自下列的一個或多個胺基酸替換：K214R、L234A、L235E、G237A、A330S、P331S、D356E和L358M，其根據EU指數編號。在一些實施方式中，所述IgG1重鏈恆定區包含選自下列的一個或多個胺基酸替換：K214R、C226S、C229S和P238S，其根據EU指數編號。在一些實施方式中，所述IgG1重鏈恆定區包含選自下列的一個或多個胺基酸替換：K214R、D356E和L358M，其根據EU指數編號。在一些實施方式中，所述IgG1重鏈恆定區包含選自下列的一個或多個胺基酸替換：S131C、K133R、G137E、G138S、Q196K、I199T、N203D、K214R、C226S、C229S和P238S，其根據EU指數編號。
在一些實施方式中，本文所描述的抗-MASP-2抗體或抗原-結合片段包含IgG4重鏈恆定區，所述IgG4重鏈恆定區包含提高抗體或抗原-結合片段的終未半衰期的一個或多個胺基酸替換。如本領域中所理解的，終未半衰期，也稱為生物半衰期表示在施用後和已達到分佈的准平衡之後血漿/血液濃度衰減50%所需的時間。所述一個或多個胺基酸替換可以選自：S228、F234、L235、M252、S254、T256、K288、T307、M428、N434、H435和Y436，其根據EU指數編號。在一些實施方式中，所述IgG4重鏈恆定區在S228具有胺基酸替換。在一些實施方式中，所述IgG4重鏈恆定區在F234具有胺基酸替換。在一些實施方式中，所述IgG4重鏈恆定區在L235具有胺基酸替換。在一些實施方式中，所述IgG4重鏈恆定區在M252具有胺基酸替換。在一些實施方式中，所述IgG4重鏈恆定區在S254具有胺基酸替換。在一些實施方式中，所述IgG4重鏈恆定區在T256具有胺基酸替換。在一些實施方式中，所述IgG4重鏈恆定區在K288具有胺基酸替換。在一些實施方式中，所述IgG4重鏈恆定區在T307具有胺基酸替換。在一些實施方式中，所述IgG4重鏈恆定區在M428具有胺基酸替換。在一些實施方式中，所述IgG4重鏈恆定區在N434具有胺基酸替換。在一些實施方式中，所述IgG4重鏈恆定區在H435具有胺基酸替換。在一些實施方式中，所述IgG4重鏈恆定區在Y436具有胺基酸替換。S228處的胺基酸替換可以是(例如) S228P。F234處的胺基酸替換可以是(例如) F234A。L235處的胺基酸替換可以是(例如) L235A。M252處的胺基酸替換可以是(例如) M252Y。S254處的胺基酸替換可以是(例如) S254T。T256處的胺基酸替換可以是(例如) T256E。K288處的胺基酸替換可以是(例如) K288A。T307處的胺基酸替換可以是(例如) T307Q或T307H。M428處的胺基酸替換可以是(例如) M428L。N434處的胺基酸替換可以是(例如) N434A。H435處的胺基酸替換可以是(例如) H435A或H435R。Y436處的胺基酸替換可以是(例如) Y436T或Y436F。
在一些實施方式中，本文所描述的抗-MASP-2抗體和抗原結合片段包含透過選自下列的胺基酸替換修飾的IgG4重鏈恆定區：i) S228P；ii) F234A和L235A；iii) S228P、F234A和L235A；(iv) T307H和N434A；v) M252Y、S254T和T256E；vi) M428L、N434A和Y436T；vii) S228P、M252Y、S254T和T256E；viii) S228P、F234A、L235A、M252Y、S254T和T256E；ix) S228P、F234A、L235A、T307Q和N434A；和(x) M252Y、S254T、T307H和N434A。
在一些實施方式中，本文所描述的抗-MASP-2抗體和抗原結合片段包含透過胺基酸替換S228P修飾的人IgG4重鏈的變異體。在一些實施方式中，本文所描述的抗-MASP-2抗體和抗原結合片段包含透過胺基酸替換F234A和L235A修飾的人IgG4重鏈的變異體。在一些實施方式中，本文所描述的抗-MASP-2抗體和抗原結合片段包含透過胺基酸替換S228P、F234A和L235A修飾的人IgG4重鏈的變異體。在一些實施方式中，本文所描述的抗-MASP-2抗體和抗原結合片段包含透過胺基酸替換T307H和N434A修飾的人IgG4重鏈的變異體。在一些實施方式中，本文所描述的抗-MASP-2抗體和抗原結合片段包含透過胺基酸替換M252Y、S254T和T256E修飾的人IgG4重鏈的變異體。在一些實施方式中，本文所描述的抗-MASP-2抗體和抗原結合片段包含透過胺基酸替換M428L、N434A和Y436T修飾的人IgG4重鏈的變異體。在一些實施方式中，本文所描述的抗-MASP-2抗體和抗原結合片段包含透過胺基酸替換S228P、M252Y、S254T和T256E修飾的人IgG4重鏈的變異體。在一些實施方式中，本文所描述的抗-MASP-2抗體和抗原結合片段包含透過胺基酸替換S228P、F234A、L235A、M252Y、S254T和T256E修飾的人IgG4重鏈的變異體。在一些實施方式中，本文所描述的抗-MASP-2抗體和抗原結合片段包含透過胺基酸替換S228P、F234A、L235A、T307Q和N434A修飾的人IgG4重鏈的變異體。在一些實施方式中，本文所描述的抗-MASP-2抗體和抗原結合片段包含透過胺基酸替換M252Y、S254T、T307H和N434A修飾的人IgG4重鏈的變異體。
在一些實施方式中，本文提供了抗-MASP-2抗體或抗原結合片段，其包含輕鏈，所述輕鏈具有SEQ ID NO：33所示的胺基酸序列，或其具有與SEQ ID NO：33具有至少約80%、約85%、約90%、約91%、約92%、約93%、約94%、約95%、約96%、約97%、約98%、約99%或100%的相同性的胺基酸序列的變異體。
在一些實施方式中，本文提供了抗-MASP-2抗體或抗原結合片段，其包含重鏈，所述重鏈具有SEQ ID NO：34所示的胺基酸序列，或其具有與SEQ ID NO：34具有至少約80%、約85%、約90%、約91%、約92%、約93%、約94%、約95%、約96%、約97%、約98%、約99%或100%的相同性的胺基酸序列的變異體。在一些實施方式中，本文提供了抗-MASP-2抗體或抗原結合片段，其包含具有選自SEQ ID NO：34-74的胺基酸序列的重鏈。在一些實施方式中，本文提供了抗-MASP-2抗體或抗原結合片段，其包含具有SEQ ID NO：34所示的胺基酸序列的重鏈。在一些實施方式中，本文提供了抗-MASP-2抗體或抗原結合片段，其包含具有SEQ ID NO：35所示的胺基酸序列的重鏈。在一些實施方式中，本文提供了抗-MASP-2抗體或抗原結合片段，其包含具有SEQ ID NO：36所示的胺基酸序列的重鏈。在一些實施方式中，本文提供了抗-MASP-2抗體或抗原結合片段，其包含具有SEQ ID NO：37所示的胺基酸序列的重鏈。在一些實施方式中，本文提供了抗-MASP-2抗體或抗原結合片段，其包含具有SEQ ID NO：38所示的胺基酸序列的重鏈。在一些實施方式中，本文提供了抗-MASP-2抗體或抗原結合片段，其包含具有SEQ ID NO：39所示的胺基酸序列的重鏈。在一些實施方式中，本文提供了抗-MASP-2抗體或抗原結合片段，其包含具有SEQ ID NO：40所示的胺基酸序列的重鏈。在一些實施方式中，本文提供了抗-MASP-2抗體或抗原結合片段，其包含具有SEQ ID NO：41所示的胺基酸序列的重鏈。在一些實施方式中，本文提供了抗-MASP-2抗體或抗原結合片段，其包含具有SEQ ID NO：42所示的胺基酸序列的重鏈。在一些實施方式中，本文提供了抗-MASP-2抗體或抗原結合片段，其包含具有SEQ ID NO：43所示的胺基酸序列的重鏈。在一些實施方式中，本文提供了抗-MASP-2抗體或抗原結合片段，其包含具有SEQ ID NO：44所示的胺基酸序列的重鏈。在一些實施方式中，本文提供了抗-MASP-2抗體或抗原結合片段，其包含具有SEQ ID NO：45所示的胺基酸序列的重鏈。在一些實施方式中，本文提供了抗-MASP-2抗體或抗原結合片段，其包含具有SEQ ID NO：46所示的胺基酸序列的重鏈。在一些實施方式中，本文提供了抗-MASP-2抗體或抗原結合片段，其包含具有SEQ ID NO：47所示的胺基酸序列的重鏈。在一些實施方式中，本文提供了抗-MASP-2抗體或抗原結合片段，其包含具有SEQ ID NO：48所示的胺基酸序列的重鏈。在一些實施方式中，本文提供了抗-MASP-2抗體或抗原結合片段，其包含具有SEQ ID NO：49所示的胺基酸序列的重鏈。在一些實施方式中，本文提供了抗-MASP-2抗體或抗原結合片段，其包含具有SEQ ID NO：50所示的胺基酸序列的重鏈。在一些實施方式中，本文提供了抗-MASP-2抗體或抗原結合片段，其包含具有SEQ ID NO：51所示的胺基酸序列的重鏈。在一些實施方式中，本文提供了抗-MASP-2抗體或抗原結合片段，其包含具有SEQ ID NO：52所示的胺基酸序列的重鏈。在一些實施方式中，本文提供了抗-MASP-2抗體或抗原結合片段，其包含具有SEQ ID NO：53所示的胺基酸序列的重鏈。在一些實施方式中，本文提供了抗-MASP-2抗體或抗原結合片段，其包含具有SEQ ID NO：54所示的胺基酸序列的重鏈。在一些實施方式中，本文提供了抗-MASP-2抗體或抗原結合片段，其包含具有SEQ ID NO：55所示的胺基酸序列的重鏈。在一些實施方式中，本文提供了抗-MASP-2抗體或抗原結合片段，其包含具有SEQ ID NO：56所示的胺基酸序列的重鏈。在一些實施方式中，本文提供了抗-MASP-2抗體或抗原結合片段，其包含具有SEQ ID NO：57所示的胺基酸序列的重鏈。在一些實施方式中，本文提供了抗-MASP-2抗體或抗原結合片段，其包含具有SEQ ID NO：58所示的胺基酸序列的重鏈。在一些實施方式中，本文提供了抗-MASP-2抗體或抗原結合片段，其包含具有SEQ ID NO：59所示的胺基酸序列的重鏈。在一些實施方式中，本文提供了抗-MASP-2抗體或抗原結合片段，其包含具有SEQ ID NO：60所示的胺基酸序列的重鏈。在一些實施方式中，本文提供了抗-MASP-2抗體或抗原結合片段，其包含具有SEQ ID NO：61所示的胺基酸序列的重鏈。在一些實施方式中，本文提供了抗-MASP-2抗體或抗原結合片段，其包含具有SEQ ID NO：62所示的胺基酸序列的重鏈。在一些實施方式中，本文提供了抗-MASP-2抗體或抗原結合片段，其包含具有SEQ ID NO：63所示的胺基酸序列的重鏈。在一些實施方式中，本文提供了抗-MASP-2抗體或抗原結合片段，其包含具有SEQ ID NO：64所示的胺基酸序列的重鏈。在一些實施方式中，本文提供了抗-MASP-2抗體或抗原結合片段，其包含具有SEQ ID NO：65所示的胺基酸序列的重鏈。在一些實施方式中，本文提供了抗-MASP-2抗體或抗原結合片段，其包含具有SEQ ID NO：66所示的胺基酸序列的重鏈。在一些實施方式中，本文提供了抗-MASP-2抗體或抗原結合片段，其包含具有SEQ ID NO：67所示的胺基酸序列的重鏈。在一些實施方式中，本文提供了抗-MASP-2抗體或抗原結合片段，其包含具有SEQ ID NO：68所示的胺基酸序列的重鏈。在一些實施方式中，本文提供了抗-MASP-2抗體或抗原結合片段，其包含具有SEQ ID NO：69所示的胺基酸序列的重鏈。在一些實施方式中，本文提供了抗-MASP-2抗體或抗原結合片段，其包含具有SEQ ID NO：70所示的胺基酸序列的重鏈。在一些實施方式中，本文提供了抗-MASP-2抗體或抗原結合片段，其包含具有SEQ ID NO：71所示的胺基酸序列的重鏈。在一些實施方式中，本文提供了抗-MASP-2抗體或抗原結合片段，其包含具有SEQ ID NO：72所示的胺基酸序列的重鏈。在一些實施方式中，本文提供了抗-MASP-2抗體或抗原結合片段，其包含具有SEQ ID NO：73所示的胺基酸序列的重鏈。在一些實施方式中，本文提供了抗-MASP-2抗體或抗原結合片段，其包含具有SEQ ID NO：74所示的胺基酸序列的重鏈。
在一些實施方式中，本文提供了抗-MASP-2抗體或抗原結合片段，其包含輕鏈，所述輕鏈具有SEQ ID NO：33所示的胺基酸序列或其具有與SEQ ID NO：33具有至少約80%、約85%、約90%、約91%、約92%、約93%、約94%、約95%、約96%、約97%、約98%、約99%或100%的相同性的胺基酸序列的變異體，和重鏈，所述重鏈具有SEQ ID NO：34所示的胺基酸序列或其具有與SEQ ID NO：34具有至少約80%、約85%、約90%、約91%、約92%、約93%、約94%、約95%、約96%、約97%、約98%、約99%或100%的相同性的胺基酸序列的變異體。
在一些實施方式中，本文提供了抗-MASP-2抗體或抗原結合片段，其包含分別具有SEQ ID NO：33和34所示的胺基酸序列的輕鏈和重鏈。在一些實施方式中，本文提供了抗-MASP-2抗體或抗原結合片段，其包含分別具有SEQ ID NO：33和35所示的胺基酸序列的輕鏈和重鏈。在一些實施方式中，本文提供了抗-MASP-2抗體或抗原結合片段，其包含分別具有SEQ ID NO：33和36所示的胺基酸序列的輕鏈和重鏈。在一些實施方式中，本文提供了抗-MASP-2抗體或抗原結合片段，其包含分別具有SEQ ID NO：33和37所示的胺基酸序列的輕鏈和重鏈。在一些實施方式中，本文提供了抗-MASP-2抗體或抗原結合片段，其包含分別具有SEQ ID NO：33和38所示的胺基酸序列的輕鏈和重鏈。在一些實施方式中，本文提供了抗-MASP-2抗體或抗原結合片段，其包含分別具有SEQ ID NO：33和39所示的胺基酸序列的輕鏈和重鏈。在一些實施方式中，本文提供了抗-MASP-2抗體或抗原結合片段，其包含分別具有SEQ ID NO：33和40所示的胺基酸序列的輕鏈和重鏈。在一些實施方式中，本文提供了抗-MASP-2抗體或抗原結合片段，其包含分別具有SEQ ID NO：33和41所示的胺基酸序列的輕鏈和重鏈。在一些實施方式中，本文提供了抗-MASP-2抗體或抗原結合片段，其包含分別具有SEQ ID NO：33和42所示的胺基酸序列的輕鏈和重鏈。在一些實施方式中，本文提供了抗-MASP-2抗體或抗原結合片段，其包含分別具有SEQ ID NO：33和43所示的胺基酸序列的輕鏈和重鏈。在一些實施方式中，本文提供了抗-MASP-2抗體或抗原結合片段，其包含分別具有SEQ ID NO：33和44所示的胺基酸序列的輕鏈和重鏈。在一些實施方式中，本文提供了抗-MASP-2抗體或抗原結合片段，其包含分別具有SEQ ID NO：33和45所示的胺基酸序列的輕鏈和重鏈。在一些實施方式中，本文提供了抗-MASP-2抗體或抗原結合片段，其包含分別具有SEQ ID NO：33和46所示的胺基酸序列的輕鏈和重鏈。在一些實施方式中，本文提供了抗-MASP-2抗體或抗原結合片段，其包含分別具有SEQ ID NO：33和47所示的胺基酸序列的輕鏈和重鏈。在一些實施方式中，本文提供了抗-MASP-2抗體或抗原結合片段，其包含分別具有SEQ ID NO：33和48所示的胺基酸序列的輕鏈和重鏈。在一些實施方式中，本文提供了抗-MASP-2抗體或抗原結合片段，其包含分別具有SEQ ID NO：33和49所示的胺基酸序列的輕鏈和重鏈。在一些實施方式中，本文提供了抗-MASP-2抗體或抗原結合片段，其包含分別具有SEQ ID NO：33和50所示的胺基酸序列的輕鏈和重鏈。在一些實施方式中，本文提供了抗-MASP-2抗體或抗原結合片段，其包含分別具有SEQ ID NO：33和51所示的胺基酸序列的輕鏈和重鏈。在一些實施方式中，本文提供了抗-MASP-2抗體或抗原結合片段，其包含分別具有SEQ ID NO：33和52所示的胺基酸序列的輕鏈和重鏈。在一些實施方式中，本文提供了抗-MASP-2抗體或抗原結合片段，其包含分別具有SEQ ID NO：33和53所示的胺基酸序列的輕鏈和重鏈。在一些實施方式中，本文提供了抗-MASP-2抗體或抗原結合片段，其包含分別具有SEQ ID NO：33和54所示的胺基酸序列的輕鏈和重鏈。在一些實施方式中，本文提供了抗-MASP-2抗體或抗原結合片段，其包含分別具有SEQ ID NO：33和55所示的胺基酸序列的輕鏈和重鏈。在一些實施方式中，本文提供了抗-MASP-2抗體或抗原結合片段，其包含分別具有SEQ ID NO：33和56所示的胺基酸序列的輕鏈和重鏈。在一些實施方式中，本文提供了抗-MASP-2抗體或抗原結合片段，其包含分別具有SEQ ID NO：33和57所示的胺基酸序列的輕鏈和重鏈。在一些實施方式中，本文提供了抗-MASP-2抗體或抗原結合片段，其包含分別具有SEQ ID NO：33和58所示的胺基酸序列的輕鏈和重鏈。在一些實施方式中，本文提供了抗-MASP-2抗體或抗原結合片段，其包含分別具有SEQ ID NO：33和59所示的胺基酸序列的輕鏈和重鏈。在一些實施方式中，本文提供了抗-MASP-2抗體或抗原結合片段，其包含分別具有SEQ ID NO：33和60所示的胺基酸序列的輕鏈和重鏈。在一些實施方式中，本文提供了抗-MASP-2抗體或抗原結合片段，其包含分別具有SEQ ID NO：33和61所示的胺基酸序列的輕鏈和重鏈。在一些實施方式中，本文提供了抗-MASP-2抗體或抗原結合片段，其包含分別具有SEQ ID NO：33和62所示的胺基酸序列的輕鏈和重鏈。在一些實施方式中，本文提供了抗-MASP-2抗體或抗原結合片段，其包含分別具有SEQ ID NO：33和63所示的胺基酸序列的輕鏈和重鏈。在一些實施方式中，本文提供了抗-MASP-2抗體或抗原結合片段，其包含分別具有SEQ ID NO：33和64所示的胺基酸序列的輕鏈和重鏈。在一些實施方式中，本文提供了抗-MASP-2抗體或抗原結合片段，其包含分別具有SEQ ID NO：33和65所示的胺基酸序列的輕鏈和重鏈。在一些實施方式中，本文提供了抗-MASP-2抗體或抗原結合片段，其包含分別具有SEQ ID NO：33和66所示的胺基酸序列的輕鏈和重鏈。在一些實施方式中，本文提供了抗-MASP-2抗體或抗原結合片段，其包含分別具有SEQ ID NO：33和67所示的胺基酸序列的輕鏈和重鏈。在一些實施方式中，本文提供了抗-MASP-2抗體或抗原結合片段，其包含分別具有SEQ ID NO：33和68所示的胺基酸序列的輕鏈和重鏈。在一些實施方式中，本文提供了抗-MASP-2抗體或抗原結合片段，其包含分別具有SEQ ID NO：33和69所示的胺基酸序列的輕鏈和重鏈。在一些實施方式中，本文提供了抗-MASP-2抗體或抗原結合片段，其包含分別具有SEQ ID NO：33和70所示的胺基酸序列的輕鏈和重鏈。在一些實施方式中，本文提供了抗-MASP-2抗體或抗原結合片段，其包含分別具有SEQ ID NO：33和71所示的胺基酸序列的輕鏈和重鏈。在一些實施方式中，本文提供了抗-MASP-2抗體或抗原結合片段，其包含分別具有SEQ ID NO：33和72所示的胺基酸序列的輕鏈和重鏈。在一些實施方式中，本文提供了抗-MASP-2抗體或抗原結合片段，其包含分別具有SEQ ID NO：33和73所示的胺基酸序列的輕鏈和重鏈。在一些實施方式中，本文提供了抗-MASP-2抗體或抗原結合片段，其包含分別具有SEQ ID NO：33和74所示的胺基酸序列的輕鏈和重鏈。
