TW202346329A - 冠狀病毒之特異性抗體及其用途 - Google Patents
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Abstract
本發明係關於SARS-CoV-2之特異性抗體或其抗原結合片段。本發明亦關於一種醫藥組合物、一種用於治療及/或預防有需要之個體之由冠狀病毒引起之疾病及/或病症的方法及一種用於偵測樣品中之冠狀病毒的方法。
Description
本發明係關於一種冠狀病毒之特異性抗體或其抗原結合片段及其用途。
COVID-19大流行已引起全球積極努力以開發有效策略來控制SARS-CoV-2之擴散且改善症狀。在感染的個體中，感染引起直接細胞病變效應及過度發炎反應的症狀。缺乏有效治療導致高發病率及死亡率。此等新鑑別之病毒的出現凸顯了開發新穎抗病毒策略的需要。
因此，需要開發用於COVID-19之有效療法。
本發明提供新穎的治療型或偵測型抗冠狀病毒(諸如抗SARS-CoV-2棘蛋白)抗體及其用於治療或預防或偵測病毒感染的用途。
因此，本發明提供一種對冠狀病毒(CoV)，尤其SARS-CoV-2中之抗原決定基具有特異性的抗體或其抗原結合片段。根據本發明之抗體因此適用於治療及/或預防或偵測由CoV，尤其SARS-CoV-2引起或與其相關的疾病及/或病症。本發明之抗體亦適用於偵測CoV (尤其SARS-CoV-2)。
在本發明之一些實施例中，本發明提供一種對CoV中之抗原決定基具有特異性的抗體或其抗原結合片段；其中該抗體或其抗原結合片段包含重鏈可變區之互補決定區(CDR)及輕鏈可變區之CDR，
其中該重鏈可變區之該等CDR包含：SEQ ID NO: 1、6或11之胺基酸序列或其基本相似序列的CDRH1，SEQ ID NO: 2、7或12之胺基酸序列或其基本相似序列的CDRH2，及SEQ ID NO: 3、8或13之胺基酸序列或其基本相似序列的CDRH3；且
其中該輕鏈可變區之該等CDR包含：
SEQ ID NO: 4、9或14之胺基酸序列或其基本相似序列的CDRL1，DVS、DAS或AAS之胺基酸序列或其基本相似序列的CDRL2，及SEQ ID NO: 5、10或15之胺基酸序列或其基本相似序列的CDRL3。
在一個實施例中，本發明提供一種對CoV中之抗原決定基具有特異性之抗體(尤其5SB12)或其抗原結合片段；其中該抗體或其抗原結合片段包含重鏈可變區之互補決定區(CDR)及輕鏈可變區之CDR，
其中該重鏈可變區之該等CDR包含：
SEQ ID NO: 1之胺基酸序列或其基本相似序列的CDRH1，SEQ ID NO: 2之胺基酸序列或其基本相似序列的CDRH2，及SEQ ID NO: 3之胺基酸序列或其基本相似序列的CDRH3；且
其中該輕鏈可變區之該等CDR包含：
SEQ ID NO: 4之胺基酸序列或其基本相似序列的CDRL1，DVS之胺基酸序列或其基本相似序列的CDRL2，及SEQ ID NO: 5之胺基酸序列或其基本相似序列的CDRL3。
在一些實施例中，本發明提供一種對CoV中之抗原決定基具有特異性之抗體(尤其1-2SA8)或其抗原結合片段；其中該抗體或其抗原結合片段包含重鏈可變區之CDR及輕鏈可變區之CDR，
其中該重鏈可變區之該等CDR包含：
SEQ ID NO: 6之胺基酸序列或其基本相似序列的CDRH1，SEQ ID NO: 7之胺基酸序列或其基本相似序列的CDRH2，及SEQ ID NO: 8之胺基酸序列或其基本相似序列的CDRH3；且
其中該輕鏈可變區之該等CDR包含：
SEQ ID NO: 9之胺基酸序列或其基本相似序列的CDRL1，DAS之胺基酸序列或其基本相似序列的CDRL2，及SEQ ID NO: 10之胺基酸序列或其基本相似序列的CDRL3。
在一些實施例中，本發明提供一種對CoV中之抗原決定基具有特異性之抗體(尤其15SE6)或其抗原結合片段；其中該抗體或其抗原結合片段包含重鏈可變區之CDR及輕鏈可變區之CDR，
其中該重鏈可變區之該等CDR包含：
SEQ ID NO: 11之胺基酸序列或其基本相似序列的CDRH1，SEQ ID NO: 12之胺基酸序列或其基本相似序列的CDRH2，及SEQ ID NO: 13之胺基酸序列或其基本相似序列的CDRH3；且
其中該輕鏈可變區之該等CDR包含：
SEQ ID NO: 14之胺基酸序列或其基本相似序列的CDRL1，AAS之胺基酸序列或其基本相似序列的CDRL2，及SEQ ID NO: 15之胺基酸序列或其基本相似序列的CDRL3。
在本發明之一些實施例中，抗原決定基位於棘蛋白。在本發明之一些其他實施例中，抗原決定基位於棘蛋白之受體結合域(RBD)。
在本發明之一些實施例中，該抗體為Fab片段、F(ab')
2片段、ScFv片段、單株抗體、嵌合抗體、奈米抗體、人類化抗體或人類抗體。
本發明提供一種載體，其編碼如本文所揭示之抗體或其抗原結合片段。
本發明提供一種經基因工程改造之細胞，其表現如本文所揭示之抗體或其抗原結合片段或含有如本文所揭示之載體。
本發明亦提供一種用於製造如本文所揭示之抗體或其抗原結合片段的方法，其包含：(a)將一或多種編碼該抗體或抗原結合片段之聚核苷酸引入宿主細胞中；(b)在有利於表現該一或多種聚核苷酸之條件下培養宿主細胞；及(c)視情況自宿主細胞及/或培養宿主細胞之培養基中分離出該抗體或抗原結合片段。
本發明提供一種醫藥組合物，其包含如本文所揭示之抗體或其抗原結合片段及醫藥學上可接受之載劑以及視情況選用之另一治療劑。
治療劑之實例包括但不限於抗病毒劑。在本發明之一些實施例中，治療劑為抗炎劑或對CoV之棘蛋白具有特異性的抗體或其抗原結合片段。
在本發明之一些實施例中，個體經疫苗接種。
本發明提供一種容器或注射裝置，其包含如本文所揭示之抗體或其抗原結合片段。
本發明提供一種用於治療或預防有需要之個體之冠狀病毒感染的方法，其包含投與治療有效量之如本文所揭示之抗體或其抗原結合片段。替代地，本發明提供一種用於治療或預防有需要之個體之冠狀病毒感染的醫藥組合物，其包含治療有效量之如本文所揭示之抗體或其抗原結合片段及醫藥學上可接受之載劑以及視情況選用之另一治療劑。
在一些實施例中，本文所描述之CoV包括但不限於SARS-CoV、MERS-CoV或SARS-CoV-2。在本發明之一些實施例中，本文所描述之CoV為野生型(WT) CoV、D614G、α-CoV、β-CoV、γ-CoV、δ-CoV或o-CoV。
在本發明之一些實施例中，向個體投與一或多種其他治療劑。
本發明提供一種用於中和有需要之個體之冠狀病毒的方法，其包含向該個體投與如本文所揭示之抗體或其抗原結合片段。替代地，本發明提供一種用於中和有需要之個體之冠狀病毒的醫藥組合物，其包含治療有效量之如本文所揭示之抗體或其抗原結合片段及醫藥學上可接受之載劑以及視情況選用之另一治療劑。
本發明亦提供一種用於在有需要之個體中引發針對冠狀病毒之抗體依賴性細胞介導之細胞毒性的方法，其包含向該個體投與如本文所揭示之抗體或其抗原結合片段。替代地，本發明提供一種用於在有需要之個體中引發針對冠狀病毒之抗體依賴性細胞介導之細胞毒性的醫藥組合物，其包含治療有效量之如本文所揭示之抗體或其抗原結合片段及醫藥學上可接受之載劑以及視情況選用之另一治療劑。
本發明提供一種用於向個體的身體投與如本文所揭示之抗體或其抗原結合片段的方法，其包含將抗體或抗原結合片段注射至該個體的身體中。
在本發明之一些實施例中，將抗體或抗原結合片段皮下、靜脈內或肌肉內注射至個體的身體中。
本發明提供一種用於偵測樣品中之冠狀病毒的方法，其包含使樣品與如本文所揭示之抗體或其抗原結合片段接觸。
本發明提供一種用於偵測樣品中之冠狀病毒的套組，其中該套組包含如本文所揭示之抗體或其抗原結合片段。
在以下部分中詳細描述本發明。本發明之其他特徵、目的及優勢可見於實施方式及申請專利範圍中。
應瞭解，本發明不限於本文所描述之特定材料及方法。亦應瞭解，本文所用之術語僅出於描述特定實施例之目的且不意欲限制本發明之範疇，本發明之範疇將僅由所附申請專利範圍限制。
必須注意的是，除非內容明確另外指示，否則如本說明書及所附申請專利範圍中所中使用，單數形式「一(a/an)」及「該(the)」包括複數個指示物。
如本文所用，術語「抗體」係指包含至少一個對特定抗原，諸如SARS-CoV-2棘蛋白具有特異性或與其相互作用之互補決定區(CDR)的任何抗原結合分子或分子複合物。術語「抗體」包括包含藉由雙硫鍵互連之四條多肽鏈，亦即兩條重(H)鏈及兩條輕(L)鏈的免疫球蛋白分子，以及其多聚體(例如IgM)。各重鏈包含重鏈可變區(本文中縮寫為HCVR或V
H)及重鏈恆定區。重鏈恆定區包含三個域，亦即C
H1、C
H2及C
H3。各輕鏈包含輕鏈可變區(本文中縮寫為LCVR或V
L)及輕鏈恆定區。輕鏈恆定區包含一個域(C
L1)。V
H及V
L區可進一步細分成稱為互補決定區(CDR)之高變區，其間穿插有稱為構架區(FR)之保守性較高之區域。各V
H及V
