TW202334422A - 抑制血管緊張素原（agt）蛋白表達的組合物和方法 - Google Patents

Abstract

本申請涉及抑制血管緊張素原（AGT）蛋白表達的組合物和方法。具體的，本申請提供了可用于降低血管緊張素原（AGT）基因表達和用于治療 AGT相關疾病和病症的組合物和方法。提供了可用于降低細胞和對象中AGT表達的AGT dsRNA試劑、AGT反義多核苷酸試劑、包含AGT dsRNA 試劑的組合物和包含AGT反義多核苷酸試劑的組合物。

Description

抑制血管緊張素原（AGT）蛋白表達的組合物和方法

本發明的部分實施方案涉及可用于抑制血管緊張素原（AGT）蛋白表達的組合物和方法。

腎素-血管緊張素-醛固酮系統（RAAS）在血壓調節中起著關鍵作用。RAAS級聯始于腎臟的近腎小球細胞將腎素分泌至循環中。腎素分泌受到幾個因素的刺激，包括遠端小管中的Na ⁺負荷、β-交感神經刺激和/或降低的腎灌注。血漿中的活性腎素將血管緊張素原（由肝臟産生）分裂成血管緊張素I，其隨後通過循環和局部表達的血管緊張素-轉化酶（ACE）轉化成血管緊張素II。血管緊張素II對RAAS的大部分作用是通過其與血管緊張素II 1型受體（AT1R）的結合來發揮的，從而導致動脉血管收縮、腎小管和腎小球效應，如增强的Na ⁺重吸收或腎小球濾過率的調節。此外，與其他刺激物（如促腎上腺皮質激素、抗-利尿激素、兒茶酚胺、內皮素、血清素）以及Mg ²⁺和K ⁺水平一起，AT1R刺激導致醛固酮釋放，其隨後促進腎遠端曲小管中的Na ⁺和K ⁺排泄。

導致例如過度血管緊張素II産生和/或AT1R刺激的RAAS失調引起高血壓，其可以導致例如提高的氧化應激，心臟、腎臟和動脉中炎症、肥大和纖維化的促進，幷且導致例如左心室纖維化、動脉重建和腎血管球硬化症。

高血壓是發達國家中最普遍的、可控的疾病，影響20-50％的成年人群體。高血壓是各種疾病、失調和病症的主要風險因素，如，縮短的預期壽命、慢性腎病、中風、心肌梗塞、心力衰竭、動脉瘤（例如，主動脉瘤）、外周動脉疾病、心臟損傷（例如，心臟擴張或肥大）和其他心血管相關疾病、失調和/或病症。此外，已經表明高血壓是心血管發病和死亡的重要風險因素，占據或構成全部中風的62％和所有心臟病病例的49％。在2017年時，發生了高血壓診斷、預防和治療的準則的變化，從而提供了用于甚至更低的血壓以進一步降低發生高血壓相關疾病及障礙的風險的目標（參見例如，Reboussin等人，Systematic Review for the 2017ACC/AHA/AAPA/ABC/ACPM/AGS/APhA/ASH/ASPC/NMA/PCNA Guideline for the Prevention，Detection，Evaluation，and Management of High Blood Presure in Adults: A Report of the American College of Cardiology/American Heart Association Task Force on Clinical Practice Guidelines. J Am Coll Cardiol. 2017 Nov 7. pii：S0735-1097(17)41517-8. doi: 10.1016/j.jacc .2017.11.004；及Whelton等人（2017ACC/AHA/AAPA/ABC/ACPM/AGS/APhA/ ASH/ASPC/NMA/PCNA Guideline for the Prevention，Detection，Evaluation，and Management of High Blood Presure in Adults：A Report of the American College of Cardiology/American Heart Association Task Force on Clinical Practice Guidelines. J Am Coll Cardiol. 2017 Nov 7. pii：S0735-1097(17)41519-1.doi：10 .1016/j .jacc .2017 .11 .006）。

儘管可用于治療高血壓的抗高血壓藥數量巨大，但超過三分之二的對象用一種抗高血壓藥不能得到控制幷且需要兩種或更多種選自不同藥物類別的抗高血壓藥。由于隨著用藥增加依從性降低和副作用增加，這進一步降低了具有受控血壓的對象的數量。

因此，本領域存在對用于治療高血壓和其他血管緊張素原相關疾病的替代療法和聯合療法的需求。

根據本發明的一個方面，提供了一種抑制血管緊張素原（AGT）表達的雙鏈核糖核酸（dsRNA）試劑，該dsRNA試劑包含正義鏈和反義鏈，在反義鏈中的核苷酸位置2至18處包含與AGT RNA轉錄物互補的區域，其中互補區域包含與表1-4中所列出的反義序列之一相差0、1、2或3個核苷酸的至少15個連續核苷酸，幷且任選地包含靶向配體。在一些實施方案中，與AGT RNA轉錄物互補的區域包含與表1-4中所列出的反義序列之一相差不超過3個核苷酸的至少15、16、17、18或19個連續核苷酸。在某些實施方案中，dsRNA的反義鏈與SEQ ID NO：519的任意靶區域至少基本互補，幷且在表1-4之一中提供。在一些實施方案中，dsRNA的反義鏈與SEQ ID NO: 519的任意靶區域完全互補幷且在表1-4之一中提供。在一些實施方案中，dsRNA試劑包含表1-4中所列出的任一個正義鏈序列，其中正義鏈序列與dsRNA試劑中的反義鏈序列至少基本上互補。在某些實施方案中，dsRNA試劑包含表1-4中列出的任一個正義鏈序列，其中正義鏈序列與dsRNA試劑中的反義鏈序列完全互補。在一些實施方案中，dsRNA試劑包含表1-4中列出的任一個反義鏈序列。在一些實施方案中，dsRNA試劑包含表1-4中作爲雙鏈體序列列出的任一個序列。

在一些實施方案中，dsRNA試劑包含與式（A）相差0、1、2或3個核苷酸的正義鏈：5'-Z ₁AGCUUGUUUGUGAAACZ ₂-3'  式（A），其中Z ₁爲包含0-15個核苷酸基序的核苷酸序列，Z ₂選自A、U、C、G中的一種或者不存在。在某些實施方案中，Z ₁爲包含1-4個核苷酸基序的核苷酸序列。在某些實施方案中，Z ₁爲包含1、2、3或4個核苷酸基序的核苷酸序列。在某些實施方案中，Z ₂爲A。在某些實施方案中，Z ₁爲包含CACC或者GACC基序的核苷酸序列。在某些實施方案中，Z ₁核苷酸序列選自以下基序：C、AC、UC、GC、CC、ACC、UCC、GCC、CCC、GACC、AACC、UACC、CACC、CGACC、CCGACC、ACCGACC、AACCGACC、CAACCGACC、CCAACCGACC、 UCCAACCGACC、UUCCAACCGACC、AUUCCAACCGACC、AAUUCCAACCGACC或 GAAUUCCAACCGACC中的一種。在一些實施方案中，dsRNA試劑包含與式（B）相差0、1、2或3個核苷酸的反義鏈：5'-Z ₃GUUUCACAAACAAGCUZ ₄-3' 式（B），其中Z ₃選自A、U、C、G中的一種或者不存在，Z ₄爲包含0-15個核苷酸基序的核苷酸序列。在某些實施方案中，Z ₄爲包含1-4個核苷酸基序的核苷酸序列。在某些實施方案中，Z ₄爲包含1、2、3或4個核苷酸基序的核苷酸序列。在某些實施方案中，Z ₃爲U。在某些實施方案中，Z ₄核苷酸序列選自包含GGUC或GGUG基序的核苷酸序列。在某些實施方案中，Z ₄核苷酸序列選自以下基序：G、GU、GC、GA、GG、GGU、GGA、GGC、GGG、GGUG、GGUC、GGUU、GGUA、GGUCG、GGUCGG、GGUCGGU、GGUCGGUU、GGUCGGUUG、GGUCGGUUGG、GGUCGGUUGGA、GGUCGGUUGGAA、GGUCGGUUGGAAU、GGUCGGUUGGAAUU或GGUCGGUUGGAAUUC。在一些實施方案中，dsRNA試劑包含正義鏈和反義鏈，所述的正義鏈和反義鏈分別包括具有本文所述與式（A）和式（B）相差0、1、2或3個核苷酸表示的核苷酸序列，幷且任選地包含靶向配體。在某些實施方案中，dsRNA試劑所述的正義鏈式（A）和反義鏈式（B）每條鏈的長度不超過35個核苷酸。在某些實施方案中，Z ₁和Z ₄核苷酸基序是完全或者部分互補的。在一些實施方案中，dsRNA試劑包含與式（A'）相差0、1、2或3個核苷酸的正義鏈：5'-Z ₁'CAGCUUGUUUGUGAAACA-3' 式（A'），dsRNA試劑包含與式（B'）相差0、1、2或3個核苷酸的反義鏈：5'-UGUUUCACAAACAAGCUGZ ₄' -3' 式（B'）， Z ₁'和Z ₄'分別獨立的包含0-13個核苷酸基序的核苷酸序列。在某些實施方案中，Z ₁'和Z ₄'分別獨立的包含1、2、或3個核苷酸基序的核苷酸序列。在某些實施方案中，Z ₁'核苷酸序列選自以下基序：A、U、G、C、AC、UC、GC、CC、GAC、AAC、UAC、CAC、CGAC、CCGAC、ACCGAC、AACCGAC、CAACCGAC 或 GAAUUCCAACCGAC中的一種。Z ₄'核苷酸序列選自以下基序：U、C、A、G、GU、GA、GC、GG、GUG、GUC、GUU、GUA、GUCG、GUCGG、GUCGGU、GUCGGUU、GUCGGUUG或GUCGGUUGGAAUUC中的一種。

在一些實施例中，dsRNA試劑包含正義鏈和反義鏈，反義鏈包含與以下所列出的反義序列之一相差0、1、2或3個核苷酸的至少15個連續核苷酸： 5’- UACUCAUUAGAAGAAAAGGUG -3’ (SEQ ID NO: 162); 5’- UCUUAGACCAAGGAGAAACGG -3’ (SEQ ID NO: 163); 5’- UGUUUCACAAACAAGCUGGUC -3’ (SEQ ID NO: 167); 5’- UGUUUCACAAACAAGCUGGUG -3’(SEQ ID NO:523); 5’- UUCGGUUGGAAUUCUUUUUGC -3’ (SEQ ID NO: 184)； 5’- GUUUCACAAACAAGCUGG -3’ (SEQ ID NO:653)。

在一些實施例中，dsRNA試劑包含正義鏈和反義鏈，所述的正義鏈和反義鏈分別包含與以下所列出的序列之一相差0、1、2或3個核苷酸的至少15個連續核苷酸： 正義鏈：5’- CACCUUUUCUUCUAAUGAGUA -3’ (SEQ ID NO: 65)， 反義鏈：5’- UACUCAUUAGAAGAAAAGGUG -3’ (SEQ ID NO: 162)。

在一些實施例中，dsRNA試劑包含正義鏈和反義鏈，所述的正義鏈和反義鏈分別包含與以下所列出的序列之一相差0、1、2或3個核苷酸的至少15個連續核苷酸： 正義鏈：5’- CCGUUUCUCCUUGGUCUAAGA -3’ (SEQ ID NO: 66)， 反義鏈：5’- UCUUAGACCAAGGAGAAACGG -3’ (SEQ ID NO: 163)。

在一些實施例中，dsRNA試劑包含正義鏈和反義鏈，所述的正義鏈和反義鏈分別包含與以下所列出的序列之一相差0、1、2或3個核苷酸的至少15個連續核苷酸： 正義鏈：5’- GACCAGCUUGUUUGUGAAACA -3’ (SEQ ID NO: 70)， 反義鏈：5’- UGUUUCACAAACAAGCUGGUC -3’ (SEQ ID NO: 167)。

在一些實施例中，dsRNA試劑包含正義鏈和反義鏈，所述的正義鏈和反義鏈分別包含與以下所列出的序列之一相差0、1、2或3個核苷酸的至少15個連續核苷酸： 正義鏈：5’- CACCAGCUUGUUUGUGAAACA-3’(SEQ ID NO:522) 反義鏈：5’- UGUUUCACAAACAAGCUGGUG -3’(SEQ ID NO:523);

在一些實施例中，dsRNA試劑包含正義鏈和反義鏈，所述的正義鏈和反義鏈分別包含與以下所列出的序列之一相差0、1、2或3個核苷酸的至少15個連續核苷酸： 正義鏈：5’- GCAAAAAGAAUUCCAACCGAA -3’ (SEQ ID NO: 87)， 反義鏈：5’- UUCGGUUGGAAUUCUUUUUGC -3’ (SEQ ID NO: 184)。

在一些實施例中，dsRNA試劑包含正義鏈和反義鏈，所述的正義鏈和反義鏈分別包含與以下所列出的序列之一相差0、1、2或3個核苷酸的至少15個連續核苷酸： 正義鏈：5’- CCAGCUUGUUUGUGAAAC -3’ (SEQ ID NO: 652)， 反義鏈：5’- GUUUCACAAACAAGCUGG -3’ (SEQ ID NO: 653)。

在一些實施例中，dsRNA試劑雙鏈體，選自表1：AD00158-19-2、AD00158-19-1、AD00158-3、AD00158-1、AD00158-2、AD00158、AD00159、AD00159-1、AD00159-2、AD00159-19-1、AD00159-19-2、AD00163、AD00163-1、AD00163-2、AD00163-19-1、AD00163-19-2、AD00163-3、AD00300-1、AD00300-19-1、AD00300-19-2中任意一條雙鏈體。

在一些實施例中，dsRNA試劑雙鏈體，選自表1中：AV01227、AV01228、AV01229、AV01230、AV01231、AV01232、AV01233、AV01234、AV01235、AV01236、AV01237、AV01238、AV01239、AV01240、AV01241、AV01242、AV01243、AV01244、AV01245、AV01246、AV01247、AV01248、AV01249、AV01250、AV01251、AV01252、AV01253、AV01254、AV01255、AV01256、AV01257或AV01711中任意一條雙鏈體。

在一些實施方案中，dsRNA試劑包含至少一種修飾的核苷酸。在某些實施方案中，反義鏈的所有核苷酸或基本上所有核苷酸都是修飾的核苷酸。在一些實施方案中，至少一種修飾的核苷酸包括：2'-O-甲基核苷酸、2'-氟核苷酸、2'-脫氧核苷酸、2',3'-seco核苷酸模擬物、鎖核苷酸、開環核酸核苷酸（unlocked nucleic acid nucleotide, UNA）、乙二醇核酸核苷酸（glycol nucleic acid nucleotide，GNA）、2'-F-阿拉伯糖核苷酸、2'-甲氧基乙基核苷酸、無碱基核苷酸、核糖醇、反向核苷酸、反向無碱基核苷酸、反向2'-OMe 核苷酸、反向2'-脫氧核苷酸、2'-氨基修飾的核苷酸、2'-烷基修飾的核苷酸、嗎啉代核苷酸和3'-OMe核苷酸、包括5'-硫代磷酸酯基團的核苷酸、或與膽固醇衍生物或十二烷酸雙癸醯胺基團連接的末端核苷酸、2'-氨基修飾的核苷酸、氨基磷酸酯或包含核苷酸的非天然鹼基。

在一些實施例中，這些雙鏈核糖核酸（dsRNA）試劑，包含正義鏈和對應于靶基因的mRNA至少一部分互補的反義鏈，該dsRNA試劑包括具有由式(C)表示的反義鏈核苷酸序列和具有式(D)表示的正義鏈核苷酸序列, 反義鏈包含由按3′至5′方向列出的式(C)表示： 3′-(N _L) _nN _M1N _LN _M2N _LN _FN _LN _M3N _LN _M4N _LN _M5N _M6N _LN _M7N _M8N _LN _FN _L-5′   式(C)， 正義鏈包含由按5′至3′方向列出的式(D)表示： 5′-(N′ _L) _n′N′ _LN′ _LN′ _LN′ _N1N′ _N2N′ _N3N′ _N4N′ _FN′ _LN′ _N5N′ _N6N′ _LN′ _LN′ _LN′ _LN′ _LN′ _LN′ _L-3′ 式(D) 其中，每個N _F代表2′-氟修飾的核苷酸；N _M1、N _M2、N _M3、N _M4、N _M5、N _M6、N _M7和N _M8分別獨立地代表修飾或者未修飾的核苷酸，N _M1、N _M2、N _M3、N _M4、N _M5、N _M6、N _M7和N _M8中有且只有三個2′-氟修飾的核苷酸或者有且只有一個2′-氟修飾的核苷酸；每個N _L獨立地代表修飾或者未修飾的核苷酸，該修飾不是2′-氟修飾的核苷酸；每個N′ _F代表2′-氟修飾的核苷酸；N′ _N1、N′ _N2、N′ _N3、N′ _N4、N′ _N5和N′ _N6分別獨立地代表修飾或者未修飾的核苷酸，N′ _N1、N′ _N2、N′ _N3、N′ _N4、N′ _N5和N′ _N6中有且只有二個2′-氟修飾的核苷酸；每個N′ _L獨立地代表修飾或者未修飾的核苷酸,該修飾不是2′-氟修飾的核苷酸；每個n和n′ 獨立地可以是0至7的整數。

在某些實施方案中，該dsRNA試劑在式(C)所示的反義鏈(從5′端起第1個配對的核苷酸開始計數)的位置2、7、12、14和16處的核苷酸是2′-氟修飾的核苷酸；在式(D)所示的正義鏈(從正義鏈3′端起第1個配對的核苷酸開始計數)的位置9、11和13處的核苷酸是2′-氟修飾的核苷酸。在某些實施方案中，該dsRNA試劑在式(C)所示的反義鏈的位置N _M2、N _M3、N _M6處的核苷酸是2′-氟修飾的核苷酸；在式(D)所示的正義鏈的位置N′ _N3、N′ _N5處的核苷酸是2′-氟修飾的核苷酸。

在一些實施方案中，dsRNA試劑包括在引導鏈的5'末端處的E-乙烯基膦酸酯核苷酸。在某些實施方案中，dsRNA試劑包含至少一個硫代磷酸酯核苷間鍵聯。在某些實施方案中，正義鏈包含至少一個硫代磷酸酯核苷間鍵聯。在一些實施方案中，反義鏈包含至少一個硫代磷酸酯核苷間鍵聯。在一些實施方案中，正義鏈包含1、2、3、4、5或6個硫代磷酸酯核苷間鍵聯。在一些實施方案中，反義鏈包含1、2、3、4、5或6個硫代磷酸酯核苷間鍵聯。

在某些實施方案中，正義鏈和反義鏈的所有或基本上所有核苷酸都是修飾的核苷酸。在一些實施方案中，修飾的正義鏈是表2-4中列出的修飾的正義鏈序列。在一些實施方案中，修飾的反義鏈是表2-4中列出的修飾的反義鏈序列。

在某些實施方案中，正義鏈與反義鏈互補或基本互補，幷且互補區域的長度在16至23個核苷酸之間。在一些實施方案中，互補區域的長度爲19-21個核苷酸。在某些實施方案中，互補區域的長度爲14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30個核苷酸。

在一些實施方案中，每條鏈的長度不超過40個核苷酸。在一些實施方案中，每條鏈的長度不超過30個核苷酸。在一些實施方案中，每條鏈的長度不超過25個核苷酸。在一些實施方案中，每條鏈的長度不超過23個核苷酸。在一些實施方案中，每條鏈的長度4、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30個核苷酸。

在某些實施方案中，dsRNA試劑包含至少一種修飾的核苷酸幷且還包含一個或更多個靶向基團或連接基團。在一些實施方案中，一個或更多個靶向基團或連接基團與正義鏈綴合。在一些實施方案中，靶向基團或連接基團包括N-乙醯基-半乳糖胺（GalNAc）。在一些實施方案中，靶向基團具有以下結構： GLO-1, GLS-1, GLO-2, GLS-2, GLO-3 GLS-3, GLO-4, GLS-4, GLO-5, GLS-5, GLO-6, GLS-6, GLO-7, GLS-7, GLO-8, GLS-8, GLO-9, GLS-9, GLO-10, GLS-10, GLO-11, GLS-11, GLO-12, GLS-12, GLO-13, GLS-13, GLO-14, GLS-14, GLO-15, GLS-15, GLO-16, 或 GLS-16。

在某些實施方案中，dsRNA試劑包含與正義鏈的5'-末端綴合的靶向基團。在一些實施方案中，dsRNA試劑包含與正義鏈的3'-末端綴合的靶向基團。在一些實施方案中，反義鏈在3'-末端包含一個反向無碱基殘基。在某些實施方案中，正義鏈在3'或/和5'末端包含一個或兩個反向無碱基殘基。在一些實施方案中，dsRNA試劑具有兩個平末端。在一些實施方案中，至少一條鏈包含至少1個核苷酸長的3'突出端。在一些實施方案中，至少一條鏈包含至少2個核苷酸長的3'突出端。

在某些實施方案中，本發明涉及用于治療的開環核酸（UNA）寡聚體。開環核酸（unlocked nucleic acid，UNA）是RNA的無環類似物，其中核糖環的C2'和C3'原子之間的鍵已被切斷。已經證明，摻入UNA對 siRNA基因沉默活性具有良好的耐受性，在某些情况下甚至可以增强其活性（Meghan A. et al. “Locked vs. unlocked nucleic acids (LNA vs. UNA): contrasting structures work towards common therapeutic goals”. Chem. Soc. Rev., 2011, 40, 5680–5689 ）。

UNA是一種熱不穩定修飾，用UNA替換核糖核苷酸會降低碱基配對强度和雙鏈體穩定性。將UNA策略性地放置在siRNA反義鏈的種子區域可以降低通過microRNA (miRNA)介導的基因沉默機制中的脫靶活性。miRNA主要通過反義種子區（從5'端開始的第2-8位）與靶mRNA之間的碱基配對來識別靶基因，以進行基因抑制。每個miRNA都可能調節大量基因。RNA誘導沉默複合物（RISC）所加載的siRNA反義鏈也可以通過miRNA介導的機制潜在地調節大量非預期基因。因此，在siRNA的種子區域中加入熱不穩定的核苷酸，如UNA，可以降低脫靶活性（Lam JK, Chow MY, Zhang Y, Leung SW. siRNA Versus miRNA as Therapeutics for Gene Silencing. Mol Ther Nucleic Acids. 2015 Sep 15;4(9):e252. doi: 10.1038/mtna.2015.23. PMID: 26372022; PMCID: PMC4877448.）。具體而言，這樣的RNA寡核苷酸或RNA寡核苷酸的複合物在種子區域含有至少一個UNA核苷酸單體（Narendra Vaish et al. “Improved specificity of gene silencing by siRNAs containing unlocked nucleobase analog”. Nucleic Acids Research, 2011, Vol. 39, No. 5 1823–1832）。

根據本技術方案，在RNA寡核苷酸或RNA寡核苷酸的複合物中幷入UNA的潜在優勢包括但不限于：

1. 减少脫靶活性。在siRNA種子區添加UNA會降低種子區的碱基配對强度，從而降低由micro-RNA機制引起的潜在脫靶活性。

2. UNA在siRNA活性方面具有良好的耐受性。在某些情况下，UNA 可以導致活性增强。

可用于本技術方案的示例性UNA單體包括但不限于： 。

在一些實施例中，dsRNA試劑是經修飾的雙鏈體，爲選自表2-4：AD00158-19-2、AD00158-19-1、AD00158-3、AD00158-1、AD00158-2、AD00158、AD00159、AD00159-1、AD00159-2、AD00159-19-1、AD00159-19-2、AD00163、AD00163-1、AD00163-2、AD00163-19-1、AD00163-19-2、AD00163-3、AD00300-1、AD00300-19-1、AD00300-19-2中任意一條雙鏈體。

在一些實施例中，dsRNA試劑是經修飾的雙鏈體，爲選自表2-4：AV01227、AV01228、AV01229、AV01230、AV01231、AV01232、AV01233、AV01234、AV01235、AV01236、AV01237、AV01238、AV01239、AV01240、AV01241、AV01242、AV01243、AV01244、AV01245、AV01246、AV01247、AV01248、AV01249、AV01250、AV01251、AV01252、AV01253、AV01254、AV01255、AV01256、AV01257中任意一條雙鏈體。

根據本發明的一個方面，提供了一種組合物，其包含本發明上述dsRNA試劑方面的任意實施方案。在某些實施方案中，組合物還包含藥學上可接受的載體。在一些實施方案中，組合物還包含一種或更多種另外的治療劑。在某些實施方案中，組合物被包裝在藥盒、容器、包裝物、分配器、預填充注射器或小瓶中。在一些實施方案中，組合物被配製用于皮下給藥或被配製用于靜脉內（IV）給藥。

根據本發明的另一方面，提供了一種細胞，其包含本發明上述dsRNA試劑方面的任意實施方案。在一些實施方案中，細胞是哺乳動物細胞，任選地是人細胞。

根據本發明的另一方面，提供了一種抑制細胞中AGT基因表達的方法，該方法包括：(i)製備包含有效量的上述dsRNA試劑或上述組合物方面的任意實施方案的細胞。在某些實施方案中，該方法還包括：(ii)將製備的細胞維持足够的時間以獲得AGT基因的mRNA轉錄物的降解，從而抑制細胞中AGT基因的表達。在一些實施方案中，細胞在對象體內幷且dsRNA試劑經皮下施用于對象。在一些實施方案中，細胞在對象體內幷且dsRNA試劑通過IV給藥施用于對象。在某些實施方案中，該方法還包括在向對象施用dsRNA 試劑後評估對AGT基因的抑制，其中評估的手段包括：(i) 確定對象中AGT相關疾病或病症的一個或更多個生理特徵，以及(ii)將所確定的生理特徵與AGT相關疾病或病症的基綫治療前生理特徵和/或AGT相關疾病或病症的對照生理特徵進行比較，其中的比較結果指示對象中AGT基因表達的抑制存在或不存在。在一些實施方案中，所確定的生理特徵是在血液中的AGT水平；在一些實施方案中，所確定的生理特徵是血壓，其包括收縮壓（SBP）、舒張壓（DBP）和平均動脉壓（MAPR）。血液中AGT水平和/或血壓的降低表明對象中AGT基因表達的降低。

根據本發明的另一方面，提供了一種抑制對象中AGT基因表達的方法，其包括向對象施用有效量的前述dsRNA試劑方面的實施方案或前述組合物的實施方案。在一些實施方案中，將dsRNA試劑皮下施用于對象。在某些實施方案中，dsRNA試劑通過IV給藥施用于對象。在一些實施方案中，該方法還包括：在施用dsRNA試劑後評估AGT基因的抑制，其中評估手段包括：(i) 確定對象的AGT相關疾病或病症的一種或更多種生理特徵；(ii)將確定的生理特徵與AGT相關疾病或病症的基綫治療前生理特徵和/或AGT相關疾病或病症的對照生理特徵進行比較；其中比較結果指示對象中AGT基因表達的抑制存在或不存在。在一些實施方案中，所確定的生理特徵是在血液中的AGT水平；在一些實施方案中，所確定的生理特徵是血壓，其包括收縮壓（SBP）、舒張壓（DBP）和平均動脉壓（MAPR）。血液中AGT水平和/或血壓的降低表明對象中AGT基因表達的降低。

根據本發明的另一方面，提供了一種治療與AGT蛋白相關之疾病或病症的方法，其包括：向對象施用有效量的本發明的前述dsRNA試劑方面的任意實施方案或本發明的前述組合物的任意實施方案，以抑制AGT基因表達。在某些實施方式中，AGT相關障礙選自：高血壓病、高血壓、臨界性高血壓、原發性高血壓、繼發性高血壓、孤立性收縮期或舒張期高血壓、妊娠相關高血壓、糖尿病性高血壓、頑固性高血壓、難治性高血壓、陣發性高血壓、腎血管性高血壓、戈德布拉特氏（Goldblatt）高血壓、眼高血壓、青光眼、肺高血壓、門脉高血壓、系統性靜脉高血壓、收縮期高血壓、不穩定性高血壓；高血壓性心臟病、高血壓性腎病變、動脉粥樣硬化、動脉硬化、血管病變、糖尿病性腎病變、糖尿病性視網膜病變、慢性心力衰竭、心肌病變、糖尿病性心肌病變、腎小球硬化症、主動脉狹窄、主動脉瘤、心室纖維化、心力衰竭、心肌梗塞、心絞痛、中風、腎疾病、腎衰竭、系統性硬化症、宮內發育遲緩（IUGR）、胎兒生長受限。在一些實施方案中，該方法還包括：向對象施用另外的治療方案。在一些實施方案中，另外的治療方案包括AGT相關疾病或病症的治療。在某些實施方案中，另外的治療方案包括：向對象施用一種或更多種本發明的AGT反義多核苷酸；向對象施用非AGT dsRNA治療劑；以及在對象中進行行爲改變。在一些實施方案中，非AGT dsRNA治療劑是以下中的一種：另外的治療劑，如利尿劑、血管緊張素轉化酶（ACE）抑制劑、血管緊張素II受體拮抗劑、β-阻滯劑、血管擴張劑、鈣通道阻滯劑、醛固酮拮抗劑、α2-激動劑、腎素抑制劑、α-阻滯劑、外周作用腎上腺素能劑、選擇性D1受體部分激動劑、非選擇性α-腎上腺素能拮抗劑、合成的、甾體抗鹽皮質激素劑，或上述任何的組合，及配製成藥劑組合的高血壓治療劑。

在一些實施方案中，將dsRNA試劑皮下施用于對象。在某些實施方案中，dsRNA試劑通過IV給藥施用于對象。在一些實施方案中，該方法還包括確定所施用的雙鏈核糖核酸（dsRNA）試劑在對象中的功效。在一些實施方案中，確定治療在對象中的功效的手段包括：(i) 確定對象中AGT相關疾病或病症的一種或更多種生理特徵；(ii)將確定的生理特徵與AGT相關疾病或病症的基綫治療前生理特徵進行比較，其中該比較結果指示對對象施用雙鏈核糖核酸（dsRNA）試劑的功效存在、不存在和水平中的一種或更多種。在一些實施方案中，所確定的生理特徵是在血液中的AGT水平；在一些實施方案中，所確定的生理特徵是血壓，其包括收縮壓（SBP）、舒張壓（DBP）和平均動脉壓（MAPR）。血液中AGT水平和/或血壓的降低表明對對象施用雙鏈核糖核酸（dsRNA）試劑的有效性的存在。

根據本發明的另一方面，提供了與對象中AGT蛋白的基綫治療前水平相比降低對象中AGT蛋白水平的方法，其包括向對象施用有效量的本發明的前述dsRNA試劑方面的任意實施方案或本發明的前述組合物的任意實施方案，以降低AGT基因表達的水平。 在一些實施方案中，將dsRNA試劑皮下施用于對象或通過IV施用于對象。

根據本發明的另一方面，提供了與對象中AGT相關疾病或病症的基綫治療前生理特徵相比改變對象中AGT相關疾病或病症的生理特徵的方法，該方法包括向對象施用有效量的本發明前述dsRNA試劑方面的任意實施方案或本發明的前述組合物的任意實施方案，以改變對象中AGT相關疾病或病症的生理特徵。在一些實施方案中，將dsRNA試劑皮下施用于對象或通過IV施用于對象。在某些實施方案中，生理特徵是在血液中的AGT水平；在一些實施方案中，所確定的生理特徵是血壓，其包括收縮壓（SBP）、舒張壓（DBP）和平均動脉壓（MAPR）。

序列說明

雙鏈體AD00051至AD00122-19-2、AD00163-3、AV01227至AVAV01257、AV01711顯示在表1中幷且顯示了其正義鏈序列。

雙鏈體AD00051至AD00122-19-2、AD00163-3、AV01227至AVAV01257、AV01711顯示在表1中幷且顯示了其反義鏈序列。

SEQ ID NO: 519是人血管緊張素原（AGT）mRNA [NCBI 參考序列：NM_001384479.1]： GAAGAAGCTGCCGTTGTTCTGGGTACTACAGCAGAAGGGTATGCGGAAGCGAGCACCCCAGTCTGAGATGGCTCCTGCCGGTGTGAGCCTGAGGGCCACCATCCTCTGCCTCCTGGCCTGGGCTGGCCTGGCTGCAGGTGACCGGGTGTACATACACCCCTTCCACCTCGTCATCCACAATGAGAGTACCTGTGAGCAGCTGGCAAAGGCCAATGCCGGGAAGCCCAAAGACCCCACCTTCATACCTGCTCCAATTCAGGCCAAGACATCCCCTGTGGATGAAAAGGCCCTACAGGACCAGCTGGTGCTAGTCGCTGCAAAACTTGACACCGAAGACAAGTTGAGGGCCGCAATGGTCGGGATGCTGGCCAACTTCTTGGGCTTCCGTATATATGGCATGCACAGTGAGCTATGGGGCGTGGTCCATGGGGCCACCGTCCTCTCCCCAACGGCTGTCTTTGGCACCCTGGCCTCTCTCTATCTGGGAGCCTTGGACCACACAGCTGACAGGCTACAGGCAATCCTGGGTGTTCCTTGGAAGGACAAGAACTGCACCTCCCGGCTGGATGCGCACAAGGTCCTGTCTGCCCTGCAGGCTGTACAGGGCCTGCTAGTGGCCCAGGGCAGGGCTGATAGCCAGGCCCAGCTGCTGCTGTCCACGGTGGTGGGCGTGTTCACAGCCCCAGGCCTGCACCTGAAGCAGCCGTTTGTGCAGGGCCTGGCTCTCTATACCCCTGTGGTCCTCCCACGCTCTCTGGACTTCACAGAACTGGATGTTGCTGCTGAGAAGATTGACAGGTTCATGCAGGCTGTGACAGGATGGAAGACTGGCTGCTCCCTGATGGGAGCCAGTGTGGACAGCACCCTGGCTTTCAACACCTACGTCCACTTCCAAGGGAAGATGAAGGGCTTCTCCCTGCTGGCCGAGCCCCAGGAGTTCTGGGTGGACAACAGCACCTCAGTGTCTGTTCCCATGCTCTCTGGCATGGGCACCTTCCAGCACTGGAGTGACATCCAGGACAACTTCTCGGTGACTCAAGTGCCCTTCACTGAGAGCGCCTGCCTGCTGCTGATCCAGCCTCACTATGCCTCTGACCTGGACAAGGTGGAGGGTCTCACTTTCCAGCAAAACTCCCTCAACTGGATGAAGAAACTATCTCCCCGGACCATCCACCTGACCATGCCCCAACTGGTGCTGCAAGGATCTTATGACCTGCAGGACCTGCTCGCCCAGGCTGAGCTGCCCGCCATTCTGCACACCGAGCTGAACCTGCAAAAATTGAGCAATGACCGCATCAGGGTGGGGGAGGTGCTGAACAGCATTTTTTTTGAGCTTGAAGCGGATGAGAGAGAGCCCACAGAGTCTACCCAACAGCTTAACAAGCCTGAGGTCTTGGAGGTGACCCTGAACCGCCCATTCCTGTTTGCTGTGTATGATCAAAGCGCCACTGCCCTGCACTTCCTGGGCCGCGTGGCCAACCCGCTGAGCACAGCATGAGGCCAGGGCCCCAGAACACAGTGCCTGGCAAGGCCTCTGCCCCTGGCCTTTGAGGCAAAGGCCAGCAGCAGATAACAACCCCGGACAAATCAGCGATGTGTCACCCCCAGTCTCCCACCTTTTCTTCTAATGAGTCGACTTTGAGCTGGAAAGCAGCCGTTTCTCCTTGGTCTAAGTGTGCTGCATGGAGTGAGCAGTAGAAGCCTGCAGCGGCACAAATGCACCTCCCAGTTTGCTGGGTTTATTTTAGAGAATGGGGGTGGGGAGGCAAGAACCAGTGTTTAGCGCGGGACTACTGTTCCAAAAAGAATTCCAACCGACCAGCTTGTTTGTGAAACAAAAAAGTGTTCCCTTTTCAAGTTGAGAACAAAAATTGGGTTTTAAAATTAAAGTATACATTTTTGCATTGCCTTCGGTTTGTATTTAGTGTCTTGAATGTAAGAACATGACCTCCGTGTAGTGTCTGTAATACCTTAGTTTTTTCCACAGATGCTTGTGATTTTTGAACAATACGTGAAAGATGCAAGCACCTGAATTTCTGTTTGAATGCGGAACCATAGCTGGTTATTTCTCCCTTGTGTTAGTAATAAACGTCTTGCCACAATAAGCCTCCAAAAA。

