TW202346316A - 花生過敏原組成物 - Google Patents
花生過敏原組成物 Download PDFInfo
- Publication number
- TW202346316A TW202346316A TW112113455A TW112113455A TW202346316A TW 202346316 A TW202346316 A TW 202346316A TW 112113455 A TW112113455 A TW 112113455A TW 112113455 A TW112113455 A TW 112113455A TW 202346316 A TW202346316 A TW 202346316A
- Authority
- TW
- Taiwan
- Prior art keywords
- nara
- series
- peanut
- pharmaceutical composition
- peanut protein
- Prior art date
Links
- 235000020232 peanut Nutrition 0.000 title claims abstract description 759
- 235000010777 Arachis hypogaea Nutrition 0.000 title claims abstract description 698
- 235000017060 Arachis glabrata Nutrition 0.000 title claims abstract description 694
- 235000018262 Arachis monticola Nutrition 0.000 title claims abstract description 694
- 239000013566 allergen Substances 0.000 title claims abstract description 466
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 368
- 241001553178 Arachis glabrata Species 0.000 title claims abstract 103
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 187
- 208000008267 Peanut Hypersensitivity Diseases 0.000 claims abstract description 59
- 206010016946 Food allergy Diseases 0.000 claims abstract description 58
- 201000010853 peanut allergy Diseases 0.000 claims abstract description 58
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 claims abstract description 44
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 430
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 430
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 111
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 78
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 76
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 claims description 70
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims description 61
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims description 56
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 52
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 50
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 47
- 238000005571 anion exchange chromatography Methods 0.000 claims description 44
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 claims description 40
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 39
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 claims description 38
- 239000006286 aqueous extract Substances 0.000 claims description 36
- 102000001708 Protein Isoforms Human genes 0.000 claims description 32
- 108010029485 Protein Isoforms Proteins 0.000 claims description 32
- 239000003125 aqueous solvent Substances 0.000 claims description 31
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 claims description 31
- 230000007815 allergy Effects 0.000 claims description 30
- 239000013638 trimer Substances 0.000 claims description 29
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 26
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 claims description 24
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 claims description 22
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 22
- 239000007909 solid dosage form Substances 0.000 claims description 19
- 235000013305 food Nutrition 0.000 claims description 16
- 210000002200 mouth mucosa Anatomy 0.000 claims description 16
- 241000282412 Homo Species 0.000 claims description 13
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 claims description 10
- 208000003455 anaphylaxis Diseases 0.000 claims description 10
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 claims description 10
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 claims description 10
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 claims description 10
- 210000004877 mucosa Anatomy 0.000 claims description 10
- 210000003296 saliva Anatomy 0.000 claims description 10
- 206010002198 Anaphylactic reaction Diseases 0.000 claims description 9
- 239000012876 carrier material Substances 0.000 claims description 9
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 9
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 claims description 9
- 208000032484 Accidental exposure to product Diseases 0.000 claims description 8
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 8
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 claims description 8
- 230000037406 food intake Effects 0.000 claims description 8
- 231100000818 accidental exposure Toxicity 0.000 claims description 7
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 7
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 7
- 230000036783 anaphylactic response Effects 0.000 claims description 6
- 230000004044 response Effects 0.000 claims description 6
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 claims description 6
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 claims description 5
- 230000006698 induction Effects 0.000 claims description 5
- 239000007892 solid unit dosage form Substances 0.000 claims description 5
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims description 4
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 claims description 3
- 239000008297 liquid dosage form Substances 0.000 claims description 2
- 239000007891 compressed tablet Substances 0.000 claims 2
- 239000008299 semisolid dosage form Substances 0.000 claims 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 abstract description 56
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 abstract description 8
- 230000000116 mitigating effect Effects 0.000 abstract 1
- 244000105624 Arachis hypogaea Species 0.000 description 661
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 325
- 229960004784 allergens Drugs 0.000 description 231
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 70
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 62
- 229940074608 allergen extract Drugs 0.000 description 61
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 51
- 239000000463 material Substances 0.000 description 49
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 41
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 31
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 30
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 28
- 238000005349 anion exchange Methods 0.000 description 26
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 26
- 239000000047 product Substances 0.000 description 24
- 238000001542 size-exclusion chromatography Methods 0.000 description 21
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 20
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 20
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 238000001294 liquid chromatography-tandem mass spectrometry Methods 0.000 description 16
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 16
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 16
- 239000011536 extraction buffer Substances 0.000 description 15
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 15
- 241000894007 species Species 0.000 description 15
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 14
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 14
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 14
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 14
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 14
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 13
- SQEHCNOBYLQFTG-UHFFFAOYSA-M lithium;thiophene-2-carboxylate Chemical compound [Li+].[O-]C(=O)C1=CC=CS1 SQEHCNOBYLQFTG-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 13
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 13
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 12
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 11
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 11
- 238000003998 size exclusion chromatography high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 11
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 11
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 10
- 208000010668 atopic eczema Diseases 0.000 description 10
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 10
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 10
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 9
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 9
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 9
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 9
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 8
- 102000009843 Thyroglobulin Human genes 0.000 description 7
- 108010034949 Thyroglobulin Proteins 0.000 description 7
- 239000000287 crude extract Substances 0.000 description 7
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 7
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 7
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 7
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 7
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 7
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 7
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 7
- 229960002175 thyroglobulin Drugs 0.000 description 7
- UCTWMZQNUQWSLP-VIFPVBQESA-N (R)-adrenaline Chemical compound CNC[C@H](O)C1=CC=C(O)C(O)=C1 UCTWMZQNUQWSLP-VIFPVBQESA-N 0.000 description 6
- 229930182837 (R)-adrenaline Natural products 0.000 description 6
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 6
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 6
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 6
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 6
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 6
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 6
- 229960005139 epinephrine Drugs 0.000 description 6
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 6
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 6
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 6
- 239000000902 placebo Substances 0.000 description 6
- 229940068196 placebo Drugs 0.000 description 6
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 6
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 6
- 229930003779 Vitamin B12 Natural products 0.000 description 5
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 5
- AGVAZMGAQJOSFJ-WZHZPDAFSA-M cobalt(2+);[(2r,3s,4r,5s)-5-(5,6-dimethylbenzimidazol-1-yl)-4-hydroxy-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] [(2r)-1-[3-[(1r,2r,3r,4z,7s,9z,12s,13s,14z,17s,18s,19r)-2,13,18-tris(2-amino-2-oxoethyl)-7,12,17-tris(3-amino-3-oxopropyl)-3,5,8,8,13,15,18,19-octamethyl-2 Chemical compound [Co+2].N#[C-].[N-]([C@@H]1[C@H](CC(N)=O)[C@@]2(C)CCC(=O)NC[C@@H](C)OP(O)(=O)O[C@H]3[C@H]([C@H](O[C@@H]3CO)N3C4=CC(C)=C(C)C=C4N=C3)O)\C2=C(C)/C([C@H](C\2(C)C)CCC(N)=O)=N/C/2=C\C([C@H]([C@@]/2(CC(N)=O)C)CCC(N)=O)=N\C\2=C(C)/C2=N[C@]1(C)[C@@](C)(CC(N)=O)[C@@H]2CCC(N)=O AGVAZMGAQJOSFJ-WZHZPDAFSA-M 0.000 description 5
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 5
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 5
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 5
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 5
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 5
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 5
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 5
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 5
- 239000011715 vitamin B12 Substances 0.000 description 5
- 235000019163 vitamin B12 Nutrition 0.000 description 5
- 206010002199 Anaphylactic shock Diseases 0.000 description 4
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 4
- 241000283073 Equus caballus Species 0.000 description 4
- 101000609762 Gallus gallus Ovalbumin Proteins 0.000 description 4
- 102000006668 UniProt protein families Human genes 0.000 description 4
- 108020004729 UniProt protein families Proteins 0.000 description 4
- 239000008186 active pharmaceutical agent Substances 0.000 description 4
- 230000000172 allergic effect Effects 0.000 description 4
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 4
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 4
- 230000001186 cumulative effect Effects 0.000 description 4
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 4
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 4
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 4
- 229940088679 drug related substance Drugs 0.000 description 4
- 235000013312 flour Nutrition 0.000 description 4
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 4
- 108010074605 gamma-Globulins Proteins 0.000 description 4
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 4
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 4
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 4
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 4
- 239000007937 lozenge Substances 0.000 description 4
- 230000000737 periodic effect Effects 0.000 description 4
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 4
- 239000008213 purified water Substances 0.000 description 4
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 4
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 4
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 4
- 238000000825 ultraviolet detection Methods 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 235000003276 Apios tuberosa Nutrition 0.000 description 3
- 235000010744 Arachis villosulicarpa Nutrition 0.000 description 3
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 3
- 108090000317 Chymotrypsin Proteins 0.000 description 3
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 3
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 3
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 3
- 230000009471 action Effects 0.000 description 3
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 3
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 3
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 3
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 3
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 3
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 3
- 230000008859 change Effects 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 229960002376 chymotrypsin Drugs 0.000 description 3
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 3
- 102000038379 digestive enzymes Human genes 0.000 description 3
- 108091007734 digestive enzymes Proteins 0.000 description 3
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 3
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 3
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 3
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 3
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 3
- RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N imidazole Natural products C1=CNC=N1 RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 3
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 3
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 3
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 3
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 3
- 230000001323 posttranslational effect Effects 0.000 description 3
- 230000004845 protein aggregation Effects 0.000 description 3
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 3
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 3
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 3
- 238000003809 water extraction Methods 0.000 description 3
- 101710168820 2S seed storage albumin protein Proteins 0.000 description 2
- 240000002470 Amphicarpaea bracteata Species 0.000 description 2
- 235000000073 Amphicarpaea bracteata Nutrition 0.000 description 2
- 206010003055 Application site reaction Diseases 0.000 description 2
- 238000009010 Bradford assay Methods 0.000 description 2
- 102000009016 Cholera Toxin Human genes 0.000 description 2
- 108010049048 Cholera Toxin Proteins 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 2
- 206010013975 Dyspnoeas Diseases 0.000 description 2
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 2
- 206010064212 Eosinophilic oesophagitis Diseases 0.000 description 2
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 2
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 2
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 208000024780 Urticaria Diseases 0.000 description 2
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 2
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 2
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 2
- 208000030961 allergic reaction Diseases 0.000 description 2
- 125000000129 anionic group Chemical group 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 239000000337 buffer salt Substances 0.000 description 2
- 239000007975 buffered saline Substances 0.000 description 2
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 2
- 230000009850 completed effect Effects 0.000 description 2
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 2
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 2
- 238000013461 design Methods 0.000 description 2
- 208000002173 dizziness Diseases 0.000 description 2
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 239000012156 elution solvent Substances 0.000 description 2
- 201000000708 eosinophilic esophagitis Diseases 0.000 description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 description 2
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 2
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 2
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 2
- 239000012669 liquid formulation Substances 0.000 description 2
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 2
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 2
- 238000001426 native polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 2
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 2
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 2
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 2
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 2
- 230000029058 respiratory gaseous exchange Effects 0.000 description 2
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 2
- 239000012266 salt solution Substances 0.000 description 2
- 239000012723 sample buffer Substances 0.000 description 2
- 238000002791 soaking Methods 0.000 description 2
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 2
- 239000012609 strong anion exchange resin Substances 0.000 description 2
- 239000006190 sub-lingual tablet Substances 0.000 description 2
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 2
- 230000024664 tolerance induction Effects 0.000 description 2
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 2
- 239000011800 void material Substances 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 2
- 101710102211 11S globulin Proteins 0.000 description 1
- UAIUNKRWKOVEES-UHFFFAOYSA-N 3,3',5,5'-tetramethylbenzidine Chemical compound CC1=C(N)C(C)=CC(C=2C=C(C)C(N)=C(C)C=2)=C1 UAIUNKRWKOVEES-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010000087 Abdominal pain upper Diseases 0.000 description 1
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonia chloride Chemical compound [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000028185 Angioedema Diseases 0.000 description 1
- 101001015517 Betula pendula Germin-like protein 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000767750 Carya illinoinensis Vicilin Car i 2.0101 Proteins 0.000 description 1
- 101000767759 Corylus avellana Vicilin Cor a 11.0101 Proteins 0.000 description 1
- 206010011224 Cough Diseases 0.000 description 1
- 101710190853 Cruciferin Proteins 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- 206010012735 Diarrhoea Diseases 0.000 description 1
- 206010013952 Dysphonia Diseases 0.000 description 1
- 208000000059 Dyspnea Diseases 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 101000635852 Equus caballus Myoglobin Proteins 0.000 description 1
- 208000004262 Food Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- 102000006395 Globulins Human genes 0.000 description 1
- 108010044091 Globulins Proteins 0.000 description 1
- 102000001554 Hemoglobins Human genes 0.000 description 1
- 108010054147 Hemoglobins Proteins 0.000 description 1
- 208000010473 Hoarseness Diseases 0.000 description 1
- 101000669447 Homo sapiens Toll-like receptor 4 Proteins 0.000 description 1
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- 108010073816 IgE Receptors Proteins 0.000 description 1
- 101710144867 Inositol monophosphatase Proteins 0.000 description 1
- 108090000174 Interleukin-10 Proteins 0.000 description 1
- 108090000176 Interleukin-13 Proteins 0.000 description 1
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 description 1
- 108010002616 Interleukin-5 Proteins 0.000 description 1
- 101000622316 Juglans regia Vicilin Jug r 2.0101 Proteins 0.000 description 1
- 239000007836 KH2PO4 Substances 0.000 description 1
- 101710094902 Legumin Proteins 0.000 description 1
- 206010024769 Local reaction Diseases 0.000 description 1
- 102100038007 Low affinity immunoglobulin epsilon Fc receptor Human genes 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- ZOKXTWBITQBERF-UHFFFAOYSA-N Molybdenum Chemical compound [Mo] ZOKXTWBITQBERF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000010718 Multiple Organ Failure Diseases 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- 239000007832 Na2SO4 Substances 0.000 description 1
- 206010030113 Oedema Diseases 0.000 description 1
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 206010052894 Oral pruritus Diseases 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 208000002193 Pain Diseases 0.000 description 1
- 206010033546 Pallor Diseases 0.000 description 1
- 235000019483 Peanut oil Nutrition 0.000 description 1
- 102000057297 Pepsin A Human genes 0.000 description 1
- 108090000284 Pepsin A Proteins 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 description 1
- 244000046052 Phaseolus vulgaris Species 0.000 description 1
- 235000010627 Phaseolus vulgaris Nutrition 0.000 description 1
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101000767757 Pinus koraiensis Vicilin Pin k 2.0101 Proteins 0.000 description 1