在一些實施方式中，變異體可以包括胺基酸殘基在抗體或多肽的胺基和/或羧基末端的添加。其它胺基酸殘基的長度可以在1個殘基至100個或更多個殘基的範圍內。在一些實施方式中，變異體包含N末端甲硫胺醯基殘基。在一些實施方式中，所述變異體包含其它多肽/蛋白(例如，Fc區)以產生融合蛋白。在一些實施方式中，將變異體工程化以成為可檢測的並且可以包含可檢測標記物和/或蛋白(例如，螢光標籤或酶)。
可以使用本領域中已知的方法產生本文所描述的變異體抗體或抗原結合片段，其包括(但不限於)定點突變、丙胺酸掃描突變和PCR突變。
在一些實施方式中，本文所揭示的抗-MASP-2抗體或抗原-結合片段的變異體可以保留以和親代抗體或抗原-結合片段類似程度、相同程度或更高程度結合MASP-2的能力。在一些實施方式中，所述變異體可以與親代抗體或抗原-結合片段在胺基酸序列方面至少約80%、約85%、約90%、約91%、約92%、約93%、約94%、約95%、約96%、約97%、約98%、約99%或更高的相同。在某些實施方式中，抗-MASP-2抗體或抗原-結合片段的變異體包含具有一個或多個守恆胺基酸替換的親代抗-MASP-2抗體或抗原-結合片段的胺基酸序列。守恆胺基酸替換在本領域中是已知的並且包括其中具有特定物理和/或化學性質的一種胺基酸更換為具有相同或類似化學或物理性質的另一種胺基酸的胺基酸替換。
在一些實施方式中，抗-MASP-2抗體或抗原-結合片段的變異體包含具有一個或多個非守恆胺基酸替換的親代抗體或抗原-結合片段的胺基酸序列。在一些實施方式中，抗-MASP-2抗體或抗原-結合片段的變異體包含具有一個或多個非守恆胺基酸替換的親代結合抗體或抗原-結合片段的胺基酸序列，其中所述一個或多個非守恆胺基酸替換不防礙或抑制所述變異體的一種或多種生物學活性(例如，MASP-2結合)。在某些實施方式中，所述一個或多個守恆胺基酸替換和/或所述一個或多個非守恆胺基酸替換可以增強所述變異體的生物活性，從而所述功能性變異體的生物活性與親代結合部分相比提高。
在一些實施方式中，所述變異體可以在結合部分的CDR (例如，VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3)中具有1、2、3、4或5個胺基酸替換。
在一些實施方式中，天然或透過干預化學修飾本文所描述的抗-MASP-2抗體或抗原結合片段。在一些實施方式中，已透過醣基化、乙醯化、PEG化、磷酸化、醯胺化、透過已知的保護/封阻基團衍生化、蛋白水解切割和/或與細胞配體或其它蛋白鍵合化學修飾了所述抗-MASP-2抗體或抗原結合片段。可以透過已知技術進行任何多種化學修飾。所述抗-MASP-2抗體或抗原結合片段可以包含胺基酸的一種或多種類似物(包括，例如，非天然胺基酸)以及本領域中已知的其它修飾。
表位定位是辨識其中抗體結合的標靶蛋白上的結合位元點、區域或表位元的方法。在本領域中，多種方法對於定位標靶蛋白上的表位是已知的。這些方法包括突變，其包括(但不限於)鳥槍法突變、定點突變和丙胺酸掃描；結構域或片段掃描；胜肽掃描(例如，Pepscan技術)；展示方法(例如，噬菌體展示、微生物展示和核糖體/mRNA展示)；包括蛋白水解和質譜法的方法；和結構確定(例如，X射線晶體學和NMR)。在一些實施方式中，透過以下測定鑒定了本文所描述的抗-MASP-2抗體或抗原結合片段，所述測定包括(但不限於) N末端定序、胺基酸分析、HPLC、質譜、離子交換層析法和木瓜蛋白酶消化。
如以下實驗部分中進一步詳細地提供的，如本文所提供的抗體3E10和人源化3E10結合至人MASP-2的蛋白酶結構域(SEQ ID NO：1所示的胺基酸415-671殘基)並且不與基準抗體納索利單抗(narsoplimab)競爭對人MASP-2的結合。在一些實施方式中，本文提供了結合至人MASP-2的蛋白酶結構域的抗-MASP-2抗體和抗原結合片段。在一些實施方式中，本文所提供的抗-MASP-2抗體和抗原結合片段不會可檢測地結合至缺少蛋白酶結構域的截短的人MASP-2。在一些實施方式中，本文所提供的抗-MASP-2抗體和抗原結合片段不與納索利單抗(narsoplimab)競爭對人MASP-2的結合。
可以透過本領域中已知的多種方法分析本發明揭露所述的抗-MASP-2抗體或抗原結合片段它們的物理、化學和/或生物學性質。在一些實施方式中，測試了抗-MASP-2抗體其結合MASP-2 (例如，人MASP-2)的能力。結合測定包括(但不限於) BLI、SPR (例如，Biacore)、ELISA和FACS。另外，可以評價抗體的溶解度、穩定性、熱穩定性、黏度、表現水準、表現品質和/或純化效率。
在一些實施方式中，本文所描述的抗-MASP-2抗體或抗原結合片段以高親合力結合至人MASP-2，例如，以10 -7M或更小、10 -8M或更小、5×10 -9M或更小、10 -9M或更小、5×10 -10M或更小、10 -10M或更小、5×10 -11M或更小、10 -11M或更小、5×10 -12M或更小或者10 -12M或更小；或者10 -12M至10 -7M、10 -11M至10 -7M、10 -10M至10 -7M、10 -9M至10 -7M、10 -8M至10 -7M、10 -10M至10 -8M、10 -9M至10 -8M、10 -11M至10 -9M或10 -10M至10 -9M的範圍內的K D。在一些實施方式中，透過BLI確定K D。在一些實施方式中，透過SPR確定K D。在一些實施方式中，本文所描述的抗-MASP-2抗體或抗原結合片段以高親合力結合至人MASP-2，例如，以10 -7M或更小、10 -8M或更小、5×10 -9M或更小、10 -9M或更小、5×10 -10M或更小、10 -10M或更小、5×10 -11M或更小、10 -11M或更小、5×10 -12M或更小或10 -12M或更小；或者10 -12M至10 -7M、10 -11M至10 -7M、10 -10M至10 -7M、10 -9M至10 -7M、10 -8M至10 -7M、10 -10M至10 -8M、10 -9M至10 -8M、10 -11M至10 -9M或者10 -10M至10 -9M的K D，如透過SPR所測量的。
在一些實施方式中，本文所描述的抗-MASP-2抗體或抗原結合片段以10 -9M或更小的K D結合至人MASP-2，如透過SPR所測量的。在一些實施方式中，本文所描述的抗-MASP-2抗體或抗原結合片段以10 -10M或更小的K D結合至人MASP-2，如透過SPR所測量的。在一些實施方式中，本文所描述的抗-MASP-2抗體或抗原結合片段以10 -11M至10 -09M的範圍內的K D結合至人MASP-2，如透過SPR所測量的。在一些實施方式中，本文所描述的抗-MASP-2抗體或抗原結合片段以5×10 -11M至10 -09M的範圍內的K D結合至人MASP-2，如透過SPR所測量的。在一些實施方式中，本文所描述的抗-MASP-2抗體或抗原結合片段以5×10 -11M至5×10 -10M的範圍內的K D結合至人MASP-2，如透過SPR所測量的。在一些實施方式中，本文所描述的抗-MASP-2抗體或抗原結合片段以約10 -10M的K D結合至人MASP-2，如透過SPR所測量的。
本文所描述的抗-MASP-2抗體和抗原結合片段可以抑制MASP-2-依賴性補體活化。換言之，本文所描述的抗-MASP-2抗體和抗原結合片段可以抑制補體活化的凝集素途徑。在一些實施方式中，本文所提供的抗-MASP-2抗體或抗原結合片段可以將MASP-2-依賴性補體活化抑制至少20%、至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%或者至少90%。在一個實施方式中，本文所提供的抗-MASP-2抗體或抗原結合片段將MASP-2-依賴性補體活化降低了至少50%(即與不存在抗體或抗原-結合片段的情況下的活化水準相比，導致50%或以下的MASP-2-依賴性補體活化)。在一個實施方式中，本文所提供的抗-MASP-2抗體或抗原結合片段將MASP-2-依賴性補體活化降低了至少80%(即與不存在抗體或抗原-結合片段的情況下的活化水準相比，導致20%或以下的MASP-2-依賴性補體活化)。在一個實施方式中，本文所提供的抗-MASP-2抗體或抗原結合片段將MASP-2-依賴性補體活化降低了至少90%(即與不存在抗體或抗原-結合片段的情況下的活化水準相比，導致10%或以下的MASP-2-依賴性補體活化)。
在一些實施方式中，本文所描述的抗-MASP-2抗體和抗原結合片段不抑制補體活化的經典途徑或替代途徑。
可以以多種水準，如C4活化、C3活化和MAC活化，測量抗-MASP-2抗體和抗原結合片段對本文所提供的MASP-2-依賴性補體活化的抑制作用。多種測定形式在本領域中是已知的以測量(例如) C4活化、C3活化和MAC活化(參見，例如，WO2012/151481)；一些描述於以下實施例部分。
本文所描述的抗-MASP-2抗體和抗原結合片段可以抑制C4活化。在一些實施方式中，本文所描述的抗-MASP-2抗體和抗原結合片段可以抑制C4活化，例如，如體外測定中所測量的，其中IC 50為0.5 μg/mL或更小、0.4 μg/mL或更小、0.3 μg/mL或更小、0.2 μg/mL或更小、0.1 μg/mL或更小、0.05 μg/mL或更小、0.04 μg/mL或更小、0.03 μg/mL或更小、0.02 μg/mL或更小、0.01 μg/mL或更小、0.005 μg/mL或更小或者0.001 μg/mL或更小。在一些實施方式中，本文所描述的抗-MASP-2抗體和抗原結合片段可以抑制C4活化，例如，如體外測定中所測量的，其中IC 50為約0.2 μg/mL或以下。在一些實施方式中，本文所描述的抗-MASP-2抗體和抗原結合片段可以抑制C4活化，例如，如體外測定中所測量的，其中IC 50為約0.1 μg/mL或以下。在一些實施方式中，本文所描述的抗-MASP-2抗體和抗原結合片段可以抑制C4活化，例如，如體外測定中所測量的，其中IC 50為約0.05 μg/mL或以下。在一些實施方式中，本文所描述的抗-MASP-2抗體和抗原結合片段可以抑制C4活化，例如，如體外測定中所測量的，其中IC 50為約0.01 μg/mL或以下。在一些實施方式中，本文所描述的抗-MASP-2抗體和抗原結合片段可以抑制C4活化，例如，如體外測定中所測量的，其中IC 50在0.001-0.5 μg/mL、0.001-0.2 μg/mL、0.001-0.1 μg/mL、0.001-0.05 μg/mL、0.001-0.01 μg/mL、0.001-0.005 μg/mL、0.005-0.5 μg/mL、0.005-0.2 μg/mL、0.005-0.1 μg/mL、0.005-0.05 μg/mL、0.005-0.01 μg/mL或者0.001-0.5 μg/mL的範圍內。在一些實施方式中，本文所描述的抗-MASP-2抗體和抗原結合片段可以抑制C4活化，例如，如體外測定中所測量的，其中IC 50在0.001-0.1 μg/mL的範圍內。在一些實施方式中，本文所描述的抗-MASP-2抗體和抗原結合片段可以抑制C4活化，例如，如體外測定中所測量的，其中IC 50在0.001-0.01 μg/mL的範圍內。
可以在存在多種濃度的人血清(例如，1-100%或5-50%)的情況下實施C4活化測定以測量抗-MASP-2抗體或抗原-結合片段的抑制作用。在一些實施方式中，在存在約5%、約10%、約20%、約30%、約40%、約50%、約60%、約70%、約80%或約90%的人血清的情況下，本文所描述的抗-MASP-2抗體和抗原結合片段可以抑制C4活化，例如，如體外測定中所測量的，其中IC 50為0.5 μg/mL或更小、0.4 μg/mL或更小、0.3 μg/mL或更小、0.2 μg/mL或更小、0.1 μg/mL或更小、0.05 μg/mL或更小、0.04 μg/mL或更小、0.03 μg/mL或更小、0.02 μg/mL或更小、0.01 μg/mL或更小、0.005 μg/mL或更小或0.001 μg/mL或更小。在一些實施方式中，在存在約5%的人血清的情況下，本文所描述的抗-MASP-2抗體和抗原結合片段可以抑制C4活化，例如，如體外測定中所測量的，其中IC 50為0.5 μg/mL或更小、0.4 μg/mL或更小、0.3 μg/mL或更小、0.2 μg/mL或更小、0.1 μg/mL或更小、0.05 μg/mL或更小、0.04 μg/mL或更小、0.03 μg/mL或更小、0.02 μg/mL或更小、0.01 μg/mL或更小、0.005 μg/mL或更小或者0.001 μg/mL或更小。在一些實施方式中，在存在約10%的人血清的情況下，本文所描述的抗-MASP-2抗體和抗原結合片段可以抑制C4活化，例如，如體外測定中所測量的，其中IC 50為0.5 μg/mL或更小、0.4 μg/mL或更小、0.3 μg/mL或更小、0.2 μg/mL或更小、0.1 μg/mL或更小、0.05 μg/mL或更小、0.04 μg/mL或更小、0.03 μg/mL或更小、0.02 μg/mL或更小、0.01 μg/mL或更小、0.005 μg/mL或更小或者0.001 μg/mL或更小。在一些實施方式中，在存在約50%的人血清的情況下，本文所描述的抗-MASP-2抗體和抗原結合片段可以抑制C4活化，例如，如體外測定中所測量的，其中IC 50為0.5 μg/mL或更小、0.4 μg/mL或更小、0.3 μg/mL或更小、0.2 μg/mL或更小、0.1 μg/mL或更小、0.05 μg/mL或更小、0.04 μg/mL或更小、0.03 μg/mL或更小、0.02 μg/mL或更小、0.01 μg/mL或更小、0.005 μg/mL或更小或者0.001 μg/mL或更小。
在一些實施方式中，在存在約5%、約10%、約20%、約30%、約40%、約50%、約60%、約70%、約80%或約90%的人血清的情況下，本文所描述的抗-MASP-2抗體和抗原結合片段可以抑制C4活化，例如，如體外測定中所測量的，其中IC 50為0.2 μg/mL或更小。在一些實施方式中，在存在約5%、約10%、約20%、約30%、約40%、約50%、約60%、約70%、約80%或約90%的人血清的情況下，本文所描述的抗-MASP-2抗體和抗原結合片段可以抑制C4活化，例如，如體外測定中所測量的，其中IC 50為0.1 μg/mL或更小。在一些實施方式中，在存在約5%、約10%、約20%、約30%、約40%、約50%、約60%、約70%、約80%或約90%的人血清的情況下，本文所描述的抗-MASP-2抗體和抗原結合片段可以抑制C4活化，例如，如體外測定中所測量的，其中IC 50為0.05 μg/mL或更小。
在一些實施方式中，在存在1-100%人血清的情況下，本文所描述的抗-MASP-2抗體和抗原結合片段可以抑制C4活化，例如，如體外測定中所測量的，其中在存在約5%、約10%、約20%、約30%、約40%、約50%、約60%、約70%、約80%或約90%的人血清的情況下，IC 50在0.001-0.5 μg/mL、0.001-0.2 μg/mL、0.001-0.1 μg/mL、0.001-0.05 μg/mL、0.001-0.01 μg/mL、0.001-0.005 μg/mL、0.005-0.5 μg/mL、0.005-0.2 μg/mL、0.005-0.1 μg/mL、0.005-0.05 μg/mL、0.005-0.01 μg/mL或0.001-0.5 μg/mL的範圍內。在一些實施方式中，在存在約5%、約10%、約20%、約30%、約40%、約50%、約60%、約70%、約80%或約90%的人血清的情況下，本文所描述的抗-MASP-2抗體和抗原結合片段可以抑制C4活化，例如，如體外測定中所測量的，其中IC 50在0.001-0.1 μg/mL的範圍內。在一些實施方式中，在存在約5%、約10%、約20%、約30%、約40%、約50%、約60%、約70%、約80%或約90%的人血清的情況下，本文所描述的抗-MASP-2抗體和抗原結合片段可以抑制C4活化，例如，如體外測定中所測量的，其中IC 50在0.01-0.1 μg/mL的範圍內。