SEQ ID NO: 520是小鼠血管緊張素原（AGT）mRNA [NCBI參考序列：NM_007428.4] ATGACTCCCACGGGGGCAGGCCTGAAGGCCACCATCTTCTGCATCTTGACCTGGGTCAGCCTGACGGCTGGGGACCGCGTATACATCCACCCCTTCCATCTCCTTTACCACAACAAGAGCACCTGCGCCCAGCTGGAGAACCCCAGTGTGGAGACACTCCCAGAGTCAACGTTCGAGCCTGTGCCCATTCAGGCCAAGACCTCCCCTGTGAATGAGAAGACCCTGCATGATCAGCTCGTGCTGGCCGCCGAGAAGCTAGAGGATGAGGACCGGAAGCGGGCTGCCCAGGTCGCAATGATCGCCAACTTCGTGGGCTTCCGCATGTACAAGATGCTGAATGAGGCAGGAAGTGGGGCCAGTGGGGCCATCCTCTCACCACCAGCTCTCTTTGGCACCCTGGTCTCTTTCTACCTTGGATCCTTAGATCCCACGGCCAGCCAGCTGCAGACGCTGCTGGATGTCCCTGTGAAGGAGGGAGACTGCACCTCCCGACTAGATGGACACAAGGTCCTCGCTGCCCTGCGGGCCATTCAGGGCTTGCTGGTCACCCAGGGTGGGAGCAGCAGCCAGACACCCCTGCTACAGTCCATTGTGGTGGGGCTCTTCACTGCTCCAGGCTTTCGTCTAAAGCACTCATTTGTTCAGAGCCTGGCTCTCTTTACCCCTGCCCTCTTCCCACGCTCTCTGGATTTATCCACTGACCCAGTTCTTGCCACTGAGAAAATCAACAGGTTCATAAAGGCTGTGACAGGGTGGAAGATGAACTTGCCACTGGAGGGGGTCAGTACAGACAGCACCCTACTTTTCAACACCTACGTTCACTTCCAAGGAACGATGAGAGGTTTCTCTCAGCTGCCTGGAGTCCATGAATTCTGGGTGGACAACAGCATCTCGGTGTCTGTGCCCATGATCTCCGGCACTGGCAACTTCCAGCACTGGAGTGACACCCAGAACAACTTCTCCGTGACGTGCGTGCCCCTAGGTGAGAGAGCCACCCTGCTGCTCATCCAGCCCCACTGCACCTCAGATCTCGACAGGGTGGAGGCCCTCATCTTCCGGAACGACCTCCTGACTTGGATAGAGAACCCGCCTCCTCGGGCCATCCGCCTGACTCTGCCCCAGCTGGAAATCCGAGGATCCTACAATCTGCAGGACCTGCTGGCTGAGGACAAGCTGCCCACCCTTTTGGGTGCGGAGGCAAATCTGAACAACATTGGTGACACCAACCCCCGAGTGGGAGAGGTTCTCAATAGCATCCTCCTCGAACTCAAAGCAGGAGAGGAGGAACAGCCGACCACGTCTGTCCAGCAGCCTGGCTCACCGGAGGCACTGGATGTGACCCTGAGCAGCCCCTTCCTGTTCGCCATCTACGAGCAGGACTCAGGCACGCTGCACTTTCTGGGCAGAGTGAATAACCCCCAGAGTGTGGTGTGA

SEQ ID NO: 521是食蟹猴血管緊張素原（AGT）mRNA [NCBI參考序列：NM_001283634.1] ATGCAGAAGCGAGCACCCCAGTCCGAGATGGCTCCTGCCAGCGTGAGCCTGAGGGCCACCATCCTCTGCCTCCTGGCCTGGGCTGGCCTGGCCACAGGTGACCGGGTGTACATACACCCCTTCCACCTCGTCATCCACAATGAGAGTACCTGTGAGCAGCTGGCAAAGGCCGATGCTGGGAAGCCCAAAGATCCCACCTTCACACCTGTTCCGATACAGGCCAAGACGTCTCCTGTGGATGAAAAGGCCCTGCAGGACCAGCTAGTGCTGGTTGCCGCAAAACTCGACACCGAGGACAAGTTGAGAGCCGCGATGGTCGGGATGCTGGCCAACTTCTTGGGCTTCCGTATATATGGCATGCACAGTGAGCTATGGGGCGTGGTCCATGGGGCCACCATCCTCTCCCCAACGGCTGTCTTTGGCACCCTGGCCTCTCTCTACCTGGGAGCGTTGGACCACACAGCCGACAGGCTACAGGCAATCCTGGGCGTCCCTTGGAAGGACAAGAACTGCACCTCCCGGCTGGATGCGCACAAGGTCCTCTCTGCCCTGCAGGCTGTACAGGGCCTGCTGGTGGCCCAGGGCAGGGCTGACGGCCAGTCCCAGCTGCTGTTGTCCACAGTGGTGGGTCTCTTCACAGCCCCAGATCTGCACCTGAAGCAGCCGTTTGTGCAGGGCCTGGCTCTCTATGCCCCTGTGGTCCTCCCACGCTCTCTGGACTTCACAGACCTGGAAGTCGCTGCTGAGAAGATTGACAGGTTCATGCAGGCTGTGACAGGATGGAAGATTAGCAGCCCCCTGACGGGAGCCAGTGCGGACAGCACCCTGGTTTTCAACACCTACGTCCATTTCCAAGGGAAGATGAGGGACTTCTTCCTGCTGGCTGAGCCCCAGGAGTTCTGGGTGGACAACAGCACCTCAGTGTCTGTCCCCATGCTGTCTGGCGTGGGCACCTTCCAGCACTGGAGCGACGCCCAGGACAACTTCTCAGTGACTCAAGTGCCCTTTACTGAGAGCGCCTGCTTGCTGCTGATTCAGCCTCACTACGCCTCTGACCTGGACAAGGTGGAGGGTCTCACTTTCCAGCAAAACTCCCTCAACTGGATGAAGAAACTGTCTCCCCGGGCCATCCACCTGACCATGCCCCGACTGGTGCTGCGAGGATCTTATGACCTGCAGGACCTGCTTGCCCAGGCTGAGCTGCCCGCCATTCTGGGCACCGAGCTGAACCTGCAAAAATTGAGCAATGACAACCTCAGGGTGGGGAAGGTGCTGAACAGCATTCTTTTTGAACTCGAAGCGGATGAGAGAGAGCCCACAGAGTCTACCCGACAGCTGAACAGGCCTGAGTTCTTGGAGGTGACCCTGGACCGCCCATTCCTGTTTGCTGTGTATGATCAAAGTGCCACTGCCCTGCACTTCCTGGGCCGTGTGGCCAACCCGCTGAGCCCAGCATGA

在顯示于表2的序列中，化學修飾表示爲：大寫：2'-氟；小寫：2'-OMe；硫代磷酸酯：*。

在顯示于表3的序列中，體內研究中使用的遞送分子在每條正義鏈的3'末端表示爲“GLO-0”。化學修飾表示爲：大寫：2'-氟；小寫：2'-OMe；硫代磷酸酯：*；開環核酸：UNA（注：AD00052、AD00113-AD00260：無UNA；AD00282-AD00301：UNA版本）。

在顯示于表4的序列中，化學修飾表示爲：大寫：2'-氟；小寫：2'-OMe；硫代磷酸酯：*；Invab = 反向無碱基。

本發明的部分實施方案包括能够抑制血管緊張素原（AGT）基因表達的RNAi試劑，例如但不限于雙鏈(ds)RNAi試劑。本發明的部分實施方案還包括包含AGT RNAi試劑的組合物和使用該組合物的方法。本文公開的AGT RNAi試劑可接附于遞送化合物以遞送至細胞，包括遞送至肝細胞。本發明的藥物組合物可包含至少一種dsAGT試劑和遞送化合物。在本發明的一些實施方案中，遞送化合物是含GalNAc的遞送化合物。遞送至細胞的AGT RNAi試劑能够抑制AGT基因表達，從而降低基因的AGT蛋白産物在細胞中的活性。本發明的dsRNAi試劑可用于治療AGT相關疾病和病症。這樣的dsRNAi試劑包括例如表1中所顯示的雙鏈體AD00051至AD00122-19-2。在一些實施方案中，優選的dsRNAi試劑包括例如雙鏈體AD00158、AD00163、AD00159、AD00290、AD00300或AD00122。在另一些實施方案中，優選的dsRNAi試劑包括例如AD00158-1、AD00158-2、AD00163-1、AD00163-3、AD00159-1或AD00300-1。在其他一些實施方案中，這樣的dsRNAi試劑包括雙鏈體變體，例如雙鏈體AD00158、AD00163、AD00163-3、AD00159、AD00290、AD00300或AD00122的變體。

在本發明的一些實施方案中，降低細胞或對象中AGT表達分別治療與細胞或對象中AGT表達相關的疾病或病症。可通過降低 AGT 活性治療的疾病和病症的非限制性實例是：高血壓病、高血壓、臨界性高血壓、原發性高血壓、繼發性高血壓、孤立性收縮期或舒張期高血壓、妊娠相關高血壓、糖尿病性高血壓、頑固性高血壓、難治性高血壓、陣發性高血壓、腎血管性高血壓、戈德布拉特氏（Goldblatt）高血壓、眼高血壓、青光眼、肺高血壓、門脉高血壓、系統性靜脉高血壓、收縮期高血壓、不穩定性高血壓；高血壓性心臟病、高血壓性腎病變、動脉粥樣硬化、動脉硬化、血管病變、糖尿病性腎病變、糖尿病性視網膜病變、慢性心力衰竭、心肌病變、糖尿病性心肌病變、腎小球硬化症、主動脉狹窄、主動脉瘤、心室纖維化、心力衰竭、心肌梗塞、心絞痛、中風、腎疾病、腎衰竭、系統性硬化症、宮內發育遲緩（IUGR）、胎兒生長受限。

下面描述了如何製備和使用包含 AGT 單鏈（ssRNA）和雙鏈（dsRNA）試劑的組合物來抑制 AGT 基因表達，以及用于治療由AGT基因表達引起或調節的疾病和病症的組合物和方法。術語“RNAi”也是本領域已知的，幷且可以被稱爲“siRNA”。

如本文所用，術語“RNAi”是指包含RNA幷通過RNA誘導的沉默複合物（RISC）途徑介導RNA轉錄物的靶向切割的試劑。如本領域已知的，RNAi靶區域是指在基因轉錄過程中形成的RNA分子的核苷酸序列的連續部分，其包括信使RNA（mRNA），它是初級轉錄産物RNA的加工産物。該序列的靶標部分將至少足够長以用作在該部分處或附近進行 RNAi定向切割的底物。靶序列可以是8-30個核苷酸長（包括端值）、10-30個核苷酸長（包括端值）、12-25個核苷酸長（包括端值）、15-23個核苷酸長（包括端值）、16 -23 個核苷酸長（包括端值），或18-23個核苷酸長（包括端值），幷包括每個規定範圍內的所有較短長度。在本發明的一些實施方案中，靶序列爲9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25或26個核苷酸長。在某些實施方案中，靶序列的長度在9到26個核苷酸之間（包括端值），包括其間的所有子範圍和整數。例如，雖然不意在限制，但在本發明的某些實施方案中，靶序列爲8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、 23、24、25、26、27、28、29或30個核苷酸長，該序列與AGT基因的RNA轉錄物的至少一部分完全或至少基本上互補。本發明的一些方面包括包含一種或更多種AGT dsRNA試劑和藥學上可接受的載體的藥物組合物。在本發明的某些實施方案中，如本文所述的AGT RNAi抑制AGT蛋白的表達。

如本文所用，“dsRNA試劑”是指包含RNA或RNA樣（例如，化學修飾的RNA）寡核苷酸分子的組合物，其能够降解或抑制靶mRNA轉錄物的翻譯。儘管不希望限于特定理論，但本發明的dsRNA試劑可通過RNA干擾機制起作用（即，通過與哺乳動物細胞的RNA干擾途徑機制（RNA誘導的沉默複合物或RISC）相互作用來誘導産生RNA干擾），或通過任何替代機制或途徑起作用。在植物、無脊椎動物和脊椎動物細胞中實現基因沉默的方法是本領域所公知的（參見例如，Sharp et al., Genes Dev. 2001, 15:485; Bernstein, et al., (2001) Nature 409:363; Nykanen, et al., (2001) Cell 107:309; 以及Elbashir, et al., (2001) Genes Dev. 15:188)），其各自的公開內容通過引用整體幷入本文。本領域已知的基因沉默手段可與本文提供的公開內容結合使用以實現抑制AGT的表達。

本文公開的dsRNA試劑由正義鏈和反義鏈組成，其包括但不限于：短干擾RNA（siRNA）、RNAi試劑、微RNA（miRNA）、短髮夾 RNA（shRNA）和切丁酶（Dicer）底物。本文描述的dsRNA試劑的反義鏈至少部分地與所靶向的mRNA互補，本領域能够理解，多種長度的dsRNA雙鏈體結構可用于抑制靶基因表達。例如，已知具有19、20、21、22和23個碱基對的雙鏈體結構的dsRNA可有效誘導RNA干擾（Elbashir et al., EMBO 2001, 20:6877-6888）。本領域還已知較短或較長的RNA雙鏈體結構也可有效誘導RNA干擾。本發明的某些實施方案中的AGT dsRNA可以包含至少一條長度至少爲21 nt的鏈，或者雙鏈體可以具有基于表1-4中任何列出的序列之一的長度减1、2、3 nt或更短的長度。與分別在表1-4中列出的dsRNA相比，在其一端或兩端减少4個核苷酸也可以是有效的。在本發明的一些實施方案中，AGT dsRNA試劑可具有來自表1-4的一個或更多個序列的至少15、16、17、18、19、20或更多個連續核苷酸的部分序列，幷且它們抑制AGT基因表達的能力與由包含全序列（此處也稱爲“親本”序列）的dsRNA産生的抑制水平相差不超過5%、10%、15%、20%、25%或30%。

本發明的組合物和方法的某些實施方案在組合物中包含單鏈RNA和/或將單鏈RNA施用于對象。例如，表1-4任一項中所列的反義鏈可以作爲一種組合物或在一種組合物內，該組合物施用給對象會降低對象中AGT多肽活性和/或AGT基因的表達。表1-4顯示了某些AGT dsRNA試劑的反義鏈和正義鏈核心延伸碱基序列。可以包含在本發明的某些組合物中和/或在本發明的某些方法中施用的單鏈反義分子在本文中稱爲“單鏈反義試劑”或“反義多核苷酸試劑”。可以包含在某些組合物中和/或在本發明的某些方法中施用的單鏈正義分子在本文中稱爲“單鏈正義試劑”或“正義多核苷酸試劑”。術語“碱基序列”在本文中是指沒有化學修飾或遞送化合物的多核苷酸序列。例如，表1所示的正義鏈對應于是表3中的相應碱基序列；但表3中的相應序列中顯示了各自的化學修飾和遞送化合物。在此公開的序列可以被分配標識符。例如，單鏈正義序列可以用“正義鏈SS#”來標識；單鏈反義序列可以用“反義鏈AS#”來標識；幷且包含正義鏈和反義鏈的雙鏈體可以用“雙鏈體AD#”來標識。

表1包括正義鏈和反義鏈，幷提供了由表1中同一行上的正義鏈和反義鏈形成的雙鏈體的標識號。在本發明的某些實施方案中，反義序列在其第1位中包含核碱基u或核碱基a。在本發明的某些實施方案中，反義序列在反義序列的第1位包含核碱基u。如本文所用，術語“匹配位置”在某種意義上是指當兩條鏈作爲雙鏈體時每條鏈中互相“配對”的位置。例如，在21核碱基正義鏈和21核碱基反義鏈中，正義鏈第1位與反義鏈第21位的核碱基處于“匹配位置”。在另一個非限制性實例中，對于23核碱基正義鏈和23核碱基反義鏈，正義鏈的第2位核碱基與反義鏈的22位處于匹配位置。在另一個非限制性實例中，在18核碱基正義鏈和18核碱基反義鏈中，正義鏈第1位核碱基與反義鏈第18位核碱基處于匹配位置；幷且正義鏈中的第4位核碱基與反義鏈中的第15位核碱基處于匹配位置。技術人員會理解如何識別雙鏈和成對鏈的正義和反義鏈之間的匹配位置。

表1中的最後一列表示雙鏈體的雙鏈體AD#/AV#，該雙鏈體在同一表格行中包含正義和反義序列。例如，表1公開了指定爲“雙鏈體AD# AD00051”的雙鏈體，其包含相應的正義鏈序列和反義鏈序列。因此，表1中的每一行都標識了本發明的雙鏈體，每一個都包含顯示在同一行中的正義和反義序列，每個雙鏈體的指定標識符均顯示在該行的最後一列中。

在本發明方法的一些實施方案中，向對象施用包含表1中所示多核苷酸序列的RNAi試劑。在本發明的一些實施方案中，向對象施用的RNAi試劑包括雙鏈體，所述雙鏈體包含表1中列出的碱基序列中的至少一個，幷包含0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23 或24個序列修改。在本發明方法的一些實施方案中，還包括將表1中所示多核苷酸序列的RNAi試劑連接至遞送分子上，其非限制性實例是包含GalNAc的遞送化合物。 表1：無修飾的AGT RNAi試劑反義鏈和正義鏈序列。所有序列均顯示爲5'到3'方向。雙鏈體AD#/AV#是分配給表中同一行中兩條鏈的雙鏈體的編號。

正義鏈碱基序列5'→ 3'	SEQ ID NO	反義鏈碱基序列5'→ 3'	SEQ ID NO	雙鏈體AD#/AV#
GCGUCAUCCACAAUGAGAGUA	1	UACUCUCAUUGUGGAUGACGC	98	AD00051
GUCAUCCACAAUGAGAGUACA	2	UGUACUCUCAUUGUGGAUGAC	99	AD00052
GAUCCACAAUGAGAGUACCUA	3	UAGGUACUCUCAUUGUGGAUC	100	AD00053
GUCCACAAUGAGAGUACCUGA	4	UCAGGUACUCUCAUUGUGGAC	101	AD00054
GUUCUUGGGCUUCCGUAUAUA	5	UAUAUACGGAAGCCCAAGAAC	102	AD00055
GUUGGGCUUCCGUAUAUAUGA	6	UCAUAUAUACGGAAGCCCAAC	103	AD00056
GUGGGCUUCCGUAUAUAUGGA	7	UCCAUAUAUACGGAAGCCCAC	104	AD00057
GGCUUCCGUAUAUAUGGCAUA	8	UAUGCCAUAUAUACGGAAGCC	105	AD00058
GCUUCCGUAUAUAUGGCAUGA	9	UCAUGCCAUAUAUACGGAAGC	106	AD00059
GCGUAUAUAUGGCAUGCACAA	10	UUGUGCAUGCCAUAUAUACGC	107	AD00060
GGUUCCUUGGAAGGACAAGAA	11	UUCUUGUCCUUCCAAGGAACC	108	AD00061
GAGAAGAUUGACAGGUUCAUA	12	UAUGAACCUGUCAAUCUUCUC	109	AD00062
GAUGCAGGCUGUGACAGGAUA	13	UAUCCUGUCACAGCCUGCAUC	110	AD00063
GGAGUUCUGGGUGGACAACAA	14	UUGUUGUCCACCCAGAACUCC	111	AD00064
GCAACAGCACCUCAGUGUCUA	15	UAGACACUGAGGUGCUGUUGC	112	AD00065
GGGGUCUCACUUUCCAGCAAA	16	UUUGCUGGAAAGUGAGACCCC	113	AD00066
GUCACUUUCCAGCAAAACUCA	17	UGAGUUUUGCUGGAAAGUGAC	114	AD00067
GCCAGCAAAACUCCCUCAACA	18	UGUUGAGGGAGUUUUGCUGGC	115	AD00068
GAGCAAAACUCCCUCAACUGA	19	UCAGUUGAGGGAGUUUUGCUC	116	AD00069
GGAGCUGAACCUGCAAAAAUA	20	UAUUUUUGCAGGUUCAGCUCC	117	AD00070
GCUGAACCUGCAAAAAUUGAA	21	UUCAAUUUUUGCAGGUUCAGC	118	AD00071
GGAACCGCCCAUUCCUGUUUA	22	UAAACAGGAAUGGGCGGUUCC	119	AD00072
GAACCGCCCAUUCCUGUUUGA	23	UCAAACAGGAAUGGGCGGUUC	120	AD00073
GUUCCUGUUUGCUGUGUAUGA	24	UCAUACACAGCAAACAGGAAC	121	AD00074
GCUGUUUGCUGUGUAUGAUCA	25	UGAUCAUACACAGCAAACAGC	122	AD00075
GUGUUUGCUGUGUAUGAUCAA	26	UUGAUCAUACACAGCAAACAC	123	AD00076
GUUGCUGUGUAUGAUCAAAGA	27	UCUUUGAUCAUACACAGCAAC	124	AD00077
GUCCCACCUUUUCUUCUAAUA	28	UAUUAGAAGAAAAGGUGGGAC	125	AD00078
GACCUUUUCUUCUAAUGAGUA	29	UACUCAUUAGAAGAAAAGGUC	126	AD00079
GCCUUUUCUUCUAAUGAGUCA	30	UGACUCAUUAGAAGAAAAGGC	127	AD00080
GCGUUUCUCCUUGGUCUAAGA	31	UCUUAGACCAAGGAGAAACGC	128	AD00081
GUUUCUCCUUGGUCUAAGUGA	32	UCACUUAGACCAAGGAGAAAC	129	AD00082
GGUUUGCUGGGUUUAUUUUAA	33	UUAAAAUAAACCCAGCAAACC	130	AD00083
GUUUGCUGGGUUUAUUUUAGA	34	UCUAAAAUAAACCCAGCAAAC	131	AD00084
GUUGCUGGGUUUAUUUUAGAA	35	UUCUAAAAUAAACCCAGCAAC	132	AD00085
GGGGUUUAUUUUAGAGAAUGA	36	UCAUUCUCUAAAAUAAACCCC	133	AD00086
GGGUUUAUUUUAGAGAAUGGA	37	UCCAUUCUCUAAAAUAAACCC	134	AD00087
GGGCAAGAACCAGUGUUUAGA	38	UCUAAACACUGGUUCUUGCCC	135	AD00088
GGCAAGAACCAGUGUUUAGCA	39	UGCUAAACACUGGUUCUUGCC	136	AD00089
GCAAGAACCAGUGUUUAGCGA	40	UCGCUAAACACUGGUUCUUGC	137	AD00090
GCUGUUCCAAAAAGAAUUCCA	41	UGGAAUUCUUUUUGGAACAGC	138	AD00091
GGUUCCAAAAAGAAUUCCAAA	42	UUUGGAAUUCUUUUUGGAACC	139	AD00092
GUUCCAAAAAGAAUUCCAACA	43	UGUUGGAAUUCUUUUUGGAAC	140	AD00093
GCAAAAAGAAUUCCAACCGAA	44	UUCGGUUGGAAUUCUUUUUGC	141	AD00094
GAAAAAGAAUUCCAACCGACA	45	UGUCGGUUGGAAUUCUUUUUC	142	AD00095
GCAACCGACCAGCUUGUUUGA	46	UCAAACAAGCUGGUCGGUUGC	143	AD00096
GAACCGACCAGCUUGUUUGUA	47	UACAAACAAGCUGGUCGGUUC	144	AD00097
GGACCAGCUUGUUUGUGAAAA	48	UUUUCACAAACAAGCUGGUCC	145	AD00098
GACCAGCUUGUUUGUGAAACA	49	UGUUUCACAAACAAGCUGGUC	146	AD00099
GCCAGCUUGUUUGUGAAACAA	50	UUGUUUCACAAACAAGCUGGC	147	AD00100
GUCAUCCACAAUGAGAGUACA	51	UGUACUCUCAUUGUGGAUGAC	148	AD00101
GUGGGCUUCCGUAUAUAUGGA	52	UCCAUAUAUACGGAAGCCCAC	149	AD00113
GCUGUUUGCUGUGUAUGAUCA	53	UGAUCAUACACAGCAAACAGC	150	AD00114
GGUUUGCUGGGUUUAUUUUAA	54	UUAAAAUAAACCCAGCAAACC	151	AD00115
GCCAGCUUGUUUGUGAAACAA	55	UUGUUUCACAAACAAGCUGGC	152	AD00116
GUCCCACCUUUUCUUCUAAUA	56	UAUUAGAAGAAAAGGUGGGAC	153	AD00122
GCCUUUUCUUCUAAUGAGUCA	57	UGACUCAUUAGAAGAAAAGGC	154	AD00123
GGGGUUUAUUUUAGAGAAUGA	58	UCAUUCUCUAAAAUAAACCCC	155	AD00124
GGUUCCAAAAAGAAUUCCAAA	59	UUUGGAAUUCUUUUUGGAACC	156	AD00125
GUUCCAAAAAGAAUUCCAACA	60	UGUUGGAAUUCUUUUUGGAAC	157	AD00126
CAUCCACAAUGAGAGUACCUA	61	UAGGUACUCUCAUUGUGGAUG	158	AD00154
CUUCUUGGGCUUCCGUAUAUA	62	UAUAUACGGAAGCCCAAGAAG	159	AD00155
CAUGCAGGCUGUGACAGGAUA	63	UAUCCUGUCACAGCCUGCAUG	160	AD00156
GCUGAACCUGCAAAAAUUGAA	64	UUCAAUUUUUGCAGGUUCAGC	161	AD00157
CACCUUUUCUUCUAAUGAGUA	65	UACUCAUUAGAAGAAAAGGUG	162	AD00158
CCGUUUCUCCUUGGUCUAAGA	66	UCUUAGACCAAGGAGAAACGG	163	AD00159
ACUGUUCCAAAAAGAAUUCCA	67	UGGAAUUCUUUUUGGAACAGU	164	AD00160
CAAAAAGAAUUCCAACCGACA	68	UGUCGGUUGGAAUUCUUUUUG	165	AD00161
CGACCAGCUUGUUUGUGAAAA	69	UUUUCACAAACAAGCUGGUCG	166	AD00162
GACCAGCUUGUUUGUGAAACA	70	UGUUUCACAAACAAGCUGGUC	167	AD00163
UCGUCAUCCACAAUGAGAGUA	71	UACUCUCAUUGUGGAUGACGA	168	AD00252
GUCCACAAUGAGAGUACCUGA	72	UCAGGUACUCUCAUUGUGGAC	169	AD00253
AGGGUCUCACUUUCCAGCAAA	73	UUUGCUGGAAAGUGAGACCCU	170	AD00254
CUGUUUGCUGUGUAUGAUCAA	74	UUGAUCAUACACAGCAAACAG	171	AD00255
UUUGCUGUGUAUGAUCAAAGA	75	UCUUUGAUCAUACACAGCAAA	172	AD00256
GUUUCUCCUUGGUCUAAGUGA	76	UCACUUAGACCAAGGAGAAAC	173	AD00257
GCAAGAACCAGUGUUUAGCGA	77	UCGCUAAACACUGGUUCUUGC	174	AD00258
CCAAAAAGAAUUCCAACCGAA	78	UUCGGUUGGAAUUCUUUUUGG	175	AD00259
CAACCGACCAGCUUGUUUGUA	79	UACAAACAAGCUGGUCGGUUG	176	AD00260
GACCUUUUCUUCUAAUGAGUA	80	UACUCAUUAGAAGAAAAGGUC	177	AD00158-1
GACCUUUCUUUCUAGCGAGUA	81	UACUCAUUAGAAGAAAAGGUC	178	AD00158-2
GACCUUUUCUUCUAAUGAGUA	82	UACUCAUUAGAAGAAAAGGUC	179	AD00158-3
CACCAGCUUGUUUGUGAAACA	83	UGUUUCACAAACAAGCUGGUG	180	AD00163-1
CACCAGCUUGUUUGUGAAACA	84	UGUUUCACAAACAAGCUGGUG	181	AD00163-2
GCGUUUCUCCUUGGUCUAAGA	85	UCUUAGACCAAGGAGAAACGC	182	AD00159-1
GCGUUUCUCCUUGGUCUAAGA	86	UCUUAGACCAAGGAGAAACGC	183	AD00159-2
GCAAAAAGAAUUCCAACCGAA	87	UUCGGUUGGAAUUCUUUUUGC	184	AD00300-1
CCUUUUCUUCUAAUGAGUA	88	UACUCAUUAGAAGAAAAGG	185	AD00158-19-1
CCAGCUUGUUUGUGAAACA	89	UGUUUCACAAACAAGCUGG	186	AD00163-19-1
GUUUCUCCUUGGUCUAAGA	90	UCUUAGACCAAGGAGAAAC	187	AD00159-19-1
AAAAAGAAUUCCAACCGAA	91	UUCGGUUGGAAUUCUUUUU	188	AD00300-19-1
CCCACCUUUUCUUCUAAUA	92	UAUUAGAAGAAAAGGUGGG	189	AD00122-19-1
CCUUUUCUUCUAAUGAGUU	93	AACUCAUUAGAAGAAAAGG	190	AD00158-19-2
CCAGCUUGUUUGUGAAACU	94	AGUUUCACAAACAAGCUGG	191	AD00163-19-2
GUUUCUCCUUGGUCUAAGU	95	ACUUAGACCAAGGAGAAAC	192	AD00159-19-2
AAAAAGAAUUCCAACCGAU	96	AUCGGUUGGAAUUCUUUUU	193	AD00300-19-2
CCCACCUUUUCUUCUAAUU	97	AAUUAGAAGAAAAGGUGGG	194	AD00122-19-2
CACCAGCUUGUUUGUGAAACA	522	UGUUUCACAAACAAGCUGGUG	523	AD00163-3
CACCAGCUUGUUUGUGAAACA	528	UGUUUCACAAACAAGCUGGUG	559	AV01227
CACCAGCUUGUUUGUGAAACU	529	AGUUUCACAAACAAGCUGGUG	560	AV01228
CACCAGCUUGUUUGUGAAACC	530	GGUUUCACAAACAAGCUGGUG	561	AV01229
CACCAGCUUGUUUGUGAAACG	531	CGUUUCACAAACAAGCUGGUG	562	AV01230
AGCUUGUUUGUGAAACA	532	UGUUUCACAAACAAGCU	563	AV01231
CAGCUUGUUUGUGAAACA	533	UGUUUCACAAACAAGCUG	564	AV01232
ACAGCUUGUUUGUGAAACA	534	UGUUUCACAAACAAGCUGU	565	AV01233
UCAGCUUGUUUGUGAAACA	535	UGUUUCACAAACAAGCUGA	566	AV01234
GCAGCUUGUUUGUGAAACA	536	UGUUUCACAAACAAGCUGC	567	AV01235
CCAGCUUGUUUGUGAAACA	537	UGUUUCACAAACAAGCUGG	568	AV01236
ACCAGCUUGUUUGUGAAACA	538	UGUUUCACAAACAAGCUGGU	569	AV01237
UCCAGCUUGUUUGUGAAACA	539	UGUUUCACAAACAAGCUGGA	570	AV01238
GCCAGCUUGUUUGUGAAACA	540	UGUUUCACAAACAAGCUGGC	571	AV01239
CCCAGCUUGUUUGUGAAACA	541	UGUUUCACAAACAAGCUGGG	572	AV01240
GACCAGCUUGUUUGUGAAACA	542	UGUUUCACAAACAAGCUGGUC	573	AV01241
AACCAGCUUGUUUGUGAAACA	543	UGUUUCACAAACAAGCUGGUU	574	AV01242
UACCAGCUUGUUUGUGAAACA	544	UGUUUCACAAACAAGCUGGUA	575	AV01243
CGACCAGCUUGUUUGUGAAACA	545	UGUUUCACAAACAAGCUGGUCG	576	AV01244
CCGACCAGCUUGUUUGUGAAACA	546	UGUUUCACAAACAAGCUGGUCGG	577	AV01245
ACCGACCAGCUUGUUUGUGAAACA	547	UGUUUCACAAACAAGCUGGUCGGU	578	AV01246
AACCGACCAGCUUGUUUGUGAAACA	548	UGUUUCACAAACAAGCUGGUCGGUU	579	AV01247
CAACCGACCAGCUUGUUUGUGAAACA	549	UGUUUCACAAACAAGCUGGUCGGUUG	580	AV01248
GAAUUCCAACCGACCAGCUUGUUUGUGAAACA	550	UGUUUCACAAACAAGCUGGUCGGUUGGAAUUC	581	AV01249
CACCAGCUUGUUUGUGAAACA	551	UGUUUCACAAACAAGCUGGUGUU	582	AV01250
CACCAGCUUGUUUGUGAAACA	552	UGUUUCACAAACAAGCUGGUGGA	583	AV01251
CACCAGCUUGUUUGUGAAACA	553	UGUUUCACAAACAAGCUGGUG	584	AV01252
CACCAGCUUGUUUGUGAAACA	554	UGUUUCACAAACAAGCUGGUG	585	AV01253
CACCAGCUUGUUUGUGAAACA	555	UGUUUCACAAACAAGCUGGUG	586	AV01254
CACCAGCUUGUUUGUAAAACA	556	UGUUUCACAAACAAGCUGGUG	587	AV01255
CACCAGCUUGUUUGUGAAAUA	557	UAUUUCACAAACAAGCUGGUG	588	AV01256
CACCAGCUUGUUUGUGAAACA	558	UGUUUCACAAACAAGCUGGUG	589	AV01257
CCAGCUUGUUUGUGAAAC	652	GUUUCACAAACAAGCUGG	653	AV01711

