TW202337488A - 白及萃取物治療嗜中性白血球活化失調相關疾病的用途 - Google Patents
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Abstract
本文揭示一種用以治療因嗜中性白血球活化及趨化失調所致相關疾病的方法。該方法包括向有此需要的個體投予有效量的台灣白及萃取物，其至少包含 3,3’-二羥基-5-甲氧聯苄基(山藥素III), 9,10-二氫-1-[(4-羥苯基)甲基]-4-甲氧基-2,7-菲二醇(Orchidble), 3',5-二甲氧基-3-羥聯苄基(BF8-4-2), 3,5-二甲氧基-3'-羥聯苄基 (BF8-4-3) 和 3-羥基-5-甲氧基聯苄基 (BF8-4-4)。
Description
本發明是有關於白及萃取物的新用途，且特別是有關於白及萃取物於治療與嗜中性白血球激活失調相關疾病和/或異常(如，急性呼吸道窘迫)的新穎用途。
嗜中性白血球是體循環中含量最豐富的顆粒性白血球，負責藉由去顆粒作用(degranulation)來消除病原體、使嗜中性白血球彈性蛋白酶(neutrophil elastase, NE)釋出、呼吸道內超氧化物量暴增、及形成嗜中性白血球胞外殺菌網絡(neutrophil extracellular trap, NET)。因此，嗜中性白血球是後天性和先天性免疫系統的關鍵效應物。在發炎期間，嗜中性白血球趨化的關鍵步驟包括黏附和遷移，其受嗜中性白血球表面上的巨噬細胞-1抗原(Mac-1；又稱為αMβ2和CD11b-CD18)構型變化所調控。嗜中性白血球激活失調及趨化作用會經由釋出過量的蛋白水解酶、活性含氧物(reactive oxygen species, ROS)和嗜中性球胞外殺菌網絡而對宿主組織造成損害，從而導致各種疾病，包括自體免疫疾病(例如：系統性紅斑狼瘡、 類風濕性關節炎和銀屑病)、傳染病(如敗血症)、炎症性疾病(如急性呼吸窘迫症候群、慢性阻塞性肺病和哮喘)、動脈粥樣硬化和其他主要疾病(如癌症)。
傳統中醫數千年前就開始以白芨(
Bletilla)塊莖來治療肺、胃腸和皮膚的發炎性和出血性疾病。在本揭示內容中，發明人意外發現白及萃取物可調節激活之人類嗜中性細胞的發炎狀況，因此可作為候選化合物，用來開發與人類嗜中性細胞激活失調及趨化(recuritment)相關疾病和/或病症(如，ARDS、糖尿病、乾癬、肝臟損傷)的治療藥物。
本揭示內容提供白及萃取物的新穎用途，所述白及萃取物可抑制激活失調之人類嗜中性細胞，因此該白及萃取物此可作為用來開發與人類嗜中性細胞激活失調及趨化相關的疾病和/或病症(如，ARDS、糖尿病、乾癬、肝臟損傷)之治療藥物的候選化合物。
本發明之一態樣係有關於一種治療罹患有ARDS、肝臟損傷、糖尿病或乾癬之個體方法。所述方法包括對該個體投予有效量的白及萃取物。
依據本揭示內容某些實施方式，所述白及萃取物係以包含下述步驟的方法製備而成：
(i) 以水來萃取白及的根、葉或莖或是由白及的根、葉、莖組成之混合物，進而獲得第一萃取物和第一殘餘物；
(ii) 以乙酸乙酯萃取步驟(i)中的第一殘餘物，以產生白及萃取物。
依據本揭示內容其他實施方式，所述白及萃取物係以乙酸乙酯萃取白及的根、葉或莖或是由白及的根、葉、莖組成之混合物所製備而成。
依據本揭示內容某些實施方式，所述白及萃取物包含 3,3’-二羥基-5-甲氧聯苄基(山藥素III), 9,10-二氫-1-[(4-羥苯基)甲基]-4-甲氧基-2,7-菲二醇(Orchidble), 3',5-二甲氧基-3-羥聯苄基(BF8-4-2), 3,5-二甲氧基-3'-羥聯苄基 (BF8-4-3) 和 3-羥基-5-甲氧基聯苄基 (BF8-4-4)。
可被本揭示內容方法治療的急性呼吸窘迫症(acute respiratory distress syndrome, ARDS)是肇因於輸血相關之肺損傷(transfusion-related lung injury)、呼吸器導致的肺損傷(ventilator-induced klung injury)、細菌引起的肺損傷、或是病毒引起的肺損傷。
依據本揭示內容某些實施方式，所述白及萃取物是以0.01 – 1,000 毫克/公斤的量被投予至該個體。較佳是，所述白及萃取物是以0.1 – 800 毫克/公斤的量被投予至該個體。
依據本揭示內容某些實施方式，可被本揭示內容方法治療之個體是哺乳類動物，較佳是，人類。
在參閱下文實施方式後，本發明所屬技術領域中具有通常知識者當可輕易瞭解本發明之基本精神及其他發明目的，以及本發明所採用之技術手段與實施態樣。
為了使本揭示內容的敘述更加詳盡與完備，下文針對了本發明的實施態樣與具體實施例提出了說明性的描述；但這並非實施或運用本發明具體實施例的唯一形式。實施方式中涵蓋了多個具體實施例的特徵以及用以建構與操作這些具體實施例的方法步驟與其順序。然而，亦可利用其他具體實施例來達成相同或均等的功能與步驟順序。
1.