在一些實施方式中，在存在約5%的人血清的情況下，本文所描述的抗-MASP-2抗體和抗原結合片段可以抑制C4活化，例如，如體外測定中所測量的，其中IC 50在0.001-0.1 μg/mL的範圍內。在一些實施方式中，在存在約5%的人血清的情況下，本文所描述的抗-MASP-2抗體和抗原結合片段可以抑制C4活化，例如，如體外測定中所測量的，其中IC 50在0.01-0.1 μg/mL的範圍內。在一些實施方式中，在存在約10%的人血清的情況下，本文所描述的抗-MASP-2抗體和抗原結合片段可以抑制C4活化，例如，如體外測定中所測量的，其中IC 50在0.001-0.1 μg/mL的範圍內。在一些實施方式中，在存在約10%的人血清的情況下，本文所描述的抗-MASP-2抗體和抗原結合片段可以抑制C4活化，例如，如體外測定中所測量的，其中IC 50在0.01-0.1 μg/mL的範圍內。在一些實施方式中，在存在約50%的人血清的情況下，本文所描述的抗-MASP-2抗體和抗原結合片段可以抑制C4活化，例如，如體外測定中所測量的，其中IC 50在0.001-0.1 μg/mL的範圍內。在一些實施方式中，在存在約50%的人血清的情況下，本文所描述的抗-MASP-2抗體和抗原結合片段可以抑制C4活化，例如，如體外測定中所測量的，其中IC 50在0.01-0.1 μg/mL的範圍內。
本文所描述的抗-MASP-2抗體和抗原結合片段可以抑制C3活化。在一些實施方式中，本文所描述的抗-MASP-2抗體和抗原結合片段可以抑制C3活化，例如，如體外測定中所測量的，其中IC 50為0.5 μg/mL或更小、0.4 μg/mL或更小、0.3 μg/mL或更小、0.2 μg/mL或更小、0.1 μg/mL或更小、0.05 μg/mL或更小、0.04 μg/mL或更小、0.03 μg/mL或更小、0.02 μg/mL或更小、0.01 μg/mL或更小、0.005 μg/mL或更小、0.002 μg/mL或更小或者0.001 μg/mL或更小。在一些實施方式中，本文所描述的抗-MASP-2抗體和抗原結合片段可以抑制C3活化，例如，如體外測定中所測量的，其中IC 50為0.2 μg/mL或更小。在一些實施方式中，本文所描述的抗-MASP-2抗體和抗原結合片段可以抑制C3活化，例如，如體外測定中所測量的，其中IC 50為0.1 μg/mL或更小。在一些實施方式中，本文所描述的抗-MASP-2抗體和抗原結合片段可以抑制C3活化，例如，如體外測定中所測量的，其中IC 50為0.05 μg/mL或更小。在一些實施方式中，本文所描述的抗-MASP-2抗體和抗原結合片段可以抑制C3活化，例如，如體外測定中所測量的，其中IC 50在0.001-0.5 μg/mL、0.001-0.2 μg/mL、0.001-0.1 μg/mL、0.001-0.05 μg/mL、0.001-0.01 μg/mL、0.001-0.005 μg/mL、0.005-0.5 μg/mL、0.005-0.2 μg/mL、0.005-0.1 μg/mL、0.005-0.05 μg/mL、0.005-0.01 μg/mL或0.001-0.5 μg/mL的範圍內。在一些實施方式中，本文所描述的抗-MASP-2抗體和抗原結合片段可以抑制C3活化，例如，如體外測定中所測量的，其中IC 50在0.001-0.1 μg/mL的範圍內。在一些實施方式中，本文所描述的抗-MASP-2抗體和抗原結合片段可以抑制C3活化，例如，如體外測定中所測量的，其中IC 50在0.001-0.05 μg/mL的範圍內。
本文所描述的抗-MASP-2抗體和抗原結合片段可以抑制MAC活化。在一些實施方式中，本文所描述的抗-MASP-2抗體和抗原結合片段可以抑制MAC活化，例如，如體外測定中所測量的，其中IC 50為0.5 μg/mL或更小、0.4 μg/mL或更小、0.3 μg/mL或更小、0.2 μg/mL或更小、0.1 μg/mL或更小、0.05 μg/mL或更小、0.04 μg/mL或更小、0.03 μg/mL或更小、0.02 μg/mL或更小、0.01 μg/mL或更小、0.005 μg/mL或更小、0.002 μg/mL或更小或者0.001 μg/mL或更小。在一些實施方式中，本文所描述的抗-MASP-2抗體和抗原結合片段可以抑制MAC活化，例如，如體外測定中所測量的，其中IC 50為0.2 μg/mL或更小。在一些實施方式中，本文所描述的抗-MASP-2抗體和抗原結合片段可以抑制MAC活化，例如，如體外測定中所測量的，其中IC 50為0.1 μg/mL或更小。在一些實施方式中，本文所描述的抗-MASP-2抗體和抗原結合片段可以抑制MAC活化，例如，如體外測定中所測量的，其中IC 50為0.05 μg/mL或更小。在一些實施方式中，本文所描述的抗-MASP-2抗體和抗原結合片段可以抑制MAC活化，例如，如體外測定中所測量的，其中IC 50在0.001-0.5 μg/mL、0.001-0.2 μg/mL、0.001-0.1 μg/mL、0.001-0.05 μg/mL、0.001-0.01 μg/mL、0.001-0.005 μg/mL、0.005-0.5 μg/mL、0.005-0.2 μg/mL、0.005-0.1 μg/mL、0.005-0.05 μg/mL、0.005-0.01 μg/mL或者0.001-0.5 μg/mL的範圍內。在一些實施方式中，本文所描述的抗-MASP-2抗體和抗原結合片段可以抑制MAC活化，例如，如體外測定中所測量的，其中IC 50在0.001-0.1 μg/mL的範圍內。在一些實施方式中，本文所描述的抗-MASP-2抗體和抗原結合片段可以抑制MAC活化，例如，如體外測定中所測量的，其中IC 50在0.001-0.05 μg/mL的範圍內。在一些實施方式中，本文所描述的抗-MASP-2抗體和抗原結合片段可以抑制MAC活化，例如，如體外測定中所測量的，其中IC 50在0.001-0.01 μg/mL的範圍內。
照此，在一些實施方式中，本文所描述的抗-MASP-2抗體或其抗原結合片段可以(1)以1 nM或以下的K D結合人MASP-2，如透過SPR所測量的；(2)以0.1 μg/mL或以下的IC 50阻斷C4活化，如體外測量的；(3)以0.1 μg/mL或以下的IC 50阻斷C3活化，如體外測量的；(4)以0.1 μg/mL或以下的IC 50阻斷MAC活化，如體外測量的；(5)不影響補體活化的經典或替代途徑；或者(6)(1)-(5)的任意組合。
在一些實施方式中，本文所描述的抗-MASP-2抗體或其抗原結合片段可以(1)以1 nM或以下的K D結合人MASP-2，如透過SPR所測量的；和(2)以0.1 μg/mL或以下的IC 50阻斷C4活化，如體外測量的。
在一些實施方式中，本文提供了特異性結合人MASP-2的蛋白酶結構域的抗體或其抗原結合片段，其中所述抗體或抗原結合片段：(1)以1 nM或以下的K D結合人MASP-2，如透過SPR所測量的； (2)以0.1 μg/mL或以下的IC 50阻斷C4活化，如體外測量的； (3)以0.1 μg/mL或以下的IC 50阻斷C3活化，如體外測量的； (4)以0.1 μg/mL或以下的IC 50阻斷MAC活化，如體外測量的； (5)不影響補體活化的經典或替代途徑；或者 (6)(1)-(5)的任意組合。
在一些實施方式中，本文提供了特異性結合人MASP-2的蛋白酶結構域的抗體或其抗原結合片段，其中所述抗體或抗原結合片段以1 nM或以下的K D結合人MASP-2，如透過SPR所測量的。在一些實施方式中，本文提供了特異性結合人MASP-2的蛋白酶結構域的抗體或其抗原結合片段，其中所述抗體或抗原結合片段以0.1 μg/mL或以下的IC 50阻斷C4活化，如體外所測量的。在一些實施方式中，本文提供了特異性結合人MASP-2的蛋白酶結構域的抗體或其抗原結合片段，其中所述抗體或抗原結合片段以0.1 μg/mL或以下的IC 50阻斷C3活化，如體外所測量的。在一些實施方式中，本文提供了特異性結合人MASP-2的蛋白酶結構域的抗體或其抗原結合片段，其中所述抗體或抗原結合片段以0.1 μg/mL或以下的IC 50阻斷MAC活化，如體外所測量的。在一些實施方式中，所述抗體或抗原結合片段不影響補體活化的經典或替代途徑。
在一些實施方式中，本文所描述的抗-MASP-2抗體或抗原-結合片段綴合至可檢測物質或分子，其允許所述試劑用於診斷和/或檢測。可檢測物質可以包括(但不限於)酶，如辣根過氧化物酶、鹼性磷酸酶、β-半乳糖苷酶和乙醯膽鹼酯酶；輔基，如生物素和黃素；螢光物質，如傘形酮、螢光素、異硫氰酸螢光素(FITC)、羅丹明、四甲基羅丹明異硫氰酸鹽(TRITC)、二氯三嗪胺螢光素、丹磺醯氯、菁(Cy3)和藻紅蛋白；生物發光材料，如螢光素酶；放射性物質，如212Bi、14C、57Co、51Cr、67Cu、18F、68Ga、67Ga、153Gd、159Gd、68Ge、3H、166Ho、131I、125I、123I、121I、115In、113In、112In、111In、140La、177Lu、54Mn、99Mo、32P、103Pd、149Pm、142Pr、186Re、188Re、105Rh、97Ru、35S、47Sc、75Se、153Sm、113Sn、117Sn、85Sr、99mTc、201Ti、133Xe、90Y、69Yb、175Yb、65Zn；正電子發射金屬；和磁性金屬離子正電子發射金屬；和磁性金屬離子。
本文所描述的抗-MASP-2抗體或抗原-結合片段可以連接至固體載體。這些固體載體包括(但不限於)玻璃、纖維素、聚丙烯醯胺、尼龍、聚苯乙烯、聚氯乙烯或聚丙烯。在一些實施方式中，在免疫測定中使用固定化抗-MASP-2抗體或抗原-結合片段。在一些實施方式中，將固定化的抗-MASP-2抗體或抗原-結合片段用於標靶抗原(例如，人MASP-2)的純化。 多核苷酸和載體
本文還提供了編碼本文所描述的多肽(例如，抗-MASP-2抗體或抗原-結合片段)的多核苷酸。術語“編碼多肽的多核苷酸”涵蓋了僅包括多肽的編碼序列的多核苷酸以及包括其它編碼和/或非編碼序列的多核苷酸。本發明揭露的多核苷酸可以處於RNA的形式或處於DNA的形式。DNA可以是cDNA、基因組DNA或合成DNA，並且可以是雙鏈或單鏈的。單鏈DNA可以是編碼鏈或非編碼(反義)鏈。本發明揭露所述的多核苷酸可以是mRNA。
本文明確考慮了編碼本文所揭示的任何抗-MASP-2抗體或抗原-結合片段的多核苷酸。出於說明性的目的，在一些實施方式中，本文所提供的多核苷酸編碼抗-MASP-2抗體或抗原-結合片段，其包含(1)如Kabat所定義的，(a)輕鏈可變區(VL)，其包含分別具有7、9和11的胺基酸序列的VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3；或者其在VL CDR中具有多至約5個胺基酸替換、添加和/或缺失的變異體；和/或(b)重鏈可變區(VH)，其包含分別具有12、16和18所示的胺基酸序列的VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3；或其在VH CDR中具有多至約5個胺基酸替換、添加和/或缺失的變異體；或(2)如IMGT所定義的，(a) VL，其包含分別具有8、10和11的胺基酸序列的VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3；或者其在VL CDR中具有多至約5個胺基酸替換、添加和/或缺失的變異體；和/或(b) VH，其包含分別具有13、17和19所示的胺基酸序列的VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3；或其在VH CDR中具有多至約5個胺基酸替換、添加和/或缺失的變異體。
在一些實施方式中，本文所提供的多核苷酸編碼抗-MASP-2抗體或抗原-結合片段，其包含(a) VL，其對SEQ ID NO：23所示的胺基酸序列具有至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或100%的序列相同性；和/或(b) VH其對SEQ ID NO：24所示的胺基酸序列具有至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或100%序列相同性。所述多核苷酸可以處於DNA形式。所述多核苷酸可以處於mRNA形式。
在一些實施方式中，本文所提供的多核苷酸編碼本文所揭示的抗-MASP-2抗體或抗原-結合片段，其包含VL和VH，其中VL包含VL CDR1、CDR2和CDR3，並且VH包含VH CDR1、CDR2和CDR3，並且其中所述VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3、VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3具有以下所示的胺基酸序列：(1)分別為SEQ ID NO：7、9、11、12、16和18；(2)分別為SEQ ID NO：8、10、11、13、17和19；(3)分別為SEQ ID NO：8、10、11、14、17和19；(4)分別為SEQ ID NO：8、10、11、15、17和19；(5)分別為SEQ ID NO：8、10、11、13、17和20；(6)分別為SEQ ID NO：8、10、11、14、17和20；(7)分別為SEQ ID NO：8、10、11、15、17和20；或其在CDR中具有多至約5個胺基酸替換、添加和/或缺失的變異體。所述多核苷酸可以處於DNA形式。所述多核苷酸可以處於mRNA形式。
在一些實施方式中，本文所提供的多核苷酸編碼本文所揭示的抗-MASP-2抗體或抗原-結合片段，其包含VL和VH，其中所述VL和VH具有以下所示的胺基酸序列：(1)分別為SEQ ID NO：21和22；(2)分別為SEQ ID NO：23和24；(3)分別為SEQ ID NO：23和25；(4)分別為SEQ ID NO：23和26；(5)分別為SEQ ID NO：23和27；(6)分別為SEQ ID NO：23和28；(7)分別為SEQ ID NO：23和29；(8)分別為SEQ ID NO：23和30；(9)分別為SEQ ID NO：23和31；或(10)分別為SEQ ID NO：23和32。所述多核苷酸可以處於DNA形式。所述多核苷酸可以處於mRNA形式。
在一些實施方式中，透過連接子連接所述VL和VH。所述連接子可以是柔性連接子或剛性連接子。在一些實施方式中，所述連接子具有胺基酸序列(GGGGS) n，n=1、2、3、4或5 (SEQ ID NO：77)。在一些實施方式中，所述連接子具有胺基酸序列(EAAAK) n，n=1、2、3、4或5 (SEQ ID NO：78)。在一些實施方式中，所述連接子具有胺基酸序列(PA) nP，n=1、2、3、4或5 (SEQ ID NO：79)。
本發明揭露還提供了本文所描述的多核苷酸的變異體，其中所述變異體編碼(例如)本文所揭示的抗-MASP-2抗體或抗原-結合片段的片段、類似物和/或衍生物。在一些實施方式中，本發明揭露提供了具有與編碼本文所描述的抗-MASP-2抗體或抗原-結合片段的多核苷酸序列具有至少約80%的相同性、至少約85%的相同性、至少約90%的相同性、至少約95%的相同性、至少約96%的相同性、至少約97%的相同性、至少約98%的相同性或者至少約99%的相同性的核苷酸序列的多核苷酸。在一些實施方式中，本發明揭露提供了具有與編碼本文所描述的抗-MASP-2抗體或抗原-結合片段的多核苷酸序列具有至少約80%的相同性、至少約85%的相同性、至少約90%的相同性、至少約95%的相同性、至少約96%的相同性、至少約97%的相同性、至少約98%的相同性或者至少約99%的相同性的核苷酸序列的多核苷酸。
如本文所使用的，短語“具有與多核苷酸序列具有至少約95%的相同性的核苷酸序列的多核苷酸”表示所述多核苷酸的核苷酸序列與參考序列相同，除了所述多核苷酸序列可以在參考核苷酸序列的每100個核苷酸中包括至多5個點突變。換言之，為了獲得具有與參考核苷酸序列具有至少95%的相同性的核苷酸序列的多核苷酸，可以使所述參考序列中多至5%的核苷酸缺失或被另一種核苷酸取代，或者可以將參考序列中多至5%的總核苷酸的一些核苷酸插入所述參考序列。參考序列的這些突變可以發生在參考核苷酸序列的5'或3'末端位置或者那些末端位置之間的任何地方，單獨散佈在參考序列中的核苷酸中或者參考序列內的一個或多個鄰接基團中。
所述多核苷酸變異體可以在編碼區、非編碼區或兩者中含有改變。在一些實施方式中，多核苷酸變異體含有產生沉默替換、添加或缺失，但不改變編碼多肽的性質或活性的改變。在一些實施方式中，多核苷酸變異體包含導致多肽的胺基酸序列不變的沉默替換(由於遺傳密碼的簡並度)。出於多種原因，可以產生多核苷酸變異體，例如，以對於特定宿主最佳化密碼子表現[例如，將人mRNA中的密碼子改變為細菌宿主，如大腸桿菌( E. coli)優選的那些]。在一些實施方式中，多核苷酸變異體包含所述序列的非編碼或編碼區中的至少一個沉默突變。
在一些實施方式中，產生多核苷酸變異體以調節或改變所述編碼多肽的表現(或表現水準)。在一些實施方式中，產生多核苷酸變異體以提高編碼多肽的表現。在一些實施方式中，產生多核苷酸變異體以減小編碼多肽的表現。在一些實施方式中，與親代多核苷酸序列相比，多核苷酸變異體具有提高的編碼多肽的表現。在一些實施方式中，與親代多核苷酸序列相比，多核苷酸變異體具有減小的編碼多肽的表現。
在一些實施方式中，多核苷酸包含在相同閱讀框中與輔助多肽從宿主細胞表現和分泌的多核苷酸(例如，起到用於控制多肽轉運的分泌序列的作用的前導序列)融合的多肽(例如，抗體)的編碼序列。所述多肽可以具有透過宿主細胞切割以形成多肽的“成熟”形式的前導序列。