表2顯示了本發明的某些化學修飾的AGT RNAi劑反義鏈和正義鏈序列。在本發明方法的一些實施方案中，將具有表2中所示多核苷酸序列的RNAi試劑施用于細胞和/或對象。在本發明方法的一些實施方案中，將具有表2中所示多核苷酸序列的RNAi試劑施用于對象。在本發明的一些實施方案中，向對象施用的RNAi試劑包含在表2第一列中標注的雙鏈體，幷且分別包含顯示在表2中同一行第三列和第六列的正義和反義鏈序列中的序列修飾。在本發明方法的一些實施方案中，表2中所示的序列可以連接到（在本文中也稱爲“綴合到”）能够將RNAi試劑遞送至對象的細胞和/或組織的化合物上。可用于本發明的某些實施方案中的遞送化合物的非限制性實例是含GalNAc的化合物。在表2中，第一列表示碱基序列的雙鏈體AD#或AV#，與表1對應。對于雙鏈體AD#標識的碱基序列，不僅顯示正義和反義鏈所包含的碱基序列，而且具有表2同一行中所示的指定化學修飾。例如，表1第一行顯示了正義和反義碱基單鏈序列，它們一起構成雙鏈體，標識爲：雙鏈體AD# AD00051；而表2列出的雙鏈體AD# AD00051中，作爲雙鏈體，其包含AD00051-SS和AD00051-AS的碱基序列，而且分別包含在第三列和第六列中顯示的正義和反義序列中的化學修飾。表2第2列中的“正義鏈SS#”是同一行中第3列所示正義序列（包括修飾）的指定標識符。表2第五列中的“反義鏈AS#”是第六列中顯示的反義序列（包括修飾）的指定標識符。 表2：提供化學修飾的AGT RNAi試劑反義鏈和正義鏈序列。所有序列都顯示爲5'到3'。這些序列用于本文所述的某些體外測試研究。化學修飾表示爲：大寫：2'-氟；小寫：2'-OMe；硫代磷酸酯：*

雙鏈體AD#	正義鏈SS#	正義序列	SEQ ID NO	反義鏈AS#	反義序列	SEQ ID NO
AD00051	AD00051-SS	g*c*gucaucCaCaAugagagu*a	195	AD00051-AS	u*A*cucuCauugUgGaUgac*g*c	245
AD00053	AD00053-SS	g*a*uccacaAuGaGaguaccu*a	196	AD00053-AS	u*A*gguaCucucAuUgUgga*u*c	246
AD00054	AD00054-SS	g*u*ccacaaUgAgAguaccug*a	197	AD00054-AS	u*C*agguAcucuCaUuGugg*a*c	247
AD00055	AD00055-SS	g*u*ucuuggGcUuCcguauau*a	198	AD00055-AS	u*A*uauaCggaaGcCcAaga*a*c	248
AD00056	AD00056-SS	g*u*ugggcuUcCgUauauaug*a	199	AD00056-AS	u*C*auauAuacgGaAgCcca*a*c	249
AD00057	AD00057-SS	g*u*gggcuuCcGuAuauaugg*a	200	AD00057-AS	u*C*cauaUauacGgAaGccc*a*c	250
AD00058	AD00058-SS	g*g*cuuccgUaUaUauggcau*a	201	AD00058-AS	u*A*ugccAuauaUaCgGaag*c*c	251
AD00059	AD00059-SS	g*c*uuccguAuAuAuggcaug*a	202	AD00059-AS	u*C*augcCauauAuAcGgaa*g*c	252
AD00060	AD00060-SS	g*c*guauauAuGgCaugcaca*a	203	AD00060-AS	u*U*gugcAugccAuAuAuac*g*c	253
AD00061	AD00061-SS	g*g*uuccuuGgAaGgacaaga*a	204	AD00061-AS	u*U*cuugUccuuCcAaGgaa*c*c	254
AD00062	AD00062-SS	g*a*gaagauUgAcAgguucau*a	205	AD00062-AS	u*A*ugaaCcuguCaAuCuuc*u*c	255
AD00063	AD00063-SS	g*a*ugcaggCuGuGacaggau*a	206	AD00063-AS	u*A*uccuGucacAgCcUgca*u*c	256
AD00064	AD00064-SS	g*g*aguucuGgGuGgacaaca*a	207	AD00064-AS	u*U*guugUccacCcAgAacu*c*c	257
AD00065	AD00065-SS	g*c*aacagcAcCuCagugucu*a	208	AD00065-AS	u*A*gacaCugagGuGcUguu*g*c	258
AD00066	AD00066-SS	g*g*ggucucAcUuUccagcaa*a	209	AD00066-AS	u*U*ugcuGgaaaGuGaGacc*c*c	259
AD00067	AD00067-SS	g*u*cacuuuCcAgCaaaacuc*a	210	AD00067-AS	u*G*aguuUugcuGgAaAgug*a*c	260
AD00068	AD00068-SS	g*c*cagcaaAaCuCccucaac*a	211	AD00068-AS	u*G*uugaGggagUuUuGcug*g*c	261
AD00069	AD00069-SS	g*a*gcaaaaCuCcCucaacug*a	212	AD00069-AS	u*C*aguuGagggAgUuUugc*u*c	262
AD00070	AD00070-SS	g*g*agcugaAcCuGcaaaaau*a	213	AD00070-AS	u*A*uuuuUgcagGuUcAgcu*c*c	263
AD00071	AD00071-SS	g*c*ugaaccUgCaAaaauuga*a	214	AD00071-AS	u*U*caauUuuugCaGgUuca*g*c	264
AD00072	AD00072-SS	g*g*aaccgcCcAuUccuguuu*a	215	AD00072-AS	u*A*aacaGgaauGgGcGguu*c*c	265
AD00073	AD00073-SS	g*a*accgccCaUuCcuguuug*a	216	AD00073-AS	u*C*aaacAggaaUgGgCggu*u*c	266
AD00074	AD00074-SS	g*u*uccuguUuGcUguguaug*a	217	AD00074-AS	u*C*auacAcagcAaAcAgga*a*c	267
AD00075	AD00075-SS	g*c*uguuugCuGuGuaugauc*a	218	AD00075-AS	u*G*aucaUacacAgCaAaca*g*c	268
AD00076	AD00076-SS	g*u*guuugcUgUgUaugauca*a	219	AD00076-AS	u*U*gaucAuacaCaGcAaac*a*c	269
AD00077	AD00077-SS	g*u*ugcuguGuAuGaucaaag*a	220	AD00077-AS	u*C*uuugAucauAcAcAgca*a*c	270
AD00078	AD00078-SS	g*u*cccaccUuUuCuucuaau*a	221	AD00078-AS	u*A*uuagAagaaAaGgUggg*a*c	271
AD00079	AD00079-SS	g*a*ccuuuuCuUcUaaugagu*a	222	AD00079-AS	u*A*cucaUuagaAgAaAagg*u*c	272
AD00080	AD00080-SS	g*c*cuuuucUuCuAaugaguc*a	223	AD00080-AS	u*G*acucAuuagAaGaAaag*g*c	273
AD00081	AD00081-SS	g*c*guuucuCcUuGgucuaag*a	224	AD00081-AS	u*C*uuagAccaaGgAgAaac*g*c	274
AD00082	AD00082-SS	g*u*uucuccUuGgUcuaagug*a	225	AD00082-AS	u*C*acuuAgaccAaGgAgaa*a*c	275
AD00083	AD00083-SS	g*g*uuugcuGgGuUuauuuua*a	226	AD00083-AS	u*U*aaaaUaaacCcAgCaaa*c*c	276
AD00084	AD00084-SS	g*u*uugcugGgUuUauuuuag*a	227	AD00084-AS	u*C*uaaaAuaaaCcCaGcaa*a*c	277
AD00085	AD00085-SS	g*u*ugcuggGuUuAuuuuaga*a	228	AD00085-AS	u*U*cuaaAauaaAcCcAgca*a*c	278
AD00086	AD00086-SS	g*g*gguuuaUuUuAgagaaug*a	229	AD00086-AS	u*C*auucUcuaaAaUaAacc*c*c	279
AD00087	AD00087-SS	g*g*guuuauUuUaGagaaugg*a	230	AD00087-AS	u*C*cauuCucuaAaAuAaac*c*c	280
AD00088	AD00088-SS	g*g*gcaagaAcCaGuguuuag*a	231	AD00088-AS	u*C*uaaaCacugGuUcUugc*c*c	281
AD00089	AD00089-SS	g*g*caagaaCcAgUguuuagc*a	232	AD00089-AS	u*G*cuaaAcacuGgUuCuug*c*c	282
AD00090	AD00090-SS	g*c*aagaacCaGuGuuuagcg*a	233	AD00090-AS	u*C*gcuaAacacUgGuUcuu*g*c	283
AD00091	AD00091-SS	g*c*uguuccAaAaAgaauucc*a	234	AD00091-AS	u*G*gaauUcuuuUuGgAaca*g*c	284
AD00092	AD00092-SS	g*g*uuccaaAaAgAauuccaa*a	235	AD00092-AS	u*U*uggaAuucuUuUuGgaa*c*c	285
AD00093	AD00093-SS	g*u*uccaaaAaGaAuuccaac*a	236	AD00093-AS	u*G*uuggAauucUuUuUgga*a*c	286
AD00094	AD00094-SS	g*c*aaaaagAaUuCcaaccga*a	237	AD00094-AS	u*U*cgguUggaaUuCuUuuu*g*c	287
AD00095	AD00095-SS	g*a*aaaagaAuUcCaaccgac*a	238	AD00095-AS	u*G*ucggUuggaAuUcUuuu*u*c	288
AD00096	AD00096-SS	g*c*aaccgaCcAgCuuguuug*a	239	AD00096-AS	u*C*aaacAagcuGgUcGguu*g*c	289
AD00097	AD00097-SS	g*a*accgacCaGcUuguuugu*a	240	AD00097-AS	u*A*caaaCaagcUgGuCggu*u*c	290
AD00098	AD00098-SS	g*g*accagcUuGuUugugaaa*a	241	AD00098-AS	u*U*uucaCaaacAaGcUggu*c*c	291
AD00099	AD00099-SS	g*a*ccagcuUgUuUgugaaac*a	242	AD00099-AS	u*G*uuucAcaaaCaAgCugg*u*c	292
AD00100	AD00100-SS	g*c*cagcuuGuUuGugaaaca*a	243	AD00100-AS	u*U*guuuCacaaAcAaGcug*g*c	293
AD00101	AD00101-SS	g*u*cauccaCaAuGagaguac*a	244	AD00101-AS	u*G*uacuCucauUgUgGaug*a*c	294
AV01227	AV01227-SS	c*a*ccagcuUgUuUgugaaac*a	590	AV01227-AS	u*G*uuucAcaaaCaAgCugg*u*g	621
AV01228	AV01228-SS	c*a*ccagcuUgUuUgugaaac*u	591	AV01228-AS	a*G*uuucAcaaaCaAgCugg*u*g	622
AV01229	AV01229-SS	c*a*ccagcuUgUuUgugaaac*c	592	AV01229-AS	g*G*uuucAcaaaCaAgCugg*u*g	623
AV01230	AV01230-SS	c*a*ccagcuUgUuUgugaaac*g	593	AV01230-AS	c*G*uuucAcaaaCaAgCugg*u*g	624
AV01231	AV01231-SS	a*g*cuUgUuUgugaaac*a	594	AV01231-AS	u*G*uuucAcaaaCaAg*C*u	625
AV01232	AV01232-SS	c*a*gcuUgUuUgugaaac*a	595	AV01232-AS	u*G*uuucAcaaaCaAgC*u*g	626
AV01233	AV01233-SS	a*c*agcuUgUuUgugaaac*a	596	AV01233-AS	u*G*uuucAcaaaCaAgCu*g*u	627
AV01234	AV01234-SS	u*c*agcuUgUuUgugaaac*a	597	AV01234-AS	u*G*uuucAcaaaCaAgCu*g*a	628
AV01235	AV01235-SS	g*c*agcuUgUuUgugaaac*a	598	AV01235-AS	u*G*uuucAcaaaCaAgCu*g*c	629
AV01236	AV01236-SS	c*c*agcuUgUuUgugaaac*a	599	AV01236-AS	u*G*uuucAcaaaCaAgCu*g*g	630
AV01237	AV01237-SS	a*c*cagcuUgUuUgugaaac*a	600	AV01237-AS	u*G*uuucAcaaaCaAgCug*g*u	631
AV01238	AV01238-SS	u*c*cagcuUgUuUgugaaac*a	601	AV01238-AS	u*G*uuucAcaaaCaAgCug*g*a	632
AV01239	AV01239-SS	g*c*cagcuUgUuUgugaaac*a	602	AV01239-AS	u*G*uuucAcaaaCaAgCug*g*c	633
AV01240	AV01240-SS	c*c*cagcuUgUuUgugaaac*a	603	AV01240-AS	u*G*uuucAcaaaCaAgCug*g*g	634
AV01241	AV01241-SS	g*a*ccagcuUgUuUgugaaac*a	604	AV01241-AS	u*G*uuucAcaaaCaAgCugg*u*c	635
AV01242	AV01242-SS	a*a*ccagcuUgUuUgugaaac*a	605	AV01242-AS	u*G*uuucAcaaaCaAgCugg*u*u	636
AV01243	AV01243-SS	u*a*ccagcuUgUuUgugaaac*a	606	AV01243-AS	u*G*uuucAcaaaCaAgCugg*u*a	637
AV01244	AV01244-SS	c*g*accagcuUgUuUgugaaac*a	607	AV01244-AS	u*G*uuucAcaaaCaAgCuggu*c*g	638
AV01245	AV01245-SS	c*c*gaccagcuUgUuUgugaaac*a	608	AV01245-AS	u*G*uuucAcaaaCaAgCugguc*g*g	639
AV01246	AV01246-SS	a*c*cgaccagcuUgUuUgugaaac*a	609	AV01246-AS	u*G*uuucAcaaaCaAgCuggucg*g*u	640
AV01247	AV01247-SS	a*a*ccgaccagcuUgUuUgugaaac*a	610	AV01247-AS	u*G*uuucAcaaaCaAgCuggucgg*u*u	641
AV01248	AV01248-SS	c*a*accgaccagcuUgUuUgugaaac*a	611	AV01248-AS	u*G*uuucAcaaaCaAgCuggucggu*u*g	642
AV01249	AV01249-SS	g*a*auuccaaccgaccagcuUgUuUgugaaac*a	612	AV01249-AS	u*G*uuucAcaaaCaAgCuggucgguuggaau*u*c	643
AV01250	AV01250-SS	c*a*ccagcuUgUuUgugaaac*a	613	AV01250-AS	u*G*uuucAcaaaCaAgCuggug*u*u	644
AV01251	AV01251-SS	c*a*ccagcuUgUuUgugaaac*a	614	AV01251-AS	u*G*uuucAcaaaCaAgCuggug*g*a	645
AV01252	AV01252-SS	c*a*ccagcuUgUuUgugaaac*a	615	AV01252-AS	u*G*uuu(cUNA)AcaaaCaAgCugg*u*g	646
AV01253	AV01253-SS	c*a*ccagcuUgUuUgugaaac*a	616	AV01253-AS	u*G*uuuc(aUNA)caaaCaAgCugg*u*g	647
AV01254	AV01254-SS	c*a*ccagcuUGUuugugaaac*a	617	AV01254-AS	u*G*uuuCacaaacaAgCugg*u*g	648
AV01255	AV01255-SS	c*a*ccagcuUgUuUguaaaac*a	618	AV01255-AS	u*G*uuucAcaaaCaAgCugg*u*g	649
AV01256	AV01256-SS	c*a*ccagcuUgUuUgugaaau*a	619	AV01256-AS	u*A*uuucAcaaaCaAgCugg*u*g	650
AV01257	AV01257-SS	c*a*ccagcuUgUuUgugaaa*c*a	620	AV01257-AS	u*G*uuucAcaaaCaAgCugg*u*g	651

表3顯示了本發明的某些化學修飾的AGT RNAi試劑反義鏈和正義鏈序列。在本發明方法的一些實施方案中，將表3中所示的RNAi試劑施用于細胞和/或對象。在本發明方法的一些實施方案中，將具有表3中所示多核苷酸序列的RNAi試劑施用于對象。在本發明的一些實施方案中，向對象施用的RNAi試劑包含在表3的第一列中標識的雙鏈體，幷且分別包含在表3中同一行第三列和第六列的正義和反義鏈序列中顯示的序列修飾和/或遞送化合物。該序列用于本文別處描述的某些體內測試研究。在本發明方法的一些實施方案中，表3中所示的序列可以連接到（在本文中也稱爲“綴合到”）用于遞送的化合物上，其非限制性實例是含GalNAc的化合物，即在表3中第三列的正義鏈上具有標識爲“GLX-n”的遞送化合物。如本文所用， “GLX”用于表示“GLS”或“GLO”遞送化合物（“X”可以是“S”或“O”），幷且GLX-n可以是任何GLS和GLO可以在合成過程中連接到寡核苷酸 3'或5-末端的遞送化合物。舉例但不局限于此：GLX-13和GLX-14可以在合成過程中連接到本發明的寡核苷酸的3'-末端，GLX-5和GLX-15可以在合成過程中連接到本發明的寡核苷酸的5'-末端。在一些實施例中，如本文所用和表3所示，“GLX-n”用于表示所連接的含GalNAc的化合物，其是化合物GLS-1、GLS-2、GLS-3、GLS-4、GLS-5、GLS-6、GLS-7、GLS-8、GLS-9、GLS-10、GLS-11、GLS-12、GLS-13、GLS-14、GLS-15、GLS-16、GLO-1、GLO-2、GLO-3、GLO-4、GLO-5、GLO-6、GLO-7、GLO-8、GLO-9、GLO-10、GLO-11、GLO-12、GLO-13、GLO-14、GLO-15和GLO-16中的任一種。在一些實施中， GLO-0表示爲現有技術中已經公開可用于連接的含GalNAc的化合物，舉例但是不限于，如Jayaprakash , et al., (2014) J. Am. Chem. Soc., 136, 16958-16961中公開可用于連接的含GalNAc的化合物全部引用于此。在一些實施中，本領域技術人員將能够製備和使用本發明的dsRNA化合物，其中附著的遞送化合物包括但是不局限于：GLS-1、GLS-2、GLS-3、GLS-4、GLS-5、GLS-6之一 , GLS-7, GLS-8, GLS-9, GLS-10, GLS-11, GLS-12, GLS-13, GLS-14, GLS-15, GLS-16, GLO-1, GLO-2, GLO -3、GLO-4、GLO-5、GLO-6、GLO-7、GLO-8、GLO-9、GLO-10、GLO-11、GLO-12、GLO-13、GLO-14、GLO-15 和 GLO-16。其中每一個的結構在本文別處提供。表3的第一列提供了分配給表中該行中的正義和反義序列的雙鏈體的雙鏈體AD#。例如，雙鏈體AD# AD00052是正義鏈AD00052-SS和反義鏈AD00052-AS構成的雙鏈體。表3中的每一行提供了一條正義鏈和一條反義鏈，幷公開了所示正義鏈和反義鏈構成的雙鏈體。表3第二列中的“正義鏈SS#”是同一行第3列所示正義序列（包括修改）的指定標識符。表3第五列中的“反義鏈AS#”是第六列中顯示的反義序列（包括修飾）的指定標識符。某些所連接的含GalNAc的GLO化合物的標識符顯示爲 GLO-0，幷且應當理解， GLO-n或GLS-n化合物中的另一種可以替代顯示爲GLO-0的化合物，所得化合物也包括在本發明的方法和/或組合物的實施方案中。 表3提供了用于體內測試的化學修飾的AGT RNAi試劑反義鏈和正義鏈序列。所有序列都顯示爲5'到3'。這些序列用于本文別處描述的某些體內測試研究。體內研究中使用的遞送分子在每條正義鏈的3'末端表示爲“GLO-0”。化學修飾表示爲：大寫：2'-氟；小寫：2'-OMe；硫代磷酸酯：*；開環核酸：UNA（注：AD00052、AD00113-AD00260：無UNA；AD00282-AD00301：UNA版本）

雙鏈體AD#	正義鏈SS#	正義序列	SEQ ID NO	反義鏈AS#	反義序列	SEQ ID NO
AD00052	AD00052-SS	g*u*cauccaCaAuGagaguac*a(GLO-0)	295	AD00052-AS	u*G*uacuCucauUgUgGaug*a*c	344
AD00113	AD00113-SS	g*u*gggcuuCcGuAuauaugg*a(GLO-0)	296	AD00113-AS	u*C*cauaUauacGgAaGccc*a*c	345
AD00114	AD00114-SS	g*c*uguuugCuGuGuaugauc*a(GLO-0)	297	AD00114-AS	u*G*aucaUacacAgCaAaca*g*c	346
AD00115	AD00115-SS	g*g*uuugcuGgGuUuauuuua*a(GLO-0)	298	AD00115-AS	u*U*aaaaUaaacCcAgCaaa*c*c	347
AD00116	AD00116-SS	g*c*cagcuuGuUuGugaaaca*a(GLO-0)	299	AD00116-AS	u*U*guuuCacaaAcAaGcug*g*c	348
AD00122	AD00122-SS	g*u*cccaccUuUuCuucuaau*a(GLO-0)	300	AD00122-AS	u*A*uuagAagaaAaGgUggg*a*c	349
AD00123	AD00123-SS	g*c*cuuuucUuCuAaugaguc*a(GLO-0)	301	AD00123-AS	u*G*acucAuuagAaGaAaag*g*c	350
AD00124	AD00124-SS	g*g*gguuuaUuUuAgagaaug*a(GLO-0)	302	AD00124-AS	u*C*auucUcuaaAaUaAacc*c*c	351
AD00125	AD00125-SS	g*g*uuccaaAaAgAauuccaa*a(GLO-0)	303	AD00125-AS	u*U*uggaAuucuUuUuGgaa*c*c	352
AD00126	AD00126-SS	g*u*uccaaaAaGaAuuccaac*a(GLO-0)	304	AD00126-AS	u*G*uuggAauucUuUuUgga*a*c	353
AD00154	AD00154-SS	c*a*uccacaAuGaGaguaccu*a(GLO-0)	305	AD00154-AS	u*A*gguaCucucAuUgUgga*u*g	354
AD00155	AD00155-SS	c*u*ucuuggGcUuCcguauau*a(GLO-0)	306	AD00155-AS	u*A*uauaCggaaGcCcAaga*a*g	355
AD00156	AD00156-SS	c*a*ugcaggCuGuGacaggau*a(GLO-0)	307	AD00156-AS	u*A*uccuGucacAgCcUgca*u*g	356
AD00157	AD00157-SS	g*c*ugaaccUgCaAaaauuga*a(GLO-0)	308	AD00157-AS	u*U*caauUuuugCaGgUuca*g*c	357
AD00158	AD00158-SS	c*a*ccuuuuCuUcUaaugagu*a(GLO-0)	309	AD00158-AS	u*A*cucaUuagaAgAaAagg*u*g	358
AD00159	AD00159-SS	c*c*guuucuCcUuGgucuaag*a(GLO-0)	310	AD00159-AS	u*C*uuagAccaaGgAgAaac*g*g	359
AD00160	AD00160-SS	a*c*uguuccAaAaAgaauucc*a(GLO-0)	311	AD00160-AS	u*G*gaauUcuuuUuGgAaca*g*u	360
AD00161	AD00161-SS	c*a*aaaagaAuUcCaaccgac*a(GLO-0)	312	AD00161-AS	u*G*ucggUuggaAuUcUuuu*u*g	361
AD00162	AD00162-SS	c*g*accagcUuGuUugugaaa*a(GLO-0)	313	AD00162-AS	u*U*uucaCaaacAaGcUggu*c*g	362
AD00163	AD00163-SS	g*a*ccagcuUgUuUgugaaac*a(GLO-0)	314	AD00163-AS	u*G*uuucAcaaaCaAgCugg*u*c	363
AD00252	AD00252-SS	u*c*gucaucCaCaAugagagu*a(GLO-0)	315	AD00252-AS	u*A*cucuCauugUgGaUgac*g*a	364
AD00253	AD00253-SS	g*u*ccacaaUgAgAguaccug*a(GLO-0)	316	AD00253-AS	u*C*agguAcucuCaUuGugg*a*c	365
AD00254	AD00254-SS	a*g*ggucucAcUuUccagcaa*a(GLO-0)	317	AD00254-AS	u*U*ugcuGgaaaGuGaGacc*c*u	366
AD00255	AD00255-SS	c*u*guuugcUgUgUaugauca*a(GLO-0)	318	AD00255-AS	u*U*gaucAuacaCaGcAaac*a*g	367
AD00256	AD00256-SS	u*u*ugcuguGuAuGaucaaag*a(GLO-0)	319	AD00256-AS	u*C*uuugAucauAcAcAgca*a*a	368
AD00257	AD00257-SS	g*u*uucuccUuGgUcuaagug*a(GLO-0)	320	AD00257-AS	u*C*acuuAgaccAaGgAgaa*a*c	369
AD00258	AD00258-SS	g*c*aagaacCaGuGuuuagcg*a(GLO-0)	321	AD00258-AS	u*C*gcuaAacacUgGuUcuu*g*c	370
AD00259	AD00259-SS	c*c*aaaaagAaUuCcaaccga*a(GLO-0)	322	AD00259-AS	u*U*cgguUggaaUuCuUuuu*g*g	371
AD00260	AD00260-SS	c*a*accgacCaGcUuguuugu*a(GLO-0)	323	AD00260-AS	u*A*caaaCaagcUgGuCggu*u*g	372
AD00282	AD00282-SS	g*u*cccaccUuUuCuucuaau*a(GLO-0)	324	AD00282-AS	u*A*uuAg(aUNA)agaaAaGgUggg*a*c	373
AD00283	AD00283-SS	g*u*uccaaaAaGaAuuccaac*a(GLO-0)	325	AD00283-AS	u*G*uuGg(aUNA)auucUuUuUgga*a*c	374
AD00284	AD00284-SS	g*c*cuuuucUuCuAaugaguc*a(GLO-0)	326	AD00284-AS	u*G*acUc(aUNA)uuagAaGaAaag*g*c	375
AD00285	AD00285-SS	g*c*cagcuuGuUuGugaaaca*a(GLO-0)	327	AD00285-AS	u*U*guUu(cUNA)acaaAcAaGcug*g*c	376
AD00286	AD00286-SS	g*g*uuccaaAaAgAauuccaa*a(GLO-0)	328	AD00286-AS	u*U*ugGa(aUNA)uucuUuUuGgaa*c*c	377
AD00287	AD00287-SS	g*g*uuugcuGgGuUuauuuua*a(GLO-0)	329	AD00287-AS	u*U*aaAa(uUNA)aaacCcAgCaaa*c*c	378
AD00288	AD00288-SS	c*a*ccuuuuCuUcUaaugagu*a(GLO-0)	330	AD00288-AS	u*A*cuCa(uUNA)uagaAgAaAagg*u*g	379
AD00289	AD00289-SS	g*a*ccagcuUgUuUgugaaac*a(GLO-0)	331	AD00289-AS	u*G*uuUc(aUNA)caaaCaAgCugg*u*c	380
AD00290	AD00290-SS	c*c*guuucuCcUuGgucuaag*a(GLO-0)	332	AD00290-AS	u*C*uuAg(aUNA)ccaaGgAgAaac*g*g	381
AD00291	AD00291-SS	c*g*accagcUuGuUugugaaa*a(GLO-0)	333	AD00291-AS	u*U*uuCa(cUNA)aaacAaGcUggu*c*g	382
AD00292	AD00292-SS	c*a*aaaagaAuUcCaaccgac*a(GLO-0)	334	AD00292-AS	u*G*ucGg(uUNA)uggaAuUcUuuu*u*g	383
AD00293	AD00293-SS	u*c*gucaucCaCaAugagagu*a(GLO-0)	335	AD00293-AS	u*A*cuCu(cUNA)auugUgGaUgac*g*a	384
AD00294	AD00294-SS	g*u*ccacaaUgAgAguaccug*a(GLO-0)	336	AD00294-AS	u*C*agGu(aUNA)cucuCaUuGugg*a*c	385
AD00295	AD00295-SS	a*g*ggucucAcUuUccagcaa*a(GLO-0)	337	AD00295-AS	u*U*ugCu(gUNA)gaaaGuGaGacc*c*u	386
AD00296	AD00296-SS	c*u*guuugcUgUgUaugauca*a(GLO-0)	338	AD00296-AS	u*U*gaUc(aUNA)uacaCaGcAaac*a*g	387
AD00297	AD00297-SS	u*u*ugcuguGuAuGaucaaag*a(GLO-0)	339	AD00297-AS	u*C*uuUg(aUNA)ucauAcAcAgca*a*a	388
AD00298	AD00298-SS	g*u*uucuccUuGgUcuaagug*a(GLO-0)	340	AD00298-AS	u*C*acUu(aUNA)gaccAaGgAgaa*a*c	389
AD00299	AD00299-SS	g*c*aagaacCaGuGuuuagcg*a(GLO-0)	341	AD00299-AS	u*C*gcUa(aUNA)acacUgGuUcuu*g*c	390
AD00300	AD00300-SS	c*c*aaaaagAaUuCcaaccga*a(GLO-0)	342	AD00300-AS	u*U*cgGu(uUNA)ggaaUuCuUuuu*g*g	391
AD00301	AD00301-SS	c*a*accgacCaGcUuguuugu*a(GLO-0)	343	AD00301-AS	u*A*caAa(cUNA)aagcUgGuCggu*u*g	392
AD00302	AD00302-SS	c*c*aaccgaCcAgCuuguuug*a(GLO-0)	524	AD00302- AS	u*C*aaAc(aUNA)agcuggUcGg uu*g*g	525

表4顯示了本發明的某些化學修飾的AGT RNAi劑反義鏈和正義鏈序列。在本發明方法的一些實施方案中，將具有表4中所示多核苷酸序列的RNAi試劑施用于對象。在本發明的一些實施方案中，向對象施用的RNAi試劑包含在表4的第一列中的行中標注的雙鏈體，幷且包含在表4中的同一行第三列和第六列中的正義和反義鏈序列中顯示的序列修飾和/或遞送化合物。在本發明方法的一些實施方案中，表4中所示的序列可以連接至能够將RNAi試劑遞送至對象的細胞和/或組織的化合物上。可用于本發明的某些實施方案中的遞送化合物的非限制性實例是含GalNAc的化合物。在表4中，術語“GLX-n”表示在所示正義鏈中含有GalNAc的化合物。例如，術語“GLO-0”和“GLS-5”各自表示連接到正義鏈的不同的含GalNAc 化合物。應當理解，顯示爲GLO-0的化合物可以被GLO-n或GLS-n化合物中的另一種替代，所得化合物也包括在本發明的方法和/或組合物的實施方案中。類似地，顯示爲GLS-5的化合物也可以被GLS-n或GLO-n化合物中的另一種替代，所得化合物包括在本發明的方法和/或組合物的實施方案中。在表4中，用于表示所連接的含GalNAC的化合物GLX-n是化合物GLS-1、 GLS-2、GLS-3、GLS-4、GLS-5、GLS-6、GLS-7、GLS-8、GLS-9、GLS-10、GLS-11、GLS-12、GLS-13、GLS-14、GLS-15、GLS-16、GLO-1、GLO-2、GLO-3、GLO-4、GLO-5、GLO-6、GLO-7、GLO-8、GLO-9、GLO-10、GLO-11、GLO-12、GLO-13、GLO-14、GLO-15和GLO-16，其中每一個的結構在本文別處提供。表4的第一列表示與表3中所示的雙鏈體對應的雙鏈體AD#。雙鏈體AD#標識了對應于表3的雙鏈體序列，表明表4中的正義、反義和雙鏈體序列與表3中具有相同雙鏈體AD#的碱基序列相同，但是與表3中所示的相應序列和雙鏈體相比，表4中的序列和雙鏈體具有不同的化學修飾和/或遞送化合物。例如，如表4 所示，分別如AD00113-1-SS、AD00113-1-AS的序列及其雙鏈體AD#AD00113-1與如表3所示的AD00113-SS（正義）、AD00113-AS（反義）和雙鏈AD#AD00113具有相同的碱基序列，而化學修飾和/或遞送化合物則如每個表中所示。表4的第一列標識雙鏈體AD# 編號；每行中的數字標識的雙鏈體包含分別在在同一行中第三列和第六列中顯示的正義鏈和反義鏈，幷且包含修飾，幷且在正義鏈3'或者5'上具有所連接的GLO-或GLS-遞送化合物。 表4提供了化學修飾的AGT RNAi試劑反義鏈和正義鏈序列。這些序列用于在本文別處描述的某些體內研究。所有序列都顯示爲5'到3'。化學修飾表示爲：大寫：2'-氟；小寫：2'-OMe；硫代磷酸酯：*；Invab = 反向無碱基。