- 101000767758 Pistacia vera Vicilin Pis v 3.0101 Proteins 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 208000037656 Respiratory Sounds Diseases 0.000 description 1
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 1
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 1
- 208000032023 Signs and Symptoms Diseases 0.000 description 1
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 108010073771 Soybean Proteins Proteins 0.000 description 1
- 210000004241 Th2 cell Anatomy 0.000 description 1
- 206010043528 Throat tightness Diseases 0.000 description 1
- 102100039360 Toll-like receptor 4 Human genes 0.000 description 1
- 206010047700 Vomiting Diseases 0.000 description 1
- 206010047924 Wheezing Diseases 0.000 description 1
- UVJQIYZYQQKIAC-UHFFFAOYSA-N [amino(ethylsulfanyl)methylidene]-[4-(trifluoromethyl)phenyl]azanium;chloride Chemical compound Cl.CCSC(N)=NC1=CC=C(C(F)(F)F)C=C1 UVJQIYZYQQKIAC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 1
- 108010016737 allergen Ara h3 Proteins 0.000 description 1
- 230000002009 allergenic effect Effects 0.000 description 1
- 208000028004 allergic respiratory disease Diseases 0.000 description 1
- 235000019270 ammonium chloride Nutrition 0.000 description 1
- UKFWSNCTAHXBQN-UHFFFAOYSA-N ammonium iodide Chemical compound [NH4+].[I-] UKFWSNCTAHXBQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000036592 analgesia Effects 0.000 description 1
- 239000003957 anion exchange resin Substances 0.000 description 1
- 230000030741 antigen processing and presentation Effects 0.000 description 1
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 239000012062 aqueous buffer Substances 0.000 description 1
- 230000001174 ascending effect Effects 0.000 description 1
- 208000006673 asthma Diseases 0.000 description 1
- 210000004666 bacterial spore Anatomy 0.000 description 1
- 210000003651 basophil Anatomy 0.000 description 1
- 239000000090 biomarker Substances 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 230000002051 biphasic effect Effects 0.000 description 1
- OWMVSZAMULFTJU-UHFFFAOYSA-N bis-tris Chemical compound OCCN(CCO)C(CO)(CO)CO OWMVSZAMULFTJU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004061 bleaching Methods 0.000 description 1
- 230000036765 blood level Effects 0.000 description 1
- 230000036772 blood pressure Effects 0.000 description 1
- 239000012912 buffer supplement Substances 0.000 description 1
- 230000003139 buffering effect Effects 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 1
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 1
- 230000011712 cell development Effects 0.000 description 1
- 230000036755 cellular response Effects 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000011210 chromatographic step Methods 0.000 description 1
- 239000003593 chromogenic compound Substances 0.000 description 1
- 238000011260 co-administration Methods 0.000 description 1
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 1
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 1
- 238000004040 coloring Methods 0.000 description 1
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 230000008094 contradictory effect Effects 0.000 description 1
- 230000009260 cross reactivity Effects 0.000 description 1
- 238000007405 data analysis Methods 0.000 description 1
- 238000010908 decantation Methods 0.000 description 1
- 238000005238 degreasing Methods 0.000 description 1
- 238000001212 derivatisation Methods 0.000 description 1
- 238000011026 diafiltration Methods 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 1
- 230000008034 disappearance Effects 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- NEKNNCABDXGBEN-UHFFFAOYSA-L disodium;4-(4-chloro-2-methylphenoxy)butanoate;4-(2,4-dichlorophenoxy)butanoate Chemical compound [Na+].[Na+].CC1=CC(Cl)=CC=C1OCCCC([O-])=O.[O-]C(=O)CCCOC1=CC=C(Cl)C=C1Cl NEKNNCABDXGBEN-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 201000006549 dyspepsia Diseases 0.000 description 1
- 239000012149 elution buffer Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 230000005713 exacerbation Effects 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 1
- 235000019634 flavors Nutrition 0.000 description 1
- 235000020932 food allergy Nutrition 0.000 description 1
- 238000002546 full scan Methods 0.000 description 1
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 238000001879 gelation Methods 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 238000009957 hemming Methods 0.000 description 1
- 210000003630 histaminocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 208000026278 immune system disease Diseases 0.000 description 1
- 230000006058 immune tolerance Effects 0.000 description 1
- 230000000984 immunochemical effect Effects 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 239000005414 inactive ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 238000011283 initial treatment period Methods 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 235000013902 inosinic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000002198 insoluble material Substances 0.000 description 1
- 238000009434 installation Methods 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- GZQKNULLWNGMCW-PWQABINMSA-N lipid A (E. coli) Chemical compound O1[C@H](CO)[C@@H](OP(O)(O)=O)[C@H](OC(=O)C[C@@H](CCCCCCCCCCC)OC(=O)CCCCCCCCCCCCC)[C@@H](NC(=O)C[C@@H](CCCCCCCCCCC)OC(=O)CCCCCCCCCCC)[C@@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](OC(=O)C[C@H](O)CCCCCCCCCCC)[C@@H](NC(=O)C[C@H](O)CCCCCCCCCCC)[C@@H](OP(O)(O)=O)O1 GZQKNULLWNGMCW-PWQABINMSA-N 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 239000006193 liquid solution Substances 0.000 description 1
- 230000005960 long-lasting response Effects 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- BLQJIBCZHWBKSL-UHFFFAOYSA-L magnesium iodide Chemical compound [Mg+2].[I-].[I-] BLQJIBCZHWBKSL-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910001641 magnesium iodide Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000007726 management method Methods 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 231100000682 maximum tolerated dose Toxicity 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- IZXGZAJMDLJLMF-UHFFFAOYSA-N methylaminomethanol Chemical compound CNCO IZXGZAJMDLJLMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 229910052750 molybdenum Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011733 molybdenum Substances 0.000 description 1
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 235000019799 monosodium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 1
- 208000029744 multiple organ dysfunction syndrome Diseases 0.000 description 1
- 239000007908 nanoemulsion Substances 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 239000000312 peanut oil Substances 0.000 description 1
- 229940111202 pepsin Drugs 0.000 description 1
- 230000002085 persistent effect Effects 0.000 description 1
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 1
- 229940127557 pharmaceutical product Drugs 0.000 description 1
- 238000009522 phase III clinical trial Methods 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 230000004481 post-translational protein modification Effects 0.000 description 1
- GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M potassium dihydrogen phosphate Chemical compound [K+].OP(O)([O-])=O GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- OTYBMLCTZGSZBG-UHFFFAOYSA-L potassium sulfate Chemical compound [K+].[K+].[O-]S([O-])(=O)=O OTYBMLCTZGSZBG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910052939 potassium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N propan-1-ol Chemical compound CCCO BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 230000013777 protein digestion Effects 0.000 description 1
- 238000000751 protein extraction Methods 0.000 description 1
- 235000021251 pulses Nutrition 0.000 description 1
- 239000002296 pyrolytic carbon Substances 0.000 description 1
- 238000010833 quantitative mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 125000001453 quaternary ammonium group Chemical group 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 238000003259 recombinant expression Methods 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000003252 repetitive effect Effects 0.000 description 1
- 201000004335 respiratory allergy Diseases 0.000 description 1
- 238000004366 reverse phase liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 239000012146 running buffer Substances 0.000 description 1
- 238000003118 sandwich ELISA Methods 0.000 description 1
- 208000013220 shortness of breath Diseases 0.000 description 1
- 238000010181 skin prick test Methods 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 1
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 1
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M sodium dihydrogen phosphate Chemical compound [Na+].OP(O)([O-])=O AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000008247 solid mixture Substances 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 235000019710 soybean protein Nutrition 0.000 description 1
- 238000012421 spiking Methods 0.000 description 1
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 1
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 1
- 229940098466 sublingual tablet Drugs 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 206010042772 syncope Diseases 0.000 description 1
- 238000004885 tandem mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 230000008719 thickening Effects 0.000 description 1
- 230000001256 tonic effect Effects 0.000 description 1
- 230000029069 type 2 immune response Effects 0.000 description 1
- 238000004704 ultra performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
- 238000005199 ultracentrifugation Methods 0.000 description 1
- 230000008673 vomiting Effects 0.000 description 1
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 1
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/35—Allergens
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
- C07K1/16—Extraction; Separation; Purification by chromatography
- C07K1/18—Ion-exchange chromatography
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/415—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from plants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/54—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the route of administration
- A61K2039/541—Mucosal route
- A61K2039/542—Mucosal route oral/gastrointestinal
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/545—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the dose, timing or administration schedule
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/57—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the type of response, e.g. Th1, Th2
- A61K2039/577—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the type of response, e.g. Th1, Th2 tolerising response
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Mycology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Botany (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
Abstract
本發明揭示包含四種花生過敏原Ara h 1、Ara h 2、Ara h 3及Ara h 6的組成物及醫藥學上可接受之調配物，以及包含該等組成物或醫藥學上可接受之調配物的套組，及其製備方法及其用於減輕花生過敏的用途及其用於花生過敏原特異性免疫療法的用途。
Description
本發明係關於免疫學領域，且特定言之，係關於花生過敏之主動免疫療法。本發明因此係關於適用於過敏原特異性主動免疫療法的組成物、包含該組成物的醫藥學上可接受之調配物、製備該組成物及調配物的方法、包含該組成物或調配物的套組，以及使用該組成物及醫藥學上可接受之產品的治療用途/方法。
花生過敏係IgE介導之免疫病症及潛在危及生命之疾病，對患者及其家庭的生活品質存在實質影響。臨床表現包括自口腔瘙癢至急性風疹或血管性水腫之一系列症狀，其可進展成更嚴重症狀及急性過敏（anaphylaxis）的病徵，諸如過敏性休克及多器官功能障礙症候群。全世界眾多人類個體受花生過敏影響，據報導，美國、加拿大、英國及澳大利亞的流行率最高(
Pandey 等人 , 2019)。
花生植物落花生(
Arachis hypogaea)的生核仁含有可誘導易感個體產生特定IgE抗體的一系列過敏原。迄今為止，18種蛋白質已顯示可結合至獲自人類血清的IgE抗體(
Iqbal 等人 , 2016)且已被國際免疫學會聯合會過敏原命名法小組委員會(the Allergen Nomenclature Sub-Committee of the International Union of Immunological Societies)定義(http://www.allergen.org/)。然而，四種主要花生過敏原，亦即，Ara h 1、Ara h 2、Ara h 3及Ara h 6，被視為關鍵的IgE結合過敏原。此等過敏原為花生仁中的最豐裕花生過敏原，且若干研究已顯示，此等四種過敏原在臨床上牽涉到觸發過敏反應(
Krause 等人 , 2021)且已指定為主要過敏原，亦即，花生過敏人群中超過50%針對其而產生IgE抗體的過敏原。
Palladino及
Breitender (2018)及
Becker 等人 (2018)之綜述論文透徹深刻地揭示了花生過敏原的特徵。過敏原Ara h 2被視為誘導危及生命之過敏反應的最重要來源(
Kukkonen 等人 , 2015)且相較於其他花生過敏原，Ara h 2特異性IgE及Ara h 6特異性IgE就花生過敏而言顯示最大的診斷準確度(
Hemmings 等人 , 2020)。
在世界的不同地區，花生過敏的臨床及免疫模式不同。在美國，針對重組產生之Ara h 1、Ara h 2及Ara h 3產生特異性IgE抗體的花生過敏患者百分比經發現分別為約80%、90%及60%。相反，在西班牙(Spain)及瑞典(Sweden)發現對此等花生過敏原敏感的花生過敏患者顯著減少(
Vereda 等人 , 2011)。值得注意的是，更小部分的患者僅對四種花生主要過敏原之一敏感。舉例而言，有報導稱，僅對Ara h 6敏感的兒童對Ara h 1、2及3中之任一者不敏感(
Van der Valk 等人 , 2016)且僅對Ara h 3敏感的兒童對Ara h 1、2及6不敏感(
Restani 等人 , 2005)。
儘管呼吸道過敏之皮下及舌下過敏原特異性免疫療法(ASIT)已證實在ASIT結束之後對侵入的過敏原成功地產生耐受性/持久無反應，但此等治療選項不能在臨床上用於治療食物過敏。採用水性花生萃取物的皮下過敏原特異性免疫療法(SCIT)已發現在誘導重度過敏反應(包括急性過敏)方面太危險，但已測試諸如舌下(SLIT)、上表皮(EPIT)及口服免疫療法(OIT)之替代方案且發現其在治療時提供不同程度的消感作用。治療中止之後的持久無反應或耐受性尚待證明，但採用4000 mg花生蛋白質之高維持劑量或300 mg花生蛋白質之長期低劑量維持療法的OIT似乎增加了一小組患者在短期中斷治療之後可保持無反應的可能性(
Chinthrajah 等人 , 2019)。
過敏原特異性免疫療法的作用方式未完全瞭解且考慮不同免疫反應，其中B細胞同型自產生IgE向產生IgG (包括亞類IgG1及IgG4)及IgA轉換似乎很重要。ASIT之後，IgE含量的減小會限制IgE介導的肥大細胞及嗜鹼性球活化及IgE促進的抗原呈遞及Th2細胞反應。增加的花生過敏原特異性IgG4抗體及亦可能IgA抗體將與IgE競爭結合過敏原且可抑制過敏原-IgE複合物的形成，IgE原本會結合至B細胞表面上的IgE低親和力受體(FcεRII)，使得IgE促進T
H2細胞發育
(Durham 及 Shamji, 2022)。已觀測到花生OIT引起IgE及IgG4抗體的含量改良(
Vickery 等人 , 2013)。
最近，FDA已批准一種經口投與的標準化花生粉末(Palforzia®)，用於執行口服免疫療法(OIT)以減輕可能因意外暴露於花生而發生的花生過敏，包括急性過敏。花生粉末係由輕度烘焙的脫脂花生粉製成且各種劑量滿足Ara h 1、Ara h 2及Ara 6之量的規範，如藉由免疫分析或與高效液相層析組合所量測
(FDA 的 Palforzia® 包裝說明書 )。粉末必須在2℃至8℃下冷藏儲存且在攝入之前與食物混合。診斷有花生過敏的患者依劑量漸增方案將花生粉與食物混合攝入，該方案包括在健康照護背景下自0.5 mg至6 mg花生蛋白質的初始日劑量遞增，隨後為由11種劑量水平組成的漸增期，各劑量水平歷時每日投與相同劑量的2週時段，自3 mg花生蛋白質開始直至300 mg花生蛋白質(劑量在五個月內增加100倍)。最後，以每日300 mg花生蛋白質的維持期繼續治療。根據FDA的Palforzia®包裝說明書，在治療期間存在出現急性過敏及胃腸不良事件的風險。在III期臨床試驗中，在OIT治療50週之後，發現對花生的耐受性自基線時＜100 mg花生蛋白質的臨限值增加至約600至1000 mg。然而，報導因不良事件(AE)而存在大量退出者(11.6%主動療法；2.4%安慰劑)。重要的是，據報導，主動療法組中14.0%個體使用腎上腺素減輕急性過敏，而安慰劑組中為6.5%個體(Vickery等人, 2018)。因此，OIT引發過敏性休克的風險似乎高於未治療的患者。
Koppelman 等人 (2018)已發現，自輕度烘焙之花生粉中可萃取的呈溶解形式之過敏原(Ara h 1、2、3及6)的濃度隨pH發生顯著變化。在6.5至8.5的唾液pH範圍內，Ara h 3溶解度顯著提高，而其餘過敏原受到的影響則低得多。總體而言，此pH範圍內的萃取動力學表明，Ara h 2及Ara h 6為個體在攝入花生後暴露的第一過敏原，且當在唾液pH範圍(6.5至8.5)內測定時，與其他過敏原相比，Ara h 1的萃取量(nmol/ml)相當低。
針對花生過敏的OIT已提出多種組成物及給藥時程：專利申請案
WO2014159609及
WO2014159607係關於包含烤花生粉的花生蛋白質組成物，且
WO2014159609進一步關於OIT給藥時程，其中初始每1天遞增劑量，隨後為每兩週一次的九個劑量增加步驟，自12 mg花生蛋白質的劑量增至300 mg花生蛋白質。專利申請案
WO2016020336係關於適於經口投與的花生蛋白質組成物，其中花生過敏原在胃中釋放。專利申請案
US2020038466係關於來源於烤花生的花生蛋白質組成物，其用於針對花生過敏的口服免疫療法，其中提議使用的組成物包含含量在總蛋白質之10至15重量%之間的Ara h 1、含量在總蛋白質之2至10重量%之間的Ara h 2及總蛋白質之10至20重量%之間的Ara h 3。
已在較小規模的人類試驗中藉由依包含漫長劑量增加期之給藥方案投予花生過敏原萃取物液滴來研究SLIT。在
Kim 等人 (2011)報導的試驗中，每日用花生過敏原液體萃取物(獲自Greer實驗室)的等分試樣治療兒童，該萃取物含有溶解於0.2%苯酚及50%甘油化生理鹽水中的5000 µg/mL花生蛋白質(估計含有300 µg/mL Ara h 2，相當於6重量%花生蛋白質)。過敏原萃取物以遞增的體積(滴劑)舌下投予約六個月之時段，隨後為六個月維持期，每日一次2000 µg花生蛋白質劑量(百分之六為Ara h 2，相當於120 µg Ara h 2)。劑量增加期包含每兩週一次的14個劑量遞增步驟，自0.25 µg花生蛋白質(0.0015 µg Ara h 2)增至2000 µg花生蛋白質(約120 µg Ara h 2)。因此，在劑量增加期期間，劑量在六個月內增加8000倍。已發現，隨機接受主動療法花生SLIT的兒童可在經口攻毒測試中攝入1,710 mg花生蛋白質(等效於6至7粒花生)的中值累積劑量，相比之下，接受安慰劑之七名兒童攝入85 mg花生蛋白質的中值累積劑量。
Burk 等人 (2015)隨後根據試驗的延續部分報導，33名兒童中的十名(30%)完成累積2500 mg花生蛋白質隨食物口服攻毒而無症狀，然而其餘兒童僅耐受460 mg花生蛋白質之中值劑量(10至1710 mg)。
Sampson 等人 (2012)描述了執行口服食物攻毒的方法。在
Fleischer 等人 (2013)報導的另一項SLIT試驗中，在36週劑量增加期中投予獲自Greer實驗室的過敏原液體萃取物(pH為6.8至8.4、含有0.5%氯化鈉及0.54%碳酸氫鈉之來自非烤花生的過敏原萃取物，其為存在於50%甘油中的水性萃取物)，其中初始劑量為0.000165 µg花生蛋白質(0.00001 µg Ara h 2)且最終劑量為1386 µg花生蛋白質(約83 µg Ara h 2)，該最終劑量用於後續維持期中。一些患者在給予1386 µg花生蛋白質的8至28週維持期之後，進一步增加劑量至3696 µg花生蛋白質(約222 µg Ara h 2)且以3696 µg花生蛋白質劑量繼續進行維持期。
Zhang 等人 (2018)已公佈SLIT與OIT的總體對比。
已提出將SLIT與TLR4促效劑(例如葡萄普魯糖基(glucopluranosyl)脂質佐劑)及花生過敏原共投予可調節過敏原特異性免疫反應(專利申請案
WO2016/172511)，且已報導以葡萄哌喃糖基脂質A (GLA)作為佐劑之花生萃取物(PE)在每日舌下(SL)重複投予花生過敏成年及青少年患者之後評估該花生萃取物之耐受性及安全的臨床試驗(
ClinicalTrials.gov 標識符 ： NCT03463135)。
SLIT依賴於將可溶性過敏原以確保高效進入口腔黏膜且被抗原呈遞細胞吸收的構形形式遞送至舌下黏膜。在藉由投予固體劑型(諸如凍乾劑型)來執行SLIT的情況下，過敏原必須自固體劑型中釋放且溶解於唾液中以變得具有可溶性且生物可及性。
通常，用於ASIT的過敏原產物係基於含有多種過敏原的過敏原萃取物，該等過敏原呈原生構形，包括多種同功型及轉譯後修飾(例如糖基化)。使用過敏原的天然形式可確保過敏患者係用包含所有潛在IgE抗體結合抗原決定基的過敏原治療，從而使患者或患者群體在天然暴露於過敏原源材料後可能會產生針對其的IgE。因此，基於重組產生之過敏原的過敏原產物可以不覆蓋所有原生IgE抗原決定基結合位且重組過敏原可不以「天然」轉譯後構形存在。
過敏原為其胺基酸序列已知的蛋白質分子。過敏原以多種同功型存在且可在表現之後藉由轉譯後方法修飾。值得注意的是，花生過敏原Ara h 1及Ara h 3似乎以寡聚形式存在於生花生中，而Ara h 2及6似乎僅以單體形式存在
(Boldt 等人 , 2005)。據報導，當自生花生純化時，Ara h 1可以由63 kDa N糖基化亞單元構成的210 kDa穩定三聚體蛋白質形式獲得，視萃取條件而定，該等亞單元可形成高達600至700 kDa的多聚體
(Blanc 等人 , 2011)。然而，Ara h 1以寡聚形式存在而非以單體形式存在可取決於用於純化的方法，如
van Boxtel 等人 (2006)的著作所指出。過敏原Ara h 3為由約60 kDa單鏈多肽(單體形式)組成的複雜過敏原，且對酶(例如胃蛋白酶)作用的穩定性小於Ara h 2及Ara h 6過敏原。其基於胺基酸序列的單體形式具有約60 kDa的分子質量，但Ara h 3似乎以360 kDa的雜聚六聚體複合物形式存在於花生中，其在轉譯後裂解為43 kDa酸性亞單元及28 kDa鹼性亞單元，該等亞單元藉由二硫鍵共價連接。即使在抑制蛋白酶活性的萃取條件下，亦可觀測到Ara h 3的若干片段(14、25、42及45 kDa)(
Palladino 及 Breitender, 2018)。若以蛋白分解方式處理，則Ara h 3將藉由二硫橋鍵結合且以三聚體及六聚體結構存在。亦已知在烘焙期間，Ara h 3容易聚集成複雜聚合物，且與來自生花生之Ara h 3截然相反的來自烤花生之Ara h 3已顯示可引起Caco-2細胞對Ara h 3的吸收增加，原因可能在於以聚集形式吸收於細胞中的Ara h 3量更高(
Wang S 等人 , 2021)。分子大小為35.9 kDa且pI為5.5的過敏原經發現與Ara h 3具有91%一致的胺基酸序列，且被視為Ara h 3的同種過敏原，但有時稱為Ara h 4。
由於蛋白質層面的結構變化可引起新的IgE結合抗原決定基消失及/或出現，因此可經由蛋白質聚集改變過敏原的內在過敏原性，例如經由二硫鍵或其他鏈間共價鍵來改變。另外，蛋白質聚集所誘導的構形變化可引起溶解度減小的蛋白質聚集體或寡聚物形成(
De Angelis 等人 , 2018)。
患者在花生水性萃取物投予後可能暴露的過敏原概況亦可取決於花生以多種栽培品種變異體存在的花生源。儘管
Koppelman 等人 (2016)在萃取最主要花生栽培品種(Runner、Virginia、Spanish及Valencia)之生花生而獲得的過敏原概況中未找到巨大差異，但相反，
Pandey 等人 (2019)發現當在pH 7.4水性緩衝液中萃取時，四種過敏原Ara h 1、2、3及6中之各者的含量在264種不同花生栽培品種變異體之間存在巨大差異，諸如1000倍差異。過敏原含量係藉由夾層ELISA量測。根據
Koppelman 等人 (2016)藉由RP-HLPC對四種過敏原的定量分析，以總花生蛋白質的重量計，估計Ara h 1的含量範圍為11.7至23.7%，平均值為17.1%±3.4%；Ara h 2的含量範圍為3.5至8.0%，平均值為6.2% (±1.3%)，Ara h 3的含量範圍為57.7至83.5%，平均值為70.6±8.6%，且Ara h 6的含量範圍為2.5至9.7%，平均值為5.8±1.8%。由於各花生栽培品種變異體的基因型不同，因此過敏原概況存在進一步的差異。藉由用於測定過敏原之定量含量的分析方法可解釋如
Pandey 等人 (2019)及
Koppelman 等人 (2016)所測定之生花生之過敏原概況的差異。
根據
Maleki 等人 , 2010，可在商業花生液體萃取物(ALK-Abelló, Hollister-Stier及Greer萃取物)及烤花生及煮花生之水性萃取物中發現不同含量的高分子量蛋白質結構。此類結構可在SDS-PAGE之頂部以拖尾形式鑑別，或可藉由西方墨點分析、利用對患者之血清IgE的結合加以鑑別。儘管主要花生過敏原(Ara h 1、Ara h 2、Ara h 3及Ara h 6)存在於所有萃取物中，但個別花生過敏患者的血清IgE僅識別一些萃取物中的此等過敏原。因此，儘管過敏原存在於各萃取物中，但同一患者的血清IgE不識別各萃取物中的過敏原。另外，一些人類血清的IgE僅識別高分子量蛋白質結構。
根據
Poms 等人 , 2004，影響自花生萃取花生蛋白質之效率的最顯著因素似乎為所用萃取緩衝液的pH。使用pH 8至11範圍內之緩衝液獲得的總蛋白質產量最佳。然而，用相同緩衝液自烤花生萃取蛋白質的產量大大低於生花生。因此，提供向花生ASIT遞送可再現且臨床上相關劑量之過敏原的花生過敏原萃取物組成物具挑戰性之處在於，在其他參數中，需要花生過敏原組成物含有呈天然構形的主要過敏原，該等過敏原被大部分過敏患者之花生過敏原特異性IgE識別。
總之，需要提供基於過敏原萃取物之產物以用於花生特異性ASIT，該等產物含有以天然構形存在的易溶過敏原，以確保過敏原當以固體劑型投予舌下黏膜時高度溶解，且另外確保呈天然構形的過敏原被花生過敏患者識別。
有利的是，含有所有四種主要花生過敏原的花生過敏原組成物具有治療全世界花生過敏個體群體的潛力，不論其敏感模式。另外，藉由將花生過敏原Ara h 1、2、3及6中之各者的莫耳含量調節至相同窄莫耳濃度範圍內，對Ara h 1、2、3或6敏感的任何患者就該患者在治療期間暴露於所討論之四種花生過敏原中之各者的相同數目個分子而言均具有同等的治療潛力。
因此，重要的是提供用於ASIT的含有花生過敏原之產物，其中花生過敏原Ara h 1、2、3及6之含量受控制，且下文提供用於製造花生過敏原萃取物的方法，該等花生過敏原萃取物含有相同且可再現之莫耳濃度範圍內的主要過敏原。
使用公司特有的內部參考過敏原組成物(藉由皮膚測試反應性(活體內標準)定量)或使用固相參照過敏原萃取物(FDA)，藉由測定總過敏原效能來控制當前的過敏原產物。另外，藉由競爭性試管內IgE測試(諸如RAST、ImmunoCAP或ELISA抑制分析)來控制單一過敏原，但此等方法量測的生物學效能可能既不與蛋白質含量相關，亦不與以重量計的單一過敏原之量相關。生物學效能依賴於用於測定生物學效能之人類血清或單株抗體的IgE抗原決定基覆蓋範圍且不能反映過敏原產物中之單一過敏原的絕對量。
Spiric 等人 (2017)推薦使用過敏原之絕對定量來證實連續批次之過敏原萃取物或過敏原源材料之間的一致性，該絕對定量係藉由用於界定及特性化過敏原萃取物的質譜法(MS)達成。然而，基於對蛋白質之獨特肽進行定量的定量MS分析可能無法偵測由於蛋白質變性或蛋白質部分消化而引起的效能損失。專利申請案
WO2017115139係關於基於花生過敏原之獨特肽的定量對包括各花生過敏原之多種同功型在內的花生過敏原的MS分析。
因此，需要用於控制基於過敏原萃取物之產物中之主要過敏原的其他方法，以確保單一過敏原之含量在各批次間的高度一致性，另外重要的是，降低過敏原效能在各批次間的差異。
專利申請案
WO2022147173A1係關於用於治療花生過敏的花生蛋白質組成物，該花生組成物被調配為以低濃度投予花生過敏原的奈米乳液。
專利申請案
EP3244212A1係關於重組產生之花生過敏原的組成物，其應用於診斷測試條帶。
專利申請案
US 2018/044384A1係關於含有重組細菌孢子的組成物，該等細菌孢子/細胞之表面上表現霍亂毒素B (CTB)以及一或多種花生過敏原；以及使用此類組成物誘導針對花生過敏原或花生過敏之耐受性或減少針對其之敏感性的方法。
專利申請案
US 2005/063994係關於包含含有重組版花生過敏原之微生物的組成物。
Marsh 等人 (2008)係關於用於純化個別花生過敏原的方法。方法包含若干層析步驟，其中將陰離子交換層析與其他親和層析步驟組合使用以便純化一些花生過敏原。
Wunschmann S 等人 (2019)係關於藉由ELISA對花生過敏原進行定量測定，其中自烘焙且脫脂的花生粉中萃取花生過敏原。
本發明之目標
本發明之具體實例的目標為提供適用於針對花生過敏之過敏原特異性免疫療法的組成物，以及提供適於製備此類組成物的方法及實施該等組成物的方法及套組。
本發明人已發現，習知用於獲得適於ASIT之過敏原組成物的水萃取方法無法提供適用於花生過敏原免疫療法之過敏原萃取物。首先，用高劑量的所有四種主要花生過敏原誘導臨床上相關的針對所有四種過敏原之耐受性被視為治療的關鍵。換言之，針對所有四種主要花生過敏原，關鍵是實現花生過敏原特異性IgE抗體的含量減小及花生過敏原特異性IgG4抗體的含量增加。
遺憾的是，在相同萃取條件下不能獲得四種主要花生過敏原的最佳萃取效率。Ara h 3的萃取效率對pH及鹽濃度極其敏感且Ara h 3的高萃取效率看似與Ara h 1的高萃取效率矛盾。另外，已發現藉由對含有高分子質量蛋白質之花生仁進行簡單的水萃取而獲得的花生過敏原組成物似乎為包含nAra h 1及/或nAra h 3多肽的聚集體。聚集體乍一看似乎可溶解於水溶液中，但在儲存後可沈澱析出或或可引起膠凝。就測定組成物中之呈單一多肽形式(單體形式)之過敏原(最終呈水溶性寡聚形式)的準確含量或過敏原效能而言，聚集體亦會引起問題。用於測定過敏原效能的免疫化學方法(例如ELISA)需要特異性針對過敏原的抗體且亦會錯誤地結合至聚集的過敏原。
令人驚訝的是，本發明人已提供包含四種過敏原nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6中之各者、高分子質量聚集體之含量有限的組成物。此類組成物可藉由簡單的少步驟製備方法獲得，該製備方法基本上包含對花生仁進行水萃取以獲得溶解的花生過敏原nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6，該等花生過敏原可吸附至陰離子交換層析材料上且在以不同鹽濃度溶離陰離子交換材料之後，於針對過敏原nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6中之任一者富集的個別溶離份中收集。可將所富集的溶離份混合，以使得四種主要過敏原中之兩者或更多者達成預選定的濃度。
有利的是，此製備方法允許產生具有類似高劑量之所有四種主要過敏原(包括Ara h 3及Ara h 1)的組成物。
本發明人亦已發現，由於不存在高質量聚集體，因此可藉由逆相層析準確地控制所富集之溶離份或其混合組成物中之四種過敏原(包括nAra h 3及nAra h 1)中之各者的濃度。nAra h 1及nAra h 3的濃度測定因其以寡聚形式存在而特別具挑戰性，但本發明人已發現，儘管所富集之溶離份或其混合組成物含有三聚體形式之nAra h 1及單體、三聚體以及六聚體形式之nAra h 3，但逆相層析方法能夠測定以單體構形表現之四種過敏原中之各者的濃度。有利的是，此允許根據過敏原之單一多肽形式(單體)的莫耳濃度來測定該等過敏原中之各者的莫耳濃度。
因此，已有可能提供包含預選定濃度之過敏原nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6中之各者的組成物，藉由選擇，其包含含量均衡的四種主要過敏原，在一些界限內，其意欲包括包含莫耳量類似之四種主要過敏原的組成物。
當以用於減輕花生過敏的過敏原特異性免疫療法施用其中主要花生過敏原之莫耳濃度類似的此類組成物時，由於任何患者將暴露於主要花生過敏原nAra h 1、2、3及6中之各者的相同數目個分子(儘管在一些界限內)，因此該等組成物將具有治療較大部分之花生過敏個體的潛力，不論其敏感模式(不論大部分針對nAra h 2及/或其他主要過敏原中之一或多者)。因此，使用此類組成物減輕花生過敏可能適合於許多過敏患者，不論其個別的花生過敏原敏感模式。此外，若此類組成物以劑量遞增治療方案(劑量增加)使用，則在各遞增步驟，主要過敏原中之各者的劑量增加將引起主要過敏原中之各者出現相同的窄劑量範圍。此可能會增加患者以有效劑量之主要過敏原中之各者治療的機會，且有利地在相同時段內達成。另外，被認為同等重要的是，使用本文所述之組成物減輕花生過敏將引起對保護性花生過敏原特異性IgG4抗體的誘導，且較佳地，所有四種主要花生過敏原的花生過敏原特異性IgG4抗體均實現增加。有利的是，花生過敏原特異性IgG4的增幅可能在分別識別Ara h 1、2、3以及6之特異性IgG4抗體的相同多倍增幅內。可以在人類試驗中研究增加IgG4抗體含量的能力且可以定量血液樣品或其他生物分泌物(如唾液、鼻或肺灌洗液)中的IgG4抗體。就小鼠回應於過敏原暴露不產生IgG4抗體而是產生IgG2抗體而言，亦可利用小鼠模型研究在過敏原暴露之後誘導IgG抗體的能力。
根據本發明的第1態樣，提供一種包含花生蛋白質nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6中之各者的組成物，其中配對nAra h 1:nAra h 2、nAra h 3:nAra h 2及nAra h 6:nAra h 2中之各者的莫耳比在0.5至2.0範圍內，較佳在0.5至1.5範圍內。
在第2態樣中，本發明係關於醫藥學上可接受之調配物，諸如醫藥組成物，其中該調配物包含本發明之第一態樣的組成物，或本文所揭示之其任何具體實例，該溶解或分散於選自由以下者組成之群的載劑物質中：液體、半固體及固體載劑物質。
在第3態樣中，本發明係關於本發明之第1態樣的組成物或(本文所揭示之其任何具體實例)或本發明之第2態樣的醫藥學上可接受之調配物(或本文所揭示之其任何具體實例)，其用作醫藥品，且尤其用於治療人類以防花生過敏的方法中，諸如藉由執行花生過敏原特異性免疫療法。下文所述之本發明之第6態樣之方法中使用的組成物亦在此態樣內。
在第4態樣中，本發明係關於一種用於製備包含nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6中之兩者或更多者之組成物的方法，該方法包含提供1)如下獲得的花生蛋白質萃取物：用水溶劑(aqueous solvent)萃取生花生仁以獲得包含nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6中之各者的水性萃取物；以及2)在7至9範圍內的pH下，經由逐步或連續的水性鹽梯度溶離對該水性萃取物進行陰離子交換層析，藉此將nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6中之各者溶離並收集至針對nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3或nAra h 6個別地富集的溶離份中；以及3)視需要收集來自陰離子交換層析的流過物溶離份；以及4)將步驟2或組合的步驟2與步驟3所得之兩個或更多個溶離份或其等分試樣合併，以獲得包含nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6中之至少兩者的該花生蛋白質組成物。較佳地，含有分子質量高之花生蛋白質的溶離份予以丟棄。