名詞解釋
「給藥」、「施用」(administered, administering or administration)兩名詞在本文中可互換使用，意指遞送方式，其包括但不限於，靜脈內、肌肉內、腹膜內、動脈內、顱內或皮下施用藥劑(例如，本發明的化合物或組合物)。
本文所述萃取物的「有效量」(effective amount)(單獨服用或與另一種藥劑組合)是指足以引發所需生物反應的量，例如抑制炎症的活化或減輕本文所述的目標疾病或與疾病相關的症狀。如本領域普通技術人員將理解的，本文所述萃取物的有效量可根據諸如所需生物學終點、萃取物的藥物動力學、所治療的病症、給藥方式和患者的年齡和健康狀況。在一些實例中，有效量可以是治療有效量，其是指單獨或與其他療法組合的治療劑量，足以在病症的治療中提供治療益處或延遲發作，或盡量減少與該病症相關的一種或多種症狀。治療有效量是指改善總體治療、減少或避免病症的症狀、病徵或原因，和/或增強另一種治療劑的治療功效的量。在其他實例中，有效量可以是預防有效量。萃取物的預防有效量是指單獨或與其他藥劑組合的治療劑量，其提供預防病症的預防益處。例如，萃取物的預防有效量可以是足以預防或延遲病症發作的量，或是預防或延遲與病症相關的一種或多種症狀發作的量，或是防止病症或一種或多種相關症狀復發的量。它也可以是改善總體預防或增強另一種預防劑的預防功效的量。此外，有效量也可以指「人類相等量 (human equivalent dose, HED)」，HED是將本揭示內容實施方式所使用的動物劑量，依據FDA出品的產業準則(Guidance for Industry: Establishing the Maximum Safe Starting Doses in Initial Clinical Trials for Therapeutics in Adult Healthy Volunteers, U.S. Department of Health and Human Services, Food and Drug Administration Center for Drug Evaluation and Research (CDER), July 2005)所提供的公式，轉換而得。
「個體(subject)」在此指人類個體(例如，諸如嬰兒、幼童或青少年之類的小兒科個體或是諸如青年、中年或老年之類的成人個體)，或是非人類的動物個體(如狗、貓、牛、豬、馬、綿羊、山羊、齧齒動物(如小鼠、大鼠))、非人類的靈長類(如，彌猴、恆河猴等)。非人類的哺乳動物可以是轉基因動物或經遺傳工程重組過基因的動物。依據某些實施方式，個體是指罹患有本文所述疾病(例如ARDS、糖尿病、乾癬、肝臟損傷等)或是可能有罹患所述疾病或是具有罹患所述疾病風險的人類個體。在其他實施方式中，所述個體是指罹患有或疑似罹患有因嗜中性白血球活化及趨化失調所致相關疾病(例如ARDS、糖尿病、乾癬、肝臟損傷等)的人類或非人類哺乳動物。
雖然用以界定本發明較廣範圍的數值範圍與參數皆是約略的數值，此處已盡可能精確地呈現具體實施例中的相關數值。然而，任何數值本質上不可避免地含有因個別測試方法所致的標準偏差。在此處，「約」通常係指實際數值在一特定數值或範圍的正負10%、5%、1%或0.5%之內。或者是，「約」一詞代表實際數值落在平均值的可接受標準誤差之內，視本發明所屬技術領域中具有通常知識者的考量而定。除了實驗例之外，或除非另有明確的說明，當可理解此處所用的所有範圍、數量、數值與百分比（例如用以描述材料用量、時間長短、溫度、操作條件、數量比例及其他相似者）均經過「約」的修飾。因此，除非另有相反的說明，本說明書與附隨申請專利範圍所揭示的數值參數皆為約略的數值，且可視需求而更動。至少應將這些數值參數理解為所指出的有效位數與套用一般進位法所得到的數值。在此處，將數值範圍表示成由一端點至另一段點或介於二端點之間；除非另有說明，此處所述的數值範圍皆包含端點。
在不和上下文衝突的情形下，本說明書所用的單數名詞涵蓋該名詞的複數型；而所用的複數名詞時亦涵蓋該名詞的單數型。
2.
本發明白
及萃取物的用途
本揭示內容是基於意外發現以本文所述方法製備而成的白及萃取物可治療嗜中性白血球活化失調。因此，本文所述的白及萃取物可做為候選藥物，用來開發能治療與嗜中性白血球活化及趨化失調相關疾病或狀況(例如，ARDS、糖尿病、乾癬、肝臟損傷等)的藥物。
因此，本發明第一態樣係提供一種治療罹患有ARDS、糖尿病、乾癬、或肝臟損傷之個體的方法。所述方法包括對該個體投予有效量的白及萃取物。
較佳是，所述白及萃取物是利用一種包含下述步驟的方法製備而成：(i) 以水來萃取白及的根、葉或莖或是由白及的根、葉、莖組成之混合物，進而獲得第一萃取物和第一殘餘物；及 (ii) 以乙酸乙酯萃取步驟(i)中的第一殘餘物，以產生白及萃取物。所產生的白及萃取物在本文中被稱為”-W+EA”萃取物。或者，所述白及萃取物是以乙酸乙酯萃取白及的根、葉或莖或是由白及的根、葉、莖組成之混合物所製備而成，以此種方法製備而成的白及萃取物在本文中被稱為”EA”萃取物。
將以上述方法製備而成的白及萃取物進行生物活性分析後發現，其可強力地抑制激活的人類嗜中性細胞內超氧陰離子的生成、彈性酶的釋出、活性含氧物(reactive oxygen species, ROS)的生成及去顆粒化等現象。此外，本發明的白及萃取物也不會影響細胞生存。依據HPLC/MS分析顯示，所述白及萃取物至少包含 3,3’-二羥基-5-甲氧聯苄基(山藥素III), 9,10-二氫-1-[(4-羥苯基)甲基]-4-甲氧基-2,7-菲二醇(Orchidble), 3',5-二甲氧基-3-羥聯苄基(BF8-4-2), 3,5-二甲氧基-3'-羥聯苄基 (BF8-4-3) 和 3-羥基-5-甲氧基聯苄基 (BF8-4-4)在內的活性化合物。上述任一活性化合物都能抑制激活的人類嗜中性細胞內超氧陰離子的生成，且除BF8-4-2外的其他3種化合物都能抑制激活的人類嗜中性細胞內彈性酶的釋出。依據本揭示內容，可確認本發明的白及萃取物(例如，”-W+EA” 萃取物或 “EA” 萃取物)可做為候選藥劑，用來開發與嗜中性白血球激活失調相關疾病和/或異常(如，ARDS、ALI、糖尿病、乾癬等)的治療藥物。
某些實施方式，可被本揭示內容方法治療的急性呼吸窘迫症(acute respiratory distress syndrome, ARDS)是肇因於輸血相關之肺損傷(transfusion-related lung injury)、呼吸器導致的肺損傷(ventilator-induced klung injury)、細菌引起的肺損傷、或是病毒引起的肺損傷。
