TW202334222A - 結合gprc5d的抗體及其用途 - Google Patents

結合gprc5d的抗體及其用途 Download PDF

Info

Publication number
TW202334222A
TW202334222A TW111142114A TW111142114A TW202334222A TW 202334222 A TW202334222 A TW 202334222A TW 111142114 A TW111142114 A TW 111142114A TW 111142114 A TW111142114 A TW 111142114A TW 202334222 A TW202334222 A TW 202334222A
Authority
TW
Taiwan
Prior art keywords
seq
amino acid
variable region
acid sequence
sequence shown
Prior art date
Application number
TW111142114A
Other languages
English (en)
Inventor
陸臻楨
王玉潔
彭雙莉
張正平
Original Assignee
大陸商正大天晴藥業集團股份有限公司
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 大陸商正大天晴藥業集團股份有限公司 filed Critical 大陸商正大天晴藥業集團股份有限公司
Publication of TW202334222A publication Critical patent/TW202334222A/zh

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants

Abstract

本公開提供了一種結合GPRC5D的抗體及其用途。具體地提供了結合抗GPRC5D抗體及其抗原結合片段、編碼它們的核酸、包含該核酸的載體、包含該載體的細胞、包含它們的藥物組合物，還提供了其在減少腫瘤或抑制腫瘤細胞生長、治療疾病等方面的用途。