在一些實施方式中，多核苷酸包含在相同閱讀框中與標記物或標籤序列融合的多肽(例如，抗體)的編碼序列。例如，在一些實施方式中，標記物序列是六組胺酸標籤(HIS-標籤)，其使得融合至所述標記物的多肽能夠被有效純化。在一些實施方式中，當使用哺乳動物宿主(例如，COS-7細胞)時，標記物序列是來源於流感血球凝集素蛋白的血球凝集素(HA)標籤。在一些實施方式中，所述標記物序列是FLAG™標籤。在一些實施方式中，可以結合其它標記物或標籤使用標記物。
在一些實施方式中，多核苷酸是分離的。在一些實施方式中，多核苷酸是基本純的。
還提供了包含本文所描述的多核苷酸的載體和細胞。在一些實施方式中，本文提供了包含本文所提供的多核苷酸的載體。所述載體可以是表現載體。在一些實施方式中，本文所提供的載體包含編碼本文所描述的抗-MASP-2抗體或抗原-結合片段的多核苷酸。在一些實施方式中，本文所提供的載體包含編碼作為本文所描述的抗-MASP-2抗體或抗原-結合片段的一部分的多肽的多核苷酸。
在一些實施方式中，本文提供了重組表現載體，其可以用於擴增和表現編碼本文所描述的抗-MASP-2抗體或抗原-結合片段的多核苷酸。例如，重組表現載體可以是可複製DNA建構物，其包括編碼抗-MASP-2抗體的多肽鏈的合成或cDNA-來源的DNA片段，其可操作性連接至來源於哺乳動物、微生物、病毒或昆蟲基因的適合的轉錄和/或轉譯調控元件。在一些實施方式中，使用病毒載體。當它們在功能上彼此相關時，DNA區是“可操作性地連接的”。例如，如果它控制序列轉錄，則啟動子可操作性連接至編碼序列；或者如果它的定位使得能夠轉譯，則核糖體結合位址可操作性連接至編碼序列。在一些實施方式中，設計用於在某些表現系統中使用的結構元件包括前導序列，其使得宿主細胞能夠胞外分泌轉譯的蛋白。在一些實施方式中，在其中在無前導序列或轉運序列的情況下表現重組蛋白的情況下，多肽可以包括N末端蛋胺酸殘基。
可以使用各式各樣的表現宿主/載體組合。對於真核宿主有用的表現載體包括(例如)包含來自SV40、牛乳頭狀瘤病毒、腺病毒和巨細胞病毒的表現控制序列的載體。對於細菌宿主有用的表現載體包括已知的細菌質體，如來自大腸桿菌( E. coli)的質體，包括pCR1、pBR322、pMB9和它們的衍生物，以及更寬的宿主範圍質體，如M13及其它絲狀單鏈DNA噬菌體。
在一些實施方式中，從一種或多種載體表現本文所描述的抗-MASP-2抗體或抗原-結合片段。適合於表現的宿主細胞包括受適當啟動子控制的原核生物、酵母細胞、昆蟲細胞或高等真核細胞。適合於與細菌、真菌、酵母和哺乳動物細胞宿主一起使用的選殖株和表現載體以及蛋白質生產，包括抗體生產的方法在本領域中是熟知的。
適合的哺乳動物宿主細胞株的實例包括(但不限於)COS-7 (猴腎-來源的)、L-929 (鼠纖維母細胞-來源的)、C127 (鼠乳腺腫瘤-來源的)、3T3 (鼠纖維母細胞-來源的)、CHO (中國倉鼠卵巢-來源的)、HeLa (人子宮頸癌-來源的)、BHK (倉鼠腎纖維母細胞-來源的)、HEK-293 (人胚腎-來源的)細胞株及其變異體。哺乳動物表現載體可以包含非轉錄元件，如複製起點、連接至要表現的基因的適合的啟動子和增強子以及其它5'或3'側接的非轉錄序列，和5'或3'非轉譯序列，如必需的核糖體結合位址、多腺苷酸化位址、剪接供體和受體位址以及轉錄終止序列。重組蛋白在昆蟲細胞培養系統(例如，杆狀病毒)中的表現還提供了用於產生正確折疊的和具有生物學功能的蛋白的穩健方法。用於在昆蟲細胞中產生異源蛋白質的杆狀病毒系統是本領域技術人員熟知的。
本發明揭露還提供了包含本文所描述的多肽、編碼本文所描述的多肽的多核苷酸或者包含這些多核苷酸的載體的宿主細胞。在一些實施方式中，本文提供了宿主細胞，其包含含有本文所揭示的多核苷酸的載體。在一些實施方式中，本文所提供的宿主細胞包含含有編碼本文所描述的抗-MASP-2抗體或抗原-結合片段的多核苷酸的載體。在一些實施方式中，本文所提供的宿主細胞包含含有編碼作為本文所描述的抗-MASP-2抗體或抗原-結合片段的一部分的多核苷酸的載體。在一些實施方式中，本文所提供的宿主細胞包含編碼本文所描述的抗-MASP-2抗體或抗原-結合片段的多核苷酸。在一些實施方式中，所述細胞產生本文所描述的抗-MASP-2抗體或抗原結合片段。 生產方法
可以使用任何本領域已知且可用的大家公認的技術製備、操縱和/或表現本文所提供的多核苷酸。可以使用多種載體。載體的實例是質體、自主複製序列和轉位因子。可以使用例示性轉座子系統，如睡美人(Sleeping Beauty)和PiggyBac，其可以穩定併入到基因組中[例如，Ivics等人, Cell, 91 (4): 501–510 (1997)；Cadiñanos等人,(2007) Nucleic Acids Research. 35 (12): e87]。其它例示性載體無限制地包括質體、噬菌體質體、黏接質體、人工染色體，如酵母人工染色體(YAC)、細菌人工染色體(BAC)或P1-來源的人工染色體(PAC)、噬菌體，如λ噬菌體或M13噬菌體，和動物病毒。作為載體有用的動物病毒類別的實例無限制地包括反轉錄病毒(包括慢病毒)、腺病毒、腺病毒相關病毒、皰疹病毒(例如，單純皰疹病毒)、痘病毒、杆狀病毒、乳頭狀瘤病毒和乳多空病毒(例如，SV40)。表現載體的實例為用於在哺乳動物細胞中表現的pClneo載體(Promega)；用於慢病毒-媒介的基因轉移和在哺乳動物細胞中的表現的pLenti4/V5-DEST™、pLenti6/V5-DEST™和pLenti6.2/V5-GW/lacZ (Invitrogen)。
在一些實施方式中，所述載體是游離基因載體或者染色體外維持的載體。如本文所使用的，術語“游離基因的”是指能夠複製，但不併入到宿主染色體DNA且不會從分裂宿主細胞中逐漸失去的載體，還表示所述載體染色體外或游離基因複製。將所述載體工程化以具有編碼來自嗜淋巴細胞皰疹病毒或γ皰疹病毒、腺病毒、SV40、牛乳頭狀瘤病毒或酵母的DNA複製起點或“ori”，具體地對應於EBV的oriP的嗜淋巴細胞皰疹病毒或γ皰疹病毒的複製起點的序列。在一些實施方式中，所述嗜淋巴細胞皰疹病毒可以是愛潑斯坦巴爾病毒(EBV)、卡波西氏肉瘤皰疹病毒(KSHV)、松鼠猴皰疹病毒(HS)或者馬立克氏病病毒(MDV)。愛潑斯坦巴爾病毒(EBV)和卡波西氏肉瘤皰疹病毒(KSHV)也是γ皰疹病毒的實例。通常，所述宿主細胞包含活化複製的病毒複製反式活化因數蛋白。
存在於表現載體中的“表現控制序列”、“控制元件”或“調控序列”是那些載體非轉譯區——複製起點、選擇盒、啟動子、增強子、轉譯起始訊號(核糖體結合位元點序列或者Kozak序列)內含子、多腺苷酸化序列、5'和3'未轉譯區——它們與宿主細胞蛋白相互作用以進行轉錄和轉譯。這些元件的強度和特異性可以不同。根據所使用的載體系統和宿主，可以使用任何數目的適合的轉錄和轉譯元件，包括泛在啟動子和誘導型啟動子。
可以用於本發明揭露的說明性的普遍存在的表現控制序列包括(但不限於)巨細胞病毒(CMV)立即早期啟動子、病毒猿猴病毒40 (SV40)啟動子(例如，早期或晚期)、莫洛尼鼠白血病病毒(MoMLV) LTR啟動子、勞氏肉瘤病毒(RSV) LTR、單純皰疹病毒(HSV)(胸苷激酶)啟動子、H5、P7.5和來自牛痘病毒的P11啟動子、延伸因子1-α (EF1a)啟動子、早期生長反應1 (EGR1)、鐵蛋白H (FerH)、鐵蛋白L (FerL)、3-磷酸甘油醛脫氫酶(GAPDH)、真核轉譯起始因子4A1 (EIF4A1)、熱衝擊70kDa蛋白5 (HSPA5)、熱休克蛋白90kDaβ，成員1 (HSP90B1)、熱休克蛋白70kDa (HSP70)、β-驅動蛋白(β-KIN)、人ROSA 26基因座[Irions等人, Nature Biotechnology 25, 1477-1482 (2007)]、泛素C啟動子(UBC)、磷酸甘油酸激酶-1 (PGK)啟動子、巨細胞病毒增強子/雞β-肌動蛋白(CAG)啟動子和β-肌動蛋白啟動子。
誘導型啟動子/系統的說明性實例包括(但不限於)類固醇-誘導型啟動子，如用於編碼糖皮質激素或雌激素受體的基因的啟動子(透過用對應激素處理可誘導)、金屬硫蛋白啟動子(透過用多種重金屬處理可誘導)、MX-1啟動子(透過干擾素可誘導)、“GeneSwitch”米非司酮-可調控系統(Sirin等人, 2003, Gene, 323:67)、cumate誘導型基因開關(WO 2002/088346)、四環素依賴性調控系統等。可以透過本領域中已知的任何方法，包括化學合成和重組表現技術產生本文所描述的抗-MASP-2抗體或抗原結合片段。除非另外說明，否則本發明的實踐使用了分子生物學、微生物學、基因分析、重組DNA、有機化學、生物化學、PCR、寡核苷酸合成和修飾、核酸雜交以及本領域技術範圍內的相關領域中的常規技術。在本文引用的參考文獻中描述了這些技術並且它們在文獻中得到了全面解釋。參見，例如，Maniatis等人(1982) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press；Sambrook等人(1989), Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 第2版, Cold Spring Harbor Laboratory Press；Sambrook等人(2001) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY；Ausubel等人, Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons (1987以及年度更新版)；Current Protocols in Immunology, John Wiley & Sons (1987以及年度更新版)；Gait (主編)(1984) Oligonucleotide Synthesis: A Practical Approach, IRL Press；Eckstein (主編)(1991) Oligonucleotides and Analogues: A Practical Approach, IRL Press；Birren等人(主編)(1999) Genome Analysis: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press；Borrebaeck (主編)(1995) Antibody Engineering, 第2版, Oxford University Press；Lo (主編)(2006) Antibody Engineering: Methods and Protocols (Methods in Molecular Biology); 第248卷, Humana Press, Inc；以上每篇文獻以其全部內容作為參考併入本文。
可以使用本領域中已知的方法產生和分離本文所描述的多肽(例如，抗-MASP-2抗體或抗原結合片段)。可以使用化學法完全或部分合成胜肽[參見，例如，Caruthers (1980) Nucleic Acids Res. Symp. Ser. 215；Horn (1980)；和Banga, A.K., Therapeutic Peptides and Proteins, Formulation, Processing and Delivery Systems (1995) Technomic Publishing Co., Lancaster, PA]。可以使用多種固相技術進行胜肽合成[參見，例如，Roberge, Science 269:202 (1995)；Merrifield, Methods. Enzymol. 289:3 (1997)]並且，例如，根據生產商的說明，使用ABI 431A胜肽合成儀(Perkin Elmer)可以實現自動合成。還可以使用組合方法合成胜肽。可以使用本領域中已知的多種程式和方法合成這些合成的殘基和多肽[參見，例如，Organic Syntheses Collective Volumes, Gilman等人(主編) John Wiley & Sons, Inc., NY]。可以透過化學修飾方法產生修飾的胜肽[參見，例如，Belousov, Nucleic Acids Res. 25:3440 (1997)；Frenkel, Free Radic. Biol. Med. 19:373 (1995)；和Blommers, Biochemistry 33:7886 (1994)]。還可以使用如寡核苷酸-媒介的(定點)突變、丙胺酸掃描和PCR基突變的方法來進行胜肽序列改變、衍生、替換和修飾。定點突變[Carter等人, Nucl. Acids Res., 13:4331 (1986)；Zoller等人, Nucl. Acids Res. 10:6487 (1987)]、盒式誘變[Wells等人, Gene 34:315 (1985)]、限制選擇突變[Wells等人, Philos. Trans. R. Soc. London SerA 317:415 (1986)]及其它技術可以實施於選殖株的DNA以產生本發明的胜肽序列、變異體、融合體和嵌合體及其改變、衍生物、替換和修飾。
可以使用本領域中已知的多種技術製備本文所描述的多肽，所述技術包括融合瘤和重組技術的使用或它們的組合。在一些實施方式中，將重組表現載體用於表現編碼本文所描述的多肽的多核苷酸。例如，重組表現載體可以是可複製DNA建構物，其包括編碼多肽的合成或cDNA-來源的DNA片段，其可操作性連接至來源於哺乳動物、微生物、病毒或昆蟲基因的適合的轉錄和/或轉譯調控元件。在一些實施方式中，本文所揭示的多肽的編碼序列可以連接至這類表現載體以用於它們在哺乳動物細胞中的表現。在一些實施方式中，使用病毒載體。當它們在功能上彼此相關時，DNA區是“可操作性地連接的”。例如，如果它控制序列轉錄，則啟動子可操作性連接至編碼序列；或者如果它的定位使得能夠轉譯，則核糖體結合位址可操作性連接至編碼序列。在一些實施方式中，設計用於在酵母表現系統中使用的結構元件包括前導序列，其使得宿主細胞能夠胞外分泌轉譯的蛋白。在一些實施方式中，在其中在無前導序列或轉運序列的情況下表現重組蛋白的情況下，多肽可以包括N末端蛋胺酸殘基。
可以使用各式各樣的表現宿主/載體組合。適合於表現的宿主細胞包括受適當啟動子控制的原核生物、酵母細胞、昆蟲細胞或高等真核細胞。適合於與細菌、真菌、酵母和哺乳動物細胞宿主一起使用的選殖株和表現載體以及蛋白質生產，包括抗體生產的方法在本領域中是熟知的。對於細菌宿主有用的表現載體包括已知的細菌質體，如來自大腸桿菌( E. coli)的質體，包括pCR1、pBR322、pMB9和它們的衍生物，以及更寬的宿主範圍質體，如M13及其它絲狀單鏈DNA噬菌體。
對於真核宿主有用的表現載體包括(例如)包含來自SV40、牛乳頭狀瘤病毒、腺病毒和巨細胞病毒的表現控制序列的載體。適合的哺乳動物宿主細胞株的實例包括(但不限於) COS-7 (猴腎-來源的)、L-929 (鼠纖維母細胞-來源的)、C127 (鼠乳腺腫瘤-來源的)、3T3 (鼠纖維母細胞-來源的)、CHO (中國倉鼠卵巢-來源的)、HeLa (人子宮頸癌-來源的)、BHK (倉鼠腎纖維母細胞-來源的)、HEK-293 (人胚腎-來源的)細胞株及其變異體。哺乳動物表現載體可以包含非轉錄元件，如複製起點、連接至要表現的基因的適合的啟動子和增強子以及其它5'或3'側接的非轉錄序列，和5'或3'非轉譯序列，如必需的核糖體結合位址、多腺苷酸化位址、剪接供體和受體位址以及轉錄終止序列。重組蛋白在昆蟲細胞培養系統(例如，杆狀病毒)中的表現還提供了用於產生正確折疊的和具有生物學功能的蛋白的穩健方法。用於在昆蟲細胞中產生異源蛋白質的杆狀病毒系統是本領域技術人員熟知的。
本文提供了抗-MASP-2抗體及其抗原結合片段，其包括(但不限於)單株抗體、多株抗體、合成抗體、人抗體、人源化抗體及其抗原結合片段。
抗體產生方法在本領域中是熟知的。參見，例如，在Harlow等人, Antibodies: A Laboratory Manual,(Cold Spring Harbor Laboratory Press, 第2版 1988)；Hammerling等人, 在Monoclonal Antibodies and T-Cell Hybridomas 563 681 (Elsevier, N.Y., 1981)中，以上每篇文獻以其全部內容作為參考併入本文。對於抗體在人中的體內使用，可以優選地使用人抗體。完全地，人抗體對於人受試者的治療性治療是特別期望地。可以透過本領域中已知的多種方法，包括使用來源於人免疫球蛋白序列的抗體序列庫的噬菌體展示方法(包括對這些技術的改善)來製備人抗體。另外參見，美國專利No. 4,444,887和4,716,111；和PCT專利公開WO 98/46645、WO 98/50433、WO 98/24893、WO 98/16654、WO 96/34096、WO 96/33735和WO 91/10741；以上每篇專利以其全部內容作為參考併入本文。人抗體還可以是其中透過來源於人DNA的一個或多個來源的核苷酸序列編碼重鏈和輕鏈的抗體。