L係由自胺基端至羧基端按以下順序排列之三個CDR及四個FR構成：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。在本發明之不同實施例中，抗SARS-CoV-2棘蛋白抗體(或其抗原結合部分)之FR可與人類生殖系序列一致，或可為天然或人工修飾的。胺基酸共有序列可以基於兩個或更多個CDR之並列分析來確定。
如本文所用，術語抗體之「抗原結合部分」、抗體之「抗原結合片段」及其類似術語包括特異性結合抗原以形成複合物之任何天然存在、可以酶方式獲得、合成或經基因工程改造之多肽或醣蛋白。
如本文所用，術語「特異性」或「特異性結合」意謂抗體不與其他抗原決定基發生明顯程度的交叉反應。
如本文所用，術語「抗原決定基」係指抗體所結合之抗原上的位點。
如本文所用，術語「互補決定區」(CDR)係指在重鏈及輕鏈多肽之可變區內發現的非連續抗原組合位點。Kabat等人，J.Biol.Chem.252:6609-6616 (1977)；Kabat等人，美國衛生及人類服務部(U.S.Dept.of Health and Human Services)，「Sequences of proteins of immunological interest」(1991)；Chothia等人，J.Mol .Biol.196:901-917(1987)；及MacCallum等人，J.Mol.Biol.262:732-745(1996)已經描述CDR，其中定義包括彼此對照比較時胺基酸殘基的重疊或子集。
當應用於多肽時，術語「基本相似性」或「基本相似」意謂兩個肽序列在諸如藉由程式GAP或BESTFIT，使用預設空位權重最佳地比對時，共有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性。較佳地，不因保守性胺基酸取代而不同的殘基位置。「保守性胺基酸取代」為一種胺基酸取代，其中胺基酸殘基經側鏈(R基團)具有類似化學特性(例如電荷或疏水性)之另一個胺基酸殘基取代。一般而言，保守性胺基酸取代不會實質上改變蛋白質之功能特性。在其中兩個或更多個胺基酸序列彼此間差異為保守性取代之情況下，可上調序列一致性或相似度百分比以根據保守取代性質加以校正。進行此調整之方式為熟習此項技術者所熟知。具有化學特性類似之側鏈的胺基酸群組實例包括(1)脂族側鏈：甘胺酸、丙胺酸、纈胺酸、白胺酸及異白胺酸；(2)脂族羥基側鏈：絲胺酸及蘇胺酸；(3)含醯胺側鏈：天冬醯胺及麩醯胺酸；(4)芳族側鏈：苯丙胺酸、酪胺酸及色胺酸；(5)鹼性側鏈：離胺酸、精胺酸及組胺酸；(6)酸性側鏈：天冬胺酸及麩胺酸；及(7)含硫側鏈為半胱胺酸及甲硫胺酸。較佳的保守性胺基酸取代群組為：纈胺酸-白胺酸-異白胺酸、苯丙胺酸-酪胺酸、離胺酸-精胺酸、丙胺酸-纈胺酸、麩胺酸-天冬胺酸及天冬醯胺-麩醯胺酸。替代地，保守性置換為在以引用之方式併入本文中之Gonnet等人(1992) Science 256: 1443-1445中所揭示之PAM250對數似然矩陣中具有正值之任何變化。「適度保守」置換為在PAM250對數似然矩陣中具有非負值之任何變化。
如本文所用之術語「單株抗體」不限於經由融合瘤技術產生之抗體。單株抗體衍生自單一純系，包括任何真核、原核或噬菌體純系，或藉由此項技術中可用或已知的任何參考衍生。
如本文所用，術語「奈米抗體」係指包含小的單可變域(自駱駝及單峰駝獲得之抗體之VHH)的抗體。自駱駝及單峰駝(雙峰駱駝(Camelus baclrianus)及單峰駱駝(Calelus dromaderius))家族成員(包括新世界成員，諸如駱馬物種(羊駝(Lama pacos)、大羊駝(Lama glama)及瘦駝(Lama vicugna)))獲得之抗體蛋白已在尺寸、結構複雜性及對人類個體之抗原性方面加以表徵。如自然界中所發現之來自此哺乳動物家族之某些IgG抗體缺少輕鏈，且因此在結構上不同於其他動物抗體之具有兩條重鏈及兩條輕鏈之典型四鏈四級結構。
非人類抗體之「人類化」形式為含有衍生自非人類免疫球蛋白之最小序列的嵌合免疫球蛋白。一般而言，人類化抗體將包含基本上所有的至少一個且通常兩個可變域，其中所有或基本上所有的CDR區對應於非人類免疫球蛋白之CDR區且所有或基本上所有的FR區為人類免疫球蛋白序列之FR區。
如本發明中所用，術語「治療劑」係指具有適用於向哺乳動物(例如人類)投與之治療性或藥理學作用的任何化合物、物質、藥物或活性成分。
如本文所用，術語「免疫結合物」係指抗原結合蛋白，例如抗體或抗原結合片段，其化學或生物學連接至放射性試劑、細胞介素、干擾素、目標或報導部分、酶、肽或蛋白質或治療劑。抗原結合蛋白可在沿分子之任何位置與放射性試劑、細胞介素、干擾素、目標或報導部分、酶、肽或治療劑連接，只要其能夠結合其目標(CoV-S)即可。免疫結合物之實例包括抗體-藥物結合物及抗體-毒素融合蛋白。在本發明之一個實施例中，該試劑可為特異性結合至CoV-S的第二不同抗體。可與抗CoV-S抗原結合蛋白(例如抗體或片段)結合之治療部分的類型將考慮待治療之病狀及待達成之所需治療效果。
如本文所用，術語「載體」意指能夠轉運其已連接之另一核酸的核酸分子。
術語細胞之「經基因工程改造(genetically engineered)」或「基因工程改造(genetic engineering)」係指使用遺傳物質操縱基因以改變細胞中之基因複本及/或基因表現量。遺傳物質可呈DNA或RNA形式。遺傳物質可藉由包括病毒轉導及非病毒轉染之各種方式轉移至細胞中。在經基因工程改造之後，細胞中某些基因之表現量可永久或暫時改變。
術語「冠狀病毒」或「CoV」係指冠狀病毒科中之任何病毒，包括但不限於SARS-CoV-2、MERS-CoV及SARS-CoV。SARS-CoV-2係指新出現之冠狀病毒，其正迅速地向全球其他地區蔓延。其經由病毒棘蛋白結合至人類宿主細胞受體血管收縮素轉換酶2 (ACE2)。棘蛋白亦與TMPRSS2結合且由TMPRSS2裂解，從而活化棘蛋白以進行病毒之膜融合。
術語「CoV-S」，亦稱為「S」或「S蛋白」係指冠狀病毒之棘蛋白，且可以指特定S蛋白，諸如SARS-CoV-2-S、MERS-CoV S及SARS-CoV S。
如本文所用，術語「冠狀病毒感染」或「CoV感染」係指感染冠狀病毒，諸如SARS-CoV-2、MERS-CoV或SARS-CoV。該術語包括冠狀病毒呼吸道感染，經常發生在下呼吸道。症狀可包括高燒、乾咳、呼吸急促、肺炎、胃腸道症狀(諸如腹瀉)、器官衰竭(腎衰竭及腎功能障礙)、敗血性休克及嚴重病例中的死亡。
如本發明中所用，術語「醫藥組合物」係指含有向哺乳動物(例如人類)投與以預防、治療或消除哺乳動物所患之特定疾病或病理性病狀的治療劑的混合物。
如本文所用，術語「治療有效量」或「靈驗量」係指當投與哺乳動物或其他個體用於治療疾病時，足以實現對該疾病之該治療的抗體之量。
如本文所用，術語「治療(treatment/treating)」及其類似術語涵蓋對哺乳動物，尤其人類之疾病的任何治療，且包括：(a)預防疾病在可易患該疾病但尚未診斷患有其之個體中發生；(b)抑制疾病，亦即遏制其發展；及(c)緩解疾病，亦即促使疾病消退。
術語「預防(preventing/prevention)」在此項技術中為公認的，且當與病狀結合使用時，其包括在病狀發作之前投與藥劑以相對於未接受藥劑之個體，降低個體中之醫學病狀之症狀的發生率或嚴重程度或延遲其發作。
如本文中可互換地使用，術語「個人」、「個體」、「宿主」及「患者」係指哺乳動物，包括但不限於鼠類(大鼠、小鼠)、非人類靈長類動物、人類、犬科動物、貓科動物、有蹄動物(例如馬科動物、牛科動物、綿羊、豬科動物、山羊)等。特定言之，個體經疫苗接種。
如本文所用，術語「需要治療」係指由照護者(例如在人類之情況下，為醫師、護士、護理從業者或個人；在動物(包括非人類之哺乳動物)之情況下，為獸醫)作出的判斷，該判斷為個體需要治療或將受益於治療。除包括知曉個體由於可由本發明化合物治療之病狀而患病或將患病以外，此判斷係基於照護者之專項知識領域內的各種因素作出。
如本文所用，術語「樣品」涵蓋獲自個人、個體或患者之多種樣品類型，且可用於診斷性或監測分析。該定義涵蓋血液及生物來源之其他液體樣品；固體組織樣品，諸如生檢樣本或組織培養物或源自其之細胞，及其後代。
「中和」係指分子(例如抗體)抑制冠狀病毒活性達到任何可偵測程度(例如抑制冠狀病毒與受體結合、由蛋白酶裂解或介導病毒進入宿主細胞或宿主細胞中之病毒繁殖的能力)的過程。
冠狀病毒(CoV)感染人類及動物且引起多種疾病，包括呼吸道、腸、腎及神經疾病。CoV使用其棘醣蛋白(S) (中和抗體之主要目標)結合其受體且介導膜融合及病毒進入。冠狀病毒棘蛋白在所有人類冠狀病毒(CoV)中高度保守且參與受體識別、病毒附著及進入宿主細胞。類似地，SARS-CoV-2 S蛋白亦與CoV之S蛋白高度保守。當S蛋白結合至受體時，TM蛋白酶絲胺酸2 (TMPRSS2) (位於宿主細胞膜上之第2型TM絲胺酸蛋白酶)藉由活化S蛋白促進病毒進入細胞。在病毒進入細胞後，病毒RNA經釋放，多聚蛋白自RNA基因體轉譯，且經由蛋白質裂解及組裝複製酶-轉錄酶複合物發生病毒RNA基因體之複製及轉錄。病毒RNA經複製，且結構蛋白在宿主細胞中合成、組裝及包裝，其後釋放病毒顆粒(