依據本揭示內容某些實施方式，所述白及萃取物(例如，”-W+EA”萃取物或是”EA”萃取物)是以0.01 – 1,000 毫克/公斤的量被投予至該個體，例如0.01、0.02、0.03、0.04、0.05、0.06、0.07、0.08、0.09、0.1、0.2、0.3、0.03、0.04、0.05、0.09、0.1、0.2、0.3、0.7、0.8、 0.9、1.0、2.0、 3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48 、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、200、210、220、230、240、250、260、270、280、290、300、310、320、330、340、350、360、370、380、390、400、410、420、430、440、450、460、470、480、490、500、510、520、530、540、550、560、570、580、590、600、610、620、630、640、650、660、670、680、690、700、710、720、730、740、750、760、770、780、790、800、810、820、830、840、850、860、870、880、890、900、910、920、930、940、950、960、970、980、990和 1,000 毫克/公斤；優選地，所述白及萃取物是以0.1至800 毫克/公斤的量施用於患者，例如0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80 、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、200、210、220、230、240、250、260、270、280、290、300、310、320、330、340、350、360、370、380、390、400、410、420、430、440、450、460、470、480、490、500、510、520、530、540、550、560、570、580、590、600、610、620、630、640、650、660、670、680、690、700、710、720、730、740、750、760、770、780、790和800毫克/公斤；更優選地，所述白及萃取物是以1至100 毫克/公斤的量施用於患者，例如1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80 、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99和100毫克/公斤。在一較佳實施方案中，所述白及萃取物係以4毫克/公斤的量投予患者。在另一較佳實施方案中，所述白及萃取物係以8毫克/公斤的量投予患者。有效量的化合物可以一劑或多劑方式投予，持續一天或數天(取決於給藥方式)。
本揭示內容的白及萃取物也可與適當的載體或佐劑配製成適於口服、非經腸胃道(parental)、吸入噴灑、表面塗抹、直腸內使用、頰內使用、陰道內使用、或植入式使用的劑型。「非經腸胃道(parenteral)」一詞在本文中可以指經由皮下(subcutaneous)、皮內(intracutaneous)、氣管內(intrathecal)、病灶內 (intralesional)、顱內 (intracranial)之注射(injection)或是灌注(infusion)。
可根據本領域已知的技術，以合適的分散劑或潤濕劑(例如TWEEN® 80)和懸浮劑來配製無菌注射製劑(injectable formulation)，例如無菌注射的水性或油性懸浮液。無菌注射製劑，也可以是溶在稀釋劑或溶劑中的無菌注射溶液或懸浮液，而該稀釋劑或溶劑是無毒且可注射的，例如，在1，3-丁二醇中的溶液。可以使用的可接受的載體和溶劑包括甘露醇、水、林格氏液和等張氯化鈉溶液。此外，無菌的固定油通常用作溶劑或懸浮介質(例如，合成的甘油單酯或甘油二酯)。脂肪酸，例如油酸及其甘油酯衍生物可用於製備注射劑，天然藥學上可接受的油，例如橄欖油或蓖麻油，尤其是其聚氧乙烯化形式的油，也可用於製備註射劑。這些油溶液或懸浮液還可含有長鏈醇稀釋劑或分散劑，或羧甲基纖維素或類似的分散劑。其他常用的界面活性劑，例如Tweens或Spans或其他類似的乳化劑或生物利用度增強劑，它們通常用於製造藥學上可接受的固體、液體或其他也可用於配製目的之劑型。
適合口服給藥的製劑可以是任何口服可接受的劑型，包括但不限於膠囊、錠劑、乳液和水性懸浮液、分散液和溶液。在口服錠劑的情況下，常用的載體包括乳糖和玉米澱粉。通常還加入潤滑劑，例如硬脂酸鎂。對於以膠囊形式口服給藥，有用的稀釋劑包括乳糖和乾玉米澱粉。當口服給予水懸浮液或乳液時，本發明的化合物可以懸浮或溶解在與乳化劑或懸浮劑組合的油相中。如果需要，可以添加某些甜味劑、調味劑或著色劑。鼻氣霧劑或吸入製劑可根據藥物製劑領域眾所周知的技術製備，並可製備為鹽水溶液、苯甲醇溶液，或使用其他合適的防腐劑、吸收促進劑以提高生物利用度、碳氟化合物和/或其他本領域已知的增溶劑或分散劑。本發明的化合物也可以以栓劑的形式用於直腸給藥。
可被包括在含有本發明化合物製劑中的藥學上可接受的載體(carriers)或賦形劑(excipients)，包括惰性稀釋劑、增溶劑、分散劑和/或造粒劑、表面活性劑和/或乳化劑、崩散劑、黏合劑、 防腐劑、緩沖劑、潤滑劑和/或油。賦形劑如可可脂和栓劑蠟、著色劑、包衣劑、甜味劑、調味劑和加香劑也可以存在於藥物組合物中。
存在於本發明製劑中的賦形劑必須是「藥學上可接受的」，即賦形劑與藥物組合物的活性成分相容(並且優選地，能夠穩定藥物組合物)並且對被給藥的患者無害。例如，增溶劑如環糊精，可與本發明的化合物形成特定的、更易溶的錯化物，可作為藥學上可接受的賦形劑，用於將本發明的化合物遞送到患者中。其他藥學上可接受的賦形劑的實例包括膠體二氧化矽、硬脂酸鎂、纖維素、十二烷基硫酸鈉等。
本文還公開了套組(例如，藥物包裝)，其包含了本文描述的化合物和容器(例如小瓶、安瓿、瓶子、注射器和/或分配器包裝或其他合適的容器)。 在一些實施例中，套組可包括第二容器，其包含藥學上可接受的賦形劑，用於稀釋或懸浮本發明製劑。 在一些實施例中，第一容器內包含本發明的白及萃取物，地二容器則包括藥學上可接受的載體(例如，生理食鹽水)，共同形成一個單位劑型(one-unit dosage form)。