在第5態樣中，本發明係關於一種套組，其包含含有複數個各別隔室的密封包裝，各隔室包含本發明之第2態樣之醫藥學上可接受之調配物(或本文所揭示之其任何具體實例)的單位劑型，其中至少一種單位劑型包含的總花生過敏原之量與套組中之另一種單位劑型中的量不相同。
在第6態樣中，本發明係關於一種治療人類以防花生過敏的方法，諸如藉由執行花生過敏原特異性免疫療法，該方法包含在延長的時段內投予本發明之第1態樣之組成物(或本文所揭示之其任何具體實例)或本發明之第2態樣之醫藥學上可接受之調配物(或本文所揭示之其任何具體實例)的一種日劑量。
藉由抵禦花生過敏之過敏原特異性免疫療法治療人類的方法亦在第6態樣之範疇內，該方法包含劑量增加期及視需要存在的維持期，其中劑量增加期包含將花生蛋白質組成物的日劑量連續多系列投予至口腔黏膜，其中各系列內的日劑量相同且其中任何在前的系列中的劑量均低於後續系列且其中各系列的持續時間長度在6至30天範圍內；且其中第一系列投予的日劑量含有總量在0.1 µg至200 µg範圍內的花生蛋白質；最後一個系列的日劑量含有總量在300 µg至5000 µg範圍內的花生蛋白質；且其中系列的數目在2至9範圍內，諸如在3至7範圍內，尤其諸如3、4、5、6、7、8或9，較佳為3、4或5。用p在7至9範圍內的水溶劑自生花生仁萃取或可萃取出花生蛋白質，且所得經萃取之花生蛋白質至少包含nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6中之各者。
定義
如本文所用，術語「花生」可與術語「落花生(groundnut)」及「落花生(Arachis hypogea)」互換。
「過敏原」係指在重複暴露於個體後可在體內誘導或刺激IgE介導之免疫反應的任何物質。典型地，過敏原可結合在重複暴露於個體後所產生的特異性IgE抗體且/或誘導Th2免疫反應，諸如引起細胞介素IL-4、IL-5、IL-10及IL-13中之一或多者產生/釋放的免疫反應。
術語「花生蛋白質」意指存在於花生仁中的蛋白質。花生蛋白質的亞級分報導為花生過敏原。
術語「花生過敏原」意指世界衛生組織及國際免疫學會聯合會(WHO/IUIS)過敏原命名小組委員會所報導的任何花生過敏原，其可見於網路url: http://allergen.org/上。過敏原典型地以胺基酸序列高度匹配的多種同功型存在。根據WHO/IUIS，已鑑別出17種不同的花生過敏原，包括Ara h 1、Ara h 2、Ara h 3、Ara h 4、Ara h 5、Ara h 6、Ara h 7、Ara h 8、Ara h 9、Ara h 10、Ara h 11、Ara h 12、Ara h 13、Ara h 14、Ara h 15、Ara h 16及Ara h 17。例示性過敏原之cDNA序列的基因庫登錄號分別包括L34402.1 (Ara h 1)、AY007229.1 (Ara h2.0101)、AY158467.1 (Ara h2.0201)、AF093541.1 (Ara h 3.0101)、AF086821.1 (Ara h 3.0201)、AF059616 (Ara h 5)、AF092846.1 (Ara h 6)、AF091737.1 (Ara h 7)、EU046325.1 (Ara h 7.0201)、AY328088.1 (Ara h 8.0101)、EF436550.1 (Ara h 8.0201)、EU159429.1 (Ara h 9.0101)及EU161278.1 (Ara h 9.0201)、AY722694.2 (Ara h 1 0.0101)、AY722695.1 (Ara h 10.0201)、DQ097716.1 (Ara h 11)、EY396089.1 (Ara h 12)、EY396019.1 (Ara h 13)、AAK13449 (Ara h l4.0101)、AAK13450 (Ara h l4.0102)、AAT11925 (Ara h l4.0103)、AAU21501 (Ara h l5.0101)。
術語「Ara h 1」表示具有生物化學名稱庫品蛋白(Cupin)(蠶豆球蛋白型，7S球蛋白)、具有分子量約64 kDa的花生過敏原物種，其以不同同功型存在，例如具有UniProt蛋白質P43238之胺基酸序列的Ara h 1.0101。
術語「Ara h 2」表示具有生物化學名稱莢豆蛋白(2S白蛋白)、具有分子量約17 kDa的花生過敏原物種，其以不同同功型存在，例如具有UniProt蛋白質Q6PSU2-1之胺基酸序列的Ara h 2.0201。
術語「Ara h 3」表示具有生物化學名稱庫品蛋白(豆球蛋白型，11S球蛋白，大豆蛋白)、具有分子量約60 kDa (或其片段(37 kDa))的花生過敏原物種，其以不同同功型存在，例如具有UniProt蛋白質O82580之胺基酸序列的Ara h 3.0101或具有UniProt蛋白質Q9SQH7之胺基酸序列的Ara h 3.0202。
術語「Ara h 6」表示具有生物化學名稱莢豆蛋白(2S白蛋白)、具有分子量約15 kDa的花生過敏原物種，其以不同同功型存在，例如具有UniProt蛋白質Q647G9之胺基酸序列的Ara h 6.0101。
因此，本文所揭示之四種主要過敏原物種(Ara h 1、2、3及6)可由上述其同功型表示。另外，本文所揭示之四種過敏原物種意欲由Ara h 1、Ara h 2、Ara h 3及Ara h 6物種表示，該等物種係藉由對生花生仁(例如栽培品種變異體Runner (替代地，栽培品種Virginia、Spanish及Valencia)之生花生仁)進行水萃取而獲得，且使用多步驟純化以獲得nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6之各別純溶離份。四種主要過敏原的產生及特性化進一步描述於實施例中的標題下：nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6之純參考標準物。
因此，所有花生過敏原皆以不同同功型(同種過敏原)存在，其可藉由與(WHO/IUIS)報導的上述特定同功型進行序列比對及藉由鑑別各過敏原物種之不同同功型間共有的獨特胺基酸片段來偵測。花生過敏原的多種同功型及獨特胺基酸片段描述於專利申請案
WO2017115139中。
過敏原Ara h 1、Ara h 2、Ara h 3及Ara h 6中之各者之名稱(亦即，nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6)之前的前綴「n」意欲表示過敏原存在於天然存在的多種變異體或同功型中，包括天然存在的多種轉譯後衍生化(例如糖基化)。根據
Breiteneder 及 Chapman (2014)，天然過敏原可由前綴(n)表示以將其與由過敏原名稱之前之前綴(r)指示的重組過敏原區分開來(例如nBet v 1相對於rBet v 1)，且術語「天然過敏原」應用於指示自天然源材料純化的任何過敏原。因此，具有前綴「n」的過敏原不包括重組產生的過敏原，或降解的過敏原(例如類過敏原)。術語「原生過敏原」牽涉到蛋白質結構且僅指過敏原的原生構形。舉例而言，天然花生過敏原保持相同的寡聚合水平(亦即，Ara h 1為三聚體、Ara h 3為三聚體 + 六聚體，及Ara h 2及Ara h 6中之各者為單體)可為重要的。天然過敏原典型地藉由用水性溶劑(視需要為經緩衝的水性溶劑)輕緩地萃取過敏原源材料而獲得，且可進一步進行離心或過濾。應瞭解，就主要過敏原不欲重組產生或者不表示過敏原物種之天然構形及同功型而言，前綴「n」可以省去。
術語「可萃取的」表示「物質」能夠以溶解形式自該物質之源材料萃取至水溶劑中。與源材料相比，水溶液將富含能夠在水溶劑存在下釋放且溶解之物質。更具體而言，術語「可萃取的」在本文中表示花生蛋白質能夠以溶解形式自花生仁萃取出來，例如藉由將花生仁(較佳為經粉碎的脫脂生花生仁)浸漬於水溶劑中。所得水溶劑(現可稱為花生過敏原萃取物)將富含水溶性花生蛋白質。此部分的花生蛋白質將反映在攝入花生之後，在唾液中或在胃腸道中釋放的花生蛋白質。在本文中，用於萃取的溶劑可為水溶劑，諸如純水，視需要經緩衝及包括鹽以產生與唾液中類似之pH及類似之張力條件。水萃取溶劑較佳不可含有有機溶劑，其視需要可含有零星量的有機溶劑，諸如乙醇、甲醇、乙腈或類似物。可用水溶劑自花生萃取的花生蛋白質至少涵蓋過敏原nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6中之各者且視需要涵蓋其他花生過敏原。
在本文中，與包含過敏原nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6中之各者之組成物相關的術語「受控制」意欲表示此等過敏原係以預選定濃度存在於組成物中，該等預選定濃度不同於將粉碎之脫脂生花生浸漬於水溶劑中而得到的濃度。出於類似的原因，在液體與固體組成物之間，受控制的濃度將相對於該等過敏原(例如Ara h 2)中之一或多者表示。在較佳具體實例中，預選定的濃度係藉由如本文所述之可證實順應預選定濃度的適合定量分析方法控制。
術語「可控」意欲表示，選自nAra h 1、2、3及6之一或多種過敏原在本文所述之組成物中的濃度可以足夠的特異性及準確度控制而不受組成物中之其他成分的干擾。
片語「高分子量複合物」或「高質量聚集體」可互換使用，其意義在於，兩個片語在本文中意欲表示個別化合物、過敏原、蛋白質締合成聚集體/複合物，其不一定藉由共價結合而保持在一起，而是以當對聚集體/複合物進行尺寸排阻層析時作為個別峰偵測到的形式保持在一起。若質量高於500 kDa，諸如高於700 kDa，則認為複合物及聚集體具有高分子量或質量。
表述「分析規模」意指所討論之方法適用於「小」測試材料樣品，且分析可以高準確度及精確度運作。
表述「製備規模」意指所討論之方法適用於「較大」樣品尺寸，諸如工業規模，且該方法允許用於產生大量子輸出且可藉由另一種分析工具收集或分析。
結合花生蛋白質或nAra h 2之日劑量說明使用的表述「約」意欲表示圍繞花生蛋白質或nAra h 2之預定日劑量的某種偏差/容限。本文所揭示之組成物係藉由具有高複雜度的方法產生及分析，其原因在於，組成物中之過敏原及花生蛋白質濃度可以圍繞理論或標稱濃度的高偏差/低容限偵測。因此，花生蛋白質或nAra h 2之任何日劑量在0.1 µg至99 µg花生蛋白質的範圍內具有±20%之容限，100至999 µg的花生蛋白質或nAra h 2之任何日劑量具有±15%之容限且1000至9999 µg的花生蛋白質或nAra h 2之任何日劑量具有±10%之容限。舉例而言，約1 µg花生蛋白質的日劑量意欲表示花生蛋白質的日劑量在0.8至1.2 µg花生蛋白質的範圍內；約40 µg花生蛋白質的日劑量意欲表示花生蛋白質的日劑量在32至48 µg花生蛋白質的範圍內；約120 µg花生蛋白質的日劑量意欲表示花生蛋白質的日劑量在102至138 µg花生蛋白質的範圍內，且約1020 µg花生蛋白質的日劑量意欲表示花生蛋白質的日劑量在918至1122 µg花生蛋白質的範圍內。
同樣，結合每單位劑量之花生蛋白質之總量或每單位劑量之nAra h 2之量之日劑量說明使用的表述「約」意欲表示圍繞花生蛋白質或nAra h 2之預定單位劑量的某種偏差/容限。容限類似於針對如上文所定義之日劑量指定的容限。
表述「醫藥組成物」當用於本說明書及申請專利範圍時，描述一種組成物，其包括四種nAra h物種1、2、3及6 (如本文關於結構及相對/總量及純度所定義)與任何醫藥學上可接受之載劑、媒劑、賦形劑、稀釋劑的混合，使得含有一量之nAra h物種的組成物可經由選定的投藥途徑投予個體，其中該量為免疫學上有效的及醫藥學/醫學上可接受的。可以瞭解，該醫藥組成物適合於以醫藥管制機構(如美國食品及藥物管理局(FDA)或歐洲醫藥管理局(EMA))可接受的品質投予有需要之個體。
本發明之特定具體實例 本發明之第 1 態樣的具體實例
第一態樣係關於包含花生蛋白質nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6中之各者的組成物，且可以個別的或組合的若干不同選項為特徵，諸如一或多個特徵a)至k)，其中該等特徵如下：
a)基本上不含分子質量≥700 kDa的花生蛋白質。分子質量可藉由分析規模的尺寸排阻HPLC測定；及/或
b)可將組成物之水性樣品負載至逆相HPLC管柱上且溶離，以便當藉由混合的等度與梯度溶離對逆相HPLC管柱進行溶離時將nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6分離成可定量的多肽，該溶離包含將由0.1%三氟乙酸水溶液組成的溶離劑A與體積增加的溶離劑B混合，該溶離劑B由與0.1%三氟乙酸混合的乙腈組成；及/或
c)基本上不含花生蛋白質，其因分子尺寸限制而不能負載於逆相HPLC管柱中及/或在逆相HPLC管柱中分離。亦即，nAra h1、nAra h 2、n Ara h 3及nAra h 6較佳呈未變性的構形；及/或
d)基本上不含源自花生之蛋白質的高分子量複合物，其中該高分子複合物的特徵為存在於丟棄的溶離份中，其可如下獲得：用水溶劑自生花生仁(較佳為粉碎的生花生仁)中萃取花生蛋白質以獲得包含nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6中之各者的水性萃取物，隨後在7至9範圍內的pH下經由逐步或連續的水性鹽梯度溶離對所萃取花生蛋白質之水性萃取物進行製備規模的陰離子交換層析，藉此溶離nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6中之各者，其中在nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6中之各者溶離之後，利用較高的鹽濃度繼續進行梯度溶離，其中該丟棄的溶離份為nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6藉由陰離子交換層析保留之後溶離的溶離份；及/或
e)包含濃度受控制之nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及/或nAra h 6中之一或多者；及/或
f)包含濃度受控制之nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3、nAra h 6中之各者；及/或
g)藉由或可藉由包含以下步驟之方法獲得：i)用水溶劑自生花生仁、較佳自粉碎的生花生仁萃取花生蛋白質，以獲得包含nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6中之各者的水性萃取物；以及ii)藉由陰離子交換層析純化所萃取的蛋白質，該層析包含將該水性萃取物負載於陰離子交換材料上及利用鹽梯度溶離進行溶離以收集針對nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3或nAra h 6個別地富集的溶離份；以及iii)將個別地富含nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6中之一或多者的溶離份或其等分試樣合併，且較佳將nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6之富集溶離份更晚溶離的溶離份丟棄；及/或
h)藉由或可藉由包含以下步驟之方法獲得：
1)用水溶劑自生花生仁、較佳自粉碎的生花生仁萃取花生蛋白質，以獲得包含nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6中之各者的水性萃取物；及
2)在7至9範圍內的pH下，經由逐步或連續的水性鹽梯度溶離對該水性萃取物進行陰離子交換層析，藉此將nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6中之各者溶離並收集至一或多個個別溶離份；及
3)視需要收集來自該陰離子交換層析的流過物溶離份；及
4)在nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6中之各者溶離之後，視需要繼續進行逐步或連續的鹽梯度溶離，獲得欲丟棄的溶離份；及
5)將步驟2所得之溶離份或其等分試樣合併，視需要將步驟2與步驟3所得之溶離份或其等分試樣合併，以獲得該組成物；及/或
i)藉由或可藉由包含以下步驟之方法獲得：
1)用水溶劑自生花生仁、較佳自粉碎的生花生仁萃取花生蛋白質，以獲得包含nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6中之各者的水性萃取物；及
2)在7至9範圍內的pH下，經由逐步或連續的水性鹽梯度溶離對該水性萃取物進行陰離子交換層析，藉此將nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6中之各者溶離並收集至針對nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3或nAra h 6個別地富集的溶離份中；
3)視需要收集來自該陰離子交換層析的流過物溶離份；及
4)將步驟2所得之溶離份或其等分試樣合併，視需要將步驟2與步驟3所得之溶離份或其等分試樣合併，以獲得該組成物；及/或
j)包含各在0.5與1.5之間之範圍內的莫耳比nAra h 1:nAra h 2、nAra h 3:nAra h 2、nAra h 6:nAra h 2。各過敏原的濃度可藉由分析規模的RP-HPLC及/或LC-MS/MS定量。為了將質量單位換算成莫耳濃度，可使用以下莫耳質量：Ara h 1使用68757 g/mol、Ara h 2使用17994 g/mol的莫耳質量、Ara h 3使用58600 g/mol的莫耳質量且Ara h 6使用14846 g/mol的莫耳質量；及/或
k)與粉碎之生花生仁已經受水溶劑萃取的水性萃取物相比，每單位重量的總花生蛋白質富含全部量的選自nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6之水溶性花生蛋白質。
在一較佳態樣中，組成物包含莫耳比在0.5至2.0範圍內、諸如在0.5至1.5範圍內的配對nAra h 1:nAra h 2、nAra h 3:nAra h 2及nAra h 6:nAra h 2中之各者。此類組成物可進一步包含醫藥學上可接受之載劑、稀釋劑、賦形劑或媒劑以形成可適用於治療花生過敏的醫藥組成物。
選項a)之組成物的主要特徵為不包括高分子質量蛋白質。此類蛋白質可為由四種過敏原nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6中之一或多者構成的大聚集體。特定而言，本發明人發現nAra h 1與nAra h 3多肽在獲自生花生仁之水性萃取物中形成此類高分子質量聚集體(或寡聚物/聚合物)之一部分且其可引起沈澱問題。此類高分子質量聚集體的存在導致在正確管理及定量花生蛋白質組成物中之nAra h 1及/或nAra h 3含量時產生困難且在一定程度上不溶於水，使得防止沈澱成為問題。
高分子質量蛋白質及其尺寸可藉由各種分析工具偵測，較佳藉由分析規模的尺寸排阻HPLC偵測。較佳地，選項a)及本文所揭示之其他具體實例的分析規模尺寸排阻HPLC可藉由用pH在7至7.5範圍內的水性(例如磷酸鹽)緩衝鹽水溶離而能夠分離五種指定尺寸的參考標準物：甲狀腺球蛋白(具有670 kDa的分子質量)、牛γ球蛋白(具有158 kDa的分子質量)、雞卵白蛋白(具有44 kDa的分子質量)、馬肌血球素(具有17 kDa的分子質量)及維生素B12 (具有1.35 kDa的分子質量)。其他指定尺寸的標記物可用於進一步在高於700 kDa的尺寸之間作出區分。指定尺寸的參考物係以質量減小的次序溶離。尺寸排阻HPLC可進一步包含利用210 nm或280 nm UV吸光度偵測峰。
顯而易見的是，若所得層析圖基本上不含質量類似於或高於指定尺寸之參考標準物甲狀腺球蛋白(其具有670 kDa之分子質量)的花生蛋白質溶離峰，則花生組成物不含有必需量或僅含有零星量的高於尺寸700 kDa之高分子質量蛋白質。層析圖最終可包含質量類似於或高於指定尺寸之參考標準物甲狀腺球蛋白的其他溶離峰，該等峰來源於樣品中存在的非花生蛋白質源。
在其他重要的具體實例中，本發明之第1態樣的組成物基本上不含分子質量＞650 kDa、較佳＞600 kDa、諸如＞550 kDa、＞500 kDa、＞450 kDa、＞450 kDa、＞400 kDa的花生蛋白質(諸如呈聚集體形式)，該分子質量藉由分析規模的尺寸排阻HPLC測定。
在本文中，「基本上不含」意謂在藉由210 nm UV吸光度測定的尺寸排阻層析圖中，高於指定分子質量臨限值的花生蛋白質不提供可見信號/峰，其超出層析圖之總峰面積之1%的臨限值，更佳超出層析圖之總峰面積之0.8%、諸如0.7%、諸如0.6%的臨限值。當測定總峰面積時，總峰面積不應包括空隙體積時或空隙體積之前溶離的峰(例如緩衝液峰)。在一些具體實例中，總峰面積可藉由將空隙體積與參考標準物馬肌血球素(具有17 kDa之分子質量)或維生素B12 (具有1.35 kDa之分子質量)之間溶離之峰的峰面積加總來測定。
組成物中之花生蛋白質且從而，nAra h 1、nAra 2、nAra h 3及nAra h 6中之各者具有可藉由水溶劑自花生仁萃取的特徵。因此，四種過敏原可藉由水溶劑自生花生仁萃取，以獲得呈水溶性形式及天然構形的過敏原。因此，花生仁較佳尚未經受可改變花生蛋白質之天然一級序列或構形的任何處理，否則，導致變性、降解或聚集之烘烤、加熱或漂白將引起花生蛋白質的天然一級序列或構形改變。生花生仁較佳經粉碎且視需要可在粉碎之前為覆皮的。水性萃取溶劑較佳可以不含任何有機溶劑，諸如醇(甲醇、乙醇、丙醇、丁醇)或乙腈或類似物。此類有機溶劑可引起蛋白質變性。溶劑視需要可含有零星量的有機溶劑。可用水溶劑自花生萃取的花生蛋白質至少涵蓋過敏原nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6中之各者且視需要涵蓋其他花生過敏原。
在一些具體實例中，在本文之具體實例中，尤其在選項d)、g)、選項h)步驟1或選項i)步驟1中，用水溶劑自生花生仁萃取花生蛋白質包含用pH在6至9範圍內的緩衝水溶劑進行萃取，視需要用pH在6至9範圍內的緩衝生理鹽水水溶劑進行萃取。
由於nAra h 3萃取效率在pH值低於中性pH時不良，因此視需要緩衝的生理鹽水水溶劑可具有6.5至9範圍內、諸如6.5至8.5範圍內、諸如6.5至8.5範圍內的pH。在甚至更佳的具體實例中，pH在7至9，諸如7至8.5範圍內，諸如7至8範圍內。當萃取的溶液允許靜置後用於以下步驟時，可將pH保持在9以下，諸如低於8.5，以避免nAra h 3沈澱。緩衝液可為或可包含適於在指定的pH範圍內緩衝的任何緩衝劑，例如磷酸鹽緩衝液、咪唑緩衝液或參(羥基甲基)-胺基甲烷緩衝液(TRIS)。舉例而言，緩衝的水溶劑可為或可包含10至200 mM之莫耳濃度範圍內、較佳在10至100 mM範圍內、諸如在10至50 mM範圍內的TRIS。緩衝液視需要包含含量在5至200 mM範圍內、較佳在10至100 mM、10至50 mM範圍內的生理鹽水，其可為NaCl或其等效鹽。在本文中，術語「等效鹽」意欲包括可完全溶解的鹽，諸如NaI、KCl、KI、NH
4Cl、NH
4I、MgCl
2、MgI
2、Na
2SO
4、K
2SO
4或NH
4SO
4，其不會與四種過敏原中之任一者以妨礙其免疫活性或溶解性的方式相互作用。典型地，水溶劑可由含有50 mM TRIS及50 mM NaCl的純化水(pH經2.0 M NaOH調節至7.4)構成。
本文所述之方法中、尤其是關於選項d)、g)、選項h)步驟2或選項i)步驟2使用的逐步或連續水性鹽梯度溶離可在6至9範圍內、諸如6.5至9範圍內、諸如6.5至8.5範圍內的pH下進行。為了使得花生蛋白質更好地吸附/保留於陰離子交換材料上，pH可高於7，諸如較佳在7至8.5範圍內，諸如較佳在7至8範圍內，諸如在7.2至7.8範圍內。另外，選項d)、g)、選項h)步驟2或選項i)步驟2的逐步或連續水性鹽梯度溶離較佳使用NaCl作為鹽或使用與NaCl等效的鹽進行。
本文之具體實例中使用的花生仁可為栽培花生(落花生)，其以多個植物品種出現，但存在四種基本類型：Runner、Virginia、Spanish及Valencia。在第1態樣之組成物中，生花生仁較佳來自名為Runner的栽培品種，因為該栽培品種似乎包含數目最多的過敏原同功型。如所提及，花生仁為生花生仁，且可為覆皮的或無皮的。最重要的是，花生仁可尚未經加熱、沸騰或烘烤處理(若此處理導致過敏原變性、降解及聚集)。
花生存在若干類型的栽培品種，但典型地，花生為選自由Runner、Virginia、Spanish及Valencia組成之群之類型的栽培品種。已發現，Runner類型的花生栽培品種可含有多種過敏原同功型，尤其是命名為#1041的基因型。
花生仁在萃取前，較佳經脫脂且粉碎，且在脫脂及粉碎之前視需要為覆皮的。舉例而言，花生仁藉由習知的已知化學或機械脫脂方法脫脂。舉例而言，可使用機械油壓榨機完成脫脂以產生碾碎的脫脂花生材料，其視需要藉由摻混機或研磨機粉碎。脫脂花生仁典型地包含至多15重量%的油，較佳5至12%重量範圍內的油。
組成物可含有濃度預選定及/或受控制的四種花生過敏原n Ara h 1、2、3及/或6中之一或多者。過敏原nAra h 3為以多種同功型及寡聚體構形天然存在之複雜過敏原。在本文所揭示之組成物中，發現nAra h 3係以如下形式存在：包含nAra h 3之一個多肽序列的單體、包含nAra 3之三個多肽序列的三聚體及包含nAra h 3之六個多肽序列的六聚體。另外，nAra h 3多肽形成尺寸高於700 kDa之高分子質量聚集體的一部分。在本文所揭示之具體實例中，尤其在選項e)及/或f)中，受控制的nAra h 3濃度可藉由定量免疫分析、分析規模的逆相HPLC或定量LC-MS/MS測定。在一個具體實例中，分析規模的逆相HPLC方法為較佳方法，原因為已發現分析規模的逆相HPLC可定量nAra h 3，其根據nAra h 3單體的莫耳含量(單一多肽nAra h 3的含量)來表示nAra h 3的莫耳含量。因此，nAra h 3濃度宜藉由分析規模的逆相HPLC測定，該逆相HPLC藉由使用混合的等度與梯度溶離能夠分離四種主要花生過敏原中之各者，例如包含分離nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6，該梯度溶離包含將由0.1%三氟乙酸水溶液組成的溶離劑A與體積增加的溶離劑B混合，該溶離劑B係由含有0.1%三氟乙酸之乙腈組成。可參照nAra h 3之純校準標準物執行定量，且視需要利用Ara h 3之莫耳質量58,600 g/mol將組成物中之nAra h 3的重量濃度換算成nAra h 3的莫耳濃度。RP-HPLC可進一步包含利用210 nm或280 nm UV吸光度偵測峰，或可藉由質譜法偵測峰。
本文所揭示之組成物的特徵可為至少nAra h 2之濃度及/或其他三種主要過敏原(例如nAra h 3)中之一或多者之濃度為受控制的濃度或濃度允許可控。因此，組成物可包含濃度經控制或可控的nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6中之各者。
本文所揭示、尤其是選項e)及/或f)所揭示之組成物中的nAra h 3濃度較佳在組成物中之花生蛋白質總質量的12重量%至70重量%範圍內。nAra h 3具有高分子質量且可構成花生蛋白質的超過50重量%，例如為組成物中之花生蛋白質總質量的12重量%至60重量%，諸如15重量%至60重量%，諸如20重量%至60重量%，諸如25重量%至55重量%，諸如17重量%至53重量%，諸如15重量%至50重量%。設想更窄的百分比範圍，諸如花生蛋白質總質量的18重量%至46重量%，尤其21重量%至42重量%。在莫耳濃度之上下文中，本文所揭示之具體實例中、尤其選項e)及/或f)中之nAra h 3的莫耳濃度較佳在2至12 nmol/mg花生蛋白質範圍內，諸如在3至11 nmol/mg範圍內，諸如在3至10 nmol/mg範圍內，諸如在3至9 nmol/mg範圍內，諸如在4至8 nmol/mg範圍內，諸如在2.8至8.4 nmol/mg花生蛋白質總質量的範圍內，較佳在3.1至7.8 nmol/mg範圍內，諸如在3.6至7.1 nmol/mg花生蛋白質總質量的範圍內。
儘管nAra h 2被視為與急性過敏相關的關鍵花生過敏原，但本文所揭示之組成物至少可含有濃度預選定或受控制的nAra h 2。nAra h 2的較佳濃度可為組成物中之花生蛋白質總質量的4重量%至20重量%，諸如4%至18%，諸如5%至15%。可考慮更窄的濃度，諸如組成物中之花生蛋白質總質量的5.5重量%至14重量%，諸如6.5重量%至13重量%，諸如7重量%至12重量%。在莫耳濃度之上下文中，本文所揭示之具體實例中之nAra h 2的莫耳濃度較佳在2至12 nmol/mg花生蛋白質範圍內，諸如在3至11 nmol/mg範圍內，諸如在3至10 nmol/mg範圍內，諸如在3至9 nmol/mg範圍內，諸如在4至8 nmol/mg範圍內，諸如在2.8至8.4 nmol/mg花生蛋白質總質量的範圍內，較佳在3.1至7.8 nmol/mg範圍內，諸如在3.6至7.1 nmol/mg花生蛋白質總質量的範圍內。
在謹慎控制組成物中之nAra h 2濃度的情況下，可將其他花生過敏原的濃度相對於nAra h 2莫耳濃度的莫耳比調節至諸如0.5至2.0 (nAra h 2濃度的50%至200%)範圍內，或更佳地，莫耳比在0.5至1.5 (nAra h 2濃度的50%至150%)範圍內。此類組成物被認為當投予有需要之個體時提供基本上等莫耳劑量之四種主要過敏原中的各者。等莫耳濃度的目標範圍甚至可以更窄，諸如在0.6至1.4 (60%至140%)範圍內或在0.7至1.3 (70至130%)範圍內，但由於花生源材料、生產方法及用於定量的分析方法存在可變性而可能難以達成。
在本文之具體實例中，尤其在選項f)中，Ara h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6中之各者的濃度較佳藉由定量免疫分析、分析規模的逆相HPLC或定量LC-MS/MS測定。特定而言，可藉由分析規模的逆相HPLC測定nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6的濃度，該逆相HPLC包含使用混合的等度與梯度溶離對nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6進行分離，該梯度溶離包含將由0.1%三氟乙酸水溶液組成的溶離劑A與體積增加的溶離劑B混合，該溶離劑B由含有0.1%三氟乙酸的乙腈組成。定量可以包括參照nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6之純校準標準物進行定量且視需要可利用Ara h 1的莫耳質量68,757 g/mol、Ara h 2的莫耳質量17,994 g/mol、Ara h 3的莫耳質量58,600 g/mol及Ara h 6的莫耳質量14,846 g/mol將濃度換算成組成物中之nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6的重量莫耳濃度。
亦可使用針對四種過敏原中之各者的重標誌肽(例如AQUA肽)、藉由使用LC-MS/MS聯合MS定量來測定nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6的濃度。藉由該MS方法，藉由用消化酶(如胰蛋白酶或胰凝乳蛋白酶)處理來消化第1態樣之組成物中的過敏原或該組成物之水性溶解物。接著將已知濃度的合成同位素標記標誌肽添加至萃取物的蛋白質消化物中。根據該方法，亦將組成物中存在的高分子質量過敏原聚集體消化且接著亦定量。因此，在組成物包含nAra h 1或nAra h 3之高分子質量聚集體的情況下，該MS方法無法定量呈天然構形且具有水溶性之nAra h 1或nAra h 3的濃度。如本發明人所表明，使用RP-HPLC聯合UV偵測及使用LC-MS/MS方法可同等準確地定量基本上不含高分子質量聚集體之本發明之第1態樣之組成物中的四種過敏原，因為兩種方法所得之各過敏原的濃度之間存在良好的相關性。
本文所揭示、尤其選項f)所揭示之組成物中之nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6中之各者相對於組成物中之花生蛋白質總質量的重量濃度典型地就nAra h 1而言在20%至60%範圍內，就nAra h2而言在5%至15%範圍內(視需要為4%至20%)，就nAra h 3而言在15%至50%範圍內(視需要在20至60%範圍內)，就nAra h 6而言在4%至12%範圍內(視需要在4至18%範圍內)，限制條件為nAra h 1、nAra h 2、nAra 3及nAra 6的總和至少構成總花生蛋白質的75重量%。典型地，相對於花生蛋白質的總質量，nAra h 1的重量濃度在20%至60%範圍內；nAra h 2的重量濃度在4%至20%範圍內；nAra h3的重量濃度在20%至60%範圍內且nAra h 6的重量濃度在4%至18%範圍內，限制條件為nAra h 1、nAra h 2、nAra 3及nAra 6的總和構成總花生蛋白質的至少75重量%，或典型地，相對於花生蛋白質的總質量，nAra h 1的重量濃度在25%至60%範圍內；nAra h2的重量濃度在6%至14%範圍內；nAra h3的重量濃度在20%至55%範圍內且nAra h 6的重量濃度在5%至15%範圍內，限制條件為nAra h 1、nAra h 2、nAra 3及nAra 6的總和至少構成總花生蛋白質的75重量%。
較佳地，在選項f)中，nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6中之各者相對於組成物中之花生蛋白質總質量的重量濃度就nAra h 1而言在21%至53%範圍內，就nAra h2而言在5.5%至14%範圍內，就nAra h 3而言在18%至46%範圍內，就nAra h 6而言在5%至11%範圍內，限制條件為nAra h 1、nAra h 2、nAra 3及nAra 6之總和至少構成總花生蛋白質的75重量%。甚至更佳為如下具體實例：其中在選項f)中，nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6中之各者相對於組成物中之花生蛋白質總質量的受控制重量濃度就nAra h 1而言在25%至50%範圍內，就nAra h2而言在6.5%至13%範圍內，就nAra h 3而言在21%至42%範圍內，就nAra h 6而言在5%至11%範圍內，限制條件為nAra h 1、nAra h 2、nAra 3及nAra 6之總和至少構成總花生蛋白質的75重量%。
在任何比率下，nAra h 1、nAra h 2、nAra 3及nAra 6的總濃度(總和)通常構成組成物中之總花生蛋白質的至少75重量%，諸如花生蛋白質之至少80重量%，諸如至少85重量%，諸如至少90重量%，且組合濃度的總和至多構成總花生蛋白質的98重量%、99重量%或100重量%。在組成物包含額外過敏原的情況下，四種主要過敏原典型地構成總花生蛋白質的75重量%至99重量%，較佳為75%至98%，諸如80%至98%、85%至98%或更窄。在需要提供僅包括四種主要過敏原之組成物的情況下，四種過敏原可構成組成物中之花生蛋白質的約100重量%，諸如99至100%之間。在莫耳比之上下文中，本文所揭示、尤其選項f)所揭示之組成物中之nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6中之各者相對於組成物中之花生蛋白質總質量的濃度係在2至12 nmol/mg範圍內，諸如在3至11 nmol/mg範圍內，諸如在3至10 nmol/mg範圍內，諸如在3至9 nmol/mg範圍內，諸如在4至11 nmol/mg範圍內，諸如在4至10 nmol/mg範圍內，諸如4至9 nmol/mg。在典型實施例中，四種主要過敏原的濃度相對於組成物中之花生蛋白質總質量在2.8 nmol/mg至8.4 nmol/mg範圍內，更佳在3.1至7.8 nmol/mg範圍內，諸如相對於組成物中之花生蛋白質總質量在3.6至7.1 nmol/mg範圍內。四種主要過敏原之間的相對濃度可謹慎地預選定或控制以符合0.5至2.0範圍內(諸如0.5至1.5或更窄範圍內，諸如0.6至1.4範圍內及較佳0.7至1.3範圍內)之配對nAra h 1:nAra h 2、nAra h 3:nAra h 2、nAra h 6:nAra h 2中之各者的莫耳比。欲考慮的其他範圍在0.4至1.6範圍內或在0.3至1.7範圍內。如所提及，適於控制濃度的分析方法係分析規模的RP-HPLC或定量免疫分析，如ELISA。
藉由簡單地萃取花生仁無法獲得本文所揭示之組成物，因為此類型的處理不會使四種過敏原之間產生均衡的莫耳濃度且難以在工業規模背景下以可再現的方式運行。本發明人已提供一種簡單的製備方法，其允許設計包含預選定濃度之四種主要過敏原的花生蛋白質組成物。
簡單地萃取花生仁無法獲得本文所揭示之組成物，因為此類型的處理不會使四種過敏原之間產生均衡的莫耳濃度(等莫耳濃度)且難以在工業規模背景下以可再現方式運行。本發明人已提供一種簡單的製備方法，其允許設計包含預選定濃度之四種主要過敏原的花生蛋白質組成物。此方法中的主要步驟包含將花生過敏原吸附至陰離子交換層析材料上及在經由不同鹽濃度處理陰離子交換材料之後，能夠收集針對過敏原nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6中之任一者富集的個別溶離份。可將所富集的溶離份混合，以使得四種主要過敏原中之兩者或更多者達成預選定的濃度。
適用於獲得本文所揭示之組成物的方法可藉由包含以下步驟之方法獲得：
1)提供如下獲得的花生蛋白質水性萃取物：用水溶劑萃取生花生仁(較佳為粉碎的脫脂花生仁)，以獲得包含nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6中之各者的水性萃取物；及
2)在7至9範圍內的pH下，經由逐步或連續的水性鹽梯度溶離對該水性萃取物進行陰離子交換層析，藉此將nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6中之各者溶離並收集至針對nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3或nAra h 6個別地富集的溶離份中；及
3)視需要收集來自該陰離子交換層析的流過物溶離份；及
4)將步驟2或組合的步驟2與步驟3所得之溶離份或其等分試樣合併以獲得該等花生蛋白質。
較簡單的方法可以是可行的。舉例而言，可將獲得呈溶解形式之四種過敏原的萃取步驟(例如上述步驟1)與將過敏原吸附於陰離子交換層析材料上的方法步驟(例如上述步驟2)組合。此類方法可包含在陰離子交換層析材料存在下將粉碎的脫脂生花生仁浸漬於水溶劑中以讓所萃取的過敏原吸附至陰離子交換材料上。其他步驟包含自陰離子交換材料移除水溶劑(例如藉由過濾或傾析)。其他步驟包含逐步添加濃度增加的pH在6至9範圍內之水性鹽溶液，其中在各步驟內移除水性鹽溶液(例如藉由過濾或離心)以獲得各針對nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3或nAra h 6富集的個別溶離份。如同上述方法，可將溶離份合併以獲得包含過敏原物種nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3或nAra h 6中之兩者或更多者的花生組成物。
應瞭解，在該方法的步驟2中，花生過敏原nAra h 1、2、3及6能夠吸附(諸如保留)於陰離子交換材料上，且應用時能夠將所有四種主要過敏原保留於約7至9之pH範圍(諸如7.5至9)內之水溶液中的陰離子交換材料就該目的而言將為可行的。較佳為強陰離子交換材料，諸如四級陰離子交換材料，例如以商標名Cytiva™ HiTrap Q HP出售的陰離子交換材料。陰離子交換材料當用於上述步驟2中時典型地裝填於管柱中。在較簡單的方法中，陰離子交換材料可以有利地連接至尺寸允許過濾或離心的惰性珠粒，以便珠粒自萃取溶劑/溶離溶劑分離。較簡單方法中使用的例示性珠粒/樹脂係以商標名Chromalite MQ/C (來自Pyrolite)出售。
步驟1的水溶劑較佳包含pH在7至9範圍內的緩衝水溶劑，且步驟2的鹽可為NaCl或與NaCl等效的鹽。pH較佳與步驟2的較佳pH一致，其需要pH高於7，以確保蛋白質帶負電以便吸附於帶正電的陰離子交換材料上。
較佳地，步驟2 (諸如選項i)、h)及/或i))所得之個別溶離份中的nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6濃度較佳藉由分析型RP-HPLC測定(實例詳情參見較佳RP-HPLC定量方法)。步驟2所得之溶離份按以下次序溶離：nAra h 6、nAra h 2、nAra h 1及nAra h 3。
在重要的具體實例中，上述步驟4、尤其是選項h)步驟5及/或選項i)步驟4中合併的整個溶離份或其等分試樣經合併以使得配對nAra h 1:nAra h 2、nAra h 3:nAra h 2、nAra h 6:nAra h 2中之各者的莫耳比在0.5至2.0範圍內，諸如在0.5至1.5範圍內或本文所揭示之其他範圍內。
在上文所揭示之本發明之第1態樣的所有實施例中，nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6較佳包含其天然存在之同功型及寡聚體形式。換言之，不包括經工程改造之人工突變體，重要的是避免自組成物中移除天然存在之同功型(相對於衍生出組成物之花生源材料來看時)。因此，組成物不含有重組表現的nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6。組成物而是包含花生蛋白質，該等花生蛋白質可藉由水溶劑自生花生萃取以形成包含蛋白質nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6中之各者的水性萃取物。
組成物中的過敏原nAra h 3較佳以選自由以下者組成之群的構形存在：單體nAra h 3、三聚體nAra h 3及六聚體nAra h 3，諸如單體、三聚體及六聚體nAra h 3之混合物，諸如主要為三聚體與六聚體nAra h 3之混合物。類似地，nAra h 1可以其單體及/或三聚體形式存在，諸如主要以其三聚體構形存在。另一方面，大多聚體形式基本上不存在。
在重要且較佳的具體實例中，組成物基本上不含包含nAra h 3多肽及/或nAra h 1多肽的聚集體，其中聚集體具有＞700 kDa的分子質量。結果是，在藉由對花生仁進行水萃取而獲得的萃取物中，nAra h 1及nAra h 3多肽形成高分子質量聚集體之一部分，使得意欲用於醫藥用途之組成物中的過敏原濃度難以控制。
第1態樣之組成物中的花生蛋白質總質量宜藉由胺基酸分析(AAA)或藉由布拉福蛋白質分析(Bradford protein assay)、使用牛血清白蛋白作為參考標準物(BCA)來測定，較佳藉由胺基酸分析(AAA)來測定，因為該方法可更準確地測定蛋白質含量。
第一態樣之具體實例進一步描述於編號的具體實例NE1至NE37中。
由於第1態樣之組成物通常用於醫藥調配物中以便藉由過敏原特異性免疫療法治療過敏症，因此組成物典型地進一步包含醫藥學上可接受之載劑、稀釋劑、賦形劑或媒劑。關於此等其他醫藥學上可接受之物質/組分的更多細節提供於下文中關於本發明之第2態樣及其他態樣的論述中。
本發明之第 2 態樣的具體實例
根據上文關於本發明之第1態樣之組成物及其具體實例的論述，因此本發明之第2態樣的醫藥學上可接受之調配物/組成物通常包含預選定/受控制量的nAra h 2，且較佳包含受控制量的nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6中之各者。
在重要的具體實例中，醫藥學上可接受之調配物中的載劑為固體載劑物質，較佳為適於形成舌下固體劑型的固體載劑物質。時間已證明經由舌下黏膜投予過敏原組成物具有優於其他投藥途徑的若干優勢。與注射投藥相比，此投藥形式至少對患者更方便。固體調配物典型地呈以下形式：錠劑(壓製或非壓製)、薄膜、糊狀物或凍乾物(例如單位劑量凍乾物)。在較佳具體實例中，固體劑型為舌下錠劑、舌下薄膜或舌下凍乾物。在重要的具體實例中，醫藥學上可接受之固體調配物當暴露於人類唾液時快速分散，其中快速分散的固體調配物較佳在暴露於唾液之後的2分鐘內(諸如1.5、1或0.5分鐘內)崩解。在關注且重要的具體實例中，載劑物質包含明膠，較佳為魚明膠，其可以上文指定的快速率分散。
調配為固體劑型的醫藥組成物優於液體劑型。如本文所揭示，固體劑型在約25℃的室溫下提供四種主要過敏原中之各者至少12個月的良好穩定性。與當前市售的OIT產品或刺痛皮膚之液體測試產品需要2℃與8℃之間的儲存條件相比，此允許本文所揭示之固體醫藥組成物在室溫下儲存。
第2態樣的醫藥學上可接受之調配物可為單位劑型，較佳為舌下單位劑型。在此類單位劑型中，每單位劑型之花生蛋白質之總量通常在0.1至5000 µg範圍內，且在此，每單位劑型之nAra h 2量在0.01至500 µg範圍內。
儘管固體調配物因穩定性問題而優於液體調配物，但醫藥組成物可替代地調配為液態溶液，最終調配為粉末狀組成物與投予之前用於溶解組成物之稀釋劑的套組。液體調配物通常含有維持等張性的生理鹽水、pH調節劑、抗氧化劑、防腐劑。另外，許多過敏原產品含有降低自由水活性的甘油，用於在儲存期間穩定過敏原的目的。
在仍適用的調配物中，醫藥組成物可調配為施用至皮膚的貼片，諸如藉由上表皮投藥。用於上表皮投予花生過敏原的例示性貼片調配物描述於專利申請案
WO2009071599A1中。
正如此項技術中所熟知，前提條件通常為過敏症之過敏原特異性免疫療法包括所謂的劑量增加期，亦即，初始治療期，其中增加過敏原的每日劑量或其他週期劑量，隨後為使用恆定的每日或其他週期劑量之所謂維持期，其中維持劑量在每個投藥週期的水平等同於或略微低於劑量增加期之最後一次劑量的水平。為了支持此類劑量方案，上文論述的單位劑量可包括不同量之過敏原。舉例而言，每單位劑型之花生蛋白質的總量可為約0.1 µg、約0.5 µg、約1.0 µg、約1.5 µg、約2 µg、約2.5 µg、約3 µg、約3.5 µg、約4 µg、約4.5 µg、約5 µg、約5.5 µg、約6 µg、約6.5 µg、約7 µg、約7.5 µg、約8 µg、約8.5 µg、約9 µg、約9.5 µg、約10 µg、約10.5 µg、約11 µg、約11.5 µg、約12 µg、約12.5 µg、約13 µg、約13.5 µg、約14 µg、約14.5 µg、約15 µg、約15.5 µg、約16 µg、約16.5 µg、約17 µg、約17.5 µg、約18 µg、約18.5 µg、約19 µg、約19.5 µg、約20 µg、約25 µg、約30 µg、約35 µg、約40 µg、約45 µg、約50 µg、約55 µg、約60 µg、約65 µg、約70 µg、約75 µg、約80 µg、約85 µg、約90 µg、約95 µg、約100 µg、約105 µg、約110 µg、約115 µg、約120 µg、約125 µg、約130 µg、約135 µg、約140 µg、約145 µg、約150 µg、約155 µg、約160 µg、約165 µg、約170 µg、約175 µg、約180 µg、約185 µg、約190 µg、約195 µg、約200 µg、約205 µg、約210 µg、約215 µg、約220 µg、約225 µg、約230 µg、約235 µg、約240 µg、約245 µg、約250 µg、約255 µg、約260 µg、約265 µg、約270 µg、約275 µg、約280 µg、約285 µg、約290 µg、約295 µg、約300 µg、約305 µg、約310 µg、約315 µg、約320 µg、約325 µg、約330 µg、約335 µg、約340 µg、約345 µg、約350 µg、約355 µg、約360 µg、約365 µg、約370 µg、約375 µg、約380 µg、約385 µg、約390 µg、約395 µg、約400 µg、約405 µg、約410 µg、約415 µg、約420 µg、約425 µg、約430 µg、約435 µg、約440 µg、約445 µg、約450 µg、約455 µg、約460 µg、約465 µg、約470 µg、約475 µg、約480 µg、約485 µg、約490 µg、約495 µg、約500 µg、約505 µg、約510 µg、約515 µg、約520 µg、約525 µg、約530 µg、約535 µg、約540 µg、約545 µg、約550 µg、約555 µg、約560 µg、約565 µg、約570 µg、約575 µg、約580 µg、約585 µg、約590 µg、約595 µg、約600 µg、約605 µg、約610 µg、約615 µg、約620 µg、約625 µg、約630 µg、約635 µg、約640 µg、約645 µg、約650 µg、約655 µg、約660 µg、約665 µg、約670 µg、約675 µg、約680 µg、約685 µg、約690 µg、約695 µg、約700 µg、約705 µg、約710 µg、約715 µg、約720 µg、約725 µg、約730 µg、約735 µg、約740 µg、約745 µg、約750 µg、約755 µg、約760 µg、約765 µg、約770 µg、約775 µg、約780 µg、約785 µg、約790 µg、約795 µg、約800 µg、約805 µg、約810 µg、約815 µg、約820 µg、約825 µg、約830 µg、約835 µg、約840 µg、約845 µg、約850 µg、約855 µg、約860 µg、約865 µg、約870 µg、約875 µg、約880 µg、約885 µg、約890 µg、約895 µg、約900 µg、約905 µg、約910 µg、約915 µg、約920 µg、約925 µg、約930 µg、約935 µg、約940 µg、約945 µg、約950 µg、約955 µg、約960 µg、約965 µg、約970 µg、約975 µg、約980 µg、約985 µg、約990 µg、約995 µg、約1000 µg、約1050 µg、約1100 µg、約1150 µg、約1200 µg、約1250 µg、約1300 µg、約1350 µg、約1400 µg、約1450 µg、約1500 µg、約1550 µg、約1600 µg、約1650 µg、約1700 µg、約1750 µg、約1800 µg、約1850 µg、約1900 µg、約1950 µg、約2000 µg、約2050 µg、約2100 µg、約2150 µg、約2200 µg、約2250 µg、約2300 µg、約2350 µg、約2400 µg、約2450 µg、約2500 µg、約2550 µg、約2600 µg、約2650 µg、約2700 µg、約2750 µg、約2800 µg、約2850 µg、約2900 µg、約2950 µg、約3000 µg、約3050 µg、約3100 µg、約3150 µg、約3200 µg、約3250 µg、約3300 µg、約3350 µg、約3400 µg、約3450 µg、約3500 µg、約3550 µg、約3600 µg、約3650 µg、約3700 µg、約3750 µg、約3800 µg、約3850 µg、約3900 µg、約3950 µg、約4000 µg、約4050 µg、約4100 µg、約4150 µg、約4200 µg、約4250 µg、約4300 µg、約4350 µg、約4400 µg、約4450 µg、約4500 µg、約4550 µg、約4600 µg、約4650 µg、約4700 µg、約4750 µg、約4800 µg、約4850 µg、約4900 µg、約4950 µg或約5000 µg。