Fehr AR, Perlman S. Coronaviruses: an overview of their replication and pathogenesis. Methods Mol Biol. 2015;1282:1-23)。
SARS-CoV-2棘蛋白為1273胺基酸第I型膜醣蛋白，其組裝成在套膜冠狀病毒顆粒之表面上構成棘或肽聚體的三聚體。該蛋白質具有兩種基本功能：宿主受體結合及膜融合，此歸因於S蛋白的N端(S1)及C端(S2)半部。CoV-S經由存在於S1次單元中之受體結合域(RBD)結合至其同源受體。全長SARS-CoV-2棘蛋白之胺基酸序列由以下SEQ ID NO: 19之胺基酸序列例示。S1域結合受體後，引起S2域發生構形變化，此促進病毒套膜與其目標細胞之質膜之間發生融合。SARS-CoV-2棘蛋白之變異體實例包括但不限於D614G：D614G；B.1.1.7：69-70缺失、144缺失、N501Y、A570D、D614G、P681H、T716I、S982A及D1118H；B.1.351：L18F、D80A、D215G、242-244缺失、R246I、K417N、E484K、N501Y、D614G及A701V。術語「CoV-S」包括自不同CoV分離株分離之CoV棘蛋白的蛋白質變異體以及重組CoV棘蛋白或其片段。該術語亦涵蓋與例如組胺酸標籤、小鼠或人類Fc或信號序列(諸如ROR1)偶聯的CoV棘蛋白或其片段。
本發明開發了對CoV，尤其SARS-CoV-2棘蛋白中之抗原決定基具有特異性的抗體或其抗原結合片段。
在本發明之一些實施例中，藉由使用單B細胞篩選平台自SARS-CoV-2感染恢復之患者中分離單株抗體(mAb)。三種mAb，包括5SB12、1-2SA8及15SE6，被證明具有針對各種SARS-CoV-2變異體之潛在治療功效。FACS分析展示，5SB12、1-2SA8及15SE6 mAb在顯示來自武漢病毒株(WH01)之全長SARS-CoV-2棘蛋白的基於細胞之分析中皆在皮莫耳水平下有效地識別SARS-CoV-2之棘蛋白。特定言之，藉由ELISA，1-2SA8及15SE6 mAb在皮莫耳水平下與全長棘蛋白及棘蛋白之RBD域結合。然而，在ELISA中，5SB12不具有與棘蛋白之全長或RBD域的良好結合活性，表明其識別棘蛋白之三級結構。
特定言之，本發明提供一種對CoV之棘蛋白中之抗原決定基具有特異性的抗體或其抗原結合片段；其中該抗體或其抗原結合片段包含重鏈可變區之CDR及輕鏈可變區之CDR，其中重鏈可變區之CDR包含CDRH1、CDRH2及CDRH3區，且輕鏈可變區之CDR包含CDRL1、CDRL2及CDRL3區，且其中：CDRH1區包含GYTFTGYQ (SEQ ID NO: 1)之胺基酸序列或具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之基本相似序列；CDRH2區包含INPNSGGT (SEQ ID NO: 2)之胺基酸序列或具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之基本相似序列；CDRH3區包含ARGPLRYGDYVLGQVGMDV (SEQ ID NO: 3)之胺基酸序列或具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之基本相似序列；且CDRL1區包含SSDVGGYNY (SEQ ID NO: 4)之胺基酸序列或具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之基本相似序列；CDRL2區包含DVS之胺基酸序列或具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之基本相似序列；CDRL3區包含SSYTSSSTVV (SEQ ID NO: 6)之胺基酸序列或具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之基本相似序列。
在本發明之一些實施例中，包含SEQ ID NO: 1至5及DVS之抗體或其抗原結合片段為5SB12。使用表現來自SARS-CoV-2之各種變異體的棘蛋白之細胞進行的基於細胞之分析進一步展現，5SB12似乎僅識別來自野生型(WT) SARS-CoV-2武漢病毒株(WH01)、D614G、α (B.1.1.7)、δ (B.1.617.2)及o (BA.1、4/5及BF.7)變異體之棘蛋白。因此，在基於假病毒之中和分析中，5SB12僅可略微中和WH01、D614G、α (B1.1.7)、δ (B.1.617.2)及o (BA.1、4/5及BF.7)變異體。
特定言之，本發明提供一種對CoV之棘蛋白中之抗原決定基具有特異性的抗體或其抗原結合片段；其中該抗體或其抗原結合片段包含重鏈可變區之CDR及輕鏈可變區之CDR，其中重鏈可變區之CDR包含CDRH1、CDRH2及CDRH3區，且輕鏈可變區之CDR包含CDRL1、CDRL2及CDRL3區，且其中：CDRH1區包含GFFVSRNY (SEQ ID NO: 6)之胺基酸序列或具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之基本相似序列；CDRH2區包含IYSGGST (SEQ ID NO: 7)之胺基酸序列或具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之基本相似序列；CDRH3區包含ARDHVRSGMDV (SEQ ID NO: 8)之胺基酸序列或具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之基本相似序列；且CDRL1區包含QDINRY (SEQ ID NO: 9)之胺基酸序列或具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之基本相似序列；CDRL2區包含DAS之胺基酸序列或具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之基本相似序列；CDRL3區包含HQYDNLPRT (SEQ ID NO: 10)之胺基酸序列或具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之基本相似序列。
在本發明之一些實施例中，包含SEQ ID NO: 6至10及DAS之抗體或其抗原結合片段為1-2SA8。經分離之mAb 1-2SA8被證明以高親和力識別SARS-CoV-2之棘蛋白的受體結合域(RBD)，且展示針對各種SARS-CoV-2變異體之保護功效。使用表現SARS-CoV-2之各種變異體的棘蛋白之細胞進行的基於細胞之分析進一步展現，1-2SA8識別廣泛範圍之棘蛋白，包括野生型(WT) SARS-CoV-2武漢病毒株(WH01)、D614G、α (B.1.1.7)、β (B.1.351)、γ (P.1)、δ (B.1.617.2)及o (BA.1、4/5及BF.7)，其中EC50值在皮莫耳範圍內。因此，在基於假病毒之中和分析中，1-2SA8具有中和WH01以及所有測試SARS-CoV-2假病毒變異體之活性，該等變異體包括D614G、α (B.1.1.7)、β (B.1.351)、γ (P.1)、δ (B.1.617.2)及o (BA.1、4/5及BF.7)，其中IC50值在皮莫耳範圍內。
特定言之，本發明提供一種對CoV之棘蛋白中之抗原決定基具有特異性的抗體或其抗原結合片段；其中該抗體或其抗原結合片段包含重鏈可變區之CDR及輕鏈可變區之CDR，其中重鏈可變區之CDR包含CDRH1、CDRH2及CDRH3區，且輕鏈可變區之CDR包含CDRL1、CDRL2及CDRL3區，且其中：CDRH1區包含GYTFTSYY (SEQ ID NO: 11)之胺基酸序列或具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之基本相似序列；CDRH2區包含INPSGGST (SEQ ID NO: 12)之胺基酸序列或具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之基本相似序列；CDRH3區包含ARWYDSLTYFDY (SEQ ID NO: 13)之胺基酸序列或具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之基本相似序列；且CDRL1區包含QGIRND (SEQ ID NO: 14)之胺基酸序列或具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之基本相似序列；CDRL2區包含AAS之胺基酸序列或具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之基本相似序列；CDRL3區包含LQDYSYPQLT (SEQ ID NO: 15)之胺基酸序列或具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之基本相似序列。