Description

結合GPRC5D的抗體及其用途
本公開涉及抗體，尤其涉及結合GPRC5D的抗體、製備方法及用途。
多發性骨髓瘤（Multiple myeloma, MM）是一種漿細胞惡性腫瘤，其特徵是骨髓來源的漿細胞異常增生，繼而導致MM患者經歷骨壞死、骨髓浸潤、腎衰竭和免疫缺陷等多種疾病相關症狀。目前，多發性骨髓瘤的治療方案包括蛋白酶體抑制劑、免疫調節藥物、單株抗體和幹細胞移植等。
GPRC5D（G protein-coupled receptor class C group 5 member D，G蛋白偶聯受體家族C組5成員D）屬於視黃酸誘導的孤兒G蛋白偶聯受體（RAIG）家族，是由345個胺基酸殘基組成的7次跨膜蛋白，其正常生理功能與硬角蛋白結構相關，但目前尚未揭示GPRC5D的具體生物學功能或配體。一些研究表明，GPRC5D在65%的多發性骨髓瘤患者的惡性骨髓來源的漿細胞上具有超過50%的表達閾值，且其表達獨立於BCMA（B細胞成熟抗原）；另有研究表明，GPRC5D的過表達與多發性骨髓瘤患者的腫瘤負荷及預後不良相關。GPRC5D在正常組織中，除皮膚的毛囊組織和骨髓來源的漿細胞外，均無表達或極低表達；GPRC5D可能為多發性骨髓瘤患者提供了新的治療思路，凸顯其臨床價值。
作為潛在的治療靶點，已有一些靶向GPRC5D的抗體在開發過程中，但仍然是有限的，需要更多可用的選擇。
本公開提供了結合GPRC5D的抗體，還提供了能夠編碼所提供的抗體的相關核酸、載體、細胞、組合物、製備方法及用途。
一方面，本公開提供了一種分離的抗GPRC5D抗體或其抗原結合片段，其中所述抗GPRC5D抗體包含：
重鏈可變區，其包含：
HCDR1，其包含SEQ ID NO：1、9、17、25或33所示的胺基酸序列，
HCDR2，其包含SEQ ID NO：2、10、18、26或34所示的胺基酸序列，和
HCDR3，其包含SEQ ID NO：3、11、19、27或35所示的胺基酸序列；和
輕鏈可變區，其包含：
LCDR1，其包含SEQ ID NO：4、12、20、28或36所示的胺基酸序列，
LCDR2，其包含SEQ ID NO：5、13、21、29或37所示的胺基酸序列，和
LCDR3，其包含SEQ ID NO：6、14、22、30或38所示的胺基酸序列。
在本公開的一個實施方案中，所述抗GPRC5D抗體包含：
(i)重鏈可變區，其包含：
包含SEQ ID NO：1所示胺基酸序列的HCDR1，
包含SEQ ID NO：2所示胺基酸序列的HCDR2，和
包含SEQ ID NO：3所示胺基酸序列的HCDR3；和
輕鏈可變區，其包含：
包含SEQ ID NO：4所示胺基酸序列的LCDR1，
包含SEQ ID NO：5所示胺基酸序列的LCDR2，和
包含SEQ ID NO：6所示胺基酸序列的LCDR3；
(ii)重鏈可變區，其包含：
包含SEQ ID NO：9所示胺基酸序列的HCDR1，
包含SEQ ID NO：10所示胺基酸序列的HCDR2，和
包含SEQ ID NO：11所示胺基酸序列的HCDR3；和
輕鏈可變區，其包含：
包含SEQ ID NO：12所示胺基酸序列的LCDR1，
包含SEQ ID NO：13所示胺基酸序列的LCDR2，和
包含SEQ ID NO：14所示胺基酸序列的LCDR3；
(iii)重鏈可變區，其包含：
包含SEQ ID NO：17所示胺基酸序列的HCDR1，
包含SEQ ID NO：18所示胺基酸序列的HCDR2，和
包含SEQ ID NO：19所示胺基酸序列的HCDR3；和
輕鏈可變區，其包含：
包含SEQ ID NO：20所示胺基酸序列的LCDR1，
包含SEQ ID NO：21所示胺基酸序列的LCDR2，和
包含SEQ ID NO：22所示胺基酸序列的LCDR3；
(iv)重鏈可變區，其包含：
包含SEQ ID NO：25所示胺基酸序列的HCDR1，
包含SEQ ID NO：26所示胺基酸序列的HCDR2，和
包含SEQ ID NO：27所示胺基酸序列的HCDR3；和
輕鏈可變區，其包含：
包含SEQ ID NO：28所示胺基酸序列的LCDR1，
包含SEQ ID NO：29所示胺基酸序列的LCDR2，和
包含SEQ ID NO：30所示胺基酸序列的LCDR3 ；或
(v)重鏈可變區，其包含：
包含SEQ ID NO：33所示胺基酸序列的HCDR1，
包含SEQ ID NO：34所示胺基酸序列的HCDR2，和
包含SEQ ID NO：35所示胺基酸序列的HCDR3；和
輕鏈可變區，其包含：
包含SEQ ID NO：36所示胺基酸序列的LCDR1，
包含SEQ ID NO：37所示胺基酸序列的LCDR2，和
包含SEQ ID NO：38所示胺基酸序列的LCDR3。
一方面，本公開提供了一種分離的抗GPRC5D抗體或其抗原結合片段，其中所述抗GPRC5D抗體包含重鏈可變區和輕鏈可變區，所述重鏈可變區包含SEQ ID NO：7、15、23、31或39所示可變區序列的HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述輕鏈可變區包含SEQ ID NO：8、16、24、32或40所示可變區序列的LCDR1、LCDR2和LCDR3。
一方面，本公開提供了一種融合蛋白，其包含本文所述的抗GPRC5D抗體或其抗原結合片段。
一方面，本公開提供了一種藥物組合物，其包含根據本文所述的抗GPRC5D抗體或其抗原結合片段、或所述的融合蛋白，其還進一步包含藥學上可接受的載體。
一方面，本公開提供了一種分離的核酸，其編碼本文所述的抗GPRC5D抗體或其抗原結合片段。
一方面，本公開提供了一種載體，其包含本文所述的核酸。
一方面，本公開提供了一種宿主細胞，其包含本文所述的載體或在其基因組中整合有本文所述的核酸。
一方面，本公開提供了一種製備本文所述的抗GPRC5D抗體或其抗原結合片段的方法，包括：培養所述的宿主細胞，從所述宿主細胞或宿主細胞培養基中回收所述抗GPRC5D抗體或其抗原結合片段。
一方面，本公開提供了所述的抗GPRC5D抗體或其抗原結合片段、所述的融合蛋白在製備治療疾病的藥物中的用途，較佳所述疾病是癌症或自身免疫疾病。
一方面，本公開提供了一種用於在受試者中減少腫瘤或抑制腫瘤細胞生長的方法，其中所述方法包括向所述受試者施用治療有效量的根據本文所述的抗GPRC5D抗體或其抗原結合片段、所述的融合蛋白或所述的藥物組合物。
一方面，本公開提供了一種在受試者中治療疾病的方法，其中所述方法包括向所述受試者施用治療有效量的根據本文所述的抗GPRC5D抗體或其抗原結合片段、所述的融合蛋白、或所述的藥物組合物，較佳所述疾病是癌症或自身免疫疾病。
一方面，本公開提供了一種試劑盒，其包含根據本文所述的抗GPRC5D抗體或其抗原結合片段、所述的免疫偶聯物、或所述的藥物組合物。
本文對本公開進行了示例性的實施方式的描述，但是本領域具通常知識者將理解的是本公開的保護範圍並不限於此，而是可基於本公開的精神和構思進行各種修飾、修改或改變，這些修飾、修改或改變後的內容仍然落在本公開的範圍內。
術語
術語“抗體”以其最廣義使用，並且涵蓋各種抗體結構，涵蓋各種結構的天然抗體和人工抗體，包括但不限於單株抗體、單特異性抗體、多特異性抗體（例如雙特異性抗體、三特異性抗體等）、單鏈抗體等，只要它們展現出期望的抗原結合活性。抗原結合片段指完整抗體以外的分子，其包含完整抗體的部分，該部分結合該完整抗體所結合的抗原。抗原結合片段包括Fab片段、Fab'片段、F(ab)'片段、Fv片段、分離的CDR區、單鏈Fv分子（scFv）和本領域已知的其它抗體片段。
術語“同種型”是指由重鏈恆定區基因編碼的抗體種類。在一個實施方案中，本文公開的抗GPRC5D抗體為IgG1或IgG4同種型。本文的抗GPRC5D抗體和其抗原結合片段可以衍生自任何物種，其包括但不限於小鼠、大鼠、兔、靈長類動物、美洲駝和人。所述抗GPRC5D抗體可以是嵌合抗體、人源化抗體或完整的人抗體。在一個特定的實施方案中，本文提供的所述抗GPRC5D抗體是人源化的。在一個特定的實施方案中，本文提供的所述抗GPRC5D抗體是嵌合的。
術語“嵌合抗體”是下述抗體：所述抗體具有衍生自一種物種的重鏈可變區的至少一部分和輕鏈可變區的至少一部分；以及衍生自另一物種的恆定區的至少一部分。例如，在一些實施方案中，嵌合抗體可以包含鼠類可變區和人恆定區。
“人源化抗體”是下述抗體：所述抗體含有衍生自非人抗體的互補決定區（CDR）；和衍生自人抗體的框架區以及恆定區。例如，本文提供的結合GPRC5D的人源化抗體可以包含衍生自一種或多種鼠類抗體的CDR以及人框架區和恆定區。
術語“單株抗體”（“mAb”）是指單分子組合物的抗體分子。單株抗體組合物顯示出對於特定表位元的單一結合特異性和親和力，或就雙特異性單株抗體而言，顯示出對於兩種不同表位的雙重結合特異性。mAb是分離的抗體的一個例子。通過本領域具通常知識者已知的融合瘤技術、重組技術、轉基因技術或其它技術，可以生產mAb。
術語“可變結構域”或“可變區”是指抗體的涉及該抗體與抗原結合的結構域。例如天然四鏈抗體（例如來源於人、鼠等）具有重鏈可變區（VH）和輕鏈可變區（VL），來源於駱駝科或鯊魚等動物的僅重鏈抗體具有單可變結構域。大多數情況下，天然抗體的每個可變結構域基本上由四個“框架區”和三個“互補決定區”組成。四個框架區分別稱為框架區1（FR1）、框架區2（FR2）、框架區3（FR3）、及框架區4（FR4）；所述框架區由本領域及下文中分別稱為互補決定區（CDR）間隔開。因此，可變結構域的一般結構可如下表示為：FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4。一個具體的例子，重鏈可變區的一般結構可如下表示為：FR1-HCDR1-FR2-HCDR2-FR3-HCDR3-FR4。一個具體的例子，輕鏈可變區的一般結構可如下表示為：FR1-LCDR1-FR2-LCDR2-FR3-LCDR3-FR4。
“CDR”（互補決定區），也稱為“高變區（HVR）”。例如天然四鏈抗體通常包含六個CDR，三個在重鏈可變區中，分別為重鏈CDR1（HCDR1）、重鏈CDR2（HCDR2）和重鏈CDR3（HCDR3），另外三個在輕鏈可變區中，分別為輕鏈CDR1（LCDR1）、輕鏈CDR2（LCDR2）和輕鏈CDR3（LCDR3）。僅重鏈抗體或單可變結構域通常具有三個CDR（CDR1、CDR2和CDR3）。
當前有許多方法來劃分定義CDR。其中，Kabat定義基於序列可變性劃分CDR，並且是最常用的（Elvin A.Kabat, et al，Sequences of Proteins of Immunological Interest , 第5版, Public Health Service , National Institutes of Health , Bethesda , Md .(1991)）；而Chothia定義則基於結構環的位置（Cyrus Chothia, et al, Canonical Structures for the Hypervariable Regions of Immunoglobulins, J .Mol .Biol .196:901-917(1987)）。AbM定義是Kabat定義和Chothia定義之間的折衷方案，並且被Oxford Molecular的AbM抗體建模軟體使用。“接觸（contact）”定義CDR的基礎是對可用的複合物晶體結構的分析。然而，應當注意的是，基於不同的方法劃分定義獲得的同一抗體可變區的CDR的邊界可能有所差異，即不同方法劃分定義的同一抗體可變區的CDR序列可能有所不同。因此，在涉及用本公開某些劃分定義的具體CDR序列限定抗體時，所述抗體的範圍還涵蓋了轉換為其他任意定義（例如IMGT、Chothia、AbM等定義中的一種或幾種的結合）的CDR序列限定的抗體。雖然本公開中請求保護的CDR是基於表S1和表S2示出的序列，但是根據其它CDR的定義規則所對應的胺基酸序列也應當落在本公開的保護範圍中。例如，在另一種定義下，嵌合抗體Chi-131重鏈CDR1的胺基酸序列為NYVMH（SEQ ID NO：71）。
術語“框架區”（FR）是除了本文定義的CDR殘基之外的那些可變結構域的胺基酸殘基。
術語“分離的”是指已經從其天然環境中分離的目標化合物（例如，抗體或核酸）。
如本文所用，術語“EC 50”是指有效濃度，抗體的50%最大應答。如本文所用，術語“IC 50”是指抑制濃度，抗體的50%最大應答。EC 50和IC 50兩者均可以通過ELISA或FACS分析或本領域已知的任何其他方法進行測量。
術語“K D”在用於本文時指平衡解離常數，以莫耳濃度（M）表示。抗體的K D值可以使用本領域公知的方法測定。一種較佳的測定抗體K D的方法是使用表面等離振子共振（surface plasmon resonance），更佳使用生物感測器系統，例如Biacore系統。
如本文所用，術語“受試者”包括任何人類或非人動物。術語“非人動物”包括所有的脊椎動物，例如哺乳動物和非哺乳動物，諸如非人靈長類、綿羊、犬、貓、馬、牛、雞、兩棲動物、爬行動物等。較佳地，根據本公開的受試者是人。除非標明，術語“患者”或“受試者”可以互換使用。
如本文所用，“癌症”是指哺乳動物中特徵通常在於不受調控的細胞生長的生理病狀。未受控制的細胞分裂和生長可以導致形成侵入相鄰組織的惡性腫瘤，並且還可通過淋巴系統或血流轉移到身體的遠側部分。“癌症”或“癌症組織”可包括腫瘤。
術語“治療”指試圖改變治療個體中疾病的自然進程，並且可以是為了預防或在臨床病理學的過程期間實施的臨床干預。治療的期望效果包括但不限於預防疾病的發生或復發，緩解症狀，降低疾病的任何直接或間接病理學後果，預防轉移，減緩疾病進展率，改善或減輕疾病狀態，及消退或改善的預後。
如本文所用，術語“治療有效量”是指向受試者提供治療性益處所必需的化合物、組合物或藥物組合的量。
術語“藥學上可接受的”是針對那些化合物、材料、組合物和/或劑型而言，它們在可靠的醫學判斷的範圍之內，適用於與人類和動物的組織接觸使用，而沒有過多的毒性、刺激性、過敏性反應或其它問題或併發症，與合理的利益/風險比相稱。
“藥物組合物是指包含活性成分和藥學上可接受的載體的組合物。
胺基酸序列的“同一性百分數（%）”是指將待比對序列與本文中所示的具體胺基酸序列進行比對並且如有必要的話為達到最大序列同一性百分數而引入空位後，並且不以任何保守置換作為序列同一性的一部分時，待比對序列中與本文中所示的具體胺基酸序列的胺基酸殘基相同的胺基酸殘基百分數。胺基酸序列的同一性比對可以採用本領域範圍內的多種方式進行，例如BLAST、BLAST-2、ALIGN或Megalign(DNASTAR)軟體。本領域具通常知識者可決定用於比對序列的適宜參數，包括在比較序列的全長裡獲得最大比對需要的任何演算法。
術語“Xn”和“Xaa”等同，是指未指定的胺基酸（Unspecified Amino Acid），通過相關表述中的後續定義來指定其涵蓋的範圍。
術語“包括”、“含有”或“包含”及其變體應理解為“包括但不限於”，意味著除所列出的要素、組分和步驟外，還可涵蓋其它未指明的要素、組分和步驟。
在本文中，除非上下文另有明確規定，否則單數術語涵蓋複數指代物，反之亦然。
為了描述和公開的目的，以引用的方式將所有的專利、專利申請和其它已確定的出版物在此明確地併入本文。這些出版物僅因為它們的公開早於本公開的申請日而提供。所有關於這些檔的日期的聲明或這些檔的內容的表述是基於申請者可得的資訊，並且不構成任何關於這些檔的日期或這些檔的內容的正確性的承認。而且，在任何國家，在本文中對這些出版物的任何引用並不構成關於該出版物成為本領域的公知常識的一部分的認可。本公開的各個方面將在下述部分中進一步詳細描述。
I ．抗 GPRC5D 抗體和其抗原結合片段
本文中，術語“人GPRC5D”和“hGPRC5D”在本文中可互換使用；“結合GPRC5D的抗體”與“抗GPRC5D抗體”之間彼此可以互換的使用。
本公開提供了新穎的結合GPRC5D的抗體。抗GPRC5D抗體顯示了其他諸多用於治療性應用或/和診斷性應用的期望的特性。例如，在一些實施方案中，所述抗GPRC5D抗體與GPRC5D具有良好的特異性。在一些實施方案中，所述抗GPRC5D抗體可以與猴GPRC5D或/和鼠GPRC5D結合，從而便於抗體開發過程中的藥理或/和安全性評價。在一些實施方案中，與一些已知的抗體相比，本文提供的抗GPRC5D抗體顯示了更好的抗原結合性能，例如對GPRC5D低表達的細胞具有更好的結合能力。在一些實施方案中，所述抗GPRC5D抗體對腫瘤細胞例如多發性骨髓瘤細胞具有良好的殺傷性能。