還可以使用不能表現功能性內源免疫球蛋白，但是可以表現人免疫球蛋白基因的基因轉殖小鼠產生人抗體。例如，可以將人重鏈和輕鏈免疫球蛋白基因複合體隨機或透過同源重組引入小鼠胚胎幹細胞。作為另外一種選擇，除人重鏈和輕鏈基因之外，可以將人可變區、恆定區和多變區引入小鼠胚胎幹細胞。透過同源重組引入人免疫球蛋白基因座，可以單獨或同時使小鼠重鏈和輕鏈免疫球蛋白基因無功能性。例如，已描述了嵌合和種系突變體小鼠中抗體重鏈連接區(JH)基因的純合缺失導致內源抗體產生的完全抑制。將修飾的胚胎幹細胞擴增並微量注射到胚囊中以產生嵌合小鼠。然後，使嵌合小鼠繁殖以產生表現人抗體的純合子代。以正常方式，透過所選的抗原，例如，本發明的多肽的全部或部分使基因轉殖小鼠免疫。例如，使用常規融合瘤技術，抗人MASP-2抗原的抗-MASP-2抗體可以得自免疫的基因轉殖小鼠。基因轉殖小鼠所具有的人免疫球蛋白基因轉殖在B細胞分化期間重排，並且隨後經歷類別轉換和體細胞突變。因此，使用這種技術，有可能產生有治療性用途的IgG、IgA、IgM和IgE抗體，包括(但不限於) IgG1 (γ1)和IgG3。對於產生人抗體的這種技術的綜述，參見，Lonberg and Huszar [Int. Rev. Immunol., 13:65-93 (1995)]。對於產生人抗體和人單株抗體的這種技術的詳細討論以及產生這些抗體的規程，參見，例如，PCT專利公開No. WO 98/24893、WO 96/34096和WO 96/33735；和美國專利No. 5,413,923；5,625,126；5,633,425；5,569,825；5,661,016；5,545,806；5,814,318；和5,939,598，以上每項專利以其全部內容作為參考併入本文。另外，可以向公司，如Abgenix, Inc.(Freemont, Calif.)和Genpharm (San Jose, Calif.)預定以使用類似於如上所述的技術提供抗所選抗原的人抗體。對於種系突變體小鼠中人種系免疫球蛋白基因陣列的轉移將在抗原攻毒時導致人抗體產生的具體討論，參見，例如，Jakobovits等人, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90:2551 (1993)；Jakobovits等人, Nature, 362:255-258 (1993)；Bruggermann等人, Year in Immunol., 7:33 (1993)；和Duchosal等人, Nature, 355:258 (1992)。
人抗體還可以來源於噬菌體展示序列庫[Hoogenboom等人, J. Mol. Biol., 227:381 (1991)；Marks等人, J. Mol. Biol., 222:581-597 (1991)；Vaughan等人, Nature Biotech., 14:309 (1996)]。噬菌體展示技術[McCafferty等人, Nature, 348:552-553 (1990)]可以用於從來自未免疫供體的免疫球蛋白可變(V)結構域基因組庫體外產生人抗體和抗體片段。根據這種技術，將抗體V結構域基因框內選殖至絲狀噬菌體，如M13或fd的主要或次要外殼蛋白基因，並在噬菌體顆粒表面上展示為功能性抗體片段。由於絲狀顆粒包含噬菌體基因組的單鏈DNA複本，因此基於抗體的功能性的選擇還導致編碼顯示出那些性質的抗體的基因的選擇。因此，噬菌體模擬了B細胞的一些性質。可以以多種形式進行噬菌體展示；對於它們的綜述，參見，例如，Johnson and Chiswell, Current Opinion in Structural Biology 3:564-571 (1993)。V-基因節段的一些來源可以用於噬菌體展示。Clackson等人, Nature, 352:624-628 (1991)從來源於未免疫小鼠脾臟的V基因的小型隨機組合序列庫分離得到大量不同的抗噁唑酮抗體。基本上按照以下文獻中所述的技術，可以從未免疫的人供體構建V基因的組庫並且可以分離抗大量不同抗原(包括自體抗原)的抗體：Marks等人, J. Mol. Biol., 222:581-597 (1991)或者Griffith等人, EMBO J., 12:725-734 (1993)。還參見美國專利No. 5,565,332和5,573,905，以上每項專利以其全部內容作為參考併入本文。
還可以透過體外活化的B細胞產生人抗體(參見，美國專利No. 5,567,610和5,229,275，每項專利以其全部內容作為參考併入本文)。還可以使用融合瘤技術，如(但不限於)Roder等人[Methods Enzymol., 121:140-167 (1986)]所述的，體外產生人抗體。
作為另外一種選擇，在一些實施方式中，將非人抗體人源化，其中修飾抗體的具體序列或區域以提高對人中天然產生的抗體的相似性。在一些實施方式中，將抗原結合結構域部分人源化。
可以使用本領域中已知的多種技術產生人源化抗體，其包括(但不限於) CDR-移植(參見，例如，歐洲專利No. EP 239,400；國際專利公開No. WO 91/09967；和美國專利No. 5,225,539、5,530,101和5,585,089，以上每項專利以其全部內容作為參考併入本文)、貼面化(veneering)或表面重塑(resurfacing)[參見，例如，歐洲專利No. EP 592,106和EP 519,596；Padlan, 1991, Molecular Immunology, 28 (4/5):489-498；Studnicka等人, 1994, Protein Engineering, 7 (6):805-814；和Roguska等人, 1994, PNAS, 91:969-973，以上每篇文獻以其全部內容作為參考併入本文]、鏈改組(參見，例如，美國專利No. 5,565,332，該專利以其全部內容作為參考併入本文)以及下列中揭示的技術，例如，美國專利申請公開No. US2005/0042664、美國專利申請公開No. US2005/0048617、美國專利No. 6,407,213、美國專利No. 5,766,886、國際專利公開No. WO 9317105、Tan等人, J. Immunol., 169:1119-25 (2002)、Caldas等人, Protein Eng., 13 (5):353-60 (2000)、Morea等人, Methods, 20 (3):267-79 (2000)、Baca等人, J. Biol. Chem., 272 (16):10678-84 (1997)、Roguska等人, Protein Eng., 9 (10):895-904 (1996)、Couto等人, Cancer Res., 55 (23 Supp):5973s-5977s (1995)、Couto等人, Cancer Res., 55 (8):1717-22 (1995)、Sandhu J S, Gene, 150 (2):409-10 (1994)和Pedersen等人, J. Mol. Biol., 235 (3):959-73 (1994)，以上每篇文獻以其全部內容作為參考併入本文。通常，可以用來自CDR供體抗體的對應殘基替代框架區中的框架殘基以改變，優選地改善，抗原結合。透過本領域熟知的方法來辨識這些框架替換，例如，透過CDR和框架殘基的相互作用的建模來辨識對於抗原結合重要的框架殘基並且透過序列比較來辨識特定位置處不常見的框架殘基。(參見，例如，Queen等人, 美國專利No. 5,585,089；和Riechmann等人, 1988, Nature, 332:323，以上文獻以其全部內容作為參考併入本文)。
人源化抗體具有來自非人類的來源的引入其中的一個或多個胺基酸殘基。這些非人胺基酸殘基通常被稱為“輸入”殘基，其通常採集自“輸入”可變域。因此，人源化抗體包含來自非人免疫球蛋白分子的一個或多個CDR和來自人的框架區。抗體的人源化在本領域中是熟知的並且可以基本上按照Winter及其同事的方法[Jones等人, Nature, 321:522-525 (1986)；Riechmann等人, Nature, 332:323-327 (1988)；Verhoeyen等人, Science, 239:1534-1536 (1988)]，透過將齧齒類CDR或CDR序列替換為對應人抗體序列，即CDR-移植來進行(EP 239,400；PCT專利公開No. WO 91/09967；和美國專利No. 4,816,567；6,331,415；5,225,539；5,530,101；5,585,089；6,548,640，以上專利的內容以其全部作為參考併入本文)。在這些人源化嵌合抗體中，已透過來自非人物種的對應序列替換了基本不太完整的人可變域。實際上，人源化抗體通常是其中一些CDR殘基和可能的一些FR殘基被來自齧齒類抗體中的類似位址的殘基替換的人抗體。還可以透過貼面化(veneering)或表面重塑(resurfacing)[EP 592,106；EP 519,596；Padlan, 1991, Molecular Immunology, 28 (4/5):489-498；Studnicka等人, Protein Engineering, 7 (6):805-814 (1994)；和Roguska等人, PNAS, 91:969-973 (1994)]或者鏈改組(美國專利No. 5,565,332)實現抗體人源化，以上文獻的內容以其全部作為參考併入本文。
用於製備人源化抗體的人可變域(輕鏈和重鏈兩者)的選擇將降低抗原性。根據所謂的“最適(best-fit)”法，將齧齒類抗體的可變域序列對已知的人可變域序列的整個序列庫進行篩選。然後，將最接近齧齒類的人序列當作人源化抗體的人框架(FR)[Sims等人, J. Immunol., 151:2296 (1993)；Chothia等人, J. Mol. Biol., 196:901 (1987)，以上文獻的內容以其全部作為參考併入本文]。另一種方法使用來源於輕鏈或重鏈的特定亞群的所有人抗體的共有序列的特定框架。相同框架可以用於幾種不同的人源化抗體[Carter等人, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89:4285 (1992)；Presta等人, J. Immunol., 151:2623 (1993)，以上文獻的內容以其全部作為參考併入本文]。
可以使抗體人源化同時保留對標靶抗原的高親和力及其它有利的生物學性質。例如，可以透過親代序列分析方法以及使用親代和人源化序列的三維模型的多種概念性人源化產物，製備人源化抗體。三維免疫球蛋白模型是通常可用的並且是本領域技術人員熟悉的。說明和顯示所選候選免疫球蛋白序列的可能的三維構形結構的電腦程式是可用的。對這些展示的檢查允許分析殘基在候選免疫球蛋白序列中發揮功能的可能作用，即影響候選免疫球蛋白結合標靶抗原的能力的殘基的分析。以這種方式，可以從受體和輸入序列選擇FR殘基並組合，從而實現所期望的抗體特徵，如對標靶抗原提高的親和力。通常，CDR殘基直接並且最顯著地參與影響抗原結合。
人源化抗體保留了與原始抗體類似的抗原特異性，例如，結合人MASP-2抗原的能力。然而，使用某些人源化方法，可以使用如下所述的“定向進化”方法提高抗體對特定抗原結合的親和力和/或特異性：J. Mol. Biol., 294:151 (1999)，以上文獻的內容以其全部作為參考併入本文。 藥物組成物
本文還提供了包含本文所揭示的抗-MASP-2抗體或抗原結合片段的藥物組成物。在一些實施方式中，所述藥物組成物包含治療有效量的本文所揭示的抗-MASP-2抗體或抗原結合片段和藥物可用的載體。在一些實施方式中，所述藥物組成物在抑制MASP-2-依賴性補體活化中有用。在一些實施方式中，所述藥物組成物在治療與MASP-2-依賴性補體活化有關的疾病或病症中有用。
在一些實施方式中，本文所提供的藥物組成物包含本文所提供的抗-MASP-2抗體或抗原結合片段。所述抗-MASP-2抗體或抗原結合片段可以以多種濃度存在。在一些實施方式中，本文所提供的藥物組成物包含1-1000 mg/mL的本文所提供的可溶性抗-MASP-2抗體或抗原結合片段。在一些實施方式中，所述藥物組成物包含10-500 mg/mL、10-400 mg/mL、10-300 mg/mL、10-200 mg/mL、10-100 mg/mL、20-100 mg/mL或50-100 mg/mL的本文所提供的可溶性抗-MASP-2抗體或抗原結合片段。在一些實施方式中，本文所提供的藥物組成物包含約10 mg/mL、約20 mg/mL、約30 mg/mL、約40 mg/mL、約50 mg/mL、約60 mg/mL、約70 mg/mL、約80 mg/mL、約90 mg/mL、約100 mg/mL、約120 mg/mL、約150 mg/mL、約180 mg/mL、約200 mg/mL、約300 mg/mL、約500 mg/mL、約800 mg/mL或約1000 mg/mL的本文所提供的抗-MASP-2抗體或抗原結合片段。本領域技術人員可以容易地調整劑量；例如，純度降低可能需要劑量增加。
本文還提供了用於製備具有本文所揭示的抗-MASP-2抗體或抗原結合片段的藥物組成物的套組。在一些實施方式中，所述套組包含處於一個或多個容器中的本文所揭示的抗-MASP-2抗體或抗原結合片段和藥物可用的載體。在另一個實施方式中，所述套組可以包含用於向受試者施用的本文所揭示的抗-MASP-2抗體或抗原結合片段。在具體的實施方式中，所述套組包含有關抗-MASP-2抗體或抗原結合片段的製備和/或施用的說明書。
在一些實施方式中，本文提供了藥物組成物，其包含本文所提供的抗-MASP-2抗體或抗原結合片段或細胞，其中所述組成物適合於局部施用。
可以在本文提供的組成物中使用的藥物可用的載體包括生理學相容的任何和所有溶劑、分散媒介、塗層、抗細菌和抗真菌劑、等滲和吸收延遲劑等。在一些實施方式中，所述載體適合於靜脈內、肌肉內、皮下、非經腸胃、脊柱或表皮施用(例如，透過注射或輸液)。基於施用途徑，可以在材料中塗覆所述活性成分(即抗-MASP-2抗體或抗原結合片段)以保護所述活性成分避免可以使所述活性成分去活化的酸及其它自然條件的作用。
本文還提供了改善抗-MASP-2抗體或抗原結合片段的穩定性以使它們能夠長期儲存的藥物組成物或製劑。在一些實施方式中，本文所揭示的藥物組成物或製劑包含：(a)本文所揭示的抗-MASP-2抗體或抗原結合片段；(b)緩衝劑；(c)穩定劑；(d)鹽；(e)膨脹劑；和/或(f)界面活性劑。在一些實施方式中，所述藥物組成物或製劑穩定至少1個月、至少2個月、至少3個月、至少6個月、至少1年、至少2年、至少3年、至少5年或更長。在一些實施方式中，當在4℃、25℃或40℃儲存時，所述藥物組成物或製劑穩定。
在本文所揭示的藥物組成物或製劑中有用的緩衝劑可以是用於在添加另一種酸或鹼後，將溶液酸度(pH)維持在所選的值附近的弱酸或鹼。適合的緩衝劑可以透過維持對製劑的pH控制來使所述藥物製劑的穩定性最大化。適合的緩衝劑還可以確保生理學相容性或最佳化溶解度。流變學、黏度及其它性質還可以基於製劑的pH。常見的緩衝劑包括(但不限於)組胺酸、檸檬酸鹽、琥珀酸鹽、乙酸鹽和磷酸鹽。在一些實施方式中，緩衝劑包含組胺酸(例如，L-組胺酸)以及等滲性試劑並透過本領域中已知的酸或鹼潛在地進行pH調節。在某些實施方式中，所述緩衝劑是L-組胺酸。在某些實施方式中，將所述製劑的pH維持在約2至約10之間，或者約4至約8之間。
將穩定劑加入至藥物產物以穩定該產物。這些試劑可以以不同的方法穩定蛋白。常見的穩定劑包括(但不限於)胺基酸，如甘胺酸、丙胺酸、賴胺酸、精胺酸或蘇胺酸，碳水化合物，如葡萄糖、蔗糖、海藻糖，棉子糖或麥芽糖，多元醇，如甘油、甘露糖醇、山梨糖醇、環糊精或具有任何種類和分子量的葡萄聚糖，或PEG。在一些實施方式中，選擇所述穩定劑以使得凍乾製劑中FIX多肽的穩定性最大化。在某些實施方式中，所述穩定劑是蔗糖和/或精胺酸。
可以將膨脹劑添加至藥物組成物或製劑以增加產物的體積和品質，借此幫助準確對其進行計量和處理。常見的膨脹劑包括(但不限於)乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露糖醇、山梨糖醇、碳酸鈣或硬脂酸鎂。
界面活性劑是具有親水性和疏水性基團的兩親性物質。界面活性劑可以是陰離子、陽離子、兩性離子或非離子的。非離子型界面活性劑的實例包括(但不限於)烷基乙氧基化物、壬基酚乙氧基化物、胺乙氧基化物、聚環氧乙烷、聚環氧丙烷、脂肪醇，如鯨蠟醇或油醇、椰油醯胺MEA、椰油醯胺DEA、聚山梨醇酯或者十二烷基二甲基氧化胺。在一些實施方式中，所述界面活性劑為聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80。
本文所揭示的藥物組成物還可以包含一種或多種緩衝液系統、防腐劑、張度劑、螯合劑、穩定劑和/或界面活性劑及其不同組合。防腐劑、等張劑、螯合劑、穩定劑和界面活性劑在藥物組成物中的用途是技術人員熟知的。可以參考Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 第19版, 1995。
在一些實施方式中，所述藥物組成物是水性製劑。這種製劑通常是溶液或混合懸浮液，但是還可以包括膠體、分散系、乳液和多相材料。將術語“水性製劑”定義為包含至少50% w/w的水的製劑。同樣地，將術語“水性溶液”定義為包含至少50% w/w的水的溶液，並且將術語“水性混合懸浮液”定義為包含至少50% w/w的水的混合懸浮液。
在一些實施方式中，將本文所揭示的藥物組成物冷凍乾燥，在使用前醫師或患者向其中添加溶劑和/或稀釋劑。
本文所揭示的藥物組成物還可以包括藥物可用的抗氧化劑。藥物可用的抗氧化劑的實例包括：(1)水溶性抗氧化劑，如抗壞血酸、半胱胺酸鹽酸鹽、硫酸氫鈉、焦亞硫酸鈉、亞硫酸鈉等；(2)油溶性抗氧化劑，如抗壞血酸棕櫚酸酯、丁基羥基苯甲醚(BHA)、丁基化羥基甲苯(BHT)、卵磷脂、沒食子酸丙酯、α-生育酚等；和(3)金屬螯合劑，如檸檬酸、乙二胺四乙酸(EDTA)、山梨糖醇、酒石酸、磷酸等。