在本發明之一些實施例中，包含SEQ ID NO: 11至15及AAS之抗體或其抗原結合片段為15SE6。使用表現SARS-CoV-2之各種變異體的棘蛋白之細胞進行的基於細胞之分析進一步展現，15SE6亦識別廣泛範圍之棘蛋白，包括野生型(WT) SARS-CoV-2武漢病毒株(WH01)、D614G、α (B.1.1.7)、β (B.1.351)、δ (B.1.617.2)及o (BA.1、4/5及BF.7)，其中EC50值在皮莫耳範圍內。因此，在基於假病毒之中和分析中，15SE6能夠在皮莫耳範圍內中和WH01、D614G、α (B.1.1.7)、δ (B.1.617.2)及o (BA.1、4/5及BF.7)假病毒。
儘管5SB12不具有中和SARS-CoV-2之強力功效，但與1-2SA8及15SE6相比，5SB12展示良好的抗體依賴性細胞介導之細胞毒性(ADCC)活性，表明活體內5SB12之潛在效用。在本發明之一些實施例中，在給與倉鼠時，5SB12預防SARS-CoV-2 (WH01)感染，此依賴於經由5SB12之Fc恆定區與效應細胞接合。此外，應注意，1-2SA8及15SE6皆能夠有效地保護倉鼠免於SARS-CoV-2 (WH01)感染，且保護功效不依賴於mAb之效應功能。此處鑑別之5SB12、1-2SA8及15SE6單株抗體藉由單B細胞篩選平台及重組抗體技術自恢復期COVID-19患者之周邊血液中分離。在本發明之一些實施例中，1-2SA8及15SE6具有針對SARS-CoV-2假病毒之各種變異體的中和活性，及針對倉鼠之SARS-CoV-2感染的預防功效。5SB12不具有針對SARS-CoV-2之強中和活性，但在與NK細胞接合時展現ADCC活性，且展示針對倉鼠之SARS-CoV-2感染的預防功效。
根據本發明之抗體可為全長(例如，IgG1或IgG4抗體)或可僅包含抗原結合部分(例如，Fab、F(ab')
2或scFv片段)，且可視需要經修飾以影響功能性。
在本發明之一些實施例中，抗體或其抗原結合片段與抗CoV-S抗原結合蛋白(例如抗體或抗原結合片段)結合，與另一部分(例如治療部分(「免疫結合物」)，諸如類毒素或抗病毒劑)結合，以治療冠狀病毒感染。在本發明之一個實施例中，抗CoV-S抗體或片段與本文所闡述之其他治療劑中之任一者結合。
可使用一般熟習此項技術者已知的各種技術以判定抗體是否「特異性結合至多肽或蛋白質內之一或多個胺基酸」。例示性技術包括例如常規交叉阻斷分析，諸如Antibodies, Harlow及Lane (Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harb., NY)中所描述；丙胺酸掃描突變分析；肽墨點分析(Reineke, 2004, Methods Mol Biol 248:443-463)及肽裂解分析。另外，可採用諸如抗原決定基切除、抗原決定基提取及抗原化學修飾之方法(Tomer, 2000, Protein Science 9:487-496)。可用於鑑別與抗體特異性結合之多肽內之胺基酸的另一方法為藉由質譜偵測之氫/氘交換。一般而言，氫/氘交換方法涉及氘標記相關蛋白質，繼而使抗體與氘標記之蛋白質結合。隨後，將蛋白質/抗體複合物轉移至水中以允許氫-氘交換在除了經抗體保護之殘基(其保持經氘標記)以外的所有殘基處發生。在抗體解離之後，對目標蛋白進行蛋白酶裂解及質譜分析，藉此展現對應於與抗體相互作用之特定胺基酸的氘標記殘基。參見例如Ehring (1999) Analytical Biochemistry 267 (2):252-259；Engen及Smith (2001) Anal. Chem. 73:256A-265A。
藉由使用此項技術中已知之常規方法，可容易地確定抗體是否特異性結合至與參考抗SARS-CoV-2棘蛋白抗體相同之抗原決定基或與其競爭結合。舉例而言，為了確定測試抗體是否結合至與本發明之參考抗SARS-CoV-2棘蛋白抗體相同的抗原決定基，使參考抗體結合至SARS-CoV-2棘蛋白。隨後，評估測試抗體結合至SARS-CoV-2棘蛋白分子之能力。若測試抗體在參考抗SARS-CoV-2棘蛋白抗體結合飽和之後能夠結合至SARS-CoV-2棘蛋白，則可得出結論，測試抗體結合至與參考抗SARS-CoV-2棘蛋白抗體不同之抗原決定基。另一方面，若測試抗體在參考抗SARS-CoV-2棘蛋白抗體結合飽和之後不能夠結合至SARS-CoV-2棘蛋白分子，則測試抗體可結合至與本發明之參考抗SARS-CoV-2棘蛋白抗體所結合之抗原決定基相同的抗原決定基。隨後可進行其他常規實驗(例如肽突變及結合分析)，以確認所觀測到之測試抗體之結合缺失實際上是否係由於與參考抗體結合至同一抗原決定基，或是否係空間阻斷(或另一現象)負責所觀測到之結合缺乏。此類實驗可使用ELISA、RIA、Biacore、流動式細胞測量術或此項技術中可用之任何其他定量或定性抗體結合分析來進行。根據本發明之某些實施例，在競爭性結合分析中量測，若例如1倍、5倍、10倍、20倍或100倍過量之一種抗體抑制另一種抗體之結合至少50%但較佳地75%、90%或甚至99%，則兩種抗體結合至相同的(或重疊)抗原決定基。或者，若降低或消除一種抗體之結合的抗原中之基本上所有胺基酸突變降低或消除另一種抗體之結合，則將兩種抗體視為結合至相同抗原決定基。若僅一個子集的降低或消除一種抗體之結合的胺基酸突變降低或消除另一種抗體之結合，則將兩種抗體視為具有「重疊抗原決定基」。
抗體亦包括完整抗體分子之抗原結合片段。抗體之抗原結合片段可使用任何適合之標準技術，諸如蛋白水解消化或涉及編碼抗體可變域及視情況存在之恆定域之DNA之操縱及表現的重組基因工程改造技術，例如自完整抗體分子衍生。該DNA為已知的及/或可易於自例如商業來源、DNA庫(包括例如噬菌體-抗體庫)獲得，或可經合成。DNA可以化學方式或藉由使用分子生物學技術定序及操縱，例如以將一或多個可變域及/或恆定域配置為適合之組態，或引入密碼子，產生半胱胺酸殘基，修飾、添加或缺失胺基酸等。
抗原結合片段之非限制性實例包括：(i) Fab片段；(ii) F(ab')
2片段；(iii) Fd片段；(iv) Fv片段；(v)單鏈Fv (scFv)分子；(vi) dAb片段；及(vii)由模擬抗體之高變區(例如分離的互補決定區(CDR)，諸如CDR3肽)或受限FR3-CDR3-FR4肽的胺基酸殘基組成的最小識別單位。其他經工程改造之分子，諸如域特異性抗體、單域抗體、域缺失抗體、嵌合抗體、CDR移植抗體、雙功能抗體、三功能抗體、四功能抗體、微型抗體、奈米抗體(例如單價奈米抗體、二價奈米抗體等)、小模組免疫藥物(SMIP)及鯊魚可變IgNAR域亦由如本文所用之表述「抗原結合片段」涵蓋。
抗體之抗原結合片段通常包含至少一個可變域。可變域可具有任何尺寸或胺基酸組成，且一般將包含至少一個與一或多個構架序列相鄰或同框之CDR。在具有與V
L域相關聯的V
H域的抗原結合片段中，V
H和V
L域可以任何適合的配置相對於彼此定位。舉例而言，可變區可為二聚的且含有V
H-V
H、V
H-V
L或V
L-V
L二聚體。或者，抗體之抗原結合片段可含有單體V
H及V
L域。
在某些實施例中，抗體之抗原結合片段可含有與至少一個恆定域共價連接之至少一個可變域。可見於本發明之抗體之抗原結合片段內的可變域及恆定域之非限制性例示性組態包括：(i) V
H-C
H1；(ii) V
H-C
H2；(iii) V
H-C
H3；(iv) V
H-C
H1-C
H2；(v) V
H-C
H1-C
H2-C
H3, (vi) V
H-C
H2-C
H3；(vii) V
H-C
L；(viii) V
L-C
H1；(ix) V
L-C
H2；(x) V
L-C
H3；(xi) V
L-C
H1-C
H2；(xii) V
L-C
H1-C
H2-C
H3；(xiii) V
L-C
H2-C
H3；及(xiv) V
L-C
L。在可變域及恆定域之任何組態，包括本文所列之例示性組態中之任一者中，可變域及恆定域可直接彼此連接或可藉由完整或部分鉸鏈區或連接區連接。鉸鏈區可由至少2個(例如5、10、15、20、40、60個或更多個)胺基酸組成，該等胺基酸在單一多肽分子中之相鄰可變域及/或恆定域之間產生可撓性或半可撓性連接。此外，本發明抗體之抗原結合片段可包含上文列出之任何可變域及恆定域組態彼此及/或與一或多個單體V
H或V
L域(例如藉由二硫鍵)非共價締合之均二聚體或雜二聚體(或其他多聚體)。
與衍生抗體之相應生殖系序列相比，本文所揭示之抗SARS-CoV-2棘蛋白抗體可在重鏈及輕鏈可變域之構架區及/或CDR區中包含一或多個胺基酸取代、插入及/或缺失。此類突變可藉由比較本文所揭示之胺基酸序列與可自例如公共抗體序列資料庫獲得之生殖系序列而容易地確定。本發明包括衍生自本文所揭示之任何胺基酸序列的抗體及其抗原結合片段，其中一或多個構架區及/或CDR區內之一或多個胺基酸突變成衍生抗體之生殖系序列的相應殘基，或突變成另一哺乳動物生殖系序列之相應殘基，或突變成相應生殖系殘基之保守性胺基酸取代(此類序列變化在本文中統稱為「生殖系突變」)。一般熟習此項技術者以本文中所揭示之重鏈及輕鏈可變區序列為起始物質，可容易地製備許多包含一或多個單獨的生殖系突變或其組合的抗體及抗原結合片段。在某些實施例中，V