一方面，本公開提供了一種分離的抗GPRC5D抗體或其抗原結合片段，其中所述抗GPRC5D抗體包含：
重鏈可變區，其包含：
HCDR1，其包含SEQ ID NO：1、9、17、25或33所示的胺基酸序列，
HCDR2，其包含SEQ ID NO：2、10、18、26或34所示的胺基酸序列，和
HCDR3，其包含SEQ ID NO：3、11、19、27或35所示的胺基酸序列；和
輕鏈可變區，其包含：
LCDR1，其包含SEQ ID NO：4、12、20、28或36所示的胺基酸序列，
LCDR2，其包含SEQ ID NO：5、13、21、29或37所示的胺基酸序列，和
LCDR3，其包含SEQ ID NO：6、14、22、30或38所示的胺基酸序列。
在一些實施方案中，所述抗GPRC5D抗體包含：
重鏈可變區，其包含：包含SEQ ID NO：1所示胺基酸序列的HCDR1，包含SEQ ID NO：2所示胺基酸序列的HCDR2，和包含SEQ ID NO：3所示胺基酸序列的HCDR3；和
輕鏈可變區，其包含：包含SEQ ID NO：4所示胺基酸序列的LCDR1，包含SEQ ID NO：5所示胺基酸序列的LCDR2，和包含SEQ ID NO：6所示胺基酸序列的LCDR3。
在一些實施方案中，所述抗GPRC5D抗體包含：
重鏈可變區，其包含：包含SEQ ID NO：9所示胺基酸序列的HCDR1，包含SEQ ID NO：10所示胺基酸序列的HCDR2，和包含SEQ ID NO：11所示胺基酸序列的HCDR3；和
輕鏈可變區，其包含：包含SEQ ID NO：12所示胺基酸序列的LCDR1，包含SEQ ID NO：13所示胺基酸序列的LCDR2，和包含SEQ ID NO：14所示胺基酸序列的LCDR3。
在一些實施方案中，所述抗GPRC5D抗體包含：
重鏈可變區，其包含：包含SEQ ID NO：17所示胺基酸序列的HCDR1，包含SEQ ID NO：18所示胺基酸序列的HCDR2，和包含SEQ ID NO：19所示胺基酸序列的HCDR3；和
輕鏈可變區，其包含：包含SEQ ID NO：20所示胺基酸序列的LCDR1，包含SEQ ID NO：21所示胺基酸序列的LCDR2，和包含SEQ ID NO：22所示胺基酸序列的LCDR3。
在一些實施方案中，所述抗GPRC5D抗體包含：
重鏈可變區，其包含：包含SEQ ID NO：25所示胺基酸序列的HCDR1，包含SEQ ID NO：26所示胺基酸序列的HCDR2，和包含SEQ ID NO：27所示胺基酸序列的HCDR3；和
輕鏈可變區，其包含：包含SEQ ID NO：28所示胺基酸序列的LCDR1，包含SEQ ID NO：29所示胺基酸序列的LCDR2，和包含SEQ ID NO：30所示胺基酸序列的LCDR3。
在一些實施方案中，所述抗GPRC5D抗體包含：
重鏈可變區，其包含：包含SEQ ID NO：33所示胺基酸序列的HCDR1，包含SEQ ID NO：34所示胺基酸序列的HCDR2，和包含SEQ ID NO：35所示胺基酸序列的HCDR3；和
輕鏈可變區，其包含：包含SEQ ID NO：36所示胺基酸序列的LCDR1，包含SEQ ID NO：37所示胺基酸序列的LCDR2，和包含SEQ ID NO：38所示胺基酸序列的LCDR3。
在一些實施方案中，提供了分離的抗GPRC5D抗體或其抗原結合片段，其中所述抗GPRC5D抗體包含重鏈可變區和輕鏈可變區，所述重鏈可變區包含SEQ ID NO：7、15、23、31或39所示可變區序列的HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述輕鏈可變區包含SEQ ID NO：8、16、24、32或40所示可變區序列的LCDR1、LCDR2和LCDR3。在一些具體的實施方案中，所述重鏈可變區包含SEQ ID NO：7所示可變區序列的HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述輕鏈可變區包含SEQ ID NO：8所示可變區序列的LCDR1、LCDR2和LCDR3。在一些具體的實施方案中，所述重鏈可變區包含SEQ ID NO：15所示可變區序列的HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述輕鏈可變區包含SEQ ID NO：16所示可變區序列的LCDR1、LCDR2和LCDR3。在一些具體的實施方案中，所述重鏈可變區包含SEQ ID NO：23所示可變區序列的HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述輕鏈可變區包含SEQ ID NO：24所示可變區序列的LCDR1、LCDR2和LCDR3。在一些具體的實施方案中，所述重鏈可變區包含SEQ ID NO：31所示可變區序列的HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述輕鏈可變區包含SEQ ID NO：32所示可變區序列的LCDR1、LCDR2和LCDR3。在一些具體的實施方案中，所述重鏈可變區包含SEQ ID NO：39所示可變區序列的HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述輕鏈可變區包含SEQ ID NO：40所示可變區序列的LCDR1、LCDR2和LCDR3。在一些實施方案中，在這些具體的實施方案中，抗體的CDR區可以是根據kabat、Chothia、IMGT或其他定義下的。
在一些實施方案中，所述重鏈可變區包含與SEQ ID NO：7、15、23、31或39所示序列具有至少80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%的同一性的胺基酸序列。在一些具體的實施方案中，所述重鏈可變區包含SEQ ID NO：7、15、23、31或39所示的胺基酸序列。
在一些實施方案中，所述輕鏈可變區包含與SEQ ID NO：8、16、24、32或40所示序列具有至少80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%的同一性的胺基酸序列。在一些具體的實施方案中，所述輕鏈可變區包含SEQ ID NO：8、16、24、32或40所示的胺基酸序列。
在一些實施方案中，所述重鏈可變區包含與SEQ ID NO：7、15、23、31或39所示序列具有至少80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%的同一性的胺基酸序列，並且所述輕鏈可變區包含與SEQ ID NO：8、16、24、32或40所示序列具有至少80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%的同一性的胺基酸序列。在一些具體的實施方案中，所述重鏈可變區包含SEQ ID NO：7、15、23、31或39所示的胺基酸序列，並且所述輕鏈可變區包含SEQ ID NO：8、16、24、32或40所示的胺基酸序列。
在一些實施方案中，所述重鏈可變區包含與SEQ ID NO：7所示序列具有至少80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%的同一性的胺基酸序列，所述輕鏈可變區包含與SEQ ID NO：8所示序列具有至少80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%的同一性的胺基酸序列。進一步的，在一些這種實施方案中，所述抗GPRC5D抗體還包含：包含SEQ ID NO：1所示胺基酸序列的HCDR1、包含SEQ ID NO：2所示胺基酸序列的HCDR2、包含SEQ ID NO：3所示胺基酸序列的HCDR3、包含SEQ ID NO：4所示胺基酸序列的LCDR1、包含SEQ ID NO：5所示胺基酸序列的LCDR2和包含SEQ ID NO：6所示胺基酸序列的LCDR3。
在一些實施方案中，所述重鏈可變區包含與SEQ ID NO：15所示序列具有至少80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%的同一性的胺基酸序列，所述輕鏈可變區包含與SEQ ID NO：16所示序列具有至少80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%的同一性的胺基酸序列。進一步的，在一些這種實施方案中，所述抗GPRC5D抗體還包含：包含SEQ ID NO：9所示胺基酸序列的HCDR1、包含SEQ ID NO：10所示胺基酸序列的HCDR2、包含SEQ ID NO：11所示胺基酸序列的HCDR3、包含SEQ ID NO：12所示胺基酸序列的LCDR1、包含SEQ ID NO：13所示胺基酸序列的LCDR2和包含SEQ ID NO：14所示胺基酸序列的LCDR3。
在一些實施方案中，所述重鏈可變區包含與SEQ ID NO：23所示序列具有至少80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%的同一性的胺基酸序列，所述輕鏈可變區包含與SEQ ID NO：24所示序列具有至少80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%的同一性的胺基酸序列。進一步的，在一些這種實施方案中，所述抗GPRC5D抗體還包含：包含SEQ ID NO：17所示胺基酸序列的HCDR1、包含SEQ ID NO：18所示胺基酸序列的HCDR2、包含SEQ ID NO：19所示胺基酸序列的HCDR3、包含SEQ ID NO：20所示胺基酸序列的LCDR1、包含SEQ ID NO：21所示胺基酸序列的LCDR2和包含SEQ ID NO：22所示胺基酸序列的LCDR3。
在一些實施方案中，所述重鏈可變區包含與SEQ ID NO：31所示序列具有至少80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%的同一性的胺基酸序列，所述輕鏈可變區包含與SEQ ID NO：32所示序列具有至少80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%的同一性的胺基酸序列。進一步的，在一些這種實施方案中，所述抗GPRC5D抗體還包含：包含SEQ ID NO：25所示胺基酸序列的HCDR1、包含SEQ ID NO：26所示胺基酸序列的HCDR2、包含SEQ ID NO：27所示胺基酸序列的HCDR3、包含SEQ ID NO：28所示胺基酸序列的LCDR1、包含SEQ ID NO：29所示胺基酸序列的LCDR2和包含SEQ ID NO：30所示胺基酸序列的LCDR3。
在一些實施方案中，所述重鏈可變區包含與SEQ ID NO：39所示序列具有至少80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%的同一性的胺基酸序列，所述輕鏈可變區包含與SEQ ID NO：40所示序列具有至少80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%的同一性的胺基酸序列。進一步的，在一些這種實施方案中，所述抗GPRC5D抗體還包含：包含SEQ ID NO：33所示胺基酸序列的HCDR1、包含SEQ ID NO：34所示胺基酸序列的HCDR2、包含SEQ ID NO：35所示胺基酸序列的HCDR3、包含SEQ ID NO：36所示胺基酸序列的LCDR1、包含SEQ ID NO：37所示胺基酸序列的LCDR2和包含SEQ ID NO：38所示胺基酸序列的LCDR3。
在一些具體的實施方案中，所述的重鏈可變區包含SEQ ID NO：7所示的胺基酸序列，所述的輕鏈可變區包含SEQ ID NO：8所示的胺基酸序列。
在一些具體的實施方案中，所述的重鏈可變區包含SEQ ID NO：15所示的胺基酸序列，所述的輕鏈可變區包含SEQ ID NO：16所示的胺基酸序列。
在一些具體的實施方案中，所述的重鏈可變區包含SEQ ID NO：23所示的胺基酸序列，所述的輕鏈可變區包含SEQ ID NO：24所示的胺基酸序列。
在一些具體的實施方案中，所述的重鏈可變區包含SEQ ID NO：31所示的胺基酸序列，所述的輕鏈可變區包含SEQ ID NO：32所示的胺基酸序列。
在一些具體的實施方案中，所述的重鏈可變區包含SEQ ID NO：39所示的胺基酸序列，所述的輕鏈可變區包含SEQ ID NO：40所示的胺基酸序列。
在一些實施方案中，本文提供的抗GPRC5D抗體包含重鏈和輕鏈，重鏈和輕鏈除了包含相應的本文所述的重鏈可變區和輕鏈可變區外，還包括恆定區。由N端至C端，所述重鏈由重鏈可變區和重鏈恆定區組成，所述輕鏈由輕鏈可變區和輕鏈恆定區組成。
在一些實施方案中，抗GPRC5D抗體的輕鏈恆定區是人κ鏈恆定區。在一些實施方案中，抗GPRC5D抗體的輕鏈恆定區是人λ鏈恆定區。
抗GPRC5D抗體的重鏈恆定區可來自任何類型的恆定區，例如IgG、IgM、IgD、IgA和IgE；以及任何同種型，例如IgG1、IgG2、IgG3和IgG4。在一些實施方案中，抗GPRC5D抗體為IgG1同種型。在一些實施方案中，抗GPRC5D抗體為IgG4同種型。
在一些實施方案中，所述重鏈恆定區的胺基酸序列如SEQ ID NO：69所示，所述輕鏈恆定區的胺基酸序列如SEQ ID NO：70所示。
在一些實施方案中，所述重鏈包含與SEQ ID NO：49所示序列具有至少80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%的同一性的胺基酸序列，所述輕鏈包含與SEQ ID NO：51所示序列具有至少80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%的同一性的胺基酸序列。一個具體的方案，所述抗GPRC5D抗體包含SEQ ID NO：49所示胺基酸序列的重鏈和SEQ ID NO：51所示胺基酸序列的輕鏈。在另一些實施方案中，所述重鏈包含與SEQ ID NO：53所示序列具有至少80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%的同一性的胺基酸序列，所述輕鏈包含與SEQ ID NO：55所示序列具有至少80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%的同一性的胺基酸序列。一個具體的方案，所述抗GPRC5D抗體包含SEQ ID NO：53所示胺基酸序列的重鏈和SEQ ID NO：55所示胺基酸序列的輕鏈。在另一些實施方案中，所述重鏈包含與SEQ ID NO：57所示序列具有至少80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%的同一性的胺基酸序列，所述輕鏈包含與SEQ ID NO：59所示序列具有至少80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%的同一性的胺基酸序列。一個具體的方案，所述抗GPRC5D抗體包含SEQ ID NO：57所示胺基酸序列的重鏈和SEQ ID NO：59所示胺基酸序列的輕鏈。在另一些實施方案中，所述重鏈包含與SEQ ID NO：61所示序列具有至少80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%的同一性的胺基酸序列，所述輕鏈包含與SEQ ID NO：63所示序列具有至少80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%的同一性的胺基酸序列。一個具體的方案，所述抗GPRC5D抗體包含SEQ ID NO：61所示胺基酸序列的重鏈和SEQ ID NO：63所示胺基酸序列的輕鏈。在另一些實施方案中，所述重鏈包含與SEQ ID NO：65所示序列具有至少80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%的同一性的胺基酸序列，所述輕鏈包含與SEQ ID NO：67所示序列具有至少80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%的同一性的胺基酸序列。一個具體的方案，所述抗GPRC5D抗體包含SEQ ID NO：65所示胺基酸序列的重鏈和SEQ ID NO：67所示胺基酸序列的輕鏈。