雙鏈體AD#	正義鏈SS#	正義序列5’-＞3’	SEQ ID NO	反義鏈AS#	反義序列5’-＞3’	SEQ ID NO
AD00113-1	AD00113-1-SS	(GLS-5)*(Invab)*gugggcuuCcGuAuauaugga*(Invab)	393	AD00113-1-AS	u*C*cauaUauacGgAaGccc*a*c	456
AD00114-1	AD00114-1-SS	(GLS-5)*(Invab)*gcuguuugCuGuGuaugauca*(Invab)	394	AD00114-1-AS	u*G*aucaUacacAgCaAaca*g*c	457
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錯配

本領域技術人員已知，對于dsRNA的功效而言，錯配是可以容忍的，尤其是錯配在dsRNA的末端區域內的情况。某些錯配具有更好的耐受性，例如具有擺動碱基對G:U和A:C的錯配對功效的耐受性更好（Du et el., A systematic analysis of the silencing effects of an active siRNA at all single-nucleotide mismatched target sites. Nucleic Acids Res. 2005 Mar 21;33(5):1671-7. Doi: 10.1093/nar/gki312. Nucleic Acids Res. 2005;33(11):3698）。本發明的方法和化合物的一些實施方案中，AGT dsRNA試劑可以含有一個或更多個與AGT靶序列的錯配。在一些實施方案中，本發明的AGT dsRNA試劑不包含錯配。在某些實施方案中，本發明的AGT dsRNA試劑包含不超過1個錯配。在一些實施方案中，本發明的AGT dsRNA試劑包含不超過2個錯配。在某些實施方案中，本發明的AGT dsRNA試劑包含不超過3個錯配。在本發明的一些實施方案中，AGT dsRNA試劑的反義鏈包含與不位于互補區域中心的AGT靶序列的錯配。在一些實施方案中，AGT dsRNA試劑的反義鏈包含1、2、3、4或更多個錯配，其位于互補區域的5'或3'末端之一或兩者的最末5、4、3、2或1個核苷酸內。本文所述的方法和/或本領域已知的方法可用于確定包含與AGT靶序列錯配的AGT dsRNA試劑是否有效抑制AGT基因的表達。

互補性

如本文所用，除非另有說明，否則術語“互補性/互補”當用于描述第一核苷酸序列（例如，AGT dsRNA試劑正義鏈或靶標AGT mRNA）與第二核苷酸序列（例如，AGT dsRNA試劑反義鏈或單鏈反義多核苷酸）的相關性時，是指包含第一核苷酸序列的寡核苷酸或多核苷酸與包含第二核苷酸序列的寡核苷酸或多核苷酸雜交[在哺乳動物生理條件（或體外類似條件）下形成碱基對間氫鍵]、幷且在某些條件下形成雙螺旋或雙螺旋結構的能力。其中也可以應用其他條件，例如在生物體內可能遇到的生理相關條件。技術人員將能够根據雜交核苷酸的最終應用確定最適合測試兩個序列互補性的條件集。互補序列包括沃森-克裏克碱基對或非沃森-克裏克碱基對，幷且包括天然或修飾的核苷酸或核苷酸模擬物，只要至少達到上述雜交要求的程度即可。序列同一性或互補性與修飾無關。

例如，在如本文所述的AGT dsRNA內的互補序列包含含有第一核苷酸序列的寡核苷酸或多核苷酸與包含第二核苷酸序列的寡核苷酸或多核苷酸在一個或兩個核苷酸序列的全長上的碱基配對。此類序列在本文中可被稱爲彼此“完全互補”。應當理解，在設計兩個寡核苷酸以在雜交時形成一個或更多個單鏈突出端的實施方案中，這種突出端在本文中不被視爲基于互補性確定的錯配。例如，AGT dsRNA試劑包含一個長度爲19個核苷酸的寡核苷酸和另一個長度爲20個核苷酸的寡核苷酸，其中較長的寡核苷酸包含與較短的寡核苷酸完全互補的19個核苷酸的序列，出于本文所述的目的，此種情况可以稱爲“完全互補”。因此，如本文所用，“完全互補”是指第一多核苷酸的連續序列中的所有（100%）碱基會與第二多核苷酸的連續序列中的相同數目的碱基雜交。連續序列可以包含第一或第二核苷酸序列的全部或部分。

如本文所用，術語“基本互補”是指在核碱基序列的雜交對中，第一多核苷酸的連續序列中的碱基的至少約85％（但不是全部）會與第二多核苷酸的連續序列中相同數目的碱基雜交。如果兩個序列在雜交時包含一個或更多個錯配碱基對，例如至少1、2、3、4或5個錯配碱基對，則可以使用術語“基本上互補”來指第一序列相對于第二序列形成多達15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30個碱基對(bp)的雙鏈體，同時保留在與其最終應用最相關的條件下雜交的能力，例如，通過RISC途徑抑制AGT基因表達。術語“部分互補”在本文中可用于指核碱基序列的雜交對中，第一多核苷酸的連續序列中碱基的至少75%（但不是全部）會與第二多核苷酸的連續序列中相同數目的碱基雜交。在一些實施方案中，“部分互補”是指第一多核苷酸的連續序列中至少76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%的碱基會與第二多核苷酸的連續序列中相同數量的碱基雜交。

術語“互補”、“完全互補”、“基本互補”和“部分互補”在本文中使用時可用于指AGT dsRNA試劑的正義鏈與反義鏈之間的碱基匹配、AGT dsRNA試劑的反義鏈與靶AGT mRNA的序列之間的碱基匹配，或單鏈反義寡核苷酸與靶AGT mRNA序列之間的碱基匹配。應當理解，術語“AGT dsRNA試劑的反義鏈”可以指與“AGT反義多核苷酸試劑”相同的序列。

如本文所用，在提及核酸序列時使用的術語“基本相同”或“基本同一性”是指核酸序列與參考序列相比，包含具有至少約85%或更高序列同一性的序列，優選至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98% 或至少99 %同一性。序列同一性的百分比通過在比對窗口上比較兩個序列的最佳比對來確定。百分比是通過以下方式來計算的：確定在兩個序列中出現相同核酸碱基的位置數以産生匹配位置的數量；將匹配位置的數量除以比對窗口中的位置總數，然後將結果乘以 100，從而得出序列同一性的百分比。本文公開的發明包括與本文公開（例如，在表 1-5 中）的那些基本相同的核苷酸序列。在一些實施方案中，所述核苷酸序列與本文公開（例如，在表1-4中）的序列完全相同，或具有至少約 85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%的同一性。

如本文所用，術語“包含序列的鏈”是指包含核苷酸鏈的寡核苷酸，所述核苷酸鏈由使用標準核苷酸命名法指代的序列描述。如本文所用，術語“雙鏈RNA”或“dsRNA”指包含RNA分子或RNAi分子複合物的序列，所述分子或複合物具有包含兩條反向平行且基本或完全互補的核酸鏈的雜交雙鏈區，其分別被稱爲相對于靶AGT RNA 具有“正義”和“反義”方向。雙鏈區可以具有允許通過RISC途徑特异性降解靶標AGT RNA的任何所需長度，但通常長度爲9至30個碱基對，例如長度爲15-30個碱基對。考慮到9到30個碱基對之間的雙鏈體，雙鏈體可以是此範圍內的任何長度，例如，9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22 、23、24、25、26、27、28、29或30個碱基對，以及其中的任何子範圍，包括但不限于15-30個碱基對、15-26個碱基對；15-23碱基對、15-22碱基對、15-21碱基對、15-20碱基對、15-19碱基對、15-18碱基對、15-17碱基對、18-30個碱基對、18-26個碱基對、18-23個碱基對、18-22個碱基對、18-21個碱基對、18-20個碱基對、19-30個碱基對、19-26個碱基對、19-23個碱基對、19-22個碱基對、19-21個碱基對、19-20個碱基對、20-30個碱基對、20-26個碱基對、20-25個碱基對、20-24個碱基對、20-23個碱基對、20-22個碱基對、20-21個碱基對、21-30個碱基對、21-26個碱基對、21-25個碱基對、21-24個碱基對、21-23個碱基對或21-22個碱基對。通過用切丁酶和類似酶加工在細胞中産生的AGT dsRNA試劑的長度通常在19-22個碱基對的範圍內。AGT dsDNA劑的雙鏈區的一條鏈包含與靶AGT RNA的區域基本互補的序列。形成雙鏈體結構的兩條鏈可以來自具有至少一個自身互補區的單個RNA分子，或者可以由兩個或更多個單獨的RNA分子形成。在雙鏈區由單個分子形成的情况下，該分子可以具有由單鏈核苷酸鏈在3'-末端的一條鏈和相應的5'-末端的另一條鏈形成的雙鏈體結構（本文稱爲“髮夾環”）。在本發明的一些實施方案中，髮夾構型包含至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20 個或更多個未配對的核苷酸。當AGT dsRNA試劑的基本互補的兩條鏈由單獨的 RNA 分子組成時，這些分子不需要共價連接，但也可以共價連接。當兩條鏈通過髮夾環以外的方式共價連接時，連接結構被稱爲“接頭”。術語“siRNA”在本文中也用于指如本文所述的dsRNA試劑。

在本發明的一些實施方案中，AGT dsRNA試劑可以包含在dsRNA試劑的一個或兩個末端具有未配對核苷酸或核苷酸類似物的正義和反義序列。沒有未配對核苷酸的末端被稱爲“平末端”幷且沒有核苷酸突出端。如果dsRNA試劑的兩端都是平末端，則dsRNA被稱爲“平末端的”。在本發明的一些實施方案中，dsRNA試劑的第一末端是平末端的，在一些實施方案中，dsRNA試劑的第二末端是平末端的，幷且在本發明的某些實施方案中，AGT dsRNA試劑的兩個末端都是平末端的。

在本發明的dsRNA試劑的一些實施方案中，dsRNA不具有一個或兩個平末端。在這種情况下，在dsRNA試劑的一條鏈的末端有至少一個未配對的核苷酸。例如，當dsRNA一條鏈的3'-末端延伸超出另一條鏈的5'-末端時，則存在核苷酸突出端，反之亦然。dsRNA 可包含至少1、2、3、4、5、6 或更多個核苷酸的突出端。核苷酸突出端可包含核苷酸/核苷類似物或由其組成，包括脫氧核苷酸/核苷。應當理解，在一些實施方案中，核苷酸突出端在dsRNA試劑的正義鏈上、在dsRNA試劑的反義鏈上，或在 dsRNA 試劑的兩端，突出端的核苷酸可存在于dsRNA的反義鏈或正義鏈的 5' 端、3' 端或兩端。在本發明的某些實施方案中，突出端中的一個或更多個核苷酸被核苷硫代磷酸酯替換。

如本文所用，術語“反義鏈”或“引導鏈”是指包含與AGT靶序列基本互補的區域的AGT dsRNA試劑的鏈。如本文所用，術語“正義鏈”或“過客鏈”是指包含與AGT dsRNA試劑的反義鏈的區域基本互補的區域的AGT dsRNA試劑的鏈。

修飾

在本發明的一些實施方案中，AGT RNAi劑的RNA被化學修飾以獲得增强的穩定性和/或一種或更多種其他有益特性。本發明的某些實施方案中的核酸可以通過本領域公知的方法合成和/或修飾，例如，見 “Current protocols in Nucleic Acid Chemistry," Beaucage, S. L. et al. (Eds.), John Wiley & Sons, Inc., New York, N.Y., USA，其作爲參考在此幷入本文。可以存在于本發明的AGT dsRNA試劑的某些實施方案中的修飾包括例如：(a)末端修飾，例如5'端修飾（磷酸化、綴合、反向連接等）、3'端修飾（綴合、DNA核苷酸、反向連接等）；(b) 碱基修飾，例如用穩定碱基、去穩定碱基或與擴展的配偶體庫進行碱基配對的碱基替換、缺失碱基（無碱基核苷酸）或綴合碱基；(c) 糖修飾（例如，在2'位置或4'位置）或糖的替換；以及 (d) 骨架修飾，包括磷酸二酯鍵的修飾或替換。在本發明的AGT dsRNA試劑、AGT反義多核苷酸和AGT正義多核苷酸的某些實施方案中可用的RNA化合物的具體實例包括但不限于包含修飾骨架或沒有天然核苷間鍵聯的RNA。作爲非限制性實例，具有骨架修飾的RNA在骨架中可以不具有磷原子。在其核苷間骨架中沒有磷原子的RNA可稱爲寡核苷。在本發明的某些實施方案中，修飾的RNA在其核苷間骨架中具有磷原子。

應當理解，術語“RNA分子”或“RNA”或“核糖核酸分子”不僅包括在自然界中表達或發現的RNA分子，還包括RNA的類似物和衍生物，其包含一種或更多種如本文所述或本領域已知的核糖核苷酸/核糖核苷類似物或衍生物。術語“核糖核苷”和“核糖核苷酸”在本文中可互換使用。RNA分子可以在核碱基結構或核糖-磷酸骨架結構中進行修飾（例如，如下文所述），幷且包含核糖核苷類似物或衍生物的分子必須保留形成雙鏈體的能力。作爲非限制性實例，RNA分子還可包含至少一種修飾的核糖核苷，其包括但不限于2'-O-甲基修飾的核苷、包含5'硫代磷酸酯基團的核苷、與膽固醇衍生物或十二烷酸雙癸醯胺基團相連的末端核苷、鎖核苷、無碱基核苷、2'-脫氧-2'-氟修飾的核苷、2'-氨基修飾的核苷、2'-烷基修飾的核苷、嗎啉代核苷、氨基磷酸酯或包含核苷的非天然鹼基，或其任何組合。在本發明的一些實施方案中，RNA分子包含以下數量的修飾的核糖核苷：至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或長達AGT dsRNA 試劑分子的核糖核苷的全長。對于這種RNA分子中的多個修飾的核糖核苷中的每一個，修飾不必相同。

在一些實施方案中，本發明的dsRNA試劑、AGT反義多核苷酸和/或AGT正義多核苷酸可以包含一個或更多個獨立選擇的修飾核苷酸和/或一個或更多個獨立選擇的非磷酸二酯鍵。本文所用的術語“獨立選擇”用于指選定的要素，例如修飾的核苷酸、非磷酸二酯鍵等，是指兩個或更多個選定的要素可以彼此相同但不必彼此相同。如本文所用，“核苷酸碱基”、“核苷酸”或“核碱基”是雜環嘧啶或嘌呤化合物，其是所有核酸的標準成分，幷且包括形成核苷酸的碱基：腺嘌呤 (a)、鳥嘌呤 (g)、胞嘧啶 (c)、胸腺嘧啶 (t) 和尿嘧啶 (u)。核碱基可進一步修飾以包括（但不旨在限制）：通用碱基、疏水性碱基、混雜碱基、尺寸擴大的碱基和氟化碱基。術語“核糖核苷酸”或“核苷酸”在本文中可用于指未修飾的核苷酸、修飾的核苷酸或替代部分。本領域技術人員將認識到，鳥嘌呤、胞嘧啶、腺嘌呤和尿嘧啶可以被其他部分替換，而不會顯著改變包含帶有這種替換部分的核苷酸的寡核苷酸的碱基配對特性。

在一個實施方案中，預期用于本文所述的方法和組合物中的修飾的RNA是肽核酸（PNA），其具有形成所需雙鏈體結構幷且允許或介導靶RNA經由RISC途徑的特异性降解的能力。在本發明的某些實施方案中，AGT RNA干擾劑包括與靶AGT RNA序列相互作用以指導靶AGT RNA切割的單鏈RNA。

修飾的RNA骨架可以包含例如硫代磷酸酯、手性硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯、磷酸三酯、氨基烷基磷酸三酯、甲基和其他烷基膦酸酯（包括 3'-亞烷基膦酸酯和手性膦酸酯）、次膦酸酯、氨基磷酸酯（包括3'-氨基氨基磷酸酯和氨基烷基氨基磷酸酯）、硫代氨基磷酸酯、硫代烷基膦酸酯、硫代烷基磷酸三酯，和硼酸磷酸酯（其具有正常3'-5' 連接的，以及這些的2'-5'連接類似物，以及具有倒置極性的那些，其中相鄰的核苷單元對以3'-5'至5'-3'或2'-5'至5'-2'形式連接）。還包括各種鹽、混合鹽和游離酸形式。製備含磷鍵的方法是本領域的常規實施手段，幷且此類方法可用于製備本發明的某些修飾的AGT dsRNA試劑、某些修飾的AGT反義多核苷酸和/或某些修飾的AGT正義多核苷酸。

其中不包含磷原子的修飾的RNA骨架具有由短鏈烷基或環烷基核苷間鍵聯、混合雜原子和烷基或環烷基核苷間鍵聯、或一個或更多個短鏈雜原子或雜環核苷間鍵聯形成的骨架。其包括具有嗎啉鍵的那些（部分由核苷的糖部分形成）；矽氧烷骨架；硫化物、亞碸和碸骨架；甲乙醯和硫甲乙醯骨架；亞甲基甲乙醯和硫甲乙醯骨架；含有烯烴的骨架；氨基磺酸鹽骨架；亞甲基亞氨基和亞甲基肼基骨架；磺酸鹽和磺醯胺骨架；醯胺骨架；以及其他混合有N、O、S和CH ₂成分的部分。製備不含磷原子的修飾的RNA骨架的方法在本領域中是常規實踐，幷且此類方法可用于製備本發明的某些修飾的AGT dsRNA試劑、某些修飾的AGT反義多核苷酸和/或某些修飾的AGT正義多核苷酸。

在本發明的某些實施方案中，RNA模擬物被包括在AGT dsRNA、AGT反義多核苷酸和/或AGT正義多核苷酸中，例如但不限于用新基團替換核苷酸單元的糖和核苷間鍵聯（即骨架）。在此類實施方案中，保持碱基單位以與合適的AGT核酸靶化合物雜交。一種這樣的寡聚化合物（已被證明具有優异雜交特性的RNA模擬物），被稱爲肽核酸（PNA）。在PNA化合物中，RNA 的糖骨架被含有醯胺的骨架，特別是氨乙基甘氨酸骨架取代。核碱基被保留幷直接或間接地與骨架醯胺部分的氮雜氮原子結合。製備RNA模擬物的方法是本領域常規實踐的，幷且此類方法可用于製備本發明的某些修飾的AGT dsRNA試劑。

本發明的一些實施方案包括具有硫代磷酸酯骨架的RNA和具有雜原子骨架的寡核苷，特別是-CH ₂--NH--CH ₂-、--CH ₂--N(CH ₃)--O--CH ₂--[稱爲亞甲基（甲基亞氨基）或 MMI 骨架]、--CH ₂--O--N(CH ₃)--CH ₂--、--CH ₂--N(CH ₃)--N(CH ₃)--CH ₂-以及--N(CH ₃)--CH ₂----[其中天然磷酸二酯骨架表示爲--O--P--O--CH ₂--]。製備具有硫代磷酸酯骨架的RNA和具有雜原子骨架的寡核苷的方法是本領域常規實踐的，幷且此類方法可用于製備本發明的某些修飾的AGT dsRNA試劑、某些AGT反義多核苷酸和/或某些AGT正義多核苷酸。

修飾的RNA還可以包含一個或更多個取代的糖部分。本發明的AGT dsRNA、AGT 反義多核苷酸和/或 AGT 正義多核苷酸可在2'位置包含以下之一：OH；F；O--、S--、或N-烷基；O--、S--或N-烯基；O-、S-或N-炔基；或O-烷基-O-烷基，其中烷基、烯基和炔基可以是取代或未取代的C ₁至C ₁₀烷基或C ₂至C ₁₀烯基和炔基。示例性的合適的修飾包括：O[(CH ₂) _nO] _mCH ₃、O(CH ₂) _nOCH ₃、O(CH ₂) _nNH ₂、O(CH ₂) _nCH ₃、O(CH ₂) _nONH ₂、以及O(CH ₂) _nON[(CH ₂) _nCH ₃)] ₂，其中n和m爲1至約10。在其他實施方案中，dsRNA在2'位置包括以下之一：C ₁至C ₁₀低級烷基、取代的低級烷基、烷芳基、芳烷基、O-烷芳基或O-芳烷基、SH、SCH ₃、OCN、Cl、Br、CN、CF ₃、OCF ₃、SOCH ₃、SO ₂CH ₃、ONO ₂、NO ₂、N ₃、NH ₂、雜環烷基、雜環烷芳基、氨基烷基氨基、聚烷基氨基；取代的甲矽烷基、RNA 裂解基團、報告基團、嵌入劑；用于改善AGT dsRNA試劑的藥代動力學特性的基團；或用于改善AGT dsRNA 試劑、AGT 反義多核苷酸和/或AGT正義多核苷酸的藥效學特性的基團，和其他具有類似性質的取代基。在一些實施方案中，修飾包括2'-甲氧基乙氧基（2'-O--CH ₂CH ₂OCH ₃，也稱爲2'-O-(2-甲氧基乙基)或2'-MOE）(Martin et al., Helv. Chim. Acta, 1995, 78:486-504)，即烷氧基-烷氧基。另一種示例性修飾是2'-二甲氨基乙氧基乙氧基，即O(CH ₂) ₂ON(CH ₃) ₂基團，也稱爲 2'-DMAOE，如下文實施例中所述；以及2'-二甲氨基乙氧基乙氧基（在本領域中也稱爲 2'-O-二甲氨基乙氧基乙基或2'-DMAEOE)，即2'-O--CH ₂-O--CH ₂--N(CH ₂) ₂。製備所描述的那些的修飾RNA的方法是本領域常規實踐的，幷且此類方法可用于製備本發明的某些修飾的AGT dsRNA試劑。

其他修飾包括 2'-甲氧基（2'-OCH ₃）、2'-氨基丙氧基 （2'-OCH ₂CH ₂CH ₂NH ₂）和2'-氟（2'-F）。類似的修飾也可以在本發明的AGT dsRNA 試劑、AGT 反義多核苷酸的RNA上的其他位置、AGT正義多核苷酸和/或AGT正義多核苷酸的其他位置，特別是3'末端核苷酸上或2'-5'連接的AGT dsRNA、AGT反義多核苷酸或AGT正義多核苷酸中的糖的3'位置、和5'末端核苷酸的5'位置進行。AGT dsRNA 試劑、AGT 反義多核苷酸和/或AGT正義多核苷酸也可以具有糖模擬物，例如代替呋喃戊糖的環丁基部分。製備例如所描述的那些的修飾RNA的方法是本領域常規實踐的，幷且此類方法可用于製備本發明的某些修飾的AGT dsRNA試劑、AGT反義多核苷酸和/或AGT正義多核苷酸。

在一些實施方案中，AGT dsRNA試劑、AGT反義多核苷酸和/或AGT正義多核苷酸可以包括核碱基（在本領域中通常簡稱爲“碱基”）修飾或取代。如本文所用，“未修飾的”或“天然”核碱基包括嘌呤碱基腺嘌呤(A)和鳥嘌呤(G)，以及嘧啶碱基胸腺嘧啶(T)、胞嘧啶(C)和尿嘧啶(U)。修飾的核碱基包括其他合成和天然核碱基，例如 5-甲基胞嘧啶（5-me-C）、5-羥甲基胞嘧啶、黃嘌呤、次黃嘌呤、2-氨基腺嘌呤、6-甲基和其他腺嘌呤和鳥嘌呤的烷基衍生物、2-丙基和其他腺嘌呤和鳥嘌呤的烷基衍生物、2-硫尿嘧啶、2-硫胸腺嘧啶和2-硫胞嘧啶、5-鹵尿嘧啶和胞嘧啶、5-丙炔基尿嘧啶和胞嘧啶、6-偶氮尿嘧啶、胞嘧啶和胸腺嘧啶、5-尿嘧啶（假尿嘧啶）、4-硫尿嘧啶；8-鹵代、8-氨基、8-硫醇、8-硫代烷基、8-羥基以及其他8-取代的腺嘌呤和鳥嘌呤；5-鹵代，特別是5-溴、5-三氟甲基和其他5-取代的尿嘧啶和胞嘧啶；7-甲基鳥嘌呤和7-甲基腺嘌呤、8-氮雜鳥嘌呤和8-氮雜腺嘌呤、7-氮雜鳥嘌呤和7-氮雜腺嘌呤以及3-氮雜鳥嘌呤和3-氮雜腺嘌呤。可以包含在本發明的AGT dsRNA試劑的某些實施方案中的另外的核碱基是本領域已知的，參見例如：Modified Nucleosides in Biochemistry, Biotechnology and Medicine, Herdewijn, P. Ed. Wiley-VCH, 2008; The Concise Encyclopedia Of Polymer Science And Engineering, pages 858-859, Kroschwitz, J. L, Ed. John Wiley & Sons, 1990, English et al., Angewandte Chemie, International Edition, 1991, 30, 613, Sanghvi, Y S., Chapter 15, dsRNA Research and Applications, pages 289-302, Crooke, S. T. and Lebleu, B., Ed., CRC Press, 1993。製備包含核碱基修飾和/或取代的dsRNA、AGT反義鏈多核苷酸和/或AGT正義鏈多核苷酸(例如本文所述的那些)的方法是本領域常規實踐的，幷且此類方法可用于製備本發明的某些修飾的AGT dsRNA試劑、AGT正義多核苷酸和/或AGT反義多核苷酸。

本發明的AGT dsRNA試劑、AGT反義多核苷酸和/或AGT正義多核苷酸的某些實施方案包括經修飾以包括一種或更多種鎖核酸（LNA）的RNA。鎖核酸是具有這樣的修飾核糖部分的核苷酸，其包含額外的連接2'和4'碳的橋。這種結構有效地將核糖“鎖定”在 3'-內結構構象中。在本發明的AGT dsRNA 試劑、AGT 反義多核苷酸和/或AGT正義多核苷酸中添加鎖核酸可以增加血清中的穩定性，幷减少脫靶效應（Elmen, J. et al., (2005) Nucleic Acids Research 33(1):439-447; Mook, O R. et al., (2007)Mol Canc Ther 6(3):833-843; Grunweller, A. et al., (2003) Nucleic Acids Research 31(12):3185-3193）。製備包含鎖核酸的dsRNA試劑、AGT反義多核苷酸和/或AGT正義多核苷酸的方法是本領域常規實施的，幷且此類方法可用于製備本發明的某些修飾的AGT dsRNA試劑。本發明的AGT dsRNA化合物、正義多核苷酸和/或反義多核苷酸的某些實施方案包括至少一種修飾的核苷酸，其中所述至少一種修飾的核苷酸包含：2'-O-甲基核苷酸、2'-氟核苷酸、2'-脫氧核苷酸、2',3'-seco 核苷酸模擬物、鎖核苷酸、2'-F-阿拉伯糖核苷酸、2'-甲氧基乙基核苷酸、2'-氨基修飾的核苷酸、2'-烷基修飾的核苷酸、嗎啉代核苷酸和3'-OMe核苷酸、包含 5'-硫代磷酸酯基團的核苷酸，或與膽固醇衍生物或十二烷酸雙癸醯胺基團連接的末端核苷酸、2'-氨基修飾的核苷酸、氨基磷酸酯或包含核苷酸的非天然鹼基。在一些實施方案中，AGT dsRNA化合物在反義鏈（在本文中也稱爲引導鏈）的5’末端處包含E-乙烯基膦酸酯核苷酸。

本發明的某些實施方案中，在AGT dsRNA化合物、正義多核苷酸的3'和5'末端和/或反義多核苷酸的3'末端包含至少一種修飾的核苷酸，其中至少一種修飾的核苷酸包括：無碱基核苷酸、核糖醇、反向核苷酸、反向無碱基核苷酸、反向2'-OMe核苷酸、反向2'-脫氧核苷酸。本領域技術人員已知，在寡核苷酸末端包含無碱基或反向無碱基核苷酸可增强穩定性 （Czauderna et al. Structural variations and stabilizing modifications of synthetic siRNAs in mammalian cells. Nucleic Acids Res. 2003;31(11):2705-2716. doi:10.1093/nar/gkg393）。

本發明的某些實施方案中，AGT dsRNA化合物、反義多核苷酸包含至少一種修飾的核苷酸，其中所述至少一種修飾的核苷酸包含開環核酸核苷酸（UNA）或/和二醇核酸核苷酸（GNA）。本領域技術人員已知，UNA和GNA是熱不穩定化學修飾，可以顯著改善siRNA化合物的脫靶譜 （Janas, et al., Selection of GalNAc-conjugated siRNAs with limited off-target-driven rat hepatotoxicity. Nat Commun. 2018;9(1):723. doi:10.1038/s41467-018-02989-4; Laursen et al., Utilization of unlocked nucleic acid (UNA) to enhance siRNA performance in vitro and in vivo. Mol BioSyst. 2010;6:862–70）。

可以在本發明的某些實施方案的AGT dsRNA試劑、AGT反義多核苷酸和/或AGT正義多核苷酸的RNA中包含另一種修飾，其包括分別增强AGT dsRNA試劑、AGT反義多核苷酸和/或AGT正義多核苷酸的一種或更多種特徵的一種或更多種配體、部分或與RNA化學連接的綴合物。可以增强的特徵的非限制性實例是：AGT dsRNA試劑、AGT反義多核苷酸和/或AGT正義多核苷酸活性、細胞分布、AGT dsRNA 試劑的遞送、AGT dsRNA 試劑的藥代動力學特性以及 AGT dsRNA 試劑的細胞攝取。在本發明的一些實施方案中，AGT dsRNA試劑包含一個或更多個靶向基團或連接基團，在本發明的AGT dsRNA試劑的某些實施方案中，其與正義鏈綴合。靶向基團的非限制性實例是包含N-乙醯基-半乳糖胺（GalNAc）的化合物。術語“靶向基團”、“靶向劑”、“連接劑”、“靶向化合物”和“靶向配體”在本文中可互換使用。在本發明的某些實施方案中，AGT dsRNA試劑包含與正義鏈的5'-末端綴合的靶向化合物。在本發明的某些實施方案中，AGT dsRNA試劑包含與正義鏈的3'-末端綴合的靶向化合物。在本發明的一些實施方案中，AGT dsRNA試劑包含含有GalNAc的靶向基團。 在本發明的某些實施方案中，AGT dsRNA試劑不包含與正義鏈的3'-末端和5'-末端之一或兩者綴合的靶向化合物。在本發明的某些實施方案中，AGT dsRNA試劑不包含與正義鏈的5'-末端和3'-末端之一或兩者綴合的含有GalNAc的靶向化合物。

另外的靶向和連接劑是本領域衆所周知的，例如，可用于本發明的某些實施方案中的靶向和連接劑包括但不限于脂質部分，例如膽固醇部分 （Letsinger et al., Proc. Natl. Acid. Sci. USA, 1989, 86: 6553-6556）、膽酸 （Manoharan et al., Biorg. Med. Chem. Let., 1994, 4:1053-1060）、硫醚，例如beryl-S-三苯甲基硫醇（Manoharan et al., Ann. N.Y. Acad. Sci., 1992, 660:306-309; Manoharan et al., Biorg. Med. Chem. Let., 1993, 3:2765-2770）、硫膽固醇（Oberhauser et al., Nucl. Acids Res., 1992, 20:533-538）、脂肪鏈，例如十二烷二醇或十一烷基殘基（Saison-Behmoaras et al., EMBO J, 1991, 10:1111-1118; Kabanov et al., FEBS Lett., 1990, 259:327-330; Svinarchuk et al., Biochimie, 1993, 75:49-54）、磷脂，例如二-十六烷基-rac-甘油或三乙基-銨1,2-二-O-十六烷基-rac-甘油-3-膦酸酯（Manoharan et al., Tetrahedron Lett., 1995, 36:3651-3654; Shea et al., Nucl. Acids Res., 1990, 18:3777-3783）、聚胺或聚乙二醇鏈（Manoharan et al., Nucleosides & Nucleotides, 1995, 14:969-973）或金剛烷乙酸（Manoharan et al., Tetrahedron Lett., 1995, 36:3651-3654）、棕櫚醯部分（Mishra et al., Biochim. Biophys. Acta, 1995, 1264:229-237）或十八胺或己氨基-羰氧基膽固醇部分（Crooke et al., J. Pharmacol. Exp. Ther., 1996, 277:923-937）。

包含AGT dsRNA試劑、AGT反義多核苷酸和/或AGT正義多核苷酸的組合物的某些實施方案可包含改變AGT dsRNA試劑的分布、靶向等性質的配體。在包含本發明的AGT dsRNA試劑的組合物的一些實施方案中，例如與不存在此類配體的物種相比，配體增加對選定靶標（例如分子、細胞或細胞類型、區室，例如細胞或器官區室、組織、器官或身體區域）的親和力。在本發明的組合物和/或方法中有用的配體可以是天然存在的物質，例如蛋白質（例如人血清白蛋白（HSA）、低密度脂蛋白（LDL）或球蛋白）、碳水化合物（例如，葡聚糖、支鏈澱粉、幾丁質、殼聚糖、菊粉、環糊精或透明質酸）或脂質。配體也可以是重組或合成分子，例如合成聚合物，例如合成聚氨基酸或聚胺。 聚氨基酸的實例是聚賴氨酸（PLL）、聚L-天冬氨酸、聚L-谷氨酸、苯乙烯-馬來酸酐共聚物、聚(L-丙交酯-共-乙醇酸)共聚物、二乙烯基醚-馬來酸酐共聚物、N-(2-羥丙基)甲基丙烯醯胺共聚物（HMPA）、聚乙二醇（PEG）、聚乙烯醇（PVA）、聚氨酯、聚(2-乙基丙烯酸)、N-异丙基丙烯醯胺聚合物，或聚磷嗪。多胺的示例包括：聚乙烯亞胺、聚賴氨酸（PLL）、精胺、亞精胺、多胺、假肽-多胺、擬肽多胺、樹枝狀多胺、精氨酸、脒、魚精蛋白、陽離子脂質、陽離子卟啉、多胺的季鹽或α螺旋肽。