H及/或V
L域內之所有構架及/或CDR殘基突變回衍生抗體之原始生殖系序列中所發現之殘基。在其他實施例中，僅某些殘基突變回原始生殖系序列，例如僅在FR1之前8個胺基酸或FR4之後8個胺基酸內發現之突變殘基，或僅在CDR1、CDR2或CDR3內發現之突變殘基。在其他實施例中，構架及/或CDR殘基中之一或多者突變為不同生殖系序列(亦即，不同於最初衍生抗體之生殖系序列的生殖系序列)之相應殘基。此外，本發明抗體可在構架區及/或CDR區內含有兩個或更多個生殖系突變之任何組合，例如其中某些個別殘基突變為特定生殖系序列之相應殘基，而不同於原始生殖系序列之某些其他殘基得以維持或突變為不同生殖系序列之相應殘基。一旦獲得，即可容易地測試含有一或多個生殖系突變之抗體及抗原結合片段的一或多種所需特性，諸如改良的結合特異性、增加的結合親和力、改良或增強的拮抗或促效生物特性(視具體情況而定)、降低的免疫原性等。本發明涵蓋以此一般方式獲得之抗體及抗原結合片段。
本發明亦包括抗SARS-CoV-2棘蛋白抗體，其包含具有一或多個保守性取代之本文所揭示之V
H、V
L及/或CDR胺基酸序列中之任一者的變異體。舉例而言，本發明包括抗SARS-CoV-2棘蛋白抗體，其具有相對於本文所揭示之V
H、V
L及/或CDR胺基酸序列中之任一者具有10個或更少、8個或更少、6個或更少、4個或更少等保守性胺基酸取代的V
H、V
L及/或CDR胺基酸序列。
在本發明之一些實施例中，根據本發明之抗體為人類化抗體。為改良根據本發明之人類化抗體之結合親和力，人類構架區中之一些胺基酸殘基經CDR之物種(例如嚙齒動物)中的相應胺基酸殘基置換。
本發明之抗體可為單特異性、雙特異性或多特異性的。多特異性抗體可對一種目標多肽之不同抗原決定基具有特異性，或可含有對超過一種目標多肽具有特異性之抗原結合域。本發明之抗SARS-CoV-2棘蛋白抗體可連接至另一功能分子(例如另一肽或蛋白質)與共表現與另一功能分子共表現。舉例而言，抗體或其片段可功能上連接(例如藉由化學偶合、遺傳融合、非共價締合或以其他方式)至一或多個其他分子實體(諸如另一抗體或抗體片段)以產生具有第二結合特異性之雙特異性或多特異性抗體。舉例而言，本發明包括雙特異性抗體，其中免疫球蛋白之一條臂對SARS-CoV-2棘蛋白或其片段具有特異性，且免疫球蛋白之另一條臂對第二治療目標具有特異性或與治療部分結合。
在另一態樣中，本發明提供表現抗體或其抗原結合片段或含有載體之經基因工程改造之細胞。經基因工程改造之細胞可為免疫細胞。
在本發明之一個較佳實施例中，抗體或其抗原結合片段可使用任何數目之表現系統，包括原核及真核表現系統來產生。在一些實施例中，表現系統為哺乳動物細胞表現，諸如融合瘤，或CHO細胞表現系統。諸多此類系統係廣泛購自商業供應商。在抗體包含V
H及V
L區之實施例中，V
H及V
L區可使用單一載體表現，例如在雙順反子表現單元中或在不同啟動子控制下。在其他實施例中，V
H及V
L區可使用單獨載體表現。如本文所描述之V
H及V
L區可視情況包含N端處之甲硫胺酸。
編碼相關抗體之重鏈及輕鏈的基因可選殖於細胞，例如，編碼單株抗體之基因可選殖於融合瘤且用於產生重組單株抗體。編碼單株抗體之重鏈及輕鏈的基因庫亦可由融合瘤或漿細胞製得。重鏈及輕鏈基因產物之隨機組合產生具有不同抗原特異性之大抗體池(參見例如Kuby, Immunology (第3版1997))。
用於製造抗體或抗原結合片段之方法的實例包含：(a)將一或多種編碼該抗體或抗原結合片段之聚核苷酸引入宿主細胞中；(b)在有利於表現該一或多種聚核苷酸之條件下培養該宿主細胞；及(c)視情況自該宿主細胞及/或培養該宿主細胞之培養基中分離出該抗體或抗原結合片段。
載體可用於將編碼本發明之抗體或抗原結合片段的聚核苷酸引入宿主細胞。在一個實施例中，一種類型之載體為「質體」，其係指可與額外DNA片段連接之環形雙股DNA環。另一類型之載體為病毒載體，其中額外DNA片段可與病毒基因體連接。某些載體能夠在其所引入之宿主細胞中自主複製(例如具有細菌複製起點之細菌載體及游離型哺乳動物載體)。其他載體(例如非游離型哺乳動物載體)可在引入宿主細胞中時整合至宿主細胞之基因體中，且藉此與宿主基因體一起複製。此外，某些載體能夠引導與其操作性連接之基因之表現。此類載體在本文中稱為「重組表現載體」(或簡言之，「表現載體」)。一般而言，用於重組DNA技術中之表現載體通常呈質體形式。由於質體為載體之最常用形式，因而在本說明書中，「質體」與「載體」可互換使用。然而，本發明意欲包括提供等效功能之此類其他形式之表現載體，諸如病毒載體(例如，複製缺陷反轉錄病毒、腺病毒及腺相關病毒)。
本發明提供包含抗體或其抗原結合片段之醫藥組合物。本發明之醫藥組合物係藉由適合之稀釋劑、載劑、賦形劑及提供改良之轉移、遞送、耐受性及類似性質之其他試劑調配。該等組合物可調配用於特定用途，諸如用於獸醫學用途或人類醫藥用途。所用組合物及賦形劑、稀釋劑及/或載劑之形式將視抗體之預期用途及用於治療性用途之投藥模式而定。可於所有醫藥化學家已知之處方集中查詢眾多適當調配物：Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Easton, Pa。此等調配物包括例如散劑、糊劑、軟膏、膠凍、蠟、油、脂質、含有脂質(陽離子或陰離子)之囊泡(諸如LIPOFECTIN.TM., Life Technologies, Carlsbad, Calif.)、DNA結合物、無水吸收糊劑、水包油及油包水乳液、乳液碳蠟(各種分子量之聚乙二醇)、半固體凝膠及含有碳蠟之半固體混合物。亦參見Powell等人「Compendium of excipients for parenteral formulations」PDA (1998) J Pharm Sci Technol 52:238-311。
在本發明之一些實施例中，醫藥組合物包含另一治療劑，諸如抗病毒劑。抗病毒劑可為SARS-CoV-2之S蛋白抗體；抗炎劑；SARS-CoV-2之S蛋白的NTD區抗體；SARS-CoV-2之S蛋白的HR1區抗體；SARS-CoV-2之S蛋白的RBD區抗體；SARS-CoV單株抗體；MERS-CoV單株抗體；SARS-CoV-2單株抗體；肽；蛋白酶抑制劑；PIKfyve抑制劑；TMPRSS2抑制劑；以及組織蛋白酶抑制劑；弗林蛋白酶(furin)抑制劑；抗病毒肽；抗病毒蛋白；抗病毒化合物。舉例而言，抗病毒劑可為選自由以下組成之群的至少一者：1A9；201；311mab-31B5；311mab-32D4；47D11；4A8；4C2；80R；阿吡莫德(Apilimod)；B38；甲磺酸卡莫司他(camostat mesylate)；卡斯瑞韋單抗(Casirivimab)；CR3014；CR3022；D12；E-64D；EK1；EK1C4；H4；HR2P；IBP02；依米得韋單抗(Imdevimab)；m336；MERS-27；MERS-4；MI-701；n3088；n3130；P2B-2F6；P2C-1F11；PI8；S230；S309；SARS-CoV-2 S HR2P片段(aal 168-1203)；漢防己鹼(Tetrandrine)；維拉賽特(Viracept) (甲磺酸奈非那韋(nelfinavir mesylate))；YM201636；a-1-PDX；法匹拉韋(favipiravir)；IFN-a；IFN-alb；IFN-a2a；咯匹那韋(lopinavir)-利托那韋(ritonavir)；Q-格里菲斯辛(Q-Griffithsin) (Q-GRFT)；及格里菲斯辛；奧司他韋(oseltamivir)；紮那米韋(zanamivir)；阿巴卡韋(abacavir)；齊多夫定(zidovudine)；紮西他濱(zalcitabine)；去羥肌苷(didanosine)；司他夫定(stavudine)；依法韋侖(efavirenz)；茚地那韋(indinavir)；利托那韋；奈非那韋；安普那韋(amprenavir)；利巴韋林(ribavirin)；瑞德西韋(Remdesivir)；氯喹；羥氯喹；rIFN-α-2a；rIFN-β-lb；rIFN-γ；nIFN-α；nIFN-β；nlFN-γ；IL-2；PD-L1；抗PD-Ll；檢查點抑制劑；干擾素；干擾素混合物；重組或天然干擾素；阿氟隆(Alferon)；α-干擾素物種；重組或天然干擾素α；重組或天然干擾素α 2a；重組或天然干擾素β；重組或天然干擾素β lb；以及重組或天然干擾素γ。α-干擾素物種可為由人類白血球產生之至少七個物種之α-干擾素的混合物，其中七個物種為：干擾素α 2、干擾素α 4、干擾素α 7、干擾素α 8、干擾素α 10、干擾素α 16；及干擾素α 17。