在某些實施例中，如本文所述的套組係用於抑制嗜中性白血球的激活和趨化失調。 在某些實施例中，如本文所述的套組用於有需要的患者中，治療如本文所述的任何目標疾病(例如，ARDS、ALI、糖尿病、乾癬)。 因此，本文所述的任何套組，可包括包含在其中的化合物或藥物組合物的施用說明。 本發明的套組還可包括監管機構(如FDA)所要求的資訊。在某些實施例中，提供套組和說明書用於治療本文所述的疾病。在某些實施例中，提供套組和說明書用於預防本文所述的疾病。本發明的套組可以包括一種或多種本文所述額外的藥劑，當作一個單獨的組合物。
還應理解，如本文所述的化合物或製劑可以在本文所述的任何方法中與一種或多種額外的藥劑(例如，治療和/或預防活性劑)組合使用。化合物或藥劑可以和額外的藥劑組合使用，給藥給有需要的患者，以提高活性(例如：活性(如：效力和/或功效)來治療、預防本文所述的疾病，和抑制患者嗜中性白血球的活化。還應理解的是，所採用的療法可以實現對相同病症的期望效果，和/或它可以實現不同的效果。
現在將參考以下實施例更具體地描述本發明，提供這些實施例是為了示範而非限制。 雖然它們通常是可以使用的，但是可以替代地使用本領域技術人員已知的其他程序、方法或技術。
實施例
材料與方法
製備白及萃取物
將台灣白及的根、莖、葉或是其之混合物乾燥磨碎後儲存在-20℃下直到要用為止。在室溫下，分別以下列任一種溶劑: 正-己烷、正-己烷/乙酸乙酯(1:1)、正-己烷/乙酸乙酯(3:1)、乙酸乙酯、95%乙醇或二次蒸餾水，萃取上述磨碎的台灣白及粉末(10克)，進而獲得6種粗萃物，分別稱為”H”、”1H1E”、”3H1E”、”EA”、”EtOH”及”H
2O”萃取物。再進一步以乙酸乙酯萃取所述”H
2O”萃取物的殘餘物，進而產生”-W+EA”萃取物。
分別以超音波震盪處理上述6種萃取物或是”-W+EA”萃取物約30分鐘，接著過濾、濃縮以產生對應的白及萃取物。再以液態層析/質譜分析儀來鑑定每一萃取物中的成分。
分離人類嗜中性白血球
本研究是經由長庚紀念醫院依據赫爾辛基協定所核准進行的試驗。在取得每一位參與研究的20-30歲左右的健康人的書面同意後，方才採取其全血。此外，每一位參與採血的健康人在採血前5週內並未服用任何藥物。依據標準流程，以葡聚糖沉降、Ficoll-Hypaque梯度離心及低張溶解紅血球的方式自全血中分離出嗜中性白血球。將所分離出來的嗜中性白血球懸浮在無鈣的HBSS緩衝液中並儲存在4℃下直到要用為止。
測量
嗜
中性彈性酶
(neutrophil elastase, NE)
釋出量
在人類嗜中性白血球(6x10
5細胞/毫升)培養基中入100 μM的NE基質(即，甲氧琥珀醯基-丙胺酸-丙胺酸-輔胺酸-纈胺酸-對-硝基苯胺(Methoxysuccinyl-Ala-Ala-Pro-Val-p-nitroanilide))與1 mM氯化鈣後，再分別加入DMSO或是本發明白及萃取物，於37℃下共同培育約5分鐘。
之後，以細胞鬆弛素B(CB,0.5微克/毫升)及甲醯基-L-甲硫胺基-L-亮胺酸基-L-苯丙胺酸(formyl-L-methionyl-L-leucyl-L-phenylalanine, fMLF) (0.1μM)活化嗜中性白血球約10分鐘，接著測量波長405 nm下的吸收值變化。結果以彈性酶釋出百分比來表示。
嗜
中性白血球胞外殺菌網絡
(neutrophil extracellular trap, NET)
的生成量
讓人類嗜中性白血球(10
6cells/mL)與 DMSO 或本發明白及萃取物一起培養5 分鐘，接著以 10 nM PMA 刺激 3 小時後，加入去氧核醣核酸酶(DNAase, 2U/mL)作用10分鐘。在4℃下加入EDTA (2 mM)中止反應，再於4℃下離心5分鐘。收集上清液後放入96-孔盤中與SYTOX Green (5 μM)混合。測量96-孔盤中的螢光影像，來評估激活的人類嗜中性白血球是否形成NET。
測量細胞外超氧陰離子生成量
激活的嗜中性細胞所產生的超氧陰離子量是依據可被SOD抑制的細胞色素c氧化酶下降程度來決定。簡言之，在37℃下，先在培養基中加入1mM鈣離子及細胞色素c氧化酶(0.6毫克/毫升)後，再以本發明白及萃取物或DMSO處理嗜中性細胞5分鐘。接著，以細胞鬆弛素B(CB,1微克/毫升)處理細胞約3分鐘，再以fMLF (0.1μM)活化約10分鐘。在雙束、6槽定位光譜儀中連續監控細胞色素c氧化酶在550nm波長下的吸收值下降程度，以有或無添加SOD(100單位/毫升)的差異除以細胞色素c氧化酶還原態的消光係數(ε=21.1mM
-1/10mm)來計算超氧陰離子量。
測量總
ROS
釋出量
在 96 孔盤中，將人類嗜中性白血球 (2 × 10
6cells/mL)與辣根過氧化酶 (horseradish peroxidase, HRP)( 6 U /mL) 和 37.5 μM 魯米諾(luminol)在 37°C 下預培養 5 分鐘。 將細胞與 DMSO或本發明白及萃取物培養 5 分鐘，接著用0.1 μM fMLF進行刺激。 隨後在 96 孔盤化學發光計(Tecan Infinite F200 Pro；Männedorf，瑞士)上即時檢測和分析化學發光。
細胞存活試驗
利用商業套組(Promega)測量乳酸去氫酶(lactate dehydrogenase, LDH)量，來評估本發明白及萃取物是否會毒殺嗜中性白血球。LDH是一種存在於細胞內的酵素，只有當細胞死亡後才會被釋放到細胞外，因此可作為細胞存活率的指標物質。商業套組(Promega)是利用當LDH將NAD還原成NADH時在波長450 nm下所引起的顏色變化，來推算LDH含量多寡。細胞毒性(cytotoxicity)則是以相對於LDH總活性而言，在無細胞下的LDH活性百分比來表示。LDH總活性則是指在37℃下以0.1% TX-100裂解細胞約30分鐘後所測得的LDH量。
動物
動物照護和實驗計畫書係經台灣長庚大學動物照護和使用委員會批准。 此外，動物研究是根據 ARRIVE(動物研究：體內實驗報告/Animal Research：Reporting of In Vivo Experiments)指南進行。 所有實驗程序均符合《實驗動物照護和使用指引》(