特定而言，Ara h 2的量可為每單位劑量約0.01 µg、約0.05 µg、約0.1 µg、約0.15 µg、約0.2 µg、約0.25 µg、約0.3 µg、約0.35 µg、約0.4 µg、約0.45 µg、約0.5 µg、約0.55 µg、約0.6 µg、約0.65 µg、約0.7 µg、約0.75 µg、約0.8 µg、約0.85 µg、約0.9 µg、約0.95 µg、約1.0 µg、約1.1 µg、約1.2 µg、約1.3 µg、約1.4 µg、約1.5 µg、約1.6 µg、約1.7 µg、約1.8 µg、約1.9 µg、約2.0 µg、約2.5 µg、約3 µg、約3.5 µg、約4 µg、約4.5 µg、約5 µg、約5.5 µg、約6 µg、約6.5 µg、約7 µg、約7.5 µg、約8 µg、約8.5 µg、約9 µg、約9.5 µg、約10 µg、約10.5 µg、約11 µg、約11.5 µg、約12 µg、約12.5 µg、約13 µg、約13.5 µg、約14 µg、約14.5 µg、約15 µg、約15.5 µg、約16 µg、約16.5 µg、約17 µg、約17.5 µg、約18 µg、約18.5 µg、約19 µg、約19.5 µg、約20 µg、約25 µg、約30 µg、約35 µg、約40 µg、約45 µg、約50 µg、約55 µg、約60 µg、約65 µg、約70 µg、約75 µg、約80 µg、約85 µg、約90 µg、約95 µg、約100 µg、約105 µg、約110 µg、約115 µg、約120 µg、約125 µg、約130 µg、約135 µg、約140 µg、約145 µg、約150 µg、約155 µg、約160 µg、約165 µg、約170 µg、約175 µg、約180 µg、約185 µg、約190 µg、約195 µg、約200 µg、約205 µg、約210 µg、約215 µg、約220 µg、約225 µg、約230 µg、約235 µg、約240 µg、約245 µg、約250 µg、約255 µg、約260 µg、約265 µg、約270 µg、約275 µg、約280 µg、約285 µg、約290 µg、約295 µg、約300 µg、約305 µg、約310 µg、約315 µg、約320 µg、約325 µg、約330 µg、約335 µg、約340 µg、約345 µg、約350 µg、約355 µg、約360 µg、約365 µg、約370 µg、約375 µg、約380 µg、約385 µg、約390 µg、約395 µg、約400 µg、約405 µg、約410 µg、約415 µg、約420 µg、約425 µg、約430 µg、約435 µg、約440 µg、約445 µg、約450 µg、約455 µg、約460 µg、約465 µg、約470 µg、約475 µg、約480 µg、約485 µg、約490 µg、約495 µg或約500 µg。
一般而言，較佳地，醫藥學上可接受之調配物中之nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6的量在上文關於本發明之第1態樣所論述；因此，關於第1態樣之組成物的所有考慮因素加以必要的變更後應用於本發明之第2態樣及其具體實例。因此，在第2態樣之重要具體實例中，醫藥學上可接受之調配物包含本文所揭示之本發明第1態樣及其任何具體實例的組成物。第2態樣之具體實例進一步定義於編號的具體實例NE38至NE51中，其係關於包含根據所編號具體實例NE1至NE37中之任一例之組成物的醫藥組成物。
本發明之第 3 態樣的具體實例
第3態樣使用的組成物或醫藥調配物典型地意味著過敏原特異性免疫療法包含複數次投予組成物或調配物。複數次投予較佳為間隔至少一天的複數次投予，且其中複數次投予最佳呈一次日劑量形式，諸如每日投予一次劑量(例如，日劑量可呈同一天內多次分開投藥之形式)，但自患者的角度看，每天(或每個其他週期，若相關)僅執行一次單次投藥則更方便得多。
因此，過敏原特異性免疫療法可包含投予複數次相同日劑量的花生蛋白質，視需要先投予複數次連續不同日劑量。或者，換言之，若發現在整個治療期期間投與一個週期(諸如每日)劑量安全，則不需要投予不相同劑量的初始方案。但過敏原特異性免疫療法亦可包含投予複數次連續不同日劑量的花生蛋白質，視需要再投予複數次相同日劑量。
在一些實施例中，在任何比率下，複數次連續不同日劑量呈連續日劑量之形式，其中較早劑量不高於較晚劑量，亦即，傳統的劑量增加方案(其中不相同的各日劑量高於系列中之任何在前的劑量)為此具體實例之一部分。不同日劑量的次數典型地選自2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29及30次連續不同的不同日劑量。
在一些具體實例中，花生蛋白質的最低總日劑量為0.1 µg，且最高總日劑量為5000 µg。舉例而言，最低日劑量可在0.1 µg與200 µg花生蛋白質之間，諸如約0.1 µg、約0.5 µg、約1 µg、約1.5 µg、約2 µg、約2.5 µg、約3 µg、約3.5 µg、約4 µg、約4.5 µg、約5 µg、約5.5 µg、約6 µg、約6.5 µg、約7 µg、約7.5 µg、約8 µg、約8.5 µg、約9 µg、約9.5 µg、約10 µg、約11 µg、約12 µg、約13 µg、約14 µg、約15 µg、約16 µg、約17 µg、約18 µg、約19 µg、約20 µg、約21 µg、約22 µg、約23 µg、約24 µg、約25 µg、約26 µg、約27 µg、約28 µg、約29 µg、約30 µg、約31 µg、約32 µg、約33 µg、約34 µg、約35 µg、約36 µg、約37 µg、約38 µg、約39 µg、約40 µg、約41 µg、約42 µg、約43 µg、約44 µg、約45 µg、約46 µg、約47 µg、約48 µg、約49 µg、約50 µg、約51 µg、約52 µg、約53 µg、約54 µg、約55 µg、約56 µg、約57 µg、約58 µg、約59 µg、約60 µg、約61 µg、約62 µg、約63 µg、約64 µg、約65 µg、約66 µg、約67 µg、約68 µg、約69 µg、約70 µg、約71 µg、約72 µg、約73 µg、約74 µg、約75 µg、約76 µg、約77 µg、約78 µg、約79 µg、約80 µg、約81 µg、約82 µg、約83 µg、約84 µg、約85 µg、約86 µg、約87 µg、約88 µg、約89 µg、約90 µg、約91 µg、約92 µg、約93 µg、約94 µg、約95 µg、約96 µg、約97 µg、約98 µg、約99 µg、約100 µg、約101 µg、約102 µg、約103 µg、約104 µg、約105 µg、約106 µg、約107 µg、約108 µg、約109 µg、約110 µg、約111 µg、約112 µg、約113 µg、約114 µg、約115 µg、約116 µg、約117 µg、約118 µg、約119 µg、約120 µg、約121 µg、約122 µg、約123 µg、約124 µg、約125 µg、約126 µg、約127 µg、約128 µg、約129 µg、約130 µg、約131 µg、約132 µg、約133 µg、約134 µg、約135 µg、約136 µg、約137 µg、約138 µg、約139 µg、約140 µg、約141 µg、約142 µg、約143 µg、約144 µg、約145 µg、約146 µg、約147 µg、約148 µg、約149 µg、約150 µg、約151 µg、約152 µg、約153 µg、約154 µg、約155 µg、約156 µg、約157 µg、約158 µg、約159 µg、約160 µg、約161 µg、約162 µg、約163 µg、約164 µg、約165 µg、約166 µg、約167 µg、約168 µg、約169 µg、約170 µg、約171 µg、約172 µg、約173 µg、約174 µg、約175 µg、約176 µg、約177 µg、約178 µg、約179 µg、約180 µg、約181 µg、約182 µg、約183 µg、約184 µg、約185 µg、約186 µg、約187 µg、約188 µg、約189 µg、約190 µg、約191 µg、約192 µg、約193 µg、約194 µg、約195 µg、約196 µg、約197 µg、約198 µg、約199 µg及約200 µg。
另外，最高日劑量可在300與5000 µg花生蛋白質之間，諸如約300 µg、約310 µg、約320 µg、約330 µg、約340 µg、約350 µg、約360 µg、約370 µg、約380 µg、約390 µg、約400 µg、約410 µg、約420 µg、約430 µg、約440 µg、約450 µg、約460 µg、約470 µg、約480 µg、約490 µg、約500 µg、約510 µg、約520 µg、約530 µg、約540 µg、約550 µg、約560 µg、約570 µg、約580 µg、約590 µg、約600 µg、約610 µg、約620 µg、約630 µg、約640 µg、約650 µg、約660 µg、約670 µg、約680 µg、約690 µg、約700 µg、約710 µg、約720 µg、約730 µg、約740 µg、約750 µg、約760 µg、約770 µg、約780 µg、約790 µg、約800 µg、約810 µg、約820 µg、約830 µg、約840 µg、約850 µg、約860 µg、約870 µg、約880 µg、約890 µg、約900 µg、約910 µg、約920 µg、約930 µg、約940 µg、約950 µg、約960 µg、約970 µg、約980 µg、約990 µg、約1000 µg、約1010 µg、約1020 µg、約1030 µg、約1040 µg、約1050 µg、約1060 µg、約1070 µg、約1080 µg、約1090 µg、約1100 µg、約1110 µg、約1120 µg、約1130 µg、約1140 µg、約1150 µg、約1160 µg、約1170 µg、約1180 µg、約1190 µg、約1200 µg、約1210 µg、約1220 µg、約1230 µg、約1240 µg、約1250 µg、約1260 µg、約1270 µg、約1280 µg、約1290 µg、約1300 µg、約1310 µg、約1320 µg、約1330 µg、約1340 µg、約1350 µg、約1360 µg、約1370 µg、約1380 µg、約1390 µg、約1400 µg、約1410 µg、約1420 µg、約1430 µg、約1440 µg、約1450 µg、約1460 µg、約1470 µg、約1480 µg、約1490 µg、約1500 µg、約1510 µg、約1520 µg、約1530 µg、約1540 µg、約1550 µg、約1560 µg、約1570 µg、約1580 µg、約1590 µg、約1600 µg、約1610 µg、約1620 µg、約1630 µg、約1640 µg、約1650 µg、約1660 µg、約1670 µg、約1680 µg、約1690 µg、約1700 µg、約1710 µg、約1720 µg、約1730 µg、約1740 µg、約1750 µg、約1760 µg、約1770 µg、約1780 µg、約1790 µg、約1800 µg、約1810 µg、約1820 µg、約1830 µg、約1840 µg、約1850 µg、約1860 µg、約1870 µg、約1880 µg、約1890 µg、約1900 µg、約1910 µg、約1920 µg、約1930 µg、約1940 µg、約1950 µg、約1960 µg、約1970 µg、約1980 µg、約1990 µg、約2000 µg、約2010 µg、約2020 µg、約2030 µg、約2040 µg、約2050 µg、約2060 µg、約2070 µg、約2080 µg、約2090 µg、約2100 µg、約2110 µg、約2120 µg、約2130 µg、約2140 µg、約2150 µg、約2160 µg、約2170 µg、約2180 µg、約2190 µg、約2200 µg、約2210 µg、約2220 µg、約2230 µg、約2240 µg、約2250 µg、約2260 µg、約2270 µg、約2280 µg、約2290 µg、約2300 µg、約2310 µg、約2320 µg、約2330 µg、約2340 µg、約2350 µg、約2360 µg、約2370 µg、約2380 µg、約2390 µg、約2400 µg、約2410 µg、約2420 µg、約2430 µg、約2440 µg、約2450 µg、約2460 µg、約2470 µg、約2480 µg、約2490 µg、約2500 µg、約2510 µg、約2520 µg、約2530 µg、約2540 µg、約2550 µg、約2560 µg、約2570 µg、約2580 µg、約2590 µg、約2600 µg、約2610 µg、約2620 µg、約2630 µg、約2640 µg、約2650 µg、約2660 µg、約2670 µg、約2680 µg、約2690 µg、約2700 µg、約2710 µg、約2720 µg、約2730 µg、約2740 µg、約2750 µg、約2760 µg、約2770 µg、約2780 µg、約2790 µg、約2800 µg、約2810 µg、約2820 µg、約2830 µg、約2840 µg、約2850 µg、約2860 µg、約2870 µg、約2880 µg、約2890 µg、約2900 µg、約2910 µg、約2920 µg、約2930 µg、約2940 µg、約2950 µg、約2960 µg、約2970 µg、約2980 µg、約2990 µg、約3000 µg、約3010 µg、約3020 µg、約3030 µg、約3040 µg、約3050 µg、約3060 µg、約3070 µg、約3080 µg、約3090 µg、約3100 µg、約3110 µg、約3120 µg、約3130 µg、約3140 µg、約3150 µg、約3160 µg、約3170 µg、約3180 µg、約3190 µg、約3200 µg、約3210 µg、約3220 µg、約3230 µg、約3240 µg、約3250 µg、約3260 µg、約3270 µg、約3280 µg、約3290 µg、約3300 µg、約3310 µg、約3320 µg、約3330 µg、約3340 µg、約3350 µg、約3360 µg、約3370 µg、約3380 µg、約3390 µg、約3400 µg、約3410 µg、約3420 µg、約3430 µg、約3440 µg、約3450 µg、約3460 µg、約3470 µg、約3480 µg、約3490 µg、約3500 µg、約3510 µg、約3520 µg、約3530 µg、約3540 µg、約3550 µg、約3560 µg、約3570 µg、約3580 µg、約3590 µg、約3600 µg、約3610 µg、約3620 µg、約3630 µg、約3640 µg、約3650 µg、約3660 µg、約3670 µg、約3680 µg、約3690 µg、約3700 µg、約3710 µg、約3720 µg、約3730 µg、約3740 µg、約3750 µg、約3760 µg、約3770 µg、約3780 µg、約3790 µg、約3800 µg、約3810 µg、約3820 µg、約3830 µg、約3840 µg、約3850 µg、約3860 µg、約3870 µg、約3880 µg、約3890 µg、約3900 µg、約3910 µg、約3920 µg、約3930 µg、約3940 µg、約3950 µg、約3960 µg、約3970 µg、約3980 µg、約3990 µg、約4000 µg、約4010 µg、約4020 µg、約4030 µg、約4040 µg、約4050 µg、約4060 µg、約4070 µg、約4080 µg、約4090 µg、約4100 µg、約4110 µg、約4120 µg、約4130 µg、約4140 µg、約4150 µg、約4160 µg、約4170 µg、約4180 µg、約4190 µg、約4200 µg、約4210 µg、約4220 µg、約4230 µg、約4240 µg、約4250 µg、約4260 µg、約4270 µg、約4280 µg、約4290 µg、約4300 µg、約4310 µg、約4320 µg、約4330 µg、約4340 µg、約4350 µg、約4360 µg、約4370 µg、約4380 µg、約4390 µg、約4400 µg、約4410 µg、約4420 µg、約4430 µg、約4440 µg、約4450 µg、約4460 µg、約4470 µg、約4480 µg、約4490 µg、約4500 µg、約4510 µg、約4520 µg、約4530 µg、約4540 µg、約4550 µg、約4560 µg、約4570 µg、約4580 µg、約4590 µg、約4600 µg、約4610 µg、約4620 µg、約4630 µg、約4640 µg、約4650 µg、約4660 µg、約4670 µg、約4680 µg、約4690 µg、約4700 µg、約4710 µg、約4720 µg、約4730 µg、約4740 µg、約4750 µg、約4760 µg、約4770 µg、約4780 µg、約4790 µg、約4800 µg、約4810 µg、約4820 µg、約4830 µg、約4840 µg、約4850 µg、約4860 µg、約4870 µg、約4880 µg、約4890 µg、約4900 µg、約4910 µg、約4920 µg、約4930 µg、約4940 µg、約4950 µg、約4960 µg、約4970 µg、約4980 µg、約4990 µg及約5000 µg。
在特別重要的具體實例中，療法包含先投予一種第一系列的複數次相同日劑量，再投予至少一種另一系列的複數次相同日劑量，該至少一種另一系列的日劑量不同於第一系列的日劑量且較佳高於第一系列的日劑量。此亦構成劑量增加方案，但傳統的多種劑量增加方案中之各新劑量相較於在前的劑量增加，本文所述之方法利用其中每次增加劑量之後重複週期性(例如每日)相同劑量的策略。因此，在重要的具體實例中，複數個系列的相同日劑量按照過敏原特異性免疫療法的劑量增加期投予，其中一系列相同日劑量中的日劑量高於任何在前的系列之相同日劑量中的日劑量。
當採用此類「複數個系列策略」時，複數個系列典型地選自2、3、4、5、6、7、8、9及10系列。
各個別系列的每日投藥典型地具有6至30天範圍內的時長(持續時間)，諸如6至22天範圍內，例如6至16天範圍內，且較佳為約14天。
劑量增加期完成之後，可以維持期繼續進行過敏原特異性免疫療法，該維持期包含投予複數次日劑量，該等日劑量與劑量增加期之最後一個系列的日劑量相同或在劑量增加期之最後一個系列之日劑量的½至
9/
10範圍內。
如已在第2態樣下所示，經由口腔黏膜(較佳為舌下黏膜)投予達成特別良好的免疫反應，因此，過敏原特異性免疫療法較佳包含投予至口腔黏膜，較佳為舌下投予。
本發明之第4態樣的具體實例進一步定義於編號的具體實例NE53至NE69及127至129中。其係關於根據編號之具體實例NE1至NE37之組成物的用途，或根據編號之具體實例NE38至NE51的醫藥組成物，其用於減輕花生過敏之方法，諸如治療有需要之個體的花生過敏。其他具體實例NE88至NE94係關於用於治療有需要之人類個體之花生過敏的特定給藥方案。
本發明之第 4 態樣的具體實例
本發明之第4態樣係關於一種製備花生過敏原組成物的方法，由於對最終產物中之過敏原含量的控制程度極高(前所未有)，因此該方法具有極高的可再現程度。此方法繼而能夠達成本發明的其他態樣。
因此，花生蛋白質可藉由包含以下步驟之方法獲得：
1)提供如下獲得的花生蛋白質水性萃取物：用水溶劑萃取生花生仁以獲得包含nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6中之各者的水性萃取物；及
2)在7至9範圍內的pH下，經由逐步或連續的水性鹽梯度溶離對該水性萃取物進行陰離子交換層析，藉此將nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6中之各者溶離並收集至針對nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3或nAra h 6個別地富集的溶離份中；及
3)視需要收集來自該陰離子交換層析的流過物溶離份；及
4)將步驟2或組合的步驟2與步驟3所得之溶離份或其等分試樣合併以獲得該等花生蛋白質。
在第4態樣中，本發明係關於一種用於製備包含nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6中之兩者或更多者之組成物的方法，該方法包含提供1)如下獲得的花生蛋白質萃取物：用水溶劑萃取生花生仁以獲得包含nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6中之各者的水性萃取物；以及2)在7至9範圍內的pH下，經由逐步或連續的水性鹽梯度溶離對該水性萃取物進行陰離子交換層析，藉此將nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6中之各者溶離並收集至針對nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3或nAra h 6個別地富集的溶離份中；以及3)視需要收集來自陰離子交換層析的流過物溶離份；以及4)將步驟2或組合的步驟2與步驟3所得之兩個或更多個溶離份或其等分試樣合併，以獲得包含nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6中之至少兩者的該花生蛋白質組成物。較佳地，含有分子質量高之花生蛋白質的溶離份予以丟棄。在此方法中，花生過敏原被吸附至陰離子交換材料上且隨後藉由鹽梯度溶離而自材料釋放。幸好，陰離子交換層析步驟可以製備規模進行且接著適用於工業規模裝置。
步驟1的水溶劑較佳包含pH在7至9範圍內的緩衝水溶劑，且步驟2的鹽可為NaCl或與NaCl等效的鹽。用於執行步驟1的條件亦進一步結合本發明之第一態樣下所述的方法揭示且與本發明之第4態樣的方法相容。
較佳地，步驟2 (諸如選項i)、h)及/或i))所得之個別溶離份中的nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6濃度較佳藉由分析型RP-HPLC測定(實例詳情參見較佳RP-HPLC定量方法)。步驟2所得之溶離份按以下次序溶離：nAra h 6、nAra h 2、nAra h 1及nAra h 3。
在重要的具體實例中，上述步驟4、尤其是選項h)步驟5及/或選項i)步驟4中合併的整個溶離份或其等分試樣經合併以使得配對nAra h 1:nAra h 2、nAra h 3:nAra h 2、nAra h 6:nAra h 2中之各者的莫耳比在0.5至2.0範圍內，諸如在0.5至1.5範圍內，較佳在0.6至1.4範圍內，諸如在0.7至1.3範圍內。同樣，在重要的具體實例中，在選項j)中，配對nAra h 1:nAra h 2、nAra h 3:nAra h 2、nAra h 6:nAra h 2中之各者的莫耳比在0.5至1.5範圍內，諸如在0.6至1.4範圍內，諸如在0.7至1.3範圍內。
在第4態樣之方法中，典型地收集個別地富含nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6的四個溶離份。可將至少兩個個別溶離份合併以提供包含選自nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6之兩種或更多種過敏原的組成物。舉例而言，可合併溶離份以獲得包含nAra h 2及nAra h 6且不含兩種其他過敏原或兩種其他過敏原之量低的組成物。在一個具體實例中，合併四個溶離份或其等分試樣提供包含nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6中之各者的組成物(亦即，第1態樣之組成物)。
構成起點溶液的溶液通常係藉由用pH在6至9範圍內的緩衝水溶劑、視需要用pH在6至9範圍內(諸如在6.5至9或6.5至8範圍內)的緩衝生理鹽水水溶劑自生花生仁、較佳自脫脂、視需要覆皮的粉碎花生仁萃取花生蛋白質而獲得。為了提高nAra h 3的萃取效率，pH可以高於中性pH，諸如在7至9範圍內，諸如在7至8.5範圍內，諸如在7至8.5範圍內。在甚至更佳的具體實例中，pH在7至8範圍內。關於緩衝水溶劑的其他細節見於本發明之第1態樣的描述中。
藉由陰離子交換層析對溶液進行分級分離可包含在6至9範圍內的pH下進行逐步或連續的水性鹽梯度溶離，藉此將nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6溶離並收集至至少兩個個別溶離份中。另外，在此，pH較佳在6至8範圍內，但較佳高於pH 7以確保蛋白質具有負電荷以便有效吸附至陰離子交換材料上。pH在7至8範圍內(諸如在7.2至7.8範圍內)時，獲得最佳條件。
至少兩個溶離份中之四種過敏原nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6的濃度較佳藉由RP-HPLC定量，以確定將至少兩個溶離份合併而需要的等分試樣，用於提供含有受控制量或預選量之四種過敏原中之兩者或更多者的組成物。如本發明之第1態樣所述進一步說明RP-HPLC方法。
在一些具體實例中，方法包含以下步驟：1)用水溶劑自生花生仁萃取花生蛋白質；2)在7至9範圍內的pH下，經由逐步或連續的水性鹽梯度溶離對所萃取的蛋白質進行陰離子交換層析，藉此將nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6中之各者溶離並收集至個別溶離份中；3)視需要收集來自陰離子交換層析的流過物溶離份；及4)將步驟2及視需要步驟3所得之整個溶離份或兩個或更多個溶離份之等分試樣合併，以獲得包含nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6中之兩者或更多者的組成物。步驟2之溶離份中之四種過敏原nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6的濃度宜藉由RP-HPLC定量，以確定應合併之相關溶離份的等分試樣，從而提供包含預選量/受控制量之兩種或更多種花生過敏原的組成物。
在需要獲得包含nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6中之各者之組成物的一些實施例中，方法包含以下步驟：1)用水溶劑自生花生仁萃取花生蛋白質；2)在7至9範圍內的pH下，經由逐步或連續的水性鹽梯度溶離對所萃取的蛋白質進行陰離子交換層析，藉此將nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6中之各者溶離並收集至個別溶離份中；3)視需要收集來自陰離子交換層析的流過物溶離份；及4)將步驟2及視需要步驟3所得之整個溶離份或各溶離份之等分試樣合併，以獲得包含nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6中之各者的組成物。步驟2之溶離份中之四種過敏原nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6的濃度宜藉由RP-HPLC定量，以確定應合併之各溶離份的等分試樣，從而提供包含受控制量或預選量之四種過敏原中之各者的組成物。
在一些具體實例中，將溶離份或其等分試樣合併，以獲得組成物中包含nAra h 1、nAra h 2、nAra 3及nAra h 6中之各者的組成物，限制條件為配對nAra h 1:nAra h 2、nAra h 3:nAra h 2、nAra h 6:nAra h 2中之各者的莫耳比當藉由分析規模的RP-HPLC測定時在0.5至1.5範圍內，各對之莫耳比較佳在0.6至1.4範圍內，諸如在0.7至1.3範圍內。
在第4態樣之方法的特別重要具體實例中，藉由將比nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6之富集溶離份溶離遲的溶離份丟棄來丟棄含有分子質量高之花生蛋白質的溶離份。由此達到避免上文關於本發明之第1態樣論述之高分子質量聚集體的目的。因此，質量高於700 kDa的高分子質量之分子予以丟棄。
上述水溶劑進一步如關於本發明之第1態樣下所述之水溶劑所說明。水溶劑典型地包含10至200 mM之莫耳濃度範圍內的TRIS，較佳在10至100 mM範圍內、諸如在10至50 mM範圍內的TRIS，且視需要包含含量在5至200 mM範圍內、較佳在10至100 mM、10至50 mM範圍內的NaCl或等效鹽。
逐步或連續的水性鹽梯度溶離較佳使用NaCl作為鹽或與NaCl等效的鹽進行。等效鹽進一步在本發明之第1態樣下說明。如實施例中所示，此產生的優勢在於，四種相關過敏原在低鹽濃度下溶離且高質量聚集體在較高鹽濃度下溶離。
關於製備方法的其他細節(例如關於陰離子交換材料、花生源、萃取溶劑、用於溶離吸附至陰離子交換材料上之過敏原的溶劑等)見於本發明之第1態樣的描述中。
其他具體實例描述於編號的具體實例NE70至NE81中，其係關於一種製備包含nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6中之兩者或更多者之組成物的方法，且其適用於產生包含預選量之nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6中之一或多者的組成物。
本發明之第 5 態樣的具體實例
本發明之第5態樣係關於一種套組，其包含含有複數個分隔隔室的密封包裝，各隔室包含本發明之第2態樣(或本文所揭示之其任何具體實例)之醫藥學上可接受之調配物的單位劑型，其中至少一個單位劑型包含一量之總花生蛋白質。
在本發明之第5態樣之套組的一些實施例中，至少一次劑量為唯一的，且單位劑量較佳不相同。此類套組特別適用於傳統的劑量增加方案，其中增加所有劑量。
在其他具體實例中，第一複數個單位劑量相同，且其中至少另一種複數個單位劑量相同，但高於第一複數個單位劑量中的單位劑量。應瞭解，此套組適用於上文所揭示的「複數個系列」劑量增加療法。在此類型之套組的較佳具體實例中，包括至少3種複數個相同單位劑量，各包含與其他複數個單位劑量中之任一者之單位劑量不同的單位劑量。至少3種複數個可例如選自3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14及15。
各單位劑型中之花生蛋白質的量較佳如上文在本發明之第3態樣之上下文中揭示的日劑量所定義。其他具體實例描述於編號的具體實例NE82至87中，其係關於一種套組，該套組包含含有適用於減輕花生過敏之方法中之單位劑量的密封包裝。各單位劑量可包含根據NE1至NE37之組成物或根據NE38至NE51之醫藥組成物。
本發明之第6態樣的具體實例
本發明之第六態樣係關於本發明之第一態樣或第2態樣的組成物，其以治療有效量用於治療人類個體以防花生過敏的方法中。換言之，本發明之第六態樣係關於本發明之第一態樣或第2態樣之組成物用於製備供治療人類以防花生過敏之醫藥品的用途。
第6態樣係利用本發明之第1、第2、第4及第5態樣且通常構成藉由使用第3態樣論述之條件治療花生過敏的方法。
術語「花生過敏治療」意欲包括減輕及/或消除、改善、抑制、減緩花生過敏之一或多種症狀或臨床徵象的進展或嚴重度。舉例而言，術語「過敏症治療」可表示減輕花生過敏，包括花生過敏原誘導的急性過敏(例如該急性過敏係因暴露於花生或含花生產品而引起)。減輕花生過敏，包括花生過敏原誘導的急性過敏，尤其可耐受對花生的意外暴露。術語「治療」亦可包括預防性治療，包括延遲或預防患者之花生過敏之一或多種症狀或臨床徵象的發作，該患者先前已經歷花生過敏之症狀或臨床徵象。若一或多種症狀或臨床徵象減少或改善，則治療通常被視為「有效」。或者，相較於不存在治療之情況下的預期，若過敏症的進展減少或中止，諸如症狀或臨床徵象之進展或惡化中止或至少減緩，則治療「有效」。治療的有益或所需功效亦可包括減弱或減小嚴重免疫反應(如急性過敏，包括過敏性休克)的頻率。舉例而言，有益作用可為減輕急性過敏之腎上腺素投予的需求減少。
意外暴露於花生典型地發生於個體非自願食用花生或暴露於花生，其接著可以觸發過敏反應。個體可暴露於整個花生或含有花生或花生蛋白質的產品。
花生過敏的臨床徵象可以包括嘔吐、胃絞痛、消化不良、腹瀉、喘鳴、呼吸短促、呼吸困難、反覆性咳嗽、咽喉緊繃、話音嘶啞、脈博弱、皮膚蒼白或發藍、蕁麻疹、可影響舌及/或唇的腫脹、眩暈及意識模糊，及嚴重情況下的急性過敏、過敏性休克。急性過敏為針對過敏原之危及生命的全身(系統性)反應且症狀可以包括呼吸減弱、咽喉腫脹、血壓突然降低、皮膚蒼白或唇發藍、昏厥及眩暈。急性過敏應立即用腎上腺素治療。
因此，在第六態樣之具體實例中，本文所揭示之花生蛋白質組成物係以治療有效量使用，以便減輕因有需要之人類個體意外暴露於以下者而引起的花生過敏及/或花生過敏原誘導之急性過敏：一或多種花生過敏原；一或多個花生；花生蛋白質；或含有花生蛋白質的產品。在其具體實例中，花生蛋白質組成物用於執行過敏原特異性免疫療法，其需要在一段時間內重複投予特定過敏原且視需要以劑量增加期開始，以便在繼續治療期(維持期)達到較高的可耐受劑量。
人類個體可為需要治療的任何人類個體，諸如兒童、青少年或成人。典型地，藉由使用花生過敏原萃取物執行口服食物攻毒及/或皮膚刺痛測試來證實人類個體對花生敏感或過敏。另外，個體可存在針對花生過敏原萃取物中之花生過敏原或四種花生過敏原中之一或多者的可偵測特異性IgE。可在血液樣品中偵測到濃度約0.7 kU/ml的過敏原特異性IgE抗體。
可藉由以下用於過敏症的獨特生物標記物實現治療功效。舉例而言，可藉由利用治療降低血液中之花生過敏原特異性IgE含量及/或增加血液中之花生過敏原特異性IgG4含量來實現有效治療。亦即，花生過敏的治療包含相較於治療前增加血液或其他生物學分泌物(唾液、鼻或肺灌洗液)中之花生過敏原特異性IgG4含量的濃度及/或相較於治療前增加血液或其他生物學分泌物中之花生過敏原特異性IgE與IgG4含量之間的比率。典型地，可在劑量增加期結束時或在至少三個月治療之後，觀測到增加。花生過敏原比含量可相對於四種主要花生過敏原(Ara h 1、2、3及6)中之一或多者或根據整個花生萃取物來測定。
花生過敏的治療可包含對一或多種花生過敏原、一或多種花生、花生蛋白質或含花生蛋白質產品之攝入誘導耐受性，諸如免疫耐受性。耐受性誘導的目標為耐受對含有花生蛋白質之產品的意外暴露。當個體可食用至少300 mg花生蛋白質而無重度過敏反應時，可實現耐受性誘導。可藉由口服食物攻毒測試來評估花生蛋白質耐受性測試。
典型地，治療需要每天一次、每週一次、兩週一次或每月一次投予，此視投藥途徑而定。對於舌下投予而言，治療包含每日投予，較佳為單劑的每日投予。劑量的濃度典型地以花生蛋白質的濃度表示，最低日劑量為0.1 µg花生蛋白質且最高日劑量為5000 µg花生蛋白質。
典型的給藥方案包含先投予一種第一系列的複數次相同日劑量，再投予至少一種另一系列的複數次相同日劑量，該至少一種另一系列的日劑量不同於第一系列的日劑量且較佳高於第一系列的日劑量。視需要，劑量增加期投予複數個系列的相同日劑量，其中一系列相同日劑量中的日劑量高於任何在前的系列之相同日劑量中的日劑量。
在一些具體實例中，花生蛋白質的最低日劑量在1至150 µg範圍內。劑量增加期可包含投予三至十次劑量的步驟，較佳為以增加的劑量投予的步驟。因此，複數個系列可選自3、4、5、6、7、8、9及10個系列。典型地，在投予更大劑量之前，投予相同劑量6至22天。因此，該系列的持續時間在6至22天範圍內。
劑量增加期完成之後，可以維持期繼續進行治療，該維持期包含投予複數次日劑量，該等日劑量與劑量增加期之最後一個系列的日劑量相同或在劑量增加期之最後一個系列之日劑量的½至
9/
10範圍內。維持期投予之花生蛋白質的日劑量可在300至5000 µg範圍內。
典型地，劑量投予至口腔黏膜，諸如投予舌下黏膜，後者較佳。
在一些具體實例中，方法包含多次每日投予不同劑量的花生過敏原，視需要再多次每日投予相同日劑量的花生過敏原。
在一定程度上重疊的其他具體實例中，方法包含多次每日投予相同劑量的花生過敏原，視需要先多次每日投予不同劑量的花生過敏原。
應注意，每日投予並非本發明的前提條件，各劑量之間可採用1天之外的間期，但較佳為日劑量，且特定言之，較佳為每日單次(每日一次)投予。
在又其他的重要具體實例中，方法包含投予複數個系列之相同日劑量的花生過敏原或花生蛋白質，其中至少一個系列的日劑量與另一系列的日劑量不同。較佳地，複數個系列中之各者包含的日劑量不同於複數個系列中之任何其他系列的劑量，且其中較早系列之後的各系列包含比較早系列高的劑量。複數個系列典型地由2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15個系列構成。
第6態樣亦包括一種藉由過敏原特異性免疫療法減輕人類之花生過敏及/或花生誘導急性過敏的方法，該方法包含劑量增加期及視需要存在的維持期，其中劑量增加期包含將多個連續系列之日劑量的花生蛋白質組成物投予至口腔黏膜，其中各系列內的日劑量相同且其中任何在前的系列中的劑量低於後續系列且其中各系列的持續時間長度在6至30天範圍內；且其中
- 第一系列投予的日劑量含有總量在0.1 µg至200 µg範圍內的花生蛋白質；
- 最後一個系列的日劑量含有總量在300 µg至5000 µg範圍內的花生蛋白質；及
- 其中系列的數目在2至9範圍內，諸如在3至7範圍內，尤其諸如3、4、5、6、7、8或9，較佳為3、4或5。
換言之，第6態樣亦關於一種醫藥組成物，其用於藉由過敏原特異性免疫療法減輕人類之花生過敏及/或花生過敏原誘導之急性過敏的方法，或醫藥組成物用於製造醫藥品的用途，該醫藥品用於藉由過敏原特異性免疫療法減輕人類之花生過敏及/或花生過敏原誘導之急性過敏之方法。
因此，本發明之第6態樣的此部分聚焦於臨床上重要的劑量增加期，劑量增加期以包括花生過敏原的過敏原特異性免疫療法起始；且聚焦於所投予之過敏原的濃度及構形。劑量增加期之後可為維持期，維持期較佳包含以與劑量增加期內所用相同的投藥途徑投予相同的醫藥組成物。然而，維持期可替代地藉由口服過敏原免疫療法(OIT)、皮下過敏原免疫療法或甚至藉由攝入花生或含有花生的產品來執行。
使用醫藥學上可接受之載劑、稀釋劑、賦形劑或媒劑將花生蛋白質組成物調配成醫藥組成物，且花生蛋白質包含用水溶劑自生花生仁(較佳為粉碎的脫脂花生仁)萃取或可萃取的過敏原，其中過敏原至少包含nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6中之各者。
為了在治療期間將所有四種主要過敏原的花生過敏原特異性IgG4血液含量提高至相同程度，花生蛋白質組成物較佳包含莫耳比在0.5至2.0範圍內、諸如在0.5至1.5範圍內或在本文所揭示之更窄範圍內的配對nAra h 1:nAra h 2、nAra h 3:nAra h 2及nAra h 6:nAra h 2中之各者。因此，在第6態樣的具體實例中，配對nAra h 1:nAra h 2、nAra h 3:nAra h 2及nAra h 6:nAra h 2中之各者的莫耳濃度比在0.5至2.0範圍內，諸如0.5至1.5或更窄。nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6中之各者的莫耳濃度希望以單體多肽的濃度表示。「單體多肽」意謂構成各過敏原蛋白質的多肽(其特徵為一或多個胺基酸序列來源於過敏原的同功型)。因此，在天然過敏原可以多肽之二聚體、三聚體或其他多聚體形式出現的情況下，其始終將由單一多肽構成。如在本發明之第1態樣下所解釋，此類莫耳濃度可藉由分析規模的逆相HPLC測定。
花生組成物中之nAra h 2的濃度可在50至150 µg/mg花生蛋白質範圍內且nAra h 3之量可在160至500 µg/mg花生蛋白質範圍內。四種過敏原nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6的組合可構成花生蛋白質之至少75重量%，從而能夠提供高劑量之具有治療相關過敏原的花生蛋白質。較佳地，四種過敏原可構成花生蛋白質之至少80重量%，諸如至少85重量%，諸如至少90重量%。在需要投予其他花生過敏原的情況下，四種過敏原可構成花生蛋白質的最多98重量%。
在任何比率下，在本文中的重要具體實例中，所投予的花生蛋白質基本上不含分子質量為至少700 kDa的花生蛋白質，如針對第1態樣之花生組成物所揭示。
較佳地，上述花生蛋白質組成物為本發明之第1態樣及本文所揭示之其任何具體實例的組成物，或本發明之第2態樣及本文所揭示之其任何具體實例的醫藥學上可接受之調配物。
若系列的相同劑量作為第6態樣之方法的一部分投予，則該系列較佳各具有10至21天的持續時間，較佳約14天。在本文中，在本發明之第3態樣下論述的第一系列之最低日劑量加以必要的變更後應用於第6態樣中之第一系列的日劑量，且同樣，最後一個系列的日劑量可為上文所論述的日劑量，其為本發明之第3態樣中的最高日劑量。如技術方案86至91中任一方案使用的醫藥組成物，其中各系列具有10至21天的持續時間。
若投予系列的相同劑量，則比第一系列遲的系列日劑量相較於相鄰在前的系列的日劑量較佳增加2至4倍，諸如3與3.5倍之間，諸如2與3倍之間。
在一具體實例中，第一系列的日劑量為約1 µg且最後一個系列的日劑量為約4320 µg，且系列的數目為9，且第一系列與最後一個系列之間7個系列的劑量依遞增次序分別為約3 µg、約10 µg、約40 µg、約120 µg、約360 µg、約1080 µg及約2160 µg。
在一具體實例中，第一系列的日劑量為約3 µg且最後一個系列的日劑量為約4320 µg，且系列的數目為8，且第一系列與最後一個系列之間6個系列的劑量依遞增次序分別為約10 µg、約40 µg、約120 µg、約360 µg、約1080 µg及約2160 µg。
在一具體實例中，第一系列的日劑量為約10 µg且最後一個系列的日劑量為約4320 µg，且系列的數目為7，且第一系列與最後一個系列之間5個系列的劑量依遞增次序分別為約40 µg、約120 µg、約360 µg、約1080 µg及約2160 µg。
在一具體實例中，第一系列的日劑量為約40 µg且最後一個系列的日劑量為約4320 µg，且系列的數目為6，且第一系列與最後一個系列之間4個系列的劑量依遞增次序分別為約120 µg、約360 µg、約1080 µg及約2160 µg。
在一具體實例中，第一系列的日劑量為約120 µg且最後一個系列的日劑量為約4320 µg，且系列的數目為5，且第一系列與最後一個系列之間3個系列的劑量依遞增次序分別為約360 µg、約1080 µg及約2160 µg。
在一具體實例中，第一系列的日劑量為約1 µg且最後一個系列的日劑量為約2160 µg，且系列的數目為8，且第一系列與最後一個系列之間6個系列的劑量依遞增次序分別為約3 µg、約10 µg、約40 µg、約120 µg、約360 µg及約1080 µg。
在一具體實例中，第一系列的日劑量為約3 µg且最後一個系列的日劑量為約2160 µg，且系列的數目為7，且第一系列與最後一個系列之間5個系列的劑量依遞增次序分別為約10 µg、約40 µg、約120 µg、約360 µg及約1080 µg。
在一具體實例中，第一系列的日劑量為約10 µg且最後一個系列的日劑量為約2160 µg，且系列的數目為6，且第一系列與最後一個系列之間4個系列的劑量依遞增次序分別為約40 µg、約120 µg、約360 µg及約1080 µg。
在一具體實例中，第一系列的日劑量為約40 µg且最後一個系列的日劑量為約2160 µg，且系列的數目為5，且第一系列與最後一個系列之間3個系列的劑量依遞增次序分別為約120 µg、約360 µg及約1080 µg。
在一具體實例中，第一系列的日劑量為約120 µg且最後一個系列的日劑量為約2160 µg，且系列的數目為4，且第一系列與最後一個系列之間2個系列的劑量依遞增次序分別為約360 µg及約1080 µg。
在一具體實例中，第一系列的日劑量為約1 µg且最後一個系列的日劑量為約1080 µg，且系列的數目為7，且第一系列與最後一個系列之間5個系列的劑量依遞增次序分別為約3 µg、約10 µg、約40 µg、約120 µg及約360 µg。
在一具體實例中，第一系列的日劑量為約3 µg且最後一個系列的日劑量為約1080 µg，且系列的數目為6，且第一系列與最後一個系列之間4個系列的劑量依遞增次序分別為約10 µg、約40 µg、約120 µg及約360 µg。
在一具體實例中，第一系列的日劑量為約10 µg且最後一個系列的日劑量為約1080 µg，且系列的數目為5，且第一系列與最後一個系列之間3個系列的劑量依遞增次序分別為約40 µg、約120 µg及約360 µg。
在一具體實例中，第一系列的日劑量為約40 µg且最後一個系列的日劑量為約1080 µg，且系列的數目為4，且第一系列與最後一個系列之間2個系列的劑量依遞增次序分別為約120 µg及約360 µg。
在一具體實例中，第一系列的日劑量為約120 µg且最後一個系列的日劑量為約1080 µg，且系列的數目為3，第一系列與最後一個系列之間的1個系列劑量為約360 µg。
上述具體實例中的日劑量意欲表示所投予之組成物中的花生蛋白質濃度。組成物中之花生蛋白質濃度可藉由胺基酸分析(AAA)或藉由布拉福蛋白質分析、使用牛血清白蛋白作為參考標準物(BCA)來測定，較佳藉由胺基酸分析(AAA)測定。
如上文所提及，當過敏原組成物投予至口腔黏膜、尤其舌下黏膜時，過敏原特異性免疫療法已證實特別有效。因此，較佳藉由口頰或舌下投予至口腔黏膜，較佳為舌下投予。
第6態樣之方法可進一步包含維持期，其包含以至少一天間隔複數次投予花生蛋白質劑至口腔黏膜，較佳為舌下黏膜。較佳地，維持期之總花生蛋白質劑量與任何最後投予系列之日劑量相同或在任何最後系列之日劑量的½至
9/
10範圍內。
為了計量方法的效率，量測患者的過敏反應作為對侵入之過敏原(在此情況下，為花生或含有衍生自花生之材料的產品，例如花生粉)攻毒的反應。較佳地，人類個體在劑量增加期完成之後，在口服食物攻毒測試中能夠耐受至少300 mg花生蛋白質，諸如至少400 mg、500 mg、600 mg、700 mg、800 mg、1000 mg、1200 mg、1500 mg、2000 mg、2500 mg、3000 mg、4000 mg、5000 mg或6000 mg花生蛋白質。同樣較佳地，人類個體在劑量增加期及至少六個月的維持期完成之後，在口服食物攻毒測試中能夠耐受至少300 mg花生蛋白質，諸如至少400 mg、500 mg、600 mg、700 mg、800 mg、1000 mg、1200 mg、1500 mg、2000 mg、2500 mg、3000 mg、4000 mg、5000 mg或6000 mg花生蛋白質。
維持期可保持至人類獲得持久反應為止，此意謂人類個體在維持期或劑量增加期結束之後，在口服食物攻毒測試中可能夠耐受至少300 mg花生蛋白質。
維持期可保持至人類獲得持久反應為止，此意謂人類個體在維持期或劑量增加期結束之後，在口服食物攻毒測試中可能夠耐受至少300 mg花生蛋白質。當人類個體在治療中止三個月或更久(諸如6個月、1、2或4年)之後可耐受至少300 mg花生蛋白質(諸如至少600 mg、700 mg、800 mg、1000 mg、1200 mg、1500 mg、2000 mg、2500 mg、3000 mg、4000 mg、5000 mg或6000 mg花生蛋白質)之攝入時，可以實現持久反應。最大耐受劑量可如
Davis 等人 (2022)所述確定。
第6態樣之其他或類似具體實例可見於編號的具體實例NE95至NE125中，其係關於一種減輕個體之花生過敏的方法，其中包含四種過敏原nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6中之各者的花生組成物係以某些給藥方案投予，該等給藥方案包含在較短時段內投予遞增劑量的劑量增加期。此類給藥方案在不導致可能需要注射腎上腺素之嚴重不良事件的情況下，被視為安全。
本發明之編號具體實例
特定而言，本發明係關於以下編號具體實例中定義的主題。應理解，此等編號具體實例服務的目的與出於定義本發明之主題之目的的申請專利範圍相同，包括若干請求項之組合可衍生的可能特徵組合，但編號具體實例中的主題不應解釋為所主張主題之一部分，除非此類主題已敍述或變得敍述於申請專利範圍中。
NE1. 一種包含nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6中之各者的組成物，其中該組成物的特徵為一或多個特徵a)至k)，其中該等特徵為：