在一些實施方案中，所述抗GPRC5D抗體與猴GPRC5D抗原或/和鼠GPRC5D抗原具有交叉反應。
在一些實施方案中，所述抗GPRC5D抗體或其抗原片段結合人GPRC5D抗原，可選的，還具有以下任意一種或幾種性質： （1）結合猴GPRC5D抗原； （2）結合鼠GPRC5D抗原；或 （3）不結合GPRC5A、GPRC5B和GPRC5C中的一種或幾種。
在一些實施方案中，抗GPRC5D抗體或其抗原片段結合人GPRC5D抗原，還結合猴GPRC5D抗原或/和鼠GPRC5D抗原，並進一步不結合GPRC5A、GPRC5B和GPRC5C。
在一些實施方案中，所述抗GPRC5D抗體為單株抗體。
在一些實施方案中，所述抗GPRC5D抗體為單特異性抗體。
在一些實施方案中，所述抗GPRC5D抗體為多特異性抗體。例如，雙特異抗體或者三特異性抗體等。
在另一方面，本文提供了與本文提供的任何示例性抗體結合GPRC5D上的相同表位的抗GPRC5D抗體或其抗原結合片段，例如與Chi-131結合相同表位，例如與Chi-169結合相同表位，例如與Chi-89結合相同表位等。在另一方面，本文提供了與本文提供的任何示例性抗體競爭的抗GPRC5D抗體或其抗原結合片段，例如與Chi-131競爭結合GPRC5D，例如與Chi-131競爭結合GPRC5D，例如與Chi-169競爭結合GPRC5D。可以通過ELISA、流式細胞術、表面電漿子共振（SPR）測定或本領域已知的任何其他方法測量與GPRC5D的結合。
本文還提供了一些示例性的結合GPRC5D的單株抗體，包括鼠抗mu-89、mu-105、mu-128、mu-131、mu-164、mu-169和mu-180及構建的嵌合抗體Chi-89、Chi-105、Chi-128、Chi-131、Chi-164、Chi-169和Chi-180。本文提供的部分示例性的抗GPRC5D抗體的HCDR（HCDR1、HCDR2和HCDR3）的胺基酸序列提供於下表S1中，LCDR（LCDR1、LCDR2和LCDR3）的胺基酸序列提供於下表S2中，部分抗體可變區的胺基酸序列提供於下表S3中。
表S1：重鏈CDR序列
抗體名稱 重鏈CDR1 重鏈CDR2 重鏈CDR3
Chi-131 GYTFTNYVMH (SEQ ID NO：1) YFNPYNDGTNYNEKFKG (SEQ ID NO：2) GGVRRYFDV (SEQ ID NO：3)
Chi-169 GFTFSNYGMS (SEQ ID NO：9) SISSGGGRIYYPDNVKG (SEQ ID NO：10) HAMDN (SEQ ID NO：11)
Chi-89 GFTFSSYGMS (SEQ ID NO：17) TISSGGSYTYYPDSVKG (SEQ ID NO：18) QALRYHMDS (SEQ ID NO：19)
Chi-105 GYTFTDYYMN (SEQ ID NO：25) YIYPNNGGTGYNQRFKG (SEQ ID NO：26) WGGTRLGYYAMDY (SEQ ID NO：27)
Chi-128 GFTFSSFGMH (SEQ ID NO：33) YISRGSSTIYYADTVKG (SEQ ID NO：34) SGYGSSSYYFDY (SEQ ID NO：35)
表S2：輕鏈CDR序列
名稱 輕鏈CDR1 輕鏈CDR2 輕鏈CDR3
Chi-131 RASQDIGSNLN (SEQ ID NO：4) ATFSLDS (SEQ ID NO：5) QQYANFPPT (SEQ ID NO：6)
Chi-169 SASSSVSNMY (SEQ ID NO：12) DTSKLAS (SEQ ID NO：13) QQWSSNPLT (SEQ ID NO：14)
Chi-89 KASQNVGTNVA (SEQ ID NO：20) SASYRYS (SEQ ID NO：21) QQYYSYPWT (SEQ ID NO：22)
Chi-105 KASQNVGTNVV (SEQ ID NO：28) WASTRHT (SEQ ID NO：29) QQYSRYPYT (SEQ ID NO：30)
Chi-128 RASSSIRSSYLH (SEQ ID NO：36) STSNLAS (SEQ ID NO：37) QQFSGYPLT (SEQ ID NO：38)
表S3：部分抗體可變區序列
名稱 區 胺基酸序列 SEQ ID NO：
Chi-131 VH EVQLQQSGPELVKPGASVKMSCKASGYTFTNYVMHWVKQKPGQGLEWIGYFNPYNDGTNYNEKFKGKATLTSDKSSNTAYMELSSLTSEDSAVYYCARGGVRRYFDVWGAGTTVTVSS 7
VL DIQMTQSPSSLSASLGERVSLTCRASQDIGSNLNWLQLGPDGTIKRLIYATFSLDSGVPKRFSGSRSGSDYSLTISSLESEDFVDYYCQQYANFPPTFGGGTKLEIK 8
Chi-169 VH EVKLVESGGGLVKPGASLKLSCAASGFTFSNYGMSWVRQTSDKRLEWVASISSGGGRIYYPDNVKGRFTISRENAKNTLYLQMSSLKSEDTALYYCTRHAMDNWGQGTSVIVSS 15
VL QIVLTQSPAIMSASPGEKVTMTCSASSSVSNMYWYQQKSGTSPKRWIYDTSKLASGVPARFSGSGSGTSYSLTISSMEAEDASTYYCQQWSSNPLTFGAGTTLELK 16
Chi-89 VH EVQLVESGGDLVKPGGSLKLSCAASGFTFSSYGMSWVRQTPDKRLEWVATISSGGSYTYYPDSVKGRFTFSRDNAKNTLYLQMSSLKSEDTAMYYCVRQALRYHMDSWGQGTSVTVSS 23
VL DIVMTQSQKFMSTSVGDRVSVTCKASQNVGTNVAWYQQKPGQSPKALIYSASYRYSGVPDRFTGSGSGTDFTLTISNVQSEDLADFFCQQYYSYPWTFGGGTKLEIK 24
Chi-105 VH EVQLQQSGPELVKPGASVKMSCKASGYTFTDYYMNWVKQSHGKSLEWIGYIYPNNGGTGYNQRFKGKATLTADKSSSTAYMELRSLTSEDSAVYYCARWGGTRLGYYAMDYWGQGTSVTVSS 31
VL DIVMTQSQKFMSTSVGDRVSVTCKASQNVGTNVVWYQQKPGQSPKLLIYWASTRHTGVPDRFTGSGSGTDFTLTISNVQSEDLADYFCQQYSRYPYTFGGGTKLEIK 32
Chi-128 VH DVQLVESGGGLVQPGGSRKVSCAASGFTFSSFGMHWVRQAPEKGLEWVAYISRGSSTIYYADTVKGRFTISRDNPKNTLFLQMTSLRSEDTAMYYCARSGYGSSSYYFDYWGQGTTLTVSS 39
VL ENVLTQSPAIMSASPREKVTMTCRASSSIRSSYLHWYQQKSGASPKLWIYSTSNLASGVPARFSGSGSGTSYSLTISSVEAEDAATYYCQQFSGYPLTFGGGTKLEIK 40
II ．抗體變體
在一些實施方案中，提供所述抗GPRC5D抗體的變體或其抗原結合片段。可以通過向編碼所述抗GPRC5D抗體的核苷酸序列引入適當修飾或通過肽合成製備抗GPRC5D抗體的胺基酸序列變體。此類修飾，例如，從抗體的胺基酸序列內部缺失胺基酸殘基，將胺基酸殘基插入所述胺基酸序列，或/和置換所述胺基酸序列中的胺基酸殘基。可以產生缺失、插入和置換的任意組合以獲得最終構建體，只要所述最終變體擁有想要的特徵，例如抗原結合作用，例如腫瘤殺傷效能等。
III ．融合蛋白
在一些實施方案中，本公開提供了融合蛋白，其包含本文所述的抗GPRC5D抗體或其抗原結合片段。
IV ．藥物組合物
本公開提供了藥物組合物，其包含所述的抗GPRC5D抗體或其抗原結合片段、或所述的融合蛋白，其還進一步包含藥學上可接受的載體。在一些實施方案中，將Chi-89、Chi-105、Chi-128、Chi-131、Chi-164、Chi-169和Chi-180抗體的任意一個或幾個，以及藥學上可接受的載體製成藥物組合物。藥學上可接受的載體包括，例如，賦形劑、稀釋劑、包封材料、填充劑、緩衝劑或其他試劑。
V ．分離的核酸
本公開提供了分離的核酸，其編碼本文所述的抗GPRC5D抗體或其抗原結合片段。在一些實施方案中，所述核酸編碼抗原結合片段，如Chi-89、Chi-105、Chi-128、Chi-131、Chi-164、Chi-169或Chi-180的抗原結合片段。在一些實施方案中，所述核酸編碼抗體，如Chi-89、Chi-105、Chi-128、Chi-131、Chi-164、Chi-169和Chi-180。序列表中示例性的列舉了一些抗GPRC5D抗體或其抗原結合片段的核酸序列。
VI ．載體
本公開提供了包含所述的分離的核酸的載體。在一些實施方案中，所述的載體為選殖載體；在另一些實施方案中，所述的載體為表達載體。所述表達載體可選的能夠表達本文所述抗GPRC5D抗體或其抗原結合片段的任意表達載體，一個具體的例子，表達載體為pcDNA3.1。
VII ．宿主細胞
在一些實施方案中，本公開提供一種宿主細胞，其包含本文所述的載體或在其基因組中整合有所述的核酸。宿主細胞為用於選殖或表達抗GPRC5D抗體或其抗原結合片段的適當宿主細胞。在一些實施方案中，宿主細胞為原核細胞。在另一些實施方案中，宿主細胞為真核細胞。在一些實施方案中，宿主細胞選自酵母細胞、哺乳細胞或適用於製備抗GPRC5D抗體或其抗原結合片段的其他細胞。哺乳細胞例如為中國倉鼠卵巢（CHO）細胞、CHO-S細胞。
VIII ．製備抗 GPRC5D 抗體和其抗原結合片段的方法
在一些實施方案中，本公開提供了製備所述的抗GPRC5D抗體或其抗原結合片段的方法，所述方法包括：培養本文所述的宿主細胞，從所述宿主細胞或宿主細胞培養基中回收所述抗GPRC5D抗體或其抗原結合片段。
為了產生所述的抗GPRC5D抗體或其抗原結合片段，將編碼所述抗GPRC5D抗體或其抗原結合片段的核酸插入載體，用於在宿主細胞中進一步選殖或/和表達。所述核酸可以採用基因拼接、化學合成等多種本領域所熟知的方法獲取。所述回收時，可以採用離心、親和層析等步驟進行。
IX ．用途
在一些實施方案中，本文提供的抗GPRC5D抗體或其抗原結合片段、所述的融合蛋白可以用於治療癌症、減少腫瘤或抑制腫瘤細胞生長。
本公開提供了所述的抗GPRC5D抗體或其抗原結合片段、或所述的融合蛋白在製備藥物中的用途。在一些實施方案中，所述用途為製備治療疾病的藥物。在一些實施方案中，所述用途為製備減少腫瘤或抑制腫瘤細胞生長的藥物。
本公開提供了一種用於在受試者中減少或抑制腫瘤細胞生長的方法，其中所述方法包括向所述的受試者施用治療有效量的所述的抗GPRC5D抗體或其抗原結合片段、所述的融合蛋白或所述的藥物組合物。
本公開提供了在受試者中治療疾病的方法，其中所述方法包括向所述受試者施用治療有效量的所述的抗GPRC5D抗體或其抗原結合片段、所述的融合蛋白、或所述的藥物組合物。需要治療的受試者包括那些已經患有疾病或病狀的受試者，以及可能患疾病或病狀並且其目的是預防、延遲或減弱疾病或病狀的受試者。
其中，上述疾病為癌症或自身免疫疾病。在一些實施方案中，所述自身免疫疾病為例如系統性紅斑狼瘡和/或類風濕性關節炎。在一些實施方案中，所述癌症是多發性骨髓瘤。
在一些實施方案中，提供了檢測或測量樣品中的GPRC5D的方法，其包括使所述樣品與本文所述的抗GPRC5D抗體或其抗原結合片段接觸並且檢測或測量結合複合物。
X ．試劑盒
本公開提供了一種試劑盒，其包含本文所述的抗GPRC5D抗體或其抗原結合片段、所述的融合蛋白、或所述的藥物組合物。
本文描述了包括所述的抗GPRC5D抗體或其抗原結合片段、所述的融合蛋白、或所述的藥物組合物的試劑盒。所述試劑盒可用於實施本文提供的抗GPRC5D抗體或其抗原結合片段、所述的融合蛋白、或所述的藥物組合物的用途或其他用途。在一些實施方案中，所述試劑盒可包括本文所述的抗GPRC5D抗體或其抗原結合片段、所述的融合蛋白、或所述的藥物組合物以及用於檢測生物樣本中是否存在GPRC5D的試劑。所述試劑盒還可以包括使用說明書。所述試劑盒還可以包括從商業和使用者的角度所需要的其它材料，例如可以包括其它緩衝液、稀釋劑、針、注射器等。
本公開還提供了以下一些具體的實施方案，但本公開的保護範圍不限於此：
實施方案1. 一種分離的抗GPRC5D抗體或其抗原結合片段，其中所述抗GPRC5D抗體包含： 重鏈可變區，其包含： HCDR1，其包含SEQ ID NO：1、9、17、25或33所示的胺基酸序列， HCDR2，其包含SEQ ID NO：2、10、18、26或34所示的胺基酸序列，和 HCDR3，其包含SEQ ID NO：3、11、19、27或35所示的胺基酸序列；和 輕鏈可變區，其包含： LCDR1，其包含SEQ ID NO：4、12、20、28或36所示的胺基酸序列， LCDR2，其包含SEQ ID NO：5、13、21、29或37所示的胺基酸序列，和 LCDR3，其包含SEQ ID NO：6、14、22、30或38所示的胺基酸序列。
實施方案2. 根據實施方案1所述的分離的抗GPRC5D抗體或其抗原結合片段，其中所述抗GPRC5D抗體包含：
(i)重鏈可變區，其包含：
包含SEQ ID NO：1所示胺基酸序列的HCDR1，
包含SEQ ID NO：2所示胺基酸序列的HCDR2，和
包含SEQ ID NO：3所示胺基酸序列的HCDR3；和
輕鏈可變區，其包含：
包含SEQ ID NO：4所示胺基酸序列的LCDR1，
包含SEQ ID NO：5所示胺基酸序列的LCDR2，和
包含SEQ ID NO：6所示胺基酸序列的LCDR3；
(ii)重鏈可變區，其包含：
包含SEQ ID NO：9所示胺基酸序列的HCDR1，
包含SEQ ID NO：10所示胺基酸序列的HCDR2，和
包含SEQ ID NO：11所示胺基酸序列的HCDR3；和
輕鏈可變區，其包含：
包含SEQ ID NO：12所示胺基酸序列的LCDR1，
包含SEQ ID NO：13所示胺基酸序列的LCDR2，和
包含SEQ ID NO：14所示胺基酸序列的LCDR3；
(iii)重鏈可變區，其包含：
包含SEQ ID NO：17所示胺基酸序列的HCDR1，
包含SEQ ID NO：18所示胺基酸序列的HCDR2，和
包含SEQ ID NO：19所示胺基酸序列的HCDR3；和
輕鏈可變區，其包含：
包含SEQ ID NO：20所示胺基酸序列的LCDR1，
包含SEQ ID NO：21所示胺基酸序列的LCDR2，和
包含SEQ ID NO：22所示胺基酸序列的LCDR3；
(iv)重鏈可變區，其包含：
包含SEQ ID NO：25所示胺基酸序列的HCDR1，
包含SEQ ID NO：26所示胺基酸序列的HCDR2，和
包含SEQ ID NO：27所示胺基酸序列的HCDR3；和
輕鏈可變區，其包含：
包含SEQ ID NO：28所示胺基酸序列的LCDR1，
包含SEQ ID NO：29所示胺基酸序列的LCDR2，和
包含SEQ ID NO：30所示胺基酸序列的LCDR3 ；或
(v)重鏈可變區，其包含：
包含SEQ ID NO：33所示胺基酸序列的HCDR1，
包含SEQ ID NO：34所示胺基酸序列的HCDR2，和
包含SEQ ID NO：35所示胺基酸序列的HCDR3；和
輕鏈可變區，其包含：
包含SEQ ID NO：36所示胺基酸序列的LCDR1，
包含SEQ ID NO：37所示胺基酸序列的LCDR2，和