本發明的組合物和/或方法中包含的配體可包含靶向基團，其非限制性實例爲細胞或組織靶向劑，例如，凝集素、糖蛋白、脂質或蛋白質，例如結合特定細胞類型如腎細胞或肝細胞的抗體。靶向基團可以是促甲狀腺素、促黑素、凝集素、糖蛋白、表面活性蛋白A、粘蛋白碳水化合物、多價乳糖、多價半乳糖、N-乙醯-半乳糖胺、N-乙醯-葡糖胺多價甘露糖、多價岩藻糖、糖基化聚氨基酸、多價半乳糖、轉鐵蛋白、雙膦酸鹽、聚谷氨酸鹽、聚天冬氨酸、脂質、膽固醇、類固醇、膽汁酸、葉酸、維生素B12、維生素A、生物素或RGD肽或RGD肽模擬物。

配體的其他實例包括染料、嵌入劑（例如吖啶）、交聯劑（例如補骨脂素、絲裂黴素 C）、卟啉（TPPC4、texaphyrin、Sapphyrin）、多環芳烴（例如吩嗪、二氫吩嗪）；人工核酸內切酶（例如 EDTA）、親脂性分子，例如膽固醇、膽酸、金剛烷乙酸、1-芘丁酸、二氫睾酮、1,3-雙-O(十六烷基)甘油、香葉氧基己基、十六烷基甘油、冰片、薄荷醇、1,3-丙二醇、十七烷基、棕櫚酸、肉豆蔻酸、O3-(油醯基)石膽酸、O3-(油醯基)膽酸、二甲氧基三苯甲基或吩噁嗪和肽綴合物（例如，觸角肽、Tat肽）、烷化劑、磷酸鹽、氨基、巰基、PEG（例如，PEG-40K）、MPEG、[MPEG] ₂、聚氨基、烷基、取代烷基、放射性標記物、酶、半抗原（例如生物素）、轉運/吸收促進劑（例如阿司匹林、維生素 E、葉酸）、合成核糖核酸酶（例如咪唑、雙咪唑、組胺、咪唑簇、吖啶-咪唑偶聯物、四氮雜大環的Eu ³⁺複合物）、二硝基苯基、HRP或AP。

本發明的組合物和/或方法中包括的配體可以是蛋白質，例如糖蛋白或肽，例如對共配體具有特定親和力的分子，或抗體，例如與特定細胞類型如癌細胞、內皮細胞、心肌細胞 或骨細胞結合的抗體。在本發明的組合物和/或方法的實施方案中有用的配體可以是激素或激素受體。在本發明的組合物和/或方法的實施方案中有用的配體可以是脂質、凝集素、碳水化合物、維生素、輔酶、多價乳糖、多價半乳糖、N-乙醯-半乳糖胺、N-乙醯-葡糖胺多價甘露糖或多價岩藻糖。在本發明的組合物和/或方法的實施方案中有用的配體可以是例如通過破壞細胞的細胞骨架（例如，通過破壞細胞的微管、微絲和/或中間絲）而增加AGT dsRNA試劑向細胞中的攝取的物質。此類試劑的非限制性實例是：taxon、長春新碱、長春碱、細胞鬆弛素、諾考達唑、japlakinolide、latrunculin A、鬼筆環肽、swinholide A、indanocine和myoservin。

在一些實施方案中，與本發明的AGT dsRNA試劑連接的配體用作藥代動力學(PK)調節劑。 可用于本發明的組合物和方法的PK調節劑的實例包括但不限于：親脂劑、膽汁酸、類固醇、磷脂類似物、肽、蛋白質結合劑、PEG、維生素、膽固醇、脂肪酸、膽酸、石膽酸、二烷基甘油酯、二醯基甘油酯、磷脂、鞘脂、萘普生、布洛芬、維生素E、生物素、結合血清蛋白的適體等。還已知包含許多硫代磷酸酯鍵的寡核苷酸與血清蛋白結合，因此，在骨架中包含多個硫代磷酸酯鍵的短寡核苷酸，例如約5個碱基、10個碱基、15個碱基或20個碱基的寡核苷酸也可用作本發明的組合物和/或方法中的配體。

AGT dsRNA試劑組合物

在本發明的一些實施方案中，AGT dsRNA試劑在組合物中。本發明的組合物可包含一種或更多種AGT dsRNA試劑和任選的一種或更多種藥學上可接受的載體、遞送劑、靶向劑、可檢測標簽等，根據本發明方法的一些實施方案可用的靶向劑的非限制性實例是將本發明的AGT dsRNA試劑引導至和/或進入待治療細胞的試劑。靶向劑的選擇將取决于以下要素：AGT 相關疾病或病症的性質，以及靶細胞類型。在一個非限制性實例中，在本發明的一些實施方案中，可能需要將AGT dsRNA試劑靶向至和/或進入肝細胞。應當理解，在本發明方法的一些實施方案中，治療劑包含僅具有遞送劑的AGT dsRNA試劑，例如包含N-乙醯半乳糖胺（GalNAc）的遞送劑，而沒有任何附加的連接元件。例如，在本發明的一些方面，AGT dsRNA試劑可以連接到包含GalNAc的遞送化合物上，幷且包含在含有藥學上可接受載體的組合物中，幷且在沒有任何連接至AGT dsRNA試劑的可檢測標記或靶向劑等的情况下施用至細胞或對象。

在本發明的AGT dsRNA試劑與一種或更多種遞送劑、靶向劑、標記劑等一起施用和/或連接到其上的情况下，本領域技術人員能够瞭解幷能够選擇和使用適合的試劑用于本發明的方法中。在本發明的某些方法中可以使用標記試劑來確定AGT dsRNA試劑在細胞和組織中的位置，幷且可用于確定已在本發明的方法中施用的包含AGT dsRNA試劑的治療組合物的細胞、組織或器官位置。接附和使用標記試劑如酶標記、染料、放射性標記等的手段是本領域公知的。應當理解，在本發明的組合物和方法的一些實施方案中，標記試劑連接至AGT dsRNA試劑中所包含的正義多核苷酸和反義多核苷酸之一或兩者。

AGT dsRNA試劑和AGT反義多核苷酸試劑的遞送

本發明方法的某些實施方案包括將AGT dsRNA試劑遞送到細胞中。 如本文所用，術語“遞送”是指促進或影響細胞攝取或吸收。AGT dsRNA試劑的吸收或攝取可通過獨立的擴散或活性細胞過程來發生，或通過使用可與本發明的AGT dsRNA試劑相關的遞送劑、靶向劑等來進行。適用于本發明方法的遞送方式包括但不限于體內遞送，其中將AGT dsRNA試劑注射到組織部位或全身給藥。在本發明的一些實施方案中，AGT dsRNA試劑連接至遞送劑。

可用于將AGT dsRNA試劑遞送至細胞、組織和/或對象的方法的非限制性實例包括：AGT dsRNA-GalNAc綴合物、SAMiRNA技術、基于LNP的遞送方法和裸RNA遞送。 這些和其他遞送方法已在本領域成功地用于遞送治療性RNAi試劑以治療各種疾病和病症，例如但不限于：肝病、急性間歇性卟啉症（AIP）、血友病、肺纖維化等。多種遞送方式的詳細信息可在出版物中找到，例如：Nikam, R.R. & K. R. Gore (2018) Nucleic Acid Ther, 28 (4), 209-224 Aug 2018; Springer A.D. & S.F. Dowdy (2018) Nucleic Acid Ther. Jun 1; 28(3): 109–118; Lee, K. et al., (2018) Arch Pharm Res, 41(9), 867-874; 和Nair, J.K. et al., (2014) J. Am. Chem. Soc. 136:16958-16961，其內容均以引用方式幷入本文。

本發明的一些實施方案包括使用脂質納米顆粒（LNP）將本發明的AGT dsRNA試劑遞送至細胞、組織和/或對象。LNP 通常用于體內遞送 AGT dsRNA 試劑，包括治療性 AGT dsRNA 試劑。使用LNP或其他遞送劑的一個好處是，當使用LNP或其他遞送劑遞送至對象時，AGT RNA劑的穩定性增加。在本發明的一些實施方案中，LNP包含負載有一種或更多種本發明的AGT RNAi分子的陽離子LNP。將包含AGT RNAi分子的 LNP施用于對象，LNP及其接附的AGT RNAi分子通過胞吞作用被細胞攝取，它們的存在導致RNAi觸發分子的釋放，從而介導RNAi。

可用于本發明的實施方案以將本發明的AGT dsRNA試劑遞送至細胞、組織和/或對象的遞送劑的另一個非限制性實例是：包含GalNAc的試劑，其與本發明的AGT dsRNA試劑連接幷將AGT dsRNA試劑遞送至細胞、組織和/或對象。PCT申請WO2020191183A1中公開了可用于本發明的方法和組合物的某些實施方案中的某些包含GalNAc的其他遞送劑的實例。可用于本發明的組合物和方法中以將AGT dsRNA試劑遞送至細胞的GalNAc靶向配體的非限制性實例是靶向配體簇。在此提出的靶向配體簇的實例如：具有磷酸二酯鍵的GalNAc配體（GLO）和具有硫代磷酸酯鍵的GalNAc配體（GLS）。術語“GLX-n”在本文中可用于表示所連接的含GalNAC的化合物是以下化合物：GLS-1、GLS-2、GLS-3、GLS-4、GLS-5、GLS-6、GLS-7、GLS-8、GLS-9、GLS-10、GLS-11、GLS-12、GLS-13、GLS-14、GLS-15、GLS-16、GLO-1、GLO-2、GLO-3、GLO-4、GLO-5、GLO-6、GLO-7、GLO-8、GLO-9、GLO-10、GLO-11、GLO-12、GLO-13、GLO-14、GLO-15和GLO-16中的任一種，每個的結構如下所示，下圖中GalNAc靶向配體與本發明的RNAi劑的連接位置在每個靶向配體的最右側。應當理解，本發明的任何RNAi和dsRNA分子都可以連接到GLS-1、GLS-2、GLS-3、GLS-4、GLS-5、GLS-6、GLS-7、GLS-8、GLS-9、GLS-10、GLS-11、GLS-12、GLS-13、GLS-14、GLS-15、GLS-16、GLO-1、GLO-2、GLO-3、GLO-4、GLO-5、GLO-6、GLO-7、GLO-8、GLO-9、GLO-10、GLO-11、GLO-12、GLO-13、GLO-14、GLO-15和GLO-16上，以下是GLO-1到GLO-16和GLS-1到GLS-16 的結構。 GLO-1 GLS-1 GLO-2 GLS-2 GLO-3 GLS-3 GLO-4 GLS-4 GLO-5 GLS-5 GLO-6 GLS-6 GLO-7 GLS-7 GLO-8 GLS-8 GLO-9 GLS-9 GLO-10 GLS-10 GLO-11 GLS-11 GLO-12 GLS-12 GLO-13 GLS-13 GLO-14 GLS-14 GLO-15 GLS-15 GLO-16 GLS-16。

在本發明的一些實施方案中，體內遞送也可以通過β-葡聚糖遞送系統，例如美國專利No. 5,032,401和5,607,677, 以及美國公布No. 2005/0281781中描述的那些，它們的全部內容通過引用幷入本文。也可以使用本領域已知的方法例如電穿孔和脂質轉染將AGT RNAi試劑體外引入細胞。在本發明方法的某些實施方案中，AGT dsRNA在沒有靶向劑的情况下被遞送。這些RNA可以作爲“裸”RNA分子遞送。作爲非限制性實例，本發明的AGT dsRNA可以在包含RNAi試劑但不包含靶向劑（例如 GalNAc 靶向化合物）的藥物組合物中施用于對象，以治療對象的AGT相關疾病或病症，例如高血壓。

應當理解，除了本文描述的某些遞送方式之外，其他RNAi遞送方式可以與本文描述的AGT RNAi試劑和治療方法的實施方案結合使用，例如但不限于本文描述的那些和本領域中使用的那些。

本發明的AGT dsRNA試劑可以以有效降低細胞和/或對象中AGT多肽的水平和活性的量和方式施用于對象。在本發明方法的一些實施方案中，將一種或更多種AGT dsRNA試劑施用于細胞和/或對象以治療與AGT表達和活性相關的疾病或病症。在一些實施方案中，本發明的方法包括向需要此類治療的對象施用一種或更多種AGT dsRNA試劑以减輕對象中與AGT表達相關的疾病或病症。可以施用本發明的AGT dsRNA試劑或AGT反義多核苷酸試劑以降低體外、離體和體內細胞中的一種或更多種中的AGT表達和/或活性。

在本發明的一些實施方案中，通過將AGT dsRNA試劑或AGT反義多核苷酸試劑遞送（例如引入）細胞中來降低細胞中AGT多肽的水平幷因此降低其活性。靶向劑和方法可用于幫助將AGT dsRNA試劑或AGT反義多核苷酸劑遞送至對象內的特定細胞類型、細胞亞型、器官、空間區域，和/或細胞內的亞細胞區域。AGT dsRNA試劑可以在本發明的某些方法中單獨地或與一種或更多種另外的AGT dsRNA試劑組合施用。在一些實施方案中，向對象施用2、3、4或更多種獨立選擇的AGT dsRNA試劑。 在本發明的某些實施方案中，將AGT dsRNA試劑與一種或更多種用于治療AGT相關疾病或病症的另外的治療方案聯合施用于對象以治療AGT相關疾病或病症。另外的治療方案的非限制性實例是：施用一種或更多種本發明的AGT反義多核苷酸、施用非AGT dsRNA治療劑和行爲改變。可以在以下一個或更多個時間施用另外的治療方案：在施用本發明的AGT dsRNA試劑之前、同時和之後。應當理解，本文所用的“同時”是指在零時間的5分鐘內、零時間的10分鐘內、零時間的30分鐘內、零時間的45分鐘內和零時間的60分鐘內，其中“零時間”是向對象施用本發明的AGT dsRNA試劑的時間。非AGT dsRNA 治療劑的非限制性實例是：另外的治療劑，如利尿劑、血管緊張素轉化酶（ACE）抑制劑、血管緊張素II受體拮抗劑、β-阻滯劑、血管擴張劑、鈣通道阻滯劑、醛固酮拮抗劑、α2-激動劑、腎素抑制劑、α-阻滯劑、外周作用腎上腺素能劑、選擇性D1受體部分激動劑、非選擇性α-腎上腺素能拮抗劑、合成的、甾體抗鹽皮質激素劑，或上述任何的組合，及配製成藥劑組合的高血壓治療劑。行爲改變的非限制性實例是：飲食方案、諮詢和鍛煉方案。這些和其他治療劑以及行爲改變是本領域已知的，幷且可用于治療對象的AGT疾病或病症，幷且還可以與一種或更多種本發明的AGT dsRNA試劑組合，向對象給藥以治療AGT疾病或病症。向細胞或對象施用以治療AGT相關疾病或病症的本發明的AGT dsRNA試劑可以與一種或更多種其他治療劑或活性成分以協同方式起作用，從而增加一種或更多種治療劑或活性成分的有效性和/或增加AGT dsRNA試劑治療AGT相關疾病或病症的有效性。

本發明的治療方法包括施用AGT dsRNA試劑，可在 AGT 相關疾病或病症發作之前和/或當存在AGT相關疾病或病症時使用，包括在疾病或病症的早期、中期、晚期階段以及任何這些階段之前和之後的所有時間使用。本發明的方法還可以治療先前已經接受過一種或更多種其他治療劑和/或治療活性成分的AGT相關疾病或病症治療的對象，其中一種或更多種其他治療劑和/或治療活性成分在治療對象的AGT相關疾病或病症方面不成功、成功性最小和/或不再成功。

載體編碼的dsRNA

在本發明的某些實施方案中，可以使用載體將AGT dsRNA試劑遞送到細胞中。AGT dsRNA 試劑轉錄單位可包含在DNA或RNA載體中。用于將序列遞送到細胞和/或對象中的此類編碼轉基因的載體的製備和使用是本領域公知的。可在本發明的方法中使用導致AGT dsRNA瞬時表達的載體，瞬時表達例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10小時或更多小時、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10 周或更多周。瞬時表達的長度可以使用基于以下要素的常規方法確定：例如但不限于所選的特定載體構建體和靶細胞和/或組織。此類轉基因可作爲綫性構建體、環狀質粒或病毒載體引入，其可爲整合或非整合載體。也可以構建轉基因以使其作爲染色體外質粒遺傳（Gassmann, et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA (1995) 92:1292）。

AGT dsRNA試劑的一條或更多條單鏈可以從表達載體上的啓動子轉錄。在要表達兩條單獨的鏈以産生例如dsRNA的情况下，可以使用例如轉染或感染的方式將兩個單獨的表達載體共同引入細胞。在某些實施方案中，本發明的AGT dsRNA試劑的每條單獨鏈都可以被包含在同一表達載體上的啓動子轉錄。在本發明的某些實施方案中，AGT dsRNA試劑被表達爲通過接頭多核苷酸序列連接的反向重複多核苷酸，使得AGT dsRNA試劑具有莖環結構。

RNA表達載體的非限制性實例是DNA質粒或病毒載體。在本發明的實施方案中有用的表達載體可以與真核細胞相容。真核細胞表達載體在本領域是常規使用的，幷且可從許多商業來源獲得。AGT dsRNA 表達載體的遞送可以是全身性的，例如通過靜脉內或肌肉內給藥、通過給藥至從對象移出的靶細胞然後將靶細胞重新引入對象，或通過允許引入所需靶細胞的任何其他方式來進行。

可包括在該方法的實施方案中的病毒載體系統包括但不限于：(a)腺病毒載體；(b) 逆轉錄病毒載體，包括但不限于慢病毒載體、莫洛尼鼠白血病病毒等；(c) 腺相關病毒載體；(d) 單純疱疹病毒載體；(e) SV 40 載體；(f) 多瘤病毒載體；(g) 乳頭狀瘤病毒載體；(h) 小核糖核酸病毒載體；(i) 痘病毒載體，例如正痘病毒載體，例如痘苗病毒載體或禽痘病毒載體，例如金絲雀痘或家禽痘病毒載體；(j) 輔助依賴型或無腸腺病毒載體。用于重組表達AGT dsRNA試劑的構建體可以包含調節元件，例如啓動子、增强子等，它們可以被選擇以提供組成型或調節型/誘導型表達。病毒載體系統以及啓動子和增强子的使用等在本領域是常規的幷且可以與本文所述的方法和組合物結合使用。

本發明的某些實施方案包括使用病毒載體將AGT dsRNA試劑遞送到細胞中。許多基于腺病毒的遞送系統在本領域中常規用于遞送至例如肺、肝、中樞神經系統、內皮細胞和肌肉。可用于本發明方法的病毒載體的非限制性實例是：AAV載體、痘病毒如痘苗病毒、改良安卡拉病毒（MVA）、NYVAC、禽痘如禽痘或金絲雀痘病毒。

本發明的某些實施方案包括使用載體將AGT dsRNA試劑遞送到細胞中的方法，幷且此類載體可以在藥學上可接受的載體中，所述載體可以但不必包括其中嵌入基因遞送載體的緩釋基質。在一些實施方案中，用于遞送AGT dsRNA的載體可以由重組細胞産生，幷且本發明的藥物組合物可以包括一種或更多種産生AGT dsRNA遞送系統的細胞。

含有AGT dsRNA或ssRNA試劑的藥物組合物

本發明的某些實施方案包括含有AGT dsRNA試劑或AGT反義多核苷酸試劑和藥學上可接受的載體的藥物組合物的用途。包含AGT dsRNA試劑或AGT反義多核苷酸劑的藥物組合物可用于本發明的方法中以降低細胞中的AGT基因表達和AGT活性，幷可用于治療AGT相關疾病或病症。此類藥物組合物可以基于遞送方式來配製。用于遞送方式的製劑的非限制性實例是：配製用于皮下遞送的組合物、配製用于通過腸胃外遞送全身給藥的組合物、配製用于靜脉內（IV）遞送的組合物、配製用于鞘內遞送的組合物、配製用于直接遞送至腦中的組合物等。可以使用一種或更多種方式施用本發明的藥物組合物以將AGT dsRNA試劑或AGT反義多核苷酸試劑遞送到細胞中，例如：表面（例如，通過透皮貼劑）；肺部，例如通過吸入或吹入粉末或氣霧劑，包括通過霧化器；氣道內、鼻內、表皮和透皮、口服或腸胃外。腸胃外給藥包括靜脉內、動脉內、皮下、腹膜內或肌肉內注射或輸注；表皮下，例如通過植入裝置；或顱內，例如通過實質內；鞘內或心室內施用。AGT dsRNA試劑或AGT反義多核苷酸劑也可以直接遞送至靶組織，例如直接遞送至肝臟、直接遞送至腎臟等。可以理解的是，“遞送AGT dsRNA試劑”或“遞送AGT反義多核苷酸試劑”到細胞中分別包括遞送AGT dsRNA試劑或AGT反義多核苷酸劑、直接在細胞中表達AGT dsRNA試劑以及從遞送到細胞中的編碼載體表達AGT dsRNA試劑，或使得AGT dsRNA或AGT反義多核苷酸試劑出現在細胞中的任何合適的方式。製劑的製備和使用以及用于遞送抑制性RNA的手段是本領域公知的和常規使用的。

如本文所用，“藥物組合物”包含藥理學有效量的本發明的AGT dsRNA試劑或AGT反義多核苷酸劑和藥學上可接受的載體。術語“藥學上可接受的載體”是指用于施用治療劑的載體。此類載體包括但不限于鹽水、緩衝鹽水、葡萄糖、水、甘油、乙醇及其組合。該術語明確排除細胞培養基。對于口服給藥的藥物，藥學上可接受的載體包括但不限于藥學上可接受的賦形劑，例如惰性稀釋劑、崩解劑、粘合劑、潤滑劑、甜味劑、調味劑、著色劑和防腐劑。合適的惰性稀釋劑包括碳酸鈉和碳酸鈣、磷酸鈉和磷酸鈣以及乳糖，而玉米澱粉和藻酸是合適的崩解劑。粘合劑可包括澱粉和明膠，而潤滑劑（如果存在）通常是硬脂酸鎂、硬脂酸或滑石粉。如果需要，片劑可以用例如單硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯之類的材料包衣，以延遲在胃腸道中的吸收。包含在藥物製劑中的試劑在下文進一步描述。如本文所用的術語，例如“藥理學有效量”、“治療有效量”和“有效量”，是指本發明的AGT dsRNA試劑或AGT反義多核苷酸試劑産生預期的藥理學、治療或預防結果的量。例如，如果與疾病或障礙相關的可測量參數至少降低 10% 時，則認爲給定的臨床治療有效，那麽用于治療該疾病或病症的藥物的治療有效量是使該參數降低至少10%所需的量。例如，治療有效量的AGT dsRNA試劑或AGT反義多核苷酸劑可以將AGT多肽水平降低至少10%。藥物組合物可以包含這樣的dsRNAi試劑，其包括例如表1中所顯示的雙鏈體AD00051至AD00122-19-2、AD00163-3、AV01227至AVAV01257、AV01711。在一些實施方案中，優選的dsRNAi試劑包括例如雙鏈體AD00158、AD00163、AD00159、AD00290、AD00300或AD00122。在另一些實施方案中，優選的dsRNAi試劑包括例如AD00158-1、AD00158-2、AD00163-1、AD00159-1或AD00300-1。在其他一些實施方案中，這樣的dsRNAi試劑包括雙鏈體變體，例如雙鏈體AD00158、AD00163、AD00163-3、AD00159、AD00290、AD00300或AD00122的變體。

有效量

在一些方面，本發明的方法包括將細胞與有效量的AGT dsRNA試劑或AGT反義多核苷酸試劑接觸以减少所接觸細胞中的AGT基因表達。本發明方法的某些實施方案包括以有效降低AGT基因表達和治療對象的AGT相關疾病或病症的量向對象施用AGT dsRNA試劑或AGT反義多核苷酸劑。就减少AGT的表達和/或用于治療AGT相關疾病或病症而言，所使用的“有效量”是實現所需生物學效果所必需或足够的量。例如，治療AGT相關疾病或病症的AGT dsRNA試劑或AGT反義多核苷酸試劑的有效量可以是：(i) 减緩或停止疾病或病症的進展所需的量；(ii) 逆轉、减少或消除疾病或病症的一種或更多種症狀。在本發明的一些方面，有效量是當施用于需要治療AGT相關疾病或病症的對象時，導致疾病或病症的預防和/或治療的治療響應的AGT dsRNA試劑或AGT反義多核苷酸劑的量。根據本發明的一些方面，有效量是本發明的AGT dsRNA試劑或AGT反義多核苷酸試劑當與針對AGT相關疾病或病症的另一種治療性治療組合或共同施用時，導致預防和/或治療該疾病或病症的治療響應的量。在本發明的一些實施方案中，用本發明的AGT dsRNA試劑或AGT反義多核苷酸試劑治療對象的生物學效應可以是由AGT相關疾病或病症引起的症狀的改善和/或完全消除。在本發明的一些實施方案中，生物學效應是AGT相關疾病或病症的完全消除，例如通過指示對象沒有AGT相關疾病或病症的診斷測試來證明。可檢測的生理症狀的非限制性實例包括在施用本發明的試劑後對象肝臟中脂質積累的减少。其他評估AGT相關疾病或病症狀態的本領域已知方式可用于確定本發明的試劑和/或方法對AGT相關疾病或病症的影響。

通常在臨床試驗中確定將AGT多肽活性降低至治療AGT相關疾病或病症的水平的AGT dsRNA試劑或AGT反義多核苷酸試劑的有效量，這樣的臨床試驗在盲法研究中爲測試人群與對照人群建立有效劑量。在一些實施方案中，有效量是導致所需響應的量，例如减少細胞、組織和/或患有疾病或病症的對象中的AGT相關疾病或病症的量。因此，用于治療可通過降低AGT多肽活性治療的 AGT 相關疾病或病症的AGT dsRNA試劑或AGT反義多核苷酸試劑的有效量可以是這樣的量：當施用時，將對象中AGT多肽活性的量降低至低于在未施用AGT dsRNA試劑或AGT反義多核苷酸劑的情况下將存在于細胞、組織和/或對象中的量。在本發明的某些方面，存在于未接觸或施用過本發明的AGT dsRNA試劑或AGT反義多核苷酸劑的細胞、組織和/或對象中的AGT多肽活性和/或AGT基因表達的水平被稱爲“對照”量。在本發明方法的一些實施方案中，對象的對照量是對象的治療前量；換言之，對象在施用AGT試劑之前的水平可以是該對象的對照水平，幷且用于與其在向對象施用siRNA後的AGT多肽活性和/或AGT基因表達水平相比較。在治療AGT相關疾病或病症的情况下，期望的響應可以是减少或消除細胞、組織和/或對象中疾病或病症的一種或更多種症狀。减少或消除可以是暫時的，也可以是永久性的。應當理解，可以使用確定AGT多肽活性、AGT基因表達、症狀評估、臨床測試等的方法來監測AGT相關疾病或病症的狀態。在本發明的一些方面，對治療AGT相關疾病或病症的期望響應是延遲疾病或病症的發作或甚至預防疾病或病症的發作。

降低AGT多肽活性的化合物的有效量也可以通過以下方式確定：評估施用AGT dsRNA試劑或AGT反義多核苷酸試劑對細胞或對象的生理作用，例如施用後AGT相關疾病或病症的减少。對象的測定和/或症狀監測可用于確定本發明的AGT dsRNA試劑或AGT反義多核苷酸劑的功效（其可以在本發明的藥物化合物中給藥），幷確定對治療是否有響應。一個非限制性實例是一種或更多種本領域已知的血壓測試。另一個非限制性示例是：在用本發明的AGT dsRNA試劑治療對象之前和之後，可以使用一種或更多種本領域已知的血壓測試來確定對象的AGT相關病症的狀態。在另一個非限制性實例中，使用一種或更多種本領域已知的中降低血壓水平測試來確定對象中AGT相關疾病的狀態。在該實施例中，疾病包括高血壓，幷且該測試用于確定在用本發明的AGT dsRNA試劑治療對象之前和之後對象中的降低血壓水平。

本發明的一些實施方案包括確定向對象施用的本發明的dsRNA試劑或AGT反義多核苷酸試劑來治療AGT相關疾病或病症之功效的方法，其通過評估和/或監測對象中AGT相關疾病或病症的一種或更多種“生理特徵”來進行。AGT相關疾病或病症的生理特徵的非限制性實例是對象的血清AGT水平、平均血壓、舒張壓。確定這種生理特徵的標準方法是本領域已知的，包括但不限于血液測試、成像研究、身體檢查等。

可以理解的是，可以至少部分地基于這種對對象確定的疾病和/或病症狀態和/或生理特徵的測定結果來修改向對象施用的AGT dsRNA試劑或AGT反義多核苷酸劑的量。治療量可以通過例如以下方式改變：通過改變施用AGT dsRNA試劑或AGT反義多核苷酸劑的組合物、通過改變給藥途徑、通過改變給藥時間等，來增加或减少AGT-dsRNA試劑或AGT反義多核苷酸試劑的量。AGT dsRNA試劑或AGT反義多核苷酸劑的有效量將隨著所治療的特定病症、所治療對象的年齡和身體狀况、病情的嚴重程度、治療的持續時間、共同治療的性質（如果有的話）、具體的給藥途徑以及健康從業者知識和專業知識範圍內的其他因素而變化。例如，有效量可取决于對治療AGT相關疾病或病症有效的AGT多肽活性和/或AGT基因表達的所需水平。技術人員可以憑經驗確定用于本發明方法的特定AGT dsRNA試劑或AGT反義多核苷酸試劑的有效量，而無需過度實驗。結合本文提供的教導，通過從本發明的多種AGT dsRNA試劑或AGT反義多核苷酸試劑中進行選擇，幷權衡例如效力、相對生物利用度、患者體重、不良副作用的嚴重程度和優選的給藥方式等因素，可以規劃有效的預防性或治療性治療方案以有效治療特定對象。如在本發明的實施方案中使用的，本發明的AGT dsRNA試劑或AGT反義多核苷酸試劑的有效量可以是當與細胞接觸時在細胞中産生所需生物學效應的量。

應當認識到，AGT基因沉默可以在表達AGT的任何細胞中通過組成型或通過基因組工程進行，幷通過任何合適的測定來確定。在本發明的一些實施方案中，通過施用本發明的AGT dsRNA試劑，AGT基因表達降低至少5%、6%、7%、8%、9%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%。在本發明的一些實施方案中，通過施用本發明的AGT dsRNA試劑，AGT基因表達减少5%至10%、5%至25%、10%至50%、10%至75%、25%至75%、25%至100%或50%至100%。

給藥

AGT dsRNA試劑和AGT反義多核苷酸試劑以足以抑制AGT基因表達的劑量在藥物組合物中遞送。在本發明的某些實施方案中，AGT dsRNA試劑或AGT反義多核苷酸劑的劑量爲每千克接受者體重每天0.01至200.0毫克，一般爲每天1至50mg/kg體重、5至40mg/kg體重、10至30mg/kg體重、1至20mg/kg體重、1至10mg/kg體重、4至15mg/kg體重，包括端值。例如，AGT dsRNA試劑或AGT反義多核苷酸試劑的每單次給藥可以以從約0.01 mg/kg、0.05 mg/kg、0.1 mg/kg、0.2 mg/kg、0.3 mg/kg、0.4 mg/kg、0.5 mg/kg、1 mg/kg、1.1 mg/kg、1.2 mg/kg、1.3 mg/kg、1.4 mg/kg、1.5 mg/kg、1.6 mg/kg、1.7 mg/kg、1.8 mg/kg、1.9 mg/kg、2 mg/kg、2.1 mg/kg、2.2 mg/kg、2.3 mg/kg、2.4 mg/kg、2.5 mg/kg、2.6 mg/kg、2.7 mg/kg、2.8 mg/kg、2.9 mg/kg、3.0 mg/kg、3.1 mg/kg、3.2 mg/kg、3.3 mg/kg、3.4 mg/kg、3.5 mg/kg、3.6 mg/kg、3.7 mg/kg、3.8 mg/kg、3.9 mg/kg、4 mg/kg、4.1 mg/kg、4.2 mg/kg、4.3 mg/kg、4.4 mg/kg、4.5 mg/kg、4.6 mg/kg、4.7 mg/kg、4.8 mg/kg、4.9 mg/kg、5 mg/kg、5.1 mg/kg、5.2 mg/kg、5.3 mg/kg、5.4 mg/kg、5.5 mg/kg、5.6 mg/kg、5.7 mg/kg、5.8 mg/kg、5.9 mg/kg、6 mg/kg、6.1 mg/kg、6.2 mg/kg、6.3 mg/kg、6.4 mg/kg、6.5 mg/kg、6.6 mg/kg、6.7 mg/kg、6.8 mg/kg、6.9 mg/kg、7 mg/kg、7.1 mg/kg、7.2 mg/kg、7.3 mg/kg、7.4 mg/kg、7.5 mg/kg、7.6 mg/kg、7.7 mg/kg、7.8 mg/kg、7.9 mg/kg、8 mg/kg、8.1 mg/kg、8.2 mg/kg、8.3 mg/kg、8.4 mg/kg、8.5 mg/kg、8.6 mg/kg、8.7 mg/kg、8.8 mg/kg、8.9 mg/kg、9 mg/kg、9.1 mg/kg、9.2 mg/kg、9.3 mg/kg、9.4 mg/kg、9.5 mg/kg、9.6 mg/kg、9.7 mg/kg、9.8 mg/kg、9.9 mg/kg、10 mg/kg、11 mg/kg、12 mg/kg、13mg/kg、14 mg/kg、15 mg/kg、16 mg/kg、17 mg/kg、18 mg/kg、19 mg/kg、20 mg/kg、21 mg/kg、22 mg/kg、23mg/kg、24 mg/kg、25 mg/kg、26 mg/kg、27 mg/kg、28 mg/kg、29 mg/kg、30 mg/kg、31 mg/kg、32 mg/kg、33mg/kg、34 mg/kg、35 mg/kg、36 mg/kg、37 mg/kg、38 mg/kg、39 mg/kg、40 mg/kg、41 mg/kg、42 mg/kg、43mg/kg、44 mg/kg、45 mg/kg、46 mg/kg、47 mg/kg、48 mg/kg、49 mg/kg至50 mg/kg體重的量來施用。