a. 基本上不含分子質量≥700 kDa的花生蛋白質。分子質量可藉由分析規模的尺寸排阻HPLC測定；及/或
b. 可將該組成物之水性樣品負載至逆相HPLC管柱上且溶離，以便當藉由混合的等度與梯度溶離對該逆相HPLC管柱進行溶離時將nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6分離成可定量的多肽，該溶離包含將由0.1%三氟乙酸水溶液組成的溶離劑A與體積增加的溶離劑B混合，該溶離劑B由與0.1%三氟乙酸混合的乙腈組成；及/或
c. 基本上不含花生蛋白質，其因分子尺寸限制而不能負載於逆相HPLC管柱中及/或在該逆相HPLC管柱中分離。亦即，nAra h1、nAra h 2、n Ara h 3及nAra h 6較佳呈非變性的構形，諸如非聚集的構形；及/或
d. 基本上不含源自花生之蛋白質的高分子量複合物，其中該高分子複合物的特徵為存在於丟棄的溶離份中，其可如下獲得：用水溶劑自生花生仁(較佳為粉碎的生花生仁)中萃取花生蛋白質以獲得包含nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6中之各者的水性萃取物，隨後在7至9範圍內的pH下經由逐步的或連續的水性鹽梯度溶離對所萃取花生蛋白質之水性萃取物進行製備規模的陰離子交換層析，藉此溶離nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6中之各者，其中在nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6中之各者溶離之後，利用較高的鹽濃度繼續進行梯度溶離，其中該丟棄的溶離份為nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6藉由陰離子交換層析保留之後溶離的溶離份；及/或
e. 包含濃度受控制的nAra h 3及/或nAra h 2；及/或
f. 包含濃度受控制的nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3、nAra h 6中之各者；及/或
g. 藉由或可藉由包含以下步驟之方法獲得：i)用水溶劑自生花生仁、較佳自粉碎的生花生仁萃取花生蛋白質，以獲得包含nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6中之各者的水性萃取物；以及ii)藉由陰離子交換層析純化所萃取的蛋白質，該層析包含將該水性萃取物負載於陰離子交換材料上及利用鹽梯度溶離進行溶離以收集針對nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3或nAra h 6個別地富集的溶離份；以及iii)將針對nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6中之一或多者個別地富集的溶離份或其等分試樣合併，且較佳將比nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6之富集溶離份更晚溶離的溶離份丟棄；及/或
h. 藉由或可藉由包含以下步驟之方法獲得：
1)用水溶劑自生花生仁、較佳自粉碎的生花生仁萃取花生蛋白質，以獲得包含nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6中之各者的水性萃取物；及
2)在7至9範圍內的pH下，經由逐步的或連續的水性鹽梯度溶離對該水性萃取物進行陰離子交換層析，藉此將nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6中之各者溶離並收集至一或多個個別溶離份中；及
3)視需要收集來自該陰離子交換層析的流過物溶離份；及
4)在nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6中之各者溶離之後，視需要繼續進行逐步或連續的鹽梯度溶離，獲得欲丟棄的溶離份；及
5)將步驟2所得之溶離份或其等分試樣合併，視需要將步驟2與步驟3所得之溶離份或其等分試樣合併，以獲得該組成物；及/或
i. 藉由或可藉由包含以下步驟之方法獲得：
1)用水溶劑自生花生仁、較佳自粉碎的生花生仁萃取花生蛋白質，以獲得包含nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6中之各者的水性萃取物；及
2)在7至9範圍內的pH下，經由逐步或連續的水性鹽梯度溶離對該水性萃取物進行陰離子交換層析，藉此將nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6中之各者溶離並收集至針對nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3或nAra h 6個別地富集的溶離份中；
3)視需要收集來自該陰離子交換層析的流過物溶離份；及
4)將步驟2所得之溶離份或其等分試樣合併，視需要將步驟2與步驟3所得之溶離份或其等分試樣合併，以獲得該組成物；及/或
j. 包含各在0.5至2.0之間(諸如0.5與1.5之間)之範圍內的莫耳比nAra h 1:nAra h 2、nAra h 3:nAra h 2、nAra h 6:nAra h 2。花生蛋白質nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6中之各者可用水溶劑自生花生萃取。各過敏原的濃度可藉由分析規模的RP-HPLC及/或LC-MS/MS定量。為了將質量單位換算成莫耳濃度，可使用以下莫耳質量：Ara h 1使用68757 g/mol、Ara h 2使用17994 g/mol的莫耳質量、Ara h 3使用58600 g/mol的莫耳質量且Ara h 6使用14846 g/mol的莫耳質量；及/或
k. 與粉碎之生花生仁已經受水溶劑萃取的水性萃取物相比，每單位重量的總花生蛋白質富含全部量的選自nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6之水溶性花生蛋白質。
NE2. 根據編號具體實例NE1的組成物，其中選項a)的該分析規模尺寸排阻HPLC能夠藉由用pH在7至7.5範圍內的水性(磷酸鹽)緩衝生理鹽水溶離來分離指定尺寸的參考標準物甲狀腺球蛋白(670 kDa)、牛γ球蛋白(158 kDa)、雞卵白蛋白(44 kDa)、馬肌血球素(17 kDa)及維生素B12 (1.35 kDa)。
NE3. 根據編號具體實例NE1或NE2之組成物，其中選項a)之組成物基本上不含分子質量＞900 kDa、諸如＞800 kDa、諸如＞700 kDa的花生蛋白質，其中分子質量＞700 kDa的花生蛋白質係藉由對組成物之水性樣品執行分析規模的尺寸排阻HPLC方法來確定，該方法藉由用pH在7至7.5範圍內的水性緩衝(較佳為磷酸鹽緩衝)生理鹽水溶離而能夠分離指定尺寸的參考標準物甲狀腺球蛋白(670kDa)、牛γ球蛋白(158 kDa)、雞卵白蛋白(44 kDa)、馬肌血球素(17 kDa)及維生素B12 (1.35 kDa)且能夠確定所得層析圖基本上不含質量類似於或高於指定尺寸之參考標準物甲狀腺球蛋白(質量為670 kDa)的花生蛋白質溶離峰，且/或其中藉由對組成物之水性樣品進行天然凝膠電泳來確定分子質量＞700 kDa之花生蛋白質的存在。
NE4. 根據前述編號具體實例中之任一例的組成物，其中該組成物基本上不含分子質量＞650 kDa、較佳＞600 kDa、諸如＞550 kDa、＞500 kDa、＞450 kDa、＞450 kDa、＞400 kDa的花生蛋白質，該分子質量係藉由分析規模的尺寸排阻HPLC測定。
NE5. 根據前述編號具體實例中之任一例的組成物，其中在選項d)、g)、選項h)步驟1或選項i)步驟1中，用水溶劑自生花生仁萃取花生蛋白質包含用pH在6至9範圍內的緩衝水溶劑進行萃取，視需要用pH在6至9範圍內的緩衝生理鹽水水溶劑進行萃取。
NE6. 根據編號具體實例NE5之組成物，其中該緩衝水溶劑的pH在6.5至8.5範圍內，諸如在6.5至9範圍內，諸如在6.5至8範圍內，諸如在7至9範圍內，諸如在7至8.5範圍內，諸如在7至8.5範圍內，且較佳在7至8範圍內。
NE7. 根據編號具體實例NE5或NE6之組成物，其中該水溶劑包含10至200 mM之莫耳濃度範圍內、較佳在10至100 mM範圍內、諸如在10至50 mM範圍內的TRIS，且視需要包含含量在5至200 mM範圍內、較佳在10至100 mM範圍內、諸如在10至50 mM範圍內的NaCl或等效鹽。
NE8. 根據編號具體實例NE5至NE7中之任一例的組成物，其中該水溶劑為溶解於純化水中且pH經2.0 M NaOH調節至7.4的50 mM TRIS + 50 mM NaCl。
NE9. 根據前述編號具體實例中之任一例的組成物，其中選項d)、g)、選項h)步驟2或選項i)步驟2中的逐步或連續水性鹽梯度溶離係在7至8.5範圍內、較佳在7至8範圍內、諸如在7.2至7.8範圍內的pH下進行。
NE10. 根據前述編號具體實例中之任一例的組成物，其中選項d)、g)、選項h)步驟2或選項i)步驟2中的逐步或連續水性鹽梯度溶離係使用NaCl作為鹽或與NaCl等效的鹽進行。
NE11. 根據前述編號具體實例中之任一例的組成物，其中選項e)及/或f)中之nAra h及/或nAra h 2的受控制濃度係藉由定量免疫分析、分析規模的逆相HPLC或定量LC-MS/MS測定，較佳藉由分析規模的逆相HPLC測定。
NE12. 根據前述編號具體實例中之任一例的組成物，其中選項e)、f)及/或j)中之nAra h 3及/或nAra h 2的受控制濃度係藉由分析規模的逆相HPLC測定，包含利用混合的等度與梯度溶離對nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6進行分離，該梯度溶離包含將由0.1%三氟乙酸水溶液組成的溶離劑A與體積增加的由含有0.1%三氟乙酸之乙腈組成之溶離劑B混合及參照nAra h 3的純校準標準物定量，視需要藉由利用Ara h 3之莫耳質量58600 g/mol將組成物中之nAra h 3的重量濃度換算成nAra h 3的莫耳濃度。
NE13. 根據前述編號具體實例中之任一例的組成物，其中選項e)及/或f)中之nAra h 3的受控制濃度係在組成物中之花生蛋白質總質量的12重量%至70重量%範圍內，諸如在12%至60%範圍內，諸如在15%至60%範圍內，諸如在20%至60%範圍內，諸如在25至55%範圍內，諸如在15%至50%範圍內，諸如在25%至50%範圍內，諸如在17%至53%範圍內。
NE14. 根據前述編號具體實例中之任一例的組成物，其中選項e)及/或f)中之nAra h 3的受控制濃度係在組成物中之花生蛋白質總質量的18重量%至46重量%範圍內。
NE15. 根據前述編號具體實例中之任一例的組成物，其中選項e)及/或f)中之nAra h 3的受控制濃度係在組成物中之花生蛋白質總質量的21重量%至42重量%範圍內。
NE16. 根據前述編號具體實例中之任一例的組成物，其中選項e)及/或f)中之nAra h 3及/或nAra h 2的受控制濃度相對於花生蛋白質的總質量係在2至12 nmol/mg範圍內，諸如在3至11 nmol/mg範圍內，諸如在4至10 nmol/mg範圍內，諸如在4至9 nmol/mg範圍內，諸如在4至8 nmol/mg範圍內，諸如相對於組成物中之花生蛋白質總質量在2.8 nmol/mg至8.4 nmol/mg範圍內，較佳在3.1 nmol/mg至7.8 nmol/mg範圍內，諸如相對於組成物中之花生蛋白質總質量在3.6 nmol/mg至7.1 nmol/mg範圍內。
NE17. 根據前述編號具體實例中之任一例的組成物，其中選項f)中之nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6濃度係藉由定量免疫分析、分析規模的逆相HPLC或定量LC-MS/MS測定。
NE18. 根據前述編號具體實例中之任一例的組成物，其中選項f)中之nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6的濃度係藉由分析規模的逆相HPLC測定，包含利用混合的等度與梯度溶離對nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6進行分離，該梯度溶離包含將由0.1%三氟乙酸水溶液組成的溶離劑A與體積增加的由與0.1%三氟乙酸混合之乙腈組成之溶離劑B混合，可參照nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6之純校準標準物執行定量，視需要藉由利用Ara h 1的莫耳質量68757 g/mol、Ara h 2的莫耳質量17994 g/mol、Ara h 3的莫耳質量58600 g/mol及Ara h 6的莫耳質量14846 g/mol將組成物中之nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6的重量濃度換算成莫耳濃度。
NE19. 根據前述編號具體實例中之任一例的組成物，其中在選項f)中，nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6中之各者相對於該組成物中之花生蛋白質總質量的重量濃度就nAra h 1而言在20%至60%範圍內；就nAra h2而言在5%至15%範圍內(視需要為4%至20%)；就nAra h 3而言在15%至50%範圍內(視需要在20至60%範圍內)；就nAra h 6而言在4%至12%範圍內(視需要在4至18%範圍內)，限制條件為nAra h 1、nAra h 2、nAra 3與nAra 6之總和至少構成總花生蛋白質的75重量%，或其中nAra h 1相對於花生蛋白質總質量的重量濃度在20%至60%範圍內；nAra h 2的重量濃度在4%至20%範圍內；nAra h3的重量濃度在20%至60%範圍內且nAra h 6的重量濃度在4%至18%範圍內，限制條件為nAra h 1、nAra h 2、nAra 3及nAra 6之總和構成總花生蛋白質的至少75重量%，或其中nAra h 1相對於花生蛋白質總質量的重量濃度在25%至60%範圍內；nAra h2的重量濃度在6%至14%範圍內；nAra h3的重量濃度在20%至55%範圍內且nAra h 6的重量濃度在5%至15%範圍內，限制條件為nAra h 1、nAra h 2、nAra 3及nAra 6之總和至少構成總花生蛋白質的75重量%。
NE20. 根據前述編號具體實例中之任一例的組成物，其中在選項f)中，nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6中之各者相對於組成物中之花生蛋白質總質量的重量濃度就nAra h 1而言在21%至53%範圍內，就nAra h2而言在5.5%至14%範圍內，就nAra h 3而言在18%至46%範圍內，就nAra h 6而言在5%至11%範圍內，限制條件為nAra h 1、nAra h 2、nAra 3及nAra 6之總和至少構成總花生蛋白質的75重量%。
NE21. 根據前述編號具體實例中之任一例的組成物，其中在選項f)中，nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6中之各者相對於組成物中之花生蛋白質總質量的受控制重量濃度就nAra h 1而言在25%至50%範圍內，就nAra h2而言在6.5%至13%範圍內，就nAra h 3而言在21%至42%範圍內，就nAra h 6而言在5%至11%範圍內，限制條件為nAra h 1、nAra h 2、nAra 3及nAra 6之總和至少構成總花生蛋白質的75重量%。
NE22. 根據前述編號具體實例中之任一例的組成物，較佳根據編號具體實例NE19至NE21中之任一例的組成物，其中nAra h 1、nAra h 2、nAra 3及nAra 6之總和構成該組成物中之總花生蛋白質的至少75重量%，諸如至少80%，諸如至少85%，諸如至少90%，典型地，其中nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3與nAra h 6的組合構成組成物中之總花生蛋白質的最多98重量%、99重量%或100重量%，使得nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3與nAra h 6的組合在總花生蛋白質的75重量%至99重量%範圍內，較佳在75%至98%範圍內，諸如在80%至100%、80%至99%、80%至98%範圍內，諸如在85%至100%、85%至99%、85%至98%範圍內。
NE23. 根據前述編號具體實例中之任一例的組成物，其中在選項e)及a)中，nAra h 1、nAra h 3及nAra h 6中之各者(視需要，nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6中之各者)的濃度(諸如受控制濃度)相對於組成物中的花生蛋白質總質量係在2至12 nmol/mg範圍內，諸如在3至11 nmol/mg範圍內，諸如在3至10 nmol/mg範圍內，諸如在3至9 nmol/mg範圍內，諸如相對於組成物中的花生蛋白質總質量在2.8 nmol/mg至8.4 nmol/mg範圍內。視需要，配對nAra h 1:nAra h 2、nAra h 3:nAra h 2、nAra h 6:nAra h 2中之各者的莫耳比係在0.5至2.0範圍內，諸如在0.5至1.5範圍內。視需要其中藉由分析規模的RP-HPLC或定量免疫分析控制/測定濃度。
NE24. 根據前述編號具體實例中之任一例的組成物，其中在選項e)及a)中，nAra h 1、nAra h 3及nAra h 6中之各者(視需要，nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6中之各者)的濃度(諸如受控制濃度)相對於組成物中的花生蛋白質總質量係在3.1 nmol/mg至7.8 nmol/mg範圍內。視需要，配對nAra h 1:nAra h 2、nAra h 3:nAra h 2、nAra h 6:nAra h 2中之各者的莫耳比係在0.5至2.0範圍內，諸如在0.5至1.5範圍內。視需要其中藉由分析規模的RP-HPLC或定量免疫分析來控制/測定濃度。
NE25. 根據前述編號具體實例中之任一例的組成物，其中在選項e)及a)中，nAra h 1、nAra h 3及nAra h 6中之各者(視需要，nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6中之各者)的濃度(諸如受控制濃度)相對於組成物中的花生蛋白質總質量係在3.6 nmol/mg至7.1 nmol/mg範圍內且限制條件為配對nAra h 1:nAra h 2、nAra h 3:nAra h 2、nAra h 6:nAra h 2中之各者的莫耳比在0.5至2.0範圍內，諸如在0.5至1.5範圍內。視需要其中藉由分析規模的RP-HPLC或定量免疫分析來控制/測定濃度。
NE26. 根據編號具體實例NE23至NE25中之任一例的組成物，其中配對nAra h 1:nAra h 2、nAra h 3:nAra h 2、nAra h 6:nAra h 2中之各者的莫耳比係在0.6至1.4範圍內。
NE27. 根據編號具體實例NE23至NE26中之任一例的組成物，其中配對nAra h 1:nAra h 2、nAra h 3:nAra h 2、nAra h 6:nAra h 2中之各者的莫耳比係在0.7至1.3範圍內。
NE28. 根據前述編號具體實例中之任一例的組成物，其中h)及/或i)中之步驟2所得之個別溶離份中的nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6濃度較佳藉由分析規模的RP-HPLC或定量免疫分析加以測定/控制。
NE29. 根據前述編號具體實例中之任一例的組成物，其中選項h)及/或i)中之步驟2所得之溶離份係針對Ara h物種、依以下溶離次序富集：nAra h 6、nAra h 2、nAra h 1及nAra h 3。
NE30. 根據前述編號具體實例中之任一例的組成物，其中將選項h)步驟5及/或選項i)步驟4中的溶離份或其等分試樣合併，以使得配對nAra h 1:nAra h 2、nAra h3:nAra h 2、nAra h 6:nAra h 2中之各者的莫耳比在0.5至2.0範圍內，諸如在0.5至1.8範圍內，諸如在0.5至1.5範圍內，較佳在0.6至1.4範圍內，諸如在0.7至1.3範圍內。
NE31. 根據前述編號具體實例中之任一例的組成物，其中在選項j)中，配對nAra h 1:nAra h 2、nAra h3:nAra h 2、nAra h 6:nAra h 2中之各者的莫耳比在0.5至2.0範圍內，諸如在0.5至1.8範圍內，諸如在0.5至1.5範圍內，諸如在0.6至1.4範圍內，諸如在0.7至1.3範圍內。
NE32. 根據前述編號具體實例中之任一例的組成物，其中nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6中之各者包含其天然存在之同功型及/或天然存在之寡聚體構形。
NE33. 根據前述編號具體實例中之任一例的組成物，該組成物包含呈選自由以下者組成之群之構形的nAra h 3：單體nAra h 3、三聚體nAra h 3及六聚體nAra h 3，諸如其中nAra h 3係以單體、三聚體及六聚體nAra h 3之混合物存在，諸如主要以三聚體與六聚體nAra h 3之混合物存在，視需要其中nAra h 1主要以其三聚體構形存在。
NE34. 根據前述編號具體實例中之任一例的組成物，其不含包含nAra h 3多肽及/或nAra h 1多肽的聚集體，其中該等聚集體具有≥700 kDa的分子質量。
NE35. 根據前述編號具體實例中之任一例的組成物，其中nAra h 2之量係在組成物中之花生蛋白質總質量的4重量%至20重量%範圍內，諸如在4至18%範圍內，諸如在5至15%、5.5至14%範圍內，諸如在6.5%至13%範圍內，諸如在組成物中之花生蛋白質總質量的7重量%至12重量%範圍內。
NE36. 根據前述編號具體實例中之任一例的組成物，其中nAra h 1、nAra h 2、nAra 3及nAra 6之組合構成該組成物中之總花生蛋白質的至少75重量%，諸如至少80%，諸如至少90%，典型地，其中nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3與nAra h 6的組合構成組成物中之總花生蛋白質的最多98重量%、99重量%或100重量%，使得nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3與nAra h 6的組合構成組成物中之總花生蛋白質的75重量%至100重量%，諸如在總花生蛋白質之75重量%至99重量%範圍內，較佳在75%至98%範圍內，諸如在80%至100%、80%至99%、80%至98%範圍內，諸如在85%至100%、85%至99%、85%至98%範圍內。
NE37. 根據前述編號具體實例中之任一例的組成物，其中花生蛋白質的總質量係藉由胺基酸分析(AAA)或藉由布拉福蛋白質分析、使用牛血清白蛋白作為參考標準物(BCA)測定，較佳藉由胺基酸分析(AAA)測定。
NE38. 根據前述編號具體實例中之任一例的組成物，其進一步包含醫藥學上可接受之載劑、稀釋劑、賦形劑或媒劑。
NE39. 一種醫藥學上可接受之調配物，其中該調配物包含溶解於或分散於選自由以下者組成之群之載劑物質中的根據前述編號具體實例中之任一例的組成物：液體、半固體及固體載劑物質。
NE40. 根據編號具體實例NE39之醫藥學上可接受之調配物，其包含受控制量的nAra h 2，較佳分別為受控制量的nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6中之各者。
NE41. 根據編號具體實例NE39或NE40之醫藥學上可接受之調配物，其中該載劑為固體載劑物質，較佳為適用於形成舌下固體劑型(諸如舌下固體單位劑型)的固體載劑物質。
NE42. 根據編號具體實例NE41之醫藥學上可接受之調配物，其中該固體調配物為錠劑(壓製或非壓製)、薄膜、糊狀物或凍乾物(諸如單位劑量凍乾物)，較佳為舌下錠劑、舌下薄膜或舌下凍乾物(舌下單位劑量凍乾物)。
NE43. 根據編號具體實例NE41或NE42之醫藥學上可接受之調配物，其當暴露於人類唾液時快速分散，較佳其中快速分散的固體調配物在暴露於唾液之後的2分鐘內(諸如1.5、1或0.5分鐘內)崩解。
NE44. 根據編號具體實例NE39至NE43中之任一例的醫藥學上可接受之調配物，其中該載劑物質包含明膠，較佳為魚明膠。
NE45. 根據編號具體實例NE39至NE44中之任一例的醫藥學上可接受之調配物，其為單位劑型，較佳為舌下單位劑型。
NE46. 根據編號具體實例NE45之醫藥學上可接受之調配物，其中每單位劑型之花生蛋白質總量在0.1至5000 µg範圍內。
NE47. 根據編號具體實例NE46之醫藥學上可接受之調配物，其中每單位劑型之nAra h 2之量在0.01至500 µg範圍內。
NE48. 根據編號具體實例NE46至NE47中之任一例的醫藥學上可接受之調配物，其中每單位劑型的花生蛋白質總量為約0.1 µg、約0.5 µg、約1.0 µg、約1.5 µg、約2 µg、約2.5 µg、約3 µg、約3.5 µg、約4 µg、約4.5 µg、約5 µg、約5.5 µg、約6 µg、約6.5 µg、約7 µg、約7.5 µg、約8 µg、約8.5 µg、約9 µg、約9.5 µg、約10 µg、約10.5 µg、約11 µg、約11.5 µg、約12 µg、約12.5 µg、約13 µg、約13.5 µg、約14 µg、約14.5 µg、約15 µg、約15.5 µg、約16 µg、約16.5 µg、約17 µg、約17.5 µg、約18 µg、約18.5 µg、約19 µg、約19.5 µg、約20 µg、約25 µg、約30 µg、約35 µg、約40 µg、約45 µg、約50 µg、約55 µg、約60 µg、約65 µg、約70 µg、約75 µg、約80 µg、約85 µg、約90 µg、約95 µg、約100 µg、約105 µg、約110 µg、約115 µg、約120 µg、約125 µg、約130 µg、約135 µg、約140 µg、約145 µg、約150 µg、約155 µg、約160 µg、約165 µg、約170 µg、約175 µg、約180 µg、約185 µg、約190 µg、約195 µg、約200 µg、約205 µg、約210 µg、約215 µg、約220 µg、約225 µg、約230 µg、約235 µg、約240 µg、約245 µg、約250 µg、約255 µg、約260 µg、約265 µg、約270 µg、約275 µg、約280 µg、約285 µg、約290 µg、約295 µg、約300 µg、約305 µg、約310 µg、約315 µg、約320 µg、約325 µg、約330 µg、約335 µg、約340 µg、約345 µg、約350 µg、約355 µg、約360 µg、約365 µg、約370 µg、約375 µg、約380 µg、約385 µg、約390 µg、約395 µg、約400 µg、約405 µg、約410 µg、約415 µg、約420 µg、約425 µg、約430 µg、約435 µg、約440 µg、約445 µg、約450 µg、約455 µg、約460 µg、約465 µg、約470 µg、約475 µg、約480 µg、約485 µg、約490 µg、約495 µg、約500 µg、約505 µg、約510 µg、約515 µg、約520 µg、約525 µg、約530 µg、約535 µg、約540 µg、約545 µg、約550 µg、約555 µg、約560 µg、約565 µg、約570 µg、約575 µg、約580 µg、約585 µg、約590 µg、約595 µg、約600 µg、約605 µg、約610 µg、約615 µg、約620 µg、約625 µg、約630 µg、約635 µg、約640 µg、約645 µg、約650 µg、約655 µg、約660 µg、約665 µg、約670 µg、約675 µg、約680 µg、約685 µg、約690 µg、約695 µg、約700 µg、約705 µg、約710 µg、約715 µg、約720 µg、約725 µg、約730 µg、約735 µg、約740 µg、約745 µg、約750 µg、約755 µg、約760 µg、約765 µg、約770 µg、約775 µg、約780 µg、約785 µg、約790 µg、約795 µg、約800 µg、約805 µg、約810 µg、約815 µg、約820 µg、約825 µg、約830 µg、約835 µg、約840 µg、約845 µg、約850 µg、約855 µg、約860 µg、約865 µg、約870 µg、約875 µg、約880 µg、約885 µg、約890 µg、約895 µg、約900 µg、約905 µg、約910 µg、約915 µg、約920 µg、約925 µg、約930 µg、約935 µg、約940 µg、約945 µg、約950 µg、約955 µg、約960 µg、約965 µg、約970 µg、約975 µg、約980 µg、約985 µg、約990 µg、約995 µg、約1000 µg、約1050 µg、約1100 µg、約1150 µg、約1200 µg、約1250 µg、約1300 µg、約1350 µg、約1400 µg、約1450 µg、約1500 µg、約1550 µg、約1600 µg、約1650 µg、約1700 µg、約1750 µg、約1800 µg、約1850 µg、約1900 µg、約1950 µg、約2000 µg、約2050 µg、約2100 µg、約2150 µg、約2200 µg、約2250 µg、約2300 µg、約2350 µg、約2400 µg、約2450 µg、約2500 µg、約2550 µg、約2600 µg、約2650 µg、約2700 µg、約2750 µg、約2800 µg、約2850 µg、約2900 µg、約2950 µg、約3000 µg、約3050 µg、約3100 µg、約3150 µg、約3200 µg、約3250 µg、約3300 µg、約3350 µg、約3400 µg、約3450 µg、約3500 µg、約3550 µg、約3600 µg、約3650 µg、約3700 µg、約3750 µg、約3800 µg、約3850 µg、約3900 µg、約3950 µg、約4000 µg、約4050 µg、約4100 µg、約4150 µg、約4200 µg、約4250 µg、約4300 µg、約4350 µg、約4400 µg、約4450 µg、約4500 µg、約4550 µg、約4600 µg、約4650 µg、約4700 µg、約4750 µg、約4800 µg、約4850 µg、約4900 µg、約4950 µg或約5000 µg。
NE49. 根據編號具體實例NE46至NE48中之任一例的醫藥學上可接受之調配物，其中Ara h 2之量為約0.01 µg、約0.05 µg、約0.1 µg、約0.15 µg、約0.2 µg、約0.25 µg、約0.3 µg、約0.35 µg、約0.4 µg、約0.45 µg、約0.5 µg、約0.55 µg、約0.6 µg、約0.65 µg、約0.7 µg、約0.75 µg、約0.8 µg、約0.85 µg、約0.9 µg、約0.95 µg、約1.0 µg、約1.1 µg、約1.2 µg、約1.3 µg、約1.4 µg、約1.5 µg、約1.6 µg、約1.7 µg、約1.8 µg、約1.9 µg、約2.0 µg、約2.5 µg、約3 µg、約3.5 µg、約4 µg、約4.5 µg、約5 µg、約5.5 µg、約6 µg、約6.5 µg、約7 µg、約7.5 µg、約8 µg、約8.5 µg、約9 µg、約9.5 µg、約10 µg、約10.5 µg、約11 µg、約11.5 µg、約12 µg、約12.5 µg、約13 µg、約13.5 µg、約14 µg、約14.5 µg、約15 µg、約15.5 µg、約16 µg、約16.5 µg、約17 µg、約17.5 µg、約18 µg、約18.5 µg、約19 µg、約19.5 µg、約20 µg、約25 µg、約30 µg、約35 µg、約40 µg、約45 µg、約50 µg、約55 µg、約60 µg、約65 µg、約70 µg、約75 µg、約80 µg、約85 µg、約90 µg、約95 µg、約100 µg、約105 µg、約110 µg、約115 µg、約120 µg、約125 µg、約130 µg、約135 µg、約140 µg、約145 µg、約150 µg、約155 µg、約160 µg、約165 µg、約170 µg、約175 µg、約180 µg、約185 µg、約190 µg、約195 µg、約200 µg、約205 µg、約210 µg、約215 µg、約220 µg、約225 µg、約230 µg、約235 µg、約240 µg、約245 µg、約250 µg、約255 µg、約260 µg、約265 µg、約270 µg、約275 µg、約280 µg、約285 µg、約290 µg、約295 µg、約300 µg、約305 µg、約310 µg、約315 µg、約320 µg、約325 µg、約330 µg、約335 µg、約340 µg、約345 µg、約350 µg、約355 µg、約360 µg、約365 µg、約370 µg、約375 µg、約380 µg、約385 µg、約390 µg、約395 µg、約400 µg、約405 µg、約410 µg、約415 µg、約420 µg、約425 µg、約430 µg、約435 µg、約440 µg、約445 µg、約450 µg、約455 µg、約460 µg、約465 µg、約470 µg、約475 µg、約480 µg、約485 µg、約490 µg、約495 µg或約500 µg。
NE50. 根據編號具體實例NE39至NE49中之任一例的醫藥學上可接受之調配物，其中nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6之量如編號具體實例NE1至NE38中之任一例所定義。
NE51. 根據編號具體實例NE39至NE50中之任一例的醫藥學上可接受之調配物，其包含根據編號具體實例NE1至NE38中之任一例的組成物。
NE52. 根據編號具體實例NE1至NE38中之任一例的組成物或根據編號具體實例NE39至NE51中之任一例的醫藥學上可接受之調配物，其用作醫藥品。
NE53. 根據編號具體實例NE1至NE38中之任一例的組成物或根據編號具體實例NE39至NE51中之任一例的醫藥學上可接受之調配物，其用於治療人類以防花生過敏的方法中，視需要其中花生過敏的治療包含過敏原特異性免疫療法。
NE54. 根據編號具體實例NE53使用的組成物或醫藥調配物，其中過敏原特異性免疫療法包含複數次投予該組成物或調配物。
NE55. 根據編號具體實例NE54使用的組成物或醫藥調配物，其中該複數次投予為複數次間隔至少一天的投予，且其中該複數次投予較佳呈一次日劑量形式，諸如每日一次投予劑量。
NE56. 根據編號具體實例NE53至NE55中之任一例使用的組成物或醫藥調配物，其中過敏原特異性免疫療法包含投予複數次相同日劑量的花生蛋白質，視需要先投予複數次連續不同日劑量。
NE57. 根據編號具體實例NE53至NE56中之任一例使用的組成物或調配物，其中過敏原特異性免疫療法包含投予複數次連續不同日劑量的花生蛋白質，視需要再投予複數次相同日劑量。
NE58. 根據編號具體實例NE56至NE57中之任一例使用的組成物或調配物，其中複數個連續不同日劑量呈連續的日劑量形式，其中較早劑量不高於較晚劑量。
NE59. 根據編號具體實例NE58使用的組成物或調配物，其中各不同日劑量高於系列中的任何在前的劑量。
NE60. 根據編號具體實例NE56至NE59中之任一例使用的組成物或調配物，其中不同日劑量的次數係選自2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29及30次連續不同的不同日劑量。
NE61. 根據編號具體實例NE53至NE60中之任一例使用的組成物或調配物，其中花生蛋白質的最低總日劑量為0.1 µg，且其中最高總日劑量為5000 µg。
NE62. 根據編號具體實例56至62中之任一例使用的組成物或調配物，其中最低日劑量介於0.1 µg與200 µg花生蛋白質之間，諸如約0.1 µg、約0.5 µg、約1 µg、約1.5 µg、約2 µg、約2.5 µg、約3 µg、約3.5 µg、約4 µg、約4.5 µg、約5 µg、約5.5 µg、約6 µg、約6.5 µg、約7 µg、約7.5 µg、約8 µg、約8.5 µg、約9 µg、約9.5 µg、約10 µg、約11 µg、約12 µg、約13 µg、約14 µg、約15 µg、約16 µg、約17 µg、約18 µg、約19 µg、約20 µg、約21 µg、約22 µg、約23 µg、約24 µg、約25 µg、約26 µg、約27 µg、約28 µg、約29 µg、約30 µg、約31 µg、約32 µg、約33 µg、約34 µg、約35 µg、約36 µg、約37 µg、約38 µg、約39 µg、約40 µg、約41 µg、約42 µg、約43 µg、約44 µg、約45 µg、約46 µg、約47 µg、約48 µg、約49 µg、約50 µg、約51 µg、約52 µg、約53 µg、約54 µg、約55 µg、約56 µg、約57 µg、約58 µg、約59 µg、約60 µg、約61 µg、約62 µg、約63 µg、約64 µg、約65 µg、約66 µg、約67 µg、約68 µg、約69 µg、約70 µg、約71 µg、約72 µg、約73 µg、約74 µg、約75 µg、約76 µg、約77 µg、約78 µg、約79 µg、約80 µg、約81 µg、約82 µg、約83 µg、約84 µg、約85 µg、約86 µg、約87 µg、約88 µg、約89 µg、約90 µg、約91 µg、約92 µg、約93 µg、約94 µg、約95 µg、約96 µg、約97 µg、約98 µg、約99 µg、約100 µg、約101 µg、約102 µg、約103 µg、約104 µg、約105 µg、約106 µg、約107 µg、約108 µg、約109 µg、約110 µg、約111 µg、約112 µg、約113 µg、約114 µg、約115 µg、約116 µg、約117 µg、約118 µg、約119 µg、約120 µg、約121 µg、約122 µg、約123 µg、約124 µg、約125 µg、約126 µg、約127 µg、約128 µg、約129 µg、約130 µg、約131 µg、約132 µg、約133 µg、約134 µg、約135 µg、約136 µg、約137 µg、約138 µg、約139 µg、約140 µg、約141 µg、約142 µg、約143 µg、約144 µg、約145 µg、約146 µg、約147 µg、約148 µg、約149 µg、約150 µg、約151 µg、約152 µg、約153 µg、約154 µg、約155 µg、約156 µg、約157 µg、約158 µg、約159 µg、約160 µg、約161 µg、約162 µg、約163 µg、約164 µg、約165 µg、約166 µg、約167 µg、約168 µg、約169 µg、約170 µg、約171 µg、約172 µg、約173 µg、約174 µg、約175 µg、約176 µg、約177 µg、約178 µg、約179 µg、約180 µg、約181 µg、約182 µg、約183 µg、約184 µg、約185 µg、約186 µg、約187 µg、約188 µg、約189 µg、約190 µg、約191 µg、約192 µg、約193 µg、約194 µg、約195 µg、約196 µg、約197 µg、約198 µg、約199 µg及約200 µg。
NE63. 根據編號具體實例NE53至NE62中之任一例使用的組成物或調配物，其中最高日劑量介於300 µg與5,000 µg花生蛋白質之間，諸如約300 µg、約310 µg、約320 µg、約330 µg、約340 µg、約350 µg、約360 µg、約370 µg、約380 µg、約390 µg、約400 µg、約410 µg、約420 µg、約430 µg、約440 µg、約450 µg、約460 µg、約470 µg、約480 µg、約490 µg、約500 µg、約510 µg、約520 µg、約530 µg、約540 µg、約550 µg、約560 µg、約570 µg、約580 µg、約590 µg、約600 µg、約610 µg、約620 µg、約630 µg、約640 µg、約650 µg、約660 µg、約670 µg、約680 µg、約690 µg、約700 µg、約710 µg、約720 µg、約730 µg、約740 µg、約750 µg、約760 µg、約770 µg、約780 µg、約790 µg、約800 µg、約810 µg、約820 µg、約830 µg、約840 µg、約850 µg、約860 µg、約870 µg、約880 µg、約890 µg、約900 µg、約910 µg、約920 µg、約930 µg、約940 µg、約950 µg、約960 µg、約970 µg、約980 µg、約990 µg、約1000 µg、約1010 µg、約1020 µg、約1030 µg、約1040 µg、約1050 µg、約1060 µg、約1070 µg、約1080 µg、約1090 µg、約1100 µg、約1110 µg、約1120 µg、約1130 µg、約1140 µg、約1150 µg、約1160 µg、約1170 µg、約1180 µg、約1190 µg、約1200 µg、約1210 µg、約1220 µg、約1230 µg、約1240 µg、約1250 µg、約1260 µg、約1270 µg、約1280 µg、約1290 µg、約1300 µg、約1310 µg、約1320 µg、約1330 µg、約1340 µg、約1350 µg、約1360 µg、約1370 µg、約1380 µg、約1390 µg、約1400 µg、約1410 µg、約1420 µg、約1430 µg、約1440 µg、約1450 µg、約1460 µg、約1470 µg、約1480 µg、約1490 µg、約1500 µg、約1510 µg、約1520 µg、約1530 µg、約1540 µg、約1550 µg、約1560 µg、約1570 µg、約1580 µg、約1590 µg、約1600 µg、約1610 µg、約1620 µg、約1630 µg、約1640 µg、約1650 µg、約1660 µg、約1670 µg、約1680 µg、約1690 µg、約1700 µg、約1710 µg、約1720 µg、約1730 µg、約1740 µg、約1750 µg、約1760 µg、約1770 µg、約1780 µg、約1790 µg、約1800 µg、約1810 µg、約1820 µg、約1830 µg、約1840 µg、約1850 µg、約1860 µg、約1870 µg、約1880 µg、約1890 µg、約1900 µg、約1910 µg、約1920 µg、約1930 µg、約1940 µg、約1950 µg、約1960 µg、約1970 µg、約1980 µg、約1990 µg、約2000 µg、約2010 µg、約2020 µg、約2030 µg、約2040 µg、約2050 µg、約2060 µg、約2070 µg、約2080 µg、約2090 µg、約2100 µg、約2110 µg、約2120 µg、約2130 µg、約2140 µg、約2150 µg、約2160 µg、約2170 µg、約2180 µg、約2190 µg、約2200 µg、約2210 µg、約2220 µg、約2230 µg、約2240 µg、約2250 µg、約2260 µg、約2270 µg、約2280 µg、約2290 µg、約2300 µg、約2310 µg、約2320 µg、約2330 µg、約2340 µg、約2350 µg、約2360 µg、約2370 µg、約2380 µg、約2390 µg、約2400 µg、約2410 µg、約2420 µg、約2430 µg、約2440 µg、約2450 µg、約2460 µg、約2470 µg、約2480 µg、約2490 µg、約2500 µg、約2510 µg、約2520 µg、約2530 µg、約2540 µg、約2550 µg、約2560 µg、約2570 µg、約2580 µg、約2590 µg、約2600 µg、約2610 µg、約2620 µg、約2630 µg、約2640 µg、約2650 µg、約2660 µg、約2670 µg、約2680 µg、約2690 µg、約2700 µg、約2710 µg、約2720 µg、約2730 µg、約2740 µg、約2750 µg、約2760 µg、約2770 µg、約2780 µg、約2790 µg、約2800 µg、約2810 µg、約2820 µg、約2830 µg、約2840 µg、約2850 µg、約2860 µg、約2870 µg、約2880 µg、約2890 µg、約2900 µg、約2910 µg、約2920 µg、約2930 µg、約2940 µg、約2950 µg、約2960 µg、約2970 µg、約2980 µg、約2990 µg、約3000 µg、約3010 µg、約3020 µg、約3030 µg、約3040 µg、約3050 µg、約3060 µg、約3070 µg、約3080 µg、約3090 µg、約3100 µg、約3110 µg、約3120 µg、約3130 µg、約3140 µg、約3150 µg、約3160 µg、約3170 µg、約3180 µg、約3190 µg、約3200 µg、約3210 µg、約3220 µg、約3230 µg、約3240 µg、約3250 µg、約3260 µg、約3270 µg、約3280 µg、約3290 µg、約3300 µg、約3310 µg、約3320 µg、約3330 µg、約3340 µg、約3350 µg、約3360 µg、約3370 µg、約3380 µg、約3390 µg、約3400 µg、約3410 µg、約3420 µg、約3430 µg、約3440 µg、約3450 µg、約3460 µg、約3470 µg、約3480 µg、約3490 µg、約3500 µg、約3510 µg、約3520 µg、約3530 µg、約3540 µg、約3550 µg、約3560 µg、約3570 µg、約3580 µg、約3590 µg、約3600 µg、約3610 µg、約3620 µg、約3630 µg、約3640 µg、約3650 µg、約3660 µg、約3670 µg、約3680 µg、約3690 µg、約3700 µg、約3710 µg、約3720 µg、約3730 µg、約3740 µg、約3750 µg、約3760 µg、約3770 µg、約3780 µg、約3790 µg、約3800 µg、約3810 µg、約3820 µg、約3830 µg、約3840 µg、約3850 µg、約3860 µg、約3870 µg、約3880 µg、約3890 µg、約3900 µg、約3910 µg、約3920 µg、約3930 µg、約3940 µg、約3950 µg、約3960 µg、約3970 µg、約3980 µg、約3990 µg、約4000 µg、約4010 µg、約4020 µg、約4030 µg、約4040 µg、約4050 µg、約4060 µg、約4070 µg、約4080 µg、約4090 µg、約4100 µg、約4110 µg、約4120 µg、約4130 µg、約4140 µg、約4150 µg、約4160 µg、約4170 µg、約4180 µg、約4190 µg、約4200 µg、約4210 µg、約4220 µg、約4230 µg、約4240 µg、約4250 µg、約4260 µg、約4270 µg、約4280 µg、約4290 µg、約4300 µg、約4310 µg、約4320 µg、約4330 µg、約4340 µg、約4350 µg、約4360 µg、約4370 µg、約4380 µg、約4390 µg、約4400 µg、約4410 µg、約4420 µg、約4430 µg、約4440 µg、約4450 µg、約4460 µg、約4470 µg、約4480 µg、約4490 µg、約4500 µg、約4510 µg、約4520 µg、約4530 µg、約4540 µg、約4550 µg、約4560 µg、約4570 µg、約4580 µg、約4590 µg、約4600 µg、約4610 µg、約4620 µg、約4630 µg、約4640 µg、約4650 µg、約4660 µg、約4670 µg、約4680 µg、約4690 µg、約4700 µg、約4710 µg、約4720 µg、約4730 µg、約4740 µg、約4750 µg、約4760 µg、約4770 µg、約4780 µg、約4790 µg、約4800 µg、約4810 µg、約4820 µg、約4830 µg、約4840 µg、約4850 µg、約4860 µg、約4870 µg、約4880 µg、約4890 µg、約4900 µg、約4910 µg、約4920 µg、約4930 µg、約4940 µg、約4950 µg、約4960 µg、約4970 µg、約4980 µg、約4990 µg及約5000 µg。
NE64. 根據編號具體實例NE53至NE63中之任一例使用的組成物或醫藥調配物，其包含先投予一種第一系列的複數次相同日劑量，再投予至少一種另一系列的複數次相同日劑量，該至少一種另一系列的日劑量不同於第一系列的日劑量且較佳高於第一系列的日劑量。
NE65. 根據編號具體實例NE64使用的組成物或醫藥調配物，其中複數個系列的相同日劑量係以過敏原特異性免疫療法的劑量增加期投予，其中一系列相同日劑量中的日劑量高於任何在前的系列之相同日劑量中的日劑量。