包含SEQ ID NO：38所示胺基酸序列的LCDR3。
實施方案3. 一種分離的抗GPRC5D抗體或其抗原結合片段，其中所述抗GPRC5D抗體包含重鏈可變區和輕鏈可變區，所述重鏈可變區包含SEQ ID NO：7、15、23、31或39所示可變區序列的HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述輕鏈可變區包含SEQ ID NO：8、16、24、32或40所示可變區序列的LCDR1、LCDR2和LCDR3。
實施方案4. 根據實施方案3所述的抗GPRC5D抗體或其抗原結合片段，其中所述抗GPRC5D抗體包含重鏈可變區和輕鏈可變區，所述重鏈可變區包含SEQ ID NO：7所示可變區序列的HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述輕鏈可變區包含SEQ ID NO：8所示可變區序列的LCDR1、LCDR2和LCDR3；所述重鏈可變區包含SEQ ID NO：15所示可變區序列的HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述輕鏈可變區包含SEQ ID NO：16所示可變區序列的LCDR1、LCDR2和LCDR3；所述重鏈可變區包含SEQ ID NO：23所示可變區序列的HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述輕鏈可變區包含SEQ ID NO：24所示可變區序列的LCDR1、LCDR2和LCDR3；所述重鏈可變區包含SEQ ID NO：31所示可變區序列的HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述輕鏈可變區包含SEQ ID NO：32所示可變區序列的LCDR1、LCDR2和LCDR3；或，所述重鏈可變區包含SEQ ID NO：39所示可變區序列的HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述輕鏈可變區包含SEQ ID NO：40所示可變區序列的LCDR1、LCDR2和LCDR3。
實施方案5. 根據實施方案1-4中任一項所述的分離的抗GPRC5D抗體或其抗原結合片段，其中所述重鏈可變區包含與SEQ ID NO：7、15、23、31或39所示序列具有至少80%同一性的胺基酸序列。
實施方案6. 根據實施方案1-5中任一項所述的分離的抗GPRC5D抗體或其抗原結合片段，其中所述輕鏈可變區包含與SEQ ID NO：8、16、24、32或40所示序列具有至少80%同一性的胺基酸序列。
實施方案7. 根據實施方案1-6中任一項所述的分離的抗GPRC5D抗體或其抗原結合片段，其中所述重鏈可變區包含與SEQ ID NO：7、15、23、31或39所示序列具有至少80%同一性的胺基酸序列，所述輕鏈可變區包含與SEQ ID NO：8、16、24、32或40所示序列具有至少80%同一性的胺基酸序列。
實施方案8. 根據實施方案7所述的分離的抗GPRC5D抗體或其抗原結合片段，其中所述重鏈可變區和輕鏈可變區選自以下任一項：
(i)所述的重鏈可變區包含與SEQ ID NO：7所示序列具有至少80%同一性的胺基酸序列，所述的輕鏈可變區包含與SEQ ID NO：8所示序列具有至少80%同一性的胺基酸序列；
(ii)所述的重鏈可變區包含與SEQ ID NO：15所示序列具有至少80%同一性的胺基酸序列，所述的輕鏈可變區包含與SEQ ID NO：16所示序列具有至少80%同一性的胺基酸序列；
(iii)所述的重鏈可變區包含與SEQ ID NO：23所示序列具有至少80%同一性的胺基酸序列，所述的輕鏈可變區包含與SEQ ID NO：24所示序列具有至少80%同一性的胺基酸序列；
(iv)所述的重鏈可變區包含與SEQ ID NO：31所示序列具有至少80%同一性的胺基酸序列，所述的輕鏈可變區包含與SEQ ID NO：32所示序列具有至少80%同一性的胺基酸序列；或，
(v)所述的重鏈可變區包含與SEQ ID NO：39所示序列具有至少80%同一性的胺基酸序列，所述的輕鏈可變區包含與SEQ ID NO：40所示序列具有至少80%同一性的胺基酸序列。
實施方案9. 根據實施方案7所述的分離的抗GPRC5D抗體或其抗原結合片段，其中所述重鏈可變區和輕鏈可變區選自以下任一項： (i)所述的重鏈可變區包含SEQ ID NO：7所示的胺基酸序列，所述的輕鏈可變區包含SEQ ID NO：8所示的胺基酸序列； (ii)所述的重鏈可變區包含SEQ ID NO：15所示的胺基酸序列，所述的輕鏈可變區包含SEQ ID NO：16所示的胺基酸序列； (iii)所述的重鏈可變區包含SEQ ID NO：23所示的胺基酸序列，所述的輕鏈可變區包含SEQ ID NO：24所示的胺基酸序列； (iv)所述的重鏈可變區包含SEQ ID NO：31所示的胺基酸序列，所述的輕鏈可變區包含SEQ ID NO：32所示的胺基酸序列；或， (v)所述的重鏈可變區包含SEQ ID NO：39所示的胺基酸序列，所述的輕鏈可變區包含SEQ ID NO：40所示的胺基酸序列。
實施方案10. 根據實施方案1-9中任一項所述的分離的抗GPRC5D抗體或其抗原結合片段，其中所述抗原結合片段為Fab片段、Fab'片段、F(ab') 2片段、Fd片段、Fv片段、分離的CDR區或scFv。
實施方案11. 根據實施方案1-10中任一項所述的分離的抗GPRC5D抗體或其抗原結合片段，其中所述的抗GPRC5D抗體是嵌合的、人源化的或全人源的。
實施方案12. 根據實施方案1-11中任一項所述的分離的抗GPRC5D抗體或其抗原結合片段，其中所述抗GPRC5D抗體為IgG1、IgG2、IgG3或IgG4同種型。
實施方案13. 根據實施方案1-12中任一項所述的分離的抗GPRC5D抗體或其抗原結合片段，其中所述抗GPRC5D抗體或其抗原片段結合人GPRC5D抗原，可選的，還具有以下任意一種或幾種性質： （1）結合猴GPRC5D抗原； （2）結合鼠GPRC5D抗原； （3）不結合GPRC5A、GPRC5B和GPRC5C中的一種或幾種。
實施方案14. 根據實施方案1-13中任一項所述的分離的抗GPRC5D抗體或其抗原結合片段，其中所述抗GPRC5D抗體為單特異性抗體或多特異性抗體。
實施方案15. 一種融合蛋白，其包含根據實施方案1-14中任一項所述的抗GPRC5D抗體或其抗原結合片段。
實施方案16. 一種藥物組合物，其包含根據實施方案1-14中任一項所述的抗GPRC5D抗體或其抗原結合片段、或實施方案15所述的免疫偶聯物，其還進一步包含藥學上可接受的載體。
實施方案17. 一種分離的核酸，其編碼根據實施方案1-14中任一項所述的抗GPRC5D抗體或其抗原結合片段。
實施方案18. 一種載體，其包含根據實施方案17所述的核酸。
實施方案19. 一種宿主細胞，其包含根據實施方案18所述的載體或在其基因組中整合有實施方案17所述的核酸。
實施方案20. 一種製備根據實施方案1-14中任一項所述的抗GPRC5D抗體或其抗原結合片段的方法，包括：培養實施方案19所述的宿主細胞，從所述宿主細胞或宿主細胞培養基中回收所述抗GPRC5D抗體或其抗原結合片段。
實施方案21. 根據實施方案1-14中任一項所述的抗GPRC5D抗體或其抗原結合片段、實施方案15所述的融合蛋白或實施方案16所述的藥物組合物，其用於治療疾病，或減少腫瘤或抑制腫瘤細胞生長；優選所述疾病是癌症或自身免疫疾病。
實施方案22. 根據實施方案1-14中任一項所述的抗GPRC5D抗體或其抗原結合片段、實施方案15所述的融合蛋白在製備治療疾病或製備減少腫瘤或抑制腫瘤細胞生長的藥物中的用途，優選所述疾病是癌症或自身免疫疾病。
實施方案23. 一種用於在受試者中減少腫瘤或抑制腫瘤細胞生長的方法，其中所述方法包括向所述受試者施用治療有效量的根據實施方案1-14中任一項所述的抗GPRC5D抗體或其抗原結合片段、根據實施方案15所述的融合蛋白或實施方案16所述的藥物組合物。
實施方案24. 一種在受試者中治療疾病的方法，其中所述方法包括向所述受試者施用治療有效量的根據實施方案1-14中任一項所述的抗GPRC5D抗體或其抗原結合片段、根據實施方案15所述的融合蛋白、或實施方案16所述的藥物組合物，優選所述疾病是癌症或自身免疫疾病。
實施方案25. 根據實施方案21、22或24所述的方案，其中所述癌症為多發性骨髓瘤。
實施方案26. 一種試劑盒，其包含根據實施方案1-14中任一項所述的抗GPRC5D抗體或其抗原結合片段、根據實施方案15所述的融合蛋白、或實施方案16所述的藥物組合物。
具體實施方式
實施例 1 ：抗原免疫
1、DNA抗原免疫
將編碼人GPRC5D蛋白（胺基酸序列如SEQ ID NO: 41）的cDNA序列通過基因合成獲得，並次選殖到表達載體pcDNA3.1(+)中，構建質體pcDNA3.1-hGPRC5D。按照去內毒大提試劑盒（QIAGEN, Cat:12391）的操作說明進行大規模質體製備。
以質體pcDNA3.1-hGPRC5D作為抗原，分別免疫A/J小鼠（南京大學模式動物研究所）、BALB/c小鼠（上海靈暢）和SJL小鼠（北京維通利華）。首先，採用透明質酸酶（Sigma，Cat: H4272）預注射至每隻小鼠的左右後肢肌肉進行預處理；其後，按照品質比1:1混勻CpG（InvivoGen, Cat: tlrl-1826）與質體pcDNA3.1-hGPRC5D，將混勻的抗原複合物通過活體基因導入儀（上海塔瑞莎生物技術有限公司,II型）注射到小鼠預處理過的肌肉部位，每隔2-3周重複上述相同的免疫一次，共免疫4次。免疫結束後，收集每隻小鼠的血清。
2、小鼠血清滴度評價
為了評估DNA抗原免疫小鼠體內所產生的抗人GPRC5D抗體的免疫反應，通過FACS檢測小鼠血清的抗體滴度。選取血清滴度較高的小鼠進行後續脾細胞融合前的衝擊免疫。
3、細胞抗原免疫
按照lipofectamin3000轉染試劑（Thermo, Cat: L3000015）的操作說明，將質體pcDNA3.1-hGPRC5D轉染到CHO-K1細胞中，獲得穩定高表達hGPRC5D細胞系CHO-K1-hGPRC5D hi。採用上述CHO-K1-hGPRC5D hi細胞作為抗原進行小鼠的衝擊免疫：脾細胞融合前3-4天，將細胞終濃度為5×10 7個/mL的CHO-K1-hGPRC5D hi細胞懸液與終濃度為0.5mg/mL的CpG（InvivoGen, Cat: tlrl-1826）混勻後，按100 µL/隻，經腹腔注射入小鼠。
實施例 2 ：小鼠抗人 GPRC5D 抗體的篩選
1、融合瘤細胞的製備
在融合當天，無菌摘取小鼠脾臟，研磨後加入紅細胞裂解液（Sigma, Cat: R7757），PBS溶液洗滌細胞後，以電融合緩衝液（BTX, Cat: 47-0001）將脾細胞重懸，然後按照細胞數目2:1的比例，將脾細胞與SP2/0小鼠骨髓瘤細胞混勻，使用電融合儀（BTX）進行脾細胞融合。加入含有1 × HAT（Gibco, Cat: 21060-017）的融合瘤培養基（Gibco, Cat: 12045-076）稀釋融合的細胞，在37℃、5% CO 2條件下培養7-10天以製備融合瘤細胞。收集融合瘤細胞的培養上清液，用於小鼠抗人GPRC5D抗體的篩選。
2、穩定細胞系的構建
為了評價小鼠抗人GPRC5D抗體在細胞水準的種屬交叉結合活性，構建以下細胞系：分別將編碼全長猴GPRC5D（胺基酸序列如SEQ ID NO: 42）和小鼠GPRC5D（胺基酸序列如SEQ ID NO: 43）的cDNA通過基因合成獲得，然後次選殖至載體pcDNA3.1(+)中，得到pcDNA3.1-cynoGPRC5D和pcDNA3.1-murineGPRC5D重組質體。參照lipofectamin3000轉染試劑（Thermo, Cat: L3000015）的操作說明，將質體pcDNA3.1-cynoGPRC5D和pcDNA3.1-murineGPRC5D分別轉染到CHO-K1細胞中，獲得CHO-K1-cynoGPRC5D和CHO-K1-murineGPRC5D穩定細胞系。
3、細胞ELISA初篩
收集對數生長期的CHO-K1-hGPRC5D hi細胞，並以含體積百分數10% FBS的DMEM/F-12（Gibco, Cat: 11320033）培養基重懸，調節細胞濃度至1 × 10 6個/mL，按100 µL/孔鋪板於96孔平底板，並在37℃、5% CO 2的培養條件下孵育過夜；第二天，PBS洗滌細胞板，加入4%（體積百分數）多聚甲醛（碧雲天, Cat: P0099）於室溫固定30分鐘；PBS洗滌後，按200 µL/孔加入含3%（體積百分數）BSA的PBS溶液，於室溫封閉2小時。封閉結束後，向細胞板加入100 µL/孔的融合瘤細胞培養上清液，於室溫孵育2小時；PBS洗滌，再加入HRP偶聯山羊抗鼠IgG+IgM(H+L)抗體（Jackson Immuno Research, Cat: 115-035-068），室溫孵育1小時；PBS洗滌後，加入100 µL/孔的TMB反應液（索萊寶, Cat: RP1200），室溫避光孵育5分鐘，並用0.5 M H 2SO 4終止反應；使用Bio-rad iMark酶標儀讀取OD450吸光值。選取吸光度大於1.0的培養上清液所對應的融合瘤細胞作為陽性殖株，進行後續的FACS篩選。
4、流式細胞術FACS篩選抗體
將細胞濃度為5 × 10 5個/mL的CHO-K1-cynoGPRC5D的細胞懸液按100µL/孔鋪板於96孔U底板中，加入100 µL/孔的陽性殖株的培養上清液，混勻後於4℃孵育1小時。用含2%（體積百分數）FBS的PBS洗滌後，加入AlexaFluor488偶聯山羊抗鼠IgG+IgM(H+L)抗體（Jackson Immuno Research, Cat: 115-545-044），4℃孵育1小時。用含2%（體積百分數）FBS的PBS洗滌並重懸細胞，使用流式細胞儀（Sartorius, IQue3）檢測螢光訊號，通過染色的平均螢光強度（MFI）來分析抗hGPRC5D抗體與CHO-K1-cynoGPRC5D細胞的結合。
5、次殖株製備
挑取經細胞ELISA和FACS篩選後，與CHO-K1-hGPRC5D hi和CHO-K1-cynoGPRC5D均為陽性結合的融合瘤細胞進行擴增培養。將擴增後的細胞按照體積比1:10的比例與半固體培養基D（Stemcell, Cat: 3810）混勻，然後置於37℃、5% CO 2的培養條件下孵育培養5天，4倍鏡檢吸取單株細胞團並轉移至鋪有融合瘤培養基（Gibco, Cat: 12045-076）的96孔板中，繼續在37℃、5% CO 2條件下培養2天。收集每孔次殖株細胞培養上清液，進一步用於次殖株的篩選。
6、次殖株篩選
（1）抗hGPRC5D抗體的FACS篩選
將細胞濃度為3 × 10 5個/mL的H929（即NCI-H929）細胞懸液按100 µL/孔鋪板置於96孔U底板中，加入100 µL/孔的次殖株細胞培養上清液或等體積的培養基（以下簡稱Medium），混勻後於4℃孵育1小時。用含2%（體積百分數）FBS的PBS洗滌細胞後，加入AlexaFluor488偶聯山羊抗鼠IgG+IgM(H+L)抗體（Jackson Immuno Research, Cat: 115-545-044），4℃孵育1小時。用含2%（體積百分數）FBS的PBS洗滌細胞並重懸，使用流式細胞儀（Sartorius, IQue3）檢測螢光訊號，通過染色的平均螢光強度（MFI）來分析小鼠抗hGPRC5D抗體與H929細胞的結合，部分結果見表1。
表1 部分小鼠抗hGPRC5D抗體與H929細胞的FACS結合測定
殖株 編號 H929MFI 殖株 編號 H929MFI 殖株 編號 H929MFI
mu-7 53151 mu-74.3 18078 mu-131 12826
mu-9 10704 mu-89 11919 mu-153 46867
mu-45 21606 mu-105 13248 mu-164 14184
mu-38.1 75956 mu-125 11670 mu-169 59318
mu-35 54719 mu-126 10271 mu-180 26579
mu-51 95531 mu-128 15661 mu-183 27008