可以用於本文所描述的藥物組成物或製劑的適合的水性和非水性載體的實例包括水、乙醇、多元醇(如甘油、丙二醇、聚乙二醇等)及其適合的混合物、植物油，如橄欖油，和可注射有機酯，如油酸乙酯。可以(例如)透過使用塗層材料，如卵磷脂，就分散系來說透過維持所需的粒徑和透過使用界面活性劑來維持適當的流動性。
這些組成物還可以含有佐劑，如防腐劑、潤濕劑、乳化劑和分散劑。可以透過滅菌程式，如上和透過包含多種抗細菌和抗真菌劑，例如，對羥苯甲酸、氯代丁醇、苯酚、山梨酸等兩者來確保對微生物存在的預防。還可以期望在所述組成物中包括等張劑，如糖、氯化鈉等。另外，可以透過包含延遲吸收的試劑，如單硬脂酸鋁和明膠來造成可注射藥物形式的延長吸收。
藥物可用的載體包括無菌水溶液或分散系和用於無菌可注射溶液或分散系的即時製備的無菌粉末。這類媒介物和試劑用於藥物活性物質的使用在本領域中是已知的。除了任何常規媒介物或試劑與所述活性化合物不相容以外，考慮了其在本文所描述的藥物組成物中的使用。藥物組成物或製劑可以包含防腐劑或者可以缺少防腐劑。可以將補充性活性化合物引入所述組成物中。
藥物組成物或製劑通常必須是無菌的並且在生產和存儲條件下穩定。可以將所述組成物配製為溶液、微乳劑、脂質體或者適合於高藥物濃度的其它有序結構。所述載體可以是含有(例如)水、乙醇、多元醇(例如，甘油、丙二醇和液體聚乙二醇等)及其適合的混合物的溶劑或分散媒介。可以(例如)透過使用塗層，如卵磷脂，就分散系來說透過維持所需的粒徑和透過使用界面活性劑來維持適當的流動性。在多數情況下，所述組成物可以在所述組成物中包括等張劑，例如，糖、多元醇，如甘露糖醇、山梨糖醇或氯化鈉。可以透過在所述組成物中包含延緩吸收的試劑，例如，單硬脂酸鹽和明膠來導致可注射組成物的延長吸收。
可以根據需要，透過在具有以上列舉的一種成分或成分組合的適合的溶劑中摻入所要求的量的活性化合物，然後微濾滅菌，製備無菌可注射溶液。通常，透過在無菌媒介物中摻入所述活性化合物來製備分散系，所述媒介物包含基礎分散媒介和來自本文列舉的那些的所要求的其它成分。在用於製備無菌可注射溶液的無菌粉末的情況下，一些製備方法是真空乾燥和冷凍乾燥(凍乾)，這些乾燥方法從先前其无菌-過濾溶液中獲得了活性成分加任何它所期望的成分的粉末。
在本文所揭示的藥物組成物或製劑中可以與載體材料組合的活性成分的量可以是不同的。在一些實施方式中，可以與載體材料組合的活性成分的量是產生治療效果的量。通常，在百分之一百中，該量將在約0.01%至約99%的活性成分，約0.1%至約70%，或者約1%至約30%的活性成分結合藥物可用的載體的範圍內。
可以將本文所揭示的藥物組成物與載體一起製備，所述載體將保護所述活性成分免於快速釋放，如控釋製劑，包括植入物、透皮貼片和微膠囊化遞送系統。可以使用生物可降解的、生物相容性的聚合物，如乙烯-乙酸乙烯共聚物、聚酸酐、聚乙醇酸、膠原、聚原酸酯和聚乳酸。用於製備這些製劑的多種方法是專利保護的或通常是本領域技術人員已知的。參見，例如，Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems, J.R. Robinson主編, Marcel Dekker, Inc., New York, 1978。
在一些實施方式中，可以配製本文所描述的抗-MASP-2抗體或抗原結合片段以確保正確體內分佈。例如，血腦屏障(BBB)排除了多種高親水性化合物。為了確保本文所描述的活化的成分跨過BBB，可以(例如)在脂質體中配製它們。對於生產脂質體的方法，參見，例如，美國專利4,522,811；5,374,548；和5,399,331。所述脂質體可以包含選擇性輸送至特定細胞或器官的一種或多種部分，因此增強標靶藥物遞送[參見，例如，V.V. Ranade (1989) J. Clin. Pharmacol. 29:685]。例示性的標靶部分包括葉酸或生物素(參見，例如，授權給Low等人的美國專利5,416,016)；甘露糖苷[Umezawa等人,(1988) Biochem. Biophys. Res. Commun. 153: 1038]；抗體[P.G. Bloeman等人(1995) FEBS Lett. 357: 140；M. Owais等人(1995) Antimicrob. Agents Chemother. 39: 180]；表面活性蛋白A受體[Briscoe等人(1995) Am. J. Physiol. 1233: 134]；pl20 [Schreier等人(1994) J. Biol. Chem. 269:9090]；還參見K. Keinanen; M.L. Laukkanen (1994) FEBS Lett. 346: 123；J.J. Killion; I.J. Fidler (1994) Immunomethods 4:273。
可以透過(例如)標準ELISA測試本文所描述的抗-MASP-2抗體或抗原結合片段與人MASP-2的結合。簡要地，用純化的MASP-2塗覆微量滴定盤，然後用牛血清白蛋白封阻。將抗體稀釋液(例如，來自MASP-2-免疫小鼠的血漿的稀釋液)加入至每個孔中並培育。清洗盤並與綴合至辣根過氧化物酶(HRP)的第二試劑(例如，對於人抗體、山羊-抗-人IgG Fc-特異性多株試劑)培育。清洗後，可以使盤顯色並透過分光光度計分析。然後，可以對於與表現人MASP-2的細胞株結合，但不與不表現MASP-2的對照細胞株結合，透過流式細胞術進一步篩選來自免疫小鼠的血清。簡要地，可以透過將表現MASP-2的CHO細胞與抗-MASP-2抗體培育來評價抗-MASP-2抗體的結合。可以清洗細胞，並且可以透過抗-人IgG Ab檢測結合。可以使用FACS或流式細胞術(Becton Dickinson, San Jose, CA)進行流式細胞術分析。顯示出最高效價的小鼠可以用於融合。
如以上所描述的ELISA測定可以用於篩選抗體，並因此篩選產生對MASP-2免疫原顯示出陽性反應性的抗體的融合瘤。然後，可以次選殖並進一步鑒定產生對MASP-2以高親合力結合的抗體的融合瘤。然後，可以選擇保留親代細胞反應性(透過ELISA)的來自每個融合瘤的一個選殖株用於製備細胞庫和用於抗體純化。
為了純化抗-MASP-2抗體，可以使所選融合瘤生長以用於單株抗體純化。可以在親合層析法之前過濾並濃縮上清液。可以透過凝膠電泳和高效液相層析檢查洗提的IgG以確保純度。可以交換緩衝溶液，並且可以確定濃度。可以將單株抗體等分並儲存。
為了確定所選抗-MASP-2單株抗體是否結合至獨特表位，可以使用可商購的試劑(Pierce, Rockford, IL)使每個抗體生物素化。可以透過抗生蛋白鏈菌素標記探針檢測生物素化的MAb的結合。可以使用如以上所描述的MASP-2塗覆的ELISA盤進行使用未標記的單株抗體和生物素化的單株抗體的競爭研究。
為了確定純化抗體的同種型，可以使用對具有特定同種型的抗體特異的試劑進行同種型ELISA。例如，為了確定人單株抗體的同種型，可以在4℃用1pg/mL抗-人免疫球蛋白塗覆微量滴定盤的孔過夜。在用1% BSA封阻後，將盤與1f ig/mL或以下的測試單株抗體或純化的同種型對照在環境溫度下反應1至2小時。然後，所述孔可以與人IgGl或人IgM-特異性鹼性磷酸酶-綴合的探針反應。如以上所描述的，使盤顯色並分析。
為了測試單株抗體與表現MASP-2的活細胞的結合，可以使用流式細胞術，如實施例中所述。簡要地，將表現膜-結合的MASP-2的細胞株(在標準生長條件下生長)與處於含有0.1% BSA的PBS中的多種濃度的單株抗體在4℃混合1小時。清洗後，作為一抗染色，將細胞與螢光素標記的抗-IgG抗體在相同條件下反應。可以透過FACScan儀，使用光和側向散射性質分析樣品以對單一細胞設門並確定標記抗體的結合。除流式細胞術測定之外或作為它的替代，可以使用透過螢光顯微術的替代測定。可以完全如以上所描述的染色細胞並透過螢光顯微術檢驗。該方法允許對個體細胞顯像，但是可以基於抗原密度具有降低的敏感性。
可以透過免疫墨點進一步測試抗-MASP-2抗體或抗原結合片段與MASP-2抗原的反應性。簡要地，可以製備來自表現MASP-2的細胞的細胞萃取物並進行十二烷基硫酸鈉聚丙烯醯胺凝膠電泳。在電泳後，將分離的抗原轉移到硝化纖維素膜，用20%小鼠血清封阻並用要測試的單株抗體探測。可以使用抗-IgG鹼性磷酸酶檢測IgG結合，並用BCIP/NBT受質片(Sigma Chem. Co., St. Louis, MO)顯色。
用於分析多種抗-MASP-2抗體的結合親和力、交叉反應性和結合動力學的方法包括本領域中已知的標準測定，例如，使用(例如) Gator系統(Probe Life)或Octet-96系統(Sartorius AG)的生物膜干涉測量法(BLI)，或者使用BIACORE™ 2000 SPR儀(Biacore AB, Uppsala, Sweden)的BIACORE™表面電漿共振(SPR)分析。 方法和用途
本文所述的抗體或抗原-結合片段、組成物和方法具有多種體外和體內應用，包括(例如)降低發炎，如透過抑制(或拮抗) MASP-2-依賴性補體活化。本文所提供的抗體或抗原結合片段還可以用於檢測MASP-2。在一些實施方式中，本文所描述的抗-MASP-2抗體或抗原結合片段是人源化抗體或抗原結合片段。例如，本文所描述的抗-MASP-2抗體或抗原結合片段可以體外或離體施用於培養中的細胞，或者例如，體內施用於人受試者，以選擇性抑制多種疾病中的凝集素途徑補體活化。因此，本文提供了改變受試者中補體活化的方法，所述方法包括向所述受試者施用本文所描述的抗-MASP-2抗體或其抗原結合部分，從而改變所述受試者中的補體活化。
還涵蓋了檢測樣品中人MASP-2抗原的存在的方法或者測量人MASP-2抗原的量的方法，其包括在允許所述抗體或抗原-結合片段和人MASP-2之間形成複合物的條件下，將所述樣品和對照樣品與特異性結合至人MASP-2的單株抗體，例如，人源化單株抗體或其抗原結合部分接觸。然後檢測複合物的形成，其中與對照樣品相比，樣品間的差異複合物形成指示了樣品中人MASP-2抗原的存在。此外，本文所描述的抗-MASP-2抗體或抗原結合片段可以經由免疫親和純化用於純化人MASP-2。
本發明揭露還提供了抗-MASP-2抗體或抗原-結合片段、編碼這些抗-MASP-2抗體或抗原結合片段的多核苷酸、包含這些多核苷酸的載體、或者具有本文所揭示的這些抗體或抗原結合片段的藥物組成物在抑制MASP-2-依賴性補體活化或者治療與MASP-2-依賴性補體活化有關的疾病或病症中的使用方法。
在一些實施方式中，本文提供了治療對其有需要的受試者中與MASP-2-依賴性補體活化有關的疾病或病症的方法，其包括向所述受試者施用治療有效量的本文所揭示的抗-MASP-2抗體或抗原結合片段。在一些實施方式中，本文提供了本文所揭示的抗-MASP-2抗體或抗原結合片段在治療與MASP-2-依賴性補體活化有關的疾病或病症中的用途。在一些實施方式中，本文提供了本文所提供的抗-MASP-2抗體或抗原結合片段用於製備用於治療與MASP-2-依賴性補體活化有關的疾病或病症的藥劑的用途。
在一些實施方式中，本文提供了治療對其有需要的受試者中與MASP-2-依賴性補體活化有關的疾病或病症的方法，其包括向所述受試者施用治療有效量的本文所揭示的藥物組成物。在一些實施方式中，本文提供了本文所揭示的藥物組成物在治療與MASP-2-依賴性補體活化有關的疾病或病症中的用途。在一些實施方式中，本文提供了本文所提供的藥物組成物用於製備用於治療與MASP-2-依賴性補體活化有關的疾病或病症的藥劑的用途。
如本領域中已知的，補體系統的失調、不希望或過量活化以及免疫複合物的沉積在多種組織中引起發炎和損傷，其已涉及多種多樣的疾病的病理發生。在一些實施方式中，可以用本文所提供的抗-MASP-2抗體或抗原結合片段或者藥物組成物治療的與MASP-2-依賴性補體活化有關的疾病或病症為腎臟疾病或病症、血管疾病或病症、皮膚疾病或病症、眼科疾病或病症、神經系統疾病或病症、血液疾病或病症、肌骨胳疾病或病症、泌尿生殖器疾病或病症、代謝疾病或病症、內分泌疾病或病症、胃腸疾病或病症或者肺疾病或病症。
在一些實施方式中，可以用本文所提供的抗-MASP-2抗體或抗原結合片段或藥物組成物治療的與MASP-2-依賴性補體活化有關的疾病或病症是腎臟病況。所述腎臟病況可以是IgA腎病(即貝格爾病)、包括重症IgAN和IgAVN (IgA-血管炎相關腎炎)、狼瘡腎炎(LN)、膜性腎病(MN)、腎病症候群、腎小球疾病：血管球性腎炎、膜性腎小球腎炎、C3腎小球病(C3G)、IgM腎病、慢性腎病、慢性腎衰竭。在一些實施方式中，本文提供了治療對其有需要的受試者中IgA腎病的方法，其包括向所述受試者施用治療有效量的本文所提供的抗-MASP-2抗體或抗原結合片段。在一些實施方式中，本文提供了使用本文所提供的抗-MASP-2抗體或抗原結合片段治療重症IgAN的方法。在一些實施方式中，其中所提供的方法使用本文所提供的抗-MASP-2抗體或抗原結合片段治療IgAVN。在一些實施方式中，本文提供了治療對其有需要的受試者中狼瘡腎炎(LN)的方法，其包括向所述受試者施用治療有效量的本文所提供的抗-MASP-2抗體或抗原結合片段。在一些實施方式中，本文提供了治療對其有需要的受試者中膜性腎病(MN)的方法，其包括向所述受試者施用治療有效量的本文所提供的抗-MASP-2抗體或抗原結合片段。在一些實施方式中，本文提供了治療對其有需要的受試者中C3腎小球病(C3G)的方法，其包括向所述受試者施用治療有效量的本文所提供的抗-MASP-2抗體或抗原結合片段。在一些實施方式中，本文提供了治療對其有需要的受試者中與蛋白尿有關的疾病或病況的方法，其包括向所述受試者施用治療有效量的本文所提供的抗-MASP-2抗體或抗原結合片段。在一些實施方式中，本文提供了治療對其有需要的受試者中由纖維化和/或發炎引起或加劇的疾病或病況的方法，其包括向所述受試者施用治療有效量的本文所提供的抗-MASP-2抗體或抗原結合片段。
在一些實施方式中，可以用本文所提供的抗-MASP-2抗體或抗原結合片段或藥物組成物治療的與MASP-2-依賴性補體活化有關的疾病或病症是血管病況。所述血管病況可以是(例如)血栓性疾病或病症、血栓性微血管病(TMA)、陣發性睡眠性血紅蛋白尿(PNH)、血管炎或者獲得性高凝血狀態，例如，中央靜脈中導管的存在。在一些實施方式中，本文提供了治療對其有需要的受試者中TMA的方法，其包括向所述受試者施用治療有效量的本文所提供的抗-MASP-2抗體或抗原結合片段。在一些實施方式中，所述疾病或病症是與造血幹細胞移植有關的TMA (HSCT-TMA)。在一些實施方式中，所述疾病或病症是非典型性溶血性尿毒症候群(aHUS)。在一些實施方式中，所述疾病或病症是血栓性血小板減少性紫癜(TTP)。在一些實施方式中，所述疾病或病症是繼發於癌症的TMA。在一些實施方式中，所述疾病或病症是繼發於化療的TMA。在一些實施方式中，所述疾病或病症是繼發於移植的TMA。在一些實施方式中，本文提供了治療對其有需要的受試者中aHUS的方法，其包括向所述受試者施用治療有效量的本文所提供的抗-MASP-2抗體或抗原結合片段。在一些實施方式中，本文提供了治療對其有需要的受試者中TTP的方法，其包括向所述受試者施用治療有效量的本文所提供的抗-MASP-2抗體或抗原結合片段。
在一些實施方式中，本文所提供的抗-MASP-2抗體或抗原結合片段或藥物組成物可以用於治療已經歷，正在經歷或將經歷器官或組織移植程式，優選地選自下列的移植程式：器官異體移植、器官異種移植、器官和組織移植的受試者。在一些實施方式中，本文所提供的抗-MASP-2抗體或抗原結合片段或藥物組成物可以用於治療移植物抗宿主病。
在一些實施方式中，本文所提供的抗-MASP-2抗體或抗原結合片段或藥物組成物可以用於治療COVID-19併發症。
可以改變本文所描述的藥物組成物中活性成分(即抗-MASP-2抗體或抗原結合片段)的真實劑量水準以獲得對於特定患者、組成物和施用形式，實現所期望的治療反應有效但對患者無毒的活性成分的量。所選劑量水準將取決於多種藥物動力學因素，包括本文所述的特定組成物的活性、施用途徑、施用時間、排泄率、治療持續時間、與所使用的特定組成物組合使用的其它藥物、化合物和/或材料、正在治療的患者的年齡、性別、體重、狀況、一般健康情況和在先病史以及醫學領域中熟知的類似因素。
可以作為緩釋製劑施用抗-MASP-2抗體或抗原結合片段，在這種情況下不需要頻繁施用。基於抗-MASP-2抗體或抗原結合片段在患者中的半衰期來改變劑量和頻率。在治療應用中，有時需要處於相對短間隔的相對高劑量直至降低或終止疾病發展並且直至患者顯示出疾病症狀的部分或完全改善。
可以透過本領域中已知的任何方法向受試者施用本文所提供的抗-MASP-2抗體或抗原結合片段或藥物組成物，所述方法包括(但不限於)胸膜施用、靜脈內施用、皮下施用、節點內施用、肌肉內施用、皮內施用、鞘內施用、胸膜內施用、腹膜內施用、顱內施用、脊柱或其它非經腸胃施用途徑，例如，透過注射或輸液，或者直接施用至胸腺。如本文所使用的短語“胃腸外施用”表示腸內和局部施用以外的施用形式，其通常透過注射並且無限制地包括靜脈內、肌肉內、動脈內、鞘內、囊內、眶內、心內、皮內、腹膜內、經氣管、皮下、表皮下、關節內、被膜下、蛛網膜下、脊柱內、硬膜外和胸骨內(intrastemal)注射和輸液。在一些實施方式中，採用皮下施用。在一些實施方式中，採用靜脈內施用。在一些實施方式中，採用口服施用。在一個實施方式中，可以局部遞送本文所提供的抗體或抗原結合片段。在另一個實施方式中，可以全身施用本文所提供的抗體或抗原結合片段。
在本文所揭示的方法中，向可以受益於MASP-2-依賴性補體活化降低的受試者施用治療有效量的本文所揭示的抗-MASP-2抗體或抗原結合片段或藥物組成物。受試者可以是可以受益於凝集素途徑補體活化的選擇性抑制的一些人。受試者可以具有凝集素途徑的不希望、無限制或過量的補體活化。所述受試者可以是哺乳動物。在一些實施方式中，所述受試者是人。