NE66. 根據編號具體實例NE65使用的組成物或醫藥調配物，其中該複數個系列係選自2、3、4、5、6、7、8、9及10個系列。
NE67. 根據編號具體實例NE64至NE66中之任一例使用的組成物或醫藥調配物，其中一個系列的持續時間在6至30天範圍內，諸如在6至22天範圍內，例如在6至16天範圍內，且較佳為約14天。
NE68. 根據編號具體實例NE64至NE67中之任一例使用的組成物或醫藥調配物，其中在劑量增加期完成之後，以維持期繼續進行過敏原特異性免疫療法，該維持期包含投予複數次日劑量，該等日劑量與劑量增加期之最後一個系列的日劑量相同或在劑量增加期之最後一個系列之日劑量的½至9/10範圍內。
NE69. 根據編號具體實例NE53至NE68中之任一例使用的組成物或醫藥調配物，其中該過敏原特異性免疫療法包含投予至口腔黏膜，較佳藉由舌下投予。
NE70. 一種用於製備包含nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6中之兩者或更多者之組成物的方法，該方法包含提供1)如下獲得的花生蛋白質萃取物：用水溶劑萃取生花生仁以獲得包含nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6中之各者的水性萃取物；以及2)在7至9範圍內的pH下，經由逐步或連續的水性鹽梯度溶離對該水性萃取物進行陰離子交換層析，藉此將nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6中之各者溶離並收集至針對nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3或nAra h 6個別地富集的溶離份中；3)視需要收集來自該陰離子交換層析的流過物溶離份；以及4)將步驟2或組合的步驟2與步驟3所得之兩個或更多個溶離份或其等分試樣合併，以獲得包含nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6中之至少兩者的該花生蛋白質組成物。較佳地，含有分子質量高之花生蛋白質的溶離份予以丟棄。
NE71. 根據編號具體實例NE70之方法，其中收集個別地富含nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6的四個溶離份且其中合併該等四個溶離份或其等分試樣提供包含nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6中之各者的組成物。
NE72. 根據編號具體實例NE70或NE71之方法，其中藉由用pH在6至9範圍內的緩衝水溶劑、視需要用pH在6至9範圍內的緩衝生理鹽水水溶劑自生花生仁萃取花生蛋白質而獲得溶液。
NE73. 根據編號具體實例NE72之方法，其中該緩衝水溶劑的pH在6.5至8.5範圍內，諸如在6.5至9範圍內，諸如在6.5至8範圍內，諸如在7至9範圍內，諸如在7至8.5範圍內，諸如在7至8.5範圍內，且較佳在7至8範圍內。
NE74. 根據編號具體實例NE70至NE73之方法，其中藉由陰離子交換層析將溶液分級分離包含在7至9範圍內的pH下進行逐步或連續的水性鹽梯度溶離，藉此將nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6溶離並收集至至少兩個個別溶離份中，且其中pH較佳在7至8.5範圍內，較佳在7至8範圍內，諸如在7.2至7.8範圍內。
NE75. 根據編號具體實例NE70至NE74之方法，其中至少兩個溶離份中之四種過敏原nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6的濃度係藉由RP-HPLC定量，以便將至少兩個溶離份之等分試樣合併，以獲得含有兩種或更多種花生過敏原的組成物，該組成物含有受控制量或預選量之四種過敏原中之兩者或更多者。
NE76. 根據編號具體實例NE70至NE75之方法，其中該方法包含以下步驟：
1)用水溶劑自生花生仁萃取花生蛋白質；
2)在7至9範圍內的pH下，經由逐步或連續的水性鹽梯度溶離對所萃取的該蛋白質進行陰離子交換層析，藉此將nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6中之各者溶離並收集至個別溶離份中；
3)視需要收集來自該陰離子交換層析的流過物溶離份；及
4)將步驟2及視需要步驟3所得之整個溶離份或各溶離份之等分試樣合併，以獲得包含nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6中之各者的組成物。
NE77. 根據編號具體實例NE76之方法，其中步驟2之溶離份中之四種過敏原nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6的濃度係藉由RP-HPLC定量，以便將溶離份之等分試樣合併，以獲得含有四種花生過敏原的組成物，該組成物含有受控制量或預選量的四種過敏原。
NE78. 根據編號具體實例NE70至NE77之方法，其中將溶離份或其等分試樣合併，以獲得組成物中包含nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3、nAra h 6中之各者的組成物，限制條件為配對nAra h 1:nAra h 2、nAra h 3:nAra h 2、nAra h 6:nAra h 2中之各者的莫耳比當藉由分析規模的RP-HPLC測定時在0.5至1.5範圍內，各對之莫耳比較佳在0.6至1.4範圍內，諸如在0.7至1.3範圍內。
NE79. 根據編號具體實例NE70至NE78之方法，其中藉由將比nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6之富集溶離份溶離遲的溶離份丟棄來丟棄含有分子質量高之花生蛋白質的溶離份。
NE80. 根據編號具體實例NE72或NE79中之任一例的方法，其中該水溶劑包含10至200 mM之莫耳濃度範圍內、較佳在10至100 mM範圍內、諸如在10至50 mM範圍內的TRIS，且視需要包含含量在5至200 mM範圍內、較佳在10至100 mM、10至50 mM範圍內的TRIS。
NE81. 根據編號具體實例NE74至NE80中之任一例的方法，其中逐步或連續的水性鹽梯度溶離係使用NaCl作為鹽或與NaCl等效的鹽進行。
NE82. 一種套組，其包含含有複數個分隔隔室的密封包裝，各隔室包含根據編號具體實例NE41至NE51中之任一例之醫藥學上可接受之調配物的單位劑型，其中至少一個單位劑型包含一量之總花生過敏原，該量不同於套組中之另一單位劑型中的量。
NE83. 根據編號具體實例NE82之套組，其中至少一次劑量為唯一的，且其中單位劑量較佳不相同。
NE84. 根據編號具體實例NE82之套組，其中第一複數個單位劑量相同，且其中至少一其他複數個單位劑量相同，但高於第一複數個單位劑量中的單位劑量。
NE85. 根據編號具體實例NE84之套組，其包含至少3種複數個相同單位劑量，各包含與任一其他複數個單位劑量中之單位劑量不同的單位劑量。
NE86. 根據編號具體實例NE85之套組，其中該等至少3種複數係選自3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14及15。
NE87. 根據編號具體實例83至87之套組，其中各單位劑型中之花生蛋白質之量如編號具體實例NE61至NE63中之任一例中關於日劑量所定義。
NE88. 一種治療人類以防花生過敏的方法，諸如減輕花生過敏及/或花生過敏原誘導的急性過敏，諸如執行花生過敏原特異性免疫療法，該方法包含在延長的時段內投予至多一次日劑量的根據編號具體實例NE1至NE38中之任一例之組成物或根據編號具體實例NE39至NE53中之任一例之醫藥學上可接受之調配物。
NE89. 根據編號具體實例NE88之方法，其中投予至口腔黏膜，諸如投予舌下黏膜。
NE90. 根據編號具體實例NE88或NE89之方法，其包含多次每日投予不同劑量的花生過敏原，視需要再多次每日投予相同日劑量的花生過敏原。
NE91. 根據編號具體實例NE88至NE90中之任一例的方法，其包含多次每日投予相同劑量的花生過敏原，視需要先多次每日投予不同劑量的花生過敏原。
NE92. 根據編號具體實例NE91之方法，其包含投予複數個系列之相同日劑量的花生過敏原，其中至少一個系列中的日劑量與另一系列中的日劑量不同。
NE93. 根據編號具體實例NE92之方法，其中複數個系列中之各者包含與複數個系列中之任何其他系列之劑量不同的日劑量，且其中較早系列之後的各系列包含高於較早系列的劑量。
NE94. 根據編號具體實例NE92至NE93中之任一例的方法，其中該複數個系列係由2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15個系列構成。
NE95. 一種治療人類以防花生過敏的方法，諸如用於減輕人類個體之花生過敏及/或花生過敏原誘導之急性過敏，諸如藉由過敏原特異性免疫療法來治療，該方法包含劑量增加期及視需要存在的維持期，其中劑量增加期包含將多個連續系列之日劑量的花生蛋白質組成物投予至口腔黏膜，其中各系列內的日劑量相同且其中任何在前的系列中的劑量低於後續系列且其中各系列的持續時間在6至30天範圍內；且其中
● 第一系列投予的日劑量含有總量在0.1 µg至200 µg範圍內的花生蛋白質；
● 最後一個系列的日劑量含有總量在300 µg至5000 µg範圍內的花生蛋白質；及
● 其中系列的數目在2至9範圍內，諸如在3至7範圍內，尤其諸如3、4、5、6、7、8或9，較佳為3、4或5；
● 較佳地，其中用水溶劑自生花生仁萃取或可萃取花生蛋白質且花生蛋白質包含nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6中之各者。
NE96. 根據編號具體實例NE88至NE95中之任一例的方法，其中配對nAra h 1:nAra h 2、nAra h 3:nAra h 2及nAra h 6:nAra h 2中之各者的莫耳濃度比係在0.5至2.0範圍內，諸如在0.5至1.5或更窄範圍內，例如在0.6至1.4、諸如0.7至1.3範圍內。nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6中之各者的莫耳濃度係以該等過敏原中之各者之單體多肽構形的濃度表示。
NE97. 根據編號具體實例NE88至NE96中之任一例的方法，其中該花生蛋白質基本上不含具有至少700 kDa之分子質量的花生蛋白質。
NE98. 根據編號具體實例NE88至NE97中之任一者的方法，其中該等花生蛋白質包含含量在50至150 µg/mg花生蛋白質範圍內的nAra h 2。
NE99. 根據編號具體實例NE88至NE98中之任一例的方法，其中該花生蛋白質包含含量在160至500 µg/mg花生範圍內的nAra h 3。
NE100. 根據編號具體實例NE88至NE99中之任一例的方法，其中nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h6的組合構成該花生蛋白質的至少75重量%。
NE101. 根據編號具體實例NE88至NE100中之任一例的方法，其中該花生蛋白質組成物為根據編號具體實例1至NE38中之任一例的組成物或根據編號具體實例NE39至NE51中之任一例的醫藥學上可接受之調配物。
NE102. 根據編號具體實例NE88至NE101中之任一例的方法，其中若投予系列的相同劑量，則該系列各具有10至21天的持續時間，較佳約14天。
NE103. 根據編號具體實例NE88至NE102中之任一例的方法，其中若投予系列的相同劑量，則第一系列的日劑量如編號具體實例NE62中所定義。
NE104. 根據編號具體實例NE103之方法，其中最後一個系列的日劑量如編號具體實例NE63中所定義。
NE105. 根據編號具體實例NE88至NE104中之任一例的方法，其中若投予系列的相同劑量，則比第一系列遲之系列的日劑量相較於相鄰在前的系列的日劑量增加2至4倍，諸如3至3.5倍，諸如2至3倍。
NE106. 根據編號具體實例NE105之方法，其中第一系列的日劑量為約1 µg且最後一個系列的日劑量為約4320 µg，且系列的數目為9，第一系列與最後一個系列之間7個系列的劑量依遞增次序分別為約3 µg、約10 µg、約40 µg、約120 µg、約360 µg、約1080 µg及約2160 µg。
NE107. 根據編號具體實例NE105之方法，其中第一系列的日劑量為約3 µg且最後一個系列的日劑量為約4320 µg，且系列的數目為8，第一系列與最後一個系列之間6個系列的劑量依遞增次序分別為約10 µg、約40 µg、約120 µg、約360 µg、約1080 µg及約2160 µg。
NE108. 根據編號具體實例NE105之方法，其中第一系列的日劑量為約10 µg且最後一個系列的日劑量為約4320 µg，且系列的數目為7，第一系列與最後一個系列之間5個系列的劑量依遞增次序分別為約40 µg、約120 µg、約360 µg、約1080 µg及約2160 µg。
NE109. 根據編號具體實例NE105之方法，其中第一系列的日劑量為約40 µg且最後一個系列的日劑量為約4320 µg，且系列的數目為6，第一系列與最後一個系列之間4個系列的劑量依遞增次序分別為約120 µg、約360 µg、約1080 µg及約2160 µg。
NE110. 根據編號具體實例NE105之方法，其中第一系列的日劑量為約120 µg且最後一個系列的日劑量為約4320 µg，且系列的數目為5，第一系列與最後一個系列之間3個系列的劑量依遞增次序分別為約360 µg、約1080 µg及約2160 µg。
NE111. 根據編號具體實例NE105之方法，其中第一系列的日劑量為約1 µg且最後一個系列的日劑量為約2160 µg，且系列的數目為8，第一系列與最後一個系列之間6個系列的劑量依遞增次序分別為約3 µg、約10 µg、約40 µg、約120 µg、約360 µg及約1080 µg。
NE112. 根據編號具體實例NE105之方法，其中第一系列的日劑量為約3 µg且最後一個系列的日劑量為約2160 µg，且系列的數目為7，第一系列與最後一個系列之間5個系列的劑量依遞增次序分別為約10 µg、約40 µg、約120 µg、約360 µg及約1080 µg。
NE113. 根據編號具體實例NE105之方法，其中第一系列的日劑量為約10 µg且最後一個系列的日劑量為約2160 µg，且系列的數目為6，第一系列與最後一個系列之間4個系列的劑量依遞增次序分別為約40 µg、約120 µg、約360 µg及約1080 µg。
NE114. 根據編號具體實例NE105之方法，其中第一系列的日劑量為約40 µg且最後一個系列的日劑量為約2160 µg，且系列的數目為5，第一系列與最後一個系列之間3個系列的劑量依遞增次序分別為約120 µg、約360 µg及約1080 µg。
NE115. 根據編號具體實例NE105之方法，其中第一系列的日劑量為約120 µg且最後一個系列的日劑量為約2160 µg，且系列的數目為4，第一系列與最後一個系列之間2個系列的劑量依遞增次序分別為約360 µg及約1080 µg。
NE116. 根據編號具體實例NE105之方法，其中第一系列的日劑量為約1 µg且最後一個系列的日劑量為約1080 µg，且系列的數目為7，第一系列與最後一個系列之間5個系列的劑量依遞增次序分別為約3 µg、約10 µg、約40 µg、約120 µg及約360 µg。
NE117. 根據編號具體實例NE105之方法，其中第一系列的日劑量為約3 µg且最後一個系列的日劑量為約1080 µg，且系列的數目為6，第一系列與最後一個系列之間4個系列的劑量依遞增次序分別為約10 µg、約40 µg、約120 µg及約360 µg。
NE118. 根據編號具體實例NE105之方法，其中第一系列的日劑量為約10 µg且最後一個系列的日劑量為約1080 µg，且系列的數目為5，第一系列與最後一個系列之間3個系列的劑量依遞增次序分別為約40 µg、約120 µg及約360 µg。
NE119. 根據編號具體實例NE105之方法，其中第一系列的日劑量為約40 µg且最後一個系列的日劑量為約1080 µg，且系列的數目為4，第一系列與最後一個系列之間2個系列的劑量依遞增次序分別為約120 µg及約360 µg。
NE120. 根據編號具體實例NE105之方法，其中第一系列的日劑量為約120 µg且最後一個系列的日劑量為約1080 µg，且系列的數目為3，第一系列與最後一個系列之間1個系列的劑量為約360 µg。
NE121. 根據編號具體實例NE88至NE120中之任一例的方法，其中投予至口腔黏膜係藉由口頰或舌下投予達成，較佳為舌下投予。
NE122. 根據編號具體實例NE88至NE121中之任一例的方法，其包含維持期，該維持期包含以至少一天間隔複數次投予花生蛋白質劑至口腔黏膜，較佳為舌下黏膜。
NE123. 根據編號具體實例NE122的方法，其中維持期的總蛋白質劑量與任何最後一個系列投予的日劑量相同或在任何最後一個系列之日劑量的0.5至0.9範圍內。
NE124. 根據編號具體實例NE88至NE123中之任一例的方法，其中人類在劑量增加期完成之後，在口服食物攻毒測試中能夠耐受至少300 mg花生蛋白質，諸如至少400 mg、500 mg、600 mg、700 mg、800 mg、1000 mg、1200 mg、1500 mg、2000 mg、2500 mg、3000 mg、4000 mg、5000 mg或6000 mg花生蛋白質。
NE125. 根據編號具體實例NE88至NE124中之任一例的方法，其中人類在劑量增加期及至少六個月的維持期完成之後，在口服食物攻毒測試中能夠耐受至少300 mg花生蛋白質，諸如至少400 mg、500 mg、600 mg、700 mg、800 mg、1000 mg、1200 mg、1500 mg、2000 mg、2500 mg、3000 mg、4000 mg、5000 mg或6000 mg花生蛋白質。
NE126. 根據編號具體實例NE1至NE38中之任一例的組成物或根據編號具體實例NE39至NE52中之任一例的醫藥學上可接受之調配物，其用於根據編號具體實例NE88至NE125中之任一例的方法。
NE127. 根據編號具體實例NE53至NE69中之任一例使用的組成物或調配物，其中減輕花生過敏及/或急性過敏的方法與意外暴露於花生或含有花生的產品有關。
NE128. 根據編號具體實例NE53至NE69及NE127中之任一例使用的組成物或調配物，其中減輕花生過敏的方法包含誘導針對一或多種花生過敏原、一或多個花生、花生蛋白質或含花生蛋白質產品的耐受性。
NE129. 根據編號具體實例NE1278之組成物或調配物，其中誘導耐受性包含對攝入或暴露於至少600 mg花生蛋白質的耐受性，例如其中誘導耐受性包含在口服食物攻毒測試中對至少600 mg花生蛋白質的耐受性。
實施例1
控制過敏原概況及定量過敏原的方法
該實施例係關於用於控制過敏原概況及定量下述實施例中所述之花生組成物中之四種主要過敏原之量的方法。
分析規模的逆相 HPLC (RP-HPLC) 方法聯合 UV 偵測
開發用於控制過敏原概況及用於定量組成物中之主要花生過敏原Ara h 1、2、3及6中之各者之含量的RP-HPLC方法。選擇逆相C4配位體作為HPLC管柱材料，以便基於尺寸、疏水性及等電點最佳化蛋白質的分離。C4配位體的保持力小於傳統C18相，且將最小化蛋白質騰帶、增加蛋白質回收及改良峰容量。
使用以下條件：
管柱： Waters ACQUITY UPLC BEH300 C4，300 Å，1.7 µm，150x2.1 mm，在60℃的溫度下操作。
偵測： 210 nm或280 nm下的UV吸光度。
標準： 利用多步驟純化，自栽培品種變異體Runner生花生純化四種主要花生過敏原中之各者，以獲得nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6之各別純溶離份，如下文所述。
溶離： 使用兩種移動相A (含有0.1%三氟乙酸的水)及B (含有0.1%三氟乙酸的乙腈)，施加混合的等度與梯度溶離。
使用兩種不同溶離特徵：長運行(86分鐘)或短運行(29分鐘)。長運行溶離係藉由2至19% B之初始梯度混合、在0.4 ml/min流速下執行，以溶離弱結合至管柱的化合物。此等化合物在19% B等度溶離。流速接著降至0.1 ml/min且每分鐘增加1%的19-32% B梯度用於以良好解析度溶離Ara h 2及Ara h 6。接著繼續溶離，其中溶離劑B之百分比以每分鐘0.1%自32%提高至37%，以溶離Ara h 1及Ara h 3。繼續與B進行梯度混合以快速達到98% B，從而確保溶離出樣品中的所有蛋白質且接著恢復至與2% B的初始梯度混合。
短運行溶離如下進行：使用0.4 ml/min流速、歷經18分鐘施加18% B至54% B的線性梯度溶離，接著在0.5分鐘內將B百分比快速提高至98%且在98% B保持，直至時間點22分鐘為止。B百分比接著在0.5分鐘內快速下降至18%且在18%保持，直至最終運行時間29分鐘為止。
質譜法 (LC-MS/MS)
使用針對四種主要過敏原中之各者的特異性重標誌肽(AQUA肽)，藉由MS定量來測定四種主要過敏原中之各者的總量。利用上述各過敏原的分子質量，測定四種過敏原中之各者相對於Ara h 2的莫耳比。MS方法包含藉由用消化酶(如胰蛋白酶或胰凝乳蛋白酶)處理來消化過敏原組成物及將已知濃度之合成同位素標記肽添加至萃取物之蛋白質消化物中。接著藉由在具有相同胺基酸序列、但不同質量的同位素標記肽與天然肽之間比較峰面積來測定天然肽的濃度。天然肽相對於其同位素標記標準物的峰面積對比產生用於計算天然肽濃度的比率。
所有質譜儀實驗均在奈米級HPLC系統(Thermo Scientific之EASY-nLC 1000)上進行，該HPLC系統連接至配備有奈米電噴霧源(Thermo Fisher Scientific)之Orbitrap Q-Exactive。對各肽樣品自動取樣且在15 cm分析管柱(50 µm內徑) EASY-Spray™ HPLC管柱上、使用5至40%乙腈/0.5%乙酸範圍內的1-h梯度進行分離。來自HPLC之流出物直接電噴霧至質譜儀中。Q-Exactive質譜儀係以僅對所關注之肽掃描的靶向擷取模式操作。記錄肽離子之全掃描(MS)與肽片段離子之片段掃描(MS/MS掃描)。使用Skyline軟體套執行所有原始資料分析。藉由加標已知量之天然純化主要過敏原及量測與重同位素標記肽之比率的增加來驗證濃度。
分析規模的尺寸排阻 HPLC (SEC) 聯合 UV 偵測管柱： Yarra 1.8 µm SEC-X 300 SS，粒度1.8 µm，孔徑300 Å，管柱尺寸150x4.6 mm，在25℃的溫度下操作。自動取樣器在20℃下操作。
偵測： 各種波長下的UV吸光度，視干擾背景及樣品蛋白質而定，較佳在280 nm或210 nm下進行計算。
標準： 以下標準物用作SEC分析的分子質量指示劑：獲自BIO-RAD凝膠過濾標準物(目錄#151-1901)之甲狀腺球蛋白(670 kDA)、牛γ-球蛋白(158 kDa)、雞卵白蛋白(44 kDa)、馬肌血球素(17 kDa)及維生素B12 (1.35 kDa)的凍乾混合物。
溶離： 8.2 mM NaH2PO4、137 mM NaCl、1.7 mM KCl及1.5 mM KH2PO4之磷酸鹽緩衝生理鹽水，pH 7.2。
樣品： 施加的體積相當於約15 µg花生蛋白質(藉由BCA測定)。
尺寸排阻層析 (SEC G200) 聯合 UV 偵測 ( 製備規模 )
使用非常適於單株抗體(mAb)及具有Mr約10 000至約600 000之其他生物分子之高解析度分析及小規模純化的基質進行製備規模SEC。在本實施例中，使用尺寸為10×300 mm的Superdex™ 200 (G200)管柱(供應商：Cytiva)。施加約7.5 µl的樣品大小。使用磷酸鹽緩衝生理食鹽水溶液(約pH 7.4)作為溶離溶劑。
nAra h 1 、 nAra h 2 、 nAra h 3 及 nAra h 6 之純參考標準物 .
利用多步驟純化，經由對栽培品種變異體Runner (混合基因型)之粉碎生花生仁進行水性萃取來純化四種主要花生過敏原中之各者，以獲得nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6之各別純溶離份，其可作為參考標準物用於鑑別或用於定量。藉由將各種層析方法組合、藉由純化粗花生過敏原萃取物來獲得純化的過敏原標準物：首先藉由陰離子交換層析、較佳使用強陰離子交換樹脂Cytiva™ HiTrap Q HP分離四種主要過敏原，以將四種主要過敏原分離至個別溶離份中，藉由使用疏水性滯留層析及尺寸排阻層析進一步純化。
利用上述分析條件、藉由分析規模的尺寸排阻HPLC (SEC X300)及藉由分析規模的RP-HPLC評價各純參考標準物。
圖 1 至 4顯示自兩種分析方法所得的四種參考標準物之層析圖。根據SEC分析的評價，nAra h 3似乎有三個溶離峰，對應於Ara h 3的單體(含有一個多肽鏈)、三聚體(含有三個多肽鏈)及六聚體構形(大概是兩個三聚體構形之間結合而成)。Ara h 3的六聚體構形當藉由本實施例X300 SEC管柱分析時具有約300 kDA的分子質量。Ara h 1以分子質量對應於Ara h 1之三聚體構形的一個峰出現。Ara h 2與6均以分子質量對應於其單體形式的單一峰出現。
由於四種過敏原天然地以若干同功型存在，因此各參考標準物之RP-HPLC概況以峰叢集出現，且可獲取整個叢集的積分以正確測定歸因於四種過敏原中之各者的峰面積。在RP-HPLC層析圖中，溶離次序為：Ara h 2同功型、Ara h 6同功型、小部分的Ara h 3同功型、Ara h 1同功型及剩餘Ara h 3同功型。
就過敏原nAra h 3而言，RP-HPLC分析可證實nAra h 3以其單體形式溶離，儘管nAra h 3的純標準物亦含有三聚體及六聚體形式。簡而言之：藉由使用G200管柱的製備型SEC對純nAra h 3參考標準物進行分級分離。收集含有六聚體、三聚體及單體形式的溶離份且藉由分析規模的SEC以及分析規模的RP-HPLC分析加以評價。
圖 3e 至 3h顯示nAra h 3之單體、三聚體或六聚體形式的注射得到類似的RP-HPLC概況。因此，已發現本發明RP-HPLC方法適於利用單體形式(單一多肽形式)的含量來定量nAra h 3。
根據胺基酸分析(AAA)所量測的蛋白質含量來測定純溶離份中之各過敏原的濃度。藉由注射不同量之參考標準物及測定四種過敏原中之各者之各濃度的峰面積來獲得線性校準曲線。
藉由注射一體積(典型地在1 µl與25 µl之間)的花生過敏原組成物及測定各過敏原的濃度(mg/mL)、利用線性校準曲線來確定花生過敏原組成物中之四種過敏原的定量含量。用於標準化的線性校準曲線可在以下範圍內產生：Ara h 1：1-10 µg，Ara h 2：1-3 µg，Ara h 3：1-12 µg及Ara h 6：1-2 µg。可利用各過敏原的平均莫耳質量(Ara h 1：68757 g/mol，Ara h 2:17994 g/mol，Ara h 3：58600 g/mol及Ara h 6：14846 g/mol)進一步將萃取物中之過敏原的定量含量換算成nmol，或可以相對於Ara h 2之量標準化的比率表示含量。
實施例2
花生仁的脫脂 / 粉碎
該實施例係關於處理生花生仁以獲得粉碎的脫脂花生粉末，其可作為起始材料(花生源材料(PSM))用於產生包含主要花生過敏原的粗過敏原萃取物。
在配備有210℃操作之螺桿式壓榨室的機械油壓榨機中處理生花生(例如ACI Seed (亦稱為AgResearch Consultants, Inc)供應的栽培品種變異體Runner的生花生)，以將碾碎的脫脂花生材料自花生油中分離出來
( 圖 5)。生花生可覆皮或無皮，但較佳為無皮，以避免所得脫脂花生材料中之著色材料。第一處理時段(約5分鐘)中產生的脫脂花生材料可由於熱誘導Ara h 1損耗而丟棄。收集脫脂花生材料且允許冷卻後碾碎成薄片。藉由研磨機進一步處理薄片以獲得最終呈粉末狀且脫脂的PSM
( 圖 5 )。該PSM具有8至12重量%範圍內的油含量。
實施例3
萃取
該實施例係關於藉由實施例2中概述之脫脂與粉碎組合製程獲得的花生源材料(PSM)之萃取。目標係獲得包含四種呈天然構形之主要花生過敏原Ara h 1、2、3及6的花生過敏原萃取物。
四種主要過敏原的最重要生物化學特徵：
1 分子質量係基於首頁 http://www.allergen.org/ 上所報導且如下表中所指明之過敏原之單體形式的胺基酸序列。 在報導若干同功型的情況下，分子質量以同功型的平均分子質量示出。 2 利用四種過敏原之胺基酸序列計算的理論 PI 由以下同功型表示：
| 參數 | Ara h 1 | Ara h 2 | Ara h 3 | Ara h 6 |
| 分子質量(g/mol) 1 | 68757 | 17994 | 58600 | 14846 |
| 等電點(PI) 2 | 6.4 | 5.4 | 5.5-5.7 | 5.5 |
| 熱穩定性 | 不穩定 | 穩定 | 穩定 | 穩定 |
| 藉由消化酶降解 | 敏感 | 耐受 | 敏感 | 耐受 |
| 過敏原 | 同種過敏原 | Uniprot | 基於以下的分子量 (MW) 計算： | AAA 編號 | Mw |
| Ara h 1 | Ara h 1.0101 | P43238 | 序列26-626 | 601 | 68757 |
| Ara h 2 | Ara h 2.0201 | Q6PSU2-1 | 序列22-172 莢豆蛋白-7 | 151 | 17994 |
| Ara h 3 | Ara h 3.0101 | O82580 | 完整序列( 507 個胺基酸). | 507 | 58350 |
| Ara h 3 | Ara h 3.0202 | Q9SQH7 | 序列21-530 | 510 | 58849 |
| Ara h 3 | Ara h 3 ( 平均值) | 58600 | |||
| Ara h 6 | Ara h 6.0101 | Q647G9 | 鏈22-145 莢豆蛋白 | 124 | 14846 |
首先，研究各種萃取條件，以深刻瞭解以下各者的影響：pH、鹽濃度、溫度、持續時間、PSM與緩衝液之間的萃取比率、花生變異體/栽培品種、脫脂方法、粉末粒徑及使用烤花生相對於非烤花生作為花生源材料。
簡言之，如下進行萃取：在5℃與25℃之間的溫度下、在攪拌下將PSM懸浮於水萃取緩衝液中一段時間，典型地在10分鐘與2小時之間，以將水溶性過敏原自花生粉末萃取至水萃取緩衝液中。接著藉由超速離心獲得粗花生過敏原萃取物(以液體上清液形式)。若上清液混濁或其含有不溶性物質，則經由過濾器(例如孔徑約1.0 µm的過濾器)過濾上清液，由此產生透明的水性過敏原萃取物。亦可對粗過敏原萃取物進行透濾以移除緩衝鹽或其他小分子。
最後，用兩種不同緩衝水性溶劑(A及B)進行過敏原的萃取，以確定用於栽培品種變異體Runner (混合基因型)花生的最佳萃取條件。
A：100 mM TRIS + 180 mM NaCl/純化水，pH用2.0 M NaOH調節至8.5。在約10℃下使用600 g PMS及12000 g萃取緩衝液(1+20萃取比率)萃取一小時且連續地監測pH且調節至pH 8.5。
B：50 mM TRIS + 50 mM NaCl/純化水，pH用2.0 M NaOH調節至7.4。在室溫(22℃)下使用600 g PSM及6000 g (=6000 ml)萃取緩衝液(1+10萃取比率)萃取一小時且連續地監測pH且調節至pH 7.4。
藉由實施例1中所述之方法(諸如逆相HPLC (RP-HPLC)及尺寸排阻層析(SEC))檢查藉由使用兩種萃取緩衝液獲得的過敏原概況。
初始研究萃取參數的結果
一般而言，自PSM中容易且快速萃取四種花生過敏原，且受以下各者的影響不是太大：萃取溫度、萃取持續時間，及PSM量相對於萃取緩衝液體積之間的比率。萃取緩衝液的pH及鹽濃度變化時，觀測到最大的影響。
Ara h 3的萃取效率隨pH發生顯著變化，Ara h 3在約8.5至9的pH下達到最大萃取。在低於7的pH下，幾乎偵測不到過敏原萃取物中的Ara h 3。其他花生過敏原Ara h 1、Ara h 2及Ara h 6的萃取效率對pH的依賴性較低，但在極低pH值(約pH 2)下，僅可萃取Ara h 2及Ara h 6。因此，為了獲得Ara h 3的粗花生過敏原萃取物，萃取pH不應低於7。
圖 6顯示當在含有150 mM TRIS且不含鹽(NaCl)的水性緩衝液中研究時，pH 5至9之四種花生過敏原之間之相對萃取效率的pH依賴性。在pH 5下，由於該pH接近於其pI，因此所有過敏原皆不容易萃取。在pH高於6.5至9時，三種過敏原Ara h 1、2及6的萃取效率相同，而Ara h 3的萃取效率自約pH 7提高至8.5-9。
關於離子強度(例如鹽濃度)，NaCl以30 mM至1000 mM添加至萃取緩衝液中揭露Ara h 3之萃取效率具有雙相依賴性，且在100 mM與200 mM NaCl之間，萃取效率最低。
圖 6亦顯示四種過敏原之萃取效率與萃取緩衝液中之NaCl含量之間的關係。
發現緩衝容量及溫度對萃取效率的影響較小：
關於緩衝容量的影響，發現使用具有高緩衝容量的萃取緩衝液具有重要作用，以便在萃取期間維持預定的pH而無需調節pH。舉例而言，發現TRIS莫耳濃度為100 mM或更高的TRIS緩衝液(參(羥基甲基)-胺基甲烷緩衝液)具有足以維持目標pH值的緩衝容量，當以pH依賴性萃取效率萃取過敏原時，此為關鍵。
關於萃取溫度，在約5℃至25℃之研究溫度內，未發現過敏原萃取效率存在任何差異。然而，發現過敏原Ara h 1為熱不穩定的且應避免高溫。舉例而言，當加熱至約90℃時，粗過敏原萃取物中的Ara h 1含量顯著下降。
關於萃取持續時間，在10分鐘與2小時的萃取持續時間之間，未偵測到產量存在差異。
關於萃取比率，亦即，PMS之量與萃取體積之間的比率，發現與萃取緩衝液的比率為1:30 (例如100 g PMS分散於30 kg (=30公升)萃取緩衝液中)時，四種花生過敏原的產量最高，且比率為1:20及1:10時，產量較低。可使用較低萃取比率，但可能會出現蛋白質混濁或沈澱。
花生變異體及脫脂方法/粉碎方法的選擇會對粗過敏原萃取物中的過敏原概況存在一些影響：
舉例而言，發現由不同烘焙程度(無烘焙、輕度及深度烤花生粉)之花生獲得之PMS在pH 8.5製成之粗過敏原萃取物的HPLC過敏原概況顯示烘焙影響過敏原概況。儘管熱穩定性過敏原Ara h 2及Ara h 6不象熱不穩定性過敏原那樣受到影響，但烤花生之粗萃取物中之Ara h 2、Ara h 3及Ara h 6的RP-HPLC峰看似更平坦。值得注意的是，深度烘焙花生之粗過敏原萃取物完全缺乏Ara h 1的峰，且輕度烤花生之粗過敏原萃取物中之Ara h 1的峰大大減少。SDS-PAGE分析亦觀測到該現象。假設生花生與烤花生之間的概況差異係由花生蛋白質在烘烤期間發生的梅納反應(Maillard reactions)及糖基化引起。
然而，人類IgE抑制ELISA證實，獲自烤花生或生花生的萃取物均可完全抑制相互的信號。因此斷定，萃取烤花生而獲得的過敏原萃取物不含不存在於生花生過敏原萃取物中的任何獨特IgE抗原決定基。當使用sIGE對花生萃取物呈陽性的一組血清(n=12；美國(4)、英國(1)、德國(4)、瑞士(1)、瑞典(1)、丹麥(1))測試時，烤花生及非烤花生(或生花生源材料)的萃取物顯示類似及完全的抑制。IgE抑制ELISA係基於游離抗原(抑制劑，生花生或烤花生的整個花生萃取物)與吸附至盤上之相應抗原(生花生或烤花生的整個花生萃取物)之間為了結合至血清IgE而發生的競爭；96孔ELISA盤在4℃下用含有1 µg生花生萃取物或1 µg烤花生萃取物的磷酸鹽緩衝生理鹽水(PBS，pH 7.4)塗覆隔夜。用PBS/Tween-20洗滌之後，在室溫下用PBS/1%酪蛋白阻斷盤2小時。盤用PBS/Tween-20洗滌且在37℃下、在濃度增加的競爭物存在下、與血清樣品的稀釋液一起培育1小時。競爭物(游離抗原)由濃度增加的生花生或烤花生之整個花生萃取物組成。用於游離過敏原競爭物的濃度係在0.0005至500 μg範圍內。洗滌之後，將盤與直接結合有HRP的抗人類IgE抗體一起在室溫下培育1小時。使用「TMB one」(3,3',5,5'-四甲基聯苯胺為辣根過氧化酶的顯色受質)顯色，且量測各孔在450 nm的OD。
圖 7顯示對生活於美國之供者之血清執行的IgE抑制分析之代表圖。該血清含有針對Ara萃取物(53 kU/L)、Ara h 1 (11 kU/L)、Ara h 2 (28 kU/L)、Ara h 3 (4 kU/L)及Ara h 6 (15 kU/L)的sIgE。此處顯示非烤花生或烤花生萃取物達成完全抑制的能力無差異。此表明由於花生的烘烤，因此未產生新的IgE抗原決定基。無論使用哪種萃取物(未烘烤或經烘烤)塗覆ELISA盤，烤花生或非烤花生萃取物對來自整個血清組之個別血清的抑制能力相似。
下表顯示四種主要花生過敏原在HPLC層析圖中的峰面積，其獲自分別由生花生、輕度烤花生及深度烤花生製成之粗過敏原萃取物的分析。所有花生為栽培品種「Spanish」花生且在內部、在350 F (177℃)下執行烘烤20分鐘以獲得「輕度烤」花生以及執行烘烤50分鐘以獲得深度烤花生。
| 花生樣品 | HPLC峰面積(mAU*min) | |||
| Ara h 1 | Ara h 2 | Ara h 3 | Ara h 6 | |
| 非烤 | 127 | 130 | 306 | 52 |
| 輕度烤 | 7 | 42 | 77 | 16 |
| 深度烤 | 0.6 | 5 | 8 | 0.2 |
另外，用TRIS緩衝液在pH 8.5萃取市售輕度烤花生粉(Golden Peanut公司)而得之粗過敏原萃取物的HPLC過敏原概況顯示，Ara h 1的層析峰缺失(
資料未顯示)。
栽培的花生(落花生)出現於許多植物品種中，但存在四種基本類型：Runner、Virginia、Spanish及Valencia。各種花生類型在大小、風味及營養組成方面有獨特之處，且栽培品種Runner為最廣泛的花生變異體。各栽培品種亦以不同基因型出現。
圖 8顯示由不同Runner基因型(#1041、#3310及#212C)製成之粗過敏原萃取物的RP-HPLC概況且指示略微不同的RP-HPLC概況，尤其在Ara h 3出現的一部分層析圖中。值得注意的是，基因型#3310及#212C不具有對於基因型1041所見的峰。值得注意的是，當藉由西方墨點法技術分析時，發現1041基因型的該額外峰被人類IgE識別。因此，可推薦的是產生獲自1041基因型、最終與其他Runner基因型或栽培品種變異體混合的過敏原萃取物。
下文顯示獲自生花生(Runner，混合基因型)之過敏原萃取物中之四種主要過敏原中之各者的量。含量以mg/mL、nmol/ml報告或以相對於Ara h 2的莫耳比報告。
| 萃取緩衝液 | 量( mg/mL)、(nmol/ml)、 相對於 Ara h 2 的 莫耳比 | |||
| Ara h 1 | Ara h 2 | Ara h 3 | Ara h 6 | |
| A (pH 8.5) | 1.7(25) 0.3 | 1.4(78) 1.0 | 4.1(70) 0.9 | 0.8(56) 0.7 |
| B (pH 7.4) | 3.3(47) 0.6 | 1.4(78) 1.0 | 2.3(40) 0.5 | 1.1(75) 1.0 |
圖 9顯示用上述萃取緩衝液製備之粗花生萃取物的HPLC概況(長運行方法)：緩衝液B (pH 7.4)相對於緩衝液A (pH 8.5)。資料表明Ara h 1在較高pH (8.5)下萃取的程度低於pH 7.3，而Ara h 3與此相反。因此，藉由簡單地萃取花生產生包含濃度均衡之四種主要過敏原的組成物具挑戰性。
實施例4
過敏原萃取物的純化
該實施例係關於粗花生過敏原萃取物(諸如實施例3所得之粗過敏原萃取物)的純化。
將實施例3所得之過敏原萃取物負載至陰離子交換層析管柱上以將四種主要過敏原視需要連同所關注之其他花生過敏原一起吸附至陰離子交換材料上。藉由該操作而直接通過管柱的液體作為個別溶離份(命名為「流過物溶離份」(FT))收集。該溶離份含有未充分吸附至陰離子交換材料上的過敏原萃取物化合物，例如不帶負電或所帶負電不充分的蛋白質或非蛋白質化合物。流過物溶離份中存在一些少量花生過敏原，如Ara h 8及Ara 9。
為了獲得富含主要過敏原之一的個別溶離份(亦即，富含Ara h 1的溶離份、富含Ara h 2的溶離份、富含Ara h 3的溶離份及富含Ara h 6的溶離份)，在用含有濃度漸增之鹽(氯化鈉(NaCl))的溶離緩衝液溶離後，收集個別液體溶離份。或者，可藉由用個別體積的具有不同鹽濃度之水性溶離溶劑逐步溶離來完成鹽梯度。陰離子交換材料為強陰離子交換樹脂Cytiva™ HiTrap Q HP。其裝填有Q瓊脂糖高效能強四級銨陰離子交換樹脂，具有小(34 µm)珠粒尺寸且提供高效能、高解析度純化。將樹脂裝填於管柱(直徑100 mm)中且用緩衝液(25 mM TRIS，HCl pH=7.4)平衡。管柱以約6 CV/hr的流速操作且使用實施例4中所述的HPLC程序評價所收集之溶離份中的過敏原含量。接著可根據各主要花生過敏原之預定量(諸如相對於Ara h 2的莫耳比)將不同溶離份混合，以得到所需的過敏原組成物。
檢查不同的鹽梯度，因為兩種過敏原Ara h 2與Ara h 6難以分離獲得個別的富集溶離份。發現將pH自pH 8.5降低至約pH 7.5實現兩種過敏原的良好分離且可獲得富含Ara h 2或富含Ara h 6的個別溶離份。
舉例而言，可經由四個個別溶離份收集四種主要花生過敏原，其中各溶離份高度富含四種主要花生過敏原之一。該陰離子交換層析程序包含以下步驟：
● 使用6 CV/hr的流速將如實施例2中所述用具有pH 7.4之緩衝水溶液(例如50 mM TRIS緩衝液pH 7.4 + 50 mM NaCl)萃取而獲得的花生過敏原萃取物負載於陰離子交換管柱的流入端。
● 在陰離子交換管柱的流出端收集流過物液體且命名為流過物溶離份(FT)；
● 以增加的鹽濃度逐步溶離總共進行四次，其中各步驟包含：i)以6 CV/hr的流速、用由25 mM TRIS、HCl pH=7.4及所給預定量的鹽(NaCl)組成的水性溶離溶劑進行溶離；及ii)經由所負載之過敏原萃取物的個別溶離份收集流出液，其中
o 第一溶離液包含125 mM NaCl的鹽含量且所得溶離份(A)富含Ara h 6；
o 第二溶離液包含200 mM NaCl的鹽含量且所得溶離份(B)富含Ara h 2；
o 第三溶離液包含375 mM NaCl的鹽含量且所得溶離份(C)富含Ara h 1；以及
o 第四溶離液包含700 mM NaCl的鹽含量且所得溶離份(D)富含Ara h 3。
當藉由RP-HPLC研究時，使用高達1000 mM NaCl的較高鹽濃度對陰離子交換管柱的任何進一步溶離不產生含有四種主要過敏原Ara h 1、2、3及6的溶離份。
藉由實施例1中所述之方法(諸如使用短運行方法的逆相HPLC及尺寸排阻層析(SEC))檢查所收集之溶離份的過敏原概況。
溶離份A、B、C及D的RP-HPLC層析圖(短運行方法)證實，如上文所概述的陰離子交換層析方法能夠產生其中花生過敏原Ara h 1、2、3及6純度高的個別溶離份(
圖 10a 至 10d)，且與Ara h 1、2、3及6相比，流過物(FT)溶離份富含其他過敏原(
圖 10e)。nAra h 1、2、3及6的純標準物顯示於
圖 10f 至 10i中。
實施例5
溶離份混合成最終藥物物質
該實施例係關於將實施例4中所得之溶離份A、B、C及D及視需要存在的溶離份FT混合，以產生包含目標含量之一或多種特定花生過敏原的花生過敏原組成物，該等花生過敏原組成物可用作治療花生過敏的藥物物質(DS)，諸如藉由過敏原特異性免疫療法。混合的溶離份可原樣使用，或可進一步處理，諸如移除非所需成分(例如緩衝液、鹽、小尺寸分子)、增濃最終的花生過敏原液體組成物，或改變pH值。亦可對花生過敏原液體組成物進行凍乾或微滴冷凍。
藉由RP-HPLC測定實施例4所收集之所有溶離份中之四種主要過敏原中之各者的濃度之後，藉由將一或多個溶離份的適當等分試樣混合來產生含有目標量之花生過敏原的花生過敏原組成物。
舉例而言，實施例4所收集之整個體積的流過物液體與所富集之四個溶離份A、B、C及D中之各者的等分試樣混合，以產生其中四種主要過敏原之間的目標莫耳比接近於1:1:1:1 (均衡的量)的花生過敏原組成物。舉例而言，可將所富集的溶離份混合以獲得經純化的花生過敏原萃取物，其中三種主要過敏原Ara h 1、2及6中之各者的莫耳濃度相對於Ara h 2之莫耳濃度的相對莫耳比在0.5至1.5或更窄範圍內，諸如0.4至1.4的相對莫耳比。此類花生過敏原組成物亦可含有與四種主要花生過敏原共溶離的其他花生過敏原。舉例而言，含有Ara h 2或6的溶離份中存在花生過敏原Ara h 7，且流過物液體中存在多種少量花生過敏原(例如Ara h 8、9、12及13)。可產生具有其他莫耳比的組成物，且溶離份A、B、C及D中可決定省去一或多者，以產生四種主要過敏原中之一或多者含量低或具有少量過敏原的花生過敏原組成物。因此，使用實施例3至5中所述的方法，甚至可提供包含受控制且預選定之量之Ara h 1、2、3及6的花生組成物，使得花生組成物不含有花生過敏原Ara h 1、2、3及6中之一者、兩者或三者，此可簡單地藉由排除一或多個所富集之溶離份來達成。
混合之後，接著藉由在22℃下執行超濾步驟、利用約5 kDa MW的膜截止值移除較小分子(例如緩衝鹽(TRIS緩衝液))及將體積減小約25倍來增濃花生過敏原液體組成物。藉由透濾移除其他低分子質量分子，直至電導率為約650 mS/cm。當藉由胺基酸分析(AAA)測定時，最終純化萃取物中的花生蛋白質含量在16至21 mg/ml範圍內。
純化過敏原萃取物的典型RP-HPLC層析圖(短運行方法)顯示於
圖 11中。藉由將FT溶離份與適當體積的溶離份A、B、C及D混合來製備經純化的過敏原萃取物，以產生其中過敏原Ara h 1、2、3及6中之各者之莫耳量均衡的萃取物，其中FT溶離份中存在少量過敏原的含量。舉例而言，FT溶離份可省去或以較小體積添加。
下文顯示藉由實施例5所述之方法所得之典型組成物中之四種過敏原之量的結果。對RP-HPLC與LC-MS/MS獲得的結果進行比較且結果揭露兩種方法之間存在良好一致性。
| 花生蛋白質中的過敏原重量% | nmol過敏原/mg花生蛋白質 | |||
| 過敏原 | RP-HPLC | LC-MS/MS | RP-HPLC | LC-MS/MS |
| Ara h 1 | 39.2 | 36.2 | 5.7 | 5.3 |
| Ara h 2 | 7.9 | 9.8 | 4.4 | 5.4 |
| Ara h 3 | 33.3 | 38.4 | 5.7 | 6.6 |
| Ara h 6 | 6.7 | 7.9 | 4.5 | 5.4 |
| 總和 | 87.1 | 92.3 |
利用過敏原Ara h 1、Ara h 3及Ara h 6中之各者之莫耳量與過敏原Ara h 2之莫耳量之間接近於1:1:1的目標莫耳比，產生三個批次的純化過敏原萃取物(批次A、B及C)。測定三個批次A、B及C以及四個批次之比較例過敏原萃取物(為了進行皮膚刺痛測試而市售的花生過敏原萃取物(Greer的SPT產品))中之四種主要過敏原的莫耳濃度及相對於Ara h 2的莫耳比。藉由LC-MS/MS與同位素標記之AQUA肽的組合來測定莫耳濃度。nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6之純參考標準物的加入係用於驗證過敏原的量及定量方法。
圖 12a顯示三個批次(A、B及C)中之相對莫耳量且揭露與目標莫耳濃度高度一致及各批次之間的偏差低。
圖 12b繪示了當將重同位素標記之AQUA肽與LC-MS/MS分析組合使用、在類似裝置中分析時，同一批次內的相對比率差異以及四個批次之Greer SPT產品(D至G)中之各批次之間的相對比率差異。
將批次A (根據實施例2至5所產生)的HPLC過敏原概況與Greer的SPT產品進行對比。
圖 13顯示批次A之RP-HPLC概況與一個批次之SPT Greer過敏原萃取物(批次D)的重疊。值得注意的是，批次A的RP-HPLC概況包含可容易偵測的來源於nAra h 1、2、3或6之峰，而Greer SPT產品在nAra h 1及nAra h 3應出現的一部分層析圖中包含平坦的峰。Greer SPT花生過敏原萃取物注射多次之後，管柱被堵塞。因此，使用RP-HPLC方法不能控制且定量SPT Greer花生過敏原萃取物中的過敏原含量，而RP-HPLC適合用作準確地控制實施例4之純化過敏原萃取物中之過敏原nAra h 1、2、3及6中之各者之含量的方法。另外，Greer SPT的RP-HPLC概況中缺乏單峰形式的nAra h 1可表明，依據可藉由RP-HPLC分析的構形，Greer萃取物中不存在nAra h 1。在定量之前利用過敏原消化成較小肽的LC-MS/MS定量方法不僅會根據單體的量返回nAra h 1的正確量，而且會量測寡聚的nAra h 1。觀測到nAra h 3亦如此，其中LC-MS/MS方法將返回來源於Ara h 3序列之所有肽(包括存在於寡聚nAra h 3中的彼等肽)的含量。測定nAra h 3單一多肽的RP-HPLC方法似乎更準確地測定來源於單體、三聚體或六聚體nAra h 3之nAra h 3的含量，因為寡聚體形式將堵塞HPLC管柱或無法以可鑑別的銳利層析峰溶離。
另外，利用尺寸排阻層析(SEC)，將實施例5所得之純化過敏原萃取物的過敏原概況與陰離子交換層析且混合之前所得之實施例3的粗過敏原萃取物進行對比。
值得注意的是，與針對nAra h 1、2、3及6之純標準物中之各者所觀測的相比，實施例3的粗過敏原萃取物包含分子質量顯著高於400至500 kDa的高分子質量分子(
圖 14)，而實施例5的純化過敏原萃取物中基本上不存在高分子質量分子
( 圖 15)。對Greers之SPT產品進行的SEC分析顯示高分子質量分子的含量顯著(
圖 16)。
圖 17顯示對實施例5所得(使用實施例2至實施例5的製程步驟)之三個批次之純化過敏原萃取物進行的SEC分析且證明Ara h 3及Ara h 1之不同構形形式之含量在批次間的差異低。另外發現，實施例5之純化過敏原萃取物中之nAra h 3三聚體與nAra h 3六聚體之間的比率高於實施例3之粗過敏原萃取物。陰離子交換分級分離似乎將nAra h 3構形變成更多的三聚體形式(資料未顯示)。
藉由尺寸排阻層析分離出高分子質量分子之後，進一步研究高分子質量分子的來源。RP-HPLC分析及LC-MS/MS AQUA肽分析發現，高質量分子包含nAra h 1及nAra h 3多肽。如實施例6所示，藉由天然凝膠電泳對此進一步驗證。Therefore, it is speculated that the high mass molecules are aggregates of nAra h 1 and/or nAra h 3 polypeptides.