mu-58 464150 mu-129 7904 Medium 8242
（2）抗hGPRC5D抗體的細胞ELISA篩選
分別收集對數生長期的CHO-K1-hGPRC5D hi細胞、CHO-K1-cynoGPRC5D細胞、CHO-K1-murineGPRC5D細胞和CHO-K1細胞，用含10%（體積百分數）FBS的DMEM/F-12（Gibco, Cat: 11320033）培養基重懸，並調節細胞濃度至1 × 10 6個/mL，按100 µL/孔鋪板於96孔平底板，並在37℃、5% CO 2的培養條件下孵育過夜；第二天，PBS洗滌細胞板，加入4%（體積百分數）多聚甲醛（碧雲天, Cat: P0099）於室溫固定30分鐘；PBS洗滌後，按200 µL/孔加入含3%（體積百分數）BSA的PBS溶液，於室溫封閉2小時。封閉結束後，向細胞板各加入50 µL/孔的次殖株細胞培養上清液，於室溫孵育2小時；PBS洗滌，再加入HRP偶聯山羊抗鼠IgG+IgM(H+L)抗體（Jackson Immuno Research, Cat: 115-035-068），室溫孵育1小時；PBS洗滌後，加入100 µL/孔的TMB反應液（索萊寶, Cat: RP1200），室溫避光孵育5分鐘，並用0.5 M H 2SO 4終止反應；使用Bio-rad iMark酶標儀讀取OD450吸光值。使用Graphpad Prism繪製次殖株吸光值柱狀圖，如圖1展示典型的小鼠抗hGPRC5D抗體（例如mu-89、mu-105、mu-126、mu-128、mu-131、mu-153、mu-164、mu-169、mu-180和mu-183等），其針對CHO-K1-hGPRC5D hi細胞、CHO-K1-cynoGPRC5D細胞和（或）CHO-K1-murineGPRC5D細胞的吸光值與對照細胞CHO-K1相比，具有至少2倍的吸光值差異。
實施例 3 ： 抗 hGPRC5D 嵌合抗體的製備
1、編碼小鼠抗hGPRC5D抗體的可變區測序
按照RNA提取試劑盒（Takara, Cat: 9767）操作說明分離篩選出的融合瘤細胞中的總RNA，並通過逆轉錄試劑盒（Thermo, Cat: K1652）合成第一鏈cDNA。以第一鏈cDNA作為範本，分別與小鼠的重鏈和輕鏈恆定區引子混合，使用聚合酶鏈式反應（PCR）技術，選殖並測序獲得小鼠抗hGPRC5D抗體可變區序列。
2、嵌合抗體表達載體的構建
採用化學合成方法，將小鼠抗hGPRC5D抗體的重鏈可變區（VH）和輕鏈可變區（VL）的核苷酸序列分別與人IgG1重鏈恆定區和Kappa輕鏈恆定區的核苷酸序列連接，利用pcDNA3.1(+)載體構建重組人-鼠嵌合抗體表達載體，用於轉染表達以製備嵌合抗體。各嵌合抗體全長以及VH/VL的核苷酸序列和胺基酸序列詳見表2。
表2 嵌合抗體全長以及VH/VL的核苷酸序列和胺基酸序列
殖株 編號 重鏈胺基酸 / 核苷酸序列 VH 胺基酸序列 輕鏈胺基酸 / 核苷酸序列 VL 胺基酸序列
Chi-89 SEQ ID NO:49/50 SEQ ID NO:23 SEQ ID NO:51/52 SEQ ID NO:24
Chi-105 SEQ ID NO:53/54 SEQ ID NO:31 SEQ ID NO:55/56 SEQ ID NO:32
Chi-128 SEQ ID NO:57/58 SEQ ID NO:39 SEQ ID NO:59/60 SEQ ID NO:40
Chi-131 SEQ ID NO:61/62 SEQ ID NO:7 SEQ ID NO:63/64 SEQ ID NO:8
Chi-169 SEQ ID NO:65/66 SEQ ID NO:15 SEQ ID NO:67/68 SEQ ID NO:16
3、陽性參照抗體表達載體的構建
選擇GC5B596作為參照抗體（單抗，來源WO2018017786A2），採用化學合成的方法獲取抗體VH（SEQ ID NO: 44）和VL（SEQ ID NO: 45）的核苷酸序列，並分別與人IgG1重鏈恆定區和Kappa輕鏈恆定區的核苷酸序列連接，利用pcDNA3.1（+）載體構建得到表達陽性參照抗體的表達載體，用於轉染表達以製備陽性參照抗體。陽性參照抗體（單抗）在本文中命名為BM-mAb。
4、抗hGPRC5D嵌合抗體和陽性參照抗體的製備
根據expiCHO表達系統（Gibco, Cat: A29129）的操作手冊進行抗hGPRC5D抗體的暫態轉染表達，轉染後將expiCHO細胞置於37℃、含8% CO 2的條件下振盪培養7天；收集細胞培養上清液，然後將澄清的培養上清液分別上樣至蛋白A柱（G.E.Healthcare, Cat: 17-5474），加入10倍柱體積的PBS緩衝液洗滌蛋白A柱，再加入醋酸緩衝液（300 mM醋酸, pH 3.6）洗脫和收集與蛋白A柱結合的IgG抗體，將收集的IgG抗體組分通過超濾裝置（分子量截止值30 kDa，Millipore, Cat: UFC903024）置換於PBS緩衝液中，獲得抗hGPRC5D抗體溶液。
實施例 4 ：抗 hGPRC5D 抗體與穩定表達人 GPRC5D 細胞的結合活性測定
1、抗hGPRC5D嵌合抗體與穩定高表達人GPRC5D細胞的結合性質
將細胞濃度為3 × 10 5個/mL的CHO-K1-hGPRC5D hi（GPRC5D表達豐度為約2E+06-3E+06個抗原/細胞）細胞懸液按100 µL/孔鋪板置於96孔U底板中，加入梯度稀釋抗hGPRC5D抗體（終濃度範圍是4.1-3000 ng/mL，3倍梯度稀釋），混勻後於4℃孵育1小時。用含2%（體積百分數）FBS的PBS洗滌細胞後，加入PE偶聯山羊抗人IgG Fcγ抗體（Jackson Immuno Research, Cat: 109-116-170），4℃孵育1小時。用含2%（體積百分數）FBS的PBS洗滌細胞並重懸，使用流式細胞儀（Sartorius, IQue3）檢測螢光訊號，通過染色的平均螢光強度（MFI）來分析抗hGPRC5D抗體與CHO-K1-hGPRC5D hi細胞的結合。經GraphpadPrism計算EC 50的分析結果如圖2所示，嵌合抗體Chi-89、Chi-105、Chi-128、Chi-131、Chi-164、Chi-169和Chi-180在高表達hGPRC5D細胞上均體現濃度梯度依賴的結合活性，具有比BM-mAb更高的抗原最大結合量。
2、抗hGPRC5D嵌合抗體與穩定低表達人GPRC5D細胞的結合性質
按照lipofectamin3000轉染試劑（Thermo, Cat: L3000015）的操作說明，將質體pcDNA3.1-hGPRC5D轉染到CHO-K1細胞中，獲得CHO-K1-hGPRC5D low穩定低表達細胞系（GPRC5D表達豐度為約2000-2500個抗原/細胞）。將細胞濃度為3 × 10 5個/mL的CHO-K1-hGPRC5D low細胞懸液按100 µL/孔鋪板置於96孔U底板中，加入梯度稀釋抗hGPRC5D抗體（終濃度範圍是4.1-3000 ng/mL，3倍梯度稀釋），混勻後於4℃孵育1小時。用含2%（體積百分數）FBS的PBS洗滌細胞後，加入PE偶聯山羊抗人IgGFcγ抗體（Jackson Immuno Research, Cat: 109-116-170），4℃孵育1小時。用含2%（體積百分數）FBS的PBS洗滌細胞並重懸，使用流式細胞儀（Sartorius, IQue3）檢測螢光訊號，通過染色的平均螢光強度（MFI）來分析抗hGPRC5D抗體與CHO-K1-hGPRC5D low細胞的結合。如圖3所示，在低表達hGPRC5D的細胞上，嵌合抗體Chi-89、Chi-105、Chi-164、Chi-180與BM-mAb相比，其結合水準相當，而Chi-128、Chi-131和Chi-169則體現出較強的靶點結合能力。
實施例 5 ：抗 hGPRC5D 抗體與腫瘤細胞的結合活性測定
分別將細胞濃度為3 × 10 5個/mL的H929和MM1S人骨髓瘤細胞懸液按100 µL/孔鋪板置於96孔U底板中，加入梯度稀釋抗hGPRC5D抗體（終濃度範圍是4.1-1000 ng/mL，3倍梯度稀釋），混勻後於4℃孵育1小時。用含2%（體積百分數）FBS的PBS洗滌細胞後，加入PE偶聯山羊抗人IgGFcγ抗體（Jackson Immuno Research, Cat: 109-116-170），4℃孵育1小時。用含2%（體積百分數）FBS的PBS洗滌細胞並重懸，使用流式細胞儀（Sartorius, IQue3）檢測螢光訊號，通過染色的平均螢光強度（MFI）來分析抗hGPRC5D抗體與人骨髓瘤細胞的結合，應用Graphpad Prism作圖4A和4B可知，嵌合抗體Chi-89、Chi-105、Chi-128、Chi-131和Chi-169在H929和MM1S細胞上均呈現濃度梯度依賴的結合活性。
實施例 6 ：抗 hGPRC5D 抗體的種屬交叉活性測定
分別將細胞濃度為5×10 5個/mL的CHO-K1-cynoGPRC5D和CHO-K1-murineGPRC5D細胞懸液按100µL/孔鋪板於96孔U底板中，加入梯度稀釋抗hGPRC5D抗體（終濃度範圍是4.6-10000 ng/mL，3倍梯度稀釋），混勻後於4℃孵育1小時。用含2%（體積百分數）FBS的PBS洗滌後，加入PE偶聯山羊抗人IgGFcγ抗體（Jackson Immuno Research, Cat:109-116-170），4℃孵育1小時。用含2%（體積百分數）FBS的PBS洗滌並重懸細胞，使用流式細胞儀（Sartorius, IQue3）檢測螢光訊號，通過染色的平均螢光強度（MFI）來分析抗hGPRC5D抗體與CHO-K1-cynoGPRC5D和CHO-K1-murineGPRC5D細胞的結合。如圖5A和5B所示，嵌合抗體Chi-89、Chi-128、Chi-131和Chi-169在CHO-K1-cynoGPRC5D和CHO-K1-murineGPRC5D細胞都體現了濃度梯度依賴的結合活性，表明這些抗hGPRC5D抗體與BM-mAb相比，同時具備猴與小鼠的GPRC5D交叉結合活性；而嵌合抗體Chi-105僅與猴GPRC5D具交叉結合活性。
實施例 7 ：抗 hGPRC5D 抗體的特異性驗證
1、抗hGPRC5D嵌合抗體在細胞水準上與同家族蛋白結合的驗證
已知GPRC家族蛋白除GPRC5D以外，還包括GPRC5A（RAIG1）、GPRC5B（RAIG2）和GPRC5C（RAIG3）。分別將編碼全長GPRC5A（SEQ ID NO:46）、GPRC5B（SEQ ID NO:47）和GPRC5C（SEQ ID NO:48）的cDNA通過基因合成獲得，然後次選殖到載體pcDNA3.1(+)中，得到pcDNA3.1-GPRC5A-GFP、pcDNA3.1-GPRC5B-GFP和pcDNA3.1-GPRC5C-GFP重組質體。參照lipofectamin3000轉染試劑（Thermo, Cat: L3000015）的操作說明，將上述重組質體DNA分別轉染到CHO-K1細胞中，獲得CHO-K1-GPRC5A、CHO-K1-GPRC5B和CHO-K1-GPRC5C穩定細胞系。
分別將細胞濃度為5 × 10 5個/mL的CHO-K1-GPRC5A、CHO-K1-GPRC5B和CHO-K1-GPRC5C細胞懸液按100 µL/孔鋪板於96孔U底板中，加入梯度稀釋抗hGPRC5D抗體（終濃度範圍是4.1-3000 ng/mL，3倍梯度稀釋），混勻後於4℃孵育1小時。用含2%（體積百分數）FBS的PBS洗滌後，加入APC偶聯山羊抗人IgGFcγ抗體（Jackson Immuno Research, Cat: 109-135-098），4℃孵育1小時。用含2%（體積百分數）FBS的PBS洗滌並重懸細胞，使用流式細胞儀（Sartorius, IQue3）檢測螢光訊號，通過染色的平均螢光強度（MFI）來分析抗hGPRC5D抗體與CHO-K1-GPRC5A、CHO-K1-GPRC5B和CHO-K1-GPRC5C細胞的結合。如圖6A、6B和6C所示，嵌合抗體Chi-89、Chi-105、Chi-128、Chi-131和Chi-169在4.1-3000 ng/mL濃度範圍內與CHO-K1-GPRC5A、CHO-K1-GPRC5B和CHO-K1-GPRC5C細胞均不結合，BM-mAb在大於1000 ng/mL濃度下與CHO-K1-GPRC5A細胞出現非特異性結合。
2、抗hGPRC5D嵌合抗體與CHO-K1細胞的結合驗證
首先，按照EZ-linkNHS-Biotin生物素試劑（Thermo, Cat: 20217）的操作說明，分別製備生物素偶聯抗hGPRC5D抗體，分別命名為Biotin-BM-mAb、Biotin-Chi-89、Biotin-Chi-128和Biotin-Chi-131，其中Biotin表示生物素。
將細胞濃度為3 × 10 5個/mL的CHO-K1細胞懸液按100 µL/孔鋪板置於96孔U底板中，加入梯度稀釋的生物素偶聯抗hGPRC5D抗體（3倍梯度稀釋，終濃度範圍是4.6-10000 ng/mL），混勻後於4℃孵育1小時。用含2%（體積百分數）FBS的PBS洗滌細胞後，加入PE偶聯鏈黴親和素（BD, Cat: 554061），4℃孵育1小時。用含2%（體積百分數）FBS的PBS洗滌細胞並重懸，使用流式細胞儀（Sartorius, IQue3）檢測螢光訊號，通過染色的平均螢光強度（MFI）來分析經過生物素偶聯後，MFI訊號放大的抗hGPRC5D抗體與CHO-K1細胞是否具有非特異性結合。結果如圖7所示，生物素偶聯的嵌合抗體Chi-89、Chi-128和Chi-131與CHO-K1細胞均產生不結合訊號。
實施例 8 ：抗 hGPRC5D 抗體的內化活性
將MM1S細胞用含10%（體積百分數）FBS的RPMI1640培養基（Gibco, Cat: 22400071）重懸並調節細胞濃度到2×10 6個/mL，按20 µL/孔鋪於96孔V底板。分別將抗體內化試劑（Sartorius, Cat: 90564）加入到抗hGPRC5D抗體BM-mAb、Chi-89、Chi-128和Chi-131，以及同型對照抗體hIgG1（Biointron, Cat: B117901）中，並置於37℃避光孵育15分鐘。然後用含10%（體積百分數）FBS的RPMI1640培養基（Gibco, Cat: 22400071）對上述抗體進行梯度稀釋（終濃度範圍是0.46-1000 ng/mL，3倍梯度稀釋），吸取20µL/孔與細胞懸液混勻，並置於37℃孵育2小時。孵育結束後，用含2%（體積百分數）FBS的PBS洗滌細胞並重懸，使用流式細胞儀（Sartorius, IQue3）檢測螢光訊號，通過染色的平均螢光強度（MFI）來分析抗hGPRC5D抗體的內化活性。結果如圖8所示，嵌合抗體Chi-89、Chi-128和Chi-131介導的靶點GPRC5D的內化與BM-mAb相比水準相當，僅產生微弱的內化作用。
無
圖1為部分小鼠抗hGPRC5D抗體與CHO-K1-hGPRC5D hi、CHO-K1-cynoGPRC5D（CHO-K1-猴GPRC5D）及CHO-K1-murineGPRC5D（CHO-K1-小鼠GPRC5D）的細胞ELISA測定OD 450；
圖2為FACS檢測嵌合抗體與高表達hGPRC5D細胞結合的MFI及EC 50；
圖3為FACS檢測嵌合抗體與低表達hGPRC5D細胞結合的MFI；
圖4A為FACS檢測抗GPRC5D抗體與H929細胞結合的MFI；
圖4B為FACS檢測抗GPRC5D抗體與MM1S細胞結合的MFI；
圖5A為FACS檢測抗GPRC5D抗體與CHO-K1-cynoGPRC5D細胞結合的MFI；
圖5B為FACS檢測抗GPRC5D抗體與CHO-K1-murineGPRC5D細胞結合的MFI；
圖6A為FACS檢測抗GPRC5D抗體與CHO-K1-GPRC5A細胞結合的MFI；
圖6B為FACS檢測抗GPRC5D抗體與CHO-K1-GPRC5B細胞結合的MFI；
圖6C為FACS檢測抗GPRC5D抗體與CHO-K1-GPRC5C細胞結合的MFI；
圖7為FACS檢測抗GPRC5D抗體與CHO-K1細胞結合的MFI；
圖8為抗GPRC5D抗體的內化活性測定。
無
TW202334222A_111142114_SEQL.xml