可以透過本領域中已知的醫療裝置施用本文所提供的抗-MASP-2抗體或抗原結合片段或藥物組成物。例如，在一些實施方式中，可以使用無針皮下注射裝置，如下列中所揭示的裝置：美國專利No.5,399,163；5,383,851；5,312,335；5,064,413；4,941,880；4,790,824；或4,596,556。用於本文所描述的用途的熟知的植入物和模組的實例包括：美國專利No. 4,487,603，其揭示了用於以受控速率分配藥物的可植入微型輸液泵；美國專利No. 4,486,194，其揭示了透過皮膚施用藥劑的治療裝置；美國專利No. 4,447,233，其揭示了以準確輸液速率用於遞送藥物的藥物輸液泵；美國專利No. 4,447,224，其揭示了用於連續藥物遞送的可變速流可植入輸液設備；美國專利No. 4,439,196，其揭示了具有多室隔室的滲透性藥物遞送系統；和美國專利No. 4,475,196，其揭示了滲透性藥物遞送系統。這些專利作為參考併入本文。多種其它這些植入物、遞送系統和模組是本領域技術人員已知的。
在一些實施方式中，本文所提供的抗-MASP-2抗體或抗原結合片段或藥物組成物可以與其它療法一起施用。在一些實施方式中，與本文所提供的抗-MASP-2抗體或抗原結合片段一起施用的其它療法可以是抗發炎和/或止痛劑、抗-再狹窄劑或者另一種補體抑制劑。例示性抗發炎和/或止痛劑包括(例如)血清素受體拮抗劑；血清素受體促效劑；組胺受體拮抗劑；血管舒緩激肽受體拮抗劑；激肽釋放酶抑制劑；速激肽受體拮抗劑，包括神經激肽和神經激肽受體亞型拮抗劑；降鈣素基因-相關胜肽(CGRP)受體拮抗劑；介白素受體拮抗劑；在花生四烯酸代謝產物合成途徑中具有活性的酶抑制劑，包括磷脂酶抑制劑，包括PLA2同工型抑制劑和PLCγ同工型抑制劑、環加氧酶(COX)抑制劑(COX-I選擇性、COX-2選擇性或者非選擇性COX-I和-2抑制劑)、脂氧合酶抑制劑；前列腺素受體拮抗劑，包括類花生酸EP-1和EP-4受體亞型拮抗劑和凝血噁烷受體亞型拮抗劑；白三烯受體拮抗劑，包括白三烯B4受體亞型拮抗劑和白三烯D4受體亞型拮抗劑；阿片樣物質受體促效劑，包括μ-阿片樣物質、δ-阿片樣物質和κ-阿片樣物質受體亞型促效劑；嘌呤受體促效劑和拮抗劑，包括P2X受體拮抗劑和P2Y受體促效劑；三磷腺苷(ATP)-敏感的鉀通道開放劑；MAP激酶抑制劑；煙鹼乙醯膽鹼抑制劑；和α腎上腺素能受體促效劑。例示性補體抑制劑可以是C3抑制劑(例如，培可他普蘭)或者抗-C5抗體(例如，依庫珠單抗或雷武珠單抗)。
可以在施用本文所描述的抗-MASP-2抗體或抗原結合片段、細胞或藥物組成物之前、同時或之後施用其它療法。組合施用可以包括在單一藥物製劑或者使用不同製劑的共施用，或者以任一種順序但通常在使得全部活性劑可以同時發揮它們的生物學活性的時間段內的連續施用。本領域技術人員可以基於要治療的受試者的需要，容易地確定用於組合施用本文所描述的藥物組成物和其它療法的適當方案，包括在組合療法中使用的其它試劑的時機和劑量。
實驗
除非另作說明，否則僅出於說明的目的提供了以下實施例，它們不意欲限制。因此，本發明決不應視為受限於以下實施例，而是應視為涵蓋由於本文所提供的教導內容而變得顯而易見的任何和所有改變。
簡要地，來自以下所描述的研究的結果證實選殖株3E10及其人源化形式以高親合力結合至人MASP-2的蛋白酶結構域，並且在阻斷補體活化中比基準抗體納索利單抗(narsoplimab)(“MASP-2-BM”)更有效。 實施例 1. 免疫和抗體篩選
用重組人MASP-2蛋白(SEQ ID NO：1，NCBI登錄號NP_006601.2)免疫來自多種株的小鼠(C57BL/6、BALB/c、SJL和CD-1)。選擇產生強效價反應的那些小鼠進行單一B細胞分離。從脾臟和淋巴結分離B細胞並透過微珠富集。將辨識人MASP-2的B細胞染色並透過FACS分離。將這些B細胞的免疫球蛋白重鏈和輕鏈基因序列選殖並重組表現。然後，將這些單株抗體對人MASP-2的結合和活性阻斷進行重篩選。選擇選殖株3E10進行進一步研究。 實施例 2. 使用 C4 活化測定的阻斷活性評價
方法：將C4活化測定用於評價嵌合抗體的阻斷活性。將100 μl 10 μg/mL的甘露聚糖(Sigma-M7504)在4℃塗覆至96孔ELISA盤過夜。用C4活化緩衝液(0.1% BSA+20 mM Tris-HCl+2 mM CaCl 2+140 mM NaCl+1 mM MgCl 2+0.05% Tween20，pH7.4)連續稀釋抗體。將55 μl連續稀釋的抗體和55 μl含有2%人血清(Quidel-A113)的C4活化緩衝液混合並在冰上培育45 min。用清洗緩衝液(10 mM Tris-HCl+140 mM NaCl+0.05% Tween20+2 mM CaCl 2，pH 7.2-7.4)清洗甘露聚糖塗覆的盤並用封阻緩衝液(0.1% BSA+10 mM Tris-HCl+140 mM NaCl，pH 7.4)封阻。將100 μl抗體-血清混合物加入至甘露聚糖塗覆的盤並在37℃培育1.5 h。清洗後，將100 μl HRP連接的抗-C4抗體(Quidel-A211，1:3000)加入至盤中並培育1 h。將TMB用於檢測活化的補體C4。
結果和結論：如圖1和圖2所示，嵌合抗體以不同程度阻斷C4活化。選殖株3E10最有效，其IC 50為0.003603 μg/mL，然而MASP-2-BM的IC 50是0.2416 μg/mL。 實施例 3. 3E10 阻斷 C3 和 MAC 活化
方法：C3和MAC活化測定：將100 μl 10 μg/mL的甘露聚糖(Sigma-M7504)在4℃塗覆至96孔ELISA盤過夜。用活化緩衝液(0.1% BSA+20 mM Tris-HCl+2 mM CaCl 2+140 mM NaCl+1 mM MgCl 2+0.05% Tween20，pH7.4)連續稀釋抗體。將55 μl連續稀釋的抗體和55 μl含有2%人血清(Quidel-A113)的活化緩衝液混合並在冰上培育45 min。用清洗緩衝液(10 mM Tris-HCl+140 mM NaCl+0.05% Tween20+2 mM CaCl 2，pH 7.2-7.4)清洗甘露聚糖塗覆的盤並用封阻緩衝液(0.1% BSA+10 mM Tris-HCl+140 mM NaCl，pH 7.4)封阻。將100 μl抗體-血清混合物加入至甘露聚糖塗覆的盤並在37℃培育1.5 h。清洗後，將100 μl HRP連接的抗-C3抗體(Quidel-A205，1:3000)或者HRP連接的抗-MAC抗體(Quidel-A239，1:3000)分別加入至盤並培育1 h。將TMB (3,3',5,5''-四甲基聯苯胺)用於檢測活化的補體C3或MAC。
結果和結論：如圖4和圖5所示，嵌合3E10阻斷C3和MAC活化，其IC 50分別為0.004142 μg/ml和0.003266 μg/ml。 實施例 4. 透過 BLI 測量的 3E10 與 MASP-2 的結合
方法：用動力學緩衝液(PBS pH 7.4，0.1% BSA+0.01% Tween-20)將選殖株3E10稀釋至100 nM。用動力學緩衝液稀釋重組MASP-2蛋白以獲得濃度梯度：200 nM、100 nM、50 nM、25 nM和0 nM (參考對照)。在平衡後，將抗體固定化至蛋白A生物感測器。檢測基線60秒。然後，檢測120秒的抗體-抗原結合以獲得K on資料，隨後在動力學緩衝液中檢測解離120秒以獲得K off資料。在緩衝液10 mM甘胺酸，pH2.0中進行生物感測器的再生。在30℃收集所有動力學資料。透過Gator生物分析系統採集資料。
結果和結論：如圖3和表4所示，以高親和力將嵌合3E10結合至人MASP-2 (K D值＜1E-10M)。 表 4.3E10與人MASP-2的結合親和力
K on(1/Ms) K off(1/s) K D(M)
3E10 2.96E+04 ＜10E-7 ＜1E-10
實施例 5. 3E10 在不同濃度的人血清中阻斷 C4 活化
方法：將C4活化測定用於評價3E10在不同濃度的人血清中的阻斷活性。將100 μl 10 μg/mL的甘露聚糖(Sigma-M7504)在4℃塗覆至96孔ELISA盤過夜。用C4活化緩衝液(0.1% BSA+20 mM Tris-HCl+2 mM CaCl 2+140 mM NaCl+1 mM MgCl 2+0.05% Tween20，pH7.4)連續稀釋抗體。將55 μl連續稀釋的抗體和55 μl含有不同濃度的人血清(Quidel-A113)的C4活化緩衝液混合並在冰上培育45 min。人血清的最終濃度分別為5%、25%和50%。用清洗緩衝液(10 mM Tris-HCl+140 mM NaCl+0.05% Tween 20+2 mM CaCl 2，pH 7.2-7.4)清洗甘露聚糖塗覆的盤並用封阻緩衝液(0.1% BSA+10 mM Tris-HCl+140 mM NaCl，pH 7.4)封阻。將100 μl抗體-血清混合物加入至甘露聚糖塗覆的盤並在37℃培育1.5 h。清洗後，將100 μl HRP連接的抗-C4抗體(Quidel-A211，1:3000)加入至盤中並培育1 h。將TMB用於檢測活化的補體C4。
結果和結論：如圖6所示，嵌合3E10在5%、10%和50%人血清中分別以0.008259 μg/mL、0.03085 μg/mL和0.06734 μg/mL的IC 50阻斷C4活化。 實施例 6. 3E10 的人源化與透過 BLI 測量的其與 MASP-2 的結合親和力
方法：對於3E10的人源化，將來自NCBI的IgBLAST用於選擇最適合的人框架用於移植齧齒類CDR。使用與齧齒類可變區具有高胺基酸序列相同性的可變區(同源性匹配或最佳配合)。透過將來自輕鏈可變區的3個CDR移植到與小鼠抗體VL盡可能同源的人VL中，使3E10人源化。類似地，將它們來自重鏈可變區的3個CDR移植到與小鼠抗體盡可能同源的人VH。按照Kabat編號。此外，在所選的人可變區的框架區中，將少量胺基酸殘基改變為存在於小鼠可變區中的胺基酸殘基(稱為“回復突變”)。3E10的人源化序列如以上表3所列。不同的人源化選殖株共有一條輕鏈序列。透過BLI和C4活化測定評價人源化3E10選殖株的結合和活性。實驗程式與以上實施例中所述相同。
透過BLI與gator測量人源化3E10選殖株的結合親和力。人源化3E10選殖株或MSAP-2-BM被固定化在Protein A生物感測器上。在30℃進行測定，並且電泳緩衝液為具有0.1 % BSA和0.005% Tween-20的1×PBS (136 mM NaCl, 8 mM NaHPO 4, 2 mM KH 2PO 4, 2.6 mM KCl)，pH7.4。將稀釋的抗體和人MASP-2加入對應的孔中。加入樣品人MASP-2後，生物感測器檢測抗體的結合和解離。生物感測器的再生是在10 mM甘胺酸，pH2.0的緩衝液。
結果和結論：如表5所示，相比嵌合3E10，人源化3E10選殖株維持了與嵌合3E10相當的對人MASP-2的高結合親和力。如圖7所示，人源化3E10證實了與嵌合3E10相當的高C4阻斷活性。 表 5.人源化3E10的結合親和力(透過BLI測試)
抗體名稱 k off(1/s) k on(1/Ms) K D(M)
MASP-2-BM 0.00108 71900 1.50E-08
3E10-mus 0.00113 73500 1.54E-08
3E10-hu-0 102 38700 2.63E-08
3E10-hu-6 0.000985 64600 1.52E-08
3E10-hu-7-1 0.00114 65700 1.73E-08
3E10-hu-7-2 0.00107 72900 1.47E-08
3E10-hu-8 0.00107 68600 1.56E-08
3E10-hu-9 0.000952 74200 1.28E-08
3E10-hu-10 0.00111 72800 1.53E-08
3E10-hu-11 0.00107 77700 1.37E-08
3E10-hu-12 0.00103 72300 1.43E-08
實施例 7. 透過 SPR 測量的人源化 3E10 與 MASP-2 的結合
方法：透過使用Biacore 8K的表面電漿共振(SPR)技術進一步測量人源化3E10的結合親和力。將人源化3E10或IMG-025-BM固定化在CM-5晶片上。在25℃進行測定，並且電泳緩衝液是具有0.005% Tween-20的1×HEPES (10 mM HEPES、150 mM NaCl、3 mM EDTA)，pH7.4。將稀釋的抗體透過Fc捕捉法捕捉至感測器晶片。將人MASP-2用作分析物，隨後作為解離相注射電泳緩衝液。
結果和結論：在圖8和表6中提供了代表性結果，從而確認人源化3E10以比基準抗體低得多的K D結合至MASP-2。 表 6.抗體與hMASP-2的結合親和力(透過SPR測試)
配體 分析物濃度 k on(1/Ms) k off(1/s) K D(M) Rmax (RU) Chi² (RU²) 擬合模型
h3E10 0.195-12.5 nM 1130000 0.000108 9.58E-11 23.1 0.03 1:1結合
MASP-2-BM 0.195-12.5 nM 1990000 0.00386 1.94E-09 24.2 0.09 1:1結合
實施例 8. 人源化 3E10 阻斷 C4 、 C3 和 MAC 活化
方法：透過無凝血活化劑的標準方法，從10位健康供體收集人血清樣品。按照與以上實施例中對於本文所揭示的人源化3E10所述的相同程式進行C4、C3和MAC測定。
結果和結論：圖9提供了代表性結果。如所示的，人源化3E10強烈阻斷來自健康供體的血清中C4、C3和MAC活化，其IC 50值為0.006200 μg/mL、0.02232 μg/mL和0.009792 μg/mL，比基準抗體低得多。 實施例 9. 人源化 3E10 對經典或替代途徑無效
方法：對於經典途徑活化，將3 μg/mL IgM抗體在4℃塗覆至96孔ELISA盤過夜。用含有40%人血清的活化緩衝液(0.1% BSA+20 mM Tris-HCl+2 mM CaCl 2+140 mM NaCl+1 mM MgCl 2+0.05% Tween20，pH7.4)將抗體連續稀釋，混合並在冰上培育45 min。將10 mM EDTA用作陽性對照。用清洗緩衝液(10 mM Tris-HCl+140 mM NaCl+0.05% Tween 20+2 mM CaCl 2，pH 7.2-7.4)清洗IgM塗覆的盤並用封阻緩衝液(0.1% BSA+10 mM Tris-HCl+140 mM NaCl，pH 7.4)封阻。將100 μl抗體-血清混合物加入至IgM塗覆的盤並在37℃培育1.5 h。清洗後，將100 μl HRP連接的抗-MAC抗體加入至盤並培育1 h。將TMB用於檢測MAC的形成。
對於替代途徑活化，將3 μg/mL LPS在具有10 mM MgCl 2的PBS中稀釋並在4℃塗覆至96孔ELISA盤過夜。用含有10%人血清的活化緩衝液(20 mM Tris-HCl+10 mM EGTA+5 mM MgCl 2，pH7.4)將抗體連續稀釋，混合並在冰上培育45 min。將10 mM EDTA用作陽性對照。用清洗緩衝液(10 mM Tris-HCl+140 mM NaCl+0.05% Tween20+2 mM CaCl 2，pH 7.2-7.4)清洗LPS塗覆的盤。將100 μl抗體-血清混合物加入至LPS塗覆的盤並在37℃培育1.5 h。清洗後，將100 μl HRP連接的抗-MAC抗體加入至盤並培育1 h。將TMB用於檢測MAC的形成。
結果和結論：圖10提供了代表性結果。如所示的，人源化3E10對從經典途徑或替代途徑活化所產生的MAC沉積無效。 實施例 10.   3E10 的表位框併
方法：用動力學緩衝液(PBS pH 7.4，0.1% BSA+0.01% Tween-20)將MASP-2-his、3E10或MASP-2-BM稀釋至100 nM濃度。在平衡後，將MASP-2-his固定化在抗-his生物感測器上。檢測基線60秒。將第1抗體結合檢測240秒，然後平衡。然後，將第2抗體結合檢測240秒。在緩衝液10 mM甘胺酸，pH2.0中進行生物感測器的再生。在30℃收集所有動力學資料。透過Gator生物分析系統採集資料。
結果和結論：如圖11所示，第一抗體的結合不影響第二抗體的結合，表明3E10和MASP-2-BM結合至MASP-2上不同的表位。 實施例 11. 人源化 3E10 的表位框併
方法：如圖12所示，將截短的人MASP-2蛋白設計用於表位定位。表7中列出了這些抗原的序列。合成了編碼這些抗原的基因並在CHO表現系統中表現。透過ELISA測試了本文所揭示的人源化3E10或基準抗體與不同截短人MASP-2蛋白的結合。 表 7.截短的人MASP-2
截短的 MASP-2 序列
MASP-2-T1 (aa 1-414) TPLGPKWPEPVFGRLASPGFPGEYANDQERRWTLTAPPGYRLRLYFTHFDLELSHLCEYDFVKLSSGAKVLATLCGQESTDTERAPGKDTFYSLGSSLDITFRSDYSNEKPFTGFEAFYAAEDIDECQVAPGEAPTCDHHCHNHLGGFYCSCRAGYVLHRNKRTCSALCSGQVFTQRSGELSSPEYPRPYPKLSSCTYSISLEEGFSVILDFVESFDVETHPETLCPYDFLKIQTDREEHGPFCGKTLPHRIETKSNTVTITFVTDESGDHTGWKIHYTSTAQPCPYPMAPPNGHVSPVQAKYILKDSFSIFCETGYELLQGHLPLKSFTAVCQKDGSWDRPMPACSIVDCGPPDDLPSGRVEYITGPGVTTYKAVIQYSCEETFYTMKVNDGKYVCEADGFWTSSKGEKSLPV (SEQ ID NO：2)