向患者投與之抗體的劑量可視患者之年齡及體型、目標疾病、病狀、投藥途徑及其類似者而變化。較佳劑量通常根據體重或體表面積計算。當本發明之抗體用於治療成年患者與CoV相關之病狀或疾病時，靜脈內投與本發明之抗體可為有利的。視病狀之嚴重程度而定，可調節治療之頻率及持續時間。投與抗體之有效劑量及時程可憑經驗確定；舉例而言，可藉由週期性評估監測患者進展，且相應地調節劑量。此外，可使用本領域中之熟知方法(例如Mordenti等人, 1991, Pharmaceut. Res. 8:1351)進行劑量之種間比例調整。
各種遞送系統為吾人所知且可用於投與本發明之醫藥組合物，例如囊封於脂質體中、微粒、微膠囊、能夠表現突變病毒之重組細胞、受體介導之內飲作用(參見例如Wu等人, 1987, J. Biol. Chem. 262:4429-4432)。引入方法包括但不限於皮內、肌肉內、腹膜內、靜脈內、皮下、鼻內、硬膜外及經口途徑。組合物可藉由任何便利途徑投與，例如藉由輸注或彈丸注射、藉由經由上皮或黏膜皮膚內層(例如口腔黏膜、直腸黏膜及腸黏膜等)吸收且可與其他生物學活性劑一起投與。投藥可為全身性或局部的。
本發明之醫藥組成物可用諸如標準針頭及注射器之容器或注射裝置皮下或靜脈內遞送。此外，關於皮下遞送，筆式遞送裝置易於在遞送本發明之醫藥組合物時應用。此類筆式遞送裝置可為可再用或拋棄式的。可再用的筆式遞送裝置通常利用含有醫藥組合物之可更換藥筒。一旦已投與藥筒內之全部醫藥組合物且藥筒為空，空藥筒可容易地丟棄且用含有醫藥組合物之新藥筒更換。隨後可再使用筆式遞送裝置。在拋棄式筆式遞送裝置中，不存在可更換藥筒。實際上，拋棄式筆式遞送裝置預填充有保存於裝置內的儲集器中的醫藥組合物。一旦清空儲集器的醫藥組合物，即丟棄整個裝置。
在某些情形中，醫藥組合物可在控制釋放系統中遞送。在一個實施例中，可使用泵(參見Langer，見上文；Sefton, 1987, CRC Crit. Ref. Biomed. Eng. 14:201)。在另一實施例中，可使用聚合材料；參見Medical Applications of Controlled Release, Langer及Wise (編), 1974, CRC Pres., Boca Raton, Fla。在又另一實施例中，可將受控釋放系統接近組合物之目標置放，因此僅需要全身性劑量之一部分(參見例如Goodson, 1984, 於Medical Applications of Controlled Release, 見上文, 第2卷, 第115-138頁)。其他控制釋放系統論述於Langer, 1990, Science 249:1527-1533之綜述中。
可注射製劑可包括用於靜脈內、皮下、皮內及肌肉內注射、滴液輸液等之劑型。此等可注射製劑可藉由公開已知之方法來製備。舉例而言，可注射製劑可例如藉由將本文所描述之抗體或其鹽溶解、懸浮或乳化於習知用於注射之無菌水性介質或油性介質中來製備。舉例而言，生理鹽水、含有葡萄糖及其他輔助劑之等張溶液等作為用於注射之水性介質，其可與適當助溶劑組合使用，該助溶劑諸如醇(例如乙醇)、多元醇(例如丙二醇、聚乙二醇)、非離子界面活性劑[例如聚山梨醇酯80、HCO-50 (氫化蓖麻油之聚氧化乙烯(50 mol)加合物)]等。採用例如芝麻油、大豆油等作為油性介質，其可與助溶劑(諸如苯甲酸苯甲酯、苄醇等)組合使用。較佳將由此製備之注射劑填充於適當安瓿中。
上文所述之用於經口或非經腸使用之醫藥組合物宜製備成呈適於配合活性成分之劑量之單位劑量的劑型。此類呈單位劑量之劑型包括例如錠劑、丸劑、膠囊、注射劑(安瓿)、栓劑等。
本發明提供一種用於偵測樣品中之冠狀病毒的方法，其包含使樣品與抗體或其抗原結合片段接觸。
本發明提供一種用於中和有需要之個體之冠狀病毒的方法，其包含向該個體投與抗體或其抗原結合片段。
本發明亦提供一種用於在有需要之個體中引發針對冠狀病毒之抗體依賴性細胞介導之細胞毒性的方法，其包含向該個體投與如本文所揭示之抗體或其抗原結合片段。
本發明提供一種用於偵測樣品中之冠狀病毒的套組，其中該套組包含抗體或其抗原結合片段。
本發明之抗SARS-CoV-2棘蛋白抗體亦可用於偵測及/或量測樣品中之冠狀病毒或表現SARS-CoV-2棘蛋白之細胞，例如出於診斷目的。舉例而言，抗SARS-CoV-2棘蛋白抗體或其片段可用於診斷特徵為冠狀病毒感染之病狀或疾病。針對冠狀病毒的例示性診斷分析可包含例如使獲自患者的樣品與本發明之抗SARS-CoV-2棘蛋白抗體接觸，其中抗SARS-CoV-2棘蛋白抗體用可偵測標記或報導分子進行標記。或者，未標記之抗SARS-CoV-2棘蛋白抗體可與自身可偵測地標記之二級抗體組合用於診斷應用中。可偵測標記或報導分子可為放射性同位素，諸如
3H、
14C、
32P、
35S或
125I；螢光或化學發光部分，諸如異硫氰酸螢光素或若丹明(rhodamine)；或酶，諸如鹼性磷酸酶、β-半乳糖苷酶、辣根過氧化酶或螢光素酶。可用於偵測或量測樣品中之冠狀病毒之特定例示性分析包括酶聯免疫吸附分析(ELISA)、放射免疫分析(RIA)及螢光活化細胞分選(FACS)。
提供以下實例以幫助熟習此項技術者實踐本發明。
實例
材料及方法
棘蛋白特異性B細胞之FACS分析及分選。來自COVID-19恢復患者之人類PBMC與S蛋白在4℃下一起培育1小時，接著洗滌且與針對CD19 (純系：HIB19，BV421結合，BD Biosciences)、CD27 (純系：M-T271，PE結合，BD Biosciences)、IgG (純系：G18-145，PECy7結合，BD Biosciences)及His (純系：J095G46，APC結合，Biolegend)之抗體混合液一起在4℃下培育15 min。碘化丙錠(Biolegend)用於排除死細胞。藉由BD FACSAria II將活的單一棘蛋白特異性記憶B細胞(CD19
+CD27
+IgG
+)分選至含有10 pl/孔捕捉緩衝液(10 mM Tris-HCl，pH 8，及5 U/pl RNasin (Promega))之96孔PCR培養盤(Applied Biosystems)中。
單 B 細胞篩選。引子係基於先前出版物來設計。接著在94℃下進行反應5 min，之後為49個94℃下30 s、58℃ (IgH/Igκ)或60℃ (Igλ)下30 s、72℃下55 s之循環，以及最終在72℃下培育5 min。進行半巢式第二輪PCR，其使用KAPA2G快速HS基因分型混合物(KAPA™ Biosystems)與4 μl未純化第一輪PCR產物在94℃下持續5 min，之後為49個94℃ 30 s、58℃ (IgH/Igκ)或60℃ (Igλ) 30 s、72℃ 45 s之循環，以及最終在72℃下培育5 min。接著在2%瓊脂糖凝膠上分析PCR產物且定序。V
H、V
κ及V
λ基因係藉由在IMGT網站(http://imgt.org/IMGT_vquest/input)上搜尋進行鑑別。接著利用含有限制性位點之單一基因特異性V
H、V
κ及V
λ基因引子，自第二輪PCR產物擴增基因，以便選殖至含有人類IgH或IgL表現主鏈之載體中。將嵌合IgH及IgL表現構築體共轉染至Expi293中以產生抗體。
抗體與表現 S 蛋白之 293T 表面的結合。293T細胞經pcDNA6/棘蛋白-P2A-eGFP轉染。經轉染細胞在10 pg/ml殺稻瘟菌素下選擇2至3週。隨後藉由FACSAria II分選所選細胞以獲得eGFP
+表現細胞。將此等細胞維持在含有10% FBS及10 pg/ml殺稻瘟菌素之DMEM中。2-3×10
5個細胞與連續稀釋之抗體在FACS緩衝液中在冰上培育1 h。接著，細胞用FACS緩衝液洗滌3次，接著在冰上在BV421小鼠抗人類IgG (BD™ Biosciences，562581，1:100)中染色20 min且用FACS緩衝液洗滌兩次。陽性細胞百分比使用FACS Canto II定量且資料用FlowJo分析。本文所用之S蛋白變異體為：WH01棘蛋白：初始S蛋白；D614G：D614G；B.1.1.7：69-70缺失、144缺失、N501Y、A570D、D614G、P681H、T716I、S982A及D1118H；B.1.351：L18F、D80A、D215G、242-244缺失、R246I、K417N、E484K、N501Y、D614G及A701V。
使用 Octet ( 生物膜層干涉術 ) 測定親和力及親合力。將純化mAb IgG以5或10 pg/ml在動力學緩衝液(含0.01%無內毒素BSA、0.002% Tween-20及0.005% NaN
3之PBS)中負載至蛋白G生物感測器(Molecular Devices, FORTEBIO™)上。在動力學緩衝液中在指定濃度下進行S蛋白(SARS-CoV-2 WH01)與IgG之締合及解離5 min。使用1:1整體擬合模型(OCTET™)計算
K
D 值。