在確定本發明的AGT dsRNA試劑的遞送劑量和時間時可以考慮多種因素。遞送的AGT dsRNA試劑或AGT反義多核苷酸劑的絕對量將取决于多種因素，包括共同治療、劑量數和個體對象參數，包括年齡、身體狀况、體格大小和體重。這些是本領域普通技術人員衆所公知的因素，幷且可以通過常規實驗解决。在一些實施方案中，可以使用最大劑量，即根據合理的醫學判斷的最高安全劑量。

在一些實施方案中，本發明的方法可包括向對象施用1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或更多個劑量的AGT dsRNA試劑或AGT反義多核苷酸試劑。在一些情况下，可以至少每天、每隔一天、每周、每隔一周、每月等向對象施用藥物化合物（例如，包含AGT dsRNA試劑或包含AGT反義多核苷酸劑）的劑量，可以每天給藥一次或每天給藥多于一次，例如在一個24小時周期內給藥2、3、4、5或更多次。本發明的藥物組合物可以每天給藥一次；或者AGT dsRNA試劑或 AGT 反義多核苷酸試劑可以在一天中以適當的間隔以兩個、三個或更多個亞劑量給藥，或者甚至使用連續輸注或通過控釋製劑遞送。在本發明方法的一些實施方案中，將本發明的藥物組合物每天一次或更多次、每周一次或更多次、每月一次或更多次或每年一次或更多次施用給對象。

在某些方面，本發明的方法包括單獨施用藥物化合物；與一種或更多種其他AGT dsRNA試劑或AGT反義多核苷酸試劑組合；和/或與對患有 AGT相關疾病或病症的對象施用的其他藥物療法或治療活動或方案組合。藥物化合物可以以藥物組合物的形式給藥。本發明方法中使用的藥物組合物可以是無菌的，幷且含有一定量的AGT dsRNA試劑或AGT反義多核苷酸試劑，其會將AGT多肽的活性降低到足以在適合施用于對象的重量或體積單位中産生所需響應的水平。可以根據不同參數選擇向對象施用的包含AGT dsRNA試劑或AGT反義多核苷酸劑藥物組合物的劑量以降低AGT蛋白活性，特別是根據所使用的給藥方式和對象的狀態來進行選擇。其他因素包括所需的治療時間。如果對象在初始劑量下的響應不足，則可以在患者耐受性允許的範圍內采用更高的劑量（或通過不同的、更局部的遞送途徑有效地提高劑量）。

治療

如本文所用的，術語“預防”或“進行預防”，當用于指將受益于AGT基因表達降低的疾病、病症或其病况時，是指對象發生與此類疾病、病症或病况相關的症狀的可能性降低，所述與此類疾病、病症或病况相關的症狀是例如與由腎素-血管緊張素-醛固酮系統（RAAS）活化引起或與之相關的疾病或病症相關的症狀，例如高血壓。在這樣的情况下發生高血壓的可能性被降低：例如，當個體具有一種或更多種高血壓風險因素，但未發生高血壓或僅發生嚴重程度較低的高血壓的情况下，其相對于具有相同風險因素且未接受本文所述治療的人群而言，未能發展出相關疾病、病症或病症，或與此類疾病、病症或病症相關的症狀的發展程度降低（例如，在臨床上患有該疾病或病症的量表上降低至少約 10%），或延遲症狀的表現（例如，延遲數天、數周、數月或數年），則被認爲是有效的預防。

基于在兩次或更多次就診期間正確測量的坐位血壓讀數的平均值，血壓正常的對象的收縮壓爲約90-119 mmHg（約12-15.9 kPa（kN/m ²）），舒張壓爲約60-79 mmHg（約8.0-10.5 kPa（kN/m ²））；患有高血壓前期的對象的收縮壓爲約120-139 mmHg（約16.1-18.5 kPa（kN/m ²）），舒張壓爲約60-79 mmHg（約8.0-10.5 kPa（kN/m ²））；患有高血壓（例如，I期高血壓）的對象的收縮壓爲約140-159 mmHg（約18.7-21.2 kPa（kN/m ²）），舒張壓爲約 90-99 mmHg（約12.0-13.2 kPa（kN/m ²））；患有高血壓（例如，II期高血壓）的對象的收縮壓爲約≥160mmHg（約≥21.3kPa（kN/m ²）），舒張壓爲約≥100 mmHg（約≥13.3 kPa（kN/m ²））。

在某些實施方案中，血管緊張素原相關疾病是原發性高血壓。“原發性高血壓”是環境或遺傳因素的結果（例如，沒有明顯的潜在醫學原因的結果）。

在某些實施方案中，血管緊張素原相關疾病是繼發性高血壓。“繼發性高血壓”具有可識別的潜在病狀，其可以有多種病因，包括腎臟、血管和內分泌原因，例如，腎實質疾病（例如，多囊腎、腎小球或間質疾病）、腎血管疾病（例如，腎動脉狹窄、纖維肌肉發育不良）、內分泌失調（例如，腎上腺皮質激素或鹽皮質激素過多、嗜鉻細胞瘤、甲狀腺功能亢進或甲狀腺功能减退、生長激素過量、甲狀旁腺功能亢進）、主動脉縮窄或使用口服避孕藥。

在某些實施方案中，血管緊張素原相關疾病是高血壓急症，例如惡性高血壓和加速性高血壓。“加速性高血壓”是指血壓嚴重升高（即等于或高于180 mmHg的收縮壓或110 mmHg的舒張壓）幷伴有一個或更多個終末器官的直接損傷。必須立即降低血壓以防止進一步的器官損傷。“惡性高血壓”是指血壓嚴重升高（即等于或高于180 mmHg的收縮壓或110 mmHg的舒張壓）幷伴有一個或更多個終末器官直接損傷和視神經乳頭水腫。必須立即降低血壓以防止進一步的器官損傷。由于血壓不受控制而導致的神經終末器官損傷可包括高血壓腦病、腦血管意外/腦梗塞；蛛網膜下腔出血和/或顱內出血。心血管終末器官損傷可包括心肌缺血/梗塞、急性左心室功能障礙、急性肺水腫和/或主動脉夾層。其他器官系統也可能受到不受控制的高血壓的影響，這可導致急性腎功能衰竭/功能不全、視網膜病變、子癇或微血管病性溶血性貧血。

在某些實施方案中，血管緊張素原相關疾病是急性高血壓。“急性高血壓”是指血壓嚴重升高（即等于或高于180 mmHg的收縮壓或110 mmHg的舒張壓）且對一個或更多個器官沒有直接損傷。血壓可在數小時內安全降低。

在某些實施方案中，血管緊張素原相關疾病是妊娠相關高血壓，例如妊娠慢性高血壓、妊娠高血壓、先兆子癇、子癇、叠加在慢性高血壓上的先兆子癇、HELLP綜合征，和妊娠高血壓（也稱爲妊娠期短暫性高血壓、妊娠後半期發現的慢性高血壓和妊娠誘發的高血壓 (PIH)）。患有“妊娠慢性高血壓”的對象是在懷孕前或懷孕20周前血壓超過140/90 mm Hg的對象。“妊娠期高血壓”或“妊娠誘導的高血壓”是指在妊娠後期（＞20周妊娠）發病的高血壓，其沒有任何先兆子癇的其他特徵，産後血壓恢復正常。“輕度子癇前期”定義爲在妊娠20周前血壓正常的女性中，在至少相隔六小時的情况下，出現兩次高血壓（血壓≥140/90 mm Hg），但沒有終末器官損傷的證據。在先前患有原發性高血壓的對象中，如果收縮壓增加30毫米汞柱或舒張壓增加15毫米汞柱，則診斷爲先兆子癇。“重度子癇前期”被定義爲在子癇前期出現以下症狀或體征之一：兩次至少間隔6小時出現收縮壓爲160毫米汞柱或更高、或舒張壓爲110毫米汞柱或更高；24小時收集的蛋白尿超過5 g或至少間隔4小時收集的兩次隨機尿樣超過 3+、肺水腫或紫紺、少尿（24 小時內＜400 mL）、持續性頭痛、上腹痛和/或肝功能受損、血小板减少症、羊水過少、胎兒生長减慢或胎盤早剝。“子癇”被定義爲不能歸因于先兆子癇女性的其他原因的癲癇發作。“HELLP 綜合征”（也稱爲B型水腫-蛋白尿-高血壓妊娠中毒症）是指妊娠對象中的溶血、肝酶水平升高和血小板水平降低。

在某些實施方案中，血管緊張素原相關疾病是頑固性高血壓。“頑固性高血壓”是指儘管同時使用三種不同類別的抗高血壓藥物，且其中一種是噻嗪類利尿劑，但血壓仍高于目標值（例如 140/90 mmHg）。用四種或更多藥物控制血壓的對象也被認爲患有頑固性高血壓。

對于AGT相關疾病和病症，其中AGT多肽的水平和/或活性的降低可有效治療該疾病或病症，可以使用本發明的方法和AGT dsRNA試劑來治療以抑制AGT表達。可以用本發明的AGT dsRNA試劑或AGT反義多核苷酸試劑和本發明的治療方法治療的疾病和病症的實例包括但不限于：高血壓病、高血壓、臨界性高血壓、原發性高血壓、繼發性高血壓、孤立性收縮期或舒張期高血壓、妊娠相關高血壓、糖尿病性高血壓、頑固性高血壓、難治性高血壓、陣發性高血壓、腎血管性高血壓、戈德布拉特氏（Goldblatt）高血壓、眼高血壓、青光眼、肺高血壓、門脉高血壓、系統性靜脉高血壓、收縮期高血壓、不穩定性高血壓；高血壓性心臟病、高血壓性腎病變、動脉粥樣硬化、動脉硬化、血管病變、糖尿病性腎病變、糖尿病性視網膜病變、慢性心力衰竭、心肌病變、糖尿病性心肌病變、腎小球硬化症、主動脉狹窄、主動脉瘤、心室纖維化、心力衰竭、心肌梗塞、心絞痛、中風、腎疾病、腎衰竭、系統性硬化症、宮內發育遲緩（IUGR）、胎兒生長受限。此類疾病和病症在本文中可稱爲“AGT相關疾病和病症”和“由AGT引起和/或調節的疾病和病症”。

在本發明的某些方面，可以在診斷AGT相關疾病或病症之前或之後的一個或更多個時間向對象施用本發明的AGT dsRNA試劑或AGT反義多核苷酸試劑。在本發明的一些方面，對象處于患有或發展AGT相關疾病或病症的風險中。與發展AGT相關疾病或病症的對照風險相比，有發展AGT相關疾病或病症風險的對象是發展AGT相關疾病或病症的可能性提高的對象。在本發明的一些實施方案中，與風險的對照水平相比，風險水平在統計上是顯著的。有風險的對象可包括，例如：是或將是具有預先存在的疾病和/或遺傳异常的對象，其使得該對象比沒有預先存在的疾病或遺傳异常的對照對象更易患AGT相關疾病或病症；具有AGT相關疾病或病症的家族和/或個人病史的對象；以及先前已接受AGT相關疾病或病症治療的對象。應當理解，使對象對AGT相關疾病或病症更易感的預先存在的疾病和/或遺傳异常可以是這樣的疾病或遺傳异常：當存在時，其先前已被確定爲與發展AGT相關疾病或病症的更高可能性具有相關關係。

應當理解，可以基于個體對象的醫學狀况向對象施用AGT dsRNA試劑或AGT反義多核苷酸試劑。例如，爲對象提供的醫療保健可以評估從對象獲得的樣品中測量的AGT水平，幷確定通過施用本發明的AGT dsRNA試劑或AGT反義多核苷酸試劑來降低對象的AGT水平是可期望的。在一個非限制性實例中，可以從對象獲得生物樣品，例如血液或血清樣品，幷且在樣品中確定對象的AGT水平。向對象施用AGT dsRNA試劑或AGT反義多核苷酸試劑，幷且在給藥後從對象獲得血液或血清樣品，幷且使用該樣品測定AGT水平，幷將該結果與對象給藥前（先前）樣品中確定的結果進行比較。與給藥前水平相比，隨後樣品中對象的AGT水平降低則表明所施用的AGT dsRNA試劑或AGT反義多核苷酸試劑在降低對象的AGT水平方面的功效。在一個非限制性實例中，血壓可以被認爲是AGT相關病症的生理特徵，即使對象沒有被診斷爲患有AGT相關疾病，例如本文公開的疾病。醫療保健提供者可以監測對象的血壓的變化，作爲施用的本發明的AGT dsRNA試劑或AGT反義多核苷酸劑的功效的量度。

本發明方法的某些實施方案包括調整治療，所述治療包括至少部分地基于對對象中由治療引起的AGT 相關疾病或病症一種或更多種生理特徵的變化的評估，來向對象施用本發明的dsRNA試劑或AGT反義多核苷酸試劑。例如，在本發明的一些實施方案中，可以確定對對象施用的本發明的dsRNA試劑或AGT反義多核苷酸劑的作用，幷用于幫助調節隨後向對象施用的本發明的dsRNA試劑或AGT反義多核苷酸劑的量。在一個非限制性實例中，對對象施用本發明的dsRNA試劑或AGT反義多核苷酸試劑，幷在施用後測定對象血壓；幷且至少部分基于所確定的水平，確定是否需要更高量的dsRNA試劑或AGT反義多核苷酸試劑以提高所施用試劑的生理作用，例如降低或進一步降低對象的血壓。在另一個非限制性實例中，向對象施用本發明的dsRNA試劑或AGT反義多核苷酸劑，幷在給藥後確定對象的血壓，幷且至少部分地基于所確定的水平，預期向對象施用更低量的dsRNA試劑或AGT反義多核苷酸試劑。

因此，本發明的一些實施方案包括評估由對象先前治療引起的一種或更多種生理特徵的變化，以調整隨後施用于對象的本發明的dsRNA試劑或AGT反義多核苷酸劑的量。本發明方法的一些實施方案包括對AGT相關疾病或病症的生理特徵的1、2、3、4、5、6或更多次測定；評估和/或監測施用的本發明的AGT dsRNA試劑或AGT反義多核苷酸試劑的功效；幷任選地使用所測定的結果來調整以下一項或更多項：本發明的dsRNA試劑或AGT反義多核苷酸試劑治療對象中AGT相關疾病或病症的劑量、給藥方案和/或給藥頻率。在本發明方法的一些實施方案中，向對象施用有效量的本發明的dsRNA試劑或AGT反義多核苷酸試劑的期望結果是：與爲對象確定的先前血壓 相比，對象的血壓降低；對象的血壓處于正常血壓範圍內。

如本文所用，術語“治療”、“治療性”或“治療的”當用于AGT相關疾病或病症時可指預防性治療、降低對象發展AGT相關疾病或病症的可能性，幷且也可以指在對象已經發展出AGT相關疾病或病症之後爲了消除或降低AGT相關疾病或病症的水平而進行的治療、防止AGT相關疾病或病症變得更嚴重，和/或與在不存在降低對象中AGT多肽活性的療法的情况下的對象相比，减緩對象中AGT相關疾病或病症的進展。

本發明的試劑、組合物和方法的某些實施方案可用于抑制AGT基因表達。如本文所用，關于AGT基因的表達，術語“抑制”、“沉默”、“减少”、“下調”和“敲低”是指例如通過以下一種或更多種情况改變AGT基因的表達：分別與由AGT基因轉錄的RNA的對照水平、所表達的AGT的活性對照水平或由mRNA 翻譯的AGT的對照水平相比，當細胞、細胞群、組織、器官或對象與本發明的AGT dsRNA試劑或AGT反義多核苷酸試劑接觸（例如，用其處理）時，其中由基因轉錄的RNA的水平、表達的AGT的活性水平，以及由細胞、細胞群、組織、器官或對象中的mRNA翻譯的AGT多肽、蛋白質或蛋白質亞基的水平降低。在一些實施方案中，對照水平是未接觸AGT dsRNA試劑或AGT反義多核苷酸試劑（例如用其處理）的細胞、組織、器官或對象中的水平。

施用方法

AGT dsRNA試劑或AGT反義多核苷酸劑的多種給藥途徑可用于本發明的方法。特定遞送模式的選擇將至少部分取决于所治療的特定病症和治療功效所需的劑量。一般而言，本發明的方法可以使用醫學上可接受的任何給藥模式來實施，這意味著産生AGT相關疾病或病症的有效治療水平而不引起臨床上不可接受的副作用的任何模式。在本發明的一些實施方案中，AGT dsRNA試劑或AGT反義多核苷酸劑可以通過口服、腸內、粘膜、皮下和/或腸胃外途徑施用。術語“腸胃外”包括皮下、靜脉內、鞘內、肌內、腹膜內和胸骨內注射或輸注技術。其他途徑包括但不限于鼻（例如，通過胃鼻管）、經皮、陰道、直腸、舌下和吸入。本發明的遞送途徑可包括鞘內、心室內或顱內。在本發明的一些實施方案中，AGT dsRNA試劑或AGT反義多核苷酸劑可以放置在緩釋基質中幷通過將基質放置在對象中來施用。在本發明的一些方面，AGT dsRNA試劑或AGT反義多核苷酸劑可以使用塗覆有靶向特定細胞或細胞器的遞送劑的納米顆粒遞送至對象細胞。多種遞送方式、方法、試劑是本領域已知的。遞送方法和遞送劑的非限制性實例在本文別處另外提供。在本發明的一些方面，關于AGT dsRNA試劑或AGT反義多核苷酸試劑的術語“遞送”可以是指：向細胞或對象施用一種或更多種“裸”AGT dsRNA試劑或AGT反義多核苷酸劑序列。在本發明的某些方面，“遞送”是指通過轉染方式給予細胞或對象、將包含 AGT dsRNA 試劑或 AGT 反義多核苷酸試劑的細胞遞送給對象、將編碼AGT dsRNA試劑或 AGT 反義多核苷酸試劑的載體遞送到細胞和/或對象等中。使用轉染方式遞送AGT dsRNA試劑或AGT反義多核苷酸劑可包括向細胞和/或對象施用載體。

在本發明的一些方法中，一種或更多種AGT dsRNA試劑或AGT反義多核苷酸試劑可以以製劑形式給藥，也可以在藥學上可接受的溶液中給藥，其通常可以含有藥學上可接受濃度的鹽、緩衝劑、防腐劑、相容的載體、佐劑和任選的其他治療成分。在本發明的一些實施方案中，AGT dsRNA試劑或AGT反義多核苷酸劑可以與另一種治療劑一起配製成用于同時給藥。根據本發明的方法，AGT dsRNA試劑或AGT反義多核苷酸試劑可以以藥物組合物的形式給藥。通常，藥物組合物包含AGT dsRNA試劑或AGT反義多核苷酸劑和任選的藥學上可接受的載體。藥學上可接受的載體是本領域普通技術人員公知的。如本文所用，藥學上可接受的載體是指不干擾活性成分生物活性（例如，AGT dsRNA試劑或AGT反義多核苷酸劑抑制細胞或對象中AGT基因表達的能力）有效性的無毒材料。施用和遞送用于治療用途的dsRNA試劑或AGT反義多核苷酸試劑的多種方法是本領域已知的幷且可用于本發明的方法中。

藥學上可接受的載體包括稀釋劑、填充劑、鹽、緩衝劑、穩定劑、增溶劑和本領域公知的其他材料。示例性的藥學上可接受的載體描述于美國專利No. 5,211,657中，而其他載體是本領域技術人員已知的。這種製劑通常可以含有鹽、緩衝劑、防腐劑、相容的載體和任選的其他治療劑。用于醫藥時，該鹽應當是藥學上可接受的，但非藥學上可接受的鹽可以方便地用于製備其藥學上可接受的鹽，不排除在本發明的範圍之外。此類藥理學和藥學上可接受的鹽包括但不限于由以下酸製備的鹽：鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、磷酸、馬來酸、乙酸、水楊酸、檸檬酸、甲酸、丙二酸、琥珀酸等。此外，藥學上可接受的鹽可以製備爲鹼金屬鹽或鹼土金屬鹽，例如鈉鹽、鉀鹽或鈣鹽。

本發明方法的一些實施方案包括將一種或更多種AGT dsRNA試劑或AGT反義多核苷酸試劑直接施用于組織。在一些實施方案中，施用化合物的組織是其中存在或可能出現AGT相關疾病或病症的組織，其非限制性實例是肝臟或腎臟。直接組織給藥可以通過直接注射或其他方式實現。許多口服遞送的化合物自然進入幷通過肝臟和腎臟，本發明的治療方法的一些實施方案包括向對象口服施用一種或更多種AGT dsRNA試劑。AGT dsRNA試劑或AGT反義多核苷酸劑，單獨或與其他治療劑聯合，可以施用一次，或者它們可以多次施用。如果多次給藥，AGT dsRNA試劑或AGT反義多核苷酸劑可以通過不同途徑給藥。例如，雖然不打算限制，第一次（或前幾次）給藥可以通過皮下方式進行，幷且一次或更多次額外給藥可以是口服和/或全身給藥。

對于其中希望全身性施用AGT dsRNA試劑或AGT反義多核苷酸劑的本發明實施方案，可以配製AGT dsRNA試劑或AGT反義多核苷酸劑用于通過注射例如通過推注或連續輸注腸胃外施用。注射製劑可以以單位劑型存在，例如安瓿或多劑量容器，其添加或不添加防腐劑。AGT dsRNA試劑製劑（也稱爲藥物組合物）可采用油性或水性載體中的混懸液、溶液或乳液等形式，幷且可含有配製劑，例如混懸劑、穩定劑和/或分散劑。

腸胃外給藥的製劑包括無菌水溶液或非水溶液、混懸液和乳液。非水溶劑的例子是丙二醇、聚乙二醇、植物油如橄欖油和可注射的有機酯如油酸乙酯。水性載體包括水、酒精/水溶液、乳液或混懸液，包括鹽水和緩衝介質。腸胃外載體包括氯化鈉溶液、林格氏葡萄糖溶液、葡萄糖和氯化鈉溶液、乳酸林格氏液或固定油。靜脉內賦形劑包括流體和營養補充劑、電解質補充劑（例如基于林格氏葡萄糖溶液的那些）等。也可以存在防腐劑和其他添加劑，例如抗微生物劑、抗氧化劑、螯合劑和惰性氣體等。其他形式的給藥，例如靜脉給藥，將導致較低的劑量。如果對象在初始劑量下的反應不足，則可以在患者耐受性允許的範圍內采用更高的劑量（或通過不同的、更局部的遞送途徑有效地提高劑量）。可以根據需要每天使用多次劑量以實現一種或更多種 AGT dsRNA 試劑或 AGT 反義多核苷酸試劑的適當全身或局部水平，幷實現AGT蛋白活性的適當降低。

在其他實施方案中，本發明的方法包括使用遞送載體，例如生物相容性微粒、納米顆粒或適合植入受體例如對象的植入物。PCT公開WO 95/24929（通過引用幷入本文）中描述了可根據該方法使用的示例性可生物降解植入物，其描述了用于包含生物大分子的生物相容的、可生物降解的聚合物基質。

不可生物降解的和可生物降解的聚合物基質都可用于本發明的方法中，以將一種或更多種AGT dsRNA試劑或AGT反義多核苷酸試劑遞送給對象。在一些實施方案中，基質可以是可生物降解的。基質聚合物可以是天然或合成聚合物。可以基于期望釋放的時間段來選擇聚合物，通常在幾小時到一年或更長時間的數量級。通常，可以使用在幾小時到三到十二個月之間的一段時間內的釋放。聚合物任選地呈水凝膠形式，其可以吸收高達其重量約90％的水，幷且還任選地與多價離子或其他聚合物交聯。

通常，AGT dsRNA試劑或AGT反義多核苷酸試劑在本發明的一些實施方案中可以使用可生物降解的植入物通過擴散或通過聚合物基質的降解來遞送。用于這種用途的示例性合成聚合物是本領域公知的。使用本領域已知的方法，可生物降解的聚合物和不可生物降解的聚合物可用于遞送AGT dsRNA試劑或AGT反義多核苷酸試劑。生物粘附聚合物如可生物侵蝕的水凝膠（H. S. Sawhney, C. P. Pathak and J. A. Hubell in Macromolecules, 1993, 26, 581-587）也可用于遞送 AGT dsRNA試劑或AGT反義多核苷酸試劑，以治療AGT相關疾病或病症。其他合適的遞送系統可以包括定時釋放、延遲釋放或持續釋放遞送系統。此類系統可避免重複施用AGT dsRNA試劑或AGT反義多核苷酸劑，從而提高對象和醫療保健專業人員的便利性。許多類型的釋放遞送系統是可用的幷且是本領域普通技術人員已知的。見例如美國專利No. 5,075,109、4,452,775、4,675,189、5,736,152、3,854,480、5,133,974和5,407,686。此外，可以使用基于泵的硬件輸送系統，其中一些也適用于植入。

長期持續釋放植入物的使用可以適用于對象的預防性治療和具有發生復發性AGT相關疾病或病症的風險的對象。如本文所用，長期釋放是指將植入物構建和布置成以至少長達10天、20天、30天、60天、90天、六個月、一年或更長時間遞送治療水平的AGT dsRNA 試劑或AGT反義多核苷酸試劑。長期持續釋放植入物是本領域普通技術人員衆所公知的幷且包括上述的一些釋放系統。

AGT dsRNA試劑或AGT反義多核苷酸試劑的治療製劑可以通過將具有所需純度的分子或化合物與任選的藥學上可接受的載體、賦形劑或穩定劑[Remington's Pharmaceutical Sciences 21 ^stedition, (2006)]以凍幹製劑或水溶液的形式混合來製備用于儲存。可接受的載體、賦形劑或穩定劑在所采用的劑量和濃度下對接受者是無毒的，幷且包括緩衝劑，例如磷酸鹽、檸檬酸鹽和其他有機酸；抗氧化劑，包括抗壞血酸和蛋氨酸；防腐劑（例如十八烷基二甲基苄基氯化銨；六甲銨氯化物；苯扎氯銨、苄索氯銨；苯酚、丁醇或苯甲醇；對羥基苯甲酸酯類，例如對羥基苯甲酸甲酯或丙酯；鄰苯二酚；間苯二酚；環己醇；3-戊醇；和間甲酚）；低分子量（少于約 10 個殘基）多肽；蛋白質，例如血清白蛋白、明膠或免疫球蛋白；親水性聚合物，如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸，例如甘氨酸、穀氨醯胺、天冬醯胺、組氨酸、精氨酸或賴氨酸；單糖、二糖和其他碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合劑如EDTA；蔗糖、甘露糖醇、海藻糖或山梨糖醇等糖類；形成鹽的反離子，如鈉；金屬配合物（例如，鋅-蛋白質配合物）；和/或非離子表面活性劑，例如TWEEN®、PLURONICS®或聚乙二醇 （PEG）。

細胞、對象和對照

本發明的方法可以與細胞、組織、器官和/或對象結合使用。在本發明的一些方面，對象是人或脊椎動物哺乳動物，包括但不限于狗、猫、馬、牛、山羊、小鼠、大鼠和靈長類動物，例如猴。因此，本發明可用于治療人和非人對象的AGT相關疾病或病症。在本發明的一些方面，對象可以是農場動物、動物園動物、馴養動物或非馴養動物，幷且本發明的方法可用于獸醫預防和治療方案。在本發明的一些實施方案中，對象是人幷且本發明的方法可用于人預防和治療方案。

可應用本發明的對象的非限制性實例是被診斷患有、懷疑患有或有風險患有與以下疾病或病症相關的疾病或病症的對象：高于期望的 AGT 表達和/或活性，也稱爲“升高的 AGT 表達水平”。與高于期望水平的AGT表達和/或活性相關的疾病和病症的非限制性實例在本文別處描述。本發明的方法可應用于在治療時已被診斷爲患有該疾病或病症的對象、與高于期望的 AGT 表達和/或活性相關的對象，或被認爲處于患有或發展與高于期望的AGT 表達和/或活性相關的疾病或病症的風險中的對象。在本發明的一些方面，與高于期望的AGT表達和/或活性水平相關的疾病或病症是急性疾病或病症；在本發明的某些方面，與高于期望的AGT表達和/或活性水平相關的疾病或病症是慢性疾病或病症。

在一個非限制性實例中，將本發明的AGT dsRNA試劑施用于被診斷患有高血壓，其包括原發性高血壓、繼發性高血壓、高血壓急症（如惡性高血壓和加速性高血壓）、急性高血壓、妊娠相關高血壓、頑固性高血壓。本發明的方法可應用于在治療時已被診斷爲患有該疾病或病症的對象，或被認爲有患或發展該疾病或病症的風險的對象。

在另一個非限制性實例中，將本發明的AGT dsRNA試劑施用以治療指因腎素-血管緊張素-醛固酮系統(RAAS)激活導致或與其相關的疾病或障礙，或其症狀或進展響應于RAAS失活的疾病或障礙。術語“血管緊張素原相關疾病”包括因AGT表達降低而受益的疾病、障礙或病症。這類疾病通常與高的血壓相關。血管緊張素原相關疾病的非限制實例包括高血壓，例如，臨界性高血壓(也稱爲高血壓前期)、原發性高血壓(也稱爲本態性高血壓或特發性高血壓)、繼發性高血壓(也稱爲非本態性高血壓)、孤立性收縮期或舒張期高血壓、妊娠相關高血壓(例如，先兆子癇、子癇和産後先兆子癇)、糖尿病性高血壓、頑固性高血壓、難治性高血壓、陣發性高血壓、腎血管性高血壓(也稱爲腎高血壓)、戈德布拉特氏高血壓、眼高壓、青光眼、肺動脉高血壓、門靜脉高血壓、系統性靜脉高血壓、收縮期高血壓、不穩定性高血壓；高血壓性心臟病、高血壓性腎病、動脉粥樣硬化、動脉硬化、血管病變(包括外周血管疾病)、糖尿病性腎病、糖尿病性視網膜病、慢性心力衰竭、心肌病、糖尿病性心肌病、腎小球硬化症、主動脉縮窄、主動脉瘤、心室纖維化、睡眠呼吸暫停、心力衰竭(例如，左心室收縮功能障礙)、心肌梗塞、心絞痛、中風、腎疾病(例如，慢性腎臟病或糖尿病性腎病變，任選地在妊娠的情况中)、腎衰竭(例如，慢性腎衰竭)、認知障礙（例如，阿爾茨海默病）和全身性硬化(例如，硬皮病腎危象)。在某些實施方式中，AGT相關疾病包括宮內發育遲緩(IUGR)或胎兒生長受限。

可應用本發明方法的細胞包括體外、體內、離體細胞。細胞可以在對象中、在培養物中和/或混懸液中，或處于任何其他合適的狀態或條件中。可以應用本發明的方法的細胞可以是：肝臟細胞（liver cell）、肝細胞（hepatocyte）、心臟細胞、胰腺細胞、心血管細胞、腎細胞或其他類型的脊椎動物細胞，包括人和非人哺乳動物細胞。在本發明的某些方面，可應用本發明方法的細胞是健康的正常細胞，其未知爲疾病細胞。在本發明的某些實施方案中，將本發明的方法和組合物應用于肝臟細胞、肝細胞、心臟細胞、胰腺細胞、心血管細胞和/或腎細胞的細胞。在本發明的某些方面，對照細胞是正常細胞，但應當理解，具有疾病或病症的細胞也可以在特定情况下用作對照細胞，例如在比較具有疾病或病症的經處理細胞與具有疾病或病症的未處理細胞的結果等的情况下。

根據本發明的方法，可以確定AGT多肽活性的水平幷將其與AGT多肽活性的對照水平進行比較。對照可以是預定值，其可以采取多種形式。它可以是單個截止值，例如中位數或平均值。它可以基于比較組來建立，例如在具有正常水平的AGT多肽和/或AGT多肽活性的組和具有增加的AGT多肽和/或AGT多肽活性水平的組中。比較組的另一個非限制性實例可以是具有AGT相關疾病或病症的一種或更多種症狀或診斷的群體與沒有疾病或病症的一種或更多種症狀或診斷的群體；已對其施用本發明的siRNA治療的對象組與未對其施用本發明的siRNA治療的對象組。通常，對照可以基于適當年齡組中的明顯健康的正常個體或明顯健康的細胞。應當理解，除了預定值之外，根據本發明的對照可以是與實驗材料平行測試的材料樣品。示例包括來自對照群體的樣品或通過製造産生的對照樣品，以用于與實驗樣品進行平行測試。在本發明的一些實施方案中，對照可包括未用本發明的AGT dsRNA試劑接觸或處理的細胞或對象，在這種情况下，可以比較AGT多肽和/或AGT多肽活性的對照水平以及與本發明的AGT dsRNA試劑或AGT反義多核苷酸試劑接觸的細胞或對象中AGT多肽和/或AGT多肽活性的水平。