The Guide for the Care and Use of Laboratory Animals)(國家研究委員會更新實驗室照護和使用指南/ National Research Council Committee for the Update of the Guide for the Care and Use of Laboratory，2011)。 8週齡大之無特定病原體(Specified pathogen-free, SPF) BALB/c雄性小鼠(體重：20±1g)係購自BioLASCO(台灣)。 五隻小鼠共用一個帶有標準墊料的通風籠子，並可自由飲用水和食物。 所有小鼠都被飼養在 SPF 動物設施中，光暗循環為 12-12 小時。小鼠在用於實驗前使其至少先適應環境 1 週。
咪
喹莫特
(Imiquimod, IMQ)
誘導的乾癬小鼠模式
BALB/c雄性小鼠被隨機分成控制組及試驗組，並每天在其背部塗抹IMQ (62.5 毫克)，連續塗抹5天(即，第0-4天)，使誘發乾癬。接著，從第1-4天，在試驗組小鼠背部塗抹本發明白及萃取物(50毫克/公斤)60分鐘後，再於同樣部位塗抹IMQ。在第5天，將所有小鼠犧牲。
LPS
誘導的
ARDS
小鼠模式
BALB/c雄性小鼠被隨機分成四組(2-3隻小鼠/組)並分別給予：載體、白及萃取物、LPS、白及萃取物+LPS。 讓小鼠禁食、隔夜，然後從腹腔注射50 μL白及萃取物(50 mg/kg) 或 50 μL載體 (10% DMSO)。以甲苯噻嗪(6 mg/kg)和Zoletil 50 (30 毫克/公斤)對小鼠進行全身麻醉，通過氣管內噴灑 50 μL LPS (來自大腸桿菌O111:B4；2 mg/kg)或50 μL 0.9% 鹽水(白及萃取物組和載體組)，來誘導小鼠產生ARDS。 五小時後，將小鼠犧牲後，收集小鼠的肺組織並冷凍，以 10%的福馬林將組織固定後，用於組織切片和染色。
組織切片和染色
將小鼠肺組織用磷酸鹽緩衝鹽水 (PBS) 洗滌後，再以 10% 福馬林固定 24 小時。 隨後將樣品脫水，用石蠟包埋，用切片機切成 3 μm 厚的切片，並放置在載玻片上。以蘇木精和伊紅 (H&E)對這些切片進行染色。 然後，以光學顯微鏡擷取影像。
脂多醣
(lipopolysaccharide, LPS)
及半乳糖胺
(D-GalN)
共同誘發急性肝臟損傷小鼠模式
將雄性C57BL/6小鼠隨機分成4組(2-3隻小鼠/組)，並分別給予：載體、LPS+D-GalN (LPS: 40 μg/kg, D-GalN: 400 mg/kg)、LPS + D-GalN + 白及萃取物(“-W+EA”, 50 mg/kg)(A組)，LPS + D-GalN + 白及萃取物(“-W+EA”, 100 mg/kg) (B組)。經腹腔注射方式隨機給予LPS+D-GalN或相同體積的對照溶劑(10% DMSO)，1 小時後，將“-W+EA”經由腹腔注射到小鼠體內處理5小時以造成肝臟損傷，再利用採血分析確認肝臟酵素GPT及GOT含量。接著，將小鼠犧牲後，取出肝臟並以H&E染色分析。
鏈脲佐菌素
(Streptozotocin, STZ)
誘發糖尿病小鼠模式
連續5天，經腹腔對雄性C57BL/6小鼠注射鏈脲佐菌素(STZ)(50毫克/公斤/天)使誘發糖尿病。在第6天，挑選血糖高於230 mg/dL的小鼠進入下一輪試驗。讓糖尿病鼠休息3天，自第9天起，經由腹腔注射”-W+EA”或是相同體積的對照溶劑，連續注射5天(即，第9至13天)。同時每天量體重並採血，確認其空腹血糖值。
實施例
1
本發明白
及萃取物的活體外分析
1.1
白及萃取物抑制激活嗜中性白血球內超氧陰離子的生成及彈性酶的釋出
依據「材料及方法」段落所述步驟製備白及萃取物，總計製成7種不同的白及萃取物，藉由其抑制被fMLF/細胞鬆弛素B激活的嗜中性白血球內超氧陰離子的生成及彈性酶的釋出量來評估每一種白及萃取物對發炎反應的功效。結果總結於表1及第1、2圖
。
表1 白及萃取物抑制被fMLF/CB激活的嗜中性白血球內超氧陰離子的生成及彈性酶釋出的效果
a: 抑制50%的濃度.
b: 在10μg/mL 下的抑制百分比。結果以平均+SEM (n= 6~7)，*p＜0.05, ** p＜0.01, *** p＜0.001 (相對於控制組而言)。
| 萃取物名稱 | 超氧陰離子 | 彈性酶釋出 | 萃取率 (%) | ||||
| IC 50(μg/mL) a | 抑制 (%) b | IC 50(μg/mL) a | 抑制 (%) b | ||||
| H | 6.06 +0.49 | 76.91 +7.44 | *** | 4.74 +0.35 | 85.12 +3.28 | *** | 0.68 |
| 3H1E | 1.94 +0.16 | 97.09 +0.70 | *** | 3.98 +0.15 | 113.47 +2.81 | *** | 1.90 |
| 1H1E | 0.98 +0.13 | 102.02 +0.65 | *** | 1.86 +0.14 | 120.23 +3.93 | *** | 2.90 |
| EA | 0.79 +0.08 | 96.89 +1.26 | *** | 1.71 +0.11 | 120.54 +4.98 | *** | 3.49 |
| EtOH | 2.19 +0.19 | 96.62 +0.84 | *** | 4.80 +0.55 | 82.77 +5.65 | *** | 12.29 |
| H 2O | ＞10 | 1.63 +4.29 | ＞10 | -4.30 +2.09 | 31.81 |
表1數據顯示，極性較高的溶劑可展現出較佳的萃取率，其中水的萃取率高達31.81%，其次是95%乙醇，其萃取率為12.29%。相反的，諸如正-己烷之類的非極性溶劑，萃取率僅有0.68% (“H萃取物”)。
至於每一種萃取物的生物功效，除了水萃取物(“H
2O 萃取物”)外，其他的萃取物，包括正-己烷/乙酸乙酯(1:1) (“1H1E萃取物”)、正-己烷/乙酸乙酯(3:1) (“3H1E萃取物”)、乙酸乙酯 (“EA萃取物”)及95%乙醇(“EtOH萃取物”)在內的萃取物，均可抑制fMLF/CB激活之嗜中性白血球內超氧陰離子的產生及彈性酶釋出，參見第1、2圖。其中，又以“EA萃取物”展現出最強的抑制效果，其抑制超氧陰離子生成的IC
50為0.79 μg/mL，抑制彈性酶釋出的IC
50為1.71 μg/mL。
由於水對白及展現出最強的萃取力，加以白及中具有抑制效果的成分多半存在乙酸乙酯萃取物中，因此，本案發明人以乙酸乙酯來萃取白及經水萃取後的殘餘物，如此可得”-W+EA萃取物”。 “EA萃取物”及”-W+EA萃取物”對 fMLF/CB激活之嗜中性白血球的調控效果分別顯示在表2及第3、4圖中。
表2 各種白及萃取物抑制被fMLF/CB激活的嗜中性白血球內超氧陰離子的生成及彈性酶釋出的效果
a: 抑制50%的濃度.