Claims (17)

  1. 一種分離的抗GPRC5D抗體或其抗原結合片段，其中所述抗GPRC5D抗體包含： 重鏈可變區，其包含： HCDR1，其包含SEQ ID NO：1、9、17、25或33所示的胺基酸序列， HCDR2，其包含SEQ ID NO：2、10、18、26或34所示的胺基酸序列，及 HCDR3，其包含SEQ ID NO：3、11、19、27或35所示的胺基酸序列；及 輕鏈可變區，其包含： LCDR1，其包含SEQ ID NO：4、12、20、28或36所示的胺基酸序列， LCDR2，其包含SEQ ID NO：5、13、21、29或37所示的胺基酸序列，及 LCDR3，其包含SEQ ID NO：6、14、22、30或38所示的胺基酸序列。
  2. 根據請求項1所述的分離的抗GPRC5D抗體或其抗原結合片段，其中所述抗GPRC5D抗體包含： (i)重鏈可變區，其包含： 包含SEQ ID NO：1所示胺基酸序列的HCDR1， 包含SEQ ID NO：2所示胺基酸序列的HCDR2，及 包含SEQ ID NO：3所示胺基酸序列的HCDR3；及 輕鏈可變區，其包含： 包含SEQ ID NO：4所示胺基酸序列的LCDR1， 包含SEQ ID NO：5所示胺基酸序列的LCDR2，及 包含SEQ ID NO：6所示胺基酸序列的LCDR3； (ii)重鏈可變區，其包含： 包含SEQ ID NO：9所示胺基酸序列的HCDR1， 包含SEQ ID NO：10所示胺基酸序列的HCDR2，及 包含SEQ ID NO：11所示胺基酸序列的HCDR3；及 輕鏈可變區，其包含： 包含SEQ ID NO：12所示胺基酸序列的LCDR1， 包含SEQ ID NO：13所示胺基酸序列的LCDR2，及 包含SEQ ID NO：14所示胺基酸序列的LCDR3； (iii)重鏈可變區，其包含： 包含SEQ ID NO：17所示胺基酸序列的HCDR1， 包含SEQ ID NO：18所示胺基酸序列的HCDR2，及 包含SEQ ID NO：19所示胺基酸序列的HCDR3；及 輕鏈可變區，其包含： 包含SEQ ID NO：20所示胺基酸序列的LCDR1， 包含SEQ ID NO：21所示胺基酸序列的LCDR2，及 包含SEQ ID NO：22所示胺基酸序列的LCDR3； (iv)重鏈可變區，其包含： 包含SEQ ID NO：25所示胺基酸序列的HCDR1， 包含SEQ ID NO：26所示胺基酸序列的HCDR2，及 包含SEQ ID NO：27所示胺基酸序列的HCDR3；及 輕鏈可變區，其包含： 包含SEQ ID NO：28所示胺基酸序列的LCDR1， 包含SEQ ID NO：29所示胺基酸序列的LCDR2，及 包含SEQ ID NO：30所示胺基酸序列的LCDR3 ；或 (v)重鏈可變區，其包含： 包含SEQ ID NO：33所示胺基酸序列的HCDR1， 包含SEQ ID NO：34所示胺基酸序列的HCDR2，及 包含SEQ ID NO：35所示胺基酸序列的HCDR3；及 輕鏈可變區，其包含： 包含SEQ ID NO：36所示胺基酸序列的LCDR1， 包含SEQ ID NO：37所示胺基酸序列的LCDR2，及 包含SEQ ID NO：38所示胺基酸序列的LCDR3。
  3. 一種分離的抗GPRC5D抗體或其抗原結合片段，其中所述抗GPRC5D抗體包含重鏈可變區和輕鏈可變區，所述重鏈可變區包含SEQ ID NO：7、15、23、31或39所示可變區序列的HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述輕鏈可變區包含SEQ ID NO：8、16、24、32或40所示可變區序列的LCDR1、LCDR2和LCDR3。
  4. 根據請求項3所述的抗GPRC5D抗體或其抗原結合片段，其中所述抗GPRC5D抗體包含重鏈可變區和輕鏈可變區，所述重鏈可變區包含SEQ ID NO：7所示可變區序列的HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述輕鏈可變區包含SEQ ID NO：8所示可變區序列的LCDR1、LCDR2和LCDR3；所述重鏈可變區包含SEQ ID NO：15所示可變區序列的HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述輕鏈可變區包含SEQ ID NO：16所示可變區序列的LCDR1、LCDR2和LCDR3；所述重鏈可變區包含SEQ ID NO：23所示可變區序列的HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述輕鏈可變區包含SEQ ID NO：24所示可變區序列的LCDR1、LCDR2和LCDR3；所述重鏈可變區包含SEQ ID NO：31所示可變區序列的HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述輕鏈可變區包含SEQ ID NO：32所示可變區序列的LCDR1、LCDR2和LCDR3；或，所述重鏈可變區包含SEQ ID NO：39所示可變區序列的HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述輕鏈可變區包含SEQ ID NO：40所示可變區序列的LCDR1、LCDR2和LCDR3。
  5. 根據請求項1-4中任一項所述的分離的抗GPRC5D抗體或其抗原結合片段，其中所述重鏈可變區包含與SEQ ID NO：7、15、23、31或39所示序列具有至少80%同一性的胺基酸序列；或/和， 所述輕鏈可變區包含與SEQ ID NO：8、16、24、32或40所示序列具有至少80%同一性的胺基酸序列。
  6. 根據請求項5所述的分離的抗GPRC5D抗體或其抗原結合片段，其中所述重鏈可變區和輕鏈可變區選自以下任一項： (i)所述的重鏈可變區包含與SEQ ID NO：7所示序列具有至少80%同一性的胺基酸序列，所述的輕鏈可變區包含與SEQ ID NO：8所示序列具有至少80%同一性的胺基酸序列； (ii)所述的重鏈可變區包含與SEQ ID NO：15所示序列具有至少80%同一性的胺基酸序列，所述的輕鏈可變區包含與SEQ ID NO：16所示序列具有至少80%同一性的胺基酸序列； (iii)所述的重鏈可變區包含與SEQ ID NO：23所示序列具有至少80%同一性的胺基酸序列，所述的輕鏈可變區包含與SEQ ID NO：24所示序列具有至少80%同一性的胺基酸序列； (iv)所述的重鏈可變區包含與SEQ ID NO：31所示序列具有至少80%同一性的胺基酸序列，所述的輕鏈可變區包含與SEQ ID NO：32所示序列具有至少80%同一性的胺基酸序列；或， (v)所述的重鏈可變區包含與SEQ ID NO：39所示序列具有至少80%同一性的胺基酸序列，所述的輕鏈可變區包含與SEQ ID NO：40所示序列具有至少80%同一性的胺基酸序列。
  7. 根據請求項1-6中任一項所述的分離的抗GPRC5D抗體或其抗原結合片段，其中所述抗原結合片段為Fab片段、Fab'片段、F(ab') 2片段、Fd片段、Fv片段、分離的CDR區或scFv； 可選地，所述的抗GPRC5D抗體是嵌合的、人源化的或全人的； 可選地，所述抗GPRC5D抗體為IgG1、IgG2、IgG3或IgG4同種型。
  8. 根據請求項1-7中任一項所述的分離的抗GPRC5D抗體或其抗原結合片段，其中所述抗GPRC5D抗體或其抗原片段結合人GPRC5D抗原，可選的，還具有以下任意一種或幾種性質： （1）結合猴GPRC5D抗原； （2）結合鼠GPRC5D抗原；或 （3）不結合GPRC5A、GPRC5B和GPRC5C中的一種或幾種。
  9. 根據請求項1-8中任一項所述的分離的抗GPRC5D抗體或其抗原結合片段，其中所述抗GPRC5D抗體為單特異性抗體或多特異性抗體。
  10. 一種融合蛋白，其包含根據請求項1-9中任一項所述的抗GPRC5D抗體或其抗原結合片段。
  11. 一種藥物組合物，其包含根據請求項1-9中任一項所述的抗GPRC5D抗體或其抗原結合片段、或請求項10所述的融合蛋白，其還進一步包含藥學上可接受的載體。
  12. 一種分離的核酸，其編碼根據請求項1-9中任一項所述的抗GPRC5D抗體或其抗原結合片段。
  13. 一種載體，其包含根據請求項12所述的核酸。
  14. 一種宿主細胞，其包含根據請求項13所述的載體或在其基因組中整合有請求項12所述的核酸。
  15. 一種製備根據請求項1-9中任一項所述的抗GPRC5D抗體或其抗原結合片段的方法，包括：培養宿主細胞，從所述宿主細胞或宿主細胞培養基中回收所述抗GPRC5D抗體或其抗原結合片段，所述宿主細胞包含編碼所述GPRC5D抗體或其抗原結合片段的核酸。
  16. 根據請求項1-9中任一項所述的抗GPRC5D抗體或其抗原結合片段、或請求項10所述的融合蛋白在製備治療疾病或製備減少腫瘤或抑制腫瘤細胞生長的藥物中的用途，較佳所述疾病是癌症或自身免疫疾病；較佳，所述癌症是多發性骨髓瘤。
  17. 一種用於在受試者中減少腫瘤或抑制腫瘤細胞生長、或者在受試者中治療疾病的方法，其中所述方法包括向所述受試者施用治療有效量的根據請求項1-9中任一項所述的抗GPRC5D抗體或其抗原結合片段、根據請求項10所述的融合蛋白或請求項11所述的藥物組合物；較佳所述疾病是癌症或自身免疫疾病；較佳，所述癌症是多發性骨髓瘤。
TW111142114A 2021-11-05 2022-11-04 結合gprc5d的抗體及其用途 TW202334222A (zh)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202111305149 2021-11-05
CN202111305149.7 2021-11-05