ADCC 分析。穩定地表現來自SARS-CoV-2 WH01之棘蛋白表現載體的HEK293T細胞及人類NK-92細胞分別用作目標細胞及效應細胞。將表現棘蛋白之HEK293T細胞或人類NK-92細胞在完全DMEM或α-MEM培養基中培養，且藉由以300 g離心3 min收集。將表現棘蛋白之HEK293T細胞在PBS中洗滌，且用含5 pM鈣黃綠素AM (INVITROGEN™)之PBS在37℃及5% CO
2下標記20 min。經鈣黃綠素AM染色的表現棘蛋白之HEK293T細胞用PBSF (含5% FBS及1% P/S之PBS)洗滌3次，且以10
4個細胞/孔接種至96孔培養盤中。效應細胞，亦即人類NK-92細胞以10
5個細胞/孔添加。將以指定濃度稀釋之mAb添加至共培養物中(E:T比=10:1)。將培養盤在37℃及5% CO
2下培育4 h，隨後以600 g將培養盤離心3 min。接著將上清液轉移至黑色煙囪式(chimney)培養盤中。藉由SpectraMax Paradigm多模式偵測平台分別在485及535 nm之激發及發射波長處偵測所釋放之鈣黃綠素AM信號。特異性細胞溶解根據下式計算：(E-S)/(M-S)，其中E為實驗孔之螢光，S為在不存在抗體之情況下的螢光，且M為在溶解緩衝液(含1% Triton X-100之PBSF)之情況下經染色目標細胞的螢光。
ELISA 。首先用2 μg-50 ng/孔(於0.1 ml中)購自Sino Biological Inc.之棘蛋白或棘蛋白之各種次單元塗佈培養盤，且接著將其用含2% BSA之PBS阻斷溶液阻斷。依序添加經含2% BSA之PBS連續稀釋之mAb及HRP結合二級抗體(1:10,000，JACKSON™ ImmunoResearch Laboratories, Inc.)。用PBST (0.05% Tween-20)徹底洗滌之後，使用過氧化酶受質溶液(TMB)及1 M H
2SO
4停止溶液且藉由微量盤讀取器讀取吸光度(OD 450 nm)。
假病毒中和分析。為了產生及純化SARS-CoV-2假型慢病毒，藉由用pCMV-ΔR&91、pLAS2w.Fluc. Ppuro及pcDNA3.1-nCoV-SΔ18 (或pcDNA3.1-nCoV-SΔ18 D614G)短暫轉染HEK293T細胞產生攜帶SARS-CoV-2 S蛋白之假型慢病毒。在轉染前一天接種HEK293T細胞，且指定質體藉由使用TransITR-LT1轉染試劑(MIRUS™)遞送至細胞中。培養基在轉染後16 h更新，且在48 h及72 h收集。藉由以4,000×g離心10 min移除細胞碎片，且使上清液通過0.45 μm針筒過濾器(PALL™ Corporation)。將假型慢病毒等分且接著儲存在-80℃下。
為藉由ALARMABLUE™分析估計慢病毒效價，藉由使用細胞生存力分析回應於慢病毒極限稀釋估計SARS-CoV-2假型慢病毒之轉導單位(TU)。簡言之，在慢病毒轉導前一天將穩定地表現人類ACE2基因之HEK293T細胞接種於96孔培養盤上。為了確定假型慢病毒之效價，將不同量之慢病毒添加至含有凝聚胺之培養基中(最終濃度8 μg/ml)。在37℃下以1,100×g在96孔培養盤中進行自旋感染30分鐘。在37℃下培育細胞16 h之後，移除含有病毒及凝聚胺之培養基且經含有2.5 μg/ml嘌呤黴素之新鮮完全DMEM置換。在嘌呤黴素處理48 h之後，移除培養基且藉由根據製造商之說明書使用10% AlarmaBlue試劑來偵測細胞生存力。未經感染之細胞(無嘌呤黴素處理)之存活率設定為100%。藉由繪製存活細胞對比經稀釋之病毒劑量來確定病毒效價(轉導單位)。
為了進行假型慢病毒中和分析，將mAb以所需稀釋度連續稀釋且與含1,000 TU SARS-CoV-2假型慢病毒之DMEM (補充有1% FBS及100 U/ml青黴素/鏈黴素)一起在37℃下培育1 h。接著在96孔培養盤中用10,000個穩定地表現人類ACE2基因之HEK293T細胞接種混合物。在感染後16 h用新鮮完全DMEM (補充有10% FBS及100 U/ml青黴素/鏈黴素)置換培養基且再連續培養細胞48 h，隨後進行螢光素酶分析。對於螢光素酶分析，螢光素酶基因之表現量藉由使用BRIGHT-GLO™分析系統分析系統(PROMEGA™)確定。相對光單位(RLU)藉由Tecan i-control (INFINITE™ 500)偵測。抑制百分比計算為稀釋血清存在下之RLU減少與無血清對照之RLU值的比率，且計算式展示如下：(RLU
Contro1- RLU
Serum) / RLU
Contro1。
結果：
COVID-19大流行已引起全球積極努力以開發有效策略來控制SARS-CoV-2之擴散且改善症狀。吾人旨在藉由使用單B細胞篩選平台自SARS-CoV-2感染恢復之患者中分離單株抗體(mAb)。吾人亦已建立若干表現各種SARS-CoV-2關注變異體或突變體之棘蛋白的細胞株。ELISA分析展示若干純系能夠與表現棘蛋白(WH01)之HEK293T細胞結合。特定言之，一些mAb能夠識別棘蛋白(WH01)之RBD域。吾人已聚焦於三種mAb，包括5SB12、1-2SA8及15SE6，其具有針對各種SARS-CoV-2變異體之潛在治療功效，此係由於其與棘蛋白之RBD域結合、其活體外針對各種SARS-CoV-2假病毒變異體之良好中和活性或其活體內治療潛力。
FACS分析展示，5SB12、1-2SA8及15SE6 mAb在顯示來自武漢病毒株(WH01)之全長SARS-CoV-2棘蛋白的基於細胞之分析中皆在皮莫耳水平下有效地識別SARS-CoV-2之棘蛋白(圖1A)。5SB12之親合力為3.41×10
-11M；1-2SA8之親合力為2.52×10
-10M；15SE6之親合力為6.42×10
-11M，特定言之，藉由ELISA，1-2SA8及15SE6 mAb亦在皮莫耳水平下與全長棘蛋白及棘蛋白之RBD域結合(圖1B)。然而，在ELISA中，5SB12不具有與棘蛋白之全長或RBD域的良好結合活性(圖1B)，表明其識別棘蛋白之三級結構。生物膜層干涉術進一步證實5SB12、1-2SA8及15SE6與棘蛋白之結合親合力(圖1C)。使用表現來自SARS-CoV-2之各種變異體的棘蛋白之細胞進行的基於細胞之分析展現，1-2SA8識別廣泛範圍之棘蛋白，包括野生型(WT) SARS-CoV-2武漢病毒株(WH01)、D614G、α (B1.1.7、β (B.1.351)、δ (B.1.617.2)及γ (P.1)，其中EC50值在皮莫耳範圍內(圖2A)。15SE6亦識別廣泛範圍之棘蛋白(圖2B)，其中EC50值在皮莫耳範圍內。引起關注地，5SB12似乎僅識別來自WH01及δ變異體之棘蛋白(圖2C)。因此，在基於假病毒之中和分析中，1-2SA8具有中和WH01以及所有測試SARS-CoV-2假病毒變異體之活性，該等變異體包括D614G、α (B1.1.7)、β (B.1.351)、γ (P.1)及δ (B.1.617.2)，其中IC50值在皮莫耳範圍內(圖3A)。15SE6亦能夠在皮莫耳範圍內中和若干不同類型之變異體(圖3B)，而5SB12僅可中和WH01及δ變異體(圖3C)。mAb 1-2SA8能夠識別o亞變異體BA.1及BA.4/5 (圖3D及圖3E)。此外，mAb 1-2SA8能夠中和o亞變異體BA.4/5及BF.7 (圖3F及圖3G)。
儘管5SB12不具有中和SARS-CoV-2之強力功效，但與1-2SA8及15SE6相比，5SB12具有良好的抗體依賴性細胞介導之細胞毒性(ADCC)活性，表明活體內5SB12之潛在效用(圖4A)。mAb 1-2SA8具有針對表現o亞變異體棘蛋白之細胞的抗體依賴性細胞介導之細胞毒性(ADCC)活性(圖4B)。實際上，在給與倉鼠時，5SB12預防SARS-CoV-2 (WH01)感染，此依賴於經由5SB12之Fc恆定區與效應細胞接合(圖5A及圖5B)。此外，應注意，1-2SA8及15SE6皆能夠有效地保護倉鼠免於SARS-CoV-2 (WH01)感染，且保護功效不依賴於mAb之效應功能(圖6A至圖6D)。使用K18-hACE2 TG小鼠，吾人證明1-2SA8及15SE6能夠完全防護致死性劑量之α (B1.1.7)病毒株攻擊(圖7及圖8A至圖8C)。總而言之，吾人鑑別出三種不同的自恢復期COVID-19患者中分離之mAb。其中兩者1-2SA8及15SE6展示跨廣泛範圍之SARS-CoV-2變異體的強效中和活性。一種mAb 5SB12儘管不具有優良中和活性，但能夠經由效應功能活體內防護SARS-CoV-2感染。
雖然已結合本文所闡述之特定實施例描述本發明，但其許多替代方案以及其修改及變化對於一般熟習此項技術者而言將為顯而易見的。所有此類替代方案、修改及變化被視為屬於本發明之範疇內。
圖1A至圖1C展示mAb與WT (WH01) SARS-CoV-2棘蛋白之結合。圖1A描繪基於細胞之分析，其展示5SB12、1-2SA8及15SE6與S蛋白之結合親合力，此藉由FACS測定。圖1B描繪ELISA，其展示5SB12、1-2SA8及15SE6與SARS-CoV-2 (WH01)之全長棘蛋白、RBD域、S1及S2域的結合。圖1C描繪5SB12、1-2SA8及15SE6與全長S蛋白之結合親合力，此藉由生物膜層干涉術量測。