b: 在10μg/mL 下的抑制百分比。結果以平均+SEM (n= 6~7)，*p＜0.05, ** p＜0.01, *** p＜0.001 (相對於控制組DMSO而言)。
| 萃取物名稱 | 超氧陰離子 | 彈性酶釋出 | 萃取率 (%) | ||||
| IC 50(μg/mL) a | 抑制 (%) b | IC 50(μg/mL) a | 抑制 (%) b | ||||
| EA | 0.79 +0.08 | 96.89 +1.26 | *** | 1.71 +0.11 | 120.54 +4.98 | *** | 3.49 |
| -W+EA | 0.061 +0.04 | 92.93 +1.73 | *** | 2.19 +0.19 | 96.62 +0.84 | *** | 2.89 |
由表2可知”-W+EA萃取物”展現出與”EA萃取物”類似的功效，特別是在抑制超氧陰離子的生成及彈性酶釋出方面。
1.2
白及萃取物不影響細胞存活率
在本實施例中，透過監控細胞釋出乳酸去氫酶(LDH)量的多寡來確認實施例1.1之白及萃取物是否會影響細胞存活率。LDH是一種存在於細胞質內的酵素，只有當細胞死亡時才會被釋放至細胞外，因此可以胞外測得的LDH量的多寡，來代表細胞存活率。結果繪示於第5圖中。
顯然的，實施例1.1中所製得的7種白及萃取物，均不具任何細胞毒性，因為經任一種萃取物處理過的人類嗜中性白血球所釋出的LDJ含量均非常低，甚至可忽略。
1.3
白及
EA
萃取物會降低
NET
網絡的生成
NET主要是由顆粒蛋白、蛋白酶、及塗覆有組織蛋白的染色質纖維組成，對發炎性疾病和自體免疫疾病至為關鍵。因此，本實施例中也探究了白及萃取物對行程NET網絡的影響，據此，嗜中性細胞先以PMA (10 nM)激活後再以Syntox green染色。結果繪示於第6圖中。
如第6圖所示，白及萃取物明顯可減少PMA所誘發的NET網絡生成。
1.4
白及
EA
萃取物的化學組成
利用液態色層分析/質譜儀(LC/MS)來分析實施例1.1中的每一種白及萃取物的化學組成，且進一步調查每一種鑑別出來的化合物調控激活的嗜中性細胞內超氧陰離子生成及彈性酶釋出的能力。結果總結於表3及表4中。
如表3數據顯示，在白及的”3H1H”、”1H1E”、”EA”、及”-W+EA”萃取物中，均可發現3,3’-二羥基-5-甲氧聯苄基(山藥素III),、9,10-二氫-1-[(4-羥苯基)甲基]-4-甲氧基-2,7-菲二醇(Orchidble), 3',5-二甲氧基-3-羥聯苄基(BF8-4-2), 3,5-二甲氧基-3'-羥聯苄基 (BF8-4-3) 和 3-羥基-5-甲氧基聯苄基 (BF8-4-4)
，且每一化合物單獨都可抑制激活的嗜中性細胞內超氧陰離子的生成以及彈性酶的釋出(表4)。
表3 各種白及萃取物的化學組成
ND: 未測定
| 化合物 | H | 3H1E | 1H1E | EA | EtOH | H 2O | -W+EA |
| 山藥素 III | 0.06 | 3.67 | 2.72 | 0.93 | 0.93 | 0.10 | 1.39 |
| Orchidble | N.D. a | 1.12 | 1.25 | 0.41 | 0.41 | 0.04 | 1.77 |
| BF8-4-2 | 1.91 | 1.10 | 0.72 | 0.64 | 0.12 | N.D. a | 0.39 |
| BF8-4-3 | 1.78 | 0.92 | 0.61 | 0.53 | 0.12 | N.D. a | 0.38 |
| BF8-4-4 | 2.8 | 1.10 | 0.67 | 0.60 | 0.14 | N.D. a | 0.37 |
表4 白及萃取物之化學組成對激活的嗜中性細胞內超氧陰離子生成以及彈性酶釋出的影響
| 化合物 | 超氧陰離子 | 彈性酶釋出 |
| IC 50(μM) | IC 50(μM) | |
| 山藥素 III | 4.30 +0.50 | ＞ 10 |
| Orchidble | 0.66 +0.12 | 6.26 +1.19 |
| BF8-4-2 | 4.63 +0.54 | ＞ 10 |
| BF8-4-3 | 4.64 +0.23 | 7.41 +0.50 |
| BF8-4-4 | 1.86 +0.21 | 2.71 +0.16 |
實施例
2
白及萃取物減輕小鼠因咪喹莫特
(IMQ)
誘發的乾癬
在本實施例中，以本領域眾所周知的乾癬動物模式，來探討白及萃取物改善乾癬的效果。在乾癬動物模式中，係以咪喹莫特(IMQ)來誘發小鼠皮膚產生類似乾癬的發炎。結果顯示在第8圖中。
第8(A)圖照片是由一代表性小鼠身上拍攝所得，分別為經過IMQ處理(中央)、及IMQ + “-W+EA”萃取物處理後(右方)的照片。第8(B)圖則是第8(A)圖中組織的染色照片。明顯的，本發明白及“-W+EA”萃取物可顯著地減輕皮膚上IMQ誘發的乾癬嚴重程度或進展。
實施例
3
白及萃取物減輕小鼠因脂多醣
(LPS)
誘發的急性呼吸道窘迫症狀