在本發明的一些實施方案中，對照水平可以是爲對象確定的AGT多肽水平，其中將在不同時間爲同一對象確定的AGT多肽水平與該對照水平進行比較。在一個非限制性實例中，在從未接受過本發明的AGT治療的對象獲得的生物樣品中確定AGT的水平。在一些實施方案中，生物樣品是血清樣品。從對象獲得的樣品中測定的AGT多肽水平可作爲對象的基綫或對照值。在本發明的治療方法中向對象施用一次或更多次AGT dsRNA試劑之後，可以從對象獲得一個或更多個另外的血清樣品，幷且可以將隨後的一個或更多個樣品中的AGT多肽水平與對象的對照/基綫水平進行比較。此類比較可用于評估對象中AGT相關疾病或病症的發作、進展或消退。例如，從對象獲得的基綫樣品中AGT多肽的水平高于在給予對象本發明的AGT dsRNA試劑或AGT反義多核苷酸試劑後從同一對象獲得的水平，則表示AGT相關疾病或病症的消退幷且表示施用的本發明的AGT dsRNA試劑治療AGT相關疾病或病症産生的功效。

在本發明的某些方面，爲對象確定的AGT多肽和/或AGT多肽活性水平中的一個或更多個值可以作爲對照值，幷用于稍後在同一對象中比較AGT多肽和/或AGT活性水平，從而允許評估對象中“基綫”AGT多肽活性的變化。因此，將初始水平用作該對象的對照水平的情况下，初始AGT多肽水平和/或初始AGT多肽活性水平可以用于顯示和/或確定本發明的方法和化合物在對象中所能够降低對象中AGT多肽和/或AGT多肽活性的水平。

使用本發明的方法，可以將本發明的AGT dsRNA試劑和/或AGT反義多核苷酸試劑施用于對象。這樣的dsRNAi試劑包括例如表1中所顯示的雙鏈體AD00051至AD00122-19-2、AD00163-3、AV01227至AVAV01257、AV01711。在一些實施方案中，優選的dsRNAi試劑包括例如雙鏈體AD00158、AD00163、AD00163-3、AD00159、AD00290、AD00300或AD00122。在另一些實施方案中，優選的dsRNAi試劑包括例如AD00158-1、AD00158-2、AD00163-1、AD00159-1或AD00300-1。在其他一些實施方案中，這樣的dsRNAi試劑包括雙鏈體變體，例如雙鏈體AD00158、AD00163、AD00163-3、AD00159、AD00290、AD00300或AD00122的變體。可以如下評估本發明的施用和治療的功效：與先前時間點從對象獲得的血清樣品中AGT多肽的給藥前水平相比，或與非接觸對照水平（例如對照血清樣品中的AGT多肽水平）相比，當施用和治療後，從對象獲得的血清樣品中AGT多肽的水平降低至少0.5%、1%、5%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80 %、90%、95%或更多。應當理解，AGT多肽的水平和AGT多肽活性的水平都與AGT基因表達的水平相關。本發明方法的某些實施方案包括以有效抑制AGT基因表達的量向對象施用本發明的AGT dsRNA和/或AGT反義試劑，從而降低對象中AGT多肽的水平幷降低AGT多肽活性的水平。

本發明的一些實施方案包括從一個或更多個對象獲得的一個或更多個生物樣品中確定AGT多肽的存在、不存在和/或量（本文也稱爲水平）。該測定可用于評估本發明的治療方法的功效。例如，本發明的方法和組合物可用于確定生物樣品中AGT多肽的水平，該生物樣品獲自先前用施用本發明的AGT dsRNA試劑和/或AGT反義劑治療的對象。與先前時間點從對象獲得的血清樣品中AGT多肽的給藥前水平相比，或與非接觸對照水平（例如對照血清樣品中的AGT多肽水平）相比，當施用和治療後，從對象獲得的血清樣品中AGT多肽的水平降低至少0.5%、1%、5%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80 %、90%、95%或更多，則表明給予對象的治療的功效水平。

在本發明的一些實施方案中，針對對象確定的AGT相關疾病或病症的生理特徵可以作爲對照結果，幷將同一對象在不同時間的生理特徵的確定結果與對照結果進行比較。在一個非限制性實例中，血壓 （和/或AGT疾病或病症的其他生理特徵）測量自從未給予本發明的AGT治療的對象，其可用作對象的基綫或對照值。在本發明的治療方法中向對象施用一次或更多次AGT dsRNA試劑之後，測量血壓幷分別與對象的對照/基綫水平進行比較。此類比較可用于評估對象中AGT相關疾病或病症的發作、進展或消退。例如，從對象獲得的基綫血壓高于在對對象施用本發明的AGT dsRNA試劑或AGT反義多核苷酸試劑後從同一對象測定的血壓，則表示AGT相關疾病或病症的消退幷且表示施用的本發明的AGT dsRNA試劑治療AGT相關疾病或病症的功效。

在本發明的一些方面，爲對象確定的AGT相關疾病或病症的一種或更多種生理特徵的值可以作爲對照值，用于稍後對同一對象的生理特徵進行比較，從而允許評估對象“基綫”生理特徵的變化。因此，可以獲得個體中的初始生理特徵，用初始生理特徵測定作爲該對象的對照，幷且顯示和/或確定本發明的方法和化合物可用于降低個體中AGT多肽的水平和/或AGT多肽活性的效果。使用本發明的方法，本發明的AGT dsRNA試劑和/或AGT反義多核苷酸試劑可以以治療AGT疾病或病症的有效量施用于對象。可以通過確定AGT疾病或病症的一種或更多種生理特徵的變化來評估本發明的施用和治療的功效。在一個非限制性實例中，與先前時間點從對象獲得血壓相比，或與非接觸對照血壓進行比較，對象血壓降低至少0.5 mmHg, 1 mmHg, 2 mmHg, 3 mmHg, 4 mmHg, 5 mmHg, 6 mmHg, 7 mmHg, 8 mmHg, 9 mmHg, 10 mmHg, 11 mmHg, 12 mmHg, 13 mmHg, 14 mmHg, 15 mmHg, 16 mmHg, 17 mmHg, 18 mmHg, 19 mmHg, 20 mmHg或更多，直到對象的血壓處于正常範圍內。

本發明的一些實施方案包括使用例如但不限于以下方法確定AGT相關疾病或病症的生理特徵的存在、不存在和/或變化：(1) 測量對象的血壓; (2)評估從一名或更多名對象獲得的一份或更多份生物樣品的生理特徵；(3) 或對對象進行身體檢查。該測定可用于評估本發明的治療方法的功效。

藥盒

包含一種或更多種AGT dsRNA試劑和/或AGT反義多核苷酸試劑及其在本發明方法中的使用說明的藥盒也在本發明的範圍內。本發明的藥盒可包含可用于治療AGT相關疾病或病症的AGT dsRNA試劑、AGT正義多核苷酸和AGT反義多核苷酸試劑中的一種或更多種。可以製備包含一種或更多種AGT dsRNA試劑、AGT正義多核苷酸和AGT反義多核苷酸試劑的藥盒以用于本發明的治療方法。本發明藥盒的組分可以以水性介質或凍幹形式包裝。本發明的藥盒可以包含被分隔開以在其中封閉地收納一個或更多個容器裝置或一系列容器裝置（例如試管、小瓶、燒瓶、瓶子、注射器等）的載體。第一容器裝置或一系列容器裝置可包含一種或更多種化合物，例如AGT dsRNA試劑和/或AGT正義或反義多核苷酸試劑。第二容器裝置或一系列容器裝置可包含靶向劑、標記劑、遞送劑等，其可作爲在本發明的治療方法的實施方案中施用的AGT dsRNA試劑和/或AGT反義多核苷酸的一部分包括在內。

本發明的藥盒還可包含說明書。說明通常采用書面形式，幷且將爲執行由藥盒體現的治療和基于該治療做出决定提供指導。

提供以下實施例以說明本發明實踐的具體實例，其幷不旨在限制本發明的範圍。對本領域普通技術人員來說明顯的是，本發明可應用于多種組合物和方法。

實施例

實施例1.RNAi試劑的合成

上表 2-4 中所示的 AGT RNAi 試劑雙鏈體是根據以下通用程序合成的：

使用基于亞磷醯胺化學的成熟固相合成方法，在寡核苷酸合成儀上合成siRNA的正義和反義鏈序列。寡核苷酸鏈的增長是通過4步循環實現的：去保護、縮合、加帽和用于添加每個核苷酸的氧化或硫化步驟。合成是在由可控多孔玻璃（CPG, 1000 Å）製成的固體支持物上進行的。單體亞磷醯胺購自商業來源。根據本文實施例2-3的程序合成具有GalNAc配體簇的亞磷醯胺（GLPA1和GLPA2作爲非限制性實例）。對于用于體外篩選的 siRNA（表2），合成是在2 μmol 規模下進行的；對于用于體內測試的 siRNA（表3、4），合成規模爲5 μmol 或更大。在GalNAc配體（作爲非限制性實例的 GLO-0）連接在正義鏈的3'-末端的情况下，使用連接有GalNAc配體的CPG固體支持物。在GalNAc配體（GLS-1或GLS-2作爲非限制性實例）連接在正義鏈的5'-末端的情况下，將GalNAc亞磷醯胺（GLPA1或GLPA2作爲非限制性實例）用于最後的偶聯反應。將3%二氯甲烷中的三氯乙酸（TCA）用于4,4'-二甲氧基三苯甲基保護基 （DMT）的脫保護。5-乙硫基-1H-四唑用作活化劑。THF/Py/H ₂O中的I ₂和吡啶/MeCN中的苯乙醯二硫化物（PADS）分別用于氧化和硫化反應。在最後的固相合成步驟之後，通過用1:1體積的40wt%甲胺水溶液和28%氫氧化銨溶液處理來切割固體載體結合的低聚物幷去除保護基團。爲了合成用于體外篩選的siRNA，將粗混合物濃縮。將剩餘的固體溶解在1.0 M NaOAc中，加入冰冷的EtOH以沉澱出作爲鈉鹽的單鏈産物，其無需進一步純化即可用于退火。爲了合成用于體內測試的siRNA，粗單鏈産物通過離子對反相HPLC（IP-RP-HPLC）進一步純化。通過將來自IP-RP-HPLC的純化單鏈寡核苷酸産物溶解在1.0 M NaOAc中幷通過添加冰冷的 EtOH 進行沉澱，將其轉化爲鈉鹽。在水中通過等摩爾互補進行正義鏈和反義鏈寡核苷酸的退火，以形成雙鏈siRNA産物，將其凍幹以提供蓬鬆的白色固體。

實施例2.中間體-A和中間體-B的製備

如以下方案1所示，通過在二氯甲烷（DCM）中用三甲基甲矽烷基三氟甲磺酸酯（TMSOTf）處理市售的半乳糖胺五乙酸酯來合成中間體-A。然後用Cbz保護的2-(2-氨基乙氧基)乙-1-醇進行糖基化，得到化合物II。通過氫化除去Cbz保護基團以提供作爲三氟乙酸鹽（TFA）鹽的中間體-A。除了使用Cbz保護的2-(2-(2-氨基乙氧基)乙氧基)乙-1-醇作爲原料之外，中間體B基于相同的方案合成。

方案1

向化合物I（20.0 g, 51.4 mmol）在 100 mL 1,2-二氯乙烷（DCE）中的溶液中加入TMSOTf（17.1 g, 77.2 mmol）。將所得反應溶液在60°C下攪拌2小時，然後在25°C下攪拌1小時；Cbz保護的2-(2-氨基乙氧基)乙-1-醇（13.5 g, 56.5 mmol）在DCE（100 mL）中用4 Å粉末分子篩（10 g）乾燥，在N ₂氣氛下在0°C滴加到上述反應溶液中。在N ₂氣氛下，將所得反應混合物在25℃下攪拌16小時。過濾反應混合物幷用飽和NaHCO ₃（200mL）、水（200mL）和飽和鹽水（200mL）洗滌。有機層經無水Na ₂SO ₄乾燥，過濾幷减壓濃縮，得到粗産物，將其與2-甲基四氫呋喃/庚烷（5/3，v/v，1.80L）一起研磨2小時。將所得混合物過濾幷乾燥以得到呈白色固體狀的化合物II（15.0g，産率50.3％）。

將 10% Pd/C（1.50 g）小心地加入到乾燥和氬氣吹掃的氫化瓶中，然後加入10毫升四氫呋喃（THF），然後是化合物II（15.0克，26.4毫摩爾）在THF（300毫升）和TFA（三氟乙酸，3.00克，26.4毫摩爾）中的溶液。將所得混合物脫氣幷用H ₂吹掃3次幷在H ₂（45 psi）氣氛下在25℃下攪拌3小時。薄層色譜法（TLC，溶劑：DCM:MeOH = 10:1）表明化合物II已完全消耗。過濾反應混合物幷减壓濃縮。將殘餘物溶解在無水DCM（500mL）中幷濃縮。該過程重複3次以得到呈泡沫狀白色固體的中間體-A（14.0g，産率96.5%）。 ¹H NMR (400 MHz DMSO- d ₆ ): δ ppm 7.90 (d, J= 9.29 Hz, 1 H), 7.78 (br s, 3 H), 5.23 (d, J= 3.26 Hz, 1 H), 4.98 (dd, J= 11.29, 3.26 Hz, 1 H), 4.56 (d, J= 8.53 Hz, 1 H), 3.98 - 4.07 (m, 3 H), 3.79 - 3.93 (m, 2 H), 3.55 - 3.66 (m, 5 H), 2.98 (br d, J= 4.77 Hz, 2 H), 2.11 (s, 3 H), 2.00 (s, 3 H), 1.90 (s, 3 H), 1.76 (s, 3 H)。

使用與合成中間體-A類似的程序合成中間體-B。 ¹H NMR (400 MHz DMSO- d ₆ ): δ ppm 7.90 (br d, J= 9.03 Hz, 4 H), 5.21 (d, J= 3.51 Hz, 1 H), 4.97 (dd, J= 11.1 Hz, 1 H), 4.54 (d, J= 8.53 Hz, 1 H), 3.98 - 4.06 (m, 3 H), 3.88 (dt, J= 10.9 Hz, 1 H), 3.76 - 3.83 (m, 1 H), 3.49 - 3.61 (m, 9 H), 2.97 (br s, 2 H), 2.10 (s, 3 H), 1.99 (s, 3 H), 1.88 (s, 3 H), 1.78 (s, 3 H).計算質譜C ₂₀H ₃₄N ₂O ₁₁: 478.22; 實測: 479.3 (M+H ⁺)。

實施例3.GalNAc配體簇亞磷醯胺GLPA1、GLPA2和GLPA15的合成。

按照以下方案2製備GLPA1和GLPA2。從苄基保護的丙烷-1,3-二胺開始，用2-溴乙酸叔丁酯對其進行烷基化，得到三酯化合物I。通過氫化除去苄基保護基，得到仲胺化合物II。將醯胺與6-羥基己酸偶聯得到化合物III。然後在用二氧六環中的HCl處理時除去叔丁基保護基以生成三酸化合物IV。進行三酸化合物IV和中間體-A或中間體-B之間的醯胺偶聯以提供化合物Va或Vb。亞磷醯胺GLPA1或GLPA2是通過化合物Va或Vb與2-氰乙基N,N-二异丙基氯亞磷醯胺和催化量的1H-四唑的亞磷酸化合成的。

方案2

向N-苄基-1,3-丙二胺（5.00 g, 30.4 mmol）在二甲基甲醯胺（DMF, 100 mL）中的溶液中加入2-溴乙酸叔丁酯（23.7 g, 121 mmol）；然後滴加二异丙基乙胺（DIEA，23.61g，182mmol）。將所得反應混合物在25-30°C攪拌16小時。 LCMS顯示 N-苄基-1,3-丙二胺被完全消耗。反應混合物用H ₂O（500mL）稀釋幷用EtOAc（500mL×2）萃取。合幷的有機物用飽和鹽水（1L）洗滌，用無水Na ₂SO ₄乾燥，過濾，减壓濃縮，得到粗産物；經矽膠柱層析純化（梯度：石油醚:乙酸乙酯20:1至5:1）。獲得無色油狀化合物I（12.1g，産率78.4%）。 ¹H NMR (400 MHz, CDCl ₃): δ ppm 7.26 - 7.40 (m, 5 H), 3.79 (s, 2 H), 3.43 (s, 4 H), 3.21 (s, 2 H), 2.72 (dt, J= 16.9, 7.34 Hz, 4 H), 1.70 (quin, J= 7.2 Hz, 2 H), 1.44 - 1.50 (m, 27 H)。

乾燥的氫化瓶用氬氣吹掃3次。加入Pd/C（200mg，10％），然後加入MeOH（5mL），然後加入化合物I（1.00g，1.97mmol）在MeOH（5mL）中的溶液。反應混合物在真空下脫氣幷重新填充H ₂。這個過程重複3次。將混合物在H ₂（15 psi）氣氛下在25°C攪拌12小時。LCMS顯示化合物I被完全消耗。在N ₂氣氛下减壓過濾反應混合物。减壓濃縮濾液，得到黃色油狀化合物II（655mg，産率79.7%），其無需進一步純化即可用于下一步。 ¹H NMR (400 MHz, CDCl ₃): δ ppm 3.44 (s, 4 H), 3.31 (s, 2 H), 2.78 (t, J= 7.1 Hz, 2 H), 2.68 (t, J= 6.9 Hz, 2 H), 1.88 (br s, 1 H), 1.69 (quin, J= 7.03 Hz, 2 H), 1.44 - 1.50 (s, 27 H)。

化合物II（655mg，1.57mmol）、6-羥基己酸（249mg，1.89mmol）、DIEA（1.02g，7.86mmol）、1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽（EDCI，904mg，4.72mmol）和1-羥基苯幷三唑（HOBt，637mg，4.72mmol）的DMF（6mL）溶液的混合物脫氣幷用N ₂吹掃3次；然後在N ₂氣氛下在 25°C攪拌3小時。LCMS指示所需産物。反應混合物用H ₂O（10mL）稀釋幷用EtOAc 20mL（10mL×2）萃取。合幷有機物幷用飽和鹽水（20mL）洗滌，經無水Na ₂SO ₄乾燥，過濾幷濃縮以得到粗産物；將其通過矽膠柱色譜法（梯度：石油醚:乙酸乙酯從5:1至1:1）純化，得到呈黃色油狀的化合物III（650mg，産率77.8%）。 ¹H NMR (400 MHz, CDCl ₃): δ ppm 3.90 - 3.95 (s, 2 H), 3.63 (t, J= 6.40 Hz, 2 H), 3.38 - 3.45 (m, 6 H), 2.72 (t, J= 6.65 Hz, 2 H), 2.40 (t, J= 7.28 Hz, 2 H), 1.55 - 1.75 (m, 8 H), 1.44 (s, 27 H). 計算質譜C ₂₇H ₅₀N ₂O ₈: 530.36; 實測: 531.3 (M+H ⁺)。

將化合物III（5.5g，10.3mmol）在HCl/二氧六環（2M，55mL）中的混合物在25℃下攪拌3小時。LCMS顯示完全消耗化合物III。過濾反應混合物，用EtOAc（50mL）洗滌，减壓乾燥，得到粗産物。將其溶解在CH ₃CN（50mL）中，真空除去揮發物。重複該過程3次以得到呈白色固體狀的化合物IV（2.05g，産率54.5％）。 ¹H NMR (400 MHz, D ₂O): δ ppm 4.21 (s, 1 H), 4.07 (d, J= 4.5 Hz, 4 H), 3.99 (s, 1 H), 3.45 - 3.52 (m, 3 H), 3.42 (t, J= 6.5 Hz, 1 H), 3.32 - 3.38 (m, 1 H), 3.24 - 3.31 (m, 1 H), 2.37 (t, J= 7.4 Hz, 1 H), 2.24 (t, J= 7.4 Hz, 1 H), 1.99 (dt, J= 15.5, 7.53 Hz, 1 H), 1.85 - 1.94 (m, 1 H), 1.85 - 1.94 (m, 1 H), 1.39 - 1.56 (m, 4 H), 1.19 - 1.31 (m, 2 H)。

將化合物IV（500 mg, 1.05 mmol）、中間體-A（2.02 g, 3.67 mmol）、DIEA （813 mg, 6.30 mmol）、EDCI（704 mg, 3.67 mmol）和在DMF（10 毫升）中的HOBt（496 mg, 3.67 mmol）的混合物脫氣幷用N ₂吹掃3次，然後將混合物在N ₂氣氛下在25°C攪拌3小時。LCMS 指示所需産物。通過加入H ₂O（10mL）淬滅反應混合物，用DCM（10mL×2）萃取。合幷的有機物用10%檸檬酸（20mL）萃取。水相用飽和NaHCO ₃溶液中和幷用DCM（10 mL x 2）再萃取。有機物經硫酸鈉乾燥，過濾幷在减壓下濃縮以産生呈白色固體狀的化合物Va（570mg，0.281mmol，産率26.8％）。 ¹H NMR: (400 MHz, CDCl ₃) ppm δ 7.84 - 8.12 (m, 3 H), 6.85 - 7.15 (m, 2 H), 6.66 - 6.81 (m, 1 H), 5.36 (br d, J= 2.7 Hz, 3 H), 5.11 - 5.27 (m, 3 H), 4.63 - 4.85 (m, 3 H), 3.90 - 4.25 (m, 18 H), 3.37 - 3.75 (m, 28 H), 3.15 - 3.28 (m, 4 H), 2.64 (br d, J= 6.53 Hz, 2 H), 2.30 - 2.46 (m, 2 H), 2.13 - 2.18 (m, 9 H), 2.05 (s, 9 H), 1.94 - 2.03 (m, 18 H), 1.68 (br s, 2 H), 1.45 (br s, 2 H), 1.12 (br t, J= 7.0 Hz, 2 H)。

向化合物Va（260 mg, 0.161 mmol）的無水DCM（5 mL）溶液中加入四唑二异丙基銨（30.3 mg, 0.177 mmol）；然後在環境溫度和N ₂下滴加3-雙(二异丙基氨基)膦醯氧基丙腈（194 mg, 0.645 mmol）。將反應混合物在20至25°C攪拌2小時。LCMS表明化合物Va被完全消耗。冷却至-20°C後，將反應混合物在0°C加入攪拌的鹽水/飽和NaHCO ₃（1:1，5mL）溶液。攪拌1分鐘後，加入DCM（5mL）。出現分層。有機層用鹽水/飽和 NaHCO ₃水溶液（1:1, 5 mL）洗滌，用Na ₂SO ₄乾燥，過濾幷濃縮至體積約1 mL。在攪拌下將殘餘溶液滴加到20mL甲基叔丁基醚（MTBE）中。這導致白色固體沉澱。將混合物離心，收集固體。將固體重新溶解在1mL DCM中幷通過加入MTBE（20mL）沉澱。再次通過離心分離固體。將收集的固體溶解在無水CH ₃CN中。除去揮發物。該過程再重複兩次，得到呈白色固體狀的GalNAc配體亞磷醯胺化合物GLPA1（153 mg, 84.4 μmol）。 ¹H NMR (400 MHz, CDCl ₃): ppm δ 7.71 - 8.06 (m, 2 H), 6.60 - 7.06 (m, 3 H), 5.37 (br d, J = 3.0 Hz, 3 H), 5.18 - 5.32 (m, 3 H), 4.70 - 4.86 (m, 3 H), 3.92 - 4.25 (m, 18 H), 3.42 - 3.85 (m, 30 H), 3.25 (m, 4 H), 2.59 - 2.75 (m, 4 H), 2.27 - 2.44 (m, 2 H), 2.15 - 2.20 (s, 9 H) 2.07 (s, 9 H), 1.96 - 2.03 (m, 18 H), 1.65 (br s, 4 H), 1.44 (br d, J = 7.28 Hz, 2 H), 1.14 - 1.24 (m, 12 H). ³¹P NMR (CDCl ₃): ppm δ 147.15.

除了使用中間體-B之外，使用相同的程序合成GalNAc配體亞磷醯胺化合物GLPA2。 ¹H NMR (400 MHz, CDCl ₃): ppm δ 7.94 - 8.18 (m, 1 H), 7.69 (br s, 1 H), 6.66 - 7.10 (m, 3 H), 5.35 (d, J= 3.5 Hz, 3 H), 5.07 - 5.25 (m, 3 H), 4.76 - 4.86 (m, 3 H), 4.01 - 4.31 (m, 10 H), 3.91 - 4.01 (m, 8 H), 3.74 - 3.86 (m, 4 H), 3.52 - 3.71 (m, 30 H), 3.42 - 3.50 (m, 6 H), 3.15 - 3.25 (m, 4 H), 2.52 - 2.70 (m, 4 H), 2.22 - 2.45 (m, 2 H), 2.15 - 2.22 (s, 9 H), 2.06 (s, 9 H), 1.95 - 2.03 (m, 18 H), 1.77 (br s, 2 H), 1.58 - 1.66 (m, 4 H), 1.40 (m, 2 H), 1.08 - 1.24 (m, 12 H). ³¹P NMR (CDCl ₃): ppm δ 147.12.

按照以下方案3製備GLPA15。

向中間體化合物II（275 g, 660 mmol, 1.00 eq.）的二氯甲烷(2.75 L)溶液中加入三乙胺(133 g, 1.32 mol, 2.00 eq.), 隨後滴加入Cbz-Cl (169 g, 990 mmol, 1.50 eq.)。反應液在25 °C 攪拌2小時，LCMS顯示化合物II完全轉化。反應液依次用 NaHCO ₃(800 mL)飽和溶液、飽和食鹽水（500 mL）洗滌，有機相用無水Na ₂SO ₄乾燥。過濾除去乾燥劑後，濾液濃縮至幹。該粗品經柱層析後(SiO ₂, PE/EA=100/1 to 5/1)得到無色油狀化合物 5(290 g, 527 mmol, 産率75.7%)。 ¹H NMR (400 MHz in DMSO-d ₆): δ ppm 7.23 - 7.40 (m, 5 H), 5.00 - 5.12 (m, 2 H), 3.86 - 3.95 (m, 2 H), 3.23 - 3.39 (m, 6 H), 2.55 - 2.67 (m, 2 H), 1.56 - 1.64 (m, 2 H), 1.31 - 1.46 (m, 27 H). MS (ESI) [M+H] ⁺m/z: 551.6 。

向化合物 5(145 g, 263 mmol, 1.00 eq) 中加入 HCOOH (2.9 L)，該溶液在 60 °C下攪拌12小時，LCMS顯示化合物 5轉化完全。向反應液中加入1.5 L甲苯 和1.5L乙腈，减壓濃縮至約500 mL, 隨後加入甲苯/乙腈（1:1，~750 mL) 幷濃縮至約500 mL, 然後加入乙腈(~1000 mL)幷濃縮至幹，粗品用700 mL乙腈在60 °C 粉碎2小時, 過濾。收集固體，乾燥得白色固體化合物 6(105 g, 定量)。 ¹H NMR (400 MHz in DMSO-d ₆): δ ppm 7.26 - 7.40 (m, 5 H), 5.02 - 5.10 (m, 2 H), 3.89 - 4.00 (m, 2 H), 3.36 - 3.45 (m, 4 H), 3.24 - 3.34 (m, 2 H), 2.59 - 2.72 (m, 2 H), 1.40 (s, 2 H). MS (ESI) [M+H] ⁺m/z: 383.0 。

向化合物 6(100 g, 261 mmol .)和中間體-A (502 g, 915. mmol, 3.50 eq.) 的DMF (1.0 L)溶液中加入TBTU(327 g, 1.02 mol, 3.90 eq.), 三乙胺 (212 g, 2.09 mol, 8.00 eq.)，反應在25 °C進行1小時，LCMS顯示化合物 6轉化完成。將反應液加入到 4000 mL水中, 幷用甲基叔丁基醚 (2000 mL 分兩次) 萃取除去雜質，剩餘水相用二氯甲烷(3000 mL 分兩次)萃取。二氯甲烷相依次用10%檸檬酸水溶液 (2000 mL 分兩次)、飽和 NaHCO ₃(2.0 L 分兩次), 飽和鹽水（2.0 L）洗滌, 無水Na ₂SO ₄乾燥。過濾得濾液，减壓濃縮得到白色固體化合物 8(260 g, 159 mmol, 産率60.9%) 。 ¹H NMR (400 MHz in DMSO-d ₆): δ ppm 7.99 - 8.08 (m, 2 H), 7.93 (br d, J=5.50 Hz, 1 H), 7.79 - 7.86 (m, 3 H), 7.26 - 7.39 (m, 5 H), 5.22 (d, J=3.13 Hz, 3 H), 4.95 - 5.08 (m, 5 H), 4.54 (br d, J=8.38 Hz, 3 H), 4.03 (s, 9 H), 3.81 - 3.93 (m, 5 H), 3.76 (br d, J=4.88 Hz, 3 H), 3.44 - 3.62 (m, 10 H), 3.34 - 3.43 (m, 6 H), 3.24 (br d, J=6.13 Hz, 7 H), 3.02 - 3.09 (m, 4 H), 2.40 - 2.47 (m, 2 H), 2.10 (s, 9 H), 1.99 (s, 9 H), 1.89 (s, 9 H), 1.77 (s, 9 H), 1.57 - 1.68 (m, 2 H)。 MS (ESI) [M+H] ⁺m/z: 816.4 。

用氬氣惰性化2 L氫化釜幷小心加入幹Pd/C (9 g)，加入 MeOH (50 mL) 潤濕Pd/C , 然後在氬氣氣氛下緩慢加入化合物 8(90 g, 55.1 mmol, 1.00 eq.) 和三氟乙酸 (6.29 g, 55.1 mmol, 1.00 eq.) 的MeOH (850 mL)溶液。混合物經脫氣/加H ₂三次置換爲氫氣氣氛，在25 °C攪拌10小時。LCMS顯示化合物 8轉化完全，過濾除去Pd/C，濾液經减壓濃縮得到化合物 9(80 g, 産率90.2%). ¹H NMR (400 MHz in DMSO-d ₆): δ ppm 9.12 (br s, 2 H), 8.50 (br t, J=5.19 Hz, 1 H), 8.10 (br t, J=5.50 Hz, 2 H), 7.85 - 7.91 (m, 3 H), 5.22 (d, J=3.25 Hz, 3 H), 4.95 - 5.01 (m, 3 H), 4.52 - 4.58 (m, 3 H), 4.03 (s, 9 H), 3.84 - 3.93 (m, 3 H), 3.75 - 3.83 (m, 3 H), 3.39 - 3.61 (m, 16 H), 3.23 - 3.32 (m, 6 H), 3.15 - 3.18 (m, 3 H), 2.97 - 3.05 (m, 2 H), 2.54 - 2.61 (m, 2 H), 2.10 (s, 9 H), 2.00 (s, 9 H), 1.89 (s, 9 H), 1.77 - 1.80 (m, 9 H), 1.70 - 1.76 (m, 2 H). MS (ESI) [M+H] ⁺m/z: 749.3 。

向化合物 9(270 g, 168 mmol, 1.00 eq.)和戊二酸酐 (28.6 g, 252 mmol, 1.50 eq) 的二氯甲烷(2.7 L) 溶液中加入三乙胺(67.8 g, 672 mmol, 4.00 eq)，該溶液在25 °C 攪拌1小時，LCMS顯示化合物 9完全轉化爲化合物 11。向反應液中加入4-羥基呱啶(42.4 g, 420 mmol, 2.50 eq.)和 TBTU(107 g, 335 mmol, 2.00 eq.)， 幷在25 °C繼續攪拌1小時。LCMS顯示化合物 11轉化完全。 緩慢加入飽和NH ₄Cl (3.0 L)淬滅反應，分層，水相用二氯甲烷(2 x 1000 mL) 萃取幷與先前的有機相合幷。合幷的有機相用飽和NaHCO ₃(aq)和飽和鹽水的1:1混合液(3.0 L)洗滌, 用無水Na ₂SO ₄乾燥, 過濾减壓濃縮。粗品溶于1.5 L二氯甲烷, 滴加到甲基叔丁基醚 (7.5 L)中, 半透明的白色沉澱在滴加過程中逐漸形成。真空過濾沉澱，收集固體真空乾燥得到白色固體化合物 13(207 g, 産率72.8%) 。 ¹H NMR (400 MHz in DMSO-d ₆): δ ppm 8.05 (br d, J=2.00 Hz, 2 H), 7.82 (br d, J=7.38 Hz, 3 H), 5.21 (br s, 3 H), 4.98 (br d, J=10.26 Hz, 3 H), 4.72 (br s, 1 H), 4.54 (br d, J=7.88 Hz, 3 H), 4.03 (br s, 9 H), 3.74 - 3.94 (m, 9 H), 3.45 - 3.71 (m, 12 H), 3.40 (br s, 6 H), 3.24 (br s, 7 H), 3.07 (br d, J=14.13 Hz, 5 H), 2.91 - 3.01 (m, 1 H), 2.24 - 2.44 (m, 5 H), 2.20 (br s, 1 H), 2.10 (s, 9 H), 1.96 - 2.04 (m, 9 H), 1.89 (br s, 9 H), 1.74 - 1.81 (m, 9 H), 1.51 - 1.73 (m, 6 H), 1.07 - 1.36 (m, 3 H). MS (ESI) [M+H] ⁺m/z: 848.0。

向化合物 13(200 g, 118 mmol, 1.00 eq.)、四唑二异丙基銨 (8.08 g, 47.2 mmol, 0.40 eq) 的二氯甲烷 (2.0 L) 溶液中加入3-雙(二异丙基氨基)膦醯氧基丙腈，（53.3 g, 177 mmol, 1.50 eq.)，反應液在40 °C 攪拌2小時，LCMS顯示化合物13轉化完成。反應液用飽和 NaHCO3 和飽和食鹽水的1:1混合液(2.0 L)洗滌, 經無水Na2SO4乾燥，濾液濃縮後所得粗品溶于二氯甲烷(1.2 L), 滴加到攪拌的甲基叔丁基醚 (6.0 L)中, 過濾懸濁液, 濾餅用基叔丁基醚淋洗, 收集固體進行真空乾燥, 將産品溶于二氯甲烷(1.0 L)幷濃縮至幹，重複操作4次以除去殘留叔丁基醚得到GLPA15 (164 g, 産率73.3%). 1H NMR (400 MHz in DMSO-d6): δ ppm 8.05 (br d, J = 6.50 Hz, 2 H), 7.81 (br d, J=9.01 Hz, 3 H), 5.22 (d, J=3.25 Hz, 3 H), 4.98 (dd, J=11.26, 3.25 Hz, 3 H), 4.55 (br d, J=8.50 Hz, 3 H), 4.03 (s, 9 H), 3.64 - 3.97 (m, 12 H), 3.55 - 3.63 (m, 6 H), 3.50 (br s, 5 H), 3.40 (br d, J=6.13 Hz, 6 H), 3.17 - 3.30 (m, 9 H), 3.07 (br d, J=14.26 Hz, 4 H), 2.76 (t, J=5.82 Hz, 2 H), 2.18 - 2.47 (m, 6 H), 2.10 (s, 9 H), 1.99 (s, 9 H), 1.89 (s, 9 H), 1.78 (s, 9 H), 1.52 - 1.74 (m, 6 H), 1.12 - 1.19 (m, 12 H). 31P NMR (DMSO-d6): ppm δ 145.25. MS (ESI) [M+H]+ m/z: 1895.7。