圖2A至圖2C展示1-2SA8、15SE6及5SB12結合至SARS-CoV-2之各種變異體的棘蛋白。藉由FACS(流式細胞儀)所測定之基於細胞之分析展示1-2SA8 (圖2A)、15SE6 (圖2B)及5SB12 (圖2C)與HEK293T細胞之結合及親合力，該等細胞表現WT (WH01)及各種關注變異體(VOC)形式之SARS-CoV-2棘蛋白，包括D614G、B.1.1.7 [α]、B.1.351 [β]、P.1 [γ]及B.1.617.2 [δ]。
圖3A至圖3C展示1-2SA8 (圖3A)、15SE6 (圖3B)及5SB12 (圖3C)中和WT (WH01)或指定關注變異體之SARS-CoV-2假病毒的EC50。指示各抗體針對各種假病毒之EC50。WT (WH01)、D614G、B.1.1.7 [α]、B.1.351 [β]、P.1 [γ]及B.1.617.2 [δ]經測試。
圖3D及圖3E展示mAb 1-2SA8能夠識別o亞變異體BA.4/5，但識別BA.1的能力下降。1-2SA8與表現o亞變異體BA.1 (圖3D)及BA.4/5 (圖3E)之棘蛋白的293T細胞之結合活性的FACS分析。指示EC50。
圖3F及圖3G展示mAb 1-2SA8能夠中和o亞變異體BA.4/5及BF.7。1-2SA8中和o亞變異體BA.1 (圖3F)、BA.4/5及BF.7 (圖3G)之SARS-CoV-2假病毒的能力。指示IC50。
圖4A展示所鑑別之mAb的抗體依賴性細胞介導之細胞毒性(ADCC)能力。5SB12、1-2SA8及15SE6以及其不會發現NK-92細胞上之FcgR之LALA形式的ADCC活性。結果係藉由將各種劑量之mAb與表現WT(WH01) 棘蛋白之293T細胞及NK-92細胞一起培育而得出。資料為平均值+/-SEM (n=9)。資料係藉由雙尾司徒頓氏t檢定(student's t test)分析，****p＜0.0001。
圖4B展示mAb 1-2SA8具有針對表現o亞變異體棘蛋白之細胞的抗體依賴性細胞介導之細胞毒性(ADCC)活性。1-2SA8針對表現o亞變異體BA.1及BA.4/5棘蛋白之293T細胞的ADCC能力。
圖5A及圖5B展示5SB12而非5SB12-LALA保護倉鼠免於SARSCoV -2 (WH01)之致死性劑量攻擊。圖5A展示mAb處理及病毒攻擊之流程圖。圖5B展示經指定處理(3.5 mg/kg於PBS中，藉由ip)及感染之小鼠肺部病毒效價。* p＜0.05，** p＜0.01。
圖6A至圖6D展示1-2SA8及15SE6防護倉鼠之SARS-CoV-2感染。圖6A展示實驗設計。在感染之前24小時用mAb (3.5 mg/kg於PBS中，藉由ip)處理倉鼠。圖6B展示抗體投與及SARS-CoV-2 (WH01)攻擊之後的體重變化。圖6C展示藉由RT-qPCR測定之SARS-CoV-2病毒基因體含量。圖6D描繪H&E染色，其展示用1-2SA8及15SE6處理後組織病理學肺病變之減少。* p＜0.05，** p＜0.01，*** p＜0.001。
圖7展示三種mAb防止K18-hACE2 TG小鼠經致死性劑量之SARS-CoV-2之α (UK)變異體攻擊後體重減輕。mAb (15 mg/kg於PBS中)藉由ip給與，接著感染SARS-CoV-2之α變異體。
圖8A至圖8C展示mAb 5SB12、1-2SA8及15SE6之不同作用模式。圖8A展示5SB12而非5SB12-LALA預處理(3.5 mg/kg於PBS中，藉由ip)能夠保護倉鼠免於SARS-CoV-2感染誘導之體重減輕，且降低肺部病毒效價。圖8B展示5SB12預處理對倉鼠之SARS-CoV-2感染的劑量依賴性保護。圖8C展示1-2SA8及15SE6 (3.5 mg/kg於PBS中，藉由ip)以及其LALA形式(3.5 mg/kg於PBS中，藉由ip)能夠保護倉鼠免於SARS-CoV-2感染誘導之體重減輕，且降低肺部病毒效價(*
p＜0.05，**
p＜0.01，***
p＜0.001)。
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Claims (20)
- 一種抗體或其抗原結合片段，其對CoV中之抗原決定基具有特異性；其中該抗體或其抗原結合片段包含重鏈可變區之互補決定區(CDR)及輕鏈可變區之CDR， 其中該重鏈可變區之該等CDR包含： SEQ ID NO: 6、1或11之胺基酸序列或其基本相似序列的CDRH1，SEQ ID NO: 7、2或12之胺基酸序列或其基本相似序列的CDRH2，及SEQ ID NO: 8、3或13之胺基酸序列或其基本相似序列的CDRH3；且 其中該輕鏈可變區之該等CDR包含： SEQ ID NO: 9、4或14之胺基酸序列或其基本相似序列的CDRL1，DAS、DVS或AAS之胺基酸序列或其基本相似序列的CDRL2，及SEQ ID NO: 10、5或15之胺基酸序列或其基本相似序列的CDRL3。
- 如請求項1之抗體或其抗原結合片段，其中： CDRH1之胺基酸序列為SEQ ID NO: 6或其基本相似序列；CDRH2之胺基酸序列為SEQ ID NO: 7或其基本相似序列；CDRH3之胺基酸序列為SEQ ID NO: 8或其基本相似序列；CDRL1之胺基酸序列為SEQ ID NO: 9或其基本相似序列；CDRL2之胺基酸序列為DAS或其基本相似序列；且CDRL3之胺基酸序列為SEQ ID NO: 10或其基本相似序列； CDRH1之胺基酸序列為SEQ ID NO: 1或其基本相似序列；CDRH2之胺基酸序列為SEQ ID NO: 2或其基本相似序列；CDRH3之胺基酸序列為SEQ ID NO: 3或其基本相似序列；CDRL1之胺基酸序列為SEQ ID NO: 4或其基本相似序列；CDRL2之胺基酸序列為DVS或其基本相似序列；且CDRL3之胺基酸序列為SEQ ID NO: 5或其基本相似序列；或 CDRH1之胺基酸序列為SEQ ID NO: 11其基本相似序列；CDRH2之胺基酸序列為SEQ ID NO: 12或其基本相似序列；CDRH3之胺基酸序列為SEQ ID NO: 13或其基本相似序列；CDRL1之胺基酸序列為SEQ ID NO: 14或其基本相似序列；CDRL2之胺基酸序列為AAS或其基本相似序列；且CDRL3之胺基酸序列為SEQ ID NO: 15或其基本相似序列。
- 如請求項1之抗體或其抗原結合片段，其中該抗原決定基位於棘蛋白。
- 如請求項1之抗體或其抗原結合片段，其中該抗原決定基位於棘蛋白之受體結合域(RBD)。
- 如請求項1之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段為Fab片段、F(ab') 2片段、ScFv片段、單株抗體、嵌合抗體、奈米抗體、人類化抗體或人類抗體。
- 如請求項1之抗體或其抗原結合片段，其中該CoV為SARS-CoV、MERS-CoV或SARS-CoV-2。
- 如請求項1之抗體或其抗原結合片段，其中該CoV為野生型(WT) CoV、D614G、α-CoV、β-CoV、γ-CoV、δ-CoV或o-CoV。
- 一種載體，其編碼如請求項1之抗體或其抗原結合片段。
- 一種經基因工程改造之細胞，其表現如請求項1至7中任一項之抗體或其抗原結合片段或含有如請求項8之載體。
- 一種用於製造如請求項1至7中任一項之抗體或其抗原結合片段的方法，其包含：(a)將一或多種編碼該抗體或抗原結合片段之聚核苷酸引入宿主細胞中；(b)在有利於表現該一或多種聚核苷酸之條件下培養該宿主細胞；及(c)視情況自該宿主細胞及/或培養該宿主細胞之培養基中分離出該抗體或抗原結合片段。
- 一種用於在有需要之個體中治療或預防冠狀病毒感染、中和冠狀病毒及/或引發針對冠狀病毒之抗體依賴性細胞介導之細胞毒性的醫藥組合物，其包含如請求項1至7中任一項之抗體或其抗原結合片段及醫藥學上可接受之載劑以及視情況選用之另一治療劑。
- 如請求項11之醫藥組合物，其中該治療劑為抗病毒劑。
- 如請求項12之醫藥組合物，其中該治療劑為抗炎劑或對SARS-CoV-2之棘蛋白具有特異性的抗體或其抗原結合片段。
- 如請求項11之醫藥組合物，其中該冠狀病毒係選自由以下組成之群：SARS-CoV-2、SARS-CoV及MERS-CoV。
- 如請求項11之醫藥組合物，其中該冠狀病毒為野生型(WT) CoV、D614G、α-CoV、β-CoV、γ-CoV、δ-CoV或o-CoV。
- 如請求項11之醫藥組合物，其中該個體經疫苗接種。
- 如請求項11之醫藥組合物，其中該抗體或抗原結合片段經皮下、靜脈內或肌肉內注射至該個體的身體中。
- 一種容器或注射裝置，其包含如請求項1至7中任一項之抗體或其抗原結合片段。
- 一種用於偵測樣品中之冠狀病毒的方法，其包含使該樣品與如請求項1至7中任一項之抗體或其抗原結合片段接觸。
- 一種用於偵測樣品中之冠狀病毒的套組，其中該套組包含如請求項1至7中任一項之抗體或其抗原結合片段。
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