MASP-2-T2 (aa 1-345) TPLGPKWPEPVFGRLASPGFPGEYANDQERRWTLTAPPGYRLRLYFTHFDLELSHLCEYDFVKLSSGAKVLATLCGQESTDTERAPGKDTFYSLGSSLDITFRSDYSNEKPFTGFEAFYAAEDIDECQVAPGEAPTCDHHCHNHLGGFYCSCRAGYVLHRNKRTCSALCSGQVFTQRSGELSSPEYPRPYPKLSSCTYSISLEEGFSVILDFVESFDVETHPETLCPYDFLKIQTDREEHGPFCGKTLPHRIETKSNTVTITFVTDESGDHTGWKIHYTSTAQPCPYPMAPPNGHVSPVQAKYILKDSFSIFCETGYELLQGHLPLKSFTAVCQKDGSWDRPMPA (SEQ ID NO：3)
MASP-2-T3 (aa 1-279) TPLGPKWPEPVFGRLASPGFPGEYANDQERRWTLTAPPGYRLRLYFTHFDLELSHLCEYDFVKLSSGAKVLATLCGQESTDTERAPGKDTFYSLGSSLDITFRSDYSNEKPFTGFEAFYAAEDIDECQVAPGEAPTCDHHCHNHLGGFYCSCRAGYVLHRNKRTCSALCSGQVFTQRSGELSSPEYPRPYPKLSSCTYSISLEEGFSVILDFVESFDVETHPETLCPYDFLKIQTDREEHGPFCGKTLPHRIETKSNTVTITFVTDESGDHTGWKIHYT (SEQ ID NO：4)
MASP-2-T4 (aa 1-166) TPLGPKWPEPVFGRLASPGFPGEYANDQERRWTLTAPPGYRLRLYFTHFDLELSHLCEYDFVKLSSGAKVLATLCGQESTDTERAPGKDTFYSLGSSLDITFRSDYSNEKPFTGFEAFYAAEDIDECQVAPGEAPTCDHHCHNHLGGFYCSCRAGYVLHRNKRTCS (SEQ ID NO：5)
MASP-2-T5 (aa 1-122) TPLGPKWPEPVFGRLASPGFPGEYANDQERRWTLTAPPGYRLRLYFTHFDLELSHLCEYDFVKLSSGAKVLATLCGQESTDTERAPGKDTFYSLGSSLDITFRSDYSNEKPFTGFEAFYAAE (SEQ ID NO：6)
結果和結論：圖13提供了代表性結果。如所示的，人源化3E10完全失去了其對於缺少蛋白酶結構域的截短的人MASP-2的結合，從而證實人MASP-2的蛋白酶結構域是人源化3E10結合所需的。相反，基準抗體MASP-2-BM顯示出對截短蛋白不同的結合性質並且對缺少蛋白酶結構域的人MASP-2保留了一定結合，從而確認人源化3E10和MASP-2-BM結合至MASP-2上的不同表位。 對電子提交的序列表的引用
本發明申請作為參考與本發明申請一起作為ASCII文字檔引入了序列表，其標題為“[P23400663C].SEQ.xml”，創建於2022年3月18日，大小為204,816位元組。
圖1提供了來自體外C4活化測定的代表性結果，其顯示了多種MASP-2抗體選殖的C4阻斷活性。選殖株3E10顯示出最強活性。
圖2提供了來自體外C4活化測定的代表性結果，其將3E10的C4阻斷活性與基準抗體納索利單抗(narsoplimab)(“MASP-2-BM”)相比較。
圖3提供了測量3E10與人MASP-2的結合親和力的生物膜干涉測量法(BLI)結果。
圖4提供了來自體外C3活化測定的代表性結果，其將3E10的C3抑制活性與MASP-2-BM相比較。
圖5提供了來自體外MAC活化測定的代表性結果，其將3E10的MAC抑制活性與MASP-2-BM相比較。
圖6提供了體外C4活化測定的代表性結果，其顯示在不同濃度(5%、25%和50%)的人血清，3E10阻斷C4活化。
圖7提供了來自體外C4活化測定的代表性結果，其顯示了多種人源化3E10的C4阻斷活性。
圖8提供了來自表面電漿共振(SPR)的代表性結果，其測量了人源化3E10與人MASP-2的結合親和力。
圖9提供了來自體外C4、C3和MAC活化測定的代表性結果，其顯示在來自健康供體的血清中，人源化3E10抑制C4、C3和MAC的活化。
圖10提供了來自體外MAC活化測定的代表性結果，其顯示人源化3E10既不影響經典途徑也不影響替代途徑-依賴性活化。
圖11提供了來自結合競爭測定的代表性結果，其顯示3E10和MASP-2-BM不競爭對人MASP-2的結合。
圖12提供了在表位定位中所使用的截短的人MASP-2蛋白的圖。
圖13提供了使用用於人源化3E10的表位定位的多種截短人MASP-2蛋白的來自結合測定的代表性結果。
TW202346336A_112110101_SEQL.xml

Claims (45)

  1. 特異性結合人MASP-2的抗體或其抗原-結合片段，其包含： (1) 如Kabat所定義的， (a) 輕鏈可變區(VL)，其包含分別具有7、9和11的胺基酸序列的VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3；或其在VL CDR中具有多至約5個胺基酸替換、添加和/或缺失的變異體；和/或， (b) 重鏈可變區(VH)，其包含分別具有12、16和18的胺基酸序列的VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3；或其在VH CDR中具有多至約5個胺基酸替換、添加和/或缺失的變異體；或者， (2) 如IMGT所定義的， (a) VL，其包含分別具有8、10和11的胺基酸序列的VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3；或其在VL CDR中具有多至約5個胺基酸替換、添加和/或缺失的變異體；和/或， (b) VH，其包含分別具有13、17和19的胺基酸序列的VH CDR1，VH CDR2，VH CDR3；或者其在VH CDR中具有多至約5個胺基酸替換、添加和/或缺失的變異體。
  2. 根據請求項1所述的抗體或抗原-結合片段，其包含分別具有SEQ ID NO：7、9、11、12、16和18所示的胺基酸序列的VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3、VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3，如Kabat所定義的。
  3. 根據請求項1所述的抗體或抗原-結合片段，其包含具有SEQ ID NO：8所示的胺基酸序列的VL CDR1；具有SEQ ID NO：10所示的胺基酸序列的VL CDR2；具有SEQ ID NO：11所示的胺基酸序列的VL CDR3；具有SEQ ID NO：13、14或15所示的胺基酸序列的VH CDR1；具有SEQ ID NO：17所示的胺基酸序列的VH CDR2；和具有SEQ ID NO：19或20所示的胺基酸序列的VH CDR3；如IMGT所定義的。
  4. 根據請求項3所述的抗體或抗原-結合片段，其包含具有下列胺基酸序列的VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3、VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3： (1) 分別為SEQ ID NO：8、10、11、13、17和19； (2) 分別為SEQ ID NO：8、10、11、14、17和19； (3) 分別為SEQ ID NO：8、10、11、15、17和19； (4) 分別為SEQ ID NO：8、10、11、13、17和20； (5) 分別為SEQ ID NO：8、10、11、14、17和20；或者 (6) 分別為SEQ ID NO：8、10、11、15、17和20。
  5. 特異性結合人MASP-2的抗體或其抗原-結合片段，其包含： (a) VL，其與SEQ ID NO：21所示的胺基酸序列具有至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或100%的序列相同性；和/或， (b) VH，其與SEQ ID NO：22所示的胺基酸序列具有至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或100%的序列相同性。
  6. 根據請求項5所述的抗體或抗原-結合片段，其包含分別具有SEQ ID NO：21和22所示的胺基酸序列的VL和VH。
  7. 特異性結合人MASP-2的抗體或其抗原-結合片段，其包含： (a) VL，其包含來自具有SEQ ID NO：21所示的胺基酸序列的VL的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3；和/或， (b) VH，其包含來自具有SEQ ID NO：22所示的胺基酸序列的VH的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3。
  8. 根據請求項1至7中任一項所述的抗體或抗原-結合片段，其是嵌合抗體或抗原-結合片段、人源化抗體或抗原-結合片段或者人抗體或抗原-結合片段。
  9. 根據請求項8所述的抗體或抗原-結合片段，其是人源化抗體或抗原-結合片段。
  10. 根據請求項9所述的抗體或抗原-結合片段，其包含： (a) VL，其與SEQ ID NO：23所示的胺基酸序列具有至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或100%的序列相同性；和/或 (b) VH，其與SEQ ID NO：24所示的胺基酸序列具有至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或100%的序列相同性。
  11. 根據請求項10所述的抗體或抗原-結合片段，其包含：具有SEQ ID NO：23 所示的胺基酸序列的VL和具有選自SEQ ID NO：24-32的胺基酸序列的VH。
  12. 根據請求項1至11中任一項所述的抗體或抗原-結合片段，其選自：Fab、Fab'、F (ab') 2、Fv、scFv、(scFv) 2、單域抗體(sdAb)和重鏈抗體(HCAb)。
  13. 根據請求項1至11中任一項所述的抗體或抗原-結合片段，其是IgG1抗體或其變異體、IgG2抗體或其變異體、IgG3抗體或其變異體或者IgG4抗體或其變異體。
  14. 根據請求項13所述的抗體，其是IgG4抗體或其變異體。
  15. 根據請求項14所述的抗體，其包含： (1) 輕鏈，其與SEQ ID NO：33所示的胺基酸序列具有至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或100%的序列相同性；和 (2) 重鏈，其與選自SEQ ID NO：34的胺基酸序列具有至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或100%的序列相同性。
  16. 根據請求項15所述的抗體，其中所述重鏈具有選自SEQ ID NO：34-42的胺基酸序列，或其透過提高抗體終未半衰期的一種或多種胺基酸替換修飾的變異體。
  17. 根據請求項16所述的抗體，其中透過選自下列的胺基酸殘基處的一個或多個替換修飾所述重鏈變異體：S228、F234、L235、M252、S254、T256、K288、T307、M428、N434、H435和Y436 (根據EU指數編號)。
  18. 根據請求項16所述的抗體，其中透過選自下列的胺基酸替換修飾所述重鏈變異體：i) S228P；ii) F234A和L235A；iii) S228P、F234A和L235A；(iv) T307H和N434A；v) M252Y、S254T和T256E；vi) M428L、N434A和Y436T；vii) S228P、M252Y、S254T和T256E；viii) S228P、F234A、L235A、M252Y、S254T和T256E；ix) S228P、F234A、L235A、T307Q和N434A；和(x) M252Y、S254T、T307H和N434A。
  19. 根據請求項15所述的抗體，其中所述輕鏈具有SEQ ID NO：33所示的胺基酸序列並且所述重鏈具有選自SEQ ID NO：43-74的胺基酸序列。
  20. 抗體或其抗原-結合片段，其與根據請求項1至19中任一項所述的抗體或抗原-結合片段競爭對人MASP-2的結合。
  21. 根據請求項1至20中任一項所述的抗體或抗原-結合片段，其是雙重特異性抗體或多重特異性抗體。
  22. 根據請求項1至21中任一項所述的所述的抗體或抗原-結合片段，其是單株抗體或抗原-結合片段。
  23. 根據請求項1至22中任一項所述的抗體或抗原-結合片段，其中所述抗體或抗原結合片段： (1) 以約1 nM或以下的K D結合人MASP-2，如透過表面電漿共振(SPR)所測量的； (2) 以約0.1 μg/mL或以下的IC 50阻斷C4活化，如體外測量的； (3) 以約0.1 μg/mL或以下的IC 50阻斷C3活化，如體外測量的； (4) 以約0.1 μg/mL或以下的IC 50阻斷MAC活化，如體外測量的； (5) 不影響補體活化的經典或替代途徑；或者 (6) (1)-(5)的任意組合。
  24. 特異性結合人MASP-2的蛋白酶結構域的抗體或其抗原結合片段，其中所述抗體或抗原結合片段： (1) 以1 nM或以下的K D結合人MASP-2，如透過SPR所測量的； (2) 以0.1 μg/mL或以下的IC 50阻斷C4活化，如體外測量的； (3) 以0.1 μg/mL或以下的IC 50阻斷C3活化，如體外測量的； (4) 以0.1 μg/mL或以下的IC 50阻斷MAC活化，如體外測量的； (5) 不影響補體活化的經典或替代途徑；或者 (6) (1)-(5)的任意組合。
  25. 根據請求項23或24所述的抗體或抗原-結合片段，其以0.001-0.01 μg/mL的IC 50阻斷C4活化，如體外所測量的。
  26. 根據請求項23或24所述的抗體或抗原-結合片段，其在存在5-50%人血清的情況下，以0.1 μg/mL或以下的IC 50阻斷C4活化，如體外所測量的。
  27. 根據請求項23至26中任一項所述的抗體或抗原-結合片段，其以0.01 nM至1 nM的範圍內的K D結合人MASP-2，如透過SPR所測量的。
  28. 根據請求項27所述的抗體或抗原-結合片段，其以0.05 nM至0.5 nM的範圍內的K D結合人MASP-2，如透過SPR所測量的。
  29. 多核苷酸，其編碼根據請求項1至28中任一項所述的抗體或抗原-結合片段。
  30. 載體，其包含根據請求項29所述的多核苷酸。
  31. 宿主細胞，其包含根據請求項29所述的多核苷酸，或者根據請求項30所述的載體。
  32. 藥物組成物，其包含治療有效量的根據請求項1至28中任一項所述的抗體或抗原-結合片段，和藥物可用的載體。
  33. 抑制對其有需要的受試者中MASP-2-依賴性補體活化的方法，其包括向所述受試者施用有效量的根據請求項1至28中任一項所述的抗體或抗原-結合片段。
  34. 根據請求項33所述的方法，其中所述受試者患有與MASP-2-依賴性補體活化有關的疾病或病症。
  35. 治療對其有需要的受試者中與MASP-2-依賴性補體活化有關的疾病或病症的方法，其包括向所述受試者施用治療有效量的根據請求項1至28中任一項所述的抗體或抗原-結合片段。
  36. 根據請求項35所述的方法，還包括向所述受試者施用其它療法。
  37. 根據請求項33至36中任一項所述的方法，其中所述受試者是人。
  38. 根據請求項1至28中任一項所述的抗體或抗原-結合片段在治療與MASP-2-依賴性補體活化有關的疾病或病症中的用途。
  39. 根據請求項1至28中任一項所述的抗體或抗原-結合片段在用於製備治療與MASP-2-依賴性補體活化有關的疾病或病症的藥劑中的用途。
  40. 根據請求項34至39中任一項所述的方法或用途，其中所述疾病或病症為腎臟疾病或病症、血管疾病或病症、皮膚疾病或病症、眼科疾病或病症、神經系統疾病或病症、血液疾病或病症、肌骨胳疾病或病症、泌尿生殖器疾病或病症、代謝疾病或病症、內分泌疾病或病症、胃腸疾病或病症或者肺疾病或病症。
  41. 根據請求項34至39中任一項所述的方法或用途，其中所述疾病或病症是IgA腎病(IgAN)、血栓性微血管病(TMA)、狼瘡腎炎(LN)、膜性腎病(MN)或者C3腎小球病(C3G)。
  42. 根據請求項41所述的方法或用途，其中所述疾病或病症是IgAN。
  43. 根據請求項41所述的方法或用途，其中所述疾病或病症是TMA。
  44. 根據請求項43所述的方法或用途，其中所述疾病或病症是非典型性溶血性尿毒症候群(aHUS)、與造血幹細胞移植有關的TMA (HSCT-TMA)、血栓性血小板減少性紫癜(TTP)、繼發於癌症的TMA、繼發於化療的TMA或者繼發於移植的TMA。
  45. 根據請求項44所述的方法或用途，其中所述疾病或病症是HSCT-TMA，根據請求項44所述的方法或用途，其中所述疾病或病症是TTP。
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