在本實施例中，以本領域眾所周知的急性呼吸道窘迫症狀(ARDS)動物模式，來探討白及萃取物改善ARDS的效果。在此動物模式中，以氣管內噴灑LPS共5小時，來誘發小鼠產生類似ARDS的症狀，再分別以DMSO或是本發明白及“-W+EA”萃取物進行治療。結果顯示在第9圖中。肺臟組織的染色照片顯示LPS會誘發出血及紅斑、肺泡間隔增厚、肺水腫等現象，而本發明白及“-W+EA”萃取物可明顯地改善上述這些症狀。
實施例
4
白及萃取物減輕小鼠因
D-GalN/LPS-
誘發的急性肝臟損傷
在本實施例中，以本領域眾所周知的急性肝臟損傷動物模式，來探討白及萃取物改善肝臟損傷的效果。在此動物模式中，以腹膜內注射D-GalN (400 mg/Kg)及LPS (40 μg/mL)處理1小時來誘發小鼠產生肝臟損傷的症狀，再分別以本發明白及“-W+EA”萃取物(50或100 mg/Kg)進行治療約5小時，之後抽血，分析血中GOT、GPT等肝臟酵素量，同時以H&E將肝臟組織染色，觀察其組織形狀的變化。結果顯示在第10、11圖中。
第10圖的柱狀圖顯示本發明白及“-W+EA”萃取物對GOT及GPT含量的影響，第11圖則分別是控制組小鼠、經D-GalN/LPS處理後小鼠及以D-GalN/LPS+白及“-W+EA”萃取物處理後小鼠肝臟的照片。
D-GalN/LPS會對肝臟造成明顯損傷(第11圖)，造成小鼠血漿中GOT及GPT含量明顯上升，這些升高的GOT及GPT量則可被白及“-W+EA”萃取物抑制(第10圖)。
實施例
5
白及萃取物減輕小鼠因鏈脲佐菌素
(
STZ)
誘發的血糖上升
在本實施例中，以本領域眾所周知的糖尿病動物模式，來探討白及萃取物改善高血糖的效果。在此動物模式中，以STZ (50 mg/Kg)處理C75B6小鼠來誘發小鼠產生高血糖，再分別以本發明白及“-W+EA”萃取物(25 mg/Kg)或生理食鹽水治療約5天，之後抽血，分析血中血糖含量多寡。結果顯示在第12圖中。
由第12圖數據顯示，每天給予25 mg/Kg的白及“-W+EA”萃取物可以有效地在不影響實驗動物體重的情況下，降低STZ-誘發的高血糖。
雖然上文實施方式中揭露了本發明的具體實施例，然其並非用以限定本發明，本發明所屬技術領域中具有通常知識者，在不悖離本發明之原理與精神的情形下，當可對其進行各種更動與修飾，因此本發明之保護範圍當以附隨申請專利範圍所界定者為準。
為讓本發明的上述與其他目的、特徵、優點與實施例能更明顯易懂，所附圖式之說明如下：
第1圖顯示白及萃取物可抑制激活的人類嗜中性白血球中彈性酶的釋出。 先讓嗜中性白血球(6 × 10
5cells/mL)與0.1% DMSO或0.3–10 μg/mL白及萃取物培養5分鐘後，再暴露於能使之激活的刺激物 fMLF (0.1μM)/CB (1μg/mL)下約10分鐘。所述白及萃取物是分別以 (A) 正己烷 (H)，(B) 正己烷/乙酸乙酯 = 3/1 (3H1E)，(C) 正己烷/乙酸乙酯 = 1/1 (1H1E)，(D)乙酸乙酯(EA)，(E) 水(ddH
2O)萃取，然後以光譜儀測量405nm下的吸光值來評估彈性酶釋出的量。 所有數據都以平均值
+標準偏差呈現 (n=6-7)。所有數據與控制組相比後，**
p＜ 0.01，***
p＜ 0.001；
第2圖顯示白及萃取物可抑制激活的人類嗜中性白血球中超氧陰離子的生成。 先讓嗜中性白血球(6 × 10
5cells/mL)與0.1% DMSO或0.3–10 μg/mL白及萃取物培養5分鐘後，再暴露於能使之激活並產生超氧陰離子的刺激物fMLF (0.1μM)/CB (1μg/mL)下約10分鐘。所述白及萃取物是分別以 (A) 正己烷 (H)，(B) 正己烷/乙酸乙酯 = 3/1 (3H1E)，(C) 正己烷/乙酸乙酯 = 1/1 (1H1E)，(D)乙酸乙酯(EA)，(E) 水(ddH
2O)萃取，白及萃取物清除超氧化物的能力係在光譜儀在550 nm波長下以細胞色素c還原法來測量而得。所有數據都以平均值
+標準偏差呈現(n=6-7)。所有數據與控制組相比後，**
p＜ 0.01，***
p＜ 0.001；
第3圖顯示不同方法製備的白及萃取物抑制激活的人類嗜中性白血球中彈性酶釋出的程度。 先讓嗜中性白血球(6 × 10
5cells/mL)與0.1% DMSO或白及萃取物(1、3或10 μg/mL)培養5分鐘後，再暴露於能使之激活的刺激物fMLF (0.1μM)/CB (1μg/mL)下約10分鐘。所述白及萃取物是分別以 (A)乙酸乙酯(EA)，(B) “-W+EA”萃取，然後以光譜儀測量405nm下的吸光值來評估彈性酶釋出的量。 所有數據都以平均值
+標準偏差呈現(n=6-8)。所有數據與控制組相比後，**
p＜ 0.01，***
p＜ 0.001；
第4圖顯示不同方法製備的白及萃取物可抑制激活的人類嗜中性白血球中超氧陰離子的生成。 先讓嗜中性白血球(6 × 10
5cells/mL)與0.1% DMSO或0.3–10 μg/mL白及萃取物培養5分鐘後，再暴露於能使之激活並產生超氧陰離子的刺激物fMLF (0.1μM)/CB (1μg/mL)下約10分鐘。所述白及萃取物是分別以 (A)乙酸乙酯(EA)，(B) “-W+EA”萃取，白及萃取物清除超氧化物的能力係在光譜儀在550 nm波長下以細胞色素c還原法來測量而得。 所有數據都以平均值
+標準偏差呈現(n=6-8)。所有數據與控制組相比後，*p＜0.05，**
p＜ 0.01，***
p＜ 0.001；