鳥槍蛋白質體學進一步證實，WHO/IUIS過敏原命名中所列的所有花生過敏原皆存在於包含五個溶離份A至D以及流過物溶離份(FT)的萃取物中。
實施例6
固體劑型
所得花生過敏原組成物可在不進一步處理的情況下或在藉由液氮凍乾或處理以產生自由流動之冷凍微滴之後，進一步調配成醫藥劑型。
圖 18顯示典型製造方法的流程圖，其始於花生源材料、經由萃取、分級分離及將溶離份混合的步驟來達成。混合之後，可對組成物進行超速離心及過濾。最後，可用液氮處理液體組成物以將組成物以冷凍的微滴儲存，隨後進一步調配成醫藥調配物，例如劑型。
舉例而言，可將所得花生過敏原組成物凍乾且接著與醫藥學上非活性的成分混合，以產生舌下劑型，諸如薄膜、壓製或非壓製錠劑或凍乾單位劑型(例如錠劑形式)。
或者，可將所得液體花生過敏原組成物與明膠(視需要為不同來源之不同尺寸明膠的混合物)及甘露糖醇混合且接著凍乾以獲得適於舌下投予的快速分散固體劑型。有利的是，已有可能提供所含總花生蛋白質含量在約0.1微克至約5000微克範圍內、相對於總花生蛋白質含量之Ara h 2重量含量之變化小的固體劑型，其中過敏原Ara h 1、Ara h 6及Ara h 3中之各者相對於Ara h 2之莫耳濃度含量係以0.5至1.5或更窄範圍內的莫耳濃度含量存在。如上文所解釋，實施例1中所述之RP-HPLC方法為適用於控制莫耳濃度及比率的方法。或者，可藉由如實施例8中所述的基於抗體之分析(例如ELISA)來控制濃度。
發現四種主要過敏原在固體劑型中、在約25℃的室溫下穩定至少12個月，從而允許在室溫下儲存本文所揭示之固體醫藥組成物。
實施例7
藉由天然凝膠電泳 ( 原生 PAGE) 控制花生蛋白質
天然凝膠電泳可用於比較及控制粗萃取物(根據實施例3產生)、純化萃取物(根據實施例4及5產生)或含有明膠及甘露糖之最終凍乾固體劑型(根據實施例6產生)的蛋白質圖譜，以得到關於高分子尺寸蛋白質結構之含量的資訊。
原生PAGE係使用Bis-Tris 4-16%凝膠(Invitrogen®)、使用Invitrogen®的試劑運行：NativePAGE樣品緩衝液(SB)、NativePAGE 20x電泳緩衝液、NativePAGE 20x陰極緩衝液添加劑、原生標記蛋白標準物及未染色的蛋白質標準物。在樣品不加熱的情況下進行電泳。將高於700 kDa之尺寸範圍內的蛋白質譜帶切除且用酶胰蛋白酶或胰凝乳蛋白酶處理用於質譜分析。
結果提供於圖19及20中：
圖19顯示nAra h 3之純化標準物(泳道2 (4 μg)及泳道3 (2 μg))及nAra h 1之純化標準物(泳道4 (4 μg)及泳道5 (2 μg))及粗萃取物(經過濾)(泳道6 (30 μg)及泳道7 (15 μg))、經純化之粗萃取物(泳道8 (15 μg))及比較例花生過敏原萃取物(Greer)萃取物(泳道9 (15 μg)之原生凝膠。分子尺寸指示劑(泳道1及泳道10)。值得注意的是，純化過敏原萃取物不含尺寸高於700 kDa的蛋白質結構，因為最長的溶離譜帶出現於約480 kDa的尺寸處，且安慰劑固體劑型的成分(明膠及甘露糖)不誘導可偵測的此類高分子尺寸蛋白質結構。
圖 20顯示以下樣品在原生電泳凝膠上溶離的蛋白質譜帶：A)標準尺寸標記物；B)粗萃取物(經過濾)；C)標準尺寸標記物；D)安慰劑固體劑型；E)添加至安慰劑中的粗萃取物(經過濾)；F)粗萃取物(經過濾)；以及G)用純化萃取物調配的固體劑型。藉由質譜分析研究泳道B之高於700 kDa之尺寸範圍內的蛋白質譜帶。發現譜帶1至6由Ara h 1蛋白質結構組成且譜帶7及8由混合的Ara h 1及Ara h 3結構組成。亦藉由MS研究泳道D、E、F及G之高於700 kDa之尺寸範圍內的相似譜帶。對於樣品D而言，未偵測到與譜帶1至8對應的蛋白質結構，而此等蛋白質結構可在樣品E及F中偵測到且零星地在樣品G中偵測到。因此，將經純化之萃取物調配成固體劑型的方法不產生顯著量的高分子尺寸蛋白質結構。
實施例8
藉由定量免疫分析測定萃取物及最終劑型中的過敏原濃度
可使用能夠特異性結合花生過敏原nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3或nAra h 6中之任一者的單株抗體、藉由定量免疫分析測定/控制本文所揭示之組成物中的nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6濃度。
單株抗體可購自供應商，例如Indoor Biotechnologies®，或其可在小鼠或兔以經純化之nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3或nAra h 6免疫且選擇用於抗體(mAb)之單株重組表現之選殖株之後，在內部產生。較佳抗體為鼠類IgG2a抗體，該等抗體可有利地藉由蛋白質A結合加以純化。理想的是，mAb應以高親和力結合過敏原，結合非重疊的抗原決定基，結合所有同功型中保守且不同過敏原之間無交叉反應性的抗原決定基。mAb可在HEK細胞中表現且藉由蛋白質A親和層析加以純化。純度及尺寸可藉由SDS-PAGE控制且可藉由ELISA控制針對所選花生過敏原的特異性及結合親和力。
使用針對nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6的特異性mAb配置基於習知或自動化ELISA之免疫分析。使用四種過敏原中之各者的純化標準物製備標準曲線(如實施例1中所述)。
nAra h 3以若干蛋白質譜帶出現於SDS-PAGE凝膠上，且選擇特異性針對Ara h 3的mAb具有重要作用，該等mAb可結合SDS-PAGE凝膠上作為nAra h 3出現的大部分或所有不同蛋白質譜帶。此為有利的，原因在於僅結合一個或幾個蛋白質譜帶的mAb將使萃取物或最終劑型中的nAra h 3濃度被低估。另外，適合的mAb能夠結合nAra h 3抗原決定基，不論nAra h 3呈單體或其寡聚形式。因此，單株抗Ara h 3抗體能夠結合i)呈單體構形的Ara h 3而成為1:1複合物；ii)呈三聚體構形的Ara h 3而成為3:1複合物(三個抗Ara h 3抗體結合一個Ara h 3三聚體)；及iii)呈六聚體構形的Ara h 3而成為6:1複合物(六個抗ara h 3抗體結合一個六聚體Ara h 3)。
舉例而言，發現當使用僅結合SDS-PAGE上作為nAra h 3出現之幾個蛋白質譜帶的特異性單株抗nAra h 3抗體執行ELISA時，根據實施例5產生之純化萃取物(經富集之nAra h 1、2、3及6混合溶離份)中的nAra h 3濃度可經基於自動化ELISA之免疫分析(Gyrolab®平台)評估為約242 μg nAra h 3/mg花生蛋白質。相比之下，當使用結合SDS-PAGE凝膠上之所有nAra h 3譜帶的特異性單株抗nAra h 3抗體執行ELISA時，濃度為約418 μg nAra h 3/mg花生蛋白質。
實施例9
劑量增加的免疫療法時程
該實施例係關於劑量增加療法(UDR)的研究，用於診斷有花生過敏之患者的過敏原特異性免疫療法。試驗藥劑將為包含目標量之所選花生過敏原的花生過敏原組成物，諸如本文所揭示之組成物，亦即，包含以mg花生蛋白質計高含量之四種主要過敏原中之各者的組成物。花生過敏原組成物可根據本文所述的實施例2、3、4、5及6產生。在免疫治療過程期間及之後，花生過敏患者能夠減輕可能因意外暴露於花生而發生的過敏反應。藉由使患者對花生過敏原脫敏，增加對花生的耐受性臨限值，且因此在意外的花生暴露後預防過敏反應。
目標為提供劑量增加步驟極少、同時仍有可能達到可耐受高維持劑量的劑量增加安全療法，以便繼續進行免疫療法。
藉由執行試驗將證實劑量增加療法安全且可以相對較高劑量的花生蛋白質開始，諸如在10至150微克花生蛋白質的範圍內，並且劑量增加可以幾個步驟完成，諸如至多五個步驟，以達到4000微克花生蛋白質的相當高之最大劑量。
目標
主要目的為藉由執行人類臨床試驗來評價劑量增加療法(UDR)中的最低可耐受攝入劑量(MTED)、最高可耐受劑量(MTD)及劑量增加步驟的數目。
若在給藥步驟之最後一次錠劑攝入之後，個體尚未經歷治療相關的任何全身不良事件(儘管個體可能已經歷治療相關不良事件，但此等不良事件大部分為中等強度的局部反應)，以及個體可能已經歷與治療無關、在耐受性評估時不應考慮的不良事件，則劑量被視為可耐受。
劑量耐受性意欲表示二元終點，其中個體分類為對試驗藥劑(花生SLIT錠劑)的特定劑量耐受或不耐受。當已符合預選定的個體耐受性準則時，劑量被視為耐受的。不耐受的劑量可因若干原因而存在：尚不符合預選定的個體耐受性準則；個體符合個體中止準則或因不良事件而中斷治療。
當在試驗期間，個體在不同時間點經歷累計總數為兩個或更多個的以下事件時，符合個體中止準則(其意謂個體應立即中斷)：a)重度全身過敏反應、b)需要用腎上腺素治療、c)損害呼吸的重度局部腫脹及d)在研究者看來，繼續治療不安全。
次要目標為評價花生SLIT錠劑的安全。所研究的安全參數為：a)治療引發之不良事件(TEAE)；b)備受關注之事件(ESI)；c)全身過敏反應；d)用腎上腺素治療的事件；e)口腔及/或咽喉的重度腫脹或水腫；f)重度哮喘惡化；g)嗜伊紅血球食道炎(EoE)；h)局部施藥部位反應；i)治療因TEAE而中斷；j)口咽檢查、身體檢查、生命徵象及臨床實驗值存在臨床重大發現；k)生命徵象及臨床實驗值相對於基線發生變化。
可進行以下測定：TEAE的總體概述可呈現經歷事件之個體的數目(%)及所有TEAE之事件的數目(%)以及因果關係、嚴重度、嚴重性、所採取的行動、結果、事件是否正引起中斷及是否指定藥劑。以上概述可針對治療相關TEAE、嚴重治療相關TEAE及引起IMP中斷之治療相關TEAE重複出現。TEAE可根據劑量、年齡組及發作的時間確定。
對於各ESI而言，可完成總體概述及依據患者群、年齡或劑量的概述。全身過敏反應的總體概述亦可包括作為另一嚴重度類別的急性過敏。對於全身過敏反應而言，可概述發作的時間及事件的持續時間。可報告局部施藥部位反應，包括發作的時間，且可概述部位反應的持續時間。
第三目標為評價花生SLIT錠劑劑量增加療法對免疫參數的影響，諸如針對花生或針對特異性花生過敏原(Ara h 1、Ara h 2、Ara h 3或Ara h 6)的特異性IgE、IgG4、IgG、IgG1或IgA。亦可包括治療開始之前及劑量增加療法期間或結束之後的花生SPT水皰直徑。
試驗藥劑
試驗藥劑含有藉由實施例2至實施例5之製造方法獲得的藥物物質，且試驗藥劑進一步調配為口服凍乾物(花生SLIT錠劑)，其置於舌下時立即崩解。藥物物質包含標準量(目標為達成四種過敏原之間的等莫耳量)的四種主要花生過敏原：nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6。典型地存在於生花生中的其他花生過敏原亦存在於藥物物質中。使用花生蛋白質的不同效能劑量(1 DU、3 DU、10 DU、40 DU、120 DU、360 DU、1080 DU、2160 DU或4320 DU)製備花生SLIT錠劑。效能單位(DU)定義為參考批次之試驗藥劑中的1 μg花生蛋白質，該參考批次之試驗藥劑已藉由與實際試驗藥劑相同的方法產生且具有預定含量相同的四種主要花生過敏原。花生蛋白質含量係藉由胺基酸分析測定。過敏原nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6構成花生蛋白質的約85重量%至95重量%。
個體
符合試驗條件的個體為具有花生過敏臨床史的成人(18至65歲)、青少年(12至17歲)及兒童(4至11歲)。花生過敏診斷係根據花生過敏臨床史確定，IgE敏感係根據血清過敏原特異性IgE、對花生的陽性SPT反應及DBPCFC的陽性反應確定。招募的所有個體必須經受雙盲、安慰劑對照、食物攻毒(DBPCFC)且在100 mg花生蛋白質攻毒劑量時或之前經歷劑量限制症狀以證實花生過敏。在所招募的個體中，高度敏感個體將定義為在篩選式DBPCFC中、在1 mg或3 mg花生蛋白質攻毒劑量時經歷劑量限制症狀的彼等個體。DBPCFC係由使用花生蛋白質或安慰劑執行的兩次各別口服食物攻毒(OFC)組成，其依隨機次序投予且執行OFC之醫師不知情。如下執行各OFC：將花生蛋白質(通常由標準化脫脂花生粉組成)或安慰劑混入媒介食物中以逐漸增加的量攝入，直至觀測到預定義的劑量限制症狀為止。劑量增量為1 mg、3 mg、10 mg、30 mg及100 mg。基於特定劑量所誘發之過敏症狀的嚴重度評價各種攻毒劑量的耐受性來評估劑量限制症狀。研究者將判定過敏反應的嚴重度為所觀測之任何症狀的最大嚴重度。關於OFC的CoFAR分級系統
(Chinthrajah 等人 , 2022)可用作一般指導。生命徵象(血壓及脈搏率)係在即將給予各種攻毒劑量之前量測，或若延長給藥間隔，則在攻毒劑量之間的適當時間量測。在檢查生命徵象時，對過敏反應的徵象及症狀執行評估。
在 DBPCFC 期間 ， 根據 (Chinthrajah 等人 , 2022) 對 過敏症狀嚴重度的分級
| 輕度 | 中度 | 重度 |
| 皮膚：有限(極少)或局部的蕁麻疹、腫脹(例如輕度唇水腫)、皮膚潮紅(例如暗淡紅斑區域極少)或輕度瘙癢(例如偶爾抓撓) | 皮膚：全身蕁麻疹(例如許多或廣泛的蕁麻疹)、腫脹(例如顯著的唇或臉水腫)、引起長時間抓撓的瘙癢、紅斑區域超過幾處或明顯的紅斑 | 皮膚：重度的廣泛性風疹/血管性水腫/紅斑 |
| 呼吸道：流鼻涕(例如偶爾鼻塞或打噴嚏)、鼻充血、偶爾咳嗽、咽喉不適 | 呼吸道：咽喉緊繃無嘶啞、持續咳嗽、哮喘無呼吸困難 | 呼吸道：喉部水腫、咽喉緊繃有嘶啞、哮喘伴呼吸困難、喘鳴 |
| GI ：輕度腹部不適(包括輕度噁心且活動性減少或不減少)、被認為繼發於作嘔的孤立性嘔吐 | GI ：持續中度腹痛/痙攣/噁心伴活動性減少、嘔吐 | GI ：重度腹痛/痙攣/反覆性嘔吐 |
| 神經學：心智狀況改變 循環：臨床上顯著的低血壓 |
進一步的評價將包括：
無症狀：若一種劑量未引發症狀，則該劑量將評估為耐受。
輕度症狀：僅以輕度症狀為特徵的反應將基於研究者的臨床判斷評估為耐受或不耐受。以下實施例充當當僅誘發輕度症狀的劑量時可視為耐受的指導：
● 症狀相對於單一器官系統為孤立的
● 在無醫藥介入的情況下，或在單次經口投與H1抗組織胺的情況下，症狀消退
● 症狀不需要投予腎上腺素
● 症狀的強度或分佈未隨時間惡化
● 在1小時內，症狀消退或顯示明確的消退跡象
● 症狀不包括客觀喘鳴
● 若給藥的過敏反應係以不符合所有上述準則的輕度症狀為特徵，則劑量應評估為不耐受。若劑量誘發的輕度症狀不符合所有上述準則且劑量評估為耐受，則必須在eCRF中記錄關於劑量為何視為耐受的解釋。
中度症狀：以中度症狀為特徵的反應通常評估為不耐受。在很少的情況下，若症狀為短暫的、自限制的(不需要介入且完全消退)及僅影響單一器官系統，則劑量誘發的中度症狀可評估為耐受。典型地，此類症狀僅為主觀的。與中度症狀有關且評估為耐受的任何劑量必須在eCRF中附有關於劑量為何視為耐受的解釋。
重度症狀：以重度症狀為特徵的反應將評估為不耐受。
治療概述
首先選擇個體接受花生SLIT錠劑固定劑量之花生蛋白質劑量(諸如1 DU、3 DU、10 DU、40 DU或120 DU)歷時2週的每日一次舌下治療。兩週治療之後，將評價治療安全及劑量耐受性。
接著選擇個體參與以下研究：劑量增加療法(UDR)之治療安全及劑量耐受性，包括不同年齡組(成人18至65歲、青少年12至17歲及兒童4至11歲)，及個體是否對花生高度敏感或不敏感。
UDR係由歷時兩週的一系列以相同劑量每日一次固定劑量投予舌下黏膜組成且其中每兩週增加劑量。個體的UDR起始攝入劑量與初始兩週試驗中所確定的最低攝入劑量(諸如1 DU、3 DU、10 DU、40 DU或120 DU)相同。UDR中的後續劑量步驟將以每兩週為準(諸如360 DU、1080 DU、2160 DU及4320 DU花生蛋白質)，以研究所研究個體耐受的最高劑量(最終根據年齡組確定)。增加個體的劑量直至其完成計劃的UDR (直至劑量4320 µg)或其個別MTD為止。允許UDR存在靈活性；若個體在2週之後不符合個體劑量增加準則，則各給藥步驟可延長額外1週治療。
將基於如下劑量來選擇MTED劑量：針對該劑量而納入劑量耐受性評估的個體中至少75%符合能夠耐受該劑量的前提條件。
評估劑量耐受性，其中將概述納入劑量耐受性評估中之個體數目以及耐受及不耐受各劑量之個體數目(%)。
耐受性評估
花生SLIT錠劑之預期不良反應包括口腔及咽喉中之輕度或中度嚴重度局部過敏反應。如同任何AIT，存在更嚴重AE的風險，諸如重度全身過敏反應以及可損害呼吸道的口腔及咽喉重度腫脹。
對於個體而言，若
在劑量步驟之最後一次錠劑攝入之後出現以下情況，則劑量被視為可耐受：
● 治療相關的任何AE為強度不超過輕度至中度的局部施藥部位反應，其中局部施藥部位反應定義為口腔、咽喉、耳、鼻、眼及上胃腸道中及周圍緊鄰於舌下錠劑施用部位發生的治療相關不良事件，其在錠劑攝入60分鐘內發作。
● 劑量步驟之最後一次錠劑攝入之後，治療相關之任何全身AE的發生將意謂劑量尚不耐受。
● 劑量步驟之最後一次錠劑攝入之前發生的治療相關AE及與治療無關的AE在耐受性評估時不應被考慮。
若根據當前劑量步驟攝入最後一次錠劑之後出現以下情況，則允許增加個體的劑量：
● 個體符合個體耐受性準則；且
其符合個體給藥前安全檢查；且在研究者看來，這樣做安全。
若個體在2週治療之後不符合所有的個體劑量增加準則，則其可用當前劑量繼續治療額外1週(亦即，延長治療)。
然而，治療2週之後不符合個體IMP順應性準則的個體僅可在前7天中的至少4天已接受治療的情況下才接受延長的治療。不符合該額外準則的個體在延長的治療之後將不能符合順應性準則且因此根據方案指定的規則及準則完成治療。
若個體在延長治療之後不符合所有的個體劑量增加準則，則根據方案指定的規則及準則，個體已完成治療。
安全評估
為了將花生SLIT錠劑的安全概況特性化，收集試驗期間的未徵集AE (包括ESI)及已徵集AE。已徵集AE係基於對SLIT錠劑的局部施藥部位反應(
Canonica 等人 , 2014)。另外，為了監測可能的全身過敏反應及哮喘惡化，已包括關於蕁麻疹及呼吸困難的問題。已徵集AE係基於將向個體詢問以每日記錄於電子日記中之16種預先指明的症狀報告。症狀將由研究者評價且適用時作為已徵集AE報告於eCRF中。
AE
AE為發生於臨床試驗個體中的任何不良醫學情形且不一定與所投予的IMP具有因果關係。AE因此可為任何不利的非預期徵象(包括例如異常實驗室發現或用藥錯誤)、症狀或疾病，不論是否被視為與IMP相關。
SAE
SAE為任何不良的醫學情形或影響，其：
● 導致死亡
● 危及生命(此係指一種事件，個體在該事件發生時處於死亡風險下；其並非指若更嚴重，則假設可能引起死亡之事件)
● 需要受試住院，不論持續時間，或延長現有住院
● 導致持久或重大失能/無能
● 係先天性異常或生育缺陷
● 經判斷在醫學上具有重要作用(此係指可能不立即危及生命或引起死亡或住院、但可能危害個體或可能需要介入以防止上列其他結果之一的事件)
局部施藥部位反應
局部施藥部位反應為緊鄰於SLIT錠劑施用部位發生、與錠劑投予有時間關係的治療相關不良事件。對於SLIT錠劑而言，此意謂AE在錠劑攝入60分鐘內引發且在口腔、咽喉、耳、鼻、眼及上胃腸道中及周圍發生。耳、眼及鼻症狀作為來源於施藥部位的神經性反射而包括在內，其可觸發如打噴嚏、流鼻涕、耳瘙癢等症狀。上GI症狀可能因吞咽少量過敏原而發生。
對於SLIT錠劑投予而言，局部施藥部位反應包括：
● 耳/眼/鼻：瘙癢、流鼻涕或流眼淚
● 口腔/舌/唇：瘙癢、發麻、腫脹、疼痛、潰爛
● 咽喉：瘙癢、刺激、咳嗽、緊繃、腫脹
● 皮膚：頭/頸區域的局部潮紅/蕁麻疹(蕁麻疹影響單一皮節)
● 胃腸：上腹痛、噁心、單發性嘔吐、單發性腹瀉
● 評估個體耐受性準則時，輕度或中度強度的局部施藥部位反應被視為可接受。
徵集到的不良事件 (SAE)
在整個試驗中，在各錠劑攝入之後，經由電子日記徵集十六種預先指明的症狀。前14種預先指明的症狀經鑑別為SLIT錠劑的潛在局部施藥部位反應(
Canonica 等人 , 2014)。另外，為了監測可能的全身過敏反應及哮喘惡化，已包括關於蕁麻疹及呼吸困難的問題：
● 口瘡(潰瘍瘡)
● 口腫
● 唇腫
● 舌腫
● 咽喉腫
● 口腔瘙癢
● 耳瘙癢
● 口腔疼痛
● 舌疼痛
● 咽喉刺激/發癢
● 胃痛
● 噁心
● 嘔吐
● 腹瀉
● 全身蕁麻疹
● 呼吸短促
ESI
選定的AE (非嚴重或嚴重)將被視為ESI。ESI為評價產品安全概況時被視為關鍵的事件，其額外資料將收集於各別eCRF表上。此試驗的ESI為：
全身過敏反應：
● 用腎上腺素治療的事件
● 口腔及/或咽喉的重度局部腫脹或水腫
● 重度哮喘惡化
● EoE
作為ESI由研究者輸入eCRF中的所有不良事件將歸類為ESI。對安全資料庫進行額外的搜尋，以鑑別出其他潛在ESI。
術語『全身過敏反應』係用於定義涵蓋一系列過敏症狀的臨床症候群。此等症狀係作為自輕度症狀至危及生命之快速進展症狀之臨床連續譜的一部分發生。
定義全身過敏反應的症狀組合應由研究者分成1級、2級或3級：
1級： 輕度症狀，諸如(皮膚及皮下組織或輕度呼吸道症狀)、廣泛性瘙癢/蕁麻疹/風疹；血管性水腫；輕度喘鳴、輕度呼吸困難；心跳過速(相對於基線值，每分鐘心跳增加＞15次)
2級： 中度症狀，諸如(暗示呼吸道、心血管或GI中度症狀的輕度症狀及特徵)、中度吞咽困難、嘶啞及/或喘鳴、呼吸短促、中度呼吸困難、中度喘鳴及回縮；嘔吐及/或腹瀉發作超過一次；輕度眩暈.
3級： 重度症狀，諸如低氧、低血壓或神經損傷、發紺或在任何階段SpO2＜92%、呼吸道損傷、低血壓、意識模糊/崩潰、喪失意識；腸道失控。
此等症狀為實例，且個體可用若干階段的症狀表示。存在的最嚴重症狀應決定嚴重度階段。
急性過敏定義為：涉及兩個或更多個器官系統的潛在危及生命之重度全身過敏反應，包括心血管及/或呼吸道損傷。呼吸道損傷描述呼吸功能惡化，很可能快速進展至呼吸衰竭及死亡。
急性過敏的定義係基於
Sampson H. A 等人 , 2006的定義且特徵可為：累及皮膚及/或黏膜組織之疾病(例如廣泛性蕁麻疹、瘙癢或潮紅，或唇、舌或齶舌腫脹)的急性發作(數分鐘至數小時)及以下者中之至少一者：
● 呼吸道損傷(例如呼吸困難、喘息-支氣管痙攣、喘鳴、PEF減少、低血氧症)
● 低血壓(BP)或末梢器官功能障礙的相關症狀(例如低張症[崩潰]、暈厥、失禁)
● 低BP：兒童：低收縮BP (年齡特異性)或收縮BP降低大於30% 成人：收縮性BP小於90 mm Hg或相對於人基線值降低大於30%
● 用腎上腺素治療的事件
● 投予腎上腺素的事件，不論途徑
● 口腔及/或咽喉的重度腫脹或水腫
● 口腔及/或咽喉的重度腫脹或水腫定義為引起呼吸道損傷、需要腎上腺素治療介入的腫脹。若使用腎上腺素作為預防性治療舉措，則其不會自動地算作將腫脹界定為重度的治療介入。
● 重度哮喘惡化
● 重度哮喘惡化定義為：
o 使用全身皮質類固醇治療哮喘症狀至少3天，或
o 因哮喘需要用全身性皮質類固醇治療而住院超過12小時
EoE
基於切片檢查、顯示≥15個嗜伊紅血球/HPF或由胃腸病學家證實的EoE事件將歸類為ESI。
重大實驗室事件
若有以下情況之一，則重大實驗室事件應記錄為AE：
● 其為異常的及臨床上顯著的(由研究者進行醫學判斷)
● 其導致IMP治療變更或中斷
● 其滿足嚴重度準則
● 其指示個體的潛在安全風險
● 在升高的AST或ALT值≥正常上限3倍且膽紅素≥正常上限2倍且鹼性磷酸酶不大於正常上限2倍的情況下
● 用藥錯誤，包括IMP的劑量過度、濫用及誤用
● 用藥錯誤、IMP的誤用、劑量過度及濫用必須始終根據不良事件報告、結合或不結合相關AE來收集。
● 用藥錯誤：藥劑治療過程中的任何非預期失效，其導致或潛在地導致對個體的傷害
● 劑量過度：一天中服用的任何累積劑量，其超過該方案預定的劑量，不論該劑量是否已引起任何AE
● 濫用：持久的或偶發的有意過度使用，其伴隨著有害的生理或心理影響
● 誤用：有意及不適當的使用
AE 評估
AE嚴重度為研究者使用以下定義評估的臨床觀測結果：
● 輕度：暫時的症狀，不干擾個體的日常活動
● 中度：明顯的症狀，對個體的日常活動構成中度的干擾
● 重度：對個體的日常活動構成相當大的干擾，不可接受
AE與IMP之間的因果關係係由研究者使用以下定義評估：
● 可能：事件與IMP之間的因果關係存在合理的可能性。
● 不太可能：事件很可能由不同於IMP的病因引起。
● SAE評估為不太可能及可能與IMP相關時，應提供很可能替代的病因。
AE結果係由研究者使用以下定義評估：
● 恢復：完全恢復或病狀已恢復至基線
● 恢復，有後遺症：作為AE的結果，個體罹患持久的失能/無能。若後遺症符合SAE準則，則AE必須作為SAE報告
● 未恢復：病狀尚未恢復至基線，然而症狀可已改善
● 致命：導致死亡的事件
● 未知：結果未知。該術語僅應在不可能有其他定義時使用，例如個體失訪時。
在每次與試驗地聯繫時，必須以客觀方式就AE詢問個體，諸如「您在最後一次聯繫後已經歷了任何問題嗎？」
AE必須記錄於AE表上。自開始至消退，每個AE必須使用一個單一AE表。對於SAE及ESI而言，亦須填寫eCRF中的具體SAE及ESI表。
在伴隨藥劑治療AE之情況下，必須填寫伴隨藥劑表。
參考文獻清單
Becker, W. M., et al. “Peanut Allergens: New Consolidated Findings on Structure, Characteristics, and Allergome.” Allergologie Select, vol. 2, no. 1, 0 2018, pp. 67-79, doi:10.5414/ALX01418E.
Blanc, Fany, et al. “Boiling Peanut Ara h 1 Results in the Formation of Aggregates with Reduced Allergenicity.” Molecular Nutrition & Food Research, vol. 55, no. 12, 2 Dec. 2011, pp. 1887-94, doi:10.1002/mnfr.201100251.
Boldt, Andrea, et al. “Analysis of the Composition of an Immunoglobulin E Reactive High Molecular Weight Protein Complex of Peanut Extract Containing Ara h 1 and Ara h 3/4.” PROTEOMICS, vol. 5, no. 3, John Wiley & Sons, Inc, 0 Feb. 2005, pp. 675-86, doi:10.1002/pmic.200401150.
Breiteneder H, Chapman MD. Allergen Nomenclature. In Allergens and Allergen Immunotherapy: Subcutaneous, sublingual and oral. 5th Edition. Edited by Richard F. Lockey and Dennis K. Ledford. CRC Press, Taylor and Francis Group, Boca Raton, Florida, USA, 2014, pp 37-49.
Burk et al. Sublingual immunotherapy for peanut allergy: Long-term follow-up of a randomised multicenter trial. Journal of Allergy and Clinical Immunology, 2015, Vol 135 , p 1240-1248.e3. DOI: 10.1016/j.jaci.2014.12.1917.
Canonica, et al. “Sublingual Immunotherapy: World Allergy Organization Position Paper 2013 Update.” World Allergy Organization Journal, vol. 7, Lippincott Williams and Wilkins, 0 2014, doi:10.1186/1939-4551-7-6.