Publications (1)

Publication Number Publication Date
TW202334222A true TW202334222A (zh) 2023-09-01

Family

ID=86240662

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
TW111142114A TW202334222A (zh) 2021-11-05 2022-11-04 結合gprc5d的抗體及其用途

Country Status (2)

Country Link
TW (1) TW202334222A (zh)
WO (1) WO2023078382A1 (zh)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN116925229B (zh) * 2023-09-19 2023-12-15 南京驯鹿生物技术股份有限公司 一种靶向gprc5d的抗体及其应用

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP3227324A4 (en) * 2014-12-05 2018-08-29 Memorial Sloan Kettering Cancer Center Antibodies targeting g-protein coupled receptor and methods of use
TWI781108B (zh) * 2016-07-20 2022-10-21 比利時商健生藥品公司 抗ｇｐｒｃ５ｄ抗體、結合ｇｐｒｃ５ｄ與ｃｄ３之雙特異性抗原結合分子及其用途
KR20190133160A (ko) * 2017-02-07 2019-12-02 다이이찌 산쿄 가부시키가이샤 항-gprc5d 항체 및 항-gprc5d 항체를 포함하는 분자
TWI829667B (zh) * 2018-02-09 2024-01-21 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 結合gprc5d之抗體
JP7303314B2 (ja) * 2019-01-18 2023-07-04 ヤンセン バイオテツク，インコーポレーテツド Ｇｐｒｃ５ｄキメラ抗原受容体及びそれを発現する細胞
JP2022543553A (ja) * 2019-07-31 2022-10-13 エフ・ホフマン－ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト Ｇｐｒｃ５ｄに結合する抗体

Also Published As

Publication number Publication date
WO2023078382A1 (zh) 2023-05-11

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP7317272B2 (ja) Ｔｉｇｉｔ抗体、その抗原結合断片及びその医療用途 本願は、２０１９年９月２９日に出願された出願番号ｃｎ２０１７１０９０８５６５．３に基づいたものであり、その優先権を主張する。その開示は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
CA2932966C (en) Pd-1 antibody, antigen-binding fragment thereof, and medical use thereof
CN113544156B (zh) 抗Claudin18.2抗体及其应用
CN110914304B (zh) Cd96抗体、其抗原结合片段及医药用途
WO2017197667A1 (zh) 抗人pd-l1人源化单克隆抗体及其应用
TWI717678B (zh) Pd-l1抗體、其抗原結合片段及醫藥用途
CN112969716B (zh) 抗pd-1抗体、其抗原结合片段及医药用途
CN113906053B (zh) 抗cea抗体及其应用
WO2021098822A1 (zh) 一种双特异性抗体
CN111615519A (zh) 结合人il-5的单克隆抗体、其制备方法和用途
WO2023078382A1 (zh) 结合gprc5d的抗体及其用途
CN113840836B (zh) 抗结缔组织生长因子抗体及其应用
JP2024514855A (ja) Ｄｌｌ３に対する結合分子及びその使用
JP2024506626A (ja) 抗ｃｄ１１２ｒ抗体及びその用途
WO2023178645A1 (zh) 靶向cd3的抗体及其应用
WO2024046245A1 (zh) 抗pvrig抗体及其应用
CN113087796B (zh) 一种抗pd-l1抗体及其应用
WO2024012434A1 (en) Antibody, antigen-binding fragment thereof, and pharmaceutical use thereof
WO2024012513A1 (en) Antibody, antigen-binding fragment thereof, and pharmaceutical use thereof
WO2024088386A1 (en) Antibody, antigen-binding fragment thereof, and pharmaceutical use thereof
WO2023116759A1 (zh) 抗bcma抗体及其用途
WO2023143322A1 (zh) p95HER2抗体及其应用
TW202317631A (zh) 抗crtam抗體及其應用
TW202413405A (zh) 抗體、其抗原結合片段及其藥物用途
TW202413414A (zh) 抗ｉｌｔ４抗體及其醫藥用途