第5圖顯示白及萃取物對人類嗜中性白血球不具細胞毒性。先讓嗜中性白血球(6 × 10
5cells/mL)與0.1% DMSO或0.3–10 μg/mL白及萃取物培養15分鐘後，再測定胞外LDH含量。所述白及萃取物是分別以 正己烷 (H)，正己烷/乙酸乙酯 = 3/1 (3H1E)，正己烷/乙酸乙酯 = 1/1 (1H1E)，乙酸乙酯(EA)，或 水(ddH
2O)萃取而成，以及水和EA(-W+EA)之組合萃取而成。先以0.1% TX-100處理細胞約30分鐘後，再利用酵素連結的免疫吸附法在490 nm波長下測定LDH含量。所有數據都以平均值
+標準偏差呈現(n=5)；
第6圖顯示白及萃取物可減少PMA激活的嗜中性白血球中NET的生成。用0.1%DMSO 或白及EA萃取物(1, 3, 10μg/mL)預處理人類嗜中性白血球5分鐘，然後在有或沒有0.1 μM PMA 的情況下培養6分鐘。接著，以 Sytox green(一種核酸染色劑)來定量所生成的NET。所顯示者為代表性圖像。 所有數據都以平均值
+標準偏差呈現(n=3)；
第7圖顯示白及萃取物可減少由fMLF激活的嗜中性白血球中ROS的生成。 (A) 用0.1% DMSO或白及EA萃取物(0.1、0.3 或1 μM)預處理人類嗜中性白血球約5分鐘，再用0.1 μM fMLF活化約6分鐘；(B)化學冷光峰值；(C) 化學冷光峰的曲線下面積(Area under curve, AUC)。所有數據都以平均值
+標準偏差呈現(n=7)。所有數據與控制組相比後，*p＜0.05，**
p＜ 0.01，***
p＜ 0.001；
第8圖顯示白及萃取物可減輕小鼠體內由IMQ-誘發的乾癬。(A)圖上半部為分別以載體(左方)、IMQ (中央)或是IMQ+白及萃取物(右方)處理後小鼠皮膚的照片，及(B) 為上述照片中皮膚染色後的微觀結構；
第9圖顯示白及萃取物可減輕小鼠體內由LPS-誘發的急性肺損傷。BALB/c小鼠(n=2-3/組)以氣管內噴灑LPS (2 mg/Kg)5小時，引發急性肺損傷，再接續以腹膜內注射載體(10% DMSO)或50mg/Kg的白及萃取物進行治療。圖中危取自有或無經白及萃取物治療後之組織色後的微觀結構；
第10圖顯示白及萃取物可減輕小鼠體內由D-GalN/LPS-誘發的急性肝臟損傷(ALI)。BALB/c小鼠(n=2-3/組)以腹膜內注射載體(10% DMSO)或D-GalN (400 mg/Kg)+ LPS (40μg/mL) 約1小時，引發急性肝損傷，再接續以腹膜內注射載體(10% DMSO)或白及萃取物(50或100 mg/Kg的)治療約5小時。接著，抽血並測量血漿中(A) GOP，及(B) GPT的含量；
第11圖顯示白及萃取物可減輕小鼠體內由D-GalN/LPS-誘發的急性肝臟損傷(ALI)。BALB/c小鼠(n=2-3/組)以腹膜內注射載體(10% DMSO)或D-GalN (400 mg/Kg)+ LPS (40μg/mL) 約1小時，引發急性肝損傷，再接續以腹膜內注射載體(10% DMSO)或白及萃取物(50或100 mg/Kg的)治療約5小時。接著，將小鼠犧牲後取出其肝臟組織後切片並以H&E染色；
第12圖白及萃取物可減輕小鼠體內由STZ-誘發產生糖尿病後之高血糖現象。C57BL/6小鼠(n=2-3/組)以腹膜內注射載體(10% DMSO)或STZ (50 mg/Kg) 約5天。小鼠體內表現高血糖值者被納入後續試驗，以腹膜內注射載體(10% DMSO)或白及萃取物(25 mg/Kg的)連續治療5天。接著，自第9天到第13天測量每隻試驗動物的(A)血糖及(B)體重。
Claims (4)
- 一種白及萃取物用於製造可治療急性呼吸窘迫症(acute respiratory distress syndrome, ARDS)、急性肝損傷(acute liver injury, ALI)、糖尿病或乾癬藥物的用途，其中該白及萃取物包含 3,3’-二羥基-5-甲氧聯苄基(山藥素III), 9,10-二氫-1-[(4-羥苯基)甲基]-4-甲氧基-2,7-菲二醇(Orchidble), 3',5-二甲氧基-3-羥聯苄基(BF8-4-2), 3,5-二甲氧基-3'-羥聯苄基 (BF8-4-3) 和 3-羥基-5-甲氧基聯苄基 (BF8-4-4)。
- 如請求項1所述之用途，其中該白及萃取物是依下列步驟製成： (i) 以水來萃取白及的根、葉或莖或是由白及的根、葉、莖組成之混合物，進而獲得第一萃取物和第一殘餘物； (ii) 以乙酸乙酯來萃取步驟(i)中的第一殘餘物，以產生該白及萃取物。
- 如請求項1所述之用途，其中該白及萃取物是以乙酸乙酯來萃取白及的根、葉或莖，或其是由白及的根、葉、莖組成之混合物所製成的。
- 如請求項1所述之用途，其中該ARDS是輸血相關肺損傷(transfusion-related lung injury)、呼吸器導致的肺損傷(ventilator-induced klung injury)、細菌引起的肺損傷、或是病毒引起的肺損傷。
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-
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