Chinthrajah, et al. “Sustained Outcomes in Oral Immunotherapy for Peanut Allergy (POISED Study): A Large, Randomised, Double-Blind, Placebo-Controlled, Phase 2 Study.” Lancet, The, vol. 394, no. 10207, Elsevier, 19 Oct. 2019, pp. 1437-49, doi:10.1016/S0140-6736(19)31793-3.
Chinthrajah, J et al. Updating the CoFAR Grading Scale for Systemic Allergic Reactions in Food Allergy. Journal of Allergy and Clinical Immunology, 2022, vol 149, p AB107, DOI: 10.1016/j.jaci.2021.12.372.
Davis, Carla M., et al. “Maximum Dose Food Challenges Reveal Transient Sustained Unresponsiveness in Peanut Oral Immunotherapy (POIMD Study).” Journal of Allergy and Clinical Immunology: In Practice, The, vol. 10, no. 2, Elsevier, 0 Feb. 2022, pp. 566-576.e6, doi:10.1016/j.jaip.2021.10.074.
De Angelis, Elisabetta, et al. “Effects of the Varietal Diversity and the Thermal Treatment on the Protein Profile of Peanuts and Hazelnuts.” Journal of Food Quality, vol. 2018, Blackwell Publishing Inc, 0 2018, pp. 1-10, doi:10.1155/2018/7635957.
Durham, Stephen R.; Shamji, Mohamed H. Allergen immunotherapy: past, present and future. Nature Reviews Immunology, 2022 pages: 1-12, DOI: 10.1038/s41577-022-00786-1.
Hemmings, et al. “Ara h 2 Is the Dominant Peanut Allergen despite Similarities with Ara h 6.” Journal of Allergy and Clinical Immunology, The, vol. 146, no. 3, Mosby, 0 Sept. 2020, pp. 621-630.e5, doi:10.1016/j.jaci.2020.03.026.
Iqbal, Amjad, et al. “Allergens of Arachis Hypogaea and the Effect of Processing on Their Detection by ELISA.” Food & Nutrition Research, vol. 60, no. 1, Taylor & Francis, 1 Jan. 2016, doi:10.3402/fnr.v60.28945.
Kim, E. H., et al. “Sublingual Immunotherapy for Peanut Allergy: Clinical and Immunologic Evidence of Desensitization.” Journal of Allergy and Clinical Immunology, The, vol. 127, no. 3, Mosby, 0 Mar. 2011, pp. 640-646.e1, doi:10.1016/j.jaci.2010.12.1083.
Koppelman, Stef, et al. “Release of Major Peanut Allergens from Their Matrix under Various PH and Simulated Saliva Conditions—Ara H2 and Ara H6 Are Readily Bio-Accessible.” Nutrients, vol. 10, no. 9, MDPI, 11 Sept. 2018, p. 1281, doi:10.3390/nu10091281.
Koppelman, Stef J., et al. “Allergenicity Attributes of Different Peanut Market Types.” Food and Chemical Toxicology, vol. 91, Pergamon, 0 May 2016, pp. 82-90, doi:10.1016/j.fct.2016.02.016.
Krause, Maren, et al. “Human Monocyte-Derived Type 1 and 2 Macrophages Recognize Ara h 1, a Major Peanut Allergen, by Different Mechanisms.” Scientific Reports, vol. 11, no. 1, Nature Publishing Group, 12 May 2021, doi:10.1038/s41598-021-89402-1.
Kukkonen, A. K., et al. “Ara h 2 and Ara 6 Are the Best Predictors of Severe Peanut Allergy: A Double‐blind Placebo‐controlled Study.” Allergy, vol. 70, no. 10, John Wiley & Sons, Inc, 25 Sept. 2015, pp. 1239-45, doi:10.1111/all.12671.
Maleki, Soheila J., et al. “Differences among Heat-Treated, Raw, and Commercial Peanut Extracts by Skin Testing and Immunoblotting.” Annals of Allergy, Asthma & Immunology, vol. 105, no. 6, Elsevier, 0 Dec. 2010, pp. 451-57, doi:10.1016/j.anai.2010.09.025.
Marsh J et al. Purification and characterisation of a panel of peanut allergens suitable for use in allergy diagnosis. Mol Nutr Food Res. 2008 Nov ;52 Suppl 2: S272-85. doi: 10.1002/mnfr.200700524.
Palladino, and Breiteneder. “Peanut Allergens.” Molecular Immunology, vol. 100, Elsevier, 0 Aug. 2018, pp. 58-70, doi:10.1016/j.molimm.2018.04.005.
Pandey, Arun K., et al. “Hypoallergen Peanut Lines Identified Through Large-Scale Phenotyping of Global Diversity Panel: Providing Hope Toward Addressing One of the Major Global Food Safety Concerns.” Frontiers in Genetics, vol. 10, Frontiers Research Foundation, 0 2019, p. 1177, doi:10.3389/fgene.2019.01177.
Poms, Roland E., et al. “Effect of Roasting History and Buffer Composition on Peanut Protein Extraction Efficiency.” Molecular Nutrition & Food Research, vol. 48, no. 6, 0 Nov. 2004, pp. 459-64, doi:10.1002/mnfr.200400052.
Restani, Patrizia, et al. “Identification of the Basic Subunit of Ara h 3 as the Major Allergen in a Group of Children Allergic to Peanuts.” Annals of Allergy, Asthma & Immunology, vol. 94, no. 2, Elsevier, 0 Feb. 2005, pp. 262-66, doi:10.1016/S1081-1206(10)61306-3.
Sampson, H. A., A. Munoz-Furlong, et al. “Second Symposium on the Definition and Management of Anaphylaxis: Summary Report-Second National Institute of Allergy and Infectious Disease/Food Allergy and Anaphylaxis Network Symposium.” Annals of Emergency Medicine, vol. 47, no. 4, Mosby, 0 Apr. 2006, pp. 373-80, doi:10.1016/j.annemergmed.2006.01.018.
Sampson, H. A., R. Gerth van Wijk, et al. “Standardizing Double-Blind, Placebo-Controlled Oral Food Challenges: American Academy of Allergy, Asthma & Immunology-European Academy of Allergy and Clinical Immunology PRACTALL Consensus Report.” Journal of Allergy and Clinical Immunology, The, vol. 130, no. 6, Mosby, 0 Dec. 2012, pp. 1260-74, doi:10.1016/j.jaci.2012.10.017.
Spiric, J., et al. “Mass Spectrometry to Complement Standardization of House Dust Mite and Other Complex Allergenic Extracts.” Clinical & Experimental Allergy, vol. 47, no. 5, John Wiley & Sons, Inc, 27 Apr. 2017, pp. 604-17, doi:10.1111/cea.12931.
Valk, J., et al. “Mono-Sensitisation to Peanut Component Ara h 6: A Case Series of Five Children and Literature Review.” European Journal of Pediatrics, vol. 175, no. 9, Springer, 0 Sept. 2016, pp. 1227-34, doi:10.1007/s00431-016-2733-7.
van Boxtel, Evelien L., et al. “Allergen Ara h 1 Occurs in Peanuts as a Large Oligomer Rather Than as a Trimer.” Journal of Agricultural and Food Chemistry, vol. 54, no. 19, American Chemical Society, 1 Sept. 2006, pp. 7180-86, doi:10.1021/jf061433+.
Vereda, A., et al. “Peanut Allergy: Clinical and Immunologic Differences among Patients from 3 Different Geographic Regions.” Journal of Allergy and Clinical Immunology, The, vol. 127, no. 3, Mosby, 0 Mar. 2011, pp. 603-07, doi:10.1016/j.jaci.2010.09.010.
Vickery, B.P et al. Peanut oral immunotherapy modifies IgE and IgG"4 responses to major peanut allergens. Journal of Allergy and Clinical Immunology, 2013, vol. 131, p 128-134. DOI: 10.1016/j.jaci.2012.10.048.
Wang, Shuo, et al. “Effect of Roasted Peanut Allergen Ara h 3 Protein on the Sensitization of Caco‐2 Cells.” Journal of the Science of Food and Agriculture, vol. 101, no. 13, John Wiley & Sons, Ltd., 4 Sept. 2021, pp. 5325-36, doi:10.1002/jsfa.11180.
Wunschmann S et al. (2019). Peanut flour protein with defined allergen content for use as a reference standard. European academy of allergy immunology congress, Vol 74, S106, p 475-476. Doi:10.1111/all.13961
Zhang, Wenming, et al. “Comparison of Sublingual Immunotherapy and Oral Immunotherapy in Peanut Allergy.” Allergo Journal International, vol. 27, no. 6, SpringerMedizin, 0 Sept. 2018, pp. 153-61, doi:10.1007/s40629-018-0067-x.
無
在顯示SEC HPLS分析層析圖的所有圖式中，指示校準標準的尺寸以淺灰色顯示且所分析的樣品以黑線顯示。
[圖1a及1b]顯示nAra h 1之純標準物的過敏原概況，如SEC HPLC分析(圖1a)或RP-HPLC (長運行方法)(圖1b)所評價。
[圖2a及2b]顯示nAra h 2之純標準物的過敏原概況，如SEC HPLC分析(圖2a)或RP-HPLC (長運行方法)(圖2b)所評價。
[圖3a及3b]顯示nAra h 3之純標準物的過敏原概況，如SEC HPLC分析(圖3a)或RP-HPLC (長運行方法)(圖3b)所評價。
[圖3c及3d]顯示nAra h 3六聚體形式之概況，如SEC HPLC分析(圖3c)或RP-HPLC (長運行方法)(圖3d)所評價。
[圖3e及3f]顯示nAra h 3三聚體形式之概況，如SEC HPLC分析(圖3e)或RP-HPLC (長運行方法)(圖3f)所評價。
[圖3g及3h]顯示nAra h 3單體形式之概況，如SEC HPLC分析(圖3g)或RP-HPLC (長運行方法)(圖3h)所評價。
[圖4a及4b]顯示nAra h 6之純標準物的過敏原概況，如SEC HPLC分析(圖4a)或RP-HPLC (長運行方法)(圖4b)所評價。
[圖5]顯示輕緩地壓碎成「薄片」之後直接自「螺旋壓榨機」收集之脫脂花生源材料的相片(左側)及最終呈粉末狀之脫脂花生源材料之典型批料的相片(右側)。
[圖6a及6b]顯示四種花生過敏原Ara h 1、2、3及6之相對萃取效率與pH (pH範圍5至9)的關係及與NaCl濃度(0至1000 mM)的關係。
[圖7]顯示對獲自US供者之血清進行的IgE抑制曲線。藍色係作為結合抗原的烤花生萃取物及作為游離抗原(抑制劑)的烤花生萃取物。紅色係作為結合抗原的烤花生萃取物及作為游離抗原的非烤花生萃取物。橙色係作為結合抗原的非烤花生萃取物及作為游離抗原的烤花生萃取物。黑色係作為結合抗原的非烤花生萃取物及作為游離抗原的非烤花生萃取物。
[圖8a至8e]顯示不同Runner基因型之過敏原萃取物的RP-HPLC概況：a)基因型#3321之Arabu粗萃取物(在Arabi, GA收集)；b)基因型#3321之Alamo粗萃取物(在Alamo, GA收集)；c)基因型#1041之Chula粗萃取物(在Chula, GA收集)；d)基因型#212C之McRae批號1粗萃取物(在McRae, GA收集)；及e)基因型#1041之McRae批號2粗萃取物(在McRae, GA收集)。HPLC概況略微不同。然而，在Ara h 3出現之一部分層析圖中，峰特徵存在差異。基因型#1041 (McRae)似乎涵蓋大部分同功型。
[圖9a及b]顯示使用萃取緩衝液A (pH 7.4) (圖9a)相對於緩衝液B (pH 8.5) (圖9b)製備之花生萃取物的RP-HPLC過敏原概況(長運行方法)。
[圖10a至10d]顯示在花生過敏原萃取物分級分離期間自陰離子交換層析收集之溶離份A、B、C、D及流過物溶離份(FT)的RP-HPLC層析圖(短運行)。溶離份A富含Ara h 6 (圖10a)，溶離份B富含Ara h 2 (圖10b)，溶離份C富含Ara h 2 (圖10c)，溶離份D富含Ara h 3 (圖10d)且溶離份FT不富含過敏原nAra h 1、2、3及6中之任一者(圖10e)。
[圖10f至10i]顯示nAra h 1、2、3及6之純參考標準物的RP-HPLC層析圖(短運行)。
[圖11]顯示如下製備之純化過敏原萃取物的RP-HPLC層析圖(短運行方法)：將FT溶離份及適當體積之溶離份A、B、C及D混合以產生其中過敏原nAra h 1、2、3及6中之各者之莫耳量均衡且存在於FT溶離份中之過敏原含量較小的萃取物。
[圖12a至12b]顯示藉由LC-MS/MS對各過敏原定量之後，Arah 1、2、3及6相對於Ara h 2標準化的相對莫耳含量。圖12a繪示實施例5所得之三個批次(A、B及C)之花生過敏原組成物的概況且圖12b繪示四個市售批次之比較例過敏原萃取物(Greer SPT產品)的概況。
[圖13]顯示藉由包含陰離子交換層析之方法獲得之純化過敏原萃取物(DS)及市購花生過敏原萃取物(Greer之SPT)的RP-HPLC重疊層析圖。
[圖14]顯示實施例3所得之粗過敏原萃取物的SEC分析(X300管柱)。
[圖15]顯示實施例5所得之純化過敏原萃取物的SEC分析(X300管柱)。
[圖16]顯示比較例過敏原萃取物(Greer SPT產品)的SEC分析(X300管柱)。
[圖17]顯示根據實施例2至5藉由相同製造方法獲得之三個批次(A、B及C)之純化過敏原萃取物的SEC分析(X300管柱)。點線顯示標準nAra h 1及nAra h 3。
[圖18]顯示包含目標量之花生過敏原之花生蛋白質組成物之完整製造製程的流程圖。
[圖19]顯示nAra h 3之純化標準物(泳道2 (4 μg)及泳道3 (2 μg))及nAra h 1之純化標準物(泳道4 (4 μg)及泳道5 (2 μg))及粗萃取物(經過濾)(泳道6 (30 μg)及泳道7 (15 μg))、純化粗萃取物(泳道8 (15 μg))及比較例萃取物(泳道9 (15 μg))的原生凝膠。分子大小指示劑(泳道1及泳道10)。
[圖20]顯示以下樣品在原生電泳凝膠上溶離的蛋白質譜帶：A)標準尺寸標記物；B)粗萃取物(經過濾)；C)標準尺寸標記物；D)安慰劑固體劑型；E)添加至安慰劑中的粗萃取物(經過濾)；F)粗萃取物(經過濾)；以及G)用純化萃取物調配的固體劑型。
Claims (91)
- 一種醫藥組成物，其包含花生蛋白質nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6中之各者且進一步包含醫藥學上可接受之載劑、稀釋劑、賦形劑或媒劑，其中配對nAra h 1:nAra h 2、nAra h 3:nAra h 2及nAra h 6:nAra h 2中之各者的莫耳比係在0.5至2.0範圍內。
- 如請求項1之醫藥組成物，其中該等配對nAra h 1:nAra h 2、nAra h 3:nAra h 2及nAra h 6:nAra h 2中之各者的莫耳比係在0.5至1.5範圍內。
- 如請求項1或2之醫藥組成物，其中該等花生蛋白質nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6中之各者可用pH在7至9範圍內的水溶劑(aqueous solvent)自生花生仁萃取。
- 如前述請求項中任一項之醫藥組成物，其中nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3與nAra h 6的組合構成該組成物中之總花生蛋白質的至少80重量%。
- 如前述請求項中任一項之組成物，其中nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3與nAra h6的組合構成該組成物中之總花生蛋白質的最多98重量%。
- 如前述請求項中任一項之醫藥組成物，其中nAra h 2的濃度係在2至12 nmol/mg花生蛋白質總質量的範圍內。
- 如前述請求項中任一項之醫藥組成物，其中nAra h 2的濃度係在3至9 nmol/mg花生蛋白質總質量的範圍內。
- 如前述請求項中任一項之醫藥組成物，其中nAra h 1、nAra h 3及nAra h 6中之各者的濃度係在2至12 nmol/mg花生蛋白質總質量的範圍內。
- 如前述請求項中任一項之醫藥組成物，其中nAra h 1、nAra h 3及nAra h 6中之各者的濃度係在3至9 nmol/mg花生蛋白質總質量的範圍內。
- 如請求項1至9中任一項之醫藥組成物，其中nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6中之各者的濃度係在2至12 nmol/mg花生蛋白質總質量的範圍內。
- 如請求項1至9中任一項之醫藥組成物，其中nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6中之各者的濃度係在3至9 nmol/mg花生蛋白質總質量的範圍內。
- 如前述請求項中任一項之醫藥組成物，其中nAra h 2及/或nAra h 3的濃度為受控制的。
- 如前述請求項中任一項之醫藥組成物，其中nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3、nAra h 6中之各者的濃度為受控制的。
- 如前述請求項中任一項之醫藥組成物，其中nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6中之各者包含其天然存在之同功型及/或天然存在之寡聚體構形。
- 如前述請求項中任一項之醫藥組成物，其中nAra h 3主要以其三聚體與六聚體構形之混合物形式存在。
- 如前述請求項中任一項之醫藥組成物，其中nAra h 1主要以其三聚體構形存在。
- 如前述請求項中任一項之醫藥組成物，其基本上不含具有＞700 kDa之分子質量的花生蛋白質。
- 如前述請求項中任一項之醫藥組成物，其中該等花生蛋白質可藉由包含以下步驟之方法獲得： 1)提供如下獲得的花生蛋白質水性萃取物：用水溶劑萃取生花生仁以獲得包含nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6中之各者的水性萃取物； 2)在7至9範圍內的pH下，經由逐步或連續的水性鹽梯度溶離對該水性萃取物進行陰離子交換層析，藉此將nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6中之各者溶離並收集至針對nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3或nAra h 6個別地富集的溶離份中； 3)視需要收集來自該陰離子交換層析的流過物溶離份；及 4)將步驟2或組合的步驟2與步驟3所得之溶離份或其等分試樣合併以獲得該等花生蛋白質。
- 如請求項18之醫藥組成物，其中步驟1之水溶劑包含pH在7至8範圍內的緩衝水溶劑。
- 如請求項18或19中任一項之醫藥組成物，其中步驟2之鹽為NaCl或與NaCl等效的鹽。
- 如請求項18至20中任一項之醫藥組成物，其中步驟2所得之個別溶離份中的nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6濃度係在步驟4中合併之前加以控制。
- 如請求項18至21中任一項之醫藥組成物，其中該等合併之溶離份或其等分試樣經合併以使得該等配對nAra h 1:nAra h 2、nAra h 3:nAra h 2、nAra h 6:nAra h 2中之各者的莫耳比在0.5至2.0範圍內。
- 如請求項18至21中任一項之醫藥組成物，其中該等合併之溶離份或其等分試樣經合併以使得該等配對nAra h 1:nAra h 2、nAra h 3:nAra h 2、nAra h 6:nAra h 2中之各者的莫耳比在0.5至1.5範圍內。
- 如前述請求項中任一項之醫藥組成物，其進一步包含選自由以下者組成之群的花生蛋白質：Ara h 5、Ara h 7、Ara h 8、Ara h 9、Ara h 10、Ara h 11、Ara h 12、Ara h 13、Ara h 14、Ara h 15、Ara h 16、Ara h 17及Ara h 18。
- 如前述請求項中任一項之醫藥組成物，其為液體、半固體或固體劑型。
- 如前述請求項中任一項之醫藥組成物，其適於舌下投予。
- 如前述請求項中任一項之醫藥組成物，其中該醫藥學上可接受之載劑、稀釋劑、賦形劑或媒劑形成舌下固體單位劑型。
- 如請求項27之醫藥組成物，其中該舌下固體單位劑型為壓製錠劑、非壓製錠劑、薄膜、糊狀物或單位劑量凍乾物(lyophilizate)。
- 如請求項27或28中任一項之醫藥組成物，其中該舌下固體單位劑型為快速分散劑型，視需要為具有以下特徵的快速分散固體劑型：當暴露於人類唾液時，該舌下固體劑型在暴露於唾液之後的2分鐘內或更短時間內崩解。
- 如前述請求項中任一項之醫藥組成物，其中該載劑物質包含明膠，視需要為魚明膠。
- 如請求項27至30中任一項之醫藥組成物，其中每單位劑型的花生蛋白質總量係在0.1至5000 µg範圍內。
- 如請求項27至31中任一項之醫藥組成物，其中每單位劑型的nAra h 2之量係在50至150 µg/mg花生蛋白質的範圍內。
- 如請求項27至32中任一項之醫藥組成物，其中每單位劑型的nAra h 3之量係在160至500 µg/mg花生蛋白質的範圍內。
- 一種如請求項1至33中任一項之醫藥組成物，其用作醫藥品。
- 一種如請求項1至33中任一項之醫藥組成物，其用於減輕花生過敏及/或急性過敏(anaphylaxis)之方法中，其中該急性過敏係因暴露於花生或含有花生的產品而引起。
- 如請求項35所使用之醫藥組成物，其中該減輕花生過敏及/或急性過敏之方法與意外暴露於花生或含有花生的產品有關。
- 如請求項35或36中任一項所使用之醫藥組成物，其中該減輕花生過敏及/或急性過敏之方法包含誘導針對一或多種花生過敏原、一或多種花生、花生蛋白質或含花生蛋白質產品的耐受性。
- 如請求項37所使用之醫藥組成物，其中誘導耐受性包含對攝入或暴露於至少600 mg花生蛋白質的耐受性。
- 如請求項37或38中任一項所使用之醫藥組成物，其中誘導耐受性包含在口服食物攻毒(challenge)測試中對至少600 mg花生蛋白質的耐受性。
- 如請求項37至39中任一項所使用之醫藥組成物，其中治療包含每日單劑的花生蛋白質。
- 如請求項40所使用之醫藥組成物，其中最低日劑量為0.1 µg花生蛋白質，且最高日劑量為5000 µg花生蛋白質。
- 如請求項40或41中任一項所使用之醫藥組成物，其中最低日劑量為0.1 µg花生蛋白質，且最高日劑量為5000 µg花生蛋白質，其中該使用包含先投予一種第一系列的複數次相同日劑量，再投予至少一種另一系列的複數次相同日劑量，該至少一種另一系列的日劑量不同於該第一系列的日劑量且較佳高於該第一系列的日劑量。
- 如請求項40或41中任一項所使用之醫藥組成物，其中花生蛋白質的最低日劑量為0.1 µg，且最高日劑量為5000 µg花生蛋白質，其中複數個系列的相同日劑量係以劑量增加(updosing)期投予，其中一相同日劑量系列中的日劑量高於任何在前的相同日劑量系列中的日劑量。
- 如請求項40至43中任一項所使用之醫藥組成物，其中花生蛋白質的最低日劑量在1至150 µg範圍內。
- 如請求項42至44中任一項所使用之醫藥組成物，其中該複數個系列係選自3、4、5、6、7、8及9個系列。
- 如請求項42至45中任一項所使用之醫藥組成物，其中一系列具有6至22天範圍內的持續時間。
- 如請求項42至46中任一項所使用之醫藥組成物，其中在該劑量增加期完成之後，該方法以維持期繼續進行，該維持期包含投予複數次日劑量，該複數次日劑量與該劑量增加期之最後一個系列的日劑量相同或在該劑量增加期之最後一個系列之日劑量的½至9/10範圍內。
- 如請求項47所使用之醫藥組成物，其中該維持期投予的花生蛋白質日劑量係在300至5000 µg範圍內。
- 如請求項35至48中任一項所使用之醫藥組成物，其中該醫藥組成物投予至口腔黏膜，較佳藉由舌下投予。
- 一種醫藥組成物，其藉由執行過敏原特異性免疫療法而用於減輕人類個體之花生過敏及/或花生過敏原誘導之急性過敏的方法中，其中該方法包含劑量增加期及視需要存在的維持期，其中該劑量增加期包含多個連續系列的花生蛋白質組成物之舌下投予日劑量，該花生蛋白質組成物包含nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6中之各者， 其中劑量增加期的各系列之內的日劑量相同；任何在前的系列中的劑量低於在後的系列；且各系列具有6至30天範圍內的持續時間；且其中 • 第一系列的花生蛋白質日劑量在0.1 µg至200 µg範圍內； • 最後一個系列的花生蛋白質日劑量在300 µg至5000 µg範圍內；且 • 其中系列的總數目在3至7範圍內。
- 如請求項50所使用之醫藥組成物，其中該等花生蛋白質係藉由或可藉由pH在7至9範圍內的水溶劑自生花生仁萃取且該等經萃取或可萃取的花生蛋白質包含nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6中之各者。
- 如請求項50或51中任一項所使用之醫藥組成物，其中該等花生蛋白質包含莫耳比在0.5至2.0範圍內的配對nAra h 1:nAra h 2、nAra h 3:nAra h 2及nAra h 6:nAra h 2中之各者。
- 如請求項50至52中任一項之醫藥組成物，其中該等花生蛋白質包含含量在50至150 µg/mg花生蛋白質範圍內的nAra h 2。
- 如請求項50至53中任一項之醫藥組成物，其中該花生蛋白質包含含量在160至500 µg/mg花生蛋白質範圍內的nAra h 3。
- 如請求項50至54中任一項所使用之醫藥組成物，其中nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3與nAra h6的組合構成該花生蛋白質的至少75重量%。
- 如請求項50至55中任一項所使用之醫藥組成物，其中該等系列中之各者具有10至21天的持續時間。
- 如請求項50至56中任一項所使用之醫藥組成物，其中該第一系列的花生蛋白質日劑量在1至150 µg範圍內。
- 如請求項50至57中任一項所使用之醫藥組成物，其中晚於該第一系列之系列的花生蛋白質日劑量相較於直接在前系列之日劑量增加2至4倍，諸如3至3.5倍之間，諸如2至3倍之間。
- 如請求項50至58中任一項所使用之醫藥組成物，其中該第一系列的花生蛋白質日劑量為約1 µg且該最後一個系列的花生蛋白質日劑量為約4320 µg，且系列的數目為9，該第一系列與最後一個系列之間7個系列的劑量依遞增次序分別為約3 µg、約10 µg、約40 µg、約120 µg、約360 µg、約1080 µg及約2160 µg。
- 如請求項50至58中任一項所使用之醫藥組成物，其中該第一系列的花生蛋白質日劑量為約3 µg且該最後一個系列的花生蛋白質日劑量為約4320 µg，且系列的數目為8，該第一系列與最後一個系列之間6個系列的劑量依遞增次序分別為約10 µg、約40 µg、約120 µg、約360 µg、約1080 µg及約2160 µg。
- 如請求項50至58中任一項所使用之醫藥組成物，其中該第一系列的花生蛋白質日劑量為約10 µg且該最後一個系列的日劑量為約4320 µg，且系列的數目為7，該第一系列與最後一個系列之間5個系列的劑量依遞增次序分別為約40 µg、約120 µg、約360 µg、約1080 µg及約2160 µg。
- 如請求項50至58中任一項所使用之醫藥組成物，其中該第一系列的花生蛋白質日劑量為約40 µg且該最後一個系列的花生蛋白質日劑量為約4320 µg，且系列的數目為6，該第一系列與最後一個系列之間4個系列的劑量依遞增次序分別為約120 µg、約360 µg、約1080 µg及約2160 µg。
- 如請求項50至58中任一項所使用之醫藥組成物，其中該第一系列的花生蛋白質日劑量為約120 µg且該最後一個系列的花生蛋白質日劑量為約4320 µg，且系列的數目為5，該第一系列與最後一個系列之間3個系列的劑量依遞增次序分別為約360 µg、約1080 µg及約2160 µg。
- 如請求項50至58中任一項所使用之醫藥組成物，其中該第一系列的花生蛋白質日劑量為約1 µg且該最後一個系列的花生蛋白質日劑量為約2160 µg，且系列的數目為8，該第一系列與最後一個系列之間6個系列的劑量依遞增次序分別為約3 µg、約10 µg、約40 µg、約120 µg、約360 µg及約1080 µg。
- 如請求項50至58中任一項所使用之醫藥組成物，其中該第一系列的花生蛋白質日劑量為約3 µg且該最後一個系列的花生蛋白質日劑量為約2160 µg，且系列的數目為7，該第一系列與最後一個系列之間5個系列的劑量依遞增次序分別為約10 µg、約40 µg、約120 µg、約360 µg及約1080 µg。
- 如請求項50至58中任一項所使用之醫藥組成物，其中該第一系列的花生蛋白質日劑量為約10 µg且該最後一個系列的花生蛋白質日劑量為約2160 µg，且系列的數目為6，該第一系列與最後一個系列之間4個系列的劑量依遞增次序分別為約40 µg、約120 µg、約360 µg及約1080 µg。
- 如請求項50至58中任一項所使用之醫藥組成物，其中該第一系列的花生蛋白質日劑量為約40 µg且該最後一個系列的花生蛋白質日劑量為約2160 µg，且系列的數目為5，該第一系列與最後一個系列之間3個系列的劑量依遞增次序分別為約120 µg、約360 µg及約1080 µg。
- 如請求項50至58中任一項所使用之醫藥組成物，其中該第一系列的花生蛋白質日劑量為約120 µg且該最後一個系列的日劑量為約2160 µg，且系列的數目為4，該第一系列與最後一個系列之間2個系列的劑量依遞增次序分別為約360 µg及約1080 µg。
- 如請求項50至58中任一項所使用之醫藥組成物，其中該第一系列的花生蛋白質日劑量為約1 µg且該最後一個系列的花生蛋白質日劑量為約1080 µg，且系列的數目為7，該第一系列與最後一個系列之間5個系列的劑量依遞增次序分別為約3 µg、約10 µg、約40 µg、約120 µg及約360 µg。
- 如請求項50至58中任一項所使用之醫藥組成物，其中該第一系列的花生蛋白質日劑量為約3 µg且該最後一個系列的花生蛋白質日劑量為約1080 µg，且系列的數目為6，該第一系列與最後一個系列之間4個系列的劑量依遞增次序分別為約10 µg、約40 µg、約120 µg及約360 µg。
- 如請求項50至58中任一項所使用之醫藥組成物，其中該第一系列的花生蛋白質日劑量為約10 µg且該最後一個系列的花生蛋白質日劑量為約1080 µg，且系列的數目為5，該第一系列與最後一個系列之間3個系列的劑量依遞增次序分別為約40 µg、約120 µg及約360 µg。
- 如請求項50至58中任一項所使用之醫藥組成物，其中該第一系列的花生蛋白質日劑量為約40 µg且該最後一個系列的花生蛋白質日劑量為約1080 µg，且系列的數目為4，該第一系列與最後一個系列之間2個系列的劑量依遞增次序分別為約120 µg及約360 µg。
- 如請求項50至58中任一項所使用之醫藥組成物，其中該第一系列的花生蛋白質日劑量為約120 µg且該最後一個系列的花生蛋白質日劑量為約1080 µg，且系列的數目為3，該第一系列與最後一個系列之間1個系列的劑量為約360 µg。
- 如請求項50至73中任一項所使用之醫藥組成物，其中投予至口腔黏膜係藉由口頰或舌下投予達成，較佳為舌下投予。
- 如請求項50至74中任一項所使用之醫藥組成物，其包含維持期，該維持期包含以至少一天間隔複數次投予花生蛋白質劑至舌下黏膜。
- 如請求項50至75中任一項所使用之醫藥組成物，其中該維持期的總蛋白質劑量與任何最後投予系列的花生蛋白質日劑量相同或在任何最後系列之花生蛋白質日劑量的0.5至0.9範圍內。
- 如請求項50至76中任一項所使用之醫藥組成物，其中人類在該劑量增加期完成之後，在口服食物攻毒測試中可耐受至少600 mg花生蛋白質。
- 如請求項50至76中任一項所使用之醫藥組成物，其中人類在該劑量增加期及六個月的維持期完成之後，在口服食物攻毒測試中可耐受至少600 mg花生蛋白質。
- 如請求項50至78中任一項所使用之醫藥組成物，其中該醫藥組成物為如請求項1至33中任一項之醫藥組成物。
- 一種用於製備花生蛋白質組成物的方法，該花生蛋白質組成物包含選自由nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6組成之群之花生蛋白質中的兩者或更多者，該方法包含 1) 提供如下獲得的花生蛋白質萃取物：用水溶劑萃取生花生仁以獲得包含nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6中之各者的水性萃取物； 2) 在7至9範圍內的pH下，經由逐步或連續的水性鹽梯度溶離對該水性萃取物進行陰離子交換層析，藉此將nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6中之各者溶離並收集至針對nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3或nAra h 6個別地富集的溶離份中；及 3) 視需要收集來自該陰離子交換層析的流過物溶離份；以及 4) 將步驟2或組合的步驟2與步驟3所得之兩個或更多個溶離份或其等分試樣合併以獲得該花生蛋白質組成物。
- 如請求項80之方法，其中步驟1之水溶劑包含pH在7至9範圍內的緩衝水溶劑。
- 如請求項81之方法，其中該pH在7至8範圍內。
- 如請求項80或81中任一項之方法，其中緩衝水溶劑包含10至200 mM之莫耳濃度範圍內的TRIS且視需要包含含量在5至200 mM範圍內的NaCl或其等效鹽。
- 如請求項80至83中任一項之方法，其中將該等生花生仁粉碎，視需要覆皮(skinned)且粉碎。
- 如請求項80至84中任一項之方法，其中步驟2之鹽為NaCl或與NaCl等效的鹽。
- 如請求項80至85中任一項之方法，其中步驟2所得之個別溶離份中的nAra h 1、nAra h 2、nAra h 3及nAra h 6濃度係在步驟4中合併之前加以控制。
- 如請求項80至86中任一項之方法，其中該等合併之溶離份或其等分試樣經合併以獲得花生組成物，該等花生組成物包含莫耳比在0.5至2.0範圍內、視需要在0.5至1.5範圍內的配對nAra h 1:nAra h 2、nAra h 3:nAra h 2、nAra h 6:nAra h 2中之各者。
- 如請求項80至87中任一項之方法，其中將步驟3所得之流過物溶離份或其等分試樣與步驟2之經合併之溶離份合併。
- 如請求項80至88中任一項之方法，其中該花生蛋白質組成物進一步包含選自由以下者組成之群的花生蛋白質：Ara h 5、Ara h 7、Ara h 8、Ara h 9、Ara h 10、Ara h 11、Ara h 12、Ara h 13、Ara h 14、Ara h 15、Ara h 16、Ara h 17及Ara h 18。
- 如請求項80至89中任一項之方法，其中步驟2收集的該等溶離份基本上不含源自花生之蛋白質的高分子量複合物。
- 如請求項90之方法，其中步驟2收集的該等溶離份基本上不含分子質量＞700 kDa的花生蛋白質。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP22167679 | 2022-04-11 | ||
| EP22167679.4 | 2022-04-11 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| TW202346316A true TW202346316A (zh) | 2023-12-01 |
Family
ID=81454679
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| TW112113455A TW202346316A (zh) | 2022-04-11 | 2023-04-11 | 花生過敏原組成物 |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| TW (1) | TW202346316A (zh) |
| WO (1) | WO2023198674A1 (zh) |
Family Cites Families (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20050063994A1 (en) | 2000-04-06 | 2005-03-24 | Caplan Michael J. | Methods and reagents for decreasing clinical reaction to allergy |
| FR2924349B1 (fr) | 2007-12-03 | 2010-01-01 | Dbv Tech | Methode de desensibilitation aux allergenes |
| WO2014159609A1 (en) | 2013-03-14 | 2014-10-02 | Allergen Research Corporation | Peanut formulations and uses thereof |
| HUE051831T2 (hu) | 2013-03-14 | 2021-03-29 | Aimmune Therapeutics Inc | Szájon át történõ deszenzitizálásra szolgáló földimogyoró-készítmények elõállítása |
| JP6665159B2 (ja) | 2014-08-04 | 2020-03-13 | デベヴェ テクノロジーズＤｂｖ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ | 食物アレルゲン組成物 |
| TW201709926A (zh) | 2015-04-23 | 2017-03-16 | 賽諾菲公司 | 用於舌下投藥之吡喃葡萄糖基脂ａ及過敏原調配物 |
| ES2952741T3 (es) | 2015-12-29 | 2023-11-03 | Sanofi Sa | Métodos para caracterizar composiciones que comprenden antígenos de cacahuete |
| US20180044384A1 (en) | 2016-02-18 | 2018-02-15 | Xiu-Min Li | Methods and compositions to reduce peanut-induced anaphylaxis |
| FR3062797A1 (fr) | 2017-02-10 | 2018-08-17 | Centre Hospitalier Et Universitaire De Clermont-Ferrand | Gelule a liberation gastro-intestinale destinee a etre utilisee dans une methode permettant de desensibiliser et/ou d'induire une tolerance chez un sujet allergique a l'arachide |
| EP3244212A1 (en) | 2017-02-15 | 2017-11-15 | Euroimmun Medizinische Labordiagnostika AG | An improved assay for the diagnosis of peanut allergy |
| WO2022147173A1 (en) | 2020-12-30 | 2022-07-07 | The Regents Of The University Of Michigan | Nanoemulsion vaccine compositions and methods for suppressing reactivity to multiple food allergens |
-
2023
- 2023-04-11 TW TW112113455A patent/TW202346316A/zh unknown
- 2023-04-11 WO PCT/EP2023/059378 patent/WO2023198674A1/en active Search and Examination
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO2023198674A1 (en) | 2023-10-19 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US12016917B2 (en) | Peanut formulations and uses thereof | |
| CA2867529C (en) | Treatment for peanut allergy | |
| JP6752140B2 (ja) | 経口脱感作のための落花生処方物の製造 | |
| Heiss et al. | Identification of a 60 kd cross-reactive allergen in pollen and plant-derived food | |
| US10881728B2 (en) | Compositions of food allergens | |
| Vassilopoulou et al. | Effect of in vitro gastric and duodenal digestion on the allergenicity of grape lipid transfer protein | |
| US9598684B2 (en) | Rothia species gluten-degrading enzymes and uses thereof | |
| US10376564B2 (en) | Interleukin-2 for treating food allergy | |
| Cabanillas et al. | Pine nut allergy: clinical features and major allergens characterization | |
| JP2022046576A (ja) | 炎症性障害の治療療法 | |
| TW202346316A (zh) | 花生過敏原組成物 | |
| JP5272115B2 (ja) | 経口免疫寛容を誘導するペプチド組成物及びその製造方法 | |
| JPH10505356A (ja) | ヒトへの投与のための組成物および方法、抗原特異的免疫応答のダウンレギュレーションを行うことが可能なペプチド | |
| WO2013045469A1 (de) | Igy-zusammensetzung für die verwendung in der zöliakie | |
| US20230020917A1 (en) | Egg allergy preventing agent or the like, and food composition containing same | |
| JP2023525856A (ja) | Ａｔｉ消化のための方法及び組成物 | |
| Burrows | Detection of Food Proteins in Human Serum Using Mass Spectrometry Methods | |
| Desidério et al. | The role of biologics in eosinophilic esophagitis | |
| CN116490207A (zh) | 基于桦树花粉变应原和苹果变应原的重组多肽 | |
| Kale et al. | Therapeutics for Allergy Management |