在某些研究中，提供了用于將包含GalNAc（本文也稱爲GalNAc遞送化合物）的靶向基團連接到正義鏈的5'-末端的方法，其包括在固相合成的最後一個偶聯步驟中使用GalNAc亞磷醯胺（GLPA1），使用這樣的合成工藝，例如在寡核苷酸鏈延長時使用的（即在正義鏈的5'末端添加核苷酸）工藝，以將其連接到正義鏈的5'-末端。

在一些研究中，將包含GalNAc的靶向基團連接到正義鏈的3'-末端的方法包括使用包含GLO-n的固體支持物（CPG）。在一些研究中，將包含GalNAc的靶向基團連接到正義鏈的 3'-末端的方法包括：將 GalNAc 靶向基團通過酯鍵連接到CPG固體支持物上，幷在合成正義鏈時使用帶有連接的GalNAc靶向基團的所得CPG，這導致GalNAc靶向基團連接在正義鏈的3'-末端。 其他GalNAc亞磷醯胺化合物（GLPAn）也同樣可以在使用合理對應的中間體後，采用本文類似或者本領域中熟知的方法獲得，幷作爲靶向基團連接到siRNA雙鏈體合適的位置。

實施例 4. AGT siRNA雙鏈體的體外篩選

Hep3B細胞用胰蛋白酶消化幷調整到合適的密度，然後接種到 96 孔板中。根據製造商的建議，在接種的同時，使用Lipofectamine RNAiMax （Invitrogen -13778-150）用測試siRNA或對照siRNA轉染細胞。siRNA以兩個濃度（0.2 nM至1.0 nM）一式三份進行測試，而對照 siRNA 以從4.6 pM到10 nM 依次3倍稀釋的8種濃度進行測試，一式三份。

轉染後24小時，去除培養基幷收穫細胞用于RNA提取。根據手册使用TRIzol™ Reagent (Invitrogen - 15596018)提取總RNA。

根據手册，使用PrimeScript™ RT試劑盒和gDNA Eraser (Perfect Real Time) (TaKaRa-RR047A)合成cDNA。通過qPCR檢測AGT cDNA。平行檢測GAPDH cDNA作爲內部對照。PCR如下進行：在95 °C下進行30秒，然後以在95 °C下10秒、在60 °C下30秒的循環進行40個循環。

數據分析

使用比較性Ct（ΔΔCt）方法，通過相對定量（RQ）確定每個樣品中AGT基因的表達；該方法測量靶基因和看家基因（GAPDH）之間的 Ct 差异（ΔCt）。

方程式列出如下：

ΔCT = 靶基因平均 Ct– GAPDH平均Ct

ΔΔCT=ΔCT (樣品) –ΔCT (隨機對照或Lipofectamine RNAiMax對照);

靶基因mRNA的相對定量 = 2^(-ΔΔCT)

抑制%= (對照的相對定量–樣品的相對定量)/對照的相對定量×100%。

表5提供了使用多種AGT RNAi試劑抑制AGT表達的體外研究的實驗結果；使用的雙鏈序列對應于表 2 中所示的化合物。

雙鏈體AD#	平均抑制%
1 nM	0.2 nM
平均	SD	平均	SD
AD00051	63.49	5.27	57.80	4.84
AD00053	82.93	1.46	60.04	3.22
AD00054	81.76	0.05	27.18	12.85
AD00055	63.11	2.61	27.67	13.05
AD00056	44.67	3.42	-10.57	8.88
AD00057	38.36	1.00	6.39	2.89
AD00058	-6.34	7.17	-10.93	13.00
AD00059	40.95	2.41	-15.25	11.41
AD00060	41.58	1.21	1.71	1.62
AD00061	34.74	7.07	-52.46	7.61
AD00062	11.16	3.26	-27.82	22.96
AD00063	25.99	1.34	-28.28	34.49
AD00064	48.56	10.83	-22.86	4.06
AD00065	17.68	12.71	-19.42	11.46
AD00066	74.76	0.61	32.99	9.82
AD00067	-15.01	11.39	-70.58	12.60
AD00068	48.42	7.31	10.85	3.85
AD00070	14.21	6.91	-41.65	19.32
AD00071	71.20	0.94	40.90	9.35
AD00072	58.69	3.25	-30.13	4.78
AD00073	23.87	7.61	-10.98	10.03
AD00074	78.21	3.00	-13.57	4.32
AD00075	38.92	2.08	20.51	2.14
AD00076	73.89	1.40	52.43	1.99
AD00077	73.85	1.28	56.13	1.41
AD00078	51.59	4.46	-24.43	20.40
AD00079	90.61	0.61	76.62	5.02
AD00080	88.44	1.14	16.00	15.09
AD00081	88.79	1.96	29.91	20.77
AD00082	77.98	0.45	60.15	10.15
AD00083	-25.46	6.04	-24.08	6.71
AD00084	29.29	3.07	-19.97	13.61
AD00085	54.82	2.64	6.94	4.85
AD00086	61.17	2.03	26.87	16.50
AD00087	52.12	5.08	-42.78	64.89
AD00088	17.16	13.36	-25.66	4.89
AD00090	72.23	5.81	14.30	6.12
AD00091	27.41	2.11	-53.58	26.95
AD00092	78.93	0.53	29.92	2.95
AD00093	80.84	0.97	30.70	14.04
AD00094	57.64	7.56	35.89	9.00
AD00095	63.51	1.25	28.95	12.77
AD00097	81.91	2.26	37.49	7.94
AD00098	74.20	0.29	57.41	2.59
AD00099	53.49	2.05	1.42	22.51
AD00100	88.90	0.91	62.84	5.16
AD00101	66.98	2.39	11.83	13.72

實施例5. AGT siRNA雙鏈體的體內測試

爲了評估AGT siRNA的體內活性，使用了感染了編碼人AGT基因的AAV的小鼠（每組4只小鼠）。在siRNA給藥前14天，對雌性C57BL/6J小鼠通過靜脉注射1x10^11 viral particle of 編碼人AGT基因的腺相關病毒8（AAV8）載體的原液來進行感染。在第0天，小鼠皮下注射單劑量2.5mg/kg or 3 mg/kg的AGT siRNA試劑或PBS。在第0天、siRNA給藥前和第7天終止時收集血樣。根據製造商推薦的方案（IBL America ，人血管緊張素原ELISA 藥盒），通過 ELISA 測定法測量人AGT蛋白濃度。通過比較siRNA處理組和PBS處理組的第7天小鼠肝臟中人AGT mRNA水平（qPCR確定）或血漿樣品中的人AGT蛋白水平來計算敲低百分比。結果如表6-9所示。

表6. AAV-人AGT轉導小鼠中的AGT單次3 mpk劑量篩選 ； 使用對應于表 3 中所示的序列、化學修飾和遞送的GalNAc，其中GLO-0爲Jayaprakash , et al., (2014) J. Am. Chem. Soc., 136, 16958-16961中的GalNAc ₃所示的遞送配體。

ID#	通過qPCR測量的小鼠肝臟中人AGT mRNA的敲低百分比	通過ELISA測量的小鼠血漿中人AGT的敲低百分比
AD00052	86%	67%
AD00113	39%	20%
AD00114	78%	NA
AD00115	81%	NA
AD00116	88%	NA
AD00122	95%	83%
AD00123	89%	76%
AD00124	68%	NA
AD00125	86%	NA
AD00126	92%	62%

NA表示未檢測。

表7. AAV-人AGT轉導小鼠中的AGT單次3 mpk劑量篩選 ；使用對應于表 3 中所示的序列、化學修飾和遞送的化合物，其中GLO-0爲Jayaprakash , et al., (2014) J. Am. Chem. Soc., 136, 16958-16961中的GalNAc3所示的遞送配體。

ID#	通過qPCR測量的小鼠肝臟中人AGT mRNA的敲低百分比	通過ELISA測量的小鼠血漿中人AGT的敲低百分比
AD00052	72%	65%
AD00154	37%	NA
AD00155	51%	NA
AD00156	48%	NA
AD00157	71%	NA
AD00158	96%	87%
AD00159	94%	80%
AD00160	68%	NA
AD00161	77%	NA
AD00162	85%	NA
AD00163	94%	81%

NA表示未檢測。

表8. AAV-人AGT轉導小鼠中的AGT單次2.5 mpk劑量篩選；使用對應于表 3 中所示的序列、化學修飾和遞送的化合物，其中GLO-0爲Jayaprakash , et al., (2014) J. Am. Chem. Soc., 136, 16958-16961中的GalNAc3所示的遞送配體。

AD#	通過qPCR測量的小鼠肝臟中人AGT mRNA的敲低百分比
AD00052	73.2%
AD00252	25.9%
AD00257	39.1%
AD00260	42.2%
AD00123	74.2%
AD00284	79.6%
AD00158	92.7%
AD00288	86.9%
AD00163	88.9%
AD00289	66.3%
AD00159	85.7%
AD00290	85.2%
AD00285	26.4%
AD00286	54.1%
AD00287	0.5%
AD00256	72.3%
AD00282	81.5%
AD00283	59.8%
AD00291	-29.9%
AD00292	78.1%
AD00293	17.9%
AD00294	60.8%
AD00298	-14.0%
AD00299	53.2%
AD00300	89.4%
AD00301	-47.3%
AD00302	62.1%

表9. AAV-人AGT轉導小鼠中的AGT單次2.5 mpk劑量篩選；使用對應于表 3 或者表4中所示的序列、化學修飾和遞送的化合物，其中GLO-0爲Jayaprakash , et al., (2014) J. Am. Chem. Soc., 136, 16958-16961中的GalNAc3所示的遞送配體。

ID#	通過ELISA測量的小鼠血漿中人AGT的敲低百分比	通過qPCR測量的小鼠肝臟中人AGT mRNA 的敲低百分比
		NA
AD00158	86%	NA
AD00158-1	85%	NA
AD00158-2	68%	NA
AD00122	83%	84%
AD00159	77%	NA
AD00159-1	77%	90%
AD00163	81%	76%
AD00163-1	89%	90%
AD00300	66%	NA
AD00300-1	69%	69%

NA表示未檢測。

實施例6. AGT siRNA雙鏈體的體內測試

爲了評估AGT siRNA的體內活性，本研究共招募15只（13-22歲，體重7~9公斤）雄性食蟹猴，動物將被隨機分成5組，每組3只，每只動物皮下注射給予2 mg/kg 供試品，使用的供試品對應于表4中所示的化合物（AD00158-1、AD00158-2、AD00163-1、AD00159-1、AD00300-1）。

禁食過夜後，在第 -14 天（給藥前）、-7（給藥前）、1（給藥前）和給藥後第8、15、22、29、43、57、64、71、78、 85 和 92天進行采血。附圖將采集的血樣在室溫下放置至少 30 分鐘凝固，然後在 4℃下以350 rpm的轉速離心10分鐘。將收集的血清（約1.0 mL）轉移到兩個預先標記的聚丙烯螺旋蓋小瓶中（0.5 ml/小瓶，一個用于 ELISA 測定，另一個備用），儲存在 -80 ^oC的冰箱中直至測試。

血清中的AGT蛋白水平通過Elisa方法測定。與猴子第一天的血漿中AGT水平相比所剩百分比的結果如圖1所示。

實施例7. AGT siRNA雙鏈體的體外篩選

按照實施例4的方法進行體外研究，實驗結果如表10所示。

表10提供了使用多種AGT RNAi試劑抑制AGT表達的體外研究的實驗結果；使用的雙鏈序列對應于表 2 中所示的化合物。

雙鏈體AD#	平均抑制%
1 nM	0.2 nM
平均	SD	平均	SD
AV01227	93.57	0.03	85.93	0.60
AV01228	91.34	3.40	82.13	0.53
AV01229	80.82	3.46	56.60	1.35
AV01230	78.49	1.26	39.11	0.04
AV01231	49.54	6.13	0.54	6.09
AV01232	80.88	1.05	53.41	1.59
AV01233	89.59	1.75	75.97	2.40
AV01234	89.20	1.86	73.90	1.12
AV01235	86.81	0.00	70.59	3.93
AV01236	90.40	0.66	79.11	2.11
AV01237	82.94	0.71	67.31	2.28
AV01238	84.52	0.63	71.77	1.19
AV01239	81.62	2.26	65.69	2.63
AV01240	87.57	1.05	73.71	1.72
AV01241	88.57	0.37	75.29	1.65
AV01242	88.03	1.08	76.62	1.46
AV01243	90.29	0.30	82.39	1.85
AV01244	86.57	0.96	75.39	2.98
AV01245	81.30	3.09	68.25	4.27
AV01246	74.37	3.11	55.34	6.77
AV01247	63.44	8.48	39.83	6.91
AV01248	73.97	1.99	48.68	2.50
AV01249	64.97	6.78	12.91	15.95
AV01250	88.45	0.15	70.96	0.83
AV01251	89.94	0.35	72.82	2.77
AV01252	87.26	1.72	65.79	2.21
AV01253	86.71	2.13	66.42	0.25
AV01254	90.45	0.53	81.11	1.59
AV01255	89.78	0.42	83.48	2.51
AV01256	89.36	0.69	78.84	0.72
AV01257	92.88	0.13	85.27	0.49

實施例8.  AD00163-3 在AAV小鼠模型中體內測試:

12只雌性C57BL/6J小鼠在適應期過後，根據體重隨機分爲2組：模型（溶媒）組、AD00163-3（1 mg/kg）組。每只小鼠均在第1天通過尾靜脉注射1×10^11 vg的 AAV-AGT病毒來建立動物模型，注射體積爲100 µL/只。在第15天，各組小鼠分別通過皮下注射給予PBS 或 表4中的AD00163-3，給藥體積爲5 mL/kg。在第15天給藥前，每只小鼠通過頜下靜脉采血，離心後收集血清樣本。在第22天，所有小鼠通過CO ₂處死，通過心臟穿刺采集全血，離心後收集血清樣本。根據製造商推薦的方案（IBL America ，人血管緊張素原ELISA 試劑盒），通過 ELISA 測定法測量人AGT蛋白濃度。通過比較siRNA處理組和PBS處理組的第7天（給藥後）小鼠血漿樣品中的人源AGT蛋白水平來計算敲低百分比。數據顯示AD00163-3（1 mg/kg）處理能顯著降低小鼠血清中人AGT蛋白的表達91%。

實施例9  AD00163-3在食蟹猴自發性高血壓模型中的測試

將血壓升高的10只食蟹猴隨機分成兩組（每組5只猴子），以10mg/kg接受鹽水或表4中的AD00163-3。在第-6天和第-2天（給藥前）和第2,7,14,21,28和35天（給藥後）收集血液樣品。根據製造商推薦的方案通過ELISA測量血清AGT濃度，使用尾套裝置測量血壓。分別如圖所示2和3，在血清AGT降低的同時（給藥後第35天减少98%），單次皮下10mg/kg劑量的AD00163-3，給藥後第35天導致SBP顯著降低28mmHg（SBP從147mmHg基綫至119mmHg），同時對照組SBP在同一時期沒有顯著變化（SBP從144mmHg基綫至145mmHg）。還觀察到平均壓和舒張壓（MBP和DBP）壓力顯著降低分別如圖4和5所示。

等同物儘管本文已經描述和說明了本發明的幾個實施例，但本領域普通技術人員很容易理解，用于執行此處描述的功能和/或獲得結果和/或一個或更多個優點的多種其他手段和/或結構，以及這些變化和/或修改中的每一個都被認爲在本發明的範圍內。更一般地，本領域技術人員將容易理解，此處描述的所有參數、尺寸、材料和配置都是示例性的，幷且實際參數、尺寸、材料和/或配置將取决于使用本發明教導的具體應用。本領域技術人員將認識到或能够僅使用常規實驗來確定本文描述的本發明的特定實施例的許多等價物。因此，應當理解，前述實施例僅通過示例的方式呈現幷且屬所附權利要求及其等效物的範圍內，本發明可以以不同于具體描述和要求保護的方式實施。本發明針對在此描述的每個單獨的特徵、系統、物品、材料和/或方法。此外，兩個或更多個此類特徵、系統、物品、材料和/或方法的任何組合，如果此類特徵、系統、物品、材料和/或方法相互不矛盾，則也包括在本發明的範圍內。

如本文所定義和使用的所有定義應理解爲對照字典定義、通過引用幷入的文件中的定義和/或所定義術語的普通含義。

在說明書和權利要求中幷未使用數量限定的情况，除非明確指出相反，否則應理解爲“至少一個”。

說明書和權利要求書中使用的短語“和/或”應理解爲表示如此結合的要素中的“一個或兩個”，即這樣的要素在某些情况下組合出現而在其他情况下分離出現。除了由“和/或”具體標識的要素之外，除非明確指出相反，否則可以可選地存在其他要素，無論與那些具體標識的要素相關或不相關。

本申請中引用或參考的所有參考文獻、專利和專利申請和出版物均通過引用整體幷入本文。

圖1是分別給予2 mg/kg 的AD00158-1、AD00158-2、AD00163-1、AD00159-1、AD00300-1後食蟹猴血清AGT蛋白水平示意圖；

圖2是給予10mg/kg的AD00163-3後食蟹猴血清AGT蛋白水平示意圖；

圖3是給予10mg/kg的AD00163-3後食蟹猴血清SBP變化示意圖；

圖4是給予10mg/kg的AD00163-3後食蟹猴平均血壓（MBP）示意圖；

圖5是給予10mg/kg的AD00163-3後食蟹猴舒張壓（DBP）示意圖。

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Claims (74)

1. 抑制血管緊張素原（AGT）表達的雙鏈核糖核酸（dsRNA）試劑，其中所述dsRNA試劑包含正義鏈和反義鏈，所述反義鏈中的核苷酸第2至18位包含與AGT RNA轉錄物互補的區域，其中互補區域包含與表1-4之一中所列出的反義序列之一相差0、1、2或3個核苷酸的至少15個連續核苷酸，幷且任選地包含靶向配體。
2. 權利要求1所述的dsRNA試劑，其中所述與AGT RNA轉錄物互補的區域包含至少15、16、17、18或19個連續核苷酸，其與表1-4之一中所列出的反義序列之一相差不超過3個核苷酸。
3. 權利要求1或2所述的dsRNA試劑，其中所述dsRNA的反義鏈與SEQ ID NO：519中的任一個靶區域至少基本上互補，幷且在表1-4的任一個中提供。
4. 權利要求3所述的dsRNA試劑，其中所述dsRNA的反義鏈與SEQ ID NO：519中的任一靶區完全互補，幷在表1-4的任一個中提供。
5. 權利要求1所述的dsRNA試劑，其中所述dsRNA試劑包含表1-4中任一項所述的正義鏈序列，其中所述正義鏈序列與所述dsRNA試劑中的反義鏈序列至少基本上互補。
6. 權利要求1所述的dsRNA試劑，其中所述dsRNA試劑包含表1-4中任一項所述的正義鏈序列，其中所述正義鏈序列與所述dsRNA試劑中的反義鏈序列完全互補。
7. 權利要求1所述的dsRNA試劑，其中所述dsRNA試劑包含表1-4中任一項所列出的反義鏈序列。
8. 權利要求1所述的dsRNA試劑，其中所述dsRNA試劑包含表1-4中任一項中作爲雙鏈體序列所列出的序列。
9. 權利要求1所述的dsRNA試劑，其中所述dsRNA試劑包含至少一種修飾的核苷酸。
10. 權利要求1所述的dsRNA試劑，其中所述反義鏈中的所有或基本上所有核苷酸是修飾的核苷酸。
11. 權利要求5或6所述的dsRNA試劑，其中所述至少一種修飾的核苷酸包括：2'-O-甲基核苷酸、2'-氟核苷酸、2'-脫氧核苷酸、2'3'-seco 核苷酸模擬物、鎖定核苷酸、開環核酸核苷酸（UNA）、乙二醇核酸核苷酸 （GNA）、2'-F-阿拉伯糖核苷酸、2'-甲氧基乙基核苷酸、無碱基核苷酸、核糖醇、反向核苷酸、反向無碱基核苷酸、反向2'-OMe核苷酸、反向2'-脫氧核苷酸、2'-氨基修飾核苷酸、2'-烷基修飾核苷酸、嗎啉代核苷酸和3'-OMe核苷酸、包含5'-硫代磷酸酯基團的核苷酸，或與膽固醇衍生物或十二烷酸雙癸醯胺基團連接的末端核苷酸、2'-氨基修飾的核苷酸、氨基磷酸酯，或包含核苷酸的非天然鹼基。
12. 權利要求9或10所述的dsRNA試劑，其中在引導鏈的5'末端包含E-乙烯基膦酸酯核苷酸。
13. 權利要求1所述的dsRNA試劑，其中所述dsRNA試劑包含至少一個硫代磷酸酯核苷間鍵聯。
14. 權利要求1所述的dsRNA試劑，其中所述正義鏈包含至少一個硫代磷酸酯核苷間鍵聯。
15. 權利要求1所述的dsRNA試劑，其中所述反義鏈包含至少一個硫代磷酸酯核苷間鍵聯。
16. 權利要求1所述的dsRNA試劑，其中所述正義鏈包含1、2、3、4、5或6個硫代磷酸酯核苷間鍵聯。
17. 權利要求1所述的dsRNA試劑，其中所述反義鏈包含1、2、3、4、5或6個硫代磷酸酯核苷間鍵聯。
18. 權利要求1所述的dsRNA試劑，其中所述正義鏈和反義鏈的全部或基本上全部核苷酸是修飾的核苷酸。
19. 權利要求1所述的dsRNA試劑，其中修飾的正義鏈是表2-4之一中所列出的修飾的正義鏈序列。
20. 權利要求1所述的dsRNA試劑，其中修飾的反義鏈是表2-4之一中所列出的修飾的反義鏈序列。
21. 權利要求1所述的dsRNA試劑，其中所述正義鏈與反義鏈互補或基本上互補，幷且互補區域的長度爲16至23個核苷酸。
22. 權利要求21所述的dsRNA試劑，其中所述互補區域的長度爲19至21個核苷酸。
23. 權利要求1所述的dsRNA試劑，其中每條鏈的長度爲不超過30個核苷酸。
24. 權利要求1所述的dsRNA試劑，其中每條鏈的長度爲不超過25個核苷酸。
25. 權利要求1所述的dsRNA試劑，其中每條鏈的長度爲不超過23個核苷酸。
26. 權利要求1所述的dsRNA試劑，其中所述dsRNA試劑包含至少一種修飾的核苷酸，幷且還包含一種或更多種靶向基團或連接基團。
27. 權利要求26所述的dsRNA試劑，其中所述一種或更多種靶向基團或連接基團與所述正義鏈綴合。
28. 權利要求26或27所述的dsRNA試劑，其中所述靶向基團或連接基團包括N-乙醯基-半乳糖胺（GalNAc）。
29. 權利要求26或27所述的dsRNA試劑，其中所述靶向基團具有以下結構： GLO-1, GLS-1, GLO-2, GLS-2, GLO-3 GLS-3, GLO-4, GLS-4, GLO-5, GLS-5, GLO-6, GLS-6, GLO-7, GLS-7, GLO-8, GLS-8, GLO-9, GLS-9, GLO-10, GLS-10, GLO-11, GLS-11, GLO-12, GLS-12, GLO-13, GLS-13, GLO-14, GLS-14, GLO-15, GLS-15, GLO-16, 或者 GLS-16。
30. 權利要求1所述的dsRNA試劑，其中所述dsRNA試劑包含與所述正義鏈的5'-末端綴合的靶向基團。
31. 權利要求1所述的dsRNA試劑，其中所述dsRNA試劑包含與所述正義鏈的3'-末端綴合的靶向基團。
32. 權利要求1所述的dsRNA試劑，其中所述反義鏈在3'-末端包含一個反向無碱基殘基。
33. 權利要求1所述的dsRNA試劑，其中所述正義鏈在3'或/和5'末端包含一個或兩個反向無碱基殘基。
34. 權利要求1所述的dsRNA試劑，其中所述dsRNA試劑具有兩個平末端。
35. 權利要求1所述的dsRNA試劑，其中至少一條鏈包含至少1個核苷酸的3'突出端。
36. 權利要求1所述的dsRNA試劑，其中至少一條鏈包含至少2個核苷酸的3'突出端。
37. 包含權利要求1至36中任一項所述的dsRNA試劑的組合物。
38. 權利要求37所述的組合物，其還包含藥學上可接受的載體。
39. 權利要求38所述的組合物，還包含一種或更多種另外的治療劑。
40. 權利要求39所述的組合物，其中所述組合物被包裝在藥盒、容器、包裝物、分配器、預填充注射器或小瓶中。
41. 權利要求37所述的組合物，其中所述組合物被配製成用于皮下給藥或被配製成用于靜脉內（IV）給藥。
42. 包含權利要求1至36中任一項所述的dsRNA試劑的細胞。
43. 權利要求42所述的細胞，其特徵在于，所述細胞是哺乳動物細胞，任選地是人細胞。
44. 抑制細胞中AGT基因表達的方法，其包括： (i) 製備包含有效量的權利要求1至36中任一項所述的雙鏈核糖核酸（dsRNA）試劑或權利要求37至41中任一項所述的組合物的細胞。
45. 權利要求44所述的方法，其還包括： (ii) 將權利要求44的(i)中製備的細胞維持足够的時間，以獲得AGT基因的mRNA轉錄物的降解，從而抑制細胞中AGT基因的表達。
46. 權利要求44所述的方法，其特徵在于，所述細胞在對象體內幷且將所述dsRNA試劑皮下施用至所述對象。
47. 權利要求44所述的方法，其中所述細胞在對象體內幷且通過IV施用將所述dsRNA試劑施用至所述對象。
48. 權利要求46或47所述的方法，其還包括在向所述對象施用所述dsRNA試劑之後評估對AGT基因的抑制，其中用于評估的手段包括： (i) 確定對象中AGT相關疾病或病症的一種或多種生理特徵，以及 (ii) 將所確定的生理特徵與AGT相關疾病或病症的基綫治療前生理特徵和/或AGT相關疾病或病症的對照生理特徵進行比較， 其中經過比較表明對象中AGT基因表達抑制存在或不存在中的一種或更多種。
49. 權利要求48所述的方法，其中所確定的生理特徵是高血壓，其包括原發性高血壓、繼發性高血壓、高血壓急症（如惡性高血壓和加速性高血壓）、急性高血壓、妊娠相關高血壓、頑固性高血壓。
50. 權利要求49所述的方法，其中所述對象的血壓的降低表明對象中AGT基因表達的降低。
51. 抑制對象中AGT基因表達的方法，所述方法包括向對象施用有效量的權利要求1至36中任一項所述的雙鏈核糖核酸（dsRNA）試劑或權利要求37至41中任一項所述的組合物。
52. 權利要求51所述的方法，其中將所述dsRNA試劑皮下施用于所述對象。
53. 權利要求51所述的方法，其中所述dsRNA試劑通過IV給藥施用于所述對象。
54. 權利要求51至53中任一項所述的方法，其還包括在向所述對象施用所述dsRNA試劑之後評估對AGT基因的抑制，其中用于評估的手段包括： (i) 確定對象中AGT相關疾病或病症的一種或多種生理特徵，以及 (ii) 將所確定的生理特徵與AGT相關疾病或病症的基綫治療前生理特徵和/或AGT相關疾病或病症的對照生理特徵進行比較， 其中經過比較表明對象中AGT基因表達抑制存在或不存在中的一種或更多種。
55. 權利要求54所述的方法，其中所確定的生理特徵是高血壓，其包括原發性高血壓、繼發性高血壓、高血壓急症（如惡性高血壓和加速性高血壓）、急性高血壓、妊娠相關高血壓、頑固性高血壓。
56. 權利要求55所述的方法，其中所述對象的血壓的降低表明對象中AGT基因表達的降低。
57. 治療與AGT蛋白相關的疾病或病症的方法，所述方法包括向對象施用有效量的權利要求1至36中任一項所述的雙鏈核糖核酸（dsRNA）試劑或權利要求37至41中任一項所述的組合物，以抑制AGT基因表達。
58. 權利要求57所述的方法，其中所述疾病或病症是由以下導致或與其相關：腎素-血管緊張素-醛固酮系統（RAAS）活化或其響應于RAAS活化的症狀或進展，所述疾病或病症通常與高血壓相關，所述高血壓包括但不限于以下的一種或多種：高血壓病、高血壓、臨界性高血壓、原發性高血壓、繼發性高血壓、孤立性收縮期或舒張期高血壓、妊娠相關高血壓、糖尿病性高血壓、頑固性高血壓、難治性高血壓、陣發性高血壓、腎血管性高血壓、戈德布拉特氏（Goldblatt）高血壓、眼高血壓、青光眼、肺高血壓、門脉高血壓、系統性靜脉高血壓、收縮期高血壓、不穩定性高血壓；高血壓性心臟病、高血壓性腎病變、動脉粥樣硬化、動脉硬化、血管病變、糖尿病性腎病變、糖尿病性視網膜病變、慢性心力衰竭、心肌病變、糖尿病性心肌病變、腎小球硬化症、主動脉狹窄、主動脉瘤、心室纖維化、心力衰竭、心肌梗塞、心絞痛、中風、腎疾病、腎衰竭、系統性硬化症、宮內發育遲緩（IUGR）、胎兒生長受限。
59. 權利要求57所述的方法，其還包括對所述對象施用另外的治療方案。
60. 權利要求59所述的方法，其中所述另外的治療方案包括：向所述對象施用一種或更多種本發明的AGT反義多核苷酸，向所述對象施用非AGT dsRNA治療劑，以及所述對象的行爲改變。
61. 權利要求60所述的方法，其中所述非AGT dsRNA治療劑是以下中的一種或更多種：另外的治療劑，如利尿劑、血管緊張素轉化酶（ACE）抑制劑、血管緊張素II受體拮抗劑、β-阻滯劑、血管擴張劑、鈣通道阻滯劑、醛固酮拮抗劑、α2-激動劑、腎素抑制劑、α-阻滯劑、外周作用腎上腺素能劑、選擇性D1受體部分激動劑、非選擇性α-腎上腺素能拮抗劑、合成的、甾體抗鹽皮質激素劑，或上述任何的組合，及配製成藥劑組合的高血壓治療劑。
62. 權利要求57所述的方法，其中所述dsRNA試劑皮下施用于所述對象。
63. 權利要求57所述的方法，其中所述dsRNA試劑通過IV給藥施用于所述對象。
64. 權利要求57至63中任一項所述的方法，其還包括確定所施用的雙鏈核糖核酸（dsRNA）試劑在所述對象中的功效。
65. 權利要求64所述的方法，其中確定治療在所述對象中的功效的手段包括： (i) 確定對象中 AGT相關疾病或病症的一種或多種生理特徵，幷且 (ii) 將所確定的生理特徵與AGT相關疾病或病症的基綫治療前生理特徵進行比較， 其中通過比較表明對對象施用雙鏈核糖核酸（dsRNA）試劑的功效的存在、不存在和功效水平中的一種或更多種。
66. 權利要求65所述的方法，其中所確定的生理特徵是：高血壓，其包括原發性高血壓、繼發性高血壓、高血壓急症（如惡性高血壓和加速性高血壓）、急性高血壓、妊娠相關高血壓、頑固性高血壓。
67. 權利要求65所述的方法，其中所述對象的血壓降低表示對對象施用雙鏈核糖核酸（dsRNA）試劑存在功效。
68. 與對象中AGT蛋白的基綫治療前水平相比降低對象中 AGT蛋白水平的方法，所述方法包括向對象施用有效量的權利要求1至36中任一項所述的雙鏈核糖核酸（dsRNA）試劑或權利要求37至41中任一項的組合物，以降低AGT基因表達水平。
69. 權利要求68所述的方法，其中將所述dsRNA試劑皮下施用于所述對象或通過IV施用于所述對象。
70. 與對象中AGT相關疾病或病症的基綫治療前生理特徵相比改變對象中AGT相關疾病或病症的生理特徵的方法，所述方法包括向對象施用有效量的權利要求1至36中任一項所述的雙鏈核糖核酸（dsRNA）試劑或權利要求37至41中任一項所述的組合物，以改變對象中AGT相關疾病或病症的生理特徵。
71. 權利要求70所述的方法，其中將所述dsRNA試劑皮下施用于所述對象或通過IV施用于所述對象。
72. 權利要求70所述的方法，其中所述生理特徵是高血壓，其包括原發性高血壓、繼發性高血壓、高血壓急症（如惡性高血壓和加速性高血壓）、急性高血壓、妊娠相關高血壓、頑固性高血壓。
73. 權利要求1所述的dsRNA試劑，包含與式（A）相差0、1、2或3個核苷酸的正義鏈：5'-Z ₁AGCUUGUUUGUGAAACZ ₂-3'  式（A），其中Z ₁爲包含0-15個核苷酸基序的核苷酸序列，Z ₂選自A、U、C、G中的一種或者不存在。
74. 權利要求1所述的dsRNA試劑，包含與式（B）相差0、1、2或3個核苷酸的反義鏈：5'-Z ₃GUUUCACAAACAAGCUZ ₄-3' 式（B），其中Z ₃選自A、U、C、G中的一種或者不存在，Z ₄爲包含0-15個核苷酸基序的核苷酸序列。